KR20240049583A - 캄프토테신 유도체, 이의 약학 조성물 및 이의 응용 - Google Patents

캄프토테신 유도체, 이의 약학 조성물 및 이의 응용 Download PDF

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KR20240049583A
KR20240049583A KR1020247009078A KR20247009078A KR20240049583A KR 20240049583 A KR20240049583 A KR 20240049583A KR 1020247009078 A KR1020247009078 A KR 1020247009078A KR 20247009078 A KR20247009078 A KR 20247009078A KR 20240049583 A KR20240049583 A KR 20240049583A
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펑 탕
야위안 푸
리펑 리우
춘얀 자오
렌홍 탕
진셩 렌
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심시어 자이밍 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드
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Abstract

식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 이의 약학 조성물, 및 항종양 분야에서의 이들의 용도를 제공한다.

Description

캄프토테신 유도체, 이의 약학 조성물 및 이의 응용
본 개시는 2021년 8월 19일에 중국 지식재산권청에 제출된, 특허출원번호가 CN202110955364.5이고, 발명의 명칭이 "캄프토테신 유도체 및 이의 응용"인 중국특허출원; 2021년 12월 13일에 중국 지식재산권청에 제출된, 특허출원번호가 CN202111515247.3이고, 발명의 명칭이 "캄프토테신 유도체 및 이의 응용"인 중국특허출원 및 2022년 5월 12일에 중국 지식재산권청에 제출된, 특허출원번호가 CN202210515797.3이고, 발명의 명칭이 "캄프토테신 유도체 및 이의 응용"인 중국특허출원의 우선권을 주장한다. 상기 언급된 선행 출원의 전체 내용은 그 전체가 참조로 본 명세서에 통합된다.
기술분야
본 개시는 신규한 캄프토테신 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 이들을 함유하는 약학 조성물 및 이의 항종양 약물로서의 용도에 관한 것이다.
캄프토테신(Camptothecin)은 중국 니사나무과 희수나무(Camptotheca acuminata)에서 추출하여 얻은 퀴놀린 알칼로이드이다. 이는 현저한 세포의 독성 활성으로 인해, 암 치료와 관련된 연구에 자주 사용된다. 후속 관련 메커니즘 연구에 따르면, 캄프토테신은 토포이소머라제 I을 억제하는 활성을 갖고 있는 것으로 나타났고, 이는 토포이소머라제 I과 DNA의 복합체와 결합하여, 안정적인 삼원 복합체를 형성함으로써, 토포이소머라제 I에 의해 매개되는 DNA 파손을 저해하여, DNA 복제, 전사 및 복구 등 과정을 차단하여, 최종적으로 세포 주기 정지 및 세포 사멸을 초래할 수 있다.
초기 임상 연구에 따르면, 캄프토테신은 낮은 용해도, 열악한 화학적 안정성 및 현저한 독성 및 부작용과 같은 문제가 존재하여, 최종적으로 이의 임상 적용을 저해하는 것으로 나타났다. 이후 캄프토테신을 변형시켜 얻은 토포테칸(topotecan), 이리노테칸(irinotecan) 등 캄프토테신 유도체는 난소암, 폐암 및 대장암 등 악성 종양 치료에 성공적으로 사용되었다. 그럼에도 불구하고, 이러한 임상 약물은 여전히 낮은 용해도, 열악한 화학적 안정성으로 인한 경구 생체 이용률이 낮은 문제가 존재할 뿐만 아니라, 구토, 골수 억제 등 심각한 임상적 이상 반응의 발생을 동반한다. 따라서, 캄프토테신 약물의 물리화학적 특성을 개선하고, 활성 및 안전성을 향상시키는 것은 여전히 시급히 해결해야 할 문제이다.
본 개시는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하되,
(I)
상기 식 I에서,
R1은 할로겐, CN, C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기로부터 선택되고, 상기 C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기는 선택적으로 Ra1에 의해 치환되며;
X1은 CR2 또는 N으로부터 선택되고;
R2는 H, 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra2에 의해 치환되며;
R5는 H, 할로겐, CN, NH2 또는 NO2로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기, 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C7시클로알케닐기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기, 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C7시클로알케닐기는 선택적으로 Ra5에 의해 치환되며;
R3은 H, , 또는 로부터 선택되고, X는 NH2 또는 OH로부터 선택되며, R6은 H 또는 C1-C3알킬기로부터 선택되고, R7은 H, C1-C3알킬기 또는 C3-C6시클로알킬기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하며, 상기 C3-C6시클로알킬기는 선택적으로 Ra3에 의해 치환되고;
n은 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되며;
R4는 H로부터 선택되거나, R4, R7은 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra4에 의해 치환되고;
각각의 Ra1, Ra2, Ra3, Ra4, Ra5는 독립적으로 D, 할로겐, CN, ＝O, OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기로부터 선택되고, 상기 OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Rb에 의해 치환되며;
각각의 Rb는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O, C1-C3알킬기, OH, O(C1-C3알킬기), NH2, NH(C1-C3알킬기) 또는 N(C1-C3알킬기)2로부터 선택되고;
조건은, i) R1이 메틸기로부터 선택되고, R2가 F로부터 선택되는 경우, R3은 , 또는 로부터 선택되며, 여기서 R6은 H 또는 C1-C3알킬기로부터 선택되고, R7은 H, C1-C3알킬기 또는 C3-C6시클로알킬기로부터 선택되며, n은 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고; ii) X가 NH2로부터 선택되는 경우, R5는 H로부터 선택되지 않으며; 및 iii) 식(I)로 표시되는 화합물은 이하의 화합물: , , 을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, 전술한 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염에 있어서, 여기서, R1은 할로겐, CN, C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기로부터 선택되고, 상기 C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기는 선택적으로 Ra1에 의해 치환되며;
X1은 CR2 또는 N으로부터 선택되고;
R2는 H, 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra2에 의해 치환되며;
R5는 H, 할로겐, CN 또는 NO2로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C7시클로알케닐기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C7시클로알케닐기는 선택적으로 Ra5에 의해 치환되며;
R3은 H, , 또는 로부터 선택되고, R6은 H 또는 C1-C3알킬기로부터 선택되며, R7은 H, C1-C3알킬기 또는 C3-C6시클로알킬기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하고, 상기 C3-C6시클로알킬기는 선택적으로 Ra3에 의해 치환되며;
n은 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되며;
R4는 H로부터 선택되거나, R4, R7은 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra4에 의해 치환되고;
각각의 Ra1, Ra2, Ra3, Ra4, Ra5는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O, OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기로부터 선택되고, 상기 OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Rb에 의해 치환되며;
각각의 Rb는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O, C1-C3알킬기, OH, O(C1-C3알킬기), NH2, NH(C1-C3알킬기) 또는 N(C1-C3알킬기)2로부터 선택되고;
조건은, i) R1이 메틸기로부터 선택되고, R2가 F로부터 선택되는 경우, R3은 , 또는 로부터 선택되며, 여기서 R6은 H 또는 C1-C3알킬기로부터 선택되고, R7은 H, C1-C3알킬기 또는 C3-C6시클로알킬기로부터 선택되며, n은 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고; 및 ii) 식(I)로 표시되는 화합물은 이하의 화합물: , , 을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, 전술한 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염에 있어서, 여기서,
R1은 할로겐, CN, C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기로부터 선택되고, 상기 C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기는 선택적으로 Ra1에 의해 치환되며;
X1은 CR2 또는 N으로부터 선택되고;
R2는 H, 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra2에 의해 치환되며;
R5는 H, 할로겐 또는 CN으로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로아릴기는 선택적으로 Ra5에 의해 치환되며;
R3은 H, 또는 로부터 선택되고, R6은 H 또는 C1-C3알킬기로부터 선택되며, R7은 H, C1-C3알킬기 또는 C3-C6시클로알킬기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하고, 상기 C3-C6시클로알킬기는 선택적으로 Ra3에 의해 치환되며;
n은 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되며;
R4는 H로부터 선택되거나, R4, R7은 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra4에 의해 치환되고;
각각의 Ra1, Ra2, Ra3, Ra4, Ra5는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O, OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기로부터 선택되고, 상기 OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Rb에 의해 치환되며;
각각의 Rb는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O, C1-C3알킬기, OH, O(C1-C3알킬기), NH2, NH(C1-C3알킬기) 또는 N(C1-C3알킬기)2로부터 선택되고;
조건은, i) R1이 메틸기로부터 선택되고, R2가 F로부터 선택되는 경우, R3은 또는 로부터 선택되며, 여기서 R6은 H 또는 C1-C3알킬기로부터 선택되고, R7은 H, C1-C3알킬기 또는 C3-C6시클로알킬기로부터 선택되며, n은 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고; 및 ii) 식(I)로 표시되는 화합물은 이하의 화합물: , , 을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, 전술한 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염에 있어서, 여기서,
R1은 할로겐, CN, C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기로부터 선택되고, 상기 C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기는 선택적으로 Ra1에 의해 치환되며;
X1은 CR2 또는 N으로부터 선택되고;
R2는 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra2에 의해 치환되며;
R5는 H, 할로겐 또는 CN으로부터 선택되고;
R3은 H 또는 로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 C3-C6시클로알킬기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하고, 상기 C3-C6시클로알킬기는 선택적으로 Ra3에 의해 치환되며;
R4는 H로부터 선택되거나, R4, R7은 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra4에 의해 치환되고;
각각의 Ra1, Ra2, Ra3, Ra4는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O, OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기로부터 선택되고, 상기 OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Rb에 의해 치환되며;
각각의 Rb는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O, C1-C3알킬기, OH, O(C1-C3알킬기), NH2, NH(C1-C3알킬기) 또는 N(C1-C3알킬기)2로부터 선택되고;
조건은, i) R1이 메틸기로부터 선택되고, R2가 F로부터 선택되는 경우, R3은 로부터 선택되며; 및 ii) 식(I)로 표시되는 화합물은 이하의 화합물: , , 을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, Ra1, Ra2, Ra3, Ra4, Ra5는 독립적으로 D, 할로겐, CN, ＝O 또는 OH로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, Ra1, Ra2, Ra3, Ra4, Ra5는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O 또는 OH로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, Ra1, Ra2, Ra3, Ra4는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O 또는 OH로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, Ra2, Ra3는 독립적으로 D로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1은 할로겐, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C3알키닐기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1은 Cl, Br, 메틸기, 시클로프로필기 또는 에티닐기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1은 Cl, Br 또는 메틸기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, X1은 N으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, X1은 CR2로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R2는 H, 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 고리 원자로서 1개 또는 2개의 산소 원자를 함유하며, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 D원자에 의해 치환된다.
일부 실시형태에서, R2는 H, 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 고리 원자로서 1개 또는 2개의 산소 원자를 함유한다.
일부 실시형태에서, R2는 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 고리 원자로서 1개 또는 2개의 산소 원자를 함유한다.
일부 실시형태에서, R2는 H 및 할로겐으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 고리 원자로서 1개 또는 2개의 산소 원자를 함유한다.
일부 실시형태에서, R2는 H, F 또는 Cl로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 , 또는 을 형성한다.
일부 실시형태에서, R2는 H, F 또는 Cl로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성한다.
일부 실시형태에서, R2는 F 또는 Cl로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성한다.
일부 실시형태에서, R1은 메틸기로부터 선택되고, R2는 F 또는 Cl로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1은 메틸기로부터 선택되고, R2는 Cl로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1은 Cl, Br, 시클로프로필기 또는 에티닐기로부터 선택되고, R2는 F로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R5는 H, 할로겐, NH2 또는 NO2로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C6시클로알케닐기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C6시클로알케닐기는 선택적으로 Ra5에 의해 치환된다.
일부 실시형태에서, R5는 H, 할로겐 또는 NO2로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C6시클로알케닐기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C6시클로알케닐기는 선택적으로 Ra5에 의해 치환된다.
일부 실시형태에서, R5는 H 또는 할로겐으로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R5는 H, 할로겐 또는 NO2로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R5는 H 또는 할로겐으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R5는 H, Cl, F, NH2 또는 NO2로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성한다.
일부 실시형태에서, R5는 H, Cl, F 또는 NO2로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성한다.
일부 실시형태에서, R5는 H 또는 F로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 을 형성한다.
일부 실시형태에서, R5는 H, Cl, F 또는 NO2로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R5는 H 또는 F로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 H로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 또는 로부터 선택되고, X는 NH2 또는 OH로부터 선택되며, R6은 H 또는 메틸기로부터 선택되고, R7은 H, 메틸기, 이소프로필기 또는 선택적으로 D원자에 의해 치환된 시클로프로필기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 또는 로부터 선택되고, X는 NH2 또는 OH로부터 선택되며, R6은 H 또는 메틸기로부터 선택되고, R7은 H, 메틸기, 이소프로필기 또는 시클로프로필기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 또는 로부터 선택되고, R6은 H 또는 메틸기로부터 선택되며, R7은 H, 메틸기, 시클로프로필기 또는 이소프로필기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 로부터 선택되고, R6은 H 또는 메틸기로부터 선택되며, R7은 H, 메틸기, 시클로프로필기 또는 이소프로필기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 또는 로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 시클로프로필기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 시클로프로필기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 로부터 선택되고, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R3은 로부터 선택되고, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 시클로프로필기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R1은 메틸기로부터 선택되고, X1은 CF 및 CCl로부터 선택되며, R3은 로부터 선택되고, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R1은 메틸기로부터 선택되고, X1은 CF로부터 선택되며, R3은 로부터 선택되고, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R1은 메틸기로부터 선택되고, R2은 F 또는 Cl로부터 선택되며, R3은 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1은 메틸기로부터 선택되고, R2은 F로부터 선택되며, R3은 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R4는 H로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R4, R7은 이들 각각에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R4, R7은 이들 각각에 연결된 원자와 함께 5원 헤테로시클릴기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R3은 H 또는 로부터 선택되고, R4는 H로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3, R4는 모두 H로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R4는 H로부터 선택되고, R3은 로부터 선택되며, R6은 H로부터 선택되고, R7은 H 또는 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 시클로프로필기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R3은 로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R4, R7은 이들 각각에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R3은 로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R4, R7은 이들 각각에 연결된 원자와 함께 5원 헤테로시클릴기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성하고, R3은 H, 또는 로부터 선택되며, R4는 H로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 선택적으로 D원자에 의해 치환된 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성하고, R3은 로부터 선택되며, R4는 H로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 선택적으로 D원자에 의해 치환된 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 시클로프로필기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 을 형성하고, R3은 로부터 선택되며, R4는 H로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 을 형성하고, R3은 H, 또는 로부터 선택되며, R4는 H로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 을 형성하고, R3은 로부터 선택되며, R4는 H로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C6시클로알케닐기를 형성하고, R3은 또는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기를 형성하고, R3은 또는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기를 형성하고, R3은 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기를 형성하고, R3은 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R2는 H로부터 선택되고, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C6시클로알케닐기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R2는 H로부터 선택되고, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 C5-C6시클로알케닐기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R2는 H로부터 선택되고, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R2는 H로부터 선택되고, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기를 형성하고, R3은 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R3은 H, , , 또는 로부터 선택되고, 여기서 X는 NH2 또는 OH로부터 선택되며, R6은 H 또는 메틸기로부터 선택되고, R7은 H, 메틸기, 이소프로필기 또는 선택적으로 D원자에 의해 치환된 시클로프로필기로부터 선택되며; R4는 H로부터 선택되거나, R4, R7은 이들 각각에 연결된 원자와 함께 5원 헤테로시클릴기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R3은 H, , , 또는 로부터 선택되고, 여기서 X는 NH2 또는 OH로부터 선택되며, R6은 H 또는 메틸기로부터 선택되고, R7은 H, 메틸기, 이소프로필기 또는 시클로프로필기로부터 선택되며; R4는 H로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 구조 단위 는 , , , , , , , , , , , , , 또는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 구조 단위 는 , , , , , , , , , , , 또는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 구조 단위 는 , , , , , , , , , , , 또는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 구조 단위 는 , , , , , , , , , , 또는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 구조 단위 는 , , , 또는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1은 메틸기로부터 선택되고, X1은 CF로부터 선택되며, 구조 단위 는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성하고, 구조 단위 는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 을 형성하고, 구조 단위 는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 을 형성하고, 구조 단위 는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성하고, 구조 단위 는 또는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 을 형성하고, 구조 단위 는 로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염은 식(Ia)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로부터 선택되되,
(Ia)
여기서, R1, R2, R3, R4, R5는 상기에서 정의된 바와 같다.
식(Ia)와 관련된 청구항 11에서, 청구항 11이 전술한 청구항 x를 인용하는 경우, 상기 식(Ia) 중의 R1, R2, R3, R4, R5는 청구항 x에서 정의된 바와 같은 것을 이해해야 한다. 예를 들어, 청구항 11이 전술한 청구항 1을 인용하는 경우, 상기 식(Ia) 중의 R1, R2, R3, R4, R5는 청구항 1에서 정의된 바와 같고; 청구항 11이 전술한 청구항 2를 인용하는 경우, 상기 식(Ia) 중의 R1, R2, R3, R4, R5는 청구항 2에서 정의된 바와 같으며, 이와 같이 유추한다.
일부 실시형태에서, 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염은 식(Ib)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로부터 선택되되,
(Ib)
여기서, R1, R3, R4, R5는 상기에서 정의된 바와 같다.
식(Ib)와 관련된 청구항 12에서, 청구항 12이 전술한 청구항 x를 인용하는 경우, 상기 식(Ib) 중의 R1, R3, R4, R5는 청구항 x에서 정의된 바와 같은 것을 이해해야 한다. 예를 들어, 청구항 12가 전술한 청구항 1을 인용하는 경우, 상기 식(Ib) 중의 R1, R3, R4, R5는 청구항 1에서 정의된 바와 같고; 청구항 12가 전술한 청구항 2를 인용하는 경우, 상기 식(Ib) 중의 R1, R3, R4, R5는 청구항 2에서 정의된 바와 같으며, 이와 같이 유추한다.
본 개시는 식(II)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하되,
(II)
상기 식 II에서,
R8은 히드록실기, 할로겐, CN, C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기로부터 선택되고;
X2는 CR9 또는 N으로부터 선택되며;
R9는 H, 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R8, R9는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고;
R10, R11은 독립적으로 H, C3-C6시클로알킬기로부터 선택되거나, R10, R11은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성한다.
일부 실시형태에서, R8은 히드록실기, 할로겐 또는 CN으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R8은 히드록실기로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, X2는 CH로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R10, R11은 모두 H로부터 선택된다.
충돌이 없는 경우, 상기 실시형태는 임의로 조합되어, 조합된 실시형태의 특징을 포함하는 기술방안을 형성할 수 있다. 이러한 조합된 기술방안은 본 발명의 범위 내에 있다. 일부 실시형태에서, 상기 식(I) 또는 식(II)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염은 이하의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로부터 선택된다
또는 .
본 개시는 식(I) 또는 식(II)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 더 제공한다.
나아가, 본 개시는 토포이소머라제 I 관련 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약물의 제조에서의 식(I) 또는 식(II)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약학 조성물의 용도를 제공한다.
나아가, 본 개시는 토포이소머라제 I 관련 질환의 예방 또는 치료에서의 식(I) 또는 식(II)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약학 조성물의 용도를 제공한다.
나아가, 본 개시는 토포이소머라제 I 관련 질환을 예방 또는 치료하기 위한 식(I) 또는 식(II) 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약학 조성물을 제공한다.
본 개시는 환자에게 치료 유효량의 식(I) 또는 식(II) 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약학 조성물, 또는 본 개시의 식(I) 또는 식(II) 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약물 제제를 투여하는 단계를 포함하는 토포이소머라제 I 관련 질환을 치료하는 방법을 더 제공한다.
일부 실시형태에서, 상기 토포이소머라제 I 관련 질환은 암을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
나아가, 본 개시는 항종양 약물을 제조하기 위한 식(I) 또는 식(II)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약학 조성물의 용도를 제공한다.
나아가, 본 개시는 항종양 측면에서의 식(I) 또는 식(II)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약학 조성물의 용도를 제공한다.
나아가, 본 개시는 항종양을 위한 식(I) 또는 식(II) 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약학 조성물을 제공한다.
본 개시는 환자에게 치료 유효량의 식(I) 또는 식(II) 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 약학 조성물, 또는 본 개시의 식(I) 또는 식(II) 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약물 제제를 투여하는 단계를 포함하는 종양 치료 방법을 더 제공한다.
용어 정의 및 설명
달리 명시하지 않는 한, 본 개시에 사용된 용어는 다음과 같은 의미를 갖고, 본 개시에 기재된 그룹 및 용어 정의는 구현예로서의 정의, 예시적 정의, 바람직한 정의, 표에 기재된 정의, 실시예의 구체적인 화합물의 정의 등을 포함하고, 서로 임의로 조합 및 결합할 수 있다. 하나의 특정된 용어는 특별한 정의가 없는 한 불확실하거나 불명확하다고 간주되어서는 안 되고, 본 분야의 통상적인 의미에 따라 이해되어야 한다. 본 명세서에 상품명이 나타나는 경우, 이에 대응되는 상품 또는 이의 활성 성분을 지칭하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 ""는 연결 사이트를 나타낸다.
본 명세서의 라세미체 또는 거울상 순수 화합물의 도식적 표현은 Maehr, J.Chem.Ed.1985, 62:114-120에서 유래되었다. 달리 명시하지 않는 한, 쐐기형 결합 및 가상 쐐기 결합( 및 )으로 하나의 입체 중심의 절대 배열을 나타내고, 검정색 고체 결합 및 가상 결합( 및 )으로 하나의 입체 중심의 상대적 배열(예: 지환족 화합물의 시스-트랜스 배열)을 나타낸다.
용어 "호변이성질체"는 분자 내 특정 원자가 두 위치 사이에서 신속하게 이동하여 생성되는 작용기 이성질체를 의미한다. 본 개시의 화합물은 호변이성을 나타낼 수 있다. 호변이성질체 화합물은 두 가지 또는 여러 가지 상호 전환 가능한 종류로 존재할 수 있다. 호변이성질체는 일반적으로 평형 형태로 존재하고, 단일 호변이성질체를 분리하려는 시도는 일반적으로 물리적 및 화학적 특성이 화합물의 혼합물과 일치하는 혼합물을 생성한다. 평형 위치는 분자 내의 화학적 특성에 따라 결정된다. 예를 들어, 많은 지방족 알데히드와, 아세트알데히드와 같은 케톤에서는 케토 형태가 우세를 차지하고; 페놀에서는, 에놀 형태가 우세를 차지한다. 본 개시는 화합물의 모든 호변이성질체 형태를 포함한다.
용어 "입체이성질체"는 시스-트랜스 이성질체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체를 포함하여 분자 내 원자의 서로 다른 공간 배열로 인해 발생하는 이성질체를 의미한다.
본 개시의 화합물은 탄소 원자, 황 원자, 질소 원자, 인 원자 또는 비대칭 이중 결합과 같은 비대칭 원자를 가질 수 있으므로, 본 개시의 화합물은 특정된 기하학적 또는 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 특정된 기하학적 또는 입체이성질체 형태는 시스 및 트랜스 이성질체, E 및 Z 기하학적 이성질체, (-)- 및 (+)- 거울상이성질체, (R)- 및 (S)- 거울상이성질체, 부분입체이성질체, (D)-이성질체, (L)-이성질체, 및 이들의 라세미 혼합물 또는 기타 혼합물일 수 있고, 예를 들어 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체가 풍부한 혼합물이며, 이상 모든 이러한 이성질체 및 이들의 혼합물은 모두 본 개시의 화합물의 정의 범위 내에 속한다. 알킬기와 같은 치환기에는 별도의 비대칭 탄소 원자, 비대칭 황 원자, 비대칭 질소 원자 또는 비대칭 인 원자가 존재할 수 있고, 모든 치환기에 포함된 이들의 이성질체 및 이들의 혼합물도 모두 본 개시의 화합물의 정의 범위 내에 속한다. 비대칭 원자를 함유한 본 개시의 화합물은 광학 활성 순수 형태 또는 라세미 형태로 분리될 수 있고, 광학 활성 순수 형태는 라세미 혼합물로부터 분리될 수 있거나, 키랄 원료 또는 키랄 시약을 사용하여 합성될 수 있다.
용어 "치환된"은 특정 원자의 임의의 하나 또는 복수의 수소 원자가 치환기에 의해 치환되는 것을 의미하고, 특정 원자의 원자가 상태가 정상이고 치환된 화합물이 안정적이면 된다. 치환기가 옥소(즉, =O)인 경우, 두 개의 수소 원자가 치환되는 것을 의미하고, 옥소는 방향족 그룹에서 발생하지 않는다.
용어 "선택적인" 또는 "선택적으로"는 이후에 설명되는 사건 또는 상황이 발생할 수 있거나 발생하지 않을 수 있는 것을 의미하고, 상기 설명은 상기 사건 또는 상황이 발생하는 것 및 상기 사건 또는 상황이 발생하지 않는 것을 포함한다. 예를 들어, 에틸기가 "선택적인" 할로겐에 의해 치환되는 것은, 에틸기가 비치환된(CH2CH3), 단일 치환된(예: CH2CH2F, CH2CH2Cl 등), 다중 치환된(예: CHFCH2F, CH2CHF2, CHFCH2Cl, CH2CHCl2 등) 완전 치환된(CF2CF3, CF2CCl3, CCl2CCl3 등) 것일 수 있다. 당업자는 공간적으로 존재할 수 없고 및/또는 합성할 수 없는 치환 또는 치환 패턴이 하나 또는 복수의 치환기를 함유하는 임의의 그룹에 도입되지 않을 것임을 이해할 수 있다.
임의의 변수(예를 들어 Ra, Rb)가 화합물의 조성 또는 구조에 1회 이상 나타나는 경우, 각 경우의 정의는 독립적이다. 예를 들어, 만약 하나의 그룹이 2개의 Rb에 의해 치환되면, 각각의 Rb는 모두 독립적인 옵션이 있다.
-(CH2)0-와 같이 연결 그룹의 수가 0인 경우, 상기 연결 그룹이 결합임을 나타낸다.
변수 중 하나가 화학 결합으로부터 선택되거나 존재하지 않는 경우, 연결된 두 개의 그룹이 직접 연결되어 있음을 나타내고, 예를 들어 A-L-Z에서 L이 결합을 나타내는 경우 상기 구조가 실제적으로는 A-Z임을 나타낸다.
본 명세서에 언급된 연결 그룹이 연결 방향을 명시하지 않은 경우, 연결 방향은 임의적이다. 예를 들어 구조 단위의 L1이 "C1-C3알킬렌-O"로부터 선택되는 경우, 이때 L1은 왼쪽에서 오른쪽으로 판독하는 순서와 동일한 방향에 따라 고리 Q 및 R1을 연결하여 "고리 Q-C1-C3알킬렌-O-R1"을 구성할 수 있거나, 왼쪽에서 오른쪽으로 판독하는 순서와 상반되는 방향에 따라 고리 Q 및 R1을 연결하여 "고리 Q-O-C1-C3알킬렌-R1"을 구성할 수 있다.
본 명세서의 Cm-Cn은, m-n 범위의 정수 개의 탄소 원자를 갖는 것을 의미한다. 예를 들어 "C1-C10"은 상기 그룹이 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자, 4개의 탄소 원자, 5개의 탄소 원자, 6개의 탄소 원자, 7개의 탄소 원자, 8개의 탄소 원자, 9개의 탄소 원자 또는 10개의 탄소 원자를 가질 수 있는 것을 의미한다.
용어 "알킬기"는 일반식이 CnH2n+1인 히드록실기를 의미하고, 상기 알킬기는 직쇄 또는 분지쇄일 수 있다. 용어 "C1-C6알킬기"는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 포화 히드록실기를 나타내는 것으로 이해해야 한다. 상기 알킬기는 메틸기, 에틸기, 프로필기, 부틸기, 펜틸기, 헥실기, 이소프로필기, 이소부틸기, sec-부틸기, tert-부틸기, 이소펜틸기, 2-메틸부틸기, 1-메틸부틸기, 1-에틸프로필기, 1, 2-디메틸프로필기, 네오펜틸기, 1, 1-디메틸프로필기, 4-메틸펜틸기, 3-메틸펜틸기, 2-메틸펜틸기, 1-메틸펜틸기, 2-에틸부틸기, 1-에틸부틸기, 3, 3-디메틸부틸기, 2, 2-디메틸부틸기, 1, 1-디메틸부틸기, 2, 3-디메틸부틸기, 1, 3-디메틸부틸기 또는 1, 2-디메틸부틸기 등을 포함하지만 이에 한정되지 않고; 용어 "C1-C3알킬기"는 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기와 같은 1개 내지 3개의 탄소 원자를 함유한 알킬기를 의미한다.
본 명세서에 기재된 "C1-C6알킬기"는 "C1-C3알킬기"를 추가로 포함할 수 있다.
용어 "알키닐기"는 탄소 원자 및 수소 원자로 조성되고 적어도 하나의 삼중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지쇄의 불포화 지방족 히드록실기를 의미한다. 예를 들어, 용어 "C2-C6알키닐기"는 하나 또는 복수의 삼중 결합을 포함하고 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄의 히드록실기로 이해되어야 한다. "C2-C6알키닐기"의 구현예는 에티닐기(-C≡CH), 프로프-1-이닐기(1-프로피닐기, -C≡CCH3), 프로프-2-이닐기(-CH2C≡CH), 부트-1-이닐기, 부트-2-이닐기 또는 부트-3-이닐기를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. "C2-C6알키닐기"는 "C2-C3알키닐기"를 포함할 수 있고, "C2-C3알키닐기" 구현예는 에티닐기(-C≡CH), 프로프-1-이닐기(1-프로피닐기, -C≡CCH3), 프로프-2-이닐기(-CH2C≡CH)를 포함할 수 있다.
용어 "시클로알킬기"는 완전히 포화되고 단일 고리, 융합 고리, 가교 고리 또는 스피로 고리 등 형태로 존재하는 탄소 고리 그룹을 의미한다. 용어 "C3-C6시클로알킬기"는 3, 4, 5 또는 6개의 고리 탄소 원자를 갖는 시클로알킬기를 의미하고, 구체적인 구현예는 시클로프로필기, 시클로부틸기, 시클로펜틸기, 시크롤헥실기 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
용어 "시클로알케닐기"는 완전히 포화되지 않고 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 갖고 단일 고리, 축합 고리, 가교 고리 또는 스피로 고리의 형태로 존재하는 비방향족 탄소 고리 그룹을 의미한다. 달리 명시하지 않는 한, 상기 탄소 고리는 일반적으로 5원 내지 8원 고리이다. 용어 "C5-C7시클로알케닐기"는 고리 원자 수가 5, 6 또는 7인 시클로알케닐기를 의미하고, 구체적인 구현예는 시클로펜테닐기, 시클로펜타디에닐기, 시클로헥세닐기, 시클로헥사디에닐기, 사이클로헵테닐기 또는 시클로헵타디에닐기 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 용어 "C5-C7시클로알케닐기"는 "C5-C6시클로알케닐기" 등 범위를 포함할 수 있다. 용어 "C5-C6시클로알케닐기"는 고리 원자 수가 5 또는 6인 시클로알케닐기를 의미하고, 구체적인 구현예는 시클로펜테닐기, 시클로펜타디에닐기, 시클로헥세닐기, 시클로헥사디에닐기 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
용어 "헤테로시클릴기"는 완전히 포화되거나 부분적으로 포화된 단일 고리, 융합 고리, 스피로 고리 또는 가교 고리 그룹을 의미하고, 그 고리 원자에는 1-5개(예를 들어 1-3개 또는 1-2개)의 헤테로원자 또는 헤테로원자 그룹(즉 헤테로원자를 함유한 원자 그룹)이 함유되며, 상기 "헤테로원자 또는 헤테로원자 그룹"은 질소 원자(N), 산소 원자(O), 황 원자(S), 인 원자(P), 붕소 원자(B), -S(=O)2-, -S(=O)-, -P(=O)2-, -P(=O)-, -NH-, -S(=O)(=NH)-, -C(=O)NH- 또는 -NHC(=O)NH- 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 용어 "4-7원 헤테로시클릴기"는 고리 원자 수가 4, 5, 6 또는 7인 헤테로시클릴기를 의미하고, 그 고리 원자에는 상기에서 언급한 것 중에서 독립적으로 선택된 1-3개의 헤테로원자 또는 헤테로원자 그룹이 함유된다. 여기서, 4원 헤테로시클릴기의 구현예는 아제티디닐기, 옥세타닐기를 포함하지만 이에 한정되지 않고; 5원 헤테로시클릴기의 구현예는 테트라히드로푸릴기, 디옥솔릴기, 피롤리디닐기, 이미다졸리디닐기, 피라졸리디닐기, 피롤리닐기, 4,5-디히드록사졸 또는 2,5-디히드로-1H-피롤릴기를 포함하지만 이에 한정되지 않으며; 6원 헤테로시클릴기의 구현예는 테트라히드로피라닐기, 피페리딜기, 모르폴리닐기, 디티아닐기, 티오모르폴리닐기, 피페라지닐기, 트리티일기, 테트라히드로피리디닐기 또는 4H-[1,3,4]티아디아지닐기를 포함하지만 이에 한정되지 않고; 7원 헤테로시클릴기의 구현예는 디아제파닐기를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. "4-7원 헤테로시클릴기"는 "4-7원 헤테로시클로알킬기", "5-6원 헤테로시클릴기", "5-6원 헤테로시클로알킬기" 등 범위를 포함할 수 있다.
용어 "5-6원 헤테로아릴기"는 5개 또는 6개의 고리 원자를 갖는 방향족 고리 그룹을 의미하고, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1-2개의 헤테로원자와 같은 1-3개를 포함한다. 5-6원 헤테로아릴기의 구현예는 티에닐기, 푸릴기, 피롤릴기, 옥사졸릴기, 티아졸릴기, 이미다졸릴기, 피라졸릴기, 이속사졸릴기, 이소티아졸릴기, 옥사디아졸릴기, 트리아졸릴기, 티아디아졸릴기, 피리딜기, 피리다지닐기, 피리미디닐기, 피라지닐기 또는 트리아지닐기 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
용어 "할로" 또는 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 및 요오드를 의미한다.
용어 "치료 유효량"은 (i) 특정 질환, 병증 또는 장애를 치료하거나, (ii) 특정 질환, 병증 또는 장애의 한 가지 또는 여러 가지 증상을 경감, 개선 또는 제거하거나, (iii) 본 명세서의 특정 질환, 병증 또는 장애의 한 가지 또는 여러 가지 증상 발병을 지연시키는 본 개시의 화합물의 용량을 의미한다. "치료 유효량"을 구성하는 본 개시의 화합물의 양은 상기 화합물, 질환 상태 및 그의 중증도, 투여 방식 및 치료할 포유동물의 연령에 따라 변경될 것이지만, 당업자는 자신의 지식 및 본 개시 내용에 따라 결정할 수 있다.
용어 "예방"은 본 개시의 화합물 또는 제제를 투여하여 질환 또는 상기 질환과 관련된 한 가지 또는 여러 가지 증상을 에방하고, 질환 또는 질환 상태가 개체(예를 들어 포유동물)에서 나타나는 것을 예방하는 것을 포함하며, 특히 이러한 개체(예를 들어 포유동물)가 상기 질환 상태를 앓기 쉽지만, 상기 질환 상태를 앓고 있는 것으로 아직 진단되지 않은 경우이다.
용어 "약학적으로 허용 가능한"은, 그러한 화합물, 재료, 조성물 및/또는 제형에 있어서, 신뢰적인 의학적 판단의 범위 내에서 인간 및 동물의 조직과의 접촉 사용에 적용되고, 과다한 독성, 자극성, 알레르기성 반응 또는 기타 문제 또는 합병증이 없으며, 합리적인 이익/위험 비율에 상응한다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 약학적으로 허용 가능한 산 또는 염기의 염을 의미하고, 화합물과 무기산 또는 유기산이 형성한 염, 및 화합물과 무기 염기 또는 유기 염기가 형성한 염을 포함한다.
용어 "약학 조성물"은 한 가지 또는 여러 가지 본 개시의 화합물 또는 이의 염이 약학적으로 허용 가능한 부형제와 조성한 혼합물을 의미한다. 약학 조성물의 목적은 유기체에 대한 본 개시의 화합물의 투여에 도움이 되는 것이다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 부형제"는 유기체에 명백한 자극 효과가 없고, 상기 활성 화합물의 생물학적 활성 및 성능을 손상시키지 않는 부형제를 의미한다. 예를 들어 탄수화물, 왁스, 수용성 및/또는 수팽윤성 중합체, 친수성 또는 소수성 물질, 젤라틴, 오일, 용매, 물 등과 같은 적합한 부형제는 당업자에게 잘 알려져 있다.
용어 "환자"는 포유동물 및 비포유동물을 포함한다. 포유동물의 구현예는 포유동물강의 모든 구성원, 즉 인간, 인간이 아닌 영장류(예를 들어 침팬지, 기타 유인원 및 원숭이); 소, 말, 양, 염소, 돼지와 같은 가축; 토끼, 개, 고양이와 같은 가축; 래트, 마우스 및 기니피그 등 설치류를 포함한 실험 동물 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 비인간 포유동물의 구현예는 새 및 물고기 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 본 명세서에 제공된 관련 방법 및 조성물의 실시형태에서, 상기 포유동물은 인간이다. 용어 "환자" 및 "개체"는 상호 교환 가능하게 사용된다.
단어 "포함(comprise)" 또는 "포함(comprise)" 및 그 영어 변형, 예를 들어 comprises 또는 comprising은 공개적이고, 비배타적인 의미, 즉 "포함하지만 한정되지 않는"것으로 이해되어야 한다.
본 개시는 본 명세서에 기재된 화합물과 동일하지만, 하나 또는 복수의 원자가 자연에서 일반적으로 발견되는 것과 상이한 원자량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 동위원소 표지된 본 개시의 화합물을 더 포함한다. 본 개시의 화합물에 결합될 수 있는 동위원소의 구현예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 요오드 및 염소의 동위원소를 포함하고, 예컨대 각각 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 123I, 125I 및 36Cl 등이다.
특정 동위원소 표지된 본 개시의 화합물(예를 들어 3H 및 14C로 표시된 화합물)은 화합물 및/또는 기질 조직 분포 분석에 사용될 수 있다. 삼중수소(즉 3H) 및 탄소-14(즉 14C) 동위원소는 제조 및 검출 용이성으로 인해 특히 바람직하다. 15O, 13N, 11C 및 18F와 같은 양전자 방출 동위원소는 양전자 방출 단층 촬영(PET) 연구에서 기질 점유율을 연구하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로 하기 방안 및/또는 실시예에 개시된 것과 유사한 절차에 따라 동위원소 표지된 시약으로 비동위원소 표지된 시약을 대체하여 동위원소 표지된 본 개시의 화합물을 제조할 수 있다.
본 개시의 약학 조성물은 본 개시의 화합물을 적합한 약학적으로 허용 가능한 부형제와 조합하여 제조될 수 있고, 예를 들어 정제, 환제, 캡슐제, 분제, 과립제, 고제, 유제, 현탁제, 좌약, 주사제, 흡입제, 젤, 미소구체 및 에어로졸 등과 같은 고체, 반고체, 액체 또는 기체 제제로 조제될 수 있다.
본 개시의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 약학 조성물의 전형적인 투여 경로는 경구, 직장, 국소, 흡입, 비경구, 설하, 질내, 비강내, 안구내, 복강내, 근육내, 피하, 정맥내 투여를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본 개시의 약학 조성물은 통상적인 혼합법, 용해법, 과립화법, 유화법, 동결건조법 등 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제조될 수 있다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 경구 형태이다. 경구 투여의 경우, 활성 화합물을 당업계에 잘 알려진 약학적으로 허용 가능한 부형제와 혼합하여, 상기 약학 조성물을 조제할 수 있다. 이러한 부형제는 본 개시의 화합물이 정제, 환제, 타블렛, 당의정, 캡슐제, 액체, 젤, 시럽제, 현탁제 등으로 조제되도록 하여, 환자에게 경구 투여될 수 있다.
통상적인 혼합, 충진 또는 정제화 방법을 통해 고체 경구 조성물을 제조할 수 있다. 예를 들어, 상기 활성 화합물을 고체 부형제와 혼합하고, 선택적으로 생성된 혼합물을 분쇄하며, 필요하면 기타 적합한 부형제를 첨가한 후, 상기 혼합물을 과립으로 가공하여, 정제 또는 당의정의 코어를 얻는 방법을 통해 얻을 수 있다. 적합한 부형제는 바인더, 희석제, 붕해제, 윤활제, 활택제, 감미제 또는 향미제 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
약학 조성물은 또한 적합한 단위 제형의 멸균 용액, 현탁제 또는 동결건조 제품과 같은 비경구 투여에 적용될 수 있다.
본 명세서에 기술된 일반식Ⅰ 화합물의 모든 투여 방법에서, 1일 투여량은 0.01 내지 200 mg/kg 체중이고, 바람직하게는 0.05 내지 50 mg/kg 체중이며, 보다 바람직하게는 0.1 내지 30 mg/kg 체중이고, 단독 또는 분할 투여량 형태이다.
이하 실시예를 통해 본 개시 방안을 상세히 설명하지만, 본 개시의 어떠한 불리한 제한을 의미하는 것이 아니다. 본 명세서는 본 개시 방안을 상세히 설명하였고, 그 구체적인 실시형태도 개시하였으며, 당업자라면 본 발명의 사상과 범위를 벗어나지 않는 상황에서 본 개시의 구체적인 실시형태에 대해 다양한 변경 및 수정이 이루어질 수 있음은 명백하다. 본 개시에 사용된 모든 시약은 시판되는 것으로, 추가 정제 없이 사용된다.
달리 명시하지 않는 한, 혼합 용매에 대해 표시된 비율은 부피 혼합 비율이다.
달리 명시하지 않는 한, %는 wt%를 의미한다.
화합물은 수동으로 또는 ChemDraw® 소프트웨어로 명명되고, 시판되는 화합물은 공급업체 카탈로그 이름을 사용한다.
화합물의 구조는 핵자기공명(NMR) 및/또는 질량분석법(MS)에 의해 결정된다. NMR 이동의 단위는 10-6(ppm)이다. NMR로 측정한 용매는 중수소화 디메틸설폭사이드, 중수소화 클로로포름, 중수소화 메탄올 등이고, 내부 표준은 테트라메틸실란(TMS)이며; "IC50"은 절반 억제 농도를 의미하고, 최대 억제 효과의 절반에 도달되는 농도를 의미한다.
하기의 용리액 또는 이동상은 두 가지 또는 여러 가지 용매로 혼합된 용리액 또는 이동상을 형성할 수 있고, 그 비율은 각 용매의 부피비이며, 예를 들어 "0~10% 메탄올/디클로로메탄"은 구배 용리 과정에서, 혼합 용리액 중의 메탄올과 디클로로메탄의 부피 용량비는 0:100~10:100이다.
실시예 1. ( S )- N -((8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-2,3,8,9,12,14-헥사히드로-11 H -[1,4]디옥사시클로[2,3- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 1)
단계 1: 1-(7-아미노-2,3-디히드로벤조[ b ][1,4]디옥산-6-일)-2-클로로에탄-1-온(중간체 1-2)의 합성
반응물 1-1(500 mg, 3.31 mmol)을 1,2-디클로로에탄(3 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추며, 여기에 삼염화붕소(1 M, 2.65 mL) 및 삼염화알루미늄(573.36 mg, 4.30 mmol)을 첨가하고, 반응액을 질소 가스 보호 하에 0℃에서 여기에 클로로아세토니트릴(299.67 mg, 3.97 mmol)을 첨가하며, 반응액을 질소 가스 보호 하에 90℃에서 16 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(30 mL) 및 1N HCl(10 mL)을 순차적으로 첨가한 후, 30 min 동안 교반하였다. 반응액에 디클로로메탄(30 mL*3)을 첨가하여 3회 추출하고, 유기상을 합병한 후 포화 식염수(30 mL)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 건조될 때까지 감압 농축하고, 조생성물은 분취용 박층 크로마토그래피(실리카, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 9:1)를 거쳐 표제 화합물(210 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 228.0 [M+H]+.
단계 2: ( S )-15-(클로로메틸)-8-에틸-8-히드록시-2,3,11,14-테트라히드로-12 H -[1,4]디옥사시클로[2,3- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(중간체 1-4)의 합성
중간체 1-2(100 mg, 439.28 μmol) 및 중간체 1-3(115.64 mg, 439.28 μmol)을 무수 톨루엔(3 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(PPTS, 22.08 mg, 87.86 μmol)을 첨가하며, 반응액을 질소 가스 보호 하에 100℃에서16 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 반응액을 여과하며, 필터 케이크를 에탄올(5 mL*2)로 세척하여 표제 화합물 조생성물(130 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 455.1 [M+H]+.
단계 3: ( S )-15-(아지도메틸)-8-에틸-8-히드록시-2,3,11,14-테트라히드로-12 H -[1,4]디옥사시클로[2,3- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(중간체 1-5)의 합성
중간체 1-4(120 mg, 263.82 μmol)을 디메틸설폭사이드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 아지드화 나트륨(25.73 mg, 395.73 μmol)을 첨가하며, 반응액을 질소 가스 보호 하에 25℃에서 3 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 여기에 얼음물(2 mL)을 첨가하여 0.5 h 동안 교반하고, 여과하여 표제 화합물 조생성물(90 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 462.1 [M+H]+.
단계 4: ( S )-15-(아미노메틸)-8-에틸-8-히드록시-2,3,11,14-테트라히드로-12 H -[1,4]디옥사시클로[2,3- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(중간체 1-6)의 합성
중간체 1-5(90 mg, 195.05 μmol)를 무수 톨루엔(1 mL)에 용해시키고, 여기에 트리에틸포스파이트(81.02 mg, 487.62 μmol)를 첨가하며, 반응액을 질소 가스 보호 하에 100℃에서 3 h 동안 교반하였다. 반응액을 25℃로 냉각시키고, 여기에 염산 메탄올 용액(0.5 mL)을 첨가하며, 반응액을 질소 가스 보호 하에 85℃에서 16 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 여과하여 표제 화합물(18 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 436.1 [M+H]+.
단계 5: ( S )- N -((8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-2,3,8,9,12,14-헥사히드로-11 H -[1,4]디옥사시클로[2,3- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 1)의 합성
중간체 1-6(18 mg, 41.34 μmol) 및 2-글리콜산 (15.72 mg, 206.69 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU)(23.58 mg, 62.01 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(DIEA)(16.03 mg, 124.02 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 3 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 10%-30%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(7 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 494.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.69 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 5.57 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.74 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.44 (s, 4H), 3.82 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.94-1.80 (m, 2H), 0.88 (m, 3H).
실시예 2. ( S )-11-(아미노메틸)-9-클로로-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 2)
단계 1: 1-(2-아미노-5-클로로-4-플루오로페닐)-2-클로로에탄-1-온(중간체 2-2)의 합성
삼염화붕소(1 M, 13.74 mL)를 1,2-디클로로에탄(24 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추며, 여기에 반응물 2-1(2 g, 13.74 mmol) 및 클로로아세토니트릴(1.56 g, 20.61 mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 10 min 동안 교반하며, 여기에 삼염화알루미늄(2.38 g, 17.86 mmol)을 첨가하였다. 이후 반응액을 질소 가스 보호 하에 25℃로 승온시켜 10 min 동안 교반하였다. 반응액을 질소 가스 보호 하에 90℃에서 18 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(50 mL) 및 5% HCl(10 mL)을 순차적으로 천천히 첨가하며 25℃에서 30 min 동안 교반한 후, 디클로로메탄(50 mL)을 첨가하고, 유기상을 물(2 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 건조될 때까지 감압 농축하고, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 40%-60%, 용리 시간 10분)하여) 표제 화합물(320 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 222.0 [M+H]+.
단계 2: ( S )-9-클로로-11-(클로로메틸)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(중간체 2-3)의 합성
중간체 2-2(220 mg, 990.80 μmol) 및 중간체 1-3(273.86 mg, 1.04 mmol)을 톨루엔(2 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(24.90 mg, 99.08 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 100℃에서 18 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(2 mL*2)로 세척하여 표제 화합물 조생성물(270 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 449.0 [M+H]+.
단계 3: ( S )-11-(아미노메틸)-9-클로로-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 2)의 합성
중간체 2-3(50 mg, 111.29 μmol)을 에탄올(1 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(23.40 mg, 166.94 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 메탄올의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(메탄올 구배 비율 0%-30%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(22 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 430.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 8.14 (s, 0.3H, HCOOH), 7.36 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.46 (s, 2H), 4.55 (s, 2H), 1.93-1.84 (m, 2H), 0.90-0.85 (m, 3H).
실시예 3. ( S )- N -((9-클로로-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 3)
화합물 2(22 mg, 51.18 μmol) 및 2-글리콜산(19.46 mg, 255.92 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(29.19 mg, 76.77 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(19.84 mg, 153.55 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응액을 여과하고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 10%-40%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(2.20 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 488.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.90-8.85 (m, 2H), 8.20 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.60 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.56 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.83 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.83 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 1.93-1.81 (m, 2H), 0.88 (m, 3H).
실시예 4. ( S )-11-(아미노메틸)-9-브로모-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 4)
단계 1: 1-(2-아미노-5-브로모-4-플루오로페닐)-2-클로로에탄-1-온(중간체 4-2)의 합성
삼염화붕소(1 M, 10.53 mL)를 1,2-디클로로에탄(24 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추며, 여기에 중간체 4-1(2 g, 10.53 mmol) 및 클로로아세토니트릴(1.19 g, 15.79 mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 10 min 동안 교반하며, 여기에 삼염화알루미늄(1.82 g, 13.68 mmol)을 첨가하였다. 반응액을 질소 가스 보호 하에 25℃에서 10 min 동안 교반하였다. 다음 90℃로 승온시켜 18 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(50 mL) 및 5% HCl(10 mL)을 순차적으로 천천히 첨가하고 25 ℃에서30 min동안 교반한 후, 디클로로메탄(50 mL)을 첨가하며, 유기상을 물(2 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 39%-49%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(380 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 265.9 [M+H]+.
단계 2: ( S )-9-브로모-11-(클로로메틸)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(중간체 4-3)의 합성
중간체 4-2(200 mg, 750.48 μmol) 및 중간체 1-3(207.44 mg, 788.01 μmol)을 무수 톨루엔(4 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(22.63 mg, 90.06 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 100℃에서 18 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(2 mL*2)로 세척하여 표제 화합물 조생성물(200 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 493.0 [M+H]+.
단계 3: ( S )-11-(아미노메틸)-9-브로모-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 4)의 합성
중간체 4-3(200 mg, 405.10 μmol)을 에탄올(4 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(113.58 mg, 810.19 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 6%-26%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(30 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI):476.0 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.83 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 8.14 (s, 0.4H, HCOOH), 7.36 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.46 (s, 2H), 4.53 (s, 2H), 1.92-1.85 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 5. (S)- N -((9-브로모-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-3,14-디옥시리덴-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 5)
화합물 4(15 mg, 26.88 μmol) 및 2-글리콜산(10.22 mg, 134.41 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(15.33 mg, 40.32 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(10.42 mg, 80.65 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응액을 여과하고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 6%-36%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(2.09 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 532.0 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 9.00 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.86 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.60 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.56 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.83 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 3.83 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.94-1.82 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
실시예 6. ( S )- N -((8-클로로-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-3,14-디옥시리덴-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 6)
단계 1: 1-(2-아미노-4-클로로-5-메틸페닐)-2-클로로에탄-1-온(중간체 6-2)의 합성
삼염화붕소(1 M, 2.82 mL)를 1,2-디클로로에탄(8 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추며, 여기에 반응물 6-1(0.5 g, 3.53 mmol) 및 클로로아세토니트릴(319.91 g, 4.24 mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 10 min 동안 교반하며, 여기에 삼염화알루미늄(612.09 mg, 4.59 mmol)을 첨가하였다. 반응액을 질소 가스 보호 하에 25℃에서 10 min 동안 교반하였다. 이후 반응액을 90℃로 승온시켜 18 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(25 mL) 및 5% HCl(5 mL)을 순차적으로 천천히 첨가하며 25℃에서 30 min 동안 교반한 후, 디클로로메탄(20 mL)을 첨가하고, 유기상을 물(20 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 분취용 박층 크로마토그래피(실리카, 석유 에테르: 에틸아세테이트 = 9:1)를 거쳐 표제 화합물(500 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 218.0 [M+H]+
단계 2: ( S )-8-클로로-11-(클로로메틸)-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(중간체 6-3)의 합성
중간체 6-2(250 mg, 1.15 mmol) 및 중간체 1-3(316.87 mg, 1.20 mmol)을 톨루엔(5 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(34.57 mg, 137.56 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 100℃에서 18 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(2 mL*2)로 세척하여 표제 화합물 조생성물(230 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 445.1 [M+H]+.
단계 3: ( S )-11-(아미노메틸)-8-클로로-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-1,12-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(중간체 6-4)의 합성
중간체 6-3(49.56 mg, 111.29 μmol)을 에탄올(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(23.40 mg, 166.94 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 2%-32%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(11.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 426.2 [M+H]+.
단계 4: ( S )- N -((8-클로로-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 6)의 합성
중간체 6-4(11 mg, 25.83 μmol) 및 2-글리콜산 (9.82 mg, 129.15 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(14.73 mg, 38.74 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(10.01 mg, 77.49 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응액을 여과하고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 10%-40%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(3.00 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 484.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.77 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.59 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.85 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.84 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 2.60 (s, 3H), 1.91-1.82 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 7. ( S )- N -((8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-2,3,8,9,12,14-헥사히드로-1 H ,11 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 7)
단계 1: 4,6-디브로모-2,3-디히드로-1 H -인덴-5-아민(중간체 7-2)의 합성
중간체 7-1(10.0 g)을 무수 아세토니트릴에 용해시키고, 0℃에서 N-브로모숙신이미드(NBS)(27.5 g)를 여러차로 나누어 첨가한 후, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여과액을 감압 농축하며, 잔류물을 200 mL의 에틸아세테이트에 용해시키고, 물(100 mL*2)로 세척하였다. 얻은 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 실리카겔과 혼합한 후, 규조토 위에 놓으며, 500 mL의 석유 에테르로 헹구고, 여과액을 농축하여 표제 화합물(17.0 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 289.9 [M+H]+.
단계 2: 4-브로모-2,3-디히드로-1 H -인덴-5-아민(중간체 7-3)의 합성
중간체 7-2(15.0 g) 및 염화제1주석(15.0 g)을 75 mL의 아세트산에 용해시키고, 6 N의 농염산 140 mL를 첨가하며, 90℃에서 3 h 동안 반응시켰다. 반응계를 실온으로 냉각시키고, 농축하여 아세트산을 제거하며, 잔류물을 100 mL의 에틸아세테이트에 용해시키고, 포화 탄산나트륨 수용액으로 pH를 약 8로 조절하며, 여과하고, 여과액에서 유기상을 분리하며, 수상을 에틸아세테이트(50 mL*3)로 추출하였다. 유기상을 합병하고 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여과액을 감압 농축하여, 표제 화합물(10 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 212.0 [M+H]+.
단계 3: N -(4-브로모-2,3-디히드로-1 H -인덴-5-일)아세트아미드(중간체 7-4)의 합성
중간체 7-3(10.0 g)을 100 mL의 무수 디클로로메탄에 용해시키고, 트리에틸아민(10.6 g)을 첨가하며, 0℃에서 염화아세틸(5.5 g)을 천천히 적가한 후, 반응계를 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 물(100 mL*2)로 세척하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하였다. 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르: 에틸아세테이트 = 90: 10)하여 표제 화합물(7.1 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 254.0 [M+H]+.
단계 4: N -(4-아세틸-2,3-디히드로-1 H -인덴-5-일)아세트아미드(중간체 7-5)의 합성
질소 가스 보호 하에, 중간체 7-4(6.7 g) 및 트리부틸-(2-에톡시비닐)주석(10.4 g)을 100 mL의 무수 1,4-디옥산에 용해시킨 후, 비스(트리페닐포스핀)팔라듐디클로라이드(1.8 g)를 첨가한 후, 반응계를 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응액을 실온으로 냉각시키고, 3 N의 염산 30 mL를 첨가하며, 실온에서 1 h 동안 교반하였다. 규조토로 반응액을 여과하고, 얻은 여과액을 100 mL의 에틸아세테이트로 희석하며, 물(100 mL*2)로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하며, 여과액을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르: 에틸아세테이트 = 85: 15)하여 표제 화합물(4.7 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 218.1 [M+H]+.
단계 5: N -(4-(2-브로모아세틸)-2,3-디히드로-1 H -인덴-5-일)아세트아미드(중간체 7-6)의 합성
중간체 7-5(4.7 g)를 50 mL 아세트산에 용해시키고, 33%의 브롬화수소산-아세트산 용액 7.3 g을 첨가하며, 실온에서 브롬(2.85 g)을 천천히 적가한 후, 실온에서 계속하여 3 h 동안 교반 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물에 부어 넣고, 다량의 고체가 석출될 때까지 교반하며, 여과하고, 석유 에테르로 필터 케이크를 세척하며, 얻은 고체를 건조시켜 표제 화합물(5.0 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 296.0 [M+H]+.
단계 6: 1-(5-아미노-2,3-디히드로-1 H -인덴-4-일)-2-클로로에탄-1-온(중간체 7-7)의 합성
중간체 7-6(5.0 g)을 30 mL 에탄올에 용해시키고, 6 N의 농염산 35 mL를 첨가하며, 반응계를 80℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응계를 실온으로 냉각시키고, 감압 농축하여 용매를 제거하며, 잔류물을 100 mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 포화 탄산수소나트륨 수용액으로 pH를 약 7로 조절하며, 유기상을 분리하고, 수상을 디클로로메탄(50 mL*2)으로 추출하였다. 유기상을 합병하고 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고, 여과액을 감압 농축하며, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르: 에틸아세테이트 = 75: 25)하여 표제 화합물(840 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 210.0 [M+H]+.
단계 7: ( S )-15-(클로로메틸)-8-에틸-8-히드록시-1,2,3,8,11,14-헥사히드로-9 H ,12 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12-디온(중간체 7-8)의 합성
중간체 7-7(100 mg) 및 중간체 1-3(125.55 mg)을 톨루엔(5 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(5.99 mg)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 18 h 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 석유 에테르(2 mL*2)로 세척하여 표제 화합물(180 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 437.0 [M+H]+.
단계 8: ( S )-15-(아미노메틸)-8-에틸-8-히드록시-1,2,3,8,11,14-헥사히드로-9 H ,12 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12-디온(중간체 7-9)의 합성
중간체 7-8(50 mg)을 메탄올(1 mL) 및 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)의 혼합 용액에 용해시키고, 여기에 메테나민(483.13 mg)을 첨가하였다. 반응액을 50℃에서 4 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 실온으로 냉각시키고, 농염산(0.5 mL)을 첨가하여 0.5 h 동안 교반한 후, 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 아세토니트릴 구배 비율 20%-40%, 용리 시간 12분으로 하여 표제 화합물 (22.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 418.2 [M+H]+.
단계 9: ( S )- N -((8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-2,3,8,9,12,14-헥사히드로-1 H ,11 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 7)의 합성
중간체 7-9(15 mg) 및 글리콜산 (10.93 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(27.32 mg) 및 디이소프로필에틸아민(4.64 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 30%-50%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(9.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 476.2[M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.28 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.49-5.45 (m, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.36 (s, 2H), 4.97 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.57 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.23-2.15 (m, 2H), 1.95-1.80 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 8. ( S )- N -((4-에틸-4,9-디히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-10-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 8)
단계 1: ( S )-10-((1,3-디옥소인돌린-2-일)메틸)-4-에틸-4,9-디히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(중간체 8-3)의 합성
반응물 8-1(200 mg, 548.92 μmol)을 농황산(2 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추었다. 여기에 반응물 8-2(116.69 mg, 658.71 μmol)을 천천히 첨가하고, 반응액을 질소 가스 보호 하에 0℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 0.5 h 후 반응액을 질소 가스 보호 하에, 25℃로 승온시켜 5 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 얼음물(10 mL) 및 디클로로메탄(25 mL)을 순차적으로 첨가하고, 유기상을 물(20 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 건조될 때까지 감압 농축하고, 조생성물은 분취용 박층 크로마토그래피(실리카, 디클로로메탄: 메탄올=10:1)를 거쳐 표제 화합물(280 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 524.3 [M+H]+.
단계 2: ( S )-10-(아미노메틸)-4-에틸-4,9-디히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(중간체 8-4)의 합성
중간체 8-3(240 mg, 458.46 μmol)을 농염산(3 mL)에 용해시키고, 반응액을 90℃에서 16 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(5 mL)을 첨가하며, 암모니아수를 적가하여 pH를 8 내지 9로 조절하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 농축 건조시켜 중간체 8-4 조생성물(150 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 394.1 [M+H]+
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 8.75 (s, 1H), 8.04 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 1.92-1.82 (m, 2H), 0.92-0.83 (m, 3H).
단계 3: ( S )- N -((4-에틸-4,9-디히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-10-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 8)의 합성
중간체 8-4(80 mg, 203.36 μmol) 및 글리콜산 (30.94 mg, 406.72 μmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(115.99 mg, 305.04 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(78.85 mg, 610.08 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응액을 여과하고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 11%-41%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(46 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 452.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 10.91 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.49 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.60 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.28 (s, 2H), 4.73 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 1.95-1.81 (m, 2H), 0.89 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 9. ( S )- N -((4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-9-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-1-히드록시시클로프로판-1-카르복사미드(화합물 9)
중간체 9-1(6.00 mg, 14.66 μmol, 특허문헌 WO 2020219287에 보고된 방법에 따라 합성할 수 있음) 및 중간체 9-2(4.49 mg, 43.97 μmol)를 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(8.36 mg, 21.98 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(5.68 mg, 43.97 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 6%-36%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(3.00 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 494.2 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.96 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.30 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.85 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 2.53 (s, 3H), 1.92-1.83 (m, 2H), 1.05-1.00 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.85-0.81 (m, 2H).
실시예 10. ( S )- N -((8-클로로-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-1-히드록시시클로프로판-1-카르복사미드(화합물 10)
중간체 6-4(6.24 mg, 14.66 μmol) 및 중간체 9-2(4.49 mg, 43.97 μmol)를 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(8.36 mg, 21.98 μmol) 및 DIEA(5.68 mg, 43.97 μmol)를 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응액을 여과하고, 건조될 때까지 감압 농축하였다. 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 16%-46%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(2.20 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 510.1 [M+H]+.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.96 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 6.29 (s, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.84 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.59 (s, 3H), 1.94-1.80 (m, 2H), 1.01 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 3.0 Hz, 2H).
실시예 11. N -((( S )-8-클로로-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-시클로프로필-2-히드록시아세트아미드(화합물 11)
중간체 6-4(6.0 mg, 14.09 μmol) 및 중간체 11-1(8.18 mg, 70.45 μmol)을 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(8.04 mg, 21.13 μmol) 및 DIEA(5.46 mg, 42.27 μmol)를 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응액을 여과하고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 조생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 16%-46%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물 (3.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 524.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.66 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.53 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.50 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.91-4.76 (m, 2H), 3.61-3.55 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 1.94-1.82 (m, 2H), 1.05-0.97 (m, 1H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.34- 0.31 (m, 2H), 0.29-0.20 (m, 2H).
실시예 12. ( S )-11-(아미노메틸)-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 12)
단계 1: 1-(6-아미노-3-클로로-2,4-디플루오로페닐)-2-클로로에탄-1-온(중간체 12-2)의 합성
삼염화붕소(1 M, 6.11 mL)를 1,2-디클로로에탄(12 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추며, 여기에 반응물 12-1(1 g, 6.11 mmol) 및 클로로아세토니트릴 (784.73 mg, 10.39 mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 10 min 동안 교반하며, 여기에 삼염화알루미늄(1.06 g, 7.95 mmol)을 첨가하였다. 이후 반응액을 질소 가스 보호 하에 25℃로 승온시켜 10 min 동안 교반하였다. 반응액을 질소 가스 보호 하에 90℃에서 18 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(25 mL) 및 5% 염산(5 mL)을 순차적으로 천천히 첨가하며 25℃에서 30 min 동안 교반한 후, 디클로로메탄(50 mL)을 첨가하고, 유기상을 물(2 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 건조될 때까지 감압 농축하고, 조생성물은 분취용 박층 크로마토그래피(실리카, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 9:1)를 거쳐 표제 화합물(340 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 240.0 [M+H]+.
단계 2: ( S )-9-클로로-11-(클로로메틸)-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(중간체 12-3)의 합성
중간체 12-2(0.2 g, 833.22 μmol) 및 중간체 1-3(219.34 mg, 833.22 μmol)을 톨루엔(4 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(20.94 mg, 83.32 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 100℃에서 18 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(2 mL*2)로 세척하여 표제 화합물 조생성물(190 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 467.1 [M+H]+.
단계 3: ( S )-11-(아미노메틸)-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 12)의 합성
중간체 12-3(50 mg, 107.01 μmol)을 에탄올(1 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(45.00 mg, 321.03 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 80℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. LC-MS는 반응이 완료되었음을 검출하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 2%-32%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(1.22 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 448.0 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.14 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.55 (s, 2H), 5.46 (s, 2H), 4.35 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 1.94-1.83 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 13. 2-시클로프로필- N -((( S )-8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-2,3,8,9,12,14-헥사히드로-1 H ,11 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 13)
단계 1: 2-시클로프로필- N -((( S )-8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-2,3,8,9,12,14-헥사히드로-1 H ,11 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 13)의 합성
중간체 7-9(10 mg) 및 중간체 11-1(8.34 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(13.66 mg) 및 디이소프로필에틸아민(3.10 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 34%-54%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물 (0.8 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 516.2 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.25 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 8.01 (d, J =8.5 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.36 (s, 2H), 4.99-4.85 (m, 2H), 3.59 (s, 1H), 3.56 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.08 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.23-2.16 (m, 2H), 1.92-1.72 (m, 2H), 1.15-1.01 (m, 1H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.46-0.19 (m, 4H).
실시예 14. 2-시클로프로필- N -((( S )-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 14)
단계 1: 1-(6-니트로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)에타논(중간체 14-2)의 합성
중간체 14-1(10.0 g, 60.92 mmol)을 니트로메탄(100 mL)에 용해시키고, 여기에 질산(35.43 g, 365.50 mmol, 65% 순도)을 천천히 첨가하며, 반응액을 25℃에서 2.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액에 포화 탄산수소나트륨 용액을 천천히 첨가하고, pH를 7-8로 조절한 후, 여기에 디클로로메탄(100 mL)을 첨가하며, 유기상을 물(50 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 분취용 박층 크로마토그래피로 정제하여(석유 에테르:에틸아세테이트 = 1:2) 표제 화합물(5 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 210.0 [M+H]+.
단계 2: 1-(6-아미노벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)에타논(중간체 14-3)의 합성
중간체 14-2(2.37 g, 11.33 mmol)를 무수 에탄올(25 mL)에 용해시키고, 여기에 팔라듐 탄소(0.2 g, 10% 순도)를 첨가하며, 반응액을 수소 가스 보호 하에 25℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에틸아세테이트로 2회 세척하며, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하고 표제 화합물(1.6 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 180.1 [M+H]+.
단계 3: N -(6-아세틸벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)아세트아미드(중간체 14-4)의 합성
중간체 14-3(1.0 g, 5.58 mmol)을 디클로로메탄(10 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 냉각시키며 여기에 N,N-디이소프로필에틸아민(DIEA)(1.08 g, 8.37 mmol) 및 염화아세틸(569.55 mg, 7.26 mmol)을 첨가하였다. 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고 표제 화합물(1.23 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI):222.1 [M+H]+.
단계 4: N -(6-(2-브로모아세틸)벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)아세트아미드(중간체14-5)의 합성
중간체 14-4(1.23 g, 5.00 mmol)를 아세트산(12 mL)에 용해시키고, 여기에 브롬화수소의 아세트산 용액(1.84 g, 7.51 mmol, 33% 순도)을 첨가한 후, 여기에 액체 브롬(959.69 mg, 6.01 mmol)을 천천히 첨가하며 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물에 부어 넣고 10 min 동안 교반하였다. 여과하고, 필터 케이크를 물로 2회 세척하며, 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물에 에틸아세테이트(2 mL) 및 석유 에테르(10 mL)를 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜 표제 화합물(500 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 300.0 [M+H]+.
단계 5: 1-(6-아미노벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)-2-클로로에타논(중간체 14-6)의 합성
중간체 14-5(0.2 g, 666.43 μmol)를 무수 에탄올(1 mL) 및 농염산(1 mL)에 용해시키고, 반응액을 60℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(10 mL) 및 포화 탄산수소나트륨(10 mL)을 순차적으로 천천히 첨가한 후, 디클로로메탄(50 mL)을 첨가하며, 유기상을 물(20 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 분취용 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트 = 6:1)를 거쳐 표제 화합물(160 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 214.0 [M+H]+.
단계 6: ( S )-14-(브로모메틸)-7-에틸-7-히드록시-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온(중간체 14-7)의 합성
중간체 14-6(50 mg, 234.06 μmol) 및 중간체 1-3(61.62 mg, 234.06 μmol)을 톨루엔(1 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(5.88 mg, 23.41 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(2 mL*2)로 세척한 후, 건조시켜 표제 화합물(60 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 441.1 [M+H]+.
단계 7: ( S )-14-(아미노메틸)-7-에틸-7-히드록시-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온(중간체 14-8)의 합성
중간체 14-7(55.00 mg, 124.76 μmol)을 에탄올(1 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(52.47 mg, 374.29 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 80℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 메탄올의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(메탄올 구배 비율 0%-27%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(10 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 422.1 [M+H]+.
단계 8: 2-시클로프로필- N -((( S )-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 14)의 합성
중간체 14-8(10.00 mg, 20.17 μmol) 및 중간체 11-1(23.42 mg, 201.71 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU)(11.50 mg, 30.26 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(7.82 mg, 60.51 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 4%-44%, 용리 시간 9분)하여) 표제 화합물(3 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 520.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.61 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 6.29 (s, 2H), 5.51 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.47 (s, 2H), 5.42 (s, 2H), 4.72 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 1.92-1.78 (m, 2H), 0.99 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.40-0.29 (m, 2H), 0.29-0.19 (m, 2H).
( , )
단계 9: 2-시클로프로필-2-히드록시벤질아세테이트(중간체 14-9-P1/P2)의 제조
중간체 14-9를 분리하여 이성질체 14-9-P1 및 14-9-P2를 제조하였다. 중간체 14-9(1.3 g)를 초임계 유체 크로마토그래피(DAICEL CHIRALPAK AD 칼럼, 10 μm 실리카, 30 mm 직경, 250 mm 길이; 에탄올(0.1% 암모니아수 함유)을 용리액으로 사용)로 분취하여 중간체 14-9-P1(600 mg) 및 중간체 14-9-P2(600 mg)을 얻었다.
이하의 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 조건으로 상기 두 개의 이성질체를 추가로 분석하였다.
중간체 14-9-P1:
상기 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 조건에서, 유지 시간은 2.990분이다.
1 H NMR (400MHz, METHANOL- d 4 ) δ 7.43-7.29 (m, 5H), 5.29-5.16 (m, 2H), 3.67 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 1.19-1.07 (m, 1H), 0.58-0.38 (m, 4H).
중간체 14-9-P2:
상기 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 조건에서, 유지 시간은 2.661분이다.
1 H NMR (400MHz, METHANOL- d 4 ) δ 7.46-7.28 (m, 5H), 5.30-5.16 (m, 2H), 3.67 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 1.21-1.03 (m, 1H), 0.60-0.36 (m, 4H).
단계 10: 2-시클로프로필-2-글리콜산(중간체 14-10-P1/P2)의 합성
수소 가스 분위기 하에, 중간체 14-9-P1(500 mg)을 메탄올(15 mL)에 첨가하고, 반응액에 습윤한 팔라듐 탄소(10 mg, 10%)를 첨가하며, 반응액을 수소 가스 분위기 하에 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 여과하고, 여과액을 감압 농축하여, 중간체 14-10-P1(273 mg)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, METHANOL- d 4 ) δ 3.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 1.21-1.09 (m, 1H), 0.61-0.40 (m, 4H).
수소 가스 분위기 하에, 중간체 14-9-P2(500 mg)를 메탄올(15 mL)에 첨가하고, 반응액에 습윤한 팔라듐 탄소(10 mg, 10%)를 첨가하며, 반응액을 수소 가스 분위기 하에 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 여과하고, 여과액을 감압 농축하여, 중간체 14-10-P2(279 mg)를 얻었다.
1 H NMR (400MHz, METHANOL- d 4 ) δ 3.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 1.19-1.08 (m, 1H), 0.60-0.39 (m, 4H).
단계 11: 2-시클로프로필- N -((( S )-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 14-P1/P2)의 합성
중간체 14-8(40.00 mg) 및 중간체 14-10-P1(28.11 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU)(46.02 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(31.28 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고(Boston Green ODS C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 16%-46%, 용리 시간 12분)하여, 화합물 14-P1(22.00 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 520.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.62 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.29 (s, 2H), 5.47 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.73 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 3.54 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 1.93-1.78 (m, 2H), 1.06-0.96 (m, 1H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.39-0.30 (m, 2H), 0.29-0.21 (m, 2H).
중간체 14-8(10.00 mg) 및 중간체 14-10-P2(8.27 mg)를 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(18.05 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(6.13 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 직접 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고(Boston Green ODS C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 16%-46%, 용리 시간 12분)하여 화합물 14-P2(8.00 mg)를 얻었다.
MS m/z (ESI): 520.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.63 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.30 (s, 2H), 5.46 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.72 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.55 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 1.92-1.81 (m, 2H), 1.03-0.97 (m, 1H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.38-0.30 (m, 2H), 0.28-0.22 (m, 2H).
이하의 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 분석 방법으로 두 개의 이성질체를 각각 추가로 분석하였다.
화합물 14-P1:
상기 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 조건에서, 유지 시간은 3.673분이다.
화합물 14-P2:
상기 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 조건에서, 유지 시간은 3.735분이다.
실시예 15. ( S )- N -((9-브로모-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ][1,7]나프티리딘-11-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 15)
단계 1: 1-(5-아미노-2-브로모피리딘-4-일)에타논(중간체 15-2)의 합성
중간체 15-1(500 mg, 3.67 mmol)을 무수 테트라히드로푸란(90 mL)에 용해시키고, 여기에 탄산수소나트륨(617.04 mg, 7.34 mmol) 및 2-피로리돈 하이드로트리브로마이드(1.64 g, 5.03 mmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 8 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 박층 크로마토그래피(실리카, 석유 에테르: 에틸아세테이트 = 20: 1)를 거쳐 표제 화합물(300 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 214.9 [M+H]+.
단계 2: N -(4-아세틸-6-브로모피리딘-3-일)아세트아미드(중간체 15-3)의 합성
중간체 15-2(150 mg, 697.52 mmol)를 디클로로메탄(2 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 냉각시키며 여기에 N,N-디이소프로필에틸아민(180.30 mg, 1.40 mmol) 및 염화아세틸(109.51 mg, 1.40 mmol)을 첨가하였다. 반응액을 25℃에서 3 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 분취용 박층 크로마토그래피(실리카, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 3:1)를 거쳐 표제 화합물(100 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI):257.0 [M+H]+.
단계 3: 1-(5-아미노-2-브로모피리딘-4-일)-2-브로모에타논(중간체 15-4)의 합성
중간체 15-3(95.00 mg, 273.45 μmol)을 아세트산(2 mL)에 용해시키고, 여기에 브롬화수소의 아세트산 용액(100.57 g, 410.18 μmol, 33% 순도)을 첨가한 후, 여기에 액체 브롬(48.07 mg, 300.80 μmol)을 천천히 첨가하며 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 분취용 박층 크로마토그래피(실리카, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 3:1)를 거쳐 표제 화합물(45 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 292.9 [M+H]+.
단계 4: 1-(5-아미노-2-브로모피리딘-4-일)-2-클로로에타논(중간체 15-5)의 합성
중간체 15-4(50.00 mg, 170.10 μmol)를 농염산(1 mL)에 용해시키고, 반응액을 60℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(10 mL) 및 포화 탄산수소나트륨(10 mL)을 순차적으로 천천히 첨가한 후 디클로로메탄(30 mL)을 첨가하며, 유기상을 물(20 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물(25 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 248.9 [M+H]+.
단계 5: ( S )-9-브로모-11-(클로로메틸)-4-에틸-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ][1,7]나프티리딘-3,14(4 H )-디온(중간체 15-6)의 합성
중간체 15-5(25 mg, 100.20 μmol) 및 중간체 1-3(26.38 mg, 100.20 μmol)을 톨루엔(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(2.52 mg, 10.02 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(2 mL*2)로 세척하여 표제 화합물(30 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 475.9 [M+H]+.
단계 6: ( S )-11-(아미노메틸)-9-브로모-4-에틸-4-히드록시-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ][1,7]나프티리딘-3,14(4 H )-디온(중간체 15-7)의 합성
중간체 15-6(30 mg, 62.93 μmol)을 에탄올(1 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(17.64 mg, 125.86 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 80℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 메탄올의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(메탄올 구배 비율 0%-25%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(4 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 457.0 [M+H]+.
단계 7: ( S )- N -((9-브로모-4-에틸-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ][1,7]나프티리딘-11-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 15)의 합성
중간체 15-7(4 mg, 8.75 μmol) 및 글리콜산(3.33 mg, 43.74 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(4.99 mg, 13.12 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(3.39 mg, 26.24 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 8%-28%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(1.00 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 515.0 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 9.38 (s, 1H), 8.88 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 8.76 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.64-5.61 (m, 1H), 5.60 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.80 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.83 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 1.92-1.80 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 16. ( S )- N -((9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-1-히드록시시클로프로판-1-카르복사미드(화합물 16)
단계 1: ( S )- N -((9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-1-히드록시시클로프로판-1-카르복사미드(화합물 16)
화합물 12(5.75 mg, 12.84 μmol) 및 중간체 9-2(3.93 mg, 38.52 μmol)를 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(7.32 mg, 19.26 μmol) 및 디이소프로필에틸아민(4.98 mg, 38.52 μmol)을 첨가하며, 반응액을 30℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 14%-34%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(3 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 532.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.46 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 5.53 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.93 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 1.92-1.82 (m, 2H), 1.04-0.99 (m, 2H), 0.90-0.87 (m, 2H), 0.87-0.82 (m, 3H).
실시예 17. ( S )- N -((8-클로로-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시-2-메틸프로피온아미드(화합물 17)
단계 1: ( S )- N -((8-클로로-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시-2-메틸프로피온아미드(화합물 17)의 합성
중간체 6-4(5 mg, 11.74 μmol) 및 중간체 17-1(2.44 mg, 23.48 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(8.95 mg, 23.48 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(1.19 mg, 11.74 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm 실리카, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 22%-42%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(1 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 512.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, Methanol- d 4 ) δ = 8.32 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 5.62 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.42 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.01 (s, 2H), 2.65 (s, 3H), 2.05-1.94 (m, 2H), 1.38 (s, 6H), 1.03 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
실시예 18. N -((( S )-8-클로로-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시-3-메틸부탄아미드(화합물 18)
단계 1: N -((( S )-8-클로로-4-에틸-4-히드록시-9-메틸-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시-3-메틸부탄아미드(화합물 18)의 합성
중간체 6-4(5 mg, 11.74 μmol) 및 중간체 18-1(2.77 mg, 23.48 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(8.95 mg, 23.48 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(1.19 mg, 11.74 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 25%-45%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(1.20 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 526.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, Methanol- d 4 ) δ = 8.30 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 5.60 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 5.56-5.45 (m, 2H), 5.42-5.37 (m, 1H), 5.00-4.90 (m, 2H), 3.91 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 2.62 (s, 3H), 2.01-1.94 (m, 2H), 1.05-1.00 (m, 6H), 0.77-0.70 (m, 3H).
실시예 19. ( S )-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-11-(((1-((히드록시메틸)시클로프로필)아미노)메틸)-9-메틸-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 19)
단계 1: 1-(2-아미노-4-플루오로-5-메틸페닐)-2-클로로에타논(중간체 19-2)의 합성
삼염화붕소(749.03 mg, 6.39 mml)를 디클로로에탄(8 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추며, 여기에 중간체 19-1(1 g, 7.99 mmol) 및 클로로아세토니트릴(723.94 mg, 9.59 mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 10 min 동안 교반하며, 여기에 삼염화알루미늄(1.39 mg, 10.39 mmol)을 첨가하였다. 이후 반응액을 질소 가스 보호 하에 25℃로 승온시켜 10 min 동안 교반하였다. 반응액을 질소 가스 보호 하에 90℃에서 18 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(30 mL) 및 5% HCl(10 mL)을 순차적으로 천천히 첨가하며, 25℃에서 30 min 동안 교반한 후, 디클로로메탄(50 ml)을 첨가하고, 유기상을 물(20 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 분취용 박층 크로마토그래피(실리카, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 9:1, 소량의 에탄올)를 거쳐 표제 화합물(300 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 201.8 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 7.47 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.35 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.64 (s, 2H), 2.20 (s, 3H).
단계 2: ( S )-11-(클로로메틸)-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-9-메틸-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(중간체 19-3)의 합성
중간체 19-2(200 mg, 991.94 μmol) 및 중간체 1-3(260.12 mg, 991.94 μmol)을 무수 톨루엔(3 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(12.46 mg, 49.60 μmol)을 첨가하며, 반응액을 질소 가스 보호 하에 90℃에서 18 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 반응액을 여과하며, 필터 케이크를 에탄올(3 mL*2)로 세척하여 표제 화합물 조생성물(223 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 429.1 [M+H]+.
단계 3: ( S )-4-에틸-8-플루오로-4-히드록시-11-(((1-((히드록시메틸)시클로프로필)아미노)메틸)-9-메틸-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 19)의 합성
중간체 19-3(20 mg, 46.64 μmol) 및 중간체 19-4(6.09 mg, 69.96 μmol)를 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 용해시키고, 여기에 탄산세슘(30.39 mg, 93.27 μmol)을 첨가하며, 반응액을 질소 가스 보호 하에 40℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 10%-40%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(1.3 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 480.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 )δ = 9.35-9.20 (m, 1H), 8.45-8.30 (m, 1H), 8.12-7.84 (m, 1H), 7.35 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 6.62-6.50 (m, 1H), 5.57-5.43 (m, 4H), 5.20-4.75 (m, 2H), 3.90-3.75 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 1.98-1.76 (m, 2H), 1.30-1.20 (m, 2H), 0.90-0.80 (m, 5H).
실시예 20. ( S )- N -((8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-8,9,12,14-테트라히드로-11 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 20)
단계 1: 1-(5-아미노벤조푸란-4-일)-2-클로로에타논(중간체 20-2)의 합성
삼염화붕소(1 M, 9.61 mL)를 디클로로에탄(14 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추며, 여기에 중간체 20-1(1.6 g, 12.02 mmol) 및 클로로아세토니트릴(1.36 g, 18.03 mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 10 min 동안 교반하며, 여기에 삼염화알루미늄(1.92 g, 14.42 mmol)을 첨가하였다. 반응액을 질소 가스 보호 하에25℃로 승온시켜 10 min 동안 교반하였다. 반응액을 질소 가스 보호 하에 90℃에서 18 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(50 mL) 및 5% HCl(10 mL)을 순차적으로 천천히 첨가하며 25℃에서 30 min 동안 교반한 후, 디클로로메탄(60 mL)을 첨가하고, 유기상을 물(30 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 분취용 박층 크로마토그래피(석유 에테르:(에틸아세테이트+에탄올=3:1) = 9:1)를 거쳐 표제 화합물(300 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 210.0 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 7.72 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.78 (s, 2H)
단계 2: ( S )-15-(클로로메틸)-8-에틸-8-히드록시-11,14-디히드로-12 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(중간체 20-3)의 합성
중간체 20-2(200 mg, 954.07 μmol) 및 중간체 1-3(251.15 mg, 954.07 μmol)을 무수 톨루엔(4 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(23.98 mg, 95.41 μmol)을 첨가하며, 반응액을 질소 가스 보호 하에 90℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 실온으로 냉각시키고, 반응액을 여과하며, 필터 케이크를 에탄올(3 mL*2)로 세척하여, 표제 화합물(300 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 437.1 [M+H]+.
단계 3: ( S )-15-(아미노메틸)-8-에틸-8-히드록시-11,14-디히드로-12 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(중간체 20-4)의 합성
중간체 20-3(70 mg, 160.24 μmol)을 에탄올(0.5 mL) 및 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(89.85 mg, 640.96 μmol)을 첨가하였다. 반응액을 25℃에서 3 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 메탄올의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 메탄올 구배 비율 5%-25%, 용리 시간 12분) 표제 화합물(17 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI):418.1 [M+H]+.
단계 4: ( S )- N -((8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-8,9,12,14-테트라히드로-11 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 20)
중간체 20-4(5.00 mg, 11.98 μmol) 및 글리콜산 (4.55 mg, 59.89 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(6.83 mg, 17.97 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(4.64 mg, 35.94 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 15%-35%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(3 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 476.2 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.48-8.41 (m, 1H), 8.35 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.58 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 5.10 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.93-1.82 (m, 2H), 0.89 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 21. ( S )- N -((9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 21)
단계 1: ( S )- N -((9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 21)의 합성
화합물 12(7 mg, 15.63 μmol) 및 글리콜산 (1.78 mg, 25.48 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(11.89 mg, 31.26 μmol) 및 디이소프로필에틸아민(2.02 mg, 15.63 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 20%-40%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(1 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 506.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, Methanol-d 4 ) δ = 8.35 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 1.8, 9.8 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.59-5.50 (m, 3H), 5.45 (s, 2H), 4.91 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 3.84 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 1.90-1.80 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 22. ( S )- N -((9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시-2-메틸프로피온아미드(화합물 22)
단계 1: ( S )- N -((9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시-2-메틸프로피온아미드(화합물 22)
화합물 12(20 mg, 44.66 μmol) 및 중간체 17-1(13.95 mg, 133.98 μmol)을 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(25.47 mg, 66.99 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(17.32 mg, 133.98 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 20%-40%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(1.07 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 534.2 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.30 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.19-8.07 (m, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.55-5.45 (m, 3H), 5.45 (s, 2H), 4.90 (d, J = 3.7 Hz, 2H), 1.90-1.82 (m, 2H), 1.24 (d, J = 4.3 Hz, 6H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 23. N -((( S )-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-시클로프로필-2-히드록시아세트아미드(화합물 23)
단계 1: N -((( S )-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-시클로프로필-2-히드록시아세트아미드(화합물 23)
화합물 12(7.0 mg, 15.63 μmol) 및 중간체 11-1(9.08 mg, 78.16 μmol)을 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(8.92 mg, 23.45 μmol) 및 디이소프로필에틸아민(6.06 mg, 46.89 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 41%-61%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(7 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 546.2 [M+H]+.
화합물 23(7 mg)을 분취용 초임계 유체 크로마토그래피로 분리 및 정제(칼럼: DAICEL CHIRALCEL OD-H(250 mm*30 mm, 5 μm); 이동상: A: 이산화탄소; B: 에탄올; B%: 50%; 유속: 80 ml/분)하여, 화합물23-P1(2.1 mg, RT: 5.106 min) 및 화합물23-P2(2.09 mg, RT: 5.641 min)를 얻었다.
화합물 23-P1:
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.32 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.53 (s, 2H), 5.47 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.93-4.86 (m, 2H), 2.02-1.96 (m, 1H), 1.91-1.81 (m, 2H), 1.04-0.96 (m, 1H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.37-0.31 (m, 2H), 0.29-0.23 (m, 2H).
MS m/z (ESI): 546.2 [M+H]+.
화합물 23-P2:
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.37-8.29 (m, 1H), 8.15 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.53 (s, 2H), 5.50-5.46 (m, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.96-4.86 (m, 2H), 2.10-1.95 (m, 1H), 1.92-1.81 (m, 2H), 1.04-0.98 (m, 1H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.40-0.31 (m, 2H), 0.30-0.25 (m, 2H).
MS m/z (ESI): 546.2 [M+H]+.
실시예 24. ( S )-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-11-(((1-(히드록시메틸)시클로프로필)아미노)메틸)-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 24)
단계 1: ( S )-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-11-(((1-(히드록시메틸)시클로프로필)아미노)메틸)-1,12-디히드로-14 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-3,14(4 H )-디온(화합물 24)의 합성
중간체 12-3(30 mg, 64.21 μmol) 및 중간체 19-4(27.97 mg, 321.03 μmol)를 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 용해시키고, 여기에 탄산세슘(41.84 mg, 128.41 μmol)을 첨가하며, 반응액을 질소 가스 보호 하에 40℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 여과액을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하며(Waters Xbridge C18 칼럼 5μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 30%-50%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(3.1 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 518.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.13-7.97 (m, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.80-6.68 (m, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.45-5.35 (m, 2H), 4.25-4.15 (m, 1H), 4.10-4.05 (m, 1H), 2.98-2.90 (m, 3H), 2.87-2.72 (m, 1H), 2.69-2.56 (m, 1H), 2.00-1.78 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.32-0.19 (m, 2H), 0.18-0.01 (m, 2H).
실시예 25. ( R )- N -((( S )-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시프로피온아미드(화합물 25)
단계 1: ( R )- N -((( S )-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시프로피온아미드(화합물 25)의 합성
화합물 12(6 mg, 13.40 μmol) 및 중간체 25-1(2.41 mg, 26.80 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(10.09 mg, 26.80 μmol) 및 디이소프로필에틸아민(1.73 mg, 13.49 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 20%-40%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(1.80 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 520.1[M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.34 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.59 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.13-3.89 (m, 1H), 1.95-1.77 (m, 2H), 1.21 (d, J =6.8 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 26. ( S )- N -((( S )-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시프로피온아미드(화합물 26)
단계 1: ( S )- N -((( S )-9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-11-일)메틸)-2-히드록시프로피온아미드(화합물 26)의 합성
화합물 12(6 mg, 13.40 μmol) 및 중간체 26-1(2.41 mg, 26.80 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(10.09 mg, 26.80 μmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(1.73 mg, 13.49 μmol)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 아세토니트릴 구배 비율 20%-40%, 용리 시간 12분) 표제 화합물(1.60 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 520.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.34 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.23-8.03 (m, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.59 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.07-3.96 (m, 1H), 1.93-1.81 (m, 2H), 1.21 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 27. ( S )- N -((4-클로로-8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-8,9,12,14-테트라히드로-11 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 27)
단계 1: (3-클로로-2-히드록시-5-니트로페닐)메탄디올(중간체 27-2)의 합성
중간체 27-2(6 g)를 아세트산(25 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추며 여기에 질산(9.64 g)을 천천히 첨가하였다. 반응액을 25℃에서 4 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물에 천천히 적가한 후, 에틸아세테이트(60 mL)로 3회 추출하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 후, 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물(5.88 g)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, METHANOL- d 4) δ = 8.16 (d, J =1.4, 2.4 Hz, 1H), 8.07-8.01 (m, 1H), 5.68 (s, 1H).
단계 2: 7-클로로-5-니트로벤조푸란-2-에틸포르메이트(중간체 27-4)의 합성
중간체 27-2(5.88 g), 중간체 27-3(7.69 g) 및 탄산칼륨(7.41g)을 아세톤(60 mL)에 용해시키고, 반응액을 70℃에서 6 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 여기에 물(50 ml)을 첨가한 후, 에틸아세테이트(50 mL)로 3회 추출하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 후, 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물(4.5 g)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 8.55 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 4.49 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.46 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 3: 7-클로로-5-니트로벤조푸란-2-카르복실산(중간체 27-5)의 합성
중간체 27-4(4.5 g)를 메탄올(50 mL)에 용해시키고, 여기에 수산화나트륨 수용액(2 g in 25 ml H2O)을 천천히 적가하며, 반응액을 25℃에서 3 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 여기에 물(120 ml)을 첨가한 후, 에틸아세테이트(50 mL)로 2회 추출하였다. 수상을 희염산으로 pH 1로 조절한 후, 에틸아세테이트(50 mL)로 3회 추출하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 후, 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물(4.0 g)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 8.45 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H).
단계 4: 7-클로로-5-니트로벤조푸란(중간체 27-6)의 합성
중간체 27-5(4 g) 및 산화구리(1.05 g)를 퀴놀린(28 mL)에 용해시키고, 반응액에 질소 가스를 유입시키며 200℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 0℃로 냉각시키고 여기에 희염산(80 ml)을 천천히 적가한 후, 물(30 ml)을 첨가하며 에틸아세테이트(30 mL)로 3회 추출하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 후, 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물(2.4 g)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 8.49 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 2.3 Hz, 1H)
단계 5: 7-클로로벤조푸란-5-아민(중간체 27-7)의 합성
중간체 27-6(2.4 g) 및 철분말(1.55 g)을 메탄올(5 mL)에 용해시키고, 여기에 염화암모늄 수용액(148.91 mg, 5 ml)을 적가하며, 반응액에 질소 가스를 유입키시고 80℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 25℃로 냉각시키고 여기에 물(10 ml)을 첨가하며, 에틸아세테이트(10 mL)로 3회 추출하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 후, 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물(1.2 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 167.8[M+H]+.
단계 6: 1-(5-아미노-7-클로로벤조푸란-4-일)-2-클로로에탄-1-온(중간체 27-8)의 합성
삼염화붕소(671.17 mg)를 1,2-디클로로에탄(8 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 온도를 낮추며, 여기에 중간체 27-7(1.2 g) 및 클로로아세토니트릴(702.75 mg)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 10 min 동안 교반하며, 여기에 삼염화알루미늄(1.24 g)을 첨가하였다. 이후 반응액을 질소 가스 보호 하에 25℃로 승온시켜 10 min 동안 교반하였다. 반응액을 질소 가스 보호 하에 90℃에서 18 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(5 mL) 및 5% HCl (1 mL)을 순차적으로 천천히 첨가하며 25℃에서 30 min 동안 교반한 후, 디클로로메탄(4 mL)을 첨가하고, 유기상을 물(2 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 박층 크로마토그래피(실리카, 석유 에테르:(에틸아세테이트와 에탄올의 3/1 혼합 용매) = 9:1)를 거쳐 표제 화합물(500 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 243.8 [M+H]+.
단계 7: ( S )-4-클로로-15-(클로로메틸)-8-에틸-8-히드록시-11,14-디히드로-12 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(중간체 27-9)의 합성
중간체 27-8(450 mg) 및 중간체 1-3(480.35 mg)을 톨루엔(5 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(23.17 mg)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 18 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 석유 에테르(2mL*2)로 세척하며, 건조시켜 표제 화합물(500 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 471.0 [M+H]+.
단계 8: (S)-15-(아미노메틸)-4-클로로-8-에틸-8-히드록시-11,14-디히드로-12 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(중간체 27-10)의 합성
중간체 27-9(450 mg)를 메탄올(1 mL) 및 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)의 혼합 용액에 용해시키고, 여기에 메테나민(267.71 mg)을 첨가하였다. 반응액을 50℃에서 4 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 실온으로 냉각시키고, 농염산(2 mL)을 첨가하여 교반한 후, 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 아세토니트릴 구배 비율 13%-43%, 용리 시간 12분) 표제 화합물(60.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 451.9 [M+H]+.
단계 9: ( S )- N -((4-클로로-8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-8,9,12,14-테트라히드로-11 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 27)의 합성
중간체 27-10(10 mg) 및 글리콜산(5.05 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(16.83 mg) 및 디이소프로필에틸아민(2.86 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 28%-48%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(6.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI):510.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.46 (s, 2H), 8.36-8.20 (m, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.58 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 2.9 Hz, 2H), 5.45 (s, 2H), 5.07 (s, 2H), 3.88 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 2.02-1.75 (m, 2H), 0.89 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 28. N -((( S )-4-클로로-8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-8,9,12,14-테트라히드로-11 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-시클로프로필-2-히드록시아세트아미드(화합물 28)
단계 1: N -((( S )-4-클로로-8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-8,9,12,14-테트라히드로-11 H -푸로[3,2- f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-시클로프로필-2-히드록시아세트아미드(화합물 28)의 합성
중간체 27-10(10 mg) 및 중간체 11-1(8.34 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(13.65 mg) 및 디이소프로필에틸아민(3.10 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 34%-54%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(6.2 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 550.1[M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.48-8.43 (m, 2H), 8.29 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 5.15-4.98 (m, 2H), 3.57 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 1.95-1.80 (m, 2H), 1.10-1.00 (m, 1H), 0.89 (t, J =7.3 Hz, 3H), 0.41-0.32 (m, 2H), 0.32-0.24 (m, 2H).
실시예 29. 2-시클로프로필- N -((( S )-7-에틸-7-히드록시-15-니트로-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 29)
단계 1: ( S )-14-(클로로메틸)-7-에틸-7-히드록시-15-니트로-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온(중간체 29-1)의 합성
중간체 14-7(500.0 mg)을 황산(15 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 냉각시켰다. 다음 여기에 질산(357.35 g, 70% 순도)을 천천히 첨가하고, 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하며, 반응 완료 후, 얼음물(10 mL)을 순차적으로 천천히 첨가한 후 디클로로메탄(30 mL)을 첨가하고, 유기상을 물 40 mL(20 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물 조생성물(280.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 486.0 [M+H]+.
단계 2: ( S )-14-(아미노메틸)-7-에틸-7-히드록시-15-니트로-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온(중간체 29-2)의 합성
중간체 29-1(270.0 mg)을 메탄올(2 mL) 및 테트라히드로푸란(2 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(233.73 mg)을 첨가하였다. 반응액을 60℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Pack CN C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% FA 함유) 및 메탄올의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(메탄올 구배 비율 9%-29%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(15.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 467.1 [M+H]+.
단계 3: 2-시클로프로필- N -((( S )-7-에틸-7-히드록시-15-니트로-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 29)의 합성
중간체 29-2(12.00 mg) 및 중간체 11-1(14.94 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(14.67 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(9.98 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액을 여과하고, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제(Boston Prime C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 아세토니트릴 구배 비율 15%-45%, 용리 시간 12분)하여 표제 화합물(5.20 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 565.2 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.25 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.52 (d, J = 2.6 Hz, 3H), 5.55 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.36 (s, 2H), 4.48 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 3.53 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 1.91-1.83 (m, 2H), 1.10-0.98 (s, 1H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.42-0.28 (m, 4H).
실시예 30. N -((( S )-15-클로로-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-시클로프로필-2-히드록시아세트아미드(화합물 30)
단계 1: 2-클로로-3,4-디히드록시벤즈알데히드(중간체 30-2)의 합성
중간체 30-1(20.0 g)을 무수 디클로로메탄(100 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 냉각시키며, 여기에 삼브롬화붕소(87.41 g)를 천천히 첨가하고, 반응액을 25℃에서 4 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물에 천천히 부어 넣고, 에틸아세테이트(200 mL)를 첨가하며, 유기상을 물(100 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 후, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 에틸아세테이트:석유 에테르 = 1: 4의 용액으로 세척하고, 여과 후 표제 화합물(14 g)을 얻는다.
MS m/z (ESI): 173.1 [M+H]+.
단계 2: 4-클로로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-포름알데히드(중간체 30-3)의 합성
중간체 30-2(10.0 g)를 무수 N,N-디메틸포름아미드(100 mL)에 용해시키고, 여기에 탄산세슘(28.32 g) 및 디요오도메탄 (23.28 g)을 첨가하였다. 반응액을 100℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물(100 mL)을 순차적으로 천천히 첨가한 후, 에틸아세테이트(150 mL)를 첨가하며, 유기상을 물(50 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 후, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물(5.2 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI):185.4 [M+H]+.
단계 3: 1-(4-클로로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-올(중간체 30-4)의 합성
중간체 30-3(5.0 g)을 무수 테트라히드로푸란(100 mL)에 용해시키고, 반응액을 -78℃로 냉각시키며, 여기에 메틸마그네슘브로마이드(4.85 g, 3 M)를 천천히 첨가하였다. 질소 가스 보호 하에 반응액을 25℃에서 4 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 물(50 mL)을 순차적으로 천천히 첨가한 후, 에틸아세테이트(100 mL)를 첨가하고,유기상을 물(50 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 후, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트 = 2:1)하여 표제 화합물(5.3 g)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 6.99 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.97 (s, 2H), 5.13 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 1.41 (d, J = 6.4 Hz, 3H)
단계 4: 1-(4-클로로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-온(중간체 30-5)의 합성
중간체 30-4(5.2 g)를 무수 디클로로메탄(100 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 냉각시키며, 여기에 Dess-Martin 시약(DMP)(16.49 g)을 천천히 첨가하였다. 질소 가스 보호 하에 반응액을 25℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 물(50 mL)을 순차적으로 천천히 첨가한 후, 에틸아세테이트(100 mL)를 첨가하고, 유기상을 물(50 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트 = 3:1)하여 표제 화합물(3.0 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 199.2 [M+H]+.
단계 5: 1-(4-클로로-6-니트로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-온(중간체 30-6)의 합성
중간체 30-5(2.50 g)를 무수 디클로로메탄(20 mL)에 용해시키고, 여기에 농황산(1.23 g) 및 질산(5.67 g)을 천천히 첨가하였다. 반응액을 25℃에서 3 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물에 천천히 부어 넣고, 에틸아세테이트(150 mL)를 첨가하며, 유기상을 물(50 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 후, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물은 분취용 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트 = 2:1)를 거쳐 표제 화합물(1.8 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 244.1 [M+H]+.
단계 6: 1-(6-아미노-4-클로로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-온(중간체 30-7)의 합성
중간체 30-6(0.80g)을 무수 메탄올(6 mL)에 용해시키고, 여기에 Raney Ni (400.0 mg)을 첨가하였다. 반응액을 수소 가스 분위기 하에 25℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물(510.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 214.2 [M+H]+.
단계 7: N -(6-아세틸-7-클로로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)아세트아미드(중간체 30-8)의 합성
중간체 30-7(260.0 mg)을 무수 디클로로메탄(5 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 냉각시키며 여기에 N,N-디이소프로필에틸아민(235.95 mg) 및 클로로아세틸아민(143.32 mg)을 첨가하였다. 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트 = 5:1)하여 표제 화합물(140.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 256.0 [M+H]+.
단계 8: N -(6-(2-브로모아세틸)-7-클로로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)아세트아미드(중간체 30-9)의 합성
중간체 30-8(110.00 mg)을 아세트산(2 mL)에 용해시키고, 여기에 브롬화수소의 아세트산 용액(158.24 mg, 33% 함량)을 첨가한 후, 여기에 액체 브롬(72.20 mg)을 천천히 첨가하며 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물에 천천히 부어 넣고, 에틸아세테이트(30 mL)를 첨가하며, 유기상을 물(20 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하여 표제 화합물(110.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 334.0 [M+H]+.
단계 9: 1-(6-아미노-4-클로로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)-2-클로로에탄-1-온(중간체 30-10)의 합성
중간체 30-9(110.00 mg)를 무수 에탄올(1 mL) 및 농염산(1 mL)에 용해시키고, 반응액을 60℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(10 mL) 및 포화 탄산수소나트륨(10 mL)을 순차적으로 천천히 첨가한 후, 디클로로메탄(30 mL)을 첨가하며, 유기상을 물(20 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 박층 크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트 = 3:1)하여 표제 화합물(75 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 248.0 [M+H]+.
단계 10: ( S )-15-클로로-14-(클로로메틸)-7-에틸-7-히드록시-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온(중간체 30-11)의 합성
중간체 30-10(75.00 mg) 및 중간체 1-3(83.57 mg)을 톨루엔(3 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(PPTS)(11.4 mg)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(2 mL*2)로 세척하며, 건조 후 표제 화합물(75.0 mg)를 얻었다.
MS m/z (ESI): 475.1 [M+H]+.
단계 11: ( S )-14-(아미노메틸)-15-클로로-7-에틸-7-히드록시-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온(중간체 30-12)의 합성
중간체 30-11(70.00 mg)을 무수 메탄올(2 mL) 및 무수 테트라히드로푸란(1 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(61.94 mg)을 첨가하였다. 반응액을 80℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Boston Prime C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 5%-25%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(16.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 456.1 [M+H]+.
단계 12: N -((( S )-15-클로로-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-시클로프로필-2-히드록시아세트아미드(화합물 30)의 합성
중간체 30-12(5.00 mg) 및 중간체 11-1(6.37 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(6.26 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(4.25 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Boston Prime C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 31%-51%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(2.30 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 554.2 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 7.78 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.30-6.25 (m, 1H), 6.16 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 5.27-5.21 (m, 2H), 5.19 (s, 2H), 4.93-4.78 (m, 2H), 3.29 (dd, J = 2.4, 6.1 Hz, 1H), 1.68-1.56 (m, 2H), 0.81-0.72 (m, 1H), 0.63 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.14-0.06 (m, 2H), 0.05-0.03 (m, 2H).
실시예 31. ( S )- N -((15-클로로-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 31)
단계 1: ( S )- N -((15-클로로-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 31)의 합성
중간체 30-12(5 mg) 및 글리콜산(4.17 mg)을 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(6.26 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(4.25 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Boston Prime C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 아세토니트릴 구배 비율 20%-40%, 용리 시간 12분)하여 표제 화합물(2.50 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 514.2 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.03 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.54-6.48 (m, 1H), 6.41 (s, 2H), 5.48 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 5.12 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.82 (s, 2H), 1.93-1.78 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
실시예 32. ( S )- N -((9-클로로-4-에틸-8,10-디플루오로-4-히드록시-3,14-디옥소-3,4,12,14-테트라히드로-1 H -피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-11-일)메틸)-3-히드록시프로피온아미드(화합물 32)
화합물 12(10 mg) 및 히드록시프로피온산(2.21 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(12.70 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.89 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 28%-48%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(0.80 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 520.1[M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.54 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.54 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 4.54 (s, 1H), 3.57 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.32-2.26 (m, 2H), 1.99-1.75 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 33. ( S )- N -((4-클로로-8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-2,3,8,9,12,14-헥사히드로-1 H ,11 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 33)
단계 1: 7-클로로-2,3-디히드로-1 H -인덴-4-올(중간체 33-2)의 합성
중간체 33-1(500 mg)을 무수 아세토니트릴(5 mL)에 용해시키고, 여기에 NCS(547 mg)를 첨가하며, 첨가 완료 후, 25℃ 조건에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액에 물(10 mL)을 첨가하고, 에틸아세테이트로 추출(10 mL*3회)하며, 포화 식염수(30 mL)로 유기층을 세척하고, 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 유기상을 감압 농축하여 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트 = 100:1~10:1)하여 표제 화합물(600 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 169.0 [M+H]+.
단계 2: 7-클로로-5-니트로-2,3-디히드로-1 H -인덴-4-올(중간체 33-3)의 합성
중간체 33-2(10 g)를 AcOH(50 mL) 및 H2O(10 mL)에 용해시키고, 0℃에서 여기에 HNO3(8.62 g, 65% 질량 분율)을 첨가하였다. 반응액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액을 얼음물(200 mL)에 천천히 첨가하였다. 여과 후, 감압 농축하여 용매를 제거하여 표제 화합물(10 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 214.0 [M+H]+.
단계 3: 5-아미노-7-클로로-2,3-디히드로-1 H -인덴-4-올(중간체 33-4)의 합성
중간체 33-3(5 g)을 무수 DCM(50 mL)에 용해시키고, 여기에 AcOH(14.04 g) 및 Zn(7.61 g)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 물(200 mL) 및 에틸아세테이트(200 mL)를 순차적으로 첨가하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨 수용액(50 mL*2)으로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 감압 농축하여 용매를 제거하여 표제 화합물(4 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 184.0 [M+H]+.
단계 4: 5-아세트아미도-7-클로로-2,3-디히드로-1 H -인덴-4-일 아세테이트(중간체 33-5)의 합성
중간체 33-4(4 g)를 무수 디클로로메탄(40 mL)에 용해시키고, 여기에 아세트산 무수물(Ac2O)(6.67 g) 및 트리에틸아민(TEA)(6.61 g)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 물(200 mL) 및 에틸아세테이트(200 mL)를 순차적으로 첨가하고, 유기상을 포화 NaCl 수용액(50 mL*2)으로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 감압 농축하여 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트 = 20:1~5:1)하여 표제 화합물(4 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 268.0 [M+H]+.
단계 5: N -(7-클로로-4-히드록시-2,3-디히드로-1 H -인덴-5-일)아세트아미드(중간체 33-6)의 합성
중간체 33-5 (4 g)를 무수 메탄올(20 mL)에 용해시키고, 여기에 K2CO3(6.19 g)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 물(200 mL) 및 에틸아세테이트(200 mL)를 순차적으로 첨가하고, 유기상을 포화 NaCl 수용액(50 mL*2)으로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 감압 농축하여 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트 = 20:1~1:1)하여 표제 화합물(2.8 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 226.0 [M+H]+.
단계 6: 5-아세트아미도-7-클로로-2,3-디히드로-1 H -인덴-4-일 트리플루오로메탄술포네이트(중간체 33-7)의 합성
중간체 33-6 (500 mg)을 디클로로메탄(5 mL)에 용해시키고, 여기에 트리플루오로메탄술폰산 무수물(Tf2O)(749 mg) 및 트리에틸아민(TEA)(672 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 물(50 mL) 및 에틸아세테이트(50 mL)를 순차적으로 첨가하고, 유기상을 포화 NaCl 수용액(50 mL*2)으로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 감압 농축하여 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트 = 20:1~1:1)하여 표제 화합물(580 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 358.0 [M+H]+.
단계 7: N -(4-(1-부톡시비닐)-7-클로로-2,3-디히드로-1 H -인덴-5-일)아세트아미드(중간체 33-8)의 합성
중간체 33-7(430 mg) 및 비닐n-부틸에테르(360.60 mg)를 디옥산(20 mL)에 용해시키고, 디이소프로필에틸아민(DIEA)(466 mg), 1,1'-비스(디페닐포스핀)페로센(DPPF)(66 mg) 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(Pd2(dba)3)(110 mg)을 첨가하며, 반응액을 80℃에서 질소 가스 보호 하에 16시간 동안 교반 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응액을 물(50 ml)로 희석하고, 에틸아세테이트(50 ml*3회)로 추출하며, 유기상을 합병하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 유기상을 감압 농축하여 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸아세테이트 = 20:1~1:1)하여 표제 화합물(300 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 308.0 [M+H]+.
단계 8: N -(4-아세틸-7-클로로-2,3-디히드로-1 H -인덴-5-일)아세트아미드(중간체 33-9)의 합성
중간체 33-8(200 mg)을 디옥산(5 mL)에 용해시키고, 1 N HCl(5 mL)을 첨가하며, 25℃에서 2시간 동안 교반 반응시켰다. 반응 종료 후, 유기상을 감압 농축하여 용매를 제거하여 표제 화합물(150 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 252.0 [M+H]+.
단계 9: N -(4-(2-브로모아세틸)-7-클로로-2,3-디히드로-1 H -인덴-5-일)아세트아미드(중간체 33-10)의 합성
중간체 33-9(300 mg)를 HBr/AcOH(4 mL, 33% 질량 분율)에 용해시키고, NBS(318.20 mg)를 첨가하며, 반응액을 25℃에서 2시간 동안 교반 반응시켰다. 반응 완료 후, 반응액을 감압 농축하여 용매를 제거하여, 표제 화합물(390 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 330.0 [M+H]+.
단계 10: 1-(5-아미노-7-클로로-2,3-디히드로-1 H -인덴-4-일)-2-클로로에탄-1-온(중간체 33-11)의 합성
중간체 33-10(300 mg)을 무수 에탄올에 용해시키고 HCl(12 M, 8.00 mL)을 첨가하며, 반응액을 80℃에서 2시간 동안 교반 반응시켰다. 반응 완료 후, 반응액을 감압 농축하여 용매를 제거하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제(크로마토그래피 칼럼: Gemini NX C18 5 μm*10*150 mm; 이동상: A: 물(0.225% 포름산 v/v), B: 아세토니트릴; B%: 30%-70%)하여 표제 화합물(64 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 244.0 [M+H]+.
단계 11: ( S )-4-클로로-15-(클로로메틸)-8-에틸-1,2,3,8,11,14-헥사히드로-9 H ,12 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12-디온(중간체 33-12)의 합성
중간체 33-11(45.00 mg) 및 중간체 1-3(48.53 mg)을 톨루엔(1 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(4.63 mg)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(2 mL*2)로 세척하며, 건조시켜 표제 화합물(80.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 471.1 [M+H]+.
단계 12: ( S )-15-(아미노메틸)-4-클로로-8-에틸-8-히드록시-1,2,3,8,11,14-헥사히드로-9 H ,12 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12-디온(중간체 33-13)의 합성
중간체 33-12(40.00 mg)를 무수 메탄올(1 mL) 및 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(35.69 mg)을 첨가하였다. 반응액을 50℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 실온으로 냉각시키고, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Boston Prime C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% FA 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 35%-55%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(15.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 452.1 [M+H]+.
단계 13: ( S )- N -((4-클로로-8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-2,3,8,9,12,14-헥사히드로-1 H ,11 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 33)의 합성
중간체 33-13(5.00 mg) 및 글리콜산(4.21 mg, 55.30 μmol)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(6.31 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(4.29 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Boston Green ODS C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.05% FA 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 32%-52%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(2.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 510.3 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.36-8.30 (m, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.96 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.74-3.66 (m, 2H), 3.14 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.27-2.19 (m, 2H), 1.92-1.82 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 34. N -((( S )-4-클로로-8-에틸-8-히드록시-9,12-디옥소-2,3,8,9,12,14-헥사히드로-1 H ,11 H -시클로펜타디에노[ f ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-15-일)메틸)-2-시클로프로필-2-히드록시아세트아미드(화합물 34)
중간체 33-13(5.00 mg) 및 중간체 11-1(6.42 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 HATU(6.31 mg) 및 디이소프로필에틸아민(4.29 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제(Boston Prime C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.05% FA 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 아세토니트릴 구배 비율 35%-55%, 용리 시간 12분)하여 표제 화합물(2.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 550.3 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.36-8.31 (m, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.47-5.41 (m, 3H), 5.38 (s, 2H), 4.96-4.90 (m, 2H), 3.69 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 3.14 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.27-2.18 (m, 2H), 1.93-1.81 (m, 2H), 1.09-1.03 (m, 1H), 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.41-0.26 (m, 4H).
실시예 35. ( S )-14-(아미노메틸)-7-에틸-15-플루오로-7-히드록시-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온(화합물 35)
단계 1: 1-(2-플루오로-3,4-디메톡시페닐)에탄-1-온(중간체 35-2)의 합성
중간체 35-1(25.0 g)을 1,2-디클로로에탄(250 mL)에 용해시키고, 반응액을 0℃로 냉각시키며, 여기에 삼염화알루미늄(64.04 g)을 천천히 첨가한 후, 반응액에 염화아세틸(64.04 g)을 적가하였다. 반응액을 질소 가스 분위기 하에 0℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 여기에 물(300 mL)을 첨가하고, 에틸아세테이트(150 mL*3회)로 추출하며, 유기상을 합병하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 유기상을 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(ISCO®; 120 g SepaFlash® 고속 실리카겔 칼럼, 구배 0~50% 석유 에테르/에틸아세테이트, 유속70 mL/min)하여, 표제 화합물(21.0 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 199.0 [M+H]+.
단계 2: 1-(2-플루오로-3,4-디히드록시페닐)에탄-1-온(중간체 35-3)의 합성
중간체 35-2(15.00 g)를 무수 디클로로메탄(150 mL)에 용해시키고, 반응액을 -78℃로 냉각시키며, 여기에 삼브롬화붕소(56.88 g)를 천천히 적가하고, 반응액을 질소 가스 분위기 하에 -78℃에서 2 h 동안 교반한 후, 0℃로 승온시켜 4 h 동안 반응시켰다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물에 천천히 적가하여 퀀칭시키고, 퀀칭 완료 후, 에틸아세테이트(150 mL*3회)로 추출하며, 유기상을 합병하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 유기상을 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(ISCO®; 120 g SepaFlash® 고속 실리카겔 칼럼, 구배 0~50% 석유 에테르/에틸아세테이트, 유속70 mL/min)하여, 표제 화합물(8.50 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 171.0 [M+H]+.
단계 3: 1-(4-플루오로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-온(중간체 35-4)의 합성
중간체 35-3(4.0 g)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(40 mL)에 용해시키고, 여기에 탄산세슘(11.49 g) 및 1,2-디요오도메탄(18.89 g)을 첨가하였다. 반응액을 질소 가스 분위기 하에 100℃에서 8 min 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 물에 천천히 부어 넣고, 에틸아세테이트(50 mL*3회)로 추출하며, 유기상을 합병하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 유기상을 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(ISCO®; 24 g SepaFlash® 고속 실리카겔 칼럼, 구배 0~15% 석유 에테르/에틸아세테이트, 유속60 mL/min)하여 표제 화합물(2.0 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 183.0 [M+H]+.
단계 4: 1-(4-플루오로-6-니트로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-온(중간체 35-5)의 합성
중간체 35-4(2.0 g)를 무수 디클로로메탄(15 mL)에 용해시키고, 여기에 농황산(5.38 g, 98% 질량 분율)을 첨가하며, 반응액을 0℃로 온도를 낮추었다. 다음 반응액에 농질산(3.46 g, 68% 질량 분율)을 천천히 적가하였다. 반응액을 25℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물(50 mL)에 천천히 적가한 후, 에틸아세테이트(50 mL)를 첨가하고, 유기상을 물(50 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(ISCO®; 24 g SepaFlash® 고속 실리카겔 칼럼, 구배 0~40% 석유 에테르/에틸아세테이트, 유속60 mL/min)하여 표제 화합물(1.8 g)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 7.51 (s, 1H), 6.26 (s, 2H), 2.63 (s, 3H).
단계 5: 1-(6-아미노-4-플루오로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-온(중간체 35-6)의 합성
중간체 35-5(1.8 g)를 무수 메탄올(18 mL) 및 물(9 mL)에 용해시키고, 여기에 염화암모늄(635.83 mg) 및 철분말(2.21 mg)을 첨가하였다. 질소 가스 분위기 하에 반응액을 80℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 반응액을 여과하고, 여과액을 에틸아세테이트(50 mL)로 희석하며, 유기상을 물(50 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하여, 표제 화합물(1.5 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 198.0 [M+H]+.
단계 6: N -(6-아세틸-7-플루오로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)아세트아미드(중간체 35-7)의 합성
중간체 35-6(500.0 mg)을 무수 디클로로메탄(5 mL)에 용해시키고, 여기에 피리딘(601.79 mg)을 첨가하며, 질소 가스 분위기 하에 반응물에 염화아세틸(398.14 mg)을 적가하였다. 질소 가스 분위기 하에 반응액을 25℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(ISCO®; 12 g SepaFlash® 고속 실리카겔 칼럼, 구배 0~40% 석유 에테르/에틸아세테이트, 유속60 mL/min)하여 표제 화합물(380.0 mg)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 11.72 (s, 1H), 8.18 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 6.10 (s, 2H), 2.64 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 2.22 (s, 3H).
단계 7: N -(6-(2-브로모아세틸)-7-플루오로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)아세트아미드(중간체 35-8)의 합성
중간체 35-7(380.0 mg)을 아세트산(3 mL)에 용해시키고, 여기에 브롬화수소의 아세트산 용액(1.95 g, 33% 함량)을 첨가한 후, 반응액에 액체 브롬(256.42 mg)을 천천히 적가하였다. 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물에 천천히 부어 넣고 0.5 h 동안 교반하며, 여과하고, 필터 케이크를 물(20 mL*2)로 세척하며, 필터 케이크를 건조시켜, 표제 화합물(400.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 317.8 [M+H]+.
단계 8: 1-(6-아미노-4-플루오로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일)-2-클로로에탄-1-온(중간체 35-9)의 합성
중간체 35-8(400.0 mg)을 무수 에탄올(2 mL) 및 농염산(2 mL)에 용해시키고, 반응액을 60℃에서 3 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(20 mL)을 순차적으로 천천히 첨가하며, 포화 탄산수소나트륨으로 pH = 8로 조절한 후, 에틸아세테이트(40 mL)를 첨가하고, 유기상을 물(20 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하여, 표제 화합물(220.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 232.0 [M+H]+.
단계 9: ( S )-14-(클로로메틸)-7-에틸-15-플루오로-7-히드록시-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온(중간체 35-10)의 합성
중간체 35-9(200.0 mg) 및 중간체 1-3(227.32 mg)을 톨루엔(3 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(21.70 mg)을 첨가하였다. 반응액을 90℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(5 mL*2)로 세척하여, 표제 화합물(320.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 459.0 [M+H]+.
단계 10: ( S )-14-(아미노메틸)-7-에틸-15-플루오로-7-히드록시-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온(화합물 35)의 합성
중간체 35-10(260.00 mg)을 무수 메탄올(1 mL) 및 무수 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(238.32 mg)을 첨가하였다. 반응액을 50℃에서 3 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 건조될 때까지 감압 농축하며, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Boston Prime C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 0%-30%, 용리 시간 14분)하여) 표제 화합물(85.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 440.0 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 7.49 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.38 (s, 2H), 5.44 (s, 4H), 4.27 (s, 2H), 1.94-1.79 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 36. ( S )-15-(아미노메틸)-8-에틸-16-플루오로-8-히드록시-2,3,11,14-테트라히드로-12 H -[1,4]디옥사시클로헥세노[2,3- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(화합물 36)
단계 1: 1-(5-플루오로-2,3-디히드로벤조[ b ][1,4]디옥센-6-일)에탄-1-온(중간체 36-1)의 합성
중간체 35-3(0.5 g) 및 1,2-디브로모에탄을 무수 N,N-디메틸포름아미드(5 mL)에 용해시키고, 여기에 탄산칼륨(1.44 g)을 첨가하며, 반응액을 100℃에서 10 min 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액을 얼음물에 천천히 부어 넣고, 에틸아세테이트(50 mL)를 첨가하며, 유기상을 물(30 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 유기상을 감압 농축하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(ISCO®; 12 g SepaFlash® 고속 실리카겔 칼럼, 구배 0~40% 석유 에테르/에틸아세테이트, 유속60 mL/min)하여, 표제 화합물(0.2 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 197.0 [M+H]+.
단계 2: 1-(5-플루오로-7-니트로-2,3-디히드로벤조[ b ][1,4]디옥센-6-일)에탄-1-온(중간체 36-2)의 합성
중간체 36-1(0.7 g)을 무수 디클로로메탄(6 mL)에 용해시키고, 여기에 농황산(1.75 g, 98% 질량 분율)을 첨가하며, 반응액을 0℃로 온도를 낮추었다. 다음 반응액에 농질산(1.12 g, 68% 질량 분율)을 천천히 적가하고, 반응액을 25℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물(20 mL)에 천천히 적가한 후, 에틸아세테이트(50 mL)를 첨가하고, 유기상을 물(30 mL*2)로 세척하며, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(ISCO®; 12 g SepaFlash® 고속 실리카겔 칼럼, 구배 0~50% 석유 에테르/에틸아세테이트, 유속 60 mL/min)하여 표제 화합물(0.3 g)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 7.61 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.48-4.44 (m, 2H), 4.43-4.38 (m, 2H), 2.63 (s, 3H).
단계 3: 1-(7-아미노-5-플루오로-2,3-디히드로벤조[ b ][1,4]디옥센-6-일)에탄-1-온(중간체 36-3)의 합성
중간체 36-2(300.0 mg)를 무수 메탄올(3 mL) 및 물(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 염화암모늄(79.85 mg) 및 철분말(347.33 mg)을 첨가하였다. 질소 가스 분위기 하에 반응액을 80℃에서 1.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 반응액을 여과하고, 여과액을 에틸아세테이트(50 mL)로 희석하며, 유기상을 물(50 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하고, 표제 화합물(250.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 212.0 [M+H]+.
단계 4: N -(7-아세틸-8-플루오로-2,3-디히드로벤조[ b ][1,4]디옥센-6-일)아세트아미드(중간체 36-4)의 합성
중간체 36-3(250.0 mg)을 무수 디클로로메탄(5 mL)에 용해시키고, 여기에 트리에틸아민(598.93 mg)을 첨가하며, 질소 가스 분위기 하에 반응액에 염화아세틸(278.77 mg)을 적가하였다. 질소 가스 분위기 하에 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제(ISCO®; 12 g SepaFlash® 고속 실리카겔 칼럼, 구배 0~70% 석유 에테르/에틸아세테이트, 유속60 mL/min)하여, 표제 화합물(0.1 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 254.0 [M+H]+.
단계 5: N -(7-(2-브로모아세틸)-8-플루오로-2,3-디히드로벤조[ b ][1,4]디옥센-6-일)아세트아미드(중간체 36-5)의 합성
중간체 36-4(100.0 mg)를 아세트산(2 mL)에 용해시키고, 여기에 브롬화수소의 아세트산 용액(290.48 mg, 33% 함량)을 첨가한 후, 반응액에 액체 브롬(75.73 mg)을 천천히 적가하였다. 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 얼음물에 천천히 부어 넣고 0.5 h 동안 교반하며, 여과하고, 필터 케이크를 건조시켜, 표제 화합물(80.0 mg)을 얻었다.
1 H NMR (400MHz, 중수소화 클로로포름) δ = 11.04 (s, 1H), 8.15 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 4.43-4.38 (m, 2H), 4.37-4.32 (m, 2H), 2.22 (s, 3H).
단계 6: 1-(7-아미노-5-플루오로-2,3-디히드로벤조[ b ][1,4]디옥센-6-일)-2-클로로에탄-1-온(중간체 36-6)의 합성
중간체 36-5(80.0 mg)를 무수 에탄올(0.5 mL) 및 농염산(0.5 mL)에 용해시키고, 반응액을 60℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물(10 mL) 및 포화 탄산수소나트륨(10 mL)을 순차적으로 천천히 첨가한 후, 디클로로메탄(30 mL)을 첨가하며, 유기상을 물(20 mL*2)로 세척하고, 세척한 유기상을 적당량의 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 건조될 때까지 감압 농축하고, 표제 화합물(60.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 246.0 [M+H]+.
단계 7: ( S )-15-(클로로메틸)-8-에틸-16-플루오로-8-히드록시-2,3,11,14-테트라히드로-12 H -[1,4]디옥사시클로헥세노[2,3- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(중간체 36-7)의 합성
중간체 36-6(60.0 mg) 및 중간체 1-3(64.3 mg)을 톨루엔(3 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(12.28 mg)을 첨가하였다. 반응액을 95℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올(1 mL)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(2mL*2)로 세척하여 표제 화합물(60.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 473.0 [M+H]+.
단계 8: ( S )-15-(아미노메틸)-8-에틸-16-플루오로-8-히드록시-2,3,11,14-테트라히드로-12 H -[1,4]디옥사시클로헥세노[2,3- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-9,12(8 H )-디온(화합물 36)의 합성
중간체 36-7(60.00 mg)을 무수 메탄올(1 mL) 및 무수 N, N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(53.36 mg)을 첨가하였다. 반응액을 50℃에서 3 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하며, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Boston Prime C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 0%-25%, 용리 시간 12분)하여) 표제 화합물(24.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 454.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) 7.60 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.49 (s, 2H), 5.45 (s, 2H), 4.60 (s, 2H), 4.54 (s, 4H), 1.92-1.84 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 37. 2-시클로프로필- N -((( S )-7-에틸-15-플루오로-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 37)
화합물 35(6 mg) 및 중간체 11-1(7.93 mg)을 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(7.79 mg) 및 N,N-디메틸디이소프로필아민(5.29 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Boston Prime C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 15%-45%, 용리 시간 12분)하여), 표제 화합물(6.50 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 538.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.21 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.40 (s, 2H), 5.47 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.84 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 3.53 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 1.90-1.81 (m, 2H), 1.01 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 0.89-0.85 (m, 3H), 0.33 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 0.30-0.25 (m, 2H).
화합물 37-P1 및 37-P2의 합성
화합물 35(6 mg) 및 중간체 14-10-P1(7.93 mg)을 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(7.79 mg) 및 N,N-디메틸디이소프로필아민(5.29 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제(Boston Green ODS C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 아세토니트릴 구배 비율 17%-47%, 용리 시간 12분)하여, 화합물 37-P1(2.87 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 538.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.19 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.40 (s, 2H), 5.47 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.84 (d, J = 4.6 Hz, 2H), 3.53 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 1.91-1.80 (m, 2H), 1.06-0.97 (m, 1H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.38-0.31 (m, 2H), 0.31-0.24 (m, 2H).
화합물 35(6 mg) 및 중간체 14-10-P2(4.76 mg)을 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(10.38 mg) 및 N,N-디메틸디이소프로필아민(1.76 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제(Boston Green ODS C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.225% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 아세토니트릴 구배 비율 17%-47%, 용리 시간 12분)하여, 화합물 37-P2(2.01 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 538.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.26-8.16 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.40 (s, 2H), 5.46 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.87-4.82 (m, 2H), 3.53 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 1.94-1.80 (m, 2H), 1.05-0.96 (m, 1H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.39-0.30 (m, 2H), 0.31-0.20 (m, 2H).
이하의 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 분석 방법으로 두 개의 이성질체를 각각 추가로 분석하였다.
화합물 37-P1:
상기 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 조건에서, 유지 시간은 3.519분이다.
화합물 37-P2:
상기 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 조건에서, 유지 시간은 3.573분이다.
실시예 38. ( S )- N -((7-에틸-15-플루오로-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 38)
화합물 35(6 mg) 및 글리콜산(3.21 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(10.38 mg) 및 디이소프로필에틸아민(1.76 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 18%-48%, 용리 시간 12분)하여), 표제 화합물(2.40 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 498.1[M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6) δ = 8.20 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.39 (s, 2H), 5.46 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.85 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 3.83 (s, 2H), 1.92-1.80 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
실시예 39. 2-시클로프로필- N -((( S )-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일-2,2- d 2 )메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 39, 화합물 39-P1/P2)
단계 1: 1-(벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일-2,2- d 2 )에탄-1-온(중간체 39-2)의 합성
중간체 39-1(3 g)을 무수 DMF 용액(25 mL)에 용해시키고, 중수소화 디클로로메탄(8.57 g) 및 탄산칼륨(8.18 g)을 첨가하며, 첨가 완료 후, 90℃로 승온시켜 16 h 동안 교반하였다. 이후 반응액을 물(100 mL)에 첨가하고, 에틸아세테이트(200 mL*2)로 추출하며, 유기상을 합병하고 포화 식염수(100 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물은 칼럼 크로마토그래피(에틸아세테이트/석유 에테르 = 5:1)를 거쳐, 표제 화합물(2.4 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 167.1[M+H]+.
단계 2: 1-(6-니트로벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일-2,2- d 2 )에탄-1-온(중간체 39-3)의 합성
중간체 39-2(2.4 g)를 무수 아세트산(10 mL)에 용해시키고, 0℃에서 농질산(32.50 g, 70% 함량)을 적가하며, 적가 완료 후 0℃에서 10 min 동안 교반하였다. 이후 실온으로 승온시키고, 1 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액을 얼음물(200 mL)에 적가하고, 여과 후, 필터 케이크를 건조시켜 표제 화합물(1.9 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 212.0 [M+H]+.
1 H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.69 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 2.49 (s, 3H).
단계 3: N -(6-아세틸벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일-2,2- d 2 )아세트아미드(중간체 39-4)의 합성
중간체 39-3(1.8 g)을 아세트산(25 mL)에 용해시키고, 아세트산 무수물(1.84 g) 및 환원 철분말(4.76 g)을 첨가하며, 실온에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 여과하고, 여과액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물은 칼럼 크로마토그래피(에틸아세테이트/석유 에테르 = 5:1)를 거쳐, 표제 화합물(1.5 g)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 224.1 [M+H]+.
단계 4: N -(6-(2-브로모아세틸)벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일-2,2- d 2 )아세트아미드(중간체 39-5)의 합성
HBr의 아세트산 용액(2.39 g, 33% 함량)을 중간체 39-4(1.45 g)의 무수 아세트산(25 mL) 용액에 적가한 후, Br2(1.07 g)를 적가하고, 적가 완료 후, 실온에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 물(50 mL)에 첨가하며, 에틸아세테이트(50 mL*2)로 추출하고, 유기상을 포화 식염수(50 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 후, 잔류물은 칼럼 크로마토그래피(에틸아세테이트/석유 에테르 = 5:1)를 거쳐, 표제 화합물(1.3 g,)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 302.1 [M+H]+.
단계 5: 1-(6-아미노벤조[ d ][1,3]디옥솔-5-일-2,2- d 2 )-2-클로로에탄-1-온(중간체 39-6)의 합성
중간체 39-5(1.2 g) 및 농염산(144.82 mg)을 에탄올(15 mL)에 용해시키고, 반응액을 60℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 완료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(YMC-Actus Triart C18 칼럼 5 μm 실리카, 30 mm 직경, 150 mm 길이; 물(0.05% NH4HCO3 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 40%-50%)하여), 표제 화합물(577 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 216.0 [M+H]+.
단계 6: ( S )-14-(클로로메틸)-7-에틸-7-히드록시-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온-2,2- d 2 (중간체 39-7)의 합성
중간체 39-6(100.0 mg) 및 중간체 1-3(109.87 mg)을 톨루엔(1 mL) 및 아세트산(1 mL)에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산 피리디늄염(5.24 mg)을 첨가하였다. 반응액을 100℃에서 16 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 반응액을 직접 건조될 때까지 감압 농축하였다. 에탄올(5 mL)을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 0.5 h 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(5mL*2)로 세척하여 표제 화합물(100.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 443.0 [M+H]+.
단계 7: ( S )-14-(아미노메틸)-7-에틸-7-히드록시-10,13-디히드로-11 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-8,11(7 H )-디온-2,2- d 2 (중간체 39-8)의 합성
중간체 39-7(100.00 mg)을 무수 에탄올(1.5 mL) 및 무수 N,N-디메틸포름아미드(1.5 mL)에 용해시키고, 여기에 메테나민(94.97 mg)을 첨가하였다. 반응액을 50℃에서 6 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피로 정제(칼럼: Boston Green ODS 150*30 mm*5 μm; 이동상: [A: 물(포름산), B: 아세토니트릴]; B%: 0%-30%, 12min)하여 표제 화합물(25.0 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 424.0 [M+H]+.
단계 8: 2-시클로프로필- N -((( S )-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일-2,2- d 2 )메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 39)의 합성
중간체 39-8(7 mg) 및 중간체 11-1(5.76 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(12.57 mg) 및 디이소프로필에틸아민(4.27 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 여과하고, 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 20%-50%, 용리 시간 12분)하여), 표제 화합물(2.60 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 522.1[M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.62 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 5.48-5.41 (m, 5H), 4.72 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.59-3.52 (m, 1H), 2.00-1.76 (m, 2H), 1.05-0.96 (m, 1H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.37-0.30 (m, 2H), 0.29-0.19 (m, 2H).
단계 9: 2-시클로프로필- N -((( S )-7-에틸-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일-2,2- d 2 )메틸)-2-히드록시아세트아미드(화합물 39-P1/P2)의 합성
중간체 39-8(7 mg) 및 중간체 14-10-P1(5.76 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(12.57 mg) 및 디이소프로필에틸아민(4.27 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용하고; 아세토니트릴 구배 비율 15%-45%, 용리 시간 12분)하여, 화합물 39-P1(3.30 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 522.1[M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.62 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.54-5.51 (m, 1H), 5.47 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.72 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.55-3.53 (m, 1H), 1.94-1.78 (m, 2H), 1.05-0.96 (m, 1H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.40-0.30 (m, 2H), 0.29-0.19 (m, 2H).
중간체 39-8(7 mg) 및 중간체 14-10-P2(5.76 mg)를 무수 N,N-디메틸포름아미드(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(12.57 mg) 및 디이소프로필에틸아민(4.27 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 15%-45%, 용리 시간 12분)하여 화합물 39-P2(4.0 mg)를 얻었다.
MS m/z (ESI): 522.1[M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.62 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.54-5.51 (m, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.72 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 3.55-3.52 (m, 1H), 1.94-1.80 (m, 2H), 1.04-0.95 (m, 1H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.39-0.30 (m, 2H), 0.29-0.21 (m, 2H).
이하의 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 분석 방법으로 두 개의 이성질체를 각각 추가로 분석하였다.
화합물 39-P1:
상기 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 조건에서, 유지 시간은 2.877분이다.
화합물 39-P2:
상기 키랄 초임계 유체 크로마토그래피 조건에서, 유지 시간은 2.690분이다.
실시예 40. ( S )-2-아미노- N -((7-에틸-15-플루오로-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)아세트아미드(화합물 40)
단계 1: ( S )-(2-(((7-에틸-15-플루오로-7-히드록시-8,11-디옥소-8,10,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)아미노)-2-옥소에틸)tert-부틸카바메이트(중간체 40-1)의 합성
화합물 35(7 mg) 및 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)아세트산(5.58 mg)을 무수 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 용해시키고, 여기에 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(12.11 mg) 및 디이소프로필에틸아민(2.06 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 농축 건조시키고, 표제 화합물(8.00 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 597.3 [M+H]+.
단계 2: ( S )-2-아미노- N -((7-에틸-15-플루오로-7-히드록시-8,11-디옥소-7,8,11,13-테트라히드로-10 H -[1,3]디옥솔로[4,5- g ]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2- b ]퀴놀린-14-일)메틸)아세트아미드(화합물 40)의 합성
중간체 40-1(6 mg)을 디클로로메탄(0.5 mL)에 용해시키고, 여기에 트리플루오로아세트산(902.27 mg)을 첨가하며, 반응액을 25℃에서 1 h 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 잔류물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여(Waters Xbridge C18 칼럼 5 μm, 25 mm 직경, 100 mm 길이; 물(0.05% 포름산 함유) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물을 용리액으로 사용(아세토니트릴 구배 비율 2%-32%, 용리 시간 12분)하여), 표제 화합물(1.3 mg)을 얻었다.
MS m/z (ESI): 497.1 [M+H]+.
1 H NMR (400MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.80-8.58 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.40 (s, 2H), 5.50 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.85 (s, 2H), 3.09-2.75 (m, 2H), 1.92-1.79 (m, 2H), 0.87 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
실시예 1-40에서 합성한 화합물 이외의 기타 화합물은 실시예 1-40의 합성 경로 및 원재료를 참조하여 합성할 수 있다.
생물학적 활성 및 관련 특성 시험예
이하의 시험예의 화합물은 모두 본 개시의 실시예의 방법에 따라 제조하였다.
시험예 1. 종양 세포 항증식 활성 시험 1
세포 및 재료: 인간 대장암 세포주 HCT116은 Kangyuan Bochuang에서 구입하였고, 인간 유방암 세포주 SKBR3은 ATCC에서 구입하였으며, 인간 난소암 세포주 OVCAR3은 ATCC에서 구입하였고, 소 혈청(Gibco#10099-141C#2186958), McCoy's 5a 배지(Gibco#16600-082#2192439), 1640 배지(Gibco#A10491-01#2193156), 페니실린-스트렙토마이신(Gibco#15140-122#2211091) 및 0.25% Trypsin-EDTA(Gibco#25200-056#2186958)은 Gibco Corporation(미국)에서 구입하였으며, 소 인슐린(Solarbio#I8040)은 Solarbio Corporation에서 구입하였고, 96웰 플레이트(Greiner Bio-one#655098#E20103H8)는 Corning Corporation(미국)에서 구입하였으며, Cell-Titer Glo 시약(Promega#G7568#0000411325)은 Promega Corporation(미국)에서 구입하였다.
세포 배양: HCT116 세포 및 SKBR3 세포는 모두 10% 소태아 혈청+1% 페니실린-스트렙토마이신을 함유한 McCoy's 5a 배양액을 사용하여 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였고, OVCAR3 세포는 20% 소태아 혈청+2 μg/mL 소 인슐린+1% 페니실린-스트렙토마이신을 함유한 1640 배양액을 사용하여 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 대수 성장기 세포를 실험에 사용할 수 있다.
세포 증식 활성 검출: Cell-Titer Glo 시약을 사용하여 HCT116, SKBR3 및 OVCAR3의 세 개의 세포주의 증식에 대한 화합물의 억제 활성을 검출하였다. HCT116 세포(웰당 1500개), SKBR3 세포(웰당 3000개) 및 OVCAR3 세포(웰당 5000개)를 96웰 플레이트에 접종하고, 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 테스트할 화합물 용액을 첨가한 후(화합물을 DMSO로 용해시켜, 화합물 농도가 1 mM이 되도록 한 후, DMSO를 사용하여 화합물을 3 μM이 되도록 희석하고, 3배 희석하며 총 9개의 농도이고, 10 μL의 조제된 화합물 용액을 96웰 플레이트에 옮겨, 최종 농도가 0-300 nM이 되도록 함), 37℃, 5% CO2 조건에서 계속하여 배양하였다. HCT116 세포를 3일 동안 배양하였고, SKBR3 세포 및 OVCAR3 세포를 5일 동안 배양하였다. Cell-Titer Glo 시약을 첨가하고, 세포 활성을 검출하였다.
음성 대조군 및 양성 대조군을 각각 Bottom 및 Top으로 설정하였다. 음성 대조군은 세포를 첨가하지 않고, 동일한 부피의 배지만 첨가하며, 기타 조작은 실험군과 일치하고; 양성 대조군은 시험 화합물을 첨가하지 않고, 동일한 부피의 DMSO만 첨가하며, 기타 조작은 실험군과 일치하다.
데이터 분석: % 화합물 억제(% Compound inhibition)를 계산하고 화합물IC50을 피팅하였다.
화합물 억제 백분율(% Compound inhibition) = 1-100% * (Signal-Bottom)/(Top-Bottom).
Signal은 실험군의 신호값을 나타내고, Bottom은 음성 대조군의 평균 신호값을 나타내며, Top은 양성 대조군의 평균 신호값을 나타낸다.
실혐 결과:
본 실험 조건에서, 본 개시의 화합물은 HCT116 세포, SKBR3 세포 및 OVCAR3 세포에 대해 모두 강력한 증식 억제 활성을 나타냈다. 본 개시의 화합물의 상응하는 항세포 증식 활성은 구체적으로 표 1을 참조한다.
본 개시의 화합물의 항세포 증식 활성
화합물 HCT116
항증식 활성
IC50 (nM)		 SKBR3
항증식 활성
IC50 (nM)		 OVCAR3
항증식 활성
IC50 (nM)
화합물 1 36.8 8.5 N/A
화합물 2 3.6 2.5 N/A
화합물 3 18.2 3.6 N/A
화합물 4 3.6 2.7 N/A
화합물 5 16.9 3.3 N/A
화합물 6 12.6 4.8 2.1
화합물 7 22.8 N/A N/A
화합물 8 289.0 55.1 N/A
화합물 9 4.6 2.1 N/A
화합물 10 5.6 2.3 N/A
화합물 11 10.4 3.2 N/A
화합물 12 13.7 4.8 N/A
화합물 13 8.0 N/A 0.7
화합물 14 8.4 2.2 0.9
화합물 14-P1 9.8 2.1 0.6
화합물 14-P2 12.4 3.5 1.0
화합물 15 81.3 N/A N/A
화합물 16 3.0 2.3 N/A
화합물 17 6.0 2.7 N/A
화합물 18 10.5 5.1 N/A
화합물 19 5.0 4.0 N/A
화합물 20 20.7 10.5 N/A
화합물 21 7.1 4.0 1.7
화합물 22 4.0 3.5 1.4
화합물 23 5.6 5.3 3.9
화합물 23-P1 7.9 5.8 1.9
화합물 23-P2 9.5 4.5 1.5
화합물 25 7.9 3.7 2.0
화합물 26 9.5 4.2 1.6
화합물 27 24.3 N/A N/A
화합물 28 8.8 N/A N/A
화합물 29 55.1 N/A N/A
화합물 30 4.6 N/A 0.4
화합물 31 1.2 N/A 0.2
화합물 32 9.8 N/A 1.0
화합물 33 5.5 N/A 0.8
화합물 34 2.3 N/A 0.6
화합물 35 N/A N/A 0.9
화합물 36 N/A N/A N/A
화합물 37 8.1 3.5 1.2
화합물 37-P1 4.8 2.1 0.5
화합물 37-P2 N/A 3.6 1.8
화합물 38 N/A N/A 2.9
화합물 39 9.5 2.9 1.0
화합물 39-P1 4.6 1.9 0.6
화합물 39-P2 6.5 2.9 1.0
화합물 40 N/A N/A 11.3
"N/A"는 테스트되지 않았음을 의미한다.
시험예 2. 종양 세포 항증식 활성 시험 2
세포 및 재료: 인간 난소암 세포주 SK-OV-3은 ATCC에서 구입하였고, 인간 난소암 세포주 PA-1은 ATCC에서 구입하였으며, 인간 소세포폐암 세포주 NCI-H82는 ATCC에서 구입하였고, 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231은 ATCC에서 구입하였으며, 인간 비소세포폐암 세포주 A549는 ATCC에서 구입하였고, 소 혈청(Gibco#10099-141C), McCoy's 5a 배지(Gibco#16600-082), MEM 배지(Gibco#11095-080), 1640 배지(Gibco#A10491-01), DMEM 배지(Gibco#11995-065), MEM NEAA(Gibco#11140-050), 피루브산나트륨(Gibco#11360-070), 페니실린-스트렙토마이신(Gibco#15140-122) 및 0.25% Trypsin-EDTA(Gibco#25200-056)는 Gibco Corporation(미국)에서 구입하였으며, 소 인슐린(Solarbio#I8040)은 Solarbio Corporation(미국)에서 구입하였고, 96웰 플레이트(Greiner Bio-one#655098)는 Corning Corporation(미국)에서 구입하였으며, Cell-Titer Glo시약(Promega#G7568은 Promega Corporation(미국)에서 구입하였다.
세포 배양: SK-OV-3 세포는 10% 소태아 혈청+1% 페니실린-스트렙토마이신을 함유한 McCoy's 5a 배양액을 사용하고, PA-1 세포는 10% 소태아 혈청+1% MEM NEAA+1% 피루브산나트륨+1% 페니실린-스트렙토마이신을 함유한 MEM 배양액을 사용하며, NCI-H82 세포 및 MDA-MB-231 세포는 모두 10% 소태아 혈청+1% 페니실린-스트렙토마이신을 함유한 1640 배양액을 사용하고, A549 세포는 10% 소태아 혈청+1% 페니실린-스트렙토마이신을 함유한 DMEM 배양액을 사용하며, 다섯 개의 세포를 모두 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 대수 성장기 세포를 실험에 사용할 수 있다.
세포 증식 활성 검출: Cell-Titer Glo 시약을 사용하여 SK-OV-3, PA-1, NCI-H82, MDA-MB-231 및 A549의 다섯 개의 세포 증식에 대한 화합물 억제 활성을 검출하였다. SK-OV-3 세포(웰당 1000개), PA-1 세포(웰당 800개), NCI-H82 세포(웰당 5000개), MDA-MB-231 세포(웰당 3000개) 및 A549 세포(웰당 400개)를 96웰 플레이트에 접종하고, 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 테스트할 화합물을 DMSO로 용해시켜, 테스트할 화합물 농도가 1 mM이 되도록 한 후, DMSO 및 해당 배지를 사용하여 테스트할 화합물을 구배 희석하고, 96웰 세포 플레이트에 옮겨, 최종 농도가 300 nM에서 시작하도록 하며, 3배 희석하고, 9개의 농도 포인트이다. 37℃, 5% CO2 조건에서 계속하여 5일 동안 배양하였다. Cell-Titer Glo 시약을 첨가하고, 세포 활성을 검출하였다.
음성 대조군 및 양성 대조군을 각각 Bottom 및 Top으로 설정하였다. 음성 대조군은 세포를 첨가하지 않고, 동일한 부피의 배지만 첨가하며, 기타 조작은 실험군과 일치하고; 양성 대조군은 시험 화합물을 첨가하지 않고, 동일한 부피의 DMSO만 첨가하며, 기타 조작은 실험군과 일치하다.
데이터 분석: % 화합물 억제(Compound inhibition)를 계산하고 화합물의 IC50을 피팅하였다.
화합물 억제 백분율(% Compound inhibition) = 1-100% *(Signal-Bottom)/(Top-Bottom).
Signal은 실험군의 신호값을 나타내고, Bottom은 음성 대조군의 평균 신호값을 나타내며, Top은 양성 대조군의 평균 신호값을 나타낸다.
실혐 결과:
본 실험 조건에서, 본 개시의 화합물은 PA-1, SK-OV-3, NCI-H82, MDA-MB-231 및 A549의 다섯 개의 세포에 대해 모두 강한 증식 억제 활성을 나타냈다. 본 개시의 화합물의 상응하는 항세포 증식 활성은 구체적으로 표 2를 참조한다. 표 1 및 표 2에 따르면, 본 개시의 화합물은 인간 대장암 세포주 HCT116, 인간 유방암 세포주 SKBR3 및 MDA-MB-231, 인간 소세포폐암 세포주 NCI-H82, 인간 비소세포폐암 세포주 A549 및 인간 난소암 세포주 OVCAR3, PA-1, SK-OV-3 등 종양 세포에 대해 동시에 강력한 증식 억제 활성을 나타냈고, 장암, 유방암, 폐암 등 발병률이 높고 치료가 어려운 다양한 종양에 대해 우수한 치료 잠재력을 가지고 있는 것을 입증하였다.
본 개시의 화합물의 항세포 증식 활성
화합물 PA-1
항증식 활성
IC50 (nM)		 SK-OV-3
항증식 활성
IC50 (nM)		 NCI-H82
항증식 활성
IC50 (nM)		 MDA-MB-231
항증식 활성
IC50 (nM)		 A549
항증식 활성
IC50 (nM)
화합물 14 1.0 3.0 3.9 10.4 9.7
화합물 14-P1 0.7 2.2 2.2 7.5 10.2
화합물 14-P2 0.9 3.2 4.7 8.8 14.3
화합물 31 1.7 12.3 4.0 13.5 15.9
화합물 35 0.8 N/A N/A N/A N/A
화합물 37 0.9 3.5 N/A 23.9 19.6
화합물 37-P1 0.9 2.1 N/A 13.2 9.1
화합물 37-P2 1.1 3.0 N/A 25.9 16.1
화합물 39 1.5 2.6 N/A 26.4 19.1
화합물 39-P1 0.9 1.9 N/A 15.6 13.9
화합물 39-P2 1.2 2.1 N/A 23.2 15.7
"N/A"는 테스트되지 않았음을 의미한다.
시험예 3. 간 마이크로솜에서의 본 개시의 화합물의 대사 안정성 측정
간 마이크로솜에서의 본 개시의 화합물의 대사 안정성은 다음과 같은 시험 방법을 사용하여 측정하였다.
가. 시험 재료 및 기기
1. 인간 간 마이크로솜(Corning 452117), 비글 간 마이크로솜(XENOTECH D1000), SD 래트 간 마이크로솜(XENOTECH R1000) 및 CD-1 마우스 간 마이크로솜(XENOTECH M1000)
2. Na2HPO4(천진광복정밀화학연구소 20180130)
3. KH2PO4(천진광복정밀화학연구소 20180920)
4. MgCl2(천진광복정밀화학연구소 20191216)
5. NADPH(Solarbio 1216C022)
6. 양성 대조 화합물 베라파밀(Sigma MKBV4993V)
7. AB Sciex API4000 LC-MS
나. 시험 단계
1. 100 mM 인산 완충액(PBS)의 조제: 7.098 g의 Na2HPO4를 칭량하고, 500 mL의 순수한 물을 첨가하여 초음파로 용해시키며, 용액 A로 사용하였다. 3.400 g의 KH2PO4를 칭량하고, 250 mL의 순수한 물을 첨가하여 초음파로 용해시키며, 용액 B로 사용하였다. A 용액을 교반기에 놓고 pH값이 7.4에 도달할 때까지 B 용액을 천천히 첨가하여 100 mM의 PBS 완충액을 조제하였다.
2. 반응계의 조제
다음 표에 따라 반응계를 조제하였다.
3. 반응계를 37℃ 수조에서 10분 동안 사전 인큐베이션하였다. 반응계에 40 μL의 10 mM NADPH 용액(NADPH는 100 mM의 인산 완충액으로 용해)을 첨가하고, NADPH의 최종 농도는 1 mM이다. 40 μL의 인산 완충액으로 NADPH 용액을 대체하여 음성 대조로 사용하였다. 음성 대조의 역할은 화합물 자체의 화학적 안정성의 영향을 배제하는 것이다.4. 반응계에 4 μL의 100 μM의 본 개시의 화합물 및 양성 대조 화합물 베라파밀을 첨가하여 반응을 시작하고, 화합물의 최종 농도는 1 μM이다.
5. 볼텍스 쉐이커에서 충분히 혼합한 후, 0.5, 15, 30, 45 및 60분에 각각 50 μL의 인큐베이션 샘플을 꺼내고, 200 μL의 내부 표준이 함유된 아이스 아세토니트릴로 반응을 정지시켰다. 샘플을 3220 g의 회전속도에서 45분 동안 원심분리하였다. 원심분리 종료 후 90 μL의 상층액을 주입 플레이트에 옮기고, 90 μL의 초순수를 첨가하여 균일하게 혼합하여, LC-MS/MS 분석에 사용하였다.
모든 데이터는 모두 Microsoft Excel 소프트웨어로 계산되었다. 이온 스펙트럼을 추출하여 피크 면적을 검출하고, 화합물 제거 백분율의 자연 로그와 시간을 선형적으로 피팅하여, 화합물의 체외 반감기(t1/2)를 측정하였다.
체외(in vitro) 반감기(t1/2)는 기울기 k를 통해 계산된다.
in vitro t1/2 = 0.693/k
체외 고유 제거율(단위: μL/min/mg 단백질(protein))은 하기 공식으로 계산된다.
in vitro CLint = k × volume of incubation (μL)/amount of proteins (mg)
CLint는 고유 제거율이고; k는 제거 속도 상수이며; volume of incubation는 인큐베이션 부피(μL)이고; amount of proteins은 단백질 양(mg)이다.
본 개시의 화합물은 우수한 간 마이크로솜 안정성을 갖고, 구체적으로 표 3을 참조한다.
화합물 인간 간 마이크로솜 안정성
t1/2(분)		 마우스 간 마이크로솜 안정성
t1/2(분)
화합물 14-P1 66.3 72.8
화합물 14-P2 50.1 65.0
화합물 37-P1 105.1 133.8
화합물 39 240.9 268.4
시험예 4. 본 개시의 화합물의 막 투과성 및 수송 특성 측정
본 개시의 화합물의 막 투과성 및 수송 특성은 다음 시험 방법을 사용하여 측정하였다.
가. 시험 재료 및 기기
1. Caco-2 세포(ATCC)
2. HEPES(Solarbio 804D049), 페니실린/스트렙토마이신(Solarbio 20200109) 및 PBS(Solarbio 20200620)
3. 소태아 혈청(FBS)(Sigma WXBD0055V), 루시퍼 황색(Sigma MKCJ3738) 및 NaHCO3(Sigma SLBZ4647)
4. Hank’s 평형염 용액(HBSS)(Gibco 2085528), 비필수 아미노산(NEAA)(Gibco 2211548) 및 Trypsin/EDTA(Gibco 2120732)
5. 고당 DMEM(Corning 20319014)
6. HTS Transwell-96 Well Permeable (Corning, 3391)
7. 저항 검출기(Millipore, Millicell® ERS-2)
8. Cellometer® Vision (Nexcelom Bioscience)
9. Infinite 200 PRO 마이크로플레이트 리더(Tecan, Infinite M200PRO)
10. 양성 대조 화합물 메토프롤롤(Sinopharm 100084-201403), 에리트로마이신(MCE 84550) 및 시메티딘(Sinopharm 100158-201406)
11. ABI QTrap 5500 LC-MS
나. 시험 단계
1. Caco-2 세포 배양
1) 수송 완충액(25 mM HEPES를 함유한 HBSS, pH 7.4)의 조제: 5.958 g의 HEPES 및 0.35 g의 NaHCO3을 정확하게 칭량하고, 900 mL의 순수를 첨가하여 용해시킨 후, 100 mL의 10×HBSS를 첨가하여 균일하게 교반하며, pH를 7.4로 조절하고, 여과하였다.
2) Caco-2 세포 배지의 조제: 고당 DMEM(L-글루타민 함유) 배지에 FBS, 페니실린/스트렙토마이신, 카나마이신 및 NEAA를 첨가하여 10% FBS, 100단위 페니실린/0.1 mg/mL 스트렙토마이신, 0.6 μg/mL 카나마이신 및 1×NEAA를 함유한 세포 배지를 조제하였다.
3) 37℃, 5% CO₂의 인큐베이터에서 T-75 배양 플라스크로 세포를 배양하고, 세포 성장이 80-90% 밀도에 도달할 경우 배지를 제거하였다. 5 mL의 PBS로 세포를 세척하고, 1.5 mL의 Trypsin/EDTA를 첨가한 후, 37℃의 인큐베이터에서 세포가 유사처럼 떨어질 때까지 5-10분 동안 인큐베이션하며, 마지막으로 FBS를 함유한 배지로 Trypsin/EDTA를 중화하였다.
4) 세포 현탁액을 120 g에서 10분 동안 원심분리하여, 상층액을 제거하였다.
5) 세포 배지를 첨가하여 세포를 재현탁하고, 밀도가 6.86×10 cells/mL(개 세포/mL)인 세포 현탁액으로 조절하였다.
2. Caco-2 세포 접종
1) Transwell 챔버의 각 웰에 50 μL의 배지를 첨가하고, 하층에 25 mL 배지를 첨가하며, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 1시간 동안 예열하였다.
2) 예열된 Transwell 챔버의 각 웰에 50 μL의 세포 현탁액을 첨가하고, 최종 접종 밀도는 2.4×10 cells/cm²이다.
3) 14-18일 동안 배양하고, 격일로 배지를 교체하며, 최초 접종 후 48시간 이내에 배지를 교체하였다. 실험 전날 배지를 반드시 교체하여야 한다.
3. 단층 세포막 무결성 평가
1) 세포를 14일 동안 배양한 후 융합 및 분화시켜, 수송 실험을 준비하였다.
2) 저항계를 사용하여 단층 필름의 저항을 측정하고, 각 웰의 저항을 기록하였다.
3) 측정 완료 후, Transwell 배양 플레이트를 다시 인큐베이션하였다.
4) TEER값을 계산하였다.
TEER 값 = TEER 측정값(Ω) × 막 면적(cm2)
단층 세포막의 저항이 < 230 Ω·cm2이면, 단층 세포막의 치밀성이 좋지 않아, 시험에 사용할 수 없음을 입증한다.
4. 수송 실험
1) DMSO로 10 mM의 본 개시의 화합물 또는 양성 대조 화합물의 스톡 용액을 희석하여 2 mM의 스톡 용액을 얻은 후, 수송 완충액으로 2 mM의 스톡 용액을 희석하여 10 μM의 본 개시의 화합물 또는 양성 대조 화합물의 작업 용액을 얻었다.
2) 인큐베이터에서 Caco-2 세포 플레이트를 꺼낸 후, 예열된 수송 완충액으로 Transwell 배양 플레이트를 2회 세척하고, 37℃ 인큐베이터에서 30분 동안 인큐베이션하였다.
3) 화합물의 상단에서 기저단(A→B)까지의 수송 속도를 측정하기 위하여, 108 μL의 화합물의 작업 용액을 Transwell 챔버(상단)에 첨가하고, 동시에 상단에서 8 μL의 샘플을 취하여 72 μL의 수송 완충액에 넣으며, 240 μL의 내부 표준이 함유된 정지 용액을 첨가하여 수송을 종료하여 초기 상단 샘플로 사용하였다. 동시에, 수신단(기저단)에 300 μL의 수송 완충액을 첨가하였다. 시험은 두 개의 샘플을 설정하였다.
4) 화합물의 기저단에서 상단(B→A)까지의 수송 속도를 측정하기 위하여, 308 μL의 화합물의 작업 용액을 기저단에 첨가하고, 동시에 기저단에서 8 μL의 샘플을 취하여 72 μL의 수송 완충액에 넣으며, 240 μL의 내부 표준이 함유된 정지 용액을 첨가하여 수송을 종료하여 기저단 샘플로 사용하였다. 동시에, Transwell 챔버(상단)에 100 μL의 수송 완충액을 첨가하였다. 시험은 두 개의 샘플을 설정하였다.
5) 세포 배양 플레이트를 37℃， 5% CO₂ 인큐베이터에서 2시간 동안 인큐베이션하였다.
6) 수송 실험 종료 후, 투여단(즉 A→B 방향의 상단 및 B→A 방향의 기저단)에서 8 μL의 샘플을 취하여 72 μL의 수송 완충액에 넣은 후, 240 μL의 내부 표준이 함유된 정지 용액을 첨가하여 수송을 종료하였다. 수신단(즉 A→B 방향의 기저단 및 B→A 방향의 상단)에서 80 μL의 샘플을 취하여 240 μL의 내부 표준이 함유된 정지 용액에 넣고, 1000 rpm에서 10분 동안 볼텍싱하며, 3220 g에서 30분 동안 원심분리하였다. 100 μL의 상층액을 취하여 주입 플레이트에 넣고, 100 μL의 초순수를 첨가하여 균일하게 혼합하여, LC-MS/MS 분석에 사용하였다.
7) 수송 실험 종료 후 형광값을 측정하고, 물로 10 mM의 루시퍼 황색 스톡 용액을 조제한 후, 수송 완충 용액으로 100 μM이 되도록 희석하였다. Transwell 챔버(상단)에 100 μL의 루시퍼 황색 용액을 첨가하고, 기저단에 300 μL의 수송 완충 용액을 첨가하며, 37℃， 5% CO₂ 인큐베이터에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 상단 및 기저단으로부터 80 μL의 용액을 취하여 96웰 플레이트에 넣고, 여기 파장 485 nm 및 방출 파장 530 nm에서 마이크로플레이트 리더를 사용하여 세포 형광값(막 무결성 검출)을 측정하였다.
이하의 공식을 사용하여 누출률(Percentage leakage(%) 또는 LY(%))을 계산한다.
Percentage Leakage = {I acceptor×0.3/(I acceptor×0.3+I donor×0.1)} × 100%
I acceptor(I수신단)는 수신측(0.3 mL)의 형광 밀도를 나타내고, I donor(I기증자)는 투여측(0.1 mL)의 형광 밀도를 나타낸다. LY>1.0%는 단층 세포막의 치밀성이 좋지 않음을 나타내고, 상응한 결과는 평가에서 제외된다.
투여측과 수신측에서 화합물의 피크 면적을 측정하고, 화합물의 겉보기 투과성 계수(P app, 단위: cm/s) 및 유출 비율(Efflux ratio)을 계산하였다.
P app={V A×[drug] acceptor /(Area×incubation time×[drug] initial donor }
V A는 수신단 용액의 부피(A→B는 0.3 mL이고, B→A는 0.1 mL임), Area(막 면적)는 Transwell-96웰 플레이트 막 면적(0.143 cm2)이며; incubation time은 인큐베이션 시간(단위: s)이고; [drug] acceptor ([약물] 수신단)은 수신단 약물 농도이며; [drug] initial donor ([약물] 초기, 기증자)는 투여측 약물 초기 농도이다.
P app(B-A)는 기저단에서 상단까지의 겉보기 투과성 계수이고; P app(A-B)는 상단에서 기저단까지의 겉보기 투과성 계수이다.
본 개시의 화합물은 우수한 막 투과성 및 수송 특성을 갖고, 구체적으로 표 4를 참조한다.
화합물 Papp(A-B) (10-6 cm/s) Papp(B-A) (10-6 cm/s) 유출 비율
화합물 14 0.26 3.95 15.2
화합물 39 0.71 4.21 5.9
시험예 5. 본 개시의 화합물의 혈장 단백질 결합률 측정
인간 및 마우스 혈장에서의 본 개시의 화합물의 단백질 결합률은 다음 시험 방법을 사용하여 측정하였다.
가. 시험 재료 및 기기
1. 인간 혈장(BioIVT), CD-1 마우스 혈장(BioIVT)
2. Na2HPO4(Sigma S5136-500G)
3. NaH2PO4(Sigma S3139-500G)
4. NaCl(Sigma S5886-IKG)
5. 96웰 평형 투석 플레이트(HTDialysis LLC, Gales Ferry, CT, HTD96B) 및 평형 투석막(MWCO 12-14K, 1101)
6. 양성 대조 화합물 와파린
7. ABI QTrap 5500 LC-MS
나. 시험 단계
1. 농도가 100 mM 인산나트륨염 및 150 mM NaCl의 완충액의 조제: 초순수로 농도가 14.2 g/L Na2HPO4 및 8.77 g/L NaCl인 염기성 용액을 조제하고, 초순수로 농도가 12.0 g/L NaH2PO4 및 8.77 g/L NaCl인 산성 용액을 조제한 후, 산성 용액으로 염기성 용액을 적정하여 pH값이 7.4가 되도록 하여 농도가 100 mM 인산나트륨염 및 150 mM NaCl의 완충액을 조제하였다.
2. 투석막의 준비: 투석막을 초순수에 60분 동안 침지시켜 막을 두 조각으로 분리한 후, 20% 에탄올에 20분 동안 침지시키고, 마지막으로 투석용 완충액으로 20분 동안 침지시켰다.
3. 혈장의 준비: 냉동 혈장을 실온에서 빠르게 해동한 후, 4℃, 3,220 g에서 10분 동안 원심분리하여 혈전을 제거하고, 상층액을 새로운 원심분리 튜브에 수집하였다. 혈장의 pH값을 측정 및 기록하고, pH값이 7-8인 혈장을 사용하였다.
4. 화합물 함유 혈장 샘플의 조제: DMSO로 10 mM의 본 개시의 화합물 또는 양성 대조 화합물의 스톡 용액을 희석하여 200 μM의 작업 용액을 얻었다. 597 μL의 인간 또는 마우스 혈장에 3 μL 200 μM의 화합물 작업 용액을 첨가하여 최종 농도가 1 μM인 혈장 샘플을 얻었다.
5. 평형 투석 단계: 작업 지침에 따라 투석 장치를 조립하였다. 투석막의 일측에 120 μL의 1 μM 화합물을 함유한 혈장 샘플을 첨가하고, 타측에 동일한 부피의 투석액(인산염 완충액)을 첨가하였다. 시험은 두 개의 샘플을 설정하였다. 투석 플레이트를 밀봉하고, 인큐베이터에 넣으며, 37℃, 5% CO2 및 약 100 rpm의 회전속도에서 6시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 종료 후, 밀봉 필름을 제거하고, 각 웰의 완충액측 및 혈장측에서 50 μL 샘플을 새로운 플레이트의 상이한 웰에 피펫팅하였다. 인산염 완충액 샘플에 50 μL의 블랭크 혈장을 첨가하고, 혈장 샘플에 동일한 부피의 블랭크 인산염 완충액을 첨가한 후, 300 μL의 내부 표준이 함유된 아세토니트릴을 첨가하여 단백질을 침전시켰다. 5분 동안 볼텍싱하고, 4℃, 3220 g에서 30분 동안 원심분리하였다. 100 μL의 상층액을 취하여 주입 플레이트에 넣고, 100 μL의 초순수를 첨가하여 균일하게 혼합하여, LC-MS/MS 분석에 사용하였다.
완충액측 및 혈장측의 화합물의 피크 면적을 측정하였다. 화합물의 혈장 단백질 결합률 공식은 다음과 같다.
% 이온화율 = (화합물의 피크 면적과 내부 표준 피크 면적의 비율완충액측/화합물의 피크 면적과 내부 표준 면적의 비율혈장측)×100%.
% 결합률 = 100% - %이온화율.
화합물 인간 혈장 단백질 결합률 % 마우스 혈장 단백질 결합률 %
화합물 14-P1 89.4 63.7
화합물 37-P1 87.2 67.3
화합물 39 91.9 65.8
시험예 6. CYP2C9, CYP2D6, CYP3A4 효소 활성에 대한 본 개시의 화합물의 억제 효과
CYP2C9, CYP2D6, CYP3A4 효소 활성에 대한 본 개시의 화합물의 억제는 다음 시험 방법을 사용하여 측정하였다.
가. 시험 재료 및 기기
1. 인간 간 마이크로솜(Corning 452117)
2. NADPH(Solarbio 705Y021)
3. 양성 기질 디클로페낙(Sigma SLBV3438), 덱스트로메토르판(TRC 3-EDO-175-1) 및 미다졸람(Cerilliant FE01161704)
4. 양성 억제제 설파피라졸(D. Ehrenstorfer GmbH 109012), 퀴니딘(TCI WEODL-RE) 및 케토코나졸(Sigma 100M1091V)
5. AB Sciex Triple Quad 5500LC-MS
나. 시험 단계
1. 100 mM 인산 완충액(PBS)의 조제: 7.098 g의 Na2HPO4를 칭량하고, 500 mL의 순수한 물을 첨가하여 초음파로 용해시키며, 용액 A로 사용하였다. 3.400 g의 KH2PO4를 칭량하고, 250 mL의 순수한 물을 첨가하여 초음파로 용해시키며, 용액 B로 사용하였다. A 용액을 교반기에 놓고 pH값이 7.4에 도달할 때까지 B 용액을 천천히 첨가하여 100 mM의 PBS 완충액을 조제하였다.
2. 100 mM의 PBS 완충액으로 10 mM의 NADPH 용액을 조제하였다. DMSO로 10 mM의 본 개시의 화합물의 스톡 용액을 희석하여 200 × 농도의 화합물 작업 용액(6000, 2000, 600, 200, 60, 20, 0 μM)을 얻었다. DMSO로 양성 억제제 스톡 용액을 희석하여 200 × 농도의 양성 억제제 작업 용액(설파피라졸, 1000, 300, 100, 30, 10, 3, 0 μM; 퀴니딘/케토코나졸, 100, 30, 10, 3, 1, 0.3, 0 μM)을 얻었다. 물, 아세토니트릴 또는 아세토니트릴/메탄올로 200 × 농도의 기질 작업 용액(120 μM 디클로페낙, 400 μM 덱스트로메토르판 및 200 μM 미다졸람)을 조제하였다.
3. 2 μL의 20 mg/ml 간 마이크로솜 용액, 1 μL의 기질 작업 용액, 1 μL의 화합물 작업 용액 및 176 μL의 PBS 완충액을 취하여, 균일하게 혼합하고, 37℃ 수욕에서 15분 동안 사전 인큐베이션하였다. 양성 대조군에 1 μL의 설파피라졸, 퀴니딘 또는 케토코나졸 작업 용액을 첨가하여 화합물 작업 용액을 대체하였다. 동시에 10 mM의 NADPH 용액을 37℃ 수욕에서 15분 동안 사전 인큐베이션하였다. 15분 후, 20 μL NADPH를 취하여 각 웰에 첨가하고, 반응을 시작하며, 37℃에서 5분(CYP2C9), 20분(CYP2D6) 또는 5분(CYP3A4) 동안 인큐베이션하였다. 모든 인큐베이션 샘플은 이중 샘플로 설정하였다. 상응한 시간 동안 인큐베이션한 후 모든 샘플에 400 μL의 내부 표준을 함유한 아이스 메탄올을 첨가하여 반응을 종료하였다. 볼텍싱 혼합하고, 3220 g, 4℃에서 40분 동안 원심분리하였다. 원심분리 종료 후 100 μL의 상층액을 주입 플레이트에 옮기고, 100 μL의 초순수를 첨가하여 균일하게 혼합하여, LC-MS/MS 분석에 사용하였다.
샘플과 내부 표준 피크 면적 비율을 통해 투여군이 대조군에 비해 대사산물 생성 감소를 비교하고, Excel XLfit 5.3.1.3으로 IC50값을 계산하였다.
하기 공식으로 잔존 활성 백분율을 계산하였다.
잔존 활성 백분율 = 대사산물 피크 면적과 내부 표준 피크 면적 비율시험 물질/대사산물 피크 면적과 내부 표준 피크 면적 비율블랭크 시약× 100%.
약물 상호 작용(drug-druginteraction, DDI)은 2가지 또는 2가지 이상의 약물에 의해 발생하는 물리적 또는 화학적 변화, 및 이러한 변화로 인한 약효의 변경을 나타낸다. 약물 상호 작용을 이해하면, 환자에게 더 우수한 약학적 서비스를 제공하고 합리적인 약물 사용을 촉진하여, 부작용의 발생을 최대로 방지할 수 있다. 약물의 상호 작용은 주로 약물 대사에 관여하는 CYP450 효소와 관련된 대사성 상호 작용이다. 표 6의 실험 결과는, CYP450에 대한 본 개시의 화합물의 억제 능력이 약한 것을 입증하고, 본 개시의 화합물의 DDI 발생 잠재적 위험이 작음을 예시한다.
화합물 CYP2C9 억제
IC50 (μM)		 CYP2D6 억제
IC50 (μM)		 CYP3A4 억제
IC50 (μM)
화합물 14-P1 >50 >50 >50
화합물 14-P2 >50 >50 >50
화합물 37-P1 >50 >50 >50
화합물 39 >50 >50 >50
시험예 7. 본 개시의 화합물의 hERG 억제 활성 측정
hERG 활성에 대한 본 개시의 화합물의 억제는 다음 시험 방법을 사용하여 측정하였다.
가. 시험 재료 및 기기
나. 세포주 및 세포 배양
hERG 이온 채널을 안정적으로 발현하는 CHO 세포주는 스위스 B’SYS GmbH 회사에서 구입하였다. 상기 세포주는 10% FBS 완충액, 100 U/mL 페니실린-스트렙토마이신, 100 μg/mL 하이그로마이신 및 100 μg/mL G418을 함유하는 F-12(HAM) 배지에서 배양하였다. 트립신 대체물 TrypLETM Express를 사용하여 소화 및 계대하고, 매주 3회 계대하며 약 80% 융합을 유지하였다.
다. 세포 내/외액 조제, 테스트할 화합물 용액 조제
세포 외액
1) NMDG 60 표준 외부 용액: 80 mM 염화나트륨, 60 mM NMDG, 4 mM 염화칼륨, 2 mM 염화칼슘, 1 mM 염화마그네슘, 5 mM 폴리덱스트로스, 10 mM HEPES, HCl을 사용하여 pH를 7.4로 조절하고, 삼투압은 289 mOsm/kg이며;
2) NMDG 60 세포 밀봉 용액: 80 mM 염화나트륨, 60 mM NMDG, 4 mM 염화칼륨, 10 mM 염화칼슘, 1 mM 염화마그네슘, 5 mM 폴리덱스트로스, 10 mM HEPES, HCl을 사용하여 pH를 7.4로 조절하고, 삼투압은 313 mOsm/kg이며;
3) 칩 충진액: 140 mM 염화나트륨, 4 mM 염화칼륨, 5 mM 폴리덱스트로스, 10 mM HEPES, NaOH를 사용하여 pH를 7.4로 조절하고, 삼투압은 289 mOsm/kg이며;
4) Standard 표준 외액: 140 mM 염화나트륨, 4 mM 염화칼륨, 2 mM 염화칼슘, 1 mM 염화마그네슘, 5 mM 폴리덱스트로스, 10 mM HEPES, NaOH를 사용하여 pH를 7.4로 조절하고, 삼투압은 298 mOsm/kg이다.
세포 내액
KF110 세포 내액: 10 mM EGTA, 10 mM HEPES, 10 mM 염화칼륨, 10 mM 염화나트륨, 110 mM 불화칼륨, KOH를 사용하여 pH를 7.2로 조절하고, 삼투압은 280 mOsm/kg보다 크다.
테스트할 화합물 용액
1) 테스트할 화합물을 DMSO로 용해시키고 최종 농도가 10 mM인 스톡 용액을 조제하였다.
2) 스톡 용액을 DMSO를 용매로 사용하고, 1:3의 비율로 다른 3개의 중간 농도 용액으로 구배 희석하며, 농도는 각각 (mM): 3.33, 1.11 및 0.37이다.
3) 실험을 시작하기 전에, 세포 외액으로 테스트할 화합물 구배 용액을 1:500의 비율로 일련의 농도의 작업 용액으로 희석하고, 그 최종 농도는 각각 (μM): 20, 6.66, 2.22 및 0.74이며, 60 μM 작업 용액은 10 mM 스톡 용액을 3:500 비율로 희석하여 조제되었다. 실험에서, 40 μL의 작업 용액을 40 μL의 세포 용액에 첨가하여, 2배 시험 농도의 화합물 작업 용액을 얻었다.
4) 주어진 농도 구배 중 5개의 상이한 농도 포인트 30, 10, 3.33, 1.11 및 0.37 μM에서 hERG 채널에 대한 잠재적 억제 효과를 테스트하여, 농도 효과 곡선을 피팅하고 상응한 IC50값을 계산하였다.
라. 실험 단계
실험 전 준비
1) SyncroPatch 384i 시스템에서 "Home All Axes"를 실행하였다.
2) "LH_Startup" 방법을 실행하고, 실험 시작 전에 기기를 세척하였다.
3) 1번 튜브를 세포 내액이 담긴 바이알에 넣고, 1번 위치에 놓으며, 세포 내액을 미리 충진하였다.
4) 조제된 세포 외액, 작업 농도의 화합물 플레이트를 기기의 대응 플레이트 위치에 놓고, 실험 준비를 완료하였다.
세포 처리
1) 두 개의 T175 배양 플라스크의 부착된 세포를 취하고, 상층 배지를 제거하였다.
2) 실온에서 10 mL 피펫으로 8 mL DPBS-2 mM EDTA를 흡수하고 2회 세척하며, 여분의 배지를 세척하였다.
3) 배양 플라스크에 3 mL TrypLETM Express를 첨가하고, 가볍게 흔들어, 용액이 전체 세포면을 피복하도록 하였다.
4) 세포 표면에 얇은 층만 남도록 소화액 부피의 절반을 제거하였다.
5) 세포를 37℃에서 8~10분 동안 인큐베이션하고, 현미경 아래에서 가볍게 흔들어, 세포의 부유 상태를 관찰하였다.
6) 원심분리관으로 10 mL의 15 mM HEPES를 함유한 F-12 배지를 조제하고, 10 mL 표준 외액을 첨가하였다. 각각의 배양 플라스크에 3 mL 혼합 용액을 첨가하고, 4~8℃ 냉장고에서 5분 동안 인큐베이션하였다.
7) 피펫으로 세포를 3~5회 가볍게 피펫팅하여 세포를 분산시키고, 10 cm 세포 배양 접시에 옮겼다.
8) 세포를 계수하고, 차가운 표준 외액으로 세포를 희석하여, 최종 밀도가 0.5~2*106 cells/mL이 되도록 확보하였다.
9) 희석된 세포 현탁액을 10 cm 저흡착 세포 배양 접시에 옮기고, 4~10℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다.
10) 세포를 가볍게 불어서 균일하게 혼합하고, 세포를 SyncroPatch 384i 시스템 전용 테프론 플레이트에 옮겨, 자동 패치 클램프 시스템의 세포 인큐베이션 탱크에 넣어, 15℃에서 인큐베이션하였다.
SyncroPatch 384i 시스템을 사용하여 전기 생리학적 신호를 기록하였다.
1) 건 팁을 장착하고 세척하였다.
2) 칩 내부를 칩 충진액으로 충진시키고, 결합 전위를 보상하였다.
3) 칩에 세포 현탁액을 첨가하였다.
4) 세포 밀봉 용액을 첨가하고, 클램핑 전위를 -90mV로 설정하였다.
5) 세포 외액으로 세포를 4회 세척하였다.
6) 내부 용액의 5 μM Escin을 세포 내에 천공하여, 완전한 세포 구조를 얻었다.
7) Analog Cslow 및 Digital Cslow를 보상하였다.
8) 500 ms, -90mV의 클램핑 전압을 설정하고; 전류 샘플링 주파수는 500 Hz이며, 여과 주파수는 3k Hz이다. 누설 전류 검출 조건은 -90 mV이고, 지속 시간은 500 ms이다.
9) 4.8초 동안 탈분극을 인가하여 막전위를 -90 mV에서 +30 mV로 탈분극시킨 후, 순간적으로 재분극 전압을 인가하여 막전위가 -50 mV로 감소되도록 하고, 5.2초 동안 지속되어 채널 불활성화를 제거함으로써, hERG 테일 전류를 관찰하며, 테일 전류의 피크 값은 hERG 전류의 크기이다. 상기 자극 모드의 샘플링 간격은 15초이다.
10) 테스트할 화합물 검출에 사용된 hERG 전류는 투여 전에 모두 120 초 동안 지속적으로 기록되어 시험 세포에 의해 생성된 hERG 전류의 안정성을 평가하였다. 평가 표준의 허용 범위 내에 있는 안정적인 세포만이, 후속 검출 결과가 신뢰될 수 있다.
11) 측정된 안정적인 hERG 전류를 검출 기준선으로 사용하였다. hERG 전류가 적어도 5분 동안 안정이 유지된 후 테스트할 화합물을 함유한 용액을 세포 주위에 관류하였다. 전류가 안정된 후, 5개의 안정적인 hERG 전류값을 판독하였다. 만약 10분 이내에 안정 상태에 도달하지 못하면, 기록된 마지막 5개의 전류 피크값을 판독값으로 사용하였다. 실험에서 시사프라이드를 양성 대조로 사용하고, 실험 세포의 안정성과 실험 결과의 정확성을 검증하였다. 본 실험은 hERG 전류에 대한 2개의 서로 독립적인 실험웰 위치(n=2)에서 5개의 상이한 농도의 샘플의 억제 효과를 검출하여, IC50 곡선을 피팅하였다.
마. 데이터 검수 표준
이하 표준은 데이터의 수용 가능성을 결정하기 위해 사용된다.
1) 초기 밀봉 저항은 100 MΩ보다 크고;
2) 직렬 저항은 25 MΩ보다 작으며;
3) 검출 전압 하의 누설 전류는 상기 조건의 전류값의 50%보다 작고;
4) 테일 전류는 프리 펄스의 플랫폼 전류 크기보다 크고, 초기 테일 전류값은 150 pA보다 크며;
5) 테일 전류의 감쇠율은 30%보다 낮다.
바. 데이터 분석
상기 hERG 전류 품질 표준을 충족시키는 데이터를 추가로 분석하고, 구체적인 단계는 다음과 같다.
1) 전류 억제율은 이하 공식으로 계산되었다.
비고: 데이터는 Data control 384 소프트웨어에 의해 출력되었다.
2) 선량 효과 곡선은 Graphpad Prism 8.0 소프트웨어를 통해 피팅하여 IC50을 계산하였다.
본 개시의 화합물은 모두 hERG 칼륨 이온 채널을 유의하게 억제하지 않았고, 화합물이 hERG 칼륨 이온 채널 억제로 인해 심장 독성의 위험이 낮다는 것을 입증하였다. 본 개시의 화합물의 hERG 칼륨 이온 채널 억제 활성은 구체적으로 표 7을 참조한다.
화합물 IC50 (μM)
화합물 14-P1 >30
화합물 14-P2 >30
화합물 37-P1 >30
화합물 39 >30

Claims (15)

  1. 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로서,

    (I)
    상기 식 I에서,
    R1은 할로겐, CN, C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기로부터 선택되고, 상기 C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기는 선택적으로 Ra1에 의해 치환되며;
    X1은 CR2 또는 N으로부터 선택되고;
    R2는 H, 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra2에 의해 치환되며;
    R5는 H, 할로겐, CN, NH2 또는 NO2로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기, 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C7시클로알케닐기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기, 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C7시클로알케닐기는 선택적으로 Ra5에 의해 치환되며;
    R3은 H, , 또는 로부터 선택되고, X는 NH2 또는 OH로부터 선택되며, R6은 H 또는 C1-C3알킬기로부터 선택되고, R7은 H, C1-C3알킬기 또는 C3-C6시클로알킬기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하며, 상기 C3-C6시클로알킬기는 선택적으로 Ra3에 의해 치환되고;
    n은 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되며;
    R4는 H로부터 선택되거나, R4, R7은 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Ra4에 의해 치환되고;
    각각의 Ra1, Ra2, Ra3, Ra4, Ra5는 독립적으로 D, 할로겐, CN, ＝O, OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기로부터 선택되고, 상기 OH, NH2, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 4-7원 헤테로시클릴기는 선택적으로 Rb에 의해 치환되며;
    각각의 Rb는 독립적으로 할로겐, CN, ＝O, C1-C3알킬기, OH, O(C1-C3알킬기), NH2, NH(C1-C3알킬기) 또는 N(C1-C3알킬기)2로부터 선택되고;
    단, i) R1이 메틸기로부터 선택되고, R2가 F로부터 선택되는 경우, R3은 , 또는 로부터 선택되며, R6은 H 또는 C1-C3알킬기로부터 선택되고, R7은 H, C1-C3알킬기 또는 C3-C6시클로알킬기로부터 선택되며, n은 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고; ii) X가 NH2로부터 선택되는 경우, R5는 H로부터 선택되지 않으며; 및 iii) 식(I)로 표시되는 화합물은 이하의 화합물: , , 을 포함하지 않는 것인 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  2. 청구항 1에 있어서,
    R1은 할로겐, C1-C3알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C3알키닐기로부터 선택되고; 또는
    R1은 Cl, Br, 메틸기, 시클로프로필기 또는 에티닐기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    R2는 H, 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 고리 원자로서 1개 또는 2개의 산소 원자를 함유하며, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 D원자에 의해 치환되고; 또는
    R2는 H 또는 할로겐으로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 고리 원자로서 1개 또는 2개의 산소 원자를 함유하며, 상기 5-6원 헤테로시클릴기는 선택적으로 D원자에 의해 치환되는 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서,
    R2는 H, F 또는 Cl로부터 선택되거나, R1, R2는 이들에 연결된 원자와 함께 , 또는 을 형성하는 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
    R3은 H, , , 또는 로부터 선택되되, X는 NH2 또는 OH로부터 선택되고, R6은 H 또는 메틸기로부터 선택되며, R7은 H, 메틸기, 이소프로필기 또는 선택적으로 D원자에 의해 치환된 시클로프로필기로부터 선택되고; R4는 H로부터 선택되거나, R4, R7은 이들 각각에 연결된 원자와 함께 5원 헤테로시클릴기를 형성하거나; 또는
    R3은 또는 로부터 선택되고, X는 NH2 또는 OH로부터 선택되며, R6은 H 또는 메틸기로부터 선택되고, R7은 H, 메틸기, 이소프로필기 또는 선택적으로 D원자에 의해 치환된 시클로프로필기로부터 선택되거나; 또는
    R3은 또는 로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하는 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  6. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
    R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성하고, R3은 H, 또는 로부터 선택되며, R4는 H로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 선택적으로 D원자에 의해 치환된 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하거나; 또는
    R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 또는 을 형성하고, R3은 로부터 선택되며, R4는 H로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 선택적으로 D원자에 의해 치환된 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 시클로프로필기를 형성하는 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  7. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
    R1, R2는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 을 형성하고, R3은 H, 또는 로부터 선택되며, R4는 H로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하거나; 또는
    R1, R2는 이에 연결된 원자와 함께 을 형성하고, R3은 로부터 선택되며, R4는 H로부터 선택되고, R6은 H로부터 선택되며, R7은 H 또는 시클로프로필기로부터 선택되거나, R6, R7은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하는 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  8. 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서,
    R5는 H, 할로겐, NH2 또는 NO2로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C6시클로알케닐기를 형성하고, 상기 5-6원 헤테로아릴기 또는 C5-C6시클로알케닐기는 선택적으로 Ra5에 의해 치환되며; 또는
    R5는 H, Cl, F, NH2 또는 NO2로부터 선택되거나, R1, R5는 이들에 연결된 원자와 함께 또는 를 형성하는 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  9. 청구항 1 내지 청구항 4 및 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서,
    구조 단위 는 , , , , , , , , , , , , , 또는 로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  10. 청구항 1 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염은 식(Ia) 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로부터 선택되되,

    (Ia)
    R1, R2, R3, R4, R5는 청구항 1 내지 청구항 9에 정의된 바와 같은 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  11. 청구항 1, 청구항 2, 청구항 5, 청구항 8 및 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염은 식(Ib) 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로부터 선택되되,

    (Ib)
    R1, R3, R4, R5는 청구항 1, 청구항 2, 청구항 5, 청구항 8 및 청구항 9에 정의된 바와 같은 것을 특징으로 하는 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  12. 식(II)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로서,

    (II)
    상기 식 II에서,
    R8은 히드록실기, 할로겐, CN, C1-C6알킬기, C3-C6시클로알킬기 또는 C2-C6알키닐기로부터 선택되고;
    X2는 CR9 또는 N으로부터 선택되며;
    R9는 H, 할로겐, CN으로부터 선택되거나, R8, R9는 이들 각각에 연결된 원자와 함께 5-6원 헤테로시클릴기를 형성하고;
    R10, R11은 독립적으로 H, C3-C6시클로알킬기로부터 선택되거나, R10, R11은 이에 연결된 C원자와 함께 C3-C6시클로알킬기를 형성하는 것인 식(I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
  13. 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염으로서,
    상기 화합물은 이하의 구조 중 하나로부터 선택되는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염:















    또는 .
  14. 청구항 1 내지 청구항 13 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  15. 항종양 약물의 제조에서의 청구항 1 내지 청구항 13 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 청구항 14에 따른 약학 조성물의 용도.
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