KR20230132282A - 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 균주 및 이의 용도 - Google Patents

헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 균주 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20230132282A
KR20230132282A KR1020220029600A KR20220029600A KR20230132282A KR 20230132282 A KR20230132282 A KR 20230132282A KR 1020220029600 A KR1020220029600 A KR 1020220029600A KR 20220029600 A KR20220029600 A KR 20220029600A KR 20230132282 A KR20230132282 A KR 20230132282A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
strain
sphingomonas
haematococcus pluvialis
genus
culture
Prior art date
Application number
KR1020220029600A
Other languages
English (en)
Inventor
안치용
이상아
고소라
오희목
Original Assignee
한국생명공학연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국생명공학연구원 filed Critical 한국생명공학연구원
Priority to KR1020220029600A priority Critical patent/KR20230132282A/ko
Publication of KR20230132282A publication Critical patent/KR20230132282A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P23/00—Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes

Landscapes

  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 조성물; 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산용 조성물; 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진방법; 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산량 증대방법; 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2 균주 및 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10 균주에 관한 것이다.
본 발명의 헤마토코쿠스 플루비알리스 생장 촉진용 균주는 부스터샷 효과로서 헤마토코쿠스와 공배양을 통해 현저한 양의 바이오매스를 동시간 내에 획득할 수 있어 고함량 아스타잔틴의 수득에 활용이 가능하며. 이는 기존의 배양공정을 그대로 활용하여 생산단가는 유지하면서도 돌연변이에 의한 잠재 위험성이 없다는 장점이 있다.

Description

헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 균주 및 이의 용도{Strains for promoting growth of Haematococcus pluvialis and Uses thereof}
본 발명은 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 조성물; 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산용 조성물; 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진방법; 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산량 증대방법; 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2 균주 및 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10 균주에 관한 것이다.
헤마토코쿠스 플루비알리스는 중금속 오염이 없는 고함량 아스타잔틴을 생합성 할 수 있는 미세조류이며, 그 함량은 3-5%에 이르나, 바이오매스 성장이 매우 느리고 다른 미세조류 혹은 박테리아에 의한 경쟁에서 대부분 열세하기 때문에 고함량의 아스타잔틴 생합성능을 가졌음에도 그 생산성이 낮은 문제점을 가지고 있다. 기존 시행되고 있는 연구개발에서는 위와 같은 낮은 생산성을 개선하기 위해 배양공정기법 개발 또는 무작위 돌연변이 등과 같은 방식으로 개선을 시도하고 있으나 생산단가증가 및 변이개체에서 발생 가능한 잠재위험성과 같은 문제점을 가지고 있다.
구체적으로, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장단계는 크게 2단계로 나뉠 수 있는데, 첫 번째 단계는 영양염이 풍부한 배지에서 일반 녹조류와 같이 바이오매스가 성장하는 단계와 두 번째는 질소제한 및 고광량 스트레스 조건에서 아스타잔틴 생산을 유도하는 단계이다. 상기 기준에 적합한 바이오매스를 획득하기 위해서는 초기 바이오매스 접종량을 높여 생장률을 높이기도 하지만 이와 같은 방식은 오히려 종균 배양기간 증가라는 단점으로 이어질 수 있다.
또한, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 무작위 돌연변이를 확보하기 위해 수행되는 감마레이 조사로 아스타잔틴 생산성을 높이는 연구가 수행된 바 있으나 무작위 돌연변이 자체로 타겟 유전자만의 돌연변이가 발생했다는 것을 증명하기 위한 추가연구 및 비용이 요구되며 돌연변이 개체의 잠재적 위험성 또한 내재되어 있다.
더불어, 종전에는 빠른 아스타잔틴 생산을 위해 에틸렌 가스 혹은 그 전구체를 활용하여 미세조류의 노화를 촉진하는 기법을 이용하였으나, 에틸렌 가스 자체의 높은 가격과 화재위험성을 동반하기 때문에 쉽게 공정을 추가할 수 없다.
본 발명자들은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 미세조류 phycosphere에 존재하는 토착 박테리아의 군집을 차세대염기서열분석기법(next generation sequencing, NGS)을 통하여 규명하고, 미세조류의 성장과 밀접하게 연관된 두 종의 박테리아(균주)를 통계학적으로 밝혀내었다. 그리고 배양액으로부터 두 종의 박테리아(균주)를 최종 순수분리한 후, 헤마토코쿠스와 공배양하여 대조군보다 약 2배 높은 바이오매스를 동일한 배양시간에 획득할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였는 바. 이는 기존의 배양공정을 그대로 활용하여 생산단가는 유지하면서도 돌연변이에 의한 잠재 위험성이 없는 장점이 있다.
본 발명의 하나의 목적은 스핑고모나스 속 (Sphingomonas sp.) 또는 파에나스로박터 속(Paenarthrobacter sp.) 균주를 포함하는 헤마토코쿠스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)의 생장 촉진용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주를 포함하는 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 헤마토코쿠스 플루비알리스를 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주와 공배양하는 단계를 포함하는, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 헤마토코쿠스 플루비알리스를 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주와 공배양하는 단계를 포함하는, 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산량 증대방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 기탁번호 KCTC18922P에 의해 기탁된 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진용 스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2 균주에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 기탁번호 KCTC18923P에 의해 기탁된 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진용 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10 균주에 관한 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양태는 스핑고모나스 속 (Sphingomonas sp.) 또는 파에나스로박터 속(Paenarthrobacter sp.) 균주를 포함하는 헤마토코쿠스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)의 생장 촉진용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 "헤마토코쿠스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis) 또는 헤마토코쿠스 라쿠스트리스(Haematococcus lacustris)"는 병용되어 사용될 수 있다. 헤마토코쿠스 플루비알리스는 최근 헤마토코쿠스 라쿠스트리스로 종명이 변경되어 기존의 플루비알리스와 통용되므로 본 출원에서 이를 병용하여 사용할 수 있다. 담수에서 서식하는 미세조류로 카로테노이드인 아스타잔틴을 건중량의 3~5%로 축적하는 능력이 있다. 헤마토코쿠스 플루비알리스는 영양 고갈, 강한 광에 노출, 염도 증가, 너무 낮거나 높은 온도와 같은 다양한 스트레스에 대항하기 위해 포자 구조를 생성한다. 이 과정에서 스트레스에 저항하기 위해 지질, 카로테노이드 등 2차 대사 산물을 축적하는데, 그 중 적색을 띄는 케토카로티노이드인 아스타잔틴은 기능성 물질로 주목받고 있다. 지구상 생물들 중에서 헤마토코쿠스 플루비알리스가 아스타잔틴의 축적함량과 수율이 가장 높으며, 특히 이 균주는 광합성을 하기 때문에 빛에 의한 이산화탄소의 고정화와 동시에 아스타잔틴의 생산성을 높이기 위한 다양한 연구가 수행되고 있다.
본 발명에서, "아스타잔틴(astaxanthin, 3,3'-dihydroxy-β,β-carotene-4,4'-dione)"은 자연계에 존재하는 적색을 띄는 케토카로티노이드(ketocarotenoid) 계통의 지용성 비식물계열 색소로, 베타-카로틴(β-carotene)과 같은 화학적 구조를 가진 카로티노이드계 색소의 일종이다. 유해 활성산소를 없애는 기능성 물질로 베타-카로틴에 비해 양쪽 말단기에 하이드록실기(-OH)와 케톤기(=O)를 하나씩 더 가지고 있다. 아스타잔틴은 이러한 독특한 분자 구조적 특성 때문에 기존의 항산화 물질보다 월등히 높은 항산화 활성을 가진다고 알려져 있다.
본 발명에서, 스핑고모나스 속 (Sphingomonas sp.)균주는 물, 토양, 및 식물의 뿌리 등과 같이 자연계에 널리 서식하는 호기성 그람음성세균으로서, 다른 그람음성세균이 세포외막에 LPS (lipopolysaccharide)를 갖고 있는데 반해, 대신에 세포외막에 GSL (glycosphingolipid)를 갖고 있다.
본 발명의 스핑고모나스 속 균주는 스핑고모나스 속에 속하는 균주를 모두 포함할 수 있고 특별한 제한이 있는 것은 아니나, 바람직하게는 스핑고모나스 한쿠켄시스 (Sphingomonas hankookensis)일 수 있으며, 2021년 10월 12일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터에 수탁번호 KCTC18922P로 기탁된 스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2균주를 의미할 수 있다.
본 발명에서, 파에나스로박터 속(Paenarthrobacter sp.) 균주는 파에나스로박터 속에 속하는 균주를 모두 포함할 수 있고 특별한 제한이 있는 것은 아니나, 바람직하게는 파에나스로박터 우레아파시엔스 (Paenarthrobacter ureafaciens)일 수 있으며, 2021년 10월 12일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터에 수탁번호 KCTC18923P로 기탁된 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10을 의미할 수 있다.
본 발명의 용어, "미세조류"란, 넓은 범위로는 광합성 색소를 포함하여 광합성을 수행할 수 있는 단세포생물을 통칭하여 의미하고, 좁은 범위로는 수서환경에서 서식하고, 광합성을 수행하며, 단세포로서 존재하거나 또는 단세포군집체를 형성할 수 있는 생물을 의미하는데, 서식하는 환경에 따라 민물에서 서식하는 담수조류와 해수에서 서식하는 해양조류로 구분하기도 한다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는 상기 스핑고모나스 속 균주, 파에나스로박터 속 균주 또는 이의 조합을 헤마토코쿠스 플루비알리스와 공배양 한 결과, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진효과가 상기 균주 미처리 그룹에 비해 월등히 높은 것을 확인 하였으며, 미세조류의 생산량 또한 현저하게 향상됨을 확인하였다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 상기 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주를 포함하는 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산용 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 스핑고모나스 속 균주 파에나스로박터 속 균주, 헤마토코쿠스 플루비알리스, 아스타잔틴은 전술한 바와 같다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는 상기 스핑고모나스 속 균주, 파에나스로박터 속 균주 또는 이의 조합을 헤마토코쿠스 플루비알리스와 공배양 한 결과, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 현저한 생장촉진 효과를 통해 기존의 생장속도가 느린 문제점을 해결하여 현저한 양의 아스타잔틴의 수득이 동시간 내에 가능함을 확인할 수 있었다.
본 발명의 상기 아스타잔틴 생산용 조성물은 유효성분으로서 헤마토코쿠스 플루비알리스; 및 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주를 포함할 수 있고 이의 배양액 또는 배양여액의 효과를 저해하지 않는 범위 내에서 효과의 안정적 발현, 적용 대상 생물로의 부착 증진, 운반 및 처리의 간편화를 위해 제제학적으로 허용 가능한 고체 담체, 액체 담체, 액체 희석제, 액화된 기체 희석제, 고체 희석제, 또는 기타 적당한 보조제, 예를 들면 유화제, 분산제 또는 기포제 등의 계면활성제를 더욱 포함할 수 있다.
또한, 상기 아스타잔틴 생산용 조성물은 바람직하게는 유제, 수화제, 입제, 분제, 캅셀형 및 젤상의 제형으로 제제화될 수 있고, 제제의 부력을 위해 도넛형과 같은 제형을 통한 접촉제로서 제공될 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다.
상기 용어 배양, 배양액, 배양여액은 하기 전술한 바와 같다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 상기 헤마토코쿠스 플루비알리스를 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주와 공배양하는 단계를 포함하는, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진방법을 제공한다.
상기 방법의 헤마토코쿠스 플루비알리스를 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주와 공배양은 7일 내지 14일간, 바람직하게는 8일 내지 12일간 배양하는 것일 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다.
또한, 상기 방법의 헤마토코쿠스 플루비알리스와의 공배양은 스핑고모나스 속 및 파에나스로박터 속 균주를 각각 6일 간격으로 접종하는 것일 수 있으며, 구체적으로 헤마토코쿠스 플루비알리스의 배양 0일 내지 3일차에 파에나스로박터 속 균주를 접종 및 스핑고모나스 속 균주를 배양 6일 내지 9일차에 접종 하는 것일 수 있으나, 상기 균주의 접종 순서 및 간격이 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 방법의 헤마토코쿠스 플루비알리스와의 공배양은 헤마토코쿠스 플루비알리스의 배양액에 스핑고모나스 속 균주 또는 파에나스로박터 속 균주를 0.001 내지 20%의 농도로 접종하는 것일 수 있고, 보다 구체적으로 스핑고모나스 속 균주의 접종농도는 0.01 내지 10%, 0.1 내지 5%, 0.1 내지 0.7%, 0.3 내지 0.6%, 또는 0.5%일 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다.
또한, 파에나스로박터 속 균주의 접종농도는 0.01 내지 10%, 0.1 내지 7%, 0.1 내지 5%, 1 내지 5%, 2 내지 4% 또는 3%일 수 있으나, 이에 제한 되는 것은 아니다.
본 발명의 용어 스핑고모나스 속 균주 파에나스로박터 속 균주, 헤마토코쿠스 플루비알리스, 아스타잔틴은 전술한 바와 같다.
본 발명의 용어, "배양액" 이란 상기 헤마토코쿠스 플루비알리스를 배양한 배지를 의미하고, 바람직하게는 상기 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주가 포함된 배양 배지이며, 이의 농축액 또는 건조물 등을 포함하는 개념일 수 있다.
본 발명에서 배양배지란, 동물세포, 식물세포, 또는 세균 등을 기르는데 필요한 영양소가 들어있는 배지를 의미하고, 배양액이란, 액체배지에 균주를 접종하여 배양한 것을 의미한다.
상기 배양액의 농축액이란 상기 배양액을 농축한 것을 말하고, 상기 배양액의 건조물이란 상기 배양액의 물기를 없앤 것을 의미한다. 건조방법은 통풍건조, 자연건조, 분무건조 및 동결건조가 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어, "배양여액"은 헤마토코쿠스 플루비알리스를 배지에 접종하여 배양한 후, 제균 즉, 균주를 제거한 배양액을 의미할 수 있다.
본 발명의 용어 "배양"이란, 미생물을 적당히 인공적으로 조절한 환경조건에서 생육시키는 일련의 행위를 의미한다. 본 발명에서 헤마토코쿠스 플루비알리스를 배양하는 방법은 당업계에 널리 알려져 있는 방법을 이용하여 수행할 수 있다.
배양에 사용되는 배지는 적당한 탄소원, 질소원, 아미노산, 비타민 등을 함유한 통상의 배지 내에서 호기성 조건 하에서 온도, pH 등을 조절하면서 적절한 방식으로 특정 균주의 요건을 충족해야 한다. 사용될 수 있는 탄소원으로는 글루코즈 및 자일로즈의 혼합당을 주 탄소원으로 사용하며 이외에 수크로즈, 락토즈, 프락토즈, 말토즈, 전분, 셀룰로즈와 같은 당 및 탄수화물, 대두유, 해바라기유, 피마자유, 코코넛유 등과 같은 오일 및 지방, 팔미트산, 스테아린산, 리놀레산과 같은 지방산, 글리세롤, 에탄올과 같은 알코올, 아세트산과 같은 유기산이 포함된다. 이들 물질은 개별적으로 또는 혼합물로서 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 질소원으로는 암모니아, 황산암모늄, 염화암모늄, 초산암모늄, 인산암모늄, 탄산안모늄, 및 질산암모늄과 같은 무기질소원; 글루탐산, 메티오닌, 글루타민과 같은 아미노산 및 펩톤, NZ-아민, 육류 추출물, 효모 추출물, 맥아 추출물, 옥수수 침지액, 카세인 가수분해물, 어류 또는 그의 분해생성물, 탈지 대두 케이크 또는 그의 분해생성물 등 유기질소원이 사용될 수 있다. 이들 질소원은 단독 또는 조합되어 사용될 수 있다. 상기 배지에는 인원으로서 인산 제1칼륨, 인산 제2칼륨 및 대응되는 소듐-함유 염이 포함될 수 있다. 사용될 수 있는 인원으로는 인산이수소칼륨 또는 인산수소이칼륨 또는 상응하는 나트륨-함유 염이 포함된다. 또한, 무기화합물로는 염화나트륨, 염화칼슘, 염화철, 황산마그네슘, 황산철, 황산망간 및 탄산칼슘 등이 사용될 수 있다. 마지막으로, 상기 물질에 더하여 아미노산 및 비타민과 같은 필수 성장 물질이 사용될 수 있다.
상기 헤마토코쿠스 플루비알리스의 배양 방법은 특별히 제한되지 않으나, 공지된 회분식 배양방법, 연속식 배양방법, 유가식 배양방법 등에 의해 수행될 수 있다. 이때, 배양조건은, 특별히 이에 제한되지 않으나, 염기성 화합물 (예: 수산화나트륨, 수산화칼륨 또는 암모니아) 또는 산성 화합물 (예: 인산 또는 황산)을 사용하여 적정 pH (예컨대, pH 5 내지 9, 구체적으로는 pH 6 내지 8, 가장 구체적으로는 pH 6.8)를 조절할 수 있다.
또한, 지방산 폴리글리콜 에스테르와 같은 소포제를 사용하여 기포 생성을 억제할 수 있다. 호기 상태를 유지하기 위해 배양물 내로 산소 또는 산소-함유 기체(예, 공기)를 주입할 수 있다.
또한, 배양온도는 20℃ 내지 37℃ 바람직하게는 24℃ 내지 26℃이며, 더욱 바람직하게는 25℃일 수 있으며, 배양시간은 10시간 내지 60시간일 수 있으며, 바람직하게는 24시간 내지 48시간일 수 있으며, 배양 pH는 6 내지 8 사이일 수 있으며 바람직하게는 7일 수 있으나, 이에 특별히 제한 되는 것은 아니다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 헤마토코쿠스 플루비알리스를 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주와 공배양하는 단계를 포함하는, 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산량 증대방법을 제공한다.
본 발명의 상기 방법은 헤마토코쿠스 플루비알리스와의 공배양 단계 이후에 배양된 헤마토코쿠스 플루비알리스의 배양액으로부터 아스타잔틴을 회수하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 용어, 스핑고모나스 속 균주, 파에나스로박터 속 균주, 헤마토코쿠스 플루비알리스, 아스타잔틴은 전술한 바와 같다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는 헤마토코쿠스 플루비알리스 배양과 동시에 파에나스로박터 속 균주를 접종하고 배양 6일차에 스핑고모나스 속 균주를 추가 접종해주어 두 종을 각각 넣은 실험구 및 상기 균주를 접종하지 않은 실험구와의 생장촉진 효과를 비교한 결과, 두 종의 균주를 6일 간격으로 접종한 부스터 샷 효과에 의해 높은 바이오매스를 획득할 수 있었으며, 상기 2 종의 성장촉진 균주를 처리한 실험구에서 성장율이 최대 2.5배 정도 증가함을 확인하여, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 배양을 통한 아스타잔틴의 생산량 증대를 확인하였다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 기탁번호 KCTC18922P에 의해 기탁된 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진용 스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2 균주를 제공한다.
또한, 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 기탁번호 KCTC18923P에 의해 기탁된 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진용 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10 균주를 제공한다.
본 발명의 헤마토코쿠스 플루비알리스 생장 촉진용 균주는 부스터샷 효과로서 헤마토코쿠스와 공배양을 통해 현저한 양의 바이오매스를 동시간 내에 획득할 수 있어 고함량 아스타잔틴의 수득에 활용이 가능하며. 이는 기존의 배양공정을 그대로 활용하여 생산단가는 유지하면서도 돌연변이에 의한 잠재 위험성이 없다는 장점이 있다.
도 1은 헤마토코쿠스 플루비알리스의 3가지 phycosphere에서 분석된 박테리아(균주)의 상대정량을 나타낸 것이다.
(AT: 미세조류 세포벽에 붙어서 생활하는 박테리아 군집, PA: 배양액 내부에 3 ㎛ 이상 크기를 갖는 입자에 붙어 생활하는 박테리아 군집, FL: 미세조류 배양액에서 부유하며 생존하는 박테리아 군집)
도 2는 스피어만 랭킹 상관분석을 통한 헤마토코쿠스 플루비알리스 positive 및 negative 박테리아 모듈(A, p-value < 0.01), 상관계수 0.6 이상의 박테리아 3종의 전장유전체 기반 기능성 유전자 비교 (B), 미세조류 positive 박테리아(Sphingomonas)와 negative 박테리아(Bradyrhizobium)의 상관관계(C)에 관한 것이다.
도 3은 NMDS (Non-metric multidimensional scaling) 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 공존 박테리아(균주)에 따른 미세조류 바이오매스 생장촉진 효과를 비교한 결과이다(0.5% 농도로 각 균주 접종한 결과(A), 3.0% 농도로 각 균주 접종한 결과(B)).
도 5 는 박테리아(균주)와 공존하는 헤마토코쿠스 플루비알리스 (A) 및 박테리아를 제거한 헤마토코쿠스 플루비알리스 순수단일배양 세포 (B)의 주사전자현미경 사진이다.
도 6은 본 발명의 생장촉진 균주 접종 방식에 따른 미세조류 세포수 (A) 및 건조중량 (B)을 나타낸 것이다.
이하 본 출원을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 출원을 예시하기 위한 바람직한 실시양태에 불과한 것이며 따라서, 본 출원의 권리범위를 이에 한정하는 것으로 의도되지는 않는다. 한편, 본 명세서에 기재되지 않은 기술적인 사항들은 본 출원의 기술 분야 또는 유사 기술 분야에서 숙련된 통상의 기술자이면 충분히 이해하고 용이하게 실시할 수 있다.
실시예 1. 헤마토코쿠스 플루비알리스의 3가지 phycosphere에서 박테리아(균주) 분리
헤마토코쿠스 플루비알리스의 phycosphere는 호스트로 작용하는 미세조류주와의 위치 그리고 박테리아의 성향에 따라 1) 미세조류 부착성 박테리아(AT: microalgae-attached bacteria); 2) 입자 부착성 박테리아(PA: particle-attached bacteria); 3) 자유로운 유동성을 가진 박테리아(FL: free-living bacteria)로 나뉜다. 이는 박테리아의 성향에 따라 미세조류 생장성과 밀접한 관련성을 가질 수 있음을 의미하며, 배양액으로부터 순수분리된 박테리아의 미세조류 상호작용성을 이해하는 데 있어 상기 특성에 따른 명확한 해석이 가능하다.
따라서, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 phycosphere에서 박테리아의 생태학적 기호도에 따라 분리하기 위하여, 기본 배양공정을 12일로 설정하고 0일, 4일, 8일, 12일에서의 배양액 샘플을 확보하였다. 이후, 앞서 설명한 3가지 phycosphere를 구분하기 위해 최초 20.0 ㎛ pore size의 필터로 여과하여 헤마토코쿠스 플루비알리스에 부착된 박테리아(AT)를 구분하여 미세조류 세포벽에 붙어서 생활하는 박테리아를 분리하였고, 상기 필터를 통과하여 나온 여과된 상등액을 다시 3.0 ㎛ pore size의 필터로 재여과하여 배양액 내부의 3 ㎛ 이상 크기를 갖는 입자에 부착하여 공존하는 PA 타입의 박테리아 군집을 획득하였다.
또한, 상기 두 과정을 통해 통과된 여액을 마지막으로 0.2 ㎛ pore size 필터로 최종 여과하여 배양액에서 자유롭게 유동하는 FL 그룹, 즉 미세조류 배양액에서 부유하며 생존하는 박테리아 군집을 확보하였다. 확보한 3가지 타입의 박테리아 군집 샘플의 gDNA를 추출하였고, 추출된 gDNA의 NGS분석을 위해 bacterial 16S rRNA (V3-V4 region)를 polymerase chain reaction (PCR)을 통해 증폭하여 Illumina사의 MiSeq 분석 장비를 사용한 metagenome sequencing을 수행하였다. 분석 결과 배양 초반(0-4일) Bradyrhizobium 속의 질소고정 박테리아가 우점함을 확인하였다(도 1).
이와 같은 원인으로는 최초 접종한 헤마토코쿠스 플루비알리스의 배양액 상태에 기인한다고 할 수 있다. 아스타잔틴을 생합성하기 위한 공정에서 헤마토코쿠스 플루비알리스는 질소 제한 환경에서 스트레스를 받으며 카로테노이드 색소를 생합성한다. 따라서 헤마토코쿠스 플루비알리스의 phycosphere의 박테리아 역시 질소 고갈조건에서 스트레스를 받고 있으며, 미세조류 배양을 위해 공급해주는 공기 속의 질소를 암모니아로 전환하는 질소고정 박테리아가 우점하는 환경이 조성된 것으로 해석할 수 있었다.
또한, 헤마토코쿠스 플루비알리스 phycosphere 박테리아는 스피어만 랭킹 상관분석에 의할 때 크게 미세조류 positive 그룹과 negative 그룹으로 나뉠 수 있음을 확인하였다(도 2).
더불어, NMDS (Non-metric multidimensional scaling) 분석 결과 박테리아의 군집 구조가 배양 시간이 지남에 따라 미세조류 바이오매스와 높은 상관관계를 가진다는 것을 확인할 수 있었다(도 3).
실시예 2. 분리한 균주의 동정 및 바이오매스 생장능 확인
헤마토코쿠스 플루비알리스 배양액으로부터 균주의 분리를 위해 3가지 박테리아용 배지(LB (Luria-Bertani), TSA (Tryptone Soy Agar), R2A (Reasoner's 2A))를 1.5% 한천(Agar)과 혼합하여 고체 형태의 원액 그리고 10% 수준으로 희석한 것의 두 종류로 준비하였다.
이후, 헤마토코쿠스 배양액을 0.85% 생리식염수(saline solution)로 연속희석(serial dilution)하여 104, 105,106,107 배까지 희석하여 각각 희석 배수 별로 3장씩 앞서 준비한 고체 배지에 평판도말방법에 의해 도말하여 25℃ 배양기에 단일 콜로니가 형성 될 때까지 배양하였다.
배양 후 단일 콜로니(single colony)가 보이면, 각각의 단일 콜로니를새로운 고체배지에 획선도말을 실시 및 획선도말을 통해 확보한 분리 균주를 박테리아 16S 리보소말 알엔에이(16S rRNA) 동정을 통해 균주의 종 및 속명을 확인하였다.
그 결과, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진 가능성을 가진 균주 5종(Sphingomonas 1종, Paenarthrobacter 1종, Microbacterium 3종)과 negative 상관관계를 갖는 Bradyrhizobium 1종을 분리하였다. 상기 6종의 경우 16S rRNA 시퀀스를 확인하여 종 수준까지 동정하였으며 각각의 종명은 다음과 같다 (표 1).
순수분리 균주의 16S 시퀀스 기반 동정결과
No. Species name
1 Sphingomonas hankookensis
2 Paenarthrobacter ureafaciens
3 Microbacterium saccharophilum
4 Microbacterium proteolyticum
5 Microbacterium zeae
6 Bradyrhizobium elkanii
상기 6종의 순수 분리한 균주를 초기 미세조류 접종량의 0.5%, 1.0%, 1.5%, 2.0%, 3.0%의 농도로 각각 미세조류와 함께 접종 해준 후, 상기 접종 농도 중 헤마토코쿠스 플루비알리스의 두드러진 바이오매스 생장을 보여준 0.5%와 3.0%에서의 결과는 하기 표 2 및 도 4에 나타내었다.
순수 분리한 박테리아 종의 접종량에 따른 대조군 대비 헤마토코쿠스의 성장가속 비교
Species Inoculation conc. (%) by volume of media The alga growth promoting effect Experimental group/control Maximum growth point (days)
Control 0.5 - 1.0 12
3.0 - 1.0 12
S. hankookensis 0.5 ++ 1.7 12
3.0 - 0.9 12
B. elkanii 0.5 - 0.7 12
3.0 - 1.0 8
P. ureafaciens 0.5 + 1.4 8
3.0 ++ 2.4 8
M. saccharophilum 0.5 - 0.7 12
3.0 - 0.6 12
M. proteolyticum 0.5 + 1.2 12
3.0 - 1.1 12
M. zeae 0.5 - 0.9 12
3.0 - 1.1 12
적은 농도 접종만으로 대조군 대비 높은 바이오매스 생장촉진 효과를 보여준 균주는 스핑고모나스 한쿠켄시스(Sphingomonas hankookensis) 였으며, 높은 접종 농도에서는 파에나스로박터 우레아파시엔스(Paenarthrobacter ureafaciens)가 미세조류 세포분열 단계에서의 생장촉진 효과가 있었다.
상기 두 균주들은 스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2 및, 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10 로 명명하였으며, 두 균주 모두 부다페스트 조약 하의 수탁기관인 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2021년 10월 12일자로 기탁하였으며 스핑고모나스 한쿠켄시스(Sphingomonas hankookensis) RH-2는 KCTC18922P, 파에나스로박터 우레아파시엔스(Paenarthrobacter ureafaciens) RH-10은 KCTC18923P의 수탁번호를 부여받았다.
실시예 3. 헤마토코쿠스 플루비알리스와 공배양을 통한 생장촉진효과 확인
구체적으로 상기 실시예 2에서 동정한 두 균주를 헤마토코쿠스 플루비알리스 생장촉진효과를 확인하기 위하여 공배양하였다.
상기 배양은 500 mL 부피의 원추형 광생물반응기에 400 mL 만큼 OHM (Optimized Haematococcus media) 배지를 채우고, 볼륨 대비 5%로 헤마코코쿠스를 접종 하였으며, 총 실험구는 하기 4가지(a-d)로 하여 배양온도 25℃를 유지하였으며, 총 18일간 배양하였다.
그 결과, 스핑고모나스 한쿠켄시스의 경우 배양 8일에서 12일 사이에 미세조류의 바이오매스 생장촉진 효과를 보였고, 파에나스로박터 우레아파시엔스는 배양 0일에서 8일 배양초기에 바이오매스 생장촉진 효과를 보이는 것을 확인하였다(도 4).
또한, 정밀한 실험을 위하여 모든 균주를 제거한 순수배양 상태의 헤마토코쿠스 플루비알리스를 확보하고, 분리한 균주 접종을 통한 미세조류 생장촉진 효과의 신뢰성을 확보하였다(도 5)
더불어, 배양 방법 및 기간에 관한 최적 조건을 확립하고자 헤마토코쿠스 플루비알리스 배양과 동시에 파에나스로박터 우레아파시엔스 균주(3.0%)를 접종하고 배양 6일차에 스핑고모나스 한쿠켄시스 균주(0.5%)를 추가 접종해주어 두 종을 각각 넣은 실험구 및 균주를 접종하지 않은 실험구와의 생장촉진 효과를 비교하였다(표 3 및 도 6).
순수 분리한 박테리아 종에 따른 대조군 대비 헤마토코쿠스의 성장가속 비교
Experimental groups Biomass analysis methods Experimental group/control
Cells/mL (104) DCW (g/L) Cells/mL (104) DCW (g/L)
Control (non-treatment of bacteria) a 18.5 1.0 1.0 1.0
D0 S. hankookensis b 25.5 1.1 1.4 1.1
D0 P. ureafaciens c 37.5 1.3 2.0 1.3
D0 P. ureafaciens + D6 S. hankookensis d 39.5 1.6 2.1 1.6
a 대조군 (박테리아 미접종)
b 배양 0일차 0.5% S. hankookensis 접종
c 배양 0 일차 3.0% P. ureafaciens 접종
d 배양 0일차 3.0% P. ureafaciens 접종 후 배양 6일차 0.5% S. hankookensis 추가접종
그 결과 상기 균주를 넣어 준 모든 실험구에서 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진효과가 미처리 그룹에 비해 월등히 높은 것을 확인할 수 있었고, 두 종의 균주(스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2 균주 및 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10 균주)를 6일 간격으로 접종한 부스터 샷 효과에 의해 바이오매스 생장이 건조중량 기준 1.6 g/L으로 높은 바이오매스를 획득할 수 있었다. 이는 RH-2 균주 또는 RH-10 균주를 단독으로 처리한 구 대비 더욱 효과가 좋음을 확인할 수 있었다.
헤마토코쿠스 플루비알리스와 산업적으로 유용한 타 미세조류와 성장률을 비교해 보면 헤마토코쿠스 플루비알리스의 경우 최대 3.6배에서 2.3배 느린 성장률을 가지고 있음을 확인할 수 있었다(표 5).
산업용 미세조류주와 헤마토코쿠스의 성장률 비교
Algal species Initial
biomass (g/L)		 Final
biomass (g/L)		 Cultivation
period (d)		 GR* (μ, d-1)
Chlorella vulgaris 0.05 1.4 12.0 0.28
Chlorella sorokiniana 0.1 2.0 10.0 0.30
Scenedesmus obliquus 0.1 1.6 12.0 0.23
Spirulina platensis 0.1 3.0 15.0 0.23
Chlamydomonas reinhardtii 0.008 0.2 9.0 0.36
Haematococcus lacustris (pluvialis) 1.0 4.0 10.0 0.14
부스터 샷 효과에 의한 헤마토코쿠스 라쿠스트리스 (플루비알리스)의 성장률
Algal species Initial
biomass (g/L)		 Final
biomass (g/L)		 Cultivation
period (d)		 GR* (μ, d-1)
Haematococcus lacustris a 0.3 1.7 12.0 0.16
Haematococcus lacustris b 2.5 § 33.0 § 12.0 0.24
*Growth rate
§Cells/mL
a Vegetative phase
b Mature phase
상기와 같은 표 4의 일반적으로 알려진 헤마토코쿠스 플루비알리스(라쿠스트리스)의 성장률과 비교해 보면, 표 5의 결과와 같이 헤마토코쿠스 플루비알리스 성장촉진 균주인 스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2 균주 및 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10 균주를 접종한 경우 최대 1.6-2.4배 성장율이 증가됨을 확인할 수 있었다.
즉, 상기와 같은 결과는 헤마토코쿠스 플루비알리스라는 강력한 항산화제를 생산하는 미세조류주의 산업적 활용에서 가장 큰 문제가 되고 있는 느린 바이오매스 성장을 무작위 돌연변이 및 배양공정 추가와 같은 위험성 내재와 추가 생산비용 증가 없이 비성장률을 최대 2.4배까지 증가 시킴을 확인하여 미세조류 기반의 항산화제 생산시장에서 경제성과 효율성을 높일 수 있음을 시사한다.
이상의 설명으로부터, 본 출원이 속하는 기술분야의 당업자는 본 출원이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 출원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 출원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
한국생명공학연구원 KCTC18922P 20211012 한국생명공학연구원 KCTC18923P 20211012

Claims (15)

  1. 스핑고모나스 속 (Sphingomonas sp.) 또는 파에나스로박터 속(Paenarthrobacter sp.) 균주를 포함하는 헤마토코쿠스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)의 생장 촉진용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 스핑고모나스 속 균주는 스핑고모나스 한쿠켄시스 (Sphingomonas hankookensis)이고, 상기 파에나스로박터는 파에나스로박터 우레아파시엔스 (Paenarthrobacter ureafaciens)인 것인, 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 스핑고모나스 한쿠켄시스 균주는 기탁번호 KCTC18922P에 의해 기탁된 스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2 균주인 것이고, 상기 파에나스로박터 우레아파시엔스 균주는 기탁번호 KCTC18923P에 의해 기탁된 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10 균주인 것인, 조성물.
  4. 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주를 포함하는 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산용 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 스핑고모나스 속 균주는 스핑고모나스 한쿠켄시스 이고, 상기 파에나스로박터는 파에나스로박터 우레아파시엔스인 것인, 조성물.
  6. 헤마토코쿠스 플루비알리스를 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주와 공배양하는 단계를 포함하는, 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 공배양은 7일 내지 14일간 배양하는 것인, 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 스핑고모나스 속 균주는 스핑고모나스 한쿠켄시스 이고, 상기 파에나스로박터는 파에나스로박터 우레아파시엔스인 것인, 방법.
  9. 제6항에 있어서, 상기 헤마토코쿠스 플루비알리스와의 공배양은 스핑고모나스 속 및 파에나스로박터 속 균주를 각각 6일 간격으로 접종하는 것인, 방법.
  10. 제6항에 있어서, 상기 파에나스로박터 속 균주와의 공배양은 파에나스로 박터 속 균주를 헤마토코쿠스 스핑플루비알리스 균주 배양 0일 내지 3일차에 접종하는 것이고, 스핑고모나스 속 균주와의 공배양은 스핑고모나스 속 균주를 배양 6일 내지 9일차에 접종하는 것인, 방법.
  11. 제6항에 있어서, 상기 공배양은 헤마토코쿠스 플루비알리스의 배양액에 스핑고모나스 속 균주 또는 파에나스로박터 속 균주를 0.001 내지 20%의 농도로 접종하는 것인, 방법.
  12. 헤마토코쿠스 플루비알리스를 스핑고모나스 속 또는 파에나스로박터 속 균주와 공배양하는 단계를 포함하는, 헤마토코쿠스 플루비알리스를 이용한 아스타잔틴 생산량 증대방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 방법은 배양된 헤마토코쿠스 플루비알리스의 배양액으로부터 아스타잔틴을 회수하는 단계를 추가로 포함하는, 아스타잔틴 생산량 증대방법.
  14. 기탁번호 KCTC18922P에 의해 기탁된 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진용 스핑고모나스 한쿠켄시스 RH-2 균주.
  15. 기탁번호 KCTC18923P에 의해 기탁된 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장촉진용 파에나스로박터 우레아파시엔스 RH-10 균주.
KR1020220029600A 2022-03-08 2022-03-08 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 균주 및 이의 용도 KR20230132282A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020220029600A KR20230132282A (ko) 2022-03-08 2022-03-08 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 균주 및 이의 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020220029600A KR20230132282A (ko) 2022-03-08 2022-03-08 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 균주 및 이의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230132282A true KR20230132282A (ko) 2023-09-15

Family

ID=88017501

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020220029600A KR20230132282A (ko) 2022-03-08 2022-03-08 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 균주 및 이의 용도

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20230132282A (ko)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102161975B (zh) 链霉菌gsdx-1318及发酵法生产寡聚糖类抗生素阿维拉霉素的方法
CN107541477B (zh) 一种利用乳酸菌发酵液培养光合细菌的方法
KR100836093B1 (ko) 신규한 데이노코커스 종 ａ2 및 이를 이용하여아스타잔틴을 생산하는 방법
Loh et al. Exploring the fermentation characteristics of a newly isolated marine bacteria strain, Gordonia terrae TWRH01 for carotenoids production
CN107164238B (zh) 一种裂殖壶菌菌株及其诱变方法和应用
CN104845896B (zh) 生产威兰胶的菌株及方法
WO2006075395A1 (ja) β−ラクタム抗生物質の活性増強剤及びその製造法
US10745718B2 (en) Microalga having aggregation ability
CN1670184A (zh) 肽类天然微生物防腐剂产生菌及应用和防腐剂的制备方法
CN114729297B (zh) 一种异养培养雨生红球藻生产虾青素的方法
CN102676406B (zh) 一种用于发酵生产核糖核酸的热带假丝酵母菌及其应用
KR102647564B1 (ko) 루테인 및 올레산을 생산하는 신규한 아스테라시스 쿼드리셀룰라레 aqys21 미세조류와 이의 배양방법
WO2003033683A1 (fr) Micro-organismes et production de composes de carotinoide
CN110713956B (zh) 一株赖氨酸芽孢杆菌s12及其应用
KR20230132282A (ko) 헤마토코쿠스 플루비알리스의 생장 촉진용 균주 및 이의 용도
JP2012139164A (ja) 微生物を用いたカロテノイドの製造法
KR102489018B1 (ko) 마이크로시스티스 에루지노사에 대한 살조활성을 가지는 파우시박터 속 균주 및 이의 용도
CN110699258B (zh) 一种提高小球藻藻细胞生物量的培养方法
CN106754381B (zh) 一株诱变湛江等鞭金藻及其培养方法
CN116179402B (zh) 一株类胡萝卜素合成菌株及其应用
CN112961817B (zh) 一种利用海盐渗透压胁迫筛选高产Macrolactins海洋芽孢杆菌的方法
CN113717919B (zh) 一种促进微藻积累β-葡聚糖的方法
KR102177885B1 (ko) 참다래 궤양병균에 대해 항균 활성을 가지는 스트렙토마이세스 레이스모크로모제네스 균주 및 이의 용도
CN115927115A (zh) 光合固氮红细菌新物种及其应用
KR20160136261A (ko) 살충 활성을 갖는 신규한 제노랍두스 네마토필라 c2-3 균주 및 이의 이용방법