KR20240021179A

KR20240021179A - 키메라 폴리펩티드 및 사용 방법

Info

Publication number: KR20240021179A
Application number: KR1020237043194A
Authority: KR
Inventors: 사트바 에스. 닐라푸; 징웨이 류; 스리데비 패치바; 융푸 탕
Original assignee: 더 보드 오브 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템
Priority date: 2021-05-14
Filing date: 2022-05-13
Publication date: 2024-02-16
Also published as: AU2022273049A1; CA3219976A1; WO2022241240A3; WO2022241240A2; BR112023023911A2; EP4337229A2; JP2024518103A

Abstract

본 개시내용의 양상은 세포를 검출, 단리, 고갈 및/또는 정제하기 위한 조성물 및 방법을 제공하며, 여기에는 이러한 방법에서 유용한 키메라 폴리펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드가 포함된다. 선택 마커, 형질도입 마커 및/또는 안전 스위치와 같은 폴리펩타이드의 용도와 함께 다양한 키메라 폴리펩타이드가 개시된다. 또한 하나 이상의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, T 세포, NK 세포, NKT 세포 및 iPSC와 같은 치료 세포를 포함하는 세포가 개시된다.

Description

키메라 폴리펩타이드 및 사용 방법

본 출원은 2021년 5월 14일에 출원된 미국 가특허출원 제63/188,936호 및 2021년 11월 2일에 출원된 미국 가특허출원 제63/274,765호에 대한 우선권을 주장하며, 두 출원 모두는 그 전체가 본원에 참조로 인용된다.

I. 기술 분야

본 개시내용의 양상은 분자생물학 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명의 실시형태는 키메라 폴리펩타이드, 조작된 세포 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.

II. 배경

CAR-NK 세포, CAR T 세포, TCR-형질도입된 T 세포와 같은, 종양 항원을 표적화하는 치료 세포는 다양한 악성종양의 치료를 위한 유망한 접근법이다. 현재까지 이러한 요법의 성공에도 불구하고, 질환 재발, 높은 제조 비용 및 독성을 포함한 몇 가지 제한 사항이 남아있다. 치료 세포를 표적화하기 위한, 예컨대 제조 동안의 단리, 식별 및 정제를 위해서 뿐만 아니라 사이토카인 방출 증후군 및 이식편대숙주 질환과 같은 이상 사례(adverse event)가 발생할 경우 제거를 위해 이러한 세포를 선택적으로 표적화하는 데 사용하기 위한 조성물 및 방법에 대한 요구가 있다.

일부 양상에서, 세포를 검출, 단리, 고갈 및/또는 정제하는 데 유용한 방법 및 조성물이 본원에 개시된다. 따라서, 일부 실시형태에서, 하나 이상의 세포외 영역(예를 들어, BCMA, Trop2, CD30, EGFR 또는 Her2로부터의) 및 막횡단 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드가 본원에 개시된다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 하나 이상의 추가 영역, 예를 들어 신호 펩타이드, 힌지 영역 또는 세포내 영역을 추가로 포함한다. 또한, 이러한 폴리펩타이드를 발현하는 조작된 세포 및 이러한 세포를 검출, 단리, 고갈 및/또는 정제하는 방법이 개시된다.

본 개시내용의 실시형태는 핵산, 폴리뉴클레오타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 펩타이드, 작제물, 벡터, 세포, 치료 세포, 면역 세포, 조작된 세포, 조작된 세포를 생성하는 방법, 조작된 세포를 검출하는 방법, 조작된 세포를 단리하는 방법, 조작된 세포를 고갈시키는 방법, 및 조작된 세포를 정제하는 방법을 포함한다. 본 개시내용의 핵산은 하나 이상의 키메라 폴리펩타이드를 포함하는 본 개시내용의 하나 이상의 폴리펩타이드를 암호화할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 핵산 분자는 키메라 폴리펩타이드를 암호화한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 핵산 분자는 2개 이상의 키메라 폴리펩타이드를 암호화한다. 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 하기 영역 또는 도메인 중 적어도 1개, 2개, 3개 이상을 포함할 수 있다: 신호 펩타이드, 세포외 도메인, 힌지 영역, 막횡단 도메인 및 세포내 영역. 본 개시내용의 조작된 세포는 본 개시내용의 1, 2, 3, 4개 이상의 폴리뉴클레오타이드 및/또는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 방법은 하기 단계 중 적어도 1, 2, 3, 4개 이상을 포함할 수 있다: 폴리뉴클레오타이드를 세포 내로 도입하는 단계, 벡터를 세포 내로 도입하는 단계, 폴리펩타이드를 세포 내로 도입하는 단계, 폴리펩타이드를 세포에서 발현시키는 단계, 세포 집단을 증대(expanding)시키는 단계, 세포를 항원-결합 단백질과 접촉시키는 단계, 세포를 항체 약물 접합체와 접촉시키는 단계 및 세포를 영상화제로 검출하는 단계.

일부 실시형태에서, (a) B-세포 성숙 항원(BCMA)으로부터의 세포외 도메인; (b) 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1(programmed cell death 1 ligand 1: PDL1)로부터의 힌지 영역; (c) 막횡단 도메인; 및 (d) 세포내 영역을 포함하는 키메라 폴리펩타이드가 본원에 개시된다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 19와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 19를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 19로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 23을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 23으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 T 세포 수용체의 알파 또는 베타 쇄이거나 CD28, CD3ε, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134, CD137 또는 CD154로부터의 막횡단 도메인이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 CD8α로부터의 막횡단 도메인이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 PDL1로부터의 막횡단 도메인이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 25와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 25를 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 25로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열 RLR(서열번호 29)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열 RLR(서열번호 29)로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 31을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 31로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 32를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 32로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 40과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 40을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 40으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 최대 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 100개 이하의 아미노산의 길이이다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 신호전달 도메인을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 BCMA로부터의 세포내 영역을 포함하지 않는다.

일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 1과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 1을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 1로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 38과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 38을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 38로 이루어진다. 또한 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자가 개시된다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 2와 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 분자를 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 39와 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 분자를 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 2를 포함한다. 또한 핵산 분자를 포함하는 벡터가 개시된다.

또한 일부 실시형태에서, (a) 조직형 플라스미노겐 활성화제(tissue-type plasminogen activator: tPA) 신호 펩타이드; (b) BCMA로부터의 세포외 도메인; (c) 힌지 영역; (d) 막횡단 도메인; 및 (e) 세포내 영역을 포함하는 키메라 폴리펩타이드가 본원에 개시된다. 일부 실시형태에서, tPA 신호 펩타이드는 서열번호 34와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, tPA 신호 펩타이드는 서열번호 34를 포함한다. 일부 실시형태에서, tPA 신호 펩타이드는 서열번호 34로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 19와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 19를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 19로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 CD8α 힌지, PDL1 힌지, IgG4 힌지, IgG1 힌지, 또는 CD34 힌지를 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 PDL1로부터의 힌지 영역를 포함한다. 힌지 영역은 서열번호 23을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 23으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 CD8α로부터의 힌지 영역이다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 24로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 T 세포 수용체의 알파 또는 베타 쇄이거나 CD28, CD3ε, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134, CD137 또는 CD154로부터의 막횡단 도메인이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 CD8α로부터의 막횡단 도메인이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 CD8α로부터의 세포내 영역의 일부이다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 최대 10, 9, 8, 7, 또는 6개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 30을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 30으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 150개 이하의 아미노산의 길이이다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 신호전달 도메인을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 BCMA로부터의 세포내 영역을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 3과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 3으로 이루어진다. 또한 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자가 개시된다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 4와 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 분자를 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 4를 포함한다. 또한 핵산 분자를 포함하는 벡터가 개시된다.

일부 실시형태에서, (a) CD30으로부터의 세포외 도메인; (b) CD30으로부터의 막횡단 도메인; 및 (c) BCMA로부터의 세포내 영역을 포함하는 키메라 폴리펩타이드가 추가로 본원에 개시된다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 20과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 20을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 20으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 27과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 27을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 27로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 33과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 33을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 33으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 신호전달 도메인을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 CD30으로부터의 세포내 영역을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 9와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 9를 포함한다. 또한 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자가 개시된다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 10과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 분자를 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 10을 포함한다. 또한 핵산 분자를 포함하는 벡터가 개시된다.

또한, 일부 실시형태에서, (a) Her2 신호 펩타이드가 아닌 신호 펩타이드; (b) Her2로부터의 세포외 도메인; 및 (c) Her2로부터의 막횡단 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드가 본원에 개시된다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 세포내 영역을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 CD8α로부터의 신호 펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 35와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 35를 포함한다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 35로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 21과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 21을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 도메인은 서열번호 21로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 28과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 28을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 28로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 11과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 11을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 11로 이루어진다. 또한 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자가 개시된다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 12와 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 12를 포함한다. 또한 핵산 분자를 포함하는 벡터가 개시된다.

추가로, 일부 실시형태에서, Trop2 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함하는 조작된 면역 세포가 본원에 개시된다. 일부 실시형태에서, Trop2 폴리펩타이드는 서열번호 15를 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산은 서열번호 16과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산은 서열번호 16를 포함한다.

또한, 일부 실시형태에서, (a) 신호 펩타이드; (b) (i) EGFR 도메인 III 및 (ii) 100개 미만의 아미노산의 길이를 갖는 EGFR 도메인 IV의 일부분을 포함하는 세포외 영역; (c) 힌지 영역; 및 (d) 막횡단 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드가 본원에 개시된다. 일부 실시형태에서, EGFR 도메인 IV의 일부분은 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 또는 35개 미만의 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 실시형태에서, EGFR 도메인 IV의 일부분은 33개 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 GM-CSFRα로부터의 신호 펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 36과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 36을 포함한다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 36으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포외 영역은 서열번호 22와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 영역은 서열번호 22를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포외 영역은 서열번호 22로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 CD8로부터의 힌지 영역이다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 37과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 37을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 37로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 신호전달 도메인을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 EGFR로부터의 세포내 영역을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 15와 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 15를 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 서열번호 15로 이루어진다. 또한, 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자가 개시된다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 16과 적어도 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 핵산 분자는 서열번호 16을 포함한다. 또한, 핵산 분자를 포함하는 벡터가 개시된다.

일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드, 핵산 분자, 또는 본 개시내용의 벡터를 세포 내로 도입하는 것을 포함하는, 조작된 세포를 생성하는 방법이 개시된다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 조작된 세포가 개시된다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포는 T 세포이다. 일부 실시형태에서, T 세포는 CD4⁺ T 세포, CD8⁺ T 세포, iNKT 세포, NKT 세포, γδ T 세포, 또는 조절 T 세포이다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포는 자연 살해(NK) 세포이다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포는 유도 만능 줄기 세포(induced pluripotent stem cell: iPSC)이다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포는 iPSC-유래 세포이다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포는 키메라 항원 수용체(CAR)를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 CAR에 작동가능하게 연결된다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포는 T 세포 수용체(TCR)를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 TCR에 작동가능하게 연결된다. 또한 본 개시내용의 조작된 세포를 포함하는 세포 집단이 개시된다.

추가로, 본 개시내용의 조작된 세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법이 개시되며, 상기 방법은 조작된 세포를 항원-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하며, 여기서 상기 항원 결합 단백질은 조작된 세포의 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 조작된 세포가 BCMA로부터의 세포외 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 BCMA-결합 단백질이다. 조작된 세포가 CD30으로부터의 세포외 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 CD30-결합 단백질이다. 조작된 세포가 Her2로부터의 세포외 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 Her2-결합 단백질이다. 조작된 세포가 Trop2 폴리펩타이드를 발현하는 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 Trop2-결합 단백질이다. 조작된 세포가 EGFR로부터의 세포외 도메인의 일부분을 포함하는 세포외 영역을 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 EGFR-결합 단백질이다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 항원-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 실시형태에서, 항원-결합 단백질은 영상화제에 연결되고, 상기 방법은 세포를 영상화제로 검출하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 항원-결합 단백질은 세포독성제(예를 들어, 항체-약물 접합체)에 연결된다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포를 항원-결합 단백질과 접촉시키는 것은 시험관내에서 수행된다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포를 항원-결합 단백질과 접촉시키는 것은 생체외에서 수행된다. 일부 실시형태에서, 조작된 세포를 항원-결합 단백질과 접촉시키는 것은 생체내에서 수행된다.

본원 전반에 걸쳐, 용어 "약"은 값이 측정 또는 정량화 방법에 대한 고유한 오차 변동을 포함함을 나타내기 위해 사용된다.

용어 "포함하는"과 관련하여 사용되는 경우, 용어 "a" 또는 "an"의 사용은 "하나"를 의미할 수 있지만, 이것은 또한 "하나 이상", "적어도 하나" 및 "하나 또는 하나 초과"의 의미와 일치한다.

어구 "및/또는"은 "및" 또는 "또는"을 의미한다.　예시하기 위해, A, B, 및/또는 C는 다음을 포함한다:　A 단독, B 단독, C 단독, A와 B의 조합, A와 C의 조합, B와 C의 조합, 또는 A, B와 C의 조합.　즉, "및/또는"은 '포괄적 또는'으로 작동한다.

단어 "포함하는"(및 예를 들어, "포함하다(comprise/comprises)"과 같은 '포함하는'의 임의의 형태), "갖는"(및 "갖다(have/has)"와 같은 '갖는'의 임의의 형태), "포함되는(including)"(및 "포함되다(includes/include)"와 같은 '포함되는'의 임의의 형태) 또는 "함유하는"(및 "함유하다(contains/contain)"과 같은 '함유하는'의 임의의 형태)은 포괄적이거나 개방형이며 추가의 인용되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다.

이들의 사용을 위한 조성물 및 방법은 본 명세서 전반에 걸쳐 개시된 임의의 성분 또는 단계를 "포함한다", "로 본질적으로 이루어진다", 또는 "로 이루어진다"일 수 있다. 개시된 임의의 성분 또는 단계"로 본질적으로 이루어진" 조성물 및 방법은 청구범위를 청구된 발명의 기본적이고 신규한 특징에 실질적으로 영향을 미치지 않는 특정된 물질 또는 단계로 제한한다.

본 명세서 전반에 걸쳐 "일 실시형태", "실시형태", "특정 실시형태", "관련된 실시형태", "특정 실시형태", "추가적인 실시형태" 또는 "추가 실시형태" 또는 이들의 조합에 대한 언급은 실시형태와 관련하여 기술된 특정 특성, 구조 또는 특징이 본 발명의 적어도 하나의 실시형태에 포함된다는 것을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전체적으로 다양한 곳에서 전술된 어구의 출현은 반드시 동일한 실시형태를 모두 언급할 필요는 없다. 게다가, 특정 특질, 구조 또는 특징은 하나 이상의 실시형태에서 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다.

치료, 진단 또는 생리학적 목적 또는 효과의 맥락에서 임의의 방법은 또한 기술된 치료, 진단, 생리학적 목적 또는 효과를 달성하거나 구현하기 위해 본원에 논의된 임의의 화합물, 조성물 또는 제제"의 용도"와 같은 "용도" 청구항 언어로 기재될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "조작된"은 세포, 핵산, 폴리펩타이드, 벡터 등을 포함하는, 인간의 손에 의해 생성된 실체를 언급한다. 적어도 일부 경우에, 조작된 실체는 합성이고 천연적으로 존재하지 않거나 본 개시내용에 사용되는 방식으로 구성되지 않는 요소를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 벡터는 재조합 핵산 기술을 통해 조작되고, 세포는 조작된 벡터의 형질감염 또는 형질도입을 통해 조작된다.

본원에 사용된 바와 같이, "예방하다" 및 "예방된", "예방하는" 등과 같은 유사 용어는 질환 또는 병태, 예를 들어, 암의 발생 또는 재발 가능성을 예방, 억제 또는 감소시키기 위한 접근법을 나타낸다. 이는 또한 질환 또는 병태의 발병 또는 재발을 지연시키거나 질환 또는 병태의 증상의 발생 또는 재발을 지연시키는 것을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, "예방" 및 유사 용어는 또한 질환 또는 병태의 강도, 효과, 증상 및/또는 부하를 감소시키는 것을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "대상체"는 일반적으로 가공처리 또는 분석을 진행하고, 구체적인 경우에 암을 갖거나 암을 갖는 것으로 의심되는 생물학적 샘플을 갖는 개체를 지칭한다. 대상체는 포유동물, 예를 들어, 인간, 연구 동물(예를 들어, 영장류, 래트, 마우스, 토끼), 가축(예를 들어, 소, 양, 염소, 돼지, 칠면조 및 닭), 가정용 애완동물(예를 들어, 개, 고양이 및 설치류), 말 및 트랜스제닉(transgenic) 비-인간 동물을 포함하여 방법 또는 재료의 대상인 임의의 유기체 또는 동물 대상체일 수 있다. 대상체는 환자일 수 있고, 예를 들어, 양성 또는 악성의 신생물 또는 암과 같은 질환(의학적 병태로서 언급될 수 있음)을 가질 수 있거나 갖는 것으로 의심될 수 있다. 대상체는 치료를 받고 있는 중이거나 치료를 받은 대상체일 수 있다. 대상체는 무증상일 수 있다. 대상체는 건강한 개체일 수 있지만 암의 예방을 원하는 개체일 수 있다. 용어 "개체"는 적어도 일부 경우에 상호교환적으로 사용될 수 있다. "대상체" 또는 "개체"는 본원에 사용된 바와 같이 의학 시설에 거주할 수 있거나 거주하지 않을 수 있고 의학 설비의 외래 환자로서 치료될 수 있다. 개체는 인터넷을 통해 하나 이상의 의학적 조성물을 투여받을 수 있다. 개체는 임의의 연령의 인간 또는 비-인간 동물을 포함할 수 있고, 따라서 성인 및 청소년(즉, 아동) 둘 다 및 유아를 포함하고, 자궁내 개체를 포함한다. 상기 용어가 의학적 치료의 필요성을 암시하는 것은 아니므로 개체가 자발적으로 또는 비자발적으로 임상 또는 기초 과학 연구의 지원 여부에 관계없이 실험의 일부가 될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, "치료" 또는 "치료하는"은, 질환 또는 병리학적 상태의 증상 또는 병리학에 대한 임의의 유익한 또는 바람직한 효과를 포함하며, 심지어 치료하고자 하는 질환 또는 병태, 예를 들어, 암의 하나 이상의 측정 가능한 마커의 최소 감소도 포함할 수 있다. 치료는 임의로 질환 또는 병태의 증상의 감소 또는 개선, 또는 질환 또는 병태의 진행의 지연을 포함할 수 있다. "치료"는 반드시 질환 또는 병태 또는 이의 관련 증상의 완전한 근절 또는 치유를 나타내지는 않는다.

본 발명의 일 실시형태와 관련하여 논의된 임의의 제한은 본 발명의 임의의 다른 실시형태에 적용될 수 있다는 것이 구체적으로 고려된다. 게다가, 본 발명의 임의의 조성물은 본 발명의 임의의 방법에서 사용될 수 있고, 본 발명의 임의의 방법은 본 발명의 임의의 조성물을 제조하거나 이용하기 위해 사용될 수 있다. 본 개시의 일 양상에 관해 논의된 임의의 실시형태는 본 개시의 다른 양상에 적용되고, 그 반대도 마찬가지이다. 예를 들어, 본원에 기술된 방법의 임의의 단계는 임의의 다른 방법에 적용될 수 있다. 더욱이, 본원에 기술된 임의의 방법은 임의의 단계 또는 단계들의 조합을 배제할 수 있다. 본원 실시예에 제시된 실시형태의 양상은 또한 상이한 실시예의 다른 곳, 또는 요약, 상세한 설명, 청구범위 및 도면의 간단한 설명과 같은 본 출원의 다른 곳에 논의된 실시형태의 맥락에서 구현될 수 있는 실시형태이다.

본원 발명의 다른 목적, 특징 및 이점은 하기 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 그러나, 본 발명의 사상 및 범위 내의 다양한 변경 및 변형이 본 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백하게 될 수 있기 때문에, 본 발명의 구체적 실시형태를 명시하고 있지만, 상세한 설명 및 구체적인 예는 단지 예로서 주어진 것임을 이해해야 한다.

하기 도면은 본 명세서의 일부를 형성하고, 본 발명의 특정한 양상을 추가로 입증하기 위해 포함된다. 본원에 제시된 구체적 실시형태의 상세한 설명과 함께 이들 도면 중 하나 이상을 참조하여 본 개시내용을 더 잘 이해할 수 있다.
도 1은 3가지 상이한 막 결합형 수용체 중 하나를 함유하는 플라스미드로 형질감염된 293T 세포의 GFP 발현 및 BCMA 염색을 도시한다: PD-L1 힌지 및 막횡단 도메인에 융합된 BCMA 세포외 도메인, CD8α 힌지 및 막횡단 도메인에 융합된 BCMA 세포외 도메인, 또는 전장의 야생형 BCMA.
도 2는 CD19 CAR과 2가지 상이한 BCMA 융합 작제물 중 하나를 공동발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 1차 T 세포(BCL6 및 BCL2L1로 형질도입됨)의 CD19 CAR 및 BCMA 염색을 도시한다: PD-L1 힌지 및 막횡단 도메인을 갖지만 기능적 세포내 도메인을 갖지 않는 BCMA 세포외 도메인(좌측 패널) 또는 PD-L1 힌지 및 막횡단 도메인 및 Trop-2의 세포질 도메인과 융합된 BCMA 세포외 도메인(tBCMA; 중간 패널). 미염색된 대조군은 우측 패널에 도시된다.
도 3은 항-APC 자기 비드를 사용하여 풍부화된 세포의 CD19 CAR 및 BCMA 염색을 도시한다.
도 4는 표시된 농도의 벨란타맙 마포도틴으로 처리된, BCMA 융합 단백질로 형질도입된 1차 T 세포(BCL6 및 BCL2L1로 형질도입됨)에 대한 살아있는 세포의 변화 퍼센트를 도시한다.
도 5는 각각 도시된 농도의 벨란타맙 마포도틴(0, 12.5 또는 25㎍)으로 처리된, BCMA 세포외 도메인 단독, CD317로부터의 세포질 도메인과 융합된 BCMA 세포외 도메인, 또는 CD3γ로부터의 세포질 도메인과 융합된 BCMA 세포외 도메인을 발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 저캣(Jurkat) 세포의 BCMA 염색(가로축)을 도시한다.
도 6은 BCL6 및 BCL2L1로 형질감염된 1차 T 세포에 대한 CD30 및 CD69 염색을 도시한다.
도 7은 표시된 시간 동안 도시된 농도의 브렌툭시맙 베도틴으로 처리된 BCL6 및 BCL2L1로 형질감염된 1차 T 세포에 대한 살아있는 세포의 변화 퍼센트를 도시한다.
도 8은 CD19 CAR 및 1) Her2 도메인 4와 2) BCMA 세포질 꼬리와 융합된 CD30 세포외 도메인 둘 다를 암호화하는 작제물의 개략도를 도시한다.
도 9는 도 8에 도시된 작제물로 형질도입된 293T 세포의 CD30 염색(좌측 패널) 및 Her2 염색(중간 패널)을 도시한다. 우측 패널은 표시된 농도의 브렌툭시맙으로 처리한 후 4일차에 살아있는 세포 수 변화를 도시한다.
도 10은 CD19 CAR 및 1) Her2 도메인 4와 2) 절단된 EGFR 둘 다를 암호화하는 작제물의 개략도를 도시한다.
도 11A는 도 10에 제시된 작제물로 형질도입된 저캣 T 세포의 Her2 및 CD19 CAR 염색을 도시한다. 도 11B는 세포를 표시된 농도의 트라스투주맙(Herceptin®)으로 처리한 후 살아있는 세포 변화 퍼센트를 도시한다.
도 12는 CD19 CAR 및 1) Her2 도메인 4와 2) Trop2 둘 다를 암호화하는 작제물의 개략도를 도시한다.
도 13은 도 12에 제시된 작제물로 형질감염된 293T 세포의 CD19 CAR 및 Trop2 염색을 도시한다.
도 14는 CD19 CAR 및 1) Her2 도메인 4와 2) 절단된 EGFR 둘 다를 암호화하는 작제물의 개략도를 도시한다.
도 15는 도 14에 도시된 작제물로 형질감염된 293T 세포의 CD19 CAR 및 EGFR 염색(세툭시맙)을 도시한다.
도 16a는 시험관내 효능을 갖는 tBCMA 안전 스위치를 도시한다. tBCMA 안전 스위치, BCL6 및 BCL2L1로 형질감염된 T 세포는 좌측의 막대 그래프 클러스터이고, tBCMA 안전 스위치, CD19 CAR, BCL6 및 BCL2L1로 형질감염된 T 세포는 중앙의 막대 그래프 클러스터이고, 대조군 비-형질감염 라지(Raji) 세포는 우측의 막대 그래프 클러스터이다.
도 16b는 생체내 효능을 갖는 tBCMA 안전 스위치를 도시한다.

본 개시내용의 양상은 세포를 검출, 단리, 고갈 및/또는 정제하는 데 유용한 폴리펩타이드에 관한 것이다. 따라서, 본 개시내용의 특정 양상은 예를 들어 BCMA로부터의 세포외 도메인, Trop-2으로부터의 세포외 도메인, CD30으로부터의 세포외 도메인, EGFR로부터의 세포외 도메인(예를 들어, 도메인 III 및 EGFR로부터의 도메인 IV의 일부) 및/또는 Her2로부터의 세포외 도메인(예를 들어, HER2로부터의 도메인 IV)을 포함하는 키메라 폴리펩타이드에 관한 것이다. 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 또한 신호 펩타이드, 힌지, 막횡단 영역 및/또는 하나 이상의 세포내 영역과 같은 하나 이상의 추가 도메인 또는 영역을 포함할 수 있다. 또한, 본 개시내용의 하나 이상의 폴리펩타이드(예를 들어, 키메라 폴리펩타이드)를 포함하는 세포(예를 들어, 치료 세포)뿐만 아니라 이러한 세포를 검출, 단리, 고갈 및/또는 정제하는 방법이 개시된다.

특정 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 예를 들어 세포 치료와 연관된 하나 이상의 특정 목적을 위해 이용된다. 특정 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 특정 치료 세포의 사용을 직접 또는 간접적으로 제어하기 위해 사용되며, 세포 요법의 모니터링, 세포 요법에서 세포의 검출, 세포 요법을 위한 세포의 단리 및/또는 원하는 사건 및/또는 시간에 세포 요법의 종료를 가능하게 한다. 특정 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 형질도입 마커, 안전 스위치, 또는 둘 다로서 이용된다. 일부 경우에, 본원에 포함된 키메라 폴리펩타이드는 세포에서 형질도입 마커 또는 선택 마커로서 사용되지만, 또 다른 안전 스위치는 세포의 억제를 제어한다. 다른 경우에, 키메라 폴리펩타이드는 임의로 동일한 세포의 또 다른 안전 스위치 이외에도 세포의 안전 스위치로서 사용된다.

안전 스위치 키메라 폴리펩타이드는 필요할 때 세포의 사멸을 유발할 목적으로 형질도입/형질감염된 세포에서 사용될 수 있다. 키메라 폴리펩타이드를 이용하는 세포는 안전 스위치인 하나 이상의 상이한 키메라 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 안전 스위치 키메라 폴리펩타이드는, 프로드럭 또는 다른 제제의 투여 시 유전자 산물이 숙주 세포를 사멸시키는 화합물로 전이되도록 하는 "자살 유전자"로서 이용된다. 다른 실시형태에서, 안전 스위치 키메라 폴리펩타이드는 원하는 경우 자살 유전자 산물을 표적화하는 제제(예컨대, 항체)에 의해 표적화되는 유전자 산물을 암호화하는 자살 유전자로서 이용된다.

일부 경우에, 개체는 세포가 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포 요법을 받는다. 세포 요법을 받고 있고/있거나 세포 요법을 받은 개체가 사이토카인 방출 증후군, 신경독성, 아나필락시스/알레르기 및/또는 표적-적중/표적외(on-target/off) 종양 독성(예를 들어)과 같은 하나 이상의 이상 사례의 하나 이상의 증상을 나타내거나 임박한 증상을 포함하여 하나 이상의 증상이 나타날 위험이 있는 것으로 간주될 때, 개체는 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하는 하나 이상의 제제의 이용을 받게 될 수 있다. 키메라 폴리펩타이드에 결합하는 제제의 사용은 요법을 위한 계획된 프로토콜의 일부일 수 있거나 그 사용에 대한 인식된 필요성이 있을 때에만 사용될 수 있다. 일부 경우에, 세포 요법은 이 요법이 더 이상 필요하지 않기 때문에 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인을 표적화하는 제제(들)의 사용에 의해 종료된다.

안전 스위치로서 키메라 폴리펩타이드의 이용은 개체에 대한 적어도 하나의 이상 사례가 개시될 때 실시될 수 있으며, 해당 이상 사례는 세포 요법의 시작부터 연속적일 수 있거나 연속적이지 않을 수 있는 일상적인 모니터링을 포함하는 임의의 수단에 의해 인지될 수 있다. 이상 사례(들)은 검사 및/또는 테스트 시 검출될 수 있다. 개체가 사이토카인 방출 증후군(사이토카인 폭풍으로도 지칭될 수 있음)을 갖는 경우, 개체는 상승된 염증성 사이토카인(들)(단순히 예로서, 인터페론 감마, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자, IL-10, IL-6 및 TNF-알파); 발열; 피로; 저혈압; 저산소증, 빈맥; 오심; 모세혈관 누출; 심장/신장/간 기능장애; 또는 이들의 조합을 가질 수 있다. 개체가 신경독성을 갖는 경우, 혼돈, 섬망, 실어증 및/또는 발작을 가질 수 있다. 일부 경우에, 개체는 C-반응성 단백질, IL-6, TNF-알파 및/또는 페리틴과 같은 사이토카인 방출 증후군의 발병 및/또는 중증도와 연관된 마커에 대해 테스트된다.

특정 실시형태에서, 세포 요법은 하나 이상의 이종 단백질을 암호화하는 하나 이상의 벡터를 포함할 수 있고, 이러한 이종 단백질(들)은 세포가 치료적이 되게 만드는 조성물일 수 있다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 이종 단백질을 암호화하는 벡터는 하나 이상의 안전 스위치를 암호화한다. 예를 들어, 안전 스위치는 CAR과 동일한 벡터 상에 있을 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 안전 스위치가 CAR과 동일한 벡터에 존재하는 경우, 안전 스위치 및 CAR은 예를 들어 IRES 또는 2A 요소에 의해 분리될 수 있다.

I. 폴리펩타이드

본 개시내용의 양상은 키메라 폴리펩타이드를 포함한 폴리펩타이드 및 이의 사용 방법에 관한 것이다. 본원에 사용된 바와 같이, "단백질" 또는 "폴리펩타이드"는 적어도 5개의 아미노산 잔기를 포함하는 분자를 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "야생형"은 유기체에서 천연적으로 발생하는 분자의 내인성 버전을 의미한다. 일부 실시형태에서는, 단백질 또는 폴리펩타이드의 야생형 버전이 사용되지만, 본 개시내용의 많은 실시형태에서는, 변형된 단백질 또는 폴리펩타이드가 사용된다. 상기 설명한 용어들은 상호교환적으로 사용될 수 있다. "변형된 단백질" 또는 "변형된 폴리펩타이드" 또는 "변이체"는 화학적 구조, 특히 이의 아미노산 서열이 야생형 단백질 또는 폴리펩타이드에 비해 변경된 단백질 또는 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 변형된/변이체 단백질 또는 폴리펩타이드는 적어도 하나의 변형된 활성 또는 기능을 갖는다(단백질 또는 폴리펩타이드가 다수의 활성 또는 기능을 가질 수 있다는 것을 인식할 때). 변형된/변이체 단백질 또는 폴리펩타이드가 하나의 활성 또는 기능에 관해서는 변경되지만 다른 측면에서는 야생형 활성 또는 기능을 유지할 수 있다는 것이 구체적으로 고려된다.

단백질이 본원에서 구체적으로 언급되는 경우, 이는 일반적으로 고유(native)(야생형) 또는 재조합(변형된) 단백질, 또는 임의로, 임의의 신호 서열이 제거된 단백질을 지칭하는 것이다. 단백질은 이것이 고유인 유기체로부터 직접적으로 단리되거나, 재조합 DNA/외인성 발현 방법에 의해 생산되거나, 고체상 펩타이드 합성(SPPS) 또는 다른 시험관내 방법에 의해 생산될 수 있다. 특정 실시형태에서, 폴리펩타이드(예를 들어, 항체 또는 이의 단편)를 암호화하는 핵산 서열이 혼입된 단리된 핵산 분절 및 재조합 벡터가 있다. 용어 "재조합"은 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드의 명칭과 함께 사용될 수 있고, 이는 일반적으로 시험관내에서 조작된 또는 이러한 분자의 복제 생성물인 핵산 분자로부터 제조된 폴리펩타이드를 지칭한다.

특정 실시형태에서, 단백질 또는 폴리펩타이드(야생형 또는 변형된)의 크기는, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775, 800, 825, 850, 875, 900, 925, 950, 975, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1750, 2000, 2250, 2500개 아미노산 잔기 또는 그 이상, 및 그 내에서 추론가능한 임의의 범위, 또는 본원에서 기술되거나 인용된 상응하는 아미노 서열의 유도체를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 폴리펩타이드는 이들의 상응하는 야생형 형태보다 더 짧게 만드는 절두(truncation)에 의해 돌연변이될 수 있고, 또한, 폴리펩타이드는 이종 단백질 또는 폴리펩타이드 서열을 특정 기능(예를 들어, 표적화 또는 국소화, 증진된 면역원성, 정제 목적 등을 위해)과 융합 또는 접합시켜 변경될 수 있는 것으로 고려된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "도메인"은 단백질 또는 폴리펩타이드의 임의의 별개의 기능적 또는 구조적 단위를 지칭하며, 일반적으로 당업자가 인식할 수 있는 구조 또는 기능을 갖는 아미노산의 서열을 지칭한다.

폴리펩타이드, 단백질, 또는 본 개시내용의 이러한 폴리펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 또는 50개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 또는 그 이상의 변이체 아미노산 또는 핵산 치환을 포함할 수 있거나, 서열번호 1 내지 48의 적어도 또는 최대 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 300, 400, 500, 550, 1000개 또는 그 이상의 연속 아미노산 또는 뉴클레오타이드, 또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위와 적어도 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 유사하거나 동일하거나 상동일 수 있다.

일부 실시형태에서, 단백질, 폴리펩타이드, 또는 핵산은 각각 서열번호 1 내지 48의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 1 내지 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 620, 621, 622, 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 696, 697, 698, 699, 700, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 710, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 735, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 757, 758, 759, 760, 761, 762, 763, 764, 765, 766, 767, 768, 769, 770, 771, 772, 773, 774, 775, 776, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 800, 801, 802, 803, 804, 805, 806, 807, 808, 809, 810, 811, 812, 813, 814, 815, 816, 817, 818, 819, 820, 821, 822, 823, 824, 825, 826, 827, 828, 829, 830, 831, 832, 833, 834, 835, 836, 837, 838, 839, 840, 841, 842, 843, 844, 845, 846, 847, 848, 849, 850, 851, 852, 853, 854, 855, 856, 857, 858, 859, 860, 861, 862, 863, 864, 865, 866, 867, 868, 869, 870, 871, 872, 873, 874, 875, 876, 877, 878, 879, 880, 881, 882, 883, 884, 885, 886, 887, 888, 889, 890, 891, 892, 893, 894, 895, 896, 897, 898, 899, 900, 901, 902, 903, 904, 905, 906, 907, 908, 909, 910, 911, 912, 913, 914, 915, 916, 917, 918, 919, 920, 921, 922, 923, 924, 925, 926, 927, 928, 929, 930, 931, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 946, 947, 948, 949, 950, 951, 952, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971, 972, 973, 974, 975, 976, 977, 978, 979, 980, 981, 982, 983, 984, 985, 986, 987, 988, 989, 990, 991, 992, 993, 994, 995, 996, 997, 998, 999, 또는 1000개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)를 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 단백질, 폴리펩타이드, 또는 핵산은 각각 서열번호 1 내지 48의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 620, 621, 622, 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 630, 631, 632, 633, 634, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 696, 697, 698, 699, 700, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 710, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 735, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 755, 756, 757, 758, 759, 760, 761, 762, 763, 764, 765, 766, 767, 768, 769, 770, 771, 772, 773, 774, 775, 776, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 800, 801, 802, 803, 804, 805, 806, 807, 808, 809, 810, 811, 812, 813, 814, 815, 816, 817, 818, 819, 820, 821, 822, 823, 824, 825, 826, 827, 828, 829, 830, 831, 832, 833, 834, 835, 836, 837, 838, 839, 840, 841, 842, 843, 844, 845, 846, 847, 848, 849, 850, 851, 852, 853, 854, 855, 856, 857, 858, 859, 860, 861, 862, 863, 864, 865, 866, 867, 868, 869, 870, 871, 872, 873, 874, 875, 876, 877, 878, 879, 880, 881, 882, 883, 884, 885, 886, 887, 888, 889, 890, 891, 892, 893, 894, 895, 896, 897, 898, 899, 900, 901, 902, 903, 904, 905, 906, 907, 908, 909, 910, 911, 912, 913, 914, 915, 916, 917, 918, 919, 920, 921, 922, 923, 924, 925, 926, 927, 928, 929, 930, 931, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 946, 947, 948, 949, 950, 951, 952, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971, 972, 973, 974, 975, 976, 977, 978, 979, 980, 981, 982, 983, 984, 985, 986, 987, 988, 989, 990, 991, 992, 993, 994, 995, 996, 997, 998, 999, 또는 1000개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 연속 아미노산 또는 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드, 단백질, 또는 핵산은 각각 서열번호 1 내지 48 중 하나와 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 유사하거나 동일하거나 상동인 적어도, 최대 또는 정확히 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 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959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971, 972, 973, 974, 975, 976, 977, 978, 979, 980, 981, 982, 983, 984, 985, 986, 987, 988, 989, 990, 991, 992, 993, 994, 995, 996, 997, 998, 999, 또는 1000개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 연속 아미노산 또는 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.

일부 양상에서, 서열번호 1 내지 48 중 임의의 것의 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 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11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 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429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 518, 519, 520, 521, 522, 523, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539, 540, 541, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583, 584, 585, 586, 587, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 620, 621, 622, 623, 624, 625, 626, 627, 628, 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829, 830, 831, 832, 833, 834, 835, 836, 837, 838, 839, 840, 841, 842, 843, 844, 845, 846, 847, 848, 849, 850, 851, 852, 853, 854, 855, 856, 857, 858, 859, 860, 861, 862, 863, 864, 865, 866, 867, 868, 869, 870, 871, 872, 873, 874, 875, 876, 877, 878, 879, 880, 881, 882, 883, 884, 885, 886, 887, 888, 889, 890, 891, 892, 893, 894, 895, 896, 897, 898, 899, 900, 901, 902, 903, 904, 905, 906, 907, 908, 909, 910, 911, 912, 913, 914, 915, 916, 917, 918, 919, 920, 921, 922, 923, 924, 925, 926, 927, 928, 929, 930, 931, 932, 933, 934, 935, 936, 937, 938, 939, 940, 941, 942, 943, 944, 945, 946, 947, 948, 949, 950, 951, 952, 953, 954, 955, 956, 957, 958, 959, 960, 961, 962, 963, 964, 965, 966, 967, 968, 969, 970, 971, 972, 973, 974, 975, 976, 977, 978, 979, 980, 981, 982, 983, 984, 985, 986, 987, 988, 989, 990, 991, 992, 993, 994, 995, 996, 997, 998, 999, 또는 1000개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 연속 아미노산 또는 뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 분자 또는 폴리펩타이드가 있다.

본 개시내용의 폴리펩타이드 및 펩타이드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 또는 그 이상의 변이체 아미노산 치환을 포함할 수 있거나 서열번호 1 내지 48 중 임의의 것의 적어도 또는 최대 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 또는 17개의 연속 아미노산 또는 뉴클레오타이드, 또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위와 적어도 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 유사하거나 동일하거나 상동일 수 있다.

일부 실시형태에서, 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 핵산은 서열번호 1 내지 48 중 임의의 것의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 1 내지 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)를 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 핵산은 서열번호 1 내지 48의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 연속 아미노산을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 핵산은 서열번호 1 내지 48 중 하나와 적어도, 최대 또는 정확히 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 유사하거나 동일하거나 상동인 서열번호 1 내지 48 중 임의의 것의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 연속 아미노산 또는 뉴클레오타이드를 포함할 수 있거나, 적어도 포함할 수 있거나, 최대로 포함할 수 있다.

일부 양상에서 서열번호 1 내지 48 중 임의의 것의 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10에서 시작하고 서열번호 1 내지 48 중 임의의 것의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 연속 아미노산 또는 뉴클레오타이드를 포함하거나 적어도 포함하거나 최대로 포함하는 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 핵산이 있다.

펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 핵산은 서열번호 1 내지 48에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 치환을 포함할 수 있거나, 적어도 포함할 수 있거나, 최대로 포함할 수 있다. 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 핵산은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 아미노산 또는 뉴클레오타이드 치환을 포함할 수 있거나, 적어도 포함할 수 있거나, 최대로 포함할 수 있고, 치환(들)은 서열번호 1 내지 48에 비해 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 및/또는 25에 존재할 수 있다. 아미노산 치환의 경우, 치환(예를 들어, 위치(들) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 및/또는 25에서)은 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 또는 발린으로의 치환일 수 있다. 핵산 치환의 경우, 치환(예를 들어, 위치(들) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 및/또는 25에서)은 구아닌, 시토신, 아데닌, 티민, 우라실 또는 기타 뉴클레오타이드로의 치환일 수 있다.

다양한 유전자에 대한 뉴클레오타이드뿐만 아니라 단백질, 폴리펩타이드 및 펩타이드 서열은 이전에 개시되었으며, 인지된 전산화된 데이터베이스에서 찾을 수 있다. 2가지 통상적으로 사용되는 데이터베이스는 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information)의 GENBANK® 및 GENPEPT® 데이터베이스(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/에서의 월드 와이드 웹(World Wide Web) 상의) 및 보편적 단백질 자원(The Universal Protein Resource: UniProt; uniprot.org에서의 월드 와이드 웹 상)이다. 이들 유전자에 대한 암호화 영역은 본원에 개시된 기술을 사용하거나 당업자에게 공지된 바와 같이 증폭 및/또는 발현될 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 조성물에는 ml당 약 0.001 mg 내지 약 10 mg의 총 폴리펩타이드, 펩타이드, 및/또는 단백질이 존재하는 것으로 고려된다. 조성물 중의 단백질의 농도는 약, 적어도 약 또는 최대 약 0.001, 0.010, 0.050, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 mg/ml 또는 그 이상(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)일 수 있다.

A. 키메라 폴리펩타이드

본원에 개시된 바와 같이, "키메라 폴리펩타이드"는 2개 이상의 상이한 폴리펩타이드로부터 유래된 영역, 도메인 또는 기타 부분을 갖는 임의의 폴리펩타이드를 기술한다. 예를 들어, 키메라 폴리펩타이드의 일례는 제1 단백질로부터 유래된 제1 도메인 및 제2 단백질로부터 유래된 제2 도메인을 갖는 폴리펩타이드이다. 영역 또는 도메인이 폴리펩타이드의 적어도 일부와 동일한 서열을 갖는 경우, 상기 영역 또는 도메인은 단백질 또는 폴리펩타이드"로부터" 또는 "로부터 유래된" 것으로 기술된다. 따라서, 예를 들어, PDL1로부터의 힌지 영역(또한 PDL1로부터 "유래된")은 PDL1 단백질의 힌지 영역의 적어도 일부와 동일한 서열을 갖는 힌지 영역을 기술한다. 단백질 또는 폴리펩타이드"로부터 유래된" 영역 또는 도메인은 또한 단백질 또는 폴리펩타이드 영역 또는 도메인으로 기술될 수 있으며; 예를 들어, CD30으로부터 유래된 막횡단 도메인은 "CD30 막횡단 도메인"으로도 기술될 수 있다. 키메라 폴리펩타이드는 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 상이한 폴리펩타이드로부터의 영역을 포함할 수 있다. 예시적인 키메라 폴리펩타이드는 키메라 항원 수용체(CAR) 및 다른 키메라 세포 표면 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 BCMA로부터의 세포외 도메인 및 BCMA가 아닌 단백질로부터 유래된 하나 이상의 추가 영역 또는 도메인을 포함하는 폴리펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 CD30으로부터의 세포외 도메인 및 CD30이 아닌 단백질로부터 유래된 하나 이상의 추가 영역 또는 도메인을 포함하는 폴리펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 Her2로부터의 세포외 도메인 및 Her2가 아닌 단백질로부터 유래된 하나 이상의 추가 영역 또는 도메인을 포함하는 폴리펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 EGFR로부터의 세포외 도메인 및 EGFR이 아닌 단백질로부터 유래된 하나 이상의 추가 영역 또는 도메인을 포함하는 폴리펩타이드이다. 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는, 예를 들어, 신호 펩타이드(예를 들어, 조직형 플라스미노겐 활성화제(tPA) 신호 펩타이드, CD8α 신호 펩타이드 또는 GM-CSFRα 신호 펩타이드), 세포외 도메인(예를 들어, BCMA로부터의 세포외 도메인, CD30으로부터의 세포외 도메인, Her2로부터의 세포외 도메인, 또는 EGFR로부터의 세포외 도메인), 힌지 도메인(예를 들어, PDL1로부터의 힌지 도메인 또는 CD8의 힌지 도메인), 막횡단 도메인(예를 들어, PDL1의 막횡단 도메인, CD8로부터의 막횡단 도메인, CD30으로부터의 막횡단 도메인, 또는 Her2로부터의 막횡단 도메인), 세포내 영역(예를 들어, CD8로부터의 세포내 영역, CD317로부터의 세포내 영역, CD3γ로부터의 세포내 영역, 또는 BCMA로부터의 세포내 영역), 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 이들 영역 또는 도메인 중 임의의 하나 이상은 본 개시내용의 특정 실시형태로부터 제외될 수 있다.

일부 실시형태에서, BCMA로부터의 세포외 도메인, 힌지 영역, 막횡단 도메인, 및 세포내 영역을 포함하는 키메라 폴리펩타이드가 본원에 개시된다. 키메라 폴리펩타이드는 BCMA 단백질로부터의 세포외 도메인과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일한 아미노산 서열을 갖는 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, BCMA로부터의 세포외 도메인은 서열번호 19와 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다.

본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는, 예를 들어, CD8α, PDL1, IgG4, IgG1, 또는 CD34로부터의 힌지 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 CD8α 힌지, PDL1 힌지, IgG4 힌지, IgG1 힌지, 또는 CD34 힌지와 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 PDL1 힌지와 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 23과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 23을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 CD8α 힌지와 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 CD8α로부터의 힌지 영역이다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 24와 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 37과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열번호 37을 포함한다.

본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 하나 이상의 막횡단 단백질로부터의 막횡단 영역을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는, 예를 들어, 4-1BB/CD137, T 세포 수용체의 알파 쇄, T 세포 수용체의 베타 쇄, CD2, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD4, CD7, CD8α, CD8β, CD9, CD11a (ITGAL), CD11b (ITGAM), CD11c (ITGAX), CD11d (ITGAD), CD16, CD18 (ITGB2), CD19 (B4), CD22, CD27 (TNFRSF7), CD28, CD29 (ITGB1), CD30 (TNFRSF8), CD33, CD37, CD40 (TNFRSF5), CD48 (SLAMF2), CD49a (ITGA1), CD49d (ITGA4), CD49f (ITGA6), CD64, CD66a (CEACAM1), CD66b (CEACAM8), CD66c (CEACAM6), CD66d (CEACAM3), CD66e (CEACAM5), CD69 (CLEC2), CD79A (B-세포 항원 수용체 복합체-연관 알파 쇄), CD79B (B-세포 항원 수용체 복합체-연관 베타 쇄),CD80, CD84 (SLAMF5), CD86, CD96 (Tactile), CD100 (SEMA4D), CD103 (ITGAE), CD123, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD154, CD158A (KIR2DL1), CD158B1 (KIR2DL2), CD158B2 (KIR2DL3), CD158C (KIR3DP1), CD158D (KIRDL4), CD158F1 (KIR2DL5A), CD158F2 (KIR2DL5B), CD158K (KIR3DL2), CD160 (BY55), CD162 (SELPLG), CD226 (DNAM1), CD229 (SLAMF3), CD244 (SLAMF4), CD247 (CD3-제타), CD258 (LIGHT), CD268 (BAFFR), CD270 (TNFSF14), CD272 (BTLA), CD276 (B7-H3), CD279 (PD-1), CD314 (NKG2D), CD319 (SLAMF7), CD335 (NK-p46), CD336 (NK-p44), CD337 (NK-p30), CD352 (SLAMF6), CD353 (SLAMF8), CD355 (CRTAM), CD357 (TNFRSF18), 유도성 T 세포 보조자극제 (ICOS), LFA-1 (CD11a/CD18), NKG2C, DAP-10, ICAM-1, NKp80 (KLRF1), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, LFA-1, SLAMF9, LAT, GADS (GrpL), SLP-76 (LCP2), PAG1/CBP, CD83 리간드, Fc 감마 수용체, MHC 클래스 1 분자, MHC 클래스 2 분자, 또는 TNF 수용체 단백질로부터의 막횡단 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 T 세포 수용체의 알파 또는 베타 쇄이거나 CD28, CD3ε, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134, CD137 또는 CD154로부터의 막횡단 도메인이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 CD8α 막횡단 도메인과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 CD8α로부터의 막횡단 도메인이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 26을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 CD30 막횡단 도메인과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 CD30으로부터의 막횡단 도메인이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 27과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 27을 포함한다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 Her2 막횡단 도메인과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 Her2로부터의 막횡단 도메인이다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 28과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 서열번호 28을 포함한다.

본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 하나 이상의 막횡단 단백질로부터의 세포내 영역(또한 "세포질 영역")을 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "세포내 영역"은 폴리펩타이드가 세포 표면에서 발현될 때 세포 표면의 세포내(또는 "세포질") 측면에 존재하는 폴리펩타이드의 영역을 기술한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 신호전달 도메인을 포함하지 않는다(즉, 임의의 세포내 신호를 전달하거나 변환할 수 없다). 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 BCMA로부터의 것이 아니다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 BCMA로부터의 것이다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 CD317로부터의 것이다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 CD3γ로부터의 것이다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2개의 아미노산 잔기, 또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위를 포함하거나 최대로 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열 RLR(서열번호 29)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열 RLR(서열번호 29)로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열 LYCWVR(서열번호 30)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열 LYCWVR(서열번호 30)로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 서열번호 31과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 31을 포함한다. 일부 실시형태에서, 서열번호 32와 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 32를 포함한다. 일부 실시형태에서, 서열번호 33과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 적어도 동일하거나 최대로 동일하다. 일부 실시형태에서, 세포내 영역은 서열번호 33을 포함한다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 조직형 플라스미노겐 활성화제(tPA) 신호 펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 34와 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 최대로 동일하거나 적어도 동일하다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 34를 포함한다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 CD8α 신호 펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 35와 적어도 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 최대로 동일하거나 적어도 동일하다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 35를 포함한다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 GM-CSFRα 신호 펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 36과 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 동일하거나 최대로 동일하거나 적어도 동일하다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 36을 포함한다.

B. 서열

키메라 폴리펩타이드 및 이의 부분, 영역 및 도메인을 포함하는 특정 폴리펩타이드의 아미노산 서열은 표 1에 제공되어 있다.

C. 변이체 폴리펩타이드

하기는 단백질의 아미노산 서브유닛을 변화시켜 동등한, 또는 심지어 개선된 2세대 변이체 폴리펩타이드 또는 펩타이드를 생성하는 것에 대한 논의이다. 예를 들어, 특정 아미노산은 항체의 항원-결합 영역 또는 기질 분자 상의 결합 부위와 같은 구조와의 상호작용적 결합 능력의 뚜렷한 손실과 함께 또는 뚜렷한 손실 없이 단백질 또는 폴리펩타이드 서열 내의 다른 아미노산을 대체할 수 있다. 단백질의 기능적 활성을 한정하는 것은 단백질의 상호작용 능력 및 성질이기 때문에, 단백질 서열에서 및 이의 상응하는 DNA 암호화 서열에서 특정 아미노산 치환이 이루어질 수 있고, 그럼에도 불구하고, 유사한 또는 원하는 특성을 갖는 단백질을 생산할 수 있다. 따라서, 다양한 변화가 이들의 생물학적 유용성 또는 활성의 뚜렷한 손실 없이 단백질을 암호화하는 유전자의 DNA 서열에서 이루어질 수 있다는 것이 본 발명자에 의해 고려된다.

용어 "기능적으로 동등한 코돈"은 본원에서 아르기닌에 대한 6개의 상이한 코돈과 같은 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈을 지칭하기 위해 사용된다. 또한 생물학적으로 동등한 아미노산을 암호화하는 코돈 또는 코돈들의 변화를 지칭하는 "중립 치환" 또는 "중립 돌연변이"가 고려된다.

본 개시내용의 아미노산 서열 변이체는 치환, 삽입, 또는 결실 변이체일 수 있다. 본 개시내용의 폴리펩타이드의 변이는 야생형과 비교하여 단백질 또는 폴리펩타이드의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50개 또는 그 이상의 비-연속 또는 연속 아미노산에 영향을 줄 수 있다. 변이체는 본원에서 제공되거나 인용된 임의의 서열과 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%(그 사이의 모든 값 및 범위를 포함) 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 변이체는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 또는 그 이상의 치환체 아미노산을 포함할 수 있다.

또한, 아미노산 및 핵산 서열이 추가 잔기, 예컨대 추가 N- 또는 C-말단 아미노산, 또는 5' 또는 3' 서열을 각각 포함할 수 있고, 서열이 단백질 발현에 관련된 생물학적 단백질 활성의 유지를 포함하는 상기 열거된 기준을 충족하는 한, 본원에 개시된 서열 중 하나에 제시된 것과 여전히 본질적으로 동일할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 말단 서열의 첨가는 특히, 예를 들어 암호화 영역의 5' 또는 3' 부분을 측접(flanking)하는 다양한 비-암호화 서열을 포함할 수 있는 핵산 서열에 적용된다.

결실 변이체는 전형적으로 고유 또는 야생형 단백질의 하나 이상의 잔기가 결여되어 있다. 개별 잔기가 결실되거나 다수의 연속 아미노산이 결실될 수 있다. 정지 코돈을 암호화 핵산 서열 내로 (치환 또는 삽입에 의해) 도입하여 절두된 단백질을 생성할 수 있다.

삽입 돌연변이는 전형적으로 폴리펩타이드 내의 비-말단 지점에서 아미노산 잔기의 첨가를 포함한다. 이것은 하나 이상의 아미노산 잔기의 삽입을 포함할 수 있다. 말단 첨가가 또한 생성될 수 있고 본원에서 기술되거나 인용된 하나 이상의 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 다량체 또는 연쇄체(concatemer)인 융합 단백질을 포함할 수 있다.

치환 변이체는 전형적으로 단백질 또는 펩타이드 내의 하나 이상의 부위에서 하나의 아미노산의 다른 아미노산으로의 교환을 함유하고, 다른 기능 또는 특성의 손실과 함께 또는 손실 없이 폴리펩타이드의 하나 이상의 특성을 조절하도록 설계될 수 있다. 치환은 보존적일 수 있으며, 즉 하나의 아미노산이 유사한 화학적 특성을 가진 아미노산으로 대체된다. "보존적 아미노산 치환"은 하나의 아미노산 부류의 구성원을 동일한 부류의 다른 구성원으로 교환하는 것을 포함할 수 있다. 보존적 치환은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 알라닌에서 세린; 아르기닌에서 라이신; 아스파라긴에서 글루타민 또는 히스티딘; 아스파르테이트에서 글루타메이트; 시스테인에서 세린; 글루타민에서 아스파라긴; 글루타메이트에서 아스파르테이트; 글리신에서 프롤린; 히스티딘에서 아스파라긴 또는 글루타민; 이소류신에서 류신 또는 발린; 류신에서 발린 또는 이소류신; 라이신에서 아르기닌; 메티오닌에서 류신 또는 이소류신; 페닐알라닌에서 티로신, 류신 또는 메티오닌; 세린에서 트레오닌; 트레오닌에서 세린; 트립토판에서 티로신; 티로신에서 트립토판 또는 페닐알라닌; 및 발린에서 이소류신 또는 류신으로의 변화를 포함한다. 보존적 아미노산 치환은 비-천연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있으며, 이는 일반적으로 생물학적 시스템에서의 합성보다는 화학적 펩타이드 합성에 의해 혼입된다. 이는 펩티도미메틱(peptidomimetics) 또는 아미노산 모이어티의 기타 반대의 또는 역전된 형태를 포함한다.

대안적으로, 치환은 비-보존적이어서, 폴리펩타이드의 기능 또는 활성이 영향을 받을 수 있다. 비-보존적 변화는 전형적으로 아미노산 잔기의 화학적으로 유사하지 않은 것으로의 치환, 예컨대 비극성 또는 비하전된 아미노산의 극성 또는 하전된 아미노산으로의 치환 및 그 반대의 치환을 포함한다. 비-보존적 치환은 아미노산 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류의 구성원으로 교환하는 것을 포함할 수 있다.

D. 치환의 고려사항

당업자는 잘 알려진 기술을 사용하여 본원에 제시된 바와 같은 폴리펩타이드의 적합한 변이체를 결정할 수 있다. 당업자는 활성에 중요한 것으로 여겨지지 않은 영역을 표적화함으로써 활성을 파괴하지 않으면서 변화될 수 있는 분자의 적합한 영역을 식별할 수 있다. 당업자는 또한 유사한 단백질 또는 폴리펩타이드 중에서 보존된 분자의 아미노산 잔기 및 부분을 식별할 수 있을 것이다. 추가 실시형태에서, 생물학적 활성 또는 구조에 중요할 수 있는 영역은 생물학적 활성을 유의하게 변경하지 않거나 단백질 또는 폴리펩타이드 구조에 불리하게 영향을 미치지 않으면서 보존적 아미노산 치환을 겪을 수 있다.

이러한 변화가 이루어질 때, 아미노산의 소수성 지수(hydropathy index)가 고려될 수 있다. 단백질의 소수성 프로파일은 각각의 아미노산에 수치 값("소수성 지수")을 할당한 다음, 펩타이드 쇄를 따라 이들 값을 반복적으로 평균화함으로써 계산된다. 각각의 아미노산은 이의 소수성 및 전하 특성에 기초하여 값을 할당받았다. 이들은 이소류신(+4.5); 발린(+4.2); 류신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스테인(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글리신(-0.4); 트레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 티로신(-1.3); 프롤린(1.6); 히스티딘(-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민(-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신(-3.9); 및 아르기닌(-4.5)이다. 단백질에 상호작용적 생물학적 기능을 부여하는데 있어 소수성 아미노산 지수의 중요성은 일반적으로 당업계에서 이해되고 있다(Kyte et al., J. Mol. Biol. 157:105-131 (1982)). 아미노산의 상대적 소수성 특성은 생성된 단백질 또는 폴리펩타이드의 2차 구조에 기여하고, 이는 결국 단백질 또는 폴리펩타이드와 다른 분자, 예를 들어 효소, 기질, 수용체, DNA, 항체, 항원 등의 상호작용을 한정하는 것으로 인정된다. 또한, 특정 아미노산은 유사한 소수성 지수 또는 점수를 갖는 다른 아미노산을 대체할 수 있고, 여전히 유사한 생물학적 활성을 보유하는 것으로 공지되어 있다. 소수성 지수에 기초하여 변화가 이루어질 때, 특정 실시형태에서, 소수성 지수가 ±2 이내인 아미노산의 치환이 포함된다. 본 개시내용의 일부 양상에서, ±1 이내인 것들이 포함되고, 본 개시내용의 다른 양상에서, ±0.5 이내인 것들이 포함된다.

또한, 당업예에서는 유사한 아미노산의 치환은 친수성에 기초하여 효과적으로 이루어질 수 있는 것으로 이해된다. 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제4,554,101호에는, 근접한 아미노산의 친수성에 의해 좌우되는 단백질의 최대 국소 평균 친수성(local average hydrophilicity)이 단백질의 생물학적 특성과 상관관계가 있다고 언급되어 있다. 특정 실시형태에서, 근접한 아미노산의 친수성에 의해 좌우되는 단백질의 최대 국소 평균 친수성은 이의 면역원성 및 항원 결합, 즉 단백질의 생물학적 특성과 상관관계가 있다. 하기 친수성 값이 이들 아미노산 잔기에 할당되었다: 아르기닌(+3.0); 라이신(+3.0); 아스파르테이트(+3.0±1); 글루타메이트(+3.0±1); 세린(+0.3); 아스파라긴(+0.2); 글루타민(+0.2); 글리신(0); 트레오닌(-0.4); 프롤린(-0.5±1); 알라닌(-0.5); 히스티딘(-0.5); 시스테인(-1.0); 메티오닌(-1.3); 발린(-1.5); 류신(-1.8); 이소류신(-1.8); 티로신(-2.3); 페닐알라닌(-2.5); 및 트립토판(-3.4). 유사한 친수성 값에 기초하여 변화가 이루어질 때, 특정 실시형태에서, 친수성 값이 ±2 이내인 아미노산의 치환이 포함되고, 다른 실시형태에서, ±1 이내인 것들이 포함되고, 또 다른 실시형태에서, ±0.5 이내인 것들이 포함된다. 일부 경우에, 친수성에 기초하여 1차 아미노산 서열로부터 에피토프를 식별할 수도 있다. 이들 영역은 또한 "에피토프 코어 영역"으로 지칭된다. 아미노산은 유사한 친수성 값을 갖는 또 다른 아미노산으로 치환될 수 있고, 여전히 생물학적으로 동등한 및 면역학적으로 동등한 단백질을 생산하는 것으로 이해된다.

추가로, 당업자는 유사한 폴리펩타이드 또는 단백질 내에서 활성 또는 구조에 중요한 잔기를 식별하는 구조-기능 연구를 검토할 수 있다. 이러한 비교의 관점에서, 유사한 단백질 내의 활성 또는 구조에 중요한 아미노산 잔기에 상응하는 단백질 내의 아미노산 잔기의 중요성을 예측할 수 있다. 당업자는 이러한 예측된 중요한 아미노산 잔기에 대한 화학적으로 유사한 아미노산 치환을 선택할 수 있다.

당업자는 또한 3차원 구조 및 아미노산 서열을 유사한 단백질 또는 폴리펩타이드 내의 해당 구조와 관련하여 분석할 수 있다. 이러한 정보의 관점에서, 당업자는 항체의 아미노산 잔기의 정렬을 이의 3차원 구조에 관해 예측할 수 있다. 당업자는 단백질의 표면 상에 있을 것으로 예측되는 아미노산 잔기의 변화를 생성하기 않도록 선택할 수 있는데, 이는 이러한 잔기가 다른 분자와의 중요한 상호작용에 관여할 수 있기 때문이다. 더욱이, 당업자는 각각의 원하는 아미노산 잔기에 단일 아미노산 치환을 함유하는 시험 변이체를 생성할 수 있다. 그 다음, 이들 변이체를 결합 및/또는 활성에 대한 표준 검정을 사용하여 스크리닝하여, 이러한 일상적인 실험으로부터 얻어진 정보를 산출할 수 있으며, 이는 당업자가 추가의 치환이 단독으로 또는 다른 돌연변이와 조합되어 회피되어야 하는 아미노산 위치를 결정할 수 있게 한다. 2차 구조를 결정하기 위해 이용가능한 다양한 도구는 월드 와이드 웹, 예를 들어 expasy.org/proteomics/단백질_structure에서 찾을 수 있다.

본 개시내용의 일부 실시형태에서, (1) 단백질 분해에 대한 감수성을 감소시키고/시키거나, (2) 산화에 대한 감수성을 감소시키고/시키거나, (3) 단백질 복합체를 형성하기 위한 결합 친화도를 변경하고/하거나, (4) 리간드 또는 항원 결합 친화도를 변경하고/하거나, (5) 이러한 폴리펩타이드에 다른 물리화학적 또는 기능적 특징을 부여하거나 변형시키는 아미노산 치환이 이루어진다. 예를 들어 단일 또는 다중 아미노산 치환(특정 실시형태에서, 보존적 아미노산 치환)이 천연 발생 서열에서 이루어질 수 있다. 치환은 분자간 접촉을 형성하는 도메인(들)의 외부에 존재하는 항체의 해당 부분에서 이루어질 수 있다. 이러한 실시형태에서, 단백질 또는 폴리펩타이드의 구조적 특징을 실질적으로 변화시키지 않는 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 고유 항체를 특징짓는 2차 구조를 파괴하지 않는 하나 이상의 대체 아미노산)이 사용될 수 있다.

E. B-세포 성숙 항원(BCMA)

종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 17 또는 TNFRSF17로도 알려진 B-세포 성숙 항원(BCMA)은 혈장 세포에서 우선적으로 발현되며 다발성 골수종을 포함한 다양한 혈액 악성종양에서 고도로 발현된다. BCMA는 TNFRSF17 유전자에 의해 암호화된다. 예시적인 mRNA는 RefSeq 수탁 번호 NM_001192를 특징으로 한다. 예시적인 단백질은 RefSeq 수탁 번호 NP_001183을 특징으로 한다. 인간 BCMA의 완전한 폴리펩타이드 서열은 서열번호 17로서 제공된다. BCMA 유전자(TNFRSF17)의 완전한 DNA 서열은 서열번호 18로서 제공된다.

F. 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1(PDL1)

CD274 또는 B7-H1로도 알려진 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1(PDL1)은 조혈 세포, 면역 세포 및 다양한 유형의 종양 세포에 의해 발현되는 면역 억제 수용체 리간드이다. 예시적인 mRNA는 RefSeq 수탁 번호 NM_001267706 및 NM_014143을 특징으로 한다. 예시적인 단백질은 RefSeq 수탁 번호 NP_001254635 및 NP_054862를 특징으로 한다.

G. CD30

종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 8 또는 TNFRSF8로도 알려진 CD30은 TNFRSF8 유전자에 의해 암호화된다. 예시적인 mRNA는 RefSeq 수탁 번호 NM_001243을 특징으로 한다. 예시적인 단백질은 RefSeq 수탁 번호 NP_001234를 특징으로 한다.

E. Her2

수용체 티로신-단백질 키나제 erbB-2(erbB-2 또는 ErbB2), Neu 또는 Her2/neu로도 알려진 Her2(또는 "HER2")는 수용체 티로신 키나제의 표피 성장 인자(EGF) 수용체 패밀리의 구성원이고, Her2의 증폭 및/또는 과발현이 유방 및 난소 종양을 포함한 수많은 암에서 보고되었다. HER2의 세포외 도메인은 도메인 I(약 1-195의 아미노산 잔기), 도메인 II(약 196-319의 아미노산 잔기), 도메인 III(약 320-488의 아미노산 잔기) 및 도메인의 IV(약 489-630의 아미노산 잔기)(신호 펩타이드가 없이 잔기 번호 매김)의 4개 도메인을 포함한다. 각각 본원에 참조로 인용되는 문헌[Garrett et al.. Mol. Cell. 11: 495-505 (2003), Cho et al.. Nature 421: 756-760 (2003), Franklin et al.. Cancer Cell 5:317-328 (2004), Plowman et al.. Proc. Natl. Acad. Sci. 90:1746-1750 (1993)], 및 미국 특허 제8,652,474호 참조. Her2는 ERBB2 유전자에 의해 암호화된다. 예시적인 mRNA는 RefSeq 수탁번호 NM_001005862를 특징으로 한다. 예시적인 단백질은 RefSeq 수탁 번호 NP_001005862를 특징으로 한다.

I. Trop2

종양-연관 칼슘 신호 전달인자 2(tumor-associated calcium signal transducer 2)로도 알려진 Trop2(또는 "Trop-2")는 암종-연관 항원이다. Trop2는 TACSTD2 유전자에 의해 암호화된다. 예시적인 mRNA는 RefSeq 수탁 번호 NM_002353을 특징으로 한다. 예시적인 단백질은 RefSeq 수탁 번호 NP_002344를 특징으로 한다. 인간 Trop2의 완전한 폴리펩타이드 서열은 서열번호 13으로서 제공된다. Trop2 유전자(TACSTD2)의 완전한 DNA 서열은 서열번호 14로서 제공된다.

J. EGFR

erbB-1로도 알려진 표피 성장 인자 수용체(EGFR)는 혈장 세포에서 우선적으로 발현되며, 다발성 골수종을 포함한 다양한 혈액 악성종양에서 고도로 발현된다. EGFR의 세포외 도메인은 4개의 도메인(N-말단부터 도메인 I, 도메인 II, 도메인 III 및 도메인 IV로 지칭되거나, 각각 L1, S1, L2 및 S2 도메인으로도 지칭됨)으로 구성된다(각각 본원에 참조로 인용된 문헌[Bajaj, M. et. al. Biochim. Biophys. Acta 916, 220-226 (1987)] 및 미국 특허 제7,514,240호 참조). EGFR은 EGFR 유전자에 의해 암호화된다. 예시적인 mRNA는 RefSeq 수탁 번호 NM_005228을 특징으로 한다. 예시적인 단백질은 RefSeq 수탁 번호 NP_005219를 특징으로 한다.

II. 핵산

특정 실시형태에서, 핵산 서열은 항체, 또는 이의 단편, 유도체, 뮤테인, 또는 변이체의 쇄 하나 또는 둘 다를 암호화하는 혼입된 서열 또는 재조합 폴리뉴클레오타이드의 단리된 단편 및 재조합 벡터, 하이브리드화 프로브, 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 식별, 분석, 돌연변이화 또는 증폭시키기 위한 PCR 프라이머 또는 시퀀싱 프라이머로서 사용하기에 충분한 폴리뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드의 발현을 억제하기 위한 안티센스 핵산, 및 본원에 기술된 상기한 것들의 상보적 서열과 같은 다양한 사례로 존재할 수 있다. 본원에 제공된 특정 항체가 또한 제공되는 에피토프를 암호화하는 핵산이 또한 제공된다. 이들 펩타이드를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 또한 제공된다. 핵산은 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있고, RNA 및/또는 DNA 뉴클레오타이드 및 이의 인공적 변이체(예를 들면, 펩타이드 핵산)를 포함할 수 있다.

용어 "폴리뉴클레오타이드"는 재조합이거나 총 게놈 핵산으로부터 단리된 핵산 분자를 지칭한다. 용어 "폴리뉴클레오타이드" 내에는 예를 들어 플라스미드, 코스미드, 파지, 바이러스 등을 포함하여 올리고뉴클레오타이드(핵산 100개 잔기 이하 길이), 재조합 벡터가 포함된다. 폴리뉴클레오타이드는, 특정 양상에서, 이들의 천연 발생 유전자 또는 단백질 암호화 서열로부터 실질적으로 단리된 조절 서열을 포함한다. 폴리뉴클레오타이드는 단일-가닥(암호화 또는 안티센스) 또는 이중-가닥일 수 있고, RNA, DNA(게놈, cDNA 또는 합성), 이들의 유사체, 또는 이들의 조합일 수 있다. 추가의 암호화 또는 비-암호화 서열이, 반드시 그럴 필요는 없지만, 폴리뉴클레오타이드 내에 존재할 수 있다.

이와 관련하여, 용어 "유전자", "폴리뉴클레오타이드", 또는 "핵산"은 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드(적절한 전사, 번역 후 변형, 또는 국소화에 필요한 임의의 서열을 포함함)를 암호화하는 핵산을 지칭하기 위한 사용한다. 당업계에서 이해될 수 있는 바와 같이, 이러한 용어는 게놈 서열, 발현 카세트, cDNA 서열, 및 단백질, 폴리펩타이드, 도메인, 펩타이드, 융합 단백질, 및 돌연변이체를 발현하거나 발현하도록 개조될 수 있는 더 작은 조작된 핵산 분절을 포함한다. 폴리펩타이드의 전부 또는 일부를 암호화하는 핵산은 이러한 폴리펩타이드의 전부 또는 일부를 암호화하는 연속 핵산 서열을 함유할 수 있다. 또한 특정 폴리펩타이드가 다소 상이한 핵산 서열을 갖는 변이를 함유하는 핵산에 의해 암호화될 수 있지만, 그럼에도 불구하고, 동일한 또는 실질적으로 유사한 단백질을 암호화하는 것으로 고려된다.

특정 실시형태에서, 본원에 개시된 서열에 대해 상당한 동일성을 갖는 폴리뉴클레오타이드 변이체; 본원에 기술된 방법(예를 들어, 표준 파라미터를 사용하는 BLAST 분석)을 사용 시 본원에 제공된 폴리뉴클레오타이드 서열과 비교하여 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 또는 더 높은 서열 동일성(그 사이의 모든 값 및 범위를 포함)을 포함하는 것들이 있다. 특정 양상에서, 단리된 폴리뉴클레오타이드는 서열의 전체 길이에 걸쳐서 본원에 기술된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 바람직하게는 95% 및 그 이상의 동일성을 갖는 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열; 또는 상기 단리된 폴리뉴클레오타이드에 대해 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함할 것이다.

핵산 분절은, 암호화 서열 자체의 길이에 관계없이, 다른 핵산 서열, 예컨대 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 추가의 제한 효소 부위, 다중 클로닝 부위, 다른 암호화 분절 등과 조합될 수 있어서, 이들의 전반적 길이는 상당히 가변적일 수 있다. 핵산은 임의의 길이일 수 있다. 이들은 예를 들어 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 125, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1000, 1500, 3000, 5000개 또는 그 이상의 뉴클레오타이드 길이일 수 있고/있거나 하나 이상의 추가 서열, 예를 들어 조절 서열을 포함할 수 있고/있거나, 더 큰 핵산, 예를 들어 벡터의 일부일 수 있다. 따라서, 대부분 임의의 길이의 핵산 단편이 이용될 수 있는 것으로 고려되고, 총 길이는 바람직하게는 이의 제조 용이성 및 의도된 재조합 핵산 프로토콜에서의 용도에 의해 제한된다. 일부 경우에, 핵산 서열은 예를 들어 폴리펩타이드의 정제, 수송, 분비, 번역 후 변형을 허용하기 위해 또는 표적화 또는 효능과 같은 치료적 이득을 위해, 추가의 이종 암호화 서열과 함께 폴리펩타이드 서열을 암호화할 수 있다. 상기 논의한 바와 같이, 태그 또는 다른 이종 폴리펩타이드가 변형된 폴리펩타이드-암호화 서열에 첨가될 수 있고, 여기서 "이종"은 변형된 폴리펩타이드와 동일하지 않는 폴리펩타이드를 지칭한다.

A. 하이브리드화

특정 하이브리드화 조건 하에 다른 핵산과 하이브리드화하는 핵산. 핵산을 하이브리드화하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6] 참조. 본원에 정의된 바와 같이, 적당히 엄격한 하이브리드화 조건은 5× 염화나트륨/나트륨 시트레이트(SSC), 0.5% SDS, 1.0 mM EDTA(pH 8.0), 약 50% 포름아미드, 6×SSC의 사전세척 용액 및 55℃의 하이브리드화 온도(또는 하이브리드화 온도가 42℃인 약 50% 포름아미드를 함유하는 것과 같은 다른 유사한 하이브리드화 용액) 및 0.5×SSC, 0.1% SDS에서 60℃의 세척 조건을 사용한다. 엄격한 하이브리드화 조건은 45℃에서 6×SSC에서 하이브리드화하고, 이어서 68℃에서 0.1×SSC, 0.2% SDS에서 1회 이상 세척하는 것이다. 또한, 당업자는 서로 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산이 전형적으로 하이브리드화된 상태를 유지하도록 하이브리드화 엄격성을 증가시키거나 감소시키기 위해 하이브리드화 및/또는 세척 조건을 조작할 수 있다.

하이브리드화 조건의 선택에 영향을 미치는 매개변수 및 적합한 조건 고안을 위한 가이드라인은, 예를 들어, 문헌[Sambrook, Fritsch, and Maniatis (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., chapters 9 and 11 (1989); Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al.., eds., John Wiley and Sons, Inc., sections 2.10 and 6.3-6.4 (1995), 이들 둘 다는 모든 목적을 위해 그 전체가 본원에 참조로 인용된다]에 의해 기재되어 있고, 예를 들어, DNA의 길이 및/또는 염기 조성에 기반하여 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다.

B. 돌연변이

변화는 핵산 내로의 돌연변이에 의해 도입될 수 있고, 이를 통해 이것이 암호화하는 폴리펩타이드의 아미노산 서열에서의 변화가 유도된다. 돌연변이는 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 도입될 수 있다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 특정 아미노산 잔기는 예를 들어 부위 지정 돌연변이유발 프로토콜을 사용하여 변화된다. 또 다른 실시형태에서, 하나 이상의 무작위로 선택된 잔기는 예를 들어 무작위 돌연변이유발 프로토콜을 사용하여 변화된다. 그러나, 돌연변이 폴리펩타이드가 발현되고 원하는 특성에 대해 스크리닝되도록 할 수 있다.

돌연변이는 이것이 암호화하는 폴리펩타이드의 생물학적 활성에 유의하게 영향을 주지 않으면서 핵산 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 비필수 아미노산 잔기에서의 아미노산 치환을 유도하는 뉴클레오타이드 치환이 이루어질 수 있다. 대안적으로, 하나 이상의 돌연변이가 핵산 내로 도입되어 이것이 암호화하는 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 선택적으로 변화시킬 수 있다(예를 들어, 문헌[Romain Studer et al.., Biochem. J. 449:581-594 (2013)] 참조). 예를 들어, 돌연변이는 생물학적 활성을 정량적으로 또는 정성적으로 변화시킬 수 있다. 정량적 변화의 예로는 활성의 증가, 감소, 또는 제거가 포함된다. 정성적 변화의 예는 항체의 항원 특이성의 변경을 포함한다.

III. 무한 면역 세포

본 개시내용의 특정 실시형태는 하나 이상의 유전자를 발현하도록 조작된 면역 세포에 관한 것이다. 하나 이상의 유전자의 발현은 하나 이상의 유전자의 발현이 결여된 세포와 비교하여 세포의 증가된 수명을 직접적으로 또는 간접적으로 유도한다. 특정 실시형태에서, 세포는 하나 이상의 이종 유전자를 포함하는 하나 이상의 유전자를 발현하도록 조작된다. 다른 경우에, 세포는, 예컨대 세포에 대해 하나 이상의 내인성 유전자의 하나 이상의 조절 요소의 조작을 통해 세포에 내인성인 하나 이상의 유전자의 발현의 상향조절을 갖도록 조작된다.

특정 실시형태에서, 면역 세포는 BCL6 및 하나 이상의 생존-촉진 유전자 또는 항-세포자멸사(anti-apoptosis) 유전자 또는 세포 생존-촉진 유전자를 발현하도록 조작된다(그리고, 생존-촉진 또는 항-세포자멸사 또는 세포 생존-촉진으로서 분류되는 유전자가 중복될 수 있거나 중복되지 않을 수 있다). 본원에 사용된 바와 같은 생존 촉진 유전자는 임의의 메커니즘에 의해 항-세포자멸사 기능을 발휘할 수 있거나 생존을 촉진할 수 있는 핵산 중합체를 지칭한다. 항-세포자멸사 기능을 발휘할 수 있는 핵산 중합체는 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자, 예컨대 BCL-xL, BCL-2, MCL-1, Bcl-w, Bfl-1, BCL-B 등일 수 있다. 항-세포자멸사 기능을 발휘할 수 있는 핵산 중합체는 세포자멸사 억제제(IAP) 계열 유전자, 예컨대 XIAP, c-IAPl, c-IAP2, NAIP, 및 서바이빈(Survivin) 등일 수 있다. 항-세포자멸사 기능을 발휘할 수 있는 핵산 중합체는 세포자멸사에서 역할을 수행하는 하나 이상의 카스파제, 예컨대 카스파제-1, 카스파제-2, 카스파제-3, 카스파제-4, 카스파제-5, 카스파제-6, 카스파제-7, 카스파제-8, 카스파제-9, 카스파제-10, 카스파제-11, 카스파제-12, 카스파제-13, 카스파제-14의 발현을 억제하거나 녹아웃시킬 수 있다. 녹다운 또는 녹아웃을 위한 핵산 중합체는 shRNA 발현 카세트일 수 있거나, 이들 카스파제 유전자는 유전자 편집 방법(CRISPR, TALEN, 아연 핑거 방법 등)에 의해서도 녹아웃될 수 있다. 항-세포자멸사 기능을 발휘할 수 있는 핵산 중합체는 하나 이상의 세포자멸사 촉진 유전자, 예컨대 BIM, Puma, Noxa, Bik, Bmf, Bad, Hrk, Bid, BAX, BAK, BOK 등의 발현을 억제하거나 녹아웃시킬 수 있다. 항-세포자멸사 기능을 발휘할 수 있는 핵산 중합체, 예컨대 인슐린 유사 성장 인자(IGF-1),　Hsp70, Hsp27, cFLIP, BNIP3, FADD, Akt, 및 NF-κB, Raf-1 및 MEK1, p90Rsk, C-Jun, BNIP2, BAG1, HSPA9, HSP90B1, miRNA21, miR-106b-25, miR-206, miR-221/222, miR-17-92, miR-133, miR-143, miR-145, miR-155, miR-330 등은 항-세포자멸사 효과를 가질 수 있다.

무한 T 세포는 야생형 또는 돌연변이체 BCL6 중 어느 하나를 사용하여 생성될 수 있다. 본 발명자들은 무한 T 세포가 야생형 BCL6 또는 단일의 특정 뉴클레오타이드 차이 - 야생형 BCL6 내의 위치 395에서 아미노산의 코돈은 CCT(프롤린/P를 암호화함)이고, 돌연변이체 BCL6 내의 위치 395에서 아미노산의 코돈은 CTT(류신/L을 암호화함)이다-를 갖는 야생형 BCL6 또는 돌연변이체 BCL6을 사용하여 생성될 수 있다. 2개의 BCL6 유전자에 대한 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열은 하기에 나타낸다(야생형 서열 내의 점 돌연변이는 밑줄 표시되어 있다).

야생형 BCL6의 aa 서열:

야생형 BCL6의 뉴클레오타이드 서열(야생형 서열 내의 점 돌연변이에 대한 코돈은 밑줄 표시되어 있다):

돌연변이체 BCL6의 aa 서열(류신 돌연변이는 밑줄 표시되어 있다):

돌연변이체 BCL6의 뉴클레오타이드 서열(류신에 대한 코돈은 밑줄 표시되어 있다):

면역 세포는 T 세포(예를 들어, 조절 T 세포, CD4⁺ T 세포, CD8⁺ T 세포, 알파 베타 T 세포, 감마-델타 T 세포 또는 이의 혼합물), NK 세포, 불변 NKT 세포, NKT 세포, 선천성 림프계 세포, 또는 이의 혼합물을 포함하는 임의의 종류의 면역 세포일 수 있다. 면역 세포는 바이러스 특이적일 수 있고 CAR을 발현하고/하거나 TCR을 발현할 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포는 단핵구 또는 과립구, 예를 들어, 골수 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포(DC), 비만 세포, 호산구 및/또는 호염구이다. 또한 면역 세포를 생성하고 조작하는 방법뿐만 아니라 입양 세포 요법을 위해 세포를 사용하고 투여하는 방법이 본원에 제공되며, 이 경우에 상기 세포는 자가 또는 동종이계일 수 있다. 따라서, 면역 세포는, 예를 들어, 암 세포를 표적화하기 위한 면역요법으로서 사용될 수 있다. 이들 면역 세포는 단일 세포 유형으로서 또는 다수의 면역 세포 유형의 조합으로서 요법을 위해 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 면역 세포는 CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD16⁺, 또는 이들의 혼합물이다.

면역 세포는 대상체, 특히 인간 대상체로부터 단리될 수 있다. 면역 세포는 관심대상의 대상체, 예컨대 특정한 질환 또는 병태를 갖는 것으로 의심되는 대상체, 특정한 질환 또는 병태에 대한 소인을 갖는 것으로 의심되는 대상체 또는 특정한 질환 또는 병태에 대한 요법을 받고 있는 대상체로부터 수득될 수 있다. 면역 세포는 혈액, 제대혈, 비장, 흉선, 림프절, 및 골수를 포함하지만 이에 제한되지는 않는 대상체에 존재하는 임의의 위치로부터 수집될 수 있다. 단리된 면역 세포는 직접적으로 사용될 수 있거나, 또는 예컨대 동결에 의해 일정 기간 동안 저장될 수 있다.

면역 세포는 혈액(혈액 은행 또는 제대혈 은행에 의해 수집된 혈액을 포함), 비장, 골수, 수술 절차 동안에 제거 및/또는 노출된 조직, 및 생검 절차를 통해 수득된 조직을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 임의의 조직으로부터 풍부화/정제될 수 있다. 면역 세포가 풍부화, 단리, 및/또는 정제되는 조직/기관은 살아 있는 대상체 및 살아있지 않은 대상체 둘 다로부터 단리될 수 있으며, 여기서 살아있지 않은 대상체는 장기 공여자이다. 특정한 실시형태에서, 면역 세포는 말초 혈액 또는 제대혈과 같은 혈액으로부터 단리된다. 일부 양상에서, 제대혈로부터 단리된 면역 세포는 CD4- 또는 CD8-양성 T 세포 저해에 의해 측정되는 증진된 면역조정 능력을 갖는다. 구체적인 양상에서, 면역 세포는, 증진된 면역조정 능력을 위해, 풀링된 혈액, 특히 풀링된 제대혈로부터 단리된다. 풀링된 혈액은 2개 이상의 공급원, 예컨대 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 공급원(예를 들어, 공여자 대상체)으로부터의 것일 수 있다.

면역 세포 집단은 요법을 필요로 하거나 감소된 면역 세포 활성과 연관된 질환을 앓고 있는 대상체로부터 수득될 수 있다. 따라서, 세포는 요법을 필요로 하는 대상체에게 자가일 것이다. 대안적으로, 면역 세포 집단은 공여자, 예컨대 부분적으로 또는 완전히 조직적합성 일치된 공여자 또는 완전히 조직적합성 불일치 공여자로부터 수득될 수 있다. 면역 세포 집단은 말초 혈액, 제대혈, 골수, 비장, 또는 면역 세포가 상기 대상체 또는 공여자에 존재하는 임의의 다른 기관/조직으로부터 수거될 수 있다. 면역 세포는 풀링된 제대혈과 같은 대상체 및/또는 공여자의 풀로부터 단리할 수 있다.

면역 세포 집단이 대상체와 구별되는 공여자로부터 수득될 때, 수득된 세포가 대상체 내로 도입될 수 있다는 점에서 대상체-적합성이라면, 공여자는 동종이계일 수 있다. 동종이계 공여자 세포는 인간-백혈구-항원(HLA)-적합성이거나 아닐 수 있다.

무한 면역 세포와 관련된 추가 방법 및 조성물은 그 전체가 본원에 참조로 인용된 PCT 특허 출원 공개 제WO/2021/034982호에 기술되어 있다.

A. T 세포

일부 실시형태에서, 면역 세포는 T 세포이다. 기능성 항-종양 효과기 세포의 유도체화, 활성화 및 증대를 위한 몇몇 기본 접근법이 지난 20년 동안 기술되어 왔다. 이들은, 자가 세포, 예컨대 종양-침윤 림프구(TIL); 자가 DC 또는 PBMC 림프구, 인공 항원-제시 세포(APC) 또는 T 세포 리간드 및 활성화 항체로 코팅된 비드를 사용하여 생체외에서 활성화된 T 세포, 또는 표적 세포막을 포획함으로써 단리된 세포; 항-숙주 종양 T 세포 수용체(TCR)를 천연적으로 발현하는 동종이계 세포; 및 "T-바디(T-bodies)"로 공지된 항체-유사 종양 인식 능력을 나타내는 종양-반응성 TCR 또는 키메라 TCR 분자를 발현하도록 유전적으로 재프로그램되거나 "재지향된(redirected)" 비-종양-특이적 자가 또는 동종이계 세포를 포함한다. 이들 접근법은 본원에 기술된 방법에서 사용될 수 있는 T 세포 생성 및 면역화를 위한 수많은 프로토콜을 발생시켰다.

일부 실시형태에서, T 세포는 혈액, 골수, 림프, 제대, 또는 림프 기관으로부터 유래된다. 일부 양상에서, 세포는 인간 세포이다. 세포는 전형적으로 1차 세포, 예컨대 대상체로부터 직접 단리되고/거나 대상체로부터 단리되고 동결된 것들이다. 일부 실시형태에서, 세포는 T 세포의 하나 이상의 하위세트 또는 다른 세포 유형, 예컨대 전체 T 세포 집단, CD4⁺ 세포, CD8⁺ 세포, 및 이의 하위집단, 예컨대 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화, 증대, 재순환, 국소화의 잠재성 및/또는 지속 성능, 항원-특이성, 항원 수용체의 유형, 특정한 기관 또는 구획에서의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로파일, 및/또는 분화 정도에 의해 정의된 것들을 포함한다. 치료될 대상체와 관련하여, 세포는 동종이계 및/또는 자가일 수 있다. 일부 양상에서, 예컨대 기성(off-the-shelf) 기술의 경우, 세포는 전분화능(pluripotent) 및/또는 다분화능(multipotent), 예컨대 줄기 세포, 예컨대 유도 만능 줄기 세포(iPSC)이다. 일부 실시형태에서, 방법은, 본원에 기술된 바와 같이, 대상체로부터 세포를 단리하고, 세포를 제조, 가공처리, 배양, 및/또는 조작하고, 동결보존 전 또는 후에, 동일한 환자에게 세포를 재도입하는 것을 포함한다.

T 세포의 하위유형 및 하위집단(예를 들어, CD4⁺ 및/또는 CD8⁺ T 세포) 중에는 나이브 T(T_N) 세포, 효과기 T 세포(T_EFF), 기억 T 세포 및 이의 하위유형, 예컨대 줄기 세포 기억 T(TSC_M), 중앙 기억 T(TC_M), 효과기 기억 T(T_EM), 또는 최종 분화된(terminally differentiated) 효과기 기억 T 세포, 종양-침윤 림프구(TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 점막-연관 불변 T(mucosa-associated invariant T)(MAIT) 세포, 천연 발생 및 적응 조절성 T (Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예컨대 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 여포성 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포, 및 델타/감마 T 세포가 있다.

일부 실시형태에서, T 세포 집단 중 하나 이상은 표면 마커와 같은 특이적 마커에 대해 양성이거나, 특이적 마커에 대해 음성인 세포가 풍부화되거나 고갈된다. 일부 경우에, 이러한 마커는 T 세포의 특정 집단에서 상대적으로 낮은 수준으로 발현되거나 부재하지만(예를 들어, 비-기억 세포), T 세포의 특정 다른 집단에서는 상대적으로 더 높은 수준으로 발현하거나 존재하는 것들(예를 들어, 기억 세포)이다.

일부 실시형태에서, T 세포는 비-T 세포, 예컨대 B 세포, 단핵구, 또는 다른 백혈구, 예컨대 CD14 상에서 발현된 마커의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 양상에서, CD4⁺ 또는 CD8⁺ 선택 단계는 CD4⁺ 헬퍼 및 CD8⁺ 세포독성 T 세포를 분리하기 위해 사용된다. 이러한 CD4⁺ 및 CD8⁺ 집단은 하나 이상의 나이브, 기억, 및/또는 효과기 T 세포 하위집단에서 발현되거나 상대적으로 더 높은 정도까지 발현된 마커에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 하위집단으로 추가로 분류될 수 있다.

일부 실시형태에서, CD8⁺ T 세포는, 예컨대 각각의 하위집단과 연관된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의해, 나이브, 중앙 기억, 효과기 기억, 및/또는 중앙 기억 줄기 세포가 추가로 풍부화되거나 고갈된다. 일부 실시형태에서, 중앙 기억 T(T_CM) 세포 또는 줄기 세포 기억 세포의 풍부화는 효능을 증가시키기 위해, 예컨대 투여 후 장기간 생존, 증대, 및/또는 생착을 개선하기 위해 수행되며, 이는 일부 양상에서 이러한 하위집단에서 특히 활발하다.

일부 실시형태에서, T 세포는 자가 T 세포이다. 이러한 방법에서, 종양 샘플은 환자로부터 수득되고 단일 세포 현탁액이 수득된다. 단일 세포 현탁액은 임의의 적합한 방식으로, 예를 들어 기계적으로(예를 들어 GENTLEMACS™ 해리기(Dissociator), Miltenyi Biotec, 캘리포니아주 어번)를 사용하여 종양을 분해) 또는 효소적으로(예를 들어, 콜라게나제 또는 DNase) 수득될 수 있다. 종양 효소 분해의 단일-세포 현탁액은 인터류킨-2(IL-2) 또는 기타 성장 인자에서 배양된다.

배양된 T 세포는 풀링되고 급속히 증대될 수 있다. 급속한 증대는 약 10 내지 약 14일의 기간에 걸쳐, 적어도 약 50배(예를 들어, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100배, 또는 그 초과)의 항원-특이적 T-세포 수의 증가를 제공한다. 보다 바람직하게는, 급속한 증대는 약 10일 내지 약 14일에 걸쳐 적어도 약 200배(예를 들어, 200배, 300배, 400배, 500배, 600배, 700배, 800배, 900배, 또는 그 초과)의 증가를 제공한다.

증대는 당업계에 공지된 바와 같은 다수의 방법 중 임의의 것에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, T 세포는 배양보조 림프구(feeder lymphocyte) 및 인터류킨-2(IL-2) 또는 인터류킨-15(IL-15)의 존재 하에 비특이적 T-세포 수용체 자극을 사용하여 급속히 증대될 수 있으며, IL-2가 바람직하다. 비-특이적 T-세포 수용체 자극은 약 30 ng/ml의 OKT3, 마우스 모노클로날 항-CD3 항체(Ortho-McNeil®(뉴저지주 라리탄)으로부터 입수 가능함)를 포함할 수 있다. 대안적으로, T 세포는 예컨대 300 IU/ml IL-2 또는 IL-15(여기서, IL-2가 바람직하다)와 같은 T-세포 성장 인자의 존재 하에, 인간 백혈구 항원 A2(HLA-A2) 결합 펩타이드 또는 다른 MHC 클래스 I 또는 클래스 II 분자에 결합하는 펩타이드와 같은, 임의로 벡터로부터 발현될 수 있는 암의 하나 이상의 항원(이의 항원 부분, 예컨대 에피토프(들), 또는 세포를 포함)에 의한 시험관내 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 자극에 의해 급속히 증대될 수 있다. 시험관내-유도된 T-세포는 HLA-A2-발현 항원-제시 세포 또는 다른 HLA 분자를 발현하는 항원-제시 상으로 펄스된 암의 동일한 항원(들)으로 재자극함으로써 급속히 증대된다. 시험관내-유도된 T-세포는 항원-제시 세포의 부재 하에서도 증대될 수 있다.

자가 T-세포는 자가 T-세포의 성장, 분화 및 활성화를 촉진하는 T-세포 성장 또는 분화 인자를 발현하도록 변형될 수 있다. 적합한 T-세포 성장 인자는, 예를 들어, 인터류킨(IL)-2, IL-7, IL-15 및 IL-12를 포함한다. 적합한 변형 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Sambrook et al.., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3^rded., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001; and Ausubel et al.., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994] 참조. 특정한 양상에서, 변형된 자가 T-세포는 T-세포 성장 인자를 높은 수준으로 발현한다. IL-12의 것과 같은 T-세포 성장 인자 암호화 서열은, T-세포 성장 인자 암호화 서열에 대한 이의 작동 가능한 연결이 고수준 발현을 촉진하는 프로모터와 같이 당업계에서 쉽게 이용 가능하다.

B. NK 세포

일부 실시형태에서, 면역 세포는 자연 살해(NK) 세포이다. NK 세포는 다양한 종양 세포, 바이러스 감염된 세포 및 골수 및 흉선 내의 일부 정상 세포에 대해 자발적 세포독성을 갖는 림프구의 하위집단이다. NK 세포는 골수, 림프절, 비장, 편도 및 흉선에서 분화하고 성숙된다. NK 세포는 인간에서 CD16, CD56, 및/또는 CD8과 같은 특이적 표면 마커에 의해 검출될 수 있다. NK 세포는 T 세포 항원 수용체, 범 T 마커 CD3, 또는 표면 면역글로불린 B 세포 수용체를 발현하지 않는다.

특정 실시형태에서, NK 세포는 당업계에 잘 알려진 방법에 의해 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 비자극된 백혈구성분채집 생성물(PBSC), 인간 배아 줄기 세포(hESC), 유도 만능 줄기 세포(iPSC), 골수, 조직 또는 제대혈로부터 유래된다.

C. NKT 세포

자연 살해 T(NKT) 세포는 T 세포와 자연 살해 세포 둘 다의 성질을 공유하는 T 세포의 이종 그룹이다. 이들 세포 중 다수는 자가 및 외래 지질 및 당지질에 결합하는 항원-제시 분자인 비-다형태 CD1d 분자를 인식한다. 이들은 모든 말초 혈액 T 세포의 대략 0.1%만을 구성한다. NKT 세포는 αβ T-세포 수용체를 공동 발현할 뿐만 아니라 전형적으로 NK 세포, 예컨대 NK1.1와 연관된 다양한 분자 마커를 발현하는 T 세포의 하위세트이다. 불변 자연 살해 T(iNKT) 세포는 이들의 발달을 위해 전사 조절인자 전골수구성 백혈병 아연 핑거에 의존하여 고수준을 발현한다. 현재, 5개의 주요 특징적인 iNKT 세포 하위세트가 있다. 이들 하위세트 세포는 일단 활성화되면 상이한 세트의 사이토카인을 생성한다. 하위유형 iNKT1, iNKT2 및 iNKT17은 사이토카인 생산에서 Th 세포 하위세트를 반영한다. 또한, T 여포성 헬퍼-유사 기능 및 IL-10 의존성 조절 기능에 특화된 하위유형이 있다.

D. 선천성 림프계 세포

선천성 림프계 세포(ILC)는 통상의 림프구 전구체(CLP)로부터 유래하고 림프구 계통에 속하는 선천성 면역 세포 그룹이다. 이들 세포는 재조합 활성화 유전자(RAG)의 결여 때문에 항원 특이적 B 또는 T 세포 수용체의 부재에 의해 정의된다. ILC는 골수 또는 수지상 세포 마커를 발현하지 않는다. 이들은 보호 면역과 항상성 및 염증의 조절에서 역할을 수행함으로 이들의 조절불능은 알레르기, 기관지 천식 및 자가면역 질환과 같은 면역 병리상태를 유도할 수 있다. ILC는 이들이 생성할 수 있는 사이토카인 및 이들의 발달 및 기능을 조절하는 전사 인자에 기반하여 분류될 수 있다.

IV. 제형 및 세포 배양

특정 실시형태에서, 본 개시내용의 세포는 특별하게 제형화될 수 있고/있거나 특정 배지에서 배양될 수 있다. 세포는 유해한 효과 없이 수용자에게 전달하기에 적합한 방식으로 제형화될 수 있다.

특정 양상에서 배지는 기본 배지로서 동물 세포의 배양을 위해 사용되는 k, 예컨대 AIM V, X-VIVO-15, NeuroBasal, EGM2, TeSR, BME, BGJb, CMRL 1066, Glasgow MEM, 개선된 MEM 아연 옵션(Zinc Option), IMDM, 배지 199, 이글 MEM, αMEM, DMEM, Ham, RPMI-1640, 피셔 배지(Fischer's media) 및 이들의 임의의 조합 중 임의의 것을 사용하여 제조될 수 있지만, 상기 배지는 이것이 동물 세포 배양을 위해 사용될 수 있는 한 특별히 제한되지 않을 수 있다. 특히, 배지는 이종 부재(xeno-free)이거나 화학적으로 한정될 수 있다.

배지는 혈청-함유 또는 무혈청 배지 또는 이종 부재일 수 있다. 이종성인 동물 유래의 성분에 의한 오염을 방지하는 양상에서, 혈청은 줄기 세포(들)의 것과 동일한 동물로부터 유래할 수 있다. 무혈청 배지는 미가공처리 또는 미정제된 혈청이 포함되지 않은 배지를 지칭하고, 따라서 정제된 혈액 유래 성분 또는 동물 조직 유래 성분(예컨대, 성장 인자)을 갖는 배지를 포함할 수 있다.

배지는 혈청에 대한 임의의 대체물을 함유할 수 있거나 함유하지 않을 수 있다. 혈청에 대한 대체물은 알부민(예컨대, 지질이 풍부한 알부민, 소 알부민, 알부민 대체물, 예컨대 재조합 알부민 또는 인간화된 알부민, 식물성 전분, 덱스트란 및 단백질 가수분해물), 트랜스페린(또는 다른 철 수송체), 지방산, 인슐린, 콜라겐 전구체, 미량 원소, 2-머캅토에탄올, 3'-티올글리세롤, 또는 이의 균등물을 적절하게 함유하는 물질을 포함할 수 있다. 혈청에 대한 대체물은 예를 들어 국제 특허 공개공보 WO 98/30679호(그 전체가 본원에서 인용됨)에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다. 대안적으로, 보다 편리함을 위해 임의의 상업적으로 입수가능한 물질이 사용될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 물질은 녹아웃 혈청 대체물(KSR), 화학적으로 한정된 지질 농축물(GIBCO™) 및 GLUTAMAX™(GIBCO™)을 포함한다.

특정 실시형태에서, 배지는 하기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 또는 그 이상을 포함할 수 있다: 비오틴과 같은 비타민; DL 알파 토코페롤 아세테이트; DL 알파-토코페롤; 비타민 A(아세테이트); BSA(소 혈청 알부민) 또는 인간 알부민, 무지방산 분획 V와 같은 단백질; 카탈라제; 인간 재조합 인슐린; 인간 트랜스페린; 슈퍼옥사이드 디스뮤타제; 코르티코스테론과 같은 기타 성분; D-갈락토스; 에탄올아민 HCl; 글루타티온(환원된); L-카르니틴 HCl; 리놀레산; 리놀렌산; 프로게스테론; 퓨트레신 2HCl; 아셀렌산나트륨; 및/또는 T3(트리오도-I-티로닌). 구체적인 실시형태에서, 이들 중 하나 이상은 명시적으로 배제될 수 있다.

일부 실시형태에서, 배지는 비타민을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 배지는 하기 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13개(및 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)를 포함한다: 비오틴, DL 알파 토코페롤 아세테이트, DL 알파-토코페롤, 비타민 A, 콜린 클로라이드, 칼슘 판토테네이트, 판토텐산, 엽산 니코틴아미드, 피리독신, 리보플라빈, 티아민, 이노시톨, 비타민 B12, 또는 이들의 조합 또는 이들의 염을 포함하는 배지. 일부 실시형태에서, 배지는 비오틴, DL 알파 토코페롤 아세테이트, DL 알파-토코페롤, 비타민 A, 콜린 클로라이드, 칼슘 판토테네이트, 판토텐산, 엽산 니코틴아미드, 피리독신, 리보플라빈, 티아민, 이노시톨 및 비타민 B12를 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 비타민은 비오틴, DL 알파 토코페롤 아세테이트, DL 알파-토코페롤, 비타민 A, 또는 이들의 조합 또는 염을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 배지는 단백질을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 단백질은 알부민 또는 소 혈청 알부민, BSA의 분획, 카탈라제, 인슐린, 트랜스페린, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 배지는 하기 중 하나 이상을 추가로 포함한다: 코르티코스테론, D-갈락토스, 에탄올아민, 글루타티온, L-카르니틴, 리놀레산, 리놀렌산, 프로게스테론, 퓨트레신, 아셀렌산나트륨, 또는 트리오도-I-티로닌, 또는 이들의 조합. 일부 실시형태에서, 배지는 하기 중 하나 이상을 포함한다: B-27® 보충제, 이종-부재 B-27® 보충제, GS21TM 보충제, 또는 이들의 조합. 일부 실시형태에서, 배지는 아미노산, 모노사카라이드, 무기 이온을 포함하거나 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 아미노산은 아르기닌, 시스틴, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 글루타민, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판, 히스티딘, 티로신, 또는 발린, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 무기 이온은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 질소 또는 인, 또는 이들의 조합 또는 염을 포함한다. 일부 실시형태에서, 배지는 하기 중 하나 이상을 추가로 포함한다: 몰리브덴, 바나듐, 철, 아연, 셀레늄, 구리 또는 망간, 또는 이들의 조합. 특정 실시형태에서, 배지는 본원에서 본원에 논의된 하나 이상의 비타민 및/또는 본원에서 논의된 하나 이상의 단백질, 및/또는 하기 중 하나 이상을 포함하거나 이로 본질적으로 이루어진다: 코르티코스테론, D-갈락토스, 에탄올아민, 글루타티온, L-카르니틴, 리놀레산, 리놀렌산, 프로게스테론, 퓨트레신, 아셀렌산나트륨 또는 트리오도-I-티로닌, B-27® 보충제, 이종-부재 B-27® 보충제, GS21TM 보충제, 아미노산(예컨대, 아르기닌, 시스틴, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 글루타민, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판, 히스티딘, 티로신 또는 발린), 모노사카라이드, 무기 이온(예컨대, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 질소 및/또는 인) 또는 이들의 염, 및/또는 몰리브덴, 바나듐, 철, 아연, 셀레늄, 구리 또는 망간. 구체적인 실시형태에서, 이들 중 하나 이상은 명시적으로 배제될 수 있다.

배지는 또한 하나 이상의 외부에서 첨가된 지방산 또는 지질, 아미노산(예컨대, 비필수 아미노산), 비타민(들), 성장 인자, 사이토카인, 항산화 물질, 2-머캅토에탄올, 피루브산, 완충제 및/또는 무기 염을 포함할 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 이들 중 하나 이상은 명시적으로 배제될 수 있다.

배지 성분 중 하나 이상은 적어도, 최대, 또는 약 0.1, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 180, 200, 250 ng/L, ng/ml, ㎍/ml, mg/ml 또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위의 농도로 첨가될 수 있다.

구체적인 실시형태에서, 본 개시내용의 세포는 특별하게 제형화된다. 이들은 세포 현탁액으로서 제형화될 수 있거나 제형화되지 않을 수 있다. 구체적인 경우에, 이들은 단일 용량 형태로 제형화된다. 이들은 전신 또는 국소 투여를 위해 제형화될 수 있다. 일부 경우에 세포는 사용 전에 저장을 위해 제형화되고, 세포 제형은 DMSO(예를 들어, 5% DMSO 중)와 같은 하나 이상의 냉동보존제를 포함할 수 있다. 세포 제형은 인간 알부민을 포함하는 알부민을 포함할 수 있고, 특정 제형은 2.5% 인간 알부민을 포함한다. 세포는 특별하게 정맥내 투여를 위해 제형화될 수 있고; 예를 들어, 이들은 1시간 미만에 걸쳐 정맥내 투여를 위해 제형화된다. 특정 실시형태에서 세포는 해동 시점으로부터 1, 2, 3, 또는 4시간 이상 동안 실온에서 안정한 제형화된 세포 현탁액 중에 있다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 세포는 하나 이상의 키메라 항원 수용체(CAR)를 추가로 포함한다. CAR이 지향될 수 있는 종양 세포 항원의 예로는, 예를 들어, 적어도 5T4, 8H9, αβ6 인테그린, BCMA, B7-H3, B7-H6, CAIX, CA9, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD70, CD123, CD138, CD171, CEA, CSPG4, EGFR, ErbB2(HER2), EGFRvIII, EGP2, EGP40, ERBB3, ERBB4, ErbB3/4, EPCAM, EphA2, EpCAM를 포함한 EGFR 패밀리, 폴레이트 수용체-a, FAP, FBP, 태아 AchR, FR□, GD2, G250/CAIX, GD3, 글리피칸-3(GPC3), Her2, IL-13Rα2, 람다, 루이스-Y, 카파, KDR, MAGE, MCSP, 메소텔린, Muc1, Muc16, NCAM, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, PRAME, PSC1, PSCA, PSMA, ROR1, SP17, 수르비빈, TAG72, TEMs, 암배아 항원, HMW-MAA, AFP, CA-125, ETA, 티로시나제, MAGE, 라미닌 수용체, HPV E6, E7, BING-4, 칼슘-활성화 클로라이드 채널 2, 사이클린-B1, 9D7, EphA3, 텔로머라제, SAP-1, BAGE 패밀리, CAGE 패밀리, GAGE 패밀리, MAGE 패밀리, SAGE 패밀리, XAGE 패밀리, NY-ESO-1/LAGE-1, PAME, SSX-2, Melan-A/MART-1, GP100/pmel17, TRP-1/-2, P. 폴리펩타이드, MC1R, 전립선-특이적 항원, β-카테닌, BRCA1/2, CML66, 피브로넥틴, MART-2, TGF-βRII, 또는 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR2)가 포함된다. CAR은 1세대, 2세대, 3세대 또는 그 이상 세대의 CAR일 수 있다. CAR은 임의의 2가지의 동일하지 않은 항원에 대해 이중특이적일 수 있거나, 또는 2가지 초과의 동일하지 않은 항원에 대해 특이적일 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 세포는 하나 이상의 키메라 폴리펩타이드를 포함한다. 세포는 키메라 항원 수용체, T 세포 수용체, 및/또는 다른 조작된 수용체 또는 분자와 함께 본 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 세포는 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 키메라 폴리펩타이드 또는 그 이상을 포함한다.

V. 키메라 항원 수용체

본 개시내용의 특정 실시형태는 키메라 항원 수용체(CAR), 하나 이상의 CAR을 포함하는 세포, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.

A. 신호 펩타이드

본 개시내용의 폴리펩타이드는 신호 펩타이드를 포함할 수 있다. "신호 펩타이드"는 세포 내, 예를 들어, 특정 세포 소기관(예를 들어, 소포체) 및/또는 세포 표면에서 단백질의 수송 및 국소화를 지시하는 펩타이드 서열을 의미한다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 초기 단백질을 소포체 내로 지시한다. 이것은 수용체가 글리코실화되고 세포막에 고정되어야 하는 경우 필수적이다. 일반적으로 대부분의 아미노 말단 성분에 고유하게 부착된 신호 펩타이드가 사용된다(예를 들어, 경쇄 - 링커 - 중쇄 방향을 갖는 scFv에서는 경쇄의 고유 신호가 사용됨).

일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 소포체(ER) 통과 후 절단되고, 즉 절단 가능한 신호 펩타이드다. 일부 실시형태에서, 제한 부위는 절단을 용이하게 하기 위해 신호 펩타이드의 카복시 말단에 있다.

B. 항원 결합 도메인

본 개시내용의 폴리펩타이드는 하나 이상의 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다. "항원 결합 도메인"은 적절한 조건 하에 항원에 결합할 수 있는 폴리펩타이드의 영역을 기술한다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 도메인은 하나 이상의 항체에 기반한 단일 쇄 가변 단편(scFv)이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 폴리펩타이드의 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 영역 및 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하며, VH 및 VL 영역은 동일한 폴리펩타이드 상에 존재한다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 도메인은 VH 영역과 VL 영역 사이에 링커를 포함한다. 링커는 항원 결합 도메인이 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성하도록 할 수 있다.

본 개시내용의 폴리펩타이드의 항원-결합 도메인의 가변 영역은 VH 및/또는 VL CDR 1, CDR 2 및/또는 CDR 3 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시킴으로써 변형되어 항체의 하나 이상의 결합 특성(예를 들어, 친화도)을 개선할 수 있다. 용어 "CDR"은 B 세포 및 T 세포에 의해 생성된 면역글로불린(항체) 및 T 세포 수용체의 가변 쇄의 일부에 기반한 상보성 결정 영역을 나타내며, 여기서 이들 분자는 특정 항원에 결합한다. 면역글로불린 및 T 세포 수용체와 연관된 대부분의 서열 변이가 CDR에서 발견되기 때문에, 이러한 영역은 때때로 초가변 영역으로 지칭된다. 돌연변이는 부위 지정 돌연변이 유발 또는 PCR-매개 돌연변이 유발에 의해 도입될 수 있으며 항체 결합에 대한 효과 또는 관심대상의 다른 기능적 특성은 적절한 시험관내 또는 생체내 분석에서 평가될 수 있다. 바람직하게는 보존적 변형이 도입되고 전형적으로 CDR 영역 내의 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 잔기가 변경된다. 돌연변이는 아미노산 치환, 추가 또는 결실일 수 있다.

예를 들어, 하나 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식계열 서열로 "역돌연변이"시킴으로써 면역원성을 감소시키기 위해 항체에 프레임워크 변형이 이루어질 수 있다.

항원 결합 도메인은 동일한 항원(다가) 또는 상이한 항원(다중 특이적)에 결합하는 VH 및 VL 영역 쌍으로 항원 결합 도메인을 다량체화함으로써 다중-특이적 또는 다가일 수 있는 것으로 또한 고려된다.

가변 영역(중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역)과 같은 항원 결합 영역 또는 CDR의 결합 친화도는 적어도 10^-5M, 10^-6M, 10^-7M, 10^-8M, 10^-9M, 10^-10M, 10^-11M, 10^-12M, 또는 10^-13M일 수 있다. 일부 실시형태에서, 가변 영역(중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역)과 같은 항원 결합 영역 또는 CDR의 KD는 적어도 10^-5M, 10^-6M, 10^-7M, 10^-8M, 10^-9M, 10^-10M, 10^-11M, 10^-12M, 또는 10^-13M(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)일 수 있다.

결합 친화도, KA 또는 KD 는 표면 플라즈몬 공명(SRP) 기반 바이오센서, 동역학 배제 분석(KinExA), 편광 변조 경사 입사 반사율 차이(OI-RD) 또는 ELISA에 기반한 마이크로어레이 검출용 광학 스캐너와 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.

일부 실시형태에서, 인간화 결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드는 마우스로부터의 결합 영역과 같은 비-인간화 결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드와 비교하여, 숙주 세포에서 동일하거나, 더 우수하거나 또는 적어도 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 104, 106, 106, 108, 109, 110, 115, 또는 120%(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위) 결합 친화도 및/또는 발현 수준을 갖는다.

일부 실시형태에서, 인간 프레임워크의 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4와 같은 프레임워크 영역은 각각 또는 집합적으로 마우스 프레임워크에 대해 적어도, 최대 또는 정확히 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 또는 200개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 아미노산 치환, 연속 아미노산 첨가 또는 연속 아미노산 결실을 가질 수 있다.

일부 실시형태에서, 마우스 프레임워크의 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4와 같은 프레임워크 영역은 각각 또는 집합적으로 인간 프레임워크에 대해 적어도, 최대 또는 정확히 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 또는 200개(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 아미노산 치환, 연속 아미노산 첨가 또는 연속 아미노산 결실을 가질 수 있다.

치환은 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 FR1, FR2, FR3 또는 FR4의 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100에 있을 수 있다.

C. 펩타이드 스페이서

세포외 스페이서와 같은 펩타이드 스페이서는 항원-결합 도메인을 막횡단 도메인에 연결시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 스페이서는 항원-결합 도메인이 상이한 방향으로 배향되어 항원 결합을 용이하게 할 수 있을 만큼 충분히 유연하다. 일 실시형태에서, 스페이서는 IgG로부터의 힌지 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 면역글로불린의 CH2CH3 영역 및 CD3의 일부분을 포함하거나 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, CH2CH3 영역은 L235E/N297Q 또는 L235D/N297Q 변형, 또는 CH2CH3 영역의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성은 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 IgG4로부터의 것이다. 세포외 스페이서는 힌지 영역을 포함할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "힌지"는 측접 폴리펩타이드 영역에 구조적 유연성 및 간격을 제공하는 유연한 폴리펩타이드 연결기 영역(본원에서 "힌지 영역"으로도 지칭됨)을 지칭하고 천연 또는 합성 폴리펩타이드로 이루어질 수 있다. 면역글로불린(예를 들어, IgG1)으로부터 유래된 "힌지"는 일반적으로 인간 IgG1의 Glu216에서 Pro230으로 뻗어 있는 것으로 정의된다(Burton (1985) Molec. Immunol., 22: 161- 206). 다른 IgG 이소타입의 힌지 영역은 중쇄간 이황화(S-S) 결합을 형성하는 첫 번째 및 마지막 시스테인 잔기를 동일한 위치에 배치함으로써 IgG1 서열과 정렬될 수 있다. 힌지 영역은 본원에 참조로 인용되는 미국 특허 제5,677,425호에 기술된 변경된 힌지 영역을 포함하지만 이에 제한되지 않는 천연 발생 또는 비-천연 발생의 것일 수 있다. 힌지 영역은 CH1 도메인의 것과 상이한 클래스 또는 서브클래스의 항체로부터 유래된 완전한 힌지 영역을 포함할 수 있다. 용어 "힌지"는 또한 측접 영역에 유연성 및 간격을 제공하는 데 있어 유사한 기능을 제공하는 CD8 및 기타 수용체로부터 유래된 영역을 포함할 수 있다.

세포외 스페이서는 적어도, 최대 또는 정확히 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 110, 119, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 325, 350, 또는 400개 아미노산(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)의 길이를 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포외 스페이서는 면역글로불린(예를 들어, IgG)으로부터의 힌지 영역으로 이루어지거나 이를 포함한다. 면역글로불린 힌지 영역 아미노산 서열은 당업계에 공지되어 있다; 예를 들어, 문헌[Tan et al.. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 162; and Huck et al.. (1986) Nucl. Acids Res] 참조.

세포외 스페이서의 길이는 CAR의 신호전달 활성 및/또는 항원-자극된 CAR 신호전달에 대한 반응으로 CAR-T 세포의 증대 특성에 영향을 줄 수 있다. 일부 실시형태에서, 50, 45, 40, 30, 35, 30, 25, 20, 15, 14, 13, 12, 11 또는 10개 미만의 아미노산과 같은 더 짧은 스페이서가 사용된다. 일부 실시형태에서, 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 260, 270, 280, 또는 290개 아미노산인 것과 같은 더 긴 스페이서는 생체내 또는 시험관내에서 증대가 증가된다는 이점을 가질 수 있다.

세포외 스페이서가 다수의 부분을 포함하는 경우, 다양한 부분 사이에 0 내지 50개의 아미노산이 있을 수 있다. 예를 들어, 힌지와 CH2 또는 CH3 영역 사이 또는 CH2 영역과 CH3 영역이 모두 존재할 경우 그 사이에 적어도, 최대, 또는 정확히 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 또는 50개 아미노산(또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위)이 있을 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포외 스페이서는 본질적으로 힌지, CH2 및/또는 CH3 영역으로 이루어지며, 이는 힌지, CH2 및/또는 CH3 영역이 존재하는 유일한 식별 가능한 영역이고 모든 다른 도메인 또는 영역이 배제되지만 식별 가능한 영역의 부분이 아닌 아미노산이 추가로 존재할 수 있음을 의미한다.

D. 막횡단 도메인

본 개시내용의 폴리펩타이드는 막횡단 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 막횡단 도메인은 막에 걸쳐 있는 소수성 알파 나선이다. 상이한 막횡단 도메인은 상이한 수용체 안정성을 초래할 수 있다.

일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 세포외 스페이서와 세포질 영역 사이에 개재된다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 세포외 스페이서와 하나 이상의 보조자극 영역 사이에 개재된다. 일부 실시형태에서, 링커는 막횡단 도메인과 하나 이상의 보조자극 영역 사이에 있다.

진핵생물(예를 들어, 포유동물) 세포의 세포막 내로의 폴리펩타이드 삽입을 제공하는 임의의 막횡단 도메인이 사용하기에 적합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 막횡단 도메인은 CD28, CD8, CD4, CD3-제타(CD3ζ), CD134 또는 CD7로부터 유래된다.

E. 세포질 영역

항원 인식 후, 본 개시내용의 수용체는 클러스터링될 수 있고 신호는 세포질 영역을 통해 세포로 전달될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본원에 기술된 보조자극 도메인은 세포질 영역의 부분이다. 일부 실시형태에서, 세포질 영역은 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 세포내 신호전달 도메인은 1차 신호전달 도메인 및 하나 이상의 보조자극 도메인을 포함할 수 있다.

본 개시내용의 폴리펩타이드에서 사용하기에 적합한 세포질 영역 및/또는 보조자극 영역은 항원 결합 도메인에 대한 항원의 결합에 의한 활성화에 반응하여 구별되고 검출가능한 신호(예를 들어, 세포에 의한 하나 이상의 사이토카인의 생산 증가; 표적 유전자의 전사 변화; 단백질 활성의 변화, 세포 거동의 변화, 예를 들어 세포 사멸; 세포 증식; 세포 분화; 세포 생존; 세포 신호전달 반응의 조절 등)를 제공하는 임의의 바람직한 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 영역은 본원에 기술된 바와 같은 적어도 하나(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6 등)의 ITAM 모티프를 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포질 영역은 DAP10/CD28 유형 신호전달 쇄를 포함한다.

본 개시내용의 폴리펩타이드에서 사용하기에 적합한 세포질 영역은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM)-함유 세포내 신호전달 폴리펩타이드를 포함한다. ITAM 모티프는 YX1X2(L/I)이며, 여기서 X1과 X2는 독립적으로 임의의 아미노산이다. 일부 경우에, 세포질 영역은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 ITAM 모티프를 포함한다. 일부 경우에, ITAM 모티프는 엔도도메인(endodomain)에서 2회 반복되며, ITAM 모티프의 첫 번째 및 두 번째 경우는 6 내지 8개의 아미노산에 의해 서로 분리되며, 예를 들어 (YX1X2(L/I))(X3)n(YX1X2(L/I))이며, 여기서 n은 6 내지 8의 정수이고, 6 내지 8개의 X3 각각은 임의의 아미노산이 될 수 있다.

적합한 세포질 영역은 ITAM 모티프를 함유하는 폴리펩타이드로부터 유래된 ITAM 모티프-함유 부분일 수 있다. 예를 들어, 적합한 세포질 영역은 임의의 ITAM 모티프-함유 단백질로부터의 ITAM 모티프-함유 도메인일 수 있다. 따라서, 적합한 엔도도메인은 이것이 유래된 전체 단백질의 전체 서열을 함유할 필요는 없다. 적합한 ITAM 모티프-함유 폴리펩타이드의 예로는 DAP12, DAP10, FCER1G(Fc 엡실론 수용체 I 감마 쇄); CD3D(CD3 델타); CD3E(CD3 엡실론); CD3G(CD3 감마); CD3-제타; 및 CD79A(항원 수용체 복합체-연관 단백질 알파 쇄)가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.

예시적인 세포질 영역은 당업계에 공지되어 있다. 하기에 나타낸 세포질 영역은 또한 본 개시내용의 CAR에 포함될 수 있는 영역의 예를 제공한다:

일부 실시형태에서, 적합한 세포질 영역은 전장 DAP12 아미노산 서열의 ITAM 모티프-함유 부분을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포질 영역은 FCER1G(FCRG; Fc 엡실론 수용체 I 감마 쇄; Fc 수용체 감마-쇄; fc-엡실론 R1-감마; fcR감마; fceRI 감마; 고친화성 면역글로불린 엡실론 수용체 서브유닛 감마; 면역글로불린 E 수용체, 고친화도, 감마 쇄 등으로도 공지됨)로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 적합한 세포질 영역은 전장 FCER1G 아미노산 서열의 ITAM 모티프-함유 부분을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 세포질 영역은 T 세포 표면 당단백질 CD3 델타 쇄(CD3D; CD3-델타; T3D; CD3 항원, 델타 서브유닛; CD3 델타; CD3d; CD3d 항원, 델타 폴리펩타이드(TiT3 복합체); OKT3, 델타 쇄; T 세포 수용체 T3 델타 쇄; T 세포 표면 당단백질 CD3 델타 쇄 등으로도 공지됨)로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 적합한 세포질 영역은 전장 CD3 델타 아미노산 서열의 ITAM 모티프-함유 부분을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포질 영역은 T 세포 표면 당단백질 CD3 엡실론 쇄(CD3ε, CD3e; T 세포 표면 항원 T3/Leu-4 엡실론 쇄, T 세포 표면 당단백질 CD3 엡실론 쇄, AI504783, CD3, CD3-엡실론, T3e 등으로도 공지됨)로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 적합한 세포질 영역은 전장 CD3 엡실론 아미노산 서열의 ITAM 모티프-함유 부분을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포질 영역은 T 세포 표면 당단백질 CD3 감마 쇄(CD3G, CD3g, T 세포 수용체 T3 감마 쇄, CD3-감마, T3G, 감마 폴리펩타이드(TiT3 복합체) 등으로도 공지됨)으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 적합한 세포질 영역은 전장 CD3 감마 아미노산 서열의 ITAM 모티프-함유 부분을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포질 영역은 T 세포 표면 당단백질 CD3 제타 쇄(CD3Z, CD3z, T 세포 수용체 T3 제타 쇄, CD247, CD3-제타, CD3H, CD3Q, T3Z, TCRZ 등으로도 공지됨)로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 적합한 세포질 영역은 전장 CD3 제타 아미노산 서열의 ITAM 모티프-함유 부분을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 세포질 영역은 CD79A(B-세포 항원 수용체 복합체-관련 단백질 알파 쇄; CD79a 항원(면역글로불린-관련 알파); MB-1 막 당단백질; ig-알파; 막-결합된 면역글로불린-연관 단백질, 표면 IgM-연관 단백질 등으로도 공지됨)로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 적합한 세포질 영역은 전장 CD79A 아미노산 서열의 ITAM 모티프-함유 부분을 포함할 수 있다.

F. 보조자극 영역

세포질 영역에 포함된 것들과 같은 적합한 보조자극 영역의 비제한적 예로는 4-lBB(CD137), CD28, ICOS, OX-40, BTLA, CD27, CD30, GITR, 및 HVEM으로부터의 폴리펩타이드가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.

보조자극 영역은 적어도, 최대 또는 정확히 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 또는 300개의 아미노산 또는 그 내에서 추론가능한 임의의 범위의 길이를 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 보조자극 영역은 막횡단 단백질 4-1BB(TNFRSF9; CD137; CDwl37; ILA; 등으로도 공지됨)의 세포내 부분으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 보조자극 영역은 막횡단 단백질 CD28(Tp44로도 알려짐)의 세포내 부분으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 보조자극 영역은 막횡단 단백질 ICOS(AILIM, CD278 및 CVID1로도 알려짐)의 세포내 부분으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 보조자극 영역은 막횡단 단백질 OX-40(TNFRSF4, RP5-902P8.3, ACT35, CD134, OX40, TXGP1L로도 알려짐)의 세포내 부분으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 보조자극 영역은 막횡단 단백질 BTLA(BTLA1 및 CD272로도 알려짐)의 세포내 부분으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 보조자극 영역은 막횡단 단백질 CD27(S 152, T14, TNFRSF7 및 Tp55로도 알려짐)의 세포내 부분으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 보조자극 영역은 막횡단 단백질 CD30(TNFRSF8, D1S166E 및 Ki-1로도 알려짐)의 세포내 부분으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 보조자극 영역은 막횡단 단백질 GITR(TNFRSF18, RP5-902P8.2, AITR, CD357 및 GITR-D로도 알려짐)의 세포내 부분으로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 보조자극 영역은 막횡단 단백질 HVEM(TNFRSF14, RP3-395M20.6, ATAR, CD270, HVEA, HVEM, LIGHTR 및 TR2로도 알려짐)의 세포내 부분으로부터 유래된다.

G. 검출 펩타이드

일부 실시형태에서, 본원에 기술된 검출 펩타이드를 추가로 포함할 수 있다. 다양한 적합한 검출 펩타이드는 당업계에 공지되어 있고 본원에서 고려된다.

H. 펩타이드 링커

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 폴리펩타이드는 펩타이드 링커(때때로 링커로 지칭됨)를 포함한다. 펩타이드 링커는 본원에 기술된 임의의 펩타이드 도메인/영역을 분리하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 링커는 신호 펩타이드와 항원 결합 도메인 사이, 항원 결합 도메인의 VH와 VL 사이, 항원 결합 도메인과 펩타이드 스페이서 사이, 펩타이드 스페이서와 막횡단 도메인 사이에, 보조자극 영역에 측접하여 또는 보조자극 영역의 N- 또는 C- 영역 상에 및/또는 막횡단 도메인과 엔도도메인 사이에 위치할 수 있다. 펩타이드 링커는 다양한 아미노산 서열 중 임의의 것을 가질 수 있다. 다른 화학적 연결이 배제되지는 않지만, 도메인 및 영역은 일반적으로 유연한 성질을 갖는 펩타이드 링커에 의해 연결될 수 있다. 링커는 약 6 내지 약 40개 아미노산의 길이, 또는 약 6 내지 약 25개 아미노산의 길이의 펩타이드일 수 있다. 이러한 링커는 합성, 링커-암호화 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 단백질을 커플링함으로써 생성될 수 있다.

유연성 정도를 갖는 펩타이드 링커가 사용될 수 있다. 펩타이드 링커는 적절한 펩타이드 링커가 일반적으로 유연한 펩타이드를 생성하는 서열을 가질 것이라는 점을 염두에 두고 사실상 어떠한 아미노산 서열이라도 가질 수 있다. 글리신 및 알라닌과 같은 작은 아미노산의 사용은 유연한 펩타이드를 생성하는 데 유용하다. 이러한 서열의 생성은 당업자에게 일상적이다.

적합한 링커는 용이하게 선택될 수 있고 임의의 적합한 길이, 예컨대 1개 아미노산(예를 들어, Gly) 내지 20개 아미노산, 2개 아미노산 내지 15개 아미노산, 3개 아미노산 내지 12개 아미노산(4개 아미노산 내지 10개 아미노산, 5개 아미노산 내지 9개 아미노산, 6개 아미노산 내지 8개 아미노산, 또는 7개 아미노산 내지 8개 아미노산 포함)일 수 있고, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개 아미노산 일 수 있다.

적합한 링커는 용이하게 선택될 수 있고 상이한 임의의 적합한 길이, 예컨대 1개 아미노산(예를 들어, Gly) 내지 20개 아미노산, 2개 아미노산 내지 15개 아미노산, 3개 아미노산 내지 12개 아미노산(4개 아미노산 내지 10개 아미노산, 5개 아미노산 내지 9개 아미노산, 6개 아미노산 내지 8개 아미노산, 또는 7개 아미노산 내지 8개 아미노산 포함)일 수 있고, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개 아미노산 일 수 있다.

VI. 세포

특정 실시형태는 본 개시내용의 폴리펩타이드 또는 핵산을 포함하는 세포에 관한 것이다. 일부 실시형태에서 세포는 면역 세포 또는 T 세포이다. "T 세포"는 T-헬퍼 세포, 불변 자연 살해 T(iNKT) 세포, 세포독성 T 세포, T-조절 세포(Treg) 감마-델타 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 및 호중구를 포함하여, CD3을 발현하는 면역 세포의 모든 유형을 포함한다.

적합한 포유동물 세포는 1차 세포 및 불멸화된 세포주를 포함한다. 적합한 포유동물 세포주는 인간 세포주, 비-인간 영장류 세포주, 설치류(예를 들어, 마우스, 래트) 세포주 등을 포함한다. 적합한 포유동물 세포주는 HeLa 세포(예를 들어, 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection: ATCC) 번호 CCL-2), CHO 세포(예를 들어, ATCC 번호 CRL9618, CCL61, CRL9096), 인간 배아 신장(HEK) 293 세포(예를 들어, ATCC 번호 CRL-1573), Vero 세포, NIH 3T3 세포(예를 들어, ATCC No. CRL-1658), Huh-7 세포, BHK 세포(예를 들어, ATCC 번호 CCL10), PC12 세포(ATCC 번호 CRL1721), COS 세포, COS-7 세포(ATCC 번호 CRL1651), RATI 세포, 마우스 L 세포(ATCC 번호 CCLI.3), HLHepG2 세포, Hut-78, 저캣, HL-60, NK 세포주(예를 들어, NKL, NK92, 및 YTS) 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

일부 경우에, 세포는 불멸화된 세포주가 아니고, 대신에 개체로부터 얻어진 세포(예를 들어, 1차 세포)이다. 예를 들어, 일부 경우에, 세포는 개체로부터 수득된 면역 세포이다. 일 예로서, 세포는 개체로부터 수득된 T 림프구이다. 다른 예로서, 세포는 개체로부터 수득된 세포독성 세포이다. 다른 예로서, 세포는 줄기 세포(예를 들어, 말초 혈액 줄기 세포) 또는 개체로부터 수득된 전구 세포이다.

VII. 사이토카인

일부 실시형태에서, 본원에 포함된 임의의 세포는 하나 이상의 이종 사이토카인을 발현할 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 세포는 하나 이상의 이종 사이토카인을 발현하도록 조작되고/되거나 하나 이상의 이종 사이토카인의 정상적인 발현을 상향조절하도록 조작된다. 세포는 다른 유전자와 동일한 벡터에서 하나 이상의 사이토카인에 대해 형질도입 또는 형질감염될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 일부 경우에, 세포는 또한 하나 이상의 사이토카인 이외에도, 임의의 종류의 키메라 단백질을 포함하는 하나 이상의 이종 단백질을 발현한다. 일례로서, 세포는 키메라 항원 수용체를 발현할 수 있다.

하나 이상의 사이토카인은 키메라 폴리펩타이드 및/또는 CAR을 포함하는 다른 단백질로부터 분리된 폴리펩타이드로서 벡터로부터 공동 발현될 수 있다. 예를 들어, 인터류킨-15(IL-15)는 조직 제한적이고, 병리학적 조건 하에서만 혈청 중 임의의 수준에서 또는 전신적으로 관찰된다. IL-15는 입양 요법을 위해 바람직할 수 있는 여러 속성들을 소유한다. IL-15는 자연 살해 세포의 발달 및 세포 증식을 유도하고, 종양-잔류 세포의 기능적 저해를 완화시킴을 통해 확립된 종양의 근절을 촉진하고 활성화-유도된 세포 사멸(AICD)을 억제하는 항상성 사이토카인이다. IL-15 이외에도, 다른 사이토카인이 고려된다. 이들은 사이토카인, 케모카인, 및 인간 적용을 위해 사용되는 세포의 활성화 및 증식에 기여하는 다른 분자를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. IL-15를 발현하는 NK 세포는 주입 후 이들의 생존에 유용한, 지속적인 지지성 사이토카인 신호전달할 수 있다.

구체적인 실시형태에서, 세포는 하나 이상의 외인성으로 제공되는 사이토카인을 발현한다. 일례로서, 사이토카인은 IL-15, IL-12, IL-2, IL-18, IL-21, IL-23, GMCSF 또는 이들의 조합이다. 추가적으로 또는 대안적으로, 사이토카인(들)은 세포에 외인성으로 제공될 수 있다. 대안적인 경우에, 세포 내의 내인성 사이토카인은 사이토카인의 프로모터 부위(들)에서의 유전자 재조합과 같은 내인성 사이토카인의 발현 조절 조작 시 상향조절된다. 사이토카인이 발현 작제물 상에서 세포에 제공되는 경우, 사이토카인은 다른 이종 단백질과 동일한 벡터로부터 암호화될 수 있다.

일부 실시형태에서, 세포에서 이용되는 이종 단백질은 사이토카인과 이의 수용체의 세포외 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 이의 수용체의 적어도 일부의 융합체이다. 구체적인 경우에, IL-15의 일부 또는 전부는 스시(sushi) 도메인과 같은 IL-15Ra 수용체의 세포외 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 IL-15Ra 수용체의 일부 또는 전부에 융합된다.

VIII. 일반적인 약제학적 조성물

일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 대상체에게 투여된다. 상이한 양상은 대상체에게 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 세포 요법(예를 들어, CAR T 세포, CAR NK 세포, TCR T 세포 등)은 병태(예를 들어 암)로부터 보호하거나 치료하기 위해 대상체에게 투여된다. 추가로, 이러한 조성물은 추가 치료제(예를 들어 화학치료제, 면역치료제, 생물치료제)와 조합하여 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 일반적으로 약학적으로 허용되는 담체 또는 수성 매질에 용해되거나 분산될 것이다.

어구 "약제학적으로 허용되는" 또는 "약리학적으로 허용되는"은 인간 또는 동물에게 투여될 때 유해 반응, 알레르기 반응 또는 기타 바람직하지 않은 반응을 일으키지 않는 분자 실체(entities) 및 조성물을 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용되는 담체"는 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항세균제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 약제학적 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 제제의 사용은 당업계에 잘 알려져 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 제제가 활성 성분과 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 면역원성 및 치료 조성물에서의 이의 사용이 고려된다. 보충적 활성 성분, 예컨대 다른 항감염제 및 백신이 또한 조성물 내로 혼입될 수 있다.

활성 화합물은 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있고, 예를 들어 정맥내, 근육내, 피하, 또는 복강내 경로를 통한 주사를 위해 제형화될 수 있다. 전형적으로, 이러한 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 제조될 수 있고; 주사 전에 액체의 첨가 시에 용액 또는 현탁액을 제조하는 데 사용하기에 적합한 고체 형태가 또한 제조될 수 있고; 제제는 또한 유화될 수 있다.

주사가능한 용도에 적합한 약제학적 형태는 멸균 수용액 또는 분산액; 예를 들어 수성 프로필렌 글리콜을 포함하는 제형; 및 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 모든 경우에, 형태는 멸균되어야 하고, 용이하게 주사될 수 있는 정도로 유동적이어야 한다. 이는 또한 제조 및 저장 조건 하에 안정하여야 하고, 세균 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다.

단백질성 조성물은 중성 또는 염 형태로 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염은 산 부가염(단백질의 유리 아미노 그룹으로 형성됨)을 포함하고, 예를 들어 염산 또는 인산과 같은 무기산, 또는 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 만델산 등과 같은 유기산으로 형성되는 염을 포함한다. 유리 카복실 그룹으로 형성된 염은 또한 예를 들어 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 또는 수산화제2철과 같은 무기 염기 및 이소프로필아민, 트리메틸아민, 히스티딘, 프로카인 등과 같은 유기 염기로부터 유래될 수 있다.

약제학적 조성물은 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 적합한 혼합물, 및 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산 매질을 포함할 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항세균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등에 의해 야기될 수 있다. 많은 경우에, 등장화제, 예를 들어 당 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 해당 조성물에서 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 사용함에 의해 야기될 수 있다.

멸균 주사가능한 용액은 활성 화합물을 필요에 따라 상기 열거된 다양한 다른 성분과 함께 적절한 용매 중에 필요한 양으로 혼입시킨 후, 여과 멸균 또는 동등한 절차에 의해 제조된다. 일반적으로, 분산액은 다양한 멸균된 활성 성분을 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은, 활성 성분의 분말과 이전에 멸균-여과된 이의 용액으로부터의 임의의 추가의 원하는 성분을 생성하는 진공 건조 및 동결 건조 기술이다.

조성물의 투여는 전형적으로 임의의 통상적인 경로를 통한 것일 것이다. 이는 경구 또는 정맥내 투여를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 대안적으로, 투여는 동소, 피내, 피하, 근육내, 복강내 또는 비강내 투여에 의할 수 있다. 이러한 조성물은 통상적으로 생리학적으로 허용되는 담체, 완충제 또는 다른 부형제를 포함하는 약제학적으로 허용되는 조성물로서 투여될 것이다.

제형에 따라, 용액은 투여 제형과 양립가능한 방식으로 그리고 치료적으로 또는 예방적으로 유효한 양으로 투여될 것이다. 제형은 상기 기술한 주사가능한 용액의 유형과 같은 다양한 투여 형태로 용이하게 투여된다.

IX. 형질도입 마커 및/또는 안전 스위치로서 키메라 폴리펩타이드

본 개시내용의 실시형태는 형질도입 마커 및/또는 안전 스위치로서 이용될 수 있는 키메라 폴리펩타이드를 포함한다. 안전 전략은, 예를 들어, 독성이 발생할 경우 이를 극복하기 위한 수단으로서 세포 요법과 함께 이용될 수 있다. 당업계에 존재하는 예에는 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제(HSV-tk)/간시클로비르, 유도성 카스파제 9 및 절두된 EGFR 유전자(tEGFR)가 포함된다. EGFR 유전자는 치료 세포를 제거하기 위해 ADCC(항체 의존성 세포 독성) 메커니즘을 주로 사용하며, ADCC는 생체내에서 이러한 안전 스위치의 효능을 제한할 수 있는 NK 세포 및 기타 효과기 세포의 존재를 필요로 한다. 이상적으로, 안전 스위치는 ADCC 또는 항체-약물 접합체(ADC) 메커니즘을 이용하여 생체내에서 치료 세포를 제거할 수 있다. ADC 접근법은 생체내에서 치료 세포를 제거하기 위해 효과기 세포를 필요로 하지 않고 따라서 생체내에서 더 효과적일 것으로 예상된다. 또한, tEGRF 안전 스위치는, 예를 들어, 최근에 림프구 고갈 화학요법으로 치료를 받은 환자에서 효능이 제한되거나 효능이 없을 수 있다. 본 개시내용은 세포 요법에 대한 안전성 분야의 요구에 대한 해결책을 제공한다.

본 개시내용의 실시형태는 마찬가지로 생산되지 않은 세포 요법과 비교하여 유해한 효과에 대한 위험이 감소된 세포 요법과 관련된 방법 및 조성물을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 치료 세포는, 예를 들어, 세포 요법이 수용자 개체에게 독성이 되는 경우 안전 스위치로서 사용될 수도 있는 적어도 하나의 단백질 마커를 발현한다. 일부 경우에, 단백질은 안전 스위치가 아닌 마커로서 이용되고, 일부 경우에 단백질은 마커가 아닌 안전 스위치로서 사용되며, 다른 경우에 단백질은 마커와 안전 스위치 둘 다로서 이용된다. 치료 세포는 임의의 독성이 개시되기 전에 마커를 사용하여 모니터링될 수 있거나 모니터링되지 않을 수 있다. 마커/안전 스위치는 또한 세포 생산 및/또는 세포 사용을 모니터링하는 데 유용할 수 있다.

특정 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 특정 세포에 대한 마커로서 뿐만 아니라 필요한 경우 세포를 사멸하기 위한 안전 스위치로서 이용된다. 일부 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 이것이 정상적으로는 발현되지 않는 세포에 존재하고/하거나 키메라 폴리펩타이드는 일부 경우에 융합 단백질을 포함하는 임의의 종류의 이종 단백질로서 세포에 존재한다. 구체적인 실시형태에서, 특정 단백질의 적어도 세포외 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드 융합 단백질은 이것을 발현하는 세포에 대한 마커로서 및 또한 바람직한 경우에 이것을 발현하는 세포를 사멸하는 표적으로서 이용된다. 구체적인 경우에, 키메라 폴리펩타이드는 세포질 도메인이 단백질의 나머지의 임의의 부분에 고유하지 않은 융합 단백질로서 존재하고(비록 융합 단백질의 막횡단 도메인이 세포외 도메인과 함께 고유하게 발견되는 막횡단 도메인일 수 있거나 아닐 수 있지만), 일부 양상에서 세포질 도메인은 내재화 세포질 도메인과 같은 세포 수용체의 세포질 도메인이다. 구체적인 경우에, 키메라 폴리펩타이드 융합 단백질의 세포질 도메인은 CD30, B 세포 성숙 항원(BCMA), 종양-연관 칼슘 신호 전달인자 2(trop-2), CD317, CD3감마, CD4, CD79b, CD19, CD22, CD25, CD33 또는 이들의 조합으로부터의 것이다.

본 개시내용의 방법은 적어도 키메라 폴리펩타이드(예컨대, 항체와 같은 세포외 도메인에 결합하는 제제가 이에 결합할 수 있는 정도로 특정 세포외 도메인의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩타이드)를 발현하는 세포를 식별하는 방법을 포함한다. 특정 단백질을 사용하여 세포를 식별하는 것은 이를 발현하는 세포의 생산 품질, 세포 위치의 모니터링 및/또는 세포 양의 결정 등과 같은 임의의 이유로 인해 이루어질 수 있다.

구체적인 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드는 CD30 세포외 도메인의 일부 또는 전부를 포함한다. 구체적인 경우에, 세포 요법의 세포는 세포 상에서 발현되는 CD30을 표적화함으로써 제어된다. 예를 들어, 세포 요법이 개체에게 독성을 나타내는 것과 같이 임의의 방식으로 유해해졌다는 임의의 징후를 세포의 수용자가 나타낸다면, CD30-양성 세포의 제어는 CD30-양성 세포가 사멸되는 것을 포함하여 세포가 억제될 수 있게 한다. 일부 실시형태에서, CD30-양성 세포는 임의의 종류의 것이고 키메라 융합 단백질을 포함하는 임의의 종류의 이종 CD30 단백질을 발현한다. 다른 실시형태에서, 세포의 천연 기구는 세포가 비-천연 조건 하에 CD30을 발현하도록 한다. 예를 들어, CD30은 이종 유전자의 특정 조합을 포함하는 하나 이상의 이종 유전자의 형질감염 또는 형질도입 후에 발현될 수 있다. 구체적인 경우, 세포에서 BCL6 및 BCL2L1의 형질감염 또는 형질도입은 CD30의 발현(통상적으로 CD30을 발현하지 않는 세포에서의 발현을 포함)을 초래하고, 이러한 경우에 CD30은 안전 스위치(또는 마커)로서 사용될 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 수용자 개체가 CD30-양성 세포 요법에 대해 독성을 나타내는 경우, 개체에게 CD30을 표적화하는 하나 이상의 제제, 예컨대 모노클로날 항체를 포함하는 항체 또는 항체-약물 접합체; CD30을 표적화하는 키메라 항원 수용체-발현 면역 세포(T 세포((αβ 또는 γδ 포함)), NK 세포, NKT 세포, 단핵구, 대식세포, B 세포, 중간엽 줄기 세포(MSC) 세포, 조혈 줄기 세포(HSC), 조혈 세포, 유도 만능 줄기 세포(iPSC) 또는 이의 유도체, 이의 혼합물, 이의 유도체); CD30/CD3 이중특이적 항체; 또는 CD30/CD16 이중특이적 항체의 유효량이 제공된다.

본 개시내용의 실시형태는 특정 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 서열을 포함하는 발현 작제물을 포함하며, 여기서 상기 키메라 폴리펩타이드는 세포내이입 또는 내재화 활성을 포함하는 세포내 도메인에 융합된 특정 세포외 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 구체적인 경우에, 키메라 폴리펩타이드 융합 단백질의 세포질 도메인은 CD30, B 세포 성숙 항원(BCMA), 종양-연관 칼슘 신호 전달인자 2(trop-2), CD317, CD3감마, CD4, CD79b, CD19, CD22, CD25, CD33 또는 이들의 조합으로부터의 것이다. 구체적인 경우에, 키메라 폴리펩타이드는 T 세포 수용체의 알파 또는 베타 쇄인 막횡단 도메인 또는 CD28, CD3ε, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD30, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134, CD137 또는 CD154로부터의 막횡단 도메인과 같은 특정 막횡단 도메인을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 융합 단백질은 서열번호 47을 포함하고, 융합 단백질을 암호화하는 서열은 서열번호 48을 포함할 수 있다. 본원에 포함된 임의의 발현 작제물은 바이러스 벡터 또는 비-바이러스 벡터를 포함하는 벡터 내에 있을 수 있다.

본 개시내용의 구체적인 실시형태는 면역 세포와 같은, 본원에 포함된 임의의 발현 작제물을 포함하는 단리된 세포를 포함한다. 세포는 αβ T 세포, γδ T 세포, NK 세포, NKT 세포, 단핵구, 대식세포, B 세포, 중간엽 줄기 세포(MSC) 세포, 조혈 줄기 세포(HSC), 조혈 세포, iPSC 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 일부 경우에, 세포는 키메라 폴리펩타이드 외의 하나 이상의 이종 단백질을 발현한다. 임의의 이종 단백질은 치료 단백질, 사이토카인, 사이토카인과 사이토카인 수용체의 융합체, 안전 스위치, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 구체적인 경우에, 치료 단백질은 조작된 항원 수용체, 항체 등이다. 조작된 항원 수용체는 암 항원을 표적화할 수 있다. 조작된 항원 수용체는 키메라 항원 수용체, T 세포 수용체, 또는 B-세포 수용체일 수 있다. 세포의 구체적인 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드 및 하나 이상의 이종 단백질은 동일한 벡터로부터 발현되지만, 다른 경우에는 키메라 폴리펩타이드 및 하나 이상의 이종 단백질이 상이한 벡터로부터 발현된다. 세포는 이종 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자를 발현할 수 있다. 본 개시내용의 실시형태는 적합한 배지에 포함된, 본원에 포함된 세포 중 어느 하나의 단리된 집단을 포함한다. 집단은 보관소에 수용되고/되거나 냉동보존될 수 있다.

본 개시내용의 구체적인 실시형태는 (1) 이종 CD30 유전자; (2) CD30 세포외 도메인의 적어도 일부를 포함하는 CD30 융합 단백질; 또는 (3) 이종 BCL6과 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자의 조합으로 형질도입 또는 형질감염되는 CD30-양성 세포를 식별하는 방법으로서, 세포를 (1) 이종 CD30 유전자; (2) CD30 세포외 도메인의 적어도 일부를 포함하는 CD30 융합 단백질; 또는 (3) 이종 BCL6과 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자의 조합으로 형질도입 또는 형질감염시키는 단계; 세포를 CD30에 결합하는 제제의 유효량에 노출시키는 단계; 및 세포 표면 상의 CD30에 대한 제제의 결합을 직접적으로 또는 간접적으로 검출하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 노출 및 검출 단계는 세포 제조 동안 및/또는 후에 일어날 수 있다. 방법은 세포를 제조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 구체적인 경우에, 방법은 면역 세포를 CD30 융합 단백질로 형질감염 또는 형질도입시키는 단계; 면역 세포를 CD30에 결합하는 항체 또는 항체-약물 접합체의 유효량에 노출시키는 단계; 및 세포 표면 상의 CD30에 대한 항체 또는 항체-약물 접합체의 결합을 직접적으로 또는 간접적으로 검출하는 단계로서 추가로 정의된다. 방법은 면역 세포를 이종 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자로 형질감염 또는 형질도입시키는 단계; 면역 세포를 CD30에 결합하는 항체 또는 항체-약물 접합체의 유효량에 노출시키는 단계; 및 세포 표면 상의 CD30에 대한 항체 또는 항체-약물 접합체의 결합을 직접적으로 또는 간접적으로 검출하는 단계로서 추가로 정의될 수 있다. 구체적인 경우에, 방법은 시험관내에서 발생하지만, 일부 경우에는 방법의 적어도 일부는 생체내에서 발생한다. 세포는 CD30 융합 단백질 외의 하나 이상의 이종 단백질, 예컨대 치료 단백질, 사이토카인, 사이토카인과 사이토카인 수용체의 융합체, 안전 스위치, 또는 이들의 혼합물을 발현할 수 있다. 치료 단백질은 조작된 항원 수용체일 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 방법은 면역 세포를 이종 CD30 또는 CD30 융합 단백질 외의 이종 단백질; 또는 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자로 형질감염 또는 형질전환시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, CD30 융합 단백질, 및 CD30 융합 단백질 외의 이종 단백질 또는 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자는 동일한 벡터로부터 발현된다. CD30 융합 단백질, 및 CD30 융합 단백질 외의 이종 단백질 또는 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자는 상이한 벡터로부터 발현될 수 있다.

일 실시형태에서, (a) 면역 세포를 (1) 이종 CD30 단백질; (2) CD30 융합 단백질; 또는 (3) 이종 BCL6과 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자의 조합으로 형질도입 또는 형질감염시키는 단계로서, 상기 면역 세포가 각각 (1) CD30; (2) CD30 융합 단백질; 또는 (3) CD30을 발현하는, 단계; 및 (b) 면역 세포를 하나 이상의 치료 단백질로 형질전환 또는 형질감염시키는 단계를 포함하는, 입양 세포 요법을 위한 면역 세포의 제조 방법이 있다. 구체적인 실시형태에서, 단계 (a)는 단계 (b) 전, 동시에 또는 후에 발생한다. 단계 (a)에서의 형질전환 또는 형질감염은 단계 (b)에서의 형질전환 또는 형질감염과 동일할 수 있다. 구체적인 실시형태에서, (1), (2) 또는 (3)이 치료 단백질과 상이한 벡터 상에 있을 수 있지만, (1), (2) 또는 (3)은 치료 단백질과 동일한 벡터 상에 있다. 구체적인 실시형태에서, 단계 (a) 후에, 방법으로부터의 면역 세포는, 예컨대 유세포분석, 폴리머라제 연쇄 반응 또는 이들의 조합에 의해 면역 세포의 표면 상에 발현된 CD30의 존재에 대해 분석된다. 일부 경우에, 방법은 이 방법으로부터 생산된 면역 세포를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 경우에, 면역 세포는 예컨대 CD30에 결합하는 제제(예를 들어, 항체 또는 항체-약물 접합체)를 사용하여 개체에서 모니터링될 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 개체는 면역 세포로 인한 하나 이상의 유해한 효과를 나타내고, 개체에게 CD30에 결합하는 제제의 유효량이 투여된다. 개체는 면역 세포로 인한 독성을 나타낼 수 있으며, 개체에게 CD30에 결합하는 제제의 유효량이 투여될 수 있다. 개체는 면역 세포로 인한 이식편대숙주 질환(GVHD)을 나타낼 수 있으며, 개체에게 CD30에 결합하는 제제의 유효량이 투여될 수 있다. 개체는 더 이상 면역 세포가 필요하지 않고, 개체에게 CD30에 결합하는 제제의 유효량이 투여될 수 있다.

본 개시내용의 실시형태는 개체에서 세포 요법으로 인한 하나 이상의 유해한 효과를 감소시키거나 예방하는 방법으로서, 세포 요법의 세포의 표면 상에 발현된 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인을 표적화하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 상기 방법은 세포 상에 발현된 CD30에 결합하는 하나 이상의 제제, 예컨대 항체(예컨대, 모노클로날 항체) 또는 항체-약물 접합체의 유효량을 개체에게 투여하는 것으로서 추가로 정의될 수 있다. 유해한 효과의 예로는 GVHD, 사이토카인 방출 증후군 또는 면역 효과 세포-연관 신경 독성 증후군이 포함된다. 폴리펩타이드가 CD30의 세포외 도메인을 포함하는 경우, 발현된 CD30 세포외 도메인은 전체 CD30 단백질을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있다. 구체적인 경우에, CD30은 세포외 도메인의 적어도 일부를 포함하는 전체 CD30 단백질의 단편이다. CD30은 면역 세포에서 천연적으로 발현될 수 있다. 일부 경우에, CD30은 면역 세포에서 천연적으로 이종 발현된다. CD30은 이종 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자를 발현하는 세포의 결과로서 세포에서 발현될 수 있다. CD30은 세포내이입 또는 내재화 활성을 포함하는 세포내 도메인에 융합된 CD30 세포외 도메인의 적어도 일부를 포함하는 것과 같은 CD30 융합 단백질일 수 있다. 세포내 도메인의 예로는 B-세포 성숙 항원(BCMA), trop-2, CD317, CD3감마, CD4, CD79b 또는 이들의 조합으로부터의 것들이 포함된다. CD30 융합 단백질은 CD30 막횡단 도메인을 포함할 수 있다. 구체적인 경우에, 융합 단백질은 서열번호 47을 포함한다. 융합 단백질을 암호화하는 서열은 서열번호 48을 포함할 수 있다.

구체적인 경우에, 임의의 표적화 단계 전에, 개체의 세포는, 예컨대 이의 키메라 폴리펩타이드를 표적화하는 하나 이상의 제제를 사용하여 생체내에서 모니터링될 수 있다. 특정 실시형태에서, 키메라 폴리펩타이드를 표적화하는 제제는 치료 세포를 억제하지 않을 만큼 충분히 적은 양으로 사용되는 항체이다. 세포 요법은 개체에 대해 동종이계 또는 자가일 수 있다. 세포 요법은 치료 단백질, 사이토카인, 사이토카인과 사이토카인 수용체의 융합체, 안전 스위치, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 하나 이상의 이종 단백질을 발현하는 면역 세포를 포함할 수 있다. 치료 단백질은 세포에 의해 발현되는 키메라 항원 수용체, T 세포 수용체, 또는 둘 다를 포함하는 하나 이상의 조작된 항원 수용체를 포함할 수 있다. 세포는 키메라 폴리펩타이드 및 키메라 항원 수용체를 발현할 수 있다.

본 개시내용의 실시형태는 이종 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자의 조합으로 형질도입되거나 형질감염되는 세포를 CD30에 결합하는 제제의 유효량에 노출시키는 단계를 포함하는, 세포의 활성을 억제하는 방법을 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 활성의 억제는 세포의 세포자멸사를 유도하는 것으로서 추가로 정의된다. 상기 방법은 세포 상에 발현된 CD30에 대한 제제의 결합을 검출하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 구체적인 경우에, 상기 방법은 본원에 포함된 임의의 종류의 세포를 이종 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자로 형질도입 또는 형질감염시키는 것을 추가로 포함한다. 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자는 BCL2L1일 수 있다.

본 개시내용의 실시형태는 CD30 세포외 도메인의 적어도 일부를 포함하는 CD30 융합 단백질로 형질도입 또는 형질감염되는 세포를 CD30에 결합하는 제제의 유효량에 노출시키는 단계를 포함하는, 세포의 활성을 억제하는 방법을 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 활성의 억제는 세포의 세포자멸사를 유도하는 것으로서 추가로 정의된다. 상기 방법은 세포 상에 발현된 CD30에 대한 제제의 결합을 검출하는 것을 추가로 포함할 수 있다.

X. CD30-양성 세포 및 관련 조성물

CD30은 TNFRSF8, D1S166E, Ki-1, 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 8 및 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 8로도 공지되어 있다. 본 개시내용은 세포 요법이 수용자 개체에게 독성이 되는 위험을 감소시키고/시키거나 생산 모니터링 및/또는 세포 위치의 모니터링을 허용하는 CD30-양성 세포를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 개시내용의 방법을 사용하여 생산된 CD30-양성 세포는 본 개시내용의 방법을 사용하여 생산되지 않은 세포에 비해 독성에 대한 감소된 위험을 갖는다. 세포의 표면 상에서 CD30 단백질의 세포외 도메인이 발현되는 것은, 단백질이 표면 상의 도메인을 인식하고 세포의 사멸을 포함하는 세포의 억제를 직접적으로 또는 간접적으로 초래하는 하나 이상의 제제로 표적화될 수 있도록 한다.

구체적인 실시형태에서, CD30-양성 세포는 수용자 개체에게 독성이 될 가능성이 있는 세포에 대한 것을 포함하여 임의의 종류의 마커 및 안전 스위치로서 이용된다. 본 개시내용의 실시형태는 CD30이 형질도입 마커 및 안전 스위치 중 하나로서 또는 둘 다로서 효과적인 방법 및 조성물을 포함한다. 세포 요법은 구체적인 실시형태에서 그 자체가 하나 이상의 이종 유전자를 발현하기 위한 변형을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있는 면역 세포인 CD30-양성 세포를 포함한다.

CD30-양성 세포는 CD30이 세포의 표면 상에서 천연적으로 발현되는 세포를 포함한다. 대안적으로, 세포는 CD30의 일부 또는 전부를 발현하도록 인간의 손에 의해 변형될 수 있으며, 일부 경우에 이러한 변형의 부재 하의 세포는 CD30을 발현하지 않을 것이다. CD30은 야생형일 수 있거나 아닐 수 있다. 특정 실시형태에서, CD30 단백질의 전부가 아닌 일부가 세포에서 발현되고, CD30 단백질의 전부 미만이 이용되는 경우, 이는 세포외 도메인의 전부는 아니더라도 CD30 세포외 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, CD30 막횡단 도메인이 이용되는 반면, 다른 경우에는 그렇지 않다. 구체적인 경우에, CD30 융합 단백질이 세포의 표면에서 발현되는 것을 포함하여 CD30의 적어도 일부가 융합 단백질에서 이용된다. 이러한 경우에, CD30 융합 단백질은 CD30 세포외 도메인의 전부는 아니더라도 적어도 일부를 포함한다. 구체적인 경우에, CD30 세포외 도메인을 인식하는 항체가 적절한 에피토프에서 결합할 수 있도록 충분한 양의 CD30 세포외 도메인이 융합 단백질에 포함된다.

세포는 또한 인간의 손에 의한 변형 후, 예컨대 CD30이 아닌 하나 이상의 이종 유전자의 형질감염 또는 형질도입 후, 세포 표면 마커로서 CD30을 발현하는 고유한 능력을 가질 수 있다. 적어도 T 세포(□□ 또는 □□ 포함), NK 세포, NKT 세포, 단핵구, 대식세포, B 세포, 중간엽 줄기 세포(MSC) 세포, 조혈 줄기 세포(HSC), 조혈 세포, 유도 만능 줄기 세포(iPSC) 또는 이의 유도체, 이들의 혼합물, 이들의 유도체)를 포함하는 특정 세포의 경우, 하나 이상의 이종 유전자의 형질감염 또는 형질도입은 정상적으로는 CD30이 발현되지 않을 때 CD30의 발현을 초래한다. 이종 유전자(들)는 CD30을 이용한 경로와 관련될 수 있거나 관련되지 않을 수 있고, 구체적인 경우에 이종 유전자는 BCL6 및 BCL2L1 유전자 또는 이들의 관련 유전자이다. 이러한 경우에, 이는 CD30이 세포의 하나 이상의 이종 유전자로의 성공적인 형질감염 또는 형질도입을 위한 형질도입 마커로서 이용될 수 있도록 한다.

막 결합형 단백질인 CD30(또는 이의 유도체)은 다양한 치료 면역 세포 생성물에서 이용될 수 있다. 일부 경우에, 면역 세포는 적어도 T 세포(□□ 또는 □□ 포함), NK 세포, NKT 세포, 단핵구, 대식세포, B 세포, 중간엽 줄기 세포(MSC) 세포, 조혈 줄기 세포(HSC), 조혈 세포, 유도 만능 줄기 세포(iPSC) 또는 이의 유도체, 이들의 혼합물, 이들의 유도체 등을 포함한다.

구체적인 경우에, 막 결합형 단백질은 CD30의 세포외 도메인 및/또는 CD30의 세포내 도메인의 일부 또는 전부를 포함한다. 일부 경우에, 막 결합형 단백질은 전장 야생형 CD30 단백질이다. 세포 내의 CD30은 CD30 세포외 도메인 및 막횡단 도메인을 포함할 수 있지만, CD30 세포내 도메인은 포함하지 않을 수 있다. 세포 내의 CD30은 CD30 세포외 도메인 및 CD30 세포내 도메인을 포함할 수 있지만, CD30 막횡단 도메인은 포함하지 않을 수 있다. 막 결합형 CD30 단백질은 하나 이상의 다른 막 결합형 수용체의 하나 이상의 내재화 세포질 꼬리를 포함하는 세포질 꼬리(적어도 내재화 모티프를 가짐, 이는 꼬리가 클라트린(clathrin)-매개 세포내 수송(trafficking) 복합체와 상호작용하여 CD30과 결합된 항-CD30 항체를 내재화할 수 있음을 의미함)를 포함할 수 있다. 클라트린-의존적 세포내이입 분류 신호와 연관된 컨센서스 서열은 당업계에 공지되어 있다(Traub, Molecular Cell Biology, Vol. 10, pp. 583-596, 2009). 일부 경우에, 세포질 꼬리는 표면 결합형 단백질의 세포질 부분이다. 구체적인 실시형태에서, 세포질 꼬리는 CD30, BCMA, trop-2, CD317, CD3감마, CD4, CD79b, CD19, CD22, CD25, CD33 등의 세포질 꼬리이다.

일 실시형태에서, CD30은 세포 내의 하나 이상의 이종 단백질과 함께 세포 내에서 공동발현된다. 이종 단백질은 치료 효능을 갖는 단백질 자체 및/또는 이를 발현하는 CD30-양성 세포에 치료 효능을 부여하는 단백질을 포함하는 치료 단백질일 수 있거나 아닐 수 있다. 세포는 CD30과 이종 단백질을 발현하기 위해 동시에 또는 상이한 시간에 제조될 수 있다. 일부 실시형태에서, CD30 양성일 수 있있거나 아닐 수 있는 세포는 하나 이상의 이종 단백질을 발현하도록 변형된 다음, 냉동보존되는 것을 포함하여 저장소에 저장된다. 필요에 따라, 세포는 해동되고, CD30을 발현하거나 CD30 융합 단백질을 발현하거나 형질전환/형질감염되어 이후에 세포에서 CD30의 발현을 상향조절하는 하나 이상의 이종 유전자를 발현하도록 추가로 변형될 수 있다. 다른 경우에, CD30을 발현하거나 CD30 융합 단백질을 발현하거나 형질전환/형질감염되어 이후에 세포에서 CD30의 발현을 상향조절하는 하나 이상의 이종 유전자를 발현하는 세포는 저장소에 냉동보존된 상태로부터 세포의 해동 후 하나 이상의 이종 단백질을 발현하도록 변형된다.

특정 실시형태에서, 임의의 CD30-양성 세포의 경우, 이종 유전자(들)는 키메라 항원 수용체 또는 TCR-발현 세포를 포함하는 하나 이상의 조작된 항원 수용체일 수 있다. 이러한 경우, 임의의 조작된 항원 수용체는 하나 이상의 암 항원을 포함하는 하나 이상의 항원을 표적화할 수 있다. 조작된 항원 수용체는 암 항원을 포함하는 관심대상의 단일 또는 다수의 항원을 표적화도록 지시될 수 있다.

구체적인 경우에, CD30-양성 세포는 하나 이상의 이종 단백질을 발현하거나 발현하지 않을 수 있는 (개체에 대해) 자가 또는 동종이계 세포이다.

일부 실시형태에서, CD30-양성 세포는 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제(HSV-tk)/간시클로비르, i카스파제9, tEGFR, synNotch, 조합적 표적-항원 인식, 억제성 키메라 항원 수용체 등을 포함하는, CD30 또는 CD30 융합 단백질 외의 추가의 안전 스위치를 발현한다.

일부 실시형태에서, 융합이 막 결합형 단백질의 세포질 영역의 적어도 일부인 단편을 포함하는 또 다른 단백질 단편과 CD30 세포외 도메인의 융합인 CD30 융합 단백질이 이용된다. 일례로서, CD30 세포외 도메인 및 막횡단 도메인(PVLFWVILVLVVVVGSSAFLL; 서열번호 51)이 B-세포 성숙 항원(BCMA) 세포질 꼬리(이는 밑줄 표시되어 있다)와 융합되었다. 대표적인 CD30-BCMA 융합 단백질의 아미노산 서열은 다음과 같다:

대표적인 CD30-BCMA 융합 단백질의 DNA 서열은 다음과 같다:

여기서 TM 도메인을 암호화하는 서열은 밑줄 표시되어 있다.

일부 실시형태에서, 야생형 CD30은, 이것이 세포에 천연적으로 존재하기 때문에, 이것이 세포 내로 형질도입된 이종 CD30이기 때문에 또는 이것이 하나 이상의 다른 유전자가 세포 내로 형질도입 또는 형질감염된 결과로서 세포에서 발현되기 때문에 이용된다. 야생형 전장 CD30은 다음과 같다:

아미노산 서열:

DNA 서열:

(1) CD30 막횡단 도메인을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있는, CD30 세포외 항원과 trop-2 세포내 도메인; (2) CD30 막횡단 도메인을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있는, CD30 세포외 항원과 CD317 세포내 도메인; (3) CD30 막횡단 도메인을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있는, CD30 세포외 항원과 CD3감마 세포내 도메인; (3) CD30 막횡단 도메인을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있는, CD30 세포외 항원과 CD4 세포내 도메인; 또는 (4) CD30 막횡단 도메인을 포함할 수 있거나 포함하지 않을 수 있는, CD30 세포외 항원과 CD79b 세포내 도메인을 포함하는 다른 특정 융합 단백질 조합이 고려된다. CD30 막횡단이 사용되지 않는 실시형태에서, 하기 중 하나의 막횡단 도메인이 이용될 수 있다: T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD28, CD3 제타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD3 델타, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD 16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, ICOS/CD278, GITR/CD357, NKG2D, 또는 DAP 분자, 예컨대 DAP10 또는 DAP12.

XI. CD30-양성 세포와 관련된 방법

본 개시내용은 하나 이상의 다른 단백질 단편과 키메라일 수 있거나 아닐 수 있는 막 결합형 CD30 단백질을 포함하는 천연 또는 재조합 CD30에 대한 것을 포함하는 CD30-양성 세포 및 이의 용도에 관한 것이다. 구체적인 실시형태에서, CD30은 다음과 같이 사용된다: (1) 제조 동안 치료 세포 생성물을 풍부화하기 위한 형질도입 및 선택 마커; (2) 생체내 증대, 표현형, 기능, 수송 및 지속성을 평가하기 위해 주입된 세포 생성물을 모니터링하기 위한 형질도입 마커; (3) 필요에 따라 모노클로날 항체, 항체-약물 접합체 또는 기타 접근법을 사용하여 주입된 치료 세포를 제거하기 위한 안전 스위치.

구체적인 경우에, 본 개시내용은 CD30이 형질도입 마커로서 사용되는 방법을 포함한다. 예를 들어, CD30을 발현할 수 있거나 발현하지 않을 수 있는 세포를 형질감염 또는 형질도입시켜 적어도 CD30 세포외 도메인을 갖는 단백질을 발현시키고, 성공적인 형질감염 또는 형질도입을 위한 후보 세포를, 예컨대 세포외 도메인의 적어도 일부에 결합하는 하나 이상의 제제를 사용하여 CD30 세포외 도메인의 존재에 대해 분석한다. 일부 경우에, 빛, 형광, 색상, 방사능 등을 사용한 검출을 포함하여 이러한 상호작용이 검출될 수 있도록 하나 이상의 제제가 표지된다. 다른 경우에, CD30을 발현할 수 있거나 발현하지 않을 수 있는 세포는 CD30이 아닌 하나 이상의 단백질을 발현하도록 형질감염 또는 형질도입되지만, 각각의 형질감염 또는 형질도입 후, 세포는 형질감염 또는 형질도입의 직접적 또는 간접적 결과로서 CD30을 발현한다.

일부 실시형태에서, CD30 단백질은 선택 마커로서 사용된다. 즉, CD30 양성인 것으로 의심되는 적어도 서브세트를 갖는 세포 집단은, 예컨대 표면 상에 CD30 결합제를 포함하는 기질을 사용하여 CD30-양성 세포를 선택할 수 있게 하는 방법에 적용된다. 집단은 집단 내의 CD30-양성 세포가 제제에 결합하여 CD30 양성이 아닌 세포를 배제할 수 있도록 하는 충분한 조건 하에 노출될 수 있다. 그 다음, 세포는 예컨대 적절한 세척 후에 결합제로부터 방출될 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 선택 마커로서 사용된 CD30은 내인성 CD30이 아니지만, 대신 인간의 손으로 인해, 예컨대 이종 CD30, CD30 융합 단백질, 또는 CD30은 아니지만 CD30의 상향조절을 초래하는 하나 이상의 이종 유전자로의 형질감염 또는 형질도입 후에 세포에 의해 발현된다.

본 개시내용의 방법은 또한 세포 생성물을 모니터링하기 위해 CD30 또는 CD30-연관된 유도체 단백질(예를 들어, 융합 단백질)을 이용한다. 모니터링은 시험관내 또는 생체내에서 이루어질 수 있으며, 모니터링은 세포의 증대, 세포와 연관된 특정 기능 등에 대한 검정을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 모니터링은 생체내에서 이루어지며, 주입에 의한 투여를 포함하여 수용자 개체로의 CD30-양성 세포의 투여 후에 이루어진다. 구체적인 경우, CD30-양성 주입된 세포 생성물은 증대, 표현형, 기능, 수송 및 지속성을 포함하는 생체내 주입된 세포 요법의 다양한 양상을 평가할 수 있도록 한다. 일부 실시형태에서, CD30-양성 세포의 모니터링은 세포 요법이 개체에게 독성이 될 수 있는 위험에 대한 정보를 제공한다. 예를 들어, CAR T 세포는 주입 후 과도한 증식을 보일 수 있고 독성을 유발할 수 있다.

특정 실시형태에서, 세포 상의 CD30 또는 CD30-연관 유도체 단백질(예를 들어, 융합 단백질)은, 세포가 더 이상 필요하지 않거나 세포 요법이 개체에게 독성이거나 임의의 지속 기간의 특정 기간에 걸쳐 개체에게 독성이 되었다는 하나 이상의 징후를 개체가 나타내는 경우에 세포 요법의 CD30-양성 세포의 활성을 억제하기 위한 안전 스위치로서 이용된다. 본 방법 및 조성물은 사이토카인 방출 증후군, 신경독성, 면역 효과기 세포-연관된 신경독성 증후군, 아나필락시스/알레르기, 적어도 GVHD를 포함한 숙주 거부, 표적-적중 종양 독성-적중(on-target on-tumor toxicity), 및/또는 표적-적중/표적외 종양 독성(정상 세포의 고갈)과 같은 하나 이상의 이상 사례를 감소시키거나 예방하는 데 유용하거나, 임박한 증상을 포함하는 하나 이상의 증상을 가질 위험이 있는 것으로 간주된다. 자살 유전자 또는 안전 스위치의 사용은 요법을 위한 계획된 프로토콜의 일부일 수 있거나, 그 사용에 대한 필요성이 인정되는 경우에만 사용될 수 있다. 일부 경우에, 안전 스위치는 독성의 개시를 지연시키고/시키거나 독성의 심각성을 감소시키는 반면, 다른 경우에는 독성을 예방하거나 독성을 완전히 억제한다.

치료 세포를 필요로 하는 개체에게 주입된 후, 막 결합형 CD30 단백질은 유세포분석, PCR, 또는 차세대 시퀀싱과 같은 다른 실험실 방법에 의해 또는 영상화 연구와 같은 임상 테스트의 사용을 포함하여 입양 전달된 T 세포의 운명을 모니터링하는 데 사용될 수 있다. 요법이 사이토카인 방출 증후군, GVHD, 종양 형성 등과 같은 이상 사례를 초래하는 상황에서는, 항체 또는 항체-약물 접합체 또는 기타 접근법을 이용하여 생체내 주입된 세포를 제거할 수 있다.

본 개시내용은 형질도입 및 선택 마커 및/또는 제거 안전 스위치로서 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있는 막 결합형 CD30 단백질 또는 융합 단백질을 제공한다. 일부 경우에, 세포는 안전 스위치로서 사용되지만 형질도입 또는 선택 마커로서는 사용되지 않는 CD30 또는 CD30 융합 단백질을 발현하는 반면, 다른 경우에는 이는 안전 스위치가 아닌 형질도입 또는 선택 마커로서 사용된다.

본 개시내용의 방법은 또한 CD30의 세포외 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 세포 상의 표면 단백질을 표적화함으로써 세포의 활성을 억제하는 방법을 포함한다. 억제되는 활성은 임의의 종류일 수 있지만, 구체적인 실시형태에서 활성의 억제는 세포에 대한 세포자멸사를 유도하는 것으로서 정의된다. 세포가 CD30에 결합하는 하나 이상의 제제의 유효량에 노출되면, 세포의 증식이 억제되거나 지연될 수 있거나 세포가 사멸될 수 있다. CD30에 결합하는 제제(들)은 본원에 개시된 임의의 방법에서 세포의 생존을 제어할 수 있다.

XII. 조합 요법

특정 실시형태에서, 본 실시형태의 조성물 및 방법은 치료 세포를 포함하는 조성물에 추가되는 암 요법을 포함한다. 추가의 요법은 방사선 요법, 수술(예를 들어, 종괴절제술 및 유방절제술), 화학요법, 유전자 요법, DNA 요법, 바이러스 요법, RNA 요법, 면역요법, 골수 이식, 나노요법, 모노클로날 항체 요법, 또는 전술한 것들의 조합일 수 있다. 추가의 요법은 보강 또는 신보강 요법의 형태일 수 있다.

일부 실시형태에서, 추가의 요법은 소분자 효소 억제제(들) 또는 항-전이제(들)의 투여이다. 일부 실시형태에서, 추가의 요법은 부작용 제한 제제(예를 들어, 항-오심제 등과 같은 치료의 부작용의 발생 및/또는 중증도를 경감시키고자 의도된 제제)의 투여이다. 일부 실시형태에서, 추가의 요법은 방사선 요법이다. 일부 실시형태에서, 추가의 요법은 수술이다. 일부 실시형태에서, 추가의 요법은 방사선 요법과 수술의 조합이다. 일부 실시형태에서, 상기 추가의 요법은 감마 방사선 조사이다. 일부 실시형태에서, 추가의 요법은 PBK/AKT/mTOR 경로를 표적화하는 요법, HSP90 억제제, 튜불린 억제제, 세포자멸사 억제제, 및/또는 화학예방제(들)이다. 추가의 요법은 당업계에 공지된 화학치료제 중 하나 이상일 수 있다.

면역 세포 요법은 면역 관문(immune checkpoint) 요법과 같은 추가의 암 요법과 관련하여, 요법 전, 요법 동안, 요법 후 또는 다양한 조합으로 투여될 수 있다. 투여는 동시 내지 수분 내지 수일 내지 수주 범위의 간격일 수 있다. 면역 세포 요법이 본 개시내용의 조성물(들)과 별도로 환자에게 제공되는 실시형태에서, 일반적으로 두 화합물이 여전히 환자에 대한 유리하게 조합된 효과를 발휘할 수 있도록 각 전달 시간 사이에 상당한 기간이 만료되지 않는 것을 보장할 수 있다. 이러한 사례에서, 면역요법 요법 및 개시된 조성물을 서로 약 12시간 내지 24시간 또는 72시간 내에, 보다 구체적으로는 서로 약 6시간 내지 12시간 내에 환자에게 제공할 수 있는 것으로 고려된다. 일부 상황에서, 각각의 투여 사이에 수일(2, 3, 4, 5, 6 또는 7일) 내지 수주(1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주)가 경과하는 경우, 치료를 위한 시기를 유의하게 연장하는 것이 바람직할 수 있다.

본 실시형태의 임의의 화합물 또는 요법을 환자에게 투여하는 것은 경우에 따라 제제의 독성을 고려하여 상기 화합물의 투여를 위한 일반 프로토콜에 따른다. 따라서, 일부 실시형태에서, 조합 요법에 기인할 수 있는 독성을 모니터링하는 단계가 있다.

A. 화학요법

광범위한 화학치료제는 본 발명의 실시형태에 따라 사용될 수 있다. 용어 "화학요법"은 암을 치료하기 위한 약물의 사용을 지칭한다. "화학치료제"는 암 치료 시에 투여되는 화합물 또는 조성물을 암시하기 위해 사용된다. 이들 제제 또는 약물은 이들이 세포 주기에 영향을 미칠지 및 어느 단계에서 영향을 미칠지와 같은 세포 내에서 이들의 활성 방식에 의해 분류된다. 대안적으로, 제제는 DNA를 직접 가교결합시키거나 DNA에 층간삽입(intercalate)되거나 핵산 합성에 영향을 미침으로써 염색체 및 유사분열 이상을 유도하는 이의 능력을 기준으로 특징 분석될 수 있다.

화학치료제의 예로는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 사이클로스포스파미드; 알킬 설포네이트, 예예컨대 부설판, 임프로설판, 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드,트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸롤로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히, 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카마이신(합성 유사체 , KW-2189 및 CB1-TM1을 포함하는); 엘레우트레오빈; 판크라티스타틴; 사코딕티인; 스폰기스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 및 우라실 머스타드; 니트로스우레아, 예컨대 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라님누스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제(예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감몰 및 칼리케아미신 오메가I1); 디네미신 A를 포함하는 디네미신; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스퍼라미신; 및 네오카지노스타틴 발색단 및 관련 크로모단백질 에네디인 항생제 발색단, 아클라시노마이신, 액티노마이신, 아우트라르니신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카지노필린, 크로모마이니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신(모르폴리노-독소루비신, 시아노모프폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신을 포함하는), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라르니신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 튜버시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 및 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 프테로프테린, 및 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 및 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 및 플록스우리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 및 테스톨락톤; 항-부신제(anti-adrenal), 예컨대 미토탄 및 트릴로스탄; 엽산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘리프티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 이오니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카바진; PSK폴리사카라이드 복합체; 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히, T-2 톡신, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 탁소이드, 예컨대 파클리탁셀 및 도세탁셀 겜시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 플라티늄 배위 착물, 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴, 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 이리노테칸(예를 들어, CPT-11); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 카보플라틴, 프로카바진, 플리코마이신, 겜시타비엔, 나벨빈, 파네실-단백질 트랜스퍼라제 억제제, 트랜스플라티늄, 및 상기한 것들 중 임의의 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산, 또는 상기 임의의 유도체를 포함한다.

B. 방사선요법

DNA 손상을 유발하고 광범위하게 사용되어온 다른 인자는 통상적으로 γ-선, X-선, 및/또는 방사성 동위원소의 종양 세포로의 직접적인 전달로서 공지된 것을 포함한다. 마이크로파, 양성자 빔 조사, 및 UV-조사와 같은 DNA 손상 인자의 다른 형태가 또한 고려된다(미국 특허 제5,760,395호 및 제4,870,287호). 모든 이러한 인자는 DNA, DNA의 전구체, DNA의 복제 및 복구 및 염색체의 어셈블리 및 유지에 대한 광범위한 손상에 영항을 미칠 가능성이 높다. X-선의 선량 범위는 장기간(3 내지 4주) 동안 50 내지 200 뢴트겐의 1일 선량부터 2000 내지 6000 뢴트겐의 단일 선량까지의 범위이다. 방사성 동위원소의 선량 범위는 매우 다양하고, 동위원소의 반감기, 방출된 방사선 강도 및 유형, 및 신생물 세포에 의한 흡수에 의해 좌우된다.

C. 면역요법

당업자는 추가의 면역요법(개시된 세포 요법 이외의)이 실시형태의 방법과 조합하거나 연계하여 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 암 치료와 관련하여, 면역치료제는 일반적으로 암 세포를 표적화하고 파괴하기 위한 면역 효과기 세포 및 분자에 의존한다. 리툭시맙(RITUXAN®)이 이러한 예이다. 면역 효과기는 예를 들어, 종양 세포의 표면 상에 일부 마커에 특이적인 항체일 수 있다. 항체 단독만으로 요법의 효과기로서 작용할 수 있거나 이것은 실제로 세포 사멸에 영향을 미치는 다른 세포를 동원할 수 있다. 항체는 또한 약물 또는 독소(화학치료제, 방사성핵종, 리신(ricin) A 쇄, 콜레라 독소, 백일해 독소) 등에 접합될 수 있고 표적화제로서 작용할 수 있다. 대안적으로, 효과기는 직접적으로 또는 간접적으로 종양 세포 표적과 상호작용하는 표면 분자를 함유하는 림프구일 수 있다. 다양한 효과기 세포는 TGF-베타 R2의 녹다운 또는 녹아웃을 갖는 것들 외의 세포독성 T 세포 및 NK 세포를 포함한다.

항체-약물 접합체는 암 치료제의 개발을 위한 획기적 접근법으로서 부상하였다. 항체-약물 접합체(ADC)는 세포-사멸 약물에 공유 결합된 모노클로날 항체(Mab)를 포함한다. 상기 접근법은 이들의 항원 표적에 대한 고특이성의 Mab와 상당히 강력한 세포독성 약물을 조합하여 풍부화된 수준의 항원과 함께 페이로드(약물)를 종양 세포에 전달하는 "무장된(armed)" Mab를 유도한다. 약물의 표적화된 전달은 또한 정상 조직에서 이의 노출을 최소화하여 감소된 독성 및 개선된 치료 지수를 초래한다. 2가지 ADC 약물, 2011년에 FDA에 의해 승인된 ADCETRIS®(브렌툭시맙 베도틴) 및 2013년에 FDA에 의해 승인된 KADCYLA®(트라스투주맙 엠탄신 또는 T-DM1)은 상기 접근법을 검증하였다. 현재, 암 치료를 위한 임상 시험의 다양한 단계에 있는 30가지 초과의 ADC 약물 후보물이 있다(Leal et al., 2014). 항체 조작 및 링커-페이로드 최적화가 보다 더 발전함에 따라서, 새로운 ADC의 발견 및 발전은 날로 상기 접근법 및 표적화 Mab의 생성에 적합한 새로운 표적의 식별 및 검증에 의존한다. ADC 표적을 위한 2가지 기준은 종양 세포에서의 상향조절된/고수준의 발현 및 강력한 내재화이다.

면역요법의 일 양상에서, 종양 세포는 표적화에 순응할 수 있는, 즉 대다수의 다른 세포 상에 존재하지 않는 일부 마커를 보유해야만 한다. 많은 종양 마커가 존재하고 이들 마커 중 어느 것이라도 본 발명의 실시형태와 관련하여 표적화를 위해 적합할 수 있다. 통상의 종양 마커는 CD20, 암배아 항원, 티로시나제(p97), gp68, TAG-72, HMFG, 시알릴 루이스 항원(Sialyl Lewis Antigen), MucA, MucB, PLAP, 라미닌 수용체, erb B, 및 p155를 포함한다. 면역요법의 대안적인 양상은 항암 효과를 면역 자극 효과와 조합하는 것이다. 사이토카인, 예컨대 IL-2, IL-4, IL-12, GM-CSF, 감마-IFN, 케모킨, 예컨대 MIP-1, MCP-1, IL-8, 및 성장 인자, 예컨대 FLT3 리간드를 포함하는 면역 자극 분자가 또한 존재한다.

현재 연구 중에 있거나 사용 중에 있는 면역요법의 예는 면역 보강제(immune adjuvant), 예를 들어, 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis), 플라스모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 디니트로클로로벤젠, 및 방향족 화합물(미국 특허 제5,801,005호 및 제5,739,169호; Hui and Hashimoto, 1998; Christodoulides et al.., 1998); 사이토카인 요법, 예를 들어 임의의 종류의 인터페론, GM-CSF, 및 TNF(Bukowski et al.., 1998; Davidson et al.., 1998; Hellstrand et al.., 1998); 유전자 요법, 예를 들어 TNF, IL-1, IL-2, 및 p53(Qin et al.., 1998; Austin-Ward and Villaseca, 1998; 미국 특허 제5,830,880호 및 제5,846,945호); 및 모노클로날 항체, 예를 들어 항-CD20, 항-강글리오시드 GM2, 및 항-p185(Hollander, 2012; Hanibuchi et al.., 1998; 미국 특허 제5,824,311호)이다. 하나 이상의 항암 요법은 본원에 기술된 항체 요법과 함께 사용될 수 있는 것으로 고려된다.

일부 실시형태에서, 면역요법은 면역 관문 억제제일 수 있다. 면역 관문은 신호(보조자극 분자)를 상향시키거나 신호를 하향시킨다. 면역 관문 차단에 의해 표적화될 수 있는 억제 면역 관문은 아데노신 A2A 수용체(A2AR), B7-H3(CD276으로도 공지됨), B 및 T 림프구 약화인자(BTLA), 세포독성 T-림프구-연관된 단백질 4(CTLA-4, CD152로도 공지됨), 인돌아민 2,3-디옥시게나제(IDO), 살해-세포 면역글로불린(KIR), 림프구 활성화 유전자-3(LAG3), 프로그램된 사멸 1(PD-1), T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 3(TIM-3) 및 T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 저해인자(V-domain Ig suppressor of T cell activation: VISTA)를 포함한다. 특히, 면역 관문 억제제는 PD-1 축 및/또는 CTLA-4를 표적화한다.

D. 수술

암을 갖는 사람의 대략 60%는 예방적, 진단학적 또는 병기 결정, 치유적 및 일시적인 수술을 포함하는 동일한 유형의 수술을 받을 것이다. 치유적 수술은 암성 조직의 전부 또는 일부가 물리적으로 제거, 절제 및/또는 파괴되는 절제술을 포함하고 본 발명의 실시형태의 치료, 화학요법, 방사선요법, 호르몬 요법, 유전자 요법 및/또는 대안적 요법과 같은 다른 요법과 연계하여 사용될 수 있다. 종양 절제술은 종양의 적어도 일부의 물리적 제거를 지칭한다. 종양 절제술 이외에도, 수술에 의한 치료는 레이저 수술, 냉동수술, 전기수술, 및 현미경적으로 제어된 수술(모흐 수술(Mohs’ surgery))을 포함한다.

암성 세포, 조직 또는 종양의 일부 또는 전부의 절제 시, 체내에 공동이 형성될 수 있다. 치료는 추가의 항암 요법과 함께 관류, 직접적인 주사 또는 영역의 국소 적용에 의해 성취될 수 있다. 이러한 치료는, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일마다, 또는 1, 2, 3, 4, 및 5주마다, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월마다 반복될 수 있다. 이들 치료는 또한 다양한 용량의 것일 수 있다.

E. 기타 제제

치료의 치료 효능을 개선하기 위해 기타 제제가 본 실시형태의 특정 양상과 조합하여 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 이러한 추가 제제는 세포 표면 수용체 및 간극연접(GAP junction)의 상향 조절에 영향을 미치는 제제, 세포증식 억제제 및 분화제, 세포 접착의 억제제, 과증식성 세포의 세포자멸사 유도제에 대한 민감성을 증가시키는 제제 또는 다른 생물학적 제제를 포함한다. 간극연접의 수를 상승시킴에 의한 세포내 신호전달의 증가는 이웃하는 과증식성 세포 집단에 대한 항-과증식 효과를 증가시킨다. 다른 실시형태에서, 세포증식억제 또는 분화제는 치료의 항-과증식 효능을 개선하기 위해 본 실시형태의 특정 양상과 조합하여 사용될 수 있다. 세포 부착의 억제제는 본 실시형태의 효능을 개선하는 것으로 고려된다. 세포 부착 억제제의 예는 병소 접착 키나제(FAK) 억제제 및 로바스타틴이다. 세포자멸사에 대한 과증식성 세포의 민감성을 증가시키는 기타 제제, 예컨대 항체 c225는 치료 효능을 개선하기 위해 본 실시형태의 특정 양상과 조합하여 사용될 수 있는 것으로 추가로 고려된다.

XIII. 벡터

특정 실시형태에서, 본원에 포함된 세포는 본원에 포함된 임의의 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 하나 이상의 벡터를 보유한다. 상이한 단백질이 바이러스 벡터 또는 비-바이러스 벡터를 포함하는 임의의 적합한 벡터에 의해 수용자 세포에 전달될 수 있다. 바이러스 벡터의 예로는 적어도 레트로바이러스, 렌티바이러스, 아데노바이러스 또는 아데노-연관 바이러스 벡터를 포함한다. 비-바이러스 벡터의 예로는 적어도 플라스미드, 트랜스포존, 지질, 나노입자, 리포좀, 이들의 조합 등이 포함된다.

세포가 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 벡터로 형질도입되고, 예를 들어 세포 내로의 이종 단백질과 같은 다른 유전자 또는 유전자들의 형질도입을 또한 필요로 하는 경우, 이들은 동일한 벡터 상에 또는 동일한 벡터와 함께 포함될 수 있거나 포함되지 않을 수 있다. 일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드, 이종 단백질(들) 등은 동일한 바이러스 벡터 분자와 같은 동일한 벡터 분자로부터 발현된다. 이러한 경우에, 폴리펩타이드의 발현은 동일한 조절 요소(들)에 의해 조절되거나 조절되지 않을 수 있다. 폴리펩타이드가 동일한 벡터 상에 있는 경우, 이들은 별도의 폴리펩타이드로서 발현될 수 있거나 발현되지 않을 수 있다. 이들이 별도의 폴리펩타이드로서 발현되는 경우, 이들은, 예를 들어, 2A 요소 또는 IRES 요소에 의해 벡터 상에서 분리될 수 있다(또는 두 종류 모두 동일한 벡터 상에서 1회 또는 1회 초과로 사용될 수 있다).

당업자는 본 개시내용의 항원 수용체의 발현을 위한 표준 재조합 기술을 통해 벡터를 작제하기 위한 장비를 잘 갖추고 있다(예를 들어, 문헌[Sambrook et al.., 2001 and Ausubel et al.., 1996] 참조, 둘 다 본원에 참조로 인용됨).

A. 조절 요소

본 개시내용에서 유용한 벡터에 포함된 발현 카세트는 특히 (5'-에서-3' 방향으로) 단백질 암호화 서열에 작동적으로 연결된 진핵 전사 프로모터, 개재 서열을 포함하는 스플라이스 신호, 및 전사 종결/폴리아데닐화 서열을 함유한다. 진핵 세포에서 단백질 암호화 유전자의 전사를 제어하는 프로모터 및 인핸서는 다수의 유전 요소들로 구성될 수 있다. 세포 기구는 각각의 요소에 의해 전달되는 조절 정보를 수집하고 통합할 수 있어 상이한 유전자들이 전사 조절의 별개의 흔한 복합 패턴으로 전개되도록 한다. 본 개시내용의 맥락에서 사용되는 프로모터는, 예를 들어, 항시적(constitutive), 유도성 및 조직-특이적 프로모터를 포함한다. 벡터가 암 요법의 생성을 위해 사용되는 경우, 프로모터는 저산소 조건 하에 효과적일 수 있다.

B. 프로모터/인핸서

본원에 제공된 발현 작제물은 임의의 폴리펩타이드(들)의 발현을 구동하기 위해 프로모터를 포함한다. 프로모터는 일반적으로 RNA 합성을 위한 시작 부위를 위치시키는 기능을 하는 서열을 포함한다. 이에 대한 가장 잘 알려진 예는 TATA 박스이지만, TATA 박스가 결여된 일부 프로모터, 예를 들어 포유동물 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제 유전자에 대한 프로모터 및 SV40 후기 유전자에 대한 프로모터에서, 시작 부위 위에 있는 개별 요소 자체는 개시 위치를 고정시키는 데 도움이 된다. 추가의 프로모터 요소는 전사 개시 빈도를 조절한다. 전형적으로, 이들은 시작 부위의 상류 영역에 위치하지만, 수많은 프로모터가 시작 부위의 하류에도 기능적 요소를 함유하는 것으로 나타났다. 암호화 서열을 프로모터"의 제어 하에" 있도록 하기 위해, 전사 리딩 프레임의 전사 개시 부위의 5' 말단을 선택된 프로모터의 "하류"(즉, 3')에 위치시킨다. "상류" 프로모터는 DNA의 전사를 자극하고 암호화된 RNA의 발현을 촉진한다.

프로모터 요소 사이의 간격은 종종 유연해서, 프로모터 기능은 요소들이 서로 상대적으로 역위되거나 이동되는 경우 보존된다. tk 프로모터에서, 예를 들어 프로모터 요소들 사이의 간격은 활성이 감소하기 시작하기 전에 50 bp 간격으로 증가될 수 있다. 프로모터에 따라, 개별 요소가 협력적으로 또는 독립적으로 기능하여 전사를 활성화할 수 있는 것으로 보인다. 프로모터는 핵산 서열의 전사 활성화에 관여하는 시스-작용 조절성 서열을 지칭하는 "인핸서"와 연계하여 사용될 수 있거나 사용되지 않을 수 있다.

프로모터는 암호화 분절 및/또는 엑손의 상류에 위치한 5' 비-암호화 서열을 단리함으로써 수득할 수 있기 때문에, 핵산 서열과 천연적으로 연관된 것일 수 있다. 이러한 프로모터는 "내인성"으로 지칭될 수 있다. 유사하게, 인핸서는 해당 서열의 하류 또는 상류에 위치한, 핵산 서열과 천연적으로 연관된 것일 수 있다. 대안적으로, 암호화 핵산 분절을, 천연 환경에서는 핵산 서열과 정상적으로 연관되지 않는 프로모터를 의미하는 재조합 또는 이종 프로모터의 제어 하에 위치시킴으로써 특정 이점을 얻을 수 있을 것이다. 재조합 또는 이종 인핸서는 또한 천연 환경에서 핵산 서열과 정상적으로 연관되지 않는 인핸서를 지칭한다. 이러한 프로모터 또는 인핸서는 다른 유전자의 프로모터 또는 인핸서, 및 임의의 다른 바이러스, 또는 원핵 또는 진핵 세포로부터 단리된 프로모터 또는 인핸서, 및 "천연 발생"이 아닌, 즉, 상이한 전사 조절 영역의 상이한 요소 및/또는 발현을 변경하는 돌연변이를 함유하는 프로모터 또는 인핸서를 포함할 수 있다. 예를 들어, 재조합 DNA 작제물에서 대부분 통상적으로 사용되는 프로모터는 β-락타마제(페니실리나제), 락토스 및 트립토판(trp-) 프로모터 시스템을 포함한다. 합성적으로 프로모터 및 인핸서의 핵산 서열을 생성하는 것 이외에도, 서열은 본원에 기술된 조성물과 연계하여 PCR™을 포함하는 재조합 클로닝 및/또는 핵산 증폭 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 추가로, 미토콘드리아, 엽록체 등과 같은 비-핵 기관 내 서열의 전사 및/또는 발현을 지시하는 제어 서열이 또한 사용될 수 있는 것으로 고려된다.

당연히, 발현을 위해 선택된 소기관, 세포 유형, 조직, 기관 또는 유기체에서 DNA 분절의 발현을 효과적으로 지시하는 프로모터 및/또는 인핸서를 사용하는 것이 중요할 것이다. 분자생물학 분야의 당업자는 일반적으로 단백질 발현을 위한 프로모터, 인핸서 및 세포 유형 조합의 사용을 알고 있다(예를 들어, 본원에 참조로 인용된 문헌[Sambrook et　al. 1989] 참조). 사용되는 프로모터는 항시적, 조직-특이적, 유도성일 수 있고/있거나 예컨대 재조합 단백질 및/또는 펩타이드의 대규모 생산에 유리한 도입된 DNA 분절의 고수준 발현을 지시하기에 적절한 조건 하에 유용할 수 있다. 프로모터는 이종성 또는 내인성일 수 있다.

추가로, 임의의 프로모터/인핸서 조합(예를 들어, epd.isb-sib.ch/의 월드 와이드 웹을 통한 진핵 세포 프로모터 데이터 베이스 EPDB에 따름)도 발현을 구동시키기 위해 사용될 수 있다. T3, T7 또는 SP6 세포질 발현 시스템의 사용은 또 다른 가능한 실시형태이다. 진핵 세포는 적절한 세균 폴리머라제가 전달 복합체의 일부로서 또는 추가의 유전적 발현 작제물로서 제공된 경우 특정 세균 프로모터로부터의 세포질 전사를 지지할 수 있다.

프로모터의 비제한적인 예로는 초기 또는 후기 바이러스 프로모터, 예를 들어, SV40 초기 또는 후기 프로모터, 사이토메갈로바이러스(CMV) 즉시 초기 프로모터, 라우스 육종 바이러스(RSV) 초기 프로모터; 예를 들어, 베타 액틴 프로모터, GADPH 프로모터, 메탈로티오네인 프로모터와 같은 진핵 세포 프로모터; 및 사이클릭 AMP 반응 요소 프로모터(cre), 혈청 반응 요소 프로모터(sre), 포르볼 에스테르 프로모터(TPA) 및 최소 TATA 박스 근처의 반응 요소 프로모터(tre)와 같은 병합된(concatenated) 반응 요소 프로모터가 포함된다. 인간 성장 호르몬 프로모터 서열(예를 들어, Genbank에 기술된 인간 성장 호르몬 최소 프로모터, 수탁 번호 X05244, 뉴클레오타이드 283-341) 또는 마우스 유선 종양 프로모터(ATCC로부터 입수 가능함, 카탈로그 번호 ATCC 45007)를 사용하는 것도 가능하다. 특정 실시형태에서, 프로모터는 CMV IE, 덱틴-1, 덱틴-2, 사람 CD11c, F4/80, SM22, RSV, SV40, Ad MLP, 베타-액틴, MHC 클래스 I 또는 MHC 클래스 II 프로모터이지만, 치료 유전자의 발현을 구동시키기 위해 유용한 임의의 다른 프로모터도 본 개시내용의 수행에 적용될 수 있다.

특정 양상에서, 본 개시내용의 방법은 또한 인핸서 서열, 즉, 프로모터의 활성을 증가시키고 시스로 작용하고 이들의 배향과 무관하게 심지어 보다 상대적으로 긴 거리(표적 프로모터로부터 수킬로베이스까지 이격되어 있는)에서 작용할 잠재력을 갖는 핵산 서열에 관한 것이다. 그러나, 인핸서 기능은 이들이 또한 소정의 프로모터에 근접하여 기능할 수 있으므로 반드시 이러한 긴 거리에 제한되지는 않는다.

C. 개시 신호 및 연계된 발현

특정 개시 신호도 암호화 서열의 효율적인 번역을 위해 본 개시내용에 제공된 발현 작제물에서 사용될 수 있다. 이들 신호는 ATG 개시 코돈 또는 근접한 서열을 포함한다. ATG 개시 코돈을 포함하는 외인성 번역 제어 신호는 제공될 필요가 있을 수 있다. 당업자는 이것을 용이하게 결정할 수 있고 필요한 신호를 제공할 수 있다. 전체 삽입체의 번역을 보장하기 위해 개시 코돈이 원하는 암호화 서열의 리딩 프레임과 "프레임 내(in-frame)"여야 한다는 것은 잘 알려져 있다. 외인성 번역 제어 신호 및 개시 코돈은 천연 또는 합성일 수 있다. 발현의 효율성은 적절한 전사 인핸서 요소를 포함함으로써 향상될 수 있다.

특정 실시형태에서, 내부 리보솜 진입 부위(IRES) 요소의 사용을 사용하여 다중유전자 또는 폴리시스트론 메시지를 생성한다. IRES 요소는 5' 메틸화된 캡 의존적 번역의 리보솜 스캐닝 모델을 우회할 수 있고 내부 부위에서 번역을 시작할 수 있다. 피코르나바이러스 과의 두 구성원(소아마비 및 뇌심근염)으로부터의 IRES 요소뿐만 아니라 포유동물 메시지로부터의 IRES도 기술되었다. IRES 요소는 이종 오픈 리딩 프레임에 연결될 수 있다. 각각이 IRES에 의해 분리된 다수의 오픈 리딩 프레임은 함께 전사되어 폴리시스트론 메시지를 생성할 수 있다. IRES 요소 덕분에, 각각의 오픈 리딩 프레임은 효율적인 번역을 위해 리보솜에 접근할 수 있다. 단일 메시지를 전사하기 위해 다수의 유전자를 단일 프로모터/인핸서를 사용하여 효율적으로 발현시킬 수 있다

본원의 다른 곳에 상세히 기술된 바와 같이, 특정 2A 서열 요소들을 사용하여 본 개시내용에 제공된 작제물 내 유전자들의 연결되거나 공동 발현을 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 절단 서열을 사용하여 단일 시스트론을 형성하기 위해 오픈 리딩 프레임들을 연결시킴으로써 유전자들을 공동 발현시킬 수 있다. 예시적인 절단 서열은 말 비염 A 바이러스(E2A) 또는 F2A(수족구 질환 바이러스 2A) 또는 "2A-유사" 서열(예를 들어, 토세아 아시그나(Thosea asigna) 바이러스 2A; T2A) 또는 돼지 테스코바이러스-1(P2A))이다. 특정 실시형태에서, 단일 벡터에서 다수의 2A 서열은 동일하지 않지만, 대안적 실시형태에서 동일한 벡터는 동일한 2A 서열 중 2개 이상을 사용한다. 2A 서열의 예는 그 전체가 본원에 참조로 인용된 US 2011/0065779에 제공되어 있다.

D. 복제 기점

숙주 세포에서 벡터를 증식시키기 위해, 벡터는 하나 이상의 복제 기점 부위(종종 "ori"로 칭함), 예를 들어 상기 기술된 바와 같은 EBV의 oriP, 또는 복제가 개시되는 특정 핵산 서열인, 프로그래밍에서 유사하거나 상승된 기능을 갖는 유전적으로 조작된 oriP에 상응하는 핵산 서열을 함유할 수 있다. 대안적으로, 상기 기술된 바와 같은 다른 염색체외 복제 바이러스의 복제 기점 또는 자율 복제 서열(ARS)이 사용될 수 있다.

E. 선택 및 스크리닝가능한 마커

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 CD30-양성 세포은 벡터에 마커를 포함시킴으로써 시험관내 또는 생체내에서 식별될 수 있다. 이러한 마커는 발현 벡터를 함유하는 세포를 쉽게 식별할 수 있도록 세포에 식별가능한 변화를 부여할 것이다. 일반적으로, 선택 마커는 선택을 허용하는 특성을 부여하는 것일 수 있다. 양성 선택 마커는 마커의 존재가 선택을 허용하는 것인 반면, 음성 선택 마커는 이의 존재가 선택을 방지하는 마커이다. 양성 선택 마커의 예는 약물 내성 마커이다.

일반적으로, 약물 선택 마커의 내포는 형질전환체의 클로닝 및 식별을 보조하고, 예를 들어, 네오마이신, 푸로마이신, 하이그로마이신, DHFR, GPT, 제오신 및 히스티디놀에 대한 내성을 부여하는 유전자는 유용한 선택 마커이다. 조건의 구현에 기반하여 형질전환체의 구별을 가능하게 하는 표현형을 부여하는 마커 이외에도, 비색 분석을 기본으로 하는 GFP와 같은 스크리닝가능한 마커를 포함하는 다른 유형의 마커도 고려된다. 대안적으로, 단순 포진 바이러스 티미딘 키나아제(tk) 또는 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT)와 같은 음성 선별 마커로서 스크리닝가능한 효소를 사용할 수 있다. 당업자는 또한 가능하게는 FACS 분석과 연계하여 면역학적 마커를 사용하는 방법을 알고 있을 것이다. 사용되는 마커는 유전자 산물을 암호화하는 핵산과 동시에 발현될 수 있는 한, 중요한 것으로 여겨지지 않는다. 선택 및 스크리닝가능한 마커의 추가 예는 당업자에게 잘 알려져 있다.

XIV. 치료 방법

다양한 실시형태에서, 본원에서 고려되는 바와 같은 발현 작제물, 핵산 서열, 벡터, 숙주 세포 등 및/또는 이를 포함하는 약제학적 조성물은 종양성 질환과 같은 암성 질환의 예방, 치료 또는 개선을 위해 사용된다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 암의 예방, 개선 및/또는 치료에 특히 유용할 수 있다. 개체는 본 개시내용의 치료 방법을 초기 치료로서 또는 예를 들어 HSCT 후와 같은 또 다른 치료 후(또는 이와 함께) 사용할 수 있다. 면역요법 방법은 암의 유형 및/또는 단계에 기반하여 암을 갖는 개체의 필요에 따라 맞춤화될 수 있고, 적어도 일부 경우에 면역요법은 개체에 대한 치료 과정 동안 변형될 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 방법에 의해 생산되는 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 면역요법을 위한 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 의학적 질환 또는 장애는 본원의 방법에 의해 생산되고 면역 반응을 유발하는 세포 집단의 전달에 의해 치료된다. 본 개시내용의 특정 실시형태에서, 암은 본 개시내용의 방법에 의해 생산된 세포 집단의 전달에 의해 치료된다. 유효량의 세포 요법을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 개체에서 암을 치료하거나 이의 진행을 지연시키기 위한 방법이 본원에 제공된다. 본 방법은 고형 암 또는 혈액 암의 치료를 위해 적용될 수 있다.

본 발명의 치료 방법이 유용한 종양은 임의의 악성 세포 유형, 예컨대 고형 종양 또는 혈액 종양에서 발견되는 것들을 포함한다. 예시적인 고형 종양은 급성 골수성 백혈병, 림프종, 폐암, 신장암, 방광암, 흑색종, 교모세포종, 유방암, 두경부암, 중피종, 다발성 골수종 및 췌장암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 기관의 종양을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

본 개시내용의 특정 실시형태에서, 본원에 포함된 면역 세포는 이를 필요로 하는 개체, 예컨대 암을 갖는 개체에게 전달된다. 일부 경우에, 개체에게 하나 이상의 용량의 면역 세포가 제공된다. 개체에게 면역 세포의 둘 이상의 용량이 제공되는 경우에, 투여 사이의 지속 기간은 개체에서 증식을 위한 시간을 허용하기에 충분해야 하고 구체적인 실시형태에서, 투여 사이의 지속 기간은 l, 2, 3, 4, 5, 6, 7일 또는 그 이상이다.

구체적인 실시형태에서, 세포는 개체에서 암과 관련된 적어도 하나의 증상을 개선하는 치료적 유효량(1 세포 내지 10¹⁰의 범위)으로 개체에게 제공된다. 치료적 유효량은 1 내지 10¹⁰, 10 내지 10¹⁰, 10²-10¹⁰, 10³ 내지 10¹⁰, 10³ 내지 10⁹, 10³ 내지 10⁸, 10³ 내지 10⁷, 10³ 내지 10⁶, 10³ 내지 10⁵, 10³ 내지 10⁴, 10⁴ 내지 10¹⁰, 10⁴ 내지 10⁹, 10⁴ 내지 10⁸, 10⁴ 내지 10⁷, 10⁴ 내지 10⁶, 10⁴ 내지 10⁵, 10⁵ 내지 10¹⁰, 10⁵ 내지 10⁹, 10⁵ 내지 10⁸, 10⁵ 내지 10⁷, 10⁵ 내지 10⁶, 10⁶ 내지 10¹⁰, 10⁶ 내지 10⁹, 10⁶ 내지 10⁸, 10⁶ 내지 10⁷, 10⁷ 내지 10¹⁰, 10⁷ 내지 10⁹, 10⁷ 내지 10⁸, 10⁸ 내지 10¹⁰, 10⁸ 내지 10⁹, 또는 10⁹ 내지 10¹⁰ 세포일 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 암을 갖는 개체에게 치료적 유효량의 세포가 1회 또는 수회 제공된다. 일부 실시형태에서, 개체가 요법으로서 이들 세포를 사용할 때 유해한 효과가 있을 위험이 있는 경우, 농도가 조정될 수 있고/있거나 세포 상의 항원을 표적화하는 하나 이상의 키메라 폴리펩타이드 제제의 투여가 있을 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 암을 갖는 개체에게 치료적 유효량의 특정 면역 세포가 1회 또는 수회 제공된 다음, 개체가 요법으로서 이들 세포를 사용할 때 유해한 효과가 있을 위험이 있는 경우, 농도가 조정될 수 있고/있거나 세포 상의 항원을 표적화하는 하나 이상의 키메라 폴리펩타이드 제제의 투여가 있을 수 있다.

특정 실시형태에서, 투여 후에, 벡터는 대상체의 게놈에 안정적으로 통합될 수 있다. 구체적인 실시형태에서, 예를 들어, 특정 세포 또는 조직에 특이적이고 세포에서 지속되는 바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 적합한 약제학적 담체 및 부형제는 당업계에 잘 알려져 있다. 본 개시내용에 따라 제조된 조성물은 상기 식별된 질환을 치료 또는 예방하거나 지연시키기 위해 사용될 수 있다.

더욱이, 본 개시내용은 본원에서 고려되고/되거나 본원에서 고려되는 공정에 의해 생산되는, 본원에 포함된 유효량의 CD30-양성 세포, 핵산, 벡터를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 종양성 질환의 예방, 치료 또는 개선 방법에 관한 것이다.

예시적인 세포의 조성물(들)의 투여에 대한 가능한 적응증은 임의의 종류의 종양성 질환을 포함하는 암성 질환이다. CD30-양성 세포의 조성물(들) 투여에 대한 예시적인 적응증은 CAR이 지시되는 항원을 포함하는 특정 항원을 발현하는 임의의 악성종양을 포함하는 암성 질환이다. 본 개시내용의 조성물(들)의 투여는, 예를 들어, 최소 잔존 질환, 초기 암, 진행성 암 및/또는 전이성 암 및/또는 불응성 암을 포함하는 암의 모든 병기 및 유형에 유용하다.

치료적 유효량의 생성된 세포는 비경구 투여, 예를 들어 정맥내, 복막내, 근육내, 흉골하, 종양내, 척추강내, 심실내, 저장소를 통한, 관절내 주사 또는 주입을 포함하는 다수의 경로에 의해 투여될 수 있다.

입양 세포 요법에 사용하기 위한 생성된 세포의 치료적 유효량은 치료받는 대상체에서 원하는 효과를 달성하는 양이다. 예를 들어, 이는 진행을 억제하거나 암 퇴행을 유발하는 데 필요한 면역 세포의 양일 수 있다.

생성된 세포 집단은 상기 질환에 맞는 치료 용법(treatment regimen), 예를 들어 질환 상태를 개선하기 위해 1일 내지 수일에 걸쳐 단일 용량 또는 수회 용량으로 또는 질환 진행을 억제하고 질환 재발을 예방하기 위해 연장된 기간 동안 주기적 용량으로 투여될 수 있다. 제형에서 사용될 정확한 용량은 또한 투여 경로, 및 질환 또는 장애의 중증도에 의해 좌우될 것이고 임상의의 판단 및 각각의 환자의 상황에 따라 결정되어야만 한다. 세포의 치료적 유효량은 치료받는 대상체, 환부의 중증도 및 유형 및 투여 방식에 의존할 것이다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체의 치료에 사용될 수 있는 용량은 적어도 1×10³, 적어도 1×10⁴, 3.8×10⁴, 적어도 3.8×10⁵, 적어도 3.8×10⁶, 적어도 3.8×10⁷, 적어도 3.8×10⁸, 적어도 3.8×10⁹, 또는 적어도 3.8×10¹⁰ T 세포/m²의 범위이다. 특정 실시형태에서, 인간 대상체의 치료에 사용되는 용량은 약 3.8×10⁹ 내지 약 3.8×10¹⁰ T 세포/m²의 범위이다. 추가의 실시형태에서, T 세포의 치료적 유효량은 체중 kg당 약 5×10⁶ 세포 내지 체중 kg당 약 7.5×10⁸ 세포, 예컨대 체중 kg당 약 2×10⁷ 세포 내지 약 5×10⁸ 세포, 또는 체중 kg당 약 5×10⁷ 세포 내지 약 2×10⁸ 세포로 다양할 수 있다. T 세포의 정확한 양은 대상체의 연령, 체중, 성별 및 생리학적 상태에 기반하여 당업자에 의해 용이하게 결정된다. 유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 도출된 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.

본 개시내용은 다른 화합물, 예를 들어 이중특이적 항체 작제물, 표적화된 독소 또는 면역 세포를 통해 작용하는 기타 화합물과의 공동 투여 프로토콜을 추가로 포함한다. 본 발명의 화합물(들)의 공동 투여를 위한 임상 용법은 성분의 투여와 동시에, 다른 성분의 투여 전 또는 다른 성분의 투여 후의 공동 투여를 포함할 수 있다. 특정 조합 요법은 화학요법, 방사선, 수술, 호르몬 요법 또는 다른 유형의 면역요법을 포함한다.

실시형태는 본원에 정의된 바와 같은 세포, 본원에 정의된 바와 같은 작제물, 본원에 정의된 바와 같은 핵산 서열, 본원에 정의된 바와 같은 벡터 및/또는 본원에 정의된 바와 같은 숙주를 포함하는 키트에 관한 것이다. 또한 본 개시내용의 키트는 상기 본원에 기술된 약제학적 조성물을 단독으로 또는 의학적 처치 또는 개입을 필요로 하는 개체에게 투여될 추가 의약과 조합하여 포함하는 것으로 고려된다.

XV. 본 개시내용의 키트

본원에 기술된 임의의 조성물은 키트에 포함될 수 있다. 비제한적 예에서, 키트는 CD30 분자, 이를 포함하는 세포, 및/또는 특정 CD30 단백질또는 CD30 융합 단백질을 암호화하는 벡터, 이종 단백질(들)을 암호화하는 벡터 및/또는 이를 생성하지 위한 시약을 포함하고, 이들 중 임의의 것은 본 개시내용의 키트 내의 적합한 용기 수단에 포함될 수 있다. 키트는 면역 세포, 벡터, 벡터(바이러스인지 아닌지에 관계없이)에 삽입하기 위한 발현 작제물 폴리뉴클레오타이드 등을 포함할 수 있다. 임의의 폴리뉴클레오타이드의 증폭을 위한 프라이머가 포함될 수 있다. 일부 경우에, 키트는 CD30-양성 세포를 포함하는 냉동보존된 세포를 포함한다. 세포의 형질감염 또는 형질도입을 위한 임의의 시약이 포함될 수 있다.

키트의 성분은 수성 매질 중에 또는 동결건조된 형태로 팩키징될 수 있다. 키트의 용기의 수단은 일반적으로 적어도 하나의 바이알, 시험관, 플라스크, 병, 주사기, 또는 하나 이상의 성분이 배치되고 바람직하게는 적합하게 분취될 수 있는 다른 용기 수단을 포함한다. 키트 내에 1개 초과의 성분이 존재하는 경우, 키트는 일반적으로 추가의 성분이 별도로 배치될 수 있는 제2, 제3 또는 다른 추가의 용기를 또한 포함할 수 있다. 그러나, 성분들을 다양하게 조합하여 하나의 바이알에 포함시킬 수 있다. 본 개시내용의 키트는 또한 전형적으로 분자, 이를 포함하는 세포 및/또는 이를 생성하기 위한 시약을 함유하기 위한 수단을 상업적 판매를 위해 엄중하게 밀폐된 상태로 포함한다. 이러한 용기는 그 안에 원하는 바이알이 보유된 사출 성형 또는 취입 성형된 플라스틱 용기를 포함할 수 있다.

키트의 성분이 하나 및/또는 그 이상의 액체 용액으로 제공되는 경우, 액체 용액은 수용액이고, 멸균 수용액이 특히 예상된다. 조성물은 또한 주사가능한 조성물로 제형화될 수 있다. 이 경우에, 용기 수단 자체는 주사기, 피펫, 및/또는 기타 이러한 유사한 장치일 수 있고, 이로부터 제형이 신체의 환부에 적용되고/되거나 동물에게 주사되고/되거나 심지어 키트의 다른 성분에 적용되고/되거나 이와 혼합될 수 있다.

그러나, 키트의 성분은 건조된 분말(들)로서 제공될 수 있다. 시약 및/또는 성분이 건조 분말로서 제공되는 경우, 분말은 적합한 용매의 첨가에 의해 재구성될 수 있다. 용매는 또한 또 다른 용기 수단으로 제공될 수 있는 것으로 예상된다.

용기의 수 및/또는 유형에 관계없이, 본 개시내용의 키트는 또한 동물의 체내에서의 최종 조성물의 주사/투여 및/또는 배치를 돕기 위한 기구를 포함하고/하거나 이와 함께 팩키징될 수 있다. 이러한 기구는 주사기, 피펫, 겸자 및/또는 임의의 이러한 의학적으로 승인된 전달 비히클일수 있다. 일부 실시형태에서, 시약 또는 장치 또는 용기는 생체외 사용을 위해 키트에 포함된다.

XVI. 실시예

하기 실시예는 본 발명의 특정 실시형태를 입증하기 위해 포함되었다. 당업자는 본 발명자에 의해 발견된 대표 기술에 따른 본 실시예에 개시된 기술이 본 발명의 실시에서 우수하게 기능을 하고, 따라서 본 발명의 실시를 위한 특정 방식을 구성하는 것으로 고려될 수 있다는 것을 인식해야 한다. 그러나, 당업자는, 본 개시내용에 비추어, 개시된 구체적인 실시형태에서 많은 변화가 실행될 수 있고 본 발명의 취지 및 범위로부터 벗어나지 않으면서 비슷하거나 유사한 결과를 수득할 수 있다는 것을 인식해야 한다.

실시예 1 - 293T 세포에서 BCMA 세포외 도메인 발현

293T 세포를 3가지의 상이한 막 결합형 수용체: PD-L1 힌지 및 막횡단 도메인에 융합된 BCMA 세포외 도메인, CD8α 힌지 및 막횡단 도메인에 융합된 BCMA 세포외 도메인, 및 전장 야생형 BCMA 중 하나를 함유하는 플라스미드로 형질감염시켰다. 폴리펩타이드는 하기 표 2에 기술되어 있다. 각 수용체를 P2A 펩타이드에 의해 증강된 GFP에 연결되었다. 형질감염 후 1일차에, 세포를 APC-접합된 항-BCMA 모노클로날 항체로 염색하였다(도 1).

실시예 2 - 치료 T 세포에서 내재화 모티프를 갖거나 갖지 않는 BCMA 세포외 도메인의 발현

BCL6 및 BCL2L1로 형질도입된 1차 T 세포를, CD19 CAR와, 2개의 상이한 BCMA 융합 작제물: PD-L1 힌지 및 막횡단 도메인을 갖지만 기능적 세포내 도메인을 갖지 않는 BCMA 세포외 도메인(도 2의 좌측 패널에 도시되어 있음) 또는 PD-L1 힌지 및 막횡단 도메인 및 Trop-2로부터의 세포질 도메인과 융합된 BCMA 세포외 도메인(tBCMA; 도 2의 중간 패널에 도시되어 있음) 중 하나를 공동발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입시켰다. 폴리펩타이드는 하기 표 3에 기술되어 있다.

세포를 APC-접합된 항-BCMA 항체 및 재조합 FITC-표지된 CD19-Fc 단백질로 염색하였다(도 2). 결과는 키메라 BCMA 단백질 발현이 CD19 CAR 발현과 일치함을 보여주며, 이는 키메라 BCMA 단백질이 치료 T 세포에 대한 형질도입 마커로서 사용될 수 있음을 나타낸다.

실시예 3 - 치료 T 세포 내로 형질도입된 BCMA 융합 단백질은 항-BCMA 비드를 사용하여 T 세포를 풍부화하는 데 사용될 수 있다

BCL6 및 BCL2L1로 형질도입된 1차 T 세포를 실시예 2에 기술된 바와 같이 형질도입시키고, APC-접합된 항-BCMA 항체로 염색한 다음, 항-APC 자기 비드를 사용하여 풍부화하였다. 2주간의 증대 후, 세포를 APC-접합된 항-BCMA 항체 및 재조합 FITC-표지된 CD19-Fc 단백질로 염색하여 형질도입된 세포의 순도를 확인하였다(도 3). 결과는 BCMA 및 항-CD19 CAR 이중 양성 집단이 자기 비드 단리에 의해 현저하게 풍부화되었음을 보여준다.

실시예 4 - T 세포를 제거하기 위한 안전 스위치로서 Trop2 세포질 도메인을 함유하는 융합 단백질

BCL6 및 BCL2L1로 형질도입된 1차 T 세포를 BCMA 융합 단백질로 형질도입시키고 실시예 3에 기술된 바와 같이 풍부화하였고 벨란타맙 마포도틴(BCMA를 표적화하는 항체-약물 접합체)의 부재 또는 존재 하에 0㎍/mL, 5㎍/mL 또는 20㎍/mL의 농도에서 배양하였다. 2일차에, 살아있는 세포를 계수 비드를 사용하여 유세포분석에 의해 계수하고, 약물이 없는 경우와 비교한 벨란타맙 마포도틴에 의한 살아있는 세포의 변화 퍼센트를 계산하였다(도 4). 결과는 Trop-2 세포내 도메인(tBCMA)을 갖는 BCMA를 발현하는 치료 T 세포가 벨란타맙 마포도틴의 세포독성 활성에 매우 민감하다는 것을 보여준다.

실시예 5 - 저캣 세포 상에서 세포질 꼬리를 갖거나 갖지 않는 BCMA 세포외 도메인의 발현

저캣 세포를 BCMA 세포외 도메인 단독, CD317로부터의 세포질 도메인과 융합된 BCMA 세포외 도메인, 또는 CD3γ로부터의 세포질 도메인과 융합된 BCMA 세포외 도메인을 발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입시켰다. 폴리펩타이드는 하기 표 4에 기술되어 있다.

세포를 25㎍/mL 또는 12.5㎍/mL 농도의 벨란타맙 마포도틴의 부재 또는 존재 하에 배양하였다. 4일 후, 배양 배지를 벨란타맙이 없는 새로운 배지로 교체하였다. 추가로 7일 동안 배양한 후, BCMA 양성 세포의 백분율을 유세포분석에 의해 측정하였다(도 5). 결과는 BCMA 양성 세포의 백분율이 용량 의존적 방식으로 감소하였음을 보여주고, 이는 벨란타맙에 의한 BCMA 양성 세포에 의한 특이적 사멸을 나타낸다.

실시예 6 - 안전 스위치로서 CD30

T 세포에서의 CD30 발현은 BCL6 및 BCL2L1 유전자의 과발현에 의해 T 세포에서 유도되거나 유지될 수 있다. BCL6 및 BCL2L1 유전자를 1차 T 세포 내로 형질감염시켰다. CD30 및 CD69의 발현을 유세포분석에 의해 측정하였다(도 6). CD30은 αβ 및 γδ T 세포 둘 다에서 항시적으로 발현되었다(세포의 >99%). 대조적으로, 4주 동안 시험관내 배양된 1차 T 세포의 약 15%는 CD30을 발현하였다. 따라서, CD30은 제조 동안의 선택 마커, 주입 후 환자 모니터링을 위한 형질도입 마커, 및 심각한 이상 사례의 경우에 치료 세포 제거를 위한 안전 스위치로서 사용될 수 있다.

실시예 7 - CD30을 발현하는 치료 T 세포에서 안전 스위치로서 CD30의 사용

CD30을 발현하는 BCL6 및 BCL2L1로 형질도입된 1차 T 세포를 증가하는 농도의 브렌툭시맙 베도틴의 부재 또는 존재 하에 배양하였다. CD30을 발현하지 않는 라지 버킷 림프종(Raji Burkitt lymphoma) 종양 세포를 대조군으로서 사용하였다. 세포를 수거하고, 생/사 염색으로 염색하고, 1일, 2일, 3일 및 4일차에 살아있는 세포의 절대 수를 계수 비드를 사용하여 유세포분석에 의해 결정하였다. 살아있는 세포 수의 변화 퍼센트를 브렌툭시맙의 부재 하에 배양된 세포와 비교하여 결정하였으며, 이는 도 7의 그래프에 도시되어 있다. 데이터는 대조군 라지 세포와 비교하여 CD30-발현 T 세포의 효율적인 사멸(최대 95%)을 시사한다. 비-특이적 세포독성은 더 높은 농도 및 더 긴 항온배양에서 관찰되었다.

실시예 8 - BCMA 세포질 꼬리와 융합된 CD30 세포외 도메인은 293T 세포에서 발현될 수 있다

293T 세포를 CD19 CAR, 및 Her2 도메인 4와 BCMA 세포질 꼬리와 융합된 CD30 세포외 도메인 둘 다를 발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입시켰다(도 8에 도시된 다이어그램). 폴리펩타이드는 하기 표 5에 기술되어 있다. 형질도입된 293T를 항-CD30 및 AF647 접합된 트라스투주맙 둘 다에 의해 염색하였다(도 9). 형질도입된 293T 세포를 상이한 농도의 브렌툭시맙 존재 하에 4일 동안 배양하고, Her2 양성(또한 CD30 양성일 것으로 예상됨)과 Her2 음성(또한 CD30 음성일 것으로 예상됨) 293T 세포 둘 다의 세포 수 변화를 4일차에 유세포 계수 비드를 사용하여 계수하였다(도 9, 우측 패널). 결과는 CD30 양성(Her2 양성) 293T 세포의 살아있는 세포 수가 대조군에 비해 유의하게 감소하였음을 보여주었다.

실시예 9 - Her2 도메인 4를 발현하는 저캣 세포는 CAR-T 세포에 의해 사멸될 수 있다

저캣 T 세포를 CD19 CAR, 및 Her2와 절두된 EGFR 둘 다를 발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입시켰다(도 10에 도시된 다이어그램). 폴리펩타이드는 하기 표 6에 기술되어 있다. 형질도입된 세포는 트라스투주맙 및 CD16 발현 CAR-T 세포의 존재 하에 사멸되었다(도 11A 내지 11B). 도 11A는 각각 CD19-Fc 융합 단백질 및 AF647-접합된 트라스투주맙으로 염색함으로써 검출된 CD19 CAR 및 Her2 도메인 4의 발현을 도시한다. 도 11B는 트라스투주맙의 존재 하에 CD16-발현 CAR-T와 공동배양했을 때 살아있는 저캣 세포의 변화 퍼센트를 도시한다.

실시예 10 - 안전 스위치로서 Trop 2

293T 세포를 LIPOFECTAMINE™ 3000을 사용하여 항-CD19 CAR, Her2 도메인 IV 및 Trop2 유전자(도 12에 도시된 다이어그램)를 함유하는 렌티바이러스 플라스미드로 형질감염시켰다. 폴리펩타이드는 하기 표 7에 기술되어 있다. 형질감염 24시간 후에 유세포분석을 수행하였다(도 13). 데이터는 형질감염된 세포에서의 항-CD19 CAR 및 Trop2의 공동발현을 보여준다.

실시예 11 - 안전 스위치로서 EGFR의 도메인 3 및 부분 도메인 4

293T 세포를 CD19 CAR, 및 Her2와 절두된 EGFR 둘 다를 함유하는 렌티바이러스 플라스미드로 형질감염시켰다(EGFR 도메인 3-부분 도메인 4 및 CD8 힌지 및 TM; 도 14에 도시된 작제물 다이어그램). 절두된 EGFR(EGFR 도메인 3-부분 도메인 4 및 CD8 힌지 및 TM)에 대한 서열은 하기 표 8에 제공되어 있다. 데이터는 CD19-Fc 융합 단백질 및 AF647-접합된 세툭시맙에 의해 검출된 형질감염된 세포에서의 항-CD19 CAR 및 절두된 EGFR의 공동발현을 보여준다(도 15, 우측 패널). 도 15, 좌측 패널은 형질도입되지 않은 293T 세포를 도시한다.

실시예 12 - tBCMA 안전 스위치는 시험관내 효능 및 생체내 효능을 모두 갖는다

BCL6 및 BCL2L1 +/- CD19 CAR로 형질도입되고 절두된 BCMA(tBCMA)를 발현하는 1차 T 세포를 증가하는 농도의 항-BCMA 항체 약물-접합체인 벨란타맙 마포도틴의 부재 또는 존재 하에 배양하였다. BCMA를 발현하지 않는 라지 버킷 림프종 종양 세포를 대조군으로서 사용하였다. 세포를 수거하고, 생/사 염색으로 염색하고, 2일차에 계수 비드를 사용하여 유세포분석에 의해 세포의 절대 수를 결정하였다. 살아있는 세포 수의 변화 퍼센트를 브렌툭시맙의 부재 하에 배양된 세포와 비교하여 결정하였으며, 이는 그래프에 도시되어 있다. 데이터는 대조군 라지 세포와 비교하여 BCMA 발현 T 세포의 효율적인 사멸(최대 80%)을 시사한다. 비특이적 세포독성은 더 높은 농도에서 관찰되었다.

BCL6, BCL2L1, CD19 CAR, tBCMA, 루시퍼라제 및 IL-15로 형질도입된 1차 T 세포를 0일차에 꼬리 정맥을 통해 NSG 마우스에 IV 주사하였다(2 x 106 세포/마우스). 벨란타맙 마포도틴은 3일차에 마우스 3 및 4에게 그리고 11일차에 마우스 1 및 2에게 2.5mg/체중 kg의 용량으로 꼬리 정맥을 통해 IV 주사하였다. T 세포 증대 및 지속성은 표시된 시점에 생물발광 영상화로 모니터링하였다. 데이터는 T 세포가 생체내에서 활발한 증대 전(마우스 3 및 4) 또는 후(마우스 1 및 2)에 주사될 때 벨란타맙 마포도틴에 의해 매우 효율적으로 근절될 수 있음을 보여준다.

* * *

본원에 개시되고 청구된 모든 방법은 본 개시내용에 비추어 과도한 실험 없이 수행하고 실시할 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법이 바람직한 실시형태의 관점에서 기술되었지만, 본 발명의 개념, 취지 및 범위로부터 벗어나지 않으면서 본원에 기술된 방법 및 본 방법의 단계 또는 순서에 변경을 적용할 수 있다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 보다 구체적으로, 동일하거나 유사한 결과가 성취되면서, 본원에 기술된 제제가 화학적으로 및 생리학적으로 관련된 특정 제제로 치환될 수 있다는 것이 명백할 것이다. 당업자에게 명백한 모든 이러한 유사한 치환 및 변형은 첨부된 청구범위에 의해 한정되는 본 발명의 취지, 범위 및 개념 내에 있는 것으로 간주된다.

SEQUENCE LISTING <110> BOARD OF REGENTS, THE UNIVERSITY OF TEXAS SYSTEM <120> CHIMERIC POLYPEPTIDES AND METHODS OF USE <130> MDAC-P1282WO-1001212180 <140> PCT/US2022/029232 <141> 2022-05-13 <150> 63/274,765 <151> 2021-11-02 <150> 63/188,936 <151> 2021-05-14 <160> 51 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 84 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His Leu Val 50 55 60 Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr Phe Ile 65 70 75 80 Phe Arg Leu Arg <210> 2 <211> 255 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 2 atgctccaga tggctggcca gtgttcgcag aacgagtact tcgacagtct 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 15 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys 20 25 30 Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys 35 40 45 Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly 50 55 60 Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile 65 70 75 80 Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp 85 90 95 Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile 100 105 110 Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser 115 120 125 Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp 130 135 140 Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr 145 150 155 160 Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile 165 170 175 Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys 180 185 190 His Ala Leu Cys Ser 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cagttctctc tggccgtggt gagcctgaac atcacatccc tgggcctgcg ctctctgaag 420 gagatcagcg acggcgatgt gatcatctcc ggcaacaaga atctgtgcta tgccaacacc 480 atcaattgga agaagctgtt tggcacatct ggccagaaga ccaagatcat cagcaaccgc 540 ggcgagaatt cctgcaaggc aaccggacag gtgtgccacg cactgtgtag ccctgaggga 600 tgttggggac cagagccacg cgactgcgtg tcctgtagga acgtgtctag gggaagggag 660 tgcgtggata agtcacagcc tttgtcactg cgaccggaag catgcaggcc agcggcgggt 720 ggggcagtac atacgcgagg tctggacttt gcgtgtgata tttatatatg ggcaccactc 780 gccggtacgt gcggggttct cttgctctca cttgtgataa cgctttattg ttgggtacga 840 taaggtgacc gatatcaagc ttatcga 867 <210> 17 <211> 184 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu 50 55 60 Leu Leu Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg 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aggagtgcac ttgcgaggac tgtatcaagt ccaagcccaa ggttgattca 420 gaccactgtt tccccctgcc cgccatggaa gagggcgcaa ccatcctggt gacaaccaag 480 actaacgact actgtaaaag ccttcctgcg gcgctgagcg ccacggagat tgagaaatcc 540 atctcggctc ggtaa 555 <210> 19 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 19 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala 50 <210> 20 <211> 384 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 20 Met Arg Val Leu Leu Ala Ala Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gly Ala Leu 1 5 10 15 Arg Ala Phe Pro Gln Asp Arg Pro Phe Glu Asp Thr Cys His Gly Asn 20 25 30 Pro Ser His Tyr Tyr Asp Lys Ala Val Arg Arg Cys Cys Tyr Arg Cys 35 40 45 Pro Met Gly Leu Phe Pro Thr Gln Gln Pro Gln 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Sequence: Synthetic peptide <400> 25 Thr His Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala 1 5 10 15 Leu Thr Phe Ile Phe 20 <210> 26 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 26 Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ser Leu Val Ile Thr 20 <210> 27 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 27 Pro Val Leu Phe Trp Val Ile Leu Val Leu Val Val Val Val Gly Ser 1 5 10 15 Ser Ala Phe Leu Leu Cys His Arg 20 <210> 28 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 28 Ser Ile Ile Ser Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly 1 5 10 15 Val Val Phe Gly Ile Leu Ile Lys Arg 20 25 <210> 29 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Arg Leu Arg 1 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Leu Tyr Cys Trp Val Arg 1 5 <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Thr Ser Tyr Asp Tyr Cys Arg Val Pro Gly 1 5 10 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Ser Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Gly 1 5 <210> 33 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 33 Lys Ile Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser 1 5 10 15 Gly Leu Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly 20 25 30 Asp Glu Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys 35 40 45 Thr Cys Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His 50 55 60 Cys Phe Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr 65 70 75 80 Thr Lys Thr 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aatacacctc cactcacttg ccagagatac 120 tgcaacgcgt ccgtaacaaa ctcagtcaag ggcacgaatg cgcacccccc caatgaaaga 180 actcacctgg tcattctcgg ggctatcctc ttgtgtctcg gagtagcgtt gacctttatc 240 ttccgcgcgt ccacgaatcg gaggaagagc ggaaagtaca agaaggtgga gattaaagaa 300 ttgggggaac tgcgcaagga gccaagtctg taa 333 <210> 40 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 40 Ala Ser Thr Asn Arg Arg Lys Ser Gly Lys Tyr Lys Lys Val Glu Ile 1 5 10 15 Lys Glu Leu Gly Glu Leu Arg Lys Glu Pro Ser Leu 20 25 <210> 41 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 41 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala 50 <210> 42 <211> 162 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 42 atgctccaga tggctggcca gtgttcgcag aacgagtact tcgacagtct tctacacgcc 60 tgtattcctt gtcagctgcg ttgctctagc aacacgcccc cactgacctg ccagcgttac 120 tgcaatgctt ccgtcaccaa ctccgtgaag ggcaccaacg cg 162 <210> 43 <211> 706 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Met Ala Ser Pro Ala Asp Ser Cys Ile Gln Phe Thr Arg His Ala Ser 1 5 10 15 Asp Val Leu Leu Asn Leu Asn Arg Leu Arg Ser Arg Asp Ile Leu Thr 20 25 30 Asp Val Val Ile Val Val Ser Arg Glu Gln Phe Arg Ala His Lys Thr 35 40 45 Val Leu Met Ala Cys Ser Gly Leu Phe Tyr Ser Ile Phe Thr Asp Gln 50 55 60 Leu Lys Cys Asn Leu Ser Val Ile Asn Leu Asp Pro Glu Ile Asn Pro 65 70 75 80 Glu Gly Phe Cys Ile Leu Leu Asp Phe Met Tyr Thr Ser Arg Leu Asn 85 90 95 Leu Arg Glu Gly Asn Ile Met Ala Val Met Ala Thr Ala Met Tyr Leu 100 105 110 Gln Met Glu His Val Val Asp Thr Cys Arg Lys Phe Ile Lys Ala Ser 115 120 125 Glu Ala Glu Met Val Ser Ala Ile Lys Pro Pro Arg Glu Glu Phe Leu 130 135 140 Asn Ser Arg 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tagatcctga gatcaaccct 240 gagggattct gcatcctcct ggacttcatg tacacatctc ggctcaattt gcgggagggc 300 aacatcatgg ctgtgatggc cacggctatg tacctgcaga tggagcatgt tgtggacact 360 tgccggaagt ttattaaggc cagtgaagca gagatggttt ctgccatcaa gcctcctcgt 420 gaagagttcc tcaacagccg gatgctgatg ccccaagaca tcatggccta tcggggtcgt 480 gaggtggtgg agaacaacct gccactgagg agcgcccctg ggtgtgagag cagagccttt 540 gcccccagcc tgtacagtgg cctgtccaca ccgccagcct cttattccat gtacagccac 600 ctccctgtca gcagcctcct cttctccgat gaggagtttc gggatgtccg gatgcctgtg 660 gccaacccct tccccaagga gcgggcactc ccatgtgata gtgccaggcc agtccctggt 720 gagtacagcc ggccgacttt ggaggtgtcc cccaatgtgt gccacagcaa tatctattca 780 cccaaggaaa caatcccaga agaggcacga agtgatatgc actacagtgt ggctgagggc 840 ctcaaacctg ctgccccctc agcccgaaat gccccctact tcccttgtga caaggccagc 900 aaagaagaag agagaccctc ctcggaagat gagattgccc tgcatttcga gccccccaat 960 gcacccctga accggaaggg tctggttagt ccacagagcc cccagaaatc tgactgccag 1020 cccaactcgc ccacagagtc ctgcagcagt aagaatgcct gcatcctcca ggcttctggc 1080 tcccctccag ccaagagccc cactgacccc aaagcctgca actggaagaa atacaagttc 1140 atcgtgctca acagcctcaa ccagaatgcc aaaccagagg ggcctgagca ggctgagctg 1200 ggccgccttt ccccacgagc ctacacggcc ccacctgcct gccagccacc catggagcct 1260 gagaaccttg acctccagtc cccaaccaag ctgagtgcca gcggggagga ctccaccatc 1320 ccacaagcca gccggctcaa taacatcgtt aacaggtcca tgacgggctc tccccgcagc 1380 agcagcgaga gccactcacc actctacatg caccccccga agtgcacgtc ctgcggctct 1440 cagtccccac agcatgcaga gatgtgcctc cacaccgctg gccccacgtt ccctgaggag 1500 atgggagaga cccagtctga gtactcagat tctagctgtg agaacggggc cttcttctgc 1560 aatgagtgtg actgccgctt ctctgaggag gcctcactca agaggcacac gctgcagacc 1620 cacagtgaca aaccctacaa gtgtgaccgc tgccaggcct ccttccgcta caagggcaac 1680 ctcgccagcc acaagaccgt ccataccggt gagaaaccct atcgttgcaa catctgtggg 1740 gcccagttca accggccagc caacctgaaa acccacactc gaattcactc tggagagaag 1800 ccctacaaat gcgaaacctg cggagccaga tttgtacagg tggcccacct ccgtgcccat 1860 gtgcttatcc acactggtga gaagccctat ccctgtgaaa tctgtggcac ccgtttccgg 1920 caccttcaga ctctgaagag ccacctgcga atccacacag gagagaaacc ttaccattgt 1980 gagaagtgta acctgcattt ccgtcacaaa agccagctgc gacttcactt gcgccagaag 2040 catggcgcca tcaccaacac caaggtgcaa taccgcgtgt cagccactga cctgcctccg 2100 gagctcccca aagcctgc 2118 <210> 45 <211> 706 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 45 Met Ala Ser Pro Ala Asp Ser Cys Ile Gln Phe Thr Arg His Ala Ser 1 5 10 15 Asp Val Leu Leu Asn Leu Asn Arg Leu Arg Ser Arg Asp Ile Leu Thr 20 25 30 Asp Val Val Ile Val Val Ser Arg Glu Gln Phe Arg Ala His Lys Thr 35 40 45 Val Leu Met Ala Cys Ser Gly Leu Phe Tyr Ser Ile Phe Thr Asp Gln 50 55 60 Leu Lys Cys Asn Leu Ser Val Ile Asn Leu Asp Pro Glu Ile Asn Pro 65 70 75 80 Glu Gly Phe Cys Ile Leu Leu Asp Phe Met Tyr Thr Ser Arg Leu Asn 85 90 95 Leu Arg Glu Gly Asn Ile Met Ala Val Met Ala Thr Ala Met Tyr Leu 100 105 110 Gln Met Glu His Val Val Asp Thr Cys Arg Lys Phe Ile Lys Ala Ser 115 120 125 Glu Ala Glu Met Val Ser Ala Ile Lys Pro Pro Arg Glu Glu Phe Leu 130 135 140 Asn Ser Arg Met Leu Met Pro Gln Asp Ile Met Ala Tyr Arg Gly Arg 145 150 155 160 Glu Val Val Glu Asn Asn Leu Pro Leu Arg Ser Ala Pro Gly Cys Glu 165 170 175 Ser Arg Ala Phe Ala Pro Ser Leu Tyr Ser Gly Leu Ser Thr Pro Pro 180 185 190 Ala Ser Tyr Ser Met Tyr Ser His Leu Pro Val Ser Ser Leu Leu Phe 195 200 205 Ser Asp Glu Glu Phe Arg Asp Val Arg Met Pro Val Ala Asn Pro Phe 210 215 220 Pro Lys Glu Arg Ala Leu Pro Cys Asp Ser Ala Arg Pro Val Pro Gly 225 230 235 240 Glu Tyr Ser Arg Pro Thr Leu Glu Val Ser Pro Asn Val Cys His Ser 245 250 255 Asn Ile Tyr Ser Pro Lys Glu Thr Ile Pro Glu Glu Ala Arg Ser Asp 260 265 270 Met His Tyr Ser Val Ala Glu Gly Leu Lys Pro Ala Ala Pro Ser Ala 275 280 285 Arg Asn Ala Pro Tyr Phe Pro Cys Asp Lys Ala Ser Lys Glu Glu Glu 290 295 300 Arg Pro Ser Ser Glu Asp Glu Ile Ala Leu His Phe Glu Pro Pro Asn 305 310 315 320 Ala Pro Leu Asn Arg Lys Gly Leu Val Ser Pro Gln Ser Pro Gln Lys 325 330 335 Ser Asp Cys Gln Pro Asn Ser Pro Thr Glu Ser Cys Ser Ser Lys Asn 340 345 350 Ala Cys Ile Leu Gln Ala Ser Gly Ser Pro Pro Ala Lys Ser Pro Thr 355 360 365 Asp Pro Lys Ala Cys Asn Trp Lys Lys Tyr Lys Phe Ile Val Leu Asn 370 375 380 Ser Leu Asn Gln Asn Ala Lys Pro Glu Gly Leu Glu Gln Ala Glu Leu 385 390 395 400 Gly Arg Leu Ser Pro Arg Ala Tyr Thr Ala Pro Pro Ala Cys Gln Pro 405 410 415 Pro Met Glu Pro Glu Asn Leu Asp Leu Gln Ser Pro Thr Lys Leu Ser 420 425 430 Ala Ser Gly Glu Asp Ser Thr Ile Pro Gln Ala Ser Arg Leu Asn Asn 435 440 445 Ile Val Asn Arg Ser Met Thr Gly Ser Pro Arg Ser Ser Ser Glu Ser 450 455 460 His Ser Pro Leu Tyr Met His Pro Pro Lys Cys Thr Ser Cys Gly Ser 465 470 475 480 Gln Ser Pro Gln His Ala Glu Met Cys Leu His Thr Ala Gly Pro Thr 485 490 495 Phe Pro Glu Glu Met Gly Glu Thr Gln Ser Glu Tyr Ser Asp Ser Ser 500 505 510 Cys Glu Asn Gly Ala Phe Phe Cys Asn Glu Cys Asp Cys Arg Phe Ser 515 520 525 Glu Glu Ala Ser Leu Lys Arg His Thr Leu Gln Thr His Ser Asp Lys 530 535 540 Pro Tyr Lys Cys Asp 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ttgactgatg ttgtcattgt tgtgagccgt 120 gagcagttta gagcccataa aacggtcctc atggcctgca gtggcctgtt ctatagcatc 180 tttacagacc agttgaaatg caaccttagt gtgatcaatc tagatcctga gatcaaccct 240 gagggattct gcatcctcct ggacttcatg tacacatctc ggctcaattt gcgggagggc 300 aacatcatgg ctgtgatggc cacggctatg tacctgcaga tggagcatgt tgtggacact 360 tgccggaagt ttattaaggc cagtgaagca gagatggttt ctgccatcaa gcctcctcgt 420 gaagagttcc tcaacagccg gatgctgatg ccccaagaca tcatggccta tcggggtcgt 480 gaggtggtgg agaacaacct gccactgagg agcgcccctg ggtgtgagag cagagccttt 540 gcccccagcc tgtacagtgg cctgtccaca ccgccagcct cttattccat gtacagccac 600 ctccctgtca gcagcctcct cttctccgat gaggagtttc gggatgtccg gatgcctgtg 660 gccaacccct tccccaagga gcgggcactc ccatgtgata gtgccaggcc agtccctggt 720 gagtacagcc ggccgacttt ggaggtgtcc cccaatgtgt gccacagcaa tatctattca 780 cccaaggaaa caatcccaga agaggcacga agtgatatgc actacagtgt ggctgagggc 840 ctcaaacctg ctgccccctc agcccgaaat gccccctact tcccttgtga caaggccagc 900 aaagaagaag agagaccctc ctcggaagat gagattgccc tgcatttcga gccccccaat 960 gcacccctga accggaaggg tctggttagt ccacagagcc cccagaaatc tgactgccag 1020 cccaactcgc ccacagagtc ctgcagcagt aagaatgcct gcatcctcca ggcttctggc 1080 tcccctccag ccaagagccc cactgacccc aaagcctgca actggaagaa atacaagttc 1140 atcgtgctca acagcctcaa ccagaatgcc aaaccagagg ggcttgagca ggctgagctg 1200 ggccgccttt ccccacgagc ctacacggcc ccacctgcct gccagccacc catggagcct 1260 gagaaccttg acctccagtc cccaaccaag ctgagtgcca gcggggagga ctccaccatc 1320 ccacaagcca gccggctcaa taacatcgtt aacaggtcca tgacgggctc tccccgcagc 1380 agcagcgaga gccactcacc actctacatg caccccccga agtgcacgtc ctgcggctct 1440 cagtccccac agcatgcaga gatgtgcctc cacaccgctg gccccacgtt ccctgaggag 1500 atgggagaga cccagtctga gtactcagat tctagctgtg agaacggggc cttcttctgc 1560 aatgagtgtg actgccgctt ctctgaggag gcctcactca agaggcacac gctgcagacc 1620 cacagtgaca aaccctacaa gtgtgaccgc tgccaggcct ccttccgcta caagggcaac 1680 ctcgccagcc acaagaccgt ccataccggt gagaaaccct atcgttgcaa catctgtggg 1740 gcccagttca accggccagc caacctgaaa acccacactc gaattcactc tggagagaag 1800 ccctacaaat gcgaaacctg cggagccaga tttgtacagg tggcccacct ccgtgcccat 1860 gtgcttatcc acactggtga gaagccctat ccctgtgaaa tctgtggcac ccgtttccgg 1920 caccttcaga ctctgaagag ccacctgcga atccacacag gagagaaacc ttaccattgt 1980 gagaagtgta acctgcattt ccgtcacaaa agccagctgc gacttcactt gcgccagaag 2040 catggcgcca tcaccaacac caaggtgcaa taccgcgtgt cagccactga cctgcctccg 2100 gagctcccca aagcctgc 2118 <210> 47 <211> 515 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 47 Met Arg Val Leu Leu Ala Ala Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gly Ala Leu 1 5 10 15 Arg Ala Phe Pro Gln Asp Arg Pro Phe Glu Asp Thr Cys His Gly Asn 20 25 30 Pro Ser His Tyr Tyr Asp Lys Ala Val Arg Arg Cys Cys Tyr Arg Cys 35 40 45 Pro Met Gly Leu Phe Pro Thr Gln Gln Cys Pro Gln Arg Pro Thr Asp 50 55 60 Cys Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Asp Arg 65 70 75 80 Cys Thr Ala Cys Val Thr Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr 85 90 95 Pro Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Val Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met 100 105 110 Phe Cys Ser Thr Ser Ala Val Asn Ser Cys Ala Arg Cys Phe Phe His 115 120 125 Ser Val Cys Pro Ala Gly Met Ile Val Lys Phe Pro Gly Thr Ala Gln 130 135 140 Lys Asn Thr Val Cys Glu Pro Ala Ser Pro Gly Val Ser Pro Ala Cys 145 150 155 160 Ala Ser Pro Glu Asn Cys Lys Glu Pro Ser Ser Gly Thr Ile Pro Gln 165 170 175 Ala Lys Pro Thr Pro Val Ser Pro Ala Thr Ser Ser Ala Ser Thr Met 180 185 190 Pro Val Arg Gly Gly Thr Arg Leu Ala Gln Glu Ala Ala Ser Lys Leu 195 200 205 Thr Arg Ala Pro Asp Ser Pro Ser Ser Val Gly Arg Pro Ser Ser Asp 210 215 220 Pro Gly Leu Ser Pro Thr Gln Pro Cys Pro Glu Gly Ser Gly Asp Cys 225 230 235 240 Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Gly Arg Cys 245 250 255 Thr Ala Cys Val Ser Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr Pro 260 265 270 Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Thr Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met Ile 275 280 285 Cys Ala Thr Ser Ala Thr Asn Ser Cys Ala Arg Cys Val Pro Tyr Pro 290 295 300 Ile Cys Ala Ala Glu Thr Val Thr Lys Pro Gln Asp Met Ala Glu Lys 305 310 315 320 Asp Thr Thr Phe Glu Ala Pro Pro Leu Gly Thr Gln Pro Asp Cys Asn 325 330 335 Pro Thr Pro Glu Asn Gly Glu Ala Pro Ala Ser Thr Ser Pro Thr Gln 340 345 350 Ser Leu Leu Val Asp Ser Gln Ala Ser Lys Thr Leu Pro Ile Pro Thr 355 360 365 Ser Ala Pro Val Ala Leu Ser Ser Thr Gly Lys Pro Val Leu Asp Ala 370 375 380 Gly Pro Val Leu Phe Trp Val Ile Leu Val Leu Val Val Val Val Gly 385 390 395 400 Ser Ser Ala Phe Leu Leu Cys His Arg Lys Ile Asn Ser Glu Pro Leu 405 410 415 Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu Leu Gly Met Ala Asn 420 425 430 Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu Ile Ile Leu Pro Arg 435 440 445 Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys Glu Asp Cys Ile Lys 450 455 460 Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe Pro Leu Pro Ala Met 465 470 475 480 Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys Thr Asn Asp Tyr Cys 485 490 495 Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu Ile Glu Lys Ser Ile 500 505 510 Ser Ala Arg 515 <210> 48 <211> 1545 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 48 atgcgagtcc tcctggccgc gttggggctc ttgttccttg gggcacttcg agcctttcca 60 caggatcgac cttttgaaga tacttgtcac ggaaaccctt ctcactacta cgataaagcg 120 gtccgacgat gctgctaccg atgccctatg ggacttttcc cgacgcagca atgcccacag 180 cggcctacgg actgtagaaa gcaatgcgag ccggactact atctggacga agcagatcgg 240 tgtactgcct gcgtaacatg ctcccgggat gacctggtgg aaaagacccc ctgcgcttgg 300 aactccagta gagtatgcga atgccgacca gggatgttct gcagcacgag cgcagttaac 360 tcatgtgcca ggtgtttttt ccattctgta tgtcctgccg ggatgattgt taagttccca 420 ggtacagctc aaaagaacac ggtatgcgaa cccgctagtc cgggagtttc cccggcctgc 480 gccagcccag agaattgcaa ggagccgtct agcggtacaa tcccacaagc taagccgacg 540 ccggtcagcc cggcgacttc atccgcctca acaatgcccg tccggggtgg gacaagactc 600 gcgcaggaag cggctagcaa gttgacacga gcccccgatt ccccttcaag tgtaggcaga 660 cctagttccg accctggcct tagcccaacg caaccctgcc cagagggatc cggagactgt 720 cggaaacaat gcgagcccga ctattacttg gatgaagccg gtcgctgtac cgcatgtgtg 780 tcctgcagcc gcgatgacct ggtcgagaaa acaccatgtg catggaatag cagtcgcacc 840 tgcgagtgcc gaccgggaat gatctgtgcc acctcagcaa ccaactcttg tgccaggtgc 900 gtaccatatc ccatctgcgc ggctgagacc gtaacaaaac ctcaagacat ggccgaaaaa 960 gacaccactt tcgaagcgcc gcctctgggc actcaaccag actgcaatcc tacgccagaa 1020 aacggggaag cacccgcgtc aacctccccc acacaatctt tgctcgtaga ctctcaggct 1080 tccaaaacac tgccaatacc aacttccgct ccggtggctc tgagctctac cggcaaaccc 1140 gtgcttgacg ccgggccagt cctgttctgg gttatattgg tgctcgtagt cgtagtaggc 1200 tccagcgcct ttctgctctg tcaccggaag atcaattccg aacctttgaa agacgagttt 1260 aagaacaccg ggagtggcct cctcggaatg gctaatatcg acttggagaa gagccgcact 1320 ggggacgaaa tcattttgcc tcgcgggctt gaatacacag tcgaagagtg cacgtgtgaa 1380 gactgcatta aatcaaaacc gaaggtggac agcgatcatt gtttcccctt gcccgctatg 1440 gaagaaggtg caactatcct cgtaacaacc aaaactaacg attattgtaa aagcctcccg 1500 gcggctctct ctgcgacgga aatagaaaaa tcaatctctg caagg 1545 <210> 49 <211> 595 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Met Arg Val Leu Leu Ala Ala Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gly Ala Leu 1 5 10 15 Arg Ala Phe Pro Gln Asp Arg Pro Phe Glu Asp Thr Cys His Gly Asn 20 25 30 Pro Ser His Tyr Tyr Asp Lys Ala Val Arg Arg Cys Cys Tyr Arg Cys 35 40 45 Pro Met Gly Leu Phe Pro Thr Gln Gln Cys Pro Gln Arg Pro Thr Asp 50 55 60 Cys Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Asp Arg 65 70 75 80 Cys Thr Ala Cys Val Thr Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr 85 90 95 Pro Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Val Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met 100 105 110 Phe Cys Ser Thr Ser Ala Val Asn Ser Cys Ala Arg Cys Phe Phe His 115 120 125 Ser Val Cys Pro Ala Gly Met Ile Val Lys Phe Pro Gly Thr Ala Gln 130 135 140 Lys Asn Thr Val Cys Glu Pro Ala Ser Pro Gly Val Ser Pro Ala Cys 145 150 155 160 Ala Ser Pro Glu Asn Cys Lys Glu Pro Ser Ser Gly Thr Ile Pro Gln 165 170 175 Ala Lys Pro Thr Pro Val Ser Pro Ala Thr Ser Ser Ala Ser Thr Met 180 185 190 Pro Val Arg Gly Gly Thr Arg Leu Ala Gln Glu Ala Ala Ser Lys Leu 195 200 205 Thr Arg Ala Pro Asp Ser Pro Ser Ser Val Gly Arg Pro Ser Ser Asp 210 215 220 Pro Gly Leu Ser Pro Thr Gln Pro Cys Pro Glu Gly Ser Gly Asp Cys 225 230 235 240 Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Gly Arg Cys 245 250 255 Thr Ala Cys Val Ser Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr Pro 260 265 270 Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Thr Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met Ile 275 280 285 Cys Ala Thr Ser Ala Thr Asn Ser Cys Ala Arg Cys Val Pro Tyr Pro 290 295 300 Ile Cys Ala Ala Glu Thr Val Thr Lys Pro Gln Asp Met Ala Glu Lys 305 310 315 320 Asp Thr Thr Phe Glu Ala Pro Pro Leu Gly Thr Gln Pro Asp Cys Asn 325 330 335 Pro Thr Pro Glu Asn Gly Glu Ala Pro Ala Ser Thr Ser Pro Thr Gln 340 345 350 Ser Leu Leu Val Asp Ser Gln Ala Ser Lys Thr Leu Pro Ile Pro Thr 355 360 365 Ser Ala Pro Val Ala Leu Ser Ser Thr Gly Lys Pro Val Leu Asp Ala 370 375 380 Gly Pro Val Leu Phe Trp Val Ile Leu Val Leu Val Val Val Val Gly 385 390 395 400 Ser Ser Ala Phe Leu Leu Cys His Arg Arg Ala Cys Arg Lys Arg Ile 405 410 415 Arg Gln Lys Leu His Leu Cys Tyr Pro Val Gln Thr Ser Gln Pro Lys 420 425 430 Leu Glu Leu Val Asp Ser Arg Pro Arg Arg Ser Ser Thr Gln Leu Arg 435 440 445 Ser Gly Ala Ser Val Thr Glu Pro Val Ala Glu Glu Arg Gly Leu Met 450 455 460 Ser Gln Pro Leu Met Glu Thr Cys His Ser Val Gly Ala Ala Tyr Leu 465 470 475 480 Glu Ser Leu Pro Leu Gln Asp Ala Ser Pro Ala Gly Gly Pro Ser Ser 485 490 495 Pro Arg Asp Leu Pro Glu Pro Arg Val Ser Thr Glu His Thr Asn Asn 500 505 510 Lys Ile Glu Lys Ile Tyr Ile Met Lys Ala Asp Thr Val Ile Val Gly 515 520 525 Thr Val Lys Ala Glu Leu Pro Glu Gly Arg Gly Leu Ala Gly Pro Ala 530 535 540 Glu Pro Glu Leu Glu Glu Glu Leu Glu Ala Asp His Thr Pro His Tyr 545 550 555 560 Pro Glu Gln Glu Thr Glu Pro Pro Leu Gly Ser Cys Ser Asp Val Met 565 570 575 Leu Ser Val Glu Glu Glu Gly Lys Glu Asp Pro Leu Pro Thr Ala Ala 580 585 590 Ser Gly Lys 595 <210> 50 <211> 1788 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 50 atgcgcgtcc tcctcgccgc gctgggactg ctgttcctgg gggcgctacg agccttccca 60 caggatcgac ccttcgagga cacctgtcat ggaaacccca gccactacta tgacaaggct 120 gtcaggaggt gctgttaccg ctgccccatg gggctgttcc cgacacagca gtgcccacag 180 aggcctactg actgcaggaa gcagtgtgag cctgactact acctggatga ggccgaccgc 240 tgtacagcct gcgtgacttg ttctcgagac gacctcgtgg agaagacgcc gtgtgcatgg 300 aactcctccc gtgtctgcga atgtcgaccc ggcatgttct gttccacgtc tgccgtcaac 360 tcctgtgccc gctgcttctt ccattctgtc tgtccggcag ggatgattgt caagttccca 420 ggcacggcgc agaagaacac ggtctgtgag ccggcttccc caggggtcag ccctgcctgt 480 gccagcccag agaactgcaa ggaaccctcc agtggcacca tcccccaggc caagcccacc 540 ccggtgtccc cagcaacctc cagtgccagc accatgcctg taagaggggg cacccgcctc 600 gcccaggaag ctgcttctaa actgacgagg gctcccgact ctccctcctc tgtgggaagg 660 cctagttcag atccaggtct gtccccaaca cagccatgcc cagaggggtc tggtgattgc 720 agaaagcagt gtgagcccga ctactacctg gacgaggccg gccgctgcac ggcctgcgtg 780 agctgttctc gagatgacct tgtggagaag acgccatgtg catggaactc ctcccgcacc 840 tgcgaatgtc gacctggcat gatctgtgcc acatcagcca ccaactcctg tgcccgctgt 900 gtcccctacc caatctgtgc agcagagacg gtcaccaagc cccaggatat ggctgagaag 960 gacaccacct ttgaggcgcc acccctgggg acccagccgg actgcaaccc caccccagag 1020 aatggcgagg cgcctgccag caccagcccc actcagagct tgctggtgga ctcccaggcc 1080 agtaagacgc tgcccatccc aaccagcgct cccgtcgctc tctcctccac ggggaagccc 1140 gttctggatg cagggccagt gctcttctgg gtgatcctgg tgttggttgt ggtggtcggc 1200 tccagcgcct tcctcctgtg ccaccggagg gcctgcagga agcgaattcg gcagaagctc 1260 cacctgtgct acccggtcca gacctcccag cccaagctag agcttgtgga ttccagaccc 1320 aggaggagct caacgcagct gaggagtggt gcgtcggtga cagaacccgt cgcggaagag 1380 cgagggttaa tgagccagcc actgatggag acctgccaca gcgtgggggc agcctacctg 1440 gagagcctgc cgctgcagga tgccagcccg gccgggggcc cctcgtcccc cagggacctt 1500 cctgagcccc gggtgtccac ggagcacacc aataacaaga ttgagaaaat ctacatcatg 1560 aaggctgaca ccgtgatcgt ggggaccgtg aaggctgagc tgccggaggg ccggggcctg 1620 gcggggccag cagagcccga gttggaggag gagctggagg cggaccatac cccccactac 1680 cccgagcagg agacagaacc gcctctgggc agctgcagcg atgtcatgct ctcagtggaa 1740 gaggaaggga aagaagaccc cttgcccaca gctgcctctg gaaagtga 1788 <210> 51 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 51 Pro Val Leu Phe Trp Val Ile Leu Val Leu Val Val Val Val Gly Ser 1 5 10 15 Ser Ala Phe Leu Leu 20

Claims

(a) B-세포 성숙 항원(B-cell maturation antigen: BCMA)으로부터의 세포외 도메인;
(b) 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1(programmed cell death 1 ligand 1: PDL1)로부터의 힌지 영역;
(c) 막횡단 도메인; 및
(d) 세포내 영역
을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
제1항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 19와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제2항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 19를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제3항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 19로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 힌지 영역이 서열번호 23을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제5항에 있어서, 상기 힌지 영역이 서열번호 23으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 T 세포 수용체의 알파 또는 베타 쇄이거나 CD28, CD3ε, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134, CD137 또는 CD154로부터의 막횡단 도메인인, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 CD8α로부터의 막횡단 도메인인, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 26과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제9항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 26을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제10항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 26으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 PDL1로부터의 막횡단 도메인인, 키메라 폴리펩타이드.
제12항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 25와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제13항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 25를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제14항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 25로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열 RLR(서열번호 29)을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제16항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열 RLR(서열번호 29)로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 31을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제18항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 31로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열 번호 32를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제20항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 32로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 40과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제22항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 40을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제23항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 40으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 최대 25개의 아미노산을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 최대 20개의 아미노산을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 최대 10개의 아미노산을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 최대 6개의 아미노산을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 최대 3개의 아미노산을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 100개 이하의 아미노산의 길이인, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 신호전달 도메인을 포함하지 않는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 BCMA로부터의 세포내 영역을 포함하지 않는, 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 1과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제33항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 1과 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제34항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 1을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 1과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 1을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 1로 이루어진 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 38과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제39항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 38과 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제40항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 38을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 38과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 38을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 38로 이루어진 키메라 폴리펩타이드.
제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자.
제45항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 2와 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 핵산 분자.
제46항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 2를 포함하는, 핵산 분자.
제45항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 39와 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 핵산 분자.
제48항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 39를 포함하는, 핵산 분자.
제45항 내지 제49항 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제45항 내지 제49항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제50항의 벡터를 세포 내로 도입하는 것을 포함하는, 조작된 세포를 생성하는 방법.
제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제45항 내지 제49항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제50항의 벡터를 포함하는 조작된 세포.
제52항에 있어서, 상기 조작된 세포가 T 세포인, 조작된 세포.
제53항에 있어서, 상기 T 세포가 CD4⁺ T 세포, CD8⁺ T 세포, iNKT 세포, NKT 세포, γδ T 세포 또는 조절 T 세포인, 조작된 세포.
제52항에 있어서, 상기 조작된 세포가 자연 살해 세포인, 조작된 세포.
제52항에 있어서, 상기 조작된 세포가 유도 만능 줄기 세포(induced pluripotent stem cell: iPSC)인, 조작된 세포.
제52항에 있어서, 상기 조작된 세포가 iPSC-유래 세포인, 조작된 세포.
제52항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor: CAR)를 추가로 포함하는 조작된 세포.
제58항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 CAR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제52항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포 수용체(TCR)를 추가로 포함하는 조작된 세포.
제60항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 상기 TCR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제52항 내지 제61항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 포함하는 조작된 세포 집단.
제52항 내지 제61항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 방법이 상기 조작된 세포를 BCMA-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
제63항에 있어서, 상기 BCMA-결합 단백질이 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제63항 또는 제64항에 있어서, 상기 BCMA-결합 단백질을 사용하여 세포 집단으로부터 세포를 분리하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제63항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 상기 세포를 영상화제로 검출하는 것을 추가로 포함하며, 상기 BCMA-결합 단백질이 상기 영상화제에 연결되는, 방법.
제63항 또는 제64항에 있어서, 상기 BCMA-결합 단백질이 세포독성제에 연결되는, 방법.
제67항에 있어서, 상기 세포독성제에 연결된 BCMA-결합 단백질이 벨란타맙 마포도틴인, 방법.
제63항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 상기 BCMA-결합 단백질의 접촉이 시험관내에서 수행되는, 방법.
제63항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 상기 BCMA-결합 단백질의 접촉이 생체외에서 수행되는, 방법.
제63항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 상기 BCMA-결합 단백질의 접촉이 생체내에서 수행되는, 방법.
(a) 조직형 플라스미노겐 활성화제(tissue-type plasminogen activator: tPA) 신호 펩타이드;
(b) BCMA로부터의 세포외 도메인;
(c) 힌지 영역;
(d) 막횡단 도메인; 및
(e) 세포내 영역
을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
제72항에 있어서, 상기 tPA 신호 펩타이드가 서열번호 34와 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제73항에 있어서, 상기 tPA 신호 펩타이드가 서열번호 34를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제74항에 있어서, 상기 tPA 신호 펩타이드가 서열번호 34로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 19와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제76항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 19를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제77항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 19로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 힌지 영역이 CD8α 힌지, PDL1 힌지, IgG4 힌지, IgG1 힌지, 또는 CD34 힌지를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제79항에 있어서, 상기 힌지 영역이 PDL1로부터의 힌지 영역인, 키메라 폴리펩타이드.
제80항에 있어서, 상기 힌지 영역이 서열번호 23을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제81항에 있어서, 상기 힌지 영역이 서열번호 23으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제79항에 있어서, 상기 힌지 영역이 CD8α로부터의 힌지 영역인, 키메라 폴리펩타이드.
제83항에 있어서, 상기 힌지 영역이 서열번호 24를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제84항에 있어서, 상기 힌지 영역이 서열번호 24로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 T 세포 수용체의 알파 또는 베타 쇄이거나 CD28, CD3ε, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134, CD137 또는 CD154로부터의 막횡단 도메인인, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 CD8α로부터의 막횡단 도메인인, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 26과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제88항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 26을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제89항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 26으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 CD8α로부터의 세포내 영역의 일부인, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 최대 10개의 아미노산을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 최대 6개의 아미노산을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 30을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제94항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 30으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가150개 이하의 아미노산의 길이인, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 신호전달 도메인을 포함하지 않는, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 BCMA로부터의 세포내 영역을 포함하지 않는, 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 3과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제99항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 3을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 3과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 3을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 3으로 이루어지는 키메라 폴리펩타이드.
제72항 내지 제103항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자.
제104항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 4와 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 핵산 분자.
제105항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 4를 포함하는, 핵산 분자.
제104항 내지 제106항 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
제72항 내지 제103항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제104항 내지 제106항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제107항의 벡터를 세포 내로 도입하는 것을 포함하는, 조작된 세포를 생성하는 방법.
제72항 내지 제103항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제104항 내지 제106항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제107항의 벡터를 포함하는 조작된 세포.
제109항에 있어서, 상기 조작된 세포가 T 세포인, 조작된 세포.
제110항에 있어서, 상기 T 세포가 CD4⁺ T 세포, CD8⁺ T 세포, iNKT 세포, NKT 세포, γδ T 세포 또는 조절 T 세포인, 조작된 세포.
제109항에 있어서, 상기 조작된 세포가 자연 살해 세포인, 조작된 세포.
제109항에 있어서, 상기 조작된 세포가 iPSC인, 조작된 세포.
제109항에 있어서, 상기 세포가 iPSC-유래 세포인, 조작된 세포.
제109항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, CAR을 추가로 포함하는 조작된 세포.
제115항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 CAR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제109항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, TCR을 추가로 포함하는 조작된 세포.
제117항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 TCR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제109항 내지 제118항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 방법이 상기 조작된 세포를 BCMA-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
제119항에 있어서, 상기 BCMA-결합 단백질이 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제119항 또는 제120항에 있어서, 상기 BCMA-결합 단백질을 사용하여 세포 집단으로부터 세포를 분리하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제119항 또는 제120항에 있어서, 상기 방법이 상기 세포를 영상화제로 검출하는 것을 추가로 포함하며, 상기 BCMA-결합 단백질이 상기 영상화제에 연결되는, 방법.
제119항에 있어서, 상기 BCMA-결합 단백질이 세포독성제에 연결되는, 방법.
제123항에 있어서, 상기 세포독성제에 연결된 BCMA-결합 단백질이 벨란타맙 마포도틴인, 방법.
제119항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 상기 BCMA-결합 단백질의 접촉이 시험관내에서 수행되는, 방법.
제119항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 상기 BCMA-결합 단백질의 접촉이 생체외에서 수행되는, 방법.
제119항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 상기 BCMA-결합 단백질의 접촉이 생체내에서 수행되는, 방법.
(a) CD30으로부터의 세포외 도메인;
(b) CD30으로부터의 막횡단 도메인; 및
(c) BCMA로부터의 세포내 영역
을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
제128항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 20과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제129항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 20을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제130항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 20으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제128항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 27과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제132항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 27을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제132항 또는 제133항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 27로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제128항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 33과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제135항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 33을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제135항 또는 제136항에 있어서, 상기 세포내 영역이 서열번호 33으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제128항 내지 제137항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 신호전달 도메인을 포함하지 않는, 키메라 폴리펩타이드.
제128항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 CD30으로부터의 세포내 영역을 포함하지 않는, 키메라 폴리펩타이드.
제128항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 9와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제128항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 9와 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제128항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 9를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 9와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 9를 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 9로 이루어진 키메라 폴리펩타이드.
제128항 내지 제145항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자.
제146항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 10과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 핵산 분자.
제146항 또는 제147항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 10을 포함하는, 핵산 분자.
제146항 내지 제148항 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
제128항 내지 제145항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제146항 내지 제148항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제149항의 벡터를 세포 내로 도입하는 것을 포함하는, 조작된 세포를 생성하는 방법.
제128항 내지 제145항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제146항 내지 제148항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제149항의 벡터를 포함하는 조작된 세포.
제151항에 있어서, 상기 조작된 세포가 T 세포인, 조작된 세포.
제152항에 있어서, 상기 T 세포가 CD4⁺ T 세포, CD8⁺ T 세포, iNKT 세포, NKT 세포, γδ T 세포, 또는 조절 T 세포인, 조작된 세포.
제151항에 있어서, 상기 조작된 세포가 자연 살해 세포인, 조작된 세포.
제151항에 있어서, 상기 조작된 세포가 iPSC인, 조작된 세포.
제151항에 있어서, 상기 조작된 세포가 iPSC-유래 세포인, 조작된 세포.
제151항 내지 제156항 중 어느 한 항에 있어서, CAR을 추가로 포함하는 조작된 세포.
제157항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 CAR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제151항 내지 제156항 중 어느 한 항에 있어서, TCR을 추가로 포함하는 조작된 세포.
제159항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 TCR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제151항 내지 제160항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 포함하는 조작된 세포 집단.
제151항 내지 제160항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 방법이 상기 조작된 세포를 CD30-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
제162항에 있어서, 상기 CD30-결합 단백질이 항-CD30 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제162항 또는 제163항에 있어서, 상기 CD30-결합 단백질을 사용하여 세포 집단으로부터 세포를 분리하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제162항 또는 제163항에 있어서, 상기 세포를 영상화제로 검출하는 것을 추가로 포함하며, 상기 CD30-결합 단백질이 상기 영상화제에 연결되는, 방법.
제162항 또는 제163항에 있어서, 상기 CD30-결합 단백질이 세포독성제에 연결되는, 방법.
제162항 내지 제166항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 상기 CD30-결합 단백질의 접촉이 시험관내에서 수행되는, 방법.
제162항 내지 제166항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 상기 CD30-결합 단백질의 접촉이 생체외에서 수행되는, 방법.
제162항 내지 제166항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 CD30-결합 단백질의 접촉이 생체내에서 수행되는, 방법.
(a) Her2 신호 펩타이드가 아닌 신호 펩타이드;
(b) Her2로부터의 세포외 도메인; 및
(c) Her2로부터의 막횡단 도메인
을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
제170항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 세포내 영역을 포함하지 않는, 키메라 폴리펩타이드.
제170항 또는 제171항에 있어서, 상기 신호 펩타이드가 CD8α로부터의 신호 펩타이드인, 키메라 폴리펩타이드.
제172항에 있어서, 상기 신호 펩타이드가 서열번호 35와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제173항에 있어서, 상기 신호 펩타이드가 서열번호 35를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제174항에 있어서, 상기 신호 펩타이드가 서열번호 35로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제170항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 21과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제176항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 21을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제177항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 서열번호 21로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제170항 내지 제178항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열 번호 28과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제179항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 28을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제180항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 28로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제170항 내지 제181항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 11과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제170항 내지 제182항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 11과 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제170항 내지 제183항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 11을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 11과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 11을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 11로 이루어진 키메라 폴리펩타이드.
제170항 내지 제187항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자.
제188항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 12와 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 핵산 분자.
제189항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 12를 포함하는, 핵산 분자.
제188항 내지 제190항 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
제170항 내지 제187항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제188항 내지 제190항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제191항의 벡터를 세포 내로 도입하는 것을 포함하는, 조작된 세포를 생성하는 방법.
제170항 내지 제187항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제188항 내지 제190항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제191항의 벡터를 포함하는 조작된 세포.
제193항에 있어서, 상기 조작된 세포가 T 세포인, 조작된 세포.
제194항에 있어서, 상기 T 세포가 CD4⁺ T 세포, CD8⁺ T 세포, iNKT 세포, NKT 세포, γδ T 세포 또는 조절 T 세포인, 조작된 세포.
제193항에 있어서, 상기 조작된 세포가 자연 살해 세포인, 조작된 세포.
제193항에 있어서, 상기 조작된 세포가 iPSC인, 조작된 세포.
제193항에 있어서, 상기 조작된 세포가 iPSC-유래 세포인, 조작된 세포.
제193항 내지 제198항 중 어느 한 항에 있어서, CAR을 추가로 포함하는 조작된 세포.
제199항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 상기 CAR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제193항 내지 제198항 중 어느 한 항에 있어서, TCR을 추가로 포함하는 조작된 세포.
제201항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 상기 TCR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제193항 내지 제202항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 포함하는 조작된 세포 집단.
제193항 내지 제202항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 방법이 상기 조작된 세포를 Her2-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
제204항에 있어서, 상기 Her2-결합 단백질이 항-Her2 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제204항 또는 제205항에 있어서, 상기 Her2-결합 단백질을 사용하여 세포 집단으로부터 세포를 분리하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제204항 또는 제205항에 있어서, 상기 방법이 상기 세포를 영상화제로 검출하는 것을 추가로 포함하며, 상기 Her2-결합 단백질이 상기 영상화제에 연결되는, 방법.
제204항 또는 제205항에 있어서, 상기 Her2-결합 단백질이 세포독성제에 연결되는, 방법.
제208항에 있어서, 상기 세포독성제에 연결된 Her2-결합 단백질이 트라스투주맙 엠탄신인, 방법.
제204항 내지 제209항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 Her2-결합 단백질의 접촉이 시험관내에서 수행되는, 방법.
제204항 내지 제209항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 Her2-결합 단백질의 접촉이 생체외에서 수행되는, 방법.
제204항 내지 제209항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 Her2-결합 단백질의 접촉이 생체내에서 수행되는, 방법.
Trop2 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함하는 조작된 면역 세포.
제213항에 있어서, 상기 Trop2 폴리펩타이드가 서열번호 15를 포함하는, 조작된 면역 세포.
제213항 또는 제214항에 있어서, 상기 핵산이 서열번호 16과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 조작된 면역 세포.
제215항에 있어서, 상기 핵산이 서열번호 16을 포함하는, 조작된 면역 세포.
제213항 내지 제216항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 면역 세포가 T 세포인, 조작된 면역 세포.
제217항에 있어서, 상기 T 세포가 CD4⁺ T 세포, CD8⁺ T 세포, iNKT 세포, NKT 세포, γδ T 세포 또는 조절 T 세포인, 조작된 면역 세포.
제213항 내지 제216항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 면역 세포가 자연 살해 세포인, 조작된 면역 세포.
제213항 내지 제219항 중 어느 한 항에 있어서, CAR을 추가로 포함하는 조작된 면역 세포.
제220항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 상기 CAR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 면역 세포.
제213항 내지 제216항 중 어느 한 항에 있어서, TCR을 추가로 포함하는 조작된 면역 세포.
제222항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 TCR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 면역 세포.
제213항 내지 제223항 중 어느 한 항의 조작된 면역 세포를 포함하는 조작된 세포 집단.
제213항 내지 제223항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 방법이 상기 조작된 세포를 Trop2-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
제225항에 있어서, 상기 Trop2-결합 단백질이 항-Trop2 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제225항 또는 제226항에 있어서, 상기 Trop2-결합 단백질을 사용하여 세포 집단으로부터 세포를 분리하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제225항 또는 제226항에 있어서, 상기 방법이 상기 세포를 영상화제로 검출하는 것을 추가로 포함하며, 상기 Trop2-결합 단백질이 상기 영상화제에 연결되는, 방법.
제225항 또는 제226항에 있어서, 상기 Trop2-결합 단백질이 세포독성제에 연결되는, 방법.
제229항에 있어서, 상기 세포독성제에 연결된 Trop2-결합 단백질이 사시투주맙 고비테칸인, 방법.
제225항 내지 제230항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 Trop2-결합 단백질의 접촉이 시험관내에서 수행되는, 방법.
제225항 내지 제230항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 Trop2-결합 단백질의 접촉이 생체외에서 수행되는, 방법.
제225항 내지 제230항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 Trop2-결합 단백질의 접촉이 생체내에서 수행되는, 방법.
(a) 신호 펩타이드;
(b) (i) EGFR 도메인 III 및 (ii) 100개 미만의 아미노산의 길이를 갖는 EGFR 도메인 IV의 일부를 포함하는 세포외 영역;
(c) 힌지 영역; 및
(d) 막횡단 도메인
을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
제234항에 있어서, 상기 EGFR 도메인 IV의 일부분이 50개 미만의 아미노산 길이를 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
제235항에 있어서, 상기 EGFR 도메인 IV의 일부분이 33개 아미노산의 길이를 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제236항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신호 펩타이드가 GM-CSFRα로부터의 신호 펩타이드인, 키메라 폴리펩타이드.
제237항에 있어서, 상기 신호 펩타이드가 서열번호 36과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제238항에 있어서, 상기 신호 펩타이드가 서열번호 36을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제239항에 있어서, 상기 신호 펩타이드가 서열번호 36으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제240항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포외 영역이 서열번호 22와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제241항에 있어서, 상기 세포외 영역이 서열번호 22를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제242항에 있어서, 상기 세포외 영역이 서열번호 22로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제243항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 힌지 영역이 CD8로부터의 힌지 영역인, 키메라 폴리펩타이드.
제244항에 있어서, 상기 힌지 영역이 서열번호 37과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제245항에 있어서, 상기 힌지 영역이 서열번호 37을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제246항에 있어서, 상기 힌지 영역이 서열번호 37로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제247항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열 번호 26과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제248항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 26을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제249항에 있어서, 상기 막횡단 도메인이 서열번호 26으로 이루어지는, 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제250항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 신호전달 도메인을 포함하지 않는, 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제251항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 EGFR로부터의 세포내 영역을 포함하지 않는, 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제252항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 15와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제253항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 15와 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제254항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 서열번호 15를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 15와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 15를 포함하는 키메라 폴리펩타이드.
서열번호 15로 이루어지는 키메라 폴리펩타이드.
제234항 내지 제258항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자.
제259항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 16과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 핵산 분자.
제260항에 있어서, 상기 핵산 분자가 서열번호 16을 포함하는, 핵산 분자.
제259항 내지 제261항 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
제234항 내지 제258항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제259항 내지 제261항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제262항의 벡터를 세포 내로 도입하는 것을 포함하는, 조작된 세포를 생성하는 방법.
제234항 내지 제258항 중 어느 한 항의 키메라 폴리펩타이드, 제259항 내지 제261항 중 어느 한 항의 핵산 분자, 또는 제262항의 벡터를 포함하는 조작된 세포.
제264항에 있어서, 상기 조작된 세포가 T 세포인, 조작된 세포.
제265항에 있어서, 상기 T 세포가 CD4⁺ T 세포, CD8⁺ T 세포, iNKT 세포, NKT 세포, γδ T 세포, 또는 조절 T 세포인, 조작된 세포.
제264항에 있어서, 상기 조작된 세포가 자연 살해 세포인, 조작된 세포.
제264항에 있어서, 상기 조작된 세포가 iPSC인, 조작된 세포.
제264항에 있어서, 상기 조작된 세포가 iPSC-유래 세포인, 조작된 세포.
제264항 내지 제269항 중 어느 한 항에 있어서, CAR을 추가로 포함하는 조작된 세포.
제270항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 상기 CAR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제264항 내지 제271항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포 수용체(TCR)를 추가로 포함하는 조작된 세포.
제264항에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드가 상기 TCR에 작동가능하게 연결되는, 조작된 세포.
제264항 내지 제273항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 포함하는 조작된 세포 집단.
제264항 내지 제273항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 방법이 상기 조작된 세포를 EGFR-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
제275항에 있어서, 상기 EGFR-결합 단백질이 항-EGFR 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제275항 또는 제276항에 있어서, 상기 EGFR-결합 단백질을 사용하여 세포 집단으로부터 세포를 분리하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제275항 또는 제276항에 있어서, 상기 방법이 상기 세포를 영상화제로 검출하는 것을 추가로 포함하며, 상기 EGFR-결합 단백질이 상기 영상화제에 연결되는, 방법.
제275항 또는 제276항에 있어서, 상기 EGFR-결합 단백질이 세포독성제에 연결되는, 방법.
제275항 내지 제279항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 EGFR-결합 단백질의 접촉이 시험관내에서 수행되는, 방법.
제275항 내지 제279항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 EGFR-결합 단백질의 접촉이 생체외에서 수행되는, 방법.
제275항 내지 제279항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포와 EGFR-결합 단백질의 접촉이 생체내에서 수행되는, 방법.
세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 세포가
(a) B-세포 성숙 항원(BCMA)으로부터의 세포외 도메인;
(b) 프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1(PDL1)로부터의 힌지 영역;
(c) 막횡단 도메인; 및
(d) 세포내 영역
을 포함하고,
상기 방법이 상기 세포를 BCMA-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 세포가
(a) 조직형 플라스미노겐 활성화제(tPA) 신호 펩타이드;
(b) BCMA로부터의 세포외 도메인;
(c) 힌지 영역;
(d) 막횡단 도메인; 및
(e) 세포내 영역
을 포함하고,
상기 방법이 상기 세포를 BCMA-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 세포가
(a) CD30으로부터의 세포외 도메인;
(b) CD30으로부터의 막횡단 도메인;
(c) BCMA로부터의 세포내 영역
을 포함하고,
상기 방법이 상기 세포를 CD30-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 세포가
(a) Her2 신호 펩타이드가 아닌 신호 펩타이드;
(b) Her2로부터의 세포외 도메인;
(c) Her2로부터의 막횡단 도메인
을 포함하고,
상기 방법이 상기 세포를 Her2-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
조작된 면역 세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 조작된 면역 세포가 Trop2 폴리펩타이드를 포함하고, 상기 방법이 상기 세포를 Trop2-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
세포를 검출, 단리, 고갈 또는 정제하는 방법으로서, 상기 세포가
(a) 신호 펩타이드;
(b) (i) EGFR 도메인 III 및 (ii) 100개 미만의 아미노산의 길이를 갖는 EGFR 도메인 IV의 일부분을 포함하는 세포외 영역;
(c) 힌지 영역; 및
(d) 막횡단 도메인
을 포함하고,
상기 방법이 상기 세포를 EGFR-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
CD30 융합 단백질을 암호화하는 서열을 포함하는 발현 작제물로서, 상기 융합 단백질이 세포내이입 또는 내재화 활성을 포함하는 세포내 도메인에 융합된 CD30 세포외 도메인의 적어도 일부분을 포함하는, 발현 작제물.
제289항에 있어서, 상기 세포내 도메인이 B-세포 성숙 항원(BCMA), trop-2, CD317, CD3감마, CD4, CD79b, 저밀도 지단백질 수용체, CD19, CD22, CD25, CD33, 또는 이들의 조합으로부터의 것인, 발현 작제물.
제289항 또는 제290항에 있어서, 상기 CD30 융합 단백질이 CD30 막횡단 도메인을 포함하는, 발현 작제물.
제289항 내지 제291항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질이 서열번호 47을 포함하는, 발현 작제물.
제289항 내지 제292항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질을 암호화하는 서열이 서열번호 48을 포함하는, 발현 작제물.
제289항 내지 제293항 중 어느 한 항의 발현 작제물을 포함하는 단리된 세포.
제294항에 있어서, 상기 세포가 면역 세포인, 세포.
제294항 또는 제295항에 있어서, 상기 세포가 αβ T 세포, γδ T 세포, NK 세포, NKT 세포, 단핵구, 대식세포, B 세포, 중간엽 줄기 세포(MSC) 세포, 조혈 줄기 세포(HSC), 조혈 세포, iPSC 또는 이들의 혼합물인, 세포.
제294항 내지 제296항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 CD30 융합 단백질 외의 하나 이상의 이종 단백질을 발현하는, 세포.
제297항에 있어서, 상기 이종 단백질이 치료 단백질, 사이토카인, 사이토카인과 사이토카인 수용체의 융합체, 안전 스위치, 또는 이들의 혼합물인, 세포.
제298항에 있어서, 상기 치료 단백질이 조작된 항원 수용체 또는 항체인, 세포.
제299항에 있어서, 상기 조작된 항원 수용체가 암 항원을 표적화하는, 세포.
제299항 또는 제300항에 있어서, 상기 조작된 항원 수용체가 키메라 항원 수용체, T 세포 수용체, 또는 B-세포 수용체인, 세포.
제8항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 이종 BCL6 및 BCL2L1 유전자를 발현하는, 세포.
제294항 내지 제302항 중 어느 한 항의 세포 중 어느 하나의 단리된 집단으로서, 상기 집단이 적합한 배지에 포함되어 있는, 집단.
제303항에 있어서, 보관소에 수용된 집단.
제303항 또는 제304항에 있어서, 상기 집단이 냉동보존되는, 집단.
(1) 이종 CD30 유전자; (2) CD30 세포외 도메인의 적어도 일부분을 포함하는 CD30 융합 단백질; 또는 (3) 이종 BCL6과 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자의 조합으로 형질도입 또는 형질감염되는 CD30-양성 세포를 식별하는 방법으로서,
세포를 (1) 이종 CD30 유전자; (2) CD30 세포외 도메인의 적어도 일부분을 포함하는 CD30 융합 단백질; 또는 (3) 이종 BCL6과 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자의 조합으로 형질도입 또는 형질감염시키는 단계;
상기 세포를 CD30에 결합하는 제제의 유효량에 노출시키는 단계; 및
상기 세포 표면 상의 CD30에 대한 제제의 결합을 직접적으로 또는 간접적으로 검출하는 단계
를 포함하는 방법.
제306항에 있어서, 상기 노출 및 검출 단계가 상기 세포의 제조 동안 및/또는 후에 일어나는, 방법.
제306항 또는 제307항에 있어서, 상기 세포를 제조하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제306항 내지 제308항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 세포를 상기 CD30 융합 단백질로 형질감염 또는 형질도입시키는 단계;
상기 면역 세포를 CD30에 결합하는 항체 또는 항체-약물 접합체의 유효량에 노출시키는 단계; 및
상기 세포 표면 상의 CD30에 대한 상기 항체 또는 항체-약물 접합체의 결합을 직접적으로 또는 간접적으로 검출하는 단계
로서 추가로 정의되는 방법.
제306항 내지 제309항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 세포를 상기 이종 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자로 형질감염 또는 형질도입시키는 단계;
상기 면역 세포를 CD30에 결합하는 항체 또는 항체-약물 접합체의 유효량에 노출시키는 단계; 및
상기 세포 표면 상의 CD30에 대한 상기 항체 또는 항체-약물 접합체의 결합을 직접적으로 또는 간접적으로 검출하는 단계
로서 추가 추가되는 방법.
제306항 내지 제310항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 시험관내에서 수행되는, 방법.
제306항 내지 제310항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법의 적어도 일부분이 생체내에서 일어나는, 방법.
제306항 내지 제312항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 CD30 융합 단백질 외의 하나 이상의 이종 단백질을 발현하는, 방법.
제313항에 있어서, 상기 이종 단백질이 치료 단백질, 사이토카인, 사이토카인과 사이토카인 수용체의 융합체, 안전 스위치, 또는 이들의 혼합물인, 방법.
제314항에 있어서, 상기 치료 단백질이 조작된 항원 수용체인, 방법.
제306항 내지 제315항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포를 상기 이종 CD30 또는 CD30 융합 단백질 외의 이종 단백질; 또는 상기 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자로 형질감염 또는 형질전환시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제316항에 있어서, 상기 CD30 융합 단백질, 및 CD30 융합 단백질 외의 이종 단백질 또는 상기 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자가 동일한 벡터로부터 발현되는, 방법.
제316항에 있어서, 상기 CD30 융합 단백질, 및 CD30 융합 단백질 외의 상기 이종 단백질 또는 상기 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자가 상이한 벡터로부터 발현되는, 방법.
(a) 면역 세포를 (1) 이종 CD30 단백질; (2) CD30 융합 단백질; 또는 (3) 이종 BCL6과 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자의 조합으로 형질도입 또는 형질감염시키는 단계로서, 상기 면역 세포가 각각 (1) CD30; (2) CD30 융합 단백질; 또는 (3) CD30을 발현하는, 단계; 및
(b) 상기 면역 세포를 하나 이상의 치료 단백질로 형질도입 또는 형질감염시키는 단계
를 포함하는, 입양 세포 요법을 위한 면역 세포의 제조 방법.
제319항에 있어서, 상기 단계 (a)가 단계 (b) 전, 동시에 또는 후에 일어나는, 방법.
제319항에 있어서, 상기 단계 (a)의 형질전환 또는 형질감염이 단계 (b)의 형질전환 또는 형질감염과 동일한, 방법.
제319항 내지 제321항 중 어느 한 항에 있어서, (1), (2) 또는 (3)이 상기 치료 단백질과 동일한 벡터 상에 존재하는, 방법.
제319항 내지 제321항 중 어느 한 항에 있어서, (1), (2) 또는 (3)이 상기 치료 단백질과 상이한 벡터 상에 존재하는, 방법.
제50항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (a) 후에, 상기 방법으로부터의 면역 세포가 면역 세포의 표면 상에 발현된 CD30의 존재에 대해 분석되는, 방법.
제324항에 있어서, 상기 분석이 유세포분석, 폴리머라제 연쇄 반응, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
제319항 내지 제325항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법으로부터 생성된 면역 세포를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제326항에 있어서, 상기 면역 세포가 상기 개체에서 모니터링되는, 방법.
제326항에 있어서, 상기 면역 세포가 CD30에 결합하는 제제를 사용하여 상기 개체에서 모니터링되는, 방법.
제328항에 있어서, 상기 제제가 항체 또는 항체-약물 접합체인, 방법.
제319항 내지 제329항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체가 상기 면역 세포로 인한 하나 이상의 유해한 효과를 나타내고, 상기 개체에게 CD30에 결합하는 제제의 유효량이 투여되는, 방법.
제330항에 있어서, 상기 개체가 상기 면역 세포로 인한 독성을 나타내고, 상기 개체에게 CD30에 결합하는 제제의 유효량이 투여되는, 방법.
제330항에 있어서, 상기 개체가 상기 면역 세포로 인한 이식편대숙주 질환(GVHD)을 나타내고, 상기 개체에게 CD30에 결합하는 제제의 유효량이 투여되는, 방법.
제329항 내지 제332항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체가 더 이상 면역 세포가 필요하지 않고, 상기 개체에게 CD30에 결합하는 제제의 유효량이 투여되는, 방법.
개체에서 세포 요법으로 인한 하나 이상의 유해한 효과를 감소 또는 예방하는 방법으로서, 상기 세포 요법의 세포의 표면 상에 발현된 CD30을 표적화하는 단계를 포함하는, 방법.
제334항에 있어서, 상기 세포 상에 발현된 CD30에 결합하는 하나 이상의 제제의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계로서 추가로 정의되는 방법.
제335항에 있어서, 상기 제제가 항체 또는 항체-약물 접합체인, 방법.
제336항에 있어서, 상기 항체가 모노클로날 항체인, 방법.
제334항 내지 제337항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유해한 효과가 GVHD, 사이토카인 방출 증후군, 또는 면역 효과기 세포-연관 신경독성 증후군을 포함하는, 방법.
제334항 내지 제338항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD30이 전체 CD30 단백질인, 방법.
제334항 내지 제338항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD30이 세포외 도메인의 적어도 일부분을 포함하는 전체 CD30 단백질의 단편인, 방법.
제334항 내지 제339항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD30이 상기 면역 세포 상에서 천연적으로 발현되거나 상기 면역 세포 상에서 천연적으로 이종 발현되는, 방법.
제334항 내지 제339항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD30이 이종 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자를 발현하는 세포의 결과로서 세포 상에서 발현되는, 방법.
제334항 내지 제340항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD30이 CD30 융합 단백질인, 방법.
제343항에 있어서, 상기 융합 단백질이 세포내이입 또는 내재화 활성을 포함하는 세포내 도메인에 융합된 CD30 세포외 도메인의 적어도 일부분을 포함하는, 방법.
제344항에 있어서, 상기 세포내 도메인이 B-세포 성숙 항원(BCMA), trop-2, CD317, CD3감마, CD4, CD79b, 또는 이들의 조합으로부터의 것인, 방법.
제344항 또는 제345항에 있어서, 상기 CD30 융합 단백질이 CD30 막횡단 도메인을 포함하는, 방법.
제334항 내지 제346항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 단계 전에, 상기 개체의 세포가 생체내에서 모니터링되는, 방법.
제347항에 있어서, 상기 세포가 CD30을 표적화하는 하나 이상의 제제를 사용하여 모니터링되는, 방법.
제348항에 있어서, 상기 CD30을 표적화하는 제제가 상기 치료 세포를 억제하지 않을 만큼 충분히 낮은 양으로 사용되는 항체인, 방법.
제334항 내지 제349항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 요법이 개체에 대해 자가 또는 동종이계인, 방법.
이종 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자의 조합으로 형질도입 또는 형질감염되는 세포를 CD30에 결합하는 제제의 유효량에 노출시키는 단계를 포함하는, 세포의 활성을 억제하는 방법.
제351항에 있어서, 상기 활성의 억제가 세포의 세포자멸사(apoptosis)를 유도하는 것으로서 추가로 정의되는, 방법.
제351항 또는 제352항에 있어서, 상기 방법이 상기 세포 상에 발현된 CD30에 대한 제제의 결합을 검출하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제351항 내지 제353항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 세포를 이종 BCL6 및 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자로 형질도입 또는 형질감염시키는 것을 추가로 포함하는, 방법.
제351항 내지 제354항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 T 세포인, 방법.
제351항 내지 제355항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 Bcl2 패밀리 유전자가 BCL2L1인 방법.
CD30 세포외 도메인의 적어도 일부분을 포함하는 CD30 융합 단백질로 형질도입 또는 형질감염되는 세포를 CD30에 결합하는 제제의 유효량에 노출시키는 단계를 포함하는, 세포의 활성을 억제하는 방법.
제357항에 있어서, 상기 활성의 억제가 상기 세포의 세포자멸사를 유도하는 것으로서 추가로 정의되는, 방법.