KR20240040098A - 넥틴-4에 특이적인 항체 및 항체 접합체 및 이의 사용방법 - Google Patents

넥틴-4에 특이적인 항체 및 항체 접합체 및 이의 사용방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20240040098A
KR20240040098A KR1020247006323A KR20247006323A KR20240040098A KR 20240040098 A KR20240040098 A KR 20240040098A KR 1020247006323 A KR1020247006323 A KR 1020247006323A KR 20247006323 A KR20247006323 A KR 20247006323A KR 20240040098 A KR20240040098 A KR 20240040098A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
substituted
antibody
nectin
chain
seq
Prior art date
Application number
KR1020247006323A
Other languages
English (en)
Inventor
도미닉 여
맥신 바우존
팡지우 장
스테판 추프라코프
윤 씨. 김
로빈 엠. 바필드
페넬로페 엠. 드레이크
Original Assignee
알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 filed Critical 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨
Publication of KR20240040098A publication Critical patent/KR20240040098A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

본 발명은 넥틴-4에 특이적인 항체 및 그러한 항체를 포함하는 항체 접합체, 예를 들어, 항체-약물 접합체 (ADC)를 제공한다. 본 발명은 그러한 항체 및 항체 접합체의 생산 방법과 이를 사용하는 방법도 포함한다. 또한, 본 발명의 항체 및 항체 접합체를 포함하는 조성물도 제공되며, 일부 경우에는, 약제학적 조성물도 포함된다. 특정 측면에서는, 세포 증식성 질환을 갖는 개체에게 본 발명의 항체 또는 항체 접합체의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 ADC의 사용 방법이 제공된다.

Description

넥틴-4에 특이적인 항체 및 항체 접합체 및 이의 사용방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 7월 30일에 출원된 미국 가출원 제63/227,666호 및 2022년 3월 23일에 출원된 미국 가출원 제63/322,914호의 우선권의 이익을 주장하며, 각 개시내용들은 본 명세서에 참조로 포함된다.
단백질-저분자 치료용 접합체 분야는 크게 발전하여 임상적으로 유익한 여러가지 약물을 제공하고 있으며, 앞으로 더 많은 약물을 제공할 수 있을 것이라 기대된다. 단백질-접합체 치료제는 특이성, 다양한 기능 및 상대적으로 낮은 표적 외 활성 등으로 인해 부작용 감소 등 여러 가지 이점을 제공할 수 있다. 단백질의 화학적 변형은 단백질을 더 강력하거나, 안정적으로, 또는 다중양태(multimodal)로 만들어 이러한 장점들을 확장할 수 있다.
다수의 표준 화학적 변형이 단백질의 번역 후 변형을 생성하고 이를 조절하기 위해 일반적으로 사용된다. 특정 아미노산의 측쇄를 선택적으로 변형하는 방법에는 여러가지가 있다. 예를 들어, 카복실산 측쇄 (아스파르테이트 및 글루타메이트)는 수용성 카르보디이미드 시약으로 초기 활성화한 후 아민과 반응시켜 표적화할 수 있다. 마찬가지로, 라이신은 활성 에스테르 또는 이소티오시아네이트를 사용하여 표적화할 수 있으며, 시스테인 티올은 말레이미드 및 α-할로-카보닐을 사용하여 표적화할 수 있다.
화학적으로 변형된 단백질 치료제 또는 시약의 생성에 대한 한 가지 중요한 장애물은 생물학적으로 활성이고 균질한 형태로 단백질을 생산하는 것이다. 약물 또는 검출가능한 라벨을 폴리펩티드에 접합하는 것은 제어하기 어려울 수 있으며, 그 결과 부착된 약물 분자의 수와 화학적 접합 부위가 다른 이질적인 접합체 혼합물이 생성될 수 있다. 일부 경우, 폴리펩티드 상의 화학 결합의 정확하고 선택적인 형성을 위해 합성 유기 화학 도구를 사용하여 폴리펩티드에 접합된 접합 부위 및/또는 약물 또는 검출가능한 라벨을 제어하는 것이 바람직할 수 있다.
넥틴-4 (넥틴 세포 부착 분자 4라고도 함)는 넥틴 계열의 구성원이다. 넥틴-4는 제1형 막관통(transmembrane) 단백질로, 접착 단백질인 넥틴 계열에 속한다. 넥틴 계열의 접착 단백질은 구조적으로 관련이 있으며 세포 외 영역에서 세 개의 보존된 면역글로불린 유사 도메인 (V, C 및 C)를 나타낸다. 넥틴-4의 분자량은 약 55kDa이고 세포 외 도메인의 분자량은 약 36kDa이다.
넥틴-4는 넥틴-1과 동종이량체(homodimer) 또는 이종이량체(heterodimer)를 형성할 수 있다. 넥틴-4는 이동, 증식, 분화, 분극화 및 바이러스 유입 등 여러 세포 활동을 조절한다. 다른 넥틴 계열은 성인 조직에서 광범위하게 발현되는 반면, 넥틴-4는 주로 태아와 태반에 국한되어 있다. 또한, 넥틴-4는 난소암, 유관 유방암(ductal breast carcinoma), 폐 선암 및 췌장암 등과 같은 다양한 고형 종양에서 과발현된다. 넥틴-4는 전이-관련 단백질로 부상하고 있으며, 질병의 진행 및 나쁜 예후와 관련이 있을 수 있다.
요약
본 발명은 넥틴-4에 특이적인 항체 및 그러한 항체를 포함하는 항체 접합체 (예를 들어, 항체-약물 접합체 (ADC))를 제공한다. 본 발명은 그러한 항체 및 항체 접합체를 생산하는 방법과 이를 사용하는 방법도 포함한다. 각각의 구현예들은 하기에서 더 자세히 설명한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 항체 및 ADC를 포함하는 조성물을 제공하며, 일부 예에서는, 약제학적 조성물이 포함된다. 특정 측면에서, 본 발명의 ADC를 세포 증식성 질환을 갖는 개인에게 치료적으로 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, ADC의 사용 방법을 제공한다.
서열에 대한 간단한 설명
SEQ ID NO: 1 내지 17: 본 명세서에서 개시된 항체의 중쇄.
SEQ ID NO: 18 내지 31: 본 명세서에서 개시된 항체의 경쇄.
SEQ ID NO: 32 내지 69: 본 명세서에서 개시된 항체의 중쇄 및 경쇄의 CDR.
SEQ ID NO: 70 내지 86: 본 명세서에서 개시된 항체의 경쇄 불변 영역.
SEQ ID NO: 87 및 88: IgG1 중쇄 및 경쇄.
SEQ ID NO: 89 내지 93: 상이한 Ig 아이소타입의 중쇄 불변 영역.
SEQ ID NO: 94 내지 98: 상이한 유형 및 유기체의 경쇄 불변 영역.
SEQ ID NO: 99: 인간 넥틴-4 단백질 서열.
SEQ ID NO: 100 내지 101: 글리신 중합체(polymer)를 포함한 유연한(flexible) 링커.
SEQ ID NO: 102 내지 126: 포밀글리신 생성 효소 (Formylglycine Generating Enzyme, FGE)로 전환되기 전 설파타제(sulfatase) 모티프의 예시.
SEQ ID NO: 127 내지 128 및 245 내지 246: FGE로 전환된 후의 설파타제 모티프의 예시.
SEQ ID NO: 129: 설파타제 모티프가 삽입된 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열.
SEQ ID NO: 130 내지 244: 상이한 면역글로불린의 불변 영역 내의 서열.
도 1은 재조합 인간 넥틴-4 단백질에 결합하는 키메라 항-넥틴-4 항체를 나타낸다.
도 2는 재조합 인간 넥틴-4 단백질에 결합하는 키메라 항-넥틴-4 항체를 나타낸다.
도 3은 인간 넥틴 및 넥틴 유사 분자(Necl) 계열 구성원에 결합하는 항-넥틴-4 항체를 나타낸다.
도 4는 인간 넥틴 및 Necl 계열 구성원에 결합하는 12E11 항체 클론 변이체를 나타낸다.
도 5는 인간 넥틴 및 Necl 계열 구성원에 결합하는 12E11 항체 클론 변이체를 나타낸다.
도 6은 인간 넥틴-4에 결합하는 인간화된(humanized) 5D9 변이체를 나타낸다.
도 7은 인간 넥틴-4에 결합하는 인간화된 5D9 변이체를 나타낸다.
도 8은 인간 넥틴-4에 결합하는 인간화된 5D9 변이체를 나타낸다.
도 9는 인간 넥틴-4에 결합하는 인간화된 5D9 변이체를 나타낸다.
도 10은 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 세포에 대한 키메라 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내(in vitro) 역가(potency)를 나타낸다.
도 11은 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 세포에 대한 키메라 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 12는 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 세포에 대한 키메라 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 13은 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 세포에 대한 키메라 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 14는 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 15는 SK-BR-3 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 16은 MDA-MB-468 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 17은 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 18은 SK-BR-3 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 19는 MDA-MB-468 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 20은 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 21은 SK-BR-3 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 22는 MDA-MB-468 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 23은 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 24는 SK-BR-3 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 25는 MDA-MB-468 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 26은 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 27은 SK-BR-3 세포에 대한 h5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 28은 MDA-MB-468 세포에 대한 인간화된 5D9 변이체 항-넥틴-4 ADC 또는 대조군의 시험관 내 역가를 나타낸다.
도 29는 화합물 20에 접합된 이중-태깅된 알데히드 태그 엔포투맙 항체의 NCI-H1781 이종 이식 모델에 대한 생체 내(in vivo) 효능을 나타낸다.
도 30a는 알데히드 태깅된 Ig 폴리펩티드의 생성을 위한 가능한 변형 부위를 나타내는 부위 지도(site map)를 나타낸다. 위쪽 서열은 IgG1 경쇄 폴리펩티드의 보존 영역의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 87)로서, Ig 경쇄에서 가능한 변형 부위를 나타내고; 아래쪽 서열은 Ig 중쇄 폴리펩티드의 보존 영역의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 88) (GenBank Accession No. AAG00909)로서, Ig 중쇄에서 가능한 변형 부위를 나타낸다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 전장(full-length) 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 30b는 IgG1 (SEQ ID NO: 89; GenBank P01857.1), IgG2 (SEQ ID NO: 90; GenBank P01859.2), IgG3 (SEQ ID NO: 91; GenBank P01860.2), IgG4 (SEQ ID NO: 92; GenBank AAB59394.1) 및 IgA (SEQ ID NO: 93; GenBank AAAT74070)의 호모 사피엔스 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 정렬을 도시한 것으로서, 면역글로불린 중쇄에서 알데히드 태그가 제공될 수 있는 변형 부위를 나타낸다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 전체 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 30c는 면역글로불린 경쇄 불변 영역의 정렬을 도시한 것으로, 면역글로불린 경쇄에서 알데히드 태그가 제공될 수 있는 변형 부위를 나타낸다. Seq1=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75031.1; SEQ ID NO: 94. Seq2=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank BAC0168.1; SEQ ID NO: 95. Seq3=호모 사피엔스 람다 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75033; SEQ ID NO: 96. Seq4=무스 무스쿨루스(Mus musculus) 경쇄 불변 영역; GenBank AAB09710.1; SEQ ID NO: 97. Seq5=래터스 노르베지쿠스(Rattus norvegicus) 경쇄 불변 영역; GenBank AAD10133; SEQ ID NO: 98.
도 30d는 면여글로불린 경쇄 불변 영역의 정렬을 도시한 것으로, 면역글로불린 경쇄에서 알데히드 태그가 제공될 수 있는 변형 부위를 나타낸다. Seq1=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75031.1; SEQ ID NO: 52. Seq2=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank BAC0168.1; SEQ ID NO: 53. Seq3=호모 사피엔스 람다 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75033; SEQ ID NO: 54. Seq4=무스 무스쿨루스 경쇄 불변 영역; GenBank AAB09710.1; SEQ ID NO: 55. Seq5=래터스 노르베지쿠스 경쇄 불변 영역; GenBank AAD10133; SEQ ID NO: 56.
도 31은 0일째에 나열된 항-넥틴-4 ADC를 2.5 또는 7.5 mg/kg으로 단일 정맥 투여한 NCI-H1781 이종 이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL1 화합물 8 (RED-601) 및 VH4/VL5 화합물 8 둘 다 내부 91N 태그를 사용하며 파드세브(Padcev)와 비교하여 절반의 페이로드(payload) 용량을 전달한다. 아이소타입 대조군 ADC의 활성은 미미했다.
도 32는 0일째에 나열된 항-넥틴-4 또는 아이소타입 대조군 ADC를 2.5 또는 7.5 mg/kg으로 단일 정맥 투여한 NCI-H1781 이종 이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL1 화합물 25 (RED-694)는 91N 태그를 사용하는 DAR4 포맷과 91N/116E 이중 태그 조합을 사용하는 DAR8 포맷으로 제작되었다. 파드세브 (제네릭)이 비교대상으로 포함되었다. 아이소타입 대조군 화합물 25 ADC의 활성은 미미했다.
도 33은 0일째에 나열된 항-넥틴-4 또는 아이소타입 대조군 ADC를 2.5 또는 7.5 mg/kg으로 단일 정맥 투여한 NCI-H1781 이종 이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL5 화합물 25 (RED-694)는 91N 태그를 사용하는 DAR4 포맷과 91N/116E 이중 태그 조합을 사용하는 DAR8 포맷으로 제작되었다. 파드세브 (제네릭)이 비교대상으로 포함되었다. 아이소타입 대조군 화합물 25 ADC의 활성은 미미했다.
도 34에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 8에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체의 DAR 값은 3.74이다.
도 35에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 8에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체는 98.5% 단량체(monomer)이다.
도 36에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 8에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체의 DAR 값은 3.73이다.
도 37에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 8에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체는 98.0% 단량체이다.
도 38에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체의 DAR 값은 6.89이다.
도 39에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체는 98.7% 단량체이다.
도 40에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체의 DAR 값은 6.86이다.
도 41에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체는 96.6% 단량체이다.
도 42에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 단일-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체의 DAR 값은 3.16이다.
도 43에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 단일-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체는 97.2% 단량체이다.
도 44에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 단일-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체의 DAR 값은 3.25이다.
도 45에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 단일-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체의 DAR 값은 3.25이다.
도 46은 랫트 교차-반응성 넥틴-4 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 임상 관찰 결과이다. 화살표는 투약일을 나타낸다. 화합물 25 접합체를 투여한 동물에서는 관찰된 것이 없는 반면, 베도틴(vedotin)을 투여한 그룹에서는 임상 관찰 결과 17일째에 평균이 2.5로 나타났으며, 결국 동물이 사망했다.
도 47은 비히클(vehicle) 또는 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 적혈구 수.
도 48은 비히클 또는 ADC를 반복으로 투여한 랫트의 호중구 수.
도 49는 비히클 또는 ADC를 반복으로 투여한 랫트의 망상 적혈구 수.
도 50은 비히클 또는 ADC를 반복으로 투여한 랫트의 림프구 수.
도 51은 비히클 또는 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 혈소판 수.
도 52는 비히클 또는 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 알라닌 아미노 전이효소 수.
도 53은 비히클 또는 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 아스파테이트 아미노 전이효소 수.
도 54는 다중-투여 비-GLP 랫트 독성 연구 #2의 랫트 혈장 샘플의 독성 동역학 분석을 나타낸다. 이 분석을 통해 투여 수준을 확인하고 엔포투맙 베도틴 접합체에 비해 엔포투맙 화합물 8 접합체의 생체 내 안정성이 개선되었음을 확인하였다.
정의
"알킬"은 1 내지 10개의 탄소 원자, 예를 들어 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개, 또는 1 내지 4개, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 1가 포화 지방족 하이드로카르빌 기를 지칭한다. 이 용어에는 예를 들어 메틸(CH3-), 에틸(CH3CH2-), n-프로필(CH3CH2CH2-), 이소프로필((CH3)2CH-), n-부틸(CH3CH2CH2CH2-), 이소부틸((CH3)2CHCH2-), sec-부틸((CH3)(CH3CH2)CH-), t-부틸((CH3)3C-), n-펜틸(CH3CH2CH2CH2CH2-) 및 네오펜틸((CH3)3CCH2-)과 같은 선형 및 분지형 하이드로카빌 기가 포함된다.
용어 "치환된 알킬"은 본 명세서에서 정의된 것과 같은 알킬 기를 의미하는데, 여기서 알킬 사슬의 하나 이상의 탄소 원자 (C1 탄소 원자 제외)가 헤테로원자, 예를 들어 -O-, -N-, -S-, -S(O)n- (n은 0 내지 2), -NR- (R은 수소 또는 알킬임)로 선택적으로 대체되고, 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시 , 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴, 및 -NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 5 개의 치환체를 갖되, 이때, R' 및 R"은 동일하거나 상이할 수 있고, 수소, 선택적으로는 치환된 알킬, 사이클로알킬, 알케닐, 사이클로알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭로부터 선택된다.
"알킬렌"은 직쇄 또는 분지형이고, 선택적으로는 -O-, -NR10-, -NR10C(O)-, -C(O)NR10- 등으로부터 선택된 하나 이상의 기가 기재되어 있는, 바람직하게는 1 내지 6개, 더 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 2가 지방족 하이드로카르빌 기를 지칭한다. 이 용어에는, 예를 들어, 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-CH2CH2-), n-프로필렌(-CH2CH2CH2-), 이소프로필렌(-CH2CH(CH3)), (-C(CH3)2CH2CH2-), (-C(CH3)2CH2C(O)-), (-C(CH3)2CH2C(O)NH-), (-CH(CH3)CH2-) 등이 포함된다.
"치환된 알킬렌"은 아래 "치환된"의 정의에서 탄소에 대해 기술된 바와 같이, 치환체로 대체된 1 내지 3개의 수소를 갖는 알킬렌 기를 지칭한다.
용어 "알케인"은 본 명세서에 정의된 바와 같은 알킬 기 및 알킬렌 기를 지칭한다.
용어 "알킬아미노알킬", "알킬아미노알케닐" 및 "알킬아미노알키닐" 은 R'NHR"- 기를 지칭하는데, 여기서 R'은 본 명세서에 정의된 알킬 기이고, R"은 본 명세서에 정의된 알킬렌, 알케닐렌 또는 알키닐렌 기이다.
용어 "알크아릴(alkaryl)" 또는 "아랄킬(aralkyl)"은 -알킬렌-아릴 및 -치환된 알킬렌-아릴 기를 지칭하며, 여기서 알킬렌, 치환된 알킬렌 및 아릴은 본 명세서에서 정의된다.
"알콕시"는 -O-알킬기를 지칭하며, 이때 알킬은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 알콕시는, 예를 들어, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, t-부톡시, sec-부톡시, n-펜톡시 등을 포함한다. 용어 "알콕시"는 또한 알케닐-O-, 사이클로알킬-O-, 사이클로알케닐-O- 및 알키닐-O- 기도 지칭하며, 이때 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐 및 알키닐은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"치환된 알콕시"라는 용어는 치환된 알킬-O-, 치환된 알케닐-O-, 치환된 사이클로알킬-O-, 치환된 사이클로알케닐-O- 및 치환된 알키닐-O- 기를 지칭하며, 이때 치환된 알킬, 치환된 알케닐, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알케닐 및 치환된 알키닐은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"알콕시아미노"라는 용어는 -NH-알콕시 기를 지칭하며, 이때 알콕시는 본 명세서에서 정의된다.
"할로알콕시"라는 용어는 알킬기 상의 하나 이상의 수소 원자가 할로 기로 치환된 알킬-O- 기를 지칭하며, 예를 들어, 트리플루오로메톡시 등과 같은 기를 포함한다.
용어 "할로알킬"은 상기 기재된 바와 같은 치환된 알킬기를 지칭하며, 이때 알킬기 상의 하나 이상의 수소 원자는 할로기로 치환된다. 이러한 기의 예에는 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로에틸 등과 같은 플루오로알킬기가 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
용어 "알킬알콕시"는 -알킬렌-O-알킬, 알킬렌-O-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-O-알킬 및 치환된 알킬렌-O-치환된 알킬기를 의미하며, 이때 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌 및 치환된 알킬렌은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
용어 "알킬티오알콕시"는 -알킬렌-S-알킬, 알킬렌-S-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-S-알킬 및 치환된 알킬렌-S-치환된 알킬기를 지칭하며, 이때 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌 및 치환된 알킬렌은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"알케닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖고 적어도 1개, 바람직하게는 1 내지 2개의 이중 결합 불포화 부위를 갖는 직쇄 또는 분지형 하이드로카르빌 기를 지칭한다. 이 용어에는, 예를 들어, 바이-비닐, 알릴(allyl) 및 부트-3-엔-1-일(but-3-en-1-yl)이 포함된다. 이 용어에는 시스 및 트랜스 이성질체 또는 이들 이성질체의 혼합물이 포함된다.
용어 "치환된 알케닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체를 갖는 본 명세서에 정의된 알케닐 기를 지칭한다.
"알키닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 3개의 탄소 원자를 갖고, 적어도 1개, 바람직하게는 1 내지 2개의 삼중 결합 불포화 부위를 갖는 선형 또는 분지형 1가 하이드로카빌 기를 지칭한다. 이러한 알키닐 기의 예에는 아세틸레닐(-C=CH) 및 프로파르길(-CH2C=CH)이 포함된다.
용어 "치환된 알키닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체를 갖는 본 명세서에 정의된 알키닐 기를 지칭한다.
"알키닐옥시"는 -O-알키닐기를 지칭하며, 이때 알키닐은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 알키닐옥시에는, 예를 들어, 에티닐옥시, 프로피닐옥시 등이 포함된다.
"아실"은 HC(O)-, 알킬-C(O)-, 치환된 알킬-C(O)-, 알케닐-C(O)-, 치환된 알케닐-C(O)-, 알키닐-C(O)-, 치환된 알키닐-C(O)-, 사이클로알킬-C(O)-, 치환된 사이클로알킬-C(O)-, 사이클로알케닐-C(O)-, 치환된 사이클로알케닐-C(O)-, 아릴- C(O)-, 치환된 아릴-C(O)-, 헤테로아릴-C(O)-, 치환된 헤테로아릴-C(O)-, 헤테로사이클릴-C(O)- 및 치환된 헤테로사이클릴-C(O)- 기를 지칭하고, 이때 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 예를 들어, 아실에는 "아세틸" 기 CH3C(O)-가 포함된다.
"아실아미노"는 -NR20C(O)알킬, -NR20C(O)치환된 알킬, NR20C(O)사이클로알킬, -NR20C(O)치환된 사이클로알킬, -NR20C(O)사이클로알케닐, -NR20C(O)치환된 사이클로알케닐, -NR20C(O)알케닐, -NR20C(O)치환된 알케닐, -NR20C(O)알키닐, -NR20C(O)치환된 알키닐, -NR20C(O)아릴, -NR20C(O)치환된 아릴, -NR20C(O)헤테로아릴, -NR20C(O)치환된 헤테로아릴, -NR20C(O)헤테로사이클릭 및 -NR20C(O)치환된 헤테로사이클릭기를 지칭하고, 이때 R20은 수소 또는 알킬이고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아미노카보닐" 또는 용어 "아미노아실"은 -C(O)NR21R22 기를 지칭하며, 이때 R21 및 R22는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 R21 및 R22는 선택적으로 이에 결합된 질소와 함께 연결되어 헤테로사이클릭을 형성하거나, 또는 치환된 헤테로사이클릭 기를 형성하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아미노카보닐아미노"는 -NR21C(O)NR22R23 기를 나타내며, 여기서 R21, R22 및 R23은 수소, 알킬, 아릴 또는 사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 2개의 R 기가 연결되어 헤테로사이클릴 기를 형성한다.
"알콕시카보닐아미노"라는 용어는 각각의 R이 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릴인 -NRC(O)또는 기를 지칭하며, 이때 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아실옥시"라는 용어는 알킬-C(O)O-, 치환된 알킬-C(O)O-, 사이클로알킬-C(O)O-, 치환된 사이클로알킬-C(O)O-, 아릴-C(O)O-, 헤테로아릴-C(O)O- 및 헤테로사이클릴-C(O)O- 기를 지칭하고, 이때 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아미노설포닐"은 -SO2NR21R22 기를 지칭하며, 여기서 R21 및 R22는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 치환된 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 R21 및 R22는 선택적으로 이에 결합된 질소와 함께 연결되어 헤테로사이클릭 또는 치환된 헤테로사이클릭 기를 형성하고, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"설포닐아미노"는 -NR21SO2R22 기를 지칭하며, 여기서 R21 및 R22는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 R21 및 R22는 선택적으로 이에 결합된 원자와 함께 연결되어 헤테로사이클릭 또는 치환된 헤테로사이클릭 기를 형성하고, 이때 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아릴" 또는 "Ar"은 (페닐 기에 존재하는 것과 같은) 단일 고리 또는 다중 축합 고리를 갖는 고리 시스템 (이러한 방향족 고리 시스템의 예는 나프틸, 안트릴 및 인다닐을 포함함)을 갖는 탄소 원자 6 내지 18개의 1가 방향족 카보사이클릭 기를 의미하며, 부착지점이 방향족 고리 원자를 통하는 경우, 축합 고리는 방향족일 수도 있고 아닐 수도 있다. 이 용어에는, 예를 들어, 페닐 및 나프틸이 포함된다. 아릴 치환체의 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 이러한 아릴 기는 아실옥시, 히드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알케닐, 치환된 알키닐, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알케닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알크아릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카복실, 카복실알킬, 시아노, 할로겐, 니트로, 헤테로아릴 , 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 트리할로메틸로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있다.
"아릴옥시"는 -O-아릴기를 말하며, 이때 아릴은 본 명세서에 정의된 바와 같으며, 예를 들어, 페녹시, 나프톡시 등을 포함하고, 본 명세서에서 정의된 것과 같은 선택적으로 치환된 아릴 기도 포함한다.
"아미노"는 -NH2 기를 지칭한다.
"치환된 아미노"라는 용어는 -NRR 기를 지칭하고, 이때 각각의 R이 수소, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되되, 적어도 하나의 R은 수소가 아니다.
"아지도"라는 용어는 -N3 기를 나타낸다.
"카복실", "카복시" 또는 "카복실레이트"는 -CO2H 또는 이의 염을 의미한다.
"카복실 에스테르" 또는 "카복시 에스테르" 또는 용어 "카복시알킬" 또는 "카복실알킬"은 -C(O)O-알킬, -C(O)O-치환된 알킬, -C(O)O-알케닐, -C(O)O-치환된 알케닐, -C(O)O-알키닐, -C(O)O-치환된 알키닐, -C(O)O-아릴, -C(O)O-치환된 아릴, - C(O)O-사이클로알킬, -C(O)O-치환된 사이클로알킬, -C(O)O-사이클로알케닐, -C(O)O-치환된 사이클로알케닐, -C(O)O-헤테로아릴, -C(O)O-치환된 헤테로아릴, -C(O)O-헤테로사이클릭 및 -C(O)O-치환된 헤테로사이클릭 기를 지칭하고, 이때 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"(카복실 에스테르)옥시" 또는 "카보네이트"는 -O-C(O)O-알킬, -O-C(O)O-치환된 알킬, -O-C(O)O-알케닐, -O-C(O)O-치환된 알케닐, -O-C(O)O-알키닐, -O-C(O)O-치환된 알키닐, -O-C(O)O-아릴, -O-C(O)O-치환된 아릴, -O-C(O)O-사이클로알킬, -O-C(O)O-치환된 사이클로알케닐, -O-C(O)O-사이클로알케닐, -O-C(O)O-치환된 사이클로알케닐, -O-C(O)O-헤테로아릴, -O-C(O)O-치환된 헤테로아릴, -O-C(O)O-헤테로사이클릭, 및 -O-C(O)O-치환된 헤테로사이클릭 기를 지칭하고, 이때 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"시아노" 또는 "니트릴"은 -CN 기를 나타낸다.
"사이클로알킬"은 융합, 가교 및 스피로 고리 시스템을 포함하는 단일 또는 다중 고리 고리를 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 사이클릭 알킬 기를 의미한다. 적합한 사이클로알킬 기의 예는, 예를 들어, 아다만틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로옥틸 등을 포함한다. 이러한 사이클로알킬 기에는, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로옥틸 등과 같은 단일 고리 구조(structure), 또는 아다만타닐 등과 같은 다중 고리 구조가 포함된다.
용어 "치환된 사이클로알킬"은 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된 1 내지 5개의 치환체, 또는 1 내지 3개의 치환체를 갖는 사이클로 알킬기를 지칭한다.
"사이클로알케닐"은 단일 또는 다중 고리를 가지며 적어도 1개의 이중 결합, 바람직하게는 1 내지 2개의 이중 결합을 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 비방향족 사이클릭 알킬기를 지칭한다.
용어 "치환된 사이클로알케닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 케토, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된 1 내지 5개의 치환체 또는 1 내지 3개의 치환체를 갖는 사이클로알케닐 기를 지칭한다.
"사이클로알키닐"은 단일 또는 다중 고리를 갖고 하나 이상의 삼중 결합을 갖는 탄소수 5 내지 10의 비방향족 사이클로알킬 기를 지칭한다.
"사이클로알콕시"는 -O-사이클로알킬을 지칭한다.
"사이클로알케닐옥시"는 -O-사이클로알케닐을 지칭한다.
"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 지칭한다.
"히드록시" 또는 "히드록실"은 -OH 기를 지칭한다.
"헤테로아릴"은 고리 내의 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된, 1 내지 10개의 탄소 원자 및 1 내지 10개의 헤테로원자와 같은 1 내지 15개의 탄소 원자의 방향족 기를 지칭한다. 이러한 헤테로아릴 기는 단일 고리 (예를 들어, 피리디닐, 이미다졸릴 또는 푸릴) 또는 고리 시스템 내 다중 축합 고리 (예를 들어, 인돌리지닐, 퀴놀리닐, 벤조푸란, 벤즈이미다졸릴 또는 벤조티에닐과 같은 기)를 가질 수 있으며, 이때 적어도 하나의 고리 시스템 내의 고리는 방향족이다. 원자가 요건을 충족시키기 위해, 이러한 헤테로아릴 고리의 임의의 헤테로원자는 H 또는 치환기, 예를 들어, 알킬 기 또는 본 명세서에 기술된 다른 치환체에 결합될 수도 있고 결합되지 않을 수도 있다. 특정 구현예에서, 헤테로아릴 기의 질소 및/또는 황 고리 원자(들)는 선택적으로 산화되어 N-옥사이드(N→O), 설피닐 또는 설포닐 모이어티(moiety)를 제공한다. 이 용어에는, 예를 들어, 피리디닐, 피롤릴, 인돌릴, 티오페닐 및 푸라닐이 포함된다. 헤테로아릴 치환체의 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 이러한 헤테로아릴 기는 아실옥시, 히드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알케닐, 치환된 알키닐, 치환된 사이클로알킬, 치환된 사이클로알케닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알크아릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카복실, 카복실알킬, 시아노, 할로겐, 니트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴 및 트리할로메틸로부터 선택된 1 내지 5개의 치환체로, 또는 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "헤테로아랄킬"은 알킬렌 및 헤테로아릴이 본 명세서에서 정의된 -알킬렌-헤테로아릴 기를 지칭한다. 이 용어는, 예를 들어, 피리딜메틸, 피리딜에틸, 인돌릴메틸 등을 포함한다.
"헤테로아릴옥시"는 -O-헤테로아릴을 의미한다.
"헤테로사이클", "헤테로사이클릭", "헤테로사이클로알킬" 및 "헤테로사이클릴"은 융합된 가교 및 스피로 고리 시스템을 포함하는, 단일 고리 또는 다중 축합 고리를 갖고, 1 내지 10개의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 20개의 고리 원자를 갖는 포화 또는 불포화 기를 지칭한다. 이러한 고리 원자는 질소, 황 또는 산소 중에서 선택되며, 이때 융합 고리 시스템에서 부착 지점이 비방향족 고리를 통하는 경우 하나 이상의 고리가 사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있다. 특정 구현예에서, 헤테로사이클릭 기의 질소 및/또는 황 원자(들)는 선택적으로 산화되어 N-옥사이드, -S(O)- 또는 -SO2- 모이어티를 제공한다. 원자가 요건을 충족시키기 위해, 이러한 헤테로사이클릭 고리 내의 임의의 헤테로원자는 하나 이상의 H 또는 하나 이상의 치환기(들), 예를 들어, 알킬 기 또는 본 명세서에 기술된 다른 치환체에 결합될 수도 있고 결합되지 않을 수도 있다.
헤테로사이클 및 헤테로아릴의 예에는 아제티딘, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 인돌리진, 이소인돌, 인돌, 디히드로인돌, 인다졸, 퓨린, 퀴놀리진, 이소퀴놀린, 퀴놀린, 프탈라진, 나프틸피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프테리딘, 카르바졸, 카르볼린, 페난트리딘, 아크리딘, 페난트롤린, 이소티아졸, 페나진, 이속사졸, 페녹사진, 페노티아진, 이미다졸리딘, 이미다졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌린, 프탈이미드, 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린, 4,5,6,7-테트라히드로벤조[b]티오펜, 티아졸, 티아졸리딘, 티오펜, 벤조[b]티오펜, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐(티아모르폴리닐이라고도 함), 1,1-디옥소티오모르폴리닐, 피페리디닐, 피롤리딘, 테트라히드로푸라닐 등이 포함되지만 이에 제한되진 않는다.
헤테로사이클릭 치환체의 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 이러한 헤테로사이클릭 기는 알콕시, 치환된 알콕시, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 융합된 헤테로사이클로부터 선택된 1 내지 5개, 또는 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있다.
"헤테로사이클릴옥시"는 -O-헤테로사이클릴기를 지칭한다.
"헤테로사이클릴티오"라는 용어는 헤테로시클릭-S- 기를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클렌"은 본 명세서에 정의된 바와 같이 헤테로사이클로부터 형성된 디라디칼(diradical) 기를 지칭한다.
"히드록시아미노"라는 용어는 -NHOH 기를 지칭한다.
"니트로"는 -NO2 기를 지칭한다.
"옥소"는 원자(=O)를 지칭한다.
"설포닐"은 SO2-알킬, SO2-치환된 알킬, SO2-알케닐, SO2-치환된 알케닐, SO2-사이클로알킬, SO2-치환된 사이클로알킬, SO2-사이클로알케닐, SO2-치환된 사이클로알케닐, SO2-아릴, SO2-치환된 아릴, SO2-헤테로아릴, SO2-치환된 헤테로아릴, SO2-헤테로사이클릭 및 SO2-치환된 헤테로사이클릭을 지칭하며, 이때 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 설포닐에는, 예를 들어, 메틸-SO2-, 페닐-SO2- 및 4-메틸페닐-SO2-가 포함된다.
"설포닐옥시"는 -OSO2-알킬, OSO2-치환된 알킬, OSO2-알케닐, OSO2-치환된 알케닐, OSO2- 사이클로알킬, OSO2-치환된 사이클로알킬, OSO2-사이클로알케닐, OSO2-치환된 사이클로알케닐, OSO2-아릴, OSO2-치환된 아릴, OSO2-헤테로아릴, OSO2-치환된 헤테로아릴, OSO2-헤테로사이클릭 및 OSO2 치환된 헤테로사이클릭을 지칭하고, 이때 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로사이클릭 및 치환된 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"아미노카보닐옥시"라는 용어는 각각의 R이 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클릭인 -OC(O)NRR 기를 지칭하며, 이때 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릭은 본 명세서에 정의된 바와 같다.
"티올"은 -SH 기를 지칭한다.
"티옥소(thioxo)" 또는 "티오케토"라는 용어는 원자(=S)를 지칭한다.
"알킬티오" 또는 용어 "티오알콕시"는 -S-알킬 기를 지칭하며, 이때 알킬은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 특정 구현예에서, 황은 -S(O)-로 산화될 수 있다. 설폭사이드는 하나 이상의 입체이성질체로 존재할 수 있다.
"치환된 티오알콕시"라는 용어는 -S-치환된 알킬기를 의미한다.
용어 "티오아릴옥시"는 아릴-S-기를 지칭하며, 이때 아릴 기는 본 명세서에 정의된 선택적으로 치환된 아릴 기를 포함하여, 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "티오헤테로아릴옥시"는 헤테로아릴-S- 기를 지칭하며, 이때 헤테로아릴 기는 본 명세서에 정의된 바와 같은 선택적으로 치환된 아릴 기를 포함하여, 본 명세서에 정의된 바와 같다.
용어 "티오헤테로사이클로옥시"는 헤테로사이클릴-S- 기를 지칭하고, 이때 헤테로사이클릴 기는 본 명세서에 정의된 바와 같은 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴 기를 포함하여, 본 명세서에 정의된 바와 같다.
본 명세서의 개시내용에 더하여, 특정 기 또는 라디칼을 변형하기 위해 사용되는 용어 "치환된"은 또한 특정 기 또는 라디칼의 하나 이상의 수소 원자가 각각 서로 독립적으로 하기에 정의된 것과 같은 동일하거나 상이한 치환기로 대체된다는 것을 의미할 수도 있다.
본 명세서의 개별 용어와 관련하여 개시된 기들 이외에, 특정 기 또는 라디칼의 포화 탄소 원자에서 하나 이상의 수소를 치환하는 치환기는 (단일 탄소 상의 임의의 2개의 수소는 =O, =NR70, =N-OR70, =N2 또는 =S로 대체될 수 있음), 달리 특정되지 않는 한, -R60, 할로, =O, -OR70, -SR70, -NR80R80, 트리할로메틸, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, -N3, -SO2R70, -SO2O-M+, -SO2OR70, -OSO2R70, -OSO2O-M+, -OSO2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70) 2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)O-M+, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)O-M+, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 이때 R60은 선택적으로 치환된 알킬, 사이클로알킬, 헤테로알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 R70은 독립적으로 수소 또는 R60이고; 각각의 R80은 독립적으로 R70이거나, 또는 대안적으로 2개의 R80'은 이들이 결합된 질소 원자와 함께 5원, 6원 또는 7원 헤테로사이클로알킬을 형성하며, 이는 O, N 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 동일하거나 상이한 추가적인 헤테로원자를 선택적으로 포함할 수 있으며, 이 중 N은 -H 또는 C1-C3 알킬 치환체를 가질 수 있으며; 각각의 M+는 순 단일 양전하를 갖는 반대 이온이다. 각각의 M+는 독립적으로, 예를 들어, K+, Na+, Li+과 같은 알칼리 이온; +N(R60)4와 같은 암모늄 이온; 또는 [Ca2+]0.5, [Mg2+]0.5 또는 [Ba2+]0.5 와 같은 알칼리 토류 이온일 수 있다 ("아래첨자 0.5는 이러한 2가 알칼리 토류 이온에 대한 반대 이온 중 하나가 발명의 화합물의 이온화된 형태이고 다른 하나는 염화물과 같은 전형적인 반대 이온일 수 있거나, 또는 본 명세서에 개시된 두 개의 이온화된 화합물이 이러한 2가 알칼리 토류 이온에 대한 반대 이온으로 작용할 수 있거나, 또는 본 발명의 이중 이온화된 화합물이 이러한 2가 알칼리 토류 이온에 대한 반대 이온으로 작용할 수 있음을 의미한다). 구체적인 예로서, -NR80R80은 -NH2, -NH-알킬, N-피롤리디닐, N-피페라지닐, 4N-메틸-피페라진-1-일 및 N-모르폴리닐을 포함하는 것을 의미한다.
본 명세서의 개시내용에 더하여, "치환된" 알켄, 알킨, 아릴 및 헤테로아릴 기에서 불포화 탄소 원자 상의 수소에 대한 치환기는 달리 명시되지 않는 한, -R60, 할로, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 틀리할로메틸, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, -N3, -SO2R70, -SO3 -M+, -SO3R70, -OSO2R70, -OSO3 -M+, -OSO3R70, -PO3 -2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2 -M+, -CO2R70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2 -M+, -OCO2R70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 이때 R60, R70, R80 및 M+는 이전에 정의된 바와 같으며, 치환된 알켄 또는 알킨의 경우, 치환체는 -O-M+, -OR70, -SR70, 또는 -S-M+이 아니다.
본 명세서의 개별 용어와 관련하여 개시된 기들 이외에, "치환된" 헤테로알킬 및 사이클로헤테로알킬 기의 질소 원자 상의 수소에 대한 치환기는 달리 명시되지 않는 한 -R60, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트리할로메틸, -CF3, -CN, -NO, -NO2, -S(O)2R70, -S(O)2O-M+, -S(O)2OR70, -OS(O)2R70, -OS(O)2O-M+, -OS(O)2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)(OR70), -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70C(O)OR70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 이때 R60, R70, R80 및 M+은 이전에 정의한 것과 같다.
본 명세서의 개시내용에 더하여, 특정 구현예에서, 치환되는 기는 1개, 2개, 3개 또는 4개의 치환체, 1, 2 또는 3개의 치환체, 1 또는 2개의 치환체, 또는 1개의 치환체를 갖는다.
상기 정의된 모든 치환기에서, 치환체 자체에 추가 치환체를 정의함으로써 도달된 중합체는 본 명세서에 포함되지 않는다 (예를 들어, 그 자체가 치환된 아릴 기로 치환된 치환체, 또는 치환된 아릴 기 등으로 추가 치환된 치환체로서 치환된 아릴 기를 갖는 치환된 아릴 등). 이러한 경우 최대 치환 횟수는 3회이다. 예를 들어, 본 명세서에서 구체적으로 고려되는 치환된 아릴기의 순차적인 치환은 치환된 아릴-(치환된 아릴)-치환된 아릴로 제한된다.
달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 명시적으로 정의되지 않은 치환체의 명명법은 작용기의 말단 부분을 명명하고 이어서 부착 지점을 향해 인접한 작용기를 명명함으로써 수행된다. 예를 들어, 치환체 "아릴알킬옥시카보닐"은 (아릴)-(알킬)-O-C(O)- 기를 지칭한다.
하나 이상의 치환체를 함유하는 본 명세서에 개시된 임의의 기에 관하여, 이러한 기는 당연히 입체적으로 비현실적이고/이거나 합성적으로 실현 불가능한 임의의 치환 또는 치환 패턴을 포함하지 않는 것으로 이해해야 한다. 또한, 대상 화합물에는 이들 화합물의 치환으로 인해 발생하는 모든 입체화학적 이성질체가 포함된다.
용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 포유동물과 같은 환자에게 투여할 수 있는 염 (주어진 투여량 계획에 대해 허용되는 포유동물 안전성을 갖는 반대이온을 갖는 염)을 의미한다. 이러한 염은 약제학적으로 허용되는 무기 또는 유기 염기 및 약제학적으로 허용되는 무기 또는 유기 산으로부터 유래될 수 있다. "약제학적으로 허용되는 염"은 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 의미하며, 이 염은 당업계에 잘 알려진 다양한 유기 및 무기 반대 이온으로부터 유도되며, 예를 들어, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 등을 포함하고; 분자가 염기 작용기를 함유하는 경우, 염산염, 브롬화수소산염, 포름산염, 타르타르산염, 베실산염, 메실산염, 아세트산염, 말레산염, 옥살산염 등과 같은 유기 또는 무기 산의 염을 포함한다.
"이의 염"이라는 용어는 산의 양성자가 금속 양이온 또는 유기 양이온 등의 양이온으로 대체될 때 형성되는 화합물을 의미한다. 해당되는 경우, 염은 약제학적으로 허용되는 염이지만, 환자에게 투여하기 위한 것이 아닌 중간체 화합물의 염에는 이것이 필요하지 않다. 예를 들어, 본 화합물의 염에는 화합물이 무기 또는 유기 산에 의해 양성화되어 양이온을 형성하고, 무기 또는 유기 산의 짝 염기(conjugate base)를 염의 음이온 성분으로 하는 염을 포함한다.
"용매화물"은 용매 분자와 용질의 분자 또는 이온이 결합하여 형성된 복합체를 지칭한다. 용매는 유기 화합물, 무기 화합물, 또는 이 둘의 혼합물일 수 있다. 용매의 일부 예에는 메탄올, N, N-디메틸포름아미드, 테트라히드로푸란, 디메틸설폭시드 및 물이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 용매가 물인 경우, 형성된 용매화물은 수화물이다.
"입체이성질체" 및 "입체이성질체들"은 원자 연결성은 동일하지만 공간에서 원자 배열이 다른 화합물을 지칭한다. 입체이성질체에는 시스-트랜스 이성질체, E 및 Z 이성질체, 거울상이성질체 및 부분입체이성질체가 포함된다.
"호변이성질체"는 에놀-케토 및 이민-에나민 호변이성질체, 또는 피라졸, 이미다졸, 벤즈이미다졸, 트리아졸 및 테트라졸과 같은 -N=C(H)-NH- 고리 원자 배열을 함유하는 헤테로아릴 기의 호변이성질체 형태와 같이 원자의 전자 결합 및/또는 양성자의 부위만 다른 분자의 대체 형태를 의미한다. 당업자는 다른 호변이성질체 고리 원자 배열이 가능하다는 것을 인식할 것이다.
용어 "또는 이의 염, 용매화물 또는 입체이성질체"는 대상 화합물의 입체이성질체의 약제학적으로 허용되는 염의 용매화물과 같은 염, 용매화물 및 입체이성질체의 모든 순열(permutation)을 포함하는 것으로 이해할 것이다.
용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 임의의 아이소타입의 항체 또는 면역글로불린 (예를 들어, IgG (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4), IgE, IgD, IgA, IgM 등), 전체 항체 (예를 들어, 차례로 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 2개의 이량체로 구성된 사량체로 구성된 항체); 단일 사슬 항체 (예를 들어, scFv); 이에 제한되는 것은 아니나, Fab, Fv, scFv, 및 Fd 단편을 포함하는, 항원에 대한 특이적 결합을 유지하는 항체의 단편 (예를 들어, 전체 또는 단일 사슬 항체의 단편), 키메라 항체, 인간화된 항체, 단일 사슬 항체, 및 항체 및 비-항체 단백질의 항원 결합 부분을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 항체는, 예를 들어, 방사성 동위원소, 검출가능 산물을 생성하는 효소, 형광 단백질 등으로 검출가능하게 표지될 수 있다. 항체는 다른 모이어티, 예컨대 특이적 결합 쌍의 구성원, 예를 들어, 비오틴 (비오틴-아비딘 특이적 결합 쌍의 구성원) 등에 추가로 접합될 수 있다. 항체는 또한, 이에 제한되는 것은 아니나, 폴리스티렌 플레이트 또는 비드 등을 포함하는 고체 지지체에 결합될 수 있다. 또한, 상기 용어에는 Fab', Fv, F(ab')2, 및 또는 항원에 대한 특이적 결합을 유지하는 다른 항체 단편, 및 단일클론 항체가 포함된다. 항체는 1가 또는 2가일 수 있다.
"항체 단편"은 온전한 항체의 일부, 예를 들어, 온전한 항체의 항원 결합 영역 또는 가변 영역를 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디(diabody); 선형 항체 (Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); 단일 사슬 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다. 항체의 파파인 분해는, 각각 단일 항원 결합 부위를 갖는 "Fab" 단편이라고 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편과, 쉽게 결정화할 수 있는 능력을 반영한 명칭인 잔류 "Fc" 단편을 생산한다. 펩신 처리는 2개의 항원 조합 부위를 가져 항원에 가교 결합 가능한 F(ab')2 단편을 수득한다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 단단하게 비-공유 회합된 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 각 가변 도메인의 3개의 CDR이 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상에서 항원 결합 부위를 한정하는 것이 이러한 입체구성이다. 집합적으로, 6개의 CDR이 항체에 대한 항원 결합 특이성을 부여한다. 하지만, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)도, 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도를 갖지만, 항원을 인식하여 그에 결합할 수 있는 능력을 갖는다.
"Fab" 단편도 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. Fab 단편은 항체 힌지 영역의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에서 소수의 잔기들이 추가되어서 Fab' 단편과는 다르다. Fab'-SH는 본 명세서에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리 티올 기를 함유하는 Fab'에 대한 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 Fab' 단편들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 제조되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 공지되어 있다.
임의의 척추동물 종의 항체 (면역글로불린)의 "경쇄"는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파와 람다라고 불리는 2개의 명백하게 구분되는 유형들 중 하나로 지정될 수 있다. 면역글로불린은, 이들의 중쇄 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 서로 다른 클래스로 지정될 수 있다. 면역글로불린의 5가지 주요 클래스는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 있고, 이들 중 다수는 하위 클래스 (아이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 더 세분화될 수 있다.
"단일 사슬 Fv" 또는 "sFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에 존재한다. 일부 측면에서, Fv 폴리펩티드는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 더 포함하는데, 이것은 sFv가 항원 결합에 바람직한 구조를 형성할 수 있게 한다.
용어 "디아바디"는 2개의 항원 결합 부위를 가진 작은 항체 단편을 가리키는데, 이 단편은 동일한 폴리펩티드 사슬에서 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH) (VH-VL)을 포함한다. 너무 짧아서 동일한 사슬 상의 2개의 도메인 사이에서 쌍 형성을 할 수 없는 링커를 사용함으로써, 상기 도메인들이 또 다른 사슬의 상보적인 도메인과 쌍을 형성하여 2개의 항원 결합 부위를 생성하게끔 강제한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "친화도"는 두 작용제의 가역적인 결합에 대한 평형 상수를 지칭하며, 해리 상수 (Kd)로 표현된다. 친화도는 무관한 아미노산 서열에 대한 항체의 친화도보다 적어도 1배 초과, 적어도 2배 초과, 적어도 3배 초과, 적어도 4배 초과, 적어도 5배 초과, 적어도 6배 초과, 적어도 7배 초과, 적어도 8배 초과, 적어도 9배 초과, 적어도 10배 초과, 적어도 20배 초과, 적어도 30배 초과, 적어도 40배 초과, 적어도 50배 초과, 적어도 60배 초과, 적어도 70배 초과, 적어도 80배 초과, 적어도 90배 초과, 적어도 100배 초과, 또는 적어도 1000배 초과, 또는 그 이상일 수 있다. 표적 단백질에 대한 항체의 친화도는, 예를 들어, 약 100 나노몰 (nM) 내지 약 0.1 nM, 약 100 nM 내지 약 1 피코몰 (pM), 또는 약 100 nM 내지 약 1 펨토몰 (fM) 또는 그 이상일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "결합력"은 2개 이상의 작용제 복합체의 희석 후 해리에 대한 저항성을 나타낸다. 용어 "면역반응성" 및 "~에 우선적으로 결합하다"는 본 명세서에서 항체 및/또는 항원 결합 단편에 관하여 서로 교환적으로 사용된다.
용어 "~에 결합하는"은, 예를 들어, 염 다리(salt bridge) 및 물 다리(water bridge)와 같은 상호작용을 포함하는, 공유, 정전기적, 소수성, 및 이온성 및/또는 수소-결합 상호작용으로 인한 두 분자 간의 직접적인 회합을 나타낸다. 대상 (subject) 항-넥틴-4 항체는 넥틴-4 폴리펩티드, 예컨대 인간 넥틴-4 폴리펩티드, 예를 들어, 글리코실화된 넥틴-4 또는 이의 단편 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 비-특이적 결합이란 약 10-7 M 미만의 친화도로 결합하는 것, 예를 들어, 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M 등의 친화도로 결합하는 것을 의미한다.
항체 및 항원의 내용에서 용어 "~에 특이적으로 결합하다"는 항체가, 예를 들어, 약 105 M-1 이상의 친화도 또는 Ka (즉, 1/M의 단위를 갖는 특정 결합 상호작용의 평형 회합 상수)로 항원에 결합하거나 또는 항원과 회합한다는 것을 의미한다.
"고친화도" 결합은 적어도 107 M-1, 적어도 108 M-1, 적어도 109 M-1, 적어도 1010 M-1, 적어도 1011 M-1, 적어도 1012 M-1, 적어도 1013 M-1, 또는 그 이상의 Ka로 결합함을 가리킨다. 다르게는, 친화도는 M의 단위 (예를 들어, 10-5 M 내지 10-13 M, 또는 그 이하)를 갖는 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수 (KD)로 정의될 수 있다. 일부 구현예에서, 특이적 결합은 항체가 약 10-5 M 이하, 약 10-6 M 이하, 약 10-7 M 이하, 약 10-8 M 이하, 또는 약 10-9 M 이하, 10-10 M, 10-11 M, 또는 10-12 M 또는 그 이하의 KD로 항원에 결합한다는 것을 의미한다. 항원에 대한 항체의 결합 친화도는 통상적인 기술을 사용하여, 예를 들어, 경쟁적 ELISA (효소-결합 면역흡착 검정), 평형 투석에 의해, 표면 플라스몬 공명 (SPR) 기술 (예를 들어, BIAcore 2000 장비, 제조업체에 의해 개괄된 일반적인 절차를 사용함)의 사용; 방사선 면역 검정; 등에 의해 쉽게 측정될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 모두의 가변 영역 내에서 발견된 인접하지 않은 항원 조합 부위를 의미하고자 한 것이다. CDR은 문헌 [Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977)]; [Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of immunological interest" (1991)]; [Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]; 및 [MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)]에 기재되어 있으며, 상기 정의들은 서로에 대해 비교할 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 하위군도 포함한다. 하지만, 항체 또는 이식된 항체 또는 이들의 변이체의 CDR을 의미하는 정의 중 하나를 적용함에 있어서는 본 명세서에서 정의되고 사용된 용어의 범위 내에 두고자 한다. 상기 인용된 각 참고문헌들에 정의된 CDR들을 포함하는 아미노산 잔기들을 비교를 위해 하기 표 1에 제시한다.
본 발명의 전반에 걸쳐, 면역글로불린 중쇄 및 면역글로불린 경쇄에서 잔기의 넘버링은 명백하게 본원에 참조로 포함되는 문헌 [MacCallum et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]에서와 같다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항체 가변 영역에 관하여 사용된 용어 "프레임워크"는 항체의 가변 영역 내에서 CDR 영역 이외의 모든 아미노산 잔기들을 의미하고자 한 것이다. 가변 영역 프레임워크는 일반적으로 길이가 약 100-120개의 아미노산의 불연속적인 아미노산 서열이지만, CDR 이외의 아미노산만을 언급하고자 한 것이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "프레임워크 영역"은 CDR에 의해 분리된 프레임워크의 각 도메인을 의미하고자 한 것이다.
"천연(native) Ig 폴리펩티드"는 본 명세서에 기재된 바와 같이 알데하이드가 태깅된 불변 영역이 없는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드다. 천연 폴리펩티드는 천연의 서열 불변 영역을 포함할 수 있거나, 또는 기존의 아미노산 서열 변형 (예컨대 부가, 결실 및/또는 치환)을 갖는 불변 영역을 포함할 수도 있다.
Ig 폴리펩티드의 내용에서, 용어 "불변 영역"은 당업계에 익히 알려져 있는 것으로, Ig 중쇄, 또는 Ig 경쇄의 C-말단 영역을 지칭한다. Ig 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2, 및 CH3 도메인 (및 CH4 도메인, 이때 중쇄는 μ 또는 ε 중쇄임)을 포함한다. 천연 Ig 중쇄에서, CH1, CH2, CH3 (및 존재하는 경우, CH4) 도메인은 중쇄 가변 (VH) 영역 (에 대한 C-말단) 바로 다음부터 시작하고, 길이가 각각 약 100개의 아미노산 내지 약 130개의 아미노산이다. 천연 Ig 경쇄에서, 불변 영역은 경쇄 가변 (VL) 영역 (에 대한 C-말단) 바로 다음부터 시작하고, 길이가 약 100개의 아미노산 내지 120개의 아미노산이다.
"에피토프"는 항체가 결합하는 항원 상의 부위 (예를 들어, 넥틴-4 상의 부위)이다. 에피토프는 단백질의 폴딩 (folding) (예를 들어, 3차 폴딩)에 의해 병치된 인접한 아미노산 또는 비인접한 아미노산 둘 다로부터 형성될 수 있다. 인접한 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매에 노출시 유지되는 반면, 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매로 처리시 손실된다. 에피토프는 일반적으로 선형 또는 공간적 입체구조 내에 적어도 3개, 및 보다 일반적으로는 적어도 5개 또는 8-10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간적 입체구조를 측정하는 방법으로는, 예를 들어, x-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed (1996)]을 참조한다. 수개의 상용 실험실에서 에피토프 맵핑 서비스를 제공한다. 막 결합된 항원과 면역반응성인 항체에 의해 결합된 에피토프는 세포의 표면 상에 (예를 들어, 막관통 단백질의 세포외 영역에) 존재함으로써, 이러한 에피토프들은 세포 표면에 접근가능하고, 용매에 접근가능하고/하거나, 세포 표면에 노출되는 것으로 간주된다.
폴리펩티드, 펩티드 또는 단백질의 아미노산 서열에 관하여 사용된 "유전적으로 암호화가능한"이라는 말은, 아미노산 서열이 해당 아미노산 서열을 암호화하는 핵산의 전사 및 번역에 의해 생성될 수 있는 아미노산 잔기들로 구성되며, 이 경우 전사 및/또는 번역은 세포에서 또는 무세포 시험관 내 전사/번역 시스템에서 이루어질 수 있음을 의미한다.
용어 "대조군 서열"은 특정 발현 시스템, 예컨대 포유류 세포, 박테리아 세포, 무세포 합성 등에서 작동가능하게 연결된 암호화 서열의 발현을 촉진하는 DNA 서열을 나타낸다. 원핵생물 시스템에 적합한 대조군 서열은, 예를 들어, 프로모터, 선택적으로 작동자 서열 및 리보좀 결합 부위를 포함한다. 진핵생물 세포 시스템은 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 이용할 수 있다.
한 핵산이 또 다른 핵산 서열과 기능적인 관계에 놓일 때 "작동가능하게 연결된다". 예를 들어, 전구서열 또는 분비성 리더 서열에 대한 DNA는, 한 폴리펩티드의 분비에 참여하는 전구단백질로서 발현되는 경우에 해당 폴리펩티드에 대한 DNA에 작동가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는, 암호화 서열의 전사에 영향을 미치는 경우에 해당 암호화 서열에 작동가능하게 연결되거나; 또는 리보좀 결합 부위는 번역의 시작을 촉진하기 위해 위치된 경우에 암호화 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"이라는 말은, 연결되는 DNA 서열이 인접하여 있고, 분비성 리더 서열의 경우에는, 인접하여 리딩 프레임 내에 있다는 것을 의미한다. 연결은 결찰에 의해 또는 증폭 반응을 통해 달성된다. 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커들이 통상적인 실시에 따라 서열들을 연결하는데 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "발현 카세트"는 (예를 들어, 관심대상 작제물로의 결찰과 상용가능한 제한 부위의 사용에 의해, 또는 관심대상 작제물 또는 숙주 세포 게놈으로의 상동 재조합에 의해) 핵산에 삽입될 수 있는 핵산, 일반적으로는 DNA의 세그먼트를 가리킨다. 일반적으로, 핵산 세그먼트는 관심대상 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 카세트 및 제한 부위는 전사와 번역에 적절한 리딩 프레임에서 카세트의 삽입이 용이하도록 설계된다. 발현 카세트는 숙주 세포, 예를 들어, 포유류 숙주 세포에서 관심대상 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 발현을 촉진하는 요소들도 포함할 수 있다. 이러한 요소들은, 이에 제한되지는 않지만, 프로모터, 최소 프로모터, 인핸서, 반응 요소, 종결자 서열, 폴리아데닐화 서열 등을 포함할 수 있다.
"단리된" 항체는 이의 천연 환경의 성분으로부터 확인되어 분리 및/또는 회수된 것이다. 이의 천연 환경의 오염 성분들은 해당 항체에 대한 진단적 또는 치료적 사용을 방해하는 물질들로서, 효소, 호르몬, 및 기타 단백질성 또는 비단백질성 용질들을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 (1) 로우리 (Lowry) 방법에 의해 측정시, 항체의 중량을 기준으로 90% 초과, 95% 초과, 또는 98% 초과, 예를 들어, 중량 기준 99% 초과까지, (2) 회전 컵 서열분석기 (spinning cup sequenator)의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 은 염색을 사용하는 환원성 또는 비환원성 조건 하에 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)에 의해 균질한 정도까지 정제될 것이다. 단리된 항체는 해당 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않기 때문에, 재조합 세포 내 동일반응계에서 해당 항체를 포함한다. 경우에 따라서는, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
용어 "천연 항체"는 다세포성 유기체의 면역 시스템에 의해 항체의 중쇄 및 경쇄가 만들어져 쌍이 형성된 항체를 지칭한다. 비장, 림프절, 골수 및 혈청이 천연 항체를 생성하는 조직의 예이다. 예를 들어, 항원으로 면역화시킨 제1 동물로부터 단리된 항체 생산 세포에 의해 생산된 항체는 천연 항체이다.
용어 "인간화된 항체" 또는 "인간화된 면역글로불린"은 상응하게 위치된 인간 항체의 아미노산으로 치환된 (예를 들어, 프레임워크 영역, 불변 영역 또는 CDR 내의) 하나 이상의 아미노산을 함유하는 비-인간 (예를 들어, 마우스 또는 토끼) 항체를 나타낸다. 일반적으로, 인간화된 항체들은, 동일한 항체의 비-인간화된 형태와 비교하였을 때, 인간 숙주에서 감소된 면역 반응을 나타낸다. 항체는, 예를 들어, CDR-이식, 베니어링(veneering) 또는 리서페이싱(resurfacing), 사슬 셔플링(shuffling) 등을 비롯하여 해당 분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 인간화될 수 있다. 특정 구현예에서, 프레임워크 치환은 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기들을 확인하기 위한 CDR과 프레임워크 잔기들의 상호작용 모델링 및 특정 위치에서 흔치 않은 프레임워크 잔기를 확인하기 위한 서열 비교에 의해 확인된다. 따라서, 상기 기재된 항체들은 해당 분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 인간화될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 명세서에 개시된 항체 분자들은 본 명세서에 제공된 가변 중쇄 영역과 UniProt: P01857-1, 버전 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1 불변 영역을 포함하는 중쇄를 포함한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 개시된 항체 분자들은 본 명세서에 제공된 가변 경쇄 영역 및 인간 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 특정 구현예에서, 인간 경쇄 불변 영역은 UniProtKB/Swiss-Prot: P01834.2에 제시된 아미노산을 갖는 인간 카파 경쇄 불변 영역이다. 특정 구현예에서, 대상 항체에 존재하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역은 돌연변이, 예를 들어 Fc 기능을 조절하기 위한 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, LALAPG 이펙터 기능 돌연변이 (L234A, L235A 및 P329G) 또는 N297A 돌연변이를 도입하여 항체 의존형 세포성 세포독성 (ADCC)을 감소시킬 수 있다. 경우에 따라, P329G 돌연변이 없이 L234A 및 L235A 돌연변이만 사용되는 경우도 있다. 치환 넘버링은 EU 넘버링 시스템을 기반으로 한다. "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 인덱스"는 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 잔기를 언급할 때 일반적으로 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에 보고된 EU 인덱스). "카바트에서의 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 가리킨다.
용어 "키메라 항체"는 통상적으로 경쇄 및 중쇄 유전자가 서로 다른 종들에 속하는 항체 가변 및 불변 영역 유전자들로부터 유전 공학에 의해 작제된 항체를 지칭한다. 예를 들어, 마우스 단일클론 항체 유전자의 가변 세그먼트는 인간 불변 세그먼트, 예컨대 감마 1 및 감마 3에 결합될 수 있다. 치료적 키메라 항체의 예로는 마우스 항체의 가변 또는 항원 결합 도메인 및 인간 항체의 불변 또는 이펙터 도메인으로 구성된 하이브리드 단백질을 들 수 있지만, 다른 포유류 종의 도메인들도 사용될 수도 있다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드", 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체 형태를 지칭하기 위해 본 명세서에서 서로 교환하여 사용된다. 달리 명시하지 않는 한, "폴리펩티드", "펩티드", 및 "단백질"은 유전적으로 암호화 및 비-암호화된 아미노산, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형 또는 유도체화된 아미노산, 및 변형된 펩티드 백본을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 상기 용어는, 이에 제한되는 것은 아니나, 이종성 아미노산 서열을 갖는 융합 단백질, 이종성 및 상동성 리더 서열을 갖는 융합체, (예를 들어, 재조합 숙주 세포에서 생산을 촉진하기 위해) 적어도 하나의 N-말단 메티오닌 잔기를 함유하는 단백질; 면역학적으로 태깅된 단백질; 등을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 항체의 내용에서, 사슬 또는 도메인이 폴리펩티드를 포함한다는 것은 명백하다.
"천연 아미노산 서열" 또는 "모체 아미노산 서열"은 변형된 아미노산 잔기를 포함시키기 위한 변형 전의 폴리펩티드의 아미노산 서열을 가리키기 위해 본 명세서에서 서로 교환하여 사용된다.
용어 "아미노산 유사체", "비천연 아미노산" 등은 서로 교환하여 사용될 수 있고, 자연 발생 단백질에서 흔히 발견되는 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, Ala 또는 A, Cys 또는 C, Asp 또는 D, Glu 또는 E, Phe 또는 F, Gly 또는 G, His 또는 H, Ile 또는 I, Lys 또는 K, Leu 또는 L, Met 또는 M, Asn 또는 N, Pro 또는 P, Gln 또는 Q, Arg 또는 R, Ser 또는 S, Thr 또는 T, Val 또는 V, Trp 또는 W, Tyr 또는 Y)과 구조 및/또는 전반적인 형상이 유사한 아미노산 유사 화합물들을 포함한다. 아미노산 유사체는 변형된 측쇄 또는 백본을 가진 천연 아미노산들도 포함한다. 아미노산 유사체는 아미노산 유사체의 자연 발생 D-형태뿐만 아니라 L-형태와 동일한 입체화학을 갖는 아미노산 유사체들도 포함한다. 경우에 따라서는, 아미노산 유사체들은 하나 이상의 천연 아미노산의 백본 구조 및/또는 측쇄 구조를 공유하며, 해당 분자에서 하나 이상의 변형된 기에서 차이가 있다. 이러한 변형으로는, 이에 제한되지는 않지만, 관련 원자 (예컨대, S)에 대한 원자 (예컨대, N)의 치환, 기 (예컨대, 메틸 또는 히드록실 등) 또는 원자 (예컨대, Cl 또는 Br 등)의 부가, 기의 결실, 공유 결합의 치환 (이중 결합에 대한 단일 결합의 치환 등), 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 유사체는 α-히드록시 산, 및 α-아미노산 등을 포함할 수 있다.
용어 "아미노산 측쇄" 또는 "아미노산의 측쇄" 등은 천연 아미노산, 비천연 아미노산 및 아미노산 유사체를 포함한, 아미노산 잔기의 α-탄소에 부착된 치환체를 나타내는데 사용될 수 있다. 아미노산 측쇄는 본 명세서에 기재된 변형된 아미노산 및/또는 접합의 내용에서 기재된 아미노산 측쇄들도 포함할 수 있다.
용어 "접합된"은 관심대상인 한 분자와 관심대상인 제2 분자를 근위에서 회합시키는, 공유 또는 비-공유, 일반적으로는 공유의 화학적 연결을 일반적으로 지칭한다. 일부 구현예에서, 작용제는 반감기 연장 모이어티, 표지제 및 치료제로부터 선택된다. 반감기 연장을 위해, 예를 들어, 본 발명의 항체는 개선된 약물동태 프로파일을 제공하도록 (예컨대, PEG화, 과글리코실화(hyperglycosylation) 등에 의해) 선택적으로 변형시킬 수 있다. 혈청 반감기를 향상시킬 수 있는 변형은 관심대상이다.
용어 "탄수화물" 등은 단당류, 이당류, 올리고당류 및 다당류의 단량체 단위 및/또는 중합체를 지칭하는데 사용될 수 있다. 용어 "당"은 더 작은 탄수화물, 예컨대 단당류, 이당류를 지칭하는데 사용될 수 있다. 용어 "탄수화물 유도체"는 관심대상 탄수화물의 하나 이상의 작용기가 치환 (임의의 적절한 치환기로 대체)되거나, 변형 (임의의 적절한 화학법을 사용하여 또 다른 기로 전환)되거나, 또는 부재하는 (예컨대, 제거되거나 H로 대체된) 화합물을 포함한다. 다양한 탄수화물과 탄수화물 유도체들이 이용가능하고, 대상 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 조정될 수도 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "단리된"은 화합물이 자연적으로 발생하는 환경과 다른 환경에 있는 관심 화합물을 기술하는 것을 의미한다. "단리된"은 관심 화합물이 실질적으로 풍부한 샘플 및/또는 관심 화합물이 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 샘플 내에 있는 화합물을 포함하는 의미이다.
본 명세서에서 사용된 "실질적으로 정제된"이라는 용어는 이의 자연 환경으로부터 제거되고, 자연적으로 연관된 다른 성분들로부터 적어도 60%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 98% 이상 유리된 화합물을 의미한다.
용어 "생리학적 조건"은 살아있는 세포에 친화적인 조건, 예를 들어, 주로 살아있는 세포에 친화적인 온도, pH, 염도 등의 수성 조건을 포괄하는 의미이다.
"반응 파트너"는 또 다른 반응 파트너와 특이적으로 반응하여 반응 생성물을 생성하는 분자 또는 분자 모이어티를 의미한다. 예시적인 반응 파트너에는 설파타제 모티프의 시스테인 또는 세린 및 포밀글리신 생성 효소(FGE)가 포함되며, 이는 모티프에서 시스테인 또는 세린 대신에 포밀글리신(fGly)을 함유하는 전환된 알데히드 태그의 반응 생성물을 형성하기 위해 반응한다. 다른 예시적인 반응 파트너에는 전환된 알데히드 태그 (예를 들어, 반응성 알데히드 기)의 fGly 잔기의 알데히드 및 알데히드-반응성 기 및 관심 모이어티를 포함하는 "알데히드-반응성 반응 파트너"가 포함되고, 이는 반응하여 fGly 잔기를 통해 폴리펩티드에 접합된 관심 모이어티를 갖는 폴리펩티드의 반응 생성물을 형성한다.
"N-말단"은 유리 아민기를 갖는 폴리펩티드의 말단 아미노산 잔기를 의미하며, N-말단이 아닌 아미노산 잔기의 아민기는 일반적으로 폴리펩티드의 공유 백본의 일부를 형성한다.
"C-말단"은 유리 카복실기를 갖는 폴리펩티드의 말단 아미노산 잔기를 의미하며, C-말단이 아닌 아미노산 잔기의 카복실기는 일반적으로 폴리펩티드의 공유 백본의 일부를 형성한다.
폴리펩티드 또는 폴리펩티드의 아미노산 서열과 관련하여 사용된 "내부 부위(internal site)"는 N-말단 또는 C-말단이 아닌 폴리펩티드의 영역을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료", "치료하는" 등은 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 의미한다. 상기 효과는 질환 또는 그 증상을 완전히 또는 부분적으로 방지하는 측면에서 예방적일 수 있고/있거나, 질환 및/또는 해당 질환에 기인하는 부작용에 대한 부분적인 또는 완전한 치유의 측면에서 치료적일 수도 있다. 본 명세서에 사용된 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서 질환에 대한 임의의 치료를 포함하고, (a) 질환에 취약할 수도 있지만 아직 해당 질환에 걸린 것으로 진단되지 않은 대상체에서 해당 질환의 발생을 방지하는 것; (b) 질환을 억제하는 것, 예를 들어, 해당 질환의 발달을 중지시키는 것; 및 (c) 질환을 완화하는 것, 예를 들어, 해당 질환의 퇴행을 유발하는 것을 포함한다.
본 명세서에서 서로 교환하여 사용되는 용어 "개체", "대상체", "숙주", 및 "환자"는, 이에 제한되는 것은 아니나, 쥐과(murine) (랫트, 마우스), 비-인간 영장류, 인간, 개, 고양이, 유제류 (예를 들어, 말, 소, 양, 돼지, 염소) 등을 포함하는 포유동물을 지칭한다.
"치료적 유효량" 또는 "효과적인 양"은, 질환을 치료하기 위해 포유동물 또는 다른 대상체에 투여될 때, 해당 질환에 대한 이러한 치료가 유효하기에 충분한 대상 항-넥틴-4 Ab의 양을 가리킨다. "치료적 유효량"은 항-넥틴-4 Ab, 해당 질환과 그의 중증도 및 치료되는 대상체의 나이, 체중 등에 따라 달라질 것이다.
본 발명을 더 기술하기 전에, 본 발명은 기재된 특정 구현예들로 한정되지 않으며, 물론 변형될 수도 있다는 것을 이해해야 한다. 또한, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 한정되기 때문에, 본 명세서에 사용된 용어들은 단지 특정 구현예들을 설명하기 위한 것이지 한정하려는 것이 아니다.
값들의 범위가 제공되는 경우, 문맥상 달리 명백하게 언급되지 않는 한, 하한 단위의 10분의 1까지, 해당 범위의 상한과 하한 사이에 있는 각 중간 값과 상기 언급된 범위 내에서 언급된 임의의 다른 값 또는 중간 값들도 본 발명에 포함되는 것으로 이해한다. 이러한 더 작은 범위의 상한과 하한은 더 작은 범위 내에 독립적으로 포함될 수 있으며, 언급된 범위에서 구체적으로 배제된 임의의 한계에 따라 본 발명에 포함된다. 언급된 범위가 한계값 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 포함된 한계값 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위도 본 발명에 포함된다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 과학 기술 용어들은 본 발명이 속하는 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기재된 것들과 유사하거나 동일한 방법과 재료들도 본 발명을 실시하거나 시험하는데 사용될 수 있지만, 바람직한 방법과 재료들을 이제 설명한다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물들은 해당 간행물들에 인용된 것과 관련된 방법 및/또는 물질들을 개시하고 설명하기 위해 본 명세서에 참조로 포함된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥상 달리 명백하게 언급하지 않는 한 복수의 지시대상도 포함한다는 점에 유의해야 한다. 따라서, 예를 들어, "하나의 항체"에 대한 언급은 복수의 이러한 항체들도 포함하고, "상기 CDR"은 하나 이상의 CDR 및 당업자에게 공지된 그의 균등물 등에 대한 언급도 포함한다. 또한, 청구범위는 임의의 선택적 요소를 배제하도록 작성될 수 있다. 이와 같이, 이러한 진술은 청구항 요소들의 언급, 또는 "부정적" 제한의 사용과 관련하여 "오직", "단지" 등과 같은 이러한 배타적인 용어의 사용에 대한 선행적인 근거 역할을 하고자 한 것이다.
본 명세서에서 논의된 간행물들은 본 출원의 출원일 전에 개시된 것만이 제공된다. 본 명세서에서 그 어떠한 것들도 본 발명이 선행 발명으로 인해 이러한 간행물을 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 또한, 제공된 공개일은 실제 공개일과 상이할 수 있으며 이것은 독립적으로 확인될 필요가 있다.
상세한 설명
본 발명은 넥틴-4에 특이적인 항체를 제공한다. 본 발명은 넥틴-4에 특이적인 이러한 항체를 포함하는 항체 접합체, 예를 들어, ADC도 제공한다. 본 발명은 그러한 항체 및 접합체의 생산 방법과 그 사용 방법을 제공한다. 각각의 구현예들은 하기 섹션에서 보다 상세하게 설명된다. 또한, 본 발명의 항체 및/또는 ADC를 포함하는 조성물이 제공되며, 일부 예시에서는 약제학적 조성물이 포함된다. 특정 측면에서, 세포 증식성 질환을 갖는 개체에게 본 발명의 ADC의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 ADC의 사용 방법이 제공된다.
넥틴-4 항체 및 이의 항체-약물 접합체
위에 요약된 바와 같이, 본 발명은 넥틴-4에 특이적인 항체 및 이러한 항체의 접합체 (예를 들어, 항체-약물-접합체(ADC))를 제공한다. 또한, 본 발명은 fGly 잔기를 포함하는 항-넥틴-4 항체를 제공한다.
항체-약물 접합체 (ADC)
본 발명은 넥틴-4에 특이적인 항체의 접합체, 예를 들어, ADC를 제공한다. "접합체"는 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)가 관심 부분 (예를 들어, 약물 또는 활성제)에 공유결합으로 부착된다는 것을 의미한다. 예를 들어, 본 발명에 따른 항체-약물 접합체는 항체에 공유결합으로 부착된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 포함한다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드(예를 들어, 항체) 및 하나 이상의 약물 또는 활성제는 하나 이상의 작용기 및 공유 결합을 통해 서로 결합된다. 예를 들어, 하나 이상의 작용기 및 공유 결합은 본 명세서에 기술된 절단가능한 링커와 같은 링커를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 접합체는 하나 이상의 다른 모이어티에 접합된 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)를 포함하는 폴리펩티드 접합체이다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드에 접합된 하나 이상의 모이어티는 각각 독립적으로 약물, 활성제, 검출 가능한 표지, 수용성 중합체, 또는 막 또는 표면에 폴리펩티드를 고정시키기 위한 모이어티와 같은 다양한 관심 모이어티 중 임의의 것일 수 있으나, 이에 제한되진 않는다. 특정 구현예에서, 접합체는 약물 접합체이고, 이때 폴리펩티드는 항체이므로, 항체-약물 접합체를 제공한다. 예를 들어, 접합체는 약물 접합체 일 수 있는데, 이때 폴리펩티드는 하나 이상의 약물 또는 활성제에 접합되어 있다. 다양한 유형의 약물 및 활성제가 접합체에 사용될 수 있으며 아래에 더 자세히 설명되어 있다.
하나 이상의 약물 또는 활성제는 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)의 임의의 원하는 부위에서 폴리펩티드에 접합될 수 있다. 따라서, 본 발명은, 예를 들어, 폴리펩티드의 C-말단 또는 그 근처 부위에 접합된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 갖는 폴리펩티드를 제공한다. 다른 예로는 폴리펩티드의 N-말단 또는 그 근처 위치에 접합된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 갖는 폴리펩티드가 포함된다. 예를 들어, 폴리펩티드의 C-말단과 N-말단 사이의 위치 (예를 들어, 폴리펩티드의 내부 부위)에 접합된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 갖는 폴리펩티드도 포함된다. 또한, 폴리펩티드가 둘 이상의 약물 또는 활성제에 접합되는 경우 위의 조합들도 가능하다.
특정 구현예에서, 본 발명의 접합체는 아미노산 잔기의 α-탄소에서 폴리펩티드의 아미노산 잔기에 접합된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 포함한다. 다른 방식으로 말하면, 접합체는 폴리펩티드 내 하나 이상의 아미노산 잔기의 측쇄가 변형되어 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된 폴리펩티드를 포함한다 (예를 들어, 본 명세서에서 기술된 링커를 통해 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된 폴리펩티드). 예를 들어, 접합체는 폴리펩티드 내 하나 이상의 아미노산 잔기의 α-탄소가 변형되어 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된 폴리펩티드를 포함한다. (예를 들어, 본 명세서에 기술된 링커를 통해 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된 폴리펩티드).
본 발명의 구현예는 폴리펩티드가 하나 이상의 모이어티, 예컨대, 2개의 모이어티, 3개의 모이어티, 4개의 모이어티, 5개의 모이어티, 6개의 모이어티, 7개의 모이어티, 8개의 모이어티, 9개의 모이어티, 또는 10개 이상의 모이어티에 접합된 접합체를 포함한다. 모이어티는 폴리펩티드의 하나 이상의 부위에서 폴리펩티드에 접합될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 모이어티가 폴리펩티드의 단일 아미노산 잔기에 접합될 수 있다. 일부 경우에, 1개의 모이어티가 폴리펩티드의 아미노산 잔기에 접합된다. 다른 구현예에서, 2개의 모이어티가 폴리펩티드의 동일한 아미노산 잔기에 접합될 수 있다. 다른 구현예에서, 제1 모이어티는 폴리펩티드의 제1 아미노산 잔기에 접합되고, 제2 모이어티는 폴리펩티드의 제2 아미노산 잔기에 접합된다. 다른 구현예에서, 2개의 모이어티가 폴리펩티드의 제1 아미노산 잔기에 접합될 수 있고, 2개의 모이어티가 폴리펩티드의 제2 아미노산 잔기에 접합될 수 있다. 상기 조합들도 가능하며, 예를 들어, 폴리펩티드가 제1 아미노산 잔기에서 제1 모이어티에 접합되고 제2 아미노산 잔기에서 2개의 다른 모이어티에 접합될 수 있다. 제1 아미노산 잔기에서 제1 및 제2 모이어티에 접합되고 제2 아미노산 잔기에서 제3 및 제4 모이어티에 접합된 폴리펩티드 등과 같은 다른 조합도 가능하지만, 이에 제한되진 않는다.
하나 이상의 관심 모이어티에 접합된 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산 잔기는 자연 발생 아미노산, 비천연(unnatural) 아미노산, 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들어, 접합체는 폴리펩티드의 자연 발생 아미노산 잔기에 접합된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 포함할 수 있다. 다른 경우에, 접합체는 폴리펩티드의 비천연 아미노산 잔기에 접합된 하나 이상의 약물 또는 활성제를 포함할 수 있다. 하나 이상의 약물 또는 활성제는 본 명세서에 기술된 바와 같이 천연 또는 비천연 단일 아미노산 잔기에서 폴리펩티드에 접합될 수 있다. 폴리펩티드 내의 하나 이상의 천연 또는 비천연 아미노산 잔기는 본 명세서에 기재된 바와 같은 모이어티 또는 모이어티들에 접합될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 내의 2개 (또는 그 이상)의 아미노산 잔기 (예를 들어, 천연 또는 비천연 아미노산 잔기)는 각각 하나 이상의 모이어티에 접합될 수 있고, 폴리펩티드 내의 그러한 다중 부위는 하나 이상의 관심 모이어티에 접합된다.
특정 구현예에서, 폴리펩티드 (예를 들어, 항체) 및 관심 모이어티 (예를 들어, 약물 또는 활성제)는 접합 모이어티(conjugation moiety)를 통해 접합된다. 예를 들어, 폴리펩티드 및 관심 모이어티는 각각 접합 모이어티에 결합 (예를 들어, 공유 결합)될 수 있으며, 이에 따라 접합 모이어티를 통해 폴리펩티드 및 관심 모이어티를 함께 간접적으로 결합할 수 있다. 일부 경우에, 접합 모이어티는 히드라지닐-인돌릴(hydrazinyl-indolyl) 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐(hydrazinyl-pyrrolo-pyridinyl) 화합물, 또는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물의 유도체를 포함한다. 예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 관심 모이어티를 폴리펩티드에 커플링시키는 일반적인 반응식은 아래의 일반 반응식에 나와 있다. 또한, 히드라지닐-인돌릴 및 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 본 명세서에서 각각 히드라지노-이소-픽텟-스펭글러 (hydrazino-iso-Pictet-Spengler, HIPS) 접합 모이어티 및 아자-히드라지노-이소-픽텟-스펭글러 (aza-hydrazino-iso-Pictet-Spengler, azaHIPS) 접합 모이어티로도 지칭된다.
위의 반응식에서, 각각의 R은 폴리펩티드에 접합된 (예를 들어, 본 명세서에 기술된 링커를 통해 폴리펩티드에 접합된) 관심 모이어티 (예를 들어, 약물 또는 활성제)를 독립적으로 포함하되, 이때 n은 0 또는 1부터 4까지의 정수이다. 위 반응식에 나타낸 바와 같이, 접합 모이어티 (예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티)는 하나 이상의 약물 또는 활성제인 R에 부착된다. 2-포르밀글리신 잔기(fGly)를 포함하는 폴리펩티드 (예: 항체)는 접합 모이어티와 반응하여 폴리펩티드(예: 항체) 접합체를 생성하고, 이에 따라 접합 모이어티를 통해 하나 이상의 약물 또는 활성제를 폴리펩티드에 부착한다.
본 명세서에 기술된 바와 같이, 관심 모이어티 (본 명세서에서 "페이로드(payload)"라고도 함)은 검출 가능한 표지와 같은 화학 엔티티(entity), 약물 또는 활성제와 같은 임의의 다양한 모이어티를 포함하지만, 이에 제한되진 않는다. R' 및 R"는 각각 독립적으로 임의의 원하는 치환체일 수 있는데, 예컨대, 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴일 수 있으나, 이에 제한되진 않는다. Z는 CR21, NR22, N, O 또는 S일 수 있으며, 이때 R21 및 R22는 각각 상기 R' 및 R"에 대해 기술된 임의의 치환체로부터 독립적으로 선택된다.
본 명세서에 기술된 접합체 및 화합물에 나타난 바와 같이, 다른 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티도 가능하다. 예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 하나 이상의 링커에 부착 (예를 들어, 공유결합으로 부착)될 수 있다. 따라서, 본 발명의 구현예는 상응하는 링커를 통해 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 포함한다. 따라서, 본 발명의 접합체는 하나 이상의 링커를 포함할 수 있으며, 이때 각 링커는 하나 이상의 상응하는 약물 또는 활성제를 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착시킨다. 일부 경우에, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 및 하나 이상의 링커는 전체적으로 "분지형 링커(branched linker)"로 간주될 수 있으며, 이때 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 2개 이상의 "분지(branch)"에 부착되되, 이때 각 분지는 약물 또는 활성제에 부착된 링커를 포함한다.
예를 들어, 위 반응식의 일부 경우에, n은 0이므로 하나의 R 기 (예: 약물 또는 활성제)가 링커를 통해 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된다. 다른 경우에, n은 1이고, 따라서 2개의 R 기 (예: 약물 또는 활성제)는 각각 그에 상응하는 링커를 통해 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된다. 이러한 경우, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 및 2개의 링커는 전체적으로 분지형 링커로 간주될 수 있다.
동일하거나 상이한 페이로드의 조합은 분지형 링커를 통해 폴리펩티드에 접합될 수 있다. 특정 구현예에서, 분지형 링커에 부착된 2개의 페이로드 (예: 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)는 동일한 페이로드 (예: 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)이다. 예를 들어, 분지형 링커의 제1 분지는 페이로드(예: 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)에 부착될 수 있고 분지형 링커의 제2 분지는 제1 분지와 동일한 페이로드(예: 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)에 부착될 수 있다.
다른 구현예에서, 분지형 링커에 부착된 2개의 페이로드 (예: 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)는 서로 상이한 페이로드 (예: 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)이다. 예를 들어, 분지형 링커의 제1 분지는 제1 페이로드 (예: 제1 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)에 부착될 수 있고, 분지형 링커의 제2 분지는 제1 분지에 부착된 제1 페이로드 (예: 제1 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)와 상이한 제2 페이로드 (예: 제2 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)에 부착될 수 있다.
히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 약물 또는 활성제에 커플링할 수 있는 링커의 다양한 구현예가 본 명세서에 상세히 기재되어 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 링커는 절단가능한 링커, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 절단가능한 링커이다.
특정 구현예에서, 폴리펩티드는 하나 이상의 관심 모이어티에 접합될 수 있으며, 이때 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산은 하나 이상의 관심 모이어티에 접합되기 전에 변형된다. 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산의 변형은 하나 이상의 관심 모이어티에의 접합에 적합한 하나 이상의 반응성 기를 함유하는 폴리펩티드를 생성할 수 있다. 일부 경우에, 폴리펩티드는 하나 이상의 관심 모이어티에의 접합에 적합한 하나 이상의 반응성 기를 제공하기 위해 하나 이상의 변형된 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드의 아미노산은 반응성 알데히드 기 (예를 들어, 반응성 알데히드)를 포함하도록 변형될 수 있다. 반응성 알데히드는 "알데히드 태그" 또는 "알드-태그(ald-tag)"에 포함될 수 있으며, 본 명세서에서는 포밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 2-포밀글리신 잔기 (본 명세서에서 "fGly"로 지칭함)를 함유하도록 전환된 설파타제 모티프 (예를 들어, L(C/S)TPSR)로부터 유래된 아미노산 서열을 지칭한다. FGE에 의해 생성된 fGly 잔기는 "포밀글리신"으로도 지칭될 수 있다. 다르게 말하면, 본 명세서에서 사용된 용어 "알데히드 태그"는 "전환된" 설파타제 모티프 (즉, 시스테인 또는 세린 잔기가 FGE의 작용에 의해 fGly로 전환된 설파타제 모티프, 예를 들어, L(fGly)TPSR (SEQ ID NO: 245))를 포함하는 아미노산 서열을 지칭한다. 전환된 설파타제 모티프는 "전환되지 않은" 설파타제 모티프 (즉, 시스테인 또는 세린 잔기가 FGE에 의해 fGly로 전환되지 않았지만 전환될 수 있는 설파타제 모티프, 예를 들어, 서열: L(C/S)TPSR의 전환되지 않은 설파타제 모티프)를 포함하는 아미노산 서열로부터 생산될 수 있다. 설파타제 모티프에 대한 포밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용과 관련하여 사용된 "전환"은 설파타제 모티프의 시스테인 또는 세린 잔기가 포밀글리신(fGly) 잔기로 (예를 들어 Cys에서 fGly으로, 또는 Ser에서 fGly으로)의 생화학적 변형을 지칭한다. 알데히드 태그의 추가적인 측면 및 부위-특이적 단백질 변형에서의 이의 용도는 미국 특허 제7,985,783호 및 미국 특허 제8,729,232호에 기재되어 있으며, 각 개시내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 경우에, 접합체를 생성하기 위해, fGly 잔기를 함유하는 폴리펩티드는 fGly과 화합물 (예를 들어, 위에서 설명한 바와 같이, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 함유하는 화합물)과의 반응에 의해 하나 이상의 관심 모이어티에 접합될 수 있다. 예를 들어, fGly-함유 폴리펩티드는 폴리펩티드에 대한 하나 이상의 약물 또는 활성제의 접합을 제공하기에 적합한 조건 하에서 반응성 파트너와 접촉될 수 있다. 일부 경우에, 반응성 파트너는 위에서 설명한 바와 같이 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 약물 또는 활성제는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착될 수 있다. 일부 경우에, 하나 이상의 약물 또는 활성제는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착되고, 예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐에 공유결합으로 부착되되, 이때 각각의 약물 또는 활성제는 상응하는 링커를 통해 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된다.
특정 구현예에서, 본 발명의 접합체는 하나 이상의 관심 모이어티 (예를 들어, 하나 이상의 약물 또는 활성제)에 부착된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 갖는 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)를 포함한다. 접합체를 제조하기 위해, 폴리펩티드의 아미노산 잔기를 변형시킨 후, 위에서 설명한 바와 같이 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된 하나 이상의 약물 또는 활성제에 커플링시킬 수 있다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)의 아미노산 잔기는 위에서 설명한 바와 같이 fGly 잔기로 전환되는 시스테인 또는 세린 잔기이다. 특정 구현예에서, 전환된 아미노산 잔기 (예를 들어, fGly 잔기)는 상기 기재된 바와 같은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 함유하는 하나 이상의 약물 또는 활성제에 접합되어 본 발명의 접합체를 제공하고, 이때 하나 이상의 약물 또는 활성제는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 폴리펩티드에 접합된다. 본 명세서에 사용된 용어 fGly'는 하나 이상의 관심 모이어티 (예를 들어, 하나 이상의 약물 또는 활성제)에 커플링된 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)의 아미노산 잔기를 의미한다.
특정 구현예에서, 접합체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 갖는 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)를 포함하며, 이는 다시 하나 이상의 상응하는 링커를 통해 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착된다. 예를 들어, 접합체는 위에 기술된 바와 같이 하나 이상의 관심 모이어티 (예를 들어, 하나 이상의 약물 또는 활성제)에 접합된 적어도 하나의 아미노산 잔기(fGly')를 갖는 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면은 화학식 Ⅰ의 접합체를 포함한다:
[화학식 Ⅰ]
상기 화학식에서,
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 CR4, N 및 C-LB-W2로부터 독립적으로 선택되고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
R2 및 R3는 각각 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 순환적으로 연결되어 선택적으로 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고;
LA는 제1 링커이고;
LB는 제2 링커이고;
W1은 제1 약물이고;
W2는 제2 약물이고; 및
W3은 폴리펩티드이다.
화학식 Ⅰ의 접합체와 관련된 치환체들은 아래에 보다 상세히 설명되어 있다.
특정 구현예에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 CR4, N 및 C-LB-W2로부터 독립적으로 선택된다. 특정 구현예에서, Z1은 CR4이다. 특정 구현예에서, Z1은 N이다. 특정 구현예에서, Z1은 C-LB-W2이다. 특정 구현예에서, Z2는 CR4이다. 특정 구현예에서, Z2는 N이다. 특정 구현예에서, Z2는 C-LB-W2이다. 특정 구현예에서, Z3은 CR4이다. 특정 구현예에서, Z3은 N이다. 특정 구현예에서, Z3은 C-LB-W2이다. 특정 구현예에서, Z4는 CR4이다. 특정 구현예에서, Z4는 N이다. 특정 구현예에서, Z4는 C-LB-W2이다.
다양한 Z1, Z2, Z3 및 Z4의 조합들도 가능하다. 예를 들어, 일부 경우에서, Z1은 CR4이고, Z2는 CR4이고, Z3은 CR4이고, 및 Z4는 CR4이다. 일부 경우에서, Z1은 N이고, Z2는 CR4이고, Z3은 CR4이고, 및 Z4는 CR4이다. 일부 경우에서, Z1은 C-LB-W2이고, Z2는 CR4이고, Z3은 CR4이고, 및 Z4는 CR4이다. 일부 경우에서, Z1은 CR4이고, Z2는 C-LB-W2이고, Z3은 CR4이고, 및 Z4는 CR4이다. 일부 경우에서, Z1은 CR4이고, Z2는 CR4이고, Z3은 C-LB-W2이고, 및 Z4는 CR4이다. 일부 경우에서, Z1은 CR4이고, Z2는 CR4이고, Z3은 CR4이고, 및 Z4는 C-LB-W2이다.
특정 구현예에서, R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R1은 수소이다. 특정 구현예에서, R1은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R1은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대, C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R1은 알키닐 또는 치환된 알키닐, 예컨대, C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R1은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R1은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R1은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R1은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, R2 및 R3은 각각 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로아릴, 치환된 사이클로아릴, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3은 순환적으로 연결되어 선택적으로 5원 내지 6원 헤테로사이클릴을 형성한다.
특정 구현예에서, R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R2는 수소이다. 특정 구현예에서, R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R2는 메틸이다. 특정 구현예에서, R2는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R2는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R2는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 구현예에서, R2는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 구현예에서, R2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 구현예에서, R2는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 구현예에서, R2는 설포닐이다. 특정 구현예에서, R2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 구현예에서, R2는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R2는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R2는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R2는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R3은 수소이다. 특정 구현예에서, R3은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R3은 메틸이다. 특정 구현예에서, R3은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R3은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R3은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R3은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 구현예에서, R3은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 구현예에서, R3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 구현예에서, R3은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 구현예에서, R3은 설포닐이다. 특정 구현예에서, R3은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 구현예에서, R3은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R3은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R3은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, R2 및 R3은 둘 다 메틸이다.
특정 구현예에서, R2 및 R3은 순환적으로 연결되어 선택적으로 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 구현예에서, R2 및 R3은 순환적으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 구현예에서, R2 및 R3은 순환적으로 연결되어 5원 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 구현예에서, R2 및 R3은 순환적으로 연결되어 6원 헤테로사이클릴을 형성한다.
특정 구현예에서, 각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된다.
각각의 R4에 대한 다양한 가능성은 다음과 같이 자세히 설명된다. 특정 구현예에서, R4는 수소이다. 특정 구현예에서, 각각의 R4는 수소이다. 특정 구현예에서, R4는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 구현예에서, R4는 F이다. 특정 구현예에서, R4는 Cl이다. 특정 구현예에서, R4는 Br이다. 특정 구현예에서, R4는 I이다. 특정 구현예에서, R4는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R4는 메틸이다. 특정 구현예에서, R4는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R4는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R4는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R4는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R4는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 구현예에서, R4는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 구현예에서, R4는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 구현예에서, R4는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 구현예에서, R4는 설포닐이다. 특정 구현예에서, R4는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 구현예에서, R4는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴 (예를 들어, 페닐 또는 치환된 페닐)이다. 특정 구현예에서, R4는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R4는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R4는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, LA는 제1 링커이다. 본 발명의 접합체에 사용될 수 있는 링커의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다.
특정 구현예에서, LB는 제2 링커이다. 본 발명의 접합체에 사용될 수 있는 링커의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다.
특정 구현예에서, W1은 제1 약물 (또는 제1 활성제)이다. 본 발명의 접합체에 사용될 수 있는 약물 및 활성제의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다.
특정 구현예에서, W2는 제2 약물 (또는 제2 활성제)이다. 본 발명의 접합체에 사용될 수 있는 약물 및 활성제의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다.
특정 구현예에서, W3은 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)이다. 특정 구현예에서, W3은 본 명세서에서 기술한 바와 같이, 하나 이상의 fGly'잔기를 포함한다. 　특정 구현예에서, 폴리펩티드는 본 명세서에 기술된 바와 같이 fGly'잔기를 통해 접합체의 나머지 부분에 부착된다.　 본 발명의 접합체에 사용될 수 있는 폴리펩티드 및 항체의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다.
특정 구현예에서, 화학식 Ⅰ의 접합체는 제1 링커인 LA를 포함한다. 제1 링커, LA는 접합 모이어티를 통해 제1 관심 모이어티 (예를 들어, 제1 약물 또는 활성제)를 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)에 결합하는데 사용될 수 있다. 제1 링커, LA는 (본 명세서에서 기술한 바와 같이) 접합 모이어티에 결합 (예를 들어, 공유결합)될 수 있다. 예를 들어, 제1 링커, LA는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 제1 약물 또는 활성제에 결합할 수 있다. 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 제1 링커, LA (따라서 제1 약물 또는 활성제)를 폴리펩티드, 예컨대 항체에 접합하는데 사용될 수 있다.
예를 들어, 상기 화학식 Ⅰ에서와 같이, LA는 접합 모이어티를 통해 W3에 부착되며, 따라서 W3는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 링커 LA에 간접적으로 결합된다. 위에서 기술한 바와 같이, W3은 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)이고, 따라서 LA는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 폴리펩티드 (항체)에 부착되고, 예를 들어, 링커 LA는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 폴리펩티드 (항체)에 간접적으로 결합된다.
대상 접합체 및 화합물의 제1 링커 LA에는 임의의 사용하기 편한 링커가 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 아미노, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 알킬 또는 치환된 알킬 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 알케닐 또는 치환된 알케닐 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 알키닐 또는 치환된 알키닐 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 알콕시 또는 치환된 알콕시 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 아미노 또는 치환된 아미노 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 카복실 또는 카복실 에스테르 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 아실 아미노 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 아릴 또는 치환된 아릴 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴 기를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 제1 링커 LA는 중합체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 동종중합체(homopolymer), 폴리프로필렌 글리콜 동종중합체, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예를 들어, 이때 동종중합체 및 공중합체는 한쪽 끝이 알킬기로 치환되지 않거나 또는 치환됨), 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리비닐피롤리돈 및 이들의 조합을 포함하는, 폴리알킬렌 글리콜 및 이의 유도체 등을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 구현예에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 아래에서 자세히 설명하는 접합체 및 화합물에서 볼 수 있듯이, 다른 링커들도 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, LA는 다음 화학식으로 설명되는 제1 링커이다:
-(L1)a-(L2)b-(L3)c-( L4)d-(L5)e-(L6)f-,
이때 L1, L2, L3, L4, L5 및 L6은 각각 독립적으로 링커 서브유닛(subunit)이고, a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 0 내지 6이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 0이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 2이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 3이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 4이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 5이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 6이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f는 각각 1이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d 및 e는 각각 1이고 f는 0이다. 특정 구현예에서, a, b, c 및 d는 각각 1이고 e 및 f는 각각 0이다. 특정 구현예에서, a, b, 및 c는 각각 1이고 d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 구현예에서, a 및 b는 각각 1이고 c, d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 구현예에서, a는 1이고 b, c, d, e 및 f는 각각 0이다.
특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L1은 (예를 들어, 상기 화학식 I과 같은) 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L2는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제 W1에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L3은, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제 W1에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L4는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제 W1에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L5는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제 W1에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L6는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제 W1에 부착된다.
제1 링커 LA에 사용하기 편한 임의의 링커 서브유닛들이 사용될 수 있다. 관심 링커 서브유닛은 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 및 폴리아크릴레이트, 아미노산 잔기(들), 탄수화물계 중합체 또는 탄수화물 잔기 및 이의 유도체들, 폴리뉴클레오티드, 알킬 기, 아릴 기, 헤테로사이클릭 기, 이들의 조합 및 이들의 치환된 버전들과 같은 중합체 단위를 포함하나, 이에 제한되진 않는다. 일부 구현예에서, L1, L2, L3, L4, L5 및 L6 각각은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 및 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함한다.
일부 구현예에서, L1은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L1은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, L2는 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L2는 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, L3은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L3은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L3은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L3은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L3은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L3은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L3은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)를 포함한다.
일부 구현예에서, L4는 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L4는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L4는 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L4는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L4는 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L4는 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L4는 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, L5는 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L5는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L5는 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L5는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L5는 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L5는 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L5는 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)를 포함한다.
일부 구현예에서, L6은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L6은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L6은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L6은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L6은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L6은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L6은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, LA는 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-(L6)f-를 포함하는 제1 링커이고, 이때:
-(L1)a-는 -(T1-V1)a-이고;
-(L2)b-는 -(T2-V2)b-이고;
-(L3)c-는 -(T3-V3)c-이고;
-(L4)d-는 -(T4-V4)d-이고;
-(L5)e-는 -(T5-V5)e-이고; 및
-(L6)f-는 -(T6-V6)f-이고,
여기서 T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은, 존재하는 경우, 테더(tether) 기이고;
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은, 존재하는 경우, 공유 결합 또는 연결 작용 기이고; 및
a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 0 내지 6이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 0이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 2이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 3이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 4이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 5이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 6이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d, e 및 f은 각각 1이다. 특정 구현예에서, a, b, c, d 및 e는 각각 1이고 f는 0이다. 특정 구현예에서, a, b, c 및 d는 각각 1이고 e 및 f는 각각 0이다. 특정 구현예에서, a, b, 및 c는 각각 1이고 d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 구현예에서, a 및 b는 각각 1이고 c, d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 구현예에서, a는 1이고 b, c, d, e 및 f는 각각 0이다.
위에서 기술한 바와 같이, 특정 구현예에서, L1은 (예를 들어, 상기 화학식 Ⅰ과 같은) 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T1은 (예를 들어, 상기 화학식 Ⅰ과 같은) 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된다. 특정 구현예에서, V1은 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L2는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T2는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V2는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L3은, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T3은, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V3은, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L4는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T4는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V4는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L5는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T5는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V5는, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L6은, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T6은, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V6은, 존재하는 경우, 제1 약물 또는 활성제에 부착된다.
특정 구현예에서, 화학식 Ⅰ의 접합체에는 제2 링커, LB를 포함한다. 제2 링커인 LB는 접합 모이어티를 통해 관심있는 제2 모이어티 (예: 제2 약물 또는 활성제)를 폴리펩티드 (예: 항체)에 결합하는데 사용될 수 있다. 제2 링커, LB는 접합 모이어티 (예를 들어, 본 명세서에서 설명된 것과 같은)에 결합 (예: 공유 결합)될 수 있다. 예를 들어, 제2 링커인 LB는 히드라지닐 인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 제2 약물 또는 활성제에 부착시킬 수 있다. 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 제2 링커인 LB (및 따라서, 제2 약물 또는 활성제)를 항체와 같은 폴리펩티드에 접합하는데 사용될 수 있다.
예를 들어, 상기 화학식 I에서 도시된 바와 같이, LB는 접합 모이어티를 통해 W3에 부착될 수 있으며, 따라서 W3은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 제2 링커 LB에 간접적으로 결합될 수 있다. 위에서 설명한 바와 같이, W3은 폴리펩티드 (예: 항체)이고, 따라서 LB는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 폴리펩티드 (항체)에 부착될 수 있고, 예를 들어, 링커 LB는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 폴리펩티드 (항체)에 간접적으로 결합될 수 있다.
대상 접합체 및 화합물의 제2 링커 LB에는 임의의 편리한 링커가 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 아미노, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로 사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된 군을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 알킬 또는 치환된 알킬 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB 알케닐 또는 치환된 알케닐 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 알키닐 또는 치환된 알키닐 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 알콕시 또는 치환된 알콕시 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 아미노 또는 치환된 아미노 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 카복실 또는 카복실 에스테르 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 아실 아미노 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 아릴 또는 치환된 아릴 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴 기를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 제2 링커 LB는 중합체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 동종중합체(homopolymer), 폴리프로필렌 글리콜 동종중합체, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예를 들어, 이때 동종중합체 및 공중합체는 한쪽 끝이 알킬기로 치환되지 않거나 또는 치환됨), 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리비닐피롤리돈 및 이들의 조합을 포함하는, 폴리알킬렌 글리콜 및 이의 유도체 등을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 구현예에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 아래에서 자세히 설명하는 접합체 및 화합물에서 볼 수 있듯이, 다른 링커들도 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, LB는 다음 화학식으로 설명되는 제2 링커이다:
-(L7)g-(L8)h-(L9)i-(L10)j-(L11)k-(L12)l-(L13)m,
이때 L7, L8, L9, L10, L11, L12 및 L13은 각각 독립적으로 링커 서브유닛이고, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 0 내지 7이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 0이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 1이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 2이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 3이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 4이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 5이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 6이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 7이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 1이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k 및 l은 각각 1이고 m은 0이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j 및 k는 각각 1이고 l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g, h, i 및 j는 각각 1이고 k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g, h, 및 i는 각각 1이고 j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g 및 h는 각각 1이고 i, j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g는 1이고 h, i, j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 0이다.
특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L7은 (예를 들어, 상기 화학식 I과 같은) 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L8은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제 W2에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L9는, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제 W2에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L10은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제 W2에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L11은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제 W2에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L12는, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제 W2에 부착된다. 특정 구현예에서, 링커 서브유닛 L13은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제 W2에 부착된다.
제2 링커 LB에 사용하기 편한 임의의 링커 서브유닛들이 사용될 수 있다. 관심 링커 서브유닛은 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 및 폴리아크릴레이트, 아미노산 잔기(들), 탄수화물계 중합체 또는 탄수화물 잔기 및 이의 유도체들, 폴리뉴클레오티드, 알킬 기, 아릴 기, 헤테로사이클릭 기, 이들의 조합 및 이들의 치환된 버전들과 같은 중합체 단위를 포함하나, 이에 제한되진 않는다. 일부 구현예에서, L7, L8, L9, L10, L11, L12 및 L13 각각은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 및 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함한다.
일부 구현예에서, L7은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L7은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L7은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L7은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L7은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L7은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L7은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, L8은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L8은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L8은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L8은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L8은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L8은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L8은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, L9은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L9은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L9은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L9은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L9은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L9은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L9은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, L10은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L10은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L10은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L10은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L10은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L10은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L10은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, L11은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L11은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L11은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L11은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L11은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L11은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L11은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, L12은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L12은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L12은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L12은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L12은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L12은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L12은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, L13은 (존재하는 경우) 폴리에틸렌 글리콜, 개질된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 또는 다이아민을 포함한다. 일부 구현예에서, L13은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L13은 개질된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 구현예에서, L13은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, L13은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 구현예에서, L13은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 구현예에서, L13은 다이아민 (예를 들어, 알킬렌 다이아민을 포함하는 연결 기)을 포함한다.
일부 구현예에서, LB는 -(L7)g-(L8)h-(L9)i-(L10)j-(L11)k-(L12)l-(L13)m-을 포함하는 제2 링커이고, 이때:
-(L7)g-는 -(T7-V7)g-이고;
-(L8)h-은 -(T8-V8)h-이고;
-(L9)i-는 -(T9-V9)i-이고;
-(L10)j-은 -(T10-V10)j-이고;
-(L11)k-은 -(T11-V11)k-이고;
-(L12)l-는 -(T12-V12)l-이고; 및
-(L13)m-은 -(T13-V13)m-이고,
여기서 T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은, 존재하는 경우, 테더 기이고;
V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은, 존재하는 경우, 공유 결합 또는 연결 작용기이고; 및
g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 0 내지 7이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 0이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 1이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 2이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 3이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 4이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 5이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 6이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 7이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 1이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k 및 l은 각각 1이고 m은 0이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j 및 k는 각각 1이고 l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g, h, i 및 j는 각각 1이고 k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g, h, 및 i는 각각 1이고 j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g 및 h는 각각 1이고 i, j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g는 1이고 h, i, j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 구현예에서, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 0이다.
상기 설명한 바와 같이, 특정 구현예에서, L7은 (예를 들어, 상기 화학식 Ⅰ과 같은) 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T7은 (예를 들어, 상기 화학식 Ⅰ과 같은) 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된다. 특정 구현예에서, V7은 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L8은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T8은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V8은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L9는, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T9는, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V9는, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L10은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T10은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V10은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L11은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T11은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V11은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L12는, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T12는, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V12는, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 구현예에서, L13은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 따라서, 특정 구현예에서, T13은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V13은, 존재하는 경우, 제2 약물 또는 활성제에 부착된다.
테더 기인 T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13과 관련해서, 임의의 사용하기 편한 테더 기가 대상 링커에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈 기, 히드라진, 다이설파이드(disulfide) 및 에스테르로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함하되, 이때 각각의 w는 1에서 20까지의 정수이고, 각각의 n은 1에서 30까지의 정수이고, 각각의 p는 1에서 20까지의 정수이고, 및 각각의 x는 1에서 12까지의 정수이다.
특정 구현예에서, 테더 기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 (C1-C12)알킬 또는 치환된 (C1-C12)알킬을 포함한다. 특정 구현예에서, (C1-C12)알킬은 1 내지 12개의 탄소원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소원자, 또는 1 내지 8개의 탄소원자, 또는 1 내지 6개의 탄소원자, 또는 1 내지 5개의 탄소원자, 또는 1 내지 4개의 탄소원자, 또는 1 내지 3개의 탄소원자를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄이다. 일부 예시에서, (C1-C12)알킬은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C12 알킬, 또는 C1-C10 알킬, 또는 C1-C6 알킬, 또는 C1-C3 알킬일 수 있다. 일부 예시에서, (C1-C12)알킬은 C2-알킬이다. 예를 들어, (C1-C12)알킬은 알킬렌 또는 치환된 알킬렌, 예컨대 C1-C12 알킬렌, 또는 C1-C10 알킬렌, 또는 C1-C6 알킬렌, 또는 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 일부 예시에서, (C1-C12)알킬은 C1-알킬렌 (예를 들어, CH2)이다. 일부 예시에서, (C1-C12)알킬은 C2-알킬렌 (예를 들어, CH2CH2)이다. 일부 예시에서, (C1-C12)알킬은 C3-알킬렌 (예를 들어, CH2CH2CH2)이다.
특정 구현예에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 1 내지 12개의 탄소원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소원자, 또는 1 내지 8개의 탄소원자, 또는 1 내지 6개의 탄소원자, 또는 1 내지 5개의 탄소원자, 또는 1 내지 4개의 탄소원자, 또는 1 내지 3개의 탄소원자를 포함하는 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기이다. 일부 예시에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 알킬, 예컨대 치환된 C1-C12 알킬, 또는 치환된 C1-C10 알킬, 또는 치환된 C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1-C3 알킬일 수 있다. 일부 예시에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬이다. 예를 들어, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 알킬렌, 예컨대 치환된 C1-C12 알킬렌, 또는 치환된 C1-C10 알킬렌, 또는 치환된 C1-C6 알킬렌, 또는 치환된 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 일부 예시에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C1-알킬렌(예를 들어, -SO3H로 치환된 C1-알킬렌)이다. 일부 예시에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬렌이다. 일부 예시에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C3-알킬렌이다. 예를 들어, 치환된 (C1-C12)알킬은 본 명세서에서 기술된 것과 같은 (PEG)k 기 (예를 들어, -CONH(PEG)3 또는 -CONH(PEG)5와 같은 -CONH(PEG)k 기; 또는 -NHCO(PEG)7와 같은 -NHCO(PEG)k 기)로 치환된 C1-C12 알킬렌(예를 들어, C3-알킬렌 또는 C5-알킬렌)을 포함할 수 있거나, 또는 -CONHCH2CH2SO3H 기로 치환된 C1-C12 알킬렌 (예를 들어, C3-알킬렌)을 포함할 수 있거나, 또는 -NHCOCH2SO3H 기로 치환된 C1-C12 알킬렌 (예를 들어, C5-알킬렌)을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 테더 기(예를 들면, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 또는 치환된 헤테로사이클릴을 포함한다. 일부 예시에서, 테더 기(예를 들면, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 아릴 또는 치환된 아릴을 포함한다. 예를 들어, 아릴은 페닐일 수 있다. 일부 경우에서, 치환된 아릴은 치환된 페닐이다. 치환된 페닐은 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환될 수 있다. 일부 예시에서, 치환된 아릴은 치환된 페닐이고, 이때 치환체는 본 명세서에서 설명된 바와 같은 절단가능한 모이어티 (예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체와 같은 효소적으로 절단가능한 모이어티)를 포함한다.
일부 예시에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 트리아졸릴 (예를 들어, 1,2,3-트리아졸릴)을 포함한다. 일부 예시에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬을 포함한다. 일부 예시에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴을 포함한다. 일부 예시에서, 치환된 헤테로아릴, 치환된 사이클로알킬 또는 치환된 헤테로사이클릴 상의 치환체는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 절단가능한 모이어티 (예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체와 같은 효소적으로 절단가능한 모이어티)를 포함한다.
특정 구현예에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 에틸렌 다이아민 (EDA) 모이어티, 예를 들어, EDA 함유 테더 기를 포함한다. 특정 구현예에서, (EDA)w는 하나 이상의 EDA 모이어티를 포함하고, 예컨대 이때 w는 1에서 50까지의 정수, 예컨대 1에서 40까지, 1에서 30까지, 1에서 20까지, 1에서 12까지 또는 1에서 6까지의 정수, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 연결된 에틸렌 다이아민 (EDA) 모이어티는 선택적으로 하나 이상의 편리한 위치에서 임의의 편리한 치환체로, 예를 들어, 알킬, 치환된 알킬, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 선택적으로 치환될 수 있다. 특정 구현예에서, EDA 모이어티는 하기 구조로 설명된다:
,
이때 y는 1에서 6까지의 정수이거나, 또는 0 또는 1이고, 각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 독립적으로 선택된다. 특정 구현예에서, y는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 특정 구현예에서, y는 1이고 r은 0이다. 특정 구현예에서, y는 1이고 r은 1이다. 특정 구현예에서, y는 2이고 r은 0이다. 특정 구현예에서, y는 2이고 r은 1이다. 특정 구현예에서, 각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택된다. 특정 구현예에서, EDA 기의 임의의 인접한 두 개의 R12 기는 예를 들어, 피페라지닐 고리를 형성하기 위해 순환적으로 연결될 수 있다. 특정 구현예에서, y는 1이고 두 개의 인접한 R12 기는 알킬 기이며, 피페라지닐 고리를 형성하기 위해 순환적으로 연결된다. 특정 구현예에서, y는 1이고 인접한 R12 기는 수소, 알킬 (예를 들어, 메틸) 및 치환된 알킬 (예를 들어, 에틸-OH 또는 프로필-OH와 같은 저급 알킬-OH)로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 4-아미노-피페리딘 (4AP) 모이어티 (본 명세서에서 피페리딘-4-아미노, P4A라고도 함)를 포함한다. 4AP 모이어티는 하나 이상의 편리한 위치에서 임의의 편리한 치환체로, 예를 들어, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 선택적으로 치환될 수 있다. 특정 구현예에서, 4AP 모이어티는 다음 구조로 설명된다:
,
이때 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 개질된 폴리에틸렌 글리콜), 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R12는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티이다. 특정 구현예에서, R12는 카복시 개질된 폴리에틸렌 글리콜이다.
특정 구현예에서, R12는 다음 구조로 나타낼 수 있는 화학식: (PEG)k로 설명되는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티를 포함한다:
,
이때 k는 1에서 20까지의 정수, 예컨대 1에서 18까지, 또는 1에서 16까지, 또는 1에서 14까지, 또는 1에서 12까지, 또는 1에서 10까지, 또는 1에서 8까지, 또는 1에서 6까지, 또는 1에서 4까지의 정수, 또는 1 또는 2, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 예시에서, k는 2이다. 특정 구현예에서, R17은 OH, COOH, OR, 또는 COOR로부터 선택되되, 이때 R은 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R17은 COOH이다. 특정 구현예에서, R17은 OH이다. 특정 구현예에서, R17은 OCH3이다.
특정 구현예에서, 테더 기(예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 (PEG)n을 포함하고, 이때 (PEG)n은 폴리에틸렌 글리콜 또는 개질된 폴리에틸렌 글리콜 연결 단위이다. 일부 구현예에서, (PEG)n은 다음 구조로 설명된다:
,
이때 n은 1에서 50까지의 정수, 예컨대 1에서 40까지, 1에서 30까지, 1에서 20까지, 1에서 12까지 또는 1에서 6까지의 정수, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 예시에서, n은 2이다. 일부 예시에서, n은 3이다. 일부 예시에서, n은 6이다. 일부 예시에서, n은 12이다.
특정 구현예에서, 테더 기 (예를 들면, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 (AA)p을 포함하고, 이때 AA는 아미노산 잔기이다. 임의의 편리한 아미노산이 사용될 수 있다. 관심 아미노산은 L- 및 D-아미노산, 20가지 주요 알파-아미노산 및 베타-알라닌과 같은 자연 발생 아미노산, 비자연발생 알파-아미노산 또는 비자연발생 베타-아미노산과 같은 비자연발생 아미노산 (예를 들면, 아미노산 유사체) 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, p는 1에서 50까지의 정수, 예컨대 1에서 40까지, 1에서 30까지, 1에서 20까지, 1에서 12까지 또는 1에서 6까지의 정수, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 특정 구현예에서, p는 1이다. 특정 구현예에서, p는 2이다.
특정 구현예에서, 테더 기(예를 들면, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 아미노산 유사체를 포함한다. 아미노산 유사체는 자연 발생 단백질에서 흔히 발견되는 하나 이상의 아미노산 (예를 들면, Ala 또는 A, Cys 또는 C, Asp 또는 D, Glu 또는 E, Phe 또는 F, Gly 또는 G, His 또는 H, Ile 또는 I, Lys 또는 K, Leu 또는 L, Met 또는 M, Asn 또는 N, Pro 또는 P, Gln 또는 Q, Arg 또는 R, Ser 또는 S, Thr 또는 T, Val 또는 V, Trp 또는 W, Tyr 또는 Y)과 구조 및/또는 전체 모양이 유사한 화합물을 포함한다. 아미노산 유사체에는 측쇄 또는 백본이 변형된 천연 아미노산도 포함된다. 아미노산 유사체에는 자연 발생 D-형태와 동일한 입체화학을 가진 아미노산 유사체뿐만 아니라, L-형태의 아미노산 유사체도 포함된다. 일부 예시에서, 아미노산 유사체는 백본 구조, 및/또는 하나 이상의 천연 아미노산의 측쇄 구조를 공유하며, 차이점은 분자 내에 하나 이상의 변형된 기가 있다는 것이다. 이러한 변형은 원자 (예: N)를 관련 원자 (예: S)로 치환, 기 (예: 메틸 또는 히드록실 등) 또는 원자 (예: Cl 또는 Br 등)의 추가, 기의 제거, 공유 결합 (이중결합의 단일결합 등)의 치환, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 아미노산 유사체는 α-히드록시 산 및 α-아미노산 등을 포함할 수 있다. 아미노산 유사체의 예로는 설포알라닌 등이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
특정 구현예에서, 테더 기(예를 들면, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 화학식 -(CR13OH)x-로 기술된 모이어티를 포함하고, 이때 x는 0이거나 x는 1에서 50까지의 정수, 예컨대 1에서 40까지, 1에서 30까지, 1에서 20까지, 1에서 12까지 또는 1에서 6까지의 정수, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12이다. 특정 구현예에서, x는 1이다. 특정 구현예에서, x는 2이다. 특정 구현예에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R13는 수소이다. 특정 구현예에서, R13은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R13은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R13은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R13은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R13은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R13은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 구현예에서, R13은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 구현예에서, R13은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 구현예에서, R13은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 구현예에서, R13은 설포닐이다. 특정 구현예에서, R13은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 구현예에서, R13은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R13은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R13은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R13은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. 이러한 구현예에서, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴은 위의 R13에서 설명되어 있다.
특정 구현예에서, 테더 기(예를 들면, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 아세탈 기, 다이설파이드, 히드라진 또는 에스테르를 포함한다. 일부 구현예에서, 테더 기는 아세탈 기를 포함한다. 일부 구현예에서, 테더 기는 히드라진을 포함한다. 일부 구현예에서, 테더 기는 다이설파이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 테더 기는 에스테르를 포함한다.
특정 구현예에서, 테더 기(예를 들면, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 또는 파라-히드록시-페닐 (PHP)을 포함한다.
일부 구현예에서, 테더 기는 다음 구조로 설명되는 MABO 기를 포함한다:
.
일부 구현예에서, 테더 기는 다음 구조로 설명되는 MABC 기를 포함한다:
.
일부 구현예에서, 테더 기는 다음 구조로 설명되는 PABO 기를 포함한다:
.
일부 구현예에서, 테더 기는 다음 구조로 설명되는 PABC 기를 포함한다:
.
일부 구현예에서, 테더 기는 다음 구조로 설명되는 PAB 기를 포함한다:
.
일부 구현예에서, 테더 기는 다음 구조로 설명되는 PABA 기를 포함한다:
.
일부 구현예에서, 테더 기는 다음 구조로 설명되는 PAP 기를 포함한다:
.
일부 구현예에서, 테더 기는 다음 구조로 설명되는 PHP 기를 포함한다:
.
일부 구현예에서, 각각의 R14는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, R14는 수소이다. 일부 구현예에서, 각각의 R14는 수소이다. 일부 구현예에서, R14는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 일부 구현예에서, R14는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 일부 구현예에서, R14는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 일부 구현예에서, R14는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 일부 구현예에서, R14는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 일부 구현예에서, R14는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 일부 구현예에서, R14는 아실 또는 아실옥시이다. 일부 구현예에서, R14는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 일부 구현예에서, R14는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 일부 구현예에서, R14는 설포닐이다. 일부 구현예에서, R14는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 일부 구현예에서, R14는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 일부 구현예에서, R14는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, R14는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, R14는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
상술한 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, 및 PHP 테더 구조의 일부 구현예에서, 페닐 고리는 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 기로 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, 테더 기 T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13 중 하나 이상은 각각 글리코시드 또는 또는 글리코시드 유도체로 선택적으로 치환된다. 예를 들어, 일부 경우에서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된다. 일부 예에서, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된다. 특정 구현예에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 상술한 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, 및 PHP 테더 구조는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 상술한 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조의 일부 구현예에서, 페닐 고리는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 기로 치환될 수 있다. 특정 구현예에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 다음 구조 중에서 선택할 수 있다:
연결 작용기와 관련하여, 대상 링커에 V1, V2, V3, V4, V5, V6, V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13 임의의 편리한 연결 작용기가 사용될 수 있다. 연결 작용기는 아미노, 카보닐, 아미도, 옥시카보닐, 카복시, 설포닐, 설폭시드(sulfoxide), 설포닐아미노, 아미노설포닐, 티오, 옥시, 포스포(phosphor), 포스포라미데이트(phosphoramidate), 티오포스포라미데이트(thiophosphoramidate) 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, V1, V2, V3, V4, V5, V6, V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 각각 공유결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 q는 1에서 6까지의 정수이다. 특정 구현예에서, q는 1에서 6까지의 정수 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)이다. 특정 구현예에서, q는 1이다. 특정 구현예에서, q는 2이다. 특정 구현예에서, q는 3이다. 특정 구현예에서, q는 4이다. 특정 구현예에서, q는 5이다. 특정 구현예에서, q는 6이다.
일부 구현예에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로 사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, R15는 수소이다. 특정 구현예에서, 각각의 R15는 수소이다. 특정 구현예에서, R15는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R15는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R15는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R15는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R15는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R15는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 구현예에서, R15는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 구현예에서, R15는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 구현예에서, R15는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 구현예에서, R15는 설포닐이다. 특정 구현예에서, R15는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 구현예에서, R15는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R15는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R15는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R15는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-8 헤테로사이클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된다. 이러한 구현예에서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴은 R15에 대해 위에서 설명한 바와 같다.
위에서 기술한 바와 같이, 일부 구현예에서, LA는 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-을 포함하는 제1 링커이고, 이때 a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, 제1 링커 LA에서:
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈 기, 다이설파이드, 히드라진 및 에스테르로부터 독립적으로 선택되고; 및
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 각각 공유결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 독립적으로 선택되되, 이때 q는 1에서 6까지의 정수이고;
이때:
(PEG)n은 이고, 이때 n은 1에서 30까지의 정수이고;
EDA는 다음 구조를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이고:
, 여기서 y는 1에서 6까지의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고;
AA는 아미노산 잔기이고, 이때 p는 1에서 20까지의 정수이고; 및
각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되되, 이때 임의의 2개의 인접한 R12 기는 피페라지닐 고리를 형성하기 위해 순환적으로 연결될 수 있고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고; 및
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6 및 V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 다음으로부터 선택된다:
이때,
T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CO-이고;
T2는 아미노산 유사체 및 V2는 -NH-이고;
T3은 (PEG)n 및 V3은 -CO-이고;
T4는 AA 및 V4는 존재하지 않고;
T5는 PABC 및 V5는 존재하지 않고; 및
f는 0이거나, 또는
이때,
T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CONH-이고;
T2는 (PEG)n 및 V2는 -CO-이고;
T3은 AA 및 V3은 존재하지 않고;
T4는 PABC 및 V4는 존재하지 않고; 및
e 및 f는 각각 0이거나, 또는
이때,
T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CONH-이고;
T2는 치환된 (C1-C12)알킬 및 V2는 -CO-이고;
T3은 AA 및 V3은 존재하지 않고;
T4는 PABC 및 V4는 존재하지 않고; 및
e 및 f는 각각 0이다.
특정 구현예에서, 제1 링커 LA에 대한 상기 링커 구조의 좌측은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합체 모이어티에 부착되고, 제1 링커 LA에 대한 상기 링커 구조의 우측은 제1 약물 또는 활성제에 부착된다.
상기 기술한 바와 같이, 일부 구현예에서, LB는 -(T7-V7)g-(T8-V8)h-(T9-V9)i-(T10-V10)j-(T11-V11)k-(T12-V12)l-(T13-V13)m-을 포함하는 제2 링커이고, 이때 g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, 제2 링커 LB에서:
T7은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈 기, 다이설파이드, 히드라진 및 에스테르로부터 독립적으로 선택되고; 및
V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 각각 공유결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 독립적으로 선택되되, 이때 q는 1에서 6까지의 정수이고;
이때:
(PEG)n은 이고, 이때 n은 1에서 30까지의 정수이고;
EDA는 다음 구조를 갖는 에틸렌 다이아민 모이어티이고:
, 여기서 y는 1에서 6까지의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고;
AA는 아미노산 잔기이고, 이때 p는 1에서 20까지의 정수이고; 및
각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되되, 이때 임의의 2개의 인접한 R12 기는 피페라지닐 고리를 형성하기 위해 순환적으로 연결될 수 있고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고; 및
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된다.
임의의 편리한 테더 기가 T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13에 사용될 수 있다. 예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6과 관련하여 위에서 설명한 테더 기 중 어느 것이라도 테더 기 T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13에 사용될 수 있다.
임의의 편리한 연결 작용기가 V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13에 사용될 수 있다. 예를 들어, V1, V2, V3, V4, V5 및 V6과 관련하여 위에서 설명한 연결 작용기 중 어느 것이라도 연결 작용기 V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13에 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택된다. 이러한 구현예에서, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴은 위의 R13에 대해서 설명되어 있다.
특정 구현예에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로 사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택된다. 이러한 구현예에서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로 사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴은 R15에 대해 위에서 설명한 것과 같다. 이러한 구현예에서, 가능한 다양한 치환체는 R15에 대해 위에서 설명한 것과 같다.
제2 링커 LB의 특정 구현예에서, 테더 기 T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13 중 하나 이상은 각각 글리코시드 또는 글리코시드 유도체로 선택적으로 치환된다. 특정 구현예에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
제2 링커 LB의 특정 구현예에서, 위에서 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 위에서 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조의 일부 구현예에서, 페닐 고리는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 기로 치환될 수 있다. 특정 구현예에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
특정 구현예에서, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13 및 V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 다음으로부터 선택된다:
이때,
T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
T8은 (C1-C12)알킬 및 V8은 -CONH-이고;
T9는 (PEG)n 및 V9는 -CO-이고;
T10은 AA 및 V10은 존재하지 않고;
T11은 PABC 및 V11은 존재하지 않고; 및
l 및 m은 각각 0이거나, 또는
이때,
T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
T8은 (C1-C12)알킬 및 V8은 -CONH-이고;
T9는 치환된 (C1-C12)알킬 및 V9는 -CO-이고;
T10은 AA 및 V10은 존재하지 않고;
T11은 PABC 및 V11은 존재하지 않고; 및
l 및 m은 각각 0이다.
특정 구현예에서, 제2 링커 LB에 대한 상기 링커 구조의 좌측은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합체 모이어티에 부착되고, 제2 링커 LB에 대한 상기 링커 구조의 우측은 제2 약물 또는 활성제에 부착된다.
특정 구현예에서, 접합체는 항체 및 하나 이상의 약물 또는 활성제가 상술한 바와 같이 링커에 의해 함께 연결되는 항체-약물 접합체이다. 일부 예시에서, 링커 (예를 들어, LA 및/또는 LB)는 절단가능한 링커이다. 절단가능한 링커는 하나 이상의 절단가능한 모이어티를 포함하는 링커로서, 이때 절단가능한 모이어티는 특정 조건 하에서 해리될 수 있는 하나 이상의 결합을 포함하고, 따라서 상기 절단가능한 링커를 둘 이상의 분리가능한 부분들로 분리한다. 예를 들어, 절단가능한 모이어티는 하나 이상의 공유 결합을 포함할 수 있으며, 이들은 특정 조건 하에서 해리 또는 분해되어 절단가능한 링커를 2개 이상의 부분으로 분리할 수 있다. 이와 같이 항체-약물 접합체에 포함되는 링커는 절단가능한 링커일 수 있으며, 적절한 조건 하에서 절단가능한 링커가 절단되어 약물에 대한 목적하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 분리 또는 방출할 수 있다.
일부 예시에서, 절단가능한 링커는 두 개의 절단가능한 모이어티들, 예컨대 제1 절단가능한 모이어티 및 제2 절단가능한 모이어티를 포함한다. 절단가능한 부분은, 약물에 대한 목적하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 분리하거나 방출하기 위해 절단가능한 모이어티의 양쪽 둘 다의 절단이 필요하도록 구성될 수 있다. 예를 들어, 절단가능한 링커의 절단은 2개의 절단가능한 모이어티들 중 하나를 처음에 절단한 다음, 2개의 절단가능한 모이어티들 중 다른 하나를 절단시킴으로써 달성될 수 있다. 특정 구현예에서, 절단가능한 링커는 제1 절단가능한 모이어티 및 제1 절단가능한 모이어티의 절단을 방해하는 제2 절단가능한 모이어티를 포함한다. "절단을 방해한다"는 것은 절단되지 않은 제2 절단가능한 모이어티의 존재가 제1 절단가능한 모이어티의 절단가능성을 감소시키거나 실질적으로 억제하여, 실질적으로 절단가능한 링커의 양을 감소시키거나 절단을 방지하는 것을 의미한다. 예를 들어, 절단되지 않은 제2 절단가능한 모이어티의 존재는 제1 절단가능한 모이어티의 절단을 방해할 수 있다. 제2 절단가능한 모이어티의 존재에 의한 제1 절단가능한 모이어티의 절단 방해는, 차례로 항체로부터 방출되는 약물의 양을 실질적으로 감소시키거나 약물의 방출을 방지한다. 예를 들어, 항체로부터의 약물의 조기 방출은 항체-약물 접합체가 약물에 대한 목적하는 표적 작용 부위 또는 그 근처에 있을 때까지 실질적으로 감소되거나 방지될 수 있다.
일부 경우에는, 제2 절단가능한 모이어티가 제1 절단가능한 모이어티의 절단을 방해하기 때문에, 절단가능한 링커의 절단은 처음에 제2 절단가능한 모이어티를 절단한 후 제1 절단가능한 모이어티를 절단함으로써 달성될 수 있다. 제2 절단가능한 모이어티의 절단은 제1 절단가능한 모이어티의 절단에 대한 장애를 감소시키거나 제거할 수 있으며, 따라서 제1 절단가능한 모이어티가 절단될 수 있게 한다. 제1 절단가능한 모이어티의 절단은 항체-약물 접합체로부터 약물을 방출하기 위해, 상술한 바와 같이 절단가능한 링커가 2개 이상의 부분으로 해리되거나 분리되는 결과를 초래할 수 있다. 일부 경우에, 제1 절단가능한 모이어티의 절단은 절단되지 않은 제2 절단가능한 모이어티의 존재 하에서 실질적으로 발생하지 않는다. "실질적으로"라는 의미는, 절단되지 않은 제2 절단가능한 모이어티의 존재 하에 제1 절단가능한 모이어티의 약 10% 이하, 예컨대 약 9% 이하, 또는 약 8% 이하, 또는 약 7% 이하, 또는 약 6% 이하, 또는 약 5% 이하, 또는 약 4% 이하, 또는 약 3% 이하, 또는 약 2% 이하, 또는 약 1% 이하, 또는 약 0.5% 이하, 또는 약 0.1% 이하의 절단이 발생한다는 의미이다.
달리 말하면, 제2 절단가능한 모이어티는, 상기 제1 절단가능한 모이어티를 절단으로부터 보호할 수 있다. 예를 들어, 절단되지 않은 제2 절단가능한 모이어티의 존재는 절단으로부터 제1 절단가능한 모이어티를 보호할 수 있고, 따라서 항체-약물 접합체가 약물에 대한 목적하는 표적 작용 부위 또는 그 근처에 있을 때까지 항체로부터 약물의 조기 방출을 실질적으로 감소시키거나 방지할 수 있다. 이와 같이, 제2 절단가능한 모이어티의 절단은 제1 절단가능한 모이어티를 노출시키고 (예를 들어, 제1 절단가능한 모이어티의 탈보호), 따라서 제1 절단가능한 모이어티가 절단될 수 있게 하고, 이는 절단가능한 링커의 절단을 초래하며, 이는 차례로 상술한 바와 같은 약물에 대한 목적하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 분리 또는 방출한다. 특정 예시에서, 제2 절단가능한 모이어티의 절단은 제1 절단가능한 모이어티의 후속적인 절단에 노출시키지만, 제2 절단가능한 모이어티의 절단은 그 자체로 절단 가능한 링커의 절단을 초래하지는 않는다 (즉, 제1 절단가능한 모이어티의 절단은 절단가능한 링커를 절단하기 위해 여전히 필요하다).
절단가능한 링커에 포함되는 절단가능한 모이어티들은 각각 효소적으로 절단가능한 모이어티일 수 있다. 예를 들어, 제1 절단가능한 모이어티는 제1 효소적으로 절단가능한 모이어티일 수 있고, 제2 절단가능한 모이어티는 제2 효소적으로 절단가능한 모이어티일 수 있다. 효소적으로 절단가능한 모이어티는, 효소의 효소 작용을 통해 상술한 바와 같이 2개 이상의 부분으로 분리될 수 있는 절단가능한 모이어티이다. 효소적으로 절단가능한 모이어티는, 효소의 효소 작용을 통해 절단될 수 있는 모든 절단가능한 모이어티일 수 있으며, 예컨대, 에스테르, 펩티드, 글리코시드 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 효소적으로 절단가능한 모이어티를 절단하는 효소는 항체-약물 접합체로부터 방출될 약물의 목적하는 표적 작용 부위와 같은 목적하는 표적 작용 부위에 존재한다. 일부 경우에, 효소적으로 절단가능한 모이어티를 절단하는 효소는 전혈, 혈장 또는 혈청과 같은 다른 영역에서는 상당한 양으로 존재하지 않는다. 따라서, 효소적으로 절단가능한 모이어티의 절단은 목적하는 작용 부위에서 상당한 절단이 발생하도록 제어될 수 있는 반면, 다른 영역 또는 항체-약물 접합체가 원하는 작용 부위에 도달하기 전에는 절단이 잘 일어나지 않도록 제어할 수 있다.
예를 들어, 본 명세서에 기술된 바와 같이, 본 명세서의 항체-약물 접합체는 암세포가 존재하는 목적하는 작용 부위로의 암 치료 약물의 전달과 같은 암의 치료에 사용될 수 있다. 어떤 경우에는, 에스테르 결합을 절단하는 에스테라제 또는 글리코시드 결합을 절단하는 글리코시다아제와 같은 효소가 암세포에서 과발현되는 암의 바이오마커가 될 수 있다. 암에서 특정 효소의 과발현, 그리고 그에 따른 국소화(localization)는 본 발명의 항체-약물 접합체의 절단가능한 링커에 포함된 효소적으로 절단가능한 모이어티의 맥락에서 사용되어 목적하는 작용 부위 (즉, 암의 부위 (및 과발현된 효소))에서 약물을 특이적으로 방출할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 효소적으로 절단가능한 모이어티는 암세포에서 과발현되는 효소에 의해 절단될 수 있는 절단가능한 모이어티 (예를 들어, 에스테르 또는 글리코시드)이다. 예를 들어, 효소는 에스테라제일 수 있다. 이와 같이, 몇몇 경우에, 효소적으로 절단가능한 모이어티는 에스테라제 효소에 의해 절단될 수 있는 절단가능한 모이어티 (예를 들어, 에스테르)이다. 일부 경우에, 효소는 글리코시다아제(glycosidase)일 수 있다. 이와 같이, 일부 경우에, 효소적으로 절단가능한 모이어티는 글리코시다아제 효소에 의해 절단될 수 있는 절단가능한 모이어티 (예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체)이다.
특정 구현예에서, 효소적으로 절단가능한 모이어티는 에스테르 결합이다. 예를 들어, 상술한 제1 절단가능한 모이어티 (즉, 제2 절단가능한 모이어티에 의해 조기 절단으로부터 보호되는 절단가능한 모이어티)는 에스테르를 포함할 수 있다. 절단되지 않은 제2 절단가능한 모이어티의 존재는 에스테라제 효소에 의한 절단으로부터 제1 절단가능한 모이어티 (에스테르)를 보호할 수 있고, 따라서 항체-약물 접합체가 약물에 대한 목적하는 표적 작용 부위 또는 그 근처에 있을 때까지 항체로부터 약물이 조기 방출되는 것을 실질적으로 감소시키거나 방지할 수 있다. 일부 예들에서, 제1 절단가능한 모이어티에 인접한 링커의 일부는 치환체에 연결되거나 치환체를 포함하고, 여기서 치환체는 제2 절단가능한 모이어티를 포함한다. 경우에 따라서는, 제2 절단가능한 모이어티는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 포함한다.
일부 구현예에서, 효소적으로 절단가능한 모이어티는 당(sugar) 모이어티, 예컨대 글리코시드 (또는 글리오실) 또는 글리코시드 유도체이다. 일부 경우에, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 포함하지 않는 절단가능한 링커와 비교하여 절단가능한 링커의 친수성의 증가를 촉진할 수 있다. 상기 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 절단가능한 링커에 사용하기에 적합한 임의의 글리코시드 또는 글리코시드 유도체일 수 있고, 이는 효소의 효소 작용을 통해 절단될 수 있다. 예를 들어, 제2 절단가능한 모이어티 (즉, 제1 절단가능한 모이어티를 조기 절단으로부터 보호하는 절단가능한 모이어티)는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제1 절단가능한 모이어티는 에스테르를 포함하고, 제2 절단가능한 모이어티는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 포함한다. 특정 구현예에서, 제2 절단가능한 모이어티는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc로부터 선택되는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체이다. 일부 경우에, 제2 절단가능한 모이어티는 글루쿠로나이드이다. 일부 경우에, 제2 절단가능한 모이어티는 갈락토시드이다. 일부 경우에, 제2 절단가능한 모이어티는 글루코시드이다. 일부 경우에, 제2 절단가능한 모이어티는 만노시드이다. 일부 경우에, 제2 절단가능한 모이어티는 푸코시드이다. 일부 경우에, 제2 절단가능한 모이어티는 O-GlcNAc이다. 일부 경우에, 제2 절단가능한 모이어티는 O-GalNAc이다.
글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글리코시드 결합을 통해 절단가능한 링커에 부착 (공유 결합)될 수 있다. 글리코시드 결합은 다양한 유형의 결합, 예컨대 O-글리코시드 결합 (O-글리코시드), N-글리코시드 결합 (글리코실아민), S-글리코시드 결합 (티오글리코시드), 또는 C-글리코시드 결합 (C-글리코시드 또는 C-글리코실)과 같은 다양한 유형의 결합을 통해 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 절단가능한 링커에 연결할 수 있다. 일부 경우에, 글리코시드 결합은 O-글리코시드 결합 (O-글리코시드)이다. 일부 경우에, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 효소에 의해 (예를 들어, 글리코시드 결합의 효소-매개 가수분해를 통해) 부착된 절단가능한 링커로부터 절단될 수 있다. 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 절단가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 수행할 수 있는 임의의 편리한 효소에 의해 절단가능한 링커로부터 제거 또는 절단될 수 있다. 절단가능한 링커에 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 부착하는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 매개하는데 사용될 수 있는 효소의 예로는 글리코시다제, 예컨대 글루쿠로니다아제, 갈락토시다아제, 글루코시다아제, 만노시다아제, 푸코시다아제 등이 있다. 다른 적합한 효소는 또한 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 절단가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 매개하는데 사용될 수도 있다. 일부 경우에, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 절단가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 매개하는데 사용되는 효소가 항체-약물 접합체의 약물에 대한 목적하는 작용 부위 또는 그 근처에서 발견된다. 예를 들어, 효소는 리소좀 효소, 예컨대 리소좀 글리코시다아제일 수 있으며, 항체-약물 접합체의 약물에 대한 목적하는 작용 부위 또는 그 부근의 세포에서 발견된다. 일부 경우에, 효소는 제1 절단가능한 모이어티의 절단을 매개하는 효소가 발견되는 표적 부위 또는 그 근처에서 발견되는 효소이다.
본 발명에 따른 접합체의 예는 다음 구조를 포함하되, 이에 제한되지 않는다:
, , 및 .
상기 구조에 명시된 임의의 화학 엔티티, 링커 및 접합 모이어티는 대상 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 조정될 수 있다.
히드라지닐-인돌릴 및 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물 및 접합체를 제조하는 방법에 관한 추가적인 개시내용은 미국 특허 제9,310,374호 및 미국 특허 제9,493,413호에 기재되어 있으며, 각 개시내용은 본 명세서에 참조에 의해 통합되어 있다. 절단가능한 링커에 대한 추가적인 개시내용은 2020년 1월 22일 출원된 WO　2020/154437, 2021년 11월 19일에 출원된 PCT/US2021/060193, 및 2022년 1월 13일에 출원된 PCT/US2022/012347에 기재되어 있으며, 각 개시내용은 본 명세서에 참조로 통합되어 있다. 분지형 링커에 관한 추가적인 개시내용은 2020년 1월 22일에 출원된 WO　2020/154437, 2021년 11월 19일에 출원된 PCT/US2021/060193, 및 2022년 3월 2일에 출원된 PCT/US2022/018534에 개시되어 있으며, 각 개시내용이 본 명세서에 참조에 의해 통합되어 있다.
접합체 생산에 유용한 화합물
본 발명은 본 명세서에 설명된 접합체를 제조하는 데 유용한 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, 화합물은 하나 이상의 약물 또는 활성제에 부착될 수 있으며, 하나 이상의 약물 또는 활성제를 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)에 접합시키는데 유용한 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 포함할 수도 있다. 예를 들어, 화합물 내의 접합 모이어티는 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)에 접합되어, 하나 이상의 약물 또는 활성제를 폴리펩티드 (항체)와 같이 간접적으로 결합할 수 있다.
특정 구현예에서, 화합물은 하기 화학식 Ⅱ의 화합물이다:
[화학식 Ⅱ]
상기 화학식에서,
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 CR4, N 및 C-LB-W2로부터 독립적으로 선택되고;
R2 및 R3는 각각 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 순환적으로 연결되어 선택적으로 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고;
LA는 제1 링커이고;
LB는 제2 링커이고;
W1은 제1 약물이고;
W2는 제2 약물이다.
화학식 Ⅱ의 화합물과 관련하여, 치환체 Z1, Z2, Z3, Z4, R2, R3, R4, LA, LB, W1 및 W2는 화학식 I의 접합체와 관련하여 위에서 설명된 바와 같다. 마찬가지로, 화학식 Ⅱ의 제1 링커 LA 및 제2 링커 LB와 관련하여, 치환체 T1, T2, T3, T4, T5, T6, V1, V2, V3, V4, V5 및 V6, 및 T7, T8, T9, T10, T11, T12, T13, V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 화학식 I의 접합체와 관련하여 위에서 설명된 바와 같다.
예를 들어, 일부 경우에서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6 및 V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 다음으로부터 선택된다:
이때,
T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CO-이고;
T2는 아미노산 유사체 및 V2는 -NH-이고;
T3은 (PEG)n 및 V3은 -CO-이고;
T4는 AA 및 V4는 존재하지 않고;
T5는 PABC 및 V5는 존재하지 않고; 및
f는 0이거나, 또는
이때,
T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CONH-이고;
T2는 (PEG)n 및 V2는 -CO-이고;
T3은 AA 및 V3은 존재하지 않고;
T4는 PABC 및 V4는 존재하지 않고; 및
e 및 f는 각각 0이거나, 또는
이때,
T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CONH-이고;
T2는 치환된 (C1-C12)알킬 및 V2는 -CO-이고;
T3은 AA 및 V3은 존재하지 않고;
T4는 PABC 및 V4는 존재하지 않고; 및
e 및 f는 각각 0이다.
예를 들어, 일부 경우에서, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13 및 V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13는 다음으로부터 선택된다:
이때,
T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
T8은 (C1-C12)알킬 및 V8은 -CONH-이고;
T9는 (PEG)n 및 V9는 -CO-이고;
T10은 AA 및 V10은 존재하지 않고;
T11은 PABC 및 V11은 존재하지 않고; 및
l 및 m은 각각 0이거나, 또는
이때,
T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
T8은 (C1-C12)알킬 및 V8은 -CONH-이고;
T9는 치환된 (C1-C12)알킬 및 V9는 -CO-이고;
T10은 AA 및 V10은 존재하지 않고;
T11은 PABC 및 V11은 존재하지 않고; 및
l 및 m은 각각 0이다.
화학식 Ⅱ의 화합물은 본 명세서에서 기술된 접합 반응에 사용될 수 있는데, 이때 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착된 하나 이상의 약물 또는 접합체가 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)에 접합되어 항체-약물 접합체를 형성한다.
본 발명에 따른 화합물들의 예시는 다음 구조를 포함하나, 이에 제한되진 않는다:
,
및 .
상기 구조에 명시된 임의의 화학 엔티티, 링커 및 접합 모이어티는 대상 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 조정될 수 있다.
항-넥틴-4 항체
상술한 바와 같이, 대상 접합체는 항-넥틴-4 항체의 아미노산 서열이 2-포밀글리신 (fGly) 잔기를 포함하도록 변형된 항-넥틴-4 항체를 치환체 W2로 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 아미노산은 표준명, 표준 세 글자 약어 및/또는 표준 한 글자 약어로 지칭할 수 있고, 그 예시는 다음과 같다: 알라닌 또는 Ala 또는 A; 시스테인 또는 Cys 또는 C; 아스파트산 또는 Asp 또는 D; 글루탐산 또는 Glu 또는 E; 페닐알라닌 또는 Phe 또는 F; 글리신 또는 Gly 또는 G; 히스티딘 또는 His 또는 H; 아이소류신 또는 Ile 또는 I; 라이신 또는 Lys 또는 K; 류신 또는 Leu 또는 L; 메타이오닌 또는 Met 또는 M; 아스파라진 또는 Asn 또는 N; 프롤린 또는 Pro 또는 P; 글루타민 또는 Gln 또는 Q; 아르지닌 또는 Arg 또는 R; 세린 또는 Ser 또는 S; 트레오닌 또는 Thr 또는 T; 발린 또는 Val 또는 V; 트립토판 또는 Trp 또는 W; 및 티로신 또는 Tyr 또는 Y.
본 발명에서 확인된 다양한 단백질 서열을 하기 표 2에 제공되며, 서열 식별자(sequence identifier) (SEQ ID NO)에 기초하여 전체적으로 참조된다.
표 2. 본 명세서에 개시된 다양한 항체의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL) 서열 및 서열 식별자. 각 VH 및 VL 서열 내 제1, 제2 및 제3 CDR 서열은 굵게 표시되고 밑줄 그어져 있다. 제1 프레임워크 (FW1) 영역은 제1 CDR 이전, 제2 프레임워크 (FW2) 영역은 제1 CDR 이전, 제3 프레임워크 (FW3) 영역은 제2 CDR 이후, 및 제4 프레임워크 (FW4) 영역은 제3 CDR 이후이다.
단백질에 대한 설명 서열 SEQ ID NO:
5D9 모체(Parental) VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLTNYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DYNAAFVSRLSISRDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARSGKWYYFDY WGQGTTLTVSS 1
5D9 VH 변이체(variant) 1 QVQLKESGPGLVQPSETLSLTCTVS GFSITNYG VHWIRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DYNAAFVSRVTISRDNSKSQVFFKLNSVQADDTAVYYC ARSGKWYYFDY WGQGTTVTVSS 2
5D9 VH 변이체 2 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS GFSITNYG VHWIRQPPGKGLEWLGV IWSGGST DYNASLVSRVTISRDTSKSQFFLKLNSVQADDTAVYYC ARSGKWYYFDY WGQGTTVTVSS 3
5D9 VH 변이체 3 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS GGSITNYG VHWIRQPPGKGLEWLGV IWSGGST DYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARSGKWYYFDY WGQGTLVTVSS 4
5D9 VH 변이체 4 QVQLQQSGPGLVKPSETLSLTCTVS GFSLTNYG VHWVRQPPGKGLEWLGV IWSGGST DYNPSLKSRLTISRDTSKNQVSFKMSSVTAADTAVYYC ARSGKWYYFDY WGQGTLVTVSS 5
5D9 VH 변이체 5 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS GGSLTNYG VHWVRQPPGKGLEWIGV IWSGGST NYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYC ARSGKWYYFDY WGQGTLVTVSS 6
12E11 모체 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLTTYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DCNGAFISRLSIIKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARMTHWYFDV WGTGTTVTVSS 7
12E11 변이체 HC 31 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLTTYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DCNGAFISRLSIIKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARLTHWYFDV WGTGTTVTVSS 8
12 E11 변이체 HC 11 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLTTYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DCNGAFISRLSIIKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARHTHWYFDV WGTGTTVTVSS 9
12E11 변이체 HC 42 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLTTYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DCNGAFISRLSIIKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARQTHWYFDV WGTGTTVTVSS 10
12E11 변이체 HC 61 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLTTYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DCNGAFISRLSIIKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARVTHWYFDV WGTGTTVTVSS 11
12E11 변이체 HC 53 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLTTYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DCNGAFISRLSIIKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARTTHWYFDV WGTGTTVTVSS 12
12E11 변이체 HC 22 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLTTYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DCNGAFISRLSIIKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARKTHWYFDV WGTGTTVTVSS 13
3C12 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLTTYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGNT DYNAAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARMTHWYFDV WGTGTTVTVSS 14
6C8 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLSTYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DYNAAFISRLTISKDNSKSQIFFKMNSLQADDTAIYYC ARMMSWYFDV WGTGTTVTVSS 15
7E8 VH QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVS GFSLATYG VHWVRQSPGKGLEWLGV IWSGGST DYNAAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYC ARNSHWYFDV WGTGTTVTVSS 16
7H10 VH QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKAS GYTFTTYW MHWVKQRPGRGLEWIGG IDPYGAHI KYNEMFKTKATLTVDKPSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYC ARGDYSNWWWTY WGQGTLVTVSA 17
5D9 모체 VL DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRAS ENIYSN LAWYQQKQGKSPQLLVY AAT NLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGSYYC QHFWGTPT FGGGTKLEIK 18
5D9 VL 변이체 1 DIQMTQSPASLSASVGDTVTITCRAS QNIYSN LAWYQQKQGKSPQLLVY AAT NLADGVPSRFSGSGSGTQYTLKINSLQSEDFGTYYC QHFWGTPT FGGGTKVEIK 19
5D9 VL 변이체 2 DIQMTQSPSSLSASVGDTVTITCRAS QNIYSN LAWYQQKQGKAPKLLVY AAT NLADGVPSRFSGSGSGTDFTLKINSLQPEDFATYYC QHFWGTPT FGGGTKVEIK 20
5D9 VL 변이체 3 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSIYSN LAWYQQKPGKAPKLLVY AAT NLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHFWGTPT FGGGTKVEIK 21
5D9 VL 변이체 4 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS ENIYSN LAWYQQKPGKAPKLLVY AAT NLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYC QHFWGTPT FGGGTKVEIK 22
5D9 VL 변이체 5 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS QSIYSN LAWYQQKPGKAPKLLVY AAT NLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QHFWGTPT FGGGTKVEIK 23
12E11 모체 VL DIVMTQSQKFMSTTVGDRVSITCKAS QNVNTA VAWYQQKPGQSPKLLIY SAS YRYTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNMQSEDLADYFC QQYSNYPLT FGAGTKLELK 24
12E11 변이체 LC 72 DIVMTQSQKFMSTTVGDRVSITCKAS QNVQTA VAWYQQKPGQSPKLLIY SAS YRYTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNMQSEDLADYFC QQYSNYPLT FGAGTKLELK 25
12E11 변이체 LC 91 DIVMTQSQKFMSTTVGDRVSITCKAS QNVYTA VAWYQQKPGQSPKLLIY SAS YRYTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNMQSEDLADYFC QQYSNYPLT FGAGTKLELK 26
12E11 변이체 LC 83 DIVMTQSQKFMSTTVGDRVSITCKAS QNVVTA VAWYQQKPGQSPKLLIY SAS YRYTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNMQSEDLADYFC QQYSNYPLT FGAGTKLELK 27
3C12 VL DIVMTQSQKFMSTTVGDRVSITCKAS QNVVTA VAWYQQKPGQSPKLLIY SAS NRYTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISYMQSEDLADYFC QQYSSYPLT FGAGTKLELK 28
6C8 VL DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKAS QNVVTN VAWYQQKPGQSPKALIY SAS YRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFC QQYNSYPLT FGAGTKLELK 29
7E8 VL DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKAS QNVVTN VAWYQQKPGQSPKALIY SAS YRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISHVQSEDLAEYFC HQYNNYPYT FGGGTKLEIK 30
7H10 VL DIVMTQSQKFMSTTVGDRVSITCKAS QNVGTA VAWYQQIPGQSPKLLIY SAS NRYTGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNMQSEDLADYFC QHYSSYPWT FGGGTKLEIK 31
CDR 서열 및 대응하는 서열 식별자는 하기 표 3에 제공된다:
표 3. 본 명세서에 개시된 다양한 VH 및 VL 사슬의 CDR 서열
단백질에 대한 설명 CDR1 서열 SEQ ID NO: CDR2 서열 SEQ ID NO: CDR3 서열 SEQ ID NO:
5D9 모체 VH GFSLTNYG 32 IWSGGST 33 ARSGKWYYFDY 34
5D9 VH 변이체 1 GFSITNYG 35 IWSGGST 33 ARSGKWYYFDY 34
5D9 VH 변이체 2 GFSITNYG 35 IWSGGST 33 ARSGKWYYFDY 34
5D9 VH 변이체 3 GGSITNYG 36 IWSGGST 33 ARSGKWYYFDY 34
5D9 VH 변이체 4 GFSLTNYG 32 IWSGGST 33 ARSGKWYYFDY 34
5D9 VH 변이체 5 GGSLTNYG 37 IWSGGST 33 ARSGKWYYFDY 34
12E11 모체 VH GFSLTTYG 38 IWSGGST 33 ARMTHWYFDV
39
12E11 변이체HC 31 VH GFSLTTYG 38 IWSGGST 33 ARLTHWYFDV 40
12 E11 변이체HC 11 VH GFSLTTYG 38 IWSGGST 33 ARHTHWYFDV 41
12E11 변이체HC 42 VH GFSLTTYG 38 IWSGGST 33 ARQTHWYFDV 42
12E11 변이체HC 61 VH GFSLTTYG 38 IWSGGST 33 ARVTHWYFDV 43
12E11 변이체HC 53 VH GFSLTTYG 38 IWSGGST 33 ARTTHWYFDV 44
12E11 변이체HC 22 VH GFSLTTYG 38 IWSGGST 33 ARKTHWYFDV 45
3C12 VH GFSLTTYG 38 IWSGGNT 33 ARMTHWYFDV 39
6C8 VH GFSLSTYG 46 IWSGGST 33 ARMMSWYFDV 47
7E8 VH GFSLATYG 48 IWSGGST 33 ARNSHWYFDV 49
7H10 VH GYTFTTYW 50 IDPYGAHI 51 ARGDYSNWWWTY 52
5D9 모체 VL ENIYSN 53 AAT 54 QHFWGTPT 55
5D9 VL 변이체 1 QNIYSN 56 AAT 54 QHFWGTPT 55
5D9 VL 변이체 2 QNIYSN 56 AAT 54 QHFWGTPT 55
5D9 VL 변이체 3 QSIYSN 57 AAT 54 QHFWGTPT 55
5D9 VL 변이체 4 ENIYSN 53 AAT 54 QHFWGTPT 55
5D9 VL 변이체 5 QSIYSN 57 AAT 54 QHFWGTPT 55
12E11모체 VL QNVNTA 58 SAS 59 QQYSNYPLT 60
12E11 변이체LC 72 VL QNVQTA 61 SAS 59 QQYSNYPLT 60
12E11 변이체LC 91 VL QNVYTA 62 SAS 59 QQYSNYPLT
60
12E11 변이체LC 83 VL QNVVTA 63 SAS
59 QQYSNYPLT 60
3C12 VL QNVVTA 63 SAS 59 QQYSSYPLT 64
6C8 VL QNVVTN 65 SAS 59 QQYNSYPLT 66
7E8 VL QNVVTN 65 SAS 59 HQYNNYPYT 67
7H10 VL QNVGTA 68 SAS 59 QHYSSYPWT 69
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 1 내지 17 중에서 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1-3 (HCDR 1-3)을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 31 중에서 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1-3 (LCDR 1-3)을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬.
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 1 내지 17 중에서 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 31 중에서 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
일부 경우에서, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 1 내지 6 중에서 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1-3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 23 중에서 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1-3을 포함하는 VL 사슬.
따라서, 특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 1 내지 6 중에서 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 23 중에서 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
하기 표 4에 표시된 중쇄 및 경쇄의 임의의 조합을 포함하는 항체가 고려된다.
표 4. 본 발명의 특정 구현예에서 HV 및 HL 사슬의 조합.
5D9 모체 VH/
5D9 모체 VL		 5D9 모체 VH/
5D9 VL 변이체 1		 5D9 모체 VH/
5D9 VL 변이체 2		 5D9 모체 VH/
5D9 VL 변이체 3		 5D9 모체 VH/
5D9 VL 변이체 4		 5D9 모체 VH/
5D9 VL 변이체 5
5D9 VH 변이체 1/5D9 모체 VL 5D9 VH 변이체 1/
5D9 VL 변이체 1		 5D9 VH 변이체 1/
5D9 VL 변이체 2		 5D9 VH 변이체 1/
5D9 VL 변이체 3		 5D9 VH 변이체 1/
5D9 VL 변이체 4		 5D9 VH 변이체 1/
5D9 VL 변이체 5
5D9 VH 변이체 2/5D9 모체 VL 5D9 VH 변이체 2/
5D9 VL 변이체 1		 5D9 VH 변이체 2/
5D9 VL 변이체 2		 5D9 VH 변이체 2/
5D9 VL 변이체 3		 5D9 VH 변이체 2/
5D9 VL 변이체 4		 5D9 VH 변이체 2/
5D9 VL 변이체 5
5D9 VH 변이체 3/5D9 모체 VL 5D9 VH 변이체 3/
5D9 VL 변이체 1		 5D9 VH 변이체 3/
5D9 VL 변이체 2		 5D9 VH 변이체 3/
5D9 VL 변이체 3		 5D9 VH 변이체 3/
5D9 VL 변이체 4		 5D9 VH 변이체 3/
5D9 VL 변이체 5
5D9 VH 변이체 V4/5D9 모체 VL 5D9 VH 변이체 4/
5D9 VL 변이체 1		 5D9 VH 변이체 4/
5D9 VL 변이체 2		 5D9 VH 변이체 4/
5D9 VL 변이체 3		 5D9 VH 변이체 4/
5D9 VL 변이체 4		 5D9 VH 변이체 4/
5D9 VL 변이체 5
5D9 VH 변이체 V5/5D9 모체 VL 5D9 VH 변이체 5/
5D9 VL 변이체 1		 5D9 VH 변이체 5/
5D9 VL 변이체 2		 5D9 VH 변이체 5/
5D9 VL 변이체 3		 5D9 VH 변이체 5/
5D9 VL 변이체 4		 5D9 VH 변이체 5/
5D9 VL 변이체 5
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 7 내지 13 중에서 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1-3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 24 내지 27 중에서 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1-3을 포함하는 VL 사슬.
일부 경우에서, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 7 내지 13 중에서 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 24 내지 27 중에서 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
특정 구현예에서, 하기 표 5에 표시된 중쇄 및 경쇄의 임의의 조합을 포함하는 항체가 고려된다.
표 5. 본 발명의 특정 구현예의 VH 및 VL 사슬의 조합.
12E11 모체 VH/
12E11 모체 VL		 12E11 모체 VH/
12E11 변이체
LC 72 VL		 12E11 모체 VH/
12E11 변이체
LC 91 VL		 12E11 모체 VH/
12E11 변이체
LC 83 VL
12E11 변이체 HC 31 VH/
12E11 모체 VL		 12E11 변이체
HC 31 VH/
12E11 변이체
LC 72 VL		 12E11 변이체
HC 31 VH/
12E11 변이체
LC 91 VL		 12E11 변이체
HC 31 VH/
12E11 변이체
LC 83 VL
12 E11 변이체 HC 11 VH/
12E11 모체 VL		 12 E11 변이체
HC 11 VH/
12E11 변이체
LC 72 VL		 12 E11 변이체
HC 11 VH/
12E11 변이체
LC 91 VL		 12 E11 변이체
HC 11 VH/
12E11 변이체
LC 83 VL
12E11 변이체 HC 42 VH/
12E11 모체 VL		 12E11 변이체
HC 42 VH/
12E11 변이체
LC 72 VL		 12E11 변이체
HC 42 VH/
12E11 변이체
LC 91 VL		 12E11 변이체
HC 42 VH/
12E11 변이체
LC 83 VL
12E11 변이체 HC 61 VH/
12E11 모체 VL		 12E11 변이체
HC 61 VH/
12E11 변이체
LC 72 VL		 12E11 변이체
HC 61 VH/
12E11 변이체
LC 91 VL		 12E11 변이체
HC 61 VH/
12E11 변이체
LC 83 VL
12E11 변이체 HC 53 VH/
12E11 모체 VL		 12E11 변이체
HC 53 VH/
12E11 변이체
LC 72 VL		 12E11 변이체
HC 53 VH/
12E11 변이체
LC 91 VL		 12E11 변이체
HC 53 VH/
12E11 변이체
LC 83 VL
12E11 변이체 HC 22 VH/
12E11 모체 VL		 12E11 변이체
HC 22 VH/
12E11 변이체
LC 72 VL		 12E11 변이체
HC 22 VH/
12E11 변이체
LC 91 VL		 12E11 변이체
HC 22 VH/
12E11 변이체
LC 83 VL
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 14의 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1-3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 28의 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1-3을 포함하는 VL 사슬.
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 14의 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 28의 서열을 포함하는 VL 사슬.
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 15의 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1-3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 29의 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1-3을 포함하는 VL 사슬.
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 15의 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 29의 서열을 포함하는 VL 사슬.
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 16의 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1-3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 30의 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1-3을 포함하는 VL 사슬.
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 16의 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 30의 서열을 포함하는 VL 사슬.
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 17의 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1-3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 31의 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1-3을 포함하는 VL 사슬.
일부 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 넥틴-4에 특이적으로 결합하며, 다음을 포함한다:
SEQ ID NO: 17의 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 31의 서열을 포함하는 VL 사슬.
특정 구현예에서, 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬은 SEQ ID NO: 1 내지 17 중에서 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1-3을 포함하고, SEQ ID NO:1 내지 17 중에서 선택된 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 서열동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬과 SEQ ID NO:1 내지 17로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 외의 영역들, 예를 들어, 하나 이상의 프레임워크 영역(FR), 예를 들어, FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 한정될 수 있다.
특정 구현예에서, 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬은 SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1-3을 포함하고, SEQ ID NO: 18 내지 31 중에서 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 서열동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬과 SEQ ID NO:18 내지 31로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 외의 영역들, 예를 들어, 하나 이상의 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 한정될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 항-넥틴-4 항체는, a) SEQ ID NO:1 내지 17 중에서 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열을 갖는 VH 영역을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO:70 내지 86 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역, 이때 불변 영역 내의 서열 LCTPSR에 존재하는 C는 fGly로 대체되고; 및 b) SEQ ID NO:18 내지 31 중에서 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 포함하는 경쇄;를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 항-넥틴-4 항체는 a) SEQ ID NO:1 내지 17 중에서 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 (예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96% , 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한) 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO:70 내지 86 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 (예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96% , 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한) 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역, 이때 불변 영역 내의 서열 LCTPSR에 존재하는 C는 fGly'로 대체되고, 여기서 fGly'는 관심 모이어티에 접합된 아미노산 잔기를 지칭하고; 및 b) SEQ ID NO:18 내지 31 중에서 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 85% 동일한 (예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96% , 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한) 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는 경쇄;를 포함할 수 있다.
본 발명의 항-넥틴-4 항체는 ELISA에 의해 측정된 바와 같이 약 0.1-1 nM, 예를 들어, 0.2-0.9 nM, 0.3-0.7 nM, 또는 0.4-0.6 nM의 EC50을 갖는 넥틴-1 단백질, 예를 들어, 재조합 넥틴-4 단백질에 결합할 수 있다. 최대 절반 반응(half maximal response) (예를 들어, 최대 형광 강도의 절반)을 제공하는 항체의 농도는 EC50으로 측정된다.
본 발명의 항-넥틴-4 항체는 암 조직에 결합할 수 있고, 정상 조직에 대한 결합이 없거나 미미한 결합 (예를 들어, 면역조직화학에 의해 측정된 바와 같은 미미한 결합 또는 면역조직화학에 의해 검출되지 않는 결합)을 보일 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기술된 항-넥틴-4 항체는 난소, 유관 유방암, 폐 선암 및 췌장암과 같은 암세포를 갖는 인간 고형 종양에 결합할 수 있으나 암세포를 갖지 않는 난소, 유방, 폐 및 췌장과 같은 인간 정상 조직에는 결합이 검출되지 않을 수 있다.
항체는 다양한 연구, 진단 및 치료 응용 분야에서 사용되며, 여기에는 미국 특허 제20210130459호, 제20200231670호, 제20180243434호, 제20110301056호, 제20100285597호, 제20080268476호에 설명된 임의의 방법을 수행하는 것이 포함되고,이들 각각의 개시내용은 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다.
대상 항체는 넥틴-4 폴리펩티드와 특이적으로 결합하고, 여기서 에피토프는 SEQ ID NO:99에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 인간 넥틴-4 항원 내의 아미노산 잔기를 포함한다:
MPLSLGAEMWGPEAWLLLLLLLASFTGRCPAGELETSDVVTVVLGQDAKLPCFYRGDSGEQVGQVAWARVDAGEGAQELALLHSKYGLHVSPAYEGRVEQPPPPRNPLDGSVLLRNAVQADEGEYECRVSTFPAGSFQARLRLRVLVPPLPSLNPGPALEEGQGLTLAASCTAEGSPAPSVTWDTEVKGTTSSRSFKHSRSAAVTSEFHLVPSRSMNGQPLTCVVSHPGLLQDQRITHILHVSFLAEASVRGLEDQNLWHIGREGAMLKCLSEGQPPPSYNWTRLDGPLPSGVRVDGDTLGFPPLTTEHSGIYVCHVSNEFSSRDSQVTVDVLDPQEDSGKQVDLVSASVVVVGVIAALLFCLLVVVVVLMSRYHRRKAQQMTQKYEEELTLTRENSIRRLHSHHTDPRSQPEESVGLRAEGHPDSLKDNSSCSVMSEEPEGRSYSTLTTVREIETQTELLSPGSGRAEEEEDQDEGIKQAMNHFVQENGTLRAKPTGNGIYINGRGHLV (SEQ ID NO: 99).
특정 구현예에서, 본 명세서에 개시된 항-넥틴-4 항체에 의해 결합된 넥틴-4 에피토프는 인간 넥틴-4 또는 SK-BR-3 유방암 세포를 과발현하는 HEK 세포에 의해 발현되는 넥틴-4 상에 존재한다.
대상 항체는 넥틴-4에 높은 결합 친화도를 나타낸다. 예를 들어, 대상 항체는 적어도 약 10-7 M, 적어도 약 10-8 M, 적어도 약 10-9 M, 적어도 약 10-10 M, 적어도 약 10-11 M, 또는 적어도 약 10-12 M, 또는 10-12 M를 초과하는 친화력으로 넥틴-4에 결합한다. 대상 항체는 약 10-7 M 내지 약 10-8 M, 약 10-8 M 내지 약 10-9 M, 약 10-9 M 내지 약 10-10 M, 약 10-10 M 내지 약 10-11 M, 또는 약 10-11 M 내지 약 10-12 M, 또는 10-12 M을 초과하는 친화력으로 넥틴-4 상에 존재하는 애피토프에 결합한다.
본 발명의 항-넥틴-4 항체는, 일부 경우에, 그 세포 표면에서 넥틴-4를 발현하는 세포의 세포사멸(apoptosis)을 유도할 수 있다.
"넥틴-4 항원" 또는 "넥틴-4 폴리펩티드"는 SEQ ID NO:99와 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "면역글로불린"은 면역글로불린 유전자에 의해 실질적으로 암호화되는 하나 이상의 폴리펩티드로 이루어진 단백질을 지칭한다. 알려진 인간 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파 (IgA1 및 IgA2), 감마 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), 델타, 엡실론 및 뮤(mu) 불변 영역 유전자; 및 수많은 면역글로불린 가변 영역 유전자;를 포함한다. 전장 면역글로불린 경쇄 (약 25kD 또는 214개의 아미노산)는 N-말단 (약 110개의 아미노산)에서 가변 영역 유전자에 의해 암호화되고, C-말단에서 카파 또는 람다 불변 영역에 의해 암호화된다. 전장 면역글로불린 중쇄 (약 50kD 또는 446개의 아미노산)는 N-말단 (약 116개의 아미노산)에서 가변 영역 유전자 및 C-말단에서 전술한 다른 불변 영역 유전자 중 하나, 예를 들어, 감마 (약 330개의 아미노산을 암호화)에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 대상 항체는 전장 면역글로불린 중쇄 및 전장 면역글로불린 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 대상 항체는 전장 면역글로불린 중쇄 및 전장 면역글로불린 경쇄를 포함하지 않고, 대신에 전장 면역글로불린 중쇄 및 전장 면역글로불린 경쇄의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원-결합 단편은 별개의 폴리펩티드 사슬 상에 함유된다; 다른 구현예에서, 항원-결합 단편은 단일 폴리펩티드 사슬 내에 함유된다. 용어 "항원-결합 단편"은 상술한 바와 같이, 넥틴-4에 특이적으로 결합할 수 있는 전장 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 결합 단편의 예로는 (i) Fab 단편 (VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편); (ii) F(ab')2 단편 (힌지 영역에서 다이설파이드 브리지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편); (iii) Fd 단편 (VH 및 CH1 도메인으로 구성됨); (iv) Fv 단편 (항체의 단일 암(arm)의 VH 및 VL 도메인으로 구성됨); (v) dAb 단편 (VH 도메인으로 구성됨); (vi) 단리된 CDR; (vii) 단일 사슬 Fv (scFv) (재조합 수단을 사용하여 합성 링커로 결합된 항체 단일 암의 VH 및 VL 도메인이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성함); (viii) 디아바디 (VH 및 VL 도메인이 결합되어 1가 분자를 형성하지 않는 2개의 scFv로 구성됨; 각 scFv의 VH는 다른 scFv의 VL 도메인과 쌍을 이루어 2가 분자를 형성함); (ix) 이중-특이적 항체 (적어도 2개의 항원 결합 영역으로 구성되고, 각 영역은 상이한 에피토프와 결합함). 일부 구현예에서, 대상 항체 단편은 Fab 단편이다. 일부 구현예에서, 대상 항체 단편은 단일-사슬 항체 (scFv)이다.
일부 구현예에서, 대상 항체는 재조합 또는 변형된 항체, 예를 들어, 키메라, 인간화, 탈면역화 또는 시험관 내 생성 항체이다. 본 명세서에 사용된 용어 "재조합" 또는 "변형된" 항체는 (i) 숙주 세포에 이식된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, (ii) 재조합, 조합 항체 라이브러리에서 단리된 항체; (iii) 인간면역글로불린 유전자를 형질전환한 동물 (예를 들어, 마우스)로부터 단리한 항체; 또는 (iv) 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 포함하는 기타 수단에 의한 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체;와 같이 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 항체를 포함하고자 한다. 이러한 재조합 항체에는 인간화, CDR 이식(grafted), 키메라, 탈면역 및 시험관 내 생성된 항체가 포함되며; 이러한 재조합 항체는 인간 생식세포(germline) 면역글로불린 서열 유래의 불변 영역을 선택적으로 포함할 수 있다.
예를 들어, 전장 이중특이성 항체는 세포가 없는 시험관 내 환경에서 또는 동시-발현(co-expression)을 사용하여 뚜렷한 특이성을 갖는 두 개의 항체 반 분자(half molecule)의 이종이량체 형성을 촉진하기위해 각 반 분자의 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입하여 두 개의 단일특이적 2가 항체 간의 Fab 암 교환 (또는 반 분자 교환)을 사용하여 생성할 수 있다. Fab 암 교환 반응은 다이설파이드-결합 이성질화 반응 및 CH3 도메인의 해리 결합의 결과이다. 단일특이성 모 항체의 힌지 영역에 있는 다이설파이드 결합이 감소한다. 그 결과 단일특이성 모 항체 중 하나의 유리 시스테인은 두 번째 단일특이성 모 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄 간 다이설파이드 결합을 형성하고, 동시에 모 항체의 CH3 도메인은 해리-결합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 암의 CH3 도메인은 동종이량체화 (homodimerization)보다 이종이량체화 (heterodimerization)를 선호하도록 설계될 수 있다. 그 결과 각각 별개의 에피토프와 결합하는 2개의 Fab 암 또는 반 분자를 갖는 이중특이성 항체가 생성된다.
"놉-인-홀(knob-in-hole)" 전략 (예를 들어, PCT Intl. Publ. 제WO 2006/028936호 참조)를 사용하여 전장 이중특이성 항체를 생성할 수 있다. 간단히 말해서, 인간 IgG에서 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산은 CH3 도메인 상호 작용에 영향을 미치는 위치에서 돌연변이를 일으켜 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄 (홀)을 갖는 아미노산은 특이적으로 제1 항원과 결합하는 항체의 중쇄에 도입되고, 큰 측쇄 (놉)을 갖는 아미노산은 특이적으로 제2 항원과 결합하는 항체의 중쇄에 도입된다. 두 항체의 동시 발현 후, "홀"이 있는 중쇄와 "놉"가 있는 중쇄의 우선적 상호 작용의 결과로 이종이량체가 형성된다. 놉 및 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다 (제1 중쇄의 제1 CH3 도메인에서의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인에서의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T3945/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S/L368A/Y407V.
하나의 CH3 표면에서 양전하를 띤 잔기와 제2 CH3 표면에서 음전하를 띤 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 이용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이들은 다음에 기술되어 있다: 미국 공개특허 제US2010/0015133호; 미국 공개특허 제US2009/0182127호; 미국 공개특허 제U82010/028637호 또는 미국 공개특허 제US2011/0123532호. 다른 전략에서, 이종이량체화는 다음과 같은 치환에 의해 촉진될 수 있다 (제1 중쇄의 제1 CH3 도메인에서 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인에서 변형된 위치로 표현됨):L351Y/F405A/Y407V/T394W, T366I/K392M/T394W/F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W/F405A/Y407V, L351Y/Y407A/T366A/K409F, L351Y/Y407A/T366V/K409F, Y407A/T366A/K409F, 또는 T350V/L351Y/F405A/Y407V, T350V/T366L/K392L/T394W, 이는 미국 특허 공보 제US2012/0149876호 또는 미국 특허 공보 제US2013/0195849호에서 기술된 바와 같다.
또한, 단일 사슬 이중특이적 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 단일 사슬 이중특이적 항체는 이중특이적 scFv이다. 대상 항체는 인간화될 수 있다. 불변 영역(들)은, 존재하는 경우, 실질적으로 또는 전체적으로 인간 면역글로불린으로부터 유래할 수도 있다.
인간화 항체를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 마우스 CDR을 인간 가변 도메인 프레임워크로 대체하는 것은, 예를 들어, 인간 가변 도메인 프레임워크가 CDR이 유래한 마우스 가변 프레임워크와 동일하거나 유사한 형태를 채택하는 경우, 정확한 공간 방향(spatial orientation)을 유지할 수 있다. 이는 프레임워크 서열이 CDR이 유도된 뮤린 가변 프레임워크 도메인과 높은 수준의 서열 동일성을 나타내는 인간 항체로부터 인간 가변 도메인을 획득함으로써 달성될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 가변 프레임워크 영역은 동일하거나 상이한 인간 항체 서열로부터 유도될 수 있다. 인간 항체 서열은 자연 발생 인간 항체의 서열이거나 여러 인간 항체의 공통 서열 일 수 있다.
뮤린 공여자(donor) 면역글로불린 및 적절한 인간 수여자(acceptor) 면역글로불린의 상보성 결정 영역을 확인한 후, 다음 단계는 생성된 인간화 항체의 특성을 최적화하기 위해 이들 성분으로부터 어떤 잔기가 치환되어야 하는지를 결정하는 것이다. 일반적으로, 인간 아미노산 잔기를 뮤린으로 치환하는 것은 최소화되어야 하는데, 이는 뮤린 잔기의 도입이 인간에서 인간-항-마우스-항체(HAMA) 반응을 유도하는 항체의 위험을 증가시키기 때문이다. 면역 반응을 결정하는 당업계에 알려진 방법들은 특정 환자에서 또는 임상시험 동안에 HAMA 반응을 모니터링하기 위해 수행될 수 있다. 인간화 항체를 투여받은 환자는 상기 요법의 투여 시작 시 및 투여 전반에 걸쳐 면역원성 평가를 받을 수 있다. HAMA 반응은, 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명 기술(BIACORE) 및/또는 고체상 ELISA 분석을 포함하여, 당업계에 공지된 방법을 사용하여 환자로부터 혈청 샘플에서 인간화 치료제에 대한 항체를 검출함으로써 측정된다. 많은 구현예에서, 대상 인간화 항체는 인간 대상체에서 HAMA 반응을 실질적으로 유도하지 않는다.
인간 가변 영역 프레임워크 잔기로부터의 특정 아미노산은 CDR 형태 및/또는 항원에 대한 결합에 대한 가능한 영향에 기초하여 치환을 위해 선택된다. 뮤린 CDR 영역과 인간 가변 프레임워크 영역의 부자연스러운 병치는 부자연스러운 형태적 억제를 초래할 수 있으며, 이는 특정 아미노산 잔기의 치환에 의해 교정되지 않는 한 결합 친화도의 손실로 이어질 수 있다. 치환을 위한 아미노산 잔기의 선택은 부분적으로 컴퓨터 모델링에 의해 결정될 수 있다. 면역글로불린 분자의 3차원 이미지를 생성하기 위한 컴퓨터 하드웨어 및 소프트웨어가 당업계에 공지되어 있다. 일반적으로, 분자 모델은 면역글로불린 사슬 또는 이의 도메인에 대한 해결된(solved) 구조로부터 시작하여 생산된다. 모델링할 사슬은 아미노산 서열 유사성을 해결된 3차원 구조의 사슬 또는 도메인과 비교하고, 가장 큰 서열 유사성을 나타내는 사슬 또는 도메인이 분자 모델을 구축하기 위한 출발점으로 선택된다. 모델링을 위해 적어도 50%의 서열 동일성을 공유하는 사슬 또는 도메인이 선택되고, 바람직하게는 적어도 60%, 70%, 80%, 90%의 서열 동일성을 공유하는 사슬 또는 도메인이 모델링을 위해 선택된다. 해결된 시작 구조는 모델링되는 면역글로불린 사슬 또는 도메인의 실제 아미노산과 시작 구조의 아미노산 간의 차이를 허용하도록 변형된다. 그런 다음 변형된 구조를 복합(composite) 면역글로불린으로 조립한다. 마지막으로, 에너지 최소화 및 모든 원자가 서로 적절한 거리 내에 있는지, 결합 길이와 각도가 화학적으로 허용 가능한 한계 내에 있는지 확인하여 모델을 개선한다.
상기(supra) 카바트(Kabat)에 의해 정의된 프레임워크 잔기가 상기 초티아(Chothia)에 의해 정의된 바와 같은 구조적 루프 잔기를 구성하는 경우, 마우스 항체에 존재하는 아미노산은 인간화 항체로의 치환을 위해 선택될 수 있다. "CDR 영역에 인접한" 잔기는 인간화 면역글로불린 사슬의 일차 서열 중 하나 이상의 CDR에 바로 인접한 위치에 있는 아미노산 잔기, 예를 들어 카바트에 의해 정의된 CDR 또는 초티아에 의해 정의된 CDR (예를 들어, 문헌 [Chothia and Lesk JMB 196:901 (1987)] 참조)에 바로 인접한 위치에 아미노산 잔기를 포함한다. 이러한 아미노산은 특히 CDR의 아미노산과 상호 작용할 가능성이 높으며, 수여자(acceptor)에서 선택될 경우 공여자 CDR을 왜곡하고 친화도를 감소시킬 수 있다. 더욱이, 인접한 아미노산은 항원과 직접 상호작용할 수 있고 (문헌 [Amit et al., Science, 233:747 (1986)]), 공여자로부터 이들 아미노산을 선택하는 것은 본래 항체에서 친화도를 제공하는 모든 항원 접촉을 유지하기위해 바람직할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상 항체는 scFv 다량체 (multimer)를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 대상 항체는 scFv 이량체 (예를 들어, 2개의 탠덤 scFv (scFv2)를 포함함), scFv 삼량체 (예를 들어, 3개의 탠덤 scFv (scFv3)를 포함함), scFv 사량체 (예를 들어, 4개의 탠덤 scFv (scFv4)를 포함함), 또는 (예를 들어, 나란한(tandem)) 4개 초과의 scFv의 다량체이다. scFv 단량체는 길이가 약 2개의 아미노산 내지 약 10개의 아미노산, 예를 들어, 길이가 2 aa, 3 aa, 4 aa, 5 aa, 6 aa, 7 aa, 8 aa, 9 aa, 또는 10 aa의 링커를 통해 나란히(tandem) 연결될 수 있다. 적합한 링커는, 예를 들어, (Gly)x를 포함하며, 여기서 x는 2에서 10까지의 정수이고, 글리신-세린 중합체 등이다.
일부 구현예에서, 대상 항체는 면역글로불린의 불변 영역 (예를 들어, Fc 영역)을 포함한다. Fc 영역은, 존재하는 경우, 인간 Fc 영역일 수 있다. 불변 영역이 존재하는 경우, 항체는 경쇄 및 중쇄 불변 영역 둘 다를 함유할 수 있다. 본 명세서에 기재된 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는 모든 유형의 불변 영역 및 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 임의의 아이소타입을 갖는 항체를 포함한다. 적합한 중쇄 Fc 영역의 예는 인간 아이소타입 IgG1 Fc이다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 대상 항체 (예를 들어, 대상 인간화 항체)는 하나 이상의 클래스 또는 아이소타입의 서열을 포함할 수 있다. 항체는 2개의 경쇄와 2개의 중쇄를 함유하는 사량체로, 별도의 중쇄로, 별도의 경쇄로, Fab, Fab' F(ab')2 및 Fv로, 또는 단일 사슬 항체로 발현될 수 있고, 이때 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 스페이서(spacer)를 통해 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항-넥틴-4 항체는 Fc 영역에 도입된 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환들 중 하나 이상은 Fc 영역의 위치 239, 298, 326, 330 및 332에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항-넥틴-4 항체는 Fc 영역에 도입된 하기 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함할 수 있다: I332E; S239D/A330L/I332E; S239D/S298A/I332E; S239D/K326T/I332E; S239D/S298A/K326T/I332E; 또는 S239D/A330L/I332E/D356E/L358M.
일부 구현예에서, 대상 항체는 카복실 말단에서 유리 티올(-SH) 기를 포함하고, 이때 유리 티올 기는 항체를 제2 폴리펩티드 (예를 들어, 대상 항체를 포함하는 다른 항체), 스캐폴드(scaffold), 담체 등에 부착하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상 항체는 하나 이상의 비자연적으로(non-naturally) 발생하는 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 비자연적으로 암호화된 아미노산은 카보닐 기, 아세틸 기, 아미노옥시 기, 히드라진 기, 히드라지드 기, 세미카바지드 기, 아지드 기, 또는 알카인 기를 포함한다. 비자연적으로 발생하는 아미노산의 포함(inclusion)은 중합체, 제2 폴리펩티드, 스캐폴드 등에 대한 연결을 제공할 수 있다. 이러한 비자연적으로 발생하는 아미노산의 예로는 N-아세틸글루코사미닐-L-세린, N-아세틸글루코사미닐-L-트레오닌 및 O-포스포티로신이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 또한 부착된 관심 모이어티, 예를 들어, 검출가능한 표지, 약물, 반감기 연장 모이어티 등을 갖는 항-넥틴-4 항체도 제공한다. 항체의 변형은 다양한 합성 및/또는 재조합 방법에 의해 달성될 수 있다. 항체에 부착된 모이어티 또는 모이어티들은 매우 다양한 기능 또는 특징들 중 하나 이상을 제공할 수 있다. 예시적인 모이어티들은 검출 가능한 라벨들 (예를 들어, 염료 라벨 (예를 들어, 발색단, 형광단), 생물물리학적 프로브 (스핀 라벨, 핵자기 공명 (NMR) 프로브), 형광 공명 에너지 전달(FRET)-유형 라벨 (예를 들어, 형광단/퀀처(quencher) 쌍의 적어도 하나의 구성원을 포함하는 FRET 쌍의 적어도 하나의 구성원), 생물발광 공명 에너지 전달 (BRET)-유형 라벨 (예를 들어, BRET 쌍의 적어도 하나의 구성원), 면역검출 가능한 태그 (예를 들어, FLAG, His(6) 등); 수용성 중합체 (예를 들어, 페길화); 정제 태그 (예를 들어, 친화성 크로마토그래피에 의한 단리를 용이하게 하기 위해 (예를 들어, FLAG 에피토프의 부착; 막 국소화 도메인 (예를 들어, 지질 또는 글리코포스파티딜이노시톨 (GPI)-유형 앵커(anchor)); 고정화 태그 (예를 들어, 선택적 부착을 포함하는, 표면에 대한 폴리펩티드의 부착을 용이하게 하기 위해); 약물 (예를 들어, 약물 표적화를 용이하게 하기 위해, 예를 들어, 항체에 약물을 부착하는 것을 통해); 등을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상 항체는 중합체 (예를 들어, 폴리펩티드 이외의 중합체)에 연결 (예를 들어, 공유결합)된다. 적합한 중합체는, 예를 들어, 생체적합성 중합체 및 수용성-생체적합성 중합체를 포함한다. 적합한 중합체는 합성 중합체 및 자연-발생 중합체를 포함한다. 적합한 중합체는, 예를 들어, 치환 또는 비치환된 직쇄 또는 분지쇄 폴리알킬렌, 폴리알케닐렌 또는 폴리옥시알킬렌 중합체 또는 분지쇄 또는 비분지쇄 다당류, 예를 들어, 호모- 또는 헤테로-다당류를 포함한다. 적합한 중합체는, 예를 들어, 에틸렌 비닐 알코올 공중합체 (일반적으로 일반적인 명칭 EVOH 또는 상품명 EVAL로 공지됨); 폴리부틸메타크릴레이트; 폴리(히드록시 발레레이트); 폴리(L-젖산); 폴리카프로락톤; 폴리(락타이드-코-글리콜라이드); 폴리(히드록시 부티레이트); 폴리(히드록시부티레이트-코-발레레이트); 폴리디옥사논; 폴리오르토에스테르; 폴리안하이드라이드; 폴리(글리콜산); 폴리(D, L-젖산); 폴리(글리콜 산-코-트리메틸렌 카보네이트); 폴리포스포에스테르; 폴리포스포에스테르 우레탄; 폴리(아미노산); 시아노아크릴레이트; 폴리(트리메틸렌 카보네이트); 폴리(이미노카보네이트); 코폴리(에테르-에스테르) (예: 폴리(에틸렌옥사이드)-폴리(락트산) (PEO/PLA) 공중합체); 폴리알킬렌 옥살레이트; 폴리포스파젠; 생체 분자, 예컨대 피브린, 피브리노겐, 셀룰로스, 전분, 콜라겐 및 히알루론산; 폴리우레탄; 실리콘; 폴리에스테르; 폴리올레핀; 폴리이소부틸렌 및 에틸렌-알파올레핀 공중합체; 아크릴 중합체 및 공중합체; 비닐 할라이드 중합체 및 공중합체, 예컨대 폴리염화비닐; 폴리비닐 에테르, 예컨대 폴리비닐 메티틸 에테르; 폴리비닐리덴 할라이드, 예컨대 폴리비닐리덴 플루오라이드 및 폴리비닐리덴 클로라이드; 폴리아크릴로니트릴; 폴리비닐 케톤; 폴리비닐 방향족 화합물, 예컨대 폴리스티렌; 폴리비닐 에스테르, 예컨대 폴리비닐 아세테이트; 올레핀과 비닐 단량체의 공중합체, 예컨대 에틸렌-메틸 메타크릴레이트 공중합체, 아크릴로니트릴-스티렌 공중합체, ABS 레진 및 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체; 폴리아미드, 예컨대 나일론 66 및 폴리카프로락탐; 알키드 레진; 폴리카보네이트; 폴리옥시메틸렌; 폴리이미드; 폴리에테르; 에폭시 레진; 폴리우레탄; 레이온; 레이온-트리아세테이트; 셀룰로스; 셀룰로스 아세테이트; 셀룰로스 부티레이트; 셀룰로스 아세테이트 부티레이트; 셀로판; 셀룰로스 질산염; 셀룰로스 프로피오네이트; 셀룰로스 에테르; 비정질 테프론; 폴리(에틸렌 글리콜); 및 카복시메틸 셀룰로스를 포함한다.
적합한 합성 중합체는 비치환 및 치환된 직쇄 또는 분지쇄 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(프로필렌글리콜) 폴리(비닐알코올) 및 이들의 유도체, 예를 들어, 치환된 폴리(에틸렌글리콜), 예컨대 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 및 이들의 유도체를 포함한다. 적합한 자연발생 중합체는, 예를 들어, 알부민, 아밀로스, 덱스트란, 글리코겐 및 이들의 유도체를 포함한다.
적합한 중합체는 500 Da 내지 50000 Da, 예를 들어, 5000 Da 내지 40000 Da, 또는 25000 내지 40000 Da의 범위에서 평균 분자량을 가질 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 대상 항체가 폴리(에틸렌 글리콜) (PEG) 또는 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체를 포함하는 경우, PEG 또는 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체는 약 0.5 킬로달톤(kDa) 내지 1 kDa, 약 1 kDa 내지 5 kDa, 5 kDa 내지 10 kDa, 10 kDa 내지 25 kDa, 25 kDa 내지 40 kDa, 또는 40 kDa 내지 60 kDa의 범위의 분자량을 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 대상 항체는 PEG 중합체에 공유결합된다. 일부 구현예에서, 대상 scFv 다량체는 PEG 중합체에 공유결합된다. 단백질에 접합하기에 적합한 PEG는 일반적으로 실온에서 물에 용해되며, 일반식 R(O-CH2-CH2)n O-R을 가지며, 이때 R은 수소, 또는 알킬기 또는 알칸올 기와 같은 보호기이되, 여기서 n은 1 내지 1000의 정수이다. R이 보호기인 경우, 일반적으로 1개에서 8개의 탄소를 가지고 있다. 대상 항체에 접합된 PEG는 선형 또는 분지형일 수 있다. 분지된 PEG 유도체는 별 모양-PEG (star-PEG) 및 다중-팔(multi-armed) PEG가 포함된다.
대상 항체는 글리코실화될 수 있고, 예를 들어, 대상 항체는 공유결합된 탄수화물 또는 다당류 모이어티를 포함할 수 있다. 항체의 글리코실화는 전형적으로 N-결합 글리코실화이거나 또는 O-결합 글리코실화이다. 항체에 글리코실화 부위를 첨가하는 것은 아미노산 서열을 변경하여 N- 또는 O-결합된 글리코실화 부위를 포함하도록 함으로써 편리하게 달성된다. 유사하게, 글리코실화 부위의 제거는 항체의 본래 글리코실화 부위 내의 아미노산 변경에 의해 달성될 수 있다.
대상 항체는 예를 들어, 글루타르알데히드, 호모이작용성(homobifunctional) 가교제, 또는 헤테로이작용성 가교제를 사용하여 제2 모이어티 (예를 들어, 지질, 대상체 항체 이외의 폴리펩티드, 합성 중합체, 탄수화물 등)에 공유 결합될 수 있다. 글루타르알데히드는 아미노 모이어티를 통해 폴리펩티드를 가교시킨다. 호모이작용성 가교제 (예를 들어, 호모이작용성 이미도에스테르, 호모이작용성 N-히드록시숙시니미딜 (NHS) 에스테르, 또는 호모이작용성 설프하이드릴 반응성 가교제)는 2개 이상의 동일한 반응성 모이어티를 포함하고, 가교제가 연결될 폴리펩티드의 혼합물을 함유하는 용액에 첨가되는 원-스텝 반응 절차에 사용될 수 있다. 호모이작용성 NHS 에스테르 및 이미도 에스테르는 폴리펩티드를 함유한 가교 아민을 가교한다. 약한 알칼리성 pH에서, 이미도 에스테르는 1차 아민과만 반응하여 이미도아미드를 형성하며, 가교 폴리펩티드의 전체 전하는 영향을 받지 않는다. 호모이작용성 설프하이드릴 반응성 가교제에는 비스말레이미미드헥산 (BMH), 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠 (DFDNB) 및 1,4-디-(3', 2'-피리딜디티오) 프로피노아미도 부탄 (DPDPB)이 포함된다.
헤테로이작용성 가교제는 2개 이상의 상이한 반응성 부분 (예를 들어, 아민 반응성 모이어티 및 술프히드릴-반응성 모이어티)을 가지며, 아민 또는 설프히드릴 반응성 모이어티를 통해 폴리펩티드 중 하나와 가교된 후, 비-반응 모이어티를 통해 다른 폴리펩티드와 반응한다. 여러 헤테로이작용성 할로아세틸 가교제를 사용할 수 있으며, 피리딜 다이설파이드 가교제도 사용할 수 있다. 카르보디이미드는 카복실을 아민에 커플링하기 위한 헤테로이작용성 가교 시약의 전형적인 예로, 아미드 결합을 생성한다.
대상 항체는 일부 구현예에서 "방사선 불투과성(radiopaque)" 라벨, 예를 들어, 예를 들어, X-선을 사용하여 용이하게 시각화할 수 있는 라벨을 포함할 수 있다. 방사선 불투과성 물질은 당업계에 잘 알려져있다. 가장 일반적인 방사성 불투과성 물질에는 요오드화물, 브롬화물 또는 바륨염이 포함된다. 다른 방사선 불투과성 물질도 공지되어 있으며, 이는 유기 비스무트 유도체, 방사선 불투과성 다중우레탄(multiurethanes), 유기비스무트 복합체, 방사선 불투과성 바륨 멀티머 복합체 등을 포함하지만, 이에 제한되진 않는다.
일부 구현예에서, 대상 항체는 폴리아민 변형체(modification)를 포함한다. 대상 항체는 자연 발생 또는 합성된 폴리아민으로 변형될 수 있다. 유용한 자연 발생 폴리아민에는 퓨트레신, 스페르미딘, 스페르민, 1,3-데아미노프로판, 노르스페르미딘, 신-호모스페르미딘, 테르민(thermine), 써모스퍼민(thermospermine), 칼도펜타민(caldopentamine), 호모칼도펜타민 및 카나발민(canavalmine)이 포함된다. 퓨트레신, 스페르미딘 및 스페르민이 특히 유용하다. 합성 폴리아민은 실험식 CXHYNZ로 구성되고, 고리형 또는 비고리형, 분지형 또는 비분지형, 1-6 NR 또는 N(R)2 모이어티를 더 포함하는 3-12개의 탄소 원자의 탄화수소 사슬일 수 있고, 이때 R은 H, (C1-C4)알킬, 페닐, 또는 벤질이다. 폴리아민은 임의의 표준 가교 방법을 사용하여 항체에 연결할 수 있다.
항체의 변형 방법
본 발명의 항-넥틴-4 항체 접합체는 다음을 포함할 수 있다: 1) 관심 모이어티에 접합된 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심 모이어티에 접합된 Ig 경쇄 불변 영역; 2) 관심 모이어티에 접합된 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심 모이어티에 접합되지 않은 Ig 경쇄 불변 영역; 또는 3) 관심 모이어티에 접합되지 않은 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심 모이어티에 접합된 Ig 경쇄 불변 영역. 대상 항-넥틴-4 항체 접합체는 또한 관심 모이어티에 접합된 VH 및/또는 VL 도메인을 포함할 수도 있다.
일 예시에서, 항체는 2-포밀글리신 잔기를 포함하도록 변형될 수 있으며, 이는 이종성 모이어티의 부착을 위한 화학적 손잡이의 역할을 할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항-넥틴-4의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역은 2-포밀글리신 생성 효소 (FGE)의 작용에 의해 전환되어 2-포밀글리신(fGly)을 함유할 수 있는 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하도록 변형될 수 있다. 이러한 설파타제 모티프는 또한 본 명세서에서 FGE-변형 부위로서 지칭될 수도 있다. FGE의 작용은 FGE가 면역글로불린 폴리펩티드 내에 위치하는 설파타제 모티프에 작용한다는 점에서 서열 특이적 방식으로 작용한다. 관심 모이어티는 태그된 Ig 폴리펩티드의 전환된 알데히드 태그의 fGly 잔기의 알데히드와 반응하기 위한 반응성 파트너의 성분으로서 제공된다. 상업적으로 입수가능한 다양한 시약은 알데히드 태그된 Ig 폴리펩티드의 fGly 잔기에 관심의 모이어티의 부착을 달성하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 다수의 관심의 모이어티의 아미노옥시, 히드라지드, 또는 티오세미카르바지드 유도체는 적합한 반응성 파트너이며, 쉽게 이용 가능하거나 표준 화학적 방법을 사용하여 생성될 수 있다.
상술한 바와 같이, 항-넥틴-4 항체의 아미노산 서열은 생체 내(in vivo) 에서 (예를 들어, 세포 내에서 알데히드 태그-함유 단백질의 번역시) 또는 시험관 내(in vitro)에서 (예를 들어, 무세포 시스템에서 알데히드 태그-함유 단백질을 FGE와 접촉시킴으로써), 포밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 2-포밀글리신(fGly) 잔기로 전환 (산화) 될 수 있는 세린 또는 시스테인 잔기를 함유하는 설파타제 모티프를 포함하도록 변형될 수 있다. 이러한 설파타제 모티프는 또한 본 명세서에서 FGE-변형 부위로서 지칭될 수도 있다.
설파타제 모티프
알데히드 태그의 최소(minimal) 설파타제 모티프는 일반적으로 길이가 5 또는 6 아미노산 잔기이며, 일반적으로 길이가 6 아미노산 잔기 이하이다. Ig 폴리펩티드에 제공되는 설파타제 모티프는 길이가 5 또는 6개 이상의 아미노산 잔기이며, 예를 들어, 5 내지 16, 6-16, 5-15, 6-15, 5-14, 6-14, 5-13, 6-13, 5-12, 6-12, 5-11, 6-11, 5-10, 6-10, 5-9, 6-9, 5-8, 또는 6-8 아미노산 잔기일 수 있으며, 설파타제 모티프는 길이가 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 또는 7 아미노산 잔기 미만인 것으로 정의될 수 있다.
특정 구현예에서, 관심 폴리펩티드는 하나 이상의 아미노산 잔기, 예컨대 2 이상, 또는 3 이상, 또는 4 이상, 또는 5 이상, 또는 6 이상, 또는 7 이상, 또는 8 이상, 또는 9 이상, 또는 10 이상, 또는 11 이상, 또는 12 이상, 또는 13 이상, 또는 14 이상, 또는 15 이상, 또는 16 이상, 또는 17 이상, 또는 18 이상, 또는 19 이상, 또는 20 이상의 아미노산 잔기가 폴리펩티드 내의 설파타제 모티프의 서열을 제공하기위해 천연 아미노산 서열에 대해 삽입, 결실, 치환 (대체)되었다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드는 폴리펩티드의 천연 아미노산 서열에 대해 아미노산 서열의 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2 미만의 아미노산 잔기의 변형(삽입, 부가, 결실, 및/또는 치환/대체)을 포함한다. 폴리펩티드의 본래(native)의 아미노산 서열 (예를 들어, 항-넥틴-4 항체)이 목적하는 설파타제 모티프의 하나 이상의 잔기를 함유하는 경우, 잔기의 총 변형 횟수는, 예를 들어, 목적하는 설파타제 모티프의 서열을 제공하기 위해 천연 아미노산 잔기 옆에 있는 아미노산 잔기의 부위-특이적 변형 (삽입, 추가, 결실, 치환/대체)에 의해 감소될 수 있다. 특정 구현예에서, 표적 항-넥틴-4 폴리펩티드의 천연 아미노산 서열의 변형의 정도가 최소화되어, 삽입, 결실, 치환 (대체), 또는 (예를 들어, N-또는 C-말단에) 부가되는 아미노산 잔기의 수를 최소화한다. 표적 항-넥틴-4 폴리펩티드의 아미노산 서열 변형의 정도를 최소화하는 것은 이러한 변형이 항-넥틴-4 기능 및/또는 구조에 미칠 수 있는 영향을 최소화할 수 있다.
특히 관심있는 알데히드 태그는 적어도 최소 설파타제 모티프 (또한, "컨센서스(consensus) 설파타제 모티프"라고도 함)를 포함하는 것들이지만, 더 긴 알데히드 태그는 본 발명에 의해 고려되고 포함되며, 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있다는 것이 쉽게 이해될 것이다. 따라서 알데히드 태그는 5개 또는 6개의 잔기의 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있거나, 또는 더 길어질 수 있고, 추가적인 아미노산 잔기에 의해 모티프의 N- 및/또는 C-말단에 플랭킹될 수 있는 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있다. 예를 들어, 5개 또는 6개의 아미노산 잔기의 알데히드 태그뿐만 아니라, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 아미노산 잔기의 더 긴 아미노산 서열도 고려된다.
알데히드 태그는 Ig 중쇄의 C-말단 또는 그 근처에 존재할 수 있다: 예를 들어, 알데히드 태그는 천연, 야생형 Ig 중쇄의 C-말단의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 내에 존재할 수 있다. 알데히드 태그는 Ig 중쇄의 CH1 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데히드 태그는 Ig 중쇄의 CH2 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데히드 태그는 Ig 중쇄의 CH3 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데히드 태그는 Ig 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 카파 경쇄 불변 영역 또는 람다 경쇄 불변 영역에 존재할 수 있다.
특정 구현예에서, 사용된 설파타제 모티프는 다음 화학식에 의해 설명될 수 있다:
[화학식 I']
X1Z1X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 102)
이때,
Z1은 시스테인 또는 세린이고 (이는 (C/S)로도 나태닐 수 있음);
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고 (이는 (P/A)로도 나타낼 수 있음);
Z3은 염기성 아미노산 (예를 들어, 알라닌(R), 및 라이신(K) 또는 히스티딘 (H)일 수 있으나, 일반적으로 라이신), 또는 지방족 아미노산 (알라닌 (A), 글라이신 (G), 류신 (L), 발린 (V), 이소류신 (I), 또는 프롤린 (P)일 수 있으며, 일반적으로 A, G, L, V, 또는 I)이며;
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우, 아미노산일 수 있고, 일반적으로 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성아미노산, 비하전아미노산(uncharged amino acid) (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전(charged) 아미노산 이외의 아미노산), 일반적으로 L, M, V, S 또는 T, 더 일반적으로는 L, M, S 또는 V이며, 단 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고; 및
X2 및 X3는 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있고, 일반적으로 지방족 아미노산, 극성, 비하전 아미노산 또는 황 함유 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산)일 수 있으며, 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C; 예를 들어, S, T, A, V 또는 G일 수 있다. 일례에서, 알데히드 태그는 화학식 L(C/S)TPSR (SEQ ID NO: 103), 예를 들어, LCTPSR (SEQ ID NO: 104) 또는 LSTPSR (SEQ ID NO: 105)이다. 따라서, 본 발명은 알데히드-태그된 Ig 중쇄 및/또는 알데히드-태그된 Ig 경쇄를 포함하는 항체를 제공하며, 이때 알데히드-태그된 Ig 항체는 이러한 설파타제 모티프를 함유하는 중쇄 및/또는 경쇄의 Ig 불변 영역 아미노산 서열을 포함한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 항-넥틴-4 중쇄 및/또는 경쇄의 아미노산 서열은 화학식 X1Z1X2Z2X3Z3의 적어도 5개 아미노산 서열을 제공하도록 변형될 수 있으며, 이때
Z1은 시스테인 또는 세린이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
Z3는 지방족 아미노산 또는 염기성 아미노산이고;
X1은 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우 임의의 아미노산이며, 단, 이종(헤테로logous) 설파타제 모티프가 폴리펩티드의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이되,
이때 서열은 Ig 불변 영역의 용매-접근가능한(solvent-accessible) 루프 영역(loop region) 내이거나 이에 인접하고, 이때 서열은 Ig 중쇄의 C-말단에 위치하지 않는다.
설파타제 모티프는 일반적으로 선택된 FGE, 예를 들어, 알데히드 태그된 폴리펩티드가 발현되는 숙주 세포에 존재하는 FGE 또는 무세포 시험관 내 방법에서 알데히드 태그된 폴리펩티드와 접촉되는 FGE에 의해 전환될 수 있도록 선택된다.
예를 들어, FGE가 진핵생물 FGE (예를 들어, 인간 FGE를 포함하는 포유동물 FGE)인 경우, 설파타제 모티프는 다음의 화학식 일 수 있다:
[화학식 Ⅰ"]
X1CX2PX3Z3
이때,
X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우, 임의의 아미노산 일 수 있으며, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산)일 수 있으며, 예를 들어, L, M, S 또는 V일 수 있고, 단, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있으며, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산)일 수 있으며, 예를 들어, S, T, A, V, G, 또는 C일 수 있고, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G일 수 있고; 및
Z3는 염기성 아미노산 (예를 들어, 알라닌 (R), 및 라이신(K) 또는 히스티딘 (H)일 수 있고, 예를 들어, 라이신), 또는 지방족 아미노산 (알라닌 (A), 글라이신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신 (I) 또는 프롤린 (P), 예를 들어, A, G, L, V, 또는 I)이다.
설파타제 모티프의 특정한 예시는 LCTPSR (SEQ ID NO: 104), MCTPSR (SEQ ID NO: 105), VCTPSR (SEQ ID NO: 106), LCSPSR (SEQ ID NO: 107), LCAPSR (SEQ ID NO: 108), LCVPSR (SEQ ID NO: 109), LCGPSR (SEQ ID NO: 110), ICTPAR (SEQ ID NO: 111), LCTPSK (SEQ ID NO: 112), MCTPSK (SEQ ID NO: 113), VCTPSK (SEQ ID NO: 114), LCSPSK (SEQ ID NO: 115), LCAPSK (SEQ ID NO: 116), LCVPSK (SEQ ID NO: 117), LCGPSK (SEQ ID NO: 118), LCTPSA (SEQ ID NO: 119), ICTPAA (SEQ ID NO: 120), MCTPSA (SEQ ID NO: 121), VCTPSA (SEQ ID NO: 122), LCSPSA (SEQ ID NO: 123), LCAPSA (SEQ ID NO: 124), LCVPSA (SEQ ID NO: 125), 및 LCGPSA (SEQ ID NO: 126)을 포함한다.
fGly-함유 서열
표적 폴리펩티드의 알데히드 태그의 설파타제 모티프에서 시스테인 또는 세린의 fGly로의 전환을 용이하게 하기 위해 사용되는 FGE는 알데히드 태그에 존재하는 설파타제 모티프에 따라 선택된다. FGE는 알데히드 태그가 부착된 폴리펩티드가 발현되는 숙주 세포에 고유하거나, 적절한 FGE를 발현하도록 숙주 세포를 유전적으로 변형할 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 FGE와 호환되는 설파타제 모티프를 사용하고, FGE를 발현하는 인간세포 또는 인간 FGE를 발현하도록 유전적으로 변형된 숙주세포, 일반적으로는 포유동물 세포에서 알데히드 태그 단백질이 발현되는 것이 바람직할 수 있다. 일반적으로, fGly-변형된 항체 생성에 사용하기에 적합한 FGE는 자연적으로 발생하거나 합성하여 생산된 공급원(source)에서 얻을 수 있다. 예를 들어, 적절한 FGE는 자연적으로 FGE를 생성하는 생물학적 공급원 또는 FGE를 암호화하는 재조합 유전자를 발현하도록 유전적으로 변형된 생물학적 공급원으로부터 얻을 수 있다. 다수의 FGE를 암호화하는 핵산은 당업계에 잘 알려져 있으며 쉽게 구할 수 있다.
설파타제 모티프에 대한 FGE의 작용 후, Z1은 산화되어 2-포밀글리신 (fGly) 잔기를 형성한다. 또한, FGE-매개된 변환 및 관심 모이어티를 포함하는 반응 파트너와의 반응 후에, 위 화학식의 Z1의 fGly의 위치는 관심 모이어티 (예를 들어, 검출가능한 표지, 수용성 중합체, 폴리펩티드, 약물, 활성제 등)에 공유결합된다. 따라서, 본 발명은 아미노산 서열이 fGly 모이어티를 포함하도록 변형된 항-넥틴-4 항체를 제공한다.
항-넥틴-4 중쇄 및/또는 경쇄에 대한 FGE의 작용에 따라, 설파타제 모티프의 세린 또는 시스테인은 fGly로 변형된다. 따라서, fGly-함유 설파타제 모티프는 다음과 같은 화학식일 수 있다:
[화학식 Ⅰ''']
X1(fGly)X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 127)
이때,
fGly는 포밀글리신 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고 (이는 (P/A)로도 나타낼 수 있음);
Z3은 염기성 아미노산 (예를 들어, 알라닌(R), 및 라이신(K) 또는 히스티딘 (H)일 수 있으나, 일반적으로 라이신), 또는 지방족 아미노산 (알라닌 (A), 글라이신 (G), 류신 (L), 발린 (V), 이소류신 (I), 또는 프롤린 (P)일 수 있으며, 예를 들어, A, G, L, V, 또는 I)이며;
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우, 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V이며, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고; 및
X2 및 X3는 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산)일 수 있으며, 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G일 수 있다.
위에서 설명한 바와 같이, 접합체를 생성하기 위해, fGly 잔기를 함유하는 폴리펩티드는 약물 또는 활성제에 부착된 링커의 반응성 모이어티 (예를 들어, 상술한 바와 같은, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티)와의 fGly 반응에 의해 약물 또는 활성제와 접합되어 fGly'-함유 설파타제 모티프를 생성할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 fGly'는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링된 설파타제 모티프의 아미노산 잔기를 지칭한다. 따라서, 본 발명은 항-넥틴-4 항체 접합체 ("항-넥틴-4 접합체"라고도 함)을 제공한다.
특정 구현예에서, 항-넥틴-4 접합체는 다음 화학식의 fGly'-함유 설파타제 모티프를 포함한다:
[화학식 Ⅱ]
X1(fGly')X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 128)
이때,
fGly'는 본 명세서에 설명된 바와 같이, 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고 (이는 (P/A)로도 나타낼 수 있음);
Z3은 염기성 아미노산 (예를 들어, 알라닌(R), 및 라이신(K) 또는 히스티딘 (H)일 수 있으나, 일반적으로 라이신), 또는 지방족 아미노산 (알라닌 (A), 글라이신 (G), 류신 (L), 발린 (V), 이소류신 (I), 또는 프롤린 (P)일 수 있으며, 예를 들어, A, G, L, V, 또는 I)이며;
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우, 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V이며, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고; 및
X2 및 X3는 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산)일 수 있으며, 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G일 수 있다.
특정 구현예에서, 화학식 Ⅱ의 서열은 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치한다. 경우에 따라, 중쇄 불변 영역은 하기 화학식 Ⅱ의 서열을 포함한다:
[화학식 Ⅱ]
X1(fGly')X2Z2X3Z3
이때,
fGly'는 본 명세서에 설명된 바와 같이, 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 하나이고 (이는 (P/A)로도 나타낼 수 있음);
Z3은 염기성 아미노산 (예를 들어, 알라닌(R), 및 라이신(K) 또는 히스티딘 (H)일 수 있으나, 일반적으로 라이신), 또는 지방족 아미노산 (알라닌 (A), 글라이신 (G), 류신 (L), 발린 (V), 이소류신 (I), 또는 프롤린 (P)일 수 있으며, 예를 들어, A, G, L, V, 또는 I)이며;
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우, 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V이며, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
X2 및 X3는 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산)일 수 있으며, 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G일 수 있고; 및
이때 서열은 아미노산 서열 QKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 129)에 대한 C-말단이고, 여기서 서열은 천연, 야생형 Ig 중쇄 불변 영역에는 존재하지 않는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 5 내지 10 개의 아미노산을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 중쇄 불변 영역은, 예를 들어, 천연 SLSLSPGK (SEQ ID NO: 249) 서열 대신에, Ig 중쇄의 C-말단에 서열 SLSLSPGSL(fGly')TPSRGS (SEQ ID NO: 248)을 포함한다.
특정 구현예에서, 중쇄 불변 영역은, 예를 들어, 천연 SPGK (SEQ ID NO: 131) 서열 대신에, Ig 중쇄의 C-말단에 서열 SPGSL(fGly')TPSRGS (SEQ ID NO: 130)을 포함한다.
특정 구현예에서, 약물 또는 활성제에 결합된 아미노산 잔기 (fGly')는 항-넥틴-4 항체의 경쇄 불변 영역에 위치한다. 특정 구현예에서, 경쇄 불변 영역은 화학식 Ⅱ의 서열을 포함한다:
[화학식 Ⅱ]
X1(fGly')X2Z2X3Z3
이때,
fGly'는 본 명세서에 설명된 바와 같이, 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 하나이고 (이는 (P/A)로도 나타낼 수 있음);
Z3은 염기성 아미노산 (예를 들어, 알라닌(R), 및 라이신(K) 또는 히스티딘 (H)일 수 있으나, 일반적으로 라이신), 또는 지방족 아미노산 (알라닌 (A), 글라이신 (G), 류신 (L), 발린 (V), 이소류신 (I), 또는 프롤린 (P)일 수 있으며, 예를 들어, A, G, L, V, 또는 I)이며;
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우, 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V이며, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
X2 및 X3는 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산)일 수 있으며, 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G일 수 있고; 및
이때 서열은 아미노산 서열 KVDNAL (SEQ ID NO: 132)에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 QSGNSQ (SEQ ID NO: 133)에 대한 N-말단이다.
특정 구현예에서, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(fGly')TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 134)을 포함한다.
특정 구현예에서, 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기 (fGly')는 항-넥틴-4 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치한다. 특정 구현예에서, 중쇄 CH1 영역은 화학식 Ⅱ의 서열을 포함한다:
[화학식 Ⅱ]
X1(fGly')X2Z2X3Z3
이때,
fGly'는 본 명세서에 설명된 바와 같이, 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 중 하나이고 (이는 (P/A)로도 나타낼 수 있음);
Z3은 염기성 아미노산 (예를 들어, 알라닌(R), 및 라이신(K) 또는 히스티딘 (H)일 수 있으나, 일반적으로 라이신), 또는 지방족 아미노산 (알라닌 (A), 글라이신 (G), 류신 (L), 발린 (V), 이소류신 (I), 또는 프롤린 (P)일 수 있으며, 예를 들어, A, G, L, V, 또는 I)이며;
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우, 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산), 예를 들어, L, M, V, S 또는 T, 예를 들어, L, M 또는 V이며, 단, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
X2 및 X3는 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있고, 예를 들어, 지방족 아미노산, 황-함유 아미노산, 또는 극성, 비하전 아미노산 (예를 들어, 방향족 아미노산 또는 하전 아미노산 이외의 아미노산)일 수 있으며, 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어, S, T, A, V 또는 G일 수 있고; 및
이때 서열은 아미노산 서열 SWNSGA (SEQ ID NO: 135)에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP (SEQ ID NO: 136)에 대한 N-말단이다.
특정 구현예에서, 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(fGly')TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 137)을 포함한다.
도 30a는 알데히드 태깅된 Ig 폴리펩티드의 생성을 위해 가능한 변형 부위를 나타낸 부위 지도(site map)을 나타낸다. 위쪽 서열은 IgG1 경쇄 폴리펩티드의 보존 영역의 아미노산 서열이며 (SEQ ID NO: 87), Ig 경쇄에서 가능한 변형 부위를 보여주고; 아래쪽 서열은 Ig 중쇄 폴리펩티드의 보존 영역의 아미노산 서열이며 (SEQ ID NO: 88) (GenBank Accession No. AAG00909), Ig 중쇄에서 가능한 변형 부위를 보여준다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 전장 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 30b는 IgG1 (SEQ ID NO: 89; GenBank P01857.1), IgG2 (SEQ ID NO: 90; GenBank P01859.2), IgG3 (SEQ ID NO: 91; GenBank P01860.2), IgG4 (SEQ ID NO: 92; GenBank AAB59394.1) 및 IgA (SEQ ID NO: 93; GenBank AAAT74070)에 대해 호모 사피엔스 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 정렬(alignment)한 것이며, 면역글로불린 중쇄에서 알데히드 태그가 제공될 수 있는 변형 부위를 보여준다. 중쇄 및 경쇄 넘버링은 전체 길이의 중쇄 및 경쇄를 기준으로 한다.
도 30c는 면역글로불린 경쇄 불변 영역의 정렬을 도시한 것으로, 면역글로불린 경쇄에서 알데히드 태그가 제공될 수 있는 변형 부위를 나타낸다. Seq1=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75031.1; SEQ ID NO: 94. Seq2=호모 사피엔스 카파 경쇄 불변 영역; GenBank BAC0168.1; SEQ ID NO: 95. Seq3=호모 사피엔스 람다 경쇄 불변 영역; GenBank CAA75033; SEQ ID NO: 96. Seq4=무스 무스쿨루스 경쇄 불변 영역; GenBank AAB09710.1; SEQ ID NO: 97. Seq5=래터스 노르베지쿠스 경쇄 불변 영역; GenBank AAD10133; SEQ ID NO: 98.
일부 구현예에서, 설파타제 모티프는 Ig 폴리펩티드 중쇄의 C-말단 이외의 위치 또는 추가적인 위치에 있다. 단리된 알데히드-태깅된 항-넥틴-4 폴리펩티드는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된 중쇄 불변 영역 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 이때 설파타제 모티프는 항-넥틴-4 폴리펩티드 중쇄 불변 영역의 표면-접근가능한(surface-accessible) 루프 영역 내에 또는 그에 인접한다.
IgG1 중쇄의 표면-접근가능한 루프 영역의 예시는 다음을 포함한다: 1) ASTKGP (SEQ ID NO: 138); 2) KSTSGGT (SEQ ID NO: 139); 3) PEPV(SEQ ID NO: 140); 4) NSGALTSG (SEQ ID NO: 141); 5) NSGALTSGVHTFPAVLQSSGL (SEQ ID NO: 142); 6) QSSGL (SEQ ID NO: 143); 7) VTV; 8) QTY; 9) TQTY (SEQ ID NO: 144); 10) HKPSN (SEQ ID NO: 145); 11) EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG (SEQ ID NO: 146); 12) FPPKP (SEQ ID NO: 147); 13) ISRTP (SEQ ID NO: 148); 14) DVSHEDPEV (SEQ ID NO: 149); 15) SHEDPEV (SEQ ID NO: 150); 16) DG; 17) DGVEVHNAK (SEQ ID NO: 151); 18) HNA; 19) QYNST (SEQ ID NO: 152); 20) VLTVL (SEQ ID NO: 153); 21) GKE; 22) NKALPAP (SEQ ID NO: 154); 23) SKAKGQPRE (SEQ ID NO: 155); 24) KAKGQPR (SEQ ID NO: 156); 25) PPSRKELTKN (SEQ ID NO: 157); 26) YPSDI (SEQ ID NO: 158); 27) NGQPENN (SEQ ID NO: 159); 28) TPPVLDSDGS (SEQ ID NO: 160); 29) HEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 161); 및 30) SLSPGK (SEQ ID NO: 162).
IgG2 중쇄의 표면-접근가능한 루프 영역의 예시는 다음을 포함한다: 1) ASTKGP (SEQ ID NO: 163); 2) PCSRSTSESTAA (SEQ ID NO: 164); 3) FPEPV (SEQ ID NO: 165); 4) SGALTSGVHTFP (SEQ ID NO: 166); 5) QSSGLY (SEQ ID NO: 167); 6) VTV; 7) TQT; 8) HKP; 9) DK; 10) VAGPS (SEQ ID NO: 168); 11) FPPKP (SEQ ID NO: 169); 12) RTP; 13) DVSHEDPEV (SEQ ID NO: 170); 14) DGVEVHNAK (SEQ ID NO: 171); 15) FN; 16) VLTVV (SEQ ID NO: 172); 17) GKE; 18) NKGLPAP (SEQ ID NO: 173); 19) SKTKGQPRE (SEQ ID NO: 174); 20) PPS; 21) MTKNQ (SEQ ID NO: 175); 22) YPSDI (SEQ ID NO: 176); 23) NGQPENN (SEQ ID NO: 177); 24) TPPMLDSDGS (SEQ ID NO: 178); 25) GNVF (SEQ ID NO: 179); 및 26) HEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 180).
IgG3 중쇄의 표면-접근가능한 루프 영역의 예시는 다음을 포함한다: 1) ASTKGP (SEQ ID NO: 181); 2) PCSRSTSGGT (SEQ ID NO: 182); 3) FPEPV (SEQ ID NO: 183); 4) SGALTSGVHTFPAVLQSSG (SEQ ID NO: 184); 5) V; 6) TQT; 7) HKPSN (SEQ ID NO: 185); 8) RVELKTPLGD (SEQ ID NO: 186); 9) CPRCPKP (SEQ ID NO: 187); 10) PKSCDTPPPCPRCPAPELLGG (SEQ ID NO: 188); 11) FPPKP (SEQ ID NO: 189); 12) RTP; 13) DVSHEDPEV (SEQ ID NO: 190); 14) DGVEVHNAK (SEQ ID NO: 191); 15) YN; 16) VL; 17) GKE; 18) NKALPAP (SEQ ID NO: 192); 19) SKTKGQPRE (SEQ ID NO: 193); 20) PPSREEMTKN (SEQ ID NO: 194); 21) YPSDI (SEQ ID NO: 195); 22) SSGQPENN (SEQ ID NO: 196); 23) TPPMLDSDGS (SEQ ID NO: 197); 24) GNI; 25) HEALHNR (SEQ ID NO: 198); 및 26) SLSPGK (SEQ ID NO: 199).
IgG4 중쇄의 표면-접근가능한 루프 영역의 예시는 다음을 포함한다: 1) STKGP (SEQ ID NO: 200); 2) PCSRSTSESTAA (SEQ ID NO: 201); 3) FPEPV (SEQ ID NO: 202); 4) SGALTSGVHTFP (SEQ ID NO: 203); 5) QSSGLY (SEQ ID NO: 204); 6) VTV; 7) TKT; 8) HKP; 9) DK; 10) YG; 11) CPAPEFLGGPS (SEQ ID NO: 205); 12) FPPKP (SEQ ID NO: 206); 13) RTP; 14) DVSQEDPEV (SEQ ID NO: 207); 15) DGVEVHNAK (SEQ ID NO: 208); 16) FN; 17) VL; 18) GKE; 19) NKGLPSS (SEQ ID NO: 209); 20) SKAKGQPREP (SEQ ID NO: 210); 21) PPSQEEMTKN (SEQ ID NO: 211); 22) YPSDI (SEQ ID NO: 212); 23) NG; 24) NN; 25) TPPVLDSDGS (SEQ ID NO: 213); 26) GNVF (SEQ ID NO: 214); 및 27) HEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 215).
IgA 중쇄의 표면-접근가능한 루프 영역의 예시는 다음을 포함한다: 1) ASPTSPKVFPLSL (SEQ ID NO: 216); 2) QPDGN (SEQ ID NO: 217); 3) VQGFFPQEPL (SEQ ID NO: 218); 4) SGQGVTARNFP (SEQ ID NO: 219); 5) SGDLYTT (SEQ ID NO: 220); 6) PATQ (SEQ ID NO: 221); 7) GKS; 8) YT; 9) CHP; 10) HRPA (SEQ ID NO: 222); 11) LLGSE (SEQ ID NO: 223); 12) GLRDASGV (SEQ ID NO: 224); 13) SSGKSAVQGP (SEQ ID NO: 225); 14) GCYS (SEQ ID NO: 226); 15) CAEP (SEQ ID NO: 227); 16) PE; 17) SGNTFRPEVHLLPPPSEELALNEL (SEQ ID NO: 228); 18) ARGFS (SEQ ID NO: 229); 19) QGSQELPREKY (SEQ ID NO: 230); 20) AV; 21) AAED (SEQ ID NO: 231); 22) HEAL (SEQ ID NO: 232); 및 23) IDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY (SEQ ID NO: 233).
Ig 경쇄 (예를 들어, 인간 카파 경쇄)의 표면-접근가능한 루프 영역의 예시는 다음을 포함한다: 1) RTVAAP (SEQ ID NO: 234); 2) PPS; 3) Gly (예를 들어, 도 8c에 표시된 인간 카파 경쇄 서열의 위치 150에 있는 Gly을 참조); 4) YPREA (SEQ ID NO: 235); 5) PREA (SEQ ID NO: 236); 6) DNALQSGN (SEQ ID NO: 237); 7) TEQDSKDST (SEQ ID NO: 238); 8) HK; 9) HQGLSS (SEQ ID NO: 239); 및 10) RGEC (SEQ ID NO: 240).
Ig 람다 경쇄의 표면-접근가능한 루프 영역의 예시는 다음을 포함한다: QPKAAP (SEQ ID NO: 241), PPS, NK, DFYPGAV (SEQ ID NO: 242), DSSPVKAG (SEQ ID NO: 243), TTP, SN, HKS, EG, 및 APTECS (SEQ ID NO: 244).
본 명세서에서 설명된 항-넥틴-4 항체의 HC의 불변 영역은 다음 서열들 중에서 한가지 서열로 선택될 수 있다:
CT-태그 (알데히드 태그-굵게 표시)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGS LCTPSR GS (SEQ ID NO: 70).
SEQ ID NO: 70에서, 중쇄 불변 영역의 C-말단에 있는 이탤릭체로 표시된 잔기는 기준(standard) IgG1 중쇄의 C-말단에 있는 라이신 잔기를 대체한다. 이탤릭체로 표시된 잔기들 중 굵게 표시된 잔기 (LCTPSR (SEQ ID NO: 104))는 알데히드 태그를 구성하며, 이때 C는 중쇄 발현 시 FGE에 의해 fGly 잔기로 변환되어 L(fGly)TPSR (SEQ ID NO: 245)를 생성한다. fGly를 fGly'로 변형하여 L(fGly')TPSR (SEQ ID NO: 246)을 생성할 수 있다. fGly'는 관심 모이어티 (예를 들어, 약물)와 커플링된 항-넥틴-4 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 이탤릭체로 표시된 잔기들 중 굵게 표시되지 않은 잔기는 기준 IgG1 중쇄 서열과 상이한 추가적인 잔기이다.
58Q-1 (알데히드 태그- 굵게 표시하고 "EEM"을 " DEL "로 치환함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLLCTPSRQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 71).
61G-1 (알데히드 태그- 굵게 표시하고 "EEM"을 " DEL "로 대체함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSLCTPSRGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 72).
91N-1 (알데히드 태그- 굵게 표시하고 "EEM"을 " DEL "로 대체함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 73).
116E-1 (알데히드 태그- 굵게 표시하고 "EEM"을 " DEL "로 대체함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPLCTPSRELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 74).
58Q-2 (알데히드 태그 - 굵게 표시함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLLCTPSRQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 75).
61G-2 (알데히드 태그- 굵게 표시함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSLCTPSRGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 76).
91N-2 (알데히드 태그- 굵게 표시함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 77).
116E-2 (알데히드 태그- 굵게 표시함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPLCTPSRELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 78).
58Q-3 (알데히드 태그- 굵게 표시하고"KKV"를" KRV "로 치환하고"EEM"을" DEL "로 치환함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLLCTPSRQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 79).
61G-3 (알데히드 태그- 굵게 표시하고"KKV"를" KRV "로 치환하고"EEM"을" DEL "로 치환함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSLCTPSRGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 80).
91N-3 (알데히드 태그- 굵게 표시하고"KKV"를" KRV "로 치환하고"EEM"을" DEL "로 치환함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 81).
116E-3 (알데히드 태그- 굵게 표시하고"KKV"을" KRV "로 치환하고"EEM"을" DEL "로 치환함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPLCTPSRELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 82).
58Q-4 (알데히드 태그- 굵게 표시하고 "KKV"을 " KRV "로 치환함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLLCTPSRQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 83).
61G-4 (알데히드 태그 - 굵게 표시하고 "KKV"를 " KRV "로 치환함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSLCTPSRGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 84).
91N-4 (알데히드 태그 - 굵게 표시하고 "KKV"를 " KRV "로 치환함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 85).
116E-4 (알데히드 태그- 굵게 표시하고 "KKV"를 " KRV "로 치환함)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRV EPKSCDKTHTCPPCPAPLCTPSRELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 86).
굵게 표시된 잔기 (LCTPSR)은 알데히드 태그를 구성하며, 이때 C는 중쇄 발현 시 FGE에 의해 fGly 잔기로 전환된다. FGly은 fGly'으로 전환될 수 있다. fGly'는 관심 모이어티 (예를 들어, 약물)과 커플링된 항-넥틴-4 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다.
약물 및 활성제
일부 경우에, 본 발명의 항-넥틴-4 항체는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄에 공유 결합된 약물 또는 활성제 (예를 들어, 본 명세서에 기재된 화학식 I의 접합체의 W1)를 갖는다. 예를 들어, 본 명세서의 항체 접합체는 치환체 W1로서 약물 또는 활성제를 포함할 수 있고, 존재하는 경우, 치환체 W2로서 제2 약물 또는 활성제를 포함할 수 있다. 다수의 약물 중 임의의 것이 항체에 접합하기 위한 반응성 파트너로서 사용하기에 적합하거나, 사용하기에 적합하도록 변형될 수 있다. "약물"은 저분자 약물, 펩티드 약물, 독소 (예를 들어, 세포독소) 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 "저분자 약물"은 화합물, 예를 들어, 관심있는 약제학적 활성을 나타내고 일반적으로 약 800 Da 이하의 분자량 또는 2000 Da 이하의 분자량을 갖지만, 최대 5 kDa의 분자를 포함할 수 있고, 약 10 kDa의 분자량을 가질 수 있는 유기 화합물을 지칭한다. 저분자 무기물(small inorganic molecule)은 탄소 원자를 함유하지 않는 분자를 말하고, 저분자 유기물(small organic molecule)은 적어도 하나의 탄소 원자를 함유하는 화합물을 지칭한다.
특정 구현예에서, 약물 또는 활성제는 마이탄신(maytansine)일 수 있다. "마이탄신", "마이탄신 모이어티", "마이탄신 활성제 모이어티" 및 "마이탄시노이드(maytansinoid)"는 마이탄신 및 이의 유사체 및 유도체, 및 약제학적으로 활성인 마이탄신 모이어티 및/또는 이들의 일부를 지칭한다. 폴리펩티드에 접합된 마이탄신은 다양한 마이탄시노이드 모이어티 중 임의의 것일 수 있고, 예컨대, 본 명세서에 기재된 바와 같은, 마이탄신 및 이들의 유사체 및 유도체일 수 있으나, 이에 제한되진 않는다.
특정 구현예에서, 약물 또는 활성제는 오리스타틴(auristatin), 또는 이의 유사체 또는 유도체, 또는 약제학적으로 활성인 오리스타틴 모이어티 및/또는 이의 일부일 수 있다. 폴리펩티드에 접합된 오리스타틴은 다양한 오리스타틴 모이어티 중 어느 하나 일 수 있고, 예컨대, 본 명세서에 기술된 바와 같은 오리스타틴 및 이들의 유사체 및 유도체일 수 있으나, 이에 제한되진 않는다. 본 명세서에 기술된 접합체 및 화합물에서 사용되는 약물의 예로는 오리스타틴 또는 오리스타틴 유도체, 예컨대 모노메틸 오리스타틴 D (MMAD), 모노메틸 오리스타틴 E (MMAE), 모노메틸 오리스타틴 F (MMAF), 이들의 유도체 등이 포함되나, 이에 제한되진 않는다.
특정 구현예에서, 약물 또는 활성제는 듀오카마이신(duocarmycin), 또는 이의 유사체 또는 유도체, 또는 약제학적으로 활성인 듀오카마이신 모이어티 및/또는 이의 일부일 수 있다. 폴리펩티드에 접합된 듀오카마이신은 다양한 듀오카마이신 모이어티 중 어느 하나 일 수 있고, 예컨대, 본 명세서에 기재된 바와 같은 듀오카마이신 및 이의 유사체 및 유도체일 수 있으나, 이에 제한되진 않는다. 본 명세서에 기재된 접합체 및 화합물에서 사용되는 약물의 예로는 듀오카마이신 또는 듀오카마이신 유도체, 예컨대 듀오카마이신 A, 듀오카마이신 B1, 듀오카마이신 B2, 듀오카마이신 C1, 듀오카마이신 C2, 듀오카마이신 D, 듀오카마이신 SA, 및 CC-1065, 이의 유도체 등이 포함되나, 이에 제한되진 않는다. 일부 구현예에서, 듀오카마이신은 듀오카마이신 유사체, 예컨대 아도젤레신(adozelesin), 비젤레신(bizelesin), 또는 카젤레신(carzelesin)이다.
특정 구현예에서, 약물 또는 활성제는 토포이소머라제 억제제, 예컨대 캄프토테신(camptothecine), 또는 이의 유사체 또는 유도체, 또는 약제학적으로 활성인 캄프토테신 모이어티 및/또는 이의 일부일 수 있다. 대상 항체에 접합된 캄프토테신은 다양한 캄프토테신 중 임의의 것일 수 있으며, 예컨대 본 명세서에 기술된 바와 같은 캄프토테신 및 이의 유사체 및 유도체일 수 있으나, 이에 제한되진 않는다. 본 명세서에 기술된 접합체에서 사용되는 약물의 예는 캄프토테신 또는 캄프토테신 유도체, 예컨대 SN-38, 벨로테칸, 엑사테칸, 9-아미노캄토테신 (9-AC), 이들의 유도체 등을 포함하나, 이에 제한되진 않는다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 화학식 Ⅰ 및 Ⅱ의 약물 또는 활성제 (예를 들어, W1 및/또는 W2)는 캄프토테신, 또는 이의 유사체 또는 유도체이다. 예를 들어, 일부 경우에, 캄프토테신 또는 이의 유사체, 또는 유도체는 화학식 Ⅲ의 화합물이다:
[화학식 Ⅲ]
이때,
R31 및 R32는 각각 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R31 및 R32는 순환적으로 연결되어 선택적으로 5 또는 6원 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R33 및 R34는 각각 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R33 및 R34는 순환적으로 연결되어 선택적으로 5원 또는 6원 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R35는 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택되고;
R36은 OH 및 OC(O)R37로부터 선택되고; 및
R37은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다.
화학식 Ⅲ의 특정 구현예에서, 화학식 Ⅰ 또는 화학식 Ⅱ의 링커 LA는 화학식 Ⅲ의 화합물의 R31, R32, R33, R34, R35 또는 R36에 부착되어 있다. 화학식 Ⅲ의 특정 구현예에서, 화학식 Ⅰ 또는 화학식 Ⅱ의 링커 LB는 화학식 Ⅲ의 화합물의 R31, R32, R33, R34, R35 또는 R36에 부착되어 있다.
특정 구현예에서, R31 및 R32는 각각 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R31 및 R32는 순환적으로 연결되어 선택적으로 5 또는 6원 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴 고리를 형성한다.
특정 구현예에서, R31은 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R31는 수소이다. 특정 구현예에서, R31은 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 구현예에서, R31은 히드록시이다. 특정 구현예에서, R31은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R31은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R31은 메틸이다. 특정 구현예에서, R31은 C2 치환된 알킬, 예컨대 -CH2CH2NH(CH(CH3)2)이다. 특정 구현예에서, R31은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R31은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R31은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R31은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R31은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R31은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R31은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, R32는 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R32는 수소이다. 특정 구현예에서, R32는 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 구현예에서, R32는 히드록시이다. 특정 구현예에서, R32는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R32는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R32는 메틸이다. 특정 구현예에서, R32는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R32는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R32는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R32는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R32는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R32는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R32는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, R31 및 R32는 순환적으로 연결되어 선택적으로 5원 내지 6원 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴 고리를 형성한다. 특정 구현예에서, R31 및 R32는 순환적으로 연결되어 5원 내지 6원 사이클로알킬을 형성한다. 특정 구현예에서, R31 및 R32는 순환적으로 연결되어 5원 내지 6원 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 구현예에서, R31 및 R32는 순환적으로 연결되어 5원 사이클로알킬을 형성한다. 특정 구현예에서, R31 및 R32는 순환적으로 연결되어 6원 사이클로알킬을 형성한다. 특정 구현예에서, R31 및 R32는 순환적으로 연결되어 5원 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 구현예에서, R31 및 R32는 순환적으로 연결되어 6원 헤테로사이클릴을 형성한다.
특정 구현예에서, R33 및 R34는 각각 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R33 및 R34는 순환적으로 연결되어 선택적으로 5 또는 6원 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴 고리를 형성한다.
특정 구현예에서, R33은 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R33은 수소이다. 특정 구현예에서, R33은 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 구현예에서, R33은 히드록시이다. 특정 구현예에서, R33은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R33은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R33은 메틸이다. 특정 구현예에서, R33은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R33은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R33은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R33은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R33은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R33은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R33은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, R34는 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R34는 수소이다. 특정 구현예에서, R34는 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 구현예에서, R34는 히드록시이다. 특정 구현예에서, R34는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R34는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R34는 메틸이다. 특정 구현예에서, R34는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R34는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R34는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R34는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R34는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R34는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R34는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, R33 및 R34는 순환적으로 연결되어 선택적으로 5원 내지 6원 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴 고리를 형성한다. 특정 구현예에서, R33 및 R34는 순환적으로 연결되어 5원 내지 6원 사이클로알킬을 형성한다. 특정 구현예에서, R33 및 R34는 순환적으로 연결되어 5원 내지 6원 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 구현예에서, R33 및 R34는 순환적으로 연결되어 5원 사이클로알킬을 형성한다. 특정 구현예에서, R33 및 R34는 순환적으로 연결되어 6원 사이클로알킬을 형성한다. 특정 구현예에서, R33 및 R34는 순환적으로 연결되어 5원 헤테로사이클릴을 형성한다. 특정 구현예에서, R33 및 R34는 순환적으로 연결되어 6원 헤테로사이클릴을 형성한다.
특정 구현예에서, R35는 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R35는 수소이다. 특정 구현예에서, R35는 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 구현예에서, R35는 히드록시이다. 특정 구현예에서, R35는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 구현예에서, R35는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R35는 메틸이다. 특정 구현예에서, R35는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R35는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 구현예에서, R35는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 구현예에서, R35는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R35는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R35는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R35는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, R36은 OH 및 OC(O)R37로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R36은 OH이다. 특정 구현예에서, R36은 OC(O)R37이다.
특정 구현예에서, R37은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R37은 수소이다. 특정 구현예에서, R37은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R37은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 구현예에서, R37은 알키닐 또는 치환된 알키닐. 특정 구현예에서, R37은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R37은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R37은 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R37은 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다.
특정 구현예에서, 화학식 Ⅲ의 화합물은 하기 화학식 Ⅲa의 구조를 갖는다:
[화학식 Ⅲa]
화학식 Ⅲa의 특정 구현예에서, R33은 위에서 설명한 바와 같다.
화학식 Ⅲa의 특정 구현예에서, R36은 위에서 설명한 바와 같다.
화학식 Ⅲa의 특정 구현예에서, R33은 OH이고 링커 LA 또는 LB는 R36에 부착된다. 화학식 Ⅲa의 특정 구현예에서, 링커 LA 또는 LB는 R33에 부착되고 R36은 OH이다.
특정 구현예에서, 화학식 Ⅲ의 화합물은 하기 화학식 Ⅲb의 구조를 갖는다:
[화학식 Ⅲb]
화학식 Ⅲb의 특정 구현예에서, R31a는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 및 설포닐로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R31a는 수소이다. 특정 구현예에서, R31a는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R31a는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R31a는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R31a는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R31a는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다. 특정 구현예에서, R31a는 카복실이다. 특정 구현예에서, R31a는 카복실 에스테르이다. 특정 구현예에서, R31a는 아실이다. 특정 구현예에서, R31a는 설포닐이다.
화학식 Ⅲb의 특정 구현예에서, R36은 위에서 설명한 바와 같다.
화학식 Ⅲb의 특정 구현예에서, R31a는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 및 설포닐로부터 선택되고, 링커 LA 또는 LB는 R36에 부착된다. 화학식 Ⅲb의 특정 구현예에서, 링커 LA 또는 LB는 R31a에 부착되고 R36은 OH이다.
특정 구현예에서, 화학식 Ⅲ의 화합물은 하기 화학식 Ⅲc의 구조를 갖는다:
[화학식 Ⅲc]
화학식 Ⅲc의 특정 구현예에서, R31b는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 및 설포닐로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R31b는 수소이다. 특정 구현예에서, R31b는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R31b는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R31b는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R31b는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R31b는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다. 특정 구현예에서, R31b는 카복실이다. 특정 구현예에서, R31b는 카복실 에스테르이다. 특정 구현예에서, R31b는 아실이다. 특정 구현예에서, R31b는 설포닐이다.
화학식 Ⅲc의 특정 구현예에서, R36은 위에서 설명한 바와 같다.
화학식 Ⅲc의 특정 구현예에서, R31b는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 및 설포닐로부터 선택되고, 링커 LA 또는 LB는 R36에 부착된다. 화학식 Ⅲc의 특정 구현예에서, 링커 LA 또는 LB는 R31b에 부착되고 R36은 OH이다.
특정 구현예에서, 화학식 Ⅲ의 화합물은 하기 화학식 Ⅲd의 구조를 갖는다:
[화학식 Ⅲd]
화학식 Ⅲd의 특정 구현예에서, R32a 및 R32b는 각각 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 및 설포닐로부터 독립적으로 선택된다.
화학식 Ⅲd의 특정 구현예에서, R32a는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 및 설포닐로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R32a는 수소이다. 특정 구현예에서, R32a는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R32a는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R32a는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R32a는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R32a는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다. 특정 구현예에서, R32a는 카복실이다. 특정 구현예에서, R32a는 카복실 에스테르이다. 특정 구현예에서, R32a는 아실이다. 특정 구현예에서, R32a는 설포닐이다.
화학식 Ⅲd의 특정 구현예에서, R32b는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 및 설포닐로부터 선택된다. 특정 구현예에서, R32b는 수소이다. 특정 구현예에서, R32b는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 구현예에서, R32b는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 구현예에서, R32b는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 구현예에서, R32b는 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-8 사이클로알킬 또는 C3-8 치환된 사이클로알킬, 예컨대 C3-6 사이클로알킬 또는 C3-6 치환된 사이클로알킬, 또는 C3-5 사이클로알킬 또는 C3-5 치환된 사이클로알킬이다. 특정 구현예에서, R32b는 헤테로사이클릴 또는 치환된 헤테로사이클릴, 예컨대 C3-6 헤테로사이클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로사이클릴, 또는 C3-5 헤테로사이클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로사이클릴이다. 특정 구현예에서, R32b는 카복실이다. 특정 구현예에서, R32b는 카복실 에스테르이다. 특정 구현예에서, R32b는 아실이다. 특정 구현예에서, R32b는 설포닐이다.
화학식 Ⅲd의 특정 구현예에서, R36은 위에서 기술한 바와 같다.
화학식 Ⅲd의 특정 구현예에서, R32a 및 R32b는 각각 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 및 설포닐로부터 독립적으로 선택되고, 링커 LA 또는 LB는 R36에 부착된다. 화학식 Ⅲd의 특정 구현예에서, 링커 LA 또는 LB는 R32a 또는 R32b에 부착되고 R36은 OH이다. 화학식 Ⅲd의 특정 구현예에서, 링커 LA 또는 LB는 R32a에 부착되고 R36은 OH이다. 화학식 Ⅲd의 특정 구현예에서, 링커 LA 또는 LB는 R32b에 부착되고 R36은 OH이다.
특정 구현예에서, 약물은 세포독소, 키나아제 억제제, 선택적 에스트로겐 수용체 조절제, 면역자극제, 톨-유사 수용체 (TLR) 작용제, 올리고뉴클레오티드, 압타머, 사이토카인, 스테로이드 및 펩티드로부터 선택된다.
예를 들어, 세포독소는 세포 사멸 (예: 괴사(necrosis) 또는 세포자연사(apoptosis)) 또는 세포 생존율 감소를 유발하는 모든 화합물을 포함할 수 있다.
키나아제 억제제는 아다보세르팁(Adavosertib), 아파티닙(Afatinib), 액시티닙(Axitinib), 보수티닙(Bosutinib), 세툭시맙(Cetuximab), 코비메티닙(Cobimetinib), 크리조티닙(Crizotinib), 카보잔티닙(Cabozantinib), 다코미티닙(Dacomitinib), 다사티닙(Dasatinib), 엔트렉티닙(Entrectinib), 에르다피티닙(Erdafitinib), 엘로티닙(Erlotinib), 포스타마티닙(Fostamatinib), 게피티닙(Gefitinib), 이브루티닙(Ibrutinib), 이매티닙(Imatinib), 라파티닙(Lapatinib), 렌바티닙(Lenvatinib), 무브리티닙(Mubritinib), 닐로티닙(Nilotinib), 파조파닙(Pazopanib), 페갑타닙(Pegaptanib), 룩소리티닙(Ruxolitinib), 소라페닙(Sorafenib), 수니티닙(Sunitinib), 투카티닙(Tucatinib), 반데타닙(Vandetanib), 베무라페닙(Vemurafenib) 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되진 않는다.
예를 들어, 선택적 에스트로겐 수용체 조절제는 엔독시펜(Endoxifen), 타목시펜(Tamoxifen), 아피목시펜(Afimoxifene), 토레미펜(Toremifene) 등을 포함하지만, 이에 제한되진 않는다.
면역자극제는 백신 (예를 들어, 박테리아 또는 바이러스 백신), 콜로니 자극 인자, 인터페론, 인터류킨 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되진 않는다. TLR 작용제는 이미퀴모드(imiquimod), 레시퀴모드(resiquimod) 등을 포함하지만, 이에 제한되진 않는다.
올리고뉴클레오티드 약물은 포미비르센(fomivirsen), 페갓타닙(pegaptanib), 미포머슨(mipomersen), 에테플리르센(eteplirsen), 데프로브로타이드(defibrotide), 누시너센(nusinersen), 골로디르센(golodirsen), 빌톨라르센(viltolarsen), 볼라네소르센(volanesorsen), 이노테르센(inotersen), 토페르센(tofersen), 토미네르센(tominersen) 등을 포함하지만, 이에 제한되진 않는다.
압타머 약물에는 페그갑타닙, AS1411, REG1, ARC1779, NU172, ARC1905, E10030, NOX-A12, NOX-E36 등이 포함되지만, 이에 제한되진 않는다.
사이토카인에는 알빈터페론 알파-2B, 알데슬루킨, ALT-801, 아나킨라, 안세스팀, 아보터민, 발루그라스팀, 벰페갈데스루킨, 비네트라킨, 신트레데킨 베수도톡스, CTCE-0214, 다베포에틴 알파, 데닐루킨 디프티톡스, 둘라네르민, 에도데킨 알파, 엠필러민, 에포에틴 델타, 에리스로포이에틴, 인간 인터루킨-2, 인터페론 알파, 인터페론 알파-2c, 인터페론 알파-n1, 인터페론 알파-n3, 인터페론 알파콘-1, 인터페론 베타-1a, 인터페론 베타-1b, 인터페론 감마-1b, 인터페론 카파, 인터루킨-1 알파, 인터루킨-10, 인터루킨-7, 레노그라스팀, 레리디스팀, 리페그필그라스팀, 로루카푸스프알파, 맥시-G34, 메톡시폴리에틸렌글라이콜-에포에틴 베타, 몰그라모스팀, 뮤플스팀, 나그레스티펜, 오프렐베킨, 페그필그라스팀, 페질로데카킨, 페그인터페론 알파-2a, 페그인터페론 알파-2b, 페그인터페론 베타-1a, 페그인터페론 람다-1a, 재조합 CD40-리간드, 레그라모스팀, 로미플로팀, 사르그라모스팀, 트롬보포이에틴, 투코투주맙 셀몰류킨, 바이러스성 대식세포-염증성 단백질 등이 포함되나, 이에 제한되진 않는다.
스테로이드 약물은 프레드니솔론(prednisolone), 베타메타손(betamethasone), 덱사메타손(dexamethasone), 하이드로코르티손(hydrocortisone), 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 데플라자코트(deflazacort) 등을 포함하지만, 이에 제한되진 않는다.
본 명세서에서 사용되는 "펩티드 약물"은 아미노-산 함유 고분자 화합물을 의미하며, 펩티드 모방체뿐만 아니라 자연적으로 발생하는 및 비자연적으로 발생하는 펩티드, 올리고펩티드, 사이클릭 펩티드, 폴리펩티드 및 단백질을 포함한다. 펩티드 약물은 화학적 합성에 의해 수득되거나, 또는 유전적으로 암호화된 공급원 (예를 들어, 재조합 공급원)으로부터 생산될 수 있다. 펩티드 약물은 분자량이 다양할 수 있으며, 분자량이 200 Da 내지 10 kDa, 또는 10 kDa 이상일 수 있다. 적합한 펩티드는 세포독성 펩티드; 혈관신생 펩티드; 항-혈관신생 펩티드; B 세포를 활성화하는 펩티드; T 세포를 활성화하는 펩티드; 항바이러스 펩티드; 바이러스 융합을 억제하는 펩티드; 하나 이상의 림프구 집단의 생산을 증가시키는 펩티드; 항균 펩티드; 성장 인자; 성장 호르몬 방출 인자; 혈관 활성 펩티드; 항염증 펩티드; 포도당 대사를 조절하는 펩티드; 항-혈전제 펩티드; 항-통각수용성 펩티드; 혈관 확장제 펩티드; 혈소판 응집 억제제; 진통제; 등을 포함하나, 이에 제한되진 않는다.
본 명세서에 기술된 접합체 및 화합물에서 사용되는 약물의 추가적인 예는 투불리신 M, 칼리체아미신, STAT3 억제제, 알파-아마니틴, 오로라 키나아제 억제제, 벨로테칸 및 안트라사이클린을 포함하지만, 이에 제한되진 않는다.
일부 경우에, 약물은 독소, 예를 들어, 세포독소이다. 고등 식물에서 흔히 볼 수 있는 단백질의 일종인 리보솜 불활성화 단백질 (RIPs)은 이러한 세포독소의 예이다. 적합한 세포독소는 리신, 아브린, 디프테리아 독소, 슈도모나스 엑소톡신 (예를 들어, PE35, PE37, PE38, PE40 등), 사포린, 젤로닌, 포케위드 항-바이러스 단백질 (PAP), 보툴리눔 독소, 브리오딘, 모모르딘 및 부가닌을 포함하지만, 이에 제한되진 않는다.
일부 경우에는, 약물은 암 화학요법제(cancer chemotherapeutic agent)이다. 암 화학요법제는 암세포의 증식을 감소시키는 비-펩티드 (예를 들어, 비-단백질성) 화합물을 포함하며, 세포독성제 (cytotoxic agent) 및 세포증식억제제 (cytostatic agent)를 포함한다. 화학요법제의 비제한적인 예로는 알킬화제, 니트로소우레아, 항대사산물, 항종양 항생제, 식물 (빈카(vinka)) 알칼로이드 및 스테로이드 호르몬이 포함된다. 펩티드 화합물도 사용할 수 있다.
적합한 암 화학요법제는 돌라스타틴 및 이들의 활성 유사체 및 유도체를 포함하고; 및 오리스타틴 및 이의 활성 유사체 및 유도체를 포함한다. 적합한 암 화학요법제는 또한 마이탄시노이드 및 이의 활성 유사체 및 유도체를 포함하고; 및 듀오카마이신 및 이의 활성 유사체 및 유도체를 포함한다.
세포 증식을 감소시키는 작용을 하는 제제는 당업계에 공지되어 있고 널리 사용되고 있다. 이러한 제제는 알킬화제, 예컨대 질소 머스타드, 니트로소우레아, 에틸렌이민 유도체, 알킬 설포네이트 및 트리아젠을 포함하며, 메클로레타민, 사이클로포스파미드 (CytoxanTM), 멜팔란 (L-사르콜리신), 카무스틴 (BCNU), 로무스틴 (CCNU), 세무스틴 (메틸-CCNU), 스트렙토조신, 클로로조토신, 우라실 머스타드, 클로르메틴, 이포스파마이드, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포라민, 부설판, 다카르바진 및 테모졸로마이드를 포함하나, 이에 제한되진 않는다.
항대사산물제는 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 아데노신 디아미나아제 억제제를 포함하며, 여기에는 시타라빈 (CYTOSAR-U), 사이토신 아라비노사이드, 플루오로우라실 (5-FU), 플록수리딘 (FudR), 6-티오구아닌, 6-메르캅토퓨린 (6-MP), 펜토스타틴, 5-플루오로우라실 (5-FU), 메토트렉세이트, 10-프로파르길-5,8-디데아자폴레이트 (PDDF, CB3717), 5,8-디데아자테트라하이드로엽산 (DDATHF), 류코보린, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴 및 젬시타빈이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
적합한 천연물 및 이의 유도체 (예를 들어, 빈카 알칼로이드, 항종양 항생제, 효소, 림포카인 및 에피포도필로톡신)는 Ara-C, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀 (Taxotere®), 데옥시코포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나아제, 아자티오프린; 브레키나르; 알칼로이드, 예를 들어 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신 등; 포도필로톡신, 예를 들어, 에토포사이드, 테니포시드 등; 항생제, 예를 들어, 안트라사이클린, 다우노루비신 (다우노마이신, 루비도마이신, 세루비딘), 이다루비신, 독소루비신, 에피루비신 및 모르폴리노 유도체 등; 페녹시존 비스사이클로펩티드, 예를 들어, 닥티노마이신; 염기성 글리코펩티드, 예를 들어, 블레오마이신; 안트라퀴논 글리코시드, 예를 들어, 플리카마이신 (미트라마이신); 안트라세네디온, 예를 들면, 미톡산트론; 아지리노피롤로 인돌레디온, 예를 들어, 미토마이신; 거대고리형 면역억제제, 예를 들어, 사이클로스포린, FK-506 (타크로리무스, 프로그라프), 라파마이신 등; 등을 포함하나, 이에 제한되진 않는다.
다른 항-증식성 세포독성제로는 나벨빈(navelbine), CPT-11, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 사이클로포스파마이드, 이포사미드 및 드롤록사핀이 있다.
항증식 활성을 갖는 미세소관에 영향을 미치는 제제는 또한 사용에 적합하며, 여기에는 알로콜히친 (NSC 406042), 할리콘드린 B (NSC 609395), 콜히친 (NSC 757), 콜히친 유도체 (예를 들어, NSC 33410), 돌스타틴 10 (NSC 376128), 마이탄신 (NSC 153858), 리조신 (NSC 332598), 파클리탁셀 (Taxol®), 탁솔® 유도체, 도세탁셀 (탁소텔®), 티오콜히친 (NSC 361792), 트리틸 시스테린, 빈블라스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트, 에오프틸론 A, 에포틸론 B, 디코더몰리드, 에스트라무스틴, 노코다졸을 포함하지만 이에 제한되지 않는 천연 및 합성 에포틸론을 포함한다.
사용하기에 적합한 호르몬 조절제 및 스테로이드(합성 유사체 포함)는 아드레노코르티코스테로이드, 예를 들어, 프레드니손, 덱사메타손 등; 에스트로겐 및 프레게스틴, 예를 들어, 하이드록시프로게스테론 카프로에이트, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 에스트라디올, 클로미펜, 타목시펜 등; 및 부신피질 억제제, 예를 들어, 아미노글루테티마이드; 17α-에티닐에스트라디올; 디에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 플루옥시메스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스토락톤, 메틸프레드니솔론, 메틸-테스토스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 히드록시프로게스테론, 아미노글루테티미드, 에스트라무스틴, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 류프롤라이드, 플루타마이드 (드로제닐), 토레미펜 (화레스톤) 및 졸라덱스®를 포함하나, 이에 제한되진 않는다. 에스트로겐은 증식과 분화를 자극하기 때문에, 에스트로겐 수용체에 결합하는 화합물은 이러한 활성을 차단하는 데 사용된다.
다른 적합한 화학요법제는 금속 복합체, 예를 들어, 시스플라틴 (시스-DDP), 카보플라틴 등; 우레아, 예를 들어, 히드록시우레아; 및 히드라진, 예를 들어, N-메틸히드라진; 에피도필로톡신; 토포이소머라제 억제제; 프로카르바진; 미톡산트론; 류코보린; 테가푸르; 등을 포함한다. 다른 관심 항-증식제는 면역억제제, 예를 들어, 미코페놀산, 탈리도마이드, 데옥시스페르구알린, 아자스포린, 레플루노마이드, 미조리빈, 아자스피란 (SKF 105685); 이레사® (ZD 1839, 4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-메톡시-6-(3-(4-모르폴리닐)프로폭시)퀴나졸린); 등을 포함한다.
탁산은 사용하기에 적합하다. "탁산"은 파클리탁셀뿐 아니라 임의의 활성 탁산 유도체 또는 프로-드러그를 포함한다. "파클리탁셀" (본 명세서에서 유사체, 제형, 및 유도체, 예를 들어, 도세탁셀, 탁솔TM, 탁소테레TM (도세탁셀의 제형), 파클리탁셀의 10-데사세틸 유사체 및 파클리탁셀의 3'N-데스벤조일-3'N-t-부톡시카보닐 유사체)는 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있거나 (문헌 WO 94/07882, WO 94/07881, WO 94/07880, WO 94/07876, WO 93/23555, WO 93/10076; 미국 특허 제5,294,637호; 제5,283,253호; 제5,279,949호; 제5,274,137호; 제5,202,448호; 제5,200,534호; 제5,229,529호; 및 EP 590,267 참조), 또는, 예를 들어, 문헌 [Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo]을 포함한 다양한 상업적 공급원에 의해 얻어질 수 있다 (Taxus brevifolia의 T7402; 또는 Taxus yannanensis의 T-1912).
파클리탁셀은 화학적으로 이용 가능한 일반적인 형태의 파클리탁셀뿐만 아니라, 유사체 및 유도체 (예: 위에서 언급한 바와 같이 탁소테레TM 도세탁셀) 및 파클리탁셀 접합체 (예: 파클리탁셀-PEG, 파클리탁셀-덱스트란, 또는 파클리탁셀-자일로스)를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다.
또한 용어 "탁산"에는 친수성 유도체 및 소수성 유도체를 모두 포함하는 다양한 공지의 유도체가 포함된다. 탁산 유도체는 갈락토스 및 만노스 유도체; 피페라지노 및 피페라지노 유도체를 포함하나, 이에 제한되진 않는다.
본 발명의 구현예는 항체가 하나 이상의 약물 모이어티에 접합된 접합체를 포함하며, 예컨대 2개의 약물 모이어티, 3개의 약물 모이어티, 4개의 약물 모이어티, 5개의 약물 모이어티, 6개의 약물 모이어티, 7개의 약물 모이어티, 8개의 약물 모이어티, 9개의 약물 모이어티, 10개의 약물 모이어티, 11개의 약물 모이어티, 12개의 약물 모이어티, 13개의 약물 모이어티, 14개의 약물 모이어티, 15개의 약물 모이어티, 16개의 약물 모이어티, 17개의 약물 모이어티, 18개의 약물 모이어티, 19개의 약물 모이어티, 또는 20개 이상의 약물 모이어티에 접합된 접합체를 포함한다. 약물 모이어티는 본 명세서에 기술된 바와 같이, 항체 내의 하나 이상의 부위에서 항체에 접합될 수 있다. 특정 구현예에서, 접합체는 0.1 내지 20, 또는 0.5 내지 20, 또는 1 내지 20, 예컨대 1 내지 19, 또는 1 내지 18, 또는 1 내지 17, 또는 1 내지 16, 또는 1 내지 15, 또는 1 내지 14, 또는 1 내지 13, 또는 1 내지 12, 또는 1 내지 11, 또는 1 내지 10, 또는 1 내지 9, 또는 1 내지 8, 또는 1 내지 7, 또는 1 내지 6, 또는 1 내지 5, 또는 1 내지 4, 또는 1 내지 3, 또는 1 내지 2의 범위에서 평균 약물-대-항체 비율 (DAR) (몰비)을 갖는다. 특정 구현예에서, 접합체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10과 같은 1 내지 10의 평균 DAR을 갖는다. 특정 구현예에서, 접합체는 1 내지 10의 평균 DAR을 갖는다. 특정 구현예에서, 접합체는 4와 같은 1 내지 5의 평균 DAR을 갖는다. 특정 구현예에서, 접합체는 5 내지 10, 예컨대 8의 평균 DAR을 갖는다. 평균은 산술 평균을 의미한다.
폴리펩티드에 접합되는 약물은 폴리펩티드와의 반응을 위한 반응성 파트너를 통합하도록 변형될 수 있다. 약물이 펩티드 약물인 경우, 반응성 모이어티 (예를 들어, 아미노옥시 또는 히드라지드)는 N-말단 영역, N-말단, C-말단 영역, C-말단, 또는 펩티드 내부의 위치에 위치할 수 있다. 예를 들어, 방법의 예는 아미노옥시 기를 갖는 펩티드 약물을 합성하는 것을 포함한다. 이 예시에서, 펩티드는 Boc-보호 전구체로부터 합성된다. 펩티드의 아미노기는 카르복실산 기 및 옥시-N-Boc 기를 포함하는 화합물과 반응할 수 있다. 예를 들어, 펩티드의 아미노기는 3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일옥시)프로판산과 반응한다. 카르복실산 기 및 옥시-N-보호기를 포함하는 화합물 상의 다른 변이체는 알킬렌 링커 내의 상이한 수의 탄소 및 알킬렌 링커 상의 치환체를 포함할 수 있다. 펩티드의 아미노기와 카르복실산기 및 옥시-N-보호기를 포함하는 화합물 사이의 반응은 표준 펩티드 커플링 화학 반응을 통해 일어난다. 사용될 수 있는 펩티드 커플링 시약의 예는, DCC (디사이클로헥실카르보디이미드), DIC (디이소프로필카르보디이미드), 디-p-톨루오일카르보디이미드, BDP (1-벤조트리아졸 디에틸포스페이트-1-사이클로헥실-3-(2-모르폴리닐에틸)카르보디이미드), EDC (1-(3-디메틸아미노프로필-3-에틸-카르보디이미드 하이드로클로라이드), 시아누릭 플루오라이드, 시아누릭 클로라이드, TFFH (테트라메틸 플루오로포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트), DPPA (디페닐포스포라지데이트), BOP (벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), HBTU (O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트), TBTU (O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄테트라플루오로보레이트), TSTU (O-(N-숙시니미딜)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트), HATU (N-[(디메틸아미노)-1-H-1,2,3-트리아졸로[4,5,6]-피리딘-1-일메틸렌]- -N-메틸메타미니움 헥사플루오로포스페이트 N-옥사이드), BOP-Cl (비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐) 염화포스핀), PyBOP ((1-H-1,2,3-벤조트리아졸-1-일옥시)-트리스(피롤리디노)포스포늄 테트라플루오로포스페이트), BrOP (브로모트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), DEPBT (3-(디에톡시포스포릴록시)-1,2,3-벤조트리아진-4(3H)-온) PyBrOP (브로모트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사풀루오로포스페이트)을 포함하나, 이에 제한되진 않는다. 비제한적인 예로서, HOBt 및 DIC는 펩티드 커플링 시약으로서 사용될 수 있다.
아미노-옥시 작용성을 노출시키기 위한 탈보호는 N-보호기를 포함하는 펩티드에 대해 수행된다. 예를 들어, N-옥시숙신이미드기의 탈보호는 사이클릭 아미드 기에 대한 표준 탈보호화 조건에 따라 발생한다. 탈보호 조건은 문헌 [Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3rd Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY and Harrison et al.]에서 확인할 수 있다. 특정 탈보호 조건에는 히드라진 시약, 아미노 시약 또는 수소화 붕소 나트륨이 포함된다. Boc 보호 기의 탈보호는 TFA에서 발생할 수 있다. 탈보호화를 위한 다른 시약은 히드라진, 메틸히드라진, 페닐히드라진, 소듐 보로하이드라이드 및 메틸아민을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 생성물 및 중간체는 HPLC 정제와 같은 통상적인 방법으로 정제될 수 있다.
일반적으로 숙련된 기술자는 pH 및 입체 장애(예: 관심 반응 파트너와의 반응에 대한 아미노산 잔기의 접근성)와 같은 요인이 중요하다는 것을 이해할 것이다. 최적의 접합 조건을 제공하기 위해 반응 조건을 수정하는 것은 통상의 기술자의 기술 범위 내에 있으며, 당해 기술분야에서 통상적이다. 접합이 살아있는 세포 내 또는 상에 존재하는 폴리펩티드로 수행되는 경우, 조건은 생리학적으로 양립할 수 있도록 선택된다. 예를 들어, pH는 반응이 일어나도록 허용하기에 충분한 시간 동안 그러나 세포가 버틸 수 있는 기간 내에 (예를 들어, 약 30분 내지 1시간) 일시적으로 떨어질 수 있다. 세포 표면 상에서 폴리펩티드의 변형을 수행하기 위한 생리학적 조건은 세포-표면 아자이드를 함유하는 세포의 변형에서 케톤-아자이드 반응에 사용되는 것과 유사할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 제6,570,040호 참조).
본 명세서에 개시된 화합물 또는 접합체와 반응성 파트너로서 작용하는 친핵기를 함유하거나 함유하도록 변형된 저분자 화합물은 또한 본 명세서의 폴리펩티드-약물 접합체에서 약물로서 사용하기 위해 고려된다. 일반적인 방법은 관심 화합물을 합성하는데 유용한 화학적 합성 반응식 및 조건에 대해 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001]; 또는 [Vogel, A Textbook of Practical Organic Chemistry, Including Qualitative Organic Analysis, Fourth Edition, New York: Longman, 1978] 참조).
항체 제조방법
대상 항체는 임의의 공지된 방법, 예를 들어, 단백질 합성을 위한 통상적인 합성 방법에 의해 생산될 수 있고; 재조합 DNA 방법에 의해 생산될 수 있다.
대상 항체가 단쇄 폴리펩티드인 경우, 표준 화학적 펩티드 합성 기술을 사용하여 합성할 수 있다. 폴리펩티드가 화학적으로 합성되는 경우, 합성은 액상 또는 고체상을 통해 진행될 수 있다. 서열의 C-말단 아미노산이 불용성 지지체에 부착된 후, 서열에 남아 있는 아미노산을 순차적으로 첨가하는 고체상 폴리펩티드 합성 (SPPS)은 대상 항체의 화학적 합성에 적합한 방법의 예시이다. Fmoc 및 Boc와 같은 다양한 형태의 SPPS를 사용하여 대상 항체를 합성할 수 있다.
표준 재조합 분석법은 대상 항체의 생산에 사용할 수 있다. 예를 들어, 불변 영역에 선택적으로 연결된 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산이 발현 벡터에 삽입된다. 경쇄 및 중쇄는 동일하거나 상이한 발현 벡터로 복제할 수 있다. 면역글로불린 사슬을 암호화하는 DNA 세그먼트(segment)는 면역글로불린 폴리펩티드의 발현을 보장하는 발현 벡터의 제어 서열에 작동가능하게 연결된다. 발현 제어 서열은 프로모터 (예를 들어, 자연적으로 연관된 또는 이종성 프로모터), 신호전달 서열, 인핸서 요소 및 전사 종결 서열을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 발현 제어 서열은 진핵생물 숙주 세포 (예를 들어, COS 또는 CHO 세포)를 형질전환시키거나 형질주입할 수 있는 벡터의 진핵생물 프로모터 시스템일 수 있다. 벡터가 적절한 숙주에 통합되면, 숙주는 뉴클레오티드 서열의 높은 수준의 발현과 항체의 수집 및 정제에 적합한 조건 하에서 유지된다.
암호의 축퇴(degeneracy)로 인해, 다양한 핵산 서열이 각각의 면역글로불린 아미노산 서열을 암호화할 수 있다. 목적하는 핵산 서열은 신규 (de novo) 고체-상 DNA 합성 또는 목적하는 폴리뉴클레오티드의 이전에 제조된 변이체의 중합효소연쇄반응(PCR) 돌연변이유발에 의해 생산될 수 있다.
적합한 발현 벡터는 일반적으로 숙주 유기체에서 에피솜 또는 숙주 염색체 DNA의 필수적인 부분으로 복제할 수 있다. 일반적으로, 발현 벡터는 원하는 DNA 서열로 형질전환된 세포를 검출할 수 있도록 선택 마커 (예: 암피실린-내성, 하이그로마이신-내성, 테트라사이클린 내성, 카나마이신 내성 또는 네오마이신 내성)를 함유한다.
대장균(Escherichia coli)은 대상체 항체-암호화 폴리뉴클레오티드를 클로닝하는 데 사용할 수 있는 원핵생물 숙주 세포의 한 예이다. 사용하기에 적합한 다른 미생물 숙주로는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)와 같은 바실리(bacilli) 및 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia) 및 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종과 같은 다른 장내세균(enterobacteriaceae)이 있다. 효모와 같은 다른 미생물도 발현에 유용하다. 사카로미세스 (Saccharomyces) (예를 들어, S. 세르비지애) 및 피키아 (Pichia)는 적합한 효모 숙주 세포의 예이다.
미생물 이외에, 포유동물 세포 (예를 들어, 시험관 내 세포 배양에서 성장한 포유류 세포)는 또한 본 발명의 폴리펩티드 (예를 들어, 면역글로불린 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드)를 발현하고 생산하는데 사용될 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포는 CHO 세포주, 다양한 Cos 세포주, HeLa 세포주, 골수종 세포주, 및 형질전환된 B-세포 또는 하이브리도마를 포함한다. 이들 세포에 대한 발현 벡터는 복제의 기원(origin of replication), 프로모터, 및 인핸서와 같은 발현 제어 서열과 필요한 처리 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위 및 전사 종결인자 서열을 포함할 수 있다. 적합한 발현 조절 서열의 예로는 면역글로불린 유전자로부터 유래된 프로모터, SV40, 아데노바이러스, 소 파필로마 바이러스, 거대세포바이러스 등을 들 수 있다.
일단 (화학적으로 또는 재조합적으로) 합성되면, 전체 항체, 이의 이량체, 개별적인 경쇄 및 중쇄, 또는 다른 형태의 대상 항체 (예를 들어, scFv 등)를 암모늄 설페이트 침전, 친화성 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 정제, 겔 전기영동 등을 포함하는 당업계의 표준 절차에 따라 정제할 수 있다 (일반적으로, 문헌 [Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, N.Y., (1982)] 참조). 대상 항체는 실질적으로 순수할 수 있고, 예를 들어, 적어도 약 80% 내지 85% 순도, 적어도 약 85% 내지 90% 순도, 적어도 약 90% 내지 95% 순도, 또는 98% 내지 99%의 순도, 또는 그 이상 순수할 수 있고, 예를 들어, 대상 항체 이외의 세포 파편, 거대분자 등과 같은 오염 물질로부터 자유로울 수 있다.
조성물
본 발명의 항체 및/또는 항체-접합체, 예를 들어, ADC는 다양한 다른 방식으로 제형화될 수 있다. 일반적으로, 접합체가 폴리펩티드-약물 접합체인 경우, 접합체는 폴리펩티드에 접합된 약물, 치료하고자 하는 상태, 및 사용하고자하는 투여 경로와 양립할 수 있는 방식으로 제형화된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임의의 항체 또는 접합체, 예를 들어, ADC 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
항체 또는 항체-접합체, 예를 들어, ADC는 임의의 적합한 형태, 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 염의 형태로 제공될 수 있고, 임의의 적절한 투여 경로, 예를 들어, 경구, 국소 또는 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있다. 접합체가 액체 주사제로서 제공되는 경우 (예를 들어, 이들이 정맥내 또는 조직 내로 직접 투여되는 구현예에서), 접합체는 즉시 사용 가능한 제형으로서, 또는 약제학적으로 허용되는 담체 및 부형제로 구성된 재구성 가능한 저장-안정성 분말 또는 액체로서 제공될 수 있다.
항체 및/또는 접합체를 제형화하는 방법은 쉽게 입수할 수 있는 방법들을 적용할 수 있다. 예를 들어, 항체 및/또는 접합체는 치료적으로 유효한 양의 항체 및/또는 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체 (예를 들어, 식염수)를 포함하는 약제학적 조성물로 제공될 수 있다. 약제학적 조성물은 다른 첨가제 (예를 들어, 완충제, 안정제, 방부제 등)를 선택적으로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 제형은 포유동물에 대한 투여에 적합하며, 예컨대 인간에 대한 투여에 적합한 것들이다.
예를 들어, 본 발명은 대상 항체 또는 항체-접합체를 포함하는 조성물을 제공한다. 대상 항체 또는 항체-접합체 조성물은, 대상 항체 또는 항체-접합체 이외에, 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 염, 예를 들어, NaCl, MgCl2, KCl, MgSO4 등; 완충제, 예를 들어, 트리스 버퍼, N-(2-히드록시에틸)피페라진-N'-(2-에탄설폰산) (HEPES), 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산 (MES), 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산 소듐 염 (MES), 3- (N-모르폴리노) 프로판 설폰산 (MOPS), N-트리스[히드록시메틸]메틸-3-아미노 프로판 설폰산 (TAPS) 등; 가용화제; 세제, 예를 들어, Tween-20 등과 같은 비이온성 세제; 프로테아제 억제제; 글리세롤; 등.
특정 구현예에서, 본 발명은 대상 항체 및/또는 항체-접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물을 제공한다. 일반적으로, 제형은 대상 항체 및/또는 항체-접합체의 유효량을 포함한다. "유효량"은 원하는 결과, 예를 들어, 암세포의 수의 감소를 이끌어내기에 충분한 투여량을 의미한다. 일부 경우에는, 목적하는 결과는 대조군에 비해 적어도 악성 종양 증상이 감소하는 것이다.
제형
대상 방법에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체는 목적하는 치료 효과 또는 진단 효과를 초래할 수 있는 임의의 편리한 수단을 사용하여 숙주에 투여될 수 있다. 따라서, 항체 및/또는 항체-접합체는 치료적 투여를 위한 다양한 제형에 혼입될 수 있다. 보다 구체적으로, 대상 항체 및/또는 항체-접합체는 적절하고, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 조합하여 약제학적 조성물로 제형화될 수 있고, 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌약, 주사제, 흡입제 및 에어로졸과 같은 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태의 제제로 제형화될 수 있다.
약제학적 제형에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 형태로 투여될 수 있거나, 또한 단독으로 또는 다른 약제학적으로 활성 화합물과 조합하여 또는 적절하게 결합하여 사용될 수 있다. 다음의 방법 및 부형제는 단지 예시적인 것이며, 어떠한 방식으로도 제한되지 않는다.
경구 제제의 경우, 대상 항체 및/또는 항체-접합체를 단독으로 또는 적절한 첨가제와 조합하여 정제, 분말, 과립 또는 캡슐을 제조할 수 있으며, 예를 들어, 락토스, 만니톨, 옥수수 전분 또는 감자 전분과 같은 통상적인 첨가제와 조합하여 제조할 수 있으며; 결정질 셀룰로스, 셀룰로스 유도체, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴과 같은 결합제(binder)와 함께 조합하여 제조할 수 있으며; 옥수수 전분, 감자 전분 또는 나트륨 카복시 메틸 셀룰로스와 같은 붕해제와 함께 조합하여 제조할 수 있으며; 탈크 또는 스테아린산 마그네슘과 같은 윤활제와 함께 조합하여 제조할 수 있으며; 원하는 경우 희석제, 완충제, 습윤제, 방부제 및 향료와 함께 조합하여 제조할 수 있다.
대상 항체 및/또는 항체-접합체는 식물성 또는 다른 유사한 오일, 합성 지방족 산 글리세라이드, 고등 지방족 산 또는 프로필렌 글리콜의 에스테르와 같은 수성 또는 비수성 용매에 이들을 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 주사를 위한 제제로 제형화될 수 있고; 그리고 원하는 경우, 가용화제, 등장제, 현탁제, 유화제, 안정제 및 방부제와 같은 통상적인 첨가제를 사용하여 제형화될 수 있다.
대상 항체 및/또는 항체-접합체를 포함하는 약제학적 조성물은 원하는 순도를 갖는 항체 및/또는 항체-접합체를 임의의 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제, 안정제, 계면활성제, 완충액 및/또는 등장화제와 혼합하여 제조한다. 허용되는 담체, 부형제 및/또는 안정제는 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산, 글루타치온, 시스테인, 메티오닌 및 구연산을 포함하는 항산화제; 방부제 (예: 에탄올, 벤질 알코올, 페놀, m-크레졸, p-클로르-m-크레졸, 메틸 또는 프로필 파라벤, 염화벤잘코늄, 또는 이의 조합물); 아미노산, 예컨대, 아르기닌, 글리신, 오르니틴, 리신, 히스티딘, 글루탐산, 아스파르트산, 이소류신, 류신, 알라닌, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 메타이오닌, 세린, 프롤린 및 이들의 조합; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; 저분자량 (약 10개 잔기 미만의) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 젤라틴 또는 혈청 알부민; EDTA와 같은 킬레이트제; 당, 예컨대 트레할로스, 수크로스, 락토스, 글루코스, 만노스, 말토스, 갈락토스, 프럭토스, 소르보스, 라피노스, 글루코사민, N-메틸글루코사민, 갈락토사민 및 뉴라민산; 및/또는 Tween, Brij Pluronics, 트리톤-X 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다.
약제학적 조성물은 액체 형태, 동결건조된 형태 또는 동결건조된 형태로부터 재구성한 액체 형태일 수 있으며, 이때 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균 용액으로 재구성되어야 한다. 동결건조된 조성물을 재구성하기 위한 표준 절차는 순수한 물의 부피 (일반적으로 동결건조 동안 제거된 부피와 동일)를 다시 첨가하는 것이지만, 그러나, 항균제를 포함하는 용액은 비경구 투여를 위한 약제학적 조성물의 제조에 사용될 수 있다.
대상 약제학적 조성물 내의 예시적인 항체 및/또는 항체-접합체 농도는 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/ml, 또는 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 또는 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL 범위일 수 있다.
항체 및/또는 항체-접합체의 수성 제형은 pH-완충 용액, 예를 들어, pH 범위가 약 4.0 내지 약 7.0, 또는 약 5.0 내지 약 6.0, 또는 대안적으로 약 5.5로 제조될 수 있다. 이 범위 내의 pH에 적합한 완충액의 예로는 포스페이트-, 히스티딘-, 시트레이트-, 석시네이트-, 아세테이트-완충액 및 기타 유기산 완충액이 있다. 완충액 농도는 예를 들어, 완충액 및 제형의 목적하는 긴장성(tonicity)에 따라, 약 1 mM 내지 약 100 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 50 mM일 수 있다.
불안정한 활성 성분 (예를 들어, 단백질)을 동결건조 과정 동안 불안정한 조건으로부터 보호하기 위해 동결건조보호제도 첨가할 수 있다. 예를 들어, 공지된 동결건조보호제는 당류 (글루코스 및 슈크로스를 포함함); 폴리올 (만니톨, 솔비톨 및 글리세롤 포함); 및 아미노산 (알라닌, 글리신 및 글루탐산 포함)를 포함한다. 동결건조보호제는 약 10 nM 내지 500 nM의 양으로 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상 제형은 대상 항체 및/또는 항체-접합체, 및 하나 이상의 작용제 (예를 들어, 계면활성제, 완충제, 안정제, 등장화제)를 포함하나, 하나 이상의 방부제, 예컨대 에탄올, 벤질 알코올, 페놀, m-크레졸, p-클로르-m-크레졸, 메틸 또는 프로필 파라벤, 염화 벤잘코늄 및 이들의 조합을 필수적으로 사용하지 않는 제형이다. 다른 구현예에서, 방부제는, 예를 들어, 약 0.001 내지 약 2%(w/v) 범위의 농도로 제형에 포함된다.
예를 들어, 대상 제형은 비경구 투여에 적합한 액체 또는 동결건조된 제형일 수 있고, 다음을 포함할 수 있다: 약 1mg/mL 내지 약 200mg/mL의 대상 항체 접합체; 0.001% 내지 약 1%의 하나 이상의 계면활성제; 약 1 mM 내지 약 100 mM의 완충액; 선택적으로 약 10 mM 내지 약 500 mM의 안정제; 및 약 5 mM 내지 약 305 mM의 등장화제; 및 pH는 약 4.0 내지 약 7.0이다.
또 다른 예로서, 대상 비경구 제형은 약 1mg/mL 내지 약 200mg/mL의 대상 항체 접합체를 포함하는 액체 또는 동결건조된 제형이고; 0.04% Tween 20 w/v; 20 mM L-히스티딘; 및 250mM 자당을 포함하고; pH는 5.5이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "단위 투여 형태"는 인간 및 동물 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 의미하며, 각 단위는 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 비히클과 관련하여 목적하는 효과를 이끌어내기에 충분한 양으로 계산된 본 발명의 항체 접합체의 결정된 양을 함유한다. 대상 항체 접합체에 대한 사양(specification)은 적용되는 특정 항체 접합체 및 달성하고자 하는 효과, 및 숙주에서 각 항체 접합체와 관련된 약력학(pharmacodynamic)에 따라 달라질 수 있다.
대상 항체 및/또는 항체-접합체를 주사용 제형으로 투여할 수 있다. 일반적으로, 주사용 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로 제조되고; 주입 전의 액체 비히클 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태로도 제조될 수 있다. 제제는 또한 유화되거나 항체 접합체가 리포좀 비히클에 캡슐화될 수도 있다.
비히클, 보조제, 담체 또는 희석제와 같이 약제학적으로 허용되는 부형제는 일반인이 쉽게 구할 수 있다. 더욱이, 약제학적으로 허용되는 보조 물질, 예컨대 pH 조절제 및 완충제, 긴장도 조절제, 안정제, 습윤제 등은 쉽게 입수할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체는 방출조절제(controlled release formulation)로 제형화된다. 서방형 제제는 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 서방형 제제의 적합한 예시는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반-투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형된 제품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 서방형 매트릭스의 예로는 폴리에스테르, L-글루탐산 및 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 하이드로겔, 폴리락타이드, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산을 포함한다. 생물학적 활성의 손실 가능성 및 서방형 제제에 포함된 항체의 면역원성의 변화 가능성은 적절한 첨가제를 사용함으로써, 수분 함량을 조절함으로써, 그리고 특이적 중합체 매트릭스 조성물을 개발함으로써 방지될 수 있다.
물리적 시스템에는 미세캡슐화 (microencapsulation), 거대캡슐화 (macroencapsulation) 및 멤브레인 시스템과 같은 속도 제어 멤브레인이 있는 저장소(reservoir) 시스템; 중공 섬유, 초미세 다공성 셀룰로스 트리아세테이트, 및 다공성 고분자 기재 및 폼과 같은 속도 제어 멤브레인이 없는 저장소 시스템; 비다공성, 고분자 또는 탄성 매트릭스에 물리적으로 용해된 시스템 (예: 비침식성, 침식성, 환경 작용제 유입 및 분해성) 및 비-다공성, 고분자 또는 탄성 매트릭스에 물리적으로 분산된 재료 (예: 비침식성, 침식성, 환경 작용제 유입 및 분해성)를 포함하는 모놀리식(monolithic) 시스템; 외부 제어층과 화학적으로 유사하거나 상이한 저장소 층을 포함하는 박층 구조; 및 삼투압 펌프 또는 이온 교환 레진에 대한 흡착과 같은 기타 물리적 방법;을 포함하나, 이에 제한되진 않는다.
화학적 시스템은 중합체 매트릭스의 화학적 침식 (예를 들어, 이질적, 또는 균질한 침식) 또는 중합체 매트릭스의 생물학적 침식 (예를 들어, 이질적, 또는 균질한 침식)을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
용량
적절한 용량은 다양한 임상적 요인에 따라 주치의 또는 기타 자격을 갖춘 의료진이 결정할 수 있다. 의학 분야에서 익히 알려져 있듯이, 임의의 한 환자에 대한 투여량은 환자의 크기, 체표면적, 연령, 투여할 특정 화합물, 환자의 성별, 투여 시간과 경로, 전반적인 건강상태 및 동시 투여 중인 다른 약물을 포함하는 다양한 요인들에 따라 달라진다. 대상 항체 및/또는 항체-접합체는 투여량 당 1 ng/kg 체중 및 20 mg/kg 체중, 예를 들어, 0.1 mg/kg 체중 내지 10 mg/kg 체중, 예를 들어, 0.5 mg/kg 체중 내지 5 mg/kg 체중의 양으로 투여될 수 있으나; 그러나, 이러한 예시적인 범위보다 적거나 많은 투여량은 특히 전술한 요인들을 고려하여 예상된다. 투여법이 지속적인 주입인 경우, 분당 체중 kg당 1μg 내지 10mg 범위일 수도 있다.
통상의 기술자는 투여 수준이 특정 항체 및/또는 항체 접합체의 기능, 증상의 중증도 및 부작용에 대한 대상체의 감수성에 따라 달라질 수 있다는 것을 쉽게 이해할 수 있다. 주어진 화합물에 대한 바람직한 투여량은 다양한 수단에 의해 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
투여 경로
대상 항체 및/또는 항체-접합체는 생체 내(in vivo) 및 생체 외(ex vivo) 방법뿐만 아니라 전신 및 국소 투여 경로를 포함하여, 약물 전달에 적합한 모든 사용 가능한 방법 및 경로를 사용하여 개인에게 투여된다.
종래의 및 약제학적으로 허용되는 투여 경로는 비강내, 근육내, 기관내, 피하, 피내, 국소 적용, 정맥내, 동맥내, 직장, 비강, 경구 및 기타 경장(enteral) 및 비경구 투여 경로를 포함한다. 투여 경로들은 조합하여 사용될 수 있거나, 원하는 경우, 항체 접합체 및/또는 목적하는 효과에 따라 조정될 수 있다. 대상 항체 및/또는 항체-접합체 조성물은 단일 투여량 또는 다중 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체 조성물이 경구로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체 조성물은 흡입 경로를 통해 투여된다. 일부 구현예에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체 조성물이 비강 내로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체 조성물이 국소적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체 조성물이 두개내(intracranially)로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체 조성물이 정맥 내로 투여된다.
항체 및/또는 항체-접합체는 전신 또는 국소 경로를 포함하여, 기존 약물의 전달에 적합한 임의의 이용 가능한 통상적인 방법 및 경로를 사용하여 숙주에게 투여할 수 있다. 일반적으로, 본 발명에 의해 고려되는 투여 경로는 경장, 비경구, 또는 흡입 경로를 포함하지만, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.
흡입 투여 이외의 비경구 투여 경로는 국소, 경피, 피하, 근육내, 안와내, 수정체내, 척추내, 흉골내, 간내 및 정맥내 경로, 예를 들어, 소화관을 통하지 않고 투여하는 임의의 경로를 포함하지만, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여는 대상 항체의 전신 또는 국소 전달에 영향을 미치기 위해 수행될 수 있다. 전신에 전달이 필요한 경우, 투여는 일반적으로 약제학적 제제가 침습적 또는 전신적으로 흡수되는 국소 또는 점막 투여를 포함한다.
대상 항체 및/또는 항체-접합체는 경장 투여에 의해 대상체에게 전달될 수도 있다. 경장 투여 경로에는 구강 및 직장 (예를 들어, 좌제를 사용하는) 전달이 포함되지만, 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.
치료란 적어도 숙주를 괴롭히는 병리학적 상태와 관련된 증상의 개선을 의미하며, 여기서 개선은 유방암, 췌장암 또는 폐암과 같이 치료되고 있는 병리학적 상태와 관련된 파라미터의, 예를 들어, 증상의 정도의 감소를 지칭하기 위해 넓은 의미로 사용된다. 따라서, 치료에는 병리학적 상태 또는 적어도 이와 관련된 증상이 완전히 억제되거나 (예를 들어, 발생 예방), 중단 (예를 들어, 종결)되어 숙주가 더 이상 병리학적 상태 또는 적어도 병리학적 상태를 특징짓는 증상들을 앓지 않는 상황도 포함된다.
일부 구현예에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체는 주사에 의해, 예를 들어, 전신 전달 (예를 들어, 정맥내 주입)을 위해 또는 국소 부위로 투여된다.
다양한 숙주 (여기서, 용어 "숙주"는 본 명세서에서 용어 "대상체", "개체" 및 "환자"와 상호 교환적으로 사용됨)는 대상 방법에 따라 치료될 수 있다. 일반적으로, 이러한 숙주는 "포유류" 또는 "포유동물"이며, 이때 이들 용어는 육식목 (예를 들어, 개 및 고양이), 설치목 (예를, 들어, 마우스, 기니피그, 및 쥐) 및 영장목 (예를 들어, 인간, 침팬지 및 원숭이)를 포함하는 포유류 강 내에 있는 유기체를 설명하기 위해 광범위하게 사용된다. 일부 구현예들에서, 숙주는 인간일 수 있다.
치료 방법
본 발명은 넥틴-4-양성 세포, 예를 들어, 암성 넥틴-4-양성 세포 또는 자가반응성 넥틴-4-양성 세포와 관련되거나 이에 의해 야기된 질병 또는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
악성종양의 치료
본 발명은 고형 종양 또는 혈액학적 악성 종양을 포함하는 악성 종양을 치료하는 방법으로서, 이 방법은 일반적으로 이를 필요로 하는 개체 (예를 들어, 악성 종양을 갖는 개체)에게 대상 항체 및/또는 항체-접합체의 유효량을 단독으로 (예를 들어, 단독요법에서) 또는 병용으로 (예를 들어, 병용요법에서) 하나 이상의 추가적인 치료제와 함께 투여하는 것을 수반한다.
악성종양으로는, 예를 들어, 간세포암(HCC), 비호지킨 림프종, 버킷 림프종, 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병, 털세포백혈병, 전림프구성 백혈병, 항문암, 충수암(appendix cancer), 담관암(예: 담관암종 (cholangiocarcinoma)), 방광암, 뇌종양, 유방암, 자궁경부암, 결장암, 미확인 원발성 암 (CUP), 식도암, 안구암, 나팔관암, 위장암, 신장암, 간암, 폐암, 수모세포종, 흑색종, 구강암, 난소암, 췌장암, 부갑상선질환, 음경암, 뇌하수체종양, 전립선암, 직장암, 피부암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 질암, 외음부암 등을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상 항체 및/또는 항체-접합체의 유효량은, 하나 이상의 용량으로 하나 이상의 추가적인 치료제와 함께 단독 (예를 들어, 단독요법에서) 또는 병용 (예를 들어, 병용요법에서)으로 투여될 때, 항체 접합체로 치료하지 않은 개체 내의 암세포의 수와 비교하여, 개체에서의 암세포의 수를 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 그 이상으로 감소시키는데 효과적이다.
일부 경우에는, 난소암, 유관 유방암, 폐 선암 및 췌장암과 같은 고형 종양이다.
본 발명의 측면들은 대상체에서 표적 부위에 약물을 전달하는 방법을 포함한다. 상기 방법은 본 발명에 따른 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하며, 이때 투여하는 단계는 대상체의 표적 부위에서 접합체로부터 치료적 유효량의 약물을 방출하는 것이 효과적이다.
일부 구현예에서, ADC의 다중 용량이 투여된다. ADC의 투여 빈도는 다양한 요인, 예를 들어, 증상의 중증도, 대상체의 상태 등에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예들에서, ADC는 한 달에 한 번, 한 달에 두 번, 한 달에 세 번, 격주, 일주일에 한 번 (qwk), 일주일에 두 번, 일주일에 세 번, 일주일에 네 번, 일주일에 다섯 번, 일주일에 여섯 번, 격일, 매일 (qd/od), 하루에 두 번 (bds/bid), 또는 하루 세 번 (tds/tid) 등으로 투여된다.
병용 요법
일부 구현예에서, 악성 종양을 치료하는 대상 방법은 대상 항체 및/또는 항체-접합체 및 하나 이상의 추가적인 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 적합한 추가적인 치료제는 (상술한 바와 같은) 암 화학요법제를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
일부 구현예에서, 치료 방법은 면역조절 치료제의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 상기 면역조절 치료제는 면역관문억제제 또는 인터루킨일 수 있다. 면역관문억제제는 A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, CD277, IDO, KIR, PD-1, LAG-3, TIM-3, TIGIT 또는 VISTA를 억제할 수 있다. PD-1 신호전달을 억제하는 면역관문억제제는 항-PD-1 항체일 수 있다. 항-PD-1 항체는 니볼루맙(nivolumab), 펨브롤리주맙(pembrolizumab), 아테졸리주맙(atezolizumab), 더발루맙(durvalumab) 또는 아벨루맙(avelumab)일 수 있다. CTLA-4를 억제하는 면역관문억제제는 항-CTLA-4 항체일 수 있다. 상기 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙(ipilimumab)일 수 있다.
치료에 적합한 대상체
다양한 대상체가 대상 방법으로 치료하기에 적합하다. 적합한 대상체는 악성종양을 가진; 악성 종양으로 진단을 받은; 악성종양을 앓았고 악성종양이 재발할 위험이 있는; 대상 항-넥틴-4 항체 접합체 이외의 작용제로 악성 종양으로 치료를 받은 (예: 암 화학요법제로 치료를 받은); 및 작용제에 반응하지 않은; 또는 대상 항-넥틴-4 항체 접합체 이외의 작용제로 악성 종양 치료를 받은 (예: 암 화학요법제로 치료를 받은 사람); 및 처음에는 작용제에 반응했지만 이후 반응을 멈춘 (예: 재발); 임의의 개체, 예를 들어, 인간을 포함한다. 대상체는 난소암, 유관 유방암, 폐 선암 및 췌장암과 같은 고형 종양을 가질 수 있다.
구현예
본 발명의 특정 구현예들은 하기 열거된 항목(clause)들에서 설명된다. 이러한 구현예들은 예시적일 뿐이며, 그 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.
1. 화학식 Ⅰ의 접합체:
[화학식 Ⅰ]
상기 화학식에서,
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 CR4, N 및 C-LB-W2로부터 독립적으로 선택되고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 선택되고;
R2 및 R3는 각각 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 순환적으로 연결되어 선택적으로 5 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 독립적으로 선택되고;
LA는 제1 링커이고;
LB는 제2 링커이고;
W1은 제1 약물이고;
W2는 제2 약물이고; 및
W3는 항-넥틴-4 항체이다.
2. 항목 1에 있어서, Z1은 CR4인 것인, 접합체.
3. 항목 1에 있어서, Z1은 N인 것인, 접합체.
4. 항목 1에 있어서, Z3은 CR4인 것인, 접합체.
5. 항목 1에 있어서, Z3은 C-LB-W2인 것인, 접합체.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 한 항목에 있어서, LA는 다음을 포함하는, 접합체:
-(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-,
이때,
a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
T1, T2, T3, T4, T5 및 T6는 각각 공유결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈 기, 히드라진, 디설파이드, 및 에스테르로부터 독립적으로 선택되고, 이때 EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이고, 여기서 각각의 w는 1에서 20까지의 정수이고, 각각의 n은 1에서 30까지의 정수이고, 각각의 p는 1에서 20까지의 정수이고, 및 각각의 x는 1에서 12까지의 정수이고;
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6는 각각 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 각각의 q는 1에서 6까지의 정수이고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고; 및
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 독립적으로 선택된다.
7. 항목 6에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된 것인, 접합체.
8. 항목 6에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된 것인, 접합체.
9. 항목 7 또는 항목 8에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로나이드 (glucuronide), 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc로부터 선택되는 것인, 접합체.
10. 항목 6 내지 9 중 어느 한 항목에 있어서,
이때,
T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CO-이고;
T2는 아미노산 유사체 및 V2는 -NH-이고;
T3은 (PEG)n 및 V3은 -CO-이고;
T4는 AA 및 V4는 존재하지 않고;
T5는 PABC 및 V5는 존재하지 않고; 및
f는 0이거나, 또는
이때,
T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CONH-이고;
T2는 (PEG)n 및 V2는 -CO-이고;
T3은 AA 및 V3은 존재하지 않고;
T4는 PABC 및 V4는 존재하지 않고; 및
e 및 f는 각각 0이거나, 또는
이때,
T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CONH-이고;
T2는 치환된 (C1-C12)알킬 및 V2는 -CO-이고;
T3은 AA 및 V3은 존재하지 않고;
T4는 PABC 및 V4는 존재하지 않고; 및
e 및 f는 각각 0이다.
11. 항목 1 내지 항목 10 중 어느 한 항목에 있어서, LB는 다음을 포함하는, 접합체:
-(T7-V7)g-(T8-V8)h-(T9-V9)i-(T10-V10)j-(T11-V11)k-(T12-V12)l-(T13-V13)m-,
이때,
g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 공유결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈 기, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 독립적으로 선택되되, 이때 EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이고, 여기서 각각의 w는 1에서 20까지의 정수이고, 각각의 n은 1에서 30까지의 정수이고, 각각의 p는 1에서 20까지의 정수이고, 및 각각의 x는 1에서 12까지지의 정수이고;
V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 공유결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 각각의 q는 1에서 6까지의 정수이고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고; 및
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 독립적으로 선택된다.
12. 항목 11에 있어서, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된 것인, 접합체.
13. 항목 11에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된 것인, 접합체.
14. 항목 12 또는 항목 13에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc로부터 선택되는 것인, 접합체.
15. 항목 11 내지 항목 14 중 어느 한 항목에 있어서,
이때,
T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
T8은 (C1-C12)알킬 및 V8은 -CONH-이고;
T9는 (PEG)n 및 V9는 -CO-이고;
T10은 AA 및 V10은 존재하지 않고;
T11은 PABC 및 V11은 존재하지 않고; 및
l 및 m은 각각 0이거나, 또는
이때,
T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
T8은 (C1-C12)알킬 및 V8은 -CONH-이고;
T9는 치환된 (C1-C12)알킬 및 V9는 -CO-이고;
T10은 AA 및 V10은 존재하지 않고;
T11은 PABC 및 V11은 존재하지 않고; 및
l 및 m은 각각 0이다.
16. 항목 1 내지 항목 15 중 어느 한 항목에 있어서, 접합체는
, 및
로부터 선택되는, 접합체.
17. 항목 1 내지 항목 16 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 IgG1 항체인 것인, 접합체.
18. 항목 17에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 IgG1 카파 항체인 것인, 접합체.
19. 항목 1 내지 항목 18 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 하기 화학식 Ⅱ의 서열을 포함하는 것인, 접합체:
[화학식 Ⅱ]
X1(fGly')X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 128)
이때,
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우 X1은 임의의 아미노산일 수 있으며, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
fGly'은 각각 제1 링커 또는 제2 링커를 통해 제1 약물 또는 제2 약물에 커플링된 아미노산 잔기이고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고; 및
Z3는 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이다.
20. 항목 19에 있어서, 상기 서열은 L(fGly')TPSR (SEQ ID NO: 246)인 것인, 접합체.
21. 항목 19에 있어서, 이때
Z3은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고; 및
X2 및 X3은 각각 S, T, A, V, G, 및 C로부터 독립적으로 선택되는 것인, 접합체.
22. 항목 19 내지 항목 21 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 서열은 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치하는 것인, 접합체.
23. 항목 22에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 화학식 Ⅱ의 서열을 포함하는 것인, 접합체:
[화학식 Ⅱ]
X1(fGly')X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 128),
이때,
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우 X1은 임의의 아미노산일 수 있으며, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
fGly'은 각각 제1 링커 또는 제2 링커를 통해 제1 약물 또는 제2 약물에 커플링된 아미노산 잔기이고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고;
Z3는 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고; 및
이때 서열은 아미노산 서열 SLSLSPG (SEQ ID NO: 247)에 대한 C-말단이다.
24. 항목 23에 있어서, 중쇄 불변 영역은 서열 SPGSL(fGly')TPSRGS (SEQ ID NO: 130)을 포함하는 것인, 접합체.
25. 항목 23에 있어서, 이때
Z3은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고; 및
X2 및 X3은 각각 S, T, A, V, G, 및 C로부터 독립적으로 선택되는 것인, 접합체.
26. 항목 22 내지 항목 25 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 70으로부터 선택된 서열 내에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
27. 항목 19 내지 항목 21 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 71, 75, 79, 및 83 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
28. 항목 19 내지 항목 21 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 72, 76, 80, 및 84 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
29. 항목 19 내지 항목 21 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 73, 77, 81, 및 85 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
30. 항목 19 내지 항목 21 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 74, 78, 82, 및 86 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
31. 항목 19 내지 21 중 어느 한 항목에 있어서, fGly' 잔기는 항-넥틴-4 항체의 경쇄 불변 영역 내에 위치하는 것인, 접합체.
32. 항목 31에 있어서, 경쇄 불변 영역은 하기 화학식 Ⅱ의 서열을 포함하는 것인, 접합체:
[화학식 Ⅱ]
X1(fGly')X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 128),
이때,
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우 X1은 임의의 아미노산일 수 있으며, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
fGly'은 링커를 통해 약물에 커플링된 아미노산 잔기이고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고;
Z3은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고; 및
이때 서열은 아미노산 서열 KVDNAL (SEQ ID NO: 132)에 대한 C-말단이고/이거나 서열 QSGNSQ (SE ID NO: 133)에 대한 N-말단이다.
33. 항목 32에 있어서, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(fGly')TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 134)을 포함하는 것인, 접합체.
34. 항목 33에 있어서, 이때
Z3은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고; 및
X2 및 X3은 각각 S, T, A, V, G, 및 C로부터 독립적으로 선택되는 것인, 접합체.
35. 항목 19 내지 항목 21 중 어느 한 항목에 있어서, fGly' 잔기는 항-넥틴-4 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치하는 것인, 접합체.
36. 항목 35에 있어서, 경쇄 불변 영역은 하기 화학식 Ⅱ의 서열을 포함하는 것인, 접합체:
[화학식 Ⅱ]
X1(fGly')X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 128),
이때,
X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우 X1은 임의의 아미노산일 수 있으며, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
fGly'은 링커를 통해 약물에 커플링된 아미노산 잔기이고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;
Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고;
Z3은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고; 및
이때 서열은 아미노산 서열 SWNSGA (SEQ ID NO: 135)에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP (SEQ ID NO: 136)에 대한 N-말단이다.
37. 항목 36에 있어서, 이때 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(fGly')TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 137)을 포함하는 것인, 접합체.
38. 항목 29에 있어서, 이때
Z3는 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고; 및
X2 및 X3은 각각 S, T, A, V, G, 및 C로부터 독립적으로 선택되는 것인, 접합체.
39. 항목 19 내지 항목 21 중 어느 한 항목에 있어서, fGly' 잔기는 항-넥틴-4 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치하는 것인, 접합체.
40. 항목 19 내지 항목 21 중 어느 한 항목에 있어서, fGly' 잔기는 항-넥틴-4 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치하는 것인, 접합체.
41. 항목 1 내지 항목 40 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 넥틴-4에 결합하기 위해 다음을 포함하는 항-넥틴-4 항체와 경쟁하는 것인, 접합체:
SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1 내지 3 (HCDR 1 내지 3)을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1 내지 3 (LCDR 1 내지 3)을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬.
42. 항목 1 내지 항목 40 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1 내지 3 (HCDR 1 내지 3)을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1 내지 3 (LCDR 1 내지 3)을 포함하는 VL 사슬.
43. 항목 42에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
44. 항목 42에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
SEQ ID NO: 1 내지 6으로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 23으로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬.
45. 항목 42에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
SEQ ID NO: 1 내지 6으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 23으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
46. 항목 42에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
SEQ ID NO: 7 내지 13으로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 24 내지 27로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬.
47. 항목 42에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
SEQ ID NO: 7 내지 13으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 24 내지 27로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
48. 항목 42에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
SEQ ID NO: 14 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 28 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬.
49. 항목 42에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
SEQ ID NO: 14 내지 17로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 28 내지 31로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
50. 항목 42에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
항-넥틴-4 항체의 VH 사슬로서, SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하고, SEQ ID NO:1 내지 17로부터 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 이때 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬과 SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 이외의 영역에 있는, 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬; 및
항-넥틴-4 항체의 VL 사슬로서, SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하고 SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 이때 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬과 SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 이외의 영역에 있는, 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬.
51. 항목 42 내지 항목 50 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 SEQ ID NO: 70 내지 86 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 불변 영역의 서열 LCTPSR에 존재하는 C는 fGly으로 대체된 것인, 접합체.
52. 항목 1 내지 항목 51 중 어느 한 항목의 접합체 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
53. 항목 1 내지 항목 51 중 어느 한 항의 접합체 또는 제52항의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
54. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 항목 1 내지 항목 51 중 어느 한 항의 접합체 또는 항목 52의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이때 상기 투여는 대상체에서 암을 치료하는 데 효과적인 것인, 방법.
55. 항목 54에 있어서, 상기 암은 난소암, 유관 유방암, 폐 선암 및 췌장암인 것인, 방법.
56. 항목 55에 있어서, 상기 암은 넥틴-4를 발현하는 암 세포를 특징으로 하는 것인, 방법.
57. 항목 56에 있어서, 상기 접합체는 넥틴-4에 결합하는 것인, 방법.
58. 항목 53 내지 항목 57 중 어느 한 항목에 있어서, 대상체에게 면역조절 치료제(immunomodulatory therapeutic agent)의 치료적 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
59. 항목 58에 있어서, 상기 면역조절 치료제는 면역관문억제제 또는 인터루킨인 것인, 방법.
60. 항목 59에 있어서, 상기 면역관문억제제는 A2AR, B7-H3, B7- H4, BTLA, CTLA-4, CD277, IDO, KIR, PD-1, LAG-3, TIM-3, TIGIT 및 VISTA를 억제하는 것인, 방법.
61. 항목 60에 있어서, PD-1 신호전달(signaling)을 억제하는 면역관문억제제는 항-PD-1 항체인 것인, 방법.
62. 항목 61에 있어서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 두르발루맙 또는 아벨루맙인 것인, 방법.
63. 항목 60에 있어서, CTLA-4를 억제하는 면역관문억제제는 항-CTLA-4 항체인 것인, 방법.
64. 항목 63에 있어서, 상기 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙인 것인, 방법.
65. 약물을 대상체의 표적 부위에 전달하는 방법으로서, 상기 방법은 항목 1 내지 항목 51 중 어느 한 항목의 접합체 또는 항목 52의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이때 투여는 대상체의 표적 부위에서 치료적 유효량의 약물을 상기 접합체로부터 방출하는데 효과적인 것인. 방법.
66. 항-넥틴-4 항체로서,
SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1 내지 3 (HCDR 1 내지 3)을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1 내지 3 (LCDR 1 내지 3)을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
67. 항목 66에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 서열; 및
SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 서열;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
68. 항목 66에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
SEQ ID NO: 1 내지 6로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 23로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
69. 항목 66에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
SEQ ID NO: 1 내지 6으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 18 내지 23으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
70. 항목 66에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
SEQ ID NO: 7 내지 13으로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 24 내지 27로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
71. 항목 66에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
SEQ ID NO: 7 내지 13으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 24 내지 27로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
72. 항목 66에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
SEQ ID NO: 14 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 28 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
73. 항목 66에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
SEQ ID NO: 14 내지 17로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
SEQ ID NO: 28 내지 31로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
74. 항목 66에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는 다음을 포함하는 것인, 항-넥틴-4 항체:
항-넥틴-4 항체의 VH 사슬로서, SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하고, SEQ ID NO:1 내지 17로부터 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 이때 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬과 SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 이외의 영역에 있는, 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬; 및
항-넥틴-4 항체의 VL 사슬로서, SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하고 SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 이때 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬과 SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 이외의 영역에 있는, 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬.
75. 항목 66 내지 항목 74 중 어느 한 항목에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 SEQ ID NO: 70 내지 86 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 불변 영역의 서열 LCTPSR에 존재하는 C는 fGly으로 대체된 것인, 항-넥틴-4 항체.
76. 항목 66 내지 항목 75 중 어느 한 항목의 항체 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
77. 항목 66 내지 항목 75 중 어느 한 항목의 항체 또는 항목 76의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
78. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 항목 66 내지 항목 75 중 어느 한 항목의 항체 또는 항목 76의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이때 상기 투여는 대상체에서 암을 치료하는 데 효과적인 것인, 방법.
79. 항목 78에 있어서, 상기 암은 난소암, 유관 유방암, 폐 선암 및 췌장암인 것인, 방법.
80. 항목 79에 있어서, 상기 암은 넥틴-4를 발현하는 암 세포를 특징으로 하는 것인, 방법.
81. 항목 80에 있어서, 접합체는 넥틴-4에 결합하는 것인, 방법.
82. 항목 78 내지 항목 81 중 어느 한 항목에 있어서, 대상체에게 면역조절 치료제의 치료적 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
83. 항목 82에 있어서, 상기 면역조절 치료제는 면역관문억제제 또는 인터루킨인 것인, 방법.
84. 항목 83에 있어서, 상기 면역관문억제제는 A2AR, B7-H3, B7- H4, BTLA, CTLA-4, CD277, IDO, KIR, PD-1, LAG-3, TIM-3, TIGIT 및 VISTA를 억제하는 것인, 방법.
85. 항목 84에 있어서, PD-1 신호전달을 억제하는 면역관문억제제는 항-PD-1 항체인 것인, 방법.
86. 항목 85에 있어서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 두르발루맙 또는 아벨루맙인 것인, 방법.
87. 항목 84에 있어서, CTLA-4를 억제하는 면역관문억제제는 항-CTLA-4 항체인 것인, 방법.
88. 항목 87에 있어서, 상기 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙인 것인, 방법.
실시예
다음의 실시예는 당업자에게 본 발명의 제조 및 사용 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 제시된 것으로, 발명자들이 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것이 아니며, 아래의 실험이 수행된 모든 또는 유일한 실험임을 나타내기 위한 것이 아니다. 사용된 수치 (예를 들어, 양, 온도 등)에 관하여 정확성을 기하기 위해 노력하였으나, 일부 실험적 오차와 편차들이 고려되어야 한다. 달리 명시하지 않는 한, 부(part)는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 압력은 대기압 또는 대기압 부근이다. 표준 약어들이 사용될 수 있는데, 예를 들어, bp는 염기쌍(들); kb는 킬로베이스; pl는 피코리터; s 또는 sec는 초; min은 분; h 또는 hr은 시; aa는 아미노산; kb는 킬로베이스; bp는 염기쌍(들); nt는 뉴클레오티드; i.m.는 근육 내(로); i.p.는 복강 내(로); s.c.는 피하(로); 및 등이 사용될 수 있다. 실시예에서 언급된 상용 시약은 달리 명시되지 않는 한 제조업체의 지침에 따라 사용되었다. 실시예 및 명세서 전체에서 ECACC 접근 번호(accession number)로 식별되는 세포의 출처는 영국 솔즈베리에 있는 유럽 세포 배양 컬렉션(ECACC)이다. 달리 정의하지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 과학 기술 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련가가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에서 기술된 것과 유사하거나 등가의 방법 및 재료가 본 발명의 실행 또는 시험에서 이용될 수 있으나, 예시적인 방법 및 재료가 하기에 기술된다. 재료, 방법, 및 실시예는 예시를 위한 것일 뿐, 발명의 범위를 한정하려는 것이 아니다.
일반 합성 절차
공개된 화합물을 합성하는 데 유용한 일반적으로 알려진 화학적 합성 반응식 및 조건을 제공하는 많은 일반 참고 문헌을 이용할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001]; 또는 [Vogel, A Textbook of Practical Organic Chemistry, Including Qualitative Organic Analysis, Fourth Edition, New York: Longman, 1978] 참조).
본 명세서에 기술된 화합물은 HPLC, 조제 박층 크로마토그래피, 플래시 컬럼 크로마토그래피 및 이온 교환 크로마토그래피와 같은 크로마토그래피를 포함하여 당업자에게 알려진 임의의 정제 프로토콜로 정제할 수 있다. 이온성 레진뿐만 아니라 정상 및 역상 등 모든 적합한 고정상을 사용할 수 있다. 특정 구현예에서, 개시된 화합물은 실리카겔 및/또는 알루미나 크로마토그래피를 통해 정제된다. 예를 들어, 문헌 [Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2nd Edition, ed. L. R. Snyder and J. J. Kirkland, John Wiley and Sons, 1979]; 및 [Thin Layer Chromatography, ed E. Stahl, Springer-Verlag, New York, 1969]을 참조할 수 있다.
대상 화합물의 제조를 위한 임의의 공정 동안, 관련 분자의 민감성 또는 반응성 기를 보호하는 것이 필요하고/하거나 바람직할 수 있다. 이는 표준 문헌에 설명된 대로 기존의 보호기를 통해 달성할 수 있고, 표준 문헌의 예시는 문헌 [J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973], [T. W. Greene and P. G. M. Wuts , "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999], ["The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981], ["Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4th edition, Vol. 15/l, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974], [H.-D. Jakubke and H. Jescheit, "Aminosauren, Peptide, Proteine", Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982], 및/또는 [Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide and Derivate", Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974]와 같다. 보호기는 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 편리한 후속 단계에서 제거할 수 있다.
대상 화합물은 상업적으로 이용가능한 출발 물질 및/또는 통상적인 합성 방법으로 제조된 출발 물질을 사용하여 다양한 합성 경로를 통해 합성할 수 있다. 본 명세서에 개시된 화합물을 합성하는 데 사용할 수 있는 다양한 합성 경로의 예가 아래 반응식들에 설명되어 있다.
실시예 1: 항-넥틴-4 단일 클론 항체
방법 및 결과
항체 디스커버리(discovery) 및 선도물질(lead) 선정 방법
재조합 인간 넥틴-4-His 단백질을 사용하여 생쥐를 면역화했다. 항원에 대한 반응성을 테스트하기 위해 1,500개의 클론을 ELISA로 스크리닝했다. 인간 및 시노몰구스 넥틴-4 단백질에 선택적으로 강하게 결합하는 클론을 확인하기 위해 인간 넥틴-4-His, 시노몰구스 넥틴-4-His 및 인간 CD22-His 단백질에 대한 재스크리닝을 통해 양성 유효물질(hit)을 확인했다. 선도(lead) 클론은 두 개의 알데히드 태그가 삽입된 IgG1 불변 영역 및 인간 카파 경쇄를 갖는 재조합 마우스-인간 키메라 항체로서, 일시적 형질감염(transfection)을 통해 선도 클론의 염기서열을 분석하고 생산했다. 항체는 추가 분석 전에 알데히드 반응성 링커-페이로드에 접합하였다.
인간화 항체 생산 방법
5D9 클론은 인간화를 위해 선택하였다. 5개의 중쇄 및 5개의 경쇄 변이 서열을 설계하고(표 2-3), 이러한 중쇄 및 경쇄를 가능한 모든 조합으로 각각 짝을 지어 항체 변이체를 구성했다. 변이체 생산을 위한 불변 영역으로서 두 개의 알데히드 태그 삽입이 있는 IgG1 불변 영역 및 인간 카파 경쇄를 사용했다. 항체를 일시적 형질감염을 통해 생산하였으며 추가 분석 전에 알데히드 반응성 링커-페이로드에 접합하였다.
항체 디스커버리 및 선도물질 선정 결과
1차로 선별된 1,500개의 클론 중 27개가 재스크리닝 과정을 통과했다. 이 중 20개의 클론 서열이 성공적으로 회수되어 2개의 알데히드 태그가 삽입된 키메라 항체로 재조합적으로 생산하였다. 선도 클론의 역가는 표 6에 나와있다. 20개의 클론 (하이브리도마 상층액 및 재조합 단백질)을 재스크리닝한 ELISA 결과는 표 6에 나와 있다.
표 6. 선도(lead) 항체 클론의 역가
항체 클론 역가 (mg/L)
12E11 250.3
3C12 302.6
5D9 241.6
6C8 275.2
7E8 145.4
7H10 256
ELISA 방법
표 7. 넥틴 및 NecL ELISA 시약
소모품
(Consumables) 		공급업체
(Vendor) 		제품 번호
(Item Num) 		제품명 (Item Name) 용도 (Use)
플레이트 피셔(Fisher) 12566121 96 딥웰 2mL 플레이트, 폴리프로필렌, 비-멸균 희석액 제조용
　 VWR 62409-024 Nunc Maxisorp 96-웰 플레이트 분석 수행용
항원 ACRO 바이오시스템 PV1-h5223 인간 넥틴-1-his (H20 내 400ug/ml) 웰 코팅용
　 ACRO 바이오시스템 PV2-H52E2 인간 넥틴-2 his (600ug/ml H20) 　
　 ACRO 바이오시스템 PV3-H52E4 인간 넥틴-3-His (H20 내 400ul/ml) 　
　 ACRO 바이오시스템 NEA-H52H3 인간 넥틴-4-His (H20 내 400ug/ml 스톡) 　
　 R&D 시스템 3678-S4-050 인간 Necl-1 (PBS 내 100ug/ml) 　
　 ACRO 바이오시스템 CA1-H5225 인간 Necl-2 (H20 내 100ug/ml) 　
　 R&D 시스템 4290-S4-050 인간 Necl-3 (PBS 내 100ug/ml) 　
　 R&D 시스템 4164-S4-050 인간 Necl-4 (PBS 내 200ug/ml) 　
　 R&D 시스템 2530-CD-50 인간 Necl-5 (PBS 내 100ug/ml) 　
항체 잭슨 이뮤노리서치 109-035-098 염소 항-인간 IgG Fc 감마 특이적인 HRP 접합체 총 Ab 검출용
　 　 　 　
TMB (피어스에 위치한) 써모피셔 34028 울트라 TMB 원-스텝 ELISA 기판 　
차단 완충제 (피어스에 위치한) 써모피셔 37528 카제인 차단제 　
H2 SO4 시그마 320501 황산 (퀀칭 시약을 만들기 위해 희석) 　
　 　 　 　 　
하드웨어 　 　 　 　
플레이트 와셔 바이오텍 　 ELx405 　
플레이트리더기 몰레큘러 디바이스 　 SoftMaxPro 소프트웨어가 탑재된 SpectraMax M5 　
넥틴 및 NecL ELISA 프로토콜
1. 맥시소프 96 웰 플레이트 상에 PBS 내 1ug/ml의 항원 100uL를 플레이트하였다.
2. 맥시소프 플레이트. 4℃에서 하룻밤 동안 인큐베이션했다.
3. 0.1% Tween PBS로 4회 세척하였다.
4. 2시간 동안 상온(RT)에서 흔들면서(shaking) 200 μL PBS 카제인으로 웰을 차단하였다.
5. 0.1% Tween PBS로 4회 세척하였다.
6. 항체 샘플을 적절한 시작 농도로 희석하였다.
7. 딥 웰 플레이트에서 3ug/ml (20 nM)에서 시작하여 PBS와 1:3으로 mAb를 연속 희석하였다. 참고: 생리학적 농도를 테스트하기 위해 300ug/ml (2μM)의 mAb의 농도를 사용할 수도 있다.
8. 96 웰 플레이트에 100 μL의 mAb 희석액을 추가했다.
9. 상온에서 1시간동안 흔들면서 인큐베이션했다.
10. 0.1% Tween PBS로 6회 세척/침지했다.
11. 웰에 염소 항 인간 HRP 1:15000 희석액 (PBS로 희석) 100uL를 추가했다.
12. 상온에서 0.5시간동안 흔들면서 인큐베이션했다.
13. 0.1% Tween PBS로 4회 세척했다.
14. 100 μL TMB를 첨가하고, 상단 웰이 진한 파란색이 될 때까지 플레이트를 전개했다.
15. 100 μL의 2N H2SO4를 첨가했다.
16. 플레이트 리더기로 흡광도를 판독하였다.
넥틴-4 결합 ELISA 클론 선정 결과
20개의 클론이 인간 넥틴-4에 결합하는지를 ELISA로 테스트했다 (도 1 및 2 및 표 8). 이 데이터에서, 6개의 클론을 선도 바인더(binder)로서 선택하였다: 12E11, 3C12, 5D9, 6C8, 7E8 및 7H10 (표 2 및 표 3에 표시한 서열).
표 8. 넥틴-4에 대한 단일클론 항체의 클론에 대한 ELISA
하이브리도마 상층액 사용 재조합적으로 제조한 항체 사용
ELISAs 　
인간 넥틴-4-His 태그 시노몰구스-넥틴-4 His 태그 인간 CD22-His 태그 인간 넥틴-4 His 태그
클론 Ag1 Ag2 Ag3 EC50 (nM)
엔포투맙 　 　 0.07 - 0.23
넥틴-4 11A3H / 11A3L 1.707 1.908 0.638 결과 없음
(no call)
넥틴-4 12C11H / 12C11L 3.251 3.297 0.599 7.408
넥틴-4 12E11H / 12E11L 3.214 3.439 0.583 0.252
넥틴-4 12G8H / 12G8L 2.277 3.381 0.575 36.600
넥틴-4 13 E6H / 13 E6L 3.218 3.331 0.723 0.287
넥틴-4 15G2H / 15G2L 3.087 3.497 0.532 1.387
넥틴-4 2B7H / 2B7L 2.328 3.529 0.559 0.793
넥틴-4 3C12H / 3C12L 3.204 3.454 0.448 0.282
넥틴-4 3D10H / 3D10L 1.546 3.457 0.491 0.638
넥틴-4 4 E1H / 4 E1L 3.042 3.431 0.511 0.239
넥틴-4 5D9H / 5D9L 3.080 3.316 0.515 0.192
넥틴-4 5F1H / 5F1L 3.268 3.359 0.460 0.104
넥틴-4 Hybridoma 6C8H / 6C8L 3.164 3.401 0.456 0.239
넥틴-4 6D11H / 6D112L 0.607 0.447 2.961 0.132
넥틴-4 7 E8H / 7 E8L 3.107 3.445 0.511 0.361
넥틴-4 7H10H / 7H10L 3.260 3.488 0.568 0.210
넥틴-4 8D8H / 8D8L 3.349 3.461 0.429 0.462
넥틴-4 8 E1H / 8 E1-9D2L 3.179 3.533 0.514 0.112
넥틴-4 9D2H / 8 E1-9D2L 3.261 3.069 0.450 0.100
넥틴-4 9H7H / 9H7L 2.325 3.238 0.535 1.992
넥틴-4 결합 ELISA 인간화 변이체 결과
인간화 5D9 변이체 (표 2 및 3에 표시된 서열)을 생산하고 (표 9에 표시된 역가) 인간 넥틴-4에 결합하는지 ELISA에 의해 테스트했다 (도 6-9). 결합 친화도는 테스트한 변이체에 따라 다양했다 (표 9).
표 9. 5D9 인간 변이체에 대한 ELISA 역가
ELISAs
EC50 (nM)
역가 (mg/L) 인간 넥틴-4
넥틴-4 5D9 키메라 mAb 0.191
넥틴-4 5D9 VH1/VL1 426.8 0.225
넥틴-4 5D9 VH1/VL2 493.9 0.368
넥틴-4 5D9 VH1/VL3 485.5 0.321
넥틴-4 5D9 VH1/VL4 379.1 0.228
넥틴-4 5D9 VH1/VL5 492.7 0.346
넥틴-4 5D9 VH2/VL1 450.9 0.279
넥틴-4 5D9 VH2/VL2 436.9 171.7
넥틴-4 5D9 VH2/VL3 544.5 107.6
넥틴-4 5D9 VH2/VL4 368.3 0.765
넥틴-4 5D9 VH2/VL5 384.8 14.66
넥틴-4 5D9 VH3/VL1 402 446629
넥틴-4 5D9 VH3/VL2 384.1 8.618
넥틴-4 5D9 VH3/VL3 464.9 23.92
넥틴-4 5D9 VH3/VL4 277 43608
넥틴-4 5D9 VH3/VL5 433.9 7.227
넥틴-4 5D9 VH4/VL1 564.5 0.212
넥틴-4 5D9 VH4/VL2 400.6 0.236
넥틴-4 5D9 VH4/VL3 589.6 0.204
넥틴-4 5D9 VH4/VL4 444.4 0.232
넥틴-4 5D9 VH4/VL5 581.8 0.195
넥틴-4 5D9 VH5/VL1 476.2 33.43
넥틴-4 5D9 VH5/VL2 353.9 2.064
넥틴-4 5D9 VH5/VL3 450.8 0.702
넥틴-4 5D9 VH5/VL4 396.6 11.52
넥틴-4 5D9 VH5/VL5 561.7 56.09
MMAE N/A N/A
*N/A, 적용불가능
시험관 내 세포독성 분석 방법
세포주를 96-웰 플레이트 (코스터 3610)에 100 μL의 성장 배지에 밀도 5 x 104 세포/웰로 하여 플레이트하였다. 다음 날, 세포를 배지에서 연속적으로 희석한 20 μL의 테스트 물품으로 처리하였다. 37℃에서 5% CO2로 5일 동안 인큐베이션한 후, 제조업체의 권장사항에 따라 Promega CellTiter Glo® 시약을 사용하여 생존력을 측정하였다. GI50 곡선은 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism)에서 페이로드 농도로 정규화하여 계산했다.
시험관 내 세포독성 분석 결과 - 선도 클론
20개의 클론에 대해, 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 293 세포에 대한 시험관 내 효능을 테스트하였다 (도 10-13, 및 표 10). 이 데이터에서, 6개의 클론이 선도 ADC 후보로 선정되었다: 12E11, 3C12, 5D9, 6C8, 7E8 및 7H10 (표 1 및 2에 표시된 서열).
표 10. 시험관 내 키메라 단일클론 항체의 효능
HEK 세포 + 넥틴-4
클론 IC50 (nM)
엔포투맙 0.685
넥틴-4 11A3H / 11A3L 125.000
넥틴-4 12C11H / 12C11L 7536.000
넥틴-4 12E11H / 12E11L 0.987
넥틴-4 12G8H / 12G8L 204.400
넥틴-4 13 E6H / 13 E6L 10.370
넥틴-4 15G2H / 15G2L 56.880
넥틴-4 2B7H / 2B7L 26.180
넥틴-4 3C12H / 3C12L 0.919
넥틴-4 3D10H / 3D10L 5216.000
넥틴-4 4 E1H / 4 E1L 18.320
넥틴-4 5D9H / 5D9L 0.446
넥틴-4 5F1H / 5F1L 1.875
넥틴-4 하이브리도마 6C8H / 6C8L 0.573
넥틴-4 6D11H / 6D112L 32.430
넥틴-4 7 E8H / 7 E8L 0.890
넥틴-4 7H10H / 7H10L 0.549
넥틴-4 8D8H / 8D8L 10.610
넥틴-4 8 E1H / 8 E1-9D2L 80.280
넥틴-4 9D2H / 8 E1-9D2L 16.680
넥틴-4 9H7H / 9H7L 39.030
시험관 내 세포독성 분석 결과- 인간화 변이체
인간화 5D9 변이체 (표 2 및 3에 표시된 서열)가 생산되고 (표 11에 표시된 역가) 인간 넥틴-4를 과발현하는 HEK 293 세포에 대해 시험관 내 효능을 테스트하였다 (도 14, 17, 20, 23, 및 26). 또한, 변이체들은 넥틴-4를 과발현하는 인간 유방암 세포 SK-BR-3 (도 15, 18, 21, 24, 및 27) 및 MDA-MB-468 (도 16, 19, 22, 25, 및 28)에 대해 시험관 내 효능이 테스트되었다. 시험관 내 효능은 테스트된 변이체들마다 다양했다 (표 11).
표 11. 테스트된 항체 변이체의 시험관 내 효능
세포 사멸
IC50 (nM)
HekNectin4 SKBR3 MDA-MB468
넥틴-4 5D9 키메라 mAb 0.207 8.47 1.307
넥틴-4 5D9 VH1/VL1 0.249 15.04 1.416
넥틴-4 5D9 VH1/VL2 3.346 9.851 10.33
넥틴-4 5D9 VH1/VL3 2.945 9.361 10.31
넥틴-4 5D9 VH1/VL4 0.277 9.017 5.172
넥틴-4 5D9 VH1/VL5 1.414 10.06 10.24
넥틴-4 5D9 VH2/VL1 3.933 14.66 21.35
넥틴-4 5D9 VH2/VL2 55.55 14.44 19.29
넥틴-4 5D9 VH2/VL3 33.72 15.89 21.42
넥틴-4 5D9 VH2/VL4 17.77 18.49 26.96
넥틴-4 5D9 VH2/VL5 181.8 234.1 251.9
넥틴-4 5D9 VH3/VL1 73.31 46.89 41.59
넥틴-4 5D9 VH3/VL2 54.78 15.3 17.68
넥틴-4 5D9 VH3/VL3 27.05 10.59 15.6
넥틴-4 5D9 VH3/VL4 41.11 25.99 40.51
넥틴-4 5D9 VH3/VL5 39.99 14.94 43.28
넥틴-4 5D9 VH4/VL1 0.182 3.848 1.082
넥틴-4 5D9 VH4/VL2 0.290 4.947 3.135
넥틴-4 5D9 VH4/VL3 0.333 6.456 3.713
넥틴-4 5D9 VH4/VL4 0.102 9.453 3.372
넥틴-4 5D9 VH4/VL5 0.269 7.255 3.932
넥틴-4 5D9 VH5/VL1 30.29 13.31 18.98
넥틴-4 5D9 VH5/VL2 49.63 10.59 17.46
넥틴-4 5D9 VH5/VL3 15.57 9.855 16.62
넥틴-4 5D9 VH5/VL4 22.09 9.527 10.97
넥틴-4 5D9 VH5/VL5 33.47 17.82 23.97
MMAE 0.396 0.325 0.150
넥틴 및 Necl 단백질 패밀리 반응성 ELISA 결과
6개의 선도 클론을 넥틴-4와 상동을 갖는 단백질, 특히 다른 넥틴 및 Necl 계열 (넥틴-1, 넥틴-2, 넥틴-3, Necl-1, Necl-2, Necl-3, Necl-4 및 Necl-5) 단백질에 대해 반응성을 테스트하였다.
대부분의 넥틴-4-관련 단백질에 대해 낮은-수준의 교차-반응성을 보인, 12E11을 제외한, 대부분의 클론은 낮은 결합을 보였다 (도 3). 이에 따라, 12E11의 변이체를 설계하고 (표 2 및 3에 표시된 서열), 생산하여 넥틴-4-관련 단백질에 결합하는지 다시 테스트하였다 (표 4 및 5). 일부 변이체는 모체 12E11 클론과 비교하여 넥틴-4-관련 단백질에 대한 낮은 반응성을 보였다.
유세포 분석법을 통한 넥틴-4 종들의 반응성 평가 - 방법
인간, 시노몰구스 원숭이, 랫트 또는 마우스 넥틴-4 단백질을 과발현하는 인간 배아 신장 (HEK) 세포를 생산했다. 세포 표면 단백질을 보존하기 위해 세포를 베르센(Versene) 옮긴 후 PBS + 2% FBS에 10e6/mL로 재현탁하였다. 100 μl를 플로우 튜브에 추가하여 106 세포/테스트로 진행했다. 1차 항체를 0.1 μg/mL로 희석하고 10 μL를 추가하여 총 1 μg /테스트가 되게했다. 1차 항체 (또는 ADC)를 세포와 함께 얼음에서 1 시간동안 인큐베이션했다. 그런 다음, 세포를 2 mL의 PBS + 2% FBS로 1회 세척하고, 검출을 위해 2차 항체를 추가했다. 제조업체의 지침에 따라 + 50% 글리세롤로 희석한 잭슨 이뮤노리서치의 AF488-접합된 항-인간 항체를 1 μL/테스트로 사용했으며, PBS + 2% FBS에서 1/5th로 희석하고 튜브 당 5 μL를 첨가했다. 2차 시약을 세포와 함께 30분간 인큐베이션한 다음, 세포를 PBS + 2% FBS로 2회 세척하고 FACSDiva 소프트웨어가 탑재된 BD FacsCanto 기기에서 유세포 분석법으로 분석하였다.
유세포 분석법을 통한 넥틴-4 종들의 반응성 평가 -결과
선도 클론을 HEK 293 세포 표면 상에 발현된 인간, 시노몰구스 원숭이, 랫트 또는 마우스 넥틴-4 단백질에 결합하는지를 테스트했다. 엔포투맙을 양성 대조군으로, 항-FITC 반응성 항체는 음성 대조군으로 포함하였다. 모든 선도 클론은 인간과 시노몰구스 단백질에는 비슷한 수준으로, 쥐 단백질에는 더 낮은 수준으로 결합하였다 (표 12). 마우스 넥틴-4 단백질에 대한 반응성은 거의 또는 전혀 관찰되지 않았으며, 이는 마우스 내에서 항체가 생산되었다는 사실과 일치한다.
표 12. 항체 클론의 종 교차-반응성
종 간 반응성
Hek293 과발현 세포의 흐름(flow) 데이터
인간 시노몰구스 랫트 마우스 모체
엔포투맙 17142 19990 45476 3224 265
12E11 8622 10395 1898 230 232
3C12 8367 10617 5064 328 188
5D9 11235 12596 2143 189 121
6C8 10217 11443 8925 194 121
7E8 9203 10437 5966 279 202
7H10 12311 14091 1293 174 145
항-FITC 아이소타입 대조군 132 189 196 163 144
실시예 2: MMAE 작제물(construct) 8의 합성
화합물 1 및 4는 상하이 메디실론(Medicilon)으로부터 상업적으로 입수하여 그대로 사용하였다. 모노메틸오리스타틴 A 5 (MMAE)는 브로드팜(BroadPharm)에서 구매하였다. 다른 모든 시약은 상업적인 출처에서 구입하여 정제하지 않고 사용하였다.
(R)-2-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸하이드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-yl)프로파나미도)-3-옥소-3-((2-(2-(3-옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로폭시)에톡시)에틸)아미노)프로판-1-설폰산 ((R)-2-(3-(2-((2-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-1,2-dimethylhydrazineyl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-1-yl)propanamido)-3-oxo-3-((2-(2-(3-oxo-3-(perfluorophenoxy)propoxy)ethoxy)ethyl)amino)propane-1-sulfonic acid) ( 3 )의 제조
카복실산 1 (1.33 g, 1.67 mmol)을 6.5 mL의 무수 DMF에서 펜타플로오로페놀 2 (1.23 g, 6.68 mmol)와 혼합했다. 이 혼합물은 상온에서 EDCI-HCl (0.64 g, 3.34 mmol)로 일부 처리하고 HPLC 분석에 의해서 1이 완전히 소모될 때까지 20 시간 교반하였다. 반응 혼합물은 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼, 0-80% 아세토니트릴-물, 0.05% TFA)로 직접 정제하였다. 순수한 분획물을 혼합하고, 진공 상태에서 탁해질 때까지 농축한 후, 동결건조하여 황갈색 분말인 PFP-에스테르 생성물 3 (1.40 g, 1.46 mmol, 87% 수율)을 얻었다. LRMS (ESI): m/z 961.2 [M+H]+, C44H45F5N6O11S에 대한 계산값: m/z 961.3.
(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로파나미도)-5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-세크-부틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-디이소프로필-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트라아자테트라데실)페녹시)-6-(메톡시카보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ((2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-((S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-3-methylbutanamido)propanamido)-5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-butyl)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl)amino)-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-5,8-diisopropyl-4,10-dimethyl-3,6,9-trioxo-2,13-dioxa-4,7,10-triazatetradecyl)phenoxy)-6-(methoxycarbonyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triyl triacetate) ( 6 )의 제조
20 mL 유리 바이알에 모노메틸 오리스타틴 5 (720 mg, 1.0 mmol), 5 mL의 무수 DMF 및 0.35 mL의 DIPEA (2.0 mmol)를 상온에서 혼합했다. 생성된 혼합물을 교반하고 PNP 카보네이트 4 (1014 mg, 1.0 mmol)를 소량씩 고체로 처리한 다음, 상온에서 일부분에 HOAt (136 mg, 1.0 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 (HPLC에 의해) 반응이 완료된 것으로 판단될 때까지 6시간동안 교반 하였다. 반응 혼합물을 30mL의 물에 붓고, 생성된 침전물을 회전시켜 분리하여 수집하고, 5 mL의 물로 세척하고, 고진공에서 잠시 건조시켜 황색 고체로서 1.87 g의 미정제 생성물(crude product) 6을 얻었으며, 정제없이 다음단계로 이동했다.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로파나미도)-5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-세크-부틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-디이소프로필-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-카복실 산 ((2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-2-((S)-2-amino-3-methylbutanamido)propanamido)-5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-butyl)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl)amino)-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-5,8-diisopropyl-4,10-dimethyl-3,6,9-trioxo-2,13-dioxa-4,7,10-triazatetradecyl)phenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid) (7)의 제조
15 mL의 THF 내의 미정제 생성물 6 (1.87 g)의 용액을 얼음 수조에서 0℃로 냉각한 후 1 M 수산화 리튬 수용액 (3 mL)으로 천천히 처리하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반한 후, 주변 온도 (ambient temperature)로 예열한 뒤, 1 M 수산화 리튬 수용액 3 mL로 처리한 후 메탄올 3 mL로 희석했다. 생성된 혼합물을 상온에서 가수분해가 완료될 때(HPLC)까지 3시간 동안 교반한 다음, 1M 수용성 HCl 용액을 첨가하여 pH 7로 퀀칭하였다. 그런 다음 반응 혼합물을 감압으로 농축하고 10 mL의 MTBE로 세척하였다. 수성층을 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼, 0-40% 아세토니트릴-물, 0.05% TFA)로 정제하였다. 순수 생성물 분획물 혼합하고, 감압 하에 농축한 후, 동결건조하여 화합물 7을 백색 분말로 얻었다 (735 mg, 0.60 mmol, 2 단계에 걸쳐 60% 수율). LRMS (ESI): m/z 1229.7 [M+H]+, C61H96N8O18에 대한 계산값: m/z 1229.7.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-세크-부틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-디이소프로필-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)-2-((2S,5S,18R)-22-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,17,20-테트라옥소-18-(설포메틸)-10,13-디옥사-3,6,16,19-테트라아자도코사나미도)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로 -2H-피란-2-카복실산 ((2S,3S,4S,5R,6S)-6-(5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-butyl)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl)amino)-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl)pyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)-5,8-diisopropyl-4,10-dimethyl-3,6,9-trioxo-2,13-dioxa-4,7,10-triazatetradecyl)-2-((2S,5S,18R)-22-(2-((1,2-dimethylhydrazineyl)methyl)-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-1-yl)-5-isopropyl-2-methyl-4,7,17,20-tetraoxo-18-(sulfomethyl)-10,13-dioxa-3,6,16,19-tetraazadocosanamido)phenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid) (8)의 제조
상온에서 3 mL의 무수 DMA에 화합물 7 (735 mg, 0.60 mmol)을 교반한 용액에 DIPEA (0.21 mL, 1.2 mmol)와 2 mL의 DMA에 PFP-에스테르 3 (575 mg, 0.60 mmol) 용액을 첨가한 후, HOAt (84 mg, 0.60 mmol)을 첨가했다. 결과 혼합물을 커플링이 완료된 것으로 판단(HPLC 분석)될 때까지 30분간 교반한 다음, 상온에서 1.2 mL의 피페리딘을 직접 처리했다. 15분 후, 반응 혼합물을 역상 크로마토그래피 (C18 칼럼, 아세토니트릴-물 0-40% 구배)로 정제했다. 순수한 분획물을 혼합하고, 감압 및 상온 하에서 농축한 후, 동결건조하여 화합물 8 (808 mg, 0.45 mmol, 75% yield)을 흰색 솜털(fluffy) 분말로 얻었다. LRMS (ESI): m/z 1783.9 [M+H]+, C84H130N14O26S에 대한 계산값: m/z 1783.9.
실시예 3: 벨로테칸(Belotecan) 작제물 20 및 25의 합성
합성 중간체 4 및 9는 상하이 메디실론에서 상업적으로 입수하여 그대로 사용했다. 벨로테칸 15는 아스타테크(AstaTech)로부터 구매했다. 다른 모든 시약은 상업적인 출처에서 구입하여 정제하지 않고 사용했다.
반응식 1. 중간체 14의 합성.
(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-((5-아미노-1-(3-(터트-부톡시)-3-옥소프로필)-1H-인돌-2-일)메틸)-1,2-디메틸히드라진-1-카복실레이트 ((9H-fluoren-9-yl)methyl 2-((5-amino-1-(3-(tert-butoxy)-3-oxopropyl)-1H-indol-2-yl)methyl)-1,2-dimethylhydrazine-1-carboxylate) ( 10 )의 제조
니트로 화합물 9 (116 mg, 0.20 mmol)을 1 mL의 THF에 용해하고 염화 암모늄 (85 mg, 1.6 mmol) 용액을 0.5 mL의 물과 1 mL의 메탄올에 혼합했다. 생성된 혼합물을 상온에서 격렬하게 교반하고 아연 분말 (104 mg, 1.6 mmol)을 5분동안 소량씩 첨가하여 처리했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하고 고형물을 여과한 후, 여과액을 포화 염화암모늄 수용액 20 mL로 희석하고, 에틸 에세테이트 (2x25 mL)로 추출했다. 유기 추출물을 황산 나트륨으로 건조시키고, 진공 하에서 용매를 제거하여 정제하지 않고 다음 단계로 이동할 미정제 생성물 10을 얻었다. LRMS (ESI): m/z 555.3 [M+H]+, C33H38N4O4에 대한 계산 값: m/z 555.3.
(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-((1-(3-(터트-부톡시)-3-옥소프로필)-5-(4-(터트-부톡시)-4-옥소부탄아미도)-1H-인돌-2-일)메틸)-1,2-디메틸히드라진-1-카복실레이트 ((9H-fluoren-9-yl)methyl 2-((1-(3-(tert-butoxy)-3-oxopropyl)-5-(4-(tert-butoxy)-4-oxobutanamido)-1H-indol-2-yl)methyl)-1,2-dimethylhydrazine-1-carboxylate) ( 12 )의 제조
미정제 화합물 10 (~0.20 mmol)을 2 mL의 DMF에서 4-(터트-부톡시)-4-옥소부탄산 11 (40 mg, 0.23 mmol)와 혼합했다. 이 혼합물에 DIPEA (0.12 mL, 0.6 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 일부에 PyAOP (110 mg, 0.21 mmol)를 첨가했다. 30분 후, 포화 염화암모늄 수용액을 부어 반응을 퀀칭시키고, 에틸 아세테이트를 추출하고, 소금물(brine)로 세척하고, 황산 나트륨으로 건조시켰다. 진공 하에서 용매를 제거하여 진한 오일로서 생성물 12를 120 mg (0.17 mmol, 2 단계에 걸쳐 85% 수율)을 얻었으며, 이를 추가 정제없이 사용했다. LRMS (ESI): m/z 733.4 [M+Na]+, C41H50N4O7에 대한 계산값: m/z 733.4.
4-((2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸하이드라지닐)메틸)-1-(2-카복시에틸)-1H-인돌-5-일)아미노)-4-옥소부탄산 (4-((2-((2-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-1,2-dimethylhydrazinyl)methyl)-1-(2-carboxyethyl)-1H-indol-5-yl)amino)-4-oxobutanoic acid) ( 13 )의 제조
비스-터트-부틸 에스테르 화합물 12 (120 mg, 0.17 mmol)를 2 mL의 무수 DCM, 2 mL의 TFA, 및 0.5 mL의 트리소프로필실란 (trisopropylsilane)의 혼합물에 용해했다. 생성된 혼합물을 상온에서 4시간동안 방치했다. 진공 상태에서 용매를 제거하고, 잔류물을 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼, 0.05% TFA와 함께 CH3CN/H2O의 0-70% v/v 구배)로 정제하여 다이에시드(diacid) 생성물 13을 53 mg (0.09 mmol, 53% 수율) 얻었다. LRMS (ESI): m/z 599.3 [M+H]+, C33H34N4O7에 대한 계산값: m/z 599.2.
(9H-플루오렌-9-일)메틸 1,2-디메틸-2-((1-(3-옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로필)-5-(4-옥소-4-(퍼플루오로페녹시)부탄아미도)-1H-인돌-2-일)메틸)히드라진-1-카복실레이트 ((9H-fluoren-9-yl)methyl 1,2-dimethyl-2-((1-(3-oxo-3-(perfluorophenoxy)propyl)-5-(4-oxo-4-(perfluorophenoxy)butanamido)-1H-indol-2-yl)methyl)hydrazine-1-carboxylate) ( 14 )의 제조
2 mL의 무수 THF 내의 다이에시드 13 (50 mg, 0.084 mmol)과 펜타플루오로페놀 (46 mg, 0.25 mmol)의 혼합물에 상온에서 일부분에 DCC (51 mg, 0.25 mmol)를 첨가했다. 생성된 혼합물은 16시간동안 교반하고, 고형물을 여과하고, 여과액을 농축한 다음, 역상 크로마토그래피 (C18 칼럼, 0.05% TFA와 함께 CH3CN/H2O의 0-100% v/v 구배)로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획물을 약 20 mL로 농축하고, 50 mL의 10% 구연산 수용액에 부은 다음, 에틸 에세테이트 (2x20mL)로 추출하고, 황산 나트륨으로 건조하였다. 진공상태에서 용매를 제거하여 67 mg의 비스-PFP 에스테르 생성물 14 (0.072 mmol, 86% 수율)를 어두운 점성 오일로서 얻었다. LRMS (ESI): m/z 953.1 [M+Na]+, C45H32F10N4O7에 대한 계산값: m/z 953.2.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틴부탄아미도)프로파나미도)-5-((((2-((S)-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)에틸)(이소프로필)카바모일)옥시)메틸)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로 -2H-피란-2-카복실산 ((2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-2-((S)-2-amino-3-methylbutanamido)propanamido)-5-((((2-((S)-4-ethyl-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-11-yl)ethyl)(isopropyl)carbamoyl)oxy)methyl)phenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid) ( 16 )의 제조
2mL DMF 내 벨로테칸 15 (HCl 염, 20 mg, 43 μmol) 용액에 15 uL의 DIPEA (86 μmol)과 6 mg의 HOAt (43 μmol)를 첨가했다. 생성된 혼합물을 상온에서 PNP 카보네이트 4 (43 mg, 43 μmol)로 처리하고 1시간 동안 교반한 후, 진공상태에서 DMF를 제거하였다. 잔류물을 1 mL의 MeOH에 용해하고 1 mL의 1M 수성 LiOH로 처리했다. 10분 후, 1mL의 1M 수성 HCl을 혼합물에 첨가하고, 다음 1 mL의 0.5 M pH 4.7 아세테이트 완충액을 첨가했다. 생성된 혼합물은 상온에서 30분간 교반한 후, 역상 HPLC (C18 칼럼, 0.05% TFA와 함께 CH3CN/H2O의 0-50% v/v 구배)로 직접 정제했다. 진공상태에서 용매를 제거하여 유리 같은 황색 고체로서 화합물 16을 17 mg (18 μmol, 43 % 수율) 얻었다. LRMS (ESI): m/z 945.4 [M+H]+, C47H56N6O15에 대한 계산값: m/z 945.4.
반응식 2. 분지형 벨로테칸 작제물 20의 합성
퍼플루오로페닐 1-(9H-플루오렌-9-일)-3-옥소-2,7,10,13,16-펜타옥사-4-아카노나데칸-19-오에이트 (perfluorophenyl 1-(9H-fluoren-9-yl)-3-oxo-2,7,10,13,16-pentaoxa-4-azanonadecan-19-oate) ( 18 )의 제조
오븐 건조 신틸레이션 바이알에 1-(9H-플루오렌-9-일)-3-옥소-2,7,10,13,16-펜타옥사-4-아자노나데칸-19-오익 산(17, 487 mg, 1 mmol) 및 펜타플로오로페닐 (368 mg, 2 mmol)을 무수 THF 5 mL에 혼합했다. 생성된 혼합물을 상온에서 일부분에 DCC (247 mg, 1.2 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 밤새 교반했다. 침전된 고형물을 여과하고, 전공상태에서 용매를 제거한 후, 잔류물을 역상 크로마토그래피 (C18 칼럼, 0.05% TFA와 함께 CH3CN/H2O의 10-100% v/v 구배)로 정제해서 무색 오일로서 670 mg의 PFP 에스테르 18 (570 mg, 0.87 mmol, 87% 수율)을 얻었다. LRMS (ESI): m/z 654.2 [M+H]+, C32H32F5NO8에 대한 계산값: m/z 654.2.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((17S,20S)-1-아미노-17-이소프로필-20-메틸-15,18-디옥소-3,6,9,12-테트라옥사-16,19-디아자헤니코산-21-아미도)-5-((((2-((S)-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)에틸)(이소프로필)카바모일)옥시)메틸)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로 -2H-피란-2-카복실산 ((2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((17S,20S)-1-amino-17-isopropyl-20-methyl-15,18-dioxo-3,6,9,12-tetraoxa-16,19-diazahenicosan-21-amido)-5-((((2-((S)-4-ethyl-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-11-yl)ethyl)(isopropyl)carbamoyl)oxy)methyl)phenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid) ( 19 )의 제조
화합물 16 (262 mg, 0.22 mmol)을 4 mL의 DMF에 용해했다. 이 용액에 상온에서 0.5mL의 DMF 내의 용액으로 DIPEA (105 μL, 0.66 mmol)와 PFP 에스테르 18 (181 mg, 0.22 mmol)을 첨가한 다음, HOAt (38 mg, 0.22 mmol)를 첨가했다. 생성된 혼합물은 상온에서 1시간 동안 방치한 다음, 4 mL의 트리에틸아민으로 직접 처리하였다. 반응 혼합물을 5시간동안 교반하고, HPLC 분석으로 판단한 대로 Fmoc-탈보호가 완료될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 진공상태에서 농축하고 역상 크로마토그래피 (C18 칼럼, 0.05% TFA와 함께 CH3CN/H2O의 0-50% v/v 구배)로 정제하여 노란색 고체로서 185 mg의 화합물 19 (0.16 mmol, 73% 수율)를 얻었다. LRMS (ESI): m/z 1192.5 [M+H]+, C58H77N7O2에 대한 계산값: m/z 1192.5.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((2S,5S)-25-(5-((2S,5S)-1-((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-4-((((2-((S)-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)에틸)(이소프로필)카바모일)옥시)메틸)페닐)아미노)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,23-테트라옥소-10,13,16,19-테트라옥사-3,6,22-트리아자헥사코산-26-아미도)-2-((1,2-디메틸하이드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,23-트리옥소-10,13,16,19-테트라옥소-3,6,22-트리아자펜타코사나미도)-5-((((2-((S)-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)에틸)(이소프로필)카바모일)옥시)메틸)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로 -2H-피란-2-카복실산 ((2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((2S,5S)-25-(5-((2S,5S)-1-((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxy-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-4-((((2-((S)-4-ethyl-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-11-yl)ethyl)(isopropyl)carbamoyl)oxy)methyl)phenyl)amino)-5-isopropyl-2-methyl-1,4,7,23-tetraoxo-10,13,16,19-tetraoxa-3,6,22-triazahexacosan-26-amido)-2-((1,2-dimethylhydrazinyl)methyl)-1H-indol-1-yl)-5-isopropyl-2-methyl-4,7,23-trioxo-10,13,16,19-tetraoxa-3,6,22-triazapentacosanamido)-5-((((2-((S)-4-ethyl-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-11-yl)ethyl)(isopropyl)carbamoyl)oxy)methyl)phenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid) ( 20 )의 제조
화합물 19 (23 mg, 19 μmol)를 2 mL의 무수 DMA에 용해하였다. 이 용액에 상온에서 일부분에 DIPEA (10 μL, 57 μmol)와 비스-PFP 에스테르 14 (8 mg, 8.6 μmol)를 고체로서 첨가한 다음, HOAt (2.6 mg, 19 μmol)를 첨가했다. 생성된 혼합물을 상온에서 1시간 방치한 다음, 17 μL의 피페리딘 (172 μmol)으로 직접 처리했다. 20분 후, 반응 혼합물을 역상 전처리(prep) HPLC (C18 칼럼, 0.05% TFA와 함께 CH3CN/H2O의 0-50% v/v 구배)로 정제했다. 순수한 분획물을 동결건조하여 노란색 분말로서 화합물 20을 5.8 mg (2.1 μmol, 24 % 수율) 얻었다. LRMS (ESI): m/z 1363.1 [M+2H]++, C134H174N18O43에 대한 계산값: m/z 1362.6.
반응식 3. 분지형 벨로테칸 작제물 25의 합성
N 6 -(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-N 2 -(3-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)프로파노일)-L-라이신 (N 6 -(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)-N 2 -(3-(2-(2-methoxyethoxy)ethoxy)propanoyl)-L-lysine) ( 23 )의 제조
2mL의 무수 DMF 내 mPEG8-산 21 (100 mg, 0.24 mmol) 용액에 상온에서 DIPEA (0.13 mL, 0.72 mmol) 및 HATU (93 mg, 0.24 mmol)를 첨가했다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, Lys(Fmoc)-OH 22 (89 mg, 0.24 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 1시간동안 계속 교반했다. 반응 혼합물을 역상 크로마토그래피 HPLC (C18, 0.05% TFA와 함께 MeCN-H2O 0-70% v/v)로 직접 정제하여 120 mg의 화합물 23 (0.16 mmol, 67% 수율)을 무색 오일로서 얻었다. LRMS (ESI): m/z 763.4 [M+H]+, C39H58N2O13에 대한 계산값: m/z 763.4.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((28S,31S,34S)-28-(4-아미노부틸)-31-이소프로필-34-메틸-26,29,32-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27,30,33-트리아자펜타트라아콘탄-35-아미도)-5-((((2-((S)-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)에틸)(이소프로필)카바모일)옥시)메틸)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로 -2H-피란-2-카복실산 ((2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((28S,31S,34S)-28-(4-aminobutyl)-31-isopropyl-34-methyl-26,29,32-trioxo-2,5,8,11,14,17,20,23-octaoxa-27,30,33-triazapentatriacontan-35-amido)-5-((((2-((S)-4-ethyl-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-11-yl)ethyl)(isopropyl)carbamoyl)oxy)methyl)phenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid) ( 24 )의 제조
3 mL의 무수 DMF 내 카복실산 23 (45 mg, 59 μmol)의 용액에 상온에서 DIPEA (21 μL, 120 μmol) 및 HATU (22 mg, 59 μmol)를 첨가했다. 생성된 혼합물을 20분간 교반한 후, 1 mL의 DMF 내 아민 16 (55 mg, 58 μmol)과 혼합했다. 반응 혼합물을 30분동안 교반한 다음, 상온에서 혼합물에 피페리딘 (115 μL, 1.2 mmol)을 첨가했다. 20분 후, 반응 혼합물을 역상 전처리 HPLC (C18, 0.05% TFA와 함께 MeCN-H2O 0-50% v/v)로 직접 정제했다. 순수한 분획물을 동결건조하여 황색 분말로서 화합물 24를 34 mg (23 μmol, 40% 수율) 얻었다. LRMS (ESI): m/z 1467.7 [M+H]+, C71H102N8O25에 대한 계산값: m/z 1467.7.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((28S,31S,34S)-28-(4-(3-(5-((S)-28-(((S)-1-(((S)-1-((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로 -2H-피란-2-일)옥시)-4-((((2-((S)-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)에틸)(이소프로필)카바모일)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바모일)-26,34-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27,33-디아자헵타트리아콘탄-37-아미도)-2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미도)부틸)-31-이소프로필-34-메틸-26,29,32-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27,30,33-트리아자펜타트리아콘탄-35-아미도)-5-((((2-((S)-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)에틸)(이소프로필)카바모일)옥시)메틸)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로 -2H-피란-2-카복실산 ((2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((28S,31S,34S)-28-(4-(3-(5-((S)-28-(((S)-1-(((S)-1-((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxy-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-4-((((2-((S)-4-ethyl-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-11-yl)ethyl)(isopropyl)carbamoyl)oxy)methyl)phenyl)amino)-1-oxopropan-2-yl)amino)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)-26,34-dioxo-2,5,8,11,14,17,20,23-octaoxa-27,33-diazaheptatriacontan-37-amido)-2-((1,2-dimethylhydrazineyl)methyl)-1H-indol-1-yl)propanamido)butyl)-31-isopropyl-34-methyl-26,29,32-trioxo-2,5,8,11,14,17,20,23-octaoxa-27,30,33-triazapentatriacontan-35-amido)-5-((((2-((S)-4-ethyl-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-11-yl)ethyl)(isopropyl)carbamoyl)oxy)methyl)phenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid) ( 25 )의 제조
2 mL의 DMA 내 화합물 24 (34 mg, 23 μmol) 및 DIPEA (8 μL, 46 μmol)의 혼합물에 상온에서 비스-PFP 에스테르 14 (9.4 mg, 10.5 μmol)를 첨가한 뒤, HOAt (3 mg, 23 μmol)를 첨가했다. 생성된 혼합물을 상온에서 30분동안 방치한 다음, 상온에서 피페리딘 (21 μL, 0.21 mmol)을 혼합물에 첨가했다. 20분 후, 반응 혼합물을 역상 전처리 HPLC (C18, 0.05% TFA와 함께 MeCN-H2O 0-50% v/v)로 직접 정제했다. 순수한 분획물을 혼합하고 동결건조하여 화합물 25 (23 mg, 7 μmol, 67% 수율)를 황색 고체로서 얻었다. LRMS (ESI): m/z 1638.3 [M+H]2+, C160H224N20O53에 대한 계산값: m/z 1638.8.
실시예 4
생체접합(bioconjugation), 정제 및 HPLC 분석
하나의 알데히드 태그를 갖는 항체 (15 mg/mL)를 각각 1.1 mM로 링커-페이로드에 접합했다. 반응은 37℃에서 0.85-2.5% DMA를 함유하는 20 mM의 구연산나트륨, 50 mM NaCl pH 5.5 (20/50 완충액)에서 72시간동안 진행하였다. 접합 후, 30 kD MWCO 0.5 mL Amicon 스핀 압축기를 사용하여 유리 약물을 제거했다. 샘플을 스핀 농축기에 넣고 15,000 xg로 7분간 원심분리 한 다음, 450 μL 20 mM 구연산 나트륨, 50 mM NaCl pH 5.5로 희석한 후 다시 원심분리하였다. 이 과정을 10번 반복했다. 최종 생성물의 DAR를 측정하기 위해, HIC (Tosoh #14947) 또는 PLRP-RP (Agilent PL1912-1802 1000A, 8 um, 50 x 2.1 mm) 칼럼을 사용하여 분석 크로마토그래피로 ADC를 수행했다. HIC 분석에는 이동상 A: 1.5 M 황산 암모늄, 25 mM 인산 나트륨 pH 7.0, 및 이동상 B: 25% 이소프로판올, 18.75 mM 인산 나트륨 pH 7.0을 사용했다. PLRP 분석에는 이동상 A: 물 내 0.1% 트리플루오로아세트산, 및 이동상 B: 아세토니트릴 내 0.1% 트리플루오로 아세트산을 사용했다. PLRP 분석 전, 50 mM DTT, 4 M 구아니딘 HCl (최종 농도)를 첨가하고 37℃에서 30분간 가열하여 샘플을 변성시켰다. 응집을 확인하기 위해, 300 mM NaCl, 5% 이소프로판올과 함께 25 mM 인산 나트륨 pH 6.8의 이동상을 사용한 분석 크기 배제 크로마토그래피 (SEC; Tosoh #08541)를 사용하여 샘플을 분석했다.
도 34에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 8에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체의 DAR 값은 3.74이다.
도 35에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 8에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체는 98.5% 단량체이다.
도 36에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 8에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체의 DAR 값은 3.73이다.
도 37에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 8에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체는 98.0% 단량체이다.
도 38에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체의 DAR 값은 6.89이다.
도 39에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체는 98.7% 단량체이다.
도 40에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체의 DAR 값은 6.86이다.
도 41에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 이중-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체는 96.6% 단량체이다.
도 42에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 단일-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체의 DAR 값은 3.16이다.
도 43에서 SEC에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 단일-태깅된 넥틴-4 VH4/VL1 항체는 97.2% 단량체이다.
도 44에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 단일-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체의 DAR 값은 3.25이다.
도 45에서 PLRP에 의해 측정된 것과 같이, 화합물 25에 접합된 단일-태깅된 넥틴-4 VH4/VL5 항체의 DAR 값은 3.25이다.
실시예 5: 이종 이식 연구
NCI-H1781 이종 이식 방법:
암컷 BALB/c 누드 마우스 (그룹당 5 마리)에 PBS 내 2,000 만개의 NCI-H1781 세포를 피하 접종했다. 치료는 종양이 평균 222 mm3 (1일차)에 도달했을 때 시작되었다. 동물에게 비히클 단독을 정맥투여하거나, 또는 DAR가 6.8인 RED-674에 접합된 두 개의 알데히드가 삽입된 엔포투맙 항체를 정맥 투여했다. ADC를 0일차와 7일차에 5 mg/kg으로 정맥 투여했다. 동물의 체중과 종양 크기를 매주 두 번씩 모니터링했다. 종양이 2,000 mm3에 도달하거나 체중 감소가 15%를 초과하면 동물을 안락사하였다.
NCI-H1781 이종 이식 결과:
토모아이소머라제 I 억제제 페이로드를 갖는 알데히드 접합 넥틴-4 표적 ADC는 NCI-H1781 이종이식을 받은 동물 5 마리 중 2 마리에서 완전 반응(complete response)을 포함하여 강력한 종양 감소(regression)을 보였다 (도 29). 연구 종료 시점 (35일차)에, 비히클 대조군 및 ADC-치료군의 평균 종양 크기(± SD)는 각각 971 ± 237 mm3와 10 ± 10 mm3 였다.
도 31은 0일째에 나열된 항-넥틴-4 ADC를 2.5 또는 7.5 mg/kg으로 단일 정맥 투여한 NCI-H1781 이종 이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL1 화합물 8 (RED-601) 및 VH4/VL5 화합물 8 둘 다 내부 91N 태그를 사용하며 파드세브(Padcev)와 비교하여 절반의 페이로드 용량을 전달한다. 아이소타입 대조군 ADC의 활성은 미미했다.
도 32는 0일째에 나열된 항-넥틴-4 또는 아이소타입 대조군 ADC를 2.5 또는 7.5 mg/kg 단일 정맥 투여에 대한 NCI-H1781 이종 이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL1 화합물 25 (RED-694)는 91N 태그를 사용하는 DAR4 포맷과 91N/116E 이중 태그 조합을 사용하는 DAR8 포맷으로 제작되었다. 파드세브 (제네릭)이 비교대상으로 포함되었다. 아이소타입 대조군 화합물 25 ADC의 활성은 미미했다.
도 33은 0일째에 나열된 항-넥틴-4 또는 아이소타입 대조군 ADC를 2.5 또는 7.5 mg/kg 단일 정맥 투여한 NCI-H1781 이종 이식 연구의 그래프를 나타낸다. VH4/VL5 화합물 25 (RED-694)는 91N 태그를 사용하는 DAR4 포맷과 91N/116E 이중 태그 조합을 사용하는 DAR8 포맷으로 제작되었다. 파드세브 (제네릭)이 비교대상으로 포함되었다. 아이소타입 대조군 화합물 25 ADC의 활성은 미미했다.
실시예 6: 독성 연구
독성 연구를 통해 베도틴-접합된 엔포투맙 항체에 비해, 토모아이소머라제 I 링커-페이로드에 접합된 넥틴-4 CH1/CT 알데히드-태깅된 엔포투맙 항체 (화합물 25)의 내약성이 개선되었음을 확인했다.
다중-용량 랫트 독성 연구에 사용된 ADC
방법
다중-용량 비-GLP 랫트 독성 연구. 수컷 스프라그-돌리(Sprague-Dawley) 랫트 (연구 시작시 8-9 주령, 5 동물/그룹)에 비히클 단독을 정맥 투여하거나, 또는 랫트 교차-반응성 항체, 엔포투맙의 가변 영역을 갖는 항체를 사용한 넥틴-4 접합체를 정맥 투여했다. 시험에 사용된 ADC는 넥틴-4 베도틴 ADC (파드세브, 제네릭) 및 엔포투맙 화합물 25 ADC였다. 총 4회 (1일, 8일, 15일 및 22일)에 걸쳐 매주 10 mg/kg씩 투여했다. 마지막 투여 후 7일 동안 동물을 관찰했다. 체중은 1주당 4회 기록하였다. 5일, 12일, 19일 및 26일에 임상 병리학을 위해 모든 동물에서 혈액을 채취하고, 투여 후 8시간 후, 4일 및 7일 째에 (모든 용량에 대해) 독성 동역학 분석을 위해 혈액을 채취 하였다. 임상 관찰은 매일 수행하였다. 0 (정상)에서 3 (중증)까지의 임상 관찰 점수 시스템의 척도는 표 13에 나와있다.
표 13: 임상 관찰 점수 시스템 척도
파라미터 0 1 2 3
활성 수준/유발되지 않은 (unprovoked) 행동 밝고 깨어 있는 상태 사소한 변화, 정형화된 행동, 찍찍거림 이동성 감소, 비활동, 우리에 웅크리고 있음, 무기력함 혼수상태
유발된 행동 환경에 대한 호기심 경미한 우울증 또는 과장된 반응; 숨어있거나 파묻혀 있지만 건드리면 깨어남 적당히 감소된 반응, 중간 정도의 발성, 뚜껑을 제거했을 때 탐색반응 없음 폭력적인 반응, 크고 지속적인 발성
운동 능력/ 신경학 정상 꼬리 뻣뻣함/ 직립, 꼬리 끌기, 머리 기울이기, 빙글빙글 돌기 휘청거리거나 비틀거림, 걷는 동안 등을 구부리고/배를 집어넣음, 떨림 움직일 수 없음, 마비, 팔다리 끌기, 심한/지속적인 경련
재채기 없음 1분에 한 번 1분에 2-3번 1분에 4번 이상
호흡 정상 약간 뚜렷하거나 감소된 흉부 움직임, 미미하거나/경미하게 들리는 가랑가랑한 숨소리 입을 벌리고 호흡, 적당히 뚜렷하거나 감소된 흉부 움직임, 중등도에서 중증의 수포음(rale) 흉부 움직임이 심하게 뚜렷하거나 줄어듦
파라미터 0 1 2 3
자세 정상 머리 숙인 자세 구부정한 등/ 집어넣은 복부 엎드림
신체 상태 정상 뚜렷한 척추, 경미한 부종 눈에 띄는 복부 팽창, 중등도의 부종 해부학적 구조 없음, 골격 구조가 매우 두드러짐, 복부 팽창, 중증의 부종
털&피부 윤기 있고 잘 손질됨 최소한의 그루밍 부족 징후, 가벼운 탈모 징후, 염증성 피부, 가벼운 털세움(piloerection) 거칠고 반짝이는 털, 심한 털세움, 중등도의 피부 병변, 오염된 항문생식기 부위, 탈항 깊은 상처 (심한 싸움 병변, 피부 궤양, 프로인트 완전 보조 궤양)
눈 정상 눈 주위의 가벼운 포르피린 얼룩 눈 주위나 발에 명백한 포르피린 얼룩 N/A
종양 또는 감염*
* 질병 모델과 무관한 		정상 작은 농양 또는 종양 (비-암 연구)) 중등도 농양 또는 종양 (비-암 연구) 큰 농양 또는 종양 (비-암 연구)
최근 7일간 체중 감소 10% 미만 감소 10-15% 감소 15-20% 감소 20% 초과 감소
다중-투여 비-GLP 랫트 독성 연구 결과:
CH1/CT-태그 부위에서 베도틴 또는 화합물 25에 접합된 엔포투맙 ADC를 다중-투여 랫트 연구에서 동일한 페이로드/동일한 항체 투여 수준에서 내약성을 비교하였다. 파드세브 (제네릭) ADC는 투여 용량에서 랫트에게 독성이 있었으며, 한 마리가 사망했다. 파드세브 (제네릭) 투여군의 다른 동물들은 털 및 피부와 관련된 임상 관찰 결과 이외에도 간 및 조혈 시스템에 대한 ADC의 영향을 나타내는 임상 병리 판독결과 등 다양한 임상 관찰 결과를 보였다. 반면, 화합물 25 ADC를 투여한 동물은 사망률, 임상 관찰 결과 및 임상 병리 판독 결과 없이 치료를 매우 잘 견뎌냈으며, 이는 파드세브 (제네릭) 군과 비교했을 때 비히클 대조군과 더 유사한 결과였다.
도 46은 랫트 교차-반응성 넥틴-4 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 임상 관찰 결과. 화살표는 투약일을 나타낸다. 화합물 25 접합체를 투여한 동물에서는 관찰된 것이 없는 반면, 베도틴을 투여한 그룹에서는 임상 관찰 결과 17일째에 평균이 2.5로 나타났으며, 결국 동물이 사망했다.
도 47은 비히클 또는 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 적혈구 수.
도 48은 비히클 또는 ADC를 반복으로 투여한 랫트의 호중구 수.
도 49는 비히클 또는 ADC를 반복으로 투여한 랫트의 망상 적혈구 수.
도 50은 비히클 또는 ADC를 반복으로 투여한 랫트의 림프구 수.
도 51은 비히클 또는 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 혈소판 수.
도 52는 비히클 또는 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 알라닌 아미노 전이효소 수.
도 53은 비히클 또는 ADC를 반복적으로 투여한 랫트의 아스파테이트 아미노 전이효소 수.
실시예 7: 독성 동역학 샘플 분석
방법
총 항체 및 총 ADC 농도는 앞서 설명한 대로 ELISA에 의해 정량화되었고, 도 54에 표시되어 있다. 총 항체의 경우, 항-인간 IgG-특이적인 항체로 접합체를 포집하고, HRP-접합된 항-인간 Fc-특이적인 항체로 검출했다. 총 ADC의 경우, 항-인간 Fab-특이적인 항체로 접합체를 포집하고, 마우스 항-마이탄신 1차 항체로 검출한 다음, HRP-접합된 항-마우스 IgG-서브클래스 1-특이적인 2차 항체를 사용하여 검출하였다. 결합된 2차 항체는 울트라 TMB 원-스텝 ELISA 기판 (써모피셔)을 사용하여 검출했다. 황산으로 반응을 퀀칭시킨 후, 소프트맥스 프로(SoftMax Pro) 소프트웨어가 탑재된 몰레큘러 디바이스 스펙트라 맥스 M5 (Molecular Devices Spectra Max M5) 플레이트 리더기에서 450 nm에서 흡광도를 측정하여 신호를 판독했다. 그래프패드 프리즘과 마이크로소프트 엑셀 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석했다.
결과: 다중-투여 비-GLP 랫트 독성 연구 #2에서 동물 혈장 샘플에 대한 독성 동력학 분석을 통해, 투여 수준 및 노출을 확인했으며, 베도틴 ADC와 비교하여 화합물 8 접합체의 안정성을 입증했다 (도 54).
본 발명은 그 구체적인 구현예를 참조하여 설명되었지만, 당업자는 본 발명의 진정한 정신 및 범위를 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 변경이 이루어질 수 있고 균등한 것으로 대체될 수 있음을 이해할 것이다. 또한, 본 발명의 목적, 정신 및 범위에 따라 특정 상황, 재료, 물질의 구성, 공정, 공정 단계 또는 단계들을 조정하기위해 많은 변형이 이루어질 수 있다. 이러한 모든 변형은 본 명세서에서 첨부된 청구항의 범위 내에 이루어져야 한다.

Claims (74)

  1. 화학식 Ⅰ의 접합체:
    [화학식 Ⅰ]

    상기 화학식에서,
    Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 CR4, N 및 C-LB-W2로부터 독립적으로 선택되고;
    R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 선택되고;
    R2 및 R3는 각각 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 순환적으로(cyclically) 연결되어 선택적으로 5원 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고;
    각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 독립적으로 선택되고;
    LA는 제1 링커이고;
    LB는 제2 링커이고;
    W1은 제1 약물이고;
    W2는 제2 약물이고; 및
    W3은 항-넥틴-4 항체이다.
  2. 제1항에 있어서, Z1은 CR4인 것인, 접합체.
  3. 제1항에 있어서, Z1은 N인 것인, 접합체.
  4. 제1항에 있어서, Z3은 CR4인 것인, 접합체.
  5. 제1항에 있어서, Z3은 C-LB-W2인 것인, 접합체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, LA는 다음을 포함하는, 접합체:
    -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-,
    이때,
    a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
    T1, T2, T3, T4, T5 및 T6는 각각 공유결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈 기, 히드라진, 디설파이드, 및 에스테르로부터 독립적으로 선택되고, 이때 EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체(analog)이고, 여기서 각각의 w는 1에서 20까지의 정수이고, 각각의 n은 1에서 30까지의 정수이고, 각각의 p는 1에서 20까지의 정수이고, 및 각각의 x는 1에서 12까지의 정수이고;
    V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 각각 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 각각의 q는 1에서 6까지지의 정수이고;
    각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고; 및
    각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 독립적으로 선택된다.
  7. 제6항에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된 것인, 접합체.
  8. 제6항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된 것인, 접합체.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로나이드(glucuronide), 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc로부터 선택되는 것인, 접합체.
  10. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    이때,
    T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CO-이고;
    T2는 아미노산 유사체 및 V2는 -NH-이고;
    T3은 (PEG)n 및 V3은 -CO-이고;
    T4는 AA 및 V4는 존재하지 않고(absent);
    T5는 PABC 및 V5는 존재하지 않고; 및
    f는 0이거나, 또는
    이때,
    T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CONH-이고;
    T2는 (PEG)n 및 V2는 -CO-이고;
    T3은 AA 및 V3은 존재하지 않고;
    T4는 PABC 및 V4는 존재하지 않고; 및
    e 및 f는 각각 0이거나, 또는
    이때,
    T1은 (C1-C12)알킬 및 V1은 -CONH-이고;
    T2는 치환된 (C1-C12)알킬 및 V2는 -CO-이고;
    T3은 AA 및 V3은 존재하지 않고;
    T4는 PABC 및 V4는 존재하지 않고; 및
    e 및 f는 각각 0이다.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, LB는 다음을 포함하는, 접합체:
    -(T7-V7)g-(T8-V8)h-(T9-V9)i-(T10-V10)j-(T11-V11)k-(T12-V12)l-(T13-V13)m-,
    이때,
    g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
    T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 공유결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈 기, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 독립적으로 선택되되, 이때 EDA는 에틸렌 다이아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이고, 여기서 각각의 w는 1에서 20까지의 정수이고, 각각의 n은 1에서 30까지의 정수이고, 각각의 p는 1에서 20까지의 정수이고, 및 각각의 x는 1에서 12까지지의 정수이고;
    V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 공유결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되되, 이때 각각의 q는 1에서 6까지의 정수이고;
    각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고; 및
    각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 및 치환된 헤테로사이클릴으로부터 독립적으로 선택된다.
  12. 제11항에 있어서, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된 것인, 접합체.
  13. 제11항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 선택적으로 치환된 것인, 접합체.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로나이드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc로부터 선택되는 것인, 접합체.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    이때,
    T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
    T8은 (C1-C12)알킬 및 V8은 -CONH-이고;
    T9는 (PEG)n 및 V9는 -CO-이고;
    T10은 AA 및 V10은 존재하지 않고;
    T11은 PABC 및 V11은 존재하지 않고; 및
    l 및 m은 각각 0이거나, 또는
    이때,
    T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
    T8은 (C1-C12)알킬 및 V8은 -CONH-이고;
    T9는 치환된 (C1-C12)알킬 및 V9는 -CO-이고;
    T10은 AA 및 V10은 존재하지 않고;
    T11은 PABC 및 V11은 존재하지 않고; 및
    l 및 m은 각각 0이다.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 접합체는
    ,
    및 로부터 선택되는, 접합체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 IgG1 항체인 것인, 접합체.
  18. 제17항에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 IgG1 카파 항체인 것인, 접합체.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 하기 화학식 Ⅱ의 서열을 포함하는 것인, 접합체:
    [화학식 Ⅱ]
    X1(fGly')X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 128)
    이때,
    X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우 X1은 임의의 아미노산일 수 있으며, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
    fGly'은 각각 제1 링커 또는 제2 링커를 통해 제1 약물 또는 제2 약물에 커플링된 아미노산 잔기이고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;
    Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고; 및
    Z3는 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이다.
  20. 제19항에 있어서, 상기 서열은 L(fGly')TPSR (SEQ ID NO: 246)인 것인, 접합체.
  21. 제19항에 있어서, 이때
    Z3은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고; 및
    X2 및 X3은 각각 S, T, A, V, G, 및 C로부터 독립적으로 선택되는 것인, 접합체.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 서열은 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치하는 것인, 접합체.
  23. 제22항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 화학식 Ⅱ의 서열을 포함하는 것인, 접합체:
    [화학식 Ⅱ]
    X1(fGly')X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 128),
    이때,
    X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우 X1은 임의의 아미노산일 수 있으며, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
    fGly'은 각각 제1 링커 또는 제2 링커를 통해 제1 약물 또는 제2 약물에 커플링된 아미노산 잔기이고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;
    Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고;
    Z3는 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고; 및
    이때 서열은 아미노산 서열 SLSLSPG (SEQ ID NO: 247)에 대한 C-말단이다.
  24. 제23항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역은 서열 SPGSL(fGly')TPSRGS (SEQ ID NO: 130)을 포함하는 것인, 접합체.
  25. 제23항에 있어서, 이때
    Z3은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고; 및
    X2 및 X3은 각각 S, T, A, V, G, 및 C로부터 독립적으로 선택되는 것인, 접합체.
  26. 제22항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 70의 서열 내에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
  27. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 71, 75, 79, 및 83 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
  28. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 72, 76, 80, 및 84 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
  29. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 73, 77, 81, 및 85 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
  30. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체의 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 74, 78, 82, 및 86 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 서열 LCTPSR (SEQ ID NO: 104)에서 C 대신에 fGly' 잔기를 포함하는 것인, 접합체.
  31. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, fGly' 잔기는 항-넥틴-4 항체의 경쇄 불변 영역 내에 위치하는 것인, 접합체.
  32. 제31항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 하기 화학식 Ⅱ의 서열을 포함하는 것인, 접합체:
    [화학식 Ⅱ]
    X1(fGly')X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 128),
    이때,
    X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우 X1은 임의의 아미노산일 수 있으며, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
    fGly'은 링커를 통해 약물에 커플링된 아미노산 잔기이고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;
    Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고;
    Z3은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고; 및
    이때 서열은 아미노산 서열 KVDNAL (SEQ ID NO: 132)에 대한 C-말단이고/이거나 서열 QSGNSQ (SE ID NO: 133)에 대한 N-말단이다.
  33. 제32항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(fGly')TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 134)을 포함하는 것인, 접합체.
  34. 제33항에 있어서, 이때
    Z3은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고; 및
    X2 및 X3은 각각 S, T, A, V, G, 및 C로부터 독립적으로 선택되는 것인, 접합체.
  35. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, fGly' 잔기는 항-넥틴-4 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치하는 것인, 접합체.
  36. 제35항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 하기 화학식 Ⅱ의 서열을 포함하는 것인, 접합체:
    [화학식 Ⅱ]
    X1(fGly')X2Z2X3Z3 (SEQ ID NO: 128),
    이때,
    X1는 존재하거나 존재하지 않고, 존재하는 경우 X1은 임의의 아미노산일 수 있으며, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있을 때 X1이 존재하고;
    fGly'은 링커를 통해 약물에 커플링된 아미노산 잔기이고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고;
    Z2는 프롤린 또는 알라닌 잔기 둘 중 하나이고;
    Z3은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고; 및
    이때 서열은 아미노산 서열 SWNSGA (SEQ ID NO: 135)에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP (SEQ ID NO: 136)에 대한 N-말단이다.
  37. 제36항에 있어서, 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(fGly')TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 137)을 포함하는 것인, 접합체.
  38. 제29항에 있어서, 이때
    Z3는 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고; 및
    X2 및 X3은 각각 S, T, A, V, G, 및 C로부터 독립적으로 선택되는 것인, 접합체.
  39. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, fGly' 잔기는 항-넥틴-4 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치하는 것인, 접합체.
  40. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, fGly' 잔기는 항-넥틴-4 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치하는 것인, 접합체.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 넥틴-4에 결합하기 위해 다음을 포함하는 항-넥틴-4 항체와 경쟁하는 것인, 접합체:
    SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1 내지 3 (HCDR 1 내지 3)을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬; 및
    SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1 내지 3 (LCDR 1 내지 3)을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬.
  42. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
    SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1 내지 3 (HCDR 1 내지 3)을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1 내지 3 (LCDR 1 내지 3)을 포함하는 VL 사슬.
  43. 제42항에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
    SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
  44. 제42항에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
    SEQ ID NO: 1 내지 6으로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 18 내지 23으로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬.
  45. 제42항에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
    SEQ ID NO: 1 내지 6으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 18 내지 23으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
  46. 제42항에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
    SEQ ID NO: 7 내지 13으로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 24 내지 27로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬.
  47. 제42항에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
    SEQ ID NO: 7 내지 13으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 24 내지 27로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
  48. 제42항에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
    SEQ ID NO: 14 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 28 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬.
  49. 제42항에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
    SEQ ID NO: 14 내지 17로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 28 내지 31로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬.
  50. 제42항에 있어서, 넥틴-4에 특이적으로 결합하는 항체는 다음을 포함하는 것인, 접합체:
    항-넥틴-4 항체의 VH 사슬로서, SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하고, SEQ ID NO:1 내지 17로부터 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 이때 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬과 SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 이외의 영역에 있는, 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬; 및
    항-넥틴-4 항체의 VL 사슬로서, SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하고 SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 이때 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬과 SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 이외의 영역에 있는, 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬.
  51. 제42항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체는
    SEQ ID NO: 70 내지 86 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 불변 영역의 서열 LCTPSR에 존재하는 C는 fGly으로 대체된 것인, 접합체.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항의 접합체 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  53. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항의 접합체 또는 제52항의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  54. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은
    제1항 내지 제51항 중 어느 한 항의 접합체 또는 제52항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이때 상기 투여는 대상체에서 암을 치료하는 데 효과적인 것인, 방법.
  55. 제54항에 있어서, 상기 암은 난소암, 유관 유방암(ductal breast carcinoma), 폐 선암 또는 췌장암인 것인, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 암은 넥틴-4를 발현하는 암 세포를 특징으로 하는 것인, 방법.
  57. 제56항에 있어서, 상기 접합체는 넥틴-4에 결합하는 것인, 방법.
  58. 약물을 대상체의 표적 부위에 전달하는 방법으로서, 상기 방법은
    제1항 내지 제51항 중 어느 한 항의 접합체 또는 제52항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이때 투여는 대상체의 표적 부위에서 치료적 유효량의 약물을 상기 접합체로부터 방출하는데 효과적인 것인. 방법.
  59. 항-넥틴-4 항체로서,
    SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 중쇄 CDR 1 내지 3 (HCDR 1 내지 3)을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬; 및
    SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 경쇄 CDR 1 내지 3 (LCDR 1 내지 3)을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
  60. 제59항에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
    SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 서열; 및
    SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 서열;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
  61. 제59항에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
    SEQ ID NO: 1 내지 6로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 18 내지 23로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
  62. 제59항에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
    SEQ ID NO: 1 내지 6으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 18 내지 23으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
  63. 제59항에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
    SEQ ID NO: 7 내지 13으로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 24 내지 27로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
  64. 제59항에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
    SEQ ID NO: 7 내지 13으로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 24 내지 27로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
  65. 제59항에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
    SEQ ID NO: 14 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 28 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
  66. 제59항에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는
    SEQ ID NO: 14 내지 17로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
    SEQ ID NO: 28 내지 31로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬;을 포함하는, 항-넥틴-4 항체.
  67. 제59항에 있어서, 상기 항-넥틴-4 항체는 다음을 포함하는 것인, 항-넥틴-4 항체:
    항-넥틴-4 항체의 VH 사슬로서, SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열을 갖는 VH 사슬의 HCDR 1 내지 3을 포함하고, SEQ ID NO:1 내지 17로부터 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 이때 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬과 SEQ ID NO: 1 내지 17로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 이외의 영역에 있는, 항-넥틴-4 항체의 VH 사슬; 및
    항-넥틴-4 항체의 VL 사슬로서, SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열을 갖는 VL 사슬의 LCDR 1 내지 3을 포함하고 SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열에 기재된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 이때 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬과 SEQ ID NO: 18 내지 31로부터 선택된 서열 사이의 임의의 아미노산 차이는 CDR 이외의 영역에 있는, 항-넥틴-4 항체의 VL 사슬.
  68. 제59항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 항-넥틴-4 항체는
    SEQ ID NO: 70 내지 86 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하고, 이때 불변 영역의 서열 LCTPSR에 존재하는 C는 fGly으로 대체된 것인, 항-넥틴-4 항체.
  69. 제59항 내지 제68항 중 어느 한 항의 항체 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  70. 제59항 내지 제68항 중 어느 한 항의 항체 또는 제69항의 약제학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  71. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은
    제59항 내지 제68항 중 어느 한 항의 항체 또는 제69항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이때 상기 투여는 대상체에서 암을 치료하는 데 효과적인 것인, 방법.
  72. 제71항에 있어서, 상기 암은 난소암, 유관 유방암, 폐 선암 또는 췌장암인 것인, 방법.
  73. 제72항에 있어서, 상기 암은 넥틴-4를 발현하는 암 세포를 특징으로 하는 것인, 방법.
  74. 제73항에 있어서, 이때 접합체는 넥틴-4에 결합하는 것인, 방법.
KR1020247006323A 2021-07-30 2022-07-28 넥틴-4에 특이적인 항체 및 항체 접합체 및 이의 사용방법 KR20240040098A (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163227666P 2021-07-30 2021-07-30
US63/227,666 2021-07-30
US202263322914P 2022-03-23 2022-03-23
US63/322,914 2022-03-23
US202263344932P 2022-05-23 2022-05-23
US63/344,932 2022-05-23
PCT/US2022/038720 WO2023009751A2 (en) 2021-07-30 2022-07-28 Antibodies and antibody conjugates specific for nectin-4 and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240040098A true KR20240040098A (ko) 2024-03-27

Family

ID=85088249

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247006358A KR20240049858A (ko) 2021-07-30 2022-07-28 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법
KR1020247006323A KR20240040098A (ko) 2021-07-30 2022-07-28 넥틴-4에 특이적인 항체 및 항체 접합체 및 이의 사용방법

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247006358A KR20240049858A (ko) 2021-07-30 2022-07-28 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법

Country Status (6)

Country Link
EP (2) EP4377319A2 (ko)
KR (2) KR20240049858A (ko)
AU (2) AU2022319782A1 (ko)
CA (2) CA3227845A1 (ko)
IL (1) IL310432A (ko)
WO (3) WO2023009759A2 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240049858A (ko) * 2021-07-30 2024-04-17 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6507097B2 (ja) * 2012-09-19 2019-04-24 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． Ｋｉｒ３ｄｌ２結合剤
US9310374B2 (en) * 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
EP3074010A4 (en) * 2013-11-27 2017-10-25 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate
US20200246480A1 (en) * 2015-11-09 2020-08-06 R.P. Scherer Technologies, Llc Anti-cd22 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
BR112019019650A2 (pt) * 2017-03-21 2020-06-30 Peptron, Inc. ligação de anticorpos especificamente à muc1 e utilização dos mesmos
WO2019113248A1 (en) * 2017-12-07 2019-06-13 The Regents Of The University Of California Anti-upar antibody-drug conjugates and methods of use thereof
BR112020011445A2 (pt) * 2017-12-11 2020-12-22 Triphase Research and Development III Corp. Conjugados de anticorpo anti-cd22-maitansina, combinações, e métodos de uso dos mesmos
JP7471224B2 (ja) * 2018-01-15 2024-04-19 シュティッヒティング・サンコン・ブロードフォールジーニング Ｈ因子増強抗体及びその使用
CA3097679A1 (en) * 2018-05-09 2019-11-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Antibodies specific to human nectin4
US20220226490A1 (en) * 2019-01-23 2022-07-21 R.P. Scherer Technologies, Llc Glycoside-Containing Peptide Linkers for Antibody-Drug Conjugates
KR20240049858A (ko) * 2021-07-30 2024-04-17 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 항체-약물 접합체 및 이의 사용방법

Also Published As

Publication number Publication date
AU2022319782A1 (en) 2024-02-15
AU2022320714A1 (en) 2024-02-08
EP4377319A2 (en) 2024-06-05
WO2023009759A3 (en) 2023-04-13
IL310432A (en) 2024-03-01
WO2023009751A2 (en) 2023-02-02
CA3227844A1 (en) 2023-02-02
WO2023009759A2 (en) 2023-02-02
WO2023009751A3 (en) 2023-03-09
EP4377320A2 (en) 2024-06-05
WO2023009835A2 (en) 2023-02-02
WO2023009835A3 (en) 2023-10-26
CA3227845A1 (en) 2023-02-02
WO2023009835A9 (en) 2024-01-04
KR20240049858A (ko) 2024-04-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102342934B1 (ko) 항체-약물 접합체 및 면역독소
KR20160113620A (ko) 항체-약물 접합체 및 면역독소
US20220226490A1 (en) Glycoside-Containing Peptide Linkers for Antibody-Drug Conjugates
WO2019113248A1 (en) Anti-upar antibody-drug conjugates and methods of use thereof
US20230277676A1 (en) Camptothecine antibody-drug conjugates and methods of use thereof
KR20240040098A (ko) 넥틴-4에 특이적인 항체 및 항체 접합체 및 이의 사용방법
WO2023025243A1 (zh) 抗Nectin-4抗体、药物缀合物及其制备方法和用途
CA3226897A1 (en) Tumor-associated calcium signal transducer 2 (tacstd2) antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
US11980668B2 (en) Sulfatase-cleavable linkers for antibody-drug conjugates
AU2022317537A1 (en) Antibody conjugates specific for mucin-1 and methods of use thereof
CN118043328A (zh) 对nectin-4特异性的抗体和抗体缀合物及其使用方法
US20220249686A1 (en) Glycoside dual-cleavage linkers for antibody-drug conjugates
JP2024503075A (ja) 抗体－薬物コンジュゲートのための二重切断エステルリンカー
WO2023028537A2 (en) Antibodies having humanized framework regions
CN118119644A (zh) 具有人源化框架区的抗体
WO2024054821A2 (en) Tissue factor antibody-drug conjugates and uses thereof
KR20240083174A (ko) 종양 관련 칼슘 신호 전달 인자 2 (tacstd2) 항체-메이탄신 접합체 및 이의 사용 방법
CN116783208A (zh) 用于抗体-药物缀合物的糖苷双裂解接头
KR20240083175A (ko) 항체-약물-접합체를 사용하는 방법