KR20240073009A - 인간화된 프레임워크 영역을 갖는 항체 - Google Patents

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스테판 츄프라코프
아요델레 오. 오군코야
페넬로페 엠. 드레이크
윤 김
맥신 보종
콜린 히클
로빈 엠. 바필드
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알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨
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Abstract

본 개시내용은 인간화 프레임워크 영역을 포함하는 가변 영역을 포함하는 결합제, 특히 항체를 제공한다. 본 개시내용의 결합제의 가변 사슬 중 하나 또는 둘 모두를 코딩하는 핵산이 또한 제공되며, 이러한 핵산을 포함하는 세포도 제공된다. 또한 일부 경우에는 본원에 개시된 결합제를 포함하는 제약 조성물을 포함하는 조성물이 제공된다. 또한, 본 개시내용의 결합제를 제조하고 사용하는 방법도 제공된다. 특정 양태에서, 세포 증식성 장애를 갖는 개체에게 치료 유효량의 본원에 개시된 결합제를 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공되며, 여기서 결합제는 비정상적으로 증식하는 세포에 대한 면역 반응, 예를 들어 T 세포 반응을 향상시키기 위해 개체에게 투여된다. 결합제는 또한 제공되는 다양한 진단 및 모니터링 응용 분야에도 유용하다.

Description

인간화된 프레임워크 영역을 갖는 항체
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 8월 25일에 출원된 미국 가출원 번호 63/236,928에 대한 우선권을 주장하며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
전자적으로 제출된 자료의 참조에 의한 포함
서열 목록은 2022년 8월 24일에 생성되고 150KB의 크기를 갖는 서열 목록 XML, "RDWD-043WO_SEQ_LIST"로서 본원에서 제공된다. 서열 목록 XML의 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
항체 생물학적 제제는 임상적으로 더욱 보편화되고 있으며, 이에 따라 여러 질병을 치료하기 위한 유망한 종류의 약물을 제시하며, 암은 항체를 사용한 치료에 특히 중요한 표적이 된다. 예를 들어, CD30에 대한 항체, 즉 브렌툭시맙은 이전에 치료받지 않은 3기 또는 4기 고전적 호지킨 림프종(cHL)을 갖는 성인 환자를 화학요법과 병용하여 치료하는 데 사용된다.
암과 같은 만성 질환을 치료하기 위해서, 일반적으로 항체와 같은 생물학적 제제를 수 개월 또는 수 년에 걸쳐 반복적으로 투여하는 것이 필요하다. 그러나 환자의 면역 체계는 투여된 항체에 대해 자체 항체를 생성하여 바람직하지 않은 면역 반응을 유도하고 항체 약물의 효능을 감소시키며 임상적 합병증을 유발할 수 있다.
따라서, 인간에게 투여될 때 면역 반응을 유도하지 않는 항체와 같은 치료제가 요망된다.
본 개시내용은 특히 결합제의 항원 결합 부분의 프레임워크 영역에 인간화 아미노산 서열을 포함하는 결합제를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 CD30과 같은 표적에 특이적으로 결합하는 항체를 제공하며, 이 항체는 특히 항체와 같은 결합제의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)의 프레임워크 영역에 인간화 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용의 특정 실시양태는 항원에 특이적으로 결합하는 결합제를 제공하며, 결합제는:
H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬 및 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함하고, 여기서 CDR은 항원에 대한 결합제의 결합 특이성을 결정하며, 여기서, 결합제에서:
VH 사슬은:
i) 서열번호 7의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 1 (HFR1), 서열번호 8의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 2 (HFR2), 서열번호 9의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 3 (HFR3), 및 서열번호 10의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 4 (HFR4); 또는
ii) 서열번호 12의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 13의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 14의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 15의 서열을 갖는 HFR4를 포함하고;
VL 사슬은:
i) 서열번호 22의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 1 (LFR1), 서열번호 23의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 2 (LFR2), 서열번호 24의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 3 (LFR3), 및 서열번호 25의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 4 (LFR4); 또는
ii) 서열번호 27의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 28의 서열을 갖는 LFR2, 29의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4를 포함한다.
일부 경우에, 결합제는 CD30에 특이적으로 결합하고, 각각 서열번호 31 내지 33의 서열을 갖는 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬; 및 각각 서열번호 34 내지 36의 서열을 갖는 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함한다.
이러한 특정 실시양태에서, 결합제는 i) 서열번호 6 및 서열번호 11로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및 ii) 서열번호 21 및 서열번호 26으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬을 포함한다.
결합제는 IgG, Fv, 단일 사슬 항체, scFv, Fab, F(ab')2 또는 Fab'와 같은 항체일 수 있다. 결합제는 또한 T 세포 수용체 또는 T 세포 수용체(TCR) 유사 항체일 수 있다.
결합제는 검출 가능한 표지, 비펩티드 합성 중합체, 지질 또는 지방산, 조영제, 친화성 도메인, 세포독소, 약물, 올리고뉴클레오티드, 단백질, 지질 나노입자, 바이러스 입자, 수용성 고분자 또는 합성 펩티드와 같은 또 다른 모이어티에 접합될 수 있다.
본 개시내용의 추가 실시양태는 본원에 개시된 VH 사슬 및/또는 VL 사슬을 포함하는 결합제를 코딩하는 핵산을 제공한다. 핵산은 숙주 세포에 일시적으로 또는 영구적으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포에서, VH 사슬 및/또는 VL 사슬을 포함하는 결합제를 코딩하는 핵산은 숙주 세포에서 활성인 전사 제어 요소에 작동가능하게 연결될 수 있다.
본 개시내용의 추가 실시양태는 본원에 개시된 결합제 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 개시내용의 특정 실시양태는 대상자에서 세포 증식성 장애와 같은 질환을 치료하는 것을 제공하며, 방법은 본원에 개시된 결합제를 포함하는 치료 유효량의 제약 조성물을 대상자에게 투여하는 단계를 포함한다.
도 1a 내지 1d. (a) 본원에 개시된 AC10 항체 및 H1 변이체의 중쇄 프레임워크 영역 1 내지 4의 서열 정렬. (b) 본원에 개시된 AC10 항체 및 H4 변이체의 중쇄 프레임워크 영역 1 내지 4의 서열 정렬. (c) 본원에 개시된 AC10 항체 및 L2 변이체의 경쇄 프레임워크 영역 1 내지 4의 서열 정렬. (b) 본원에 개시된 AC10 항체 및 L4 변이체의 경쇄 프레임워크 영역 1 내지 4의 서열 정렬.
도 2a 내지 2c. HIPS 매개 접합을 이용한 알데히드 태그된 항체 생산 및 ADC 생성. (a) 포르밀글리신 인식 서열 (CXPXR)은 유전적으로 항체에 코딩된다. (b) 공동 번역 포르밀글리신 생성 효소는 인식 서열 내의 시스테인을 알데히드 작용기를 함유하는 포르밀글리신 잔기로 변환하고 이는 특이적으로 (c) 히드라지노-이소-픽텟 스펭글러 (HIPS: Hydrazino-iso-Pictet-Spengler) 접합 요소와 접합될 수 있다.
도 3. 메이탄신 페이로드(RED-106)를 보유하는 절단 불가능한 링커에 접합된 CT 태그된 H1/L1 항체는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)로 측정한 결과 1.88의 DAR을 수득한다.
도 4. RED-106에 접합된 CT 태그된 H1/L1 항체는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)로 측정한 결과 99.2% 단량체성이다.
도 5. RED-106에 접합된 CT 태그된 H1/L4 항체는 HIC로 측정한 결과 1.91의 DAR을 수득한다.
도 6. RED-106에 접합된 CT 태그된 H1/L4 항체는 SEC로 측정한 결과 99.5% 단량체성이다.
도 7. RED-106에 접합된 CT 태그된 H4/L2 항체는 HIC로 측정한 결과 1.89의 DAR을 수득한다.
도 8. RED-106에 접합된 CT 태그된 H4/L2 항체는 SEC로 측정한 결과 99.7% 단량체성이다.
도 9. RED-106에 접합된 CT 태그된 H4/L4 항체는 HIC로 측정한 결과 1.90의 DAR을 수득한다.
도 10. RED-106에 접합된 CT 태그된 H4/L4 항체는 SEC로 측정한 결과 99.5% 단량체성이다.
도 11. 재조합 인간 CD30 단백질에 대한 인간화 항-CD30 항체의 ELISA 결합. H1 중쇄 변이체와 L1 내지 L5 경쇄의 다양한 조합을 포함하는 항체 변이체를 테스트했다. 참고용으로 키메라 항체(H/L)가 포함되어 있다.
도 12. 재조합 인간 CD30 단백질에 대한 인간화 항-CD30 항체의 ELISA 결합. H4 중쇄 변이체와 L1 내지 L5 경쇄의 다양한 조합을 포함하는 항체 변이체를 테스트했다. 참고용으로 키메라 항체(H/L)가 포함되어 있다.
도 13. H1 중쇄 변이체와 L1 내지 L5 경쇄 변이체의 다양한 조합을 포함하는 메이탄신-접합된 인간화 항-CD30 ADC의 SU-DHL-1 세포에 대한 시험관내 효능. 키메라 항체(H/L)로 만든 ADC가 참고용으로 포함되어 있다.
도 14. H1 중쇄 변이체와 L1 내지 L5 경쇄 변이체의 다양한 조합을 포함하는 메이탄신-접합된 인간화 항-CD30 ADC의 L540 세포에 대한 시험관내 효능. 키메라 항체(H/L)로 만든 ADC가 참고용으로 포함되어 있다.
도 15. H4 중쇄 변이체와 L1 내지 L5 경쇄 변이체의 다양한 조합을 포함하는 메이탄신-접합된 인간화 항-CD30 ADC의 SU-DHL-1 세포에 대한 시험관내 효능. 키메라 항체(H/L)로 만든 ADC가 참고용으로 포함되어 있다.
도 16. H4 중쇄 변이체와 L1 내지 L5 경쇄 변이체의 다양한 조합을 포함하는 메이탄신-접합된 인간화 항-CD30 ADC의 L540 세포에 대한 시험관내 효능. 키메라 항체(H/L)로 만든 ADC가 참고용으로 포함되어 있다.
도 17. VH1/VL4, VH4/VL2 및 VH4/VL4 변이체를 포함하는 메이탄신-접합된 인간화 항-CD30 ADC의 HuT 102 이종이식편에 대한 생체내 효능. VH4/VL4 변이체는 DAR4 및 DAR2 구성 모두로 테스트되었다. 0일차에 단일 10mg/kg 용량의 ADC를 투여했다.
도 18은 0일차에 나열된 항-CD30 ADC의 단일 정맥내 용량을 이용한 L-82 이종이식 연구의 그래프를 보여준다. VH4/VL4 화합물 8(RED-601)은 내부 91N 태그를 사용하고 애드세트리스(Adcetris)에 대해 비교된 페이로드 용량의 절반을 전달한다. 50% ADC 투여량(1.5mg/kg) 및 동일한 투여량(3mg/kg)에서 VH4/VL4 화합물 8은 애드세트리스와 비교하여 동등하게 효과적이었으며, 다리가 모두 달린 그룹 당 8마리의 마우스 중 8마리의 완전 반응을 나타냈다. VH4/VL4 항체 단독으로는 최소한의 활성을 나타냈다.
도 19는 0일차에 나열된 항-CD30 ADC의 단일 정맥내 용량을 사용한 Karpas 299 이종이식 연구의 그래프를 보여준다. VH4/VL4 화합물 8(RED-601)은 내부 91N 태그를 사용하고 애드세트리스와 비교하여 페이로드 용량의 절반을 전달한다. 50% ADC 투여량 (1.5 mg/kg) 및 동일한 투여량 (3 mg/kg)에서 VH4/VL4 화합물 8은 애드세트리스와 비교하여 5/6 및 6/6 완전 반응을 나타냈으며 VH4/VL4 화합물 8과 비교하여 페이로드 양의 2배를 사용했지만 6/6 완전 반응을 나타냈다. VH4/VL4 항체 단독은 최소 활성을 가졌다.
도 20. 91N에서 화합물 8(RED-601)에 접합된 단일 태그된 CD30 VH4/VL4 항체는 PLRP에 의해 결정된 대로 1.58의 DAR을 수득하였다.
도 21. 91N에서 화합물 8(RED-601)에 접합된 단일 태그된 CD30 VH4/VL4 항체는 SEC에 의해 결정된 바와 같이 98% 단량체성이다.
정의
용어 "결합제"는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하는 단백질을 지칭한다. 각각의 VH 및 VL 사슬은 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 개입된 프레임워크(FR) 영역을 포함한다. 전형적으로, VH 사슬은 순차적으로 배열된 HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4를 포함한다. 유사하게, VL 사슬은 전형적으로 순차적으로 배열된 LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4를 포함한다. 따라서, 항체와 같은 결합제와 관련하여 사용되는 용어 "프레임워크"는 결합제의 가변 영역 내 CDR 외부의 아미노산 잔기를 의미하도록 의도된다.
용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 임의의 이소형 (예를 들어, IgG (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4), IgE, IgD, IgA, IgM 등)의 항체 또는 면역글로불린, 전체 항체 (예를 들어, 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 2개의 이량체로 차례로 구성된 사량체로 구성된 항체); 단일 사슬 항체 (예를 들어, scFv); Fab, Fv, scFv 및 Fd 단편, 키메라 항체, 인간화 항체, 단일쇄 항체 및 항체의 항원 결합 부분과 비항체 단백질을 포함하는 융합 단백질을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는 항원에 특이적인 결합을 유지하는 항체의 단편 (예를 들어, 전체 또는 단일 쇄 항체의 단편)을 포함한다. 항체는 예를 들어 방사성 동위원소, 검출 가능한 생성물을 생성하는 효소, 형광 단백질 등을 사용하여 검출 가능하게 표지될 수 있다. 항체는 특이적 결합 쌍의 구성원, 예를 들어 비오틴 (비오틴-아비딘 특이적 결합 쌍의 구성원) 등과 같은 다른 모이어티에 추가로 접합될 수 있다. 항체는 또한 폴리스티렌 플레이트 또는 비드 등을 포함하지만 이에 국한되지 않는 고체 지지체에 결합될 수도 있다. Fab', Fv, F(ab')2 및/또는 항원에 대한 특이적 결합을 유지하는 다른 항체 단편 및 단일클론 항체도 이 용어에 포함된다. 항체는 1가 또는 2가일 수 있다.
"항체 단편"은 온전한 항체의 일부, 예를 들어 온전한 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체 (Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); 단일 사슬 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다. 항체의 파파인 소화는 각각 단일 항원 결합 부위를 갖는 "Fab" 단편이라고 불리는 두 개의 동일한 항원 결합 단편 및 쉽게 결정화되는 능력을 반영하는 명칭인 잔류 "Fc" 단편을 생성한다. 펩신 처리는 2개의 항원 결합 부위를 가지며 여전히 항원을 가교할 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다.
일부 실시양태에서, 대상 결합제는 재조합 또는 변형된 결합제, 예를 들어 키메라, 인간화, 탈면역화 또는 시험관내 생성된 항체이다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "재조합" 또는 "변형된" 결합제 또는 항체는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 결합제, 예를 들어 (i) 숙주 세포로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체; (ii) 재조합, 조합 항체 라이브러리로부터 단리된 항체; (iii) 인간 면역글로불린 유전자에 대해 형질전환된 동물 (예를 들어, 마우스)로부터 분리된 항체; 또는 (iv) 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 포함하는 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함하도록 의도된다. 이러한 재조합 항체는 인간화, CDR 이식, 키메라, 탈면역화 및 시험관내 생성 항체를 포함하고; 임의로 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래된 불변 영역을 포함할 수 있다.
"Fv"는 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 비공유 결합으로 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 구성된다. 이러한 구성에서는 각 가변 도메인의 3개 CDR이 상호작용하여 VH-VL 이량체 표면에 항원 결합 부위를 정의한다. 종합적으로, 6개의 CDR은 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 CDR만 포함하는 Fv의 절반)조차도 전체 결합 부위보다 친화력은 낮지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
"Fab" 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인과 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab 단편은 항체 힌지 영역의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복실 말단에 몇 개의 잔기를 추가한다는 점에서 Fab' 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기가 유리 티올 기를 보유하는 Fab'에 대한 본원에서의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 이들 사이에 힌지 시스테인이 있는 Fab' 단편의 쌍으로 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 공지되어 있다.
임의의 척추동물 종으로부터의 항체의 "경쇄"(면역글로불린)는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파 및 람다라고 불리는 두 가지 명확하게 구별되는 유형 중 하나로 지정될 수 있다. 이들의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 면역글로불린은 다양한 클래스로 분류될 수 있다. 면역글로불린에는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5가지 주요 클래스가 있으며 이들 중 일부는 하위 클래스 (이소형), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2로 추가로 나뉠 수 있다.
"단일 사슬 Fv" 또는 "sFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에 존재한다. 일부 양태에서, Fv 폴리펩티드는 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함하며, 이는 sFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성할 수 있게 한다.
용어 "디아바디"는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 의미하며, 이 단편은 동일한 폴리펩티드 사슬(VH-VL)에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 동일한 사슬에 있는 두 도메인 사이의 쌍을 이루기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써 도메인은 강제로 다른 사슬의 상보성 도메인과 쌍을 이루고 두 개의 항원 결합 부위를 생성한다.
용어 "결합"은 예를 들어 염 브릿지 및 물 브릿지와 같은 상호작용을 포함하는 공유적, 정전기적, 소수성 및 이온성 및/또는 수소 결합 상호 작용으로 인한 두 분자 사이의 직접적인 결합을 지칭한다. 대상 항-CD30 항체는 CD30 단백질, 예를 들어 인간 CD30 단백질, 예를 들어 글리코실화된 CD30 또는 이의 단편 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 비특이적 결합은 약 10-7 M 미만의 친화도를 갖는 결합, 예를 들어 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M 등의 친화도를 갖는 결합을 지칭한다.
항체 및 항원의 맥락에서 용어 "특이적으로 결합한다"는 항체가 예를 들어 약 105 M-1 이상의 친화성 또는 Ka (즉, 1/M 단위와의 특정 결합 상호작용의 평형 연관 상수)로 항원에 결합(bind)하거나 회합(associate)한다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견되는 비연속 항원 결합 부위를 의미하도록 의도된다. CDR은 [Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977)]; [Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" (1991)]; [Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]; 및 [MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)]에 기재되어 있고, 여기서 서로 비교할 경우 아미노산 잔기의 중복 또는 하위 집합이 정의에 포함된다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 이식된 항체 또는 이의 변이체의 CDR을 지칭하는 정의의 적용은 본원에서 정의되고 사용되는 용어의 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 상기 인용된 참고문헌 각각에 의해 정의된 CDR을 포함하는 아미노산 잔기는 비교로서 아래 표 1에 제시되어 있다.
표 1: CDR 정의
본 개시내용 전반에 걸쳐, 면역글로불린 중쇄 및 면역글로불린 경쇄 내의 잔기의 넘버링은 [Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]에 의해 설명되는 바와 같고, 이는 본원에 참고로서 명시적으로 포함된다. 또한, 본 개시내용에 언급된 프레임워크 영역 및 CDR은 [Chothia et al]에 의해 설명되는 바와 같다.
면역글로불린 폴리펩티드의 맥락에서, 용어 "불변 영역"은 당업계에서 잘 이해되며, Ig 중쇄 또는 Ig 경쇄의 C-말단 영역을 지칭한다. Ig 중쇄 불변 영역에는 CH1, CH2 및 CH3 도메인 (및 중쇄가 μ 또는 ε 중쇄인 CH4 도메인)이 포함된다. 천연 Ig 중쇄에서, CH1, CH2, CH3 (및 존재하는 경우 CH4) 도메인은 중쇄 가변 (VH) 영역 바로 뒤 (C-말단)에서 시작하고, 각각 길이는 약 100개 아미노산 내지 약 130개의 아미노산이다. 천연 Ig 경쇄에서, 불변 영역은 경쇄 가변 (VL) 영역 바로 뒤 (C-말단)에서 시작되며, 길이는 약 100개 아미노산 내지 120개 아미노산이다.
"에피토프"는 항체가 결합하는 항원 상의 부위 (예를 들어, CD30 상의 부위)이다. 에피토프는 단백질의 접힘 (예를 들어, 3차 접힘)에 의해 병치된 인접 아미노산 또는 비인접 아미노산 둘 다로부터 형성될 수 있다. 인접 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매에 노출되면 유지되는 반면, 접힘에 의해 형성된 에피토프는 일반적으로 변성 용매로 처리하면 손실된다. 에피토프는 일반적으로 선형 또는 공간 구조로 적어도 3개, 더 일반적으로는, 적어도 5개 또는 8 내지 10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간 구조를 결정하는 방법에는 예를 들어 X선 결정학 및 2차원 핵자기 공명이 포함된다. 예를 들어, [Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed (1996)]를 참조한다. 몇몇 상업 실험실에서는 에피토프 매핑 서비스를 제공한다. 막 관련 항원과 면역반응하는 항체에 의해 결합된 에피토프는 세포 표면 (예를 들어, 막횡단 단백질의 세포외 영역)에 존재할 수 있으므로, 이러한 에피토프는 세포 표면 접근 가능, 용매 접근 가능 및/또는 세포 표면 노출된 것으로 간주된다.
폴리펩티드, 펩티드 또는 단백질의 아미노산 서열과 관련하여 사용된 "유전적으로 코딩 가능한"은 아미노산 서열을 코딩하는 핵산의 전사 및 번역에 의해 생산될 수 있는 아미노산 잔기로 아미노산 서열이 구성됨을 의미하며, 여기서 전사 및/또는 번역은 세포에서 또는 무세포 시험관 내 전사/번역 시스템에서 일어날 수 있다.
용어 "제어 서열"은 특정 발현 시스템, 예를 들어, 포유동물 세포, 박테리아 세포, 무세포 합성 등에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열의 발현을 촉진하는 DNA 서열을 지칭한다. 원핵생물 시스템에 적합한 제어 서열은 예를 들어 프로모터, 임의로 오퍼레이터 서열 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵 세포 시스템은 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 활용할 수 있다.
핵산은 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 놓일 때 "작동가능하게 연결"된다. 예를 들어, 프리서열(pre-sequence) 또는 분비 리더에 대한 DNA가 폴리펩티드의 분비에 참여하는 전단백질로 발현된다면 폴리펩티드에 대한 DNA에 작동 가능하게 연결되고; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결되거나; 또는 리보솜 결합 부위가 번역 개시를 촉진하도록 위치된다면 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된다"는 것은 연결되는 DNA 서열이 연속적이라는 것을 의미하며, 분비 리더의 경우 연속적이며 판독 틀에 있음을 의미한다. 연결은 결찰 또는 증폭 반응을 통해 수행된다. 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커는 통상적인 관행에 따라 서열을 연결하는데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 분자는 본원에 제공된 바와 같은 가변 중쇄 영역 및 UniProt: P01857-1, 버전 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1 불변 영역을 포함하는 중쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 분자는 본원에 제공된 바와 같은 가변 경쇄 영역 및 인간 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 경쇄 불변 영역은 UniProtKB/Swiss-Prot: P01834.2에 제시된 아미노산을 갖는 인간 카파 경쇄 불변 영역이다. 특정 실시양태에서, 대상 항체에 존재하는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역은 돌연변이, 예를 들어 Fc 기능을 조절하기 위한 치환체를 포함할 수 있다. 예를 들어, LALAPG 이펙터 기능 돌연변이 (L234A, L235A 및 P329G) 또는 N297A 돌연변이가 도입되어 항체 의존성 세포 독성(ADCC)을 감소시킬 수 있다. 치환체의 넘버링은 EU 넘버링 체계를 기반으로 한다. "EU 넘버링 체계" 또는 "EU 지수"는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역에서 잔기를 언급할 때 사용된다 (예를 들어, [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에 보고된 EU 지수). "Kabat에서와 같은 EU 지수"는 인간 IgG 1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다.
용어 "키메라 결합제"는 경쇄 및 중쇄 유전자가 일반적으로 유전 공학에 의해 다른 종에 속하는 가변 및 불변 영역 유전자로부터 구축된 결합제를 지칭한다. 예를 들어, 마우스로부터의 유전자의 가변 세그먼트는 인간 불변 세그먼트에 연결될 수 있다. "키메라 결합제"의 예는 키메라 항체 또는 키메라 TCR-유사 항체이다. TCR 유사 항체의 특정 양태는 [He et al. (2019), J Hematol Oncol.;12(1):99]에 의해 설명된다.
용어 "키메라 항체"는 다른 종에 속하는 항체 가변 및 불변 영역 유전자로부터 일반적으로 유전 공학에 의해 경쇄 및 중쇄 유전자가 구성된 항체를 지칭한다. 예를 들어, 마우스 단클론 항체 유전자의 가변 세그먼트는 감마 1 및 감마 3과 같은 인간 불변 세그먼트에 연결될 수 있다. 치료용 키메라 항체의 예는, 다른 포유동물 종으로부터의 도메인이 사용될 수 있지만, 마우스 항체로부터의 가변 도메인 또는 항원 결합 도메인 및 인간 항체로부터의 불변 도메인 또는 효과기 도메인으로 구성된 하이브리드 단백질이다.
용어 "인간화 항체"는 인간에서 자연적으로 생성된 항체와의 유사성을 증가시키기 위해 단백질 서열이 변형된 비인간 종으로부터의 항체를 지칭한다. 인간화 항체는 인간에게 투여될 경우 이들 항체에 대한 면역 반응을 유도하지 않거나 해당 비인간 항체 투여에 비해 훨씬 약한 면역 반응을 유도한다. 인간화 항체는 원래의 비인간 항체에 비해 적어도 세 가지 이점을 가지고 있다: 항체의 면역원성이 감소하고 (대부분의 면역 반응이 마우스 Ig 불변 영역에 대해 발생하기 때문에); 인간 불변 영역은 인간 이펙터 기능이 발생하도록 허용하며; 인간에서 인간화 항체의 혈청 반감기가 상당히 증가한다.
본원에 개시된 결합제는 또한 결합 파트너, 예를 들어 고체 지지체 상에 고정된 것과 상호작용할 수 있고 식별 또는 정제에 유용한 펩티드 서열을 포함하는 친화성 도메인을 포함할 수 있다. 히스티딘과 같은 연속적인 단일 아미노산이 단백질에 융합되면 니켈 세파로스와 같은 수지 컬럼에 높은 친화력으로 결합하여 융합 단백질의 원스텝 정제에 사용할 수 있다. 친화성 도메인의 예는 His5 (HHHHH) (서열번호 177), His X6 (HHHHHH) (서열번호 178), C-myc (EQKLISEEDL) (서열번호 179), Flag (DYKDDDDK) (서열번호 180), StrepTag (WSHPQFEK) (서열번호 181), 헤마글루티닌, 예를 들어, HA Tag (YPYDVPDYA; 서열번호 182), 글루타티논-S-트랜스퍼라제 (GST), 티오레독신, 셀룰로스 결합 도메인, RYIRS (서열번호 183), Phe-His-His-Thr (서열번호 184), 키틴 결합 도메인, S-펩티드, T7 펩티드, SH2 도메인, C-end RNA 태그, WEAAAREACCRECCARA (서열번호 185), 금속 결합 도메인, 예를 들어, 아연 결합 도메인 또는 칼슘 결합 도메인 예컨대 칼슘-결합 단백질로부터의 것, 예를 들어 칼모듈린, 트로포닌 C, 칼시뉴린 B, 미오신 경쇄, 리커버린, S-모듈린, 비시닌, VILIP, 뉴로칼신, 히포칼신, 프레케닌, 칼트랙틴, 칼페인 대형 하위단위, S100 단백질, 파발부민, 칼빈딘 D9K, 칼빈딘 D28K 및 칼레티닌, 인테인, 비오틴, 스트렙타비딘, MyoD, 류신 지퍼 서열 및 말토스 결합 단백질을 포함한다.
"천연 아미노산 서열" 또는 "모 아미노산 서열"은 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 변형 전의 폴리펩티드의 아미노산 서열을 지칭하기 위해 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 본 개시내용에서, "천연 아미노산 서열" 또는 "모 아미노산 서열"은 미국 특허 출원 공개 제20050123536호에 기재된 바와 같은 항-CD30 항체 AC10에서 발견된 서열을 지칭하고, 그의 전체가 본원에 참고로서 포함된다. 특히, AC10 항체의 VH 및 VL 사슬에 있는 다양한 도메인의 아미노산 서열이 다음 표 (표 2)에 나타난다:
용어 "접합된"은 일반적으로 하나의 관심 분자를 두 번째 관심 분자와 근접하게 결합시키는 공유 또는 비공유, 일반적으로 공유 결합의 화학적 연결을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 제제는 반감기 연장 모이어티, 표지제, 및 약물로부터 선택된다. 반감기 연장을 위해, 예를 들어, 본 개시내용의 항체는 개선된 약동학적 프로파일을 제공하도록 임의로 변형될 수 있다 (예를 들어, PEG화, 과글리코실화 등에 의해). 혈청 반감기를 향상시킬 수 있는 변형이 관심사이다.
본원에 사용된 용어 "치료", "치료하는" 등은 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 지칭한다. 효과는 질병 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방하는 측면에서 예방적일 수 있고/있거나 질병 및/또는 질병으로 인한 부작용에 대한 부분적 또는 완전한 치료 측면에서 치료적일 수 있다. 본원에서 사용된 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서의 질병의 모든 치료를 포함하며, (a) 질병에 걸리기 쉬우나 아직 질병을 갖는 것으로 진단되지 않은 대상자에서 질병이 발생하는 것을 예방하는 것; (b) 질병을 억제하는 것, 즉 질병의 발병을 저지하는 것; 및 (c) 질병을 완화시키는 것, 즉 질병의 퇴행을 유발하는 것을 포함한다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "개체", "대상자", "숙주" 및 "환자"는 쥐 (래트, 마우스), 비인간 영장류, 인간, 개과, 고양이과, 유제류 (예를 들어, 말, 소, 양, 돼지, 염소)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 포유동물을 지칭한다.
"치료학적 유효량" 또는 "유효량"은 질병을 치료하기 위해 포유동물 또는 다른 대상자에게 투여될 때 질병에 대한 그러한 치료를 실시하기에 충분한 항체, 예를 들어 항-CD30 항체와 같은 대상 결합제의 양을 지칭한다. "치료학적 유효량"은 항체, 질병 및 그의 중증도, 치료할 대상자의 연령, 체중 등에 따라 달라질 수 있다.
"알킬”은 1 내지 10개의 탄소 원자 및 예컨대 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5, 또는 1 내지 4, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 1가 포화 지방족 히드로카빌기를 지칭한다. 이 용어는, 예로서, 메틸 (CH3-), 에틸 (CH3CH2-), n-프로필 (CH3CH2CH2-), 이소프로필 ((CH3)2CH-), n-부틸 (CH3CH2CH2CH2-), 이소부틸 ((CH3)2CHCH2-), sec-부틸 ((CH3)(CH3CH2)CH-), t-부틸 ((CH3)3C-), n-펜틸 (CH3CH2CH2CH2CH2-), 및 네오펜틸 ((CH3)3CCH2-)과 같은 선형 또는 분지형 히드로카빌기를 포함한다.
용어 "치환된 알킬"은 알킬 사슬의 하나 이상의 탄소 원자 (C1 탄소 원자 제외)가 선택적으로 O-, N-, S-, -S(O)n- (n은 0 내지 2임), -NR- (R은 수소 또는 알킬임)와 같은 헤테로원자로 대체되고, 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로사이클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-아릴, SO2-헤테로아릴 및 -NRaRb 로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 5개의 치환기를 갖고, 여기서, R' 및 R"는 동일하거나 상이할 수 있고, 수소, 임의로 치환된 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 시클로알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릭으로부터 선택되는 것인 본원에 정의된 바와 같은 알킬기를 지칭한다.
"알킬렌"은 -O-, -NR10-, NR10C(O)-, -C(O)NR10- 등으로부터 선택되는 1개 이상의 기가 선택적으로 개입되어 있고, 직쇄 또는 분지형인 바람직하게는 1 내지 6개 및 더욱 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 2가 지방족 히드로카빌기를 지칭한다. 이 용어는, 예로서, 메틸렌 (-CH2-), 에틸렌 (-CH2CH2-), n-프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 이소-프로필렌 (-CH2CH(CH3)-), (-C(CH3)2CH2CH2-), (-C(CH3)2CH2C(O)-), (-C(CH3)2CH2C(O)NH-), (-CH(CH3)CH2-) 등을 포함한다.
"치환된 알킬렌"은 하기 "치환된"의 정의에서 탄소에 대해 설명된 바와 같은 치환기로 대체된 1 내지 3개의 수소를 갖는 알킬렌기를 지칭한다.
용어 "알칸"은 본원에 정의된 바와 같이 알킬기 및 알킬렌기를 지칭한다.
용어 “알킬아미노알킬”, “알킬아미노알케닐”, 및 “알킬아미노알키닐”은 기 R'NHR''-를 지칭하고, 여기서 R'는 본원에 정의된 바와 같은 알킬기이고 R''는 본원에 정의된 바와 같은 알킬렌, 알케닐렌, 또는 알키닐렌기이다.
용어 “알카릴” 또는 “아랄킬”은 기 -알킬렌-아릴 및 치환된 알킬렌-아릴을 지칭하고, 여기서 알킬렌, 치환된 알킬렌 및 아릴은 본원에 정의된다.
"알콕시”는 기 -O-알킬을 지칭하고, 여기서 알킬은 본원에 정의된 바와 같다. 알콕시는, 예로서, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, t-부톡시, sec-부톡시, n-펜톡시 등을 포함한다. 용어 “알콕시”는 또한 기 알케닐-O-, 시클로알킬-O-, 시클로알케닐-O-, 및 알키닐-O-를 지칭하며, 여기서 알케닐, 시클로알킬, 시클로알케닐, 및 알키닐은 본원에 정의된 바와 같다.
용어 "치환된 알콕시"는 기 치환된 알킬-O-, 치환된 알케닐-O-, 치환된 시클로알킬-O-, 치환된 시클로알케닐-O-, 및 치환된 알키닐-O-를 지칭하고, 여기서 치환된 알킬, 치환된 알케닐, 치환된 시클로알킬, 치환된 시클로알케닐 및 치환된 알키닐은 본원에 정의된 바와 같다.
용어 “알콕시아미노”는 기 -NH-알콕시를 지칭하고, 여기서 알콕시는 본원에 정의된다.
용어 “할로알콕시”는 기 알킬-O-를 지칭하고, 여기서 알킬기 상의 하나 이상의 수소 원자는 할로기로 치환되고 예로서, 트리플루오로메톡시 등과 같은 기를 포함한다.
용어 "할로알킬"은 상기 설명된 바와 같은 치환된 알킬기를 지칭하고, 여기서 알킬기 상의 하나 이상의 수소 원자는 할로기로 치환된다. 이러한 기의 예는, 제한 없이, 플루오로알킬기, 예컨대 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로에틸 등을 포함한다.
용어 "알킬알콕시"는 기 -알킬렌-O-알킬, 알킬렌-O-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-O-알킬, 및 치환된 알킬렌-O-치환된 알킬을 지칭하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌, 및 치환된 알킬렌은 본원에 정의된 바와 같다.
용어 "알킬티오알콕시"는 기 -알킬렌-S-알킬, 알킬렌-S-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-S-알킬 및 치환된 알킬렌-S-치환된 알킬을 지칭하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌 및 치환된 알킬렌은 본원에 정의된 바와 같다.
"알케닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖고, 적어도 1개, 바람직하게는 1 내지 2개 부위의 이중 결합 불포화를 갖는 직쇄 또는 분지형 히드로카빌기를 지칭한다. 이 용어는, 예로서, 바이-비닐, 알릴, 및 뷰트-3-엔-1-일을 포함한다. 이 용어 내에는 시스 및 트랜스 이성질체 또는 이러한 이성질체의 혼합물이 포함된다.
용어 "치환된 알케닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 옥소, 티오케토, 카르복실, 카르복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, SO-알킬, -SO-치환된 알킬, SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기 또는 1 내지 3개의 치환기를 갖는 본원에 정의된 바와 같은 알케닐기를 지칭한다.
"알키닐”은 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 3개의 탄소 원자를 갖고, 적어도 1개, 바람직하게는 1 내지 2개 부위의 삼중 결합 불포화를 갖는 직선형 또는 분지형 1가 히드로카빌기를 지칭한다. 이러한 알키닐기의 예는 아세틸레닐 (-C≡CH), 및 프로파길 (-CH2C≡CH)을 포함한다.
용어 "치환된 알키닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 옥소, 티오케토, 카르복실, 카르복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기, 또는 1 내지 3개의 치환기를 갖는 본원에 정의된 바와 같은 알키닐기를 지칭한다.
"알키닐옥시"는 기 -O-알키닐을 지칭하고, 여기서 알키닐은 본원에 정의된 바와 같다. 알키닐옥시는, 예로서, 에티닐옥시, 프로피닐옥시 등을 포함한다.
"아실"은 기 H-C(O)-, 알킬-C(O)-, 치환된 알킬-C(O)-, 알케닐-C(O)-, 치환된 알케닐-C(O)-, 알키닐-C(O)-, 치환된 알키닐-C(O)-, 시클로알킬-C(O)-, 치환된 시클로알킬-C(O)-, 시클로알케닐-C(O)-, 치환된 시클로알케닐-C(O)-, 아릴-C(O)-, 치환된 아릴-C(O)-, 헤테로아릴-C(O)-, 치환된 헤테로아릴-C(O)-, 헤테로시클릴-C(O)- 및 치환된 헤테로시클릴-C(O)-를 지칭하고, 여기서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다. 예를 들어, 아실은 "아세틸" 기 CH3C(O)-를 포함한다.
"아실아미노"는 기 -NR20C(O)알킬, -NR20C(O)치환된 알킬, NR20C(O)시클로알킬, -NR20C(O)치환된 시클로알킬, -NR20C(O)시클로알케닐, -NR20C(O)치환된 시클로알케닐, -NR20C(O)알케닐, -NR20C(O)치환된 알케닐, -NR20C(O)알키닐, -NR20C(O)치환된 알키닐, -NR20C(O)아릴, -NR20C(O)치환된 아릴, -NR20C(O)헤테로아릴, -NR20C(O)치환된 헤테로아릴, -NR20C(O)헤테로시클릭 및 -NR20C(O)치환된 헤테로시클릭을 지칭하고, 여기서 R20은 수소 또는 알킬이고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다.
"아미노카르보닐" 또는 용어 "아미노아실"은 기 -C(O)NR51R52를 지칭하며, 여기서 R51 및 R52는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R51 및 R52는 선택적으로 이에 결합된 질소와 함께 연결되어 헤테로시클릭 또는 치환된 헤테로시클릭 기를 형성하고, 여기서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다.
"아미노카르보닐아미노"는 기 -NR51C(O)NR52R53 을 지칭하고, 여기서 R51, R52, 및 R53은 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 또는 시클로알킬로부터 선택되거나, 2개의 R기가 연결되어 헤테로시클릴기를 형성한다.
용어 “알콕시카르보닐아미노”는 기 -NRC(O)OR를 지칭하고, 여기서 각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴이고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로시클릴은 본원에 정의된 바와 같다.
용어 "아실옥시"는 기 알킬-C(O)O-, 치환된 알킬-C(O)O-, 시클로알킬-C(O)O-, 치환된 시클로알킬-C(O)O-, 아릴-C(O)O-, 헤테로아릴-C(O)O- 및 헤테로시클릴-C(O)O-를 지칭하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴은 본원에 정의된 바와 같다.
"아미노술포닐”은 기 -SO2NR51R52를 지칭하고, 여기서 R51 및 R52는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R51 및 R52는 임의로 연결되어 이들에 결합된 질소와 함께 헤테로시클릭 또는 치환된 헤테로시클릭기를 형성하고 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다.
"술포닐아미노”는 기 -NR51SO2R52를 지칭하고, 여기서 R51 및 R52는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R51 및 R52는 임의로 이들에 결합된 원자와 함께 연결되어 헤테로시클릭 또는 치환된 헤테로시클릭기를 형성하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다.
"아릴" 또는 "Ar"은 단일 고리 (예컨대 페닐기에 존재함) 또는 다중 축합 고리 (축합 고리는 방향족일 수도 있고 아닐 수도 있으나, 부착 지점은 방향족 고리의 원자를 통해야 함)를 갖는 고리 시스템 (예컨대 방향족 고리 시스템의 예에는 나프틸, 안트릴 및 인다닐이 포함됨)을 갖는 6 내지 18개 탄소 원자의 1가 방향족 카르보시클릭기를 지칭한다. 이 용어는, 예로서 페닐 및 나프틸을 포함한다. 아릴 치환기에 대한 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 이러한 아릴기는 아실옥시, 히드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알케닐, 치환된 알키닐, 치환된 시클로알킬, 치환된 시클로알케닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알카릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카르복실, 카르복실알킬, 시아노, 할로겐, 니트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 트리할로메틸로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기, 또는 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환될 수 있다.
"아릴옥시"는 기 -O-아릴을 지칭하며, 여기서 아릴은 본원에 정의된 바와 같은 임의로 치환된 아릴 기를 포함하여, 예를 들어 페녹시, 나프톡시 등을 포함하여 본원에 정의된 바와 같다.
"아미노"는 기 -NH2를 지칭한다.
용어 "치환된 아미노"는 각각의 R이 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴로 이루어진 군으로부터 선택되지만, 적어도 하나의 R은 수소가 아닌 기 -NRR을 지칭한다.
용어 "아지도"는 기 -N3을 지칭한다.
"카르복실", "카르복시" 또는 "카르복실레이트"는 -CO2H 또는 이의 염을 지칭한다.
"카르복실 에스테르" 또는 "카르복시 에스테르" 또는 용어 "카르복시알킬" 또는 "카르복실알킬"은 기 -C(O)O-알킬, -C(O)O-치환된 알킬, -C(O)O-알케닐, -C(O)O-치환된 알케닐, -C(O)O-알키닐, -C(O)O-치환된 알키닐, -C(O)O-아릴, -C(O)O-치환된 아릴, -C(O)O-시클로알킬, -C(O)O-치환된 시클로알킬, -C(O)O-시클로알케닐, -C(O)O-치환된 시클로알케닐, -C(O)O-헤테로아릴, -C(O)O-치환된 헤테로아릴, -C(O)O-헤테로시클릭, 및 -C(O)O-치환된 헤테로시클릭을 지칭하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다.
"(카르복실 에스테르)옥시" 또는 "카르보네이트"는 기 -O-C(O)O-알킬, -O-C(O)O-치환된 알킬, -O-C(O)O-알케닐, -O-C(O)O-치환된 알케닐, -O-C(O)O-알키닐, -O-C(O)O-치환된 알키닐, -O-C(O)O-아릴, -O-C(O)O-치환된 아릴, -O-C(O)O-시클로알킬, O-C(O)O-치환된 시클로알킬, -O-C(O)O-시클로알케닐, -O-C(O)O-치환된 시클로알케닐, -O-C(O)O-헤테로아릴, -O-C(O)O-치환된 헤테로아릴, -O-C(O) O-헤테로시클릭, 및 -O-C(O)O-치환된 헤테로시클릭을 지칭하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다.
"시아노" 또는 "니트릴"은 기 -CN을 지칭한다.
"시클로알킬"은 융합, 가교 및 스피로 고리 시스템을 포함하는 단일 또는 다중 환형 고리를 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 환형 알킬기를 지칭한다. 적합한 시클로알킬기의 예는, 예를 들어 아다만틸, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로옥틸 등을 포함한다. 이러한 시클로알킬기는 예를 들어 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로옥틸 등과 같은 단일 고리 구조, 또는 아다만타닐 등과 같은 다중 고리 구조를 포함한다.
용어 "치환된 시클로알킬"은 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 옥소, 티오케토, 카르복실, 카르복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기, 또는 1 내지 3개의 치환기를 갖는 시클로알킬기를 지칭한다.
"시클로알케닐"은 단일 또는 다중 고리를 갖고 적어도 1개의 이중 결합 및 바람직하게는 1 내지 2개의 이중 결합을 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 비방향족 시클릭 알킬기를 지칭한다.
용어 "치환된 시클로알케닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 케토, 티오케토, 카르복실, 카르복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기 또는 1 내지 3개의 치환기를 갖는 시클로알케닐기를 지칭한다.
"시클로알키닐"은 단일 또는 다중 고리를 갖고 적어도 하나의 삼중 결합을 갖는 5 내지 10개의 탄소 원자의 비방향족 시클로알킬기를 지칭한다.
"시클로알콕시"는 -O-시클로알킬을 지칭한다.
"시클로알케닐옥시"는 -O-시클로알케닐을 지칭한다.
"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 지칭한다.
"히드록시" 또는 "히드록실"은 기 -OH를 지칭한다.
"헤테로아릴"은 1 내지 15개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소 원자 및 고리 내의 산소, 질소, 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 10개의 헤테로원자의 방향족 기를 지칭한다. 이러한 헤테로아릴기는 단일 고리 (예컨대, 피리디닐, 이미다졸릴 또는 푸릴) 또는 고리 시스템 내 다중 축합 고리 (예를 들어 인돌리지닐, 퀴놀리닐, 벤조푸란, 벤즈이미다졸릴 또는 벤조티에닐과 같은 기에서와 같음)를 가질 수 있으며, 여기서 고리 시스템 내의 적어도 하나의 고리는 방향족이다. 원자가 요건을 충족시키기 위해, 이러한 헤테로아릴 고리 내 임의의 헤테로 원자는 H 또는 치환기, 예를 들어 알킬기 또는 본원에 기술된 다른 치환기에 결합될 수도 있고 결합되지 않을 수도 있다. 특정 실시양태에서, 헤테로아릴 기의 질소 및/또는 황 고리 원자(들)는 임의로 산화되어 N-옥시드 (N→O), 술피닐 또는 술포닐 모이어티를 제공한다. 이 용어는 예를 들어 피리디닐, 피롤릴, 인돌릴, 티오페닐 및 푸라닐을 포함한다. 헤테로아릴 치환기에 대한 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 이러한 헤테로아릴기는 아실옥시, 히드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알케닐, 치환된 알키닐, 치환된 시클로알킬, 치환된 시클로알케닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알카릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카르복실, 카르복실알킬, 시아노, 할로겐, 니트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴 및 트리할로메틸로부터 선택된 1 내지 5개의 치환기, 또는 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환될 수 있다.
용어 "헤테로아랄킬"은 기 -알킬렌-헤테로아릴을 지칭하며, 알킬렌 및 헤테로아릴은 본원에서 정의된다. 이 용어는 예를 들어 피리딜메틸, 피리딜에틸, 인돌릴메틸 등을 포함한다.
"헤테로아릴옥시"는 -O-헤테로아릴을 지칭한다.
"헤테로사이클", "헤테로시클릭", "헤테로시클로알킬" 및 "헤테로시클릴"은 단일 고리 또는 융합된 가교 및 스피로 고리 시스템을 포함하는 다중 축합 고리를 갖고 1 내지 10개의 헤테로원자를 포함하여 3 내지 20개의 고리 원자를 갖는 포화 또는 불포화 기를 지칭한다. 이러한 고리 원자는 질소, 황 또는 산소로부터 선택되며, 융합 고리 시스템에서는 부착 지점이 비방향족 고리를 통과하는 경우 하나 이상의 고리가 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있다. 특정 실시양태에서, 헤테로시클릭기의 질소 및/또는 황 원자(들)는 임의로 산화되어 N-옥시드, -S(O)- 또는 -SO2- 모이어티를 제공한다. 원자가 요건을 충족시키기 위해, 이러한 헤테로시클릭 고리 내의 임의의 헤테로원자는 하나 이상의 H 또는 하나 이상의 치환기(들), 예를 들어 알킬기 또는 본원에 기술된 다른 치환기에 결합될 수도 있고 결합되지 않을 수도 있다.
헤테로사이클 및 헤테로아릴의 예는 아제티딘, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 인돌리진, 이소인돌, 인돌, 디히드로인돌, 인다졸, 퓨린, 퀴놀리진, 이소퀴놀린, 퀴놀린, 프탈라진, 나프틸피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프테리딘, 카르바졸, 카르볼린, 페난트리딘, 아크리딘, 페난트롤린, 이소티아졸, 페나진, 이속사졸, 페녹사진, 페노티아진, 이미다졸리딘, 이미다졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌린, 프탈이미드, 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린, 4,5,6,7-테트라히드로벤조[b]티오펜, 티아졸, 티아졸리딘, 티오펜, 벤조[b]티오펜, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐 (티아모르폴리닐이라고도 함), 1,1-디옥소티오모르폴리닐, 피페리디닐, 피롤리딘, 테트라히드로푸라닐 등을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다.
헤테로시클릭 치환기에 대한 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 이러한 헤테로시클릭 기는 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 히드록실, 옥소, 티오케토, 카르복실, 카르복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 히드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 융합된 헤테로사이클로부터 선택되는 1 내지 5개 또는 1 내지 3개 치환기로 임의로 치환될 수 있다.
"헤테로시클릴옥시"는 기 -O-헤테로시클릴을 지칭한다.
용어 "헤테로시클릴티오"는 기 헤테로시클릭-S-를 지칭한다.
용어 "헤테로시클렌"은 본원에 정의된 바와 같이 헤테로사이클로부터 형성된 디라디칼기를 지칭한다.
용어 "히드록시아미노"는 기 -NHOH를 지칭한다.
"니트로"는 기 -NO2를 지칭한다.
"옥소"는 원자 (=O)를 지칭한다.
"술포닐"은 기 SO2-알킬, SO2-치환된 알킬, SO2-알케닐, SO2-치환된 알케닐, SO2-시클로알킬, SO2-치환된 시클로알킬, SO2-시클로알케닐, SO2-치환된 시클로알케닐, SO2-아릴, SO2-치환된 아릴, SO2-헤테로아릴, SO2-치환된 헤테로아릴, SO2-헤테로시클릭, 및 SO2-치환된 헤테로시클릭을 지칭하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다. 술포닐은 예를 들어 메틸-SO2-, 페닐-SO2- 및 4-메틸페닐-SO2-를 포함한다.
"술포닐옥시"는 기 -OSO2-알킬, OSO2-치환된 알킬, OSO2-알케닐, OSO2-치환된 알케닐, OSO2-시클로알킬, OSO2-치환된 시클로알킬, OSO2-시클로알케닐, OSO2-치환된 시클로알케닐, OSO2-아릴, OSO2-치환된 아릴, OSO2-헤테로아릴, OSO2-치환된 헤테로아릴, OSO2-헤테로시클릭, 및 OSO2 치환된 헤테로시클릭을 지칭하고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다.
용어 "아미노카르보닐옥시"는 기 -OC(O)NRR을 지칭하며, 여기서 각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릭이고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릭은 본원에 정의된 바와 같다.
"티올"은 기 -SH를 지칭한다.
"티옥소" 또는 용어 "티오케토"는 원자 (=S)를 지칭한다.
"알킬티오" 또는 용어 "티오알콕시"는 기 -S-알킬을 지칭하고, 여기서 알킬은 본원에 정의된 바와 같다. 특정 실시양태에서, 황은 -S(O)-로 산화될 수 있다. 설폭시드는 하나 이상의 입체이성질체로서 존재할 수 있다.
용어 "치환된 티오알콕시"는 기 -S-치환된 알킬을 지칭한다.
용어 "티오아릴옥시"는 기 아릴-S-를 지칭하며, 여기서 아릴 기는 본원에 정의된 임의로 치환된 아릴 기를 포함하여 본원에 정의된 바와 같다.
용어 "티오헤테로아릴옥시"는 기 헤테로아릴-S-를 지칭하고, 여기서 헤테로아릴기는 본원에 정의된 바와 같은 임의로 치환된 아릴기를 포함하여 본원에 정의된 바와 같다.
용어 "티오헤테로시클로옥시"는 기 헤테로시클릴-S-를 지칭하고, 여기서 헤테로시클릴기는 본원에 정의된 바와 같은 임의로 치환된 헤테로시클릴기를 포함하여 본원에 정의된 바와 같다.
본원의 개시내용에 더하여, 특정 기 또는 라디칼을 변형하기 위해 사용될 때 용어 "치환된"은 또한 특정 기 또는 라디칼의 하나 이상의 수소 원자가 각각 서로 독립적으로 아래에 정의된 것과 동일하거나 다른 치환기로 대체된다는 것을 의미할 수 있다.
본원의 개별 용어와 관련하여 개시된 기 외에도, 지정된 기 또는 라디칼 내 포화 탄소 원자 상의 하나 이상의 수소 (단일 탄소 상의 임의의 2개의 수소는 =O, =NR70, =N-OR70, =N2 또는 =S로 대체될 수 있음)를 치환하기 위한 치환기는, 달리 지정하지 않는 한, -R60, 할로, =O, -OR70, -SR70, -NR80R80, 트리할로메틸, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, -N3, -SO2R70, -SO2O-M+, -SO2OR70, -OSO2R70, -OSO2O-M+, -OSO2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70) 2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)O-M+, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)O-M+, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이며, 여기서 R60은 임의로 치환된 알킬, 시클로알킬, 헤테로알킬, 헤테로시클로알킬알킬, 시클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 R70은 독립적으로 수소 또는 R60이며; 각각의 R80은 독립적으로 R70이거나, 대안적으로 2개의 R80은 이들이 결합된 질소 원자와 함께 5원, 6원, 또는 7원 헤테로시클로알킬을 형성하며, 이는 O, N, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 동일하거나 상이한 추가 헤테로원자를 1 내지 4개를 임의로 포함할 수 있고, 이들 중 N은 -H 또는 C1-C3 알킬 치환을 가질 수 있으며; 각 M+는 순 단일 양전하를 갖는 반대 이온이다. 각각의 M+는 독립적으로, 예를 들어 K+, Na+, Li+와 같은 알칼리 이온; +N(R60)4와 같은 암모늄 이온; 또는 [Ca2+]0.5, [Mg2+]0.5 또는 [Ba2+]0.5와 같은 알칼리 토류 이온일 수 있다 ("아래첨자 0.5는 이러한 2가 알칼리 토류 이온에 대한 반대 이온 중 하나가 본 발명의 화합물의 이온화된 형태일 수 있고 다른 하나는 염화물과 같은 전형적인 반대 이온일 수 있음을 의미하며, 또는 본원에 개시된 2개의 이온화된 화합물이 이러한 2가 알칼리 토류 이온에 대한 반대 이온으로 작용할 수 있거나, 본 발명의 이중 이온화 화합물이 이러한 2가 알칼리 토류 이온에 대한 반대 이온으로 작용할 수 있음을 의미한다). 구체적인 예로서, -NR80R80은 -NH2, -NH-알킬, N-피롤리디닐, N-피페라지닐, 4N-메틸-피페라진-1-일 및 N-모르폴리닐을 포함하기 위한 것이다.
본원의 개시내용에 추가로, "치환된" 알켄, 알킨, 아릴 및 헤테로아릴기의 불포화 탄소 원자 상의 수소에 대한 치환기는 달리 명시되지 않는 한, -R60, 할로, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트리할로메틸, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, -N3, -SO2R70, -SO3 -M+, -SO3R70, -OSO2R70, -OSO3 -M+, -OSO3R70, -PO3 -2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2 -M+, -CO2R70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2 -M+, -OCO2R70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 여기서 R60, R70, R80 및 M+는 이전에 정의된 바와 같으며, 단, 치환된 알켄 또는 알킨의 경우 치환기는 -O-M+, -OR70, -SR70, 또는 -S-M+가 아니다.
본원의 개별 용어와 관련하여 개시된 기 이외에, "치환된" 헤테로알킬 및 시클로헤테로알킬기의 질소 원자 상의 수소에 대한 치환기는 달리 명시되지 않는 한, -R60, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트리할로메틸, -CF3, -CN, -NO, -NO2, -S(O)2R70, -S(O)2O-M+, -S(O)2OR70, -OS(O)2R70, -OS(O)2O-M+, -OS(O)2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)(OR70), -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70C(O)OR70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 여기서 R60, R70, R80 및 M+는 이전에 정의된 바와 같다.
본원의 개시내용에 더하여, 특정 실시양태에서, 치환되는 기는 1, 2, 3, 또는 4개의 치환기, 1, 2, 또는 3개의 치환기, 1 또는 2개의 치환기, 또는 1개의 치환기를 갖는다.
상기 정의된 모든 치환된 기에서, 그 자체에 추가 치환기를 갖는 치환기를 정의함으로써 도달한 중합체 (예를 들어, 치환된 아릴 기로 자체 치환되는 치환기로서 치환된 아릴 기를 갖는 치환된 아릴, 이는 치환된 아릴기 등에 의해 추가로 치환됨)는 본원에 포함되도록 의도되지 않는 것으로 이해된다. 이러한 경우 이러한 치환의 최대 횟수는 3회이다. 예를 들어, 본원에서 구체적으로 고려되는 치환된 아릴기의 연속 치환은 치환된 아릴-(치환된 아릴)-치환된 아릴로 제한된다.
달리 표시되지 않는 한, 본원에서 명시적으로 정의되지 않은 치환기의 명명법은 작용기의 말단 부분을 명명하고 이어서 부착 지점을 향한 인접 작용기를 명명함으로써 도달된다. 예를 들어, 치환기 "아릴알킬옥시카르보닐"은 기 (아릴)-(알킬)-O-C(O)-를 지칭한다.
하나 이상의 치환기를 함유하는 본원에 개시된 임의의 기에 관하여, 물론 이러한 기는 입체적으로 비실용적이고/이거나 합성적으로 실현 불가능한 임의의 치환 또는 치환 패턴을 함유하지 않는 것으로 이해된다. 또한, 대상 화합물에는 이들 화합물의 치환으로 인해 발생하는 모든 입체화학적 이성질체가 포함된다.
용어 "제약상 허용되는 염"은 포유동물과 같은 환자에게 투여할 수 있는 염 (주어진 투여량 요법에 대해 허용되는 포유동물 안전성을 갖는 반대이온을 갖는 염)을 의미한다. 이러한 염은 제약상 허용되는 무기 또는 유기 염기 및 제약상 허용되는 무기 또는 유기 산으로부터 유래될 수 있다. "제약상 허용되는 염"은 화합물의 제약상 허용되는 염을 지칭하며, 이 염은 당업계에 잘 알려진 다양한 유기 및 무기 반대 이온으로부터 유래되며, 단지 예로서, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 등을 포함하고; 분자가 염기성 작용기를 함유하는 경우, 염산염, 브롬화수소산염, 포름산염, 타르타르산염, 베실산염, 메실산염, 아세트산염, 말레산염, 옥살산염 등의 유기 또는 무기 산의 염을 포함한다.
용어 "그의 염"은 산의 양성자가 금속 양이온 또는 유기 양이온 등과 같은 양이온으로 대체될 때 형성된 화합물을 의미한다. 해당되는 경우, 염은 제약상 허용되는 염이지만, 환자에게 투여하기 위한 것이 아닌 중간체 화합물의 염은 제약상 허용되는 염일 필요가 없다. 예를 들어, 본 화합물의 염에는 화합물이 무기 또는 유기 산에 의해 양성자화되어 양이온을 형성하고, 무기 또는 유기 산의 공액 염기가 염의 음이온 성분인 염이 포함된다.
"용매화물"은 용매 분자와 용질의 분자 또는 이온의 조합에 의해 형성된 복합체를 지칭한다. 용매는 유기 화합물, 무기 화합물, 또는 이들 둘의 혼합물일 수 있다. 용매의 일부 예에는 메탄올, N,N-디메틸포름아미드, 테트라히드로푸란, 디메틸설폭시드 및 물이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 용매가 물인 경우, 형성된 용매화물은 수화물이다.
"입체이성질체" (단수형 및 복수형)는 원자 연결성은 동일하지만 공간에서 원자 배열이 다른 화합물을 지칭한다. 입체이성질체에는 시스-트랜스 이성질체, E 및 Z 이성질체, 거울상이성질체, 및 부분입체이성질체가 포함된다.
"호변이성체"는 원자의 전자 결합 및/또는 양성자의 위치만 다른 분자의 대체 형태, 예컨대 에놀-케토 및 이민-엔아민 호변이성체, 또는 피라졸, 이미다졸, 벤즈이미다졸, 트리아졸 및 테트라졸과 같은 -N=C(H)-NH- 고리 원자 배열을 함유하는 헤테로아릴기의 호변이성체 형태를 지칭한다. 당업자는 다른 호변이성체 고리 원자 배열이 가능하다는 것을 인식할 것이다.
용어 "또는 이의 염, 용매화물 또는 입체이성질체"는 대상 화합물의 입체이성질체의 제약상 허용되는 염의 용매화물과 같은 염, 용매화물 및 입체이성질체의 모든 치환을 포함하기 위한 것임이 이해될 것이다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체 형태를 지칭하기 위해 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 달리 구체적으로 나타내지 않는 한, "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 유전적으로 코딩된 아미노산과 코딩되지 않은 아미노산, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형되거나 유도체화된 아미노산, 및 변형된 펩티드 백본을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 이 용어에는 이종 아미노산 서열을 갖는 융합 단백질, 이종 및 상동 리더 서열과의 융합, 적어도 하나의 N-말단 메티오닌 잔기를 함유하는 단백질 (예를 들어, 재조합 숙주 세포에서의 생산을 촉진하기 위한 것); 면역학적으로 태그된 단백질 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 융합 단백질이 포함된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 기술된 바와 같이 항체 또는 결합제이다.
본 발명을 추가로 설명하기 전에, 본 발명은 설명된 특정 실시양태에 제한되지 않고, 물론 다양할 수 있다는 것을 이해해야 한다. 또한, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에, 본원에 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 설명하기 위한 목적으로 사용된 것이며 제한하려는 의도가 아니라는 점을 이해해야 한다.
일정 범위의 값이 제공되는 경우, 각 중간 값은 문맥에서 달리 명확하게 나타내지 않는 한 하한의 단위의 10분의 1까지, 해당 범위의 상한과 하한 및 상기 언급된 범위에서의 다른 명시되거나 중간인 값 사이인 것으로 이해되며, 본 발명에 포함된다. 이들 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있고, 또한 언급된 범위에서 구체적으로 배제된 임의의 한계에 따라 본 발명 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 포함된 한계 중 어느 하나 또는 둘 모두를 제외하는 범위도 본 발명에 포함된다.
다르게 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 설명된 것과 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 테스트에 사용될 수도 있지만, 이제 바람직한 방법 및 재료가 기재된다. 본원에 언급된 모든 간행물은 해당 간행물이 인용된 방법 및/또는 자료를 개시하고 설명하기 위해 참조로 본원에 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이 그리고 첨부된 청구범위에 있어서, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥에서 달리 명시하지 않는 한 복수의 지시대상물을 포함한다는 점에 유의해야 한다. 따라서, 예를 들어, "항체"에 대한 언급은 복수의 이러한 항체를 포함하고, "CDR"에 대한 언급은 하나 이상의 CDR 및 당업자에게 공지된 그의 등가물 등에 대한 언급을 포함한다. 임의의 선택적인 요소를 배제하기 위해 청구범위가 작성될 수 있다는 점도 추가로 유의해야 한다. 이와 같이, 이러한 진술은 청구항 구성요소의 언급과 관련하여 "단독으로", "오직" 등의 이러한 배타적 용어의 사용, 또는 "부정적" 제한의 사용을 위한 선행 기반으로서 역할하도록 의도된다.
본원에서 논의된 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 개시내용에 대해서만 제공된다. 본원의 어떠한 내용도 본 발명이 이전의 발명이라는 이유로 이러한 간행물에 선행할 자격이 없음을 인정하는 것으로 해석해서는 안 된다. 추가로, 제공된 간행일은 실제 간행일과는 상이할 수 있으며, 해당 날짜는 독립적으로 확인해야 할 수도 있다.
상세한 설명
위에서 언급한 바와 같이, "인간화 항체"는 인간에서 자연적으로 생성된 항체 변이체와의 유사성을 증가시키기 위해 단백질 서열이 변형된 비인간 종의 항체이다. 인간화 항체는 인간에게 투여 시 이들 항체에 대한 면역 반응을 유도하지 않거나 해당 비인간 항체 투여에 비해 훨씬 약한 면역반응을 유도한다. 인간화 항체는 원래의 비인간 항체에 비해 적어도 세 가지 장점을 가지고 있다: 항체의 면역원성이 감소하고 (대부분의 면역 반응이 마우스 Ig 불변 영역에 대해 발생하기 때문에); 인간 불변 영역은 인간 효과기 기능이 발생하도록 허용하며; 인간에서 인간화 항체의 혈청 반감기가 상당히 증가한다.
또한 상기 기재된 바와 같이, 가변 영역과 관련하여 사용될 때 "프레임워크" 또는 "프레임워크 영역"은 항체와 같은 결합 단백질의 가변 영역 내의 CDR 외부의 아미노산 잔기를 지칭한다. 가변 영역 프레임워크는 일반적으로 길이가 약 100 내지 120개 아미노산 사이인 불연속적인 아미노산 서열이지만 CDR 외부의 아미노산만을 참조하도록 의도된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "프레임워크 영역"은 CDR에 의해 분리된 프레임워크의 각 도메인을 의미하도록 의도된다.
본 개시내용의 특정 실시양태는 인간화 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 영역을 포함하는 결합제를 제공한다. 인간화 프레임워크 영역 내에 삽입된 CDR 영역에 따라, 본원에 개시된 결합제는 임의의 항원, 특히 CD30 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다. 또한, 본원에 개시된 결합제의 가변 사슬 폴리펩티드 중 하나 또는 둘 모두를 코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 이러한 핵산을 포함하는 세포도 기술된다. 일부 경우에는 제약 조성물을 포함하여, 본원에 개시된 결합제, 특히 항체를 포함하는 조성물이 추가로 제공된다.
본 개시내용의 결합제를 제조하고 사용하는 방법도 제공된다. 특정 양태에서, 세포 증식성 장애를 갖는 개체에게 치료 유효량의 결합제, 특히 본 개시내용의 항체를 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공되며, 여기서 결합제는 면역 반응, 예를 들어, 세포 증식성 장애의 비정상적 증식 세포에 대한 T 세포 반응을 향상시키기 위해 개체에게 투여된다. 항체는 다양한 진단 및 모니터링 응용 분야에도 유용하며 또한 본원에 제공된다.
인간화 프레임워크 영역
위에 요약된 바와 같이, 본 개시내용은 인간화 프레임워크 영역을 포함하는 결합제를 제공한다. "모 아미노산 서열"로서, 항-CD30 항체인 AC-10 항체의 아미노산 서열을 사용하여 인간화 프레임워크 영역을 갖는 결합제를 유도한다.
예를 들어, 도 1a는 AC10 항체의 VH 사슬의 프레임워크 영역 1 내지 4 (HFR1 내지 HFR4에 대해 각각 서열번호 2 내지 4 및 10)와 중쇄 변이체 1 (H1 변이체)의 프레임워크 영역 1 내지 4 (HFR1 내지 HFR4에 대해 각각 서열번호 7 내지 10) 사이의 서열 정렬을 기술한다. AC10의 것과 비교하여 H1 변이체의 프레임워크 영역의 특정 돌연변이는 인간에게 투여될 때 H1 변이체의 프레임워크 영역을 포함하는 결합제를 덜 면역원성으로 만들 수 있다.
유사하게, 도 1b는 AC10 항체의 VH 사슬의 프레임워크 영역 1 내지 4 (HFR1 내지 HFR4에 대해 각각 서열번호 2 내지 4 및 10)와 중쇄 변이체 4 (H4 변이체)의 프레임워크 영역 1 내지 4 (HFR1 내지 HFR4에 대해 각각 서열번호 12 내지 15) 사이의 서열 정렬을 기술한다. AC10의 것과 비교하여 H4 변이체의 프레임워크 영역의 특정 돌연변이는 인간에게 투여될 때 H4 변이체의 프레임워크 영역을 포함하는 결합제를 덜 면역원성으로 만들 수 있다.
또한, 도 1c는 AC10 항체의 VL 사슬의 프레임워크 영역 1 내지 4 (LFR1 내지 LFR4에 대해 각각 서열번호 17 내지 20)와 경쇄 변이체 2 (L2 변이체)의 프레임워크 영역 1 내지 4 (LFR1 내지 LFR4에 대해 각각 서열번호 22 내지 25) 사이의 서열 정렬을 기술한다. AC10의 것과 비교하여 L2 변이체의 프레임워크 영역의 특정 돌연변이는 인간에게 투여될 때 L2 변이체의 프레임워크 영역을 포함하는 결합제를 덜 면역원성으로 만들 수 있다.
또한, 도 1d는 AC10 항체의 VL 사슬의 프레임워크 영역 1 내지 4 (LFR1 내지 LFR4에 대해 각각 서열번호 17 내지 20)와 경쇄 변이체 4 (L4 변이체)의 프레임워크 영역 1 내지 4 (LFR1 내지 LFR4에 대해 각각 서열번호 27 내지 30) 사이의 서열 정렬을 기술한다. AC10의 것과 비교하여 L4 변이체의 프레임워크 영역의 특정 돌연변이는 인간에게 투여될 때 L4 변이체의 프레임워크 영역을 포함하는 결합제를 덜 면역원성으로 만들 수 있다.
특정 실시양태에서, 결합제는
1) H1 변이체의 프레임워크 영역과 L2 변이체의 프레임워크 영역
2) H1 변이체의 프레임워크 영역고 L4 변이체의 프레임워크 영역;
3) H4 변이체의 프레임워크 영역과 L2 변이체의 프레임워크 영역; 또는
4) H4 변이체의 프레임워크 영역과 L4 변이체의 프레임워크 영역
을 함유하는 것으로 기술된다.
본 개시내용의 특정 실시양태는 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬 및 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함하는 결합제를 제공하며, 여기서 CDR은 항원에 대한 결합제의 결합 특이성을 결정하고, 여기서, 결합제에서,
VH 사슬은:
i) 서열번호 7의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 8의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 9의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 10의 서열을 갖는 HFR4; 또는
ii) 서열번호 12의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 13의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 14의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 15의 서열을 갖는 HFR4;
를 포함하고,
VL 사슬은:
i) 서열번호 22의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 23의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 24의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4; 또는
ii) 서열번호 27의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 28의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 29의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4
를 포함한다.
CDR 이식
본원에 사용된 용어 "CDR 이식(grafting)"은 프레임워크 영역을 제공하는 항체에 CDR 공여자 항체의 특이성 및 친화성을 전달하기 위해 항체로부터의 CDR을 또 다른 항체의 프레임워크 영역으로 이식하는 것을 의미한다. CDR 이식은 일반적으로 인간화 항체를 생성하기 위해 비인간 항체로부터 인간 항체의 프레임워크 영역으로 CDR을 전달하는 데 사용되지만, 본원에 사용된 용어 "CDR 이식"은 임의의 공여자 항체로부터 임의의 수용자 항체의 프레임워크 영역으로 CDR을 전달하는 것을 포함한다.
[Almagro et al. (2018), Frontiers in Immunology, Vol. 8, Article 1751 ("Almagro")]에는 CDR 이식의 특정 양태가 설명되어 있다. 특히, Almagro는 항체로부터의 CDR이 다른 항체의 프레임워크 영역에 이식되어 프레임워크 영역을 제공하는 항체에 CDR 공여자 항체의 특이성과 친화도를 전달할 수 있음을 교시한다. Almagro는 또한 CDR 이식이 CD52에 대한 인간화 항체이며 임상 용도로 승인된 알렘투주맙을 조작하는 데 사용되었다고 언급한다. 래트 IgG2a의 CDR을 인간 VH 및 VL 프레임워크 영역에 이식하여 알렘투주맙을 생산했다. Almagro는 또한 쥐 항체로부터의 CDR 이식이 인간화 항체 다클리주맙을 생산하는 데 사용되었다고 교시한다. Almagro는 CDR 이식이 2017년 7월 30일자로 치료용으로 승인된 모든 인간화 항체를 조작하는 데 사용되었다고 교시한다. 실제로 Almagro는 설치류 CDR을 인간 FR에 이식하여 인간화 항체를 제조하는 것이 "치료용 항체 개발의 공학 및 임상 분야에서의 놀라운 진전"이라고 교시한다.
따라서, 항원에 특이적으로 결합하는 제1 항체로부터의 CDR은 프레임워크 영역, 예를 들어 인간화 서열에 기인하는 특정 유익한 특성을 갖는 제2 항체의 프레임워크 영역에 이식될 수 있다. 생성된 항체는 제1 항체의 결합 특이성을 유지하는 동시에 제2 항체의 프레임워크 영역의 유익한 특성, 예를 들어 인간에서 감소된 면역원성을 획득한다.
위에서 언급한 바와 같이, 본 개시내용의 특정 실시양태는 인간화 프레임워크 영역을 갖는 항체를 제공한다. 그러므로, 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 항체로부터의 CDR은 CDR을 제공하는 항체에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화 항체를 생성하기 위해 본원에 개시된 프레임워크 영역에 이식될 수 있다.
따라서, 본 개시내용의 특정 실시양태는 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬 및 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함하는 항원에 특이적으로 결합하는 결합제를 제공하고, 여기서 CDR은 항원에 대한 결합제의 결합 특이성을 결정하며, 여기서, 결합제에서:
VH 사슬은:
i) 서열번호 7의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 8의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 9의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 10의 서열을 갖는 HFR4; 또는
ii) 서열번호 12의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 13의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 14의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 15의 서열을 갖는 HFR4를 포함하고;
VL 사슬은:
i) 서열번호 22의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 23의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 24의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4; 또는
ii) 서열번호 27의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 28의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 29의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4를 포함한다.
특정 실시양태에서, 결합제의 VH 사슬은 모 AC-10 서열과 비교하여 변이체에서 돌연변이된 잔기를 제외하고, 즉 돌연변이된 잔기는 유지하고, 표 3에 기술된 바와 같이 FR1 내지 FR4에 제시된 아미노산 서열에 대한 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 프레임워크 영역에 포함한다. 모 AC-10 서열과 비교하여 H1 및 H4 변이체의 돌연변이를 도 1a 및 도 1b에 각각 나타내었다.
특정 실시양태에서, CD-30 결합제의 VL 사슬은 모 AC-10 서열과 비교하여 변이체에서 돌연변이된 잔기를 제외하고, 즉 돌연변이된 잔기는 유지하고, 표 3에 기술된 바와 같이 FR1 내지 FR4에 제시된 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 프레임워크 영역에 포함한다. 모 AC-10 서열과 비교하여 L2 및 L4 변이체의 돌연변이를 도 1c 및 도 1d에 각각 나타내었다.
일부 경우에, 결합제는 키메라 결합제이다. 키메라 결합제는 키메라 항체 또는 키메라 TCR-유사 항체일 수 있다.
일부 경우에, 결합제는 T 세포 수용체, 항체와 같은 T 세포 수용체, IgG, Fv, 단일 사슬 항체, scFv, Fab, F(ab')2 또는 Fab'이다. IgG는 IgG1일 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상 결합제는 면역글로불린의 불변 영역(예를 들어, Fc 영역)을 포함한다. Fc 영역은 존재하는 경우 인간 Fc 영역일 수 있다. 불변 영역이 존재하는 경우, 항체는 경쇄 및 중쇄 불변 영역을 모두 포함할 수 있다. 본원에 기술된 항체에는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는 모든 유형의 불변 영역과 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 임의의 이소형을 갖는 항체가 포함된다. 적합한 중쇄 Fc 영역의 예는 인간 이소형 IgG1 Fc이다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 대상 결합제 (예를 들어, 대상 인간화 항체)는 하나 이상의 클래스 또는 이소형으로부터의 서열을 포함할 수 있다. 항체는 두 개의 경쇄와 두 개의 중쇄를 포함하는 사량체, 별도의 중쇄, 경쇄, Fab, Fab' F(ab')2 및 Fv로 표현되거나 중쇄와 경쇄 가변 도메인이 스페이서를 통해 연결된 단일 사슬 항체로 발현될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체, 예를 들어 항-CD30 항체와 같은 결합제는 Fc 영역에 도입된 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 Fc 영역의 위치 239, 298, 326, 330 및 332에 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 Fc 영역에 도입된 다음 아미노산 치환 중 하나 이상을 포함할 수 있다: I332E; S239D/A330L/I332E; S239D/S298A/I332E; S239D/K326T/I332E; S239D/S298A/K326T/I332E; 또는 S239D/A330L/I332E/D356E/L358M.
일부 실시양태에서, 항체와 같은 대상 결합제는 카르복실 말단에 유리 티올(-SH) 기를 포함하며, 여기서 유리 티올 기는 항체를 제2 폴리펩티드 (예를 들어, 대상 항체를 포함하는 다른 항체), 스캐폴드, 담체 등에 부착하는데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체와 같은 대상 결합제는 하나 이상의 비천연 발생 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 비천연적으로 코딩된 아미노산은 카르보닐 기, 아세틸 기, 아미노옥시 기, 히드라진 기, 히드라지드 기, 세미카르바지드 기, 아지드 기 또는 알킨 기를 포함한다. 비천연 발생 아미노산의 포함은 중합체, 제2 폴리펩티드, 스캐폴드 등에 대한 연결을 제공할 수 있다. 이러한 비천연 발생 아미노산의 예에는 N-아세틸글루코사미닐-L- 세린, N-아세틸글루코사미닐-L-트레오닌 및 O-포스포티로신이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
일부 경우에, 결합제는 이중특이적 항체와 같은 이중특이적 결합제이다. 예를 들어, 이중특이적 항체는 연결된 두 개의 항원 결합 단편 또는 추가 도메인이 부착된 두 개의 큰 면역글로불린 유사 분자를 포함할 수 있다. 이러한 이중특이적 항체에서, 2개의 가변 도메인은 본원에 기술된 바와 같은 프레임워크 영역을 가질 수 있지만, 상이한 표적에 특이적인 CDR을 가질 수 있다.
전장 이중특이적 항체는 예를 들어 무세포 환경에서 시험관내에서 또는 공동 발현을 사용하여 뚜렷한 특이성을 갖는 2개의 항체 반분자의 이종이량체 형성을 촉진하기 위해 각각의 반분자의 중쇄 CH3 경계면에 치환을 도입함으로써 2개의 단일특이적 2가 항체 사이의 Fab 암 교환 (또는 반분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있다. Fab 암 교환 반응은 이황화 결합 이성질체화 반응과 CH3 도메인의 해리-결합의 결과이다. 모 단일특이적 항체의 힌지 영역에 있는 중쇄 이황화 결합이 감소된다. 모 단일특이적 항체 중 하나의 생성된 유리 시스테인은 제2 모 단일특이적 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화 결합을 형성하고 동시에 모 항체의 CH3 도메인은 해리-결합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 암의 CH3 도메인은 동종이량체화보다 이종이량체화를 선호하도록 조작될 수 있다. 생성된 생성물은 각각 별개의 에피토프에 결합하는 두 개의 Fab 암 또는 반분자를 갖는 이중특이적 항체이다.
"노브인홀(knob-in-hole)" 전략 (예를 들어, PCT 국제 공개 번호 WO 2006/028936 참조)을 사용하여 전장 이중특이적 항체를 생성할 수 있다. 간략하게, 인간 IgG에서 CH3 도메인의 경계면을 형성하는 선택된 아미노산은 이종이량체 형성을 촉진하기 위해 CH3 도메인 상호작용에 영향을 미치는 위치에서 돌연변이될 수 있다. 제1 항원과 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄에는 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 도입되고, 제2 항원과 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄에는 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 도입된다. 두 항체의 공동 발현 후, "홀"이 있는 중쇄와 "노브"가 있는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로 이종이합체가 형성된다. 노브 및 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다 (제1 중쇄의 제1 CH3 도메인의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인의 변형된 위치로 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T3945/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S/L368A/Y407V.
미국 특허 공개 번호 US2010/0015133; 미국 특허 공개 번호 US2009/0182127; 미국 특허 공개 번호 U82010/028637 또는 미국 특허 공개 번호 US2011/0123532에 기술된 바와 같이, 하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기와 두 번째 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기적 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있다. 다른 전략에서, 이종이량체화는 다음 치환에 의해 촉진될 수 있다 (첫 번째 중쇄의 첫 번째 CH3 도메인의 변형된 위치/두 번째 중쇄의 두 번째 CH3 도메인의 변형된 위치로 표현됨): 미국 특허 공개 번호 US2012/0149876 또는 미국 특허 공개 번호 US2013/0195849에 기술된 바와 같은 L351 Y/F405A/Y407V/T394W, T366I/K392M/T394W/F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W/F405A/Y407V, L351Y/Y407A/T366A/K409F, L351Y/Y407A/T366V/K409F, Y407A/T366A/K409F, 또는 T350V/L351Y/F405A/Y407V, T350V/T366L/K392L/T394W.
또한, 단일 사슬 이중특이적 항체도 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 단일 사슬 이중특이적 항체는 이중특이적 scFv이다.
일부 실시양태에서, 대상 결합제는 scFv 다량체를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 대상 결합제는 scFv 이량체(예를 들어, 2개의 직렬 scFv (scFv2)를 포함함), scFv 삼량체(예를 들어, 3개의 직렬 scFv(scFv3)를 포함함), scFv 사량체(예를 들어, 4개의 직렬 scFv(scFv4)를 포함함), 또는 4개 이상의 scFv의 다량체(예를 들어, 직렬)이다. scFv 단량체는 약 2개 아미노산 내지 약 10개 아미노산 길이, 예를 들어 2 aa, 3 aa, 4 aa, 5 aa, 6 aa, 7 aa, 8 aa, 9 aa, 또는 10 aa의 링커를 통해 직렬로 연결될 수 있다. 적합한 링커에는, 예를 들어 (Gly)x (여기서 x는 2 내지 10의 정수임)(서열번호 191), 글리신-세린 중합체 등이 포함된다.
CD30 결합제
상기 요약된 바와 같이, CDR 이식을 통해 항원에 특이적으로 결합하는 제1 항체로부터의 CDR은 프레임워크 영역, 예를 들어 인간화 서열에 기인하는 특정한 유익한 특징을 갖는 제2 항체의 프레임워크 영역에 이식될 수 있다. 생성된 항체는 제1 항체의 결합 특이성을 유지하는 동시에 제2 항체의 프레임워크 영역의 유익한 특성, 예를 들어 인간에서 감소된 면역원성을 획득한다.
또한, 상기 논의된 바와 같이, 본 개시내용의 특정 실시양태는 인간화 프레임워크 영역을 갖는 항체를 제공한다. 그러므로, 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 항체로부터의 CDR은 CDR을 제공하는 항체에 대한 결합 특이성을 갖는 인간화 항체를 생성하기 위해 본원에 개시된 프레임워크 영역에 이식될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 CD30 단백질에 특이적으로 결합하는 결합제를 제공한다. 이러한 결합제는 항-CD30 항체일 수 있다. CD-30 결합제는 결합제의 가변 도메인에 CD30에 특이적으로 결합하는 능력을 부여하는 CDR을 이식함으로써 생산될 수 있다.
한 실시양태에서, 결합제에 CD30 결합 특이성을 부여하는 VH 사슬 CDR은 서열번호 31 내지 33의 서열을 포함하고; 결합제에 CD30 결합 특이성을 부여하는 VL 사슬 CDR은 서열번호 34 내지 36의 서열을 포함한다. 결합제에 CD30 결합 특이성을 부여하는 CDR의 임의의 다른 조합은 또한 본원에 기술된 VH 및 VL 도메인에 이식될 수 있다.
따라서, 본 개시내용의 특정 실시양태는 CD30 단백질에 특이적으로 결합하는 결합제를 제공하며, 결합제는
i) 서열번호 6 및 서열번호 11로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 사슬; 및
ii) 서열번호 21 및 서열번호 26으로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 사슬
을 포함한다.
예를 들어, CD30에 특이적으로 결합하는 결합제는 1) 각각 서열 번호 31 내지 33의 서열을 갖는 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬; 및 각각 서열번호 34 내지 36의 서열을 갖는 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함할 수 있다.
일 실시양태에서, CD30에 특이적으로 결합하는 결합제는 서열번호 31 내지 33의 서열을 갖는 H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3, 및 서열번호 34 내지 36의 서열을 갖는 L-CDR1, L-CDR2, 및 L-CDR3을 포함하고, 결합제에서:
VH 사슬은:
i) 서열번호 7의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 8의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 9의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 10의 서열을 갖는 HFR4; 또는
ii) 서열번호 12의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 13의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 14의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 15의 서열을 갖는 HFR4를 포함하고;
VL 사슬은:
i) 서열번호 22의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 23의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 24의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4; 또는
ii) 서열번호 27의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 28의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 29의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4를 포함한다.
본 개시내용의 특정 실시양태는 CD30 단백질에 특이적으로 결합하는 결합제를 제공하고, 결합제는
a) 서열번호 6을 포함하는 VH 사슬 및 서열번호 21을 포함하는 VL 사슬,
b) 서열번호 6을 포함하는 VH 사슬 및 서열번호 26을 포함하는 VL 사슬,
c) 서열번호 11을 포함하는 VH 사슬 및 서열번호 21을 포함하는 VL 사슬, 및
d) 서열번호 11을 포함하는 VH 사슬 및 서열번호 26을 포함하는 VL 사슬
로부터 선택된 VH 및 VL 사슬의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 항체는 CD30에 특이적으로 결합하고 CD30에 대한 결합을 위해 다음을 포함하는 항체와 경쟁한다:
제1 항체가 CD30에 대한 결합을 위해 제2 항체와 경쟁하는지 여부를 결정하기 위한 임의의 적합한 접근법이 사용될 수 있다. 제1 항체가 화합물에 결합하기 위해 제2 항체와 "경쟁"하는지 여부는 당업계에 공지된 경쟁 결합 분석을 사용하여 쉽게 결정될 수 있다. 경쟁 항체는 예를 들어 항체 경쟁 분석을 통해 식별될 수 있다. 예를 들어, 제1 항체 샘플은 고체 지지체에 결합될 수 있다. 그런 다음, 이러한 제1 항체와 경쟁할 수 있다고 의심되는 제2 항체 샘플을 추가한다. 두 항체 중 하나는 표지된다. 표지된 항체와 표지되지 않은 항체가 화합물의 분리된 개별 부위에 결합하는 경우, 표지된 항체는 의심되는 경쟁 항체의 존재 여부에 관계없이 동일한 수준으로 결합한다. 그러나 상호작용 부위가 동일하거나 중복되는 경우에는 표지되지 않은 항체가 경쟁하게 되어 항원에 결합된 표지된 항체의 양이 감소하게 된다. 표지되지 않은 항체가 과도하게 존재하는 경우, 표지된 항체가 결합하는 경우는 거의 없거나 있어도 매우 적다.
본 개시내용의 목적을 위해, 경쟁 항체는 화합물에 대한 항체의 결합을 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 또는 약 99% 이상 감소시키는 항체이다. 이러한 경쟁 분석을 수행하기 위한 절차의 세부사항은 당업계에 잘 알려져 있다. 이러한 분석은 정제된 항체를 사용하여 정량적으로 이루어질 수 있다. 표준 곡선은 하나의 항체를 그 자체에 대해 적정함으로써 확립될 수 있으며, 즉, 동일한 항체가 표지와 경쟁자 모두에 사용된다. 플레이트에 대한 표지된 항체의 결합을 억제하는 비표지 경쟁 항체의 능력이 적정될 수 있다. 결과를 플롯팅할 수 있고 원하는 정도의 결합 억제를 달성하는 데 필요한 농도를 비교할 수 있다.
일부 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 항체는 CD30에 특이적으로 결합하고 다음을 포함한다:
Chothia 명명법에 의해 정의된 HCDR 1 내지 3 및 LCDR 1 내지 3. 나열된 명명법에 따라 정의된 바와 같이 본원에 개시된 항-CD30 항체의 HCDR 1 내지 3 및 LCDR 1 내지 3은 하기 표 (표 3)에 기술된 바와 같을 수 있다.
표 3: 서열번호로 확인된 AC-10 항체 및 H1, H4, L2 및 L4 변이체의 도메인 및 서열.
특정 실시양태에서, CD30 결합제의 VH 사슬은 표 3에 제시된 HCDR 1 내지 3을 포함하고, 모 AC-10 서열과 비교하여 변이체에서 돌연변이된 잔기를 제외하고, 즉 돌연변이된 잔기가 유지된 채 표 3에 기술된 FR1 내지 FR4에 제시된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 프레임워크 영역에서 포함한다. 모 AC-10 서열과 비교하여 H1 및 H4 변이체의 돌연변이를 도 1a 및 도 1b에 각각 나타내었다.
특정 실시양태에서, CD-30 결합제의 VL 사슬은 본원 표 3에 제시된 LCDR 1 내지 3을 포함하고, 모 AC-10 서열과 비교하여 변이체에서 돌연변이된 잔기를 제외하고, 즉 돌연변이된 잔기가 유지된 채 표 3에 기술된 FR1 내지 FR4에 제시된 아미노산 서열과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 프레임워크 영역에서 포함한다. 모 AC-10 서열과 비교하여 L2 및 L4 변이체의 돌연변이를 각각 도 1c 및 도 1d에 나타내었다.
본원에 개시된 CD30-결합제는 미국 특허 출원 번호 20020064527, 20040136992, 20080003221, 20080206242, 20060177442, 20100239571, 20090214544, 20190218293, 20180280532, 20200095329, 20200095330, 및 20200102399에 기술된 임의의 방법을 수행하는 것을 포함하여 다양한 연구, 진단 및 치료 적용에서의 용도를 발견하고, 이들의 개시내용은 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.
"CD30 항원" 또는 "CD30 단백질"은 NCBI 항목, GenBank 접근 번호: CAC16652.1에 설명된 단백질 서열과 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
일부 경우에, 본원에 개시된 CD30 결합제는 예를 들어 추가 모이어티에 대한 접합에 의해 변형된다. 항체, 예를 들어 본원에 개시된 항-CD30 항체와 같은 결합제에 접합될 수 있는 다양한 모이어티가 하기에 기술되어 있다.
결합제 접합체
본 개시내용은 결합제 접합체와 같은 접합체를 제공한다. 일부 경우에, 결합제는 항체이고, 따라서 이러한 경우에 본 개시내용은 항체-약물 접합체(ADC)를 제공한다. "접합체"는 관심 모이어티(예를 들어, 약물 또는 활성제)에 공유적으로 부착된 폴리펩티드(예를 들어, 결합제 또는 항체)를 의미한다. 예를 들어, 결합제 접합체는 약물 또는 활성제에 공유적으로 부착된 결합제(예를 들어, 항체)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드(예를 들어, 항체) 및 약물 또는 활성제는 하나 이상의 작용기 및 공유 결합을 통해 서로 결합된다. 예를 들어, 하나 이상의 작용기 및 공유 결합은 본원에 기술된 링커를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 접합체는 관심 모이어티에 접합된 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 접합체이다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드에 접합된 모이어티는 검출 가능한 표지, 약물, 수용성 중합체, 또는 막이나 표면에 폴리펩티드를 고정화하기 위한 모이어티와 같으나 이에 제한되지 않는 다양한 관심 모이어티 중 임의의 것일 수 있다. 특정 실시양태에서, 접합체는 폴리펩티드가 약물 또는 활성제에 접합된 약물 접합체이다. 적합한 약물 및 활성제, 이들의 유사체 및 유도체가 본원에 더 자세히 기재되어 있다.
관심 모이어티(예를 들어, 약물 또는 활성제)는 폴리펩티드의 임의의 원하는 부위에서 폴리펩티드에 접합될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은 예를 들어 폴리펩티드의 C-말단 또는 그 근처 부위에 접합된 모이어티를 갖는 폴리펩티드를 제공한다. 다른 예에는 폴리펩티드의 N-말단 또는 그 근처 위치에 접합된 모이어티를 갖는 폴리펩티드가 포함된다. 예에는 또한 폴리펩티드의 C-말단과 N-말단 사이의 위치(예를 들어, 폴리펩티드의 내부 부위)에 접합된 모이어티를 갖는 폴리펩티드도 포함된다. 폴리펩티드가 2개 이상의 모이어티에 접합되는 경우 상기의 조합도 가능하다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 접합체는 아미노산 잔기의 α-탄소에서 폴리펩티드의 아미노산 잔기에 접합된 약물 또는 활성제를 포함한다. 다른 방식으로 말하면, 접합체는 폴리펩티드 내의 하나 이상의 아미노산 잔기의 측쇄가 약물 또는 활성제에 부착된 (예를 들어, 본원에 기술된 링커를 통해 약물 또는 활성제에 부착된) 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 접합체는 폴리펩티드 내 하나 이상의 아미노산 잔기의 α-탄소가 약물 또는 활성제에 부착된 (예를 들어, 본원에 기술된 링커를 통해 약물 또는 활성제에 부착된) 폴리펩티드를 포함한다.
본 개시내용의 실시양태는 폴리펩티드가 하나 이상의 모이어티, 예를 들어 2개 모이어티, 3개 모이어티, 4개 모이어티, 5개 모이어티, 6개 모이어티, 7개 모이어티, 8개 모이어티, 9개 모이어티, 또는 10개 이상의 모이어티에 접합된 접합체를 포함한다. 모이어티는 폴리펩티드의 하나 이상의 부위에서 폴리펩티드에 접합될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 모이어티가 폴리펩티드의 단일 아미노산 잔기에 접합될 수 있다. 일부 경우에, 하나의 모이어티가 폴리펩티드의 아미노산 잔기에 접합된다. 다른 실시양태에서, 2개의 모이어티가 폴리펩티드의 동일한 아미노산 잔기에 접합될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제1 모이어티는 폴리펩티드의 제1 아미노산 잔기에 접합되고, 제2 모이어티는 폴리펩티드의 제2 아미노산 잔기에 접합된다. 상기의 조합도 가능하며, 예를 들어 폴리펩티드가 제1 아미노산 잔기에서 제1 모이어티에 접합되고 제2 아미노산 잔기에서 2개의 다른 모이어티에 접합되는 경우이다. 제1 아미노산 잔기에서 제1 및 제2 모이어티에 접합되고 제2 아미노산 잔기에서 제3 및 제4 모이어티에 접합된 폴리펩티드 등과 같은 다른 조합도 가능하지만 이에 제한되지는 않는다.
하나 이상의 모이어티에 접합된 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산 잔기는 자연 발생 아미노산, 비천연 아미노산, 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들어, 접합체는 폴리펩티드의 자연 발생 아미노산 잔기에 접합된 모이어티를 포함할 수 있다. 다른 경우에, 접합체는 폴리펩티드의 비천연 아미노산 잔기에 접합된 모이어티를 포함할 수 있다. 하나 이상의 모이어티는 상기 기재된 바와 같이 단일 천연 또는 비천연 아미노산 잔기에서 폴리펩티드에 접합될 수 있다. 폴리펩티드 내의 하나 이상의 천연 또는 비천연 아미노산 잔기는 본원에 기재된 바와 같은 모이어티 또는 모이어티들에 접합될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 내의 2개 (또는 그 이상)의 아미노산 잔기 (예를 들어, 천연 또는 비천연 아미노산 잔기)는 각각 1개 또는 2개의 모이어티에 접합될 수 있어, 폴리펩티드 내의 다중 부위가 관심 모이어티에 접합될 수 있다.
본원에 기술된 바와 같이, 폴리펩티드는 하나 이상의 모이어티에 접합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 관심 모이어티는 약물 또는 검출 가능한 표지와 같은 화학적 실체이다. 예를 들어, 약물 또는 활성제가 폴리펩티드에 접합될 수 있거나, 다른 실시양태에서는 검출 가능한 표지가 폴리펩티드에 접합될 수 있다. 따라서, 예를 들어 본 개시내용의 실시양태는 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 폴리펩티드와 약물의 접합체; 폴리펩티드와 검출 가능한 표지의 접합체; 2개 이상의 약물과 폴리펩티드의 접합체; 2개 이상의 검출 가능한 표지와 폴리펩티드의 접합체 등.
특정 실시양태에서, 폴리펩티드 및 관심 모이어티는 커플링 모이어티를 통해 접합된다. 예를 들어, 폴리펩티드 및 관심 모이어티는 각각 커플링 모이어티에 결합 (예를 들어, 공유 결합)될 수 있으며, 이에 따라 폴리펩티드 및 관심 모이어티 (예를 들어, 약물 또는 활성제)를 커플링 모이어티를 통해 함께 간접적으로 결합시킬 수 있다. 일부 경우에, 커플링 모이어티는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물, 또는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물의 유도체를 포함한다. 예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 통해 관심 모이어티 (예를 들어, 약물 또는 활성제)를 폴리펩티드에 커플링하기 위한 일반적인 반응식은 아래의 일반 반응식에 표시된다. 히드라지닐-인돌릴 및 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티는 또한 본원에서 각각 히드라지노-이소-픽텟-스펭글러(HIPS) 커플링 모이어티 및 아자-히드라지노-이소-픽텟-스펭글러(azaHIPS) 커플링 모이어티로도 지칭된다.
; 또는
위의 반응식에서, 각각의 R은 폴리펩티드에 접합된 관심 모이어티 (예를 들어, 약물 또는 활성제)이며, 여기서 n은 1 내지 4의 정수이다. 위의 반응식에 나타난 바와 같이, 2-포르밀글리신 잔기(fGly)를 포함하는 폴리펩티드는 커플링 모이어티 (예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티)를 포함하도록 변형된 약물과 반응하여 커플링 모이어티에 부착된 폴리펩티드 접합체를 생성하며, 따라서 커플링 모이어티를 통해 약물을 폴리펩티드에 부착시킨다.
본원에 기술된 바와 같이, 모이어티는 검출 가능한 표지, 또는 약물 또는 활성제와 같은 화학적 실체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 모이어티 중 임의의 것일 수 있다. R' 및 R"는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴과 같은 임의의 원하는 치환기일 수 있으나 이들로 제한되지는 않는다. Z는 CR61, NR62, N, O 또는 S일 수 있으며, 여기서 R61 및 R62는 각각 독립적으로 상기 R' 및 R"에 대해 기술된 임의의 치환기로부터 선택된다.
본원에 기술된 접합체 및 화합물에 나타난 바와 같이, 다른 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티도 가능하다. 예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티는 링커에 부착 (예를 들어, 공유 부착)될 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 실시양태는 링커를 통해 약물 또는 활성제에 부착된 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 포함한다. 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 약물 또는 활성제에 결합시킬 수 있는 링커의 다양한 실시양태가 본원에 상세히 기재되어 있다.
본원에 기술된 접합체 및 화합물에 나타난 바와 같이 추가적인 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티도 가능하다. 예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 2개 이상의 링커에 부착 (예를 들어, 공유 부착)될 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 실시양태는 각각 상응하는 링커를 통해 2개 이상의 약물 또는 활성제에 부착된 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 포함한다. 따라서, 본 개시내용의 접합체는 2개 이상의 링커를 포함할 수 있으며, 여기서 각 링커는 상응하는 약물 또는 활성제를 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착한다. 따라서, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 및 2개 이상의 링커는 전체적으로 "분지형 링커"로 간주될 수 있으며, 여기서 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 2개 이상의 "분지"에 부착되며, 각 분지에는 약물이나 활성제에 부착된 링커가 포함된다.
다른 페이로드의 동일한 조합은 분지형 링커를 통해 폴리펩티드에 접합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 분지형 링커에 부착된 2개의 페이로드(예를 들어, 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)는 동일한 페이로드(예를 들어, 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)이다. 예를 들어, 분지형 링커의 제1 분지는 페이로드(예를 들어, 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)에 부착될 수 있고 분지형 링커의 제2 분지는 동일한 페이로드(예를 들어, 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)에 제1 분지로서 부착될 수 있다.
다른 실시양태에서, 분지형 링커에 부착된 2개의 페이로드(예를 들어, 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)는 서로 다른 페이로드(예를 들어, 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)이다. 예를 들어, 분지형 링커의 제1 분지는 제1 페이로드(예를 들어, 제1 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)에 부착될 수 있고 분지형 링커의 제2 분지는 제1 분지에 부착된 제1 페이로드 (예를 들어, 제1 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)와 다른 제2 페이로드(예를 들어, 제2 약물, 활성제 또는 검출 가능한 표지)에 부착될 수 있다.
특정 실시양태에서, 폴리펩티드(예를 들어, 항체)는 관심 모이어티에 접합될 수 있으며, 여기서 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산은 관심 모이어티에 접합되기 전에 변형된다. 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산의 변형은 관심 모이어티에의 접합에 적합한 하나 이상의 반응성 기를 함유하는 폴리펩티드를 생성할 수 있다. 일부 경우에, 폴리펩티드는 관심 모이어티(예를 들어, 상기 기재된 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티와 같은 커플링 모이어티를 포함하는 모이어티)에 접합하기에 적합한 하나 이상의 반응성 기를 제공하기 위해 하나 이상의 변형된 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드의 아미노산은 반응성 알데히드기 (예를 들어, 반응성 알데히드)를 포함하도록 변형될 수 있다. 반응성 알데히드는 "알데히드 태그" 또는 "ald-태그"에 포함될 수 있으며, 이는 본원에 사용된 바와 같이 2-포르밀글리신 잔기(본원에서는 "fGly"로 지칭됨)를 함유하는 포르밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 전환된 설파타제 모티프 (예를 들어, L(C/S)TPSR)로부터 생성된 아미노산 서열을 지칭한다. FGE에 의해 생성된 fGly 잔기는 "포르밀글리신"으로도 지칭될 수 있다. 다르게 말하면, 용어 "알데히드 태그"는 "전환된" 설파타제 모티프(즉, 시스테인 또는 세린 잔기가 FGE의 작용에 의해 fGly로 전환된 설파타제 모티프, 예를 들어 L(fGly)TPSR)를 포함하는 아미노산 서열을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 전환된 설파타제 모티프는 "전환되지 않은" 설파타제 모티프(즉, 시스테인 또는 세린 잔기가 FGE에 의해 fGly로 전환되지 않았지만 전환될 수 있는 설파타제 모티프, 예를 들어, 서열이 L(C/S)TPSR인 변환되지 않은 설파타제 모티프)를 포함하는 아미노산 서열로부터 생성될 수 있다. 설파타제 모티프에 대한 포르밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용의 맥락에서 사용된 "전환"은 설파타제 모티프의 시스테인 또는 세린 잔기가 포르밀글리신(fGly) 잔기로(예를 들어 Cys에서 fGly로, 또는 Ser에서 fGly로)의 생화학적 변형을 지칭한다. 알데히드 태그의 추가 양태 및 부위-특이적 단백질 변형에서의 그의 용도는 미국 특허 번호 7,985,783 및 미국 특허 번호 8,729,232에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다.
일부 경우에, 접합체를 생성하기 위해, fGly 잔기를 함유하는 폴리펩티드는 fGly와 화합물 (예를 들어, 상기 기재된 바와 같이 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로- 피리디닐 커플링 모이어티를 함유하는 화합물)과의 반응에 의해 관심 모이어티에 접합될 수 있다. 예를 들어, fGly 함유 폴리펩티드는 약물과 폴리펩티드의 접합을 제공하기에 적합한 조건 하에서 반응성 파트너 함유 약물과 접촉될 수 있다. 일부 경우에, 반응성 파트너 함유 약물은 위에서 설명한 바와 같이 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, 약물 또는 활성제는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 일부 경우에, 약물 또는 활성제는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티에 부착되며, 예컨대 본원에서 자세히 설명된 바와 같이 링커를 통해 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티에 공유적으로 부착된다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 접합체는 관심 모이어티 (예를 들어, 약물 또는 활성제)에 부착된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 갖는 폴리펩티드 (예를 들어, 결합제 또는 항체)를 포함한다. 접합체를 제조하기 위해, 폴리펩티드의 아미노산 잔기를 변형시킨 다음, 위에서 설명한 바와 같이 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 함유하는 약물 또는 활성제에 커플링시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드의 아미노산 잔기는 상기 기재된 바와 같이 fGly 잔기로 전환되는 시스테인 또는 세린 잔기이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 잔기 (예를 들어, fGly 잔기)는 상기 기재된 바와 같은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 함유하는 약물 또는 활성제에 접합되어 약물 또는 활성제가 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 머이어티를 통해 폴리펩티드에 접합되는 경우 본 개시내용의 접합체를 제공한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 fGly'는 관심 모이어티 (예를 들어, 약물 또는 활성제)에 커플링된 폴리펩티드 (예를 들어, 결합제 또는 항체)의 아미노산 잔기를 지칭한다.
특정 실시양태에서, 접합체는 본원에 기재된 바와 같은 링커에 부착된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 갖는 폴리펩티드 (예를 들어, 결합제 또는 항체)를 포함하며, 이는 결국 약물 또는 활성제에 부착된다. 예를 들어, 접합체는 약물 또는 활성제에 접합된 적어도 하나의 아미노산 잔기 (fGly')를 갖는 폴리펩티드 (예를 들어, 결합제 또는 항체)를 포함할 수 있다.
화학식 (I)의 접합체
본 개시내용의 양태는 화학식 (I)의 접합체를 포함하고:
여기서
Z는 CR4 또는 N이고;
R1은 수소 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성하고;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
L은 링커이고;
W1은 약물 (또는 활성제)이고;
W2는 본원에 기재된 바와 같은 결합제이다.
특정 실시양태에서, Z는 CR4 또는 N이다. 특정 실시양태에서, Z는 CR4이다. 특정 실시양태에서, Z는 N이다.
특정 실시양태에서, R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, R1은 수소이다. 특정 실시양태에서 R1은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R1은 메틸이다. 특정 실시양태에서, R1은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R1은 알키닐 또는 치환된 알키닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R1은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R1은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R1은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R1은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다.
특정 실시양태에서, R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R2는 수소이다. 특정 실시양태에서, R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R2는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R2는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R2는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R2는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R2는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R2는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R2는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R2는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R2는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R2는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R2는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R3은 수소이다. 특정 실시양태에서, R3은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R3은 메틸이다. 특정 실시양태에서, R3은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R3은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R3은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R3은 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R3은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R3은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R3은 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R3은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R3은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R3은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R3은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R2 및 R3은 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R2 및 R3은 환형으로 연결되어 5원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R2 및 R3은 환형으로 연결되어 6원 헤테로시클릴을 형성한다.
특정 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다.
각각의 R4에 대한 다양한 가능성은 다음과 같이 더 자세히 설명된다. 특정 실시양태에서, R4는 수소이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R4는 수소이다. 특정 실시양태에서, R4는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시양태에서, R4는 F이다. 특정 실시양태에서, R4는 Cl이다. 특정 실시양태에서, R4는 Br이다. 특정 실시양태에서, R4는 I이다. 특정 실시양태에서, R4는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R4는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R4는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R4는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R4는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R4는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R4는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R4는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R4는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R4는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R4는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R4는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R4는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴 (예를 들어, 페닐 또는 치환된 페닐)이다. 특정 실시양태에서, R4는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R4는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R4는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, W1은 약물이다. 약물의 추가 설명을 본원의 개시내용에서 확인한다.
특정 실시양태에서, W2는 본원에 기재된 바와 같은 결합제이다. 특정 실시양태에서, W2는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 fGly' 잔기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 결합제는 본원에 기재된 바와 같이 fGly' 잔기를 통해 접합체의 나머지 부분에 부착된다. 대상 접합체에서 사용되는 결합제에 대한 추가 설명은 본원의 개시내용에서 확인한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 링커 L을 포함한다. 링커는 접합 모이어티 (예를 들어, 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티)를 하나 이상의 관심 모이어티에 결합시키는 데 사용될 수 있다. 링커는 임의의 편리한 위치에서 접합 모이어티 (예를 들어, 본원에 기술된 바와 같음)에 결합 (예를 들어, 공유 결합)될 수 있다. 예를 들어, 링커는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 약물에 부착할 수 있다. 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 사용하여 링커 (및 그에 따른 약물)를 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 결합제와 같은 폴리펩티드에 접합시킬 수 있다. 예를 들어, 접합 모이어티는 링커 (및 그에 따른 약물)를 본원에 기재된 항체 또는 결합제의 fGly 잔기와 같은 폴리펩티드의 변형된 아미노산 잔기에 접합시키는 데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, L은 접합 모이어티를 W1에 부착시키고, 이에 따라 접합 모이어티는 링커 L을 통해 W1에 간접적으로 결합된다. 상기 기재한 바와 같이, W1은 약물이고, 따라서 L이 접합 모이어티를 약물에 부착하며, 예를 들어, 접합 모이어티는 링커 L을 통해 약물에 간접적으로 결합된다.
임의의 편리한 링커가 대상 접합체에 활용될 수 있다. 특정 실시양태에서, L은 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 아미노, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된 기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알킬 또는 치환된 알킬기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알케닐 또는 치환된 알케닐기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알키닐 또는 치환된 알키닐기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알콕시 또는 치환된 알콕시기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 아미노 또는 치환된 아미노기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 카르복실 또는 카르복실 에스테르기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 아실 아미노기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 아릴 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴기를 포함한다.
특정 실시양태에서, L은 중합체를 포함한다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 글리콜 단독중합체, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예를 들어, 단독중합체 및 공중합체가 비치환되거나 알킬기를 갖는 하나의 말단에서 치환되는 경우), 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리비닐피롤리돈, 이들의 조합 등을 포함하는 폴리알킬렌 글리콜 및 이의 유도체를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 실시양태에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 아래에 더 자세히 설명된 접합체 및 화합물에 나타낸 바와 같이 다른 링커도 가능하다.
일부 실시양태에서, L은 다음 일반식으로 기재되고:
-(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-(L6)f-,
여기서 L1, L2, L3, L4, L5 및 L6은 각각 독립적으로 링커 하위단위이고, a, b, c, d, e, 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c, d, e, 및 f의 합은 1 내지 6이다.
특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 2이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 3이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 4이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 5이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 6이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f는 각각 1이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d 및 e는 각각 1이고 f는 0이다. 특정 실시양태에서, a, b, c 및 d는 각각 1이고 e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a, b 및 c는 각각 1이고 d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a 및 b는 각각 1이고 c, d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a는 1이고 b, c, d, e와 f는 각각 0이다.
특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (I)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위단위 L2는 존재하는 경우 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위단위 L3은 존재하는 경우 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위단위 L4는 존재하는 경우 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위단위 L5는 존재하는 경우 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위단위 L6은 존재하는 경우 약물에 부착된다.
임의의 편리한 링커 하위단위가 링커 L에 활용될 수 있다. 관심 링커 하위단위에는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 및 폴리아크릴레이트와 같은 중합체 단위, 아미노산 잔기(들), 탄수화물 기반 중합체 또는 탄수화물 잔기 및 이의 유도체, 폴리뉴클레오티드, 알킬기, 아릴기, 헤테로시클릭기, 이들의 조합, 및 이들의 치환된 버전이 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, L1, L2, L3, L4, L5 및 L6 (존재하는 경우) 각각은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 및 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함한다.
일부 실시양태에서, L1 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L2 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L3 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L4 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L5 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L6 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-(L6)f-를 포함하는 링커이고, 여기서:
-(L1)a-은 -(T1-V1)a-이고;
-(L2)b-는 -(T2-V2)b-이고;
-(L3)c-는 -(T3-V3)c-이고;
-(L4)d-는 -(T4-V4)d-이고;
-(L5)e-는 -(T5-V5)e-이고;
-(L6)f-는 -(T6-V6)f-이며,
여기서 T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 존재하는 경우 테더기이고;
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 존재하는 경우 공유 결합 또는 연결 작용기이고;
a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c, d, e 및 f의 합은 1 내지 6이다.
상기 기재된 바와 같이, 특정 실시양태에서, L1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (I)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (I)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, V1은 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L2는 존재하는 경우 약물에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T2는 존재하는 경우 약물에 부착되거나, V2는 존재하는 경우 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L3은 존재하는 경우 약물에 부착된다. 따라서, 특정 실시양태에서, T3은 존재하는 경우 약물에 부착되거나, V3은 존재하는 경우 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L4는 존재하는 경우 약물에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T4는 존재하는 경우 약물에 부착되거나, V4는 존재하는 경우 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L5는 존재하는 경우 약물에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T5는 존재하는 경우 약물에 부착되거나, V5는 존재하는 경우 약물에 부착된다. 특정 실시양태에서, L6은 존재하는 경우 약물에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T6은 존재하는 경우 약물에 부착되거나, V6은 존재하는 경우 약물에 부착된다.
테더기 T1, T2, T3, T4, T5 및 T6과 관련하여 임의의 편리한 테더기가 대상 링커에 활용될 수 있다. 일부 실시양태에서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카르보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈기, 히드라진, 이황화물, 및 에스테르로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함하고, 여기서 각각의 w는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이고, 각각의 p는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 m은 1 내지 12의 정수이다.
특정 실시양태에서, 테터기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 (C1-C12)알킬 또는 치환된 (C1-C12)알킬을 포함한다. 특정 실시양태에서, (C1-C12)알킬은 1 내지 12개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8개의 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 알킬기이다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C12 알킬, 또는 C1-C10 알킬, 또는 C1-C6 알킬, 또는 C1-C3 알킬일 수 있다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬이다. 예를 들어, (C1-C12)알킬은 알킬렌 또는 치환된 알킬렌, 예컨대 C1-C12 알킬렌, 또는 C1-C10 알킬렌, 또는 C1-C6 알킬렌, 또는 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬렌 (예를 들어, CH2CH2)이다.
특정 실시양태에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 1 내지 12개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8개의 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 치환된 알킬 기이다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C1-C12 알킬, 또는 치환된 C1-C10 알킬, 또는 치환된 C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1-C3 알킬과 같은 치환된 알킬일 수 있다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬이다. 예를 들어, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C1-C12 알킬렌, 또는 치환된 C1-C10 알킬렌, 또는 치환된 C1-C6 알킬렌, 또는 치환된 C1-C3 알킬렌과 같은 치환된 알킬렌일 수 있다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬렌이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 또는 치환된 헤테로시클릴을 포하한다. 일부 경우에, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6)는 아릴 또는 치환된 아릴을 포함한다. 예를 들어, 아릴은 페닐일 수 있다. 일부 경우에 치환된 아릴은 치환된 페닐일 수 있다. 치환된 페닐은 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다. 일부 경우에, 치환된 아릴은 치환된 페닐이고, 여기서 치환기는 본원에 기재된 바와 같은 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체와 같은 효소적으로 절단 가능한 모이어티)를 포함한다.
일부 경우에, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴을 포함한다. 일부 경우에, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6)는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬을 포함한다. 일부 경우에, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6)는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴을 포함한다. 일부 경우에 치환된 헤테로아릴, 치환된 시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클릴 상의 치환기는 본원에 기재된 바와 같은 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체와 같은 효소적으로 절단 가능한 모이어티)를 포함한다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 에틸렌 디아민 (EDA) 모이어티, 예를 들어 테더를 함유하는 EDA를 포함한다. 특정 실시양태에서, (EDA)w는 하나 이상의 EDA 모이어티를 포함하며, 여기서 w는 1 내지 50, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6 (예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)의 정수이다. 연결된 에틸렌 디아민 (EDA) 모이어티는 임의로 하나 이상의 편리한 위치에서 임의의 편리한 치환기, 예를 들어 알킬, 치환된 알킬, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, EDA 모이어티는 하기 구조로 기재되고:
여기서 y는 1 내지 6의 정수이거나 0 또는 1이며, 각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, y는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 특정 실시양태에서, y는 1이고 r은 0이다. 특정 실시양태에서, y는 1이고 r은 1이다. 특정 실시양태에서, y는 2이고 r은 0이다. 특정 실시양태에서, y는 2이고 r은 1이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, EDA의 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어, 예를 들어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있다. 특정 실시양태에서, y는 1이고, 2개의 인접한 R12 기는 알킬기이며 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성한다. 특정 실시양태에서, y는 1이고 인접한 R12 기는 수소, 알킬 (예를 들어, 메틸) 및 치환된 알킬 (예를 들어, 저급 알킬-OH, 예컨대 에틸-OH 또는 프로필-OH)로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 4-아미노-피페리딘 (4AP) 모이어티 (본원에서는 피페리딘-4-아미노, P4A라고도 지칭함)를 포함한다. 4AP 모이어티는 하나 이상의 편리한 위치에서 임의의 편리한 치환기, 예를 들어 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 임의로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 4AP 모이어티는 하기 구조로 기재되고:
여기서 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜), 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R12는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티이다. 특정 실시양태에서, R12는 카르복시 변형된 폴리에틸렌 글리콜이다.
특정 실시양태에서, R12는 화학식: (PEG)k로 기재되는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티를 포함하며, 이는 하기 구조로 표현될 수 있고:
여기서 k는 1 내지 20의 정수, 예컨대 1 내지 18, 또는 1 내지 16, 또는 1 내지 14, 또는 1 내지 12, 또는 1 내지 10, 또는 1 내지 8, 또는 1 내지 6, 또는 1 내지 4, 또는 1 또는 2, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 경우에, k는 2이다. 특정 실시양태에서, R17은 OH, COOH, 또는 COOR로부터 선택되고, 여기서 R은 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R17은 COOH이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 (PEG)n을 포함하며, 여기서 (PEG)n은 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜 연결 단위이다. 특정 실시양태에서, (PEG)n은 하기 구조로 기재되고:
여기서 n은 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12, 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 경우에, n은 2이다. 일부 경우에, n은 3이다. 일부 경우에, n은 6이다. 일부 경우에, n은 12이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 (AA)p를 포함하며, 여기서 AA는 아미노산 잔기이다. 임의의 편리한 아미노산이 사용될 수 있다. 관심 아미노산에는 L- 및 D-아미노산, 20가지 1차 알파-아미노산 및 베타-알라닌과 같은 자연 발생 아미노산, 비-자연 발생 아미노산 (예를 들어, 아미노산 유사체), 예컨대 비-자연 발생 알파-아미노산 또는 비-자연 발생 베타-아미노산 등이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, p는 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 특정 실시양태에서, p는 1이다. 특정 실시양태에서, p는 2이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 아미노산 유사체를 포함한다. 아미노산 유사체에는 자연 발생 단백질 (예를 들어 Ala 또는 A, Cys 또는 C, Asp 또는 D, Glu 또는 E, Phe 또는 F, Gly 또는 G, His 또는 H, Ile 또는 I, Lys 또는 K, Leu 또는 L, Met 또는 M, Asn 또는 N, Pro 또는 P, Gln 또는 Q, Arg 또는 R, Ser 또는 S, Thr 또는 T, Val 또는 V, Trp 또는 W, Tyr 또는 Y)에서 흔히 발견되는 하나 이상의 아미노산과 구조 및/또는 전체적인 모양이 유사한 화합물이 포함된다. 아미노산 유사체에는 변형된 측쇄 또는 백본이 있는 천연 아미노산도 포함된다. 아미노산 유사체에는 자연 발생 D-형태와 동일한 입체화학을 갖는 아미노산 유사체뿐만 아니라 L-형태의 아미노산 유사체도 포함된다. 일부 경우에, 아미노산 유사체는 하나 이상의 천연 아미노산의 백본 구조 및/또는 측쇄 구조를 공유하며, 차이점은 분자 내 하나 이상의 변형기이다. 이러한 변형에는 관련 원자 (예컨대, S)에 대한 원자(예컨대, N)의 치환, 기(예컨대, 메틸 또는 히드록실 등) 또는 원자(예컨대, Cl 또는 Br 등)의 추가, 기의 삭제, 공유 결합의 치환 (이중 결합에 대한 단일 결합 등) 또는 이들의 조합이 포함될 수 있지만 이에 국한되지는 않는다. 예를 들어, 아미노산 유사체에는 α-히드록시산, 및 α-아미노산 등이 포함될 수 있다. 아미노산 유사체의 예에는 술포알라닌 등이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 식 -(CR13OH)m-로 기재되는 모이어티를 포함하며, 여기서 m은 0이거나 n은 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12이다. 특정 실시양태에서, m은 1이다. 특정 실시양태에서, m은 2이다. 특정 실시양태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R13은 수소이다. 특정 실시양태에서, R13은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R13은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R13은 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R13은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R13은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R13은 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R13은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R13은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R13은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. 이들 실시양태에서, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴은 R13에 대해 상기 기재된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및/또는 T6)는 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카르보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 또는 파라-히드록시-페닐 (PHP)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 테더기는 하기 구조로 기재되는 MABO기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 하기 구조로 기재되는 MABC기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 하기 구조로 기재되는 PABO기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 하기 구조로 기재되는 PABC기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 하기 구조로 기재되는 PAB기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 하기 구조로 기재되는 PABA기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 하기 구조로 기재되는 PAP기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 하기 구조로 기재되는 PHP기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 각각의 R14는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, R14는 수소이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R14는 수소이다. 특정 실시양태에서, R14는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R14는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R14는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R14는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R14는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R14는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R14는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R14는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R14는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R14는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R14는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R14는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R14는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R14는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R14는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
위에 표시된 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조의 일부 실시양태에서, 페닐 고리는 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되는 하나 이상의 추가기로 치환될 수 있다.
링커 L의 특정 실시양태에서, 하나 이상의 테더기 T1, T2, T3, T4, T5 또는 T6은 각각 임의로 글리코시드 또는 글리코시드 유도체로 치환된다. 특정 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 위에 표시된 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 위에 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조의 일부 실시양태에서, 페닐 고리는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가기로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 하기 구조들로부터 선택될 수 있다:
연결 작용기 V1, V2, V3, V4, V5 및 V6과 관련하여 임의의 편리한 연결 작용기가 링커 L에서 활용될 수 있다. 관심 연결 작용기는 아미노, 카르보닐, 아미도, 옥시카르보닐, 카르복시, 술포닐, 술폭시드, 술포닐아미노, 아미노술포닐, 티오, 옥시, 포스포, 포스포라미데이트, 티오포스포라이데이트 등을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이다. 특정 실시양태에서, q는 1 내지 6의 정수(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)이다. 특정 실시양태에서, q는 1이다. 특정 실시양태에서, q는 2이다. 특정 실시양태에서, q는 3이다. 특정 실시양태에서, q는 4이다. 특정 실시양태에서, q는 5이다. 특정 실시양태에서, q는 6이다.
특정 실시양태에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, R15는 수소이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R15는 수소이다. 특정 실시양태에서, R15는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R15는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R15는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R15는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R15는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R15는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R15는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R15는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R15는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다. 이러한 실시양태에서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴은 R15에 대해 위에서 설명한 것과 같다.
특정 실시양태에서, 테더기는 아세탈기, 디설파이드, 히드라진 또는 에스테르를 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 아세탈기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 히드라진을 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 디설파이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 에스테르를 포함한다.
상기 기재된 바와 같이, 일부 실시양태에서, L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-를 포함하는 링커이고, 여기서 a, b, c, d, e, 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1 이고, 여기서 a, b, c, d, e 및 f의 합은 1 내지 6이다.
일부 실시양태에서, 링커 L에서:
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클, 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈기, 디설파이드, 히드라진, 및 에스테르로부터 선택되고;
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
여기서:
(PEG)n은 이고, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 하기 구조르 갖는 에틸렌 디아민 모이어티이고:
, 여기서 y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고,
AA는 아미노산 잔기이고, 여기서 p는 1 내지 20의 정수이고;
각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 2개의 인접한 임의의 R12기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6 및 V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 하기로부터 선택되고:
여기서:
T1은 (C1-C12)알킬이고 V1은is -CO-이고;
T2는 아미노산 유사체이고 V2는 -NH-이고;
T3은 (PEG)n이고 V3은 -CO-이고;
T4는 AA이고 V4는 존재하지 않고;
T5는 PABC이고 V5는 존재하지 않고;
f는 0이거나; 또는
여기서:
T1은 (C1-C12)알킬이고 V1은 -CO이고-;
T2는 4AP이고 V2는 -CO-이고;
T3은 (C1-C12)알킬이고 V3은 -CO-이고;
d, e 및 f는 각각 0이다.
예를 들어, 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 접합체는 하기로부터 선택되는 구조를 갖는다:
특정 실시양태에서, 링커 구조의 왼쪽은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착되고, 링커 구조의 오른쪽은, 예를 들어 상기 표시된 바와 같이 약물 W1에 부착된다.
특정 실시양태에서, 접합체는 항체와 약물이 상기 기재된 바와 같은 링커 (예를 들어, L)에 의해 함께 연결된 항체-약물 접합체이다. 일부 경우에, 링커는 절단 가능한 링커이다. 절단 가능한 링커는 하나 이상의 절단 가능한 모이어티를 포함하는 링커이며, 여기서 절단 가능한 모이어티는 특정 조건 하에서 해리될 수 있는 하나 이상의 결합을 포함하여 이에 따라 절단 가능한 링커를 2개 이상의 분리 가능한 부분으로 분리한다. 예를 들어, 절단 가능한 모이어티는 특정 조건 하에서 해리되거나 나뉘어져 절단 가능한 링커를 2개 이상의 부분으로 분리할 수 있는 하나 이상의 공유 결합을 포함할 수 있다. 이와 같이 절단 가능한 링커는 항체-약물 접합체에 포함될 수 있으며, 따라서 적절한 조건 하에서 절단 가능한 링커는 절단되어 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 분리하거나 방출한다.
일부 경우에, 절단 가능한 링커는 2개의 절단 가능한 모이어티, 예컨대 제1 절단 가능한 모이어티 및 제2 절단 가능한 모이어티를 포함한다. 절단 가능한 모이어티는 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 분리하거나 방출하기 위해 두 절단 가능한 모이어티의 절단이 필요하도록 구성될 수 있다. 예를 들어, 절단 가능한 링커의 절단은 두 개의 절단 가능한 모이어티 중 하나를 처음에 절단한 다음 두 개의 절단 가능한 모이어티 중 다른 하나를 절단함으로써 달성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 절단 가능한 링커는 제1 절단 가능한 모이어티 및 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 방해하는 제2 절단 가능한 모이어티를 포함한다. "절단을 방해한다"는 것은 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재가 제1 절단 가능한 모이어티의 절단 가능성을 감소시키거나 실질적으로 억제하여 이에 따라 절단 가능한 링커의 양을 실질적으로 감소시키거나 절단을 방지함을 의미한다. 예를 들어, 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 방해할 수 있다. 제2 절단 가능한 모이어티의 존재에 의한 제1 절단 가능한 모이어티의 절단 방해는 결과적으로 항체로부터 약물의 양을 실질적으로 감소시키거나 방출하는 것을 방지한다. 예를 들어, 항체-약물 접합체가 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위 또는 그 근처에 있을 때까지 항체로부터 약물의 조기 방출이 실질적으로 감소되거나 예방될 수 있다.
일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 방해하므로, 절단 가능한 링커의 절단은 처음에 제2 절단 가능한 모이어티를 절단한 다음 제1 절단 가능한 모이어티를 절단함으로써 달성될 수 있다. 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 제1 절단 가능한 모이어티의 절단에 대한 방해를 감소 또는 제거하여 이에 따라 제1 절단 가능한 모이어티가 절단되도록 할 수 있다. 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 절단 가능한 링커가 상기 기재된 바와 같이 2개 이상의 부분으로 해리되거나 분리되어 항체-약물 접합체로부터 약물을 방출하게 할 수 있다. 일부 경우에, 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재 시 실질적으로 발생하지 않는다. 실질적으로 이는 제1 절단 가능한 모이어티의 약 10% 이하의 절단이 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재 하에 발생한다는 것을 의미하며, 예컨대 약 9% 이하, 또는 약 8% 이하, 또는 약 7% 이하, 또는 또는 약 6% 이하, 또는 약 5% 이하, 또는 약 4% 이하, 또는 약 3% 이하, 또는 약 2% 이하, 또는 약 1% 이하, 또는 약 0.5% 이하, 또는 약 0.1% 이하의 제1 절단 가능한 부분의 절단은 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재 하에서 발생한다.
다른 방식으로 말하면, 제2 절단 가능한 모이어티는 제1 절단 가능한 모이어티를 절단으로부터 보호할 수 있다. 예를 들어, 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 제1 절단 가능한 모이어티를 절단으로부터 보호할 수 있으며, 이에 따라 항체-약물 접합체가 약물에 대해 원하는 표적 작용 부위 또는 근처에 있을 때까지 항체로부터 약물의 조기 방출을 실질적으로 감소시키거나 방지할 수 있다. 이와 같이, 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 제1 절단 가능한 모이어티를 노출시켜 (예를 들어, 제1 절단 가능한 모이어티를 탈보호함), 이에 따라 제1 절단 가능한 모이어티가 절단되도록 하고, 이는 절단 가능한 링커의 절단을 초래하고, 이는 차례로 분리되거나 위에서 설명한 대로 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 방출한다. 특정 예에서, 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 제1 절단 가능한 모이어티를 후속 절단에 노출시키지만, 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 그 자체로 절단 가능한 링커의 절단을 초래하지는 않는다 (즉, 절단 가능한 링커를 절단하기 위해 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 여전히 필요하다).
절단 가능한 링커에 포함된 절단 가능한 모이어티는 각각 효소적 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 예를 들어, 제1 절단 가능한 모이어티는 제1 효소적 절단 가능한 모이어티일 수 있고, 제2 절단 가능한 모이어티는 제2 효소적 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 효소적으로 절단 가능한 모이어티는 효소의 효소 작용을 통해 위에서 설명한 대로 두 개 이상의 부분으로 분리될 수 있는 절단 가능한 모이어티이다. 효소적으로 절단 가능한 모이어티는 펩티드, 글리코시드 등과 같으나 이에 제한되지 않는 효소의 효소 작용을 통해 절단될 수 있는 임의의 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 일부 경우에, 효소적 절단 가능한 모이어티를 절단하는 효소는 원하는 표적 작용 부위, 예컨대 항체-약물 접합체로부터 방출될 약물의 원하는 표적 작용 부위에 존재한다. 일부 경우에, 효소적 절단 가능한 모이어티를 절단하는 효소는 전혈, 혈장 또는 혈청과 같은 다른 영역에서는 상당한 양으로 존재하지는 않는다. 이와 같이, 효소적 절단 가능한 모이어티의 절단은 원하는 작용 부위에서 실질적인 절단이 일어나는 반면, 다른 영역에서는 또는 항체-약물 접합체가 원하는 작용 부위에 도달하기 전에는 절단이 유의하게 발생하지 않도록 제어될 수 있다.
예를 들어, 본원에 기술된 바와 같이, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 암 치료, 예컨대 암 세포가 존재하는 원하는 작용 부위에 암 치료 약물을 전달하는 데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 프로테아제 효소 카텝신 B와 같은 효소가 암세포에서 과발현되는 암의 바이오마커가 될 수 있다. 암에서 특정 효소의 과발현 및 그에 따른 국소화는 원하는 작용 부위 (즉, 암 부위 (및 과발현된 효소))에서 약물을 특이적으로 방출하기 위해 본 개시내용의 항체-약물 접합체의 절단 가능한 링커에 포함된 효소적 절단 가능한 모이어티의 맥락에서 사용될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 효소적 절단 가능한 모이어티는 암세포에서 과발현되는 효소에 의해 절단될 수 있는 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 펩티드)이다. 예를 들어, 효소는 프로테아제 효소 카텝신 B일 수 있다. 이와 같이, 일부 경우에, 효소적 절단 가능한 모이어티는 카텝신 B와 같은 프로테아제 효소에 의해 절단될 수 있는 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 펩티드)이다.
특정 실시양태에서, 효소적 절단 가능한 모이어티는 펩티드이다. 펩티드는 절단 가능한 링커에 사용하기에 적합하고 효소의 효소 작용을 통해 절단될 수 있는 임의의 펩티드일 수 있다. 효소적으로 절단 가능한 모이어티로 사용될 수 있는 펩티드의 비제한적인 예에는, 예를 들어 Val-Ala, Phe-Lys 등이 포함된다. 예를 들어, 상기 기재된 제1 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 제2 절단 가능한 모이어티에 의해 조기 절단으로부터 보호되는 절단 가능한 모이어티)는 펩티드를 포함할 수 있다. 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 프로테아제 효소 (예를 들어, 카텝신 B)에 의한 절단으로부터 제1 절단 가능한 모이어티 (펩티드)를 보호할 수 있으며, 이에 따라 항체-약물 접합체가 약물에 대한 원하는 작용 표적 부위 또는 그 근처에 있을 때까지 항체로부터 약물의 조기 방출을 실질적으로 감소시키거나 방지할 수 있다. 일부 경우에, 제1 절단 가능한 모이어티를 포함하는 펩티드의 아미노산 잔기 중 하나는 치환기에 연결되거나 이를 포함하며, 여기서 치환기는 제2 절단 가능한 모이어티를 포함한다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 글리코시드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 효소적으로 절단 가능한 모이어티는 글리코시드 (또는 글리오실)와 같은 당 모이어티이다. 일부 경우에, 글리코시드는 글리코시드를 포함하지 않는 절단 가능한 링커와 비교하여 절단 가능한 링커의 친수성 증가를 촉진할 수 있다. 글리코시드는 절단 가능한 링커에 사용하기에 적합하고 효소의 효소 작용을 통해 절단될 수 있는 임의의 글리코시드 또는 글리코시드 유도체일 수 있다. 예를 들어, 제2 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 조기 절단으로부터 제1 절단 가능한 모이어티를 보호하는 절단 가능한 모이어티)는 글리코시드일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 제1 절단 가능한 모이어티는 펩티드를 포함하고, 제2 절단 가능한 모이어티는 글리코시드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 절단 가능한 모이어티는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된 글리코시드 또는 글리코시드 유도체이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 글루쿠로니드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 갈락토시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 글루코시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 만노시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 푸코시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 O-GlcNAc이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 O-GalNAc이다.
글리코시드는 글리코시드 결합을 통해 절단 가능한 링커에 부착 (공유 결합)될 수 있다. 글리코시드 결합은 O-글리코시드 결합 (O-글리코시드), N-글리코시드 결합 (글리코실아민), S-글리코시드 결합 (티오글리코시드), 또는 C-글리코시드 결합 (C-글리코시드 또는 C-글리코실)과 같지만 이들로 제한되지 않는 다양한 유형의 결합을 통해 글리코시드를 절단 가능한 링커에 연결할 수 있다. 일부 경우에, 글리코시드 결합은 O-글리코시드 결합 (O-글리코시드)이다. 일부 경우에, 글리코시드는 효소에 의해 (예를 들어, 글리코시드 결합의 효소 매개 가수분해를 통해) 부착된 절단 가능한 링커로부터 절단될 수 있다. 글리코시드는 글리코시드를 절단 가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 수행할 수 있는 임의의 편리한 효소에 의해 절단 가능한 링커로부터 제거되거나 절단될 수 있다. 글리코시드를 절단 가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 중재하는 데 사용될 수 있는 효소의 예는 글루쿠로니다제, 글리코시다제, 예컨대 갈락토시다제, 글루코시다제, 만노시다제, 푸코시다아제 등이다. 다른 적합한 효소가 또한 글루코시드를 절단 가능한 링커에 부착시키는 글리코시다제 결합의 절단 (가수분해)을 매개하는데 사용될 수도 있다. 일부 경우에, 글리코시드를 절단 가능한 링커에 부착하는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 매개하는 데 사용되는 효소는 항체-약물 접합체의 약물에 대한 원하는 작용 부위 또는 근처에서 발견된다. 예를 들어, 효소는 항체-약물 접합체의 약물에 대한 원하는 작용 부위 또는 근처의 세포에서 발견되는 리소좀 글리코시다제와 같은 리소좀 효소일 수 있다. 일부 경우에, 효소는 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 매개하는 효소가 발견되는 표적 부위 또는 근처에서 발견되는 효소이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 접합체는 하기로부터 선택되는 구조를 갖는다:
상세한 설명 및 상기 구조에서 제시된 화학적 실체, 약물, 링커 및 커플링 모이어티 중 임의의 것이 대상 접합체에 사용하기 위해 채택될 수 있다.
히드라지닐-인돌릴 및 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물 및 접합체 제조 방법과 관련된 추가 개시는 미국 특허 번호 9,310,374 및 미국 특허 번호 9,493,413에서 발견되며, 이들 각각의 개시 내용은 본원에 참고로 포함된다. 절단 가능한 링커와 관련된 추가 개시내용은 2021년 6월 24일에 출원된 미국 가특허 번호 63/214,525에서 발견되며, 이의 개시내용은 참고로 본원에 포함된다.
화학식 (I)의 특정 실시양태에서, 접합체는 화학식 (Ia)의 접합체이고:
여기서
Z는 CR4 또는 N이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성하고;
각각의 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-를 포함하는 링커이고, 여기서 a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c 및 d의 합은 1 내지 4이고;
T1, T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노 (4AP), 아세탈기, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 선택되고, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기이고, 여기서 w는 1 내지 20의 정수, n은 1 내지 30의 정수, p는 1 내지 20의 정수, 및 h는 1 내지 12의 정수이고;
V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
각각의 R13은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택되고;
각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
W1은 약물 (또는 활성제)이고;
W2는 본원에 기재된 바와 같은 결합제이다.
특정 실시양태에서, Z는 CR4 또는 N이다. 특정 실시양태에서 Z는 CR4이다. 특정 실시양태에서, Z는 N이다.
특정 실시양태에서, R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R1은 수소이다. 특정 실시양태에서, R1은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R1은 메틸이다. 특정 실시양태에서, R1은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R1은 알키닐 또는 치환된 알키닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R1은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R1은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R1은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R1은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다.
특정 실시양태에서, R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R2는 수소이다. 특정 실시양태에서, R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R2는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R2는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R2는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R2는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R2는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R2는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R2는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R2는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R2는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R2는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R2는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R3은 수소이다. 특정 실시양태에서, R3은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R3은 메틸이다. 특정 실시양태에서, R3은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R3은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R3은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R3은 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R3은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R3은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R3은 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R3은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R3은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R3은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R3은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R2 및 R3은 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R2 및 R3은 환형으로 연결되어 5원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R2 및 R3은 환형으로 연결되어 6원 헤테로시클릴을 형성한다.
특정 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다.
각각의 R4에 대한 다양한 가능성은 다음과 같이 더 자세히 설명된다. 특정 실시양태에서, R4는 수소이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R4는 수소이다. 특정 실시양태에서, R4는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시양태에서, R4는 F이다. 특정 실시양태에서, R4는 Cl이다. 특정 실시양태에서, R4는 Br이다. 특정 실시양태에서, R4는 I이다. 특정 실시양태에서, R4는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R4는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R4는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R4는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R4는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R4는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R4는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R4는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R4는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R4는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R4는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R4는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R4는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴 (예를 들어, 페닐 또는 치환된 페닐)이다. 특정 실시양태에서, R4는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R4는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R4는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, W1은 약물 또는 활성제이다. 대상 접합체에 적합한 약물 및 활성제의 추가 설명을 본원의 개시내용에서 확인한다.
특정 실시양태에서, W2는 본원에 기재된 바와 같은 결합제이다. 특정 실시양태에서, W2는 항체이다. 특정 실시양태에서, W2는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 fGly' 잔기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 결합제는 본원에 기술된 바와 같이 fGly' 잔기를 통해 접합체의 나머지 부분에 부착된다. 대상 접합체에서 사용되는 결합제 및 항체에 대한 추가 설명은 본원의 개시내용에서 확인한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (Ia)의 화합물은 링커 L을 포함한다. 링커는 커플링 모이어티를 하나 이상의 관심 모이어티 및/또는 하나 이상의 폴리펩티드에 결합시키는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 커플링 모이어티를 폴리펩티드 또는 화학적 실체에 결합시킨다. 링커는 임의의 편리한 위치에서 커플링 모이어티 (예를 들어, 본원에 기술된 바와 같음)에 결합 (예를 들어, 공유 결합)될 수 있다. 예를 들어, 링커는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 약물 또는 활성제에 부착할 수 있다. 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티를 사용하여 링커 (및 그에 따른 약물 또는 활성제)를 결합제 또는 항체와 같은 폴리펩티드에 접합시킬 수 있다. 예를 들어, 커플링 모이어티는 링커 (및 그에 따른 약물 또는 활성제)를 결합제 또는 항체의 fGly 잔기와 같은 폴리펩티드의 아미노산 잔기에 접합시키는 데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, L은 커플링 모이어티를 W1에 부착시키고, 이에 따라 커플링 모이어티는 링커 L을 통해 W1에 간접적으로 결합된다. 상기 기재한 바와 같이, W1은 약물 또는 활성제이고, 따라서 L이 커플링 모이어티를 약물 또는 활성제에 부착하며, 예를 들어, 커플링 모이어티는 링커 L을 통해 약물 또는 활성제에 간접적으로 결합된다.
임의의 편리한 링커가 대상 접합체 및 화합물에 활용될 수 있다. 특정 실시양태에서, L은 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 아미노, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된 기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알킬 또는 치환된 알킬기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알케닐 또는 치환된 알케닐기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알키닐 또는 치환된 알키닐기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알콕시 또는 치환된 알콕시기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 아미노 또는 치환된 아미노기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 카르복실 또는 카르복실 에스테르기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 아실 아미노기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 아릴 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬기를 포함한다. 특정 실시양태에서, L은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴기를 포함한다.
특정 실시양태에서, L은 중합체를 포함한다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 글리콜 단독중합체, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예를 들어, 단독중합체 및 공중합체가 비치환되거나 알킬기를 갖는 하나의 말단에서 치환되는 경우), 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리비닐피롤리돈, 이들의 조합 등을 포함하는 폴리알킬렌 글리콜 및 이의 유도체를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 실시양태에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 아래에 더 자세히 설명된 접합체 및 화합물에 나타낸 바와 같이 다른 링커도 가능하다.
일부 실시양태에서, L은 일반식 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-로 설명되는 링커이고, 여기서 L1, L2, L3 및 L4는 각각 독립적으로 링커 단위이고, a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c 및 d의 합은 1 내지 4이다.
특정 실시양태에서, a, b, c 및 d의 합은 1이다. 특정 실시양태에서, a, b, c 및 d의 합은 2이다. 특정 실시양태에서, a, b, c 및 d의 합은 3이다. 특정 실시양태에서, a, b, c 및 d의 합은 4이다. 특정 실시양태에서, a, b, c 및 d는 각각 1이다. 특정 실시양태에서, a, b 및 c는 각각 1이고 d는 0이다. 특정 실시양태에서, a 및 b는 각각 1이고 c 및 d는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a는 1이고 b, c 및 d는 각각 0이다.
특정 실시양태에서, L1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (Ia)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, L2는 존재하는 경우 W1에 부착된다. 특정 실시양태에서, L3은 존재하는 경우 W1에 부착된다. 특정 실시양태에서, L4는 존재하는 경우 W1에 부착된다.
임의의 편리한 링커 단위가 대상 링커에 활용될 수 있다. 관심 링커 단위에는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 및 폴리아크릴레이트와 같은 중합체 단위, 아미노산 잔기(들), 탄수화물 기반 중합체 또는 탄수화물 잔기 및 이의 유도체, 폴리뉴클레오티드, 알킬기, 아릴기, 헤테로시클릭기, 이들의 조합, 및 이들의 치환된 버전이 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, L1, L2, L3 및 L4 (존재하는 경우) 각각은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 및 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함한다.
일부 실시양태에서, L1 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L2 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L3 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L4 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-를 포함하는 링커이고, 여기서:
-(L1)a-는 -(T1-V1)a-이고;
-(L2)b-는 -(T2-V2)b-이고;
-(L3)c-는 -(T3-V3)c-이고;
-(L4)d-는 -(T4-V4)d-이고,
여기서 T1, T2, T3 및 T4는 존재하는 경우 테더기이고;
V1, V2, V3 및 V4는 존재하는 경우 공유 결합 또는 연결 작용기이고;
a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c 및 d의 합은 1 내지 4이다.
상기 기재된 바와 같이, 특정 실시양태에서, L1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (Ia)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (Ia)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, V1은 W1 (약물 또는 활성제)에 부착된다. 특정 실시양태에서, L2는 존재하는 경우 W1에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T2는 존재하는 경우 W1에 부착되거나, V2는 존재하는 경우 W1에 부착된다. 특정 실시양태에서, L3은 존재하는 경우 W1에 부착된다. 따라서, 특정 실시양태에서, T3은 존재하는 경우 W1에 부착되거나, V3은 존재하는 경우 W1에 부착된다. 특정 실시양태에서, L4는 존재하는 경우 W1에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T4는 존재하는 경우 W1에 부착되거나, V4는 존재하는 경우 W1에 부착된다.
테더기 T1, T2, T3 및 T4와 관련하여 임의의 편리한 테더기가 대상 링커에 활용될 수 있다. 일부 실시양태에서, T1, T2, T3 및 T4는 각각 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노 (4AP), 아세탈기, 디설파이드, 히드라진 및 에스테르로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함하고, 여기서 w는 1 내지 20의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이고, p는 1 내지 20의 정수이고, h는 1 내지 12의 정수이다.
특정 실시양태에서, 테터기 (예를 들어, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 (C1-C12)알킬 또는 치환된 (C1-C12)알킬을 포함한다. 특정 실시양태에서, (C1-C12)알킬은 1 내지 12개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8개의 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 알킬기이다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C12 알킬, 또는 C1-C10 알킬, 또는 C1-C6 알킬, 또는 C1-C3 알킬일 수 있다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬이다. 예를 들어, (C1-C12)알킬은 알킬렌 또는 치환된 알킬렌, 예컨대 C1-C12 알킬렌, 또는 C1-C10 알킬렌, 또는 C1-C6 알킬렌, 또는 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬렌이다.
특정 실시양태에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 1 내지 12개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8개의 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 치환된 알킬 기이다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C1-C12 알킬, 또는 치환된 C1-C10 알킬, 또는 치환된 C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1-C3 알킬과 같은 치환된 알킬일 수 있다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬이다. 예를 들어, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C1-C12 알킬렌, 또는 치환된 C1-C10 알킬렌, 또는 치환된 C1-C6 알킬렌, 또는 치환된 C1-C3 알킬렌과 같은 치환된 알킬렌일 수 있다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬렌이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 에틸렌 디아민 (EDA) 모이어티, 예를 들어 테더를 함유하는 EDA를 포함한다. 특정 실시양태에서, (EDA)w는 하나 이상의 EDA 모이어티를 포함하며, 예컨대 여기서 w는 1 내지 50, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6 (예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)의 정수이다. 연결된 에틸렌 디아민 (EDA) 모이어티는 임의로 하나 이상의 편리한 위치에서 임의의 편리한 치환기, 예를 들어 알킬, 치환된 알킬, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, EDA 모이어티는 하기 구조로 기재되고:
여기서 y는 1 내지 6의 정수이고, r은 0 또는 1이며, 각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, y는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 특정 실시양태에서, y는 1이고 r은 0이다. 특정 실시양태에서, y는 1이고 r은 1이다. 특정 실시양태에서, y는 2이고 r은 0이다. 특정 실시양태에서, y는 2이고 r은 1이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, EDA의 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어, 예를 들어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있다. 특정 실시양태에서, y는 1이고, 2개의 인접한 R12 기는 알킬기이며 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성한다. 특정 실시양태에서, y는 1이고 인접한 R12 기는 수소, 알킬 (예를 들어, 메틸) 및 치환된 알킬 (예를 들어, 저급 알킬-OH, 예컨대 에틸-OH 또는 프로필-OH)로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 테더기는 4-아미노-피페리딘 (4AP) 모이어티 (본원에서는 피페리딘-4-아미노, P4A라고도 지칭함)를 포함한다. 4AP 모이어티는 하나 이상의 편리한 위치에서 임의의 편리한 치환기, 예를 들어 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 임의로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 4AP 모이어티는 하기 구조로 기재되고:
여기서 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜), 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R12는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티이다. 특정 실시양태에서, R12는 카르복시 변형된 폴리에틸렌 글리콜이다.
특정 실시양태에서, R12는 화학식: (PEG)k로 기재되는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티를 포함하며, 이는 하기 구조로 표현될 수 있고:
여기서 k는 1 내지 20의 정수, 예컨대 1 내지 18, 또는 1 내지 16, 또는 1 내지 14, 또는 1 내지 12, 또는 1 내지 10, 또는 1 내지 8, 또는 1 내지 6, 또는 1 내지 4, 또는 1 또는 2, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 경우에, k는 2이다. 특정 실시양태에서, R17은 OH, COOH, 또는 COOR로부터 선택되고, 여기서 R은 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R17은 COOH이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 (PEG)n을 포함하며, 여기서 (PEG)n은 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜 연결 단위이다. 특정 실시양태에서, (PEG)n은 하기 구조로 기재되고:
여기서 n은 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12, 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 경우에, n은 2이다. 일부 경우에, n은 3이다. 일부 경우에, n은 6이다. 일부 경우에, n은 12이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 (AA)p를 포함하며, 여기서 AA는 아미노산 잔기이다. 임의의 편리한 아미노산이 사용될 수 있다. 관심 아미노산에는 L- 및 D-아미노산, 20가지 1차 알파-아미노산 및 베타-알라닌과 같은 자연 발생 아미노산, 비-자연 발생 아미노산 (예를 들어, 아미노산 유사체), 예컨대 비-자연 발생 알파-아미노산 또는 비-자연 발생 베타-아미노산 등이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, p는 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 특정 실시양태에서, p는 1이다. 특정 실시양태에서, p는 2이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3 및/또는 T4)는 식 -(CR13OH)h-로 기재되는 모이어티를 포함하며, 여기서 h는 0이거나 n은 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12이다. 특정 실시양태에서, h는 1이다. 특정 실시양태에서, h는 2이다. 특정 실시양태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R13은 수소이다. 특정 실시양태에서, R13은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R13은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R13은 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R13은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R13은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R13은 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R13은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R13은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R13은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. 이들 실시양태에서, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴은 R13에 대해 상기 기재된 바와 같다.
연결 작용기 V1, V2, V3 및 V4와 관련하여 임의의 편리한 연결 작용기가 대상 링커에 활용될 수 있다. 관심 연결 작용기에는 아미노, 카르보닐, 아미도, 옥시카르보닐, 카르복시, 술포닐, 술폭시드, 술포닐아미노, 아미노술포닐, 티오, 옥시, 포스포, 포스포라미데이트, 티오포스포라이데이트 등이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이다. 특정 실시양태에서, q는 1 내지 6의 정수 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)이다. 특정 실시양태에서, q는 1이다. 특정 실시양태에서, q는 2이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
각각의 R15에 대한 다양한 가능성은 다음과 같이 더 자세히 설명된다. 특정 실시양태에서, R15는 수소이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R15는 수소이다. 특정 실시양태에서, R15는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R15는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R15는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R15는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R15는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R15는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R15는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R15는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R15는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다. 이러한 실시양태에서, 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴 치환기는 R15에 대해 위에서 설명한 것과 같다.
특정 실시양태에서, 테더기는 아세탈기, 디설파이드, 히드라진 또는 에스테르를 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 아세탈기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 디설파이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 히드라진을 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 에스테르를 포함한다.
상기 기재된 바와 같이, 일부 실시양태에서, L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-를 포함하는 링커이고, 여기서 a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1 이고, 여기서 a, b, c 및 d의 합은 1 내지 4이다.
일부 실시양태에서, 대상 링커에서:
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 아세탈기, 디설파이드, 히드라진, 및 에스테르로부터 선택되고;
V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
여기서:
(PEG)n는 이고, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 하기 구조를 갖는 에틸렌 디아민 모이어티이고:
여기서 y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고,
AA는 아미노산 잔기이고, 여기서 p는 1 내지 20의 정수이고;
각각의 R15 및 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성하고
R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, T1, T2, T3 및 T4 및 V1, V2, V3 및 V4는 다음 표, 예를 들어 다음 표 (표 A)의 한 행으로부터 선택된다:
표 A
특정 실시양태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-를 포함하는 링커이고, 여기서 -(L1)a-는 -(T1-V1)a-이고; -(L2)b-는 -(T2-V2)b-이고; -(L3)c-는 -(T3-V3)c-이고; -(L4)d-는 -(T4-V4)d-이다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 (C1-C12)알킬이고 V4는 -CO-이다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 존재하지 않고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -NR15-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -NR15-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR15-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않고는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (EDA)w이고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 존재하지 않고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (AA)p이고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -SO2-이고, T4는 (AA)p이고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 (PEG)n이고 V4는 -CO-이다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (CR13OH)h이고, V2는 -CO-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 치환된 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -SO2-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -CO-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 존재하지 않고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고 V4는 -NR15-이다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR15-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -P(O)OH-이고, T4는 (AA)p이고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 존재하지 않고, T3은 (AA)p이고, V3은 존재하지 않고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 (C1-C12)알킬이고 V4는 -CO(AA)p-이다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR15-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR15-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR15-이고, T3은 존재하지 않고, V3은 -CO-이고, T4는 (C1-C12)알킬이고 V4는 -NR15-이다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR15-이고, T4는 (PEG)n이고 V4는 -CO(AA)p-이다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다.
특정 실시양태에서, 링커는 다음 구조 중 하나로 기재된다:
위에 묘사된 링커 구조의 특정 실시양태에서, 각각의 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고; 각각의 y는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고; 각각의 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고; 각각의 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고; 각각의 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고; 각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이고; 각각의 R'는 독립적으로 H, 아미노산의 측쇄, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이다. 상기 묘사된 링커 구조의 특정 실시양태에서, 각각의 f는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각각의 y는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각각의 n은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각각의 h는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 상기 묘사된 링커 구조의 특정 실시양태에서, 각각의 R은 독립적으로 H, 메틸 또는 -(CH2)m-OH이고, 여기서 m은 1, 2, 3 또는 4 (예를 들어, 2)이다.
링커 L의 특정 실시양태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, T1은 에틸렌이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 에틸렌이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, T1은 에틸렌이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 에틸렌이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않으며, 여기서 T2 (예를 들어, 4AP)는 다음 구조를 갖고:
여기서
R12는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜)이다.
특정 실시양태에서, 링커 L은 다음 구조를 포함하고:
여기서
각각의 f는 독립적으로 1 내지 12의 정수이고;
n은 1 내지 30의 정수이다.
특정 실시양태에서, f는 1이다. 특정 실시양태에서, f는 2이다. 특정 실시양태에서, 한 f는 2이고 한 f는 1이다.
특정 실시양태에서, n은 1이다.
특정 실시양태에서, 상기 링커 구조의 좌측은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티에 부착되고, 상기 링커 구조의 우측은 약물 또는 활성제에 부착된다.
상기 구조에서 제시된 임의의 화학적 실체, 링커 및 커플링 모이어티는 대상 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 조정될 수 있다.
히드라지닐-인돌릴 및 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물 및 접합체를 생산하는 방법에 관한 추가 개시는 미국 특허 번호 9,310,374, 및 미국 특허 번호 9,493,413에서 찾을 수 있으며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
화학식 (II)의 접합체
본 개시내용의 양태는 화학식 (II)의 접합체를 포함하고:
여기서:
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 CR24, N 및 C-LB-W12로부터 선택되고, 여기서 적어도 하나의 Z1, Z2, Z3 및 Z4는 C-LB-W12이고;
R21은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R22 및 R23은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R22 및 R23은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성하고;
각각의 R24는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
LA는 제1 링커이고;
LB는 제2 링커이고;
W11은 제1 약물 (또는 활성제)이고;
W12는 제2 약물 (또는 활성제)이고;
W13은 본원에 기재된 바와 같은 결합제이다.
화학식 (II)의 접합체와 관련된 치환기는 아래에 더 자세히 설명되어 있다.
특정 실시양태에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 CR24, N 및 C-LB-W12로부터 선택되며, 여기서 적어도 하나의 Z1, Z2, Z3 및 Z4는 C-LB-W12이다. 특정 실시양태에서, Z1은 CR24이다. 특정 실시양태에서, Z1은 N이다. 특정 실시양태에서, Z1은 C-LB-W12이다. 특정 실시양태에서, Z2는 CR24이다. 특정 실시양태에서, Z2는 N이다. 특정 실시양태에서, Z2는 C-LB-W12이다. 특정 실시양태에서, Z3은 CR24이다. 특정 실시양태에서, Z3은 N이다. 특정 실시양태에서, Z3은 C-LB-W12이다. 특정 실시양태에서, Z4는 CR24이다. 특정 실시양태에서, Z4는 N이다. 특정 실시양태에서, Z4는 C-LB-W12이다.
다양한 Z1, Z2, Z3 및 Z4의 조합이 가능하다. 예를 들어, 일부 경우에, Z1은 C-LB-W12이고, Z2는 CR24이고, Z3은 CR24이고, Z4는 CR24이다. 일부 경우에, Z1은 CR24이고, Z2는 C-LB-W12이고, Z3은 CR24이고, Z4는 CR24이다. 일부 경우에, Z1은 CR24이고, Z2는 CR24이고, Z3은 C-LB-W12이고, Z4는 CR24이다. 일부 경우에, Z1은 CR24이고, Z2는 CR24이고, Z3은 CR24이고, Z4는 C-LB-W12이다.
특정 실시양태에서, R21은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R21은 수소이다. 특정 실시양태에서, R21은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R21은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R21은 알키닐 또는 치환된 알키닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R21은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R21은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R21은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R21은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R22 및 R23은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R22 및 R23은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다.
특정 실시양태에서, R22는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R22는 수소이다. 특정 실시양태에서, R22는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R22는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R22는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R22는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R22는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R22는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R22는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R22는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R22는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R22는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R22는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R22는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R22는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R22는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R22는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R22는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R23은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R23은 수소이다. 특정 실시양태에서, R23은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R23은 메틸이다. 특정 실시양태에서, R23은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R23은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R23은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R23은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R23은 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R23은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R23은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R23은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R23은 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R23은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R23은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R23은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R23은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R23은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R22 및 R23 둘 다는 메틸이다.
특정 실시양태에서, R22 및 R23은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R22 및 R23은 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R22 및 R23은 환형으로 연결되어 5원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R22 및 R23은 환형으로 연결되어 6원 헤테로시클릴을 형성한다.
특정 실시양태에서, 각각의 R24는 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다.
각각의 R24에 대한 다양한 가능성은 다음과 같이 더 자세히 설명된다. 특정 실시양태에서, R24는 수소이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R24는 수소이다. 특정 실시양태에서, R24는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시양태에서, R24는 F이다. 특정 실시양태에서, R24는 Cl이다. 특정 실시양태에서, R24는 Br이다. 특정 실시양태에서, R24는 I이다. 특정 실시양태에서, R24는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R24는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R24는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R24는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R24는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R24는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R24는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R24는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R24는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R24는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R24는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R24는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R24는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴 (예를 들어, 페닐 또는 치환된 페닐)이다. 특정 실시양태에서, R24는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R24는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R24는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, LA는 제1 링커이다. 본 개시내용의 접합체에 사용될 수 있는 링커의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, LB는 제2 링커이다. 본 개시내용의 접합체에 사용될 수 있는 링커의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, W11은 제1 약물 (또는 제1 활성제)이다. 본 개시내용의 접합체에 사용될 수 있는 약물 및 활성제의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, W12는 제2 약물 (또는 제2 활성제)이다. 본 개시내용의 접합체에 사용될 수 있는 약물 및 활성제의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, W13은 폴리펩티드 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 결합제)이다. 특정 실시양태에서, W13은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 fGly' 잔기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같이 fGly' 잔기를 통해 접합체의 나머지 부분에 부착된다. 본 개시내용의 접합체에 사용될 수 있는 폴리펩티드 (예를 들어, 항체 또는 결합제)의 예는 하기에 더욱 상세히 기재되어 있다. 일부 경우에, W13은 항체 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 항체)이다. 일부 경우에, W13은 결합제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 결합제)이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 접합체는 제1 링커 LA를 포함한다. 제1 링커 LA는 접합 모이어티를 통해 관심 제1 모이어티 (예를 들어, 제1 약물 또는 활성제)를 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)에 결합시키는 데 사용될 수 있다. 제1 링커 LA는 접합 모이어티 (예를 들어, 본원에 기술된 바와 같음)에 결합 (예를 들어, 공유 결합)될 수 있다. 예를 들어, 제1 링커 LA는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 제1 약물에 부착할 수 있다. 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 제1 링커 LA (및 이에 따른 제1 약물)를 폴리펩티드, 예컨대 항체에 접합시키는 데 사용될 수 있다.
예를 들어, 위의 화학식 (II)에 나타낸 바와 같이, LA는 접합 모이어티를 통해 W13에 부착되고, 따라서 W13은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 링커 LA에 간접적으로 결합된다. 위에서 설명한 바와 같이, W13은 폴리펩티드 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 결합제)이고, 따라서 LA는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 폴리펩티드 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 결합제)에 부착되며, 예를 들어 링커 LA는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 폴리펩티드 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 결합제)에 간접적으로 결합된다.
대상 접합체 및 화합물에서 제1 링커 LA에 대해 임의의 편리한 링커가 활용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 아미노, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되는 기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 알킬 또는 치환된 알킬기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 알케닐 또는 치환된 알케닐기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 알키닐 또는 치환된 알키닐기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 알콕시 또는 치환된 알콕시기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 아미노 또는 치환된 아미노기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 카르복실 또는 카르복실 에스테르기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 아실 아미노기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 아릴 또는 치환된 아릴기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴기를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 제1 링커 LA는 중합체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 글리콜 단독중합체, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예를 들어, 단독중합체 및 공중합체가 비치환되거나 알킬기를 갖는 하나의 말단에서 치환되는 경우), 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리비닐피롤리돈, 이들의 조합 등을 포함하는 폴리알킬렌 글리콜 및 이의 유도체를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 실시양태에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 아래에 더 자세히 설명된 접합체 및 화합물에 표시된 바와 같이 다른 링커도 가능하다.
일부 실시양태에서, LA는 하기 일반식에 의해 기재된 제1 링커이고:
-(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-(L6)f-,
여기서 L1, L2, L3, L4, L5 및 L6는 각각 독립적으로 링커 하위 단위이고, a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 0 내지 6이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 0이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 2이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 3이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 4이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 5이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 6이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f는 각각 1이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d 및 e는 각각 1이고 f는 0이다. 특정 실시양태에서, a, b, c 및 d는 각각 1이고 e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a, b 및 c는 각각 1이고 d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a 및 b는 각각 1이고 c, d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a는 1이고 b, c, d, e 및 f는 각각 0이다.
특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (I)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L2는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제 W11에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L3은 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제 W11에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L4는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제 W11에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L5는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제 W11에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L6은 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제 W11에 부착된다.
임의의 편리한 링커 하위 단위가 제1 링커 LA에 활용될 수 있다. 관심 링커 하위 단위는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 및 폴리아크릴레이트와 같은 중합체 단위, 아미노산 잔기(들), 탄수화물 기반 중합체 또는 탄수화물 잔기 및 이의 유도체, 폴리뉴클레오티드, 알킬기, 아릴기, 헤테로시클릭기, 이들의 조합, 및 이들의 치환된 버전을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, L1, L2, L3, L4, L5 및 L6 (존재하는 경우) 각각은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기, 및 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함한다.
일부 실시양태에서, L1 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L1은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L2 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L2는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L3 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L3은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L4 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L4는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L5 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L5는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L6 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L6은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, LA는 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-(L6)f-를 포함하는 제1 링커이고, 여기서:
-(L1)a-는 -(T1-V1)a-이고;
-(L2)b-는 -(T2-V2)b-이고;
-(L3)c-는 -(T3-V3)c-이고;
-(L4)d-는 -(T4-V4)d-이고;
-(L5)e-는 -(T5-V5)e-이며;
-(L6)f-는 -(T6-V6)f-이고,
여기서 T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 존재하는 경우 테더기이고
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6는 존재하는 경우 공유 결합 또는 연결 작용기이고; a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 0 내지 6이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 0이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 1이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 2이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 3이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 4이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 5이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f의 합은 6이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d, e 및 f는 각각 1이다. 특정 실시양태에서, a, b, c, d 및 e는 각각 1이고 f는 0이다. 특정 실시양태에서, a, b, c 및 d는 각각 1이고 e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a, b 및 c는 각각 1이고 d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a 및 b는 각각 1이고 c, d, e 및 f는 각각 0이다. 특정 실시양태에서, a는 1이고 b, c, d, e 및 f는 각각 0이다.
상기 기재된 바와 같이, 특정 실시양태에서, L1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (II)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T1은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (II)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, V1은 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L2는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T2는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V2는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L3은 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T3은 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V3은 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L4는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T4는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V4는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L5는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T5는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V5는 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L6은 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T6은 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착되거나, V6은 존재하는 경우 제1 약물 또는 활성제에 부착된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 접합체는 제2 링커 LB를 포함한다. 제2 링커 LB는 접합 모이어티를 통해 관심 제2 모이어티 (예를 들어, 제2 약물 또는 활성제)를 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)에 결합하는 데 사용될 수 있다. 제2 링커 LB는 접합 모이어티 (예를 들어, 본원에 기술된 바와 같음)에 결합 (예를 들어, 공유 결합)될 수 있다. 예를 들어, 제2 링커 LB는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 제2 약물에 부착할 수 있다. 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티는 제2 링커 LB (및 이에 따른 제2 약물)를 폴리펩티드, 예컨대 항체에 접합시키는 데 사용될 수 있다.
예를 들어, 위의 화학식 (II)에 나타낸 바와 같이, LB는 접합 모이어티를 통해 W13에 부착되고, 따라서 W13은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 제2 링커 LB에 간접적으로 결합된다. 위에서 설명한 바와 같이, W13은 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)이므로 따라서 LB는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 폴리펩티드 (항체)에 부착되며, 예를 들어, 링커 LB는 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티를 통해 폴리펩티드 (항체)에 간접적으로 결합된다.
대상 접합체 및 화합물에서 제2 링커 LB에 대해 임의의 편리한 링커가 활용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 아미노, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되는 기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 알킬 또는 치환된 알킬기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 알케닐 또는 치환된 알케닐기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 알키닐 또는 치환된 알키닐기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 알콕시 또는 치환된 알콕시기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 아미노 또는 치환된 아미노기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 카르복실 또는 카르복실 에스테르기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 아실 아미노기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 아릴 또는 치환된 아릴기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬기를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴기를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 제2 링커 LB는 중합체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 글리콜 단독중합체, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예를 들어, 단독중합체 및 공중합체가 비치환되거나 알킬기를 갖는 한 말단에서 치환되는 경우), 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리비닐피롤리돈, 이들의 조합 등을 포함하는 폴리알킬렌 글리콜 및 이의 유도체를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 실시양태에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 아래에 더 자세히 설명된 접합체 및 화합물에 표시된 바와 같이 다른 링커도 가능하다.
일부 실시양태에서, LB는 다음 일반식에 의해 기재되는 제2 링커이고:
-(L7)g-(L8)h-(L9)i-(L10)j-(L11)k-(L12)l-(L13)m,
여기서 L7, L8, L9, L10, L11, L12 및 L13은 각각 독립적으로 링커 하위 단위이고, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 0 내지 7이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 0이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 1이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 2이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 3이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 4이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 5이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 6이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 7이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 1이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k 및 l은 각각 1이고 m은 0이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j 및 k는 각각 1이고 l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g, h, i 및 j는 각각 1이고 k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g, h 및 i는 각각 1이고 j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g 및 h는 각각 1이고 i, j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g는 1이고 h, i, j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 0이다.
특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L7은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (II)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L8은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제 W12에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L9는 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제 W12에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L10은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제 W12에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L11은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제 W12에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L12는 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제 W12에 부착된다. 특정 실시양태에서, 링커 하위 단위 L13은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제 W12에 부착된다.
임의의 편리한 링커 하위 단위가 제2 링커 LB에 활용될 수 있다. 관심 링커 하위 단위는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 및 폴리아크릴레이트와 같은 중합체 단위, 아미노산 잔기(들), 탄수화물 기반 중합체 또는 탄수화물 잔기 및 이의 유도체, 폴리뉴클레오티드, 알킬기, 아릴기, 헤테로시클릭기, 이들의 조합, 및 이들의 치환된 버전을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, L7, L8, L9, L10, L11, L12 및 L13 (존재하는 경우) 각각은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 및 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기를 포함한다.
일부 실시양태에서, L7 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L7은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L7은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L7은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L7은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L7은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L7은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L8 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L8은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L8은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L8은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L8은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L8은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L8은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L9 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L9는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L9는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L9는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L9는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L9는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L9는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L10 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L10은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L10은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L10은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L10은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L10은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L10은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L11 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L11은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L11은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L11은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L11은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L11은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L11은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L12 (존재하는 경우)는 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L12는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L12는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L12는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L12는 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L12는 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L12는 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, L13 (존재하는 경우)은 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬기, 치환된 알킬, 아릴기, 치환된 아릴기 또는 디아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, L13은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L13은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시양태에서, L13은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L13은 알킬기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시양태에서, L13은 아릴기 또는 치환된 아릴기를 포함한다. 일부 실시양태에서, L13은 디아민 (예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기)을 포함한다.
일부 실시양태에서, LB는 -(L7)g-(L8)h-(L9)i-(L10)j-(L11)k-(L12)l-(L13)m-를 포함하는 제2 링커이고, 여기서:
-(L7)g-는 -(T7-V7)g-이고;
-(L8)h-는 -(T8-V8)h-이고;
-(L9)i-는 -(T9-V9)i-이고;
-(L10)j-는 -(T10-V10)j-이고;
-(L11)k-는 -(T11-V11)k-이고;
-(L12)l-는 -(T12-V12)l-이고;
-(L13)m-는 -(T13-V13)m-이고,
여기서 T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 존재하는 경우 테더기이고;
V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 존재하는 경우 공유 결합 또는 연결 작용기이고;
g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 0 내지 7이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 0이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 1이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 2이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 3이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 4이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 5이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 6이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m의 합은 7이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 1이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k 및 l은 각각 1이고 m은 0이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j 및 k는 각각 1이고 l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g, h, i 및 j는 각각 1이고 k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g, h 및 i는 각각 1이고 j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g 및 h는 각각 1이고 i, j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g는 1이고 h, i, j, k, l 및 m은 각각 0이다. 특정 실시양태에서, g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 0이다.
상기 기재된 바와 같이, 특정 실시양태에서, L7은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (II)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T7은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티 (예를 들어, 위의 화학식 (II)에 나타낸 바와 같음)에 부착된다. 특정 실시양태에서, V7은 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L8은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T8은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V8은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L9는 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T9는 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V9는 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L10은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T10은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V104는 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L11은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T11은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V11은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L12는 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T12는 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V12는 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 특정 실시양태에서, L13은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다. 이와 같이, 특정 실시양태에서, T13은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착되거나, 또는 V13은 존재하는 경우 제2 약물 또는 활성제에 부착된다.
테더기 T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13과 관련하여 임의의 편리한 테더기가 대상 링커에 활용될 수 있다. 일부 실시양태에서, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카르보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈기, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기를 포함하고, 여기서 각 w는 1 내지 20의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이고, p는 1 내지 20의 정수이고, x는 1 내지 12의 정수이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 (C1-C12)알킬 또는 치환된 (C1-C12)알킬을 포함한다. 특정 실시양태에서, (C1-C12)알킬은 1 내지 12개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8개의 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 알킬기이다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C12 알킬, 또는 C1-C10 알킬, 또는 C1-C6 알킬, 또는 C1-C3 알킬일 수 있다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬이다. 예를 들어, (C1-C12)알킬은 알킬렌 또는 치환된 알킬렌, 예컨대 C1-C12 알킬렌, 또는 C1-C10 알킬렌, 또는 C1-C6 알킬렌, 또는 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 C1-알킬렌 (예를 들어, CH2)이다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 C2-알킬렌 (예를 들어, CH2CH2)이다. 일부 경우에, (C1-C12)알킬은 C3-알킬렌 (예를 들어, CH2CH2CH2)이다.
특정 실시양태에서, 치환된 (C1-C12)알킬은 1 내지 12개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 8개의 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 5개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지형 치환된 알킬기이다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 알킬, 예컨대 치환된 C1-C12 알킬, 또는 치환된 C1-C10 알킬, 또는 치환된 C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1-C3 알킬일 수 있다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬이다. 예를 들어, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 알킬렌, 예컨대 치환된 C1-C12 알킬렌, 또는 치환된 C1-C10 알킬렌, 또는 치환된 C1-C6 알킬렌, 또는 치환된 C1-C3 알킬렌일 수 있다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C1-알킬렌 (예를 들어, -SO3H로 치환된 C1-알킬렌)이다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C2-알킬렌이다. 일부 경우에, 치환된 (C1-C12)알킬은 치환된 C3-알킬렌이다. 예를 들어, 치환된 (C1-C12)알킬은 본원에 기재된 바와 같은 (PEG)k 기(예를 들어, -CONH(PEG)k, 예컨대 -CONH(PEG)3 또는 -CONH(PEG)5; 또는 -NHCO(PEG)k, 예컨대 -NHCO(PEG)7)로 치환된 C1-C12 알킬렌 (예를 들어, C3-알킬렌 또는 C5-알킬렌)을 포함할 수 있거나, 또는 -CONHCH2CH2SO3H 기로 치환된 C1-C12 알킬렌 (예를 들어 C3-알킬렌)을 포함할 수 있거나, 또는 -NHCOCH2SO3H 기로 치환된 C1-C12 알킬렌 (예를 들어, C5-알킬렌)을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 또는 치환된 헤테로시클릴을 포함한다. 일부 경우에, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 아릴 또는 치환된 아릴을 포함한다. 예를 들어, 아릴은 페닐일 수 있다. 일부 경우에, 치환된 아릴은 치환된 페닐이다. 치환된 페닐은 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있다. 일부 경우에, 치환된 아릴은 치환된 페닐이고, 여기서 치환기는 본원에 기술된 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체와 같은 효소적으로 절단 가능한 모이어티)를 포함한다.
일부 경우에, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 트리아졸릴 (예를 들어, 1,2,3-트리아졸릴)을 포함한다. 일부 경우에, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬을 포함한다. 일부 경우에, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴을 포함한다. 일부 경우에, 치환된 헤테로아릴, 치환된 시클로알킬 또는 치환된 헤테로시클릴 상의 치환기는 본원에 기술된 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체와 같은 효소적으로 절단 가능한 모이어티)를 포함한다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)은 에틸렌 디아민 (EDA) 모이어티를 포함하고, 예를 들어, 테더기를 함유하는 EDA를 포함한다. 특정 실시양태에서, (EDA)w는 하나 이상의 EDA 모이어티를 포함하며, 예컨대 여기서 w는 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 연결된 에틸렌 디아민 (EDA) 모이어티는 하나 이상의 편리한 위치에서 임의의 편리한 치환기, 예를 들어 알킬, 치환된 알킬, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 임의로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, EDA 모이어티는 하기 구조로 기재되고:
여기서 y는 1 내지 6의 정수이거나 0 또는 1이고, 각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, y는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 특정 실시양태에서, y는 1이고 r은 0이다. 특정 실시양태에서, y는 1이고 r은 1이다. 특정 실시양태에서, y는 2이고 r은 0이다. 특정 실시양태에서, y는 2이고 r은 1이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, EDA의 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어, 예를 들어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있다. 특정 실시양태에서, y는 1이고, 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성하는 알킬기이다. 특정 실시양태에서, y는 1이고 인접한 R12 기는 수소, 알킬 (예를 들어, 메틸) 및 치환된 알킬 (예를 들어, 저급 알킬-OH, 예컨대 에틸-OH 또는 프로필-OH)로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 4-아미노-피페리딘 (4AP) 모이어티 (본원에서는 피페리딘-4-아미노, P4A라고도 지칭함)를 포함한다. 4AP 모이어티는 하나 이상의 편리한 위치에서 임의의 편리한 치환기, 예를 들어 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 임의로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 4AP 모이어티는 하기 구조로 기재되고:
여기서 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜), 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R12는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티이다. 특정 실시양태에서, R12는 카르복시 변형된 폴리에틸렌 글리콜이다.
특정 실시양태에서, R12는 화학식 (PEG)k로 기재되는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티를 포함하고, 이는 하기 구조로 표현될 수 있고:
여기서 k는 1 내지 20의 정수, 예컨대, 1 내지 18, 또는 1 내지 16, 또는 1 내지 14, 또는 1 내지 12, 또는 1 내지 10, 또는 1 내지 8, 또는 1 내지 6, 또는 1 내지 4, 또는 1 또는 2, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 경우에, k는 2이다. 특정 실시양태에서, R17은 OH, COOH, OR, 또는 COOR로부터 선택되고, 여기서 R은 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R17은 COOH이다. 특정 실시양태에서, R17은 OH이다. 특정 실시양태에서, R17은 OCH3이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)은 (PEG)n을 포함하며, 여기서 (PEG)n은 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜 연결 단위이다. 특정 실시양태에서, (PEG)n은 하기 구조로 기재되고:
여기서 n은 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 경우에, n은 2이다. 일부 경우에, n은 3이다. 일부 경우에, n은 6이다. 일부 경우에, n은 12이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 (AA)p를 포함하며, 여기서 AA는 아미노산 잔기이다. 임의의 편리한 아미노산이 사용될 수 있다. 관심 아미노산은 L- 및 D-아미노산, 20가지 1차 알파-아미노산 및 베타-알라닌과 같은 자연 발생 아미노산, 비-자연 발생 아미노산 (예를 들어, 아미노산 유사체), 예컨대어 비-자연 발생 알파-아미노산 또는 비-자연 발생 베타-아미노산 등을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, p는 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 특정 실시양태에서, p는 1이다. 특정 실시양태에서, p는 2이다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 아미노산 유사체를 포함한다. 아미노산 유사체는 자연 발생 단백질 (예를 들어, Ala 또는 A, Cys 또는 C, Asp 또는 D, Glu 또는 E, Phe 또는 F, Gly 또는 G, His 또는 H, Ile 또는 I, Lys 또는 K, Leu 또는 L, Met 또는 M, Asn 또는 N, Pro 또는 P, Gln 또는 Q, Arg 또는 R, Ser 또는 S, Thr 또는 T, Val 또는 V, Trp 또는 W, Tyr 또는 Y)에서 일반적으로 발견되는 하나 이상의 아미노산과 구조 및/또는 전체 형태가 유사한 화합물을 포함한다. 아미노산 유사체는 변형된 측쇄 또는 백본이 있는 천연 아미노산도 포함한다. 아미노산 유사체는 자연 발생 D-형 뿐만 아니라 L-형 아미노산 유사체에 있는 것과 동일한 입체화학을 갖는 아미노산 유사체도 포함한다. 일부 경우에, 아미노산 유사체는 하나 이상의 천연 아미노산의 백본 구조 및/또는 측쇄 구조를 공유하며, 차이점(들)은 분자 내 하나 이상의 변형된 기이다. 이러한 변형은 관련 원자 (예컨대, S)에 대한 원자 (예컨대, N)의 치환, 기 (예컨대, 메틸 또는 히드록실 등) 또는 원자 (예컨대 Cl 또는 Br 등)의 추가, 기의 삭제, 공유 결합의 치환 (이중 결합에 대한 단일 결합 등) 또는 이들의 조합을 포함할 수 있지만 이에 국한되지는 않는다. 예를 들어, 아미노산 유사체는 α-히드록시산, 및 α-아미노산 등을 포함할 수 있다. 아미노산 유사체의 예는 술포알라닌 등을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 화학식 -(CR13OH)x-에 의해 기재되는 모이어티를 포함하고, 여기서 x는 0이거나 x는 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12이다. 특정 실시양태에서, x는 1이다. 특정 실시양태에서, x는 2이다. 특정 실시양태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R13은 수소이다. 특정 실시양태에서, R13은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R13은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R13은 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R13은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R13은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R13은 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R13은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R13은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R13은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R13은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R13은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. 이들 실시양태에서, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴은 R13에 대해 상기 기재된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 아세탈기, 디설파이드, 히드라진 또는 에스테르를 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 아세탈기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 히드라진을 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 디설파이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 테더기는 에스테르를 포함한다.
특정 실시양태에서, 테더기 (예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13)는 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카르보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP) 또는 파라-히드록시-페닐 (PHP)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 테더기는 다음 구조로 기재되는 MABO 기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 다음 구조로 기재되는 MABC 기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 다음 구조로 기재되는 PABO 기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 다음 구조로 기재되는 PABC 기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 다음 구조로 기재되는 PAB 기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 다음 구조로 기재되는 PABA 기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 다음 구조로 기재되는 PAP 기를 포함한다:
일부 실시양태에서, 테더기는 다음 구조로 기재되는 PHP 기를 포함한다:
특정 실시양태에서, 각각의 R14는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, R14는 수소이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R14는 수소이다. 특정 실시양태에서, R14는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R14는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R14는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R14는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R14는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R14는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R14는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R14는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R14는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R14는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R14는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R14는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R14는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R14는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R14는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
위에 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, 및 PHP 테더 구조의 일부 실시양태에서, 페닐 고리는 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된 하나 이상의 추가 기로 치환될 수 있다.
특정 실시양태에서, 테더기 T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및/또는 T13 중 하나 이상은 각각 글리코시드 또는 글리코시드 유도체로 임의로 치환된다. 예를 들어, 일부 경우에, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 글리코시드로 임의로 치환된다. 일부 경우에, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 글리코시드로 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 위에 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, 및 PHP 테더 구조는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가 기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 위에 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP 테더 구조의 일부 실시양태에서, 페닐 고리는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가 기로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 다음 구조로부터 선택될 수 있다:
연결 작용기 V1, V2, V3, V4, V5, V6, V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13과 관련하여 임의의 편리한 연결 작용기가 대상 링커에 활용될 수 있다. 관심 연결 작용기는 아미노, 카르보닐, 아미도, 옥시카르보닐, 카르복시, 술포닐, 술폭시드, 술포닐아미노, 아미노술포닐, 티오, 옥시, 포스포, 포스포라미데이트, 티오포스포라이데이트 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, V1, V2, V3, V4, V5, V6, V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이다. 특정 실시양태에서, q는 1 내지 6의 정수 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)이다. 특정 실시양태에서, q는 1이다. 특정 실시양태에서, q는 2이다. 특정 실시양태에서, q는 3이다. 특정 실시양태에서, q는 4이다. 특정 실시양태에서, q는 5이다. 특정 실시양태에서, q는 6이다.
일부 실시양태에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, R15는 수소이다. 특정 실시양태에서, 각각의 R15는 수소이다. 특정 실시양태에서, R15는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R15는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R15는 카르복실 또는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R15는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시양태에서, R15는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시양태에서, R15는 술포닐이다. 특정 실시양태에서, R15는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시양태에서, R15는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R15는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R15는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R15는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-8 헤테로시클릴 또는 C3-8 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다. 이들 실시양태에서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴은 R15에 대해 상기 기재된 바와 같다.
상기 기재된 바와 같이, 일부 실시양태에서 LA는 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-를 포함하는 제1 링커이고, 여기서 a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
일부 실시양태에서, 제1 링커 LA에서:
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈기, 디설파이드, 히드라진, 및 에스테르로부터 선택되고;
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
여기서:
(PEG)n은 이고, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 다음 구조를 갖는 에틸렌 디아민 모이어티이고:
여기서 y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고,
AA는 아미노산 잔기이고, 여기서 p는 1 내지 20의 정수이고;
각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성하고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6 및 V1, V2, V3, V4, V5 및 V6은 다음으로부터 선택되고:
여기서:
T1은 (C1-C12)알킬이고 V1은 -CONH-이고;
T2는 치환된 (C1-C12)알킬이고 V2는 -CO-이고;
T3은 AA이고 V3은 존재하지 않고;
T4는 PABC이고 V4는 존재하지 않으며;
e 및 f는 각각 0이다.
특정 실시양태에서, 제1 링커 LA에 대한 상기 링커 구조의 좌측은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착되고, 제1 링커 LA에 대한 상기 링커 구조의 우측은 제1 약물 또는 활성제에 부착된다.
상기 기재된 바와 같이, 일부 실시양태에서, LB는 -(T7-V7)g-(T8-V8)h-(T9-V9)i-(T10-V10)j-(T11-V11)k-(T12-V12)l-(T13-V13)m-를 포함하는 제2 링커이고, 여기서 g, h, i, j, k, l 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이다.
일부 실시양태에서, 제2 링커 LB에서:
T7은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈기, 디설파이드, 히드라진 및 에스테르로부터 선택되고;
V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로부터 선택되고, 여기서, q는 1 내지 6의 정수이고;
여기서:
(PEG)n은 이고, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 다음 구조를 갖는 에틸렌 디아민 모이어티이고:
여기서 y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고,
AA는 아미노산 잔기이고, 여기서 p는 1 내지 20의 정수이고;
각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다.
임의의 편리한 테더기가 T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13에 사용될 수 있다. 예를 들어, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6 과 관련하여 위에서 설명한 테더기 중 임의의 것이 테더기 T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13에 사용될 수 있다.
임의의 편리한 연결 작용기는 V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13에 사용될 수 있다. 예를 들어, V1, V2, V3, V4, V5 및 V6과 관련하여 위에서 설명한 연결 작용기 중 임의의 것이 연결 작용기 V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택된다. 이들 실시양태에서, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴은 R13에 대해 상기 기재된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택된다. 이들 실시양태에서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴은 R15에 대해 상기 기재된 바와 같다. 이들 실시양태에서, 다양한 가능한 치환기는 R15에 대해 상기 기재된 바와 같다.
제2 링커 LB의 특정 실시양태에서, 테더기 T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13 중 하나 이상은 각각 글리코시드 또는 글리코시드 유도체로 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
제2 링커 LB의 특정 실시양태에서, 위에 표시된 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, 및 PHP 테더 구조는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가 기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 위에 나타낸 MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, 및 PHP 테더 구조의 일부 실시양태에서, 페닐 고리는 글리코시드 및 글리코시드 유도체로부터 선택된 하나 이상의 추가 기로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13 및 V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 다음으로부터 선택되고:
여기서:
T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
T8은 (C1-C12)알킬이고 V8은 -CONH이고-;
T9는 치환된 (C1-C12)알킬이고 V9는 -CO-이고;
T10은 AA이고 V10은 존재하지 않고;
T11은 PABC이고 V11은 존재하지 않고;
l 및 m은 각각 0이다.
특정 실시양태에서, 제2 링커 LB에 대한 상기 링커 구조의 좌측은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 접합 모이어티에 부착되고, 제2 링커 LB에 대한 상기 링커 구조의 우측은 제2 약물 또는 활성제에 부착된다.
특정 실시양태에서, 접합체는 항체와 약물이 상기 기재된 바와 같은 링커에 의해 함께 연결된 항체-약물 접합체이다. 일부 경우에, 링커 m (예를 들어, LA 및/또는 LB)은 절단 가능한 링커이다. 절단 가능한 링커는 하나 이상의 절단 가능한 모이어티를 포함하는 링커이며, 여기서 절단 가능한 모이어티는 특정 조건 하에서 해리될 수 있는 하나 이상의 결합을 포함하여 이에 따라 절단 가능한 링커를 2개 이상의 분리 가능한 부분으로 분리한다. 예를 들어, 절단 가능한 모이어티는 특정 조건 하에서 해리되거나 나뉘어져 절단 가능한 링커를 2개 이상의 부분으로 분리할 수 있는 하나 이상의 공유 결합을 포함할 수 있다. 이와 같이 항체-약물 접합체에 포함된 링커는 절단 가능한 링커일 수 있으며, 따라서 적절한 조건 하에서 절단 가능한 링커는 절단되어 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 분리하거나 방출한다.
일부 경우에, 절단 가능한 링커는 2개의 절단 가능한 모이어티, 예컨대 제1 절단 가능한 모이어티 및 제2 절단 가능한 모이어티를 포함한다. 절단 가능한 모이어티는 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 분리하거나 방출하기 위해 두 절단 가능한 모이어티의 절단이 필요하도록 구성될 수 있다. 예를 들어, 절단 가능한 링커의 절단은 두 개의 절단 가능한 모이어티 중 하나를 처음에 절단한 다음 두 개의 절단 가능한 모이어티 중 다른 하나를 절단함으로써 달성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 절단 가능한 링커는 제1 절단 가능한 모이어티 및 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 방해하는 제2 절단 가능한 모이어티를 포함한다. "절단을 방해한다"는 것은 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재가 제1 절단 가능한 모이어티의 절단 가능성을 감소시키거나 실질적으로 억제하여 이에 따라 절단 가능한 링커의 양을 실질적으로 감소시키거나 절단을 방지함을 의미한다. 예를 들어, 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 방해할 수 있다. 제2 절단 가능한 모이어티의 존재에 의한 제1 절단 가능한 모이어티의 절단 방해는 결과적으로 항체로부터 약물의 양을 실질적으로 감소시키거나 방출하는 것을 방지한다. 예를 들어, 항체-약물 접합체가 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위 또는 그 근처에 있을 때까지 항체로부터 약물의 조기 방출이 실질적으로 감소되거나 예방될 수 있다.
일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 방해하므로, 절단 가능한 링커의 절단은 처음에 제2 절단 가능한 모이어티를 절단한 다음 제1 절단 가능한 모이어티를 절단함으로써 달성될 수 있다. 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 제1 절단 가능한 모이어티의 절단에 대한 방해를 감소 또는 제거하여 이에 따라 제1 절단 가능한 모이어티가 절단되도록 할 수 있다. 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 절단 가능한 링커가 상기 기재된 바와 같이 2개 이상의 부분으로 해리되거나 분리되어 항체-약물 접합체로부터 약물을 방출하게 할 수 있다. 일부 경우에, 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재 시 실질적으로 발생하지 않는다. 실질적으로 이는 제1 절단 가능한 모이어티의 약 10% 이하의 절단이 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재 하에 발생한다는 것을 의미하며, 예컨대 약 9% 이하, 또는 약 8% 이하, 또는 약 7% 이하, 또는 또는 약 6% 이하, 또는 약 5% 이하, 또는 약 4% 이하, 또는 약 3% 이하, 또는 약 2% 이하, 또는 약 1% 이하, 또는 약 0.5% 이하, 또는 약 0.1% 이하의 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재 하에서 발생한다.
다른 방식으로 말하면, 제2 절단 가능한 모이어티는 제1 절단 가능한 모이어티를 절단으로부터 보호할 수 있다. 예를 들어, 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 제1 절단 가능한 모이어티를 절단으로부터 보호할 수 있으며, 이에 따라 항체-약물 접합체가 약물에 대해 원하는 표적 작용 부위 또는 근처에 있을 때까지 항체로부터 약물의 조기 방출을 실질적으로 감소시키거나 방지할 수 있다. 이와 같이, 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 제1 절단 가능한 모이어티를 노출시켜 (예를 들어, 제1 절단 가능한 모이어티를 탈보호함), 이에 따라 제1 절단 가능한 모이어티가 절단되도록 하고, 이는 절단 가능한 링커의 절단을 초래하고, 이는 차례로 분리되거나 위에서 설명한 대로 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위에서 항체로부터 약물을 방출한다. 특정 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 제1 절단 가능한 모이어티를 후속 절단에 노출시키지만, 제2 절단 가능한 모이어티의 절단은 그 자체로 절단 가능한 링커의 절단을 초래하지는 않는다 (즉, 절단 가능한 링커를 절단하기 위해 제1 절단 가능한 모이어티의 절단은 여전히 필요하다).
절단 가능한 링커에 포함된 절단 가능한 모이어티는 각각 효소적 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 예를 들어, 제1 절단 가능한 모이어티는 제1 효소적 절단 가능한 모이어티일 수 있고, 제2 절단 가능한 모이어티는 제2 효소적 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 효소적으로 절단 가능한 모이어티는 효소의 효소 작용을 통해 위에서 설명한 대로 두 개 이상의 부분으로 분리될 수 있는 절단 가능한 모이어티이다. 효소적으로 절단 가능한 모이어티는 에스테르, 펩티드, 글리코시드 등과 같으나 이에 제한되지 않는 효소의 효소 작용을 통해 절단될 수 있는 임의의 절단 가능한 모이어티일 수 있다. 일부 경우에, 효소적 절단 가능한 모이어티를 절단하는 효소는 원하는 표적 작용 부위, 예컨대 항체-약물 접합체로부터 방출될 약물의 원하는 표적 작용 부위에 존재한다. 일부 경우에, 효소적 절단 가능한 모이어티를 절단하는 효소는 전혈, 혈장 또는 혈청과 같은 다른 영역에서는 상당한 양으로 존재하지는 않는다. 이와 같이, 효소적 절단 가능한 모이어티의 절단은 원하는 작용 부위에서 실질적인 절단이 일어나는 반면, 다른 영역에서는 또는 항체-약물 접합체가 원하는 작용 부위에 도달하기 전에는 절단이 유의하게 발생하지 않도록 제어될 수 있다.
예를 들어, 본원에 기술된 바와 같이, 본 개시내용의 항체-약물 접합체는 암 치료, 예컨대 암 세포가 존재하는 원하는 작용 부위에 암 치료 약물을 전달하는 데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 에스테르 결합을 절단하는 에스테라제 또는 글리코시드 결합을 절단하는 글리코시다제와 같은 효소가 암세포에서 과발현되는 암의 바이오마커가 될 수 있다. 암에서 특정 효소의 과발현 및 그에 따른 국소화는 원하는 작용 부위 (즉, 암 부위 (및 과발현된 효소))에서 약물을 특이적으로 방출하기 위해 본 개시내용의 항체-약물 접합체의 절단 가능한 링커에 포함된 효소적 절단 가능한 모이어티의 맥락에서 사용될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 효소적 절단 가능한 모이어티는 암세포에서 과발현되는 효소에 의해 절단될 수 있는 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 에스테르 또는 글리코시드)이다. 예를 들어, 효소는 에스테라제일 수 있다. 이와 같이, 일부 경우에, 효소적 절단 가능한 모이어티는 에스테라제 효소에 의해 절단될 수 있는 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 에스테르)이다. 일부 경우에, 효소는 글리코시다제일 수 있다. 이와 같이 일부 경우에, 효소적 절단 가능한 모이어티는 글리코시다제 효소에 의해 절단될 수 있는 절단 가능한 모이어티 (예를 들어, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체)이다.
특정 실시양태에서, 효소적 절단 가능한 모이어티는 에스테르 결합이다. 예를 들어, 상기 기재된 제1 절단 가능한 모이어티 (즉, 제2 절단 가능한 모이어티에 의한 조기 절단으로부터 보호되는 절단 가능한 모이어티)는 에스테르를 포함할 수 있다. 절단되지 않은 제2 절단 가능한 모이어티의 존재는 에스테라제 효소에 의한 절단으로부터 제1 절단 가능한 모이어티 (에스테르)를 보호할 수 있으며, 이에 따라 항체-약물 접합체가 약물에 대한 원하는 표적 작용 부위 또는 그 근처에 있을 때까지 항체로부터 약물의 조기 방출을 실질적으로 감소시키거나 방지할 수 있다. 일부 경우에, 제1 절단 가능한 모이어티에 인접한 링커의 일부는 치환기에 연결되거나 이를 포함하며, 여기서 치환기는 제2 절단 가능한 모이어티를 포함한다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 효소적 절단 가능한 모이어티는 글리코시드 (또는 글리코실) 또는 글리코시드 유도체와 같은 당 모이어티이다. 일부 경우에, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 포함하지 않는 절단 가능한 링커와 비교하여 절단 가능한 링커의 친수성의 증가를 촉진할 수 있다. 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 절단 가능한 링커에 사용하기에 적합하고 효소의 효소 작용을 통해 절단될 수 있는 임의의 글리코시드 또는 글리코시드 유도체일 수 있다. 예를 들어, 제2 절단 가능한 모이어티 (즉, 제1 절단 가능한 모이어티를 조기 절단으로부터 보호하는 절단 가능한 모이어티)는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 제1 절단 가능한 모이어티는 에스테르를 포함하고, 제2 절단 가능한 모이어티는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 절단 가능한 모이어티는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택된 글리코시드 또는 글리코시드 유도체이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 글루쿠로니드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 갈락토시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 부분은 글루코시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 만노시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 푸코시드이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 O-GlcNAc이다. 일부 경우에, 제2 절단 가능한 모이어티는 O-GalNAc이다.
글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글리코시드 결합을 통해 절단 가능한 링커에 부착 (공유 결합)될 수 있다. 글리코시드 결합은 O-글리코시드 결합 (O-글리코시드), N-글리코시드 결합 (글리코실아민), S-글리코시드 결합 (티오글리코시드), 또는 C-글리코시드 결합 (C-글리코시드 또는 C-글리코실)과 같지만 이들로 제한되지 않는 다양한 유형의 결합을 통해 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 절단 가능한 링커에 연결할 수 있다. 일부 경우에, 글리코시드 결합은 O-글리코시드 결합 (O-글리코시드)이다. 일부 경우에, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 효소에 의해 (예를 들어, 글리코시드 결합의 효소 매개 가수분해를 통해) 부착된 절단 가능한 링커로부터 절단될 수 있다. 글리코시드 또는 글리코시드 유도체는 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 절단 가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 수행할 수 있는 임의의 편리한 효소에 의해 절단 가능한 링커로부터 제거되거나 절단될 수 있다. 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 절단 가능한 링커에 부착시키는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 중재하는 데 사용될 수 있는 효소의 예는 글리코시다제, 예컨대 글루쿠로니다제, 갈락토시다제, 글루코시다제, 만노시다제, 푸코시다아제 등이다. 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 절단 가능한 링커에 부착하는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 매개하기 위해 다른 적합한 효소도 사용될 수 있다. 일부 경우에, 글리코시드 또는 글리코시드 유도체를 절단 가능한 링커에 부착하는 글리코시드 결합의 절단 (가수분해)을 매개하는 데 사용되는 효소는 항체-약물 접합체의 약물에 대한 원하는 작용 부위 또는 근처에서 발견된다. 예를 들어, 효소는 항체-약물 접합체의 약물에 대한 원하는 작용 부위 또는 근처의 세포에서 발견되는 리소좀 글리코시다제와 같은 리소좀 효소일 수 있다. 일부 경우에, 효소는 제1 절단 가능한 모이어티의 절단을 매개하는 효소가 발견되는 표적 부위 또는 근처에서 발견되는 효소이다.
본 개시내용에 따른 접합체의 예는 다음 구조를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다:
상기 구조에서 제시된 화학적 실체, 링커 및 접합 모이어티 중 임의의 것이 대상 화합물 및 접합체에 사용하기 위해 조정될 수 있다.
히드라지닐-인돌릴 및 히드라지닐-피롤로-피리디닐 화합물 및 접합체 제조 방법과 관련된 추가 개시는 미국 특허 번호 9,310,374 및 미국 특허 번호 9,493,413에서 발견되며, 이들 각각의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다.
결합제 접합체의 추가 실시양태
일부 경우에, 결합제는 부착된 관심 모이어티, 예를 들어 검출 가능한 표지, 약물 또는 반감기 연장 모이어티를 갖는다. 결합제의 변형은 다양한 합성 및/또는 재조합 방법에 의해 달성될 수 있다. 결합제에 부착된 모이어티 또는 모이어티들은 매우 다양한 기능 또는 특징 중 하나 이상을 제공할 수 있다. 예시적인 모이어티에는 검출 가능한 표지 (예를 들어, 염색 표지 (예를 들어, 발색단, 형광단), 생물물리학적 프로브 (스핀 라벨, 핵자기공명(NMR) 프로브), 형광 공명 에너지 전달(FRET) 유형 표지 (예를 들어, 형광단/소광제 쌍의 적어도 하나의 구성원을 포함하는 FRET 쌍의 적어도 하나의 구성원), 생물발광 공명 에너지 전달(BRET) 유형 표지 (예를 들어, BRET 쌍의 적어도 하나의 구성원), 면역검출 가능한 태그 (예를 들어, FLAG, His(6) 등)가 포함된다.
부착된 모이어티는 또한 수용성 중합체 (예를 들어, PEG화); 정제 태그 (예를 들어, 친화성 크로마토그래피에 의한 분리를 촉진하기 위한 것 (예를 들어, FLAG 에피토프 부착); 막 위치화 도메인 (예를 들어, 지질 또는 글리코포스파티딜이노시톨(GPI) 유형 앵커); 고정화 태그 (예를 들어, 선택적 부착을 포함하여 표면에 폴리펩티드의 부착을 촉진하기 위한 것); 약물 (예를 들어, 약물 표적화를 촉진하기 위한 것, 예를 들어, 항체에 약물 부착을 통해) 등일 수 있다.
반감기 연장을 위해, 본 개시내용의 결합제는 개선된 약동학적 프로파일을 제공하도록 임의로 변형될 수 있다 (예를 들어, PEG화, 과글리코실화 등에 의해).
일부 경우에, 결합제는 공유적으로 연결된 비펩티드 중합체를 가질 수 있다. 적합한 중합체에는 예를 들어 생체적합성 중합체, 및 수용성 생체적합성 중합체가 포함된다. 적합한 중합체에는 합성 중합체 및 자연 발생 중합체가 포함된다. 적합한 중합체에는 예를 들어 치환되거나 치환되지 않은 직쇄 또는 분지쇄 폴리알킬렌, 폴리알케닐렌 또는 폴리옥시알킬렌 중합체 또는 분지형 또는 비분지형 다당류, 예를 들어 호모- 또는 헤테로-다당류가 포함된다. 적합한 중합체에는 예를 들어 에틸렌 비닐 알코올 공중합체 (일반적으로 일반명 EVOH 또는 상표명 EVAL로 알려짐); 폴리부틸메타크릴레이트; 폴리(히드록시발레레이트); 폴리(L-락트산); 폴리카프로락톤; 폴리(락타이드-코-글리콜라이드); 폴리(히드록시부티레이트); 폴리(히드록시부티레이트-코-발레레이트); 폴리디옥사논; 폴리오르토에스테르; 폴리무수물; 폴리(글리콜산); 폴리(D,L-락트산); 폴리(글리콜산-코-트리메틸렌 카보네이트); 폴리포스포에스테르; 폴리포스포에스테르 우레탄; 폴리(아미노산); 시아노아크릴레이트; 폴리(트리메틸렌 카보네이트); 폴리(이미노카보네이트); 코폴리(에테르-에스테르)(예를 들어, 폴리(에틸렌 옥사이드)-폴리(락트산)(PEO/PLA) 공중합체); 폴리알킬렌 옥살레이트; 폴리포스파젠; 피브린, 피브리노겐, 셀룰로오스, 전분, 콜라겐 및 히알루론산과 같은 생체분자; 폴리우레탄; 실리콘; 폴리에스테르; 폴리올레핀; 폴리이소부틸렌 및 에틸렌-알파올레핀 공중합체; 아크릴 중합체 및 공중합체; 폴리염화비닐과 같은 할로겐화비닐 중합체 및 공중합체; 폴리비닐 메틸 에테르와 같은 폴리비닐 에테르; 폴리비닐리덴 플루오라이드, 폴리비닐리덴 클로라이드 등의 폴리비닐리덴 할라이드; 폴리아크릴로니트릴; 폴리비닐 케톤; 폴리스티렌과 같은 폴리비닐 방향족; 폴리비닐 아세테이트와 같은 폴리비닐 에스테르; 에틸렌-메틸 메타크릴산메틸 공중합체, 아크릴로니트릴-스티렌 공중합체, ABS 수지, 및 에틸렌-비닐-아세테이트 공중합체 등의 비닐 단량체와 올레핀의 공중합체; 나일론 66, 폴리카프로락탐과 같은 폴리아미드; 알키드 수지; 폴리카보네이트; 폴리옥시메틸렌; 폴리이미드; 폴리에테르; 에폭시 수지; 폴리우레탄; 레이온; 레이온-트리아세테이트; 셀룰로오스; 셀룰로오스 아세테이트; 셀룰로오스 부티레이트; 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트; 셀로판; 질산셀룰로오스; 셀룰로오스 프로피오네이트; 셀룰로오스 에테르; 무정형 테플론; 폴리(에틸렌 글리콜); 및 카르복시메틸 셀룰로오스가 포함된다.
적합한 합성 중합체에는 비치환되고 치환된 직쇄 또는 분지쇄 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(프로필렌글리콜) 폴리(비닐알코올) 및 이들의 유도체, 예를 들어 메톡시폴리(에틸렌글리콜)과 같은 치환된 폴리(에틸렌글리콜) 및 이들의 유도체가 포함된다. 적합한 자연 발생 중합체에는 예를 들어 알부민, 아밀로스, 덱스트란, 글리코겐 및 이들의 유도체가 포함된다.
적합한 중합체는 500 Da 내지 50000 Da 범위, 예를 들어 5000 Da 내지 40000 Da, 또는 25000 Da 내지 40000 Da 범위의 평균 분자량을 가질 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 대상 항체가 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG) 또는 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체를 포함하는 경우, PEG 또는 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체는 약 0.5 킬로달톤(kDa) 내지 1 kDa, 약 1 kDa 내지 5 kDa, 5 kDa 내지 10 kDa, 10 kDa 내지 25 kDa, 25 kDa 내지 40 kDa, 또는 40 kDa 내지 60 kDa 범위의 분자량을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상 결합제는 PEG 중합체에 공유적으로 연결된다. 일부 실시양태에서, 대상 scFv 다량체는 PEG 중합체에 공유적으로 연결된다. 단백질에 접합하기에 적합한 PEG는 일반적으로 실온에서 물에 용해되며, 일반식 R(O-CH2-CH2)nO-R을 가지며, 여기서 R은 수소 또는 보호기, 예컨대 알킬 또는 알칸올기이며, n은 1 내지 1000의 정수이다. R이 보호기인 경우, 이는 일반적으로 1 내지 8개의 탄소를 갖는다. 대상 항체에 접합된 PEG는 선형 또는 분지형일 수 있다. 분지형 PEG 유도체에는 스타-PEG의 유도체와 다중 암 PEG의 유도체가 포함된다.
항체와 같은 대상 결합제는 글리코실화될 수 있으며, 예를 들어 대상 항체는 공유적으로 연결된 탄수화물 또는 다당류 모이어티를 포함할 수 있다. 항체의 글리코실화는 일반적으로 N-연결 또는 O-연결된다. 항체에 글리코실화 부위를 첨가하는 것은 N- 또는 O-연결된 글리코실화 부위를 포함하도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성된다. 유사하게, 글리코실화 부위의 제거는 항체의 천연 글리코실화 부위 내의 아미노산 변경에 의해 달성될 수 있다.
항체와 같은 대상 결합제는 예를 들어 글루타르알데히드, 동종이작용성 가교결합제, 또는 이종이작용성 가교결합제를 사용하여 제2 모이어티 (예를 들어, 지질, 대상 항체 이외의 폴리펩티드, 합성 중합체, 탄수화물 등)에 공유적으로 연결될 수 있다. 글루타르알데히드는 아미노 모이어티를 통해 폴리펩티드를 가교 결합한다. 동종이작용성 가교결합제 (예를 들어, 동종이작용성 이미도에스테르, 동종이작용성 N-히드록시숙신이미딜(NHS) 에스테르, 또는 동종이작용성 설프히드릴 반응성 가교제)는 2개 이상의 동일한 반응성 모이어티를 함유하고, 가교결합제가 연결될 폴리펩티드의 혼합물을 함유하는 용액에 첨가되는 원스텝 반응 절차에 사용될 수 있다. 동종이작용성 NHS 에스테르 및 이미도 에스테르는 아민 함유 폴리펩티드를 가교 결합한다. 약한 알칼리성 pH에서 이미도 에스테르는 오직 1차 아민과만 반응하여 이미도아미드를 형성하며, 가교 결합된 폴리펩티드의 전체 전하는 영향을 받지 않는다. 동종이작용성 설프히드릴 반응성 가교제에는 비스말레이미드헥산(BMH), 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠(DFDNB) 및 1,4-디-(3',2'-피리딜디티오) 프로피온아미도 부탄(DPDPB)이 포함된다.
이종이작용성 가교결합제는 2개 이상의 상이한 반응성 모이어티 (예를 들어, 아민 반응성 모이어티 및 설프히드릴 반응성 모이어티)를 갖고 아민 또는 설프히드릴 반응성 모이어티를 통해 폴리펩티드 중 하나와 가교 결합된 다음 반응하지 않은 모이어티를 통해 다른 폴리펩티드와 반응한다. 피리딜 디설파이드 가교제와 마찬가지로 다중 이종이작용성 할로아세틸 가교제가 이용 가능하다. 카르보디이미드는 카르복실기를 아민에 결합시켜 아미드 결합을 생성하는 이종이작용성 가교 시약의 전형적인 예이다.
항체와 같은 대상 결합제는 고체 지지체 상에 고정될 수 있다. 적합한 지지체는 당업계에 잘 알려져 있으며, 특히 시판되는 컬럼 재료, 폴리스티렌 비드, 라텍스 비드, 자성 비드, 콜로이드 금속 입자, 유리 및/또는 실리콘 칩 및 표면, 니트로셀룰로오스 스트립, 나일론 막, 시트, 듀라사이트, 반응 트레이의 웰(예를 들어, 다중 웰 플레이트), 플라스틱 튜브 등을 포함한다. 고체 지지체는 예를 들어 유리, 폴리스티렌, 폴리염화비닐, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리카보네이트, 덱스트란, 나일론, 아밀로스, 천연 및 변형 셀룰로오스, 폴리아크릴아미드, 아가로스, 및 자철석을 포함하여 다양한 물질을 포함할 수 있다. 대상 항체를 고체 지지체에 고정시키는 적합한 방법은 잘 알려져 있으며, 이온성, 소수성, 공유 상호작용 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 고체 지지체는 예를 들어 수용액에서 수용성 또는 불용성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 적합한 고체 지지체는 일반적으로 수용액에 불용성이다.
항체와 같은 대상 결합제는 일부 실시양태에서 검출가능한 표지를 포함할 수 있다. 적합한 검출 가능한 표지에는 분광학, 광화학, 생화학, 면역화학, 전기, 광학 또는 화학적 수단으로 검출할 수 있는 모든 조성물이 포함된다. 적합한 것에는 자성 비드 (예를 들어, Dynabeads™), 형광 염료(예를 들어, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 텍사스 레드, 로다민, 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질, 황색 형광 단백질 등), 방사성 표지(예를 들어, 3H, 125I, 35S, 14C, 또는 32P), 효소(예를 들어, 홀스래디쉬 과산화효소, 알칼리성 포스파타제, 루시퍼라제 및 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA)에서 일반적으로 사용되는 기타) 및 비색 표지, 예컨대 콜로이드 금 또는 유색 유리 또는 플라스틱 (예를 들어, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 라텍스 등) 비드가 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 항체와 같은 대상 결합제는 조영제 또는 방사성 동위원소를 포함하며, 여기서 조영제 또는 방사성 동위원소는 예를 들어 영상화, 예를 들어 인간에 대해 수행되는 영상화 절차에서 검출 가능한 표지로서 사용하기에 적합한 것이다. 표지의 비제한적인 예에는 1231I(요오드), 18F(불소), 99Tc(테크네튬), 111In(인듐), 67Ga(갈륨)과 같은 방사성 동위원소와 가돌리늄(Gd), 디스프로슘, 및 철과 같은 조영제가 포함된다. 방사성 Gd 동위원소(153Gd)도 이용 가능하며 인간이 아닌 포유동물의 영상화 절차에 적합하다.
항체와 같은 대상 결합제는 표준 기술을 사용하여 표지될 수 있다. 예를 들어, 대상 항체는 클로라민 T 또는 1,3,4,6-테트라클로로-3α,6α-데페닐글리코릴을 사용하여 요오드화될 수 있다. 항체와 같은 대상 결합제는 표준 기술을 통해 조영제로 표지될 수도 있다. 예를 들어, 대상 항체는 Gd 디에틸렌 트리아민 펜타아세트산(GdDTPA) 또는 Gd 테트라아자시클로도데칸테트라아세트산(GdDOTA)과 같은 저분자 Gd 킬레이트를 항체에 접합시킴으로써 Gd로 표지될 수 있다. 대상 항체는 예를 들어 폴리리신-Gd 킬레이트를 항체에 접합시킴으로써 Gd로 표지될 수 있다. 대안적으로, 대상 항체는 Gd 킬레이터 지질을 포함하는 상자성 중합 리포솜을 아비딘 및 비오티닐화된 항체와 함께 배양함으로써 Gd로 표지될 수 있다.
대상 결합제에 연결될 수 있는 적합한 형광 단백질에는 Aequoria victoria의 녹색 형광 단백질 또는 이의 돌연변이 또는 유도체, Enhanced GFP, 상업적으로 이용 가능한 많은 GFP, 예를 들어, Clontech, Inc.로부터의 것; 적색 형광 단백질; 황색 형광 단백질; Anthozoan 종의 다양한 형광 및 착색 단백질; 등이 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다.
항체와 같은 대상 결합제는 일부 실시양태에서 "방사선 불투과성" 표지, 예를 들어 엑스레이를 사용하여 쉽게 시각화할 수 있는 표지를 포함할 것이다. 방사선 불투과성 물질은 당업자에게 잘 알려져 있다. 가장 일반적인 방사선 불투과성 물질에는 요오드화물, 브롬화물 또는 바륨염이 포함된다. 다른 방사선 불투과성 물질도 공지되어 있으며, 유기 비스무트 유도체, 방사선 불투과성 멀티우레탄, 유기비스무트 복합재, 방사선 불투과성 바륨 다합체 착물 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
항체와 같은 대상 결합제는 일부 실시양태에서 융합 파트너, 예를 들어 리간드; 에피토프 태그; 펩티드; 항체 이외의 단백질; 등에 연결(예를 들어, 공유적으로 또는 비공유적으로 연결)될 것이다. 적합한 융합 파트너에는 생체 내에서 향상된 안정성(예를 들어, 향상된 혈청 반감기)을 부여하고; 정제의 용이성 등을 제공하고; 세포로부터 융합 단백질의 분비를 제공하고; 에피토프 태그, 예를 들어, His5 (HHHHH) (서열번호 177), His X6 (HHHHHH) (서열번호 178), C-myc (EQKLISEEDL) (서열번호 179), Flag (DYKDDDDK) (서열번호 180), StrepTag (WSHPQFEK) (서열번호 181), 헤마글루티닌, 예를 들어, HA Tag (YPYDVPDYA; 서열번호 182), 글루타티논-S-트랜스퍼라제 (GST), 티오레독신, 셀룰로오스 결합 도메인, RYIRS (서열번호 183), Phe-His-His-Thr (서열번호 184), 키틴 결합 도메인, S-펩티드, T7 펩티드, SH2 도메인, C-말단 RNA 태그, WEAAAREACCRECCARA (서열번호 185) 등을 제공하고; 검출 가능한 신호를 제공하고 (예를 들어, 검출 가능한 생성물 (예를 들어, β-갈락토시다제, 루시퍼라제)을 생성하는 효소 또는 자체적으로 검출 가능한 단백질 (예를 들어, 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질, 황색 형광 단백질 등); 다량체화, 예를 들어 면역글로불린의 Fc 부분과 같은 다량체화 도메인을 제공하는 등의 펩티드 및 폴리펩티드가 포함된다.
일부 실시양태에서, 대상 항체는 폴리아민 변형을 포함한다. 대상 항체는 자연 발생 또는 합성 폴리아민으로 변형될 수 있다. 유용한 자연 발생 폴리아민에는 푸트레신, 스페르미딘, 스페르민, 1,3-데아미노프로판, 노르스페르미딘, 신-호모스페르미딘, 테르민, 써모스퍼민, 칼도펜타민, 호모칼도펜타민 및 카나발민이 포함된다. 푸트레신, 스페르미딘 및 스페르민이 특히 유용하다. 합성 폴리아민은 실험식 CXHYNZ로 구성되며 환형 또는 비환형, 분지형 또는 비분지형, 1 내지 6개의 NR 또는 N(R)2 모이어티를 추가로 포함하는 3 내지 12개의 탄소 원자의 탄화수소 사슬일 수 있으며, 여기서 R은 H, (C1-C4) 알킬, 페닐, 또는 벤질이다. 폴리아민은 임의의 표준 가교 방법을 사용하여 항체에 연결될 수 있다.
본 개시내용의 항체와 같은 결합제가 공유적으로 연결된 이종 모이어티를 포함하는 경우, 이종 모이어티는 직접적으로 또는 링커를 통해 중쇄 및/또는 경쇄에 연결될 수 있다. 적합한 링커는 용이하게 선택될 수 있으며, 1개 아미노산 (예를 들어, Gly) 내지 20개 아미노산, 2개 아미노산 내지 15개 아미노산, 3개 아미노산 내지 12개 아미노산, 예컨대 4개 아미노산 내지 10개 아미노산, 5개 아미노산 내지 9개 아미노산, 6개 아미노산 내지 8개 아미노산 또는 7개 아미노산 내지 8개 아미노산과 같이 다양한 길이의 적합한 링커 중 하나일 수 있으며, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개의 아미노산일 수 있다.
유연한 링커의 예에는 글리신 중합체 (G)n, 글리신-세린 중합체(예를 들어 (GS)n, (GSGGS)n(서열번호 186) 및 (GGGS)n(서열번호 187) 포함, 여기서 n은 적어도 하나의 정수), 글리신-알라닌 중합체, 알라닌-세린 중합체, 및 당업계에 공지된 다른 유연한 링커가 포함된다.
일부 경우에, 결합제, 예를 들어 항체는 공유적으로 연결된 지질 또는 지방산 부분을 포함한다.
특정 실시양태에서, 결합제는 절단 가능한 또는 절단 가능하지 않은 링커를 통해 제제에 접합된다. 대상 항체의 사용에 적합한 링커에는 "유연한 링커"가 포함된다. 존재하는 경우, 링커 분자는 일반적으로 연결된 영역 사이의 일정 유연한 이동을 허용하기에 충분한 길이이다. 링커 분자의 길이는 일반적으로 약 6 내지 50개 원자이다. 링커 분자는 또한 예를 들어 아릴 아세틸렌, 2 내지 10개의 단량체 단위를 함유하는 에틸렌 글리콜 올리고머, 디아민, 이산, 아미노산, 또는 이들의 조합일 수 있다. 폴리펩티드에 결합할 수 있는 다른 링커 분자가 본 개시내용에 비추어 사용될 수 있다.
일부 실시양태에 따르면, 링커는 중성 pH(혈류 pH 7.3 내지 7.5)에서 안정하지만 약산성 엔도솜(pH 5.0 s지 6.5) 및 표적 세포(예를 들어, 암세포)의 리소좀(pH 4.5 내지 5.0)으로 내재화 시 가수분해되는 산 절단 가능성 링커와 같은 화학적으로 불안정한 링커이다. 화학적으로 불안정한 링커에는 히드라존 기반 링커, 옥심 기반 링커, 카보네이트 기반 링커, 에스테르 기반 링커 등이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 링커는 효소적으로 불안정한 링커, 예컨대 혈류에서는 안정적이지만 표적 세포 (예를 들어, 암세포)의 리소좀 내 리소좀 프로테아제(예컨대 카텝신 또는 플라스민)에 의해 표적 세포 내로 내재화 시 효소 절단을 겪는 효소적으로 불안정한 링커이다. 효소적으로 불안정한 링커에는 펩티드 결합을 포함하는 링커, 예를 들어 발린-시트룰린(VC) 링커, 예를 들어 말레이미도카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질(MC-vc-PAB) 링커, 발릴-알라닐-파라-아미노벤질옥시(Val-Ala-PAB) 링커 등과 같은 디펩티드 기반 링커가 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
결합제 변형 방법
항체와 같은 결합제는 임의의 다양한 방법을 사용하여 공유적으로 부착된 이종 모이어티 (예를 들어, 검출 가능한 표지, 약물 등)를 갖도록 변형될 수 있다. 본 개시내용은 관심 모이어티에 접합된 결합제를 제공하며, 여기서 관심 모이어티에 접합된 결합제는 "결합제 접합체"로 지칭된다. 본 개시내용의 결합제 접합체는 다음을 포함할 수 있다: 1) 관심 모이어티에 접합된 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심 모이어티에 접합된 Ig 경쇄 불변 영역; 2) 관심 모이어티에 접합된 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심 모이어티에 접합되지 않은 Ig 경쇄 불변 영역; 또는 3) 관심 모이어티에 접합되지 않은 Ig 중쇄 불변 영역; 및 관심 모이어티에 접합된 Ig 경쇄 불변 영역. 대상 결합제 접합체는 본원에 기술된 바와 같은 VH 및/또는 VL 도메인을 포함할 수 있다.
전술한 바와 같이, 결합제는 이종 모이어티의 부착을 위한 화학적 핸들 역할을 할 수 있는 2-포르밀글리신 잔기(fGly)를 포함하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 결합제의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역은 2-포르밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 전환되어 2-포르밀글리신(fGly)를 함유할 수 있는 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하도록 변형될 수 있다. 이러한 설파타제 모티프는 본원에서 FGE-변형 부위로도 지칭될 수 있다. FGE의 작용은 FGE가 면역글로불린 폴리펩티드 내에 위치한 설파타제 모티프에서 작용한다는 점에서 서열 특이적 방식으로 지시된다. 관심 모이어티는 본원에 기술된 바와 같이 태그된 Ig 폴리펩티드의 전환된 알데히드 태그의 fGly 잔기의 알데히드와의 반응을 위한 반응 파트너의 성분으로서 제공된다.
변형된 불변 영역 서열
일부 경우에, 본원에 개시된 결합제의 아미노산 서열, 예를 들어 항체는 생체 내 (예를 들어, 세포에서 알데히드 태그 함유 단백질의 번역 시) 또는 시험관 내 (예를 들어, 무세포 시스템에서 알데히드 태그 함유 단백질과 FGE를 접촉하여) 포르밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해 2-포르밀글리신(fGly) 잔기로 전환(산화)될 수 있는 세린 또는 시스테인 잔기를 함유하는 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된다. 이러한 설파타제 모티프는 본원에서 FGE-변형 부위로도 지칭될 수 있다.
설파타제 모티프
알데히드 태그의 최소 설파타제 모티프는 일반적으로 길이가 5 또는 6개 아미노산 잔기이고, 일반적으로 길이가 6개 이하의 아미노산 잔기이다. Ig 폴리펩티드에 제공된 설파타제 모티프는 적어도 5 또는 6개의 아미노산 잔기이고, 길이가 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 또는 7개 미만의 아미노산 잔기인 설파타제 모티프를 정의하기 위해 예를 들어, 길이가 5 내지 16, 6-16, 5-15, 6-15, 5-14, 6-14, 5-13, 6-13, 5-12, 6-12, 5-11, 6-11, 5-10, 6-10, 5-9, 6-9, 5-8, 또는 6-8개 아미노산 잔기일 수 있다.
특정 실시양태에서, 관심 결합제에는 결합제 내 설파타제 모티프의 서열을 제공하기 위해 천연 아미노산 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 잔기, 예컨대 2개 이상, 또는 3개 이상, 또는 4개 이상, 또는 5개 이상, 또는 6개 이상, 또는 7개 이상, 또는 8개 이상, 또는 9개 이상, 또는 10개 이상, 또는 11개 이상, 또는 12개 이상, 또는 13개 이상, 또는 14개 이상, 또는 15개 이상, 또는 16개 이상, 또는 17개 이상, 또는 18개 이상, 또는 19개 이상, 또는 20개 이상의 아미노산 잔기가 삽입, 결실, 치환 (대체)된 것들이 포함된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 결합제의 천연 아미노산 서열에 비해 아미노산 서열의 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2개 미만의 아미노산 잔기의 변형 (삽입, 추가, 결실 및/또는 치환/대체)을 포함한다. 결합제 (예를 들어, 항-CD30 항체)에 고유한 아미노산 서열이 원하는 설파타제 모티프의 하나 이상의 잔기를 함유하는 경우, 잔기의 총 변형 수는 예를 들어 부위 특이적 변형 (삽입, 추가, 삭제, 치환/대체)에 의해 천연 아미노산 잔기 옆에 있는 아미노산 잔기를 감소시켜 원하는 설파타제 모티프의 서열을 제공할 수 있다. 특정 실시양태에서, 삽입, 결실, 치환 (대체), 또는 추가 (예를 들어, N- 또는 C-말단에)되는 아미노산 잔기의 수를 최소화하기 위해 표적 결합제, 예컨대 항-CD30 항체의 천연 아미노산 서열의 변형 정도가 최소화된다. 항-CD30 항체와 같은 결합제의 아미노산 서열 변형 정도를 최소화하면 이러한 변형이 결합제의 기능 및/또는 구조에 미칠 수 있는 영향을 최소화할 수 있다.
특히 관심 있는 알데히드 태그는 적어도 최소 설파타제 모티프 ("공통 설파타제 모티프"라고도 지칭함)를 포함하는 것임을 유의해야 하지만, 더 긴 알데히드 태그도 본 개시내용에 의해 고려되고 포함되며 본 개시내용의 조성물 및 방법에서의 용도를 찾을 수 있다는 점을 쉽게 인식할 것이다. 따라서 알데히드 태그는 5개 또는 6개 잔기의 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있거나, 더 길 수 있고 추가 아미노산 잔기에 의해 모티프의 N- 및/또는 C-말단 측에서 옆에 위치할 수 있는 최소 설파타제 모티프를 포함할 수 있다. 예를 들어, 5 또는 6개 아미노산 잔기의 알데히드 태그가 고려될 뿐만 아니라, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 아미노산 잔기의 더 긴 아미노산 서열도 고려된다.
알데히드 태그는 Ig 중쇄의 C-말단에 또는 그 근처에 존재할 수 있고; 예를 들어, 알데히드 태그는 천연 야생형 Ig 중쇄의 C-말단의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 아미노산 내에 존재할 수 있다. 알데히드 태그는 Ig 중쇄의 CH1 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데히드 태그는 Ig 중쇄의 CH2 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데히드 태그는 Ig 중쇄의 CH3 도메인 내에 존재할 수 있다. 알데히드 태그는 Ig 경쇄 불변 영역, 예를 들어 카파 경쇄 불변 영역 또는 람다 경쇄 불변 영역에 존재할 수 있다.
특정 실시양태에서, 사용된 설파타제 모티프는 다음 일반식으로 기재될 수 있고:
X1Z10X2Z20X3Z30 (I')
여기서
Z10은 시스테인 또는 세린 ((C/S)로 나타낼 수도 있음)이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 ((P/A)로 나타낼 수도 있음)이고;
Z30은 염기성 아미노산 (예를 들어, 아르기닌(R), 및 리신(K) 또는 히스티딘(H), 예를 들어, 리신)이거나, 또는 지방족 아미노산 (알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I), 또는 프롤린(P), 예를 들어 A, G, L, V, 또는 I)이고;
X1은 존재하거나 존재하지 않으며, 존재하는 경우 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 L, M, V, S 또는 T, 예를 들어 L, M, S 또는 V일 수 있으나, 단, 설파타제 모티프가 결합제의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산일 수 있지만 일반적으로 지방족 아미노산, 극성, 비하전된 아미노산, 또는 황 함유 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어 S, T, A, V 또는 G일 수 있다.
항체 중쇄 및/또는 경쇄의 아미노산 서열은 변형되어 일반식 X1Z10X2Z20X3Z30의 적어도 5개 아미노산의 서열을 제공할 수 있으며, 여기서
Z10은 시스테인 또는 세린이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
Z30은 지방족 아미노산 또는 염기성 아미노산이고;
X1은 존재하거나 존재하지 않으며, 존재하는 경우 임의의 아미노산이며, 단, 이종 설파타제 모티프가 폴리펩티드의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
여기서 서열은 Ig 불변 영역의 용매-접근가능한 루프 영역 내에 있거나 이에 인접하고, 서열은 Ig 중쇄의 C-말단에 있지 않다.
설파타제 모티프는 일반적으로 선택된 FGE, 예를 들어 알데히드 태그된 결합제가 발현되는 숙주 세포에 존재하는 FGE 또는 무세포 시험관내 방법에서 알데히드 태그된 폴리펩티드와 접촉될 FGE에 의해 전환될 수 있도록 선택된다.
예를 들어, FGE가 진핵 FGE (예를 들어, 인간 FGE를 포함하는 포유동물 FGE)인 경우, 설파타제 모티프는 다음 일반식일 수 있고:
X1CX2PX3Z30 (I")
여기서
X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외)일 수 있으며, 예를 들어 L, M, S 또는 V일 수 있지만, 단, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어, S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어 S, T, A, V 또는 G일 수 있고;
Z30은 염기성 아미노산 (예를 들어, 아르기닌(R), 및 리신(K) 또는 히스티딘(H), 예를 들어, 리신일 수 있음)이거나 지방족 아미노산 (알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어 A, G, L, V 또는 I)이다.
설파타제 모티프의 특정 예는 VCTPSR (서열번호 37), LCSPSR (서열번호 38), LCAPSR (서열번호 39), LCVPSR (서열번호 40), LCGPSR (서열번호 41), ICTPAR (서열번호 42), LCTPSK (서열번호 43), MCTPSK (서열번호 44), VCTPSK (서열번호 45), LCSPSK (서열번호 46), LCAPSK (서열번호 47), LCVPSK (서열번호 48), LCGPSK (서열번호 49), LCTPSA (서열번호 50), ICTPAA (서열번호 51), MCTPSA (서열번호 52), VCTPSA (서열번호 53), LCSPSA (서열번호 54), LCAPSA (서열번호 55), LCVPSA (서열번호 56), LCGPSA (서열번호 57), LCTPSR (서열번호 58), 및 MCTPSR (서열번호 59)을 포함한다.
fGly-함유 서열
중쇄 및/또는 경쇄에 대한 FGE의 작용 시, 설파타제 모티프의 세린 또는 시스테인은 fGly로 전환된다. 따라서, fGly 함유 설파타제 모티프는 다음 일반식일 수 있고:
X1(fGly)X2Z20X3Z30 (I''')
여기서
fGly는 포르밀글리신 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 ((P/A)로 나타낼 수도 있음)이고;
Z30은 염기성 아미노산 (예를 들어, 아르기닌(R), 및 리신(K) 또는 히스티딘(H)일 수 있으며 일반적으로 리신임)이거나 지방족 아미노산 (알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I), 또는 프롤린(P), 예를 들어 A, G, L, V 또는 I이고;
X1은 존재하거나 존재하지 않을 수도 있고, 존재할 경우 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 L, M, V, S 또는 T, 예를 들어 L, M 또는 V일 수 있지만, 단, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어 S, T, A, V 또는 G일 수 있다.
전술한 바와 같이, 접합체를 생성하기 위해, fGly 잔기를 함유하는 결합제는 fGly를 약물 또는 활성제에 부착된 링커의 반응성 모이어티 (예를 들어, 상기 설명된 바와 같은 히드라지닐-인돌릴 또는 히드라지닐-피롤로-피리디닐 커플링 모이어티)와 반응시켜 약물 또는 활성제에 접합되어 fGly' 함유 설파타제 모티프를 생성할 수 있다. 본원에 사용된 용어 fGly'는 본원에 기술된 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링되는 설파타제 모티프의 아미노산 잔기를 지칭한다. 따라서 fGly' 함유 설파타제 모티프는 다음 일반식일 수 있고:
X1(fGly')X2Z20X3Z30 (II)
여기서
fGly'는 본원에 기술된 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 ((P/A)로 나타낼 수도 있음)이고;
Z30은 염기성 아미노산 (예를 들어, 아르기닌(R), 및 리신(K) 또는 히스티딘(H)일 수 있으며, 일반적으로는 리신임)이거나, 또는 지방족 아미노산 (알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어 A, G, L, V 또는 I이고;
X1은 존재하거나 존재하지 않을 수도 있고, 존재할 경우 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 L, M, V, S 또는 T, 예를 들어 L, M 또는 V일 수 있으나, 단, 설파타제 모티프가 결합제의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어 S, T, A, V 또는 G일 수 있다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기는 결합제의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 위치한다. 일부 경우에, 중쇄 불변 영역은 일반식 (III)의 서열을 포함하고:
X1(fGly')X2Z20X3Z30 (III)
여기서
fGly'는 본원에 기술된 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 ((P/A)로 나타낼 수도 있음)이고;
Z30은 염기성 아미노산 (예를 들어, 아르기닌(R), 및 리신(K) 또는 히스티딘(H)일 수 있으며, 일반적으로 리신임)이거나, 또는 지방족 아미노산 (알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I), 또는 프롤린(P)), 예를 들어, A, G, L, V, 또는 I이고;
X1은 존재할 수도 있고 존재하지 않을 수도 있고, 존재할 경우 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 L, M, V, S 또는 T, 예를 들어 L, M 또는 V일 수 있으나, 단, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어 S, T, A, V 또는 G일 수 있고;
여기서 서열은 아미노산 서열 QKSLSLSPGK (서열번호 188)의 C-말단이고, 서열은 천연 야생형 중쇄 Ig 불변 영역에는 존재하지 않는 1, 2, 3, 4, 5 또는 5 내지 10개의 아미노산을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 예를 들어, 천연 SLSLSPGK (서열번호 61) 서열 대신에 Ig 중쇄의 C-말단에서 서열 SLSLSPGSL(fGly')TPSRGS (서열번호 60)를 포함한다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기는 결합제의 경쇄 불변 영역에 위치한다. 특정 실시양태에서, 경쇄 불변 영역은 일반식 (III)의 서열을 포함하고:
X1(fGly')X2Z20X3Z30 (III)
여기서
fGly'는 본원에 기술된 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 ((P/A)로 나타낼 수도 있음)이고;
Z30은 염기성 아미노산 (예를 들어, 아르기닌(R), 및 리신(K) 또는 히스티딘(H)일 수 있으며 일반적으로 리신)이거나, 또는 지방족 아미노산 (알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어 A, G, L, V 또는 I이고;
X1은 존재할 수도 있고 존재하지 않을 수도 있고, 존재할 경우 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 L, M, V, S 또는 T, 예를 들어 L, M 또는 V일 수 있고, 단, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어 S, T, A, V 또는 G일 수 있고;
여기서 서열은 아미노산 서열 KVDNAL (서열번호 62)의 C-말단 및/또는 아미노산 서열 QSGNSQ (서열번호 63)의 N-말단이다.
특정 실시양태에서, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(fGly')TPSRQSGNSQ (서열번호 64)를 포함한다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기는 결합제, 예컨대 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 CH1 영역은 일반식 (III)의 서열을 포함하고:
X1(fGly')X2Z20X3Z30 (III)
여기서
fGly'는 본원에 기술된 링커를 통해 약물 또는 활성제에 커플링된 아미노산 잔기이고;
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기 ((P/A)로 나타낼 수도 있음)이고;
Z30은 염기성 아미노산 (예를 들어, 아르기닌(R), 및 리신(K) 또는 히스티딘(H)일 수 있으며 일반적으로 리신)이거나, 또는 지방족 아미노산 (알라닌(A), 글리신(G), 류신(L), 발린(V), 이소류신(I) 또는 프롤린(P), 예를 들어 A, G, L, V 또는 I이고;
X1은 존재할 수도 있고 존재하지 않을 수도 있고, 존재할 경우 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 L, M, V, S 또는 T, 예를 들어 L, M 또는 V일 수 있고, 단, 설파타제 모티프가 표적 폴리펩티드의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 독립적으로 임의의 아미노산, 예를 들어 지방족 아미노산, 황 함유 아미노산, 또는 극성, 비하전된 아미노산 (즉, 방향족 아미노산 또는 하전된 아미노산 이외), 예를 들어 S, T, A, V, G 또는 C, 예를 들어 S, T, A, V 또는 G일 수 있고;
여기서 서열은 아미노산 서열 SWNSGA (서열번호 65)의 C-말단 및/또는 아미노산 서열 GVHTFP (서열번호 66)의 N-말단이다.
특정 실시양태에서, 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(fGly')TPSRGVHTFP (서열번호 67)를 포함한다.
변형 부위
위에서 언급한 바와 같이, 항체와 같은 결합제의 아미노산 서열은 FGE의 생체내 (예를 들어, 세포에서 알데히드 태그 함유 단백질의 번역 시) 또는 시험관내(예를 들어, 무세포 시스템에서 알데히드 태그 함유 단백질을 FGE와 접촉시킴으로써) 작용에 의해 fGly 잔기로 전환 (산화)될 수 있는 세린 또는 시스테인 잔기를 함유하는 설파타제 모티프를 포함하도록 변형될 수 있다. 본 개시내용의 접합체를 생성하는 데 사용되는 결합제드는 적어도 Ig 불변 영역, 예를 들어 Ig 중쇄 불변 영역 (예를 들어, 적어도 CH1 도메인; 적어도 CH1 및 CH2 도메인; CH1, CH2 및 CH3 도메인, 또는 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인) 또는 Ig 경쇄 불변 영역을 포함한다. 이러한 Ig 폴리펩티드는 본원에서 "표적 Ig 폴리펩티드" 또는 "표적 항-CD30 항체" 또는 "표적 항-CD30 Ig 폴리펩티드"로 지칭된다.
설파타제 모티프가 도입되는 결합제, 예컨대 항체, 특히 항-CD30 항체의 부위는 임의의 편리한 부위일 수 있다. 위에서 언급한 바와 같이, 일부 경우에, (예를 들어, N- 또는 C-말단에) 삽입, 결실, 치환 (대체) 및/또는 추가되는 아미노산 잔기의 수를 최소화하기 위해 표적 항-CD30 폴리펩티드의 천연 아미노산 서열의 변형 정도가 최소화된다. 표적 항-CD30 폴리펩티드의 아미노산 서열 변형 정도를 최소화하면 이러한 변형이 항-CD30 기능 및/또는 구조에 미칠 수 있는 영향을 최소화할 수 있다.
항-CD30 항체와 같은 항체에서, 중쇄 불변 영역은 임의의 중쇄 이소형의 Ig 불변 영역, 비천연 발생 Ig 중쇄 불변 영역 (공통 Ig 중쇄 불변 영역 포함)을 포함할 수 있다. Ig 불변 영역 아미노산 서열은 알데히드 태그를 포함하도록 변형될 수 있으며, 여기서 알데히드 태그는 Ig 불변 영역의 용매 접근 가능한 루프 영역에 또는 그 근처에 존재한다. Ig 불변 영역 아미노산 서열은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개 아미노산, 또는 16개 초과의 아미노산의 삽입 및/또는 치환에 의해 변형되어, 위에서 설명한 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 제공할 수 있다.
일부 경우에, 알데히드 태그된 항체, 예컨대 항-CD30 항체는 알데히드 태그된 Ig 중쇄 불변 영역 (예를 들어, 적어도 CH1 도메인; 적어도 CH1 및 CH2 도메인; CH1, CH2 및 CH3 도메인; 또는 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인)을 포함한다. 알데히드 태그된 Ig 중쇄 불변 영역은 IgA, IgM, IgD, IgE, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이소형 중쇄의 중쇄 불변 영역 서열 또는 그의 임의의 동종이형 변이체, 예를 들어 인간 중쇄 불변 영역 서열 또는 마우스 중쇄 불변 영역 서열, 하이브리드 중쇄 불변 영역, 합성 중쇄 불변 영역, 또는 FGE에 의해 변형되어 fGly-변형된 Ig 폴리펩티드를 생성할 수 있는 적어도 하나의 설파타제 모티프를 포함하는 공통 중쇄 불변 영역 서열 등을 포함할 수 있다. Ig 중쇄의 동종이형 변이체는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, [Jefferis and Lefranc (2009) MAbs 1:4]를 참조한다.
일부 경우에, 알데히드 태그된 항체, 예컨대 항-CD30 항체는 알데히드 태그된 Ig 경쇄 불변 영역을 포함한다. 알데히드 태그된 Ig 경쇄 불변 영역은 카파 경쇄, 람다 경쇄, 예를 들어 인간 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역, 하이브리드 경쇄 불변 영역, 합성 경쇄 불변 영역, 또는 FGE에 의해 변형되어 fGly 변형된 항체, 예컨대 fGly 변형 항-CD30 항체를 생성할 수 있는 적어도 하나의 설파타제 모티프를 포함하는 공통 경쇄 불변 영역 서열 등을 포함할 수 있다. 예시적인 불변 영역에는 인간 감마 1 및 감마 3 영역이 포함된다. 설파타제 모티프를 제외하고 불변 영역은 야생형 아미노산 서열을 가질 수 있거나 야생형 아미노산 서열과 적어도 70% 동일한 (예를 들어, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일한) 아미노산 서열을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서 설파타제 모티프는 Ig 폴리펩티드 중쇄의 C-말단 이외의 위치에 있거나 그에 추가하여 존재한다. 위에서 언급한 바와 같이, 단리된 알데히드 태그된 항체, 예컨대 항-CD30 항체는 위에서 설명한 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된 중쇄 불변 영역 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 설파타제 모티프는 항체 중쇄 불변 영역의 표면 접근 가능한 루프 영역 내에 또는 그에 인접해 있다.
일부 경우에, 항체, 예컨대 항-CD30 항체에서 면역글로불린 아미노산 서열은 전술한 바와 같은 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되고, 여기서 변형은 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 설파타제 모티프는 1) 아미노산 122-127; 2) 아미노산 137-143; 3) 아미노산 155-158; 4) 아미노산 163-170; 5) 아미노산 163-183; 6) 아미노산 179-183; 7) 아미노산 190-192; 8) 아미노산 200-202; 9) 아미노산 199-202; 10) 아미노산 208-212; 11) 아미노산 220-241; 12) 아미노산 247-251; 13) 아미노산 257-261; 14) 아미노산 269-277; 15) 아미노산 271-277; 16) 아미노산 284-285; 17) 아미노산 284-292; 18) 아미노산 289-291; 19) 아미노산 299-303; 20) 아미노산 309-313; 21) 아미노산 320-322; 22) 아미노산 329-335; 23) 아미노산 341-349; 24) 아미노산 342-348; 25) 아미노산 356-365; 26) 아미노산 377-381; 27) 아미노산 388-394; 28) 아미노산 398-407; 29) 아미노산 433-451; 및 30) 아미노산 446-451 중 하나 이상에 상응하는 IgG1 중쇄 불변 영역의 영역 내에 있거나 그에 인접해 있고; 여기서 아미노산 넘버링은 인간 IgG1의 아미노산 넘버링을 기반으로 한다.
일부 경우에, 항체, 예컨대 항-CD30 항체에서 면역글로불린 아미노산 서열은 전술한 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되며, 여기서 변형은 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 설파타제 모티프는 1) 아미노산 1-6; 2) 아미노산 16-22; 3) 아미노산 34-47; 4) 아미노산 42-49; 5) 아미노산 42-62; 6) 아미노산 34-37; 7) 아미노산 69-71; 8) 아미노산 79-81; 9) 아미노산 78-81; 10) 아미노산 87-91; 11) 아미노산 100-121; 12) 아미노산 127-131; 13) 아미노산 137-141; 14) 아미노산 149-157; 15) 아미노산 151-157; 16) 아미노산 164-165; 17) 아미노산 164-172; 18) 아미노산 169-171; 19) 아미노산 179-183; 20) 아미노산 189-193; 21) 아미노산 200-202; 22) 아미노산 209-215; 23) 아미노산 221-229; 24) 아미노산 22-228; 25) 아미노산 236-245; 26) 아미노산 217-261; 27) 아미노산 268-274; 28) 아미노산 278-287; 29) 아미노산 313-331; 및 30) 아미노산 324-331 중 하나 이상에 상응하는 IgG1 중쇄 불변 영역의 영역 내에 있거나 그에 인접해 있고; 여기서 아미노산 넘버링은 인간 IgG1 (인간 IgG1 불변 영역)의 아미노산 넘버링을 기반으로 한다.
IgG1 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능 루프 영역은 1) ASTKGP (서열번호 68); 2) KSTSGGT (서열번호 69); 3) PEPV (서열번호 70); 4) NSGALTSG (서열번호 71); 5) NSGALTSGVHTFPAVLQSSGL (서열번호 72); 6) QSSGL (서열번호 73); 7) VTV; 8) QTY; 9) TQTY (서열번호 74); 10) HKPSN (서열번호 75); 11) EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG (서열번호 76); 12) FPPKP (서열번호 77); 13) ISRTP (서열번호 78); 14) DVSHEDPEV (서열번호 79); 15) SHEDPEV (서열번호 80); 16) DG; 17) DGVEVHNAK (서열번호 81); 18) HNA; 19) QYNST (서열번호 82); 20) VLTVL (서열번호 83); 21) GKE; 22) NKALPAP (서열번호 84); 23) SKAKGQPRE (서열번호 85); 24) KAKGQPR (서열번호 86); 25) PPSRKELTKN (서열번호 87); 26) YPSDI (서열번호 88); 27) NGQPENN (서열번호 89); 28) TPPVLDSDGS (서열번호 90); 29) HEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 91); 및 30) SLSPGK (서열번호 92)를 포함한다.
일부 경우에, 표적 면역글로불린 아미노산 서열은 전술한 바와 같은 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되며, 여기서 변형은 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 설파타제 모티프는 1) 아미노산 1-6; 2) 아미노산 13-24; 3) 아미노산 33-37; 4) 아미노산 43-54; 5) 아미노산 58-63; 6) 아미노산 69-71; 7) 아미노산 78-80; 8) 87-89; 9) 아미노산 95-96; 10) 114-118; 11) 122-126; 12) 134-136; 13) 144-152; 14) 159-167; 15) 175-176; 16) 184-188; 17) 195-197; 18) 204-210; 19) 216-224; 20) 231-233; 21) 237-241; 22) 252-256; 23) 263-269; 24) 273-282; 25) 아미노산 299-302 중 하나 이상에 상응하는 IgG2 중쇄 불변 영역의 영역 내에 있거나 그에 인접해 있고; 여기서 아미노산 넘버링은 아미노산 서열 (인간 IgG2)의 넘버링을 기반으로 한다.
IgG2 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능 루프 영역은 1) ASTKGP (서열번호 68); 2) PCSRSTSESTAA (서열번호 93); 3) FPEPV (서열번호 94); 4) SGALTSGVHTFP (서열번호 95); 5) QSSGLY (서열번호 96); 6) VTV; 7) TQT; 8) HKP; 9) DK; 10) VAGPS (서열번호 97); 11) FPPKP (서열번호 77); 12) RTP; 13) DVSHEDPEV (서열번호 79); 14) DGVEVHNAK (서열번호 81); 15) FN; 16) VLTVV (서열번호 101); 17) GKE; 18) NKGLPAP (서열번호 102); 19) SKTKGQPRE (서열번호 103); 20) PPS; 21) MTKNQ (서열번호 104); 22) YPSDI (서열번호 88); 23) NGQPENN (서열번호 89); 24) TPPMLDSDGS (서열번호 107); 25) GNVF (서열번호 108); 및 26) HEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 91)를 포함한다.
일부 경우에, 표적 면역글로불린 아미노산 서열은 전술한 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되며, 여기서 변형은 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 설파타제 모티프는 1) 아미노산 1-6; 2) 아미노산 13-22; 3) 아미노산 33-37; 4) 아미노산 43-61; 5) 아미노산 71; 6) 아미노산 78-80; 7) 87-91; 8) 아미노산 97-106; 9) 111-115; 10) 147-167; 11) 173-177; 16) 185-187; 13) 195-203; 14) 210-218; 15) 226-227; 16) 238-239; 17) 246-248; 18) 255-261; 19) 267-275; 20) 282-291; 21) 아미노산 303-307; 22) 아미노산 313-320; 23) 아미노산 324-333; 24) 아미노산 350-352; 25) 아미노산 359-365; 및 26) 아미노산 372-377 중 하나 이상에 상응하는 IgG3 중쇄 불변 영역의 영역 내에 있거나 그에 인접해 있고; 여기서 아미노산 넘버링은 아미노산 서열 (인간 IgG3)의 넘버링을 기반으로 한다.
IgG3 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능 루프 영역은 1) ASTKGP (서열번호 68); 2) PCSRSTSGGT (서열번호 110); 3) FPEPV (서열번호 94); 4) SGALTSGVHTFPAVLQSSG (서열번호 112); 5) V; 6) TQT; 7) HKPSN (서열번호 75); 8) RVELKTPLGD (서열번호 114); 9) CPRCPKP (서열번호 115); 10) PKSCDTPPPCPRCPAPELLGG (서열번호 116); 11) FPPKP (서열번호 77); 12) RTP; 13) DVSHEDPEV (서열번호 79); 14) DGVEVHNAK (서열번호 81); 15) YN; 16) VL; 17) GKE; 18) NKALPAP (서열번호 84); 19) SKTKGQPRE (서열번호 103); 20) PPSREEMTKN (서열번호 122); 21) YPSDI (서열번호 88); 22) SSGQPENN (서열번호 124); 23) TPPMLDSDGS (서열번호 107); 24) GNI; 25) HEALHNR (서열번호 126); 및 26) SLSPGK (서열번호 92)를 포함한다.
일부 경우에, 표적 면역글로불린 아미노산 서열은 전술한 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되며, 여기서 변형은 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실, 및/또는 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 설파타제 모티프는 1) 아미노산 1-5; 2) 아미노산 12-23; 3) 아미노산 32-36; 4) 아미노산 42-53; 5) 아미노산 57-62; 6) 아미노산 68-70; 7) 아미노산 77-79; 8) 아미노산 86-88; 9) 아미노산 94-95; 10) 아미노산 101-102; 11) 아미노산 108-118; 12) 아미노산 122-126; 13) 아미노산 134-136; 14) 아미노산 144-152; 15) 아미노산 159-167; 16) 아미노산 175-176; 17) 아미노산 185-186; 18) 아미노산 196-198; 19) 아미노산 205-211; 20) 아미노산 217-226; 21) 아미노산 232-241; 22) 아미노산 253-257; 23) 아미노산 264-265; 24) 269-270; 25) 아미노산 274-283; 26) 아미노산 300-303; 27) 아미노산 399-417 중 하나 이상에 상응하는 IgG4 중쇄 불변 영역 내에 있거나 그에 인접해 있고; 여기서 아미노산 넘버링은 아미노산 서열 (인간 IgG4)의 넘버링을 기반으로 한다.
IgG4 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능 루프 영역은 1) STKGP (서열번호 128); 2) PCSRSTSESTAA (서열번호 93); 3) FPEPV (서열번호 94); 4) SGALTSGVHTFP (서열번호 95); 5) QSSGLY (서열번호 96); 6) VTV; 7) TKT; 8) HKP; 9) DK; 10) YG; 11) CPAPEFLGGPS (서열번호 133); 12) FPPKP (서열번호 77); 13) RTP; 14) DVSQEDPEV (서열번호 135); 15) DGVEVHNAK (서열번호 81); 16) FN; 17) VL; 18) GKE; 19) NKGLPSS (서열번호 137); 20) SKAKGQPREP (서열번호 138); 21) PPSQEEMTKN (서열번호 139); 22) YPSDI (서열번호 88); 23) NG; 24) NN; 25) TPPVLDSDGS (서열번호 90); 26) GNVF (서열번호 108); 및 27) HEALHNHYTQKSLSLSLGK (서열번호 143)를 포함한다.
일부 경우에, 결합제는 전술한 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되며, 여기서 변형은 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 설파타제 모티프는 1) 아미노산 1-13; 2) 아미노산 17-21; 3) 아미노산 28-32; 4) 아미노산 44-54; 5) 아미노산 60-66; 6) 아미노산 73-76; 7) 아미노산 80-82; 8) 아미노산 90-91; 9) 아미노산 123-125; 10) 아미노산 130-133; 11) 아미노산 138-142; 12) 아미노산 151-158; 13) 아미노산 165-174; 14) 아미노산 181-184; 15) 아미노산 192-195; 16) 아미노산 199; 17) 아미노산 209-210; 18) 아미노산 222-245; 19) 아미노산 252-256; 20) 아미노산 266-276; 21) 아미노산 293-294; 22) 아미노산 301-304; 23) 아미노산 317-320; 24) 아미노산 329-353 중 하나 이상에 상응하는 IgA 중쇄 불변 영역의 영역 내에 있거나 그에 인접해 있고; 아미노산 넘버링은 아미노산 서열 (인간 IgA)의 넘버링을 기반으로 한다.
IgA 중쇄의 예시적인 표면 접근 가능 루프 영역은 1) ASPTSPKVFPLSL (서열번호 144); 2) QPDGN (서열번호 145); 3) VQGFFPQEPL (서열번호 146); 4) SGQGVTARNFP (서열번호 147); 5) SGDLYTT (서열번호 148); 6) PATQ (서열번호 149); 7) GKS; 8) YT; 9) CHP; 10) HRPA (서열번호 150); 11) LLGSE (서열번호 151); 12) GLRDASGV (서열번호 152); 13) SSGKSAVQGP (서열번호 153); 14) GCYS (서열번호 154); 15) CAEP (서열번호 155); 16) PE; 17) SGNTFRPEVHLLPPPSEELALNEL (서열번호 156); 18) ARGFS (서열번호157); 19) QGSQELPREKY (서열번호158); 20) AV; 21) AAED (서열번호 159); 22) HEAL (서열번호 160); 및 23) IDRLAGKPTHVNVSVVMAEVDGTCY (서열번호 161)를 포함한다.
설파타제 모티프는 Ig 중쇄의 이러한 변형 부위의 이들 아미노산 서열 중 하나 이상 내에 또는 그에 인접하게 제공될 수 있다. 예를 들어, Ig 중쇄 폴리펩티드 아미노산 서열은 이들 아미노산 서열 중 하나 이상에서 변형되어 (예를 들어, 변형이 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함하는 경우) 이들 변형 부위에 인접한 N-말단 및/또는 인접한 C-말단에서 설파타제 모티프를 제공할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, Ig 중쇄 폴리펩티드 아미노산 서열은 이들 아미노산 서열 중 하나 이상에서 변형되어 (예를 들어, 변형이 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함하는 경우) Ig 중쇄 변형 부위의 임의의 두 잔기 사이에 설파타제 모티프를 제공할 수 있다. 일부 실시양태에서, Ig 중쇄 폴리펩티드 아미노산 서열은 서로 인접할 수 있거나 1, 2, 3, 4개 이상 (예를 들어, 약 1 내지 약 25개, 약 25 내지 약 50개, 또는 약 50 내지 약 100개, 또는 그 이상)의 아미노산으로 분리될 수 있는 2개의 모티프를 포함하도록 변형될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 천연 아미노산 서열이 설파타제 모티프 서열의 하나 이상의 아미노산 잔기를 제공하는 경우, 변형 부위에 설파타제 모티프를 제공하기 위해 Ig 중쇄 폴리펩티드 아미노산 서열의 변형 부위의 선택된 아미노산 잔기는 변형 (예를 들어, 변형이 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함하는 경우)될 수 있다.
따라서, 표면 접근 가능 루프 영역의 아미노산 서열은 변형되어 설파타제 모티프를 제공할 수 있고, 여기서 변형은 삽입, 결실, 및/또는 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, 변형이 CH1 도메인에 있는 경우, 표면 접근 가능 루프 영역은 아미노산 서열 NSGALTSG (서열번호 71)를 가질 수 있고, 알데히드 태그된 서열은 예를 들어 NSGALCTPSRG (서열번호 162)일 수 있고, 예를 들어 여기서 NSGALTSG (서열번호 71) 서열의 "TS" 잔기는 "CTPSR"로 대체되어 설파타제 모티프는 서열 LCTPSR을 갖게 된다. 또 다른 예로서, 변형이 CH2 도메인에 있는 경우, 표면 접근 가능 루프 영역은 아미노산 서열 NKALPAP (서열번호 84)를 가질 수 있고, 알데히드 태그된 서열은 예를 들어 NLCTPSRAP (서열번호 163)일 수 있으며, 예를 들어 여기서 NKALPAP 서열의 "KAL" 잔기는 "LCTPSR"로 대체되어 설파타제 모티프가 서열 LCTPSR을 갖게 된다. 또 다른 예로서, 변형이 CH2/CH3 도메인에 있는 경우, 표면 접근 가능 루프 영역은 아미노산 서열 KAKGQPR (서열번호 86)을 가질 수 있고, 알데히드 태그된 서열은 예를 들어 KAKGLCTPSR (서열번호 192)일 수 있으며, 예를 들어 여기서 KAKGQPR 서열의 "GQP" 잔기는 "LCTPS"로 대체되어 설파타제 모티프가 서열 LCTPSR을 갖게 된다.
위에서 언급한 바와 같이, 단리된 알데히드 태그된 항체, 예컨대 항-CD30 항체는 위에서 설명한 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형된 경쇄 불변 영역 아미노산 서열을 포함할 수 있으며, 여기서 설파타제 모티프는 Ig 폴리펩티드 경쇄 불변 영역의 표면 접근 가능 루프 영역 내에 있거나 그에 인접해 있다.
일부 경우에, 표적 면역글로불린 아미노산 서열은 전술한 바와 같은 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되며, 여기서 변형은 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실 및/또는 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 설파타제 모티프는 1) 아미노산 130-135; 2) 아미노산 141-143; 3) 아미노산 150; 4) 아미노산 162-166; 5) 아미노산 163-166; 6) 아미노산 173-180; 7) 아미노산 186-194; 8) 아미노산 211-212; 9) 아미노산 220-225; 10) 아미노산 233-236 중 하나 이상에 상응하는 Ig 경쇄 불변 영역 내에 있거나 그에 인접하고; 여기서 아미노산 넘버링은 인간 카파 경쇄의 아미노산 넘버링을 기반으로 한다. 일부 경우에, 표적 면역글로불린 아미노산 서열은 상기 기술된 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되고, 여기서 변형은 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실, 및/또는 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 설파타제 모티프는 1) 아미노산 1-6; 2) 아미노산 12-14; 3) 아미노산 21; 4) 아미노산 33-37; 5) 아미노산 34-37; 6) 아미노산 44-51; 7) 아미노산 57-65; 8) 아미노산 83-83; 9) 아미노산 91-96; 10) 아미노산 104-107 중 하나 이상에 상응하는 Ig 경쇄 불변 영역 내에 있거나 그에 인접하며; 여기서 아미노산 넘버링은 도 인간 카파 경쇄를 기반으로 한다.
Ig 경쇄 (예를 들어, 인간 카파 경쇄)의 예시적 표면 접근 가능 루프 영역은 1) RTVAAP (서열번호 165); 2) PPS; 3) Gly (예를 들어, 인간 카파 경쇄 서열의 위치 150에 있는 Gly 참조); 4) YPREA (서열번호 166); 5) PREA; 6) DNALQSGN (서열번호 167); 7) TEQDSKDST (서열번호 168); 8) HK; 9) HQGLSS (서열번호 169); 및 10) RGEC (서열번호 170)를 포함한다.
Ig 람다 경쇄의 예시적 표면 접근 가능 루프 영역은 QPKAAP (서열번호 171), PPS, NK, DFYPGAV (서열번호 172), DSSPVKAG (서열번호 173), TTP, SN, HKS, EG, 및 APTECS (서열번호 174)를 포함한다.
일부 경우에, 표적 면역글로불린 아미노산 서열은 상기 기술된 바와 같이 설파타제 모티프를 포함하도록 변형되며, 여기서 변형은 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입, 결실, 및/또는 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 설파타제 모티프는 1) 아미노산 1-6; 2) 아미노산 12-14; 3) 아미노산 121-22; 4) 아미노산 31-37; 5) 아미노산 44-51; 6) 아미노산 55-57; 7) 아미노산 61-62; 8) 아미노산 81-83; 9) 아미노산 91-92; 10) 아미노산 102-105 중 하나 이상에 상응하는 래트 Ig 경쇄 불변 영역의 영역 내에 있거나 그에 인접하여; 여기서 아미노산 넘버링은 래트 경쇄의 아미노산 넘버링을 기반으로 한다.
일부 경우에, 설파타제 모티프는 중쇄 불변 영역의 CH1 영역에 도입된다. 일부 경우에, 설파타제 모티프는 중쇄의 C-말단에 또는 그 근처 (예를 들어, 1 내지 10개 아미노산 이내)에 도입된다. 일부 경우에, 설파타제 모티프는 경쇄 불변 영역에 도입된다.
일부 경우에, 설파타제 모티프는 항-CD30 중쇄 불변 영역의 CH1 영역, 예를 들어 IgG1 중쇄 아미노산 서열의 아미노산 서열의 121 내지 219 내에 도입된다. 예를 들어, 일부 경우에, 설파타제 모티프는 아미노산 서열: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVE (서열번호 175)에 도입된다. 예를 들어, 이러한 실시양태 중 일부에서, 아미노산 서열 GALTSGVH (서열번호 193)는 GALCTPSRGVH (서열번호 194)로 변형되고, 여기서 설파타제 모티프는 LCTPSR (서열번호 58)이다.
일부 경우에, 설파타제 모티프는 서열번호 175의 91번째 위치에서 아스파라긴 잔기 앞에 추가된다. 설파타제 모티프는 LCTPSR (서열번호 58)일 수 있다. 예를 들어, 설파타제 모티프 LCTPSR (서열번호 58)는 서열번호 175의 91번째 위치에 있는 아스파라긴 잔기 앞에 첨가되어 KPSLCTPSRNTK (서열번호 189)의 서열을 포함하는 항체를 생성할 수 있다. 설파타제 모티프에 대한 이러한 삽입 부위는 본원에서 91N으로 지칭된다.
91N 부위에 설파타제 모티프를 삽입하는 특정 세부사항은 미국 특허 출원 공개 번호 20200010561에 기재되어 있으며, 이는 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
예를 들어, 설파타제 모티프 LCTPSR (서열번호 58)은 서열번호 175의 91번째 위치에 있는 아스파라긴 잔기 앞에 추가되어 다음 서열을 포함하는 항체를 생성할 수 있다 (설파타제 모티프는 굵은 이탤릭체로 강조 표시되어 있으며, 91번째 아스파라긴 잔기는 굵은 글씨로 강조 표시됨).ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPS LCTPSR N TKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 190).
일부 경우에, 설파타제 모티프는 서열번호 175에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열에서 91번째 아스파라긴 잔기 앞에 첨가된다. 서열번호 175의 서열과 이러한 서열의 서열 정렬에 기초하여, 당업자는 91번째 아스파라긴 잔기의 위치를 용이하게 결정할 수 있고, 이에 따라 설파타제 모티프 삽입 부위를 결정할 수 있다.
91N 부위에 설파타제 모티프의 삽입을 갖는 항체의 비제한적인 예는 아래에 설명된 실시예 9-10 및 도 18 내지 21에 제공된다.
일부 경우에, 설파타제 모티프는 항체 중쇄의 C-말단에 또는 그 근처에 도입되고, 예를 들어 설파타제 모티프는 항체 중쇄의 1개 아미노산, 2개 아미노산 (aa), 3개 aa, 4개 aa, 5개 aa, 6개 aa, 7개 aa, 8개 aa, 9개 aa 또는 10개 aa C-말단 내에 도입된다. 하나의 비제한적인 예로서, 항체 중쇄의 C-말단 리신 잔기는 아미노산 서열 SLCTPSRGS (서열번호 195)로 대체될 수 있다.
일부 경우에, 설파타제 모티프는 항-CD30 항체 경쇄의 불변 영역에 도입된다. 하나의 비제한적인 예로서, 일부 경우에, 설파타제 모티프가 항-CD30 항체 경쇄의 불변 영역에 도입되는데, 여기서 설파타제 모티프는 KVDNAL (서열번호 62)의 C-말단 및/또는 QSGNSQ (서열번호 63)의 N-말단이다. 예를 들어, 일부 경우에, 설파타제 모티프는 LCTPSR (서열번호 58)이고, 항-CD30 경쇄는 아미노산 서열 KVDNALLCTPSRQSGNSQ (서열번호 176)를 포함한다.
약물
일부 경우에, 본 개시내용의 결합제는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄에 공유적으로 연결된 약물을 포함한다. "약물"에는 소분자 약물, 펩티드 약물, 독소 (예를 들어, 세포독소) 등이 포함된다. 일부 경우에, 본 개시내용의 결합제는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄에 공유적으로 연결된 약물 (예를 들어, 본원에 기술된 화학식 (I) 및 화학식 (Ia)의 접합체의 W1, 또는 본원에 기술된 화학식 (II)의 접합체의 W11 또는 W12)을 갖는다. 예를 들어, 본 개시내용의 결합제 (예를 들어, 항체) 접합체는 치환기 W1, W11 또는 W12로서 본원에 기재된 바와 같은 약물 또는 활성제를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "소분자 약물"은 관심 있는 제약 활성을 나타내고 일반적으로 분자량이 약 800 Da 이하 또는 2000 Da 이하이지만 최대 5kDa의 분자를 포함할 수 있으며 약 10kDa만큼 클 수도 있는 화합물, 예를 들어 유기 화합물을 지칭한다. 무기 소분자는 탄소 원자를 포함하지 않는 분자를 지칭하고, 유기 소분자는 적어도 하나의 탄소원자를 포함하는 화합물을 지칭한다.
본원에 사용된 "펩티드 약물"은 아미노산 함유 중합체 화합물을 지칭하며, 자연 발생 및 비천연 발생 펩티드, 올리고펩티드, 환형 펩티드, 폴리펩티드 및 단백질뿐만 아니라 펩티드 모방체도 포함하는 것을 의미한다. 펩티드 약물은 화학적 합성에 의해 얻어지거나 유전적으로 암호화된 공급원 (예를 들어, 재조합 공급원)으로부터 생산될 수 있다. 펩티드 약물의 분자량 범위는 200Da 내지 10kDa 또는 그 이상일 수 있다.
일부 경우에, 약물은 독소 예를 들어, 세포독소이다. 고등 식물에 어디에나 존재하는 단백질 종류인 리보솜 비활성화 단백질(RIP)이 이러한 세포독소의 예이다. 적합한 세포독소에는 리신, 아브린, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소 (예를 들어, PE35, PE37, PE38, PE40 등), 사포린, 젤로닌, 국화과 항바이러스 단백질(PAP), 보툴리눔 독소, 브리오딘, 모모딘, 및 부가닌이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
일부 경우에, 약물은 암 화학요법제이다. 암 화학요법제는 암세포의 증식을 감소시키는 비펩티드성(즉, 비단백질성) 화합물을 포함하며, 세포독성제 및 세포증식억제제를 포함한다. 화학요법제의 비제한적인 예에는 알킬화제, 니트로소우레아, 항대사제, 항종양 항생제, 식물 (빈카) 알칼로이드 및 스테로이드 호르몬이 포함된다. 펩티드 화합물도 사용될 수 있다.
적합한 암 화학요법제는 돌라스타틴 및 이의 활성 유사체 및 유도체; 및 아우리스타틴 및 이의 활성 유사체 및 유도체를 포함한다. 적합한 암 화학요법제는 또한 메이탄시노이드 및 이의 활성 유사체 및 유도체; 및 듀오카르마이신 및 이의 활성 유사체 및 유도체도 포함한다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제는 메이탄신일 수 있다. "메이탄신", "메이탄신 모이어티", "메이탄신 활성제 모이어티" 및 "메이탄시노이드"는 메이탄신 및 이의 유사체 및 유도체, 그리고 제약 활성 메이탄신 모이어티 및/또는 이의 일부를 지칭한다. 폴리펩티드에 접합된 메이탄신은 본원에 기술된 메이탄신 및 이의 유사체 및 유도체 (예를 들어, 데아실메이탄신)와 같은 다양한 메이탄시노이드 모이어티 중 임의의 것일 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 활성제는 아우리스타틴, 또는 이의 유사체 또는 유도체, 또는 제약 활성 아우리스타틴 모이어티 및/또는 이의 일부일 수 있다. 폴리펩티드에 접합된 아우리스타틴은 본원에 기술된 아우리스타틴 및 이의 유사체 및 유도체와 같은 다양한 아우리스타틴 모이어티 중 임의의 것일 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 본원에 기재된 접합체 및 화합물에 사용되는 약물의 예에는 아우리스타틴 또는 아우리스타틴 유도체, 예를 들어 모노메틸 아우리스타틴 D(MMAD), 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF), 그의 유도체 등이 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다.
일부 경우에, 적합한 암 화학요법제는 토포이소머라제 억제제, 예컨대 캄프토테신 및 이의 유도체 (예를 들어, 토포테칸, 이리노테칸, 벨로테칸, 엑사테칸, SN-38, 실라테칸, 코시테칸, 루르토테칸, 기마테칸, 루비테칸, 9-아미노캄프토테신(9-AC) 등)를 포함하지만 이에 국한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화학식 (I) 및 화학식 (Ia)의 약물 W1 또는 본원에 기재된 화학식 (II)의 W11 또는 W12는 캄프토테신, 또는 그의 유사체 또는 유도체이다. 예를 들어, 일부 경우에, 캄프토테신 또는 이의 유사체 또는 유도체는 화학식 (IV)의 화합물이고:
여기서:
R31 및 R32는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R31 및 R32는 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고;
R33 및 R34는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R33 및 R34는 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고;
R35는 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R36은 OH 및 OC(O)R37로부터 선택되고;
R37은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다.
화학식 (IV)의 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화학식 (I) 또는 화학식 (Ia)의 링커 L, 또는 본원에 기재된 화학식 (II)의 제1 링커 LA 또는 제2 링커 LB는 R31, R32, R33, R34, R35 또는 R36에서 화학식 (IV)의 화합물에 부착된다.
특정 실시양태에서, R31 및 R32는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R31 및 R32는 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성한다.
특정 실시양태에서, R31은 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R31은 수소이다. 특정 실시양태에서, R31은 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 실시양태에서, R31은 히드록시이다. 특정 실시양태에서, R31은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R31은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R31은 메틸이다. 특정 실시양태에서, R31은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R31은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R31은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R31은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R31은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R31은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R31은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R32는 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R32는 수소이다. 특정 실시양태에서, R32는 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 실시양태에서, R32는 히드록시이다. 특정 실시양태에서, R32는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R32는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R32는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R32는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R32는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R32는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R32는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R32는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R32는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R32는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R31 및 R32는 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성한다. 특정 실시양태에서, R31 및 R32는 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 시클로알킬을 형성한다. 특정 실시양태에서, R31 및 R32는 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R31 및 R32는 환형으로 연결되어 5원 시클로알킬을 형성한다. 특정 실시양태에서, R31 및 R32는 환형으로 연결되어 6원 시클로알킬을 형성한다. 특정 실시양태에서, R31 및 R32는 환형으로 연결되어 5원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R31 및 R32는 환형으로 연결되어 6원 헤테로시클릴을 형성한다.
특정 실시양태에서, R33 및 R34는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, R33 및 R34는 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성한다.
특정 실시양태에서, R33은 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R33은 수소이다. 특정 실시양태에서, R33은 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 실시양태에서, R33은 히드록시이다. 특정 실시양태에서, R33은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R33은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R33은 메틸이다. 특정 실시양태에서, R33은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R33은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R33은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R33은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R333은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R333은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R333은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R34는 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R34는 수소이다. 특정 실시양태에서, R34는 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 실시양태에서, R34는 히드록시이다. 특정 실시양태에서, R34는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R34는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R34는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R34는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R34는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R34는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R34는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R34는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R34는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R34는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R33 및 R34는 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성한다. 특정 실시양태에서, R33 및 R34는 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 시클로알킬을 형성한다. 특정 실시양태에서, R33 및 R34는 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R33 및 R34는 환형으로 연결되어 5원 시클로알킬을 형성한다. 특정 실시양태에서, R33 및 R34는 환형으로 연결되어 6원 시클로알킬을 형성한다. 특정 실시양태에서, R33 및 R34는 환형으로 연결되어 5원 헤테로시클릴을 형성한다. 특정 실시양태에서, R33 및 R34는 환형으로 연결되어 6원 헤테로시클릴을 형성한다.
특정 실시양태에서, R35는 수소, 할로겐, 히드록시, 아미노, 치환된 아미노, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R35는 수소이다. 특정 실시양태에서, R35는 할로겐 (예를 들어, F, Cl, Br, I)이다. 특정 실시양태에서, R35는 히드록시이다. 특정 실시양태에서, R35는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시양태에서, R35는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R35는 메틸이다. 특정 실시양태에서, R35는 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R35는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R35는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시양태에서, R35는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R35는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R35는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R35는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, R36은 OH 및 OC(O)R37로부터 선택된다. 특정 실시양태에서 R36은 OH이다. 특정 실시양태에서, R36은 OC(O)R37이다.
특정 실시양태에서, R37은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R37은 수소이다. 특정 실시양태에서, R37은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R37은 알케닐 또는 치환된 알케닐, 예컨대 C2-6 알케닐 또는 C2-6 치환된 알케닐, 또는 C2-4 알케닐 또는 C2-4 치환된 알케닐, 또는 C2-3 알케닐 또는 C2-3 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, R37은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, R37은 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R37은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R37은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R37은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IV)의 화합물은 화학식 (IVa)의 구조를 갖는다:
화학식 (IVa)의 화합물의 특정 실시양태에서, R33은 상기 기재된 바와 같다.
화학식 (IVa)의 화합물의 특정 실시양태에서, R36은 상기 기재된 바와 같다.
화학식 (IVa)의 화합물의 특정 실시양태에서, R33은 OH이고 L은 R36에서 부착된다. 화학식 (IVa)의 화합물의 특정 실시양태에서 L은 R33에서 부착되고 R36은 OH이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IV)의 화합물은 화학식 (IVb)의 구조를 갖는다:
화학식 (IVb)의 화합물의 특정 실시양태에서, R31a는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 및 술포닐로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R31a는 수소이다. 특정 실시양태에서, R31a는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R31a는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R31a는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R31a는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R31a는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다. 특정 실시양태에서, R31a는 카르복실이다. 특정 실시양태에서, R31a는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R31a는 아실이다. 특정 실시양태에서, R31a는 술포닐이다.
화학식 (IVb)의 화합물의 특정 실시양태에서, R36은 상기 기재된 바와 같다.
화학식 (IVb)의 화합물의 특정 실시양태에서, R31a는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 및 술포닐로부터 선택되고, L은 R36에 부착된다. 화학식 (IVb)의 화합물의 특정 실시양태에서, L은 R31a에 부착되고 R36은 OH이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IV)의 화합물은 화학식 (IVc)의 구조를 갖는다:
화학식 (IVc)의 화합물의 특정 실시양태에서, R31b는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 및 술포닐로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R31b는 수소이다. 특정 실시양태에서, R31b는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R31b는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R31b는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R31b는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R31b는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다. 특정 실시양태에서, R31b는 카르복실이다. 특정 실시양태에서, R31b는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R31b는 아실이다. 특정 실시양태에서, R31b는 술포닐이다.
화학식 (IVc)의 화합물의 특정 실시양태에서, R36은 상기 기재된 바와 같다.
화학식 (IVc)의 화합물의 특정 실시양태에서, R31b는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 및 술포닐로부터 선택되고, L은 R36에 부착된다. 화학식 (IVc)의 화합물의 특정 실시양태에서, L은 R31b에 부착되고 R36은 OH이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IV)의 화합물은 화학식 (IVd)의 구조를 갖는다:
화학식 (IVd)의 화합물의 특정 실시양태에서, R32a 및 R32b는 각각 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 및 술포닐로부터 선택된다.
화학식 (IVd)의 화합물의 특정 실시양태에서, R32a는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 및 술포닐로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R32a는 수소이다. 특정 실시양태에서, R32a는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R32a는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R32a는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R32a는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R32a는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다. 특정 실시양태에서, R32a는 카르복실이다. 특정 실시양태에서, R32a는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R32a는 아실이다. 특정 실시양태에서, R32a는 술포닐이다.
화학식 (IVd)의 화합물의 특정 실시양태에서, R32b는 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 및 술포닐로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, R32b는 수소이다. 특정 실시양태에서, R32b는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-6 알킬 또는 C1-6 치환된 알킬, 또는 C1-4 알킬 또는 C1-4 치환된 알킬, 또는 C1-3 알킬 또는 C1-3 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, R32b는 아릴 또는 치환된 아릴, 예컨대 C5-8 아릴 또는 C5-8 치환된 아릴, 예컨대 C5 아릴 또는 C5 치환된 아릴, 또는 C6 아릴 또는 C6 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, R32b는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5-8 헤테로아릴 또는 C5-8 치환된 헤테로아릴, 예컨대 C5 헤테로아릴 또는 C5 치환된 헤테로아릴, 또는 C6 헤테로아릴 또는 C6 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, R32b는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬, 예를 들어 C3-8 시클로알킬 또는 C3-8 치환된 시클로알킬, 예컨대 C3-6 시클로알킬 또는 C3-6 치환된 시클로알킬, 또는 C3-5 시클로알킬 또는 C3-5 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시양태에서, R32b는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴, 예컨대 C3-6 헤테로시클릴 또는 C3-6 치환된 헤테로시클릴, 또는 C3-5 헤테로시클릴 또는 C3-5 치환된 헤테로시클릴이다. 특정 실시양태에서, R32b는 카르복실이다. 특정 실시양태에서, R32b는 카르복실 에스테르이다. 특정 실시양태에서, R32b는 아실이다. 특정 실시양태에서, R32b는 술포닐이다.
화학식 (IVd)의 화합물의 특정 실시양태에서, R36은 상기 기재된 바와 같다.
화학식 (IVd)의 화합물의 특정 실시양태에서, R32a 및 R32b는 각각 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실 및 술포닐로부터 선택되고 L은 R36에 부착된다. 화학식 (IVd)의 화합물의 특정 실시양태에서, L은 R32a 또는 R32b에 부착되고 R36은 OH이다. 화학식 (IVd)의 화합물의 특정 실시양태에서, L은 R32a에 부착되고 R36은 OH이다. 화학식 (IVd)의 화합물의 특정 실시양태에서, L은 R32b에 부착되고 R36은 OH이다.
세포 증식을 감소시키는 작용을 하는 제제는 당업계에 알려져 있으며 널리 사용된다. 이러한 제제에는 메클로르에타민, 시클로포스파미드(Cytoxan™), 멜팔란(L-사르콜리신), 카르무스틴(BCNU), 로무스틴(CCNU), 세무스틴(메틸-CCNU), 스트렙토조신, 클로로조토신, 우라실 머스타드, 클로르메틴, 이포스파미드, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포라민, 부술판, 다카르바진 및 테모졸로미드를 포함하지만 이에 국한되지 않는 질소 머스타드, 니트로소우레아, 에틸렌이민 유도체, 알킬 술포네이트 및 트리아젠과 같은 알킬화제가 포함된다.
항대사제에는 시타라빈(CYTOSAR-U), 시토신 아라비노사이드, 플루오로우라실(5-FU), 플록수리딘(FudR), 6-티오구아닌, 6-메르캅토퓨린(6-MP), 펜토스타틴, 5-플루오로우라실(5-FU), 메토트렉세이트, 10-프로파르길-5,8-디데아자폴레이트(PDDF, CB3717), 5,8-디데아자테트라히드로엽산(DDATHF), 류코보린, 플루다라빈 인산염, 펜토스타틴 및 젬시타빈을 포함하지만 이에 국한되지 않는 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체, 및 아데노신 데아미나제 억제제가 포함된다.
적합한 천연물 및 이의 유도체(예를 들어, 빈카 알칼로이드, 항종양 항생제, 효소, 림포카인 및 에피포도필로톡신)에는 Ara-C, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀(Taxotere®), 데옥시코포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나제, 아자티오프린; 브레퀴나르; 알칼로이드, 예를 들어 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신 등; 포도필로톡신 예를 들어, 에토포시드, 테니포시드 등; 항생제, 예를 들어 안트라사이클린, 다우노루비신 염산염 (다우노마이신, 루비도마이신, 세루비딘), 이다루비신, 독소루비신, 에피루비신 및 모르폴리노 유도체 등; 페녹시존 비스사이클로펩티드, 예를 들어, 닥티노마이신; 염기성 글리코펩티드, 예를 들어 블레오마이신; 안트라퀴논 글리코시드, 예를 들어, 플리카마이신(미트라마이신); 안트라센디온, 예를 들어, 미톡산트론; 아지리노피롤로 인돌레디온, 예를 들어 미토마이신; 거대고리형 면역억제제, 예를 들어, 사이클로스포린, FK-506(타크로리무스, 프로그라프), 라파마이신 등이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
기타 항증식성 세포독성제는 나벨벤, CPT-11, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 시클로포스파미드, 이포사미드 및 드롤록사핀이다.
항증식 활성을 갖는 미세소관 영향제는 또한 사용하기에 적합하며, 알로콜히친(NSC 406042), 할리콘드린 B(NSC 609395), 콜히친(NSC 757), 콜히친 유도체(예를 들어, NSC 33410), 돌스타틴 10(NSC 376128), 메이탄신(NSC 153858), 리족신(NSC 332598), 파클리탁셀(Taxol®), 탁솔® 유도체, 도세탁셀(Taxotere®), 티오콜히친(NSC 361792), 트리틸 시스테린, 빈블라스틴 황산염, 에오프틸론 A, 에포틸론 B, 디스코더몰리드를 포함하지만 이에 국한되지 않는 빈크리스틴 황산염, 천연 및 합성 에포틸론; 에스트라무스틴, 노코다졸 등을 포함하지만 이에 국한되지는 않는다.
사용하기에 적합한 호르몬 조절제 및 스테로이드(합성 유사체 포함)에는 아드레노코르티코스테로이드, 예를 들어 프레드니손, 덱사메타손 등; 에스트로겐 및 프로게스틴, 예를 들어 히드록시프로게스테론 카프로에이트, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 에스트라디올, 클로미펜, 타목시펜 등; 및 부신피질 억제제, 예를 들어 아미노글루테티미드; 17α-에티닐에스트라디올; 디에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 플루옥시메스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스토락톤, 메틸프레드니솔론, 메틸-테스토스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 히드록시프로게스테론, 아미노글루테티미드, 에스트라무스틴, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 류프롤리드, 플루타미드(Drogenil), 토레미펜(Fareston) 및 Zoladex®을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는다. 에스트로겐은 증식과 분화를 자극하기 때문에; 에스트로겐 수용체에 결합하는 화합물은 이 활성을 차단하는 데 사용된다.
다른 적합한 화학요법제는 금속 착물, 예를 들어 시스플라틴(cis-DDP), 카르보플라틴 등; 요소, 예를 들어 수산화요소; 및 히드라진, 예를 들어 N-메틸히드라진; 에피도필로톡신; 토포이소머라제 억제제; 프로카르바진; 미톡산트론; 류코보린; 테가푸르 등이 포함된다. 관심 있는 다른 항증식제는 면역억제제, 예를 들어 마이코페놀산, 탈리도마이드, 데속시스페르구알린, 아자스포린, 레플루노마이드, 미조리빈, 아자스피란(SKF 105685); Iressa®(ZD 1839, 4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-메톡시-6-(3-(4-모르폴리닐)프로폭시)퀴나졸린) 등을 포함한다.
탁산이 사용하기에 적합하다. "탁산"에는 파클리탁셀뿐만 아니라 임의의 활성 탁산 유도체 또는 전구약물이 포함된다. "파클리탁셀"(본원에서는 유사체, 제형 및 유도체, 예를 들어 도세탁셀, TAXOL™, TAXOTERE™ (도세탁셀의 제형), 파클리탁셀의 10-데스아세틸 유사체 및 3'N-데스벤조일-3'N-t-부톡시카르보닐 유사체를 포함하는 것으로 이해되어야 함)은 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조될 수 있거나 (또한 WO 94/07882, WO 94/07881, WO 94/07880, WO 94/07876, WO 93/23555, WO 93/10076; U.S. 특허 번호 5,294,637; 5,283,253; 5,279,949; 5,274,137; 5,202,448; 5,200,534; 5,229,529; 및 EP 590,267 참조), 또는 예를 들어 Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo를 비롯한 다양한 상업적 공급원으로부터 입수된다 (Taxus brevifolia의 T7402; 또는 Taxus yannanensis의 T-1912).
파클리탁셀은 화학적으로 이용가능한 일반적인 형태의 파클리탁셀뿐만 아니라 유사체 및 유도체(예를 들어, 위에서 언급한 TAXOTERE™ 도세탁셀) 및 파클리탁셀 접합체(예를 들어, 파클리탁셀-PEG, 파클리탁셀-덱스트란, 또는 파클리탁셀-자일로스)를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다.
또한, "탁산"이라는 용어에는 친수성 유도체 및 소수성 유도체를 둘 다 포함하는 다양한 공지된 유도체가 포함된다. 탁산 유도체에는 갈락토스 및 만노스 유도체; 피페라지노 및 피페라지노 유도체가 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다.
항체 생산 방법
대상 결합제는 임의의 공지된 방법, 예를 들어 단백질 합성을 위한 통상적인 합성 방법; 재조합 DNA 방법 등에 의해 생산될 수 있다.
대상 결합제가 단일 사슬 폴리펩티드인 경우, 이는 표준 화학적 펩티드 합성 기술을 사용하여 합성될 수 있다. 폴리펩티드가 화학적으로 합성되는 경우 합성은 액체상 또는 고체상을 통해 진행될 수 있다. 서열의 C-말단 아미노산이 불용성 지지체에 부착된 후 서열에 남아 있는 아미노산을 순차적으로 첨가하는 고체상 폴리펩티드 합성(SPPS)은 대상 항체의 화학적 합성에 적합한 방법의 예이다. Fmoc 및 Boc와 같은 다양한 형태의 SPPS를 대상 항체 합성에 사용할 수 있다.
대상 결합제의 생산을 위해 표준 재조합 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 임의로 불변 영역에 연결된 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산은 발현 벡터에 삽입된다. 경쇄와 중쇄는 동일하거나 다른 발현 벡터에 클로닝될 수 있다. 면역글로불린 사슬을 코딩하는 DNA 세그먼트는 면역글로불린 폴리펩티드의 발현을 보장하는 발현 벡터(들)의 제어 서열에 작동 가능하게 연결된다. 발현 제어 서열에는 프로모터(예를 들어, 천연 관련 또는 이종 프로모터), 신호 서열, 인핸서 요소 및 전사 종결 서열이 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 발현 제어 서열은 진핵 숙주 세포(예를 들어, COS 또는 CHO 세포)를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터 내의 진핵 프로모터 시스템일 수 있다. 벡터가 적절한 숙주에 통합되면, 숙주는 뉴클레오티드 서열의 높은 수준의 발현과 항체의 수집 및 정제에 적합한 조건 하에서 유지된다.
코드의 축퇴성으로 인해 다양한 핵산 서열이 각 면역글로불린 아미노산 서열을 코딩할 수 있다. 원하는 핵산 서열은 새로운 고체상 DNA 합성에 의해 또는 원하는 폴리뉴클레오티드의 이전에 제조된 변이체의 중합효소 연쇄 반응(PCR) 돌연변이 유발에 의해 생산될 수 있다.
적합한 발현 벡터는 전형적으로 에피솜으로서 또는 숙주 염색체 DNA의 통합 부분으로서 숙주 유기체에서 복제가능하다. 일반적으로 발현 벡터에는 원하는 DNA 서열로 형질전환된 세포를 검출할 수 있도록 선택 마커(예를 들어, 암피실린 내성, 히그로마이신 내성, 테트라시클린 내성, 카나마이신 내성 또는 네오마이신 내성)가 포함되어 있다.
대장균(Escherichia coli)은 대상 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 클로닝하는 데 사용될 수 있는 원핵 숙주 세포의 예이다. 사용하기에 적합한 다른 미생물 숙주에는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)와 같은 간균, 및 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia) 및 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종과 같은 기타 장내세균이 포함된다. 효모와 같은 다른 미생물도 발현에 유용하다. 사카로마이스(Saccharomyces)(예를 들어, S. cerevisiae) 및 피치아(Pichia)는 적합한 효모 숙주 세포의 예이다.
미생물 이외에, 포유동물 세포(예를 들어, 시험관 내 세포 배양에서 성장한 포유동물 세포)는 또한 본 발명의 폴리펩티드(예를 들어, 면역글로불린을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 단편)를 발현하고 생산하는 데 사용될 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포에는 CHO 세포주, 다양한 Cos 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주 및 형질전환된 B-세포 또는 하이브리도마가 포함된다. 이들 세포에 대한 발현 벡터에는 복제 기점, 프로모터 및 인핸서와 같은 발현 제어 서열과 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위 및 전사 종결자 서열과 같은 필요한 처리 정보 부위가 포함될 수 있다. 적합한 발현 제어 서열의 예는 면역글로불린 유전자, SV40, 아데노바이러스, 소 유두종 바이러스, 거대세포바이러스 등으로부터 유래된 프로모터이다.
(화학적으로 또는 재조합적으로) 합성되면, 전체 항체, 이들의 이량체, 개별 경쇄 및 중쇄, 또는 대상 항체의 다른 형태 (예를 들어, scFv 등)는 해당 분야의 표준 절차, 예컨대 황산암모늄 침전, 친화성 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 정제, 겔 전기영동 등에 따라 정제될 수 있다 (일반적으로 Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, N.Y., (1982) 참조)). 대상 항체는 실질적으로 순수하며, 예를 들어 적어도 약 80% 내지 85% 순수, 적어도 약 85% 내지 90% 순수, 적어도 약 90% 내지 95% 순수, 또는 98% 내지 99%, 또는 그 이상 순수, 예를 들어, 세포 잔해, 대상 항체 이외의 거대분자 등의 오염물질이 없어야 한다.
조성물
본 개시내용은 대상 결합제를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 결합제 조성물은 결합제 이외에 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 염, 예를 들어 NaCl, MgCl2, KCl, MgSO4 등; 완충제, 예를 들어 트리스 완충제, N-(2-히드록시에틸)피페라진-N'-(2-에탄술폰산)(HEPES), 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산(MES), 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 나트륨염(MES), 3-(N-모르폴리노)프로판술폰산(MOPS), N-트리스[히드록시메틸]메틸-3-아미노프로판술폰산(TAPS) 등; 가용화제; 세제, 예를 들어 Tween-20 등과 같은 비이온성 세제; 프로테아제 억제제; 글리세린 등.
핵산
본 개시내용은 대상 결합제를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 대상 결합제를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 의도된 표적 세포 (예를 들어, 코딩된 항체를 합성하여 유전적으로 변형된 세포)에서 뉴클레오티드 서열의 발현을 허용하는 프로모터 및 인핸서와 같은 하나 이상의 조절 요소에 작동가능하게 연결될 수 있다.
적합한 프로모터 및 인핸서 요소는 해당 분야에 알려져 있다. 박테리아 세포에서의 발현을 위해, 적합한 프로모터에는 lacI, lacZ, T3, T7, gpt, 람다 P 및 trc가 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 진핵 세포에서의 발현을 위해, 적합한 프로모터에는 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린 유전자 프로모터 및 인핸서 요소; 거대세포바이러스 즉시 초기 프로모터; 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제 프로모터; 초기 및 후기 SV40 프로모터; 레트로바이러스의 긴 말단 반복에 존재하는 프로모터; 마우스 메탈로티오네인-I 프로모터; 및 당업계에 공지된 다양한 조직 특이적 프로모터가 포함된다.
일부 실시양태에서, 예를 들어, 효모 세포에서의 발현을 위해, 적합한 프로모터는 구성적 프로모터, 예컨대 ADH1 프로모터, PGK1 프로모터, ENO 프로모터, PYK1 프로모터 등; 또는 조절성 프로모터, 예컨대 GAL1 프로모터, GAL10 프로모터, ADH2 프로모터, PHO5 프로모터, CUP1 프로모터, GAL7 프로모터, MET25 프로모터, MET3 프로모터, CYC1 프로모터, HIS3 프로모터, ADH1 프로모터, PGK 프로모터, GAPDH 프로모터, ADC1 프로모터, TRP1 프로모터, URA3 프로모터, LEU2 프로모터, ENO 프로모터, TP1 프로모터, 및 AOX1(예를 들어, 피키아(Pichia)에서 사용하기 위한 것)이다. 적절한 벡터 및 프로모터의 선택은 당업자의 수준 내에 있다.
원핵 숙주 세포에 사용하기에 적합한 프로모터에는 박테리오파지 T7 RNA 폴리머라제 프로모터; trp 프로모터; lac 오페론 프로모터; 하이브리드 프로모터, 예를 들어 lac/tac 하이브리드 프로모터, tac/trc 하이브리드 프로모터, trp/lac 프로모터, T7/lac 프로모터; trc 프로모터; tac 프로모터 등이 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다. 대장균과 같은 원핵생물에 사용하기에 적합한 강력한 프로모터에는 Trc, Tac, T5, T7 및 P람다가 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 박테리아 숙주 세포에 사용하기 위한 오퍼레이터의 비제한적 예에는 락토스 프로모터 오퍼레이터(락토스와 접촉할 때 LacI 억제 단백질이 구조를 변경하여 LacI 억제 단백질이 오퍼레이터에 결합하는 것을 방지함), 트립토판 프로모터 오퍼레이터(트립토판과 복합체화되는 경우 TrpR 억제 단백질은 오퍼레이터와 결합하는 구조를 가지며; 트립토판이 없는 경우 TrpR 억제 단백질은 오퍼레이터와 결합하지 않는 구조를 가짐), 및 tac 프로모터 오퍼레이터가 포함된다.
대상 결합제를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 발현 벡터 및/또는 클로닝 벡터에 존재할 수 있다. 대상 결합제가 2개의 별도의 폴리펩티드를 포함하는 경우, 2개의 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 동일하거나 별도의 벡터에 클로닝될 수 있다. 발현 벡터에는 선택 가능한 마커, 복제 기점 및 벡터의 복제 및/또는 유지를 제공하는 기타 특징이 포함될 수 있다.
다수의 적합한 벡터 및 프로모터가 당업자에게 알려져 있으며; 대상 재조합 구조체를 생성하기 위해 많은 것들이 상업적으로 이용 가능하다. 다음 벡터는 예시로 제공된다. 박테리아: pBs, phagescript, PsiX174, pBluescript SK, pBs KS, pNH8a, pNH16a, pNH18a, pNH46a (Stratagene, La Jolla, Calif., USA); pTrc99A, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, 및 pRIT5 (Pharmacia, Uppsala, Sweden). 진핵생물: pWLneo, pSV2cat, pOG44, PXR1, pSG (Stratagene) pSVK3, pBPV, pMSG 및 pSVL (Pharmacia).
세포
본 개시내용은 대상 핵산으로 유전적으로 변형된 단리된 유전적으로 변형된 숙주 세포(예를 들어, 시험관 내 세포)를 제공한다. 일부 실시양태에서, 대상 단리된 유전적으로 변형된 숙주 세포는 대상 결합제를 생산할 수 있다.
적합한 포유동물 세포에는 1차 세포 및 불멸화 세포주가 포함된다. 적합한 포유동물 세포주에는 인간 세포주, 비인간 영장류 세포주, 설치류(예를 들어, 마우스, 래트) 세포주 등이 포함된다. 적합한 포유동물 세포주는 HeLa 세포 (예를 들어, 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC) 번호 CCL-2), CHO 세포 (예를 들어, ATCC 번호 CRL9618, CCL61, CRL9096), Vero 세포, NIH 3T3 세포(예를 들어, ATCC 번호 CRL-1658), Huh-7 세포, BHK 세포(예를 들어, ATCC 번호 CCL10), PC12 세포(ATCC 번호 CRL1721), COS 세포, COS-7 세포(ATCC 번호 CRL1651)), RAT1 세포, 마우스 L 세포(ATCC 번호 CCLI.3), 인간 배아 신장(HEK) 293 세포(ATCC 번호 CRL1573), HLHepG2 세포 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
적합한 효모 세포에는 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 피키아 핀란디카(Pichia finlandica), 피키아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피키아 코클라마에(Pichia koclamae), 피키아 멤브라나에파시엔스(Pichia membranaefaciens), 피키아 오푼티아에(Pichia opuntiae), 피키아 써모톨레란스(Pichia thermotolerans), 피키아 살리크타리아(Pichia salictaria), 피키아 구에르쿰(Pichia guercuum), 피키아 피페리(Pichia pijperi), 피키아 스티프티스(Pichia stiptis), 피키아 메타놀리카(Pichia methanolica), 피키아 sp.(Pichia sp.), 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae), 사카로미세스 sp.(Saccharomyces sp.), 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 클루이베로마이세스 sp.(Kluyveromyces sp.), 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스퍼질러스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger), 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae), 트리코데르마 리세이(Trichoderma reesei), 크리소스포리움 루크노웬스(Chrysosporium lucknowense), 푸사리움 sp.(Fusarium sp.), 푸사리움 그라미네움(Fusarium gramineum), 푸사리움 베네나툼(Fusarium venenatum), 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa), 클라미도모나스 라인하르티(Chlamydomonas reinhardtii) 등이 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다.
적합한 원핵 세포에는 대장균, 젖산균, 살모넬라균, 이질균 등의 다양한 실험실 균주 중 임의의 것이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
제약 조성물
본 개시내용은 본원에 기술된 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체와 같은 대상 결합제를 포함하는 제약 조성물을 비롯한 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 본원에 기재된 VH 및 VL 프레임워크 영역을 포함하는 항-CD30 항체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 서열번호 6, 11, 21 또는 26의 서열을 갖는 적어도 하나의 VH 또는 VL 사슬을 포함하는 항-CD30 항체를 포함한다.
일반적으로, 제제는 유효량의 대상 결합제를 포함한다. "유효량"은 원하는 결과, 예를 들어 암세포 수의 감소를 생성하기에 충분한 투여량을 의미한다. 일부 경우에, 대조군과 비교하여 원하는 결과는 적어도 악성 종양 증상의 감소이다.
제제
대상 방법에서, 대상 결합제는 원하는 치료 효과 또는 진단 효과를 초래할 수 있는 임의의 편리한 수단을 사용하여 숙주에게 투여될 수 있다. 결합제는 본원에 기술된 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체일 수 있다. 특정 실시양태에서, 결합제는 본원에 기술된 VH 및 VL 프레임워크 영역을 포함하는 항-CD30 항체이다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 서열번호 6, 11, 21 또는 26의 서열을 갖는 적어도 하나의 VH 또는 VL 사슬을 포함하는 항-CD30 항체를 포함한다.
결합제는 치료 투여를 위해 다양한 제형에 포함될 수 있다. 보다 구체적으로, 결합제는 적절한 제약상 허용되는 담체 또는 희석제와 조합하여 제약 조성물로 제제화될 수 있으며, 정제, 캡슐, 분말, 과립제, 연고, 용액, 좌약, 주사제, 흡입제 및 에어로졸과 같은 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태의 제제로 제제화될 수 있다.
제약상 투여 형태에서, 대상 결합제는 제약상 허용되는 염의 형태로 투여될 수 있거나, 단독으로 또는 다른 제약상 활성 화합물과 적절하게 조합하여 사용될 수도 있다. 다음 방법 및 부형제는 단지 예시일 뿐이며 어떠한 방식으로든 제한되지 않는다.
경구 제제의 경우, 대상 결합제는 단독으로 또는 적절한 첨가제와 조합하여 정제, 분말, 과립 또는 캡슐을 제조할 수 있으며, 예를 들어 락토스, 만니톨, 옥수수 전분 또는 감자 전분과 같은 통상적인 첨가제와 함께; 결정질 셀룰로오스, 셀룰로오스 유도체, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴과 같은 결합제와 함께; 옥수수 전분, 감자 전분 또는 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스와 같은 붕해제와 함께; 활석 또는 스테아르산 마그네슘과 같은 윤활제와 함께; 및 원하는 경우 희석제, 완충제, 습윤제, 방부제 및 향미제와 함께 사용된다.
대상 결합제는 이를 수성 또는 비수성 용매, 예컨대 식물성 또는 기타 유사한 오일, 합성 지방산 글리세리드, 고급 지방산의 에스테르 또는 프로필렌 글리콜에 용해, 현탁, 또는 유화시킴으로써; 그리고 원하는 경우 가용화제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정제 및 방부제와 같은 기존 첨가제와 함께 주사용 제제로 제제화될 수 있다.
대상 결합제를 포함하는 제약 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 결합제를 선택적인 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제, 안정화제, 계면활성제, 완충제 및/또는 긴장제와 혼합함으로써 제조된다. 허용되는 담체, 부형제 및/또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산, 글루타티온, 시스테인, 메티오닌 및 시트르산을 포함하는 항산화제; 방부제 (예컨대 에탄올, 벤질 알코올, 페놀, m-크레졸, p-클로르-m-크레졸, 메틸 또는 프로필 파라벤, 염화벤잘코늄, 또는 이들의 조합 등); 아르기닌, 글리신, 오르니틴, 리신, 히스티딘, 글루탐산, 아스파르트산, 이소류신, 류신, 알라닌, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 메티오닌, 세린, 프롤린 및 이들의 조합과 같은 아미노산; 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 젤라틴 또는 혈청 알부민과 같은 단백질; EDTA와 같은 킬레이트제; 트레할로스, 수크로스, 유당, 글루코스, 만노스, 말토스, 갈락토스, 과당, 소르보스, 라피노스, 글루코사민, N-메틸글루코사민, 갈락토사민, 및 뉴라민산과 같은 당류; 및/또는 Tween, Brij Pluronics, Triton-X, 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다.
제약 조성물은 액체 형태, 동결건조된 형태 또는 동결건조된 형태로부터 재구성된 액체 형태일 수 있으며, 여기서 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균 용액으로 재구성되어야 한다. 동결건조된 조성물을 재구성하기 위한 표준 절차는 일정량의 순수한 물(전형적으로 동결건조 중에 제거된 부피와 동일함)을 다시 추가하는 것이지만; 항균제를 포함하는 용액은 비경구 투여용 제약 조성물의 생산에 사용될 수 있다.
대상 제약 조성물 중 예시적인 항체 농도는 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/ml 또는 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 또는 약 150 mg/mL 내지 약 200 mg/mL 범위일 수 있다.
결합제의 수성 제제는 pH 완충 용액, 예를 들어 약 4.0 내지 약 7.0, 또는 약 5.0 내지 약 6.0, 또는 대안적으로 약 5.5 범위의 pH에서 제조될 수 있다. 이 범위 내의 pH에 적합한 완충제의 예에는 인산염-, 히스티딘-, 구연산염-, 숙신산염-, 아세트산염-완충제 및 기타 유기산 완충제가 포함된다. 완충제 농도는 예를 들어 완충제 및 제제의 원하는 장성 정도에 따라 약 1mM 내지 약 100mM, 또는 약 5mM 내지 약 50mM일 수 있다.
동결건조 과정 동안 불안정한 조건으로부터 불안정한 활성 성분(예를 들어, 단백질)을 보호하기 위해 동결보호제가 첨가될 수도 있다. 예를 들어, 공지된 동결보호제에는 당(포도당 및 자당 포함); 폴리올(만니톨, 소르비톨 및 글리세롤 포함); 및 아미노산(알라닌, 글리신 및 글루탐산 포함)이 포함된다. 동결보호제는 약 10 mM 내지 500 nM의 양으로 포함될 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상 제제는 대상 결합제 및 하나 이상의 제제(예를 들어, 계면활성제, 완충제, 안정화제, 등장화제)를 포함하고, 에탄올, 벤질 알코올, 페놀, m-크레졸, p-클로르-m-크레졸, 메틸 또는 프로필 파라벤, 벤잘코늄 클로라이드 및 이들의 조합과 같은 하나 이상의 보존제를 본질적으로 함유하지 않는다. 다른 실시양태에서, 보존제는 예를 들어 약 0.001 내지 약 2%(w/v) 범위의 농도로 제제에 포함된다.
예를 들어, 대상 제제는 비경구 투여에 적합한 액체 또는 동결건조 제제일 수 있고, 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 대상 항체; 약 0.001% 내지 약 1%의 적어도 하나의 계면활성제; 약 1 mM 내지 약 100 mM의 완충액; 임의로 약 10 mM 내지 약 500 mM의 안정화제; 및 약 5 mM 내지 약 305 mM의 등장화제를 포함할 수 있고; pH는 약 4.0 내지 약 7.0이다.
또 다른 예로서, 대상 비경구 제제는 약 1 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 대상 항체; 0.04% Tween 20 w/v; 20mM L-히스티딘; 및 250 mM 수크로스를 포함하는 액체 또는 동결건조 제제이고; pH는 5.5이다.
본원에 사용된 용어 "단위 투여 형태"는 인간 및 동물 대상자에 대한 단위 투여량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 의미하며, 각 단위는 제약상 허용되는 희석제, 담체 또는 비히클과 관련하여 원하는 효과를 생성하기에 충분한 양으로 계산된 본 발명의 결합제의 예정된 양을 함유한다. 대상 결합제에 대한 사양은 사용된 특정 항체와 달성하려는 효과, 그리고 숙주의 각 결합제와 관련된 약력학에 따라 달라질 수 있다.
대상 결합제는 주사 가능한 제형으로 투여될 수 있다. 전형적으로, 주사용 조성물은 액체 용액 또는 현탁액; 주입 전 액체 비히클에 용해되거나 현탁되기에 적합한 고체 형태로 제조된다. 제제는 또한 유화되거나 항체가 리포솜 비히클에 캡슐화될 수도 있다.
비히클, 애쥬번트, 담체 또는 희석제와 같은 제약상 허용되는 부형제는 대중이 쉽게 이용할 수 있다. 또한, pH 조절제 및 완충제, 등장성 조절제, 안정화제, 습윤제 등과 같은 제약상 허용되는 보조 물질은 대중이 쉽게 이용할 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상 결합제는 제어 방출 제제로 제제화된다. 지속 방출 제제는 당업계에 널리 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 지속 방충 제제의 적합한 예에는 매트릭스가 성형품 형태인 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐가 포함된다. 지속 방출 매트릭스의 예에는 폴리에스테르, L-글루탐산과 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 하이드로겔, 폴리락타이드, 분해성 젖산-글리콜산 공중합체 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산이 포함된다. 지속 방충 제제에 포함된 항체의 생물학적 활성 손실 가능성과 면역원성의 변화 가능성은 적절한 첨가제 사용, 수분 함량 조절 및 특정 중합체 매트릭스 구성 개발을 통해 방지할 수 있다.
물리적 시스템에는 마이크로캡슐화, 매크로캡슐화 및 막 시스템과 같은 속도 제어 막을 갖춘 저장소 시스템; 중공 섬유, 초미세다공성 셀룰로오스 트리아세테이트, 및 다공성 중합체성 기재 및 폼과 같은 속도 제어 막이 없는 저장소 시스템; 비다공성, 중합체성 또는 탄성 매트릭스에 물리적으로 용해된 시스템(예를 들어, 비침식성, 침식성, 환경 인자 침투 및 분해성), 및 비다공성, 중합체성 또는 탄성 매트릭스에 물리적으로 분산된 물질(예를 들어, 비침식성, 침식성, 환경 인자 침입 및 분해성)을 포함하는 모놀리식 시스템; 외부 제어층과 화학적으로 유사하거나 유사하지 않은 저장층을 포함하는 적층 구조; 및 삼투압 펌프 또는 이온 교환 수지에의 흡착과 같은 기타 물리적 방법이 포함되지만 이들로 제한되지는 않는다.
화학적 시스템에는 중합체 매트릭스의 화학적 침식(예를 들어, 이종 또는 균질 침식), 또는 중합체 매트릭스의 생물학적 침식(예를 들어, 이종 또는 균질)이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
투여량
적합한 투여량은 다양한 임상적 요인에 기초하여 주치의 또는 기타 자격을 갖춘 의료진에 의해 결정될 수 있다. 의학 분야에서 잘 알려진 바와 같이, 임의의 환자에 대한 투여량은 환자의 크기, 신체 표면적, 연령, 투여할 특정 화합물, 환자의 성별, 시간 및 투여 경로, 일반적 건강, 및 동시에 투여될 기타 약물을 포함한 많은 요인에 따라 달라진다. 대상 결합제는 용량당 1ng/kg 체중 내지 20mg/kg 체중 사이의 양, 예를 들어, 0.1 mg/kg 체중 내지 10 mg/kg 체중 사이, 예를 들어, 0.5 mg/kg 체중 내지 5 mg/kg 체중 사이의 양으로 투여될 수 있지만; 특히 앞서 언급한 요인을 고려하면 이 예시적인 범위보다 낮거나 높은 용량이 구상된다. 요법이 연속 주입인 경우 분당 체중 1kg 당 1μg 내지 10mg 범위일 수도 있다.
당업자는 용량 수준이 특정 결합제의 성능, 증상의 중증도 및 부작용에 대한 대상자의 민감성에 따라 달라질 수 있음을 쉽게 인식할 것이다. 주어진 화합물에 대한 바람직한 투여량은 다양한 수단에 의해 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다.
투여 경로
대상 결합제는 생체내 및 생체외 방법뿐만 아니라 전신 및 국소 투여 경로를 포함하여 약물 전달에 적합한 임의의 이용 가능한 방법 및 경로를 사용하여 개체에게 투여된다.
통상적이고 제약상 허용되는 투여 경로에는 비강내, 근육내, 기관내, 피하, 피내, 국소 적용, 정맥내, 동맥내, 직장, 비강, 경구 및 기타 장내 및 비경구 투여 경로가 포함된다. 투여 경로는 원하는 경우 조합될 수 있거나 항체 및/또는 원하는 효과에 따라 조정될 수 있다. 대상 항체 조성물은 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 조성물은 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 조성물은 흡입 경로를 통해 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 조성물은 비강내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 조성물은 국소적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 조성물은 두개내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상 항체 조성물은 정맥내로 투여된다.
결합제는 전신 또는 국소 경로를 포함하여 기존 약물의 전달에 적합한 임의의 이용 가능한 기존 방법 및 경로를 사용하여 숙주에 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 발명에 의해 고려되는 투여 경로는 장내, 비경구 또는 흡입 경로를 포함하지만 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.
흡입 투여 이외의 비경구 투여 경로에는 국소, 경피, 피하, 근육내, 안와내, 피막내, 척수내, 흉골내, 간내 및 정맥내 경로, 즉, 소화관을 통한 것 이외의 임의의 투여 경로가 포함되지만 반드시 이에 제한되지는 않는다. 대상 항체의 전신 또는 국소 전달을 수행하기 위해 비경구 투여가 수행될 수 있다. 전신 전달이 요구되는 경우, 투여는 전형적으로 제약상 제제의 침습적 또는 전신 흡수된 국소 또는 점막 투여를 수반한다.
대상 결합제는 또한 장내 투여에 의해 대상자에게 전달될 수도 있다. 장내 투여 경로에는 경구 및 직장 (예를 들어, 좌약 사용) 전달이 포함되지만 반드시 이에 제한되는 것은 아니다.
치료란 숙주를 괴롭히는 병리학적 상태와 연관된 증상의 적어도 개선되는 것을 의미하며, 여기서 개선은 매개변수, 예를 들어, 유방암, 췌장암, 또는 폐암과 같은 치료 중인 병리학적 상태와 관련된 증상 크기가 적어도 감소하는 것을 지칭하기 위해 넓은 의미로 사용된다. 따라서 치료에는 또한 병리학적 상태 또는 적어도 이와 관련된 증상이 완전히 억제, 예를 들어 발생 방지 또는 중지, 예를 들어 숙주가 더 이상 병리학적 상태를 겪지 않거나 적어도 병리학적 상태를 특징짓는 증상을 겪지 않도록 종료되는 상황도 포함된다.
일부 실시양태에서, 대상 결합제는 예를 들어 전신 전달 (예를 들어 정맥내 주입)을 위해 주사에 의해 또는 국소 부위에 투여된다.
다양한 숙주 (여기서 용어 "숙주"는 본원에서 용어 "대상자", "개체" 및 "환자"와 상호교환적으로 사용됨)는 대상 방법에 따라 치료 가능하다. 일반적으로 이러한 숙주는 "포유동물" 또는 "포유류"이며, 여기서 이러한 용어는 육식동물 목(예를 들어, 개 및 고양이), 설치류 목(예를 들어, 마우스, 기니피그 및 래트), 및 영장류(예를 들어, 인간, 침팬지, 및 원숭이)를 포함하여 포유류 강에 속하는 유기체를 설명하기 위해 광범위하게 사용된다. 일부 실시양태에서, 숙주는 인간일 것이다.
치료 방법
본 개시내용은 CD30-양성 세포, 예를 들어 암성 CD30-양성 세포; 자가반응성 CD30-양성 세포와 관련되거나 그에 의해 야기되는 질병 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
본원에 개시된 프레임워크 영역을 포함하는 VH 및 VL 사슬을 사용하여 임의의 표적에 특이성을 갖는 항체를 생성할 수 있기 때문에, 이러한 항체는 관심 표적에 결합하는 항체를 투여함으로써 치료할 수 있는 질병 또는 장애를 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
악성 종양 치료
본 개시내용은 고형 종양 또는 혈액학적 악성종양을 포함하는 악성종양을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 일반적으로 치료를 필요로 하는 개체 (예를 들어, 악성종양을 앓는 개체)에게 유효량의 대상 결합제를 단독으로(예를 들어, 단일요법으로) 또는 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여(예를 들어, 병용 요법으로) 투여하는 것을 포함한다.
악성 종양에는 예를 들어 HCC, 비호지킨 림프종, 버킷 림프종, 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병, 털상세포 백혈병, 전림프구성 백혈병, 항문암, 충수암, 담관암 (즉, 담관암종), 방광암, 뇌종양, 유방암, 자궁경부암, 대장암, 원발성 불명의 암(CUP), 식도암, 눈암, 나팔관암, 위장병암, 신장암, 간암, 폐암, 수모세포종, 흑색종, 구강암, 난소암, 췌장암, 부갑상선 질환, 음경암, 뇌하수체 종양, 전립선암, 직장암, 피부암, 위암, 고환암, 인후암, 갑상선암, 자궁암, 질암, 외음부암 등이 포함된다.
일부 실시양태에서, 대상 결합제의 유효량은 단독으로 (예를 들어, 단일요법으로) 또는 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 (예를 들어, 병용요법으로) 투여되는 경우, 결합제로 치료하지 않은 개체에서의 암성 세포의 수와 비교하여 개체에서 암성 세포의 수를 적어도 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 그 이상 감소시키는데 효과적인 하나 또는 그 이상으로 투여되는 양이다.
병용 요법
일부 실시양태에서, 악성 종양을 치료하는 대상 방법은 대상 결합체 및 하나 이상의 추가 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 적합한 추가 치료제에는 암 화학요법제 (상술한 바와 같음)가 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
일부 경우에, 추가 치료제는 체크포인트 억제제 또는 인터루킨과 같은 면역조절 치료제이다. 면역 체크포인트 억제제는 단백질과 같은 면역 억제 체크포인트 분자의 기능을 억제한다. 면역 체크포인트 억제제는 면역 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다. 다양한 면역 체크포인트 억제제가 알려져 있다. 면역 체크포인트 억제제에는 펩티드, 항체, 핵산 분자 및 소분자가 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
임의의 적합한 체크포인트 억제제가 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있다. 억제 체크포인트 분자의 예에는 A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, CD277, IDO, KIR, PD-1, LAG-3, TIM-3, TIGIT 및 VISTA가 포함된다.
일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 예를 들어 PD-1 또는 PD-L1을 억제함으로써 PD-1 신호전달을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-1 신호전달을 억제하는 제제는 항-PD-1 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 두르발루맙 또는 아벨루맙이다. 일부 실시양태에서, PD-L1을 억제하는 면역 체크포인트 억제제는 예를 들어 AMP-244, MEDI-4736, MPDL328 OA 및 MIH1을 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4를 표적으로 하는 항체, 예를 들어 이필리무맙과 같은 CTLA-4의 억제제이다.
일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 T 세포 면역글로불린 및 뮤신 도메인 함유 단백질-3 (TIM-3)으로도 알려진 막횡단 단백질인 CD366을 표적으로 한다.
면역 체크포인트 억제제의 추가 예시 및 특정 양태는 [Hui (2019), Immune checkpoint inhibitors, J. Cell Biol., Vol. 218 No. 3 740-741]에 기재되고, 이의 전체 내용이 참고로 본원에 포함된다.
치료에 적합한 대상자
다양한 대상자가 대상 방법을 사용한 치료에 적합하다. 적합한 대상자에는 임의의 개인 예를 들어, 악성종양을 앓고 있는 인간; 악성종양 진단을 받은 인간; 악성 종양이 있었고 악성 종양이 재발할 위험이 있는 인간; 대상 결합제 이외의 제제로 악성 종양 치료를 받았고(예를 들어, 암 화학요법제로 치료를 받았고) 제제에 반응하지 않은 인간; 또는 대상 결합제 이외의 제제로 악성종양 치료를 받았고(예를 들어, 암 화학요법제로 치료를 받았고) 초기에 제제에 반응했지만 후속적으로 반응이 중단된(예를 들어, 재발된) 인간이 포함된다.
검출 방법
본 개시내용은 대상 결합제의 사용을 수반하는 다양한 검출 방법을 제공한다. 검출 방법에는 진단 방법, 예후 방법, 모니터링 방법이 포함된다. 대상자 검출 방법은 일반적으로 대상 결합제의 표적을 발현하는 세포, 예를 들어 암성 세포를 검출하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상 방법은 예를 들어 개인에게 악성 종양이 있는지 여부를 결정하는 진단 방법이다.
일부 실시양태에서, 대상 방법은 모니터링 방법, 예를 들어 악성종양을 갖는 것으로 진단되고 장애에 대해 치료를 받고 있고 장애의 치료에 대한 반응 및/또는 진행/퇴행에 대해 모니터링되는 개인이다.
일부 경우에, 대상 검출 방법은 본 개시내용의 검출 가능하게 표지된 결합제, 특히 항-CD30 항체를 개체에게 투여하는 단계; 및 개체의 조직에 대한 결합제의 결합을 검출하는 단계를 포함한다. 검출은 예를 들어 자기 공명 영상 또는 기타 적합한 영상 기술을 통해 달성될 수 있다.
다른 경우에, 대상 검출 방법은 본 개시내용의 검출 가능하게 표지된 결합제, 예를 들어 CD30 항체를 개체로부터 얻은 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계; 및 생물학적 샘플 내 분자에 대한 결합제의 결합을 검출하는 단계를 포함한다.
결합제, 예를 들어 CD30 항체는 직접적으로 또는 간접적으로 표지될 수 있다. 간접 표지에는 검출 가능한 표지를 포함하는 2차 항체가 포함되며, 여기서 2차 항체는 대상 결합제에 결합한다. 다른 간접 표지에는 비오틴이 포함되며, 여기서 항-CD30 항체와 같은 비오티닐화된 결합제는 검출 가능한 표지를 포함하는 아비딘 또는 스트렙타비딘을 사용하여 검출될 수 있다.
적합한 검출 가능한 표지에는 분광학, 광화학, 생화학, 면역화학, 전기, 광학 또는 화학적 수단으로 검출할 수 있는 임의의 조성물이 포함된다. 적합한 것에는 자성 비드 (예를 들어, Dynabeads™), 형광 염료(예를 들어, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 텍사스 레드, 로다민, 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질, 황색 형광 단백질 등), 방사성 표지(예를 들어, 3H, 125I, 35S, 14C, 또는 32P), 효소(예를 들어, 홀스래디쉬 과산화효소, 알칼리성 포스파타제, 루시퍼라제 및 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA)에서 일반적으로 사용되는 기타) 및 콜로이드 금과 같은 비색 표지 또는 유색 유리 또는 플라스틱(예를 들어, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 라텍스 등) 비드가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
실시양태
본 개시내용의 특정 실시양태는 아래 나열된 조항에 설명되어 있다. 이들 실시양태는 예시일 뿐이고 범위를 제한하려는 의도는 아니다.
1. CD30 단백질에 특이적으로 결합하는 결합제로서:
i)QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMTWVRQKPGQGLEWMGWIYPGSGNTKYNQKFKGRVTITVDTSSSTAFMELSSLTSEDTAVYFCANYGNYWFAYWGQGTQVTVSA (서열번호 6), 및
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYITWVRQAPGQGLEWMGWIYPGSGNTKYNEKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANYGNYWFAYWGQGTLVTVSS (서열번호 11)
로부터 선택된 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬; 및
ii)DIVMTQSPASLAVSLGERATISCKSSQSVDFDGDSYLNWYQQKPGQPPKLLIYAASTRESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQEEDVATYYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIK (서열번호 21), 및
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVDFDGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIK (서열번호 26)
로부터 선택된 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬
을 포함하는 결합제.
2. 제1항에 있어서, 서열번호 11을 포함하는 VH 사슬 및 서열번호 26을 포함하는 VL 사슬을 포함하는 결합제.
3. CD30에 특이적으로 결합하는 결합제로서:
각각 서열번호 31 내지 33을 갖는 H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬; 및 각각 서열번호 34 내지 36을 갖는 L-CDR1, L-CDR2, 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함하고; 여기서;
VH 사슬은:
i) 서열번호 7의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 1 (HFR1), 서열번호 8의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 2 (HFR2), 서열번호 9의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 3 (HFR3), 및 서열번호 10의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 4 (HFR4); 또는
ii) 서열번호 12의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 13의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 14의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 15의 서열을 갖는 HFR4;를 포함하고
VL 사슬은:
i) 서열번호 22의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 1 (LFR1), 서열번호 23의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 2 (LFR2), 서열번호 24의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 3 (LFR3), 및 서열번호 25의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 4 (LFR4); 또는
ii) 서열번호 27의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 28의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 29의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4를 포함하는 것인
결합제.
4. 항원에 특이적으로 결합하는 결합제로서,
H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬 및 L-CDR1, L-CDR2, 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함하고; 여기서 상보성 결정 영역은 항원에 대한 결합제의 결합 특이성을 결정하고, 결합제에서:
VH 사슬은:
i) 서열번호 7의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 8의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 9의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 10의 서열을 갖는 HFR4; 또는
ii) 서열번호 12의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 13의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 14의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 15의 서열을 갖는 HFR4;를 포함하고
VL 사슬은:
i) 서열번호 22의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 23의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 24의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4; 또는
ii) 서열번호 27의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 28의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 29의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 30의 서열을 갖는 LFR4를 포함하는 것인
결합제.
5. 제1항에 있어서, CD30에 특이적으로 결합하고, 각각 서열번호 31 내지 33의 서열을 갖는 H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬; 및 각각 서열번호 34 내지 36의 서열을 갖는 L-CDR1, L-CDR2, 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함하는 것인 결합제.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항체인 결합제.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, T-세포 수용체, T-세포 수용체 유사 항체, IgG, Fv, 단일쇄 항체, scFv, Fab, F(ab')2, 또는 Fab'로 이루어진 군으로부터 선택되는 결합제.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, IgG인 결합제.
9. 제8항에 있어서, IgG는 IgG1인 결합제.
10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, Fab인 결합제.
11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, scFv인 결합제.
12. CD30에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 도메인을 포함하는 이중특이적 결합제로서, 여기서 제1 항원 결합 도메인은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 VH 사슬 및 VL 사슬을 포함하는 것인 결합제.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 검출 가능하게 표지된 결합제.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 공유적으로 연결된 비펩티드 합성 중합체를 포함하는 결합제.
15. 제14항에 있어서, 합성 중합체는 폴리(에틸렌 글리콜) 중합체인 결합제.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 공유적으로 연결된 지질 또는 지방산 모이어티를 포함하는 것인 결합제.
17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서 공유적으로 연결된 폴리사카라이드 또는 탄수화물 모이어티를 포함하는 결합제.
18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 조영제를 포함하는 결합제.
19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 친화성 도메인을 추가로 포함하는 결합제.
20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 고체 지지체 상에 고정된 결합제.
21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 공유적으로 연결된 시토톡신을 포함하는 결합제.
22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 아미노산 서열을 포함하는 결합제.
23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체이고, 여기서 설파타제 모티프는 2-포르밀글리신(fGly) 모이어티를 포함하도록 변형된 것인, 결합제.
24. 제23항에 있어서, 다음의 서열을 포함하고:
X1(fGly)X2Z20X3Z30
여기서
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우 임의의 아미노산일 수 있으나, 단 서열이 항체의 N-말단에 있는 경우에 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산인
결합제.
25. 제24항에 있어서, 서열이 L(fGly)TPSR인 결합제.
26. 제24항에 있어서,
Z30은R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고;
X2 및 X3 은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G, 및 C로부터 선택되는 것인
결합제.
27. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 서열은 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 있는 결합제.
28. 제27항에 있어서, 중쇄 불변 영역은 다음 서열을 포함하고:
X1(fGly)X2Z20X3Z30
여기서
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우 임의의 아미노산일 수 있으나, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
여기서 서열은 아미노산 서열 SLSLSPG에 대해 C-말단인
결합제.
29. 제27항에 있어서, 중쇄 불변 영역은 서열 SPGSL(fGly)TPSRGS를 포함하는 결합제.
30. 제27항에 있어서,
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고;
X2 및 X3 은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G, 및 C로부터 선택되는 것인
결합제.
31. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, fGly 모이어티는 항체의 경쇄 불변 영역에 위치하는 것인 결합제.
32. 제31항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 다음의 서열을 포함하고:
X1(fGly)X2Z20X3Z30
여기서
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우 임의의 아미노산일 수 있으나, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
여기서 서열은 서열 KVDNAL에 대한 C-말단이고/이거나 서열 QSGNSQ에 대한 N-말단인
결합제.
33. 제32항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(fGly)TPSRQSGNSQ를 포함하는 결합제.
34. 제33항에 있어서,
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G, 및 C로부터 선택되는 것인
결합제.
35. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서 fGly 모이어티는 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치하는 것인 결합제.
36. 제35항에 있어서, 중쇄 CH1 영역은 다음의 서열을 포함하고:
X1(fGly)X2Z20X3Z30
여기서
Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우 임의의 아미노산일 수 있으나, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
여기서 서열은 아미노산 서열 SWNSGA에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP에 대한 N-말단인
결합제.
37. 제36항에 있어서, 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(fGly)TPSRGVHTFP를 포함하는 것인 결합제.
38. 제36항에 있어서,
Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고;
X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G, 및 C로부터 선택되는 것인
결합제.
39. 제35항, 제36항 또는 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 CH1 영역의 91번째 위치에 있는 아스파라긴 잔기 앞에서 서열 X1(fGly)X2Z20X3Z30을 포함하는 결합제.
40. 제35항, 제36항, 제38항 또는 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 CH1 영역은 서열번호 175의 서열 또는 서열번호 175의 서열에 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 결합제.
41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 서열 X1(fGly)X2Z20X3Z30은 서열 LCTPSR (서열번호 58)을 포함하는 것인 결합제.
42. 제41항에 있어서, 서열번호 175의 91번째 위치에 있는 아스파라긴 잔기 앞에 서열 LCTPSR (서열번호 58)을 포함하여 KPSLCTPSRNTK (서열번호 189)의 서열을 포함하는 항체를 생산하는 것을 포함하는 결합제.
43. 제42항에 있어서, 다음 서열:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 190)를 포함하는 결합제.
44. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, fGly 모이어티는 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치하는 것인 결합제.
45. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, fGly 모이어티는 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치하는 것인 결합제.
46. 제23항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, fGly 모이어티를 통해 항체에 공유적으로 연결된 이종 모이어티를 포함하는 결합제.
47. 제46항에 있어서, 이종 모이어티는 약물, 올리고뉴클레오티드, 단백질, 지질 나노입자, 바이러스 입자, 독소, 검출가능한 표지, 수용성 중합체, 또는 합성 펩티드인 결합제.
48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항의 결합제의 가변 중쇄 (VH) 사슬, 가변 경쇄 (VL) 사슬, 또는 둘 모두를 코딩하는 핵산.
49. 제48항에 있어서, 결합제는 단일쇄 항체이고, 여기서 단일쇄 항체를 코딩하는 핵산.
50. 제49항에 있어서, 단일쇄 항체는 scFv인 핵산.
51. 핵산은 진핵 세포에서 활성인 전사 제어 요소에 작동 가능하게 연결되는 것인 제48항 내지 제50항 중 어느 한 항의 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터.
52. 제48항 내지 제50항 중 어느 한 항의 핵산 또는 제51항의 발현 벡터를 포함하는 세포.
53. 제52항에 있어서, 핵산은 결합제의 VH 사슬 및 VL 사슬을 코딩하는 것인 세포.
54. 제53항에 있어서, 결합제는 단일쇄 항체이고, 핵산은 단일쇄 항체를 코딩하는 것인 세포.
55. 제54항에 있어서, 단일쇄 항체는 scFv인 세포.
56. 세포로서:
결합제의 VH 사슬을 코딩하는 제1 핵산; 및
결합제의 VL 사슬을 코딩하는 제2 핵산을 포함하고,
여기서 VH 사슬 및 VL 사슬은 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항의 결합제를 생산하는 것인
세포.
57. 제56항에 있어서,
제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터
를 포함하는 세포.
58. 융합 단백질로서,
이종 아미노산 서열에 융합된 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항의 결합제의 VH 사슬, VL 사슬, 또는 둘 모두
를 포함하는 융합 단백질.
59. 접합체로서,
제1항 내지 제47항 중 어느 한 항의 결합제; 및
결합제에 접합된 제제
를 포함하는 접합체.
60. 제59항에 있어서, 제제는 반감기 연장 모이어티, 표지화제, 및 약물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체.
61. 제60항에 있어서, 화학식 (I)의 것이고:
여기서
Z는 CR4 또는 N이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성하고;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
L은 링커이고;
W1은 약물이고;
W2는 결합제인
접합체.
62. 제61항에 있어서, L은 다음을 포함하고:
-(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-,
여기서
a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c, d, e, 및 f의 합은 1 내지 6이고;
T1, T2, T3, T4, T5 및 T6는 각각 독립적으로 공유결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시(MABO), 메타-아미노-벤질옥시카르보닐(MABC), 파라-아미노-벤질옥시(PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐(PABC), 파라-아미노벤질(PAB), 파라-아미노-벤질아미노(PABA), 파라-아미노-페닐(PAP), 파라-히드록시-페닐(PHP),아세탈, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 선택되고, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이고, 여기서 각각의 w는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이고, 각각의 p는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 m은 1 내지 12의 정수이고;
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되는 것인
접합체.
63. 제62항에 있어서,
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3, T4, T5 및 T6는 각각 독립적으로 공유결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈기, 히드라진, 및 에스테르로부터 선택되고;
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6는 각각 독립적으로 공유 결합-CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2-, 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서:
(PEG)n은 이고, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 다음 구조를 갖는 에틸렌 디아민 모이어티이고:
여기서 y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고;
각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있는 것인
접합체.
64. 제62항 또는 제63항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 임의로 치환되는 것인 접합체.
65. 제58항에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc으로부터 선택되는 것인 접합체.
66. 제62항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
T1은 (C1-C12)알킬이고 V1은 -CO-이고;
T2는 아미노산 유사체이고 V2는 -NH-;
T3은 (PEG)n이고 V3은 -CO-이고;
T4는 AA이고 V4는 존재하지 않고;
T5는 PABC이고 V5는 존재하지 않고;
f는 0인
접합체.
67. 제61항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 약물은 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE)인 접합체.
68. 제61항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
의 구조를 갖는 접합체.
69. 제60항에 있어서, 화학식 (Ia)의 것이고
여기서
Z는 CR4 또는 N이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성하고;
각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-를 포함하는 링커이고, 여기서 a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c 및 d의 합은 1 내지 4이고;
T1, T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노 (4AP), 아세탈기, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 선택되고, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기이고, 여기서 w는 1 내지 20의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이고, p는 1 내지 20의 정수이고, h는 1 내지 12의 정수이고;
V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
W1은 약물이고;
W2는 결합제인
접합체.
70. 제69항에 있어서,
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (EDA)w, (PEG)n, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (AA)p, -(CR13OH)h-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 아세탈기, 히드라진, 및 에스테르로부터 선택되고;
V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2-, 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서:
(PEG)n은 이고, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 다음 구조를 갖는 에틸렌 디아민 모이어티이고:
여기서 y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고;
각각의 R12 및 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있고;
R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택되는 것인
접합체.
71. 제69항에 있어서, T1, T2, T3 및 T4, 및 V1, V2, V3 및 V4는 다음의 표로부터 선택되는 것인 접합체.
72. 제69항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L이 다음 구조 중 하나로부터 선택되고:
여기서
각각의 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
각각의 y는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
각각의 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고;
각각의 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
각각의 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴이고;
각각의 R'은 독립적으로 H, 아미노산의 측쇄 기, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴인
접합체.
73. 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는 것인 접합체.
74. 제69항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L은 다음 구조를 포함하고:
여기서
각각의 f는 독립적으로 1 내지 12의 정수이고;
n은 1 내지 30의 정수인
접합체.
75. 제60항에 있어서, 화학식 (II)의 것이고:
여기서:
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 CR24, N 및 C-LB-W12로부터 선택되고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 하나는 C-LB-W12이고;
R21은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R22 및 R23은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R22 및 R23은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성하고;
각각의 R24는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
LA는 제1 링커이고;
LB는 제2 링커이고;
W11은 제1 약물이고;
W12는 제2 약물이고;
W13은 결합제인
접합체.
76. 제75항에 있어서, Z1은 CR24인 접합체.
77. 제75항에 있어서, Z1은 N인 접합체.
78. 제75항에 있어서, Z3은 C-LB-W12인 접합체.
79. 제75항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, LA는:
-(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-를 포함하고,
여기서
a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 독립적으로 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카르보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈기, 히드라진, 디설파이드, 및 에스테르로부터 선택되고, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이고, 여기서 각각의 w는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이고, 각각의 p는 는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 x는 1 내지 12의 정수이고;
V1, V2, V3, V4, V5 및 V6는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 q는 1 내지 6의 정수이고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되는
접합체.
80. 제79항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 임의로 치환되는 접합체.
81. 제80항에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택되는 접합체.
82. 제75항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서,
T1은 (C1-C12)알킬이고 V1은 -CONH-이고;
T2는 치환된 (C1-C12)알킬이고 V2는 -CO-이고;
T3은 AA이고 V3은 존재하지 않고;
T4는 PABC이고 V4는 존재하지 않고;
e 및 f는 각각 0인
접합체.
83. 제75항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, LB는:
-(T7-V7)g-(T8-V8)h-(T9-V9)i-(T10-V10)j-(T11-V11)k-(T12-V12)l-(T13-V13)m-을 포함하고,
여기서
g, h, i, j, k, 1 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 독립적으로 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타- 아미노-벤질옥시카르보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈기, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 선택되고, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이고, 여기서 각각의 w는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이고, 각각의 p는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 x는 1 내지 12의 정수이고;
V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, 각각의 q는 1 내지 6의 정수이고;
각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되는 것인
접합체.
84. 제83항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 임의로 치환되는 접합체.
85. 제83항 또는 제84항에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택되는 접합체.
86. 제83항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서,
T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
T8은 (C1-C12)알킬이고 V8은 -CONH-이고;
T9는 치환된 (C1-C12)알킬이고 V9는 -CO-이고;
T10은 AA이고 V10은 존재하지 않고;
T11은 PABC이고 V11은 존재하지 않고;
l 및 m은 각각 0인
접합체.
87. 제75항에 있어서, 구조:
를 갖는 접합체.
88. 제약 조성물로서:
a) 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항의 결합제; 및
b) 제약상 허용되는 담체
를 포함하는 제약 조성물.
89. 제약 조성물로서:
a) 제58항의 융합 단백질; 및
b) 제약상 허용되는 담체
를 포함하는 제약 조성물.
90. 제약 조성물로서:
a) 제59항 내지 제87항 중 어느 한 항의 접합체; 및
b) 제약상 허용되는 담체
를 포함하는 제약 조성물.
91. 제88항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포 활성화제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
92. 제91항에 있어서, T 세포 활성화제는 면역 체크포인트 억제제, 시토카인, 및 억제성 면역 수용체의 길항제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
93. 제88항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 리포솜에 캡슐화된 것인 제약 조성물.
94. 대상자에서 세포 증식성 장애를 치료하는 방법으로서,
세포 증식성 장애를 갖는 대상자에게 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항의 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
95. 제94항에 있어서, 대상자에게 치료 유효량의 면역조절 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
96. 제95항에 있어서, 면역조절 치료제는 면역 체크포인트 억제제 또는 인터루킨인 방법.
97. 제96항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제는 A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, CD277, IDO, KIR, PD-1, LAG-3, TIM-3, TIGIT 및 VISTA를 억제하는 것인 방법.
98. 제97항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 신호전달을 억제하는 것인 방법.
99. 제98항에 있어서, PD-1 신호전달을 억제하는 면역 체크포인트 억제제는 항-PD-1 항체인 방법.
100. 제99항에 있어서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 두르발루맙, 또는 아벨루맙인 방법.
101. 제97항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4를 억제하는 것인 방법.
102. 제101항에 있어서, CTLA-4의 억제제는 항-CTLA-4 항체인 방법.
103. 제102항에 있어서, 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙인 방법.
실시예
다음 실시예는 당업자에게 본 발명을 만들고 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 제시된 것이며, 발명가가 그들의 발명으로 간주하는 것의 범위를 제한하려는 의도도 없고, 아래의 실험이 수행된 실험의 전부 또는 유일한 실험임을 나타내려는 의도는 없다. 사용된 수치 (예를 들어, 양, 온도 등)에 대한 정확성을 보장하기 위해 노력했지만 일부 실험 오류 및 편차를 고려해야 한다. 달리 명시하지 않는 한, 부는 중량부, 분자량은 중량 평균 분자량, 온도는 섭씨 단위, 및 압력은 대기압 또는 그 부근이다. 표준 약어, 예를 들어, bp, 염기쌍; kb, 킬로베이스; pl, 피코리터; s 또는 sec, 초; min, 분; h 또는 hr, 시간; aa, 아미노산; kb, 킬로베이스; bp, 염기쌍; nt, 뉴클레오티드; i.m., 근육내(근육내로); i.p., 복강내(복강내로); s.c, 피하(피하로); 등을 사용할 수 있다.
실시예에 언급된 시판 시약은 달리 명시하지 않는 한 제조업체의 지침에 따라 사용되었다. 달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예시적인 방법 및 재료가 아래에 설명되어 있지만, 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 등가인 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 테스트에 사용될 수도 있다. 재료, 방법 및 실시예는 예시일 뿐이며 범위를 제한하려는 의도는 없다.
실시예 1: AC-10 변이체의 생성
AC-10의 25개 변이체는 다양한 수준의 인간 생식세포 유사 유사성을 지닌 프레임워크 영역에 대한 키메라 서열의 CDR 이식을 기반으로 생성되었다. 구체적으로, 프레임워크 영역이 83.5% 내지 100% 인간 생식계열 서열 범위인 5개의 중쇄 및 5개의 경쇄 서열 변이체를 설계했다. 각각의 중쇄와 경쇄를 서로 조합하여 테스트하여 총 25개의 변이체가 분석되었다. 이들 중, 2개의 중쇄 변이체(VH2 및 VH3)는 임의의 경쇄 서열과 조합하여 테스트했을 때 CD30 항원에 더 이상 결합하지 않는 항체를 생성하여 선택에서 10개의 항체 변이체를 제거했다. 85% 내지 98.9% 인간 생식계열 유사 범위의 조합된 중쇄 및 경쇄 프레임워크 영역을 나타내는 나머지 15개 항체를 ADC로 제조하고 시험관내 효능에 대해 테스트했다(표 4 내지 6). 안정성 테스트와 ADC로서의 생체 내 효능을 포함한 추가 테스트를 위해 이러한 데이터에서 가장 강력한 인간화 변이체가 선택되었다.
실시예 2
4-아미노-피페리딘 (4AP) 기를 함유하는 링커-페이로드 (RED-106)는 하기 나타낸 반응식 1에 따라 합성되었다.
반응식 1
tert -부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (210)의 합성
자석 교반 막대를 함유하는 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 피페리딘-4-온 염산염 일수화물(1.53 g, 10 mmol), 디-tert-부틸 디카보네이트(2.39g, 11mmol), 탄산나트륨(1.22g, 11.5mmol), 디옥산(10mL) 및 물(1mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(100mL)로 희석하고 EtOAc (3 x 100mL)로 추출했다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 물질을 진공에서 건조시켜 1.74g(87%)의 화합물 210을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (CDCl3) δ 3.73 (t, 4H, J = 6.0), 2.46 (t, 4H, J = 6.0), 1.51 (s, 9H).
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C10H18NO3에 대한 계산치 200.3; 발견치 200.2.
tert -부틸 4-((2-(2-(3-( tert -부톡시)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 (211)의 합성
자석 교반 막대를 함유한 건조된 섬광 바이알에 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트(399mg, 2mmol), H2N-PEG2-COOt-Bu(550mg, 2.4mmol), 4Å 분자체(활성 분말, 200mg) 및 1,2-디클로로에탄(5mL)를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(845 mg, 4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc와 포화 수성 NaHCO3사이에 분배시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 850 mg의 화합물 211을 점성 오일로 수득하였다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C21H41N2O6에 대한 계산치 417.3; 발견치 417.2.
13-(1-( tert -부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)-2,2-디메틸-4,14-디옥소-3,7,10-트리옥사-13-아자헵타데칸-17-오산 (212)의 합성
자석 교반 막대를 함유한 건조된 섬광 바이알에 tert-부틸 4-((2-(2-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 211(220mg, 0.5mmol), 숙신산 무수물(55mg, 0.55mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘(5mg, 0.04mmol) 및 디클로로메탄(3mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피(50-100% EtOAc/헥산 용출)로 부분적으로 정제하여 117 mg의 화합물 212를 투명한 오일로서 수득하였고, 이는 추가 특성화 없이 다음 단계에 사용되었다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C25H45N2O9에 대한 계산치 517.6; 발견치 517.5.
17-( tert -부틸) 1-((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 -클로로-1 4 -히드록시-8 5 ,14-디메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-디옥소-7-아자-1(6,4)-옥사지나나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아시클로테트라데카판-10,12-디엔-4-일) (2S)-8-(1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)-2,3-디메틸-4,7-디옥소-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸디오에이트 (213)의 합성
자석 교반 막대를 함유한 건조된 섬광 바이알에 13-(1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)-2,2-디메틸-4,14-디옥소-3,7,10-트리옥사-13-아자헵타데칸-17-오산 212(55mg, 0.1mmol), N-데아실 메이탄신 124(65mg, 0.1mmol), HATU(43mg, 0.11mmol), DMF(1mL) 및 디클로로메탄(0.5mL)을 첨가했다. 혼합물을 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 플래쉬 크로마토그래피(5-100% MeCN/물 용출)로 직접 정제하여 18 mg(16%)의 화합물 213을 백색 필름으로 얻었다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C57H87ClN5O17에 대한 계산치 1148.6; 발견치 1148.7.
(2S)-1-(((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 -클로로-1 4 -히드록시-8 5 ,14-디메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-디옥소-7-아자-1(6,4)-옥사지나나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아시클로테트라데카판-10,12-디엔-4-일)옥시)-2,3-디메틸-1,4,7-트리옥소-8-(피페리딘-4-일)-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸-17-오산 (214)의 합성
자석 교반 막대를 함유한 건조된 섬광 바이알에 메이탄시노이드 213(31 mg, 0.027 mmol) 및 디클로로메탄(1 mL)을 첨가했다. 용액을 0℃로 냉각시키고 사염화주석(IV)(디클로로메탄 중 1.0M 용액, 0.3mL, 0.3mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 플래쉬 크로마토그래피(5-100% MeCN/물 용출)로 직접 정제하여 16mg(60%)의 화합물 214를 백색 고체로 수득하였다 (16mg, 60% 수율).
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C48H71ClN5O15에 대한 계산치 992.5; 발견치 992.6.
(2S)-8-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-(((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 -클로로-1 4 -히드록시-8 5 ,14-디메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-디옥소-7-아자-1(6,4)-옥사지나나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아시클로테트라데카판 -10,12-디엔-4-일)옥시)-2,3-디메틸-1,4,7-트리옥소-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸-17-오산 (215)의 합성
자석 교반 막대를 함유한 건조된 섬광 바이알에 메이탄시노이드 214(16 mg, 0.016 mmol), (9H-플루오렌-9-일)메틸 1,2-디메틸-2-((1-(3- 옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로필)-1H-인돌-2-일)메틸)히드라진-1-카르복실레이트(5)(13mg, 0.02mmol), DIPEA(8μL, 0.05mmol) 및 DMF(1mL)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 플래쉬 크로마토그래피(5-100% MeCN/물 용출)로 직접 정제하여 18 mg(77%)의 화합물 215를 백색 고체로 수득하였다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C77H98ClN8O18에 대한 계산치 1457.7; 발견치 1457.9.
(2S)-1-(((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 -클로로-1 4 -히드록시-8 5 ,14-디메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-디옥소-7-아자-1(6,4)-옥사지나나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤젠아시클로테트라데카판-10,12-디엔-4-일)옥시)-8-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2,3-디메틸-1,4,7-트리옥소-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸-17-오산 (216)의 합성
자석 교반 막대를 함유한 건조된 섬광 바이알에 메이탄시노이드 215(18mg, 0.012mmol), 피페리딘(20μL, 0.02mmol) 및 DMF(1mL)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 플래쉬 크로마토그래피(1-60% MeCN/물 용출)로 직접 정제하여 15mg(98%)의 화합물 216(본원에서는 HIPS-4AP-메이탄신 또는 HIPS-4-아미노-피페리딘-메이탄신으로도 지칭됨)을 흰색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) m/z: [M+H]+ C62H88ClN8O16에 대한 계산치 1235.6; 발견치 1236.0.
실시예 3: ADC의 생체접합, 정제 및 HPLC 분석
1개 또는 2개의 알데히드 태그(단일 또는 이중 태그된 구조체, 도 1a 내지 1c)를 보유하는 항체(15 mg/mL)를 각각 1.1 또는 1.7 mM에서 링커-페이로드에 접합시켰다. 반응은 0.85 내지 2.5% DMA를 함유한 20mM 구연산나트륨, 50mM NaCl pH 5.5(20/50 완충액)에서 37℃에서 72시간 동안 진행되었다. 일부 경우에, 링커 페이로드 용해도를 향상시키기 위해 Triton-X-100을 0.25%로 추가했다. 접합 후, 30 kD MWCO 0.5 mL Amicon 스핀 농축기를 사용하여 유리 약물을 제거했다. 샘플을 스핀 농축기에 첨가하고 15,000 x g에서 7분간 원심분리한 다음 450μL 20mM 구연산나트륨, 50mM NaCl pH 5.5로 희석하고 다시 원심분리했다. 이 과정은 10번 반복되었다. 최종 제품의 약물-항체 비율(DAR)을 결정하기 위해 HIC(Tosoh #14947) 또는 PLRP-RP(Agilent PL1912-1802 1000A, 8μm, 50 x 2.1mm) 컬럼을 사용하여 분석 크로마토그래피로 항체-약물 접합체(ADC)를 검사했다. HIC 분석에서는 이동상 A: 1.5M 황산암모늄, 25mM 인산나트륨 pH 7.0 및 이동상 B: 25% 이소프로판올, 18.75mM 인산나트륨 pH 7.0을 사용했다. PLRP 분석에서는 이동상 A: 물 중 용해된 0.1% 트리플루오로아세트산, 및 이동상 B: 아세토니트릴 중 용해된 0.1% 트리플루오로아세트산을 사용했다. PLRP 분석 전에 50mM DTT, 4M 구아니딘 HCl(최종 농도)을 첨가하고 37℃에서 30분 동안 가열하여 샘플을 변성시켰다. 응집을 측정하기 위해, 샘플을 5% 이소프로판올과 함께 300mM NaCl, 25mM 인산나트륨 pH 6.8의 이동상을 사용하여 분석 크기 배제 크로마토그래피(SEC; Tosoh #08541)를 사용하여 분석했다.
ADC는 1.9 이하의 DAR에 대해 메이탄신 페이로드(RED-106)를 보유하는 절단 불가능한 링커에 항체 중쇄 C-말단에서 접합되었다.
도 3. 메이탄신 페이로드(RED-106)를 보유하는 절단 불가능한 링커에 접합된 CT 태그된 H1/L1 항체는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)에 의해 결정된 바와 같이 1.88의 DAR을 얻었다.
도 4. RED-106에 접합된 CT 태그된 H1/L1 항체는 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정된 바와 같이 99.2% 단량체성이다.
도 5. RED-106에 접합된 CT 태그된 H1/L4 항체는 HIC에 의해 결정된 바와 같이 1.91의 DAR을 얻었다.
도 6. RED-106에 접합된 CT 태그된 H1/L4 항체는 SEC에 의해 결정된 바와 같이 99.5% 단량체성이다.
도 7. RED-106에 접합된 CT 태그된 H4/L2 항체는 HIC에 의해 결정된 바와 같이 1.89의 DAR을 얻었다.
도 8. RED-106에 접합된 CT 태그된 H4/L2 항체는 SEC에 의해 결정된 바와 같이 99.7% 단량체성이다.
도 9. RED-106에 접합된 CT 태그된 H4/L4 항체는 HIC에 의해 결정된 바와 같이 1.90의 DAR을 얻었다.
도 10. RED-106에 접합된 CT 태그된 H4/L4 항체는 SEC에 의해 결정된 바와 같이 99.5% 단량체성이다.
실시예 4: 재조합 CD30에 대한 인간화 항-CD30 항체의 결합
본 개시내용에 기술된 VH 및 VL 사슬로부터의 프레임워크 영역을 포함하는 항-CD30 항체의 결합을 평가하기 위해 ELISA를 수행하였다. CD30에 대한 결합은 여러 경쇄 변이체 L1 내지 L5와 결합된 H1 변이체를 함유하는 테스트된 변이체의 다양한 조합에서 영향을 받지 않았다 (도 11).
유사하게, 본 개시내용에 기술된 VH 및 VL 사슬로부터의 프레임워크 영역을 포함하는 항-CD30 항체의 결합을 평가하기 위해 ELISA를 수행하였다. CD30에 대한 결합은 여러 경쇄 변이체 L1 내지 L5와 결합된 H4 변이체를 함유하는 테스트된 변이체의 다양한 조합에서 영향을 받지 않았다 (도 12).
실시예 5: CD30 발현 세포주에 대한 항-CD30 ADC의 시험관내 세포독성
세포주를 100 μL의 성장 배지 중 웰 당 5 x 104 세포의 밀도로 96-웰 플레이트(Costar 3610)에 플레이팅했다. 다음날 세포를 배지에 연속 희석된 20 μL의 테스트 결합제로 처리했다. 5% CO2로, 37℃에서 5일 동안 배양한 후, 제조사의 권장 사항에 따라 Promega CellTiter Glo® 시약을 사용하여 생존력을 측정했다. GI50 곡선은 페이로드 농도에 대해 표준화된 GraphPad Prism에서 계산되었다. 중쇄 및 경쇄 변이체의 다양한 조합을 표적 세포에 대한 시험관내 세포독성 효능에 대해 테스트하였다.
표 4. 항체 H1 중쇄를 포함하는 인간화 CD30-표적화 메이탄신-접합 ADC의 시험관내 효능을 반영하는 IC50 값.
ADC는 최대 1.9의 DAR에 대한 메이탄신 페이로드를 보유하는 절단 불가능한 링커에 항체 중쇄 C-말단에서 접합되었다.
표 5. 항체 H4 중쇄를 포함하는 인간화 CD30-표적화 메이탄신-접합 ADC의 시험관내 효능을 반영하는 IC50 값.
표 6. 항체 H5 중쇄를 포함하는 인간화 C30-표적화 메이탄신-접합 ADC의 시험관내 효능을 반영하는 IC50 값.
본 개시내용에 기술된 VH 및 VL 사슬로부터의 프레임워크 영역을 포함하는 항-CD30 항체에 대해 시험관내 세포독성 평가를 수행하였다. 여러 경쇄 변이체 L1 내지 L5와 결합된 H1 변이체를 함유하는 테스트된 변이체 중 일부는 SU-DHL-1 세포에 대해 바람직한 세포독성을 나타냈다 (도 13).
본 개시내용에 기술된 VH 및 VL 사슬로부터의 프레임워크 영역을 포함하는 항-CD30 항체에 대해 시험관내 세포독성 평가를 수행하였다. 여러 경쇄 변이체 L1 내지 L5와 결합된 H1 변이체를 함유하는 테스트된 변이체 중 일부는 L540 세포에 대해 바람직한 세포독성을 나타냈다 (도 14).
본 개시내용에 기술된 VH 및 VL 사슬로부터의 프레임워크 영역을 포함하는 항-CD30 항체에 대해 시험관내 세포독성 평가를 수행하였다. 여러 경쇄 변이체 L1 내지 L5와 결합된 H4 변이체를 함유하는 테스트된 변이체 중 일부는 SU-DHL-1 세포에 대해 바람직한 세포독성을 나타냈다 (도 15).
본 개시내용에 기술된 VH 및 VL 사슬로부터의 프레임워크 영역을 포함하는 항-CD30 항체에 대해 시험관내 세포독성 평가를 수행하였다. 여러 경쇄 변이체 L1 내지 L5와 결합된 H4 변이체를 함유하는 테스트된 변이체 중 일부는 L540 세포에 대해 바람직한 세포독성을 나타냈다 (도 16).
실시예 6: 생물물리학적 특성화 - 안정성
용융 온도 및 강제 안정성 결과는 인간화 변이체가 모 키메라에 비해 개선된 특징을 나타냄을 보여주었다. 예를 들어, 아래 표 7은 시차 주사 형광측정법에 의해 결정된 인간화 항체 및 ADC 용융 온도가 키메라 서열에 비해 개선되었음을 보여준다.
표 7. 인간화 항체 및 ADC의 용융 온도
ADC는 최대 1.9의 DAR에 대한 메이탄신 페이로드를 보유하는 절단불가능 링커에 항체 중쇄 C-말단에서 접합되었다.
표 8. pH 5.5 및 7.2에서의 인간화 ADC 강제 안정성은 키메라 서열에 비해 개선을 보여준다.
ADC는 최대 1.9의 DAR에 대한 메이탄신 페이로드를 보유하는 절단불가능 링커에 항체 중쇄 C-말단에서 접합되었다. 샘플을 지정된 pH 및 온도에서 완충액에 3일 동안 넣어 놓은 다음 크기 배제 크로마토그래피로 분석했다. HMW, 고분자량 종(high-molecular weight species).
실시예 7: HUT102 이종이식 모델에 대한 항-CD30 ADC의 생체내 효능
방법: 암컷 NCG 마우스(그룹당 8마리)에게 HuT102 세포를 피하 접종했다. 종양이 평균 139mm3에 도달했을 때 치료가 시작되었으며, 이때 동물에게 비히클 단독 또는 10mg/kg의 단일 용량의 항-CD30 ADC를 정맥 내 투여했다. 2개의 알데히드 태그(CH1/CT) 또는 1개의 알데히드 태그(CT)를 보유하고 메이탄신 페이로드(RED-106)를 보유하는 절단불가능 링커에 접합되어 최대 4 또는 최대 2의 약물 대 항체 비율을 생성하는 항-CD30 ADC 각각을 테스트했다. 동물의 체중과 종양 크기를 매주 2회 모니터링했다. 종양이 2000mm3에 도달했을 때 동물을 안락사시켰다. 모든 DAR4 ADC는 HuT 102 종양에 대해 효과적이었으며, 투여 후 약 2주 동안 종양 성장을 지연시켰다. DAR2 ADC는 훨씬 더 효과적이어서 연구 기간 동안 종양 성장을 예방했다 (도 17).
실시예 8
MMAE 구조 8의 합성
화합물 1 및 4는 Shanghai Medicilon으로부터 상업적으로 입수하였고, 받은 대로 사용하였다. 모노메틸아우리스타틴 A 5(MMAE)는 BroadPharm에서 구입했다. 다른 모든 시약은 상업적인 출처에서 구입하여 정제하지 않고 사용했다.
(R)-2-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1,2-디메틸히드라진일)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로판아미도)-3-옥소-3-((2-(2-(3-옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로폭시)에톡시)에틸)아미노)프로판-1-술폰산 ( 3 )의 제조
카르복실산 1(1.33g, 1.67mmol)을 6.5mL의 무수 DMF 중 펜타플루오로페놀 2(1.23g, 6.68mmol)와 혼합했다. 이 혼합물을 실온에서 EDCI-HCl(0.64g, 3.34mmol)로 한번에 처리하고, HPLC 분석에 의해 판단할 때 1이 완전히 소비될 때까지 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 역상 크로마토그래피(C18 컬럼, 0.05% TFA를 갖는 0-80% 아세토니트릴-물)로 직접 정제했다. 순수한 분획을 합하고, 어두워질 때까지 진공 하에 농축하고, 동결건조하여 PFP-에스테르 생성물 3(1.40g, 1.46mmol, 87% 수율)을 황갈색 분말로 생성했다. LRMS (ESI): m/z 961.2 [M+H]+, C44H45F5N6O11S에 대한 계산치 m/z 961.3.
(2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-디이소프로필-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 ( 6 )의 제조
20mL 유리 바이알에서 모노메틸 아우리스타틴 A 5(720mg, 1.0mmol), 5mL의 무수 DMF, 및 0.35mL의 DIPEA(2.0mmol)를 실온에서 합쳤다. 생성된 혼합물을 교반하고 고체로서 PNP 카보네이트 4(1014mg, 1.0mmol)를 소량씩 나누어 처리한 후, 실온에서 HOAt(136mg, 1.0mmol)를 한번에 첨가하였다. 반응이 완료된 것으로 판단될 때까지(HPLC) 반응 혼합물을 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 30mL에 붓고, 생성된 침전물을 회전 분리하여 수집하고, 물 5mL로 세척하고, 고진공 하에 잠깐 건조시켜 1.87g의 조 생성물 6을 황색 고체로 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-디이소프로필-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-카르복실산 ( 7 )의 제조
15mL의 THF 중 용해된 조 화합물 6(1.87g)의 용액을 얼음조에서 0℃로 냉각시키고 1M 수산화리튬 수용액(3mL)으로 천천히 처리하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반한 후, 주위 온도까지 가온하고, 3mL의 1M 수산화리튬 수용액으로 처리하고, 3mL의 메탄올로 희석했다. 생성된 혼합물을 가수분해가 완료될 때까지 (HPLC) 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 1 M HCl 수용액을 pH 7까지 첨가하여 켄칭하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고 10 mL의 MTBE로 세척했다. 수성 층을 역상 크로마토그래피(C18 컬럼, 0.05% TFA를 갖는 0-40% 아세토니트릴-물)로 정제했다. 순수한 생성물 분획을 합하고, 감압 하에 농축하고, 동결건조하여 백색 분말로서 화합물 7을 얻었다(735mg, 0.60mmol, 2단계에 걸쳐 60% 수율). LRMS (ESI): m/z 1229.7 [M+H]+, C61H96N8O18에 대한 계산치 m/z 1229.7.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(5-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,8-디이소프로필-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)-2-((2S,5S,18R)-22-(2-((1,2-디메틸히드라진일)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,17,20-테트라옥소-18-(술포메틸)-10,13-디옥사-3,6,16,19-테트라아자도코산아미도)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-카르복실산 ( 8 )의 제조
3mL의 무수 DMA 중 용해된 화합물 7(735mg, 0.60mmol)의 교반된 용액에 DIPEA(0.21mL, 1.2mmol) 및 2mL의 DMA 중 용해된 PFP-에스테르 3(575mg, 0.60mmol) 용액을 실온에서 첨가한 후, HOAt(84mg, 0.60mmol)를 첨가했다. 생성된 혼합물을 커플링이 완료된 것으로 판단될 때까지(HPLC 분석) 30분 동안 교반한 다음, 실온에서 1.2mL의 피페리딘으로 직접 처리했다. 15분 후, 반응 혼합물을 역상 크로마토그래피(C18 컬럼, 아세토니트릴-물의 0-40% 구배)로 정제했다. 순수한 분획을 합하고, 감압 및 실온 하에서 농축하고, 동결건조하여 화합물 8 (808 mg, 0.45 mmol, 75% 수율)을 흰색 솜털 같은 분말로 생성했다. LRMS (ESI): m/z 1783.9 [M+H]+, C84H130N14O26S에 대한 계산치 m/z 1783.9.
벨로테칸 구조 21의 합성
합성 중간체 4 및 9는 Shanghai Medicilon으로부터 상업적으로 구입하여 받은 그대로 사용했다. 벨로테칸(Belotecan) 15는 AstaTech에서 구입했다. 다른 모든 시약은 상업적인 출처에서 구입하여 정제하지 않고 사용했다.
반응식 2. 중간체 14의 합성.
(9H-플루오렌-9-일)메틸2-((5-아미노-1-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)-1H-인돌-2-일)메틸)-1,2-디메틸히드라진-1-카르복실레이트 ( 10 )의 제조
니트로 화합물 9(116mg, 0.20mmol)를 1mL의 THF에 용해시키고 0.5mL의 물 및 1mL의 메탄올 중 염화암모늄(85mg, 1.6mmol)의 용액과 합쳤다. 생성된 혼합물을 실온에서 격렬하게 교반하고 아연 분말(104 mg, 1.6 mmol)로 5분에 걸쳐 소량씩 처리하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 고체를 여과 제거하고, 여액을 20mL의 포화 염화암모늄 수용액으로 희석하고 에틸 아세테이트(2x25mL)로 추출했다. 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하여 조 생성물 10을 얻었고 이를 정제 없이 다음 단계로 사용하였다. LRMS (ESI): m/z 555.3 [M+H]+, C33H38N4O4에 대한 계산치 m/z 555.3.
(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-((1-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)-5-(4-(tert-부톡시)-4-옥소부탄아미도)-1H-인돌- 2-일)메틸)-1,2-디메틸히드라진-1-카르복실레이트 ( 12 )의 제조
조 화합물 10(~0.20mmol)을 2mL의 DMF 중 4-(tert-부톡시)-4-옥소부탄산 11(40mg, 0.23mmol)과 합쳤다. 이 혼합물에 DIPEA(0.12mL, 0.6mmol)를 첨가한 다음, PyAOP(110mg, 0.21mmol)를 실온에서 한꺼번에 첨가하였다. 30분 후, 포화 수성 염화암모늄에 부어 반응을 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 진공 하에 제거하여 120mg의 생성물 12 (0.17mmol, 2단계에 걸쳐 85% 수율)를 어두운 오일로 얻었고 이를 추가 정제 없이 추가로 사용했다. LRMS (ESI): m/z 733.4 [M+Na]+, C41H50N4O7에 대한 계산치 m/z 733.4.
4-((2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1-(2-카르복시에틸)-1H-인돌-5-일 )아미노)-4-옥소부탄산 ( 13 )의 제조
비스-tert-부틸 에스테르 화합물 12(120mg, 0.17mmol)를 2mL의 무수 DCM, 2mL의 TFA 및 0.5mL의 트리소프로필실란의 혼합물에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 방치하였다. 용매를 진공 하에서 제거하고, 잔류물을 역상 크로마토그래피(C18 컬럼, 0.05% TFA를 갖는 CH3CN/H2O의 0-70% v/v 구배)로 정제하여 53 mg(0.09 mmol, 53% 수율)의 이산 생성물 13을 얻었다. LRMS (ESI): m/z 599.3 [M+H]+, C33H34N4O7에 대한 계산치 m/z 599.2.
(9H-플루오렌-9-일)메틸 1,2-디메틸-2-((1-(3-옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로필)-5-(4-옥소-4-(퍼플루오로페녹시)부탄아미도)-1H-인돌-2-일)메틸)히드라진-1-카르복실레이트 ( 14 )의 제조
2mL의 무수 THF 중 이산 13(50mg, 0.084mmol)과 펜타플루오로페놀(46mg, 0.25mmol)의 혼합물에 DCC(51mg, 0.25mmol)를 실온에서 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 16시간 동안 교반하고, 고체를 여과 제거하고, 여액을 농축하고, 역상 크로마토그래피(C18 컬럼, 0.05% TFA를 포함하는 CH3CN/H2O의 0-100% v/v 구배)로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 약 20mL로 농축하고, 50mL의 10% 수성 시트르산에 붓고, 에틸 아세테이트(2x20mL)로 추출하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 진공 하에서 제거하여 67mg(0.072mmol, 86% 수율)의 비스-PFP 에스테르 생성물 14를 어두운 점성 오일로서 얻었다. LRMS (ESI): m/z 953.1 [M+Na]+, C45H32F10N4O7에 대한 계산치 m/z 953.2.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-5-((((2-((S)-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)에틸)(이소프로필)카르바모일)옥시)메틸)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-카르복실산 ( 16 )의 제조
2mL DMF 중 벨로테칸 15(HCl 염, 20mg, 43μmol)의 용액에 15uL의 DIPEA(86μmol) 및 6mg의 HOAt(43μmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 PNP 카보네이트 4(43mg, 43μmol)로 처리하고 1시간 동안 교반한 다음, 진공 하에서 DMF를 제거하였다. 잔류물을 1 mL의 MeOH에 용해시키고 1 mL의 1M 수성 LiOH로 처리하였다. 10분 후, 1M 수성 HCl 1mL를 혼합물에 첨가한 후, 0.5M pH 4.7 아세테이트 완충액 1mL를 첨가했다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고 역상 HPLC(C18 컬럼, 0.05% TFA를 갖는 CH3CN/H2O의 0-50% v/v 구배)로 직접 정제했다. 용매를 진공 하에서 제거하여 17mg(18μmol, 43% 수율)의 화합물 16을 유리질 노란색 고체로 생성했다. LRMS (ESI): m/z 945.4 [M+H]+, C47H56N6O15에 대한 계산치 m/z 945.4.
반응식 3. 분지형 벨로테칸 구조 21의 합성
N 6 -(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-N 2 -(3-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)프로파노일)-L-리신 ( 19 )의 제조
2mL의 무수 DMF 중 mPEG8-산 17(100mg, 0.24mmol)의 용액에 DIPEA(0.13mL, 0.72mmol) 및 HATU(93mg, 0.24mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반한 후, Lys(Fmoc)-OH 18 (89 mg, 0.24 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 1시간 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 역상 크로마토그래피 HPLC(C18, 0.05% TFA를 포함하는 0-70% v/v MeCN-H2O)로 직접 정제하여 120 mg의 화합물 19(0.16 mmol, 67% 수율)를 무색 오일로 생성했다. LRMS (ESI): m/z 763.4 [M+H]+, C39H58N2O13에 대한 계산치 m/z 763.4.
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((28S,31S,34S)-28-(4-아미노부틸)-31-이소프로필-34-메틸-26,29,32-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27,30,33-트리아자펜타트리아콘탄-35-아미도)-5-((((2-((S)-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1H-피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)에틸)(이소프로필)카바모일)옥시)메틸)페녹시)-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-카르복실산 ( 20 )의 제조
3mL의 무수 DMF 중 카르복실산 23(45mg, 59μmol)의 용액에 실온에서 DIPEA(21μL, 120μmol) 및 HATU(22mg, 59μmol)를 첨가했다. 생성된 혼합물을 20분 동안 교반하고 1mL의 DMF 중 아민 16(55mg, 58μmol)과 합했다. 반응 혼합물을 30분간 교반한 후, 실온에서 혼합물에 피페리딘(115μL, 1.2mmol)을 첨가하였다. 20분 후, 반응 혼합물을 역상 정제 HPLC(C18, 0.05% TFA를 갖는 0-50% v/v MeCN-H2O)로 직접 정제했다. 순수한 분획을 동결건조하여 34mg(23μmol, 40% 수율)의 화합물 20을 노란색 분말로 생성했다. LRMS (ESI): m/z 1467.7 [M+H]+, C71H102N8O25에 대한 계산치 m/z 1467.7.
( 21 )의 제조
2mL의 DMA 중 화합물 20(34mg, 23μmol)과 DIPEA(8μL, 46μmol)의 혼합물에 비스-PFP 에스테르 14(9.4mg, 10.5μmol)에 이어 HOAt(3 mg, 23 μmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분간 방치한 후, 혼합물에 피페리딘(21 μL, 0.21 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 20분 후, 반응 혼합물을 역상 정제 HPLC(C18, 0.05% TFA를 갖는 0-50% v/v MeCN-H2O)로 직접 정제했다. 순수한 분획을 합치고 동결건조하여 화합물 21을 노란색 고체로 얻었다(23mg, 7μmol, 67% 수율). LRMS (ESI): m/z 1638.3 [M+H]2+, C160H224N20O53에 대한 계산치 m/z 1638.8.
실시예 9
생체접합, 정제 및 HPLC 분석
알데히드 태그된 항체의 HIPS 접합 1개의 알데히드 태그를 보유하는 항체 (15mg/mL)를 각각 1.1mL에서 링커-페이로드에 접합하였다 (실시예 7 참조). 반응을 37 ℃에서 72시간 동안 0.85-2.5% DMA를 함유한 20 mM 구연산나트륨, 50 mM NaCl pH 5.5 (20/50 완충액)에서 진행시켰다. 접합 후, 30 kD MWCO 0.5 mL Amicon 스핀 농축기를 사용하여 유리 약물을 제거했다. 샘플을 스핀 농축기에 첨가하고 15,000 x g에서 7분간 원심분리한 후 450μL 20mM 구연산나트륨, 50mM NaCl pH 5.5로 희석하고 다시 원심분리했다. 이 과정은 10번 반복되었다. 최종 제품의 DAR을 결정하기 위해 HIC(Tosoh #14947) 또는 PLRP-RP(Agilent PL1912-1802 1000A, 8um, 50 x 2.1mm) 컬럼을 사용하는 분석 크로마토그래피로 ADC를 검사했다. HIC 분석에서는 이동상 A: 1.5M 황산암모늄, 25mM 인산나트륨 pH 7.0 및 이동상 B: 25% 이소프로판올, 18.75mM 인산나트륨 pH 7.0을 사용했다. PLRP 분석에서는 이동상 A: 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산, 및 이동상 B: 아세토니트릴 중 0.1% 트리플루오로아세트산을 사용했다. PLRP 분석 전에 50mM DTT, 4M 구아니딘 HCl(최종 농도)을 첨가하고 37℃에서 30분 동안 가열하여 샘플을 변성시켰다. 응집을 측정하기 위해, 샘플을 5% 이소프로판올과 함께 300mM NaCl, 25mM 인산나트륨 pH 6.8의 이동상을 사용하여 분석 크기 배제 크로마토그래피(SEC; Tosoh #08541)를 사용하여 분석했다.
도 20. 91N에서 화합물 8(RED-601)에 접합된 단일 태그된 CD30 VH4/VL4 항체는 PLRP에 의해 결정된 바와 같이 1.58의 DAR을 얻었다.
도 21. 91N에서 화합물 8(RED-601)에 접합된 단일 태그된 CD30 VH4/VL4 항체는 SEC에 의해 결정된 바와 같이 98% 단량체성이다.
실시예 10: 이종이식 연구
CD30 ADC를 갖는 L-82 이종이식편
연구를 위해 암컷 NOD/SCID 마우스 (그룹 당 8마리)를 사용했다. 동물의 옆구리에 50% PBS/50% Matrigel 중 1천만 개의 세포를 피하 접종했다. 종양이 평균 부피 100mm3에 도달하면 모든 동물을 단일 10mg/kg 정맥 투여량의 인간 IgG로 치료했다 (0일차). 그런 다음 1일차에 동물을 비히클 단독, 비접합 항체(3mg/kg) 또는 1.5 또는 3mg/kg의 ADC로 처리했다. 동물의 체중과 종양 크기를 매주 2회 모니터링했다. 종양이 2000mm3에 도달했을 때 동물을 안락사시켰다. ADC는 이 연구에서 매우 효과적이었다.
도 18은 0일차에 나열된 항-CD30 ADC의 단일 정맥내 용량을 이용한 L-82 이종이식 연구의 그래프를 보여준다. VH4/VL4 화합물 8(RED-601)은 내부 91N 태그를 사용하고 애드세트리스(Adcetris)에 비해 페이로드 용량의 절반을 전달한다. 50% ADC 투여량(1.5mg/kg) 및 동일한 투여량(3mg/kg)에서 VH4/VL4 화합물 8은 애드세트리스와 비교하여 동등하게 효과적이었으며, 모든 군은 그룹 당 8마리의 마우스 중 8마리의 완전 반응을 나타냈다. VH4/VL4 항체 단독으로는 최소한의 활성을 나타냈다.
CD30 ADC를 갖는 카르파스(Karpas) 299 이종이식편
연구를 위해 암컷 CB17/SCID 마우스 (그룹 당 6마리)를 사용했다. 동물의 옆구리에 PBS 중 500만 개의 세포를 피하로 접종했다. 종양의 평균 부피가 214mm3에 도달하면 동물을 비히클 단독, 비접합 항체(3mg/kg) 또는 1.5 또는 3mg/kg의 ADC로 치료했다. 동물의 체중과 종양 크기를 매주 2회 모니터링했다. 종양이 2000mm3에 도달했을 때 동물을 안락사시켰다. ADC는 이 연구에서 매우 효과적이었다.
도 19는 0일차에 나열된 항-CD30 ADC의 단일 정맥내 용량을 사용한 카르파스 299 이종이식 연구의 그래프를 보여준다. VH4/VL4 화합물 8(RED-601)은 내부 91N 태그를 사용하고 애드세트리스와 비교하여 페이로드 용량의 절반을 전달한다. 50% ADC 투여(1.5 mg/kg) 및 동일한 투여(3 mg/kg)에서 VH4/VL4 화합물 8은 애드세트리스와 비교하여 5/6 및 6/6 완전 반응을 나타냈으며, VH4/VL4 화합물 8과 비교하여 페이로드 양의 2배를 사용했지만 6/6 완전 반응을 나타냈다. VH4/VL4 항체 단독은 최소 활성을 가졌다.
본 발명은 그의 특정 실시양태를 참조하여 설명되었지만, 본 발명의 진정한 사상과 범위를 벗어나지 않으면서 다양한 변경이 이루어질 수 있고 등가물이 대체될 수 있다는 것이 당업자에게 이해되어야 한다. 또한, 특정 상황, 물질, 물질의 조성, 절차, 절차 단계 또는 단계들을 본 발명의 목적, 사상 및 범위에 적용하기 위해 많은 변형이 이루어질 수 있다. 그러한 모든 변형은 본원에 첨부되는 청구범위의 범위 내에 있도록 의도된다.
서열목록 전자파일 첨부

Claims (83)

  1. CD30 단백질에 특이적으로 결합하는 결합제로서:
    i)QVQLQQSGPEVVKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMTWVRQKPGQGLEWMGWIYPGSGNTKYNQKFKGRVTITVDTSSSTAFMELSSLTSEDTAVYFCANYGNYWFAYWGQGTQVTVSA (서열번호 6), 및
    QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYITWVRQAPGQGLEWMGWIYPGSGNTKYNEKFKGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANYGNYWFAYWGQGTLVTVSS (서열번호 11)
    로부터 선택되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 사슬; 및
    ii)DIVMTQSPASLAVSLGERATISCKSSQSVDFDGDSYLNWYQQKPGQPPKLLIYAASTRESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQEEDVATYYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIK (서열번호 21), 및
    DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVDFDGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIK (서열번호 26)
    로부터 선택되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 사슬
    을 포함하는 결합제.
  2. 제1항에 있어서, 서열번호 11을 포함하는 VH 사슬 및 서열번호 26을 포함하는 VL 사슬을 포함하는 결합제.
  3. CD30에 특이적으로 결합하는 결합제로서:
    각각 서열번호 31 내지 33을 갖는 H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬; 및 각각 서열번호 34 내지 36을 갖는 L-CDR1, L-CDR2, 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함하고; 여기서;
    VH 사슬은:
    i) 서열번호 7의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 1 (HFR1), 서열번호 8의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 2 (HFR2), 서열번호 9의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 3 (HFR3), 및 서열번호 10의 서열을 갖는 중쇄 프레임워크 영역 4 (HFR4); 또는
    ii) 서열번호 12의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 13의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 14의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 15의 서열을 갖는 HFR4;를 포함하고
    VL 사슬은:
    i) 서열번호 22의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 1 (LFR1), 서열번호 23의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 2 (LFR2), 서열번호 24의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 3 (LFR3), 및 서열번호 25의 서열을 갖는 경쇄 프레임워크 영역 4 (LFR4); 또는
    ii) 서열번호 27의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 28의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 29의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 30의 서열을 갖는 LFR4를 포함하는 것인
    결합제.
  4. 항원에 특이적으로 결합하는 결합제로서,
    H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬 및 L-CDR1, L-CDR2, 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함하고; 여기서 상보성 결정 영역은 항원에 대한 결합제의 결합 특이성을 결정하고, 결합제에서:
    VH 사슬은:
    i) 서열번호 7의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 8의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 9의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 10의 서열을 갖는 HFR4; 또는
    ii) 서열번호 12의 서열을 갖는 HFR1, 서열번호 13의 서열을 갖는 HFR2, 서열번호 14의 서열을 갖는 HFR3, 및 서열번호 15의 서열을 갖는 HFR4;를 포함하고
    VL 사슬은:
    i) 서열번호 22의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 23의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 24의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 25의 서열을 갖는 LFR4; 또는
    ii) 서열번호 27의 서열을 갖는 LFR1, 서열번호 28의 서열을 갖는 LFR2, 서열번호 29의 서열을 갖는 LFR3, 및 서열번호 30의 서열을 갖는 LFR4를 포함하는 것인
    결합제.
  5. 제1항에 있어서, CD30에 특이적으로 결합하고, 각각 서열번호 31 내지 33의 서열을 갖는 H-CDR1, H-CDR2, 및 H-CDR3을 포함하는 VH 사슬; 및 각각 서열번호 34 내지 36의 서열을 갖는 L-CDR1, L-CDR2, 및 L-CDR3을 포함하는 VL 사슬을 포함하는 것인 결합제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항체인 결합제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, T-세포 수용체, T-세포 수용체 유사 항체, IgG, Fv, 단일쇄 항체, scFv, Fab, F(ab')2, 또는 Fab'로 이루어진 군으로부터 선택되는 결합제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, IgG인 결합제.
  9. 제8항에 있어서, IgG는 IgG1인 결합제.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, Fab인 결합제.
  11. 1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, scFv인 결합제.
  12. CD30에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 도메인을 포함하는 이중특이적 결합제로서, 여기서 제1 항원 결합 도메인은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 VH 사슬 및 VL 사슬을 포함하는 것인 결합제.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 검출 가능하게 표지된 결합제.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 활성제에 접합된 결합제.
  15. 제14항에 있어서, 활성제는 시토톡신인 결합제.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 아미노산 서열을 포함하는 결합제.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 결합제는 설파타제 모티프의 아미노산 서열을 포함하는 불변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체이고, 여기서 설파타제 모티프는 2-포르밀글리신(fGly) 모이어티를 포함하도록 변형된 것인, 결합제.
  18. 제17항에 있어서, 다음의 서열을 포함하고:
    X1(fGly)X2Z20X3Z30
    여기서
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우 임의의 아미노산일 수 있으나, 단 서열이 항체의 N-말단에 있는 경우에 X1이 존재하고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산인
    결합제.
  19. 제18항에 있어서, 서열이 L(fGly)TPSR인 결합제.
  20. 제18항에 있어서,
    Z30은R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고;
    X2 및 X3 은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G, 및 C로부터 선택되는 것인
    결합제.
  21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 서열은 항체의 중쇄 불변 영역의 C-말단에 있는 것인 결합제.
  22. 제21항에 있어서, 중쇄 불변 영역은 다음 서열을 포함하고:
    X1(fGly)X2Z20X3Z30
    여기서
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우 임의의 아미노산일 수 있으나, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    여기서 서열은 아미노산 서열 SLSLSPG에 대해 C-말단인
    결합제.
  23. 제21항에 있어서, 중쇄 불변 영역은 서열 SPGSL(fGly)TPSRGS를 포함하는 결합제.
  24. 제21항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고;
    X2 및 X3 은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G, 및 C로부터 선택되는 것인
    결합제.
  25. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, fGly 모이어티는 항체의 경쇄 불변 영역에 위치하는 것인 결합제.
  26. 제25항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 다음의 서열을 포함하고:
    X1(fGly)X2Z20X3Z30
    여기서
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우 임의의 아미노산일 수 있으나, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    여기서 서열은 서열 KVDNAL에 대한 C-말단이고/이거나 서열 QSGNSQ에 대한 N-말단인
    결합제.
  27. 제26항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 서열 KVDNAL(fGly)TPSRQSGNSQ를 포함하는 것인 결합제.
  28. 제27항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G, 및 C로부터 선택되는 것인
    결합제.
  29. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, fGly 모이어티는 항체의 중쇄 CH1 영역에 위치하는 것인 결합제.
  30. 제29항에 있어서, 중쇄 CH1 영역은 다음의 서열을 포함하고:
    X1(fGly)X2Z20X3Z30
    여기서
    Z20은 프롤린 또는 알라닌 잔기이고;
    Z30은 염기성 아미노산 또는 지방족 아미노산이고;
    X1은 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우 임의의 아미노산일 수 있으나, 단 서열이 접합체의 N-말단에 있는 경우 X1이 존재하고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 임의의 아미노산이고,
    여기서 서열은 아미노산 서열 SWNSGA에 대한 C-말단이고/이거나 아미노산 서열 GVHTFP에 대한 N-말단인
    결합제.
  31. 제30항에 있어서, 중쇄 CH1 영역은 서열 SWNSGAL(fGly)TPSRGVHTFP를 포함하는 것인 결합제.
  32. 제30항에 있어서,
    Z30은 R, K, H, A, G, L, V, I, 및 P로부터 선택되고;
    X1은 L, M, S, 및 V로부터 선택되고;
    X2 및 X3은 각각 독립적으로 S, T, A, V, G, 및 C로부터 선택되는 것인
    결합제.
  33. 제29항, 제30항 또는 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 CH1 영역의 91번째 위치에 있는 아스파라긴 잔기 앞에서 서열 X1(fGly)X2Z20X3Z30을 포함하는 결합제.
  34. 제29항, 제30항, 제32항 또는 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 CH1 영역은 서열번호 175의 서열 또는 서열번호 175의 서열에 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 결합제.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 서열 X1(fGly)X2Z20X3Z30은 서열 LCTPSR (서열번호 58)을 포함하는 것인 결합제.
  36. 제35항에 있어서, KPSLCTPSRNTK (서열번호 189)의 서열을 포함하는 항체를 생산하기 위해 서열번호 175의 91번째 위치에 있는 아스파라긴 잔기 앞에 서열 LCTPSR (서열번호 58)을 포함하는 결합제.
  37. 제36항에 있어서, 다음 서열:
    ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSLCTPSRNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 190)을 포함하는 결합제.
  38. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, fGly 모이어티는 항체의 중쇄 CH2 영역에 위치하는 것인 결합제.
  39. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, fGly 모이어티는 항체의 중쇄 CH3 영역에 위치하는 것인 결합제.
  40. 제17항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, fGly 모이어티를 통해 항체에 공유적으로 연결된 이종 모이어티를 포함하는 결합제.
  41. 제40항에 있어서, 이종 모이어티는 약물, 올리고뉴클레오티드, 단백질, 지질 나노입자, 바이러스 입자, 독소, 검출가능한 표지, 수용성 중합체, 또는 합성 펩티드인 결합제.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 결합제의 가변 중쇄 (VH) 사슬, 가변 경쇄 (VL) 사슬, 또는 둘 모두를 코딩하는 핵산.
  43. 제42항에 있어서, 결합제는 단일쇄 항체이고, 단일쇄 항체를 코딩하는 핵산.
  44. 제43항에 있어서, 단일쇄 항체는 scFv인 핵산.
  45. 핵산은 진핵 세포에서 활성인 전사 제어 요소에 작동 가능하게 연결되는 것인 제42항 내지 제44항 중 어느 한 항의 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터.
  46. 제42항 내지 제44항 중 어느 한 항의 핵산 또는 제45항의 발현 벡터를 포함하는 세포.
  47. 제42항에 있어서, 핵산은 결합제의 VH 사슬 및 VL 사슬을 코딩하는 것인 세포.
  48. 제47항에 있어서, 결합제는 단일쇄 항체이고, 핵산은 단일쇄 항체를 코딩하는 것인 세포.
  49. 제4항에 있어서, 단일쇄 항체는 scFv인 세포.
  50. 세포로서:
    결합제의 VH 사슬을 코딩하는 제1 핵산; 및
    결합제의 VL 사슬을 코딩하는 제2 핵산을 포함하고,
    여기서 VH 사슬 및 VL 사슬은 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 결합제를 생산하는 것인
    세포.
  51. 제50항에 있어서,
    제1 핵산을 포함하는 제1 발현 벡터; 및
    제2 핵산을 포함하는 제2 발현 벡터
    를 포함하는 세포.
  52. 융합 단백질로서,
    이종 아미노산 서열에 융합된 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 결합제의 VH 사슬, VL 사슬, 또는 둘 모두
    를 포함하는 융합 단백질.
  53. 접합체로서,
    제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 결합제; 및
    결합제에 접합된 제제
    를 포함하는 접합체.
  54. 제53항에 있어서, 제제는 반감기 연장 모이어티, 표지화제, 및 약물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체.
  55. 제54항에 있어서, 화학식 (I)의 것이고:

    여기서
    Z는 CR4 또는 N이고;
    R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성하고;
    각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
    L은 링커이고;
    W1은 약물이고;
    W2는 결합제인
    접합체.
  56. 제55항에 있어서, L은 다음을 포함하고:
    -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-,
    여기서
    a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c, d, e, 및 f의 합은 1 내지 6이고;
    T1, T2, T3, T4, T5 및 T6는 각각 독립적으로 공유결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시(MABO), 메타-아미노-벤질옥시카르보닐(MABC), 파라-아미노-벤질옥시(PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐(PABC), 파라-아미노벤질(PAB), 파라-아미노-벤질아미노(PABA), 파라-아미노-페닐(PAP), 파라-히드록시-페닐(PHP),아세탈, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 선택되고, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이고, 여기서 각각의 w는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이고, 각각의 p는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 m은 1 내지 12의 정수이고;
    V1, V2, V3, V4, V5 및 V6는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
    각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R15는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되는 것인
    접합체.
  57. 제56항에 있어서,
    T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
    T2, T3, T4, T5 및 T6는 각각 독립적으로 공유결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)m-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP, PHP, 아세탈기, 히드라진, 및 에스테르로부터 선택되고;
    V1, V2, V3, V4, V5 및 V6는 각각 독립적으로 공유 결합-CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2-, 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    여기서:
    (PEG)n은 이고, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
    EDA는 다음 구조를 갖는 에틸렌 디아민 모이어티이고:
    여기서 y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
    4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고;
    각각의 R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있는 것인
    접합체.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 임의로 치환되는 것인 접합체.
  59. 제58항에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc, 및 O-GalNAc으로부터 선택되는 것인 접합체.
  60. 제56항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서,
    T1은 (C1-C12)알킬이고 V1은 -CO-이고;
    T2는 아미노산 유사체이고 V2는 -NH-;
    T3은 (PEG)n이고 V3은 -CO-이고;
    T4는 AA이고 V4는 존재하지 않고;
    T5는 PABC이고 V5는 존재하지 않고;
    f는 0인
    접합체.
  61. 제55항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 약물은 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE)인 접합체.
  62. 제55항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,

    의 구조를 갖는 접합체.
  63. 제54항에 있어서, 화학식 (Ia)의 것이고:

    여기서
    Z는 CR4 또는 N이고;
    R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2 및 R3은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성하고;
    각각의 R4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
    L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-를 포함하는 링커이고, 여기서 a, b, c 및 d는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, 여기서 a, b, c 및 d의 합은 1 내지 4이고;
    T1, T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노 (4AP), 아세탈기, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 선택되고, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기이고, 여기서 w는 1 내지 20의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이고, p는 1 내지 20의 정수이고, h는 1 내지 12의 정수이고;
    V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고;
    각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
    W1은 약물이고;
    W2는 결합제인
    접합체.
  64. 제63항에 있어서,
    T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
    T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 (EDA)w, (PEG)n, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (AA)p, -(CR13OH)h-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 아세탈기, 히드라진, 및 에스테르로부터 선택되고;
    V1, V2, V3 및 V4는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2-, 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    여기서:
    (PEG)n은 이고, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
    EDA는 다음 구조를 갖는 에틸렌 디아민 모이어티이고:
    여기서 y는 1 내지 6의 정수이고 r은 0 또는 1이고;
    4-아미노-피페리딘 (4AP)은 이고;
    각각의 R12 및 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 임의의 2개의 인접한 R12 기는 환형으로 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있고;
    R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택되는 것인
    접합체.
  65. 제63항 또는 제64항에 있어서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 4AP이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 존재하지 않고 V4는 존재하지 않는 것인 접합체.
  66. 제63항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L은 다음 구조를 포함하고:

    여기서
    각각의 f는 독립적으로 1 내지 12의 정수이고;
    n은 1 내지 30의 정수인
    접합체.
  67. 제54항에 있어서, 화학식 (II)의 것이고:

    여기서:
    Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 CR24, N 및 C-LB-W12로부터 선택되고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 하나는 C-LB-W12이고;
    R21은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    R22 및 R23은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R22 및 R23은 임의로 환형으로 연결되어 5원 또는 6원 헤테로시클릴을 형성하고;
    각각의 R24는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 술포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되고;
    LA는 제1 링커이고;
    LB는 제2 링커이고;
    W11은 제1 약물이고;
    W12는 제2 약물이고;
    W13은 결합제인
    접합체.
  68. 제67항에 있어서, Z1은 CR24인 접합체.
  69. 제67항에 있어서, Z1은 N인 접합체.
  70. 제67항에 있어서, Z3은 C-LB-W12인 접합체.
  71. 제67항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, LA는:
    -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-(T6-V6)f-를 포함하고,
    여기서
    a, b, c, d, e 및 f는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
    T1, T2, T3, T4, T5 및 T6은 각각 독립적으로 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타-아미노-벤질옥시카르보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈기, 히드라진, 디설파이드, 및 에스테르로부터 선택되고, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이고, 여기서 각각의 w는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이고, 각각의 p는 는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 x는 1 내지 12의 정수이고;
    V1, V2, V3, V4, V5 및 V6는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 q는 1 내지 6의 정수이고;
    각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되는 것인
    접합체.
  72. 제61항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 임의로 치환되는 것인 접합체.
  73. 제72항에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택되는 것인 접합체.
  74. 제67항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서,
    T1은 (C1-C12)알킬이고 V1은 -CONH-이고;
    T2는 치환된 (C1-C12)알킬이고 V2는 -CO-이고;
    T3은 AA이고 V3은 존재하지 않고;
    T4는 PABC이고 V4는 존재하지 않고;
    e 및 f는 각각 0인
    접합체.
  75. 제67항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, LB는:
    -(T7-V7)g-(T8-V8)h-(T9-V9)i-(T10-V10)j-(T11-V11)k-(T12-V12)l-(T13-V13)m-을 포함하고,
    여기서
    g, h, i, j, k, 1 및 m은 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
    T7, T8, T9, T10, T11, T12 및 T13은 각각 독립적으로 공유 결합, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)x-, 4-아미노-피페리딘 (4AP), 메타-아미노-벤질옥시 (MABO), 메타- 아미노-벤질옥시카르보닐 (MABC), 파라-아미노-벤질옥시 (PABO), 파라-아미노-벤질옥시카르보닐 (PABC), 파라-아미노벤질 (PAB), 파라-아미노-벤질아미노 (PABA), 파라-아미노-페닐 (PAP), 파라-히드록시-페닐 (PHP), 아세탈기, 히드라진, 디설파이드 및 에스테르로부터 선택되고, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 모이어티이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기 또는 아미노산 유사체이고, 여기서 각각의 w는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 n은 1 내지 30의 정수이고, 각각의 p는 1 내지 20의 정수이고, 각각의 x는 1 내지 12의 정수이고;
    V7, V8, V9, V10, V11, V12 및 V13은 공유 결합, -CO-, -NR15-, -NR15(CH2)q-, -NR15(C6H4)-, -CONR15-, -NR15CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR15-, -NR15SO2- 및 -P(O)OH-로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, 각각의 q는 1 내지 6의 정수이고;
    각각의 R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 카르복실, 카르복실 에스테르, 아실, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴로부터 독립적으로 선택되는 것인
    접합체.
  76. 제71항에 있어서, MABO, MABC, PABO, PABC, PAB, PABA, PAP 및 PHP는 각각 글리코시드로 임의로 치환되는 것인 접합체.
  77. 제75항 또는 제76항에 있어서, 글리코시드는 글루쿠로니드, 갈락토시드, 글루코시드, 만노시드, 푸코시드, O-GlcNAc 및 O-GalNAc로부터 선택되는 것인 접합체.
  78. 제75항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서,
    T7은 존재하지 않고 V7은 -NHCO-이고;
    T8은 (C1-C12)알킬이고 V8은 -CONH-이고;
    T9는 치환된 (C1-C12)알킬이고 V9는 -CO-이고;
    T10은 AA이고 V10은 존재하지 않고;
    T11은 PABC이고 V11은 존재하지 않고;
    l 및 m은 각각 0인
    접합체.
  79. 제67항에 있어서, 구조:

    를 갖는 접합체.
  80. 제약 조성물로서:
    a) 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 결합제; 및
    b) 제약상 허용되는 담체
    를 포함하는 제약 조성물.
  81. 제약 조성물로서:
    a) 제52항의 융합 단백질; 및
    b) 제약상 허용되는 담체
    를 포함하는 제약 조성물.
  82. 제약 조성물로서:
    a) 제53항 내지 제79항 중 어느 한 항의 접합체; 및
    b) 제약상 허용되는 담체
    를 포함하는 제약 조성물.
  83. 대상자에서 세포 증식성 장애를 치료하는 방법으로서,
    세포 증식성 장애를 갖는 대상자에게 제80항 내지 제82항 중 어느 한 항의 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
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