KR20240049858A - 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법 - Google Patents

항체-약물 접합체 및 이의 사용방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20240049858A
KR20240049858A KR1020247006358A KR20247006358A KR20240049858A KR 20240049858 A KR20240049858 A KR 20240049858A KR 1020247006358 A KR1020247006358 A KR 1020247006358A KR 20247006358 A KR20247006358 A KR 20247006358A KR 20240049858 A KR20240049858 A KR 20240049858A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
substituted
alkyl
aryl
amino
heteroaryl
Prior art date
Application number
KR1020247006358A
Other languages
English (en)
Inventor
페넬로페 엠. 드레이크
스테판 츄프라코프
아요델레 오. 오군코야
Original Assignee
알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 filed Critical 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨
Publication of KR20240049858A publication Critical patent/KR20240049858A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

본 개시내용은 항체 접합체(예를 들어 항체-약물 접합체(ADC))를 제공한다. 또한, 본 개시내용은 이러한 접합체를 생성하는 방법 및 이를 사용하는 방법을 포함한다. 또한, 일부 경우, 약제학적 조성물을 포함하는, 본 개시내용의 ADC를 포함하는 조성물이 제공된다. 특정 양태에서, 개체에 치료적 유효량의 본 개시내용의 ADC를 투여하는 단계를 포함하는 ADC를 사용하는 방법이 제공된다.

Description

항체-약물 접합체 및 이의 사용방법
본 출원은 2021년 7월 30일자로 출원된 미국 가출원 번호 제63/227,666호, 2022년 3월 23일자로 출원된 미국 가출원 번호 제63/322,914호 및 2022년 5월 23일자로 출원된 미국 가출원 번호 제63/344,932호에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이들은 각각 개시내용이 참조에 의해 본원에 원용된다.
단백질-소분자 치료용 접합체의 분야는 대단히 진보되어, 수년 내에 더 많은 약물이 제공될 것이라는 전망과 함께 다수의 임상적으로 유익한 약물이 제공된다. 단백질-접합체 치료제는, 예를 들어, 더 적은 부작용을 초래하는, 특이성, 기능의 다양성 및 상대적으로 낮은 표적외 활성으로 인해 여러 장점을 제공할 수 있다. 단백질의 화학적 변형은 이러한 장점을 더 강력하거나, 안정적이거나 또는 다중모드로 부여하여 확대할 수 있다.
단백질에 대한 번역후 변형을 생성하고 조작하기 위해 다수의 표준 화학적 변환이 보통 사용된다. 당업자가 소정의 아미노산의 측쇄를 선택적으로 변형시킬 수 있는 다수의 방법이 있다. 예를 들어, 카복실산 측쇄(아스파 테이트 및 글루타메이트)는 수용성 카보다이이미드 시약에 의한 초기 활성화 및 후속의 아민과의 반응에 의해 표적화될 수 있다. 유사하게, 라이신은 활성화된 에스터 또는 아이소티오사이아네이트의 사용을 통해 표적화될 수 있고, 시스테인 티올은 말레이미드 및 α-할로-카보닐로 표적화될 수 있다.
화학적으로 변경된 단백질 치료제 또는 시약의 생성에 대한 한가지 중요한 장애는 생물학적으로 활성인, 균일한 형태의 단백질의 생성이다. 폴리펩타이드에 대한 약물 또는 검출 가능한 표지의 접합은 제어가 어려울 수 있고, 결과적으로 부착된 약물 분자의 수 및 화학적 접합의 위치가 상이한 접합체의 불균일한 혼합물을 초래한다. 몇몇 경우에, 폴리펩타이드 상에서 화학적 결합의 정확하고 선택적인 형성을 지시하기 위하여 접합 및/또는 폴리펩타이드에 접합체된 약물 또는 검출 가능한 표지의 부위를 합성 유기 화학의 툴을 사용하여 제어하는 것이 바람직할 수 있다.
본 개시내용은 항체 접합체(예를 들어, 항체-약물 접합체(ADC))를 제공한다. 또한, 본 개시내용은 이러한 접합체를 생성하는 방법 및 이를 사용하는 방법을 포함한다. 또한, 일부 경우, 약제학적 조성물을 포함하는, 본 개시내용의 ADC를 포함하는 조성물이 제공된다. 특정 양태에서, 개체에 치료적 유효량의 본 개시내용의 ADC를 투여하는 단계를 포함하는 ADC를 사용하는 방법이 제공된다.
도 1, 패널 A는 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 항체 백본을 따라 목적하는 위치에 삽입된 포밀글라이신-생성 효소(FGE) 인식 서열을 나타낸다. 발현 시, 진핵 세포에 대해 내인성인 FGE는 공통 서열 내에서 Cys의 포밀글라이신 잔기(fGly)로의 전환을 촉매한다. 도 1, 패널 B는 부위 특이적으로 접합된 ADC를 생성하기 위하여 하이드라지노-아이소-피쳇-슈펭글러(HIPS) 링커 및 페이로드와 반응된 알데하이드 모이어티(항체당 2개)를 운반하는 항체를 나타낸다. 도 1, 패널 C는 안정한 C-C 결합을 생성하기 위하여 중간체 하이드라조늄 이온에 이어서 친핵성 인돌과의 분자내 알킬화를 통하여 진행되는 HIPS 화학을 도시한다.
도 2는 본 개시내용의 실시양태에 따른, 투여 후 5일차에 래트에 있는 림프구 집단의 그래프를 나타낸다.
도 3은 본 개시내용의 실시양태에 따른, 투여 후 5일차에 래트에서 순환하는 아스파테이트 아미노 전이효소(AST) 수준의 그래프를 나타낸다.
도 4는 본 개시내용의 실시양태에 따른, 투여 후 5일차에 래트에서 순환하는 알라닌 아미노 전이효소(ALT) 수준의 그래프를 나타낸다.
도 5는 본 개시내용의 실시양태에 따른, 투여 후 5일차에 래트에 있는 적혈구 수의 그래프를 나타낸다.
도 6은 본 개시내용의 실시양태에 따른, 투여 후 5일차에 래트에 있는 헤모글로빈 수준의 그래프를 나타낸다.
도 7은 본 개시내용의 실시양태에 따른, 투여 후 5일차에 래트에 있는 헤마토크리트 수준의 그래프를 나타낸다.
도 8은 본 개시내용의 실시양태에 따른, 7일차에 단일 용량의 ADC를 사용한 제1 Granta 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다.
도 9는 본 개시내용의 실시양태에 따른, 0일차에 단일 2 mg/kg 용량의 ADC를 사용한 제2 Granta 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다. 내부 태그 58Q 및 91N을 사용하면 베도틴 접합체와 비교하여 절반의 DAR로 우수한 효능을 제공한다.
도 10은 본 개시내용의 실시양태에 따른, 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여받은 래트에서 순환하는 호중구 수의 그래프를 나타낸다.
도 11은 본 개시내용의 실시양태에 따른, 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여받은 래트에서 순환하는 단핵구 수의 그래프를 나타낸다.
도 12는 본 개시내용의 실시양태에 따른, 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여받은 래트에서 적혈구 수의 그래프를 나타낸다.
도 13은 본 개시내용의 실시양태에 따른, 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여받은 래트에서 헤모글로빈 수준의 그래프를 나타낸다.
도 14는 본 개시내용의 실시양태에 따른, 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여받은 래트에서 헤마토크릿 수준의 그래프를 보여준다.
도 15는 본 개시내용의 실시양태에 따른, 래트 교차 반응성 넥틴-4 ADC를 반복적으로 투여받은 래트에서 임상 관찰의 그래프를 나타낸다. 화살표는 투여일을 나타낸다. 화합물 5 접합체를 투여받은 동물에서는 관찰이 없었던 반면, 베도틴 투여 군의 임상 관찰은 17일차에 평균 2.5였으며 동물의 사망으로 최고점에 달하였다.
도 16a는 알데하이드 태깅 Ig 폴리펩타이드의 생성을 위한 가능한 변형 부위를 나타내는 부위맵을 도시한다. 상부 서열은 IgG1 경쇄 폴리펩타이드(서열 식별 번호:1)의 보존된 영역의 아미노산 서열이고 Ig 경쇄에서 가능한 변형 부위를 나타내며, 하부 서열은 Ig 중쇄 폴리펩타이드(서열 식별 번호:2)(GenBank 수탁 번호 제AAG00909호)의 보존된 영역의 아미노산 서열이고 Ig 중쇄에서 가능한 변형 부위를 나타낸다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 16b 내지 도 16c는 알데하이드 태그가 면역글로불린 중쇄에서 제공될 수 있는 변형 부위를 나타내는, IgG1(서열 식별 번호:3; GenBank P01857.1), IgG2(서열 식별 번호:4; GenBank P01859.2), IgG3(서열 식별 번호:5; GenBank P01860.2), IgG4(서열 식별 번호:6; GenBank AAB59394.1) 및 IgA(서열 식별 번호:7; GenBank AAAT74070)에 대한 호모 사피엔스 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 정렬을 묘사한다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 전체 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 16d는 알데하이드 태그가 면역글로불린 경쇄에서 제공될 수 있는 변형 부위를 나타내는 면역글로불린 경쇄 불변 영역의 정렬을 도시한다. Seq1=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75031.1; 서열 식별 번호:8. Seq2=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank BAC0168.1; 서열 식별 번호:9. Seq3=호모 사피엔스 람다 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75033; 서열 식별 번호:10. Seq4=무스 무스쿨루스 경쇄 불변 영역; GenBank AAB09710.1; 서열 식별 번호:11. Seq5=라투스 노르베기쿠스 경쇄 불변 영역; GenBank AAD10133; 서열 식별 번호:12.
도 17은 0일차에 열거된 항CD30 ADC의 단일 정맥내 용량을 사용한 L-82 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL4 화합물 8(RED-601)은 내부 91N 태그를 사용하며 Adcetris와 비교하여 절반의 페이로드 용량을 전달한다. 50% ADC 투여(1.5 mg/kg) 및 동일한 투여(3 mg/kg)에서 VH4/VL4 화합물 8은 Adcetris와 비교하여 동등하게 효능적이었으며, 모든 군은 8마리의 마우스/군 중 8마리의 완전 반응을 나타내었다. VH4/VL4 항체는 단독으로 최소 활성을 가졌다.
도 18은 0일차에 나열된 항CD30 ADC를 단일 정맥내 투여한 Karpas 299 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL4 화합물 8(RED-601)은 내부 91N 태그를 사용하며 Adcetris와 비교하여 절반의 페이로드 용량을 전달한다. 50% ADC 투여(1.5 mg/kg) 및 동일한 투여(3 mg/kg)에서 VH4/VL4 화합물 8은 Adcetris와 비교하여 5/6 및 6/6의 완전 반응을 제공하였으며, Adcetris는 VH4/VL4 화합물 8과 비교하여 페이로드 양이 2배임에도 불구하고 6/6의 완전 반응을 제공하였다. VH4/VL4 항체는 단독으로 최소 활성을 가졌다.
도 19는 0일차에 나열된 항넥틴-4 ADC의 단일 2.5 또는 7.5 mg/kg 정맥내 용량을 사용한 NCI-H1781 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL1 화합물 8(RED-601) 및 VH4/VL5 화합물 8은 모두 내부 91N 태그를 사용하며 Padcev와 비교하여 절반의 페이로드 용량을 전달한다. 동종형 대조 ADC는 최소 활성을 가졌다.
도 20은 다회 용량 비GLP 래트 독성학 연구 #2로부터 유래한 쥐 혈장 검체의 독성동태학적 분석을 나타낸다. 분석은 투여 수준을 확인하고 엔포투맙 베도틴 접합체에 비해 엔포투맙 화합물 5 접합체의 개선된 생체내(in vivo) 안정성을 나타낸다.
"알킬"은 1 내지 10개의 탄소 원자, 예컨대, 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개, 또는 1 내지 4개, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 1가의 포화 지방족 하이드로카빌기를 지칭한다. 이러한 용어는, 예로서, 선형 또는 분지형 하이드로카빌기, 예컨대, 메틸(CH3-), 에틸(CH3CH2-), n-프로필(CH3CH2CH2-), 아이소프로필((CH3)2CH-), n-뷰틸(CH3CH2CH2CH2-), 아이소뷰틸((CH3)2CHCH2-), sec-뷰틸((CH3)(CH3CH2)CH-), t-뷰틸((CH3)3C-), n-뷰틸(CH3CH2CH2CH2CH2-), 및 네오펜틸((CH3)3CCH2-)을 포함한다.
용어 "치환된 알킬"은 알킬 사슬의 하나 이상의 탄소 원자(C1 탄소 원자 제외)가 헤테로원자, 예컨대, -O-, -N-, -S-, -S(O)n-(여기서 n은 0 내지 2), -NR-(여기서 R은 수소 또는 알킬)로 선택적으로 대체되었으며 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 싸이오케토, 카복실, 카복시알킬, 싸이오아릴옥시, 싸이오헤테로아릴옥시, 싸이오헤테로사이클로옥시, 싸이올, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 -NRaRb로 구성되는 군으로부터 선택되는 1개 내지 5개의 치환기를 갖는 본원에서 정의되는 알킬기를 지칭히며, R’ 및 R”는 동일하거나 상이할 수 있으며 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 사이클로알킬, 알케닐, 사이클로알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭으로부터 선택된다.
"알킬렌"은, 직쇄형 또는 분지형이며 선택적으로 -O-, -NR10-, -NR10C(O)-, -C(O)NR10- 등으로부터 선택되는 1개 이상의 기로 차단되는 바람직하게는 1 내지 6개, 더 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 2가 지방족 하이드로카빌기를 지칭한다. 이러한 용어는, 예로서, 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-CH2CH2-), n-프로필렌(-CH2CH2CH2-), 아이소-프로필렌(-CH2CH(CH3)-), (-C(CH3)2CH2CH2-), (-C(CH3)2CH2C(O)-), (-C(CH3)2CH2C(O)NH-), (-CH(CH3)CH2-) 등을 포함한다.
"치환된 알킬렌"은 하기 "치환된"의 정의에서 탄소에 대해 기재된 바와 같은 치환체로 대체된 1 내지 3개의 수소를 갖는 알킬렌기를 지칭한다.
용어 "알칸"은, 본 명세서에 정의된 바와 같은, 알킬기 및 알킬렌기를 지칭한다.
용어 "알킬아미노알킬", "알킬아미노알케닐" 및 "알킬아미노알키닐"은 R'NHR"-기를 지칭하고, R'은 알킬기 본원에서 정의되는 바와 같으며, R"은 본원에서 정의되는 바와 같은 알킬렌, 알케닐렌 또는 알키닐렌기이다.
용어 "알크아릴" 또는 "아르알킬"은 -알킬렌-아릴 및 -치환된 알킬렌-아릴기를 지칭하며, 알킬렌, 치환된 알킬렌 및 아릴은 본원에서 정의된다.
"알콕시"는 -O-알킬기를 지칭하되, 여기서 알킬은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 알콕시는, 예로서, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 아이소프로폭시, n-부톡시, t-부톡시, sec-부톡시, n-펜톡시 등을 포함한다. 용어 "알콕시"는 또한 알켄일-O-, 사이클로알킬-O-, 사이클로알켄일-O- 및 알킨일-O-기를 지칭하되, 여기서 알켄일, 사이클로알킬, 사이클로알켄일 및 알킨일은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "치환된 알콕시"는 치환된 알킬-O-, 치환된 알켄일-O-, 치환된 사이클로알킬-O-, 치환된 사이클로알켄일-O-, 및 치환된 알킨일-O-기를 지칭하되, 여기서 치환된 알킬, 치환된 알켄일, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알켄일 및 치환된 알킨일은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "알콕시아미노"는 -NH-알콕시기를 지칭하되, 여기서 알콕시는 본 명세서에 정의되어 있다.
용어 "할로알콕시"는, 알킬기 상의 1개 이상의 수소 원자가 할로기로 치환된 알킬-O-기를 지칭하며, 예로서, 트라이플루오로메톡시 등과 같은 기를 포함한다.
용어 "할로알킬"은, 알킬기 상의 1개 이상의 수소 원자가 할로기로 치환된, 위에서 기재된 치환된 알킬기를 지칭한다. 이러한 기의 예는, 제한 없이, 플루오로알킬기, 예컨대, 트라이플루오로메틸, 다이플루오로메틸, 트라이플루오로에틸 등을 포함한다.
용어 "알킬알콕시"는 -알킬렌-O-알킬, 알킬렌-O-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-O-알킬 및 치환된 알킬렌-O-치환된 알킬기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌 및 치환된 알킬렌은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "알킬티오알콕시"는 -알킬렌-S-알킬, 알킬렌-S-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-S-알킬 및 치환된 알킬렌-S-치환된 알킬기를 지칭하되, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌 및 치환된 알킬렌은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"알켄일"은 2개 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 갖고, 적어도 1개, 바람직하게는 1개 내지 2개의 이중 결합 불포화 부위를 갖는 직쇄형 또는 분지형 하이드로카빌기를 지칭한다. 이러한 용어는, 예로서, 바이-바이닐, 알릴 및 뷰트-3-엔-1-일을 포함한다. 이 용어에는 시스 및 트랜스 이성질체 또는 이들 이성질체의 혼합물이 포함된다.
용어 "치환된 알케닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 싸이오케토, 카복실, 카복실알킬, 싸이오아릴옥시, 싸이오헤테로아릴옥시, 싸이오헤테로사이클로옥시, 싸이올, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기 또는 1 내지 3개의 치환기를 갖는 본원에서 정의되는 바와 같은 알케닐기를 지칭한다.
"알킨일"은 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 3개의 탄소 원자를 갖고 삼중 결합 불포화의 적어도 1개, 바람직하게는 1 내지 2개 부위를 갖는 직쇄형 또는 분지형 1가 하이드로카빌기를 지칭한다. 이러한 알키닐기의 예는 아세틸레닐(-C≡CH) 및 프로파길(-CH2C≡CH)을 포함한다.
용어 "치환된 알키닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 싸이오케토, 카복실, 카복실알킬, 싸이오아릴옥시, 싸이오헤테로아릴옥시, 싸이오헤테로사이클로옥시, 싸이올, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기 또는 1 내지 3개의 치환기를 갖는 본원에서 정의되는 바와 같은 알키닐를 지칭한다.
"알킨일옥시"는 -O-알킨일기를 지칭하되, 여기서 알킨일은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 알킨일옥시는, 예로서, 에틴일옥시, 프로핀일옥시 등을 포함한다.
"아실"은 H-C(O)-, 알킬-C(O)-, 치환된 알킬-C(O)-, 알케닐-C(O)-, 치환된 알케닐-C(O)-, 알키닐-C(O)-, 치환된 알키닐-C(O)-, 사이클로알킬-C(O)-, 치환된 사이클로알킬-C(O)-, 사이클로알케닐-C(O)-, 치환된 사이클로알케닐-C(O)-, 아릴-C(O)-, 치환된 아릴-C(O)-, 헤테로아릴-C(O)-, 치환된 헤테로아릴-C(O)-, 헤테로사이클릴-C(O)- 및 치환된 헤테로사이클릴-C(O)-기를 지칭하며, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본원에서 정의되는 바와 같다. 예를 들어, 아실은 "아세틸"기 CH3C(O)-를 포함한다.
"아실아미노"는 -NR20C(O)알킬, -NR20C(O)치환된 알킬, N R20C(O)사이클로알킬, -NR20C(O)치환된 사이클로알킬, -NR20C(O)사이클로알켄일, -NR20C(O)치환된 사이클로알케닐, -NR20C(O)알케닐, -NR20C(O)치환된 알케닐, -NR20C(O)알키닐, -NR20C(O)치환된 알키닐, -NR20C(O)아릴, -NR20C(O)치환된 아릴, -NR20C(O)헤테로아릴, -NR20C(O)치환된 헤테로아릴, -NR20C(O)헤테로사이클릭 및 -NR20C(O)치환된 헤테로사이클릭기를 지칭하며, R20은 수소 또는 알킬이고 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본원에서 정의되는 바와 같다.
"아미노카보닐" 또는 용어 "아미노아실"은 -C(O)NR21R22기를 지칭하며, R21 및 R22는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭으로 구성되는 군으로부터 선택되며 R21 및 R22는 이에 결합되는 질소와 함께 선택적으로 결합되어 헤테로사이클릭 또는 치환된 헤테로사이클릭기를 형성하며, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본원에서 정의되는 바와 같다.
"아미노카보닐아미노"는 -NR21C(O)NR22R23기를 지칭하되, 여기서 R21, R22 및 R23은 독립적으로 수소, 알킬, 아릴 또는 사이클로알킬로부터 선택되거나, 또는 2개의 R기는 연결되어 헤테로사이클릴기를 형성한다.
용어 "알콕시카보닐아미노"는 -NRC(O)OR기를 지칭하되, 여기서 각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴이고, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "아실옥시"는 알킬-C(O)O-, 치환된 알킬-C(O)O-, 사이클로알킬-C(O)O-, 치환된 사이클로알킬-C(O)O-, 아릴-C(O)O-, 헤테로아릴-C(O)O- 및 헤테로사이클릴-C(O)O-기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아미노설포닐"은 -SO2NR21R22기를 지칭하되, 여기서 R21 및 R22는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로환식, 치환된 헤테로환식으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R21과 R22는 선택적으로 이들에 결합된 질소와 함께 연결되어 헤테로환식 또는 치환된 헤테로환식 기를 형성하고, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로환식 및 치환된 헤테로환식은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"설포닐아미노"는 -NR21SO2R22기를 지칭하되, 여기서 R21 및 R22는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로환식 및 치환된 헤테로환식으로 이루어진 군으로부터 선택되고, R21과 R22는 이들에 결합된 원자들과 함께 연결되어 헤테로환식 또는 치환된 헤테로환식 기를 형성하고, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로환식 및 치환된 헤테로환식은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아릴" 또는 "Ar"은 부착 지점이 방향족 고리의 원자를 통하는 경우 단일 고리(예컨대, 페닐기에 존재함) 또는 축합 고리가 방향족일 수 있거나 또는 방향족이 아닐 수 있는 다중 축합 고리를 갖는 고리 시스템(이러한 방향족 고리 시스템의 예는 나프틸, 안트릴 및 인단일을 포함함)을 갖는 6개 내지 18개의 탄소 원자의 1가 방향족 탄소환식기를 지칭한다. 이 용어는, 예로서, 페닐 및 나프틸을 포함한다. 아릴 치환체에 대한 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 이러한 아릴기는, 아실옥시, 하이드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알켄일, 알킨일, 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알켄일, 치환된 알킨일, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알켄일, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알크아릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카복실, 카복실알킬, 사이아노, 할로겐, 나이트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 트라이할로메틸로부터 선택된, 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있다.
"아릴옥시"는 -O-아릴기를 지칭하되, 여기서 아릴은 본 명세서에 정의된 바와 같되, 예로서, 또한 본 명세서에 정의된 바와 같은 선택적으로 치환된 아릴기를 포함하는, 페녹시, 나프톡시 등을 포함한다.
"아미노"는 -NH2기를 지칭한다.
용어 "치환된 아미노"는 -NRR기를 지칭하되, 여기서 각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단 적어도 1개의 R은 수소가 아니다.
용어 "아지도"는 -N3기를 지칭한다.
"카복실", "카복시" 또는 "카복실레이트"는 -CO2H 또는 이의 염을 지칭한다.
"카복실 에스터" 또는 "카복시 에스터" 또는 용어 "카복시알킬" 또는 "카복시알킬"은 -C(O)O-알킬, -C(O)O-치환된 알킬, -C(O)O-알케닐, -C(O)O-치환된 알케닐, -C(O)O-알키닐, -C(O)O-치환된 알키닐, -C(O)O-아릴, -C(O)O-치환된 아릴, -C(O)O-사이클로알킬, -C(O)O-치환된 사이클로알킬, -C(O)O-사이클로알케닐, -C(O)O-치환된 사이클로알케닐, -C(O)O-헤테로아릴, -C(O)O-치환된 헤테로아릴, -C(O)O-헤테로사이클릭 및 -C(O)O-치환된 헤테로사이클릭기를 지칭하며, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본원에서 정의되는 바와 같다.
"(카복실 에스터)옥시" 또는 "카보네이트"는 -O-C(O)O-알킬, -O-C(O)O-치환된 알킬, -O-C(O)O-알케닐, -O-C(O)O-치환된 알케닐, -O-C(O)O-알키닐, -O-C(O)O-치환된 알키닐, -O-C(O)O-아릴, -O-C(O)O-치환된 아릴, -O-C(O)O-사이클로알킬, -O-C(O)O-치환된 사이클로알킬, -O-C(O)O-사이클로알케닐, -O-C(O)O-치환된 사이클로알케닐, -O-C(O)O-헤테로아릴, -O-C(O)O-치환된 헤테로아릴, -O-C(O)O-헤테로사이클릭 및 -O-C(O)O-치환된 헤테로환식기를 지칭하며, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본원에서 정의되는 바와 같다.
"사이아노" 또는 "나이트릴"은 -CN기를 지칭한다.
"사이클로알킬"은 융합된, 브리지된 및 스피로 고리계를 포함하는 단일 또는 다중 환식 고리를 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 환식 알킬기를 지칭한다. 적합한 사이클로알킬기의 예는, 예를 들어, 아다만틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로옥틸 등을 포함한다. 이러한 사이클로알킬기는, 예로서, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로옥틸 등과 같은 단일 고리 구조, 또는 아다만타닐 등과 같은 다중 고리 구조를 포함한다.
용어 "치환된 사이클로알킬"은 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 싸이오케토, 카복실, 카복실알킬, 싸이오아릴옥시, 싸이오헤테로아릴옥시, 싸이오헤테로사이클로옥시, 싸이올, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기 또는 1 내지 3개의 치환기를 갖는 사이클로알킬기를 지칭한다.
"사이클로알켄일"은 단일 또는 다중 고리를 갖고 적어도 1개의 이중 결합, 바람직하게는 1 내지 2개의 이중 결합을 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 비방향족 환식 알킬기를 지칭한다.
용어 "치환된 사이클로알케닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 케토, 싸이오케토, 카복실, 카복실알킬, 싸이오아릴옥시, 싸이오헤테로아릴옥시, 싸이오헤테로사이클로옥시, 싸이올, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기 또는 1 내지 3개의 치환기를 갖는 사이클로알케닐기를 지칭한다.
"사이클로알킨일"은 단일 또는 다중 고리를 가지며 적어도 하나의 삼중 결합을 갖는 5개 내지 10개의 탄소 원자의 비방향족 사이클로알킬기를 지칭한다.
"사이클로알콕시"는 -O-사이클로알킬을 지칭한다.
"사이클로알켄일옥시"는 -O-사이클로알켄일을 지칭한다.
"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 아이오도를 지칭한다.
"하이드록시" 또는 "하이드록실"은 -OH기를 지칭한다.
"헤테로아릴"은 1 내지 15개의 탄소 원자, 예컨대, 1 내지 10개의 탄소 원자와 고리 내에 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 10개의 헤테로원자를 가진 방향족 기를 지칭한다. 이러한 헤테로아릴기는 단일 고리(예컨대, 피리딘일, 이미다졸릴 또는 퓨릴) 또는 (예를 들어, 인돌리진일, 퀴놀린일, 벤조퓨란, 벤즈아미다졸릴 또는 벤조티엔일과 같은 기에서와 같이) 고리계 내 다중 축합 고리를 가질 수 있고, 여기서, 고리계 내 적어도 하나의 고리는 방향족이다. 원자가 요건을 충족시키기 위해, 이러한 헤테로아릴 고리 내 임의의 헤테로원자는 H 또는 치환체기, 예컨대, 알킬기 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 다른 치환체에 결합될 수 있거나 또는 결합되지 않을 수 있다. 소정의 실시형태에 있어서, 헤테로아릴기 중의 질소 및/또는 황 고리 원자(들)는 선택적으로 산화되어 N-옥사이드(N→O), 설피닐 또는 설포닐 모이어티를 제공한다. 이 용어는, 예로서, 피리딘일, 피롤릴, 인돌릴, 티오페닐 및 퓨란일을 포함한다. 헤테로아릴 치환기에 대한 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 이러한 헤테로아릴기는 아실옥시, 하이드록시, 싸이올, 아실, 알킬, 알콕시, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알케닐, 치환된 알키닐, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알케닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알크아릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카복실, 카복실알킬, 사이아노, 할로겐, 나이트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 싸이오아릴옥시, 싸이오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴 및 트라이할로메틸로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기 또는 1 내지 3개의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "헤테로아르알킬"은 -알킬렌-헤테로아릴기를 지칭하되, 여기서 알킬렌 및 헤테로아릴은 본 명세서에 정의되어 있다. 이 용어는, 예로서, 피리딜메틸, 피리딜에틸, 인돌릴메틸 등을 포함한다.
"헤테로아릴옥시"는 -O-헤테로아릴을 지칭한다.
"헤테로환", "헤테로환식", "헤테로사이클로알킬" 및 "헤테로사이클릴"은, 융합된, 브리지된 및 스피로 고리계를 포함하는 단일 고리 또는 다중 축합 고리를 갖고 1 내지 10개의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 20개의 고리 원자를 갖는 포화 또는 불포화기를 지칭한다. 이들 고리 원자는 질소, 황 또는 산소로부터 선택되되, 여기서, 융합된 고리계에서, 고리 중 하나 이상은 사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴일 수 있고, 단 부착점은 비-방향족 고리를 통한다. 소정의 실시형태에 있어서, 헤테로환식 기 중의 질소 및/또는 황 원자(들)은 선택적으로 산화되어 N-옥사이드, -S(O)- 또는 -SO2- 모이어티를 제공한다. 원자가 요건을 충족시키기 위해, 이러한 헤테로환식 고리 내의 임의의 헤테로원자는 하나 이상의 H 또는 하나 이상의 치환기(들), 예를 들어, 알킬기 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 다른 치환기에 결합될 수 있거나 또는 결합되지 않을 수 있다.
헤테로환 및 헤테로아릴의 예는, 아제티딘, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 인돌리진, 아이소인돌, 인돌, 다이하이드로인돌, 인다졸, 퓨린, 퀴놀리진, 아이소퀴놀린, 퀴놀린, 프탈라진, 나프틸피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프테리딘, 카바졸, 카볼린, 페난트리딘, 아크리딘, 페난트롤린, 아이소티아졸, 페나진, 아이소옥사졸, 페녹사진, 페노티아진, 이미다졸리딘, 이미다졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌린, 프탈이미드, 1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린, 4,5,6,7-테트라하이드로벤조[b]티오펜, 티아졸, 티아졸리딘, 티오펜, 벤조[b]티오펜, 몰폴린일, 티오몰폴린일(티아몰폴린일로도 지칭됨), 1,1-다이옥소티오몰폴린일, 피페리딘일, 피롤리딘, 테트라하이드로퓨란일 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
헤테로사이클릭 치환기에 대한 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 이러한 헤테로사이클릭기는 선택적으로 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 사이아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 싸이오케토, 카복실, 카복실알킬, 싸이오아릴옥시, 싸이오헤테로아릴옥시, 싸이오헤테로사이클로옥시, 싸이올, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 나이트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 융합된 헤테로사이클로부터 선택되는 1개 내지 5개 또는 1개 내지 3개의 치환기로 치환될 수 있다.
"헤테로사이클릴옥시"는 -O-헤테로사이클릴기를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클릴티오"는 헤테로환식-S-기를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클렌"은 본 명세서에 정의된 바와 같은 헤테로환으로부터 형성된 다이라디칼기를 지칭한다.
용어 "하이드록시아미노"는 -NHOH기를 지칭한다.
"나이트로"는 -NO2기를 지칭한다.
"옥소"는 원자(=O)를 지칭한다.
"설폰일"은 SO2-알킬, SO2-치환된 알킬, SO2-알켄일, SO2-치환된 알켄일, SO2-사이클로알킬, SO2-치환된 사이클로알킬, SO2-사이클로알켄일, SO2-치환된 사이클로알켄일, SO2-아릴, SO2-치환된 아릴, SO2-헤테로아릴, SO2-치환된 헤테로아릴, SO2-헤테로환식 및 SO2-치환된 헤테로환식기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로환식 및 치환된 헤테로환식은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 설포닐은, 예로서, 메틸-SO2-, 페닐-SO2- 및 4-메틸페닐-SO2-를 포함한다.
"설폰일옥시"는 -OSO2-알킬, OSO2-치환된 알킬, OSO2-알켄일, OSO2-치환된 알켄일, OSO2-사이클로알킬, OSO2-치환된 사이클로알킬, OSO2-사이클로알켄일, OSO2-치환된 사이클로알켄일, OSO2-아릴, OSO2-치환된 아릴, OSO2-헤테로아릴, OSO2-치환된 헤테로아릴, OSO2-헤테로환식 및 OSO2 치환된 헤테로환식기를 지칭하되, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 치환된 사이클로알켄일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로환식 및 치환된 헤테로환식은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "아미노카보닐옥시"는 -OC(O)NRR기를 지칭하며, 각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릭이며, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭은 본원에서 정의되는 바와 같다.
"티올"은 -SH기를 지칭한다.
"티옥소" 또는 용어 "티오케토"는 원자(=S)를 지칭한다.
"알킬티오" 또는 용어 "티오알콕시"는 -S-알킬기를 지칭하되, 여기서 알킬은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 소정의 실시형태에 있어서, 황은 -S(O)-로 산화될 수 있다. 설폭사이드는 하나 이상의 입체이성질체로서 존재할 수 있다.
용어 "치환된 티오알콕시"는 -S-치환된 알킬기를 지칭한다.
용어 "티오아릴옥시"는 아릴-S-기를 지칭하되, 여기서 아릴기는 본 명세서에 정의된 바와 같으며, 또한 본 명세서에 정의된 선택적으로 치환된 아릴기를 포함한다.
용어 "티오헤테로아릴옥시"는 헤테로아릴-S-기를 지칭하되, 여기서 헤테로아릴기는 본 명세서에 정의된 바와 같으며, 또한 본 명세서에 정의된 바와 같은 선택적으로 치환된 아릴기를 포함한다.
용어 "티오헤테로사이클로옥시"는 헤테로사이클릴-S-기를 지칭하되, 여기서 헤테로사이클릴기는 또한 본 명세서에 정의된 바와 같으며, 또한 본 명세서에 정의된 바와 같은 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴기를 포함한다.
본 명세서의 개시내용에 추가하여, 용어 "치환된"은, 특정 기 또는 라디칼을 변형시키는데 사용되는 경우, 또한 특정된 기 또는 라디칼의 1개 이상의 수소 원자가 각각 서로 독립적으로 아래에 정의된 바와 같은 동일하거나 상이한 치환체 기로 대체됨을 의미할 수 있다.
본원에서 개별 용어와 관련하여 개시되는 기에 더하여, 특정 기 또는 라디칼에 있는 포화 탄소 원자상에 있는 하나 이상의 수소(단일 탄소 상에 있는 임의의 2개의 수소가 =O, =NR70, =N-OR70, =N2 또는 =S로 대체될 수 있음)를 치환하기 위한 치환기는, 달리 명시되지 않는 한, -R60, 할로, =O, -OR70, -SR70, -NR80R80, 트라이할로메틸, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, -N3, -SO2R70, -SO2O-M+, -SO2OR70, -OSO2R70, -OSO2O-M+, -OSO2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)O-M+, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)O-M+, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, R60은 선택적으로 치환된 알킬, 사이클로알킬, 헤테로알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬이며, 각 R70은 독립적으로 수소 또는 R60이고, 각 R80은 독립적으로 R70이거나 대안적으로, 2개의 R80은 결합된 질소 원자와 함께, O, N 및 S로 구성되는 군으로부터 선택되는 1개 내지 4개의 동일하거나 상이한 추가 헤테로원자를 선택적으로 포함할 수 있는 5원, 6원 또는 7원 헤테로사이클로알킬을 형성하며, N은 -H 또는 C1-C3 알킬 치환을 가질 수 있고, 각각의 M+는 순 단일 양전하를 갖는 반대 이온이다. 각각의 M+는 독립적으로, 예를 들어, 알칼리 이온, 예컨대, K+, Na+, Li+; 암모늄 이온, 예컨대, +N(R60)4; 또는 알칼리토류 이온, 예컨대, [Ca2+]0.5, [Mg2+]0.5, 또는 [Ba2+]0.5이다("아래첨자 0.5는 이러한 2가 알칼리토류 이온에 대한 카운터 이온들 중 하나가 본 발명의 화합물의 이온화된 형태일 수 있고 다른 것은 클로라이드와 같은 전형적인 카운터 이온이거나, 또는 본 명세서에 개시된 2종의 이온화된 화합물이 그러한 2가 알칼리토류 이온에 대한 카운터 이온으로서 작용할 수 있거나, 또는 본 발명의 이중으로 이온화된 화합물이 이러한 2가 알칼리토류 이온에 대한 카운터 이온으로서 작용할 수 있는 것을 의미한다). 구체예로서, -NR80R80은 -NH2, -NH-알킬, N-피롤리디닐, N-피페라지닐, 4N-메틸-피페라진-1-일 및 N-모폴리닐을 포함하는 것을 의미한다.
본원의 개시에 더하여, "치환된" 알켄, 알카인, 아릴 및 헤테로아릴기에 있는 불포화 탄소 원자상에 있는 수소에 대한 치환기는, 달리 명시되지 않는 한, -R60, 할로, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트라이할로메틸, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, -N3, -SO2R70, -SO3 -M+, -SO3R70, -OSO2R70, -OSO3 -M+, -OSO3R70, -PO3 -2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2 -M+, -CO2R70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2 -M+, -OCO2R70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, R60, R70, R80 및 M+는 이전에 정의된 바와 같으며, 단, 치환된 알켄 또는 알카인의 경우, 치환기는 -O-M+, -OR70, -SR70 또는 -S-M+가 아니다.
본원에서 개별 용어와 관련하여 개시되는 기에 더하여, "치환된" 헤테로알킬 및 사이클로헤테로알킬에 있는 수소 또는 질소에 대한 치환기는, 달리 명시되지 않는 한, -R60, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트라이할로메틸, -CF3, -CN, -NO, -NO2, -S(O)2R70, -S(O)2O-M+, -S(O)2OR70, -OS(O)2R70, -OS(O)2O-M+, -OS(O)2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)(OR70), -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70C(O)OR70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이며, R60, R70, R80 및 M+는 이전에 정의된 바와 같다.
본 명세서에서의 개시내용에 부가해서, 소정의 실시양태에서, 치환되는 기는 1, 2, 3 또는 4개의 치환체, 1, 2 또는 3개의 치환체, 1 또는 2개의 치환체, 또는 1개의 치환체를 갖는다.
상기 정의된 모든 치환된 기에서, 자체에 대한 추가의 치환기를 가지는 치환기를 정의함으로써 이루어진 중합체(예컨대, 치환된 아릴기로 자체 치환되는 치환체로서 치환된 아릴기를 갖는 치환된 아릴, 이것은 추가로 치환된 아릴기 등에 의해 치환됨)는 본 명세서에 포함되는 것으로 의도되지 않는다. 이러한 경우에, 이러한 치환의 최대수는 3이다. 예를 들어, 본 명세서에서 구체적으로 상정되는 치환된 아릴기의 연속적인 치환은 치환된 아릴-(치환된 아릴)-치환된 아릴로 한정된다.
달리 나타내지 않는 한, 본 명세서에 명백히 정의되지 않은 치환체의 명명법은 작용기에 이어서 부착점 쪽으로 인접한 작용기의 말단 부분을 명명함에 의해 발생한다. 예를 들어, 치환체 "아릴알킬옥시카보닐"은 (아릴)-(알킬)-O-C(O)-기를 지칭한다.
1개 이상의 치환체를 함유하는 본 명세서에 개시된 기 중 어느 하나에 관하여, 물론, 이러한 기가 입체적으로 비현실적이고/이거나 합성에 의해 비-실현가능한 임의의 치환 또는 치환 패턴을 함유하지 않는 것이 이해된다. 또한, 본 발명의 화합물은 이들 화합물의 치환으로부터 발생하는 모든 입체화학 이성질체를 포함한다.
용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 환자, 예컨대, 포유류에게 투여하는 것이 허용되는 염 (주어진 투약 처방에 대한 허용되는 포유류 안전성을 갖는 카운터이온을 가진 염)을 의미한다. 그러한 염은 약제학적으로 허용 가능한 무기 또는 유기 염기로부터 그리고 약제학적으로 허용 가능한 무기 또는 유기 산으로부터 유래될 수 있다. "약제학적으로 허용 가능한 염"은, 화합물의 제약학적으로 허용되는 염을 지칭하고, 그 염들은 당업계에 잘 알려져 있는 다양한 유기 및 무기 카운터 이온으로부터 유래되고, 단지 예로써, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 등을 포함하고; 분자가 염기성 작용기를 함유할 때, 유기 또는 무기 산의 염, 예컨대, 염산염, 브로민화수소산염, 폼산염, 타르타르산염, 베실레이트, 메실레이트, 아세테이트, 말레에이트, 옥살레이트 등을 포함한다.
용어 "이의 염"은 산의 양성자가 양이온, 예컨대, 금속 양이온 또는 유기 양이온 등에 의해 대체될 때 형성된 화합물을 의미한다. 해당하는 경우, 염은 약제학적으로 허용 가능한 염이지만, 이것은 환자에게 투여하기 위해 의도되지 않은 중간체 화합물의 염에 대해서는 필요하지 않다. 예로써, 본 발명의 화합물의 염은 화합물이 무기 또는 유기 산에 의해 양자화되어 양이온을 형성하는 것들을 포함하고, 이때 무기 또는 유기산의 접합체 염기는 염의 음이온 성분이다.
"용매화물"은 용매 분자와 용질의 분자 또는 이온과의 조합에 의해 형성된 복합체를 지칭한다. 용매는 유기 화합물, 무기 화합물 또는 이들 둘 다의 혼합물일 수 있다. 용매의 몇몇 예는, 메탄올, N,N-다이메틸폼아마이드, 테트라하이드로퓨란, 다이메틸설폭사이드 및 물을 포함한다. 용매가 물일 때, 형성된 용매화물은 수화물이다.
"입체이성질체" 및 "입체이성질체"들은 동일한 원자 연결을 갖지만 공간에 있어서 상이한 원자 배열을 갖는 화합물을 지칭한다. 입체이성질체는 시스-트랜스 이성질체, E 및 Z 이성질체, 거울상이성질체 및 부분입체이성질체를 포함한다.
"호변이성질체"는 원자들의 전자 결합에서만 그리고/또는 양자의 위치에서만 상이한 분자의 대체 형태, 예컨대 엔올-케토 및 이민-엔아민 호변이성질체, 또는 -N=C(H)-NH-고리 원자 배열을 함유하는 헤테로아릴기, 예컨대, 피라졸, 이미다졸, 벤즈이미다졸, 트라이아졸 및 테트라졸의 호변이성질체 형태를 지칭한다. 당업자라면 다른 호변이성질체 고리 원자 배열이 가능한 것을 인지할 것이다.
용어 "또는 이의 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체"는 염, 용매화물 및 입체이성질체, 예컨대, 본 발명의 화합물의 입체이성질체의 약제학적으로 허용 가능한 염의 용매화물의 모든 치환을 포함하는 것으로 의도됨이 이해될 것이다.
용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 임의의 동종형(예를 들어, IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4), IgE, IgD, IgA, IgM 등), 전체 항체(예를 들어, 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드의 2개의 이량체로 차례로 구성되는 사량체로 구성되는 항체); 단쇄 항체(예를 들어, scFv); Fab, Fv, scFv 및 Fd 단편을 포함하나 이에 제한되지 않는 항원에 대한 특이적 결합을 유지하는 항체의 단편(예를 들어, 전체 또는 단쇄 항체의 단편), 키메라 항체, 인간화 항체, 단쇄 항체 및 항체의 항원 결합 부분 및 비항체 단백질을 포함하는 융합 단백질의 항체 또는 면역글로불린을 포함한다. 항체는 예를 들어, 방사성 동위원소, 검출 가능한 생성물을 생성하는 효소, 형광 단백질 등을 사용하여 검출 가능하게 표지될 수 있다. 항체는 특이적 결합 쌍의 구성원, 예를 들어, 비오틴(비오틴-아비딘 특이적 결합 쌍의 구성원) 등과 같은 다른 부분에 더 접합될 수 있다. 또한, 항체는 폴리스티렌 플레이트 또는 비드 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 고체 지지체에 결합될 수 있다. 또한, Fab', Fv, F(ab')2 및/또는 항원에 대한 특이적 결합을 유지하는 다른 항체 단편 및 단클론 항체가 해당 용어에 포함된다. 항체는 일가 또는 이가일 수 있다.
"항체 단편"은 온전한 항체의 부분, 예를 들어, 온전한 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 다이아바디; 선형 항체(Zapata 등, Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); 단쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성되는 다중특이성 항체를 포함한다. 항체의 파파인 소화는 "Fab" 단편으로 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편을 생성하며, 각각은 단일 항원 결합 부위 및 용이하게 결정화되는 능력을 반영하는 명칭인 잔여 "Fc" 단편이다. 펩신 처리는 2개의 항원 결합 부위를 가지며 여전히 항원을 가교 결합 항원일 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다.
"Fv"는 완전한 항원 인식 및 항원 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 단단한 비공유 연관된 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 구성된다. 이러한 구성에서, 각 가변 도메인의 3개 CDRS가 상호작용하여 VH-VL 이량체 표면상에 항원 결합 부위를 정의한다. 종합적으로, 6개의 CDR은 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)조차도 전체 결합 부위보다 친화성이 낮음에도 불구하고 항원을 인식하고 이에 결합하는 능력을 갖는다.
또한, "Fab" 단편은 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터 유래한 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에 추가적인 몇 개의 잔기를 갖는다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 싸이올기를 보유하는 Fab'에 대한 본원의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 알려져 있다.
임의의 척추동물 종의 항체(면역글로불린)의 "경쇄"는 불변 도메인의 아미노산 서열을 기반으로 카파 및 람다라고 불리는 두 가지 명확하게 구분되는 유형 중 하나로 할당될 수 있다. 중쇄의 불변 도메인의 항체 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린은 상이한 클래스로 할당될 수 있다. 5개의 주요 면역글로불린 클래스인 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 있고, 이들 중 여러 가지는 서브클래스(동종형), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2로 더 세분될 수 있다.
"단쇄 Fv" 또는 "sFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 이러한 도메인은 단일 폴리펩타이드 사슬에 존재한다. 일부 양태에서, Fv 폴리펩타이드는 VH와 VL 도메인 사이에 폴리펩타이드 링커를 더 포함하며, 이는 sFv가 항원 결합을 위해 목적하는 구조를 형성할 수 있게 한다.
용어 "다이아바디"는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 지칭하며, 단편은 동일한 폴리펩티드 사슬(VH-VL)에 있는 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결되는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 동일한 사슬에서 두 도메인 사이의 쌍을 허용하기에는 너무 짧은 링커를 사용하여 도메인이 다른 사슬의 상보적 도메인과 쌍을 이루고 두 개의 항원 결합 부위를 생성하도록 한다.
본원에서 사용되는 용어 "친화도"는 2종의 작용제의 가역적 결합에 대한 평형 상수를 지칭하며 해리 상수(Kd)로 표시된다. 친화성은 비관련 아미노산 서열에 대한 항체의 친화성보다 적어도 1-배 크거나, 적어도 2-배 크거나, 적어도 3-배 크거나, 적어도 4-배 크거나, 적어도 5-배 크거나, 적어도 6-배 크거나, 적어도 7-배 크거나, 적어도 8-배 크거나, 적어도 9-배 크거나, 적어도 10-배 크거나, 적어도 20-배 크거나, 적어도 30-배 크거나, 적어도 40-배 크거나, 적어도 50-배 크거나, 적어도 60-배 크거나, 적어도 70-배 크거나, 적어도 80-배 크거나, 적어도 90-배 크거나, 적어도 100-배 크거나 또는 적어도 1000-배 크거나 또는 그 이상일 수 있다. 표적 단백질에 대한 항체의 친화성은, 예를 들어, 약 100 나노몰(nM) 내지 약 0.1 nM, 약 100 nM 내지 약 1 피코몰(pM) 또는 약 100 nM 내지 약 1 펨토몰(fM) 이상일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "결합능(avidity)"은 희석 후 해리에 대한 2종 이상의 작용제의 복합체의 저항성을 지칭한다. 용어 "면역반응성" 및 "우선적으로 결합"은 항체 및/또는 항원 결합 단편과 관련하여 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
용어 "결합"은, 예를 들어, 염 가교 및 물 가교와 같은 상호작용을 포함하는 공유, 정전기적, 소수성 및 이온성 및/또는 수소 결합 상호작용으로 인한 두 분자 사이의 직접적인 회합을 지칭한다. 대상 항체는 폴리펩타이드, 예를 들어 인간 폴리펩타이드, 예를 들어, 글라이코실화된 폴리펩타이드 또는 이의 단편 내에 있는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 비-특이적 결합은 약 10-7 M 미만의 친화성으로 결합, 예를 들어, 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M 등의 친화성으로 결합하는 것을 지칭할 것이다.
항체 및 항원의 맥락에서 용어 "특이적으로 결합"은 항체가 예를 들어 약 105 M-1 이상의 친화도 또는 Ka(즉, 1/M의 단위와의 특정 결합 상호작용의 평형 결합 상수)로 항원에 결합하거나 항원과 회합하는 것을 의미한다.
"고친화도" 결합은 적어도 107 M-1, 적어도 108 M-1, 적어도 109 M-1, 적어도 1010 M-1, 적어도 1011 M-1, 적어도 1012 M-1, 적어도 1013 M-1 또는 그 이상의 Ka로 결합하는 것을 지칭한다. 대안적으로, 친화도는 M의 단위(예를 들어, 10-5 M 내지 10-13 M 또는 그 미만)와의 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수(KD)로서 정의될 수 있다. 일부 실시양태에서, 특이적 결합은 항체가 약 10-5 M 이하, 약 10-6 M 이하, 약 10-7 M 이하, 약 10-8 M 이하 또는 10-9 M 이하, 10-10 M, 10-11 M 또는 10-12 M 또는 그 미만의 KD로 항체에 결합하는 것을 의미한다. 항원에 대한 항체의 결합 친화도는 통상적인 기법, 예를 들어, 경쟁적 ELISA(효소-결합 면역흡착 검정), 평형 투석, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술(예를 들어, 제조자에 의해 요약된 일반적인 절차를 사용하는 BIAcore 2000 기구)의 사용, 방사선면역검정 등에 의해 쉽게 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "프레임워크"는 항체의 가변 영역과 관련하여 사용되는 경우 항체의 가변 영역 내 CDR 영역 외부의 모든 아미노산 잔기를 의미하는 것으로 의도됩니다. 가변 영역 프레임워크는 일반적으로 길이가 약 100개 내지 120개 아미노산 사이의 불연속 아미노산 서열이나 CDR 외부의 아미노산만을 참조하도록 의도된다. 본원에서 사용되는 용어 "프레임워크 영역"은 CDR에 의해 분리되는 프레임워크의 각 도메인을 의미하도록 의도된다.
"모 Ig 폴리펩티드"는 본원에 기재된 바와 같은 알데히드-태그된 불변 영역이 결여된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드이다. 모 폴리펩타이드는 천연 서열 불변 영역을 포함할 수 있거나, 또는 기존의 아미노산 서열 변형(예컨대 첨가, 결실 및/또는 치환)을 가진 불변 영역을 포함할 수 있다.
폴리펩타이드의 맥락에서, 용어 "불변 영역"은 당업계에서 잘 이해되고, Ig 중쇄 또는 Ig 경쇄의 C-말단 영역을 지칭한다. Ig 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2, 및 CH3 도메인(및 CH4 도메인, 여기서 중쇄는 μ 또는 ε 중쇄임)을 포함한다. 천연 Ig 중쇄에서, CH1, CH2, CH3(및 존재한다면 CH4) 도메인은 중쇄 가변(VH) 영역 바로 뒤에서(C-말단쪽임) 시작하고, 각각 길이가 약 100개 아미노산 내지 약 130개 아미노산이다. 천연 Ig 경쇄에서, 불변 영역은 경쇄 가변(VL) 영역(에 대해 C-말단 방향으로) 직후 시작하며, 길이가 약 100개 아미노산 내지 120개 아미노산이다.
"에피토프"는 항체가 결합하는 항원상에 있는 부위이다. 에피토프는 단백질의 접힙(예를 들어, 3차 접힙)에 의해 병치된 연속 아미노산 또는 비연속 아미노산 모두로부터 형성될 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 노출되면 유지되는 반면, 접힘에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매로 처리하면 손실된다. 에피토프는 전형적으로 선형 또는 공간적 형태로 적어도 3개, 보다 일반적으로 적어도 5개 또는 8개 내지 10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간적 형태를 결정하는 방법은 예를 들어, X선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다. (예를 들어, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, 제66권, Glenn E. Morris, (1996)판 참조) 여러 상업적 실험실은 에피토프 매핑 서비스를 제공한다. 막 연관 항원과 면역반응성인 항체에 의해 결합되는 에피토프는 세포의 표면(예를 들어, 막횡단 단백질의 세포외 영역)에 존재할 수 있어서, 이러한 에피토프는 세포 표면 접근 가능하고/하거나, 용매 접근 가능하고/하거나 세포-표면 노출된 것으로 간주된다.
폴리펩타이드, 펩타이드 또는 단백질의 아미노산 서열과 관련하여 사용된 "유전적으로 암호화될 수 있는"은 아미노산 서열이 그 아미노산 서열을 암호화하는 핵산의 전사 및 번역에 의해 생산될 수 있는 아미노산 잔기들로 구성되는 것을 의미하고, 여기서 전사 및/또는 번역은 세포에서 또는 시험관내 전사/번역 시스템에서 무세포에서 일어날 수 있다.
용어 "제어 서열"은 특정 발현 시스템, 예를 들어 포유동물 세포, 박테리아 세포, 무세포 합성 등에서 작동 가능하게 연결되는 코딩 서열의 발현을 용이하게 하는 DNA 서열을 지칭한다. 원핵생물 시스템에 적합한 제어 서열은 예를 들어 프로모터, 임의로 오퍼레이터 서열 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵세포 시스템은 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 이용할 수 있다.
핵산은 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치될 때 "작동 가능하게 연결"된다. 예를 들어, 전서열 또는 분비 신호에 대한 DNA는, 이것이 폴리펩타이드의 분비에 참여하는 전단백질로서 발현된다면 폴리펩타이드에 대한 DNA에 작동 가능하게 연결된 것이고; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미친다면 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 것이고; 또는 리보솜 결합 부위는 그것이 번역의 개시를 용이하게 하기 위해 위치된다면 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 것이다. 일반적으로, "작동 가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열이 연속적이고, 분비 리더의 경우에, 연속적이고 리딩 프레임에 있는 것을 의미한다. 연결은 결찰에 의해 또는 증폭 반응을 통해 이루어진다. 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 링커는 종래의 실시에 따라 서열들을 연결시키기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "발현 카세트"는 (예컨대 관심 작제물로의 결찰과 부합하는 제한 부위의 사용에 의해 또는 관심의 구성물로의 또는 숙주 세포 게놈으로의 상동 재조합에 의해) 핵산에 삽입될 수 있는 핵산, 보통 DNA의 분절을 지칭한다. 일반적으로, 핵산 분절은 관심 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 카세트 및 제한 부위는 전사 및 번역을 위한 적절한 리딩 프레임에 카세트의 삽입을 용이하게 하기 위 해 디자인된다. 발현 카세트는 또한 숙주 세포에서 관심 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 발현을 용이하게 하는 요소들을 포함할 수 있다. 이들 요소는, 프로모터, 최소 프로모터, 인핸서, 응답 요소, 종결자 서열, 폴리아데닐화 서열 등을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.
"단리된" 항체는 이의 자연 환경의 성분으로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 것이다. 이의 자연 환경의 오염 성분은 항체에 대한 진단적 또는 치료적 용도를 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 (1) Lowry 방법에 의해 결정되는 바와 같이 항체의 90중량% 초과, 95중량% 초과 또는 98중량% 초과, 예를 들어, 99중량% 초과로, (2) 스피닝 컵 배열분석 장치(spinning cup sequenator)의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 수득하기에 충분한 정도로 또는 (3) 환원 또는 비환원 조건하에 쿠마시 블루 또는 은 염색을 사용하여 소듐 도데실 설페이트-폴리아크릴아마이드 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 의한 균질성으로 정제될 수 있다. 단리된 항체는 항체의 자연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에 재조합 세포 내의 동일 반응계 항체를 포함한다. 일반적으로, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
용어 "천연 항체"는 항체의 중쇄 및 경쇄가 다세포 유기체의 면역체계에 의해 만들어지고 쌍을 이루는 항체를 지칭한다. 비장, 림프절, 골수 및 혈청이 천연 항체를 생산하는 조직들의 예이다. 예를 들어, 항원으로 면역화된 제1 동물로부터 단리된 항체 생산 세포에 의해 생산된 항체는 천연 항체이다.
용어 "인간화된 항체" 또는 "인간화된 면역글로불린"은 인간 항체로부터의 상응하여 위치된 아미노산으로 치환된 (예를 들어 프레임워크 영역, 불변 영역 또는 CDR에) 하나 이상의 아미노산을 함유하는 비-인간(예컨대 마우스 또는 토끼) 항체를 지칭한다. 일반적으로, 인간화된 항체는, 동일한 항체의 비-인간화된 버전에 비해서, 인간 숙주에서 감소된 면역 반응을 유발한다. 항체는 예를 들어 CDR-그래프팅, 베니어 또는 재표면화, 사슬 셔플링 등을 포함하는 당해 기술분야에서 알려진 다양한 기법을 사용하여 인간화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 프레임워크 치환은 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기를 식별하기 위한 CDR과 프레임워크 잔기의 상호작용의 모델링 및 특정 위치에서 특이한 프레임워크 잔기를 식별하기 위한 서열 비교에 의해 확인된다. 따라서, 위에서 기재된 항체들은 당업계에 잘 알려져 있는 방법들을 사용하여 인간화될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에서 개시되는 항체 분자는 본원에서 제공되는 바와 같은 가변 중쇄 영역 및 UniProt: P01857-1, 버전 1에서 제시되는 아미노산 서열 서열을 갖는 인간 IgG1 불변 영역을 포함하는 중쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 개시되는 항체 분자는 본원에서 제공되는 바와 같은 가변 경쇄 영역 및 인간 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 경쇄 불변 영역은 UniProtKB/Swiss-Prot: P01834.2에서 제시되는 아미노산을 갖는 인간 카파 경쇄 불변 영역이다. 특정 실시양태에서, 대상 항체에 존재하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역은 돌연변이, 예를 들어, Fc 기능을 조절하기 위한 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, LALAPG 이펙터 기능 돌연변이(L234A, L235A 및 P329G) 또는 N297A 돌연변이가 도입되어 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)을 감소시킬 수 있다. 치환의 넘버링은 EU 넘버링 시스템을 기반으로 한다. "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 색인"은 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 잔기를 지칭할 때 사용된다(예를 들어, Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 제5판 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD에서 보고되는 EU 색인). (1991)). "Kabat에서와 같은 EU 색인"는 인간 IgG 1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다.
용어 쌍땀키메라 항체쌍땀는 경쇄 및 중쇄 유전자들이 전형적으로 유전자 조작에 의해, 상이한 종에 속하는 항체 가변 및 불변 영역 유전자들로부터 작제된 항체를 나타낸다. 예를 들어, 마우스 단클론성 항체로부터의 유전자의 가변 분절은 인간 불변 분절, 예컨대, 감마 1 및 감마 3에 연결될 수 있다. 치료용 키메라 항체의 예는 마우스 항체로부터의 가변 또는 항원-결합 도메인과 인간 항체로부터의 불변 또는 이펙터 도메인으로 구성된 하이브리드 단백질이지만, 다른 포유류 종으로부터의 도메인도 사용될 수 있다.
용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체 형태를 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 구체적으로 달리 표시되지 않는 한, "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 유전적으로 암호화된 및 암호화되지 않은 아미노산, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형된 또는 유도체화된 아미노산, 및 변형된 펩타이드 백본을 갖는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 이들 용어는, 이종성 아미노산 서열을 가진 융합 단백질, 이종성 및 동종성 리더 서열을 가진 융합체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 융합 단백질, 적어도 하나의 N-말단 메티오닌 잔기를 함유하는 단백질(예컨대 재조합 박테리아 숙주 세포에서 생성을 용이하게 하기 위한 것임); 면역학적으로 태그 부착된 단백질 등을 포함한다. 항체의 맥락에서, 사슬 또는 도메인이 폴리펩타이드를 포함한다는 것은 분명하다.
"천연 아미노산 서열" 또는 "모 아미노산 서열"은 변형된 아미노산 잔기를 포함하도록 변형 전에 폴리펩타이드의 아미노산 서열을 지칭하기 위하여 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
용어 "아미노산 유사체", "비천연 아미노산" 등은 호환 가능하게 사용되고, 천연 유래 단백질에서 통상적으로 발견되는 하나 이상의 아미노산(예컨대, Ala 또는 A, Cys 또는 C, Asp 또는 D, Glu 또는 E, Phe 또는 F, Gly 또는 G, His 또는 H, Ile 또는 I, Lys 또는 K, Leu 또는 L, Met 또는 M, Asn 또는 N, Pro 또는 P, Gln 또는 Q, Arg 또는 R, Ser 또는 S, Thr 또는 T, Val 또는 V, Trp 또는 W, Tyr 또는 Y)에 대해 구조 및/또는 전체 형상이 유사한 아미노산-유사 화합물들을 포함한다. 아미노산 유사체는 또한 변형된 측쇄 또는 백본을 가진 천연 아미노산을 포함한다. 아미노산 유사체는 또한 천연 유래 D-형태뿐만 아니라, 아미노산 유사체들의 L-형태와 동일한 입체화학을 가지는 아미노산 유사체를 포함한다. 몇몇 경우에, 아미노산 유사체는 하나 이상의 천연 아미노산의 백본 구조 및/또는 측쇄 구조를 공유하며, 이때 차이(들)는 분자의 하나 이상의 변형된 기이다. 이러한 변형은, 관련된 원자(예컨대, S)에 대한 원자(예컨대, N)의 치환, 기(예컨대, 메틸, 또는 하이드록실 등) 또는 원자(예컨대 Cl 또는 Br 등)의 첨가, 기의 결실, 공유 결합의 치환(이중 결합에 대한 단일 결합 등), 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 유사체는 α-하이드록시산, 및 α-아미노산 등을 포함할 수 있다.
용어 "아미노산 측쇄" 또는 "아미노산의 측쇄" 등은, 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 및 아미노산 유사체를 포함하여, 아미노산 잔기의 α-탄소에 부착된 치환체를 지칭하는데 사용될 수 있다. 아미노산 측쇄는 또한 본 명세서에 기재된 변형된 아미노산 및/또는 접합체의 맥락에서 기술된 바와 같은 아미노산 측쇄를 포함할 수 있다.
용어 "접합"은 일반적으로 하나의 관심 분자를 제2 관심 분자와 근접하게 연관시키는 공유 또는 비공유, 일반적으로 공유 결합의 화학적 결합을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 반감기 연장 부분, 표지제 및 치료제로부터 선택된다. 반감기 연장을 위해, 예를 들어, 본 개시내용의 항체는 (예를 들어, PEG화, 과글리코실화 등에 의해) 개선된 약동학적 프로파일을 제공하도록 선택적으로 변형될 수 있다. 혈청 반감기를 향상시킬 수 있는 변형이 관심 대상이다.
용어 "탄수화물" 등은 단당류, 이당류, 올리고당류 및 다당류의 단량체 단위 및/또는 중합체를 지칭하기 위해 사용될 수 있다. 용어 당은 더 작은 탄수화물, 예컨대, 단당류, 이당류를 지칭하기 위해 사용될 수 있다. 용어 "탄수화물 유도체"는 관심 탄수화물의 하나 이상의 작용기가 치환(임의의 편리한 치환기에 의해 대체)되거나, 변형(임의의 편리한 화학을 사용하여 다른 기로 변환)되거나 또는 없는(예컨대 제거되거나 H에 의해 대체되는) 화합물들을 포함한다. 다양한 탄수화물 및 탄수화물 유도체가 활용될 수 있고 본 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 적응될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "단리"는 화합물이 자연 발생하는 환경과 상이한 환경에 있는 관심 화합물을 설명하는 것을 의미한다. "단리된"은 관심 화합물이 실질적으로 풍부한 샘플 내에 존재하고/하거나 관심 화합물이 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 화합물을 포함하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "실질적으로 정제된"은 이의 자연 환경으로부터 제거되며, 자연적으로 관련된 다른 성분이 적어도 60% 없고, 적어도 75% 없고, 적어도 80% 없고, 적어도 85% 없고, 적어도 90% 없고, 적어도 95% 없고, 적어도 98% 없거나 또는 98% 이상 없는 화합물을 지칭한다.
용어 "생리학적 조건"은 살아있는 세포에 적합한 조건, 예를 들어, 주로 살아있는 세포에 적합한 온도, pH, 염도 등 수성 조건을 포함하는 것을 의미한다.
"반응 파트너"는 반응 생성물을 생성하기 위해 다른 반응 파트너와 특이적으로 반응하는 분자 또는 분자 모이어티를 의미한다. 예시적인 반응성 파트너는 설파타제 모티프의 시스테인 또는 세린 및 포르밀글리신 생성 효소(FGE)를 포함하며, 이들은 반응하여 모티프에서 시스테인 또는 세린 대신 포르밀글리신(fGly)을 함유하는 전환된 알데히드 태그의 반응 생성물을 형성한다. 다른 예시적인 반응성 파트너는 전환된 알데하이드 태그(예를 들어, 반응성 알데하이드기)의 fGly 잔기의 알데하이드 및 "알데하이드-반응성 반응성 파트너"를 포함하며, 이는 알데하이드-반응성 기 및 관심 모이어티를 포함하고, 이는 반응하여 fGly 잔기를 통해 폴리펩타이드에 접합된 관심 모이어티를 갖는 폴리펩타이드의 반응 생성물을 형성한다.
"N-말단"은 유리 아민기를 갖는 폴리펩타이드의 말단 아미노산 잔기를 나타내고, 비-N-말단 아미노산 잔기의 아민기는 통상 폴리펩타이드의 공유 백본의 부분을 형성한다.
"C-말단"은 유리 카복실기를 갖는 폴리펩타이드의 말단 아미노산 잔기를 나타내고, 비-C-말단 아미노산 잔기의 카복실기는 통상 폴리펩타이드의 공유 백본의 부분을 형성한다.
폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 관련하여 사용되는 바와 같은 "내부 부위"는 N-말단 또는 C-말단에 있지 않은 폴리펩타이드의 영역을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료", "치료하는" 등은 목적하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 수득하는 것을 지칭한다. 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다는 관점에서 예방적일 수 있고/있거나 질환 및/또는 질환에 기인할 수 있는 부작용에 대한 부분적 또는 완전한 치유의 관점에서 치료적일 수 있다. 본원에서 사용되는 "치료"는 포유동물, 예를 들어, 인간에서 질환의 임의의 치료를 포괄하며, 다음을 포함한다: (a) 질환에 대한 소인이 있을 수 있지만 아직 질환을 갖는 것으로 진단되지 않은 대상체에서 질환이 발생하는 것을 방지하는 것; (b) 질환을 억제하는 것, 예를 들어, 이의 발병을 저지하는 것; 및 (c) 질환을 완화시키는 것, 즉, 질환의 퇴행을 야기하는 것.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "개체", "대상체", "숙주" 및 "환자"는 뮤린(래트, 마우스), 비인간 영장류, 인간, 개, 고양이, 유제류(예를 들어, 말, 소, 양, 돼지, 염소) 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 포유동물을 지칭한다.
"치료적 유효량" 또는 "효능량"은 질환을 치료하기 위해 포유동물 또는 다른 대상체에게 투여되는 경우, 질환에 대한 이러한 치료에 영향을 주기에 충분한 대상체 항체-약물 접합체의 양을 지칭한다. "치료적 유효량"은 항체, 약물, 질환 및 이의 중증도, 치료 대상체의 연령, 체중 등에 따라 달라질 것이다.
본 발명을 추가로 기술하기 전에, 본 발명은 기재된 특정 실시형태로 제한되지 않으며, 그 자체가 물론 변할 수 있음이 이해되어야 한다. 또한, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에, 본 명세서에서 사용된 용어는 단지 특정 실시형태를 설명하기 위한 것이며 제한하려는 의도가 아님을 이해하여야 한다.
값의 범위가 제공되는 경우, 문맥에서 달리 명시하지 않는 한 해당 범위의 상한 및 하한과 임의의 다른 언급되거나 또는 언급된 범위 내의 개재 값 사이의 각각의 개재 값은 하한 단위의 10분의 1까지 본 발명 내에 포함된다. 이러한 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 더 작은 범위 내에 포함될 수 있고, 또한 언급된 범위에서 임의의 구체적으로 배제된 제한에 따라 본 발명 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 모두를 포함하는 경우, 포함된 한계 중 하나 또는 모두를 제외한 범위도 본 발명에 포함된다.
달리 규정하지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 테스트에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 이제 기술된다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물은, 간행물이 인용된 것과 관련된 방법 및/또는 재료를 개시하고 기술하기 위하여 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
본 명세서에서 그리고 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수형 표현은 문맥이 달리 명확히 나타내지 않는 한 복수의 지시대상을 포함함을 주목해야 한다. 따라서, 예를 들어, "항체"에 대한 언급은 복수의 이러한 항체를 포함하며, "CDR"에 대한 언급은 통상의 기술자에게 알려진 하나 이상의 CDR 및 이의 균등물 등에 대한 언급을 포함한다. 청구범위는 임의의 선택적 요소를 제외하도록 작성될 수 있음에 추가로 유의한다. 이와 같이, 이러한 언급은 청구범위의 요소의 언급 또는 "부정적인" 제한의 사용과 관련하여 "단독으로," "유일한" 등으로서 이러한 배타적인 용어의 사용을 위한 선행 기초로서 역할하도록 의도된다.
본 명세서에 논의된 간행물은, 본 출원의 출원일 전에 이들의 개시내용에 대해 오로지 제공된다. 본 문서의 어떠한 내용도 본 발명이 선행 발명으로 인해 그러한 공개보다 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다. 추가로, 제공된 간행물의 날짜는 독립적으로 확인될 필요가 있을 수도 있는 실제 간행일과는 상이할 수 있다.
상세한 설명
본 개시내용은 항체 접합체(예를 들어 항체-약물 접합체(ADC))를 제공한다. 또한, 본 개시내용은 이러한 접합체를 생성하는 방법 및 이를 사용하는 방법을 포함한다. 또한, 일부 경우, 약제학적 조성물을 포함하는, 본 개시내용의 ADC를 포함하는 조성물이 제공된다. 특정 양태에서, 개체에 치료적 유효량의 본 개시내용의 ADC를 투여하는 단계를 포함하는 ADC를 사용하는 방법이 제공된다.
항체-약물 접합체
본 개시내용은 접합체, 예를 들어 항체-약물 접합체(ADC)를 제공한다. "접합체"는 폴리펩타이드(예를 들어, 항체)가 관심 모이어티(예를 들어, 약물 또는 활성제)에 공유 부착된 것을 의미한다. 예를 들어, 본 개시내용에 따른 항체-약물 접합체는 항체에 공유 부착된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드(예를 들어, 항체) 및 하나 이상의 약물 또는 활성제는 하나 이상의 작용기 및 공유 결합을 통해 서로 결합된다. 예를 들어, 하나 이상의 작용기 및 공유 결합은 본원에서 설명되는 바와 같은 링커를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 접합체는 하나 이상의 다른 모이어티에 접합된 폴리펩티드(예를 들어, 항체)를 포함하는 폴리펩티드 접합체이다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드에 접합된 하나 이상의 모이어티는 각각 독립적으로 다양한 관심 모이어티, 예를 들어 약물, 활성제, 검출가능한 표지, 수용성 중합체, 또는 폴리펩티드를 막 또는 표면에 고정화하기 위한 모이어티일 수 있다. 특정 실시양태에서, 접합체는 폴리펩티드가 항체인 약물 접합체이며, 따라서 항체-약물 접합체를 제공한다. 예를 들어, 접합체는 폴리펩티드가 하나 이상의 약물 또는 활성제에 접합된 약물 접합체일 수 있다. 다양한 종류의 약물 또는 활성제가 접합체에 사용될 수 있으며, 이는 아래에 보다 상세하게 설명된다.
하나 이상의 약물 또는 활성제는 폴리펩티드의 임의의 원하는 부위에서 폴리펩티드(예를 들어, 항체)에 접합될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은, 예를 들어 폴리펩티드의 C-말단 또는 그 부근의 부위에 접합된 약물 또는 활성제를 갖는 폴리펩티드를 제공한다. 다른 예는 폴리펩티드의 N-말단 또는 그 부근의 위치에 접합된 약물 또는 활성제를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 예는 또한 폴리펩티드의 C-말단과 N-말단 사이의 위치(예를 들어, 폴리펩티드의 내부 부위)에 접합된 약물 또는 활성제를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 폴리펩티드가 2개 이상의 약물 또는 활성제에 접합되는 경우 상기 조합도 가능하다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 접합체는 아미노산 잔기의 α-탄소에서 폴리펩티드의 아미노산 잔기에 접합된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 포함한다. 달리 말하면, 접합체는 폴리펩티드 내의 하나 이상의 아미노산 잔기의 측쇄가 변형되어 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된(예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 링커를 통해 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된) 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 접합체는 폴리펩티드에서 하나 이상의 아미노산 잔기의 α-탄소가 변형되어 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된(예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 링커커를 통해 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된) 폴리펩티드를 포함한다.
본 개시내용의 실시형태는 폴리펩타이드가 1개 이상의 모이어티, 예컨대, 2개의 모이어티, 3개의 모이어티, 4개의 모이어티, 5개의 모이어티, 6개의 모이어티, 7개의 모이어티, 8개의 모이어티, 9개의 모이어티, 또는 10개 이상의 모이어티에 접합된 접합체를 포함한다. 모이어티는 폴리펩타이드의 1개 이상의 부위에서 폴리펩타이드에 접합될 수 있다. 예를 들어, 1개 이상의 모이어티는 폴리펩타이드의 단일 아미노산 잔기에 접합될 수 있다. 몇몇 경우에, 1개의모이어티는 폴리펩타이드의 아미노산 잔기에 접합된다. 다른 실시형태에서, 2개의 모이어티는 폴리펩타이드의 동일한 아미노산 잔기에 접합될 수 있다. 다른 실시형태에서, 제1 모이어티는 폴리펩타이드의 제1 아미노산 잔기에 접합되고, 제2 모이어티는 폴리펩타이드의 제2 아미노산 잔기에 접합된다. 상기의 조합이 또한 가능하며, 예를 들어, 폴리펩타이드는 제1 아미노산 잔기에서 제1 모이어티에 접합되고 제2 미노산 잔기에서 2개의 다른 모이어티에 접합된다. 제한 없이, 제1 아미노산 잔기에서 제1 및 제2 모이어티에 접합되고 제2 아미노산 잔기에서 제3 및 제4 모이어티에 접합된 폴리펩타이드 등과 같은 다른 조합이 또한 가능하다.
1개 이상의 관심 모이어티에 접합된 폴리펩타이드의 1개 이상의 아미노산 잔기는 자연 발생 아미노산, 비천연 아미노산 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들어, 접합체는 폴리펩티드의 자연 발생 아미노산 잔기에 접합된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 포함할 수 있다. 다른 경우에, 접합체는 폴리펩티드의 비천연 아미노산 잔기에 접합된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 포함할 수 있다. 하나 이상의 약물 또는 활성제는 본원에서 설명되는 바와 같이 단일 천연 또는 비천연 아미노산 잔기에서 폴리펩타이드에 접합될 수 있다. 폴리펩타이드의 하나 이상의 천연 또는 비천연 아미노산 잔기는 본 명세서에 기재된 바와 같은 모이어티 또는 모이어티들에 접합될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 내의 2개(또는 그 이상)의 아미노산 잔기(예를 들어, 천연 또는 비천연 아미노산 잔기)는 각각 하나 또는 2개의 모이어티에 접합될 수 있어, 폴리펩티드 내의 다중 부위가 관심 모이어티에 접합된다.
특정 실시양태에서, 폴리펩티드(예를 들어, 항체) 및 관심 모이어티(예를 들어, 약물 또는 활성제)은 접합 모이어티를 통해 접합된다. 예를 들어, 폴리펩티드 및 관심 모이어티는 접합 모이어티에 각각 결합(예를 들어, 공유 결합)되어 접합 모이어티를 통해 함께 폴리펩티드 및 관심 모이어티를 간접적으로 결합시킬 수 있다. 일부 경우에, 접합 모이어티는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물, 또는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물의 유도체를 포함한다. 예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 관심 모이어티를 폴리펩티드에 커플링하기 위한 일반적인 반응식은 아래의 일반적인 반응식에 제시되어 있다. 히드라지닐-인돌릴 및 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 본원에서 각각 히드라지노-이소-픽텟-스펭글러(HIPS, hydrazino-iso-Pictet-Spengler) 접합 모이어티 및 아자-히드라지노-이소-픽텟-스펭글러(azaHIPS) 접합 모이어티로도 지칭된다.
위의 반응 도식에서, R은 폴리펩타이드에 접합된(예를 들어, 본원에서 설명되는 바와 같은 링커를 통해 폴리펩티드에 접합된) 관심 모이어티(예를 들어, 약물 또는 활성제)를 포함한다. 위의 반응식에 나타난 바와 같이, 2-포르밀글리신 잔기(fGly)를 포함하는 폴리펩티드는 접합 모이어티(예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티)를 포함하도록 변형되어 접합 모이어티에 부착된 폴리펩티드 접합체를 생성하여 접합 모이어티를 통해 약물 또는 활성제를 폴리펩티드에 부착시킨다.
본원에 기술된 바와 같이, 모이어티는 검출가능한 표지 또는 약물 또는 활성제와 같은 화학적 실체와 같은 다양한 모이어티일 수 있지만 이에 제한되지 않는다. R' 및 R"은 각각 독립적으로 임의의 목적하는 치환체, 예컨대, 제한 없이, 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴일 수 있다. Z는 CR21, NR22, N, O 또는 S일 수 있으며, 여기서 R21 및 R22는 각각 독립적으로 상기 R' 및 R"에 대해 기재된 임의의 치환기로부터 선택된다.
다른 하이드라진일-인돌릴 또는 하이드라진일-피롤로-피리딘일 커플링 모이어티가 또한 본 명세서에 기재된 접합체 및 화합물에서 나타난 것과 같이 가능하다. 예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티는 링커에 부착(예를 들어, 공유 부착)될 수 있다. 이와 같이, 본 개시내용의 실시양태는 링커를 통해 약물 또는 활성제에 부착된 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 포함한다. 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 약물 또는 활성제에 커플링할 수 있는 링커의 다양한 실시양태가 본원에서 상세히 설명된다. 예를 들어, 일부 경우, 링커는 본원에서 설명되는 바와 같은 절단 가능한 링커이다. 다른 실시양태에서, 링커는 본원에서 설명되는 바와 같은 절단 불가능한 링커이다.
특정 실시양태에서, 폴리펩타이드(예컨대, 항체)는 하나 이상의 관심 모이어티에 접합될 수 있으며, 폴리펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기는 관심 모이어티에 접합되기 전 변형된다. 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산 잔기의 변형은 관심 모이어티에 대한 접합에 적합한 하나 이상의 반응성 기를 함유하는 폴리펩티드를 생산할 수 있다. 일부 경우, 폴리펩타이드는 관심 모이어티(예를 들어, 위에서 설명되는 바와 같은 하이드라지닐-인돌릴 또는 하이드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티와 같은 접합 모이어티를 포함하는 하나 이상의 모이어티)에 접합하기에 적합한 하나 이상의 반응기를 제공하기 위해 하나 이상의 변형된 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드의 아미노산은 반응성 알데히드 기(예를 들어, 반응성 알데히드)를 포함하도록 변형될 수 있다. 반응성 알데하이드는 "알데하이드 태그" 또는 "ald-태그"에 포함될 수 있으며, 이는 본원에서 사용되는 바와 같이 2-포밀글라이신 잔기("fGly"로 본원에서 지칭됨)를 함유하는 포밀글라이신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 전환된 설파테이스 모티프(예를 들어, L(C/S)TPSR)로부터 유래되는 아미노산 서열을 지칭한다. FGE에 의해 생성된 fGly 잔기는 또한 "포르밀글리신"으로 지칭될 수 있다. 달리 말하면, 용어 "알데하이드 태그"는 "전환된" 설파테이스 모티프(FGE, 예를 들어, L(fGly)TPSR의 작용에 의해 시스테인 또는 세린 잔기가 fGly로 전환된 설파테이스 모티프)를 포함하는 아미노산 서열을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 전환된 설파테이스 모티프는 "미전환" 설파타제 모티프(즉, 시스테인 또는 세린 잔기가 FGE에 의해 fGly로 전환되지 않았지만, 전환될 수 있는 설파테이스 모티프, 예컨대, 서열: L(C/S)TPSR을 갖는 미전환 설파테이스 모티프)를 포함하는 아미노산 서열로부터 생성될 수 있다. 설파타제 모티프에 대한 포르밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용과 관련하여 사용되는 "전환"은 설파타제 모티프의 시스테인 또는 세린 잔기가 포르밀글리신(fGly) 잔기로의 생화학적 변형(예를 들어, Cys에서 fGly로, 또는 Ser에서 fGly로)을 의미한다. 알데하이드 태그 및 부위-특이적 단백질 변형에서 그의 사용의 추가의 양상은 미국 특허 제7,985,783호 및 미국 특허 제8,729,232호에 기재되고, 상기 각 문헌의 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
일부 경우에, 접합체를 생성하기 위해, fGly 잔기를 함유하는 폴리펩티드는 fGly와 화합물(예를 들어, 전술한 바와 같은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 함유하는 화합물)의 반응에 의해 관심 모이어티에 접합될 수 있다. 예를 들어, fGly-함유 폴리펩티드는 폴리펩티드에 대한 약물의 접합을 제공하기에 적합한 조건 하에서 반응성 파트너-함유 약물과 접촉될 수 있다. 일부 경우에, 반응성 파트너-함유 약물은 상기 기술된 바와 같이 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, 약물 또는 활성제는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 일부 경우에, 약물 또는 활성제는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐에 부착되며, 예컨대 링커, 예컨대 본원에 상세히 기재된 바와 같은 링커를 통해 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐에 공유 결합된다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 접합체는 하나 이상의 관심 모이어티(예를 들어, 약물 또는 활성제)에 부착된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 갖는 폴리펩티드(예를 들어, 항체)를 포함한다. 접합체를 만들기 위해, 폴리펩티드의 아미노산 잔기가 변형된 다음 상기 기재된 바와 같이 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된 하나 이상의 약물 또는 활성제에 커플링될 수 있다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드(예를 들어, 항체)의 아미노산 잔기는 상기 기재된 바와 같이 fGly 잔기로 변형된 시스테인 또는 세린 잔기이다. 특정 실시양태에서, 변형된 아미노산 잔기(예를 들어, fGly 잔기)는 위에서 설명되는 바와 같은 하이드라지닐-인돌릴 또는 하이드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 함유하는 약물 또는 활성제에 접합되어 본 개시내용의 접합체를 제공하는데, 하나 이상의 약물 또는 활성제가 하이드라지닐-인돌릴 또는 하이드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 폴리펩타이드에 접합된다. 본원에서 사용되는 용어 fGly'는 관심 모이어티(예를 들어, 약물 또는 활성제)에 커플링되는 폴리펩티드(예를 들어, 항체)의 변형된 아미노산 잔기를 지칭한다.
특정 실시양태에서, 접합체는 본원에서 설명되는 바와 같은 링커에 부착된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 갖는 폴리펩타이드(예를 들어, 항체)를 포함하며, 이는 차례로 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된다. 예를 들어, 접합체는 상기 기술된 바와 같이 하나 이상의 관심 모이어티(예를 들어, 하나 이상의 약물 또는 활성제)에 접합된 적어도 하나의 아미노산 잔기(fGly')를 갖는 폴리펩티드(예를 들어, 항체)를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 측면은 하기 화학식 (I)의 접합체를 포함한다:
(I)
식 중
Z는 CR4 또는 N이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되며;
R2 및 R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 각각 독립적으로 선택되거나 R2 및 R3은 선택적으로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하며;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되며;
L은 링커이며;
W1은 약물이며;
W2는 항체이다.
소정의 실시형태에서, Z는 CR4 또는 N이다. 소정의 실시형태에서, Z는 CR4이다. 소정의 실시형태에서, Z는 N이다.
특정 실시양태에서, R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, R1는 수소이다. 소정의 실시형태에서, R1은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R1는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R1은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대, C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R1은 알키닐 또는 치환된 알키닐, 예컨대, C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 소정의 실시형태에서, R1는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R1은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R1은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R1는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
소정의 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3은 선택적으로 환상으로 연결되어 5 또는 6-원 헤테로사이클릴을 형성한다.
소정의 실시형태에서, R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R2는 수소이다. 소정의 실시형태에서, R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R2는 메틸이다. 소정의 실시형태에서, R2는 알켄일 또는 치환된 알켄일, 예컨대, C2-6 알켄일 또는 C2-6 치환된 알켄일, 또는 C2-4 알켄일 또는 C2-4 치환된 알켄일, 또는 C2-3 알켄일 또는 C2-3 치환된 알켄일이다. 특정 실시양태에서, R2는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R2는 카복실 또는 카복실 에스터이다. 특정 실시양태에서, R2는 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R2는 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 특정 실시양태에서, R2는 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R2는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R2은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R2는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R2는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
소정의 실시형태에서, R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R3는 수소이다. 소정의 실시형태에서, R3은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R3은 메틸이다. 소정의 실시형태에서, R3은 알켄일 또는 치환된 알켄일, 예컨대, C2-6 알켄일 또는 C2-6 치환된 알켄일, 또는 C2-4 알켄일 또는 C2-4 치환된 알켄일, 또는 C2-3 알켄일 또는 C2-3 치환된 알켄일이다. 특정 실시양태에서, R3은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R3는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R3는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R3은 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R3는 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 특정 실시양태에서, R3는 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R3는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R3은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R3은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R3는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 실시양태에서, R2 및 R3은 선택적으로 고리형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R2 및 R3은 고리형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R2 및 R3은 고리형으로 연결되어 5원 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R2 및 R3은 고리형으로 연결되어 6원 헤테로사이클릴을 형성한다.
특정 실시양태에서, 각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된다.
각각의 R4에 대한 다양한 가능성은 다음과 같이 더 상세하게 기재된다. 소정의 실시형태에서, R4는 수소이다. 소정의 실시형태에서, 각각의 R4는 수소이다. 특정 실시양태에서, R4는 F, Cl, Br 또는 I와 같은 할로겐이다. 특정 실시양태에서, R4는 F이다. 특정 실시양태에서, R4는 Cl이다. 특정 실시양태에서, R4는 Br이다. 특정 실시양태에서, R4는 I이다. 특정 실시양태에서, R4는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 소정의 실시형태에서, R4는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R4은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대, C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R4는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R4는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R4는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R4는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R4는 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R4는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R4는 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 특정 실시양태에서, R4는 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R4는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R4는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴(예를 들어, 페닐 또는 치환된 페닐)이다. 특정 실시양태에서, R4은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R4는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R4는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 실시양태에서, W1은 약물이다. 약물의 추가의 설명은 본원의 개시내용에서 발견된다.
특정 실시양태에서, W2는 항체이다. 특정 실시양태에서, W2는 본원에서 설명되는 바와 같은 하나 이상의 fGly' 잔기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체는 본원에서 설명되는 바와 같이 fGly' 잔기를 통해 접합체의 나머지 부분에 부착된다. 대상 접합체에서 사용되는 항체에 대한 추가 설명은 본원의 개시내용에서 찾을 수 있다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 링커 L을 포함한다. 링커는 접합 모이어티(예를 들어, 하이드라지닐-인돌릴 또는 하이드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티)가 하나 이상의 관심 모이어티에 결합하게 하기 위해 활용될 수 있다. 링커는 임의의 편리한 위치에서 접합 모이어티(예를 들어, 본원에 기술된 바와 같음)에 결합(예를 들어, 공유 결합)될 수 있다. 예를 들어, 링커는 하이드라지닐-인돌릴 또는 하이드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 약물에 부착할 수 있다. 하이드라지닐-인돌릴 또는 하이드라지닐-피롤로-피리디닐 결합 모이어티는 링커(및 따라서, 약물)를 폴리펩타이드, 예컨대, 항체에 접합하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 접합 모이어티는 항체의 fGly 잔기와 같은 폴리펩타이드의 변형된 아미노산 잔기에 링커(및 그에 따른 약물)를 접합하는 데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, L은 접합 모이어티를 W1에 부착시키고, 따라서 접합 모이어티는 링커 L을 통해서 W1에 간접적으로 결합된다. 위에서 설명되는 바와 같이, W1은 약물이고, 따라서 L은 접합 모이어티를 약물 부착시키며, 예를 들어, 접합 모이어티는 링커 L을 통해서 약물에 간접적으로 결합된다.
임의의 편리한 링커 단위가 대상 접합체에 활용될 수 있다. 소정의 실시형태에서, L은 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실 아미노, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된 기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알킬 또는 치환된 알킬기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알켄일 또는 치환된 알켄일기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알킨일 또는 치환된 알킨일기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알콕시 또는 치환된 알콕시기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 아미노 또는 치환된 아미노기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 카복실 또는 카복실 에스터기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 아실 아미노기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 아릴 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, L은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, L은 중합체를 포함한다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 글리콜 동종중합체, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체(예컨대, 동종중합체 및 공중합체는 일단부에서 알킬기로 치환되거나 비치환됨), 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에틸 에터, 폴리비닐피롤리돈, 이들의 조합 등을 포함하는, 폴리알킬렌 글리콜 및 이들의 유도체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 소정의 실시형태에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 이하에 더욱 상세히 기재된 접합체 및 화합물에 나타낸 바와 같은 기타 링커도 가능하다.
일부 실시양태에서, L은 하기 식으로 기술되는 링커이며:
-(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-(L6)f-,
L1, L2 , L3, L4, L5 및 L6은 각각 독립적으로 링커 서브유닛이며, a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이며, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1 내지 6이다.
특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 2이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 3이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 4이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 5이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 6이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f는 각각 1이다. 실시양태에서, a, b, c, d 및 e는 각각 1이고 f는 0이다. 특정 실시양태에서, a, b, c 및 d는 각각 1이고 e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a, b, 및 c는 각각 1이고 d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a 및 b는 각각 1이고 c, d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a는 1이고 b, c, d, e와 f는 각각 0이다.
특정 실시양태에서, 링커 서브유닛 L1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티(예를 들어, 상기 화학식 (I)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 서브유닛 L2는 존재하는 경우, 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 서브유닛 L3은 존재하는 경우, 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 서브유닛 L4은 존재하는 경우, 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 서브유닛 L5은 존재하는 경우, 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 서브유닛 L6은 존재하는 경우, 약물에 부착된다.
임의의 편리한 링커 서브유닛이 링커 L에서 이용될 수 있다. 관심 있는 링커 서브유닛은 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 및 폴리아크릴레이트와 같은 중합체 단위, 아미노산 잔기(들), 탄수화물-기반 중합체 또는 탄수화물 잔기 및 이의 유도체, 폴리뉴클레오티드, 알킬 기, 아릴 기, 헤테로시클릭 기, 이의 조합 및 이의 치환된 버전를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 각각의 L1, L2 , L3, L4, L5 및 L6(존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 및 다이아민(예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L1은 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 폴리에틸렌 글라이콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 변형된 폴리에틸렌 글라이콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 다이아민(예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L2는 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 다이아민(예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L3은 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 다이아민(예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L4는 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 다이아민(예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L5는 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 다이아민(예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
몇몇 실시형태에서, L6은 (만약 존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 다이아민(예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-(L6)f-를 포함하는 링커이며, 여기서:
-(L1)a-은 -(T1-V1)a-이며;
-(L2)b-는 -(T2-V2)b-이며;
-(L3)c-는 -(T3-V3)c-이며;
-(L4)d-는 -(T4-V4)d-이고;
-(L5)e-는 -(T5-V5)e-이고; 그리고
-(L6)f-는 -(T6-V6)f-이고,
여기서 T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 존재하는 경우, 테더 기이고;
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6(존재하는 경우)은 공유 결합 또는 연결 작용기이고; 그리고
a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c, d, e 및 f의 합은 1 내지 6이다.
상기 기술된 바와 같이, 특정 실시양태에서, L1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티(예를 들어, 상기 화학식 (I)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티(예를 들어, 상기 화학식 (I)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, V1은 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L2은 존재하는 경우, 약물에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T2은, 존재한다면, 약물에 부착되거나, 또는 V2은, 존재한다면, 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L3은 존재하는 경우, 약물에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T3은, 존재한다면, 약물에 부착되거나, 또는 V3은, 존재한다면, 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L4은 존재하는 경우, 약물에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T4은, 존재한다면, 약물에 부착되거나, 또는 V4은, 존재한다면, 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L5은 존재하는 경우, 약물에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T5은, 존재한다면, 약물에 부착되거나, 또는 V5은, 존재한다면, 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L6은 존재하는 경우, 약물에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T6은, 존재한다면, 약물에 부착되거나, 또는 V6은, 존재한다면, 약물에 부착된다.
테더 기, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6에 관하여, 임의의 편리한 테더 기가 대상 링커에서 이용될 수 있다. 일부 실시양태에서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), 메타-아미노-벤질옥시(MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노-벤질옥시(PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐(PABC), 파라-아미노벤질(PAB), 파라-아미노-벤질아미노(PABA), 파라-아미노-페닐(PAP), 파라-히드록시-페닐(PHP), 아세탈기, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함하고, 여기서, 각각 w는 1 내지 20의 정수이고, 각각 n은 1 내지 30의 정수이고, 각각 p는 1 내지 20의 정수이고, 각각 m은 1 내지 12의 정수이다.
특정 실시양태에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 (C1-C12)알킬 또는 치환된 (C1-C12)알킬을 포함한다. 소정의 실시형태에서, (C1-C12)알킬은 1 내지 12 탄소 원자, 예컨대, 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5 탄소 원자, 또는 1 내지 4 탄소 원자, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 알킬기이다. 몇몇 경우에, (C1-C12)알킬은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-C12 알킬, 또는 C1-C10 알킬, 또는 C1-C6 알킬, 또는 C1-C3 알킬일 수 있다. 몇몇 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬이다. 예를 들어, (C1-C12)알킬은 알킬렌 또는 치환된 알킬렌, 예컨대, C1-C12 알킬렌, 또는 C1-C10 알킬렌, 또는 C1-C6 알킬렌, 또는 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬렌(예를 들어, CH2CH2)이다.
소정의 실시형태에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 1 내지 12 탄소 원자, 예컨대, 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8개의 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 치환된 알킬기이다. 몇몇 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 알킬, 예컨대, 치환된 C1-C12 알킬, 또는 치환된 C1-C10 알킬, 또는 치환된 C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1-C3 알킬일 수 있다. 몇몇 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬이다. 예를 들어, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 알킬렌, 예컨대, 치환된 C1-C12 알킬렌, 또는 치환된 C1-C10 알킬렌, 또는 치환된 C1-C6 알킬렌, 또는 치환된 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 일부 경우, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬렌이다.
특정 실시양태에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴을 포함한다. 일부 경우에, 테더기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 아릴 또는 치환된 아릴을 포함한다. 예를 들어, 아릴은 페닐일 수 있다. 어떤 경우에, 치환된 아릴은 치환된 페닐이다. 치환된 페닐은 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다. 어떤 경우에, 치환된 아릴은 치환된 페닐이고, 여기서 치환기는 본원에 기술된 바와 같은 절단 가능한 모이어티(예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체와 같은 효소적으로 절단 가능한 모이어티)를 포함한다.
일부 경우에, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴을 포함한다. 일부 경우에, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬을 포함한다. 일부 경우에, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴을 포함한다. 일부 경우에, 치환된 헤테로아릴, 치환된 시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클릴 상의 치환기는 본원에 기술된 바와 같은 절단 가능한 모이어티(예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체와 같은 효소적으로 절단 가능한 모이어티)을 포함한다.
특정 구실시양태에서, 테더기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 에틸렌 다이아민(EDA) 모이어티, 예를 들어 EDA 함유 테더 기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, (EDA)w는 1개 이상의 EDA 모이어티를 포함하며, 예컨대, w는 1 내지 50, 예컨대, 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)이다. 연결된 에틸렌 다이아민(EDA) 모이어티는 선택적으로 임의의 편리한 치환체로, 예컨대, 알킬, 치환된 알킬, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 하나 이상의 편리한 위치에서 치환될 수 있다. 소정의 실시형태에서, EDA 모이어티는 하기 구조로 표기된다:
,
y는 1 내지 6의 정수이고, r은 0 또는 1이며, 각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된다. 소정의 실시형태에서, y는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 소정의 실시형태에서, y는 1이고 r은 0이다. 소정의 실시형태에서, y는 1이고 r은 1이다. 소정의 실시형태에서, y는 2이고 r은 0이다. 소정의 실시형태에서, y는 2이고 r은 1이다. 소정의 실시형태에서, 각각의 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, EDA의 임의의 2개의 인접한 R12기는, 예컨대, 환상으로 연결되어, 피페라진일 고리를 형성할 수 있다. 소정의 실시형태에서, y는 1이고, 2개의 인접한 R12기는 알킬기이고, 환상으로 연결되어 피페라진일 고리를 형성한다. 소정의 실시형태에서, y는 1이고, 인접한 R12기는 수소, 알킬(예컨대, 메틸) 및 치환된 알킬(예컨대, 저급 알킬-OH, 예컨대, 에틸-OH 또는 프로필-OH)로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 4-아미노-피페리딘(4AP) 모이어티(또한 본원에서 피페리딘-4-아미노, P4A로 지칭된다)를 포함한다. 4AP 모이어티는 선택적으로 임의의 편리한 치환체로, 예컨대, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 하나 이상의 편리한 위치에서 치환될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 4AP 모이어티는 하기 구조로 표기된다:
여기서 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티(예컨대, 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜), 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R12는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, R12는 카복시 변형된 폴리에틸렌 글리콜이다.
특정 실시양태에서, R12는 식: (PEG)k에 의해 설명되는 폴리에틸렌 글라이콜 모이어티를 포함하며 이는 구조:
,
여기서 k는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 18, 또는 1 내지 16, 또는 1 내지 14, 또는 1 내지 12, 또는 1 내지 10, 또는 1 내지 8, 또는 1 내지 6, 또는 1 내지 4, 또는 1 또는 2의 정수, 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 몇몇 경우에, k는 2이다. 소정의 실시형태에서, R17은 OH, COOH 또는 COOR로부터 선택되되, 여기서 R은 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R17은 COOH이다. 특정 실시양태에서, R17은 COOCH3이다.
특정 실시양태에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 (PEG)n을 포함하고, 여기서 (PEG)n은 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜 연결 단위이다. 소정의 실시형태에서, (PEG)n은 하기 구조로 표기된다:
,
여기서 n은 1 내지 50, 예컨대, 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6의 정수, 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 몇몇 경우에, n은 2이다. 몇몇 경우에, n은 3이다. 몇몇 경우에, n은 6이다. 몇몇 경우에, n은 12이다.
특정 실시양태에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 (AA)p를 포함하며, 여기서 AA는 아미노산 잔기이다. 임의의 편리한 아미노산이 사용될 수 있다. 관심 아미노산은 L-아미노산 및 D-아미노산, 자연 발생 아미노산, 예컨대, 임의의 20개의 1차 알파-아미노산 및 베타-알라닌, 비자연 발생 아미노산(예를 들어, 아미노산 유사체), 예컨대, 비자연 발생 알파-아미노산 또는 비자연 발생 베타-아미노산 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, p는 1 내지 50, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20의 정수이다. 소정의 실시형태에서, p는 1이다. 소정의 실시형태에서, p는 2이다.
특정 실시양태에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 아미노산 유사체를 포함한다. 아미노산 유사체는 자연 발생 단백질에서 일반적으로 발견되는 하나 이상의 아미노산(예를 들어, Ala 또는 A, Cys 또는 C, Asp 또는 D, Glu 또는 E, Phe 또는 F, Gly 또는 G, His 또는 H, Ile 또는 I, Lys 또는 K, Leu 또는 L, Met 또는 M, Asn 또는 N, Pro 또는 P, Gln 또는 Q, Arg 또는 R, Ser 또는 S, Thr 또는 T, Val 또는 V, Trp 또는 W, Tyr 또는 Y)과 구조 및/또는 전체 모양이 유사한 화합물을 포함한다. 아미노산 유사체는 또한 변형된 측쇄 또는 백본을 가진 천연 아미노산을 포함한다. 아미노산 유사체는 또한 천연 유래 D-형태뿐만 아니라, 아미노산 유사체들의 L-형태와 동일한 입체화학을 가지는 아미노산 유사체를 포함한다. 몇몇 경우에, 아미노산 유사체는 하나 이상의 천연 아미노산의 백본 구조 및/또는 측쇄 구조를 공유하며, 이때 차이(들)는 분자의 하나 이상의 변형된 기이다. 이러한 변형은, 관련된 원자(예컨대, S)에 대한 원자(예컨대, N)의 치환, 기(예컨대, 메틸, 또는 하이드록실 등) 또는 원자(예컨대 Cl 또는 Br 등)의 첨가, 기의 결실, 공유 결합의 치환(이중 결합에 대한 단일 결합 등), 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 유사체는 α-하이드록시산, 및 α-아미노산 등을 포함할 수 있다. 아미노산 유사체의 예는 설포알라닌 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
특정 실시양태에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 식 -(CR13OH)m- 으로 기술되는 모이어티를 포함하며, 여기서 m은 0이거나 n은 1 내지 50, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12이다. 소정의 실시형태에서, m은 1이다. 소정의 실시형태에서, m은 2이다. 소정의 실시형태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, R13는 수소이다. 소정의 실시형태에서, R13은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R13은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대, C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R13은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R13은 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R13는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R13은 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 특정 실시양태에서, R13은 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R13는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R13는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R13은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R13는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R13는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 실시양태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. 이들 실시형태에서, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴은 R13에 대해서 위에서 기재된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 메타-아미노-벤질옥시(MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노-벤질옥시(PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐(PABC), 파라-아미노벤질(PAB), 파라-아미노-벤질아미노(PABA), 파라-아미노-페닐(PAP) 또는 파라-히드록시-페닐(PHP)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 테더는 다음 구조로 기술되는 MABO 기를 포함한다:
.
일부 실시양태에서, 테더는 다음 구조로 기술되는 MABC 기를 포함한다:
.
일부 실시양태에서, 테더는 다음 구조로 기술되는 PABO 기를 포함한다:
.
일부 실시양태에서, 테더는 다음 구조로 기술되는 PABC 기를 포함한다:
.
일부 실시양태에서, 테더는 다음 구조로 기술되는 PAB 기를 포함한다:
.
일부 실시양태에서, 테더는 다음 구조로 기술되는 PABA 기를 포함한다:
.
일부 실시양태에서, 테더는 다음 구조로 기술되는 PAP 기를 포함한다:
.
일부 실시양태에서, 테더는 다음 구조로 기술되는 PHP 기를 포함한다:
.
특정 실시양태에서, 각각의 R14는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
소정의 실시형태에서, R14는 수소이다. 소정의 실시형태에서, 각각의 R14는 수소이다. 소정의 실시형태에서, R14는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R14은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대, C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R14는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R14는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R14는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R14는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R14는 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R14는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R14는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R14는 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R14는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R14는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R14은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R14는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R14는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
위에 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조의 일부 실시양태에서, 페닐 고리는 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된 하나 이상의 추가 기로 치환될 수 있다.
링커 L의 특정 실시양태에서, 테더 기 T1, T2, T3, T4, T5 또는 T6 중 하나 이상은 각각 글리코시드 또는 글리코시드 유도체로 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 위에서 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조는 글리코사이드 및 글리코시드 유도체로부터 선택되는 하나 이상의 추가 기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 위에 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조의 일부 실시양태에서, 페닐 고리는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가 기로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 다음 구조로부터 선택될 수 있다:
, , ,,
, , 및.
연결 작용기, V1, V2, V3, V4, V5 및 V6에 관하여, 임의의 편리한 연결 작용기는 링커 L에서 이용될 수 있다. 관심 연결 작용기는 비제한적으로 아미노, 카보닐, 아미도, 옥시카보닐, 카복시, 설포닐, 설폭시드, 설포닐아미노, 아미노설포닐, 티오, 옥시, 포스포, 포스포르아미데이트, 티오포스포라데이트 등을 포함한다. 일부 실시양태에서, V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이다. 소정의 실시형태에서, q는 1 내지 6의 정수(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)이다. 특정 실시양태에서, q는 1이다. 특정 실시양태에서, q는 2이다. 특정 실시양태에서, q는 3이다. 특정 실시양태에서, q는 4이다. 특정 실시양태에서, q는 5이다. 특정 실시양태에서, q는 6이다.
몇몇 실시형태에서, 각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, R15는 수소이다. 소정의 실시형태에서, 각각의 R15는 수소이다. 소정의 실시형태에서, R15는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대, C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R15는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대, C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R15는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R15는 아실 또는 아실옥시이다. 소정의 실시형태에서, R15는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R15는 알킬아마이드 또는 치환된 알킬아마이드이다. 특정 실시양태에서, R15는 설포닐이다. 소정의 실시형태에서, R15는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 소정의 실시형태에서, R15는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대, C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대, C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R15은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대, C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 소정의 실시형태에서, R15는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대, C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 소정의 실시형태에서, R15는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대, C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
소정의 실시형태에서, 각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알켄일, 치환된 알켄일, 알킨일, 치환된 알킨일, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구실시양태에서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴은 R15에 대해 전술한 바와 같다.
소정의 실시형태에서, 테더기는 아세탈기, 설파이드, 하이드라진 또는 에스터를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 테더기는 아세탈기를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 테더기는 하이드라진을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 테더기는 설파이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 테더기는 에스터를 포함한다.
전술한 바와 같이, 일부 실시양태에서 L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-를 포함하는 링커이고, 여기서 a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c, d, e 및 f의 합은 1 내지 6이다.
일부 실시양태에서, 링커 L에서:
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되며;
T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈기 , 디설파이드, 히드라진 및 에스테르로부터 선택되고; 그리고
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
식 중:
(PEG)n은이되, n은 1 내지 30의 정수이며;
EDA는 하기 구조:
를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이되, y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘(4AP)은이고;
AA는 아미노산 잔기이되, p는 1 내지 20의 정수이고; 그리고
각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 임의의 2개의 인접한 R12 기는 고리형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며; 그리고
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6 및 V1, V2, V3, V4 ,V5 및 V6, 은 다음으로부터 선택된다:
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 -CO-이며;
T3은 (C1-C12)알킬이며 V3은 -CO-이며;
d, e, 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
d, e, 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
T4는 (AA)p이며 V4는 부재하며;
T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
f는 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CONH-이며;
T2는 (PEG)n이며 V2는 -CO-이며;
T3은 (AA)p이며 V3은 부재하며;
T4는 PABC이며 V4는 부재하며;
e 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 아미노산 유사체이며 V2는 -NH-이며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
T4은 (AA)p이며 V4은 부재하며;
T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
f는 0이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 링커 L는 다음으로부터 선택되는 구조를 갖는다:
;
;
;
;
.
특정 실시양태에서, 물결선()으로 도시되는 링커 L의 좌측은 인돌릴 또는 피롤릴 질소에서 각각 하이드라지닐-인돌릴 또는 하이드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 부분에 부착된다. 특정 실시양태에서, 별표(*)로 도시된 링커 L의 우측은 약물 W1에 부착된다. 예를 들어, 링커 L의 좌측은 아마이드 결합을 통해 약물 W1에 부착될 수 있다.
특정 실시양태에서, 화학식 I의 접합체는 하기로부터 선택된 구조를 갖는다:
;
;
;
; 및
.
특정 실시양태에서, 접합체는 위에서 설명되는 바와 같이 항체 및 약물이 링커(예를 들어, L)에 의해 함께 연결된 항체-약물 접합체이다. 일부 경우, 링커는 절단 불가능한 링커이다.
다른 경우, 링커는 절단 가능한 링커이다. 절단 가능한 링커는 하나 이상의 절단 가능한 모이어티를 포함하는 링커이며, 여기서 절단 가능한 모이어티는 특정 조건 하에서 해리될 수 있는 하나 이상의 결합을 포함하여 절단 가능한 링커를 2개 이상의 분리가능한 부분으로 분리한다. 예를 들어, 절단 가능한 모이어티는 하나 이상의 공유 결합을 포함할 수 있으며, 이는 특정 조건 하에서 절단 가능한 링커를 2개 이상의 부분으로 분리하기 위해 해리되거나 분해될 수 있다. 그러한 절단 가능한 링커는 적절한 조건 하에서 절단 가능한 링커가 절단되어 약물에 대한 원하는 작용 표적 부위에서 항체로부터 약물을 분리하거나 방출하도록 항체-약물 접합체에 포함될 수 있다.
일부 예에서, 절단 가능한 링커는 2개의 절단 가능한 부분, 예컨대 제1 절단 가능한 모이어티 및 제2 절단 가능한 모이어티를 포함한다. 절단 가능한 모이어티는 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 분리하거나 방출하기 위해 두 절단 가능한 모이어티의 절단이 필요하도록 구성될 수 있다. 예를 들어, 절단 가능한 링커의 절단은 초기에 2개의 절단 가능한 모이어티 중 하나를 절단한 다음 2개의 절단 가능한 모이어티 중 다른 하나를 절단함으로써 달성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 절단 가능한 링커는 제1 절단 가능한 모이어티 및 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 방해하는 제2 절단 가능한 모이어티를 포함한다. "절단을 방해한다"는 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재가 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 가능성을 감소시키거나 실질적으로 억제하여 절단 가능한 링커의 양을 실질적으로 감소시키거나 절단을 방지함을 의미한다. 예를 들어, 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 방해할 수 있다. 제2 절단 가능한 모이어티의 존재에 의한 제1 절단 가능한 모이어티의 절단 방해는 결국 항체로부터 약물의 방출을 방지하거나 양을 실질적으로 감소시킨다. 예를 들어, 항체로부터의 약물의 조기 방출은 항체-약물 접합체가 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위에 또는 그 근처에 있을 때까지 실질적으로 감소되거나 방지될 수 있다.
일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티가 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 방해하기 때문에, 절단 가능한 링커의 절단은 초기에 제2 절단 가능한 모이어티를 절단한 다음 제1 절단 가능한 모이어티를 절단함으로써 달성될 수 있다. 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 제1 절단 가능한 모이어티의 절단에 대한 방해를 감소시키거나 제거하여, 제1 절단 가능한 모이어티가 절단되게 할 수 있다. 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 항체-약물 접합체로부터 약물을 방출하기 위해 상기 기재된 바와 같이 절단 가능한 링커가 해리되거나 2개 이상의 부분으로 분리되는 결과를 초래할 수 있다. 일부 경우에, 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재 하에 실질적으로 발생하지 않는다. 실질적으로란 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재 하에 제1 절단 가능한 모이어티의 약 10% 이하의 절단이 발생하며, 예컨대 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재 하에 제1 절단 가능한 모이어티의 약 9% 이하, 또는 약 8% 이하, 또는 약 7% 이하, 또는 약 6% 이하, 또는 약 5% 이하, 또는 약 4% 이하, 또는 약 3% 이하, 또는 약 2% 이하, 또는 약 1% 이하, 또는 약 0.5% 이하, 또는 약 0.1% 이하 절단이 발생한다.
달리 말하면, 제2 절단 가능한 모이어티는 절단으로부터 제1 절단 가능한 모이어티를 보호할 수 있다. 예를 들어, 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 절단으로부터 제1 절단 가능한 모이어티를 보호할 수 있고, 따라서 항체-약물 접합체가 약물에 대한 목적하는 작용 표적 부위에 또는 그 근처에 있을 때까지 항체로부터 약물의 조기 방출을 실질적으로 감소시키거나 방지할 수 있다. 이와 같이, 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 제1 절단 가능한 모이어티를 노출시키고(예를 들어, 제1 절단 가능한 모이어티를 탈보호), 따라서 제1 절단 가능한 모이어티가 절단되도록 허용하고, 이는 절단 가능한 링커의 절단을 초래하고, 차례로 상기 기술된 바와 같이 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위에서 분리 또는 항체로부터 약물을 방출한다. 특정 예에서, 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 제1 절단 가능한 모이어티를 후속 절단에 노출시키지만, 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 그 자체로 절단 가능한 링커의 절단을 초래하지 않는다(즉, 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 여전히 절단 가능한 링커를 절단하기 위해 필요하다).
절단 가능한 링커에 포함된 절단 가능한 모이어티는 각각 효소적으로 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 예를 들어, 제1 절단 가능한 모이어티는 제1 효소적으로 절단 가능한 모이어티일 수 있고, 제2 절단 가능한 모이어티는 제2 효소적으로 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 효소적으로 절단 가능한 모이어티는 효소의 효소 작용을 통해 전술한 바와 같이 2개 이상의 부분으로 분리될 수 있는 절단 가능한 모이어티이다. 효소에 의해 절단 가능한 모이어티는 효소의 효소 작용을 통해 절단될 수 있는 임의의 절단 가능한 모이어티, 예를 들어 비제한적으로 펩티드, 글리코시드 등일 수 있다. 일부 경우에, 효소적으로 절단 가능한 모이어티를 절단하는 효소는 항체-약물 접합체로부터 방출될 약물의 원하는 표적 작용 부위와 같은 원하는 표적 작용 부위에 존재한다. 어떤 경우에는 효소적으로 절단 가능한 모이어티를 절단하는 효소가 전혈, 혈장 또는 혈청과 같은 다른 영역에 상당한 양으로 존재하지 않는다. 이와 같이, 효소적으로 절단 가능한 모이어티의 절단은 원하는 작용 부위에서 상당한 절단이 일어나는 반면, 다른 영역에서는 또는 항체-약물 접합체가 원하는 작용 부위에 도달하기 전에 절단이 유의하게 일어나지 않도록 제어될 수 있다.
예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 암 치료, 예를 들어 암 세포가 존재하는 원하는 작용 부위에 암 치료 약물을 전달하기 위해 사용될 수 있다. 경우에 따라 프로테아제 효소인 카텝신 B와 같은 효소는 암세포에서 과발현되는 암에 대한 바이오마커가 될 수 있다. 암에서 특정 효소의 과발현 및 이에 따른 국소화는 목적하는 작용 부위(예를 들어, 암 부위(및 과발현된 효소))에서 약물을 특이적으로 방출하기 위해 본 개시내용의 항체-약물 접합체의 절단 가능한 링커에 포함된 효소적으로 절단 가능한 모이어티의 맥락에서 사용될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 효소적으로 절단 가능한 모이어티는 암 세포에서 과발현되는 효소에 의해 절단될 수 있는 절단 가능한 모이어티(예를 들어, 펩티드)이다. 예를 들어, 효소는 프로테아제 효소 카텝신 B일 수 있다. 이와 같이, 일부 경우에, 효소적으로 절단 가능한 모이어티는 카텝신 B와 같은 프로테아제 효소에 의해 절단될 수 있는 절단 가능한 모이어티(예를 들어, 펩티드)이다.
특정 실시양태에서, 효소적으로 절단 가능한 모이어티는 펩티드이다. 펩티드는 절단 가능한 링커에 사용하기에 적합하고 효소의 효소적 작용을 통해 절단될 수 있는 임의의 펩티드일 수 있다. 효소적으로 절단 가능한 모이어티로서 사용될 수 있는 펩티드의 비제한적 예는, 예를 들어 Val-Ala, Phe-Lys 등을 포함한다. 예를 들어, 위에서 설명되는 제1 절단 가능한 모이어티(즉, 제2 절단 가능한 모이어티에 의해 조기 절단으로부터 보호되는 절단 가능한 모이어티)는 펩타이드를 포함할 수 있다. 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 프로테아제 효소(예를 들어, 카텝신 B)에 의한 절단으로부터 제1 절단 가능한 모이어티(펩티드)을 보호할 수 있으므로 항체-약물 접합체가 약물의 원하는 작용 표적 부위 또는 그 근처에서 분리될 때까지 항체로부터 약물의 조기 방출을 실질적으로 감소시키거나 방지할 수 있다. 일부 예에서, 제1 절단 가능한 모이어티를 포함하는 펩티드의 아미노산 잔기 중 하나는 치환기에 연결되거나 치환기를 포함하며, 여기서 치환기는 제2 절단 가능한 모이어티를 포함한다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 글리코시드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 효소적으로 절단 가능한 부분은 글리코시드(또는 글리오실)와 같은 당 모이어티이다. 일부 경우에, 글리코시드는 글리코시드를 포함하지 않는 절단 가능한 링커와 비교하여 절단 가능한 링커의 친수성 증가를 촉진할 수 있다. 글리코시드는 절단 가능한 링커에 사용하기에 적합하고 효소의 효소적 작용을 통해 절단될 수 있는 임의의 글리코시드 또는 글리코시드 유도체일 수 있다. 예를 들어, 제2 절단 가능한 모이어티(즉, 조기 절단으로부터 제1 절단 가능한 모이어티를 보호하는 절단 가능한 모이어티)는 글리코사이드일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 제1 절단 가능한 모이어티는 펩티드를 포함하고 제2 절단 가능한 모이어티는 글리코시드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 절단 가능한 모이어티는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc로부터 선택되는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 글루쿠로나이드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 갈락토시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 글루코시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 만노시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 푸코시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 O-GlcNAc이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 O-GalNAc이다.
글리코사이드는 글리코사이드 결합을 통해 절단 가능한 링커에 부착(공유 결합)될 수 있다. 글리코시드 결합은 O-글리코시드 결합(O-글리코시드), N-글리코시드 결합(글리코실아민), S-글리코시드 결합(티오글리코시드) 또는 C-글리코시드 결합(C-글리코시드 또는 C-글리코실)과 같은 비제한적인 다양한 유형의 결합을 통해 글리코시드를 절단 가능한 링커에 연결할 수 있다. 일부 경우에는 글리코시드 결합이 O-글리코시드 결합(O-글리코시드)이다. 일부 경우에, 글리코시드는 효소에 의해 부착된 절단 가능한 링커로부터 절단될 수 있다(예를 들어, 글리코시드 결합의 효소-매개 가수분해를 통해). 글리코시드는 절단 가능한 링커에 글리코시드를 부착시키는 글리코시드 결합의 절단(가수분해)을 수행할 수 있는 임의의 편리한 효소에 의해 절단 가능한 링커로부터 제거되거나 절단될 수 있다. 글리코시드를 절단 가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단(가수분해)을 매개하는데 사용될 수 있는 효소의 예는 글루쿠로니다제, 글리코시다아제, 예컨대 갈락토시다제, 글루코시다제, 만노시다제, 푸코시다제 등이다. 글리코시드를 절단 가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단(가수분해)을 매개하기 위해 다른 적합한 효소도 사용될 수 있다. 일부 경우에, 글리코시드를 절단 가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단(가수분해)을 매개하는데 사용되는 효소는 항체-약물 접합체의 약물에 대한 원하는 작용 부위 또는 그 근처에서 발견된다. 예를 들어, 효소는 항체-약물 접합체의 약물에 대한 원하는 작용 부위 또는 그 근처에서 세포에서 발견되는 리소좀 글리코시다제와 같은 리소좀 효소일 수 있다. 일부 경우에, 효소는 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 매개하는 효소가 발견되는 표적 부위에서 또는 그 근처에서 발견되는 효소이다.
설명 및 본원에서 설명되는 상기 구조에서 제시되는 임의의 화학적 실체, 약물, 링커 및 결합 모이어티는 대상 접합체에 사용하기 위해 적응될 수 있다.
히드라지닐-인돌릴 및 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물 및 접합체를 생성하는 방법에 관한 추가 개시는 미국 특허 9,310,374 및 미국 특허 9,493,413에서 찾아볼 수 있으며, 이들 각각의 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다. 절단 가능한 링커와 관련된 추가 개시내용은 2020년 1월 22일자로 출원된 PCT 공개 번호 제WO 2020/154437호 및 2021년 11월 19일자로 출원된 미국 출원 번호 제17/531,343호에서 찾아볼 수 있으며, 이들 은 각각 개시 내용이 참조에 의해 본원에 원용된다.
항체-약물-접합체(ADC)는 일반적으로 세포독성 소분자와 같은 약물에 연결된 항체를 포함하며 건강하지 않은 세포를 표적으로 한다. 표적 항원은 때때로 건강하지 않은 세포와 건강한 세포 모두에서 발현되기 때문에 생체내(in vivo)에서 페이로드(예를 들어, 약물 또는 활성제)는 두 유형의 세포 모두에서 오프로드될 수 있다. 이러한 경우 ADC는 건강하지 않은 세포와 동일한 항원을 발현하는 비표적 세포나 건강한 세포를 표적으로 할 수 있다. 이는 임상적으로 검출할 수 있는 교차 반응을 초래할 수 있다. 예를 들어, 대상에게 ADC를 투여하면 ADC의 표적 매개 교차 반응성과 연관되는 독성이 유발될 수 있다. 독성은 ADC 자체의 특이성 또는 효능에 관계없이 대상에게 투여될 수 있는 제한된 투여량을 의미할 수 있다. 따라서, 일부 경우, 표적 항원을 발현하는 건강한 세포와 ADC의 교차 반응으로 인한 독성을 감소시키는 것이 바람직할 수 있다.
일부 경우, 본 개시내용의 ADC는 ADC가 대상체에게 투여되는 경우 ADC의 표적 매개 교차 반응성과 연관디는 감소된 독성을 갖는다. 예를 들어, 본원에서 설명되는 화학식 (I)의 ADC는 대상체에게 화학식 (I)이 아닌 ADC가 투여되는 경우 교차 반응성에 의해 야기되는 독성과 비교하여 대상체에서 표적 매개 교차 반응성에 의해 야기되는 독성이 감소되거나 저하될 수 있다. 독성 감소 또는 저하는 대상체에서의 독성과 연관되는 하나 이상의 매개변수의 감소 또는 저하를 의미한다. 예를 들어, 매개변수는 임상 관찰을 기반으로 점수가 매겨질 수 있으며 대상체의 신체 부위나 기능적, 생리학적 또는 행동적 양상에 해당할 수 있다. 독성을 감소시켜 본 개시내용의 ADC는 각 신체 부위 또는 대상체의 생리학적 또는 행동적 양상에 대한 임상 점수(들)를 기반으로 대상ㅊ에서 반응 파라미터의 발생, 강도, 중증도 및/또는 기간을 감소시키거나 저하시킨다. 대상체에서 독성과 연관되는 매개변수는 활성 수준/유발되지 않은 행동, 유발된 행동, 운동/신경학적, 호흡, 자세, 신체 상태, 피부 상태, 안구 상태, (질환 징후와 관련없는) 종양 또는 감염, 체중 등 및 이들의 조합을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
일부 예에서, 본원에서 사용되는 화학식 (I) 이외의 ADC는 링커-페이로드가 본원에서 개시되는 화학식 (I)의 ADC와 구조적으로나 기능적으로 또는 둘 모두 상이한 ADC를 지칭한다. 일부 경우, 화학식 (I) 이외의 ADC는 본 개시내용의 화학식 (I)에 포함되지 않는다. 예를 들어, 화학식 (I) 이외의 ADC는 화학식 (I)과 비교하여 구조가 상이한 링커를 갖는 약물에 결합된 항체를 지칭할할 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 ADC를 대상체에게 투여하는 경우, 표적 매개 교차 반응성은 대상체에서 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배 또는 그 이상 감소된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 ADC를 대상체에게 투여하는 경우, 표적 매개 교차 반응성은 대상체에서 위에서 설명되는 특정 매개변수 또는 매개변수의 조합의 임상적 관찰의 수, 중증도 및/또는 기간을 감소시켜 감소된다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 ADC를 대상체에게 투여하는 경우, 대상체에게 화학식 (I) 이외의 ADC를 투여하고 표적 항원이 동일한 경우와 비교하여 생체내(in vivo) ADC의 안정성이 증가된다.
일부 실시양태에서, 위에서 논의되는 바와 같이, 화학식 (I)의 ADC는 제1 및 제2 절단 가능한 모이어티를 갖는 절단 가능한 링커를 포함하며, 여기서 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 제1 절단 가능한 모이어티를 절단으로부터 보호하며, 따라서 ADC로부터의 약품의 방출을 실질적으로 감소시키거나 방지한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 ADC는 절단 가능한 링커를 포함하며, 제2 절단 가능한 모이어티(예를 들어, 제1 절단 가능한 모이어티를 조기 절단으로부터 보호하는 절단 가능한 모이어티)는 글리코사이드 또는 글리코사이드 유도체이며 제1 절단 가능한 모이어티는 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상는 ADC에 의해 표적화되는 건강하지 않은 세포와 비교하여 건강한 세포에서 글루쿠로니데이스 또는 글리코시데이스의 차등적 발현을 가질 수 있다. 예를 들어, 건강한 세포는 ADC의 표적이 되는 건강하지 않은 세포에 비해 글루쿠로니데이스 또는 글리코시데이스를 덜 발현할 수 있다. 일부 경우, 표적 항원을 발현하는 건강한 세포와 ADC의 표적 매개 교차 반응성이 있는 경우, 건강한 세포에 의한 글루쿠로니데이스 또는 글리코시데이스의 감소된 발현은 링커의 제2 절단 가능한 모이어티의 절단의 감소 또는 방지를 초래할 수 있으며, 따라서 건강한 세포의 위치에서 ADC로부터의 약물의 방출의 감소 또는 방지를 초래할 수 있다. 결국, 일부 실시양태에서, 이는 표적 항원을 발현하는 건강한 세포와 ADC의 표적 매개 교차 반응성에 의해 야기되는 독성의 감소를 초래할 수 있다.
접합체 생성에 유용한 화합물
본 개시내용은 본원에 기술된 접합체를 생성하는 데 유용한 히드라지닐-인돌릴 및 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물은 폴리펩티드(예를 들어, 항체) 및 약물 또는 활성제(예를 들어, 캄프토테신 또는 캄프토테신 유도체)의 접합에 유용한 접합 모이어티일 수 있다. 예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물은 폴리펩티드(항체)에 결합될 수 있고 또한 약물 또는 활성제에 결합되어 간접적으로 폴리펩티드(항체)와 약물을 함께 결합시킬 수 있다.
특정 실시양태에서, 화합물은 화학식 (III)의 화합물이다:
(III)
식 중
Z는 CR4 또는 N이며;
R2 및 R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 각각 독립적으로 선택되거나 R2 및 R3은 선택적으로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하며;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되며;
L은 링커이며;
W1은 약물이다.
화학식 (III)의 화합물과 관련하여, 치환기 Z, R2, R3, R4, L 및 W1은 화학식 (I)의 접합체와 관련하여 위에서 설명되는 바와 같다. 유사하게, 화학식 (III)의 링커 L에 관하여, T1, T2, T3, T4, T5, T6, V1, V2, V3, V4, V5 및 V6 치환기는 화학식 (I)의 접합체와 관련하여 위에서 설명되는 바와 같다.
예를 들어, 화학식 (III)의 화합물의 일부 경우, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6 및 V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 다음으로부터 선택된다:
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 -CO-이며;
T3은 (C1-C12)알킬이며 V3은 -CO-이며;
d, e, 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
d, e, 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
T4는 AA이며 V4는 부재하며;
T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
f는 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CONH-이며;
T2는 (PEG)n이며 V2는 -CO-이며;
T3는 AA이며 V3는 부재하며;
T4는 PABC이며 V4는 부재하며;
e 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 아미노산 유사체이며 V2는 -NH-이며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
T4는 AA이며 V4는 부재하며;
T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
f는 0이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (III)의 링커 L는 다음으로부터 선택되는 구조를 갖는다:
;
;
;
;
.
특정 실시양태에서, 물결선()으로 도시되는 링커 L의 좌측은 인돌릴 또는 피롤릴 질소에서 각각 하이드라지닐-인돌릴 또는 하이드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 부분에 부착된다. 특정 실시양태에서, 별표(*)로 도시된 링커 L의 우측은 약물 W1에 부착된다. 예를 들어, 링커 L의 좌측은 아마이드 결합을 통해 약물 W1에 부착될 수 있다.
화학식 (III)의 화합물은 본원에 기술된 접합 반응에 사용될 수 있으며, 여기서 히드라지닐-인돌일 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된 약물 또는 활성제가 폴리펩티드(예를 들어, 항체)에 접합되어 항체-약물 접합체를 형성한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (III)의 화합물은 다음으로부터 선택되는 구조를 갖는다:
;
;
;
; 및
.
상기 구조에 기재된 임의의 화학적 실체, 링커 및 접합 모이어티는 대상 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 개조될 수 있다.
항체
위에서 언급된 바와 같이, 대상 접합체는, 치환체 W2로서 항체를 포함할 수 있으며, 항체의 아미노산 서열은 2-포밀글라이신(fGly) 잔기를 포함하도록 변형되었다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 아미노산은 표준 명칭, 표준 3자 약어 및/또는 표준 1자 약어로 지칭될 수 있다: 알라닌 또는 Ala 또는 A; 시스테인 또는 Cys 또는 C; 아스파트산 또는 Asp 또는 D; 글루탐산 또는 Glu 또는 E; 페닐알라닌 또는 Phe 또는 F; 글라이신 또는 Gly 또는 G; 히스티딘 또는 His 또는 H; 아이소류신 또는 Ile 또는 I; 라이신 또는 Lys 또는 K; 류신 또는 Leu 또는 L; 메싸이오닌 또는 Met 또는 M; 아스파라긴 또는 Asn 또는 N; 프롤린 또는 Pro 또는 P; 글루타민 또는 Gln 또는 Q; 아르기닌 또는 Arg 또는 R; 세린 또는 Ser 또는 S; 트레오닌 또는 Thr 또는 T; 발린 또는 Val 또는 V; 트립토판 또는 Trp 또는 W; 및 티로신 또는 Tyr 또는 Y이다.
본 개시내용의 항체는 특정 표적 조직(예를 들어, 암성 조직)에 결합할 수 있고, 정상 조직에 대한 결합(예를 들어, 면역조직화학으로 측정할 때 유의하지 않은 결합 또는 면역조직화학으로 검출 불가능한 결합)을 나타내지 않을 수 있다. 예를 들어, 본원에서 설명되는 항체는 암성 세포가 있는 인간 위, 유방 및/또는 폐 조직에 결합할 수 있으나, 암성 세포가 없는 인간 위, 유방 및/또는 폐 조직에 대한 검출 가능한 결합을 나타내지 않을 수 있다.
항체는 미국 출원 공개 제2012/0141375호 및 제2016/0145343호에서 설명되는 임의의 방법을 수행하는 것을 포함하여 다양한 연구, 진단 및 치료 응용에 사용되며, 이들은 각각 개시내용이 참조에 의해 본원에 원용된다.
대상 항체는 특정 표적에 대한 고친화도 결합을 나타낸다. 예를 들어, 대상 항체는 적어도 약 10-7 M, 적어도 약 10-8 M, 적어도 약 10-9 M, 적어도 약 10-10 M, 적어도 약 10-11 M, 또는 적어도 약 10-12 M 또는 적어도 약 10-12 M의 친화도로 결합한다. 예를 들어, 대상 항체는 약 10-7 M 내지 약 10-8 M, 약 10-8 M 내지 약 10-9 M, 약 10-9 M 내지 약 10-10 M, 약 10-10 M 내지 약 10-11 M 또는 약 10-11 M 내지 약 10-12 M 또는 10-12 M 초과의 친화도로 에피토프에 결합한다.
본원에 사용되는 용어 "면역글로불린"은 면역글로불린 유전자에 의해 실질적으로 코딩되는 하나 이상의 폴리펩타이드로 구성되는 단백질을 지칭한다. 인식되는 인간 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파(IgA1 및 IgA2), 감마(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), 델타, 엡실론 및 뮤 불변 영역 유전자; 및 수많은 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함한다. 전장 면역글로불린 경쇄(약 25 kD 또는 214개 아미노산)는 N-말단(약 110개 아미노산)의 가변 영역 유전자 및 C-말단의 카파 또는 람다 불변 영역에 의해 코딩된다. 전장 면역글로불린 중쇄(약 50 kD 또는 446개 아미노산)는 N-말단의 가변 영역 유전자(약 116개 아미노산) 및 C-말단의 다른 전술한 불변 영역 유전자 중 하나, 예를 들어, (약 330개 아미노산을 코딩하는) 감마에 의해 코딩된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체는 전장 면역글로불린 중쇄 및 전장 면역글로불린 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상 항체는 전장 면역글로불린 중쇄 및 전장 면역글로불린 경쇄를 포함하지 않으며, 대신 전장 면역글로불린 중쇄 및 전장 면역글로불린 경쇄의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 별도의 폴리펩타이드 사슬상에 함유되어 있으며; 다른 실시양태에서, 항원 결합 단편은 단일 폴리펩타이드 사슬 내에 함유된다. 용어 "항원 결합 단편"은 위에서 설명되는 바와 같이 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 전장 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 결합 단편의 예는 (i) Fab 단편(VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성되는 일가 단편; (ii) F(ab')2 단편(힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결되는 2개의 Fab 단편을 포함하는 이가 단편; (iii) Fd 단편(VH 및 CH1 도메인으로 구성됨); (iv) Fv 단편(항체의 단일 아암(arm)의 VH 및 VL 도메인으로 구성됨); (v) dAb 단편(VH 도메인으로 구성됨); (vi) 단리된 CDR; (vii) 단쇄 Fv (scFv) (VH 및 VL 도메인이 짝을 이루어 일가 분자를 형성하도록 재조합 수단을 사용하여 합성 링커에 의해 연결되는 항체의 단일 암의 VH 및 VL 도메인으로 구성됨); (viii) 다이아바디(VH 및 VL 도메인이 짝을 이루어 일가 분자를 형성하지 않도록 연결되는 2개의 scFv로 구성됨; scFv 쌍 중 각각의 하나의 VH는 다른 scFv의 VL 도메인과 쌍을 이루어 이가 분자를 형성함); (ix) 이중특이적 항체(적어도 2개의 항원 결합 영역으로 구성되며, 각각의 영역은 상이한 에피토프에 결합함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 단편은 Fab 단편이다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 단편은 단쇄 항체(scFv)이다.
일부 실시양태에서, 대상 항체는 재조합 또는 변형 항체, 예를 들어 키메라, 인간화, 탈면역화 또는시험관내 생성 항체이다. 본원에서 사용되는 용어 "재조합" 또는 "변형"된 항체는 재조합 수단, 예컨대, (i) 숙주 세포로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체; (ii) 재조합 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, (iii) 인간 면역글로불린 유전자에 대해 이식유전자성인 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체 또는 (iv) 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열로 스플라이싱하는 단계를 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나 발현되거나 생성되거나 단리된 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 항체는 인간화, CDR 이식, 키메라, 탈면역 및 시험관내 생성 항체를 포함하며, 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래한 불변 영역을 선택적으로 포함할 수 있다.
전장 이중특이적 항체는 예를 들어, 시험관내 무세포 환경에서 또는 공동 발현을 사용하여 구분되는 특이성을 갖는 2개의 항체 절반 분자의 이종이량체 형성을 촉진하기 위해 각각의 절반 분자에 있는 중쇄 CH3 계면에서 치환을 도입하여 2개의 단일특이적 이가 항체 사이의 Fab 아암 교환(또는 절반 분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있다. Fab 아암 교환 반응은 이황화 결합 이성질체화 반응과 CH3 도메인의 해리-결합의 결과이다. 모 단일특이적 항체의 힌지 영역에 있는 중쇄 이황화 결합이 감소됩니다. 모 단일특이적 항체 중 하나의 생성된 유리 시스테인은 제2 모 단일특이적 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화 결합을 형성하고 동시에 모 항체의 CH3 도메인은 해리-회합에 의해 방출 및 재형성됩니다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화보다 이종이량체화를 선호하도록 조작될 수 있습니다. 생성된 생성물은 각각 구분된 에피토프에 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 절반 분자를 갖는 이중특이적 항체이다.
"노브-인-홀" 전략(예를 들어, PCT 국제 공보 제WO 2006/028936호 참조)을 사용하여 전장 이중특이적 항체를 생성할 수 있다. 간략하게, 인간 IgG에서 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산은 이종이량체 형성을 촉진하기 위해 CH3 도메인 상호작용에 영향을 미치는 위치에서 돌연변이될 수 있다. 소형 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 항원과 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄에 도입되며, 대형 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 항원과 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄에 도입된다. 두 항체의 공동 발현 후, "홀"이 있는 중쇄와 "노브"가 있는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로 이종이합체가 형성됩니다. 노브 및 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인의 변형된 위치로 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T3945/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S/L368A/Y407V.
하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기와 제2 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환하여 정전기적 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 출원 공개 번호 제2010/0015133호; 제2009/0182127호; 제2010/028637호; 및 제2011/0123532호에서 설명되는 바와 같다. 다른 전략에서, 이종이량체화는 다음 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인의 변형된 위치로 표현됨):L351 Y/F405A/Y407V/T394W, T366I/K392M/T394W/F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W/F405A/Y407V, L351Y/Y407A/T366A/K409F, L351Y/Y407A/T366V/K409F, Y407A/T366A/K409F 또는 T350V/L351Y/F405A/Y407V, T350V/T366L/K392L/T394W에 의해 촉진될 수 있으며, 이는 미국 출원 공개 번호 제2012/0149876호 또는 미국 출원 공개 번호 제2013/0195849호에서 설명되는 바와 같다.
또한, 단쇄 이중특이적 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 단쇄 이중특이적 항체는 이중특이적 scFv이다. 대상 항체는 인간화될 수 있다. 존재하는 경우, 불변 영역(들)은 또한 실질적으로 또는 전체적으로 인간 면역글로불린으로부터 유래될 수 있다.
인간화 항체를 제조하는 방법은 당해 기술분야에서 알려져 있다. 마우스 CDR을 인간 가변 도메인 프레임워크로 치환하면 예를 들어 인간 가변 도메인 프레임워크가 CDR이 유래된 마우스 가변 도메인 프레임워크와 동일하거나 유사한 형태를 채택하는 경우 올바른 공간 배향이 유지될 수 있다. 이는 프레임워크 서열이 CDR이 유래된 쥐 가변 프레임워크 도메인과 높은 수준의 서열 동일성을 나타내는 인간 항체로부터 인간 가변 도메인을 수득하여 달성될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 가변 프레임워크 영역은 동일하거나 상이한 인간 항체 서열로부터 유래될 수 있습니다. 인간 항체 서열은 자연 발생 인간 항체의 서열일 수 있거나 여러 인간 항체의 공통 서열일 수 있다.
뮤린 공여체 면역글로불린과 적절한 인간 수용체 면역글로불린의 상보성 결정 영역을 식별한 후, 다음 단계는 이러한 성분의 잔기가 있는 경우 생성된 인간화 항체의 특성을 최적화하기 위해 대체되어야 하는지를 결정하는 것이다. 일반적으로, 인간 아미노산 잔기를 뮤린으로 치환하는 것은 최소화되어야 하는데, 뮤린 잔기의 도입은 인간에서 인간-항-마우스-항체(HAMA) 반응을 유발하는 항체의 위험을 증가시키기 때문이다. 특정 환자에서 또는 임상 시험 동안 HAMA 반응을 모니터링하기 위해 면역 반응을 결정하는 당해 기술분야에서 인식된 방법을 수행할 수 있다. 인간화 항체가 투여된 환자는 상기 요법의 시작 및 투여 전반에 걸쳐 면역원성 평가를 받을 수 있다. HAMA 반응은 예를 들어, 표면 플라스몬 공명 기술(BIACORE) 및/또는 고체상 ELISA 분석을 포함하는 당해 기술분야에서 알려진 방법을 사용하여 환자로부터 유래한 혈청 검체에서 인간화 치료제에 대한 항체를 검출하여 측정된다. 많은 실시양태에서, 대상 인간화 항체는 인간 대상에서 HAMA 반응을 실질적으로 유발하지 않는다.
인간 가변 영역 프레임워크 잔기의 특정 아미노산은 CDR 형태 및/또는 항원에 대한 결합에 대한 가능한 영향을 기반으로 치환을 위해 선택된다. 뮤린 CDR 영역과 인간 가변 프레임워크 영역의 부자연스러운 병치는 부자연스러운 구조적 제한을 초래할 수 있으며, 이는 특정 아미노산 잔기의 치환에 의해 교정되지 않는 한 결합 친화도의 상실을 초래한다. 치환을 위한 아미노산 잔기의 선택은 부분적으로 컴퓨터 모델링에 의해 결정될 수 있다. 면역글로불린 분자의 3차원 영상을 생성하기 위한 컴퓨터 하드웨어 및 소프트웨어는 당해 기술분야에서 알려져 있다. 일반적으로, 분자 모델은 면역글로불린 사슬이나 이의 도메인의 해석된 도메인으부터 시작하여 제작된다. 모델링하려는 사슬은 해석된 3차원 구조의 사슬 또는 도메인과 아미노산 서열 유사성을 비교하고, 가장 큰 서열 유사성을 나타내는 사슬 또는 도메인을 분자 모델 구축의 출발점으로 선택한다. 적어도 50% 서열 동일성을 공유하는 사슬 또는 도메인이 모델링을 위해 선택되며, 바람직하게는 적어도 60%, 70%, 80%, 90%의 서열 동일성 또는 그 이상을 공유하는 사슬 또는 도메인이 모델링을 위해 선택된다. 해석된 시작 구조는 모델링되는 면역글로불린 사슬 또는 도메인의 실제 아미노산과 시작 구조의 실제 아미노산 사이의 차이를 허용하도록 변형된다. 변형된 구조는 복합 면역글로불린으로 조립된다. 최종적으로, 모델은 에너지 최소화와 모든 원자가 서로 적절한 거리 내에 있는지, 결합 길이 및 각도가 화학적으로 허용 가능한 한계 내에 있는지 확인하여 개선된다.
Kabat에 의해 정의된 프레임워크 잔기가 Chothia에 의해 정의된 구조적 루프 잔기를 구성하는 경우, 마우스 항체에 존재하는 아미노산을 인간화 항체로의 치환을 위해 선택할 수 있다. "CDR 영역에 인접한" 잔기는 인간화 면역글로불린 사슬의 1차 서열에서 하나 이상의 CDR에 바로 인접한 위치, 예를 들어 Kabat에 의해 정의된 CDR 또는 Chothia에 의해 정의된 CDR(예를 들어, Chothia 및 Lesk JMB 196:901 (1987) 참조)에 바로 인접한 위치에 있는 아미노산 잔기를 포함합니다. 이러한 아미노산은 특히 CDR의 아미노산과 상호작용할 가능성이 높으며, 수용체로부터 선택되는 경우 공여체 CDR을 왜곡하고 이의 친화도를 감소시킬 가능성이 있습니다. 또한, 인접한 아미노산은 항원과 직접 상호작용할 수 있으며(Amit 등, Science, 233:747 (1986)) 공여체로부터 이러한 아미노산을 선택하는 것은 원래의 친화성을 제공하는 모든 항원 접촉을 유지하는 것이 바람직할 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상 항체는 scFv 다량체를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 대상 항체는 scFv 이량체(에를 들어, 2개의 직렬 scFv(scFv2)를 포함함), scFv 삼량체(예를 들어, 3개의 직렬 scFv(scFv3)를 포함함), scFv 사량체(예를 들어, 4개의 직렬 scFv(scFv4)를 포함함)이거나, (예를 들어, 직렬로) 4개 초과의 scFv의 다량체이다. scFv 단량체는 약 2개 아미노산 내지 약 10개 아미노산 길이, 예를 들어, 길이가 2 aa, 3 aa, 4 aa, 5 aa, 6 aa, 7 aa, 8 aa, 9 aa, 또는 10 aa이다. 적합한 링커는 예를 들어, (Gly)x(x는 2 내지 10의 정수임) 글라이신-세린 중합체 등을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상 항체는 면역글로불린의 불변 영역(예를 들어, Fc 영역)을 포함한다. Fc 영역은, 존재하는 경우, 인간 Fc 영역일 수 있다. 불변 영역이 존재하는 경우, 항체는 경쇄 및 중쇄 불변 영역을 모두 함유할 수 있다. 본원에서 설명되는 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는 모든 유형의 불변 영역 및 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 임의의 동종형을 갖는 항체를 포함한다. 적합한 중쇄 Fc 영역의 예는 인간 동종형 IgG1 Fc이다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 대상 항체(예를 들어, 대상 인간화 항체)는 하나 이상의 클래스 또는 동종형으로부터 유래한 서열을 포함할 수 있다. 항체는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 함유하는 사량체로서, 별도의 중쇄, 경쇄로서, Fab, Fab' F(ab')2 및 Fv로서, 또는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인이 스페이서를 통해 연결된 단쇄 항체로서 발현될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 Fc 영역에 도입된 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 Fc 영역의 위치 239, 298, 326, 330 및 332에 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 Fc 영역에 도입된 다음 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함할 수 있다: I332E; S239D/A330L/I332E; S239D/S298A/I332E; S239D/K326T/I332E; S239D/S298A/K326T/I332E; 또는 S239D/A330L/I332E/D356E/L358M.
일부 실시양태에서, 대상 항체는 하나 이상의 비자연 발생 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 비자연적으로 코딩된 아미노산은 카보닐기, 아세틸기, 아미노옥시기, 하이드라진기, 하이드라자이드기, 세미카바자이드기, 아지드기 또는 알카인기를 포함한다. 비천연 발생 아미노산의 포함은 중합체, 제2 폴리펩타이드, 스캐폴드 등에 대한 연결을 제공할 수 있습니다. 이러한 비천연 발생 아미노산의 예는 N-아세틸글루코사미닐-L-세린, N-아세틸글루코사미닐-L-트레오닌 및 O-포스포타이로신을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 개시내용은 관심 부착된 부분, 예를 들어, 검출 가능한 표지, 약물, 반감기 연장 모이어티 등을 갖는 항체를 제공한다. 항체의 변형은 다양한 합성 및/또는 재조합 방법에 의해 달성될 수 있다. 항체에 부착된 모이어티 또는 모이어티들은 매우 다양한 기능 또는 특징 중 하나 이상을 제공할 수 있다. 예시적인 모이어티는 검출 가능한 표지(예를 들어, 염료 라벨(예를 들어, 발색단, 형광단), 생물물리학적 프로브(스핀 표지, 핵 자기 공명(NMR) 프로브), 형광 공명 에너지 전달(FRET)-유형 표지(예를 들어, 형광단/소광체 쌍의 적어도 하나의 구성원을 포함하는 FRET 쌍의 적어도 하나의 구성원), 생물발광 공명 에너지 전달(BRET)-유형 표지(예를 들어, BRET 쌍의 적어도 하나의 구성원), 면역 검출 가능한 태그(예를 들어, FLAG, His(6) 등); 수용성 중합체(예를 들어, PEG화); (예를 들어, 친화도 크로마토그래피(예를 들어, FLAG 에피토프의 부착)에 의한 단리를 용이하게 하기 위한) 정제 태그; 막 국소화 도메인(예를 들어, 지질 또는 글리코포스파티딜이노시톨(GPI) 유형 앵커); (예를 들어, 선택적 부착을 포함하여, 표면에 대한 폴리펩타이드의 부착을 용이하게 하기 위한) 고정화 태그; (예를 들어, 항체에 대한 약물의 부착을 통해 약물 표적화를 용이하게 하기 위한) 약물; 및 등을 포함한다.
대상 항체는 글라이코실화될 수 있으며, 예를 들어, 대상 항체는 공유 결합된 탄수화물 또는 다당류 부분을 포함할 수 있다. 항체의 글라이코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 첨가는 하나 이상의 N-연결 또는 O-연결 글라이코실화 부위를 함유하도록 아미노산 서열을 변경하는 것을 통해 쉽게 달성된다. 유사하게, 글라이코실화 부위의 제거는 항체의 천연 글라이코실화 부위 내의 아미노산 변경에 의해 달성될 수 있다.
일부 실시양태에서 대상 항체는 "방사선 불투과성" 표지, 예를 들어 X선을 사용하여 용이하게 시각화할 수 있는 표지를 포함할 것이다. 방사선 불투과성 물질은 통상의 기술자에게 잘 알려져 있다. 가장 일반적인 방사선 불투과성 물질은 아이오딘화물, 브로민화물 또는 바륨 염을 포함한다. 다른 방사선 불투과성 물질도 알려져 있으며, 유기 비스무트 유도체, 방사선 불투과성 멀티우레탄, 유기비스무트 복합재, 방사선 불투과성 바륨 다합체 착물 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
항체를 변형하는 방법
본 개시내용의 항체 접합체는 1) 관심 모이어티에 접합된 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심 모이어티에 접합된 Ig 경쇄 불변 영역; 2) 관심 모이어티에 접합된 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심 모이어티에 접합되지 않은 Ig 경쇄 불변 영역; 또는 3) 관심 부분에 접합되지 않은 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심 부분에 접합된 Ig 경쇄 불변 영역을 포함하 수 있다. 또한, 대상 항체 접합체는 관심 모이어티에 접합된 VH 및/또는 VL 도메인을 포함할 수 있다.
한 예에서, 항체는 이종성 모이어티의 부착을 위한 화학적 핸들 역할을 할 수 있는 2-포밀글라이신 잔기를 포함하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역은 2-포밀글라이신(fGly)을 함유하기 위해 2-포밀글라이신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 전환될 수 있는 설파테이스 모티프의 아미노산 서열을 포함하도록 변형될 수 있다. 이러한 설파타제 모티프는 본 명세서에서 FGE-변형 부위로도 지칭될 수 있다. FGE의 작용은 FGE가 면역글로불린 폴리펩타이드 내에 위치한 설파테이스 모티프에서 작용한다는 점에서 서열 특이적 방식으로 지시된다. 관심 부분은 태깅된 Ig 폴리펩티드의 전환된 알데하이드 태그의 fGly 잔기의 알데하이드와의 반응을 위한 반응 파트너의 요소로서 제공된다. 광범위한 시판 시약을 사용하여 알데하이드 태깅된 Ig 폴리펩타이드의 fGly 잔기에 관심 모이어티를 부착할 수 있다. 예를 들어, 관심 있는 여러 모이어티의 아미노옥시, 하이드라자이드 또는 싸이오세미카바자이드 유도체는 적합한 반응 파트너이며 용이하게 이용 가능하거나 표준 화학적 방법을 사용하여 생성될 수 있다.
위에서 언급된 바와 같이, 항체의 아미노산 서열은 포밀글라이신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 생체내에서(예를 들어, 세포에서 알데하이드 태그 함유 단백질의 번역 시) 또는 시험관내에서(예를 들어, 무세포계에서 알데하이드 태그 함유 단백질을 FGE와 접촉시켜) 2-포밀글라이신(fGly) 잔기로 전환(산화)될 수 있는 세린 또는 시스테인 잔기를 함유하는 설파테이스 모티프를 포함하도록 변형된다. 이러한 설파타제 모티프는 본 명세서에서 FGE-변형 부위로도 지칭될 수 있다.
설파테이스 모티프
알데하이드 태그의 최소 설파타제 모티프는 보통 길이가 5 또는 6개의 아미노산 잔기, 보통 길이가 6개 이하의 아미노산 잔기이다. Ig 폴리펩타이드에 제공된 설파타제 모티프는, 길이가 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 또는 7개 미만의 아미노산 잔기의 설파타제 모티프를 규정하기 위하여, 길이가 적어도 5 또는 6개의 아미노산 잔기이고, 예를 들면 5 내지 16, 6 내지 16, 5 내지 15, 6 내지 15, 5 내지 14, 6 내지 14, 5 내지 13, 6 내지 13, 5 내지 12, 6 내지 12, 5 내지 11, 6 내지 11, 5 내지 10, 6 내지 10, 5 내지 9, 6 내지 9, 5 내지 8, 또는 6 내지 8개의 아미노산 잔기의 길이일 수 있다.
소정의 실시형태에서, 관심 폴리펩타이드는 폴리펩타이드에서 설파타제 모티프의 서열을 제공하기 위한 천연 아미노산 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 잔기, 예컨대, 2개 이상, 또는 3개 이상, 또는 4개 이상, 또는 5개 이상, 또는 6개 이상, 또는 7개 이상, 또는 8개 이상, 또는 9개 이상, 또는 10개 이상, 또는 11개 이상, 또는 12개 이상, 또는 13개 이상, 또는 14개 이상, 또는 15개 이상, 또는 16개 이상, 또는 17개 이상, 또는 18개 이상, 또는 19개 이상, 또는 20개 이상의 아미노산 잔기가 삽입, 결실, 치환(대체)된 것들을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 천연 아미노산 서열에 비해 아미노산 서열의 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 미만의 아미노산 잔기의 변형(삽입, 첨가, 결실 및/또는 치환/대체)을 포함한다. 폴리펩타이드(예를 들어, 항체) 고유의 아미노산 서열이 원하는 설파테이스 모티프의 잔기를 하나 이상 함유는 경우, 예를 들어 원하는 설파테이스 모티프의 서열을 제공하기 위해 천연 아미노산 잔기와 측접하는 아미노산 잔기의 부위 특이적 변형(삽입, 첨가, 결실, 치환/대체)에 의해 잔기의 총 변형 수를 감소시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 표적 항체의 천연 아미노산 서열의 변형 정도는 삽입, 결실, 치환(대체) 또는 첨가되는(예를 들어, N-말달 또는 C-말단에 대한) 아미노산 잔기의 수를 최소화하기 위해 최소화된다. 표적 폴리펩타이드의 아미노산 서열 변형 정도를 최소화하면 이러한 변형이 항체 기능 및/또는 구조에 미칠 수 있는 영향을 최소화할 수 있다.
특정 관심 알데하이드 태그는 적어도 최소 설파테이스 모티프("공통 설파테이스 모티프"로도 지칭됨)를 포함하는 한편, 더 긴 알데하이드 태그가 본 개시내용에 의해 상정되고 포함되며 본 개시내용의 조성물 및 방법에 사용될 수 있다는 것이 쉽게 인지될 것임이 주지되어야 한다. 그러므로, 알데하이드 태그는 5 또는 6개의 잔기의 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있거나, 또는 더 길 수 있고 추가의 아미노산 잔기에 의해 모티프의 N- 및/또는 C-말단 쪽에서 측접될 수 있는 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있다. 예를 들어, 5 또는 6개 아미노산 잔기의 알데하이드 태그가 고려될 뿐만 아니라, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 아미노산 잔기의 더 긴 아미노산 서열이 상정된다.
알데하이드 태그는 Ig 중쇄의 C-말단에 또는 그 부근에 존재할 수 있고; 예컨대, 알데하이드 태그는 천연, 야생형 Ig 중쇄의 C-말단의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 내에 존재할 수 있다. 알데하이드 태그는 Ig 중쇄의 CH1 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데하이드 태그는 Ig 중쇄의 CH2 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데하이드 태그는 Ig 중쇄의 CH3 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데하이드 태그는 Ig 경쇄 불변 영역에, 예컨대, 카파 경쇄 불변 영역 또는 람다 경쇄 불변 영역에 존재할 수 있다.
소정의 실시형태에서, 사용된 설파타제 모티프는 다음 식에 의해 표시될 수 있다:
X1Z1X2Z2X3Z3 (서열 식별 번호:13)(I’), 식 중
Z1은 시스테인 또는 세린이며(또한, 이는 (C/S)로 표시될 수 있으며);
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이며(또한, 이는 (P/A)로 표시될 수 있으며);
Z3은 염기성 아미노산(예를 들어, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 흔히 라이신일 수 있음) 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글라이신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I) 또는 프롤린(P), 흔히, A, G, L, V 또는 I이며;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우, 임의의 아미노산일 수 있으나, 흔히, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산, (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 흔히, L, M, V, S 또는 T, 더 흔히, L, M, S 또는 V일 수 있으며, 단, 설파테이스 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하며;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있으나, 흔히, 지방족 아미노산, 극성, 비하전된 아미노산 또는 황 함유 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G이다. 한 예에서, 알데하이드 태그는 화학식 L(C/S)TPSR(서열 식별 번호:14), 예를 들어, LCTPSR(서열 식별 번호:15) 또는 LSTPSR(서열 식별 번호:16)이다. 따라서, 본 개시내용은 알데하이드 태깅된 Ig 중쇄 및/또는 알데하이드 태깅딘 Ig 경쇄를 포함하는 항체를 제공하며, 알데하이드 태깅된 Ig 항체는 이러한 설파테이스 모티프를 함유하는 중쇄 및/또는 경쇄의 Ig 불변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 항체 중쇄 및/또는 경쇄의 아미노산 서열은 변형되어 화학식 X1Z1X2Z2X3Z3의 적어도 5개의 아미노산의 서열을 제공할 수 있으며,
Z1은 시스테인 또는 세린이며;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기이며;
Z3은 지방족 아미노산 또는 염기성 아미노산이며;
X1은 존재하거나 또는 존재하지 않으며, 존재할 경우, 임의의 아미노산이며, 단, 이종성 설파테이스 모티프가 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하며;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
서열은 Ig 불변 영역의 용매-접근 가능한 루프 영역 내에 또는 이에 인접하여 있으며, 서열은 Ig 중쇄의 C-말단에 있지 않다.
설파타제 모티프는, 일반적으로, 선택된 FGE, 예컨대 알데하이드 태그 부착된 폴리펩타이드가 발현되는 숙주 세포에 존재하는 FGE 또는 무세포 시험관내 방법에서 알데하이드 태그 부착된 폴리펩타이드와 접촉되는 FGE에 의해 전환될 수 있도록 선택된다.
예를 들어, FGE가 진핵생물 FGE(예컨대, 인간 FGE를 포함하여 포유류 FGE)인 경우에, 설파타제 모티프는 하기 화학식의 것일 수 있다:
X1CX2PX3Z3 (I’’)
식 중
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산, (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, S 또는 V일 수 있으며, 단, 설파테이스 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하며;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G이며;
Z3은 염기성 아미노산(예를 들어, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 예를 들어, 라이신일 수 있음) 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글라이신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어, A, G, L, V 또는 I일 수 있다.
설파타제 모티프의 구체예는 LCTPSR(서열 식별 번호:17), MCTPSR(서열 식별 번호:18), VCTPSR(서열 식별 번호:19), LCSPSR(서열 식별 번호:20), LCAPSR(서열 식별 번호:21), LCVPSR(서열 식별 번호:22), LCGPSR(서열 식별 번호:23), ICTPAR(서열 식별 번호:24), LCTPSK(서열 식별 번호:25), MCTPSK(서열 식별 번호:26), VCTPSK(서열 식별 번호:27), LCSPSK(서열 식별 번호:28), LCAPSK(서열 식별 번호:29), LCVPSK(서열 식별 번호:30), LCGPSK(서열 식별 번호:31), LCTPSA(서열 식별 번호:32), ICTPAA(서열 식별 번호:33), MCTPSA(서열 식별 번호:34), VCTPSA(서열 식별 번호:35), LCSPSA(서열 식별 번호:36), LCAPSA(서열 식별 번호:37), LCVPSA(서열 식별 번호:38) 및 LCGPSA(서열 식별 번호:39)를 포함한다.
fGly 함유 서열
일반적으로, 표적 폴리펩타이드의 알데하이드 태그의 설파테이스 모티프에서 시스테인 또는 세린의 fGly로의 전환을 용이하게 하기 위해 사용되는 FGE는 알데하이드 태그에 존재하는 설파테이스 모티프에 따라 선택된다. FGE는 알데하이드 태깅된 폴리펩티드가 발현되는 숙주 세포에 고유할 수 있거나, 숙주 세포는 적절한 FGE를 발현하도록 유전적으로 변형될 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 FGE에 적합한 설파테이스 모티프를 사용하고, FGE를 발현하는 인간 세포에서 또는 인간 FGE를 발현하도록 유전적으로 변형된 숙주 세포, 일반적으로, 포유동물 세포에서 알데하이드 태깅된 단백질을 발현시키는 것이 바람직할 수 있다. 일반적으로, fGly 변형 항체를 생성하는 데 사용하기에 적합한 FGE는 자연 발생 공급원으로부터 수득되거나 합성하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 적절한 FGE는 FGE를 자연적으로 생성하거나 FGE를 코딩하는 재조합 유전자를 발현하도록 유전자 변형된 생물학적 공급원으로부터 유래될 수 있다. 다수의 FGE를 코딩하는 핵산은 용이하게 당해 기술분야에서 알려져 있다.
설파테이스 모티프에 대한 FGE의 작용에 따라 Z1은 산화되어 2-포밀글라이신(fGly) 잔기를 생성한다. 또한, FGE 매개 전환 및 관심 모이어티를 포함하는 반응성 파트너와의 반응 후, 위의 화학식의 Z1에서 fGly 위치는 관심 부분(예를 들어, 검출 가능한 표지, 수용성 중합체, 폴리펩타이드, 약물, 활성제 등)에 공유 결합된다. 따라서, 본 개시내용은 fGly 부분을 포함하도록 변형되는 아미노산 서열을 갖는 항체를 제공한다.
항체 중쇄 및/또는 경쇄에 FGE가 작용하면 설파타제 모티프에서 세린 또는 시스테인이 fGly로 변형된다. 따라서, fGly-함유 설파타제 모티프는 하기 식일 수 있다:
X1(fGly)X2Z2X3Z3 (서열 식별 번호:40) (I’’’)
식 중
fGly는 포밀글라이신 잔기이며;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이며(또한, 이는 (P/A)로 표시될 수 있으며);
Z3은 염기성 아미노산(예를 들어, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 흔히 라이신일 수 있음) 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글라이신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어, A, G, L, V 또는 I이며;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산, (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V일 수 있으며, 단, 설파테이스 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하며;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G이다.
위에서 설명되는 같이, 접합체를 생성하기 위해, fGly 잔기를 함유하는 폴리펩티드는 fGly를 약물 또는 활성제에 부착된 링커의 반응성 모이어티(예를 들어, 위에서 설명되는 바와 같은 하이드라지닐-인돌릴 또는 하이드라지닐-피롤로-피리디닐 결합 모이어티)와 반응시켜 fGly' 함유 설파테이스 모티프를 생성하여 약물 또는 활성제에 접합될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 fGly'는 본원에서 설명되는 바와 같이 링커를 통해 약물 또는 활성제에 결합되는 설파테이스 모티프의 아미노산 잔기를 지칭한다. 따라서, 본 개시내용은 항체 접합체를 제공한다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 화학식:
X1(fGly')X2Z2X3Z3(서열 식별 번호:41) (II)의 fGly'-함유 설파테이스 모티프를 포함하며,
식 중
fGly'는 본원에 기재된 바와 같은 링커를 통해 약물 또는 활성제에 결합된 아미노산 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이며(또한, 이는 (P/A)로 표시될 수 있으며);
Z3은 염기성 아미노산(예를 들어, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 흔히 라이신일 수 있음) 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글라이신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어, A, G, L, V 또는 I이며;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산, (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V일 수 있으며, 단, 설파테이스 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하며;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 서열은 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치된다. 몇몇 경우에, 중쇄 불변 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(fGly')X2Z2X3Z3 (II)
식 중
fGly'는 본원에 기재된 바와 같은 링커를 통해 약물 또는 활성제에 결합된 아미노산 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이며(또한, 이는 (P/A)로 표시될 수 있으며);
Z3은 염기성 아미노산(예를 들어, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 흔히 라이신일 수 있음) 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글라이신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어, A, G, L, V 또는 I이며;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산, (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V일 수 있으며, 단, 설파테이스 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하며;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G이며;
서열은 아미노산 서열 QKSLSLSPGK에 대해서 C-말단이며, 여기서 서열은 천연의, 야생형 Ig 중쇄 불변 영역에 존재하지 않는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 5 내지 10개의 아미노산을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 예를 들어, 천연 SLSLSPGK(서열 식별 번호:43) 서열 대신, Ig 중쇄의 C-말단에 서열 SLSLSPGSL(fGly')TPSRGS(서열 식별 번호:42)를 포함한다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제에 결합되는 아미노산 잔기(fGly')는 항체의 경쇄 불변 영역에 위치한다. 소정의 실시형태에서, 경쇄 불변 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(fGly')X2Z2X3Z3 (II)
식 중
fGly'는 본원에 기재된 바와 같은 링커를 통해 약물 또는 활성제에 결합된 아미노산 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이며(또한, 이는 (P/A)로 표시될 수 있으며);
Z3은 염기성 아미노산(예를 들어, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 흔히 라이신일 수 있음) 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글라이신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어, A, G, L, V 또는 I이며;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산, (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V일 수 있으며, 단, 설파테이스 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하며;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G이며;
여기서 서열은 아미노산 서열 KVDNAL(서열 식별 번호:44)의 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 QSGNSQ(서열 식별 번호:45)의 N-말단이다.
특정 실시양태에서, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(fGly')TPSRQSGNSQ(서열 식별 번호:46)를 포함한다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제에 결합되는 아미노산 잔기(fGly')는 항체의 중쇄 불변 CH1 영역에 위치한다. 소정의 실시형태에서, 중쇄 CH1 영역은 하기 화학식 (II)의 서열을 포함한다:
X1(fGly')X2Z2X3Z3 (II)
식 중
fGly'는 본원에 기재된 바와 같은 링커를 통해 약물 또는 활성제에 결합된 아미노산 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 어느 하나이며(또한, 이는 (P/A)로 표시될 수 있으며);
Z3은 염기성 아미노산(예를 들어, 아르기닌(R), 그리고 라이신(K) 또는 히스티딘(H), 흔히 라이신일 수 있음) 또는 지방족 아미노산(알라닌(A), 글라이신(G), 류신(L), 발린(V), 아이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어, A, G, L, V 또는 I이며;
X1은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있으며, 존재할 경우, 임의의 아미노산, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산, (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V일 수 있으며, 단, 설파테이스 모티프가 표적 폴리펩타이드의 N-말단에 존재할 경우, X1은 존재하며;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산예를 들어, 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산(예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G이며;
여기서 서열은 아미노산 서열 SWNSGA(서열 식별 번호:47)의 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP(서열 식별 번호:48)의 N-말단이다.
특정 실시형태에서, 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(fGly')TPSRGVHTFP(서열 식별 번호:49)를 포함한다.
도 16a는 알데하이드 태깅 Ig 폴리펩타이드의 생성을 위한 가능한 변형 부위를 나타내는 부위맵을 도시한다. 상부 서열은 IgG1 경쇄 폴리펩타이드(서열 식별 번호:1)의 보존된 영역의 아미노산 서열이고 Ig 경쇄에서 가능한 변형 부위를 나타내며, 하부 서열은 Ig 중쇄 폴리펩타이드(서열 식별 번호:2)(GenBank 수탁 번호 제AAG00909호)의 보존된 영역의 아미노산 서열이고 Ig 중쇄에서 가능한 변형 부위를 나타낸다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 16b 내지 도 16c는 알데하이드 태그가 면역글로불린 중쇄에서 제공될 수 있는 변형 부위를 나타내는, IgG1(서열 식별 번호:3; GenBank P01857.1), IgG2(서열 식별 번호:4; GenBank P01859.2), IgG3(서열 식별 번호:5; GenBank P01860.2), IgG4(서열 식별 번호:6; GenBank AAB59394.1) 및 IgA(서열 식별 번호:7; GenBank AAAT74070)에 대한 호모 사피엔스 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 정렬을 묘사한다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 전체 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 16d는 알데하이드 태그가 면역글로불린 경쇄에서 제공될 수 있는 변형 부위를 나타내는 면역글로불린 경쇄 불변 영역의 정렬을 도시한다. Seq1=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75031.1; 서열 식별 번호:8. Seq2=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank BAC0168.1; 서열 식별 번호:9. Seq3=호모 사피엔스 람다 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75033; 서열 식별 번호:10. Seq4=무스 무스쿨루스 경쇄 불변 영역; GenBank AAB09710.1; 서열 식별 번호:11. Seq5=라투스 노르베기쿠스 경쇄 불변 영역; GenBank AAD10133; 서열 식별 번호:12.
몇몇 실시형태에서, 설파타제 모티프는 Ig 폴리펩타이드 중쇄의 C-말단 이외의 위치에, 또는 부가해서 C-말단에위치된다. 단리된 알데하이드 태깅된 항체는 위에서 설명되는 바와 같은 설파테이스 모티프를 포함하도록 변형된 중쇄 불변 영역 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 설파테이스 모티프는 항체 중쇄 불변 영역의 표면 접근 가능한 루프 영역 내에서 있거나 이와 인접한다.
IgG1 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능한 루프 영역은 1) ASTKGP; 2) KSTSGGT; 3) PEPV; 4) NSGALTSG; 5) NSGALTSGVHTFPAVLQSSGL; 6) QSSGL; 7) VTV; 8) QTY; 9) TQTY; 10) HKPSN; 11) EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG; 12) FPPKP; 13) ISRTP; 14) DVSHEDPEV; 15) SHEDPEV; 16) DG; 17) DGVEVHNAK; 18) HNA; 19) QYNST; 20) VLTVL; 21) GKE; 22) NKALPAP; 23) SKAKGQPRE; 24) KAKGQPR; 25) PPSRKELTKN; 26) YPSDI; 27) NGQPENN; 28) TPPVLDSDGS; 29) HEALHNHYTQKSLSLSPGK; 및 30) SLSPGK를 포함한다.
IgG2 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능한 루프 영역은 1) ASTKGP; 2) PCSRSTSESTAA; 3) FPEPV; 4) SGALTSGVHTFP; 5) QSSGLY; 6) VTV; 7) TQT; 8) HKP; 9) DK; 10) VAGPS; 11) FPPKP; 12) RTP; 13) DVSHEDPEV; 14) DGVEVHNAK; 15) FN; 16) VLTVV; 17) GKE; 18) NKGLPAP; 19) SKTKGQPRE; 20) PPS; 21) MTKNQ; 22) YPSDI; 23) NGQPENN; 24) TPPMLDSDGS; 25) GNVF; 및 26) HEALHNHYTQKSLSLSPGK를 포함한다.
IgG3 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능한 루프 영역은 1) ASTKGP; 2) PCSRSTSGGT; 3) FPEPV; 4) SGALTSGVHTFPAVLQSSG; 5) V; 6) TQT; 7) HKPSN; 8) RVELKTPLGD; 9) CPRCPKP; 10) PKSCDTPPPCPRCPAPELLGG; 11) FPPKP; 12) RTP; 13) DVSHEDPEV; 14) DGVEVHNAK; 15) YN; 16) VL; 17) GKE; 18) NKALPAP; 19) SKTKGQPRE; 20) PPSREEMTKN; 21) YPSDI; 22) SSGQPENN; 23) TPPMLDSDGS; 24) GNI; 25) HEALHNR; 및 26) SLSPGK를 포함한다.
IgG4 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능한 루프 영역은 1) STKGP; 2) PCSRSTSESTAA; 3) FPEPV; 4) SGALTSGVHTFP; 5) QSSGLY; 6) VTV; 7) TKT; 8) HKP; 9) DK; 10) YG; 11) CPAPEFLGGPS; 12) FPPKP; 13) RTP; 14) DVSQEDPEV; 15) DGVEVHNAK; 16) FN; 17) VL; 18) GKE; 19) NKGLPSS; 20) SKAKGQPREP; 21) PPSQEEMTKN; 22) YPSDI; 23) NG; 24) NN; 25) TPPVLDSDGS; 26) GNVF; 및 27) HEALHNHYTQKSLSLSLGK를 포함한다.
IgA 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능한 루프 영역은 1) ASPTSPKVFPLSL; 2) QPDGN; 3) VQGFFPQEPL; 4) SGQGVTARNFP; 5) SGDLYTT; 6) PATQ; 7) GKS; 8) YT; 9) CHP; 10) HRPA; 11) LLGSE; 12) GLRDASGV; 13) SSGKSAVQGP; 14) GCYS; 15) CAEP; 16) PE; 17) SGNTFRPEVHLLPPPSEELALNEL; 18) ARGFS; 19) QGSQELPREKY; 20) AV; 21) AAED; 22) HEAL; 및 23) IDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY를 포함한다.
Ig 경쇄(예를 들어, 인간 카파 경쇄)의 예시적인 표면 접근 가능한 루프 영역은 1) RTVAAP; 2) PPS; 3) Gly(예를 들어, 도 8c에서 도시되는 인간 카파 경쇄 서열의 위치 150에 있는 Gly 참조); 4) YPREA; 5) PREA; 6) DNALQSGN; 7) TEQDSKDST; 8) HK; 9) HQGLSS; 및 10) RGEC를 포함한다.
Ig 람다 경쇄의 예시적인 표면 접근 가능한 루프 영역은 QPKAAP, PPS, NK, DFYPGAV, DSSPVKAG, TTP, SN, HKS, EG, 및 APTECS를 포함한다.
본원에서 개시되는 항체의 HC의 불변 영역은 다음 서열 중 하나로부터 선택될 수 있다.
CT-태깅(알데하이드 태그 - 굵은체)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGS LCTPSR GS(서열 식별 번호:50)
위의 서열에서, 중쇄 불변 영역의 C-말단에서 사체로 표기된 잔기는 표준 IgG1 중쇄의 C-말단에서 라이신 잔기를 대체한다. 사체로 표기된 잔기 중 굵은체 잔기(LCTPSR)는 알데하이드 태그를 구성하며, C는 중쇄의 발현 시 FGE에 의해 fGly 잔기로 전환된다. fGly는 fGly'로 변환될 수 있습니다. fGly'는 관심 모이어티(예를 들어, 약물)에 결합되는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 사체로 표기된 잔기 중 굵은체로 표기되지 않은 잔기는 표준 IgG1 중쇄 서열과는 상이한 추가의 잔기이다.
58Q-1(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "EEM"가 " DEL "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLLCTPSRQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:51).
61G-1(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "EEM"가 " DEL "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSLCTPSRGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:52).
91N-1(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "EEM"가 " DEL "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:53).
116E-1(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "EEM"가 " DEL "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPLCTPSRELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열 식별 번호:54).
58Q-2(알데하이드 태그 - 굵은체)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLLCTPSRQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:55).
61G-2(알데하이드 태그 - 굵은체)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSLCTPSRGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:56).
91N-2(알데하이드 태그 - 굵은체)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:57).
116E-2(알데하이드 태그 - 굵은체)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPLCTPSRELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:58).
58Q-3(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "KKV"가 " KRV "로 치환 및 "EEM"가 " DEL "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLLCTPSRQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:59).
61G-3(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "KKV"가 " KRV "로 치환 및 "EEM"가 " DEL "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSLCTPSRGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:60).
91N-3(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "KKV"가 " KRV "로 치환 및 "EEM"가 " DEL "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:61).
116E-3(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "KKV"가 " KRV "로 치환 및 "EEM"가 " DEL "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPLCTPSRELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:62).
58Q-4(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "KKV"가 " KRV "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLLCTPSRQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:63).
61G-4(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "KKV"가 " KRV "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSLCTPSRGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:64).
91N-4(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "KKV"가 " KRV "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:65).
116E-4(알데하이드 태그 - 굵은체 및 "KKV"가 " KRV "로 치환)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPLCTPSRELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 식별 번호:66).
굵은체 잔기(LCTPSR)는 알데하이드 태그를 구성하며, C는 중쇄의 발현 시 FGE에 의해 fGly 잔기로 전환된다. fGly는 fGly'로 변환될 수 있습니다. fGly'는 관심 모이어티(예를 들어, 약물)에 결합되는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다.
약물
일부 경우, 본 개시내용의 항체는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄에 공유 결합으로 연결되는 약물(예를 들어, 본원에서 설명되는 화학식 (I)의 접합체 및 화학식 (III)의 화합물에 있는 W1)을 갖는다. 예를 들어, 본 개시내용의 항체 접합체는 치환기 W1로서 약물 또는 활성제를 포함할 수 있다. 다수의 약물 중 임의의 것이 항체에 접합하기 위한 반응성 파트너로서 사용하기에 적합하거나, 또는 사용하기에 적합하도록 변형될 수 있다. "약물"은 소분자 약물, 펩타이드 약물, 독소(예를 들어, 세포독소) 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "소분자 약물"은 화합물, 예를 들어 유기 화합물을 지칭하며, 이는 관심 약제학적 활성을 나타내며 일반적으로 800 Da 이하, 또는 2000 Da 이하의 분자량이나, 최대 5kDa의 분자를 포괄할 수 있고 10 kDa만큼 클 수 있다. 무기 소분자는 탄소 원자를 함유하지 않는 분자를 지칭하는 반면, 유기 소분자는 적어도 하나 이상의 탄소 원자를 함유하는 화합물을 지칭한다.
다른 실시양태에서, 약물 또는 활성제는 메이탄신일 수 있다. "메이탄신", "메이탄신 모이어티", "메이탄신 활성제 모이어티" 및 "메이탄시노이드"는 메이탄신 및 유사체 및 이들의 유도체, 및 약제학적 활성 메이탄신 모이어티 및/또는 이의 부분을 지칭한다. 폴리펩티드에 접합된 메이탄신은 다양한 메이탄시노이드 모이어티, 예컨대, 비제한적으로, 본원에 기재된 바와 같은 메이탄신 및 이의 유사체 및 유도체 (예를 들어, 데아실메이탄신) 중 임의의 것일 수 있다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제는 아우리스타틴, 또는 이의 유사체 또는 유도체, 또는 약제학적으로 활성인 아우리스타틴 모이어티 및/또는 이의 부분일 수 있다. 폴리펩티드에 접합된 아우리스타틴은 다양한 아우리스타틴 모이어티, 예컨대, 비제한적으로, 아우리스타틴 및 본원에 기재된 바와 같은 이의 유사체 및 유도체 중 임의의 것일 수 있다. 본원에 기재된 접합체 및 화합물에 사용될 수 있는 약물의 예는 아우리스타틴 또는 아우리스타틴 유도체, 예컨대 모노메틸 아우리스타틴 D(MMAD), 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF), 이의 유도체 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 약물은 MMAE이다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제는 듀오카마이신 또는 이의 유사체 또는 유도체 또는 약제학적으로 활성인 듀오카마이신 모이어티 및/또는 이의 부분일 수 있다. 폴리펩티드에 접합된 듀오카마이신은 다양한 듀오카마이신 모이어티, 예컨대, 비제한적으로, 본원에 기재된 듀오카마이신 및 이의 유사체 및 유도체 중 임의의 것일 수 있다. 본원에 기재된 접합체 및 화합물에 사용되는 약물의 예는 듀오카마이신 또는 듀오카마이신 유도체, 예컨대 듀오카마이신 A, 듀오카마이신 B1, 듀오카마이신 B2, 듀오카마이신 C1, 듀오카마이신 C2, 듀오카마이신 D, 듀오카마이신 SA, 및 CC-1065, 이의 유도체 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 듀오카마이신은 듀오카마이신 유사체, 예컨대, 비제한적으로, 아도젤레신, 비젤레신, 또는 카르젤레신이다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제는 위상이성질체화효소 억제제, 예컨대, 캄프토테신 또는 이의 유사체 또는 유도체, 또는 약제학적으로 활성인 캄프토테신 모이어티 및/또는 이의 부분일 수 있다. 대상 항체에 접합되는 캄프토테신은 2022년 1월 13일자로 출원된 미국 출원 번호 제17/575,481호에서 설명되는 바와 같은 캄프토테신 및 이의 유사체 및 유도체를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 캄프토테신 모이어티 중 임의의 것일 수 있으며, 이는 개시내용이 참조에 의해 본원에 원용된다. 본원에서 설명되는 접합체에서 사용되는 약물의 위상이성질체화효소의 추가 예는 캄프토테신 또는 캄프토테신 유도체, 예컨대, SN-38, 벨로테칸, 엑사테칸, 9-아미노캄프토테신(9-AC), 이의 유도체 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
특정 실시양태에서, 약물은 세포독소, 카이네이스 억제제, 면역자극제, 톨-유사(toll-like) 수용체(TLR) 효능제, 올리고뉴클레오타이드, 압타머, 사이토카인, 스테로이드 및 펩타이드로부터 선택된다.
예를 들어, 세포독소는 세포 사멸(예를 들어, 괴사 또는 아폽토시스(apoptosis)) 또는 세포 생존능의 감소를 유도하는 임의의 화합물을 포함할 수 있다.
키나아제 억제제는 아다보세르팁, 아파티닙, 악시티닙, 보수티닙, 세툭시맙, 코비메티닙, 크리조티닙, 카보잔티닙, 다코미티닙, 다사티닙, 엔트렉티닙, 에르다피티닙, 에를로티닙, 포스타마티닙, 게피티닙, 이브루티닙, 이마티닙, 라파티닙, 렌바티닙, 뮤브리티닙, 닐로티닙, 파조파닙, 페갑타닙, 룩솔리티닙, 소라페닙, 수니티닙, 투카티닙, 반데타닙, 베무라페닙 등을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
면역자극제는 백신(예를 들어, 박테리아 또는 바이러스 백신), 콜로니 자극 인자, 인터페론, 인터류킨 등을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. TLR 효능제는 이미퀴모드, 레시퀴모드 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
올리고뉴클레오티드 약물은 포미비르센, 페갑타닙, 미포머르센, 에테플리르센, 데피브로티드, 뉴시너센, 골로디르센, 빌톨라르센, 볼라네코르센, 이노터센, 토페르센, 토미너센 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
압타머 약물은 페갑타닙, AS1411, REG1, ARC1779, NU172, ARC1905, E10030, NOX-A12, NOX-E36 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
사이토카인은 알빈인터페론 알파-2B, 알데스류킨, ALT-801, 아나킨라, 앤세스팀, 아보테르민, 발루그라스팀, 벰페갈데스류킨, 비네트라킨, 신트레데킨 베수도톡스, CTCE-0214, 다베포에틴 알파, 데닐류킨 디프티톡스, 둘라네르민, 에도데킨 알파, 에필러민, 에포에틴 델타, 에리스로포이에틴, 인간 인터류킨-2, 인터페론 알파, 인터페론 알파-2c, 인터페론 알파-n1, 인터페론 알파-n3, 인터페론 알파콘-1, 인터페론 베타-1a, 인터페론 베타-1b, 인터페론 감마-1b, 인터페론 카파, 인터류킨-1 알파, 인터류킨-10, 인터류킨-7, 레노그라스팀, 레리디스티팀, 리페그필그라스팀, 로루카푸스프 알파, 맥시-G34, 메톡시 폴리에틸렌 글리콜-에포에틴 베타, 몰그라모스팀, 무플레스팀, 나그레스티펜, 오프레베킨, 페그필그라스팀, 페길로데카킨, 페그인터페론 알파-2a, 페그인터페론 알파-2b, 페그인터페론 베타-1a, 페그인터페론 람다-1a, 재조합 CD40-리간드, 레그라모스팀, 로미플로스팀, 사르그라모스팀, 트롬보포이에틴, 투코투주맙 셀몰류킨, 바이러스성 대식세포-염증 단백질 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
스테로이드 약물은 프레드니솔론, 베타메타손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 데플라자코르트 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "펩티드 약물"은 아미노산-함유 중합체성 화합물을 지칭하고, 이는 자연-발생 및 비-자연-발생 펩티드, 올리고펩티드, 사이클릭 펩티드, 폴리펩티드, 및 단백질뿐만 아니라 펩티드 모방체를 포괄하는 것을 의미한다. 펩타이드 약물은 화학적 합성에 의해 수득될 수 있거나, 또는 유전적으로 코딩된 공급원(예를 들어, 재조합 공급원)으로부터 생성될 수 있다. 펩티드 약물은 분자량 범위일 수 있고, 분자량은 200 Da 내지 10 kDa 또는 그 이상일 수 있다. 적합한 펩타이드는 세포독성 펩타이드; 혈관형성 펩타이드; 항혈관형성 펩타이드; B 세포를 활성화하는 펩타이드; T 세포를 활성화하는 펩타이드; 항바이러스 펩타이드; 바이러스 융합을 억제하는 펩타이드; 하나 이상의 림프구 집단의 생성을 증가시키는 펩타이드; 항미생물 펩타이드; 성장 인자; 성장 호르몬 방출 인자; 혈관활성 펩타이드; 항염증 펩타이드; 포도당 대사를 조절하는 펩타이드; 항혈전성 펩타이드; 항통각성 펩타이드; 혈관확장성 펩타이드; 혈소판 응집 억제제; 진통제 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본원에 기재된 접합체 및 화합물에서 사용되는 약물의 추가적인 예는 튜뷸라이신 M, 칼리케아미신, STAT3 억제제, 알파-아만니틴, 오로라 키나아제 억제제, 벨로테칸 및 안트라사이클린을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 경우, 약물이 독소, 예를 들어, 세포독소이다. 고등 식물에서 편재한 단백질의 클래스인 리보솜 불활성화 단백질(RIP)이 이러한 세포독소의 예이다. 적합한 세포독소는 리신, 아브린, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소(예를 들어, PE35, PE37, PE38, PE40 등), 사포린, 젤로닌, 국화과 항바이러스 단백질(PAP), 보툴리눔 독소, 브리오딘, 모모딘 및 부가닌을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 경우, 약물은 암 화학요법제이다. 암 화학요법제는 암 세포의 증식을 감소시키고, 세포독성제 및 세포증식억제제를 포괄하는 비펩타이드성(즉, 비단백질성) 화합물을 포함한다. 화학치료적 제제의 비-제한 예는 알킬화 제제, 니트로소우레아, 항대사물질, 항종양 항생제, 식물 (빈카) 알칼로이드, 및 스테로이드 호르몬을 포함한다. 펩티드성 화합물이 또한 사용될 수 있다.
적합한 암 화학요법제는 돌라스타틴 및 이의 활성 유사체 및 유도체; 및 아우리스타틴 및 이의 활성 유사체 및 유도체를 포함한다. 적합한 암 화학요법제는 메이탄시노이드 및 이의 활성 유사체 및 유도체; 및 듀오카마이신 및 이의 활성 유사체 및 유도체를 포함한다.
세포성 증식을 감소시키는 작용을 하는 제제는 당업계에서 알려지고 널리 사용된다. 이러한 제제는 메클로레타민, 사이클로포스파미드(Cytoxan™), 멜팔란(L-사르콜리신), 카무스틴(BCNU), 로무스틴(CCNU), 세무스틴(메틸-CCNU), 스트렙토조신, 클로로조토신, 유라실 머스타드, 클로르메틴, 이포스파마이드, 클로람부실에틸렌, 피포브로만, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌싸이오포스포라민, 부설판, 다카바진 및 테모졸로미드를 포하나 이에 제한되지 않는 알킬화 제제, 예컨대, 질소 머스타드, 나이트로소유레아, 에틸렌이민 유도체, 알킬 설포네이트 및 트라이아젠을 포함한다.
항대사물질 작용제는 시타라빈(CYTOSAR-U), 사이토신 아라비노사이드, 플루오로유라실(5-FU), 플록수리딘(FudR), 6-싸이오구아닌, 6-머캅토퓨린(6-MP), 펜토스타틴, 5-플루오로유라실 (5-FU), 메토트렉세이트, 10-프로파길-5,8-다이데아자폴레이트(PDDF, CB3717), 5,8-다이데아자테트라하이드로엽산(DDATHF), 류코보린, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴 및 젬시타빈을 포함하나 이에 제한되지 않는 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 아데노신 데아미나제 억제제를 포함한다.
적합한 자연 생성물 및 이의 유도체(예를 들어, 빈카 알칼로이드, 항종양 항생제, 효소, 림포카인 및 에피포도필로톡신)는 Ara-C, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀(Taxotere®), 데옥시코포마이신, 마이토마이신-C, L-아스파라지네이스, 아자싸이오프린; 브레퀴나르; 알칼로이드, 예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신 등; 포도필로톡신, 예를 들어, 에토포시드, 테니포시드 등; 항생제, 예를 들어, 안트라사이클린, 다우노루비신 염산염(다우노마이신, 루비도마이신, 세루비딘), 이다루비신, 독소루비신, 에피루비신 및 모폴리노 유도체 등; 페녹시존 비스사이클로펩타이드, 예를 들어, 닥티노마이신; 염기성 글리코펩타이드, 예를 들어 블레오마이신; 안트라퀴논 글리코사이드, 예를 들어, 플리카마이신(미트라마이신); 안트라센디온, 예를 들어, 미톡산트론; 아지리노피롤로 인돌레디온, 예를 들어, 미토마이신; 매크로사이클릭 면역억제제, 예를 들어, 사이클로스포린, FK-506(타크로리무스, 프로그라프), 라파마이신 등; 및 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
다른 항-증식성 세포독성 제제는 나벨벤, CPT-11, 아나스트로졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 및 드롤록사핀이다.
항증식성 활성을 갖는 미세소관 영향 제제는 또한 사용에 적합하고, 비제한적으로, 알로콜히신 (NSC 406042), 할리콘드린(Halichondrin) B (NSC 609395), 콜히친 (NSC 757), 콜히친 유도체 (예를 들면, NSC 33410), 돌스타틴 10 (NSC 376128), 메이탄신 (NSC 153858), 리족신 (NSC 332598), 파클리탁셀 (Taxol®), Taxol® 유도체, 도세탁셀 (Taxotere®), 티오콜히신 (NSC 361792), 트리틸 시스테린, 빈블라스틴 술페이트, 빈크리스틴 술페이트, 비제한적으로, 에오프틸론 A, 에포틸론 B, 디스코더몰리드를 포함하는 자연 및 합성 에포틸론; 에스트라무스틴, 노코다졸, 및 기타 등등을 포함한다.
사용에 적합한 (합성 유사체를 포함하는) 호르몬 조절제 및 스테로이드는 아드레노코르티코스테로이드, 예를 들면 프레드니손, 덱사메타손 등; 에스트로겐 및 프레게스틴, 예를 들어, 하이드록시프로게스테론 카프로에이트, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 에스트라디올, 클로미펜, 타목시펜; 등; 및 부신피질 억압제, 예를 들어. 아미노글루테티미드; 17α-에티닐에스트라디올; 다이에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 플루옥시메스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스토락톤, 메틸프레드니솔론, 메틸-테스토스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 하이드록시프로게스테론, 아미노글루테티미드, 에스트라무스틴, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 류프롤라이드, 플루타미드(Flutamide)(Drogenil), 토레미펜(Toremifene)(Fareston), 및 Zoladex®를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 에스트로겐은 증식 및 분화를 자극시키고, 따라서, 에스트로겐 수용체에 결합하는 화합물은 이 활성을 차단하는 데 사용된다.
다른 적합한 화학요법제는 금속 착체, 예를 들어 시스플라틴(cis-DDP), 카보플라틴 등; 유레아, 예를 들어 하이드록시유레아; 및 하이드라진, 예를 들어 N-메틸하이드라진; 에피도필로톡신; 위상이성질체화효소 억제제; 프로카바진; 미톡산트론; 류코보린; 테가푸르 등을 포함한다. 다른 관심 항증식제는 면역억제제, 예를 들어 마이코페놀산, 탈리도마이드, 데속시스페구알린, 아자스포린, 레플루노미드, 미조리빈, 아자스피란(SKF 105685); Iressa®(ZD 1839, 4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-메톡시-6-(3-(4-모폴리닐)프로폭시)퀴나졸린) 등을 포함한다.
탁산은 사용하기에 적합하다. "탁산"은 파클리탁셀, 뿐만 아니라 임의의 활성 탁산 유도체 또는 전구약물을 포함한다. (본원에 유사체, 제형, 및 유도체 예컨대, 예를 들어, 도세탁셀, TAXOLTM, TAXOTERETM(도세탁셀의 제제), 파클리탁셀의 10-데스아세틸 유사체 및 파클리탁셀의 3'N-데스벤조일-3'N-t-뷰톡시카보닐 유사체를 포함하는 것으로 이해되어야 하는) "파클리탁셀"은 통상의 기술자에게 알려진 기법을 활용하여 용이하게 제조될 수 있거나(또한, WO 94/07882, WO 94/07881, WO 94/07880, WO 94/07876, WO 93/23555, WO 93/10076; 미국 특허 번호 5,294,637; 5,283,253; 5,279,949; 5,274,137; 5,202,448; 5,200,534; 5,229,529; 및 EP 590,267 참고), 예를 들어, 미주리주 세인트루이스, Sigma Chemical Co.를 포함하는 다양한 상업적 공급원 (Taxus brevifolia로부터 유래한 T7402; 또는 Taxus yannensis로부터 유래한 T-1912).
파클리탁셀은 일반적인 화학적으로 이용 가능한 형태의 파클리탁셀뿐만 아니라, 유사체 및 유도체(예를 들어, 위에서 언급되는 바와 같은 TAXOTERETM 도세탁셀) 및 파클리탁셀 접합체(예를 들어, 파클리탁셀-PEG, 파클리탁셀-덱스트란, 또는 파클리탁셀-자일로스)를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다.
또한, 용어 "탁산"은 양쪽 친수성 유도체 및 소수성 유도체를 포함하는 다양한 알려진 유도체를 포함한다. 탁산 유도체는 갈락토스 및 만노스 유도체; 피페라지노 및 피페라지노 유도체를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본 개시내용의 실시양태는 항체가 2개 이상의 약물 모이어티, 예컨대 3개의 약물 모이어티, 4개의 약물 모이어티, 5개의 약물 모이어티, 6개의 약물 모이어티, 7개의 약물 모이어티, 8개의 약물 모이어티, 9개의 약물 모이어티, 10개의 약물 모이어티, 11개의 약물 모이어티, 12개의 약물 모이어티, 13개의 약물 모이어티, 14개의 약물 모이어티, 15개의 약물 모이어티, 16개의 약물 모이어티, 17개의 약물 모이어티, 18개의 약물 모이어티, 19개의 약물 모이어티, 또는 20개 이상의 약물 모이어티에 접합되는 접합체를 포함한다. 약물 모이어티는 본원에 기재된 바와 같이 항체 내의 하나 이상의 부위에서 항체에 접합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 접합체는 0.1 내지 20, 또는 0.5 내지 20, 또는 1 내지 20, 예컨대 1 내지 19, 또는 1 내지 18, 또는 1 내지 17, 또는 1 내지 16, 또는 1 내지 15, 또는 1 내지 14, 또는 1 내지 13, 또는 1 내지 12, 또는 1 내지 11, 또는 1 내지 10, 또는 1 내지 9, 또는 1 내지 8, 또는 1 내지 7, 또는 1 내지 6, 또는 1 내지 5, 또는 1 내지 4, 또는 1 내지 3, 또는 1 내지 2의 범위의 평균 약물-대-항체 비(DAR)(몰비)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 접합체는 1 내지 10, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10의 평균 DAR을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 접합체는 1 내지 10의 평균 DAR을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 접합체는 1 내지 5의 평균 DAR을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 접합체는 5 내지 10의 평균 DAR을 갖는다. 평균은 산술적 평균을 의미한다.
폴리펩티드에 접합되는 약물은 폴리펩티드와의 반응을 위한 반응성 파트너를 포함하도록 변형될 수 있다. 약물이 펩티드 약물인 경우, 반응성 모이어티(예를 들어, 아미노옥시 또는 하이드라지드)은 N-말단 영역, N-말단, C-말단 영역, C-말단, 또는 펩티드 내부 위치에 위치할 수 있다. 예를 들어, 방법의 예는 아미노옥시기를 갖는 펩타이드 약물을 합성하는 단계를 수반한다. 이러한 예에서, 펩티드는 Boc-보호된 전구체로부터 합성된다. 펩티드의 아미노 기는 카르복실산 기 및 옥시-N-Boc 기를 포함하는 화합물과 반응할 수 있다. 일 예로서, 펩티드의 아미노 기는 3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일옥시)프로판산과 반응한다. 카르복실산 기 및 옥시-N-보호기를 포함하는 화합물에 대한 다른 변형은 알킬렌 링커 내의 상이한 수의 탄소 및 알킬렌 링커 상의 치환체를 포함할 수 있다. 펩티드의 아미노 기와 카르복실산 기 및 옥시-N-보호기를 포함하는 화합물 사이의 반응은 표준 펩티드 커플링 화학을 통해 발생한다. 사용될 수 있는 펩티드 커플링 시약의 예는 DCC(디사이클로헥실카르보디이미드), DIC(디이소프로필카르보디이미드), 디-p-톨루오일카르보디이미드, BDP(1-벤조트리아졸 디에틸포스페이트-1-사이클로헥실-3-(2-모르폴리닐에틸)카르보디이미드), EDC(1-(3-디메틸아미노프로필-3-에틸-카르보디이미드 염산염), 시아누릭 플루오라이드, 시아누릭 클로라이드, TFFH(테트라메틸 플루오로포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트), DPPA(디페닐포스포라지데이트), BOP(벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), HBTU(O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트), TBTU(O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트), TSTU(O-(N-숙신이미딜)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트), HATU(N-[(디메틸아미노)-1-H-1,2,3-트리아졸로[4,5,6]-피리딘-1-일메틸렌]- -N-메틸메탄아미늄 헥사플루오로포스페이트 N-옥사이드), BOP-Cl(비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀산 클로라이드), PyBOP((1-H-1,2,3-벤조트리아졸-1-일옥시)-트리스(피롤리디노)포스포늄 테트라플루오로포스페이트), BrOP(브로모트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), DEPBT(3-(디에톡시포스포릴옥시)-1,2,3-벤조트리아진-4(3H)-온)) PyBrOP(브로모트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 비제한적인 예로서, HOBt 및 DIC가 펩티드 커플링 시약으로 사용될 수 있다.
아미노-옥시 작용기를 노출시키기 위한 탈보호는 N-보호기를 포함하는 펩티드 상에서 수행된다. N-옥시석신이미드기의 탈보호는 예를 들어, 사이클릭 아미드기에 대한 표준 탈보호 조건에 따라 발생한다. 탈보호 조건은 Greene 및 Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 제3판, 1999, John Wiley & Sons, NY 및 Harrison 등 특정 탈보호 조건은 하이드라진 시약, 아미노 시약 또는 수소화붕소 소듐을 포함한다. Boc 보호기의 탈보호는 TFA으로 발생할 수 있다. 탈보호에 대한 다른 시약은 하이드라진, 메틸하이드라진, 페닐하이드라진, 나트륨 보로하이드라이드, 및 메틸아민을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 생성물 및 중간체는 통상적인 수단, 예컨대 HPLC 정제에 의해 정제될 수 있다.
통상의 기술자는 pH 및 입체 장애(예를 들어, 관심 반응 파트너와의 반응에 대한 아미노산 잔기의 접근성)와 같은 요인이 중요하다는 것을 인식할 것이다. 최적의 접합 조건을 제공하기 위해 반응 조건을 수정하는 것은 통상의 기술자의 기술 범위 내에 있으며 해당 분야에서 일상적인 일이다. 생세포 내에 또는 상에 존재하는 폴리펩티드와 접합이 수행되는 경우, 생리학적으로 적합하도록 조건이 선택된다. 예를 들어, pH는 반응이 발생하기에 충분한 시간 동안, 그러나 세포에 의해 내약성이 되는 기간 내에(예를 들어, 약 30분 내지 1시간) 일시적으로 강하될 수 있다. 세포 표면 상에서 폴리펩티드의 변형을 수행하기 위한 생리학적 조건은 세포-표면 아지드를 갖는 세포의 변형에서 케톤-아지드 반응에 사용되는 것과 유사할 수 있다(예를 들어, 미국 6,570,040 참조).
본원에 개시된 화합물 또는 접합체와의 반응성 파트너로서 작용하는 α-친핵성 기를 함유하거나 이를 함유하도록 변형된 소분자 화합물이 또한 본 개시내용의 폴리펩티드-약물 접합체에서 약물로서 사용하기 위해 고려된다. 일반적인 방법이 관심 화합물을 합성하는 데 유용한 화학적 합성 반응식 및 조건을 위하여 당해 기술분야에서 알려져 있다(예를 들어, Smith 및 March, March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 제5판, Wiley-Interscience, 2001; 또는 Vogel, A Textbook of Practical Organic Chemistry, Including Qualitative Organic Analysis, 제4판, New York: Longman, 1978 참조).
항체를 생성하는 방법
대상 항체는 임의의 알려진 방법, 예를 들어, 단백질 합성을 위한 통상적인 합성 방법; 재조합 DNA 방법 등에 의해 생성될 수 있다
대상 항체가 단일 사슬 폴리펩타이드인 경우, 이는 표준 화학적 폴리펩타이드 합성 기법을 사용하여 합성될 수 있다. 폴리펩타이드가 화학적으로 합성되는 경우 합성은 액체상 또는 고체상을 통해 진행될 수 있다. 서열의 C-말단 아미노산이 불용성 지지체에 부착된 후 서열에 남아 있는 아미노산을 순차적으로 첨가하는 고체상 폴리펩타이드 합성(SPPS)은 대상 항체의 화학적 합성에 적합한 방법의 예이다. Fmoc 및 Boc와 같은 다양한 형태의 SPPS를 대상 항체 합성에 사용할 수 있다.
표준 재조합 방법이 대상 항체의 생성을 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 임의로 불변 영역에 연결된 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산은 발현 벡터에 삽입된다. 경쇄및 중쇄는 동일하거나 상이한 발현 벡터에서 클로닝될 수 있다. 면역글로불린 사슬을 코딩하는 DNA 분절은 면역글로불린 폴리펩타이드의 발현을 보장하는 발현 벡터(들)의 제어 서열에 작동 가능하게 연결된다. 발현 조절 서열은 프로모터(예를 들어, 천연 연관 또는 이종성 프로모터), 신호 서열, 인핸서 요소 및 전사 종결 서열을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 발현 제어 서열은 진핵 숙주 세포(예를 들어, COS 또는 CHO 세포)를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터에 있는 진핵 프로모터 시스템일 수 있다. 벡터가 적절한 숙주에 통합되면, 숙주는 뉴클레오타이드 서열의 고수준 발현과 항체의 수집 및 정제에 적합한 조건하에서 유지된다.
코드의 축퇴성으로 인해, 다양한 핵산 서열이 각 면역글로불린 아미노산 서열을 코딩할 수 있다. 목적하는 핵산 서열은 신규 고체상 DNA 합성에 의해 또는 목적하는 폴리뉴클레오타이드의 이전에 제조된 변이체의 중합효소 연쇄 반응(PCR) 돌연변이생성에 의해 생성될 수 있다.
적합한 발현 벡터는 전형적으로 에피솜으로서 또는 숙주 염색체 DNA의 통합 부분으로서 숙주 유기체에서 복제 가능하다. 일반적으로, 발현 벡터는 목적하는 DNA 서열로 형질전환된 세포를 검출할 수 있도록 선택 마커(예를 들어, 암피실린 저항성, 히그로마이신 저항성, 테트라사이클린 저항성, 카나마이신 저항성 또는 네오마이신 저항성)을 함유한다.
대장균(Escherichia coli)은 대상 항체 코딩 폴리뉴클레오타이드를 클로닝하기 위해 사용될 수 있는 원핵 숙주 세포의 예이다. 사용하기에 적합한 다른 미생물 숙주는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)와 같은 간균, 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia) 및 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종과 같은 다른 장내세균을 포함한다. 또한, 효모와 같은 다른 미생물이 발현에 유용하다. 사카로미세스(예를 들어, S. 세레비시아) 및 피키아(Pichia)는 적합한 효모 숙주 세포의 예이다.
미생물에 더하여, 포유동물 세포(예를 들어, 시험관내(in vitro) 세포 배양물에서 성장한 포유동물 세포)는 또한 본 발명의 폴리펩타이드(예를 들어, 면역글로불린을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 단편)를 발현하고 생성하기 위해 사용될 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포는 CHO 세포주, 다양한 Cos 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주 및 형질전환된 B 세포 또는 하이브리도마를 포함한다. 이러한 세포에 대한 발현 벡터는 복제 기점, 프로모터 및 인핸서와 같은 발현 제어 서열과 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위 및 전사 터미네이터 서열과 같은 필요한 처리 정보 부위를 포함할 수 있다. 적합한 발현 조절 서열의 예는 면역글로불린 유전자, SV40, 아데노바이러스, 소 유두종 바이러스, 거대세포바이러스 등으로부터 유래된 프로모터이다.
(화학적으로 또는 재조합적으로) 일단 합성되면, 전체 항체, 이의 이량체, 개별 경쇄 및 중쇄, 또는 대상 항체의 다른 형태(예를 들어, scFv 등)는 황산 암모늄 침전, 친화도 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 정제, 겔 전기영동 등을 포함하는 당해 기술 분야의 표준 절차에 따라 정제될 수 있다(예를 들어, 일반적으로 Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, N.Y., (1982) 참조). 대상 항체는 실질적으로 순수할 수 있으며, 예를 들어, 적어도 약 80% 내지 85% 순수, 적어도 약 85% 내지 90% 순수, 적어도 약 90% 내지 95% 순수 또는 98% 내지 99%, 또는 그 이상 순수하고, 예를 들어, 대상 항체 이외의 세포 파편, 거대분자 등과 같은 오염물이 없을 수 있다.
조성물
본 개시내용의 접합체는 다양한 상이한 방법으로 제형화될 수 있다. 일반적으로, 접합체가 폴리펩타이드-약물 접합체(예를 들어, 항체-약물 접합체)인 경우, 접합체는 폴리펩타이드에 접합된 약물, 처리될 병태 및 사용될 투여 경로와 부합하는 방식으로 제제화된다.
몇몇 실시형태에서, 본 개시내용의 임의의 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
접합체(예를 들어, 항체-약물 접합체)는 임의의 적합한 형태, 예를 들어 약제학적으로 허용되는 염의 형태로 제공될 수 있고, 임의의 적합한 투여 경로, 예를 들어 경구, 국소 또는 비경구용 투여용으로 제형화될 수 있다. 접합체가 주사 가능한 액체로서 (예컨대, 정맥내로 투여되거나 또는 조직으로 직접 투여되는 실시형태들에서) 제공되는 경우, 접합체는 사용 준비가 되어 있는 투약 형태로서, 또는 복원 가능한 보관-안정한 분말 또는 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제로 구성된 액체로서 제공될 수 있다.
접합체를 제형화하는 방법은 쉽게 활용할 수 있는 방법으로부터 적응될 수 있다. 예를 들어, 접합체는 치료적 유효량의 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체(예컨대, 식염수)를 포함하는 약제학적 조성물로 제공될 수 있다. 약제학적 조성물은 선택적으로 다른 첨가제(예컨대, 완충제, 안정화제, 보존제 등)를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 제형은 포유류에 투여하기에 적합한데, 예컨대, 인간에 투여하기에 적합한 것들이다.
예를 들어, 본 개시내용은 대상 항체 접합체를 포함하는 조성물을 제공한다. 대상 항체 접합체 조성물은, 대상 항체 접합체에 더하여, 하나 이상의 염, 예를 들어, NaCl, MgCl2, KCl, MgSO4, 등; 완충제, 예를 들어, Tris 완충제, N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N’-(2-에테인설폰산)(HEPES), 2-(N-모폴리노)에테인설폰산(MES), 2-(N-모폴리노)에테인설폰산 소듐 염(MES), 3-(N-모폴리노)프로페인설폰산(MOPS), N-트리스[하이드록시메틸]메틸-3-아미노프로페인설폰산(TAPS), 등; 가용화제; 세제, 예를 들어, 비이온성 세제, 예컨대, Tween-20, 등; 단백질분해효소 억제제; 글리세롤 등을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 대상 항체 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물을 제공한다. 일반적으로, 제제는 유효량의 대상 항체 접합체를 포함한다. "유효량"은 목적하는 결과, 예를 들어, 암성 세포 수의 감소를 생성하기에 충분한 투여량을 의미한다. 일부 경우, 대조군과 비교하여 목적하는 결과가 적어도 악성 종양 증상의 감소이다.
제제
대상 방법에서, 대상 항체 접합체는 목적하는 치료적 효과 또는 진단적 효과를 초래할 수 있는 임의의 편리한 수단을 사용하여 숙주에게 투여될 수 있다. 따라서, 항체 접합체는 치료적 투여를 위한 다양한 제제로 혼입될 수 있다. 보다 구체적으로, 대상 항체 접합체는 적절한 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 담체 또는 희석제와 배합하여 약제학적 조성물로 제제화될 수 있으며, 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌약, 주사제, 흡입제 및 에어로졸과 같은 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태의 제제로 제제화될 수 있다.
약제학적 투여 형태에서, 대상 항체 접합체는 약제학적으로 허용 가능한 염의 형태로 투여될 수 있거나, 단독으로 또는 다른 약제학적 활성 화합물과 적절하게 조합하여 사용될 수도 있다. 다음의 방법 및 부형제는 단지 예시일 뿐이며 어떠한 방식으로든 제한하지 않는다.
경구 제제의 경우, 대상 항체 접합체는 단독으로 사용될 수 있거나 정제, 분말, 과립 또는 캡슐을 제조하기 위한 적절한 부가제, 예를 들어 락토스, 만니톨, 옥수수 전분 또는 감자 전분과 같은 종래의 부가제; 결정질 셀룰로스, 셀룰로스 유도체, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴과 같은 결합제; 옥수수 전분, 감자 전분 또는 소듐 카복시메틸셀룰로스와 같은 붕괴제; 활석 또는 마그네슘 스테아레이트과 같은 윤활제; 및 바람직한 경우, 희석제, 완충제, 습윤제, 보존제 및 향미제와 조합하여 사용된다.
대상 항체 접합체는 이를 식물성 또는 다른 유사한 오일, 합성 지방산 글리세라이드, 고급 지방산의 에스터 또는 프로필렌 글라이콜과 같은 수성 또는 비수성 용매에 용해시키거나, 현탁시키거나, 유화시키고. 바람직한 경우 가용화제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제 및 보존제와 같은 종래의 첨가제를 사용하여 주사용 제제로 제제화될 수 있다.
대상 항체 접합체를 포함하는 약제학적 조성물은 목적하는 정도의 순도를 갖는 항체 접합체를 선택적인 생리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 안정화제, 계면활성제, 완충제 및/또는 긴장제와 혼합하여 제조된다. 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 안정제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제를 포함합니다. 아스코르브산, 글루타티온, 시스테인, 메티오닌 및 시트르산을 포함하는 항산화제; 방부제(에탄올, 벤질 알코올, 페놀, m-크레졸, p-클로르-m-크레졸, 메틸 또는 프로필 파라벤, 염화벤잘코늄, 또는 이들의 조합 등); 아르기닌, 글리신, 오르니틴, 리신, 히스티딘, 글루탐산, 아스파르트산, 이소류신, 류신, 알라닌, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 메티오닌, 세린, 프롤린 및 이들의 조합과 같은 아미노산; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 젤라틴 또는 혈청 알부민과 같은 단백질; EDTA와 같은 킬레이트제; 트레할로스, 수크로스, 유당, 글루코스, 만노스, 말토스, 갈락토스, 과당, 소르보스, 라피노스, 글루코사민, N-메틸글루코사민, 갈락토사민, 및 뉴라민산 등의 당류; 및/또는 Tween, Brij Pluronics, Triton-X, 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제.
약제학적 조성물은 액체 형태, 동결건조 형태 또는 동결건조 형태로부터 재구성된 액체 형태일 수 있으며, 여기서 동결건조 제제는 투여 전 멸균 용액으로 재구성되어야 한다. 동결건조된 조성물을 재구성하기 위한 표준 절차는 일정 부피의 순수(전형적으로 동결건조 동안 제거된 부피와 균등함)를 다시 첨가하는 것이다. 그러나, 항균제를 포함하는 용액은 비경구 투여용 약제학적 조성물의 생성에 사용될 수 있다.
대상 약제학적 조성물에 있는 예시적인 항체 접합체 농도는 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/ml 또는 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 또는 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL 범위일 수 있다.
항체 접합체의 수성 제제는 pH 완충 용액, 예를 들어 약 4.0 내지 약 7.0, 또는 약 5.0 내지 약 6.0, 또는 대안적으로 약 5.5 범위의 pH에서 제조될 수 있다. 이러한 범위 내의 pH에 적합한 완충제의 예는 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제, 시트레이트 완충제, 석시네이트 완충제, 아세테이트 완충제 및 다른 유기 산 완충제를 포함한다. 완충제 농도는 예를 들어, 완충제 및 제형의 목적하는 장성 정도에 따라 약 1 mM 내지 약 100 mM 또는 약 5 mM 내지 약 50 mM일 수 있다.
또한, 동결보호제가 동결건조 처리 동안 불안정한 조건으로부터 불안정한 활성 성분(예를 들어, 단백질)을 보호하기 위해 첨가될 수 있다. 예를 들어, 알려진 동결보호제는 당(포도당 및 자당 포함); 폴리올(만니톨, 소르비톨 및 글리세롤 포함); 및 아미노산(알라닌, 글라이신 및 글루탐산 포함)을 포함한다. 동결보호제는 약 10 nM 내지 500 nM의 양으로 포함될 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상 제제는 대상 항체 접합체 및 하나 이상의 작용제(예를 들어, 계면활성제, 완충제, 안정화제, 등장화제)를 포함하며 에탄올, 벤질 알코올, 페놀, m-크레졸, p-클로르-m-크레졸, 메틸 또는 프로필 파라벤, 염화 벤잘코늄 및 이들의 조합을 포함한다. 다른 실시양태에서, 보존제는 예를 들어, 약 0.001 내지 약 2%(w/v) 범위의 농도로 제제에 포함된다.
예를 들어, 대상 제제는 비경구 투여에 적합한 액체 또는 동결건조 제제일 수 있으며, 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 대상 항체 접합체; 약 0.001% 내지 약 1%의 적어도 하나의 계면활성제; 약 1 mM 내지 약 100 mM의 완충제; 선택적으로 약 10 mM 내지 약 500 mM의 안정화제; 및 약 5 mM 내지 약 305 mM의 등장화제를 포함하며, pH는 약 4.0 내지 약 7.0이다.
다른 예로서, 대상 비경구 제제는 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 대상 항체 접합체; 0.04% Tween 20 w/v; 20 mM의 L-히스티딘; 및 250 mM의 자당을 포함하는 액체 또는 동결건조 제제이며, pH는 5.5이다.
본원에서 사용되는 용어 "단위 투여 형태"는 인간 및 동물 대상체를 위한 단일 투여로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 부형제, 담체 또는 운반체와 관련하여 목적하는 효과를 내기에 충분한 양으로 계산된 본 발명의 항체 접합체의 미리 결정된 양을 포함한다. 대상 항체 접합체에 대한 사양은 숙주에서 사용된 특정 항체 접합체 화합물 및 달성될 효과 및 각각의 항체 접합체와 연관되는 약동학에 따라 다르다.
대상 항체 접합체는 주사 가능한 제제로 투여될 수 있다. 전형적으로, 주사 가능한 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로 제조되며, 주입 전 액체 운반체에 용해되거나 현탁되기에 적합한 고체 형태도 제조될 수 있다. 또한, 제제는 유화될 수 있거나 항체 접합체는 리포솜 운반체에 캡슐화될 수 있다.
운반체, 보조제, 담체 또는 희석제와 같은 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 대중이 용이하게 이용 가능하다. 또한, pH 조정제 및 완충제, 등장성 조정제, 안정제, 습윤제 등과 같은 약제학적으로 허용 가능한 보조 물질은 대중이 용이하게 이용 가능하다.
일부 실시양태에서, 대상 항체 접합체는 제어 방출 제제로 제제화된다. 서방형 제제는 당해 기술분야에서 널리 알려진 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 서방형 제제의 적합한 예는 항체 접합체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 매트릭스는 성형 물품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 서방형 매트릭스의 예는 폴리에스테르, L-글루탐산과 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-바이닐 아세테이트, 하이드로겔, 폴리락타이드, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시뷰티르산을 포함한다. 서방형 제제에 포함되는 항체의 생물학적 활성 손실 가능성 및 면역원성 변경 가능성은 적절한 부가제를 사용하여, 수분 함량을 제어하여 그리고 특정 중합체 매트릭스 조성을 개발하여 방지할 수 있다.
물리적 시스템은 속도 제어 막을 갖는 저장조 시스템, 예컨대, 미세캡슐화, 거대캡슐화 및 막 시스템; 속도 제어 막을 갖지 않는 저장조 시스템, 예컨대, 중공 섬유, 초미세다공성 셀룰로스 트라이아세테이트 및 다공성 중합체성 기질 및 발포체; 비다공성, 중합체성 또는 탄성중합체성 매트릭스 (예를 들어, 비침식성, 침식성, 환경제 침식 및 분해성)에 물리적으로 용해되는 시스템을 포함하는 모놀리식 시스템 및 비다공성, 중합체성 또는 탄성중합체성 매트릭스(예를 들어, 비침식성, 침식성, 환경제 침식 및 분해성)에 물리적으로 분산되는 물질을 포함하는 모놀리식 시스템; 외부 제어 층과 화학적으로 유사하거나 유사하지 않은 저장조 층을 포함하는 적층 구조체; 및 삼투압 펌프, 또는 이온-교환 수지 상으로의 흡착과 같은 다른 물리적 방법을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
화학적 시스템은 중합체 매트릭스의 화학적 침식(예를 들어, 이질성 또는 균질성 침식), 또는 중합체 매트릭스의 생물학적 침식(예를 들어, 이질성 또는 균질성)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
투여량
적합한 투여량은 다양한 임상적 요인을 기준으로 주치의 또는 다른 자격을 갖춘 의료진이 결정할 수 있다. 의학 분야에서 잘 알려진 바와 같이, 임의의 환자에 대한 투여량은 환자의 치수, 신체 표면적, 연령, 투여할 특정 화합물, 환자의 성별, 시간 및 투여 경로, 일반적인 건강 및 동시에 투여되고 있는 다른 약물을 포함하는 많은 요인에 따라 달라진다. 대상 항체 접합체는 용량당 1 ng/kg 체중 내지 20 mg/kg 체중, 예를 들어 0.1 mg/kg 체중 내지 10 mg/kg 체중, 예를 들어, 0.5 mg/kg 체중 내지 5 mg/kg 체중의 양으로 투여될 수 있으며, 그러나 특히 앞서 언급한 요인을 고려하면 이러한 예시적인 범위 미만 또는 이상인 용량이 구상된다. 요법이 연속 주입인 경우 분당 체중 1 kg당 1 μg 내지 10 mg 범위일 수도 있다.
통상의 기술자는 용량 수준이 특정 항체 접합체의 기능, 증상의 중증도 및 부작용에 대한 대상체의 민감성에 따라 달라질 수 있음을 용이하게 인식할 것이다. 특정 화합물에 대한 바람직한 투여량은 다양한 수단에 의해 통상의 기술자가 용이하게 결정할 수 있다.
투여 경로
대상 항체 접합체는 생체내(in vivo) 및 생체외(ex vivo) 방법뿐만 아니라 전신 및 국소 투여 경로를 포함하여 약물 전달에 적합한 임의의 이용 가능한 방법 및 경로를 사용하여 개체에게 투여된다.
통상적이고 약제학적으로 허용 가능한 투여 경로는 비강내, 근육내, 기관내, 피하, 피내, 국소 적용, 정맥내, 동맥내, 직장, 비강, 경구 및 다른 장내 및 비경구 투여 경로를 포함한다. 투여 경로는 목적하는 경우 조합될 수 있거나 항체 접합체 및/또는 목적하는 효과에 따라 조정될 수 있다. 대상 항체 접합체 조성물은 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 접합체 조성물은 경구 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 접합체 조성물은 흡입 경로를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 접합체 조성물은 비강내 투여된다. 일부 실시양태에서,대상 항체 접합체 조성물은 국소 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 접합체 조성물은 두개내 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 접합체 조성물은 정맥내 투여된다.
항체 접합체는 전신 또는 국소 경로를 포함하는 종래의 약물의 전달에 적합한 임의의 이용 가능한 종래의 방법 및 경로를 사용하여 숙주에게 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 발명에 의해 고려되는 투여 경로는 장내, 비경구 또는 흡입 경로를 포함하나 반드시 이에 제한되지는 않는다.
흡입 투여 이외의 비경구 투여 경로는 국소, 경피, 피하, 근육내, 안와내, 피막내, 척추내, 흉골내, 간내 및 정맥내 경로, 예를 들어, 소화관을 통한 것 이외의 임의의 투여 경로를 포함하나 반드시 이에 제한되지는 않는다. 비경구 투여가 대상 항체의 전신 또는 국소 전달을 수행하기 위해 수행될 수 있다. 전신 전달이 필요한 경우, 투여는 전형적으로 약제학적 제제의 침습적 또는 전신 흡수된 국소 또는 점막 투여를 수반한다.
또한, 대상 항체 접합체는 장내 투여에 의해 대상체에게 전달될 수 있다. 장내 투여 경로는 경구 및 직장(예를 들어, 좌약 사용) 전달을 포함하나 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.
"치료"는 적어도 숙주에 영향을 미치는 병리적 병태와 연관된 증상의 개선이 이루어지는 것을 의미하며, 여기서 개선은 적어도 치료 중인 병리적 병태, 예컨대, 유방암, 췌장암 또는 폐암와 연관된 파라미터, 예를 들어, 증상의 정도의 저감을 나타내기 위해 넓은 의미로 사용된다. 이와 같이, 치료는 또한 병리적 병태, 또는 적어도 이와 연관된 증상이 완전히 억제되어, 예를 들어, 발생하는 것이 예방되거나 중단되어, 예를 들어, 종결되어서, 더 이상 숙주가 병태로, 또는 적어도 병태를 특징으로 하는 증상으로부터 고통받지 않는 상황을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상 항체 접합체는 주사에 의해, 예를 들어 전신 전달(예를 들어, 정맥내 주입)을 위해 또는 국소 부위에 투여된다.
다양한 숙주(여기서 용어 "숙주"는 본원에서 "대상체", "개체" 및 "환자"라는 용어와 상호교환적으로 사용됨)가 대상 방법에 따라 치료 가능하다. 일반적으로, 이러한 숙주는 "포유동물" 또는 "포유류"이며, 여기서 이러한 용어는 육식동물목(예를 들어, 개 및 고양이), 설치목(예를 들어, 마우스, 기니피그, 및 쥐) 및 영장목(예를 들어, 인간, 침팬지 및 원숭이)를 포함하는 포유동물강 내에 있는 유기체를 설명하기 위해 광범위하게 사용된다. 일부 실시양태에서, 숙주는 인간일 것이다.
치료 방법
본 개시내용은 고형 종양 또는 혈액학적 악성종양을 포함하는 악성종양의 치료 방법을 제공하며, 방법은 일반적으로 이를 필요로 하는 개체(예를 들어, 악성종양이 있는 개체)에게 유효량의 대상 항체 접합체를 단독으로(예를 들어, 단일 요법으로) 또는 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여(예를 들어, 조합 요법으로) 투여하는 단계를 포함한다.
악성 종양은 HCC, 비호지킨 림프종, 버킷 림프종, 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병, 모발 세포 백혈병, 전림프구성 백혈병, 항문암, 충수암, 담관암(즉, 담관암종), 방광암, 뇌 종양, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 미상의 원발성 암(CUP), 식도암, 안암, 나팔관암, 위장관암, 신장암, 간암, 폐암, 수모세포종, 흑색종, 구강암, 난소암, 췌장암, 부갑상선 질환, 음경암, 뇌하수체 종양, 전립선암, 직장암, 피부암, 위암, 고환암, 후두암, 갑상선암, 자궁암, 질암, 외음부암 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 대상 항체 접합체의 유효량은, 단독으로(예를 들어, 단일 요법으로) 또는 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여(예를 들어, 조합 요법으로) 투여되는 경우, 하나 이상의 용량으로, 항체 접합체로 치료하지 않은 개체에 있는 암성 세포의 수와 비교하여 개체에 있는 암성 세포의 수를 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 그 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 양이다.
일부 경우, 유방암은 에스트로겐, 프로게스테론 및 HER2에 대해 삼중 음성이다. 일부 경우, 삼중 음성 유방암은 전이성 삼중 음성 유방암이다. 일부 경우, 삼중 음성 유방암은 재발성 또는 난치성 삼중 음성 유방암이다. 일부 경우, 삼중 음성 유방암은 재발성 또는 난치성 전이성 삼중 음성 유방암입니다.
본 개시내용의 양상들은 대상체의 표적 부위에 약물을 전달하는 방법을 포함한다. 해당 방법은 본 개시내용에 따른 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 투여는 대상체의 표적 부위에 접합체로부터 치료적 유효량의 약물을 방출하는데 효과적이다.
일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체의 다중 용량이 투여된다. 항체-약물 접합체의 투여 빈도는 다양한 인자, 예를 들어, 증상의 중증도, 대상체의 병태 등 중 임의의 것에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항체-약물 접합체는 월 1회, 월 2회, 월 3회, 격주, 주 1회(qwk), 주 2회, 주 3회, 주 4회, 주 5회, 주 6회, 격일, 매일(qd/od), 1일 2회(bds/bid) 또는 1일 3회(tds/tid) 등으로 투여된다.
조합 요법
일부 실시양태에서, 악성종양을 치료하는 대상 방법은 대상 항체 접합체 및 하나 이상의 추가 치료제를 투여하는 단계를 포함한다. 적합한 추가 치료제는 암 화학요법제(위에서 설명한 바와 같음)를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 대상체에게 치료적 유효량의 면역조절 치료제를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 면역조절 치료제는 면역 관문 억제제 또는 인터류킨일 수 있다. 면역 관문 억제제는 A2AR, B7-H3, B7- H4, BTLA, CTLA-4, CD277, IDO, KIR, PD-1, LAG-3, TIM-3, TIGIT 또는 VISTA를 억제할 수 있다. PD-1 신호전달을 억제하는 면역 관문 억제제는 항PD-1 항체일 수 있다. 항PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 더발루맙 또는 아벨루맙일 수 있다. CTLA-4를 억제하는 면역 관문 억제제는 항CTLA-4 항체일 수 있다. 항CTLA-4 항체는 이필리무맙일 수 있다.
치료에 적합한 대상체
다양한 과목이 대상 방법으로 치료하기에 적합하다. 적합한 대상체는 개체, 예를 들어, 악성 종양이 있는 사람; 악성 종양을 진단받은 사람; 악성 종양이 있고 악성 종양의 재발에 대한 위험이 있는 사람; 대상 항체 접합체 이외의 제제로 악성 종양에 대해 치료받은 사람(예를 들어, 암 화학요법제로 치료받은 사람) 및 작용제에 반응하지 않은 사람; 또는 대상 항체 접합체 이외의 작용제로 악성 종양에 대해 치료받은 사람(예를 들어, 암 화학요법제로 치료받은 사람) 및 제제에 초기에 반응했지만 후속적으로 반응을 중단한 사람(예를 들어, 재발한 사람)을 포함한다.
실시양태
본 개시내용의 특정 실시양태는 아래에 나열된 항에 설명되어 있다. 이러한 실시양태는 단지 예시적이며 범위를 제한하려는 의도는 아니다.
1. 화학식 (I):
(I)
의 접합체로서
Z는 CR4 또는 N이며;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되며;
R2 및 R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 각각 독립적으로 선택되거나 R2 및 R3은 선택적으로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하며;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되며;
L은 링커이며;
W1은 약물이며;
W2는 항체인, 접합체.
2. 제1항에 있어서, L은
-(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-를 포함하며,
식 중
a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이며, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1 내지 6이며;
T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), 메타-아미노-벤질옥시(MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노-벤질옥시(PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐(PABC), 파라-아미노벤질(PAB), 파라-아미노-벤질아미노(PABA), 파라-아미노-페닐(PAP), 파라-하이드록시-페닐(PHP), 아세탈, 하이드라진, 다이설파이드 및 에스터로부터 각각 독립적으로 선택되며, EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이며, PEG는 폴리에틸렌 글라이콜이며, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이며, 각각의 w는 1 내지 20의 정수이며, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이며, 각각의 p는 1 내지 20의 정수이며, 각각의 m은 1 내지 12의 정수이며;
V1, V2, V3, V4 ,V5 및 V6은 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며, 각각의 q는 1 내지 6의 정수이며;
각각의 R13은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되며;
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되는, 접합체.
3. 제2항에 있어서,
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되며;
T2, T3, T4, T5 및 T6은 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈 기, 하이드라진 및 에스터로부터 각각 독립적으로 선택되며;
V1, V2, V3, V4 ,V5 및 V6은 각각 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 각각 선택되며;
식 중:
(PEG)n은이되, n은 1 내지 30의 정수이며;
EDA는 하기 구조: 를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이되, y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이며;
4-아미노-피페리딘(4AP)은이며;
각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 임의의 2개의 인접한 R12 기는 고리형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있다.
4. 제2항 또는 제3항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 글리코사이드로 각각 임의로 치환되는, 접합체.
5. 제4항에 있어서, 상기 글리코사이드는 글루쿠로나이드, 갈락토사이드, 글루코사이드, 만노사이드, 푸코사이드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택되는, 접합체.
6. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 -CO-이며;
T3은 (C1-C12)알킬이며 V3은 -CO-이며;
d, e, 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
d, e, 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
T4는 (AA)p이며 V4는 부재하며;
T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
f는 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CONH-이며;
T2는 (PEG)n이며 V2는 -CO-이며;
T3은 (AA)p이며 V3은 부재하며;
T4는 PABC이며 V4는 부재하며;
e 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 아미노산 유사체이며 V2는 -NH-이며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
T4은 (AA)p이며 V4은 부재하며;
T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
f는 0인, 접합체.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커 L은
;
;
;
;
,
으로부터 선택되는 구조를 갖며 는 화학식 (I)에서 N에 대한 L의 부착을 나타내며, *는 W1에 대한 L의 부착을 나타내는, 접합체.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약물은 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)인, 접합체.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체는
;
;
;
; 및
으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 접합체.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1 항체인, 접합체.
11. 제10항에 있어서, 상기 항체는 IgG1 카파 항체인, 접합체.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 fGly'를 갖는 서열을 포함하며, fGly'는 상기 링커를 통해 상기 약물에 결합되는 아미노산 잔기인, 접합체.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치되는, 접합체.
14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 경쇄 불변 영역에 위치되는, 접합체.
15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치되는, 접합체.
16. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치되는, 접합체.
17. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치되는, 접합체.
18. 화학식 (III):
(III)
식 중,
Z는 CR4 또는 N이며;
R2 및 R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 각각 독립적으로 선택되거나 R2 및 R3은 선택적으로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하며;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되며;
L은 링커이며;
W1은 약물인, 화합물.
19. 제18항에 있어서, L은
-(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-를 포함하며,
식 중,
a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이며, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1 내지 6이며;
T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), 메타-아미노-벤질옥시(MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노-벤질옥시(PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐(PABC), 파라-아미노벤질(PAB), 파라-아미노-벤질아미노(PABA), 파라-아미노-페닐(PAP), 파라-하이드록시-페닐(PHP), 아세탈, 하이드라진, 다이설파이드 및 에스터로부터 각각 독립적으로 선택되며, EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이며, PEG는 폴리에틸렌 글라이콜이며, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이며, 각각의 w는 1 내지 20의 정수이며, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이며, 각각의 p는 1 내지 20의 정수이며, 각각의 m은 1 내지 12의 정수이며;
V1, V2, V3, V4 ,V5 및 V6은 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며, 각각의 q는 1 내지 6의 정수이며;
각각의 R13은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되며;
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되는, 화합물.
20. 제19항에 있어서,
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되며;
T2, T3, T4, T5 및 T6은 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈 기, 하이드라진 및 에스터로부터 각각 독립적으로 선택되며;
V1, V2, V3, V4 ,V5 및 V6은 각각 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 각각 선택되며;
식 중:
(PEG)n은이되, n은 1 내지 30의 정수이며;
EDA는 하기 구조: 를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이되, y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이며;
4-아미노-피페리딘(4AP)은이며;
각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 임의의 2개의 인접한 R12 기는 고리형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있는, 화합물.
21. 제19항 또는 제20항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 글리코사이드로 각각 임의로 치환되는, 화합물.
22. 제21항에 있어서, 상기 글리코사이드는 글루쿠로나이드, 갈락토사이드, 글루코사이드, 만노사이드, 푸코사이드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택되는, 화합물.
23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 -CO-이며;
T3은 (C1-C12)알킬이며 V3은 -CO-이며;
d, e, 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
d, e, 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
T4는 AA이며 V4는 부재하며;
T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
f는 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CONH-이며;
T2는 (PEG)n이며 V2는 -CO-이며;
T3는 AA이며 V3는 부재하며;
T4는 PABC이며 V4는 부재하며;
e 및 f는 각각 0이거나;
식 중:
T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
T2는 아미노산 유사체이며 V2는 -NH-이며;
T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
T4는 AA이며 V4는 부재하며;
T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
f는 0인, 화합물.
24. 제18항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커 L은
;
;
;
;
,
으로부터 선택되는 구조를 갖며 는 화학식 (I)에서 N에 대한 L의 부착을 나타내며, *는 W1에 대한 L의 부착을 나타내는, 화합물.
25. 제18항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약물은 MMAE인, 화합물.
26. 제18항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은
;
;
;
; 및
으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 화합물.
27. 약제학적 조성물로서,
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 접합체; 및
약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
28. 방법으로서,
대상체에 유효량의 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
29. 대상체에 있는 암을 치료하는 방법으로서,
상기 대상체에 치료적 유효량의 제27항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 투여하는 단계는 상기 대상체에 있는 암을 치료하는 데 효과적인, 방법.
30. 제29항에 있어서, 상기 암은 유방암, 난소암, 폐암 또는 위암인, 방법.
31. 약물을 대상체에 있는 표적 부위에 전달하는 방법으로서,
상기 대상체에 제27항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 투여하는 단계는 치료적 유효량의 상기 약물을 상기 대상체에 있는 상기 표적 부위에 방출하는 데 효과적인, 방법.
실시예
하기의 실시예는 본 발명을 어떻게 만들고 사용하는지의 완전한 개시 및 설명을 당업자에게 제공하기 위하여 제시되고, 이는 본 발명자들이 이들의 발명으로서 간주하는 것의 범위를 제한하고자 하는 것도 아니고 이들은 하기 실험이 모두 또는 유일하게 수행된 실험인 것을 나타내도록 의도되지도 않는다. 사용된 숫자(예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력하였지만 일부 실험 오류 및 편차를 고려하여야 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이고, 온도는 섭씨 온도이고, 압력은 대기압 또는 그 부근이다. 표준 약어, 예를 들어, bp, 염기쌍(들); kb, 킬로염기(들); pl, 피코리터(들); s 또는 sec, 초(들); min, 분(들); h 또는 hr, 시간(들); aa, 아미노산(들); kb, 킬로염기(들); bp, 염기쌍(들); nt, 뉴클레오타이드(들); i.m., 근육내(로); i,p. 복강내(로); s.c., 피하내(로) 등이 사용될 수 있다.
실시예에서 지칭되는 상업적으로 이용 가능한 시약은 달리 명시하지 않는 한 제조업체의 지침에 따라 사용되었다. 실시예 및 명세서 전반에 걸쳐 ECACC 수탁 번호로 식별된 세포의 공급원은 영국 솔즈베리 소재 유럽 세포 배양 모음(ECACC)이다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에게 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예시적인 방법 및 물질이 아래에서 설명되나, 본원에서 설명되는 바와 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 또한 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있다. 물질, 방법 및 예는 단지 예시적이며 범위를 제한하려는 의도는 아니다.
실시예 1:
재료 및 방법
일반론
합성 시약은 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 아크로스(Acros), AK 사이언티픽(AK Scientific) 또는 다른 상업적 공급원으로부터 구입했으며 정제하지 않고 사용하였다. 무수 용매는 밀봉된 병에 있는 상업적 공급원으로부터 수득하였다. 모든 경우에, 용매는 부치(Buchi) V-700 진공 펌프가 장착된 부치 회전 증발기(Buchi Rotovapor) R-114로 감압 하에 제거되었다. 컬럼 크로마토그래피는 바이오타지(Biotage) 크로마토그래피 시스템을 사용하여 수행되었다. 분취용 HPLC 정제는 Phenomenex Kinetex 5 μm EVO C18 150 x 21.2 mm 컬럼이 장착된 Waters 분취용 HPLC 유닛을 사용하여 수행하였다. HPLC 분석을 모델 G1322A 탈기기(Degasser), 모델 G1311A 4차 펌프(Quarternary Pump), 모델 G1329A 오토샘플러(Autosampler), 모델 G1314 가변 파장 검출기(Variable Wavelength Detector), 애질런트 포로쉘(Agilent Poroshell) 120 SB C18, 4.6 mm x 50 mm 컬럼이 장착된 애질런트(Agilent) 1100 시리즈 분석 HPLC상에서 실온에서 0.05% 트라이플루오로아세트산을 함유하는 물 및 아세토나이트릴의 10-100% 구배를 사용하여 수행하였다. HPLC는 254 또는 205 nm에서 모니터링되었다. 저분리능 질량 스펙트럼(LRMS)을 10-100% 구배의 물 및 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴을 사용하여 실온에서 Agilent 1260 Infinity HPLC 시스템, G1314 가변 파장 검출기, 및 Agilent Poroshell 120 SB C18, 4.6 mm x 50 mm 컬럼이 장착된 Agilent Technology 6120 Quadrupole LC/MS 상에서 획득하였다.
MMAE 작제물의 합성
연구에서 사용된 MMAE 화합물 1 내지 5의 구조는 아래에 나타나 있다. 화합물 1은 Harpel 등 Antibodies 2019, 8, 54에서 이전에 보고되었다. 화합물 2 및 화합물 3은 Chuprakov 등 Bioconjugate Chem.　2021, 32, 4, 746-754에서 이전에 보고되었다. 합성 중간체 6, 8 및 11을 Shanghai Medicilon으로부터 상업적으로 수득하였으며 이를 정제 없이 사용하였다. 모노메틸 아우리스타틴 E 9를 BroadPharm로부터 구입하여 수령한 바와 같이 사용하였다.
MMAE 작제물 4의 합성
(9H-플루오렌-9-일)메틸 1,2-다이메틸-2-((1-(3-옥소-3-((2-(2-(3-옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로폭시)에톡시)에틸)아미노)프로필)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)메틸)하이드라진-1-카복실레이트( 7 )의 제조
20 mL의 섬광 바이알에 화합물 6(56 mg, 87 μmol), 펜타플루오로페놀(18 mg, 98 μmol), 35 μL의 DIPEA 및 1 mL의 EtOAc를 조합하였다. 생성된 혼합물을 19 mg(122 μmol)의 EDC로 처리하였으며 실온에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하였으며 1M 수성 HCl 후 포화 수성 NaHCO3로 세척하였다. 유기층을 소듐 설페이트로 건조시켰고, 여과하였으며, 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 고진공하에서 건조하여 59 mg의 PFP-에스터 7(73 μmol, 84% 수율)을 백색 고체로 수득하였으며 이를 정제 없이 더 사용하였다.
LRMS (ESI): m/z 810.7 [M+H]+, 계산치 C41H40F5N5O7 m/z 810.8.
(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸뷰탄아미도)프로판아미도)-5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-뷰틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-다이아이소프로필-4,10-다이메틸-3,6,9-트라이옥소-2,13-다이옥사-4,7,10-트라이아자테트라데실)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트라이일 트라이아세테이트( 10 )의 제조
오븐 건조된 20 mL의 유리 섬광 바이알에 2 mL의 무수 DMF에 TFA 염(9, 150 mg, 0.18 mmol) MMAE 및 PNP 카보네이트 8(160 mg, 0.16 mmol)을 혼합하였다. 이러한 혼합물을 84 uL(0.48 mmol)의 DIPEA로 처리하고 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. DIPEA를 진공하에 제거하였고, 잔류 용액을 32 uL(0.32 mmol)의 피페리딘으로 0℃에서 7시간 동안 처리한 후, 역상 분취용 HPLC(C18, 아세토나이트릴-물 5 내지 95% 구배, 0.05% TFA)로 정제하였다. 순수한 분획을 동결건조하여 160 mg(0.12 mmol, 2단계에 걸쳐 75% 수율)의 표제 화합물 10을 백색 분말로 수득하였다.
LRMS (ESI): m/z 1369.8 [M+H]+, 계산치 C68H104N8O21 m/z 1369.7.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-뷰틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-다이아이소프로필-4,10-다이메틸-3,6,9-트라이옥소-2,13-다이옥사-4,7,10-트라이아자테트라데실)-2-((2S,5S)-19-(2-((1,2-다이메틸하이드라진일)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)-5-아이소프로필-2-메틸-4,7,17-트라이옥소-10,13-다이옥사-3,6,16-트라이아자노나데칸아미도)페녹시)-3,4,5-트라이하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산( 4 )의 제제
유리 바이알에서 화합물 10(20 mg, 15 μmol) 및 PFP 에스터 7(14 mg, 17 μmol)을 0.5 mL의 무수 DMF에 조합하였다. 생성된 혼합물을 DIPEA(7 μL) 및 HOAt(1 mg)로 처리하였고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축하였고, 2.5 mL의 MeOH에 재구성하였다. 용액을 0℃로 냉각하였고, 1.5 mL의 1M LiOH 수용액으로 처리하였으며, 실온으로 가온하였고, 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 1M HCl을 첨가하여 반응 혼합물을 중화시켰고, 메탄올을 진공에서 제거하였으며, 잔류물을 역상 분취 HPLC(C18, 10 내지 60% 아세토니트릴-물/0.05% TFA)로 정제하였다. 순수한 분획을 조합하고 동결건조하여 12 mg(7 μmol, 2 단계에 걸쳐 47% 수율)의 화합물 4를 백색 분말로 수득하였다.
LRMS (ESI): m/z 1633.9 [M+H]+, 계산치 C81H125N13O22 m/z 1633.9.
MMAE 작제물 5의 합성
(R)-2-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-다이메틸하이드라진일)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로판아미도)-3-옥소-3-((2-(2-(3-옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로폭시)에톡시)에틸)아미노)프로페인-1-설폰산( 12 )의 제제
카복실산 11(1.33 g, 1.67 mmol)을 6.5 mL의 무수 DMF 중 펜타플루오로페놀(1.23 g, 6.68 mmol)과 혼합하였다 . 이러한 혼합물을 EDCI-HCl(0.64 g, 3.34 mmol)로 한 부분에서 실온에서 처리하였으며, HPLC 분석에 의해 판단되는 바와 같이 11이 완전히 소모될 때까지 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 역상 크로마토그래피(C18 컬럼, 0.05% TFA를 갖는 0-80% 아세토나이트릴-물)로 직접 정제하였다. 순수한 분획을 조합하였고, 흐릿할 때까지 진공하에서 농축하였으며, 동결건조하여 황갈색 분말로서 PFP-에스터 12(1.40 g, 1.46 mmol, 87% 수율)를 수득하였다.
LRMS (ESI): m/z 961.2 [M+H]+, 계산치 C44H45F5N6O11S m/z 961.3.
(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)-3-메틸뷰탄아미도)프로판아미도)-5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-뷰틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-다이아이소프로필-4,10-다이메틸-3,6,9-트라이옥소-2,13-다이옥사-4,7,10-트라이아자테트라데실)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라하이드로-2H-피란-3,4,5-트라이일 트라이아세테이트( 13 )의 제조
20 mL 유리 바이알에 모노메틸 아우리스타틴 A 9(720 mg, 1.0 mmol), 5 mL의 무수 DMF 및 0.35 mL의 DIPEA(2.0 mmol)를 실온에서 조합하였다. 생성된 혼합물을 교반하였고, 고체로서 PNP 카보네이트 8(1014 mg, 1.0 mmol)을 소량씩 처리한 후, 실온에서 HOAt(136 mg, 1.0 mmol)를 한 부분에 첨가하였다. 반응 혼합물을 반응이 완료되었다고 판단될 때까지 6시간 동안 교반하였다(HPLC). 반응 혼합물을 물 30 mL에 부었고, 생성된 침전물을 회전 분리하여 수집하였으며, 5 mL의 물로 세척하였고, 고진공하에서 잠깐 건조시켜 1.87 g의 조 생성물 13을 황색 고체로 수득하였으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계로 진행하였다.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸뷰탄아미도)프로판아미도)-5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-뷰틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-다이아이소프로필-4,10-다이메틸-3,6,9-트라이옥소-2,13-다이옥사-4,7,10-트라이아자테트라데실)페녹시)-3,4,5-트라이하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산( 14 )의 제조
15 mL의 THF 중 조 화합물 13(1.87 g)의 용액을 빙욕에서 0℃로 냉각하였으며, 1 M 수산화 리튬 수용액(3 mL)으로 서서히 처리하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반한 후, 주위 온도로 가온하였고, 3 mL의 1 M 수성 수산화 리튬으로 처리하였으며, 3 mL의 메탄올로 희석하였다. 생성된 혼합물을 가수분해가 완료될 때까지 실온에서 3시간 동안 교반한 후(HPLC), 1 M 수성 HCl 용액을 pH 7에 첨가하여 켄칭하였다. 이후, 반응 혼합물을 감압하에서 농축하였으며, 10 mL의 MTBE로 세척하였다. 수성층을 역상 크로마토그래피(C18 컬럼, 0.05% TFA를 갖는 0-40% 아세토나이트릴-물)로 정제하였다. 순수한 생성물 분획을 조합하였고, 감압하에서 농축하였으며, 동결건조하여 화합물 14를 백색 분말(735 mg, 0.60 mmol, 2 단계에 걸쳐 60% 수율)로서 생성하였다.
LRMS (ESI): m/z 1229.7 [M+H]+, 계산치 C61H96N8O18 m/z 1229.7.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-디이소프로필-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)-2-((2S,5S,18R)-22-(2-((1,2-디메틸히드라진일)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,17,20-테트라옥소-18-(술포메틸)-10,13-디옥사-3,6,16,19-테트라아자도코산아미도)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-카르복실산 ( 5 )
3 mL의 무수 DMA 중 화합물 14(735 mg, 0.60 mmol)의 교반 용액에 DIPEA(0.21 mL, 1.2 mmol) 및 2 mL의 DMA 중 PFP-에스터 12(575 mg, 0.60 mmol)의 용액을 실온에서 첨가한 후, HOAt(84 mg, 0.60 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 결합이 완료되었다고 판단될 때까지 30분 동안 교반한 후(HPLC 분석), 실온에서 1.2 mL의 피페리딘으로 직접 처리하였다. 15분 후, 반응 혼합물을 역상 크로마토그래피(C18 컬럼, 아세토나이트릴-물의 0-40% 구배)로 정제하였다. 순수한 분획을 조합하였고, 감압 및 실온하에서 농축한 후, 동결건조하여 화합물 5(808 mg, 0.45 mmol, 75% 수율)를 백색 솜털 분말로서 수득하였다. LRMS (ESI): m/z 1783.9 [M+H]+, 계산치 C84H130N14O26S m/z 1783.9.
실시예 2: 생체접합, 정제 및 HPLC 분석
알데하이드 태깅된 항체의 HIPS 접합
일 알데하이드 태그를 보유하는 항체(15 mg/mL)를 각각 1.1 mM의 링커-페이로드에 접합시켰다. 반응물을 0.85-2.5% DMA를 함유하는 20 mM 소듐 시트레이트, 50 mM NaCl pH 5.5(20/50 완충제)에서 37℃에서 72시간 동안 진행하였다. 접합 후, 유리 약물을 30 kD MWCO 0.5 mL Amicon 스핀 농축기를 사용하여 제거하였다. 검체를 분리 농축기에 첨가하였고, 15,000 x g에서 7분 동안 원심분리한 후, 450 μL 20 mM 소듐 시트레이트, 50 mM NaCl pH 5.5로 희석하였으며, 다시 원심분리하였다. 상기 공정을 10회 반복하였다. 최종 생성물의 DAR을 결정하기 위해, HIC(Tosoh #14947) 또는 PLRP-RP(Agilent PL1912-1802 1000A, 8 um, 50 x 2.1 mm) 컬럼을 사용하여 분석 크로마토그래피에 의해 ADC를 조사하였다. HIC 분석에서는 이동상 A: 1.5 M 암모늄 설페이트, 25 mM 소듐 포스페이트 pH 7.0 및 이동상 B: 25% 아이소프로필, 18.75 mM 인산나트륨 pH 7.0을 사용하였다. PLRP 분석에서는 이동상 A: 수 중 0.1% 트라이플루오로아세트산, 이동상 B: 아세토나이트릴 중 0.1% 트라이플루오로아세트산을 사용하였다. PLRP 분석 이전에, 검체를 50 mM DTT, 4 M 구아니딘 HCl(최종 농도)을 첨가하고 37℃에서 30분 동안 가열하여 변성시켰다. 응집을 결정하기 위해 300 mM NaCl, 25 mM 인산 나트륨 pH 6.8 및 5% 이소프로판올의 이동상을 갖는 분석 크기 배제 크로마토그래피(SEC; Tosoh #08541)를 사용하여 검체를 분석하였다.
태깅되지 않은(야생형) 항체의 말레이미드 접합　
항체(5 mg/mL)를 PBS, pH 8.0, 1 mM DTPA 중 37℃에서 90분 동안 2.5 mol 당량의 TCEP를 사용하여 환원시켰다. TCEP를 제거하였으며 단백질을 접선 유동 여과를 사용하여 PBS, pH 7.4, 1 mM DTPA로 교환하였다. 환원된 항체(3 mg/mL)를 빙상에서 60분 동안 10 mol. 당량의 말레이미드-발시트-MMAE와 접합시켰다.유리 약물을 제거하였고 최종 ADC를 접선 유동 여과를 사용하여 PBS, pH 7.4로 교환하였다.　
실시예 3: 독성 연구
단일 용량 래트 독성 연구에 사용된 ADC
단일 용량 비GLP 래트 독성학 연구
수컷 스프라그-다울리(Sprague-Dawley) 래트(연구 시작 시 8 내지 9주령, 5마리 동물/군)에 운반체 단독 또는 비교차 반응성 폴라투주맙(항CD79b) 접합체를 정맥내 투여하였다. ADC는 군 전체에 걸쳐 동일한 페이로드 투여 수준을 달성하기 위해 20 mg/kg(DAR ~4 베도틴 접합체) 또는 40 mg/kg(DAR ~2를 갖는 다른 모든 접합체)으로 투여되었다. 투여는 1일차에 발생하였으며, 이후 11일의 관찰 기간이 이어졌다. 투여 후 5일차 및 12일차에 임상 병리를 위해, 그리고 8시간차 및 4일차, 7일차 및 12일차에 독성동태학적 분석을 위해 모든 동물로부터 혈액을 수집하였다. 임상 관찰을 매일 수행하였다.
단일 용량 비GLP 래트 독성학 결과: 5개의 상이한 링커 유형을 통해 접합되는 MMAE를 운반하는 폴라투주맙 ADC를 래트 연구에서 동일한 페이로드 투여 수준에서의 내약성에 대해 비교하였다. 화합물 5 링커-페이로드를 운반하는 접합체는 조혈 세포 집단 및 간 기능 시험(AST 및 ALT)에 대한 영향과 관련하여 다른 모든 ADC(가장 유사한 운반체 대조군 처리 동물)보다 우수하였다.
도 2는 투여 후 5일차에 래트의 림프구 집단의 그래프를 나타낸다.
도 3은 투여 후 5일차에 래트에서 순환 아스파테이트 아미노 전이효소(AST) 수준의 그래프를 나타낸다.
도 4는 투여 후 5일차에 래트에서 순환 알라닌 아미노 전이효소(ALT) 수준의 그래프를 나타낸다.
도 5는 투여 후 5일차에 래트의 적혈구 수 그래프를 나타낸다.
도 6은 투여 후 5일차에 래트의 헤모글로빈 수준의 그래프를 나타낸다.
도 7은 투여 후 5일차에 래트의 적혈구용적률 수준의 그래프를 나타낸다.
제1 Granta 이종이식 연구에서 사용된 ADC
도 8은 7일차에 단일 용량의 ADC를 사용한 제1 Granta 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다.
제1 Granta 이종이식 연구 결과: 베도틴 및 CT 알데하이드 태깅된 HIPS 접합체를 포함하는 5가지 상이한 링커 유형을 통해 접합된 MMAE를 운반하는 폴라투주맙 ADC를 그란타 519 이종이식 연구에서 동일한 페이로드 투여 수준에서의 효능에 대해 비교하였다. 모든 접합체는 단일 투여 후 우수한 효능을 나타내었으며, 베도틴과 화합물 5 접합체는 가장 긴 종양 증식 억제를 나타내었다.
제2 Granta 이종이식 연구에서 사용된 ADC
도 9는 0일차에 단일 2 mg/kg 용량의 ADC를 사용한 제2 Granta 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다. 내부 태그 58Q 및 91N을 사용하면 베도틴 접합체와 비교하여 절반의 DAR로 우수한 효능을 제공한다.
제2 Granta 이종이식 연구 결과: CT, 58Q 및 91N을 포함하는 다양한 태그 부위에서 베도틴 또는 화합물 5에 접합된 폴라투주맙 ADC를 Granta 519 이종이식 연구에서 동일한 항체 투여 수준에서의 효능에 대해 비교하였다. 모든 접합체는 단일 2 mg/kg 투여 후 우수한 효능을 나타내었으며, 화합물 5는 내부적으로 태깅된 접합체, 58Q 및 91N으로 가장 긴 종양 증식 억제를 나타냈다. 이러한 2개의 접합체는 50%의 세포독성 페이로드 용량만을 운반함에도 불구하고 베도틴 접합체와 비교하여 우수한 효능을 나타내었다(예를 들어, 3.45의 베도틴 DAR을 1.66의 91N ADC DAR과 비교). 2개의 선택된 내부 태그와 대조적으로, CT 태깅된 ADC의 효능은 베도틴 접합체와 비교하여 동일한 항체 용량에서 매우 약하였다. 이러한 차이는 최상의 결과를 달성하기 위해 특정 태그 부위를 특정 링커-페이로드와 결합하는 것의 중요성을 강조한다.
다회 투여 래트 독성 연구 #1에 사용된 ADC
다회 용량 비GLP 래트 독성학 연구 #1
수컷 스프라그-다울리(Sprague-Dawley) 래트(연구 시작 시 8 내지 9주령, 5마리 동물/군)에 운반체 단독 또는 비교차 반응성 폴라투주맙(항CD79b) 베도틴 또는 알데히드 태깅된 HIPS 접합체를 정맥내 투여하였으며, 각각은 ~4의 DAR을 가졌다. 총 4회 투여(1일차, 8일차, 15일차, 22일차) 동안 매주 투여하였다. 동물을 최종 투여 후 7일 동안 관찰하였다. 체중을 주 4회 기록하였다. 투여 4일 후(모든 투여량에 대해) 임상 병리학을 위해 혈액을 수집하였다. 임상 관찰을 매일 수행하였다.
다회 용량 비GLP 래트 독성학 연구 #1 결과: CH1/CT 태그 부위에서 베도틴 또는 화합물 5에 접합된 폴라투주맙 ADC를 다회 용량 래트 연구에서 동일한 페이로드/동일한 항체 투여 수준에서의 내약성에 대해 비교하였다. 화합물 5 ADC를 투여한 래트는 수주 동안 운반체 대조군과 유사한 결과를 나타낸 반면, 베도틴 접합체를 투여한 래트는 제1 투여 후 명백하고 시간 경과에 따라 악화되는 백혈구 및 적혈구 매개변수의 감소와 함께 현저한 골수억제를 나타내었다.
도 10은 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여한 래트에서 순환 호중구 수의 그래프를 나타낸다.
도 11은 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여한 래트에서 순환 단핵구 수의 그래프를 나타낸다.
도 12는 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여한 래트에서 적혈구 수의 그래프를 나타낸다.
도 13은 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여한 래트에서 헤모글로빈 수준의 그래프를 나타낸다.
도 14는 운반체 또는 ADC를 반복적으로 투여한 래트에서 헤마토크리트 수준의 그래프를 나타낸다.
다회 투여 래트 독성 연구 #2에 사용된 ADC
다회 용량 비GLP 래트 독성학 연구 #2
수컷 스프라그-다울리 래트(연구 시작 시 8 내지 9주령, 5마리 동물/군)에게 운반체 단독 또는 래트 교차 반응성 항체의 가변 영역을 운반하는 항체를 사용하여 만든 넥틴-4 접합체 엔포투맙와 함께 정맥내 투여하였다. 시험된 ADC는 넥틴-4 베도틴 및 넥틴-4 CH1/CT 화합물 5였다. 총 4회 투여(1일차, 8일차, 15일차, 22일차) 동안 매주 10 mg/kg로 투여하였다. 동물을 최종 투여 후 7일 동안 관찰하였다. 체중을 주 4회 기록하였다. 5일차, 12일차, 19일차 및 26일차에 임상 병리를 위해, 및 8시간차 및 4일차 및 7일차에 투여 후 독성동태학적 분석을 위해(모든 용량에 대해) 모든 동물로부터 혈액을 수집하였다. 임상 관찰을 매일 수행하였다. 임상 관찰 점수계 척도는 0(정상)에서 3(중증) 범위였으며 표 1에 나와 있다.
임상 관찰 점수 체계
매개변수 0 1 2 3
활성 수준/유발되지 않은 행동 밝고 기민함 사소한 변화, 고정관념적인 행동, 울음 이동성 저하, 비활성,
새장에 갇힌 무기력함		 혼수상태
유발된 행동 환경에 대한 호기심 경미한 우울증 또는 반응의 과장;
굴을 파거나 숨지만 만지면 깨어남.		 중등도로 저하된 반응,
중등도 발성,
리드를 제거하면 탐색이 불가능함.		 폭력적인 반응,
크고 지속적인 발성
운동 /
신경계 		정상 뻣뻣한/곧은 꼬리,
꼬리 끌기, 머리 기울이기,
빙글빙글 돌기,
 비틀거리거나 비틀거림,
걸을 때 등이 굽어 있음/복부가 접혀 있음, 떨림
 움직일 수 없음, 마비,
사지를 끌기,
중증/장기간 경련
호흡 정상 약간 두드러지거나 감소된 흉부 운동 입을 벌려 호흡,
중간 정도의 뚜렷하거나 감소된 흉부 운동		 심하게 두드러지거나 감소된 흉부 운동
자세 정상 고개를 아래로 밀어 넣음 등이 굽은 상태/배가 굽은 상태 엎드린 상태
신체 상태 정상 척추가 뚜렷하게 보임,
경증 부종
피부 처짐/탈수		 눈에 띄게 팽창된 복부,
중등도의 부종
중등도의 피부 처짐/탈수		 누락된 해부,
두드러진 골격 구조
복부 팽만,
중증 부종
모피 및 피부 윤기나고 잘 손질된 외피. 최소한의 손질 부족 징후,
경증 탈모 증상,
염증이 생긴 피부,
경증 입모		 거칠고 빛나는 외피,
중증 입모,
중등도 피부 병변,
오염된 항문생식기 부위,
항문 탈출		 깊은 상처(중증 전투 병변,
피부궤양,
프로인트 완전 보조 궤양)
안구 정상 안구 주위에 경증 포르피린 염색 안구 주위나 발에 두드러진 포르피린 얼룩이 있음 해당 없음
종양 또는 감염*
*질환 모델과 관련 없음 		정상 작음(농양 또는 종양(암이 아닌 연구) 중등도 농양 또는 종양(암이 아닌 연구)
 큰 농양 또는 종양(암이 아닌 연구)
체중 기준선 대비 손실 >0 또는 <10% 기준선 대비 10 내지 15% 손실 기준선 대비 15 내지 20% 손실 기준선 대비 >20% 손실
다회 용량 비GLP 래트 독성학 연구 #2 결과:
CH1/CT 태그 부위에서 베도틴 또는 화합물 5에 접합된 엔포투맙 ADC를 다회 용량 래트 연구에서 동일한 페이로드/동일한 항체 투여 수준에서의 내약성에 대해 비교하였다. 본 연구에서 가장 두드러진 관찰 중 하나는 베도틴 투여군에서 관찰된 수많은 임상적 관찰이었다. 대부분의 관찰은 피부 병변과 관련이 있었다. 대조적으로, 화합물 5 투여군에서 관찰된 임상적 관찰은 없었다(도 15). 베도틴 및 화합물 5 ADC가 동일한 페이로드(유리 MMAE)를 방출한다는 점을 고려하면, 화합물 5 군에서 임상 관찰의 결여는 예상치 못한 것이었다. 이전에는 화합물 5 링커에 의해 부여되는 개선된 내약성이 대부분 순환계의 개선된 안정성으로 인해 비표적 독성을 낮추는 것과 관련이 있는 것으로 생각되었다. 그러나, 본 연구의 결과는 화합물 5 링커가 피부와 같은 건강한 조직에서 표적 항원 발현을 갖는 ADC에 사용될 때 추가적인 내약성 개선을 부여할 수도 있음을 시사하였다. 이러한 발견은 신규하고 예상치 못한 것이며 잠재적인 치료 유용성이었다.
도 15는 래트 교차 반응성 넥틴-4 ADC를 반복적으로 투여한 래트에서 임상적 관찰의 그래프를 나타낸다. 화살표는 투여일을 나타낸다. 화합물 5 접합체를 투여받은 동물에서는 관찰이 없었던 반면, 베도틴 투여 군의 임상 관찰은 17일차에 평균 2.5였으며 동물의 사망으로 최고점에 달하였다.
실시예 4: 효능 연구
방법
넥틴-4 ADC를 사용한 NCI-H1781 이종이식편
암컷 BALB/c 누드 마우스를 연구에 사용하였다(5마리 마우스/군). 동물을 50% PBS/50% Matrigel 중 2천만 개의 세포로 측부에 피하 접종하였다. 종양이 평균 부피 220 mm3에 도달한 경우, 동물을 단일 정맥내 투여량의 운반체 단독 또는 ADC로 2.5 또는 7.5 mg/kg으로 처리하였다. 동물은 체중 및 종양 크기에 대해서 주 2회 모니터링하였다. 동물은 종양이 2000 mm3에 도달했을 때 안락사시켰다. 연구에서 ADC에 대한 용량 반응 효능이 관찰되었습니다.
CD30 ADC를 사용한 L-82 이종이식편
암컷 NOD/SCID 쥐를 연구에 사용했다(8마리 쥐/군). 동물을 50% PBS/50% Matrigel 중 1,000만 개의 세포로 측부에 피하 접종하였다. 종양이 100 mm3의 평균 부피에 도달한 경우, 모든 동물을 인간 IgG의 단일 10 mg/kg 정맥내 용량으로 치료하였다(0일차). 이후, 1일차에 동물을 운반체 단독, 비접합 항체(3 mg/kg) 또는 1.5 또는 3 mg/kg의 ADC로 처리하였다. 동물은 체중 및 종양 크기에 대해서 주 2회 모니터링하였다. 동물은 종양이 2000 mm3에 도달했을 때 안락사시켰다. ADC는 본 연구에서 매우 효과적이었다.
도 17은 0일차에 열거된 항CD30 ADC의 단일 정맥내 용량을 사용한 L-82 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL4 화합물 8(RED-601)은 내부 91N 태그를 사용하며 Adcetris와 비교하여 절반의 페이로드 용량을 전달한다. 50% ADC 투여(1.5 mg/kg) 및 동일한 투여(3 mg/kg)에서 VH4/VL4 화합물 8은 Adcetris와 비교하여 동등하게 효능적이었으며, 모든 군은 8마리의 마우스/군 중 8마리의 완전 반응을 나타내었다. VH4/VL4 항체는 단독으로 최소 활성을 가졌다.
도 18은 0일차에 나열된 항CD30 ADC를 단일 정맥내 투여한 Karpas 299 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL4 화합물 8(RED-601)은 내부 91N 태그를 사용하며 Adcetris와 비교하여 절반의 페이로드 용량을 전달한다. 50% ADC 투여(1.5 mg/kg) 및 동일한 투여(3 mg/kg)에서 VH4/VL4 화합물 8은 Adcetris와 비교하여 5/6 및 6/6의 완전 반응을 제공하였으며, Adcetris는 VH4/VL4 화합물 8과 비교하여 페이로드 양이 2배임에도 불구하고 6/6의 완전 반응을 제공하였다. VH4/VL4 항체는 단독으로 최소 활성을 가졌다.
도 19는 0일차에 나열된 항넥틴-4 ADC의 단일 2.5 또는 7.5 mg/kg 정맥내 용량을 사용한 NCI-H1781 이종이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL1 화합물 8(RED-601) 및 VH4/VL5 화합물 8은 모두 내부 91N 태그를 사용하며 Padcev와 비교하여 절반의 페이로드 용량을 전달한다. 동종형 대조 ADC는 최소 활성을 가졌다.
실시예 5: 독성동태학적 검체 분석
방법
총 항체 및 총 ADC 농도는 도 20에서 이전에 설명되고 도시되는 바와 같이 ELISA에 의해 정량화되었다. 전체 항체의 경우, 항-인간 IgG-특이적 항체로 접합체를 포획하고 HRP-접합된 항-인간 Fc-특이적 항체로 검출하였다. 총 ADC의 경우, 접합체를 항인간 Fab-특이적 항체로 포획하였고, 마우스 항메이탄신 1차 항체로 검출한 후, HRP-접합된 항마우스 IgG-서브클래스 1-특이적 2차 항체로 검출하였다. 결합된 2차 항체는 울트라 TMB 1-단계 ELISA 기질(Thermo Fisher)을 사용하여 검출되었다. 황산으로 반응을 켄칭한 후, 소프트맥스 프로(SoftMax Pro) 소프트웨어가 장착된 분자 장치 스펙트라 맥스(Molecular Devices Spectra Max) M5 플레이트 판독기에서 450 nm에서 흡광도를 취하여 신호를 판독했다. 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 및 마이크로 소프트 엑셀(Microsoft Excel) 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석했다.
결과: 다중 용량 비GLP 래트 독성학 연구 #2에서 동물로부터 유래한 혈장 검체의 독성동태학적 분석으로 투여 수준 및 노출이 확인되었으며, 베도틴 ADC와 비교하여 화합물 5 접합체의 개선된 안정성이 입증되었다(도 20).
본 발명이 이의 구체적인 실시형태를 참조로 설명되었지만, 본 발명의 진정한 사상 및 범주로부터 벗어나는 일 없이 다양한 변화가 이루어질 수 있고 동등물이 대체될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해되어야 한다. 또한, 본 발명의 목적, 사상 및 범주에 대해 특정 상황, 물질, 물질의 조성, 방법, 방법의 단계 또는 단계들을 적응시키기 위해 많은 변형이 이루어질 수 있다. 그러한 모든 변형은 첨부되는 청구범위의 범주 내인 것으로 의도된다.

Claims (31)

  1. 화학식 (I):
    (I)
    의 접합체로서,
    Z는 CR4 또는 N이며;
    R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되며;
    R2 및 R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 각각 독립적으로 선택되거나 R2 및 R3은 선택적으로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하며;
    각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되며;
    L은 링커이며;
    W1은 약물이며;
    W2는 항체인, 접합체.
  2. 제1항에 있어서, L은
    -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-를 포함하며,
    식 중
    a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이며, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1 내지 6이며;
    T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), 메타-아미노-벤질옥시(MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노-벤질옥시(PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐(PABC), 파라-아미노벤질(PAB), 파라-아미노-벤질아미노(PABA), 파라-아미노-페닐(PAP), 파라-하이드록시-페닐(PHP), 아세탈, 하이드라진, 다이설파이드 및 에스터로부터 각각 독립적으로 선택되며, EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이며, PEG는 폴리에틸렌 글라이콜이며, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이며, 각각의 w는 1 내지 20의 정수이며, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이며, 각각의 p는 1 내지 20의 정수이며, 각각의 m은 1 내지 12의 정수이며;
    V1, V2, V3, V4 ,V5 및 V6은 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으부터 각각 독립적으로 선택되며, 각각의 q는 1 내지 6의 정수이며;
    각각의 R13은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되며;
    각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되는, 접합체.
  3. 제2항에 있어서,
    T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되며;
    T2, T3, T4, T5 및 T6은 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈 기, 하이드라진 및 에스터로부터 각각 독립적으로 선택되며;
    V1, V2, V3, V4 ,V5 및 V6은 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으부터 각각 독립적으로 선택되며:
    식 중
    (PEG)n은이며, n은 1 내지 30의 정수이며;
    EDA는 다음의 구조: 를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이며, y는 1 내지 6의 정수이며 r은 0 또는 1이며;
    4-아미노-피페리딘(4AP)은이며;
    각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글라이콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며, 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있는, 접합체.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 글리코사이드로 각각 임의로 치환되는, 접합체.
  5. 제4항에 있어서, 상기 글리코사이드는 글루쿠로나이드, 갈락토사이드, 글루코사이드, 만노사이드, 푸코사이드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택되는, 접합체.
  6. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
    T2는 4AP이며 V2는 -CO-이며;
    T3은 (C1-C12)알킬이며 V3은 -CO-이며;
    d, e 및 f는 각각 0이거나;
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
    T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
    T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
    d, e 및 f는 각각 0이거나;
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
    T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
    T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
    T4는 (AA)p이며 V4는 부재하며;
    T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
    f는 0이거나;
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CONH-이며;
    T2는 (PEG)n이며 V2는 -CO-이며;
    T3은 (AA)p이며 V3은 부재하며;
    T4는 PABC이며 V4는 부재하며;
    e 및 f는 각각 0이거나;
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
    T2는 아미노산 유사체이며 V2는 -NH-이며;
    T3는 (PEG)n이며 V3는 -CO-이며;
    T4은 (AA)p이며 V4은 부재하며;
    T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
    f는 0인, 접합체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커 L은
    ;
    ;
    ;
    ;
    ,
    으로부터 선택되는 구조를 갖며 는 화학식 (I)에서 N에 대한 L의 부착을 나타내며, *는 W1에 대한 L의 부착을 나타내는, 접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약물은 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)인, 접합체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접합체는
    ;
    ;
    ;
    ; 및

    으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 접합체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1 항체인, 접합체.
  11. 제10항에 있어서, 상기 항체는 IgG1 카파 항체인, 접합체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 fGly'를 갖는 서열을 포함하며, fGly'는 상기 링커를 통해 상기 약물에 결합되는 아미노산 잔기인, 접합체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치되는, 접합체.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 경쇄 불변 영역에 위치되는, 접합체.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치되는, 접합체.
  16. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치되는, 접합체.
  17. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 상기 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치되는, 접합체.
  18. 화학식 (III):
    (III)
    의 화합물로서,
    Z는 CR4 또는 N이며;
    R2 및 R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 각각 독립적으로 선택되거나 R2 및 R3은 선택적으로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하며;
    각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아마이드, 치환된 알킬아마이드, 설포닐, 싸이오알콕시, 치환된 싸이오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되며;
    L은 링커이며;
    W1은 약물인, 화합물.
  19. 제18항에 있어서, L은
    -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-를 포함하며,
    식 중
    a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이며, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1 내지 6이며;
    T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), 메타-아미노-벤질옥시(MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노-벤질옥시(PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐(PABC), 파라-아미노벤질(PAB), 파라-아미노-벤질아미노(PABA), 파라-아미노-페닐(PAP), 파라-하이드록시-페닐(PHP), 아세탈, 하이드라진, 다이설파이드 및 에스터로부터 각각 독립적으로 선택되며, EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이며, PEG는 폴리에틸렌 글라이콜이며, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이며, 각각의 w는 1 내지 20의 정수이며, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이며, 각각의 p는 1 내지 20의 정수이며, 각각의 m은 1 내지 12의 정수이며;
    V1, V2, V3, V4 ,V5 및 V6은 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며, 각각의 q는 1 내지 6의 정수이며;
    각각의 R13은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되며;
    각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스터, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되는, 화합물.
  20. 제19항에 있어서,
    T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되며;
    T2, T3, T4, T5 및 T6은 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘(4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈 기, 하이드라진 및 에스터로부터 각각 독립적으로 선택되며;
    V1, V2, V3, V4 ,V5 및 V6은 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며:
    식 중
    (PEG)n은이며, n은 1 내지 30의 정수이며;
    EDA는 다음의 구조: 를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이며, y는 1 내지 6의 정수이며 r은 0 또는 1이며;
    4-아미노-피페리딘(4AP)은이며;
    각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글라이콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며, 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있는, 화합물.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 글리코사이드로 각각 임의로 치환되는, 화합물.
  22. 제21항에 있어서, 상기 글리코사이드는 글루쿠로나이드, 갈락토사이드, 글루코사이드, 만노사이드, 푸코사이드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택되는, 화합물.
  23. 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
    T2는 4AP이며 V2는 -CO-이며;
    T3은 (C1-C12)알킬이며 V3은 -CO-이며;
    d, e 및 f는 각각 0이거나;
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
    T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
    T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
    d, e 및 f는 각각 0이거나;
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
    T2는 4AP이며 V2는 부재하며;
    T3은 (PEG)n이며 V3은 -CO-이며;
    T4는 AA이며 V4는 부재하며;
    T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
    f는 0이거나;
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CONH-이며;
    T2는 (PEG)n이며 V2는 -CO-이며;
    T3은 AA이며 V3은 부재하며;
    T4는 PABC이며 V4는 부재하며;
    e 및 f는 각각 0이거나;
    식 중
    T1은 (C1-C12)알킬이며 V1은 -CO-이며;
    T2는 아미노산 유사체이며 V2는 -NH-이며;
    T3는 (PEG)n이며 V3는 -CO-이며;
    T4은 AA이며 V4은 부재하며;
    T5는 PABC이며 V5는 부재하며;
    f는 0인, 화합물.
  24. 제18항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커 L은
    ;
    ;
    ;
    ;
    ,
    으로부터 선택되는 구조를 갖며 는 화학식 (I)에서 N에 대한 L의 부착을 나타내며, *는 W1에 대한 L의 부착을 나타내는, 화합물.
  25. 제18항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약물은 MMAE인, 화합물.
  26. 제18항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은
    ;
    ;
    ;
    ; 및

    으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 화합물.
  27. 약제학적 조성물로서,
    제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 접합체; 및
    약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  28. 방법으로서,
    대상체에 유효량의 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  29. 대상체에 있는 암을 치료하는 방법으로서,
    상기 대상체에 치료적 유효량의 제27항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 투여하는 단계는 상기 대상체에 있는 암을 치료하는 데 효과적인, 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 암은 유방암, 난소암, 폐암 또는 위암인, 방법.
  31. 약물을 대상체에 있는 표적 부위에 전달하는 방법으로서,
    상기 대상체에 제27항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 투여하는 단계는 치료적 유효량의 상기 약물을 상기 대상체에 있는 상기 표적 부위에 전달하는 데 효과적인, 방법.
KR1020247006358A 2021-07-30 2022-07-28 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법 KR20240049858A (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163227666P 2021-07-30 2021-07-30
US63/227,666 2021-07-30
US202263322914P 2022-03-23 2022-03-23
US63/322,914 2022-03-23
US202263344932P 2022-05-23 2022-05-23
US63/344,932 2022-05-23
PCT/US2022/038730 WO2023009759A2 (en) 2021-07-30 2022-07-28 Antibody-drug conjugates and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240049858A true KR20240049858A (ko) 2024-04-17

Family

ID=85088249

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247006358A KR20240049858A (ko) 2021-07-30 2022-07-28 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법
KR1020247006323A KR20240040098A (ko) 2021-07-30 2022-07-28 넥틴-4에 특이적인 항체 및 항체 접합체 및 이의 사용방법

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247006323A KR20240040098A (ko) 2021-07-30 2022-07-28 넥틴-4에 특이적인 항체 및 항체 접합체 및 이의 사용방법

Country Status (6)

Country Link
EP (2) EP4377319A2 (ko)
KR (2) KR20240049858A (ko)
AU (2) AU2022319782A1 (ko)
CA (2) CA3227845A1 (ko)
IL (1) IL310432A (ko)
WO (3) WO2023009759A2 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240049858A (ko) * 2021-07-30 2024-04-17 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6507097B2 (ja) * 2012-09-19 2019-04-24 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． Ｋｉｒ３ｄｌ２結合剤
US9310374B2 (en) * 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
EP3074010A4 (en) * 2013-11-27 2017-10-25 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate
US20200246480A1 (en) * 2015-11-09 2020-08-06 R.P. Scherer Technologies, Llc Anti-cd22 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
BR112019019650A2 (pt) * 2017-03-21 2020-06-30 Peptron, Inc. ligação de anticorpos especificamente à muc1 e utilização dos mesmos
WO2019113248A1 (en) * 2017-12-07 2019-06-13 The Regents Of The University Of California Anti-upar antibody-drug conjugates and methods of use thereof
BR112020011445A2 (pt) * 2017-12-11 2020-12-22 Triphase Research and Development III Corp. Conjugados de anticorpo anti-cd22-maitansina, combinações, e métodos de uso dos mesmos
JP7471224B2 (ja) * 2018-01-15 2024-04-19 シュティッヒティング・サンコン・ブロードフォールジーニング Ｈ因子増強抗体及びその使用
CA3097679A1 (en) * 2018-05-09 2019-11-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Antibodies specific to human nectin4
US20220226490A1 (en) * 2019-01-23 2022-07-21 R.P. Scherer Technologies, Llc Glycoside-Containing Peptide Linkers for Antibody-Drug Conjugates
KR20240049858A (ko) * 2021-07-30 2024-04-17 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법

Also Published As

Publication number Publication date
AU2022319782A1 (en) 2024-02-15
AU2022320714A1 (en) 2024-02-08
EP4377319A2 (en) 2024-06-05
WO2023009759A3 (en) 2023-04-13
IL310432A (en) 2024-03-01
WO2023009751A2 (en) 2023-02-02
CA3227844A1 (en) 2023-02-02
KR20240040098A (ko) 2024-03-27
WO2023009759A2 (en) 2023-02-02
WO2023009751A3 (en) 2023-03-09
EP4377320A2 (en) 2024-06-05
WO2023009835A2 (en) 2023-02-02
WO2023009835A3 (en) 2023-10-26
CA3227845A1 (en) 2023-02-02
WO2023009835A9 (en) 2024-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220226490A1 (en) Glycoside-Containing Peptide Linkers for Antibody-Drug Conjugates
KR20230133312A (ko) 캄프토테신 항체-약물 접합체 및 이의 사용 방법
KR20240049858A (ko) 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법
CA3226897A1 (en) Tumor-associated calcium signal transducer 2 (tacstd2) antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
US11980668B2 (en) Sulfatase-cleavable linkers for antibody-drug conjugates
JP2022544068A (ja) Ｇｐｃ３特異的抗体およびその使用方法
AU2022317537A1 (en) Antibody conjugates specific for mucin-1 and methods of use thereof
CN118043328A (zh) 对nectin-4特异性的抗体和抗体缀合物及其使用方法
JP2024503075A (ja) 抗体－薬物コンジュゲートのための二重切断エステルリンカー
WO2023028537A2 (en) Antibodies having humanized framework regions
US20220249686A1 (en) Glycoside dual-cleavage linkers for antibody-drug conjugates
CN118119644A (zh) 具有人源化框架区的抗体
CN116783208A (zh) 用于抗体-药物缀合物的糖苷双裂解接头
WO2024054821A2 (en) Tissue factor antibody-drug conjugates and uses thereof
KR20240083174A (ko) 종양 관련 칼슘 신호 전달 인자 2 (tacstd2) 항체-메이탄신 접합체 및 이의 사용 방법
KR20230077720A (ko) Mucin-1에 특이적인 항체 및 이의 사용 방법
KR20230165207A (ko) 항체-약물 접합체용 분지형 링커 및 이의 사용 방법