KR20240057221A - 독새풀 추출물을 포함하는 미백용 또는 주름 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 또는 주름 개선용 화장료 조성물, 식품 조성물 및 피부 미백용 또는 주름 개선용 의약외품 조성물에 관한 것으로,
본 발명의 조성물은 천연물 유래의 물질이어서 독성이 없으며, 인체에 적용하여도 부작용을 유발하지 않아 피부 미백, 주름 개선 또는 항산화를 위한 화장료 조성물의 개발에 널리 활용될 수 있을 것이다.

Description

독새풀 추출물을 포함하는 미백용 또는 주름 개선용 조성물 {A composition for skin whitening or anti-wrinkle comprising Alopecurus aequalis extracts}

본 발명은 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 화장료 조성물 및 피부 미백용 의약외품 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체에서 가장 큰 조직으로 햇빛이나 물리, 화학적 자극으로부터 신체 내부를 보호해 주는 기능을 하며 이는 인간의 생명유지를 위해 절대적으로 필요하며 끊임없이 재생되어 항상성을 유지시킨다.　피부는 바깥쪽으로부터 표피, 진피, 피하지방 순서대로 구성되어 있으며 가장 얇은 조직인 표피는　피부의 보습과 보호를 담당하는 중요한 기능을 담당하고 있으며 수분 손실, 손상과 세균 침입 등을 방지하는 역할을 맡고 있다.　피부는 신체를 전부 감싸고 있는 조직으로 다양한 기능을 가지고 있다. 신체 내부와 외부 사이에서 장벽 기능을 가지고 있으므로 랑게르한스섬에 의한 면역 체계를 갖추고 있고 표피에 의한 수분 조절기능을 가지고 있음. 또한, 적절한 햇빛으로 비타민 D를 합성하고 지질의 저장고와 땀샘으로의 배설 기능도 수행한다. 건강한　피부에서의 정상적인 분화과정에 의해 생성된 각질층은　피부의 보습을 유지하고 외부환경의 자극으로부터 보호하는 기능을 가지고 있다. 이러한 기능을　피부　장벽 기능이라 하며 표피의 가장 중요한 역할이라고 할 수 있다.

화장품의 주요한 효능 중 하나인　미백은 멜라닌 합성과　피부　명암에 관련된 많은 효소들의 활성이 명백해졌지만 아시안　피부색이 특히 더 과색소가 침착되고 노화되기 쉬운 이유에 대해선 아직 완전히 밝혀지지 않은 상태이다.　피부　명암을 밝힌다고 여겨지는 물질들은 전형적으로 멜라닌 합성과 그에 관여된 효소들 각각을 저해하는 것으로 알려져 있다.

사람의　피부색은 여러 가지 요인들 특히, 계절, 인종, 및 성별에 따라 다르며, 주로 멜라닌, 카로틴, 및 헤모글로빈의 양에 의해서 결정되는데, 이중 멜라닌이 가장 결정적인 요소로 작용한다. 멜라닌(melanin)은　피부　기저층에 존재하는 멜라닌 세포(melanocyte)에서 합성되며 주변 각질 세포로 전이되어 사람의　피부색을 나타낸다. 멜라닌이 비정상적으로 적게 되면 백반증과 같은　피부　병변이 유발되며, 반대로 과잉으로 생산될 경우에는 기미, 잡티를 형성하는 것으로 알려져 있다. 멜라닌은 아미노산 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나아제(tyrosinase)가 작용함으로써, 티로시나아제는 자외선에 의해 더욱 활성화되기 때문에 햇빛을 많이 받게 되면　피부가 검게 변하게 된다. 국내 및 일본 등지에서　피부　미백효과 개념의 화장품들이 큰 시장을 형성하고 있는데, 이들은 대개 티로시나아제의 활성 억제 효과가 있는 물질들을 배합한 제품들이다.

종래에 티로시나아제의 활성억제제로서　미백화장품에 배합되는 원료들에는 아스코르빈산(비타민 C) 및 그 유도체, 상백피추출물, 녹차추출물, 알로에추출물, 황금추출물뿐만 아니라, 코직산, 알부틴, 유용성 감초추출물 및 트라넥삼산아마이드 등이 있다. 그러나 상기 식물추출물들은 불안정하고 제품에 배합할 경우 효과가 지속적이지 못하며, 티로시나아제 활성억제력도 미미하다는 문제점이 있다. 또한 코직산(kojic acid)은 티로시나아제 억제제로서 통상적으로 사용되고 있으나, 알레르기 반응을 일으킬 수 있으며(Nakagawa M. et.al.,　ContactDermatitis, 43:PP9-3(1995)) 제품 내에서 불안정하여 2%에 가까운 과량을 사용해야 하는 등 조성물로서 제조하는데 어렵다는 문제점이 있다.

피부 주름 개선 및 탄력 개선 화장료로 레티노이드, 아데노신, 동물 태반유래 단백질, 및 클로렐라 추출물 등이 알려져 있다. 가장 널리 알려진 레티놀은 피부 적용 시 자극 등의 안전성 문제로 사용량 제한이 있고, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부 탄력 증진 및 주름 개선 효과를 기대하기가 어렵다.

이에, 본 발명자들은 천연물 유래 피부 미백용 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 개발하기 위해 예의 연구 노력한 결과, 독새풀 추출물은 피부 미백 및 주름 개선 효과를 가짐을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

또한, 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 통상의 실험만을 사용하여 본 발명에 기재된 본 발명의 특정 양태에 대한 다수의 등가물을 인지하거나 확인할 수 있다. 또한, 이러한 등가물은 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.

본 발명의 하나의 양태는 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에서 용어, "독새풀 (Alopecurus aequalis)"이란, 외떡잎식물 벼목 화본과의 한해살이풀이며, 뚝새풀이라고도 한다. 소의 먹이로 사용하기도 하며, 한방에서는 뿌리를 제외한 식물체 전부를 간맥낭이라는 약재로 사용되어 전신부종을 내리고 어린아이의 수두와 복통설사에 효과가 있다고 알려져 있다. 북아메리카를 제외한 북반구 온대와 한대에 분포한다.

본 발명에서의 용어 "추출물"이란 용매에 침지한 다음, 상온 또는 가온상태에서 일정시간동안 추출하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미할 수 있다.

피부 미백 또는 주름 개선 활성을 갖는 상기 독새풀 추출물은 천연, 잡종, 변종 식물의 다양한 기관으로부터 추출될 수 있고, 예를 들어 뿌리, 줄기, 잎, 꽃, 열매의 몸통, 열매의 껍질뿐만 아니라 식물 조직 배양물로부터 추출 가능하다.

본 발명에서, 상기 독새풀 추출물은 독새풀의 뿌리, 줄기, 잎, 꽃, 또는 열매로부터 추출한 것일 수 있으며, 이에 특별히 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, 상기 독새풀 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 및 이들의 혼합 용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것을 포함할 수 있으나, 바람직하게 열수 또는 에탄올 추출물이다. 또한, 본 발명에 있어서, 상기 추출물에는, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나도 포함될 수 있다. 본 발명의 추출 용매는 열수 또는 50% 내지 90%, 구제적으로 60% 내지 80%, 보다 구체적으로 65% 내지 75% 에탄올 일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 사용된 용어, "미백"은 피부를 하얗게 하는 것을 의미하고, 멜라닌의 합성을 저해하여 멜라닌의 피부 침착을 억제하거나 방지하는 모든 작용을 의미한다.

상기 멜라닌은 흑갈색 알갱이의 색소로서, 멜라닌 세포 내 멜라노솜이라는 세포 소기관에 의해 만들어진다. 멜라닌은 피부, 털, 눈 등에 존재하며, 멜라닌의 양에 따라 피부색이 결정되는데, 멜라닌의 양이 많을수록 검은 피부색을 띤다.

본 발명에서 티로시나아제는 티로신을 히드록시화하여 dihydroxyphenylalanine(DOPA)을 형성하고, 더 산화되어 도파퀴논을 형성하는 효소로써, 티로시나아제 반응은 멜라닌 합성의 첫 단계이다. 상기 도파(L-DOPA)는 카테콜아민이 생합성되는 과정에서 생겨나는 전구물질로써, 아미노산인 티로신이 티로신 수산화효소(tyrosine hydroxylase)에 의해 카테콜 계열의 L-도파로 변환된다.

따라서, 상기 조성물은 멜라닌 생성을 억제하는 피부 미백 효능을 특징으로 하는 것일 수 있다.

또한, 본 발명에 있어서, 상기 미백은 티로시나아제 활성 억제 또는 L-도파 산화 억제 활성에 의해 달성되는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 독새풀 추출물을 처리한 경우, 멜라닌 생성 저해, 티로시나아제 활성 저해 및 L-도파 산화 억제되었으며, 그 수준이 미처리 경우보다 우수하였다 (도 1 내지 도 3)

독새풀 추출물은 미백 효과가 우수하므로, 상기 독새풀 추출물은 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 용어, "주름"은 크게 얼굴표정을 짓는데 쓰이는 표정근에 의한 표정 주름과 전반적 혹은 국소적으로 피부가 쇠하여 생기는 잔주름으로 구분 할 수 있다. 구체적으로 주름은 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐과 탄력 섬유의 감소, 외부 환경 등에 의해 유발될 수 있다. 본 발명의 목적상 주름은 표정 주름 또는 잔주름을 모두 포함하는 의미로 사용될 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 용어, "탄력"은 피부를 손가락으로 눌렀을 때 팽팽하게 버티는 힘으로, "탄력 개선" 또는 "탄력 증진"은, 개체의 피하 지방층 구조를 강화시켜 피부의 탄력을 높이는 것을 의미로서, 본 발명의 조성물을 이용하여 피부의 탄력을 높이는 것을 의미할 수 있다.

본 발명의 용어, "노화"는 시간의 흐름에 따라 생체 구조와 기능이 쇠퇴하는 현상을 의미하며, 본 발명의 노화 방지는 노화를 예방, 억제, 지연 시키는 등 노화가 개선된다면 그 정도 등에 제한되지 않는다. 본 발명에서 주름 개선 및 노화 방지는 콜라겐 합성 촉진에 의한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 용어, "콜라겐(Collagen)"은 대부분의 동물, 특히 포유동물에서 많이 발견되는 섬유 단백질로, 피부와 연골 등 체내의 모든 결합조직의 대부분을 차지하며, 체내에서 가장 흔한 세포인 섬유아세포 (fibroblasts)가 콜라겐을 생성 분비한다. 요리, 혹은 식품과 의약산업에서 널리 이용되는 젤라틴은 콜라겐을 비가역적으로 가수분해 한 것이다. 콜라겐의 감소는 주름을 유발하고, 피부의 탄력을 감소시키는 주된 원인이므로, 콜라겐의 합성은 주름 개선 및 탄력 증진을 위해 필수적이다.

본 발명의 일 실시예에서는 독새풀 추출물을 처리한 경우, 콜라겐 발현은 증가하고 및 콜라게나제(MMP-1) 활성은 억제되었으며, 그 수준이 미처리 경우보다 우수하였다 (도 4).

독새풀 추출물은 미백 효과뿐만 아니라, 콜라겐 합성 증진율이 우수하여 피부 주름 개선, 탄력 증진 등에 현저한 효과를 확인하였다.

본 발명에서 상기 조성물은 상기 조성물은 추가로 항산화 효능을 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 용어, "항산화"는 산화를 억제하는 모든 작용을 포함하는 것을 의미하며, 구체적으로 활성 산소종 등의 자유라디칼을 제거하는 작용을 의미할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 인체는 산화촉진물질(prooxidant)과 산화억제물질(antioxidant)이 균형을 이루고 있으나 여러 가지 요인들에 의하여 이런 균형 상태가 불균형을 이루게 되고 산화촉진 쪽으로 기울게 되면, 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 잠재적인 세포손상 및 병리적 질환을 일으키게 된다. 이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygenspecies, ROS)은 불안정하고 반응성이 높아 여러 생체물질과 쉽게 반응하고, 체내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포 독성 및 발암 등을 초래하게 된다. NO, HNO2, ONOO-와 같은 활성 질소종(reactivenitrogen species, RNS)은 염증 반응 시 대식세포 호중구 및 다른 면역 세포 들의 면역반응으로 인해 다량 생성되며, 이때 ROS도 같이 생성된다. 상기와 같은 활성산소는 체내에서 세포를 산화시켜 파괴시키며, 그에 따라 각종 질환에 노출되게 된다. 따라서, 본 발명의 독새풀 추출물을 포함하는 조성물은 자유라디칼 소거 및 NO 생성 억제를 통한 항산화 활성을 통해, 건강증진에 기여할 수 있다.

본 발명의 용어, "자유라디칼(free radical)" 1개의 쌍 안 지은 전자를 갖는 원자 혹은 분자, 수소원자, 염소원자 등은 단원자의 유리기인데, 보통 자유 라디칼이라 불리는 것은 무기 혹은 유기 화합물 분자에서 프로톤 1개가 탈리하여 잔기에 쌍 안 이룬 전자 1개가 있는 것을 말한다. 활성산소들은 화학적인 반응성이 뛰어나며 이들에 의해 유도되는 자유 라디칼은 생체 내의 각종 반응에 영향을 미치고 노화 등을 야기한다. 생물체는 자유 라디칼들에 의해 일어나는 유해성에 항상 노출되어 있으며, 세포의 연령증가에 따라 유해성이 점진적으로 축적되어 다양한 질병들을 일으킨다. 따라서, 자유라디칼 저해는 항산화 효과에 중요한 역할을 한다.

본 발명의 구체적인 일 실시예에서는 독새풀 추출물을 처리한 경우, 자유라디칼이 소거되었으며, 그 수준이 미처리 경우보다 우수하였다 (도 5)

독새풀 추출물은 미백 효과, 주름개선 및 탄력 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라, 자유라디칼 소거능이 증가됨을 통해 항산화 활성 증진 효과를 확인하였으므로, 상기 독새풀 추출물은 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군에서 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.

본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하이드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 구체적으로, 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 다른 하나의 양태는 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 식품 조성물을 제공한다.

상기 독새풀, 추출물, 미백, 주름 개선, 항산화는 전술한 바와 같다.

본 발명의 용어 "식품 조성물"은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구르트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.

본 발명의 다른 하나의 양태는 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.

상기 독새풀, 추출물, 미백, 주름 개선 항산화는 전술한 바와 같다.

본 발명에서의 용어, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미한다. 예를 들어, 약사법에 따른 의약외품은 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람/동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.

구체적으로, 상기 의약외품은 피부외용제 및 개인위생용품을 포함할 수 있다. 보다 구체적으로 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 또는 연고제일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.

본 발명에 따른 상기 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

본 발명의 조성물은 천연물 유래의 물질이어서 독성이 없으며, 인체에 적용하여도 부작용을 유발하지 않아 피부 미백, 주름 개선 또는 항산화를 위한 화장료 조성물의 개발에 널리 활용될 수 있을 것이다.

도 1는 독새풀 추출물의 멜라닌 생성 저해 활성을 평가한 그래프이다.
도 2은 독새풀 추출물의 티로시나아제 저해 활성을 평가한 그래프이다.
도 3는 독새풀 추출물의 용매별 L-도파 산화 억제 활성을 평가한 그래프이다.
도 4는 독새풀 추출물의 콜라겐 및 콜라게나제(MMP-1)의 mRNA 발현량을 평가한 그래프이다.
도 5는 독새풀 추출물의 용매별 라디칼 소거 활성을 평가한 그래프이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 독새풀 추출물 제조

독새풀 건조물 10g에 하기 표에 나타난 조건의 각 용매를 20배 무게로 첨가하여, 90℃에서 3시간 동안 추출하였다. 이후, 추출한 용액을 여과하여 추출물을 준비하였다.

조건	용매종류
A	70% 에탄올
B	100% 에탄올
C	100% 메탄올
D	정제수(열수)

실시예 2. 멜라닌 생성저해 활성 평가

멜라닌형성세포 (B16F10)를 96 웰 플레이트에 2 x10⁴ cells/well 접종하여 37℃ 5% CO₂ 에서 24시간 배양하였다. 배지를 제거하고 세포를 PBS로 세척하였다. 이후, 실시예 1.의 각 용매별 독새풀 추출물을 30배 희석하여 DMEM (100nM α-MSH가 첨가)에 첨가한 후, 48시간 배양하였다. 이때 추출물 대신 100㎍/mL 알부틴(Arbutin) 첨가하여 양성대조군으로 이용하였다. ELISA reader로 490nm에서 배양액의 흡광도를 측정하였다 (도 1).

그 결과, 독새풀 70% 에탄올 추출물(A) 및 독새풀 열수 추출물(D)은 다른 추출조건보다 현저히 높은 멜라닌 생성을 억제하였으며, 특히 양성대조군인 알부틴보다 현저히 높거나 유사한 정도의 억제효과가 있음을 확인하였다.

그에 따라, 본 발명의 독새풀 추출물은 피부 미백 등에 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

실시예 3. 티로시나아제 저해 활성 평가

1,500Unit/mL 티로시나아제 (Tyrosinase), 1.5mM L-티로신(L-Tyrosine), 100㎍/mL 일부틴 및 실시예 1.의 각 용매별 독새풀 추출물을 30배 희석하여 0.1M 인산 완충액(Phosphate buffer, pH6.4)에 녹여 준비하였다. 그 다음, 96 웰 플레이트에 각 웰에 120㎕ 0.1M 인산 완충액 (pH6.4), 20㎕ 티로시나아제, 20㎕ 독새풀 추출물을 가하고 혼합한 후 40㎕ L-티로신을 첨가하여 실온에서 15분간 반응시킨 후, ELISA reader로 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 공시험액은 티로시나아제 대신 20㎕ 버퍼를 첨가하여 측정하였으며, 티로시나아제 저해 양성대조군은 20㎕ 알부틴을 첨가하여 측정하였다. 티로시나아제 활성 저해율은 아래의 계산식에 따라 계산하였다 (도 2).

Tyrosinase inhibition (%)

= 100 - (시료반응 흡광도-공시험액 흡광도)/(100%효소활성 흡광도-공시험액 흡광도) X 100

그 결과, 독새풀 70% 에탄올 추출물(A)은 다른 추출조건보다 현저히 높은 티로시나아제 저해 활성을 나타냈으며, 특히 양성대조군인 알부틴보다 현저히 높은 억제효과가 있음을 확인하였다.

그에 따라, 본 발명의 독새풀 추출물은 피부 미백 등에 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

실시예 4. L-도파 산화 억제 활성 평가

1500Unit/mL 티로시나아제, 1mM L-DOPA, 100㎍/mL 알부틴 및 실시예 1.의 각 용매별 독새풀 추출물을 0.1M 인산 완충액(pH7.0)에 녹여 준비하였다. 96 웰 플레이트에 각 웰에 40㎕ 인산 완충액, 5㎕ 티로시나아제, 5㎕ 독새풀 추출물을 가하고 혼합한 후 50㎕ L-DOPA 용액을 첨가하여 실온에서 15분 반응시킨 후, ELISA reader로 490nm에서 흡광도을 측정하였다. L-도파 산화억제 양성대조군은 5㎕ 알부틴을 첨가하여 측정하였으며, 이때 공시험액은 L-도파 대신 50㎕ 버퍼를 첨가하여 측정하였다. L-도파 산화억제율은 아래의 계산식에 따라 계산하였다 (도 3).

L-DOPA inhibition (%)

= 100 - (시료반응 흡광도-공시험액 흡광도)/(100%효소활성 흡광도-공시험액 흡광도) X 100

그 결과, 독새풀 70% 에탄올 추출물(A) 및 독새풀 열 수 추출물(D)은 다른 추출조건보다 현저히 높은 L-DOPA 산화 억제 효과를 나타냈으며, 특히 양성대조군인 알부틴과 유사한 억제효과가 있음을 확인하였다.

그에 따라, 본 발명의 독새풀 추출물은 피부 미백 등에 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

실시예 5. 콜라겐(Collagen) 및 콜라겐분해효소인 콜라게나제(MMP-1)의 mRNA 발현량 평가

인간섬유아세포(HDF)를 24 well 플레이트에 1 x10⁵ cells/well 접종하여 37℃ 5% CO2 에서 24시간 배양하였다. 그 후, 배지를 제거하고 세포를 PBS로 세척하고 DMEM 배지에서 독새풀 추출물을 30배 희석하여 첨가한 후, 24시간 배양하였다. 양성대조군은 추출물 대신 TGF-β 10ng/mL을 첨가하였다. 배양 후 세포 내 mRNA를 RNA extraction Kit (Qiagen-RNeasy Mini Kit)의 매뉴얼대로 mRNA를 추출하고 cDNA synthesis Kit (TaKaRa사 제품), qPCR master Mix(enzynomics사 제품)을 사용하여 Real-time PCR 기기로 각각 콜라겐(Collagen)과 콜라겐분해효소인 콜라게나제(collagenase, MMP-1)의 mRNA 발현량을 측정하였다 (도 4).

그 결과, 독새풀 70% 에탄올 추출물(A)과 독새풀 열수 추출물(D) 모두 높은 콜라겐 발현 증가효과를 나타냈으며, 특히 양성대조군인 TGF-보다도 더 높은 효과가 있음을 확인하였다.

또한, 독새풀 70% 에탄올 추출물(A)과 독새풀 열수 추출물(D) 모두 높은 콜라게나제 발현 억제효과가 있으며, 특히 독새풀 열수 추출물은 양성대조군과 유사한 억제 활성을 보였으며, 독새풀 70% 에탄올 추출물(A)의 경우 양성대조군인 TGF-β보다도 현저히 높은 억제효과가 있음을 확인하였다.

그에 따라, 본 발명의 독새풀 추출물은 피부 미백뿐만 아니라 주름 개선 등에 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

실시예 6. 라디칼 소거활성 평가

96 웰 플레이트에 각 웰에 실시예 1.의 각 용매별 독새풀 추출물을 30배 희석하여 100㎕ 분주하고, 0.2mM DPPH(2,2-Diphenyl-L-Picryhydrazyl) 100uL를 첨가하여 실온, 암실에서 30분 반응시켜 ELISA reader로 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 공시험액은 DPPH 대신 80% 메탄올을 첨가하여 측정하였으며, 라디칼 소거활성 양성대조군은 시료 대신 ascorbic acid 10㎍/mL 를 첨가하여 측정하였다. DPPH Scavenging(%)는 아래의 계산식에 따라 계산하였다 (도 5).

DPPH Scavenging(%)

= 100 - (시료반응 흡광도-공시험액 흡광도)/(100% DPPH 흡광도-공시험액 흡광도) X 100

그 결과, 70% 에탄올 추출물(A)은 다른 추출조건보다 현저히 높은 라디칼 소거활성을 나타냈으며, 특히 양성대조군인 알부틴과 유사한 억제 활성이 있음을 확인하였다.

그에 따라, 본 발명의 독새풀 추출물은 피부 미백, 주름개선뿐만 아니라 피부 항산화 등에 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (8)

1. 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 미백은 멜라닌 생성 억제, 티로시나아제 활성 저해 또는 L-도파 산화 억제에 의한 것임을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 주름 개선은 콜라겐 발현 증가 또는 콜라게나제(MMP-1) 억제 활성에 의한 것임을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 추가로 항산화 효능을 갖는 것인, 화장료 조성물.
   
5. 제1항에 있어서, 상기 독새풀 추출물의 추출 용매는 열수 또는 에탄올은 50 내지 90% 에탄올인 것인, 화장료 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군에서 선택되는 제형을 갖는 것인, 화장료 조성물.
   
7. 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 식품 조성물.
   
8. 독새풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 또는 주름 개선용 의약외품 조성물.