KR20230131448A

KR20230131448A - VEGF-Grab 및 PD-1 또는 PD-L1 길항제를 포함하는 병용 투여용 조성물

Info

Publication number: KR20230131448A
Application number: KR1020230028475A
Authority: KR
Inventors: 임혜성; 양현걸; 양한나; 김찬; 전홍재
Original assignee: 주식회사 파노로스바이오사이언스
Priority date: 2022-03-04
Filing date: 2023-03-03
Publication date: 2023-09-13
Also published as: WO2023167560A1

Abstract

본 발명은 VEGF-Grab을 유효성분으로 포함하고, PD-1 또는 PD-L1 길항제와 병용 투여하기 위한, 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 대한 것이다.

Description

VEGF-Grab 및 PD-1 또는 PD-L1 길항제를 포함하는 병용 투여용 조성물{Composition For Combi-Therapy Comprising VEGF-Grab and PD-1 or PD-L1 Antagonist}

본 발명은 VEGF-Grab을 유효성분으로 포함하고, PD-1 또는 PD-L1 길항제와 병용 투여하기 위한, 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

암세포가 증식, 성장하기 위해서는 산소와 영양을 공급하는 새로운 혈관이 필요하며, 새로운 혈관 형성에는 혈관내피세포 성장인자(VEGF; vascular endothelial growth factor)가 중추적인 역할을 수행하는 것으로 알려져 있다. VEGF는 두 개의 서브유닛으로 구성된 약 46 KDa의 이량체로서, 포유동물에서는 현재 다섯 종류의 VEGF(VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D 및 PlGF)가 밝혀져 있다. 상기 VEGF는 VEGF 수용체(VEGFR)-1, VEGFR-2, VEGFR-3 라고 알려진 세 개의 수용체 타이로신 인산화 효소(RTK)에 결합하고, 이러한 VEGF 수용체는 세포이동, 생존, 증식 등을 유발하며, 다른 RTK 등에는 없는 삼차원의 혈관을 형성할 수 있는 신호를 전달하거나 혈관투과성을 조절하는 기능을 가진다.

VEGF 분자의 발현은 종양 세포에서 증가하고, VEGF의 수용체는 종양 침윤 혈관 내피세포에서 증가하지만, 혈관신생에 관련되지 않은 정상 세포에서는 VEGF 및 VEGF의 수용체는 모두 낮게 발현된다는 것이 밝혀진 이후, VEGF는 암 치료의 타겟으로 사용되고 있다.

이에 따라, 암세포 자체보다는 암세포에 영양을 공급하는 혈관의 생성을 차단하는 새로운 항암 치료법들이 개발되었으며, 항-VEGF 수용체 항체, 가용성 수용체 구조체, 안티센스, VEGF에 대한 RNA 앱타머 및 저분자량 VEGF 수용체 타이로신 키나제(RTK) 억제제 등이 VEGF 신호전달 방해에 사용될 수 있음이 보고되었다. 실제로, 항-VEGF 중화 항체는 누드 마우스에서 다양한 인간 종양 세포주의 성장을 억제하는 것으로 밝혀졌다(Warren et al. J. Clin. Invest. 95: 1789-1797 (1995)). 아울러, VEGF 억제제와 관련된 특허문헌으로, VEGF 억제제로서의 퀴나졸린 유도체(미국 등록특허 9040548), 혈관형성 매개 세포 증식성 질병을 치료하거나 고형 종양 성장을 억제하기 위한 VEGF 수용체 및 HGF 수용체 신호전달 억제제(미국 등록특허 8470850), VEGF와 그의 수용체간의 결합을 저해하여 암 등의 질병의 치료에 사용되는 신 혈관형성을 억제하는 물질(한국 공개특허 2003-0075947) 등의 다양한 VEGF 억제제가 개시된 바 있다.

한편, 우리 몸의 면역기능은 항원인지와 동시에 이러한 동시자극 신호 및 동시억제신호의 조절을 통하여 전체적인 T 림프구 기능을 조절한다. 이러한 조절 기전을 면역검문(immune checkpoint)이라고 한다. 우리 몸의 면역기능은 종양세포에서 일어나는 돌연변이 등의 변화로 인해 발현되는 종양 특이 항원(tumor-specific neo-antigen)을 감지하고 이를 통하여 종양세포 또는 바이러스 감염원 등을 제거한다.

다만, 일부 종양세포는 반대로 이러한 면역공격을 회피하기 위하여 종양미세환경(tumor micro-environment)을 변화시켜 면역기능을 억제하거나 T세포 면역관용(immune tolerance) 또는 면역편집(immuno-editing) 등을 통하여 면역 회피(immune escape)를 한다.

이러한 회피 전략의 하나로서 면역검문(immune checkpoint) 기능의 변화를 통하여 종양 특이 T 림프구 세포의 기능을 억제한다. 즉, 종양세포에서 이러한 억제 면역검문을 활성화시킴으로써 종양 특이 T-림프구 세포의 공격을 회피한다. 이와 관련하여, PD-1 또는 리간드 PD-L1에 대한 단클론항체를 이용하여 그 기능을 억제함으로써 억제된 종양 특이 T-림프구 세포 활성 및 효과를 증강시킴으로써 항종양 효과를 얻을 수 있다.

이러한 기술적 배경하에서, 본 발명자들은 암 면역치료를 연구하던 중, VEGF-Grab과 PD-1 또는 PD-L1 길항제의 병용에 의해 종양 성장 지연, 암의 전이 예방 효과가 나타남을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 배경기술 부분에 기재된 상기 정보는 오직 본 발명의 배경에 대한 이해를 향상시키기 위한 것이며, 이에 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가지는 자에게 있어 이미 알려진 선행기술을 형성하는 정보를 포함하지 않을 수 있다.

본 발명의 목적은 VEGF-Grab을 유효성분으로 포함하고, PD-1 또는 PD-L1 길항제와 병용 투여하기 위한, 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 VEGF-Grab 또는 이를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물과 PD-1 또는 PD-L1 길항제 또는 이를 포함하는 약학 조성물을 병용하여 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 예방 또는 치료방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 PD-1 또는 PD-L1 길항제 또는 이를 포함하는 약학 조성물과 병용하여 암을 예방 또는 치료하기 위한, VEGF-Grab 또는 이를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물의 용도를 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 PD-1 또는 PD-L1 길항제 또는 이를 포함하는 약학 조성물과 병용하는 암 예방 또는 치료용 약제 제조를 위한, VEGF-Grab 또는 이를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물의 사용을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 VEGFR1(vascular endothelial growth factor receptor 1) 도메인 2, VEGFR1 도메인 3 및 항체의 Fc 영역을 포함하는 융합단백질을 유효성분으로 포함하고, PD-1 또는 PD-L1 길항제와 병용 투여하기 위한, 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, VEGF-Grab 또는 이를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물과 PD-1 또는 PD-L1 길항제 또는 이를 포함하는 약학 조성물을 병용하여 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

본 발명은 또한, PD-1 또는 PD-L1 길항제 또는 이를 포함하는 약학 조성물과 병용하여 암을 예방 또는 치료하기 위한, VEGF-Grab 또는 이를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한, PD-1 또는 PD-L1 길항제 또는 이를 포함하는 약학 조성물과 병용하는 암 예방 또는 치료용 약제 제조를 위한, VEGF-Grab 또는 이를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물의 사용을 제공한다.

본 발명에 따른 약학 조성물을 통해, 종양 성장 지연, 암의 전이 예방 효과를 나타낼 수 있다.

도 1은 MC38 대장암 모델에서 PB101과 PD-L1 면역 체크포인트 억제제의 병합 면역 치료 개요를 나타낸 것이다.
도 2는 PB101 및 αPD-L1 병합 투여군에서 종양 성장 지연 효과를 확인한 도면이다.
도 3은 Hepa-VEGF 간암 모델에서 PB101과 PD-L1 면역 체크포인트 억제제의 병합 면역 치료 개요를 나타낸 것이다.
도 4는 PB101 및 αPD-L1 병합 투여군에서 종양 성장 지연 효과를 확인한 도면이다.
도 5는 PB101 및 αPD-L1 병합 투여군에서 생존혜택(survival benefit)을 확인한 도면이다.
도 6은 Hepa-VEGF 간암 모델에서 PB101과 PD-L1 면역 체크포인트 억제제의 병합 면역 치료 후 암세포 리챌린지(Rechallenge) 실험 개요를 나타낸 것이다.
도 7은 병용투여군에 암을 심었을 경우 암이 자라지 않음을 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 8은 병용투여군에 암을 심었을 경우 암이 전이되지 않음을 확인한 결과를 나타낸 도면이다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명은 일 관점에서, VEGFR1(vascular endothelial growth factor receptor 1) 도메인 2, VEGFR1 도메인 3 및 항체의 Fc 영역을 포함하는 융합단백질을 유효성분으로 포함하고, PD-1 또는 PD-L1 길항제와 병용 투여하기 위한, 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 다른 관점에서, VEGFR1(vascular endothelial growth factor receptor 1) 도메인 2, VEGFR1 도메인 3 및 항체의 Fc 영역을 포함하는 융합단백질 또는 이를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물과 PD-1 또는 PD-L1 길항제 또는 이를 포함하는 약학 조성물을 병용하여 투여하는 것을 특징으로 하는 암의 예방 또는 치료방법에 관한 것이다.

본 발명은 또 다른 관점에서, PD-1 또는 PD-L1 길항제 또는 이를 포함하는 약학 조성물과 병용하여 암을 예방 또는 치료하기 위한, VEGFR1(vascular endothelial growth factor receptor 1) 도메인 2, VEGFR1 도메인 3 및 항체의 Fc 영역을 포함하는 융합단백질 또는 이를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또 다른 관점에서, PD-1 또는 PD-L1 길항제 또는 이를 포함하는 약학 조성물과 병용하는 암 예방 또는 치료용 약제 제조를 위한, VEGFR1(vascular endothelial growth factor receptor 1) 도메인 2, VEGFR1 도메인 3 및 항체의 Fc 영역을 포함하는 융합단백질 또는 이를 유효성분으로 포함하는 약학 조성물의 사용에 관한 것이다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

VEGF-Grab

본 발명은 VEGFR1(vascular endothelial growth factor receptor 1) 도메인 2, VEGFR1 도메인 3 및 항체의 Fc 영역을 포함하는 융합단백질을 포함한다.

"VEGFR1(vascular endothelial growth factor receptor 1; 혈관내피세포 성장인자 수용체 1)"이란, 혈관내피증식인자(VGEF)의 수용체로서, 수용체의 티로신인산화효소(thyrosine kinase)를 활성화하여 세포분열, 유주, 분화 등을 자극할 수 있다. 또한, VEGFR1 도메인 2 및 도메인 3은 VEGF를 인식하는 도메인이다.

상기 VEGFR1 도메인 2 및 도메인 3는 종에 따라 활성을 나타내는 단백질의 아미노산 서열에 차이가 존재하는 경우가 있기 때문에, 그 유래나 서열에 한정되지 않으며, 이의 야생형 또는 활성을 가지는 변이체를 포함할 수 있다. 본 발명의 VEGFR1 도메인 2는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VEGFR1 도메인 3은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

VEGFR1 도메인 2의 아미노산 서열(서열번호 1):

EFGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGH

VEGFR1 도메인 3의 아미노산 서열(서열번호 2):

LYKTNYLTHRQTNTIIDVQISTPSPVTLLRGHTLVLNCTATTPLNTRVQMTWSYPDEKNKNASVRRRIDQSNSHANIFYSVLTIDKMQNKDKGLYTCRVRSGPSFKSVNTSVHIYDKA

"항체 Fc 영역"은, 면역글로불린의 중쇄와 경쇄 가변영역, 중쇄 불변영역 1(CH1)과 경쇄 불변영역(CL1)을 제외한, 중쇄 불변영역 2(CH2) 및 중쇄 불변영역 3(CH3) 부분을 의미하며, 중쇄 불변영역에 힌지(hinge) 부분을 포함하기도 한다. 상기 항체 Fc 영역은 생체 내에서 대사되는 생분해성의 폴리펩타이드이기 때문에, 약물의 캐리어로 사용하기에 안전하다. 또한, 면역글로불린 Fc 영역은 면역글로불린 전체 분자에 비해 상대적으로 분자량이 적기 때문에 결합체의 제조, 정제 및 수율 면에서 유리할 뿐만 아니라 아미노산 서열이 항체마다 다르기 때문에 높은 비균질성을 나타내는 Fab 부분을 제거함으로써 물질의 동질성이 크게 증가되고 혈중 항원성의 유발 가능성도 낮아지게 되는 효과도 기대할 수 있다.

상기 항체의 Fc 영역은 IgA, IgD, IgE, IgG, IgM 유래 또는 이들의 조합(combination) 또는 이들의 혼성(hybrid)에 의한 Fc 영역이거나, 구체적으로 인간 혈액에 가장 풍부한 IgG 또는 IgM 유래이며, 보다 구체적으로 인간 유래 IgG1일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 융합단백질은 VEGFR1 도메인 2(R1D2)-VEGFR1 도메인 3(R1D3)-힌지(hinge)-인간 항체의 Fc 영역(CH2 및 CH3)을 포함하는 단백질을 의미할 수 있으며, “VEGF-Grab”이라는 명칭과 혼용되어 사용될 수 있다.

상기 융합단백질은 VEGFR1(vascular endothelial growth factor receptor 1; 혈관내피세포 성장인자 수용체 1)의 리간드인 VEGF에 결합하여 VEGF-A, VEGF-B 또는 PlGF에 결합하여 활성을 억제한다. 상기 융합단백질은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

VEGF-Grab 융합단백질의 아미노산 서열(서열번호 3):

EFGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVQISTPSPVTLLRGHTLVLNCTATTPLNTRVQMTWSYPDEKNKNASVRRRIDQSNSHANIFYSVLTIDKMQNKDKGLYTCRVRSGPSFKSVNTSVHIYDKALEDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

본 발명의 일 실시예에서는, VEGF-Grab 융합단백질을 'PB101'로 명명하였다.

상기 융합단백질은 N 말단부터 VEGFR1 도메인 2, VEGFR1 도메인 3 및 항체 단편의 순서 또는 VEGFR1 도메인 3, VEGFR1 도메인 2 및 항체 단편의 순서로 연결될 수 있으며, 상기 융합단백질에서 VEGFR1 도메인 2, VEGFR1 도메인 3 및 항체의 Fc 영역은 각각에 직접적으로 연결될 수도 있고, 링커를 통해 연결될 수도 있다.

상기 링커는 융합단백질의 활성을 나타내게 하는 한 특별히 이에 제한되지 않으나, 구체적으로는 글라이신, 알라닌, 루이신, 이소루이신, 프롤린, 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 리신, 아르기닌산 등의 아미노산을 사용하여 연결시킬 수 있고, 더욱 구체적으로는 발린, 루이신, 아스파르트산, 글라이신, 알라닌, 프롤린 등을 여러개 사용하여 연결시킬 수 있으며, 더욱 구체적으로는 유전자 조작의 용이성을 고려하여 글라이신, 발린, 루이신, 아스파르트산 등의 아미노산을 1개 내지 20개씩 연결하여 사용할 수 있다.

구체적으로, 상기 링커는 펩타이드 링커일 수 있으며, 약 5-25 aa 잔기를 포함하거나, 구체적으로 약 5-30 aa 잔기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 글리신 및/또는 세린과 같은 친수성 아미노산이 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 링커는 구조적 유연성을 부여하기 위하여 예를 들어, 글리신 링커 (G, Gly)p (p는 1 내지 10), GS 링커 (G_nS)_m (n, m은 각각 1 내지 10)을 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 링커는 GGGGS 또는 (GGGGS)₂를 포함하거나, (G, Gly)p에서 p가 1-10인 1-10 aa의 글리신을 포함할 수 있다.

PD-1 또는 PD-L1 길항제

상기 PD-1 길항제는 PD-1에 PD-L1이 결합하는 것을 억제할 수 있는 제제를 포함한다. 예를 들어, 상기 PD-1 길항제는 항-PD-1 항체일 수 있다.

상기 PD-L1 길항제는 PD-L1의 PD-1에 대한 결합을 억제할 수 있는 제제를 포함한다. 예를 들어, 상기 PD-L1 길항제는 항-PD-L1 항체일 수 있다.

"항체(antibody)"는 PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체를 의미한다. 본 발명의 범위에는 PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 완전한 항체 형태 뿐만 아니라, 상기 항체 분자의 항원 결합 단편도 포함된다.

완전한 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 구조이며, 각각의 경쇄는 중쇄와 다이설파이드 결합으로 연결되어 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어, "중쇄"는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변영역 도메인 VH 및 3개의 불변영역 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 전체길이 중쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어, "경쇄"는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변영역 도메인 VL 및 불변영역 도메인 CL을 포함하는 전체길이 경쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다.

상기 전체 항체는 IgA, IgD, IgE, IgM 및 IgG의 아형(subtype)을 포함하며, 특히 IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다. 중쇄 불변영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 및 엡실론(ε) 타입을 가지고 서브클래스로 감마1(γ1), 감마2(γ2), 감마3(γ3), 감마4(γ4), 알파1(α1) 및 알파2(α2)를 가진다. 경쇄의 불변영역은 카파(κ) 및 람다(λ) 타입을 가진다.

항체의 항원 결합 단편 또는 항체 단편이란 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab')₂ 및 Fv 등을 포함한다. 항체 단편 중 Fab는 경쇄 및 중쇄의 가변영역과 경쇄의 불변영역 및 중쇄의 첫 번째 불변영역(CH1)을 가지는 구조로 1개의 항원 결합 부위를 가진다. Fab'는 중쇄 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역(hinge-region)을 가진다는 점에서 Fab와 차이가 있다. F(ab')₂는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기가 다이설파이드 결합을 이루면서 생성된다.

Fv는 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역만을 가지고 있는 최소의 항체조각에 해당한다. 이중쇄 Fv(two-chain Fv)는 비공유결합으로 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역이 연결되어 있고, 단쇄 Fv(single-chain Fv, scFv)는 일반적으로 펩타이드 링커를 통하여 중쇄의 가변영역과 경쇄의 가변영역이 공유결합으로 연결되거나 또는 C-말단에서 바로 연결되어 있어서 이중쇄 Fv와 같이 다이머와 같은 구조를 이룰 수 있다. 이러한 항체 단편은 단백질 가수분해 효소를 이용하거나(예를 들어, 완전한 형태의 항체를 파파인으로 제한 절단하면 Fab를 얻을 수 있고 펩신으로 절단하면 F(ab')₂를 얻을 수 있다), 유전자 재조합 기술을 이용하여 제작할 수 있다.

"Fv" 단편은 완전한 항체 인식 및 결합 부위를 함유하는 항체 단편이다. 이러한 영역은 1개의 중쇄 가변 도메인과 1개의 경쇄 가변 도메인이 결합된 이량체이다.

"Fab" 단편은 경쇄의 가변 및 불변 도메인과, 중쇄의 가변 및 제1 불변 도메인(CH1)을 포함한다. F(ab')₂ 항체 단편은 일반적으로 Fab'단편 C-말단에 존재하는 힌지 영역의 시스테인에 의해 공유적으로 연결된 한 쌍의 Fab' 단편을 포함한다.

"단일쇄 Fv(scFv)" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 단일 폴리펩티드 쇄로 이루어진 구조체이다. scFv가 항원 결합을 위해 목적하는 구조를 형성할 수 있도록 하는 폴리펩티드 링커를 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체, 다특이적 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, scFv, Fab 단편, F(ab')₂ 단편, 다이설파이드-결합 Fvs(sdFv) 및 항-이디오타입(항-Id) 항체, 또는 상기 항체들의 에피토프-결합 단편 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 중쇄 불변영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 또는 엡실론(ε) 중의 어느 한 이소타입으로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 불변영역은 감마 1(IgG1), 감마 2(IgG2), 감마 3(IgG3) 또는 감마 4(IgG4)이다. 경쇄 불변영역은 카파 또는 람다 형일 수 있다.

상기 단일클론 항체는 실질적으로 동질적 항체 집단으로부터 수득한 항체, 즉 집단을 차지하고 있는 개개의 항체가 미량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생적 돌연변이를 제외하고는 동일한 것을 지칭한다. 단일클론 항체는 고도로 특이적이어서, 단일 항원 부위에 대항하여 유도된다. 전형적으로 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 상이한 항체를 포함하는 통상의 (폴리클로날) 항체와는 대조적으로, 각각의 단일클론 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 지시된다.

"에피토프(epitope)"는 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 결정부위(determinant)를 의미한다. 에피토프는 통상 화학적으로 활성인 표면 분자군, 예를 들어 아미노산 또는 당 측쇄로 구성되며, 일반적으로 특정한 3차원의 구조적 특징뿐만 아니라 특정한 전하 특성을 갖는다. 입체적 에피토프 및 비입체적 에피토프는 변성 용매의 존재하에서 전자에 대한 결합은 소실되지만 후자에 대해서는 소실되지 않는 점에서 구별된다.

상기 "인간화" 형태의 비-인간(예: 뮤린) 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는, 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기를 목적하는 특이성, 친화성 및 능력을 보유하고 있는 비-인간 종(공여자 항체), 예를 들어 마우스, 랫트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 초가변 영역으로부터의 잔기로 대체시킨 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다.

상기 "인간 항체"는 인간 면역글로불린으로부터 유래하는 분자로서 상보성 결정영역, 구조 영역을 포함한 항체를 구성하는 모든 아미노산 서열 전체가 인간의 면역글로불린으로 구성되어 있는 것을 의미한다.

중쇄 및/또는 경쇄 일부가 특별한 종으로부터 유래되거나 특별한 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 이와 상동성인 반면, 나머지 쇄(들)는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 이와 상동성인 "키메라" 항체(면역글로불린)뿐 아니라 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 상기 항체의 단편이 포함된다.

본 발명에서 사용된 항체의 "가변영역"은 상보성 결정 영역(CDR; 즉 CDR1, CDR2, 및 CDR3) 및 골격 영역(FR)의 아미노산 서열을 포함하는 항체 분자의 경쇄 및 중쇄 부분을 의미한다. VH는 중쇄의 가변 도메인을 의미한다. VL은 경쇄의 가변 도메인을 의미한다.

"상보성 결정영역(complement determining region, CDR)"은 항원 결합을 위해 필요한 존재인, 항체 가변 도메인의 아미노산 잔기를 의미한다. 각 가변 도메인은 전형적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3로 확인된 3개의 CDR 영역을 갖는다.

"골격영역(FR)”은 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다. 각 가변 도메인은 전형적으로, FR1, FR2, FR3 및 FR4로서 확인된 4개의 FR을 가진다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체는 구체적으로, 마우스 PD-L1 항체인 10F.9G2일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 항-PD-1 항체는 예를 들어 AMP-224, GLS-010, PDR-001, Pidilizumab, PF-06801591, Genolimzumab, CA-170, MEDI-0680, JS-001, LZM-009, AK-103, Nivolumab, Dostarlimab, Pembrolizumab, Sintilimab, Tislelizumab, Toripalimab, Camrelizumab, 또는 Cemiplimab일 수 있다.

상기 항-PD-L1 항체는 예를 들어, CX-072, WBP-3155, KN035, A167, Cosibelimab, Atezolizumab, Avelumab, Durvalumab, Adebrelimab, 또는 BMS-936559일 수 있다.

핵산분자, 발현벡터 및 숙주세포

상기 융합단백질 또는 상기 길항제를 코딩하는 단리된 핵산분자를 제공한다.

"핵산"은 DNA(gDNA 및 cDNA) 및 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 가지며, 핵산에서 기본 구성단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드 뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다. 본 발명의 중쇄 및 경쇄 가변영역을 코딩하는 핵산의 서열은 변형될 수 있다. 상기 변형은 뉴클레오타이드의 추가, 결실, 또는 비보존적 치환 또는 보존적 치환을 포함한다.

상기 단리된 핵산분자를 포함하는 발현벡터를 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 용어, "벡터"는 숙주세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단으로, 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터, 박테리오파지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터 등을 포함한다. 벡터의 성분으로는 일반적으로 다음 중의 하나 이상이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다: 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 항생제 내성 마커 유전자, 증강인자 요소, 프로모터, 전사 종결 서열. 항체를 코딩하는 핵산은 프로모터 및 전사 종결 서열 등과 같이 작동적으로 연결되어 있다.

"작동적으로 연결"은 핵산 발현조절서열(예: 프로모터, 시그널 서열 또는 전사조절인자 결합 위치의 어레이)과 다른 핵산 서열사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 따라 상기 조절서열은 상기 다른 핵산 서열의 전사 및/또는 해독을 조절하게 된다.

원핵세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터(예컨대, tac 프로모터, lac 프로모터, lacUV5 프로모터, lpp 프로모터, pLλ 프로모터, pRλ 프로모터, rac5 프로모터, amp 프로모터, recA 프로모터, SP6 프로모터, trp 프로모터 및 T7 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 또한, 예를 들어, 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 포유동물 세포의 지놈으로부터 유래된 프로모터(예: 메탈로티오닌 프로모터, β-액틴 프로모터, 사람 헤로글로빈 프로모터 및 사람 근육 크레아틴 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예: 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, HSV의 tk 프로모터, 마우스 유방종양 바이러스(MMTV) 프로모터, HIV의 LTR 프로모터, 몰로니 바이러스의 프로모터, 엡스타인-바 바이러스(EBV)의 프로모터 및 로우스 사코마 바이러스(RSV)의 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.

본원에서 사용된 용어, 목적 단백질의 "이종 핵산 서열의 발현" 또는 "발현"은, 삽입된 DNA 서열의 전사, mRNA 전사체의 번역, 및 융합 단백질 생산물 또는 항체 또는 항체 단편의 생산을 의미한다.

상기 벡터는 선택표지로서 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함하며, 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 게네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다.

상기 발현벡터를 포함하는 숙주세포를 제공한다.

본원에서 사용된 용어 "숙주세포"는 재조합 발현 벡터가 도입될 수 있는 원핵 및 진핵 세포를 나타낸다. 본원에서 사용된 용어, "형질전환된" 및 "형질감염된"은 당업계에 공지된 많은 기술에 의한 세포 내로의 핵산(예를 들어, 벡터)을 도입하는 것을 의미한다.

에스케리치아 콜라이(Escherichia coli), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilus) 및 바실러스 투링기엔시스(Bacillus thuringiensis)와 같은 바실러스 속 균주, 스트렙토마이세스(Streptomyces), 슈도모나스(Pseudomonas)(예를 들면, 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida)), 프로테우스미라빌리스(Proteus mirabilis) 및 스타필로코쿠스(Staphylococcus)(예를 들면, 스타필로코쿠스 카르노수스(Staphylocus carnosus))와 같은 원핵 숙주세포를 이용할 수 있다.

다만, 동물 세포에 대한 관심이 가장 크며, 유용한 숙주 세포주의 예는 COS-7, BHK, CHO, CHOK1, DXB-11, DG-44, CHO/-DHFR, CV1, COS-7, HEK293, BHK, TM4, VERO, HELA, MDCK, BRL 3A, W138, Hep G2, SK-Hep, MMT, TRI, MRC 5, FS4, 3T3, RIN, A549, PC12, K562, PER.C6, SP2/0, NS-0, U20S 또는 HT1080일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 숙주세포는 각종 배지에서 배양할 수 있다. 시판용 배지 중 제한 없이 배양 배지로서 사용할 수 있다. 당업자에게 공지되어 있는 기타 모든 필수 보충물이 적당한 농도로 포함될 수도 있다. 배양 조건, 예를 들어 온도, pH 등이 발현을 위해 선별된 숙주세포와 함께 이미 사용되고 있고, 이는 당업자에게 명백할 것이다.

상기 융합단백질 또는 상기 길항제의 회수는 예를 들어 원심분리 또는 한외여과에 의해 불순물을 제거하고, 그 결과물을 예를 들어 친화 크로마토그래피 등을 이용하여 정제할 수 있다. 추가의 기타 정제 기술 예를 들어 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호 작용 크로마토그래피, 히드록실아파타이트 크로마토그래피 등이 사용될 수 있다.

약학 조성물

본 발명에 따른 약학 조성물은 어떠한 경로로도 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 직접적으로(예, 조직 부위에 주입, 이식 또는 국부적으로 투여함으로써, 국소적으로) 또는 시스템적으로(예, 비경구 또는 경구로) 임의의 적절한 수단에 의하여 동물에게 제공될 수 있다. 본 발명의 조성물이 정맥 내, 피하, 눈(ophthalmic), 복강 내, 근육 내, 구강, 직장, 안와 내(intraorbital), 뇌 내(intracerebral), 두개 내(intracranial), 척추 내(intraspinal), 뇌실 내(intraventricular), 수막강 내(intrathecal), 조내(intracistenal), 캡슐 내(intracapsular), 비 내(intranasal) 또는 에어로졸 투여와 같이 비경구적으로 제공되는 경우, 약학 조성물은 예를 들면, 수성(aqueous) 이거나 생리학적으로 적용가능한 체액 현탁액 또는 용액의 부분을 포함할 수 있다. 이에 따라, 담체 또는 운반체(vehicle)가 생리학적으로 허용가능하므로 조성물에 첨가하여 환자에게 전달될 수 있다. 따라서, 제제를 위한 체액과 같은 담체로 일반적으로 생리식염수를 포함할 수 있다.

또한, 투여 빈도는 사용되는 제제 내의 VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제의 약동학적 파라미터에 따라 달라질 것이다. 전형적으로, 임상의는 목적 효과를 달성하는 투여량에 도달할 때까지 약학 조성물을 투여할 것이다. 따라서, 약학 조성물은 단일 용량으로서, 시간 간격을 둔 2회 이상의 용량으로서, 또는 이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 적절한 투여량의 추가의 정밀화는 당업자에 의해 일상적으로 이루어지고, 그들에 의해 일상적으로 수행되는 업무 영역 내에 해당한다.

또한, 단위 투여량은 인간에 있어서 0.01 ㎍/kg 내지 100 mg/kg이며, 구체적으로, 1 ㎍/체중kg 내지 10 mg/kg이다. 상기 함량이 최적량이긴 하나, 치료대상 질환 및 부작용의 유무에 따라 달라질 수 있으며, 최적의 투여량은 통상적인 실험을 이용하여 결정될 수 있다. 융합 단백질의 투여는 주기적인 급속 주입(periodic bolus injections)에 의하거나, 외측 공급원(external reservoir)(예, 정맥주사 보유주머니(intravenous bag)) 또는 내측(예, 생체부식성 임플란트(bioerodable implant))으로부터의 지속적인 정맥 내, 피하, 또는 복막 내 투여에 의할 수 있다. 상기 PD-1 또는 PD-L1 길항제는 정맥 또는 피하 투여될 수 있다.

상기 융합단백질의 투여량은 1 mg/kg 내지 15 mg/kg로 투여될 수 있다. 구체적으로, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11mg/kg, 12mg/kg, 13mg/kg, 14mg/kg 또는 15mg/kg으로 투여될 수 있다.

상기 PD-1 또는 PD-L1 길항제의 투여량은 1 mg/kg 내지 20 mg/kg로 투여될 수 있다. 구체적으로, 상기 PD-1 또는 PD-L1 길항제의 투여량은 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11mg/kg, 12mg/kg, 13mg/kg, 14mg/kg, 15mg/kg, 16mg/kg, 17mg/kg, 18mg/kg, 19mg/kg, 20mg/kg으로 투여될 수 있다.

병용

VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제는 바람직하게, 상보적 활성을 지니고 있으므로, 이들은 서로에게 불리한 영향을 미치지 않는다.

본 발명에 따른 조성물은 (1) 복합 제형으로 공동-제형화하고 동시에 투여 또는 전달하거나; (2) 별개의 제형으로서 동시 또는 순차로 투여 또는 전달될 수 있다.

상기 복합 제형의 경우 VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제가 동일한 조성으로 존재할 수 있다. 제형은 예를 들어, 건조된 파우더 조성물, 용액 또는 현탁액일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제를 동시 또는 순차적으로 투여할 수 있다. VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제는 일반적으로 서로 분리되고 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적으로 투여하는 경우, 2회 이상 투여로 투여할 수 있다. 순차적으로 투여하는 경우, VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제 중 한 가지 다음에 다른 한 가지, 또는 VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제 두 가지 투여 간에 간격을 두고 교대로 투여할 수 있다.

상기 작용제에 대한 적합한 투여량은 현재 업계에서 통상 사용되고 있는 양일 수 있고, 병용으로 인해 투여량을 줄일 수 있다.

조성물의 투여

본 발명의 조성물은 치료하고자 하는 질환에 적당한 모든 경로에 의해 투여할 수 있다. 적합한 경로에는 경구, 비경구(피하, 근육내, 정맥내, 동맥내, 흡입, 피내, 수막강내, 경막, 및 주입 기술 포함), 경피, 직장, 비내, 국소(볼 및 설하 포함), 질, 복강내, 폐내 및 비내 투여가 포함된다. 국소 투여는 경피 패치 또는 이온삼투요법 장치와 같이 경피 투여를 이용하는 것을 포함할 수 있다. 약물의 제형화는 다음 문헌에 논의되어 있다 [참고: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th Ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton, PA]. 약물 제형화의 기타 예는 다음 문헌에 기재되어 있다 [참고: Liberman, H. A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Vol 3, 2^nd Ed., New York, NY].

바람직한 경로는, 예를 들어 수용자의 상태에 따라서 다양할 수 있다. 경구 투여하는 경우에는, 이를 제약상 허용되는 담체, 활택제 또는 부형제와 함께, 환제, 캅셀제, 정제 등으로서 제형화할 수 있다. 비경구 투여하는 경우에는, 이를 제약상 허용되는 비경구 비히클 또는 희석제와 함께, 단위 투여 주사제 형태로 제형화할 수 있다.

예방 또는 치료

본 발명의 조성물은 암의 예방 또는 치료, 구체적으로 암 면역치료에 사용된다.

상기 암은 고형암과 혈액암을 모두 포함하며, 구체적으로 간암, 대장암, 폐암, 췌장암, 비소세포성 폐암, 결장암, 골암, 피부암, 두부 또는 경부 암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 위암, 항문부근암, 결장암, 유방암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, 중추신경계(CNS; central nervous system) 종양, 1차 중추신경계 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 간내담도암, 수모세포종, 췌장신경내분비 종양 등일 수 있으며, 보다 구체적으로 상기 암 중 고형암일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 암은 예를 들어, 대장암 또는 간암일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명은 암의 예방 또는 치료, 구체적으로 암 면역치료의 용도를 제공한다.

본 발명은 암의 예방 또는 치료, 구체적으로 암 면역치료 방법을 제공한다. 상기 개체는 암을 앓고 있는 개체일 수 있다. 또한 상기 개체는 포유동물일 수 있으며, 바람직하게는 인간일 수 있다.

"치료"는 임의의 주관적 또는 객관적 매개변수, 예를 들어 경감; 관해; 환자에 대해 더 용인 가능한 증상 또는 손상 생성, 병리 또는 병태의 감소; 퇴보 또는 쇠퇴 속도의 늦춤; 덜 쇠약하게 하는 최종 퇴보 지점의 생성; 환자의 신체적 또는 정신적 웰빙의 개선을 포함하는 손상, 병리 또는 병태의 치료 또는 개선에서의 임의의 성공 징후를 지칭한다. 증상의 치료 또는 개선은 신체 검사, 신경정신병학적 검사 및/또는 정신 의학적 평가를 포함하는 객관적 또는 주관적 매개변수에 기반할 수 있다.

"유효량"은 일반적으로 증상의 중증도, 빈도를 감소시키거나, 증상, 근본적인 원인을 제거하거나 증상의 발생 또는 근본적인 원인을 예방하거나, 질환 상태로부터 초래되거나 또는 이와 관련된 손상을 개선시키거나 또는 교정하는 데 충분한 양이다. 일부 구현예에서, 유효량은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량이다. "치료적 유효량"은 질환 상태 또는 증상, 특히 질환 상태와 관련된 상태 또는 증상을 교정하거나, 또는 질환 상태 또는 어떠한 방법으로든 질환과 관련된 임의의 다른 바람직하지 않은 증상의 진행을 달리 예방하거나, 방해하거나, 지연시키거나 또는 반전시키는 데 충분한 양이다. "예방적 유효량"은 대상체에게 투여될 때, 의도된 예방적 효과, 예를 들어, 질환 상태 개시의 예방 또는 지연, 또는 질환 상태 또는 관련 증상의 개시(또는 재발) 가능성 감소를 갖는 약제학적 조성물의 양이다.

제품

상기 언급된 암 치료에 유용한 VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제를 포함하는 키트가 제공될 수 있다. 이러한 키트는 복합 제형으로 공동-제형화하는 경우 단일 용기를 포함한다. 이러한 키트가 VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제 각각을 포함하는 용기를 포함한다.

키트는 상기 용기와 연합되거나 그 위에 표지 또는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 용어 "패키지 삽입물"은 치료 제품의 상업적 패키지 내에 통상적으로 포함되는 지시 사항을 지칭할 수 있고, 이러한 치료 제품의 적응증, 활용, 투여량, 투여, 금기 사항 및/또는 사용에 관한 경고에 관한 정보를 포함하고 있다. 적합한 용기에는, 예를 들어 병, 바이알, 주사기, 블리스터 팩(blister pack) 등이 포함된다. 용기는 각종 재료, 예를 들어 유리 또는 플라스틱으로부터 형성할 수 있다. 상기 표지 또는 패키지 삽입물은 해당 조성물이 선택된 질환, 예를 들어 암의 예방 또는 치료 또는 암 면역치료에 사용된다는 것을 표시한다. 부가적으로, 제약상 허용되는 완충제, 예를 들어 제균성 주사용 수(BWFI), 인산염 완충 식염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 상업적 및 사용자 측면에서 바람직한 기타 재료, 예를 들어 기타 완충제, 희석제, 충진제, 바늘 및 주사기를 추가로 포함할 수 있다.

추가로, VEGF-Grab, PD-1 또는 PD-L1 길항제를 필요로 하는 환자에게 동시에, 순차적으로, 또는 별개로 투여하는 것에 관한 지시 사항을 추가로 포함할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다.

실시예 1: MC38 대장암 모델에서 PB101과 PD-L1 면역 체크포인트 억제제의 병합 면역 치료

1.1 방법

8주령 C57BL/6 면역 보존 마우스의 오른쪽 측면에 2 x 10⁵ MC38 대장암 세포주를 피하 주사(subcutaneous injection)하였다. 종양 크기가 약 50 mm³에 도달하였을 때, i.p.(intraperitoneal injection, 복강주사)를 통하여 약물 투여를 진행하였다(도 1).

모든 군에서 종양 크기를 측정하며, 관찰 종료 시 CO₂ 가스를 사용하여 안락사를 시행하였다.

1.2 결과

MC38 대장암 모델에서 대조군에 비해 αPD-L1(mouse PD-L1 항체인 10F.9G2) 단독 투여군은 29.5%, PB101 단독 투여군은 54.7%의 종양 성장 지연을 나타냈으며, 특히 PB101 및 αPD-L1 병합 투여군에서는 종양 성장 지연이 71.4%로 현저하게 증가하는 것을 관찰하였다(도 2).

MC38 대장암 모델에서 PB101과 αPD-L1의 병합 치료는 단독 치료에 비해 항 종양 반응 효과를 증가시켰다.

실시예 2: Hepa - VEGF 간암 모델에서 PB101과 PD-L1 면역 체크포인트 억제제의 병합 면역 치료

2.1 방법

8주령 C57BL/6 면역 보존 마우스의 오른쪽 측면에 5 x 10⁶ Hepa-VEGF 대장암 세포주를 피하 주사(subcutaneous injection) 하였다. 종양 크기가 약 50 mm³에 도달하였을 때, i.p.(intraperitoneal injection, 복강주사)를 통하여 약물 투여를 진행하였다(도 3).

모든 군에서 종양 크기를 측정하고, 지속적이 효과를 확인하기 위해 생존을 85일까지 확인하였다.

2.2 결과

Hepa-VEGF 간암 모델에서 26일 기준 control군에 비해 αPD-L1 투여군은 48.2%, PB101 단독 투여군은 60.3%의 종양 성장 지연을 나타냈으며, 특히 PB101 및 αPD-L1 병합 투여군에서는 종양 성장 지연이 84.1%로 현저하게 증가하는 것을 관찰하였다. 또한, 다른 실험군들과 달리 PB101 및 αPD-L1 병합 투여군의 27.2%(3/11)에서 완전한 종양 퇴행(complete tumor regression)이 관찰되었다(도 4).

첫 2주간 약물 투여 후, 약물을 중단하고 60일 동안 모니터링한 결과, 단독 투여 및 병용 투여에서 모두 생존 혜택(survival benefit)이 관찰되었다(도 5).

실시예 3: Hepa - VEGF 간암 모델에서 PB101과 PD-L1 면역 체크포인트 억제제의 병합 면역 치료 후 암세포 리챌린지 ( Rechallenge ) 실험

3.1 방법

2번의 실험 진행 후, PB101 + aPD-L1 병용투여군에서 CR 및 CR에 근접한 4마리 쥐를 선별하여 2 x 10⁶ Hepa-VEGF 대장암 세포주를 피하 주사(subcutaneous injection)하며 동시에 1 x 10⁶ Hepa-VEGF 대장암 세포주를 정맥 주사(intravenous injection) 하였다. 병용투여군 6마리에 동일한 방법으로 암세포 주사하였으며, 20일 까지 추적 관찰 후, 안락사 시행하였다(도 6).

3.2 결과

병용투여군에 암을 심었을 경우, 대조군과 달리 암이 자라지 않는 것을 확인하였으며(도 7), 이는 면역메모리세포 형성에 기인한 것으로 추정된다.

또한, 정맥주사한 암세포의 경우, 대조군에서 폐로의 전이가 확인되었으나 병용투여군에서는 거의 확인되지 않았다(도 8). 이는 면역메모리세포 형성에 기인한 것으로 추정된다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

VEGFR1(vascular endothelial growth factor receptor 1) 도메인 2, VEGFR1 도메인 3 및 항체의 Fc 영역을 포함하는 융합단백질을 유효성분으로 포함하고, PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제와 병용 투여하기 위한, 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 VEGFR1 도메인 2는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 VEGFR1 도메인 3는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 PD-1 또는 PD-L1 길항제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제4항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체는 AMP-224, GLS-010, PDR-001, Pidilizumab, PF-06801591, Genolimzumab, CA-170, MEDI-0680, JS-001, LZM-009, AK-103, Nivolumab, Dostarlimab, Pembrolizumab, Sintilimab, Tislelizumab, Toripalimab, Camrelizumab, 또는 Cemiplimab인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제4항에 있어서, 상기 항-PD-L1 항체는 CX-072, WBP-3155, KN035, A167, Cosibelimab, Atezolizumab, Avelumab, Durvalumab, Adebrelimab, 또는 BMS-936559인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 융합단백질 및 PD-1 또는 PD-L1 길항제는 복합 제형으로 포함되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 융합단백질 및 PD-1 또는 PD-L1 길항제는 동시 또는 순차 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.