BR112020011445A2 - Conjugados de anticorpo anti-cd22-maitansina, combinações, e métodos de uso dos mesmos - Google Patents

Conjugados de anticorpo anti-cd22-maitansina, combinações, e métodos de uso dos mesmos Download PDF

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Abstract

conjugados de anticorpo anti-cd22-maitansina, combinações, e métodos de uso dos mesmos a presente divulgação fornece métodos para o tratamento de um câncer ou câncer resistente com uma combinação de um conjugado de anticorpo anti-cd22-maitansina e um ou mais agentes anticancerígenos. a divulgação também abrange métodos para sensibilizar um câncer com essas combinações. também são fornecidas composições farmacêuticas incluindo essas combinações.

Description

CONJUGADOS DE ANTICORPO ANTI-CD22-MAITANSINA, COMBINAÇÕES, E MÉTODOS DE USO DOS MESMOS
APLICAÇÕES RELACIONADAS
[0001] Esta aplicação reivindica prioridade à aplicação provisória U.S. No. 62/597,160, submetida no dia 11 de dezembro de 2017, a mesma é incorporada por referência no presente documento na sua integridade.
INCORPORAÇÃO DE LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0002] O conteúdo do arquivo de texto “TRPS-04001WO_SeqList_ST25.txt”, o qual foi criado no dia 10 de dezembro de 2018, e que tem um tamanho de 95 KB, é incorporado por referência no presente documento na sua integridade.
INTRODUÇÃO
[0003] O campo de conjugados terapêuticos de proteínas-moléculas pequenas tem avançado amplamente, fornecendo um número de fármacos com benefícios clínicos com a promessa de desenvolver mais nos próximos anos. Os conjugados terapêuticos de proteínas podem trazer diversas vantagens devido à, por exemplo, especificidade, multiplicidade de funções e uma atividade fora do alvo relativamente baixa, o que resulta em efeitos adversos menores. A modificação química de proteínas pode estender estas vantagens, tornando-as mais potentes, estáveis ou multimodais.
[0004] Um número padrão de transformações químicas são utilizadas comumente para criar e manipular modificações pós-translacionais sobre proteínas. Existe um número de métodos onde é possível modificar as cadeias laterais de certos aminoácidos de maneira seletiva. Por exemplo, cadeias laterais ácidas carboxílicas aspartato e glutamato podem ser direcionadas pela ativação inicial com um reagente de carbodiimida solúvel em água e a subsequente reação com a amina. Da mesma forma, a lisina pode ser direcionada através da utilização de ésteres ou isotiocianatos, e tióis de cisteína podem ser direcionados com maleimidas e α-halo-carbonilas.
[0005] Um obstáculo significativo na criação de proteínas quimicamente modificadas, sejam terapêuticas ou reagentes, é a produção da proteína em uma forma homogênea, biologicamente ativa. A conjugação de um fármaco ou rótulo detectável para um polipeptídeo pode ser difícil de controlar, resultando numa mistura heterogênea de conjugados que se diferenciam no número de moléculas do fármaco ligadas e na posição da conjugação química.
Em algumas instâncias, pode ser desejável controlar o lugar da conjugação e/ou o fármaco ou o rótulo detectável conjugado ao polipeptídeo usando as técnicas da química orgânica sintética para dirigir a formação direta e seletiva das ligações químicas no polipeptídeo.
RESUMO
[0006] A presente divulgação fornece métodos para o tratamento de cânceres e cânceres resistentes com um conjugado anticorpo-maitansina anti-CD22 em combinação com um ou mais agentes anticancerígeno. Esta divulgação envolve também métodos para sensibilizar cânceres através do tratamento com esses conjugados e agentes anticancerígenos.
[0007] Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para o tratamento do câncer em um sujeito, o método compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um ou mais agentes anticancerígenos, e um conjugado, como aqui descrito, para o sujeito em necessidade.
[0008] Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para o tratamento de câncer resistente em um sujeito, o método compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um ou mais agentes anticancerígenos, e um conjugado, como aqui descrito, para o sujeito em necessidade.
[0009] Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para sensibilizar um câncer em um sujeito, o método compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um ou mais agentes anticancerígenos, e um conjugado, como aqui descrito, para o sujeito em necessidade.
[0010] Em um aspecto, a presente divulgação fornece uma composição farmacêutica para o tratamento de câncer, a composição farmacêutica compreendendo um ou mais agentes anticancerígenos; um conjugado como aqui; e um excipiente farmacêuticamente aceitável. Em um aspecto, a presente divulgação fornece a utilização da composição farmacêutica para a fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer. Em um aspecto, a presente divulgação fornece a utilização da composição farmacêutica para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um câncer resistente.
[0011] Em um aspecto, a presente divulgação fornece a utilização da composição farmacêutica para a fabricação de um medicamento para sensibilizar um câncer. Em um aspecto,
a presente divulgação fornece a utilização da composição farmacêutica para o tratamento de um câncer.
[0012] Em um aspecto, a presente divulgação fornece a utilização da composição farmacêutica para o tratamento de um câncer. Em um aspecto, a presente divulgação fornece a utilização da composição farmacêutica para sensibilizar um câncer.
[0013] Em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para o tratamento de um câncer resistente em um sujeito, o método compreende a administração para o sujeito de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um conjugado como aqui divulgado.
[0014] Em um aspecto, a presente divulgação fornece a utilização de uma combinação que compreende um ou mais agentes anticancerígenos, e um conjugado como aqui descrito, na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer ao sujeito em necessidade.
[0015] Em um aspecto, a presente divulgação fornece a utilização de uma combinação que compreende um ou mais agentes anticancerígenos, e um conjugado como aqui descrito, para o tratamento de câncer ao sujeito em necessidade.
[0016] Em algumas modalidades dos aspectos acima referidos, o conjugado inclui pelo menos um resíduo de aminoácido da fórmula (I): (I) onde Z é CR4 ou N; R1 é selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; R2 e R3 são, cada um, independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila,
arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou R2 e R3 estão opcionalmente ligados a um heterociclila de 5 ou 6-membros; cada R4 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; L é um ligante que compreende -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-, onde a, b, c e d são, independentemente, 0 ou 1, e a soma de a, b, c e d é 1 a 4; T1, T2, T3 e T4 são independentemente selecionados a partir de alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, um dissulfeto, e um éster, onde EDA é uma fração de etileno diamina, PEG é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado, e AA é um resíduo de aminoácido, onde w é um número inteiro de 1 a 20, n é um número inteiro de 1 a 30, p é um número inteiro de 1 a 20, e h é um número inteiro de 1 a 12; V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionados a partir de um grupo que consiste de uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, onde q é um número inteiro de 1 a 6; cada R13 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída; cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; W1 é um maitansinóide; e W2 é um anticorpo anti-CD22.
[0017] Em algumas modalidades, T1 é selecionado a partir de uma alquila(C1-C12) e uma alquila (C1-C12) substituída;
T2, T3 e T4 são, independentemente selecionadas a partir de (EDA)w, (PEG)n,[ alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (AA)p , -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina e um éster; e V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionado a partir de um grupo que consiste de uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR15-, -NR15SO2-, e -P(O)OH-; onde: (PEG)n é , onde n é um número inteiro de 1 a 30; EDA é uma fração etileno diamina que tem a seguinte estrutura: , onde y é um número inteiro de 1 a 6 e r é 0 ou 1; piperidin-4-amino é ; cada R12 e R15 é selecionado independentemente a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma fração de polietilenoglicol, uma arila e uma arila substituída, onde quaisquer dois grupos R12 contíguos podem ser ligados ciclicamente para formar um anel de piperazinila; e R13 é selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída.
[0018] Em certas modalidades, T1, T2, T3 e T4, e V1, V2, V3 e V4 são selecionados a partir da seguinte tabela: T1 V1 T2 V2 T3 V3 T4 V4 alquila(C1- - (PEG)n -CO- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p - - - - - C12) alquila(C1- - (PEG)n -NR15- - - - - C12) CONR15-
alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -NR15- - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- - - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - - - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (EDA)w - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w - - - - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - alquila(C1- -CO- C12) CONR15 C12) - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- - - C12) C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (AA)p - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -SO2- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - (PEG)n -CO- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (CR13OH)h -CO- - - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- -SO2- alquila(C1- -CO- - - - - C12) C12) substituída alquila(C1- - alquila(C1- - (CR13OH)h - - - C12) CONR15- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n - (AA)p - C12) P(O)OH - alquila(C1- -CO- (EDA)w - (AA)p - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- alquila(C1- - C12) CONR15- C12) C12) NR15- alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- - - C12) C12)
[0019] Em certas modalidades, L é selecionado a partir de uma das seguintes estruturas:
onde cada f é, independentemente, 0 ou um inteiro indo de 1 a 12; cada y é, independentemente, 0 ou um inteiro indo de 1 a 20; cada n é, independentemente, 0 ou um inteiro indo de 10 a 30; cada p é. independentemente, 0 ou um inteiro indo de 1 a 20; cada h é, independentemente, 0 ou um inteiro indo de 1 a 12; cada R é, independentemente, hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; e cada R’ é, independentemente, H, um grupo de cadeia lateral de um aminoácido, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída.
[0020] Em certas modalidades, o maitansinóide é da fórmula: onde sinaliza o ponto de ligação entre o maitansinóide e L.
[0021] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
[0022] Em certas modalidades, o ligante, L, inclui a seguinte estrutura: , onde cada f é, independentemente, um número inteiro indo de 1 a 12; e n é um número inteiro indo de 1 a 30.
[0023] Em certas modalidades, o conjugado inclui a seguinte estrutura:
[0024] Em certas modalidades, o conjugado inclui a seguinte estrutura: .
[0025] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD22 liga um epítopo dentro dos aminoácidos 1 até 847, dentro dos aminoácidos 1-759, dentro dos aminoácidos 1-751, ou dentro dos aminoácidos 1-670, de uma sequência de aminoácidos CD22 como apresentado nas FIG. 8A-8C.
[0026] Em certas modalidades, o anticorpo anti-CD22 compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II)
caracterizado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), com a condição que quando a sequência esteja na N-terminal do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural).
[0027] Em certas modalidades, a sequência é L(FGly’)TPSR (SEQ ID NO: 185).
[0028] Em certas modalidades, Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
[0029] Em certas modalidades, o resíduo modificado de aminoácido é posicionado em uma C- terminal de uma região constante de cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
[0030] Em certas modalidades, a região constante de cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizador por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), com a condição que quando a sequência estiver na N-terminal do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e onde a sequência é C-terminal à sequência de aminoácidos SLSLSPG (SEQ ID NO: 186).
[0031] Em certas modalidades, a região constante de cadeia pesada compreende a sequência SPGSL(FGly’)TPSRGS (SEQ ID NO: 184).
[0032] Em certas modalidades, Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são selecionados independentemente a partir de S, T, A, V, G, e C.
[0033] Em certas modalidades, o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região constante de cadeia leve do anticorpo anti-CD22.
[0034] Em certas modalidades, a região constante de cadeia leve compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizador por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou de alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), com a condição que quando a sequência estiver na N-terminal do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e onde a sequência é C-terminal à sequência KVDNAL (SEQ ID NO: 58), e/ou é N- terminal à sequência QSGNSQ (SEQ ID NO: 59).
[0035] Em certas modalidades, a região constante de cadeia leve compreende a sequência KVDNAL(FGly’)TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 60).
[0036] Em certas modalidades, Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são, independentemente, selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
[0037] Em certas modalidades, o resíduo de aminoácidos é posicionado em uma região de cadeia pesada CH1 do anticorpo anti-CD22.
[0038] Em certas modalidades, a região de cadeia pesada CH1 compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190):
X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizador por FGly’ ser o resíduo modificado de aminoácidos da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), com a condição de que quando a sequência estiver na N-terminal do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e onde a sequência é C-terminal à sequência de aminoácidos SWNSGA (SEQ ID NO: 61) e/ou é N-terminal à sequência de aminoácidos GVHTFP (SEQ ID NO: 62).
[0039] Em certas modalidades, a região de cadeia pesada CH1 compreende a sequência SWNSGAL(FGly’)TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 63).
[0040] Em certas modalidades, Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
[0041] Em certas modalidades, o resíduo de aminoácidos modificados é posicionado em uma região de cadeia pesada CH2 do anticorpo anti-CD22.
[0042] Em certas modalidades, o resíduo de aminoácidos modificados é posicionado em uma região de cadeia pesada CH3 do anticorpo anti-CD22.
[0043] Em algumas modalidades, o conjugado anticorpo-fármaco da presente divulgação é dosado em 1 mg/kg. Em certas modalidades, o conjugado anticorpo-fármaco é dosado em 1 mg/kg em uma programação semanal. Em algumas modalidades, o conjugado anticorpo-fármaco da presente divulgação é administrado em uma dosagem de 3 mg/kg. Em algumas modalidades, o conjugado anticorpo-fármaco é administrado em uma dosagem de 3 mg/kg de forma semanal. Em algumas modalidades, o conjugado anticorpo-fármaco da presente divulgação é administrado em uma dosagem de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o conjugado anticorpo-fármaco é administrado em uma dosagem de 10 mg/kg de forma semanal.
[0044] Em algumas modalidades, um ou mais dos agentes anticancerígenos são selecionados a partir de abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat, bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
[0045] Em algumas modalidades, um ou mais dos agentes anticancerígenos é selecionado a partir de um inibidor da tirosina quinase de Bruton, um conjugado anticorpo-fármaco anti- CD30, um inibidor PI3K, um agente alicante de DNA, um inibidor de síntese de DNA, um inibidor de histona desacetilase, um anticorpo anti-CD20 monoclonal, um inibidor de proteassoma, um inibidor de DNA polimerase, um Inibidor de RNA polimerase, um inibidor da interleucina-2, um corticosteroide, um inibidor de topoisomerasa II, um inibidor de reductase dihidrofolato, um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD20, um conjugado de fármaco anticorpo- radioativo anti-CD22, um inibidor P110δ, um inibidor ubiquitin E3 ligase, um inibidor de quimiocina CXCR4 receptora, um inibidor de tubulina, e um agente para terapia de transferência celular adotiva.
[0046] Em algumas modalidades, um ou mais dos agentes anticancerígenos é selecionado a partir de ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper- CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo(“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona,
sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R-EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
[0047] Em algumas modalidades, um ou mais agentes anticancerígenos compreende rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R- CHOP”)].
[0048] Em algumas modalidades, o câncer está afiliado com uma desregulação da sinalização BCR. Em algumas modalidades, o câncer está afiliado com uma desregulação da sinalização BCR, e o câncer é responsivo à depleção de células B.
[0049] Em algumas modalidades, o câncer é um linfoma. Em algumas modalidades, o câncer é um linfoma de células B. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado a partir do linfoma de Burkitt, linfoma difuso de grandes células B, linfoma de Hodgkin, e linfoma não Hodgkin. Em algumas modalidades, o câncer é um linfoma não-Hodgkin. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado a partir de um linfoma de zona marginal, linfoma de células de manto, linfoma folicular, e linfoma primário de sistema nervoso central. Em algumas modalidades, o câncer é um linfoma de células de manto. Em algumas modalidades, o câncer é um linfoma difuso de grandes células B. Em algumas modalidades, o câncer é um linfoma folicular. Em algumas modalidades, o câncer é um linfoma de zona marginal. Em algumas modalidades, o câncer é leucemia.
[0050] Em algumas modalidades, o câncer é selecionado a partir do síndrome mieloproliferativa crônica, leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica de pequenas células, leucemia de células pilosas, e leucemia linfoblástica aguda.
[0051] Em algumas modalidades, o câncer é resistente a tratamento com um ou mais dos agentes anticancerígenos selecionados a partir de abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat, bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
[0052] Em algumas modalidades, o câncer é resistente a tratamento com um ou mais dos agentes anticancerígenos selecionados a partir de: ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper-CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R- CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R- EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
[0053] Em algumas modalidades, o câncer é resistente a tratamento com rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”).
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0054] A FIG. 1, painel A, mostra uma sequência de reconhecimento de uma enzima geradora de formilglicina (FGE) inserida na localização desejada ao longo do esqueleto do anticorpo usando técnicas padrão da biologia molecular. Apôs a expressão, a FGE, que é endógena às células eucarióticas, catalisa a conversão de Cys dentro da sequência de consenso para um resíduo de formilglicina (FGly). A FIG. 1, painel B, mostra anticorpos que carregam porções de aldeído (2 por anticorpo) reagiram com um ligante Hidrazino-iso-Pictet-Spengler (HIPS) e uma carga útil para gerar um conjugado ADC específico no local. A FIG. 1, painel C, mostra a química do HIPS, a qual procede a partir de um íon intermediário de hidrazônio seguido por uma alquilação intramolecular uma indole nucleofílica para gerar uma ligação C-C estável.
[0055] A FIG. 2 mostra o traço na coluna de interação hidrofóbica (HIC) de um anticorpo anti-CD22 marcado por aldeído conjugado no C-terminal (CT) a uma carga útil de maitansina ligada a um ligante HIPS-4AP, de acordo com as modalidades da presente divulgação.
[0056] A FIG. 3 mostra shows um traço na HIC de um anticorpo anti-CD22 marcado por aldeído conjugado no C-terminal (CT) a uma carga útil de maitansina ligada a um ligante HIPS- 4AP, de acordo com as modalidades da presente divulgação.
[0057] A FIG. 4 mostra o traço na cromatografia de fase reversa (PLRP) de um anticorpo anti-CD22 marcado por aldeído conjugado no C-terminal (CT) a uma carga útil de maitansina ligada a um ligante HIPS-4AP, de acordo com as modalidades da presente divulgação.
[0058] A FIG. 5 mostra um gráfico de análise por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) de um anticorpo anti-CD22 marcado por aldeído conjugado no C-terminal a uma carga útil de maitansina ligada a um ligante HIPS-4AP, de acordo com as modalidades da presente divulgação.
[0059] A FIG. 6A mostra um gráfico que indica a potência in vitro contra células WSU- DLCL2 (% de viabilidade vs. Log da concentração (nM) do conjugado anticorpo-fármaco (ADC)) para ADCs anti-CD22 conjugados no C-terminal (CT) a uma carga útil de maitansina ligada a um ligante HIPS-4AP, de acordo com as modalidades da presente divulgação. A FIG. 6B mostra um gráfico da potência in vitro contra células de Ramos (% de viabilidade vs. Log da concentração (nM) do conjugado anticorpo-fármaco (ADC)) para ADCs anti-CD22 conjugados no C-terminal (CT) a uma carga útil de maitansina ligada a um ligante HIPS-4AP, de acordo com as modalidades da presente divulgação.
[0060] A FIG. 7 mostra um gráfico indicando a eficácia in vivo contra um modelo de xenoenxerto WSU-DLCL2 (volume médio do tumor (mm3) vs. dias) para ADCs anti-CD22 conjugados no C-terminal (CT) a uma carga útil de maitansina ligada a um ligante HIPS-4AP, de acordo com as modalidades da presente divulgação.
[0061] A FIG. 8A-8C fornece sequências de aminoácidos de isoformas CD22, i.e., isoforma2 (SEQ ID NO: 1), isoforma4 (SEQ ID NO: 2), isoforma1 (SEQ ID NO: 3), e isoforma3 (SEQ ID NO: 4).
[0062] A FIG. 9A descreve um mapa do local mostrando possíveis locais de modificação para a geração de um polipeptídeo Ig marcado por aldeído. A sequência de cima é a sequência de aminoácidos da região conservada de um polipeptídeo IgG1 de cadeia leve (SEQ ID NO: 5) e mostra possíveis locais de modificação em uma cadeia leve Ig; a sequência de baixo é a sequência de aminoácidos da região conservada de um polipeptídeo Id de cadeia pesada (SEQ ID NO: 6); GenBank Accession No. AAG00909) e mostra possíveis locais de modificação em um cadeia pesada Ig. A numeração das cadeias leves e pesadas está baseada nas cadeias leves e pesadas de tamanho completo.
[0063] A FIG. 9B descreve um alinhamento de regiões constantes de cadeias pesadas de imunoglobulina para IgG1 (SEQ ID NO: 7), IgG2 (SEQ ID NO: 8), IgG3 (SEQ ID NO: 9), IgG4 (SEQ ID NO: 10), e IgA (SEQ ID NO: 11), mostrando locais de modificação nos quais os rótulos de aldeídos podem ser fornecidos em uma cadeia pesada de imunoglobulina. A numeração das cadeias leves e pesadas está baseada nas cadeias leves e pesadas completas.
[0064] FIG. 9C descreve um alinhamento das regiões constantes da cadeia leve da imunoglobulina, i.e., homo sapiens kappa (SEQ ID NO: 12), No. de acesso GenBank CAA75031.1; homo sapiens kappa (SEQ ID NO: 13), No. de acesso GenBank BAC0168.1; homo sapiens lambda (SEQ ID NO: 14), No. de acesso GenBank CAA75033; Mus musculus (SEQ ID NO: 15), No. de acesso GenBank AAB09710.1; Rattus norvegicus (SEQ ID NO: 16), No. de acesso GenBank AAD10133, mostrando locais de modificação nos quais os marcadores de aldeído podem ser fornecidos em uma cadeia leve de imunoglobulina.
[0065] FIG. 10 mostra ilustrações de formatos ELISA para a detecção de vários analitos, de acordo com modalidades da presente divulgação.
[0066] FIG. 11 – um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, era altamente monomérico, apresentando um DAR médio de 1,8 e incluía uma única espécie de cadeia leve e pesada. O ADC anti-CD22 foi analisado por (FIG. 11, painel A) cromatografia de exclusão por tamanho para avaliar a porcentagem de monômero (99,2%) e por interação hidrofóbica (HIC; FIG. 11, painel B) e cromatografia de fase reversa (PLRP) (FIG. 11, painel C) para avaliar a proporção de fármaco/anticorpo (DAR), que foi de 1,8.
[0067] FIG. 12 – um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, ligado à proteína CD22 humana, bem como o anticorpo anti-CD22 do tipo selvagem. Um ELISA competitivo foi usado para comparar a ligação do ADC anti-CD22 ao anticorpo do tipo selvagem (WT) anti-CD22. Os dados são apresentados como a média ± S.D. (n = 4).
[0068] FIG. 13 – um ADC anti-CD22 de acordo com a presente divulgação mediou a internalização de CD22 de maneira semelhante ao anticorpo anti-CD22 de tipo selvagem. As linhas de células NHL, Ramos, Granta-519 e WSU-DLCL2 foram usadas para comparar a internalização da superfície celular CD22 como mediada pela ligação WT anti-CD22 ou CAT- 02-106.
[0069] FIG. 14 – um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, foi igualmente potente contra células tumorais parentais e células tumorais NHL expressivas de MDR1 in vitro. Ramos e WSU-DLCL2 células parentais (WT) (FIG. 14, painel A e painel C) e variantes daquelas linhas que foram projetadas para expressar MDR1 (MDR1 +, FIG. 14, painel B e painel D) foram usadas como alvos para estudos de citotoxicidade in vitro da atividade de ADC anti-CD22. A maitansina livre e um αCD22 ADC feitos com o anticorpo CAT-02, mas conjugados à maitansina usando um ligante clivável de valina-citrulina foram usados como controle. Em uma experiência de controle adicional, o inibidor de MDR1, ciclosporina, foi adicionado às células WT ou MDR1 + WSU-DLCL2 (FIG. 14, painel E e painel F). Os dados são apresentados como a média ± S.D. (n = 2).
[0070] FIG. 15 – um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, não mediou a citotoxicidade fora do alvo. A linha de células tumorais gástricas, NCI-N87, foi incubada in vitro por 5 dias na presença de concentrações crescentes do ADC anti-CD22. Em seguida, a viabilidade celular foi avaliada usando um método baseado em MTS. Os dados são apresentados como a média ± S.D. (n =2).
[0071] FIG. 16 – O ADC relacionado ao ADC anti-CD22, anti-HER2 conjugado com uma carga útil do ligante HIPS-4AP-maitansina, não induziu a morte de espectadores. Estudos de citotoxicidade in vitro foram conduzidos usando células HER2 + NCI-N87, células HER2- Ramos ou uma cocultura de ambas as células como alvos. A maitansina livre (2 nM) e o anti- HER2 conjugado ao MMAE por meio de um ligante clivável de valina-citrulina (vc) (carga útil de 2 nM) foram utilizados como controles positivos para a morte de espectadores. O ADC anti- HER2 foi dosado com 2 nM de carga útil. Os dados são apresentados como a média ± S.D. (n =2).
[0072] FIG. 17 – Um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, foi eficaz in vivo contra os modelos de derivados de NHL WSU-DLCL2 e xenoenxerto de Ramos. Ratos fêmeas CB17 ICR SCID (8/grupo) com xenoenxerto WSU-DLCL2 foram tratados só com veículo ou com ADC anti-CD22 em uma dose única de 10 mg/kg (FIG. 17, painel A), ou doses múltiplas de 10 mg/kg (FIG. 17, painel B), administradas a cada quatro dias, para um total de quatro doses (q4d x 4). O tratamento foi iniciado quando os tumores atingiram um tamanho médio de 118 ou 262 mm3 para os estudos com doses únicas ou estudos com multidoses, respectivamente. (FIG. 17, painel C) Ratos fêmeas CB17 ICR SCID (12/grupo) com xenoenxerto de Ramos foram tratados só com o veículo ou com 5 ou 10 mg/kg CAT-02-106 q4d x 4. A dosagem foi iniciada quando os tumores atingiram um tamanho médio de 246 mm3. Os dados são apresentados como a média ± S.E.M.
[0073] FIG. 18 – Ramos e células WSU-DLCL2 expressaram diferentes níveis de superfície celular CD22. Ramos e células WSU-DLCL2 foram incubadas com um anticorpo anti- CD22, marcados com fluoresceína e depois analisadas por citometria de fluxo. A intensidade média de fluorescência do canal FL1 (detecção de fluoresceína) para cada tipo de célula é mostrado no gráfico.
[0074] FIG. 19 - Os pesos corporais do rato não foram afetados pelo tratamento com um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação. Os pesos corporais médios dos ratos nos estudos de eficácia do xenoenxerto são mostrados. (FIG. 19, painel A) Estudo com doses únicas WSU-DLCL2; (FIG. 19, painel B) Estudo com multidoses WSU-DLCL2; (FIG. 19, painel C) Estudo de Ramos. As barras de erro indicam S.D.
[0075] FIG. 20 – um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, pode ser dosado em ratos até 60 mg/kg com efeitos mínimos. Ratos Sprague-Dawley (5/grupos) receberam uma dose de 6, 20, 40, ou 60 mg/kg de CAT-02-106 seguida por um período de observação de 12 dias. (FIG. 20, painel A) O peso corporal foi monitorado nos horários indicados. (FIG. 20, painel B) Alanina aminotransferase (ALT), e (FIG. 20, painel C) as contagens de plaquetas foram avaliadas 5 e 12 dias após as doses. Os dados são apresentados como a média ± S.D.
[0076] FIG. 21 – um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, ligada especificamente a células B de macaco cynomolgus. Os linfócitos de sangue periférico dos Cynomolgus foram bloqueados de acordo com seus perfis de dispersão frontal e lateral (parte superior esquerda). As células foram incubadas com isotiocianato de fluoresceína estreptavidina (FITC) conjugado (SA) isoladamente (parte superior direita) ou com ADC anti-CD22 biotinilado seguido por FITC SA. A co-incubação com célula T (CD3, inferior esquerda) ou células B (CD20, inferior direita) demonstrou a especificidade do CAT-02-106 ligado a uma população de células B.
[0077] FIG. 22 – um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, demonstrou reatividade específica de células B em tecidos humanos e de macacos cynomolgus. O ADC anti- CD22 ligado a regiões ricas em células B do baço (acima). Os tecidos cardíacos foram negativos para a coloração (média). As seções pulmonares foram negativas, com exceção dos leucócitos dispersos (abaixo).
[0078] FIG. 23 – Macacos cynomolgus não exibem efeitos adversos observados com uma dose repetida de 60 mg/kg de um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação. Macacos cynomolgus (2/sexo/grupo) receberam 10, 30 ou 60 mg/kg de ADC anti-CD22 uma vez a cada três semanas, para um total de duas doses seguidas por um período de observação de 21 dias. (FIG. 23, painel A) Aspartato transaminase (AST), (FIG. 23, painel B) alanina aminotransferase (ALT), (FIG. 23, painel C) plaquetas e (FIG. 23, painel D) monócitos foram monitorados nos tempos indicados. Os dados são apresentados como a média ± S.D.
[0079] FIG. 24 (painel A e painel B) – O tratamento com um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, reduziu as populações de células B periféricas em macacos cynomolgus. As células mononucleares de sangue periférico de macacos cynomolgus incluídos no estudo de toxicidade foram monitoradas por citometria de fluxo para detectar a proporção de células B (CD20 +), células T (CD3 +) e células NK (CD20-/CD3-) observados em animais pré- dose e nos dias 7, 14, 28 e 35. Os dados são apresentados como a média ± S.D.
[0080] FIG. 25 – um ADC anti-CD22, de acordo com a presente divulgação, exibiu uma estabilidade in vivo muito alta, como mostrado por um estudo farmacocinético em ratos. Ratos Sprague-Dawley (3/grupo) receberam uma única dose de 3 mg/kg de ADC anti-CD22 por via intravenosa. As amostras de plasma foram coletadas nos horários designados e analisadas (como mostrado na FIG. 10) para anticorpo total, conjugado total e concentrações totais de ADC.
[0081] FIG. 26 mostra a tabela 3: Resumo dos parâmetros médios (± SD) farmacocinéticos e toxicocinéticos (TK) dos valores totais de ADC em animais dosados com um ADC anti-CD22, de acordo com modalidades da presente divulgação.
[0082] FIG. 27 é um gráfico que representa a regressão tumoral em um modelo de xenoenxerto Granta-519. O gráfico compara os regimes de dosagem de um ADC anti-CD22 da presente invenção e compara o tratamento ADC anti-CD22 ao tratamento com rituximabe.
[0083] FIG. 28 é um gráfico que mostra a regressão tumoral em um modelo de xenoenxerto. O gráfico compara tratamentos com rituximabe, um ADC anti-CD22 da presente invenção, R-CHOP e tratamento com R-CHOP seguido de tratamento com ADC anti-CD22.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0084] A presente divulgação fornece métodos de tratamento de câncer, como câncer resistente, usando um conjugado anticorpo anti-CD22-maitansina, por exemplo, em combinação com um ou mais agentes anticancerígenos. Modalidades de cada uma são descritas em mais detalhes nas seções abaixo.
DEFINIÇÕES
[0085] Os termos seguintes têm os seguintes significados, salvo indicação em contrário. Qualquer termo indefinido tem um significado reconhecido.
[0086] “Alquila” refere-se a grupos monovalentes saturados de hidrocarbila alifáticos possuindo de 1 a 10 átomos de carbono e 1 a 6 átomos de carbono, ou 1 a 5, ou 1 a 4, ou 1 a 3 átomos de carbono. Este termo inclui, a título de exemplo, grupos hidrocarbila lineares e ramificados, como metila (CH3-), etila (CH3CH2-), n-propila (CH3CH2CH2-), isopropila ((CH3)2CH-), n-butila (CH3CH2CH2CH2-), isobutila ((CH3)2CHCH2-), sec-butila ((CH3)(CH3CH2)CH-), t-butila ((CH3)3C-), n-pentila (CH3CH2CH2CH2CH2-), e neopentila ((CH3)3CCH2-).
[0087] O termo “alquila substituída” refere-se a um grupo alquila como aqui definido, em que um ou mais átomos de carbono na cadeia alquila (exceto o átomo de carbono C1) foram opcionalmente substituídos por um heteroátomo como -O-, -N-, -S-, -S(O)n- (onde n é 0 a 2), - NR- (onde R é um hidrogênio ou alquila) e que tem 1 a 5 substitutos selecionados do grupo constituído por alcoxi, alcoxi substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, acila, acilamina, aciloxi, amina, aminoacila, aminoaciloxi, oxiaminoacila, azida, ciano, halogênio, hidroxila, oxo, tioceto, carboxila, carboxialquila, tioariloxi, tioheteroariloxi, tioheterociclooxi, tiol, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, ariloxi, heteroarila, heteroariloxi, heterociclila, heterociclooxi, hidroxiamina, alcoxiamina, nitro, -SO- alquila, -SO-arila, -SO-heteroarila, -SO2-alkyl, -SO2-aryl, -SO2-heteroarila, e -NRaRb, caracterizados porque R’ e R” podem ser iguais ou diferentes e são escolhidos a partir do hidrogénio, opcionalmente substituídos por alquila, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heteroarila e heterociclila.
[0088] “Alquilena” refere-se a grupos divalentes de hidrocarbila alifáticos tendo de preferência de 1 a 6, e mais preferencialmente 1 a 3 átomos de carbono, com cadeia linear ou ramificada e que são opcionalmente interrompidos com um ou mais grupos selecionados de -O-,
-NR10-, -NR10C(O)-, -C(O)NR10- e afins. Este termo inclui, a título de exemplo, metileno (- CH2-), etileno (-CH2CH2-), n-propileno (-CH2CH2CH2-), iso-propileno (-CH2CH(CH3)-), (- C(CH3)2CH2CH2-), (-C(CH3)2CH2C(O)-), (-C(CH3)2CH2C(O)NH-), (-CH(CH3)CH2-) e afins.
[0089] “Alquilena substituída” refere-se a um grupo alquilena com 1 a 3 hidrogênios substituído por substituintes como descrito para carbonos na definição de "substituído" abaixo.
[0090] O termo “alcano” refere-se ao grupo alquila e ao grupo alquilena, tal como definido no presente documento.
[0091] O termo “alquilaminoalquila”, “alquilaminoalquenila” e “alquilaminoalquinila” refere-se ao grupo R’NHR”- onde R’ é o grupo alquila conforme aqui definido e R” é o grupo alquilena, alquenilena ou alquinilena conforme aqui definido.
[0092] O termo “alcarila” ou “aralquila” refere-se ao grupo -alquilena-arila e -alquilena substituída-arila onde alquilena, alquilena substituída e arila são aqui definidos.
[0093] “Alcoxi” refere-se ao grupo –O-alquila, em que alquila é aqui definido. Alcoxi inclui, a título de exemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, t-butoxi, sec-butoxi, n- pentoxi e afins. O termo “alcoxi” também se refere aos grupos alquenil-O-, cicloalquil-O-, cicloalquenil-O-, e alquinil-O-, onde alquenila, cicloalquila, cicloalquenila, e alquinila são aqui definidos.
[0094] O termo “alcoxi substituída” refere-se aos grupos substituídos alquil-O-, substituídos alquenil-O-, substituídos cicloalquil-O, substituídos cicloalquenil-O-, e substituídos alquinil-O- onde alquila substituída, alquenila substituída, cicloalquila substituída, cicloalquenila substituída e alquinila substituída são aqui definidos.
[0095] O termo “alcoxiamina” refere-se ao grupo –NH-alcoxi, em que alcoxi é definido aqui.
[0096] O termo “haloalcoxi” refere-se aos grupos alquil-O- em que um ou mais átomos de hidrogênio no grupo alquila foram substituídos por um grupo halo e incluem, a título de exemplo, grupos como trifluorometoxi e similares.
[0097] O termo “haloalquila” refere-se a um grupo alquil substituído como descrito acima, em que um ou mais átomos de hidrogênio no grupo alquila foram substituídos por um grupo halo. Exemplos de tais grupos incluem, sem limitação, grupos fluoroalquila, como trifluorometila, difluorometila, trifluoroetila e similares.
[0098] O termo “alquilalcoxi” refere-se ao grupo -alquilena-O-alquil, alquilena-O-alquila substituída, alquilena substituída-O-alquil, e alquilena substituída-O-alquila substituída em que alquila, alquila substituída, alquilena e alquilena substituída como são aqui definidos.
[0099] O termo “alquiltioalcoxi” refere-se ao grupo -alquilena-S-alquil, alquilena-S-alquila substituída, alquilena substituída-S-alquil e alquilena substituída-S-alquila substituída em que alquila, alquila substituída, alquilena e alquilena substituída como aqui definido.
[00100] “Alquenila” refere-se a grupos hidrocarbila de cadeia linear ou ramificada com 2 a 6 átomos de carbono, e de preferência 2 a 4 átomos de carbono e possuindo pelo menos 1 e de preferência de 1 a 2 locais de insaturação de ligação dupla. Este termo inclui, a título de exemplo, bi-vinil, allil, e but-3-en-1-il. Incluídos neste termo estão os isômeros cis e trans ou misturas desses isômeros.
[00101] O termo “alquenila substituída” refere-se a um grupo alquenila como aqui definido, tendo desde 1 a 5 substituintes, ou de 1 a 3 substituintes, selecionado de alcoxi, alcoxi substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, acila, acil amina, aciloxi, amina, amina substituída, amino acila, aminoaciloxi, oxiaminoacila, azida, ciano, halogênio, hidroxila, oxo, tioceto, carboxila, carboxilalquila, tioariloxi, tioheteroariloxi, tioheterociclooxi, tiol, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, ariloxi, heteroarila, heteroariloxi, heterociclila, heterociclooxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquila, -SO-alquila substituída, -SO-arila, -SO-heteroarila, -SO2-alquila, -SO2-alquila substituída, -SO2-arila e -SO2- heteroarila.
[00102] “Alquinila” refere-se a grupos monovalentes de hidrocarbila lineares ou ramificados com 2 a 6 átomos de carbono, e de preferência 2 a 3 átomos de carbono e com pelo menos 1 e de preferência de 1 a 2 locais de insaturação de ligação tripla. Exemplos de tais grupos alquinila incluem acetilenila (-C≡CH), e propargila (-CH2C≡CH).
[00103] O termo “alquinila substituída” refere-se a um grupo alquinila como aqui definido tendo de 1 a 5 substituintes, ou de 1 a 3 substituintes, selecionado de alcoxi, alcoxi substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, acila, acil amina, aciloxi, amina, amina substituída, amino acila, aminoaciloxi, oxiaminoacila, azida, ciano, halogênio, hidroxila, oxo, tioceto, carboxila, carboxilalquila, tioariloxi, tioheteroariloxi, tioheterociclooxi, tiol, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, ariloxi, heteroarila, heteroariloxi, heterociclila, heterociclooxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquila, -SO-alquila substituída, -SO-arila, -SO-heteroarila, -SO2-alquila, -SO2-alquila substituída, -SO2-arila,e -SO2- heteroarila.
[00104] “Alquiniloxi” refere-se ao grupo –O-alquinila, em que alquinila como aqui definido. Alquiniloxi inclui, a título de exemplo, etiniloxi, propiniloxi e afins.
[00105] “Acila” refere-se aos grupos H-C(O)-, alquil-C(O)-, alquila substituída-C(O)-, alquenil-C(O)-, alquenila substituída-C(O)-, alquinil-C(O)-, alquinila substituída-C(O)-, cicloalquil-C(O)-, cicloalquila substituída-C(O)-, cicloalquenil-C(O)-, cicloalquenil substituída- C(O)-, aril-C(O)-, arila substituída-C(O)-, heteroaril-C(O)-, substituído heteroaril-C(O)-, heterociclil-C(O)-, e substituído heterociclil-C(O)-, onde alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloaquenila, cicloalquenila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída como aqui são definidos. Por exemplo, acila inclui o grupo “acetil” CH3C(O)-
[00106] “Acil amina” refere-se aos grupos –NR20C(O)alquila, -NR20C(O)-alquila substituída, N R20C(O)cicloalquila, -NR20C(O)cicloalquila substituída, -NR20C(O)cicloalquenila, - NR20C(O)cicloalquenila substituída, -NR20C(O)alquenila, -NR20C(O)alquenila substituída, - NR20C(O)alquinil, -NR20C(O)alquinila substituída, -NR20C(O)arila, -NR20C(O)arila substituída, -NR20C(O)heteroarila, -NR20C(O)heteroarila substituída, -NR20C(O)heterociclila, e - NR20C(O)heterociclila substituída, onde R20 é hidrogênio ou alquila e onde alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída como são definidos aqui.
[00107] “Aminocarbonila” ou o termo “aminoacila” refere-se ao grupo -C(O)NR21R22, em que R21 e R22 independentemente são selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída e onde R21 e R22 são opcionalmente unidos ao nitrogênio a ele ligado para formar um heterociclila ou um grupo heterociclila substituída, e em que alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila,
cicloalquenila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída como são definidos aqui
[00108] “Aminocarbonilamina” refere-se ao grupo –NR21C(O)NR22R23 onde R21, R22, e R23 são selecionados independentemente de hidrogênio, alquila, arila ou cicloalquila, ou onde dois grupos R são unidos para formar um grupo heterociclila.
[00109] O termo “alcoxicarbonilamina” refere-se ao grupo -NRC(O)OR onde cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, arila, heteroarila, ou heterociclila em que alquila, alquila substituída, arila, heteroarila, e heterociclila como são definidos aqui.
[00110] O termo “aciloxi” refere-se aos grupos alquil-C(O)O-, alquila substituída-C(O)O-, cicloalquil-C(O)O-, cicloalquila substituída-C(O)O-, aril-C(O)O-, heteroaril-C(O)O-, e heterociclil-C(O)O-em que alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, heteroarila, e heterociclila como são definidos aqui.
[00111] “Aminosulfonila” refere-se ao grupo –SO2NR21R22, em que R21 e R22 independentemente são selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, heterociclila substituída e onde R21 e R22 são opcionalmente unidos ao nitrogênio a ele ligado para formar um heterociclila ou grupo heterociclila substituída e alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila e heterociclila substituída como são definidos aqui.
[00112] “Sulfonilamina” refere-se ao grupo –NR21SO2R22, em que R21 e R22 independentemente são selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída e onde R21 e R22 são opcionalmente unidos aos átomos a eles ligados para formar um grupo heterociclila ou grupo heterociclila substituída, em que alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila,
cicloalquenila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída como são definidos aqui.
[00113] “Arila” ou “Ar” refere-se a um grupo carbocíclico aromático monovalente de 6 a 18 átomos de carbono com um único anel (como está presente em um grupo fenila) ou um sistema de anéis com vários anéis condensados (exemplos de tais sistemas de anéis aromáticos incluem naftila antrila e indanila) quais anéis condensados podem ou não ser aromáticos, desde que o ponto de ligação seja através de um átomo de um anel aromático. Este termo inclui, a título de exemplo, fenila e naftila. Salvo disposição em contrário da definição para o substituinte arila, esses grupos arila podem opcionalmente ser substituídos por 1 a 5 substituintes ou 1 a 3 substituintes, selecionados a partir de aciloxi, hidroxi, tiol, acila, alquila, alcoxi, alquenila, alquinila, cicloalquila, cicloalquenila, alquila substituída, alcoxi substituída, alquenila substituída, alquinila substituída, cicloalquila substituída, cicloalquenila substituída, amina, amina substituída, amino acila, acil amino, alcarila, arila, ariloxi, azida, carboxila, carboxilalquila, ciano, halogênio, nitro, heteroarila, heteroariloxi, heterociclila, heterociclooxi, aminoaciloxi, oxiacilamino, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, tioariloxi, tioheteroariloxi, -SO- alquila, -SO-alquila substituída, -SO-arila, -SO-heteroarila, -SO2-alquila, -SO2-alquila substituída, -SO2-arila, -SO2-heteroarila e trihalometila.
[00114] “Ariloxi” refere-se ao grupo –O-arila, em que arila é como definida neste texto, incluindo, a título de exemplo, phenoxi, naphthoxi e afins, incluindo opcionalmente o grupo arila substituída como são definidas neste texto.
[00115] “Amina” refere-se ao grupo –NH2.
[00116] O termo “amina substituída” refere-se ao grupo -NRR onde cada R é selecionado independentemente a partir do grupo que consiste de hidrogênio, alquila, alquila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, alquenila, alquenila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, heteroarila, e heterociclila dado que pelo menos um R não seja hidrogênio.
[00117] O termo “azida” refere-se ao grupo –N3.
[00118] “Carboxila,” “carboxi” ou “carboxilato” refere-se a –CO2H ou sais do mesmo.
[00119] “Éster de carboxila” ou “carboxi éster” ou os termos “carboxialquila” ou “carboxilalquila” refere-se aos grupos -C(O)O-alquila, -C(O)O-alquila substituída, -C(O)O- alquenila, -C(O)O-alquenila substituída, -C(O)O-alquinila, -C(O)O-alquinila substituída, -
C(O)O-arila, -C(O)O-arila substituída, -C(O)O-cicloalquila, -C(O)O-cicloalquila substituída, - C(O)O-cicloalquenila, -C(O)O-cicloalquenila substituída, -C(O)O-heteroarila, -C(O)O- heteroarila substituída, -C(O)O-heterociclila, e -C(O)O-heterociclila substituída, onde alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída são como definidas neste texto.
[00120] “(Éster de carboxila)oxi” ou carbonato refere-se aos grupos –O-C(O)O-alquila, -O- C(O)O-alquila substituída, -O-C(O)O-alquenila, -O-C(O)O-alquenila substituída, -O-C(O)O- alquinila, -O-C(O)O-alquinila substituída, -O-C(O)O-arila, -O-C(O)O-arila substituída, -O- C(O)O-cicloalquila, -O-C(O)O-cicloalquila substituída, -O-C(O)O-cicloalquenila, -O-C(O)O- cicloalquenil substituída, -O-C(O)O-heteroaril, -O-C(O)O-substituído heteroaril, -O-C(O)O- heterociclila, e -O-C(O)O-heterociclila substituída, em que alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída são como definidas neste texto.
[00121] “Ciano” ou “nitrilo” refere-se ao grupo –CN.
[00122] “Cicloalquila” refere-se aos grupos cíclicos alquila de 3 até 10 átomos de carbono com anéis cíclicos simples ou múltiplos incluindo sistemas de anéis fundidos, em ponte e espirais. Exemplos de grupos de cicloalquila apropriados incluem, por exemplo, adamantila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclooctila e afins. Tais grupos de cicloalquila incluem, a título de exemplo, estruturas de anel simples tais como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclooctila e afins, ou estruturas de anéis múltiplas tais como adamantanila e afins.
[00123] O termo “cicloalquila substituída” refere-se a grupos de cicloalquila tendo de 1 até 5 substituintes, ou de 1 até 3 substituintes, selecionado a partir de alquila, alquila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, acila, acilamina, aciloxi, amina, amina substituída, aminoacila, aminoaciloxi, oxiaminoacila, azida, ciano, halogênio, hidroxila, oxo, tioceto, carboxila, carboxilalquila, tioariloxi, tioheteroariloxi, tioheterociclooxi, tiol, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, ariloxi, heteroarila, heteroariloxi, heterociclila, heterociclooxi, hidroxiamina, alcoxiamina, nitro, -SO-
alquila, -SO-alquila substituída, -SO-arila, -SO-heteroarila, -SO2-alquila, -SO2-alquila substituída, -SO2-arila e -SO2-heteroarila.
[00124] “Cicloalquenila” refere-se a grupos de alquila cíclicos não-aromáticos de 3 até 10 átomos de carbono tendo anéis simples ou múltiplos tendo pelo menos uma ligação dupla e, preferentemente, de 1 até 2 ligações duplas.
[00125] O termo “cicloalquenila substituída” refere-se a um grupo de cicloalquenila tendo de 1 até 5 substituintes, ou de 1 até 3 substituintes, selecionados a partir de alcoxi, alcoxi substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, acila, acilamina, aciloxi, amina, amina substituída, aminoacila, aminoaciloxi, oxiaminoacila, azida, ciano, halogênio, hidroxila, ceto, tioceto, carboxila, carboxilalquila, tioariloxi, tioheteroariloxi, tioheterociclooxi, tiol, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, ariloxi, heteroarila, heteroariloxi, heterociclila, heterociclooxi, hidroxiamina, alcoxiamina, nitro, -SO-alquila, -SO-alquila substituída, -SO-arila, -SO-heteroarila, -SO2-alquila, -SO2-alquila substituída, -SO2-arila e -SO2- heteroarila.
[00126] “Cicloalquinila” refere-se a grupos de cicloalquila não-aromáticos de 5 até 10 átomos de carbono tendo anéis simples ou múltiplos e tendo pelo menos uma ligação tripla.
[00127] “Cicloalcoxi” refere-se ao –O-cicloalquila.
[00128] “Cicloalqueniloxi” refere-se ao –O-cicloalquenila.
[00129] “Halo” ou “halogênio” refere-se a fluoro, cloro, bromo e iodo.
[00130] “Hidroxi” ou “hidroxila” refere-se ao grupo –OH.
[00131] “Heteroarila” refere-se a um grupo aromático de 1 até 15 átomos de carbono, tais como de 1 até 10 átomos de carbono e de 1 até 10 heteroátomos selecionados a partir de grupo que consiste de oxigênio, nitrogênio, e enxofre ao longo do anel. Tais grupos heteroarila podem ter um só um anel (tais como, piridinil, imidazolil ou furil) ou anéis condensados múltiplos em um sistema de anéis (por exemplo como em grupos tais como, indolizinil, quinolinil, benzofuran, benzimidazolil ou benzotienil), onde pelo menos um anel ao longo do sistema de anéis é aromático. Para satisfazer os requerimentos de valência, quaisquer heteroátomos nos anéis de heteroaril podem ou não estar ligados ao H ou a um grupo substituinte, e.g., um grupo de alquila ou outro substituinte como descrito neste texto. Em certas modalidades, o(s) átomo(s) de anel de nitrogênio ou de enxofre do grupo de heteroaril são opcionalmente oxidados para fornecer as porções N-óxido (N→O), sulfinil, ou sulfonil. Este termo inclui, a título de exemplo, piridinil,
pirrolil, indolil, tiofenil, e furanil. Salvo disposição em contrário pela definição para o substituinte heteroaril, tais grupos de heteroarila podem ser opcionalmente substituídos com de 1 até 5 substituintes, ou de 1 até 3 substituintes, selecionados a partir de aciloxi, hydroxi, tiol, acila, alquila, alcoxi, alquenila, alquinila, cicloalquila, cicloalquenila, alquila substituída, alcoxi substituída, alquenila substituída, alquinila substituída, cicloalquila substituída, cicloalquenila substituída, amina, amina substituída, amino acila, acil amina, alcarila, arila, ariloxi, azida, carboxila, carboxilalquila, ciano, halogênio, nitro, heteroarila, heteroariloxi, heterociclila, heterociclooxi, aminoaciloxi, oxiacilamino, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, tioariloxi, tioheteroariloxi, -SO-alquila, -SO-alquila substituída, -SO-arila, -SO-heteroarila, -SO2-alquila, - SO2-alquila substituída, -SO2-arila e -SO2-heteroarila, e trihalometila.
[00132] O termo “heteroaralquila” refere-se aos grupos -alquilena-heteroarila onde alquilena e heteroarila são definidos neste texto. Este termo inclui, a título de exemplo, piridilmetila, piridiletila, indolilmetila e afins.
[00133] “Heteroariloxi” refere-se ao –O-heteroarila.
[00134] “Heterociclo,” “heterociclila,” “heterocicloalquila,” e “heterociclila” refere-se ao grupo saturado ou não-saturado tendo um só anel ou múltiplos anéis condensados, incluindo sistemas de anéis fundidos, em ponte e em espiral, e tendo de 3 até 20 átomos de anel, incluindo de 1 até 10 átomos hetero. Esses átomos de anel são selecionados a partir do nitrogênio, enxofre, ou oxigênio, onde, em sistemas de anéis fundidos, um ou mais dos anéis podem ser cicloalquila, arila, ou heteroarila, desde que o ponto de ligação seja através do anel não-aromático. Em certas modalidades, o(s) átomos de nitrogênio e/ou de enxofre do grupo heterociclila são opcionalmente oxidados para fornecer as porções de N-óxido, -S(O)-, ou –SO2-. Para satisfazer os requerimentos de valência, quaisquer heteroátomos em tais grupos heterociclilas podem ou não estar ligados a um ou mais H ou um ou mais grupo(s) substituinte(s), e.g., um grupo alquila ou outro substituinte como descrito neste texto.
[00135] Exemplos de heterociclos e heteroarilas incluem, mas não são limitados a, azetidina, pirrol, imidazol, pirazol, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, indolizina, isoindol, indol, di- hidroindol, indazol, purina, quinolizina, isoquinolina, quinolina, ftalazina, naftilpiridina, quinoxalina, quinazolina, cinolina, pteridina, carbazol, carbolina, carbolina, fenantridina, acridina, fenantrolina, isotiazol, fenazina, isoxazol, fenoxazina, fenotiazina, imidazidina, imidazidina, imidazidina, imidazidina, imidazidina, piperazina, indolina, ftalimida, 1,2,3,4-tetra-
hidroisoquinolina, 4,5,6,7-tetra-hidrobenzo[b]tiofeno, tiazol, tiazolidina, tiofeno, benzo[b]tiofeno, morfolinil, tiomorfolinila (também referido como tiamorfolinila), 1,1- dioxotiomorfolinil, piperidinila, pirrolidina, tetra-hidrofuranila,e afins.
[00136] Salvo imposto de outra forma pela definição do para o substituinte heterociclila, tais grupos heterociclilas podem, opcionalmente, ser substituídos com de 1 até 5, ou de 1 até 3 substituintes, selecionados a partir de alcoxi, alcoxi substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, acila, acil amino, aciloxi, amina, amina substituída, amino acila, aminoaciloxi, oxiaminoacila, azida, ciano, halogênio, hidroxila, oxo, tioceto, carboxila, carboxilalquila, tioariloxi, tioheteroariloxi, tioheterociclooxi, tiol, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, ariloxi, heteroarila, heteroariloxi, heterociclila, heterociclooxi, hidroxiamino, alcoxiamino, nitro, -SO-alquila, -SO-alquila substituída, -SO-arila, -SO- heteroarila, -SO2-alquila, -SO2-alquila substituída, -SO2-aryl, -SO2-heteroarila, e heterociclo unido.
[00137] “Heterocicliloxi” refere-se ao grupo –O-heterociclila.
[00138] O termo “heterocicliltio” refere-se ao grupo heterociclila-S-.
[00139] O termo “heterocicleno” refere-se ao grupo diradical formado a partir de um heterociclo, como definido neste texto.
[00140] O termo “hidroxiamino” refere-se ao grupo -NHOH.
[00141] “Nitro” refere-se ao grupo –NO2.
[00142] “Oxo” refere-se ao átomo (=O).
[00143] “Sulfonila” refere-se ao grupo SO2-alquila, SO2-alquila substituída, SO2-alquenila, SO2-alquenila substituída, SO2-cicloalquila, SO2-cicloalquila substituída, , SO2-cicloalquenila, SO2-cicloalquenila substituída, SO2-arila, SO2-arila substituída, SO2-heteroarila, SO2- heteroarila substituída, SO2-heterociclila, e SO2-heterociclila substituída, onde alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída são como definidas neste texto. Sulfonil inclui, a maneira de exemplo, metil-SO2-, fenil-SO2-, e 4-metilfenil-SO2-.
[00144] “Sulfoniloxi” refere-se ao grupo –OSO2-alquila, OSO2-alquila substituída, OSO2- alquenila, OSO2-alquenila substituída, OSO2-cicloalquila, OSO2-cicloalquila substituída, OSO2-cicloalquenil, OSO2-cicloalquenila substituída, OSO2-arila, OSO2-arila substituída,
OSO2-heteroarila, OSO2-heteroarila substituída, OSO2-heterociclila, e OSO2 heterociclila substituída, onde alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída são como definidas neste texto.
[00145] O termo “aminocarboniloxi” refere-se ao grupo -OC(O)NRR onde cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, arila, heteroarila, ou heterociclila onde alquila, alquila substituída, arila, heteroarila e heterociclila são como definidas neste texto.
[00146] “Tiol” refere-se ao grupo -SH.
[00147] “Tioxo” ou o termo “tioceto” refere-se ao átomo (=S).
[00148] “Alquiltio” ou o termo “tioalcoxi” refere-se ao grupo -S-alquila, em que alquila é como definida neste texto. Em certas modalidades, o enxofre pode ser oxidado para -S(O)-. O sulfóxido pode existir como um ou mais estereoisômeros.
[00149] O termo “tioalcoxi substituída” refere-se ao grupo -S-alquila substituída.
[00150] O termo “tioariloxi” refere-se ao grupo aril-S- em que o grupo arila é como definida neste texto incluindo opcionalmente aos grupos arila substituída também definidas neste texto.
[00151] O termo “tiioheteroariloxi” refere-se ao grupo heteroaril-S- em que o grupo heteroarila é como definido no texto incluindo opcionalmente aos grupos substituídos arila também definido neste texto.
[00152] O termo “tioheterociclooxi” refere-se ao grupo heterociclil-S- em que o grupo heterociclila é como definido neste texto incluindo opcionalmente o grupo heterociclila substituída também definidos neste texto.
[00153] Além da divulgação aqui, o termo "substituído", quando usado para modificar um grupo ou radical especificado, também pode significar que um ou mais átomos de hidrogênio do grupo ou radical especificado são, independentemente um do outro, substituídos pelo mesmo ou diferentes grupos substituintes como definido abaixo.
[00154] Além dos grupos divulgados com relação aos termos individuais aqui mencionados, grupos substituintes para substituir um ou mais hidrogênios (quaisquer dois hidrogênios em um único carbono pode ser substituído por =O, =NR70, =N-OR70, =N2 or =S) em átomos de carbono saturados no grupo ou radical especificado, salvo indicação em contrário, -R60, halo, =O, -OR70, - SR70, -NR80R80, trihalometila, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, -N3, -SO2R70, -SO2O–M+, -
SO2OR70, -OSO2R70, -OSO2O–M+, -OSO2OR70, -P(O)(O–)2(M+)2, -P(O)(OR70)O–M+, - P(O)(OR70) 2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)O–M+, -C(O)OR70, -C(S)OR70, - C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)O-M+, -OC(O)OR70, - OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2–M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, - NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 e -NR70C(NR70)NR80R80, onde R60 é selecionado do grupo formado opcionalmente por alquila, cicloalquila, heteroalquila, heterocicloalquilalquila, cicloalquilalquila, arila, arilalquila, heteroarila e heteroarilalquila, cada R70 é independentemente hidrogênio ou R60; cada R80 é independentemente R70 ou alternativamente, dois R80’s, tomados juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um heterocicloalquila de 5-, 6- or 7- membros, que pode opcionalmente incluir de 1 a 4 dos mesmos ou diferentes heteroátomos adicionais selecionados do grupo formado por O, N e S, dos quais N pode ter substituição de -H ou alquila C1-C3; e cada M+ é um contra-íon com uma única carga positiva líquida. Cada M+ pode ser independentemente, por exemplo, um íon álcali, tal como K+, Na+, Li+; e íon amônio, tal como +N(R60)4; ou um íon alcalino-terroso, como [Ca2+]0.5, [Mg2+]0.5, ou [Ba2+]0.5 (“subscrito 0,5 significa que um dos contra-íons para esses íons alcalino-terrosos divalentes pode ser uma forma ionizada de um composto da invenção e o outro, um contra-íon típico, como cloreto, ou dois compostos ionizados aqui divulgados, podem servir como contra- íons para esses íons alcalino-terrosos divalentes, ou um composto duplamente ionizado da invenção pode servir como contra-íon para esses íons alcalino-terrosos divalentes). Como exemplos específicos, -NR80R80 destina-se a incluir -NH2, -NH-alquila, N-pirrolidinil, N- piperazinila, 4N-metil-piperazin-1-il e N-morfolinil.
[00155] Além da divulgação aqui, grupos substituintes de hidrogênios em átomos de carbono insaturados em "substituído" alceno, alcino, arila e grupos heteroarila são, salvo indicação em contrário, -R60, halo, -O-M+, -OR70, -SR70, -S–M+, -NR80R80, trihalometila, -CF3, -CN, -OCN, - SCN, -NO, -NO2, -N3, -SO2R70, -SO3–M+, -SO3R70, -OSO2R70, -OSO3–M+, -OSO3R70, -PO3- 2 (M+)2, -P(O)(OR70)O–M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2–M+, -CO2R70, - C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2–M+, -OCO2R70, - OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2–M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, - NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 e -NR70C(NR70)NR80R80, onde R60, R70, R80 e M+ conforme definido anteriormente, desde que em caso de substituição alcenoalceno ou alcinoalcino, os substituintes não são -O-M+, -OR70, -SR70, ou -S–M+.
[00156] Além dos grupos divulgados com relação aos termos individuais deste documento, grupos substituintes para hidrogênios em átomos de nitrogênio em "substituído" heteroalquila e cicloheteroalquila grupos são, salvo indicação em contrário, -R60, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, - NR80R80, trihalometila, -CF3, -CN, -NO, -NO2, -S(O)2R70, -S(O)2O-M+, -S(O)2OR70, -OS(O)2R70, -OS(O)2O-M+, -OS(O)2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)(OR70), -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, - OC(S)R70, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70C(O)OR70, - NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 e -NR70C(NR70)NR80R80, onde R60, R70, R80 e M+ são como definidos anteriormente.
[00157] Além da divulgação aqui, em uma certa modalidade, um grupo que é substituído tem 1, 2, 3 ou 4 substituintes, 1, 2 ou 3 substituintes, 1 ou 2 substituintes ou 1 substituinte.
[00158] Entende-se que em todos os grupos substituídos definidos acima, os polímeros chegaram por meio da definição de substituintes com outros substituintes para si mesmos (por exemplo, arila substituída com um grupo arila substituída como um substituinte que é ele próprio substituído por um grupo arila substituída, que é posteriormente substituído por um grupo arila substituída, etc.) não se destinam à inclusão aqui. Nesses casos, o número máximo de tais substituições é três. Por exemplo, substituições em série de grupos arila substituída especificamente contemplados aqui são limitadas a arila substituída-(arila substituída)-arila substituída.
[00159] Salvo indicação em contrário, a nomenclatura de substituintes que não são explicitamente definidos aqui é alcançada nomeando a parte terminal da funcionalidade seguida pela funcionalidade adjacente em direção ao ponto de ligação. Por exemplo, o substituinte “arilalquilaxicarbonila” refere-se ao grupo (aril)-(alquil)-O-C(O)-.
[00160] Quanto a qualquer um dos grupos aqui divulgados que contêm um ou mais substituintes, entende-se, é claro, que esses grupos não contêm nenhum tipo de substituição ou padrão de substituição que seja esteticamente impraticável e/ou sinteticamente inviável. Além disso, os compostos em questão incluem todos os isômeros estereoquímicos resultantes da substituição desses compostos.
[00161] O termo "sal farmaceuticamente aceitável" significa que um sal é aceitável para administração em um paciente, como um mamífero (sais com contra-íons tendo segurança mamífera aceitável para um determinado regime de dosagem). Tais sais podem ser derivados de bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis e de ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. "Sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a sais farmaceuticamente aceitáveis de um composto, cujos sais são derivados de uma variedade de contra-íons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na arte e incluem, a título de exemplo, apenas sódio, potássio, cálcio, magnésio, amônio, tetraalquilamônio e afins; e quando a molécula contém funcionalidade básica, sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos, como cloridrato, bromidrato, formato, tartarato, besilato, mesilato, acetato, maleato, oxalato e afins.
[00162] O termo "sais do mesmo" significa que um composto é formado quando um próton de um ácido é substituído por um cátion, como um cátion metálico ou cátion orgânico e similares. Onde aplicável, o sal é um sal farmaceuticamente aceitável, embora isso não seja necessário para sais de compostos intermediários que não se destinam à administração a um paciente. A título de exemplo, os sais dos presentes compostos incluem aquele em que o composto é protonado por um ácido inorgânico ou orgânico para formar um cátion, com a base conjugada do ácido inorgânico ou orgânico como componente aniônico do sal.
[00163] "Solvato" refere-se a um complexo formado pela combinação de moléculas de solvente com moléculas ou íons do soluto. O solvente pode ser um composto orgânico, um composto inorgânico ou uma mistura de ambos. Alguns exemplos de solventes incluem, entre outros, metanol, N,N-dimetilformamida, tetrahidrofurano, dimetilsulfóxido, e água. Quando o solvente é a água, o solvato formado é um hidrato.
[00164] "estereoisômero" e "estereoisômeros" se referem a compostos que possuem a mesma conectividade atômica, mas com diferentes arranjos atômicos no espaço. Os estereoisômeros incluem isômeros cis-trans, isômeros E e Z, enantiômeros e diastereômeros.
[00165] "Tautômero" refere-se a formas alternativas de uma molécula que diferem apenas na ligação eletrônica de átomos e / ou na posição de um próton, como os tautômeros de ceto-enol e imina-enamina ou as formas tautoméricas de grupos de heteroarila contendo um -N=C(H)-NH- disposição de átomos no anel, como pirazóis, imidazóis, benzimidazóis, triazóis, e tetrazóis. Uma pessoa versada na técnica reconheceria que são possíveis outros arranjos tautométricos de átomos no anel.
[00166] Será apreciado que o termo "ou um sal ou solvato ou estereoisômero do mesmo" se destina a incluir todas as permutações de sais, solvatos e estereoisômeros, como um solvato de um sal farmaceuticamente aceitável de um estereoisômero de um composto em questão.
[00167] “Quantidade farmaceuticamente eficaz” e “quantidade terapeuticamente eficaz” referem-se à quantidade suficiente de um composto para tratar uma desordem ou doença, ou um ou mais dos sintomas, e/ou para prevenir a ocorrência da doença ou desordem. Em referência a desordens proliferativos tumorigênicos, a quantidade farmaceuticamente ou terapeuticamente eficaz compreende uma quantidade suficiente para, entre outras coisas, causar uma diminuição no tamanho do tumor ou diminuir a taxa de crescimento do tumor.
[00168] “Paciente” refere-se a sujeitos humanos ou não-humanos, especialmente sujeitos mamíferos.
[00169] O termo “tratar” ou “tratamento”, como usando neste texto, refere-se a tratar ou ao tratamento de uma doença ou condição médica no paciente, tal como um mamífero (em particular, um humano), que inclui: (a) prevenir a ocorrência de doença ou condição médica, tal como, um tratamento profilático no sujeito; (b) a melhora da doença ou condição médica, tal como, eliminando ou causando uma regressão da doença ou condição médica no paciente; (c) suprimindo a doença ou condição médica através de, por exemplo, diminuindo ou parando o desenvolvimento da doença ou condição médica no paciente; ou (d) aliviando um sintoma da doença ou condição médica no paciente.
[00170] Os termos “polipeptídeo”, “peptídeo”, e “proteína” são usados de maneira permutável neste texto para se referir à forma polimérica de aminoácidos de qualquer comprimento. Salvo especificado de outra forma, “polipeptídeo”, “peptídeo” e “proteína” podem incluir aminoácidos geneticamente codificados ou não-codificados, aminoácidos ou derivados quimicamente ou biologicamente modificados, e polipeptídeos que possuem esqueletos peptídicos modificados. O termo inclui a fusão de proteínas, incluindo, mas não limitado, a fusão de proteínas com uma sequência de aminoácidos heteróloga, fusões com sequências líderes heterólogas ou homólogas, proteínas que contêm pelo menos um resíduo de metionina N- terminal (e.g., para facilitar a produção em uma célula hospedeira bacteriana recombinante); proteínas marcadas imunologicamente; e afins.
[00171] “Sequência nativa de aminoácidos” ou “sequência parental de aminoácidos” são usados de maneira permutável neste texto para se referir à sequência de aminoácidos de um polipeptídeo prévio à modificação para incluir um resíduo de aminoácido modificado.
[00172] Os termos “análogo de aminoácido”, “aminoácido antinatural” e afins podem ser usados de maneira permutável, e incluem compostos do tipo aminoácido com estrutura similar e/ou forma geral similar a um ou mais aminoácidos usualmente encontrados em proteínas de ocorrência natural [(e.g., Ala ou A, Cis ou C, Asp ou D, Glu ou E, Fen ou F, Gli ou G, His ou H, Ile ou I, Lis ou K, Leu ou L, Met ou M, Asn ou N, Pro ou P, Gln ou Q, Arg ou R, Ser ou S, Tre ou T, Val ou V, Trp ou W, Tir ou Y)]. Análogos de aminoácido incluem também aminoácidos naturais com cadeias laterais ou esqueletos modificados. Análogos de aminoácido incluem também análogos com a mesma estereoquímica de uma D-forma de ocorrência natural, assim como da L-forma de análogos de aminoácido. Em algumas instâncias, os análogos de aminoácido compartilham estruturas de esqueleto, e/ou as estruturas de cadeia lateral de um ou mais aminoácidos de ocorrência natural, com a(s) diferença(s) sendo um ou mais grupos modificados na molécula. Tal modificação pode incluir, mas não está limitada, a substituição de um átomo (como ser N) para um átomo relacionado (como ser S), a adição de um grupo (como ser metila, hidroxila, etc.) ou um átomo (como ser Cl, ou Br, etc.), a eliminação de um grupo, a substituição de uma ligação covalente (de ligação simples, ligação dupla, etc.), ou combinações dos mesmos. Por exemplo, análogos de aminoácido podem incluir ácidos α-hidroxi, e α- aminoácidos e afins.
[00173] Os termos “cadeia lateral de aminoácidos” ou “cadeia lateral de um aminoácido” e afins podem ser usados para se referir ao substituinte ligado ao carbono-α-de um resíduo de aminoácido, incluindo aminoácidos naturais, aminoácidos antinaturais, e análogos de aminoácidos. Uma cadeia lateral de aminoácidos pode também incluir uma cadeia lateral de aminoácidos como descrito no contexto de aminoácidos e conjugados modificados descritos neste texto.
[00174] O termo “carboidrato” e afins pode ser usado para se referir a unidades de monômeros e/ou polímeros de monossacarídeos, dissacarídeos, oligossacarídeos e polissacarídeos. O termo açúcar pode ser usado para se referir aos carboidratos menores, como ser monossacarídeos, dissacarídeos. O termo “derivado de carboidrato” inclui compostos onde um ou mais grupos funcionais do carboidrato de interesse são substituídos (substituídos por qualquer substituinte conveniente), modificados (convertidos para outro grupo utilizando qualquer química conveniente) ou ausentes (e.g., eliminados ou substituídos por H). Uma variedade de carboidratos e derivados de carboidratos estão disponíveis podem ser adaptados para o uso nos compostos e conjugados em questão.
[00175] O termo “anticorpo” é usado no sentido mais amplo e inclui anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento completos), anticorpos policlonais, e anticorpos multi específicos (e.g., anticorpos biespecíficos), anticorpos humanizados, anticorpos de cadeia simples, anticorpos quiméricos, fragmentos de anticorpo (e.g., fragmentos Fab) e afins. Um anticorpo é capaz de ligar um antígeno alvo. (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York). Um antígeno alvo pode ter um ou mais locais de ligação, também chamados epítopos, reconhecidos pelas regiões que determinam a complementaridade (CDRs) formadas por uma ou mais regiões variáveis do anticorpo.
[00176] O termo “anticorpo natural” refere-se a um anticorpo no qual as cadeias leves e pesadas têm sido feitas e pareadas pelo sistema imunológico de um organismo multicelular. Baço, linfonodos, medula óssea e soro são exemplos de tecidos que produzem anticorpos naturais. Por exemplo, os anticorpos produzidos pelas células isoladas produtoras de anticorpos de um animal imunizado com um antígeno são anticorpos naturais.
[00177] O termo “anticorpo humanizado” ou “imunoglobulina humanizada” refere-se a um anticorpo não-humano (e.g., de rato ou coelho) que contêm um ou mais aminoácidos (em uma região de estrutura, uma região constante ou uma CDR, por exemplo) que têm sido substituídos por um aminoácido de um anticorpo humano correspondentemente colocado. Em geral, os anticorpos humanizados produzem uma resposta imunitária no humano hospedeiro, como comparado com uma versão não-humanizada do mesmo anticorpo. Os anticorpos podem ser humanizados utilizando uma variedade de técnicas conhecidas neste âmbito, por exemplo enxerto de CDR (EP 239,400; PCT publication WO 91/09967; U.S. Pat. Nos. 5,225,539; 5,530,101; e 5,585,089), revestimento ou recapeamento (EP 592,106; EP 519,596; Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991); Studnicka et al., Protein Engineering 7(6):805- 814 (1994); Roguska. et al., PNAS 91:969-973 (1994)), e misturamento de cadeias (U.S. Pat. No. 5,565,332).] Em certas modalidades, as substituições em uma região de estrutura são identificadas pela modelagem das interações dos resíduos da CDR e os de estrutura para identificar resíduos de estrutura importantes para a ligação de antígenos e a comparação de sequências para identificar resíduos de estrutura inusuais em localizações particulares (veja, e.g., U.S. Pat. No. 5,585,089; Riechmann et al., Nature 332:323 (1988)). Métodos adicionais para humanizar anticorpos contemplados para o uso na presente invenção estão descritos na patente
U.S. Pat. Nos. 5,750,078; 5,502,167; 5,705,154; 5,770,403; 5,698,417; 5,693,493; 5,558,864; 4,935,496; e 4,816,567, e publicações PCT WO 98/45331 e WO 98/45332. Em modalidades particulares, um anticorpo de um coelho sujeito pode ser humanizado de acordo com os métodos descritos em US20040086979 e US20050033031. Da mesma forma, os anticorpos descritos anteriormente podem ser humanizados utilizando os métodos bem conhecidos no âmbito.
[00178] O termo “anticorpos quiméricos” refere-se a anticorpos nos quais têm sido construídas cadeias de genes leves e pesadas, geralmente através da engenharia genética, a partir de genes de região constante e anticorpos variáveis pertencentes a espécies diferentes. Por exemplo, os segmentos variáveis dos genes de um anticorpo monoclonal de rato podem ser ligados a segmentos constantes de humanos, tais como gamma 1 e gamma 3. Um exemplo de um anticorpo quimérico terapêutico é uma proteína híbrida composta do domínio de ligação de antígenos do anticorpo de um rato e um domínio constante ou efetor de um anticorpo humano, apesar que domínios de outras espécies de mamíferos podem ser usados.
[00179] Um polipeptídeo de imunoglobulina de região variável leve ou pesada é composta de uma região de estrutura (FR) interrompida por três regiões hipervariáveis, também chamadas de “regiões de determinação de complementaridade” ou “CDRs” . A extensão da região de estrutura e das CDRs têm sido definida (veja, “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” E. Kabat et al., U.S. Department of Health and Human Services, 1991). A região de estrutura de um anticorpo, que é a região combinada das estruturas das cadeias leves e pesadas constituintes, serve para posicionar e alinhar as CDRs. As CDRs são primariamente responsáveis pela ligação do epítopo de um antígeno.
[00180] Ao longo da presente divulgação, a numeração dos resíduos em uma cadeia pesada de imunoglobulina e em uma cadeia leve de imunoglobulina é tal como em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), expressamente incorporado no presente texto por referência.
[00181] Um " polipeptídeo Ig parental" é um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos carente de uma região constante de marcação de aldeído como descrito neste texto. O polipeptídeo parental pode compreender uma região constante de sequência nativa, ou uma região constante com sequências de aminoácidos modificados preexistentes (como ser adições, exclusões e/ou substituições).
[00182] No contexto de um polipeptídeo Ig, o termo “região constante” é bem entendido no âmbito, e refere-se à região C-terminal de uma cadeia pesada de Ig, ou uma cadeia leve de Ig. Uma região constante de cadeia pesada de Ig inclui os domínios CH1, CH2, e CH3 (e domínios CH4, onde a cadeia pesada é uma cadeia pesada do tipo μ ou ε). Em uma cadeia pesada de Ig nativa, os domínios CH1, CH2, CH3 (e CH4, se presente) começam imediatamente apôs (são C- terminais a) as regiões variáveis de cadeia pesada (VH), e cada uma é de ao redor de 100 aminoácidos até 130 aminoácidos de comprimento. Em uma cadeia leve de Ig nativa, a região constante começa imediatamente após (é C-terminal a) a região variável de cadeia leve (VL), e é de ao redor de 100 aminoácidos até 120 aminoácidos de comprimento.
[00183] Como usado neste texto, o termo “CDR” ou “região de determinação de complementaridade” pretende significar os locais de combinação de antígenos não contíguos encontrados na região variável dos polipeptídeos das cadeias pesada e leve. As CDRs têm sido descritas por Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, “Sequences of proteins of immunological interest” (1991); por Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); e MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), onde as definições incluem a sobreposição ou subconjuntos de resíduos de aminoácidos quando comparados entre si. Porém, a aplicação de qualquer definição para se referir à CDR de um anticorpo ou anticorpos enxertados ou variantes do mesmo pretende estar no contexto do termo como definido e usado neste texto. Os resíduos de aminoácidos que envolvem as CDRs como definidos em cada uma das referências citadas anteriormente são colocadas na Tabela 1 para comparação. Tabela 1: Definições de CDR Kabat1 Chothia2 MacCallum3 VH CDR1 31-35 26-32 30-35 VH CDR2 50-65 53-55 47-58 VH CDR3 95-102 96-101 93-101 VL CDR1 24-34 26-32 30-36 VL CDR2 50-56 50-52 46-55 VL CDR3 89-97 91-96 89-96 1 A numeração de resíduos segue a nomenclatura de Kabat et al., supra 2 A numeração de resíduos segue a nomenclatura de Chothia et al., supra 3 A numeração de resíduos segue a nomenclatura de MacCallum et al., supra
[00184] Por “codificável geneticamente” como usado em referência à sequência de aminoácidos do polipeptídeo, peptídeo ou proteína significa que a sequência de aminoácidos é composta de resíduos de aminoácidos capazes de produzir por transcrição e translação de um ácido nucléico que codifica a sequência de aminoácidos, onde a transcrição e/ou translação pode ocorrer em uma célula, ou num sistema de transcrição/translação in vitro sem células.
[00185] O termo “sequências de controle” refere-se às sequências de DNA que facilitam a expressão de uma sequência de codificação operativamente ligada em um sistema de expressão particular, e.g. célula de mamífero, célula bacteriana, síntese sem células, etc. As sequências de controle que são adequadas para sistemas procariontes, por exemplo, incluem um promotor, opcionalmente uma sequência de operador, e um local de ligação de ribosomas. Os sistemas de células eucarióticas podem usar promotores, sinais de poliadenilação e potenciadores.
[00186] Um ácido nucléico é “ligado operacionalmente” quando é posto em uma relação funcional com outra sequência de ácidos nucléicos. Por exemplo, o DNA de uma pré-sequência ou líder secretor é ligado operacionalmente ao DNA de um polipeptídeo se for expressado como uma pré proteína que faz parte da secreção do polipeptídeo; um promotor ou potenciador é ligado operacionalmente a uma sequência de codificação se afeta a transcrição da sequência; ou um sítio de ligação de ribossomas é ligado operacionalmente a uma sequência de codificação se for posicionada de modo que a inicialização da translação seja facilitada. Geralmente, “ligado operacionalmente” significa que as sequências de DNA que são ligadas são contíguas, e, no caso de um líder secretor, contíguas e no quadro de leitura. A vinculação é realizada por reações de ligação ou de amplificação. Adaptadores ou ligantes oligonucleotídeos sintéticos podem ser usados para a sequências de ligação de acordo com a prática convencional.
[00187] O termo “cassete de expressão” como usado neste texto, refere-se a um segmento de ácido nucléico, geralmente DNA, que pode ser inserido dentro de um ácido nucléico (e.g., através do uso de sítios de restrição compatíveis com a ligação para um constructo de interesse ou através da recombinação homóloga para um constructo de interesse ou para o genoma de uma célula hospedeira).Em geral, o segmento de ácido nucléico compreende um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo de interesse, e os sítios de restrição e cassete são designados para facilitar a inserção do cassete em um quadro de leitura próprio para a transcrição e translação. Os cassetes de expressão podem também compreender elementos que facilitam a expressão de um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo de interesse em uma célula hospedeira. Esses elementos podem incluir, mas não são limitados para: um promotor, um promotor mínimo, um potenciador, um elemento de resposta, uma sequência de terminação, uma sequência de poliadenilação e afins.
[00188] Como é usado neste texto, o termo “isolado” é usado para descrever um composto de interesse que está em um ambiente diferente do qual o composto ocorre naturalmente. “Isolado” é usado para incluir compostos que estão entre amostras que são substancialmente enriquecidas para o composto de interesse e/ou nas quais o composto de interesse é parcial ou substancialmente purificado.
[00189] Como usado neste texto, o termo “substancialmente purificado” refere-se a um composto que é removido do seu ambiente natural e que é pelo menos 60% livre, pelo menos 75% livre, pelo menos 80%, pelo menos 85% livre, pelo menos 90% livre, pelo menos 95% livre, pelo menos 98% livre, ou mais de 98% livre, de outros compostos com os quais é naturalmente associado.
[00190] O termo “condições fisiológicas” é usado com o intuito de abranger aquelas condições compatíveis com células vivas, e.g., condições predominantemente aquosas de temperatura, pH, salinidade etc., compatíveis com células vivas.
[00191] O termo “parceiro reativo” refere-se a uma molécula ou porção de moléculas que reage especificamente com outro parceiro reativo para produzir uma reação produto. Parceiros reativos exemplares incluem uma cisteína ou serina de um motivo de sulfatase e uma enzima geradora de formilglicina (FGE), a qual reage para formar uma reação produto de um marcador de aldeído convertido contendo formilglicina (FGLy) em vez de cisteína ou serina no motivo. Outro parceiros reativos exemplares incluem um aldeído de um resíduo de FGLy de um marcador de aldeído convertido (e.g. um grupo de aldeídos reativos) e um “parceiro reativo de aldeídos reativos”, o que compreende um grupo de aldeídos reativos e uma fração de interesse, e no qual reagem para formar uma reação produto de um polipeptídeo modificado marcado por aldeído que tem a fração de interesse conjugada ao polipeptídeo modificado através de um resíduo FGLy modificado.
[00192] "N-terminal" refere-se ao resíduo terminal de aminoácidos de um polipeptídeo que tem um grupo de aminas livres, que o grupo de aminas nos resíduos de aminoácidos não- terminais N normalmente faz parte do esqueleto covalente do polipeptídeo.
[00193] “C-terminal” refere-se ou resíduo terminal de aminoácidos de um polipeptídeo que tem um grupo livre de carboxila, onde o grupo de carboxila em resíduos de aminoácidos não-C-terminais normalmente faz parte do esqueleto covalente do polipeptídeo.
[00194] “Local interno”, como usando neste texto, refere-se a uma sequência de aminoácidos de um polipeptídeo ou um polipeptídeo, significa uma região do polipeptídeo que não está no N-terminal nem no C-terminal.
[00195] Como usado neste texto, um “agente anticancerígenos” refere-se, por exemplo, a um agente quimioterapêutico e/ou um agente terapêutico biológico, e.g., um composto molecular pequeno, um anticorpo, um conjugado anticorpo-fármaco e afins, ou composições dos mesmos que são efetivas no tratamento e prevenção do câncer em um sujeito.
[00196] Como usado neste texto, um “câncer resistente” refere-se a um câncer que não é suscetível a, ou não é mais suscetível a, ou é menos suscetível a, alguma(s) forma(s) particulares de tratamento. Como usado neste texto, um “câncer resistente” é usado como sinônimo de “câncer refratário”. Em algumas modalidades, um câncer resistente pode ser uma recaída do câncer, e.g., um câncer cujo tratamento inicialmente deu resultados positivos, mas onde o câncer tem se tornado resistente ao tratamento.
[00197] Como usado neste texto, a “sensibilização de um câncer” ou “câncer sensibilizado” refere-se a um câncer resistente que tem se tornado não mais resistente a , ou tem se tornado menos resistente ao tratamento. Em outras palavras, um câncer resistente torna-se responsivo ou ganha uma capacidade de resposta ao tratamento quando o mesmo é sensibilizado.
[00198] Como usado neste texto, o termo “conjugado de anticorpos anti-CD22” é usado como sinônimo com “conjugado anticorpo-fármaco”, “ADC”, “conjugado”, e “conjugado polipeptídeo-fármaco”.
[00199] Antes de continuar com a descrição da presente invenção, é para ser entendido que esta invenção não está limitada para as modalidades particulares aqui descritas, as quais podem variar. Também é para ser entendido que a terminologia utilizada neste texto tem o fim de descrever só as modalidades particulares, e não tem a intenção de ser limitante, uma vez que o âmbito da presente invenção será limitado só pelas alegações anexadas.
[00200] Onde uma série de valores for fornecido, é entendido que cada valor intermediário, até um décimo da unidade do limite inferior a não ser especificado de outra forma pelo contexto, entre o limite superior e o limite inferior da série ou qualquer outro valor seja intermediário ou declarado dentro da série de valores, é abrangido por esta invenção. Os limites superior e inferior de estas séries de valores menores podem ser independentemente incluídas nas séries de valores menos, e também são abrangidas por esta invenção, sujeitos a qualquer limite de exclusão específico na série dada. Onde a série dada inclui um ou ambos os limites, aquelas séries que excluem um ou os dois limites também são abrangidas por esta invenção.
[00201] É apreciado que certas características da invenção, que são, por clareza, descritas no contexto de modalidades separadas, podem também ser descritas em combinação em uma única modalidade. Da mesma forma, diversas características da invenção, as quais são, por brevidade, descritas no contexto de uma única modalidade, podem também ser fornecidas de maneira separada ou em um sub-combinação de modalidades. Todas as combinações das modalidades pertencentes à invenção são abrangidas pela presente invenção e são divulgadas no presente documento tal como se cada uma das combinações tivesse sido individual e explicitamente divulgada, na medida em que essas combinações abranjam assuntos que são, por exemplo, compostos que são compostos estáveis (i.e., compostos que podem ser fabricados, isolados, caracterizados, e testados para atividade biológica). Além disso, todas as sub- combinações das diversas modalidades e elementos das mesmas (e.g., elementos dos grupos químicos listados nas modalidades que descrevem estas variáveis) são também abrangidas especificamente pela presente invenção e são divulgadas no presente documento tal como se cada sub-combinação fosse individual e explicitamente divulgada neste texto.
[00202] Salvo especificado ao contrário, todos os termos técnicos e científicos usados neste texto têm o mesmo significado como comumente entendidos por alguém na competência corrente na técnica à qual esta invenção pertence. Apesar de todos os métodos similares ou equivalentes aos descritos neste texto poderem ser usados na prático ou testagem da presente invenção, os métodos e materiais preferidos são aqui descritos. Todas as publicações aqui mencionadas foram incorporadas por referência para divulgação e descrevem os métodos e/ou materiais em relação aos quais as publicações foram citadas.
[00203] Deve ser notado que, como utilizado aqui e nas alegações anexas, as formas singulares "a", "um" e "uma" ou "o" incluem referências plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Note-se ainda que as alegações podem ser redigidas de modo a excluir qualquer elemento opcional. Como tal, esta declaração destina-se a servir de base à utilização de terminologia exclusiva, como “apenas”, “únicamente” e afins, em conexão com a recitação de elementos de reivindicação, ou o uso de uma limitação “negativa”.
[00204] É apreciado que certas características desta invenção, as quais são, por clareza, descritas no contexto de modalidades separadas, podem ser também fornecidas em uma combinação em uma única modalidade. Da mesma forma, várias características desta invenção, as quais são, por brevidade, descritas no contexto de uma única modalidade, podem ser fornecidas de maneira separada ou em uma sub-combinação adequada.
[00205] As publicações discutidas neste texto são únicamente fornecidas para a divulgação anterior a data de apresentação da presente aplicação. Nada neste texto deve ser interpretado como uma admissão de que a presente invenção não tem o direito de preceder esta publicação em virtude de uma invenção anterior. Além disso, as datas de publicação previstas podem ser diferentes das datas de publicação propriamente ditas, que podem ter que ser confirmadas de forma independente.
CONJUGADOS ANTICORPO-FÁRMACO
[00206] A presente divulgação fornece conjugados, e.g., conjugados anticorpo-fármaco. É entendido por “conjugado” como uma primeira fração (e.g., um anticorpo) é associado de maneira estável com uma segunda fração (e.g., o fármaco). Por exemplo, um conjugado de maitansina inclui uma maitansina (e.g., um agente fracionário ativo de maitansina) associado estavelmente com uma outra fração (e.g., o anticorpo). “Associado estavelmente” significa que uma fração é ligada a uma outra fração ou estrutura sob condições padrão. Em certas modalidades, a primeira e segunda fração estão ligadas entre si através de um ou mais ligações covalentes.
[00207] Em certas modalidades, o conjugado é um conjugado de polipeptídeo, que inclui um polipeptídeo conjugado a uma segunda fração. Em certas modalidades, a fração conjugada ao polipeptídeo pode ser qualquer uma de uma variedade de frações de interesse tais como, mas não limitadas a um rótulo detectável, um fármaco, um polímero solúvel na água, ou uma fração para a imobilização do polipeptídeo a uma membrana ou uma superfície. Em certas modalidades, o conjugado é um conjugado de maitansina, onde um polipeptídeo é conjugado a uma fração de maitansina ou um agente ativo de maitansina. “Maitansina”, “fração de maitansina”, “fração de agente ativo de maitansina” e “maitansinóide” referem-se a uma maitansina e análogos e derivados da mesma, e frações farmaceuticamente ativas de maitansina e/ou porções da mesma. Uma maitansina conjugada a um polipeptídeo pode ser de uma variedade de frações maitansinóides como ser, mas não sendo limitadas por maitansina e análogos e derivados da mesma como descritos neste texto.
[00208] A fração de interesse pode ser conjugada ao polipeptídeo em qualquer localização desejada do polipeptídeo. Assim, a presente divulgação fornece, por exemplo, um polipeptídeo modificado tendo uma fração conjugada no sítio da ou perto do da C-terminal do polipeptídeo. Outros exemplos incluem um polipeptídeo modificado tendo uma fração conjugada em uma posição ou perto da N-terminal do polipeptídeo. Exemplos incluem também um polipeptídeo modificado tendo uma fração conjugada em uma posição entre a C-terminal e a N-terminal do polipeptídeo (e.g., em um sítio interno do polipeptídeo). Combinações dos anteriores são também possíveis onde o polipeptídeo modificado é conjugado a dois ou mais frações.
[00209] Em certas modalidades, um conjugado da presente divulgação inclui um conjugado de maitansina conjugado a um resíduo de aminoácido de um polipeptídeo no carbono- α de um resíduo de aminoácido. Dito de outra forma, um conjugado de maitansina inclui um polipeptídeo onde a cadeia lateral de um ou mais resíduos de aminoácidos no polipeptídeo têm sido modificados para serem ligados a uma maitansina (e.g., ligados a uma maitansina através de um ligante como descrito neste texto). Por exemplo, um conjugado de maitansina inclui um polipeptídeo onde o carbono-α de um ou mais resíduos de aminoácidos no polipeptídeo têm sido modificados para serem ligados a uma maitansina (e.g., ligados a uma maitansina através de um ligante como descrito neste texto).
[00210] Modalidades da presente divulgação incluem conjugados onde um polipeptídeo é conjugado a uma ou mais frações, assim como 2 frações, 3 frações, 4 frações, 5 frações, 6 frações, 7 frações, 8 frações, 9 frações, ou 10 ou mais frações. As frações podem ser conjugadas ao polipeptídeo em um ou mais locais no polipeptídeo. Por exemplo, uma ou mais frações podem ser conjugadas a um único resíduo de aminoácido do polipeptídeo. Em alguns casos, uma fração é conjugada a um resíduo de aminoácido do polipeptídeo. Em outras modalidades, duas frações podem ser conjugadas a um mesmo resíduo de aminoácido do polipeptídeo. Em outras modalidades, uma primeira fração é conjugada a um primer resíduo de aminoácido do polipeptídeo e uma segunda fração é conjugada a um segundo resíduo de aminoácido do polipeptídeo. Combinações das situações acima referidas são também possíveis, por exemplo onde um polipeptídeo é conjugado a uma primeira fração em um primer resíduo de aminoácido e conjugada a outras duas frações em um segundo resíduo de aminoácido. Outras combinações são também possíveis, tais como, mas não limitadas a, um polipeptídeo conjugado a uma primeira e segunda fração em um primeiro resíduo de aminoácido e conjugado a uma terceira e quarta fração em um segundo resíduo de aminoácido, etc.
[00211] Um ou mais resíduos de aminoácido do polipeptídeo que são conjugados a uma ou mais frações podem ser aminoácidos de ocorrência natural, aminoácidos antinaturais, ou combinações dos mesmos. Por exemplo, o conjugado pode incluir uma fração conjugada a um resíduo de aminoácido de ocorrência natural do polipeptídeo. Em outras instâncias, o conjugado pode incluir uma fração conjugada a um resíduo de aminoácido antinatural do polipeptídeo. Uma ou mais frações podem estar conjugadas ao polipeptídeo em um único resíduo de aminoácido natural ou antinatural como descrito anteriormente. Um ou mais resíduos de aminoácidos naturais ou antinaturais no polipeptídeo podem estar conjugados com uma fração ou frações como descrito neste texto. Por exemplo, dois (ou mais) resíduos de aminoácido (e.g., resíduos de aminoácido naturais ou antinaturais) no polipeptídeo podem estar, cada um, conjugados a uma ou duas frações, tal que múltiplos sítios do polipeptídeo são modificados.
[00212] Como descrito neste texto, um polipeptídeo pode estar conjugado com uma ou mais frações. Em certas modalidades, a fração de interesse é uma entidade química, como sendo um fármaco ou um rótulo detectável. Por exemplo, um fármaco (e.g., maitansina) pode estar conjugada ao polipeptídeo, ou em outras modalidades, um rótulo detectável pode estar conjugado ao polipeptídeo. Assim, por exemplo, modalidades da presente divulgação incluem, mas não são limitadas por, um conjugado de um polipeptídeo e um fármaco; um conjugado de um polipeptídeo e um rótulo detectável; um conjugado de dois ou mais fármacos e um polipeptídeo; um conjugado de dois ou mais rótulos detectáveis e um polipeptídeo; e afins.
[00213] Em algumas modalidades, o polipeptídeo e a fração de interesse estão conjugados através de uma fração de acoplamento. Por exemplo, o polipeptídeo e a fração de interesse podem, cada um, estar ligados (e.g., ligados covalentemente) à fração de acoplamento, restringindo assim o polipeptídeo e fração de interesse (e.g., um fármaco, tal como a maitansina) juntos através da fração de acoplamento. Em alguns casos, a fração de acoplamento inclui um composto de hidrazinil-indol ou um composto de hidrazinil-pirrol-piridinil, ou um composto derivado de hidrazinil-indol ou hidrazinil-pirrol-piridinil. Por exemplo, um esquema geral para acoplar uma fração de interesse (e.g., uma maitansina) a um polipeptídeo através da fração de acoplamento hidrazinil-indol ou hidrazinil-pirrol-piridinil é mostrado no esquema geral de reação abaixo. As frações de acoplamento hidrazinil-indol e hidrazinil-pirrol-piridinil são também referidas no texto como a fração de acoplamento hidrazino-iso-Pictet-Spengler (HIPS) e a fração de acoplamento aza-hidrazino-iso-Pictet-Spengler (azaHIPS), respetivamente.
[00214] No esquema de reação de cima, R é a fração de interesse (e.g., maitansina) que é conjugada ao polipeptídeo. Como mostrado no esquema de reação de cima, um polipeptídeo que inclui um resíduo 2-formilglicina (fGly) que reage com um fármaco (e.g., maitansina) que tem sido modificado para incluir a fração de acoplamento (e.g., uma fração de acoplamento de hidrazinil-indol ou de hidrazinil-pirrol-piridinil) para produzir um conjugado de polipeptídeo ligado à fração de acoplamento, ligando assim a maitansina ao polipeptídeo através da fração de acoplamento.
[00215] Como descrito neste texto, a fração pode ser qualquer uma de uma variedade de frações tais como, mas não limitadas a ser, uma entidade química, tal como um rótulo detectável, ou um fármaco (e.g., um maitansinóide). R’ e R” podem, cada um, independentemente ser qualquer substituinte desejado, tal como, mas não limitado a, hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Z pode ser CR11, NR12, N, O ou S, onde R11 e R12 são, cada um, independentemente selecionados a partir de qualquer substituinte descrito por R’ e R” acima.
[00216] Outras frações de acoplamento de hidrazinil-indol ou hidrazinil-pirrol-piridinil são também possíveis, como mostrado nos conjugados e compostos descritos neste documento.
Por exemplo, frações de acoplamento de hidrazinil-indol ou hidrazinil-pirrol-piridinil podem ser modificadas para ser ligadas (e.g., ligadas covalentemente) com um ligante. Como tal, as modalidades da presente divulgação incluem as frações de acoplamento de hidrazinil-indol ou hidrazinil-pirrol-piridinil ligadas a um fármaco (e.g., maitansina) através de um ligante. Diversas modalidades do ligante que pode ligar a fração de acoplamento de hidrazinil-indol ou hidrazinil- pirrol-piridinil ao fármaco (e.g., maitansina) são descritas em detalhe neste documento.
[00217] Em certas modalidades, o polipeptídeo pode ser conjugado com uma fração de interesse, em que o polipeptídeo é modificado antes da conjugação com a fração de interesse. A modificação do polipeptídeo pode produzir um polipeptídeo modificado que contém um ou mais grupos reativos adequados para conjugação de acordo com o interesse da sociedade. Em alguns casos, o polipeptídeo pode ser modificado em um ou mais resíduos de aminoácidos para fornecer um ou mais grupos reativos adequados para conjugação de uma fração de interesse (e.g., uma fração que inclui uma porção de acoplamento, como uma hidrazinil-indol ou uma fração de acoplamento hidrazinil-pirrol-piridinil como descrito acima). Por exemplo, o polipeptídeo pode ser modificado para incluir um grupo aldeído reativo (e.g., um aldeído reativo). Um aldeído reativo pode ser incluído em uma "marcação de aldeído" ou "rótulo de aldeído", que, conforme usado aqui, refere-se a uma sequência de aminoácidos derivada de um sulfatase (e.g., L(C/S)TPSR) que foi convertido pela ação de uma enzima geradora de formilglicina (FGE) para conter um resíduo de 2-formilglicina (aqui referido como “FGly”). O resíduo FGly gerado por um FGE também pode ser chamado de “formilglicina”. Em outras palavras, o termo "marcado de aldeído" é usado aqui para se referir a uma sequência de aminoácidos que inclui um motivo de sulfatase "convertido" (i.e., um motivo de sulfatase em que um resíduo de cisteína ou serina foi convertido em FGly pela ação de uma FGE, e.g., L(FGly)TPSR). Um motivo de sulfatase convertido pode ser derivado de uma sequência de aminoácidos que inclui um motivo de sulfatase "não convertido" (i.e., um motivo de sulfatase em que o resíduo de cisteína ou serina não foi convertido em FGly por uma FGE, mas é capaz de ser convertido, e.g., um motivo de sulfatase não convertido com a sequência: L(C/S)TPSR). Por "conversão", conforme usado no contexto da ação de uma enzima geradora de formilglicina (FGE) em um motivo de sulfatase refere-se à modificação bioquímica de um resíduo de cisteína ou serina em um motivo de sulfatase para um resíduo de formilglicina (FGly) (e.g., Cys para FGly, ou Ser para FGly). Aspectos adicionais dos marcadores de aldeído e o uso do mesmo na modificação de proteínas específicas do local são descritas na patente norte-americana No. 7,985,783 e na patente norte- americana No. 8,729,232, as divulgações de cada uma das quais são incorporadas aqui por referência.
[00218] Em alguns casos, o polipeptídeo modificado contendo o resíduo FGly pode ser conjugado com a fração de interesse pela reação do FGly com um composto (e.g., um composto contendo uma fração de acoplamento de hidrazinil-indol ou de hidrazinil-pirrol-piridinil, como descrito acima). Por exemplo, um polipeptídeo contendo FGly pode ser contatado com um medicamento contendo parceiro reativo sob condições adequadas para proporcionar a conjugação do fármaco com o polipeptídeo. Em alguns casos, o fármaco contendo uma fração de acoplamento de hidrazinil-indol ou de hidrazinil-pirrol-piridinil como descrito acima. Por exemplo, uma maitansina pode ser modificada para incluir uma fração de acoplamento de hidrazinil-indol ou de hidrazinil-pirrol-piridinil. Em alguns casos, a maitansina está ligada a um hidrazinil-indol ou a um hidrazinil-pirrol-piridinil, tal como covalentemente ligada a um hidrazinil-indol ou um hidrazinil-pirrol-piridinil através de um ligante, conforme descrito em detalhes neste texto.
[00219] Em certas modalidades, um conjugado da presente divulgação inclui um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo, como um anticorpo anti-CD22) tendo pelo menos um resíduo de aminoácido modificado. O resíduo de aminoácido modificado do polipeptídeo pode ser associado a um fármaco (por exemplo, maitansina) contendo uma fração de acoplamento de hidrazinil-indol ou de hidrazinil-pirrol-piridinil como descrito acima. Em certas modalidades, o resíduo de aminoácido modificado do polipeptídeo (por exemplo, anticorpo anti-CD22) pode ser derivado de um resíduo de cisteína ou serina que foi convertido em um resíduo de FGly como descrito acima. Em certas modalidades, o resíduo FGly é conjugado a um fármaco que contém um hidrazinil-indol ou um acoplamento fracionário de hidrazinil-pirrol-piridinil como descrito acima para fornecer um conjugado da presente divulgação em que a droga é conjugada ao polipeptídeo através do hidrazinil-indol ou de uma fração de acoplamento de hidrazinil-pirrol- piridinil. Como usado aqui, o termo FGly 'refere-se ao resíduo de aminoácido modificado do polipeptídeo (por exemplo, anticorpo anti-CD22) que é acoplado à fração de interesse (por exemplo, um medicamento, como um maitansinóide).
[00220] Em certas modalidades, o conjugado inclui pelo menos um resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I) aqui descrita.
Por exemplo, o conjugado pode incluir pelo menos um resíduo de aminoácido modificado com uma cadeia lateral da fórmula (I):
(I) em que Z é CR4 ou N; R1 é selecionado de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; R2 e R3 são selecionados independentemente de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou R2 e R3 estão opcionalmente ligados ciclicamente para formar um heterociclila de 5 ou 6 membros; cada R4 é selecionado independentemente do hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; L é um ligante compreendendo -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-, em que a, b, c e d são cada um independentemente 0 ou 1, onde a soma de a, b, c e d é 1 a 4; T1, T2, T3 e T4 são selecionados independentemente de alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, um dissulfeto, e um éster, em que EDA é uma fração de etileno diamina, PEG é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado, e AA é um resíduo de aminoácido, em que w é um inteiro de 1 a 20, n é um inteiro de 1 a 30, p é um inteiro de 1 a 20, e h é um inteiro de 1 a 12; V1, V2, V3 e V4 são cada um independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, em que q é um inteiro de 1 a 6; cada R13 é selecionado independentemente a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída; cada R15 é selecionado independentemente a partir de alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; W1 é um maitansinóide; e W2 é um anticorpo anti-CD22.
[00221] Em certas modalidades, Z é CR4 ou N. Em certas modalidades, Z é CR4. Em certas modalidades, Z é N.
[00222] Em certas modalidades, R1 é selecionado para hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Em certas modalidades, R1 é hidrogênio. Em certas modalidades, R1 é alquila ou alquila substituída, tal como C1-6 alquila ou C1-6 alquila substituída, ou C1-4 alquila ou C1-4 alquila substituída, ou C1-3 alquila ou C1-3 alquila substituída. Em certas modalidades, R1 é alquenila ou alquenila substituída, tal como C2-6 alquenila ou C2-6 alquenila substituída, ou C2-4 alquenila ou C2-4 alquenila substituída, ou C2-3 alquenila or C2-3 alquenila substituída. Em certas modalidades, R1 é alquinila ou alquinila substituída, tal como C2-6 alquenila ou C2-6 alquenila substituída, ou C2-4 alquenila ou C2-4 alquenila substituída, ou C2-3 alquenila ou C2-3 alquenila substituída. Em certas modalidades, R1 é arila ou arila substituída, tal como C5-8 arila ou C5-8 arila substituída, tal como um C5 arila ou C5 arila substituída, ou um C6 arila ou C6 arila substituída. Em certas modalidades, R1 é heteroarila ou heteroarila substituída, tal como C5-8 heteroarila ou C5-8 heteroarila substituída, tal como um C5 heteroarila ou C5 heteroarila substituída, ou um C6 heteroarila ou C6 heteroarila substituída. Em certas modalidades, R1 é cicloalquila ou cicloalquila substituída, tal como C3-8 cicloalquila ou C3-8 cicloalquila substituída, tal como um C3-6 cicloalquila ou C3-6 cicloalquila substituída, ou um C3-5 cicloalquila ou C3-5 cicloalquila substituída. Em certas modalidades, R1 é heterociclila ou heterociclila substituída, tal como C3-8 heterociclila ou C3-8 heterociclila substituída, tal como um C3-6 heterociclila ou C3-6 substituído heterociclila, ou um C3-5 heterociclila ou C3-5 substituído heterociclila.
[00223] Em certas modalidades, R2 e R3 são cada um independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou R2 e R3 são opcionalmente ligados ciclicamente para formar um heterociclila de 5 ou 6 membros.
[00224] Em certas modalidades, R2 é selecionado para hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Em certas modalidades, R2 é hidrogênio. Em certas modalidades, R2 é alquila ou alquila substituída, tal como C1-6 alquila ou C1-6 alquila substituída, ou C1-4 alquila ou C1-4 alquila substituída, ou C1-3 alquila ou C1-3 alquila substituída. Em certas modalidades, R2 é alquenila ou alquenila substituída, tal como C2-6 alquenila ou C2-6alquenila substituída, ou C2-4 alquenila ou C2-4 alquenila substituída, ou C2-3 alquenila ou C2-3 alquenila substituída. Em certas modalidades, R2 é alquinila ou alquinila substituída. Em certas modalidades, R2 é alcoxi ou alcoxi substituída. Em certas modalidades, R2 é amina ou amina substituída. Em certas modalidades, R2 é carboxila ou éster de carboxila. Em certas modalidades, R2 é acila ou aciloxi. Em certas modalidades, R2 é acil amina ou amino acila. Em certas modalidades, R2 é alquilamida ou alquilamida substituída. Em certas modalidades, R2 é sulfonil. Em certas modalidades, R2 é tioalcoxi ou tioalcoxi substituída. Em certas modalidades, R2 é arila ou arila substituída, tal como C5-8 arila ou C5-8 arila substituída, tal como um C5 arila ou C5 arila substituída, ou um C6 arila ou C6 arila substituída. Em certas modalidades, R2 é heteroarila ou heteroarila substituída, tal como C5-8 heteroarila ou C5-8 heteroarila substituída, tal como um C5 heteroarila ou C5 heteroarila substituída, ou um C6 heteroarila ou C6 heteroarila substituída. Em certas modalidades, R2 é cicloalquila ou cicloalquila substituída, tal como C3-8 cicloalquila ou C3-8 cicloalquila substituída, tal como um C3-6 cicloalquila ou C3-6 cicloalquila substituída, ou um C3-5 cicloalquila ou C3-5 cicloalquila substituída. Em certas modalidades, R2 é heterociclila ou substituído heterociclila, tal como um C3-6 heterociclila ou C3-6 substituído heterociclila, ou um C3-5 heterociclila ou C3-5 substituído heterociclila.
[00225] Em certas modalidades, R3 é selecionado para hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Em certas modalidades, R3 é hidrogênio. Em certas modalidades, R3 é alquila ou alquila substituída, tal como C1-6 alquila ou C1-6 alquila substituída, ou C1-4 alquila ou C1-4 alquila substituída, ou C1-3 alquila ou C1-3 alquila substituída. Em certas modalidades, R3 é alquenila ou alquenila substituída, tal como C2-6 alquenila ou C2-6 alquenila substituída, ou C2-4 alquenila ou C2-4 alquenila substituída, ou C2-3 alquenila ou C2-3 alquenila substituída. Em certas modalidades, R3 é alquinila ou alquinila substituída. Em certas modalidades, R3 é alcoxi ou alcoxi substituída. Em certas modalidades, R3 é amino ou substituído amino. Em certas modalidades, R3 é carboxila ou éster de carboxila. Em certas modalidades, R3 é acil ou aciloxi. Em certas modalidades, R3 é acil amino ou amino acila. Em certas modalidades, R3 é alquilamida ou alquilamida substituída. Em certas modalidades, R3 é sulfonil. Em certas modalidades, R3 é tioalcoxi ou tioalcoxi substituída. Em certas modalidades, R3 é arila ou arila substituída, tal como C5-8 arila ou C5-8 arila substituída, tal como um C5 arila ou C5 arila substituída, ou um C6 arila ou C6 arila substituída. Em certas modalidades, R3 é heteroarila ou heteroarila substituída, tal como C5-8 heteroarila ou C5-8 heteroarila substituída, tal como um C5 heteroarila ou C5 heteroarila substituída, ou um C6 heteroarila ou C6 heteroarila substituída. Em certas modalidades, R3 é cicloalquila ou cicloalquila substituída, tal como C3-8 cicloalquila ou C3-8 cicloalquila substituída, tal como um C3-6 cicloalquila ou C3-6 cicloalquila substituída, ou um C3-5 cicloalquila ou C3-5 cicloalquila substituída. Em certas modalidades, R3 é heterociclila ou substituído heterociclila, tal como C3-8 heterociclila ou C3-8 substituído heterociclila, tal como um C3-6 heterociclila ou C3-6 substituído heterociclila, ou um C3-5 heterociclila ou C3-5 substituído heterociclila.
[00226] Em certas modalidades, R2 e R3 são opcionalmente ligados ciclicamente para formar uma heterociclila de 5 ou 6 membros. Em certas modalidades, R2 e R3 são ciclicamente ligados para formar um heterociclila de 5 ou 6 membros. Em certas modalidades, R2 e R3 são ciclicamente ligados para formar uma heterociclila de 5 membros. Em certas modalidades, R2 e R3 são ciclicamente ligados para formar uma heterociclila de 6 membros.
[00227] Em certas modalidades, cada R4 é selecionado independentemente para hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída.
[00228] As várias possibilidades para cada R4 são descritas em mais detalhes a seguir. Em certas modalidades, R4 é hidrogênio. Em certas modalidades, cada R4 é hidrogênio. Em certas modalidades, R4 é halogênio, como F, Cl, Br ou I. Em certas modalidades, R4 é F. Em certas modalidades, R4 é Cl. Em certas modalidades, R4 é Br. Em certas modalidades, R4 é I. Em certas modalidades, R4 é alquila ou alquila substituída, tal como C1-6 alquila ou C1-6 alquila substituída, ou C1-4 alquila ou C1-4 alquila substituída, ou C1-3 alquila ou C1-3 alquila substituída. Em certas modalidades, R4 é alquenila ou alquenila substituída, tal como C2-6 alquenila ou C2-6 alquenila substituída, ou C2-4 alquenila ou C2-4 alquenila substituída, ou C2-3 alquenila ou C2-3 alquenila substituída. Em certas modalidades, R4 é alquinila ou alquinila substituída. Em certas modalidades, R4 é alcoxi ou alcoxi substituída. Em certas modalidades, R4 é amino ou substituído amino. Em certas modalidades, R4 é carboxila ou éster de carboxila. Em certas modalidades, R4 é acila ou aciloxi. Em certas modalidades, R4 é acil amina ou amino acila. Em certas modalidades, R4 é alquilamida ou alquilamida substituída. Em certas modalidades, R4 é sulfonil. Em certas modalidades, R4 é tioalcoxi ou tioalcoxi substituída. Em certas modalidades, R4 é arila ou arila substituída, tal como C5-8 arila ou C5-8 arila substituída, tal como um C5 arila ou C5 arila substituída, ou um C6 arila ou C6 arila substituída (e.g., fenil ou substituído fenil). Em certas modalidades, R4 é heteroarila ou heteroarila substituída, tal como C5-8 heteroarila ou
C5-8 heteroarila substituída, tal como um C5 heteroarila ou C5 heteroarila substituída, ou um C6 heteroarila ou C6 heteroarila substituída. Em certas modalidades, R4 é cicloalquila ou cicloalquila substituída, tal como C3-8 cicloalquila ou C3-8 cicloalquila substituída, tal como um C3-6 cicloalquila ou C3-6 cicloalquila substituída, ou um C3-5 cicloalquila ou C3-5 cicloalquila substituída. Em certas modalidades, R4 é heterociclila ou substituído heterociclila, tal como C3-8 heterociclila ou C3-8 substituído heterociclila, tal como um C3-6 heterociclila ou C3-6 substituído heterociclila, ou um C3-5 heterociclila ou C3-5 substituído heterociclila.
[00229] Em certas modalidades, W1 é um maitansinóide. Uma descrição adicional do maitansinóide é encontrada na divulgação aqui.
[00230] Em certas modalidades, W2 é um anticorpo anti-CD22. Uma descrição adicional do anticorpo anti-CD22 é encontrada na divulgação aqui.
[00231] Em certas modalidades, os compostos de fórmula (I) incluem um ligante, L. O ligante pode ser utilizado para ligar um acoplamento fracionário a uma ou mais frações de interesse e/ou um ou mais polipeptídeos. Em algumas modalidades, o ligante liga um acoplamento fracionário a um polipeptídeo ou a uma entidade química. O ligante pode ser ligado (por exemplo, ligado covalentemente) ao acoplamento fracionário (por exemplo, como aqui descrito) em qualquer posição conveniente. Por exemplo, o ligante pode anexar um hidrazinil-indol ou uma fração de acoplamento de hidrazinil-pirrol-piridinil a um fármaco (e.g., uma maitansina). O hidrazinil-indol ou a fração de acoplamento de hidrazinil-pirrol-piridinil pode ser usado para conjugar o ligante (e, portanto, o fármaco, e.g., maitansina) a um polipeptídeo, tal como um anticorpo anti-CD22.
[00232] Em certas modalidades, L anexa o acoplamento fracionado de W1, e, portanto, a fração de acoplamento é indiretamente ligada a W1 através do ligante L. Como descrito acima, W1 é um maitansinóide e, assim, L liga a fração de acoplamento a um maitansinóide, e.g., a fração de acoplamento é indiretamente ligado ao maitansinóide através do ligante L.
[00233] Quaisquer ligantes convenientes podem ser utilizados nos conjugados sujeitos e compostos. Em certas modalidades, L inclui um grupo selecionado dentre alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acil amina, alquilamida, alquilamida substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Em certas modalidades, L inclui uma alquila ou um grupo alquila substituída. Em certas modalidades, L inclui uma alquenila ou um grupo alquenila substituída. Em certas modalidades, L inclui uma alquinila ou um grupo alquinila substituída. Em certas modalidades, L inclui uma alcoxi ou um grupo alcoxi substituída. Em certas modalidades, L inclui uma amina ou um grupo amina substituída. Em certas modalidades, L inclui uma carboxila ou um grupo éster de carboxila. Em certas modalidades, L inclui um grupo acil amina. Em certas modalidades, L inclui uma alquilamida ou um grupo alquilamida substituída. Em certas modalidades, L inclui uma arila ou um grupo arila substituída. Em certas modalidades, L inclui uma heteroarila ou um grupo heteroarila substituída. Em certas modalidades, L inclui uma cicloalquila ou um grupo cicloalquila substituída. Em certas modalidades, L inclui uma heterociclila ou um grupo substituído heterociclila.
[00234] Em certas modalidades, L inclui um polímero. Por exemplo, o polímero pode incluir um polialquilena glicol e derivados do mesmo, incluindo polietilenoglicol, metoxipolietilenoglicol, polietilenoglicol homopolímeros, polipropileno glicol homopolímeros, copolímeros of etileno glicol com propileno glicol (e.g., onde os homopolímeros e copolímeros são não substituídos ou substituídos em uma extremidade por um grupo alquila), álcool polivinil, éteres de etil de polivinil , polivinilpirrolidone, e combinações dos mesmos e afins. Em certas modalidades, o polímero é um glicol polialquilena. Em certas modalidades, o polímero é um polietilenoglicol. Outros ligantes também são possíveis, como mostrado nos conjugados e compostos descritos em mais detalhes abaixo.
[00235] Em algumas modalidades, L é um ligante descrito pela fórmula -(L1)a-(L2)b-(L3)c- (L4)d-, em que L1, L2 , L3 e L4 são cada um independentemente um ligante único, e a, b, c e d são cada um independentemente 0 ou 1, em que a soma de a, b, c e d é de 1 a 4.
[00236] Em certas modalidades, a soma de a, b, c e d é 1.Em certas modalidades, a soma de a, b, c e d é 2. Em certas modalidades, a soma de a, b, c e d é 3. Em certas modalidades, a soma de a, b, c e d é 4. Em certas modalidades, a, b, c e d são cada um 1. Em certas modalidades, a, b e c são cada um 1 e d é 0. Em certas modalidades, a e b são cada um 1 e c e d são cada um 0. Em certas modalidades, a é 1 e b, c e d são 0.
[00237] Em certas modalidades, L1 está ligado ao hidrazinil-indol ou a fração de acoplamento de hidrazinil-pirrol-piridinil (e.g., como mostrado na fórmula (I) acima). Em certas modalidades, L2, se estiver presente, é ligado ao W1. Em certas modalidades, L3, se estiver presente, é ligado ao W1. Em certas modalidades, L4, se estiver presente, é ligado ao W1.
[00238] Quaisquer unidades ligantes convenientes podem ser utilizadas nos sujeitos de ligação. As unidades ligantes de interesse incluem, mas não estão limitadas a, unidades de polímeros, como glicóis de polietileno, polietilenos e poliacrilatos, resíduo(s) de aminoácidos, polímeros baseados em carboidratos ou resíduos de carboidratos e derivados dos mesmos, polinucleotídeos, grupos alquila, grupos arila, grupos heterociclicos, combinações dos mesmos, e versões substituídas dos mesmos. Em algumas modalidades, cada um dos L1, L2 , L3 e L4 (se estiver presente) compreendem um ou mais grupos selecionados independentemente de polietilenoglicol, um polietilenoglicol modificado, um resíduo de aminoácido, um grupo alquila, uma alquila substituída, um grupo arila, um grupo arila substituída, e um diamina (e.g., um grupo de ligação que inclui uma alquilena diamina).
[00239] Em algumas modalidades, L1 (se estiver presente) compreende um polietilenoglicol, um polietilenoglicol modificado, um resíduo de aminoácido, um grupo alquila, uma alquila substituída, um grupo arila, um grupo arila substituída, ou uma diamina. Em algumas modalidades, L1 compreende um polietilenoglicol. Em algumas modalidades, L1 compreende um polietilenoglicol modificado. Em algumas modalidades, L1 compreende um resíduo de aminoácido. Em algumas modalidades, L1 compreende um grupo alquila ou uma alquila substituída. Em algumas modalidades, L1 compreende um grupo arila ou um grupo arila substituída. Em algumas modalidades, L1 compreende um diamina (e.g., um grupo de ligação compreendendo uma alquilena diamina).
[00240] Em algumas modalidades, L2 (se estiver presente) compreende um polietilenoglicol, um polietilenoglicol modificado, um resíduo de aminoácido, um grupo alquil, uma alquila substituída, um grupo arila, um grupo arila substituída, ou uma diamina. Em algumas modalidades, L2 compreende um polietilenoglicol. Em algumas modalidades, L2 compreende um polietilenoglicol modificado. Em algumas modalidades, L2 compreende um resíduo de aminoácido. Em algumas modalidades, L2 compreende um grupo alquila ou uma alquila substituída. Em algumas modalidades, L2 compreende um grupo arila ou um grupo arila substituída. Em algumas modalidades, L2 compreende um diamina (e.g., um grupo de ligação compreendendo uma alquilena diamina).
[00241] Em algumas modalidades, L3 (se estiver presente) compreende um polietilenoglicol, um polietilenoglicol modificado, um resíduo de aminoácido, um grupo alquila, uma alquila substituída, um grupo arila, um grupo arila substituída, ou uma diamina. Em algumas modalidades, L3 compreende um polietilenoglicol. Em algumas modalidades, L3 compreende um polietilenoglicol modificado. Em algumas modalidades, L3 compreende um resíduo de aminoácido. Em algumas modalidades, L3 compreende um grupo alquila ou uma alquila substituída. Em algumas modalidades, L3 compreende um grupo arila ou um grupo arila substituída. Em algumas modalidades, L3 compreende uma diamina (e.g., um grupo de ligação compreendendo uma alquilena diamina).
[00242] Em algumas modalidades, L4 (se estiver presente) compreende um polietilenoglicol, um polietilenoglicol modificado, um resíduo de aminoácido, um grupo alquila, uma alquila substituída, um grupo arila, um grupo arila substituída, ou uma diamina. Em algumas modalidades, L4 compreende um polietilenoglicol. Em algumas modalidades, L4 compreende um polietilenoglicol modificado. Em algumas modalidades, L4 compreende um resíduo de aminoácido. Em algumas modalidades, L4 compreende um grupo alquila ou uma alquila substituída. Em algumas modalidades, L4 compreende um grupo arila ou um grupo arila substituída. Em algumas modalidades, L4 compreende uma diamina (e.g., um grupo de ligação compreendendo uma alquilena diamina).
[00243] Em algumas modalidades, L é um ligante compreendendo -(L1)a-(L2)b-(L3)c- (L4)d-, onde: -(L1)a- é -(T1-V1)a-; -(L2)b- é -(T2-V2)b-; -(L3)c- é -(T3-V3)c-; e -(L4)d- é -(T4-V4)d-, em que T1, T2, T3 e T4 , se estiverem presentes, são grupos amarrados; V1, V2, V3 e V4, se estiverem presentes, são ligações covalentes ou grupos funcionais de ligação; e a, b, c e d são cada um independentemente 0 ou 1, em que a soma de a, b, c e d é de 1 a
4.
[00244] Como descrito acima, em certas modalidades, L1 é ligado ao hidrazinil-indol ou ao acoplamento fracionado de hidrazinil-indol-pirrol-piridinil (e.g., como mostrado na fórmula (I) acima). Como tal, em certas modalidades, T1 é ligado ao hidrazinil-indol ou ao acoplamento fracionado de hidrazinil-pirrol-piridinil (e.g., como mostrado na fórmula (I) acima). Como tal, em certas modalidades, V1 é ligado ao W1 (o maitansinóide). Em certas modalidades, L2, se estiver presente, é ligado ao W1. Como tal, em certas modalidades, T2, se estiver presente, é ligado ao W1, ou V2, se estiver presente, é ligado ao W1. Em certas modalidades, L3, se estiver presente, é ligado ao W1. Como tal, em certas modalidades, T3, se estiver presente, é ligado ao W1, ou V3, se estiver presente, é ligado ao W1. Em certas modalidades, L4, se estiver presente, é ligado ao W1. Como tal, em certas modalidades, T4, se estiver presente, é ligado ao W1, ou V4, se estiver presente, é ligado ao W1.
[00245] Em relação aos grupos amarrados, T1, T2, T3 e T4, quaisquer grupos amarrados convenientes podem ser utilizados nos ligantes. Em algumas modalidades, T1, T2, T3 e T4 cada um compreende um ou mais grupos, selecionados independentemente a partir de alquila(C1-C12), uma alquila (C1-C12) substituída, um (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, um dissulfeto, um hidrazina, e um éster, onde w é um inteiro a partir de 1 a 20, n inteiro a partir de 1 a 30, p inteiro a partir de 1 a 20, e h inteiro a partir de 1 a 12.
[00246] Em certas modalidades, quando a soma de a, b, c e d é 2 e um dos T1-V1, T2-V2, T3-V3, ou T4-V4 é (PEG)n-CO, então n não é 6. Por exemplo, em alguns casos, o ligante pode ter a seguinte estrutura: , onde n não é 6.
[00247] Em certas modalidades, quando a soma de a, b, c e d é 2 e um dos T1-V1, T2-V2, T3-V3, ou T4-V4 é alquila(C1-C12)-NR15, então alquila(C1-C12) não é uma alquila C5. Por exemplo, em alguns casos, o ligante pode ter a seguinte estrutura: , onde g não é 4.
[00248] Em certas modalidades, o grupo amarrado (e.g., T1, T2, T3 e/ou T4) inclui uma alquila(C1-C12) ou uma alquila (C1-C12) substituída. Em certas modalidades, alquila(C1-C12) é uma cadeia linear ou ramificada do grupo alquila que inclui de 1 a 12 átomos de carbono, como
1 a 10 átomos de carbono ou 1 a 8 átomos de carbono ou 1 a 6 átomos de carbono ou 1 a 5 átomos de carbono ou 1 a 5 átomos de carbono ou 1 a 4 átomos de carbono ou 1 a 3 átomos de carbono. Em alguns casos, alquila(C1-C12) pode ser uma alquila ou alquila substituída, tal como alquila(C1-C12 ), ou alquila(C1-C10), ou alquila(C1-C6), ou alquila(C1-C3). Em alguns casos, alquila(C1-C12) é uma alquila C2. Por exemplo, alquila(C1-C12) pode ser uma alquilena ou alquilena substituída, tal como alquilena C1-C12, ou alquilena C1-C10, ou alquilena C1-C6, ou alquilena C1-C3. Em alguns casos, alquila(C1-C12) é uma alquilena C2 substituída.
[00249] Em certas modalidades, alquila (C1-C12) substituída é uma cadeia linear ou ramificada do grupo alquila substituída que inclui de 1 a 12 átomos de carbono, como 1 a 10 átomos de carbono ou 1 a 8 átomos de carbono ou 1 a 6 átomos de carbono , ou 1 a 5 átomos de carbono ou 1 a 4 átomos de carbono ou 1 a 3 átomos de carbono. Em alguns casos, alquila (C1- C12) substituída pode ser uma alquila substituída, tal como alquila C1-C12 substituída, ou alquila C1-C10 substituída, ou alquila C1-C6 substituída, ou alquila C1-C3 substituída. Em alguns casos, alquila (C1-C12) substituída é uma alquila C2 substituída. Por exemplo, alquila (C1-C12) substituída pode ser uma alquilena substituída, tal como alquilena C1-C12 substituída, ou alquilena C1-C10 substituída, ou alquilena C1-C6 substituída, ou alquilena C1-C3 substituída. Em alguns casos, alquila (C1-C12) substituída é uma alquilena C2 substituída.
[00250] Em certas modalidades, o grupo amarrado (e.g., T1, T2, T3 e/ou T4) inclui uma fração de etileno diamina (EDA), e.g., um EDA contendo amarras. Em certas modalidades, (EDA)w inclui um ou mais frações de EDA, como onde w é um número inteiro de 1 a 50, como de 1 a 40, de 1 a 30, de 1 a 20, de 1 a 12 ou de 1 a 6, como 1, 2, 3, 4, 5 ou 6). A fração do ligante etileno diamina (EDA) pode opcionalmente ser substituído em uma ou mais posições convenientes por quaisquer substituintes convenientes, e.g., com uma alquila, uma alquila substituída, um acila, um acila substituída, uma arila ou uma arila substituída. Em certas modalidades, a fração EDA é descrita pela estrutura: , onde y é um inteiro de 1 a 6, r é 0 ou 1, e cada R12 é selecionado independentemente de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila,
acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Em certas modalidades, y é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em certas modalidades, y é 1 e r é 0. Em certas modalidades, y é 1 e r é 1. Em certas modalidades, y é 2 e r é 0. Em certas modalidades, y é 2 e r é 1. Em certas modalidades, cada R12 é selecionado independentemente de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila e uma arila substituída. Em certas modalidades, nenhum dos dois grupos adjacententes R12 de EDA podem ser ligados ciclicamente, e.g., para formar um anel piperazinila. Em certas modalidades, y é 1 e os dois grupos adjacentes R12 são um grupo alquila, ligados ciclicamente para formar um anel de piperazinila. Em certas modalidades, y é 1 e os grupos adjacentes R12 são selecionados a partir de hidrogênio, uma alquila (e.g., metila) e uma alquila substituída (e.g., alquil-OH inferior, tal como etil-OH ou propil-OH).
[00251] Em certas modalidades, o grupo amarrado inclui uma fração de 4-amino- piperidine (4AP) (também aqui referido como piperidin-4-amino, P4A). A fração 4AP pode opcionalmente ser substituído em uma ou mais posições convenientes com quaisquer substituintes convenientes, e.g., com uma alquila, uma alquila substituída, uma fração de polietilenoglicol, um acila, um acila substituída, uma arila ou uma arila substituída. Em certas modalidades, a fração de 4AP é descrita pela estrutura: onde R12 é selecionado de hidrogênio, alquila, alquila substituída, uma fração de polietilenoglicol (e.g., um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado), alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Em certas modalidades, R12 é uma fração de um polietilenoglicol. Em certas modalidades, R12 é um carboxi polietilenoglicol modificado.
[00252] Em certas modalidades, R12 inclui uma fração de polietilenoglicol descrita pela fórmula: (PEG)k , que pode ser representado pela estrutura:
, onde k é um número inteiro de 1 a 20, como 1 a 18, ou de 1 a 16, ou de 1 a 14, ou de 1 a 12, ou de 1 a 10, ou de 1 a 10, ou de 1 a 8, ou de 1 para 6 ou de 1 a 4 ou 1 ou 2, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20. Em alguns casos, k é 2. Em certas modalidades, R17 é selecionado a partir de OH, COOH, ou COOR, onde R é selecionado a partir de alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Em certas modalidades, R17 é COOH.
[00253] Em certas modalidades, um grupo amarrado (e.g., T1, T2, T3 e/ou T4) incluiu (PEG)n, onde a unidade ligante (PEG)n é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado. Em certas modalidades, (PEG)n é descrita pela estrutura: , onde n é um número inteiro de 1 a 50, como de 1 a 40, de 1 a 30, de 1 a 20, de 1 a 12 ou de 1 a 6, como 1, 2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20. Em alguns casos, n é 2. Em alguns casos, n é 3. Em alguns casos, n é 6. Em alguns casos, n é 12.
[00254] Em certas modalidades, um grupo amarrado (e.g., T1, T2, T3 e/ou T4) inclui (AA)p, onde AA é um resíduo de aminoácido. Quaisquer aminoácidos convenientes podem ser utilizados. Os aminoácidos de interesse incluem, entre outros, aminoácidos L- e D-, aminoácidos de ocorrência natural, como qualquer um dos 20 aminoácidos primários e beta-alanina, aminoácidos de ocorrência não-natural (e.g., análogos de aminoácidos), além dos alfa- aminoácido ou beta-aminoácido, entre outros, que também não ocorrem naturalmente. Em certas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 50, como 1 a 40, 1 a 30, 1 a 20, 1 a 12 ou 1 a 6, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20. Em certas modalidades, p é 1. Em certas modalidades, p é 2.
[00255] Em certas modalidades, um grupo amarrado (e.g., T1, T2, T3 e/ou T4) incluiu uma fração descrita pela fórmula -(CR13OH)h-, onde h é 0 ou n é um inteiro de 1 a 50, de 1 a 40, de 1 a 30, de 1 a 20, de 1 a 12 ou de 1 a 6, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12. Em certas modalidades, h é 1. Em certas modalidades, h é 2. Em certas modalidades, R13 é selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila,
alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Em certas modalidades, R13 é hidrogênio. Em certas modalidades, R13 é alquila ou alquila substituída, tal como alquila C1-6 ou alquila C1-6 substituída, ou alquila C1-4 ou alquila C1-4 substituída, ou alquila C1-3 ou alquila C1-3 substituída. Em certas modalidades, R13 é alquenila ou alquenila substituída, tal como alquenila C2-6 ou alquenila C2-6 substituída, ou alquenila C2-4 ou alquenila C2-4 substituída, ou alquenila C2-3 ou alquenila C2-3 substituída. Em certas modalidades, R13 é alquinila ou alquinila substituída. Em certas modalidades, R13 é alcoxi ou alcoxi substituída. Em certas modalidades, R13 é amina ou amina substituída. Em certas modalidades, R13 é carboxila ou éster de carboxila. Em certas modalidades, R13 é acila ou aciloxi. Em certas modalidades, R13 é acil amina ou amino acila. Em certas modalidades, R13 é alquilamida ou alquilamida substituída. Em certas modalidades, R13 é sulfonil. Em certas modalidades, R13 é tioalcoxi ou tioalcoxi substituída. Em certas modalidades, R13 é arila ou arila substituída, tal como arila C5-8 ou arila C5-8 substituída, tal como uma arila C5 ou arila C5 substituída, ou uma arila C6 ou arila C6 substituída. Em certas modalidades, R13 é heteroarila ou heteroarila substituída, tal como heteroarila C5-8 ou heteroarila C5-8 substituída, tal como uma heteroarila C5 ou heteroarila C5 substituída, ou uma heteroarila C6 ou heteroarila C6 substituída. Em certas modalidades, R13 é cicloalquila ou cicloalquila substituída, tal como cicloalquila C3-8 ou cicloalquila C3-8 substituída, tal como uma cicloalquila C3-6 ou cicloalquila C3-6 substituída, ou uma cicloalquila C3-5 ou cicloalquila C3-5 substituída. Em certas modalidades, R13 é heterociclila ou heterociclila substituída, tal como heterociclila C3-8 ou heterociclila C3-8 substituída, tal como uma heterociclila C3-6 ou heterociclila C3-6 substituída, ou uma heterociclila C3-5 ou heterociclila C3-5 substituída.
[00256] Em certas modalidades, R13 é selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída. Nestas modalidades, alquil, alquila substituída, arila, e arila substituída como são descritas acima para R13.
[00257] Em relação aos grupos funcionais de ligação, V1, V2, V3 e V4, qualquer grupo funcional de ligação conveniente pode ser utilizado nos ligantes. Os grupos funcionais de ligação de interesse incluem, mas não estão limitados a amina, carbonila, amida, oxicarbonila, carboxi,
sulfonila, sulfóxido, sulfonilamina, aminosulfonila, tio, oxi, fosfo, fosforamidato, tiofosforamidato e afins. Em algumas modalidades, V1, V2, V3 e V4 são cada um independentemente selecionados para uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, - NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, - NR15SO2- e -P(O)OH-, onde q é um inteiro de 1 a 6. Em certas modalidades, q é um número inteiro de 1 a 6 (e.g., 1, 2, 3, 4, 5 ou 6). Em certas modalidades, q é 1. Em certas modalidades, q é 2.
[00258] Em algumas modalidades, cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonila, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída.
[00259] As várias possibilidades para cada R15 são descritos em mais detalhes a seguir. Em certas modalidades, cada R15 é hidrogênio. Em certas modalidades, cada R15 é hidrogênio. Em certas modalidades, R15 é alquila ou alquila substituída, tal como alquila C1-6 ou alquila C1-6 substituída, ou alquila C1-4 ou alquila C1-4 substituída, ou alquila C1-3 ou alquila C1-3 substituída. Em certas modalidades, R15 é alquenila ou alquenila substituída, tal como alquenila C2-6 ou alquenila C2-6 substituída, ou alquenila C2-4 ou alquenila C2-4 substituída, ou alquenila C2-3 ou alquenila C2-3 substituída. Em certas modalidades, R15 é alquinila ou alquinila substituída. Em certas modalidades, R15 é alcoxi ou alcoxi substituída. Em certas modalidades, R15 é amina ou amina substituída. Em certas modalidades, R15 é carboxila ou éster de carboxila. Em certas modalidades, R15 é acila ou aciloxi. Em certas modalidades, R15 é acil amina ou amino acila. Em certas modalidades, R15 é alquilamida ou alquilamida substituída. Em certas modalidades, R15 é sulfonila. Em certas modalidades, R15 é tioalcoxi ou tioalcoxi substituída. Em certas modalidades, R15 é arila ou arila substituída, tal como arila C5-8 ou arila C5-8 substituída, tal como uma arila C5 ou arila C5 substituída, ou uma arila C6 ou arila C6 substituída. Em certas modalidades, R15 é heteroarila ou heteroarila substituída, tal como heteroarila C5-8 ou heteroarila C5-8 substituída, tal como uma heteroarila C5 ou heteroarila C5 substituída, ou uma heteroarila C6 ou heteroarila C6 substituída. Em certas modalidades, R15 é cicloalquila ou cicloalquila substituída, tal como cicloalquila C3-8 ou cicloalquila C3-8 substituída, tal como uma cicloalquila
C3-6 ou cicloalquila C3-6 substituída, ou uma cicloalquila C3-5 ou cicloalquila C3-5 substituída. Em certas modalidades, R15 é heterociclila ou heterociclila substituída, tal como heterociclila C3-8 ou heterociclila C3-8 substituída, tal como uma heterociclila C3-6 ou heterociclila C3-6 substituída, ou uma heterociclila C3-5 ou heterociclila C3-5 substituída.
[00260] Em certas modalidades, cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, carboxila éster, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída. Nestas modalidades, o hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída substituintes como é descrito acima para R15.
[00261] Em certas modalidades, o grupo amarrado inclui um grupo acetal, um dissulfeto, uma hidrazina ou um éster. Em algumas modalidades, o grupo amarrado inclui um grupo de acetal. Em algumas modalidades, o grupo amarrado inclui um dissulfeto. Em algumas modalidades, o grupo amarrado inclui uma hidrazina. Em algumas modalidades, o grupo amarrado inclui um éster.
[00262] Como descrito acima, em algumas modalidades, L é um ligante compreendendo - (T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-,onde a, b, c e d são cada um independentemente 0 ou 1, onde a soma de a, b, c e d é de 1 a 4.
[00263] Em algumas modalidades, no ligante: T1 é selecionado a partir de uma alquila(C1-C12) e uma alquila (C1-C12) substituída; T2, T3 e T4 cada um é selecionado independentemente a partir de alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 4-amino-piperidina (4AP), um grupo acetal, um dissulfureto, uma hidrazina e um éster; e V1, V2, V3 e V4 cada um é selecionado independentemente a partir de uma ligação covalente, - CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, - S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, onde q é um inteiro de 1 a 6; em que:
(PEG)n é , onde n é um inteiro de 1 a 30; EDA é uma fração de etileno diamina com a seguinte estrutura: , onde y é um inteiro de 1 a 6 e r é 0 ou 1; 4-amino-piperidina (4AP) é ; AA é um resíduo de aminoácido, em que p é um número inteiro de 1 a 20; e cada R15 e R12 é selecionado independentemente a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila e uma arila substituída, em que qualquer dois grupos adjacentes R12 pode ser ligado ciclicamente para formar um anel piperazinila; e R13 é selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída.
[00264] Em certas modalidades, T1, T2, T3 e T4 e V1, V2, V3 e V4 são selecionados na tabela a seguir, por exemplo, uma linha da tabela a seguir: T1 V1 V2 V2 T3 V3 T4 V4 alquila(C1- - (PEG)n -CO- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p - - - - - C12) alquila(C1- - (PEG)n -NR15- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -NR15- - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- - - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - - - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (EDA)w - - - C12) CONR15-
alquila(C1- -CO- (EDA)w - - - - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - alquila(C1- -CO- C12) CONR15 C12) - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- - - C12) C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (AA)p - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -SO2- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - (PEG)n -CO- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (CR13OH)h -CO- - - - - C12) alquila(C1- alquila(C1- - C12) -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) CONR15- substituída alquila(C1- -SO2- alquila(C1- -CO- - - - - C12) C12) alquila(C1- - alquila(C1- - (CR13OH)h - - - C12) CONR15- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) NR15-
alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n - (AA)p - C12) P(O)OH - alquila(C1- -CO- (EDA)w - (AA)p - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- alquila(C1- - C12) CONR15- C12) C12) NR15- alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- - - C12) C12)
[00265] Em certas modalidades, L é um ligante composto -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-, onde - (L1)a- é -(T1-V1)a-; -(L2)b- é -(T2-V2)b-; -(L3)c- é -(T3-V3)c-; e -(L4)d- é -(T4-V4)d-.
[00266] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (AA)p, V2 é -NR15-, T3 é (PEG)n, V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00267] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (EDA)w, V2 é -CO-, T3 é (CR13OH)h, V3 é -CONR15-, T4 é alquila(C1-C12) e V4 é -CO-.
[00268] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (AA)p, V2 é -NR15-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 é ausente.
[00269] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CONR15-, T2 é (PEG)n, V2 é - CO-, T3 está ausente, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00270] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (AA)p, V2 está ausente, T3 está ausente, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00271] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CONR15-, T2 é (PEG)n, V2 é - NR15-, T3 está ausente, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00272] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (AA)p, V2 é -NR15-, T3 é (PEG)n, V3 é -NR15-, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00273] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (EDA)w, V2 é -CO-, T3 está ausente, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00274] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CONR15-, T2 é alquila(C1- C12), V2 é -NR15-, T3 está ausente, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00275] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CONR15-, T2 é (PEG)n, V2 é - CO-, T3 é (EDA)w, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00276] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (EDA)w, V2 está ausente, T3 está ausente, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00277] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CONR15-, T2 é (PEG)n, V2 é - CO-, T3 é (AA)p, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00278] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (EDA)w, V2 é -CO-, T3 é (CR13OH)h, V3 é -CO-, T4 é (AA)p e V4 está ausente.
[00279] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (AA)p, V2 é -NR15-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 é (AA)p e V4 está ausente.
[00280] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (AA)p, V2 é -NR15-, T3 é (PEG)n, V3 é -CO-, T4 é (AA)p e V4 está ausente.
[00281] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (AA)p, V2 é -NR11-, T3 é (PEG)n, V3 é -SO2-, T4 é (AA)p e V4 está ausente.
[00282] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (EDA)w, V2 é -CO-, T3 é (CR13OH)h, V3 é -CONR15-, T4 é (PEG)n e V4 é -CO-.
[00283] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (CR13OH)h, V2 é - CO-, T3 está ausente, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00284] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CONR15-, T2 é substituída alquila(C1-C12), V2 é -NR15-, T3 é (PEG)n, V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00285] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12),V1 é -SO2-, T2 é alquila(C1-C12), V2 é -CO-, T3 está ausente, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00286] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CONR15-, T2 é alquila(C1- C12), V2 está ausente, T3 é (CR13OH)h, V3 é -CONR15-, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00287] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (AA)p, V2 é -NR15-, T3 é (PEG)n, V3 é -CO-, T4 é (AA)p e V4 é -NR15-.
[00288] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (AA)p, V2 é -NR15-, T3 é (PEG)n, V3 é -P(O)OH-, T4 é (AA)p e V4 está ausente.
[00289] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (EDA)w, V2 está ausente, T3 é (AA)p, V3 está ausente, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00290] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (EDA)w, V2 é -CO-, T3 é (CR13OH)h, V3 é -CONR15-, T4 é alquila(C1-C12) e V4 é -CO(AA)p-.
[00291] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CONR15-, T2 é alquila(C1- C12), V2 é -NR15-, T3 está ausente, V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00292] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CONR15-, T2 é alquila(C1- C12), V2 é -NR15-, T3 está ausente, V3 é -CO-, T4 é alquila(C1-C12) e V4 é -NR15-.
[00293] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é (EDA)w, V2 é -CO-, T3 é (CR13OH)h, V3 é -CONR15-, T4 é (PEG)n e V4 é -CO(AA)p-.
[00294] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 é (AA)p e V4 está ausente.
[00295] Em certas modalidades, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
[00296] Em certas modalidades, o ligante é descrito por uma das seguintes estruturas:
[00297] Em certas modalidades das estruturas de ligação descritas acima, cada f é independentemente 0 ou um número inteiro de 1 a 12; cada y é independentemente 0 ou um número inteiro de 1 a 20; cada n é independentemente 0 ou um número inteiro de 1 a 30; cada p é independentemente 0 ou um número inteiro de 1 a 20; cada h é independentemente 0 ou um número inteiro de 1 a 12; cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; e cada R’ é independentemente H, uma cadeia lateral de um aminoácido, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída.
Em certas modalidades das estruturas de ligação descritas acima, cada f é independentemente 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; cada y é independentemente 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; cada n é independentemente 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; cada p é independentemente 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; e cada h é independentemente 0, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em certas modalidades das estruturas de ligação descritas acima, cada R é independentemente H, metila ou -(CH2)m-OH onde m é 1, 2, 3 ou 4 (e.g., 2).
[00298] Em certas modalidades de ligante, L, T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente. Em certas modalidades, T1 é etileno, V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é etileno, V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente. Em certas modalidades, T1 é etileno, V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é etileno, V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente, onde T2 (e.g., 4AP) tem a seguinte estrutura: , em que R12 é uma fração de polietilenoglicol (e.g., um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado).
[00299] Em certas modalidades, o ligante, L, inclui a seguinte estrutura: , em que cada f é independentemente um número inteiro de 1 a 12; e n é um número inteiro de 1 a
30.
[00300] Em certas modalidades, f é 1. Em certas modalidades, f é 2. Em certas modalidades, um f é 2 e um f é 1.
[00301] Em certas modalidades, n é 1.
[00302] Em certas modalidades, o ligante, L, inclui a seguinte estrutura:
, em que cada f é independentemente um número inteiro de 1 a 12; e n é um número inteiro de 1 a 30.
[00303] Em certas modalidades, f é 1. Em certas modalidades, f é 2. Em certas modalidades, um f é 2 e um f é 1. Em algumas modalidades, ambos os f são 1.
[00304] Em certas modalidades, n é 1.
[00305] Em certas modalidades, o lado esquerdo da estrutura do ligante acima é ligado ao hidrazinil-indol ou a uma fração de acoplamento de hdrazinil-pirrolo-piridinil, e o lado direito da estrutura ligante acima está ligado a uma maitansina.
[00306] Qualquer uma das entidades químicas, ligantes e acoplamento fracionados estabelecidas nas estruturas acima pode ser adaptada para uso nos conjugados e compostos em questão.
[00307] A publicação do pedido n.º 2014/0141025 dos Estados Unidos da América, apresentado em 11 de Março de 2013, e do pedido n.º 2015/0157736 dos Estados Unidos da América, apresentado em 26 de Novembro de 2014, contém mais informações sobre os compostos hidrazinil-indol e hidrazinil-pirrolo-piridinil e os métodos para produzir um conjugado, sendo as informações sobre cada um deles incorporadas no presente documento por referência. ANTICORPOS ANTI-CD22
[00308] Como observado acima, um dado conjugado pode compreender, como substituinte W, um anticorpo anti-CD22, em que o anticorpo anti-CD22 foi modificado para incluir um resíduo de 2-formilglicina (FGly). Como usados aqui, os aminoácidos podem ser referidos por seu nome padrão, abreviação padrão de três letras e/ou abreviatura padrão de uma letra, como: Alanina ou Ala ou A; Cisteína ou Cis ou C; Ácido aspártico ou Asp ou D; Ácido glutâmico ou Glu ou E; Fenilalanina ou Fen ou F; Glicina ou Gli ou G; Histidina ou His ou H; Isoleucina ou Ile ou I; Lisina ou Lis ou K; Leucina ou Leu ou L; Metionina ou Met ou M; Asparagina ou Asn ou N; Proline ou Pro ou P; Glutamina ou Gln ou Q; Arginina ou Arg ou R; Serina ou Ser ou S; Treonina ou Tre ou T; Valina ou Val ou V; Triptofano ou Trp ou W; e tirosina ou Tir ou Y.
[00309] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado liga-se especificamente a um polipeptídeo CD22, em que o epítopo compreende resíduos de aminoácidos dentro de um antígeno CD22 (e.g., nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1-759, nos aminoácidos 1-751 , ou dentro dos aminoácidos 1-670, de uma sequência de aminoácidos CD22 representada na FIG. 8A-8C).
[00310] O epítopo CD22 pode ser formado por um polipeptídeo que possui pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99 % ou 100% , identidade da sequência de aminoácidos a um trecho adjacente de cerca de 500 aminoácidos a cerca de 670 aminoácidos da sequência de aminoácidos isoforma 4 de CD22 humana representada na FIG. 8A-8C. O epítopo CD22 pode ser formado por um polipeptídeo que possui pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99 % ou 100% de identidade da sequência de aminoácidos com um trecho adjacente de cerca de 500 aminoácidos a cerca de 751 aminoácidos da sequência de aminoácidos isoforma 3 CD22 humana representada na FIG. 8A-8C. O epítopo CD22 pode ser formado por um polipeptídeo que possui pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99 % ou 100% de identidade da sequência de aminoácidos com um trecho adjacente de cerca de 500 aminoácidos a cerca de 759 aminoácidos da sequência de aminoácidos isoforma 2 de CD22 humana representada na FIG. 8A-8C. O epítopo CD22 pode ser formado por um polipeptídeo que possui pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99 %, ou 100%, de identidade de sequência de aminoácidos a um trecho adjacente de cerca de
500 aminoácidos a cerca de 847 aminoácidos da sequência de aminoácidos isoforma 1 de CD22 humana representada na FIG. 8A-8C.
[00311] Um "antígeno CD22" ou "polipeptídeo CD22" pode compreender uma sequência de aminoácidos possuindo pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99%, ou 100%, de identidade de sequência de aminoácidos a um trecho contíguo de cerca de 500 aminoácidos (aa) a cerca de 847 aa (isoforma 1), a cerca de 759 aa (isoforma 2) e cerca de 751 aa (isoforma 3) ou a cerca de 670 aa (isoforma 4) de uma sequência de aminoácidos 1, 2, 3 ou 4 de isoforma CD22 representada na FIG. 8A-8C.
[00312] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado exibe alta ligação de afinidade ao CD22. Por exemplo, em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado se liga ao CD22 com uma afinidade de pelo menos cerca de 10-7 M, pelo menos cerca de 10-8 M, pelo menos cerca de 10-9 M, pelo menos cerca de 10-10 M, pelo menos cerca de 10-11 M, ou pelo menos cerca de 10-12 M, ou maior que 10-12 M. Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado se liga a um epítopo presente no CD22 com uma afinidade de aproximadamente 10-7 M a cerca de 10-8 M, a cerca de 10-8 M a cerca de 10-9 M, a cerca de 10-9 M a cerca de 10-10 M, a cerca de 10-10 M a cerca de 10-11 M, ou a cerca de 10-11 M a cerca de 10-12 M, ou maior que 10-12 M.
[00313] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compete pela ligação de um epítopo dentro do CD22 com um segundo anticorpo anti-CD22 e/ou se liga ao mesmo epítopo dentro do CD22, como um segundo anticorpo anti-CD22. Em alguns casos, um anticorpo anti- CD22 que compete pela ligação de um epítopo no CD22 com um segundo anticorpo anti-CD22 também se liga ao epítopo como o segundo anticorpo anti-CD22. Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 que compete pela ligação a um epítopo dentro do CD22 com um segundo anticorpo anti-CD22 se liga a um epítopo que se sobrepõe ao epítopo ligado ao segundo anticorpo anti- CD22. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado.
[00314] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado pode induzir apoptose em uma célula que expressa CD22 em sua superfície celular.
[00315] Um anticorpo anti-CD22 adequado para uso em um conjugado sujeito inibirá, em alguns casos, a proliferação de células tumorais humanas que superexpressam CD22, onde a inibição ocorre in vitro, in vivo ou in vitro e in vivo ao mesmo tempo. Por exemplo, em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado para uso em um conjugado sujeito inibe a proliferação de células tumorais humanas que superexpressam CD22 em pelo menos cerca de 15%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 25%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80% ou mais de 80%, por exemplo, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou 100%.
[00316] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compete para ligar com um epítopo CD22 (e.g., um epítopo compreendendo resíduos de aminoácidos dentro do antígeno CD22 (e.g., dentro dos aminoácidos 1 até 847, dentro dos aminoácidos 1-759, dentro dos aminoácidos 1-751, ou dentro dos aminoácidos 1-670, de uma sequência do aminoácido CD22 como mostrada na FIG. 8A-8C) com um anticorpo compreendendo uma região de determinação de complementaridade (CDR) de cadeia pesada selecionada a partir de IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 compete para ter uma ligação a um epítopo CD22 (e.g., um epítopo compreendendo resíduos de aminoácidos dentro de um antígeno CD22 (e.g., dentro dos aminoácidos 1 até 847, dentro dos aminoácidos 1-759, dentro dos aminoácidos 1-751, ou dentro dos aminoácidos 1-670, de uma sequência do aminoácido CD22 como mostrado na FIG. 8A-8C) com um anticorpo compreendendo uma CDR de cadeia leve selecionada a partir de RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado.
[00317] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compete para se ligar a um epítopo CD22 (e.g., um epítopo compreendendo resíduos de aminoácido dentro do antígeno CD22 (e.g., dentro dos aminoácidos 1 até 847, dentro dos aminoácidos 1-759, dentro dos aminoácidos 1-751, ou dentro dos aminoácidos 1-670, de uma sequência do aminoácido CD22 como mostrado na FIG. 8A-8C) com um anticorpo compreendendo VH CDRs IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compete para se ligar a um epítopo CD22 (e.g., um epítopo compreendendo resíduos de aminoácidos dentro do antígeno
CD22 (e.g., um epítopo dentro dos aminoácidos 1 até 847, dentro dos aminoácidos 1-759, dentro dos aminoácidos 1-751, ou dentro dos aminoácidos 1-670, de uma sequência do aminoácido CD22 como mostrado na FIG. 8A-8C) com um anticorpo compreendendo os VL CDRs RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compete para se ligar a um epítopo CD22 (e.g., um epítopo compreendendo resíduos de aminoácidos dentro do antígeno CD22 (e.g., dentro dos aminoácidos 1 até 847, dentro dos aminoácidos 1-759, dentro dos aminoácidos 1-751, ou dentro dos aminoácidos 1-670, de uma sequência do aminoácido CD22 como mostrado na FIG. 8A-8C) com um anticorpo que compreende os VH CDRs IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19) e VL CDRs RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado.
[00318] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende os VH CDRs IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19). Em alguns casos, o anticorpo anti- CD22 é humanizado. Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VL CDRs RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VH CDRs IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19) e VL CDRs RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado.
[00319] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VH CDRs presentes em uma região VH de um anti-CD22 compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos:
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGG GTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLF
AYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado.
[00320] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VL CDRs presentes em uma região VL de anti-CD22 compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSG VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 24). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado.
[00321] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VH CDRs presentes em
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGG
GTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLF AYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23) e VL CDRs presentes em
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSG VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 24). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado.
[00322] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende: a) uma cadeia pesada compreendendo uma região VH tendo a sequência de aminoácidos EVQLVESGGGLVKPGGSLX1LSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGG GTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNX2LYLQMX3SLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVL FAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 25), onde X1 é K (Lys) ou R (Arg); X2 é S (Ser) ou T (Thr); e X3 é N (Asn) ou S (Ser); e b) uma cadeia leve de imunoglobulina.
[00323] Uma cadeia leve pode ter qualquer sequência de aminoácidos VL adequada, sempre que o anticorpo resultando tenha uma ligação específica com CD22.
[00324] Algumas sequências de aminoácidos VL incluem:
[00325] DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLI
YYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVE IKR (SEQ ID NO: 24; VK1);
[00326] DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLI
YYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVE IKR (SEQ ID NO: 26; VK2); e
[00327] DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLI
YYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVE IKR (SEQ ID NO: 27; VK4).
[00328] Assim, e.g., um anticorpo anti-CD22 adequado pode compreender: a) uma cadeia pesada compreendendo uma região VH que tem uma sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 25; e uma cadeia leve compreendendo uma região VL de VK1 (SEQ ID NO: 24). Em outros casos, um anticorpo anti-CD22 adequado pode compreender: a) uma cadeia pesada compreendendo uma a região VH tendo uma sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 25; e uma cadeia leve compreendendo uma região VL de VK2 (SEQ ID NO: 26). Ainda em outros casos, um anticorpo anti-CD22 sujeito pode compreender: a) uma cadeia pesada compreendendo uma região VH tendo uma sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 25; e uma cadeia leve compreendendo a região VL de VK4 (SEQ ID NO: 27).
[00329] Em algumas instâncias, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende: a) uma cadeia leve de imunoglobulina compreendendo a sequência de aminoácidos: DIQMTQSPSSX1SASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAX2KLLIYYTSILHS GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQX3EDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 28), onde X1 é L (Leu) ou V (Val); X2 é V (Val) ou P (Pro); e X3 é Q (Gln) ou P (Pro); e b) uma cadeia pesada de imunoglobulina. A cadeia pesada pode compreender um sequência de aminoácidos selecionada a partir de:
[00330] EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLE
WVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSG YGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 29; VH3);
[00331] EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLE
WVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSG YGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23; VH4);
[00332] EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLE
WVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAMYYCARHSG YGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 30; VH5); e
[00333] EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLE
WVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSG YGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 31; VH6).
[00334] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 compreende uma região VH compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos:
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGG
GTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLF AYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23).
[00335] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 compreende uma região VH compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos:
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGG
GTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLF AYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23) e uma região VL compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSG VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 24). Sequências de região constante modificadas
[00336] Como notado acima, a sequência de aminoácidos de um anticorpo anti-CD22 é modificada para incluir um motivo de sulfatase que contêm um resíduo de serina ou cisteína que é capaz de ser convertido (oxidado) para um resíduo de 2-formilglicina (FGly) pela ação de uma enzima geradora de formilglicina (FGE) tanto in vivo (e.g., ao tempo de translação de uma proteína que contém um marcador de aldeído em uma célula) como in vitro (e.g., ao contatar um proteína contendo um marcador de aldeído com uma FGE em um sistema sem células). Esses motivos de sulfatase também podem ser referidos neste texto como em um sítio de modificação da FGE. Motivos de Sulfatase
[00337] Um motivo de sulfatase mínimo de um marcador de aldeído tem um comprimento usual de 5 até 6 resíduos de aminoácidos, usualmente não mais de 6 resíduos de aminoácidos de comprimento. Os motivos de sulfatase fornecidos em um polipeptídeo Ig são pelo menos de 5 ou 6 resíduos de aminoácido, e podem ter, por exemplo, de 5 até 15, 6-16, 5-15, 6-15, 5-14, 6-14, 5- 13, 6-13, 5-12, 6-12, 5-11, 6-11, 5-10, 6-10, 5-9, 6-9, 5-8, ou 6-8 resíduos de aminoácidos de comprimento, de forma que para definir um motivo de sulfatase de menos de 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 ou 7 resíduos de aminoácidos de comprimento.
[00338] Em certas modalidades, os polipeptídeos de interesse incluem aqueles onde um ou mais resíduos de aminoácidos, como ser 2 ou mais, ou 3 ou mais, ou 4 ou mais, ou 5 ou mais, ou 6 ou mais, ou 7 ou mais, ou 8 ou mais, ou 9 ou mais, ou 10 ou mais, ou 11 ou mais, ou 12 ou mais, ou 13 ou mais, ou 14 ou mais, ou 15 ou mais, ou 16 ou mais, ou 17 ou mais, ou 18 ou mais ,ou 19 ou mais, ou 20 ou mais resíduos de aminoácidos têm sido inseridos, excluídos, substituídos (restituídos) relativos à sequência de aminoácidos nativa para fornecer para uma sequência do motivo de sulfatase no polipeptídeo. Em certas modalidades, o polipeptídeo inclui uma modificação (inserção, adição, exclusão e/ou substituição/restituição) de menos de 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 ou 2 resíduos de aminoácidos relativos à sequência de aminoácidos do polipeptídeo. Onde uma sequência nativa de aminoácidos do polipeptídeo (e.g., o anticorpo anti-CD22) contêm um ou mais resíduos do motivo de sulfatase desejado, o número total de modificações dos resíduos pode ser reduzido, e.g., através da modificação de sítio-específica (inserção, adição, exclusão, substituição/restituição) dos resíduos de aminoácidos ligando os resíduos de aminoácidos nativos para fornecer uma sequência do motivo de sulfatase requerido. Em certas modalidades, a extensão da modificação das sequências de aminoácidos do alvo de polipeptídeo anti-CD22 é minimizada, de forma de minimizar o número de resíduos de aminoácidos que estão inseridos, excluídos, substituídos (restituídos), ou adicionado (e.g., à N- ou C-terminal). Minimizando a extensão da modificação da sequência de aminoácidos do alvo de polipeptídeo anti-CD22 pode minimizar o impacto que estas modificações podem ter sobre a função e/ou estrutura anti-CD22.
[00339] Deve ser notado que enquanto os rótulos de aldeídos de interesse particular são aqueles que compreendem pelo menos um motivo de sulfatase mínimo (também referido como “motivo de sulfatase de consenso”), deve ser rapidamente visto que os rótulos de aldeído maiores são contemplados e abrangidos pela presente divulgação e podem ter um uso na composição e métodos da presente divulgação. Os rótulos de aldeído podem então compreender um motivo de sulfatase mínimo de 5 ou 6 resíduos, ou podem ser maiores e compreender um motivo de sulfatase mínimo a qual pode estar ligado nos lados N- e/ou C-terminal do motivo por resíduos de aminoácidos adicionais. Os rótulos de aldeído de, por exemplo, 5 ou 6 resíduos de aminoácidos são contemplados, assim como são contempladas sequências de aminoácidos maiores de mais de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou mais resíduos de aminoácidos.
[00340] Um rótulo de aldeído pode estar presente em ou próximo à C-terminal de uma cadeia pesada Ig; e.g., um rótulo de aldeído pode estar presente dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 aminoácidos da C-terminal de uma cadeia tipo pesada de Ig nativa. Um rótulo de aldeído pode estar presente dentro do domínio CH1 de uma cadeia pesada de Ig. Um rótulo de aldeído pode estar presente dentro do domínio CH2 de uma cadeia pesada de Ig. Um rótulo de aldeído pode estar presente dentro do domínio CH3 de uma cadeia pesada de Ig. Um rótulo de aldeído pode estar presente em uma região constante da cadeia leve de Ig, e.g., em uma região constante kappa da cadeia leve ou uma região constante lambda da cadeia leve.
[00341] Em certas modalidades, o motivo de sulfatase usado pode ser descrito pela fórmula (SEQ ID NOs: 191 – 192): X1Z10X2Z20X3Z30 (I’) onde Z10 é cisteína ou serina (que também pode estar representado por (C/S)); Z20 é um resíduo de prolina ou de alanina (que também pode estar representado por (P/A)); Z30 é um aminoácido básico (e.g., arginina (R), e pode ser lisina (K) ou histidina (H), e.g., lisina), ou um aminoácido alifático (alanina (A), glicina (G), leucina (L), valina (V), isoleucina (I), ou prolina (P), e.g., A, G, L, V, ou I; X1 está presente (SEQ ID NO: 191) ou ausente (SEQ ID NO: 192) e, quando estiver presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferentes de um aminoácido carregado ou um aminoácido aromático), e.g., L, M, V, S ou T, e.g., L, M, S ou V, com a condição que quando o motivo de sulfatase esteja na N-terminal para um polipeptídeo alvo, X1 esteja presente; e X2 e X3 podem, independentemente, ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), contudo, usualmente um aminoácido alifático, um aminoácido sem carga e polar, ou um aminoácido que contém enxofre (i.e., diferentes de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., S, T, A, V, G ou C, e.g., S, T, A, V ou G.
[00342] A sequência de aminoácidos de uma cadeia leve e/ou pesada de um anti-CD22 pode ser modificada para fornecer uma sequência de pelo menos 5 aminoácidos da fórmula X1Z10X2Z20X3Z30, onde Z10 é cisteina ou serina; Z20 é um resíduo de prolina ou de alanina; Z30 é um aminoácido alifático ou um aminoácido básico; X1 está presente (SEQ ID NO: 191) ou ausente (SEQ ID NO: 192) e, quando estiver presente, é qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), com a condição de que quando o motivo de sulfatase heterólogo está em uma N-terminal do polipeptídeo, X1 está presente; X2 e X3 são, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de occorência natural), onde a sequência está dentro ou é adjacente a uma região de laço acessível para solvente da região constante de Ig, e onde a sequência não está em uma C-terminal da cadeia pesada de Ig.
[00343] O motivo de sulfatase é geralmente selecionado de forma que seja capaz de ser convertido por uma FGE selecionada, e.g., uma FGE presente em uma célula hospedeira na qual um polipeptídeo marcado por aldeído é expressado ou uma FGE a qual será contatada com o polipeptídeo marcado por aldeído em um método in vitro sem células.
[00344] Por exemplo, onde a FGE é uma FGE eucariótica (e.g., uma FGE de mamífero, incluindo uma FGE humana), o motivo de sulfatase pode ser da fórmula (SEQ ID NOs: 193 – 194): X1CX2PX3Z30 (I”) onde X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 193) ou ausente (SEQ ID NO: 194) e, quando estiver presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., L, M, S ou V, com a condição que quando o motivo de sulfatase estiver em uma N-terminal do polipeptídeo alvo, X1 está presente;
X2 e X3 podem ser, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., S, T, A, V, G, ou C, e.g., S, T, A, V ou G; e Z30 é um aminoácido básico (e.g., arginina (R), e pode ser lisina (K) ou histidina (H), e.g., lisina), ou um aminoácido alifático (alanina (A), glicina (G), leucina (L), valina (V), isoleucina (I), ou prolina (P), e.g., A, G, L, V, ou I.
[00345] Exemplos específicos dos motivos de sulfatase incluem LCTPSR (SEQ ID NO: 32), MCTPSR (SEQ ID NO: 33), VCTPSR (SEQ ID NO: 34), LCSPSR (SEQ ID NO: 35), LCAPSR (SEQ ID NO: 36), LCVPSR (SEQ ID NO: 37), LCGPSR (SEQ ID NO: 38), ICTPAR (SEQ ID NO: 39), LCTPSK (SEQ ID NO: 40), MCTPSK (SEQ ID NO: 41), VCTPSK (SEQ ID NO: 42), LCSPSK (SEQ ID NO: 43), LCAPSK (SEQ ID NO: 44), LCVPSK (SEQ ID NO: 45), LCGPSK (SEQ ID NO: 46), LCTPSA (SEQ ID NO: 47), ICTPAA (SEQ ID NO: 48), MCTPSA (SEQ ID NO: 49), VCTPSA (SEQ ID NO: 50), LCSPSA (SEQ ID NO: 51), LCAPSA (SEQ ID NO: 52), LCVPSA (SEQ ID NO: 53), e LCGPSA (SEQ ID NO: 54). Sequências que contém FGly
[00346] Mediante ação da FGE em uma cadeia leve e/ou pesada anti-CD22, a serina e a cisteína no motivo de sulfatase é modificado para FGly. Assim, o motivo de sulfatase que contém FGly pode ser da fórmula (SEQ ID NOs: 187 e 188): X1(FGly)X2Z20X3Z30 (I’’’) onde FGly é o resíduo de formilglicina; Z20 é um resíduo de prolina ou de alanina (o qual pode ser representado por (P/A)); Z30 é um aminoácido básico (e.g., arginina (R), o pode ser lisina (K) ou histidina (H), sendo usualmente lisina), ou um aminoácido alifático (alanina (A), glicina (G), leucina (L), valina (V), isoleucina (I), ou prolina (P), e.g., A, G, L, V, ou I; X1 pode estar presente (i.e., SEQ ID NO: 187) or ausente (i.e., SEQ ID NO: 188) e, quando estiver presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., L, M, V, S ou T, e.g., L, M ou V, com a condição que quando o motivo de sulfatase estiver em uma N-terminal do polipeptídeo alvo, X1 está presente; e X2 e X3 podem ser, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., S, T, A, V, G or C, e.g., S, T, A, V or G.
[00347] Como descrito acima, o polipeptídeo modificado contendo o resíduo de FGly pode estar conjugado com um fármaco (e.g., um maitansinóide) por reação do FGly com o fármaco (e.g., um fármaco contendo uma fração de acoplamento de hidrazinil-indol ou uma fração de acoplamento de hidrazinil-pirrol-piridinil, como descrito acima) para produzir um motivo de sulfatase contendo FGly’. Como é usado neste texto, o termo FGly’ refere-se ao resíduo de aminoácido modificado do motivo de sulfatase que está acoplado ao fármaco, como ser um maitansinóide (e.g., o resíduo de aminoácidos modificado da fórmula (I)). Assim, o motivo de sulfatase que contém FGly’ pode ser da fórmula (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) onde FGly’ é um resíduo de aminoácidos modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou de alanina (o qual pode ser representado por (P/A)); Z30 é um aminoácido básico (e.g., arginina (R), e pode ser lisina (K) ou histidina (H), sendo usualmente lisina), ou um aminoácido alifático (alanina (A), glicina (G), leucina (L), valina (V), isoleucina (I), ou prolina (P), e.g., A, G, L, V, ou I; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando estiver presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., L, M, V, S ou T, e.g., L, M ou V, com a condição que quando o motivo de sulfatase estiver em uma N-terminal do polipeptídeo alvo, X1 está presente; e X2 e X3 podem ser, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., S, T, A, V, G ou C, e.g., S, T, A, V ou G.
[00348] Em certas modalidades, o resíduo de aminoácidos modificado da fórmula (I) está posicionado na C-terminal de uma região constante de cadeia pesada do anticorpo anti-CD22. Em algumas instâncias, a região constante de cadeia pesada compreende a sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) onde FGly’ é o resíduo de aminoácidos modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou de alanina (o qual pode ser representado por (P/A)); Z30 é um aminoácido básico (e.g., arginina (R), e pode ser lisina lisina (K) ou histidina (H), sendo usualmente lisina), ou um aminoácido alifático (alanina (A), glicina (G), leucina (L), valina (V), isoleucina (I), ou prolina (P), e.g., A, G, L, V, ou I; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando estiver presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., L, M, V, S ou T, e.g., L, M ou V, com a condição que quando o motivo de sulfatase estiver em uma N-terminal do polipeptídeo alvo, X1 está presente; e X2 e X3 podem ser, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., S, T, A, V, G ou C, e.g., S, T, A, V ou G; e em que a sequência é C-terminal à sequência de aminoácidos QKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 55), e onde a sequência pode incluir 1, 2, 3, 4, 5, ou de 5 até 10, aminoácidos não presentes em uma região constante da cadeia tipo pesada de Ig nativa.
[00349] Em certas modalidades, a região constante de cadeia pesada compreende a sequência SLSLSPGSL(FGly’)TPSRGS (SEQ ID NO: 56) na C-terminal da cadeia pesada de Ig, e.g., no lugar de uma sequência nativa SLSLSPGK (SEQ ID NO: 57).
[00350] Em certas modalidades, o resíduo de aminoácidos modificado da fórmula (I) está posicionado em uma região constante de cadeia leve do anticorpo anti-CD22. Em certas modalidades, a região de cadeia leve compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) onde FGly’ é o resíduo de aminoácidos modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou de alanina (o qual pode ser representado por (P/A)); Z30 é um aminoácido básico (e.g., arginina (R), e pode ser lisina (K) ou histidina (H), sendo usualmente lisina), ou um aminoácido alifático (alanina (A), glicina (G), leucina (L), valina (V), isoleucina (I), ou prolina (P), e.g., A, G, L, V, ou I; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando estiver presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., L, M, V, S ou T, e.g., L, M ou V, com a condição que quando o motivo de sulfatase estiver em uma N-terminal do polipeptídeo alvo, X1 está presente; e X2 e X3 podem ser, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., S, T, A, V, G ou C, e.g., S, T, A, V ou G; e em que a sequência é C-terminal à sequência de aminoácidos KVDNAL (SEQ ID NO: 58) e/ou é N-terminal à sequência de aminoácidos QSGNSQ (SEQ ID NO: 59).
[00351] Em certas modalidades, a região constante de cadeia leve compreende a sequência KVDNAL(FGly’)TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 60).
[00352] Em certas modalidades, o resíduo de aminoácidos modificado da fórmula (I) está posicionado em uma região de cadeia pesada CH1 do anticorpo anti-CD22. Em certas modalidades, a região de cadeia pesada CH1 compreende a sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II)
onde FGly’ é o resíduo de aminoácidos modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou de alanina (o qual pode ser representado por (P/A)); Z30 é um aminoácido básico (e.g., arginina (R), e pode ser lisina (K) ou histidina (H), sendo usualmente lisina), ou um aminoácido alifático (alanina (A), glicina (G), leucina (L), valina (V), isoleucina (I), ou prolina (P), e.g., A, G, L, V, ou I; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando estiver presente, pode ser qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., L, M, V, S ou T, e.g., L, M ou V, com a condição que quando o motivo de sulfatase estiver em uma N-terminal do polipeptídeo alvo, X1 está presente; e X2 e X3 podem ser, independentemente, qualquer aminoácido, (e.g., qualquer aminoácido de ocorrência natural), e.g., um aminoácido alifático, um aminoácido que contém enxofre, ou um aminoácido sem carga e polar, (i.e., diferente de um aminoácido aromático ou um aminoácido carregado), e.g., S, T, A, V, G ou C, e.g., S, T, A, V ou G; e em que a sequência é C-terminal à sequência de aminoácidos SWNSGA (SEQ ID NO: 61) e/ou é N-terminal à sequência de aminoácidos GVHTFP (SEQ ID NO: 62).
[00353] Em certas modalidades, a região de cadeia pesada CH1 compreende a sequência SWNSGAL(FGly’)TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 63). Local de modificação
[00354] Como notado acima, a sequência de aminoácidos de um anticorpo anti-CD22 é modificada para incluir um motivo de sulfatase que contenha um resíduo de serina ou de cisteína que seja capaz ser convertido (oxidado) para um resíduo FGly pela ação de uma FGE seja in vivo (e.g., no tempo de translação de uma proteína marcada por aldeído em uma célula) ou in vitro (e.g., ao contatar uma proteína contendo um aldeído marcado com uma FGE em um sistema sem células). Os polipeptídeos anti-CD22 usados para gerar um conjugado da presente divulgação incluem pelo menos uma região constante de Ig, e.g., uma região constante de cadeia pesada de Ign (e.g., pelo menos um domínio CH1; pelo menos um domínio CH1 e um domínio CH2; um domínio CH1, CH2, e CH3; ou um domínio CH1, CH2, CH3, e CH4), ou uma região constante de cadeia leve de Ig. Estes polipeptídeos Ig são referidos neste texto como “polipeptídeos Ig alvo” ou “anticorpos anti-CD22 alvo” ou “polipeptídeos Ig anti-CD22 alvo”.
[00355] O local no anticorpo anti-CD22 no qual um motivo de sulfatase é introduzido pode ser qualquer local conveniente. Como foi notado acima, em algumas instâncias, a extensão de modificação da sequência nativa de aminoácidos do polipeptídeo anti-CD22 alvo é minimizada, assim como para minimizar o número de resíduos de aminoácidos que são inseridos, removidos, substituídos (restituídos) e/ou adicionados (e.g., às N- ou C-terminais). A minimização da extensão da modificação das sequências de aminoácidos de polipeptídeos anti- CD22 alvo pode minimizar o impacto que tais modificações podem ter sobre o funcionamento ou a estrutura do anti-CD22.
[00356] Uma região constante de cadeia pesada do anticorpo anti-CD22 pode incluir regiões constantes de Ig de qualquer isotipo de cadeia pesada, regiões constantes de Ig de cadeia pesada de ocorrência não natural (incluindo regiões constantes de Ig de cadeia pesada de consenso). Uma região constante de Ig pode ser modificada para incluir um rótulo de aldeído, onde o rótulo de aldeído está presente em ou é adjacente a região de laço acessível por solventes ou uma região constante de Ig. Uma região constante de Ig pode ser modificada pela inserção e/ou substituição de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, ou 16 aminoácidos, ou mais de 16 aminoácidos, para fornecer uma sequência de aminoácidos de um motivo de sulfatase, como acima descrito.
[00357] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 marcado por aldeído compreende uma região constante de Ig de cadeia pesada marcada por aldeído (e.g., pelo menos um domínio CH1; pelo menos um domínio CH1 e um domínio CH2; um domínio CH1, CH2, e CH3; ou um domínio CH1, CH2, CH3, e CH4). A região constante de Ig de cadeia pesada marcada por aldeído pode incluir sequências de região constante de cadeias pesadas de isotipo IgA, IgM, IgD, IgE, IgG1, IgG2, IgG3, ou IgG4 ou qualquer variação aliotípica das mesmas, e.g., sequências de regiões constantes de cadeia pesada de humanos ou sequências de regiões constantes de cadeia pesada de ratos, uma região constante de cadeia pesada híbrida, uma região constante de cadeia pesada sintética, ou um sequência de região constante de cadeia pesada de consenso, etc., modificadas para incluir pelo menos um motivo de sulfatase que pode ser modificado por uma FGE para gerar um polipeptídeo Ig de FGly modificado. Variantes alotípicas de cadeias pesadas de Ig são conhecidas na área, veja, e.g., Jefferis and Lefranc (2009) MAbs 1:4.
[00358] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 marcado por aldeído compreende uma região constante de Ig de cadeia leve marcada por aldeído. A região constante de Ig de cadeia leve marcada por aldeído pode incluir regiões constantes de sequências de cadeias leves kappa, cadeias leves lambda, e.g., regiões constantes de cadeia leve kappa de humanos ou regiões constantes de cadeia leve lambda de humanos, uma região constante de cadeia leve híbrida, uma região constante de cadeia leve sintética, ou uma região constante de sequência de cadeia leve de consenso, etc., modificadas para incluir pelo menos um motivo de sulfatase que pode ser modificado por uma FGE para gerar um polipeptídeo do anticorpo anti-CD22 modificado por FGly. Algumas regiões constantes, a maneira de exemplo, incluem as regiões gamma 1 humano e gamma 3 humano. Com exceção do motivo de sulfatase, uma região constante modificada pode ter uma sequência de aminoácidos do tipo selvagem, ou pode ter uma sequência de aminoácidos que seja pelo menos 70% idêntica (e.g., pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% idêntica) a uma sequência de aminoácidos do tipo selvagem.
[00359] Em algumas modalidades o motivo de sulfatase está em uma posição diferente da, ou em adição a, C-terminal da cadeia pesada do polipeptídeo Ig. Como foi notado acima, um polipeptídeo anti-CD22 marcado por aldeído isolado pode compreender uma região constante de cadeia pesada modificada para incluir um motivo de sulfatase como descrito anteriormente, onde o motivo de sulfatase está em, ou é adjacente a, uma região de laço acessível por superfície da região constante de cadeia pesada do polipeptídeo anti-CD22.
[00360] Em algumas instâncias, a imunoglobulina anti-CD22 alvo é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, remoções, e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo de sulfatase está dentro de, ou é adjacente a, uma região de uma região constante de IgG1 de cadeia pesada correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 122-127; 2) aminoácidos 137- 143; 3) aminoácidos 155-158; 4) aminoácidos 163-170; 5) aminoácidos 163-183; 6) aminoácidos 179-183; 7) aminoácidos 190-192; 8) aminoácidos 200-202; 9) aminoácidos 199-202; 10) aminoácidos 208-212; 11) aminoácidos 220-241; 12) aminoácidos 247-251; 13) aminoácidos 257-261; 14) aminoácidos 269-277; 15) aminoácidos 271-277; 16) aminoácidos 284-285; 17) aminoácidos 284-292; 18) aminoácidos 289-291; 19) aminoácidos 299-303; 20) aminoácidos 309-313; 21) aminoácidos 320-322; 22) aminoácidos 329-335; 23) aminoácidos 341-349; 24) aminoácidos 342-348; 25) aminoácidos 356-365; 26) aminoácidos 377-381; 27) aminoácidos
388-394; 28) aminoácidos 398-407; 29) aminoácidos 433-451; e 30) aminoácidos 446-451; onde a numeração de aminoácidos está baseada na numeração de aminoácidos do IgG1 humano como mostrado na Figura 9B.
[00361] Em algumas instâncias, a imunoglobulina anti-CD22 alvo é modificada para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, remoções, e/ou substituições de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo de sulfatase está dentro de, ou é adjacente a, uma região de uma região constante de IgG1 de cadeia constante correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42-49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127-131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácidos 149-157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217-261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; onde a numeração de aminoácidos está baseada na numeração de aminoácidos do IgG1 humano como estabelecido em SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humano; sequência mostrada na Figura 9B).
[00362] Regiões de laço acessíveis por superfícies de uma cadeia pesada de IgG1 exemplares incluem: 1) ASTKGP (SEQ ID NO: 64); 2) KSTSGGT (SEQ ID NO: 65); 3) PEPV (SEQ ID NO: 66); 4) NSGALTSG (SEQ ID NO: 67); 5) NSGALTSGVHTFPAVLQSSGL (SEQ ID NO: 68); 6) QSSGL (SEQ ID NO: 69); 7) VTV (SEQ ID NO: 70); 8) QTY (SEQ ID NO: 71); 9) TQTY (SEQ ID NO: 72); 10) HKPSN (SEQ ID NO: 73); 11) EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG (SEQ ID NO: 74); 12) FPPKP (SEQ ID NO: 75); 13) ISRTP (SEQ ID NO: 76); 14) DVSHEDPEV (SEQ ID NO: 77); 15) SHEDPEV (SEQ ID NO: 78); 16) DG (SEQ ID NO: 79); 17) DGVEVHNAK (SEQ ID NO: 80); 18) HNA (SEQ ID NO: 81); 19) QYNST (SEQ ID NO: 82); 20) VLTVL (SEQ ID NO: 83); 21) GKE (SEQ ID NO: 84); 22) NKALPAP (SEQ ID NO: 85); 23) SKAKGQPRE (SEQ ID NO: 86); 24) KAKGQPR (SEQ ID NO: 87); 25) PPSRKELTKN (SEQ ID NO: 88); 26) YPSDI (SEQ ID NO: 89); 27) NGQPENN (SEQ ID NO: 90; 28) TPPVLDSDGS (SEQ ID NO: 91); 29)
HEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 92); e 30) SLSPGK (SEQ ID NO: 93), como mostrado nas Figuras 9A e 9B.
[00363] Em algumas instâncias, um alvo de imunoglobulina é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, remoções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em algumas modalidades, o motivo de sulfatase está dentro de, ou é adjacente a, uma região de uma região constante de iGg2 de cadeia pesada correspondente a um ou mais de : 1) aminoácidos 1-6 ; 2) aminoácidos 13-24; 3) aminoácidos 33-37; 4) aminoácidos 43-54; 5) aminoácidos 58-63; 6) aminoácidos 69-71; 7) aminoácidos 78-80; 8) aminoácidos 87-89; 9) aminoácidos 95-96; 10) aminoácidos 114-118; 11) aminoácidos 122-126; 12) aminoácidos 134-136; 13) aminoácidos 144-152; 14) aminoácidos 159-167; 15) aminoácidos 175-176; 16) aminoácidos 184-188; 17) aminoácidos 195-197; 18) aminoácidos 204-210; 19) aminoácidos 216-224 ; 20) aminoácidos 231-233; 21) aminoácidos 237-241; 22) aminoácidos 252-256; 23) aminoácidos 263-269; 24) aminoácidos 273-282; 25) aminoácidos 299-302; onde a numeração de aminoácidos está baseada na numeração de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 8 (IgG2 humano; também mostrado na Figura 9B).
[00364] Regiões de laço acessíveis por superfícies de uma cadeia pesada de IgG2 incluem 1) ASTKGP (SEQ ID NO: 64); 2) PCSRSTSESTAA (SEQ ID NO: 94); 3) FPEPV (SEQ ID NO:/ 95); 4) SGALTSGVHTFP (SEQ ID NO: 96); 5) QSSGLY (SEQ ID NO: 97); 6) VTV (SEQ ID NO: 70); 7) TQT (SEQ ID NO: 98); 8) HKP (SEQ ID NO: 99); 9) DK (SEQ ID NO: 100); 10) VAGPS (SEQ ID NO: 101); 11) FPPKP (SEQ ID NO: 75); 12) RTP (SEQ ID NO: 102); 13) DVSHEDPEV (SEQ ID NO: 77); 14) DGVEVHNAK (SEQ ID NO: 80); 15) FN (SEQ ID NO: 103); 16) VLTVV (SEQ ID NO: 104); 17) GKE (SEQ ID NO: 84); 18) NKGLPAP (SEQ ID NO: 105); 19) SKTKGQPRE (SEQ ID NO: 106); 20) PPS (SEQ ID NO: 107); 21) MTKNQ (SEQ ID NO: 108); 22) YPSDI (SEQ ID NO: 89); 23) NGQPENN (SEQ ID NO: 90); 24) TPPMLDSDGS (SEQ ID NO: 109); 25) GNVF (SEQ ID NO: 110); e 26) HEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 92), como mostrado na Figura 9B.
[00365] Em algumas instâncias, um alvo de imunoglobulina é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, remoções, e/ou substituições do resíduo de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo de sulfatase está dentro de, ou é adjacente a, uma região de uma região constante de IgG3 de cadeia pesada correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 13-22 ; 3)
aminoácidos 33-37; 4) aminoácidos 43-61; 5) aminoácidos 71; 6) aminoácidos 78-80; 7) aminoácidos 87-91; 8) aminoácidos 97-106; 9) aminoácidos 111-115; 10) aminoácidos 147-167; 11) aminoácidos 173-177; 16) aminoácidos 185-187; 13) aminoácidos 195-203; 14) aminoácidos 210-218; 15) aminoácidos 226-227; 16) aminoácidos 238-239; 17) aminoácidos 246-248; 18) aminoácidos 255-261; 19) aminoácidos 267-275; 20) aminoácidos 282-291; 21) aminoácidos 303-307; 22) aminoácidos 313-320; 23) aminoácidos 324-333; 24) aminoácidos 350-352; 25) aminoácidos 359-365; e 26) aminoácidos 372-377; onde a numeração de aminoácidos está baseada na numeração de sequências de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 9 (IgG3 humano; também mostrado na Figura 9B).
[00366] Regiões de laço de uma cadeia pesada de IgG3 que são acessíveis por superfícies incluem 1) ASTKGP (SEQ ID NO: 64); 2) PCSRSTSGGT (SEQ ID NO: 111); 3) FPEPV (SEQ ID NO: 95); 4) SGALTSGVHTFPAVLQSSG (SEQ ID NO: 112); 5) V (SEQ ID NO: 113); 6) TQT (SEQ ID NO: 98); 7) HKPSN (SEQ ID NO: 73); 8) RVELKTPLGD (SEQ ID NO: 114); 9) CPRCPKP (SEQ ID NO: 115); 10) PKSCDTPPPCPRCPAPELLGG (SEQ ID NO: 116); 11) FPPKP (SEQ ID NO: 75); 12) RTP (SEQ ID NO: 102); 13) DVSHEDPEV (SEQ ID NO: 77); 14) DGVEVHNAK (SEQ ID NO: 80); 15) YN (SEQ ID NO: 117); 16) VL (SEQ ID NO: 118); 17) GKE (SEQ ID NO: 84); 18) NKALPAP (SEQ ID NO: 85); 19) SKTKGQPRE (SEQ ID NO: 119); 20) PPSREEMTKN (SEQ ID NO: 120); 21) YPSDI (SEQ ID NO: 89); 22) SSGQPENN (SEQ ID NO: 121); 23) TPPMLDSDGS (SEQ ID NO: 109); 24) GNI (SEQ ID NO: 122); 25) HEALHNR (SEQ ID NO: 123); e 26) SLSPGK (SEQ ID NO: 93), como mostrado na Figura 9B.
[00367] Em algumas instâncias, um alvo de imunoglobulina é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, remoções e/ou substituições de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo de sulfatase está dentro de, ou é adjacente a, uma região de uma região constante de IgG4 de cadeia pesada correspondente a um ou mas de: 1) aminoácidos 1-5; 2) aminoácidos 12-23; 3) aminoácidos 32- 36; 4) aminoácidos 42-53; 5) aminoácidos 57-62; 6) aminoácidos 68-70; 7) aminoácidos 77-79; 8) aminoácidos 86-88; 9) aminoácidos 94-95; 10) aminoácidos 101-102; 11) aminoácidos 108- 118; 12) aminoácidos 122-126; 13) aminoácidos 134-136; 14) aminoácidos 144-152; 15) aminoácidos 159-167; 16) aminoácidos 175-176; 17) aminoácidos 185-186; 18) aminoácidos 196-198; 19) aminoácidos 205-211; 20) aminoácidos 217-226; 21) aminoácidos 232-241; 22)
aminoácidos 253-257; 23) aminoácidos 264-265; 24) aminoácidos 269-270; 25) aminoácidos 274-283; 26) aminoácidos 300-303; 27) aminoácidos 399-417; onde a numeração de aminoácidos está baseada na numeração de sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 10 (IgG4 humano; também mostrado na Figura 9B).
[00368] Exemplos de regiões de laço acessíveis à superfície de uma cadeia pesada de IgG4 incluem 1)STKGP (SEQ ID NO: 124); 2) PCSRSTSESTAA (SEQ ID NO: 94); 3) FPEPV (SEQ ID NO: 95); 4) SGALTSGVHTFP (SEQ ID NO: 96); 5) QSSGLY (SEQ ID NO: 97); 6) VTV (SEQ ID NO: 70); 7) TKT (SEQ ID NO: 125); 8) HKP (SEQ ID NO: 99); 9) DK (SEQ ID NO: 100); 10) YG (SEQ ID NO: 126); 11) CPAPEFLGGPS (SEQ ID NO: 127); 12) FPPKP (SEQ ID NO: 75); 13) RTP (SEQ ID NO: 102); 14) DVSQEDPEV (SEQ ID NO: 128); 15) DGVEVHNAK (SEQ ID NO: 80); 16) FN (SEQ ID NO: 103); 17) VL (SEQ ID NO: 118); 18) GKE (SEQ ID NO: 84); 19) NKGLPSS (SEQ ID NO: 129); 20) SKAKGQPREP (SEQ ID NO: 130); 21) PPSQEEMTKN (SEQ ID NO: 131); 22) YPSDI (SEQ ID NO: 89); 23) NG (SEQ ID NO: 132); 24) NN (SEQ ID NO: 133); 25) TPPVLDSDGS (SEQ ID NO: 91); 26) GNVF (SEQ ID NO: 110); e 27) HEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 134), como mostrado na figura 9B.
[00369] Em alguns casos, um alvo de imunoglobulina é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e / ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo de sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgA correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-13; 2) aminoácidos 17-21; 3) aminoácidos 28-32; 4) aminoácidos 44-54; 5) aminoácidos 60-66; 6) aminoácidos 73-76; 7) aminoácidos 80-82; 8) aminoácidos 90-91; 9) aminoácidos 123-125; 10) aminoácidos 130-133; 11) aminoácidos 138-142; 12) aminoácidos 151-158; 13) aminoácidos 165-174; 14) aminoácidos 181-184; 15) aminoácidos 192-195; 16) aminoácido 199; 17) aminoácidos 209-210; 18) aminoácidos 222-245; 19) aminoácidos 252-256; 20) aminoácidos 266-276; 21) aminoácidos 293-294; 22) aminoácidos 301-304; 23) aminoácidos 317-320; 24) aminoácidos 329-353; onde a numeração de aminoácidos é baseada na numeração da sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 11 (IgA humana; também representada na Figura 9B).
[00370] Exemplos de regiões de laço acessíveis à superfície de uma cadeia pesada de IgA incluem 1) ASPTSPKVFPLSL (SEQ ID NO: 135); 2) QPDGN (SEQ ID NO: 136); 3)
VQGFFPQEPL (SEQ ID NO: 137); 4) SGQGVTARNFP (SEQ ID NO: 138); 5) SGDLYTT (SEQ ID NO: 139); 6) PATQ (SEQ ID NO: 140); 7) GKS (SEQ ID NO: 141); 8) YT (SEQ ID NO: 142); 9) CHP (SEQ ID NO: 143); 10) HRPA (SEQ ID NO: 144); 11) LLGSE (SEQ ID NO: 145); 12) GLRDASGV (SEQ ID NO: 146); 13) SSGKSAVQGP (SEQ ID NO: 147); 14) GCYS (SEQ ID NO: 148); 15) CAEP (SEQ ID NO: 149); 16) PE (SEQ ID NO: 150); 17) SGNTFRPEVHLLPPPSEELALNEL (SEQ ID NO: 151); 18) ARGFS (SEQ ID NO: 152); 19) QGSQELPREKY (SEQ ID NO: 153); 20) AV (SEQ ID NO: 154); 21) AAED (SEQ ID NO: 155); 22) HEAL (SEQ ID NO: 156); e 23) IDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY (SEQ ID NO: 157), como mostra na Figura 9B.
[00371] Um motivo de sulfatase pode ser fornecido dentro ou adjacente a uma ou mais dessas sequências de aminoácidos de tais locais de modificação de uma cadeia pesada de Ig. Por exemplo, um polipeptídeo de cadeia pesada de Ig pode ser modificado (e.g., onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos) em uma ou mais dessas sequências de aminoácidos para fornecer um motivo de sulfatase adjacente e terminal N e/ou adjacente e terminal C a esses locais de modificação. Alternativamente ou além disso, um polipeptídeo de cadeia pesada de Ig pode ser modificado (e.g., onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos) em uma ou mais dessas sequências de aminoácidos para fornecer um motivo de sulfatase entre quaisquer dois resíduos dos locais de modificação da cadeia pesada de Ig. Em algumas modalidades, um polipeptídeo de cadeia pesada de Ig pode ser modificado para incluir duas modificações, que podem ser adjacentes um ao outro, ou que podem ser separados por um, dois, três, quatro ou mais (e.g., de cerca de 1 a cerca de 25, de cerca de 25 a cerca de 50 ou de cerca de 50 a cerca de 100 ou mais aminoácidos. Alternativamente ou além disso, quando uma sequência de aminoácidos nativa fornece um ou mais resíduos de aminoácidos de um motivo de sulfatase, resíduos de aminoácidos selecionados dos locais de modificação de uma sequência de aminoácidos de polipeptídeo de cadeia pesada de Ig podem ser modificados (e.g., onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos), de modo a fornecer um motivo de sulfatase no local de modificação.
[00372] A sequência de aminoácidos de uma região de laço acessível à superfície pode, assim, ser modificada para fornecer um motivo de sulfatase, onde as modificações podem incluir inserções, deleções e/ou substituições. Por exemplo, onde a modificação está em um domínio
CH1, a região do laço acessível à superfície pode ter a sequência de aminoácidos NSGALTSG (SEQ ID NO: 67), e a sequência marcada com aldeído pode ser, e.g., NSGALCTPSRG (SEQ ID NO: 158), e.g., onde o “TS” resíduos de NSGALTSG (SEQ ID NO: 67), sequência é substituída por “CTPSR,” , i.e., NSGALCTPSRG (SEQ ID NO: 159), de modo que o motivo sulfatase tenha a sequência LCTPSR (SEQ ID NO: 32). Como outro exemplo, onde a modificação está em um domínio CH2, a região do laço acessível à superfície pode ter a sequência de aminoácidos NKALPAP (SEQ ID NO: 85), e a sequência marcada com aldeído pode ser, e.g., NLCTPSRAP (SEQ ID NO: 160), e.g., onde o “KAL” resíduos de NKALPAP (SEQ ID NO: 85) sequência é substituída por “LCTPSR,” de modo que o motivo sulfatase tenha a sequência LCTPSR (SEQ ID NO: 32). Como outro exemplo, onde a modificação está em um domínio CH2/CH3, a região do loop acessível à superfície pode ter a sequência de aminoácidos KAKGQPR (SEQ ID NO: 87), e a sequência marcada com aldeído pode ser, e.g., KAKGLCTPSR (SEQ ID NO: 161), e.g., onde o “GQP” resíduos de KAKGQPR (SEQ ID NO: 87) sequência é substituída por “LCTPS,” de modo que o motivo sulfatase tenha a sequência LCTPSR (SEQ ID NO: 32).
[00373] Como observado acima, um polipeptídeo de Ig anti-CD22 marcado com aldeído isolado pode compreender uma região constante da cadeia leve modificada para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde o motivo de sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de laço acessível à superfície da região constante da cadeia leve do polipeptídeo Ig. Exemplos ilustrativos de regiões de alça acessíveis à superfície de uma região constante da cadeia leve são apresentados nas Figuras 9A e 9C.
[00374] Em alguns casos, um alvo de imunoglobulina é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia leve de Ig correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 130-135; 2) aminoácidos 141-143; 3) aminoácidos 150; 4) aminoácidos 162-166; 5) aminoácidos 163-166; 6) aminoácidos 173-180; 7) aminoácidos 186-194; 8) aminoácidos 211-212; 9) aminoácidos 220-225; 10) aminoácidos 233- 236; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos da cadeia leve kappa humana, como representado na Figura 9C. Em alguns casos, um alvo de imunoglobulina é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia leve de Ig correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácidos 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 e 13 (cadeia leve kappa humana; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, i.e., seq1 e seq2, respectivamente).
[00375] Exemplos de regiões de alça acessíveis à superfície de uma cadeia leve de Ig (e.g., uma cadeia leve kappa humana) incluem: 1) RTVAAP (SEQ ID NO: 162); 2) PPS (SEQ ID NO: 107); 3) Gly (ver, e.g., Gly na posição 150 da sequência de cadeia leve kappa humana representada na Figura 9C); 4) YPREA (SEQ ID NO: 163); 5) PREA (SEQ ID NO: 164); 6) DNALQSGN (SEQ ID NO: 165); 7) TEQDSKDST (SEQ ID NO: 166); 8) HK (SEQ ID NO: 167); 9) HQGLSS (SEQ ID NO: 168); e 10) RGEC (SEQ ID NO: 169), como mostra nas Figuras 9A e 9C.
[00376] Regiões de laço acessíveis à superfície exemplares de uma cadeia leve de Ig lambda, e.g., seq3 (SEQ ID NO: 14) na Figura 9C, incluem QPKAAP (SEQ ID NO: 170), PPS (SEQ ID NO: 107), NK (SEQ ID NO: 171), DFYPGAV (SEQ ID NO: 172), DSSPVKAG (SEQ ID NO: 173), TTP (SEQ ID NO: 174), SN (SEQ ID NO: 175), HKS (SEQ ID NO: 176), EG (SEQ ID NO: 177), e APTECS (SEQ ID NO: 178), como mostra na Figura 9C.
[00377] Em alguns casos, um alvo de imunoglobulina é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia leve de Ig de rato correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácidos 121-22; 4) aminoácidos 31-37; 5) aminoácidos 44-51; 6) aminoácidos 55-57; 7) aminoácidos 61- 62; 8) aminoácidos 81-83; 9) aminoácidos 91-92; 10) aminoácidos 102-105; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos da cadeia leve de rato, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 16 (seq5 representada na Figura 9C).
[00378] Em alguns casos, um motivo de sulfatase é introduzido na região CH1 de uma região constante da cadeia pesada anti-CD22. Em alguns casos, um motivo de sulfatase é introduzido no ou próximo (e.g., dentro de 1 a 10 aminoácidos) do terminal C de uma cadeia pesada anti-CD22. Em alguns casos, um motivo de sulfatase é introduzido na região constante da cadeia leve.
[00379] Em alguns casos, um motivo de sulfatase é introduzido na região CH1 de uma região constante da cadeia pesada anti-CD22, e.g., dentro dos aminoácidos 121-219 da sequência de aminoácidos da cadeia pesada IgG1 representada na Figura 9A. Por exemplo, em alguns casos, um motivo de sulfatase é introduzido na sequência de aminoácidos:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVE (SEQ ID NO: 179). Por exemplo, em algumas dessas modalidades, a sequência de aminoácidos GALTSGVH (SEQ ID NO: 180) é modificada para GALCTPSRGVH (SEQ ID NO: 181), onde o motivo de sulfatase é LCTPSR (SEQ ID NO: 32).
[00380] Em alguns casos, um motivo de sulfatase é introduzido no terminal C de uma cadeia pesada anti-CD22 ou próximo a ele, por exemplo, os motivos de sulfatase introduzidos em 1 aminoácido, 2 aminoácidos (aa), 3 aa, 4 aa, 5 aa , 6 aa, 7 aa, 8 aa, 9 aa ou 10 aa, o terminal C de uma cadeia pesada anti-CD22. Como um exemplo não-limitante, o resíduo de lisina C- terminal de uma cadeia pesada anti-CD22 pode ser substituído pela sequência de aminoácidos SLCTPSRGS (SEQ ID NO: 182).
[00381] Em alguns casos, um motivo de sulfatase é introduzido na região constante de uma cadeia leve de um anticorpo anti-CD22. Como um exemplo não-limitativo, em alguns casos, um motivo de sulfatase é introduzido na região constante de uma cadeia leve de um anticorpo anti-CD22, onde o motivo de sulfatase é C-terminal para KVDNAL (SEQ ID NO: 58), e/ou é N- terminal para QSGNSQ (SEQ ID NO: 59). Por exemplo, em alguns casos, o motivo de sulfatase é LCTPSR (SEQ ID NO: 32), e a cadeia leve anti-CD22 compreende a sequência de aminoácidos KVDNALLCTPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 183). Exemplares de anticorpos anti-CD22
[00382] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compete pela ligação a um epítopo CD22 (por exemplo, um epítopo nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1-759, nos aminoácidos 1-751 ou nos aminoácidos 1-670 , de uma sequência de aminoácidos CD22 representada na FIG. 8A-8C) com um anticorpo compreendendo uma VH CDR de cadeia pesada selecionada a partir de IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH
CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42-49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127-131; 13) aminoácidos 137- 141; 14) aminoácido 149-157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217-261; 27) aminoácidos 268- 274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; e.g., onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, isto é, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00383] Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e / ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42-49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7)
aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127-131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149- 157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217-261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e / ou substituições de resíduos de aminoácidos; por exemplo, onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, isto é, seq1 ou seq2, respectivamente). RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado.
Em alguns casos, o anticorpo anti- CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos.
Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 122-127; 2) aminoácidos 137-143; 3) aminoácidos 155-158; 4) aminoácidos 163-170; 5) aminoácidos 163-183; 6) aminoácidos 179-183; 7) aminoácidos 190- 192; 8) aminoácidos 200-202; 9) aminoácidos 199-202; 10) aminoácidos 208-212; 11) aminoácidos 220-241; 12) aminoácidos 247-251; 13) aminoácidos 257-261; 14) aminoácido 269- 277; 15) aminoácidos 271-277; 16) aminoácidos 284-285; 17) aminoácidos 284-292; 18) aminoácidos 289-291; 19) aminoácidos 299-303; 20) aminoácidos 309-313; 21) aminoácidos 320-322; 22) aminoácidos 329-335; 23) aminoácidos 341-349; 24) aminoácidos 342-348; 25)
aminoácidos 356-365; 26) aminoácidos 377-381; 27) aminoácidos 388-394; 28) aminoácidos 398-407; 29) aminoácidos 433-451; e 30) aminoácidos 446-451; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos da IgG1 humana, como representado na Figura 9B. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; por exemplo, onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, isto é, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00384] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compete pela ligação de um epítopo CD22 (e.g., um epítopo nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1-759, nos aminoácidos 1-751 ou nos aminoácidos 1-670 , de uma sequência de aminoácidos CD22 representada na FIG. 8A-8C) com um anticorpo compreendendo VH CDRs IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42-49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127-131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149- 157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217-261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; por exemplo, onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00385] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compete pela ligação de um epítopo CD22 (e.g., um epítopo nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1-759, nos aminoácidos 1-751 ou nos aminoácidos 1-670 , de uma sequência de aminoácidos CD22 representada na FIG. 8A-8C) com um anticorpo compreendendo VL CDRs RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42- 49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127- 131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149-157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217- 261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de
IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; e.g., onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, isto é, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00386] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compete pela ligação de um epítopo CD22 (e.g., um epítopo nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1-759, nos aminoácidos 1-751 ou nos aminoácidos 1- 670, de uma sequência de aminoácidos CD22 representada na FIG. 8A-8C) com um anticorpo que compreende VH CDRs IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19) e VL CDRs RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42- 49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127- 131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149-157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217- 261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de
IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; por exemplo, onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, isto é, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00387] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VH CDRs IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19). Em alguns casos, o anticorpo anti- CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42-49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127-131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149- 157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217-261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B.) Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir uma sulfatase motivo como descrito acima, em que a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; e.g., onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2)
aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, isto é, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00388] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VL CDRs RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). corpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42- 49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127- 131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149-157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217- 261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; por exemplo, onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00389] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VH CDRs IYDMS (VH CDR1; SEQ ID NO: 17), YISSGGGTTYYPDTVKG (VH CDR2; SEQ ID NO: 18), e HSGYGSSYGVLFAY (VH CDR3; SEQ ID NO: 19) e VL CDRs RASQDISNYLN (VL CDR1; SEQ ID NO: 20), YTSILHS (VL CDR2; SEQ ID NO: 21), e QQGNTLPWT (VL CDR3; SEQ ID NO: 22). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42- 49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127- 131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149-157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217- 261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; por exemplo, onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00390] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VH CDRs presentes em uma VH região anti-CD22 compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos:
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGG
GTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLF AYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42-49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127-131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149- 157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217-261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; por exemplo, onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, isto é, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00391] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende CDRs VL presentes em uma VL região anti-CD22 compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSG VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 24). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42- 49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127- 131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149-157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217- 261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; por exemplo, onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00392] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende VH CDRs presentes em
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGG
GTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLF AYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23) e VL CDRs presente em
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSG VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 24). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é humanizado. Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42- 49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127- 131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149-157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217- 261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos; por exemplo, onde o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante de Ig kappa correspondente a um ou mais de: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 12-14; 3) aminoácido 21; 4) aminoácidos 33-37; 5) aminoácidos 34-37; 6) aminoácidos 44-51; 7) aminoácidos 57-65; 8) aminoácidos 83-83; 9) aminoácidos 91-96; 10) aminoácidos 104-107; onde a numeração de aminoácidos é baseada nas SEQ ID NOs: 12 ou 13 (cadeias leves kappa humanas; sequências de aminoácidos representadas na Figura 9C, seq1 ou seq2, respectivamente).
[00393] Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende a sequência de aminoácidos VH
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGG
GTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLF AYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23). Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende a sequência de aminoácidos VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSG VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIKR (SEQ ID
NO: 24). Em alguns casos, um anticorpo anti-CD22 adequado compreende a sequência de aminoácidos VH
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGG
GTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLF AYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23); e a sequência de aminoácidos VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSG VPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 24). Em alguns casos, o anticorpo anti-CD22 é modificado para incluir um motivo de sulfatase como descrito acima, onde a modificação inclui uma ou mais inserções, deleções e/ou substituições de resíduos de aminoácidos. Em certas modalidades, o motivo da sulfatase está dentro ou adjacente a uma região de uma região constante da cadeia pesada de IgG1 correspondente a um ou mais dos seguintes: 1) aminoácidos 1-6; 2) aminoácidos 16-22; 3) aminoácidos 34-47; 4) aminoácidos 42-49; 5) aminoácidos 42-62; 6) aminoácidos 34-37; 7) aminoácidos 69-71; 8) aminoácidos 79-81; 9) aminoácidos 78-81; 10) aminoácidos 87-91; 11) aminoácidos 100-121; 12) aminoácidos 127-131; 13) aminoácidos 137-141; 14) aminoácido 149- 157; 15) aminoácidos 151-157; 16) aminoácidos 164-165; 17) aminoácidos 164-172; 18) aminoácidos 169-171; 19) aminoácidos 179-183; 20) aminoácidos 189-193; 21) aminoácidos 200-202; 22) aminoácidos 209-215; 23) aminoácidos 221-229; 24) aminoácidos 22-228; 25) aminoácidos 236-245; 26) aminoácidos 217-261; 27) aminoácidos 268-274; 28) aminoácidos 278-287; 29) aminoácidos 313-331; e 30) aminoácidos 324-331; em que a numeração de aminoácidos é baseada na numeração de aminoácidos de IgG1 humana, conforme estabelecido na SEQ ID NO: 7 (região constante de IgG1 humana representada na Figura 9B).
Fármacos para Conjugação a um Polipeptídeo
[00394] A presente divulgação fornece conjugados de fármaco-polipeptídeo. Exemplos de fármacos incluem fármacos de pequenas moléculas, como um agente anticancerígenos do câncer. Por exemplo, onde o polipeptídeo é um anticorpo (ou fragmento do mesmo) que tem especificidade para uma célula tumoral, o anticorpo pode ser modificado conforme descrito aqui para incluir um aminoácido modificado, que pode ser subsequentemente conjugado com um agente anticancerígenos do câncer, como um microtúbulo que afeta agentes. Em certas modalidades, o fármaco é um agente que afeta microtúbulos que possui atividade antiproliferativa, como um maitansinóide. Em certas modalidades, o fármaco é um maitansinóide, que como a seguinte estrutura: onde indica o ponto de ligação entre o maitansinóide e o ligante, L, na fórmula (I). Por "ponto de ligação" entende-se que o símbolo indica a ligação entre o N do maitansinóide e o ligante L na fórmula (I). Por exemplo, na fórmula (I), W1 é um maitansinóide, como um maitansinóide da estrutura acima, em que indica o ponto de ligação entre o maitansinóide e o ligante L.
[00395] Como descrito acima, em certas modalidades, L é um ligante descrito pela fórmula -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-, em que L1, L2 , L3 e L4 são cada um independentemente uma unidade de ligação. Em certas modalidades, L1 é ligado ao acoplamento fracionado, como um hidrazinil-indol ou uma fração de acoplamento de hidrazinil-pirrol-piridinil (e.g., como mostra na fórmula (I) acima). Em certas modalidades, L2, se estiver presente, está ligado a W1 (o maitansinóide). Em certas modalidades, L3, se estiver presente, está ligado a W1 (o maitansinóide). Em certas modalidades, L4, se estiver presente, está ligado a W1 (o maitansinóide).
[00396] Como descrito acima, em certas modalidades, o ligante -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d- é descrito pela fórmula -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-, em que a, b, c e d são cada um independentemente 0 ou 1, onde a soma de a, b, c e d é 1 a 4. Em certas modalidades, como descrito acima, L1 está ligado ao hidrazinil-indol ou a uma fração de acoplamento de hidrazinil- pirrol-piridinil (e.g., como mostra na fórmula (I) acima). Como tal, em certas modalidades, T1 está ligado ao hidrazinil-indol ou o acoplamento fracionário hidrazinil-pirrol-piridinil (e.g., como mostra na fórmula (I) acima). Em certas modalidades, V1 está ligado ao W1 (o maitansinóide). Em certas modalidades, como descrito acima, L2, se estiver presente, está ligado ao W1 (o maitansinóide). Assim sendo, em certas modalidades, T2, se estiver presente, está ligado ao W1
(o maitansinóide), ou V2, se estiver presente, está ligado W1 (o maitansinóide). Em certas modalidades, como descrito acima, L3, se presente, está ligado ao W1 (o maitansinóide). Assim sendo, em certas modalidades, T3, se presente, está ligado ao W1 (o maitansinóide), ou V3, se presente, está ligado ao W1 (o maitansinóide). Em certas modalidades, como descrito acima, L4, se presente, está ligado ao W1 (o maitansinóide). Assim sendo, em certas modalidades, T4, se presente, está ligado ao W1 (o maitansinóide), ou V4, se presente, está ligado ao W1 (o maitansinóide).
[00397] Modalidades da presente divulgação incluem conjugados onde um polipeptídeo(e.g., anticorpo anti-CD22) é conjugado com uma ou mais porções de fármacos (e.g., maitansinóide), tal como 2 porções de fármacos, 3 porções de fármacos, 4 porções de fármacos, 5 porções de fármacos, 6 porções de fármacos, 7 porções de fármacos, 8 porções de fármacos, 9 porções de fármacos, ou 9 porções de fármacos ou 10 ou mais porções de fármacos. As porções de fármacos podem ser conjugadas com o polipeptídeo em um ou mais locais no polipeptídeo, como aqui descrito. Em certas modalidades, os conjugados têm uma proporção média de fármaco/anticorpo (DAR) (proporção molar) na faixa de 0,1 a 10, ou de 0,5 a 10, ou de 1 a 10, como de 1 a 9, ou de 1 a 8, ou de 1 a 7, ou de 1 a 6, ou de 1 a 5, ou de 1 a 4, ou de 1 a 3, ou de 1 a 2. Em certas modalidades, os conjugados têm um DAR médio de 1 a 2, como 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 ou 2. Em certas modalidades, os conjugados têm um DAR médio de 1,6 a 1,9. Em certas modalidades, os conjugados têm um DAR médio de 1,7. Por média, entende-se a média aritmética.
AGENTES ANTICANCERÍGENOS
[00398] Os agentes anticancerígenos da presente divulgação incluem qualquer agente para o tratamento de um câncer, e.g., agentes quimioterapêuticos e/ou agentes terapêuticos biológicos. Em algumas modalidades, o câncer a ser tratado pelos métodos divulgados (e.g., por tratamento com um ADC como aqui divulgado) são resistentes a um agente anticancerígeno (e.g., um agente anticancerígeno definido abaixo). Em algumas modalidades, os agentes anticancerígenos estabelecidos abaixo são usados em combinação com um ADC como divulgado aqui para o tratamento de câncer, incluindo cânceres que são resistentes aos agentes anticancerígenos estabelecidos abaixo.
[00399] Um agente anticancerígeno pode incluir um agente alquilante, e.g., agente alquilante de DNA.
Por exemplo, um agente alquilante pode incluir bendamustina clorambucil, carmustina, ciclofosfamida, mecloretamina, ou similares, e sais farmaceuticamente aceitáveis e suas formulações.
Um agente anticancerígeno pode incluir um inibidor da síntese de DNA ou RNA, e.g., inibidores de topoisomerasa, inibidores de polimerase, inibidores de di-hidrofolato redutase ou semelhantes.
Por exemplo, um inibidor da síntese de DNA ou RNA pode incluir nelarabina, bleomicina, citarabina, doxorrubicina, pralatrexato, metotrexato, ou afins, e sais farmaceuticamente aceitáveis e suas formulações.
Um agente anticancerígeno pode incluir um inibidor de quinase, por exemplo, um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK), e.g., acalabrutinibe, ibrutinibe, ou afins, e sais farmaceuticamente aceitáveis e suas formulações.
Um agente anticancerígeno pode incluir um inibidor da fosfoinositida-3-quinase (PI3K) ou um inibidor de uma isoforma da mesma, e.g., inibidor P110δ.
Por exemplo, um inibidor PI3K pode incluir copanlisib, idelalisibe, ou afins, e sais farmaceuticamente aceitáveis e suas formulações.
Um agente anticancerígeno pode incluir inibidor de quimiocina, por exemplo, um inibidor de receptor de quimiocina CXCR4. O inibidor quimiocina pode incluir plerixafor, ou afins, e sais farmaceuticamente aceitáveis e suas formulações.
Um agente anticancerígeno pode incluir inibidor de histona desacetilase, e.g., vorinostat, romidespsin, belinostat, ou afins, e sais farmaceuticamente aceitáveis e suas formulações.
O agente anticancerígeno pode incluir um inibidor de proteassoma, como bortezomibe.
O agente anticancerígeno pode incluir um corticosteroide, como dexametasona, prednisona ou afins.
O agente anticancerígeno pode incluir agentes imunossupressores ou agentes antineoplásicos.
Por exemplo, o agente anticancerígeno pode incluir um inibidor interleucina-2, e.g., denileulina difitox, ou afins.
Por exemplo, o agente anticancerígeno pode incluir interferon alfa 2b recombinante.
O agente anticancerígeno pode incluir um inibidor de tubulina, e.g., vincristina, vimblastina, ou afins, e sais farmaceuticamente aceitáveis e suas formulações.
O agente anticancerígeno pode incluir um anticorpo monoclonal ou seus conjugados de fármacos, por exemplo, conjugados de fármacos de moléculas pequenas, conjugados de fármacos radioativos ou semelhantes.
Por exemplo, o agente anticancerígeno pode incluir anticorpos de CD19, CD20, CD22, CD30 ou afins.
Exemplos de agentes anticancerígenos baseados em anticorpos incluem brentuximab vedotin, tositumomabe, tositumomabe iodo-131, ibritumomab tiuxetano, obinutuzumabe, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, ou afins.
Os agentes anticancerígenos podem incluir inibidor ubiquitin E3 ligase, e.g., lenalidomida,
ou afins. O agente anticancerígeno pode incluir terapia de transferência celular adotiva, por exemplo, com axicabtagene ciloleucel.
[00400] A presente invenção pode incluir terapias (e.g., terapias combinadas) envolvendo mais de um agente anticancerígeno (e.g, em combinação com um ADC, conforme estabelecido aqui). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper- CVAD”). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“ICE”). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R- CHOP”). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R-EPOCH”). Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
[00401] Em outras modalidades, um agente anticancerígeno pode incluir R-CHOP, R- CVP, R-EPOCH, ou R-ICE, onde rituximabe é substituído com um anticorpo anti-CD20 diferente, e.g., ofatumumab, obinutuzumabe, ocrelizumabe e afins. Por exemplo, R-CHOP com rituximabe substituído com obinutuzumabe pode incluir obinutuzumabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona. Por exemplo, R-CVP com rituximabe substituído com obinutuzumabe, pode incluir obinutuzumabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona. Por exemplo, R-EPOCH com rituximabe substituído com ocrelizumabe, pode incluir ocrelizumabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina.
[00402] Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui R-CHOP.
[00403] Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui rituximabe.
[00404] Em uma modalidade, um agente anticancerígeno inclui bendamustina.
FORMULAÇÕES
[00405] Os conjugados da presente divulgação (incluindo conjugados de anticorpos) podem ser formulados em uma variedade de formas diferentes. Em geral, onde o conjugado é um conjugado polipeptídeo-fármaco, o conjugado é formulado de uma maneira compatível com o fármaco conjugado ao polipeptídeo, a condição a ser tratada, e a via de administração a ser usada.
[00406] O conjugado (e.g., um conjugado polipeptídeo-fármaco) pode ser fornecido de uma forma adequada, e.g., em forma de um sal farmaceuticamente aceitável, e pode ser formulada para qualquer via adequada de administração, e.g., administração oral, tópica ou parenteral. Onde o conjugado é administrado como um líquido injetável (tal como em aquelas modalidades onde os fármacos são administrados por via intravenosa ou diretamente no tecido), o conjugado pode ser administrado de uma forma pronta para uso, ou como um pó estável para armazenamento reconstituível ou como um líquido composto de transportadores e excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
[00407] Os agentes anticancerígenos da presente divulgação podem ser formulados em uma diversidades de formas. Em geral, os agentes anticancerígenos são formulados de uma maneira compatível com a condição a ser tratada e a via de administração a ser usada.
[00408] Os agentes anticancerígenos podem ser administrados em uma via adequada, e.g., em forma de um sal farmaceuticamente aceitável, e pode ser formulado para qualquer via de administração adequada, e.g., oral, tópica ou parenteral.
[00409] Os métodos para formular conjugados e/ou agentes anticancerígenos podem ser adaptados a partir daqueles atualmente disponíveis. Por exemplo, os conjugados e/ou agentes anticancerígenos podem ser fornecidos em uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente efetiva de um conjugado e um transportador farmaceuticamente aceitável (e.g., salina). A composição farmacêutica pode, opcionalmente, incluir outros aditivos (e.g., amortecedores, estabilizadores, preservativos e afins). Em algumas modalidades, as formulações são adequadas para a administração em mamíferos, tal como aquelas que são adequadas para a administração em humanos.
[00410] Em certas modalidades, onde a condição requer de uma combinação de terapias, i.e., tratamento com um conjugado da presente invenção e um ou mais agentes anticancerígenos, o conjugado e o(s) agente(s) anticancerígeno(s) podem ser formulados juntos para uma co- administração, ou podem ser formulados separados para uma administração subsequente. Da mesma forma, quando um ou mais agentes anticancerígenos são usados, um ou mais agentes anticancerígenos podem ser formulados juntos ou podem ser formulados separados.
MÉTODOS DE TRATAMENTO
[00411] Os conjugados de polipeptídeos-fármacos da presente divulgação têm um uso no tratamento de uma doença ou condição em um sujeito que é favorável ao tratamento pela administração do fármaco parental (i.e., o fármaco anterior à conjugação com o polipeptídeo). Por “tratamento” é entendido que pelo menos exista uma melhoria nos sintomas associados com a condição que afeta o hospedeiro, onde a palavra melhoria é usada num sentido amplo para se referir a, pelo menos, a diminuição na magnitude de algum parâmetro, e.g. sintoma, associado com a condição a ser tratada. Assim sendo, o tratamento também inclui situações onde a condição patológica, ou pelo menos os sintomas associados com a mesma, são completamente inibidos, e.g., impedidos de acontecer, ou parados, e.g. terminados, tal que o hospedeiro não sofre mais da condição, ou pelo menos dos sintomas que caracterizam a condição. Assim, o tratamento inclui: (i) prevenção, i.e., redução do risco de desenvolver sintomas clínicos, incluindo causando que os sintomas clínicos não se desenvolvam, e.g., impedindo a progressão da doença para um estado prejudicial; (ii) inibição, i.e., interrompendo o desenvolvimento ou posterior desenvolvimento de sintomas clínicos, e.g., mitigando ou inibindo completamente uma doença ativa; e/ou (iii) alívio, i.e., causando a regressão dos sintomas clínicos.
[00412] No contexto do câncer, o termo “tratando” inclui qualquer uma de: reduzir o crescimento de um tumor sólido, inibir a replicação das células cancerosas, reduzir a carga total do tumor, e a melhoria de um ou mais sintomas associados com um câncer.
[00413] O sujeito a ser tratado pode estar em necessidade de terapia, onde o hospedeiro a ser tratado é favorável ao tratamento usando o fármaco parental. Da mesma forma, uma variedade de sujeitos podem ser favoráveis ao tratamento usando os conjugados polipeptídeo- fármaco como divulgados neste texto. Geralmente, estes sujeitos são “mamíferos”, com humanos sendo de interesse. Outros sujeitos podem incluir animais de estimação (e.g., cachorros e gatos),
animais pecuários (e.g., vacas, porcos, cabras, cavalos e afins), roedores (e.g., ratos, porquinhos- da-índia, e.g., como na modelagem animal da doença), assim como primatas não-humanos (e.g., macacos, chimpanzés).
[00414] A quantidade do conjugado polipeptídeo-fármaco, administrado pode ser inicialmente determinada baseada na orientação de uma dose e/ou regime de dosagem do fármaco parental. Em geral, os conjugados polipeptídeo-fármaco podem fornecer um envio direcionado e/ou uma vida meia do soro aumentada do fármaco ligado, fornecendo assim para pelo menos uma administração de dosagem reduzida ou de administração reduzida no regime de dosagem. Assim, os conjugados polipeptídeo-fármaco podem fornecer para uma dosagem reduzida e/ou administração reduzida em um regime de dosagem relativo ao fármaco parental prévio a ter sido conjugado com um conjugado polipeptídeo-fármaco da presente divulgação.
[00415] Além disso, porque os conjugados polipeptídeo-fármaco podem fornecer uma estequiometria controlada para o envio de fármacos, as dosagens dos conjugados polipeptídeo- fármaco podem ser calculadas baseadas no número de moléculas do fármaco fornecidas em uma base por conjugado polipeptídeo-fármaco.
[00416] Em algumas modalidades, são administradas doses múltiplas de um conjugado polipeptídeo-fármaco. A frequência de administração de um conjugado polipeptídeo-fármaco pode variar dependendo em qualquer um de uma variedade de fatores, e.g., severidade dos sintomas, condição do sujeito, etc. Por exemplo, em algumas modalidades, o conjugado polipeptídeo-fármaco é administrado uma vez por mês, duas vezes por mês, três vezes por mês, uma vez a cada semana (qwk), duas vezes a cada semana, três vezes a cada semana, 4 vezes por semana, cinco vezes por semana, seis vezes por semana, a cada certos dias, a cada dia (qd/od), duas vezes por dia (bds/bid), ou três vezes por dia (tds/tid), etc.
[00417] Os conjugados polipeptídeo-fármaco da presente divulgação têm um uso em tratamento na combinação com agentes anticancerígeno para condições ou doenças, em um sujeito, que são favoráveis a tratamento pela administração do fármaco parental, e.g., maitansina, e/ou favoráveis ao tratamento por, ou previamente favoráveis ao tratamento por, administração de um agente anticancerígeno. O tratamento de combinação pode ter um efeito sinérgico no tratamento da condição ou doença. O tratamento de combinação pode servir para tornar a condição ou doença mais suscetível ao tratamento. Por exemplo, um câncer resistente, e.g., um câncer resistente a tratamento por um ou mais agentes anticancerígenos, pode se tornar sensível a uma terapia de combinação como descrita neste texto.
[00418] Em várias modalidades, uma quantidade de dosagem em mg/kg de um conjugado polipeptídeo-fármaco administrado a um sujeito pode incluir um ou mais dentre: 0,10, 0,25, 0,50, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18 e 20, ou um intervalo entre qualquer um dos números anteriores, por exemplo, entre cerca de 3 e cerca de 5, entre cerca de 5 e cerca de 10, entre cerca de 9 e 10, ou afins. O conjugado polipeptídeo-fármaco pode ser administrado em um dos valores das doses anteriores a uma taxa de uma vez por semana (qw), uma vez a cada duas semanas (q2w), uma vez a cada três semanas (q3w) ou uma vez por mês (qm). O conjugado polipeptídeo- fármaco pode ser administrado em um dos valores das doses anteriores a uma taxa de uma vez por semana (qw), uma vez a cada duas semanas (q2w), uma vez a cada três semanas (q3w) ou uma vez por mês (qm), por um período de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 semanas. Em certas modalidades, o conjugado polipeptídeo-fármaco é administrado uma vez a cada três semanas (e.g, por um período de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 semanas). Alternativamente, o conjugado polipeptídeo-droga pode ser administrado em uma dose única em qualquer um dos valores das doses anteriores. O conjugado polipeptídeo-fármaco pode ser administrado em outro valor de dose anterior em uma das taxas anteriores para um dos períodos anteriores. Por exemplo o conjugado polipeptídeo-fármaco pode ser administrado a 10 mg/kg, uma vez a cada três semanas, por um período de seis semanas. Além disso, por exemplo, o conjugado polipeptídeo- fármaco pode ser administrado depois a 3 mg/kg, uma vez por semana, por um período de 4 semanas, e assim por diante.
[00419] Em diversas modalidades, um ou mais agentes anticancerígenos podem ser administrados a um sujeito em uma dose simples ou múltipla. A frequência de administração de um ou mais agentes anticancerígenos pode variar dependendo de qualquer variedade de fatores, e.g., severidade dos sintomas, condição do sujeito, etc. Por exemplo, em algumas modalidades, um ou mais agentes anticancerígenos são administrados uma vez por mês, duas vezes por mês, três vezes por mês, uma vez por semana, (qwk), uma vez a cada duas semanas (q2wk), uma vez a cada 3 semanas (q3wk), duas vezes por semana, três vezes por semana, quatro vezes por semana, cinco vezes por semana, seis vezes por semana, a cada certos dias, a cada dia (qd/od), duas vezes por dia (bds/bid), ou três vezes por dia (tds/tid), etc. Um agente anticancerígeno pode ser administrado em um valor de dose, e por um período de tempo que tenha sido aprovado para um agente anticancerígeno em particular pela U.S. Food and Drug Administration.
[00420] Em certas modalidades, um conjugado peptídeo-fármaco e um ou mais agentes anticancerígenos são co-administrados.
[00421] Em algumas modalidades, um conjugado peptídeo-fármaco é administrado antes da administração de um ou mais agentes anticancerígenos. Por exemplo, o conjugado peptídeo- fármaco é administrado como descrito aqui, seguido pela administração de um ou mais agentes anticancerígenos, como aqui descrito. Em certas modalidades, um período de tempo separa a administração do conjugado peptídeo-fármaco e a administração de um ou mais agentes anticancerígenos.
[00422] Em algumas modalidades, um conjugado peptídeo-fármaco é administrado por um período de tempo e mais tarde o conjugado peptídeo-fármaco é co-administrado com um ou mais agentes anticancerígenos.
[00423] Em algumas modalidades, um ou mais agentes anticancerígenos é administrado antes da administração de um conjugado peptídeo-fármaco. Por exemplo, um ou mais agentes anticancerígenos é administrado como descrito aqui, seguido pela administração do conjugado peptídeo-fármaco como descrito aqui.
[00424] Em algumas modalidades, um ou mais agentes anticancerígenos é administrado por um período de tempo e mais tarde um ou mais agentes anticancerígenos é co-administrado com um conjugado peptídeo-fármaco.
[00425] Em certas modalidades, um câncer se torna resistente à administração com um ou mais agentes anticancerígenos. A administração de um conjugado peptídeo-fármaco a um sujeito com câncer resistente pode tratar o câncer e/ou sensibilizar o câncer para tratamento adicional com um ou mais agentes anticancerígenos.
Métodos de tratamento do câncer
[00426] A presente divulgação fornece métodos para a entrega de um ou mais agentes anticancerígenos do câncer e um conjugado peptídeo-fármaco a um indivíduo com um câncer ou um câncer aqui descrito que se tornou resistente a um ou mais agentes anticancerígenos, e.g., R- CHOP. Os métodos são úteis para o tratamento de uma ampla variedade de cânceres, incluindo carcinomas, sarcomas, leucemias e linfomas. Os métodos são ainda úteis para sensibilizar um câncer aqui descrito, i.e., aliviar a resistência de um câncer a um ou mais agentes anticancerígenos aqui descritos, e.g., R-CHOP. Em algumas modalidades, o conjugado peptídeo-fármaco pode ser administrado a um câncer na ausência de outras terapias (e.g., como monoterapia). Em algumas modalidades, o conjugado peptídeo-fármaco pode ser administrado a um câncer em combinação com outras terapias contra o câncer (e.g., em combinação com R- CHOP).
[00427] A presente divulgação fornece métodos para a entrega de um ou mais agentes anticancerígenos do câncer e um conjugado peptídeo-fármaco a um indivíduo com câncer. Os métodos são úteis no tratamento de cânceres associados à desregulação da sinalização BCR devido à superexpressão de células B e/ou disfunção. Os métodos são úteis no tratamento de cânceres responsivos às terapias de depleção de células B. Os métodos também são úteis para o tratamento de cânceres associados à desregulação da sinalização BCR que se tornaram resistentes a um ou mais agentes anticancerígenos.
[00428] Os carcinomas que podem ser tratados usando um método específico incluem, mas não estão limitados a, carcinoma esofágico, carcinoma hepatocelular, carcinoma basocelular (uma forma de câncer de pele), carcinoma espinocelular (vários tecidos), carcinoma vesical, incluindo carcinoma de células transitórias (neoplasia maligna da bexiga), carcinoma broncogênico, carcinoma do cólon, carcinoma colorretal, carcinoma gástrico, carcinoma do pulmão, incluindo carcinoma de pequenas células e carcinoma de células não pequenas do pulmão, carcinoma adrenocortical, carcinoma da tireóide, carcinoma pancreático, carcinoma da mama, ovário carcinoma, carcinoma da próstata, adenocarcinoma, carcinoma da glândula sudorípara, carcinoma da glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinoma papilar, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma de células renais, carcinoma ductal in situ ou carcinoma do ducto biliar, carcinoma do cólon, carcinoma do cólon, carcinoma do colo do útero, carcinoma do colo do útero, carcinoma do colo do útero, carcinoma do colo do útero, carcinoma do colo do útero, carcinoma ductal, carcinoma do colo do útero, carcinoma do colo do útero, carcinoma ductal, carcinoma do colo do útero, carcinoma do colo do útero, carcinoma ductal, carcinoma do colo do útero. carcinoma, carcinoma uterino, carcinoma testicular, carcinoma osteogênico, epitélio carcinoma e carcinoma nasofaríngeo, etc.
[00429] Os sarcomas que podem ser tratados usando um método específico incluem, entre outros, fibrossarcoma, mixossarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, cordoma, sarcoma osteogênico, osteossarcoma, angiossarcoma, endoteliosarcoma, linfangiossarcoma, linfangioendoteliossarcoma, sinovioma, mesotelioma, sarcoma de Ewing, leiomioma, e outros sarcomas de tecidos moles.
[00430] Outros tumores sólidos que podem ser tratados usando um método específico incluem, mas não estão limitados a, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, menangioma, melanoma, neuroblastoma, e retinoblastoma.
[00431] As leucemias que podem ser tratadas usando um método específico incluem, mas não estão limitadas a, a) síndromes mieloproliferativas crônicas (distúrbios neoplásicos de células-tronco hematopoiéticas multipotenciais); b) leucemias mielógenas agudas (transformação neoplásica de uma célula-tronco hematopoiética multipotencial ou uma célula hematopoiética com potencial de linhagem restrito; c) leucemias linfocíticas crônicas (CLL; proliferação clonal de pequenos linfócitos imunologicamente imaturos e funcionalmente incompetentes), incluindo CLL de células B, leucemia prolinfocítica CLL de células T, leucemia linfocítica pequena (SLL) e leucemia de células ciliadas; e d) leucemias linfoblásticas agudas (caracterizadas pelo acúmulo de linfoblastos).
[00432] Os linfomas que podem ser tratados usando um método específico incluem, mas não estão limitados a, linfomas de células B (e.g., linfoma de Burkitt, linfoma difuso de células B grandes); Linfoma de Hodgkin; linfoma de células B não-Hodgkin (e.g., linfomas da zona marginal (MZL), linfoma de células do manto (MCL), linfoma folicular, linfoma do sistema nervoso central primário); e similar.
[00433] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento do linfoma não-Hodgkin com um ADC, conforme estabelecido neste documento. O método pode compreender a administração do ADC, em que o linfoma não-Hodgkin é resistente ao R-CHOP (e.g., após a fuga do R-CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
[00434] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento do linfoma não-Hodgkin com um ADC, conforme estabelecido aqui em combinação com o R-CHOP. O método pode compreender a administração do ADC em combinação com o R-CHOP, em que o linfoma não-Hodgkin é resistente ao R-CHOP (e.g, após a fuga do R-CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
[00435] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento de linfoma difuso de células B grandes com um ADC, conforme estabelecido neste documento. O método pode compreender a administração do ADC em que o linfoma difuso de células B grandes é resistente ao R-CHOP (e.g., após a fuga do R-CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
[00436] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento de linfoma difuso de células B grandes com um ADC, conforme estabelecido aqui em combinação com R- CHOP. O método pode compreender a administração do ADC em combinação com o R-CHOP, em que o linfoma difuso de grandes células B é resistente ao R-CHOP (e.g., após a fuga do R- CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
[00437] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento de linfoma folicular com um ADC, conforme estabelecido neste documento. O método pode compreender a administração do ADC em que o linfoma folicular é resistente ao R-CHOP (e.g., após a fuga do R-CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
[00438] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento de linfoma folicular com um ADC, conforme estabelecido aqui em combinação com R-CHOP. O método pode compreender a administração de ADC em combinação com R-CHOP, em que o linfoma folicular é resistente a R-CHOP (e.g., após a fuga de R-CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
[00439] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento de linfoma de células do manto com um ADC, conforme estabelecido neste documento. O método pode compreender a administração do ADC em que o linfoma de células do manto é resistente ao R- CHOP (e.g., após a fuga do R-CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
[00440] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento de linfoma de células do manto com um ADC, conforme estabelecido aqui em combinação com R-CHOP. O método pode compreender a administração de ADC em combinação com R-CHOP, em que o linfoma de células do manto é resistente a R-CHOP (e.g., após a fuga de R-CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
[00441] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento de linfoma da zona marginal com um ADC, conforme estabelecido neste documento. O método pode compreender a administração do ADC em que o linfoma da zona marginal é resistente ao R- CHOP (e.g., após a fuga do R-CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
[00442] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece o tratamento de linfoma da zona marginal com um ADC, como aqui estabelecido em combinação com R-CHOP. O método pode compreender a administração do ADC em combinação com o R-CHOP, em que o linfoma da zona marginal é resistente ao R-CHOP (e.g., após a fuga do R-CHOP). Em algumas modalidades, o ADC é:
e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em algumas modalidades, o ADC é: e é administrado em uma dose de cerca de 10 mg/kg.
EXEMPLOS
[00443] Os exemplos a seguir são apresentados com o objetivo de proporcionar aqueles que possuem uma competência básica na técnica, uma completa divulgação e descrição de como fazer e utilizar o presente invento, e não se destinam a limitar o alcance do que os inventores consideram ser o seu invento e nem pretendem representar que os experimentos listados abaixo são todos, ou os únicos, experimentos realizados. Foram feitos esforços para garantir a exatidão com respeito aos números utilizados (por exemplo, quantidades, temperatura, etc), mas devem ser considerados alguns erros e desvios experimentais. Salvo indicação contrária, as partes são partes por peso, o peso molecular é o peso molecular médio, a temperatura está em graus Celsius e a pressão considerada é a pressão atmosférica ou próxima. O termo "média" refere-se à média aritmética. Podem ser utilizadas abreviaturas padrão, por exemplo, bp, par(es) de base; kb, quilobase(s); pl, picolitro(s); s ou seg, segundo(s); min, minuto(s); h ou hr, hora(s); aa, aminoácido(s); kb, quilobase(s); bp, par(s) de base; nt, nucleotídeo(s); i.m, intramuscular(ly); i.p., intraperitoneal(ly); s.c., subcutânea(ly); e afins.
Procedimentos Sintéticos Gerais
[00444] Estão disponíveis muitas referências gerais que fornecem esquemas químicos sintéticos comumente conhecidos e condições úteis para sintetizar os compostos relatados (ver, por exemplo, Smith e March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, quinta edição, Wiley-Interscience, 2001; ou Vogel, A Textbook of Practical Organic Chemistry, Including Qualitative Organic Analysis, quarta edição, New York: Longman, 1978).
[00445] Os compostos descritos no presente documento podem ser purificados por qualquer protocolo de purificação conhecido da técnica, incluindo a cromatografia, como a HPLC, a cromatografia de camada delgada preparatória, a cromatografia em coluna flash e a cromatografia de troca iônica. Qualquer fase estacionária adequada pode ser utilizada, incluindo fases normais e invertidas e resinas iônicas. Em certas modalidades, os compostos revelados são purificados por cromatografia com silicagel e/ou alumina. Ver, por exemplo, Introduction to Modern Liquid Chromatography, Second Edition, ed, John Wiley and Sons, 1979; e Thin Layer Chromatography, ed. E. Stahl, Springer-Verlag, New York, 1969.
[00446] Durante qualquer dos processos de preparação dos compostos em questão, pode ser necessário e/ou desejável proteger os grupos sensíveis ou reativos de qualquer uma das moléculas em questão. Isto pode ser alcançado através dos grupos protetores convencionais descritos na literatura da área, tais como J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, Londres e Nova Iorque 1973, em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third Edition, Wiley, New York 1999, in "The Peptides"; Volume 3 (editores: E. Gross e J. Meienhofer), Academic Press, Londres e Nova York 1981, in "Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl,Fourth Edition, Vol. 15/l, Georg
Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke e H. Jescheit, "Aminosauren, Peptide, Proteine", Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, e Basel 1982, e/ou em Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide and Derivate", Georg Thieme Verlag, Stuttgart
1974. Os grupos de proteção podem ser removidos numa fase posterior conveniente, utilizando métodos conhecidos da técnica.
[00447] Os compostos sujeitos podem ser sintetizados por várias vias sintéticas utilizando matérias-primas disponíveis comercialmente e/ou matérias-primas preparadas por métodos sintéticos convencionais. Vários exemplos de vias sintéticas que podem ser usadas para sintetizar os compostos aqui divulgados são descritos nos diagramas abaixo.
EXEMPLO 1
[00448] Um ligante contendo um grupo de 4-amino-piperidina (4AP) foi sintetizado como mostra a figura 1 abaixo. Diagrama 1
Síntese de 4-oxopiperidin-1-carboxilato de (9H-fluoren-9-il)metila (200)
[00449] Para um balão de fundo redondo de 100 ml, contendo uma barra de agitação magnética foram adicionados cloridrato de piperidin-4-ona monohidratado (1,53 g, 10 mmol), cloridrato de Fmoc (2,58 g, 10 mmol), carbonato de sódio (3,18 g, 30 mmol), dioxano (20 mL) e água (2 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi diluída com EtOAc (100 ml) e extraída com água (1 x 100 ml). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O material resultante foi seco sob vácuo para obter um composto 200 como sólido branco (3,05 g, 95% de eficiência).
[00450] 1HNMR (CDCl3) δ 7.78 (d, 2H, J = 7,6), 7,59 (d, 2H, J = 7,2), 7,43 (t, 2H, J = 7,2), 7,37 (t, 2H, J = 7,2), 4,60 (d, 2H, J = 6,0), 4,28 (t, 2H, J = 6,0), 3,72 (br, 2H), 3,63 (br, 2H), 2,39 (br, 2H), 2,28 (br, 2H),
[00451] EM (ESI) m/z: [M+H]+ calculado para C20H20NO3 322,4; Encontrado 322,2 Síntese de 4-((2-(2-(2-(3-(terc-butoxi)- 3- oxopropoxi)etoxi)etil)amino)piperidin-1- carboxilato de (9H-fluoren-9-il)metila (201)
[00452] A piperidinona 200 (642 mg, 2,0 mmol), H2N-PEG2-CO2t-Bu (560 mg, 2,4 mmol), peneiras moleculares 4Å (pó ativado, 500 mg) e 1,2-dicloroetano (5 ml) foram adicionadas a um balão de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética. A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Foram adicionados à mistura de reação triacetoxiboridrato de sódio (845 mg, 4,0 mmol). A mistura foi agitada durante 5 dias à temperatura ambiente. A mistura resultante foi diluída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado (1 x 50 ml) e salmoura (1 x 50 ml), e seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter o composto 201 como óleo, que foi transportado sem mais purificação.
Síntese de ácido 13-(1-((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)piperidin-4-il)-2,2-dimetil- 4,14- dioxo-3,7,10-trioxa-13-azaheptadecan-17-óico (202)
[00453] A um frasco de cintilação seca contendo uma barra de agitação magnética foi adicionado N-Fmoc-piperidin-4-amino-PEG2-CO2t-Bu (201) da etapa anterior, anidrido succínico (270 mg, 2,7 mmol) e diclorometano (5 mL). A mistura foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi dividida entre EtOAc e NaHCO3 saturado. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x). A camada aquosa foi acidificada com HCl (1 M) até pH ~3. A camada aquosa foi extraída (3x) com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. A mistura de reação foi purificada por cromatografia flash C18 (eluir 10-100% MeCN/água com 0,1% de ácido acético). As frações que continham o produto foram concentradas sob pressão reduzida e depois foram tornadas azeotrópicas com tolueno (3 x 50 mL) para remover o ácido acético residual e obter 534 mg (42%, 2 etapas) do composto 202 como sólido branco.
[00454] 1HNMR (DMSO-d6) δ 11.96 (br, 1H), 7.89 (d, 2H, J = 7.2), 7.63 (d, 2H, J = 7.2), 7,42 (t, 2H, J = 7,2), 7,34 (t, 2H, J = 7,2), 4,25-4,55 (m, 3H), 3,70-4,35 (m, 3H), 3,59 (t, 2H, J = 6,0), 3,39 (m, 5H), 3,35 (m, 3H), 3,21 (br, 1H), 2,79 (br, 2H), 2,57 (m, 2H), 2,42 (q, 4H, J = 6,0), 1,49 (br, 3H), 1,37 (s, 9H).
[00455] EM (ESI) m/z: [M+H]+ calculado para C35H47N2O9 639,3; Encontrado 639,2.
Síntese de ácido (2S)-1-((14S,16S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14- dimetóxi- 33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)- benzenaciclotetracapano-10,12-dieno-4-il)oxi)-2,3-dimetil-1,4,7-trioxo-8-(piperidin-4-il)- 11,14-dioxa- 3,8-diazaheptadecano-17-óico (203)
[00456] A uma solução de éster 202 (227 mg, 0,356 mmol), diisopropiletilamina (174 μL, 1,065 mmol) N-deacetil maitansin 124 (231 mg, 0,355 mmol) em 2 mL de DMF se adicionou PyAOP (185 mg, 0,355 mmol). A solução foi agitada durante 30 min. A piperidina (0,5 mL) foi adicionada à mistura de reação e agitada durante mais 20 min. O crude da reação foi purificado por cromatografia de fase reversa C18 utilizando um gradiente de 0-100% de acetonitrila:água, resultando em 203,2 mg (55%, 2 etapas) de composto 203.
Síntese de 1-((14S, 16S, 33S, 2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14- dimetoxi- 33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)- benzenato- clotecaphano-10,12-dien-4-il) (2S)-8-(1-(3-(2-((2-((9H-fluoren-9- il)metoxi)carbonil)-1,2- dimetil-hidrazinil)metil)-1H-indol-1-il)propanoil)piperidin-4-il)- 2,3-dimetil-4,7-dioxo- 11,14-dioxa-3,8-diazaheptadecanodioato de 17-(terc-butila) (204)
[00457] Se agitou uma solução de piperidina 203 (203,2 mg, 0,194 mmol), éster 12 (126,5 mg, 0,194 mmol), 2,4,6-trimetilpiridina (77 μL, 0,582 mmol), HOAT (26,4 mg, 0,194 mmol) em 1mL DMF durante 30 min. A reação bruta foi purificada por cromatografia de fase reversa C18, utilizando um gradiente de 0-100% de acetonitrila:água com 0,1% de ácido fórmico, o que permitiu obter 280,5 mg (rendimento de 97%) de composto 204.
[00458] EM (ESI) m/z: [M+H]+ Cálculo para C81H106ClN8O18 1513,7; Encontrado 1514,0.
Síntese de ácido (2S)-8-(1-(3-(2-((2-((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-1,2- dimetilidrazinil)metil)-1H-indol-1-il)propanoil)piperidin-4-il)-1- (((14S, 16S, 33S, 2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14-dimetoxi-33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7- aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)-benzenaciclotetradecafano-10,12- dieno-4-il)oxi)-2,3-dimetil-1,4,7-trioxo-11,14-dioxa-3,8-diazaheptadecano-17-óico (205)
[00459] A uma solução de composto 204 (108 mg, 0,0714 mmol) em 500 μL de DCM foi adicionado 357 μL de uma solução 1M de SnCl4 em DCM. A mistura heterogênea foi agitada durante 1 hora e depois purificada por cromatografia de fase reversa C18, utilizando um gradiente de 0-100% de acetonitrila:água com 0,1% de ácido fórmico, resultando em 78,4 mg (75% de rendimento) de composto 205.
[00460] EM (ESI) m/z: [M-H]- Calculado para C77H96ClN8O18 1455,7; Encontrado 1455,9.
EXEMPLO 2
[00461] Se sintetizou um ligante contendo um grupo de 4-amino-piperidina (4AP) como mostra a figura 2 abaixo.
Diagrama 2
Síntese de 4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butila (210)
[00462] Em um balão de fundo redondo de 100 mL contendo uma barra de agitação magnética foram adicionados cloridrato de piperidin-4-ona monohidratado (1,53 g, 10 mmol), dicarbonato de di-terc-butila (2,39 g, 11 mmol), carbonato de sódio (1,22 g, 11,5 mmol), dioxano (10 mL) e água (1 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi diluída com água (100 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O material resultante foi seco em vácuo para obter 1,74 g (87%) do composto 210 como sólido branco. 1
[00463] HNMR (CDCl3) δ 3,73 (t, 4H, J = 6,0), 2,46 (t, 4H, J = 6,0), 1,51 (s, 9H).
[00464] EM (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C10H18NO3 200,3; Encontrado 200,2.
Síntese de 4-((2-(3-(terc-butoxi)-3-oxopropoxi)etoxi)etil)amino)piperidin-1-carboxilato de terc-butila (211)
[00465] Adicionou-se 4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butila (399 mg, 2 mmol), H2N-PEG2-COOt-Bu (550 mg, 2,4 mmol), 4 peneiras moleculares Å (pó ativado, 200 mg) e 1,2-dicloroetano (5 mL) a um balão de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética. A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Foram adicionados à mistura de reação triacetóxidos de sódio (845 mg, 4 mmol). A mistura foi agitada durante 3 dias à temperatura ambiente. A mistura resultante foi dividida em EtOAc e NaHCO3 aquoso saturado. A camada orgânica foi lavada com água salgada, seca sobre o Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter 850 mg do composto 211 como óleo viscoso.
[00466] EM (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C21H41N2O6 417,3; Encontrado 417,2.
Síntese de ácido 13-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)-2,2-dimetil-4,14-dioxo-3,7,10- trioxa-13-azaheptadecano-17-óico (212)
[00467] A um balão de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética foram adicionados 4-((2-(3-(terc-butoxi)-3-oxopropoxi)etoxi-)etil)amino)piperidin-1-carboxilato 211 (220 mg, 0,5 mmol), anidrido succínico (55 mg, 0,55 mmol), 4-(dimetilamino)piridina (5 mg, 0,04 mmol) e diclorometano (3 mL). A mistura foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi parcialmente purificada por cromatografia flash (eluir 50- 100% EtOAc/hexanos) para obter 117 mg do composto 212 como óleo transparente, que foi transportado sem mais caracterização.
[00468] EM (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C25H45N2O9 517,6; Encontrado 517,5.
Síntese de 1-((14S, 16S, 33S, 2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14- dimetoxi- 33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)- benzenato- clotecaphano-10,12-dien-4-il) (2S)-8-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)- 2,3-dimetil-4,7- dioxo-11,14-dioxa-3,8-diazaheptadecanedioato de terc-butila (213)
[00469] Adicionou-se a um frasco cintilador seco contendo uma barra de agitação magnética o ácido 13-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)-2,2-dimetil-4,-14-dioxo-13,7,10- trioxa- 13-azaheptadecan-17-óico 212 (55 mg, 0,1 mmol), N-deacetil maitansina 124 (65 mg, 0,1 mmol), HATU (43 mg, 0,11 mmol), DMF (1 mL) e diclorometano (0,5 mL). A mistura foi agitada durante 8 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia flash C18 (eluir 5-100% MeCN/água) para obter 18 mg (16%) do composto 213 com uma camada branca.
[00470] EM (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C57H87ClN5O17 1148,6; Encontrado 1148,7.
Síntese de ácido (2S)-1-((14S, 16S, 33S, 2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14- dimetóxi- 33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)- benzenato- clotecapano-10,12-dieno-4-il)oxi)-2,3-dimetil-1,4,7-trioxo-8-(piperidin-4-il)- 11,14-dioxa- 3,8-diazaheptadecano-17-óico (214)
[00471] A um frasco seco contendo uma barra de agitação magnética foram adicionados o maitansinoide 213 (31 mg, 0,027 mmol) e o diclorometano (1 mL). A solução foi esfriada a 0 °C e foi adicionado tetracloreto de estanho (IV) (solução 1,0 M em diclorometano, 0,3 mL, 0,3 mmol). A mistura de reação foi agitada durante uma hora a 0 °C. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia flash C18 (elute 5-100% MeCN/água) para obter 16 mg (60%) do composto 214 como sólido branco (16 mg, 60% de rendimento).
[00472] EM (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C48H71ClN5O15 992,5; Encontrado 992,6.
Síntese de ácido (2S)-8-(1-(3-(2-((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-1,2- dimetilidrazinil)metil)-1H- indol-1-il)propanoil)piperidin-4-il)-1- (((14S, 16S, 33S, 2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14- hidroxi-85,14-dimetoxi-33,2,7,10-tetrametil- 12,6-dioxo-7- aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran- 8(1,3)-benzenato-clotecapano-10,12-dien-4-il)oxi)-2,3- dimetil-1,4,7-trioxo-11,14-dioxa-3,8- diazaheptadecano-17-óico (215)
[00473] Adicionou-se maitansinoide 214 (16 mg, 0,016 mmol), e (9H-fluoren-9-il)metil 1,2-dimetil-2-((1-(3-oxo-3- (perfluorofenoxi)propil)-1H-indol-2-il)metil)hidrazina-1-carboxilato de 2-dimetil-2-((1-(3-oxo- 3-(perfluorofenoxi)propil)-1H-indol-2-il)metil)hidrazina-1- carboxilato de 2-dimetil (5 ) (13 mg, 0,02 mmol), DIPEA (8 μL, 0,05 mmol), e DMF (1 mL) a um frasco cintilador seco contendo uma barra de agitação magnética. A solução foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia flash C18 (eluir 5-100% MeCN/água) para obter 18 mg (77%) do composto 215 como sólido branco.
[00474] EM (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C77H98ClN8O18 1457,7; Encontrado 1457,9.
Síntesis del ácido (2S)-1-(((14S, 16S, 33S, 2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14- dimetoxi-33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)- benzenaciclotetradecapan-10,12-dien-4-il)oxi)-2,3-dimetil-1,4,7-trioxo-8-(piperidin-4-il)- 11,14-dioxa-3,8-diazaheptadecan-17-óico (214)
[00475] A maitansinoide 215 (18 mg, 0,012 mmol), a piperidina (20 μL, 0,02 mmol) e o DMF (1 mL) foram adicionados a um balão de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética. A solução foi agitada durante 20 minutos à temperatura ambiente. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia flash C18 (eluir 1-60% MeCN/água) para obter 15 mg (98%) do composto 216 (também conhecido aqui como HIPS-4AP-metansin ou HIPS-4-amino-piperidin-metansin) como um sólido branco.
[00476] EM (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C62H88ClN8O16 1235,6; Encontrado 1236,0.
EXEMPLO 3 Procedimentos experimentais Geral
[00477] Foram realizadas experiências para a criação de conjugados de anticorpos- fármacos (ADC) especificamente orientados. A produção de ADC especificamente orientados incluiu a incorporação de formilglicina (FGly), um aminoácido artificial na sequência de proteínas. Para colocar FGly (FIG. 1), foi inserida uma curta sequência consensual, CXPXR, onde X é serina, treonina, alanina ou glicina, no local desejado nas regiões conservadas de cadeias pesadas ou leves de anticorpos, utilizando técnicas padrão de clonagem de biologia molecular. Esta construção "etiquetada" foi produzida de forma recombinante em células que coexistem com a enzima geradora de formilglicina (FGE), a qual converteu de forma transversal a cisteína dentro do rótulo em um resíduo de FGly, gerando um grupo funcional de aldeído
(também aqui referido como rótulo de aldeído). O grupo funcional aldeído serviu de cabo químico para a conjugação bioortogonal. Foi utilizada uma ligação de hidrazina-iso-Pictet- Spengler (HIPS) para conectar a carga útil (por exemplo, um fármaco, como uma citotoxina (por exemplo, maitansina)) à FGly, resultando na formação de uma ligação C-C estável e covalente entre a carga útil da citotoxina e o anticorpo. Previa-se que esta ligação C-C fosse estável às condições fisiologicamente relevantes encontradas na ACD durante a circulação e reciclagem de FcRn, por exemplo, proteases, pH baixo e reagentes redutores. Os anticorpos rotulados com aldeídos podem ser produzidos em diversos locais. Foram realizadas experiências para testar os efeitos da inserção do rótulo do aldeído na cadeia pesada do terminal C (CT). Uma caracterização biofísica e funcional dos ADC’s resultantes foi realizada por conjugação com cargas úteis de maitansina através de um ligante HIPS.
Clonagem, expressão e purificação de anticorpos rotulados
[00478] A sequência de rotulagem do aldeído foi inserida no terminal C da cadeia pesada (CT), utilizando técnicas padrão de biologia molecular. Para a produção em pequena escala, foram transferidas células CHO-S com construções de expressões de FGE humanas e foram utilizados grupos de células superexpressoras de FGE para a produção transitória de anticorpos. Para a produção em maior escala, a tecnologia GPEx (Catalent, Inc., Somerset, NJ) foi utilizada para gerar uma linha de células clonais que exercem uma pressão excessiva sobre o FGE humano (GPEx). Logo, o clone do FGE foi então utilizado para gerar grupos estáveis de células que expressam anticorpos. Os anticorpos foram purificados a partir do meio condicionado utilizando uma cromatografia da proteína A (MabSelect, GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, PA). Os anticorpos purificados foram rapidamente congelados e armazenados a - 80ºC até nova utilização.
Bioconjugação, purificação e análise por HPLC
[00479] O anticorpo terminal C rotulado com aldeído αCD22 (15 mg/mL) foi conjugado com HIPS-4AP-maitansina (8 mol. medicamento:equivalente de anticorpo) durante 72 horas a 37°C em citrato de sódio 50 mM, 50 mM NaCl pH 5,5 contendo 0,85% de WFD. O anticorpo não conjugado foi removido por cromatografia de interação hidrofóbica em uma escala preparatória (HIC; GE Healthcare 17-5195-01) com fase móvel A: 1,0 M de sulfato de amônia,
25 mM de fosfato de sódio, pH 7,0, e fase móvel B: 25% de isopropanol, 18,75 mM de fosfato de sódio, pH 7,0. Foi utilizado um gradiente isocrático de 33% B para eluir material não conjugado, seguido de um gradiente linear de 41-95% B para eluir espécies mono- e diconjugadas. Para determinar o DAR do produto final, os ADC’s foram examinados pelo HIC analítico (Tosoh #14947, Grove City, OH) com fase móvel A: sulfato de amônia 1,5 M, fosfato de sódio 25 mM pH 7,0, e fase móvel B: isopropanol 25%, fosfato de sódio 18,75 mM pH 7,0. Para determinar a agregação, as amostras foram analisadas por cromatografia de exclusão de tamanho analítico (SEC; Tosoh #08541) com uma fase móvel de NaCl 300 mM, 25 mM de fosfato de sódio pH 6,8.
Resultados
[00480] Os anticorpos αCD22 modificados para conter o rótulo de aldeído no terminal pesado da cadeia C (CT) foram conjugados com uma carga útil de maitansina ligada a um ligador HIPS-4AP, tal como acima descrito. Após a conclusão da reação conjugada, o anticorpo não conjugado foi removido pelo HIC preparatório e o fármaco livre remanescente foi removido durante a troca do tampão por filtração do fluxo tangencial. As reações foram de elevado rendimento, com uma eficiência de conjugação de 2% e um rendimento total superior a 70%. As ADC’s resultantes tinham uma relação fármaco-anticorpo (DAR) de 1,6-1,9 e eram predominantemente monoméricos. As Figuras 2 a 5 mostram as DAR das reações brutas representativas e as ADC’s purificadas determinadas pelo HIC e a cromatografia de fase reversa PLRP, e se mostra a integridade monomérica determinada pela SEC.
[00481] A FIG 2 mostra um vestígio na coluna de interação hidrofóbica (HIC) de um anticorpo anti-CD22 marcado com aldeído conjugado no terminal C (CT) com uma carga útil de maitansina ligada a um ligante HIPS-4AP. A FIG 2 indica que o DAR bruto foi de 1,68, tal como determinado pelo.
[00482] A FIG 3 mostra um vestígio HIC de um anticorpo anti-CD22 marcado com aldeído, conjugado no terminal C (CT) com uma carga de maitansina ligada a um ligante HIPS- 4AP. A FIG 3 indica que a DAR final foi de 1,77, tal como determinado pelo HIC.
[00483] A FIG 4 mostra um vestígio de cromatografia de fase reversa (PLRP) de um anticorpo anti-CD22 marcado com aldeído conjugado no terminal C (CT) com uma carga de maitansina ligada a um ligante HIPS-4AP. O FIG 4 indica que a DAR final foi de 1,81, tal como determinado pelo PLRP.
[00484] A FIG 5 mostra uma parcela de análise por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) de um anticorpo conjugado com aldeído anti-CD22 no terminal C (CT) a uma carga útil de maitansina acoplada a um ligante HIPS-4AP. Tal como demonstrado na FIG 5, a análise SEC indicou 98,2% de monômero para o produto final.
Citotoxicidade in vitro
[00485] As linhas celulares do linfoma de células B CD22-positivas, Ramos e WSU- DLCL2, foram obtidas dos bancos de células ATCC e DSMZ, respectivamente. As células foram mantidas em meio RPMI-1640 (Cellgro, Manassas, VA) suplementadas com 10% de soro fetal bovino (Invitrogen, Grand Island, NY) e Glutamax (Invitrogen). 24 horas antes da aplicação, as células foram passadas para garantir o crescimento na fase logarítmica. No dia da implantação, 5000 células/poço foram semeadas em placas de 96 poços num meio de crescimento normal 90 μL complementado com 10 IU de penicilina e 10 μg/mL de estreptomicina (Cellgro). As células foram tratadas em várias concentrações com 10 μL de analitos diluídos, e as placas foram incubadas a 37 °C numa atmosfera de 5% de CO2. Após 5 d, 100 μL/well de reagente Cell Titer- Glo (Promega, Madison, WI) foi adicionado, e a luminescência foi medida utilizando um leitor de placas de dispositivo molecular SpectraMax M5. O software GraphPad Prism foi utilizado para análise de dados. Resultados
[00486] Neste caso αCD22 HIPS-4AP-Maitansina CT mostrou uma atividade muito potente contra as células WSU-DLCL2 e Ramos in vitro em comparação com a maitansina livre (FIG 6). As concentrações de IC50 foram de 0,018 e 0,086 nM para a ADC e fármaco livre, respectivamente, contra células WSU-DLCL2, e 0,007 e 0,040 nM para a ACD e o fármaco livre, respectivamente, contra as células de Ramos.
[00487] A FIG. 6A mostra um gráfico da potência in vitro contra células WSU- DLCL2 [% de viabilidade versus concentração logarítmica de anticorpos conjugados (ADC) (nM)] para os anti-CD22 ADC conjugados no terminal C (CT) a uma carga útil maitansina acoplada a um ligante HIPS-4AP. FIG. 6B mostra um gráfico da potência in vitro contra células de Ramos [% de viabilidade vs. Log de concentração de anticorpos conjugados (ADC) (nM)] para os ADC anti-CD22 conjugados no terminal C (CT) a uma carga útil de maitansina ligada a um ligante HIPS-4AP.
Estudos de Xenoenxertos
[00488] Os camundongos fêmeas ICR SCID (8/grupo) foram inoculados por via subcutânea com 5 x 106 células WSU-DLCL2. O tratamento começou quando os tumores atingiram uma média de 262 mm3, momento em que os animais foram dosados por via intravenosa apenas com o veículo ou rotulados com CT αCD22 HIPS-4AP-maitansina (10 mg/kg). A dosagem foi realizada de quatro em quatro dias para um total de quatro doses (q4d x 4). Os animais eram controlados duas vezes por semana quanto ao peso corporal e a dimensão do tumor. Os animais foram abatidos quando os tumores atingiram 2000 mm3.
Resultados
[00489] O tempo médio até ao ponto final para os animais dos grupos de controle dos veículos foi de 16 dias; portanto, a inibição do crescimento tumoral (TGI%) foi calculada nesse dia. A TGI% foi definida pela seguinte fórmula TGI (%) = (TVgrupo control - TVgrupo tratado)/ TVcontrol x 100 onde a TV é o volume do tumor.
[00490] Os animais que foram dosados com αCD22 HIPS-4AP-maitansina demonstraram 90% TGI no 16º dia, com 5 dos 8 tumores em completa regressão (FIG 7). Três destas regressões completas duraram até ao final do estudo (dia 58). A FIG 7 mostra um gráfico indicando a eficácia in vivo contra um modelo de xenoenxerto WSU- DLCL2 (volume médio de tumor (mm3) vs. dias) para os ADCs anti-CD22 (CT) conjugados com o terminal C (CT) a uma carga útil de maitansina acoplada a um ligante HIPS-4AP. As setas verticais da FIG. 7 indicam a dose, que se produziu a cada quatro dias para um total de quatro doses (q4d x 4).
EXEMPLO 4 Introdução
[00491] Os tumores derivados de hematologia constituem ~10% de todos os casos de câncer recentemente diagnosticados nos EUA. Destes, a designação de linfoma não-Hodgkin
(NHL) descreve um grupo diversificado de cânceres que, coletivamente, se encontram entre os 10 cânceres mais frequentemente diagnosticados em todo o mundo. Embora as tendências de sobrevivência a longo prazo estejam melhorando, continua havendo uma necessidade clínica não atendida significativa de tratamentos para ajudar pacientes com doenças recorrentes ou refratárias, uma das causas da qual é o efluxo de fármacos através de uma maior regulação das bombas xenobióticas, como a MDR1. Um fármaco conjugado foi produzido em um local especificamente dirigido contra o CD22 e o transporte de uma carga útil de maitansina não- separável, resistente ao efluente mediado por MDR1. A construção foi eficaz contra o xenoenxerto de CD22+ NHL e pode ser dosada repetidamente em macacos cynomolgus a 60 mg/kg, sem efeitos adversos observados. Globalmente, os dados indicam que este medicamento tem potencial para ser utilizado eficazmente em pacientes com tumores CD22+ que desenvolveram resistência ao MDR1 relacionada com terapias anteriores. O CD22 é um alvo clinicamente validado para o tratamento da NHL e TODOS. Um conjugado de fármacos anti- CD22, tal como atualmente revelado, pode ser utilizado para o tratamento de pacientes com NHL e TODOS recorrente/refratários.
Material e Métodos
[00492] Um anticorpo anti-CD22 especificamente orientado foi conjugado, utilizando a tecnologia de etiquetagem de aldeídos, com um ligante de carga de maitansina não-separável. O ADC foi caracterizado tanto em termos biofísicos como funcionais in vitro. A eficácia foi então determinada in vivo em ratos utilizando dois modelos de xenoenxertos e foram efetuados estudos de toxicidade em ratos e macacos cynomolgus. Foram realizados estudos farmacodinâmicos em macacos e estudos farmacocinéticos e toxicocinéticos comparando a exposição total ao ADC em estudos de eficácia e toxicidade.
Resultados
[00493] O ADC era muito potente in vivo, inclusive contra linhas celulares que tinham sido construídas para superexpressar a bomba de efluentes, MDR1. A construção foi eficaz numa dose de 10 mg/kg x 4 contra modelos de tumores de xenoenxerto NHL, e num estudo de toxicidade cinomolgus, o ADC foi dosado duas vezes a 60 mg/kg sem que se observassem efeitos adversos. A exposição do ADC total a estas doses (avaliada pela AUC0-inf) indicou que a exposição necessária para alcançar a eficácia era inferior aos limites toleráveis. Finalmente, uma revisão da resposta farmacodinâmica nos macacos tratados mostrou que o compartimento das células B estava seletivamente esgotado, indicando que o ADC eliminava as células-alvo sem uma toxicidade significativa fora do alvo.
[00494] Os resultados indicaram que o ADC pode ser utilizado eficazmente em pacientes com tumores CD22+ que desenvolveram resistência ao MDR1 relacionada com terapias anteriores.
EXEMPLO 5 Introdução
[00495] Leucemias, linfomas e mielomas são altamente prevalentes na população, representando ~ 10% de todos os casos de novos diagnósticos de câncer nos EUA em 2015. Desses cânceres, as neoplasias derivadas de células B compõem um grupo grande e diversificado que inclui linfoma não Hodgkin (NHL), leucemia linfocítica crônica (CLL) e leucemia linfoblástica aguda (ALL). Da mesma forma, como categoria, o NHL designa cerca de 60 subconjuntos de linfoma, dos quais cerca de 85% são derivados de células B, incluindo linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma folicular (FL) e linfoma de células do manto (MCL). Coletivamente, as doenças NHL estão entre os tipos de câncer mais comuns observados, classificando-se como o 7º câncer mais comum nos EUA e o 10º câncer mais comum diagnosticado em todo o mundo em 2012. Embora as tendências de longo prazo mostrem melhorias nas taxas de supervivência de 5 anos para a maioria dos diagnósticos de câncer de sangue, ainda existe uma necessidade clínica não atendida significativa, com 16% de CLL, 30% de ALL e 30% de pacientes com NHL diagnosticados de 2004 a 2010 não conseguindo atingir uma meta de sobrevivência de 5 anos.
[00496] CD22 é uma glicoproteína de superfície celular de linhagem restrita de células B que é expressa na maioria das neoplasias hematológicas de células B, mas não é expressa em células-tronco hematopoiéticas, células B de memória ou outros tecidos não-hematopoiéticos normais. Seu padrão de expressão e sua rápida cinética de internalização a tornam um alvo para terapias conjugado anticorpo-fármaco (ADC) e foi validado como tal em ensaios clínicos contra a NHL e a ALL.
[00497] Nas experiências descritas neste texto, a tecnologia de conjugação específica do local com base na etiqueta de aldeído e na química Hidrazino-iso-Pictet-Spengler (HIPS) foi usada para colocar uma carga de maitansina acoplada através de um ligante não clivável à C- terminal da cadeia pesada do anticorpo. O rótulo de aldeído geneticamente codificado incorporou a sequência de 6 aminoácidos, LCTPSR (SEQ ID NO: 32). Cotranslacionalmente, a enzima geradora de formilglicina superexpressa (FGE) converteu a cisteína na sequência de consenso em um resíduo de formilglicina, portando um grupo funcional aldeído, que foi reagido com uma carga útil do HIPS-ligante para gerar um ADC. Essa abordagem proporcionou controle sobre o posicionamento da carga útil e o DAR, e produziu preparações ADC altamente homogêneas. Os ADCs conjugados especificamente no local apresentaram uma farmacocinética (PK) melhorada e eficácia em relação aos conjugados estocásticos, provavelmente devido à falta de espécies subconjugadas ou superconjugadas na preparação, o que pode levar a moléculas ineficazes ou excessivamente tóxicas, respectivamente. Além disso, a carga útil de ligante-maitansina não clivável usada no ADC anti-CD22 foi resistente ao efluxo pelo MDR1 e não mediou a morte fora do alvo ou espectador. Juntas, essas características contribuíram para a eficácia e segurança do ADC anti-CD22 observado em estudos pré-clínicos.
Materiais e Métodos Geral
[00498] Todos os estudos em animais foram conduzidos de acordo com as diretrizes do Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais e foram realizados nos Laboratórios Charles River, Aragen Bioscience ou Covance Laboratories. O anticorpo anti-maitansina murino foi produzido pelo ProMab e validado internamente. O anticorpo anti-AF488 de coelho foi adquirido da Life Technologies. Os anticorpos secundários conjugados com peroxidase de rábano silvestre (HRP) foram de Jackson Immunoresearch. Os anticorpos utilizados para estudos farmacodinâmicos foram da BD Pharmingen. As linhas celulares foram obtidas nos bancos de células ATCC e DSMZ, onde foram autenticadas por morfologia, cariotipagem e abordagens baseadas em PCR.
Clonagem, expressão, e purificação de anticorpos marcados
[00499] Os anticorpos foram gerados usando técnicas padrão de clonagem e purificação e tecnologia de expressão GPEx®.
Bioconjugação, purificação, e análises de HPLC
[00500] Os ADCs foram fabricados e caracterizados como descrito em Drake et al., Bioconjugate Chem., 2014, 25, 1331-41.
Geração de linhas celulares MDR1+
[00501] O cDNA de MDR1 (ABCB1) foi obtido da Sino Biological e clonado em um plasmídeo pEF com um marcador de seleção de higromicina. Um instrumento AMAXA Nucleofector™ foi utilizado para eletroporar células de Ramos (ATCC CRL-1923) e WSU- DLCL2 (DSMZ ACC 575) de acordo com as instruções do fabricante. Após a seleção com higromicina (Invitrogen 10687010), as piscinas foram enriquecidas com tratamento com paclitaxel (25 nM por até 10 dias) para selecionar células com MDR1 funcional. As células resultantes foram mantidas sob seleção de higromicina em RPMI (Gibco 21870-092) suplementadas com 10% de soro fetal bovino (FBS) e 1X GlutaMax (Gibco 35050-079).
Ensaios de citotoxicidade in vitro
[00502] As linhas celulares foram plaqueadas em placas de 96 poços (Costar 3610) a uma densidade de 5 x 104 células/poço em 100 μL de meio de crescimento e deixadas em repouso por 5 h. A diluição serial das amostras de teste foi realizada em RPMI em 6x a concentração final e 20 μL foram adicionados às células. Após incubação a 37 °C com 5% CO2 por 5 dias, a viabilidade foi medida usando um ensaio de proliferação Promega CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (G3581) de acordo com as instruções do fabricante. AS curvas de GI50 foram calculadas em GraphPad Prism utilizando o valor da ração fármaco-anticorpo do ADC (DAR) para normalizar a concentração de dose.
Estudo de Xenoenxertos
[00503] Camundongos CB17 ICR SCID fêmeas foram inoculados subcutaneamente com células WSU-DLCL2 ou células de Ramos em Matrigel a 50%. Os tumores foram medidos duas vezes por semana e o volume do tumor foi estimado de acordo com a fórmula: 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑑𝑜 𝑡𝑢𝑚𝑜𝑟 ( 𝑚𝑚 ) = onde w = largura do tumor e l = comprimento do tumor.
Quando os tumores atingiram o volume médio desejado, os animais foram randomizados em grupos de 8 a 12 camundongos e dosados como descrito abaixo. Os animais foram sacrificados no final do estudo ou quando os tumores atingiram 2000 mm3.
Estudo de toxicologia em ratos e análise toxicocinética (TK)
[00504] Ratos Sprague-Dawley machos (8-9 semanas de idade no início do estudo) receberam uma dose intravenosa única de 6, 20, 40 ou 60 mg/kg de ADC anti-CD22 (5 animais/grupo). Os animais foram observados por 12 dias após a dose. Os pesos corporais foram registrados nos dias 0, 1, 4, 8 e 11. O sangue foi coletado de todos os animais às 8 horas e nos dias 5, 9 e 12 e foi utilizado para análises toxicocinéticas (todos os momentos) e para análises clínicas e hematológicas (dias 5 e 12). As análises toxicocinéticas foram realizadas por ELISA, utilizando as mesmas condições e reagentes descritos nas análises farmacocinéticas.
Estudos de toxicologia em primatas não-humanos e estudos TK
[00505] Macacos cynomolgus (2/sexo/grupo) receberam duas doses (a cada 21 dias) de 10, 30 ou 60 mg/kg do ADC anti-CD22, seguido de um período de observação de 21 dias. Os pesos corporais foram avaliados antes da dosagem no dia 1 e nos dias 8, 15, 22 (predose), 29, 36 e 42. O sangue foi coletado para análises de toxicocinética, química clínica e hematologia, de acordo com os esquemas apresentados na Tabela 2. As análises toxicocinéticas foram realizadas por ELISA, utilizando as mesmas condições e reagentes descritos para as análises farmacocinéticas, exceto que a proteína CD22-His foi usada como reagente de captura para as medidas totais de anticorpos e ADC totais.
Tabela 2. Resumo dos resultados farmacocinéticos em ratos dosados com um ADC anti- CD22 a 3 mg/kg Parâmetro, (SD) médio Total Ab Total ADC Conjugado Total AUC0-inf (dia μg/mL) 304 (40) 218 (18) 261 (26) Depuração (mL/dia/kg) 10,0 (1) 13,8 (1) 11,6 (1)
C0.04 d 73,2 (5) 83,9 (16) 76,8 (6) t1/2 efetivo (dias)* 9,48 (1) 6,13 (0.6) 7,22 (0.6) VSS (mL/kg) 41,1 (3) 36,7 (7) 39,2 (3) Medições de anticorpos totais conjugados e não conjugados Ab; O ADC total é uma medição sensível a DAR; conjugados totais medem todos os analitos com DAR ≥1. SD, desvio padrão; AUC0-inf, área sob consideração vs. curva de tempo de 0 até infinito; C0.04 d, concentração observada em 1 h; t1/2 efetivo. vida média efetiva; VSS, volume da distribuição no estado estável. *A incerteza para vida média é dada como um erro padrão.
Estudo farmacodinâmico de primatas não humanos
[00506] Amostras de sangue total dos macacos cynomolgus inscritos no estudo de toxicologia ADC anti-CD22 foram analisadas por citometria de fluxo para avaliar populações de leucócitos CD3+, CD20+ e CD3-/CD20-. Brevemente, a uma alíquota de 100 μL de sangue inteiro, foram adicionados e incubados no gelo por 30 min os anticorpos de controle fluoresceína e ficoeritrina-conjugado isotipo ou anticorpos fluoresceína-conjugado anti-CD20 e ficoeritrina- conjugado anti-CD3. Em seguida, os glóbulos vermelhos foram lisados com uma solução de cloreto de amônio (Stem Cell Technologies) e as células foram lavadas duas vezes em solução salina tamponada com fosfato + 1% de FBS. As células marcadas foram analisadas por citometria de fluxo em um instrumento FACSCanto™ executando o software FACSDiva™.
Modelos de estudos farmacocinéticos (PK)
[00507] Para o estudo com camundongos, os animais utilizados no experimento com o xenoenxerto de Ramos foram amostrados em grupos de três em tempos a partir do início da 1 h após a primeira dose e continuando durante o período de observação. Para o estudo em ratos, ratos Sprague-Dawley machos (3 por grupo) foram doseados por via intravenosa com um único bolus de 3 mg/kg do ADC. O plasma foi coletado 1 hora, 8 horas e 24 horas e 2, 4, 6, 8, 10, 14 e 21 dias após a dose. As amostras de plasma foram armazenadas a -80 °C até o uso.
Análises de amostras PK e TK
[00508] As concentrações de anticorpo total, ADC total (sensível ao DAR) e conjugado total (DAR ≥1) foram quantificadas por ELISA, conforme diagramado na FIG. 10. Para o anticorpo total, os conjugados foram capturados com um anticorpo específico para IgG anti- humano e detectados com um anticorpo específico para Fc anti-humano conjugado com HRP. Para o ADC total, os conjugados foram capturados com um anticorpo anti-humano específico de Fab e detectados com um anticorpo primário de camundongo anti-maitansina, seguido por um anticorpo secundário específico de subclasse 1 de IgG anti-camundongo conjugado com HRP. Para o conjugado total, os conjugados foram capturados com um anticorpo anti-maitansina e detectados com um anticorpo específico para Fc anti-humano conjugado com HRP. O anticorpo secundário ligado foi detectado usando o substrato Ultra TMB One-Step ELISA (Thermo Fisher). Depois de temperar a reação com ácido sulfúrico, os sinais foram lidos tomando a absorbância a 450 nm num leitor de placa Molecular Devices Spectra Max M5 equipado com o software SoftMax Pro. Os dados foram analisados usando o software GraphPad Prism e Microsoft Excel.
Ligação indireta antígeno CD22 por ELISA
[00509] As placas Maxisorp de 96 poços (Nunc) foram revestidas durante a noite a 4 °C com 1 μg/mL de CD22-His humano (Sino Biolígiol) em PBS. A placa foi bloqueada com tampão de caseína (ThermoFisher) e, em seguida, o anticorpo anti-CD22 do tipo selvagem e ADCs foram semeados em uma série de 11 etapas de diluições de duas vezes, a partir de 200 ng/mL. A placa foi incubada, agitando, em temperatura ambiente por 2 h. Após lavagem em solução salina tamponada com fosfato (PBS) 0,1% Tween-20, o analito ligado foi detectado com um anticorpo secundário de burro anti-humano conjugado com peroxidase de rábano silvestre (HRP) específica para Fc-γ. Os sinais foram visualizados com Ultra TMB (Pierce) e extintas com 2 N H2SO4. A absorbância a 450 nm foi determinada usando um leitor de placas SpectraMax M5 de Molecular Devices e os dados foram analisados usando GraphPad Prism.
Internalização de CD22 mediada por ADC anti-CD22 em linhas celulares NHL CD22+
[00510] Células de Ramos, Granta-519, e WSU-DLCL2 (1e6/teste) foram incubadas na rotulagem de amortecimento (tampão) [soro fetal bovino (FBS) PBS+ 1%], ou na rotulagem de amortecimento com o ADC anti-CD22 (1 μg/teste). As amostras foram colocadas a 4 ou 37 °C por 2 h. Em seguida, as células foram incubadas em gelo por 20 min com anti-CD22 marcado com fluoresceína. Após lavar 2 vezes no tampão de marcação, as células foram analisadas por citometria de fluxo em um instrumento FACSCanto™ executando o software FACSDiva™. A diferença na fluorescência entre as células a 4 e 37 ° C ± ADC foi interpretada como internalização mediada por ADC anti-CD22.
Estudos de reatividade cruzada com cynomolgus e tecido humano
[00511] Os estudos de reatividade cruzada de tecido foram realizados por Ensigna Biosystems Inc. (Richmond, CA), usando ADC anti-CD22 biotinilado e um anticorpo isotipo conjugado por carga de ligação HIPS-4AP-maitansina biotinilado como controle. Utilizaram-se microarrays de tecidos contendo pele, coração, pulmão, rim, fígado, pâncreas, estômago, intestino delgado, intestino grosso e baço (controle positivo). O anticorpo primário foi detectado usando estreptavidina conjugada à peroxidase de rábano silvestre, seguida de visualização com substrato DAB.
Síntese da carga útil do ligante HIPS-4AP-maitansina 1,2-dimetilhidrazin-1-carboxilato de (9H-Fluoren-9-il)metila (2).
[00512] MeNHNHMe•2HCl (1) (5,0 g, 37,6 mmol) foi dissolvido em CH3CN (80 mL). Et3N (22 mL, 158 mmol) foi adicionado e o precipitado formado foi removido por filtração. Uma solução FmocCl (0,49 g, 18.9 mmol, 0,5 eq) foi adicionada gota a gota à solução resultante de MeNHNHMe, por 2,5 h a -20 °C. A mistura de reação foi então diluída com EtOAc, lavada com salmoura de H2O, seca sobre Na2SO4, e concentrada no vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica (hexanes:EtOAc = 3:2) para dar 3,6 g (34%) do composto 2.
[00513] 1H NMR (400 MHz, CDCl3)  7,75-7,37 (m, 8 H), 4,48 (br s, 2H), 4,27 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,05 (s, 3H), 2,55 (br s, 3H).
2-(((terc-Butildimetilsilil)oxi)metil)-1H-indol (4)
[00514] Um balão seco em estufa foi carregado com indol-2-metanol, 3, (1,581 g, 10,74 mmol), TBSCl (1,789 g, 11,87 mmol), e imidazol (2,197 g, 32,27 mmol), e esta mistura foi suspensa em CH2Cl2 (40 mL, anídrico). Após 16 h, a mistura de reação foi concentrada até um resíduo laranja. A mistura bruta foi absorvida em Et2O (50 mL), lavada com AcOH aquoso (5% v/v, 3 x 50 mL) e salmoura (25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas para fornecer 2,789 g (99%) do composto 4 como um sólido cristalino que foi usado sem purificação adicional. 1
[00515] H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,29 (s, 1H), 7,57 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 8,1, 0,6 Hz, 1H), 7,19 – 7,14 (m, 1H), 7,12 – 7,07 (m, 1H), 6,32 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 4,89 (s, 2H), 0,95 (s, 9H), 0,12 (s, 6H).
[00516] 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 138,3; 136,0; 128,6; 121,7; 120,5; 119,8; 110,9; 99,0; 59,4; 26,1; 18,5; -5,2.
[00517] HRMS (ESI) calculado para C15H24NOSi [M+H]+: 262,1627; encontrado: 262,1625.
3-(2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-1H-indol-1-il)propanoato de metila (6)
[00518] A uma solução de indol 4 (2.789 μg, 10.67 mmol) em CH3CN (25 mL) foi adicionado acrilato de metila, 5, (4.80 mL, 53.3 mmol) seguido de 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec- 7-eno (800 μL, 5,35 mmol), e a mistura resultante foi submetida a refluxo. Após 18 h, a solução foi arrefecida e concentrada num óleo laranja que foi purificado por cromatografia em sílica gel (9:1 hexanos:EtOAc) para dar 3.543 g (96%) do composto 6 como um óleo incoloro.
[00519] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,58 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,23 – 7,18 (m, 1H), 7,12 – 7,07 (m, 1H), 6,38 (s, 1H), 4,84 (s, 2H), 4,54 – 4,49 (m, 2H), 2,89 – 2,84 (m, 2H), 0,91 (s, 9H), 0,10 (s, 6H).
[00520] 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 172,0; 138,5; 137,1; 127,7; 122,0; 121,0; 119,8; 109,3; 101,8; 58,2; 51,9; 39,5; 34,6; 26,0; 18,4; -5,2.
[00521] HRMS (ESI) calculado para C19H30NO3Si [M+H]+: 348,1995; encontrado: 348,1996.
3-(2-(hidroximetil)-1H-indol-1-il)propanoato de metila (7)
[00522] A uma solução do composto 6 (1,283 g, 3,692 mmol) em THF (20 mL) a 0 °C foi adicionado uma solução de 1.0 M de fluoreto de tetrabutilamônio em THF (3,90 mL, 3,90 mmol). Após 15 minutos, a mistura de reação foi diluída com Et2O (20 mL) e lavada com NaHCO3 (sat. aq., 3 x 20 mL), e concentrado para um óleo verde pálido. O óleo foi purificado por cromatografia em sílica gel (2:1 hexanos:EtOAc) para dar 822 mg (95%) de 7 como um sólido branco cristalino.
[00523] 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7,60 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,34 (dd, J = 8,2, 0,4 Hz, 1H), 7,27 – 7,23 (m, 1H), 7,16 – 7,11 (m, 1H), 6,44 (s, 1H), 4,77 (s, 2H), 4,49 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,66 (s, 3H), 2,87 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,64 (s, 1H).
[00524] 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 172.3; 138,5; 137.0; 127,6; 122,2; 121,1; 119,9; 109,3; 102,3; 57,1; 52,0; 39,1; 34,3.
[00525] HRMS (ESI) calculado para C13H15NNaO3 [M+Na]+: 256,0950; encontrado: 256,0946.
3-(2-formil-1H-indol-1-il)propanoato de metila (8)
[00526] O periodiano Dess-Martin (5,195 g, 12,25 mmol) foi suspenso em uma mistura de CH2Cl2 (20 mL) e piridina (2,70 mL, 33,5 mmol). Após 5 minutos, a suspensão branca resultante foi transferida para uma solução de metil 3-(2-(hidroximetil)-1H- indol-1-il)propanoato (7; 2,611 g, 11,19 mmol) em CH2Cl2 (10 mL), resultando em uma suspensão vermelho-marrom. Após 1 h, a reação foi extinta com tiossulfato de sódio (solução aquosa 10%, 5 mL) e NaHCO3 (solução aquosa saturada, 5 mL). A camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (3 x 20 mL); os extratos combinados foram secos sobre Na2SO4, filtrados, e concentrados em um óleo marrom. Purificação por cromatografia em sílica gel (5-50% EtOAc em hexanos) produziu 2,165 g (84%) do composto 8 como um óleo incoloro.
[00527] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,87 (s, 1H), 7,73 (dt, J = 8,1, 1,0 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 8,6, 0,9 Hz, 1H), 7,45 – 7,40 (m, 1H), 7,29 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,18 (ddd, J = 8,0, 6,9, 1,0 Hz, 1H), 4,84 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,62 (s, 3H), 2,83 (t, J = 7,2 Hz, 2H).
[00528] 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 182,52; 171,75; 140,12; 135,10; 127,20; 126,39; 123,46; 121,18; 118,55; 110,62; 51,83; 40,56; 34,97.
[00529] HRMS (ESI) calculado para C13H13NO3Na [M+Na]+: 254,0793; encontrado: 254,0786.
Ácido 3-(2-Formil-1H-indol-1-il) propanoico (9)
[00530] A uma solução de indol 8 (2.369 g, 10,24 mmol) dissolvida em dioxano (100 mL) foi adicionado LiOH (4 M de solução aquosa, 7.68 mL, 30,73 mmol). Um precipitado branco espesso se formou gradualmente ao longo de várias horas. Após 21 h, HCl (1 M de solução aquosa, 30 mL) foi adicionado gota a gota para dar uma solução com pH = 4. A solução foi concentrada e o óleo castanho claro resultante foi dissolvido em EtOAc (50 mL) e lavado com água (2 x 50 mL) e salmoura (20 mL). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada, e concentrada em um sólido laranja. Purificação por cromatografia em sílica gel (10-50% EtOAc em hexanos com 0,1% de ácido acético) produziu 1.994 g (84%) do composto 9 como um sólido amarelo pálido.
[00531] H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,89 (s, 1H), 7,76 (dt, J = 8,1, 0,9 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 8,6, 0,9 Hz, 1H), 7,48 – 7,43 (m, 1H), 7,33 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,21 (ddd, J = 8,0, 6,9, 1,0 Hz, 1H), 4,85 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,91 (t, J = 7,2 Hz, 2H).
[00532] 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 182,65; 176,96; 140,12; 135,02; 127,33; 126,42; 123,53; 121,27; 118,76; 110.55; 40,19; 34,82.
[00533] HRMS (ESI) calculado para C12H10NO3 [M-H]-: 216,0666; encontrado: 216,0665.
Ácido 3-(2-((2-(((9H-Fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-1,2-dimetilhidrazinil)metil)-1H-indol-1- il)propanoico (10)
[00534] Para uma solução de composto 9 (1,193 g, 5,492 mmol) e 1,2- dimetilhidrazinecarboxilato de (9H-fluoren-9-il)metila, 2, (2,147 g, 7,604 mmol) em 1,2- dicloroetano (anídrico, 25 mL) foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1.273 g, 6.006 mmol). A suspensão amarela resultante foi agitada por 2 h e depois extinta com NaHCO3 (solução aquosa saturada, 10 mL), seguido pela adição de HCl (1 M de solução aquosa) a pH 4. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 (5 x 10 mL). Os extratos orgânicos reunidos foram secos sobre Na2SO4, filtrados, e concentrados em um óleo de laranja. A purificação por cromatografia em sílica gel C18 (20-90% CH3CN em água) produziu 1,656 g (62%) do composto 10 como um sólido rosa ceroso.
[00535] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,76 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,70 – 7,47 (br m, 3H), 7,42 – 7,16 (br m, 6H), 7,12 – 7,05 (m, 1H), 6,37 (s, 0,6H), 6,05 (s, 0,4H), 4,75 – 4,30 (br m, 4H), 4,23 (m, 1H), 4,10 (br s, 1H), 3,55 (br d, 1H), 3,11 – 2,69 (m, 5H), 2,57 (br s, 2H), 2,09 (br s, 1H).
[00536] 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 174,90; 155,65; 143,81; 141,42; 136,98; 134,64; 127,75; 127,48; 127,12; 124,92; 122,00; 120,73; 120,01; 119,75; 109,19; 103,74; 67,33; 66,80; 51,39; 47,30; 39,58; 39,32; 35,23; 32,10.
[00537] HRMS (ESI) calculado para C29H30N3O4 [M+H]+: 484,2236; encontrado: 484,2222.
1,2-dimetil-2-((1-(3-oxo-3-(perfluorofenoxi)propil)-1H-indol-2-il)metil)hidrazin-1- carboxilato de (9H-Fluoren-9-il)metila (RED-004).
[00538] O composto 10 (5,006 g, 10,4 mmol), foi adicionado a um balão de fundo redondo de 2 bocas de 100 mL seco contendo uma barra de agitação seca. EtOAc anídrico, 40 mL, foi adicionado com uma seringa e a solução foi agitada a 20 °C por 5 min. dando uma solução clara, pálida, verde-amarela. A solução foi esfriada até 0 ° C num banho de água gelada e pentafluorofenol (2098,8 mg, 11,4 mmol), em 3 mL de EtOAc anídrico foi adicionado gota a gota. A solução foi agitada a 0 °C por 5 min. DCC (2348,0 mg, 11,4 mmol), em 7 mL de EtOAc anídrico foi adicionado gota a gota, lentamente por seringa. A solução foi agitada a 0 °C por 5 min, depois foi removida do banho e aquecida até 20 °C. A reação foi agitada por 2 h, esfriada até 0 °C, e filtrada para dar uma solução clara, pálida, verde-amarela. A solução foi diluída com 50 mL de EtOAc, e lavada com 2 x 25 mL de H2O, 1 x 25 mL 5 M de NaCl, e seca sobre Na2SO4. A solução foi filtrada, evaporada e seca sob alto vácuo, dando origem a 6552.5 mg (97%) de RED-004 como um sólido branco esverdeado.
[00539] 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 780 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,58 (m, 3H), 7,45-7,22 (m, 6H), 7,14 (dd(appt. t), J = 7,4 Hz, 1H), 6,42 & 6,10 (2 br s, 1H), 4.74 (dd(appt. t), J = 5,4 Hz, 2H), 3,65-3,18 (br, 3H), 3,08 & 2,65 (2 br s, 3H), 2,88 (s, 3H).
(S)-3,4-dimetiloxazolidin-2,5-diona (RED-194).
[00540] A uma solução de N-Boc-Ala-OH (11) (0,005 mol) em cloreto de metileno (25 ml) a 0°C, foi adicionado sob nitrogênio 1.2 equivalente do tricloreto fosforoso. A mistura de reação foi agitada por 2 h a 0 ° C, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com tetracloreto de carbono (3 x 20 ml) para proporcionar RED-194.
Metil-L-alaninato de (14S,16S,32R,33R,2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14- dimetoxi-33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)- benzenaciclotetradecafano-10,12-dien-4-ila (RED-062).
[00541] Maitansinol (RED-063) (4,53g, 8 mmol) foi dissolvida em um DMF anídrico (11 mL) para uma solução clara e incolor que foi transferida para um balão de fundo redondo de 2 bocas seco sob N2. O THF anídrico (44 mL) foi adicionado seguido por DIPEA (8,4 mL, 48 mmol). Uma solução de RED-194 (5,4 g, 42 mmol) foi adicionado para fornecer uma solução clara e incolor. Dessecado, Zn(OTf)2 (8,7 g, 24 mmol) finamente moído foi adicionado à solução de agitação e a mistura de reação foi agitada a 20 °C por 2 dias. A reação foi extinta pela adição a uma solução de 70 mL de 1.2 M NaHCO3 e 70 mL EtOAc. Após agitação, a mistura resultante produziu um precipitado branco que foi removido por filtração. O filtrado foi extraído com EtOAc (5 x 70 mL), seco (Na2SO4) e concentrado para dar um óleo laranja avermelhado. Este foi dissolvido em CH2Cl2 (15 mL) e purificado usando um sistema de Biotage (absorbido em 2x amostras Biotage Ultra 10 g, purificação em 2x cartuchos Biotage Ultra 100 g com 0-20% de gradiente de MeOH em CH2Cl2) para produzir 4,38 g do RED-062 como um sólido de pêssego pálido (95% de, 93,7% diastereômero desejado).
4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butila (13).
[00542] A um balão de fundo redondo de 100 mL contendo uma barra de agitação magnética foi adicionado cloridrato de piperidin-4-ona monohidratado (12) (1.53 g, 10 mmol), dicarbonato de di-terc-butil (2.39 g, 11 mmol), carbonato de sódio (1.22 g, 11,5 mmol), dioxano (10 mL), e água (1 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi diluída com água (100 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O material resultante foi seco sob vácuo para produzir 1.74 g (87%) do composto 13 como um sólido branco.
[00543] 1H NMR (CDCl3) δ 3.73 (t, 4H, J = 6.0), 2.46 (t, 4H, J = 6.0), 1.51 (s, 9H).
[00544] MS (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C10H18NO3 200.3; encontrado 200.2.
4-((2-(2-(3-(terc-butoxi)-3-oxopropoxi)etoxi)etil)amino)piperidin-1-carboxilato de terc- butila (14).
[00545] A um frasco de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética foi adicionado o composto 13 (399 mg, 2 mmol), H2N-PEG2-COOt-Bu (550 mg, 2,4 mmol), peneiras moleculares de 4 Å (pó ativado, 200 mg), e 1,2-dicloroetano (5 mL). A mistura foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. À mistura de reação foi adicionado triacetoxiboro- hidreto de sódio (845 mg, 4 mmol). A mistura foi agitada durante 3 dias à temperatura ambiente. A mistura resultante foi particionada entre EtOAc e NaHCO3 aquoso saturado. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para produzir 850 mg do composto 14 como um óleo viscoso.
[00546] MS (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C21H41N2O6 417.3; encontrado 417.2.
Ácido 13-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)-2,2-dimetil-4,14-dioxo-3,7,10-trioxa-13- azaheptadecan-17-óico (RED-195).
[00547] A um frasco de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética foi adicionado o composto 14 (220 mg, 0,5 mmol), anidrido succínico (55 mg, 0,55 mmol), 4- (dimetilamina)piridina (5 mg, 0,04 mmol), e diclorometano (3 mL). A mistura foi agitada por 24 h em temperatura ambiente. A mistura de reação foi parcialmente purificada por cromatografia flash (eluida ao 50-100% EtOAc/hexanos) para produzir 117 mg do composto RED-195 como um óleo claro, que foi transportado sem caracterização adicional.
[00548] MS (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C25H45N2O9 517.6; encontrado 517.5.
1-((14S,16S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14-dimetoxi-33,2,7,10-tetrametil- 12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)-benzenaciclotetradecafano-10,12- dien-4-il) (2S)-8-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)-2,3-dimetil-4,7-dioxo-11,14-dioxa- 3,8-diazaheptadecanedioato de 17-(terc-butila) (RED-196).
[00549] A um frasco de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética foi adicionado o RED-195 (445 mg, 0,86 mmol), HATU (320 mg, 0,84 mmol), DIPEA (311 mg, 2,42 mmol), e diclorometano (6 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 5 minutos. A solução resultante foi adicionada ao RED-062 (516 mg, 0,79 mmol) e a mistura de reação foi agitada por mais 30 minutos em temperatura ambiente. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia flash (eluida 3-10% MeOH/DCM) para dar 820 mg (90%) de RED-196 como um sólido castanho claro.
[00550] MS (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C57H87ClN5O17 1148.6; encontrado
1148.8.
Ácido (2S)-1-(((14S,16S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14-dimetoxi- 33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)- benzenaciclotetradecafano-10,12-dien-4-il)oxi)-2,3-dimetil-1,4,7-trioxo-8-(piperidin-4-il)- 11,14-dioxa-3,8-diazaheptadecan-17-óico (RED-197).
[00551] A um frasco de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética foi adicionado o RED-196 (31 mg, 0,027 mmol) e diclorometano (1 mL). A solução foi arrefecida a 0 °C e foi adicionado tetracloreto de estanho (IV) (solução 1,0 M em diclorometano, 0,3 mL, 0,3 mmol). A mistura de reação foi agitada por 1 h a 0 °C. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia flash C18 (eluição de 5-100% MeCN/água) para produzir 16 mg (60%) de RED-197 como um sólido branco (16 mg, 60% de produção).
[00552] MS (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C48H71ClN5O15 992,5; encontrado 992,6.
Ácido (2S)-8-(1-(3-(2-((2-(((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)-1,2-dimetilhidrazinil)metil)- 1H-indol-1-il)propanoil)piperidin-4-il)-1-(((14S,16S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14- hidroxi-85,14-dimetoxi-33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran- 8(1,3)-benzenaciclotetradecafano-10,12-dien-4-il)oxi)-2,3-dimetil-1,4,7-trioxo-11,14-dioxa- 3,8-diazaheptadecan-17-óico (RED-198).
[00553] A um frasco de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética foi adicionado RED-197 (16 mg, 0,016 mmol), 1,2-dimetil-2-((1-(3-oxo-3-(perfluorofenoxi)propil)- 1H-indol-2-il)metil)hidrazina-1-carboxilato de (9H-fluoren-9-il)metila (12) (13 mg, 0,02 mmol), DIPEA (8 μL, 0,05 mmol), e DMF (1 mL). A solução foi agitada por 18 h em temperatura ambiente. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia flash C18 (eluição de 5-100% de MeCN/água) para produzir 18 mg (77%) do RED-198 como um sólido branco.
[00554] MS (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C77H98ClN8O18 1457,7; encontrado 1457,9.
Ácido (2S)-1-(((14S,16S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-cloro-14-hidroxi-85,14-dimetoxi- 33,2,7,10-tetrametil-12,6-dioxo-7-aza-1(6,4)-oxazinan-3(2,3)-oxiran-8(1,3)- benzenaciclotetradecafano-10,12-dien-4-il)oxy)-8-(1-(3-(2-((1,2-dimetilhidrazinil)methil)- 1H-indol-1-il)propanol)piperidin-4-il)-2,3-dimetil-1,4,7-trioxo-11,14-dioxa-3,8- diazaheptadecan-17-óico (RED-106).
[00555] A um frasco de cintilação seco contendo uma barra de agitação magnética foi adicionado RED-197 (18 mg, 0,012 mmol), piperidina (20 μL, 0a02 mmol), e DMF (1 mL). A solução foi agitada durante 20 minutos à temperatura ambiente. A mistura de reação foi purificada diretamente por cromatografia flash C18 (eluição de 1-60% de MeCN/água) para produzir 15 mg (98%) de composto RED-106 como um sólido branco.
[00556] MS (ESI) m/z: [M+H]+ Calculado para C62H88ClN8O16 1235,6; encontrado
1236.0.
Resultados e Discussão Produção e caracterização inicial do ADC anti-CD22
[00557] O anticorpo anti-CD22 usado (CAT-02) foi uma variante humanizada do anticorpo RFB4. O anticorpo anti-CD22 rotulado no C-terminal foi produzido usando uma linha celular clonal GPEx® com títulos de biorreator de 1,6 g/L e 97% de conversão de cisteina para formilglicina. A carga útil do ligante HIPS-4AP-maitansina foi sintetizada (acima descrito) e conjugada ao anticorpo marcado por aldeído. O ADC resultante foi caracterizado (FIG. 11) por cromatografia de exclusão de tamanho para avaliar a porcentagem de monômero (99,2%) e por interação hidrofóbica (HIC) e cromatografia de fase reversa (PLRP) para avaliar a proporção de fármaco-anticorpo (DAR) , que foi de 1,8. O ADC foi comparado ao anticorpo anti-CD22 de tipo selvagem (sem marcação) em termos de afinidade para a proteína CD22 humana e internalização em células CD22 + usando um método baseado em ELISA (FIG. 12) e um método baseado em citometria de fluxo (FIG. 13), respectivamente. Para ambas medidas funcionais, o ADC teve um desempenho igualmente bom em comparação com o anticorpo de tipo selvagem, indicando que a conjugação não teve efeito em esses parâmetros.
O ADC anti-CD22 não era um substrato para o MDR1 e não promove a morte fora do alvo ou de espectador
[00558] A potência do ADC anti-CD22 foi testada in vitro contra as linhas de células tumorais de Ramos e WSU-DLCL2 HNL. A atividade foi comparada à da maitansina livre e a um ADC relacionado produzido com o anticorpo CAT-02 anti-CD22 conjugado à maitansina através de um ligante de dipeptídeo clivável de valina-citrulina. Ambos os ADCs apresentaram atividade subnanomolar contra as células de Ramos e WSU-DLCL2 do tipo selvagem (FIG. 14, painel A e painel C). Em variantes dessas células projetadas para expressar a bomba de efluxo xenobiótica, MDR1, apenas o ADC anti-CD22 da presente divulgação manteve sua potência original (FIG. 14, painel B e painel D). Por outro lado, a maitansina livre foi ~10 vezes menos eficaz, e o ADC portador de maitansina clivável foi essencialmente desprovido de atividade. Em um experimento de controle, o co-tratamento de células WSU-DLCL2 com ciclosporina, um inibidor de MDR1, não teve efeito em células de tipo selvagem, mas restaurou a potência original da maitansina livre e o ADC clivável em células MDR1 + (FIG. 14, painel E e painel F). Juntos, esses resultados indicaram que o metabolito ativo do ADC anti-CD22 da presente divulgação não era um substrato para o efluxo de MDR1. Em estudos relacionados de citotoxicidade in vitro, o ADC anti-CD22 da presente divulgação não teve efeito na linha celular negativa para antígeno, NCI-N87 (FIG. 15), indicando que não teve atividade fora do alvo durante um período de cultura celular de 5 dias. Além disso, um ADC baseado em anti-HER2 conjugado à carga útil do ligante HIPS-4AP-maitansina não mediou a morte de células negativas ao antígeno na cocultura com células positivas para o antígeno (FIG. 16), implicando que o metabólito ativo do ADC anti-CD22 da presente divulgação, que seria o mesmo do conjugado ADC anti-HER2, também não mediaria a morte de espectadores.
O ADC anti-CD22 foi eficaz contra os modelos de xenoenxerto NHL
[00559] A eficácia in vivo do ADC anti-CD22 foi avaliada em relação aos modelos de xenoenxerto WSU-DLCL2 e de Ramos (FIG. 17), que expressaram quantidades relativamente maiores e menores de CD22, respectivamente (FIG. 18). Em um estudo de dose única, os camundongos portadores de tumores WSU-DLCL2 receberam 10 mg/kg de ADC anti-CD22 ou um veículo de controle. A dosagem foi iniciada quando os tumores tiveram uma média de 118 mm3. Dos animais que receberam o ADC, 25% (2 de 8) tiveram uma resposta parcial, com tumores que regrediram para 4 mm3 no dia 31. Os grupos tratados com ADC anti-CD22 e grupos veículos de controle apresentaram volumes médios de tumor de 415 e 1783 mm3, respectivamente, no dia 31. Em seguida, em um estudo multidose, camundongos portadores de xenoenxertos WSU-DLCL2 foram tratados com 10 mg/kg de ADC anti-CD22 ou com um veículo de controle a cada quatro dias, totalizando quatro doses. A dosagem foi iniciada quando a média dos tumores era 262 mm3.Dos animais que receberam o ADC, 75% (6 de 8) apresentaram uma resposta completa, sendo 38% (3 de 8) duráveis até o final do estudo (dia 59), 43 dias após a última dose. Por outro lado, o grupo veículo de controle atingiu um volume médio de tumor de 2191 mm3 no dia 17. Finalmente, em um estudo multidose, camundongos portadores de xenoenxertos de Ramos foram tratados com 5 ou 10 mg/kg de ADC anti-CD22 ou com um veículo de controle a cada quatro dias, totalizando quatro doses. A dosagem foi iniciada quando a média dos tumores 246 mm3. Conforme previsto, foi observado um efeito da dose nos grupos que receberam a dose de 5 ou 10 mg/kg, demonstrando um atraso no crescimento do tumor de 63% ou 87%, respectivamente. Especificamente, os tempos médios até o ponto final foram 12, 19 e 22 dias para os grupos de veículo de controle, e os grupos com dosagem de 5 e 10 mg/kg, respectivamente. Nos três estudos, nenhum efeito foi observado no peso corporal do camundongo nos grupos de dosagem de ADC anti-CD22 (FIG. 19).
O ADC anti-CD22 foi bem tolerado em até 60 mg/kg em ratos e macacos cynomolgus
[00560] O ADC anti-CD22 não se ligou ao CD22 roedor, no entanto, a dosagem do ADC nesses animais forneceu informações relacionadas à toxicidade fora do alvo e à segurança da carga útil do ligante. Como mencionado acima, em estudos com xenoenxerto de camundongo não foi observado nenhum efeito da dosagem no peso corporal ou em observações clínicas. Em um estudo exploratório de toxicidade em ratos (FIG. 20), os animais (5 por grupo) receberam uma dose intravenosa única do ADC anti-CD22 em 6, 20, 40 ou 60 mg/kg e foram observados por 12 dias após a dose. Todos os animais sobreviveram até o final do estudo. Os animais tratados com 60 mg/kg apresentaram uma redução de 10% no peso corporal em relação ao grupo de veículo de controle. Alterações químicas clínicas compatíveis com lesão hepatobiliar mínima a leve ocorreram no dia 5 em animais administrados doses >40 mg/kg e incluíram atividades aumentadas de alanina aminotransferase (ALT), aspartato transaminase (AST) e fosfatase alcalina (ALP). A maioria das alterações foi revertida no dia 12. Em relação à hematologia,
ocorreram contagens de plaquetas de moderada a acentuadamente no dia 5 em animais que receberam doses >40 mg/kg e tinham sido completamente revertidas para o dia 12. Alterações compatíveis com a inflamação ocorreram nos dias 5 e 12 em animais administrados doses >40 mg/kg e incluíram contagens de neutrófilos e monócitos levemente a moderadamente aumentadas, concentrações de globulina levemente aumentadas e proporção reduzida de albumina: globulina.
[00561] O ADC anti-CD22 ligou-se ao CD22 cynomolgus (FIG. 21) e tinha um perfil de reatividade cruzada de tecido semelhante em macacos em comparação com humanos (FIG. 22). Portanto, os macacos cynomolgus representaram um modelo apropriado para testar as toxicidades dentro e fora do alvo deste ADC. Em um estudo exploratório de dose repetida, os macacos (2/sexo/grupo) receberam 10, 30 ou 60 mg/kg de ADC anti-CD22 uma vez a cada três semanas, para um total de duas doses, seguido de um período de observação de 21 dias. Todos os animais sobreviveram até o término do estudo. Não ocorreram alterações relacionadas ao ADC anti-CD22 nas observações clínicas, peso corporal ou consumo de alimentos. As alterações patológicas clínicas ocorreram principalmente em animais que receberam doses ≥30 mg/kg, e foram consistentes com lesão hepática mínima, aumento do consumo de plaquetas e/ou sequestro e inflamação (FIG. 23). Essas alterações foram semelhantes em 30 e 60 mg/kg e após a primeira e a segunda dose, e foram de magnitude que não se espera que estejam associadas a alterações microscópicas ou efeitos clínicos. Alterações compatíveis com lesão hepática mínima em animais que receberam doses ≥30 mg/kg consistiram no aumento das atividades de ALT, AST e ALP que haviam se revertido parcialmente nos dias 21 e 42. A contagem de plaquetas levemente a moderadamente diminuída observada dentro de uma semana após a dosagem havia revertido principalmente nos dias 21 e 42. As alterações compatíveis com a inflamação consistiram em contagens de neutrófilos e monócitos aumentadas mínima a moderadamente, concentrações de globulina ligeiramente a moderadamente aumentadas e concentrações de albumina minimamente diminuídas.
A administração do ADC anti-CD22 levou à depleção de células B em macacos cynomolgus
[00562] Para avaliar os efeitos farmacodinâmicos do ADC anti-CD22 em espécies reativas cruzadas, as populações de células periferais mononucleares do sangue foram monitoradas em amostras colhidas em macacos cynomolgus incluídos no estudo de toxicidade de dose repetida. Especificamente, a citometria de fluxo foi usada para detectar a proporção de células B (CD20+), células T (CD3+) e células NK (CD20-/CD3-) observadas em animais pré-dose e nos dias 7, 14, 28 e 35 (Figura 5). Nos animais tratados com ADC anti-CD22 pré-dose, as células B incluíram uma média de 11,6% de linfócitos totais; esse valor caiu para uma média de 3,8% no dia 35, representando uma diminuição média de 68% nas populações de células B medidas em relação aos níveis de linha de base (FIG. 24). A depleção de células B foi semelhante em todos os grupos de dosagem, de 10 a 60 mg/kg, indicando que a dose mais baixa foi suficiente para obter o efeito. Enquanto isso, as células B em animais tratados com veículos de controle e as células T e células NK (não mostradas) em todos os grupos permaneceram praticamente inalteradas ao longo do tratamento. Os resultados indicaram que o ADC anti-CD22 foi capaz de mediar seletivamente a depleção de células CD22 + de cynomolgus in vivo, sem levar a toxicidades adversas fora do alvo.
Farmacocinética e toxicocinética do ADC anti-CD22 em camundongos, ratos e macacos cynomolgus
[00563] Para avaliar a estabilidade in vivo do ADC anti-CD22, foi realizado um estudo farmacocinético (PK) em ratos. As concentrações de anticorpo total, ADC total e conjugado total foram monitoradas no sangue periférico de animais (3/grupo) por 21 dias após o recebimento de uma dose única de 3 mg/kg de ADC anti-CD22 (Tabela 2 e FIG. 25 ). Como mostrado na FIG. 10, os ensaios de ADC total e conjugado total empregaram medições sensíveis ao DAR e insensíveis ao DAR, respectivamente. Os parâmetros PK obtidos para todos os três analitos foram semelhantes, indicando que o conjugado era amplamente estável em circulação. Por exemplo, as meias-vidas de eliminação do anticorpo total, ADC total e conjugado total foram 9,48, 6,13 e 7,22 dias, respectivamente.
[00564] Em seguida, as concentrações de analito ADC anti-CD22 foram medidas ao longo do tempo no sangue periférico de camundongos do estudo de eficácia multidose de Ramos descrito acima. O objetivo desta análise foi determinar o nível total de exposição ao ADC alcançado em uma dose eficaz em estudos com xenoenxertos (FIG. 26). Para esse parâmetro de referência, lembre-se que 10 mg/kg x 4 doses ao longo de 22 dias levaram a um atraso de 87% no crescimento do tumor no modelo de Ramos e que 10 mg/kg x 4 doses ao longo de 28 dias levaram a 75% dos animais a exibir uma resposta completa (nenhum tumor palpável restante) no modelo WSU-DLCL2. A área média sob a curva de concentração versus tempo do tempo 0 ao infinito (AUC0-inf) para 10 mg/kg x 4 dose no camundongo foi 2530 ± 131 (S.D.) dia μg/mL.
[00565] Finalmente, as concentrações de analito ADC anti-CD22 em amostras de plasma toxicocinético de animais dosados nos estudos de toxicidade para ratos e macacos cynomolgus descritos anteriormente foram avaliadas (FIG. 26). O objetivo dessas análises foi determinar os níveis totais de exposição ao ADC alcançados em doses correlacionadas à presença ou ausência de toxicidades observadas. Com respeito ao estudo em ratos, os valores de Cmax e AUC0-inf foram geralmente proporcionais à dose. A AUC0-inf média para a dose de 60 mg/kg foi 5201 ± 273 dia μg/mL. Com respeito ao estudo em macacos, os valores de Cmax e AUC0-inf foram geralmente proporcionais à dose. A AUC0-inf média para a primeira dose de 60 mg/kg foi 6140 ± 667 dia  μg/mL. O anticorpo ligado ao antígeno no modelo cynomolgus, no entanto, a depuração (não mostrada) foi semelhante entre todos os grupos de dosagem. Isso indicou que a dose baixa (10 mg/kg) foi suficiente para saturar os mecanismos de depuração mediados por alvo e, portanto, que a depuração mediada por antígeno não afetou significativamente os resultados deste estudo. Esta observação foi consistente com o efeito farmacodinâmico do tratamento ADC anti-CD22 na depleção de células B, cuja extensão foi semelhante em todos os grupos de dosagem.
EXEMPLO 6 Linfoma de Células do Manto: Regressão Tumoral Após Tratamento com R-CHOP no Modelo de Xenoenxerto Granta-519
[00566] As células Granta-519 (0,5 x 107) foram implantadas nos flancos direitos de camundongos CB17-SCID. O volume médio dos tumores foi 180 mm3 onze dias após a implantação. Os camundongos foram randomizados em 8 grupos de 8 camundongos por grupo. O ADC, o rituximabe e o R-CHOP foram testados quanto à inibição do crescimento tumoral contra um veículo de controle. Todos os camundongos foram injetados com o ADC por via intravenosa (i.v.) em um esquema de uma vez por semana ou uma vez a cada três semanas por um período de 6 semanas, como mostrado na Tabela 4 abaixo. O R-CHOP foi administrado por via intravenosa em uma dose única: rituximabe 30 mg/kg; ciclofosfamida 30 mg/kg, doxorubicina 2.475 mg/kg; e vincristina 0.365 mg/kg. A prednisona (0.15 mg/kg) foi administrada por via oral uma vez por dia.
Tabela 4.
Gr. n Tratamento Dosagem (mg/kg) Rota Plan 1 8 Veículo - i.v. QW x 3 2 8 Rituximabe 30mg/kg i.v. QW x 4 3 8 ADC 1mg/kg i.v. QW x 4 4 8 ADC 3mg/kg i.v. QW x 6 5 8 ADC 10mg/kg i.v. QW x 6 6 8 ADC 10mg/kg i.v. Q3W x 2 R: 30mg/kg i.v. Dose única Ciclo: 30mg/kg R- CHOP i.v. Dose única Dox: 2.475mg/kg 7 8 (dosagem no i.v. Dose única Vincrist:0.365mg/ dia 0) i.v. Dose única kg p.o. QD x5 Predn: 0.15mg/kg R: 30mg/kg Dose única i.v. Ciclo: 30mg/kg Dose única i.v. Dox: 2.475mg/kg Dose única R-CHOP (D0) i.v. 8 8 Vincrist:0.365mg/ Dose única + ADC (D14) i.v. kg QD x5 p.o. Predn: 0.15mg/kg QW desde i.v. ADC,10mg/kg D14
[00567] O ADC dosado em 1 mg / kg, 3 mg / kg e 10 mg / kg em um esquema semanal resultou em 19%, 59,7% e 87,3% de inibição do crescimento tumoral (TGI), respectivamente, que, sem querer se vincular pela teoria sugere atividade antitumoral dependente da dose. Ver FIG. 27. Também foi observado que a atividade antitumoral era substancialmente maior em um esquema de uma vez por semana (87.3% TGI) versus um esquema de uma vez a cada três semanas (70.5% TGI). O tratamento com R-CHOP (dias 0-5) resultou em inibição transitória do crescimento do tumor. Os tumores se restabeleceram e, no dia 14, os tumores eram iguais ao volume registrado antes do tratamento. No dia 14, os tumores restabelecidos foram tratados com o ADC (10 mg / kg) uma vez por semana. Os tumores mostraram uma inibição significativa no crescimento para o dia 38 (P <0.001). Ver FIG. 28.
[00568] O ADC inibiu o crescimento do tumor Granta-519 em camundongos de maneira dependente da dose e dependente da frequência, sem afetar o peso corporal. Além disso, o ADC retomou a inibição do crescimento tumoral após a fuga do R-CHOP.
Conclusões
[00569] Foi produzido um ADC CD22 direcionado de forma sítio-específica conjugado com uma carga útil de maitansina que era resistente a efluxo por células expressivas de MDR1.. O ADC tinha um DAR de 1,8, exibiu boas características biofísicas e eficácia mediada variando de atraso significativo no crescimento do tumor (87%) até resposta completa in vivo contra dois modelos de xenoenxerto NHL. Essa eficácia foi alcançada em níveis de exposição bem abaixo daqueles associados à toxicidade; de fato, no estudo de toxicidade por dose repetida de cynomolgus, nenhum efeito adverso observado foi observado, mesmo na dose mais alta de 60 mg / kg, indicando que doses mais altas podem ser usadas. O ADC anti-CD22 tinha uma combinação de eficácia e segurança. Como uma vantagem adicional, vários componentes subjacentes, incluindo o antígeno alvo, o anticorpo parental e a carga citotóxica à base de maitansina, foram utilizados em seres humanos e foram bem estudados em relação à segurança e toxicidade. Com base no macaco cynomolgus, que é um modelo razoável para projetar perfis farmacocinéticos e de toxicidade humanos, os resultados desses estudos indicaram que o ADC anti-CD22 é de uso terapêutico para pacientes com LNH, como aqueles que desenvolveram doença refratária devido à regulação positiva de MDR1.
[00570] Embora a presente invenção tenha sido descrita com referência às modalidades específicas da mesma, deve ser entendido pelos especialistas na técnica que várias alterações podem ser feitas e equivalentes podem ser substituídos sem se afastar do verdadeiro espírito e escopo da invenção. Além disso, muitas modificações podem ser feitas para adaptar uma situação específica, material, composição da matéria, processo, etapa ou etapas do processo, ao objetivo, espírito e escopo da presente invenção. Todas essas modificações devem estar dentro do escopo das reivindicações anexas.

Claims (212)

REIVINDICAÇÕES
1. Método para tratar um câncer em um sujeito, o método caracterizado por compreende: administrar ao sujeito, em necessidade, uma quantidade terapeuticamente eficaz de: um ou mais agentes anticancerígeno e um conjugado, y um conjugado compreendendo: pelo menos um resíduo de aminoácido modificado com uma cadeia lateral de fórmula (I): (I) em que: Z é CR4 ou N; R1 é selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; R2 e R3 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonila, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou R2 e R3 estão opcionalmente ligados ciclicamente para formar uma heterociclila de 5 ou 6 membros;
cada R4 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acil, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonila, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; L é um ligante compreendendo -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4- V4)d-, representado por a, b, c e d são independentemente 0 ou 1, onde a soma de a, b, c e d é 1 a 4; T1, T2, T3 e T4 são independentemente selecionados a partir de alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, uma dissulfeto, e um éster, representado por EDA que é uma fração de etileno diamina, PEG é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado, e AA é um resíduo de aminoácido, representado pelo w que é um inteiro de 1 a 20, n é um inteiro de 1 a 30, p é um inteiro de 1 a 20, e h é um inteiro de 1 a 12; V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionados a partir do grupo constituído por uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, representado por q que é um inteiro de 1 a 6; cada R13 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída; cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; W1 é um maitansinóide; e W2 é um anticorpo anti-CD22;
caracterizado pela administração ser eficaz no tratamento do câncer no sujeito.
2. O método da reivindicação 1, caracterizado por: T1 é selecionado a partir de uma alquila(C1-C12) e uma alquila (C1-C12) substituída; T2, T3 e T4 são independentemente selecionado a partir de (EDA)w, (PEG)n, alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (AA)p , -(CR13OH)h-, 4-amino-piperidina (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, e um éster; e V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionados a partir do grupo constituído por uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR15-, -NR15SO2-, e -P(O)OH-; caracterizado por: (PEG)n é , onde n é um inteiro de 1 a 30; EDA é uma fração de etileno diamina com a seguinte estrutura: , onde y é um inteiro de 1 a 6 e r é 0 ou 1; 4-amino-piperidina (4AP) é ; cada R12 e R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma fração de polietilenoglicol, uma arila e uma arila substituída, caracterizado por quaisquer dois grupos R12 adjacentes podem ser ligados ciclicamente para formar um anel piperazinila; e R13 é selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída.
3. O método da reivindicação 1, caracterizado por T1, T2, T3 e T4, e V1, V2, V3 e V4 são selecionados da tabela a seguir: T1 V1 T2 V2 T3 V3 T4 V4 alquila(C1- - (PEG)n -CO- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p - - - - - C12) alquila(C1- - (PEG)n -NR15- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -NR15- - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- - - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - - - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (EDA)w - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w - - - - - C12)
alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - alquila(C1- -CO- C12) CONR15 C12) - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- - - C12) C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (AA)p - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -SO2- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - (PEG)n -CO- C12) CONR15 -
alquila(C1- -CO- (CR13OH)h -CO- - - - - C12) alquila (C1- alquila(C1- - C12) -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) CONR15- substituída alquila(C1- -SO2- alquila(C1- -CO- - - - - C12) C12) alquila(C1- - alquila(C1- - (CR13OH)h - - - C12) CONR15- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n - (AA)p - C12) P(O)OH - alquila(C1- -CO- (EDA)w - (AA)p - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- alquila(C1- - C12) CONR15- C12) C12) NR15- alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- - - C12) C12)
4. O método da reivindicação 1, caracterizado pelo ligante, L, é selecionado a partir de uma das seguintes estruturas:
caracterizado por cada f ser independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 12; cada y ser independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 20; cada n ser independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 30; cada p ser independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 20; cada h ser independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 12; cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acil, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonila, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; e cada R’ é independentemente H, um grupo de cadeia lateral de um aminoácido, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acil, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonila, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída.
5. O método da reivindicação 1, caracterizado a fórmula do maitansinóide é: onde indica o ponto de ligação entre o maitansinóide e L.
6. O método da reivindicação 1, caracterizado por T1 que é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
7. O método da reivindicação 1, caracterizado que o ligante, L, compreende a seguinte estrutura: , onde cada f é independentemente um inteiro de 1 a 12; e n é um inteiro de 1 a 30.
8. O método da reivindicação 1, caracterizado que o anticorpo anti-CD22 se liga a um epítopo nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1-759, nos aminoácidos 1-751 ou nos aminoácidos 1-670 de uma sequência de aminoácidos CD22 representada na FIG. 8A-8C.
9. O método da reivindicação 1, caracterizado que o anticorpo anti-CD22 compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 - 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizada por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I); Z20 ser um resíduo de prolina ou alanina; Z30 ser um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido.
10. O método da reivindicação 9, caracterizado que a sequência é L(FGly’)TPSR (SEQ ID NO: 185).
11. O método da reivindicação 9, caracterizado Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
12. O método da reivindicação 1, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado no terminal C de uma região constante da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
13. O método da reivindicação 12, caracterizado que a região constante da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 - 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) onde FGly’ é o resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência está no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SLSLSPG (SEQ ID NO: 186).
14. O método da reivindicação 13, caracterizado que a região constante da cadeia pesada compreende a sequência SPGSL(FGly’)TPSRGS (SEQ ID NO: 184).
15. O método da reivindicação 13, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P;
X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
16. O método da reivindicação 1, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região constante da cadeia leve do anticorpo anti-CD22.
17. O método da reivindicação 16, caracterizado que a região constante da cadeia leve compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 - 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) onde FGly’ é o resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência está no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência C-terminal para a sequência KVDNAL (SEQ ID NO: 58), e/ou é N-terminal para a sequência QSGNSQ (SEQ ID NO: 59).
18. O método da reivindicação 17, caracterizado que a região constante da cadeia leve compreende a sequência KVDNAL(FGly’)TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 60).
19. O método da reivindicação 17, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 cada é selecionado independentemente a partir de S, T, A, V, G, e C.
20. O método da reivindicação 1, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH1 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
21. O método da reivindicação 20, caracterizado que a região CH1 da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) em que FGly’ é o resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência está no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SWNSGA (SEQ ID NO: 61) e/ou é o N-terminal para a sequência de aminoácidos GVHTFP (SEQ ID NO: 62).
22. O método da reivindicação 21, caracterizado que a região CH1 da cadeia pesada compreende a sequência SWNSGAL(FGly’)TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 63).
23. O método da reivindicação 21, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 w X3 está independentemente selecionado a partir de S, T, A, V, G, e C.
24. O método da reivindicação 1, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH2 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
25. O método da reivindicação 1, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH3 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
26. O método da reivindicação 1, caracterizado que o um ou mais agentes anticancerígeno é selecionado dentre abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat,
bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
27. O método da reivindicação 1, caracterizado que um ou mais agentes anticancerígenos são selecionados a partir de um inibidor de tirosina quinase de Bruton, um conjugado de anticorpo-fármaco anti-CD30, um inibidor de PI3K, um agente alquilante de DNA, um inibidor de síntese de DNA, um inibidor de histona desacetilase, um anti-CD20 anticorpo monoclonal, um inibidor de proteassoma, um inibidor de DNA polimerase, um inibidor de RNA polimerase, um inibidor de interleucina-2, um corticosteroide, um inibidor de topoisomerasa II, inibidor de diidrofolato redutase, um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD20, um conjugado radioativo- anticorpo anti-CD20, um inibidor P110δ, um inibidor da ubiquitina E3 ligase, um inibidor do receptor de quimiocina CXCR4, um inibidor de tubulina e um agente para terapia de transferência celular adotiva.
28. O método da reivindicação 1, caracterizado que o um ou mais agentes anticancerígenos é selecionado dentre ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper-CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo(“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R-EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
29. O método da reivindicação 1, caracterizado que um ou mais agentes anticancerígenos compreende rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”).
30. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer está afiliado à desregulação da sinalização BCR.
31. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer está afiliado à desregulação da sinalização de BCR e o câncer é responsivo à depleção de células B.
32. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é linfoma.
33. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é um linfoma de células B.
34. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é selecionado a partir do linfoma de Burkitt, linfoma difuso de grandes células B, linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin.
35. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é um linfoma não Hodgkin.
36. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é selecionado a partir de linfoma de zona marginal, linfoma de células do manto, linfoma folicular e linfoma primário do sistema nervoso central.
37. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é linfoma de células do manto.
38. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é um linfoma difuso de células B grandes.
39. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é linfoma folicular.
40. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é linfoma da zona marginal.
41. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é leucemia.
42. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é selecionado a partir de síndrome mieloproliferativa crônica, leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica pequena, leucemia de células ciliadas e leucemia linfoblástica aguda.
43. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é resistente ao tratamento com um ou mais agentes anticancerígenos selecionados a partir de abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat, bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
44. O método da reivindicação 1, caracterizado que o câncer é resistente ao tratamento com um ou mais agentes anticancerígenos selecionados a partir de: ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper-CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina,
rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R-EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
45. Método para tratar um câncer resistente em um sujeito, onde o método caracterizado por compreender: administrar ao sujeito que necessita uma quantidade terapeuticamente eficaz de: um ou mais agentes anticâncer e um conjugado, onde o conjugado compreende: pelo menos um resíduo de aminoácido modificado com uma cadeia lateral de fórmula (I): (I) caracterizado por: Z é CR4 ou N; R1 é selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; R2 e R3 são, cada um, independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou sãoR2 e R3 estão opcionalmente ligados ciclicamente para formar uma heterociclila de 5 ou 6 membros; cada R4 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída,
alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; L é um ligante que compreende -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4- V4)d-, caracterizado pelo a, b, c e d serem independentemente 0 ou 1, onde a soma de a, b, c e d é 1 a 4; T1, T2, T3 e T4 são independentemente selecionados a partir de alquila(C1-C12), alquila(C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, um dissulfeto, e um éster, em que EDA é uma fração de etileno diamina, PEG é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado, e AA é um resíduo de aminoácido, em que w é um inteiro de 1 a 20, n é um inteiro de 1 a 30, p é um inteiro de 1 a 20, e h é um inteiro de 1 a 12; V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, em que q é um inteiro de 1 a 6; cada R13 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída; cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; W1 é um maitansinóide; e W2 é um anticorpo anti-CD22; em que a administração é eficaz para tratar o câncer resistente no sujeito.
46. O método da reivindicação 45, caracterizado por: T1 é selecionado de uma alquila(C1-C12) e uma alquila (C1-C12) substituída; T2, T3 e T4 são independentemente selecionados a partir de (EDA)w, (PEG)n, alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (AA)p , -(CR13OH)h-, 4-amino-piperidina (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, e um éster; e V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR15-, -NR15SO2-, e -P(O)OH-; caracterizado pelo: (PEG)né , onde n é um inteiro de 1 a 30; EDA é uma fração de etileno diamina com a seguinte estrutura: , onde y é um inteiro de 1 a 6 e r é 0 ou 1; 4-amino-piperidina (4AP) é ; cada R12 e R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma fração de polietilenoglicol, uma arila e uma arila substituída, em que quaisquer dois grupos R12 adjacentes podem ser ligados ciclicamente para formar um anel piperazinila; e R13 é selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída.
47. O método da reivindicação 45, caracterizado que T1, T2, T3 e T4, e V1, V2, V3 e V4 são selecionados na tabela a seguir: T1 V1 T2 V2 T3 V3 T4 V4 alquila(C1- - (PEG)n -CO- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- - - C12)
alquila(C1- -CO- (AA)p - - - - - C12) alquila(C1- - (PEG)n -NR15- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -NR15- - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- - - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - - - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (EDA)w - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w - - - - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - alquila(C1- -CO- C12) CONR15 C12) - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- - - C12) C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (AA)p - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -SO2- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - (PEG)n -CO- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (CR13OH)h -CO- - - - - C12)
alquila(C1- alquila(C1- - C12) -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) CONR15- substituída alquila(C1- -SO2- alquila(C1- -CO- - - - - C12) C12) alquila(C1- - alquila(C1- - (CR13OH)h - - - C12) CONR15- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n - (AA)p - C12) P(O)OH - alquila(C1- -CO- (EDA)w - (AA)p - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- alquila(C1- - C12) CONR15- C12) C12) NR15- alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- - - C12) C12)
48. O método da reivindicação 45, caracterizado que o ligante, L, é selecionado dentre uma das seguintes estruturas:
em que cada f é independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 12; cada y é independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 20; cada n é independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 30; cada p é independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 20; cada h é independentemente 0 ou um inteiro de 1 a 12; cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; e cada R’ é independentemente H, um grupo de cadeia lateral de um aminoácido, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída.
49. O método da reivindicação 45, caracterizado que o maitansinóide é da fórmula: onde indica o ponto de ligação entre o maitansinóide e L.
50. O método da reivindicação 45, caracterizado que T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
51. O método da reivindicação 45, caracterizado que o ligante, L, compreende a seguinte estrutura: , caracterizado por cada f ser independentemente um inteiro de 1 a 12; e n é um inteiro de 1 a 30.
52. O método da reivindicação 45, caracterizado que o anticorpo anti-CD22 se liga a um epítopo nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1-759, nos aminoácidos 1-751 ou nos aminoácidos 1-670 de uma sequência de aminoácidos CD22 representada na FIG. 8A-8C.
53. O método da reivindicação 45, caracterizado que o anticorpo anti-CD22 compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser um resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido.
54. O método da reivindicação 53, caracterizado que a sequência é L(FGly’)TPSR (SEQ ID NO: 185).
55. O método da reivindicação 53, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
56. O método da reivindicação 45, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado no terminal C de uma região constante da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
57. O método da reivindicação 56, caracterizado que a região constante da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SLSLSPG (SEQ ID NO: 186).
58. O método da reivindicação 57, caracterizado que a região constante da cadeia pesada compreende a sequência SPGSL(FGly’)TPSRGS (SEQ ID NO: 184).
59. O método da reivindicação 57, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P;
X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
60. O método da reivindicação 45, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região constante da cadeia leve do anticorpo anti-CD22.
61. O método da reivindicação 60, caracterizado que a região constante da cadeia leve compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência C-terminal para a sequência KVDNAL (SEQ ID NO: 58), e/ou é N-terminal para a sequência QSGNSQ (SEQ ID NO: 59).
62. O método da reivindicação 61, caracterizado que a região constante da cadeia leve compreende a sequência KVDNAL(FGly’)TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 60).
63. O método da reivindicação 61, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
64. O método da reivindicação 45, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH1 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
65. O método da reivindicação 64, caracterizado que a região CH1 da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SWNSGA (SEQ ID NO: 61) e/ou é N-terminal para a sequência de aminoácidos GVHTFP (SEQ ID NO: 62).
66. O método da reivindicação 65, caracterizado que a região CH1 da cadeia pesada compreende a sequência SWNSGAL(FGly’)TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 63).
67. O método da reivindicação 65, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
68. O método da reivindicação 45, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH2 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
69. O método da reivindicação 45, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH3 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
70. O método da reivindicação 45, caracterizado que um ou mais agentes anticancerígenos é selecionado a partir de abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat,
bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
71. O método da reivindicação 45, caracterizado que o um ou mais agentes anticâncer é selecionado a partir de um inibidor de tirosina quinase de Bruton, um conjugado de anticorpo- fármaco anti-CD30, um inibidor de PI3K, um agente alquilante de DNA, um inibidor de síntese de DNA, um inibidor de histona desacetilase, um anti-CD20 anticorpo monoclonal, um inibidor do proteassoma, um inibidor da DNA polimerase, um inibidor da RNA polimerase, um inibidor da interleucina-2, um corticosteroide, um inibidor da topoisomerasa II, inibidor da diidrofolato redutase, um conjugado anticorpo anti-CD20, um conjugado de fármaco radioativo-anticorpo anti-CD20, um inibidor P110δ, um inibidor da ubiquitina E3 ligase, um inibidor do receptor de quimiocina CXCR4, um inibidor de tubulina e um agente para terapia de transferência celular adotiva.
72. O método da reivindicação 45, caracterizado que um ou mais agentes anticancerígenos é selecionado a partir de ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper-CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo(“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R-EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
73. O método da reivindicação 45, caracterizado que um ou mais agentes anticancerígenos compreende rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”).
74. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente está afiliado à desregulação da sinalização BCR.
75. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente está afiliado à desregulação da sinalização BCR e o câncer é responsivo à depleção de células B.
76. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é linfoma.
77. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é um linfoma de células B.
78. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é selecionado a partir do linfoma de Burkitt, linfoma difuso de grandes células B, linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin.
79. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é o linfoma não Hodgkin.
80. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é selecionado a partir de linfoma da zona marginal, linfoma de células do manto, linfoma folicular e linfoma primário do sistema nervoso central.
81. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é linfoma de células do manto.
82. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é um linfoma difuso de células B grandes.
83. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é linfoma folicular.
84. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é linfoma de zona marginal.
85. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer resistente é leucemia.
86. O método da reivindicação 45, caracterizado pelo câncer ser selecionado a partir do síndrome mieloproliferativa crônica, leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica de pequenas células, leucemia de células pilosas, e leucemia linfoblástica aguda.
87. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer é resistente ao tratamento com um ou mais agentes anticancerígenos selecionados a partir de abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat, bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
88. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer é resistente ao tratamento com um ou mais agentes anticancerígenos selecionados a partir de: ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper-CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R-EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
89. O método da reivindicação 45, caracterizado que o câncer é resistente ao tratamento com rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”).
90. Método para sensibilizar um câncer em um sujeito, onde o método caracterizado por compreender: administrar ao sujeito em necessidade uma quantidade terapeuticamente eficaz de: um ou mais agentes anticancerígenos, e um conjugado, onde o conjugado compreende: pelo menos um resíduo de aminoácido modificado com uma cadeia lateral de fórmula (I): (I) em que: Z é CR4 ou N;
R1 é selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; R2 e R3 são, cada um, independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou R2 e R3 são opcionalmente ligados ciclicamente para formar uma heterociclila de 5 ou 6 membros; cada R4 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; L é um ligante que compreende -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4- V4)d-, em que a, b, c e d são independentemente 0 ou 1, onde a soma de a, b, c e d é 1 a 4; T1, T2, T3 e T4 são independentemente selecionados a partir de alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, um dissulfeto, e um éster, em que EDA é uma fração de etileno diamina, PEG é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado, e AA é um resíduo de aminoácido, em que w é um inteiro de 1 a 20, n é um inteiro de 1 a 30, p é um inteiro de 1 a 20, e h é um inteiro de 1 a 12;
V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, em que q é um inteiro de 1 a 6; cada R13 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída; cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; W1 é um maitansinóide; e W2 é um anticorpo anti-CD22; em que a administração é eficaz para sensibilizar um câncer no sujeito.
91. O método da reivindicação 90, caracterizado por: T1 é selecionado a partir de uma alquila(C1-C12) e uma alquila (C1-C12) substituída; T2, T3 e T4 são independentemente selecionados a partir de (EDA)w, (PEG)n, alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (AA)p , -(CR13OH)h-, 4-amino-piperidina (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, e um éster; e V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR15-, -NR15SO2-, e -P(O)OH-; caracterizado por: (PEG)n é , onde n é um inteiro de 1 a 30; EDA é uma fração de etileno diamina com a seguinte estrutura: , onde y é um inteiro de 1 a 6 e r é 0 ou 1;
4-amino-piperidina (4AP) é ; cada R12 e R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma fração de polietilenoglicol, uma arila e uma arila substituída, caracterizados por quaisquer dois grupos R12 podem ser ligados ciclicamente para formar um anel de piperazinila; e R13 é selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída.
92. O método da reivindicação 90, caracterizado pelo T1, T2, T3 e T4, e V1, V2, V3 e V4 são selecionados a partir da seguinte tabela: T1 V1 T2 V2 T3 V3 T4 V4 alquila(C1- - (PEG)n -CO- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p - - - - - C12) alquila(C1- - (PEG)n -NR15- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -NR15- - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- - - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - - - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (EDA)w - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w - - - - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - alquila(C1- -CO- C12) CONR15 C12) -
alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- - - C12) C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (AA)p - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -SO2- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - (PEG)n -CO- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (CR13OH)h -CO- - - - - C12) alquila(C1- alquila(C1- - C12) -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) CONR15- substituída alquila(C1- -SO2- alquila(C1- -CO- - - - - C12) C12) alquila(C1- - alquila(C1- - (CR13OH)h - - - C12) CONR15- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n - (AA)p - C12) P(O)OH - alquila(C1- -CO- (EDA)w - (AA)p - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- - - C12) CONR15- C12)
alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- alquila(C1- - C12) CONR15- C12) C12) NR15- alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- - - C12) C12)
93. O método da reivindicação 90, caracterizado que o ligante, L, é selecionado a partir de uma das seguintes estruturas:
em que cada f ser, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 12; cada y é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 20; cada n é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 30; cada p é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 20; cada h é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 12; cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; e cada R' é independentemente H, uma cadeia lateral de um aminoácido, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída.
94. O método da reivindicação 90, caracterizado que o maitansinóide é da fórmula: onde indica o ponto de ligação entre o maitansinóide e L.
95. O método da reivindicação 90, caracterizado por T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
96. O método da reivindicação 90, caracterizado que o ligante, L, compreende a seguinte estrutura: , em que cada f é independentemente um inteiro de 1 a 12; e n é um inteiro de 1 a 30.
97. O método da reivindicação 90, caracterizado que o anticorpo anti-CD22 se liga a um epítopo nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1-759, nos aminoácidos 1-751 ou nos aminoácidos 1-670 de uma sequência de aminoácidos CD22 representada na FIG. 8A-8C.
98. O método da reivindicação 90, caracterizado que o anticorpo anti-CD22 compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido.
99. O método da reivindicação 98, caracterizado que a sequência é L(FGly’)TPSR (SEQ ID NO: 185).
100. O método da reivindicação 99, caracterizado por: Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
101. O método da reivindicação 90, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado no terminal C de uma região constante da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
102. O método da reivindicação 101, caracterizado que a região constante da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) em que FGly’ é o resíduo de aminoácido modificado da fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer resíduo de aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SLSLSPG (SEQ ID NO: 186).
103. O método da reivindicação 102, caracterizado que a região constante da cadeia pesada compreende a sequência SPGSL(FGly’)TPSRGS (SEQ ID NO: 184).
104. O método da reivindicação 102, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P;
X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
105. O método da reivindicação 90, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região constante da cadeia leve do anticorpo anti-CD22.
106. O método da reivindicação 105, caracterizado que a região constante da cadeia leve compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência C-terminal para a sequência KVDNAL (SEQ ID NO: 58), e/ou é N-terminal para a sequência QSGNSQ (SEQ ID NO: 59).
107. O método da reivindicação 106, caracterizado que a região constante da cadeia leve compreende a sequência KVDNAL(FGly’)TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 60).
108. O método da reivindicação 106, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
109. O método da reivindicação 90, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH1 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
110. O método da reivindicação 109, caracterizado que a região CH1 da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser um resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SWNSGA (SEQ ID NO: 61) e/ou é N-terminal para a sequência de aminoácidos GVHTFP (SEQ ID NO: 62).
111. O método da reivindicação 110, caracterizado que a região CH1 da cadeia pesada compreende a sequência SWNSGAL(FGly’)TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 63).
112. O método da reivindicação 110, caracterizado que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
113. O método da reivindicação 90, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH2 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
114. O método da reivindicação 90, caracterizado que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH3 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
115. O método da reivindicação 90, caracterizado que um ou mais agentes anticancerígenos são selecionados a partir de abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat,
bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
116. O método da reivindicação 90, caracterizado que o um ou mais agentes anticancerígeno é selecionado a partir de um inibidor de tirosina-quinase de Bruton, um conjugado anticorpo- fármaco anti-CD30, um inibidor PI3K, um agente alquilante de DNA, um inibidor da síntese de DNA, um inibidor de histona desacetilase, um anticorpo monoclonal anti-CD20, um inibidor de proteassoma, um inibidor de DNA polimerase, um inibidor de RNA polimerase, um inibidor de interleucina-2, um corticosteroide, um inibidor de topoisomerasa II, inibidor da diidrofolato redutase, um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD20, um fármaco conjugado radioativo- anticorpo anti-CD20, um inibidor P110δ, um inibidor da ubiquitina E3 ligase, um inibidor do receptor de quimiocina CXCR4, um inibidor de tubulina e um agente para terapia de transferência celular adotiva.
117. O método da reivindicação 90, caracterizado que um ou mais agentes anticancerígenos são selecionados a partir de ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper-CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R-EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
118. O método da reivindicação 90, caracterizado que um ou mais agentes anticancerígenos compreende rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”).
119. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer está afiliado à desregulação da sinalização BCR.
120. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer está afiliado à desregulação da sinalização de BCR e o câncer é responsivo à depleção de células B.
121. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é linfoma.
122. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é um linfoma de células B.
123. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é selecionado a partir do linfoma de Burkitt, linfoma difuso de grandes células B, linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin.
124. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é linfoma não Hodgkin.
125. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é selecionado a partir de linfoma da zona marginal, linfoma de células do manto, linfoma folicular e linfoma primário do sistema nervoso central.
126. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é linfoma de células do manto.
127. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é um linfoma difuso de células B grandes.
128. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é linfoma folicular.
129. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é linfoma da zona marginal.
130. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é leucemia.
131. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é selecionado a partir de síndrome mieloproliferativa crônica, leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica pequena, leucemia de células ciliadas e leucemia linfoblástica aguda.
132. O método da reivindicação 90, caracterizado pelo câncer ser resistente a tratamento com um ou mais dos agentes anticancerígenos selecionados a partir de abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat, bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
133. O método da reivindicação 90, caracterizado pelo câncer ser resistente a tratamento com um ou mais dos agentes anticancerígenos selecionados a partir de: ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper-CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R-EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
134. O método da reivindicação 90, caracterizado que o câncer é resistente ao tratamento com rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”).
135. Composição farmacêutica para tratamento de um câncer, a composição farmacêutica caracterizada por compreender: um ou mais agentes anticancerígenos; um conjugado; e um excipiente farmacêuticamente aceitável, em que o conjugado compreende pelo menos um resíduo de aminoácido modificado com uma cadeia lateral de fórmula (I): (I) caracterizado por: Z ser CR4 ou N; R1 ser selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; R2 e R3 serem, cada um, independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida,
alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou R2 e R3 serem opcionalmente ligados ciclicamente para formar uma heterociclila de 5 ou 6 membros; cada R4 ser independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; L ser um ligante compreendendo -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-, representado por a, b, c, e d serem cada um, independentemente, 0 ou 1, onde a soma de a, b, c, e d vai de 1 até 4; T1, T2, T3 e T4 são independentemente selecionados a partir de alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, um dissulfeto, e um éster, em que EDA é uma fração de etileno diamina, PEG é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado, e AA é um resíduo de um aminoácido, em que w é um inteiro de 1 a 20, n é um inteiro de 1 a 30, p é um inteiro de 1 a 20, e h é um inteiro de 1 a 12; V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, em que q é um inteiro de 1 a 6; cada R13 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída; cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila,
heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; W1 é um maitansinóide; e W2 é um anticorpo anti-CD22.
136. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, caracterizada pelo fato de que: T1 é selecionado a partir de uma alquila(C1-C12) e uma alquila (C1-C12) substituída; T2, T3 e T4 são independentemente selecionados a partir de (EDA)w, (PEG)n, alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (AA)p , -(CR13OH)h-, 4-amino-piperidina (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, e um éster; e V1, V2, V3 e V4 são independentemente selecionados a partir do grupo constituído por uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR15-, -NR15SO2-, e -P(O)OH-; em que: (PEG)n é , onde n é um inteiro de 1 a 30; EDA é uma fração de etileno diamina com a seguinte estrutura: , onde y é um inteiro de 1 a 6 e r é 0 ou 1; 4-amino-piperidina (4AP) é ; cada R12 e R15 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma fração de polietilenoglicol, uma arila e uma arila substituída, representados por quaisquer dois grupos R12 podem ser ligados ciclicamente para formar um anel de piperazinila; e R13 é selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída.
137. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, caracterizada pelo fato de que T1, T2, T3 e T4, e V1, V2, V3 e V4 são selecionados da tabela a seguir: T1 V1 T2 V2 T3 V3 T4 V4 alquila(C1- - (PEG)n -CO- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p - - - - - C12) alquila(C1- - (PEG)n -NR15- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -NR15- - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- - - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - - - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (EDA)w - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w - - - - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - alquila(C1- -CO- C12) CONR15 C12) - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- - - C12) C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (AA)p - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -SO2- (AA)p - C12)
alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - (PEG)n -CO- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (CR13OH)h -CO- - - - - C12) alquila (C1- alquila(C1- - C12) -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) CONR15- substituída alquila(C1- -SO2- alquila(C1- -CO- - - - - C12) C12) alquila(C1- - alquila(C1- - (CR13OH)h - - - C12) CONR15- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n - (AA)p - C12) P(O)OH - alquila(C1- -CO- (EDA)w - (AA)p - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- alquila(C1- - C12) CONR15- C12) C12) NR15- alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- - - C12) C12)
138. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, é caracterizada pelo fato de que o ligante, L, ser selecionado dentre uma das seguintes estruturas:
representada por cada f ser, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 12; cada y é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 20; cada n é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 30; cada p é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 20; cada h é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 12; cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; e cada R' é independentemente H, uma cadeia lateral de um aminoácido, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída.
139. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, caracterizada pelo fato de que o maitansinóide é da fórmula: onde indica o ponto de ligação entre o maitansinóide e L.
140. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, caracterizada pelo fato de que T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
141. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, caracterizada pelo fato de que o ligante, L, compreende a seguinte estrutura: , em que cada f é independentemente um inteiro de 1 a 12; e n é um inteiro de 1 a 30.
142. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-CD22 se liga a um epítopo nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1- 759, nos aminoácidos 1-751 ou nos aminoácidos 1-670 de um aminoácido CD22 sequência representada na FIG. 8A-8C.
143. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-CD22 compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) representado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático;
X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido.
144. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 143, caracterizada pelo fato de que a sequência é L(FGly’)TPSR.
145. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 143, caracterizada pelo fato de que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
146. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, caracterizada pelo fato de que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado no terminal C de uma região constante da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
147. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 146, caracterizada pelo fato de que a região constante da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) representado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SLSLSPG (SEQ ID NO: 186).
148. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 147, caracterizada pelo fato de que a região constante da cadeia pesada compreende a sequência SPGSL(FGly’)TPSRGS (SEQ ID NO: 184) .
149. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 147, caracterizada pelo fato de que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
150. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 135, caracterizada pelo fato de que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região constante da cadeia leve do anticorpo anti-CD22.
151. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 150, caracterizada pelo fato de que a região constante da cadeia leve compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) representado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência C-terminal para a sequência KVDNAL (SEQ ID NO: 58), e/ou é N-terminal para a sequência QSGNSQ (SEQ ID NO: 59).
152. A composição farmacêutica da reivindicação 151, caracterizada que a região constante da cadeia leve compreende a sequência KVDNAL(FGly’)TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 60).
153. A composição farmacêutica da reivindicação 151, caracterizada que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
154. A composição farmacêutica da reivindicação 135, caracterizada que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH1 da cadeia pesada do anticorpo anti- CD22.
155. A composição farmacêutica da reivindicação 154, caracterizada que a região CH1 da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SWNSGA (SEQ ID NO: 61) e/ou é N-terminal para a sequência de aminoácidos GVHTFP (SEQ ID NO: 62).
156. A composição farmacêutica da reivindicação 155, caracterizada que a região CH1 da cadeia pesada compreende a sequência SWNSGAL(FGly’)TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 63).
157. A composição farmacêutica da reivindicação 155, caracterizada que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
158. A composição farmacêutica da reivindicação 135, caracterizada que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH2 da cadeia pesada do anticorpo anti- CD22.
159. A composição farmacêutica da reivindicação 135, caracterizada que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH3 da cadeia pesada do anticorpo anti- CD22.
160. A composição farmacêutica da reivindicação 135, caracterizada por um ou mais agentes anticancerígenos é selecionado de abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat, bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
161. A composição farmacêutica da reivindicação 135, caracterizada por um ou mais agentes anticancerígenos é selecionado de um inibidor da tirosina quinase de Bruton, um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD30, um inibidor PI3K, um agente alicante de DNA, um inibidor de síntese de DNA, um inibidor de histona desacetilase, um anticorpo anti-CD20 monoclonal, um inibidor de proteassoma, um inibidor de DNA polimerase, um inibidor de RNA polimerase, um inibidor da interleucina-2, um corticosteroide, um inibidor de topoisomerasa II, um inibidor de dihidrofolato de redutase, um conjugado anticorpo-fármaco anti-CD20, um conjugado de fármaco anticorpo-radioativo anti-CD22, um inibidor P110δ, um inibidor ubiquitin E3 ligase, um inibidor de quimiocina CXCR4 receptora, um inibidor de tubulina, e um agente para terapia de transferência celular adotiva.
162. A composição farmacêutica da reivindicação 135, caracterizada por um ou mais agentes anticancerígenos é selecionado de ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper-CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R- CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R- EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
163. A composição farmacêutica da reivindicação 135, caracterizada por um ou mais agentes anticancerígenos ser rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”).
164. O uso de uma composição farmacêutica caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para tratar um câncer, a composição farmacêutica compreendendo uma composição farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 135-163.
165. O uso de uma composição farmacêutica caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para tratar um câncer resistente, a composição farmacêutica compreendendo uma composição farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 135-163.
166. O uso de uma composição farmacêutica caracterizado por ser para a fabricação de um medicamento para sensibilizar um câncer, a composição farmacêutica compreendendo uma composição farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 135-163.
167. O uso de uma composição farmacêutica caracterizado por ser para tratar um câncer, a composição farmacêutica compreendendo uma composição farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 135-163.
168. O uso de uma composição farmacêutica caracterizado por ser para tratar um câncer resistente, a composição farmacêutica compreendendo uma composição farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 135-163.
169. O uso de uma composição farmacêutica caracterizado por ser para sensibilizar um câncer, a composição farmacêutica compreendendo uma composição farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 135-163.
170. Um método para tratar um câncer resistente em um sujeito, o método caracterizado por compreender: a administração para o sujeito em necessidade do tratamento uma quantidade de conjugado terapeuticamente efetiva, o conjugado compreende: pelo menos um resíduo de aminoácido modificado com uma cadeia lateral da fórmula (I): (I) caracterizado por: Z ser CR4 ou N; R1 ser selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída,
cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; R2 e R3 serem, cada um, independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou R2 e R3 serem opcionalmente ligados ciclicamente para formar uma heterociclila de 5 ou 6 membros; cada R4 ser independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; L ser um ligante compreendendo -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4- V4)d-, representado por a, b, c, e d serem cada um, independentemente, 0 ou 1, onde a soma de a, b, c, e d vai de 1 até 4; T1, T2, T3 e T4 são selecionados independentemente de alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, um dissulfeto, e um éster, em que EDA é uma fração de etileno diamina, PEG é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado, e AA é um resíduo de aminoácido, em que w é um inteiro de 1 a 20, n é um inteiro de 1 a 30, p é um inteiro de 1 a 20, e h é um inteiro de 1 a 12; V1, V2, V3 e V4 são cada um independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -
OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, em que q é um inteiro de 1 a 6; cada R13 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída; cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; W1 é um maitansinóide; e W2 é um anticorpo anti-CD22; em que a administração é eficaz para tratar o câncer resistente no sujeito.
171. O método da reivindicação 170, caracterizado que: T1 é selecionado a partir de uma alquila(C1-C12) e uma alquila (C1-C12) substituída; T2, T3 e T4 são independentemente selecionados a partir de (EDA)w, (PEG)n, alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (AA)p , -(CR13OH)h-, 4-amino-piperidina (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, e um éster; e V1, V2, V3 e V4 são cada um independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, em que q é um inteiro de 1 a 6-; em que: (PEG)né , onde n é um inteiro de 1 a 30; EDA é uma fração de etileno diamina com a seguinte estrutura: , onde y é um inteiro de 1 a 6 e r é 0 ou 1;
4-amino-piperidina (4AP) é ; cada R12 e R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma fração de polietilenoglicol, uma arila e uma arila substituída, caracterizados por quaisquer dois grupos R12 podem ser ligados ciclicamente para formar um anel de piperazinila; e R13 é selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída.
172. O método da reivindicação 170, caracterizado por T1, T2, T3 e T4, e V1, V2, V3 e V4 são selecionados da tabela a seguir: T1 V1 T2 V2 T3 V3 T4 V4 alquila(C1- - (PEG)n -CO- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p - - - - - C12) alquila(C1- - (PEG)n -NR15- - - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -NR15- - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- - - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - - - - C12) CONR15- C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (EDA)w - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w - - - - - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - alquila(C1- -CO- C12) CONR15 C12) -
alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- - - C12) C12) alquila(C1- - (PEG)n -CO- (AA)p - - - C12) CONR15- alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -SO2- (AA)p - C12) alquila(C1- -CO- (EDA)w -CO- (CR13OH)h - (PEG)n -CO- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (CR13OH)h -CO- - - - - C12) alquila(C1- alquila(C1- - C12) -NR15- (PEG)n -CO- - - C12) CONR15- substituída alquila(C1- -SO2- alquila(C1- -CO- - - - - C12) C12) alquila(C1- - alquila(C1- - (CR13OH)h - - - C12) CONR15- C12) CONR15 - alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n -CO- (AA)p - C12) NR15- alquila(C1- -CO- (AA)p -NR15- (PEG)n - (AA)p - C12) P(O)OH - alquila(C1- -CO- (EDA)w - (AA)p - - - C12) alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- - - C12) CONR15- C12)
alquila(C1- - alquila(C1- -NR15- - -CO- alquila(C1- - C12) CONR15- C12) C12) NR15- alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- (AA)p - C12) C12) alquila(C1- -CO- 4AP -CO- alquila(C1- -CO- - - C12) C12)
173. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o ligante, L, é selecionado a partir de uma das seguintes estruturas:
caracterizado por cada f ser, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 12; cada y é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 20; cada n é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 30; cada p é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 20; cada h é, independentemente, 0 ou um número inteiro de 1 até 12; cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; e cada R' é independentemente H, uma cadeia lateral de um aminoácido, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída.
174. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que a fórmula do maitansinóide é: onde indica o ponto de ligação entre o maitansinóide e L.
175. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que T1 é alquila(C1-C12), V1 é -CO-, T2 é 4AP, V2 é -CO-, T3 é alquila(C1-C12), V3 é -CO-, T4 está ausente e V4 está ausente.
176. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o ligante, L, compreende a seguinte estrutura: , em que cada f é independentemente um inteiro de 1 a 12; e n é um inteiro de 1 a 30.
177. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CD22 se liga a um epítopo nos aminoácidos 1 a 847, nos aminoácidos 1-759, nos aminoácidos 1-751 ou nos aminoácidos 1-670 de uma sequência de aminoácidos CD22 representada na FIG. 8A-8C.
178. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CD22 compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido.
179. O método da reivindicação 178, caracterizado pelo fato de que a sequência é L(FGly’)TPSR (SEQ ID NO: 185).
180. O método da reivindicação 178, caracterizado pelo fato de que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
181. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado no terminal C de uma região constante da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
182. O método da reivindicação 181, caracterizado pelo fato de que a região constante da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SLSLSPG (SEQ ID NO: 186).
183. O método da reivindicação 182, caracterizado pelo fato de que a região constante da cadeia pesada compreende a sequência SPGSL(FGly’)TPSRGS (SEQ ID NO: 184).
184. O método da reivindicação 182, caracterizado pelo fato de que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
185. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região constante da cadeia leve do anticorpo anti-CD22.
186. O método da reivindicação 185, caracterizado que a região constante da cadeia leve compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência C-terminal para a sequência KVDNAL (SEQ ID NO: 58), e/ou é N-terminal para a sequência QSGNSQ (SEQ ID NO: 59).
187. O método da reivindicação 186, caracterizado pelo fato de que a região constante da cadeia leve compreende a sequência KVDNAL(FGly’)TPSRQSGNSQ (SEQ ID NO: 60).
188. O método da reivindicação 186, caracterizado pelo fato de que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
189. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH1 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
190. O método da reivindicação 189, caracterizado que a região CH1 da cadeia pesada compreende uma sequência da fórmula (II) (SEQ ID NOs: 189 – 190): X1(FGly’)X2Z20X3Z30 (II) caracterizado por FGly’ ser o resíduo de aminoácido modificado de fórmula (I); Z20 é um resíduo de prolina ou alanina; Z30 é um aminoácido básico ou um aminoácido alifático; X1 pode estar presente (SEQ ID NO: 189) ou ausente (SEQ ID NO: 190) e, quando presente, pode ser qualquer aminoácido, com a condição de que quando a sequência estiver no terminal N do conjugado, X1 está presente; e X2 e X3 são independentemente qualquer aminoácido, e em que a sequência é C-terminal para a sequência de aminoácidos SWNSGA (SEQ ID NO: 61) e/ou é N-terminal para a sequência de aminoácidos GVHTFP (SEQ ID NO: 62).
191. O método da reivindicação 190, caracterizado pelo fato de que a região CH1 da cadeia pesada compreende a sequência SWNSGAL(FGly’)TPSRGVHTFP (SEQ ID NO: 63).
192. O método da reivindicação 190, caracterizado pelo fato de que Z30 é selecionado a partir de R, K, H, A, G, L, V, I, e P; X1 é selecionado a partir de L, M, S, e V; e X2 e X3 são independentemente selecionados a partir de S, T, A, V, G, e C.
193. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH2 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
194. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o resíduo de aminoácido modificado é posicionado em uma região CH3 da cadeia pesada do anticorpo anti-CD22.
195. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o câncer resistente está afiliado à desregulação da sinalização BCR.
196. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o câncer resistente está afiliado à desregulação da sinalização BCR e o câncer é responsivo à depleção de células B.
197. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o câncer resistente é linfoma.
198. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o câncer resistente é um linfoma de células B.
199. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o câncer resistente é selecionado a partir do linfoma de Burkitt, linfoma difuso de grandes células B, linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin.
200. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo câncer resistente ser um linfoma não Hodgkin.
201. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo câncer resistente ser selecionado de linfoma de zona marginal, linfoma de células do manto, linfoma folicular e linfoma do sistema nervoso central primário.
202. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo câncer resistente ser um linfoma de células do manto.
203. O método da reivindicação 170, caracterizado por câncer resistente ser um linfoma difuso de células B grandes.
204. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo câncer resistente ser um linfoma folicular.
205. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo câncer resistente ser um linfoma da zona marginal.
206. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo câncer resistente ser leucemia.
207. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo câncer ser selecionado a partir do síndrome mieloproliferativa crônica, leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica de pequenas células, leucemia de células pilosas, e leucemia linfoblástica aguda.
208. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo câncer ser resistente a tratamento com um ou mais dos agentes anticancerígenos selecionados a partir de abitrexato metotrexato, brentuximab vedotin, copanlisib, cloridrato de copanlisib, clorambucil, nelarabina, axicabtageno ciloleucel, carmustina, belinostat, bendamustina, cloridrato de bendamustina, tositumomabe iodo-131, tositumomabe, bleomicina, bortezomibe, acalabrutinibe, ciclofosfamida, citarabina, lipossoma de citarabina, denileukin diftitox, lipossoma de citarabina, dexametasona, doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, metotrexato, pralatrexato, ofatumamb, obinutuzumabe, ocrelizumabe, ibritumomab tiuxetano, ibrutinibe, idelalisib, interferon alfa 2b recombinante, romidespsin, lenalidomida, cloridrato de mecloretamina, plerixafor, prednisona, rituximabe, rituximabe e hialuronidase humana, bortezomibe, vimblastina, sulfato de vimblastina, vincristina, sulfato de vincristina, e vorinostat.
209. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo câncer ser resistente a tratamento com um ou mais dos agentes anticancerígenos selecionados a partir de: ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“CHOP”); ciclofosfamida,
sulfato de vincristina, cloridrato de procarbazina, e prednisona (“COPP”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“CVP”); fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“EPOCH”); ciclofosfamida, sulfato de vincristina, cloridrato de doxorrubicina, e dexametasona (“hyper-CVAD”); ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“ICE”); rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”); rituximabe, ciclofosfamida, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CVP”); rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, rituximabe, fosfato de etoposídeo, prednisona, sulfato de vincristina, ciclofosfamida, e cloridrato de doxorrubicina (“R-EPOCH”); e rituximabe, ifosfamida, carboplatina, e fosfato de etoposídeo (“R-ICE”).
210. O método da reivindicação 170, caracterizado pelo fato de que o câncer é resistente ao tratamento com rituximabe, ciclofosfamida, cloridrato de doxorrubicina, sulfato de vincristina, e prednisona (“R-CHOP”).
211. Uso de uma combinação que compreende: um ou mais agentes anticancerígenos, e um conjugado, o conjugado compreende: pelo menos um resíduo de aminoácido modificado com uma cadeia lateral da fórmula (I): (I) caracterizado por: Z ser CR4 ou N; R1 ser selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída;
R2 e R3 serem, cada um, independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou R2 e R3 serem opcionalmente ligados ciclicamente para formar uma heterociclila de 5 ou 6 membros; cada R4 ser independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; L ser um ligante compreendendo -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-, representado por a, b, c, e d serem cada um, independentemente, 0 ou 1, onde a soma de a, b, c, e d vai de 1 até 4; T1, T2, T3 e T4 são selecionados independentemente de alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, um dissulfeto, e um éster, em que EDA é uma fração de etileno diamina, PEG é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado, e AA é um resíduo de aminoácido, em que w é um inteiro de 1 a 20, n é um inteiro de 1 a 30, p é um inteiro de 1 a 20, e h é um inteiro de 1 a 12; V1, V2, V3 e V4 são cada um independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, em que q é um inteiro de 1 a 6; cada R13 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída; cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila,
éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; W1 é um maitansinóide; e W2 é um anticorpo anti-CD22; no fabricação de um medicamento para o tratamento de um câncer em um indivíduo que dele necessite.
212. Uso de uma combinação que compreende: um ou mais agentes anticancerígenos, e um conjugado, o conjugado compreende: pelo menos um resíduo de aminoácido modificado com uma cadeia lateral da fórmula (I): (I) caracterizado por: Z ser CR4 ou N; R1 ser selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; R2 e R3 serem, cada um, independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída, ou R2 e R3 serem opcionalmente ligados ciclicamente para formar uma heterociclila de 5 ou 6 membros;
cada R4 ser independentemente selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, alcoxi, alcoxi substituída, amina, amina substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, aciloxi, acil amina, amino acila, alquilamida, alquilamida substituída, sulfonil, tioalcoxi, tioalcoxi substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; L ser um ligante compreendendo -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-, representado por a, b, c, e d serem cada um, independentemente, 0 ou 1, onde a soma de a, b, c, e d vai de 1 até 4; T1, T2, T3 e T4 são selecionados independentemente de alquila(C1-C12), alquila (C1-C12) substituída, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, piperidin-4-amino (4AP), um grupo acetal, uma hidrazina, um dissulfeto, e um éster, em que EDA é uma fração de etileno diamina, PEG é um polietilenoglicol ou um polietilenoglicol modificado, e AA é um resíduo de aminoácido, em que w é um inteiro de 1 a 20, n é um inteiro de 1 a 30, p é um inteiro de 1 a 20, e h é um inteiro de 1 a 12; V1, V2, V3 e V4 são cada um independentemente selecionados do grupo que consiste em uma ligação covalente, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, - OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- e -P(O)OH-, em que q é um inteiro de 1 a 6; cada R13 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, uma alquila, uma alquila substituída, uma arila, e uma arila substituída; cada R15 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, carboxila, éster de carboxila, acila, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterociclila, e heterociclila substituída; W1 é um maitansinóide; e W2 é um anticorpo anti-CD22; para o tratamento de um câncer em um sujeito em necessidade.
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