KR20240035764A

KR20240035764A - 항-gfral 항체 및 이의 응용

Info

Publication number: KR20240035764A
Application number: KR1020237045454A
Authority: KR
Inventors: 치안 리우; 바오란 렌; 슈 펭; 리핑 송; 이 판; 리 양
Original assignee: 상하이 제이엠티-바이오 테크노로지 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2021-06-30
Filing date: 2022-06-29
Publication date: 2024-03-18
Also published as: AU2022303422A1; EP4365201A1; WO2023274276A1; CN117693525A; CA3225972A1; TW202317630A

Abstract

항-GFRAL 항체 및 이의 용도에 관한 것으로, 상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 GFRAL에 의해 매개되거나 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로에 의해 매개된 질환 또는 이상, 특히 악액질 증후군의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.

Description

항-GFRAL 항체 및 이의 응용

관련 출원의 상호 참조

본 출원은 2021년 6월 30일에 제출한 중국 특허 출원 제202110739877.2호의 우선권을 주장하는 바, 모든 목적을 위해 그 전체 내용은 참조로서 본문에 인용된다.

본 출원은 총체적으로 생물제약 분야에 관한 것으로, 구체적으로 새로운 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학적 조성물 및 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 의학적 및 약제학적 용도에 관한 것이다.

성장 분화 인자 15(이하, GDF15, growth differentiation factor 15로 지칭됨)는 형질전환 성장 인자 β(TGF-β) 슈퍼패밀리의 구성원이다. TGF-β 슈퍼패밀리에는 형질전환 성장 인자 β, 액티빈(activin), 골형성단백질(BMP), 성장 분화 인자(GDF)와 같은 30개 이상의 구성원이 있다. 이들은 다양한 기관에서 발육, 세포 분화 및 조직 복구를 조절하는 데 중요한 역할을 한다¹.

정상적인 생리학적 상태에서 GDF15는 대부분의 조직에서 약하게 발현된다. 염증이나 조직 손상이 발생하면 GDF15의 발현이 상당히 증가한다. 따라서 GDF15는 염증 마커로 간주되고, 종양, 국소 허혈성 질환, 대사장애 및 신경퇴행성 질환과 같은 여러 질환의 병리학적 과정에도 관여한다.

연구자는 전임상 동물 모델에서 GDF15가 식욕부진과 체중 감소를 유발할 수 있음을 발견하였다. 또한 GDF15 수준은 다양한 진행성 종양의 환자의 혈액에서 유의하게 상승하고, 종양 악액질 및 불량한 생존 기간과 유의한 상관관계가 있음이 임상적으로 나타났다. 2017년에는 여러 연구 그룹에서 뇌간 뉴런에 있는 GDF15 수용체인 GFRAL(GDNF family receptor alpha-like)을 동시에 발견하였고, GFRAL-RET 신호 복합체가 GDF15에 의해 유도된 체중 감소를 매개한다는 사실을 입증하였다^2,3,4. GFRAL은 뇌간의 맨 아래 구역(AP, Area postrema)과 고립로핵(STN, solitary tract nucleus)에서 특이적으로 발현된다. 연구에서는 GDF15가 GFRAL과 결합하고 공동 수용체 RET와 6원 복합체를 형성하여 RET의 활성화를 유발하고 다운스트림 세포외 신호 조절 키나아제(Erk1/2, extracellular signal-regulated kinase), 단백질 키나아제 B(PKB/AKT, Ak strain tranforming) 및 포스포리파제 γ(PLCγ: phospholipase C-gamma) 신호 전달 경로의 추가 활성화를 유발하는 것으로 밝혀졌다^2,3,4. 생체내 실험 데이터에 따르면 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로의 활성화는 말초 교감 신경을 통해 지방 조직에서 지질 대사 관련 유전자의 발현을 유도할 수 있고, 그 결과 종양보유 마우스에서 지방 및 근육의 질량과 기능이 감소할 수 있다. 이에 대응하여, GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로를 차단하면 암 악액질 환자의 체중 감소를 억제할 가능성이 있다.

악액질 증후군(CACS, Cancer anorexia-cachexia syndrome)은 식욕부진, 근육량 및 지방 조직 감소로 인한 체중 감소를 포함하는 암 환자의 통제되지 않는 체중 감소를 임상 증상으로 하는 복합 대사 증후군이다. 악액질은 종종 말기 암 환자에서 발생하고, 주로 암 환자의 삶의 질 저하 및 생존율 감소와 관련이 있으며, 전체 암 관련 사망의 약 1/4을 차지한다.

현재 악액질 치료를 위해 전세계 주요 약물 규제 기관에서 널리 승인된 단일 약물은 없다. 종양 악액질 환자의 경우, 2020년 미국 임상 종양 치료 지침에서는 프로게스테론 및 유사체와 글루코코르티코이드를 단기 중재 요법으로 권장한다⁵.

악액질의 병인학 및 병리학은 복잡하다. 관련 연구에 따르면, 성장 분화 인자 15(GDF15, Growth differentiation factor 15)는 암(화학 치료제에 대한 민감도가 감소된 암을 포함)과 만성 질환으로 인한 악액질의 매개체이다. 전염병 연구에 따르면 GDF15 혈청 수준은 악액질의 중증도와 양의 상관관계가 있는 것으로 나타났다. 임상 연구 데이터에 따르면 조직 손상, 염증 및 다양한 질환 상태(암, 심혈관 질환 및 신장 질환 포함)에서 GDF15는 혈액 순환에서 크게 증가하고, GDF15 혈청 수준 상승은 조절되지 않는 체중 감소 및 불량한 예후와 관련이 있다.

GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로는 상기 병증에 대한 잠재적인 치료 표적이고, 항-GFRAL 항체의 개발 및 사용이 본 분야에서 시급히 필요하다.

제1 양태에서, 본 출원은 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2) 및 중쇄 CDR3(HCDR3)을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 은 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3)을 포함하되,

(1) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 75로 표시되는 서열이거나 서열번호 75로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열이거나 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열이거나 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열이거나 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 80으로 표시되는 서열이거나 서열번호 80으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열이거나 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(2) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 68로 표시되는 서열이거나 서열번호 68로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열이거나 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 70으로 표시되는 서열이거나 서열번호 70으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열이거나 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이거나 서열번호 65로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 73으로 표시되는 서열이거나 서열번호 73으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(3) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 1로 표시되는 서열이거나 서열번호 1로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 2로 표시되는 서열이거나 서열번호 2로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 3으로 표시되는 서열이거나 서열번호 3으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 5로 표시되는 서열이거나 서열번호 5로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 7로 표시되는 서열이거나 서열번호 7로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(4) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 9로 표시되는 서열이거나 서열번호 9로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 10으로 표시되는 서열이거나 서열번호 10으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 11로 표시되는 서열이거나 서열번호 11로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 13으로 표시되는 서열이거나 서열번호 13으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 14로 표시되는 서열이거나 서열번호 14로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 15로 표시되는 서열이거나 서열번호 15로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(5) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 17로 표시되는 서열이거나 서열번호 17로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 18로 표시되는 서열이거나 서열번호 18로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 19로 표시되는 서열이거나 서열번호 19로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 21로 표시되는 서열이거나 서열번호 21로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이거나 서열번호 22로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(6) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 24로 표시되는 서열이거나 서열번호 24로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 25로 표시되는 서열이거나 서열번호 25로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 26으로 표시되는 서열이거나 서열번호 26으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 28로 표시되는 서열이거나 서열번호 28로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 29로 표시되는 서열이거나 서열번호 29로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(7) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이거나 서열번호 31로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 32로 표시되는 서열이거나 서열번호 32로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 33으로 표시되는 서열이거나 서열번호 33으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 35로 표시되는 서열이거나 서열번호 35로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 36으로 표시되는 서열이거나 서열번호 36으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 37로 표시되는 서열이거나 서열번호 37로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(8) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 39로 표시되는 서열이거나 서열번호 39로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 40으로 표시되는 서열이거나 서열번호 40으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 41로 표시되는 서열이거나 서열번호 41로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 43으로 표시되는 서열이거나 서열번호 43으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이거나 서열번호 22로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(9) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 45로 표시되는 서열이거나 서열번호 45로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 46으로 표시되는 서열이거나 서열번호 46으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 47로 표시되는 서열이거나 서열번호 47로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 49로 표시되는 서열이거나 서열번호 49로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50으로 표시되는 서열이거나 서열번호 50으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(10) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이거나 서열번호 31로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 53으로 표시되는 서열이거나 서열번호 53으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 54로 표시되는 서열이거나 서열번호 54로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 56으로 표시되는 서열이거나 서열번호 56으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 57로 표시되는 서열이거나 서열번호 57로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 58로 표시되는 서열이거나 서열번호 58로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(11) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 60으로 표시되는 서열이거나 서열번호 60으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 61로 표시되는 서열이거나 서열번호 61로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 62로 표시되는 서열이거나 서열번호 62로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 64로 표시되는 서열이거나 서열번호 64로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이거나 서열번호 65로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 66으로 표시되는 서열이거나 서열번호 66으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(12) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 82로 표시되는 서열이거나 서열번호 82로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 83으로 표시되는 서열이거나 서열번호 83으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 84로 표시되는 서열이거나 서열번호 84로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 86으로 표시되는 서열이거나 서열번호 86으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 87로 표시되는 서열이거나 서열번호 87로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 88로 표시되는 서열이거나 서열번호 88로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며;

중쇄 CDR1-3 및 경쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의된다.

제2 양태에서, 본 출원은 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되,

중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 12, 20, 27, 34, 42, 48, 52, 55, 63, 71, 78, 85, 90, 92, 93, 98, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 120, 121로 표시되는 아미노산 서열, 또는 서열번호 4, 12, 20, 27, 34, 42, 48, 52, 55, 63, 71, 78, 85, 90, 92, 93, 98, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 120, 121로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지고; 및/또는

경쇄 가변 영역은 서열번호 8, 16, 23, 30, 38, 44, 51, 59, 67, 74, 81, 89, 94, 96, 97, 122, 124, 125, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135로 표시되는 아미노산 서열, 또는 서열번호 8, 16, 23, 30, 38, 44, 51, 59, 67, 74, 81, 89, 94, 96, 97, 122, 124, 125, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.

제3 양태에서, 본 출원은 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2) 및 중쇄 CDR3(HCDR3)을 포함하되,

(1) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 75로 표시되는 서열이거나 서열번호 75로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열이거나 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열이거나 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(2) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 68로 표시되는 서열이거나 서열번호 68로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열이거나 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 70으로 표시되는 서열이거나 서열번호 70으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(3) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 1로 표시되는 서열이거나 서열번호 1로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 2로 표시되는 서열이거나 서열번호 2로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 3으로 표시되는 서열이거나 서열번호 3으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(4) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 9로 표시되는 서열이거나 서열번호 9로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 10으로 표시되는 서열이거나 서열번호 10으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 11로 표시되는 서열이거나 서열번호 11로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(5) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 17로 표시되는 서열이거나 서열번호 17로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 18로 표시되는 서열이거나 서열번호 18로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 19로 표시되는 서열이거나 서열번호 19로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(6) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 24로 표시되는 서열이거나 서열번호 24로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 25로 표시되는 서열이거나 서열번호 25로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 26으로 표시되는 서열이거나 서열번호 26으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(7) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이거나 서열번호 31로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 32로 표시되는 서열이거나 서열번호 32로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 33으로 표시되는 서열이거나 서열번호 33으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(8) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 39로 표시되는 서열이거나 서열번호 39로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 40으로 표시되는 서열이거나 서열번호 40으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 41로 표시되는 서열이거나 서열번호 41로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(9) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 45로 표시되는 서열이거나 서열번호 45로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 46으로 표시되는 서열이거나 서열번호 46으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 47로 표시되는 서열이거나 서열번호 47로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(10) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이거나 서열번호 31로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 53으로 표시되는 서열이거나 서열번호 53으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 54로 표시되는 서열이거나 서열번호 54로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(11) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 60으로 표시되는 서열이거나 서열번호 60으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 61로 표시되는 서열이거나 서열번호 61로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 62로 표시되는 서열이거나 서열번호 62로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는

(12) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 82로 표시되는 서열이거나 서열번호 82로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 83으로 표시되는 서열이거나 서열번호 83으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 84로 표시되는 서열이거나 서열번호 84로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고;

중쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의된다.

제4 양태에서, 본 출원은 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 경쇄 CDR1(HCDR1), 경쇄 CDR2(HCDR2) 및 경쇄 CDR3(HCDR3)을 포함하되,

(1) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열이거나 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 80으로 표시되는 서열이거나 서열번호 80으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열이거나 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(2) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열이거나 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이거나 서열번호 65로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 73으로 표시되는 서열이거나 서열번호 73으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(3) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 5로 표시되는 서열이거나 서열번호 5로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 7로 표시되는 서열이거나 서열번호 7로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(4) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 13으로 표시되는 서열이거나 서열번호 13으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 14로 표시되는 서열이거나 서열번호 14로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 15로 표시되는 서열이거나 서열번호 15로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(5) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 21로 표시되는 서열이거나 서열번호 21로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이거나 서열번호 22로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(6) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 28로 표시되는 서열이거나 서열번호 28로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 29로 표시되는 서열이거나 서열번호 29로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(7) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 35로 표시되는 서열이거나 서열번호 35로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 36으로 표시되는 서열이거나 서열번호 36으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 37로 표시되는 서열이거나 서열번호 37로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(8) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 43으로 표시되는 서열이거나 서열번호 43으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이거나 서열번호 22로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(9) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 49로 표시되는 서열이거나 서열번호 49로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50으로 표시되는 서열이거나 서열번호 50으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(10) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 56으로 표시되는 서열이거나 서열번호 56으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 57로 표시되는 서열이거나 서열번호 57로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 58로 표시되는 서열이거나 서열번호 58로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(11) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 64로 표시되는 서열이거나 서열번호 64로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이거나 서열번호 65로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 66으로 표시되는 서열이거나 서열번호 66으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는

(12) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 86으로 표시되는 서열이거나 서열번호 86으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 87로 표시되는 서열이거나 서열번호 87로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 88로 표시되는 서열이거나 서열번호 88로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며;

경쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의된다.

제5 양태에서, 본 출원은 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되,

(i) 상기 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 CDR 영역을 포함하고, 적어도 하나의 상기 중쇄 CDR 영역의 아미노산 서열은 서열번호 1, 서열번호 9, 서열번호 17, 서열번호 24, 서열번호 31, 서열번호 39, 서열번호 45, 서열번호 60, 서열번호 68, 서열번호 75, 서열번호 82, 서열번호 2, 서열번호 10, 서열번호 18, 서열번호 25, 서열번호 32, 서열번호 40, 서열번호 46, 서열번호 53, 서열번호 61, 서열번호 69, 서열번호 76, 서열번호 83, 서열번호 3, 서열번호 11, 서열번호 19, 서열번호 26, 서열번호 33, 서열번호 41, 서열번호 47, 서열번호 54, 서열번호 62, 서열번호 70, 서열번호 77, 서열번호 84, 서열번호 99로 표시되는 아미노산 서열 또는 이들과 적어도 80%(바람직하게는 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택되며; 및/또는

(ii) 상기 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 CDR 영역을 포함하고, 적어도 하나의 상기 경쇄 CDR 영역의 아미노산 서열은 서열번호 5, 서열번호 13, 서열번호 21, 서열번호 28, 서열번호 35, 서열번호 43, 서열번호 49, 서열번호 56, 서열번호 64, 서열번호 72, 서열번호 79, 서열번호 86 , 서열번호 95, 서열번호 126, 서열번호 128, 서열번호 6, 서열번호 14, 서열번호 36, 서열번호 57, 서열번호 65, 서열번호 80, 서열번호 87, 서열번호 7, 서열번호 15, 서열번호 22, 서열번호 29, 서열번호 37, 서열번호 50, 서열번호 58, 서열번호 66, 서열번호 73, 서열번호 88, 서열번호 123로 표시되는 아미노산 서열 또는 이들과 적어도 80%(바람직하게는 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 서열을 가지며;

제6 양태에서, 본 출원은 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 분리된 핵산 분자를 제공한다.

제7 양태에서, 본 출원은 제6 양태에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다.

제8 양태에서, 본 출원은 제6 양태에 따른 핵산 분자 또는 제7 양태에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.

제9 양태에서, 본 출원은 치료제와 접합된 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 항체-약물 접합체를 제공한다.

제10 양태에서, 본 출원은 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 제9 양태에 따른 항체-약물 접합체, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

제11 양태에서, 본 출원은 GFRAL에 의해 매개되거나 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로에 의해 매개된 질환 또는 이상의 치료 또는 예방을 위한 약물의 제조에서 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 제6 양태에 따른 핵산 분자, 제7 양태에 따른 벡터, 제8 양태에 따른 숙주 세포 또는 제9 양태에 따른 항체-약물 접합체의 용도를 제공하며, 예를 들어, 상기 질환 또는 이상은 악액질 증후군, 종양(암 포함), 심혈관 질환, 신장 질환, 국소 허혈성 질환, 대사장애, 신경퇴행성 질환, 식욕부진 또는 식욕부진으로 인한 체중 감소이다.

제12 양태에서, 본 출원은 개체에서 GFRAL에 의해 매개되거나 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로에 의해 매개된 질환 또는 이상을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 개체에게 치료적 유효량의 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 제9 양태에 따른 항체-약물 접합체 또는 제10 양태에 따른 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 예를 들어, 상기 질환 또는 이상은 악액질 증후군, 종양(암 포함), 심혈관 질환, 신장 질환, 국소 허혈성 질환, 대사장애, 신경퇴행성 질환, 식욕부진 또는 식욕부진으로 인한 체중 감소이다.

제13 양태에서, 본 출원은 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 검출 가능한 라벨을 포함하는 접합체를 제공한다.

제14 양태에서, 본 출원은 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 융합 단백질을 제공한다.

도 1A 내지 도 1D는 본 출원의 예시적 항체의 결합 동역학 실험 결과를 보여주고, 여기서 도 1A는 168A7 hGFRAL 항체이며, 도 1B는 8E10 hGFRAL 항체이고, 도 1C는 26D7 hGFRAL 항체이며, 도 1D는 26D7 mGFRAL 항체이다.
도 2는 인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 모델에서 치료 시간에 따른 각 실험군의 전체 체중 변화율 곡선을 보여준다.
도 3은 인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 모델에서 항-GFRAL 항체에 대한 비복근 중량 검출 실험 결과를 보여준다.
도 4는 인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 모델에서 항-GFRAL 항체에 대한 피하 지방 중량 검출 실험 결과를 보여준다.
도 5는 AAV-GDF15 모델에서 항-GFRAL 항체에 대한 체중 감소 모니터링 실험 결과를 보여준다.
도 6은 AAV-GDF15 모델에서 인간화 항-GFRAL 항체(26D7H3aL2c)에 대한 체중 감소 모니터링 실험 결과를 보여준다.
도 7은 AAV-GDF15 모델에서 인간화 항-GFRAL 항체(26D7H3aL2c)에 대한 음식 섭취량 모니터링 실험 결과를 보여준다.
도 8은 AAV-GDF15 모델에서 인간화 항-GFRAL 항체(26D7H5bL5a)에 대한 체중 감소 모니터링 실험 결과를 보여준다.
도 9는 AAV-GDF15 모델에서 인간화 항-GFRAL 항체(26D7H5bL5a)에 대한 음식 섭취량 모니터링 실험 결과를 보여준다.
도 10은 인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 모델에서 치료 시간에 따른 각 실험군의 전체 체중 변화율 곡선을 보여준다.
도 11은 인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 모델에서 치료 시간에 따른 각 실험군의 순체중 변화율 곡선을 보여준다.

정의:

달리 정의되지 않는 한, 본문에 사용된 모든 과학적 및 기술적 용어는 당업자가 이해하는 의미와 동일한 의미를 갖는다. 본 분야의 정의 및 용어와 관련하여, 당업자는 구체적으로 Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel)를 참조할 수 있다. 아미노산 잔기의 약어는 20개의 일반적인 L-아미노산 중 하나를 지칭하기 위해 본 분야에서 사용되는 표준 3 문자 및/또는 1 문자 코드이다.

본 출원에서는 숫자 범위 및 매개변수 근사치가 넓은 범위로 표시되지만, 구체적인 실시예에 표시된 값은 가능한 한 정확하게 기재된다. 그러나 임의의 값에는 이들 각각의 측정에 존재하는 표준 편차로 인해 필연적으로 특정 오차가 포함되어 있다. 또한, 본문에 공개된 모든 범위는 그 안에 포함된 임의의 및 모든 하위범위를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어 기재된 “1 내지 10”의 범위는 최소값 1과 최대값 10 사이(끝점 포함)의 임의의 및 모든 하위범위를 포함하는 것으로 간주되어야 하고; 즉, 최소값 1 또는 그 이상으로 시작되는 모든 하위범위, 예를 들어 1 내지 6.1, 및 최대값 10 또는 그 이하로 종료되는 범위, 예를 들어 5.5 내지 10이다. 또한, “본문에 인용된”이라고 언급된 모든 참고문헌은 그 전체가 인용되는 것으로 이해되어야 한다.

본문에 사용된 용어 “대상” 또는 “개체”는 인간과 같은 포유동물을 의미하지만, 야생 동물, 가축 또는 실험 동물(예: 고릴라, 원숭이, 래트, 마우스, 토끼, 기니피그, 우드척, 땅다람쥐 등)과 같은 다른 동물일 수도 있다.

넓은 의미에서, “항체”는 면역글로불린 분자의 가변 영역에 위치한 적어도 하나의 항원 인식 부위를 통해 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 분자를 의미할 수 있고, 따라서 완전 항체/전장 항체, 항체의 단쇄 또는 항체의 임의의 항원 결합 단편(“항원 결합 부분”으로도 지칭됨)을 포함한다. “항체”와 “항원 결합 단편/항원 결합 부분”이 동일한 맥락에서 나타나는 경우, “항체”는 “항원 결합 단편/항원 결합 부분”에 대한 완전체로 이해될 수 있고, 양자는 함께 넓은 의미에서의 항체의 개념에 해당된다.

“전장 항체”는 이황화 결합으로 연결된 적어도 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(H)쇄를 포함하는 단백질을 의미한다. 각 중쇄는 하나의 중쇄 가변 영역(약어: VH) 및 하나의 중쇄 불변 영역을 포함한다. 상기 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인(domain), CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각 경쇄는 하나의 경쇄 가변 영역(약어: VL) 및 하나의 경쇄 불변 영역을 포함한다. 상기 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인, CL을 포함한다. VH 및 VL 영역은 상보적 결정 영역(CDR)으로 지칭되는 가변성이 높은 다수의 영역으로 추가로 분할될 수 있고, 그 중에는 프레임워크 영역(FR)으로 지칭되는 보다 보존적인 다수의 영역이 있다. 각각의 VH 및 VL은 모두 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 아미노 말단에서 카르복실 말단까지 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 이러한 가변 영역에는 항원과 상호작용하는 결합 도메인이 포함된다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예: 효과기 세포) 및 고전적인 보체 시스템의 제1 성분(Clq)을 포함하는 숙주의 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 전장 항체는 IgD, IgE, IgG, IgA 또는 IgM(또는 위의 하위클래스)과 같은 임의의 종류의 항체일 수 있지만, 항체는 임의의 특정 클래스에 속하지 않는다. 항체의 중쇄 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 면역글로불린을 상이한 클래스로 지정할 수 있다. 통상적으로, 면역글로불린에는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5가지 주요 클래스가 있고, 이러한 클래스 중 일부는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2와 같은 하위클래스(동종형)로 추가로 분류될 수 있다. 상이한 면역글로불린 클래스에 대응되는 중쇄 불변 도메인은 각각 a, d, e, g, 및 m라고 한다. 상이한 클래스의 면역글로불린의 하위단위 구조와 3차원 구조는 공지되어 있다. 키메라 또는 인간화 항체도 본 출원에 따른 항체에 포함된다. 상보적 결정 영역(통상적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 CDR)은 항체의 친화력 및 특이성에 가장 큰 영향을 미치는 가변 영역의 하위영역이라는 것이 당업자에게 잘 알려져 있다. VH 또는 VL의 CDR 아미노산 서열은 IMGT 정의, Chothia 정의 및 Kabat 정의를 비롯한 여러 일반적인 정의 방식이 있다. 주어진 항체의 가변 영역 아미노산 서열에 대해, 통상적으로 상이한 정의 방식에 따라 VH 및 VL 아미노산 서열의 CDR 아미노산 서열을 결정할 수 있다. 본 출원의 실시형태에서, IMGT를 이용하여 CDR 아미노산 서열을 정의한다. 주어진 항체의 가변 영역 아미노산 서열에 대해, 다양한 방식을 통해 가변 영역 아미노산 서열의 CDR 아미노산 서열을 분석할 수 있다.

용어 “뮤린 항체”는 면역화된 마우스의 B 세포와 골수종 세포의 융합, 항체를 무한히 증식하고 분비할 수 있는 뮤린 혼성화 융합 세포의 선택, 그리고 획득된 항체의 스크리닝, 제조 및 정제로부터 유래된 항체를 의미하고, 뮤린 항체는 일반적으로 면역원성을 가지므로 후속적으로 인간화 처리가 필요하다.

용어 “인간화 항체”는 마우스 종과 같은 다른 포유동물 종으로부터 유래된 CDR 서열을 인간 프레임 서열에 이식하여 획득된 항체를 의미한다. 결합 친화력을 유지하기 위해, 백본 세그먼트(FR이라고 함)의 일부 잔기를 수정할 수 있다. 당업자에게 공지된 기술을 통해 본 출원에 따른 인간화 항체 또는 이의 단편을 제조할 수 있다.

용어 “키메라 항체”는 가변 영역 서열이 한 종으로부터 유래되고 불변 영역 서열이 다른 종으로부터 유래된 항체, 예를 들어 가변 영역 서열이 마우스 항체로부터 유래되고 불변 영역 서열이 인간 항체로부터 유래된 항체를 의미한다. 유전자 재조합 기술을 사용하여 본 출원에 따른 키메라 항체 또는 이의 단편을 제조할 수 있다. 예를 들어, 상기 키메라 항체는 프로모터, 본 출원에 따른 비인간, 특히 뮤린 단클론 항체의 가변 영역을 코딩하는 서열 및 인간 항체의 불변 영역을 코딩하는 서열을 포함하는 재조합 DNA를 클로닝함으로써 생산될 수 있다. 이러한 재조합 유전자에 의해 코딩된 본 출원의 키메라 항체는 예를 들어 뮤린-인간 키메라일 것이고, 상기 항체의 특이성은 뮤린 DNA로부터 유래된 가변 영역에 의해 결정되며, 이의 동종형은 인간 DNA로부터 유래된 불변 영역에 의해 결정된다.

용어 “부분 인간화 항체”는 인간으로부터 유래된 불변 영역과 비인간(예: 마우스)으로부터 유래된 가변 영역(CDR 포함)을 포함하는 항체를 의미한다.

용어 “반인간화 항체”는 인간화 항체의 한 유형으로 하나의 항체 사슬이 뮤린 가변 영역을 포함하고 다른 항체 사슬이 인간화 가변 영역을 포함하는 항체, 즉 절반 인간화 항체를 의미한다.

용어 “단클론 항체”는 기본적으로 균질한 항체군으로부터 획득된 항체를 의미하고, 즉 군을 구성하는 각 항체는 소수의 개체에서 자연적으로 발생하는 돌연변이가 존재할 수 있다는 점을 제외하면 동일하다.

본문에 사용된 용어 “항원 결합 단편” 또는 “항원 결합 부분”은 서로 교환하여 사용될 수 있고, 특히 Fv, Fab, F(ab')₂또는 Fab'와 같은 항체 단편, 또는 화학전 변형에 의해 또는 리포솜으로의 통합에 의해 반감기를 증가시킬 수 있는 임의의 단편을 의미하며, 상기 화학적 변형은 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜(페길화, PEG화)(Fv-PEG, scFv-PEG, Fab-PEG, F(ab')₂-PEG 또는 Fab'-PEG로 지칭되는 페길화 단편)(“PEG”는 폴리에틸렌 글리콜임)과 같은 폴리(알킬렌)글리콜의 첨가이고, 상기 단편은 GFRAL 결합 활성을 갖는다. 바람직하게는, 상기 기능성 단편은 그것이 유래된 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 사슬의 부분 서열로 구성되거나 이들을 포함하고, 상기 부분 서열은 그것이 유래된 항체와 동일한 결합 특이성 및 충분한 친화력을 유지하기에 충분하며, 이러한 기능성 단편은 그것이 유래된 항체 서열의 적어도 5개의 아미노산, 바람직하게는 10, 15, 25, 50 및 100개의 연속 아미노산을 포함한다. 항원 결합 단편의 구현예는 (1) VL-CL 사슬 및 VH-CH1 사슬을 갖는 1가 단편일 수 있는 Fab 단편; (2) 힌지 영역의 이황화 브리지에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 갖는 2가 단편일 수 있는 F(ab')₂ 단편(즉, Fab'의 이량체); 및 (3) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

용어 “단쇄 항체(scFv)”은 VH 도메인과 VL 도메인이 펩티드 링커에 의해 연결된 단일 폴리펩티드 사슬을 의미한다. (scFv)₂는 펩티드 링커에 의해 연결된 2개의 VH 도메인 및 이황화 브리지를 통해 상기 2개의 VH 도메인과 조합된 2개의 VL 도메인을 포함한다.

용어 “Fc 단편”, “Fc 도메인”, “Fc 모이어티” 또는 유사한 용어는 힌지 영역(hinge), 불변 영역의 CH2 단편 및 CH3 단편을 포함하는 항체 중쇄 불변 영역의 일부를 의미한다.

본문에 사용된 용어 “특이적 결합”은 항원 에피토프에 대한 항체의 결합과 같은 두 분자 사이의 비-무작위 결합 반응을 의미한다.

“다중특이적 항체”라고도 하는 “다중 항체”라는 용어는 적어도 2개의 서로 다른 항원에 대해 결합 특이성을 갖는 분자를 의미하고, 여기서 2개의 항원에만 결합하는 분자를 이중 항체(즉, 이중특이적 항체, BsAb)라고도 한다.

용어 “이중특이적 항체”는 2개의 항원 에피토프에 대한 결합 능력을 동시에 갖는 항체를 의미한다. 2개의 항원 에피토프는 상이한 항원에 있을 수 있고, 동일한 항원에 있을 수도 있다. 이중특이적 항체는 다양한 구조적 구성을 가질 수 있다. 예를 들어, 이중특이적 항체는 2개의 Fc 단편 및 이들에 각각 융합된 2개의 항원 결합 부분으로 구성될 수 있고(2개의 아암이 상이한 항원 표적 또는 에피토프에 결합한다는 점을 제외하면 천연 항체와 유사함), 항원 결합 부분은 단쇄 항체(scFv)의 형태 또는 Fab 단편의 형태일 수 있다.

통상적으로, 단클론 항체 또는 이의 기능성 단편, 특히 뮤린 단클론 항체 또는 이의 기능성 단편을 제조하기 위해, 특히 매뉴얼 “Antibodies”에 기재된 기술(Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor NY, pp.726, 1988)을 참조하거나 Kohler 및 Milstein이 설명한 하이브리도마 세포로부터 제조하는 기술(Nature, 256: 495-497, 1975)을 참조할 수 있다.

용어 “보존적 변이체” 또는 “보존적 아미노산 치환”은 GFRAL에 대한 항체의 친화력과 같은 단백질의 친화력에 기본적으로 영향을 미치거나 감소시키지 않는 치환을 의미한다. 예를 들어, GFRAL에 특이적으로 결합하는 인간 항체는 최대 약 1개, 최대 약 2개, 최대 약 5개, 최대 약 10개 또는 최대 약 15개의 보존적 치환을 포함할 수 있고, GFRAL 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 용어 “보존적 변이체”는 항체가 GFRAL에 특이적으로 결합하는 한 치환된 아미노산으로 비치환된 모 아미노산을 대체하는 것도 포함한다. 비보존적 치환은 활성 또는 GFRAL 결합을 감소시키는 치환이다.

용어 “분리된” 생물학적 성분(예: 핵산, 단백질(항체 포함) 또는 세포기관)은 상기 성분이 자연적으로 존재하는 환경(예: 세포)에서 다른 생물학적 성분(즉, 다른 염색체 및 추가 염색체 DNA 및 RNA, 단백질 및 세포소기관)과 기본적으로 분리되거나 정제되었다. 이미 “분리된” 핵산 및 단백질은 표준 정제 방법으로 정제된 핵산 및 단백질을 포함한다. 상기 용어는 숙주 세포에서 재조합 발현에 의해 제조된 핵산 및 단백질과 화학적으로 합성된 핵산도 포함한다.

용어 “유도된 서열”은 관련 서열과 적어도 80%(바람직하게는 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가지고 여전히 동일하거나 유사한 기능을 갖는 서열을 의미한다.

본문에 사용된 용어 “약학적 조성물”은 특정 목적을 달성하기 위해 함께 조합되는 적어도 하나의 약물 및 선택적인 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 보조제의 조합을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 상기 약학적 조성물은 본 출원의 목적을 달성하기 위해 함께 작용할 수 있는 한, 시간적 및/또는 공간적으로 분리된 조합을 포함한다. 예를 들어, 상기 약학적 조성물에 함유된 성분(예: 본 출원에 따른 항체, 핵산 분자, 핵산 분자 조합 및/또는 접합체)은 개체에게 함께 또는 별도로 투여될 수 있다. 상기 약학적 조성물에 함유된 성분들을 개별적으로 개체에게 투여하는 경우, 상기 성분들은 동시에 또는 순차적으로 개체에게 투여될 수 있다. 바람직하게는, 상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 물, 완충 수용액, 등장성 염 용액(예: PBS(인산염 완충액)), 글루코스, 만니톨, 덱스트로스, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 셀룰로오스, 탄산마그네슘, 0.3% 글리세롤, 히알루론산, 에탄올 또는 폴리프로필렌글리콜, 트리글리세리드와 같은 폴리알킬렌글리콜이다. 사용되는 약학적으로 허용 가능한 담체의 유형은 특히 본 출원에 따른 조성물이 경구, 비강, 피내, 피하, 근육내 또는 정맥내 투여용으로 조제되는지 여부에 따라 달라진다. 본 출원에 따른 조성물은 첨가제로서 습윤제, 유화제 또는 완충액 물질을 포함할 수 있다. 본 출원에 따른 약학적 조성물 또는 약물 제제는 임의의 적합한 경로를 통해 투여될 수 있고, 예를 들어 경구, 비강, 피내, 피하, 근육내 또는 정맥내 투여될 수 있다.

본문에 사용된 용어 “치료적 유효량” 또는 “유효량”은 투여된 개체에게 유익성을 나타내기에 충분한 용량을 의미한다. 실제 투여량 및 투여 속도와 시간 과정은 치료할 대상의 상태 및 중증도에 따라 달라진다. 치료 처방(예: 용량 결정 등)은 궁극적으로 일반의나 다른 의사의 책임이고 이들에 따라 달라지며, 통상적으로 치료할 질환, 환자 개체의 상태, 전달 부위, 투여 방법 및 의사가 알고 있는 다른 요인을 고려한다.

본문에 사용된 용어 “융합 단백질”은 일반적인 맥락에서 적어도 2개의 도메인으로 구성된 단백질로, 각 도메인은 자연 상태에서 연관되지 않고, 개별 유전자에 의해 코딩되며, 각 유전자는 서로 연결되고, 전체적으로 전사 및 번역되어, 단일 단백질이 생성된다. 본 출원의 기술적 맥락에서, 항체 또는 항원 결합 부분을 포함하는 “융합 단백질”은 유전공학적 기술을 이용하여 항체 또는 항원 결합 부분을 다른 생물학적 활성 단백질과 융합시켜 획득된 산물을 의미하고, 이러한 항체 융합 단백질은 항체의 항원 결합 능력과 항체에 융합된 생물학적 활성 단백질의 독특한 생물학적 특성을 모두 가지고 있다.

아미노산 또는 핵산 서열에 관한 용어 “동일성/상동성/일치성”은 서열 정렬 및 갭 도입 후 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 변이체의 동일한 잔기의 백분율로 정의되고, 원하는 경우 최대 백분율의 동일성을 달성한다. 정렬에 사용되는 방법 및 컴퓨터 프로그램은 본 분야에 공지되어 있다.

암 악액질 치료를 위한 새로운 전략으로서 GDF15/GFRAL/RET 신호 전달 경로의 차단 또는 억제에 기반하여, 본 출원의 발명자는 GDF15/GFRAL/RET 단백질 복합체의 형성 또는 GDF15 신호 전달을 차단하여, GFRAL에 의해 매개되거나 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로에 의해 매개된 질환 또는 이상, 특히 악액질의 비자발적인 체중 감소의 발생, 빈도 또는 중증도, 또는 GDF15 단백질에 의해 유도되거나 GDF15 단백질과 관련되고 화학 치료제(예: 항종양 항체 트라스투주맙)에 대한 민감도가 감소된 암을 치료, 예방 또는 경감하여, 악액질에 대해 허가 약물이 없는 국면을 타개할 것으로 예상되는 효과적인 GFRAL 표적화 길항성 항체를 찾고자 노력하였고, 이로써 본 출원의 각 발명을 구축하였다.

제1 양태에서, 본 출원은 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2) 및 중쇄 CDR3(HCDR3)을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3)을 포함하되,

일부 실시형태에서,

(1) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 1로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 2로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 3으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 5로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 7로 표시되는 서열이며; 또는

(2) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 9로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 10으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 11로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 13으로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 14로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 15로 표시되는 서열이며; 또는

(3) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 17로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 18로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 19로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 21로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이며; 또는

(4) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 24로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 25로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 26으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 28로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 29로 표시되는 서열이며; 또는

(5) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 32로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 33으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 35로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 36으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 37로 표시되는 서열이며; 또는

(6) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 39로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 40으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 41로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 43으로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이며; 또는

(7) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 45로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 46으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 47로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 49로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50으로 표시되는 서열이며; 또는

(8) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 53으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 54로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 56으로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 57로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 58로 표시되는 서열이며; 또는

(9) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 60으로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 61로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 62로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 64로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 66으로 표시되는 서열이며; 또는

(10) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 68로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 70으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 73으로 표시되는 서열이며; 또는

(11) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 75로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 80으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열이며; 또는

(12) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 82로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 83으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 84로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 86으로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 87로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 88로 표시되는 서열이며;

일부 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 12, 20, 27, 34, 42, 48, 52, 55, 63, 71, 78, 85, 90, 92, 93, 98, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 120, 121로 표시되는 아미노산 서열, 또는 서열번호 4, 12, 20, 27, 34, 42, 48, 52, 55, 63, 71, 78, 85, 90, 92, 93, 98, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 120, 121로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.

일부 실시형태에서, 경쇄 가변 영역은 서열번호 8, 16, 23, 30, 38, 44, 51, 59, 67, 74, 81, 89, 94, 96, 97, 122, 124, 125, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135로 표시되는 아미노산 서열, 또는 서열번호 8, 16, 23, 30, 38, 44, 51, 59, 67, 74, 81, 89, 94, 96, 97, 122, 124, 125, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.

일부 실시형태에서:

(1) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 4로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 8로 표시되는 서열이며;

(2) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 12로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 16으로 표시되는 서열이며;

(3) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 20으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 23으로 표시되는 서열이며;

(4) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 27로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 30으로 표시되는 서열이며;

(5) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 34로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 38로 표시되는 서열이며;

(6) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 42로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 44로 표시되는 서열이며;

(7) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 48로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 51로 표시되는 서열이며;

(8) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 52로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 51로 표시되는 서열이며;

(9) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 55로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 59로 표시되는 서열이며;

(10) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 63으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 67로 표시되는 서열이며;

(11) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 71로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 74로 표시되는 서열이며;

(12) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 78로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 81로 표시되는 서열이며;

(13) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 85로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 89로 표시되는 서열이며;

(14) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 98로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 122로 표시되는 서열이며;

(15) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 98로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;

(16) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 100으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;

(17) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 101로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;

(18) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 102로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;

(19) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 103으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;

(20) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 104로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;

(21) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;

(22) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 112로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;

(23) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 113으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;

(24) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 125로 표시되는 서열이며;

(25) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 127로 표시되는 서열이며;

(26) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 100으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;

(27) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 101로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;

(28) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;

(29) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 106으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;

(30) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 107로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;

(31) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 108로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;

(32) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 109로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;

(33) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 110으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;

(34) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 111로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;

(35) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 130으로 표시되는 서열이며;

(36) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 131로 표시되는 서열이며;

(37) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 100으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 132로 표시되는 서열이며;

(38) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 114로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 132로 표시되는 서열이며;

(39) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 115로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 133으로 표시되는 서열이며;

(40) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 117로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 133으로 표시되는 서열이며;

(41) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 118로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 133으로 표시되는 서열이며;

(42) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 119로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 133으로 표시되는 서열이며;

(43) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 115로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 134로 표시되는 서열이며;

(44) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 117로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 134로 표시되는 서열이며;

(45) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 118로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 134로 표시되는 서열이며;

(46) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 119로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 134로 표시되는 서열이며;

(47) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 119로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 135로 표시되는 서열이며;

(48) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 120으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 135로 표시되는 서열이며;

(49) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 121로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 135로 표시되는 서열이며;

(50) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 90으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 94로 표시되는 서열이며;

(51) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 92로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 94로 표시되는 서열이며;

(52) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 90으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 96으로 표시되는 서열이며;

(53) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 92로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 96으로 표시되는 서열이며;

(54) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 90으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 97로 표시되는 서열이며; 또는

(55) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 93으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 97로 표시되는 서열이다.

구체적인 실시형태에서, 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 75로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 76으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 99로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 128로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 80으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 123으로 표시되는 서열이다. 보다 구체적인 실시형태에서, 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 127로 표시되는 서열이다.

중쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의된다.

일부 실시형태에서,

(1) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 1로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 2로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 3으로 표시되는 서열이며; 또는

(2) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 9로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 10으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 11로 표시되는 서열이며; 또는

(3) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 17로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 18로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 19로 표시되는 서열이며; 또는

(4) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 24로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 25로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 26으로 표시되는 서열이며; 또는

(5) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 32로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 33으로 표시되는 서열이며; 또는

(6) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 39로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 40으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 41로 표시되는 서열이며; 또는

(7) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 45로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 46으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 47로 표시되는 서열이며; 또는

(8) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 53으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 54로 표시되는 서열이며; 또는

(9) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 60으로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 61로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 62로 표시되는 서열이며; 또는

(10) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 68로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 70으로 표시되는 서열이며; 또는

(11) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 75로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열이며; 또는

(12) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 82로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 83으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 84로 표시되는 서열이며;

중쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의된다.

제3 양태에 따른 항체의 일 구현예는 단일 도메인 항체이고,중쇄 가변 영역 유전자 항체(Variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody, VHH)라고도 하며, 이는 하나의 중쇄 가변 영역으로 구성되고, 나노항체라고도 한다. VHH 항체는 알파카의 말초 혈액에서 처음 발견된 경쇄가 자연적으로 결실된 항체로, 상기 항체는 단 1개의 중쇄 가변 영역(VHH) 및 2개의 일반적인 CH2와 CH3 영역을 포함한다. 클로닝 및 발현된 VHH 구조는 원래의 중쇄 항체와 동등한 구조적 안정성 및 항원에 대한 결합 활성을 가지고, 지금까지 알려진 표적 항원에 결합 가능한 최소 단위이다.

경쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의된다.

일부 실시형태에서,

(1) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 5로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 7로 표시되는 서열이며; 또는

(2) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 13으로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 14로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 15로 표시되는 서열이며; 또는

(3) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 21로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이며; 또는

(4) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 28로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 29로 표시되는 서열이며; 또는

(5) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 35로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 36으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 37로 표시되는 서열이며; 또는

(6) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 43으로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이며; 또는

(7) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 49로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50으로 표시되는 서열이며; 또는

(8) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 56으로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 57로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 58로 표시되는 서열이며; 또는

(9) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 64로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 66으로 표시되는 서열이며; 또는

(10) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 73으로 표시되는 서열이며; 또는

(11) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 80으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열이며; 또는

(12) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 86으로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 87로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 88로 표시되는 서열이며;

경쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의된다.

일부 구체적인 실시형태에서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 CDR1, CDR2, CDR3을 포함하며; 여기서 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 1, 서열번호 9, 서열번호 17, 서열번호 24, 서열번호 31, 서열번호 39, 서열번호 45, 서열번호 60, 서열번호 68, 서열번호 75, 서열번호 82로 표시되는 서열 또는 이들과 적어도 80%(바람직하게는 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택되고;

중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 2, 서열번호 10, 서열번호 18, 서열번호 25, 서열번호 32, 서열번호 40, 서열번호 46, 서열번호 53, 서열번호 61, 서열번호 69, 서열번호 76, 서열번호 83, 서열번호 91, 서열번호 116으로 표시되는 서열 또는 이들과 적어도 80%(바람직하게는 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택되며;

중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 3, 서열번호 11, 서열번호 19, 서열번호 26, 서열번호 33, 서열번호 41, 서열번호 47, 서열번호 54, 서열번호 62, 서열번호 70, 서열번호 77, 서열번호 84, 서열번호 99로 표시되는 서열 또는 이들과 적어도 80%(바람직하게는 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택되고;

및/또는 이의 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 5, 서열번호 13, 서열번호 21, 서열번호 28, 서열번호 35, 서열번호 43, 서열번호 49, 서열번호 56, 서열번호 64, 서열번호 72, 서열번호 79, 서열번호 86, 서열번호 95, 서열번호 126, 서열번호 128로 표시되는 서열 또는 이들과 적어도 80%(바람직하게는 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택되며;

경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6, 서열번호 14, 서열번호 36, 서열번호 57, 서열번호 65, 서열번호 80, 서열번호 87로 표시되는 서열 또는 이들과 적어도 80%(바람직하게는 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택되고;

경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 7, 서열번호 15, 서열번호 22, 서열번호 29, 서열번호 37, 서열번호 50, 서열번호 58, 서열번호 66, 서열번호 73, 서열번호 88, 서열번호 123으로 표시되는 서열 또는 이들과 적어도 80%(바람직하게는 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 갖는 서열로부터 선택된다.

일부 구체적인 실시형태에서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되,

(i) 상기 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 CDR 영역을 포함하고, 여기서,

(1) CDR1의 서열은 서열번호 1로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 2로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 3으로 표시되는 서열이며;

(2) CDR1의 서열은 서열번호 9로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 10으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 11로 표시되는 서열이며;

(3) CDR1의 서열은 서열번호 17로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 18로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 19로 표시되는 서열이며;

(4) CDR1의 서열은 서열번호 24로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 25로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 26으로 표시되는 서열이며;

(5) CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 32로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 33으로 표시되는 서열이며;

(6) CDR1의 서열은 서열번호 39로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 40으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 41로 표시되는 서열이며;

(7) CDR1의 서열은 서열번호 45로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 46으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 47로 표시되는 서열이며;

(8)CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 53으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 54로 표시되는 서열이며;

(9)CDR1의 서열은 서열번호 60으로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 61로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 62로 표시되는 서열이며;

(10) CDR1의 서열은 서열번호 68로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 69로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 70으로 표시되는 서열이며;

(11) CDR1의 서열은 서열번호 75로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 76으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 77로 표시되는 서열이며;

(12) CDR1의 서열은 서열번호 82로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 83으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 84로 표시되는 서열이며;

(ii) 상기 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 CDR 영역을 포함하고, 여기서,

(13) CDR1의 서열은 서열번호 5로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 7로 표시되는 서열이며;

(14) CDR1의 서열은 서열번호 13으로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 14로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 15로 표시되는 서열이며;

(15) CDR1의 서열은 서열번호 21로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이며;

(16) CDR1의 서열은 서열번호 28로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 29로 표시되는 서열이며;

(17) CDR1의 서열은 서열번호 35로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 36으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 37로 표시되는 서열이며;

(18) CDR1의 서열은 서열번호 43으로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이며;

(19) CDR1의 서열은 서열번호 49로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 50으로 표시되는 서열이며;

(20) CDR1의 서열은 서열번호 56으로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 57로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 58로 표시되는 서열이며;

(21) CDR1의 서열은 서열번호 64로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 66으로 표시되는 서열이며;

(22) CDR1의 서열은 서열번호 72로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 73으로 표시되는 서열이며;

(23) CDR1의 서열은 서열번호 79로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 80으로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 50으로 표시되는 서열이며;

(24) CDR1의 서열은 서열번호 86으로 표시되는 서열이며, CDR2의 서열은 서열번호 87로 표시되는 서열이고, CDR3의 서열은 서열번호 88로 표시되는 서열이다.

제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 항-GFRAL 항체는 완전 항체, 단쇄 항체(scFv) 또는 이중특이적 항체이다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 항-GFRAL 항체의 항원 결합 단편은 Fab, Fab', Fv 또는 F(ab')₂이다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 항-GFRAL 항체는 뮤린 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체이다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 항-GFRAL 항체는 단클론 항체이다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 상기 단클론 항체는 뮤린 항체일 수 있고, 인간화 항체일 수도 있다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 항-GFRAL 항체는 이중특이적 항체이다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 항-GFRAL 항체는 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 동종형이고, 즉, 항체는 IgG1 아형, IgG2 아형 또는 IgG4 아형의 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구체적인 실시형태에서, 항-GFRAL 항체는 IgG1의 동종형이다. 구체적인 실시형태에서, 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 IgG1 중쇄 불변 영역 및 인간 κ 경쇄 불변 영역을 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 IgG4 중쇄 불변 영역 및 인간 κ 경쇄 불변 영역을 포함하고, 상기 인간 IgG4 중쇄 불변 영역은 야생형 및 돌연변이형을 포함한다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 항-GFRAL 항체는 κ 아형 또는 λ 아형의 경쇄 불변 영역을 포함한다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 본 출원의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 분리된 것이다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 본 출원의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 키메라 항체일 수 있고, 인간화 항체일 수도 있으며, 인간화 항체는 반인간화 항체, 부분 인간화 항체 또는 완전 인간 항체를 포함한다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 본 출원의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 ADCC 활성을 갖는다. 제1 양태 내지 제5 양태의 일부 실시형태에서, 본 출원의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 CDC 활성을 갖는다.

제6 양태에서, 본 출원은 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 분리된 핵산 분자를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 출원은 본 출원의 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 본 출원의 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 분리된 폴리뉴클레오티드의 조합을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 조절 서열에 작동 가능하게 연결되고, 조절 서열은 상기 벡터로 형질전환된 숙주 세포에 의해 인식될 수 있다.

제7 양태에서, 본 출원은 제6 양태에 따른 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드의 조합을 포함하는 벡터(예: 발현 벡터)를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 출원의 발현 벡터는 본 출원에 따른 핵산 분자 또는 본 출원에 따른 폴리뉴클레오티드의 조합을 포함하고, 상기 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포 또는 무세포 발현 시스템에서 이에 의해 코딩된 폴리펩티드의 발현을 허용하는 조절 서열에 효과적으로 연결된다. 발현 벡터의 선택은 숙주 세포의 선택에 따라 달라지고, 선택된 숙주 세포에서 원하는 발현 및 조절 특징을 갖도록 선택할 수 있다.

“발현 벡터”는 하나 이상의 발현 제어 서열을 포함하는 벡터이고, “발현 제어 서열”은 다른 DNA 서열의 전사 및/또는 번역을 제어 및 조절하는 DNA 서열이다.

벡터의 핵산은 하나 이상의 발현 제어 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 본문에 사용된 바와 같이, “작동 가능하게 연결”은 발현 제어 서열이 표적 코딩 서열의 발현을 효과적으로 제어하도록 유전 구축물에 혼입되는 것을 의미한다. 발현 제어 서열의 예시는 프로모터, 인핸서 및 전사 종결 영역을 포함한다. 프로모터는 통상적으로 전사 개시 부위 업스트림의 100개의 뉴클레오티드 내(통상적으로 RNA 중합효소 II의 개시 부위 근처)에 있는 DNA 분자 영역으로 구성된 발현 제어 서열이다. 코딩 서열이 프로모터의 제어 하에 있기 위해서는 폴리펩티드 번역 판독 프레임의 번역 개시 부위가 프로모터 다운스트림의 1개 내지 약 50개 뉴클레오티드 사이에 위치해야 한다. 인핸서는 시간, 위치 및 수준 측면에서 발현 특이성을 제공한다. 프로모터와 달리 인핸서는 전사 부위로부터 다양한 거리에서 작용할 수 있다. 인핸서는 전사 개시 부위의 다운스트림에 위치할 수도 있다. RNA 중합효소가 코딩 서열을 mRNA로 전사한 다음 mRNA가 코딩 서열에 의해 코딩된 단백질로 번역될 수 있는 경우, 코딩 서열은 세포 내 발현 제어 서열에 “작동 가능하게 연결”되고 발현 제어 서열의 “제어” 하에 있다.

적합한 발현 벡터는 예를 들어 박테리오파지, 바쿨로바이러스, 담배 모자이크 바이러스, 헤르페스바이러스, 거대세포바이러스, 레트로바이러스, 백시니아바이러스, 아데노바이러스 및 아데노 관련 바이러스로부터 유래된 플라스미드 및 바이러스 벡터를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 많은 벡터 및 발현 시스템은 Novagen(Madison,WI), Clontech(Palo Alto, CA), Stratagene(LaJolla, CA) 및 Invitrogen Life Technologies(Carlsbad, CA)와 같은 회사에서 상업적으로 구입할 수 있다.

발현 벡터는 태그 서열을 포함할 수 있다. 태그 서열은 통상적으로 코딩된 폴리펩티드와의 융합체로 발현된다. 이러한 태그는 카르복실 또는 아미노 말단을 포함하여 폴리펩티드 내의 임의의 위치에 삽입될 수 있다. 유용한 태그의 예시에는 Fc 단편, 폴리히스티딘, 녹색 형광 단백질(GFP), 글루타티온 S-트랜스퍼라제(GST), c-myc, 헤마글루티닌, FlagTM 태그(Kodak, NewHaven, CT), 말토스 E 결합 단백질 및 단백질 A가 포함되지만 이에 한정되지는 않는다. 일부 실시형태에서, GFRAL 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 분자는 Ig 중쇄 불변 영역의 하나 이상의 도메인, 예를 들어 인간 면역글로불린 Cγ1 사슬의 힌지 영역, CH2 영역 및 CH3 영역에 대응되는 아미노산 서열(Fc 단편)을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터에 존재한다.

제8 양태에서, 본 출원은 제6 양태에 따른 핵산 분자 또는 제7 양태에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 본 출원의 일부 실시형태에서, 상기 숙주 세포는 원핵 숙주 세포, 진핵 숙주 세포 또는 박테리오파지일 수 있다. 상기 원핵 숙주 세포는 대장균, 고초균, 스트렙토마이세스 또는 프로테우스 미라빌리스 등일 수 있다. 상기 진핵 숙주 세포는 피키아 파스토리스, 사카로미세스 세레비시아, 스키조사카로미세스 세레비시아, 트리코데르마와 같은 진균, Myxomorpha formosana와 같은 곤충 세포, 담배와 같은 식물 세포, BHK 세포, CHO 세포, COS 세포, 골수종 세포와 같은 포유동물 세포일 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 출원에 따른 숙주 세포는 바람직하게는 포유동물 세포, 보다 바람직하게는 BHK 세포, CHO 세포, NSO 세포 또는 COS 세포이다.

제9 양태에서, 본 출원은 치료제와 접합된 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate)를 제공한다.

제9 양태의 일부 실시형태에서, 치료제는 세포독성 약물, 면역강화제 또는 방사성 동위원소와 같은 항종양 약물이다.

일부 실시형태에서, 세포독성 약물의 유형은 튜불린 억제제(예: 알칼로이드), DNA 토포이소머라제 억제제, DNA 손상제, 항대사제 또는 항종양 항생제를 포함한다.

일부 실시형태에서, 튜불린 억제제는 아우리스타틴 유도체(예: MMAE(Monomethyl auristatin E), MMAF(Monomethyl auristatin F)) 또는 메이탄시노이드 유도체(예: DM1, DM4, 안사미토신(Ansamitocin), 메르탄신(Mertansine) 또는 돌라스타틴(dolastatin) 및 이의 유도체)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, DNA 토포이소머라제 억제제는 캄프토테신 유사체 또는 DNA 토포이소머라제I 억제제 및 이의 유도체, 예를 들어, DXD, SN38, 이리노테칸, 이리노테칸 염산염, 캄프토테신, 9-아미노캄프토테신, 9-니트로캄프토테신, 10-히드록시캄프토테신, 9-클로로-10-히드록시캄프토테신, 22-히드록시-시스티리딘, 토포테칸, 레르토테칸, 베일로테칸, 에코시트라콘, 호모실레이트칸(homosilatecan), 6,8-디브로모-2-메틸-3-[2-(D-자일로피라노실아미노)페닐]-4(3H)-퀴나졸리논, 2-시아노-3-(3,4-디히드록시페닐)-N-(페닐메틸)-(2E)-2-아크릴아미드, 2-시아노-3-(3,4-디히드록시페닐)-N-(3-히드록시페닐프로필)-(E)-2-아크릴아미드, 12-β-D-글루코피라노실-12,13-디히드로-2,10-디히드록시-6-[[2-히드록시-1-(히드록시메틸)에틸]아미노]-5H-인돌로[2,3-a]피롤로[3,4-c]카바졸-5,7(6H)-디온, N-[2-(디메틸아미노)에틸]-4-아크리딘카르복스아미드디염산염, N-[2-(디메틸아미노)에틸]-4-아크리딘카르복스아미드이다.

일부 실시형태에서, DNA 손상제는 칼리케아마이신(calicheamicin)류, 듀오카르마이신(duocarmycin)류, 안트라마이신류 유도체 PBD(pyrrolobenzodiazepine, 피롤로벤조디아제핀)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 항대사제는 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린 또는 5-플루오로우라실을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 항종양 항생제는 폴리펩티드류 항생제(예: 악티노마이신 D 또는 블레오마이신) 또는 안트라퀴논류 약물(예: 독소루비신 또는 미톡산트론 염산염)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 실시형태에서, 방사성 동위원소는 ²¹¹At, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁵³Sm, ²¹²Bi, ³²P, ⁶⁰Co 또는 ¹⁷⁷Lu를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 면역강화제는 레바미솔(levamisole), 피도티모드(pidotimod), 이미퀴모드(imiquimod), 이소프리노신, 폴리이노신산 또는 폴리우리딜산을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 본 출원의 항-GFRAL 항체는 링커를 통해 약물 모이어티에 공유 결합으로 연결된다. 일부 실시형태에서, 링커는 절단 가능한 링커이다. 일부 실시형태에서, 링커는 세포내 조건에서 절단될 수 있다. 일 실시형태에서, 링커는 5.5 미만의 pH 조건에서 가수분해될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 세포내 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 카텝신 절단 가능한 링커이다. 일부 실시형태에서, 링커는 디펩티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 디펩티드는 발린(Val)-시트룰린(Cit)이다. 일부 실시형태에서, 항체는 항체의 시스테인의 티올을 통해 링커에 연결된다. 일 실시형태에서, 항체는 항체의 아미노(특히, 글루타민 잔기의 아미노)를 통해 링커에 연결된다. 링커의 비제한적 구현예는 mc-Val-Cit-pAB, mc-Val-Cit-pABC, mc-Val-Cit, NH2-(PEG)m-Val-Cit, NH2-(PEG)m-Val-Cit-pAB를 포함하고, 여기서 m은 1 내지 8의 정수이다.

일부 실시형태에서, 상기 약학적 조성물은 활석 분말, 스테아르산마그네슘 및 미네랄 오일과 같은 윤활제; 습윤제; 유화제; 현탁제; 벤조산, 소르빈산 및 프로피온산칼슘과 같은 방부제; 감미제 및/또는 방향제 등 중 하나 이상을 더 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 출원의 약학적 조성물은 정제, 환제, 분말, 로젠지, 엘릭시르, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 좌제 또는 캡슐 등 형태로 조제될 수 있다.

일부 실시형태에서, 임의의 생리학적으로 허용 가능한 투여 방식을 이용하여 본 출원의 약학적 조성물을 전달할 수 있고, 이러한 투여 방식은 경구 투여, 비경구 투여, 비강 투여, 직장 투여, 복막내 투여, 혈관내 주사, 피하 투여, 경피 투여, 흡입 투여 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 치료 용도의 약학적 조성물은 원하는 순도를 갖는 시약을 적절한 경우 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 등과 혼합함으로써 동결 건조 제제 또는 수용액의 형태로 저장용으로 조제될 수 있다.

제11 양태에서, 본 출원은 GFRAL에 의해 매개되거나 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로에 의해 매개된 질환 또는 이상의 치료 또는 예방을 위한 약물의 제조에서 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 제6 양태에 따른 핵산 분자, 제7 양태에 따른 벡터, 제8 양태에 따른 숙주 세포 또는 제8 양태에 따른 항체-약물 접합체의 용도를 제공하며, 예를 들어, 상기 질환 또는 이상은 악액질 증후군, 종양(암 포함), 심혈관 질환, 신장 질환, 국소 허혈성 질환, 대사장애, 신경퇴행성 질환, 식욕부진 또는 식욕부진으로 인한 체중 감소이다.

제12 양태에서, 본 출원은 개체에서 GFRAL에 의해 매개되거나 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로에 의해 매개된 질환 또는 이상을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 개체에게 치료적 유효량의 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 제9 양태에 따른 항체-약물 접합체 또는 제10 양태에 따른 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 예를 들어, 상기 질환 또는 이상은 악액질 증후군, 종양(암 포함), 심혈관 질환, 신장 질환, 국소 허혈성 질환, 대사장애, 신경퇴행성 질환, 식욕부진 또는 식욕부진으로 인한 체중 감소이다. 일부 구체적인 실시형태에서, 악액질 증후군은 종양(암 포함)으로 인한 악액질 증후군이다. 본 출원의 종양, 암 또는 비정상 증식성 질환은 방광암, 유방암, 결장암, 신장암, 간암, 폐암, 난소암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 갑상선암 및 피부암을 포함하는 암; 편평세포암종; 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프모구 백혈병, B 세포 림프종, T 세포 림프종, 버킷 림프종을 포함하는 림프구성 조혈 종양; 급성 및 만성 골수성 백혈병 및 전골수성 백혈병을 포함하는 골수성 조혈 종양; 섬유육종 및 횡문근육종을 포함하는 중간엽 유래 종양; 성상세포종, 신경모세포종, 신경아교종 및 신경초종을 포함하는 중추 및 말초 신경계 종양; 섬유육종, 횡문근육종 및 골육종을 포함하는 중간엽 유래 종양; 및 흑색종, 색소성 건피증, 각질가시세포종, 정상피종, 갑상선 여포암 및 기형암종을 포함하는 기타 종양을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 종양(암 포함)은 혈액 종양 또는 고형 종양을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 종양(암 포함)은 혈액 종양, 바람직하게는 림프종 또는 백혈병이고, 골수종, B-세포 림프종, 외투세포 림프종, 비호지킨 B-세포 림프종, 비호지킨 림프종 T-세포 림프종, 피부 림프종, 역형성 대세포 림프종, 다발성 골수종, 불활성 비호지킨 림프종, 형질세포종, 만성 림프구성 백혈병, 소림프구성 림프종, 여포성 림프종을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 실시형태에서, 혈액 종양은 재발성 또는 불응성이다.

일부 실시형태에서, 상기 암종양(암 포함)은 고형 종양이고, 호흡기 종양, 소화관 종양, 비뇨기 종양, 남성 장기 종양, 여성 장기 종양, 피부암, 내피 세포 종양, 뇌종양, 신경계 종양, 내분비기관 종양을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 호흡기 종양은 폐암, 비인두암 및 후두암을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 소화관 종양은 식도암, 위암, 대장암, 간암, 췌장암, 담관암을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 비뇨기 종양은 신장암, 신우요관암, 방광암, 요도암을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 남성 장기 종양은 음경암, 전립선암 또는 고환암을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 여성 장기 종양은 유방암, 외음부암, 질암, 자궁경부암, 자궁체암 또는 난소암을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 신경계 종양은 별아교세포종, 희소돌기아교세포종, 뇌실막종, 수모세포종, 수막종을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 뇌종양은 신경교종, 신경세포종, 배아 중간엽 종양, 간질 종양, 상피 종양, 기형종, 송과체부종양을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 피부암은 피부 흑색종 또는 비흑색종 피부암을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

일부 실시형태에서, 상기 암은 고형 종양이고, 방광암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 흉부종양, 자궁내막암, 식도편평상피암, 위암, 두부종양, 췌장암, 담관암, 결장직장암, 안암, 두경부편평상피암, 요로상피암, 신장암, 간암, 림프절암, 폐암, 구강암, 경부종양, 난소암, 전립선암, 고환암, 후두암 및 자궁암, 흑색종, 침샘암, 섬유육종, 연조직 육종 및 골육종을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 실시형태에서, 위의 암은 재발성 또는 불응성이다.

일부 실시형태에서, 상기 유방암은 유관암, 소엽암, 골수암, 신경교암, 관형암, 염증성 유방암, 삼중음성유방암(TNBC)을 포함한다.

일부 실시형태에서, 상기 난소암은 난소의 선암종 및 난소에서 복강으로 이동하는 선암종과 같은 상피성 난소 종양을 포함한다.

일부 실시형태에서, 상기 백혈병은 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 털세포 백혈병, 척수형성이상증, 골수증식성 질환, NK 세포 백혈병(예: 모구 형질세포양 수지세포 종양), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 비만세포증, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 다발성 골수종(MM) 및 골수이형성증후군(MDS)을 포함한다.

일부 실시형태에서, 상기 췌장암은 췌장의 선방세포 선암종, 췌장의 도관세포 선암종 또는 IV기 췌장암이다.

일부 실시형태에서, 상기 폐암은 비소세포폐암(NSCLC) 및 소세포폐암(SCLC)을 포함하고; 일부 실시형태에서, 비소세포폐암(NSCLC)은 편평세포암종, 선암종, 대세포암을 포함하지만 이에 한정되지 않고; 일부 실시형태에서, 폐암은 재발성이며; 일부 실시형태에서, 폐암은 재발성 편평세포폐암 또는 (진행성)IV 기 편평세포폐암이다.

일부 실시형태에서, 상기 전립선암은 전이성 거세 저항성 전립선암(mCRPC)이다.

제13 양태에서, 본 출원은 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 검출 가능한 라벨을 포함하는 접합체를 제공한다. 상기 검출 가능한 라벨은 예를 들어 검출 가능한 형광 라벨, 화학 발광 라벨 또는 동위원소 라벨 등이다.

제14 양태에서, 본 출원은 제1 양태 내지 제5 양태 중 어느 하나의 실시형태에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 융합 단백질을 제공한다. 항체 융합 단백질의 구현예는 Fab 융합 단백질, Fc 융합 단백질 및 단쇄 항체(scFv) 융합 단백질 등을 포함하고, 효과기 단백질(예: 사이토카인)이 융합된 부위에 따라 명명된다.

이해해야 할 것은, 위의 상세한 설명은 단지 당업자가 본 출원의 내용을 보다 명확하게 이해하도록 하기 위한 것이고, 어떤 방식으로든 제한하려는 의도가 아니다. 당업자는 상기 실시형태에 대해 다양한 수정 및 변경을 이룰 수 있다.

실시예

이하, 실시예를 결부하여 본 출원의 구체적인 실시형태를 상세하게 설명하지만, 당업자는 하기 실시예가 본 출원을 설명하기 위한 것일 뿐 본 출원의 범위를 한정하기 위한 것이 아님을 이해할 것이다.

실시예에서 구체적인 조건을 명시하지 않은 경우, 일반적인 조건 또는 제조업체에서 권장하는 조건을 따른다. 사용된 시약 또는 기기는 제조업체를 명시하지 않은 경우, 시중에서 판매되는 일반 제품이다.

실시예 1: 뮤린 항체의 획득

항-GFRAL 항체를 획득하기 위해, 발명자는 인간 GFRAL-His 융합 단백질(Kaiju, 카탈로그 번호 GFL-HM401) 및 인간 GFRAL 단백질을 과발현하는 세포를 이용하여 마우스를 면역화함으로써 항-인간 GFRAL 항체의 생산을 유도하였다.

인간 GFRAL을 과발현하는 세포의 제조: HEK293 세포를 pLVX-IRES-퓨로마이신-hGFRAL 유전자를 운반하는 렌티바이러스로 감염시키고, 72시간 후, 최종 농도 1μg/ml의 퓨로마이신을 첨가하여 단클론 세포주를 스크리닝하고, 동물 면역화를 위해 FACS 방법으로 인간 GFRAL의 발현이 높은 세포주를 스크리닝하였다.

동물을 피하 또는 복강내 주사에 의해 보조제(프로인트 완전 보조제 또는 프로인트 불완전 보조제)의 부재 또는 존재 하에 인간 GFRAL-His 융합 단백질 또는 인간 GFRAL을 과발현하는 세포로 면역화시켰다. 적합한 역가가 달성될 때까지 2주마다 면역 증강을 통해 동물을 지속적으로 유도하였다. 각각의 면역 증강 후에 동물로부터 혈액을 채취하고, ELISA 및 FACS 방법을 통해 혈청 내 항체 역가를 검출하며; 최종 면역 4일 후, 적합한 역가를 갖는 동물의 비장을 채취하여 단세포 현탁액을 제조하였다. 전기융합을 사용하여 세포를 SP2/0 마우스 골수종 세포에 융합시켰다. 융합된 세포를 하이브리도마 세포 선택제 티미딘, 하이포크산틴 및 아미노프테린(HAT)을 함유하는 배지에 재현탁시킨 다음, 배양을 위해 96웰 플레이트에 접종하였다.

7-10일간 배양 후, 배양 상층액을 수집하고, 실시예 2에 기술된 ELISA 또는 FACS 방법을 통해 검출하여 인간 GFRAL 및 게잡이원숭이 GFRAL 단백질에 결합할 수 있는 항체 클론을 스크리닝하고 마우스 GFRAL 단백질에 대한 결합 여부를 검증하였다. 새로운 HAT 함유 배지를 첨가한 후 하이브리도마 세포를 계속 배양하였다. 2일 후 1라운드에서 스크리닝된 양성 클론의 배양 상층액을 수집한 다음 실시예 3에 기술된 GFRAL 항체 길항 기능 활성에 대해 검출하였다. 그 후, 스크리닝된 양성 클론을 추가로 서브클로닝하였다. 성공적인 서브클로닝 후, 일반적인 항체 정제 방법으로 이러한 항체를 정제하고, 실시예 3에 기술된 GFRAL 항체 길항 기능 측정법을 통해 항체의 길항 기능을 추가로 측정하였다. 동시에 요구에 부합되는 일부 클론에 대해 항체의 가변 영역 시퀀싱을 수행하였다.

총 5라운드에 걸친 융합 스크리닝을 수행하여 약 30,000개의 클론을 스크리닝하였다. ELISA 및 FACS 스크리닝을 통해 1,000개 이상의 클론을 스크리닝하여 GFRAL 길항 기능 검출을 수행하고, 그중에서 100개 미만의 클론을 스크리닝하여 서브클로닝함으로써, 최종적으로 본 출원의 항체를 획득하였다.

본 출원에 관한 항체 관련 서열은 하기 표와 같다:

뮤린 항체 서열(밑줄 친 부분은 CDR을 나타냄)

명칭	번호(IMGT)
61G8	중쇄 CDR1: GYGVN 서열번호 1중쇄 CDR2: MIWGDGTTDYNSALKS 서열번호 2 중쇄 CDR3: DPKYNYGYAMDY 서열번호 3 중쇄 가변 영역: QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYGVNWVRQSPGKGLEWLGMIWGDGTTDYNSALKS RLTIRKDNSKSQVFLRMNSLQTDDTARYYCARDPKYNYGYAMDYWGQGTSVTVSS 서열번호 4 경쇄 CDR1: RASESVDNFGNSFMH 서열번호 5 경쇄 CDR2: RASNLES 서열번호 6 경쇄 CDR3: QQTNEEPYT 서열번호 7 경쇄 가변 영역: DIVLTQAPGSLAVSLGQRATISCRASESVDNFGNSFMHWYQQKPGQSPKLLIYRASNLESGIPARF SGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQTNEEPYTFGGGTKLEIE 서열번호 8
90E1	중쇄 CDR1: SYVIH 서열번호 9 중쇄 CDR2: YINPYNDDINYNEKFKG 서열번호 10 중쇄 CDR3: YDYDWYFDV 서열번호 11 중쇄 가변 영역: EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIHWVKQEPGQGLEWIGYINPYNDDINYNEKFKGK ATLTSDKSSSTAYMEFSSLTSEDSAVYYCARYDYDWYFDVWGAGTAVTVSS 서열번호 12 경쇄 CDR1: KSSQSLLDSDGKTYVN 서열번호 13 경쇄 CDR2: LVSKLGS 서열번호 14 경쇄 CDR3:WQGTHFPQT 서열번호 15 경쇄 가변 영역: DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYVNWLLQRPGQSPKRLIFLVSKLGSGVPDRFTG SGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPQTFGGGTKLEIK 서열번호 16
82G8	중쇄 CDR1: GHGVN 서열번호 17 중쇄 CDR2: MIWGDGYTDYNSALKS 서열번호 18 중쇄 CDR3:DTYGRTYDYAMDY 서열번호 19 중쇄 가변 영역: QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGHGVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGYTDYNSALKSRLSISKDN SKSQVFLKMNSLQTDDTATYYCARDTYGRTYDYAMDYWGQGTSVTVSS 서열번호 20 경쇄 CDR1: RASESVDNYGNSFMH 서열번호 21 경쇄 CDR2: RASNLES 서열번호 6 경쇄 CDR3: QQSNEDPRT 서열번호 22 경쇄 가변 영역: DIVLTQSPASLAVSLGQRAAISCRASESVDNYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTD FTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPRTFGGGTKLEIK 서열번호 23
8E10	중쇄 CDR1: NYWMN 서열번호 24 중쇄 CDR2: QIYPGDDDADYNGKFQG 서열번호 25 중쇄 CDR3: SGRRDFDY 서열번호 26 중쇄 가변 영역: QVQLQQSGSELVRPGSSVKISCRASGYTFSNYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDDDADYNGKFQG KATLTADKSSSTAYMQLNTLTSEDSAVYFCTRSGRRDFDYWGQGTTLTVSS 서열번호 27 경쇄 CDR1: RASESIDNYGNSFMH 서열번호 28 경쇄 CDR2: RASNLES 서열번호 6 경쇄 CDR3: QQNNEDPYT 서열번호 29 경쇄 가변 영역: NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESIDNYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPARFSGSGS RTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIK 서열번호 30
174E10	중쇄 CDR1: SYGVH 서열번호 31 중쇄 CDR2: VIWSGGRIDYNAAFIS 서열번호 32 중쇄 CDR3: KGSSYYGLYYYGMDY 서열번호 33 중쇄 가변 영역: QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGRIDYNAAFISRLSIS KDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYCARKGSSYYGLYYYGMDYWGQGTSVTVSS 서열번호 34 경쇄 CDR1: KSSQSLLNSGNQKNYLT 서열번호 35 경쇄 CDR2: WASTRES 서열번호 36 경쇄 CDR3: QNDYGYPLT 서열번호 37 경쇄 가변 영역: DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKSGQTPKLLIYWASTRESGVPDRFT GSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYGYPLTFGAGTKLELK 서열번호 38
96C12	중쇄 CDR1: GYSVN 서열번호 39 중쇄 CDR2: MIWGDGSTDYNSALKS 서열번호 40 중쇄 CDR3: DRDYRYDGGYIMDS 서열번호 41 중쇄 가변 영역: RVQLRESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYSVNWVRQPPGKGLEWLGMIWGDGSTDYNSALKSRLSIS KDNSKSQVFLKMNSLQTDDTARYYCARDRDYRYDGGYIMDSWGQGTSVTVSS 서열번호 42 경쇄 CDR1: RASESVDNFGNSFLH 서열번호 43 경쇄 CDR2: RASNLES 서열번호 6 경쇄 CDR3: QQSNEDPRT 서열번호 22 경쇄 가변 영역: DIVLTQSPGSLAVSLGQRATISCRASESVDNFGNSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPARFSGSGSR TDFTLTISPVEADDVATYYCQQSNEDPRTFGGGTKLEIR 서열번호 44
36D1	중쇄 CDR1: RNWMH 서열번호 45 중쇄 CDR2: EIDPSDSYTHYNQKFKG 서열번호 46 중쇄 CDR3: VGNYDNGKDRLYAMDY 서열번호 47 중쇄 가변 영역: QVQLQQPGTEFVKPGASVKLSCKASGYTFTRNWMHWLKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYTHYNQKFKGKA TLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARVGNYDNGKDRLYAMDYWGQGTSVTVSS 서열번호 48 경쇄 CDR1: RASESVDNFGNTFLH 서열번호 49 경쇄 CDR2: RASNLES 서열번호 6 경쇄 CDR3: QQNNEDPWT 서열번호 50 경쇄 가변 영역: DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNFGNTFLHWFRQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDF TLTINPVEADDVATYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK 서열번호 51
33B12	중쇄 CDR1: RNWMH 서열번호 45 중쇄 CDR2: EIDPSDSYTHYNQKFKG 서열번호 46 중쇄 CDR3: VGNYDNGTDRLYAMDY 서열번호 47 중쇄 가변 영역: QVQLQQPGTELVKPGASVKLSCKASGYTFTRNWMHWLKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYTHYNQKFKGKATLTV EMSSSTAYMQLRSLTSEDSAVYYCARVGNYDNGTDRLYAMDYWGQGTSVTVSS 서열번호 52 경쇄 CDR1: RASESVDNFGNTFLH 서열번호 49 경쇄 CDR2: RASNLES 서열번호 6 경쇄 CDR3: QQNNEDPWT 서열번호 50 경쇄 가변 영역: DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNFGNTFLHWFRQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDF TLTINPVEADDVATYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK 서열번호 51
174D6	중쇄 CDR1: SYGVH 서열번호 31 중쇄 CDR2: VIWSGGRTDYNAAFIS 서열번호 53 중쇄 CDR3: KGSSYYGLYYYGMDF 서열번호 54 중쇄 가변 영역: QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGRTDYNAAFISRLNISKDS SKSQVFFKMNSLQADDTAIYYCARKGSSYYGLYYYGMDFWGQGTSVTVSS 서열번호 55 경쇄 CDR1: RASESVDNYGISFMN 서열번호 56 경쇄 CDR2: VASNQGS 서열번호 57 경쇄 CDR3: QHSKEVPRT 서열번호 58 경쇄 가변 영역: DIVLTQSPASLTVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQPPKLLIYVASNQGSGVPARFSGSGSGTDFS LNIHPMEEDDTAMYFCQHSKEVPRTFGGGTKLEIK 서열번호 59
165C5	중쇄 CDR1: SYAMS 서열번호 60 중쇄 CDR2: SITTGGSTYYLDSVRG 서열번호 61 중쇄 CDR3: SLIITATGFDY 서열번호 62 중쇄 가변 영역: EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASITTGGSTYYLDSVRGRFTISRDNA RNILSLQMSSLRSEDTAIYYCARSLIITATGFDYWGQGTTLTVSS 서열번호 63 경쇄 CDR1: RASQDVGTAVA 서열번호 64 경쇄 CDR2: SASNRYT 서열번호 65 경쇄 CDR3: QQYSIYYT 서열번호 66 경쇄 가변 영역: DIVMTQSQKFMSISVGDRVNITCRASQDVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSASNRYTGVPNRFTGSGSGTDFTLAI SNMQSEDLADYFCQQYSIYYTFGGGTKLEIK 서열번호 67
2D4	중쇄 CDR1: SFVMS 서열번호 68 중쇄 CDR2: SITSGGTTFYPDSVKG 서열번호 69 중쇄 CDR3: GPPQFSSLSMDY 서열번호 70 중쇄 가변 영역: EVNLVESGGGLVKPGGPLKLSCAASGFTFSSFVMSWVRQTPEKRLEWVASITSGGTTFYPDSVKGRFTISRDNA RNILYLQMSNLRSGDTAMYYCARGPPQFSSLSMDYWGQGTSVTVSS 서열번호 71 경쇄 CDR1: KASQNVGTAVS 서열번호 72 경쇄 CDR2: SASNRYT 서열번호 65 경쇄 CDR3: QQYSSLFT 서열번호 73 경쇄 가변 영역: DIVMTQSQKFMSTSVGDRITITCKASQNVGTAVSWFQQKPGQVPKLLIYSASNRYTGVPDRFTGSGSGTEFTLTI SNIQSEDLADYFCQQYSSLFTFGSGTKLEIK 서열번호 74
26D7	중쇄 CDR1: GYTFTDYGMN 서열번호 75 중쇄 CDR2: WINTYTGEPTYADDFKD 서열번호 76 중쇄 CDR3: RYGYDAGIDC 서열번호 77 중쇄 가변 영역: QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKVSGYTFTDYGMNWVKQTPGKDLKWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFAFSLE ASASTAYLQINNLKNEDTATYFCARRYGYDAGIDCWGQGTTLTVSS 서열번호 78 경쇄 CDR1: RASESVDSYGNNLMH 서열번호 79 경쇄 CDR2: LASYLES 서열번호 80 경쇄 CDR3: QQNNEDPWT 서열번호 50 경쇄 가변 영역: NIVLTQSPPSLAVSLGQRATISCRASESVDSYGNNLMHWYQQKPGQPPKLLIYLASYLESGVPARFSGSGSRTD FTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK 서열번호 81
168A7	중쇄 CDR1: TSDMGVG 서열번호 82 중쇄 CDR2: HIWWDDDKYYNPSLKR 서열번호 83 중쇄 CDR3: LYDYDDEYYFDY 서열번호 84 중쇄 가변 영역: QVTLKESGPGILKPSQTLSLTCSFSGFSLSTSDMGVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWDDDKYYNPSLKRQLTISKDN SRNQVFLKISSVDTTDTATYYCARLYDYDDEYYFDYWGQGTTLTVSS 서열번호 85 경쇄 CDR1: RASQDSNNYLN 서열번호 86 경쇄 CDR2: YTSRLHS 서열번호 87 경쇄 CDR3: QQGNTIPWT 서열번호 88 경쇄 가변 영역: DIQMTQTKSSLSASLGDRVTISCRASQDSNNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTI SNLEHEDIATYFCQQGNTIPWTFGGGTKLEIK 서열번호 89

실시예 2: 항-GFRAL 항체의 스크리닝 및 선택ELISA 또는 FACS 방법을 통해 실시예 1에서 설명된 배양 상층액에서 하이브리도마에 의해 생성된 항-GFRAL 항체 또는 정제 항체와 인간 GFRAL, 게잡이원숭이 GFRAL 및 마우스 GFRAL 단백질의 결합을 측정하였다.

ELISA 측정 방법의 흐름은 다음과 같다: 96웰 플레이트에 인간 GFRAL-His 단백질, 게잡이원숭이 GFRAL-His 단백질, 또는 마우스 GFRAL-Fc 단백질을 코팅하고, PBS/1%BSA로 웰 플레이트를 차단한 후, 하이브리도마 상층액 또는 정제된 항체를 반응 웰에 첨가하며, 실온에서 1시간 동안 배양한 후, HRP-표지된 항-마우스 IgG(Fab 영역) 항체를 반응 웰에 첨가하여 실온에서 추가로 1시간 동안 배양하였다. 기질과 정지 용액을 연속적으로 첨가한 후 OD₄₅₀ 값을 판독하였다. OD₄₅₀ 값을 통해 GFRAL 단백질에 대한 항체의 결합 능력을 확인하고 평가하였다.

FACS 스크리닝에서는 동물 면역화에 사용된 것과 다른 인간 GFRAL을 과발현하는 단클론 세포주를 사용하였다. 하이브리도마 상층액 또는 정제된 항체를 인간 GFRAL을 과발현하는 단클론 세포와 함께 4℃에서 1시간 동안 배양한 후, Alexa Fluor 647 염료 표지 항-마우스 Fc 항체를 반응 웰에 첨가하여 4℃에서 추가로 1시간 동안 배양하였다. 세포의 Alexa Fluor 647 형광 신호를 유세포 분석기를 통해 분석하여 하이브리도마 상층액에 GFRAL에 대한 항체가 포함되어 있는지 여부를 판단하거나 세포 표면의 GFRAL 단백질에 대한 항체의 결합 능력을 평가하였다.

ELISA 측정법에서, 실시예 1에서 설명된 정제 항체와 인간 GFRAL, 게잡이원숭이 GFRAL 및 마우스 GFRAL 단백질의 결합의 대표적인 데이터는 하기와 같다.

상이한 유래의 GFRAL 단백질에 대한 항-GFRAL 항체의 결합에 관한 ELISA 실험

	ELISA EC ₅₀ (nM)
클론 ID	인간 GFRAL-His	게잡이원숭이 GFRAL-His	마우스 GFRAL-Fc
33B12	0.06	0.08	>6.67
165C5	0.27	0.03	0.12
36D1	0.18	0.07	>6.67
26D7	0.07	0.06	0.15
82G8	0.03	0.04	>6.67
8E10	0.05	0.06	>6.67
168A7	1.87	0.09	>6.67
174D6	0.28	0.07	0.14
61G8	0.07	0.08	>6.67
174E10	0.18	0.06	0.12
96C12	0.03	0.03	>6.67
2D4	0.09	0.10	0.08

실시예 3: GFRAL 항체 길항 기능 측정예를 들어, 리포터 유전자 측정법에 기반하여, 항체가 GDF15를 차단하여 GFRAL/RET 신호 전달 경로를 활성화하는 기능을 스크리닝 또는 평가하기 위해 실시예 1에서 설명된 배양 상층액 또는 정제된 항체에 대해 GFRAL 항체 길항 기능 측정을 수행하였다. 상기 방법은 GFRAL/RET 관련 유전자로 안정적으로 형질감염된 세포를 이용하고, GDF15는 GFRAL/RET 신호 전달 경로를 활성화하여 ERK 인산화를 유발하며, ERK 인산화는 Gal4-Elk1 인산화를 추가로 유발하고 DNA의 USA 프로모터 영역에 결합한 후, 루시퍼라제 리포터 유전자 전사를 시작하며, 루시퍼라제 수준을 측정하여 GFRAL/RET 신호 전달 경로에 대한 GDF15의 활성화 및 항체의 길항 기능을 측정하였다.

하기와 같은 방법을 사용하여 리포터 유전자로 안정적으로 형질감염된 세포주를 구축하였다. 먼저 2개의 리포터 플라스미드 Gal4-Elk1과 6XUAS-Luc를 먼저 HEK293 세포에 형질감염시키고, 상응한 항생제 스크리닝 기간 후에 표적 분자를 안정적으로 발현하는 세포주를 획득하였다. 인간 GFRAL(hGFRAL) 또는 마우스 GFRAL(mGFRAL) 및 인간 RET(hRET) 또는 마우스 RET(mRET)를 코딩하는 플라스미드를 세포에 추가로 형질감염시키고, 항생제 스크리닝 후 GFRAL/RET/Gal4-Elk1/Luc로 안정적으로 형질감염된 세포주를 획득하였다.

예를 들어, 하기와 같은 방법을 사용하여 GFRAL 항체의 길항 기능 활성을 측정하였다. 리포터 유전자로 안정적으로 형질감염된 세포를 적절한 밀도로 96웰 플레이트에 접종하고, 하이브리도마 상층액 또는 시험할 항체와 함께 5% CO₂ 및 포화 습도를 갖춘 37℃ 인큐베이터에서 밤새 배양하였다. 다음날 특정 농도의 인간 GDF15 또는 마우스 GDF15를 첨가하여 세포를 자극하고, 5-6시간 후에 One-Glo(Promega) 키트를 사용하여 세포 내 루시퍼라제 수준을 측정하였다.

항-GFRAL 항체에 의한 인간 GFRAL/RET 신호 전달 억제의 대표적인 결과는 다음과 같다:

GFRAL 항체의 차단 활성

뮤린	IC₅₀(nM)
클론 ID	인간 GFRAL/인간 RET	마우스 GFRAL/마우스 RET
33B12	7.04	>694
165C5	55.48	7.22
36D1	6.89	>694
26D7	6.35	0.76
82G8	5.67	>694
8E10	3.33	>694
168A7	3.29	>694
174D6	104.40	>694
61G8	11.60	>694
174E10	37.17	104.90
96C12	6.42	>694
2D4	11.64	2.23
90E1	81.37	75.50

실시예 4: 항체 친화력 측정Biacore 친화력 측정법에 기반하여, 3가지 항체 균주 168A7, 8E10 및 26D7에 대해 결합 친화력 측정을 수행하였다. 정제된 항체의 평형 해리 상수(KD)를 측정하여 인간 GFRAL 또는 마우스 GFRAL에 대한 결합력을 평가하였다. 아미노 결합 키트(카탈로그 번호: BR100050, Cytiva)의 지침에 따라 항-인간 Fc 항체를 CM5 칩의 플로우 셀에 고정시켰다. 플로우 셀 2, 3 및 4에서 플로우 셀 1을 기준으로 사용하여 정제된 항체(~300RU)를 포획하였다. 그런 다음 인간 또는 마우스 GFRAL 단백질(HBS-EP 완충액 내)을 30μL/min의 유속으로 주입하고 25℃에서 결합 동역학을 평가하였다. 그 결과는 하기와 같다(도 1A-도 1C, 표 4)

3가지 뮤린 항체의 결합 동역학 데이터

	결합 친화력
뮤린	인간 GFRAL		마우스 GFRAL
클론 ID	KD(M)	k_off(1/s)	KD(nM)	k_off(1/s)
168A7	1.45E-12	7.06E-05	미측정	미측정
8E10	1.79E-11	4.04E-04	미측정	미측정
26D7	1.53E-11	9.37E-05	1.66E-10	2.93E-04

이로부터 알다시피, 뮤린 항체는 인간 GFRAL에 대해 높은 친화력을 가지고, 여기서 26D7은 인간 GFRAL 및 마우스 GFRAL 모두에 대해 우수한 결합 활성을 가지며 마우스 모델에 대한 실험에 사용하기에 적합하다.실시예 5: 동물 모델 연구에서 뮤린 GFRAL 길항성 항체의 생물학적 기능 평가

5.1 인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 마우스 모델에서 종양-유도된 체중 감소 억제에 있어서 항-GFRAL 항체의 작용 평가

항-GFRAL 항체가 종양보유 마우스에서 종양 유발 체중 감소 효과를 완화할 수 있는지 여부를 결정하기 위해, 6-9주령 암컷 BALB/c 누드 마우스(GemPharmatech Co., Ltd)를 사용하였다. 마우스에게 시험관내에서 배양된 HT1080 세포주를 접종하고, 마우스 체중이 약 7% 감소한 후 성공적으로 접종된 마우스를 무작위로 두 그룹으로 나누어 각 그룹당 10마리씩 두 그룹에 매주 10 mg/kg 용량의 대조 항체(mIgG1, 출처: Crownbio, GFRAL 비표적화 음성 대조 항체) 또는 항-GFRAL 항체 26D7을 피하 주사하였다. 다른 그룹(n=10)의 비 종양보유 마우스에도 대조 항체 10mg/kg/주를 피하 주사하였다. 일일 체중 및 음식 섭취량을 기록하고, Study Director^TM(버전 3.1.399.19) 소프트웨어를 사용하여 측정된 체중 데이터를 기록하였다. 데이터는 다음과 같이 요약되고, 데이터는 종양 부피, 전체 체중 및 체중 변화율(즉, 기준 체중에 대한 체중 변화율)의 평균값±SEM으로 표시된다. 이러한 실험에서는 P<0.05가 통계적 차이가 유의한 것으로 간주된다. 결과(도 2 및 표 5 참조)는 항-GFRAL 항체 26D7이 종양보유 마우스에서 GDF15-유도된 체중 감소를 역전시킬 수 있음을 보여준다.

인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 모델에서 마우스 체중 및 종양 크기에 대한 항-GFRAL 항체 26D7의 영향

그룹	종양 부피(mm ³ )		체중(g)		체중 변화 ^a (%)	P ^b
그룹	0일	13일	0일	13일	13일	P ^b
비 종양보유 마우스, mIgG1	N/A	N/A	21.3±0.3	21.7±0.3	2.08±0.70	0.004
종양보유 마우스, mIgG1	0	1721±171	23.1±0.4	22.0±0.4	-4.73±1.91	-
종양보유 마우스, 26D7	0	1921±129	23.0±0.3	24.6±0.2	7.11±0.92	<0.001

참고: 데이터는 평균값±SEM으로 표시되고;a: 체중 변화=[(i일차 체중-0일차 체중)/0일차 체중]*100%;b: 상이한 그룹에 대해 0일차부터 13일차까지의 체중 변화를 비교하여 독립적인 t 검정을 수행한다.

아울러, 실험 종료 시점에 동물 복지 요구사항에 따라 동물을 안락사시킨 후, 마우스의 피하 지방과 비복근을 분리하여 무게를 측정하고, one way ANOVA-검정을 이용하여 통계 분석을 수행하며, 실험에서는 P<0.05가 통계적 차이가 유의한 것으로 간주된다. 도 3, 도 4에 도시된 바와 같이, 실험 결과는 항-GFRAL 항체 26D7이 종양보유 마우스에서 종양으로 인한 마우스의 비복근 및 피하 지방 중량 감소를 역전시킬 수 있음을 보여준다.

5.2 AAV-mGDF15 모델에서 GDF-15-유도된 체중 감소를 역전시키는 데 있어 뮤린 항-GFRAL 항체의 작용 평가

12-14주령 수컷 C57BL/6 마우스를 사용하여 AAV-mGDF15 마우스 모델을 구축하였다. 먼저 GDF15를 발현하는 아데노바이러스 관련 바이러스(rAAV)를 구축하고, 간략한 흐름은 하기와 같다:

1. PCR 증폭 단편 프라이머를 설계하고, 프라이머 5' 말단에 선형화된 클로닝 벡터 말단의 상동 서열을 도입하며, 프라이머 서열을 설계하여 합성하였다.

2. 벡터 플라스미드를 함유한 박테리아 용액을 밤새 배양하고, 새로운 박테리아 용액에서 플라스미드를 추출한 다음, 1μg의 신선한 플라스미드를 채취하고, 상응한 제한효소로 이중 절단하였다. 절단된 생성물을 아가로스 겔 전기영동 분석한 후 겔 회수를 수행하고, 필터 컬럼을 원심분리한 후 농도를 측정하였다.

3. 희석된 프라이머와 주형을 사용하여 PCR 증폭을 수행하고, 증폭 후 아가로스 겔 전기영동을 통해 목적 유전자를 분석하고 회수하며, 회수 방법은 위와 같다.

4. 회수 벡터와 목적 단편의 농도를 측정한 후, HieffClone™ 재조합 반응 시스템을 이용하여 50℃의 조건에서 과발현 벡터를 목적 단편과 연결시켰다. 연결 생성물을 컴피턴트 세포에 첨가하여 형질전환시키고, 37℃에서 밤새 배양한 후, 클론을 스크리닝하여 시퀀싱하였다.

5. 고순도 플라스미드를 추출한 후, HG transgene 시약을 사용하여 바이러스 벡터와 보조 패키징 요소 플라스미드를 AAV-293 세포에 공동 형질감염시키고, 형질감염 후 48시간 동안 배양하며, 세포 박리 후 세포 및 상층액을 수집하고, 이를 농축 및 정제하여 고역가의 바이러스 농축액을 획득하였다.

관련 프라이머 서열

프라이머 명칭	프라이머 서열(5'-3')
순방향 프라이머	GCGAATTCGAAGTATACCTCGAGGCCACCATGGCCCCG
역방향 프라이머	GTGTCTGACTGTGTCGGATCCTCAAGCGCAGTGGCAGCCCCGG

“Matched distribution”(StudyDirector^TM software, version 3.1.399.19) 방법에 기반하여, 마우스를 평균 체중에 따라 그룹당 6마리씩 3그룹으로 무작위로 나누며, 여기서 그룹 1의 마우스는 처리하지 않았고, 그룹 2, 3의 마우스는 mGDF15를 발현하는 rAAV 1×10¹⁰vg을 단일 꼬리 정맥 주사로 투여하였다. rAAV 주사 10일 후, 피하 주사를 통해 그룹 1, 2의 마우스에게 10mg/kg 용량의 대조 항체 mIgG1을 투여하고, 그룹 3의 마우스에게 동일한 용량의 항-GFRAL 항체 26D7을 투여하였다. 체중을 주 3회 모니터링하고, 음식 섭취량을 주 2회 모니터링하였다. 체중 데이터는 다음과 같이 요약되며, 데이터는 전체 체중 및 체중 변화율의 평균값±SEM(즉, 기준 체중 대비 체중 변화율)으로 표시된다.

AAV-mGDF15 마우스 모델에서 마우스 체중 감소에 대한 항-GFRAL 항체 26D7의 개선 효과 데이터

그룹	0일차 전처리	10일차 처리 (10 mg/kg)	체중(g)			체중 변화 ^a (%)		P ^b
그룹	0일차 전처리	10일차 처리 (10 mg/kg)	0일	10일	24일	10일	24일	P ^b
1	NA	mIgG1	26.5±0.8	28.3±0.9	30.1±0.9	6.55±2.03	13.30±3.26	<0.001
2	AAV- GDF15	mIgG1	26.4±0.8	24.3±1.4	24.7±1.4	-7.66±4.43	-5.66±4.19	-
3	AAV- GDF15	26D7	26.7±0.8	24.3±1.0	29.2±0.9	-8.84±3.41	9.21±3.17	<0.001

참고: 데이터는 평균값±SEM으로 표시되고;a. 체중 변화=[(i일차 체중-0일차 체중)/0일차 체중]*100%;b. 상이한 그룹에 대해 0일차부터 24일차까지의 체중 변화를 비교하여 독립적인 t 검정을 수행한다.

도 5 및 표 7의 데이터 분석에서, 실험 결과는 항-GFRAL 항체 26D7이 GDF15에 의해 유도된 체중 감소를 역전시키고 마우스의 체중을 약 10%까지 효과적으로 증가시킬 수 있음을 보여주며, 이러한 체중 변화는 통계적으로 유의하다.

상기 실험 데이터를 종합하면, 본 출원에서 획득된 뮤린 GFRAL 길항성 항체는 GFRAL/RET 신호 전달을 효과적으로 차단할 수 있고, 우수한 차단 활성을 가지며, 동시에 종양보유 마우스 모델 및 비 종양보유 마우스 모델 실험 결과에 의해 확인된 바와 같이, 본 출원에서 획득된 항-GFRAL 항체는 종양 또는 GDF15에 의해 유도된 체중 감소를 유의하게 역전시킬 수 있고, 암 및 다른 원인으로 인한 악액질을 치료 또는 완화하는 특별한 치료 효과를 잠재적으로 가지고 있음이 밝혀졌다.

실시예 6 뮤린 항체의 인간화 및 활성 측정

2D4 뮤린 항체 및 26D7 뮤린 항체를 선택하여 인간화 설계를 수행하고, 간략한 단계는 다음과 같다: 먼저 Discovery Studio 및 Schrφdinger Antibody Modeling 등 소프트웨어를 각각 사용하여 뮤린 항체의 가변 영역 구조를 시뮬레이션하고 최적의 구조 모델을 선택하여 항체의 가변 영역 구조와 CDR 구조를 분석하였다.

인간 Germline 서열과 정렬하여 뮤린 항체와 고도로 상동성인 인간 중쇄 및 경쇄 Germline 서열을 각각 스크리닝하였다. 뮤린 항체 CDR 서열을 인간 Germline 서열의 상응한 위치에 전이시키고, 동시에 뮤린 항체 구조 모델 분석 결과를 바탕으로 뮤린 항체의 아미노산 서열을 개별적으로 또는 프레임워크 영역에서 CDR 구조 형성에 중요한 역할을 하는 아미노산 잔기와 조합하여 교체하여, 상이한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 설계하였다(표 8, 표 9, 표 10).

표 8에 나타낸 서열을 갖는 인간화 항체를 다음과 같이 제조하였다. 인간 IgG4 불변 영역 및 κ 불변 영역을 사용하여, 상이한 경쇄 및 중쇄 가변 영역 조합에 따라 상이한 인간화 항체를 구축하였다(표 11).

실시예 3에 기술된 리포터 유전자 측정법을 사용하여 인간화 항체에 의한 인간 GFRAL 및 뮤린 GFRAL 기능의 길항 작용을 검출하고, 그 결과를 표 11에 나타내었다.

획득된 인간화 항체의 서열 구조

항체1: FM1-CDR1-FM2-CDR2-FM3-CDR3-FM4
2D4-mVH
EVNLVESGGGLVKPGGPLKLSCAASGFTFSSFVMSWVRQTPEKRLEWVASITSGGTTFYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSNLRSGDTAMYYCARGPPQFSSLSMDYWGQGTSVTVSS
(서열번호 71)
2D4-H6a
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSFVMSWVRQAPGKGLEWVASITSGGTTFYPESVRGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARGPPQFSSLSMDYWGQGTTVTVSS
(서열번호 90)
중쇄 CDR2: SITSGGTTFYPESVRG (서열번호 91)

2D4-H6b
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSFVMSWVRQAPGKGLEWVASITSGGTTFYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARGPPQFSSLSMDYWGQGTTVTVSS
(서열번호 92)

2D4-H6c
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSFVMSWVRQAPGKGLEWVASITSGGTTFYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRAEDTAVYYCARGPPQFSSLSMDYWGQGTTVTVSS
(서열번호 93)

2D4-mVL
DIVMTQSQKFMSTSVGDRITITCKASQNVGTAVSWFQQKPGQVPKLLIYSASNRYTGVPDRFTGSGSGTEFTLTISNIQSEDLADYFCQQYSSLFTFGSGTKLEIK
(서열번호 74)

2D4-L6a
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNVGTAVSWYQQKPGKAPKLLIYSASNRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSLFTFGGGTKLEIK
(서열번호 94)

경쇄 CDR1: RASQNVGTAVS(서열번호 95)

2D4-L6b
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTAVSWFQQKPGKAPKLLIYSASNRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSLFTFGGGTKLEIK
(서열번호 96)

2D4-L6c
DIQMTQSPSSLSASVGDRITITCKASQNVGTAVSWFQQKPGKAPKLLIYSASNRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSLFTFGGGTKLEIK
(서열번호 97)

항체2: FM1-CDR1-FM2-CDR2-FM3-CDR3-FM4
26D7-mVH
QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKVSGYTFTDYGMNWVKQTPGKDLKWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFAFSLEASASTAYLQINNLKNEDTATYFCARRYGYDAGIDCWGQGTTLTVSS
(서열번호 78)

26D7-H1a
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYADDFKDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 98)
중쇄 CDR3: RYGYDAGIDA(서열번호 99)
26D7-H1b
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYADDFKDRVTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 100)

26D7-H2a
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 101)
26D7-H2b
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYADDFKDRVTFTLDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 102)

26D7-H2c
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYADDFKDRVTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 103)

26D7-H2d
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYADDFKDRVTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 104)

26D7-H3a
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKVSGYTFTDYGMNWVRQTPGQGLKWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 105)

26D7-H3b
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKVSGYTFTDYGMNWVRQTPGQGLEWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 106)

26D7-H3c
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYGMNWVRQTPGQGLKWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 107)

26D7-H3d
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLKWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 108)

26D7-H3e
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKVSGYTFTDYGMNWVRQTPGQGLKWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 109)

26D7-H3f
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLKWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 110)

26D7-H3g
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 111)

26D7-H3h
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 112)

26D7-H3i
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDASTSTAYMELRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLVTVSS
(서열번호 113)

26D7-H4a
QIQLVQSGAEVKKPGASVKISCKVSGYTFTDYGMNWVRQTPGQGLKWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDASTSTAYLEIRSLRSDDTAVYFCARRYGYDAGIDAWGQGTLLTVSS
(서열번호 114)

26D7-H5a
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTTVTVSS
(서열번호 115)

중쇄 CDR2: WINTYTGEPTYAQKLQG (서열번호 116)
26D7-H5b
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYTGEPTYAQKLQGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTTVTVSS
(서열번호 117)

26D7-H5c
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWVGWINTYTGEPTYADDFKDRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTTVTVSS
(서열번호 118)

26D7-H5d
QIQLVQSGAEVKKPGASVKISCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFTFTLDTSTSTAYLEIRSLRSDDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTTVTVSS
(서열번호 119)

26D7-H5e
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTTVTVSS
(서열번호 120)

26D7-H5f
QIQLVQSGSELKKPGASVKISCKVSGYTFTDYGMNWVRQAPGQGLEWVGWINTYTGEPTYADDFKDRFVFSLDASVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARRYGYDAGIDAWGQGTTVTVSS
(서열번호 121)

26D7-mVL
NIVLTQSPPSLAVSLGQRATISCRASESVDSYGNNLMHWYQQKPGQPPKLLIYLASYLESGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK
(서열번호 81)

26D7-L1a
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASESVDSYGNNLMHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQNNESPWTFGQGTKVEIK
(서열번호 122)

경쇄 CDR3: QQNNESPWT(서열번호 123)
26D7-L2a
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASESVDSYGNNLMHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFATYYCQQNNESPWTFGQGTKVEIK
(서열번호 124)

26D7-L2b
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASESVDAYGNNLMHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFATYYCQQNNESPWTFGQGTKVEIK
(서열번호 125)
경쇄 CDR1: RASESVDAYGNNLMH (서열번호 126)

26D7-L2c

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASESVESYGNNLMHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFATYYCQQNNESPWTFGQGTKVEIK
(서열번호 127)

경쇄 CDR1: RASESVESYGNNLMH (서열번호 128)

26D7-L3a
EIVLTQSPGTLSLSPGERATISCRASESVDSYGNNLMHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSRTDFTLTISRLEPEDFATYYCQQNNESPWTFGQGTKVEIK
(서열번호 129)

26D7-L3b
EIVLTQSPGTLSLSPGERATISCRASESVDNYGNNLMHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSRTDFTLTISRLEPEDFATYYCQQNNESPWTFGQGTKVEIK
(서열번호 130)

26D7-L3c
EIVLTQSPGTLSLSPGERATISCRASESVDAYGNNLMHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSRTDFTLTISRLEPEDFATYYCQQNNESPWTFGQGTKVEIK
(서열번호 131)
26D7-L4a
EIVLTQSPGTLSVSPGERATISCRASESVDSYGNNLMHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSRTDFTLTISRVEPEDFATYYCQQNNESPWTFGQGTKLEIK
(서열번호 132)

26D7-L5a
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASESVESYGNNLMHWYQQKPGKAPKLLIYLASYLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNESPWTFGGGTKLEIK
(서열번호 133)

26D7-L5b
DIQLTQSPSSLSASVGDRATITCRASESVDSYGNNLMHWYQQKPGKAPKLLIYLASYLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNESPWTFGGGTKLEIK
(서열번호 134)

26D7-L5c
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVDSYGNNLMHWYQQKPGQPPKLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCQQNNESPWTFGGGTKLEIK

(서열번호 135)
참고: 밑줄 친 부분은 CDR 영역임

상기 인간화 중쇄 및 경쇄를 하기 방식에 따라 인간화 항체로 조합하고 이를 세포 수준에서 IC₅₀ 값에 대해 테스트하였다.

26D7 인간화 설계 방안

	26D7 인간화 설계
클론 ID	중쇄	경쇄
26D7H1aL1a	H1a(서열번호 98)	L1a(서열번호 122)
26D7H1aL2a	H1a(서열번호 98)	L2a(서열번호 124)
26D7H1bL2a	H1b(서열번호 100)	L2a(서열번호 124)
26D7H2aL2a	H2a(서열번호 101)	L2a(서열번호 124)
26D7H2bL2a	H2b(서열번호 102)	L2a(서열번호 124)
26D7H2cL2a	H2c(서열번호 103)	L2a(서열번호 124)
26D7H2dL2a	H2d(서열번호 104)	L2a(서열번호 124)
26D7H3aL2a	H3a(서열번호 105)	L2a(서열번호 124)
26D7H3hL2a	H3h(서열번호 112)	L2a(서열번호 124)
26D7H3iL2a	H3i(서열번호 113)	L2a(서열번호 124)
26D7H3aL2b	H3a(서열번호 105)	L2b(서열번호 125)
26D7H3aL2c	H3a(서열번호 105)	L2c(서열번호 127)
26D7H1bL3a	H1b(서열번호 100)	L3a(서열번호 129)
26D7H2aL3a	H2a (서열번호 101)	L3a(서열번호 129)
26D7H3aL3a	H3a(서열번호 105)	L3a(서열번호 129)
26D7H3bL3a	H3b(서열번호 106)	L3a(서열번호 129)
26D7H3cL3a	H3c(서열번호 107)	L3a(서열번호 129)
26D7H3dL3a	H3d(서열번호 108)	L3a(서열번호 129)
26D7H3eL3a	H3e(서열번호 109)	L3a(서열번호 129)
26D7H3fL3a	H3f(서열번호 110)	L3a(서열번호 129)
26D7H3gL3a	H3g(서열번호 111)	L3a(서열번호 129)
26D7H3aL3b	H3a(서열번호 105)	L3b(서열번호 130)
26D7H3aL3c	H3a(서열번호 105)	L3c(서열번호 131)
26D7H1bL4a	H1b(서열번호 100)	L4a(서열번호 132)
26D7H4aL4a	H4a(서열번호 114)	L4a(서열번호 132)
26D7H5aL5a	H5a(서열번호 115)	L5a(서열번호 133)
26D7H5bL5a	H5b(서열번호 117)	L5a(서열번호 133)
26D7H5cL5a	H5c(서열번호 118)	L5a(서열번호 133)
26D7H5dL5a	H5d(서열번호 119)	L5a(서열번호 133)
26D7H5aL5b	H5a(서열번호 115)	L5b(서열번호 134)
26D7H5bL5b	H5b(서열번호 117)	L5b(서열번호 134)
26D7H5cL5b	H5c(서열번호 118)	L5b(서열번호 134)
26D7H5dL5b	H5d(서열번호 119)	L5b(서열번호 134)
26D7H5dL5c	H5d(서열번호 119)	L5c(서열번호 135)
26D7H5eL5c	H5e(서열번호 120)	L5c(서열번호 135)
26D7H5fL5c	H5f(서열번호 121)	L5c(서열번호 135)

2D4 인간화 설계 방안

	2D4 인간화 설계
클론 ID	중쇄	경쇄
2D4H6aL6a	H6a(서열번호 90)	L6a(서열번호 94)
2D4H6bL6a	H6b(서열번호 92)	L6a(서열번호 94)
2D4H6aL6b	H6a(서열번호 90)	L6b(서열번호 96)
2D4H6bL6b	H6b(서열번호 92)	L6b(서열번호 96)
2D4H6aL6c	H6a(서열번호 90)	L6c(서열번호 97)
2D4H6cL6c	H6c(서열번호 93)	L6c(서열번호 97)

인간화 항체 세포 수준 실험

	IC₅₀(nM)
클론 ID	인간 GFRAL/인간 RET	마우스 GFRAL/마우스 RET
26D7H1aL2a	2.6	7.7
26D7H2aL2a	7.6	1.6
26D7H2dL2a	6.5	3.0
26D7H3aL2c	8.3	1.9
26D7H4aL4a	5.7	0.1
26D7H5bL5a	11.8	0.9
26D7H5eL5c	8.3	0.7
26D7H5fL5c	8.9	0.4
26D7-mVH+mVL	8.7	0.7
2D4H6aL6b	24.4	1.4
2D4H6cL6c	22.5	1.3
2D4-mVH+mVL	23.8	1.4

표 11의 세포 실험 결과에 나타낸 바와 같이(일부 인간화 항체 데이터만 나타냄), 대부분의 인간화 항체는 뮤린 항체와 유사하거나 더 나은 GFRAL 길항 기능의 활성을 갖는다.아울러, 인간화 항-GFRAL 항체의 친화력 수준을 검증하기 위해, 실시예 4에 기재된 방법을 적용하여 인간화 항체 26D7H3aL2c(서열번호 105+서열번호 127) 및 26D7H5bL5a(서열번호 117+서열번호 133)에 대해 결합 친화력 측정을 수행하였다. 구체적인 방법은 하기와 같다:

아미노 커플링 키트(카탈로그 번호: BR100050, Cytiva)의 지침에 따라, 400mM EDC 및 100mM NHS를 사용하여 10ul/min의 유속으로 CM5 칩의 표면을 활성화하고, 그런 다음 뮤린 항-인간 Fc 항체를 CM5 칩의 시험 채널(Fc2)과 참조 채널(Fc1)에 고정시키며, 마지막으로 칩을 10ul/min의 유속으로 1M 에탄올아민으로 차단하고; 그런 다음 시험 채널(Fc2)에서 5μg/ml로 희석된 인간화 항체(~300RU)를 포획하며, 참조 채널에서는 리간드 포획을 수행할 필요가 없다. 추후 2배로 희석된 인간, 마우스 또는 게잡이원숭이 GFRAL 단백질(HBS-EP 완충액 내)을 30 μL/min의 유속으로 주사하고, 25℃에서 결합 동역학을 평가하였다. 그 결과는 하기와 같다(표 12 참조)

인간화 항체의 결합 동역학 데이터

	결합 친화력
인간화 항체	인간 GFRAL		마우스 GFRAL		게잡이원숭이 GFRAL
클론 ID	KD(M)	k_off(1/s)	KD(nM)	k_off(1/s)	KD(M)	k_off(1/s)
26D7H3aL2c	4.65E-11	1.25E-04	1.34E-10	2.15E-04	1.31E-10	1.93E-04
26D7H5bL5a	1.19E-10	2.68E-04	2.58E-10	3.14E-04	2.46E-10	2.31E-04

이로부터 보다시피, 인간화 항-GFRAL 항체 26D7H3aL2c 및 26D7H5bL5a는 뮤린 항체로서 인간 및 마우스 GFRAL에 대한 높은 친화력을 유지하면서 게잡이원숭이 GFRAL에 대한 높은 결합 활성을 입증하였다.

실시예 7 동물 모델에서 인간화 항-GFRAL 항체의 생물학적 기능 평가

7.1 AAV-mGDF15 모델에서 GDF-15-유도된 체중 감소를 역전시키는 데 있어 인간화 항-GFRAL 항체의 작용 평가

인간화 항-GFRAL 항체의 생체내 효능을 추가로 검증하기 위해, 실시예 5.2에 기술된 방법을 참조하여 AAV-mGDF15 모델에서 GDF15-유도된 마우스(비 종양보유 마우스) 체중 감소에 대한 인간화 항체의 개선 작용을 연구하였다. 구체적인 방법은 하기와 같다:

평균 체중에 따라 무작위로 그룹을 나눈 후, 마우스에게 mGDF15를 발현하는 rAAV 또는 대조군 AAV 1×10¹⁰vg을 단일 꼬리 정맥 주사로 투여하였다. rAAV 주사 후 6일차부터, 그룹을 나눈 마우스에게 각각 10mg/kg의 대조 항체(hIgG4), 10mg/kg의 뮤린 항-GFRAL 항체(예: m26D7) 또는 10mg/kg, 3mg/kg 또는 1mg/kg 용량의 인간화 항-GFRAL 항체(예: 26D7H3aL2c, 26D7H5bL5a)를 주 1회 피하 주사하였다. 체중을 주 3회 모니터링하고, 음식 섭취량을 주 2회 모니터링하였다. 체중은 다음과 같이 요약되고, 데이터는 전체 체중 및 체중 변화율의 평균값±SEM(즉, 기준 체중에 대한 체중 변화율)으로 표시된다. 이러한 실험에서, P＜0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주된다.

AAV-mGDF15 마우스 모델에서 마우스 체중 감소에 대한 인간화 항-GFRAL 항체의 개선 효과 데이터

그룹	전처리 0일차	항체 처리 6일차	체중(g)			체중 변화 ^a (%)		P ^b
그룹	전처리 0일차	항체 처리 6일차	0일차	6일차	33일차	6일차	33일차	P ^b
1	AAV8- control	hIgG4, 10mg/kg	26.1±0.9	26.9±1.4	29.1±1.8	3.04±2.87	11.4±4.60	<0.0001
2	AAV8- mGDF15	hIgG4, 10mg/kg	25.9±0.7	24.0±0.9	21.2±1.3	-7.27±2.82	-16.89±4.98	-
3	AAV8- mGDF15	26D7H3aL2c, 10mg/kg	26.2±0.5	24.0±0.9	28.2±1.1	-8.52±2.89	7.31±3.67	<0.0001
4	AAV8- mGDF15	26D7H3aL2c, 3mg/kg	26.4±1.1	24.0±0.9	28.8±1.5	-9.00±2.19	9.13±4.37	<0.0001
5	AAV8- mGDF15	26D7H3aL2c, 1mg/kg	26.0±0.7	24.0±1.0	26.8±1.2	-7.55±3.40	3.23±4.41	<0.0001
6	AAV8- mGDF15	26D7H5bL5a, 10mg/kg	26.3±0.9	26.0±1.1	28.7±1.9	-8.64±1.59	8.89±4.86	<0.0001
7	AAV8- mGDF15	26D7H5bL5a, 3mg/kg	26.3±1.0	24.0±1.0	27.5±0.8	-8.74±1.76	4.62±3.12	0.0095
8	AAV8- mGDF15	26D7H5bL5a, 1mg/kg	26.1±0.6	24.0±0.9	24.8±0.5	-7.88±2.34	-4.73±3.94	0.0002
9	AAV8- mGDF15	m26D7, 10mg/kg	25.5±0.3	24.0±1.2	28.9±1.2	-6.10±4.19	13.30±3.94	<0.0001

참고: 데이터는 평균값±SEM으로 표시되고;a. 체중 변화=[(i일차 체중-0일차 체중)/0일차 체중]*100%;b. 상이한 그룹에 대해 0일차부터 33일차까지의 체중 변화를 비교하여 독립적인 t 검정을 수행한다.

도 6-9 및 표 13에 나타낸 바와 같이, 실험 결과에 따르면, 뮤린 GFRAL 항체의 효과와 유사하게, 인간화 항-GFRAL 항체는 용량 의존 방식으로 GDF15에 의해 유도된 체중 감소를 역전시켜 마우스의 체중을 효과적으로 증가시키면서 마우스의 음식 섭취량을 증가시킬 수 있다. 인간화 항체 26D7H3aL2c 및 26D7H5bL5a는 모두 체중 감소를 역전시키는 효과를 달성하고, 26D7H3aL2c는 더 나은 성능을 보였다. 이 실험 결과는 인간화 GFRAL 항체가 뮤린 항체로서 AAV-mGDF15 마우스 모델에서 생체내 효능을 유지하고 GDF-15에 의해 유도된 악액질 증상을 개선하는데 효과적이라는 것을 추가로 입증하였다.

7.2 인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 마우스 모델에서 악액질 증상의 개선에 있어서 인간화 항-GFRAL 항체의 작용 평가

인간화 항-GFRAL 항체의 동물 체내 효능을 추가로 검증하기 위해, 실시예 5.1에 기술된 방법을 참조하여 인간 섬유육종 HT-1080 피하 이종이식 BALB/c 누드 암컷 마우스 모델에서 GDF15-유도된 마우스 체중 감소에 대한 인간화 항체의 개선 작용을 연구하였다. 구체적인 방법은 하기와 같다:

누드 마우스의 피하 종양 접종을 위해 지수성장기의 HT-1080 세포를 수집하고, 마우스 피하 이종이식 종양 모델을 구축하였다. 평균 종양 부피가 약 110.51mm³에 도달했을 때, 마우스 체중과 종양 크기에 따라 무작위로 4개 그룹으로 나누고, 동시에 비 종양보유 마우스 그룹도 참여하여 투여를 시작하였다. 실험군은 시험품 26D7H3aL2c 1mg/kg, 3mg/kg, 10mg/kg 3개의 용량군, hIgG4 10mg/kg 종양보유 마우스 대조군 및 hIgG4 10mg/kg 비 종양보유 마우스 대조군이 있다. 각 그룹에는 8마리의 마우스가 포함되고, 각 마우스는 3주 동안 주 1회 피하 주사로 투여하였다. 일일 체중과 음식 섭취량을 기록하고, Study Director^TM 소프트웨어를 사용하여 측정된 체중 데이터를 기록하며, GraphPad Prism 8에서 전체 체중 변화 및 순체중 변화의 통계 분석 및 플롯팅을 수행하고, 2요인 ANOVA Dunnett 다중 비교 검정을 사용하며, p값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의한 것으로 간주된다.

결과(도 10, 11 및 표 14, 15 참조)는 하기와 같다: 인간화 항-GFRAL 항체 26D7H3aL2c는 1, 3, 10 mg/kg의 용량에서 인간 섬유육종 HT-1080 피하 이종이식 모델에서 악액질로 인한 체중 감소를 유의하게 개선하고, 26D7H3aL2c는 용량 의존적 약력학적 관계가 있었다.

인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 모델에서 각 그룹 동물의 전체 체중 변화 상황

그룹	투여군	용량 (mg/kg)	동물 수 (실험 시작/실험 종료)	평균 체중/g (MEAN±SEM)		전체 체중 평균 변화율(%)(MEAN±SEM)	P Value(대조군에 비해)
그룹	투여군	용량 (mg/kg)	동물 수 (실험 시작/실험 종료)	0일차	19일차	19일차	19일차
1	비 종양보유 마우스 hIgG4	10	8/8	23.98±0.37	24.73±0.27	3.20±0.96	0.3618
2	종양보유 마우스hIgG4	10	8/8	22.84±0.69	22.83±0.53	0.29±2.37	-
3	종양보유 마우스26D7H3aL2c	1	8/8	22.84±0.65	24.89±0.46	9.22±1.35	<0.0001
4	종양보유 마우스26D7H3aL2c	3	8/8	22.84±0.54	25.31±0.55	10.92±1.30	<0.0001
5	종양보유 마우스26D7H3aL2c	10	8/8	22.84±0.49	26.13±0.59	14.50±2.03	<0.0001

참고: 데이터는 “평균값±표준오차”로 표시되고; 그룹 1, 3, 4, 5와 그룹 2를 비교하고, 2 요인 ANOVA Dunnett 다중 비교 검증을 사용하며; ****p<0.0001이다.

인간 섬유육종 HT-1080 종양보유 모델에서 각 그룹 동물의 순체중 변화 상황

그룹	투여군	용량(mg/kg)	동물 수(실험 시작/실험 종료)	평균 체중 (순)/g(MEAN±SEM)		체중(순) 평균 변화율(%)(MEAN±SEM)	P값 (대조군에 비해)
그룹	투여군	용량(mg/kg)	동물 수(실험 시작/실험 종료)	0일차	19일차	19일차	19일차
1	비 종양보유 마우스 hIgG4	10	8/8	23.98±0.37	24.73±0.27	3.20±0.96	<0.0001
2	종양보유 마우스 hIgG4	10	8/8	22.73±0.69	21.63±0.55	-4.57±-2.07	-
3	종양보유 마우스 26D7H3aL2c	1	8/8	22.74±0.65	23.01±0.63	1.39±1.67	0.0024
4	종양보유 마우스 26D7H3aL2c	3	8/8	22.74±0.54	23.18±0.54	2.03±1.26	0.0006
5	종양보유 마우스 26D7H3aL2c	10	8/8	22.74±0.49	23.81±0.51	4.76±1.14	<0.0001

참고: 마우스 순체중=마우스 체중-마우스 종양 중량; 여기서 마우스 종양 중량 추정 방법[1]은 1g/1000mm³이다.데이터는 “평균값±표준오차”로 표시되고; 그룹 1, 3, 4, 5와 그룹 2를 비교하고, 2 요인 ANOVA Dunnett 다중 비교 검정을 사용하며; **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001이다.

위의 실험 데이터 분석을 종합하면, 항-GFRAL 항체는 HT-1080 종양보유 마우스 모델 및 AAV-mGDF15 비 종양보유 마우스 모델 모두에서 마우스 체중 감소의 악액질 증상을 역전시켰고, 이는 HT-1080 종양보유 마우스 모델에서 종양으로 인한 마우스 체중 감소가 GDF15/GFRAL 신호 전달 경로와 직접적으로 관련되어 있음을 입증하였다. 항-GFRAL 항체는 GDF15/GFRAL 신호 전달 경로를 차단함으로써 종양보유로 인한 마우스 체중 감소를 크게 개선하였다. 동시에, 실험 결과는 인간화 GFRAL 항체가 뮤린 항체로서 인간 GFRAL 및 마우스 GFRAL에 대한 높은 결합 친화력 및 생체내 약물 효능을 유지하고(HT-1080 종양보유 마우스 모델 및 AAV-mGDF15 마우스 모델의 실험 결과를 바탕으로), GDF-15에 의해 유도된 악액질 증상을 효과적으로 개선하거나 심지어 역전시키고 예상치 못한 기술적 효과를 달성할 수 있다는 것을 추가로 입증하였다.

참고문헌

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SEQUENCE LISTING <110> SHANGHAI JMT-BIO TECHNOLOGY CO., LTD. <120> ANTI-GFRAL ANTIBODY AND APPLICATION THEREOF <150> CN 202110739877.2 <151> 2021-06-30 <160> 135 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain CDR1 <222> (1)..(5) <400> 1 Gly Tyr Gly Val Asn 1 5 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain CDR2 <222> (1)..(16) <400> 2 Met Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain CDR3 <222> (1)..(12) <400> 3 Asp Pro Lys Tyr Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain Variable Region <222> (1)..(120) <400> 4 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Arg Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Arg Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Pro Lys Tyr Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 5 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain CDR1 <222> (1)..(15) <400> 5 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Phe Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain CDR2 <222> (1)..(7) <400> 6 Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain CDR3 <222> (1)..(9) <400> 7 Gln Gln Thr Asn Glu Glu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 8 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 8 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ala Pro Gly Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr 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Phe Pro Gln Thr 1 5 <210> 16 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(112) <400> 16 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Val Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Phe Leu Val Ser Lys Leu Gly Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain CDR1 <222> (1)..(5) <400> 17 Gly His Gly Val Asn 1 5 <210> 18 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain CDR2 <222> (1)..(16) <400> 18 Met Ile Trp Gly Asp Gly Tyr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain CDR3 <222> (1)..(13) <400> 19 Asp Thr Tyr Gly Arg Thr Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 20 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain Variable Region <222> (1)..(121) <400> 20 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly His 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Tyr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Thr Tyr Gly Arg Thr Tyr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 21 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain CDR1 <222> (1)..(15) <400> 21 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15 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Ala Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 119 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain Variable Region <222> (1)..(119) <400> 119 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Phe Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Ile Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Tyr Gly Tyr Asp Ala Gly Ile Asp Ala Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 120 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain Variable Region <222> (1)..(119) <400> 120 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Tyr Gly Tyr Asp Ala Gly Ile Asp Ala Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 121 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Heavy Chain Variable Region <222> (1)..(119) <400> 121 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Ala Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Tyr Gly Tyr Asp Ala Gly Ile Asp Ala Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 122 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 122 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 123 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain CDR3 <222> (1)..(9) <400> 123 Gln Gln Asn Asn Glu Ser Pro Trp Thr 1 5 <210> 124 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 124 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 125 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 125 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ala Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 126 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain CDR1 <222> (1)..(15) <400> 126 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ala Tyr Gly Asn Asn Leu Met His 1 5 10 15 <210> 127 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 127 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 128 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain CDR1 <222> (1)..(15) <400> 128 Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Ser Tyr Gly Asn Asn Leu Met His 1 5 10 15 <210> 129 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 129 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 130 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 130 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 131 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 131 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ala Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 132 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 132 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 133 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 133 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 134 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 134 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 135 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> Light Chain Variable Region <222> (1)..(111) <400> 135 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr 20 25 30 Gly Asn Asn Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn 85 90 95 Glu Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110

Claims

항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2) 및 중쇄 CDR3(HCDR3)을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2) 및 경쇄 CDR3(LCDR3)을 포함하되,
(1) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 75로 표시되는 서열이거나 서열번호 75로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열이거나 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열이거나 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열이거나 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 80으로 표시되는 서열이거나 서열번호 80으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열이거나 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(2) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 68로 표시되는 서열이거나 서열번호 68로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열이거나 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 70으로 표시되는 서열이거나 서열번호 70으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열이거나 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이거나 서열번호 65로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 73으로 표시되는 서열이거나 서열번호 73으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(3) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 1로 표시되는 서열이거나 서열번호 1로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 2로 표시되는 서열이거나 서열번호 2로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 3으로 표시되는 서열이거나 서열번호 3으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 5로 표시되는 서열이거나 서열번호 5로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 7로 표시되는 서열이거나 서열번호 7로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(4) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 9로 표시되는 서열이거나 서열번호 9로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 10으로 표시되는 서열이거나 서열번호 10으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 11로 표시되는 서열이거나 서열번호 11로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 13으로 표시되는 서열이거나 서열번호 13으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 14로 표시되는 서열이거나 서열번호 14로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 15로 표시되는 서열이거나 서열번호 15로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(5) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 17로 표시되는 서열이거나 서열번호 17로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 18로 표시되는 서열이거나 서열번호 18로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 19로 표시되는 서열이거나 서열번호 19로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 21로 표시되는 서열이거나 서열번호 21로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이거나 서열번호 22로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(6) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 24로 표시되는 서열이거나 서열번호 24로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 25로 표시되는 서열이거나 서열번호 25로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 26으로 표시되는 서열이거나 서열번호 26으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 28로 표시되는 서열이거나 서열번호 28로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 29로 표시되는 서열이거나 서열번호 29로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(7) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이거나 서열번호 31로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 32로 표시되는 서열이거나 서열번호 32로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 33으로 표시되는 서열이거나 서열번호 33으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 35로 표시되는 서열이거나 서열번호 35로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 36으로 표시되는 서열이거나 서열번호 36으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 37로 표시되는 서열이거나 서열번호 37로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(8) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 39로 표시되는 서열이거나 서열번호 39로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 40으로 표시되는 서열이거나 서열번호 40으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 41로 표시되는 서열이거나 서열번호 41로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 43으로 표시되는 서열이거나 서열번호 43으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이거나 서열번호 22로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(9) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 45로 표시되는 서열이거나 서열번호 45로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 46으로 표시되는 서열이거나 서열번호 46으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 47로 표시되는 서열이거나 서열번호 47로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 49로 표시되는 서열이거나 서열번호 49로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50으로 표시되는 서열이거나 서열번호 50으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(10) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이거나 서열번호 31로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 53으로 표시되는 서열이거나 서열번호 53으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 54로 표시되는 서열이거나 서열번호 54로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 56으로 표시되는 서열이거나 서열번호 56으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 57로 표시되는 서열이거나 서열번호 57로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 58로 표시되는 서열이거나 서열번호 58로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(11) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 60으로 표시되는 서열이거나 서열번호 60으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 61로 표시되는 서열이거나 서열번호 61로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 62로 표시되는 서열이거나 서열번호 62로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 64로 표시되는 서열이거나 서열번호 64로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이거나 서열번호 65로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 66으로 표시되는 서열이거나 서열번호 66으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(12) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 82로 표시되는 서열이거나 서열번호 82로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 83으로 표시되는 서열이거나 서열번호 83으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 84로 표시되는 서열이거나 서열번호 84로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 86으로 표시되는 서열이거나 서열번호 86으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 87로 표시되는 서열이거나 서열번호 87로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 88로 표시되는 서열이거나 서열번호 88로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며;
중쇄 CDR1-3 및 경쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의되는 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
제1항에 있어서,
중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 12, 20, 27, 34, 42, 48, 52, 55, 63, 71, 78, 85, 90, 92, 93, 98, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 120, 121로 표시되는 아미노산 서열, 또는 서열번호 4, 12, 20, 27, 34, 42, 48, 52, 55, 63, 71, 78, 85, 90, 92, 93, 98, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 120, 121로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
제1항 또는 제2항에 있어서,
경쇄 가변 영역은 서열번호 8, 16, 23, 30, 38, 44, 51, 59, 67, 74, 81, 89, 94, 96, 97, 122, 124, 125, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135로 표시되는 아미노산 서열, 또는 서열번호 8, 16, 23, 30, 38, 44, 51, 59, 67, 74, 81, 89, 94, 96, 97, 122, 124, 125, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
(1) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 4로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 8로 표시되는 서열이며;
(2) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 12로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 16으로 표시되는 서열이며;
(3) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 20으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 23으로 표시되는 서열이며;
(4) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 27로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 30으로 표시되는 서열이며;
(5) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 34로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 38로 표시되는 서열이며;
(6) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 42로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 44로 표시되는 서열이며;
(7) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 48로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 51로 표시되는 서열이며;
(8) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 52로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 51로 표시되는 서열이며;
(9) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 55로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 59로 표시되는 서열이며;
(10) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 63으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 67로 표시되는 서열이며;
(11) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 71로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 74로 표시되는 서열이며;
(12) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 78로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 81로 표시되는 서열이며;
(13) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 85로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 89로 표시되는 서열이며;
(14) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 98로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 122로 표시되는 서열이며;
(15) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 98로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;
(16) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 100으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;
(17) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 101로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;
(18) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 102로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;
(19) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 103으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;
(20) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 104로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;
(21) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;
(22) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 112로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;
(23) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 113으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 124로 표시되는 서열이며;
(24) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 125로 표시되는 서열이며;
(25) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 127로 표시되는 서열이며;
(26) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 100으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;
(27) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 101로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;
(28) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;
(29) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 106으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;
(30) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 107로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;
(31) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 108로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;
(32) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 109로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;
(33) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 110으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;
(34) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 111로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 129로 표시되는 서열이며;
(35) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 130으로 표시되는 서열이며;
(36) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 131로 표시되는 서열이며;
(37) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 100으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 132로 표시되는 서열이며;
(38) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 114로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 132로 표시되는 서열이며;
(39) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 115로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 133으로 표시되는 서열이며;
(40) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 117로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 133으로 표시되는 서열이며;
(41) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 118로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 133으로 표시되는 서열이며;
(42) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 119로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 133으로 표시되는 서열이며;
(43) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 115로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 134로 표시되는 서열이며;
(44) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 117로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 134로 표시되는 서열이며;
(45) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 118로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 134로 표시되는 서열이며;
(46) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 119로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 134로 표시되는 서열이며;
(47) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 119로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 135로 표시되는 서열이며;
(48) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 120으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 135로 표시되는 서열이며;
(49) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 121로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 135로 표시되는 서열이며;
(50) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 90으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 94로 표시되는 서열이며;
(51) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 92로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 94로 표시되는 서열이며;
(52) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 90으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 96으로 표시되는 서열이며;
(53) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 92로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 96으로 표시되는 서열이며;
(54) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 90으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 97로 표시되는 서열이며; 또는
(55) 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 93으로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 97로 표시되는 서열인 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 75로 표시되는 서열이고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 76으로 표시되는 서열이며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 99로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 128로 표시되는 서열이며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 80으로 표시되는 서열이고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 123으로 표시되는 서열이며; 바람직하게는, 중쇄 가변 영역 서열은 서열번호 105로 표시되는 서열이고, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 127로 표시되는 서열이며; 보다 바람직하게는, 상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 중쇄 불변 영역 및 인간 κ 경쇄 불변 영역 또는 λ 경쇄 불변 영역을 포함하고; 가장 바람직하게는, 상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 IgG4 중쇄 불변 영역 및 인간 κ 경쇄 불변 영역을 포함하는 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하되,
중쇄 가변 영역은 서열번호 4, 12, 20, 27, 34, 42, 48, 52, 55, 63, 71, 78, 85, 90, 92, 93, 98, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 120, 121로 표시되는 아미노산 서열, 또는 서열번호 4, 12, 20, 27, 34, 42, 48, 52, 55, 63, 71, 78, 85, 90, 92, 93, 98, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 117, 118, 119, 120, 121로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지고; 및/또는
경쇄 가변 영역은 서열번호 8, 16, 23, 30, 38, 44, 51, 59, 67, 74, 81, 89, 94, 96, 97, 122, 124, 125, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135로 표시되는 아미노산 서열, 또는 서열번호 8, 16, 23, 30, 38, 44, 51, 59, 67, 74, 81, 89, 94, 96, 97, 122, 124, 125, 127, 129, 130, 131, 132, 133, 134 또는 135로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2) 및 중쇄 CDR3(HCDR3)을 포함하되,
(1) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 75로 표시되는 서열이거나 서열번호 75로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열이거나 서열번호 76 또는 서열번호 116으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열이거나 서열번호 77 또는 서열번호 99로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(2) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 68로 표시되는 서열이거나 서열번호 68로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열이거나 서열번호 69 또는 서열번호 91로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 70으로 표시되는 서열이거나 서열번호 70으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(3) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 1로 표시되는 서열이거나 서열번호 1로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 2로 표시되는 서열이거나 서열번호 2로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 3으로 표시되는 서열이거나 서열번호 3으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(4) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 9로 표시되는 서열이거나 서열번호 9로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 10으로 표시되는 서열이거나 서열번호 10으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 11로 표시되는 서열이거나 서열번호 11로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(5) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 17로 표시되는 서열이거나 서열번호 17로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 18로 표시되는 서열이거나 서열번호 18로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 19로 표시되는 서열이거나 서열번호 19로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(6) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 24로 표시되는 서열이거나 서열번호 24로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 25로 표시되는 서열이거나 서열번호 25로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 26으로 표시되는 서열이거나 서열번호 26으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(7) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이거나 서열번호 31로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 32로 표시되는 서열이거나 서열번호 32로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 33으로 표시되는 서열이거나 서열번호 33으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(8) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 39로 표시되는 서열이거나 서열번호 39로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 40으로 표시되는 서열이거나 서열번호 40으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 41로 표시되는 서열이거나 서열번호 41로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(9) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 45로 표시되는 서열이거나 서열번호 45로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 46으로 표시되는 서열이거나 서열번호 46으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 47로 표시되는 서열이거나 서열번호 47로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(10) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 31로 표시되는 서열이거나 서열번호 31로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 53으로 표시되는 서열이거나 서열번호 53으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 54로 표시되는 서열이거나 서열번호 54로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(11) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 60으로 표시되는 서열이거나 서열번호 60으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 61로 표시되는 서열이거나 서열번호 61로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 62로 표시되는 서열이거나 서열번호 62로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고; 또는
(12) 중쇄 CDR1의 서열은 서열번호 82로 표시되는 서열이거나 서열번호 82로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 중쇄 CDR2의 서열은 서열번호 83으로 표시되는 서열이거나 서열번호 83으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 중쇄 CDR3의 서열은 서열번호 84로 표시되는 서열이거나 서열번호 84로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고;
중쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의되는 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
상기 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 경쇄 CDR1(HCDR1), 경쇄 CDR2(HCDR2) 및 경쇄 CDR3(HCDR3)을 포함하되,
(1) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열이거나 서열번호 79 또는 서열번호 126 또는 서열번호 128로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 80으로 표시되는 서열이거나 서열번호 80으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열이거나 서열번호 50 또는 서열번호 123으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(2) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열이거나 서열번호 72 또는 서열번호 95로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이거나 서열번호 65로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 73으로 표시되는 서열이거나 서열번호 73으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(3) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 5로 표시되는 서열이거나 서열번호 5로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 7로 표시되는 서열이거나 서열번호 7로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(4) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 13으로 표시되는 서열이거나 서열번호 13으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 14로 표시되는 서열이거나 서열번호 14로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 15로 표시되는 서열이거나 서열번호 15로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(5) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 21로 표시되는 서열이거나 서열번호 21로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이거나 서열번호 22로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(6) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 28로 표시되는 서열이거나 서열번호 28로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 29로 표시되는 서열이거나 서열번호 29로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(7) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 35로 표시되는 서열이거나 서열번호 35로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 36으로 표시되는 서열이거나 서열번호 36으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 37로 표시되는 서열이거나 서열번호 37로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(8) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 43으로 표시되는 서열이거나 서열번호 43으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 22로 표시되는 서열이거나 서열번호 22로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(9) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 49로 표시되는 서열이거나 서열번호 49로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 6으로 표시되는 서열이거나 서열번호 6으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 50으로 표시되는 서열이거나 서열번호 50으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(10) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 56으로 표시되는 서열이거나 서열번호 56으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 57로 표시되는 서열이거나 서열번호 57로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 58로 표시되는 서열이거나 서열번호 58로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(11) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 64로 표시되는 서열이거나 서열번호 64로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 65로 표시되는 서열이거나 서열번호 65로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 66으로 표시되는 서열이거나 서열번호 66으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며; 또는
(12) 경쇄 CDR1의 서열은 서열번호 86으로 표시되는 서열이거나 서열번호 86으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며, 경쇄 CDR2의 서열은 서열번호 87로 표시되는 서열이거나 서열번호 87로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지고, 경쇄 CDR3의 서열은 서열번호 88로 표시되는 서열이거나 서열번호 88로 표시되는 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 동일성을 가지며;
경쇄 CDR1-3의 아미노산 서열은 IMGT에 따라 정의되는 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-GFRAL 항체는 완전 항체, 단쇄 항체(scFv), 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체이고; 및/또는
상기 항-GFRAL 항체의 항원 결합 부분은 Fab, Fab', Fv 또는 F(ab')₂이며; 및/또는
상기 항-GFRAL 항체는 뮤린 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체이고; 및/또는
상기 항-GFRAL 항체는 단클론 항체이며; 및/또는
상기 항-GFRAL 항체는 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 동종형이고; 및/또는
상기 항-GFRAL 항체는 κ 아형 또는 λ 아형의 경쇄 불변 영역을 포함하며; 및/또는
상기 항-GFRAL 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역 및 인간 κ 경쇄 불변 영역을 포함하고; 및/또는
상기 항-GFRAL 항체는 인간 IgG4 중쇄 불변 영역 및 인간 κ 경쇄 불변 영역을 포함하는 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
의료 요법에 사용되는 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 코딩하는 분리된 핵산 분자.
제11항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
제11항에 따른 핵산 분자 또는 제12항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
치료제와 접합된 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 항체-약물 접합체.
제14항에 있어서,
상기 치료제는 세포독성 약물, 면역강화제 또는 방사성 동위원소와 같은 항종양 약물인 항체-약물 접합체.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 제14항 또는 제15항에 따른 항체-약물 접합체, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
제16항에 있어서,
GFRAL에 의해 매개되거나 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로에 의해 매개된 질환 또는 이상의 치료 또는 예방에 사용되고, 예를 들어 상기 질환 또는 이상은 악액질 증후군(예: 종양으로 인한 악액질 증후군), 종양(암 포함), 심혈관 질환, 신장 질환, 국소 허혈성 질환, 대사장애, 신경퇴행성 질환, 식욕부진 또는 식욕부진으로 인한 체중 감소인 약학적 조성물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 제11항에 따른 핵산 분자, 제12항에 따른 벡터, 제13항에 따른 숙주 세포 또는 제14항 또는 제15항에 따른 항체-약물 접합체의 용도로서,
상기 용도는 GFRAL에 의해 매개되거나 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로에 의해 매개된 질환 또는 이상의 치료 또는 예방을 위한 약물을 제조하기 위한 것이고,
예를 들어, 상기 질환 또는 이상은 악액질 증후군(예: 종양으로 인한 악액질 증후군), 종양(암 포함), 심혈관 질환, 신장 질환, 국소 허혈성 질환, 대사장애, 신경퇴행성 질환, 식욕부진 또는 식욕부진으로 인한 체중 감소인 용도.
개체에서 GFRAL에 의해 매개되거나 GFRAL-RET-GDF15 신호 전달 경로에 의해 매개된 질환 또는 이상을 치료하는 방법으로서,
상기 방법은 상기 개체에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 제14항 또는 제15항에 따른 항체-약물 접합체 또는 제16항에 따른 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 예를 들어, 상기 질환 또는 이상은 악액질 증후군(예: 종양으로 인한 악액질 증후군), 종양(암 포함), 심혈관 질환, 신장 질환, 국소 허혈성 질환, 대사장애, 신경퇴행성 질환, 식욕부진 또는 식욕부진으로 인한 체중 감소인 방법.
제17항 또는 제18항 또는 제19항에 있어서,
상기 종양(암 포함)은 혈액 종양 또는 고형 종양인 약학적 조성물, 용도 또는 방법.
제20항에 있어서,
상기 혈액 종양은 림프종 또는 백혈병, 예를 들어 골수종, B-세포 림프종, 외투세포 림프종, 비호지킨 B-세포 림프종, 비호지킨 림프종 T-세포 림프종, 피부 림프종, 역형성 대세포 림프종, 다발성 골수종, 불활성 비호지킨 림프종, 형질세포종, 만성 림프구성 백혈병, 소림프구성 림프종, 여포성 림프종이고; 선택적으로, 상기 혈액 종양은 재발성 또는 불응성인 약학적 조성물, 용도 또는 방법.
제20항에 있어서,
상기 고형 종양은 호흡기 종양, 소화관 종양, 비뇨기 종양, 남성 장기 종양, 여성 장기 종양, 피부암, 내피 세포 종양, 뇌종양, 신경계 종양, 내분비기관 종양으로부터 선택되는 약학적 조성물, 용도 또는 방법.
제20항에 있어서,
상기 고형 종양은 방광암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 흉부종양, 자궁내막암, 식도편평상피암, 위암, 두부종양, 췌장암, 담관암, 결장직장암, 안암, 두경부편평상피암, 요로상피암, 신장암, 간암, 림프절암, 폐암, 구강암, 경부종양, 난소암, 전립선암, 고환암, 후두암 및 자궁암, 흑색종, 침샘암, 섬유육종, 연조직 육종 및 골육종으로부터 선택되고; 선택적으로, 상기 고형 종양은 재발성 또는 불응성인 약학적 조성물, 용도 또는 방법..
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 검출 가능한 라벨을 포함하는 접합체.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항-GFRAL 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 융합 단백질.