KR20230125671A - Csf1r 억제용 화합물 및 이의 의약 용도 - Google Patents

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KR20230125671A
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Abstract

본 개시는 CSF1R 억제제로 유용한 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다. 본 개시는 이러한 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 본 개시는 또한 이러한 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 이용하는 것을 특징으로 하는, CSF1R 매개 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약 용도를 제공한다. 본 개시는 또한 본 개시에 따른 화합물, 이의 염 또는 이들을 포함하는 조성물의 유효한 양을 CSF1R 매개 질환의 치료가 필요한 개체에게 투여하는 것을 포함하는 CSF1R 매개 질환의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

Description

CSF1R 억제용 화합물 및 이의 의약 용도{Compound for inhibiting CSF1R and medical use thereof}
본 개시는 CSF1R (Colony-stimulating factor 1 receptor) 억제용 화합물 및 이의 의약 용도에 관한 것이다. 본 개시는 또한 CSF1R를 억제하여 다양한 암의 치료 또는 예방에 유용한 화합물 또는 이의 용도에 관한 것이다.
종양 관련 대식세포(TAM)의 종양 허용(tumor-permissive) 및 면역억제 특성은 이러한 세포를 치료적으로 표적화하는 것에 대한 관심을 불러일으켰다. 이러한 맥락에서, 콜로니-자극 인자 1(CSF1)/콜로니-자극 인자 1 수용체(CSF1R, Colony-stimulating factor 1 receptor) 축이 가장 주목받고 있으며, 현재 리간드 또는 수용체를 표적으로 하는 다양한 접근법이 임상 개발 중이다.
예를 들어, CSF1R 억제제는 흑색종, 전립선암, 교모세포종(Gliobastoma, GBM) (특히, 재발성 GBM), 백혈병 (특히, 만성 골수성 백혈병, refractory leukemia), 골수성 백혈병, 고형 암 또는 고형 종양 (특히, refractory solid tumor), 호지킨 림프종 (특히, 재발성 또는 불응성 CHL), 유방암 (특히, 삼중음성유방암(Triple negative breast cancer, TNBC), 위장관기질종양 (GIST), 육종, 난소암, 폐암 (특히, 비소세포폐암 (non-small cell lung cancer, NSCLC)), 두경부 편평세포암, 방광암 (특히, 요로상피 방광암), 췌장암, 위암, 평활근육종, 담관암, 대장암, 신장암 (신세포암) 등에 효과가 있는 것으로 확인되어 다양한 임상 실험이 진행 중이다 (Cannarile et al. Journal for ImmunoTherapy of Cancer (2017) 5:53). 또한, CSF1R 억제제는 뇌종양, 특히 신경교종의 하나인 교모세포종의 재발을 예방하는데 효과가 있다고 알려져 있다 (https://doi.org/10.1158/2159-8290.CD-NB2020-078, American Association for Cancer Research, Volume 10, Issue 10, pp. OF1).
이 밖에도 CSF1R 저해제가 관절염, 신경 퇴행성 질환 (알츠하이머 병, 파킨슨 병, 루게릭병(Lou Gehrig's disease) 등), 죽상동맥경화증, 섬유증(fibrosis), 당뇨, 다발성 경화증, 루푸스 등에 효과가 있다고 알려져 있으며 (Experimental & Molecular Medicine volume 52, pages1239-1254 (2020)), 자가면역질환, 골다공증, 류마티스성 관절염, 신경병성 통증(neuropathic pain), 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis, ALS), 당뇨병성 신경병증, 골 손실 등에 효과적이라고 알려져 있다 (Mun et al. Experimental & Molecular Medicine (2020) 52:1239-1254).
그러나, 아직까지 효과가 매우 뛰어나며, 약물로서 바람직한 특성을 가진 CSF1R 억제제가 필요한 실정이다.
Cannarile et al. Journal for ImmunoTherapy of Cancer (2017) 5:53 American Association for Cancer Research, Volume 10, Issue 10, pp. OF1
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 CSF1R 억제제로 유용한 신규 화합물 및 이의 의약 용도를 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 개시의 일 양태는 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
상기 화학식 1에서, R1 내지 R5는 서로 독립적으로 수소, -OH, 할로겐, -C1-3알킬, -C1-3알킬-OH, -O-C1-3알킬, -C1-3알킬-O-C1-3알킬, -O-C1-3할로알킬, -SO2CH3, 또는 -NH2이거나, R1 내지 R5 중 인접한 2개의 R이 서로 연결되어 페닐기와 함께 dihydrobenzofuran, 2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxine, 또는 benzo[d][1,3]dioxole을 형성함.
본 개시에 따른 화합물들은 구조가 유사한 화합물들과 비교하여 CSF1R 억제 활성이 우수하여 다양한 암의 치료 또는 예방에 효과적일 수 있다. 뿐만 아니라, 본 개시에 따른 화합물들은 BBB (blood brain barrier) 통과 등의 측면에서도 우수한 특성을 나타내어 뇌종양, 특히, 교모세포종 등의 치료에 유용하다.
본 명세서에서 용어 "치환기(substituent)", "라디칼(radical)", "기(group)", "모이어티(moiety)", 및 "절편(fragment)"은 서로 바꾸어 사용할 수 있다.
만약 치환기가 "임의로 치환된" 또는 “선택적으로 치환된”으로 설명된다면, 상기 치환기는 (1) 치환되지 않거나 (2) 또는 정의된 치환기들 중 하나 이상으로 치환될 수 있다. 만약 치환 가능한 위치가 치환되지 않은 경우 기본(default) 치환기는 수소이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알킬"은 (탄소수가 특별히 한정되지 않은 경우) 탄소수 1 내지 10을 가진 포화된 직쇄상 또는 분지상의 비-고리(cyclic) 탄화수소를 의미한다. "저급 알킬"은 탄소수가 1 내지 4인 직쇄상 또는 분지상 알킬을 의미한다. 대표적인 포화 직쇄상 알킬은 -메틸, -에틸, -n-프로필, -n-부틸, -n-펜틸, -n-헥실, -n-헵틸, -n-옥틸, -n-노닐 과 -n-데실을 포함하고, 반면에 포화 분지상 알킬은 -이소프로필, -sec-부틸, -이소부틸, -tert-부틸, 이소펜틸, 2-메틸헥실, 3-메틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2-메틸헥실, 3-메틸헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2-메틸헥실, 3-메틸헥실, 4-메틸헥실, 5- 메틸헥실, 2,3-디메틸부틸, 2,3-디메틸펜틸, 2,4-디메틸펜틸, 2,3-디메틸헥실, 2,4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 2,2-디메틸펜틸, 2,2-디메틸헥실, 3,3-디메틸펜틸, 3,3-디메틸헥실, 4,4-디메틸헥실, 2-에틸펜틸, 3-에틸펜틸, 2-데틸헥실, 3-에틸헥실, 4-에틸헥실, 2-메틸-2-에틸펜틸, 2-메틸-3-에틸펜틸, 2-메틸-4-에틸펜틸, 2-메틸-2-에틸헥실, 2-메틸-3-에틸헥실, 2-메틸-4-에틸헥실, 2,2-디에틸펜틸, 3,3-디에틸헥실, 2,2-디에틸헥실, 및 3,3-디에틸헥실을 포함한다.
본 명세서에서 "C1-6", "C1-6", 또는 "C1-C6"와 같이 기재될 경우 이는 탄소수가 1 내지 6개임을 의미한다. 예를 들어, C1-6알킬은 탄소수가 1 내지 6인 알킬을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "할로겐" 및 "할로"는 플루오린, 클로린, 브로민 또는 아이오딘을 의미한다. 본 발명의 바람직한 일 태양에 있어, 할로겐은 클로린 또는 플루오린이며, 더욱 바람직한 태양에서 할로겐은 플루오린이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "할로알킬"은 각각 하나 이상의 수소 원자가 할로겐 원자로 치환된 알킬 그룹을 의미한다. 예를 들어, 할로알킬은 -CF3, -CHF2, -CH2F, -CBr3, -CHBr2, -CH2Br, -CC13, -CHC12, -CH2CI, -CI3, -CHI2, -CH2I, -CH2-CF3, -CH2-CHF2, -CH2-CH2F, -CH2-CBr3, -CH2-CHBr2, -CH2-CH2Br, -CH2-CC13, -CH2-CHC12, -CH2-CH2CI, -CH2-CI3, -CH2-CHI2, -CH2-CH2I, 및 이와 유사한 것을 포함한다. 본 발명의 바람직한 일 태양에서, 할로알킬은 CF3이다. 여기에서 알킬 및 할로겐은 위에서 정의된 것과 같다.
비-한정적인, 본 개시에 따른 화학식 1의 화합물의 예는 후술하는 실시예들에서 제조된 화합물 1 내지 28 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
상기 화합물들 중에서도, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-(methylsulfonyl)benzyl)pyridin-2-amine (화합물 1), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 3), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-fluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 4), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-fluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 12), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 14), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 15), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 17), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-difluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 19), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-fluoro-4-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 23), 또는 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-methoxy-3-(trifluoromethyl)benzyl)pyridin-2-amine (화합물 24)이 CSF1R 억제 활성 등의 본 발명 목적상 더욱 바람직하였으며, 특히, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-(methylsulfonyl)benzyl)pyridin-2-amine (화합물 1), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 3), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-fluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 4), 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 17), 및 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-difluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 19)이 본 발명의 목적상 더욱 더 바람직하였다.
본 발명에 있어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 여기서 언급한 화합물에서 발견되는 특정 치환체에 의존하는 비교적 비독성 산으로 제조된 활성 화합물의 염들을 포함한다. 본 발명의 화합물의 산성 부가 염들은 충분한 양의 원하는 산, 순수한 또는 적당한 비활성(inert) 용매로 본 발명 화합물의 중성 형태를 접촉하여 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 산성 부가 염의 예들은 초산, 프로피온산, 이소부틸산, 옥살릭산(oxalic), 마레익(maleic), 말로닉(malonic), 안식향성, 숙신산, 수버릭(suberic), 푸마릭(fumaric), 만데릭(mandelic), 프탈릭(phthalic), 벤젠설포닉(benzenesulfonic), p-토릴설포닉(tolylsulfonic), 구연산, 주석산, 메탄솔포닉(methanesulfonic), 및 그 유사체를 포함하는 상대적으로 비독성 유기산에서 유래한 염들 뿐만 아니라, 염화수소, 브롬화 수소, 질산, 탄산, 일수소탄산(monohydrogencarbonic), 인산(phosphoric), 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 요오드화수소 또는 아인산(phosphorous acid) 및 그 유사체를 포함한다. 또한 알긴네이트(arginate)와 그 유사체와 같은 아미노산의 염 및 글루쿠로닉(glucuronic) 또는 갈락투노릭(galactunoric) 산들과 그 유사체와 같은 유기산의 유사체를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어인 "본 발명의 화합물"은 화학식 1의 화합물(들)뿐만 아니라, 이의 클라드레이트(clathrates), 수화물, 용매화물, 또는 다형체를 포함하는 의미이다. 또한 용어 "본 발명의 화합물"은 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 언급되지 않을 경우 본 발명 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염도 포함하는 의미이다.
본 명세서에서 사용될 경우, 용어 "결정다형(polymorph)"은 본 발명의 화합물의 고체 결정 형태 또는 그것의 복합체를 의미한다. 같은 화합물의 다른 결정다형은 다른 물리적, 화학적 그리고/또는 스펙트럼적 특성을 보인다. 물리적 특성 측면의 차이점으로는 안정성(예를 들어, 열 또는 빛 안정성), 압축성과 밀도(제제화 및 생산물 제조에 중요함), 그리고 용해율(생물학적 이용률에 영향을 줄 수 있음)을 포함하나, 이에 한정되지 아니한다. 안정성에서 차이는 화학반응성 변화들(예를 들어, 또 다른 다형으로 구성되었을 때보다 하나의 다형으로 구성되었을 때 더 빠르게 변색이 되는 것 같은 차별적 산화) 또는 기계적인 특징들(예를 들어 동역학적으로 선호된 다형체로서 저장된 정제 파편들이 열역학 적으로 더 안정된 다형으로 변환) 또는 둘 다(하나의 다형의 정제는 높은 습도에서 더 분해에 예민)를 야기한다. 결정다형의 다른 물리적 성질들은 그들의 가공에 영향을 줄 수 있다. 예를 들어, 한 결정다형은 또 다른 결정다형에 비하여, 예를 들어, 그것의 형태 또는 입자의 크기 분포에 기인하여 용매화합물을 형성할 가능성이 많을 수 있거나, 여과 또는 세척이 더 어려울 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "용매 화합물"은 비공유 분자간의 힘에 의해 결합된 화학량론적 또는 비-화학량론적인 양의 용매를 포함하는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 의미한다. 바람직한 용매들은 휘발성이고, 비독성이며, 인간에게 극소량 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "수화물(hydrate)"은 비공유 분자간의 힘에 의해 결합된 화학량론적 또는 비-화학량론적인 양의 물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "클라드레이트(clathrate)"은 게스트 분자(예를 들어, 용매 또는 물)를 가두어 놓은 공간(예를 들어, 채널(channel))을 포함한 결정 격자의 형태의 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "정제된(purified)"은 분리될 때, 분리체는 90% 이상 순수한 것을 의미하며, 일 실시예에서는 95% 이상 순수하고, 다른 실시 예에서는 99% 이상 순수하고, 또 다른 실시예에서는 99.9% 이상 순수한 것을 의미한다.
용어 "약학적으로 허용 가능한"은 약학적 제제로 사용하기에 적합한 것을 의미하며, 일반적으로 이러한 사용을 위하여 안전한 것으로 간주되며, 이러한 사용을 위하여 국가의 관리 기관에 의하여 공식적으로 승인되거나 한국 약전 또는 미국 약전의 명단에 있는 것을 의미한다.
본 개시의 일 양태는 본 발명 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의, CSF1R 매개 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약 용도를 제공한다.
본 명세서에 있어, "CSF1R 매개 질환"은 CSF1R의 억제 또는 저해를 통해 치료될 수 있는 질환을 의미하며, 장애(disorder)를 포함하는 의미이다. CSF1R 매개 질환으로는 흑색종, 전립선암, 교모세포종(Gliobastoma, GBM) (특히, 재발성 GBM), 백혈병 (특히, 만성 골수성 백혈병, refractory leukemia), 골수성 백혈병, 고형 암 또는 고형 종양 (특히, refractory solid tumor), 호지킨 림프종 (특히, 재발성 또는 불응성 CHL), 유방암 (특히, 삼중음성유방암(Triple negative breast cancer, TNBC), 위장관기질종양 (GIST), 육종, 난소암, 폐암 (특히, 비소세포폐암 (non-small cell lung cancer, NSCLC)), 두경부 편평세포암, 방광암 (특히, 요로상피 방광암), 췌장암, 위암, 평활근육종, 담관암, 대장암, 신장암 (신세포암), 뇌종양 (특히, 교모세포종), 관절염, 신경 퇴행성 질환 (알츠하이머 병, 파킨슨 병, 루게릭병(Lou Gehrig's disease) 등), 죽상동맥경화증, 섬유증(fibrosis), 당뇨, 다발성 경화증, 루푸스, 자가면역질환, 골다공증, 류마티스성 관절염, 신경병성 통증(neuropathic pain), 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis, ALS), 당뇨병성 신경병증, 또는 골 손실이다.
따라서, 본 개시는 또한 본 발명 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효 성분으로 포함하는 흑색종, 전립선암, 교모세포종(Gliobastoma, GBM) (특히, 재발성 GBM), 백혈병 (특히, refractory leukemia), 골수성 백혈병, 고형 암 또는 고형 종양 (특히, refractory solid tumor), 호지킨 림프종 (특히, 재발성 또는 불응성 CHL), 유방암 (특히, 삼중음성유방암(Triple negative breast cancer, TNBC), 위장관기질종양 (GIST), 육종, 난소암, 폐암 (특히, 비소세포폐암 (non-small cell lung cancer, NSCLC)), 두경부 편평세포암, 방광암 (특히, 요로상피 방광암), 췌장암, 위암, 평활근육종, 담관암, 대장암, 신장암 (신세포암), 뇌종양 (특히, 교모세포종), 관절염, 신경 퇴행성 질환 (알츠하이머 병, 파킨슨 병, 루게릭병(Lou Gehrig's disease) 등), 죽상동맥경화증, 섬유증(fibrosis), 당뇨, 다발성 경화증, 루푸스, 자가면역질환, 골다공증, 류마티스성 관절염, 신경병성 통증(neuropathic pain), 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis, ALS), 당뇨병성 신경병증, 또는 골 손실의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다. 본 개시의 다른 양태는 또한 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료학적으로 유효한 양을 CSF1R 매개 질환의 치료 또는 예방이 필요한 개체에게 투여하는 것을 특징으로 하는, CSF1R 매개 질환의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 또 다른 양태에서, 상기 개체는 동물이다. 다른 바람직한 양태에서, 상기 개체는 인간이다.
본 명세서에서 사용된 "유효량" 또는 "유효한 양"은 본 발명 화합물의 의약 용도가 암 또는 종양인 경우 원발, 국소성 또는 전이성(metastatic) 암세포 또는 암조직을 파괴, 변형, 통제 또는 제거하거나; 암의 확장을 늦추거나 또는 최소화하거나; 또는 암, 신생물 질환, 또는 종양의 치료 또는 관리에서 치료상 이점을 제공하기에 충분한 본 발명의 화합물의 양을 말한다. "유효량" 은 또한 암 또는 신생물 세포 사멸을 야기하기에 충분한 본 발명의 화합물의 양을 말한다. "유효량"은 또한 생체외(in vitro) 또는 생체내(in vivo) 어떤 쪽이든 CSF1R을 저해하기에 충분한 양을 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "신생물(neoplastic)"은 양성이거나 암성일지 모르는 세포 또는 조직(예를 들어, 종기)의 비정상적 성장을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 "치료"는 본 발명 화합물의 의약 용도가 암 또는 종양인 경우 원발, 국소성 또는 전이성 암조직의 근절, 제거, 변형, 또는 통제를 포함하고; 암의 확장을 최소화하거나 지연시키는 것이다.
본 명세서에서 사용된 "예방(prevention)"은 환자에서 상기 CSF1R 매개 질환의 재발의 방지를 의미하며, 확장 또는 발병의 예방을 포함한다.
본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 일반적으로 치료적으로 유효한 양이 투여된다. 본 발명의 화합물은 임의의 적합한 경로에 의하여 이러한 경로에 적당한 약학 조성물의 형태, 그리고 의도된 치료를 위하여 효과적인 투여량으로 투여될 수 있다. 효과적인 투여량은 단일 또는 분할 투여로 일반적으로 약 0.0001 내지 약 200mg/체중kg/일이고, 바람직하게는 약 0.001 내지 약 100 mg/kg/일이고, 더욱 바람직하게는 약 0.015 내지 50 mg/체중kg/일이다. 나이, 종, 및 치료될 질병 또는 상태(condition)에 따라 이 범위의 하한 미만의 투여량 수준이 적합할 수 있다. 다른 경우에는, 여전히 더 큰 투여량이 해로운 부작용없이 사용될 수 있다. 더 큰 투여량은 하루 동안 투여를 위하여, 여러 작은 투여량으로 분할될 수 있다. 적절한 투여량을 결정하기 위한 방법들이 본 발명이 속한 분야에 잘 알려져 있다.
본 개시의 다른 양태는 또한 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 포함하는 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 다음과 같이 다양한 방법의 투여를 위한 형태로 제조될 수 있다.
구강 투여(Oral administration)
본 발명의 화합물은 구강으로 투여될 수 있으며, 구강은 연하(swallowing)를 포함하는 개념이다. 구강 투여에 의하여 본 발명의 화합물이 위장관(gastrointestinal tract)에 들어가거나, 예를 들어, 구강(buccal) 또는 설하(sublingual) 투여와 같이, 입으로부터 혈류로 직접적으로 흡수될 수 있다.
구강 투여를 위한 적합한 조성물은 고형상, 액상, 겔(gel), 또는 파우더 형상일 수 있으며, 정제(tablet), 로젠지(lozenge), 캡슐(capsule), 과립제, 산제 등의 제형을 가질 수 있다.
구강 투여를 위한 조성물은 선택적으로 장용 코팅(enteric coating)될 수 있으며, 장용 코팅을 통하여 지연된(delayed) 또는 지속된(sustained) 방출을 나타낼 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 구강 투여를 위한 조성물은 즉시 또는 변형된(modified) 방출 패턴을 가진 제형일 수 있다.
액체 제형은 용액, 시럽 및 현탁액을 포함할 수 있으며, 이러한 액상 조성물은 연질 또는 경질 캡슐 내에 함유된 형태일 수 있다. 이러한 제형은 약학적으로 허용 가능한 담체, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리에틸렌글리콜, 셀룰로오스, 또는 오일(oil)을 포함할 수 있다. 상기 제형은 또한 하나 이상의 유화제 및/또는 현탁제를 포함할 수 있다.
정제(tablet) 제형에서, 활성 성분인 약물의 양은 정제 총 중량 대비 약 0.05 중량% 내지 약 95 중량%, 더욱 일반적으로 제형의 약 2 중량% 내지 약 50 중량%로 존재할 수 있다. 또한, 정제는 약 0.5 중량% 내지 약 35 중량%, 더욱 일반적으로 제형의 약 2 중량% 내지 약 25 중량%를 포함하는 붕해제를 함유할 수 있다. 붕해제의 예로는 유당, 전분, 소디움스타치글리콜레이트, 크로스포비돈, 크로스카멜로스소디움(croscarmellose sodium), 말토덱스트린 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
정제로 제조하기 위해 포함되는 적합한 활택제는 약 0.1 중량% 내지 약 5 중량% 양으로 존재할 수 있고, 탈크(talc), 이산화규소, 스테아린산, 칼슘, 아연 또는 마그네슘 스테아레이트, 소듐 스테아릴 푸마레이트 등이 활택제로 사용될 수 있으나, 본 발명은 이러한 첨가제들의 종류에 한정되는 것은 아니다.
정제로 제조하기 위한 결합제(binder)로는 젤라틴, 폴리에틸렌글리콜, 당(sugar), 검(gum), 녹말(starch), 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등이 사용될 수 있으며, 정제로 제조하기 위한 적합한 희석제로는 만니톨, 자일리톨, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 녹말(starch), 미결정셀룰로오스 등이 사용될 수 있으나, 본 발명은 이러한 첨가제들의 종류에 한정되는 것은 아니다.
선택적으로 정제에 포함될 수 있는 가용화제는 정제 총 중량 대비 약 0.1 중량% 내지 약 3 중량% 양이 사용될 수 있고, 예를 들어, 폴리소르베이트, 소디움 라우릴설페이트, 소디움 도데실설페이트, 프로필렌 카보네이트, 디에틸렌글리콜모노에틸에테르, 디메틸이소소르비드, 폴리옥시에틸렌글리콜화된 천연 또는 수소화 피마자유, HCORTM(Nikkol), 올레일에스테르, 젤루시어(GelucireTM), 카프릴릭/카프릴산 모노/디글리세리드, 소르비탄지방산에스테르, 솔루톨HSTM 등이 본 발명에 따른 약학 조성물에 사용될 수 있으나, 본 발명은 이러한 가용화제의 구체적 종류에 한정되는 것은 아니다.
비경구 투여(Parenteral Administration)
본 발명의 화합물은 혈류, 근육, 또는 내장 내로 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여를 위한 적합한 방법은 정맥내(intravenous), 근육내(intra-muscular), 피하 동맥내(subcutaneous intraarterial), 복강내(intraperitoneal), 척추강내(intrathecal), 두개내(intracranial) 주사 등을 포함한다. 비경구 투여를 위한 적합한 장치는 (바늘 및 바늘 없는 주사기를 포함하는) 주사기(injector) 및 주입 방법(infusion method)을 포함한다.
비경구 투여를 위한 조성물은 즉시 또는 변형된 방출 패턴을 가진 제형일 수 있으며, 변형된 방출 패턴은 지연된(delayed) 또는 지속된(sustained) 방출 패턴일 수 있다.
대부분의 비경구 제형은 액상 조성물이며, 이러한 액상 조성물은 본 발명에 따른 약효 성분, 염, 완충제, 등장화제 등을 포함하는 수용액이다.
비경구 제형은 또한 건조된 형태(예를 들어, 동결 건조) 또는 멸균 비-수용액으로서 제조될 수 있다. 이들 제형은 멸균수(sterile water)와 같은 적합한 비히클(vehicle)과 함께 사용될 수 있다. 용해도 증강제(solubility-enhancing agents) 또한 비경구 용액의 제조에 사용될 수 있다.
국소 투여(Topical Administration)
본 발명의 화합물은 피부 또는 경피로 국소적으로 투여될 수 있다. 이 국소 투여를 위한 제형은 로션, 용액, 크림, 젤, 하이드로젤, 연고, 폼(foam), 임플란트(implant), 패치 등을 포함한다. 국소 투여 제형을 위한 약학적으로 허용 가능한 담체는 물, 알코올, 미네랄 오일, 글리세린, 폴리에틸렌글리콜 등을 포함할 수 있다. 국소 투여는 또한 전기천공법(electroporation), 이온도입법(iontophoresis), 음파영동(phonophoresis) 등에 의하여 수행될 수 있다.
국소 투여를 위한 조성물은 즉시 또는 변형된 방출 패턴을 가진 제형일 수 있으며, 변형된 방출 패턴은 지연된(delayed) 또는 지속된(sustained) 방출 패턴일 수 있다.
본 개시는 CSF1R 억제제에 의해 치료 또는 예방될 수 있는 CSF1R 매개 질환 (예를 들어, 다양한 종류의 암)의 치료 또는 예방에 유용한 화합물 및 이의 의약 용도를 제공한다. 본 개시에 따른 화합물은 의약품의 유효 성분으로 다양한 장점을 가진다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명이 속한 분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
중간체들의 합성
(a) 중간체 2, di-(tert-butyl) 5-formylpyridin-2-ylimidodicarbonate의 합성
중간체 1, tert-butyl (5-formylpyridin-2-yl)carbamate (200mg, 0.899mmol) 및 DMAP (10.9mg, 0.0899mmol)을 Acetonitrile 3ml에 녹인 후 Boc2O (0.41ml, 1.8mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응물은 실온에서 24시간 교반하였다. 반응 완료 후 반응물을 감압 농축하고 잔여물을 포화 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (Hexane:EtOAc = 4:1)로 정제하여 하얀 고체 중간체 2를 277mg (95.7%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 1.40 (s, 18H), 7.62 (m, 1H), 8.27 (m, 1H), 8.90 (s, 1H), 10.03 (s, 1H)
(b) 중간체 4의 합성
중간체 2, di-(tert-butyl) 5-formylpyridin-2-ylimidodicarbonate (280mg, 0.868mmol), 중간체 3, 2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazine (140mg, 0.911mmol), 및 Tetrabutylammonium hydrogen sulfate (8.8mg, 0.026mmol)에 2-propanol 2.5ml를 넣고 고체가 완전히 녹을 때까지 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. Potassium tert-butoxide (19.5mg, 0.174mmol)을 첨가 후 72시간 동안 교반시켰다. 반응 완료 후 용매를 감압 농축하고 잔여물을 포화 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 노란색 고체 compound 4를 207mg (50.1%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.28 (br. s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.87-7.89 (d, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.25-7.27 (d, 1H), 6.08-6.09 (d, 1H), 6.02-6.03 (d, 1H), 1.34 (s, 18H).
(c) 중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine의 합성
중간체 4 (110mg, 0.231mmol)을 Acetonitrile 2ml에 녹이고 모두 녹을 때까지 실온에서 교반하였다. Triethylsilane (0.185ml, 1.156mmol)을 천천히 첨가한 후 TFA (0.159ml, 2.079mmol)을 천천히 첨가하였다. 80℃에서 24시간 동안 환류 교반하였으며 반응 종료 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 노란색 고체 compound 5를 47.5mg (79.2%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.09 (br. s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.24-7.27 (dd, 1H), 6.32-6.34 (d, 1H), 5.65 (s, 2H), 3.81 (s, 3H).
본 발명 일 태양에 따른 실시예 화합물들의 합성
1) 화합물 1 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-(methylsulfonyl)benzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (10mg, 0.0385mmol)과 4-(methylsulfonyl)benzaldehyde (12.7mg, 0.0693mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채웠다. 그후 AcOH (3.3μl, 0.05776mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (24.5mg, 0.11552mmol)을 첨가한 후 60℃에서 47시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 1를 0.9mg (5.2%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 3.04(s, 3H), 4.01(s, 2H), 4.63(d, 2H), 5.11(s, 1H), 6.35(d, 1H), 7.26(s, 1H), 7.42(d, 1H), 7.53-7.56(d, 2H), 7.88(d, 2H), 8.05(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.61(s, 1H)
2) 화합물 2 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-((perfluorophenyl)methyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (10mg, 0.0385mmol)과 2,3,4,5,6-pentafluorobenzaldehyde (9.06mg, 0.0462mmol)을 소량의 DMF에 넣어 녹인 후 DCE 2ml를 채웠다. AcOH (2.2μl, 0.0385mmol)을 천천히 첨가하고 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (24.5mg, 0.115mmol)을 첨가한 후 60℃에서 48시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (10% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 2를 2mg (12%) 얻었다.
3) 화합물 3 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3-methoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (26mg, 0.1mmol)과 3-methoxybenzaldehyde (14μl, 0.12mmol)을 DCE 2ml에 녹인 후 AcOH (5.7μl, 0.1mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (63.5mg, 0.3mmol)을 첨가한 후 60℃에서 24시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 3을 13mg (34.3%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 3.67(s, 3H), 3.82(s, 2H), 4.37(d, 2H), 6.38(d, 1H), 6.73(m, 1H), 6.80(m, 1H), 6.83-6.84(m, 2H), 7.13-7.15(m, 1H), 7.27(m, 1H), 7.69(s, 1H), 7.88(s, 1H), 8.24(s, 1H), 12.08(s,1H)
4) 화합물 4 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-fluorobenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (11mg, 0.0427mmol)과 4-fluorobenzaldehyde (6.36mg, 0.0513mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (2.4μl, 0.0427mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (27.15mg, 0.128mmol)을 첨가한 후 60℃에서 56시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 4을 3.7mg (23.6%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 3.81(s, 2H), 4.37(s, 2H), 6.38-6.40(dd, 1H), 6.85(m, 1H), 7.04-7.08(m, 2H), 7.26-7.31(m, 3H), 7.70(s, 1H), 7.87(s, 1H), 8.24(s, 1H), 12.10(s, 1H)
5) 화합물 5 (N-benzyl-5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (10mg, 0.0385mmol)과 benzaldehyde (6.4μl, 0.0635mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (3.3μl, 0.05776mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (24.5mg, 0.11552mmol)을 첨가한 후 60℃에서 48시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 5를 3mg (15.04%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 4,00(s, 2H), 4.48(d, 2H), 5.08(s, 1H), 6.36(d, 1H), 7.25-7.27(m, 3H), 7.34(m, 2H), 7.40(d, 1H), 7.52(s, 1H), 8.05(s, 1H), 8.22(s, 1H), 8.64(s, 1H)
6) 화합물 6 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3,5-dichlorobenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (20mg, 0.077mmol)과 3,5-dichlorobenzaldehyde (16.2mg, 0.0924mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (4.4μl, 0.077mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (40.8mg, 0.1925mmol)을 첨가한 후 60℃에서 14시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 6를 3.7mg (11.5%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.02(s, 2H), 4.48(d, 2H), 5.25(s, 1H), 6.34(d, 1H), 7.24(s, 2H), 7.26(s, 1H), 7.43-7.46(m, 2H), 8.04(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.68(s, 1H)
7) 화합물 7 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,5-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (20mg, 0.077mmol)과 2,5-dimethoxybenzaldehyde (14.1mg, 0.0847mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (4.4μl, 0.077mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (37.5mg, 0.1771mmol)을 첨가한 후 60℃에서 28.5시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 7를 4.1mg (13%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 3.73(s, 3H), 3.81(s, 3H), 4.00(s, 2H), 4.44(d, 2H), 5.29(s, 1H), 6.38(d, 1H), 6.73(m, 1H), 6.79(s,1H), 6.91(d, 1H), 7.24(m, 1H), 7.43(dd, 1H), 8.03(s, 1H), 8.22(s,1H), 8.63(s, 1H)
8) 화합물 8 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3,4-trimethoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (20mg, 0.077mmol)과 2,3,4-trimethoxybenzaldehyde (16.6mg, 0.0847mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (4.4μl, 0.077mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (37.5mg, 0.1771mmol)을 첨가한 후 60℃에서 23시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 8를 2.1mg (6.1%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 3.84(s, 3H), 3.87(s, 3H), 3.92(s, 3H), 4.00(s, 2H), 4.41(d, 2H), 5.04(s, 1H), 6.39(d, 1H), 6.60(d, 1H), 7.01(d,1H), 7.25(m, 1H), 7.42(dd, 1H), 8.04(m, 1H), 8.22(s, 1H), 8.65(s,1H)
9) 화합물 9 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-(trifluoromethoxy)benzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (9mg, 0.034565mmol)과 2-(trifluoromethoxy)benzaldehyde (5.4μl, 0.038mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (2μl, 0.03465mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (16.8mg, 0.0796mmol)을 첨가한 후 60℃에서 22시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (10% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 9를 4mg (26.7%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.01(s, 2H), 4.60(s, 2H), 5.02(s, 3H), 6.33-6.35(d, 1H), 7.22-7.24(m, 2H), 7.30(m, 2H), 7.41(dd, 1H), 7.46(dd, 1H), 8.06(s,1H), 8.23(s, 1H), 8.56(s, 1H)
10) 화합물 10 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3-(trifluoromethoxy)benzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (14mg, 0.054mmol)과 3-(trifluoromethoxy)benzaldehyde (9.2μl, 0.0647mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (3μl, 0.054mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (34.8mg, 0.162mmol)을 첨가한 후 60℃에서 24시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (10% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 10를 4.4mg (18.8%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.01(s, 2H), 4.54(s, 2H), 4.90 (s, 1H), 6.33-6.35(d, 1H), 7.10-7.12(d, 1H), 7.25(m, 1H), 7.26(s, 1H), 7.29(d, 1H), 7.35(s, 1H), 7.41-7.43(dd,1H), 8.07(s,1H), 8.23(s, 1H), 8.65(s, 1H)
11) 화합물 11 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3-fluorobenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (14mg, 0.054mmol)과 3-fluorobenzaldehyde (9.4μl, 0.0647mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (3μl, 0.054mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (34.34mg, 0.162mmol)을 첨가한 후 60℃에서 64시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (10% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 11을 2.5mg (12.8%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.01(s, 2H), 4.51(d, 2H), 5.05 (s, 1H), 6.34-6.35(d, 1H), 6.95-6.97(t, 1H), 7.05(d,1H), 7.13-7.15(d, 1H), 7.31(m, 1H), 7.41(dd, 1H), 8.06(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.58(s, 1H), 8.62(s, 1H)
12) 화합물 12 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-fluorobenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (10mg, 0.0385mmol)과 2-fluorobenzaldehyde (7.5μl, 0.0716mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (3μl, 0.054mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (37.89mg, 0.1788mmol)을 첨가한 후 60℃에서 42시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (10% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 12을 2.1mg (14%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.01(s, 2H), 4.57(d, 2H), 4.92 (s, 1H), 6.37(d, 1H), 7.03-7.05(m, 2H), 7.23(m,1H), 7.25-7.26(m, 1H), 7.38-7.43(m, 2H), 8.07(s, 1H), 8.22(s, 1H), 8.64(s, 1H)
13) 화합물 13 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,4-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (10mg, 0.0385mmol)과 2,4-Dimethoxybenzaldehyde (7.04mg, 0.0423mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (2.2μl, 0.0385mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (18.7mg, 0.0885mmol)을 첨가한 후 60℃에서 12시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (10% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 13을 2.5mg (15.8%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 3.79(s, 3H), 3.83(s, 3H), 3.99(s, 2H), 4.39(d, 2H), 6.39-6.41(m, 2H), 6.46(d, 1H), 7.18(s,1H), 7.21(s, 1H), 7.24(s, 1H), 7.41(dd, 1H), 8.01(s, 1H), 8.22(s,1H), 8.61(s, 1H)
14) 화합물 14 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-methoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (12mg, 0.0462mmol)과 4-methoxybenzaldehyde (6.17μl, 0.0508mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (2.6μl, 0.0462mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (24.5mg, 0.1155mmol)을 첨가한 후 60℃에서 42시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (10% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 14을 2.5mg (14.3%) 얻었다.
1 H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 3.79(s, 3H), 4.01(s, 2H), 4.41(d, 2H), 5.35(s, 1H), 6.37(d, 1H), 6.86(d, 2H), 7.25(s, 1H), 7.28(m, 2H), 7.46(m, 1H), 8.00(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.62(s, 1H)
15) 화합물 15 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-methoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (12mg, 0.0462mmol)과 2-methoxybenzaldehyde (6.1μl, 0.0508mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (2.64μl, 0.0462mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (24.5mg, 0.1155mmol)을 첨가한 후 60℃에서 48시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (10% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 15을 2.6mg (14.8%) 얻었다.
1 H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 3.84(s, 3H), 3.99(s, 2H), 4.46(d, 2H), 6.45(d, 1H), 6.87-6.92(m, 2H), 7.22(m, 2H), 7.29(d, 1H), 7.41(dd, 1H), 8.04(s, 1H), 8.22(s, 1H), 8.56(s, 1H)
16) 화합물 16 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-((2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)methyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (14mg, 0.054mmol)과 2,3-dihydrobenzofuran-5-carbaldehyde (8.2μl, 0.065mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (2.64μl, 0.0462mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (34.3mg, 0.162mmol)을 첨가한 후 60℃에서 24시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (10% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 16을 3mg (14.2%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 3.16-3.20(m, 2H), 4.01(s, 2H), 4.38(d, 2H), 4.54-4.58(m, 2H), 4.92(s, 1H), 6.35(d, 1H), 6.72(d, 2H), 7.07(m, 1H), 7.19(s, 1H), 7.25(m, 1H), 7.41(dd, 1H), 8.05(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.61(s, 1H)
17) 화합물 17 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (20mg, 0.077mmol)과 2,3-dimethoxybenzaldehyde (14.1mg, 0.0847mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (4.4μl, 0.077mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (37.5mg, 0.1771mmol)을 첨가한 후 60℃에서 22시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 17를 7mg (22.2%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 3.83(s, 6H), 3.90(s, 2H), 4.47(d, 2H), 6.48(s, 1H), 6.77(m, 1H), 6.89(m, 2H), 7.34(s, 2H), 7.49(m, 1H), 7.79(s, 1H), 8.13(s, 1H), 9.60(s, 1H)
18) 화합물 18 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-fluoro-3-(trifluoromethoxy)benzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (10mg, 0.0385mmol)과 2-fluoro-3-(trifluoromethoxy)benzaldehyde (8.8mg, 0.0423mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (2.2μl, 0.0385mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (18.77mg, 0.08855mmol)을 첨가한 후 60℃에서 24시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 18을 2.5mg (14.3%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 6.32(s, 2H), 6.92(d, 2H), 8.67(d, 1H), 8.80(s, 1H), 9.37(m, 1H), 9.51(m, 1H), 9.64-9.66(m, 1H), 9.72-9.78(m, 2H), 10.36(s, 1H), 10.53(s, 1H), 10.91(s, 1H)
19) 화합물 19 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-difluorobenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (29mg, 0.111mmol)과 2,3-difluorobenzaldehyde (24.25μl, 0.222mmol)을 Acetonitrile 2ml에 녹인 후 고체가 완전히 녹을 때까지 실온에서 10분 동안 교반시켰다. Triethylsilane (131.2μl, 0.821mmol)을 첨가한 후 실온에서 15분 동안 교반시켰다. Trifluoroacetic acid (64.6μl, 0.844mmol)을 첨가한 후 80℃에서 18시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 19를 10.2mg (24%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.09 (br. s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.31-7.33 (dd, 1H), 7.22-7.24 (d, 1H), 7.10 (br. s, 2H), 6.96 (s, 1H), 6.45-6.47 (d, 1H), 4.47-4.49 (d, 2H), 3.82 (s, 2H)
20) 화합물 20 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,6-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (17mg, 0.066mmol)과 2,6-dimethoxybenzaldehyde (22mg, 0.132mmol)을 Acetonitrile 1.5ml에 녹인 후 고체가 완전히 녹을 때까지 실온에서 10분 동안 교반시켰다. Triethylsilane (77.8μl, 0.821mmol)을 첨가한 후 실온에서 15분 동안 교반시켰다. Trifluoroacetic acid (38.3μl, 0.844mmol)을 첨가한 후 80℃에서 24시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 20를 4.6mg (17.1%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.09 (br. s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.17-7.25 (m, 2H), 6.61 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.43-6.45 (d, 1H), 5.83 (t, 1H), 4.26-4.27 (d, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.72 (s, 6H)
21) 화합물 21 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3,5-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (19mg, 0.074mmol)과 3,5-dimethoxybenzaldehyde (24.6mg, 0.148mmol)을 Acetonitrile 2ml에 녹인 후 고체가 완전히 녹을 때까지 실온에서 10분 동안 교반시켰다. Triethylsilane (87.5μl, 0.548mmol)을 첨가한 후 실온에서 15분 동안 교반시켰다. Trifluoroacetic acid (43μl, 0.562mmol)을 첨가한 후 80℃에서 19시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 21를 8.4mg (28%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.09 (br. s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.26-7.29 (d, 1H), 6.79 (t, 1H), 6.38-6.43 (m, 3H), 6.29 (s, 1H), 4.31-4.32 (d, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.65 (s, 6H)
22) 화합물 22 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3,4,5-trimethoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (12.5mg, 0.048mmol)과 3,4,5-trimethoxybenzaldehyde (18.84mg, 0.096mmol)을 Acetonitrile 1.5ml에 녹인 후 고체가 완전히 녹을 때까지 실온에서 10분 동안 교반시켰다. Triethylsilane (56.7μl, 0.355mmol)을 첨가한 후 실온에서 15분 동안 교반시켰다. Trifluoroacetic acid (28μl, 0.365mmol)을 첨가한 후 80℃에서 30시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 22를 2.8mg (12%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.09 (br. s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.27-7.29 (d, 1H), 6.75 (t, 1H), 6.61 (s, 2H), 6.40-6.43 (d, 1H), 4.30-4.32 (d, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.68 (s, 6H), 3.57 (s, 3H)
23) 화합물 23 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-fluoro-4-methoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (12mg, 0.046mmol)과 2-fluoro-4-methoxybenzaldehyde (14.2mg, 0.092mmol)을 Acetonitrile 1.5ml에 녹인 후 고체가 완전히 녹을 때까지 실온에서 10분 동안 교반시켰다. Triethylsilane (54.4μl, 0.340mmol)을 첨가한 후 실온에서 15분 동안 교반시켰다. Trifluoroacetic acid (26.8μl, 0.350mmol)을 첨가한 후 80℃에서 30시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 23를 6.4mg (35%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.19 (br. s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.37-7.39 (d, 1H), 7.29-7.33 (t, 1H), 6.82-6.85 (m, 2H), 6.75-6.77 (d, 1H), 6.49-6.51 (d, 1H), 4.43-4.44 (d, 2H), 3.91 (s, 2H), 3.79 (s, 3H)
24) 화합물 24 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-methoxy-3-(trifluoromethyl)benzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (14mg, 0.054mmol)과 4-methoxy-3-(trifluoromethyl)benzaldehyde (13.2mg, 0.065mmol)을 DCE 1.5ml에 녹인 후 AcOH (3.1μl, 0.054mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (28.6mg, 0.135mmol)을 첨가한 후 60℃에서 27시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 24를 3.9mg (16%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.09 (br. s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.52 (s, 2H), 7.27-7.29 (d, 1H), 7.13-7.15 (m, 1H), 6.86-6.89 (t, 1H), 6.39-6.41 (d, 1H), 4.36-4.38 (d, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.80 (s, 3H)
25) 화합물 25 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,4,6-trimethoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (16mg, 0.062mmol)과 2,4,6-trimethoxybenzaldehyde (14.5mg, 0.074mmol)을 DCE 1.5ml에 녹인 후 AcOH (3.5μl, 0.062mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (33mg, 0.154mmol)을 첨가한 후 60℃에서 36시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 25를 7.9mg (29%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.09 (br. s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.23-7.25 (d, 1H), 6.42-6.44 (d, 1H), 6.20 (s, 2H), 5.75 (br. s, 1H), 4.17-4.18 (d, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.72 (s, 6H)
26) 화합물 26 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(6-fluoro-2,3-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
중간체 5, 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (44.3mg, 0.189mmol)과 6-fluoro-2,3-dimethoxybenzaldehyde (41.7mg, 0.2264mmol)을 DCE 2ml에 녹인 후 AcOH (10.8μl, 0.189mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (100mg, 0.472mmol)을 첨가한 후 60℃에서 27시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 26를 44.3mg (55%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 12.09 (br. s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.25-7.27 (d, 1H), 6.93-6.96 (m, 1H), 6.84-6.89 (t, 1H), 6.29 (s, 1H), 4.31-4.32 (d, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.65 (s, 6H)
27) 화합물 27 (5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-dichlorobenzyl)pyridin-2-amine)의 합성
5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (9mg, 0.0346mmol)과 2,3-dichlorobenzaldehyde (8.57mg, 0.049mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (2.2μl, 0.0385mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (18.77mg, 0.08855mmol)을 첨가한 후 60℃에서 24시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 하얀색 고체 화합물 27을 5mg (34.5%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.02(s, 2H), 4.48(d, 2H), 4.75(s, 1H), 6.32(d, 1H), 7.24(s, 2H), 7.25(s, 1H), 7.43-7.47(m, 2H), 8.04(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.68(s, 1H)
28) 화합물 28 (N-(2-aminobenzyl)-5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine)의 합성
단계 1) 5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-amine (9mg, 0.0346mmol)과 benzyl (2-formylphenyl)carbamate (11.7mg, 0.046mmol)을 소량의 DMF에 녹인 후 DCE 2ml로 채운 후 AcOH (2.2μl, 0.0385mmol)을 천천히 첨가하였다. 60℃에서 1시간 동안 환류 교반하였다. Sodium triacetoxyborohydride (18.77mg, 0.08855mmol)을 첨가한 후 60℃에서 24시간 환류 교반한 후 반응물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 NaHCO3 용액으로 중화시키고 brine과 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 column chromatography (8% MeOH in MC)로 정제하여 노란색 고체 benzyl (2-(((5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-yl)amino)methyl)phenyl)carbamate 을 2.5mg (14.7%) 얻었다.
단계 2) benzyl (2-(((5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)pyridin-2-yl)amino)methyl)phenyl)carbamate(2.5mg, 0.005mmol)와 10% Pd/C 10% wt을 MeOH에 녹였다. NaBH4 (1.5mg, 0.04mmol)을 천천히 첨가한 후 실온에서 10분간 교반시켰다. Celite filter 후 column chromatography (5% MeOH in MC)로 정제하여 노란색 고체 화합물 28을 1.5mg(82%) 얻었다.
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.48(d, 2H), 4.87(s, 1H), 5.21(s, 2H), 6.31(d, 1H), 6.98-7.02(t, 1H), 7.06(s, 1H), 7.31(m, 2H), 7.42(dd, 2H), 7.92(s, 1H), 7.99(s, 1H), 8.21(s, 1H), 8.45(s, 1H)
본 발명에 따른 실시예 화합물들의 평가
CSF1R kinase에 대한 저해 활성을 Promega의 ADP-GloTM kinase assay kit를 이용하여 측정하였다.
Buffer는 다음과 같이 분주 및 조성하였다. kit에 포함된 5X buffer 400 μl, DTT (100 mM) 1 μl, MnCl2 (2.5 M) 2 μl, 및 DW 597 μl를 섞어 1 ml의 volume을 조성하여 2X buffer를 제조하였으며, 이를 DW와 1:1 부피 비로 섞어 1X buffer를 제조하였다.
분석을 위해 100 ng/μl의 enzyme을 2X buffer와 1:19의 부피 비로 섞어 5 ng/μl의 농도로 제조하였다. 10 mM ATP를 1X buffer와 1:9의 부피 비로 섞어 1mM ATP를 제조 후, 이를 다시 1X buffer와 1:9의 부피 비로 섞어 100 μM의 ATP를 제조하였다.
384 well HT Plate (SPL, 32384)에 100 nM의 시험 화합물을 1 μl씩 각 well에 넣고, 제조한 100μM의 ATP와 kit에 포함된 substrate인 poly (4:1 Glu, Tyr) peptide를 1:1로 섞어 2 μl씩 각 well에 넣은 뒤 제조한 5 ng/μl enzyme을 2 μl씩 넣었다. 빛을 차단하고 60분 동안 상온에서 반응시켰다. 이후, ADP-GloTM 용액을 5 μl씩 넣고, 빛이 차단된 상태로 40분 동안 상온에서 반응하였다. 이후 Kinase detection reagent를 10 μl씩 넣고, 빛을 차단하여 30분 동안 상온에서 반응시킨 후, Luminometer (Berthold Techonologies, Centro LB960)로 측정하였다.
보다 정확한 실험이 되도록 standard를 이용하여 평가실험 간 오차를 보정하였다. standard로는 알려진 CSF1R 억제제인 Pexidartinib (양성 대조군)을 이용하였다. 그 결과를 종합하여 하기 표 1에 나타내었다.
화합물 억제율(%) 양성 대조군 대비 억제 정도
1 64 1.170
2 46 0.833
3 63 1.150
4 64 1.172
5 42 0.770
6 44 0.805
7 35 0.638
8 31 0.566
9 47 0.861
10 49 0.892
11 50 0.904
12 56 1.023
13 54 0.981
14 55 1.008
15 57 1.031
16 51 0.927
17 57 1.041
18 44 0.794
19 63 1.151
20 48 0.879
21 46 0.835
22 51 0.934
23 57 1.036
24 57 1.027
25 49 0.887
26 54 0.986
27 26 0.479
28 29 0.533
양성 대조군 55 1.000
상기 표 1의 결과에 나타나는 바와 같이, 화합물 1, 3, 4, 12, 14, 15, 17, 19, 23, 및 24의 경우 양성 대조군 대비 우수한 활성을 나타내었다. 특히, 화합물 1, 3, 4, 17, 및 19는 현저히 우수한 효력을 보였다.

Claims (8)

  1. 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    [화학식 1]

    상기 화학식 1에서, R1 내지 R5는 서로 독립적으로 수소, -OH, 할로겐, -C1-3알킬, -C1-3알킬-OH, -O-C1-3알킬, -C1-3알킬-O-C1-3알킬, -O-C1-3할로알킬, -SO2CH3, 또는 -NH2이거나, R1 내지 R5 중 인접한 2개의 R이 서로 연결되어 페닐기와 함께 dihydrobenzofuran, 2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxine, 또는 benzo[d][1,3]dioxole을 형성함.
  2. 제1항에 있어서, 상기 화합물은
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-(methylsulfonyl)benzyl)pyridin-2-amine (화합물 1),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 3),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-fluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 4),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-fluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 12),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 14),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 15),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 17),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-difluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 19),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2-fluoro-4-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 23), 또는
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-methoxy-3-(trifluoromethyl)benzyl)pyridin-2-amine (화합물 24)인,
    화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제2항에 있어서, 상기 화합물은
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-(methylsulfonyl)benzyl)pyridin-2-amine (화합물 1),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(3-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 3),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(4-fluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 4),
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-dimethoxybenzyl)pyridin-2-amine (화합물 17), 또는
    5-((2-chloro-5H-pyrrolo[2,3-b]pyrazin-7-yl)methyl)-N-(2,3-difluorobenzyl)pyridin-2-amine (화합물 19)인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 포함하는 조성물.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효 성분으로 포함하는 CSF1R 매개 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 CSF1R 매개 질환은 흑색종, 전립선암, 교모세포종, 백혈병, 골수성 백혈병, 고형 암 또는 고형 종양, 호지킨 림프종, 유방암, 위장관기질종양, 육종, 난소암, 폐암, 두경부 편평세포암, 방광암, 췌장암, 위암, 평활근육종, 담관암, 대장암, 신장암, 뇌종양, 관절염, 신경 퇴행성 질환 (알츠하이머 병, 파킨슨 병, 루게릭병(Lou Gehrig's disease) 등), 죽상동맥경화증, 섬유증(fibrosis), 당뇨, 다발성 경화증, 루푸스, 자가면역질환, 골다공증, 류마티스성 관절염, 신경병성 통증(neuropathic pain), 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis, ALS), 당뇨병성 신경병증, 또는 골 손실인 약학 조성물.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료학적으로 유효한 양을 CSF1R 매개 질환의 치료 또는 예방이 필요한 개체에게 투여하는 것을 특징으로 하는, CSF1R 매개 질환의 치료 또는 예방 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 CSF1R 매개 질환은 흑색종, 전립선암, 교모세포종, 백혈병, 골수성 백혈병, 고형 암 또는 고형 종양, 호지킨 림프종, 유방암, 위장관기질종양, 육종, 난소암, 폐암, 두경부 편평세포암, 방광암, 췌장암, 위암, 평활근육종, 담관암, 대장암, 신장암, 뇌종양, 관절염, 신경 퇴행성 질환 (알츠하이머 병, 파킨슨 병, 루게릭병(Lou Gehrig's disease) 등), 죽상동맥경화증, 섬유증(fibrosis), 당뇨, 다발성 경화증, 루푸스, 자가면역질환, 골다공증, 류마티스성 관절염, 신경병성 통증(neuropathic pain), 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis, ALS), 당뇨병성 신경병증, 또는 골 손실인 치료 또는 예방 방법.
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American Association for Cancer Research, Volume 10, Issue 10, pp. OF1
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