KR20240036239A - 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 피부 재생용 조성물 - Google Patents
부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 피부 재생용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 피부 재생용 조성물을 제공한다. 본 발명의 부다템플 추출물은 산화 스트레스에 의해 유도되는 활성산소종 감소, 산화 스트레스에 의한 피부 세포 손상을 보호하는 효과가 있다. 본 발명의 부다템플 추출물은 항산화용, 피부 재생 또는 피부 세포 보호용, 산화 스트레스에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 건강기능식품, 화장료 조성물, 약학 조성물 등으로 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 부다템플(Crassula Buddha's Temple) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 피부 재생용 조성물에 관한 것이다.
노화에 따라 신진대사나 세포의 재생 능력이 저하되면서 피부 색소 침착, 주름 등이 유발되며 피부의 재생이 지연되는 등의 현상이 발생한다. 피부 노화는 원인에 따라 크게 자연노화(Intrinsic aging)와 자외선 등 외부 스트레스로 인해 발생하는 외인성 노화(Extrinsic aging)로 분류된다.
자외선은 체내 비타민 D의 합성, 살균 등의 이로운 효과가 있는 반면, 피부염, 피부암, 일광 화상, 피부노화, 건조, 잔주름 등의 해로운 효과를 발생시키기도 한다. 자외선(Ultraviolet, UV)은 파장길이에 따라 A, B, C의 3가지로 나뉘는데, 이 중 UVC는 오존층에서 차단되고 UVA와 UVB가 피부에 영향을 미친다. 특히 중간 파장인 UVB(290 내지 320 nm)는 급성이나 만성적으로 노출되었을 경우, 심각한 피부 손상을 야기하는데, 피부 진피 내 구성성분인 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin), 히알루론산(hyaluronic acid) 등을 파괴하여 피부의 탄력 소실을 유도하며 주름을 유발한다.
또한, 자외선은 활성산소를 발생시키는데, 이는 세포내 신호전달 체계를 손상시켜 피부에서 콜라겐(collagen) 분해효소인 MMP-1(Matrix metalloproteinase1)의 발현을 증가시키고, 콜라겐을 파괴함으로써 피부의 재생을 지연시킨다. 또한 활성산소가 지나치게 많아질 경우 체내의 항산화 방어계를 무너뜨려 단백질, 지질, DNA와 같은 세포 성분을 손상시키고, 이에 따라 세포 기능이 변질되어 궁극적으로 피부 노화가 촉진될 수 있다. 활성산소는 교원질 대사에 작용하여 직접적으로 교원질을 파괴시킬 뿐 아니라, 콜라겐의 결핍을 초래함으로써 결합조직을 손상시킨다. 또한 활성산소는 피부의 탄력성을 유지하며 충격을 흡수하는 역할을 하는 히알루론산 사슬을 절단시켜 피부 탄력 및 피부 수분을 감소시키고, 이에 따라 피부 노화를 가속화한다.
활성산소의 증가는 산화 스트레스(oxidative stress)를 유발하여 세포에 손상을 입히며, 그 결과 당뇨, 심혈관계 질환, 신경계 질환 및 DNA 손상에 따른 암(cancer)을 유발하고 노화를 촉진시키는 등 다양한 형태의 병리적 이상을 초래한다. 또한, 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)이 파골세포(osteoclast) 생성의 신호전달에 관여하여 파골세포의 생성을 촉진한다는 연구 결과를 고려해볼 때, 활성산소로부터 우리 몸을 보호할 필요성이 요구된다.
이에, 본 발명은 부다템플 추출물의 항산화, 피부 재생 효과를 확인하여 이를 이용한 건강기능식품, 화장료, 약학 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 피부 재생, 산화 스트레스에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 부다템플 추출물은, 바람직하게는 100~120℃, 0.3~0.5kPa kg/cm3 조건에서 10~20분간 열수추출한 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 부다템플 추출물은, 바람직하게는 산화 스트레스에 의한 세포 손상을 개선 또는 예방하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 부다템플 추출물은, 바람직하게는 산화 스트레스에 의해 유도되는 활성산소종을 감소시키는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 부다템플 추출물은, 바람직하게는 미토콘드리아 활성을 증진시키는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 부다템플 추출물은, 바람직하게는 HO1, SOD1, SOD2의 발현을 억제하여 산화 스트레스를 감소시키는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 부다템플 추출물은, 바람직하게는 BAX, BCL2, COX2의 발현을 억제하여 세포 사멸을 억제하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 재생은, 상기 피부 재생은, 바람직하게는 산화 스트레스에 의한 손상을 개선 또는 예방하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 산화 스트레스에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 산화 스트레스에 의해 유발되는 질환은, 바람직하게는 암, 치은염, 치주염, 염증성 장질환, 골수염, 후천성 면역결핍증, 심맥관계 질환, 대장직장암, 방광암, 관상동맥질환, 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 만성 신장병, 알콜성 간질환, 폐쇄성 폐질환, 인슐린저항 증후군 및 당뇨병으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것일 수 있다.
발명은 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 피부 재생용, 산화 스트레스에 의해 유도되는 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 부다템플 추출물은 산화 스트레스 억제 효과가 있으며, 산화 스트레스에 의한 세포 손상 개선, 활성산소종 감소 등 산화 스트레스에 의한 세포 손상 보호 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 부다템플 추출물이 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에 미치는 영향을 확인한 도이다. 도 1a는 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포의 세포성장 곡선을 나타낸 도이고, 도 1b는 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포의 생존 세포 수를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 부다템플 추출물이 산화 스트레스가 유도된 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에서 활성산소종을 감소시키는 것을 확인한 도이다. 도 2a는 형광 강도 변화를 나타낸 도이고, 도 2b는 산화 스트레스가 유도된 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에서 활성산소종 수준을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 부다템플 추출물이 미토콘드리아 활성을 증진시키는 것을 확인한 도이다. 도 3a는 형광 강도 변화를 나타낸 도이고, 도 3b는 산화 스트레스가 유도된 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에서 활성산소종 수준을 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 부다템플 추출물이 세포 사멸을 억제하는 것을 확인한 도이다. 도 4a는 형광 강도 변화를 나타낸 도이고, 도 4b는 산화 스트레스가 유도된 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에서 세포 수를 분석한 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 부다템플 추출물의 단백질 발현 정도를 확인한 도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 부다템플 추출물이 산화 스트레스가 유도된 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에서 활성산소종을 감소시키는 것을 확인한 도이다. 도 2a는 형광 강도 변화를 나타낸 도이고, 도 2b는 산화 스트레스가 유도된 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에서 활성산소종 수준을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 부다템플 추출물이 미토콘드리아 활성을 증진시키는 것을 확인한 도이다. 도 3a는 형광 강도 변화를 나타낸 도이고, 도 3b는 산화 스트레스가 유도된 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에서 활성산소종 수준을 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 부다템플 추출물이 세포 사멸을 억제하는 것을 확인한 도이다. 도 4a는 형광 강도 변화를 나타낸 도이고, 도 4b는 산화 스트레스가 유도된 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에서 세포 수를 분석한 도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 본 발명의 부다템플 추출물의 단백질 발현 정도를 확인한 도이다.
본 발명은 부다템플(Crassula Buddha's Temple) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 피부 재생용 조성물에 관한 것이다.
부다템플(Crassula Buddha's Temple)은 다육식물의 일종으로, 잎이 빽빽하게 쌓여 가장자리가 접혀있고 네모난 기둥 모양으로 성장한다.
본 발명에 있어서, 상기 부다템플 추출물은, 바람직하게는 100~120℃, 0.3~0.5kPa kg/cm3 조건에서 10~20분간 열수추출한 것이 좋다.
본 발명의 부다템플 추출물은 산화 스트레스에 의해 유도되는 활성산소종을 감소시키는 효과가 있으며, 미토콘드리아 활성을 증진시켜 에너지를 생성하는 효과가 있다.
본 발명의 부다템플 추출물은 산화 스트레스 억제에 따른 항산화 효과 뿐만 아니라, 산화 스트레스에 의한 세포 손상, 세포 사멸을 개선 또는 예방하는 효과가 있어, 산화 스트레스에 의해 손상되는 세포를 보호하여 피부를 재생시키는 효과가 있다.
또한, 본 발명의 산화 스트레스에 의해 유발되는 질환을 예방 또는 치료하는 효과가 있다. 본 발명에 있어서, 상기 산화 스트레스에 의해 유발되는 질환은, 암, 치은염, 치주염, 염증성 장질환, 골수염, 후천성 면역결핍증, 심맥관계 질환, 대장직장암, 방광암, 관상동맥질환, 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 만성 신장병, 알콜성 간질환, 폐쇄성 폐질환, 인슐린저항 증후군 및 당뇨병으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것일 수 있다.
본 발명에 따른 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 "추출물"은 적절한 용매를 이용하여 부다템플(Crassula Buddha's Temple)로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다. 상기 부다템플로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 식품학/약학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(Methanol), 에탄올(Ethanol), 프로판올(Propanol), 이소프로판올(Isopropanol), 부탄올(Butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤(Acetone), 에테르(Ether), 벤젠(Benzene), 클로로포름(Chloroform), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(Methylene chloride), 헥산(Hexane) 및 시클로헥산 (Cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법, 고온고압추출법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다.
본 발명의 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(Thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(High performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다. 따라서, 본 발명에 있어서 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 유효성분인 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제(타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 하기 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화 되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알콜 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 유효성분인 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다. 본 발명에서 '건강기능식품 조성물'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강 기능성 식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강 기능성 식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강 기능성 식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀 기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강 기능성 식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
본 발명의 “화장료 조성물”은 상술한 본 발명의 부다템플(Crassula Buddha's Temple)에서 추출한 추출물의 화장품학적 유효량(Cosmetically effective amount) 및 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조할 수 있다.
본 명세서에서 “화장품학적 유효량”은 상술한 본 발명의 조성물의 산화 스트레스에 따른 피부 세포 보호, 피부 재생 효과를 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
화장료 조성물의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(Foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스 등의 화장품으로 제형화될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알콜 설페이트, 지방족 알콜 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알콜, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 에센스, 팩, 파운데이션, 색조화장품, 선크림, 투웨이케이크, 페이스파우더, 콤팩트, 메이크업베이스, 스킨커버, 아이쉐도우, 립스틱, 립글로스, 립픽스, 아이브로우 펜슬, 화장수 등의 화장품 및 샴푸, 비누 등의 세정제에 적용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물에는 상기 청각(Codium fragile)에서 추출한 추출물 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학 조성물은, 유효성분 이외에 보조제(Adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(Witepsol), 트윈(Tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.
상기 약학 조성물은 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화 될 수 있다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수 있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다.
또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 실험은 개별적으로 3회 이상 수행되었으며, 3번의 개별적 실험 데이터를 mean ± standard deviation(SD)으로 표기하였다. 통계적 분석은 GraphPad PRISM software를 사용하여 unpaired two-tailed student’s ONE 방식으로 수행되었으며, p 값이 0.05 미만이면 통계적 유의성을 지니는 것으로 간주하였다. 도면상에 p 값이 0.05 미만일 경우 *, 0.01 미만은 ** 그리고 0.001 미만은 ***으로 표시하였다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 자세히 설명한다. 다만, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
<실시예 1> 부다템플 추출물의 제조
부다템플(Crassula 'Buddha's Temple)의 줄기 40 g을 3~4 cm 간격으로 절단하고 증류수로 1회 세척하였다. 250 mL 유리병에 부다템플의 줄기와 증류수 120 mL를 넣고, 110 ℃, 0.4 kg/cm3 조건에서(Wiseclave WAC-60, Daihan Scientific, Wonju-si, Gangwon-do, Korea) 15분간 고압 열수 추출하였다. 부다템플 줄기를 제거하고, 추출물을 -80℃에서 12시간 냉동하였다. 이후 해동하여 0.2 μm syringe filter(Minisart, Sartorius, Goettingen, Germany)로 여과하여 부다템플 추출물을 제조하였다.
부다템플 추출물을 각각 3회 제조하여 건조중량을 분석한 결과를 표 1에 기재하였다. 부다템플 추출물의 평균 건조중량은 5.67 ± 0.577 mg/mL로 확인되었다.
| 제조예 1 | 제조예 2 | 제조예 3 | 평균값 | |
| 건조중량 (mg/mL) |
5 | 6 | 6 | 5.67 ± 0.577 |
<실시예 2> 부다템플 추출물의 페놀 함량 분석
식물 자원 소재들은 다양한 페놀 계열 물질을 포함하고 있는 것으로 알려졌으며, 카테킨을 비롯한 페놀 계열의 물질은 항암, 항산화 뿐만 아니라 다양한 효능을 지닌 것으로 알려져 있다. (Middleton, E., Jr., Kandaswami, C.& Theoharides, T. C. The effects of plant flavonoids on mammalian cells: implications for inflammation, heart disease, and cancer. Pharmacol. Rev. 52, 673-751 (2000). Ling, W. H. & Jones, P.J. Dietary phytosterols: a review of metabolism, benefits and side effects. Life Sci. 57, 195-206 (1995)).
2-1. 부다템플 추출물의 총 페놀 함량 분석
갈릭산(SIGMA, G7384-100G, USA)을 최종 1 mL이 되도록 100%(v/v) 메탄올(ARMRESCO, K977-1L, USA)에 녹여 1 M 갈릭산을 제조한 후, 100%(v/v) 메탄올에 희석(1 μM, 5 μM, 10 μM, 25 μM, 75 μM, 0.3mM, 0.7mM, 2mM, 6mM)하여 폴리페놀 함량 분석을 위한 스탠다드 용액으로 사용하였다. 10% Folin&Ciocalteu's 페놀 시약(SIGMA, F9252-1L, USA) 200 μL를 99.98 mL의 DW에 희석하여 10%의 Folin&Ciocalteu's 페놀 시약 반응액을 제조하였다. 1.5 mL 튜브에 스탠다드 용액 또는 부다템플 추출물을 각각 100 μL씩 첨가하였다. 이후, 페놀 시약 반응액을 200μL 첨가 및 혼합하여 상온에서 1분간 반응시켰다. 상기 혼합액에 Sodium carbonate 800μL를 넣고 혼합한 뒤 37℃에서 30분간 반응시켰다. 반응이 끝난 뒤 얼음에 넣어 반응을 멈추게 하고, 큐벳(HellmaAnalytics, 104-10-46, Germany)에 1 mL씩 첨가하여 분광광도계(Optizen, Optizen POP Bio, Korea)를 이용하여 765 nm에서 흡광도를 측정하였다.
부다템플 추출물의 총 페놀 함량 분석 결과를 표 2에 기재하였다.
| 1차 분석 | 2차 분석 | 3차 분석 | 평균값 | |
| 총 페놀함량 (μg/mL) |
570.6 | 565.6 | 555.6 | 563.92 ± 7.64 |
2-2. 부다템플 추출물의 카테킨(Catechin) 함량 분석
1 mg의 카테킨을 1 mL의 100%(v/v) 메탄올(ARMRESCO, USA)에 용해하고, 1.5 mL 튜브에 0, 1, 5, 10, 20 μL씩 분주하였다. 최종 부피가 20 μL 가 되도록 100%(v/v) 메탄올을 각 튜브에 20, 19, 15, 10, 0 μL씩 추가하여 표준 용액으로 사용하였다. 바닐린(JUNSEI, Japan) 0.1 g을 10 mL 100%(v/v) 메탄올에 용해하여 1%(v/v) vanillin 용액을 제조하였다. 다음으로 메탄올에 희석한 8% HCl (Daejung, Korea)과 1%(v/v) vanillin 용액을 1:1의 부피 비로 혼합하여 반응액을 제조하였다. 반응액을 30℃에서 15분간 반응시켰다. 카테킨 표준용액 20 μL와 부다템플 추출물 20 μL은 30℃에서 5분간 반응시켰다. 반응액 100 μL와 스탠다드 용액 또는 반응액 100 μL와 부다템플 추출물 20μL를 각각 혼합하고 30℃에서 20분간 반응시켰다. 이후 얼음에 넣어 반응을 멈추었다. 96well 플레이트(SPL Life Sciences, Korea)에 각 혼합물을 100 μL씩 분주하고, 마이크로플레이트 스펙트로포토미터(Microplate spectrophotometer, Sunrise™, Tecan, Mannedorf, Switzerland)를 이용하여 492 nm에서 흡광도를 측정하였다.
부다템플 추출물의 카테킨 함량 분석 결과를 표 3에 기재하였다.
| 1차 분석 | 2차 분석 | 3차 분석 | 평균값 | |
| 카테킨 함량 (μg/mL) |
265.3 | 268.1 | 254.1 | 262.54 ± 7.42 |
<실시예 3> 부다템플 추출물의 세포생존률 확인
NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포를 10% 소태아혈청(Gibco, Grand Island, NY) 페니실린-스트렙토마이신 및 1%(v/v) non-essential amino acid solution이 첨가된 배지를 사용해 36.5℃, 95% air 그리고 5% CO2(Thermo Fisher Scientific) 조건에서 배양하였다.
96웰 플레이트(SPL Life Sciences, Korea)에 배지 100 μL와 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포를 1×103 cells/mL 농도로 시딩(seeding)하고 12시간 배양하였다. 부다템플 추출물을 배지양을 기준으로 0-1, 10-3, 10-5, 10-7, 10-9, 10-11, 10-13로 희석하여 처리하고, 대조구(vehicle)는 증류수 1 μL를 처리하였다. 24시간 반응시킨 뒤 EZ cytox 세포생존율 분석 시약(WST-1 cell viability assay kit; DoGenBio, Seoul, Korea)를 웰 당 10%(v/v)가 되도록 처리하고, 2시간 반응시켰다. 마이크로플레이트 스펙트로포토미터(Microplate spectrophotometer, Sunrise™, Tecan, Mannedorf, Switzerland)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 1a에 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포의 세포성장 곡선을 나타내었다. 부다템플 추출물은 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에 세포독성을 나타내지 않는 것으로 확인되었다.
<실시예 4> 부다템플 추출물의 산화 스트레스에 의한 세포손상 보호 효과 확인
NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에 산화 스트레스를 유도하여 본 발명의 부다템플 추출물의 세포 보호 효과를 확인하였다. 60 mm 세포배양 접시에 NIH/3T3 세포를 1×105 cells/mL 농도로 시딩(seeding)하고 12시간 배양한 후, 부다템플 추출물을 배지 양의 1/10,000,000(10-7)로 희석하여 처리하였다. 18시간 후 Tert-butyl hydroperoxide(tBHP) 10 μM를 처리하고, 대조구(vehicle) 대비 생존 세포 수를 확인하였다. 대조구로 증류수를 사용하였다.
도 1b에 실험 결과를 나타내었다. 부다템플 추출물(BT)은 대조구 대비 생존 세포 수를 증가시켰을 뿐만 아니라, 산화 스트레스가 유도되어 생존 세포 수가 감소한 경우에도 세포 보호 효과를 나타내는 것으로 나타났다.
또한, 상기 Tert-butyl hydroperoxide(tBHP) 10 μM 처리 후 24시간 반응시킨 뒤, 최종 10 μM의 농도로 fluorogenic dichlorofluorescein diacetate(H2DCFDA; Sigma-Aldrich)를 처리하고 30분간 배양하였다. 세포를 1mL phosphate buffered saline(PBS; pH 7.4)으로 1회 세척하고 유세포 분석기(Guava EasyCyte; Millipore, Temecula, CA)로 활성산소종 생성의 변화를 확인하였다. DCF-Median fluorescence intensity(MFI)는 FlowJo Version 10.5.3(TreeStar, Ashland, OR)으로 계산하였으며, 측정 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2의 유세포 분석 결과에서 보듯이, 본 발명의 부다템플 추출물은 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포에서 유도된 활성산소종(reactive oxygen species; ROS)을 감소시키는 것을 확인하였다. 즉, 본 발명의 부다템플 추출물은 활성산소종 생성 감소를 통한 항산화 활성이 우수하였다.
<실시예 5> 부다템플 추출물의 미토콘드리아 활성 증진 효과
60 mm 세포배양 접시에 NIH/3T3 세포를 1×105 cells/mL 농도로 시딩(seeding)하고 12시간 배양한 후, 부다템플 추출물을 배지 양의 1/10,000,000(10-7)로 희석하여 처리하였다. 18시간 후 Tert-butyl hydroperoxide(tBHP) 10 μM를 처리하고 24시간 반응시켰다. 대조구로 증류수를 사용하였다. 이후, 50nM 농도의 MTDR을 30분간 처리하고 세포를 PBS(phosphate buffered saline, pH 7.4)로 세척하였다. 세포를 수거하여 유세포분석으로 MTDR의 MFI(median fluorescence intensity)를 측정하였다. 유세포분석은 Guava EasyCyte 유세포 분석기와 GuavaIncyte software 및 FlowJo software를 사용하였다. 실험 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에서 보듯이, 본 발명의 부다템플 추출물은 미토콘드리아 활성을 증진시키는 것으로 나타났으며, 유도된 활성산소종을 감소시키는 것으로 나타났다. 이에 따라 세포의 에너지 생성 효과 및 건강 증진 효과를 발휘할 수 있음을 확인하였다.
<실시예 6> 부다템플 추출물의 세포사멸 효과 확인
60 mm 세포배양 접시에 NIH/3T3 세포를 2×105 cells/mL 농도로 시딩(seeding)하고 12시간 배양한 후, 부다템플 추출물을 배지 양의 1/10,000,000(10-7)로 희석하여 처리하였다. 18시간 후 Tert-butyl hydroperoxide(tBHP) 100 μM를 처리하였다. 대조구로 증류수를 사용하였다. Annexin V conjugated with Alexa Fluor488, 100 μg/mL Propidium iodide (PI), 1×Annexin-binding buffer로 염색하고 유세포분석으로 PI/Annexin V Dead Cell Apoptosis Assay(using V13245)를 측정하였다. 유세포분석은 Guava EasyCyte 유세포 분석기와 GuavaIncyte software 및 FlowJo software를 사용하였다.
도 4에서 보듯이, 본 발명의 부다템플 추출물은 세포사멸에 대한 necrotic cell의 상향조절 효과를 나타내었으며, 이를 통해 본 발명의 부다템플 추출물이 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포의 세포 사멸을 예방 또는 개선하는 것으로 확인되었다. 즉, 본 발명의 부다템플 추출물은 산화 스트레스에 따른 세포 사멸을 예방 또는 개선함에 따라 세포 보호 효과를 발휘할 수 있다.
<실시예 7> 부다템플 추출물의 산화 스트레스 억제 및 피부 세포 보호 효과 확인
본 실험에서는 부다템플 추출물이 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포의 intracellular ROS lever에 미치는 영향을 측정하였다. BAX, BCL2, COX2 단백질은 미토콘드리아(mitochondria)의 막(membrane) 표면에 결합하여 pore를 형성하고 cytochrome C을 세포질 내로 유출시키며 세포 사멸을 개시하는 역할을 한다.
60 mm 세포배양 접시에 NIH/3T3 세포를 2×105 cells/mL 농도로 시딩(seeding)하고 12시간 배양한 후, 부다템플 추출물을 배지 양의 1/10,000,000(10-7)로 희석하여 처리하였다. 18시간 후 Tert-butyl hydroperoxide(tBHP) 100 μM를 처리하였다. 대조구로 증류수를 사용하였다. TRIzol Reagent(Thermo Fisher Scientific)로 total RNA를 분리하였고 M-MLV-RT cDNA 합성 키트(Wizbiosolutions, Seongnam, Korea)로 cDNA를 합성하였다. 96-웰 optical-plate(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)에 5 μL 2×Real-Time PCR Master Mix including SYBR green(Biofact, Yuseong-gu, Daejeon, Korea), 3 μL 증류수, 10 ng cDNA, 최종 1 pM의 프라이머를 넣고, StepOnePlus Real-Time PCR System(Applied Biosystems)으로 pre-denaturing(95℃ 에서 10분), amplification 50 cycles(95℃에서 15초 및 60℃에서 1분) 조건에서 qPCR을 진행하였다. 2-ΔΔCt방법으로 mRNA 발현 변화를 확인하였다. 사용한 프라이머의 서열을 하기 표 4에 기재하였다.
| Target genes | Sequences(5’ to 3’) |
| HO1 (Heme oxygenase-1) |
F : CACTCTGGAGATGACACCTGAG |
| R : GTGTTCCTCTGTCAGCATCACC | |
| SOD1 (Superoxide dismutase) |
F : GGTGAACCAGTTGTGTTGTCAGG |
| R : ATGAGGTCCTGCACTGGTACAG | |
| SOD2 (superoxide dismutase) |
F : TAACGCGCAGATCATGCAGCTG |
| R : AGGCTGAAGAGCGACCTGAGTT | |
| BAX (Bcl-2-associated X protein) |
F : GTTTCATCCAGGATCGAGCAG |
| R : TTACGGTTCAGGTACTCAGTC | |
| BCL2 (B-cell lymphoma 2) |
F : CTTTGAGTTCGGTGGGGTCA |
| R : GCCGGTTCAGGTACTCAGTC | |
| COX2 (cyclooxygenase-2) |
F : TGCTGGTGGAAAAACCTCGT |
| R : AAAACCCACTTCGCCTCCAA |
도 5에 실험 결과를 나타내었다. 본 발명의 부다템플 추출물은 HO1, SOD1, SOD2의 발현을 억제하여 산화 스트레스를 감소시켰으며, BAX, BCL2, COX2 단백질의 발현을 억제하여 세포 사멸을 억제하는 것으로 나타났다. 즉, 본 발명의 부다템플 추출물은 NIH/3T3 배아 마우스 섬유아세포의 사멸을 억제하여 피부 세포 보호에 효과적임을 확인하였다.
Claims (13)
- 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 건강기능식품 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 부다템플 추출물은,
100~120℃, 0.3~0.5kPa kg/cm3 조건에서 10~20분간 열수추출한 것인, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 부다템플 추출물은,
산화 스트레스에 의한 세포 손상을 개선 또는 예방하는 것인, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 부다템플 추출물은,
산화 스트레스에 의해 유도되는 활성산소종을 감소시키는 것인, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 부다템플 추출물은,
미토콘드리아 활성을 증진시키는 것인, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 부다템플 추출물은,
HO1, SOD1, SOD2의 발현을 억제하여 산화 스트레스를 감소시키는 것인, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 부다템플 추출물은,
BAX, BCL2, COX2의 발현을 억제하여 세포 사멸을 억제하는 것인, 조성물.
- 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물.
- 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 건강기능식품.
- 제9항에 있어서,
상기 피부 재생은,
산화 스트레스에 의한 세포 손상을 개선 또는 예방하는 것인, 조성물.
- 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 재생용 화장료 조성물.
- 부다템플 추출물을 유효성분으로 포함하는 산화 스트레스에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제12항에 있어서,
상기 산화 스트레스에 의해 유발되는 질환은,
암, 치은염, 치주염, 염증성 장질환, 골수염, 후천성 면역결핍증, 심맥관계 질환, 대장직장암, 방광암, 관상동맥질환, 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 만성 신장병, 알콜성 간질환, 폐쇄성 폐질환, 인슐린저항 증후군 및 당뇨병으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인, 조성물.
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