TW202408585A - 5t4抗體-藥物結合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供5T4抗體-藥物結合物及其用途。

Description

5T4抗體-藥物結合物及其用途
本發明大體上係關於結合至5T4 (例如人類5T4)的抗體-藥物結合物(ADC)及其使用方法。
5T4係含有八個富白胺酸重複序列的N-糖基化跨膜72 kDa醣蛋白。5T4，亦已知為Wnt活化抑制因子1或WAIF1，因其表現於胚胎滋養層中而通常稱為癌胚抗原(其首次發現於胚胎滋養層中)，或稱為滋養層醣蛋白(TPBG)。5T4發現於腫瘤(諸如大腸直腸、卵巢及胃腫瘤)中。其表現用作預後輔助手段。5T4在正常組織中的表現極其有限，但在惡性腫瘤中、在其整個發育過程中廣泛存在。儘管其受到限制的表現似乎賦予5T4成為癌症療法中之目標的可能性，但靶向5T4之抗體、ADC及疫苗的成功治療尚未實現。
此項技術中仍需要可靶向5T4的ADC，以治療、預防或緩解5T4介導的疾病、病症或病狀，諸如涉及表現5T4之腫瘤細胞的彼等疾病、病症或病狀。
本發明提供包含結合至5T4之抗體的ADC (「5T4-ADC」)。在一些實施例中，此類5T4-ADC與包含本文所述之重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)的抗體結合至人類5T4的相同抗原決定基。
本發明亦提供包含5T4-ADC的醫藥組成物，該5T4-ADC包含結合至5T4的抗體或其片段及與該抗體或其片段結合(直接地或間接地結合)的藥物。在一些實施例中，此類醫藥組成物包括5T4-ADC，該5T4-ADC包含的抗體或其片段與包含本文所述之VH及VL的抗體結合至人類5T4的基本相同抗原決定基。
本發明亦提供使用結合至5T4的5T4-ADC治療、預防或減輕5T4介導之疾病、病症或病狀的方法，諸如減輕5T4介導之疾病、病症或病狀的一或多種症狀。
更具體而言，本發明提供一種5T4-ADC，其包含(a)結合至5T4的抗體及(b)一或多個嗒𠯤-吡咯并偶合部分，包含藥物與嗒𠯤-吡咯并偶合部分經由連接子的結合。在一些實施例中，5T4-ADC係由式(IV)表示： ， 其中 Ab表示結合至5T4的抗體； R 2及R 3各自獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；或R 2與R 3以環形連接以形成5員或6員雜環基； L係連接子且由-(T 1V 1) a-(T 2V 2) b-(T 3V 3) c-(T 4V 4) d-(T 5V 5) e-表示； T 1、T 2、T 3、T 4及T 5各自獨立地為C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、(EDA) w、(PEG) n、(AA) p、-(CR 13OH) h-、哌啶-4-胺(P4A-R 12)、胺基甲酸間胺基苯甲酯(MABC)基團、間胺基苯甲氧基(MABO)基團、對胺基苯甲氧基(PABO)基團、胺基甲酸對胺基苯甲酯(PABC)基團、對胺基苯甲基(PAB)基團、縮醛、二硫鍵、肼、(AA) p-MABC-(AA) p、(AA) p-MABO-(AA) p、(AA) p-PABO-(AA) p或(AA) p-PABC-(AA) p； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地為共價鍵、-C(=O)-、-NR 11-、-C(=O)NR 11-、-NR 11C(=O)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-O-、-S-、-S(=O)-、-SO 2-、-SO 2NR 11-、-NR 11SO 2-或-P(=O)OH-； a、b、c、d及e各自獨立地為0或1，其中a、b、c、d及e之總和為1至5； h獨立地為整數1至12； m為0或1； n獨立地為整數1至30； p獨立地為零或整數1至20； r為整數1至10； w獨立地為整數1至20； X 1、X 2、X 3及X 4各自獨立地為C、N、O或S； Y 1、Y 2、Y 3及Y 4各自獨立地為氫、鹵素、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基，或Y 1與Y 2、Y 2與Y 3或Y 3與Y 4以環形連接； W 1為藥物； R 11獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、PEG、芳基或經取代之芳基；且 R 12獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基；且 R 13獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、芳基或經取代之芳基。
在一些實施例中，藥物係類美登素(maytansinoid)或奧瑞他汀(auristatin)，諸如MMAE或MMAF。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)表示，其中R 2及R 3各自為烷基，例如甲基。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)表示，其中X 1、X 2、X 3及X 4中之每一者獨立地為C或N。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V)表示： ， 其中X 1、Y 1、Y 2、Y 3、Y 4、R 2、R 3、L及W 1如本文所定義，諸如針對式(IV)所定義。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI)表示： ， 其中X 1係C或N，且L及W 1如本文所定義，諸如針對式(IV)所定義。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)或(VI)表示，其中： L係連接子且由-(T 1V 1) a-(T 2V 2) b-(T 3V 3) c-(T 4V 4) d-(T 5V 5) e-表示； T 1、T 2、T 3、T 4及T 5各自獨立地為C 1-C 6烷基、P4A-R 12、(AA) p、(AA) p-PABC或(PEG) n； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地選自由以下組成之群：共價鍵、-C(=O)-、-NR 11-、-C(=O)NR 11-、-NR 11C(=O)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-O-、-S-、-S(=O)-、-SO 2-、-SO 2NR 11-、-NR 11SO 2-及-P(=O)OH-； a、b、c、d及e各自獨立地為0或1，其中a、b、c、d及e之總和為1至5； p為整數1至20； n為整數1至30； R 11選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、PEG、芳基及經取代之芳基；且 R 12獨立地為聚乙二醇或經羧酸修飾之聚乙二醇。
在其他實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)或(VI)表示，其中： a、b、c、d及e各自獨立地為0或1，其中a、b、c、d及e之總和為1至5； p為整數1至20； n為整數1至30； L係連接子且由-(T 1V 1) a-(T 2V 2) b-(T 3V 3) c-(T 4V 4) d-(T 5V 5) e-表示； T 1為C 1-C 6烷基； T 2、T 3、T 4及T 5各自獨立地為(PEG) n、C 1-C 6烷基、(AA) p、P4A-R 12、(AA) p-(PABO-R 16)-(AA) p、(AA) p-(PABC-R 16)-(AA) p、(AA) p-(PABO-R 16)或(AA) p-(PABC-R 16)； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地為-CO-或-NR 11； R 11獨立地為氫或烷基； R 12獨立地為經羧酸修飾之聚乙二醇；且 R 16為氫。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)或(VI)表示，其中： L係-(C 1-C 6烷基)-(V 1)-(P4A-R 12)-(V 2)-(C 1-C 6烷基)-(V 3)-； V 1、V 2及V 3各自獨立地為-CO-或-NR 11-； R 11獨立地為氫或C 1-C 6烷基；且 R 12為經羧酸修飾之聚乙二醇部分。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)或(VI)表示，其中L為： 其中 表示連接至嗒𠯤-吡咯并偶合部分之氮且*表示連至W 1之連接點。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-1)表示： 其中： Ab表示結合至5T4的抗體； r為整數1至10； X 1為C或N；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-1)表示，其中藥物係類美登素或奧瑞他汀，諸如MMAE。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-1)表示，其中X 1為C且W 1為美登素或去醯化美登素。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-1)表示，其中X 1為N且W 1為MMAE。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)或(VI)表示，其中： L為(C 1-C 6烷基)-V 1-(AA)-V 2-(PEG) n-V 3-((AA) p-(PABC-R 16))- V 4-( C 1-C 6烷基)-V 5； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地選自由-CO-及-NR 11-組成之群； R 11獨立地為氫或C 1-C 6烷基； R 16為氫；且 n及p各自獨立地為整數1至20；
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)或(VI)表示，其中L為： ， 其中 表示連接至嗒𠯤-吡咯并偶合部分之氮；且*表示連至W 1之連接點。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-2)表示： 其中： Ab表示結合至5T4的抗體； r為整數1至10； X 1為C或N；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-2)表示，其中藥物係類美登素或奧瑞他汀，諸如MMAE。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-2)表示，其中X 1為C且W 1為美登素或去醯化美登素。
本發明亦提供式(IV)、(V)及(VI)之5T4-ADC： (VI)， 其中： Ab表示結合至5T4的抗體； r為整數1至10； m為0或1； R 2及R 3各自獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；或R 2與R 3以環形連接以形成5員或6員雜環基； X 1、X 2、X 3及X 4各自獨立地選自由C、N、O及S組成之群； Y 1、Y 2、Y 3及Y 4各自獨立地為氫、鹵素、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基，或Y 1與Y 2、Y 2與Y 3或Y 3與Y 4以環形連接； L為 ， 表示連至嗒𠯤-吡咯并偶合部分之氮的連接點； *表示連至W 1之連接點； R 5獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 6獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 7為可裂解部分； k為整數1至10； L 1包含-(T 1-V 1) a-(T 2-V 2) b-(T 3-V 3) c-(T 4-V 4) d-； L 2包含-(T 5-V 5) e-(T 6-V 6) f-(T 7-V 7) g-(T 8-V 8) h-； T 1、T 2、T 3、T 4、T 5、T 6、T 7及T 8各自獨立地為共價鍵、C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基、(EDA) w、(PEG) n、(AA) p、-(CR 13OH) m-、P4A-R 12、縮醛、肼、二硫鍵及酯； V 1、V 2、V 3、V 4、V 5、V 6、V 7及V 8各自獨立地為共價鍵、-CO-、-NR 15-、-NR 15(CH 2) q-、-NR 15(C 6H 4)-、-CONR 15-、-NR 15CO-、-C(O)O-、-OC(O)-、-O-、-S-、-S(O)-、-SO 2-、-SO 2NR 15-、-NR 15SO 2-及-P(O)OH-； a、b、c、d、e、f、g及h各自獨立地為1或0； m獨立地為整數1至12； n獨立地為整數1至30； p獨立地為整數1至20； q獨立地為整數1至6； w獨立地為整數1至20； R 12獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 13獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、芳基及經取代之芳基；且 R 15獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、羧基、羧基酯、醯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)表示，其中R 2及R 3各自為烷基，例如甲基。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)表示，其中X 1、X 2、X 3及X 4中之每一者獨立地為C或N。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-3)表示： ， 其中： Ab表示結合至5T4的抗體； X 1為C、N、O或S； R 5獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 6獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 7為可裂解部分； L 1包含-(T 1-V 1) a-(T 2-V 2) b-(T 3-V 3) c-(T 4-V 4) d-； L 2包含-(T 5-V 5) e-(T 6-V 6) f-(T 7-V 7) g-(T 8-V 8) h-； T 1、T 2、T 3、T 4、T 5、T 6、T 7及T 8各自獨立地為共價鍵、C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基、(EDA) w、(PEG) n、(AA) p、-(CR 13OH) m-、P4A-R 12、縮醛、肼、二硫鍵或酯； V 1、V 2、V 3、V 4、V 5、V 6、V 7及V 8各自獨立地為共價鍵、-CO-、-NR 15-、-NR 15(CH 2) q-、-NR 15(C 6H 4)-、-CONR 15-、-NR 15CO-、-C(O)O-、-OC(O)-、-O-、-S-、-S(O)-、-SO 2-、-SO 2NR 15-、-NR 15SO 2-或-P(O)OH-； a、b、c、d、e、f、g及h各自獨立地為1或0； k為整數1至10； m獨立地為整數1至12； n獨立地為整數1至30； p獨立地為整數1至20； q獨立地為整數1至6； w獨立地為整數1至20； R 12獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 13獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、芳基或經取代之芳基；且 R 15獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、羧基、羧基酯、醯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)或(VI)表示，其中： L為 ； R 5、R 6、L 1、L 2及k如本文所定義，諸如針對式(VI-3)所定義；且 R 7為 ，其中**表示連至本文所述之苯基的連接點，諸如式(VI-3)、(V-4)或(VI-4)。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V-5)表示： ，其中Ab、L 1、L 2、R 2、R 3、R 5、X 1、Y 1、Y 2、Y 3、Y 4、W 1及r如本文所定義，諸如針對式(VI-3)所定義，且R 6'及R 6"各自獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-5)表示： ，其中Ab、L 1、L 2、R 5、W 1及r如本文所定義，諸如針對式(VI-3)所定義，且R 6'及R 6"各自獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基，且其中X 1為C或N。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-6)表示： ，其中Ab、L 1、L 2、W 1及r如本文所定義，諸如針對式(VI-3)所定義且其中X 1為C或N。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-3)、(V-5)、(VI-5)或(VI-6)表示，其中： L 1包含-(T 1-V 1) a-(T 2-V 2) b-(T 3-V 3) c-； T 1、T 2及T 3各自獨立地選自由C 1-C 12烷基、(PEG) n及(AA) p組成之群； V 1、V 2及V 3各自獨立地為-C(=O)-或-NR 11-； a、b及c各自為1； n獨立地為整數1至10； p獨立地為整數1至10； R 11獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分、芳基或經取代之芳基。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-3)、(V-5)、(VI-5)或(VI-6)表示，其中L 1為 ，其中 表示連至嗒𠯤-吡咯并偶合部分之氮的連接點，且其中*表示連至連接子中之末端氮的連接點，如本文所述，諸如式(VI-6)中所示。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-7)表示： (VI-7)，其中Ab、L 1、L 2、W 1及r如本文所定義，諸如針對式(VI-3)所定義且其中X 1為C或N。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-7)表示，其中L 2為羰基。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-7)表示，其中X 1為N且W 1為MMAE。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之VH中所示的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3以及包含胺基酸序列SEQ ID NO:26之VL中所示的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:44之VH中所示的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3以及包含胺基酸序列SEQ ID NO:45之VL中所示的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3；或(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:62之VH中所示的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3以及包含胺基酸序列SEQ ID NO:63之VL中所示的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含：(a) VH區，其包含(1)具有選自由SEQ ID NO:1、7、12、13及18組成之群之胺基酸序列的VH CDR1；(2)具有選自由SEQ ID NO:2、8、14、19及24組成之群之胺基酸序列的VH CDR2；及(3)具有選自由SEQ ID NO:3、9、15及20組成之群之胺基酸序列的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含(1)具有選自由SEQ ID NO:4、10、16及21組成之群之胺基酸序列的VL CDR1；(2)具有選自由SEQ ID NO:5、11及22組成之群之胺基酸序列的VL CDR2；及(3)具有選自由SEQ ID NO:6、17及23組成之群之胺基酸序列的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含：(i) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:2的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3；或(ii) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:7的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:8的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:9的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3；或(iii) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:2的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3；或(iv) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:15的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR3；或(v) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:18的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:19的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:23的VL CDR3；或(vi) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:24的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含：(a) VH區，其包含(1)具有選自由SEQ ID NO:27、31、34、35及39組成之群之胺基酸序列的VH CDR1；(2)具有選自由SEQ ID NO:28、32、36、40及43組成之群之胺基酸序列的VH CDR2；及(3)具有選自由SEQ ID NO:29、33、37及41組成之群之胺基酸序列的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含(1)具有選自由SEQ ID NO:4、10、16及21組成之群之胺基酸序列的VL CDR1；(2)具有選自由SEQ ID NO:5、11及22組成之群之胺基酸序列的VL CDR2；及(3)具有選自由SEQ ID NO:30、38及42組成之群之胺基酸序列的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含：(i) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3；或(ii) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:31的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:32的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:33的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3；或(iii) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:34的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3；或(iv) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:35的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:37的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:38的VL CDR3；或(v) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:39的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:40的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:41的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR3；或(vi) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:43的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含：(a) VH區，其包含(1)具有選自由SEQ ID NO:46、50、53、13及57組成之群之胺基酸序列的VH CDR1；(2)具有選自由SEQ ID NO:47、51、54、58及61組成之群之胺基酸序列的VH CDR2；及(3)具有選自由SEQ ID NO:48、52、55及59組成之群之胺基酸序列的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含(1)具有選自由SEQ ID NO:4、10、16及21組成之群之胺基酸序列的VL CDR1；(2)具有選自由SEQ ID NO:5、11及22組成之群之胺基酸序列的VL CDR2；及(3)具有選自由SEQ ID NO:49、56及60組成之群之胺基酸序列的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含：(i) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:47的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3；或(ii) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:50的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:51的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3；或(iii) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:47的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3；或(iv) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:55的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:56的VL CDR3；或(v) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:57的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:58的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:59的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:60的VL CDR3；或(vi) VH區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:61的VH CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；及VL區，其包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、含有胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及含有胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含SEQ ID NO:25、26、44、45、62及63中之任一者中所示的構架1 (FR1)、構架2 (FR2)、構架3 (FR3)及/或構架4 (FR4)序列。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含人類構架序列。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示，其中抗體(Ab)包含：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:25的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:26的VL；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:44的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:45的VL；或(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:62的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:63的VL。
本發明亦提供一種醫藥組成物，其包含5T4-ADC，其中該5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示；及醫藥學上可接受之賦形劑，其中該抗體(Ab)如本文所述之任何實施例中所述。在一些實施例中，此類醫藥組成物中之5T4-ADC的藥物/抗體比率(DAR)可為約1至約10，例如約1至約4、約1至約2、約1.5至約2、或約1.75至約1.9的DAR。
本發明亦提供一種用於治療個體之癌症或腫瘤的方法，其包含向該個體投與5T4-ADC，其中該5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)表示；或醫藥組成物，該醫藥組成物包含式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VI-2)、(VI-3)、(V-5)、(VI-5)、(VI-6)或(VI-7)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑，其中抗體(Ab)如本文的任何實施例中所述。
相關申請案之交互參考
本申請案主張2022年5月13日申請的美國臨時申請案第63/341,957號之權益，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。 序列表
本申請案含有已以XML檔案格式與本申請案一起提交之電腦可讀序列表，該序列表之全部內容以全文引用之方式併入本文中。與本申請案一起提交之序列表XML檔案的名稱為「14529-099-185_SEQ_LISTING.xml」，創建於2023年5月9日，且大小為125,376個位元組。
本發明提供結合至5T4的抗體-藥物結合物(ADC)及與其結合(直接地或間接地結合)的藥物。此類5T4-ADC適用於治療、預防或減輕5T4介導之疾病、病症或病狀(包括該疾病、病症或病狀之一或多種症狀)的組成物及方法中。5T4介導之疾病、病症及病狀包括多種癌症，包括(但不限於)其中腫瘤細胞表現或過度表現5T4的任何癌症。另外，5T4-ADC適用於殺滅及/或移除腫瘤細胞。本文所述之5T4-ADC適用於治療癌症的組成物及方法中。
術語「烷基」係指單價飽和脂族烴基，其具有一至十二個碳原子，諸如1至10、1至6、1至5、1至4或1至3個碳原子。此術語包括例如直鏈及分支鏈烴基，諸如甲基(-CH 3)、乙基(-CH 2CH 3)、正丙基(-CH 2CH 2CH 3)、異丙基(-CH(CH 3) 2)、正丁基(-CH 2CH 2CH 2CH 3)、異丁基(-CH 2CH(CH 3) 2)、二級丁基(-CH(CH 3)(CH 3CH 2))、三級丁基(-C(CH 3) 3)、正戊基(-CH 2CH 2CH 2CH 2CH 3)及新戊基(-CH 2C(CH 3) 3)。
術語「經取代之烷基」係指如本文所定義的烷基，其中烷基鏈中的一或多個碳原子(除C 1碳原子之外)已視情況置換成雜原子，諸如-O-、-N-、-S-、-S(O) n- (其中n為0至2)、-NR- (其中R為氫或烷基)，且具有一至五個選自由以下組成之群的取代基：烷氧基、經取代之烷氧基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧基胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、側氧基、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫醇、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環基、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO 2-烷基、-SO 2-芳基、-SO 2-雜芳基及-NR aR b，其中R a與R b 可相同或不同且選自氫、視情況經取代之烷基、環烷基、烯基、環烯基、炔基、芳基、雜芳基及雜環。
術語「烯基」係指直鏈或分支鏈二價脂族烴基，其較佳具有一至六個且更佳一至三個碳原子，且視情況經一或多個選自以下的基團取代：-O-、-NR 10-、-NR 10C(O)-、-C(O)NR 10-及其類似基團。此術語包括例如亞甲基(-CH 2-)、伸乙基(-CH 2CH 2-)、伸正丙基(-CH 2CH 2CH 2-)、伸異丙基(-CH 2CH(CH 3)-)、(-C(CH 3) 2CH 2CH 2-)、(-C(CH 3) 2CH 2C(O)-)、(-C(CH 3) 2CH 2C(O)NH-)、(-CH(CH 3)CH 2-)及其類似基團。
術語「經取代之烯基」係指其中一至三個氫經下文「取代」定義中針對碳所述的取代基置換的伸烷基。
術語「烷芳基」或「芳烷基」係指基團-伸烷基-芳基及-經取代之伸烷基-芳基，其中伸烷基、經取代之伸烷基及芳基如本文所定義。
術語「烷氧基」係指基團-O-烷基，其中烷基如本文所定義。烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、三級丁氧基、二級丁氧基、正戊氧基及其類似基團。術語「烷氧基」亦指烯基-O-、環烷基-O-、環烯基-O-及炔基-O-，其中烯基、環烷基、環烯基及炔基如本文所定義。
術語「經取代之烷氧基」係指如下基團：經取代之烷基-O-、經取代之烯基-O-、經取代之環烷基-O-、經取代之環烯基-O-及經取代之炔基-O-，其中經取代之烷基、經取代之烯基、經取代之環烷基、經取代之環烯基及經取代之炔基如本文所定義。
術語「烷氧基胺基」係指基團-NH-烷氧基，其中烷氧基如本文所定義。
術語「烷基烷氧基」係指基團-伸烷基-O-烷基、伸烷基-O-經取代之烷基、經取代之伸烷基-O-烷基，及經取代之伸烷基-O-經取代之烷基，其中烷基、經取代之烷基、伸烷基及經取代之伸烷基如本文所定義。
術語「烯基」係指直鏈或分支鏈烴基，其具有二至六個碳原子，諸如二至四個碳原子，且具有至少一個、較佳一至兩個雙鍵不飽和位。此術語包括例如雙乙烯基、烯丙基及丁-3-烯-1-基。此術語包括順式及反式異構體或此等異構體之混合物。
術語「經取代之烯基」係指具有一至五個取代基或一至三個取代基的如本文所定義之烯基，該等取代基選自烷氧基、經取代之烷氧基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、經取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧基胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、側氧基、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫醇、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環基、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-SO-烷基、-SO-經取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO 2-烷基、-SO 2-經取代之烷基、-SO 2-芳基，及-SO 2-雜芳基。
術語「炔基」係指直鏈或分支鏈單價烴基，其具有二至六個碳原子、較佳二至三個碳原子，且具有至少一個、較佳一至二個參鍵不飽和位。此類炔基之實例包括乙炔基(-C≡CH)及炔丙基(-CH 2C≡CH)。
術語「經取代之炔基」係指具有一至五個取代基或一至三個取代基的如本文所定義之炔基，該等取代基選自烷氧基、經取代之烷氧基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、經取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧基胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、側氧基、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫醇、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環基、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-SO-烷基、-SO-經取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO 2-烷基、-SO 2-經取代之烷基、-SO 2-芳基，及-SO 2-雜芳基。
術語「醯基胺基」係指選自以下之基團：-NR 20C(O)烷基、-NR 20C(O)經取代之烷基、N R 20C(O)環烷基、-NR 20C(O)經取代之環烷基、-NR 20C(O)-環烯基、-NR 20C(O)-經取代之環烯基、-NR 20C(O)烯基、-NR 20C(O)-經取代之烯基、-NR 20C(O)炔基、-NR 20C(O)-經取代之炔基、-NR 20C(O)芳基、-NR 20C(O)-經取代之芳基、-NR 20C(O)-雜芳基、-NR 20C(O)經取代之雜芳基、-NR 20C(O)-雜環，及-NR 20C(O)-經取代之雜環，其中R 20為氫或烷基且其中烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環及經取代之雜環如本文所定義。
術語「醯基」係指選自以下之基團：H-C(O)-、烷基-C(O)-、經取代之烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、經取代之烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、經取代之炔基-C(O)-、環烷基-C(O)-、經取代之環烷基-C(O)-、環烯基-C(O)-、經取代之環烯基-C(O)-、芳基-C(O)-、經取代之芳基-C(O)-、雜芳基-C(O)-、經取代之雜芳基-C(O)-、雜環基-C(O)-及經取代之雜環基-C(O)-，其中烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環及經取代之雜環如本文所定義。舉例而言，醯基包括「乙醯基」CH 3C(O)-。
術語「胺基羰基」或術語「胺基醯基」係指基團-C(O)NR 21R 22，其中R 21及R 22獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環及經取代之雜環且其中R 21及R 22視情況與其所結合之氮接合在一起形成雜環基或經取代之雜環基，且其中烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環基及經取代之雜環基如本文所定義。
術語「醯氧基」係指選自以下之基團：烷基-C(O)O-、經取代之烷基-C(O)O-、環烷基-C(O)O-、經取代之環烷基-C(O)O-、芳基-C(O)O-、雜芳基-C(O)O-及雜環基-C(O)O-，其中烷基、經取代之烷基、環烷基、經取代之環烷基、芳基、雜芳基及雜環基如本文所定義。
術語「胺基磺醯基」係指基團-SO 2NR 21R 22，其中R 21及R 22獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環及經取代之雜環且其中R 21及R 22視情況與其所結合之氮接合在一起形成雜環基或經取代之雜環基，且烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環基及經取代之雜環基如本文所定義。
術語「磺醯基胺基」係指基團-NR 21SO 2R 22，其中R 21及R 22獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環及經取代之雜環且其中R 21及R 22視情況與其所結合之原子接合在一起形成雜環基或經取代之雜環基，且其中烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環基及經取代之雜環基如本文所定義。
術語「芳基」係指具有六至十八個碳原子的單價芳族碳環基，其呈單個環形式(諸如以苯基存在)或具有多個稠環的環系統形式(此類芳族環系統之實例包括萘基、蒽基及二氫茚基)，該等稠環可為或可不為芳族，限制條件為連接點係經由芳族環的原子。此術語包括例如苯基及萘基。除非被芳基取代基之定義另外限制，否則此類芳基可視情況經一至五個取代基或一至三個取代基取代，該等取代基選自醯氧基、羥基、硫醇、醯基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、經取代之烷基、經取代之烷氧基、經取代之烯基、經取代之炔基、經取代之環烷基、經取代之環烯基、胺基、經取代之胺基、胺基醯基、醯基胺基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基烷基、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環基、雜環氧基、胺基醯氧基、氧基醯基胺基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、-SO-烷基、-SO-經取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO 2-烷基、-SO 2-經取代之烷基、-SO 2-芳基、-SO 2-雜芳基及三鹵甲基。
術語「芳氧基」係指基團-O-芳基，其中芳基如本文所定義，包括例如苯氧基、萘氧基及其類似基團，包括亦如本文所定義的視情況經取代之芳基。
術語「胺基」係指基團-NH 2。
術語「經取代之胺基」係指基團-NRR，其中各R獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、環烷基、經取代之環烷基、烯基、經取代之烯基、環烯基、經取代之環烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、雜芳基及雜環基，限制條件為至少一個R不為氫。
術語「疊氮基」係指基團-N 3。
術語「羧基(carboxyl)」、「羧基(carboxy)」或「羧酸鹽」係指-CO 2H或其鹽。
術語「羧基酯(carboxyl ester)」或「羧基酯(carboxy ester)」或術語「羧烷基(carboxyalkyl)」或「羧基烷基(carboxylalkyl)」係指選自以下之基團：-C(O)O-烷基、-C(O)O-經取代之烷基、-C(O)O-烯基、-C(O)O-經取代之烯基、-C(O)O-炔基、-C(O)O-經取代之炔基、-C(O)O-芳基、-C(O)O-經取代之芳基、-C(O)O-環烷基、-C(O)O-經取代之環烷基、-C(O)O-環烯基、-C(O)O-經取代之環烯基、-C(O)O-雜芳基、-C(O)O-經取代之雜芳基、-C(O)O-雜環及-C(O)O-經取代之雜環，其中烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環及經取代之雜環如本文所定義。
術語「氰基」或「腈」係指基團-CN。
術語「環烷基」係指三至十個碳原子的環烷基，其具有單個或多個環，包括稠合、橋接及螺接環系統。適合環烷基之實例包括例如金剛烷基、環丙基、環丁基、環戊基、環辛基及其類似基團。
術語「經取代之環烷基」係指具有一至五個取代基或一至三個取代基的環烷基，其中該等取代基獨立地選自烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、經取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧基胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、側氧基、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫醇、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環基、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-SO-烷基、-SO-經取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO 2-烷基、-SO 2-經取代之烷基、-SO 2-芳基，及-SO 2-雜芳基。
術語「環烯基」係指三至十個碳原子的非芳族環烷基，其具有單個或多個環且具有至少一個雙鍵，較佳一或兩個雙鍵。
術語「經取代之環烯基」係指具有一至五個取代基或一至三個取代基的環烯基，其中該等取代基獨立地選自烷氧基、經取代之烷氧基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、經取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧基胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫醇、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環基、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-SO-烷基、-SO-經取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO 2-烷基、-SO 2-經取代之烷基、-SO 2-芳基，及-SO 2-雜芳基。
術語「鹵基」及「鹵素」係指氟、氯、溴或碘。
術語「羥基(hydroxy)」及「羥基(hydroxyl)」係指基團-OH。
術語「雜芳基」係指一種芳族基團，其具有一至十五個碳原子，諸如一至十個碳原子，且在環內具有一至十個選自由氧、氮及硫組成之群的雜原子。此類雜芳基可在環系統中具有單個環(諸如吡啶基、咪唑基或呋喃基)或多個稠環(例如以下基團：諸如吲哚𠯤基、喹啉基、苯并呋喃、苯并咪唑基或苯并噻吩基)，其中環系統內的至少一個環為芳族。為了滿足原子價要求，此類雜芳基環中的任何雜原子可或可不鍵結至H或取代基，例如烷基或如本文所述的其他取代基。在一些實施例中，雜芳基中的氮及/或硫環原子視情況經氧化以提供N-氧化物(N→O)、亞磺醯基或磺醯基部分。此術語包括例如吡啶基、吡咯基、吲哚基、噻吩基及呋喃基。除非被雜芳基取代基之定義另外限制，否則此類雜芳基可視情況經一至五個取代基或一至三個取代基取代，其中該等取代基獨立地選自醯氧基、羥基、硫醇、醯基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、經取代之烷基、經取代之烷氧基、經取代之烯基、經取代之炔基、經取代之環烷基、經取代之環烯基、胺基、經取代之胺基、胺基醯基、醯基胺基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基烷基、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環基、雜環氧基、胺基醯氧基、氧基醯基胺基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、-SO-烷基、-SO-經取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO 2-烷基、-SO 2-經取代之烷基、-SO 2-芳基及-SO 2-雜芳基及三鹵甲基。
術語「雜芳烷基」係指包含結合至雜芳基之伸烷基的基團，其中伸烷基及雜芳基如本文所定義。此術語包括例如吡啶基甲基、吡啶基乙基、吲哚基甲基及其類似基團。
術語「雜芳基氧基」係指-O-雜芳基。
術語「雜環(heterocycle)」、「雜環(heterocyclic)」、「雜環烷基」及「雜環基」本文中可互換使用以指具有單個環或多個稠環(包括稠合、橋接及螺接的環系統)的飽和或不飽和基團，該基團具有三至二十個環原子，包括一至十個雜原子。此等環原子係選自氮、硫及氧，其中在稠環系統中，一或多個環可為環烷基、芳基或雜芳基，限制條件為連接點係經由非芳族環。在一些實施例中，雜環基中的氮原子及/或硫原子視情況經氧化以提供N-氧化物、-S(O)-或-SO 2-部分。為了滿足原子價要求，此類雜環中的任何雜原子可或可不鍵結至一或多個H或一或多個取代基，例如烷基或如本文所述的其他取代基。
雜環及雜芳基之實例包括但不限於氮雜環丁烷、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡𠯤、嘧啶、嗒𠯤、吲哚𠯤、異吲哚、吲哚、二氫吲哚、吲唑、嘌呤、喹𠯤、異喹啉、喹啉、呔𠯤、萘基吡啶、喹喏啉、喹唑啉、㖕啉、喋啶、咔唑、咔啉、啡啶、吖啶、啡啉、異噻唑、吩𠯤、異㗁唑、啡㗁 𠯤、啡噻𠯤、咪唑啶、咪唑啉、哌啶、哌𠯤、吲哚啉、鄰苯二甲醯亞胺、1,2,3,4-四氫異喹啉、4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑啶、噻吩、苯并[b]噻吩、𠰌啉基、硫𠰌啉基(亦稱為噻𠰌啉基)、1,1-二氧雜硫𠰌啉基、哌啶基、吡咯啶、四氫呋喃基及其類似基團。
除非被雜環取代基之定義另外限制，否則此類雜環基可視情況經一至五個取代基或一至三個取代基取代，該等取代基選自烷氧基、經取代之烷氧基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、醯基、醯基胺基、醯氧基、胺基、經取代之胺基、胺基醯基、胺基醯氧基、氧基胺基醯基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、側氧基、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、硫代雜環氧基、硫醇、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳基氧基、雜環基、雜環氧基、羥胺基、烷氧基胺基、硝基、-SO-烷基、-SO-經取代之烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO 2-烷基、-SO 2-經取代之烷基、-SO 2-芳基、-SO 2-雜芳基及稠合雜環。
術語「羥胺基」係指基團-NHOH。
術語「硝基」係指基團-NO 2。
術語「側氧基」係指雙鍵鍵結的氧原子(=O)。
術語「磺醯基」係指基團-SO 2-烷基、-SO 2-經取代之烷基、-SO 2-烯基、-SO 2-經取代之烯基、-SO 2-環烷基、-SO 2-經取代之環烷基、-SO 2-環烯基、-SO 2-經取代之環烯基、-SO 2-芳基、-SO 2-經取代之芳基、-SO 2-雜芳基、-SO 2-經取代之雜芳基、-SO 2-雜環及-SO 2-經取代之雜環，其中烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、環烯基、經取代之環烯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環及經取代之雜環如本文所定義。磺醯基包括例如甲基-SO 2-、苯基-SO 2-及4-甲基苯基-SO 2-。
術語「硫醇」係指基團-SH。
術語「硫酮基(thioxo)」或術語「硫酮基(thioketo)」係指雙鍵鍵結的硫原子(=S)。
術語「烷基硫基」或術語「硫代烷氧基」係指基團-S-烷基，其中烷基如本文所定義。在一些實施例中，硫可氧化成-S(O)-。亞碸可以一或多種立體異構體形式存在。
術語「經取代之硫代烷氧基」係指基團-S-經取代之烷基。
術語「硫代芳氧基」係指基團芳基-S-，其中該芳基如本文所定義，包括本文亦定義的視情況經取代之芳基。
術語「硫代雜芳氧基」係指基團雜芳基-S-，其中雜芳基如本文所定義，包括本文亦定義的視情況經取代之芳基。
術語「硫代雜環氧基」係指基團雜環基-S-，其中該雜環基如本文所定義，包括本文亦定義的視情況經取代之雜環基。
除本文中之揭示內容以外，術語「取代」當用於修飾指定基團或自由基時，亦可意謂指定基團或自由基中的一或多個氫原子彼此獨立地各自經如下文中所定義之相同或不同取代基置換。
除本文中關於個別術語所揭示的基團之外，用於取代指定基團或自由基中之飽和碳原子上之一或多個氫(單個碳上的任何兩個氫可經=O、=NR 70、=N-OR 70、=N 2或=S置換)的取代基除非另外說明，否則亦為-R 60、鹵基、=O、-OR 70、-SR 70、-NR 80R 80、三鹵甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO 2、=N 2、-N 3、-SO 2R 70、-SO 2O -M +、-SO 2OR 70、-OSO 2R 70、-OSO 2O -M +、-OSO 2OR 70、-P(O)(O -) 2(M +) 2、-P(O)(OR 70)O -M +、-P(O)(OR 70) 2、-C(O)R 70、-C(S)R 70、-C(NR 70)R 70、-C(O)O -M +、-C(O)OR 70、-C(S)OR 70、-C(O)NR 80R 80、-C(NR 70)NR 80R 80、-OC(O)R 70、-OC(S)R 70、-OC(O)O -M +、-OC(O)OR 70、-OC(S)OR 70、-NR 70C(O)R 70、-NR 70C(S)R 70、-NR 70CO 2 -M +、-NR 70CO 2R 70、-NR 70C(S)OR 70、-NR 70C(O)NR 80R 80、-NR 70C(NR 70)R 70及-NR 70C(NR 70)NR 80R 80，其中R 60選自由以下組成之群：視情況經取代之烷基、環烷基、雜烷基、雜環烷基烷基、環烷基烷基、芳基、芳烷基、雜芳基及雜芳基烷基，各R 70獨立地為氫或R 60；各R 80獨立地為R 70，或替代地兩個R 80'與其所鍵結的氮原子一起形成5員、6員或7員雜環烷基，該雜環烷基可視情況包括一至四個選自由O、N及S組成之群的相同或不同額外雜原子，其中N可存在-H或C 1-C 6烷基取代；且各M +為具有單個淨正電荷的相對離子。各M +可獨立地為例如鹼金屬離子，諸如K +、Na +、Li +；銨離子，諸如 +N(R 60) 4；或鹼土金屬離子，諸如[Ca 2+] 0.5、[Mg 2+] 0.5或[Ba 2+] 0.5(「下標0.5意謂此類二價鹼土金屬離子中的一個相對離子可為本發明化合物的離子化形式，且另一者為典型相對離子(諸如氯離子)，或本發明所揭示之兩個離子化化合物可充當此類二價鹼土金屬離子之相對離子，或本發明的雙重離子化化合物可充當此類二價鹼土金屬離子之相對離子)。作為具體實例，-NR 80R 80意欲包括-NH 2、-NH-烷基、 N-吡咯啶基、 N-哌𠯤基、4 N-甲基-哌𠯤-1-基及 N-𠰌啉基。
除本文中的揭示內容之外，「經取代」之烯基、炔基、芳基及雜芳基中之不飽和碳原子上之氫的取代基除非另外說明，否則亦為-R 60、鹵基、-O -M +、-OR 70、-SR 70、-S -M +、-NR 80R 80、三鹵甲基、-CF 3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO 2、-N 3、-SO 2R 70、-SO 3 -M +、-SO 3R 70、-OSO 2R 70、-OSO 3 -M +、-OSO 3R 70、-PO 3 -2(M +) 2、-P(O)(OR 70)O -M +、-P(O)(OR 70) 2、-C(O)R 70、-C(S)R 70、-C(NR 70)R 70、-CO 2 -M +、-CO 2R 70、-C(S)OR 70、-C(O)NR 80R 80、-C(NR 70)NR 80R 80、-OC(O)R 70、-OC(S)R 70、-OCO 2 -M +、-OCO 2R 70、-OC(S)OR 70、-NR 70C(O)R 70、-NR 70C(S)R 70、-NR 70CO 2 -M +、-NR 70CO 2R 70、-NR 70C(S)OR 70、-NR 70C(O)NR 80R 80、-NR 70C(NR 70)R 70及-NR 70C(NR 70)NR 80R 80，其中R 60、R 70、R 80及M +如本文所定義，限制條件為在經取代之烯基或炔基的情況下，取代基不為-O -M +、-OR 70、-SR 70或-S-M +。
除本文中關於個別術語所揭示的基團之外，「經取代」之雜烷基及環雜烷基中之氮原子上之氫的取代基除非另外說明，否則亦為-R 60、-O -M +、-OR 70、-SR 70、-S -M +、-NR 80R 80、三鹵甲基、-CF 3、-CN、-NO、-NO 2、-S(O) 2R 70、-S(O) 2O -M +、-S(O) 2OR 70、-OS(O) 2R 70、-OS(O) 2O -M +、-OS(O) 2OR 70、-P(O)(O -) 2(M +) 2、-P(O)(OR 70)O -M +、-P(O)(OR 70)(OR 70)、-C(O)R 70、-C(S)R 70、-C(NR 70)R 70、-C(O)OR 70、-C(S)OR 70、-C(O)NR 80R 80、-C(NR 70)NR 80R 80、-OC(O)R 70、-OC(S)R 70、-OC(O)OR 70、-OC(S)OR 70、-NR 70C(O)R 70、-NR 70C(S)R 70、-NR 70C(O)OR 70、-NR 70C(S)OR 70、-NR 70C(O)NR 80R 80、-NR 70C(NR 70)R 70及-NR 70C(NR 70)NR 80R 80，其中R 60、R 70、R 80及M +如本文所定義。
經取代之基團可存在一個、兩個、三個或四個取代基，諸如一個、兩個或三個取代基，或一或兩個取代基，或一個取代基。
除非另外指明，否則本文中未明確定義之取代基的命名係藉由命名官能基之末端部分，隨後向連接點命名相鄰官能基來達成。舉例而言，取代基「芳基烷氧基羰基」係指基團(芳基)-(烷基)-O-C(O)-。
對於本文揭示之含有一或多個取代基的任一基團，當然應瞭解，此類基團不含在空間上不切實際及/或在合成上不可行之任何取代或取代模式。另外，本發明化合物包括由此等化合物之取代產生的所有立體化學異構體。
術語「個體」係指人類及非人類個體，尤其哺乳動物個體。
如本文所用，術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」意謂治療(treating)或治療(treatment)個體(諸如哺乳動物(特別是人類))的疾病或醫學病狀，包括：(a)預防個體出現疾病或醫學病狀，諸如預防性治療個體；(b)改善個體的疾病或醫學病狀，諸如消除或促使個體的疾病或醫學病狀消退；(c)抑制個體之疾病或醫學病狀，例如藉由減緩或阻滯個體之疾病或醫學病狀發展；或(d)減輕個體之疾病或醫學病狀的症狀。在一些實施例中，術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」排除預防性治療。
如本文所用，術語「原生胺基酸序列」係指為了包括經修飾之胺基酸殘基而進行修飾之前的多肽胺基酸序列。
術語「胺基酸類似物」、「非天然胺基酸」及其類似物可互換使用，且包括在結構及/或總體形狀上與天然存在之蛋白質中通常發現之一或多個胺基酸(例如Ala或A、Cys或C、Asp或D、Glu或E、Phe或F、Gly或G、His或H、Ile或I、Lys或K、Leu或L、Met或M、Asn或N、Pro或P、Gln或Q、Arg或R、Ser或S、Thr或T、Val或V、Trp或W、Tyr或Y)相似的胺基酸樣化合物。胺基酸類似物亦包括具有經修飾之側鏈或主鏈的天然胺基酸。胺基酸類似物亦包括與胺基酸類似物的天然存在之D形式以及L-形式具有相同立體化學構型的胺基酸類似物。在一些實施例中，胺基酸類似物共用主鏈結構及/或一或多個天然胺基酸的側鏈結構，差異在於分子中的一或多個經修飾基團。此類修飾可包括但不限於一原子(諸如N)對有關原子(諸如S)的取代、基團(諸如甲基或羥基及其類似基團)或原子(諸如Cl或Br及其類似原子)的加成、基團的缺失、共價鍵的取代(單鍵對雙鍵的取代，及其類似者)，或其組合。舉例而言，胺基酸類似物可包括α-羥基酸及α-胺基酸，及其類似物。
術語「胺基酸側鏈」用於指連接至胺基酸殘基之α碳的取代基，包括天然胺基酸、非天然胺基酸及胺基酸類似物。胺基酸側鏈亦可包括如在本文所述之經修飾胺基酸及/或結合物之上下文中所述的胺基酸側鏈。
術語「碳水化合物」用於指單醣、雙醣、寡醣及多醣的單體單元及/或聚合物。術語糖用於指較小碳水化合物，諸如單醣、雙醣。術語「碳水化合物衍生物」包括其中所關注碳水化合物中之一或多個官能基經取代(經任何方便的取代基置換)、經修飾(使用任何方便的化學反應轉化成另一基團)或不存在(例如消去或經H置換)的化合物。多種碳水化合物及碳水化合物衍生物可獲得且可經調適以用於本發明化合物及結合物。
術語「糖苷」或「糖基」係指經由醣苷鍵結合至部分的糖分子或基團。舉例而言，糖苷所結合的部分可為如本文所述的可裂解連接子。醣苷鍵可使糖苷經由各種類型的鍵連接至其他部分，該等鍵諸如(但不限於) O-醣苷鍵(O-糖苷)、N-醣苷鍵(糖基胺)、S-醣苷鍵(硫苷)或C-醣苷鍵(C-糖苷或C-糖基)。在一些情況下，糖苷可與連接至其的部分裂解，諸如藉由化學介導之水解或酶介導之水解。
除非另外指明，否則術語「5T4」係指來自任何脊椎動物來源的多肽(「多肽」與「蛋白質」在本文中可互換地使用)或任何原生5T4，包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類、食蟹獼猴(獼猴))、犬及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。5T4，亦已知為「5T4癌胚滋養層醣蛋白」或「Wnt活化抑制因子1」或「5T4癌滋養層醣蛋白」或「5T4癌胚抗原」或「WAIF1」或「M6P1」或「5T4-AG」或「5T4AG」或「TPBG」，為由TPBG基因編碼的醣蛋白。術語5T4涵蓋「全長」5T4，以及在細胞中加工而產生的任何形式之5T4或其任何片段。在一些實施例中，5T4包含信號序列。在一些實施例中，5T4不包括信號序列。在一些實施例中，術語5T4係指全長5T4之包含5T4胞外域的片段。術語5T4亦涵蓋5T4的天然存在之變異體，諸如SNP變異體、剪接變異體及對偶基因變異體。下文提供人類5T4之全長胺基酸序列(例示性信號序列=斜體文字；例示性胞外域=加下劃線的文字)： (SEQ ID NO:64) 下文提供食蟹獼猴(獼猴) 5T4之全長胺基酸序列(例示性信號序列=斜體文字；例示性胞外域=加下劃線的文字)： (SEQ ID NO:65) 下文提供小鼠5T4之全長胺基酸序列(例示性信號序列=斜體文字；例示性胞外域=加下劃線的文字)： (SEQ ID NO:66)
術語「抗體」、「免疫球蛋白」或「Ig」在本文中可互換使用且在最廣泛意義上使用且特別涵蓋例如多株抗體、單株抗體(包括促效劑、拮抗劑、中和抗體、全長單株抗體)、具有多抗原決定基或單抗原決定基特異性的抗體組成物、重組產生的抗體、單域抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)、合成抗體、嵌合抗體、人源化抗體，或具有全長重鏈及/或輕鏈之抗體的人類形式。抗體亦包括保留5T4結合特徵的單一抗體域以及抗體片段(及/或包含抗體片段的多肽)。抗體片段之非限制性實例包括抗體的抗原結合區及/或效應子區域，例如Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv、scFv、(scFv) 2、單鏈抗體分子、雙可變域抗體、單可變域抗體、線性抗體、V區、由抗體片段形成的多特異性抗體、F(ab) 2、Fd、Fc、雙功能抗體、二-雙功能抗體、二硫鍵連接的Fv (dsFv)、單域抗體(例如奈米抗體)或其他片段(例如由非共價偶合之重鏈及輕鏈之可變區組成的片段)。一般而言，可變(V)區可為免疫球蛋白重鏈(VH)及/或輕鏈(VL)可變區的任何適合佈置。舉例而言，抗體亦包括包含兩個重鏈及兩個輕鏈分子的四聚體抗體、抗體輕鏈單體及抗體重鏈單體。因此，舉例而言，V區可為二聚體且含有結合5T4的VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚體。在任何實施例中，VH區與VL區可直接或經由連接子共價偶合以形成單鏈Fv (scFv)。為便於參考，本文中提及的scFv蛋白納入「抗體片段」類別中。抗體片段之另一種形式為包含抗體之一或多個互補決定區(CDR)的肽。CDR (亦稱為「最小識別單元」或「高變區」)可藉由構築編碼一或多個所關注CDR之聚核苷酸來獲得。此類聚核苷酸如下製備：例如使用產抗體細胞之mRNA作為模板、利用聚合酶鏈反應合成可變區(參見例如Larrick等人, Methods: A Companion to Methods in Enzymology, 2:106 (1991); Courtenay-Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies," in Monoclonal Antibodies Production, Engineering and Clinical Application, Ritter等人(編), 第166頁, Cambridge University Press (1995); 及Ward等人, "Genetic Manipulation and Expression of Antibodies," in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch等人(編), 第137頁, Wiley-Liss, Inc. (1995))。抗體片段可併入例如單域抗體、最大抗體、微型抗體、胞內抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、新抗原受體之可變區(v-NAR)及雙單鏈Fv區(參見例如Hollinger及Hudson, Nature Biotechnology, 23(9):1126-1136, 2005)。在一些實施例中，包含VH及/或VL的抗體含有輕鏈及/或重鏈恆定區，諸如一或多個恆定區，包括一或多個IgG1、IgG2、IgG3及/或IgG4恆定區。在一些實施例中，抗體可包括上述任一者的抗原決定基結合片段。本文所述之抗體可屬於免疫球蛋白分子的任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或任何亞類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。
如本文所用，術語「單特異性」表示抗體具有一或多個結合位，其中各結合位結合至相同抗原之相同抗原決定基。
術語「雙特異性」意謂抗體可特異性結合至至少兩種不同的抗原決定子，例如各由一對抗體重鏈可變區(VH)及抗體輕鏈可變區(VL)形成的兩個結合位，該抗體重鏈可變區及該抗體輕鏈可變區結合至不同抗原或結合至相同抗原上之不同抗原決定基。此類雙特異性抗體可具有1+1格式(包含一個針對第一抗原或抗原決定基的結合位及一個針對第二抗原或抗原決定基的結合位)。其他雙特異性抗體格式可為2+1或1+2格式(包含兩個針對第一抗原或抗原決定基的結合位及一個針對第二抗原或抗原決定基的結合位)或2+2形式(包含兩個針對第一抗原或抗原決定基的結合位及兩個針對第二抗原或抗原決定基的結合位)。當雙特異性抗體包含兩個抗原結合位時，各結合位可結合至不同抗原決定子。此類雙特異性抗體可結合至相同抗原上的兩個不同抗原決定基(例如5T4上的抗原決定基)。
在兩種或更多種核酸或多肽之上下文中，術語「一致」或「一致性」百分比係指當根據最大一致性比較及比對(必要時，引入空位)時，兩種或更多種序列或子序列相同或具有指定百分比之相同核苷酸或胺基酸殘基，不考慮任何保守胺基酸取代作為序列一致性的一部分。一致性百分比可使用序列比較軟體或算法或藉由目視檢查來量測。此項技術中熟知可用於獲得胺基酸或核苷酸序列比對的各種算法及軟體。此等算法及軟體包括(但不限於)鹼基局部比對搜尋工具(BLAST)、ALIGN、MegAlign、BestFit、GCG Wisconsin套裝及其變型。在一些實施例中，兩種核酸或多肽基本上一致，意謂其當根據最大一致性比較及比對時，具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%且在一些實施例中，具有至少95%、96%、97%、98%或99%核苷酸或胺基酸殘基一致性，如使用序列比較算法或藉由目視檢查所量測。在一些實施例中，長度為至少約10個殘基、至少約20個殘基、至少約40至60個殘基、至少約60至80個殘基或其間任何整數值的胺基酸序列區域存在一致性。在一些實施例中，一致性存在於比60至80個殘基更長(諸如至少約80至100個殘基)的區域上，且在一些實施例中，序列在所比較之序列(諸如目標蛋白或抗體之編碼區)的全長上基本上一致。在一些實施例中，長度為至少約10個鹼基、至少約20個鹼基、至少約40至60個鹼基、至少約60至80個鹼基或其間任何整數值的核苷酸序列區域內存在一致性。在一些實施例中，在比60至80個鹼基更長的區域(諸如至少約80至1000或更多個鹼基)內存在一致性，且在一些實施例中，序列在所比較之序列(諸如編碼所關注蛋白質之核苷酸序列)之全長內基本上一致。
「保守胺基酸取代」為一個胺基酸殘基被具有類似化學特徵之側鏈之另一胺基酸殘基置換的取代。此項技術中已大體定義具有類似側鏈之胺基酸殘基家族，包括鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β分支側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。舉例而言，苯丙胺酸取代酪胺酸為保守取代。一般而言，本發明之多肽、可溶性蛋白質及/或抗體之序列中的保守取代不消除含有胺基酸序列之多肽、可溶性蛋白質或抗體對目標結合位的結合。鑑別出不消除結合之胺基酸保守取代的方法在此項技術中已熟知。
術語「多肽」係指任何長度之胺基酸聚合物。聚合物可為線性或分支的，其可包含經修飾之胺基酸，且其可包括非胺基酸(例如經非胺基酸取代)。術語亦涵蓋已經天然修飾或藉由介入而經修飾的胺基酸聚合物；例如二硫鍵形成、糖基化、脂質化、乙醯化、磷酸化或任何其他操縱或修飾，諸如與諸如標記組分或藥物(例如毒素)之部分連接或結合(直接地或間接地)。該定義內亦包括例如含有胺基酸之一或多種類似物(包括例如非天然胺基酸)以及此項技術中已知之其他修飾的多肽。應瞭解，由於本發明之多肽可基於抗體或免疫球蛋白超家族之其他成員，但在一些實施例中，多肽可以單鏈或單鏈二聚體形式存在。
如本文所用，「抗原」為含有抗體可特異性結合之抗原決定基的部分或分子。因此，抗原可被抗體結合。在一些實施例中，本文所述抗體所結合的抗原為5T4 (例如人類5T4)，或其片段，諸如包含5T4之一或多個區域的片段。
如本文所用，「抗原決定基」為此項技術中之術語且係指抗原中可供抗體特異性結合之局部區域。抗原決定基可為線性抗原決定基或可為構形、非線性或不連續之抗原決定基。舉例而言，在多肽抗原之情況下，抗原決定基可為多肽之鄰接胺基酸(「線性」抗原決定基)或抗原決定基可包含來自多肽之兩個或更多個非鄰接區域(「構形」、「非線性」或「不連續」抗原決定基)的胺基酸，例如人類5T4。熟習此項技術者應瞭解，一般而言，線性抗原決定基可以或可以不依賴於二級、三級或四級結構。舉例而言，在一些實施例中，抗體結合至一組胺基酸，不論其是否摺疊成天然三維蛋白質結構。在其他實施例中，抗體需要構成抗原決定基的胺基酸殘基展現特定構形(例如彎曲、扭轉、轉彎或摺疊)以便識別及結合抗原決定基。
一種抗體與參考抗體結合「抗原決定基」、「基本上相同的抗原決定基」或「相同的抗原決定基」。用於確定兩種抗體在三維空間中是否結合至相同、重疊或相鄰抗原決定基的最廣泛使用之快速方法為競爭分析，其可組態成多種不同格式，例如使用經標記之抗原或經標記之抗體。在一些分析中，使抗原固著於96孔盤上，或表現於細胞表面上，且使用放射性、螢光或酶標記來量測未標記之抗體阻斷經標記之抗體結合的能力。
「抗原決定基分組」為基於抗體所識別之抗原決定基而將抗體分組的方法。更特定而言，抗原決定基分組包含利用競爭分析與計算方法的組合來區分不同抗體之抗原決定基識別特性的方法及系統，以便基於其抗原決定基識別特性而將抗體聚類且鑑別具有不同結合特異性的抗體。本文中描述了關於抗原決定基分組及測定抗體之抗原決定基結合之方法的其他細節，如實例5所示。
如本文所用，術語「特異性結合」、「特異性識別」、「免疫特異性結合」、「選擇性地結合」、「免疫特異性識別」及「免疫特異性」在抗體之上下文中為類似術語且係指結合至抗原(例如抗原決定基)的分子，如熟習此項技術者所瞭解。
在一些實施例中，「特異性結合」意謂例如多肽或分子與抗原決定基、蛋白質或目標分子的相互作用比替代物質(包括相關及不相關蛋白質)更頻繁、更快速、持續時間更長、親和力更大或上述一些組合。舉例而言，特異性結合至抗原之分子通常可以較低親和力結合至其他肽或多肽，如藉由例如免疫分析、BIACORE™、KinExA 3000儀器(Sapidyne Instruments, Boise, ID)、OctetQK384系統(ForteBio, Menlo Park, CA)或此項技術中已知之其他分析所測定。在一些實施例中，抗體或抗原結合域當結合至一種抗原的親和力高於任何交叉反應性抗原時，其結合至或特異性結合至該抗原，如使用諸如放射免疫分析(RIA)及酶聯免疫吸附分析(ELISA)之實驗技術所測定。典型地，特異性或選擇性反應為背景信號或雜訊的至少兩倍且可超過背景的十倍。關於結合特異性的論述，參見例如Fundamental Immunology 332-36 (Paul編，第2版，1989)。在一些實施例中，一種抗體或抗原結合區對「非目標」蛋白質的結合程度為該抗體或抗原結合區對其目標抗原之結合的小於約10%，例如藉由螢光活化細胞分選(FACS)分析或RIA所測定。在一些實施例中，特異性結合至一種抗原的分子結合至該抗原的K A為至少2 log、2.5 log、3 log、4 log或大於該分子結合至另一種抗原時的K A。在一些實施例中，特異性結合至抗原之分子與其他蛋白質不發生交叉反應。在另一特定實施例中，特異性結合至抗原之分子與非5T4蛋白質不發生交叉反應。在一些實施例中，「特異性結合」意謂例如多肽或分子以約0.1 mM或更小、但更通常小於約1 µM的K D結合蛋白質或目標。在一些實施例中，「特異性結合」意謂多肽或分子以至少約0.1 µM或更小、至少約0.01 µM或更小、或至少約1 nM或更小的K D結合目標。由於不同物種之同源蛋白質之間存在序列一致性，因此特異性結合可包括多肽或分子識別超過一種物種的蛋白質或目標。同樣，由於不同蛋白質之多肽序列之某些區域內的同源性，因此特異性結合可包括多肽或分子識別超過一種蛋白質或目標。應瞭解，在一些實施例中，特異性結合第一目標之抗體或分子可或可不特異性結合第二目標。因此，「特異性結合」不一定需要(儘管其可包括)排他性結合，例如結合至單一目標。因此，在一些實施例中，多肽或分子可特異性結合超過一種目標。在一些實施例中，多個目標可被多肽或分子上的同一抗原結合位結合。舉例而言，在一些實施例中，抗體可包含兩個相同抗原結合位，其各自特異性結合兩種或更多種蛋白質上之相同抗原決定基。在替代實施例中，抗體可為雙特異性的且包含至少兩個具有不同特異性之抗原結合位。一般而言，但不非必定，提及「結合」意謂「特異性結合」。
術語「結合親和力」一般係指分子(例如抗體)之單一結合位與其結合搭配物(例如抗原，諸如5T4)之間非共價相互作用力的總和。除非另外指明，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間1:1相互作用的固有結合親和力。結合分子X對其結合搭配物Y之親和力通常可由解離常數(K D)表示。可藉由此項技術中已知之常見方法(包括本文所述之方法)量測親和力。低親和力抗體一般緩慢結合抗原且傾向於容易解離，而高親和力抗體一般較快結合抗原且傾向於較長時間保持結合狀態。此項技術中已知多種量測結合親和力的方法，其中任一者可用於本發明之目的。在一個實施例中，「K D」或「K D值」可藉由生物層干涉術(BLI)、使用例如OctetQK384系統(ForteBio, Menlo Park, CA)量測。或者，亦可在放射性標記的抗原結合分析(RIA)中量測K D，例如使用所關注之抗體的Fab版及其抗原所執行(Chen等人, (1999) J. Mol Biol 293:865-881)或使用表面電漿子共振(SPR)分析、藉由BIACORE™所執行，例如使用BIACORE™-2000或BIACORE™-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)。「締合速率(on-rate)」或「締合速率(rate of association)」或「締合速率(association rate)」或「k on」以及「解離速率(off-rate)」或「解離速率(rate of dissociation)」或「解離速率(dissociation rate)」或「k off」亦可使用本文所述的相同SPR或BLI技術、分別使用例如OctetQK384系統(ForteBio, Menlo Park, CA)或BIACORE™-2000或BIACORE™-3000 (BIACORE™, Inc., Piscataway, NJ)測定。
術語「競爭」當在5T4抗體之上下文中使用時，描述一種結合劑在另一種結合劑存在下，由於另一種結合劑的結合而至少部分地被抑制結合至抗原決定基或結合位。可藉由分析來測定競爭，其中所研究的結合劑阻止或抑制參考分子(例如參考配位體，或參考抗原結合蛋白，諸如參考抗體)特異性結合至共用抗原(例如5T4)。可以利用多種類型的競爭結合分析來確定測試抗體是否與參考分子競爭結合至5T4 (例如人類5T4)。可使用的分析實例包括固相直接或間接放射免疫分析(RIA)、固相直接或間接酶免疫分析(EIA)、夾心競爭分析(參見例如Stahli等人(1983), Methods in Enzymology 9:242-253)；直接固相生物素-抗生物素蛋白EIA (參見例如Kirkland等人(1986), J. Immunol. 137:3614-3619或Cheung等人(1990) Virology 176:546-552)；固相直接標記分析、固相直接標記夾心分析(參見例如Harlow及Lane, (1988), Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press)；使用I-125標記之固相直接標記RIA (參見例如Morel等人(1988), Molec. Immunol. 25:7-15)；及直接標記RIA (Moldenhauer等人, (1990) Scand. J. Immunol. 32:77-82)。通常，此類分析涉及使用與固體表面或細胞結合的純化抗原(例如5T4，諸如人類5T4)，該固體表面或細胞攜有未標記之測試抗原結合蛋白(例如測試5T4抗體或ADC)或經標記之參考抗原結合蛋白(例如參考5T4抗體或ADC)。可藉由在測試免疫球蛋白存在下測定與固體表面或細胞結合之標記的量來量測競爭性抑制。測試抗原結合蛋白通常過量存在。藉由競爭分析(競爭抗體)鑑別之抗體包括與參考抗體結合至相同抗原決定基之抗體，及/或結合至鄰近抗原決定基的抗體，該鄰近抗原決定基充分靠近參考抗體所結合的抗原決定基以致抗體出現空間位阻(例如相似抗原決定基或重疊抗原決定基)。通常，當競爭抗體過量存在時，其將參考抗體對共用抗原的特異性結合抑制至少20%，例如至少20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或75%。在一些實施例中，結合被抑制至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更大。
術語「恆定區」及「恆定域」在本文中可互換使用，為此項技術中熟知的抗體術語，且係指抗體部分，例如不直接參與抗體結合至抗原、但可展現各種效應功能(諸如與Fc受體相互作用)的輕鏈及/或重鏈之羧基端部分。該術語包括免疫球蛋白分子的一部分，相對於免疫球蛋白可變區，該部分具有通常更保守的胺基酸序列。
抗體「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區(例如原生序列Fc區或胺基酸序列變異型Fc區)且因抗體同型而異的彼等生物活性。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
在本文中，術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈之C端區域，包括例如原生序列Fc區、重組型Fc區及變異型Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc區的邊界可變化，但人類IgG重鏈Fc區通常定義成自位置Cys226 (EU編號系統)或Pro230 (EU編號系統)之胺基酸殘基延伸至其羧基端。可移除Fc區之C端離胺酸(EU編號系統之殘基447)，例如在抗體之製備或純化期間，或藉由以重組方式工程改造編碼抗體重鏈的核酸。下文提供例示性Fc區序列(CH2域=粗體文字；CH3域=加下劃線的文字)： CPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:67)。
「功能Fc區」具有原生序列Fc區之「效應功能」。例示性「效應功能」包括C1q結合；補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)之下調及其類似者。此類效應功能通常需要將Fc區與結合區或結合域(例如抗體可變區或域)組合且可以使用所揭示的各種分析加以評估。
「原生序列Fc區」包含與自然界中所發現之Fc區的胺基酸序列一致且未被人類操縱、修飾及/或改變(例如分離、純化、選擇，包括或與其他序列(諸如可變區序列)組合)的胺基酸序列。原生序列人類Fc區包括原生序列人類IgG1 Fc區(非A及A異型)；原生序列人類IgG2 Fc區；原生序列人類IgG3 Fc區；及原生序列人類IgG4 Fc區；以及天然存在之其變異體。
「變異型Fc區」包含由於至少一個胺基酸修飾(例如取代、添加或缺失，較佳為一或多個胺基酸取代)而與原生序列Fc區之胺基酸序列不同的胺基酸序列。在一些實施例中，相較於原生序列Fc區或相較於親本多肽之Fc區，變異型Fc區在原生序列Fc區中或親本多肽之Fc區中具有至少一個胺基酸取代，例如約一個至約十個胺基酸取代，且較佳約一個至約五個胺基酸取代。本文所述之變異型Fc區與原生序列Fc區及/或親本多肽Fc區可具有至少約80%同源性，或與其具有至少約90%同源性，例如與其具有至少約95%同源性。本文中所述之變異型Fc區在本文中可具有效應喪失功能(例如靜默Fc)。下文提供例示性變異型Fc區(「靜默Fc」)序列(CH2域=粗體文字，其中胺基酸變化加下劃線；CH3域=加下劃線的文字)： CPPCP APE AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL KAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:68)。
術語「重鏈」當結合抗體使用時，係指約50至70 kDa之多肽鏈，其中胺基端部分包括約120至130個或更多個胺基酸的可變區，且羧基端部分包括一或多個恆定區。基於恆定區的胺基酸序列，術語「重鏈」可指任何不同類型，例如alpha (α)、delta (δ)、epsilon (ε)、gamma (γ)及mu (µ)，其分別產生IgA、IgD、IgE、IgG及IgM類別的抗體，包括IgG子類，例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
如本文所用，術語「輕鏈」當結合抗體使用時，可指約25 kDa的多肽鏈，其中胺基端部分包括約100至約110或更多個胺基酸的可變區，且羧基端部分包括恆定區。輕鏈之大致長度為211至217個胺基酸。基於恆定區之胺基酸序列，存在兩種不同類型，稱為kappa (κ)或lambda (λ)。輕鏈胺基酸序列在此項技術中已熟知。
術語「抗原結合片段」、「抗原結合域」、「抗原結合區」及類似術語係指抗體的一部分，該部分包含與抗原相互作用的胺基酸殘基，該等胺基酸殘基將其針對抗原的特異性及親和力賦予結合片段或區域(例如CDR)。如本文所用，「抗原結合片段」包括「抗體片段」，其包含抗體的一部分，該部分包括一或多個CDR，諸如抗體之抗原結合區或可變區。
本文所述之抗體包括(但不限於)合成抗體、單株抗體、重組產生之抗體、多特異性抗體(例如包括雙特異性抗體)、人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體、胞內抗體、單鏈Fv (scFv)(例如包括單特異性、雙特異性及其類似者)、駱駝化抗體、Fab片段、F(ab')片段、二硫鍵連接的Fv (sdFv)、抗個體基因型(抗Id)抗體及上述任一者之抗原決定基結合片段。
在一些實施例中，本文所述之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，諸如含有一或多個結合至5T4之抗原結合位的分子。
如本文所述的5T4抗體可為任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何亞類(例如IgG2a或IgG2b)之免疫球蛋白分子。在一些實施例中，如本文所述的5T4抗體為IgG抗體(例如人類IgG)或類別(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或其亞類。
在一些實施例中，5T4抗體為包含兩個重(H)鏈/輕(L)鏈對的4鏈抗體單元，其中H鏈的胺基酸序列一致且L鏈的胺基酸序列一致。在一些實施例中，H及/或L鏈包含恆定區，例如人類恆定區。在一些實施例中，5T4抗體的L鏈恆定區係κ或λ輕鏈恆定區，例如人類κ或λ輕鏈恆定區。在一些實施例中，5T4抗體的H鏈恆定區包含γ重鏈恆定區，例如人類γ重鏈恆定區。在一些實施例中，5T4抗體包含IgG恆定區，例如人類IgG恆定區(例如IgG1、IgG2、IgG3及/或IgG4恆定區)。
如本文所用，「5T4抗體」及「結合至5T4的抗體」可互換使用且係指優先結合至5T4的抗體。抗體或其片段可優先結合至5T4，諸如人類5T4，此意謂該抗體或其片段以比其結合至不相關對照蛋白質更大的親和力結合至5T4，諸如人類5T4。舉例而言，該抗體或其片段可特異性識別且結合至5T4或其一部分。「特異性結合」意謂5T4抗體或其片段結合至5T4的親和力比結合至不相關對照蛋白質(例如雞卵白溶菌酶)之親和力大至少5、10、15、20、25、50、100、250、500、1000或10,000倍。在一些實施例中，5T4抗體或其片段可排他性地實質性結合5T4 (例如能夠將5T4與其他已知多肽區分開來，例如根據結合親和力的可量測差異)。在一些實施例中，5T4抗體可與除人類5T4序列之外的5T4序列(例如食蟹獼猴5T4序列)反應。
術語「可變區」與「可變域」可互換使用且係指抗體之輕鏈或重鏈的一部分，該部分通常位於輕鏈或重鏈之胺基端，在重鏈中具有約120至130個胺基酸的長度，在輕鏈中具有約100至110個胺基酸的長度，且用於各種抗體對其抗原之結合及特異性。重鏈可變區在本文中稱為「VH」。輕鏈可變區在本文中稱為「VL」。術語「可變」係指可變區之某些區段的序列在抗體間廣泛不同之事實。V區介導抗原結合且限定特定抗體對其抗原之特異性。然而，可變性不均勻分佈於可變區之110個胺基酸跨度內。實際上，V區由約15至30個胺基酸的較小可變性(例如相對無變化)鏈段(稱為構架區(FR))組成，該等鏈段被較大可變性(例如極其可變性)的較短區域(稱為「高變區」或替代地稱為「互補決定區」)分隔。重鏈及輕鏈之可變區各自包含基本上採用β片組態之四個構架(FR1、FR2、FR3及FR4)，該等構架藉由三個高變區連接，從而形成連接β片結構之環且在一些情況下形成β片結構之一部分。各鏈中之高變區藉由構架緊密接近結合在一起，且與來自另一鏈之高變區一起促成抗體之抗原結合位形成(參見例如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest第5版，公共衛生處(Public Health Service)，國立衛生研究院(National Institutes of Health)，Bethesda, MD, (1991))。恆定區不直接涉及抗體對抗原之結合，而是展現多種效應功能，諸如使抗體參與抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。可變區的序列在不同抗體之間廣泛不同。序列中之可變性集中於CDR中，而可變區中較小可變的部分稱為構架區(FR)。輕鏈及重鏈之CDR主要負責抗體與抗原之相互作用。在特定實施例中，可變區為人類可變區。
術語「高變區」、「HVR」、「HV」、「互補決定區」及「CDR」當在本文中使用時，係指抗體可變區中的區域，該等區域在序列上高變且/或形成結構上限定的環。一般而言，抗體包含六個高變區：三個高變區位於VH中(H1或VH CDR1、H2或VH CDR2，及H3或VH CDR3)，且三個高變區位於VL中(L1或VL CDR1、L2或VL CDR2，及L3或VL CDR3)。本文中使用且涵蓋若干個高變區定界。Kabat CDR係基於序列可變性且最常用(參見例如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest第5版，公共衛生處(Public Health Service)，美國國家衛生研究院(National Institutes of Health), Bethesda, MD. (1991))。Chothia實際上提及結構環之位置(參見例如Chothia及Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。使用Kabat編號規約進行編號時，Chothia CDR-H1環末端在H32與H34之間變化，此視環的長度而定(此原因為Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B；若既不存在35A、亦不存在35B，則環末端位於32；若僅存在35A，則環末端位於33；若35A與35B均存在，則環末端位於34)。AbM高變區表示Kabat CDR與Chothia結構環之間的平衡，且被Oxford Molecular的AbM抗體模型化軟體利用(參見例如Martin, 於Antibody Engineering, 第2卷第3章, Springer Verlag)。「接觸」高變區係基於可利用的複雜晶體結構之分析。來自此等高變區或CDR中之每一者的殘基標示於下文中。
已開發及廣泛採用一種通用編號系統：ImMunoGeneTics (IMGT ®)資訊系統(Lafranc等人, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77 (2003))。IMGT ®為專用於人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TR)及主要組織相容複合體(MHC)的整合式資訊系統。本文中，依據胺基酸序列與輕鏈或重鏈內的位置提及CDR。由於免疫球蛋白可變區結構內之CDR的「位置」在各物種之間為保守的且存在於稱為環的結構中，因此藉由使用比對結構特徵之可變區序列的編號系統容易鑑別出CDR及構架殘基。此資訊可用於將來自一個物種之免疫球蛋白之CDR殘基移植及置換至典型地來自人類抗體之受體構架中。Honegger及Plückthun, J. Mol. Biol.309: 657-670 (2001)已開發出另一種編號系統(AHon)。編號系統(包括例如Kabat編號及IMGT ®獨特編號系統)之間的一致性已為熟習此項技術者熟知(參見例如Kabat，同上；Chothia及Lesk，同上；Martin，同上；Lefranc等人，同上)且亦說明於下文。此項技術中已知或本文所述之各種系統代表定界CDR的不同方法，且當其用於界定相同抗體時，其通常被視為等效的。本文所示的例示性系統係將Kabat與Chothia組合。
   例示性 IMGT ® Kabat AbM Chothia 接觸
V HCDR1 26-35 27-38 31-35 26-35 26-32 30-35
V HCDR2 50-65 56-65 50-65 50-58 53-55 47-58
V HCDR3 95-102 105-117 95-102 95-102 96-101 93-101
V LCDR1 24-34 27-38 24-34 24-34 26-32 30-36
V LCDR2 50-56 56-65 50-56 50-56 50-52 46-55
V LCDR3 89-97 105-117 89-97 89-97 91-96 89-96
高變區可以包含如下「延長的高變區」：VL中的24-36或24-34 (L1)、46-56或50-56 (L2)及89-97或89-96 (L3)，以及VH中的26-35或26-35A (H1)、50-65或49-65 (H2)及93-102、94-102或95-102 (H3)。如本文所用，術語「高變區」、「HVR」、「HV」、「互補決定區」或「CDR」可互換使用。
術語「載體」係指用於攜載或包括例如核酸序列以將核酸序列引入宿主細胞中的物質。載體實例包括表現載體、質體、噬菌體載體、病毒載體、游離基因體及人工染色體，其可包括可操作以穩定整合至宿主細胞染色體中的選擇序列或標記物。另外，載體可包括一或多個可選標記物基因及適當的表現控制序列。可包括在內的可選標記物基因例如提供針對抗生素或毒素、補體營養缺陷型缺乏的抗性，或供應培養基中不存在之關鍵營養。表現控制序列可包括此項技術中熟知之組成型及誘導型啟動子、轉錄增強子、轉錄終止子及其類似物。當兩種或更多種核酸分子共表現(例如抗體重鏈與輕鏈或抗體VH與VL區)時，可將兩種核酸分子例如插入單一表現載體或各別表現載體中。對於單一載體表現而言，編碼核酸可操作地連接至一個共用表現控制序列，或連接至不同表現控制序列，諸如一個誘導型啟動子及一個組成型啟動子。可使用此項技術中熟知之方法證實核酸分子引入宿主細胞中。此類方法包括例如核酸分析，諸如北方墨點法或聚合酶鏈反應(PCR)擴增mRNA；或基因產物表現之免疫墨點法，或測試所引入之核酸序列或其相應基因產物之表現的其他適合分析方法。熟習此項技術者應瞭解，核酸分子的表現量足以產生所需產物(例如5T4抗體)，且進一步瞭解，可以使用此項技術中熟知之方法最佳化表現量以達成足夠的表現。
術語「5T4介導之疾病」、「5T4介導之病症」及「5T4介導之病狀」可互換使用且係指與表現5T4之細胞(諸如表現5T4之腫瘤細胞)相關或以其為特徵的任何疾病、病症或病狀。5T4介導之疾病包括癌症，包括(但不限於)表現或過度表現5T4的癌症。
在本文的任何實施例中，術語「腫瘤」係指任何贅生性細胞生長或增殖(不論惡性或良性)，及所有癌前及癌細胞及組織。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物中典型地以細胞生長調節異常為特徵的生理學病狀。
術語「ADC」係指抗體-藥物結合物，在本發明的上下文中，其係指5T4抗體與另一部分(包括如本文所述的藥物)的偶合。
如本文所用，「藥物」係指具有生物活性的化合物，諸如細胞毒性化合物(例如細胞毒性小分子、細胞毒性合成肽及其類似物)。
藥物之實例包括小分子藥物，諸如癌症化學治療劑。舉例而言，在多肽為對腫瘤細胞具有特異性之抗體(或其片段)的情況下，抗體可如本文所述經修飾以包括經修飾之胺基酸，隨後可使其與癌症化學治療劑結合。癌症化學治療劑包括減少癌細胞增殖的非肽(亦即，非蛋白質)化合物，且涵蓋細胞毒性劑及細胞生長抑制劑。化學治療劑之非限制性實例包括烷基化劑、亞硝基脲、抗代謝物、抗腫瘤抗生素、植物(長春花)生物鹼及類固醇激素。亦可使用肽化合物。
適合的癌症化學治療劑包括海兔毒素(dolastatin)及其活性類似物及衍生物；以及奧瑞他汀(auristatin)及其活性類似物及衍生物(例如單甲基奧瑞他汀D (MMAD)、單甲基奧瑞他汀E (MMAE)、單甲基奧瑞他汀F (MMAF)及其類似物)。參見例如WO 96/33212、WO 96/14856及U.S. 6,323,315。舉例而言，海兔毒素10或奧瑞他汀PE可包括於本發明之5T4-ADC中。適合的癌症化學治療劑亦包括類美登素及其活性類似物及衍生物(參見例如EP 1391213；及Liu等人(1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA93:8618-8623)；倍癌黴素(duocarmycins)及其活性類似物及衍生物(例如包括合成類似物KW-2189及CB 1-TM1)；以及苯并二氮呯及其活性類似物及衍生物(例如吡咯并苯并二氮呯(PBD))。
用於減少細胞增殖之藥劑係此項技術中已知的且被廣泛使用。此類藥劑包括烷基化劑，諸如氮芥(nitrogen mustards)、亞硝基脲、乙烯亞胺衍生物、烷基磺酸鹽及三氮烯，包括(但不限於)二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)(CYNOTAN™)、美法侖(melphalan)(L-溶肉瘤素(L-sarcolysin))、卡莫司汀(carmustine)(BCNU)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、司莫司汀(semustine)(甲基-CCNU)、鏈脲菌素(streptozocin)、氯脲菌素(chlorozotocin)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、雙氯乙基甲胺(chlormethine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、哌泊溴烷(pipobroman)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基硫代磷胺(triethylenethiophosphoramine)、白消安(busulfan)、達卡巴嗪(dacarbazine)及替莫唑胺(temozolomide)。
抗代謝物藥劑包括葉酸類似物、嘧啶類似物、嘌呤類似物及腺苷去胺酶抑制劑，包括(但不限於)阿糖胞苷(cytarabine)(CYTOSAR-U ®)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟尿嘧啶(fluorouracil)(5-FU)、氟尿苷(floxuridine)(FudR)、6-硫鳥嘌呤、6-巰基嘌呤(6-MP)、噴司他汀(pentostatin)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲胺喋呤、10-炔丙基-5,8-二去氮葉酸酯(PDDF、CB3717)、5,8-二去氮四氫葉酸(DDATHF)、甲醯四氫葉酸、氟達拉賓磷酸鹽(fludarabine phosphate)、噴司他汀(pentostatin)及吉西他濱(gemcitabine)。
適合的天然產物及其衍生物(例如長春花生物鹼、抗腫瘤抗生素、酶、淋巴因子及表鬼臼毒素(epipodophyllotoxins))包括(但不限於) Ara-C、紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL ®)、多西他賽(docetaxel)(TAXOTERE ®)、去氧助間型黴素(deoxycoformycin)、絲裂黴素-C、L-天冬醯胺酶、硫唑嘌呤(azathioprine)；布喹那(brequinar)；生物鹼，例如長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、長春瑞賓(vinorelbine)、長春地辛(vindesine)及其類似物；鬼臼毒素(podophyllotoxins)，例如依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)及其類似物；抗生素，例如蒽環黴素(anthracycline)、鹽酸道諾黴素(daunorubicin hydrochloride)(柔紅黴素(daunomycin)、紅比黴素(rubidomycin)、色魯比定(cerubidine))、艾達黴素(idarubicin)、小紅莓(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)及𠰌啉基衍生物及其類似物；酚㗁腙雙環肽(phenoxizone biscyclopeptides)，例如更生黴素(dactinomycin)；鹼性醣肽，例如博萊黴素(basic glycopeptides)；蒽醌糖苷，例如普卡黴素(plicamycin)(光神黴素(mithramycin))；蒽二酮，例如米托蒽醌(mitoxantrone)；氮雜環丙烯并吡咯并吲哚二酮，例如絲裂黴素(mitomycin)；巨環免疫抑制劑，例如環孢靈(cyclosporine)、FK-506 (他克莫司(tacrolimus)、普咯格(prograf))、雷帕黴素(rapamycin)及其類似物；及其類似物。
其他抗增殖細胞毒性劑包括諾維本(navelbene)、CPT-11、阿那曲唑(anastrazole)、來曲唑(letrazole)、卡培他濱(capecitabine)、瑞洛薩芬(reloxafine)、環磷醯胺、異環磷醯胺(ifosamide)及屈洛昔芬(droloxafine)。
具有抗增殖活性的影響微管之藥劑亦適用且包括(但不限於)別秋水仙鹼(allocolchicine)(NSC 406042)、軟海綿素B (NSC 609395)、秋水仙鹼(NSC 757)、秋水仙鹼衍生物(例如NSC 33410)、海兔毒素10 (NSC 376128)、美登素(NSC 153858)、根瘤菌素(NSC 332598)、紫杉醇(TAXOL ®)、TAXOL ®衍生物、多西他賽(TAXOTERE ®)、硫代秋水仙鹼(NSC 361792)、三苯甲基半胱胺酸、硫酸長春鹼、長春新鹼硫酸鹽、天然及合成埃博黴素(epothilones)(包括但不限於埃博黴素A、埃坡黴素B)、圓皮海綿內酯(discodermolide)；雌氮芥(estramustine)、諾考達唑(nocodazole)，及其類似物。
適合使用的激素調節劑及類固醇(包括合成類似物)包括(但不限於)腎上腺皮質類固醇，例如普賴蘇(prednisone)、地塞米松(dexamethasone)及其類似物；雌激素及孕激素，例如羥孕酮巳酯(hydroxyprogesterone caproate)、乙酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、雌二醇(estradiol)、氯米芬(clomiphene)、他莫昔芬(tamoxifen)及其類似物；腎上腺皮質抑制劑，例如胺魯米特(aminoglutethimide)；17α-炔雌醇；己烯雌酚(diethylstilbestrol)、睪固酮(testosterone)、氟羥甲基睪酮(fluoxymesterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、睪內酯(testolactone)、甲基普賴蘇穠(methylprednisolone)、甲基睪固酮、普賴蘇穠(prednisolone)、曲安西龍(triamcinolone)、氯烯雌醚(chlorotrianisene)、羥基孕酮(hydroxyprogesterone)、胺魯米特(aminoglutethimide)、雌氮芥、乙酸甲羥孕酮、亮丙立德(leuprolide)、氟他胺(flutamide)(DROGENIL ®)、托瑞米芬(toremifene)(FARESTON ®)及戈舍瑞林(goserelin)(ZOLADEX ®)及其類似物。雌激素刺激增殖及分化；因此，結合至雌激素受體的化合物用於阻斷此活性。皮質類固醇可抑制T細胞增殖。
其他適合的化學治療劑包括金屬錯合物，例如順鉑(cisplatin)(cis-DDP)、卡鉑(carboplatin)及其類似物；脲，例如羥脲；肼，例如N-甲基肼；表葉毒素(epidophyllotoxin)；拓樸異構酶抑制劑；丙卡巴肼(procarbazine)；米托蒽醌(mitoxantrone)；甲醯四氫葉酸；替加氟(tegafur)及其類似物。所關注的其他抗增殖劑包括免疫抑制劑，例如黴酚酸(mycophenolic acid)、沙立度胺(thalidomide)、去氧斯匹胍素(desoxyspergualin)、氮雜孢菌素(azasporine)、來氟米特(leflunomide)、咪唑立賓(mizoribine)、氮雜螺烷(azaspirane)(SKF 105685)；吉非替尼(gefitinib)(IRESSA ®、ZD 1839、4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-(4-𠰌啉基)丙氧基)喹唑啉)；及其類似物。
紫杉烷適合使用。「紫杉烷」包括紫杉醇，以及任何活性紫杉烷衍生物或前藥。「紫杉醇」(在本文中應理解為包括類似物、調配物及衍生物，諸如多西他賽、TAXOL ®、TAXOTERE ®(多西他賽調配物)、紫杉醇之10-去乙醯基類似物及紫杉醇之3'N-去苯甲醯基-3'N-三級丁氧基羰基類似物)可容易使用熟習此項技術者已知之技術製備(亦參見WO 94/07882、WO 94/07881、WO 94/07880、WO 94/07876、WO 93/23555、WO 93/10076；美國專利第5,294,637號；第5,283,253號；第5,279,949號；第5,274,137號；第5,202,448號；第5,200,534號；第5,229,529號；及EP 590,267)，或獲自多種商業來源，包括例如Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo. (來自短葉紅豆杉( Taxus brevifolia)的T7402；或來自雲南紅豆杉( Taxus yannanensis)的T-1912)。應理解，紫杉醇不僅指化學上可獲得的常見形式之紫杉醇，而且指類似物及衍生物(例如本文所指出的TAXOTERE ®多西他賽)及紫杉醇結合物(例如紫杉醇-PEG、紫杉醇-聚葡萄糖，或紫杉醇-木糖)。
術語「紫杉烷」亦包括多種已知衍生物，包括親水性衍生物與疏水性衍生物。紫杉烷衍生物包括(但不限於)國際專利申請案第WO 99/18113號中所述之半乳糖及甘露糖衍生物；WO 99/14209中所述之哌𠯤基及其他衍生物；WO 99/09021、WO 98/22451及美國專利第5,869,680號中所述之紫杉烷衍生物；WO 98/28288所述中之6-硫基衍生物；美國專利第5,821,263號中所述之亞磺醯胺衍生物；及美國專利第5,415,869號中所述之紫杉醇衍生物。其進一步包括紫杉醇之前藥，包括(但不限於) WO 98/58927；WO 98/13059；及美國專利第5,824,701號中所述的彼等物。
適合使用的生物反應調節劑包括(但不限於) (1)酪胺酸激酶(RTK)活性抑制劑；(2)絲胺酸/蘇胺酸激酶活性抑制劑；(3)腫瘤相關抗原拮抗劑，諸如特異性結合至腫瘤抗原的抗體；(4)細胞凋亡受體促效劑；(5)介白素-2；(6) IFN-α；(7) IFN-γ；(8)群落刺激因子；及(9)血管生成抑制劑。
「有效量」通常為足以達成以下效果的量：降低症狀之嚴重度及/或頻率、消除症狀及/或潛在病因、防止症狀及/或其潛在病因出現及/或改善或修復疾病、病症或病狀所致或與疾病、病症或病狀相關的損傷。在一些實施例中，有效量為治療有效量。
如本文所用，術語「治療有效量」係指本文所述之抗體或ADC足以降低及/或改善所指定疾病、病症或病狀及/或與其相關之症狀之嚴重度及/或持續時間的量。藥劑(包括治療劑)之治療有效量可為達成以下而必需的量：(i)降低或改善所指定疾病、病症或病狀之進展或進程，(ii)降低或改善所指定疾病、病症或病狀之復發、發展或發作及/或(iii)改善或增強另一種療法(例如除本文所述之抗體或ADC之投與以外的療法)的治療作用。本發明之物質/分子/藥劑(例如5T4抗體或ADC)的「治療有效量」可基於多種因素而改變，諸如個體的疾病狀態、年齡、性別及體重，以及該物質/分子/藥劑誘導個體之所需反應的能力。治療有效量涵蓋其中該物質/分子/藥劑之治療有益作用超過任何毒性或有害作用的量。在一些實施例中，術語「治療有效量」係指抗體或其他藥劑(例如或藥物)有效地「治療」個體或哺乳動物之疾病、病症或病狀的量。
在一些實施例中，藥物為具有抗增殖活性的影響微管之藥劑，諸如類美登素。在一些實施例中，藥物為抗有絲分裂劑，諸如奧瑞他汀或其活性奧瑞他汀類似物或衍生物。在一些實施例中，藥物為DNA烷基化劑。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受」意謂經聯邦或州政府之管制機構批准或列於美國藥典(U.S. Pharmacopia)、歐洲藥典(European Pharmacopia)或其他公認藥典中用於動物，更特定言之，用於人類。
「賦形劑」包括載劑、賦形劑、防腐劑或穩定劑，其在所用劑量及濃度下對暴露於其的細胞或哺乳動物無毒且可為了例如達成穩定性、增積調配或賦予最終劑型中之活性成分之治療性增強(例如促進吸收、減小黏度、增強溶解性)而包括在內。「賦形劑」可為天然或合成的有機或無機成分，活性成分與其合併以促進活性成分的利用，例如活性成分投與個體。賦形劑實例包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少於約十個胺基酸殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；及/或非離子型界面活性劑，諸如TWEEN™、聚乙二醇(PEG)及PLURONICS™。術語「賦形劑」亦可指與治療劑一起投與之稀釋劑、佐劑(例如弗氏佐劑(Freund's adjuvant)(完全或不完全))、賦形劑或媒劑。此類賦形劑可為無菌液體，諸如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似物。靜脈內投與組成物(例如醫藥組成物)時，水為例示性賦形劑。亦可使用生理鹽水溶液及右旋糖水溶液及甘油溶液作為液體賦形劑，尤其用於可注射溶液。適合的賦形劑(例如醫藥賦形劑)包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、脫脂牛乳、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇及其類似物。在任何實施例中，組成物亦可含有少量濕潤劑或乳化劑，或pH緩衝劑。組成物可呈溶液、懸浮液、乳液、錠劑、丸劑、膠囊、散劑、持續釋放調配物及其類似形式。口服組成物(諸如調配物)可包括標準賦形劑，諸如醫藥級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂及其類似物。適合賦形劑之實例描述於Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2020) (Elsevier Science, Amsterdam, Netherlands)，包括醫藥化合物，可含有有效量或治療有效量的5T4-ADC，例如分離或純化形式，以及適量之賦形劑以提供正確投與個體的形式。調配物應適於投藥模式。
5T4抗體
本文所述之5T4-ADC包含藥物及與其結合的5T4抗體。在一些實施例中，5T4抗體係指一種抗體，其特異性結合至5T4，諸如5T4蛋白、5T4多肽、5T4多肽片段、5T4肽或5T4抗原決定基。在一些實施例中，5T4抗體為結合至5T4的人類或人源化抗體(例如包含人類恆定區)。在一些實施例中，5T4抗體可結合至哺乳動物(例如人類)細胞(包括表現5T4之腫瘤細胞)之表面上所表現的5T4。在一些實施例中，5T4抗體結合細胞(諸如腫瘤細胞)上所表現的5T4胞外抗原決定基(例如胞外5T4抗原決定基)。在一些實施例中，5T4為人類5T4。人類5T4的例示性胺基酸序列描述於本文中。
在一些實施例中，5T4抗體與參考5T4抗體競爭結合至5T4，該參考抗體包含本文所述之任一種抗體的VH區、VL區、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3，諸如表1至3中之任一者中所述之VH區、VL區、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列。因此，在一些實施例中，5T4抗體與參考5T4抗體競爭結合至5T4，該參考抗體包含來自以下抗體的一個、二個及/或三個VH CDR及/或一個、二個及/或三個VL CDR：(a)命名為mAbA4的抗體；或(b)命名為mAbA15的抗體；或(c)命名為mAbA17的抗體。在一些實施例中，5T4-ADC包含藥物(直接地或間接地)結合至5T4抗體，該抗體與包含來自以下抗體之一個、二個及/或三個VH CDR及一個、二個及/或三個VL CDR的參考5T4抗體競爭結合至5T4：(a)命名為mAbA4的抗體；或(b)命名為mAbA15的抗體；或(c)命名為mAbA17的抗體。在一些實施例中，5T4抗體與包含來自以下抗體之VH區及VL區的參考5T4抗體競爭結合至5T4：(a)命名為mAbA4的抗體；或(b)命名為mAbA15的抗體；或(c)命名為mAbA17的抗體。在一些實施例中，5T4抗體與參考5T4抗體競爭結合至5T4，該參考抗體包含：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:25的VH區及包含胺基酸序列SEQ ID NO:26的VL區；或(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:44的VH區及包含胺基酸序列SEQ ID NO:45的VL區；或(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:62的VH區及包含胺基酸序列SEQ ID NO:63的VL區。
在一些實施例中，5T4抗體包含本文所述之任一種抗體的VH區、VL區、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3，諸如表1至3中之任一者中所述之VH區、VL區、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的胺基酸序列。因此，在一些實施例中，5T4抗體包含來自以下抗體的一個、二個及/或三個重鏈CDR及/或一個、二個及/或三個輕鏈CDR：(a)命名為mAbA4的抗體；或(b)命名為mAbA15的抗體；或(c)命名為mAbA17的抗體。在一些實施例中，5T4抗體包含來自以下抗體的一個、二個及/或三個重鏈CDR及一個、二個及/或三個輕鏈CDR；(a)命名為mAbA4的抗體；或(b)命名為mAbA15的抗體；或(c)命名為mAbA17的抗體。
在一些實施例中，5T4抗體包含VH區，該VH區包含如本文(諸如表1至3中之任一者)所述之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3中的一或多者(諸如一者、二者或三者)；及/或VL區，該VL區包含如本文(諸如表1至3中之任一者)所述之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3中的一或多者(諸如一者、二者或三者)。在一些實施例中，5T4抗體具雙特異性且包含第一結合區，該第一結合區包含如表1至3中之任一者中所述的一個、二個及/或三個重鏈CDR及/或一個、二個及/或三個輕鏈CDR；以及第二區，該第二區包含結合劑的一個、二個及/或三個重鏈CDR及/或一個、二個及/或三個輕鏈CDR，該結合劑結合至並非5T4的第二目標抗原。在一些實施例中，5T4抗體具雙特異性且包含第一結合域，該第一結合域包含如表1至3中之任一者中所述的一個、二個及/或三個重鏈CDR及/或一個、二個及/或三個輕鏈CDR；以及第二結合域，該第二結合域包含來自結合劑的一個、二個及/或三個重鏈CDR及/或一個、二個及/或三個輕鏈CDR，該結合劑結合至第二5T4抗原決定基。
命名為mAbA4的抗體包含SEQ ID NO:25之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:26之VL胺基酸序列。
命名為mAbA15的抗體包含SEQ ID NO:44之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:45之VL胺基酸序列。
命名為mAbA17的抗體包含SEQ ID NO:62之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:63之VL胺基酸序列。 表 1 ：抗體 mAbA4
      例示性 IMGT ® Kabat Chothia 接觸 AbM
VH CDR Seq. VH CDR1 GFTFSRYYIH (SEQ ID NO:1) GFTFSRYY (SEQ ID NO:7) RYYIH (SEQ ID NO:12) GFTFSRY (SEQ ID NO:13) SRYYIH (SEQ ID NO:18) GFTFSRYYIH (SEQ ID NO:1)
VH CDR2 FISPGGSYTYYADSVKG (SEQ ID NO:2) ISPGGSYT (SEQ ID NO:8) FISPGGSYTYYADSVKG (SEQ ID NO:2) PGGS (SEQ ID NO:14) WVAFISPGGSYTY (SEQ ID NO:19) FISPGGSYTY (SEQ ID NO:24)
VH CDR3 EYYSMGVLDY (SEQ ID NO:3) AREYYSMGVLDY (SEQ ID NO:9) EYYSMGVLDY (SEQ ID NO:3) YYSMGVLD (SEQ ID NO:15) AREYYSMGVLD (SEQ ID NO:20) EYYSMGVLDY (SEQ ID NO:3)
VL CDR Seq. VL CDR1 RASQSVSSAVA (SEQ ID NO:4) QSVSSA (SEQ ID NO:10) RASQSVSSAVA (SEQ ID NO:4) SQSVSSA (SEQ ID NO:16) SSAVAWY (SEQ ID NO:21) RASQSVSSAVA (SEQ ID NO:4)
VL CDR2 SASSLYS (SEQ ID NO:5) SAS (SEQ ID NO:11) SASSLYS (SEQ ID NO:5) SAS (SEQ ID NO:11) LLIYSASSLY (SEQ ID NO:22) SASSLYS (SEQ ID NO:5)
VL CDR3 QQAYESPYT (SEQ ID NO:6) QQAYESPYT (SEQ ID NO:6) QQAYESPYT (SEQ ID NO:6) AYESPY (SEQ ID NO:17) QQAYESPY (SEQ ID NO:23) QQAYESPYT (SEQ ID NO:6)
VH胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYYIHWVRQAPGKGLEWVAFISPGGSYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREYYSMGVLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:25)
VL胺基酸序列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYESPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:26)
表 2 ：抗體 mAbA15
      例示性 IMGT ® Kabat Chothia 接觸 AbM
VH CDR Seq. VH CDR1 GFTFSSYYIH (SEQ ID NO:27) GFTFSSYY (SEQ ID NO:31) SYYIH (SEQ ID NO:34) GFTFSSY (SEQ ID NO:35) SSYYIH (SEQ ID NO:39) GFTFSSYYIH (SEQ ID NO:27)
VH CDR2 YITSTGSYTEYADSVKG (SEQ ID NO:28) ITSTGSYT (SEQ ID NO:32) YITSTGSYTEYADSVKG (SEQ ID NO:28) STGS (SEQ ID NO:36) WVAYITSTGSYTE (SEQ ID NO:40) YITSTGSYTE (SEQ ID NO:43)
VH CDR3 YDRSTRYSGLDY (SEQ ID NO:29) ARYDRSTRYSGLDY (SEQ ID NO:33) YDRSTRYSGLDY (SEQ ID NO:29) DRSTRYSGLD (SEQ ID NO:37) ARYDRSTRYSGLD (SEQ ID NO:41) YDRSTRYSGLDY (SEQ ID NO:29)
VL CDR Seq. VL CDR1 RASQSVSSAVA (SEQ ID NO:4) QSVSSA (SEQ ID NO:10) RASQSVSSAVA (SEQ ID NO:4) SQSVSSA (SEQ ID NO:16) SSAVAWY (SEQ ID NO:21) RASQSVSSAVA (SEQ ID NO:4)
VL CDR2 SASSLYS (SEQ ID NO:5) SAS (SEQ ID NO:11) SASSLYS (SEQ ID NO:5) SAS (SEQ ID NO:11) LLIYSASSLY (SEQ ID NO:22) SASSLYS (SEQ ID NO:5)
VL CDR3 QQAYATPVT (SEQ ID NO:30) QQAYATPVT (SEQ ID NO:30) QQAYATPVT (SEQ ID NO:30) AYATPV (SEQ ID NO:38) QQAYATPV (SEQ ID NO:42) QQAYATPVT (SEQ ID NO:30)
VH胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:44)
VL胺基酸序列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:45)
表 3 ：抗體 mAbA17
      例示性 IMGT ® Kabat Chothia 接觸 AbM
VH CDR Seq. VH CDR1 GFTFSRYWIH (SEQ ID NO:46) GFTFSRYW (SEQ ID NO:50) RYWIH (SEQ ID NO:53) GFTFSRY (SEQ ID NO:13) SRYWIH (SEQ ID NO:57) GFTFSRYWIH (SEQ ID NO:46)
VH CDR2 AIFPYSGSTLYADSVKG (SEQ ID NO:47) IFPYSGST (SEQ ID NO:51) AIFPYSGSTLYADSVKG (SEQ ID NO:47) PYSG (SEQ ID NO:54) WVAAIFPYSGSTL (SEQ ID NO:58) AIFPYSGSTL (SEQ ID NO:61)
VH CDR3 SPSRSILPSGLDY (SEQ ID NO:48) ARSPSRSILPSGLDY (SEQ ID NO:52) SPSRSILPSGLDY (SEQ ID NO:48) PSRSILPSGLD (SEQ ID NO:55) ARSPSRSILPSGLD (SEQ ID NO:59) SPSRSILPSGLDY (SEQ ID NO:48)
VL CDR Seq. VL CDR1 RASQSVSSAVA (SEQ ID NO:4) QSVSSA (SEQ ID NO:10) RASQSVSSAVA (SEQ ID NO:4) SQSVSSA (SEQ ID NO:16) SSAVAWY (SEQ ID NO:21) RASQSVSSAVA (SEQ ID NO:4)
VL CDR2 SASSLYS (SEQ ID NO:5) SAS (SEQ ID NO:11) SASSLYS (SEQ ID NO:5) SAS (SEQ ID NO:11) LLIYSASSLY (SEQ ID NO:22) SASSLYS (SEQ ID NO:5)
VL CDR3 QQGDGSPYT (SEQ ID NO:49) QQGDGSPYT (SEQ ID NO:49) QQGDGSPYT (SEQ ID NO:49) GDGSPY (SEQ ID NO:56) QQGDGSPY (SEQ ID NO:60) QQGDGSPYT (SEQ ID NO:49)
VH胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWIHWVRQAPGKGLEWVAAIFPYSGSTLYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSPSRSILPSGLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:62)
VL胺基酸序列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDGSPYTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:63)
在一些實施例中，5T4抗體包含VH區。在一些實施例中，5T4抗體包含VL區。在一些實施例中，5T4抗體具有(i) VH區；及(ii) VL區之組合。
在一些實施例中，5T4抗體包含具有以下之組合的重鏈：(i)如本文所述的VH，諸如表1至3中之任一者所述；及(ii)一或多個重鏈恆定區(例如CH1、鉸鏈、CH2及CH3)。例示性IgG重鏈可包含如本文所述的任何VH胺基酸序列及以下CH1、鉸鏈、CH2及CH3胺基酸序列： ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:69)。 另一種例示性IgG重鏈可包含如本文所述的任何VH胺基酸序列及以下CH1、鉸鏈、CH2及CH3胺基酸序列： ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALKAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:70)。
在一些實施例中，5T4抗體包含具有以下之組合的輕鏈：(i)如本文所述的VL區，諸如表1至3中之任一者所述；及(ii)輕鏈恆定區(CL)。例示性輕鏈(例如與IgG重鏈成對)可包含本文所述之任何VL胺基酸序列及以下CL胺基酸序列： RTVAAPSVFIFPPSDSQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:71)。
在一些實施例中，5T4抗體包含(a)具有以下之組合的重鏈：(i)如本文所述的VH，諸如表1至3中之任一者所述，及(ii)一或多個重鏈恆定區(例如CH1、鉸鏈、CH2及CH3)；及(b)具有以下之組合的輕鏈：(i)如本文所述的VL，諸如表1至3中之任一者所述，及(ii)呈IgG格式的輕鏈恆定區(CL1)。
在一些實施例中，結合至5T4的抗體可包含：重鏈，其具有胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYYIHWVRQAPGKGLEWVAFISPGGSYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREYYSMGVLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSLCTPSRGS (SEQ ID NO:90)；及輕鏈，其具有胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYESPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:91)。
在一些實施例中，結合至5T4的抗體可為重鏈，該重鏈已經修飾以包括甲醯基甘胺酸殘基且因此具有胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYYIHWVRQAPGKGLEWVAFISPGGSYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREYYSMGVLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL(fGly)TPSRGS (SEQ ID NO:92)，其中f(Gly)為甲醯基甘胺酸殘基。
在一些實施例中，5T4-ADC包含：重鏈，其具有胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYYIHWVRQAPGKGLEWVAFISPGGSYTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREYYSMGVLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL nTPSRGS (SEQ ID NO:93)，其中 n為胺基酸，其側鏈經如本文所揭示之連接子-藥物置換，例如式(XIV)、(XV)或(XVI)之連接子-藥物。
在一些實施例中，結合至5T4的抗體包含：重鏈，其具有胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSLCTPSRGS (SEQ ID NO:94)；及輕鏈，其具有胺基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCR ASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:95)。
在一些實施例中，結合至5T4的抗體可為重鏈，該重鏈已經修飾以包括甲醯基甘胺酸殘基且因此具有胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL( fGly)TPSRGS (SEQ ID NO:96)，其中f(Gly)為甲醯基甘胺酸殘基。
在一些實施例中，5T4-ADC包含：重鏈，其具有胺基酸序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL nTPSRGS (SEQ ID NO:97)，其中 n為胺基酸，其側鏈經如本文所揭示之連接子-藥物置換，例如式(XIV)、(XV)或(XVI)之連接子-藥物。
在一些實施例中，結合至5T4的抗體包含：重鏈，其具有胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWIHWVRQAPGKGLEWVAAIFPYSGSTLYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSPSRSILPSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSLCTPSRGS (SEQ ID NO:98)；及輕鏈，其具有胺基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRA SQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDGSPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:99)。
在一些實施例中，結合至5T4的抗體可為重鏈，該重鏈已經修飾以包括甲醯基甘胺酸殘基且因此具有胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWIHWVRQAPGKGLEWVAAIFPYSGSTLYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSPSRSILPSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL (fGly)TPSRGS (SEQ ID NO:100)，其中f(Gly)為甲醯基甘胺酸殘基。
在一些實施例中，5T4-ADC包含：重鏈，其具有胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWIHWVRQAPGKGLEWVAAIFPYSGSTLYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSPSRSILPSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL nTPSRGS (SEQ ID NO:101)，其中 n為胺基酸，其側鏈經如本文所揭示之連接子-藥物置換，例如式(XIV)、(XV)或(XVI)之連接子-藥物。
在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個、三個、四個、五個或六個CDR)，例如表1中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個、三個、四個、五個或六個CDR)，例如表2中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個、三個、四個、五個或六個CDR)，例如表3中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。
在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個或三個VH CDR)，例如表1中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個或三個VL CDR)，例如表1中所述的VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個或三個VH CDR)，例如表1中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3；及一或多個CDR (例如一個、二個或三個VL CDR)，例如表1中所述的VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。
在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個或三個VH CDR)，例如表2中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3。在其他實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個或三個VL CDR)，例如表2中所述的VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個或三個VH CDR)，例如表2中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3；及一或多個CDR (例如一個、二個或三個VL CDR)，例如表2中所述的VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。
在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個或三個VH CDR)，例如表3中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個或三個VL CDR)，例如表3中所述的VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、二個或三個VH CDR)，例如表3中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3；及一或多個CDR (例如一個、二個或三個VL CDR)，例如表3中所述的VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3。
在一些實施例中，5T4抗體包含如本文所述的一或多個(例如一個、二個或三個) VH CDR，諸如表1至3中所述。在其他實施例中，5T4抗體包含如本文所述的一或多個(例如一個、二個或三個) VL CDR，諸如表1至3中所述。在一些實施例中，5T4抗體包含如本文(諸如表1至3)所述的一或多個(例如一個、二個或三個) VH CDR及如本文(諸如表1至3)所述的一或多個(例如一個、二個或三個) VL CDR。因此，在一些實施例中，5T4抗體包含胺基酸序列含有SEQ ID NO:1、7、12、13、18、27、31、34、35、39、46、50、53及57中之任一者的VH CDR1。在一些實施例中，5T4抗體包含胺基酸序列含有SEQ ID NO:2、8、14、19、24、28、32、36、40、43、47、51、54、58及61中之任一者的VH CDR2。在一些實施例中，5T4抗體包含含有SEQ ID NO:3、9、15、20、29、33、37、41、48、52、55及59中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含獨立地選自以下的VH CDR1及/或VH CDR2及/或VH CDR3：表1至3中之任一者中所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含含有SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1。在一些實施例中，5T4抗體包含含有SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。在一些實施例中，5T4抗體包含含有SEQ ID NO:6、17、23、30、38、42、49、56及60中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含獨立地選自以下的VL CDR1及/或VL CDR2及/或VL CDR3：如本文(諸如表1至3中之任一者)所述的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3。
在一些實施例中，5T4抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1：(i) SEQ ID NO:1、27或46、(ii) SEQ ID NO:7、31或50、(iii) SEQ ID NO:12、34或53、(iv) SEQ ID NO:13或53及(v) SEQ ID NO:18、39或57；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2：(i) SEQ ID NO:2、28或47、(ii) SEQ ID NO:8、32或51、(iii) SEQ ID NO:14、36或54、(iv) SEQ ID NO:19、40或58及(v) SEQ ID NO:24、43或61；以及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3：(i) SEQ ID NO:3、29或48、(ii) SEQ ID NO:9、33或52、(iii) SEQ ID NO:15、37或55及(iv) SEQ ID NO:20、41或59；及/或VL區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1：(i) SEQ ID NO:4、(ii) SEQ ID NO:10、(iii) SEQ ID NO:16及(iv) SEQ ID NO:21；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2：(i) SEQ ID NO:5、(ii) SEQ ID NO:11及(iii) SEQ ID NO:22；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3：(i) SEQ ID NO:6、30或49、(ii) SEQ ID NO:17、38或56及(iii) SEQ ID NO:23、42或60。
在一些實施例中，5T4抗體包含VH區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1：(i) SEQ ID NO:1、27或46、(ii) SEQ ID NO:7、31或50、(iii) SEQ ID NO:12、34或53、(iv) SEQ ID NO: 53及(v) SEQ ID NO:18、39或57；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2：(i) SEQ ID NO:2、28或47、(ii) SEQ ID NO:8、32或51、(iii) SEQ ID NO:14、36或54、(iv) SEQ ID NO:19、40或58及(v) SEQ ID NO:24、43或61；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3：(i) SEQ ID NO:3、29或48、(ii) SEQ ID NO:9、33或52、(iii) SEQ ID NO:15、37或55及(iv) SEQ ID NO:20、41或59。
在一些實施例中，5T4抗體包含VL區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1：(i) SEQ ID NO:4、(ii) SEQ ID NO:10、(iii) SEQ ID NO:16及(iv) SEQ ID NO:21；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2：(i) SEQ ID NO:5、(ii) SEQ ID NO:11及(iii) SEQ ID NO:22；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3：(i) SEQ ID NO:6、30或49、(ii) SEQ ID NO:17、38或56及(iii) SEQ ID NO:23、42或60。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1：(i) SEQ ID NO:1、27或46、(ii) SEQ ID NO:7、31或50、(iii) SEQ ID NO:12、34或53、(iv) SEQ ID NO: 53及(v) SEQ ID NO:18、39或57；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2：(i) SEQ ID NO:2、28或47、(ii) SEQ ID NO:8、32或51、(iii) SEQ ID NO:14、36或54、(iv) SEQ ID NO:19、40或58及(v) SEQ ID NO:24、43或61；以及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3：(i) SEQ ID NO:3、29或48、(ii) SEQ ID NO:9、33或52、(iii) SEQ ID NO:15、37或55及(iv) SEQ ID NO:20、41或59；及/或VL區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1：(i) SEQ ID NO:4、(ii) SEQ ID NO:10、(iii) SEQ ID NO:16及(iv) SEQ ID NO:21；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2：(i)SEQ ID NO:5、(ii) SEQ ID NO:11及(iii) SEQ ID NO:22；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3：(i) SEQ ID NO:6、30或49、(ii) SEQ ID NO:17、38或56及(iii) SEQ ID NO:23、42或60。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含VH區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1：(i) SEQ ID NO:1、27或46、(ii) SEQ ID NO:7、31或50、(iii) SEQ ID NO:12、34或53、(iv) SEQ ID NO: 13、35或53及(v) SEQ ID NO:18、39或57；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2：(i) SEQ ID NO:2、28或47、(ii) SEQ ID NO:8、32或51、(iii) SEQ ID NO:14、36或54、(iv) SEQ ID NO:19、40或58及(v) SEQ ID NO:24、43或61；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3：(i) SEQ ID NO:3、29或48、(ii) SEQ ID NO:9、33或52、(iii) SEQ ID NO:15、37或55及(iv) SEQ ID NO:20、41或59。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含VL區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1：(i) SEQ ID NO:4、(ii) SEQ ID NO:10、(iii) SEQ ID NO:16及(iv) SEQ ID NO:21；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2：(i) SEQ ID NO:5、(ii) SEQ ID NO:11及(iii) SEQ ID NO:22；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3：(i) SEQ ID NO:6、30或49、(ii) SEQ ID NO:17、38或56及(iii) SEQ ID NO:23、42或60。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含來自以下抗體的所有三個重鏈CDR及/或所有三個輕鏈CDR：(a)命名為mAbA4的抗體，其包含SEQ ID NO:25之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:26之VL胺基酸序列；或(b)命名為mAbA15的抗體，其包含SEQ ID NO:44之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:45之VL胺基酸序列；或(c)命名為mAbA17的抗體，其包含SEQ ID NO:62之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:63之VL胺基酸序列。在一些實施例中，5T4-ADC包含5T4抗體，其中該5T4抗體包含來自命名為mAbA4之抗體的所有三個重鏈CDR及/或所有三個輕鏈CDR。在一些實施例中，5T4-ADC包含5T4抗體，其中該5T4抗體包含來自命名為mAbA15之抗體的所有三個重鏈CDR及/或所有三個輕鏈CDR。在一些實施例中，5T4-ADC包含5T4抗體，其中該5T4抗體包含來自命名為mAbA17之抗體的所有三個重鏈CDR及/或所有三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a)包含如本文(諸如表1至3)所述之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3胺基酸序列的VH區；及/或(b)包含如本文(諸如表1至3)所述之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3胺基酸序列的VL區。在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：VH區，其包含如本文(諸如表1至3)所述的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3胺基酸序列。在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含VL區，其包含如本文(諸如表1至3)所述的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3胺基酸序列。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：VL CDR1，其包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者的胺基酸序列；及(2) VL CDR2，其包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者的胺基酸序列。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:7的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:7的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:18的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:18的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1；及VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:31的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:31的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:34的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:34的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:35的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:35的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:39的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:39的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:50的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:50的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:57的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:57的VH CDR1；及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1；及(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:1、7、12、13及18中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1；(2)包含SEQ ID NO:2、8、14、19及24中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:3、9、15及20中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:6、17及23中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:2的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:7的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:8的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:2的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:18的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:19的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:23的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:24的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:27、31、34、35及39中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1；(2)包含SEQ ID NO:28、32、36、40及43中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:29、33、37及41中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:30、38及42中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:31的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:32的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:33的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:34的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:35的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:37的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:38的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:39的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:40的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:41的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:43的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:13、46、50、53及57中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1；(2)包含SEQ ID NO:47、51、54、58及61中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:48、52、55及59中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:49、56及60中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:47的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:50的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:51的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:47的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:55的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:56的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:57的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:58的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:59的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:60的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:61的VH CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1；(2)包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2；及(3)包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含：VH區，其包含：胺基酸序列選自由SEQ ID NO:27、31、34、35及39組成之群的VH CDR1；以及VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；及(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2。
在一些實施例中，5T4-ADC包含結合至5T4的抗體，其中該抗體包含本文所述之VH區及/或VL區，其中VH及/或VL包含人類構架序列。在一些實施例中，VH區及/或VL區包含構架1 (FR1)、構架2 (FR2)、構架3 (FR3)及/或構架4 (FR4)序列，諸如人類FR1、人類FR2、人類FR3及/或人類FR4。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由Kabat系統測定(Kabat等人, (1971) Ann. NY Acad. Sci. 190:382-391及Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest第五版, 美國健康與人類服務部(U.S. Department of Health and Human Services)，NIH公告第91-3242號)。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由Chothia系統測定，其在本文中稱為「Chothia CDR」(參見例如Chothia及Lesk, 1987, J. Mol. Biol., 196:901-917；Al-Lazikani等人, 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948；Chothia等人, 1992, J. Mol. Biol., 227:799-817；Tramontano A.等人, 1990, J. Mol. Biol. 215(1):175-82；以及美國專利第7,709,226號)。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由ImMunoGeneTics (IMGT ®)系統測定，例如以下文獻中所述：Lefranc, M.-P., 1999, The Immunologist, 7:132-136及Lefranc, M.-P.等人, 1999, Nucleic Acids Res., 27:209-212 (「IMGT ®CDR」)。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由AbM系統測定，其在本文中稱為「AbM CDR」，例如MacCallum等人, 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745中所述。亦參見例如Martin, A., "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," 於Antibody Engineering, Kontermann及Dübel編，第31章，第422-439頁, Springer-Verlag, Berlin (2001)。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由接觸系統測定，其在本文中將稱為「接觸CDR」(參見例如MacCallum RM等人, 1996, J Mol Biol 5: 732-745)。接觸CDR係基於可獲得的複雜晶體結構之分析。
在一些實施例中，沿著5T4抗體之VH (例如CDR1、CDR2或CDR3)及/或VL (例如CDR1、CDR2或CDR3)區的一或多個(例如一個、二個、三個) CDR之位置可改變一個、二個、三個、四個、五個或六個胺基酸位置，限制條件為維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)對5T4 (例如人類5T4)的結合。舉例而言，在一些實施例中，可藉由將CDR之N端及/或C端邊界相對於當前CDR位置位移一個、二個、三個、四個、五個或六個胺基酸來改變表1、2或3中之任一者的界定CDR之位置，限制條件為維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)對5T4 (例如人類5T4)的結合。另外或可替代地，在一些實施例中，沿著本文所述之5T4抗體(例如人類5T4抗體)之VH (例如CDR1、CDR2或CDR3)及/或VL (例如CDR1、CDR2或CDR3)區的一或多個(例如一個、二個、三個) CDR之長度可改變(例如更短或更長)一個、二個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，限制條件為維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)對5T4 (例如人類5T4)的結合。舉例而言，在一些實施例中，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3可比SEQ ID NO:1-24、27-43或46-61所述的一或多個CDR短一個、二個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，限制條件為維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)對5T4 (例如人類5T4)的結合。在其他實施例中，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3可比SEQ ID NO:1-24、27-43或46-61所述的一或多個CDR長一個、二個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，限制條件為維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)對5T4 (例如人類5T4)的結合。另外或可替代地，在一些實施例中，相較於SEQ ID NO:1-24、27-43或46-61所述的一或多個CDR，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3的胺基端可延長一個、二個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，限制條件為維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)對5T4 (例如人類5T4)的結合。另外或可替代地，在一些實施例中，相較於SEQ ID NO:1-24、27-43或46-61所述的一或多個CDR，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3的羧基端可延長一個、二個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，限制條件為維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)對5T4 (例如人類5T4)的結合。另外或可替代地，在一些實施例中，相較於SEQ ID NO:1-24、27-43或46-61所述的一或多個CDR，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3的胺基端可縮短一個、二個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，限制條件為維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)對5T4 (例如人類5T4)的結合。在一些實施例中，相較於SEQ ID NO:1-24、27-43或46-61所述的一或多個CDR，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3的羧基端可縮短一個、二個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，限制條件為維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)對5T4 (例如人類5T4)的結合。此項技術中已知之任何方法可用於確定對5T4 (例如人類5T4)的結合是否得到維持，例如本文所述之「實例」章節中所述的結合分析及條件。舉例而言，本文所述之實例2描述一種用於量測對5T4 (例如人類5T4)之結合的分析。
在一些實施例中，5T4-ADC可包含5T4抗體，該抗體包含一或多個(例如一個、二個、三個、四個或更多個)保守序列修飾。就作為5T4抗體(諸如人類5T4抗體)的多肽而言，保守序列修飾包括其中胺基酸殘基經具有相似側鏈之胺基酸殘基置換的保守胺基酸取代。具有相似側鏈之胺基酸殘基家族在此項技術中已定義。本文中揭示此等家族。因此，在一些實施例中，5T4抗體中經預測的非必需胺基酸殘基可經來自相同側鏈家族的另一胺基酸殘基置換。鑑別不消除抗原結合之保守胺基酸取代及編碼其之核苷酸的方法在此項技術中已熟知(參見例如Brummell等人, Biochem. 32:1180-1187 (1993); Kobayashi等人, Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); 及Burks等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997))。在一些實施例中，本文所述之保守序列修飾將5T4抗體(例如人類5T4抗體)之胺基酸序列修飾50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。在一些實施例中，胺基酸序列修飾係指對CDR的至多一個、二個、三個、四個、五個或六個胺基酸取代，諸如表1至3中之任一者中所述的彼等修飾。因此，舉例而言，此類各CDR可含有至多五個保守胺基酸取代，例如至多(不超過)四個保守胺基酸取代，例如至多(不超過)三個保守胺基酸取代，例如至多(不超過)二個保守胺基酸取代，或不超過一個保守胺基酸取代。在一些實施例中，5T4-ADC包含5T4抗體，該抗體含有與mAbA4、mAbA15或mAbA17之CDR (參見例如表1、2或3)具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的一或多個CDR (例如一個、二個、三個、四個、五個或六個CDR)。在一些實施例中，5T4-ADC包含5T4抗體，該抗體含有CDR與mAbA4、mAbA15或mAbA17之CDR (參見例如表1、2或3)一致的VH及VL。在一些實施例中，胺基酸序列修飾不包括特異性決定殘基(SDR)內的任何修飾。在一些實施例中，胺基酸序列修飾不包括CDR (諸如CDR1、CDR2、CDR3或其任何組合)內的任何修飾。在其他實施例中，胺基酸序列修飾位於構架或恆定區中。
在一些實施例中，5T4-ADC中的抗體包含胺基酸序列與SEQ ID NO:25具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH及胺基酸序列與SEQ ID NO:26具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL，且維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)抗體對5T4 (例如人類5T4)的結合。
在一些實施例中，5T4-ADC中的抗體包含胺基酸序列與SEQ ID NO:44具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH及胺基酸序列與SEQ ID NO:45具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL，且維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)抗體對5T4 (例如人類5T4)的結合。
在一些實施例中，5T4-ADC中的抗體包含胺基酸序列與SEQ ID NO:62具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VH及胺基酸序列與SEQ ID NO:63具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的VL，且維持(例如基本上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)抗體對5T4 (例如人類5T4)的結合。
另外提供編碼如本文所揭示之5T4結合劑(例如抗體或抗體片段)或融合多肽的核酸、與其互補的核酸、包含如本文所揭示之核酸的載體、包含如本文所揭示之核酸或載體的細胞。在一些實施例中，細胞表現5T4結合劑。在一些實施例中，細胞複製核酸或載體。在一些實施例中，進一步提供用於產生5T4抗體(包括人類5T4抗體)、適用於製備ADC的材料。就此而言，細胞(例如經分離之細胞)可產生包含如本文所述之VH及VL的抗體。在一些實施例中，聚核苷酸可包含編碼5T4抗體或抗體片段的一或多種核酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸為經分離的及/或重組的聚核苷酸。在一些實施例中，經分離之聚核苷酸包含編碼抗體重鏈可變區(VH)及/或抗體輕鏈可變區(VL)的核苷酸序列，其中VH及VL包含與如本文所述之CDR一致的CDR。
在一些實施例中，一或多種載體(例如表現載體)可包含一或多種聚核苷酸，以便一或多種聚核苷酸在適合宿主細胞中的表現。使用重組技術，此類載體適用於例如擴增宿主細胞中的聚核苷酸以產生其適用數量，及用於表現結合劑，諸如抗體或抗體片段。
在一些實施例中，一或多種載體為表現載體，其中一或多種聚核苷酸可操作地連接至包含表現控制序列的一或多種聚核苷酸。特別考慮了自控複製的重組表現構築體，諸如並有一或多種聚核苷酸的質體及病毒DNA載體，該等聚核苷酸編碼結合5T4的抗體序列。表現控制DNA序列包括啟動子、增強子及操縱子，且通常基於其中將使用表現構築體的表現系統來選擇。啟動子及增強子序列通常根據其增強基因表現的能力來選擇，而操縱子序列通常根據其調節基因表現的能力來選擇。表現構築體亦可包括編碼一或多種可選標記物的序列，該等可選標記物允許鑑別攜載構築體的宿主細胞。表現構築體亦可包括有助於(例如促進)在宿主細胞中進行同源重組的序列。在一些實施例中，表現構築體亦包括宿主細胞中複製所必需的序列。
在一些實施例中，表現控制序列可包括啟動子/增強子序列，例如細胞巨大病毒啟動子/增強子(Lehner等人, J. Clin. Microbiol., 29: 2494-2502, 1991; Boshart等人, Cell, 41: 521-530, 1985)；勞氏肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)啟動子(Davis等人, Hum. Gene Ther., 4: 151, 1993)；Tie啟動子(Korhonen等人, Blood, 86(5): 1828-1835, 1995)；猿猴病毒40啟動子；DRA (在腺瘤中下調；Alrefai等人, Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 293: G923-G934, 2007)；MCT1 (單羧酸轉運蛋白1；Cuff等人, Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., G977-G979. 2005)；及Math1 (小鼠無調同源物1；Shroyer等人, Gastroenterology, 132: 2477-2478, 2007)，用於在哺乳動物細胞中表現，該啟動子可操作地連接於多肽編碼序列的上游(例如5')。在一些實施例中，啟動子可為上皮特異性啟動子或內皮特異性啟動子。聚核苷酸亦可視情況包括適合的聚腺苷酸化序列(例如SV40或人類生長激素基因聚腺苷酸化序列)，該聚腺苷酸化序列可操作地連接於多肽編碼序列的下游(例如3')。
在任何實施例中，一或多種聚核苷酸可視情況另外包含一或多種核苷酸序列，該等核苷酸序列編碼與多肽序列同框融合的一或多種分泌信號肽。一或多種分泌信號肽可引導表現一或多種聚核苷酸之細胞分泌抗體多肽且可藉由細胞與所分泌的多肽裂解。在任何實施例中，一或多種聚核苷酸可視情況進一步包含預定功能僅為促進載體大規模產生的一或多種序列。
表現載體可使用例如以下文獻中所述的標準重組DNA技術製備：Sambrook等人, Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989), 及Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1994)。視情況使得病毒載體為複製缺乏型，例如藉由使病毒複製所必需的選擇基因缺失或中斷。
細胞可包含一或多種聚核苷酸及/或一或多種載體。舉例而言，在任何實施例中，細胞可用編碼5T4抗體(例如人類5T4抗體)的一或多種聚核苷酸或包含一或多種編碼5T4抗體(例如人類5T4抗體)之聚核苷酸的一或多種載體轉型或轉染。在一些實施例中，細胞可表現5T4抗體(例如人類5T4抗體)，其含有與如本文所述之CDR (諸如mAbA4、mAbA15及/或mAbA17 (參見例如表1、2及/或3))具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的一或多個(例如一個、二個、三個、四個、五個或六個) CDR。在一些實施例中，細胞可表現5T4抗體(例如人類5T4抗體)，該抗體含有CDR與如本文所述之CDR (諸如mAbA4、mAbA15及/或mAbA17之CDR (參見例如表1、2及/或3))一致的VH區及VL區。適用於產生如本文所述之5T4抗體的細胞包括原核細胞，諸如大腸桿菌(參見例如Plückthun等人, Methods Enzymol., 178: 497-515, 1989)；及真核細胞，諸如動物細胞(例如骨髓瘤細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或融合瘤細胞)、酵母(例如釀酒酵母)或植物細胞(例如菸草、玉米、大豆或水稻細胞)。使用哺乳動物宿主細胞可提供轉譯修飾(例如糖基化、截斷、脂質化及磷酸化)，轉譯修飾可為賦予重組表現產物最佳生物活性所需的。類似地，在任何實施例中，多肽(例如5T4抗體，包括人類5T4抗體)可經糖基化或非糖基化及/或已經共價修飾以包括一或多個水溶性聚合物連接，諸如聚乙二醇、聚氧乙二醇或聚丙二醇。
用於將DNA或RNA引入宿主細胞中的方法已熟知且包括(但不限於)轉型、轉染、電穿孔、核注入及與諸如脂質體、微胞、空骸細胞及原生質體之運載體融合。此類宿主細胞適用於擴增聚核苷酸及表現由聚核苷酸編碼的多肽。就此而言，產生5T4抗體的方法可包含將編碼如本文所述之5T4抗體的RNA或DNA引入宿主細胞中；培養該宿主細胞；及分離出由此產生之5T4抗體。
自聚核苷酸產生抗體的多種方法通常已熟知。舉例而言，基本分子生物學程序描述於Maniatis等人, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989 (亦參見Maniatis等人，第3版，Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 2001)。另外，許多出版物描述藉由操縱DNA、建立表現載體及將適當細胞轉型及培養而適於製備抗體的技術(參見例如Mountain及Adair, Biotechnology and Genetic Engineering Reviews中的第1章, Tombs編, Intercept, Andover, UK, 1992)；及 Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel編, Wiley Interscience, New York, 1999)。 5T4-ADCS
結合至5T4的抗體與藥物可彼此直接地或間接地經由嗒𠯤-吡咯并偶合部分連接以形成如本文所述的5T4-ADC。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)表示： ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； m為0或1； R 2及R 3各自獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；或R 2與R 3以環形連接以形成5員或6員雜環基； X 1、X 2、X 3及X 4各自獨立地為C、N、O或S； Y 1、Y 2、Y 3及Y 4各自獨立地為氫、鹵素、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基，或Y 1與Y 2、Y 2與Y 3或Y 3與Y 4以環形連接； L為如本文所述的連接子；且 W 1為藥物。
式(IV)先前已描述於WO 2015/081282中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，m為0或1且R 2及R 3各自為烷基。舉例而言，R 2及R 3可各自獨立地為C 1-C 10烷基(例如C 1-C 6烷基)。在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、異丁基或三級丁基。在一些實施例中，R 2及R 3中之至少一者為甲基。在一些實施例中，R 2與R 3均為甲基。在一些實施例中，X 1、X 2、X 3及X 4中之每一者獨立地為C或N。在一些實施例中，X 1為C。在一些實施例中，X 1為N。在一些實施例中，X 2為C或N。在一些實施例中，X 2為C。在一些實施例中，X 3為C或N。在一些實施例中，X 3為C。在一些實施例中，X 4為C或N。在一些實施例中，X 4為C。X 1、X 2、X 3及X 4之各種組合為可能的。舉例而言，在一些實施例中，X 1、X 2、X 3及X 4中之每一者為C。在其他實施例中，X 1、X 2、X 3及X 4中之三者為C且X 1、X 2、X 3及X 4之一為N。在一些實施例中，Y 1、Y 2、Y 3及Y 4中之每一者為氫。
在式(IV)之5T4-ADC的上下文中，式(IV)之連接子-藥物可由下式(XIV)表示： ， 其中 表示結合至5T4之抗體的連接點，例如SEQ ID NO:93、97或101之殘基 n。式(XIV)之連接子-藥物的全部其他變數可如本文所定義，諸如關於式(IV)所定義，及/或如本文所述。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V)表示： ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； R 2及R 3各自獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；或R 2與R 3以環形連接以形成5員或6員雜環基； X 1為C或N； Y 1、Y 2、Y 3及Y 4各自獨立地為氫、鹵素、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基，或Y 1與Y 2、Y 2與Y 3或Y 3與Y 4以環形連接； L為如本文所述的連接子；且 W 1為藥物。
式(V)先前已描述於WO 2015/081282中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，R 2及R 3各自為烷基。舉例而言，R 2及R 3可各自獨立地為C 1-C 10烷基(例如C 1-C 6烷基)。在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、異丁基或三級丁基。在一些實施例中，R 2及R 3中之至少一者為甲基。在一些實施例中，R 2與R 3均為甲基。在一些實施例中，Y 1、Y 2、Y 3及Y 4中之每一者為氫。
在式(V)之5T4-ADC的上下文中，式(V)之連接子-藥物可由下式(XV)表示： ， 其中 表示結合至5T4之抗體的連接點，例如SEQ ID NO:93、97或101之殘基n。式(XV)之連接子-藥物的全部其他變數可如本文所定義，諸如關於式(V)所定義，及/或如本文所述。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI)表示： ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； L為如本文所述的連接子；且 W 1為藥物。
式(IV)先前已描述於WO 2015/081282中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
在式(VI)之5T4-ADC的上下文中，式(VI)之連接子-藥物可由下式(XVI)表示： ， 其中 表示結合至5T4之抗體的連接點，例如SEQ ID NO:93、97或101之殘基n。式(XVI)之連接子-藥物的全部其他變數可如本文所定義，諸如關於式(VI)所定義，及/或如本文所述。 連接子
在一些實施例中，5T4-ADC可包含連接子(L)部分，其將如本文所述的嗒𠯤-吡咯并偶合部分連接至藥物。在任何實施例中，連接子L可由以下結構表示： -(T 1V 1) a-(T 2V 2) b-(T 3V 3) c-(T 4V 4) d-(T 5V 5) e-， 其中a、b、c、d及e各自獨立地為0或1且其中a、b、c、d及e之總和為1至5。在一些實施例中，a、b、c、d及e之總和為3。在一些實施例中，a、b、c、d及e之總和為5。
在連接子L中，T 1、T 2、T 3、T 4及T 5各自獨立地為C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、(EDA) w、(PEG) n、(AA) p、-(CR 13OH) h-、哌啶-4-胺(P4A)、胺基甲酸間胺基苯甲酯(MABC)基團、間胺基苯甲氧基(MABO)基團、對胺基苯甲氧基(PABO)基團、胺基甲酸對胺基苯甲酯(PABC)基團、對胺基苯甲基(PAB)基團、縮醛、二硫鍵、肼、蛋白酶可裂解部分、葡糖醛酸酶可裂解部分、β-內醯胺酶可裂解部分、酯、(AA) p-MABC-(AA) p、(AA) p-MABO-(AA) p、(AA) p-PABO-(AA) p或(AA) p-PABC-(AA) p，其中w為整數1至20，n為整數1至30，各p獨立地為零或整數1至20，h為整數1至12，且各R 13獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、芳基或經取代之芳基。
如本文所用，「(EDA) w」為具有以下結構的乙二胺部分： ， 其中y為整數1至6，r為0或1，w為整數1至20，且各R 14獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、PEG、芳基或經取代之芳基，且其中任何二個相鄰R 14基團可以環形連接以形成哌𠯤基環，其中各 表示在任何方向上連至相鄰化學部分的連接點。
哌啶-4-胺部分可視情況在一或多個位置經任何取代基取代，例如烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分、醯基、經取代之醯基、芳基或經取代之芳基。因此，如本文所用，哌啶-4-胺如本文所用可藉由對應於以下結構的術語「P4A-R 12」描述： 其中R 12獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分(例如聚乙二醇或經修飾之聚乙二醇)、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基，其中各 表示在任何方向上連至相鄰化學部分的連接點。
如本文所用，(PEG) n為具有以下結構的聚乙二醇： ， 其中n為整數1至50，諸如1至40、1至30、1至20、1至12或1至6，諸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，其中各 表示在任何方向上連至相鄰化學部分的連接點。
如本文所用，「AA」係指如本文所述的胺基酸，包括(但不限於)天然存在之任何胺基酸、天然存在之胺基酸類似物、天然存在之胺基酸的鏡像異構體，及非天然存在之胺基酸。在(AA) p中，各胺基酸殘基可獨立地選自本文所述之胺基酸殘基且p可為整數1至50，諸如1至40、1至30、1至20、1至12或1至6，諸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
如本文所用，MABC基團可藉由術語「MABC-R 16」及以下結構描述： 。
如本文所用，MABO基團可藉由術語「MABO-R 16」及以下結構描述： 。
如本文所用，PABC基團可藉由術語「PABC-R 16」及以下結構描述： 。
如本文所用，PABO基團可藉由術語「PABO-R 16」及以下結構描述： 。
如本文所用，對胺基苯甲基(PAB)基團可藉由術語「PAB-R 16」及以下結構描述： 。
在MABC-R 16、MABO-R 16、PABC-R 16、PABO-R 16及PAB-R 16中，各 表示在任何方向上連至相鄰化學部分的連接點，且R 16獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基。
在一些實施例中，T 1、T 2、T 3、T 4及T 5中的一或多者為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，T 1獨立地為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，T 1為乙基。在一些實施例中，T 1及T 3中之每一者為C 1-C 6烷基。在一些實施例中，T 1及T 3中之每一者為乙基。
在一些實施例中，T 1、T 2、T 3、T 4及T 5中的一或多者為P4A-R 12。在一些實施例中，各R 12獨立地為聚乙二醇部分。在一些實施例中，各R 12獨立地為經羧酸修飾之聚乙二醇。在一些實施例中，T 2為P4A-R 12，其中R 12為經羧酸修飾之聚乙二醇。
在一些實施例中，T 1、T 2、T 3、T 4及T 5中的一或多者為(PEG) n。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，T 3為(PEG) n，其中n為2。
在一些實施例中，T 1、T 2、T 3、T 4及T 5中的一或多者為(AA) p。在一些實施例中，p為1。在一些實施例中，T 2為(AA) p，其中p為1。在一些實施例中，(AA) p中的AA為具有極性不帶電荷側鏈的胺基酸(例如絲胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺或麩醯胺酸)。在一些實施例中，(AA) p中的AA為麩醯胺酸。
在一些實施例中，T 1、T 2、T 3、T 4及T 5中的一或多者為(AA) p-(PABC-R 16)-(AA) p。在一些實施例中，R 16為氫。在一些實施例中，p為0。在一些實施例中，R 16為氫，且p為0。因此，在一些實施例中，T 1、T 2、T 3、T 4及T 5中的一或多者為藉由以下結構描述的AA-PABC： ， 其中各 表示在任何方向上連至連接子中之相鄰化學部分的連接點。
在一些實施例中，AA-PABC中的p為2。在一些實施例中，T 4為AA-PABC，其中p為2。在一些實施例中，(AA) 2中的兩個胺基酸為纈胺酸及瓜胺酸。
連接子L中的V 1、V 2、V 3、V 4及V 5可各自獨立地為共價鍵、胺基、羰基、醯胺基、氧基羰基、羧基、磺醯基、亞碸、磺醯基胺基、胺基磺醯基、硫基、氧基、磷醯基、胺基磷酸酯或硫代胺基磷酸酯。在一些實施例中，V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地為共價鍵、-C(=O)-、-NR 11-、-C(=O)NR 11-、-NR 11C(=O)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-O-、-S-、-S(=O)-、-SO 2-、-SO 2NR 11-、-NR 11SO 2-及-P(=O)OH-，其中R 11為氫、烷基、經取代之烷基、PEG、芳基或經取代之芳基。在一些實施例中，V 1、V 2及V 3獨立地為C(=O)或-NR 11-，其中R 11獨立地為氫或C 1-C 6烷基。
在一些實施例中，連接子L可由以下結構表示： -(T 1V 1) a-(T 2V 2) b-(T 3V 3) c-(T 4V 4) d-(T 5V 5) e-， 其中： a、b、c、d及e各自獨立地為0或1，其中a、b、c、d及e之總和為1至5； T 1為C 1-C 6烷基； T 2、T 3、T 4及T 5各自獨立地為(PEG) n、C 1-C 6烷基、(AA) p、P4A-R 12、(AA) p-(PABO-R 16)-(AA) p、(AA) p-(PABC-R 16)-(AA) p、(AA) p-(PABO-R 16)或(AA) p-(PABC-R 16)； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地為共價鍵、-CO-或-NR 11-； 各R 11獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇、芳基或經取代之芳基； 各R 12獨立地為氫、烷基、經取代之烷基，或經修飾或未修飾之聚乙二醇部分； R 16為氫； n為整數1至30；且 p為整數1至20。
在一些實施例中，R 12為(PEG) n。在一些實施例中，R 12為末端經羧酸修飾的(PEG) n。在一些實施例中，R 11為氫或C 1-C 12烷基。在一些實施例中，p為1。在一些實施例中，p為2。在一些實施例中，在連接子中之一個位置，p為1，且在連接子中之另一位置，p為2。在一些實施例中，n為整數1至5。在一些實施例中，n為2。
不可裂解的連接子
在一些實施例中，連接子L可由以下結構表示： (T 1V 1) a-(T 2V 2) b-(T 3V 3) c-(T 4V 4) d-(T 5V 5) e-， 其中： a、b、c、d及e各自獨立地為0或1，其中a、b、c、d及e之總和為1至5； T 1為C 1-C 6烷基； T 2及T 3各自獨立地為C 1-C 6烷基或P4A-R 12； T 4及T 5各自獨立地為(PEG) n、C 1-C 6烷基、(AA) p、P4A-R 12、(AA) p-(PABO-R 16)-(AA) p、(AA) p-(PABC-R 16)-(AA) p、(AA) p-(PABO-R 16)或(AA) p-(PABC-R 16)； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地為共價鍵、-CO-或-NR 11-；且 各R 11獨立地為氫或C 1-C 6烷基；且 各R 12獨立地為經修飾或未修飾之聚乙二醇部分。
在一些實施例中，T 1及T 3中之每一者獨立地為C 1-C 6烷基，獨立地為諸如甲基、乙基或丙基。在一些實施例中，T 1及T 3中之每一者為乙基。在一些實施例中，T 2為P4A-R 12，其中R 12為經修飾或未修飾之聚乙二醇部分。在一些實施例中，d及e為0。
在一些實施例中，連接子L可由以下結構表示： -(C 1-C 6烷基)-(V 1)-(P4A-R 12)-(V 2)-(C 1-C 6烷基)-(V 3)-， 其中： V 1、V 2及V 3各自獨立地為-CO-或-NR 11-； 各R 11獨立地為氫或C 1-C 6烷基；且 各R 12獨立地為經羧酸修飾之聚乙二醇部分。
在一些實施例中，連接子L為連接子(L-1)： ， 其中 表示連至如本文所述之嗒𠯤-吡咯并偶合部分之氮的連接點，且*表示連至W 1之連接點。
因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-1)表示： ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-1)表示，其中X 1為C。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VIa-1)表示： ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 W 1為藥物。 在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-1)表示，其中X 1為N。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VIb-1)表示： ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
可裂解連接子
在一些實施例中，抗體與藥物彼此經由可裂解連接子結合。可裂解連接子為包括一或多個可裂解部分的連接子，其中該可裂解部分包括可在一些條件下解離的一或多個鍵，從而將可裂解連接子分離成兩個或更多個可分離部分。舉例而言，可裂解部分可包括一或多個共價鍵，其在一些條件下可解離或分解以將可裂解連接子分離成兩個或更多個部分。因此，可裂解連接子可包括於5T4-ADC中，使得在某些條件下，可裂解連接子經裂解以使藥物在藥物之所需作用靶點處自抗體分離或釋放。
在一些實施例中，可裂解連接子可為酶可裂解連接子。酶可裂解連接子可經由酶的酶作用而分離成如上文所述的兩個或更多個部分。酶可裂解連接子可包含可經由酶之酶作用而裂解的任何可裂解部分，諸如(但不限於)肽、糖苷及其類似物。在一些情況下，使酶可裂解連接子裂解的酶存在於所需作用靶點，諸如待自抗體-藥物結合物釋放之藥物的所需作用靶點。在一些情況下，使酶可裂解連接子裂解的酶未大量存在於其他區域中，諸如全血、血漿或血清中。從而可控制酶可裂解部分的裂解，使得實質性裂解發生於所需作用部位，而在其他區域中或在抗體-藥物結合物到達所需作用部位之前不會顯著發生裂解。
在一些實施例中，酶可裂解連接子包含肽。肽可為適用於可裂解連接子且可經由酶的酶作用裂解的任何肽。可用作酶可裂解部分之肽的非限制性實例包括例如Val-Ala；Phe-Lys；及其類似物。
在一些實施例中，連接子L為可裂解的且可由以下結構表示： -(T 1V 1) a-(T 2V 2) b-(T 3V 3) c-(T 4V 4) d-(T 5V 5) e-， 其中： a、b、c、d及e各自獨立地為0或1，其中a、b、c、d及e之總和為1至5； T 1及T 5各自為C 1-C 6烷基； T 2、T 3及T 4各自獨立地為(PEG) n、(AA) p或(AA) p-PABC-R 16； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地為共價鍵、-CO-或-NR 11-； R 11如本文所述； R 1 6如本文所述； 各n獨立地為整數1至30；且 各p獨立地為整數1至20。
在一些實施例中，n為整數1至5。在一些實施例中，n為2。
在一些實施例中，p為1。在一些實施例中，p為2。在一些實施例中，在連接子L中的一個位置，p為1，且在連接子L中的另一位置，p為2。
在一些實施例中，T 2為胺基酸殘基。在一些實施例中，T 2為具有極性不帶電荷側鏈的胺基酸殘基。在一些實施例中，T 2為麩醯胺酸殘基。
在一些實施例中，T 3為(PEG) n，其中n為整數1至30，諸如1至5。在一些實施例中，n為2。
在一些實施例中，T 4為(AA) p-PABC-R 16，其中p為整數1至20，諸如1至5，且R 16為氫。在一些實施例中，p為2。在一些實施例中，胺基酸(AA)為纈胺酸及瓜胺酸。
在一些實施例中，連接子L可由以下結構表示： -(C 1-C 6烷基)-V 1-(AA)-V 2-(PEG) n-V 3-((AA) p-(PABC-R 16))-V 4- (C 1-C 6烷基)-V 5-， 其中： R 16為氫； n及p中之每一者獨立地為整數1至30、1至20或1至5； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地為共價鍵、-CO-或-NR 11-；且 各R 11獨立地為氫或C 1-C 6烷基。
在一些實施例中，n與p均為2。
在一些實施例中，連接子L可為連接子(L-2)： (L-2)， 其中 表示連接至如本文所述之嗒𠯤-吡咯并偶合部分且*表示連至W 1之連接點。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-2)表示： (VI-2)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，X 1為N或C。 在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-2)表示，其中X 1為C。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VIa-2)表示： (VIa-2)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-2)表示，其中X 1為N。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VIb-2)表示： ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
雙重裂解連接子
在一些實施例中，可裂解連接子包括二個可裂解部分，諸如第一可裂解部分及第二可裂解部分。可裂解部分可經組態以使得需要裂解兩個可裂解部分，以便例如在藥物之所需作用靶點將藥物自抗體分離或釋放。舉例而言，可藉由首先使二個可裂解部分之一裂解且接著使二個可裂解部分中之另一者裂解來達成可裂解連接子的裂解。在一些實施例中，可裂解連接子包括第一可裂解部分及阻礙第一可裂解部分裂解的第二可裂解部分。「阻礙裂解」意謂未裂解之第二可裂解部分的存在減少第一可裂解部分裂解的可能性或基本上抑制第一可裂解部分的裂解，從而實質上減少可裂解連接子的裂解量或阻止可裂解連接子裂解。在實施例中，未裂解之第二可裂解部分的存在可阻礙第一可裂解部分的酶及/或化學裂解。第二可裂解部分之存在對第一可裂解部分裂解的阻礙作用又實質上減少藥物自抗體釋放的量或阻止釋放。舉例而言，可實質上減少或阻止藥物自抗體的過早釋放，直至5T4-ADC位於藥物之所需作用靶點處或附近。
在一些實施例中，第二可裂解部分阻礙第一可裂解部分的裂解，且可裂解連接子的裂解可藉由首先使第二可裂解部分裂解且接著使第一可裂解部分裂解來達成。第二可裂解部分的裂解可減少或排除第一可裂解部分裂解的位阻，從而允許第一可裂解部分裂解。第一可裂解部分的裂解可引起可裂解連接子解離或分離成如本文所述的兩個或更多個部分，以使藥物自5T4-ADC釋放。在一些實施例中，在未裂解之第二可裂解部分存在下，第一可裂解部分基本上不發生裂解。術語「基本上」在本文中意謂在未裂解之第二可裂解部分存在下，第一可裂解部分發生約10%或更少的裂解，諸如在未裂解之第二可裂解部分存在下，第一可裂解部分發生約9%或更少、或約8%或更少、或約7%或更少、或約6%或更少、或約5%或更少、或約4%或更少、或約3%或更少、或約2%或更少、或約1%或更少、或約0.5%或更少、或約0.1%或更少的裂解。
換言之，第二可裂解部分可防止第一可裂解部分裂解。在實施例中，未裂解之第二可裂解部分的存在可防止第一可裂解部分裂解，且從而基本上減少或防止藥物自5T4抗體過早釋放，直至5T4-ADC位於藥物之所需作用靶點處或附近。因此，第二可裂解部分的裂解使第一可裂解部分暴露(例如將第一可裂解部分的保護基脫除)，從而允許第一可裂解部分裂解，引起可裂解連接子的裂解，此又使藥物在藥物之所需作用靶點自抗體分離或釋放，如本文所述。在一些實施例中，第二可裂解部分的裂解使第一可裂解部分暴露而隨後裂解，但第二可裂解部分的裂解不引起且本身不引起可裂解連接子的裂解(例如為了使可裂解連接子裂解，仍需要第一可裂解部分裂解)。
適用於可裂解連接子中之可裂解部分的實例包括化學可裂解部分及酶可裂解部分。舉例而言，第一可裂解部分可為化學可裂解部分且第二可裂解部分可為化學可裂解部分，該第二可裂解部分與第一可裂解部分可相同或不同。在其他實施例中，第一可裂解部分可為酶可裂解部分且第二可裂解部分可為化學可裂解部分。在又其他實施例中，第一可裂解部分可為化學可裂解部分且第二可裂解部分可為酶可裂解部分。在又其他實施例中，第一可裂解部分可為酶可裂解部分且第二可裂解部分可酶可裂解部分，該第二可裂解部分與第一可裂解部分相同或不同。
化學可裂解部分包括可在某些化學條件存在下裂解的可裂解部分。在一些實施例中，化學可裂解部分包括可在某些化學條件存在下解離的一或多個鍵，從而將可裂解部分分離成兩個或更多個可分離部分。舉例而言，化學可裂解部分在可引起化學可裂解部分水解的化學條件存在下可裂解，諸如酸性條件或鹼性條件。在一些實施例中，化學可裂解部分藉以裂解的化學條件可存在於所需作用靶點，諸如待自5T4-ADC釋放之藥物的所需作用靶點。在一些實施例中，在化學可裂解部分之所需裂解位發現的化學條件未顯著存在於其他區域中，諸如全血、血漿或血清中。從而可控制化學可裂解部分的裂解，使得實質性裂解發生於所需作用部位，而在其他區域中或在5T4-ADC到達所需作用部位之前不會顯著發生裂解。
在一些實施例中，可裂解部分可為酶可裂解部分。酶可裂解部分為可經由酶的酶作用而分離成如上文所述之兩個或更多個部分的可裂解部分。酶可裂解部分可為經由酶之酶作用而可裂解的任何可裂解部分，諸如(但不限於)肽、糖苷及其類似物。在一些實施例中，使酶可裂解部分裂解的酶存在於所需作用靶點，諸如待自5T4-ADC釋放之藥物的所需作用靶點。在一些實施例中，使酶可裂解部分裂解的酶未大量存在於其他區域中，諸如全血、血漿或血清中。從而可控制酶可裂解部分的裂解，使得實質性裂解發生於所需作用部位，而在其他區域中或在5T4-ADC到達所需作用部位(例如癌細胞)之前不會顯著發生裂解。
在一些實施例中，連接子L可為連接子(L-3)： ， 其中： 表示連至如本文所述之嗒𠯤-吡咯并偶合部分(例如式IV、V及VI中之任一者)的連接點； *表示連至W 1之連接點； 各R 5獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； 各R 6獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 7為可裂解部分； k為整數1至10； L 1包含-(T 1-V 1) a-(T 2-V 2) b-(T 3-V 3) c-(T 4-V 4) d-， L 2包含-(T 5-V 5) e-(T 6-V 6) f-(T 7-V 7) g-(T 8-V 8) h-； T 1、T 2、T 3、T 4、T 5、T 6、T 7及T 8各自獨立地為共價鍵、C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基、(EDA) w、(PEG) n、(AA) p、-(CR 13OH) m-、P4A-R 12、縮醛、肼、二硫鍵或酯； V 1、V 2、V 3、V 4、V 5、V 6、V 7及V 8各自獨立地為共價鍵、-CO-、-NR 15-、-NR 15(CH 2) q-、-NR 15(C 6H 4)-、-CONR 15-、-NR 15CO-、-C(O)O-、-OC(O)-、-O-、-S-、-S(O)-、-SO 2-、-SO 2NR 15-、-NR 15SO 2-或-P(O)OH-； a、b、c、d、e、f、g及h中之每一者獨立地為1或0； m獨立地為整數1至12； n獨立地為整數1至30； p獨立地為整數1至20； q獨立地為整數1至6； w獨立地為整數1至20； 各R 12獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分(例如聚乙二醇或經修飾之聚乙二醇)、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； 各R 13獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、芳基或經取代之芳基；且 各R 15獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、羧基、羧基酯、醯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基。
在一些實施例中，式(V)之5T4-ADC包括連接子(L-3)。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V-3)表示 ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； W 1為藥物； R 2、R 3、Y 1、Y 2、Y 3及Y 4如本文所定義，諸如關於式(V)所定義；且 L 1、L 2、R 5、R 6、R 7及k如本文所定義，諸如關於連接子(L-3)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為整數1至2。
在一些實施例中，式(VI)之5T4-ADC包括連接子(L-3)。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-3)表示 ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； W 1為藥物；且 L 1、L 2、R 5、R 6、R 7及k如本文所定義，諸如關於連接子(L-3)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在連接子(L-3)之一些實施例中，k為2。因此，連接子L可為連接子(L-4)： ， 其中： 表示連至如本文所述之嗒𠯤-吡咯并偶合部分(例如式IV、V及VI中之任一者)的連接點； *表示連至W之連接點； 各R 5獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 6'及R 6"各自獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 7為可裂解部分；且 L 1及L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-3)所定義。
在一些實施例中，式(V)之5T4-ADC包括連接子(L-4)。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V-4)表示： ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； W 1為藥物； R 2、R 3、Y 1、Y 2、Y 3及Y 4如本文所定義，諸如關於式(V)所定義； L 1、L 2、R 5、R 6'、R 6"及R 7如本文所定義，諸如關於連接子(L-4)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，式(VI)之5T4-ADC包括連接子(L-4)。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-4)表示 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； W 1為藥物； L 1、L 2、R 5、R 6'、R 6"及R 7如本文所定義，諸如關於連接子(L-4)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，R 7為酶可裂解部分，其包含糖部分，諸如糖苷或糖基。在一些實施例中，相較於不包括糖苷的可裂解連接子，糖苷可有助於可裂解連接子之親水性的增強。糖苷可為適用於可裂解連接子且可經由酶的酶作用裂解的任何糖苷。
R 7部分中的糖苷可經由糖苷鍵連接至5T4-ADC的其餘部分。糖苷鍵可使糖苷經由各種類型的鍵連接至5T4-ADC，該等鍵諸如(但不限於) O-糖苷鍵(O-糖苷)、N-糖苷鍵(糖基胺)、S-糖苷鍵(硫苷)或C-糖苷鍵(C-糖苷或C-糖基)。在一些實施例中，糖苷鍵為O-糖苷鍵(O-糖苷)。
在一些實施例中，R 7為 ， 其中**表示連至本文所述之苯基的連接點，諸如式(VI-3)、(V-4)或(VI-4)。因此，連接子L可為連接子(L-5)： ， 其中： 表示連至如本文所述之嗒𠯤-吡咯并偶合部分(例如式IV、V及VI中之任一者)的連接點； *表示連至W 1之連接點； 各R 5獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； R 6'及R 6"各自獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；且 L 1及L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-3)所定義。
在一些實施例中，連接子(L-5)連接至式(V)。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V-5)表示： 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； W 1為藥物； R 2、R 3、Y 1、Y 2、Y 3及Y 4如本文所定義，諸如關於式(V)所定義； L 1、L 2、R 5、R 6'及R 6"如本文所定義，諸如關於連接子(L-5)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，式(VI)之5T4-ADC可包括連接子(L-5)。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-5)表示： 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； W 1為藥物； L 1、L 2、R 5、R 6'及R 6"如本文所定義，諸如關於連接子(L-5)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在連接子(L-5)之一些實施例中，R 5為氫，R 6'為異丙基且R 6"為甲基。因此，在一些實施例中，連接子L可為連接子(L-6)： ， 其中： 表示連至嗒𠯤-吡咯并偶合部分(例如式IV、V及VI中之任一者)的連接點； *表示連至W 1之連接點；且 L 1及L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-5)所定義。
在一些實施例中，式(V)之5T4-ADC包括連接子(L-6)。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V-6)表示： 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； R 2、R 3、Y 1、Y 2、Y 3及Y 4如本文所定義，諸如關於式(V)所定義； W 1為藥物；且 L 1及L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-6)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，式(VI)之5T4-ADC包括連接子(L-6)。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-6)表示： ， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； W 1為藥物；且 L 1及L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-6)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V-3)、(V-4)、(V-5)、(V-6)、(VI-3)、(VI-4)、(VI-5)或(VI-6)表示，其中： L 1包含-(T 1-V 1) a-(T 2-V 2) b-(T 3-V 3) c-(T 4-V 4) d-； L 2包含-(T 5-V 5) e-(T 6-V 6) f-(T 7-V 7) g-(T 8-V 8) h-； T 1、T 2及T 3各自獨立地為C 1-C 12烷基、(PEG) n或(AA) p； T 5、T 6、T 7及T 8各自獨立地為共價鍵、C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基、(EDA) w、(PEG) n、(AA) p、-(CR 13OH) m-、P4A-R 12、縮醛、肼、二硫鍵及酯； V 1、V 2、V 3、V 4、V 5、V 6、V 7及V 8各自獨立地為-C(=O)-或-NR 11-； a、b及c各自為1； d為0且因此，T 4及V 4不存在； e、f、g及h中之每一者獨立地為1或0； n為整數1至10； p為整數1至10；且 R 11為氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分、芳基或經取代之芳基。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V-3)、(V-4)、(V-5)、(V-6)、(VI-3)、(VI-4)、(VI-5)或(VI-6)表示，其中T 1、T 2及T 3為C 1-C 6烷基、(AA) p或(PEG) n，且p及n獨立地為整數1至10。在一些實施例中，p為1。在一些實施例中，n為2。在一些實施例中，(AA) p可包括非天然存在之胺基酸，諸如半胱胺酸磺酸胺基酸。在一些實施例中，V 1、V 2及V 3獨立地為-C(=O)-或-NR 15-，其中R 15為氫。
在本文所述之任何實施例中，L 1可如下： -(C 1-C 6烷基)-V 1-(AA) p-V 2-(PEG) n-V 3 -其中V 1、V 2、V 3、AA、p及n如本文所述，諸如關於連接子(L-3)所定義。在一些實施例中，V 1、V 2及V 3為-C(=O)或-NR 15-，其中R 15為氫。在一些實施例中，p為1且n為2。在一些實施例中，(AA) p可包括非天然存在之胺基酸，諸如半胱胺酸磺酸胺基酸。
在一些實施例中，L 1為 ，其中各 表示在任何方向上連至連接子中之相鄰化學部分的連接點。因此，在一些實施例中，連接子L可為連接子(L-7)： (L-7)， 其中： 表示連至如本文所述之嗒𠯤-吡咯并偶合部分(例如式IV、V及VI中之任一者)的連接點； *表示連至W 1之連接點；且 L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-3)所定義。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V-7)表示： (V-7)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； R 2、R 3、Y 1、Y 2、Y 3及Y 4如本文所定義，諸如關於式(V)所定義； W 1為藥物；且 L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-7)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-7)表示： (VI-7)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； W 1為藥物；且 L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-7)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在L 2之一些實施例中，e為1，T 5為共價鍵，V 5為羰基，且f、g及h中之每一者為0。在一些實施例中，L 2為羰基(C=O)。因此，在一些實施例中，連接子L可為連接子(L-8)： (L-8)， 其中： 表示連至如本文所述之嗒𠯤-吡咯并偶合部分(例如式IV、V及VI中之任一者)的連接點；且 *表示連至W 1之連接點。
在一些實施例中，式(V)之5T4-ADC中的連接子(L)可為連接子(L-8)。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(V-8)表示： 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； R 2、R 3、Y 1、Y 2、Y 3及Y 4如本文所定義，諸如關於式(V)所定義；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，式(VI)之5T4-ADC中的連接子(L)可為連接子(L-8)。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-8)表示： (VI-8)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-8)表示，其中X 1為C。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VIa-8)表示： (VIa-8)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-8)表示，其中X 1為N。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VIb-8)表示： (VIb-8)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 W 1為藥物。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
藥物
適用於如本文所述之5T4-ADC中的藥物(在本文提供的各式中表示為W 1)不受特別限制。適合藥物之實例包括(但不限於)小分子藥物，諸如癌症化學治療劑。舉例而言，藥物可為影響微管的藥劑。在一些實施例中，藥物為具有抗增殖活性之影響微管的藥劑，諸如類美登素或奧瑞他汀。
美登素
在一些實施例中，藥物為類美登素。舉例而言，藥物可為美登素，其具有以下結構(W-1)： ， 或其衍生物，諸如去醯化美登素(W-1')： (W-1')， 其中 指示類美登素之連至5T4-ADC中之連接子的連接點。
舉例而言，在由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)及(VIb-8)表示的任一種5T4-ADC中，W 1可為類美登素，諸如W-1或W-1'之類美登素，其中 指示類美登素與L或L 2之間的連接點。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-11)、式(VI-21)或式(VI-81)表示： (VI-11)， (VI-21)， (VI-81)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 X 1為C或N。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，X 1為C，且5T4-ADC可由式(VIa-11)或式(VIa-21)表示： (VIa-11)， (VIa-21)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體；且 r為整數1至10。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，X 1為N，且5T4-ADC可由式(VIb-81)表示： (VIb-81)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體；且 r為整數1至10。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，以上結構之類美登素可稱為去醯化美登素或去醯基美登素。
奧瑞他汀
在一些實施例中，藥物為抗有絲分裂劑，諸如奧瑞他汀或其活性奧瑞他汀類似物或衍生物(例如單甲基奧瑞他汀D (MMAD)、單甲基奧瑞他汀E (MMAE)、單甲基奧瑞他汀F (MMAF)及其類似物)。舉例而言，在表示本文所述之5T4-ADC的任一式中，W 1可為MMAE、MMAF或MMAD。
在一些實施例中，W 1為MMAE，其具有以下結構(W-2)： ， 其中 指示5T4-ADC中之MMAE與連接子L (諸如如本文所揭示之L 2部分)之間的連接點。
舉例而言，MMAE可包括於包含連接子(L-1)之5T4-ADC中。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-12)表示： (VI-12)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 X 1為C或N。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，MMAE可包括於包含連接子(L-5)之5T4-ADC中。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-52)表示： (VI-52)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N；且 L 1及L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-3)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，MMAE可包括於包含連接子(L-6)之5T4-ADC中。因此，在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-62)表示： (VI-62)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； X 1為C或N；且 L 1及L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-3)所定義。 在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VI-12)、(VI-52)及(VI-62)表示，其中X 1為N。在一些實施例中，5T4-ADC可由式(VIb-12)、式(VIb-52)或式(VIb-62)表示： (VIb-12)， (VIb-52)，或 (VIb-62)，其中 Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10； R 5、R 6'、R 6"、L 1及L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-5)所定義；且 r為整數1至10。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，MMAE可包括於包含連接子(L-7)之5T4-ADC中。因此，5T4-ADC可由式(VIb-72)表示： (VIb-72)， 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 L 2如本文所定義，諸如關於連接子(L-6)所定義。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，MMAE可包括於包含連接子(L-8)之5T4-ADC中。因此，5T4-ADC可由式(VIb-82)表示： (VIb-82)， 其中 Ab為結合至5T4之抗體；且 r為整數1至10。
在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
在一些實施例中，W 1為MMAE，其具有以下結構(W-3)： ， 其中 指示5T4-ADC中之MMAF與連接子之間的連接點。
舉例而言，MMAF可包括於5T4-ADC中，例如如下： 其中： Ab為結合至5T4之抗體； r為整數1至10；且 Y 1、Y 2、Y 3、Y 4、X 1、R 2、R 3及L如本文所定義，諸如關於式(V)所定義。
在一些實施例中，L係選自連接子(L-1)、(L-2)、(L-3)、(L-4)、(L-5)、(L-6)、(L-7)及(L-8)。在一些實施例中，X 1為C或N。在一些實施例中，Y 1、Y 2、Y 3及Y 4中之每一者為氫。在一些實施例中，R 2及R 3獨立地為C 1-C 6烷基，諸如甲基。在一些實施例中，r為整數1至10。在一些實施例中，r為整數1至4。在一些實施例中，r為1或2。
總結章節
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為本文所揭示之結合至5T4的抗體。在一些實施例中，抗體包含VH，該VH包含與如本文(諸如表1至3中之任一者)所述之CDR一致或基本上一致的一或多個(諸如一個、二個或三個) CDR。另外或可替代地，在一些實施例中，抗體包含VL，該VL包含與如本文(諸如表1至3中之任一者)所述之CDR一致或基本上一致的一或多個(諸如一個、二個或三個) CDR。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為本文所揭示之結合至5T4的抗體。在一些實施例中，抗體包含與如本文(諸如表1至3中之任一者)所述之VH一致或基本上一致的VH。另外或可替代地，在一些實施例中，抗體包含與如本文(諸如表1至3中之任一者)所述之VL一致或基本上一致的VL。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為結合至5T4的抗體。在一些實施例中，抗體包含：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:25的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:26的VL；或(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:44的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:45的VL；或(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:62的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:63的VL。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為本文所揭示之結合至5T4的抗體。在一些實施例中，抗體包含(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:1、7、12、13及18中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1；(2)包含SEQ ID NO:2、8、14、19及24中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:3、9、15及20中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:6、17及23中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為結合至5T4的抗體。在一些實施例中，抗體包含(i) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:2的VH CDR2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3；或(ii) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:7的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3；或(iii) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:2的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3；或(iv) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:15的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR3；或(v) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:18的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:19的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:23的VL CDR3；或(vi) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:24的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為結合至5T4的抗體且包含(a) VH區，其包含：(1)包含 SEQ ID NO:27、31、34、35及39中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1；(2)包含SEQ ID NO:28、32、36、40及43中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:29、33、37及41中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:30、38及42中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為結合至5T4的抗體。在一些實施例中，抗體包含(i) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3；或(ii) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:31的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:33的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3；或(iii) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:34的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3；或(iv) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:35的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:37的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:38的VL CDR3；或(v) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:39的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:40的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO: 41的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR3；或(vi) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:43的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為結合至5T4的抗體。在一些實施例中，抗體包含(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:46、50、53、13及57中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1；(2)包含SEQ ID NO:47、51、54、58及61中之任一者之胺基酸序列的VH CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:48、52、55及59中之任一者之胺基酸序列的VH CDR3；以及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO:4、10、16及21中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1；(2)包含SEQ ID NO:5、11及22中之任一者之胺基酸序列的VL CDR2；及(3)包含SEQ ID NO:49、56及60中之任一者之胺基酸序列的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為結合至5T4的抗體且包含(i) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:47的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3；(ii) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:50的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:51的VH CDR2、包含胺基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3；或(iii) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:47的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3；或(iv) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR1及包含胺基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:55的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:56的VL CDR3；或(v) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:57的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:58的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:59的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:60的VL CDR3；或(vi) VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:61的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為結合至5T4的抗體。在一些實施例中，抗體進一步包含SEQ ID NO:25、26、44、45、62及63中之任一者中所示的構架1 (FR1)、構架2 (FR2)、構架3 (FR3)及/或構架4 (FR4)序列。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為結合至5T4且包含人類構架序列的抗體。
在一些實施例中，5T4-ADC可由式(IV)、(V)、(VI)、(VI-1)、(VIa-1)、(VIb-1)、(VI-2)、(VIa-2)、(VIb-2)、(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)、(VIb-8)、(VI-11)、(VI-21)、(VI-81)、(VIa-11)、(VIa-21)、(VIb-81)、(VI-12)、(VI-52)、(VI-62)、(VIb-12)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)表示，其中Ab為結合至5T4的抗體。在一些實施例中，抗體包含：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:25的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:26的VL；或(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:44的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:45的VL；或(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:62的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:63的VL。 抗體 - 連接子 - 藥物結合
在一些實施例中，抗體可在與連接子-藥物結合之前經修飾。修飾抗體可產生經修飾之抗體，其含有適合與連接子-藥物結合的一或多個反應性基團。
在一些實施例中，抗體可在一或多個胺基酸殘基處經修飾以提供適合與連接子-藥物結合的一或多個反應性基團。舉例而言，引入多肽中的羰基可選擇性地與α-親核體(諸如攜有胺氧基及醯肼的化合物)反應。對蛋白質上之羰基官能基具選擇性的化學物質及增強的動力學、部位選擇性及結合物穩定性可使得生物結合物改善。
在一些實施例中，抗體可經修飾以包括反應性醛基(例如反應性醛)。反應性醛可包括於「醛標籤」或「ald標籤」中，該標籤意指來源於硫酸酯酶模體的胺基酸序列，該胺基酸序列已藉由產甲醯基甘胺酸酶(FGE)的作用轉化而含有2-甲醯基甘胺酸殘基(在本文中稱為「fGly」)。藉由FGE產生的fGly殘基在文獻中亦稱為「甲醯基甘胺酸」。換言之，術語「醛標籤」在本文中用於指胺基酸序列，其包含「轉化」的硫酸酯酶模體(亦即，其中半胱胺酸或絲胺酸殘基已藉由FGE之作用轉化成fGly的硫酸酯酶模體，例如L(fGly)TPSR (SEQ ID NO:102))。轉化的硫酸酯酶模體可來源於包含「未轉化」之硫酸酯酶模體的胺基酸序列(亦即，其中半胱胺酸或絲胺酸殘基尚未藉由FGE轉化成fGly、但能夠轉化的硫酸酯酶模體，例如具有序列：L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)的未轉化之硫酸酯酶模體)。在產甲醯基甘胺酸酶(FGE)對硫酸酯酶模體之作用的上下文中使用的「轉化」係指硫酸酯酶模體中之半胱胺酸或絲胺酸殘基被生物化學修改成甲醯基甘胺酸(fGly)殘基(例如Cys修改成fGly，或Ser修改成fGly)。如本文所用，醛標記之抗體係指其中半胱胺酸或絲胺酸殘基已經修飾以形成甲醯基甘胺酸殘基的抗體。醛標籤及其用於部位特異性蛋白質修飾的其他態樣描述於美國7,985,783及美國申請公開案第2011/0117621號中，該等文獻的揭示內容各自以引用的方式併入本文中。
為了包括fGly而使多肽發生的轉化可藉由基於細胞(活體內)或游離方法(活體外)完成。類似地，為了產生適於結合之多肽而對多肽的修飾(例如為了產生含有適於結合之反應性基團的多肽而進行的修飾)可藉由基於細胞(活體內)或游離方法(活體外)完成。
抗體之胺基酸序列可經修飾以包括含有絲胺酸或半胱胺酸殘基的硫酸酯酶模體，該絲胺酸或半胱胺酸殘基能夠在活體內(例如在細胞中轉譯含有醛標籤之蛋白質時)或活體外(例如藉由使含有醛標籤之蛋白質與FGE在游離系統中接觸)藉由FGE之作用轉化(氧化)成FGly殘基。用於產生5T4-ADC的5T4抗體包括至少一個Ig恆定區，例如Ig重鏈恆定區(例如至少CH1域；至少CH1及CH2域；CH1、CH2及CH3域；或CH1、CH2、CH3及CH4域)，或Ig輕鏈恆定區。
硫酸酯酶模體可引入抗體中之任何方便部位。如本文中所指出，在一些實施例中，目標多肽之原生胺基酸序列的修飾程度降至最低，以使插入、缺失、經取代(置換)及/或添加(例如N端或C端添加)之胺基酸殘基數目降至最低。使目標抗體之胺基酸序列的修飾程度最小化可使此類修飾對抗體功能及/或結構可具有的影響降至最低。
在一些實施例中，醛標記之抗體包含醛標記之Ig重鏈恆定區(例如至少CH1域；至少CH1及CH2域；CH1、CH2及CH3域；或CH1、CH2、CH3及CH4域)。醛標記之Ig重鏈恆定區可包括IgA、IgM、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型重鏈或其任何同種異型變異體之重鏈恆定區序列，例如人類重鏈恆定區序列或小鼠重鏈恆定區序列、雜合體重鏈恆定區、合成重鏈恆定區，或共有重鏈恆定區序列及其類似序列，該等序列經修飾以包括至少一個硫酸酯酶模體，該硫酸酯酶模體可藉由FGE修飾以產生經fGly修飾之Ig多肽。Ig重鏈的同種異型變異體在此項技術中已知。參見例如Jefferis及Lefranc (2009) MAbs1:4。
在一些實施例中，醛標記的抗體包含醛標記的Ig輕鏈恆定區。醛標記的Ig輕鏈恆定區可包括κ輕鏈、λ輕鏈的恆定區序列，例如κ或λ輕鏈恆定區、雜合體輕鏈恆定區、合成輕鏈恆定區或共有輕鏈恆定區序列及其類似序列，該等恆定區序列經修飾以包括至少一個硫酸酯酶模體，該硫酸酯酶模體可藉由FGE修飾以產生fGly修飾之抗體。
或者，經分離的未修飾多肽可在缺乏適合酶的宿主細胞中重組產生之後或藉由合成產生之後加以分離。接著可使經分離之多肽與適合酶在對多肽達成所需修飾以包括fGly的條件下接觸。可藉由此項技術中已知之方法(例如使用加熱、調節pH、離液劑(例如尿素及其類似物)、有機溶劑(例如烴類：辛烷、苯、氯仿)及其類似物)使多肽展開且使變性蛋白質與適合酶接觸。接著可使經修飾的多肽在適合條件下再摺疊。
在一些實施例中，可藉由fGly與連接子-藥物上之偶合部分(諸如本文所述的肼基-吡咯并偶合部分)的反應而使含有fGly殘基的經修飾抗體與連接子-藥物結合。舉例而言，可自產生來源(例如產生重組宿主細胞的來源、合成產生的來源)分離出含fGly抗體，且與含有反應性搭配物的藥物或其他部分(例如可偵測標記)在適於達成藥物或其他部分與5T4抗體結合的條件下接觸。舉例而言，含有反應性搭配物的藥物或其他部分可包括結合部分(例如本文所述的肼基-吡咯并偶合部分)。可使含有肼基吡咯并的藥物與抗體反應以產生如本文所述的5T4-ADC。
用於使抗體與嗒𠯤-吡咯并偶合部分偶合的通用流程如下所示。
在本文中可互換地稱為氮雜-肼基-異-皮克特-施彭格勒(aza-hydrazino- iso-Pictet-Spengler，azaHIPS)偶合部分的肼基-吡咯并偶合部分在與甲醯基-甘胺酸結合後形成嗒𠯤-吡咯并偶合部分，諸如式(III)所示。5T4抗體可包括與azaHIPS偶合部分反應的2-甲醯基甘胺酸殘基(fGly)，從而將二者結合在一起。為了產生5T4-ADC，可使藥物直接地或間接地(例如經由連接子部分)與azaHIPS部分在azaHIPs部分的任何位置(例如R 16、Y 1、Y 2、Y 3或Q 4)偶合。R 2及R 3可各自獨立地為任何所需取代基，諸如(但不限於)氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基。R 16、Y 1、Y 2、Y 3及Q 4可如本文所述，諸如關於式(I)或式(II)所述。
下式(I)表示肼基-吡咯并偶合部分，其可用於使結合至5T4的抗體與藥物在本文所述之任何5T4-ADC中連接。 其中： R 16、Y 1、Y 2、Y 3及Q 4中之一者為-L-W 1， 其中Q 3及Q 4中之一者為-(CH 2) mNR 3NHR 2； m為0或1； R 2及R 3各自獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；或R 2與R 3以環形連接以形成5員或6員雜環基； 若Q 3不為-(CH 2) mNR 3NHR 2，則Q 3為Y 4； 若Q 4不為-L-W 1或-(CH 2) mNR 3NHR 2，則Q 4為Y 4； X 1、X 2、X 3及X 4各自獨立地為C、N、O或S，其中X 1、X 2、X 3及X 4中之一者視情況不存在； Y 1、Y 2、Y 3(若不為-L-W 1)及Y 4各自獨立地為氫、鹵素、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；或Y 1與Y 2、Y 2與Y 3或Y 4與Y 3(若Q 4為Y 4)可視情況以環形連接； 若R 16不為L-W 1，則R 16為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； L為如本文所述的連接子；且 W 1為藥物。
式(I)先前已描述於WO 2015/081282中，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，肼基-吡咯并偶合部分可由式(II)表示： ， 其中： Q 3及Q 4中之一者為[-(CH 2) mNR 3NR 2]； Q 3及Q 4中之另一者為Y 4； m為0或1；且 R 2及R 3各自獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；或R 2與R 3以環形連接以形成5員或6員雜環基； X 1、X 2、X 3及X 4各自獨立地為C、N、O或S，其中X 1、X 2、X 3及X 4中之一者視情況不存在； Y 1、Y 2、Y 3及Y 4各自獨立地為氫、鹵素、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；或Y 1與Y 2、Y 2與Y 3或Y 3與Y 4(若Q 4為Y 4)可視情況以環形連接； L為如本文所述的連接子；且 W 1為藥物。
式(II)先前已描述於WO 2015/081282及WO 2020/154437中，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，m為0或1且R 2及R 3各自為烷基。舉例而言，R 2及R 3可各自獨立地為C 1-C 10烷基(例如C 1-C 6烷基)。在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、異丁基或三級丁基。在一些實施例中，R 2及R 3中之至少一者為甲基。在一些實施例中，R 2與R 3均為甲基。在一些實施例中，X 1、X 2、X 3及X 4中之每一者各自獨立地為C或N。在一些實施例中，X 1為C。在一些實施例中，X 1為N。在一些實施例中，X 2為C或N。在一些實施例中，X 2為C。在一些實施例中，X 3為C或N。在一些實施例中，X 3為C。在一些實施例中，X 4為C或N。在一些實施例中，X 4為C。X 1、X 2、X 3及X 4之各種組合為可能的。舉例而言，在一些實施例中，X 1、X 2、X 3及X 4中之每一者為C。在其他實施例中，X 1、X 2、X 3及X 4中之三者為C且X 1、X 2、X 3及X 4之一為N。在一些實施例中，Y 1、Y 2、Y 3及Y 4中之每一者為氫。
用於製備5T4-ADC的例示性流程顯示於流程A中：
在流程A中，使連接子-藥物與結合至5T4的抗體結合。5T4抗體在輕鏈的恆定區中具有識別模體，例如L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體(例如SEQ ID NO: 90、94、98中)。L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體之半胱胺酸殘基可轉化成甲醯基甘胺酸(fGly)且隨後與azaHIPs部分經由皮克特-施彭格勒反應(Pictet-Spengler reaction)結合。
用於製備5T4-ADC的例示性流程顯示於流程B中：
在流程B中，使連接子-藥物與結合至5T4的抗體結合。5T4抗體在重鏈的恆定區中具有識別模體，例如L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體(例如SEQ ID NO: 90、94、98中)。L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體之半胱胺酸殘基可轉化成甲醯基甘胺酸(fGly)且隨後與azaHIPs部分經由皮克特-施彭格勒反應(Pictet-Spengler reaction)結合。
在一些實施例中，5T4-ADC包括經由嗒𠯤-吡咯并偶合部分與5T4抗體之各重鏈恆定區之C端結合的連接子-藥物且可以1至4、1至2、1.75至2、或1.9至2之抗體/連接子-藥物化學計量比率為特徵。在另一個實施例中，5T4-ADC包括僅與一個重鏈恆定區之C端連接的嗒𠯤-吡咯并偶合部分，其中抗體與藥物之間的化學計量比率為0.5至1、0.75至1、或0.9至1。
在一些實施例中，5T4-ADC包括經由嗒𠯤-吡咯并偶合部分與5T4抗體結合的連接子-藥物，其中該連接子-藥物包含經由連接子(L-1)與嗒𠯤-吡咯并偶合部分結合的美登素，如以下流程C所示：
在一些實施例中，5T4抗體在重鏈的恆定區中具有識別模體，例如L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體(例如SEQ ID NO: 90、94、98中)。L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體之半胱胺酸殘基可轉化成甲醯基甘胺酸(fGly)且隨後經由皮克特-施彭格勒反應與azaHIPs部分結合，該azaHIPs部分經由連接子(L-1)與MMAE結合。
在一些實施例中，5T4-ADC包括經由嗒𠯤-吡咯并偶合部分與5T4抗體結合的連接子-藥物，其中該連接子-藥物包含經由連接子(L-2)與嗒𠯤-吡咯并偶合部分結合的MMAE，如以下流程D所示：
在一些實施例中，5T4抗體在重鏈的恆定區中具有識別模體，例如L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體。L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體之半胱胺酸殘基可轉化成甲醯基甘胺酸(fGly)且隨後經由皮克特-施彭格勒反應與azaHIPs部分結合，該azaHIPs部分經由連接子(L-2)與MMAE結合。
在一些實施例中，5T4-ADC包括經由嗒𠯤-吡咯并偶合部分與5T4抗體結合的連接子-藥物，其中該連接子-藥物包含經由連接子(L-7)與嗒𠯤-吡咯并偶合部分結合的MMAE，如以下流程E所示：
在一些實施例中，5T4抗體在重鏈的恆定區中具有識別模體，例如L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體(例如SEQ ID NO: 90、94、98中)。L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體之半胱胺酸殘基可轉化成甲醯基甘胺酸(fGly)且隨後經由皮克特-施彭格勒反應與azaHIPs部分結合，該azaHIPs部分經由連接子(L-7)與MMAE結合。
在一些實施例中，5T4-ADC包括經由嗒𠯤-吡咯并偶合部分與5T4抗體結合的連接子-藥物，其中該連接子-藥物包含經由連接子(L-8)與嗒𠯤-吡咯并偶合部分結合的MMAE，如以下流程F所示：
在一些實施例中，結合至5T4的抗體在重鏈的恆定區中具有識別模體，例如L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體(例如SEQ ID NO: 90、94、98中)。L(C/S)TPSR (SEQ ID NO:103)識別模體之半胱胺酸殘基可轉化成甲醯基甘胺酸(fGly)且隨後經由皮克特-施彭格勒反應與azaHIPs部分結合，該azaHIPs部分經由連接子(L-8)與MMAE結合。 調配物及組成物
5T4-ADC可包括於醫藥組成物中以便投與例如個體，用於治療疾病、病症或病狀。醫藥組成物可包含平均而言可展現約1至約2之藥物/抗體比率(「DAR」)的5T4-ADC。換言之，使各種抗體與一或兩種連接子-藥物結合物結合。測定DAR的方法已為熟習此項技術者所熟知且包括使用逆相層析或HPLC-MS進行的方法。
舉例而言，在任何實施例中，包含5T4-ADC的醫藥組成物可展現約1至約1.9、或約1至約1.8、約1至約1.7、約1.5至約1.9、約1.5至約1.8、約1.5至約1.7、約1.7至約1.9、約1.7至約1.8、或約1.8至約1.9的DAR。在一些實施例中，醫藥組成物包含5T4-ADC，該5T4-ADC包含如本文所述之結合至5T4的抗體，包括如本文(諸如表1至3中之任一者)所述的mAbA4、mAbA15及mAbA17；及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含式(IV)、(V)或(VI)之5T4-ADC，且L係選自連接子(L-1)、(L-2)、(L-3)、(L-4)、(L-5)、(L-6)、(L-7)及(L-8)。在一些實施例中，醫藥組成物包含含有MMAE、MMAF、美登素或其任何衍生物的5T4-ADC。在一些實施例中，醫藥組成物包含式(VI-1)、(VIa-1)或(VIb-1)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含式(VI-2)、(VIa-2)或(VIb-2)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含式(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)或(VIb-8)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含式(VI-11)、(VI-12)、(VIa-11)或(VIb-12)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含式(VI-21)或(VIa-21)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含式(VI-52)、(VI-62)、(VI-81)、(VIb-81)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含mAbA4-VIa-21 (亦即，與抗體mAbA4結合的式VIa-21之連接子-藥物)、mAbA15-VIa-21 (亦即，與抗體mAbA15結合的式VIa-21之連接子-藥物)、mAbA15-VIb-82 (亦即，與抗體mAbA15結合的式VIb-82之連接子-藥物)或mAbA17-VIb-82 (亦即，與抗體mAbA17結合的式VIb-82之連接子-藥物)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。
5T4-ADC可以多種不同方法中之任一者調配。本發明之5T4-ADC可以任何適合形式提供，例如以醫藥學上可接受之鹽形式提供，且可根據任何適合的投藥途徑調配，例如經口、外用或非經腸投與。在5T4-ADC以可注射液形式提供的情況下(諸如在其可靜脈內或直接投與組織的彼等實施例中)，5T4-ADC可以即用劑型或以由醫藥學上可接受之賦形劑及賦形劑構成的儲存穩定性復原用散劑或液體提供。
用於調配5T4-ADC的方法可利用此項技術中可利用的彼等方法調適。舉例而言，5T4-ADC可以包含有效量之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑(例如生理鹽水)的醫藥組成物提供。醫藥組成物可視情況包括其他添加劑(例如緩衝劑、穩定劑、防腐劑及其類似物)。在一些實施例中，調配物適合投與哺乳動物，諸如適合投與人類的彼等調配物。
本文亦提供含有有效量之本文所述5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組成物。在一些實施例中，5T4-ADC包含如本文所述之結合至5T4的抗體，包括mAbA4、mAbA15及mAbA17，如表1至3中之任一者所述。在一些實施例中，醫藥組成物包含有效量的式(IV)、(V)或(VI)之5T4-ADC，且L係選自連接子(L-1)、(L-2)、(L-3)、(L-4)、(L-5)、(L-6)、(L-7)或(L-8)。在一些實施例中，醫藥組成物包含有效量的5T4-ADC，該5T4-ADC包含MMAE、MMAF、美登素或其任何衍生物。在一些實施例中，醫藥組成物包含有效量的式(VI-1)、(VIa-1)或(VIb-1)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含有效量的式(VI-2)、(VIa-2)或(VIb-2)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含有效量的式(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)或(VIb-8)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含有效量的式(VI-11)、(VI-12)、(VIa-11)或(VIb-12)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含有效量的式(VI-21)或(VIa-21)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含有效量的式(VI-52)、(VI-62)、(VI-81)、(VIb-81)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物包含有效量的mAbA4-VIa-21、mAbA15-VIa-21、mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。
醫藥學上可接受之賦形劑可為適合投與人類或獸醫學個體的一或多種相容固體或液體填充劑、稀釋劑、其他賦形劑或囊封物質(例如生理學上可接受的及/或藥理學上可接受的)。當醫藥組成物中存在超過一種醫藥學上可接受之賦形劑時，可將醫藥學上可接受之賦形劑與一或多種活性組分(例如雜合體分子)以避免大幅度降低所需醫藥功效的方式彼此間共混。醫藥學上可接受之材料通常能夠投與個體，而不產生顯著的非所需生理學作用，諸如噁心、眩暈、皮疹或胃不適。舉例而言，包含醫藥學上可接受之賦形劑的組成物當投與人類個體用於治療目的時，需要無免疫原性。
本發明之醫藥組成物可另外含有適合緩衝劑，包括例如呈鹽形式之乙酸、呈鹽形式之檸檬酸、呈鹽形式之硼酸及呈鹽形式之磷酸。醫藥組成物亦可視情況含有適合防腐劑，諸如苯紮氯銨、氯丁醇、對羥苯甲酸酯及硫柳汞。本發明之醫藥組成物可以單位劑型呈遞且可藉由任何適合方法製備，其中多種方法在製藥技術中已熟知。此類方法包括使本發明之抗體或抗原結合片段與構成一或多種附屬成分之賦形劑合併的步驟。一般而言，藉由使活性劑與液體賦形劑、細粉狀固體賦形劑或兩者均勻且緊密地合併且接著必要時使產物成形來製備醫藥組成物。
適合於非經腸投與的組成物宜包含組成物的無菌水性製劑，其較佳對接受者之血液具有等張性。此水性製劑可使用適合的分散劑或濕潤劑及懸浮劑、由已知方法調配。無菌可注射製劑亦可為存在於非經腸可接受之無毒稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如1,3-丁二醇中之溶液。在可接受之媒劑及溶劑中，可使用水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等張氯化鈉溶液。另外，習知使用無菌不揮發油作為溶劑或懸浮介質。出於此目的，可使用任何溫和的不揮發油，諸如合成的單甘油酯或二甘油酯。另外，可使用脂肪酸(諸如油酸)製備可注射劑。適合於經口、皮下、靜脈內、肌肉內投與及其類似投與的賦形劑調配物可見於Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA。
本發明之醫藥組成物的製備及其各種投藥途徑可根據此項技術中熟知之方法進行。適用於本發明之上下文中的遞送系統包括定時釋放型、延遲釋放型及持續釋放型遞送系統，使得組成物的遞送發生於所治療之部位敏感化之前及足以引起所治療之部位敏感化的時間後。組成物可結合其他治療劑或療法使用。此類系統可避免組成物重複投與，從而增加個體及醫師的便利性，且可特別適合於本發明之一些組成物。
許多類型之釋放遞送系統可以獲得且為一般技術者所知。適合的釋放遞送系統包括聚合物基質系統，諸如聚(丙交酯-乙交酯)、共聚草酸酯、聚己內酯、聚酯醯胺、聚原酸酯、聚羥丁酸及聚酸酐。含有藥物之前述聚合物的微膠囊描述於例如美國專利5,075,109中。遞送系統亦包括非聚合物系統，其為脂質，包括固醇，諸如膽固醇、膽固醇酯及脂肪酸；或中性脂肪，諸如單酸甘油酯、二酸甘油酯及三酸甘油酯；水凝膠釋放系統；矽橡膠系統；基於肽之系統；蠟包衣；使用習知黏合劑及賦形劑之壓縮錠劑；部分融合之植入物；及其類似物。特定實例包括但不限於：(a)侵蝕系統，其中活性組成物以基質內之形式包含在內，諸如美國專利4,452,775、4,667,014、4,748,034及5,239,660中所述之彼等系統，及(b)擴散系統，其中活性組分以可控速率自聚合物滲透，諸如美國專利3,832,253及3,854,480中所述。另外，可使用基於泵浦之硬體遞送系統，其中一些適於植入。
一般而言，5T4-ADC或醫藥組成物宜封裝於例如小瓶、袋囊、安瓿及/或適於治療方法的任何容器中。組分可以濃縮物形式(包括凍乾組成物)提供，其可在使用之前進一步稀釋，或其可在使用濃度下提供。活體內使用5T4-ADC時，可以具有所需量及濃度之組分的滅菌容器提供單次劑量。 治療方法
本文亦提供使用包含結合至5T4 (諸如人類5T4)之抗體及與該抗體直接或間接結合之藥物的5T4-ADC治療、預防或減輕5T4介導之疾病、病症或病狀(包括5T4介導之疾病、病症或病狀的一或多種症狀)的方法。本文亦提供使用包含結合至5T4 (諸如人類5T4)之抗體及與該抗體直接或間接結合之藥物的5T4-ADC殺滅腫瘤細胞的方法。
結合至5T4的抗體可包括如本文所述的任何抗體，諸如mAbA4、mAbA15及mAbA17，如表1至3中之任一者所述。在一些實施例中，殺滅腫瘤細胞的方法包含使腫瘤細胞與式(IV)、(V)或(VI)之5T4-ADC接觸，其中L為連接子(L-1)、(L-2)、(L-3)、(L-4)、(L-5)、(L-6)、(L-7)或(L-8)。在一些實施例中，殺滅腫瘤細胞的方法包含使腫瘤細胞與包含MMAE、MMAF、美登素或其任何衍生物的5T4-ADC接觸。在一些實施例中，殺滅腫瘤細胞的方法包含使腫瘤細胞與式(VI-1)、(VIa-1)或(VIb-1)之5T4-ADC接觸。在一些實施例中，殺滅腫瘤細胞的方法包含使腫瘤細胞與式(VI-2)、(VIa-2)或(VIb-2)之5T4-ADC接觸。在一些實施例中，殺滅腫瘤細胞的方法包含使腫瘤細胞與式(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)或(VIb-8)之5T4-ADC接觸。在一些實施例中，殺滅腫瘤細胞的方法包含使腫瘤細胞與式(VI-11)、(VI-12)、(VIa-11)或(VIb-12)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑接觸。在一些實施例中，殺滅腫瘤細胞的方法包含使腫瘤細胞與式(VI-21)或(VIa-21)之5T4-ADC接觸。在一些實施例中，殺滅腫瘤細胞的方法包含使腫瘤細胞與式(VI-52)、(VI-62)、(VI-81)、(VIb-81)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)之5T4-ADC接觸。在一些實施例中，殺滅腫瘤細胞的方法包含使腫瘤細胞與mAbA4-VIa-21、mAbA15-VIa-21、mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC接觸。在一些實施例中，接觸為活體內或活體外的。
在任何實施例中，腫瘤細胞與5T4-ADC接觸的方法可包含使腫瘤細胞與包含5T4-ADC及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑的組成物接觸。在一些實施例中，組成物中的5T4-ADC可以約1至約10、約1至約4、約1至約2、約1.5至約2、或約1.75至約1.9的DAR為特徵。
本文亦提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，包含向該個體投與有效量的5T4-ADC，其中該5T4-ADC包含結合至5T4的抗體及經由連接子與其結合的藥物，如本文所述。在一些實施例中，結合至5T4的抗體為mAbA4、mAbA15或mAbA17，如本文所述，諸如表1至3中之任一者所述。
在一些實施例中，治療有需要之個體之癌症的方法包含向該個體投與有效量的式(IV)、(V)或(VI)之5T4-ADC，其中L為(L-1)、(L-2)、(L-3)、(L-4)、(L-5)、(L-6)、(L-7)或(L-8)。在一些實施例中，治療有需要之個體之癌症的方法包含向該個體投與有效量的如本文所述之5T4-ADC，其包含MMAE、MMAF、美登素或其任何衍生物。在一些實施例中，治療有需要之個體之癌症的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-1)、(VIa-1)或(VIb-1)之5T4-ADC。在一些實施例中，治療有需要之個體之癌症的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-2)、(VIa-2)或(VIb-2)之5T4-ADC。在一些實施例中，治療有需要之個體之癌症的方法包含向該個體投與有效量的式(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)或(VIb-8)之5T4-ADC。在一些實施例中，治療有需要之個體之癌症的方法包含向該個體投與有效量的(VI-11)、(VI-12)、(VIa-11)或(VIb-12)之5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，治療有需要之個體之癌症的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-21)或(VIa-21)之5T4-ADC。在一些實施例中，治療有需要之個體之癌症的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-52)、(VI-62)、(VI-81)、(VIb-81)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)之5T4-ADC。在一些實施例中，治療有需要之個體之癌症的方法包含向該個體投與有效量的mAbA4-VIa-21、mAbA15-VIa-21、mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC。
在任何實施例中，治療個體之有需要之癌症的方法可包含向該個體投與醫藥組成物，該醫藥組成物包含5T4-ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，醫藥組成物中的5T4-ADC可以約1至約10、約1至約4、約1至約2、約1.5至約2、或約1.75至約1.9的DAR為特徵。
在一些實施例中，治療個體之有需要之癌症的方法有效地增強個體中之癌細胞(例如腫瘤細胞)的移除。
「增強」癌細胞或腫瘤細胞的移除不需要100%增強移除。在此考慮了移除速率的任何增強。類似地，「調節」腫瘤生長係指減小腫瘤尺寸、減緩腫瘤生長或抑制現有腫瘤尺寸的增大。不需要腫瘤完全消除；腫瘤尺寸的任何減小或減緩腫瘤生長構成個體的有益生物作用。就此而言，相較於該方法不存在下所觀測的移除水平(例如未暴露於該方法之藥劑的生物學匹配對照個體或試樣)，腫瘤細胞移除可增強例如至少約5%、至少約10%或至少約20%。該作用係根據以下來偵測：例如腫瘤尺寸的減小、腫瘤標記物含量的減少或維持，或腫瘤細胞群的減少或維持。在一些實施例中，相較於該方法之5T4結合劑(例如抗體)不存在下的腫瘤細胞移除，腫瘤細胞的移除增強例如至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%或更大(約100%)。
本發明亦提供一種調節(例如抑制、減少、預防)有需要之個體之腫瘤生長的方法，該方法包含向該個體投與有效調節該個體中之腫瘤生長之量的5T4-ADC，該5T4-ADC包含結合至5T4的抗體及經由連接子與該抗體連接的藥物，如本文所述。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含投與有效量的5T4-ADC，該5T4-ADC包含結合至5T4的抗體及經由連接子與該抗體結合的藥物，如本文所述。在一些實施例中，結合至5T4的抗體為mAbA4、mAbA15或mAbA17，如表1至3中之任一者所述。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含向該個體投與有效量的式(IV)、(V)或(VI)之5T4-ADC，其中L為(L-1)、(L-2)、(L-3)、(L-4)、(L-5)、(L-6)、(L-7)或(L-8)。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含向該個體投與有效量的包含MMAE、MMAF、美登素或其任何衍生物之5T4-ADC。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-1)、(VIa-1)或(VIb-1)之5T4-ADC。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-2)、(VIa-2)或(VIb-2)之5T4-ADC。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含向該個體投與有效量的式(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)或(VIb-8)之5T4-ADC。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-11)、(VI-12)、(VIa-11)或(VIb-12)之5T4-ADC。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-21)或(VIa-21)之5T4-ADC。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-52)、(VI-62)、(VI-81)、(VIb-81)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)之5T4-ADC。在一些實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法包含向該個體投與有效量的mAbA4-VIa-21、mAbA15-VIa-21、mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC。
在任何實施例中，調節有需要之個體之腫瘤生長的方法可包含向該個體投與包含5T4-ADC及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組成物。在一些實施例中，醫藥組成物中的5T4-ADC可以約1至約10、約1至約4、約1至約2、約1.5至約2、或約1.75至約1.9的DAR為特徵。
在一些實施例中，可藉由本文所述方法治療及/或殺滅的本文所述癌症及腫瘤細胞表現例如癌症或腫瘤細胞表面上的5T4。在一些實施例中，腫瘤或癌症細胞可過度表現5T4。如本文所用，術語「過度表現」意謂轉錄及轉譯的遺傳產物比正常(諸如正常細胞)的遺傳產物更多，其過程通常具有癌細胞的特徵。
可用本文所述之5T4-ADC治療的癌症實例包括但不限於：乳癌、大腸癌、腎癌、肺癌、鱗狀細胞骨髓性白血病、血管瘤、黑色素瘤、星形細胞瘤及神經膠母細胞瘤，以及其他細胞增殖性疾病狀態，包括但不限於心臟增生性疾病，諸如肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肉瘤)、黏液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤及畸胎瘤；肺增生性疾病，諸如支氣管癌(例如鱗狀細胞、未分化小細胞、未分化大細胞腺癌)、肺泡(例如細支氣管)癌瘤、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨瘤性錯構瘤、間皮瘤；胃腸道系統的增生性疾病，諸如食道(例如鱗狀細胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(例如癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰臟(例如胰腺管腺癌、胰島素瘤、升糖素瘤、胃泌素瘤、類癌腫瘤、血管活性腸肽瘤)、小腸(例如腺癌、淋巴瘤、類癌腫瘤、卡波西氏肉瘤(Karposi's sarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經纖維瘤、纖維瘤)、大腸(例如腺癌、管腺瘤、絨毛腺瘤、錯構瘤、平滑肌瘤)；生殖泌尿道的增生性疾病，諸如腎(例如腺癌、威姆氏腫瘤(例如腎母細胞瘤)、淋巴瘤、白血病、腎細胞癌)、膀胱及尿道(例如鱗狀細胞癌、移行細胞癌、腺癌)、前列腺(例如腺癌、肉瘤、前列腺小細胞癌瘤)、睪丸(例如精原細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎上皮癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質細胞癌瘤、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣腫瘤、脂肪瘤)；肝臟的增生性疾病：肝腫瘤(例如肝細胞癌)、膽管癌、肝母細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞腺瘤、血管瘤；骨骼的增生性疾病，諸如骨原性肉瘤(例如骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、惡性淋巴瘤(例如網狀細胞肉瘤)、惡性巨細胞瘤脊索瘤、骨軟骨瘤(例如骨軟骨外生骨疣)、良性軟骨瘤、軟骨母細胞瘤、軟骨黏液性纖維瘤、骨樣骨瘤及巨細胞腫瘤；神經系統的增生性疾病，諸如顱骨(例如骨瘤、血管瘤、肉芽腫、黃瘤、變形性骨炎)、腦膜(例如腦脊髓膜瘤、腦膜肉瘤、神經膠質瘤病)、腦(例如星形細胞瘤、神經管胚細胞瘤、神經膠質瘤、室管膜瘤、胚細胞瘤(例如松果體瘤)、多形性神經膠母細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤、許旺氏細胞瘤(schwannoma)、視網膜母細胞瘤、先天性腫瘤)、脊髓神經纖維瘤、腦脊髓膜瘤、神經膠質瘤、肉瘤)；婦科系統的增生性疾病，諸如子宮(例如子宮內膜癌)、子宮頸(例如子宮頸癌、腫瘤前子宮頸發育不良)、卵巢(例如卵巢癌瘤)漿液性囊腺癌、黏液性囊腺癌、未分類的癌瘤、濾泡膜細胞瘤、塞特利-萊迪希氏細胞腫瘤(Sertoli-Leydig cell tumors)、無性細胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(例如鱗狀細胞癌、上皮內癌瘤、腺癌、纖維肉瘤、黑色素瘤)、陰道(例如透明細胞癌瘤、鱗狀細胞癌、葡萄樣肉瘤(胚胎性橫紋肌肉瘤)、輸卵管(例如癌瘤)；血液(例如骨髓性白血病(急性及慢性)、急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴球性白血病、骨髓增生性疾病、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群)、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(例如惡性淋巴瘤)；皮膚的增生性疾病，諸如惡性黑色素瘤、基底細胞癌、鱗狀細胞癌、卡波西氏肉瘤、痣發育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、牛皮癬；腎上腺的增生性疾病，諸如神經母細胞瘤；及甲狀腺的增生性疾病，包括髓質甲狀腺癌。在一些實施例中，腫瘤或癌症為復發腫瘤或癌症。在一些實施例中，腫瘤或癌症為轉移性腫瘤或癌症。在一些實施例中，腫瘤或癌症為原發腫瘤或癌症。另外或可替代地，腫瘤或癌症對化學療法或其他非5T4目標抗癌療法具有抗性。
另外，包含結合至5T4之抗體的5T4-ADC可用於緩解或減少與癌症相關的副作用，諸如骨骼退化、椎骨塌縮及麻痺。在一個實施例中，個體罹患骨骼轉移或處於罹患骨骼轉移的風險中且包含結合至5T4之抗體的5T4-ADC係以減少周圍骨骼退化的量投與。因此，在一些實施例中，包含結合至5T4之抗體的5T4-ADC預防因骨骼轉移所致的骨骼退化，其中減少或不減少腫瘤細胞增殖。在一些實施例中，5T4結合劑(例如抗體或ADC)(包含結合至5T4之抗體的5T4-ADC)預防因骨骼轉移所致的骨骼退化且減少腫瘤細胞增殖。一般而言，對腫瘤細胞增殖的影響(例如抑制增殖或對增殖無影響)依賴於特定轉移的微環境。舉例而言，可抑制位於具有實質量之1型膠原蛋白之微環境中的轉移增殖。相比之下，位於缺乏實質量之1型膠原蛋白之微環境中的轉移增殖無法抑制，但轉移附近的骨骼退化減少或被阻止。
因此，本發明亦提供一種減輕或減少與癌症相關之副作用的方法，包含向有需要之個體投與有效量的5T4-ADC。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含投與有效量的5T4-ADC，該5T4-ADC包含結合至5T4的抗體及經由連接子與該抗體結合的藥物，如本文所述。在一些實施例中，結合至5T4的抗體為mAbA4、mAbA15或mAbA17，如表1至3中之任一者所述。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含向該個體投與有效量的式(IV)、(V)或(VI)之5T4-ADC，其中L為(L-1)、(L-2)、(L-3)、(L-4)、(L-5)、(L-6)、(L-7)或(L-8)。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含向該個體投與有效量的包含MMAE、MMAF、美登素或其任何衍生物之5T4-ADC。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-1)、(VIa-1)或(VIb-1)之5T4-ADC。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-2)、(VIa-2)或(VIb-2)之5T4-ADC。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含向該個體投與有效量的式(V-3)、(VI-3)、(V-4)、(VI-4)、(V-5)、(VI-5)、(V-6)、(VI-6)、(V-7)、(VI-7)、(V-8)、(VI-8)、(VIa-8)或(VIb-8)之5T4-ADC。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-11)、(VI-12)、(VIa-11)或(VIb-12)之5T4-ADC。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-21)及(VIa-21)之5T4-ADC。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含向該個體投與有效量的式(VI-52)、(VI-62)、(VI-81)、(VIb-81)、(VIb-52)、(VIb-62)、(VIb-72)或(VIb-82)之5T4-ADC。在一些實施例中，減輕或減少與癌症相關之副作用的方法包含向該個體投與有效量的mAbA4-VIa-21、mAbA15-VIa-21、mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC。
在任何實施例中，減輕或減少有需要之個體之與癌症相關之副作用的方法可包含向該個體投與包含如本文所揭示之5T4-ADC及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組成物。在一些實施例中，醫藥組成物中的5T4-ADC可以約1至約10、約1至約4、約1至約2、約1.5至約2、或約1.75至約1.9的DAR為特徵。
應瞭解，在本文所述之標的物的定義內亦提供基本上不影響本文所述之各種實施例之活性的修飾。相應地，以下實例意欲說明而非限制本發明。 實例 實例 1. 抗體產生
為了獲得針對人類5T4的結合劑，藉由噬菌體呈現來執行抗體發現。
為了獲得針對人類5T4的結合劑，藉由對人類Fab文庫進行噬菌體呈現來執行抗體發現且使用標準方案執行。自Acro Biosystems (經生物素標記之人類5T4 His-AVITAG™ Acro目錄號TPG-H83Eb)購得或產生人類5T4的胞外域。所產生的抗原由人類5T4、食蟹獼猴5T4及小鼠5T4組成，其皆選殖入含有C端6-his-Avi標籤的載體中且在可能的情況下，使用共表現的生物素連接酶、使用標準程序、在活體外進行生物素標記。
篩選出能夠結合至經生物素標記之人類5T4的噬菌體殖株。簡言之，使用能夠在噬菌體(亦稱為噬菌質體)中複製及表現的表現載體構築Fab格式化噬菌體文庫。重鏈與輕鏈均在同一表現載體中編碼，其中重鏈與噬菌體鞘蛋白pIII之截斷變異體融合。輕鏈及重鏈-pIII融合物係以各別多肽形式表現且組裝於細菌胞外質中，其中氧化還原電位能夠使二硫鍵形成，從而形成候選抗體的抗原結合域(Fab)。
使用來源於特定人類重鏈可變域及特定人類輕鏈可變域的序列建立文庫。在所篩選文庫內產生具有多樣性的輕鏈可變域，引入VL CDR3 (L3)中，且其中輕鏈VL CDR1 (L1)及CDR2 (L2)保留人類生殖系序列。在所篩選的文庫中，VH區的所有三個CDR係根據人類抗體譜系中發現的CDR長度多樣化，以與位置胺基酸頻率匹配。
文庫中所使用的噬菌體呈現重鏈(SEQ ID NO:72)及輕鏈(SEQ ID NO:73)支架列舉如下，其中「x」表示為了建立文庫而改變的CDR胺基酸，且粗斜體表示恆定的CDR序列。
SEQ ID NO:72之序列為EVQLVESGGGLVQPGGSLRLS CAASGFTFSXXXXXWVRQAPGKGLEWVAXXXXXXXXXXXXXXXXXRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARXXXXXXXXXXXXXXWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC。
SEQ ID NO:73之序列為DIQMTQSPSSLSASVGDRVTI TC RASQSVSSAVA WYQQKPGKAPKLLIY SASSLYS GVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC XXXXXXXXXFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDSQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC。
使用簡併的DNA寡核苷酸引子、經由突變誘發來建立多樣性，以將多樣性引入VL CDR3 (L3)及VH CDR1 (H1)、CDR2 (H2)及CDR3 (H3)，從而模擬天然抗體譜系中所發現的多樣性，如Kunkel, TA ( PNAS1985年1月1日, 82 (2) 488-492)中更詳細所述，該文獻以全文引用之方式併入本文中。簡言之，利用標準程序、自經分離的噬菌體製備併有尿嘧啶的單股環狀DNA且執行Kunkel突變誘發以將多樣性引入四個CDR。接著經由電穿孔將化學合成的DNA引入TG1細胞，隨後回收。對回收的細胞進行繼代培養且用M13K07輔助噬菌體感染以產生噬菌體文庫。
利用標準程序執行噬菌體淘選。簡言之，在PBST-2% BSA中，以1 mL的體積、利用所製備的文庫、對固著於鏈黴抗生物素蛋白磁性珠粒上的目標執行第一輪噬菌體淘選，該等磁性珠粒上存在大約1x10 12個噬菌體。培育一小時之後，使用磁性台架自上清液中分離出珠粒所結合的噬菌體。洗滌珠粒三次以移除非特異性結合的噬菌體且接著以大約0.6的OD 600添加至ER2738細胞(5 mL)中。在室溫下培育20分鐘之後，使感染細胞在25 mL 2xYT + 胺苄青黴素(Ampicillin)及M13K07輔助噬菌體(最終濃度為大約1x10 10pfu/mL)中繼代培養且允許在37℃下、在劇烈搖振下生長隔夜。次日，利用標準程序，藉由PEG沈澱來製備噬菌體。淘選之前，預清除對SAV塗覆之珠粒具有特異性的噬菌體。使用KingFisher磁珠處置器，使用50或100 nM經珠粒固著的5T4抗原，利用標準程序執行第二輪淘選(第3輪使用100 nM 5T4，第4輪使用50 nM 5T4)。總之，執行3至4輪噬菌體淘選，以富集呈現對5T4抗原具有特異性之Fab的噬菌體。使用多株ELISA證實5T4特異性富集，且分離出個別殖株且藉由執行單株噬菌體ELISA來進一步驗證。使用DNA定序來測定含有候選抗體之經分離Fab殖株的CDR序列。
將編碼候選抗體之重鏈及輕鏈可變域的基因分別選殖入哺乳動物表現載體中以便作為全長IgG表現於哺乳動物細胞中。
對於全長IgG而言，重鏈恆定區(例如CH1=常規文字；鉸鏈=斜體文字；CH2=粗體文字；及CH3=加下劃線文字)包括以下胺基酸序列： ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:74)。
對於全長IgG而言，輕鏈恆定區(例如CL)包括以下胺基酸序列： RTVAAPSVFIFPPSDSQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:75)。
使用蛋白質A樹脂自培養上清液中純化IgG抗體。 實例 2 . 篩選分析
利用二價結合分析來提供實例1中藉由噬菌體呈現而獲得之具有VH/VL的抗體是否結合來自臨床上相關之所有三種物種的固著5T4的資料：人類、食蟹獼猴(獼猴)及小鼠。對於二價結合及交叉反應性分析而言，使用來自蛋白質資料庫的序列合成人類、獼猴及小鼠5T4抗原且作為生物素標記之蛋白質表現，該等蛋白質使用his-avi標籤且活體內使用共表現之BirA酶進行生物素標記。
使用基於Octet之標準分析定性地測定各種抗體是否結合至各種抗原。對此等分析而言，使200 nM生物素標記抗原在1X動力學緩衝液(ForteBio)中固著於鏈黴抗生物素蛋白生物感測器上。接著將所負載的感測器浸漬於含有500 nM之所關注抗體的孔中且監測締合結合信號。締合步驟期間的信號增加高於陰性對照則被視為結合至抗原。
根據使用Octet定性測定的結合親和力，測試的所有二十七種抗體皆顯示結合至人類5T4，其中十三種抗體亦顯示結合至獼猴5T4，且其中十三種抗體亦顯示結合至小鼠5T4。例示性抗體的資料顯示於下表4中。 表 4. 藉由 Octet 定性測定的二價結合親和力
抗體 人類5T4 Octet ( 二價) 獼猴5T4 Octet ( 二價) 小鼠5T4 Octet ( 二價)
mAbA5 + + -
mAbA15 + + +
mAbA17 + + +
利用單價結合分析來測定實例1中藉由噬菌體呈現而獲得之各種5T4結合劑對人類5T4的相對親和力。人類5T4係購自Acro Biosystems (Acro目錄號TPGH52E)且亦分別產生。使用Octet (Pall ForteBio)儀器監測結合劑與人類5T4的單價相互作用。對於此等分析而言，使36 nM抗體在1X動力學緩衝液(ForteBio)中固著於抗人類Fc (AHC)感測器上。接著將感測器浸漬於含有人類5T4之3倍連續稀釋液(在1 µM至1.37 nM範圍內)的孔中。允許締合達到平衡。接著將感測器移至僅含有1X動力學緩衝液的孔中且允許解離至平衡。量測締合及解離速率且根據此等速率、使用內建分析軟體(ForteBio)計算單價K D。
在測試的所有二十七種抗體中，大部分抗體在內部的單價結合親和力分析(批號20-019-62)中顯示弱結合。在所有三個批次中，mAbA4、mAbA15及mAbA17為展現強或中度結合的彼等抗體。資料顯示於下表5中。 表 5. 藉由 Octet 定性測定的單價結合親和力
抗體 單價結合親和力 - Acro TPGH52E5 ( 批號B465-87AF1-K2) 單價結合親和力 - 內部( 批號20-019-62) 單價結合親和力 - Acro TPGH52E5 ( 批號B465-87AF1-JP)
Octet Octet Octet
K D[nM] K D[nM] K D[nM]
mAbA4 0.01 83 30.2
mAbA15 3.62 10.4 11.2
mAbA17 2.81 9.34 21.1
實例 3 ：其他篩選及選擇
評估針對5T4的結合而選出之抗體，例如實例2中所述的抗體，對於表現5T4之細胞的結合。分析當天，收集70-90%滿度(confluence)的細胞。在+4℃，在v形底96孔盤(Costar 3897)中，將每孔100,000個細胞與每孔50 μL 8點或12點抗體稀釋系列一起培育30分鐘。培育之後，藉由200 x g離心5分鐘，用PBS洗滌細胞一次。接著在+4℃下，將細胞與每孔50 µL Alexa Fluor 488山羊抗人類IgG Fab (Jackson Immuno Research 109-547-003)一起以1:100稀釋度培育30分鐘。藉由200 x g離心5分鐘，用PBS洗滌細胞兩次且在iQue Screener Plus (Sartorius)上獲取細胞。將BL1 (Alexa-Fluor-488)通道的平均螢光強度相對於抗體濃度作圖，以產生劑量反應曲線及EC50值。
在測試的二十七種抗體中，二十六種抗體對HEK-5T4細胞顯示結合親和力，十六種抗體對MCF-7細胞顯示結合親和力，且二十六種抗體對HEK-cyno-5T4細胞顯示結合親和力。
進一步在使用HEK-5T4及MCF-7細胞的內化分析中評價抗體，該等抗體係根據對所有三種HEK-5T4、MCF-7及HEK-cyno-5T4細胞株的結合而選出(包括mAbA4、mAbA15及mAbA17)。
收集70-90%滿度的黏附細胞且接種在96孔黑色、透明/平底半區域盤(Corning 3882)中以每孔20,000個細胞於50 μL培養基中在37℃過夜。對於懸浮細胞株而言，在37℃用聚-L-鳥胺酸溶液(Millipore-Sigma)塗覆96孔盤1小時且在分析之前的約1至2小時，將細胞以每孔40,000個細胞的密度接種在50 μL培養基中。抗體在細胞培養基中稀釋，與3X莫耳濃度的Incucyte人類FabFluor-pH紅色抗體標記試劑混合且在室溫下培育15分鐘。製備抗體/FabFluor混合物之2X最終濃度的所有稀釋液。接著將50 μL的2X抗體/Fab-Fluor混合物雙重複直接添加至預接種有細胞的每個孔中，且快速地將培養盤轉移至Incucyte中。接著在長達24小時期間每30分鐘掃描培養盤。注意在抗體/FabFluor混合物添加至細胞的2至3分鐘內開始首次掃描(0小時)。藉由讀取隨時間產生的紅色信號(相對於該孔中的細胞匯合%標準化)來分析培養盤。少數抗體係在不同濃度下針對目標細胞株測試，且基於良好的信號:雜訊比來選擇最佳濃度。
在內化分析中，六種抗體(包括mAbA4及mAbA15)在HEK-5T4細胞中顯示強內化，一種抗體在HEK-5T4細胞中顯示中度內化，且七種抗體在HEK-5T4細胞中未顯示內化或顯示非特異性內化。在其他分析中，兩種抗體在MCF-7細胞中顯示強內化，四種抗體在HEK-5T4細胞中顯示中度內化，且八種抗體在MCF-7細胞中未顯示內化或顯示非特異性內化。 實例 4 ：可開發性分析
藉由評估可開發性的各種方法來測試抗體，該等抗體係根據對5T4的結合而選出，諸如實例2及3中所述的彼等抗體。舉例而言，利用各種層析方法(包括尺寸排阻層析(SEC)、疏水性相互作用層析(HIC)及立式單層吸附層析(SMAC))評估各因素，諸如單體百分比、溶解性及抗體聚集或沈澱。
在Agilent 1100 HPLC上，使用配有6 mm x 4 cm保護管柱(PN 08543)的7.8 mm ID x 30 cm TSKgel G3000SWXL管柱(Tosoh Bioscience LLC, PN 08541)執行尺寸排阻層析(SEC)分析。將抗體在杜爾貝科氏PBS (Dulbecco's PBS)(pH 7.4，無Ca 2+/Mg 2+)中相對於1 mg/mL濃度標準化且經由離心澄清，得到集結粒，同時仍保留可溶聚集體。移動相緩衝液為2X濃度(自10X儲備液濃度稀釋)的杜爾貝科氏PBS (pH 7.4，無Ca 2+/Mg 2+)。各樣品負載10 µL且在環境溫度下以每分鐘1.0 mL等度溶離20分鐘。監測280 nm吸光度。對層析峰求積分以測定均一性百分比及滯留時間。除分子分級之外，管柱固定相以及移動相的選擇亦支持疏水性及靜電相互作用(二級相互作用比SMAC輕得多)。使用Agilent ChemStation B.04.03 SP1執行資料分析。
結果顯示，基於SEC分析，mAbA4、mAbA15及mAbA17 (在測試的其他抗體中)具有強可開發性。
在Agilent 1100 HPLC上，使用4.6 mm ID x 3.5 cm TSKgel丁基-NPR管柱(Tosoh Bioscience LLC, PN 14947)執行疏水性相互作用層析(HIC)分析。抗體在杜爾貝科氏PBS (pH 7.4，無Ca 2+/Mg 2+)中相對於1 mg/mL濃度標準化。管柱在環境溫度下用每分鐘1 mL流量的100%移動相緩衝液A (2 M硫酸銨/20 mM磷酸鈉，pH 7.0)平衡。各樣品負載10 µL且使用100%移動相緩衝液A至100%移動相緩衝液B (20 mM磷酸鈉，pH 7.0)的梯度、以每分鐘1.0 mL溶離15分鐘，在100% B保持3分鐘以洗滌管柱，且歷時2分鐘恢復100% A達成平衡。監測280 nm吸光度。計算樣品滯留時間且與一組標準對照進行比較以鑑別出滯留時間延長(疏水性增加)且存在多個物種的抗體。使用Agilent ChemStation B.04.03 SP1執行資料分析。
疏水性相互作用層析(HIC)分析結果顯示，某些抗體具有強可開發性，而其他抗體具有中度可開發性。基於HIC分析，mAbA4、mAbA15及mAbA17為具有強可開發性的彼等物。抗體疏水性可影響抗體聚集、溶解性及黏度。結果表明此等抗體的聚集及沈澱傾向低。
在Agilent 1100 HPLC上，使用配有4.6 mm x 50 mm保護管柱(PN 213300P-4605)的4.6 mm ID x 300 mm Zenix SEC 300管柱(Sepax Technologies, PN 213300P-4630)執行立式單層吸附層析(SMAC)分析。將抗體在杜爾貝科氏PBS (Dulbecco's PBS)(pH 7.4，無Ca 2+/Mg 2+)中相對於1 mg/mL濃度標準化且經由離心澄清，得到集結粒，同時仍保留可溶聚集體。移動相緩衝液為2X濃度(自10X儲備液濃度稀釋)的杜爾貝科氏PBS (pH 7.4，無Ca 2+/Mg 2+)。各樣品負載10 µL且在環境溫度下以每分鐘0.4 mL等度溶離32分鐘。監測280 nm吸光度。計算樣品滯留時間且與一組標準對照進行比較，以鑑別出滯留時間延長(形成聚集體的傾向增加及/或疏水性/靜電相互作用增加)的抗體，原因在於管柱固定相以及移動相選擇促進除分子分級之外的二級相互作用。使用Agilent ChemStation B.04.03 SP1執行資料分析。
立式單層吸附層析(SMAC)分析結果顯示，某些抗體具有強可開發性，而其他抗體具有中度可開發性。基於SMAC分析，mAbA4、mAbA15及mAbA17為具有強可開發性的彼等物。測定係基於良好的滯留時間，其表示膠體穩定性及低聚集傾向。 實例 5 ：抗原決定基分組分析
利用抗原決定基分組分析測定實例1中藉由噬菌體呈現而獲得之各種抗體結合至5T4的哪個抗原決定基。
為了維持5T4蛋白的整體結構，同時仍能夠測定抗原決定基結合，藉由選殖人類5T4之七種鄰接序列(抗原決定基1至7)中之每一者以置換相應小鼠序列中之每一者來產生小鼠-人類嵌合體。為了產生嵌合體，藉由GenScript合成人類及小鼠全長5T4基因且選殖入帶有6-His-Avi標籤的哺乳動物載體中。接著自人類基因中移除如本文所述之七種序列(抗原決定基1至7)中的每一者且使用適當引子分別選殖入小鼠基因中。人類5T4 (H1)之抗原決定基1對應於SSPTSSASSFSSSAPFLASAVSAQPPL PDQCPALCECSEAART (SEQ ID NO:76)；人類5T4 (H2)之抗原決定基2對應於VKCVNRNLTEVPTDLPAYVRNLFLTGNQLAVLPAGAFARRPPL AELAALNLSGSRLDEVR (SEQ ID NO:77)；人類5T4 (H3)之抗原決定基3對應於AGAFEHLPSLRQLDLSHNPLADLSPFAFSG (SEQ ID NO:78)；人類5T4 (H4)之抗原決定基4對應於SNASVSAPSPLVELILNHIVPPED ERQNRSFEGMVVAALLAGRALQGLRRLE (SEQ ID NO:79)；人類5T4 (H5)之抗原決定基5對應於LASNHFLYLPRDVLAQLPSLRHLDLSNNSL VSLTYVSFRNLTHLESL (SEQ ID NO:80)；人類5T4 (H6)之抗原決定基6對應於HLEDNALKVLHNGTLAELQGLPHIRVFL (SEQ ID NO:81)；且人類5T4 (H7)之抗原決定基7對應於DNNPWVCDCHMADMVTWLKET EVVQGKDRLTCAYPEKMRNRVLLELNSADLDCDPILPPSLQTS (SEQ ID NO:82)。使用Expi293蛋白質表現系統(Thermo Fisher)短暫表現抗原且在活體外使用共表現的BirA生物素連接酶進行生物素標記且利用Ni-NTA親和層析進行純化。如表6中所示，所產生之人類(H)及小鼠(M)序列的七種嵌合構築體為：(1) H1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 (SEQ ID NO:83)；(2) M1 H2 M3 M4 M5 M6 M7 (SEQ ID NO:84)；(3) M1 M2 H3 M4 M5 M6 M7 (SEQ ID NO:85)；(4) M1 M2 M3 H4 M5 M6 M7 (SEQ ID NO:86)；(5) M1 M2 M3 M4 H5 M6 M7 (SEQ ID NO:87)；(6) M1 M2 M3 M4 M5 H6 M7 (SEQ ID NO:88)；及(7) M1 M2 M3 M4 M5 M6 H7 (SEQ ID NO:89)。接著測試各種抗體對嵌合構築體及全長人類蛋白中之每一者的結合。對嵌合體的任何顯著結合信號指示抗體特異性結合的區域。 表 6. 5T4 嵌合構築體
人類5T4抗原決定基1 H1M2 M3 M4 M5 M6 M7 (SEQ ID NO:83)   SSPTSSASS FSSSAPFLAS AVSAQPPLPD QCPALCECSE AARTVKCVNR NLLEVPADLP PYVRNLFLTG NQMTVLPAGA FARQPPLADL EALNLSGNHL KEVCAGAFEH LPGLRRLDLS HNPLTNLSAF AFAGSNASVS APSPLEELIL NHIVPPEDQR QNGSFEGMVA FEGMVAAALR SGLALRGLTR LELASNHFLF LPRDLLAQLP SLRYLDLRNN SLVSLTYASF RNLTHLESLH LEDNALKVLH NSTLAEWHGL AHVKVFLDNN PWVCDCYMAD MVAWLKETEV VPDKARLTCA FPEKMRNRGL LDLNSSDLDC DAVLPQSLQT S
人類5T4抗原決定基2 M1 H2M3 M4 M5 M6 M7 (SEQ ID NO:84)  SAPSSSVPS SSTSPAAFLA SGSAQPPPAE RCPAACECSE AART VKCVNR NLTEVPTDLP AYVRNLFLTG NQLAVLPAGA FARRPPLAEL AALNLSGSRL DEVRAGAFEH LPGLRRLDLS HNPLTNLSAF AFAGSNASVS APSPLEELIL NHIVPPEDQR QNGSFEGMVA FEGMVAAALR SGLALRGLTR LELASNHFLF LPRDLLAQLP SLRYLDLRNN SLVSLTYASF RNLTHLESLH LEDNALKVLH NSTLAEWHGL AHVKVFLDNN PWVCDCYMAD MVAWLKETEV VPDKARLTCA FPEKMRNRGL LDLNSSDLDC DAVLPQSLQT S
人類5T4抗原決定基3 M1 M2 H3M4 M5 M6 M7 (SEQ ID NO:85)  SAPSSSVPS SSTSPAAFLA SGSAQPPPAE RCPAACECSE AARTVKCVNR NLLEVPADLP PYVRNLFLTG NQMTVLPAGA FARQPPLADL EALNLSGNHL KEVC AGAFEH LPSLRQLDLS HNPLADLSPF AFSGSNASVS APSPLEELIL NHIVPPEDQR QNGSFEGMVA FEGMVAAALR SGLALRGLTR LELASNHFLF LPRDLLAQLP SLRYLDLRNN SLVSLTYASF RNLTHLESLH LEDNALKVLH NSTLAEWHGL AHVKVFLDNN PWVCDCYMAD MVAWLKETEV VPDKARLTCA FPEKMRNRGL LDLNSSDLDC DAVLPQSLQT S
人類5T4抗原決定基4 M1 M2 M3 H4M5 M6 M7 (SEQ ID NO:86)  SAPSSSVPS SSTSPAAFLA SGSAQPPPAE RCPAACECSE AARTVKCVNR NLLEVPADLP PYVRNLFLTG NQMTVLPAGA FARQPPLADL EALNLSGNHL KEVCAGAFEH LPGLRRLDLS HNPLTNLSAF AFAG SNASVS APSPLVELIL NHIVPPEDER QNRSFEGMVV AALLAGRALQ GLRRLELASN HFLFLPRDLL AQLPSLRYLD LRNNSLVSLT YASFRNLTHL ESLHLEDNAL KVLHNSTLAE WHGLAHVKVF LDNNPWVCDC YMADMVAWLK ETEVVPDKAR LTCAFPEKMR NRGLLDLNSS DLDCDAVLPQ SLQTS
人類5T4抗原決定基5 M1 M2 M3 M4 H5M6 M7 (SEQ ID NO:87)  SAPSSSVPS SSTSPAAFLA SGSAQPPPAE RCPAACECSE AARTVKCVNR NLLEVPADLP PYVRNLFLTG NQMTVLPAGA FARQPPLADL EALNLSGNHL KEVCAGAFEH LPGLRRLDLS HNPLTNLSAF AFAGSNASVS APSPLEELIL NHIVPPEDQR QNGSFEGMVA FEGMVAAALR SGLALRGLTR LE LASNHFLY LPRDVLAQLP SLRHLDLSNN SLVSLTYVSF RNLTHLESLH LEDNALKVLH NSTLAEWHGL AHVKVFLDNN PWVCDCYMAD MVAWLKETEV VPDKARLTCA FPEKMRNRGL LDLNSSDLDC DAVLPQSLQT S
人類5T4抗原決定基6 M1 M2 M3 M4 M5 H6M7 (SEQ ID NO:88)  SAPSSSVPS SSTSPAAFLA SGSAQPPPAE RCPAACECSE AARTVKCVNR NLLEVPADLP PYVRNLFLTG NQMTVLPAGA FARQPPLADL EALNLSGNHL KEVCAGAFEH LPGLRRLDLS HNPLTNLSAF AFAGSNASVS APSPLEELIL NHIVPPEDQR QNGSFEGMVA FEGMVAAALR SGLALRGLTR LELASNHFLF LPRDLLAQLP SLRYLDLRNN SLVSLTYASF RNLTHLESL H LEDNALKVLH NGTLAELQGL PHIRVFLDNN PWVCDCYMAD MVAWLKETEV VPDKARLTCA FPEKMRNRGL LDLNSSDLDC DAVLPQSLQT S
人類5T4抗原決定基7 M1 M2 M3 M4 M5 M6 H7(SEQ ID NO:89)  SAPSSSVPS SSTSPAAFLA SGSAQPPPAE RCPAACECSE AARTVKCVNR NLLEVPADLP PYVRNLFLTG NQMTVLPAGA FARQPPLADL EALNLSGNHL KEVCAGAFEH LPGLRRLDLS HNPLTNLSAF AFAGSNASVS APSPLEELIL NHIVPPEDQR QNGSFEGMVA FEGMVAAALR SGLALRGLTR LELASNHFLF LPRDLLAQLP SLRYLDLRNN SLVSLTYASF RNLTHLESLH LEDNALKVLH NSTLAEWHGL AHVKVFL DNN PWVCDCHMAD MVTWLKETEV VQGKDRLTCA YPEKMRNRVL LELNSADLDC DPILPPSLQT S
抗原決定基分組分析係使用基於Octet之標準分析來確定各種抗體的抗原決定基組。在此等分析中，使50 nM生物素標記抗原在1X動力學緩衝液(ForteBio)中固著於鏈黴抗生物素蛋白感測器上。接著將感測器浸漬於含有100 nM之所討論之抗體的孔中且監測締合信號。有效地剔除抗體結合的嵌合體接著對應於抗體所結合的特異性抗原決定基。分析中包括人類全長5T4作為參照。
結果顯示，九種抗體特異性結合至5T4之抗原決定基4，三種抗體特異性結合至5T4之抗原決定基7，且三種抗體特異性結合至5T4之抗原決定基2，一種抗體特異性結合至5T4之抗原決定基4與抗原決定基6，且十一種抗體結合至全長5T4 (FL)。例示性抗原決定基分組結果(對於mAbA4、mAbA15及mAbA17而言)概述於表7中。 表 7 . 抗原決定基分組分析
抗體 抗原決定基組
mAbA4 4
mAbA15 2
mAbA17 7
如本文所述，在如實例1所述自噬菌體文庫篩選的所有抗體中，在形成IgG之後仍能夠結合至5T4的二十七種抗體進一步如實例2至5中所述進行測試。命名為mAbA4、mAbA15及mAbA17的三種抗體係基於多種活性加以選擇，包括其結合人類5T4的特異性、其對獼猴5T4的結合、其細胞表面結合信號及其強可開發性，如藉由多種方法(諸如SEC、HIC及SMAC)所評估。此等抗體之VH、VL及CDR序列描述於本文中，例如表1至3中。 實例 6 ： ADC 的 製備
A. 經標記之抗體的製備
經標記之抗體係根據此項技術中已知之方法製備，諸如以下文獻中所述的方法：Rabuka D.等人, "Site-specific chemical protein conjugation using genetically encoded aldehyde tags," Nat Protoc., 2012; 7(6):1052-1067及美國專利第7,985,783 B2號，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中。簡言之，可使含有異源硫酸酯酶模體的抗體與產甲醯基甘胺酸酶接觸以將模體中的半胱胺酸或絲胺酸轉化成具有醛部分的甲醯基甘胺酸，從而產生「醛標記的抗體」。可使用任何產甲醯基甘胺酸酶，諸如結核分支桿菌( Mycobacterium tuberculosis)或結核分支桿菌( Mycobacterium tuberculosis)。
B.連接子-有效負載的製備
1.連接子-有效負載VIa-21的合成.
連接子-藥物 VIa-21的合成顯示於 圖 1的流程1中。自上海美迪西生物醫藥有限公司(Shanghai Medicilon Inc.)(中國上海)商購化合物 2- 1且按原樣使用。化合物 2- 1亦可根據國際專利申請公開案WO 2015/081282中所揭示之合成程序製備，該公開案其以全文引用的方式併入本文中。化合物 21-1係根據例如以下文獻中所揭示之程序製備：Kudirka等人, ACS Med. Chem. Lett. 2016, 7(11):94-998及國際專利申請公開案WO 2015/081282，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中。所用的所有其他試劑皆獲自商業來源且不經純化即使用。
在室溫下，將化合物 21-1(62 mg，54 µmol)及30 µL DIPEA添加至化合物 2- 1(45 mg，54 µmol)於2 mL無水DMF中之攪拌溶液中。在室溫下添加(7-氮雜苯并三唑-1-基氧基)三吡咯啶鏻六氟磷酸鹽(「PyAOP」，28 mg，54 µmol)。30分鐘後，將反應混合物傾入20 mL鹽水中且用DCM (2×25 mL)萃取。有機層經硫酸鈉乾燥，在真空下濃縮且藉由矽膠層析(5-10% MeOH/DCM)純化，獲得70 mg (36 µmol，67%產率)呈無色固體狀之中間物 3。固體之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1986.0 [M+Na] +，正如對C 101H 135ClN 14O 24所預期。
在室溫下，將含有SnCl 4的DCM (1 M，0.36 mL)緩慢添加至中間物 Fmoc-VIa-21(70 mg，36 µmol)於無水DCM (2 mL)中之溶液中。添加之後，允許反應混合物在室溫下攪拌30分鐘且用含有兩滴水的2 mL乙腈淬滅反應。所得溶液在真空下濃縮且藉由逆相層析(C18管柱，0-100%乙腈-水 + 0.05%三氟乙酸(「TFA」))純化殘餘物。合併純溶離份且凍乾，得到25 mg (13 µmol，36%產率)呈無色固體狀之Fmoc-VIa-21。固體之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1929.8 [M+Na] +，正如對C 97H 127ClN 14O 24所預期。
在室溫下，將哌啶(26 µL)添加至 Fmoc-VIa-21(25 mg，13 µmol)於2 mL無水DMA中之溶液中。20分鐘之後，藉由逆相HPLC (C18管柱，0-75%乙腈-水 + 0.05% TFA)直接純化反應混合物。合併純溶離份且凍乾，得到8 mg呈白色固體狀的連接子-藥物 VIa-21(5 µmol，39%產率)。白色固體之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1685.9 [M+H] +，正如對C 82H 117ClN 14O 22所預期。
2. 連接子 - 有效負載 VIa-11 的 合成 .連接子-有效負載 VIa-11的合成顯示於 圖 2的流程2中。將4-哌啶酮鹽酸鹽單水合物(1.53 g，10 mmol)、Boc酸酐(2.39 g，11 mmol)、碳酸鈉(1.22 g，11.5 mmol)、二㗁烷(10 mL)及水(1 mL)添加至含有磁性攪拌棒的100 mL圓底燒瓶中。在室溫下攪拌反應混合物1小時。混合物用水(100 mL)稀釋且用乙酸乙酯(「EtOAc」，3×100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。所得物質真空乾燥，產生呈白色固體狀的4-側氧基哌啶-1-甲酸三級丁酯(1.74 g，87%產率)。 1H NMR (CDCl 3) δ 3.73 (t, 4H, J= 6.0), 2.46 (t, 4H, J= 6.0), 1.51 (s, 9H)。
將4-側氧基哌啶-1-甲酸三級丁酯(399 mg，2 mmol)、3-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)丙酸三級丁酯(550 mg，2.4 mmol)、4 Å分子篩(活化粉末，200 mg)及1,2-二氯乙烷(5 mL)添加至含有磁性攪拌棒的乾燥閃爍瓶中。在室溫下攪拌混合物1小時。將三乙醯氧基硼氫化鈉(845 mg，4 mmol)添加至反應混合物中。在室溫下攪拌混合物3天，接著分配於EtOAc與NaHCO 3飽和水溶液之間。有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮，產生呈黏稠油狀之中間物 1-1(4-((2-(2-(3-(三級丁氧基)-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)胺基)哌啶-1-甲酸三級丁酯)(850 mg，＞100%產率)。油狀物的MS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z417.2，正如所預期。
將中間物 1-1(220 mg，0.5 mmol)、丁二酸酐(55 mg，0.55 mmol)、4-(二甲胺基)吡啶(5 mg，0.04 mmol)及二氯甲烷(3 mL)添加至含有磁性攪拌棒的乾燥閃爍瓶中。在室溫下攪拌混合物24小時。藉由急驟層析(溶離劑=50-100% EtOAc/己烷)部分地純化反應混合物，產生呈透明油狀之中間物 1-2(13-(1-(三級丁氧基羰基)哌啶-4-基)-2,2-二甲基-4,14-二側氧基-3,7,10-三氧雜-13-氮雜十七烷-17-烷酸)(117 mg)。
將中間物 1-2(55 mg，0.1 mmol)、去醯基美登素(65 mg，0.1 mmol)、1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡錠3-氧化物六氟磷酸鹽(「HATU」，43 mg，0.11 mmol)、二甲基甲醯胺(「DMF」，1 mL)及二氯甲烷(「DCM」，0.5 mL)添加至含有磁性攪拌棒的乾燥閃爍瓶中。在室溫下攪拌混合物8小時。藉由C18急驟層析(溶離劑=5-100% MeCN/水)直接純化反應混合物，產生呈白色膜狀的中間物 11-1(18 mg，16%產率)。膜狀物的MS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1148.7，正如所預期。
將中間物 11-1(31 mg，0.027 mmol)及二氯甲烷(1 mL)添加至含有磁性攪拌棒的乾燥閃爍瓶中。將溶液冷卻至0℃且添加四氯化錫(IV)(1.0 M於DCM中的溶液，0.3 mL，0.3 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物1小時。藉由C18急驟層析(溶離劑=5-100% MeCN/水)直接純化反應混合物，產生呈白色固體狀的中間物 11-2(16 mg，60%產率)。白色固體的MS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z992.6，正如所預期。
將中間物 11-2(16 mg，0.016 mmol)、Fmoc-VIa (13 mg，0.02 mmol，顯示於流程6中)、 N,N-二異丙基乙胺(「DIPEA」，8 μL，0.05 mmol)及DMF (1 mL)添加至含有磁性攪拌棒的乾燥閃爍瓶中。在室溫下攪拌溶液18小時。藉由C18急驟層析(溶離劑=5-100% MeCN/水)直接純化反應混合物，產生呈白色固體狀的 Fmoc-VIa-11(18 mg，77%產率)。白色固體的MS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1457.9，正如所預期。
將 Fmoc-VIa-11(18 mg，0.012 mmol)、哌啶(20 μL，0.02 mmol)及DMF (1 mL)添加至含有磁性攪拌棒的乾燥閃爍瓶中。在室溫下攪拌溶液20分鐘。藉由C18急驟層析(溶離劑=1-60% MeCN/水)直接純化反應混合物，產生呈白色固體狀的連接子-藥物 VIa-11(15 mg，98%產率)。白色固體的MS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1236.0，正如所預期。
3.連接子-有效負載VIb-11的合成.
連接子-藥物 VIb-11的合成顯示於 圖 3之流程3中。
自上海美迪西生物醫藥有限公司商購化合物 1-1 且按原樣使用。化合物 1-1亦可根據國際專利申請公開案WO 2015/081282、WO 2015/187428及Albers等人, Eur. J. Med. Chem. 2014, 83:3-9中所揭示之合成程序製備，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中。單甲基奧瑞他汀F (MMAF)獲自商業來源且不經純化即使用。
在室溫下，將DIPEA (35 µL，0.2 mmol)、接著將HATU (30 mg，0.08 mmol)添加至化合物 1-1(90 mg，0.09 mmol)於0.6 mL無水DMF中之溶液中。所得混合物攪拌30分鐘且與MMAF (50 mg，0.07 mmol)合併。在室溫下攪拌反應混合物2小時且藉由逆相層析(C18，40-100%乙腈-水 + 0.05% TFA)直接純化，得到98 mg呈黃色油狀的中間物 12-1(0.06 mmol，86%產率)。白色固體之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1717.7 [M+H] +，正如對C 98H 128N 10O 17所預期。
在室溫下，將哌啶(40 µL，0.4 mmol)添加至中間物 12-1(98 mg，0.06 mmol)於0.8 mL無水DMA中之溶液中。30分鐘後，藉由逆相HPLC (C18管柱，10-70%乙腈-水 + 0.05% TFA)直接純化反應混合物。合併純溶離份且凍乾，得到45 mg呈白色固體狀的連接子-藥物 VIb-12(0.03 mmol，50%產率)。白色固體之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1317.8 [M+H] +，正如對C 69H 108N 10O 15所預期。
4. 連接子-有效負載VIb-82的合成.
連接子-藥物VIb-82的合成顯示於 圖 4的流程4中。
化合物 8-1及2,3,4,5,6-五氟苯酚自上海美迪西生物醫藥有限公司商購且按原樣使用。單甲基奧瑞他汀E (MMAE)係購自BroadPharm (San Diego, CA, USA)。所有其他試劑皆獲自商業來源且不經純化即使用。
將化合物 8-1(1.33 g，1.67 mmol)與2,3,4,5,6-五氟苯酚(1.23 g，6.68 mmol)合併於6.5 mL無水DMF中。此混合物在室溫下用1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺(「EDCI-HCl」，0.64 g，3.34 mmol)一次性處理且攪拌20小時，直至化合物 8-1完全消耗為止，如HPLC分析所證明。將反應混合物負載於C18管柱(BIOTAGE ®，60 g樣品)且用ACN/水 + 0.05% TFA之0-80%梯度(10個管柱體積)溶離。合併純溶離份，在旋轉式蒸發器上濃縮直至稍微渾濁為止，且凍乾，得到呈淺棕色粉末狀之中間物 8-2(1.40 g，1.46 mmol，87%產率)，在氮氣下、在-20℃下儲存直至進一步使用為止。淺棕色粉末的LRMS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z961.2 [M+H] +，正如對C 44H 45F 5N 6O 11S所預期。
在室溫下，在20 mL玻璃瓶中，將MMAE (720 mg，1.0 mmol)、5 mL無水DMF及0.35 mL DIPEA (2.0 mmol)合併。將所得混合物攪拌且用固體狀的化合物 8-3(1014 mg，1.0 mmol)、分幾小份處理，隨後在室溫下一次性添加HOAt (136 mg，1.0 mmol)。攪拌反應混合物6小時直至反應完成，如HPLC分析所證明。將反應混合物傾入30 mL水中。所得白色沈澱物藉由離心分離且收集，用5 mL水洗滌，且在高真空下短暫乾燥，得到1.87 g呈黃色固體狀的中間物 8-4，其不經純化即根據下述本發明進一步反應。
中間物 8-4(1.87 g)於15 mL THF中之溶液在冰浴中冷卻至0℃且用1 M氫氧化鋰水溶液(3 mL)緩慢處理。反應混合物在0℃下攪拌3小時，接著升溫至環境溫度，用3 mL的1 M氫氧化鋰水溶液處理且用3 mL甲醇稀釋。在室溫下攪拌所得混合物3小時，直至水解完成為止，如HPLC分析所證明。接著藉由添加1 M HCl水溶液以使反應混合物達到pH 7來淬滅反應。接著在減壓下濃縮反應混合物且用10 mL甲基第三丁基醚(「MTBE」)洗滌。藉由逆相層析(C18管柱，0-40%乙腈-水 + 0.05% TFA)純化水層。合併純產物溶離份，在減壓下濃縮且凍乾，得到呈白色粉末狀之中間物 8-5(735 mg，0.60 mmol，60%產率，經兩個步驟)。白色粉末之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1229.7 [M+H] +，正如對C 61H 96N 8O 18所預期。
在室溫下，將DIPEA (0.21 mL，1.2 mmol)及中間物 8-2(575 mg，0.60 mmol)於2 mL DMA中之溶液添加至中間物 8-5(735 mg，0.60 mmol)於3 mL無水DMA中之攪拌溶液中。1-接著添加羥基-7-氮雜苯并三唑(「HOAt」，84 mg，0.60 mmol)。攪拌所得混合物30分鐘，直至偶合完成，如HPLC所證明。接著在室溫下用1.2 mL哌啶處理反應混合物。15分鐘之後，藉由逆相層析(C18管柱，乙腈-水的0-40%梯度)純化反應混合物。合併純溶離份，在減壓及室溫下濃縮且凍乾，得到呈白色蓬鬆粉末狀的連接子-藥物 VIb-82(808 mg，0.45 mmol，75%產率)。白色粉末之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於 m/z1783.9 [M+H] +，正如對C 84H 130N 14O 26S所預期。
5. 連接子-有效負載VIb-81的合成.
連接子-藥物VIb-81的合成顯示於圖5的流程5中。
將3-羥基-4-硝基苯甲醛(204 mg，1.22 mmol)及乙醯基溴-α-D-半乳糖(500 mg，1.22 mmol)與20 mL無水乙腈合併於50 mL圓底燒瓶中。溶液用氧化銀(I)(986 mg，4.3 mmol)處理且所得混合物在室溫下、在暗處劇烈攪拌24小時。在真空下濃縮反應混合物之後，使用乙酸乙酯-己烷混合物作為溶離劑(0-100%梯度)、在矽膠上純化殘餘物，獲得420 mg (0.85 mmol，70%產率)呈淺黃色固體狀的三乙酸(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙醯氧基甲基)-6-(2-胺基-5-(羥甲基)苯氧基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三基酯。黃色固體之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於520.0 [M+Na] +，正如對C 21H 23NO 13所預期。
將鈀/碳(30 mg，10% wt.)及30 μL三甲胺添加至三乙酸((2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙醯氧基甲基)-6-(5-甲醯基-2-硝基苯氧基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三基酯(350 mg，0.70 mmol)於3 mL乙酸乙酯中之溶液中。移除空氣之後，向燒瓶配備氫氣球且在室溫下攪拌反應混合物48小時。經由矽藻土墊過濾之後，在真空下移除溶劑且所得殘餘物在高真空下乾燥，得到呈白色固體狀的300 mg三乙酸(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙醯氧基甲基)-6-(2-胺基-5-(羥甲基)苯氧基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三基酯，其不經另外純化即進一步用於合成。白色固體之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於470.1 [M+H] +，正如對C 21H 27NO 11所預期。
將Boc-L-丙胺酸(220 mg，1.11 mmol)及三乙酸(2R,3S,4S,5R,6S)-2-(乙醯氧基甲基)-6-(2-胺基-5-(羥甲基)苯氧基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三基酯(520 mg，1.16 mmol)合併於5 mL無水二氯甲烷及0.50 mL無水甲醇中。所得溶液在室溫下用N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1,2-二氫喹啉(「EEDQ」，280 mg，1.13 mmol)處理。反應混合物在暗處攪拌一小時，隨後真空移除溶劑。所得中間物 8-7在高真空下乾燥一小時且在室溫下溶解於TFA與DCM之6 mL 1:1混合物中。允許溶液靜置一小時，隨後移除溶劑且所得中間物 8-8在高真空下保持數小時。
在各別的20 mL閃爍瓶中，將Fmoc-L-纈胺酸(375 mg，1.1 mmol)與HATU (420 mg，1.1 mmol)及DIPEA (375 μL，2.15 mmol)混合於3 mL無水DMF中。在室溫下攪拌混合物30分鐘，與中間物 8-8合併且攪拌隔夜直至反應完成(如LCMS分析所證明)。反應混合物直接在逆相C18管柱(CH 3CN-H 2O/0.05% TFA，0-80%梯度)上純化，產生中間物 8-9，其為含有少量雜質的混合物。產物在高真空下充分乾燥且不經另外純化即經歷下一步驟。
將中間物 8-9溶解於6 mL無水DCM中且用DIPEA (375 μL，2.15 mmol)處理，隨後在室溫下一次性添加686 mg (2.26 mmol)雙(4-硝基苯基)碳酸酯。攪拌反應混合物一小時，隨後在真空下移除溶劑。所得殘餘物在矽膠(EtOAc-己烷，10-100%梯度)上藉由管柱層析純化，產生呈微黃色固體狀之中間物 8-10(640 mg，0.62 mmol，56%產率，經四個步驟)。中間物的LRMS (ESI)分析揭露峰值位於1049.3 [M+Na] +，正如對C 51H 54N 4O 19所預期。
將4-(甲胺基)丁酸(61 mg，0.52 mmol)、61 μL (0.35 mmol) DIPEA及1 mL無水DMF添加至20 mL閃爍瓶中。在室溫下將所得溶液與180 mg (0.175 mmol)中間物 8-10合併。攪拌反應混合物一小時，直至中間物 8-10完全消耗(如LCMS分析所證明)。在真空下移除溶劑，且將殘餘物溶解於3 mL甲醇中。將所得溶液冷卻至0℃且用3 mL 1 M氫氧化鋰水溶液處理。攪拌反應混合物30分鐘，接著升溫至室溫且在真空下濃縮。殘餘物直接在逆相C18管柱(CH 3CN-H 2O/0.05% TFA，0-50%梯度)上純化，獲得90 mg (0.146 mmol，83%產率，經兩個步驟)呈黃色油狀的中間物 8-11。油狀物的LRMS (ESI)分析揭露峰值位於615.3 [M+H] +，正如對C 27H 42N 4O 12所預期。
將中間物 8-11(84 mg，0.14 mmol)、1 mL無水DMF及DIPEA (48 μL，0.28 mmol)添加至20 mL閃爍瓶中，隨後添加130 mg (0.14 mmol)中間物 8-2。攪拌所得混合物30分鐘，直至偶合完成(如LCMS分析所證明)。將美登素(89 mg，0.14 mmol)於0.5 mL DMF中的溶液直接添加至反應混合物中，隨後添加HATU (52 mg，0.14 mmol)。30分鐘後，反應混合物在逆相C18管柱(CH 3CN-H 2O/0.05% TFA，10-95%梯度)上純化。溶劑完全移除之後，將所得中間物 8溶解於3 mL DMF中且在室溫下用150 μL哌啶處理。30分鐘後，反應混合物直接在逆相製備型HPLC (C18管柱，CH 3CN-H 2O/0.05% TFA，0-50%梯度)上純化。將純溶離份凍乾，得到58 mg (0.032 mmol，23%產率，經三個步驟)連接子-藥物 VIb-81。凍乾固體之LRMS (ESI)分析揭露峰值位於1801.8 [M+H] +，正如對C 82H 118ClN 13O 28S所預期。
C. 5T4 ADC之生物結合
如下使醛標記的抗體(15 mg/mL)與合成的連接子-藥物(8 mol當量的藥物:抗體)結合：使連接子-藥物與醛標記之抗體在37℃下、在20 mM檸檬酸鈉PH 5.5、含有0.85% DMA的50 mM氯化鈉中反應72小時。在一些情況下，為了改良連接子-藥物溶解性，添加0.25 TX-100及/或最高10% vol/vol DMA。結合之後，藉由使用具有30 kDa TFF卡匣(Sigma-Aldrich，目錄號P3C030C00)的115V Labscale切向流過濾(TFF)系統(Millipore，目錄號XX42LSS11)進行透濾且在20 mM檸檬酸鈉pH 5.5、50 mM NaCl中交換12個透濾體積(600 mL)來移除殘餘游離藥物。或者，藉由在20 mM檸檬酸鈉PH 5.5、50 mM氯化鈉使用多輪稀釋且使用AMICON ®0.5 mL 30 kD截止分子量(MWCO)(Millipore Sigma，目錄號#UFC5030BK)或ZEBA ®去鹽管柱(Fisher Scientific，目錄號PI87766)濃縮來移除殘餘游離藥物。為了測定最終產物的藥物/抗體比率(DAR)，藉由分析型疏水性相互作用層析(HIC)或聚合物逆相層析(PLRP)來檢查抗體-藥物結合物。使用1.5 M硫酸銨及25 mM磷酸鈉(PH 7.0)作為移動相A且使用25%異丙醇及18.75 mM磷酸鈉(PH 7.0)作為移動相B，運作HIC管柱(Tosoh Bioscience，目錄號14947)。使用含有0.1%三氟乙酸的H 2O作為移動相A及含有0.1%三氟乙酸的CH 3CN作為移動相B，運作PLRP管柱(Agilent，目錄號PL1912-1802)，其中將管柱加熱至80℃。為了測定聚集，使用分析型尺寸排阻層析(Tosoh Bioscience，目錄號08541)、使用300 mM NaCl、25 mM磷酸鈉及5%異丙醇(pH 6.8)的移動相分析樣品。
D. ADC 表徵：執行以下分析以表徵最終ADC產物：
1. 解鏈溫度分析
使用APPLIED BIOSYSTEMS™ PROTEIN THERMAL SHIFT™染料套組(ThermoFisher Scientific目錄號4461146)製備用於蛋白質熱漂移實驗的樣品(解鏈溫度)。使用QUANTSTUDIO™ 3儀器(ThermoFisher Scientific目錄號A28567)，利用PROTEIN THERMAL SHIFT™軟體v1.4 (ThermoFisher Scientific目錄號466038)收集資料。簡言之，將PROTEIN THERMAL SHIFT™染料(1000X)在水中、在去離子水中稀釋8X。在冰上藉由將5 µL PROTEIN THERMAL SHIFT™緩衝液、12.5 µL蛋白質溶液及2.5 µL經稀釋的PROTEIN THERMAL SHIFT™染料(8X)合併以獲得20 µL的總反應溶液體積來製備樣品。用移液管將反應溶液混合10次。接著以1000 rpm將管離心1分鐘且接著在冰上培育直至分析。將樣品負載於儀器盤上，接著負載於QUANTSTUDIO™ 3即時PCR系統儀器中。使用標準解鏈曲線實驗、在以下條件下收集資料：步驟1溫度：25℃，歷時2分鐘；步驟2溫度：99℃，歷時2分鐘，使用連續快速勻變模式(步驟1：1.6℃/秒；步驟2：0.05℃/秒)。解鏈溫度原始資料在QUANTSTUDIO™ 3分析軟體內去卷積。下 表 8報告各種ADC的所測解鏈溫度。 表 8. ADC 之解鏈溫度
mAb 或ADC CH2 T m Fab T m
mAbA4 WT 69.18 89.94
mAbA15 WT 70.07 86.38
mAbA17 WT 70.06 81.92
mAbA4-VIa-11 69.03 89.63
mAbA15-VIa-11 69.34 89.95
mAbA17-VIa-11 69.04 80.9
mAbA4-VIb-82 69.3 89.59
mAbA15-VIb-82 69.74 86.04
mAbA17-VIb-82 69.46 80.87
mAbA15-VIb-12 69.48 85.94
2. 藥物 / 抗體比率 (DAR).分析型疏水性相互作用層析(HIC)(Tosoh #14947)聯合UV/Vis偵測。藉由逆相液相層析(RP-HPLC)(Agilent目錄號PL1912-1802)聯合UV/Vis偵測來分析最終產物的還原形式，以驗證DAR。RP層析提供的資料亦驗證僅重鏈經修飾且存在僅一種修飾。下 表 9報告所測試之各種ADC的DAR。 表 9. ADC 的 藥物 / 抗體量測值
抗體 連接子- 有效負載
VIa-21 VIa-11 VIb-12 VIb-82 VIb-81
mAbA4 1.8 1.8 - 1.8 -
mAbA15 1.8 1.9 1.9 1.9 1.9
mAbA17 1.9 1.8 - 1.8 -
上述經鑑別之各種分析方法的具體方案進一步詳細如下。
分析型疏水性相互作用層析 (HIC) ：在配備有Tosoh (#14947)之4.6 mm x 35 mm TSK凝膠丁基-NPR管柱的Agilent 1100儀器上分析樣品，該管柱在25℃下保持。藉由添加20 µL 50 mM NaCl (pH 5.5)及20 µL移動相A至20 µg樣品中來製備樣品且在室溫下注射。梯度溶離係使用移動相A (25 mM Na 3PO 4、1.5 M (NH 4) 2SO 4，pH 7.0)及移動相B (18.75 mM Na 3PO 4PH 7.0、25%異丙醇)，利用 表 10中所報告的程式，流量為每分鐘1.0 mL。偵測係經由215 nm、252 nm及280 nm UV。 表 10. HIC 分析用的梯度溶離程式
時間(min) 移動相B (%)
0.0 12
5.5 42
7.5 70
8.5 100
9.5 100
10 12
12 12
逆相 HPLC ：在配備有Agilent之50 x 2.1 mm PL1912-1802 (8 µm，1000 Å)管柱的Agilent 1100儀器上分析樣品，該管柱在80℃下保持。藉由將0.5 mM DTT、50 µL 8 M胍HC、130 mM tris及1 mM EDTA (PH 7.6)之10 µL混合物添加至20 µg樣品中且添加PBS直至100 µL最終體積來製備樣品。製備之後，在37℃下培育樣品30分鐘。在25%乙腈 + 0.1% TFA中以每分鐘2.0 mL的流量溶離樣品且經由215 nm、252 nm及280 nm UV偵測。
尺寸排阻 HPLC ：在配備有Tosoh (#08541)之7.8 mm x 300 mm G300 SW XL管柱的Agilent 1100儀器上分析樣品，該管柱在25℃下保持。在室溫下注射樣品(1 mg/mL，20 µg)，在25 mM NaPO4緩衝液、300 mM NaCl pH 6.8中以每分鐘1.0 mL的流量溶離，且經由215 nm、252 nm及280 nm UV偵測。
LC-MRM/MS ：此方法如下測定連接子-藥物的游離藥物濃度：將製備ADC時藉由RP-HPLC-MRM產生之連接子-藥物及其已知修飾的信號與使用連接子-藥物作為校正標準及二丁卡因-HCl (dibucaine-HCl)作為內標的內標曲線進行比較。
使用0.457 nM至1000 nM範圍內的樣品產生標準曲線。藉由添加0.75 µL 100 µM連接子-藥物至74.25 µL基質中且經由移液管抽吸(10次)達成混合來製備1000 nM連接子-藥物標準物。製得之標準物在-80℃下儲存。標準物1:3如下稀釋：添加25 µL至50 µL基質中，經由移液管抽吸(10次)達成混合且渦旋，以產生333.33 nM標準物。藉由在50 µL基質中稀釋25 µL 333.33 nM標準物而以相同方式產生111.11 nM標準物。以類似方式進行進一步稀釋，產生具有以下濃度之八種標準物：1000、333.33、111.11、37.04、12.35、4.12、1.37及0.46 nM。
將ADC (50 µL)添加至八個離心管中之每一者中。將內標(150 µL)添加至每一者中以在各具有不同濃度之連接子-藥物的各離心管中建立200 µL的最終體積。所有離心管渦旋5分鐘，隨後溶液變得混濁，因為蛋白質變性且沈澱，從而在溶液中留下游離藥物。所有樣品在冰上培育30分鐘以有助於沈澱，接著再次渦旋10分鐘。
為了分離出所沈澱的mAb，將各樣品離心(10分鐘，15,000 x g)。移出上清液(75 µL)且置於自動取樣瓶中且用75 µL水稀釋。使用以下HPLC/MS方法三重複運作各樣品。
在配備有Agilent之2.1 x 100 mm ZORBAX ®RRHD Eclipse Plus C18管柱(95Å，1.8 µm)的Agilent 1100儀器上分析樣品，該管柱在50℃下保持。在室溫下注射樣品(1 mg/mL，20 µg)且在1%乙腈 + 0.1% TFA中以每分鐘0.5 mL的流量溶離。使用質譜法進行偵測。
使用SCIEX之Analyst軟體的「化合物優化」函數建立質譜方法。儀器輸出分子的MRM轉換集，其接著用於LC-MS方法。亦使用「化合物優化」產生二丁卡因的MRM轉換。
下 表 11中所標識的轉換係用於測定連接子-藥物VIb-82的游離濃度(此可基於質譜儀而變化)。使用類似轉換測定VIa-21、VIb-12及VIa-11游離濃度。各轉換物種的屬性描繪於下 表 11中。 表 11. 用於測定連接子 - 有效負載 VIb-82 之 游離濃度的轉換物種
Q1 (Da) Q3 (Da) 時間(ms) 轉換物種 DP ( 伏) CE ( 伏) CXP ( 伏)
892.536 718.2 30 VIb-82親本 1 29 26
892.536 501.1 30 VIb-82親本 1 35 18
892.536 725 30 VIb-82親本 1 29 26
898.527 718.2 30 VIb-82 +12 Da 1 29 30
898.527 737.1 30 VIb-82+12 Da 1 29 12
898.527 513 30 VIb-82+12 Da 1 39 54
883.684 718.1 30 VIb-82-18 Da 136 31 30
883.684 501 30 VIb-82-18 Da 136 37 20
883.684 725 30 VIb-82-18 Da 136 27 12
343.968 271.1 10 IS 31 29 24
343.968 215.1 10 IS 31 39 16
VIb-82，親本，C 84H 130N 14O 26S 單同位素質量：1782.9001 VIb-82，-18 Da，C 84H 128N 14O 25S 單同位素質量：1764.8896 VIb-82，+12 Da，C 85H 130N 14O 26S 單同位素質量：1794.9001 VIb-82，-2 Da，C 84H 128N 14O 26S 單同位素質量：1780.8845
為了計算游離藥物百分比，產生線性校準曲線。質譜方法中所鑑別出的各種轉換產生其自身層析圖。對所有標準物之各種轉換的峰求積分，以求得峰面積。將所有轉換的峰面積(包括「親本」、「-18 Da」及「+12 Da」)加在一起，以產生「VIb-82面積」值。同樣將內標之所有轉換的峰面積相加，以產生「IS面積」值。計算VIb-82面積相對於IS面積的比率且產生散佈圖，其中x軸為濃度且y軸為比率。利用圖資料產生趨勢線，其中趨勢線方程式的x截距為ADC濃度。使用以下方程式計算游離藥物%： 實例 7 ： 未結合之抗體對人類 5T4 的 結合 (ELISA)
A. 正常結合 .利用ELISA測試未結合之抗體結合至人類5T4 (hu5T4)之能力。第1天，將具有c端聚組胺酸及Avi (AVITAG™)標籤(AcroBiosystems (Newark, DE, USA)，目錄號TPG-H52E5)的未結合之人類TPBG/5T4蛋白在PBS中稀釋至2 µg/mL，充分混合，在96孔盤(Nunc MAXISORP ®)中每孔塗覆100 µL且在4℃培育隔夜。
第2天，培養盤用含有0.1% Tween ®-20的PBS (「PBS-T」)洗滌四次。孔用200 µL含有酪蛋白之PBS (BLOCKER™酪蛋白，獲自ThermoFisher Scientific)阻斷且在室溫下、在搖振的同時培育2小時。
在PBS中製備IgG-ADC之1:3稀釋系列且以每孔100 µL體積添加於96孔盤中。在室溫下，在搖振的同時培育盤1小時。
山羊抗人類IgG Fcγ特異性HRP結合物(Jackson Immunoresearch，目錄號109-035-098)在PBS中以1:15000的係數稀釋。使用洗盤器(BIOTEK ®ELx405™)、使用PBS-T將ELISA盤洗滌六次，隨後向各孔中添加100 µL山羊抗人類IgG Fcγ特異性HRP結合物。接著在室溫下，在搖振的同時培育盤30分鐘。
使用洗盤器(BIOTEK ELx405™)、使用PBS-T將ELISA盤洗滌六次，隨後向各孔中添加100 µL的3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)。允許培養盤顯色直至深藍色變得可見。接著添加H 2SO 4(2 N，100 µL)以淬滅反應且在讀盤器(獲自Molecular Devices的SPETRAMAX ®M5，其配備有SOFTMAX ®Pro軟體)讀取各孔的吸光度。
B. 應激測試
1. 高 pH 應激測試. 利用ELISA，在鹼性(高pH)條件下測試若干未結合之抗體結合至5T4的能力。含有1 mg/mL抗體的0.1% w/w H 2O 2/1x PBS在室溫下、在暗處儲存24至48小時，隨後添加50 mM甲硫胺酸。在如A部分中所述經由ELISA進行分析之前，將樣品冷凍儲存。下 表 12報告針對各種測試抗體計算的EC 50。 表 12. 未結合之抗體在高 pH 下對 hu5T4 的 結合
mAb 條件 EC 50(nM)
mAbA4 pH 8.5，第0天 0.120
mAbA4 pH 8.5，第1天 0.127
mAbA4 pH 8.5，第4天 0.114
mAbA4 pH 8.5，第7天 0.128
mAbA4 pH 8.5，第14天 0.136
mAbA15 pH 8.5，第0天 0.134
mAbA15 pH 8.5，第1天 0.128
mAbA15 pH 8.5，第4天 0.133
mAbA15 pH 8.5，第7天 0.143
mAbA15 pH 8.5，第14天 0.131
mAbA17 pH 8.5，第0天 0.153
mAbA17 pH 8.5，第1天 0.174
mAbA17 pH 8.5，第4天 0.150
mAbA17 pH 8.5，第7天 0.158
mAbA17 pH 8.5，第14天 0.167
2. 低 pH 應激測試 .利用ELISA，在酸性(低pH)條件下測試若干未結合之抗體結合至5T4的能力。製備抗體於20 mM Tris/10 mM EDTA中之1 mg/mL至10 mg/mL溶液(PH 8.5)且在37℃下儲存1至2週。在如A部分中所述經由ELISA進行分析之前，將樣品冷凍儲存。下 表 13報告針對各種測試抗體計算的EC 50。 表 13. 未結合之抗體在低 pH 下對 hu5T4 的 結合
mAb 條件 EC 50(nM)
mAbA4 pH 5.5，第0天 0.133
mAbA4 pH 5.5，第1天 0.132
mAbA4 pH 5.5，第4天 0.125
mAbA4 pH 5.5，第7天 0.124
mAbA4 pH 5.5，第14天 0.122
mAbA15 pH 5.5，第0天 0.124
mAbA15 pH 5.5，第1天 0.134
mAbA15 pH 5.5，第4天 0.123
mAbA15 pH 5.5，第7天 0.132
mAbA15 pH 5.5，第14天 0.138
mAbA17 pH 5.5，第0天 0.164
mAbA17 pH 5.5，第1天 0.159
mAbA17 pH 5.5，第4天 0.157
mAbA17 pH 5.5，第7天 0.190
mAbA17 pH 5.5，第14天 0.153
3. 氧化應激 .利用ELISA，在氧化環境中測試若干未結合之抗體結合至5T4的能力。製備抗體於20 mM檸檬酸鹽/50 mM NaCl中之1 mg/mL至10 mg/mL溶液(pH 5.5)且在37℃下儲存1至2週。在如A部分中所述經由ELISA進行分析之前，將樣品冷凍儲存。下 表 14報告針對各種測試抗體計算的EC 50。 表 14. 未結合之抗體在氧化應激下對 hu5T4 的 結合
mAb 條件 EC 50(nM)
mAbA4 PBS，0時 0.182
mAbA4 PBS，第24小時 0.200
mAbA4 PBS，第48小時 0.189
mAbA4 PBS+H 2O 2，0時 0.225
mAbA4 PBS+H 2O 2，第24小時 0.393
mAbA4 PBS+H 2O 2，第48小時 0.386
mAbA15 PBS，0時 0.229
mAbA15 PBS，第24小時 0.212
mAbA15 PBS，第48小時 0.203
mAbA15 PBS+H 2O 2，0時 0.191
mAbA15 PBS+H 2O 2，第24小時 0.190
mAbA15 PBS+H 2O 2，第48小時 0.189
mAbA17 PBS，0時 0.198
mAbA17 PBS，第24小時 0.186
mAbA17 PBS，第48小時 0.185
mAbA17 PBS+H 2O 2，0時 0.188
mAbA17 PBS+H 2O 2，第24小時 0.183
mAbA17 PBS+H 2O 2，第48小時 0.207
實例 8. 未結合之抗體對獼猴、大鼠及小鼠 5T4 的 交叉反應性 (ELISA 及 OCTET)
利用ELISA及Octet測試未結合之抗體結合至非人類5T4-Ts的能力。使用實例7中所述的ELISA方案，其中將人類5T4抗原置換成重組獼猴5T4-Fc (源自R&D Systems (Minneapolis, MN, USA)，目錄號2280-TG-100或LSBio (Seattle, WA, USA)、目錄號LS-G137131)、重組小鼠5T4-Fc (R&D Systems，目錄號5049-TG-100)、具有N端標籤6His-SUMO的重組大鼠TPBG/5T4 (LSBio目錄號G56592)、具有N端標籤His的重組小鼠TPBG/5T4 (LSBio目錄號G12168)抗原。對於Octet分析而言，蛋白質A生物晶片用抗體塗覆，用PBS洗滌且接著與如上文所鑑別的抗原反應。測試的所有抗體皆結合至人類、獼猴及大鼠5T4。未觀測到對小鼠5T4的顯著結合交叉反應性。 實例 9. 未結合之抗體對經 5T4 轉染之 CHO 及 HEK293 細胞的 細胞結合
測試未結合之抗體結合至HEK293及CHO細胞的能力，該等細胞經轉染以表現人類、獼猴、大鼠或小鼠5T4。未轉染的細胞作為對照用於觀測非特異性結合。mAbA4、mAbA15及mAbA17對經轉染以表現人類及獼猴5T4的HEK293及CHO細胞具有反應性，但對經轉染以表現大鼠或小鼠5T4的細胞無反應性。 實例10. 5T4 ADC之活體外細胞毒性
將MDA-MB-468、MDA-MB-231、MCF-7、NCI-H226或BxPC3細胞以每孔1500個細胞的密度接種於Costar 3610盤(Corning (Corning NY, USA)，VWR目錄號VWR#29444-010)中，添加100 µL生長培養基且培育隔夜。對於待測試的各種ADC而言，製備6倍稀釋系列。將20 µL各種所製備的ADC溶液添加至細胞中，從而產生100 nM至0.02 nM的最終稀釋範圍，且在37℃、5% CO 2下培育5天。利用Cell TITER-GLO ®存活率分析(Promega (Madison, WI, USA)，目錄號G7573)量測細胞存活率且與未處理之(對照)細胞進行比較。
A. VIa-11. 圖 6報告經mAbA15-VIa-11、mAbA17-VIa-11及與美登素直接結合之mAbA17處理之MDA-MB-468細胞的細胞存活率。 圖 7報告經mAb15-VIa-11、mAb15-VIa-11及與美登素直接結合之mAbA17處理之MCF-7細胞的細胞存活率。
B. VIa-82. 圖 8報告經mAbA15-VIb-82、mAbA17-VIb-82、同型對照物及游離MMAE處理之MDA-MB-468細胞的細胞存活率。 圖 9報告經mAbA15-VIb-82、mAbA17-VIb-82、同型對照物及游離MMAE處理之MCF-7細胞的細胞存活率。 圖 10報告經與連接子-藥物VIb-82結合之各種抗體處理之MDA-MB-231細胞的細胞存活率。 圖 11報告經與連接子-藥物VIb-82結合之各種抗體處理之NCI-H226細胞的細胞存活率。下文所提供之 圖 12報告經與連接子-藥物VIb-82結合之各種抗體處理之BxPC3細胞的細胞存活率。 實例11. 針對癌症異種移植模型之5T4 ADC的活體內功效
MCF-7.1 乳癌異種移植模型 .向雌性NCr NU/NU小鼠(n=8)注射(側腹)含有1x10 7個MCF-7.1腫瘤細胞的50% MATRIGEL ®(Corning Life Sciences)基質。當平均腫瘤體積達到150至250 mm 3時，將小鼠隨機分成各別治療組且接受媒劑、同型對照物或ADC的靜脈內注射。第1天及第4天，在注射MCF-7.1細胞之後靜脈內輸注5 mg/kg濃度的ADC，或第1天單次靜脈內注射媒劑、同型對照物或測試物(5 mg/kg)。在整個研究過程中，對任一治療組的體重不存在不利影響。
圖 13展示治療對MCF-7.1異種移植小鼠之腫瘤消退及抑制的影響，該等小鼠經mAbA15-VIa-11及mAbA17-VIa-11治療。如箭頭所示，小鼠在第1天及第4天接受靜脈內注射，如圖x軸上的箭頭所示。
圖 14展示治療對MCF-7.1異種移植小鼠之腫瘤消退及抑制的影響，該等小鼠經mAbA15-VIb-82及mAbA17-VIb-82治療。如箭頭所示，小鼠在第1天接受單次靜脈內注射，如圖x軸上的箭頭所示。
圖 15展示單次給藥對MCF-7.1異種移植小鼠之腫瘤消退及抑制的劑量反應影響，該等小鼠經mAbA15-VIb-82之三種不同劑量濃度中之一者治療。如箭頭所示，小鼠接受媒劑、同型對照(5 mg/kg)或ADC (0.5 mg/kg、2.5 mg/kg或5 mg/kg)之單次靜脈內注射。 圖 16報告每週給藥對經mAbA15-VIb-82治療之MCF-7.1異種移植小鼠之腫瘤消退及抑制的劑量反應影響。如箭頭所示，小鼠在第1天及第8天接受媒劑、同型對照(2.5 mg/kg)或ADC (0.25 mg/kg、1.25 mg/kg或2.5 mg/kg)的分次劑量。
圖 17報告單次給藥對經mAbA17-VIb-82治療之MCF-7.1異種移植小鼠之腫瘤消退及抑制的劑量反應影響。如箭頭所示，小鼠接受媒劑、同型對照(5 mg/kg)或ADC (0.5 mg/kg、2.5 mg/kg或5 mg/kg)之單次靜脈內注射。
圖 18報告每週給藥對經mAbA17-VIb-82治療之MCF-7.1異種移植小鼠之腫瘤消退及抑制的劑量反應影響。如箭頭所示，小鼠在第1天及第8天接受媒劑、同型對照(2.5 mg/kg)或ADC (0.25 mg/kg、1.25 mg/kg或2.5 mg/kg)的分次劑量。
MDA-MB-468 乳癌異種移植模型 ：向雌性SCID Beige小鼠(n=8)注射(側腹)含有1x10 7個MDA-MB-468腫瘤細胞的50% MATRIGEL ®(Corning Life Sciences)基質。當平均腫瘤體積達到100至150 mm 3時，將小鼠隨機分成各別治療組且接受媒劑、5 mg/kg同型對照物或5 mg/kg ADC的靜脈內注射。在整個研究過程中，對任一治療組的體重不存在不利影響。
在 圖 19中，將mAbA15與連接子-藥物VIb-82之結合物對腫瘤消退及抑制的影響與mAbA15與連接子-藥物VIb-81之結合物及與MMAF直接結合之結合物的影響進行比較。小鼠在第1天及第4天接受ADC靜脈內注射，如圖x軸上的箭頭所示。
MDA-MB-231 乳癌異種移植模型 ：將1x10 6個MDA-MB-231腫瘤細胞接種至雌性BalbC/裸小鼠(n=8)的乳腺脂肪墊中。當平均腫瘤體積達到50至150 mm 3時，將小鼠隨機分成各別治療組且接受媒劑、同型對照物或5 mg/kg ADC的靜脈內注射。在整個研究過程中，對任一治療組的體重不存在不利影響。mAbA15-VIb-82及mAbA15-VIa-11對腫瘤消退及抑制的影響顯示於 圖 20中。在將小鼠分成實驗組之後的第1天及第4天，小鼠接受靜脈內注射(圖x軸上的箭頭指示在MCF-7細胞注射之後給藥的日期)。
NCI-H226 肺癌異種移植模型 ：將含有1x10 7個NCI-H226腫瘤細胞的1:1 MATRIGEL ®基質接種至雌性BalbC/裸小鼠(n=8)。當平均腫瘤體積達到150至200 mm 3時，將小鼠隨機分成各別治療組且接受媒劑、同型對照物或5 mg/kg ADC的靜脈內注射。在整個研究過程中，對任一治療組的體重不存在不利影響。mAbA15-VIb-82及mAbA15-VIa-11對腫瘤消退及抑制的影響顯示於 圖 21中。小鼠在第1天及第4天接受靜脈內注射，如圖x軸上的箭頭所示。
BxPC3 胰臟癌異種移植模型 ：將含有1x10 7個BxPC3腫瘤細胞的1:1 MATRIGEL ®基質接種至雌性BalbC/裸小鼠(n=8)。當平均腫瘤體積達到150至200 mm 3時，將小鼠隨機分成各別治療組且接受媒劑、同型對照物或5 mg/kg ADC的靜脈內注射。在整個研究過程中，對任一治療組的體重不存在不利影響。mAbA15-VIb-82及mAbA15-VIa-11對腫瘤消退及抑制的影響顯示於 圖 22中。小鼠在第1天及第4天接受靜脈內注射，如圖x軸上的箭頭所示。
Calu-6 肺癌異種移植模型 ：向含有5x10 6個Calu-6腫瘤細胞的PBS接種至雌性BalbC/裸小鼠(n=10)。當平均腫瘤體積達到100至200 mm 3時，將小鼠隨機分成各別治療組且接受媒劑、同型對照物或1.25、2.5或5 mg/kg ADC的靜脈內注射。此標示為治療的「第1天」。小鼠在第1天接受單次靜脈內注射。在整個研究過程中，對任一治療組的體重不存在不利影響。mAbA15-VIb-82對腫瘤消退及抑制的影響顯示於 圖 23中。
大鼠毒理動力學 (TK) 研究 ：將如上文實例中所述產生之5 mg/kg單次劑量的mAbA15-VIb-82靜脈內給與雄性史泊格多利大白鼠(Sprague-Dawley rats)(每組3隻)。在給藥後的0.5小時、6小時及24小時以及第2、4、7、10、14及21天收集K 2EDTA穩定化血漿。藉由兩種ELISA方法定量總抗體及總ADC濃度。對於總抗體量測而言，利用抗人類IgG特異性抗體捕捉結合物且用HRP結合的抗人類Fc特異性抗體加以偵測。對於總ADC量測而言，利用抗人類Fab特異性抗體捕捉結合物且用小鼠抗有效負載一級抗體偵測，隨後用HRP結合的抗小鼠IgG-亞類1特異性二級抗體偵測。使用Ultra TMB One-Step ELISA受質(ThermoFisher)偵測所結合的二級抗體。利用硫酸淬滅反應之後，藉由在配備有SoftMax Pro軟體的Molecular Devices Spectra Max M5讀盤器上獲取450 nm吸光度來讀取信號。使用GraphPad Prism及Microsoft Excel軟體分析資料且繪製於 圖 24A(30 mg/kg)、 圖 24B(60 mg/kg)及 圖 24C(90 mg/kg)中。 * * * * *
在通篇本申請案中，已提及多個公開案、專利、專利申請案及其他文獻。此等公開案、專利、專利申請案及其他文獻之揭示內容特此以引用之方式併入本申請案中用於所有目的，包括為了更充分地描述本文中所揭示之主題所關於的目前先進技術。雖然所揭示之主題已結合上文提供之實例加以描述，但應瞭解，可在不偏離所揭示之主題精神的情況下進行各種潤飾。熟習此項技術者在審閱本說明書後將顯而易知諸多變型。
圖1提供式VIa-21之連接子-藥物的例示性合成流程1。
圖2提供式VIa-11之連接子-藥物的例示性合成流程2。
圖3提供式VIb-11之連接子-藥物的例示性合成流程3。
圖4提供式VIb-82之連接子-藥物的例示性合成流程4。
圖5提供式VIb-81之連接子-藥物的例示性合成流程5。
圖6報告經式mAbA15-VIa-11或mAbA17-VIa-11 ADC之5T4-ADC處理之MDA-MB-468細胞的細胞存活率。
圖7報告經式mAbA15-VIa-11或mAbA17-VIa-11 ADC之5T4-ADC處理之MCF-7細胞的細胞存活率。
圖8報告經式mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC處理之MDA-MB-468細胞的細胞存活率。
圖9報告經式mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC處理之MCF-7細胞的細胞存活率。
圖10報告經式mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC處理之MDA-MB-231細胞的細胞存活率。
圖11報告經式mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC處理之MCI-H226細胞的細胞存活率。
圖12報告經式mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC處理之BxPC3細胞的細胞存活率。
圖13報告經式mAbA15-VIa-11或mAbA17-VIa-11之5T4-ADC治療之MCF-7.1異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖14報告經式mAbA15-VIb-82或mAbA17-VIb-82之5T4-ADC治療之MCF-7.1異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖15報告經式mAbA15-VIb-82之5T4-ADC的0.5 mg/kg、2.5 mg/kg或5.0 mg/kg單次劑量治療之MCF-7.1異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖16報告經式mAbA15-VIb-82之5T4-ADC之0.25 mg/kg、1.25 mg/kg或2.5 mg/kg的兩次劑量(相隔1週)治療之MCF-7.1異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖17報告經式mAbA17-VIb-82之5T4-ADC之0.5 mg/kg、2.5 mg/kg或5.0 mg/kg的單次劑量治療之MCF-7.1異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖18報告經式mAbA17-VIb-82之5T4-ADC之0.25 mg/kg、1.25 mg/kg或2.5 mg/kg的兩次劑量(相隔1週)治療之MCF-7.1異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖19報告經式mAbA15-VIa-11、mAbA15-VIb-81或mAbA15-VIb-82之5T4-ADC治療之MDA-MB-468異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖20報告經式mAbA15-VIb-82或mAbA15-VIa-11之5T4-ADC治療之MDA-MB-231異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖21報告經式mAbA15-VIb-82或mAbA15-VIa-11之5T4-ADC治療之NCI-H226異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖22報告經式mAbA15-VIb-82或mAbA15-VIa-11之5T4-ADC治療之BxPC3異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖23報告經式mAbA15-VIb-82之5T4-ADC治療之Calu-6異種移植小鼠的平均腫瘤體積。
圖24A至圖24C顯示在毒理動力學(TK)研究中藉由兩種ELISA方法對經30 mg/kg (圖24A)、60 mg/kg (圖24B)及90 mg/kg (圖24C)之式mAbA15-VIb-82之5T4-ADC治療之大鼠定量的總抗體及總ADC濃度(μg/mL)。
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Claims (54)

  1. 一種式(IV)之抗體-藥物結合物(ADC)，其包含： a. 結合至5T4的抗體；及 b. 一或多種藥物，其經由連接子與一或多種嗒𠯤-吡咯并偶合部分結合 其中： Ab表示結合至5T4的抗體； r為整數1至10； m為0或1； R 2及R 3各自獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基；或R 2與R 3環形連接形成5員或6員雜環基； X 1、X 2、X 3及X 4各自獨立地選自由C、N、O及S組成之群； Y 1、Y 2、Y 3及Y 4各自獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基，或Y 1與Y 2、Y 2與Y 3，或Y 3與Y 4環形連接； W 1為藥物； L表示連接子且為-(T 1V 1) a-(T 2V 2) b-(T 3V 3) c-(T 4V 4) d-(T 5V 5) e-，其中： a、b、c、d及e各自獨立地為0或1，其中a、b、c、d及e之總和為1至5； T 1、T 2、T 3、T 4及T 5各自獨立地包含C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、(EDA) w、(PEG) n、(AA) p、-(CR 13OH) h-、哌啶-4-胺(P4A-R 12)、胺基甲酸間-胺基苯甲酯(MABC)基團、間-胺基苯甲氧基(MABO)基團、對-胺基苯甲氧基(PABO)基團、胺基甲酸對-胺基苯甲酯(PABC)基團、對-胺基苯甲基(PAB)基團、縮醛、二硫鍵、肼、(AA) p-MABC- (AA) p、(AA) p-MABO-(AA) p、(AA) p-PABO-(AA) p或(AA) p-PABC- (AA) p， w為整數1至20； n為整數1至30； 各p獨立地為零或整數1至20； h為整數1至12；且 各R 12為氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； 各R 13為氫、烷基、經取代之烷基、芳基或經取代之芳基； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地選自由以下組成之群：共價鍵、-C(=O)-、-NR 11-、-C(=O)NR 11-、-NR 11C(=O)-、-C(=O)O-、-OC(=O)-、-O-、-S-、-S(=O)-、-SO 2-、-SO 2NR 11-、-NR 11SO 2-及-P(=O)OH-，其中R 11選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、PEG、芳基及經取代之芳基。
  2. 如請求項1之ADC，其中W 1選自由類美登素(maytansinoid)及奧瑞他汀(auristatin)組成之群。
  3. 如請求項1或2之ADC，其中該奧瑞他汀為MMAE。
  4. 如請求項1至3中任一項之ADC，其中R 2及R 3各自為烷基。
  5. 如請求項1至4中任一項之ADC，其中R 2及R 3各自為甲基。
  6. 如請求項1至5中任一項之ADC，其中X 1、X 2、X 3及X 4各獨立地選自C及N。
  7. 如請求項1至6中任一項之ADC，其中該ADC由式(V)表示： 。
  8. 如請求項1至7中任一項之ADC，其中該ADC由式(VI)表示： ， 其中X 1為C或N。
  9. 如請求項1至8中任一項之ADC，其中T 1、T 2、T 3、T 4及T 5各自獨立地選自由以下組成之群：C 1-C 6烷基、P4A-R 12、(AA) p、(AA) p-PABC及(PEG) n，其中p為整數1至5，且R 12為聚乙二醇或經羧酸修飾之聚乙二醇。
  10. 如請求項1至9中任一項之ADC，其中 T 1為C 1-C 6烷基； T 2、T 3、T 4及T 5各自獨立地選自(PEG) n、C 1-C 6烷基、(AA) p、P4A-R 12、(AA) p-(PABO-R 16)-(AA) p、(AA) p-(PABC-R 16)-(AA) p、(AA) p-(PABO-R 16)及(AA) p-(PABC-R 16)，其中R 12為經羧酸修飾之聚乙二醇且R 16為氫；且 V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地選自-CO-及-NR 11-，其中R 11選自氫及烷基。
  11. 如請求項1至10中任一項之ADC，其中L為： -(C 1-C 6烷基)-(V 1)-(P4A-R 12)-(V 2)-(C 1-C 6烷基)-(V 3)-， 其中： V 1、V 2及V 3各自獨立地選自由-CO-及-NR 11-組成之群； 各R 11獨立地選自由氫及C 1-C 6烷基組成之群；且 R 12為經羧酸修飾之聚乙二醇部分。
  12. 如請求項1至11中任一項之ADC，其中L為： 其中： 表示連接至該嗒𠯤-吡咯并偶合部分之氮；且 *表示連接至W 1。
  13. 一種式(VI-1)之抗體-藥物結合物(ADC)，其包含： a. 結合至5T4的抗體；及 b. 一或多種藥物，其經由連接子與一或多種嗒𠯤-吡咯并偶合部分結合 其中： Ab表示結合至5T4的抗體； r為整數1至10； X 1為C或N； 且W 1為藥物。
  14. 如請求項13之ADC，其中W 1選自由類美登素及奧瑞他汀組成之群。
  15. 如請求項14之ADC，其中該奧瑞他汀為MMAE。
  16. 如請求項‎13或‎14之ADC，其中X 1為C且W 1為去醯化美登素(maytansine)。
  17. 如請求項‎14至‎15中任一項之ADC，其中X 1為N且W 1為MMAE。
  18. 如請求項‎13至‎17中任一項之ADC，其中L為： (C 1-C 6烷基)-V 1-(AA)-V 2-(PEG) n-V 3-((AA) p-(PABC-R 16))-V 4-(C 1-C 6烷基)-V 5， 其中： R 16為氫； n及p各自獨立地為整數1至20； V 1、V 2、V 3、V 4及V 5各自獨立地選自由-CO-及-NR 11-組成之群；且 各R 11獨立地選自由氫及C 1-C 6烷基組成之群。
  19. 如請求項‎13至‎17中任一項之ADC，其中L為： ， 其中： 表示連接至該嗒𠯤-吡咯并偶合部分之氮；且 *表示連接至W 1。
  20. 一種抗體-藥物結合物(ADC)，其包含結合至5T4的抗體，該抗體經由一或多種嗒𠯤-吡咯并偶合部分與一或多種藥物結合，如式(VI-2)所示： (VI-2) 其中： Ab表示結合至5T4的抗體； r為整數1至10； X 1為C或N；且 W 1為藥物。
  21. 如請求項‎20之ADC，其中W 1選自類美登素及奧瑞他汀。
  22. 如請求項‎21之ADC，其中該奧瑞他汀為MMAE。
  23. 如請求項‎20或‎21之ADC，其中X 1為C且W 1為去醯化美登素。
  24. 一種式(IV)之抗體-藥物結合物(ADC)，其包含： a. 結合至5T4的抗體；及 b. 一或多種藥物，其經由連接子與一或多種嗒𠯤-吡咯并偶合部分結合 其中： Ab表示結合至5T4的抗體； W 1為藥物； r為整數1至10； m為0或1； R 2及R 3各自獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基；或R 2與R 3環形連接形成5員或6員雜環基； X 1、X 2、X 3及X 4各自獨立地選自由C、N、O及S組成之群； Y 1、Y 2、Y 3及Y 4各自獨立地選自由以下組成之群：氫、鹵素、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基，或Y 1與Y 2、Y 2與Y 3，或Y 3與Y 4環形連接； L為 ， 其中： 表示連接至該嗒𠯤-吡咯并偶合部分之氮； *表示連接至W 1； 各R 5獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基； 各R 6獨立地選自烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基； R 7為可裂解部分； k為整數1至10； L 1包含 -(T 1-V 1) a-(T 2-V 2) b-(T 3-V 3) c-(T 4-V 4) d-； L 2包含-(T 5-V 5) e-(T 6-V 6) f-(T 7-V 7) g-(T 8-V 8) h-； a、b、c、d、e、f、g及h各獨立地為1或0； T 1、T 2、T 3、T 4、T 5、T 6、T 7及T 8各自獨立地選自由以下組成之群：共價鍵、C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基、(EDA) w、(PEG) n、(AA) p、-(CR 13OH) m-、P4A-R 12、縮醛、肼、二硫鍵及酯； 各w為整數1至20； 各n為整數1至30； 各p為整數1至20； 各m為整數1至12； V 1、V 2、V 3、V 4、V 5、V 6、V 7及V 8各自獨立地選自由以下組成之群：共價鍵、-CO-、-NR 15-、-NR 15(CH 2) q-、-NR 15(C 6H 4)-、-CONR 15-、-NR 15CO-、-C(O)O-、-OC(O)-、-O-、-S-、-S(O)-、-SO 2-、-SO 2NR 15-、-NR 15SO 2-及-P(O)OH-； 各q為整數1至6； R 12選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基； 各R 13獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、芳基及經取代之芳基；且 各R 15獨立地選自由以下組成之群：氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、羧基、羧基酯、醯基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基及經取代之雜環基。
  25. 如請求項‎24之ADC，其中W 1選自類美登素及奧瑞他汀。
  26. 如請求項‎25之ADC，其中該奧瑞他汀為MMAE。
  27. 如請求項‎24至‎26中任一項之ADC，其中R 2及R 3各自為烷基。
  28. 如請求項‎27之ADC，其中R 2及R 3各自為甲基。
  29. 如請求項‎24至‎28中任一項之ADC，其中X 1、X 2、X 3及X 4各獨立地選自C及N。
  30. 如請求項‎24至‎29中任一項之ADC，其由式(VI-3)表示： 。
  31. 如請求項‎30之ADC，其中R 7為 ，其中**表示連至式(VI-3)中之苯基的連接點。
  32. 如請求項‎24至‎31中任一項之ADC，其由式(V-5)表示： ， 其中R 6'及R 6''各自獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基。
  33. 如請求項‎‎24至‎32中任一項之ADC，其由式(VI-5)表示： ， 其中X 1為C或N，其中R 6'及R 6"各自獨立地為烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基。
  34. 如請求項‎24至‎‎33中任一項之ADC，其由式(VI-6)表示： 。
  35. 如請求項‎24至‎34中任一項之ADC，其中 L 1包含-(T 1-V 1) a-(T 2-V 2) b-(T 3-V 3) c-(T 4-V 4) d-； a、b及c各自為1； d為0且因此T 4及V 4不存在； T 1、T 2及T 3各自獨立地選自由C 1-C 12烷基、(PEG) n及(AA) p組成之群， n為整數1至10； p為整數1至10； V 1、V 2及V 3各自獨立地選自由-C(=O)-及-NR 11-組成之群；且 R 11選自氫、烷基、經取代之烷基、聚乙二醇部分、芳基及經取代之芳基。
  36. 如請求項24至35中任一項之ADC，其中L 1為 ，其中 表示連至嗒𠯤-吡咯并偶合部分之氮的連接點，且其中*表示在任何方向上連至該連接子之其餘部分的連接點。
  37. 如請求項24至36中任一項之ADC，其由式(VI-7)表示： (VI-7)，其中X 1為C或N。
  38. 如請求項24至37中任一項之ADC，其中L 2為羰基。
  39. 如請求項24至38中任一項之ADC，其中X 1為N且W 1為MMAE。
  40. 如請求項24至39中任一項之ADC，其由式(VIb-82)表示： 。
  41. 如請求項1至40中任一項之ADC，其中該抗體包含： (i)    包含胺基酸序列SEQ ID NO:25之VH中所示的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，以及包含胺基酸序列SEQ ID NO:26之VL中所示的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3；或 (ii)   包含胺基酸序列SEQ ID NO:44之VH中所示的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，以及包含胺基酸序列SEQ ID NO:45之VL中所示的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3；或 (iii)  包含胺基酸序列SEQ ID NO:62之VH中所示的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，以及包含胺基酸序列SEQ ID NO:63之VL中所示的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3。
  42. 如請求項1至41中任一項之ADC，其中該抗體包含： (a)    VH區，其包含： (1) VH CDR1，其具有選自由SEQ ID NO:1、7、12、13及18組成之群的胺基酸序列； (2) VH CDR2，其具有選自由SEQ ID NO:2、8、14、19及24組成之群的胺基酸序列；及 (3) VH CDR3，其具有選自由SEQ ID NO:3、9、15及20組成之群的胺基酸序列； 以及 (b)    VL區，其包含： (1) VL CDR1，其具有選自由SEQ ID NO:4、10、16及21組成之群的胺基酸序列； (2) VL CDR2，其具有選自由SEQ ID NO:5、11及22組成之群的胺基酸序列；及 (3) VL CDR3，其具有選自由SEQ ID NO:6、17及23組成之群的胺基酸序列。
  43. 如請求項1至42中任一項之ADC，其中該抗體包含： (i)    VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:2的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3；或 (ii)   VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:7的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:8的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:9的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3；或 (iii)  VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:12的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:2的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3；或 (iv)   VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:14的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:15的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:17的VL CDR3；或 (v)    VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:18的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:19的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:20的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:23的VL CDR3；或 (vi)   VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:1的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:24的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDR3。
  44. 如請求項1至41中任一項之ADC，其中該抗體包含： (a)    VH區，其包含： (1) VH CDR1，其具有選自由SEQ ID NO:27、31、34、35及39組成之群的胺基酸序列； (2) VH CDR2，其具有選自由SEQ ID NO:28、32、36、40及43組成之群的胺基酸序列；及 (3) VH CDR3，其具有選自由SEQ ID NO:29、33、37及41組成之群的胺基酸序列；以及 (b)    VL區，其包含： (1) VL CDR1，其具有選自由SEQ ID NO:4、10、16及21組成之群的胺基酸序列； (2) VL CDR2，其具有選自由SEQ ID NO:5、11及22組成之群的胺基酸序列；及 (3) VL CDR3，其具有選自由SEQ ID NO:30、38及42組成之群的胺基酸序列。
  45. 如請求項1至41及44中任一項之ADC，其中該抗體包含： (i)    VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3；或 (ii)   VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:31的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:32的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:33的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3；或 (iii)  VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:34的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:28的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3；或 (iv)   VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:35的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:36的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:37的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:38的VL CDR3；或 (v)    VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:39的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:40的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:41的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:42的VL CDR3；或 (vi)   VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:27的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:43的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:29的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:30的VL CDR3。
  46. 如請求項1至41中任一項之ADC，其中該抗體包含： (a)    VH區，其包含： (1) VH CDR1，其具有選自由SEQ ID NO:46、50、53、13及57組成之群的胺基酸序列； (2) VH CDR2，其具有選自由SEQ ID NO:47、51、54、58及61組成之群的胺基酸序列；及 (3) VH CDR3，其具有選自由SEQ ID NO:48、52、55及59組成之群的胺基酸序列；以及 (b)    VL區，其包含： (1) VL CDR1，其具有選自由SEQ ID NO:4、10、16及21組成之群的胺基酸序列； (2) VL CDR2，其具有選自由SEQ ID NO:5、11及22組成之群的胺基酸序列；及 (3) VL CDR3，其具有選自由SEQ ID NO:49、56及60組成之群的胺基酸序列。
  47. 如請求項1至41及46中任一項之ADC，其中該抗體包含： (i)    VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:47的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3；或 (ii)   VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:50的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:51的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:52的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:10的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3；或 (iii)  VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:53的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:47的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3；或 (iv)   VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:13的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:54的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:55的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:16的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:11的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:56的VL CDR3；或 (v)    VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:57的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:58的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:59的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:21的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:22的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:60的VL CDR3；或 (vi)   VH區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:46的VH CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:61的VH CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:48的VH CDR3；以及VL區，其包含：包含胺基酸序列SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含胺基酸序列SEQ ID NO:5的VL CDR2及包含胺基酸序列SEQ ID NO:49的VL CDR3。
  48. 如請求項1至46中任一項之ADC，其中該抗體進一步包含SEQ ID NO: 25、26、44、45、62及63中之任一者所示的構架1 (FR1)、構架2 (FR2)、構架3 (FR3)及/或構架4 (FR4)序列。
  49. 如請求項1至48中任一項之ADC，其中該抗體進一步包含人類構架序列。
  50. 如請求項1至49中任一項之ADC，其中該抗體包含： (i)    包含胺基酸序列SEQ ID NO:25的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:26的VL；或 (ii)   包含胺基酸序列SEQ ID NO:44的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:45的VL；或 (iii)  包含胺基酸序列SEQ ID NO:62的VH及包含胺基酸序列SEQ ID NO:63的VL。
  51. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至50中任一項之ADC及醫藥學上可接受之賦形劑。
  52. 如請求項51之醫藥組成物，其中該抗體-藥物結合物的藥物/抗體比率為約1至約4。
  53. 如請求項52之醫藥組成物，其中該藥物/抗體比率為約2。
  54. 一種用於治療個體之癌症或腫瘤的方法，其包含將如請求項1-49中任一項之抗體-藥物結合物或如請求項51至53中任一項之醫藥組成物投與該個體。
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