KR20240046162A - 인간 cxcl16 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 출원은 암 치료를 위한 CXCL16 항체를 개시한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체는 암, 예를 들어 갑상선암, 유방암 및 전립선암의 성장을 억제할 수 있다. 또한 암 치료를 위한 표적화 항암제 및/또는 면역 체크포인트 억제제와 CXCL16 항체의 조합이 기재되어 있다.

Description

인간 CXCL16 항체 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 11월 25일에 대한민국 특허청에 출원된 대한민국 특허 출원 번호 10-2021-0164723의 우선권을 주장한다. 상기 출원의 전체 내용은 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
분야
본 발명은 암을 치료하는데 사용되는 치료용 항체에 관한 것이다.
암은 현재 전 세계적으로 가장 많은 사망을 초래하는 질환 중 하나이며, 암 발병 연령이 점차 낮아지고 평균 수명이 점차 길어짐에 따라 암 발생률은 더욱 증가할 것으로 예상된다. 암은 유전적 및 환경적 인자로 인해 비정상적인 세포 분열이 일어날 때 발생한다.
잘 분화된 유두상 갑상선 암종 또는 여포상 갑상선 암종과 달리, 역형성 갑상선 암종은 빠른 성장 및 높은 국소 재발로 인해 치명적인 질환이며, 5년 생존율이 1.0% 내지 7.1%이다. 평균 생존 기간은 4 내지 12개월로 공지되어 있다. 어떤 치료도 만족스러운 결과를 보여주지 못하였다. 다양한 치료가 시도되었으나 현재까지 임상 결과 및 예후 결과에서 만족스러운 결과를 보여주지 못하고 있다. 이는 매우 드물게 발생하며, 전체 갑상선암의 비율은 대개 5% 내지 10% 이하로 공지되어 있다. 역형성 갑상선 암종의 성장은 단기간 내에 빠르게 일어나기 때문에, 진단 당시 종양은 클 뿐만 아니라 중증 국소 침윤 및 원격 전이를 가지므로 많은 경우에 수술적 치료를 불가능하게 만든다. 따라서, 갑상선 역형성 암종의 치료를 위해, 단일 요법보다는 다중모드 접근법이 필요하다.
삼중-음성 음성 유방암 (TNBC)은 유방암에서 흔히 발견되는 수용체를 갖지 않는다. 이는 에스트로겐 수용체 또는 프로게스테론 수용체를 발현하지 않으며 HER2-음성이다 (ER-/PR-/HER2-). TNBC는 수많은 통상적인 유방암 요법, 예컨대 탁솔, 타목시펜 및 항-HER2 수용체 항체 (트라스투주맙)에 저항성이 있다. 삼중-음성 유방암은 젊은 연령층에서 발생하고, 폐경전 연령에 더 흔하며, 높은 국소 및 원격 재발률을 갖고, 림프절 전이보다 혈행성으로 전이될 가능성이 더 높으며, 다른 유형보다 더 높은 핵 및 조직 등급을 갖고, 큰 종양 크기를 갖는다. 이러한 모든 특징은 나쁜 예후와 연관된다. 그러나, 삼중-음성 유방암은 아직까지 다른 유방암과 비교하여 효과적인 분자 표적 요법 또는 항암제를 갖지 않기 때문에 다양한 종양 생물학에 대한 조사가 필요하다.
최근 연구에 기초하여, 특이적 표적을 갖는 항암 약물은 표적이 없는 항암 약물보다 저항성 (후천적 저항성)이 발달할 가능성이 더 높은 것으로 보고되고 있다. 항암 약물에 대한 후천적 저항성을 예방하고 항암 약물의 효능을 최대화하기 위해, 후천적 저항성을 유도하는 인자를 억제하는 약물과의 조합 요법이 대두되고 있다. 또한, 표적화 항암제의 적용 범위가 종종 제한되며, 다른 인자의 억제제와의 공동-투여에 의해 적용 범위를 확대하는 것도 가능하다. 또한, 이러한 조합된 투여에 의해, 항암제에 대한 저항성을 나타내는 경우, 뿐만 아니라 효능을 나타내는 경우에도 항암제의 효능을 향상시킴으로써 투여되는 항암제의 양을 감소시킬 수 있다. 이를 통해, 신체 각 장기에 대한 항암제의 독성 및/또는 부작용을 최소화하면서 항암 효능을 증가시킬 수 있다.
간단한 요약
본 출원은 암 치료를 위한 CXCL16 항체를 개시한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체는 암, 예를 들어 갑상선암, 유방암 및 전립선암의 성장을 억제할 수 있다. 또한 암 치료를 위한 표적화 항암제 및/또는 면역 체크포인트 억제제와 CXCL16 항체의 조합이 기재되어 있다.
한 측면에서, 하기를 포함하는 중쇄 가변 영역: 서열식별번호: 12 중 어느 하나의 HCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 서열식별번호: 13 중 어느 하나의 HCDR2 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 및 서열식별번호: 14 중 어느 하나의 HCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 하기를 포함하는 경쇄 가변 영역: 서열식별번호: 15 중 어느 하나의 LCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 서열식별번호: 16 중 어느 하나의 LCDR2 또는 서열에 비해 1, 2 또는 3개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 및 서열식별번호: 17 중 어느 하나의 LCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체를 포함하는, CXCL16에 결합하는 항체가 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 항체는 하기 중 하나 이상을 포함한다: 서열식별번호: 22와 적어도 80% 동일한 HC-FR1; 서열식별번호: 23과 적어도 80% 동일한 HC-FR2; 서열식별번호: 24와 적어도 80% 동일한 HC-FR3; 서열식별번호: 25와 적어도 80% 동일한 HC-FR4; 서열식별번호: 26과 적어도 80% 동일한 LC-FR1; 서열식별번호: 27과 적어도 80% 동일한 LC-FR2; 서열식별번호: 28과 적어도 80% 동일한 LC-FR3; 및 서열식별번호: 29와 적어도 80% 동일한 LC-FR4.
일부 실시양태에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1; 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2; 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3; 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4; 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1; 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2; 서열식별번호: 28과 적어도 80% 동일한 LC-FR3; 및 서열식별번호: 29와 적어도 80% 동일한 LC-FR4.
일부 실시양태에서, 항체는 하기 중 하나 이상을 포함한다: 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1; 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2; 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3; 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4; 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1; 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2; 서열식별번호: 28과 적어도 80% 동일한 LC-FR3; 및 서열식별번호: 29와 적어도 80% 동일한 LC-FR4. 일부 실시양태에서, 항체는 CXCL16에 대한 결합에 대해 CXCR6 (서열식별번호: 21)과 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 항체는 하기를 포함하는 중쇄 가변 영역: 서열식별번호: 12 중 어느 하나의 HCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 서열식별번호: 13 중 어느 하나의 HCDR2 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 및 서열식별번호: 14 중 어느 하나의 HCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 하기를 포함하는 경쇄 가변 영역: 서열식별번호: 15 중 어느 하나의 LCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 서열식별번호: 16 중 어느 하나의 LCDR2 또는 서열에 비해 1, 2 또는 3개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 및 서열식별번호: 17 중 어느 하나의 LCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 12-17의 6개 CDR을 모두 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나의 VH 아미노산 서열 또는 VH 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하고/거나, 항체는 서열식별번호: 6-10 중 어느 하나의 VL 아미노산 서열; 및 VL 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5로 이루어진 군으로부터 선택된 항체의 VH, 또는 이의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5로 이루어진 군으로부터 선택된 항체의 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5로 이루어진 군으로부터 선택된 항체의 VH 및 VL 둘 모두를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 42의 중쇄 및 서열식별번호: 43의 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 치환 중 적어도 1개 또는 2개는 보존적 치환이거나; 치환의 적어도 50%는 보존적 치환이거나; 또는 모든 치환은 보존적 치환이다.
또 다른 측면에서, 본원에 개시된 단리된 항체 또는 항체 단편이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 항체는 인간화 항체, 키메라 항체, 다중특이적 항체, 이중특이적 항체, scFv 또는 Fab이다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체는 인간화 항체이고, 인간 IgG1 이소타입 불변 도메인 서열식별번호: 48을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 CXCL16 항체는 서열식별번호: 49를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 본원에 개시된 CXCL16 항체와 결합에 대해 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나의 VH 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역, 및/또는 서열식별번호: 6-10 중 어느 하나의 VL 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하거나, 또는 항체는 프레임워크 영역에만 존재하는 상응하는 VH 또는 VL 영역에 대한 변이를 갖는, VH 아미노산 서열과 적어도 70% 동일성을 갖는 VH 영역 및 VL 아미노산 서열과 적어도 70% 동일성을 갖는 VL 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체의 VL 영역 내 FW 영역은 상응하는 항체 중 어느 하나의 VL 영역에 존재하는 FW 영역과 적어도 80% 동일하다.
또 다른 측면에서, 항체 및 세포독성제를 포함하는 면역접합체가 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, (1) 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나의 VH 아미노산 서열과 적어도 70% 아미노산 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호: 6-10 중 어느 하나의 VL 아미노산 서열과 적어도 70% 아미노산 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하는 폴리펩티드가 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 상기 개시된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 상기 개시된 항체의 VH 영역 및/또는 VL 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터가 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 실시예(들) 20의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 상기 개시된 항체의 VH 영역 및/또는 VL 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
또 다른 측면에서, (i) 상기 개시된 항체 또는 항체의 면역접합체 및 (ii) 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 면역 반응을 유도하고/거나 암을 치료하는 방법으로서, 상기 개시된 항체 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 종양 전이를 억제하는 방법으로서, 상기 개시된 항체 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 종양 전이가 골 전이인 종양 전이를 억제하는 방법. 일부 실시양태에서, 항체는 정맥내로 투여된다.
또 다른 측면에서, CXCL16에 결합하는 항체에 의해 결합될 수 있는 종양 조직을 갖는 암 환자를 치료하는 방법으로서, 상기 개시된 항체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 암은 갑상선암 또는 유방암이다. 일부 실시양태에서, 유방암은 삼중-음성 유방암이다. 일부 실시양태에서, 항체는 정맥내로 투여된다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학요법 및/또는 방사선 요법을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 화학요법은 파클리탁셀이다. 일부 실시양태에서, 방법은 면역학적 체크포인트 항원을 표적화하는 작용제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 작용제는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 모노클로날 항체는 PD-1 리간드가 PD-1에 결합하는 것을 차단한다. 일부 실시양태에서, 모노클로날 항체는 항-PD-1 항체이다.
또 다른 측면에서, CXCL16에 결합하는 항체로 치료하기에 적합한 종양을 갖는 환자를 식별하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 방법은 환자로부터의 종양 샘플을 상기 개시된 항체와 접촉시키는 것, 및 종양 샘플에 대한 항체의 결합을 검출하는 것을 포함하고, 여기서 결합의 검출은 환자가 CXCL16에 결합하는 항체로 치료하기에 적합한 종양을 갖고 있음을 나타낸다.
또 다른 측면에서, 항체를 생산하는 방법으로서, 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 발현되는 조건 하에 상기 개시된 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 종양-표적화 활성을 갖는 항체를 식별하는 방법으로서, 방법은 상기 개시된 항체의 VH 또는 VL CDR3을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 돌연변이유발시키는 것; 돌연변이유발된 VH 또는 VL CDR3을 포함하는 항체를 발현시키는 것; 및 생체내에서 종양 성장을 억제하거나 종양 크기, 종양 침윤 및/또는 전이를 감소시키는 항체를 선택하는 것을 포함하는 방법이 본원에 제공한다.
또 다른 측면에서, 암을 치료하는 방법을 위한 상기 개시된 항체의 용도가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 암은 증가된 CXCL16 발현과 연관된다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 갑상선암, 자궁경부암, 폐암, 췌장암, 비소세포 폐암, 간암, 결장암, 결장직장암, 골암, 피부암, 두부암, 자궁경부암, 피부 흑색종, 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 간암, 뇌 종양, 방광암, 혈액암, 위암, 항문주위암, 유방암, 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 질암, 외음부 암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비 선암종, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장암, 요관암, 신장 세포 암종, 신장 골반 암종, CNS 중추 신경계 종양, 원발성 CNS 림프종, 척수 종양, 또는 뇌간 신경교종이다.
도 1a 및 1b는 인간 CXCL16 (도 1a) 대 마우스 CXCL16 (도 1b)에 대한 인간화 CXCL16 항체 (HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2 및 HC5LC5)의 결합의 결과를 보여준다.
도 2a, 2b, 2c 및 2d는 암 세포 주화성 및 이동 분석에 대한 인간화 CXCL16 항체 (HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2 및 HC5LC5)의 효과의 결과를 보여준다. 암 세포 주화성 및 이동을 억제하는 인간화 CXCL16 항체의 능력을 여러 세포주에서 평가하였다: CXCR6-과발현된 CHO-K1 세포 (도 2a), 갑상선암 세포주 BHP10-3M (도 2b), 유방암 세포주 MDA-MB-231 (도 2c), 및 단핵구 세포주 THP-1 (도 2d).
도 3a, 3b, 3c 및 3d는 Akt 활성화에 대한 인간화 CXCL16 항체 (HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2 및 HC5LC5)의 효과의 결과를 보여준다. 암 세포에서 CL16-유도된 Akt 활성화를 억제하는 인간화 CXCL16 항체의 능력을 여러 세포주에서 평가하였다: CXCR6-과발현된 CHO-K1 세포 (도 3a), 갑상선암 세포주 BHP10-3M (도 3b), 유방암 세포주 MDA-MB-157 (도 3c), 및 전립선암 세포주 PC3 (도 3d).
도 4a 및 4b는 삼중-음성 유방암 세포주 MDA-MB-231로부터 유래된 종양을 보유하는 마우스에서 종양 성장 (도 4a) 또는 종양 중량 (도 4b)의 결과를 보여준다. 이들 마우스를 항-마우스 CXCL16 항체 단독 또는 파클리탁셀 (PTX)과 조합된 항-마우스 CXCL16 항체로 처리하였다. 결과는 항-마우스 CXCL16 항체가 유방암 마우스 모델에서 종양 부피 및 중량을 유의하게 감소시켰다는 것을 보여준다.
도 5는 렌바티닙 (표적화 항암제) 및 항-마우스 CXCL16 항체의 조합 요법에 의해 치료된 갑상선암을 보유하는 마우스에서의 종양 성장을 보여준다. 결과는 렌바티닙 및 항-마우스 CXCL16 항체의 조합 요법이 갑상선암 마우스 모델에서 종양 부피를 유의하게 감소시켰다는 것을 보여준다.
도 6은 렌바티닙 (표적화 항암제), PD-L1 억제제 (면역 체크포인트 억제제) 및 항-마우스 CXCL16 항체의 조합 요법에 의해 치료된 갑상선암을 보유하는 마우스에서의 종양 성장을 보여준다.
도 7은 파클리탁셀, PD-L1 억제제 (면역 체크포인트 억제제) 및 항-마우스 CXCL16 항체의 조합 요법에 의해 치료된 유방암을 보유하는 마우스에서의 종양 성장을 보여준다.
도 8a는 뼈의 전이성 니치와 유사한 2-챔버 시스템을 예시한다. 도 8b는 CD11b+ 세포의 이동에 대한 CXCL16 항체 (HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2 및 HC5LC5)의 효과를 보여준다.
도 9a, 9b 및 9c는 졸렌드론산 (ZA)-저항성 골 전이의 골수 혈청에서 더 높은 CXCL16 농도가 검출되었음을 보여준다. 도 9a는 5 및 7주의 경골 내 골 종양의 생물발광 이미지 (BLI)를 보여준다. 도 9b는 골 전이의 ZA-R 모델의 발달을 예시하는 개략도이다. 도 9c는 골수 혈청 내 CXCL16 농도를 나타내는 데이터를 보여준다.
도 10a, 10b 및 10c는 항-CXCL16 항체가 골 전이의 종양 성장을 감소시켰다는 것을 보여준다. 도 10a는 실험 설계를 예시한다. 도 10b는 골 전이의 정도를 나타내는 대표적인 BLI를 보여준다. 도 10c는 생물발광 (BLI) 결과를 나타내는 도트 플롯을 함유한다.
도 11a, 11b 및 11c는 항-CXCL16 항체의 치료 결과가 ZA-저항성 골 전이의 종양 성장을 감소시켰다는 것을 보여준다. 도 11a는 실험 설계를 보여준다. 도 11b는 골 전이의 정도를 나타내는 대표적인 BLI를 보여준다. 도 11c는 생물발광 (BLI) 결과를 나타내는 도트 플롯을 함유한다.
상세한 설명
본 개시내용은 CXCL16 항체를 포함하는, 암을 예방 또는 치료하기 위한 제약 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 제약은 표적화 항암제 및 면역 체크포인트 억제제 중 하나 이상을 추가로 포함한다. CXCL16 항체는 전장 항체 또는 이의 단편의 형태로 제공될 수 있다.
용어론
본원에서 사용된 바와 같은 단수형 "하나"는 내용이 달리 명시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 그러므로, 예를 들어 "항체"에 대한 언급은 임의로 2개 이상의 이러한 분자 등의 조합을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "약"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 쉽게 공지된 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭하며; 예를 들어 ± 20%, ± 10% 또는 ± 5%는 인용된 값의 의도된 의미 내에 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 항원성 에피토프에 특이적으로 결합하는데 필요한 가변 영역 서열을 포함하는 단리된 또는 재조합 결합제를 의미한다. 따라서, 본원에서 사용된 바와 같은 "항체"는 원하는 생물학적 활성, 예를 들어 특이적 표적 항원에 결합하는 것을 나타내는 임의의 부류 또는 하위부류 또는 이의 단편의 임의의 형태의 항체이다. 그러므로, 이는 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 인간 항체, 키메라 항체, 나노바디, 디아바디, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 scFv, Fab 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 항체 단편을 포함한다. 본 출원에서, 용어 "항-CXCL16 항체" 및 "CXCL16 항체"는 상호교환적으로 사용된다.
"항체 단편"은 무손상 항체의 일부, 예를 들어 무손상 항체의 항원-결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fvs, Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체 (예를 들어, 문헌 [Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)]); 단일-쇄 항체 분자 (예를 들어, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다. 항체의 파파인 소화는 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는 "Fab" 단편이라고 불리는 2개의 동일한 항원-결합 단편, 및 쉽게 결정화하는 능력을 반영하는 명칭인 잔류 "Fc" 단편을 생성한다. 펩신 처리는 2개의 항원 조합 부위를 갖는 F(ab')2 단편을 생성하며 여전히 항원을 가교시킬 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 결합 도메인은 가변 경쇄 (VL) 및 가변 중쇄 (VH)를 포함하는 Fv를 포함한다. 이들은 일반적으로 단일 폴리펩티드 쇄에 (N-에서 C-말단으로) VL-scFv 링커-VH 또는 VH-scFv 링커-VL을 포함하는 scFv 도메인으로서, 또는 VL-CL과 커플링된 VH-CH1인 2개의 상이한 폴리펩티드 쇄에 있는 Fab 단편으로서 형식화된다.
단일-쇄 Fv 또는 scFv는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체 단편을 지칭하며, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 쇄에 존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함하며, 이는 scFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성하도록 허용한다. scFv의 개요에 대해서는, 문헌 [Pluckthun (1994) THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315]을 참조한다. 또한 WO 88/01649 및 미국 특허 번호 4,946,778 및 5,260,203을 참조한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "V-영역" 또는 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 프레임워크 1, CDR1, 프레임워크 2, CDR2, 프레임워크 3, CDR3 및 프레임워크 4의 세그먼트를 포함하는 항체 가변 영역 도메인을 지칭한다. 중쇄 V-영역인 VH는 B-세포 분화 동안 V(D)J 재조합으로서 공지된 V-유전자 (HV), D-유전자 (HD) 및 J-유전자 (HJ)의 재배열의 결과이다. 경쇄 V-영역인 VL은 항체의 V-유전자 (LV) 및 J-유전자 (LJ)의 재배열의 결과이며, 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄의 가변 영역은 "VH" 또는 "VH"로서 기재되고, 경쇄의 가변 영역은 "VL" 또는 "VL"로서 기재된다. 이들 도메인은 일반적으로 항체의 가장 가변적인 부분이며 항원-결합 부위를 함유한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "상보성-결정 영역 (CDR)"은 경쇄 및 중쇄 가변 영역에 의해 확립된 4개의 "프레임워크" 영역을 방해하는 각 쇄 내 3개의 초가변 영역 (HVR)을 지칭한다. CDR은 항원의 에피토프에 결합하는데 주요한 기여자이다. 각 쇄의 CDR은 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 지칭되며, N-말단부터 시작하여 순차적으로 번호가 매겨지며, CDR이 위치된 쇄에 의해서도 식별된다. 그러므로, VH CDR3 (HCDR3)은 이것이 발견되는 항체의 중쇄의 가변 도메인에 있는 반면, VL CDR3 (LCDR3)은 이것이 위치된 항체의 경쇄의 가변 도메인으로부터의 CDR3이다. CDR 서열을 언급할 때 용어 "CDR"은 "HVR"과 상호교환적으로 사용된다.
CDR 및 프레임워크 영역의 아미노산 서열은 관련 기술분야에 널리 공지된 다양한 정의, 예를 들어 카바트(Kabat), 코티아(Chothia), 국제 이뮤노제네틱스(ImMunoGeneTics) 데이터베이스 (IMGT) 및 AbM을 사용하여 결정될 수 있다 (예를 들어 문헌 [Chothia & Lesk, 1987, Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J. Mol. Biol. 196, 901-917]; [Chothia C. et al., 1989, Conformations of immunoglobulin hypervariable regions. Nature 342, 877-883]; [Chothia C. et al., 1992, Structural repertoire of the human VH segments. J. Mol. Biol. 227, 799-817]; [Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 1997, 273(4)] 참조). 항원 조합 부위의 정의는 또한 하기에 기재되어 있다: 문헌 [Ruiz et al., IMGT, The international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res., 28, 219-221 (2000)]; 및 [Lefranc, M.-P. IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res. Jan 1;29(1):207-9 (2001)]; [MacCallum et al, Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography, J. Mol. Biol., 262 (5), 732-745 (1996)]; 및 [Martin et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 86, 9268-9272 (1989)]; [Martin, et al., Methods Enzymol., 203, 121-153, (1991)]; [Pedersen et al., Immunomethods, 1, 126, (1992)]; 및 [Rees et al., In Sternberg M.J.E. (ed.), Protein Structure Prediction. Oxford University Press, Oxford, 141-172 1996)]. 카바트 넘버링에 의해 결정된 바와 같은 CDR에 대한 언급은 예를 들어 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)]에 기초한다. 코티아 CDR은 코티아에 의해 정의된 바와 같이 결정된다 (예를 들어 문헌 [Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)] 참조). CDR의 넘버링 및 배치는 사용된 넘버링 시스템에 따라 상이할 수 있다. 가변 중쇄 및/또는 가변 경쇄 서열의 개시내용은 사용된 넘버링 시스템에 관계없이 연관 CDR의 개시내용을 포함하는 것으로 이해된다. 달리 명시적으로 언급되지 않는 한, 본 출원에서의 CDR, 예를 들어 표 3에 표시된 CDR은 IMGT 및 카바트를 조합함으로써 정의된다. 하나의 예시적인 예로서, 서열식별번호: 1의 CDR1 영역은 GFTFSNAVMN이며, 이는 GFTFSNAV (IMGT에 따름) 및 NAVMN (카바트에 따름)의 잔기의 조합이다.
"Fc 영역"은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인을 배제하는 항체의 불변 영역을 지칭한다. 인간 면역글로불린의 경우, "Fc"는 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 IgE 및 IgM의 마지막 3개 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 이들 도메인에 대한 가요성 힌지 N-말단을 지칭한다. IgA 및 IgM의 경우, Fc는 J 쇄를 포함할 수 있다. IgG의 경우, Fc는 면역글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3 및 Cγ1과 Cγ2 사이의 힌지를 포함한다. Fc 영역의 경계는 다양할 수 있다는 것이 관련 기술분야에서 이해되지만; 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 대개 문헌 [Kabat et al., (1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, VA)]에서와 같이 EU 지수에 따른 넘버링을 사용하여 카르복실-말단에 잔기 C226 또는 P230을 포함하는 것으로 정의된다. 용어 "Fc 영역"은 단리된 이 영역 또는 항체 또는 항체 단편과 관련하여 이 영역을 지칭할 수 있다. "Fc 영역"은 Fc 영역의 자연 발생 대립유전자 변이체 뿐만 아니라 이펙터 기능을 조정하는 변형을 포함한다. Fc 영역은 또한 생물학적 기능에 변경을 초래하지 않는 변이체를 포함한다. 예를 들어, 생물학적 기능의 실질적인 손실 없이 면역글로불린의 Fc 영역의 N-말단 또는 C-말단으로부터 하나 이상의 아미노산이 결실될 수 있다. 이러한 변이체는 활성에 최소한의 영향을 미치도록 관련 기술분야에 공지된 일반 규칙에 따라 선택될 수 있다 (예를 들어 문헌 [Bowie, et al., Science 247:306-1310, 1990] 참조). 예를 들어, IgG4 항체의 경우, 단일 아미노산 치환 (카바트 넘버링에 따른 S228P; IgG4Pro로 명명됨)이 도입되어 재조합 IgG4 항체에서 관찰되는 이질성을 폐기할 수 있다 (예를 들어 문헌 [Angal, et al., Mol Immunol 30:105-108, 1993] 참조). 특정 실시양태에서, Fc 영역은 항체의 약동학 특성을 개선하는 치환, 예를 들어 증가된 혈청 반감기를 포함한다. Fc 영역의 치환의 비제한적인 예는 미국 특허 번호 8,088,376에서 찾을 수 있으며, 이의 내용은 그 전문이 참조로 포함된다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "중쇄"는 항원에 특이성을 부여하기에 충분한 가변 영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 도메인 VH, 및 3개의 불변 도메인 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 전장 중쇄, 및 이의 단편을 모두 지칭한다.
또한, 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "경쇄"는 항원에 특이성을 부여하기에 충분한 가변 영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 도메인 VL 및 불변 영역 CL을 포함하는 전장 경쇄 및 이의 단편을 모두 지칭한다.
2개 이상의 폴리펩티드 서열과 관련하여 용어 "동일한" 또는 퍼센트 "동일성"은 비교 창 또는 지정된 영역에 걸쳐 최대 상응성을 위해 비교되고 정렬될 때 명시된 영역, 예를 들어 2개 서열의 길이에 걸쳐 동일하거나 (예를 들어, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상) 동일한 명시된 백분율의 아미노산 잔기를 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하는 방법을 포함하는 다양한 방법으로 수행될 수 있다. 퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하는데 적합한 알고리즘의 예는 문헌 [Altschul et al., Nuc. Acids Res. 25:3389-3402 (1977)] 및 [Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)]에 기재된 BLAST 2.0 알고리즘이다. 그러므로, 본 발명의 목적을 위해, BLAST 2.0은 퍼센트 서열 동일성을 결정하기 위해 디폴트 파라미터와 함께 사용될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 이의 단편은 관련 기술분야에 공지된 방법, 예를 들어 파지 디스플레이 방법 또는 효모 세포 표면 발현 시스템을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 4,946,778 및 5,258,498에 기재된 방법은 scFv를 제조하는데 사용될 수 있고, WO 92/22324에 기재된 방법은 재조합 Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편을 생산하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 항체는 인간을 포함한 포유동물, 조류 등을 포함한 임의의 동물로부터 유래될 수 있다. 바람직하게는, 항체는 인간, 마우스, 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 말 또는 닭 항체일 수 있다.
인간 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체이며, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 내인성 면역글로불린을 발현하지 않는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대해 형질감염된 동물로부터 단리된 항체를 포함한다 (미국 특허 번호 5,939,598 참조).
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상기 서열에 의해 정의된 항체에서 돌연변이, 예컨대 하나 이상의 치환, 결실, 역전 또는 전위를 통해 본 발명의 원하는 효과를 달성하는 모든 돌연변이체를 포함한다.
용어 "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드"는 상호교환적으로 사용되며, 본원에서 사용된 바와 같이, RNA, cDNA, 게놈 DNA, 및 이들의 합성 형태 및 혼합된 중합체의 센스 및 안티센스 가닥 둘 모두를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드, 데옥시뉴클레오티드 또는 어느 한 유형의 뉴클레오티드의 변형된 형태 및 이들의 조합을 지칭한다. 이 용어는 또한 단일- 및 이중-가닥 형태의 DNA를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 또한, 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 cDNA 또는 mRNA는 자연 발생 및/또는 비-자연 발생 뉴클레오티드 연결에 의해 함께 연결된 자연 발생 및 변형된 뉴클레오티드 중 하나 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자가 쉽게 이해하는 바와 같이, 핵산 분자는 화학적으로 또는 생화학적으로 변형될 수 있거나, 비-천연 또는 유도체화된 뉴클레오티드 염기를 함유할 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 표지, 메틸화, 자연 발생 뉴클레오티드 중 하나 이상의 유사체로의 치환, 뉴클레오티드간 변형, 예컨대 하전되지 않은 연결 (예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포라미데이트, 카바메이트 등), 하전된 연결 (예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등), 펜던트 모이어티 (예를 들어, 폴리펩티드), 인터칼레이터 (예를 들어, 아크리딘, 소랄렌 등), 킬레이트제, 알킬화제 및 변형된 연결 (예를 들어, 알파 아노머 핵산 등)을 포함한다. 상기 용어는 또한 단일-가닥, 이중-가닥, 부분적 듀플렉스, 트리플렉스, 헤어핀, 원형 및 자물쇠 입체구조를 포함하는 임의의 위상학적 입체구조를 포함하도록 의도된다. 달리 명시되지 않는 한, 핵산 서열에 대한 언급은 그의 상보체를 포함한다. 그러므로, 특정 서열을 갖는 핵산 분자에 대한 언급은 그의 상보적 서열과 함께 그의 상보적 가닥을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 동일한 폴리펩티드 서열을 코딩하는 코돈-최적화된 핵산을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 연결된 또 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자기-복제 핵산 구조로서의 벡터 뿐만 아니라 이것이 도입된 숙주 세포의 게놈에 혼입된 벡터를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같은 "벡터"는 관심 핵산 서열이 벡터에 삽입되는 재조합 구축물을 지칭한다. 특이적 벡터는 작동가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭된다.
본원에서 사용된 바와 같은 "치환"은 하나 이상의 아미노산 또는 뉴클레오티드가 각각 상이한 아미노산 또는 뉴클레오티드에 의해 대체되는 것을 의미한다.
"단리된" 핵산은 자연 환경의 구성성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 일반적으로 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체외에 존재하거나 자연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
"항체 또는 이의 단편을 코딩하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 이의 단편)를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자를 지칭하며, 단일 벡터 또는 별도의 벡터에 이러한 핵산 분자(들)를 포함하며, 이러한 핵산 분자(들)는 숙주 세포의 하나 이상의 위치에 존재한다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되며, 외인성 핵산이 도입된 세포 (이러한 세포의 자손 포함)를 지칭한다. 그러므로, 숙주 세포는 재조합 숙주 세포이고, 계대 횟수에 관계없이 1차 형질전환된 세포 및 그로부터 유래된 자손을 포함한다.
본원에서 사용된 용어인 폴리펩티드 "변이체"는 전형적으로 하나 이상의 치환, 결실, 첨가 및/또는 삽입이 본원에 구체적으로 개시된 폴리펩티드와 상이한 폴리펩티드이다. 본원에서 사용된 바와 같은 "변이체"는 자연 발생 서열보다는 조작된 서열을 지칭한다.
동일한 표적에 대한 2개의 항체의 결합 강도를 설명하는 맥락에서 용어 "비교가능한"은 서로 3배 이내인 2개의 결합 반응으로부터 계산된 2개의 해리 상수 (KD) 값을 지칭한다. 다시 말해서, 제1 KD (제1 항체와 표적 간의 결합 반응의 KD)와 제2 KD (제2 항체와 표적 간의 결합 반응의 KD)의 비율은 1:3 또는 3:1의 범위 내에 있다 (종점 포함). 더 낮은 KD 값은 더 강한 결합을 나타낸다. 예를 들어, 참조 항체와 비교하여 더 강한 결합을 갖는 항체 변이체는 참조 항체에 대한 동일한 표적에 대해 측정된 KD의 적어도 1/3인 KD로 표적에 결합한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "치료제"는 질환을 앓고 있는 환자에게 치료적 유효 용량으로 투여될 때 질환의 증상 및 질환과 연관된 합병증을 치유하거나 적어도 부분적으로 정지시키는 작용제를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "개체"는 질환의 치료를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 인간 또는 비인간 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말, 소 등을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 개체는 포유동물이다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "투여"는 임의의 적합한 방법에 의해 대상체에게 본 발명의 미리 결정된 조성물을 제공하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "예방"은 표적 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 임의의 작용을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "치료"는 표적 질환 및 그의 대사 이상이 개선되는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "개선"은 본원에 개시된 조성물의 투여에 의해 원하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들어 증상의 정도를 감소시키는 임의의 작용을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "골 전이"는 암 세포가 원래 부위로부터 뼈로 확산되는 것을 지칭한다. 거의 모든 유형의 암, 예를 들어 유방암 세포, 갑상선암 세포, 전립선암 세포 등은 뼈로 확산(전이)될 수 있다.
CXCL16
CXCL16 (NM_022059)은 케모카인 (C-X-C 모티프) 리간드 16 (CXCL16)을 코딩하는 유전자이다. CXCL16 단백질은 CXC 케모카인 패밀리에 속하는 작은 시토카인이다. 이는 CXC 케모카인 도메인, 무신-유사 줄기, 막횡단 도메인, 및 SH2에 결합할 수 있는 잠재적인 티로신 인산화 영역을 함유하는 세포질 꼬리로 이루어진다. CXCL16의 발현은 염증성 시토카인 IFN-감마 및 TNF-알파에 의해 유도된다. CXCL16은 갑상선암의 예후를 예측하기 위한 마커로서 보고되고 있다. 대한민국 특허 번호 10-2019-0145732를 참조한다.
인간 CXCL16 단백질 (서열식별번호: 11)은 254개의 아미노산을 포함하며, 케모카인 수용체 CXCR6에 결합할 수 있다. Kim et al., Scientific Reports, 9:13288 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-49613-z. 다른 케모카인과 달리, CXCL16은 막-결합된 분자 뿐만 아니라 가용성 케모카인으로도 발현된다. Abel et al., J. Immunol. 172, 6362- 6372 (2004). CXCL16은 대식세포 및 수지상 세포에 의해 생성되며 면역 세포 주화성을 CXCL16-풍부화된 환경으로 조절한다. Jin et al., Oncol. Rep. 37, 3279-3286 (2017).
인간 CXCL16:
Figure pct00001
CXCL16 항체
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체는 CXCL16 (서열식별번호: 11)에 결합하고, 하기를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다: 서열식별번호: 12를 포함하는 HCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 변이체 HCDR1; 서열식별번호: 13을 포함하는 HCDR2 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 변이체 HCDR2; 및 서열식별번호: 14를 포함하는 HCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 변이체 HCDR3. 일부 실시양태에서, 항체는 하기를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다: 서열식별번호: 15 중 어느 하나를 포함하는 LCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 변이체 LCDR1; 서열식별번호: 16 중 어느 하나를 포함하는 LCDR2 또는 서열에 비해 1, 2 또는 3개의 아미노산이 치환된 변이체 LCDR2; 및 서열식별번호: 17 중 어느 하나를 포함하는 LCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 변이체 LCDR3.
일부 실시양태에서, CXCL16에 결합하는 항체는 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나와 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH; 및 서열식별번호: 6-10 중 어느 하나와 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, CXCL16 항체는 표 3에 제시된 VL 서열과 비교하여 VL 아미노산 서열에 적어도 하나의 돌연변이 및 10, 20, 30, 40 또는 50개 이하의 돌연변이를 갖는다. 일부 실시양태에서, VL 아미노산 서열은 표 3에 제시된 VL 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 삽입 또는 결실을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VL 아미노산 서열은 표 2에 표시된 CDR 서열에 비해 결실 또는 삽입, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 아미노산 결실 또는 삽입을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CXCL16 항체는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 각각은 표 2에 표시된 바와 같은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3과 적어도 70% 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 CXCL16 항체는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 각각은 표 2에 표시된 바와 같은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3과 적어도 80% 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 CXCL16 항체는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 중 1개, 2개 또는 3개 모두를 포함하고, 각각은 서열식별번호: 15-17에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, CXCL16 항체는 표 3에 제시된 VH 서열과 비교하여 VH 아미노산 서열에 적어도 하나의 돌연변이 및 10, 20, 30, 40 또는 50개 이하의 돌연변이를 갖는다. 일부 실시양태에서, VH 아미노산 서열은 표 3에 제시된 VH 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 삽입 또는 결실을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VH 아미노산 서열은 표 1에 표시된 CDR 서열에 비해 결실 또는 삽입, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 아미노산 결실 또는 삽입을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VH 영역은 표 1에 표시된 HCDR1 서열에 비해 1 또는 2개의 치환을 갖는 HCDR1을 포함한다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 표 1에 표시된 HCDR1 서열에 비해 3, 4 또는 5개의 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, VH 영역은 표 1에 표시된 HCDR2 서열에 비해 1 또는 2개; 또는 1, 2 또는 3개의 치환을 갖는 CDR2을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH 영역은 표 1에 표시된 HCDR3 서열에 비해 1, 2 또는 3개; 또는 1, 2, 3 또는 4개의 치환을 갖는 HCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CXCL16 항체는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 각각은 표 1에 표시된 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3과 적어도 70% 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 CXCL16 항체는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 각각은 표 1에 표시된 바와 같은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3과 적어도 80% 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항종양 항체는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 중 1개, 2개 또는 3개 모두를 포함하고, 각각은 서열식별번호: 12-14에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체의 VH 영역의 FR1 영역은 서열식별번호: 22와 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일하다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체의 VH 영역의 FR1 영역은 서열식별번호: 22의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체의 VH 영역의 FR2 영역은 서열식별번호: 23과 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일하다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체의 VH 영역의 FR2 영역은 서열식별번호: 23의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체의 VH 영역의 FR3 영역은 서열식별번호: 24와 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일하다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체의 VH 영역의 FR3 영역은 서열식별번호: 24의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체의 VH 영역의 FR4 영역은 서열식별번호: 25와 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일하다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체의 VH 영역의 FR4 영역은 서열식별번호: 25의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체의 VL 영역의 FR1 영역은 서열식별번호: 26과 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일하다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체의 VL 영역의 FR1 영역은 서열식별번호: 26의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체의 VL 영역의 FR2 영역은 서열식별번호: 27과 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일하다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체의 VL 영역의 FR2 영역은 서열식별번호: 27의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체의 VL 영역의 FR3 영역은 서열식별번호: 28과 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일하다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체의 VL 영역의 FR3 영역은 서열식별번호: 28의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체의 VL 영역의 FR4 영역은 서열식별번호: 29와 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일하다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체의 VL 영역의 FR4 영역은 서열식별번호: 29의 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, CXCL16 항체는 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체는 HC5LC1이다.
<표 1>
예시적인 CXCL16 항체의 중쇄 CDR 서열
Figure pct00002
<표 2>
예시적인 CXCL16 항체의 경쇄 CDR 서열
Figure pct00003
<표 3>
예시적인 CXCL16 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열
Figure pct00004
참고: 본 개시내용의 각 CXCL16 항체의 명칭은 두 파트로 이루어진다: 제1 파트는 중쇄를 나타내고, 제2 파트는 경쇄를 나타낸다. 예로서, 항체 HC5LC1은 중쇄 HC5 (서열식별번호: 42 포함) 및 경쇄 LC1 (서열식별번호: 43 포함) 등을 포함한다. 표 4를 참조한다.
<표 4>
예시적인 중쇄 및 경쇄의 전장 서열
Figure pct00005
<표 5>
예시적인 CXCL16 항체의 프레임워크 영역 서열
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
본 개시내용의 목적을 위해, HC-FR1은 중쇄 가변 영역의 프레임워크 1 (FR1) 영역을 지칭하고; HC-FR2는 중쇄 가변 영역의 FR2 영역을 지칭하고; HC-FR3은 중쇄 가변 영역의 FR3 영역을 지칭하고; LC-FR1은 경쇄 가변 영역의 프레임워크 1 (FR1) 영역을 지칭하고; LC-FR2는 경쇄 가변 영역의 FR2 영역을 지칭하고; LC-FR3은 경쇄 가변 영역의 FR3 영역을 지칭한다.
변이체
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 CXCL16 항체의 변이체는 중쇄 및/또는 경쇄 서열에 돌연변이를 도입함으로써 생성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 돌연변이(들)는 본원에 개시된 CXCL16 항체의 CDR 중 하나 이상, 예를 들어 항체 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5 중 어느 하나에 도입된다. 일부 실시양태에서, 돌연변이(들)는 프레임워크 영역에 도입된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 CXCL16 항체는 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나의 VH 영역, 및/또는 서열식별번호: 6-10 중 어느 하나의 VL 영역을 포함하거나, 또는 항체는 프레임워크 영역에만 존재하는 상응하는 VH 또는 VL 영역에 대한 변이를 갖는, 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나와 적어도 80% 동일성을 갖는 VH 영역 및 서열식별번호: 6-10 중 어느 하나와 적어도 80% 동일성을 갖는 VL 영역을 포함한다.
본원에 개시된 항체는 종양 세포에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 암 세포주에 첨가되고, 결합은 생체광 간섭계 (포르테바이오(ForteBio))를 사용하여 분석된다. HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5는 모두 인간 CXCL16에 대한 강한 결합을 나타내었다. 표 6 및 실시예 1을 참조한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 CXCL16 항체는 서열식별번호: 12의 HCDR1, 서열식별번호: 13의 HCDR2, 서열식별번호: 14의 HCDR3, 서열식별번호: 15의 LCDR1, 서열식별번호: 16의 LCDR2, 서열식별번호: 17의 LCDR3을 포함하고; VH 영역의 FW 영역은 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나의 VH 영역에 존재하는 FW 영역과 적어도 80% 동일하고, 여기서 VL 영역의 FW 영역은 서열식별번호: 6-10 중 어느 하나의 VL 영역에 존재하는 FW 영역과 적어도 80% 동일하다.
종양-결합 활성
본원에 기재된 CXCL16 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 검정에 의해 평가된 바와 같이 종양 세포에 결합할 수 있다. 적합한 검정의 비제한적인 예는 바이오센서 시스템, 예컨대 비아코어(BIACORE)® 시스템을 사용하는 표면 플라스몬 공명 분석 또는 유동 세포계측법 검정, 또는 생체광 간섭계 검정을 포함하며, 이는 실시예 섹션에서 추가로 설명된다.
일부 실시양태에서, 변이체 활성을 평가하기 위한 결합 검정은 생체외에서 종양 조직 또는 종양 세포에 대해, 예를 들어 생체내에서 동계 (면역-매치된) 마우스에서 종양 이식편으로서 성장된 후 24-48시간 이내에 수확되고 프로세싱된 종양 세포에 대해 수행된다. 결합은 유동 세포계측법을 포함한 임의의 수의 수단에 의해 평가될 수 있다.
일부 실시양태에서, 종양 세포에 결합하는 항체의 결합은 표준 면역염색 절차를 사용하여 신선하게 동결된 인간 종양 샘플 또는 고정된 종양 샘플에 대해 수행된 면역형광 방법에 의해 평가된다.
본원에 개시된 항체는 종양 세포에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 암 세포주에 첨가되고, 결합은 생체광 간섭계 검정을 사용하여 분석된다. HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5는 인간 CXCL16에 대한 강한 결합을 나타내었다. 예를 들어 표 6 및 실시예 1을 참조한다.
종양 억제 활성
본원에 개시된 CXCL16 항체의 생체내 종양 억제 활성은 종양 성장 및 동물 생존의 모니터링을 포함하나 이에 제한되지는 않는 여러 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 CXCL16 항체는 종양 성장 속도, 크기, 종양 침윤 및/또는 전이의 감소를 포함하여 종양에 대한 억제 효과를 나타낸다. 하나의 예시적인 예에서, CXCL16 항체는 MDA-MB-231 세포로부터 유래된 종양을 보유하는 마우스에서 종양 성장을 억제한다 (실시예 2 참조). 이러한 항체는 예를 들어 CXCL16을 발현하거나 과발현하는 종양을 갖는 대상체에게 투여될 때 생체내에서 종양-표적화 효과를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체는 암 세포 주화성 및 이동을 억제한다. 암 세포 주화성 및 이동은 관련 기술분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 평가될 수 있다. CXCR6을 발현하는 세포는 CXCL16 시토카인을 함유하는 배지를 향해 이동하는 경향을 갖기 때문에 이들 검정이 전형적으로 설계된다. 하나의 예시적인 검정은 트랜스웰 이동 검정이다. 간략히 말해서, 용기는 상부 챔버 및 하부 챔버로 나누어지며, CXCR6을 발현하는 세포가 상부 챔버에 플레이팅되고, CXCL16이 하부 챔버에 함유된 배지에 첨가된다. 상부 챔버는 세포가 통과하도록 허용하는 폴리카르보네이트 막으로 하부 챔버로부터 분리된다. CXCR6을 발현하는 세포가 CXCL16을 함유하는 하부 챔버 내 배지로 이동하는 기간 후, 하부 챔버 내 세포를 계수하며, 이는 하부 챔버로 이동하는 세포의 수를 나타낸다. CXCR6-발현 세포가 본원에 개시된 CXCL16 항체로 처리되면, 하부 챔버로 이동된 세포의 수가 감소하며, 이는 CXCL16 항체가 주화성 이동을 억제할 수 있음을 나타낸다. 하나의 예시적인 검정이 실시예 2에 개시되어 있다. 결과는 도 8b에 나타내었으며, 이는 HC5LC1, HC5LC2 및 HC5LC5를 포함하는 다양한 CXCL16 항체가 주화성 및 이동을 억제함을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체는 암 세포의 골 전이를 억제한다. 골 전이를 억제하는 항체의 활성은 관련 기술분야에 널리 공지된 방법으로 평가된다. 하나의 예시적인 방법은 뼈의 전이성 니치를 모방하는 2-챔버 시스템을 사용한다. 간략히 말해서, 메쉬 삽입물인 상부 챔버가 하부 챔버 내에 매달려 있다. 하부 챔버는 암 세포/전체 골수 세포 공동-배양물 및 CXCL16 풍부화된 유체를 함유하며, 이는 뼈의 전이성 니치의 미세환경을 모방한다. 상부 챔버는 골수로부터의 전구파골세포 (예를 들어, 인간 CD11b+ 골수 골수성 세포)를 보유한다. 전형적으로, 전구파골세포는 파골세포로 분화되며, 이는 뼈의 전이성 니치에서 종양 형성을 지원한다. 그러므로 전구파골세포 이동의 억제는 뼈의 전이성 니치에서 종양 진행을 효과적으로 차단할 수 있으며, 즉 골 전이를 억제할 수 있다. 상부 챔버 내 세포를 CXCL16 항체와 접촉시킨 후, 상부 챔버 (일명, 삽입물의 메쉬)에 남아있는 세포를 계수하며; 이들 세포의 수는 전이성 니치로의 세포 동원을 억제하는 항체의 능력과 양의 상관관계가 있다:
항체 형식
본 발명의 추가 측면에서, 본 개시내용에 따른 CXCL16 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디 또는 F(ab')2 단편일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 실질적으로 전장 항체, 예를 들어 IgG 항체 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소타입이다. 특이적 항체 단편의 검토에 대해서는 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9: 129-134 (2003)]을 참조한다. 항체 단편은 무손상 항체의 단백질분해 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
일부 실시양태에서, 환자에게 투여되는 본 개시내용에 따른 CXCL16 항체는 IgG1 하위부류의 IgG이다. 일부 실시양태에서, 이러한 항체는 IgG2, IgG3 또는 IgG4 하위부류의 IgG이다. 일부 실시양태에서, 이러한 항체는 IgM이다. 일부 실시양태에서, 이러한 항체는 람다 경쇄 불변 영역을 갖는다. 일부 실시양태에서, 이러한 항체는 카파 경쇄 불변 영역을 갖는다.
일부 실시양태에서 본 개시내용에 따른 CXCL16 항체는 1가 형식이다. 일부 실시양태에서, 종양-표적화 항체는 단편 형식, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디 또는 F(ab')2 단편이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 단편을 포함하는 본원에 개시된 CXCL16 항체는 이펙터 기능을 갖는, 예를 들어 항체-의존적 세포성 세포독성 (ADCC), 항체-의존적 세포성 식균작용 (ADCP), 및/또는 상보체-의존적 세포독성 (CDC)을 나타내는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 상보체 고정, Fc 수용체 결합 및/또는 ADCC를 변경하도록 조작된 Fc 영역일 수 있다. 따라서, Fc 영역은 이펙터 기능, 즉 면역 세포에서 발현되는 Fc 수용체에 결합 시 특정 생물학적 기능을 유도하는 능력을 증가시키거나 감소시키기 위한 추가적인 돌연변이를 포함할 수 있다. 면역 세포는 단핵구, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호산구, 비만 세포, 혈소판, B 세포, 거대 과립 림프구, 랑게르한스 세포, 자연 살해 (NK) 세포, 및 세포독성 T 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 Fc 영역은 이펙터 기능을 조정하는 추가 변형을 포함할 수 있다. 이펙터 기능을 조정하는 Fc 영역 아미노산 돌연변이의 예는 Fc 영역의 위치 228, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 243, 265, 269, 270, 297, 298, 318, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333 및 334 (EU 넘버링 체계)의 하나 이상의 치환을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
이펙터 기능을 감소시키는 예시적인 치환은 하기를 포함한다: 위치 329는 프롤린이 글리신 또는 아르기닌 또는 Fc의 프롤린 329와 FcγRIII의 트립토판 잔기 Trp 87 및 Trp 110 사이에 형성된 Fc/Fcγ 수용체 경계면을 파괴하기에 충분히 큰 아미노산 잔기로 치환되는 돌연변이를 가질 수 있다. 이펙터 기능을 감소시키는 추가적인 예시적 치환은 S228P, E233P, L235E, N297A, N297D 및 P331S를 포함한다. 이펙터 기능을 감소시키기 위한 다중 치환, 예를 들어 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 L235A; 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A, L235A 및 P329G; 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 및 L235E; 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 G237A; 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A, L235A 및 G237A; 인간 IgG2 Fc 영역의 V234A 및 G237A; 인간 IgG4 Fc 영역의 L235A, G237A 및 E318A; 및 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 및 L236E가 또한 존재할 수 있다. 이펙터 기능을 증가시키는 치환의 예는 예를 들어 E333A, K326W/E333S, S239D/I332E/G236A, S239D/A330L/I332E, G236A/S239D/A330L/I332E, F243L, G236A, 및 S298A/E333A/K334A를 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 돌연변이는 P329G, L234A, L235A 또는 이들의 조합을 포함한다. 이펙터 기능을 증가 또는 감소시킬 수 있는 Fc 영역 내 아미노산 돌연변이의 설명은 예를 들어 문헌 [Wang et al., Protein Cell. 9(1): 63-73, 2018]; [Saunders, Front Immunol. Jun 7, eCollection, 2019]; [Kellner et al., Transfus Med Hemother. 44(5): 327-336, 2017]; 및 [Lo et al., J Biol Chem. 292(9):3900-3908, 2017]에서 찾을 수 있다.
일부 실시양태에서, Fc 영역은 ADCC를 조정하는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 EU 넘버링 체계에 따른 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334에서의 치환을 가질 수 있다. 구체적으로, S298A, E333A 및 K334A가 Fc 영역에 도입되어 FcγRIIIa에 대한 Fc 영역의 친화성을 증가시키고 FcγRIIa 및 FcγRIIb에 대한 Fc 영역의 친화성을 감소시킬 수 있다.
Fc 영역은 또한 혈청 반감기를 증가시키기 위한 추가적인 돌연변이를 포함할 수 있다. 신생아 Fc 수용체 (FcRn)에 대한 향상된 결합을 통해, Fc 영역에서의 이러한 돌연변이는 항체 약동학을 개선할 수 있다. 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 Fc 영역에서의 치환의 예는 예를 들어 M252Y/S254T/T256E, T250Q/M428L, N434A, N434H, T307A/E380A/N434A, M428L/N434S, M252Y/M428L, D259I/V308F, N434S, V308W, V308Y, 및 V308F를 포함한다. 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있는 Fc 영역 내 아미노산 돌연변이의 설명은 예를 들어 문헌 [Dumet et al., MAbs. 26:1-10, 2019]; [Booth et al., MAbs. 10(7):1098-1110, 2018]; 및 [Dall'Acqua et al., J Biol Chem. 281(33):23514-24, 2006]에서 찾을 수 있다.
또한, 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 화학적으로 변형될 수 있거나 (예를 들어, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음), 글리코실화 (예를 들어, 저푸코실화, 비푸코실화 또는 증가된 시알릴화)를 변경하고 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변화시키도록 세포주 및/또는 세포 배양 조건에서 변형 (예를 들어 생산)될 수 있다. 예를 들어, 항체는 다양한 중합체 중 하나, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜에 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 화학적 모이어티에 대한 연결을 용이하게 하고/거나 번역후 변형, 예를 들어 글리코실화에 적용되는 잔기를 변경하기 위한 돌연변이를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 CXCL16 항체는 NK 세포를 동원하고/거나 ADCC를 증가시키는 항체의 능력을 증가시키는 변경된 글리코실화를 갖는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 푸코스를 함유하지 않는 글리칸을 포함한다 (즉, Fc 영역은 비푸코실화됨). 비푸코실화된 항체는 세포 내부의 푸코스 풀을 고갈시키는 이종 효소를 발현하는 세포주를 사용하여 생산될 수 있다 (예를 들어, 프로비오겐 아게(ProBioGen AG) (독일 베를린)에 의한 GLYMAXX®). 비-푸코실화된 항체는 또한 내인성 α-1,6-푸코실트랜스퍼라제 (FUT8) 유전자가 결실된 숙주 세포주를 사용하여 생산될 수 있다. 문헌 [Satoh, M. et al., "Non-fucosylated therapeutic antibodies as next-generation therapeutic antibodies," Expert Opinion on Biological Therapy, 6:11, 1161-1173, DOI: 10.1517/14712598.6.11.1161]을 참조한다.
일부 실시양태에서, CXCL16 항체는 다가 항체로서 구축된다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체는 분자당 4개의 CXCL16 결합 아암을 포함하는 4가 분자로서 구축된다. 이러한 구축물은 증가된 ADCC 활성, 뿐만 아니라 유동 세포계측법에 의해 측정된 종양 세포에 대한 증가된 결합을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 CXCL16 항체는 이중특이적 또는 다중특이적 형식, 예를 들어 삼중특이적 형식으로 사용된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항체는 동일하거나 상이한 항원에 결합하는 추가 결합 도메인을 포함하는 이중특이적 또는 다중특이적 항체에 혼입될 수 있다.
이중특이적 또는 다중특이적 항체에 사용될 수 있는 다양한 가능한 형식이 있다. 형식은 요소, 예컨대 결합 아암의 수, 각 결합 아암의 형식 (예를 들어, Fab, scFv, scFab 또는 VH-단독), 결합 아암에 존재하는 항원 결합 도메인의 수, 서로에 대한 각 아암의 연결성 및 기하학, Fc 도메인의 존재 또는 부재, Ig 부류 (예를 들어, IgG 또는 IgM), Fc 하위부류 (예를 들어, hIgG1, hIgG2 또는 hIgG4), 및 Fc에 대한 임의의 돌연변이 (예를 들어, 이펙터 기능을 감소 또는 증가시키거나 혈청 반감기를 연장하기 위한 돌연변이)에 따라 달라질 수 있다. 또한, 이중특이적 및 다중특이적 형식의 예에 대해서는 문헌 [Speiss et al., Alternative Molecular Formats and Therapeutic Applications for Bispecific Antibodies, Mol Immunol, 67, 95-106 (2015)], 도 1을 참조한다.
CXCL16 항체 접합체/ 공동자극제
추가 측면에서, 본 발명의 CXCL16 항체는 치료제, 이미지화/검출가능한 모이어티 또는 효소에 접합되거나 연결될 수 있다. 예를 들어, 종양-표적화 항체는 검출가능한 마커, 세포독성제, 면역조정제, 이미지화제, 치료제, 올리고뉴클레오티드 또는 효소에 접합될 수 있다. 항체를 원하는 분자에 접합 또는 연결하기 위한 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 모이어티는 공유결합적으로 또는 비-공유결합적 연결에 의해 항체에 연결될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체는 세포독성 모이어티 또는 생존에 필요한 중요한 세포 프로세스에 효과를 발휘하는 다른 모이어티 ("페이로드")에 직접적으로 또는 절단가능한 또는 비-절단가능한 링커를 통해 접합된다. 일부 실시양태에서, 페이로드는 예를 들어 G2/M에서 세포 주기 정지를 야기함으로써 유사분열을 겪는 세포에서 아폽토시스를 유도하는 미세소관 억제제이다. 사용될 수 있는 미세소관 억제제의 비제한적인 예는 메이탄신 유도체 (DM1/DM4), 또는 아우리스타틴 (MMAE/MMAF) 및 이의 변이체, 예컨대 모노메틸 아우리스타틴 D, PF-06380101, 듀오스타틴5, AS269, Tap18Hr1, AGD-0182, HPA-아우리스타틴 F를 포함한다. 일부 실시양태에서, 페이로드는 튜불린-표적화제, 예를 들어 헤미아스테린, 튜부리신 또는 에리불린이다. 일부 실시양태에서, 페이로드는 DNA-손상 페이로드이며, 이는 에네디인 (칼리케아마이신), 듀오카르마이신 유도체, 피롤로벤조디아제핀 이량체 (PBD 이량체), 및 인돌리노벤조디아제핀 슈도-이량체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 예를 들어 아우리스타틴, 리신 A 쇄, 독소루비신, 다우노루비신, 메이탄시노이드, 탁솔, 에티듐 브로마이드, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 디히드록시 안트라신 디온, 메토트렉세이트, 악티노마이신, 디프테리아 독소, 슈도모나스로부터의 외독소 A, 슈도모나스 외독소40, 아브린, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파 사르신, 젤로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 코브라 독 인자, 리보뉴클레아제, 조작된 시가 독소, 페노마이신, 에노마이신, 큐리신, 크로틴, 칼리케아마이신, 사포나리아 오피시날리스(Saponaria officinalis) 억제제, 글루코코르티코이드, 아우리스타틴, 아우로마이신, 이트륨, 비스무트, 콤브레스타틴, 듀오카르마이신, 돌라스타틴, cc1065 또는 시스플라틴을 포함하나 이에 제한되지는 않는 세포독성제에 접합된다. 일부 실시양태에서, 항체는 작용제, 예컨대 효소 억제제, 증식 억제제, 용해제, DNA 또는 RNA 합성 억제제, 막 투과성 개질제, DNA 대사산물, 디클로로에틸술피드 유도체, 단백질 생산 억제제, 리보솜 억제제, 또는 아폽토시스 유도제에 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 약물, 예컨대 토포이소머라제 억제제, 예를 들어 토포이소머라제 I 억제제에 접합된다. 토포이소머라제 I 억제제는 퀴놀린 알칼로이드 (SN-38, DXd)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체는 예를 들어 막의 침투를 향상시켜 막을 가로지르는 단백질 전위를 촉진함으로써 생물학적 막을 가로지르는 항체의 수송을 촉진하는 분자에 연결된다. 그러므로, 예를 들어 항체는 세포 침투제, 예컨대 세포-침투 펩티드에 연결될 수 있다. 세포-침투 펩티드의 예는 TAT, 침투성 폴리아르기닌 분자, 쿠니츠 도메인-유래 펩티드, 예를 들어 안지오펩-2, SynB, 부포린, 트랜스포탄, 양친매성 펩티드 등을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 양이온성 분자, 예컨대 폴리아민과 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 수송, 예를 들어 트랜스시토시스를 촉진하는 작용제에 접합될 수 있다. 그러므로, 예를 들어 항체는 내재화된 내피 세포 수용체, 예를 들어 CXCR6 수용체, 인슐린 수용체, 인슐린-유사 성장 인자 수용체, 또는 저밀도 지질단백질 수용체 등에 결합하는 작용제에 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 항체의 세포질로의 진입을 촉진하는 독소, 예를 들어 시가 독소에 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체는 조작된 독소체 (ETB)에 접합되어 항체의 세포로의 내재화를 촉진할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 CXCL16 항체는 폴리펩티드 면역조정제, 예를 들어 아주반트와 접합되거나 투여된다. 면역조정제의 예는 시토카인 (예를 들어, 전환 성장 인자-β (TGFβ)), 성장 인자, 림프독소, 종양 괴사 인자 (TNF), 조혈 인자, 인터루킨 (예를 들어, 인터루킨-1 (IL-1), IL-2, IL-3, IL-6, IL-10, IL-12, IL-15, IL-15/IL-15Rα, 예를 들어 스시 도메인, 복합체, IL-18 및 IL-21), 콜로니 자극 인자 (예를 들어, 과립구-콜로니 자극 인자 (G-CSF) 및 과립구 대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터페론 (예를 들어, 인터페론-α, -β 또는 -γ, 에리트로포이에틴 및 트롬보포이에틴, 또는 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 선천성 면역 시스템을 자극하는 화합물, 예컨대 아주반트, Toll-유사 수용체 (TLR) 효능제, C-유형 렉틴 수용체 (CLR) 효능제, 레티노산-유도성 유전자 I-유사 수용체 (RLR) 효능제, 사포닌, 다당류, 예컨대 키틴, 키토산, β-글루칸, ISCOM, QS-21, 인터페론 유전자 (STING) 효능제의 자극제, 또는 또 다른 면역강화제와 연결되거나 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 CXCL16 항체는 IL-15 수용체 효능제, 예컨대 IL-15 융합 구축물, IL-15:IL-15Rα 융합 구축물 또는 단일-쇄 IL-15:IL-15Rα (스시) 융합 구축물에 접합되거나 투여된다. 한 실시양태에서, IL-15 수용체 효능제에 접합된 종양-표적화 항체는 이중특이적 또는 다중특이적 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 IL-15 수용체 효능제를 추가로 포함하는 본원에 기재된 항원 결합 도메인을 포함하는 이중특이적 또는 다중특이적 항체이다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 CXCL16 항체는 단일-쇄 IL-15:IL-15Rα (스시) 융합 구축물과 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, CXCL16 항체는 중합체-접합된 IL-15 구축물, 예컨대 NKTR-255와 함께 투여된다.
IL-15:IL-15Rα 단일 쇄 구축물은 예를 들어 0.01 mg/kg 체중 미만 내지 약 25 mg/kg 체중, 또는 0.1 - 10 mg/kg 범위, 또는 환자당 1 mg - 2 g, 또는 대략 50 mg - 1000 mg/환자 범위의 치료적 유효 용량을 포함하여 대상체에게 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 단일-쇄 IL-15 융합 구축물은 폴리펩티드 링커를 통해 IL-15Rα (스시)에 연결된 IL-15를 포함한다. 한 실시양태에서, 단일-쇄 IL-15 융합 구축물은 긴 반감기를 위해 폴리펩티드 링커를 통해 또 다른 단백질, 예컨대 Fc에 연결된다. 예를 들어 WO2018071919A1 (미국 특허 번호 10550185에 상응함)의 도 9b를 참조한다. 한 실시양태에서, IL-15는 Fc 중쇄의 N-말단에 연결되거나 융합되고, IL-15Rα(스시)는 원하는 하이브리드 Fc를 형성하기 위한 중쇄 이종이량체화 기술을 사용하여 다른 Fc 중쇄 N-말단에 연결되거나 융합된다. 예를 들어 WO2018071919A1의 도 9a를 참조한다.
일부 실시양태에서, 항체는 방사성핵종, 철-관련 화합물, 염료, 형광제 또는 이미지화제에 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 작용제, 예컨대 (그러나 이에 제한되지는 않음) 금속; 금속 킬레이트제; 란타나이드; 란타나이드 킬레이트제; 방사성금속; 방사성금속 킬레이트제; 양전자-방출 핵; 마이크로버블 (초음파용); 리포솜; 리포솜 또는 나노스피어에 미세캡슐화된 분자; 단결정질 산화철 나노화합물; 자기 공명 이미지화 조영제; 광 흡수제, 반사제 및/또는 산란제; 콜로이드성 입자; 형광단, 예컨대 근적외선 형광단에 연결될 수 있다.
임의의 상기 구축물의 한 실시양태에서, CXCL16 항체는 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5 중 어느 하나이다. 임의의 상기 구축물의 한 실시양태에서, 종양-표적화 결합 도메인은 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5의 VH 및 VL 서열을 포함한다.
항체의 생성
개시된 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 벡터 및 재조합 방법론을 사용하여 일반적으로 생산된다 (예를 들어 문헌 [Sambrook & Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press]; [Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology] 참조). 유전적 조작을 위한 시약, 클로닝 벡터 및 키트는 상업적 공급업체로부터 입수가능하다. 따라서, 본 발명의 추가 측면에서, 본원에 기재된 바와 같은 임의의 종양-표적화 항체의 VH 및/또는 VL 영역을 코딩하는 단리된 핵산 또는 이의 단편; 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 항체-코딩 핵산을 복제하고/거나 항체를 발현하는데 사용되는 핵산이 도입된 숙주 세포가 본원에 제공된다. 이러한 핵산은 종양-표적화 항체의 VL을 함유하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 함유하는 아미노산 서열 (예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코딩할 수 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) VL 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 VH 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 벡터, 또는 (2) VL 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 제1 벡터 및 VH 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 제2 벡터를 함유한다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16 항체를 제조하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 항체 발현에 적합한 조건 하에 이전 단락에 기재된 바와 같이 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 후속적으로 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수된다.
본 개시내용의 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 적합한 벡터는 클로닝 벡터 및 발현 벡터를 포함한다. 선택된 클로닝 벡터는 사용하려는 숙주 세포에 따라 달라질 수 있지만, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자기-복제할 수 있고, 특정 제한 엔도뉴클레아제에 대한 단일 표적을 보유할 수 있고/거나, 벡터를 함유하는 클론의 선택에서 사용될 수 있는 마커에 대한 유전자를 운반할 수 있다. 예는 플라스미드 및 박테리아 바이러스, 예를 들어 pUC18, pUC19, 블루스크립트(Bluescript) (예를 들어, pBS SK+) 및 이의 유도체, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1 플라스미드, pCR1, RP4, 파지 DNA, 및 셔틀 벡터를 포함한다. 이들 및 많은 다른 클로닝 벡터, 예컨대 pFUSE, pTRIOZ, pETEv2, TGEX-HC-hG1, TGEX-LC-hk, pOpti VEC, pCDNA3.3, pTRIOz, pFUSECHig, pFUSE-CLig 또는 pOptiVEC가 상업적 공급업체로부터 입수가능하다.
발현 벡터는 일반적으로 본 개시내용의 핵산을 함유하는 복제가능한 폴리뉴클레오티드 구축물이다. 발현 벡터는 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 통합 부분으로서 숙주 세포에서 복제가능할 수 있다. 적합한 발현 벡터는 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 레트로바이러스 및 임의의 다른 벡터를 포함하는 플라스미드 및 바이러스 벡터를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 기재된 바와 같은 항체를 발현하기에 적합한 숙주 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 모두 포함한다. 예를 들어, CXCL16 항체는 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우 박테리아에서 생산될 수 있다. 발현 후, 항체는 박테리아 세포 페이스트로부터 가용성 분획으로 단리될 수 있으며 추가로 정제될 수 있다. 대안적으로, 숙주 세포는 진핵 미생물, 예컨대 글리코실화 경로가 "인간화"되어 부분적 또는 완전 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체의 생산을 초래하는 진균 및 효모 균주를 포함하는 사상 진균 또는 효모, 척추동물, 무척추동물 및 식물 세포를 포함하는 진핵생물 숙주 세포일 수 있다. 무척추동물 세포의 예는 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 수많은 바큘로바이러스 균주가 식별되었다. 식물 세포 배양물은 또한 숙주 세포로서 활용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 척추동물 숙주 세포는 본 개시내용의 항체를 생산하는데 사용된다. 예를 들어, 포유동물 세포주, 예컨대 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (293 또는 293 세포, 예를 들어 문헌 [Graham et al., J. Gen Virol. 36:59,1977]에 기재된 바와 같음; 베이비 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (TM4 세포, 예를 들어 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251, 1980]에 기재된 바와 같음, 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK; 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); TRI 세포, 예를 들어 문헌 [Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68, 1982]에 기재된 바와 같음; MRC 5 세포; 및 FS4 세포는 종양-표적화 항체를 발현하는데 사용될 수 있다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216, 1980); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 본 개시내용의 숙주 세포는 또한 제한 없이 단리된 세포, 시험관내 배양된 세포 및 생체외 배양된 세포를 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토에 대해서는 예를 들어 문헌 [Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268, 2003]을 참조한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 CXCL16 항체는 CHO 세포주, 예를 들어 CHO-K1 세포주에 의해 생산된다. 중쇄 및 경쇄 서열을 코딩하는 하나 이상의 발현 플라스미드가 도입될 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 중쇄를 코딩하는 발현 플라스미드 및 경쇄를 코딩하는 발현 플라스미드는 시약, 예컨대 프리스타일(Freestyle) 맥스 시약을 사용하여 CHO-K1 숙주 세포주에서 1:1의 비율로 선형화된 플라스미드로서 숙주 세포에 형질감염된다. 단일 세포 이미지화와 커플링된 형광 활성화 세포 분류 (FACS)는 생산 세포주를 수득하기 위한 클로닝 방법으로서 사용될 수 있다.
본 개시내용의 CXCL16 항체 또는 이의 단편을 코딩하는 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포는 폴리펩티드의 발현이 발생하도록 허용하기에 적절한 조건 하에 배양될 수 있다. 폴리펩티드는 폴리펩티드를 함유하는 세포 및 배지의 혼합물로부터 분비되고 단리될 수 있다. 대안적으로, 폴리펩티드는 세포질 또는 막 분획에 유지될 수 있고, 원하는 방법을 사용하여 세포가 수확 및 용해되고 폴리펩티드가 단리될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 시험관내 합성에 의해 생산될 수 있다 (예를 들어 수트로 바이오파마(Sutro Biopharma) 생화학적 단백질 합성 플랫폼 참조).
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 CXCL16 항체의 변이체를 생성하는 방법이 본원에 제공된다. 그러므로, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 VH CDR3의 변이체를 코딩하는 구축물은 변형될 수 있고, 변형된 구축물에 의해 코딩된 VH 영역은 본원에 기재된 바와 같은 VL 영역 또는 변이체 영역과 쌍형성된 본원에 기재된 바와 같은 VH 영역의 맥락에서 표적 세포 (예를 들어, 유방암 세포)에 대한 결합 활성 및/또는 생체내 종양-표적화 활성에 대해 테스트될 수 있다. 유사하게, 본원에 기재된 바와 같은 VL CDR3의 변이체를 코딩하는 구축물은 변형될 수 있고, 변형된 구축물에 의해 코딩된 VL 영역은 표적 세포 또는 다른 종양 세포에 대한 결합 및/또는 생체내 종양-표적화 활성 효능에 대해 테스트될 수 있다. 이러한 분석은 또한 다른 CDR 또는 프레임워크 영역을 사용하여 수행될 수 있으며, 그 후 원하는 활성을 갖는 항체가 선택될 수 있다.
암의 치료
추가 측면에서, 본원에 제공된 바와 같은 CXCL16 항체 또는 본원에 기재된 바와 같은 이의 변이체는 암을 치료하기 위한 치료제로서 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 종양-표적화 효과를 갖는 CXCL16 항체를 사용한 치료의 후보인 대상체를 식별하는 방법을 제공한다. 그러므로, 한 실시양태에서, 본 발명은 본 개시내용의 CXCL16 항체를 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 환자를 식별하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 환자는 CXCL16을 과발현하는 암, 즉 정상 조직보다 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 80% 또는 적어도 100% 더 높은 수준으로 CXCL16을 발현하는 암을 갖는다. 일부 실시양태에서, 암 샘플은 원발성 종양으로부터 유래된다. 대안적인 실시양태에서, 암 샘플은 전이성 병변이다. CXCL16과의 결합 상호작용을 통한 암 세포에 대한 항체의 결합은 임의의 검정, 예컨대 생체광 간섭계 (포르테바이오), 면역조직화학 또는 유동 세포계측법을 사용하여 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 샘플 내 종양 세포의 적어도 0.2%, 0.5% 또는 1%, 또는 적어도 5% 또는 10%, 또는 적어도 20%, 30% 또는 50%에 대한 항체의 결합은 본원에 기재된 바와 같은 CXCL16으로 치료될 환자를 결정하기 위한 선택 기준으로서 사용될 수 있다.
본원에 개시된 CXCL16 항체는 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 종양은 신체 조직의 자율적인 과성장으로 인해 비정상적으로 성장된 덩어리를 지칭하며, 종양은 양성 종양 및 악성 종양으로 나눌 수 있다. 악성 종양은 양성 종양과 비교하여 매우 빠르게 성장하며, 주변 조직을 침윤하면서 전이가 발생하여 생명을 위협하게 된다. 이러한 악성 종양은 흔히 "암"으로 지칭된다. 그러므로, 용어 "암"은 세포 사멸의 조절과 관련된 질환 또는 정상적인 아폽토시스의 균형이 붕괴될 때 과도한 세포 증식에 의해 야기된 질환을 지칭한다. 일부 경우에, 이들 비정상적인 과다증식성 세포는 주변 조직 및 장기를 침윤하여 덩어리를 형성할 수 있으며, 침윤은 구조의 파괴 또는 변형을 야기할 수 있으며, 이러한 상태를 총칭하여 암이라고 한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체의 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 암은 자궁경부암, 폐암, 췌장암, 비소세포 폐암, 간암, 결장암, 결장직장암, 골암, 피부암, 두부암, 자궁경부암, 피부 흑색종, 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 간암, 뇌 종양, 방광암, 혈액암, 위암, 항문주위암, 유방암, 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 질암, 외음부 암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장암, 요관암, 신장 세포 암종, 신장 골반 암종, 중추 신경계 종양, 원발성 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌이다. 일부 실시양태에서, 암은 신경교종 및 뇌하수체 선종이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체에 의해 치료될 수 있는 갑상선암은 역형성 갑상선암이다. 미분화 갑상선암이라고도 불리는 역형성 갑상선암은 갑상선암 중에서 예후가 가장 나쁜 암이다. 폐 또는 뼈로의 원격 전이는 종종 처음부터 발견되며, 확인되면 병기 IV로 간주된다. 평균 생존 기간은 약 3 내지 6개월이며, 생존율은 0%에 가깝다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체로 치료될 수 있는 유방암은 삼중-음성 유방암이다. 삼중-음성 유방암은 에스트로겐 및 프로게스테론 수용체가 결여된 것으로 공지되어 있으며 (ER-/PR-), HER2 유전자가 발현되지 않는다. 따라서, TNBC는 에스트로겐 수용체 조정제 (타목시펜) 및 HER2 억제제 (트라스투주맙)에 저항성이 있다. 삼중-음성 유방암은 미국 전체 유방암 환자의 약 12-17%, 한국인 전체 유방암 환자의 약 15.9%를 차지한다. 삼중-음성 유방암 환자의 5년 생존율은 약 77%이며, 이는 다른 유형의 유방암을 갖는 환자의 약 93%보다 낮은 것으로 보고되어 있다. 이들 암 환자는 본원에 개시된 CXCL16 항체의 치료로부터 이익을 얻을 수 있다.
조합 요법
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체는 본 출원에서 조합제로도 지칭되는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CXCL16 항체는 하나 이상의 표적화 항암제와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적화 항암제는 치료용 항체, 예컨대 종양 세포 항원을 표적화하는 항체이다. 표적화 항암제의 비제한적인 예는 세툭시맙, 트라스투주맙, 이브리투모맙, 리툭시맙, 브렌툭시맙, 알렘투주맙, 이매티닙, 닐로티닙, 라도티닙, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 올무티닙, 오시머티닙, 세리티닙, 라파티닙, 룩소리티닙, 토파시티닙, 베무라티닙, 수니티닙, 액시티닙, 반데타닙, 다사티닙, 크리조티닙, 조파닙, 레고라페닙, 베바시주맙, 파클리탁셀, 젬시타빈, 도세탁셀, 액시티닙, 닌테다닙 및 렌바티닙을 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 억제제, PD-L1 억제제 및 CTLA-4 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되지만 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 조합제는 PD-L1 억제제이다. PD-L1 억제제의 비제한적인 예는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두발루맙, 엔바폴리맙, 코시벨리맙, AUNP12, CA-170, BMS-986189, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙, 스파탈리주맙, 캄렐리주맙, 신틸리맙을 포함하며, 티슬렐리주맙, 토리팔리맙, 도스타리맙, INCMGA00012, AMP-224 및 AMP-514로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
일부 실시양태에서, 조합제는 CTLA-4 억제제이다. CTLA-4 억제제의 비제한적인 예는 이필리무맙 및 트레멜리무맙을 포함한다.
일부 실시양태에서, CXCL16 항체 및 조합제는 동시에, 별도로 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, CXCL16 항체는 숙시네이트 대사를 억제한다.
일부 실시양태에서, 표적화 항암제는 경구로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 주사에 의해 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, CXCL16 항체 및 조합제는 각각 단일 투여 형태 또는 단일 용량으로 제공될 수 있다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 종양의 크기를 감소시키거나 종양 전이를 억제하기 위한 것일 수 있다.
본원에 개시된 제약 조성물은 또한 제약상 허용되는 염을 포함할 수 있다. 본원에서 용어 "제약상 허용되는 염"은 제약상 허용되는 무기산, 유기산 또는 염기로부터 유래된 염을 포함한다.
적합한 산의 예는 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-술폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄술폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 글루콘산, 나프탈렌-2-술폰산, 벤젠술폰산 등을 포함한다. 산부가염은 통상적인 방법에 의해, 예를 들어 과량의 산 수용액에 화합물을 용해시키고 수혼화성 유기 용매, 예컨대 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 염을 침전시킴으로써 제조될 수 있다. 또한, 이는 동몰량의 화합물 및 산 또는 알콜을 물에 가열한 후 혼합물을 증발 건조시킴으로써, 또는 침전된 염의 흡인 여과에 의해 제조될 수 있다.
적합한 염기로부터 유래된 염은 알칼리 금속, 예컨대 나트륨 및 칼륨, 알칼리 토금속, 예컨대 마그네슘, 및 암모늄을 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들어 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액에 화합물을 용해시키고, 용해되지 않은 화합물 염을 여과한 후, 여액을 증발시키고 건조시킴으로써 수득될 수 있다. 이 경우, 금속 염으로서 나트륨, 칼륨 또는 칼슘 염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적합한 은염 (예를 들어, 질산은)과 반응시킴으로써 상응하는 은염을 수득할 수 있다.
CXCL16 항체 및/또는 하나 이상의 조합제 (예를 들어, 표적화 항암제, 면역 체크포인트 억제제)는 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라 제약 조성물에서 적절하게, 예를 들어 조성물의 총 중량에 대해 0.0001 내지 0.0001로 조정될 수 있다. 이는 99.9 중량%, 또는 0.001 내지 50 중량%일 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 함량 비율은 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한다.
본 발명의 제약 조성물은 질환의 정도 및/또는 목적에 따라 활성 성분의 함량을 달리할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1회 투여시 유효 용량은 0.01 μg 내지 10000 mg, 바람직하게는 0.1 μg 내지 1000 mg이다. 이는 하루에 여러 번 반복해서 투여될 수 있다. 그러나, 제약 조성물의 투여량은 다양한 인자, 예컨대 제형화 방법, 투여 경로 및 치료 횟수, 뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설 속도 등을 고려하여 결정되며 환자에게 효과적인 투여량이 결정된다. 따라서, 이러한 점을 고려하면, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 조성물의 적절하고 효과적인 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 제약 조성물은 본 발명의효과를 나타내는 한 그의 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 있어서 특별히 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 제약 조성물은 제약 조성물의 제조에 일반적으로 사용되는 적합한 담체, 부형제 및 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 부형제는 예를 들어 희석제, 결합제, 붕해제, 윤활제, 흡착제, 습윤제, 필름-코팅재 및 제어-방출 첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나일 수 있다.
본 발명에 따른 제약 조성물은 각각 산제, 과립제, 지속-방출 과립제, 장용성 과립제, 액제, 점안제, 엘릭서제, 에멀젼, 현탁액, 주정제, 트로키제, 향료 및 리모네이드, 정제, 지속 방출 정제, 장용성 정제, 설하정, 경질 캡슐, 연질 캡슐, 지속 방출 캡슐, 장용성 캡슐, 환제, 팅크제, 연질 추출물, 건조 추출물, 유체 추출물, 주사제, 캡슐, 관류제, 고약, 로션, 페이스트, 스프레이, 흡입제, 패치, 멸균 주사 용액, 또는 외용제, 예컨대 에어로졸로 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있으며, 제형화되고 사용될 수 있다. 외용제는 크림, 겔, 패치, 스프레이, 연고, 경고제, 로션, 리니먼트, 페이스트 또는 카타플라스마일 수 있다.
본 발명에 따른 제약 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 올리고사카라이드, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 전분, 아카시아검, 알기네이트, 젤라틴, 인산칼슘, 규산칼슘, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산마그네슘 및 미네랄 오일을 포함한다.
제형의 경우, 일반적으로 사용되는 희석제 또는 부형제, 예컨대 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 및 계면활성제를 사용하여 제조된다.
본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제 및 트로키제를 위한 첨가제로서, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 프룩토스, 디-만니톨, 침전 탄산칼슘, 합성 규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제된 라놀린, 미세결정질 셀룰로스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 카올린, 우레아, 콜로이드성 실리카 겔, 히드록시프로필 전분, 히드록시프로필메틸 부형제, 예컨대 셀룰로스 (HPMC), HPMC 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌 글리콜, 카세인, 락트산칼슘 및 프리모겔(Primogel); 젤라틴, 아라비아검, 에탄올, 한천 분말, 셀룰로스 프탈레이트 아세테이트, 카르복시메틸셀룰로스, 칼슘 카르복시메틸셀룰로스, 글루코스, 정제수, 카세인나트륨, 글리세린, 스테아르산, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 나트륨 메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 덱스트린, 히드록시셀룰로스, 히드록시프로필 전분, 히드록시메틸셀룰로스, 정제된 쉘락, 전분 분말, 히드록시프로필셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐피롤리돈 등, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 옥수수 전분, 한천 분말, 메틸셀룰로스, 벤토나이트, 히드록시프로필 전분, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 알긴산나트륨, 칼슘 카르복시메틸셀룰로스, 시트르산칼슘, 나트륨 라우릴 술페이트, 규산 무수물, 1-히드록시 프로필셀룰로스, 덱스트란, 이온 교환 수지, 폴리비닐 아세테이트, 포름알데히드 처리된 카세인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로스, 구아검, 중탄산나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화된 전분, 아라비아검, 붕해제, 예컨대 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에틸 셀룰로스, 수크로스, 규산알루미늄마그네슘, 디-소르비톨 용액, 경질 무수 규산; 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 수소화된 식물성 오일, 활석, 라임스톤, 카올린, 페트롤라툼, 스테아르산나트륨, 카카오 버터, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에틸렌 글리콜 4000, 6000, 액체 파라핀, 수소화된 대두유 (루브리 왁스), 스테아르산알루미늄, 스테아르산아연, 나트륨 라우릴 술페이트, 산화마그네슘, 마크로골 (마크로골(Macrogol)), 합성 규산알루미늄, 규산 무수물, 고급 지방산, 고급 알콜, 실리콘 오일, 파라핀 오일, 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에테르, 전분, 염화나트륨, 아세트산나트륨, 올레산나트륨, dl-류신, 경질 규산 무수물 등 윤활제가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 액체 제형을 위한 첨가제로서, 물, 희석 염산, 희석 황산, 시트르산나트륨, 모노스테아레이트 수크로스, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 지방산 에스테르 (트윈에스테르), 폴리옥시에틸렌 모노알킬 에테르, 라놀린 에테르, 라놀린 에스테르, 아세트산, 염산, 수성 암모니아, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤라민, 폴리비닐피롤리돈, 에틸 셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 시럽에서, 수크로스 용액, 기타 당류 또는 감미제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라, 향료, 착색제, 보존제, 안정화제, 현탁화제, 유화제, 증점제 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 에멀젼에서 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라, 유화제, 보존제, 안정화제, 향료 등이 사용될 수 있다.
현탁화제, 예컨대 아카시아, 트라가칸타, 메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메틸셀룰로스, HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910이 본 발명에 따른 현탁화제에서 사용될 수 있다. 필요에 따라, 계면활성제, 보존제, 안정화제, 착색제 및 향료가 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 주사제는 주사용 증류수, 0.9% 염화나트륨 주사, 링겔 주사, 덱스트로스 주사, 덱스트로스 + 염화나트륨 주사, PEG (PEG), 락테이트화 링겔 주사, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 비휘발성 오일-참기름, 용매, 예컨대 면실유, 땅콩유, 대두유, 옥수수유, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 및 벤젠 벤조에이트; 가용화 보조제, 예컨대 벤조산나트륨, 살리실산나트륨, 아세트산나트륨, 우레아, 우레탄, 모노에틸아세트아미드, 부타졸리딘, 프로필렌 글리콜, 트윈, 니정틴아미드, 헥사민 및 디메틸아세트아미드; 약산 및 이의 염 (아세트산 및 아세트산나트륨), 약염기 및 이의 염 (암모니아 및 아세트산암모늄), 유기 화합물, 단백질, 완충제, 예컨대 알부민, 펩톤, 검; 등장화제, 예컨대 염화나트륨; 안정화제, 예컨대 중아황산나트륨 (NaHSO3), 이산화탄소 가스, 메타중아황산나트륨 (Na2S2O5), 아황산나트륨 (Na2SO3), 질소 가스 (N2), 에틸렌디아민테트라아세트산; 황산화제, 예컨대 나트륨 바이술피드 0.1%, 나트륨 포름알데히드 술폭실레이트, 티오우레아, 이나트륨 에틸렌디아민테트라아세테이트, 아세톤 중아황산나트륨; 진통제, 예컨대 벤질 알콜, 클로로부탄올, 프로카인 히드로클로라이드, 글루코스 및 칼슘 글루코네이트; 현탁화제, 예컨대 SiMC 나트륨, 알긴산나트륨, 트윈(Tween) 80, 및 알루미늄 모노스테아레이트를 포함한다.
본 발명에 따른 좌제는 카카오 지방, 라놀린, 위텝솔(witepsol), 폴리에틸렌 글리콜, 글리세로젤라틴, 메틸 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 스테아르산 및 올레산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 땅콩유, 팜유, 카카오 버터 + 콜레스테롤, 레시틴, 라네트 왁스, 글리세롤 모노스테아레이트, 트윈 또는 스판(Span), 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(Monolene) (프로필렌 글리콜 모노스테아레이트), 글리세린, 아뎁스 솔리두스(Adeps Solidus), 부티룸 테고(Butyrum Tego) -G), 세베스 파마(Cebes Pharma) 16, 헥사라이드 베이스(Hexalide Base) 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테(Hydroxote) SP, S-70-XXA, S-70-XX75 (S-70-XX95), 히드로 히드록코테 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈(Idropostal), 마사 에스트라리움(Massa estrarium), A, AS, B, C, D, E, I, T, 마사(Massa)-MF, 마수폴(Masupol), 마수폴-15, 네오수포스탈(Neosupostal)-N, 파라마운드(Paramound)-B, 수포시로(Suposhiro) (OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제 IV 유형 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비(Wecobi) (W, R, S, M, Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57) 등을 포함한다.
경구 투여용 고체 제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하며, 이러한 제제는 추출물에 적어도 하나의 부형제, 예를 들어 전분, 탄산칼슘, 수크로스) 또는 락토스, 젤라틴 등을 포함한다. 단순 부형제 외에, 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘 활석이 또한 사용될 수 있다.
경구 투여용 액체 제형은 현탁액, 내용액제, 에멀젼, 시럽 등을 포함한다. 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 및 액체 파라핀 외에, 다양한 부형제, 예컨대 습윤제, 감미제, 향료 및 보존제가 포함될 수 있다. 비경구 투여용 제형은 멸균 수용액, 비수성 용액, 현탁액, 에멀젼, 동결-건조 제제, 및 좌제를 포함한다. 비수성 용매 및 현탁화제는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 예컨대 올리브유, 및 주사가능한 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다.
본 발명에 따른 제약 조성물은 제약적 유효량으로 투여된다. 본 발명에서, "제약적 유효량"은 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 이익/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 유형, 중증도, 약물 활성 및 유형; 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배설 속도, 치료 기간, 공동 약물을 포함하는 인자 및 의학 분야에 널리 공지된 기타 인자에 의해 결정된다. 예시적인 실시양태에서, CXCL16 항체는 복강내 주사를 통해 100 mcg/20g/일, 주 2회; 또는 정맥내 주사를 통해 50 mcg/20g/일, 주 3회 투여되고; PD-L1 펩티드는 복강내 주사를 통해 0.1 mg/20g/일, 주 5회 투여되고; 렌바티닙은 경구 투여를 통해 30 m/kg/일 투여되고; 파클리탁셀은 복강내 주사를 통해 10 mg/kg, 주 2회, 또는 복강내 주사를 통해 10 mg/kg/일, 주 1회 투여된다.
본 발명에 따른 제약 조성물은 개별 치료제로서 또는 다른 치료제와 조합하여 투여될 수 있고, 통상적인 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다.
제약 조성물 및 다른 치료제는 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 상기 모든 인자를 고려하여 최소한의 양으로 또는 부작용 없이 최대의 효과를 얻을 수 있는 양을 결정할 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 다양한 경로를 통해 개체에게 투여될 수 있다. 모든 투여 방식, 예를 들어 경구 투여, 피하 주사, 복강내 투여, 정맥내 주사, 근육내 주사, 척추주위 (척수강내) 주사, 설하 투여, 협측 투여, 직장 삽입, 내부 삽입에 따라 투여될 수 있는 질 투여, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등이 예상될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 다양한 관련 인자, 예컨대 치료될 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중증도와 함께 활성 성분인 약물의 유형에 따라 결정된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 활성 성분으로서 CXCL16 항체; 및 표적화 항암제 및 면역 체크포인트 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 조합제를 제공하며, 여기서 CXCL16 항체 및 조합제는 동시에, 별도로 또는 순차적으로 투여되고, 암을 예방 또는 치료하기 위한 제약 조합 제형을 제공한다.
본 발명의 제약 조합 제제의 구성성분인 CXCL16 항체, 표적화 항암제 및 면역 체크포인트 억제제는 그대로 또는 염의 형태로 사용될 수 있으며, 바람직하게는 제약상 허용되는 염의 형태로 사용될 수 있다.
본 발명의 제약 조합 제형은 투여 방법 및 투여 경로에 따라 CXCL16 항체를 구성성분으로서 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적화 항암제 및 면역 체크포인트 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 조합제는 또한 CXCL16 항체와 함께 하나의 제형에 동시에 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조합제 및 CXCL16 항체는 1일 또는 1일 1회 투여량 단위에 따라 개별적으로 제형화되고 하나의 패키지에 함유될 수 있다. 본원에 개시된 제약 조합물의 구체적인 제형화 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있거나 명백할 것이며, 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995)]에 기재되어 있다. 본 발명에 따른 제약 조합 제형의 구성성분인 CXCL16 항체, 및 표적화 항암제 및 면역 체크포인트 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 조합제는 동시에 또는 별도로 투여되거나, 미리 결정된 순서에 따라 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "동시 투여"는 CXCL16 항체 및 조합물이 함께 또는 실질적으로 동시에 (예를 들어, 투여 간격이 15분 이하) 복용되어, 경구 투여의 경우 2개 구성성분이 위장에 동시에 존재함을 의미한다. 공동으로 투여될 때, 조합물은 하나의 제형에 동시에 포함되도록 제형화될 수 있다. 경구 투여의 경우, 바람직하게는 일일 용량이 모두 단일 용량으로 포함되도록 제형화될 수 있지만; 또한 분할 용량으로, 예컨대 1일 2, 3, 4회 투여되도록 제형화될 수 있다.
예시적인 실시양태
실시양태 1. CXCL16 항체를 활성 성분으로서 포함하는, 암을 예방 또는 치료하기 위한 제약 조성물.
실시양태 2. 실시양태 1의 제약 조성물 및 화학요법제, 표적화 항암제 및 면역 체크포인트 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 조합제를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 예방 또는 치료하는 방법.
실시양태 3: 실시양태(들) 2에 있어서, 표적화 항암제가 세툭시맙, 트라스투주맙, 이브리투모맙, 리툭시맙, 브렌툭시맙, 알렘투주맙, 이매티닙, 닐로티닙, 라도티닙, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 올무티닙, 오시머티닙, 세리티닙, 라파티닙, 룩소리티닙, 토파시티닙, 베무라티닙, 수니티닙, 액시티닙, 반데타닙, 다사티닙, 크리조티닙, 파조파닙, 레고라페닙, 베바시주맙, 파클리탁셀, 젬시타빈, 도세탁셀, 액시티닙, 닌테다닙 및 렌바티닙인 방법 (적어도 하나가 로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약 조성물).
실시양태 4: 실시양태(들) 2에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 PD-1 억제제, PD-L1 억제제 및 CTLA-4 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나인 방법.
실시양태 5: 실시양태(들) 4에 있어서, PD-L1 억제제가 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두발루맙, 엔바폴리맙, 코시벨리맙, AUNP12, CA-170 또는 BMS-986189 중 하나인 방법.
실시양태 6: 실시양태(들) 4에 있어서, PD-1 억제제가 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙, 스파탈리주맙, 캄렐리주맙, 신틸리맙, 티스렐리주맙 (티슬렐리주맙), 토리팔리맙, 도스타리맙, INCMGA00012, AMP-224 또는 AMP-514인 방법.
실시양태 7: 실시양태(들) 4에 있어서, CTLA-4 억제제가 이필리무맙 또는 트레멜리무맙인 방법.
실시양태 8: 실시양태(들) 2에 있어서, CXCL16 항체 및 조합제가 동시에, 별도로 또는 순차적으로 투여되는 것인 방법.
실시양태 9: 실시양태(들) 2에 있어서, CXCL16 항체가 숙시네이트 대사를 억제하는 것을 특징으로 하는 방법 (제약 조성물).
실시양태 10: 실시양태(들) 2에 있어서, 암이 자궁경부암, 폐암, 췌장암, 비소세포 폐암, 간암, 결장암, 결장직장암, 골암, 피부암, 두부암, 자궁경부암, 피부 흑색종, 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 간암, 뇌 종양, 방광암, 혈액암, 위암, 항문주위암, 유방암, 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 질암, 외음부 암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비 선암종, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장암, 요관암, 신장 세포 암종, 신장 골반 암종, CNS 중추 신경계 종양, 원발성 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종 및 뇌하수체 종양인 방법.
실시양태 11: 실시양태(들) 2에 있어서, 표적화 항암제가 경구로 투여되는 것인 방법.
실시양태 12: 실시양태(들) 2에 있어서, CXCL16 항체 및 조합제가 각각 단일 투여 형태 또는 단일 용량으로 제공되는 것인 방법.
실시양태 13: 실시양태(들) 1 또는 2에 있어서, 제약 조성물이 종양의 크기를 감소시키거나 종양 전이를 억제하는 것인 방법.
실시양태 14. CXCL16 항체 및 화학요법제, 표적화 항암제 및 면역 체크포인트 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 조합제를 활성 성분으로서 포함하는, 암을 예방 또는 치료하기 위한 제약 조합 제형으로서, 여기서 CXCL16 항체 및 조합제는 동시에, 별도로 또는 순차적으로 투여되는 것인 제약 조합 제형.
실시양태 15: CXCL16 항체를 활성 성분으로서 포함하는, 암 전이를 억제하기 위한 제약 조성물.
실시양태 16: 활성 성분으로서 암 전이를 억제하기 위한 CXCL16 항체, 및 화학요법제, 표적화 항암제 및 면역 체크포인트 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 조합제를 포함하는 제약 조성물.
실시양태 17: CXCL16 항체를 활성 성분으로서 포함하는, 암을 진단하기 위한 조성물.
실시양태 18: 실시양태(들) 17의 조성물을 포함하는, 암을 진단하기 위한 키트.
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이하, 본 발명의 이해를 돕기 위해 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위해 제공된 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
비공식 서열 목록:
서열식별번호: 1: HC1의 중쇄 가변 영역
Figure pct00009
서열식별번호: 2: HC2의 중쇄 가변 영역
Figure pct00010
서열식별번호: 3: HC3의 중쇄 가변 영역
Figure pct00011
서열식별번호: 4: HC4의 중쇄 가변 영역
Figure pct00012
서열식별번호: 5: HC5의 중쇄 가변 영역
Figure pct00013
서열식별번호: 6: LC1의 경쇄 가변 영역
Figure pct00014
서열식별번호: 7: LC2의 경쇄 가변 영역
Figure pct00015
서열식별번호: 8: LC3의 경쇄 가변 영역
Figure pct00016
서열식별번호: 9: LC4의 경쇄 가변 영역
Figure pct00017
서열식별번호: 10: LC5의 경쇄 가변 영역
Figure pct00018
서열식별번호: 11: 인간 CXCL16
Figure pct00019
서열식별번호: 12: HCDR1
Figure pct00020
서열식별번호: 13: HCDR2
Figure pct00021
서열식별번호: 14: HCDR3
Figure pct00022
서열식별번호: 15: LCDR1
Figure pct00023
서열식별번호: 16: LCDR2
Figure pct00024
서열식별번호: 17: LCDR3
Figure pct00025
서열식별번호: 18: 중쇄 신호 펩티드
Figure pct00026
서열식별번호: 19: 경쇄 신호 펩티드
Figure pct00027
서열식별번호: 20: CXCR6
Figure pct00028
서열식별번호: 21: HC-FR1
Figure pct00029
; 여기서 X1은 A 또는 Q 또는 E일 수 있고; X2는 L 또는 V일 수 있고; X3은 Q 또는 K일 수 있고; X4는 K 또는 G일 수 있고; X5는 E 또는 G일 수 있고; X6은 K 또는 R일 수 있고; X7은 I 또는 L일 수 있다.
서열식별번호: 22: HC-FR2
Figure pct00030
; 여기서 X1은 P 또는 S일 수 있고; X2는 A 또는 G일 수 있다.
서열식별번호: 23: HC-FR3
Figure pct00031
; 여기서 X1은 F 또는 I일 수 있고; X2는 D 또는 N일 수 있고; X3은 S, T 또는 N일 수 있고; X4는 M 또는 T일 수 있고; X5는 V, L 또는 A일 수 있고; X6은 D 또는 N일 수 있고; X7은 N, S 또는 I일 수 있고; X8은 K 또는 R일 수 있고; X9는 T 또는 A일 수 있고; X10은 M 또는 V일 수 있다.
서열식별번호: 24: HC-FR4
Figure pct00032
; 여기서 X1은 L 또는 T일 수 있다.
서열식별번호: 25: LC-FR1
Figure pct00033
; 여기서 X1은 V, Q일 수 있고; X2는 S, D일 수 있고; X3은 A, S일 수 있고; X4는 V, A일 수 있고; X5는 A, L, V일 수 있고; X6은 E, D일 수 있고; X7은 T, R일 수 있고; X8은 V, A일 수 있고; X9는 N, T일 수 있다.
서열식별번호: 26: LC-FR2
Figure pct00034
; X1은 S 또는 P일 수 있다.
서열식별번호: 27: LC-FR3
Figure pct00035
; X1은 D, S일 수 있고; X2는 I, S 또는 T일 수 있고; X3은 S 또는 A일 수 있고; X4는 V 또는 L일 수 있고; X5는 A, P일 수 있고; X6은 L, V 또는 F일 수 있고; X7은 I, V 또는 T일 수 있다.
서열식별번호: 28: LC-FR4
Figure pct00036
; 여기서 X1은 L 또는 V일 수 있고; X2는 L 또는 I일 수 있다.
서열식별번호: 29: 키메라 항체 CLS-A1HC0LC0 중쇄 서열
Figure pct00037
서열식별번호: 30: 키메라 항체 CLS-A1HC0LC0 경쇄 서열
Figure pct00038
서열식별번호: 31: 마우스 CXCL16 서열
Figure pct00039
서열식별번호: 32 키메라 항체의 중쇄 (HC0)의 아미노산 서열
Figure pct00040
서열식별번호: 33: 키메라 항체의 중쇄 (HC0)의 최적화된 코딩 서열 (크리세툴루스 그리세우스(Cricetulus griseus) (CHO)의 경우)
Figure pct00041
서열식별번호: 34: 키메라 항체의 경쇄 (LC0)의 아미노산 서열
Figure pct00042
서열식별번호: 35: 키메라 항체의 경쇄_LC (LC0)의 최적화된 코딩 서열 (크리세툴루스 그리세우스 (CHO)의 경우) 서열
Figure pct00043
서열식별번호: 36: 키메라 항체 HC0LC0 VH 도메인은 서열을 가졌다
Figure pct00044
(CDR 잔기는 밑줄로 표시됨).
서열식별번호: 37: 가장 가까운 인간 생식계열 유전자 V-영역은 호모 사피엔스 IGHV3-73*01이다
Figure pct00045
서열식별번호: 38: 중쇄 HC1
Figure pct00046
서열식별번호: 39: 중쇄 HC2
Figure pct00047
서열식별번호: 40: 중쇄 HC3
Figure pct00048
서열식별번호: 41: 중쇄 HC4
Figure pct00049
서열식별번호: 42: 중쇄 HC5
Figure pct00050
서열식별번호: 43: 경쇄 LC1
Figure pct00051
서열식별번호: 44: 경쇄 LC2
Figure pct00052
서열식별번호: 45: 경쇄 LC3
Figure pct00053
서열식별번호: 46: 경쇄 LC4
Figure pct00054
서열식별번호: 47: 경쇄 LC5
Figure pct00055
서열식별번호: 48: 인간 IgG1 이소타입 불변 도메인
Figure pct00056
서열식별번호: 49: 인간 IgK 이소타입 불변 도메인
Figure pct00057
실시예
실시예 1. CXCL16에 대한 인간 CXCL16의 결합
25개의 CXCL16 항체의 결합 특징을 생체광 간섭계 (포르테바이오)를 사용하여 분석하였다. 모든 항체를 신선하게 제조된 런닝 버퍼에 희석하였다. 항체를 0.3 μg/mL의 포획 방법을 사용하여 일련의 바이오센서 표면에 고정화하였다. 재조합 인간 CXCL16 (rhCXCL16) 단백질 (100 nM)을 표면 위로 통과시켜 10분 동안 결합 반응을 생성하였다. 항체 및 항원 상호작용에 대한 결합 데이터를 바이오센서에서 25℃에서 수집하였다. 그 후, 런닝 버퍼를 10분 동안 통과시켜 해리시켰다. 회합 상수 (ka) 및 해리 상수 (kd)를 관찰하고, 평형 결합 상수 (KD)를 계산하였다. 만들어진 25개의 항체 중 5개의 항체가 유의한 결합 친화성 (KD <1x10-8 M)을 나타내었다. R2 : 적합성 및 실험 데이터가 얼마나 상관관계가 있는지를 나타내는 값; X2 : 실험 데이터와 적합선 간의 오차 측정값.
선택된 6개의 CXCL16 항체의 결합 친화성을 추가로 특징화하기 위해, 단백질-기반 ELISA를 수행하였다. 재조합 인간 CXCL16 항원 (976-CX, 알앤디 시스템스(R&D Systems), USA)을 96-웰 플레이트에 고정화하고, 2시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 4℃에서 밤새 PBS 중 1% BSA와 함께 인큐베이션함으로써 비특이적 결합 부위를 차단하였다. 그 후, 플레이트를 PBS로 세척하였다. 다양한 농도 (0.001 ~ 10 nM)의 인간화 CXCL16 항체를 고정화된 항원과 함께 2시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 플레이트를 세척하고, HRP-표지된 항-인간 IgG 항체 (W4031, 프로메가(Promega), USA)와 함께 0.5시간 동안 인큐베이션하고, 기질 용액 (DY008B, 알앤디 시스템스)을 사용하여 현상하였다. 결과는 도 1a에 나타내었으며, 이는 인간화 항체인 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5의 결합 친화성이 대조군 IgG 항체보다 유의하게 더 높았음을 나타낸다.
마우스 CXCL16 항원과의 교차-반응성을 평가하기 위해, 재조합 마우스 CXCL16 항원 (503-CX, 알앤디 시스템스)을 사용하여 동일한 ELISA 실험을 수행하였다. 마우스 CXCL16 항원을 2시간 동안 실온에서 인큐베이션에 의해 96-웰 플레이트에 고정화하였다. 4℃에서 밤새 PBS 중 1% BSA와 함께 인큐베이션함으로써 비특이적 결합 부위를 차단하였다. 코팅 후, 플레이트를 PBS로 세척하였다. 다양한 농도 (0.00 1~ 10 nM)의 인간화 CXCL16 항체를 고정화된 항원과 함께 2시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 결합 후, 플레이트를 세척하고, HRP-표지된 항-인간 IgG 항체 (W4031, 프로메가, USA)와 함께 0.5시간 동안 인큐베이션하고, 기질 용액 (DY008B, 알앤디 시스템스)을 사용하여 현상시켰다. 결과는 도 1b에 나타내었다. 인간화 항체의 결합 친화성은 IgG 항체와 유사하였다. 결과는 인간화 CXCL16 항체가 인간 CXCL16에 특이적으로 결합한다는 것을 나타낸다. 표 6을 참조한다.
<표 6>
인간화 CXCL16 항체 및 CXCL16 항원 (포르테바이오)의 결합 분석.
Figure pct00058
참고: HC0LC0은 인간 CXCL16에 결합하는 키메라 항체이며; 실시예 7의 관련 개시내용을 참조한다. ND는 신호가 검출가능하지 않았음을 지칭한다. "Res@3.7 nM"은 3.7 nM에서의 분해능을 의미한다.
실시예 2 기능적 검정
a. 암 세포 주화성 및 이동의 억제
CXCR6은 케모카인 CXCL16에 대한 수용체이고, CXCR6을 보유하는 세포는 CXCL16에 반응하여 이동한다. 따라서, CXCL16 및 CXCR6 상호작용에 의해 유도된 세포 이동을 억제하는 CXCL16 항체의 활성을 평가하기 위해, 트랜스웰 이동 검정을 수행하였다. 8 μm의 기공 크기를 갖는 폴리카르보네이트 막 (코닝(Corning), 미국 뉴욕주)을 젤라틴으로 미리 코팅하고, 막을 24-웰 플레이트에 배치하였다. 막은 각 웰을 상부 챔버 및 하부 챔버로 분리하였다. 상부 챔버를 CXCR6-과발현된 CHO-K1 세포로 플레이팅하였다. 하부 챔버를 100 ng/mL rhCXCL16을 함유하는 배지로 충전하였다. 4-5시간 후, 하부 챔버를 1% 크리스탈 바이올렛 용액으로 염색하고, 하부 챔버의 이동된 세포의 수를 계수하였다. 결과는 인간화 CXCL16 항체 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5가 CXCR6-과발현된 CHO-K1 세포가 상부 챔버로부터 하부 챔버로 이동하는 것을 억제하였음을 보여준다. 결과는 rhCXCL16의 처리가 CXCR6-과발현된 CHO-K1 세포의 하부 챔버로의 세포 이동을 증가시킨 반면, 인간화 CXCL16 항체의 처리가 이동을 감소시켰음을 보여준다. 도 2a를 참조한다.
CXCL16의 차단이 암 세포 이동의 억제를 유발할 수 있는지 평가하기 위해, 트랜스웰 이동 검정을 수행하였다. 검정을 위해, 8 μm 기공-크기 폴리카르보네이트 막 (코닝, 미국 뉴욕주)을 사용하였다. 8 μm의 기공 크기를 갖는 폴리카르보네이트 막 (코닝, 미국 뉴욕주)을 젤라틴으로 미리 코팅하고, 24-웰 플레이트에 배치하였다. 막은 각 웰을 상부 챔버 및 하부 챔버로 분리하였다. CXCL16 항체 (10 - 100 μg/mL)를 상부 및 하부 챔버에서 0.5시간 동안 사전 인큐베이션하였다. 상부 및 하부 챔버를 각각 갑상선암 세포 BHP10-3M (1 x 105/100 μL) 및 공동-배양 조건화된 배지 (0.5X co-CM)로 플레이팅하였다.
co-CM은 BHP10-3M 및 THP-1 세포의 공동-배양으로부터 수득된 조건화된 배지이다. BHP10-3M 세포를 10 ml의 RPMI1640 배지에 3 x 106개 세포를 갖는 100 mm 배양 접시에 시딩하였다. 24시간 인큐베이션 후, THP-1 세포를 6 x 106개 세포로 추가적으로 시딩하였다. 그 후, 10 μL의 5 mM PMA 스톡 용액 (V1171, 프로메가)을 10 mL의 RPMI 배지에 첨가하여 5 μM PMA를 만들었다. 이는 대식세포 분화를 유도하였다. 24시간 인큐베이션 후, 갑상선암 세포 및 대식세포의 공동-배양으로부터 수득된 조건화된 배지 (co-CM)를 수집하였고, 이는 CXCL16이 풍부하였다. 상부 챔버에서 갑상선암 세포 및 하부 챔버에서 co-CM의 6시간 인큐베이션 후, 하부 챔버를 1% 크리스탈 바이올렛 용액으로 염색하고, 이동된 세포의 수를 계수하였다. co-CM은 BHP10-3M 세포의 하부 챔버로의 세포 이동을 증가시켰고, 인간화 CXCL16 항체 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5는 이동을 감소시켰다. 도 2b를 참조한다.
CXCL16의 차단이 암 세포 이동의 억제를 유발할 수 있는지 평가하기 위해, 트랜스웰 이동 검정을 수행하였다. 검정을 위해, 8 μm 기공-크기 폴리카르보네이트 막 (코닝, 미국 뉴욕주)을 사용하였다. 막을 젤라틴으로 미리 코팅하고, 삽입물을 24-웰 플레이트에 배치하였다. CXCL16 항체 (10 - 100 μg/mL)를 상부 및 하부 챔버에서 30분 동안 사전 인큐베이션하였다. 상부 및 하부 챔버를 각각 유방암 세포 MDA-MB-231 (1 x 105/100 μL) 및 공동-배양 조건화된 배지 (0.5X co-CM)로 플레이팅하였다.
co-CM은 MDA-MB-231 및 THP-1 세포의 공동-배양으로부터 수득된 조건화된 배지이다. BHP10-3M 세포를 10 ml의 RPMI1640 배지에 3 x 106개 세포를 갖는 100 mm 배양 접시에 시딩하였다. 24시간 인큐베이션 후, THP-1 세포를 6 x 106개 세포로 추가적으로 시딩하였다. 그 후, 10 μL의 5 mM PMA 스톡 용액 (V1171, 프로메가)을 10 mL의 RPMI 배지에 첨가하여 5 μM PMA를 만들었다. 이는 대식세포 분화를 유도하였다. 24시간 인큐베이션 후, 갑상선암 세포 및 대식세포의 공동-배양으로부터 수득된 조건화된 배지 (co-CM)를 수집하였고, 이는 CXCL16이 풍부하였다. 상부 챔버에서 유방암 세포 및 하부 챔버에서 co-CM의 6시간 인큐베이션 후, 하부 챔버를 1% 크리스탈 바이올렛 용액으로 염색하고, 이동된 세포의 수를 계수하였다. co-CM은 MDA-MB-231 세포의 하부 챔버로의 세포 이동을 증가시켰고, 인간화 CXCL16 항체는 이를 감소시켰다. 도 2c를 참조한다.
CXCL16의 차단이 단핵구/대식세포 이동의 억제를 유발할 수 있는지 평가하기 위해, 트랜스웰 이동 검정을 수행하였다. 검정을 위해, 5 μm 기공-크기 폴리카르보네이트 막 (코닝, 미국 뉴욕주)을 사용하였다. 막을 젤라틴으로 미리 코팅하고, 삽입물을 24-웰 플레이트에 배치하였다. 인간화 CXCL16 항체 (10 - 100 μg/mL)를 상부 및 하부 챔버에서 30분 동안 사전 인큐베이션하였다. 상부 및 하부 챔버를 단핵구 세포 THP-1 및 공동-배양 조건화된 배지로 플레이팅하였다. 4시간 후, 하부 챔버를 1% 크리스탈 바이올렛 용액으로 염색하고, 이동된 세포의 수를 계수하였다. co-CM은 THP-1 세포의 하부 챔버로의 세포 이동을 증가시켰고, 인간화 CXCL16 항체는 이를 감소시켰다. 결과는 인간화 CXCL16 항체가 CXCL16 및 CXCR6 상호작용에 의해 유도된 세포 이동을 억제한다는 것을 시사하였다. 인간화 CXCL16 항체는 갑상선암 및 유방암 세포를 포함한 암 세포 이동을 억제한다. 인간화 CXCL16 항체에 의한 암 세포 이동의 억제는 항암 효과를 나타내었다. 도 2d를 참조한다.
b. 세포내 Akt 신호전달 경로의 활성화, 및 CXCL16-Akt 신호전달은 세포 이동을 매개한다
CXCL16-CXCR6 상호작용은 세포내 Akt 신호전달 경로를 활성화시키며, 이는 세포 이동을 촉진한다. 본 실험은 CXCL16-CXCR6 상호작용에 의해 유도된 Akt 신호전달을 차단하는 CXCL16 항체의 능력을 평가하기 위해 설계되었다. 암 세포를 10 μg/mL의 인간화 CXCL16 항체 (HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 또는 HC5LC5) 또는 대조군 항체 (MAB976, 알앤디 시스템스, 미국 미네소타주 미니애폴리스)의 존재 하에 30분 동안 100 ng/mL의 rhCXCL16 (976-CX, 알앤디 시스템스)으로 처리하였다. 세포 용해물을 수확하였다. 항-pAkt (희석 비율 1:1000, #9102; 세포 신호전달), 항-Akt (희석 비율 1:1000, #4370; 세포 신호전달), 및 항-β 액틴 항체 (희석 비율 1:10,000, STJ91464, 세인트 존스 래보러토리(St John's laboratory), UK)를 사용하였다. 결과는 rhCXCL16이 갑상선암 (도 3b), 유방암 (도 3c) 및 전립선암 세포 (도 3d)를 포함한 다양한 암 세포에서 Akt 인산화를 활성화시키는 반면, CXCL16 항체인 HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5가 Akt 인산화를 폐지한다는 것을 보여준다.
c. 골 전이의 시험관내 모델에서 세포 이동의 억제
뼈의 전이성 니치와 유사하도록 2-챔버 시스템을 설정하였다. 하부 챔버는 CXCL16 풍부화된 암 세포/전체 골수 세포 공동-배양 (co-CM이라고 함)의 조건화된 배지 (CM)를 함유한다. 암 세포 배양 단독으로부터의 CM은 단일-CM으로 지칭되는 대조군을 위해 사용된다. 단일-CM은 무시가능한 농도의 CXCL16을 함유한다. 전이성 챔버로 동원될 수 있는 세포를 보유하는 상부 챔버 (삽입물 사용). 인간 CD11b+ 골수 골수성 세포를 CXCL16 항체로 1시간 동안 처리하고, 처리된 세포를 상부 챔버에 첨가하였다. 4시간 후, 삽입물 (일명, 상부 챔버)을 수확하고, 삽입물 내 세포를 염색하고, 전이성 니치로의 세포 동원을 억제하는 CXCL16 항체의 능력을 평가하였다. 도 8a 및 8b에 나타낸 바와 같이, co-CM (고농도의 sCXCL16)은 단일-CM 그룹에 비해 향상된 세포 이동 잠재성을 보여주었다.
d. 이방성 이종이식편 모델에서 단독으로 또는 파클리탁셀 (PTX)과 조합하여 종양 성장의 억제
본 실시예는 인간화 CXCL16이 이방성 이종이식편 모델에서 단독으로 또는 파클리탁셀 (PTX)과 조합하여 종양 성장을 억제한다는 것을 보여준다. 유방암 마우스 모델을 생성하기 위해, 삼중 음성 유방암 세포주 MDA-MB-231 (6.5x105개 세포)을 T 세포가 결여된 BALB/c 누드 마우스의 등에 이식하였다. 세포 이식 후 5일차부터 항암 약물을 각 실험군에 투여하였다. "IgG 대조군" 그룹은 IgG 항체를 받았다. IgG 항체 (MAB006, 알앤디 시스템스)를 주 3회 50 mcg/20g/일로 정맥내로 투여하였다. "PTX" 그룹은 파클리탁셀을 받았다. 파클리탁셀 (S1150, 셀렉캠(Selleckchem))을 주 1회 10 mg/kg/마우스로 복강내로 투여하였다. "항-CXCL16" 그룹은 항-CXCL16 항체를 받았다. 항-마우스 CXCL16 항체 (MAB503, 알앤디 시스템스, 미국 미네소타주 미니애폴리스)를 주 3회 50 mcg/20g/일로 정맥내로 투여하였다. "PTX+항-CXCL16" 그룹은 파클리탁셀 및 항-CXCL16 항체를 모두 받았다. 종양 크기를 7, 11, 13, 15, 18 및 20일차에 측정하였다. 캘리퍼로 종양 크기를 측정하고, 하기 방정식을 사용하여 종양 부피를 계산하였다: 부피 = ½ × a × b2, 여기서 a = 긴 종양 직경 및 b = 짧은 종양 직경. 20일차에 마우스를 희생시키고, 종양을 제거하고, 종양 중량을 측정하였다. 결과는 마우스 CXCL16 항체가 마우스 종양 모델에서 종양 부피 및 중량을 유의하게 감소시켰음을 보여준다. CXCL16 그룹의 종양 부피 및 중량의 감소는 PTX 그룹과 비교가능하였다. 이는 인간화 CXCL16 항체가 종양 성장을 억제하고 생체내에서 항암 효과를 가질 수 있음을 시사한다. 도 4a 및 도 4b를 참조한다.
실시예 3. 갑상선암 마우스 모델에 대한 표적화 항암제와의 조합 효과
2x106개 세포의 역형성 갑상선암 세포주 FRO을 T 세포가 결여된 nu/nu 마우스의 등에 주사하고, 종양이 형성된 5일차부터 항암 약물을 각 실험군에 투여하였다. 대조군은 항암 약물을 받지 않았고, 실험군 1에 항-VEGF 표적화 항암 약물인 렌바티닙 (렌비마®)을 주 5회 30 mg/kg/일로 경구로 투여하고, 실험군 2에 렌바티닙을 투여하고, 항-CXCL16 치료용 항체를 주 2회 100 mcg/20g/일로 복강내로 투여하였다. 캘리퍼로 종양 크기를 측정하고, 하기 방정식을 사용하여 종양 부피를 계산하였다: 부피 = ½ × a × b2, 여기서 a = 긴 종양 직경 및 b = 짧은 종양 직경.
도 5에 나타낸 바와 같이, 렌바티닙의 치료 효과가 유지된 I상 (22일차까지)에서, 실험군 1 및 실험군 2의 종양 성장 속도는 유사하였다. 그런데도, 렌바티닙의 치료 효과는 낮아져 속도는 대조군과 동일하였다. 종양이 다시 성장하기 시작하는 기간인 2상 (22일 후)에서, 실험군 1과 비교하여 CXCL16 치료용 항체 (항-CXCL16)를 투여받은 그룹인 실험군 2에서 종양의 성장 속도가 유의하게 감소되었으며, 이는 조합 치료의 상승작용적 효과를 나타낸다.
실시예 4. 갑상선암 마우스 모델에 대한 표적화 항암제 및/또는 PD-L1 억제제와의 조합 효과
5x106개 세포의 역형성 갑상선암 세포주 TBP3743을 C57Bl/6 마우스의 등에 주사하고, 종양이 형성된 5일차부터 항암 약물을 각 실험군에 투여하였다. 대조군에는 항암 약물을 투여하지 않았다. 실험군 1에는 표적화 항암 약물 렌바티닙을 주 5회 30 mg/kg으로 경구로 투여하고, 실험군 2에는 렌바티닙 경구 투여 및 항-마우스 CXCL16 항체를 주 2회 100 mcg/20g/일로 주사하고, 실험군 3에는 렌바티닙을 투여하였다. 렌바티닙의 경구 투여 및 펩티드 PD-L1 억제제의 주사 (KR-20190072466-A에 기재된 바와 같음, 그 전체 개시내용은 본원에 참조로 포함됨)를 주 5회 수행하고, 실험군 4에서는 렌바티닙의 경구 투여, 주 5회 PD-L1 억제제 (펩티드)의 주사, 및 주 2회 항-CXCL16 치료용 항체의 주사를 함께 사용하였다.
실험 15일차부터, 렌바티닙 단독 (실험군 1), 렌바티닙 + 항-CXCL16 치료용 항체 (실험군 2), 또는 렌바티닙 + PD-L1 억제제 (실험군 3)와 비교하여, 치료 효과가 조합 투여 그룹에서 더 좋았다. 실험 19일차에, 렌바티닙 + PD-L1 억제제 + 항-CXCL16 치료용 항체의 3-작용제 요법 그룹 (실험군 4)이 가장 좋은 치료 효과를 나타낸 것으로 확인되었다. 도 6을 참조한다.
실시예 5. 유방암 마우스 모델에 대한 표적화 항암제 및/또는 PD-L1 억제제와의 조합 효과
유방암 세포주인 4T1 2x106개 조각을 C3H 마우스의 등에 주사하고, 종양이 형성된 5일차부터 항암 약물을 각 실험군에 투여하였다. 대조군에는 항암제를 투여하지 않았으며, 실험군에는 표적화 항암 약물 파클리탁셀 (탁솔)을 주 2회 10 mg/kg/일로 복강내로 투여하였고, 실험군 2에는 파클리탁셀 투여 및 항-CXCL16 치료용 항체를 주 2회 100 mcg/20g/일로 복강내로 투여하였고, 실험군 3에는 파클리탁셀을 주사하고 PD-L1 억제제 (펩티드)를 주 5회 0.1 mg/20g/일로 복강내로 투여하였고, 실험군 4에는 파클리탁셀을 주사하고 PD-L1 억제제 (펩티드)를 주 5회 주사하고 항-CXCL16 치료용 항체를 주 2회 주사하였다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 실험군 1 (탁솔 단독) 및 실험군 2 및 3 (2-약물 요법)은 뚜렷한 치료 효과를 갖지 않았으나, 실험의 17일차 및 19일차에는 파클리탁셀 + PD-L1 억제제 + 항-CXCL16 치료용 항체 (실험군 4)는 3-약물 요법에서 가장 좋은 치료 효과를 나타내었다.
그러므로, CXCL16 항체는 표적화 항암제 및/또는 PD-L1 억제제와 조합될 때 상승작용적 효과를 나타낼 것이다. 따라서, 암을 예방 또는 치료하기 위해 본 발명의 CXCL16 항체, 표적화 항암제 및/또는 면역 체크포인트 억제제가 조합하여 사용될 수 있을 것으로 예상된다.
실시예 6. CXCL16 항체는 마우스 모델에서 골 전이를 억제할 수 있다
1. 졸렌드론산 (ZA)-저항성 골 전이의 골수 혈청 중 더 높은 CXCL16 농도
역형성 갑상선암 세포주 FRO (2x105개 세포/10 μL PBS)를 6주령 암컷 BALB/c 누드 마우스의 오른쪽 경골에 이식하였다. 마우스를 대조군 및 졸레드론산 (ZA)-처리군으로 나누었다. 졸레드론산은 골 전이 치료에 효과적인 것으로 공지된 작용제이다. ZA-처리군에서는 졸렌드론산 (ZA)을 3일차부터 주 1회 4 μg/마우스로 정맥내로 주사하였다. 생물발광 이미지화 (BLI)를 매주 평가하였다. 세포 이식 후 4-5주에 BLI를 관찰할 때, ZA에 대한 치료 반응은 다양하다. ZA-처리된 마우스 16마리 중 7마리에서 골 종양이 관찰되었다. 골 종양을 갖지 않는 9마리의 마우스는 "ZA 비저항성 (ZA_비R)" 그룹으로서 정의되고, 골 종양을 갖는 7마리의 마우스는 "ZA-저항성 (ZA-R)" 그룹으로 지정되었다. ZA_비R 그룹은 7주차까지 경골 뼈에서 무시가능한 BLI 신호를 나타낸 반면, ZA-R은 4-5주부터 7주까지 종양 성장을 나타내었다.
ZA-R의 초기 단계인 세포 이식 5주 후, 마우스를 희생시켰다. 골수 혈청을 수확하고, ELISA를 사용하여 CXCL16 농도를 측정하였다. 결과는 ZA_R의 CXCL16 농도가 ZA_비R 그룹 및 대조군보다 유의하게 더 높았음을 보여준다. ZA_비R의 CXCL16 농도는 대조군보다 낮았다. 도 9b-9c를 참조한다. 결과는 골 전이에서 ZA-저항성이 높은 CXCL16 농도와 연관됨을 나타낸다.
2. 항-CXCL16 항체는 골 전이의 종양 성장을 감소시켰다
역형성 갑상선암 세포주 FRO (2x105개 세포/10 μL PBS)을 6주령 암컷 BALB/c 누드 마우스의 오른쪽 경골에 이식하였다. 3일차에, 마우스를 대조군, CXCL16 항체 (aCXCL16) 그룹 및 졸레드론산 (ZA) 그룹으로 나누었다. CXCL16 그룹에서는 항-CXCL16 항체 (인간 CXCL16 단백질에 대한 래트 IgG 및 서열식별번호: 12-17의 CDR을 갖는 래트 IgG)를 주 1회 25 μg/마우스로 복강내로 주사하였다. ZA-처리군에서는 졸렌드론산 (ZA)을 주 1회 4 μg/마우스로 정맥내로 주사하였다. 생물발광 이미지화 (BLI)를 매주 평가하였다. 도 10b 및 10c에 나타낸 바와 같이, 21일차에, CXCL16 그룹의 BLI 신호는 대조군보다 유의하게 더 낮았지만 ZA 그룹과 비교가능하였다. 이들 결과는 항-CXCL16 항체가 골 전이의 종양 성장을 감소시켰다는 것을 나타내었다. 결과는 또한 CXCL16 항체가 ZA와 유사한 정도로 골 전이 진행을 억제하고 CXCL16 항체가 골 전이 억제에 잠재적인 치료 효과를 갖음을 시사한다.
3. aCXCL16의 처리는 ZA-저항성 골 전이의 종양 성장을 감소시켰다
역형성 갑상선암 세포주 FRO (2x105개 세포/10 μL PBS)을 6주령 암컷 BALB/c 누드 마우스의 오른쪽 경골에 이식하였다. 3일차에, ZA를 주 1회 4 μg/마우스로 정맥내로 주사하였다. 28일차에, ZA 처리에도 불구하고 골 종양을 갖는 ZA-저항성 마우스를 선택하였다. 이들을 ZA 그룹 및 ZA+aCXCL16 그룹으로 나누었다. ZA 그룹에서는 ZA를 단독으로 주사한 반면, ZA+aCXCL16 그룹에서는 ZA 및 항-인간 CXCL16 항체 (서열식별번호: 12-17의 CDR을 갖는 래트 IgG)를 모두 주사하였다. 항-CXCL16 항체를 28일차부터 42일차까지 2주 동안 주 1회 25 μg/마우스로 복강내로 주사하였다. 생물발광 이미지화 (BLI)를 매주 평가하였다. 도 11a-11c에 나타낸 바와 같이, 42일차에, ZA+aCXCL16 그룹의 BLI 신호는 ZA 그룹보다 유의하게 더 낮았다. 이들 결과는 항-CXCL16 항체가 ZA-저항성 골 종양 성장을 감소시켰다는 것을 나타내었다.
실시예 7. 인간화 CXCL16 항체의 생산
1. 키메라 항체 HC0LC0의 생산
래트에서 생성된 항-인간 CXCL16 항체를 수득하였다. 질량 분광분석법을 사용하여 항체를 시퀀싱하고, 서열식별번호: 12-17에 개시된 바와 같은 CDR 서열을 갖는 것으로 결정하였다. 래트 항체의 변이체의 서열은 하기 추가로 기재된 바와 같이 래트 항체의 불변 영역 서열을 인간 IgG1 항체의 불변 영역 서열로 대체함으로써 설계되었다. 키메라 항체는 HC0LC0로 지정된다.
변이체 항체의 중쇄 및 경쇄 (각각 서열식별번호: 32 및 서열식별번호: 34)를 코딩하는 DNA 서열 (서열식별번호: 33 및 서열식별번호: 35)을 합성하고, 포유동물 일시적 발현 플라스미드 pETEv2 (TGEX-HC-hG1, TGEX-LC-hk, pOpti VEC, pCDNA3.3, pTRIOz, pFUSECHig, pFUSE-CLig가 또한 사용될 수 있음)로 클로닝하였다. 뮤린 항체 신호 펩티드 MGWTLVFLFLLSVTAGVHS (서열식별번호: 18) 및 MVSSAQFLGLLLLCFQGTRC (서열식별번호: 19)는 각각 키메라 항체의 중쇄 및 경쇄의 발현에 사용되었는데, 이는 이들이 CHO 세포에서 더 높은 수준의 발현을 초래할 수 있기 때문이다.
CHO 세포 기반 일시적 발현 시스템을 사용하여 변이체 항체를 발현하였고, 세포 배양 상청액에 함유된 생성된 항체를 원심분리 및 여과에 의해 수집하였다. 친화성 크로마토그래피를 통해 세포 배양 상청액으로부터 이들 변이체 항체를 정제하였다 (최첨단 AKTA 크로마토그래피 장비 사용). 정제된 항체를 포스페이트 완충된 식염수 용액으로 완충액 교환하였다. 최종적으로, 키메라 항체 HC0LC0를 정제하였다.
2. 키메라 항체 HC0LC0의 인간화
키메라 항체 HC0LC0 가변 도메인을 시퀀싱하고, CDR-루프 입체구조의 최적 체류를 위해 조합된 IMGT 및 카바트 항체 넘버링 시스템을 사용하여 CDR을 식별하였다. IMGT 및 카바트 항체 넘버링 시스템은 널리 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Lefranc, M.-P. et al., "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains". Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003) PMID: 12477501 LIGM:268]; 및 [Dunbar J and Deane CM. ANARCI: Antigen receptor numbering and receptor classification. Bioinformatics (2016)]을 참조한다.
키메라 항체 HC0LC0 VH 도메인은 신호 펩티드 서열을 포함하지 않는 하기 서열을 가졌다.
Figure pct00059
(CDR 잔기는 밑줄로 표시됨).
가장 가까운 인간 생식계열 유전자 V-영역은 호모 사피엔스 IGHV3-73*01이다:
Figure pct00060
(CDR 잔기는 밑줄로 표시됨)
BLAST 검색 알고리즘을 사용하여 설치류 VH 도메인과의 비교를 위해 인간 IgG 서열의 데이터베이스를 검색하고, 상위 200 BLAST 결과로부터 선택된 후보 인간 가변 도메인을 검색하였다. 핵심 프레임워크 잔기 및 정준 루프 구조를 유지하면서 프레임워크 상동성의 조합에 기초하여 3개의 인간 가변 도메인을 선택하고, 수용자 프레임워크로서 사용하였다. 그 후, HC0LC0 VH의 CDR을 이들 수용자 프레임워크에 이식하여 인간화 VH 변이체를 생성한다. 일부 경우에, 생식계열 서열과 가까운 유사성을 유지하면서 항체를 부모 항체 (래트 CXCL16 항체)와 더 유사하게 만들기 위해 역돌연변이를 만들었다. CDR 잔기는 밑줄로 표시된다.
Figure pct00061
유사하게, CDR-루프 입체구조의 최적 체류를 위해 조합된 IMGT 및 카바트 항체 넘버링 시스템을 사용하여 키메라 항체 HC0LC0의 경쇄의 가변 도메인을 결정하였다.
키메라 항체 HC0LC0 VL 도메인은 신호 펩티드 서열을 포함하지 않는 하기 서열을 가졌다.
Figure pct00062
황색으로 강조 표시된 CDR 잔기는 IMGT 넘버링 시스템을 사용하여 식별되었으며, 적색으로 강조 표시된 CDR 잔기는 카바트 넘버링 시스템을 사용하여 식별되었다.
가장 가까운 인간 생식계열 유전자 V-영역은 호모 사피엔스 IGKV4-1*01이다:
Figure pct00063
BLAST 검색 알고리즘을 사용하여 래트 VL 도메인과의 비교를 위해 인간 IgK 서열의 데이터베이스를 검색하고, 상위 200 BLAST 결과로부터 선택된 후보 인간 가변 도메인을 검색하였다. 핵심 프레임워크 잔기 및 정준 루프 구조를 유지하면서 프레임워크 상동성의 조합에 기초하여 이들을 2개 후보로 감소시켰다. 이들 수용자 프레임워크에 이식된 HC0LC0 VL의 CDR을 사용하여, 이들은 인간화 변이체가 되었다. VH1-5는 인간 생식계열 서열과 가까운 유사성을 유지하면서 항체를 부모 항체 (래트 CXCL16 항체)와 더 유사하게 만들기 위해 역돌연변이를 함유한다.
Figure pct00064
3. 인간화 검증
WHO의 인간화 항체 정의에 따라 인간화되었는지 여부를 결정하기 위해 인간화 변이체를 체크하였다. 문헌 [Ehrenmann F., Kaas Q. and Lefranc M.-P. 2010 IMGT/3Dstructure-DB and IMGT/DomainGapAlign: a database and a tool for immunoglobulins or antibodies, T cell receptors, MHC, IgSF and MhcSF　Nucleic Acids Res.　38, D301-307]을 참조한다. 인간화 쇄의 가변 도메인은 전체로서 분석하였을 때 다른 종보다 인간에 더 가까운 V 영역 아미노산 서열을 갖는다 (이뮤노제네틱스 인포메이션 시스템(IMMUNOGENETICS INFORMATION SYSTEM)® (IMGT®) DomainGapAlign 도구)을 사용하여 평가하였다. 표 7을 참조한다.
<표 7>
HC0LC0 및 인간화 변이체에 대한 WHO의 할당된 항체 INN
Figure pct00065
4. T-세포 에피토프 스크리닝
MHC 클래스 II 분자의 그루브에 펩티드 서열의 제시는 CD4+ T-세포의 활성화 및 면역원성 반응을 유발한다. 이러한 반응을 감소시키기 위해, 치료용 단백질은 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합 친화성을 낮춤으로써 T-세포를 활성화시킬 수 있는 "T-세포 에피토프"의 혼입을 회피하도록 설계될 수 있다.
원래 래트 항체 VH 및 VL 및 인간화 변이체 서열을 MHC II 결합 펩티드에 대해 스크리닝하여 인간화 프로세스가 인실리코 알고리즘을 사용하여 높은 친화성을 갖는 펩티드 서열을 제거하였는지 결정하였다. 하기 8개 대립유전자는 세계 인구의 99% 이상을 대표하며, MHC 클래스 II 에피토프의 예측에 사용되는 표준 대립유전자 세트이다: DRB1*01:01; DRB1*03:01; DRB1*04:01; DRB1*07:01; DRB1*08:02; DRB1*11:01; DRB1*13:02; DRB1*15:01. 문헌 [Wang et al., Peptide binding predictions for HLA DR, DP and DQ molecules. BMC Bioinformatics. 11:568]; [Gonzalez-Galarza FF, Nucleic Acid Research, 39 (2011), D913-D919]; [Greenbaum J, et al., Immunogenetics 63(6):325-35]을 참조한다.
본 발명의 상기 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 기술적 사상 또는 필수적인 특색을 변화시키지 않고도 다른 구체적인 형태로 용이하게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있다. 따라서, 상기 기재된 실시양태는 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아니다.

Claims (44)

  1. 하기를 포함하는 중쇄 가변 영역:
    서열식별번호: 12 중 어느 하나의 HCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체;
    서열식별번호: 13 중 어느 하나의 HCDR2 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 및
    서열식별번호: 14 중 어느 하나의 HCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체;
    하기를 포함하는 경쇄 가변 영역:
    서열식별번호: 15 중 어느 하나의 LCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체;
    서열식별번호: 16 중 어느 하나의 LCDR2 또는 서열에 비해 1, 2 또는 3개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 및
    서열식별번호: 17 중 어느 하나의 LCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체
    를 포함하는, CXCL16에 결합하는 항체.
  2. 제1항에 있어서, 하기 중 하나 이상을 포함하는 항체:
    서열식별번호: 22와 적어도 80% 동일한 HC-FR1;
    서열식별번호: 23과 적어도 80% 동일한 HC-FR2;
    서열식별번호: 24와 적어도 80% 동일한 HC-FR3;
    서열식별번호: 25와 적어도 80% 동일한 HC-FR4;
    서열식별번호: 26과 적어도 80% 동일한 LC-FR1;
    서열식별번호: 27과 적어도 80% 동일한 LC-FR2;
    서열식별번호: 28과 적어도 80% 동일한 LC-FR3; 및
    서열식별번호: 29와 적어도 80% 동일한 LC-FR4.
  3. 제1항에 있어서, 하기를 포함하는 항체:
    서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1;
    서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2;
    서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3;
    서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4;
    서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1;
    서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2;
    서열식별번호: 28과 적어도 80% 동일한 LC-FR3; 및
    서열식별번호: 29와 적어도 80% 동일한 LC-FR4.
  4. 제1항에 있어서, 하기 중 하나 이상을 포함하는 항체:
    서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR1;
    서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR2;
    서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR3;
    서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 갖는 HC-FR4;
    서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR1;
    서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 갖는 LC-FR2;
    서열식별번호: 28과 적어도 80% 동일한 LC-FR3; 및
    서열식별번호: 29와 적어도 80% 동일한 LC-FR4.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, CXCL16에 대한 결합에 대해 CXCR6 (서열식별번호: 21)과 경쟁하는 항체.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기를 포함하는 중쇄 가변 영역:
    서열식별번호: 12 중 어느 하나의 HCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체;
    서열식별번호: 13 중 어느 하나의 HCDR2 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 및
    서열식별번호: 14 중 어느 하나의 HCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체;
    하기를 포함하는 경쇄 가변 영역:
    서열식별번호: 15 중 어느 하나의 LCDR1 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체;
    서열식별번호: 16 중 어느 하나의 LCDR2 또는 서열에 비해 1, 2 또는 3개의 아미노산이 치환된 이의 변이체; 및
    서열식별번호: 17 중 어느 하나의 LCDR3 또는 서열에 비해 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 치환된 이의 변이체
    를 포함하는 항체.
  7. 제1항 또는 제6항에 있어서, 서열식별번호: 12-17의 6개 CDR을 모두 포함하는 항체.
  8. 제1항 또는 제7항에 있어서, 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나의 VH 아미노산 서열 또는 VH 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하고/거나,
    서열식별번호: 6-10 중 어느 하나의 VL 아미노산 서열; 및 VL 아미노산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5로 이루어진 군으로부터 선택된 항체의 VH, 또는 이의 변이체를 포함하는 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5로 이루어진 군으로부터 선택된 항체의 VL을 포함하는 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, HC4LC1, HC5LC1, HC5LC2, HC5LC3 및 HC5LC5로 이루어진 군으로부터 선택된 항체의 VH 및 VL 둘 모두를 포함하는 항체.
  12. 제6항에 있어서, 치환 중 적어도 1개 또는 2개가 보존적 치환이거나; 치환의 적어도 50%가 보존적 치환이거나; 또는 모든 치환이 보존적 치환인 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 단리된 항체 또는 항체 단편.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화 항체, 키메라 항체, 다중특이적 항체, 이중특이적 항체, scFv 또는 Fab인 항체.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 항체와 결합에 대해 경쟁하는 항체.
  16. 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나의 VH 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역, 및/또는 서열식별번호: 6-10 중 어느 하나의 VL 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는 항체, 또는 프레임워크 영역에만 존재하는 상응하는 VH 또는 VL 영역에 대한 변이를 갖는, VH 아미노산 서열과 적어도 70% 동일성을 갖는 VH 영역 및 VL 아미노산 서열과 적어도 70% 동일성을 갖는 VL 영역을 포함하는 항체.
  17. 제7항에 있어서, 항체의 VL 영역 내 FW 영역이 상응하는 항체 중 어느 하나의 VL 영역에 존재하는 FW 영역과 적어도 80% 동일한 것인 항체.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 항체 및 세포독성제를 포함하는 면역접합체.
  19. (1) 서열식별번호: 1-5 중 어느 하나의 VH 아미노산 서열과 적어도 70% 아미노산 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호: 6-10 중 어느 하나의 VL 아미노산 서열과 적어도 70% 아미노산 서열 동일성을 갖는 VL 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  20. 제19항의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체의 VH 영역 및/또는 VL 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터.
  22. 제21항의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  23. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체의 VH 영역 및/또는 VL 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포.
  24. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체 또는 제18항의 면역접합체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  25. 면역 반응을 유도하고/거나 암을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체 또는 제24항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  26. 종양 전이를 억제하는 방법으로서, 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체 또는 제24항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 종양 전이가 골 전이인, 종양 전이를 억제하는 방법.
  28. 제25항에 있어서, 항체가 정맥내로 투여되는 것인 방법.
  29. CXCL16에 결합하는 항체에 의해 결합될 수 있는 종양 조직을 갖는 암 환자를 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  30. 제25항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 갑상선암 또는 유방암인 방법.
  31. 제30항에 있어서, 유방암이 삼중-음성 유방암인 방법.
  32. 제25항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 정맥내로 투여되는 것인 방법.
  33. 제25항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 화학요법 및/또는 방사선 요법을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, 화학요법을 투여하는 것이 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  35. 제25항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 면역학적 체크포인트 항원을 표적화하는 작용제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  36. 제35항에 있어서, 작용제가 모노클로날 항체인 방법.
  37. 제36항에 있어서, 모노클로날 항체가 PD-1 리간드가 PD-1에 결합하는 것을 차단하는 것인 방법.
  38. 제37항에 있어서, 모노클로날 항체가 항-PD-1 항체인 방법.
  39. CXCL16에 결합하는 항체로 치료하기에 적합한 종양을 갖는 환자를 식별하는 방법으로서, 방법은 환자로부터의 종양 샘플을 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체와 접촉시키는 것, 및 종양 샘플에 대한 항체의 결합을 검출하는 것을 포함하고, 여기서 결합의 검출은 환자가 CXCL16에 결합하는 항체로 치료하기에 적합한 종양을 갖고 있음을 나타내는 것인 방법.
  40. 항체를 생산하는 방법으로서, 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 발현되는 조건 하에 제22항 또는 제23항의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 방법.
  41. 종양-표적화 활성을 갖는 항체를 식별하는 방법으로서, 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체의 VH 또는 VL CDR3을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 돌연변이유발시키는 것; 돌연변이유발된 VH 또는 VL CDR3을 포함하는 항체를 발현시키는 것; 및 생체내에서 종양 성장을 억제하거나 종양 크기, 종양 침윤 및/또는 전이를 감소시키는 항체를 선택하는 것을 포함하는 방법.
  42. 암을 치료하는 방법을 위한 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
  43. 제42항에 있어서, 암이 증가된 CXCL16 발현과 연관되는 것인 항체의 용도.
  44. 제42항에 있어서, 암이 유방암, 갑상선암, 자궁경부암, 폐암, 췌장암, 비소세포 폐암, 간암, 결장암, 결장직장암, 골암, 피부암, 두부암, 자궁경부암, 피부 흑색종, 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 간암, 뇌 종양, 방광암, 혈액암, 위암, 항문주위암, 유방암, 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 질암, 외음부 암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비 선암종, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장암, 요관암, 신장 세포 암종, 신장 골반 암종, CNS 중추 신경계 종양, 원발성 CNS 림프종, 척수 종양, 또는 뇌간 신경교종인 용도.
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