KR20230134888A - 엑소폴리사카라이드 생산량 및 알코올 분해활성 및 항산화 활성이 증진된 돌연변이 균주 락토바실러스 퍼멘텀 jy563 - Google Patents

엑소폴리사카라이드 생산량 및 알코올 분해활성 및 항산화 활성이 증진된 돌연변이 균주 락토바실러스 퍼멘텀 jy563 Download PDF

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Abstract

본 발명은 엑소폴리사카라이드 생산량 및 알코올 분해활성 및 항산화 활성이 증진된 돌연변이 균주 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563에 관한 것으로, 본 발명의 균주는 엑소폴리사카라이드의 생성성이 향상되어 기존 모균주의 낮은 생산량을 해결하여 다양한 산업에 적용이 가능하다.
또한, 알코올 분해활성 및 항산화 활성이 증가하여 프로바이오틱스 제제 및 숙취해소제 등의 건강식품으로 활용할 수 있다. 게다가 유전자 편집 및 산입으로 균주 개량된 것이 아니기 때문에 안정성이 인정되는 장점이 있다.

Description

엑소폴리사카라이드 생산량 및 알코올 분해활성 및 항산화 활성이 증진된 돌연변이 균주 락토바실러스 퍼멘텀 JY563 {Mutant strain Lactobacillus fermentum JY563 with increased exopolysaccharide yield and increased alcohol dehydrogenase activity and increased antioxidant activity}
본 발명은 엑소폴리사카라이드 생산량 및 알코올 분해활성 및 항산화 활성이 증진된 돌연변이 균주 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563에 관한 것이다.
인간의 장내 미생물총은 대변 1g당 1012의 박테리아를 구성하는 약 1500종의 미생물로 구성되며 일부 미생물은 정장 효과가 있음이 알려졌다. 하지만 식습관과 환경조건에 따라 장내 미생물 분포의 다양성이 붕괴되면 유해균의 침입 및 번식, 그에 따른 세균성 질환과 소화불량 등 생체에 악영향을 끼치게 된다. 이러한 균형 붕괴를 예방하기 위해 간편하게 건강유지에 도움이 될 수 있는 미생물제제로 프로바이오틱스의 개념이 등장하였다.
프로바이오틱스란 2001년 WHO에서 살아있는 미생물로서 적정량을 섭취하였을 때, 숙주에게 유익한 영향을 미치는 것으로 정의하고 있다. 프로바이오틱스는 요구르트 및 기타 발효 식품, 건강 보조 식품 및 미용 제품에서 찾을 수 있다. 일부 유산균은 프로바이오틱 특성을 가지는데, 그 중 락토바실리는(Lactobacilli)는 7개의 속 (Enterococcus, Lactococcus, Streptococcus, Lactobacillus, Oenococcus, Leuconostoc, and Pediococcus)으로 구성된 그람양성균으로, 최종 산물로 젖산 뿐 만 아니라 엑소폴리사카라이드 및 박테리오신 등을 생산한다.
그 중 엑소폴리사카라이드는 유산균을 위장관에 더 오래 남을 수 있게 하여 프로바이오틱 박테리아의 집락를 강화한다. 또한, 항종양 효과, 면역자극 활성 및 혈중 콜레스테롤 저하가 있다고 보고되었으며, 유산균에서 생산한 엑소폴리사카라이드는 식품, 바이오 유화제, 바이오 응집제, 중금속 제거 및 약물 전달제를 포함한 광범위한 응용 분야에서 사용될 수 있다. 엑소폴리사카라이드는 프로바이오틱 특성을 가지는 유산균을 이용하여 생산하는 연구가 활발히 진행되고 있으나, 야생형(wild-type) 유산균의 경우 엑소폴리사카라이드(exopolysaccharide, EPS) 생산량이 매우 적어 산업 적용에 제한이 있다.
한편, 엑소폴리사카라이드 생산과 관련된 유전자 삽입 또는 유전자 편집을 사용한다면 생산량을 늘릴 수 있다. 그러나 유전자 편집된 균주의 시장 적용은 통제 및 제품에 대한 승인을 받아야 하기 때문에 진입장벽이 높다. 다만, 유럽연합에서는 유산균에 대한 유전자 편집 방법으로써 유산균의 자연적 변형(conjugation, phage transduction, or natural competence) 또는 무작위적 돌연변이 방법(UV 또는 Ethyl methanesulfonate)을 허용하고 있다.
따라서, 본 발명에서는 에틸 메탄설폰산염 (Ethyl methanesulfonate, EMS)을 이용해 무작위적 돌연변이를 유도함으로써 엑소폴리사카라이드의 생산량이 증진된 돌연변이 균주를 수득하는 것을 목적으로 한다.
한국등록특허 제10-1511976호 (2015.04.08.)에는, 면역증강 활성을 가지는 신규한 락토바실러스 퍼멘텀 HY7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품에 관하여 개시되어 있다. 한국등록특허 제10-2363111호 (2022.02.10.)에는, 항염 및 항산화 활성을 갖는 락토바실러스 퍼멘텀 균주 및 이의 용도에 관하여 개시되어 있다. 한국등록특허 제10-1820961호 (2018.01.16.)에는, 증진된 엑소폴리사카라이드 생산량을 갖는 신규한 류코녹스톡 시트리움 균주에 관하여 개시되어 있다.
본 발명은 엑소폴리사카라이드 생산량, 알코올 분해활성 및 항산화 활성이 증진된 신규한 균주를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P)를 제공한다. 이때, 상기 균주는, 바람직하게는 엑소폴리사카라이드 생산량, 알코올 분해활성 및 항산화 활성 중 선택되는 어느 하나 이상의 기능이 증진된 것일 수 있다.
본 발명은 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P), 이의 배양액 및 이의 사균체 중 선택되는 어느 하나를 유효성분으로 포함하는 항산화용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명은 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P), 이의 배양액 및 이의 사균체 중 선택되는 어느 하나를 유효성분으로 포함하는 숙취해소제를 제공한다.
본 발명의 균주는 엑소폴리사카라이드의 생성성이 향상되어 기존 모균주의 낮은 생산량을 해결하여 다양한 산업에 적용이 가능하다. 또한, 알코올 분해활성 및 항산화 활성이 증가하여 프로바이오틱스 제제 및 숙취해소제 등의 건강식품으로 활용할 수 있다. 게다가 유전자 편집 및 산입으로 균주 개량된 것이 아니기 때문에 안정성이 인정되는 장점이 있다.
도 1은 락토바실러스 퍼멘텀 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 엑소폴리사카라이드(exopolysaccharide, EPS) 생산량을 비교 결과이다.
도 2는 락토바실러스 퍼멘텀 모균주 (좌) 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563 (우) 종이 디스크 확산 분석을 이용한 항균 활성을 비교한 결과이다.
도 3은 락토바실러스 퍼멘텀 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 알코올 디하이드로겐에이즈 (alcohol dehydrogenase) 활성을 비교한 결과이다.
도 4는 락토바실러스 퍼멘텀 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 항산화 활성을 비교한 결과이다.
본 발명에서는 균주의 안전성을 높이기 위하여, 에틸 메탄설폰산염 (Ethyl methanesulfonate, EMS)을 이용해 무작위적 돌연변이를 유도하여, 생산된 여러 균주 중 엑소폴리사카라이드의 생산량이 증진된 돌연변이 균주를 수득하였다.
이 경우, 무작위적 돌연변이로 인해 기존 균주가 가진 유효특징이 저감 혹은 소멸할 수 있는데, 본 발명에서 수득한 균주는 알코올 분해활성 및 항산화 활성 모균주에 비해 더욱 증진된 특성을 보유하는 것을 확인함으로써, 해당 균주를 '락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563'이라 명명하였다. 또한, 본 균주를 한국생명공학연구원에 기탁하여 2022년 02월 09일자로 수탁번호 KCTC18980P를 부여받았다.
따라서, 본 발명은 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P)를 제공한다. 이때, 상기 균주는, 바람직하게는 엑소폴리사카라이드 생산량, 알코올 분해활성 및 항산화 활성 중 선택되는 어느 하나 이상의 기능이 증진된 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 본 발명의 균주가 엑소폴리사카라이드 생산량이 3.25g/L로 모균주보다 107% 증진되었음을 확인하였다. 이는 기존에 낮은 생산량 때문에 화장품 산업, 식품 산업 및 제약산업의 적용에 제한이 있었던 문제점을 해결할 수 있을 것으로 기대된다.
또한, 본 발명의 일 실시예에서 무작위적 돌연변이로 인해 균주 특성이 바뀌었는지 확인하기 위해 여러 분석을 진행한 결과, 본 발명의 균주가 모균주에 비하여 알코올 분해활성 및 항산화 활성이 각각 46%와 69% 더 뛰어났음을 확인하였다.
이에 따라, 본 발명의 균주를 이용함에 따라, 기존 알려진 엑소폴리사카라이드의 효능으로 항종양 효과, 콜레스테롤저하 효과 및 면역기능 향상을 기대할 수 있다.
또한, 본 발명에서 확인된 본 발명 균주의 항균능, 알코올 분해 및 항산화 활성 특성을 부여하기 위하여 건강보조제로서 프로바이오틱스 제품으로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
따라서, 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P), 이의 배양액 및 이의 사균체 중 선택되는 어느 하나를 유효성분으로 포함하는 항산화용 건강기능식품 또는 숙취해소제를 제공한다.
상기 "건강기능식품"이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P), 이의 배양액 및 이의 사균체는 바람직하게 항산화용 건강기능식품 또는 숙취해소제 대비 0.00001~50 중량% 포함되는 것이 좋다. 0.00001 중량% 미만일 경우에는 그 효과가 미비하고, 50 중량%를 초과하는 경우에는 사용량 대비 효과 증가가 미미하여 비경제적이다.
본 발명의 건강기능식품에 있어, 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P), 이의 배양액 및 이의 사균체의 함량은 특별히 제한되지 않으며, 투여 대상의 상태, 구체적인 병증의 종류, 진행 정도 등에 따라 다양하게 변경될 수 있다. 필요한 경우, 식품의 전체 함량으로도 포함될 수 있다.
본 발명의 항산화용 건강기능식품은 일 예로, 면류, 껌류, 유제품류, 아이스크림류, 육류, 곡류, 카페인 음료, 일반음료, 초콜릿, 빵류, 스낵류, 과자류, 사탕, 피자, 젤리, 알코올성 음료, 술, 비타민 복합제 및 그 밖의 건강보조식품류 중 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 항산화용 건강기능식품 또는 숙취해소제는 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid), 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin) 등을 포함할 수 있다. 또한, 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 시스테인, 발린, 라이신, 트립토판 등의 아미노산을 포함할 수 있다. 또한, 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 디히드로초산나트륨 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨루엔(BHT) 등), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 첨가할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예 또는 실험예를 통해 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예 또는 실험예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[실시예 1: 본 발명 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 수득]
본 발명의 균주를 수득하기 위한, 무작위적 돌연변이 유발 실험을 수행하였다. 이를 위하여 실험실에서 자체 보유하고 있는 락토바실러스 퍼멘텀(자연에서 선별하여 자체 동정 수행)을 모균주로 이용하였다.
락토바실러스 퍼멘텀 모균주를 MRS에서 30℃, 200rpm으로 전배양한 1×1010 cells를 1.5㎖ 마이크로 센트리퓨즈 튜브에 옮겼다. 이후, 0.1M의 인산나트륨 버퍼(pH 7.2)를 이용하여 3회 세척을 진행하고, EMS의 최종 농도가 1M이 되도록 첨가한 뒤 30℃, 200rpm으로 인큐베이션하여 균주를 회수하였다. 대조군은 ENS가 첨가되지 않은 균주를 이용하였다.
정해진 시간마다 얻어진 샘플은 2회 세척을 진행한 뒤 연속희석법(Serial dilution)을 통해 희석한 후, MRS 아가 플레이트에 스프레딩하여 3일 동안 배양하였다. 대조군과 돌연변이가 진행된 것의 콜로니를 카운팅하여 사멸율을 확인하고, 그 중 크기가 큰 싱글 콜로니를 마스터 플레이트로 옮겨 확보하였다.
1차 스크리닝은 테스트 튜브를 이용하여 얻어진 모든 균주를 테스트하였다. 5㎖의 MRS 배지에 각각의 돌연변이 균주들을 픽킹(picking)하여 넣고 35℃에서 200rpm으로 48시간 동안 배양한 후, 글루코오스 소비를 다 한 균주들의 배양액을 회수하여 세포를 다운시킨 뒤 상등액을 총 당 정량에 사용하였다. 2차 스크리닝은 1차 서크리닝에서 얻어진 우수한 균주들을 모균주와 함께 250㎖ 플라스크에 워킹ㅂ보볼륨 king volume) 50㎖로 35℃에서 200rpm으로 24시간 동안 배양한 후, 배양액을 회수하여 총 당 정량 분석에 사용하였다.
총 당 정량 분석을 위하여, 상등액을 50배 희석하여 샘플을 제작하였다. 96웰 플레이트에에 웰당 0, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1g/L의 당 농도를 갖는 표준 샘플(standard sample)과 배양액 샘플을 50㎕씩 첨가한 뒤, 그 위에 안드론 시약 (황산 85%, 안드론 0.2%)을 150㎕ 첨가하고 80℃에서 60분 동안 반응시켰다.
이후, microplate reader (Biotek, Winooski, USA)를 이용하여 흡광도(OD630nm)를 측정하였다. 정량은 표준 샘플을 기준으로 커브(curve)를 그려 흡광도 값을 대입하여 실시하였다. 모든 실험은 삼중으로 수행되었으며 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다.
구체적으로, 유산균의 엑소폴리사카라이드의 생산은 주변환경이 척박할수록 늘어나기 때문에 사멸율이 높게 나오는 조건을 목표로 진행하였다. 최적의 돌연변이 유발시간을 찾기 위해 EMS의 농도를 고정하고 처리시간을 다르게 하여 진행하였다. 0.1M 인산나트륨 버퍼 (pH 7.2)로 1×1010 cells를 세척한 후에 EMS의 최종 농도가 1M이 되도록 첨가하고, 30℃, 200rpm에서 75분 동안 인큐베이션하여 돌연변이를 일으켰을 때 사멸율이 99.9990-99.9999%로 확인되었다. 이렇게 얻어진 돌연변이 균주에서 무작위적 돌연변이 유발을 한 번 더 유도하였다. 기존의 모균주에 적용한 무작위적 돌연변이 조건으로는 세포가 모두 사멸한 것으로 확인되었다. 따라서, 조건을 수정하여 진행하였다.
구체적으로, 0.1M 인산나트륨 버퍼 (pH 7.2)로 1×1010 cells를 세척한 후에 EMS의 최종 농도가 1M이 되도록 첨가하고, 30℃, 200rpm에서 60분 동안 인큐베이션하여 돌연변이를 일으켰을 때 사멸율이 99.99990-99.99999%로 확인되었다. 이렇게 얻어진 돌연변이 균주 1000개 모두를 테스트 튜브에서 35℃, 200rpm으로 48시간 동안 배양하였다.
배양이 다 끝나면 배양액 모두를 세포 다운(cell down)하여 샘플을 제작하였다. 제작한 샘플은 HPLC를 통해 잔존당이 있는지 여부를 확인하였고, 당을 다 소비하지 못한 샘플은 총 당 정량에서 제외되었다. 당을 다 소비한 샘플 935개는 모두 총 당 정량을 통해 엑소폴리사카라이드를 정량하였다. 그 중 우수한 돌연변이 균주를 선별하였으며, 이들 균주를 락토바실러스 퍼멘텀 JY563이라 명명하였다. 이 균주들은 250㎖ 플라스크에 배양액 양을 50㎖로 35℃, 200rpm으로 24시간 동안 배양하여 총 당 정량을 진행하였다.
실험 결과, 엑소폴리사카라이드 생산량은 모균주 및 돌연변이 균주 JY563이 각각 1.57±0.02g/L 및 3.25±0.05g/L로 나타나, 돌연변이 균주 JY563이 모균주보다 107% 증진된 엑소폴리사카라이드 생산량을 가지는 것으로 나타났다 (도 1). 도 1은 락토바실러스 퍼멘텀 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 엑소폴리사카라이드(exopolysaccharide, EPS) 생산량을 비교 결과이다.
[실험예 1: 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 항균활성 분석]
모균주와 락토바실러스 퍼멘텀 JY563 배양액의 항균 활성을 확인하기 위하여, 변형된 종이 디스크 확산 분석을 수행했다. 즉, 다양한 병원성 세균 균주(Bacillus cereus, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemolyticus 및 Salmonella typhimurium)를 LB 한천 배지를 사용하여 37℃, 200rpm에서 18시간 동안 사전 배양하고, 모든 균주를 1×106 CFU/㎖로 플레이팅하였다. 모균주와 락토바실러스 퍼멘텀 JY563 배양액을 MRS 배지에서 24시간 동안 배양한 후 4℃, 8000rpm에서 10분 동안 원심분리한 후, 10㎖의 상등액을 동결건조하고 10배 농축하였다. LB 한천 배지의 종이 디스크(직경 6mm)에 30㎕를 분주하여 저해환의 크기를 측정하여 표 1에 나타내었다.
박테리아 균주 저해환 (지름 mm)
모균주 L. fermentum JY563
그람 양성균 B. Cereus 17.35 ± 0.63 16.20 ± 1.13
S. aureus 16.40 ± 0.42 14.80 ± 0.28
그람 음성균 E. coli 14.55 ± 0.49 12.40 ± 0.85
V. parahaemolyticus 15.45 ± 0.35 15.10 ± 1.27
S. typhimurium 12.90 ± 0.42 11.70 ± 0.14
* 종이 디스크 지름 6㎜
실험 결과, 모균주와 락토바실러스 퍼멘텀 JY563은 비슷한 항균 활성을 보인 것으로 확인되었다. 또한, 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 농축 상층액은 그람 음성 박테리아(E. coli, V. parahaemolyticus 및 S. typhimurium)보다 그람 양성 박테리아(B. cereus 및 S. aureus)의 성장을 더 효과적으로 억제하였다 (도 2). 도 2는 락토바실러스 퍼멘텀 모균주 (좌) 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563 (우) 종이 디스크 확산 분석을 이용한 항균 활성을 비교한 결과이다.
[실험예 2: 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 알코올 디하이드로겐에이즈 활성 분석]
알코올 디하이드로겐에이즈 활성은 Alcohol Dehydrogenase Activity Colorimetric Assay Kit (BioVision Inc., CA, USA)을 사용하여 제조업체의 지침에 따라 측정하였다. 모균주와 락토바실러스 퍼멘텀 JY563을 MRS 배지에서 35℃, 200rpm으로 배양하였다. 이후, 6시간 동안 배양한 후 배양액을 원심분리하여 세포를 회수한 다음 10mM 인산나트륨 버퍼 (pH 7.5)에 현탁시켰다.
그 후, 현탁액을 4℃에서 소니게이터(amplication 70%, on 5 sec, off 5 sec, 10 min)를 이용하여 파쇄하고 21,124 x g에서 10분간 원심분리하여 얻은 상등액을 분석에 사용하였다. 상등액에 반응 혼합물을 첨가하여 37℃에서 3분 동안 인큐베이션하고, microplate reader로 3분 간격으로 60분 동안 흡광도(OD450nm)를 측정하였다. 모든 실험은 삼중으로 수행되었으며 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다.
실험 결과, 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 ADH 활성은 각각 1.34±0.00 U/㎎ protein 및 2.07±0.01U/㎎ protein으로, 락토바실러스 퍼멘텀 JY563이 모균주보다 46% 높은 활성을 보인 것으로 확인되었다 (도 3). 도 3은 락토바실러스 퍼멘텀 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 알코올 디하이드로겐에이즈 (alcohol dehydrogenase) 활성을 비교한 결과이다.
[실험예 3: 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 항산화 활성 분석]
각 시료의 항산화 활성 분석은 ORAC(oxygen radical absorbance capacity) assay kit(Cell biolabs, San Diego, CA, US)를 사용하여 제안된 방법에 따라 수행하였다. 소니게이터(amplication 70%, on 5초, off 5초, 10분)를 사용하여 4℃에서 파쇄하고 21,124 x g에서 10분 동안 원심분리하여 얻은 상등액을 분석에 사용하였다.
샘플을 적절한 농도로 희석하고 96-웰 면역 플레이트에 25㎕를 첨가하고 150㎕의 플루오레세인(fluorescein) 용액을 첨가하여 37℃에서 30분 동안 안정화를 수행하였다. 그 후, 80㎎/㎖ 농도의 자유 라디칼 개시제를 25㎕ 첨가하여 반응시켰다. 이후, microplate reader (Thermo Scientific, Waltham, MA, US)를 이용하여 흡광도 OD485nm에서 여기(excitation)한 후, 흡광도 OD535nm에서 방출(emission)하여 37℃의 조건으로 60분 동안 1분마다 형광을 측정하고 환원속도(reduction rate)를 계산하여 항산화 활성을 분석하였다.
데이터 처리를 위해 시료 첨가군과 무첨가군을 이용하여 곡선의 면적(AUC)을 표현한 후, 표준 Trolox(Cell Biolabs, San Diego, CA, US)를 이용하여 얻어진 검량선에 대입하여 측정하였다. 모든 실험은 3중으로 수행되었으며 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다.
실험 결과, 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 항산화 활성은 각각 20.72±0.61μM TE/g cell extract 및 34.92±0.50μM TE/g cell extract로, 락토바실러스 퍼멘텀 JY563은 모균주보다 69% 더 높은 활성을 보였다 (도 4). 도 4는 락토바실러스 퍼멘텀 모균주 및 락토바실러스 퍼멘텀 JY563의 항산화 활성을 비교한 결과이다.
한국생명공학연구원 KCTC18980P 20220209

Claims (4)

  1. 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 균주는,
    엑소폴리사카라이드 생산량, 알코올 분해활성 및 항산화 활성 중 선택되는 어느 하나 이상의 기능이 증진된 것을 특징으로 하는 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주.
  3. 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P), 이의 배양액 및 이의 사균체 중 선택되는 어느 하나를 유효성분으로 포함하는 항산화용 건강기능식품.
  4. 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum) JY563 균주(기탁번호: KCTC18980P), 이의 배양액 및 이의 사균체 중 선택되는 어느 하나를 유효성분으로 포함하는 숙취해소제.
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