KR20230124684A - 개선된 cd30 표적화 항체 약물 접합체 및 이의 용도 - Google Patents

개선된 cd30 표적화 항체 약물 접합체 및 이의 용도 Download PDF

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KR20230124684A
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brentuximab
adc
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하인리히 레온하르트
요나스 헬마-스메츠
도미니크 슈마커
마르쿠스 거라히
크리스티안 하켄베르거
마르크-안드레 카스퍼
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루드비히-막시밀리안스-우니버지테트 뮌헨
포슝스베르분드 베를린 에.베.
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Abstract

본 발명은 (a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 중쇄와 경쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열 및 비천연 아미노산을 포함함 -; 및 (b) 적어도 하나의 약물 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)로서, 상기 약물 모이어티는 링커를 통해 각각의 비천연 아미노산에 커플링되는, 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이의 제조 방법, 이를 포함하는 약학적 조성물 뿐만 아니라 이의 용도에 관한 것이다.

Description

개선된 CD30 표적화 항체 약물 접합체 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 12월 23일에 출원된 유럽 특허 출원 번호 제20216838.1호의 우선권을 주장하며, 이의 내용은 모든 목적을 위해 전체적으로 본 명세서에 참조로 인용된다.
기술분야
본 발명은 브렌툭시맙 및 적어도 하나의 약물 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC), 이를 제조하는 방법, 이를 포함하는 약학적 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
림프성 악성종양은 모든 암의 약 4 내지 5%를 차지하며 림프계에서 유래한다. 고전적인 호지킨 림프종과 역형성 거대세포 림프종 및 말초 T 세포 림프종과 같은 여러 비호지킨 림프종에서 CD30은 최근 몇 년 동안 표적 치료를 위한 가치있는 종양 바이오마커로 입증되었다. 2011년 브렌툭시맙 베도틴(Brentuximab vedotin)의 First-in-class 승인으로 최초의 CD30 특이적 생물학적 약물이 시장에 출시되었으며 이후 전반적인 반응이 좋은 필수 치료 옵션이 되었다. 브렌툭시맙 베도틴은 종양 표적화 키메릭 IgG1 항체 성분인 브렌툭시맙, 및 세포 내 전달 및 방출 시 효율적으로 아폽토시스를 유도하는, 강력한 페이로드 모이어티 모노메틸-아우리스타틴 E와 화학적으로 연결된 카텝신(Cathepsin) B 절단가능한 발린-시트룰린 링커 모이어티를 포함하는 링커-페이로드 성분으로 구성된다.
브렌툭시맙 베도틴은 ADC(Antibody Drug Conjugate)로 최근 몇 년 동안 큰 관심을 받고 있는 비교적 새로운 치료 방식이다. 이러한 바이오 의약품은 강력한 세포독성 약물을 종양 세포에 직접 전달하므로 기존 화학 요법에 비해 치료 범위를 넓힐 수 있는 잠재력이 있다. 현재까지 9개의 확률적으로 결합된 ADC가 승인되었다. 이러한 분자는 노출된 리신 잔기와 무작위로 반응하는 활성화된 카르복실산(예를 들어, Mylotarg, Besponsa, Kadcyla)과의 접합을 기반으로 한다. 대안적으로, 말레이미드는 사슬내-디설파이드 환원(예를 들어, 브렌툭시맙 베도틴(Adcetris®, Polivy, Padcev, Enhertu, Trodelvy, Blenrep)으로 입수가능) 후의 유리 시스테인에 링커-페이로드 모이어티를 접합시키는 가장 중요한 접합 시약이 되었다.
그러나 브렌툭시맙 베도틴은 임상에서 혈소판 감소증과 같은 부작용으로 민감하고 오래 지속되는 독성을 일으키는 것으로 알려져 있다.
따라서, 바람직하게는 부작용이 적은 개선된 브렌툭시맙-포함 ADC에 대한 필요성이 여전히 존재한다. 본 발명은 이러한 필요성을 해결하는 것을 목적으로 한다.
이러한 필요성은 청구범위 및 본 명세서에 기술된 구현예에서 정의된 주제에 의해 해결된다.
따라서, 본 발명은
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 중쇄와 경쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열 및 비천연 아미노산을 포함함 -; 및
(b) 적어도 하나의 약물 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC)로서,
상기 약물 모이어티는 링커를 통해 각각의 비천연 아미노산에 커플링되는,항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다.
브렌툭시맙의 중쇄는 서열 번호 1을 포함하거나 서열 번호 1과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있고/있거나 브렌툭시맙의 경쇄는 서열 번호 2를 포함하거나 서열 번호 2와 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있으며, 바람직하게는 브렌툭시맙은 서열 번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 및 서열 번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄로 이루어진다.
약물 모이어티는 캄프토테신, 메이탄시노이드, 칼리케아마이신, 듀오카르마이신, 튜불리신, 아마톡신, 돌라스타틴 및 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 피롤로벤조디아제핀 이량체, 인돌리노-벤조디아제핀 이량체, 방사성동위원소, 치료용 단백질 및 펩티드(또는 이의 단편), 핵산, PROTAC, 키나아제 억제제, MEK 억제제, KSP 억제제, 및 이의 유사체 또는 전구약물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 약물 모이어티는 MMAE이다.
튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열은 적어도 아미노산 서열 X1X2X3X4 (서열 번호 3)를 가질 수 있으며, 여기서 X1 및 X2는 임의의 아미노산이고, X3는 E, D 또는 C이고, X4는 E이고, 바람직하게는 X2는 G, S, A, V, 또는 F이고/이거나 X1은 E, D, A, K 또는 P이다.
인식 서열은 EGEE (서열 번호　4)일 수 있고, 바람직하게는 인식 서열은 VDSVEGEGEEEGEE (서열 번호　5), SVEGEGEEEGEE (서열 번호　6), SADGEDEGEE (서열 번호 7), SVEAEAEEGEE (서열 번호　8), SYEDEDEGEE (서열 번호　9), 또는 SFEEENEGEE (서열 번호　10)이다.
비천연 아미노산은 2-치환, 3-치환 또는 4-치환 티로신 또는 벤질 위치에서 치환된 티로신 유도체일 수 있다. 3- 또는 4-치환된 티로신 유도체는 3-니트로티로신, 3-아미노티로신, 3-아지도티로신, 3-포르밀티로신, 3-아세틸티로신 또는 4-아미노페닐알라닌일 수 있으며, 바람직하게는 비천연 아미노산은 3-포르밀티로신이다.
링커는 바람직하게는 프로테아제에 의해, 보다 바람직하게는 카텝신 B와 같은 카텝신에 의해 절단될 수 있다. 링커는 발린-시트룰린 모이어티를 포함할 수 있다. 링커는 하이드록실아민 기를 포함할 수 있고, 비천연 아미노산은 3-포르밀티오신과 같이 방향족 고리 내 하이드록실 기의 오르토 포르밀 기를 포함하고, 링커의 하이드록실아민 기는 접합 후 비천연 아미노산의 포르밀 기와 옥심을 형성한다.
브렌툭시맙은 2개, 4개, 6개 또는 8개, 바람직하게는 2개 또는 4개의 약물 모이어티, 더 바람직하게는 2개의 약물 모이어티에 접합될 수 있다.
링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 1에 나타낸 구조를 가질 수 있다:
상기 식에서, R은 하나 이상의 약물 모이어티로, 이는 하나 이상의 절단 부위에 의해 구조 1의 하이드록실아민에 임의로 커플링되며, 바람직하게는 구조 1의 하이드록실아민은 비천연 아미노산에 접합된다.
링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 2 또는 3에 나타낸 구조를 가질 수 있다:
상기 식에서, Z는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
D는 하나 이상의 약물 모이어티이고;
Y는 카텝신 B와 같은 카텝신에 대한 절단 부위와 같은 절단 부위이고;
바람직하게는 구조 2 또는 3의 하이드록실아민은 비천연 아미노산에 접합된다.
링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 4 또는 5에 나타낸 구조를 가질 수 있으며, 여기서 D는 약물 모이어티, 바람직하게는 MMAE이다:
비천연 아미노산은 3-포르밀티로신일 수 있고 링커의 하이드록실아민 기는 비천연 아미노산의 3-포르밀 기와 옥심을 형성할 수 있다.
본 발명은 또한 본 명세서에 정의된 ADC의 제조 방법에 관한 것으로, 상기 방법은
(a) 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 경쇄와 중쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 도입하거나 부가하는 단계;
(b) 단계 (a)에서 얻은 브렌툭시맙을, 튜불린 티로신 리가아제가 상기 브렌툭시맙을 비천연 아미노산과 결찰시키기에 적합한 조건 하에 튜블린 티로신 리가아제 및 비천연 아미노산의 존재 하에서 접촉시키는 단계; 및
(c) 단계 (b)에서 얻어진 결찰된 브렌툭시맙에 약물 모이어티를 포함하는 선택적으로 절단가능한 링커를 접합시키는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 본 명세서에 정의된 ADC의 제조 방법에 의해 얻을 수 있는 ADC에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 명세서에 정의된 ADC의 제조 방법에 의해 수득된 ADC에 관한 것이다.
본 발명은 또한 본 발명의 ADC를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 질환을 치료하는 방법에 사용하기 위한 본 발명의 ADC 또는 본 발명의 약학적 조성물에 관한 것이다. 바람직하게는, 질환은 CD30의 과발현과 관련된다. 보다 바람직하게는, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE), 바람직하게는 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명은 비제한적 실시예 및 첨부된 도면과 함께 고려될 때 상세한 설명을 참조하여 더 잘 이해될 것이다.
도 1은 분석 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 크로마토그램을 나타내며, 도 1A는 변형되지 않은 브렌툭시맙의 SEC를 나타내고, 도 1B 내지 1D는 단백질 A 크로마토그래피(PAC) 후 브렌툭시맙의 Tub-태그 변이체의 SEC를 나타낸다. 단클론 항체(mAb)는 발현 및 정제 후 고도의 단량체성이다.
도 2는 브렌툭시맙(검정) 및 Bren. LC-Tub(회색, 점선), Bren. HC-Tub(회색), Bren. LCHC-Tub(검정, 점선)으로 지칭된 브렌툭시맙의 Tub-태그 유사체(브렌툭시맙은 "Bren."으로 약기함)의 분석을 나타낸다. 도 2A는 220 nm에서 기록된 정규화된 흡수 스펙트럼을 나타내는 친수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 크로마토그램이다. 머무름 시간은 소수성에 대한 척도이다. 도 2B는 융점(Tm) 측정을 위한 시차 주사 형광 측정법(DSF)을 나타낸다.
도 3은 분석 SEC 및 HIC를 통한 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 분석을 나타낸다. 각 브렌툭시맙 변이체(브렌툭시맙은 "Bren."으로 약기함, 도 3A 및 3D는 Bren. HC-vc-PAB-MMAE DAR2(본 명세서에서는 "Bren. HC-2"로도 표시됨)를 나타내고, 도 3B 및 3E는 Bren. LC-vc-PAB-MMAE DAR2(본 명세서에서는 "Bren. LC-2"로도 표시됨)를 나타내고, 도 3C 및 3F는 Bren. LCHC-vc-PAB-MMAE DAR4(또한 본 명세서에서 "Bren. LCHC-2"로도 표시됨)를 나타냄)를 발현하고, PAC로 정제하고, DAR 2의 생성을 위해 페이로드 2 그리고 DAR 4 ADC 생성을 위해 페이로드 2 또는 페이로드 3에 접합시켰다. HIC 및 완충제 교환을 통한 최종 연마 후, Tub-태그 ADC를 응집체 함량 및 DAR 균질성 측면에서 분석했다. 모든 Tub-태그 ADC는 HMWS 함량이 매우 낮고(< 1%) 우수한 DAR 균질성을 나타냈다.
도 4는 미가공 스펙트럼의 디콘볼루션 후 미들업 단백질 MS에 의한 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 분석을 나타낸다. 도 4A는 Bren. HC-Tub에 대한 결과를 나타내고, 도 4B는 Bren. LCHC-Tub에 대한 결과를 나타내고, 도 4C는 Bren-LC-Tub에 대한 결과를 나타내고, 도 4D는 Bren. HC-vc-PAB-MMAE(본 명세서에서는 "Bren. HC-2"로도 표시됨)에 대한 결과를 나타내고, 도 4E는 Bren-LCHC-vc-PAB-MMAE(본 명세서에서는 "Bren. LCHC-2"로도 표시됨)에 대한 결과를 나타내고, 도 4F는 Bren. LC-2(vc-PAB-MMAE)(본 명세서에서는 "Bren. LC-3"으로도 표시됨)에 대한 결과를 나타낸다. 1369 m/z의 질량 이동은 3-포르밀-L-티로신 1의 혼입 및 페이로드 2와의 옥심 결찰로부터 기인한다. 페이로드 3과 옥심 결찰 후, 2604 m/z의 질량 차이가 관찰되었다. 이 결과는 계산된 값과 일치한다.
도 5는 프로테아제 카텝신 B(각 vc 모이어티에 대해 1:1000)와의 분해 반응 동안 페이로드 2 및 3을 함유하는 발린-시트룰린(vc)의 RP-HPLC 분석을 도 5A에서 나타낸다. 분석에 앞서 E-64로 반응을 정지시켰다. 150분의 반응 시간 후 크로마토그램은 220 nm에서 기록되었다. 도 5B의 플롯은 시간 경과에 따른 유리 MMAE의 증가(검정) 및 페이로드 2의 감소(회색, 원)를 나타낸다. 도 5C는 페이로드 3의 절단을 나타낸다. 카텝신 B와의 반응 동안 하나의 MMAE 모이어티를 함유하는 중간체가 형성된다(회색, 삼각형).
도 6은 브렌툭시맙 베도틴과 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 고온에서 보관한 결과를 나타낸다. 도 6A는 연구 과정 동안 HMWS의 증가를 나타낸다(Bren. LC-2(vc-PAB-MMAE)(본 명세서에서는 "Bren. LC-3"로도 표시됨); Bren. LC-vc-PAB-MMAE(본 명세서에서는 "Bren. LC-2"로도 표시됨; Bren. HC-vc-PAB-MMAE(본 명세서에서는 "Bren. HC-2"로도 표시됨). 브렌툭시맙 베도틴에서 가장 높은 응집체 함량 증가를 볼 수 있다. 이에 비해 Tub-태그 ADC의 HMWS 함량은 거의 일정하게 유지된다. 도 6B 및 6C는 브렌툭시맙 베도틴(평균 약물 대 항체 비(DARav) 4) 및 페이로드 3과 접합된 Bren. LC(Bren. LC-3, DAR 4)에 대해 220 nm에서 기록된 정규화된 흡수 스펙트럼을 보여주는 SEC 크로마토그램을 나타낸다.
도 7은 마우스 혈장에서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC 안정성의 예시적인 예시를 나타낸다. 도 7A 및 7B는 브렌툭시맙 베도틴을 37℃에서 마우스 혈장에 보관한 결과를 보여주고, 도 7C 및 7D는 Bren. LC-3 DAR 4를 37℃에서 마우스 혈장에서 보관한 결과를 나타낸다.
도 8은 CD30 과발현 세포주 Karpas299 및 CD30 음성 세포주 HL60에서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 시험관내 효능을 나타낸다.
도 9는 Bren. LC-2의 생체내 효능을 종양 부피(cm3)로 나타낸 것이다. Bren. LC-2의 생체내 효능을 평가하기 위해 종양 부피가 100 내지 150 mm3인 마우스를 무작위로 선택하고 종양 이식 후 7일과 10일에 1.5 mg/kg을 2회 주사하여 치료를 수행했다.
도 10은 Bren. LC-2의 생체내 효능을 치료된 동물의 종양 부피(cm3) 및 생존율로 나타낸다. Bren. LC-2의 생체내 효능을 평가하기 위해 종양 부피가 100 내지 150 mm3인 마우스를 무작위로 선택하고 1.0 mg/kg을 1회 주사하여 치료를 수행했다.
도 11은 Bren. LC-3의 생체내 효능을 치료된 동물의 종양 부피(cm3) 및 생존율(Kaplan-Meier-Plot)로 나타낸다. Bren. LC-3의 생체내 효능을 평가하기 위해 종양 부피가 100 내지 150 mm3인 마우스를 무작위로 선택하고 종양 이식 후 8일과 11일에 0.5 mg/kg을 2회 주사하여 치료를 수행했다.
도 12는 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren LC-2)의 PK 분석을 나타낸다. 도 12A에는 브렌툭시맙 베도틴과 비교한 온전한(intact) ADC의 양을 나타낸다. 도 12B에는, MS-분석에 의해 분석된 혈액 단백질로 전달된 MMAE의 양을 나타낸다.
도 13은 브렌툭시맙 베도틴과 비교하여 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC에 대한 1일, 8일, 15일 및 22일에 10 mg/kg의 정맥내(볼루스) 투여 후 수컷 및 암컷 래트에서 무손상 ADC 및 전체 항체의 평균 혈청 농도를 보여준다.
도 14는 수컷 및 암컷 래트에서 브렌툭시맙 베도틴(검정 막대)의 것과 비교한 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC(Bren LC-2)(회색 막대)의 예시적인 독성 프로파일을 나타낸다. 도 14에 제시된 매개변수는 마이크로리터당 카운트의 망상적혈구(K/μl의 RET), 마이크로리터당 백만 단위의 적혈구(M/μL의 RBC), 마이크로리터당 백만 단위의 헤모글로빈(M/μL의 Hb), 부피 퍼센트 단위의 헤마토크리트(%의 HTC), 마이크로리터당 카운트 단위의 호산구(K/μl의 EOS), 초 단위의 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(APPT)(초), 리터당 밀리몰 단위의 포도당 수준(mmol/L), 그램 단위(g)의 흉선 중량 및 그램 단위(g)의 고환 중량이다.
도 15는 정제 후 HA-VC-PAB-MMAE의 크로마토그램을 나타낸다.
도 16은 정제 후 Boc-Glu-(VC-PAB-MMAE)2의 크로마토그램을 나타낸다.
도 17은 정제 후 Boc-HA-Glu-(VC-PAB-MMAE)2의 크로마토그램을 나타낸다.
도 18은 정제 후 HA-Glu-(VC-PAB-MMAE)2의 크로마토그램을 나타낸다.
도 19는 12 및 15 mg/kg을 투여한 사이노몰구스(cynomolgus) 원숭이에서 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE의 독성동태학 분석을 보여준다. mAb 및 온전한 ADC의 총량을 ELISA로 평가했다. 온전한 ADC와 총 mAb 곡선의 높은 중첩은 두 용량 수준에서 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE의 높은 안정성을 나타낸다.
도 20은 사이노몰구스 원숭이에서 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)의 반복 투여 연구를 통해 수집된 다양한 혈액 값의 선택 및 체중을 나타낸다. 도 20, 왼쪽 상단 패널은 시간 경과에 따른 체중을 나타낸다. 도 20, 오른쪽 상단 패널은 시간 경과에 따른 림프구 농도를 나타낸다. 도 20, 왼쪽 하단 패널은 시간 경과에 따른 호중구 농도를 나타낸다. 도 20, 오른쪽 하단 패널은 시간 경과에 따른 백혈구 농도를 나타낸다. 데이터는 각각의 경우에 브렌툭시맙 베도틴(Adcetris)과 유사한 연구의 문헌 값과 비교하여 6, 12 및 15 mg/kg 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)를 반복적으로 투여한 2마리 암컷 동물의 3개 그룹의 평균 및 오차로 표시된다. 체중은 킬로그램, 림프구는 리터당 10억, 호중구는 리터당 10억, 백혈구는 리터당 10억으로 표시된다.
도 21은 링크 https://www.pmda.go.jp/files/000229787.pdf에서 제공되는 브렌툭시맙 베도틴에 대한 2013년 후생노동성 의약품식품안전국 평가허가과 심의보고서에 기재된 브렌툭시맙의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 나타낸 것이다.
본 발명을 하기에서 상세하게 설명하고 또한 첨부된 실시예 및 도면에 의해 추가로 예시될 것이다.
림프성 악성 종양은 모든 암의 약 4 내지 5%를 차지하며 림프계에서 유래한다. 고전적인 호지킨 림프종과 역형성 대세포 림프종 및 말초 T 세포 림프종과 같은 여러 비호지킨 림프종에서 CD30은 최근 몇 년 동안 표적 치료를 위한 귀중한 종양 바이오마커로 입증되었다. 2011년 브렌툭시맙 베도틴(Adcetris®)의 혁신 신약 승인으로 최초의 CD30 특이적 생물학적 제제가 시장에 출시되었으며, 이후 전반적인 반응이 좋은 필수적인 치료 옵션이 되었다. 브렌툭시맙 베도틴은 종양 표적화 키메라 IgG1 항체 성분인 브렌툭시맙, 및 세포 내 전달 및 방출 시 효율적으로 아폽토시스를 유도하는, 강력한 페이로드 모이어티 모노메틸-아우리스타틴 E와 화학적으로 연결된 카텝신 B 절단가능한 발린-시트룰린 링커 모이어티를 포함하는 링커 페이로드 성분으로 구성된다.
그러나 브렌툭시맙 베도틴은 일상적인 임상에서 혈소판 감소증과 같은 부작용으로 민감하고 오래 지속되는 독성을 일으키는 것으로 알려져 있다.
본 발명자들은 튜불린 티로신 리가아제의 사용이 놀랍게도 경쇄 및/또는 중쇄의 C-말단에 TTL 인식 서열을 추가함으로써 변형된 브렌툭시맙에 대한 약물 모이어티의 고도로 특이적이고 화학량론적으로 정의된 접합을 가능하게 한다는 것을 보여줄 수 있다. TTL은 3-포르밀 티로신과 같은 비천연 아미노산을 TTL 인식 서열에 접합시키는데 사용될 수 있다. 약물 모이어티, 예를 들어 MMAE는 링커에 의해, 예를 들어 비천연 아미노산 상의 활성기와 반응할 수 있는 활성기를 포함하는 링커에 의해 비천연 아미노산에 특이적으로 접합될 수 있다. 예를 들어, 링커는 비천연 아미노산의 포르밀기와 반응하여 옥심을 형성하는 하이드록실아민을 포함할 수 있다(실시예 1 참조). 요컨대, 본 발명자들은 브렌툭시맙 베도틴이 본 명세서에 기재된 접합 전략에 의해 브렌툭시맙 베도틴의 기능적 성분 브렌툭시맙과 MMAE를 조합함으로써 놀랍게도 개선될 수 있음을 보여주었다. 본 발명의 ADC는 놀랍게도 더 높은 시험관내 안정성(실시예 2 참조), 더 높은 생체내 효능(실시예 4 참조), 더 높은 생체내 안정성(실시예 5 참조)을 나타내고 개선된 독성 프로파일(실시예 6 참조)을 갖는다. 이로써, 브렌툭시맙 베도틴의 부작용을 놀라울 정도로 줄일 수 있었다.
따라서, 본 발명은
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 중쇄와 경쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열 및 비천연 아미노산을 포함함 -; 및
(b) 적어도 하나의 약물 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)로서,
상기 약물 모이어티는 링커를 통해 각각의 비천연 아미노산에 커플링되는, 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다.
본 명세서에서 일반적으로 사용되는 용어 "항체-약물 접합체"(ADC)는 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편과 같은 항체를 화학요법제, 독소, 면역요법제, 이미징 프로브 등과 같은 다른 제제와의 연결을 의미한다. 연결은 공유 결합, 또는 정전기력을 통한 것과 같은 비공유 상호작용, 바람직하게는 공유 결합일 수 있다. 당업계에 공지되고 본 명세서에 기술된 다양한 링커가 항체 약물 접합체를 형성하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 ADC는 또한 화학식 Ab-(L-(D)x)y를 갖는 것으로써 기술될 수 있다. "Ab"는 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편과 같은 항체를 나타내고, "L"은 링커를 나타내고 "D"는 약물 모이어티를 나타낸다. "x"는 1 내지 10의 정수일 수 있다. "y"는 1 내지 10의 정수일 수 있다. 따라서 x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10일 수 있다. 따라서 y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10일 수 있다. 순전히 예시적인 예로서, x 또는 y는 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4 또는 1 내지 2의 정수일 수 있다.
"Ab": 항체
브렌툭시맙
본 명세서에 요약된 바와 같이, 본 발명의 ADC는 화학식 Ab-(L-(D)x)y를 갖는 것으로써 기술될 수 있다. 본 발명의 ADC의 "Ab 부분"은 브렌툭시맙이다. cAC10 또는 SGN-30으로도 알려진 브렌툭시맙은 당업자에게 잘 알려진 항체이다(문헌[Wahl et al. (2002), Cancer Res, 62:3736-3742)]을 참조). 브렌툭시맙은 표적 세포의 세포 표면에 있는 CD30에 특이적으로 결합하는 단클론 항체이다. CD30에 대한 결합은 브렌툭시맙의 내재화를 시작한 다음 리소좀 구획으로 이동한다. 세포 내에서 ADC의 약물 모이어티는 예를 들어 링커의 절단 또는 분해를 통해 단클론 항체로부터 방출될 수 있다. 브렌툭시맙은 본 발명의 ADC에 포함된다.
TNFRSF8로도 알려진 CD30은 종양 괴사 인자 수용체 패밀리 및 종양 마커의 세포막 단백질이다. 이 수용체는 활성화된 T 및 B 세포에 의해 발현되지만 휴지기에 의해서는 발현되지 않는다. TRAF2 및 TRAF5는 이 수용체와 상호작용할 수 있고, NF-κB의 활성화를 유도하는 신호 전달을 매개할 수 있다. 이는 아폽토시스의 양성 조절자이며, 또한 자가반응성 CD8 이펙터 T 세포의 증식 가능성을 제한하고 자가면역으로부터 신체를 보호하는 것으로 나타났다. 별개의 아이소타입을 암호화하는 이 유전자의 2개의 대안적으로 스플라이싱된 전사 변이체가 보고되었다. CD30은 역형성 대세포 림프종과 관련이 있다. 이는 배아 암종에서 발현되지만 정상피종에서는 발현되지 않으므로 이러한 생식 세포 종양을 구별하는 데 유용한 마커이다. CD30과 CD15는 호지킨 림프종에 전형적인 리드-슈테른베르크(Reed-Sternberg) 세포에서도 발현된다.
승인된 약물로서 본 명세서에 사용된 브렌툭시맙의 각각의 중쇄는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는다(도 21에도 나타냄). 중쇄가 서열 번호 1에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 항체를 사용하는 것이 본 명세서에서 또한 가능하다. 예를 들어, 도 21에 도시된 바와 같이, 위치 447의 마지막 잔기 K는 원한다면 생략될 수 있다. 이러한 중쇄는 브렌툭시맙 중쇄의 변이체로 볼 수 있다. 유사하게, 예를 들어 브렌툭시맙의 중쇄의 처음 2개 또는 3개의 N-말단 잔기를 결실시킬 수 있다. 이러한 중쇄는 브렌툭시맙과 비교하여 3개 또는 4개의 돌연변이를 가질 것이며 따라서 브렌툭시맙 중쇄에 대해 약 99.2%(4개의 아미노산 차이) 내지 99.8%(1개의 아미노산 차이)의 서열 동일성을 가질 것이다.
승인된 약물로서 본 명세서에 사용된 브렌툭시맙의 각각의 경쇄는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는다(도 21에도 나타냄). 경쇄가 서열 번호 2에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 항체를 사용하는 것이 본 명세서에서 또한 가능하다. 예를 들어, 위치 218의 마지막 잔기 C는 원한다면 생략될 수 있다. 이러한 경쇄는 브렌툭시맙 경쇄의 변이체로 볼 수 있다. 유사하게, 예를 들어 브렌툭시맙의 경쇄의 처음 2개 또는 3개의 N-말단 잔기를 결실시킬 수 있다. 이러한 경쇄는 브렌툭시맙과 비교하여 3개 또는 4개의 돌연변이를 가질 것이며 따라서 브렌툭시맙 경쇄에 대해 약 98.2%(4개의 아미노산 차이) 내지 99.5%(1개의 아미노산 차이)의 서열 동일성을 가질 것이다.
일 특정 구현예에서, 브렌툭시맙은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 특정 구현예에서, 브렌툭시맙은 서열 번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 및 서열 번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄로 이루어진다.
일반적으로, 본 명세서에서 사용될 때, 2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열과 관련하여 용어 "퍼센트(%) 동일한" 또는 "퍼센트(%) 동일성"은, 2개 이상의 서열 또는 하위서열이 동일한 정도를 의미한다. 2개의 서열이 비교되는 영역에 대해 동일한 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열을 갖는 경우 "동일"하다. 하기 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하거나 또는 수동 정렬 및 육안 검사에 의해 측정시 지정된 영역 또는 비교 창에 대한 최대 대응을 위해 비교 및 정렬될 때, 2개의 서열이 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 특정 백분율(즉, 지정된 영역에 대해, 또는 명시되지 않다면 전체 서열에 대해, 60% 동일성, 임의로 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 동일성)을 갖는다면 "실질적으로 동일하다". 선택적으로, 동일성은 길이가 적어도 약 30개 뉴클레오티드(또는 10개 아미노산)인 영역, 또는 더 바람직하게는 길이가 100 내지 500개 또는 1000개 이상의 뉴클레오티드(또는 20, 50, 200개 이상의 아미노산)인 영역에 대해 존재한다.
서열 상동성 또는 서열 동일성의 백분율은 예를 들어 본 명세서에서 프로그램 BLASTP, 버전 blastp 2.2.5(2002년 11월 16일)를 사용하여 결정될 수 있다(문헌[Altschul et al., Nucleic Acids Res, 1997] 참조). 이 구현예에서, 상동성의 백분율은 바람직하게는 페어와이즈 비교에서 기준으로 야생형 단백질 스캐폴드를 사용하여, 프로펩티드 서열을 포함하는 전체 폴리펩티드 서열(매트릭스: BLOSUM 62; 갭 코스트: 11.1; 컷오프 값은 10-3으로 설정됨)의 정렬을 기반으로 한다. 이는 BLASTP 프로그램 출력 결과로 표시된 "양성"(동종 아미노산) 수를 정렬을 위해 프로그램에 의해 선택된 아미노산 총수로 나눈 백분율로서 계산된다.
브렌툭시맙에 대한 비천연 아미노산의 TTL 인식 서열 및 커플링
본 발명의 ADC에서, 브렌툭시맙은 예를 들어 경쇄, 중쇄 또는 경쇄와 중쇄 모두의 C-말단에서의 하나 이상의 TTL 인식 서열(들)에 융합될 수 있다. 이 TTL 인식 서열은 TTL이 비천연 아미노산을 브렌툭시맙의 경쇄 및/또는 중쇄의 C-말단에 있는 TTL 인식 서열에 접합하도록 한다. 결과적으로, 본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙은 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 모든 중쇄 및 경쇄의 C-말단의 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열("TTL 인식 서열")을 포함한다. 본 발명의 ADC에서, 비천연 아미노산이 이 TTL 인식 서열에 부착된다. 이 비천연 아미노산에 결합된 것은 링커를 통한 약물 모이어티이다. 본 명세서에서 사용되는 "Tub-태그"는 TTL에 대한 인식 서열 또는 TTL 인식 서열, 바람직하게는 서열 번호 4 또는 서열 번호 5에 관한 것이다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "튜불린 티로신 리가아제" (본 명세서에서는 때때로 "TTL"로서 약칭됨)는, 폴리펩티드를 기능화할 수 있는, 즉 본 명세서에서 정의된 비천연 아미노산을 폴리펩티드에 공유적으로 부착시킬 수 있는 폴리펩티드를 포함한다. 그 작용을 위해 상기 폴리펩티드가 TTL에 대한 인식 서열을 포함하는 것이 바람직하다. 상기 용어는 진핵생물, 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 회색 늑대(Canis Lupus)로부터의 TTL을 포함한다. 바람직한 TTL은 서열 번호 13에 제시되어 있다. 서열 번호 13에 제시된 TTL의 아미노산 서열을 갖는 전체 아미노산 서열에 걸쳐 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상의 동일성을 갖는 TTL도 상기 용어에 포함된다. 바람직하게는, 전술한 바와 같은 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 갖는 이러한 폴리펩티드는 TTL 활성을 갖는다. TTL 활성은 당업계에 공지되거나 본 명세서에 기술된 바와 같이 시험될 수 있다. 서열 동일성의 백분율은 예를 들어 본 명세서에서 상기 기재된 바와 같이 결정될 수 있다. 바람직하게는 서열 번호 13에 나타낸 아미노산 서열이 페어와이즈 비교에서 기준으로 사용된다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "기능화"는 본 명세서에 사용된 모든 문법적 형태에서 브렌툭시맙과 같은 폴리펩티드에 "비천연 아미노산을 공유 결합"시키는 것을 의미한다. 특정 이론에 구애됨이 없이, TTL은 TTL 인식 서열의 궁극적인 C-말단 아미노산에 본 명세서에서 정의된 바와 같은 비천연 아미노산을 부가하는 것으로 생각된다.
튜불린 티로신 리가아제(TTL)를 사용하여 단백질을 변형시키는 방법은 WO 2016/066749호 및 WO 2017/186855호에 기술되어 있으며, 이는 본 명세서에 참조로 포함된다. TTL이 본 명세서에 기술된 ADC의 항체와 같은 관심 단백질에 비천연 아미노산을 부착하기 위해서는 TTL이 인식 서열을 필요로 한다. 본 명세서에 기재된 ADC는 적어도 아미노산 서열 X4X3X2X1을 포함하는 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 경쇄와 중쇄 모두의 C-말단에 튜불린-티로신 리가아제(TTL)에 대한 인식 서열을 포함하도록 변형될 수 있다. 용어 "인식 서열" 또는 "인식 모티프"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되며 TTL에 의해 인식되는 아미노산의 스트레치를 지칭한다. 이러한 인식 서열은 당업계에 공지되어 있으며; 예를 들어 Ruediger et al. (1994), Eur. J. Biochem. 220, 309-320 또는 Prota e al. (2013), J. Cell. Biol. 200, No. 3, 259-270을 참조한다. 또한, 당업자는 예를 들어 Ruediger 등에 의한 "Tyrosination of peptides by TTL" 검정을 적용함으로써 관심 아미노산 서열이 TTL 인식 서열인지 여부를 쉽게 테스트할 수 있다. TTL에 의해 "인식됨"은 인식 모티프에 대한 TTL의 결합을 포함한다. 인식 모티프는 유리하게는 본 명세서에서 X4, X3, X2 및 X1로 지정된 적어도 4개의 아미노산을 포함한다. 일반적으로, "X"는 본 명세서에서 달리 나타내지 않는 한 임의의 아미노산을 나타낼 수 있다. 아미노산에는 다음과 같은 20개의 "표준" 아미노산이 포함되지만 이에 제한되지 않는다: 이소류신(Ile, I), 류신(Leu, L), 리신(Lys, K), 메티오닌(Met, M), 페닐알라닌(Phe, F), 트레오닌(Thr, T), 트립토판(Trp, W), 발린(Val, V), 알라닌(Ala, A), 아스파라긴(Asn, N), 아스파르테이트(Asp, D), 시스테인(Cys, C), 글루타메이트(Glu, E), 글루타민(Gln, Q), 글리신(Gly, G), 프롤린(Pro, P), 세린(Ser, S), 티로신(Tyr, Y), 아르기닌(Arg, R) 및 히스티딘(His, H). 본 발명은 또한 제한 없이 D-배위 아미노산, β-아미노산, 측쇄를 갖는 아미노산 뿐만 아니라 당업자에게 공지된 모든 비-천연 아미노산을 포함한다.
튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열은 적어도 아미노산 서열 X1X2X3X4 (서열 번호 3)을 가질 수 있으며, 여기서 X1 및 X2는 임의의 아미노산이고, X3은 E, D 또는 C이고 X4는 E이고, 바람직하게는 X2는 G, S, A, V, 또는 F이고/이거나, X1은 E, D, A, K, 또는 P이다. 인식 서열은 EGEE (서열 번호 4)이고, 바람직하게는 인식 서열은 VDSVEGEGEEEGEE (서열 번호 5), SVEGEGEEEGEE (서열 번호 6), SADGEDEGEE (서열 번호 7), SVEAEAEEGEE (서열 번호 8), SYEDEDEGEE (서열 번호 9), 또는 SFEEENEGEE (서열 번호 10)일 수 있다. 일 구현예에서, 인식 서열은 VDSVEGEGEEEGEE (서열 번호 5)이다.
본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙에 존재하는 TTL 인식 서열의 수는 약물 대 항체 비(DAR)를 결정한다. 약물 대 항체 비(DAR)는 특정 접합체 분자에 대해 정의된 화학량론적 값(예: 화학식 Ab-(L-(D)x)y 에서 x와 y를 곱한 값)을 갖지만, 그 값은 일반적으로 접합 단계와 관련된 어느 정도의 불균일성으로 인해 많은 분자를 포함하는 샘플을 설명하는 데 사용될 때는 그 값이 평균 값일 수 있음을 이해한다. 따라서, 상기 및 이하 본 명세서에 기술된 항체 약물 접합체 중 임의의 하나와 관련하여 항체 약물 접합체의 샘플에 대한 평균 로딩량을 약물 대 항체 비 또는 "DAR"로 지칭한다. 그러나 바람직하게는, 본 발명은 실질적으로 모든 또는 모든 ADC가 필요한 DAR을 갖거나 다시 말해 화학량론적으로 정의되는 ADC를 제공한다.
본 발명의 ADC는 단클론성 IgG 항체인 브렌툭시맙을 기반으로 한다. IgG 항체는 2개의 "경쇄"와 2개의 "중쇄"를 포함하거나 이로 이루어진다. TTL 인식 서열은 경쇄, 중쇄 또는 경쇄와 중쇄 모두의 C-말단에만 융합될 수 있기 때문에 브렌툭시맙의 최대 TTL 인식 서열 수는 4개로 제한된다. 중쇄 또는 경쇄 중 어느 하나가 C-말단에 TTL 인식 서열을 포함하는 경우, 본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙에는 2개의 TTL 인식 서열이 있다. 중쇄 및 경쇄가 C-말단에 TTL 인식 서열을 포함하는 경우, 본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙에는 4개의 TTL 인식 서열이 있다.
본 발명의 ADC에서, TTL 인식 서열은 항체 브렌툭시맙 사슬의 C-말단에 직접적으로 융합될 수 있다. 이와 관련하여, TTL 인식 서열이 중쇄의 C-말단에 직접 융합된(즉, 그 사이에 어떠한 아미노산 잔기도 존재하지 않음) (서열 번호 12)의 브렌툭시맙 중쇄를 참조한다. 대안적으로, (펩티드) 링커는 TTL 인식 서열과 항체의 사슬 사이에 배열될 수 있다. 따라서 브렌툭시맙 경쇄, 중쇄, 또는 경쇄와 중쇄 모두가 TTL 인식 서열과 각각의 C-말단 사이에 배열된 아미노산 링커 서열을 포함할 수 있는 것이 가능하다. 예시적인 예로서, TTL 인식 서열이 GGGGS(G4S) 링커를 통해 브렌툭시맙 경쇄의 C-말단에 융합된 서열 번호 11의 경쇄를 참조한다. 아미노산 링커는 TTL 인식 서열의 기능이 유지되는 한 임의의 적합한 길이를 가질 수 있다. 예를 들어, 아미노산 링커는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 다시, TTL 인식 서열과 브렌툭시맙의 C-말단 사이에 GGGGS(G4S) 링커가 배열된 서열 번호 11의 경쇄를 참조한다. 또한 단일 사슬 Fv 단편과 같은 재조합 항체 분자의 상이한 사슬을 서로 융합시키기 위한 링커로 일반적으로 사용되는 (G4S)2 또는 (G4S)3와 같은 다른 표준 링커를 사용하는 것이 가능할 수 있다. 따라서, 이들 예에서, 링커는 10개의 아미노산 잔기((G4S)2) 또는 15개의 아미노산 잔기((G4S)3)의 길이를 가질 수 있다. 그러나 링커는 결코 최대 15개 아미노산 잔기 길이로 제한되지 않지만, 상기 개시에 따르면, 아미노산 링커 서열은 심지어 15개 초과의 아미노산을 포함할 수 있다.
또한 상기 개시에 따르면, 본 발명의 ADC는 항체 사슬 중 어느 것도 TTL 인식 서열과 각각의 항체 사슬 사이에 펩티드 링커를 포함하지 않도록 구성될 수 있다. 이러한 ADC에서 TTL 인식 서열은 브렌툭시맙의 경쇄와 중쇄 모두에 직접 융합될 수 있다. 그러나 본 발명의 ADC는 또한 항체 사슬 중 하나가 TTL 인식 서열과 각각의 항체 사슬 사이에 펩티드 링커를 포함하도록 구성될 수 있다. 이러한 ADC에서, TTL 인식 서열은 링커(예를 들어, 서열 번호 11의 경쇄에서와 같은 GGGGS-링커)를 통해 각각의 경쇄에 융합될 수 있는 반면, TTL 인식 서열은 브렌툭시맙의 2개의 중쇄 각각에 직접 융합될 수 있다. 마지막으로, 본 발명의 ADC는 또한 항체 경쇄 및 항체 중쇄 모두가 TTL 인식 서열과 각각의 항체 사슬 사이에 펩티드 링커를 포함하도록 구성될 수 있다. 이러한 ADC에서 TTL 인식 서열은 링커(예를 들어, GGGGS-링커 또는 (G4S)2 링커)를 통해 브렌툭시맙의 2개의 경쇄 각각과 2개의 중쇄 각각에 융합될 수 있다.
일 구현예에서, 브렌툭시맙은 경쇄의 C-말단, 즉 총 2개에 TTL 인식 서열을 포함한다. TTL 인식 서열은 아미노산 링커 서열(예컨대, GGGGS)을 통해 경쇄의 C-말단에 융합될 수 있다. TTL 인식 서열은 경쇄의 C-말단에 직접 결합될 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 1에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 11에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 1에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 14에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 1에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 11에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 1에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 14에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있다.
일 구현예에서, 브렌툭시맙은 경쇄 및 중쇄의 C-말단, 즉 총 4개에 TTL 인식 서열을 포함한다. TTL 인식 서열은 아미노산 링커 서열(예컨대, GGGGS)을 통해 경쇄의 C-말단에 융합될 수 있고, TTL 인식 서열은 중쇄의 C-말단에 직접 결합될 수 있다. TTL 인식 서열은 아미노산 링커(예컨대, GGGGS)를 통해 경쇄의 C-말단에 결합될 수 있고, TTL 인식 서열은 아미노산 링커(예컨대, GGGGS)를 통해 중쇄의 C-말단에 결합될 수 있다. TTL 인식 서열은 경쇄의 C-말단에 직접 결합될 수 있고, TTL 인식 서열은 중쇄의 C-말단에 직접 결합될 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 12에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 11에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 12에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 14에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 12에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 11에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 12에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 14 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있다.
일 구현예에서, 브렌툭시맙은 중쇄의 C-말단, 즉 총 2개에 TTL 인식 서열을 포함한다. TTL 인식 서열은 중쇄의 C-말단에 직접 결합될 수 있다. TTL 인식 서열은 아미노산 링커 서열(예컨대, GGGGS)을 통해 중쇄의 C-말단에 결합될 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 12에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 2에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 브렌툭시맙 중쇄는 서열 번호 12에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있고 브렌툭시맙 경쇄는 서열 번호 2에 제시된 서열을 갖는 폴리펩티드로 이루어질 수 있다.
그러나 TTL 인식 서열의 수는 비천연 아미노산에 접합된 약물 모이어티의 수와 반드시 같지는 않다, 즉, DAR과 반드시 같지는 않다. 또한 본 발명에 포함되는 것은 하나 초과의 약물 모이어티가 (링커를 통해) 비천연 아미노산에 커플링된다는 것이다. 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10, 바람직하게는 2개의 약물 모이어티가 링커를 통해 하나의 비천연 아미노산에 결합될 수 있다. 이 경우, 링커는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개, 바람직하게는 2개의 약물 모이어티가 결합될 수 있는 스캐폴드로서 작용할 수 있다. 링커는 차례로 비천연 아미노산에 결합된다. 2개의 약물 모이어티에 대한 스캐폴드로서 작용하는 예시적인 링커는 구조 3 또는 5이다. 따라서, 항체는 2개, 4개, 6개 또는 8개, 바람직하게는 2개 또는 4개의 약물 모이어티, 보다 바람직하게는 2개의 약물 모이어티에 접합될 수 있다.
비천연 아미노산
비천연 아미노산은 본 발명의 ADC의 "Ab" 부분의 링커에 대한 고정점이다. 이와 관련하여, 본 명세서에서 Ab-(L-(D)x)y로 기재된 "ADC 식"을 다시 언급한다. 따라서, 본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙과 같이 C-말단에 TTL 인식 서열을 갖는 폴리펩티드의 C-말단에 결합될 수 있는 비천연 아미노산은, 링커 L의 작용기와 반응하여 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기를 포함한다.
일반적으로 비천연 아미노산은 티로신 유도체로 보여질 수 있다. 바람직하게는, 티로신 유도체는 링커를 통해 약물 모이어티의 접합을 허용하는 활성기를 포함한다.
티로신 유도체는 (추가로) 비천연(비-천연) 작용기를 함유할 수 있으며, 이는 바람직하게는 화학선택적 또는 생물직교(bioorthogonal) 변형에 사용된다. 작용기는 클릭 화학에 적합할 수 있다. "클릭 화학"이라는 용어는 2001년에 Kolb, Finn 및 Sharpless가 도입한 화학 철학을 의미하며 반응성 기를 포함하는 작은 단위들을 함께 결합하여 빠르고 안정적으로 공유 결합을 생성할 수 있는 강력한 연결 반응의 기를 포함한다. 클릭 화학 반응은 일반적으로 모듈식이며, 범위가 넓고, 높은 화학적 수율을 제공하고, 무해한 부산물을 생성하고, 입체특이적이며, 및/또는 간단한 생리학적 반응 조건에서 쉽게 사용할 수 있는 출발 물질 및 시약을 사용하여 수행할 수 있다. 또한 클릭 화학 반응은 바람직하게는 독성 용매를 사용하지 않거나 무해하거나 쉽게 제거되는 용매(바람직하게는 물)를 사용하고/하거나 비-크로마토그래피 방법(결정화 또는 증류)으로 간단한 생성물 분리를 제공한다. 독특한 발열 반응은 반응물을 "스프링-로드(spring-loaded)"가 되게 한다.
클릭 화학 반응은 예를 들어, 특히 1,3-쌍극자 패밀리로부터의 첨가 고리화 반응, 헤테로-딜스-알더 반응; 친핵성 개환 반응, 예를 들어, 에폭사이드, 아지리딘, 사이클릭 설페이트, 사이클릭 설파미데이트, 아지리디늄 이온 및 에피술포늄 이온과 같은 변형된(strained) 헤테로사이클릭 친전자체의 친핵성 개환 반응; 비-알돌 유형의 카르보닐 화학(예: 옥심 에테르, 히드라존 및 방향족 헤테로사이클의 형성); 및 탄소-탄소 다중 결합에 대한 첨가; 예를 들어 에폭시화, 다이하이드록실화, 아지리딘화, 및 니트로실 및 설페닐 할라이드 첨가와 같은 산화 반응 뿐만 아니라 특정 Michael 첨가 반응을 포함한다. 클릭 화학 반응의 일반 원리는 Kolb, Finn 및 Sharpless(2001)에 의해 기술되었다. 본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙에 공유 결합된 티로신 유도체 또는 비천연 아미노산에 링커를 통해 원하는 약물 모이어티를 부착하기에 적합한 클릭 화학 반응을 선택하는 것은 당업자의 지식 내에 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "클릭 화학 핸들"은 클릭 화학 반응에 참여할 수 있는 반응물 또는 반응기를 지칭한다. 그러한 반응물 또는 반응기는 바람직하게는 화학선택적 또는 생물직교 변형을 위한 비천연(비-천연) 작용기이지만, 대안적으로 화학선택적 또는 생물직교 변형을 위한 천연 작용기일 수 있다. 예를 들어, 변형된 알킨(예: 사이클로옥틴)은 변형 촉진 고리 첨가(예: SPAAC(변형 촉진 아지드-알킨 고리첨가)에 참여할 수 있기 때문에 클릭 화학 핸들이다. 일반적으로 클릭 화학 반응에는 서로 반응할 수 있는 클릭 화학 핸들을 포함하는 적어도 2개의 분자가 필요하다. 서로 반응하는 이러한 클릭 화학 핸들 쌍은 때때로 여기에서 "파트너 클릭 화학 핸들"이라고 한다. 예를 들어, 아지드는 사이클로옥틴 또는 다른 알킨에 대한 파트너 클릭 화학 핸들이다. 본 발명의 맥락에서, 클릭 화학 핸들은 바람직하게는 말단 알킨, 아지드, 변형된 알킨, 디엔, 디에노필(dieneophile), 알콕시아민, 카르보닐, β-아릴에틸아민, 포스핀, 히드라지드, 히드라진, 티올, 테트라진, 알켄, 사이클로옥텐, 노르보르넨, 테트라진, 니트론, 시아노벤조티아졸 및 사이클로옥틴으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 다른 적합한 클릭 화학 핸들은 당업자가 쉽게 접근할 수 있다.
클릭 화학을 통한 접합의 맥락에서, 접합은 클릭 화학 핸들의 반응에 의해 형성된 공유 결합을 통해 이루어진다. 특정 구현예에서, 회합은 공유적이며, 엔티티는 서로 "접합"된다고 한다.
본 발명은 전술한 예시적인 클릭 화학 핸들, 및 추가적인 클릭 화학 핸들, 반응성 클릭 화학 핸들 쌍, 및 그러한 클릭 화학 핸들 쌍에 대한 반응 조건에 제한되지 않는다는 것이 당업자에게 명백할 것이라는 점에 유의해야 한다.
본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙에 포함된 비천연 아미노산에 링커를 접합시키기에 적합한 다른 방법은 스타우딩거 반응(예를 들어, 스타우딩거-결찰, 스타우딩거-포스파이트 반응, 스타우딩거-포스포나이트 반응), 변형 촉진 고리첨가, 테트라진 결찰, 역전자 요구 딜스-알더 반응, 1,2-아미노티올과 알데하이드 또는 케톤의 티아졸리딘 형성 반응, 1,2-아미노알코올과 알데하이드 또는 케톤의 옥사졸리딘 형성 반응, 옥심 형성, 히드라존 형성, 1,2-디올과 알데하이드 또는 케톤의 아세탈 형성 반응, Pictet-Spengler 반응, 트랩-Knoevenagel 결찰, 탠덤-Knoevenagel 축합, 알켄 또는 알킨에 대한 티올 첨가, 교차 복분해, 금속 촉매화, 특히 Pd-, Cu, Ni 및 Fe-촉매화된, 전자 끌기 기로 치환된 티로신 유도체와의 교차 결합, 바람직하게는 옥심 형성을 포함한다.
링커를 통해 브렌툭시맙에 공유 결합된 비천연 아미노산에 예를 들어 클릭 화학 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의의 다른 적합한 방법에 의해 약물 모이어티가 부착될 수 있는 것으로 생각된다. 따라서 약물 모이어티는 비-펩티드 결합에 의해 링커를 통해 비천연 아미노산에 접합될 수 있지만, 대안적으로 펩티드 결합에 의해 링커를 통해 비천연 아미노산에 접합될 수도 있다.
비천연 아미노산은 2-치환, 3-치환 또는 4-치환 티로신 또는 벤질 위치에서 치환된 티로신 유도체일 수 있다. 3- 또는 4-치환 티로신 유도체는 3-니트로티로신, 3-아미노티로신, 3-아지도티로신, 3-포르밀티로신, 3-아세틸티로신 또는 4-아미노페닐알라닌일 수 있다. 3-치환 티로신은 3-니트로티로신일 수 있다. 3-치환된 티로신은 3-아미노티로신일 수 있다. 3-치환 티로신은 3-아지도티로신일 수 있다. 3-치환된 티로신은 3-포르밀티로신일 수 있다. 3-치환 티로신은 3-아세틸티로신일 수 있다. 치환된 티로신은 치환된 페닐알라닌일 수 있다. 4-치환 티로신은 4-아미노페닐알라닌일 수 있다. 특히 바람직한 비천연 아미노산은 3-포르밀티로신이다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 바와 같이, "임의로 치환된" 또는 "치환된"이라는 용어는 하나 이상(예를 들어 1 내지 기에 결합된 수소 원자의 최대 수, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 최대 10, 예를 들어 1 내지 5, 1 내지 4, 또는 1 내지 3, 또는 1 또는 2)의 수소 원자(들)이 수소가 아닌 기, 예컨대 알킬(바람직하게는 C1-6 알킬), 알케닐(바람직하게는 C2-6 알케닐), 알키닐(바람직하게는 C2-6 알키닐), 아릴(바람직하게는 3원 내지 14원 아릴), 헤테로아릴(바람직하게는 3원 내지 14원 헤테로아릴), 사이클로알킬(바람직하게는 3원 내지 14원 사이클로알킬), 헤테로사이클릴(바람직하게는 3원 내지 14원 헤테로사이클릴), 할로겐, CN, 아지도, NO2, OR71, N(R72)(R73), ON(R72)(R73), N+(O-)(R72)(R73),S(O)02R71, S(O)02OR71, OS(O)02R71, OS(O)02OR71, S(O)02N(R72)(R73), OS(O)02N(R72)(R73), N(R71)S(O)02R71, NR71S(O)02OR71, NR71S(O)02N(R72)(R73), C(=W1)R71, C(=W1)W1R71, W1C(=W1)R71, 및 -W1C(=W1)W1R71 로 대체될 수 있으며, 여기서 R71, R72, 및 R73은 H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, 3원 내지 7원 사이클로알킬, 5원 또는 6원 아릴, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 및 3원 내지 7원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로사이클릴 기는 C1-3 알킬, 할로겐, CF3, CN, 아지도, NO2, OH, O(C1-3 알킬), S(C1-3 알킬), NH2, NH(C1-3 알킬), N(C1-3 알킬)2, NHS(O)2(C1-3 알킬), S(O)2NH2-z(C1-3 알킬)z, C(=O)OH, C(=O)O(C1-3 알킬), C(=O)NH2z(C1-3 알킬)z, NHC(=O)(C1-3 알킬), NHC(=NH)NHz2(C1-3 알킬)z, 및 N(C1-3 알킬)C(=NH)NH2-z(C1-3 알킬)z 로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 z는 0, 1, 또는 2이고, C1-3 알킬은 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필이고; W1은 O, S, 및 NR84 로부터 독립적으로 선택되고, R84는 -H 또는 C1-3 알킬이다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 바와 같이, 용어 "알킬"은 포화 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소의 모노라디칼을 의미한다. 바람직하게는, 알킬기는 1 내지 12개(예컨대 1 내지 10개)의 탄소 원자, 즉 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 탄소 원자(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 탄소 원자), 더 바람직하게는 1 내지 8개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 6개 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 알킬기는 1 내지 20개의 탄소 원자를 함유한다(C1-20 알킬). 또 다른 구현예에서, 사용된 알킬기는 1 내지 15개의 탄소 원자를 함유한다(C1-15 알킬). 또 다른 구현예에서, 사용된 알킬기는 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다(C1-10 알킬). 또 다른 구현예에서, 사용된 알킬기는 1 내지 8개의 탄소 원자를 함유한다(C1-8 알킬). 또 다른 구현예에서, 사용된 알킬기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다(C1-6 알킬). 또 다른 구현예에서, 사용된 알킬기는 1 내지 5개의 탄소 원자를 함유한다(C1-5 알킬). 또 다른 구현예에서, 사용된 알킬기는 1 내지 4개의 탄소 원자를 함유한다(C1-4 알킬). 또 다른 구현예에서, 사용된 알킬기는 1 내지 3개의 탄소 원자를 함유한다(C1-3 알킬). 또 다른 구현예에서, 사용된 알킬기는 1 내지 2개의 탄소 원자를 함유한다(C1-2 알킬). 알킬 라디칼의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, 부틸, 이소-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소-펜틸, sec-펜틸, 네오-펜틸, 1,2-디메틸-프로필, 이소-아밀, n-헥실, 이소-헥실, sec-헥실, n-헵틸, 이소-헵틸, n-옥틸, 2-에틸-헥실, n-노닐, n-데실, n-운데실, n-도데실을 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이는 하나 이상의 치환기를 가질 수 있다. 알킬기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 선형이다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 분지형이다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 치환된다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 비치환된다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 선형이고 치환되거나 비치환된다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 분지형이고 치환되거나 비치환된다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용되는 용어 "알킬렌"은 포화 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소의 2라디칼을 의미한다. 바람직하게는, 알킬렌은 1 내지 10개의 탄소 원자, 즉 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 1 내지 8개의 탄소 원자, 예컨대 1 내지 6개의 탄소 원자 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 예시적인 알킬렌기는 메틸렌, 에틸렌(즉, 1,1-에틸렌, 1,2-에틸렌), 프로필렌(즉, 1,1-프로필렌, 1,2-프로필렌(-CH(CH3)CH2-), 2,2-프로필렌(-C(CH3)2-) 및 1,3-프로필렌), 부틸렌 이성질체(예: 1,1-부틸렌, 1,2-부틸렌, 2,2-부틸렌, 1,3-부틸렌 , 2,3-부틸렌(시스 또는 트랜스 또는 이들의 혼합물), 1,4-부틸렌, 1,1-이소부틸렌, 1,2-이소부틸렌 및 1,3-이소부틸렌), 펜틸렌 이성질체(예: 1,1-펜틸렌, 1,2-펜틸렌, 1,3-펜틸렌, 1,4-펜틸렌, 1,5-펜틸렌, 1,1-이소-펜틸렌, 1,1-sec-펜틸, 1,1-네오-펜틸), 헥실렌이성질체(예: 1,1-헥실렌, 1,2-헥실렌, 1,3-헥실렌, 1,4-헥실렌, 1,5-헥실렌, 1,6-헥실렌, 1,1-이소헥실렌) 등을 포함한다. 알킬렌기는 고리형 또는 비고리형, 분지형 또는 비분지형, 치환 또는 비치환일 수 있다. 알킬렌기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "아지도"는 N3을 의미한다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "알케닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 불포화 선형 또는 분지형 탄화수소의 모노라디칼을 의미한다. 일반적으로 알케닐기의 탄소-탄소 이중 결합의 최대 수는 알케닐기의 탄소 원자 수를 2로 나누어 계산한 정수와 같을 수 있으며, 알케닐기 탄소 원자 수가 홀수인 경우 나누기 결과를 다음 정수로 내림한다. 예를 들어, 9개의 탄소 원자를 갖는 알케닐기의 경우, 탄소-탄소 이중 결합의 최대 수는 4이다. 바람직하게는, 알케닐기는 1 내지 4개, 즉 1, 2, 3 또는 4개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는다. 바람직하게는, 알케닐기는 2 내지 10개의 탄소 원자, 즉 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 2 내지 8개의 탄소 원자, 예컨대 2 내지 6개의 탄소 원자 또는 2 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 알케닐기는 2 내지 10개의 탄소 원자 및 1, 2, 3, 4 또는 5개의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고, 보다 바람직하게는 2 내지 8개의 탄소 원자 및 1, 2, 3 또는 4개의 탄소-탄소 이중 결합, 예컨대 2 내지 6개의 탄소 원자 및 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합 또는 2 내지 4개의 탄소 원자 및 1 또는 2개의 탄소-탄소 이중 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 알케닐기는 2 내지 20개의 탄소 원자를 함유한다(C2-20 알케닐). 일부 구현예에서, 본 발명에 사용된 알케닐기는 2 내지 15개의 탄소 원자를 함유한다(C2-15 알케닐). 또 다른 구현예에서, 사용된 알케닐기는 2 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다(C2-10 알케닐). 또 다른 구현예에서, 알케닐기는 2 내지 8개의 탄소 원자를 함유한다(C2-8 알케닐). 또 다른 구현예에서, 알케닐기는 2 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다(C2-6 알케닐). 또 다른 구현예에서, 알케닐기는 2 내지 5개의 탄소 원자를 함유한다(C2-5 알케닐). 또 다른 구현예에서, 알케닐기는 2 내지 4개의 탄소 원자를 함유한다(C2-4 알케닐). 또 다른 구현예에서, 알케닐기는 2 내지 3개의 탄소 원자를 함유한다(C2-3 알케닐). 또 다른 구현예에서, 알케닐기는 2개의 탄소 원자를 함유한다(C2 알케닐). 탄소-탄소 이중 결합(들)은 시스(Z) 또는 트랜스(E) 배위일 수 있다. 예시적인 알케닐기는 비닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐(즉, 알릴), 1-부테닐, 2-부테닐, 3-부테닐, 1-펜테닐, 2-펜테닐, 3-펜테닐, 4-펜테닐, 1-헥세닐, 2-헥세닐, 3-헥세닐, 4-헥세닐, 5-헥세닐, 1-헵테닐, 2-헵테닐, 3-헵테닐, 4-헵테닐, 5-헵테닐, 6-헵테닐, 1-옥테닐, 2-옥테닐, 3-옥테닐, 4-옥테닐, 5-옥테닐, 6-옥테닐, 7-옥테닐, 1-노네닐, 2-노네닐, 3-노네닐, 4-노네닐, 5-노네닐, 6-노네닐, 7-노네닐, 8-노네닐, 1-데세닐, 2-데세닐, 3-데세닐, 4-데세닐, 5-데세닐, 6-데세닐, 7-데세닐, 8-데세닐, 9-데세닐 등을 포함한다. 알케닐기가 질소 원자에 부착된 경우 이중 결합은 질소 원자에 대해 알파가 될 수 없다. 일부 구현예에서 알케닐 사슬은 선형이다. 일부 구현예에서 알케닐 사슬은 분지형이다. 일부 구현예에서 알케닐 사슬은 치환된다. 일부 구현예에서 알케닐 사슬은 비치환된다. 일부 구현예에서 알케닐 사슬은 선형이고 치환되거나 비치환된다. 일부 구현예에서 알케닐 사슬은 분지형이고 치환되거나 비치환된다. 알케닐기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "알케닐렌"은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 불포화 선형 또는 분지형 탄화수소의 2라디칼을 의미한다. 일반적으로 알케닐렌기의 탄소-탄소 이중 결합의 최대 수는 알케닐렌기의 탄소 원자 수를 2로 나누어 계산한 정수와 같을 수 있으며, 알케닐렌기 탄소 원자 수가 홀수인 경우 나누기 결과를 다음 정수로 내림한다. 예를 들어, 9개의 탄소 원자를 갖는 알케닐렌기의 경우, 탄소-탄소 이중 결합의 최대 수는 4이다. 바람직하게는, 알케닐렌기는 1 내지 4개, 즉 1, 2, 3 또는 4개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는다. 바람직하게는, 알케닐렌기는 2 내지 10개의 탄소 원자, 즉 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 2 내지 8개의 탄소 원자, 예컨대 2 내지 6개의 탄소 원자 또는 2 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 알케닐렌기는 2 내지 10개의 탄소 원자 및 1, 2, 3, 4 또는 5개의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고, 보다 바람직하게는 2 내지 8개의 탄소 원자 및 1, 2, 3 또는 4개의 탄소-탄소 이중 결합, 예컨대 2 내지 6개의 탄소 원자 및 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합 또는 2 내지 4개의 탄소 원자 및 1 또는 2개의 탄소-탄소 이중 결합을 포함한다. 탄소-탄소 이중 결합(들)은 시스(Z) 또는 트랜스(E) 배위일 수 있다. 예시적인 알케닐렌기는 에텐-1,2-디일, 비닐리덴, 1-프로펜-1,2-디일, 1-프로펜-1,3-디일, 1-프로펜-2,3-디일, 알릴리덴, 1-부텐-1,2-디일, 1-부텐-1,3-디일, 1-부텐-1,4-디일, 1-부텐-2,3-디일, 1-부텐-2,4-디일, 1-부텐-3,4-디일, 2-부텐-1,2-디일, 2-부텐-1,3-디일, 2-부텐-1,4-디일, 2-부텐-2,3-디일, 2-부텐-2,4-디일, 2-부텐-3,4-디일 등을 포함한다. 알케닐렌기가 질소 원자에 부착된 경우 이중 결합은 질소 원자에 대해 알파가 될 수 없다. 알케닐렌기는 고리형 또는 비고리형, 분지형 또는 비분지형이고, 치환되거나 비치환될 수 있다. 알케닐렌기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "알키닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 불포화 선형 또는 분지형 탄화수소의 모노라디칼을 의미한다. 일반적으로 알키닐기의 탄소-탄소 삼중 결합의 최대 수는 알키닐기의 탄소 원자 수를 2로 나누어 계산한 정수와 같을 수 있으며, 알키닐기 탄소 원자 수가 홀수인 경우 나누기 결과를 다음 정수로 내림한다. 예를 들어, 9개의 탄소 원자를 갖는 알키닐기의 경우, 탄소-탄소 삼중 결합의 최대 수는 4이다. 바람직하게는, 알키닐기는 1 내지 4개, 즉 1, 2, 3 또는 4개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는다. 바람직하게는, 알키닐기는 2 내지 10개의 탄소 원자, 즉 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 2 내지 8개의 탄소 원자, 예컨대 2 내지 6개의 탄소 원자 또는 2 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 알키닐기는 2 내지 10개의 탄소 원자 및 1, 2, 3, 4 또는 5개(바람직하게는 1, 2 또는 3개)의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하고, 더욱 바람직하게는 2 내지 8개의 탄소 원자 및 1, 2, 3 또는 4개(바람직하게는 1 또는 2개)의 탄소-탄소 삼중 결합, 예를 들어 2 내지 6개의 탄소 원자 및 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 삼중 결합 또는 2 내지 4개의 탄소 원자 및 1 또는 2개의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 알키닐기는 2 내지 20개의 탄소 원자를 함유한다(C2-20 알키닐). 일부 구현예에서, 사용된 알키닐기는 2 내지 15개의 탄소 원자를 함유한다(C2-15 알키닐). 또 다른 구현예에서, 알키닐기는 2 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다(C2-10 알키닐). 또 다른 구현예에서, 알키닐기는 2 내지 8개의 탄소 원자를 함유한다(C2-8 알키닐). 또 다른 구현예에서, 알키닐기는 2 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다(C2-6 알키닐). 또 다른 구현예에서, 알키닐기는 2 내지 5개의 탄소 원자를 함유한다(C2-5 알키닐). 또 다른 구현예에서, 알키닐기는 2 내지 4개의 탄소 원자를 함유한다(C2-4 알키닐). 또 다른 구현예에서, 알키닐기는 2 내지 3개의 탄소 원자를 함유한다(C2-3 알키닐). 또 다른 구현예에서, 알키닐기는 2개의 탄소 원자를 함유한다(C2 알키닐). 예시적인 알키닐기는 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 3-부티닐, 1-펜티닐, 2-펜티닐, 3-펜티닐, 4-펜티닐, 1-헥시닐, 2-헥시닐, 3-헥시닐, 4-헥시닐, 5-헥시닐, 1-헵티닐, 2-헵티닐, 3-헵티닐, 4-헵티닐, 5-헵티닐, 6-헵티닐, 1-옥티닐, 2-옥티닐, 3-옥티닐, 4-옥티닐, 5-옥티닐, 6-옥티닐, 7-옥티닐, 1-노닐릴, 2-노니닐, 3-노니닐, 4-노니닐, 5-노니닐, 6-노니닐, 7-노니닐, 8-노니닐, 1-데시닐, 2-데시닐, 3-데시닐, 4-데시닐, 5-데시닐, 6-데시닐, 7-데시닐, 8-데시닐, 9-데시닐 등을 포함하며, 이는 하나 이상의 치환기를 가질 수 있다. 알키닐기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알키닐기가 질소 원자에 부착된 경우 삼중 결합은 질소 원자에 대해 알파가 될 수 없다. 알키닐기는 고리형 또는 비고리형, 분지형 또는 비분지형이고, 치환되거나 비치환될 수 있다. 알케닐렌기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서 알키닐 사슬은 선형이다. 일부 구현예에서 알키닐 사슬은 분지형이다. 일부 구현예에서 알키닐 사슬은 치환된다. 일부 구현예에서 알키닐 사슬은 비치환된다. 일부 구현예에서 알키닐 사슬은 선형이고 치환되거나 비치환된다. 일부 구현예에서 알키닐 사슬은 분지형이고 치환되거나 비치환된다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "알키닐렌"은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 불포화 선형 또는 분지형 탄화수소의 2라디칼을 의미한다. 일반적으로 알키닐렌기의 탄소-탄소 삼중 결합의 최대 수는 알키닐렌기의 탄소 원자 수를 2로 나누어 계산한 정수와 같을 수 있으며, 알키닐렌기 탄소 원자 수가 홀수인 경우 나누기 결과를 다음 정수로 내림한다. 예를 들어, 9개의 탄소 원자를 갖는 알키닐렌기의 경우, 탄소-탄소 삼중 결합의 최대 수는 4이다. 바람직하게는, 알키닐렌기는 1 내지 4개, 즉 1, 2, 3 또는 4개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는다. 바람직하게는, 알키닐렌기는 2 내지 10개의 탄소 원자, 즉 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 2 내지 8개의 탄소 원자, 예컨대 2 내지 6개의 탄소 원자 또는 2 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 알키닐렌기는 2 내지 10개의 탄소 원자 및 1, 2, 3, 4 또는 5개(바람직하게는 1, 2 또는 3개)의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하고, 더욱 바람직하게는 2 내지 8개의 탄소 원자 및 1, 2, 3 또는 4개(바람직하게는 1 또는 2개)의 탄소-탄소 삼중 결합, 예를 들어 2 내지 6개의 탄소 원자 및 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 삼중 결합 또는 2 내지 4개의 탄소 원자 및 1 또는 2개의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함한다. 예시적인 알키닐렌기는 에틴-1,2-디일, 1-프로핀-1,3-디일, 1-프로핀-3,3-디일, 1-부틴-1,3-디일, 1-부틴-1,4-디일, 1-부틴-3,4-디일, 2-부틴-1,4-디일 등을 포함한다. 알키닐렌기가 질소 원자에 부착된 경우 삼중 결합은 질소 원자에 대해 알파가 될 수 없다. 알키닐렌기는 고리형 또는 비고리형, 분지형 또는 비분지형이고, 치환되거나 비치환될 수 있다. 알키닐렌기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "사이클로알킬" 또는 "사이클로지방족" 또는 "카르보사이클릭" 또는 "카르보사이클"은 바람직하게는 3 내지 14개의 탄소 원자, 예를 들어, 3 내지 10개의 탄소 원자, 즉 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 탄소 원자, 더 바람직하게는 3 내지 8개의 탄소 원자, 더욱 더 바람직하게는 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는 "알킬" 및 "알케닐"의 사이클릭 비방향족 버전을 나타낸다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 사이클로알킬기는 3 내지 14개의 탄소 원자를 함유한다(C3-14 사이클로알킬). 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 사이클로알킬기는 3 내지 12개의 탄소 원자를 함유한다(C3-12 사이클로알킬). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 사이클로알킬기는 3 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다(C3-10 사이클로알킬). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 사이클로알킬기는 3 내지 8개의 탄소 원자를 함유한다(C3-8 사이클로알킬). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 사이클로알킬기는 3 내지 7개의 탄소 원자를 함유한다(C3-사이클로알킬). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 사이클로알킬기는 3 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다(C3-6 사이클로알킬). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 사이클로알킬기는 3 내지 5개의 탄소 원자를 함유한다(C3-5 사이클로알킬). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 사이클로알킬기는 3 내지 4개의 탄소 원자를 함유한다(C3-4 사이클로알킬). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 사이클로알킬기는 3개의 탄소 원자를 함유한다(C3 사이클로알킬). 예시적인 사이클로알킬은 사이클로프로필, 사이클로프로페닐, 사이클로부틸, 사이클로부테닐, 사이클로펜틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헵틸, 사이클로헵테닐, 사이클로옥틸, 사이클로옥테닐, 사이클로노닐, 사이클로노네닐, 사이클로데실, 사이클로데세닐 및 아다만틸을 포함한다. 용어 "사이클로알킬"은 또한 이의 바이사이클릭 및 트리사이클릭 버전을 포함하는 것을 의미한다. 바이사이클릭 고리가 형성되는 경우 각각의 고리가 2개의 인접한 탄소 원자에서 서로 연결되는 것이 바람직하지만, 대안적으로 2개의 고리는 동일한 탄소 원자를 통해 연결되며, 즉 스피로 고리 시스템을 형성하거나 "브릿지" 고리 시스템을 형성한다. 사이클로알킬의 바람직한 예는 C3-C8-사이클로알킬, 특히 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 스피로[3,3]헵틸, 스피로[3,4]옥틸, 스피로[4,3]옥틸, 비사이클로[4.1.0] 헵틸, 비사이클로[3.2.0]헵틸, 비사이클로[2.2.1]헵틸, 비사이클로[2.2.2]옥틸, 비사이클로[5.1.0]옥틸 및 비사이클로[4.2.0]옥틸을 포함한다. 사이클로알킬기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "사이클로프로필렌"은 1개의 수소 원자가 제거되어 2라디칼을 생성한 상기 정의된 바와 같은 사이클로프로필기를 의미한다. 사이클로프로필렌은 동일한 탄소 원자(1,1-사이클로프로필렌, 즉 제미날 2라디칼)를 통해 또는 2개의 탄소 원자(1,2-사이클로프로필렌)를 통해 2개의 원자 또는 모이어티를 연결할 수 있다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "아릴" 또는 "방향족 고리"는 3 내지 20개의 고리 원자를 갖는 방향족 모노- 또는 폴리사이클릭 고리 시스템을 지칭하며, 이들 중 모든 고리 원자는 탄소이고, 이는 치환 또는 비치환될 수 있다. 본 발명의 특정 구현예에서, "아릴"은 하나 이상의 치환기를 가질 수 있는 페닐, 바이페닐, 나프틸 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 1개, 2개 또는 3개의 방향족 고리를 갖는 모노, 바이 또는 트리사이클릭 C4-C20 방향족 고리 시스템을 지칭한다. 바람직하게는, 아릴기는 하나의 고리(예를 들어, 페닐) 또는 2 이상의 축합 고리(예를 들어, 나프틸)에 배열될 수 있는 3 내지 14개(예를 들어, 5 내지 10개, 예를 들어 5, 6 또는 10개)의 탄소 원자, 보다 바람직하게는 6 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다. 예시적인 아릴기는 사이클로프로페닐륨, 사이클로펜타디에닐, 페닐, 인데닐, 나프틸, 아줄레닐, 플루오레닐, 안트릴 및 페난트릴을 포함한다. 바람직하게는, "아릴"은 6개의 탄소 원자를 함유하는 모노사이클릭 고리 또는 10개의 탄소 원자를 함유하는 방향족 바이사이클릭 고리 시스템을 지칭한다. 바람직한 예는 페닐 및 나프틸이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 3 내지 20개의 탄소 원자를 함유한다(C3-20 아릴). 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 3 내지 18개의 탄소 원자를 함유한다(C3-18 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 3 내지 16개의 탄소 원자를 함유한다(C3-16 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 6 내지 16개의 탄소 원자를 함유한다(C6-16 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 7 내지 16개의 탄소 원자를 함유한다(C7-16 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 6 내지 14개의 탄소 원자를 함유한다(C6-14 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 7 내지 14개의 탄소 원자를 함유한다(C7-14 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 6 내지 12개의 탄소 원자를 함유한다(C6-12 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 7 내지 12개의 탄소 원자를 함유한다(C7-12 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 6 내지 11개의 탄소 원자를 함유한다(C6-11 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 7 내지 11개의 탄소 원자를 함유한다(C7-11 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 6 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다(C6-10 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 7 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다(C7-10 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 6 내지 8개의 탄소 원자를 함유한다(C6-8 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 6개의 탄소 원자를 함유한다(C6 아릴). 또 다른 구현예에서, 본 발명에 사용된 아릴기는 10개의 탄소 원자를 함유한다(C10 아릴). 일부 구현예에서, Z는 치환된 모노사이클릭 6원 아릴 또는 비치환된 모노사이클릭 6원 아릴이 아니다. 일부 구현예에서, Z는 치환된 페닐 또는 비치환된 페닐이 아니다. 일부 구현예에서, Z는 -NO2, -N3, 할로겐, -NH2, 하이드록실, -OR11 및 -C(=O)R11로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 치환된 페닐이 아니며, 여기서 R11은 수소, 치환된 아릴 또는 치환된 알키닐이다. 아릴 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "아릴렌"은, 본 명세서에 정의된 아릴기로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 아릴 2라디칼을 지칭한다. 아릴렌 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 추가로, 아릴렌기는 본 명세서에 정의된 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌, 헤테로알킬렌, 헤테로알케닐렌 또는 헤테로알키닐렌기에 링커 기로서 혼입될 수 있다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "헤테로아릴" 또는 "헤테로방향족 고리"는 아릴기의 하나 이상의 탄소 원자가 O, S 또는 N의 헤테로원자로 대체된 상기 정의된 바와 같은 아릴기를 의미한다. 바람직하게는, 헤테로아릴기는 3 내지 14개의 탄소 원자를 함유한다. 바람직하게는, 헤테로아릴은 1, 2 또는 3개의 탄소 원자가 O, N 또는 S의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된 5원 또는 6원 방향족 모노사이클릭 고리를 지칭한다. 대안적으로, 이는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 탄소 원자가 O, N 또는 S의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된 방향족 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 고리 시스템을 의미한다. 바람직하게는, 헤테로아릴기의 각 고리에서 O 원자의 최대 수는 1이고, S 원자의 최대 수는 1이며, O 및 S 원자의 최대 총 수는 2이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1, 2 또는 3개의 탄소 원자가 O, N 또는 S의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된 5원 방향족 모노사이클릭 고리이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1, 2 또는 3개의 탄소 원자가 O의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된 5원 방향족 모노사이클릭 고리이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1, 2 또는 3개의 탄소 원자가 O 및 N의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된 5원 방향족 모노사이클릭 고리이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1, 2 또는 3개의 탄소 원자가 O 및 S의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된 5원 방향족 모노사이클릭 고리이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1, 2 또는 3개의 탄소 원자가 N 및 S의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된 5원 방향족 모노사이클릭 고리이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1, 2 또는 3개의 탄소 원자가 O, S 또는 N의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된 6원 방향족 모노사이클릭 고리이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1, 2 또는 3개의 탄소 원자가 N으로 대체된 6원 방향족 모노사이클릭 고리이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 탄소 원자가 O, N 또는 S의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된 방향족 바이사이클릭 시스템이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1개의 탄소 원자가 O로 대체된 방향족 바이사이클릭 시스템이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 1개의 탄소 원자가 N으로 대체된 방향족 바이사이클릭 시스템이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 치환된 또는 비치환된 인돌릴이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 2개의 탄소 원자가 N으로 대체된 방향족 바이사이클릭 시스템이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 치환된 또는 비치환된 7-아자인돌릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 치환된 또는 비치환된 6-아자인돌릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 치환된 또는 비치환된 5-아자인돌릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 치환된 또는 비치환된 4-아자인돌릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴기는 치환 또는 비치환 이미다졸릴이다. 특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 헤테로아릴기는 3개의 탄소 원자가 N으로 대체된 방향족 바이사이클릭 시스템, 바람직하게는 치환 또는 비치환 디아자인돌릴 기이다. 예시적인 헤테로아릴기는 푸라닐, 티에닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴(1,2,5- 및 1,2,3-), 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴(1,2,3- 및 1,2,4-), 테트라졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 티아디아졸릴(1,2,3- 및 1,2,5-), 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 트리아지닐(1,2,3-, 1,2,4- 및 1,3,5- ), 벤조푸라닐(1- 및 2-), 인돌릴, 아자인돌릴(4-, 5-, 6- 및 7-), 디아자인돌릴, 이소인돌릴, 벤조티에닐(1- 및 2-), 1H-인다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤족사졸릴, 인독사지닐, 벤즈이속사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈이소티아졸릴, 벤조트리아졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤조디아지닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 벤조트리아지닐(1,2,3- 및 1,2,4-벤조트리아지닐), 피리다지닐, 페녹사지닐, 티아졸로피리디닐, 피롤로티아졸릴, 페노티아지닐, 이소벤조푸라닐, 크로메닐, 잔테닐, 페녹사티이닐, 피롤리지닐, 인돌리지닐, 인다졸릴, 푸리닐, 퀴놀리지닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐(1,5-, 1,6-, 1, 7-, 1,8 -, 및 2,6-), 신놀리닐, 프테리디닐, 카르바졸릴, 페난트리디닐, 아크리디닐, 페리미디닐, 페난트롤리닐 (1,7-, 1,8-, 1,10-, 3,8- 및 4,7-), 페나지닐, 옥사졸로피리디닐, 이속사졸로피리디닐, 피롤로옥사졸릴, 피롤로피롤릴 등을 포함하며, 이는 하나 이상의 치환기를 가질 수 있다. 헤테로아릴 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 5원 또는 6원 헤테로아릴기는 푸라닐, 티에닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴(1,2,5- 및 1,2,3-), 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴(1,2,3- 및 1,2,4-), 티아졸릴, 이소티아졸릴, 티아디아졸릴(1,2,3- 및 1,2,5-), 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 트리아지닐(1,2,3-, 1,2,4- 및 1,3,5-), 및 피리다지닐을 포함한다. 예시적인 비사이클릭 헤테로아릴기는 7-아자인돌릴, 6-아자인돌릴, 5-아자인돌릴, 4-아자인돌릴, 디아자인돌릴 및 인돌릴이다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "디아자인돌릴" 또는 "디아자인돌"은 환형 페닐 고리의 2개 탄소 원자가 N으로 대체된 인돌 코어 구조를 갖는 화합물을 지칭한다. 바람직하게는 인돌 코어의 탄소 원자 4, 5, 6 및/또는 7은 N으로 대체된다. 바람직하게는 인돌 코어의 탄소 원자 4 및 5는 N으로 대체된다. 바람직하게는 인돌 코어의 탄소 원자 4 및 6은 N으로 대체된다. 바람직하게는 인돌 코어의 탄소 원자 4 및 7은 N으로 대체된다. 바람직하게는 인돌 코어의 탄소 원자 5 및 6은 N으로 대체된다. 바람직하게는 인돌 코어의 탄소 원자 6 및 7은 N으로 대체된다. 바람직하게는 인돌 코어의 탄소 원자 5 및 7은 N으로 대체된다. 일부 구현예에서 디아자인돌릴은 치환된다. 일부 구현예에서 디아자인돌릴은 비치환된다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "헤테로아릴렌"은 본 명세서에서 정의된 헤테로아릴기로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 바이라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴렌기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 추가로, 헤테로아릴렌기는 링커 기로서 본 명세서에 정의된 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌, 헤테로알킬렌, 헤테로알케닐렌 또는 헤테로알키닐렌 기에 혼입될 수 있다. 헤테로아릴렌기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "아릴알킬" 및 "헤테로아릴알킬"은 탄소 원자(예를 들어, 메틸렌기)가 예를 들어 산소 원자로 대체된 알킬기(예를 들어, 페녹시메틸, 2-피리딜옥시메틸, 3-(1-나프틸옥시)프로필 등)를 포함하여, 아릴기 및 헤테로아릴기가 각각 알킬기에 부착된 라디칼(예를 들어, 벤질, 페네틸, 피리딜메틸 등)을 포함하는 것을 의미한다. 바람직하게는, 아릴알킬은 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴(C1-C6)알킬이다. 바람직하게는 아릴알킬은 치환 또는 비치환 (C6-C10)아릴(C1-C6)알킬이다. 바람직하게는 헤테로아릴알킬은 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴(C1-C6)알킬이다. 바람직하게는 헤테로아릴알킬은 치환 또는 비치환 (C3-C10)헤테로아릴(C1-C6)알킬이다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 선형이다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 분지형이다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 치환된다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 비치환된다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 선형이고 치환되거나 비치환된다. 일부 구현예에서 알킬 사슬은 분지형이고 치환되거나 비치환된다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "헤테로사이클릴" 또는 "헤테로사이클릭 고리" 또는 "헤테로사이클"은 사이클릭 헤테로지방족 기를 지칭한다. 헤테로사이클릭 기는 비방향족, 부분 불포화 또는 완전 포화 3원 내지 10원 고리 시스템을 지칭하며, 이는 3 내지 8개의 원자 크기인 단일 고리를 포함하고, 비방향족 고리에 융합된 방향족 5원 또는 6원 아릴 또는 헤테로아릴기를 포함할 수 있는 바이- 및 트리-사이클릭 고리 시스템을 포함한다. 헤테로사이클릭 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 이들 헤테로사이클릭 고리는 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 것들을 포함하며, 여기서 질소 및 황 헤테로원자는 임의로 산화될 수 있고 질소 헤테로원자는 임의로 4차화될 수 있다. 특정 구현예에서, 헤테로사이클이라는 용어는 적어도 하나의 고리 원자가 O, S 및 N(여기서 질소 및 황은 헤테로원자는 임의로 산화될 수 있음)으로부터 선택된 헤테로원자이고, 나머지 고리 원자는 탄소이고, 라디칼은 임의의 고리 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 결합되는 비방향족 5원 또는 6원 또는 7원 고리 또는 폴리사이클릭 기를 지칭한다. 헤테로사이클릴 기는 산소, 황 및 질소로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 융합된 5원, 6원 또는 7원 고리를 포함하는 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 기를 포함하지만, 이에 제한되지 않으며, 여기서 (i) 각각의 5원 고리는 0 내지 2개의 이중 결합을 갖고, 각각의 6원 고리는 0 내지 2개의 이중 결합을 가지며, 각각의 7원 고리는 0 내지 3개의 이중 결합을 갖고. (ii) 질소 및 황 헤테로원자는 임의로 산화되고, (iii) 질소 헤테로원자는 임의로 4차화될 수 있고, (iv) 상기 헤테로사이클릭 고리의 어느 것이든 아릴 또는 헤테로아릴 고리에 융합될 수 있다. 바람직하게는, 헤테로사이클릴 기의 각 고리에서 O 원자의 최대 수는 1이고, S 원자의 최대 수는 1이며, O 및 S 원자의 최대 총 수는 2이다. 용어 "헤테로사이클릴"은 또한 상기 언급된 헤테로아릴 기의 부분적으로 또는 완전히 수소화된 형태(예를 들어 디하이드로, 테트라하이드로 또는 퍼하이드로 형태)를 포함하는 것을 의미한다. 예시적인 헤테로사이클릴 기는 모르폴리노, 이소크로마닐, 크로마닐, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 디- 및 테트라하이드로푸라닐, 디- 및 테트라하이드로티에닐, 디- 및 테트라하이드로옥사졸릴, 디- 및 테트라하이드로이속사졸릴, 디- 및 테트라하이드로옥사디아졸릴(1,2,5- 및 1,2,3-), 디하이드로피롤릴, 디하이드로이미다졸릴, 디하이드로피라졸릴, 디- 및 테트라하이드로트리아졸릴(1,2,3- 및 1,2,4-), 디- 및 테트라하이드로티아졸릴, 디- 및 테트라하이드로티아졸릴, 디- 및 테트라하이드로티아디아졸릴(1,2,3- 및 1,2,5-), 디- 및 테트라하이드로피리딜, 디- 및 테트라하이드로피리미디닐, 디- 및 테트라하이드로피라지닐, 디- 및 테트라하이드로트리아지닐(1,2,3-, 1,2,4- 및 1,3,5-), 디- 및 테트라하이드로벤조푸라닐(1- 및 2-), 디- 및 테트라하이드로인돌릴, 디- 및 테트라하이드로이소인돌릴, 디- 및 테트라하이드로벤조티에닐(1- 및 2), 디- 및 테트라하이드로-1H-인다졸릴, 디- 및 테트라하이드로벤즈이미다졸릴, 디- 및 테트라하이드로벤즈옥사졸릴, 디- 및 테트라하이드로인독사지닐, 디- 및 테트라하이드로벤즈이속사졸릴, 디- 및 테트라하이드로벤조티아졸릴, 디- 및 테트라하이드로벤즈이소티아졸릴, 디- 및 테트라하이드로벤조트리아졸릴, 디- 및 테트라하이드로퀴놀리닐, 디- 및 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 디- 및 테트라하이드로벤조디아지닐, 디- 및 테트라하이드로퀴녹살리닐, 디- 및 테트라하이드로퀴나졸리닐, 디- 및 테트라하이드로벤조트리아지닐(1,2,3- 및 1,2 ,4-), 디- 및 테트라하이드로피리다지닐, 디- 및 테트라하이드로페녹사지닐, 디- 및 테트라하이드로티아졸로피리디닐 (예를 들어 4,5,6-7-테트라하이드로[1,3]티아졸로[5,4-c]피리디닐 또는 4,5,6-7-테트라하이드로[1,3]티아졸로[4,5-c]피리디닐, 예를 들어, 4,5,6-7-테트라하이드로[1,3]티아졸로[5,4-c]피리딘-2-일 또는 4,5,6-7-테트라하이드로[1,3]티아졸로[4,5-c]피리딘-2-일), 디- 및 테트라하이드로피롤로티아졸릴 (예를 들어 5,6-디하이드로-4H-피롤로[3,4-d][1,3]티아졸릴), 디- 및 테트라하이드로페노티아지닐, 디- 및 테트라하이드로이소벤조푸라닐, 디- 및 테트라하이드로크로메닐, 디- 및 테트라하이드로잔테닐, 디- 및 테트라하이드로페녹사티이닐, 디- 및 테트라하이드로피롤리지닐, 디- 및 테트라하이드로인돌리지닐, 디- 및 테트라하이드로인다졸릴, 디- 및 테트라하이드로퓨리닐, 디- 및 테트라하이드로퀴놀리지닐, 디- 및 테트라하이드로프탈라지닐, 디- 및 테트라하이드로나프티리디닐 (1,5-, 1,6-, 1,7-, 1,8-, 및 2,6-), 디- 및 테트라하이드로신놀릴, 디- 및 테트라하이드로프테리디닐, 디- 및 테트라하이드로카르바졸릴, 디- 및 테트라하이드로페난트리디닐, 디- 및 테트라하이드로아크리디닐, 디- 및 테트라하이드로페리미디닐, 디- 및 테트라하이드로페난트롤리닐(1,7-, 1,8-, 1,10-, 3,8-, 및 4,7-), 디- 및 테트라하이드로페나지닐, 디- 및 테트라하이드로옥사졸로피리디닐, 디- 및 테트라하이드로이속사졸로피리디닐, 디- 및 테트라하이드로피롤로옥사졸릴, 및 디- 및 테트라하이드로피롤로피롤릴을 포함한다. 예시적인 5원 또는 6원 헤테로사이클릴기는 모르폴리노, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 디- 및 테트라하이드로푸라닐, 디- 및 테트라하이드로티에닐, 디- 및 테트라하이드로옥사졸릴, 디- 및 테트라하이드로이속사졸릴, 디- 및 테트라하이드로옥사디아졸릴(1,2,5- 및 1,2,3-), 디하이드로피롤릴, 디하이드로이미다졸릴, 디하이드로피라졸릴, 디- 및 테트라하이드로트리아졸릴(1,2,3- 및 1,2,4-), 디- 및 테트라하이드로티아졸릴, 디- 및 테트라하이드로이소티아졸릴, 디- 및 테트라하이드로티아디아졸릴(1,2,3- 및 1,2,5-), 디- 및 테트라하이드로피리딜, 디- 및 테트라하이드로피리미디닐, 디- 및 테트라하이드로피라지닐, 디- 및 테트라하이드로트리아지닐(1,2,3-, 1,2 ,4-, 및 1,3,5-), 디- 및 테트라하이드로피리다지닐 등을 포함하며, 이는 하나 이상의 치환기를 가질 수 있다. 바람직하게는 2H-1-벤조피라닐(2H-크로메닐), 벤조디하이드로피라닐(크로마닐), 4H-1-벤조피라닐(4H-크로메닐), 1H-2-벤조피라닐(1H-이소크로메닐), 이소크로마닐, 3H-2-벤조피라닐(3H-이소크로메닐)), 1-벤조피란-4-온-일(크로모닐), 4-크로마노닐, 1-벤조피란-2-온-일(쿠마리닐), 디하이드로쿠마리닐, 3-이소크로마노닐, 2-쿠마라논-일을 포함한다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 2H-1-벤조피라닐(2H-크로메닐)이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 벤조디하이드로피라닐(크로마닐)이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 4H-1-벤조피라닐(4H-크로메닐)이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 1H-2-벤조피라닐(1H-이소크로메닐)이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 이소크로마닐이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 3H-2-벤조피라닐(3H-이소크로메닐)이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 1-벤조피란-4-온-일(크로모닐)이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 4-크로마노닐이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 1-벤조피란-2-온-일(쿠마리닐)이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 디하이드로쿠마리닐이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 3-이소크로마노닐이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 2-쿠마라논-일이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 O, N 또는 S의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 O로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 N으로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 S로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C9-C10)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 O, N 또는 S의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C9-C10)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 O로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C9-C10)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 N으로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C9-C10)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 S로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C10)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 O, N 또는 S의 동일하거나 상이한 헤테로원자로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C10)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 O로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C10)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 N으로 대체된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클릴 기는 치환 또는 비치환 (C10)헤테로사이클릴 기이고, 여기서 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 탄소 원자는 S로 대체된다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 용어 "헤테로알킬"은 탄소 원자 사이에 하나 이상의 헤테로원자(예를 들어, 산소, 황, 질소, 인 또는 규소 원자)를 함유하는 본 명세서에 정의된 바와 같은 알킬 모이어티를 지칭한다. 헤테로알킬은 치환되거나 비치환될 수 있다. 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 20개의 탄소 원자 및 1 내지 6개의 헤테로원자를 함유한다(C1-20 헤테로알킬). 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 10개의 탄소 원자 및 1 내지 4의 헤테로원자를 함유한다(C1-10 헤테로알킬). 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유한다(C1-6 헤테로알킬). 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 5개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유한다(C1-5 헤테로알킬). 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 4개의 탄소 원자 및 1 내지 2개의 헤테로원자를 함유한다(C1-4 헤테로알킬). 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 3개의 탄소 원자 및 1개의 헤테로원자를 함유한다(C1-3 헤테로알킬). 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 2개의 탄소 원자 및 1개의 헤테로원자를 함유한다(C1-2 헤테로알킬). 본 명세서에 사용된 용어 "헤테로알킬렌"은 본 명세서에 정의된 바와 같은 헤테로알킬기로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 2라디칼을 지칭한다. 헤테로알킬렌기는 고리형 또는 비고리형, 분지형 또는 비분지형, 치환 또는 비치환일 수 있다. 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 치환 헤테로알킬기이다(C1-6 헤테로알킬). 특정 구현예에서, 헤테로알킬기는 1 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 비치환 헤테로알킬기이다(C1-6 헤테로알킬). 일부 구현예에서 헤테로알킬은 메틸렌기가 S로 대체된 알킬 모이어티이다. 일부 구현예에서 헤테로알킬은 메틸렌기가 O로 대체된 알킬 모이어티이다. 일부 구현예에서 헤테로알킬은 메틸렌기가 NR1로 대체된 알킬 모이어티이며, 이는 수소, 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알케닐, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알키닐, 치환 또는 비치환 (C3-C8)사이클로알킬, 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴, 및 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 헤테로알킬은 -CH2SCH3이다. 일부 구현예에서, 헤테로알킬은 -CH2OCH3이다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 바와 같이, 헤테로알킬렌기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 바와 같은 용어 "헤테로알케닐"은, 탄소 원자 사이에 하나 이상의 헤테로원자(예를 들어, 산소, 황, 질소, 인 또는 규소 원자)를 추가로 포함하는 본 명세서에 정의된 바와 같은 알케닐 모이어티를 지칭한다. 특정 구현예에서, 헤테로알케닐기는 2 내지 20개의 탄소 원자 및 1 내지 6개의 헤테로원자를 함유한다(C2-20 헤테로알케닐). 특정 구현예에서, 헤테로알케닐기는 2 내지 10개의 탄소 원자 및 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유한다(C2-10 헤테로알케닐). 특정 구현예에서, 헤테로알케닐기는 2 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유한다(C2-6 헤테로알케닐). 특정 구현예에서, 헤테로알케닐기는 2 내지 5개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유한다(C2-5 헤테로알케닐). 특정 구현예에서, 헤테로알케닐기는 2 내지 4개의 탄소 원자 및 1 내지 2개의 헤테로원자를 함유한다(C2-4 헤테로알케닐). 특정 구현예에서, 헤테로알케닐기는 2 내지 3개의 탄소 원자 및 1개의 헤테로원자를 함유한다(C2-3 헤테로알케닐). 본 명세서에서 사용되는 용어 "헤테로알케닐렌"은 본 명세서에서 정의된 헤테로알케닐기로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 2라디칼을 지칭한다. 헤테로알케닐렌기는 고리형 또는 비고리형, 분지형 또는 비분지형, 치환 또는 비치환일 수 있다. 특정 구현예에서, 헤테로알케닐기는 1 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 치환 헤테로알케닐기이다(C1-6 헤테로알케닐). 특정 구현예에서, 헤테로알케닐기는 1 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 비치환 헤테로알케닐기이다(C1-6 헤테로알케닐).
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 바와 같은 용어 "헤테로알키닐"은, 탄소 원자 사이에 하나 이상의 헤테로원자(예를 들어, 산소, 황, 질소, 인 또는 규소 원자)를 추가로 포함하는 본 명세서에 정의된 바와 같은 알키닐 모이어티를 지칭한다. 특정 구현예에서, 헤테로알키닐기는 2 내지 20개의 탄소 원자 및 1 내지 6개의 헤테로원자를 함유한다(C2-20 헤테로알키닐). 특정 구현예에서, 헤테로알키닐기는 2 내지 10개의 탄소 원자 및 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유한다(C2-10 헤테로알키닐). 특정 구현예에서, 헤테로알키닐기는 2 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유한다(C2-6 헤테로알키닐). 특정 구현예에서, 헤테로알키닐기는 2 내지 5개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유한다(C2-5 헤테로알키닐). 특정 구현예에서, 헤테로알키닐기는 2 내지 4개의 탄소 원자 및 1 내지 2개의 헤테로원자를 함유한다(C2-4 헤테로알키닐). 특정 구현예에서, 헤테로알키닐기는 2 내지 3개의 탄소 원자 및 1개의 헤테로원자를 함유한다(C2-3 헤테로알키닐). 본 명세서에서 사용되는 용어 "헤테로알키닐렌"은 본 명세서에서 정의된 헤테로알키닐기로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 2라디칼을 의미한다. 헤테로알키닐렌기는 고리형 또는 비고리형, 분지형 또는 비분지형, 치환 또는 비치환일 수 있다. 특정 구현예에서, 헤테로알케닐기는 1 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 치환된 헤테로알키닐기이다(C1-6 헤테로알키닐). 특정 구현예에서, 헤테로알키닐기는 1 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 비치환된 헤테로알키닐기이다(C1-6 헤테로알키닐).
본 명세서에 기술된 바와 같은 비천연 아미노산은 또한 화학식 I을 갖는 것으로 기술될 수 있다:
일부 구현예에서 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물은 X가 O, NR1 또는 S이고; Y가 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고; Z가 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알케닐, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알키닐, 치환 또는 비치환 (C3-C8)사이클로알킬, 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴, 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴(C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴(C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 (C1-C6)헤테로알킬, 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; R1이 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고, 여기서 A가 메틸렌기이고, n이 0 또는 1이고, 바람직하게는 n이 1인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 구현예에서 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물은 X가 O이고; Y가 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고; Z가 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴 및 치환 또는 비치환 (C1-C6)헤테로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; R1이 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고, 여기서 A가 메틸렌기이고, n이 0 또는 1이고, 바람직하게는 n이 1인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 구현예에서 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물은 X가 O, NR1 또는 S이고; Y가 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고; Z가 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴, 비치환 (C3-C14)헤테로아릴 및 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고; R1이 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고, 여기서 A가 메틸렌기이고, n이 0 또는 1이고, 바람직하게는 n이 1인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 구현예에서 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물은 X가 O이고; Y가 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고; Z가 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴 및 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 A가 메틸렌기이고, n이 0 또는 1이고, 바람직하게는 n이 1인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 구현예에서 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물은 X가 O, NR1 또는 S이고; Y가 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고; Z가 치환 또는 비치환 2H-1-벤조피라닐(2H-크로메닐), 치환 또는 비치환 벤조디하이드로피라닐(크로마닐), 치환 또는 비치환 4H-1-벤조피라닐(4H-크로메닐), 치환 또는 비치환 1H-2-벤조피라닐(1H-이소크로메닐), 치환 또는 비치환 이소크로마닐, 치환 또는 비치환 3H-2-벤조피라닐(3H-이소크로메닐), 치환 또는 비치환 1-벤조피란-4-온-일(크로모닐), 치환 또는 비치환 4-크로마노닐, 치환 또는 비치환 1-벤조피란-2-온-일(쿠마리닐), 치환 또는 비치환 디하이드로쿠마리닐, 치환 또는 비치환 3-이소크로마노닐, 치환 또는 비치환 2-쿠마라논-일, 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C1-C6)헤테로알킬, 치환 또는 비치환 이미다졸릴, 치환 또는 비치환 아자인돌릴 (7-아자인돌릴, 6-아자인돌릴, 5-아자인돌릴 및 4-아자인돌릴 포함), 치환 또는 비치환 디아자인돌릴 및 치환 또는 비치환 인돌릴로 이루어진 군으로부터 선택되고; R1이 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고, 여기서 A가 메틸렌기이고, n이 0 또는 1이고, 바람직하게는 n이 1인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 구현예에서 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물은 X가 O이고; Y가 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고; Z가 치환 또는 비치환 2H-1-벤조피라닐(2H-크로메닐), 치환 또는 비치환 벤조디하이드로피라닐(크로마닐), 치환 또는 비치환 4H-1-벤조피라닐(4H-크로메닐), 치환 또는 비치환 1H-2-벤조피라닐(1H-이소크로메닐), 치환 또는 비치환 이소크로마닐, 치환 또는 비치환 3H-2-벤조피라닐(3H-이소크로메닐), 치환 또는 비치환 1-벤조피란-4-온-일(크로모닐), 치환 또는 비치환 4-크로마노닐, 치환 또는 비치환 1-벤조피란-2-온-일(쿠마리닐), 치환 또는 비치환 디하이드로쿠마리닐, 치환 또는 비치환 3-이소크로마노닐, 치환 또는 비치환 2-쿠마라논-일, 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C1-C6)헤테로알킬, 치환 또는 비치환 이미다졸릴, 치환 또는 비치환 아자인돌릴 (7-아자인돌릴, 6-아자인돌릴, 5-아자인돌릴 및 4-아자인돌릴 포함), 치환 또는 비치환 디아자인돌릴 및 치환 또는 비치환 인돌릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 A가 메틸렌기이고, n이 0 또는 1이고, 바람직하게는 n이 1인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 구현예에서 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물은 X가 O, NR1 또는 S이고; Y가 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고; Z가 치환 또는 비치환 1-벤조피란-2-온-일(쿠마리닐), 치환 또는 비치환 디하이드로쿠마리닐, 치환 또는 비치환 이미다졸릴, 치환 또는 비치환 아자인돌릴 (7-아자인돌릴, 6-아자인돌릴, 5-아자인돌릴 및 4-아자인돌릴 포함), 및 치환 또는 비치환 인돌릴로 이루어진 군으로부터 선택되고; R1이 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고, 여기서 A가 메틸렌기이고, n이 0 또는 1이고, 바람직하게는 n이 1인 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 구현예에서 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물은 X가 O이고; Y가 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이고; Z가 치환 또는 비치환 1-벤조피란-2-온-일(쿠마리닐), 치환 또는 비치환 디하이드로쿠마리닐, 치환 또는 비치환 이미다졸릴, 치환 또는 비치환 아자인돌릴 (7-아자인돌릴, 6-아자인돌릴, 5-아자인돌릴 및 4-아자인돌릴 포함), 및 치환 또는 비치환 인돌릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 A가 메틸렌기이고, n이 0 또는 1이고, 바람직하게는 n이 1인 것을 특징으로 할 수 있다.
화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 X는 O이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 X는 S이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 X는 NR1이고, 여기서 R1은 수소, 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알케닐, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알키닐, 치환 또는 비치환 (C3-C8)사이클로알킬, 치환 또는 비치환 (C6-C14) 아릴 및 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴, 바람직하게는 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 더욱 바람직하게는 수소, 더욱 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 더욱 더 바람직하게는 비치환 (C1-C6) 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 수소, 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 수소, 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴 및 치환 또는 비치환 헤테로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알케닐, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알키닐, 치환 또는 비치환 (C3-C8)사이클로알킬, 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴, 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴(C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴(C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 (C1-C6)헤테로알킬, 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 수소이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 알케닐, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C2-C6)알케닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 알키닐, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C2-C6)알키닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C3-C8)사이클로알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 아릴, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 아릴알킬, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴(C1-C6)알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 바람직하게는 치환 또는 비치환된 (C3-C14)헤테로아릴이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴(C1-C6)알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C1-C6)헤테로알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 헤테로알케닐, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알케닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Y는 치환 또는 비치환 헤테로알키닐, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알키닐이다.
화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 수소, 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; 단, Z는 치환 또는 비치환 모노사이클릭 6원 아릴이 아니다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 수소, 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴 및 치환 또는 비치환 헤테로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 단, Z는 치환 또는 비치환 모노사이클릭 6원 아릴이 아니다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알케닐, 치환 또는 비치환 (C2-C6)알키닐, 치환 또는 비치환 (C3-C8)사이클로알킬, 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴, 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴(C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴, 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴(C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C3-C14) 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 (C1-C6)헤테로알킬, 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; 단, Z는 치환 또는 비치환 모노사이클릭 6원 아릴이 아니다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 수소 또는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 수소이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 알킬, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 알케닐, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C2-C6)알케닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 알키닐, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C2-C6)알키닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C3-C8)사이클로알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 아릴, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴이며, 바람직하게는 단, Z는 치환 또는 비치환 모노사이클릭 6원 아릴이 아니다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 아릴알킬, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C6-C14)아릴(C1-C6)알킬이며, 바람직하게는 단, Z는 치환 또는 비치환 모노사이클릭 6원 아릴이 아니다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로아릴(C1-C6)알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C3-C14)헤테로사이클릴이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C1-C6)헤테로알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 헤테로알케닐, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알케닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 헤테로알키닐, 바람직하게는 치환 또는 비치환 (C2-C6)헤테로알키닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 2H-1-벤조피라닐(2H-크로메닐), 치환 또는 비치환 벤조디하이드로피라닐(크로마닐), 치환 또는 비치환 4H-1-벤조피라닐(4H-크로메닐), 치환 또는 비치환 1H-2-벤조피라닐(1H-이소크로메닐), 치환 또는 비치환 이소크로마닐, 치환 또는 비치환 3H-2-벤조피란일(3H-이소크로메닐), 치환 또는 비치환 1-벤조피란-4-온-일(크로모닐), 치환 또는 비치환 4-크로마노닐, 치환 또는 비치환 1-벤조피란-2-온-일(쿠마리닐), 치환 또는 비치환 디하이드로쿠마리닐, 치환 또는 비치환 3-이소크로마노닐, 치환 또는 비치환 2-쿠마라논-일, 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬, 치환 또는 비치환 (C1-C6)헤테로알킬, 치환 또는 비치환 이미다졸릴, 치환 또는 비치환 아자인돌릴 (7-아자인돌릴, 6-아자인돌릴, 5-아자인돌릴 및 4-아자인돌릴 포함) 및 치환 또는 비치환 인돌릴로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 2H-1-벤조피라닐(2H-크로메닐)이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 벤조디하이드로피라닐(크로마닐)이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 4H-1-벤조피라닐(4H-크로메닐)이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 1H-2-벤조피라닐(1H-이소크로메닐)이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 이소크로마닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 3H-2-벤조피라닐(3H-이소크로메닐)이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 1-벤조피란-4-온-일(크로모닐)이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 4-크로마노닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 1-벤조피란-2-온-일(쿠마리닐)이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 디하이드로쿠마리닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 3-이소크로마노닐이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 2-쿠마라논-일이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 (C1-C6)알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환된 (C1-C6)헤테로알킬이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환된 이미다졸릴이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 7-아자인돌릴, 6-아자인돌릴, 5-아자인돌릴 및 4-아자인돌릴을 포함하는 치환 또는 비치환 아자인돌릴이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 또는 비치환 인돌릴이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 모노사이클릭 6원 아릴 또는 비치환 모노사이클릭 6원 아릴이 아니다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 치환 페닐 또는 비치환 페닐이 아니다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서 Z는 -NO2, -N3, 할로겐, -NH2, 하이드록실, -OR11 및 -C(=O)R11로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 치환된 페닐이 아니며, 여기서 R11은 수소, 치환 알킬 또는 비치환 알키닐이다.
화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서, A는 메틸렌기이고 n은 1이다. 화학식 I에 따른 화학식을 갖는 화합물의 일부 구현예에서, A는 메틸렌기이고 n은 2이다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 바와 같은 용어 "지방족"은 포화 및 불포화, 비방향족, 직쇄(즉, 비분지형), 분지형, 비고리형 및 고리형(즉, 탄소고리형) 탄화수소를 모두 포함하며, 이들은 하나 이상의 작용기로 임의로 치환된다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, "지방족"은 본 명세서에서 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐 및 사이클로알키닐 모이어티를 포함하는 것으로 의도되지만 이에 제한되지 않는다. 따라서, 본 명세서에서 사용되는 용어 "알킬"은 직쇄, 분지형 및 사이클릭 알킬기를 포함한다. 유사한 관례가 "알케닐", "알키닐" 등과 같은 다른 일반적인 용어에 적용된다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 "알킬", "알케닐", "알키닐" 등의 용어는 치환된 기 및 비치환된 기를 모두 포함한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 사용된 "지방족"은 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 지방족 기(고리형, 비고리형, 치환, 비치환, 분지형 또는 비분지형)를 나타내는 데 사용된다(C1-20 지방족). 특정 구현예에서, 지방족 기는 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다(C1-10 지방족). 특정 구현예에서, 지방족 기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다(C1-6 지방족). 특정 구현예에서, 지방족 기는 1 내지 5개의 탄소 원자를 갖는다(C1-5 지방족). 특정 구현예에서, 지방족 기는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다(C1-4 지방족). 특정 구현예에서, 지방족 기는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는다(C1-3 지방족). 특정 구현예에서, 지방족 기는 1 내지 2개의 탄소 원자를 갖는다(C1-2 지방족). 지방족 기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 지방족 기는 포화 또는 불포화, 비분지형 또는 분지형 알킬, 바람직하게는 (C1-C20)알킬, 보다 바람직하게는 (C1-C10)알킬, 보다 더 바람직하게는 (C1-C6)알킬이다.
본 명세서 및 전체 설명에 걸쳐 사용된 바와 같은 용어 "헤테로지방족"은 탄소 원자 사이에 하나 이상의 헤테로원자(예를 들어, 산소, 황, 질소, 인 또는 규소 원자)로 임의 치환되는, 포화 및 불포화, 비방향족, 직쇄(즉, 비분지형), 분지형, 비고리형, 고리형(즉, 헤테로사이클릭) 또는 폴리사이클릭 탄화수소를 모두 포함하는 본 명세서에 정의된 지방족 모이어티를 지칭한다. 특정 구현예에서, 헤테로지방족 모이어티는 하나 이상의 수소 원자를 하나 이상의 치환기로 독립적으로 대체함으로써 치환된다. 당업자가 이해하는 바와 같이, "헤테로지방족"은 본 명세서에서 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알케닐 및 헤테로사이클로알키닐 모이어티를 포함하는 것으로 의도되지만 이에 제한되지 않는다. 따라서, "헤테로지방족"이라는 용어는 "헤테로알킬", "헤테로알케닐", "헤테로알키닐" 등의 용어를 포함한다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어 "헤테로알킬", "헤테로알케닐", "헤테로알키닐" 등은 치환된 기 및 비치환된 기를 모두 포함한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 사용된 "헤테로지방족"은 1 내지 20개의 탄소 원자 및 1 내지 6개의 헤테로원자를 갖는 헤테로지방족 기(고리형, 비고리형, 치환, 비치환, 분지형 또는 비분지형)를 나타내는 데 사용된다(C1-20 헤테로지방족). 특정 구현예에서, 헤테로지방족 기는 1 내지 10개의 탄소 원자 및 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유한다(C1-10 헤테로지방족). 특정 구현예에서, 헤테로지방족 기는 1 내지 6개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유한다(C1-6 헤테로지방족). 특정 구현예에서, 헤테로지방족 기는 1 내지 5개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유한다(C1-5 헤테로지방족). 특정 구현예에서, 헤테로지방족 기는 1 내지 4개의 탄소 원자 및 1 내지 2개의 헤테로원자를 함유한다(C1-4 헤테로지방족). 특정 구현예에서, 헤테로지방족 기는 1 내지 2개의 탄소 원자 및 1개의 헤테로원자를 함유한다(C1-2 헤테로지방족). 헤테로지방족 기 치환기는 안정한 모이어티의 형성을 초래하는 본 명세서에 기술된 임의의 치환기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 지방족 기는 포화 또는 불포화, 비분지형 또는 분지형 알킬, 바람직하게는 (C1-C20)헤테로알킬, 보다 바람직하게는 (C1-C10)헤테로알킬, 보다 더 바람직하게는 (C1-C6)헤테로알킬이다.
"L": 링커
본 개시내용은 본 명세서에 기재된 바와 같이 변형된 브렌툭시맙이 약물 모이어티에 연결된 항체 약물 접합체를 제공한다. 본 개시내용에 따르면, 브렌툭시맙은 링커에 의한 공유 부착을 통해 약물 모이어티에 연결될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "링커"는 브렌툭시맙, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 기능적 등가물과 같은 항체를 다른 부분, 예컨대 약물 부분에 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티이다. 이와 관련하여, 본 명세서에 기술된 "ADC 식" : Ab-(L-(D)x)y를 다시 언급한다. 따라서 약물 모이어티 D는 링커 L을 통해 브렌툭시맙에 연결될 수 있다. L은 브렌툭시맙 Ab를 약물 모이어티 D에 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티이다. 바람직하게는, 링커 L은 공유 결합(들)을 통해 브렌툭시맙 Ab를 약물 모이어티 D에 부착시킨다. 링커 시약은 약물 모이어티 D와 브렌툭시맙 Ab를 연결하여 항체 약물 접합체를 형성하는 데 사용할 수 있는 이작용성 또는 다작용성 모이어티이다. 항체 약물 접합체는 약물 모이어티 D 및 항체 Ab에 결합하기 위한 반응성 작용기를 갖는 링커를 사용하여 제조될 수 있다. 용어" 링커 시약", " 가교결합제 시약", "가교결합제 시약으로부터 유도된 링커" 및 "링커"는 본 명세서 전반에 걸쳐 혼용될 수 있다.
링커는 효소 절단, 산-유도 절단, 광-유도 절단 및 디설파이드 결합 절단과 같은 절단(절단가능한 링커)에 민감할 수 있다. 효소 절단은 바람직하게는 화합물 또는 항체가 활성으로 유지되는 조건에서 프로테아제-유도 절단, 펩티다아제-유도 절단, 에스테라아제-유도 절단, 글리코시다아제-유도 절단, 포스파타아제-유도 절단 및 설파타아제-유도 절단을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 대안적으로, 링커는 절단에 대해 실질적으로 저항성일 수 있다(예를 들어, 안정한 링커 또는 비-절단가능한 링커). 일부 양태에서, 링커는 프로하전된(procharged) 링커, 친수성 링커, PEG 기반 링커 또는 디카르복실산 기반 링커일 수 있다. 따라서, 본 명세서에 개시된 항체 약물 접합체 중 어느 하나의 일부 구현예에서 링커(L)는 절단가능한 링커, 절단불가능한 링커, 친수성 링커, PEG 기반 링커, 프로하전된 링커 및 디카르복실산 기반 링커로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, L은 절단가능한 링커이다. 일부 구현예에서, L은 비-절단가능한 링커이다. 일부 구현예에서, L은 효소 절단에 민감한 링커이다. 일부 구현예에서, L은 산-불안정 링커, 광-불안정 링커, 펩티다아제 절단가능 링커, 프로테아제 절단가능 링커, 에스테라아제 절단가능 링커, 글리코시다아제 절단가능 링커, 포스파타아제 절단가능 링커, 설파타아제 절단가능 링커, 디설파이드 결합 환원성 링커, 친수성 링커, 프로하전된 링커, PEG 기반 링커 또는 디카르복실산 기반 링커이다. 바람직하게는 펩티다아제 절단가능 링커이다. 다른 바람직한 링커는 프로테아제에 의해 절단가능하다.
비-절단가능한 링커는 안정한 공유 결합 방식으로 약물을 항체에 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티이며 절단가능한 링커에 대해 위에 나열된 범주에 속하지 않는다. 따라서 비-절단가능한 링커는 산 유도 절단, 펩티다아제 유도 절단, 프로테아제 유도 절단, 에스테라아제 유도 절단 및 디설파이드 결합 절단에 대해 실질적으로 저항성이 있다. 또한, 비-절단가능한 이란 약물 또는 항체가 활성을 잃지 않는 조건에서 산, 광불안정 절단제, 펩티다아제, 프로테아제, 에스테라아제 또는 디설파이드 결합을 절단하는 화학적 또는 생리학적 화합물에 의해 유도된 절단을 견디는 링커 또는 링커에 인접한 화학 결합의 능력을 말한다.
산에 불안정한 링커는 산성 pH에서 절단가능한 링커이다. 예를 들어, 엔도좀 및 리소좀과 같은 특정 세포내 구획은 산성 pH(pH 4 내지 5)를 가지며 산에 불안정한 링커를 절단하기에 적합한 조건을 제공한다.
일부 링커는 펩티다아제에 의해 절단될 수 있으며, 즉 펩티다아제 절단가능한 링커이다. 이와 관련하여 특정 펩티드는 세포 내부 또는 외부에서 쉽게 절단된다. 예를 들어 문헌[Trout et al., 79 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 626-629 (1982)] 및 문헌[Umemoto et al. 43 Int. J. Cancer, 677-684 (1989)]을 참조한다. 펩티드는 α-아미노산과 펩티드 결합으로 구성되며 화학적으로 하나의 아미노산의 카르복실레이트와 두 번째 아미노산의 아미노기 사이의 아미드 결합이다.
일부 링커는 에스테라아제, 즉 에스테라아제 절단가능한 링커에 의해 절단될 수 있다. 이와 관련하여 특정 에스테르는 세포 내부 또는 외부에 존재하는 에스테라아제에 의해 절단될 수 있다. 에스테르는 카르복실산과 알코올의 축합에 의해 형성된다. 단순 에스테르는 지방족 알코올과 같은 단순 알코올과 작은 고리형 및 작은 방향족 알코올로 생산되는 에스테르이다.
프로하전된 링커는 항체 약물 접합체에 통합된 후에도 전하를 유지하는 하전된 가교 시약에서 유래된다. 프로하전된 링커의 예는 US 2009/0274713호에서 확인할 수 있다.
링커는 바람직하게는 프로테아제에 의해, 보다 바람직하게는 카텝신 B와 같은 카텝신에 의해 절단될 수 있다. 링커는 카텝신 B와 같은 카텝신에 의해 절단될 수 있는 발린-시트룰린 모이어티를 포함할 수 있다. 링커는 하이드록실아민 기를 포함할 수 있고, 비천연 아미노산은 3-포르밀티로신과 같은 방향족 고리에 하이드록실 기의 오르토 포르밀기를 포함하고, 링커의 하이드록실아민 기는 접합 후 비천연 아미노산의 포르밀기와 옥심을 형성한다. 링커는 절단 부위를 포함할 수 있다. "절단 부위"는 프로테아제 또는 펩티다아제에 의해 인식되고 상기 프로테아제 또는 펩티다아제에 의해 가수분해되는 아미노산의 서열이다. 바람직하게는, 절단 부위는 발린 시트룰린 모이어티이다.
일 구현예에서, 본 발명의 ADC의 링커는 하기 화학식을 갖는다: -Aa-Xx-Ww-Yy, 여기서: -A-는 스트레처 단위이고; a는 0 또는 1이고; 여기서 -X-는 제2 스페이서 단위이고; x는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고; 각각의 -W-는 독립적으로 아미노산 단위이고; w는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고; -Y-는 제1 스페이서 단위이고; y는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수, 바람직하게는 0, 1 또는 2이다.
스트레처 단위(-A-)는 존재하는 경우 리간드 단위를, 즉 본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙의 비천연 아미노산을 아미노산 단위(-W-)에 연결할 수 있다. 이와 관련하여 비천연 아미노산은 스트레처의 작용기와 결합을 형성할 수 있는 작용기를 가지고 있다. 천연적으로 또는 화학적 조작을 통해 비천연 아미노산에 존재할 수 있는 유용한 작용기는, 설프하이드릴(-SH), 아미노, 아지도, 알키닐, 하이드록실, 카르복시, 탄수화물의 아노머 하이드록실기, 포르밀 및 카르복실기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일 양태에서, 비천연 아미노산 작용기는 설프하이드릴 및 아미노이다. 바람직하게는, 비천연 아미노산의 작용기는 포르밀이다. 설프하이드릴기는 리간드의 분자내 디설파이드 결합의 환원에 의해 생성될 수 있다. 대안적으로, 설프하이드릴기는 2-이미노티올란(트라우트 시약) 또는 다른 설프하이드릴 생성 시약을 사용하여 비천연 아미노산의 리신 모이어티의 아미노기의 반응에 의해 생성될 수 있다.
스트레처의 반응성 기는 비천연 아미노산에 존재할 수 있는 변형된 탄수화물(-CHO) 기에 반응하는 반응 부위를 포함할 수 있다. 예를 들어, 탄수화물은 과요오드산나트륨과 같은 시약을 사용하여 약하게 산화될 수 있거나 비천연 포르밀티로신 아미노산은 TTL을 사용하여 리간드에 결찰될 수 있으며, 생성된 (-CHO) 단위는 하이드라지드, 옥심, 피라졸론, 티오피라졸론, 1차 또는 2차 아민, 하이드라진, 티오세미카르바존, 하이드라진 카르복실레이트 및 아릴하이드라지드와 같은 작용기, 예를 들어 문헌[Kaneko, T. et al. (1991) Bioconjugate Chem 2:133-41]에 기재된 것을 포함하는 스트레처와 축합될 수 있다. 본 구현예의 비천연 아미노산에 커플링된 후의 대표적인 스트레처 단위는 구조 VIa, VIb 및 VIc의 대괄호 안에 묘사되며, 여기서 -W-, -Y-, -D, w 및 y는 상기 정의된 바와 같고 L은 본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙의 비천연 아미노산이다.
여기서 R17은 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택된다.
스트레처 단위는 또한 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다:
여기서 G는 -Cl, -Br, -I, -O-메실 및 -O-토실로부터 선택되고;
J는 -Cl, -Br, -I, -F, -OH, -O-N-숙신이미드, -O(4-니트로페닐), -O-펜타플루오로페닐, -O-테트라플루오로페닐 및 -O-C(O)-OR18로부터 선택되고; R18은 -C1-C8 알킬 또는 -아릴이고,
R17은 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택된다. 물결선은 아미노산 단위 W(존재하는 경우), 스페이서 단위 W(아미노산이 없고 스페이서 단위가 있는 경우) 또는 약물 모이어티(아미노산 단위 또는 스페이서 단위가 없는 경우)에 대한 공유 결합을 나타낸다.
스트레처 단위는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 1 에 나타낸 바와 같은 구조를 포함하거나 이로 이루어질 수 있다:
여기서 R은 제2 스페이서 단위 X, 아미노산 단위 W, 제1 스페이서 단위 W 또는 약물 모이어티에 대한 공유 결합을 나타낼 수 있다.
본 명세서에 기술된 바와 같은 링커에서, 스트레처 단위는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 6 또는 7 에 나타낸 바와 같은 구조를 포함하거나 이로 이루어질 수 있다:
여기서 Z는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; z는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고;
X는 바람직하게는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되는, 본 명세서에 정의된 임의의 제2 스페이서 단위; 또는 PEGi와 같은 폴리에틸렌 글리콜 기반 링커이며, i는 2 내지 12 범위의 정수, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12, 바람직하게는 2로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; x는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고;
Y는 본 명세서에 정의된 임의의 제1 스페이서 단위이고; y는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고;
W는 본 명세서에 정의된 임의의 아미노산 단위이고; w는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고;
D는 약물 모이어티이고,
바람직하게는 구조 6 또는 7의 하이드록실아민이 본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙의 비천연 아미노산에 접합되어 커플링 후에 옥심을 형성한다.
아미노산 단위(-W-)는 존재할 때 스페이서 단위가 있으면 스트레처 단위를 스페이서 단위에 연결하고, 스페이서 단위가 없으면 스트레처 단위를 약물 모이어티에 연결하고 리간드 단위를 스트레처 단위 및 스페이서 단위가 없는 경우 약물 모이어티에 연결한다.
Ww-는 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 펜타펩티드, 헥사펩티드, 헵타펩티드, 옥타펩티드, 노나펩티드, 데카펩티드, 운데카펩티드 또는 도데카펩티드 단위이다. 각각의 -W- 단위는 독립적으로 아래 대괄호 안에 표시된 화학식을 가지며, w는 0 내지 12 범위의 정수이다:
여기서 R19는 수소, 메틸, 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, 벤질, p-하이드록시벤질, -CH2OH, -CH(OH)CH3, -CH2CH2SCH3, -CH2CONH2, -CH2COOH, -CH2CH2CONH2, -CH2CH2COOH, -(CH2)3NHC(=NH)NH2, -(CH2)3NH2, -(CH2)3NHCOCH3, -(CH2)3NHCHO, -(CH2)4NHC(=NH)NH2, -(CH2)4NH2, -(CH2)4NHCOCH3, -(CH2)4NHCHO, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4NHCONH2, -CH2CH2CH(OH)CH2NH2, 2-피리딜메틸-, 3-피리딜메틸-, 4-피리딜메틸-, 페닐, 사이클로헥실,
이다.
아미노산 단위는 종양 관련 프로테아제를 포함하는 하나 이상의 효소에 의해 효소적으로 절단되어 약물 모이어티(-D)를 유리시킬 수 있으며, 이는 일 구현예에서 약물(D)을 제공하기 위해 방출 시 생체내에서 양성자화된다. 예시적인 Ww 단위는 화학식 (VII) 내지 (IX)로 나타내어진다:
여기서 R20 및 R21은 하기와 같고:
여기서 R20, R21 및 R22는 하기와 같고:
여기서 R20, R21, R22 및 R23은 하기와 같다:
추가의 적합한 링커는 문헌[Salomon et al., Mol. Pharmaceutics 2019, 16, 12, 4817-4825]를 참조한다.
예시적인 아미노산 단위는 R20이 벤질이고 R21이 -(CH2)4NH2이고; R20이 이소프로필이고 R21이 -(CH2)4NH2이고; R20이 이소프로필이고 R21이 -(CH2)3NHCONH2인 화학식 (VII)의 단위를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또 다른 예시적인 아미노산 단위는 R20이 벤질이고, R21이 벤질이고, R22가 -(CH2)4NH2인 화학식 (VIII)의 단위이다.
유용한 -Ww- 단위는 특정 효소, 예를 들어 종양 관련 프로테아제에 의한 효소 절단에 대한 선택성에서 설계되고 최적화될 수 있다. 일 구현예에서, -Ww- 단위는 그의 절단이 카텝신 B, C 및 D, 또는 플라스민 프로테아제("종양 관련 프로테아제")에 의해 촉매화되는 것이다.
일 구현예에서, -Ww-는 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드 또는 펜타펩티드이다.
R19, R20, R21, R22 또는 R23이 수소가 아닌 경우, R19, R20, R21, R22 또는 R23이 부착된 탄소 원자는 키랄이다.
R19, R20, R21, R22 또는 R23이 부착된 각 탄소 원자는 독립적으로 (S) 또는 (R) 배위를 갖는다.
아미노산 단위의 한 양태에서, 아미노산 단위는 발린-시트룰린이다. 또 다른 양태에서, 아미노산 단위는 페닐알라닌-리신(즉, fk)이다. 아미노산 단위의 또 다른 양태에서, 아미노산 단위는 N-메틸발린시트룰린이다. 또 다른 양태에서, 아미노산 단위는 5-아미노발레르산, 호모 페닐알라닌 리신, 테트라이소퀴놀린카르복실레이트 리신, 사이클로헥실알라닌 리신, 이소네페코트산 리신, 베타-알라닌 리신, 글리신 세린 발린 글루타민 및 이소네페코트산이다.
특정 구현예에서, 아미노산 단위는 천연 아미노산을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 아미노산 단위는 비천연 아미노산을 포함할 수 있다.
존재하는 경우 첫 번째 스페이서 단위(-Y-)는 아미노산 단위가 존재할 때 아미노산 단위를 약물 모이어티에 연결할 수 있다. 대안적으로, 제1 스페이서 단위는 아미노산 단위가 없을 때 스트레처 단위를 약물 모이어티에 연결할 수 있다. 첫 번째 스페이서 단위는 또한 아미노산 단위와 스트레처 단위가 둘 모두 없을 때 약물 모이어티를 리간드 단위에 연결할 수 있다. 두 번째 스페이서 단위(-X-)는 존재하는 경우 스트레처 단위를 아미노산 단위에 연결할 수 있다. 대안적으로, 제2 스페이서 단위는 아미노산 단위가 존재하지 않는 경우에 스트레처 단위를 제1 스페이서 단위에 연결할 수 있다. 대안적으로, 제1 스페이서 단위 및 아미노산 단위가 존재하지 않는 경우, 제2 스페이서 단위는 또한 스트레처 단위를 약물 모이어티에 연결할 수 있다. 두 스페이서 단위는 동일하거나 동일하지 않을 수 있다. "스페이서 단위"에 대한 개시내용은 일반적으로 제1 및 제2 스페이서 단위 둘 모두에 적용된다. 상기 제1 및 제2 스페이서 단위는 동일할 수 있다. 제1 및 제2 스페이서 단위는 상이할 수 있으며, 각각은 하기 스페이서 단위의 예 중에서 독립적으로 선택된다.
스페이서 단위는 두 가지 일반적인 유형이 있다: 자가-희생(self-immolative) 및 비자가-희생. 비자가-희생 스페이서 단위는 약물-링커-리간드 접합체 또는 약물-링커 화합물로부터 아미노산 단위의, 특히 효소적, 절단 후 스페이서 단위의 일부 또는 전부가 약물 모이어티에 결합된 상태로 남아 있는 것이다. 비자가-희생 스페이서 단위의 예는 (글리신-글리신) 스페이서 단위 및 글리신 스페이서 단위(둘 다 반응식 1에 도시됨)(아래)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 글리신-글리신 스페이서 단위 또는 글리신 스페이서 단위를 함유하는 예시 화합물이 종양-세포 관련 프로테아제, 암세포-관련 프로테아제 또는 림프구-관련 프로테아제를 통해 효소적 절단될 때, 글리신-글리신-약물 모이어티 또는 글리신-약물 모이어티가 L-Aa-Ww-로부터 절단된다. 일 구현예에서, 표적 세포 내에서 독립적인 가수분해 반응이 일어나 글리신-약물 모이어티 결합을 절단하고 약물을 유리시킨다.
반응식 1
또 다른 구현예에서, 스페이서 단위는 페닐렌 부분이 Qm으로 치환된 p-아미노벤질 알코올(PAB) 단위(반응식 2 및 3 참조)이며, 여기서 Q는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0 내지 4 범위의 정수이다.
일 구현예에서, 비자가-희생 스페이서 단위는 -Gly-Gly-이다. 또 다른 구현예에서, 비자가-희생 스페이서 단위는 -Gly-이다.
일 구현예에서, 제1 스페이서 단위가 부재(y=0)인 ADC 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이 제공된다. 일 구현예에서, 제2 스페이서 단위가 부재(x=0)인 ADC 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이 제공된다.
대안적으로, 자가-희생 스페이서 단위를 함유하는 예시적인 화합물은 별도의 가수분해 단계 없이 -D를 방출할 수 있다. 이 구현예에서, 스페이서 단위는 PAB 기의 아미노 질소 원자를 통해 -Ww-에 연결되고 카르보네이트, 카바메이트 또는 에테르 기를 통해 -D에 직접 연결되는 PAB 기이다. 임의의 특정 이론 또는 메커니즘에 얽매이지 않고, 반응식 2는 문헌[Toki et al. (2002) J Org. Chem. 67:1866-1872]에 의해 지지되는 카바메이트 또는 카르보네이트 기를 통해 -D에 직접 부착된 PAB 기의 약물 방출의 가능한 메커니즘을 도시한다.
반응식 2
여기서 Q는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0 내지 4 범위의 정수이고; p는 1 내지 약 20 범위이다.
임의의 특정 이론 또는 메커니즘에 얽매이지 않고, 반응식 3은 에테르 또는 아민 연결을 통해 -D에 직접 부착된 PAB 기의 약물 방출의 가능한 메카니즘을 도시한다.
반응식 3
여기서 Q는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0 내지 4 범위의 정수이고; p는 1 내지 약 20 범위이다.
자가-희생 스페이서의 다른 예는 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체(문헌[Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Lett. 9:2237]) 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈과 같은 PAB 기와 전자적으로 유사한 방향족 화합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 치환 및 비치환 4-아미노부티르산 아미드(문헌[Rodrigues et al., Chemistry Biology, 1995, 2, 223]) 및 적절히 치환된 비사이클로[2.2.1] 및 비사이클로[2.2.2] 고리 시스템(문헌[Storm, et al., J. Amer. Chem. Soc., 1972, 94, 5815]) 및 2-아미노페닐프로피온산 아미드(문헌[Amsberry, et al., J. Org. Chem., 1990, 55, 5867])와 같이 아미드 결합 가수분해 시 고리화를 겪는 스페이서를 사용할 수 있다. 글리신의 α-위치에서 치환된 아민 함유 약물의 제거(문헌[Kingsbury, et al., J. Med. Chem., 1984, 27, 1447])도 예시 화합물에서 유용한 자가-희생 스페이서의 예이다.
일 구현예에서, 스페이서 단위는 반응식 4에 도시된 바와 같은 분지형 비스(하이드록시메틸)스티렌(BHMS) 단위이며, 이는 다수의 약물을 통합하고 방출하는 데 사용될 수 있다.
반응식 4
여기서 Q는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0 내지 4 범위의 정수이고; n은 0 또는 1이고; p는 1 내지 약 20의 범위이다.
일 구현예에서, -D 모이어티는 동일하다. 또 다른 구현예에서, -D 모이어티는 상이하다.
일 양태에서, 스페이서 단위는 화학식 (X) 내지 화학식 (XII)로 나타내어진다.
여기서 Q는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0 내지 4 범위의 정수이다.
및
제1 스페이서 단위(-X-)는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있거나, 또는 PEGi와 같은 폴리에틸렌 글리콜 기반 링커이고; 여기서, i는 2 내지 12 범위의 정수, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 2의 정수이고; x는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이다.
제2 스페이서 단위(-Y-)는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있거나, 또는 PEGi와 같은 폴리에틸렌 글리콜 기반 링커이고; 여기서, i는 2 내지 12 범위의 정수, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 2의 정수이고; x는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이다.
링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 1에 나타낸 바와 같은 구조를 갖거나 포함할 수 있다:
여기서 R은 하나 이상의 절단 부위에 의해 1의 하이드록실아민에 임의로 결합되는 하나 이상의 약물 모이어티이고, 바람직하게는 하이드록실아민 1이 비천연 아미노산에 접합된다.
링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 6 또는 7에 도시된 구조를 포함하거나 이로 이루어질 수 있다:
여기서 Z는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; z는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고;
X는 바람직하게는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐; 또는 PEGi와 같은 폴리에틸렌 글리콜 기반 링커로 이루어진 군으로부터 선택되는 본 명세서에 정의된 임의의 제2 스페이서 단위이며, i는 2 내지 12 범위의 정수, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12, 바람직하게는 2로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; x는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고;
Y는 본 명세서에 정의된 임의의 제1 스페이서 단위이고; y는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고;
W는 본 명세서에 정의된 임의의 아미노산 단위이고; w는 독립적으로 0 내지 12 범위의 정수이고;
D는 약물 모이어티이고,
바람직하게는 구조 6 또는 7의 하이드록실아민이 본 발명의 ADC에 포함된 브렌툭시맙의 비천연 아미노산에 접합되어 커플링 후에 옥심을 형성한다.
링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 2 또는 3에 나타낸 구조를 갖거나 포함할 수 있다:
Z는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
D는 하나 이상의 약물 모이어티이고;
Y는 카텝신 B와 같은 카텝신에 대한 절단 부위와 같은 절단 부위이고;
바람직하게는 여기서 구조 2 또는 3의 하이드록실아민은 비천연 아미노산에 접합된다.
링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 4 또는 5에 나타낸 바와 같은 구조를 가질 수 있으며, 여기서 D는 본 명세서에 기재된 바와 같은 약물 모이어티, 바람직하게는 MMAE이다:
"비천연 아미노산에 커플링되기 전"은 본 명세서에 사용된 바와 같이 대응물인 비천연 아미노산과 공유 결합을 형성하기 전의 링커와 같은 화학적 실체를 기술한다. 그러나 이는 서로 공유 결합된 것으로 묘사되지 않은 본 명세서의 링커 또는 약물 모이어티에 대해서도 마찬가지이다. 당업자는 2개의 화학적 실체의 반응의 결과로서 생성된 구조를 쉽게 인식할 수 있다. 본 명세서에서 정의된 바와 같은 구조 1 내지 5의 경우, 대응물은 포르밀기를 포함하는 비천연 아미노산이다. 상기 비천연 아미노산은 3-포르밀티로신일 수 있으며, 상기 구조 1 내지 5 중 어느 하나의 링커의 하이드록실아민 기는 상기 비천연 아미노산의 3-포르밀기와 옥심/하이드록시이민을 형성할 수 있다. 반응 메커니즘은 다음과 같이 제시된다:
이와 관련하여, mAb는 브렌툭시맙에 해당하고 페이로드는 본 명세서에 정의된 바와 같은 링커를 통해 비천연 아미노산, 여기서는 3-포르밀티로신에 결합된 본 명세서에 정의된 바와 같은 약물 모이어티를 지칭한다.
약물 모이어티 D와 브렌툭시맙 Ab 사이에 비-절단가능한 링커를 형성하는 적합한 가교결합 시약은 당업계에 잘 알려져 있으며, 황 원자(예: SMCC)를 포함하거나 황 원자가 없는 비-절단가능한 링커를 형성할 수 있다. 약물 모이어티 D와 브렌툭시맙 Ab 사이에 비-절단가능한 링커를 형성하는 가교 시약은 말레이미도 또는 할로아세틸 기반 모이어티를 포함한다. 본 발명에 따르면, 이러한 비-절단가능한 링커는 말레이미도 또는 할로아세틸 기반 모이어티로부터 유도된다고 한다.
말레이미도 기반 모이어티를 포함하는 가교 시약은 N-숙신이미딜-4-(말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC), 술포숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(술포-SMCC), N-숙신이미딜-4-(말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복시-(6-아미도카프로에이트) - SMCC의 "장쇄" 유사체(LC-SMCC)임 - , κ-말레이미도운데칸산 N-숙신이미딜 에스테르(KMUA), γ-말레이미도부티르산 N-숙신이미딜 에스테르(GMBS), ε-말레이미도카프로산 N-숙신이미딜 에스테르(EMCS), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르(MBS), N-(α-말레이미도아세톡시)-숙신이미드 에스테르(AMSA), 숙신이미딜-6-(β-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트(SMPH), N-숙신이미딜-4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(SMPB), N-(-p-말레이미도페닐)이소시아네이트(PMIP) 및 말레이미드-PEG-NHS(MAL-PEG-NHS라고도 함)와 같은 폴리에틸렌 글리콜 스페이서를 함유하는 말레이미도 기반 가교결합제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 가교 시약은 말레이미도 기반 모이어티에서 유래된 비-절단가능한 링커를 형성한다. 말레이미도 기반 가교 시약의 대표적인 구조는 다음과 같다.
일부 구현예에서, 링커 L은 N-숙신이미딜-4-(말레이미도메틸)사이클로헥산카복실레이트(SMCC), 술포숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트(sulfo-SMCC) 또는 MAL-PEG-NHS로부터 유도된다.
할로아세틸 기반 모이어티를 포함하는 가교 시약에는 N-숙신이미딜 요오도아세테이트(SIA), N-숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(SIAB), N-숙신이미딜 브로모아세테이트(SBA) 및 N-숙신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트(SBAP)가 포함된다. 이러한 가교 시약은 할로아세틸 기반 모이어티에서 유도된 비-절단가능한 링커를 형성한다. 할로아세틸 기반 가교 시약의 대표적인 구조는 다음과 같다.
일부 구현예에서 링커 L은 N-숙신이미딜 요오도아세테이트(SIA) 또는 N-숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(SIAB)로부터 유도된다.
약물 모이어티 D와 브렌툭시맙 Ab 사이에 절단가능한 링커를 형성하는 적합한 가교 시약은 당업계에 잘 알려져 있다. 디설파이드 함유 링커는 생리학적 조건에서 발생할 수 있는 디설파이드 교환을 통해 절단가능한 링커이다. 본 발명에 따르면, 이러한 절단가능한 링커는 디설파이드계 모이어티로부터 유도된다고 한다. 적합한 디설파이드 가교결합제는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP), N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오)펜타노에이트(SPP), N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오)부타노에이트(SPDB) 및 N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오)2-술포-부타노에이트(sulfo-SPDB)를 포함하며, 그 구조는 아래에 표시되어 있다. 이러한 디설파이드 가교 결합 시약은 디설파이드 기반 모이어티에서 파생된 절단가능한 링커를 형성한다.
일부 구현예에서, 링커 L은 N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오)부타노에이트(SPDB)로부터 유도된다.
약물 모이어티 D와 브렌툭시맙 Ab 사이에 하전된 링커를 형성하는 적합한 가교 시약은 프로하전된 가교 시약으로 알려져 있습니다. 일 구현예에서, 링커 L은 CX1-1인 프로하전된 가교 시약으로부터 유도된다. CX1-1의 구조는 다음과 같다:
본 명세서에 개시된 브렌툭시맙 약물 접합체에 적합하게 사용될 수 있는 추가 링커는 말레이미도카프로일(MC), 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도카프로일(MC), 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐(mDPR) 및 4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-1-카르보닐(MCC)이다.
일부 구현예에서 링커는 말레이미도카프로일(MC)이다. 말레이미도카프로일은 다음 구조를 갖는다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, MC 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있고, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
말레이미도카프로일 링커는 예를 들어 하기 구조를 갖는 NHS 에스테르인 가교결합제로부터 유도될 수 있다:
일부 구현예에서 링커는 4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-1-카르보닐(MCC)이다. MCC의 구조는 다음과 같습니다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, MCC 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 바와 같이 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있다.
일부 구현예에서 링커는 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도카프로일(MC)이다. 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도카프로일 링커의 비제한적인 예는 하기에 기재되어 있다.
일부 구현예에서 링커는 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐(mDPR)이다. 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐(mDPR) 링커의 비제한적인 예는 하기에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 브렌툭시맙 약물 접합체 Ab-(L-(D)x)y 중 어느 하나의 링커(L)는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP), N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)펜타노에이트(SPP), N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)부타노에이트(SPDB), N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오)2-술포-부타노에이트(sulfo-SPDB), N-숙신이미딜 요오도아세테이트(SIA), N-숙신이미딜(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트(SIAB), 말레이미드-PEG-NHS, 말레이미도카프로일(MC), 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도카프로일(MC), 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐(mDPR), 4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-1-카르보닐(MCC), N-숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC), N-술포숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(sulfo-SMCC) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 17-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-5,8,11,14-테트라옥소-4,7,10,13-테트라아자헵타-데칸-1-오에이트(CX-1)로 이루어진 군으로부터 선택된 가교 시약으로부터 유도된다. 바람직한 구현예에서, 링커는 N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)부타노에이트(SPDB), 말레이미도카프로일(MC), 자가-절단 펩드를 갖는 말레이미도카프로일(MC), 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐(mDPR), 4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-1-카르보닐(MCC), N-숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC))로 이루어진 군으로부터 선택된 가교 시약으로부터 유도된다. 따라서, 일부 구현예에서 링커는 N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)부타노에이트(SPDB)로부터 유도된다.
일부 구현예에서 링커는 말레이미도카프로일(MC)로부터 유도된다. 일부 구현예에서 링커는 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도카프로일(MC)로부터 유도된다. 일부 구현예에서 링커는 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐(mDPR)로부터 유도된다. 일부 구현예에서 링커는 4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-1-카르보닐(MCC)로부터 유도된다. 일부 구현예에서 링커는 N-숙신이미딜 4-(말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트(SMCC)로부터 유도된다.
본 명세서에서 상기 기재된 바와 같이, 링커는 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도카프로일(MC)일 수 있다. 일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 링커는 말레이미도카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐(MC-VC-PAB), 말레이미도카프로일-발린-알라닌-p-아미노벤질옥시카르보닐(MC-VA-PAB), 말레이미도카프로일-리신-페닐알라닌-p-아미노벤질옥시카르보닐(MC-KF-PAB), 말레이미도카프로일-발린-리신-p-아미노벤질옥시카르보닐(MC-VK-PAB)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도카프로일(MC) 링커는 예를 들어 미국 특허 출원 공보 US 2006/0074008호, 문헌[G.M. Dubowchik et al., Bioconjuate Chem. 2002, 13, 855-869] 또는 문헌[S.O. Doronina et al., Nature Biotechnology, vol. 21, 778-784 (2003)]에 개시되어 있으며, 상기 문헌의 모든 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 링커는 말레이미도카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐(MC-VC-PAB)이다. MC-VC-PAB 링커의 구조는 다음과 같다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, MC-VC-PAB 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다. 이 링커 및 파라-아미노벤질옥시카르보닐 기를 함유하는 자가-절단 펩티드를 갖는 하기 말레이미도카프로일 링커는 예를 들어 물결선으로 표시된 위치에 파라-니트로페녹시 기가 부착된 가교 시약으로부터 유도될 수 있다(예를 들어, 문헌[G.M. Dubowchik et al., Bioconjuate Chem. 2002, 13, 855-869], 또는 문헌[S.O. Doronina et al., Nature Biotechnology, vol. 21, 778-784 (2003)] 참조). 따라서 MC-VC-PAB 링커의 경우 가교 시약은 다음과 같은 구조를 가질 수 있다:
예를 들어, 이러한 가교 시약을 약물 모이어티와 반응시키는 경우 파라-니트로페녹시 기는 약물 모이어티로 대체될 수 있다.
임의의 이론에 구애됨이 없이, MC-VC-PAB 링커 및 하기에 기재된 파라-아미노벤질옥시카르보닐기를 함유하는 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도카프로일 링커에서, 프로테아제에 의한 절단은 펩티드 부분과 파라-아미노벤질옥시카르보닐 모이어티 사이에서 발생할 수 있다(예를 들어 문헌[G.M. Dubowchik et al., Bioconjuate Chem. 2002, 13, 855-869] 또는 문헌[S.O. Doronina et al., Nature Biotechnology, vol. 21, 778-784 (2003)] 참조). 파라-아미노벤질옥시카르보닐 모이어티는 자가-희생 기로서 작용할 수 있다. 이와 관련하여, "자가-희생 기"라는 용어는 일반적으로 안정한 3자의 분자로 2개의 이격된 화학적 잔기를 함께 공유 결합할 수 있는 이작용성 화학적 잔기를 지칭한다. 이는 제1 화학 모이어티에 대한 결합이 절단되면 제2 화학 모이어티에서 자발적으로 분리된다.
일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 링커는 말레이미도카프로일-발린-알라닌-p-아미노벤질옥시카르보닐(MC-VA-PAB)이다. MC-VA-PAB 링커의 구조는 다음과 같다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, MC-VC-PAB 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 링커는 말레이미도카프로일-리신-페닐알라닌-p-아미노벤질옥시카르보닐(MC-KF-PAB)이다. MC-KF-PAB 링커의 구조는 다음과 같다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, MC-KF-PAB 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 링커는 말레이미도카프로일-발린-리신-p-아미노벤질옥시카르보닐(MC-VK-PAB)이다. MC-VK-PAB 링커의 구조는 다음과 같다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, MC-VK-PAB 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
상기 본 명세서에 기재된 바와 같이, 링커는 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐(mDPR)일 수 있다. 이러한 링커는 하기 구조를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐 모이어티(mDPR)를 포함한다:
일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐(mDPR) 링커는 말레이미도디아미노프로피오닐-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐(mDPR-VC-PAB), 말레이미도디아미노프로피오닐-발린-알라닌-p-아미노벤질옥시카르보닐(mDPR-VA-PAB), 말레이미도디아미노프로피오닐-리신-페닐알라닌-p-아미노벤질옥시카르보닐(mDPR-KF-PAB), 말레이미도디아미노프로피오닐-발린-리신-p-아미노벤질옥시카르보닐(mDPR-VK-PAB)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 자가-절단 펩티드를 갖는 말레이미도디아미노프로피오닐(mDPR) 링커는 예를 들어 미국 특허 출원 공보 US 2013/0309256에 개시되어 있으며, 그의 전체 개시 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 링커는 말레이미도디아미노프로피오닐-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐(mDPR-VC-PAB)이다. mDPR-VC-PAB 링커의 구조는 다음과 같다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, mDPR-VC-PAB 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다. 임의의 이론에 구애됨이 없이, mDPR-VC-PAB 링커 및 파라-아미노벤질옥시카르보닐기를 함유하는 자가-절단 펩티드를 갖는 하기 말레이미도디아미노프로피오닐 링커에서, 프로테아제에 의한 절단은 펩티드 부분과 파라-아미노벤질옥시카르보닐 모이어티 사이에서 발생할 수 있다. 파라-아미노벤질옥시카르보닐 모이어티는 자가-희생 기로서 작용할 수 있다.
일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 링커는 말레이미도디아미노프로피오닐-발린-알라닌-p-아미노벤질옥시카르보닐(mDPR-VA-PAB)이다. mDPR-VA-PAB 링커의 구조는 다음과 같다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, mDPR-VA-PAB 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 링커는 말레이미도디아미노프로피오닐-리신-페닐알라닌-p-아미노벤질옥시카르보닐(mDPR-KF-PAB)이다. mDPR-KF-PAB 링커의 구조는 다음과 같다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, mDPR-KF-PAB 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
일부 구현예에서 자가-절단 펩티드를 갖는 링커는 말레이미도디아미노프로피오닐-발린-리신-p-아미노벤질옥시카르보닐(mDPR-VK-PAB)이다. mDPR-VK-PAB 링커의 구조는 다음과 같다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, mDPR-VK-PAB 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
일부 구현예에서 본 명세서에 개시된 브렌툭시맙 약물 접합체의 링커는 글루쿠론산 변형을 포함한다. 글루쿠론산 변형을 갖는 링커에 대해, 예를 들어 문헌[S.C. Jeffrey et al., Bioconjugate Chem. 2006, 17, 831-840, R.P. Lyon et al., Nature Biotechnology, vol. 33, 733-736 (2015)], 미국 특허 출원 공보 US 2013/0309256, 및 국제 특허 출원 공보 WO 2015/057699를 참조하며, 이들의 전체 개시 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 글루쿠론산 변형을 포함하는 상기 링커는 말레이미도카프로일-글루쿠로나이드(MC-G) 또는 말레이미도디아미노프로피오닐-글루쿠로나이드(mDPR-G)일 수 있다.
상기 말레이미도카프로일-글루쿠로나이드(MC-G) 링커는 하기 구조를 갖는다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, MC-G 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
상기 말레이미도디아미노프로피오닐-글루쿠로나이드(mDPR-G) 링커는 다음 구조를 갖는다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, mDPR-G 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
일부 구현예에서 글루쿠론산 변형을 포함하는 상기 링커는 폴리에틸렌 글리콜 변형을 추가로 포함한다. 글루쿠론산 변형 및 폴리에틸렌 글리콜 변형을 갖는 링커에 대해, 문헌[R.P. Lyon et al., Nature Biotechnology, vol. 33, 733-736 (2015)] 및 국제 특허 출원 공보 WO 2015/057699를 참조하며, 이들의 전체 개시 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 글루쿠론산 변형을 포함하고 폴리에틸렌 글리콜 변형을 추가로 포함하는 상기 링커는 말레이미도카프로일-글루쿠로나이드-폴리에틸렌 글리콜(MC-G-PEG), 말레이미도디아미노프로피오닐-글루쿠로나이드-폴리에틸렌 글리콜(mDPR-G-PEG), 또는 말레이미도프로피오닐-글루쿠로나이드-폴리에틸렌 글리콜(MP-G-PEG)일 수 있다.
상기 말레이미도카프로일-글루쿠로나이드-폴리에틸렌 글리콜(MC-G-PEG) 링커는 다음 구조를 갖는다:
여기서 n은 6 내지 72, 8 내지 72, 12 내지 72, 10 내지 72, 12 내지 36 또는 38, 6 내지 24 또는 8 내지 24 범위의 정수이고; 여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, MC-G-PEG 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
상기 말레이미도디아미노프로피오닐-글루쿠로나이드-폴리에틸렌 글리콜(mDPR-G-PEG) 링커는 다음 구조를 갖는다:
여기서 n은 6 내지 72, 8 내지 72, 10 내지 72, 12 내지 72, 12 내지 36 또는 38, 6 내지 24 또는 8 내지 24 범위의 정수이고; 여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, mDPR-G-PEG 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
상기 말레이미도프로피오닐-글루쿠로나이드-폴리에틸렌 글리콜(MP-G-PEG) 링커는 다음 구조를 갖는다:
여기서 n은 6 내지 72, 8 내지 72, 10 내지 72, 12 내지 72, 12 내지 36 또는 38, 6 내지 24 또는 8 내지 24 범위의 정수이고; 여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, MP-G-PEG 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 공유 부착될 수 있으며, 약물 모이어티(D)는 상기 구조식에서 물결선으로 표시된 링커의 카르보닐 탄소 원자에 공유 부착될 수 있다.
임의의 이론에 구애됨이 없이, 상기 MC-G, mDPR-G, MC-G-PEG, mDPR-G-PEG 또는 MP-G-PEG 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체로부터 약물의 방출은 글루쿠로니다아제에 의한 글루쿠론산 모이어티의 절단에 의해 개시될 수 있다(예를 들어 문헌[S.C. Jeffrey et al., Bioconjugate Chem. 2006, 17, 831-840]을 참조).
일부 구현예에서 링커는 백금 착물 링커이다. 백금 착물 링커에 대해 예를 들어 문헌[N.J. Sijbrandi et al, Cancer Res. 2016, 77(2), 257-267], 문헌[D. Walboer et al., ChemMedChem 2015, 10, 797-803] 또는 미국 특허 출원 US　2014/377174를 참조하며, 이들의 전체 개시 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 상기 백금 착물 링커는 하기 구조를 갖는 에틸렌디아민 백금(II) 링커이다:
여기서 R은 독립적으로 할로겐 원자, 예를 들어 Cl, Br, F 또는 I, 바람직하게는 Cl을 나타낸다. 비제한적인 예로서, 백금 착물 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 하나의 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab) 및 하나의 약물 모이어티(D)가 백금 복합체에 결합될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 백금 착물 링커, 특히 에틸렌디아민 백금(II) 링커, 및 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)는 스페이서에 의해 분리될 수 있다. 적합한 스페이서는 길이, 조성 또는 절단성에서 다른 특성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 하기 화학식을 갖는 1-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)-3-(피페리딘-4-일메틸)우레아이다:
여기서 스페이서의 NH2 기는 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 결합되고, 피페리딘 기의 질소 원자는 상기 백금 착물 링커에 결합된다. 다음 구조는 그러한 스페이서의 사용에 대한 바람직한 구현예를 보여준다:
여기서 스페이서의 NH2 기는 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 결합되고, R은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D) 또는 약물 모이어티(D)에, 바람직하게는 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)에 대한 부착을 나타낸다. 바람직하게는, NH2 기는 약물 모이어티(D)에 공유 결합되고 상기 백금 착물 링커는 R로 표시된 바와 같이 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)에 결합된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 하기 구조를 갖는 4-옥소-4-((피페리딘-4-일메틸)아미노)부타노일이다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 스페이서의 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타내고, 피페리딘 기의 질소 원자는 상기 백금 착물 링커에 결합된다. 다음 구조는 그러한 스페이서의 사용에 대한 바람직한 구현예를 보여준다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 카르보닐 탄소 원자의 공유 부착을 나타내고, R은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)에 대한 부착을 나타낸다. 바람직하게는, 카르보닐 탄소는 물결선으로 표시된 바와 같이 약물 모이어티(D)에 공유 결합되고, 백금 착물 링커는 R로 표시된 바와 같이 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)에 결합된다.
일부 구현예에서 링커는 디설파이드 브릿지 대체 링커이다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "디설파이드 브릿지 대체 링커"는 브렌툭시맙(Ab)의 2개의 시스테인으로부터 생성되는 디설파이드 브릿지를 대체할 수 있는 링커를 나타낸다. 따라서, 이러한 디설파이드 브릿지 대체 링커는 약물 모이어티(D)에 결합되는 경우, 브렌툭시맙(Ab)의 2개의 시스테인 사이 공간에 약물 모이어티(D)가 도입된다. 디설파이드 브릿지 대체 링커에 대해 예를 들어 문헌[M.E.B. Smith et al., J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 1960-1965] 및 국제 특허 출원 WO 2013/173393를 참조하며, 이들의 전체 개시 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 상기 디설파이드 브릿지 대체 링커는 하기 구조를 갖는 말레이미드 링커일 수 있다:
여기서 X는 할로겐 원자, 예를 들어 Cl, Br, F 또는 I, 바람직하게는 Cl 또는 Br, 더 바람직하게는 Br을 나타내고, 물결선은 약물 모이어티(D)에 대한 질소 원자의 공유 부착을 나타낸다. 이러한 링커에 대해서는 문헌[M.E.B. Smith et al., J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 1960-1965]을 참조한다. 바람직한 구현예는 하기 구조를 갖는 디브로모말레이미드이다:
여기서 물결선은 말레이미드 모이어티에 대한 약물 모이어티(D)의 공유 결합을 나타낸다. 하나 또는 둘 다의 브롬 원자는 티올 기와 반응할 수 있으며, 이는 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)의 디설파이드 브릿지로부터 환원에 의해 얻어지며, 예를 들어 하기 반응식에 나타낸 바와 같다:
여기서 AA1, AA2, AA3 및 AA4는 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)의 펩티드 사슬을 포함한다. AA1, AA2, AA3 및 AA4는 단일 펩티드 사슬의 일부이거나 단일 펩티드 사슬의 일부가 아닐 수 있다. 바람직한 구현예에서, 약물 모이어티는 R로 표시된 바와 같이 말레이미드 모이어티에 공유 결합된다. 디브로모말레이미드와 반응하기 전에 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)의 디설파이드 브릿지는 환원제로 환원되어 유리 티올 기를 얻는다. 적합한 환원제는 예를 들어 디티오트레이톨(DTT), 디티온산나트륨, 티오황산나트륨, 아황산나트륨 또는 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP)을 포함하며, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP)이 바람직하다. 환원 단계 후에 디브로모말레이미드가 브렌툭시맙(Ab)에 첨가되고, 상기 디브로모말레이미드는 유리 티올기와 반응하여 상기 펩티드 사슬 또는 사슬들의 시스테인의 두 티올기 사이에 브릿지를 형성한다.
일부 구현예에서 디설파이드 브릿지 대체 링커는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 단편을 포함한다:
여기서 Ab는 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편의 펩티드 사슬에 대한 부착을 나타내고, 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 약물 모이어티(D)에 대한 부착을 나타낸다. 이러한 링커에 대해서는 WO 2013/173393을 참조한다. 따라서, 일부 구현예에서 디설파이드 브릿지 대체 링커는 단편 을 포함한다. 일부 구현예에서 디설파이드 브릿지 대체 링커는 단편 을 포함한다. 일부 구현예에서 디설파이드 브릿지 대체 링커는 단편 을 포함한다. 일부 구현예에서 디설파이드 브릿지 대체 링커는 단편 을 포함한다. 일부 구현예에서 디설파이드 브릿지 대체 링커는 단편 을 포함한다. 일부 구현예에서 디설파이드 브릿지 대체 링커는 단편 을 포함한다. 일부 구현예에서 디설파이드 브릿지 대체 링커는 단편 을 포함한다. 물결선으로 표시된 약물 모이어티(D)의 부착과 관련하여, 이들 구현예에서 약물은 선택적 스페이서를 통해 단편에 부착될 수 있다. 그러한 스페이서는 예를 들어 에틸렌 글리콜 올리고머, 예를 들어 로부터 유도될 수 있다.
일부 구현예에서 링커는 글리코링커이다. 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "글리코링커"는 일반적으로 단당류 또는 올리고당류 단편을 포함하는 링커를 나타낸다. 글리코링커는 예를 들어 문헌[F.S. Ekholm et al., ChemMedChem 2016, 11, 2501-2505], 미국 특허 출원 US 2016/0820797, 미국 특허 출원 US 2016/0257764, 국제 특허 출원 WO 2016/053107, 미국 특허 출원 US 2016/0106860 및 국제 특허 출원 WO 2016/001485에 기재되어 있으며, 이들의 전체 개시 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
따라서, 본 명세서에 사용된 글리코링커는 단편 -G-를 포함할 수 있으며, 여기서 G는 단당류, 또는 2 내지 20개, 바람직하게는 2 내지 12개, 보다 바람직하게는 2 내지 10개, 더욱 더 바람직하게는 2 내지 8개, 및 가장 바람직하게는 2 내지 6개의 당 모이어티를 포함하는 선형 또는 분지형 올리고당류이다. 단편 -G-에 존재할 수 있는 당 모이어티는 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어 글루코스(Glc), 갈락토스(Gal), 만노스(Man), 푸코스(Fuc), N-아세틸글루코사민(GlcNAc), N-아세틸갈락토사민(GalNAc), N-아세틸-뉴라민산(NeuNAc) 또는 시알산, 자일로스(Xyl)를 포함한다.
일부 구현예에서 글리코링커는 단편 을 포함할 수 있으며, 여기서 물결선은 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 및 브렌툭시맙 약물 접합체의 약물 모이어티(D)에 대한 부착을 나타낸다. 예를 들어, 일부 구현예에서 단편 을 포함하는 갈락토스로부터의 글리코링커가 사용될 수 있다. 일부 구현예에서 단편은 임의의 스페이서를 통해 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 및/또는 약물 모이어티(D)에 부착될 수 있다. 예를 들어, 단당류 단편 및 스페이서를 포함하는 글리콜링커는 다음 구조를 가질 수 있다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 및 브렌툭시맙 약물 접합체의 약물 모이어티(D)에 대한 부착을 나타낸다. 예를 들어, 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)은 카르보닐 탄소 원자에서 글리코링커에 부착될 수 있고 약물 모이어티(D)는 단당류 단편에 부착될 수 있으며, 따라서 다음 구조를 생성한다:
여기서 Ab는 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편이고 D는 약물 모이어티이다. 일부 구현예에서, 단당류 단편이 갈락토스인 경우, 글리코링커는 다음 구조를 가질 수 있다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 및 브렌툭시맙 약물 접합체의 약물 모이어티(D)에 대한 부착을 나타낸다. 예를 들어, 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)은 카르보닐 탄소 원자에서 글리코링커에 부착될 수 있고 약물 모이어티(D)는 단당류 단편에 부착될 수 있으며, 따라서 다음 구조를 생성한다:
여기서 Ab는 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)이고 D는 약물 모이어티이다. 이들 구현예의 글리코링커는 예를 들어 문헌[F.S. Ekholm et al., ChemMedChem 2016, 11, 2501-2505]에 기재된다.
일부 구현예에서 글리코링커는 구조 를 가지며, 여기서 물결선은 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)에 대한 부착을 나타내고, Su(A)x는 x개의 작용기 A를 포함하는 당 유도체 Su이고, 여기서 A는 티올기 또는 이의 전구체, 할로겐, 술포닐옥시기, 할로겐화 아세트아미도기, 머캅토아세트아미도기 및 술폰화 하이드록시아세트아미도기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, x는 1, 2, 3 또는 4이고, b는 0 또는 1이다. 당 유도체 Su(A)x는 당 또는 당 유도체 Su, 예를 들어 아미노 당 또는 달리 유도체화된 당으로부터 유도된다. 당 및 당 유도체의 예는 갈락토스(Gal), 만노스(Man), 글루코스(Glc), N-아세틸뉴라민산 또는 시알산(Sial) 및 푸코스(Fuc)를 포함한다. 당 유도체 Su(A)x는 바람직하게는 갈락토스(Gal), 만노스(Man), N-아틸글루코사민(GlcNAc), 푸코스(Fuc) 및 N-아세틸뉴라민산(시알산 Sia 또는 NeuNAc)에서 유도되며, 바람직하게는 GlcNAc, Glc, Gal 및 GalNAc 로 이루어진 군으로부터 선택된다. 보다 바람직하게는 Su(A)x는 Gal 또는 GalNac에서 유도되고, 가장 바람직하게는 Su(A)x는 GalNAc에서 유도된다. 브렌툭시맙 약물 접합체의 약물 모이어티(D)는 작용기 A와의 반응을 통해 글리코링커에 부착될 수 있다. 약물 모이어티는 선택적 스페이서, 예를 들어 말레이미드 모이어티를 포함하는 스페이서를 통해 글리코링커에 부착될 수 있다. 이들 구현예의 글리코링커는 예를 들어 미국 특허 출원 US 2016/0280797에 기재되어 있다.
일부 구현예에서 글리코링커는 구조 를 가지며, 여기서 물결선은 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab)에 대한 부착을 나타내고, Su(A)x는 x개의 작용기 A를 포함하는 당 유도체 Su이고, 여기서 A는 티올기 또는 이의 전구체, 할로겐, 술포닐옥시기, 할로겐화 아세트아미도기, 머캅토아세트아미도기 및 술폰화 하이드록시아세트아미도기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, x는 1, 2, 3 또는 4이고, b는 0 또는 1이고, d는 0 또는 1이고, e는 0 또는 1이고, G는 단당류, 또는 2 내지 20개의 당 모이어티를 포함하는 선형 또는 분지형 올리고당이다. 당 유도체 Su(A)x는 당 또는 당 유도체 Su, 예를 들어 아미노 당 또는 달리 유도체화된 당으로부터 유도된다. 당 및 당 유도체의 예는 갈락토스(Gal), 만노스(Man), 글루코스(Glc), N-아세틸뉴라민산 또는 시알산(Sial) 및 푸코스(Fuc)를 포함한다. 당 유도체 Su(A)x는 바람직하게는 갈락토스(Gal), 만노스(Man), N-아틸글루코사민(GlcNAc), 푸코스(Fuc) 및 N-아세틸뉴라민산(시알산 Sia 또는 NeuNAc)에서 유도되며, 바람직하게는 GlcNAc, Glc, Gal 및 GalNAc 로 이루어진 군으로부터 선택된다. 보다 바람직하게는 Su(A)x는 Gal 또는 GalNac에서 유도되고, 가장 바람직하게는 Su(A)x는 GalNAc에서 유도된다. G는 단당류, 또는 2 내지 20개, 바람직하게는 2 내지 12개, 더 바람직하게는 2 내지 10개, 훨씬 더 바람직하게는 2 내지 8개, 가장 바람직하게는 2 내지 6개의 당 모이어티를 포함하는 선형 또는 분지형 올리고당을 나타낸다. 단편 G에 존재할 수 있는 당 모이어티는 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어 글루코스(Glc), 갈락토스(Gal), 만노스(Man), 푸코스(Fuc), N-아세틸글루코사민(GlcNAc), N-아세틸갈락토스아민(GalNAc), N-아세틸뉴라민산(NeuNAc) 또는 시알산, 자일로스(Xyl)를 포함한다. 브렌툭시맙 약물 접합체의 약물 모이어티(D)는 작용기 A와의 반응을 통해 글리코링커에 부착될 수 있다. 약물 모이어티는 선택적 스페이서, 예를 들어 말레이미드 모이어티를 포함하는 스페이서를 통해 글리코링커에 부착될 수 있다. 이들 구현예의 글리코링커는 예를 들어 미국 특허 출원 US 2016/0280797에 기재되어 있다.
일부 구현예에서 링커는 메틸렌 알콕시 카바메이트 링커이다. 메틸렌 알콕시 카바메이트 링커에 대해서는 예를 들어 문헌[R.V. Kolakowski et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2016, 55, 7948-7951] 또는 국제 특허 출원 WO 2015/095755를 참조하며, 이들의 전체 개시 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 상기 메틸렌 알콕시 카바메이트 링커는 다음 구조를 갖는다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 및 브렌툭시맙 약물 접합체의 약물 모이어티(D)에 대한 부착을 나타내고, R 기는 C1-C4 알킬, 및 로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, R은 에틸과 같은 C1-C4 알킬 또는 이다. 더욱 바람직하게는, R은 이다. 일부 구현예에서, 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 및 약물 모이어티(D)는 다음 구조에 나타낸 바와 같이 메틸렌 알콕시 카바메이트 링커에 부착된다:
여기서 Ab는 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편이고 D는 약물 모이어티이다. 이들 구현예에서 R 기는 C1-C4 알킬, 및 로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, R은 에틸과 같은 C1-C4 알킬 또는 이다. 더욱 바람직하게는, R은 이다. 일부 구현예에서, 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 및 약물 모이어티(D)는 다음 구조에 나타낸 바와 같이 메틸렌 알콕시 카바메이트 링커에 부착된다. 이러한 스페이서는 예를 들어 하기 구조를 가질 수 있다:
여기서 물결선은 메틸렌 알콕시 카바메이트 링커에 대한 부착을 나타낸다. 그 결과 다음과 같은 구조가 된다:
여기서 물결선은 브렌툭시맙 약물 접합체의 다른 부분, 특히 브렌툭시맙 또는 항원 결합 단편(Ab) 또는 약물 모이어티(D), 바람직하게는 약물 모이어티(D)에 대한 링커의 공유 부착을 나타낸다. 비제한적인 예로서, 이러한 메틸렌 알콕시 카바메이트 링커를 포함하는 브렌툭시맙 약물 접합체에서 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편(Ab)은 말레이미드 모이어티에 부착될 수 있고, 약물 모이어티(D)는 물결선으로 표시된 위치에 부착될 수 있다. 이들 구현예에서 R 기는 C1-C4 알킬, 및 로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, R은 에틸과 같은 C1-C4 알킬 또는 이다. 보다 바람직하게는 R은 이다.
일부 구현예에서, 링커(L)는 -(숙신이미드-3-일-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-, -(숙신이미드-3-일-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-, -(숙신이미드-3-일-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-, -(숙신이미드-3-일-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-, -(숙신이미드-3-일-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-, 및 -(숙신이미드-3-일-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-, 바람직하게는 -(숙신이미드-3-일-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-로부터 선택된다.
"D": 약물 모이어티
본 개시내용은 약물 모이어티를 포함하는 항체 약물 접합체를 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "약물 모이어티" 또는 "페이로드"는 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 항체 또는 항원 결합 단편에 접합된 화학적 또는 생화학적 모이어티를 지칭한다. 이와 관련하여, 본 명세서에 Ab-(L-(D)x)y 으로 기재된 "ADC 식"을 다시 언급한다. 브렌툭시맙은 본 명세서에 기재되거나 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 여러 동일하거나 상이한 약물 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서 약물 모이어티는 항암제이다. 따라서, 약물은 캄프토테신, 토포이소머라제 억제제, 메이탄시노이드, 칼리케아마이신, 듀오카르마이신, 튜불리신, 아마톡신, 돌라스타틴 및 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 피롤로벤조디아제핀 이량체, 인돌리노-벤조디아제핀 이량체, 방사성동위원소, 치료 단백질 및 펩티드(또는 이의 단편), 핵산, PROTAC, 키나아제 억제제, MEK 억제제, KSP 억제제, 및 이의 유사체 또는 전구약물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 약물 모이어티는 MMAE이다.
본 명세서에서 사용된 "캄프토테신"(CPT)은 토포이소머라제 독성물질에 관한 것이다. 1966년 M. E. Wall과 M. C. Wani가 항암제에 대한 천연물의 체계적인 스크리닝에서 발견했다. 이는 한의학에서 암 치료제로 사용되는 중국 고유의 나무인 캄프토테카 아쿠미나타(Camptotheca acuminata) (Camptotheca, 해피 트리)의 껍질과 줄기에서 분리되었다. 캄프토테신이라는 용어는 또한 CPT 유사체를 포함할 수 있다. 토포테칸, 이리노테칸, 벨로테칸 및 트라스투주맙 데룩스테칸의 4가지 CPT 유사체가 승인되어 오늘날 암 화학요법에 사용된다. 캄프토테신은 다음 구조를 갖는다:
다음과 같은 CPT 유사체도 CPT라는 용어로 구상된다:
일부 구현예에서 약물 모이어티는 다음 구조를 갖는 것들을 포함하는 메이탄시노이드 약물 모이어티이다:
여기서 물결선은 항체 약물 접합체의 링커에 대한 메이탄시노이드의 황 원자의 공유 부착을 나타낸다. R은 각 경우에 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이다. 아미드 기를 황 원자에 부착시키는 알킬렌 사슬은 메타닐, 에타닐 또는 프로파닐 수 있으며, 즉 m은 1, 2 또는 3이다. (미국 특허 번호 633,410, 미국 특허 번호 5,208,020, 문헌[Chari et al. (1992) Cancer Res. 52; 127-131], 문헌[Lui et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. 93 :8618-8623]).
메이탄시노이드 약물 모이어티의 모든 입체이성질체는 본 명세서에 개시된 항체 약물 접합체, 즉 메이탄시노이드의 키랄 탄소에서 R 및 S 배위의 임의의 조합에 대해 고려된다. 일부 구현예에서 메이탄시노이드 약물 모이어티는 다음의 입체화학을 갖는다:
일부 구현예에서 메이탄시노이드 약물 모이어티는 N 2'-데아세틸-N 2'-(3-메르캅토-1-옥소프로필)-메이탄신(DM1으로도 알려짐)이다. DM1은 다음 구조식으로 표시된다:
일부 구현예에서 메이탄시노이드 약물 모이어티는 N 2'-데아세틸-N2'-(4-머캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신(DM3으로도 알려짐)이다. DM3는 다음 구조식으로 표시된다.
일부 구현예에서 메이탄시노이드 약물 모이어티는 N 2'-데아세틸-N 2'-(4-메틸-4-메르캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신(DM4로도 알려짐)이다. DM4는 다음 구조식으로 표시된다.
바람직하게는, 메이탄시노이드 약물 모이어티를 포함하는 본 명세서에 개시된 항체 약물 접합체에서 메이탄시노이드는 N 2'-데아세틸-N 2'-(3-메르캅토-1-옥소프로필)-메이탄신(DM1) 또는 N 2'-데아세틸-N 2'-(4-메틸-4-메르캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신(DM4)이다.
약물 모이어티는 칼리케아미신일 수 있다. 본 명세서에 사용된 "칼리케아미신"은 마이크로모노스포라 에키노스포라(Micromonospora echinospora) 박테리아로부터 유래된 엔다인계(enediyne) 항종양 항생제 부류에 관한 것이며, 칼리케아미신 γ1 이 가장 주목할 만하다. 그것은 원래 1980년대 중반에 텍사스 커빌에 위치한 백악질 토양 또는 "칼리체 구덩이(caliche pits)"에서 분리되었다. 이는 모든 세포에 매우 독성을 가진다. 따라서, 약물 모이어티는 다음 구조로 예시된 칼리케아미신일 수 있다:
약물 모이어티는 듀오카르마이신일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 듀오카르마이신은 소분자, 합성, DNA 마이너 그루브 결합 알킬화제를 기술한다. 듀오카르마이신은 고형 종양을 표적화하는 데 적합할 수 있다. 그들은 DNA의 마이너 그루브에 결합하고 N3 위치에서 핵염기 아데닌을 알킬화한다. DNA의 비가역적 알킬화는 핵산 구조를 파괴하여, 결국 종양 세포 사멸로 이어진다. 듀오카르마이신의 예는 CC-1065, 다우노루비신, 미토마이신 C, 블레오마이신, 사이클로시티딘, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 메토트렉세이트 및 탁솔 및 이들의 유도체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
약물 모이어티는 시스플라틴 또는 이의 유도체와 같은 백금계 항종양제일 수 있다.
약물 모이어티는 튜불리신일 수 있다. 튜불리신은 항미소관, 항유사분열, 세포자멸 유도제, 항암, 항혈관신생 및 항증식 기능을 가진다. 튜불리신은 9개 구성원(A-I)을 포함하는 세포독성 펩티드이다. 바람직하게는, 튜불리신은 튜불리신 A이다. 튜불리신 A는 항암제로서 잠재적인 적용을 갖는다. 그것은 G2/M 단계에서 세포를 체포한다. 튜불리신 A는 다음의 구조를 가진다:
약물 모이어티는 아마톡신일 수 있다. 아마톡신은 독 버섯의 여러 속, 특히 데스 캡(Amanita phalloides) 및 광대버섯속(Amanita)의 여러 다른 구성원 뿐만 아니라 일부 종버섯속(Conocybe), 에밀종버섯속(Galerina) 및 갓버섯속(Lepiota)에서 확인된 적어도 8가지의 독성 화합물의 하위그룹의 총칭이다. 아마톡신은 소량으로도 치명적이다. 화합물은 보존된 거대이환 모티프(프롤린 및 트립토판 유래 잔기에 고유한 고리를 세는 경우 전체 오환 구조)에 배열된 8개의 아미노산 잔기의 구조와 유사한 구조를 가지고 있다. 모든 아마톡신은 35개의 아미노산 프로단백질로 합성되는 올리고펩티드이며, 여기에서 마지막 8개의 아미노산은 프롤릴 올리고펩티다아제에 의해 절단된다. 아마톡신의 도식적인 아미노산 서열은 Ile-Trp-Gly-Ile-Gly-Cys-Asn-Pro 이며 Trp와 Cys 사이에 설폭사이드(S=O) 모이어티를 통한 가교결합과 분자 변이체의 하이드록실화를 가진다. 현재 10개의 알려진 아마톡신이 있으며 이는 약물 모이어티가 될 수 있다.
약물 모이어티는 돌라스타틴(Dolastatin) 10 또는 돌라스타틴 15와 같은 돌라스타틴일 수 있다. 둘 모두 인도양 바다 토끼 돌라벨라 아우리쿨라리아(Dollabella auricularia)로부터 분리된 해양 천연물이다. 이 강력한 항종양제는 팔라우의 해양 시아노박테리움 심플로카(Symploca) sp. VP642에서도 분리된다. 작은 선형 펩티드 분자인 돌라스타틴 10 및 15는 유방암 및 간암, 고형 종양 및 일부 백혈병에 대한 효능을 나타내는 항암제로 간주된다. 전임상 연구는 실험적인 항종양 및 튜불린 조립 시스템에서 효능을 나타냈다. 돌라스타틴은 유사분열 억제제이다. 이들은 튜불린 형성을 방해하여 미세소관 조립을 억제함으로써 유사분열에 의한 세포 분열을 방해하고 여러 악성 세포 유형에서 아폽토시스 및 Bcl-2 인산화를 유도한다. 돌로스타틴 10 (N,N-디메틸-L-발릴-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]-1-피롤리디닐}-5-메틸-1-옥소-4-헵타닐]-N-메틸-L-발린아미드)는 하기 구조를 갖는다:
돌라스타틴 15 ((2S)-1-[(2S)-2-벤질-3-메톡시-5-옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일]-3-메틸-1-옥소-2-부타닐 N,N-디메틸-L-발릴-L-발릴-N-메틸-L-발릴-L-프롤릴-L-프롤)는 하기 구조를 갖는다:
본 명세서에 개시된 항체 약물 접합체의 일부 구현예에서 약물 모이어티는 아우리스타틴이다. 바람직하게는, 아우리스타틴은 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF) 또는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)이다.
본 명세서에 기재된 항체 약물 접합체의 일부 구현예에서 약물 모이어티는 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF 로도 알려짐)이다. MMAF는 다음 구조식으로 나타낸다:
모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF)는 별표(*)로 표시된 질소 원자를 통해 링커에 결합될 수 있다.
일부 구현예에서 아우리스타틴 약물 모이어티는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE 로도 알려짐)이다. MMAE는 다음 구조식으로 나타낸다:
모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)는 별표(*)로 표시된 질소 원자를 통해 링커에 결합될 수 있다.
이들 분자는 빈크리스틴이 튜불린(빈카/펩티드 영역으로 알려진 위치)에 결합하는 것을 비경쟁적으로 억제하지만 RZX/MAY 영역에 결합한 것으로 나타났다.
약물 모이어티는 하기 구조를 갖는 화합물과 같은 피롤로벤조디아제핀 이량체일 수 있다:
약물 모이어티는 하기 구조를 갖는 화합물과 같은 인돌리노벤조디아제핀 이량체일 수 있다:
약물 모이어티는 방사성동위원소일 수 있다. 본 명세서에 기술된 전형적인 방사성동위원소는 작은 방사선원, 일반적으로 요오드-125, 요오드-131, 이리듐-192 또는 팔라듐-103과 같은 감마 또는 베타 방사체에 관한 것일 수 있다.
약물 모이어티는 치료용 단백질 또는 펩티드 또는 이의 단편일 수 있다. 전형적인 예는 인터류킨, 리신, 디프테리아 독소, 슈도모나스 외독소 PE38과 같은 사이토카인이다.
약물 모이어티는 키나아제 억제제, 바람직하게는 전-종양형성 기능과 관련된 키나아제의 억제제일 수 있다. 예시적인 키나아제 억제제는 이마티닙(imatinib), 닐로티닙(nilotinib), 다사티닙(dasatinib), 보수티닙(bosutinib), 포나티닙(ponatinib), 게피티닙(gefitinib), 에를로티닙(erlotinib), 아파티닙(afatinib), 오시머티닙(osimertinib), 라파티닙(lapatinib), 네라티닙(neratinib), 소라페닙(sorafenib), 수니티닙(sunitinib), 파조파닙(pazopanib), 악시티닙(axitinib), 렌바티닙(lenvatinib), 카보자티닙(cabozatinib), 반데타닙(vandetanib), 레고라페닙(regorafenib), 베무라페닙(vemurafenib), 다브라페닙(dabrafenib), 트라메티닙(trametinib), 코비메티닙(cobimetinib), 크리조티닙(crizotinib), 세르티닙(certinib), 알렉티닙(alectinib), 브리가티닙(brigatinib), 롤라티닙(lorlatinib), 이브루티닙(ibrutinib), 아칼리브루티닙(acalibrutinib), 미도스타우린(midostaurin), 룩솔리티닙(ruxolitinib), 이델라리십(idelalisib), 코판리십(copanlisib), 팔보시클립(palbociclib), 리보시클립(ribociclib) 또는 아베마시클립(abemaciclib)을 포함한다.
약물 모이어티는 MEK 억제제일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 MEK 억제제는 미토겐 활성화 단백질 키나아제 키나아제 효소 MEK1 및/또는 MEK2를 억제하는 화학 물질 또는 약물을 설명한다. 그들은 일부 암에서 종종 과활성화되는 MAPK/ERK 경로에 영향을 미치는 데 사용될 수 있다. 따라서 MEK 억제제는 일부 암, 특히 BRAF 변이 흑색종 및 KRAS/BRAF 변이 결장직장암의 치료 가능성이 있다. 일반적인 MEK 억제제는 트라메티닙(GSK1120212), 코비메티닙 또는 XL518, 비니메티닙(MEK162), 셀루메티닙, PD-325901, CI-1040, PD035901 또는 TAK-733을 포함한다.
약물 모이어티는 KSP(키네신 스핀들 단백질) 억제제일 수 있다. KSP 억제제의 예는 이스피네십(SB-715992), SB743921, AZ 3146, GSK923295, BAY 1217389, MPI-0479605 및 ARQ 621을 포함한다.
약물 모이어티는 핵산일 수 있다. 핵산은 약물 모이어티로 사용될 때 DNA/RNA 분자, 예를 들어 면역 조절 기능(바람직하게는 선천성 면역)을 갖는 DNA/RNA 분자와 관련될 수 있다. 면역 조절은 면역 반응의 증가 또는 감소, 바람직하게는 감소를 의미할 수 있다. DNA/RNA 분자는 또한 siRNA일 수 있으며, 바람직하게는 표적 단백질 발현을 (특이적으로) 조절/조작(예: 감소)하도록 설계되었다(예시적인 표적은 근위축증 단백질 키나아제(DMPK)일 수 있음).
약물 모이어티는 PROTAC일 수 있다. 단백질 분해 표적 키메라(PROTAC)는 2개의 활성 도메인 및 원하지 않는 특정 단백질을 제거할 수 있는 링커를 포함하는 이종이작용성 소분자이다. PROTAC은 기존의 효소 억제제로 작용하기보다는 선택적 세포내 단백질 분해를 유도하여 작용하는 것이 바람직하다. PROTAC은 일반적으로 2개의 공유 결합 단백질 결합 분자로 구성된다: 하나는 E3 유비퀴틴 리가아제와 결합할 수 있고 다른 하나는 분해를 위한 표적 단백질에 결합한다. 표적 단백질에 대한 E3 리가아제의 동원은 유비퀴틴화를 야기하고, 이어서 프로테아좀에 의한 표적 단백질의 분해를 야기한다. 예시적인 PROTACS는 문헌[Sakamoto et al. (2001), PNAS,　98(15):8554-9]에 기술되며, 이는 본 명세서에 참조로 포함된다.
ADC의 제조 방법
본 발명의 ADC를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 특히, 폴리펩티드의 C-말단에서 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열의 도입 또는 부가 및 튜불린 티로신 리가아제의 존재 하에 폴리펩티드(여기서는 브렌툭시맙)를 비천연 아미노산과 접촉시키는 것 및 상기 결찰된 브렌툭시맙에 대한 약물 모이어티를 포함하는 링커의 접합은 이미 WO 2016/066749, WO　2017/186855, 문헌[Schumacher et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 13787-13791] 에 기재되어 있으며, 이들의 전체 개시 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다. 실시예의 물질 및 방법은 또한 본 발명의 ADC를 생성하거나 얻는 방법에 대한 지침을 포함한다.
따라서, 본 발명은 또한 하기를 포함하는 본 명세서에 기재된 ADC의 제조 방법에 관한 것이다:
(a) 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 경쇄와 중쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 도입하거나 부가하는 단계;
(b) 단계 (a)에서 얻은 브렌툭시맙을, 튜불린 티로신 리가아제가 상기 브렌툭시맙을 비천연 아미노산과 결찰시키기에 적합한 조건 하에 튜블린 티로신 리가아제 및 비천연 아미노산의 존재 하에서 접촉시키는 단계; 및
(c) 단계 (b)에서 얻어진 결찰된 브렌툭시맙에 약물 모이어티를 포함하는 선택적으로 절단가능한 링커를 접합시키는 단계.
브렌툭시맙의 C-말단에서 TTL에 대한 인식 서열의 도입 또는 추가는 본 명세서에 기술된 바와 같이 수행된다. 예를 들어, 이러한 인식 서열은 유전 공학 또는 합성, 화학적 단백질 합성 또는 합성 생물학을 통해 도입되거나 추가될 수 있다.
본 발명은 또한 본 명세서에 정의된 ADC의 제조 방법에 의해 얻을 수 있는 ADC에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 명세서에 정의된 ADC의 제조 방법에 의해 수득된 ADC에 관한 것이다.
약학적 조성물
본 발명은 또한 본 발명의 ADC를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, "약학적으로 허용되는"이라는 용어는 동물, 특히 인간에 사용하기 위해 규제 기관 또는 기타 일반적으로 인정된 약전에 의해 승인된 것을 의미한다. 약학적으로 허용되는 담체는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 물, 5% 덱스트로스 또는 생리학적으로 완충된 식염수와 같은 수용액, 또는 글리콜, 글리세롤, 올리브 오일과 같은 오일 또는 인간 또는 인간이 아닌 대상체에게 투여하기에 적합한 주사 가능한 유기 에스테르와 같은 기타 용매 또는 비히클을 포함한다. 특정한 예시적인 약학적으로 허용되는 담체는 (생분해성) 리포솜; 생분해성 폴리머 폴리(D,L-락트산-코-글리콜산(PLGA)으로 만들어진 마이크로스피어, 알부민 마이크로스피어, 합성 폴리머(가용성), 나노섬유, 단백질-DNA 복합체, 단백질 접합체, 적혈구 또는 비로좀을 포함한다. 다양한 담체 기반 투여 형태는 고체 지질 나노입자(SLN), 중합체 나노입자, 세라믹 나노입자, 하이드로겔 나노입자, 공중합 펩티드 나노입자, 나노결정 및 나노현탁액, 나노결정, 나노튜브 및 나노와이어, 기능화된 나노담체, 나노스피어, 나노캡슐, 리포솜, 지질 에멀젼, 지질 미세소관/마이크로실린더, 지질 미세기포, 리포스피어, 리포폴리플렉스, 역지질 미셀, 덴드리머, 에토좀, 다중복합 초박형 캡슐, 아쿠아좀, 파마코좀, 콜로이드좀, 니오좀, 디스콤, 프로니오좀, 마이크로스피어, 마이크로에멀젼 및 고분자 미셀을 포함한다. 다른 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 부형제는 특히 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey(1991)]에 기술되어 있다. 또한, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st edition; Lippincott Williams & Wilkins, 2005]을 참조한다.
일부 구현예에서, 약학적으로 허용되는 담체 또는 조성물은 멸균이다. 약학적 조성물은 활성제 이외에, 예를 들어 증량제, 충전제, 가용화제, 안정제, 삼투압제, 흡수 증진제 등으로 작용하는 생리학적으로 허용되는 화합물을 포함할 수 있다. 생리학적으로 허용되는 화합물은 예를 들어 글루코스, 수크로스, 락토스와 같은 탄수화물; 덱스트란; 만니톨과 같은 폴리올; 아스코르브산 또는 글루타티온과 같은 항산화제; 방부제; 킬레이트제; 완충제; 또는 기타 안정제 또는 부형제를 포함한다.
약제학적으로 허용되는 담체(들) 및/또는 생리학적으로 허용되는 화합물(들)의 선택은 예를 들어 활성제의 성질, 예를 들어 조성물의 용해도, 상용성(일반적인 사용 상황에서 약학적 조성물의 약학적 효능을 실질적으로 감소시키는 방식으로 상호 작용하지 않고 물질이 조성물에 함께 존재할 수 있음을 의미) 및/또는 투여 경로에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 치료적 유효량의 본 명세서에 기술된 ADC를 포함하고 다양한 형태, 예를 들어 고체, 액체, 기체 또는 동결건조 형태로 구조화될 수 있으며, 특히, 연고, 크림, 경피 패치, 겔, 분말, 정제, 용액, 에어로졸, 과립, 알약, 현탁액, 에멀젼, 캡슐, 시럽, 액체, 엘릭시르, 추출물, 팅크 또는 유체 추출물의 형태 또는 국소 또는 경구 투여에 특히 적합한 형태일 수 있다. 경구, 국소, 경피, 피하, 정맥내, 복강내, 근육내 또는 안구내를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 경로가 본 발명의 폴리펩티드의 투여에 적용가능하다. 그러나, 원하는 경우 임의의 다른 경로가 당업자에 의해 용이하게 선택될 수 있다.
치료 방법에서의 용도
실시예 4 및 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 ADC는 치료, 특히 암 치료에 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 임의로 유효량의 본 발명의 ADC 또는 본 발명의 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 질환 치료 방법에 사용하기 위한 본 발명의 ADC 또는 본 발명의 약학적 조성물에 관한 것이다. 바람직하게는, 질환은 CD30의 과발현과 관련된다. 질환은 CD30의 과발현과 관련된 암일 수 있다. 보다 바람직하게는, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE), 바람직하게는 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL)일 수 있다. 질환은 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)일 수 있다. 질환은 호지킨 림프종(HL)일 수 있다.
본 발명은 또한 질환을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 본 발명의 ADC의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 질환 치료용 약제의 제조를 위한 본 발명의 약학적 조성물의 용도에 관한 것이다. 바람직하게는, 질환은 CD30의 과발현과 관련된다. 질환은 CD30의 과발현과 관련된 암일 수 있다. 보다 바람직하게는, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE), 바람직하게는 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL)일 수 있다. 질환은 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)일 수 있다. 질환은 호지킨 림프종(HL)일 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 ADC의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 질환 치료 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 발명의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 질환 치료 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 질환은 CD30의 과발현과 관련된다. 질환은 CD30의 과발현과 관련된 암일 수 있다. 보다 바람직하게는, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE), 바람직하게는 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL)일 수 있다. 질환은 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)일 수 있다. 질환은 호지킨 림프종(HL)일 수 있다.
어구 "유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용될 때 질환의 발병으로부터 대상체를 보호하거나 질환 증상의 중증도 감소, 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 기간 증가 또는 질환 고통으로 인한 장애 또는 부자유 예방에 의해 입증된 질환 퇴행을 촉진하는 치료제(예를 들어, 본 발명의 ADC)의 양을 의미한다. 질환 퇴행을 촉진하는 치료제의 능력은 임상 시험 동안 인간 대상체에서, 인간에서 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서와 같이 숙련된 의사에게 알려진 다양한 방법을 사용하여 또는 시험관내 분석에서 제제의 활성을 분석하여 평가할 수 있다. 정확한 양은 치료 목적에 따라 달라지며, 공지된 기술을 사용하여 당업자에 의해 확인될 것이다(예를 들어 문헌[Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding] 참조).
또한, 본 발명은 환자에서 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한 본 명세서에 개시된 항체 약물 접합체에 관한 것이다. 용어 "환자"는 본 발명에 따라 인간, 비인간 영장류 또는 다른 동물, 특히 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이 또는 마우스 및 래트와 같은 설치류와 같은 포유동물을 의미한다. 특히 바람직한 구현예에서, 환자는 인간이다. 명시된 경우를 제외하고 "환자" 또는 "대상체"라는 용어는 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용된다. 모든 문법적 형태의 "치료"라는 용어는 치료 또는 예방 치료를 포함한다. "치료적 또는 예방적 치료"란 임상 및/또는 병리학적 증상의 완전한 예방을 목적으로 하는 예방적 치료 또는 임상 및/또는 병리학적 증상의 개선 또는 완화를 목적으로 하는 치료적 치료를 포함한다. 따라서 "치료"라는 용어에는 질환의 개선 또는 예방도 포함된다.
본 발명의 ADC는 치료적으로 효과적인 임의의 용량으로 투여될 수 있다. 상한은 일반적으로 부작용 측면에서 투여하기에 여전히 안전한 용량이다. 전형적으로, 본 발명의 ADC는 0.5 내지 20 mg/kg의 (n번의 유효) 투여량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 ADC는 1 내지 10 mg/kg의 (n번의 유효) 투여량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 ADC는 1 내지 9 mg/kg의 (n번의 유효) 투여량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 ADC는 1.2 내지 9 mg/kg의 (n번의 유효) 투여량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 ADC는 1.8 내지 8 mg/kg의 (n번의 유효) 투여량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 ADC는 2 내지 6 mg/kg의 (n번의 유효) 투여량으로 투여될 수 있다. 예시적인 예로서, 본 발명의 ADC는 20 mg/kg, 18 mg/kg, 16 mg/kg, 14 mg/kg, 12 mg/kg, 10 mg/kg, 9 mg/kg, 8 mg/kg, 7 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg 또는 1 mg/kg의 (n번의 유효) 투여량으로 투여될 수 있다. 유리하거나 필요한 경우 다른 투여량이 가능하다.
본 발명의 ADC는 다른 제제, 특히 항암 약물, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물과 공동 투여될 수 있다. 공동 투여는 순차적 및 동시 투여를 포함한다. 적합한 항암 약물은 예를 들어 본 명세서에 기재된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함한다. 본 발명의 ADC는 사이클로포스파미드, 독소루비신 및 프레드니손(CHP 방식)과 공동 투여될 수 있다. 본 발명의 ADC는 특히 면역조절 약물, 면역관문 억제제, 화학요법제(예를 들어, 사이클로포스파미드, 독소루비신 하이드로클로라이드(하이드록시다우노루비신), 빈크리스틴 설페이트(온코빈) 및 프레드니손(CHOP 방식) 에토포사이드, 빈크리스틴, 클로르메틴), 단백질 억제제와 같은 항암 약물과 공동 투여될 수 있다.
"종양"은 잘못 조절된 세포 증식, 특히 암에 의해 형성된 세포 또는 조직의 그룹을 의미한다. 종양은 구조적 구성 및 정상 조직과의 기능적 조정이 부분적으로 또는 완전히 결여될 수 있으며 일반적으로 양성 또는 악성일 수 있는 별개의 조직 덩어리를 형성한다. 특히, 용어 "종양"은 악성 종양을 지칭한다. 일 구현예에 따르면, 용어 "종양" 또는 "종양 세포"는 비고형 암 및 백혈병 세포와 같은 비고형 암의 세포를 의미하기도 한다. 다른 구현예에 따르면, 각각의 비고형 암 또는 이의 세포는 용어 "종양" 및 "종양 세포"에 포함되지 않는다.
"전이"는 암 세포가 원래 부위에서 신체의 다른 부분으로 퍼지는 것을 의미한다. 전이의 형성은 매우 복잡한 과정이며 일반적으로 원발성 종양에서 암 세포가 분리되어 신체 순환계로 들어가고 신체의 다른 곳에서 정상 조직 내에서 성장하기 위해 정착한다. 종양 세포가 전이될 때 새로운 종양은 이차 또는 전이성 종양이라고 하며 그 세포는 일반적으로 원래 종양의 세포와 닮았다. 이것은 예를 들어 유방암이 폐로 전이되면 이차 종양은 비정상적인 폐세포가 아닌 비정상적인 유방 세포로 구성된다는 것을 의미한다. 그러면 폐에 있는 종양을 폐암이 아니라 전이성 유방암이라고 한다.
본 발명의 예시적인 ADC
다음 표에서 예시적인 ADC의 개요가 개시된다. 이들 예시적인 ADC에서, 비천연 아미노산은 3-포르밀 티로신이고 약물 모이어티(D)는 본 명세서에 정의된 바와 같은 약물 모이어티, 바람직하게는 MMAE이다:
구조 4 및 5는 하기에 반복된다:
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다:
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 11을 갖고;
브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 1을 가짐 -, 및
(b) 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다:
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 중쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 중쇄는 서열 번호 12를 갖고;
브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 2를 가짐 -, 및
(b) 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다:
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 중쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 중쇄는 서열 번호 12를 갖고;
브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 11을 가짐 -;
(b) 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단 및 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단 및 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다:
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 11을 갖고;
브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 1을 가짐 -, 및
(b) 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다:
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 14를 갖고;
브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 1을 가짐 -, 및
(b) 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다:
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 중쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 중쇄는 서열 번호 12를 갖고;
브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 14를 가짐 -;
(b) 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단 및 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단 및 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다:
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 14를 갖고;
브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 1을 가짐 -, 및
(b) 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
서열
본 발명은 특히 하기 서열에 관한 것이다.
브렌툭시맙/cAC10 중쇄 (서열 번호 1):
브렌툭시맙/cAC10 경쇄 (서열 번호 2):
TTL 인식 서열 (서열 번호 3):
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Glu
여기서,
Xaa1 은 임의의 아미노산이며; 예시로서, Xaa1 은 Glu, Asp, Ala, Lys 또는 Pro일 수 있고;
Xaa2 는 임의의 아미노산이며; 예시로서, Xaa2 는 Gly, Ser, Ala, Val 또는 Phe일 수 있고;
Xaa3 은 Glu, Asp 또는 Cys이다.
TTL 인식 서열 (서열 번호 4):
Glu-Gly-Glu-Glu
TTL 인식 서열 (서열 번호 5):
Val-Asp-Ser-Val-Glu-Gly-Glu-Gly-Glu-Glu-Glu-Gly-Glu-Glu
TTL 인식 서열 (서열 번호 6):
Ser-Val-Glu-Gly-Glu-Gly-Glu-Glu-Glu-Gly-Glu-Glu
TTL 인식 서열 (서열 번호 7):
Ser-Ala-Asp-Gly-Glu-Asp-Glu-Gly-Glu-Glu
TTL 인식 서열 (서열 번호 8):
Ser-Val-Glu-Ala-Glu-Ala-Glu-Glu-Gly-Glu-Glu
TTL 인식 서열 (서열 번호 9):
Ser-Tyr-Glu-Asp-Glu-Asp-Glu-Gly-Glu-Glu
TTL 인식 서열 (서열 번호 10):
Ser-Phe-Glu-Glu-Glu-Asn-Glu-Gly-Glu-Glu
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-링커, 및 C-말단에서의 TTL 인식 서열을 포함하는 브렌툭시맙 경쇄 (서열 번호 11):
C-말단에서의 TTL 인식 서열에 융합된 브렌툭시맙 중쇄 (서열 번호 12):
회색 늑대(Canis Lupus)로부터의 TTL (서열 번호 13):
C 말단에서의 TTL 인식 서열을 포함하는 브렌툭시맙 경쇄 (서열 번호 14):
본 발명의 항목
본 발명은 하기 항목에 관한 것이다:
1. (a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 중쇄와 경쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열 및 비천연 아미노산을 포함함 -; 및
(b) 적어도 하나의 약물 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC)로서,
상기 약물 모이어티는 링커를 통해 각각의 비천연 아미노산에 커플링되는, 항체-약물 접합체(ADC).
2. 항목 1에 있어서, 브렌툭시맙의 중쇄는 서열 번호 1을 포함하거나 서열 번호 1과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖고/갖거나, 브렌툭시맙의 경쇄는 서열 번호 2를 포함하거나 서열 번호 2와 적어도 95%의 서열 동일성을 가지며, 바람직하게는 브렌툭시맙은 서열 번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 및 서열 번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄로 이루어진, ADC.
3. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 약물 모이어티는 캄프토테신, 메이탄시노이드, 칼리케아마이신, 듀오카르마이신, 튜불리신, 아마톡신, 돌라스타틴 및 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 피롤로벤조디아제핀 이량체, 인돌리노-벤조디아제핀 이량체, 방사성동위원소, 치료용 단백질 및 펩티드(또는 이의 단편), 핵산, PROTAC, 키나아제 억제제, MEK 억제제, KSP 억제제, 및 이의 유사체 또는 전구약물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 약물 모이어티는 MMAE인, ADC.
4. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열은 적어도 아미노산 서열 X1X2X3X4(서열 번호 3)를 가지며, 여기서 X1 및 X2는 임의의 아미노산이고, X3은 E, D 또는 C이고, X4는 E이고, 바람직하게는 여기서 X2는 G, S, A, V 또는 F이고/이거나 X1은 E, D, A, K 또는 P인, ADC.
5. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 인식 서열은 EGEE (서열 번호 4)이고, 바람직하게는 인식 서열은 VDSVEGEGEEEGEE (서열 번호 5), SVEGEGEEEGEE (서열 번호 6), SADGEDEGEE (서열 번호 7), SVEAEAEEGEE (서열 번호 8), SYEDEDEGEE (서열 번호 9), 또는 SFEEENEGEE (서열 번호 10)인, ADC.
6. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 비천연 아미노산은 2-치환, 3-치환 또는 4-치환 티로신 또는 벤질 위치에서 치환된 티로신 유도체인, ADC.
7. 항목 6에 있어서, 상기 3- 또는 4-치환된 티로신 유도체는 3-니트로티로신, 3-아미노티로신, 3-아지도티로신, 3-포르밀티로신, 3-아세틸티로신 또는 4-아미노페닐알라닌이고, 바람직하게는 비천연 아미노산은 3-포르밀티로신인, ADC.
8. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 링커는 바람직하게는 프로테아제에 의해, 보다 바람직하게는 카텝신 B와 같은 카텝신에 의해 절단가능한, ADC.
8a. 항목 1 내지 항목 7 중 어느 하나에 있어서, 링커는 비-절단가능한, ADC.
9. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 링커는 발린-시트룰린 모이어티를 포함하는, ADC.
10. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 링커는 하이드록실아민기를 포함하고 비천연 아미노산은 3-포르밀티오신과 같은 방향족 고리 내 하이드록실기의 오르토 포르밀기를 포함하고, 링커의 하이드록실아민기는 접합 후 비천연 아미노산의 포르밀기와 옥심을 형성하는, ADC.
11. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 브렌툭시맙은 2개, 4개, 6개 또는 8개, 바람직하게는 2개 또는 4개의 약물 모이어티, 더 바람직하게는 2개의 약물 모이어티에 접합되는, ADC.
12. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 1에 나타낸 바와 같은 구조를 갖는, ADC:
상기 식에서, R은 하나 이상의 약물 모이어티로, 이는 하나 이상의 절단 부위에 의해 구조 1의 하이드록실아민에 임의로 커플링되며, 바람직하게는 구조 1의 하이드록실아민은 비천연 아미노산에 접합된다.
13. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 2 또는 3에 나타낸 바와 같은 구조를 갖는, ADC:
상기 식에서, Z는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
D는 하나 이상의 약물 모이어티이고;
Y는 카텝신 B와 같은 카텝신에 대한 절단 부위와 같은 절단 부위이고;
바람직하게는 구조 2 또는 3의 하이드록실아민은 비천연 아미노산에 접합된다.
14. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 4 또는 5에 나타낸 바와 같은 구조를 가지며, 여기서 D는 약물 모이어티, 바람직하게는 MMAE인, ADC.
15. 항목 14에 있어서, D는 MMAE이고, 비천연 아미노산은 3-포르밀티로신이고 링커의 하이드록실아민기는 비천연 아미노산의 3-포르밀기와 옥심을 형성하는, ADC.
16. 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 11을 갖고;
브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 1을 가짐 -, 및
(b) 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
17. 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 중쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 중쇄는 서열 번호 12를 갖고;
브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 2를 가짐 -, 및
(b) 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
18. 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 중쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 중쇄는 서열 번호 12를 갖고;
브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 11을 가짐 -;
(b) 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단 및 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 중쇄의 인식 서열의 C-말단 및 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
19. 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
(a) 브렌툭시맙 - 상기 브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고;
인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 11을 갖고;
브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 1을 가짐 -, 및
(b) 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:
여기서 물결선은 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타낸다.
20. 하기를 포함하는, 항목 1 내지 항목 19 중 어느 하나에 정의된 ADC의 제조 방법:
(a) 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 경쇄와 중쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 도입하거나 부가하는 단계;
(b) 단계 (a)에서 얻은 브렌툭시맙을, 튜불린 티로신 리가아제가 상기 브렌툭시맙을 비천연 아미노산과 결찰시키기에 적합한 조건 하에 튜블린 티로신 리가아제 및 비천연 아미노산의 존재 하에서 접촉시키는 단계; 및
(c) 단계 (b)에서 얻어진 결찰된 브렌툭시맙에 약물 모이어티를 포함하는 선택적으로 절단가능한 링커를 접합시키는 단계.
21. 항목 20의 방법에 의해 얻을 수 있거나 얻고 있는 ADC.
22. 항목 1 내지 항목 19 또는 항목 21 중 어느 하나의 ADC를 포함하는 약학적 조성물.
23. 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 항목 1 내지 항목 19 또는 항목 21 중 어느 하나의 ADC 또는 항목 22의 약학적 조성물.
24. 항목 23에 있어서, 질환은 CD30의 과발현과 관련된 것인 ADC 또는 약학적 조성물.
25. 항목 23 또는 항목 24에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE), 바람직하게는 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, ADC 또는 약학적 조성물.
25a. 항목 23 또는 항목 24에 있어서, 질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, ADC 또는 약학적 조성물.
25b. 항목 23 또는 항목 24에 있어서, 질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL); 또는 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)인, ADC 또는 약학적 조성물.
26. CD30의 과발현과 관련된 질환의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 항목 1 내지 항목 19 또는 항목 21 중 어느 하나의 ADC의 용도.
27. 항목 26에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
28. 항목 27에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)인, 용도.
28a. 항목 26에 있어서, 질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
28b. 항목 26에 있어서, 질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL); 또는 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)인, 용도.
29. CD30의 과발현과 관련된 질환의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 항목 22의 약학적 조성물의 용도.
30. 항목 29에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
31. 항목 30에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)인, 용도.
31a. 항목 29에 있어서, 질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
31b. 항목 29에 있어서, 질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL); 또는 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)인, 용도.
32. 항목 1 내지 항목 19 중 어느 하나의 유효량의 ADC를 치료를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, CD30의 과발현과 관련된 질환을 치료하는 방법.
33. 항목 32에 있어서, 질환은 CD30의 과발현과 관련된 암인, 방법.
34. 항목 32 또는 항목 33에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE), 바람직하게는 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
35. 항목 34에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)인, 방법.
35a. 항목 32 또는 항목 33에 있어서, 질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
35b. 항목 32 또는 항목 33에 있어서, 질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL); 또는 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)인, 방법.
36. 항목 32 내지 항목 35b 중 어느 하나에 있어서, ADC는 14 mg/kg, 12 mg/kg, 10 mg/kg, 9 mg/kg, 8 mg/kg, 7 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg 또는 1 mg/kg의 투여량; 또는 2 내지 6 mg/kg의 투여량으로 투여되는, 방법.
37. 항목 22의 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, CD30의 과발현과 관련된 질환의 치료 방법.
38. 항목 37에 있어서, 질환은 CD30의 과발현과 관련된 암인, 방법.
39. 항목 37 또는 항목 38에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE), 바람직하게는 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
40. 항목 39에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)인, 방법.
40a. 항목 38 또는 항목 38에 있어서, 질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
40b. 항목 38 또는 항목 38에 있어서, 질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL); 또는 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)인, 방법.
41. 항목 37 내지 항목 40b 중 어느 하나에 있어서, ADC는 14 mg/kg, 12 mg/kg, 10 mg/kg, 9 mg/kg, 8 mg/kg, 7 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg 또는 1 mg/kg의 투여량; 또는 2 내지 6 mg/kg의 투여량으로 투여되는, 방법.
여기서 사용된 단수형은 문맥상 달리 명시되지 않는 한 복수형 언급을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "시약"에 대한 언급은 이러한 상이한 시약 중 하나 이상을 포함하고 "그 방법"에 대한 언급은 본 명세서에 기재된 방법에 대해 수정되거나 대체될 수 있는 당업자에게 공지된 동등한 단계 및 방법에 대한 언급을 포함한다.
달리 나타내지 않는 한, 일련의 구성 요소 앞에 오는 "적어도"라는 용어는 시리즈의 모든 요소를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 당업자는 단지 일상적인 실험을 사용하여 본 명세서에 기재된 본 발명의 특정 실시예에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 발명에 포함되도록 의도된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "및/또는"은 "및", "또는" 및 "상기 용어에 의해 연결된 요소의 전부 또는 임의의 다른 조합"의 의미를 포함한다.
용어 "미만" 또는 "초과"는 구체적인 숫자를 포함하지 않는다.
예를 들어, 20 미만은 표시된 숫자보다 작음을 의미한다. 유사하게, 초과 또는 ~보다 큰은 표시된 숫자 초과 또는 그 보다 큰 것을 의미하며, 예를 들어 80% 초과는 80%의 표시된 숫자보다 큰 것을 의미한다.
문맥상 달리 요구되지 않는 한, 본 명세서 및 이하의 청구범위 전체에 걸쳐, 단어 "포함하다" 및 "포함하고" 및 "포함하는" 과 같은 변형은, 언급된 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계 그룹의 포함을 의미하지만 임의의 다른 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 그룹을 배제하지 않음을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 본 명세서에서 "포함하는"이라는 용어는 "함유하는" 또는 "비롯한"이라는 용어로 대체될 수 있으며, 때때로 본 명세서에서 "갖는"이라는 용어와 함께 사용되는 경우도 있다. 본 명세서에 사용된 "로 이루어진"은 지정되지 않은 요소, 단계 또는 성분을 제외한다.
"포함하는"이라는 용어는 "포함하지만 이에 제한되지 않는다"를 의미한다. "포함하는" 및 "포함하지만 이에 제한되지 않는다"는 상호 교환적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용된 용어 "약", "대략" 또는 "본질적으로"는 주어진 값 또는 범위의 20% 이내, 바람직하게는 15% 이내, 바람직하게는 10% 이내, 보다 바람직하게는 5% 이내를 의미한다. 또한 구체적인 숫자. 즉, "약 20"은 숫자 20을 포함한다.
본 발명은 본 명세서에 기술된 특정 방법론, 프로토콜, 물질, 시약 및 물질 등에 제한되지 않으며 그 자체가 다양할 수 있음을 이해해야 한다. 본 명세서에서 사용된 용어는 단지 특정한 구현예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명의 권리범위를 한정하려는 의도가 아니다.
본 명세서의 본문 전반에 걸쳐 인용된 모든 간행물(모든 특허, 특허 출원, 과학 간행물, 지침 등 포함)은 위에 또는 아래든지 상관없이 전체 내용이 참조로 포함된다. 본 명세서의 어떤 것도 본 발명이 선행 발명에 의해 그러한 개시보다 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 참조로 포함된 자료가 본 명세서와 모순되거나 일치하지 않는 범위 내에서 명세서가 그러한 자료를 대체할 것이다. 본 명세서에 인용된 모든 문서 및 특허 문서의 내용은 그 전체가 참고로 포함된다.
실시예
본 발명 및 그 장점에 대한 훨씬 더 나은 이해는 단지 예시 목적으로 제공되는 다음의 실시예로부터 명백해질 것이다. 실시예는 어떤 식으로든 본 발명의 범위를 제한하려는 의도가 아니다.
물질 및 방법
화학물질, 물질, 시약 및 용매
화학물질 및 용매는 Merck (Merck group, Germany), TCI (Tokyo chemical industry CO., LTD., Japan) 및 Acros Organics (Thermo Fisher scientific, USA), Sigma-Aldrich (Merck group, Germany), Carl Roth (Carl Roth GmbH, Germany), Cytiva (Cytiva UK Limited, England)에서 구입하였으며 추가 정제 없이 사용하였다. 건조 용매는 Acros Organics (Thermo Fisher scientific, USA)에서 구입하였다.
TTL 발현 및 정제
이전에 기재된 바와 같이(Schumacher et al. (2015), Angewandte Chemie (International ed. in English), 54:13787-13791, WO 2016/066749, WO　2017/186855), 튜불린-티로신 리가아제(TTL)는 N-말단 His- 및 SUMO3 용해도-태그가 있는 대장균 BL21(DE3)에서 발현되었다. 배양은 카나마이신(30 μg/mL)이 보충된 LB 배지에서 37℃, 180 rpm에서 OD600이 0.6 내지 0.8에 도달할 때까지 수행하였다. 배양물을 18℃로 냉각시킨 후, 세포를 0.5 mM IPTG로 유도하고 단백질 발현을 18℃에서 18시간 동안 달성하였다.
원심분리에 의해 배양물을 수확한 후, 리소자임(100 μg/ml), DNAse(25 μg/ml) 및 PMSF(1 mM)가 보충된 TTL 결합 완충액(20　mM Tris/HCl pH 8.2, 250　mM NaCl, 20　mM 이미다졸, 3 mM　β-메르캅토에탄올)에서 초음파 처리를 통해 용해를 수행한 후, 파편 원심분리를 20.000 g에서 30분 동안 수행하고 상등액을 여과하였다.
His-SUMO3-TTL은 용리 완충액(20 mM Tris/HCl pH 8.2, 250 mM NaCl, 500 mM 이미다졸, 3 mM β-메르캅토에탄올)에 4 CV에 걸쳐 선형 구배를 적용하는 5 ml His-Trap HP(Cytiva)를 사용하여 정제하였다. 정제된 단백질은 TTL 저장 완충액(20 mM MOPS/KCl pH 7.4, 100 mM KCl, 10 mM MgCl2, 50 mM L-아르기닌, 3 mM　β-메르캅토에탄올)으로의 완충액 교환에 의해 PD-10 Sephadex G-25M 컬럼(Cytiva)에서 후속적으로 탈염되었다. 단백질 분취물을 충격 동결시키고 -80℃에서 보관하였다.
브렌툭시맙 Tub-태그 발현 및 정제
브렌툭시맙 Tub-태그의 재조합 발현은 현탁액에 적응된 CHO 세포에서 수행되었다. 씨드를 화학적으로 정의된 환경에서 성장하시켰으며; 동물 성분이 없는 배지와 상층액을 원심분리 후 여과하여 수확하였다. 단백질 A 친화성 크로마토그래피(MabSelect SuRe, Cytiva)를 사용하여 정제를 달성했다. HCCF의 pH를 7.5로 조정하고 컬럼을 결합 완충액(20 mM NaH2PO4, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA pH 7.5)으로 평형화시켰다. 컬럼에서 최적의 체류 시간을 달성하기 위해 배양 역가에 따라 유속을 조정했다. 용출 완충액(100 mM 구연산삼나트륨, pH 3.0)으로 단계적으로 용출을 수행하였다. 용출액을 중화하고 저장 완충액(PBS, 100 mM L-아르기닌)으로 완충액을 교환한 후 항체를 8 내지 15 mg/mL, 2 내지 8℃(단기 보관)에서 보관하거나 충격 동결하고 -80℃(장기 보관)에서 보관하였다.
TTL을 적용한 브렌툭시맙 Tub-태그 접합 반응.
이전 간행물에 따라 TTL 촉매 결찰을 수행하였다(Schumacher et al. (2015), Angewandte Chemie (International ed. in English), 54:13787-13791, WO 2016/066749, WO　2017/186855). 요약하면, 3-포르밀-L-티로신을 220 mM MOPS / KCl, 100 mM KCl, 10 mM MgCl2, 5 mM ATP, 5 mM 3-포르밀-L-티로신, pH 7.0으로 구성된 여러 부피의 브렌툭시맙 Tub-태그에 결찰시켰다. pH 값을 조정한 후, 브렌툭시맙 Tub-태그 및 TTL을 첨가하고 항체의 티로신화를 위해 18℃에서 12시간 동안 반응을 수행하였다.
티로신화된 브렌툭시맙 Tub-태그의 정제
미정제 티로신화 반응물을 희석하여 전도도를 낮췄다(<10 mS/cm). 이어서 혼합물을 5 mL HiTrap Capto Q ImpRes 컬럼(Cytiva)에 로딩했다. 컬럼을 5 CV AEX 결합 완충액(14.4　mM Na2HPO4, 5.6　　mM NaH2PO4, pH 4.5) 및 5　CV 10% AEX 용출 완충액(14.4　mM Na2HPO4, 5.6　　mM NaH2PO4, 1　M NaCl pH 4.5)으로 세척한 후, 티로신화된 브렌툭시맙 Tub-태그의 용출을 10 CV에 걸쳐 50% 용출 완충액에 대한 선형 구배로 달성하였다. 풀링된 생성물 함유 분획의 단백질 농도를 UV280 방법(NanoPhotometer NP80, IMPLEN)으로 측정하였다.
TTL 반응 후 옥심-결찰
음이온 교환 크로마토그래피를 통한 정제 후 티로신화된 브렌툭시맙 Tub-태그의 단백질 농도를 조정하고 공용매로서 DMSO를 첨가하였다(2% 최종 v/v). 18℃에서 반응이 완료될 때까지 약간 과량의 2 (HA-vc-PAB-MMAE) 또는 3 (HA-(VC-PAB-MMAE)2)으로 옥심-결찰을 수행하였다. 페이로드 2와 3의 구조는 도 23에 제시되어 있다.
브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 정제
미정제 옥심-결찰물을 CEX 결합 완충액(1 내지 1 v/v, 14.4 mM Na2HPO4, 5.6 mM NaH2PO4, pH 4.5)으로 희석하고 5 mL HiTrap Capto S ImpAct 컬럼(Cytiva)에 로딩하였다. 컬럼을 10 CV CEX 세척 완충액(14.4 mM Na2HPO4, 5.6 mM NaH2PO4, 0.1 % Triton-x-114, pH 4.5) 및 5 CV CEX 결합 완충액으로 세척한 후, TUB-010의 용출을 20 CV에 걸쳐 100% CEX 용출 완충액(14.4　mM Na2HPO4, 5.6 mM NaH2PO4, 1　M NaCl pH 4.5)에 대한 선형 구배로 달성하였다. 풀링된 분획의 pH를 7.2로 조정하였다. 완충액 교환은 TFF(Vivaflow 50R)를 통해 제형 완충액을 이용해 수행되었다.
3-포르밀- L -티로신의 합성
N -[(tert부틸옥시)카르보닐]-L-티로신
300 ml H2O 및 300 ml 1,4-디옥산 중 20 g L-티로신(0.110 mol, 1 당량)의 용액에 24.5 ml 트리에틸아민(0.176 mol, 1.6 당량)을 천천히 추가했다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 디-tert-부틸 디카르보네이트 26.4 g(0.121 mol, 1.1 당량)을 나누어 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 밤새 천천히 실온으로 가온시켰다. 유기 용매를 감압하에 제거하고 용액을 2 N HCl로 pH 1로 산성화시켰다. 수성상을 EtOAc 200 ml로 3회 추출하고, 유기 분획을 합하고, MgSO4로 건조하고, 모든 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 원하는 화합물을 백색 고체(30.6 g, 0.109 mmol, 99%)로 얻었다. 분석 데이터는 이전에 보고된 결과와 일치했다(Schumacher et al. (2015), Angewandte Chemie (International ed. in English), 54:13787-13791).
N -[(tert부틸옥시)카르보닐]-L-포르밀티로신
300 ml 클로로포름 중의 20 g N-[(tert-부틸옥시)카르보닐]-L-티로신(0.071 mol, 1 당량)의 현탁액에 2.56 ml H2O(0.142 mol, 2 당량) 및 17.1 mg의 분말형 수산화나트륨(0.427 mol, 6 당량)을 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 격렬하게 교반하면서 밤새 환류 가열하였다. 그 후 혼합물을 실온으로 냉각시키고 H2O 300 ml로 희석하였다. 유기층을 분리하여 버렸다. 수성층을 2 N HCl로 pH 1로 산성화하고 EtOAc 200 ml로 3회 추출하였다. 유기 분획을 합하고 MgSO4로 건조하고 모든 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 미정제 생성물을 실리카 상 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2 중 5% MeOH + 0.5% 포름산)로 정제하여 황색조의 고체로 얻었다. (5.26 g, 0.017몰, 24%). 분석 데이터는 이전에 보고된 결과와 일치했다(Schumacher et al. (2015), Angewandte Chemie (International ed. in English), 54:13787-13791).
L-포르밀티로신 TFA 염
500 mg의 N-[(tert부틸옥시)카르보닐]-L-포르밀티로신(1.616 mmol, 1 당량)을 1 ml의 CH2Cl2에 현탁시키고 0℃로 냉각시켰다. 0.1 ml의 H2O를 첨가한 후, 1 ml의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하고, 모든 휘발성 물질을 질소 스트림에서 제거하고 미정제 생성물을 다음 구배를 갖는 VP 250/32 Macherey-Nagel Nucleodur C18 HTec Spum 컬럼(Macherey-Nagel Nagel GmbH)를 사용하는 분취용 HPLC(Gilson Inc)로 정제하였다: (A = H2O + 0.1% TFA, B = MeCN (아세토니트릴) + 0.1% TFA, 유속 30 ml/min, 5% B 0-5 min, 5-30% B 5-50 min, 99% B 50-60 min. 원하는 생성물을 동결 건조 후 황색조의 분말의 TFA 염으로 얻었다. (397　mg, 1.228　mmol, 76%). 분석 데이터는 이전에 보고된 결과와 일치했다(Schumacher et al. (2015), Angewandte Chemie (International ed. in English), 54:13787-13791).
하이드록실아민-MMAE(HA-VC-PAB-MMAE)의 합성
(Fmoc-아미노옥시)아세트산(FMOC-HA-COOH)
50 ml 둥근 바닥 플라스크에 4 ml의 물에 용해된 100 mg(0.915 mmol, 1.0 당량) O-(카르복시메틸)하이드록실아민 헤미하이드로클로라이드(Sigma-Aldrich) 및 240 mg (2.264 mmol, 2.1 당량) 탄산나트륨을 나누어 첨가하였다. 용액을 0℃로 냉각시키고 2 ml 1,4-디옥산 중의 260 mg(1.005 mmol, 1.1 당량) 플루오레닐메틸옥시카르보닐 클로라이드(TCI-chemicals) 용액을 적가하였다. 용액을 밤새 실온으로 가온하였다. 감압하에 디옥산을 제거하고, 물 50 ml를 첨가하고, 용액을 2 mol/l HCl로 산성화시켰다. 수성상을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고 합한 유기상을 MgSO4로 건조시켰다. 모든 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하고 원하는 화합물을 흰색 고체로 얻었다. (283 mg, 99.0%) 분석 데이터는 이전에 보고된 결과와 일치했다 (Clave et al. (2008), Organic & Biomolecular Chemistry, 6:3065-3078).
Fmoc-VC-PAB-PNP
10 ml 스크류 캡 바이알에 200 mg Fmoc-VC-PAB(0.333 mmol, 1.0 당량), 202 mg 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트(0.333 mmol, 1.0 당량) 및 1 ml의 DMF를 채웠다. 232 μl의 DIPEA(1.332 mmol, 4.0 당량)를 첨가하고 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉 디에틸에테르에 붓고 여액을 원심분리를 통해 수집하였다. 여액을 DMF 1 ml에 다시 용해시키고 얼음처럼 차가운 디에틸에테르로 두 번째 침전시켰다. 침전물을 원심분리에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시키고 원하는 생성물을 황색조의 분말로 얻었다. (247 mg, 97.0%). 분석 데이터는 이전에 보고된 결과에 따랐다(WO2004010957).
H 2 N-VC-PAB-MMAE
10 ml 스크류 캡 바이알에 DMSO 중 MMAE TFA 염의 1 mol/l 용액(50 mg, 0.06 mmol, 1.0 당량.) 60 μl, 0.4 DMSO 중 Fmoc-VC-PAB-PNP 용액(0.072 mmol, 1.2당량) 180　μl 및 DMSO 중 하이드록시벤조트리아졸 수화물의 1 mol/l 용액(0.06 mmol, 1.0 당량) 60 μl를 채웠다. 105 μl DIPEA(0.6 mmol, 10.0 당량)를 첨가하고 황색 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. UPLC/MS를 통해 모니터링한 MMAE 출발 물질의 완전한 소비 후, DMSO 중 디에탄올아민의 50%(w/w) 용액 120 μl를 첨가하고 황색 용액을 1시간 동안 추가로 교반했다. 1.5 ml의 아세토니트릴 및 3 ml의 물을 첨가하고 용액을 하기 구배를 갖는 VP 250/32 Macherey-Nagel Nucleodur C18 HTec Spum 컬럼(Macherey-Nagel GmbH)을 사용하는 분취용 HPLC(Gilson Inc)를 통해 정제하였다: (A = H2O + 0.1% TFA, B = MeCN (아세토니트릴) + 0.1% TFA, 유속 30 ml/min, 30% B 0-5 min, 30-60% B 5-25 min, 99% B 25-35 min. 원하는 생성물을 동결 건조 후 흰색 분말의 TFA 염으로 얻었다. (29.5　mg, 39.7%). 분석 데이터는 이전에 보고된 결과에 따랐다(Tang et al. (2016), Organic & Biomolecular Chemistry, 14(40): 9501-9518).
HA-VC-PAB-MMAE
10 ml 스크류 캡 바이알에 23.3 mg의 H2N-VC-PAB-MMAE(0.0188 mmol, 1.0 당량), DMSO 중 0.6 mol/L 용액 Fmoc-HA-COOH(0.0226 mmol, 1.2 당량) 38 μl, 및 DMSO 중 0.6 mol/L 용액 Pybop(0.0226 mmol, 1.2 당량) 38 μl를 채웠다. 33 μl DIPEA(0.1880 mmol, 10.0 당량)를 첨가하고 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. DMSO 중의 디에탄올아민의 50%(w/w) 용액 150 μl를 첨가하고, 용액을 1시간 동안 더 교반하였다. 1.5 ml의 아세토니트릴 및 3 ml의 물을 첨가하고 용액을 하기 구배를 갖는 VP 250/32 Macherey-Nagel Nucleodur C18 HTec Spum 컬럼(Macherey-Nagel GmbH)을 사용하는 분취용 HPLC(Gilson Inc)를 통해 정제하였다: (A = H2O + 0.1% TFA, B = MeCN (아세토니트릴) + 0.1% TFA, 유속 30 ml/min, 30% B 0-5 min, 30-99% B 5-60 min, 99% B 60-70 min. 원하는 생성물을 동결 건조 후 흰색 분말의 TFA 염으로 얻었다. (20.1　mg, 81.6 %). C60H98N11O14 + [M+H]+ 에 대한 HR-MS 산출치: 1196.7290, 실측치 1196.7278. 정제된 물질의 HPLC 크로마토그램에 대한 도 15를 참조한다.
분지형 MMAE 하이드록실아민(HA-(VC-PAB-MMAE)2)의 합성
BOC-Glu(OSu) 2
50 mL 둥근 바닥 플라스크에 1.00 g Boc-Glu-OH(4.04 mmol, 1.00 당량), 0.93 g N-하이드록시숙신이미드(8.08 mmol, 2.00 당량) 및 25 mg DMAP(0.20 mmol, 0.05 당량)를 채우고, 20 mL의 무수 THF에 용해시켰다. 현탁액을 0℃로 냉각시키고, 10 mL의 무수 THF에 용해된 1.84 g의 디사이클로헥실카르보디이미드(8.88 mmol, 2.2 당량)를 적가하였다. 백색 현탁액을 밤새 실온으로 가온시켰다. 혼합물을 여과하고, 여액을 증발시키고, 잔류물을 실리카겔 상의 플래쉬-컬럼-크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물이 무색 오일로 얻어졌다. (460　mg, 1.04　mmol, 25.8%). 분석 데이터는 이전에 보고된 결과에 따랐다 (Koshi et al., J. Am. Chem. Soc.　2008, 130, 1, 245-251).
Boc-Glu-(VC-PAB-MMAE) 2
10 ml 스크류 캡 바이알에 15.83 mg의 H2N-VC-PAB-MMAE TFA 염(0.012 mmol, 2.00 당량), 2.84 mg Boc-Glu(OSu)2(0.06 mmol, 1.00 당량) 및 150 μL DMF를 채웠다. 4.5 μl DIPEA(0.0256 mmol, 4.0 당량)를 첨가하고, 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 1.5 ml의 아세토니트릴 및 3 ml의 물을 첨가하고 용액을 하기 구배를 갖는 VP 250/21 Macherey-Nagel Nucleodur C18 HTec Spum 컬럼(Macherey-Nagel GmbH & Co. Kg, Germany)이 장착된 Gilson PLC 2020 시스템(Gilson Inc, WI, Middleton, USA)을 사용하는 분취용 HPLC를 통해 정제하였다: (A = H2O + 0.1% TFA, B = MeCN (아세토니트릴) + 0.1% TFA, 유속 10 ml/min, 30% B 0-5 min, 30-99% B 5-60 min, 99% B 60-70 min. 원하는 생성물을 동결 건조 후 흰색 분말로 얻었다. (8.84　mg, 0.0036 mmol, 55.8 %). C126H203N21O28 2+ [M+2H]2+ 에 대한 HR-MS 산출치: 1229,7565, 실측치 1229,7567. 정제된 물질의 HPLC 크로마토그램은 도 16을 참조한다.
Boc-HA-Glu-(VC-PAB-MMAE) 2
10 ml 스크류 캡 바이알에 3.99 mg의 Boc-Glu-(VC-PAB-MMAE)2(1.63 μmol, 1.00 당량)를 채우고, 100 μL CH2Cl2에 용해시키고 -20℃까지 냉각시켰다. 100 μL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. -20℃에서 3시간 후, 용액을 0℃로 가온하고 모든 휘발성 물질을 N2-스트림 하에 제거하였다. 100 μL DMF에 용해된 0.94 mg Boc-HA-OSu(3.26 μmol, 2.00 당량)를 첨가한 후, 2.8 μl DIPEA(0.163 μmol, 10.0 당량)를 첨가하고 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 1.5 ml의 아세토니트릴 및 3 ml의 물을 첨가하고 용액을 하기 구배를 갖는 VP 250/21 Macherey-Nagel Nucleodur C18 HTec Spum 컬럼(Macherey-Nagel GmbH & Co. Kg, Germany)이 장착된 Gilson PLC 2020 시스템(Gilson Inc, WI, Middleton, USA)을 사용하는 분취용 HPLC를 통해 정제하였다: (A = H2O + 0.1% TFA, B = MeCN (아세토니트릴) + 0.1% TFA, 유속 5 ml/min, 30% B 0-5 min, 30-99% B 5-60 min, 99% B 60-70 min. 원하는 생성물을 동결 건조 후 흰색 분말로 얻었다. (2.11　mg, 0.748 μmol, 46%). C128H206N22O30 2+ [M+2H]2+ 에 대한 HR-MS 산출치: 1266,2647 실측치 1266,2644. 정제된 물질의 HPLC 크로마토그램은 도 17을 참조한다.
HA-(VC-PAB-MMAE) 2
10 ml 스크류 캡 바이알에 2.11 mg의 Boc-Glu-(VC-PAB-MMAE)2(0.75 μmol)를 채우고, 100 μL CH2Cl2에 용해시키고 -20℃까지 냉각시켰다. 100 μL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. -20℃에서 3시간 후, 용액을 0℃로 가온하고 모든 휘발성 물질을 N2-스트림 하에 제거하였다. 원하는 생성물을 50% MeCN/H2O로부터 동결 건조 후 흰색 분말로 얻었다. (1.90　mg, 0.748 μmol, quant.). C123H198N22O28 2+ [M+2H]2+ 에 대한 HR-MS 산출치: 1216,2384 실측치 1216,2326. 정제된 물질의 HPLC 크로마토그램은 도 18을 참조한다.
플래시 및 박층 크로마토그래피
플래시 컬럼 크로마토그래피는 NORMASIL 60® 실리카 겔 40-63 μm(VWR international, USA)를 사용하여 수행하였다. 유리 TLC 플레이트, 형광 표시자 F254s로 코팅된 실리카 겔 60 W는 Merck(Merck Group, Germany)에서 구입했다. 스폿은 254 nm 램프 또는 망간 염색(10　g K2CO3, 1.5　g KMnO4, 200　ml H2O 중 0.1　g NaOH)을 사용한 형광 고갈에 의해 가시화되었고, 이어서 가열되었다.
분취용 HPLC
분취용 HPLC는 VP 250/32 Macherey-Nagel Nucleodur C18 HTec Spum 컬럼(Macherey-Nagel GmbH & Co. Kg, Germany)을 사용하여 Gilson PLC 2020 시스템(Gilson Inc, WI, Middleton, USA)에서 수행되었다. 다음 구배를 사용하였다: 방법 C: (A = H2O + 0.1% TFA (트리플루오로아세트산), B = MeCN (아세토니트릴) + 0.1% TFA, 유속 30 ml/min, 5% B 0-5 min, 5-90% B 5-60 min, 90% B 60-65 min. 방법 D: (A = H2O + 0.1% TFA, B = MeCN + +0.1% TFA), 유속 30 ml/min, 5% B 0-5 min, 5-25% B 5-10 min, 25%-45% B 10-50 min, 45-90% 50-60 min, 90% B 60-65 min. 방법 E: 0.1% TFA, 유속 18 ml/min, 5% B 0-5 min, 5-90% B 5-60 min, 90% B 60-65 min, VP 250/21 Macherey-Nagel Nucleodur C18 HTec Spum 컬럼(Macherey-Nagel GmbH & Co. Kg, Germany)을 사용함.
HR-MS
고해상도 ESI-MS 스펙트럼은 quaternary solvent manager, Waters 샘플 manager-FTN, Waters PDA 검출기 및 Acquity UPLC 단백질 BEH C18 컬럼(1.7　μm, 2.1　mm x 50　mm)이 있는 Waters manager가 장착된 Waters H-클래스 기기에서 기록되었다. 샘플을 0.3 mL/min의 유속으로 용출하였다. 다음 구배를 사용하였다: A: H2O 중 0.01% FA; B: MeCN 중 0.01% FA. 5% B: 0-1 min; 5 to 95% B: 1-7 min; 95% B: 7 to 8.5 min. 질량 분석은 Waters XEVO G2-XS QTof 분석기로 수행되었다.
UPLC-UV/MS
UPLC-UV/MS 트레이스는 quaternary solvent manager, Waters 오토샘플러, 유속이 0.6 mL/분인 Acquity UPLC BEH C18 1.7 μm, 2.1 x 50 mm RP 컬럼이 있는 Waters TUV 검출기 및 Waters Acquity QDa 검출기가 장착된 Waters H-클래스 장비에서 기록되었다. 순도 분석을 위해 다음 구배를 사용하였다: A: H2O 중 0.1% TFA; B: MeCN 중 0.1% TFA. 5% B 0 - 1.5 min, 5-95% B 1.5-11 min, 95% B 11-13 min, 5% B 13-15 min.
원형 단백질 MS
원형 단백질을 quaternary solvent manager, a Waters sample manager-FTN, a Waters PDA detector 및 Acquity UPLC 단백질 BEH C4 컬럼(300 Å, 1.7 μm, 2.1 mm x 50 mm)이 장착된 Waters H-class 기기를 사용하여 분석하였다. 다음 구배를 사용하였다: A: H2O 중 0.01% FA; B: MeCN 중 0.01% FA. 5-95% B 0-6 min. Waters XEVO G2-XS QTof 분석기로 질량 분석을 수행했다. 단백질은 40 kV의 콘 전압을 적용하여 양이온 모드에서 이온화되었다. 로데이터는 MaxEnt 1로 분석되었다.
레자주린(Resazurin) 분석
HL60 및 Karpas 세포주를 10% FCS 및 0.5% 페니실린-스트렙토마이신이 보충된 RPMI-1640에서 배양하였다. 세포를 96-웰 세포 배양 마이크로플레이트에 5*10^3 세포/웰의 밀도로 시딩하였다. ADC 또는 항체의 1:4 연속 희석은 세포 배양 배지에서 3 μg/mL 최종 농도에서 시작하여 마이크로플레이트의 각 웰에 이중으로 이동되었다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 96시간 동안 배양하였다. 이어서, 레자주린을 최종 농도 50 μl로 첨가한 후 37℃, 5% CO2에서 3 내지 4시간 동안 인큐베이션하였다. 레자주린에서 레조루핀으로의 대사 전환은 Tecan Infinite M1000 마이크로 플레이트 판독기에서 레조루핀(λEX = 560 nm 및 λEX = 590 nm)의 형광 신호로 정량화된다. 평균 및 표준 편차는 복제물로부터 계산되었고, 처리되지 않은 대조군으로 정규화되었으며 항체 농도에 대해 플롯팅되었다. 데이터 분석은 MatLab R2016 소프트웨어로 수행되었다.
A-SEC에 의한 ADC의 특성화 및 안정성 평가
ADC는 PBS(Dulbeccos Phospahte Bufferd Saline, Sigma-Aldrich Merck KGaA)에서 1 mg/mL의 단백질 농도로 조정되었고 멸균 여과되었다(Ultrafree-MC Centrifugal 필터 유닛, Merck Millipore). 샘플을 4 내지 8℃, 37℃ 및 40℃에서 최대 14일 동안 보관하였다. 고온에서 보관된 샘플의 경우, 응축물이 형성되지 않았는지 확인했다. A-SEC를 통해 분석하기 전에 샘플을 4℃, 4000 x g에서 4분 동안 원심분리한다.
생체내 이종이식 모델
생체내 효능 실험은 동물 복지법에 따라 수행되었으며 현지 당국의 승인을 받았다. 간단히 말해서, Karpas 299 세포를 CB17-Scid 마우스에 0일에 피하 주사했다. 종양이 특정 평균 종양 부피에 도달했을 때 치료를 시작했다. 마우스를 처리군 및 대조군으로 무작위화한 후 ADC를 정맥내 주사로 투여하였다. 전체 연구 동안 종양 부피, 체중 및 일반적인 건강 상태를 기록했다.
약동학 분석
실험은 동물 복지법에 따라 수행되었으며 현지 당국의 승인을 받았다. 시험 항목은 Sprague Dawley 래트에 1일째 단일 정맥내(볼루스) 주사로 투여하였다. 생물분석을 위해 1 mL의 목표 부피로 경정맥을 통해 최대 504시간 동안 다양한 시점에서 혈액을 수집했다. 응고가 되도록 샘플을 실온에서 최소 1시간 동안 보관했다. 샘플을 4℃에서 10분 동안 1500 g에서 원심분리하였다. 생성된 혈청은 -20℃에서 보관하였다. PK 매개변수는 정맥(볼루스) 투여 경로와 일치하는 비구획 접근법을 사용하여 Phoenix(WinNonlin) 약동학 소프트웨어 1.4(Certara, 6.4)를 사용하여 계산되었으며, 생체내 형성 프로파일 접근법(혈관외)은 유리 페이로드에 사용되었다.
반복 투여 독성 연구
실험은 동물 복지법에 따라 수행되었으며 현지 당국의 승인을 받았다. 수컷 및 암컷 Sprague Dawley 래트(10/성별/그룹)에게 매주(1일, 8일, 15일 및 22일) 대조군(비히클), 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC (10 mg/kg) 또는 브렌툭시맙 베도틴 (10 mg/kg)을 투여하고, 26일째(5마리/성별/그룹)에 주요 투여 단계 부검 및 51일째(5마리/성별/그룹)에 회복 단계 부검을 가졌다. 임상 관찰, 체중 및 음식 소비를 연구 내내 매일 결정하였다. 약동학적 샘플을 각 투여 전, 각 투여 후 15분 및 각 동물의 부검 시에 얻었다. 모든 동물을 부검하고 장기의 무게를 재고 고정액에 유지시켰다. 임상 병리학(혈액학, 임상 화학 및 응고 종말점) 샘플도 부검 시 또한 채취했다.
실시예 1: CD30+ 적응증의 치료를 위한 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC
Tub-태그 기술은 극성이 높고 효소 튜불린 티로신 리가아제(TTL)에 대한 인식 서열 역할을 하는, 즉 본 발명의 의미 내에서 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열인, 천연 알파-튜불린 유래 펩티드를 사용한다.
TTL은 짧은 친수성 펩티드 태그(Tub-태그)를 인식하고 티로신 유도체 및 아미노산 유사 빌딩 블록과의 펩티드 결합 형성을 촉매화한다. 여기에서 발명자들은 안정성, 효능 및 독성 측면에서 승인된 브렌툭시맙 기반 ADC 브렌툭시맙 베도틴을 놀랍게도 능가하는 CD30 결합 ADC를 촉진하는 항체 브렌툭시맙(cAC10)에 페이로드를 접합하는 데 Tub-태그 기술이 사용될 수 있음을 입증한다.
도 22는 Tubulis의 독점 Tub-태그®("TTL 인식 서열" 기술. TTL: 튜불린 티로신 리가아제)에 의한 브렌툭시맙과 같은 단클론 항체에 대한 링커(페이로드)를 통한 약물 모이어티의 부위 특이적 융합을 보여준다.
본 발명자들은, 임의로 각각의 항체 사슬에 대한 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열 사이에 배열된 Gly4Ser 아미노산 링커의 서열과 함께, 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 단클론 항체 cAC10(브렌툭시맙, 도 23에 예시적으로 제시된 경쇄에 융합된 Tub-태그)의 경쇄(경쇄 서열 번호 11, 중쇄 서열 번호 1), 중쇄(경쇄 서열 번호 2, 중쇄 서열 번호 12) 또는 중쇄 및 경쇄(경쇄 서열 번호 11, 중쇄 서열 번호 12)에 융합시킴으로써 연구를 시작했다.
도 23은 ADC 제조를 위한 화학효소 컨쥬게이션을 보여준다. (청색) Tub-태그 인식 서열, (검정) 티로신 유도체, (황색) 생물직교 핸들이 있는 페이로드. Tub-태그는 사용된 Tub-태그의 수에 따라 DAR(Drug to Antibody Ratio) 범위가 2 내지 8인 균질 ADC를 가능하게 하는 경쇄 및/또는 중쇄에 배치될 수 있다. 페이로드 2와 3도 묘사되어 있다.
이러한 브렌툭시맙 변이체는 확립된 세포 배양 방법을 사용하여 재조합적으로 발현되었고 이후에 단백질 A 크로마토그래피로 성공적으로 정제되었다. 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용한 분석은 Tub-태그 항체의 우수한 순도를 보여주었고 단지 최소량의 고분자량 종(HMWS)만이 관찰되었다(HMWS = 1.5 - 7%). 결과는 도 1에 제시되어 있다. 이 결과는 항체가 발현 및 정제 후 고도의 단량체임을 보여준다. 도 1B에서 볼 수 있는 바와 같이, 브렌툭시맙의 중쇄에 대한 Tub-태그 인식 서열의 부착은 고분자량 종의 감소를 11%에서 단 1.5%로, 즉 10배 감소시킨다.
도 1A는 변형되지 않은 브렌툭시맙의 분석적 크기 배제 크로마토그램을 나타내며, 이는 또한 단백질 A 크로마토그래피(PAC) 후 본 명세서에서 단지 "브렌툭시맙"으로도 지칭된다. "HMWC"는 "고분자량 성분"을 의미한다.
도 1B는 중쇄(경쇄 서열 번호 2, 중쇄 서열 번호 12)에 융합된 TTL 인식 서열(Tub-태그)을 포함하는 브렌툭시맙의 분석적 크기 배제 크로마토그램을 나타내며, 이는 또한 단백질 A 크로마토그래피(PAC) 후 본 명세서에서 "Bren. HC-Tub"로도 지칭된다.
도 1C는 경쇄(경쇄 서열 번호 11, 중쇄 서열 번호 1)에 융합된 TTL 인식 서열(Tub-태그)을 포함하는 브렌툭시맙의 분석적 크기 배제 크로마토그램을 나타내며, 이는 또한 단백질 A 크로마토그래피(PAC) 후 본 명세서에서 "Bren. LC-Tub"로도 지칭된다.
도 1D는 경쇄 및 중쇄(경쇄 서열 번호 11, 중쇄 서열 번호 12)에 융합된 TTL 인식 서열(Tub-태그)을 포함하는 브렌툭시맙의 분석적 크기 배제 크로마토그램을 나타내며, 이는 또한 단백질 A 크로마토그래피(PAC) 후 본 명세서에서 "Bren. LCHC-Tub"로도 지칭된다.
브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 중쇄와 경쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하는 브렌툭시맙("Tub 태그 변이체" 또는 "브렌툭시맙 Tub-태그")의 제조가능성을 보여준 후, 발명자들은 소수성에 대한 일반적인 척도인 친수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)에 의해 보유 시간을 결정했다. 이 연구는 변형되지 않은 cAC10(브렌툭시맙)과 비교하여 모든 Tub-태그 변이체의 더 높은 친수성과 표면 극성을 나타냈다(도 2A).
도 2A는 브렌툭시맙(검정), Bren. LC-Tub(회색, 점선), Bren. HC-Tub(회색) 및 Bren. LCHC-Tub(검정, 점선)의 분석적 소수성 상호작용 크로마토그램을 나타낸다. 크로마토그램은 220 nm에서 기록된 정규화된 흡수 스펙트럼을 나타낸다. 머무름 시간은 소수성에 대한 척도이다. 소수성 상호작용 크로마토그램에서 머무름 시간이 길수록 소수성이 더 크다는 것을 나타낸다. 짧은 머무름 시간은 더 큰 친수성을 나타낸다.
항체 백본의 변경은 구조 및 안정성의 교란을 초래할 수 있기 때문에 브렌툭시맙 및 Tub-태그 변이체의 융점(Tm)을 시차 주사 형광측정법(DSF)으로 측정했다. 이러한 실험은 Tub-태그 변이체가 동일한 융점(Tm = 70.9 내지 71.8℃)을 갖고 따라서 변형되지 않은 mAb(Tm = 71.0℃)와 동일한 열 스트레스에 대한 안정성을 갖는다는 것을 확인했다(도 2B).
도 2B는 브렌툭시맙, Bren. LC-Tub, Bren. HC-Tub 및 Bren. LCHC-Tub)의 융점(Tm) 측정을 위한 시차 주사 형광 측정 곡선을 나타낸다.
본 발명자들은 Tub-태그-항체의 효소적 변형을 위해 상이한 티로신-유도체를 시험한 반면, 3-포르밀-L-티로신은 ADC 제조에 최적인 것으로 밝혀졌다. 요약하면, 발명자들은 3-포르밀-L-티로신을 Tub-태그의 말단 글루탐산 잔기에 공유 부착시키기 위해 TTL과 함께 상이한 브렌툭시맙 Tub-태그 변이체를 인큐베이션하였다. 특히, 3-포르밀-L-티로신의 아미노기는 Tub-태그의 C-말단에 부착되었다. 그 후, 과량의 3-L-포르밀-티로신 및 잔류 TTL을 단백질 A 크로마토그래피 또는 음이온 교환 크로마토그래피(AEX)로 제거하였다. 이어서, 링커-페이로드("링커-약물 모이어티")가 생물직교 반응에 의해 공유 결합되었다. 생성된 ADC의 정제는 과잉-링커 페이로드를 제거하고 ADC의 순도를 개선하기 위해 양이온 교환 크로마토그래피(CEX)로 수행되었다. 프로세스의 마지막 단계는 접선 흐름 여과(TFF) 및 멸균 여과를 통한 제형화를 포함했다. 약물 대 항체 비(DAR)가 2인 ADC의 제조를 위해 선형 페이로드 2를 적용했다(도 23에 도시됨, MMAE와 접합된 설명 및 청구 범위에 정의된 "구조 4"). 약물 대 항체 비(DAR)가 4인 ADC의 제조를 위해 선형 페이로드 3을 적용했다(도 23에 도시됨, MMAE와 접합된 설명 및 청구 범위에 정의된 "구조 5"). 특히, 페이로드 2 및 페이로드 3의 H2N-O- 모이어티는 TTL 인식 서열에 결합된 3-포르밀-L-티로신의 포르밀기와 반응하여 -C=N-O- 구조를 갖는 옥심을 생성하였다. 이 절차는 순수하고 균질한 ADC를 생성했으며 품질은 예를 들어 SEC, HIC(도 3) 및 미들업 MS(도 4)를 통해 제어되어 우수한 순도와 균질성을 보여준다.
하기 ADC가 준비되었으며 실시예에서 추가로 조사되었다(페이로드 2 및 3은 도 23에 나타냄):
도 3은 SEC(도 3A 내지 C) 및 HIC(도 3D 내지 F)를 통한 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 분석을 나타낸다. 도 3A 및 D는 Bren. HC-vc-PAB-MMAE DAR2 (또한 본 명세서에서 "Bren. HC-2"로도 표시됨)에 대한 결과를 나타내고, 도 3B 및 E는 Bren. LC-vc-PAB-MMAE DAR2 (또한 본 명세서에서 "Bren. LC-2"로도 표시됨)에 대한 결과를 나타내고, 도 3C 및 F는 Bren. LCHC-vc-PAB-MMAE DAR4 (또한 본 명세서에서 "Bren. LCHC-2"로도 표시됨)에 대한 결과를 나타낸다. 각각의 브렌툭시맙 변이체가 발현되었고, PAC로 정제되었으며, 페이로드 2와 접합되어 DAR 2를 생성하였고, 페이로드 2 또는 페이로드 3과 접합되어 DAR 4 ADC를 생성하였다. HIC 및 완충액 교환을 통한 최종 연마 후 Tub-태그 ADC를 응집체 함량 및 DAR 균질성 측면에서 분석했다. 모든 Tub-태그 ADC는 HMWS 함량이 매우 낮고(< 1%) 우수한 DAR 균질성을 나타냈다.
도 4는 탈당화 후 미들업 단백질 MS에 의한 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 분석을 나타낸다. 디컨볼루션된 스펙트럼을 나타낸다. 도 4A는 Bren. HC-Tub의 결과를 나타내고; 도 4B는 Bren. LCHC-Tub의 결과를 나타내고; 도 4C는 Bren. LC-Tub의 결과를 나타내고; 도 4D는 Bren. HC-vc-PAB-MMAE (또한 본 명세서에서 "Bren. HC-2"로도 표시됨)의 결과를 나타내고; 도 4E는 Bren. LCHC-vc-PAB-MMAE (또한 본 명세서에서 "Bren. LCHC-2"로도 표시됨)의 결과를 나타내고; 도 4F는 Bren. LC-2(vc-PAB-MMAE) (또한 본 명세서에서 "Bren. LC-3"로도 표시됨)의 결과를 나타낸다. 1369 m/z의 질량 이동은 3-포르밀-L-티로신의 혼입 및 페이로드 2와의 옥심 결찰로 인해 발생한다. 페이로드 3과 옥심 결찰 후 2604 m/z의 질량 차이가 관찰되었다. 이 결과는 계산된 값과 일치한다.
항체와 접합하기 전에 페이로드 2와 3을 프로테아제 카텝신 B에 의한 절단에 대한 민감성에 대해 분석하였다(도 5). 결과는 페이로드 2와 3이 카텝신 B에 의해 절단되어 유리된 약물 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)를 방출함을 보여준다.
도 5는 도 5A에서 프로테아제 카텝신 B와의 소화 반응 동안 페이로드 2를 함유하는 발린-시트룰린(vc)의 RP-HPLC 분석을 보여준다(각 vc 부분에 대해 1:1000). 분석에 앞서 E-64로 반응을 정지시켰다. 반응 시간 150분 후의 크로마토그램은 220 nm에서 기록되었다. 도 5B의 플롯은 카텝신 B와 반응하는 동안 시간 경과에 따른 유리 MMAE의 증가(검정)와 페이로드 2의 감소(회색, 원)를 보여준다. 도 5C는 페이로드 3의 절단을 보여준다. 페이로드 3과 카텝신 B의 반응 중에 하나의 MMAE 모이어티를 포함하는 중간체가 형성된다(회색, 삼각형).
실시예 2: ADC의 시험관내 안정성
실시예 1에 기술된 브렌툭시맙 ADC의 안정성을 설명하기 위해, 발명자들은 형광 염료 SYPRO Orange를 기반으로 열 스트레스 테스트를 수행하였다. DSF 실험은 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC가 해당 mAb와 유사한 융점을 가짐을 밝혔다 (브렌툭시맙 Tm = 71.0℃, 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC Tm = 70.9 - 72.9℃). 이는 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 항체 유사 안정성을 보여준다. 비교에 사용된 브렌툭시맙 베도틴은 융점이 68.5℃로 더 낮았고 용융 곡선은 더 높은 온도 범위를 포함하고 있었다. 또한 ADC의 안정성 연구를 완충액과 마우스 혈장에서 수행했다. 완충액에 보관된 시료를 SEC를 통해 분리하여 HMWS(High Molecular Weight Species)의 형성을 분석하였다. 4℃에서 2주간 보관한 후에도 크로마토그램에서 유의한 변화는 관찰되지 않았다. 그러나 고온에서 보관하는 동안 차이가 나타났다. 제조업체 지침에 따라 브렌툭시맙 베도틴을 용해한 후 0.74%의 HMWS가 결정되었다. 이 값은 40℃에서 14일 동안 보관하는 동안 11.44%로 증가했는데, 이는 HMWS가 15.5배 증가했음을 나타낸다. 이러한 값과 비교하여 매우 안정적이고 HMWS 함량의 낮은 1.0 내지 5.0배 증가가 측정된 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC가 측정되었다(도 6A). 브렌툭시맙 LC-3 DAR 4는 브렌툭시맙 베도틴과 동일한 약물 부하를 포함하므로(DARav 4) 페이로드에 의해 유도된 높은 소수성을 특징으로 하지만 HMWS 함량의 낮은 증가가 측정되었다. DAR 4를 갖는 Tub-태그 ADC Bren. LC-3을 제조한 후 0.47%의 HMWS가 결정되었다. 40℃에서 보관하는 동안 HMWS가 2.34%로 약간만 증가한 것으로 관찰되었다(도 6C, 브렌툭시맙 베도틴에 대한 결과 비교를 위해 도 6B에 도시됨).
도 6은 높은 온도에서 브렌툭시맙 베도틴 및 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 보관한 결과를 보여준다. 도 6A는 Bren. LC-2(vc-PAB-MMAE) (또한 본 명세서에서 "Bren. LC-3"으로 표시됨); Bren. LC-vc-PAB-MMAE (또한 본 명세서에서 "Bren. LC-2"로 표시됨); Bren. HC-vc-PAB-MMAE (또한 본 명세서에서 "Bren. HC-2"로 표시됨); 및 브렌툭시맙 베도틴에 대한 연구 과정 동안 HMWS의 증가를 보여준다. 브렌툭시맙 베도틴에서 가장 높은 집합체 함량 증가를 볼 수 있다. 이에 비해 Tub-태그 ADC의 HMWS 함량은 거의 일정하게 유지된다. 도 6B 및 6C는 페이로드 3과 접합된 브렌툭시맙 베도틴(평균 약물 대 항체 비(DARav) 4) 및 Bren. LC(Bren. LC-3, DAR 4)에 대해 220 nm에서 기록된 정규화된 흡수 스펙트럼을 보여주는 SEC 크로마토그램을 보여준다.
또한 마우스 혈장에서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 안정성을 평가한 결과 Tub-태그 ADC의 우수한 안정성을 보였다. 대조적으로, 브렌툭시맙 베도틴은 빠르게 분해되었다(도 7, 표 1). 브렌툭시맙 베도틴과 같은 말레이미드 연결 ADC의 급속한 분해가 최근에 나타났으며 retro-Michael 첨가가 이러한 관찰에 대한 하나의 설명이 될 수 있다.
표 1: 브렌툭시맙 베도틴 및 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 마우스 혈장에서 37℃에서 7일 동안 보관.
도 7 은 브렌툭시맙 베도틴과 비교하여 마우스 혈장에서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 안정성에 대한 예시적인 설명을 보여준다. 도 7A 및 7B 는 브렌툭시맙 베도틴을 37℃에서 마우스 혈장에 보관한 결과를 보여준다. 도 7C 및 7D 는 Bren. LC- 3 DAR 4를 37℃에서 마우스 혈장에 보관한 결과를 보여준다.
실시예 3: ADC의 시험관내 효능
본 발명자들은 이어서 세포 기반 생존능 검정에서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 시험관내 효능을 평가하고 그 결과를 브렌툭시맙 베도틴과 비교하였다. CD30 과발현 세포주 Karpas299와 CD30 음성 세포주 HL60을 이 레자주린 분석에 사용했다(도 8). 항원 양성 세포주 Karpas299에서 브렌툭시맙 베도틴(IC50 = 2.08)에 대해 결정된 IC50 값은 문헌 데이터와 일치했다. 전반적으로, 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC는 낮은 IC50 값과 우수한 시험관내 효능을 보였다(표 2).
표 2: 레자주린 분석으로 결정된 브렌툭시맙 베도틴 및 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 IC50 값.
도 8은 CD30 과발현 세포주 Karpas299 및 CD30 음성 세포주 HL60에서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 시험관내 효능을 나타낸다.
실시예 4: 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 생체내 효능
브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 생체내 효능은 면역 결핍 CB17-SCID 마우스에서 Karpas299 유래 종양 모델로 평가되었다. 도 9와 10에서 볼 수 있듯이 Bren. LC-2는 브렌툭시맙 베도틴과 유사한 예상치 못한 높은 생체내 효능을 보였다. 이러한 관찰은 브렌툭시맙 LC-2가 4개의 MMAE 분자에 접합된 브렌툭시맙 베도틴과 비교하여 DAR 2 MMAE ADC이므로 약물 로딩의 절반을 갖추고 있다는 사실에도 불구하고 이루어졌다. 게다가 예상외로 Bren. LC-3은 평균 생존율이 2.5배 증가하여 브렌툭시맙 베도틴의 생체내 효능을 상당히 능가했다(도 11).
도 9는 종양 부피(cm3)로 표시된 Bren. LC-2의 생체내 효능을 보여준다. Bren. LC-2의 생체내 효능을 평가하기 위해 종양 부피가 100 내지 150 mm3인 마우스를 무작위로 선택하고 종양 이식 후 7일과 10일에 1.5 mg/kg을 2회 주사하여 치료를 수행했다.
도 10은 치료된 동물의 생존율(Kaplan-Meier-Plot) 및 종양 부피(cm3)로 표현된 Bren. LC-2의 생체내 효능을 보여준다. Bren. LC-2의 생체내 효능을 평가하기 위해 종양 부피가 100 내지 150 mm3인 마우스를 무작위로 선택하고 1.0 mg/kg을 1회 주사하여 치료를 수행했다.
도 11은 치료된 동물의 종양 부피(cm3) 및 생존율로 표현된 Bren. LC-3의 생체내 효능을 보여준다. Bren. LC-3의 생체내 효능을 평가하기 위해 종양 부피가 100 내지 150 mm3인 마우스를 무작위로 선택하고 종양 이식 후 8일과 11일에 0.5 mg/kg을 2회 주사하여 치료를 수행했다.
실시예 5: 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 약동학
브렌툭시맙 Tub-태그 ADC가 높은 시험관내 안정성 및 우수한 생체내 효능을 특징으로 한다는 놀라운 발견에 동기를 부여받은 발명자들은 시험관내 안정성이 살아있는 유기체로 변환되는지 여부를 밝히고 Sprague Dawley 래트에서 약동학 분석을 수행하기를 원했다. 1일째 단일 정맥내(볼루스) 주사로 시험 아이템을 동물에게 투여하였다. 시간 경과에 따른 ADC 함량을 분석하기 위해 ELISA 기반 분석법이 개발되어 항체와 온전한 ADC를 검출하였다(항체에 연결된 페이로드를 측정). 전체 항체 분석은 항체 클리어런스에 대한 유용한 정보를 제공하며 온전한 ADC 분석과 비교한 검출 차이는 항체의 페이로드 손실을 설명할 수 있다. 또한, 본 발명자들은 페이로드 손실 및 혈액 단백질로의 페이로드 전달의 결정을 용이하게 하는 MS 기반 검정을 개발하였다. 이 연구는 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC가 우수한 생체내 안정성을 가지고 있음을 보여주었다(도 12A). 또한, 브렌툭시맙 베도틴과 달리 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC는 페이로드가 전달되고 혈액 단백질에 공유 결합될 수 있도록 특성화되지 않는다(도 12B).
도 12는 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren LC-2)의 약동학(PK) 분석을 보여준다. 도 12A에는 브렌툭시맙 베도틴과 비교한 온전한 ADC의 양이 제시되어 있다. 도 12B에는 MS-분석에 의해 분석된 혈액 단백질로 전달된 MMAE의 양이 제시되어 있다.
실시예 6: TUB-010의 반복 투여 독성 연구
지금까지 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC는 증가된 생체내 효능 및 안정성을 특징으로 하는 것으로 나타났다. 따라서, 발명자들은 증가된 생체내 안정성이 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 유익한 독성학적 프로파일을 초래하는지 여부를 궁금해했다. 이것은 개선된 효능과 조합된 개선된 독성학적 프로파일이 상당히 넓어진 치료 범위를 유도할 수 있고 따라서 환자 치료에 강력한 이점이 될 수 있기 때문에 유리하다. 따라서, 발명자들은 Sprague Dawley 수컷 및 암컷 래트에서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 독성 및 독성동태학을 평가하고 프로파일을 브렌툭시맙 베도틴의 것과 비교하였다. 수컷 및 암컷 Sprague Dawley 래트에게 대조군(비히클), 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC(Bren LC-2)(10 mg/kg) 또는 브렌툭시맙 베도틴(10 mg/kg)을 매주(1일, 8일, 15일 및 22일) 투여하고, 26일째(5마리/성별/그룹)에 주요 투여 단계 부검 및 51일째(5마리/성별/그룹)에 회복 단계 부검을 가졌다. 임상 관찰, 체중 및 음식 소비를 연구 내내 매일 결정하였다. 약동학적 샘플을 각 투여 전, 각 투여 후 15분 및 각 동물의 부검 시에 얻었다. 모든 동물을 부검하고 장기의 무게를 재고 고정액에 유지시켰다. 임상 병리학(혈액학, 임상 화학 및 응고 종말점) 샘플도 부검 시 또한 채취했다. 온전한 ADC 및 총 항체의 평균 혈청 농도는 도 13에 제시되어 있다. 그래프는 Bren LC-2를 사용한 투여가 반복 투여 후 생체내에서 합리적인 수준의 혈청 농도를 초래한다는 것을 명확하게 입증한다. 온전한 ADC와 Bren LC-2에 대한 총 항체 사이의 높은 중첩은 생체내 구조의 우수한 안정성을 다시 한 번 강조하고 브렌툭시맙 베도틴 그룹과 차별화한다.
도 13은 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC에 대해 1일, 8일, 15일 및 22일째에 10 mg/kg의 정맥내(볼루스) 투여 후 수컷 및 암컷 래트에서 온전한 ADC 및 전체 항체의 평균 혈청 농도를 브렌툭시맙 베도틴의 것과 비교한 것이다.
브렌툭시맙 베도틴과 달리 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC(Bren LC-2)에서는 적혈구 집단에 대한 영향이 관찰되지 않았다. 이것은 임상 실습에서 브렌툭시맙 베도틴에 의해 관찰된 빈혈(및 잠재적으로 혈소판 감소증)을 상쇄할 수 있다. 예상되는 MMAE 구동 고환 변화는 Bren LC-2와 브렌툭시맙 베도틴 모두에서 관찰되었지만 Bren LC-2에서는 발병이 지연되었으며 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 안정성이 고환 독성의 발병 지연에 역할을 할 가능성이 있다. Bren. LC-2의 예시적인 독성 프로파일은 도 14에 제시되어 있다.
도 14는 수컷 및 암컷 래트에서 브렌툭시맙 베도틴(오른쪽 막대)의 독성 프로파일과 비교한 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC(Bren LC-2)(왼쪽 막대)의 예시적인 독성 프로파일을 보여준다. 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC Bren LC-2에 대한 도 14에 도시된 매개변수는 마이크로리터당 카운트 단위의 망상적혈구(K/μl의 RET), 마이크로리터당 백만 단위의 적혈구(M/μL의 RBC), 마이크로리터당 백만 단위의 헤모글로빈(M/μL의 Hb), 부피 퍼센트 단위의 헤마토크리트(%의 HTC), 마이크로리터당 카운트 단위의 호산구(K/μl의 EOS), 초 단위의 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(APPT)(초), 리터당 밀리몰 단위의 포도당 수준(mmol/L), 그램 단위(g)의 흉선 중량 및 그램 단위(g)의 고환 중량이다. 참고로, 래트에게 대조군(비히클)을 투여했다(데이터는 제시되지 않음).
특히 도 14는 하기를 나타낸다:
망상적혈구 : 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료는 망상적혈구 수에 현저한 영향을 미치는 반면, 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료에서는 영향이 관찰되지 않았다. 따라서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료에서는 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료에 비해 임상에서 빈혈이 적을 것으로 예상된다(적혈구, 헤모글로빈 및 헤마토크리트 데이터와 일치).
적혈구 : 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료는 적혈구 수에 현저한 영향을 미치지만 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료에서는 현저한 영향이 관찰되지 않았다. 따라서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료는 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료에 비해 임상에서 빈혈이 적을 것으로 예상된다(적혈구, 헤모글로빈 및 헤마토크리트 데이터와 일치).
헤모글로빈 : 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료는 헤모글로빈 수치가 감소하지만(주로 남성에서) 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료에서는 현저한 영향이 관찰되지 않았다. 따라서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료는 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료에 비해 임상에서 빈혈이 적을 것으로 예상된다(적혈구, 헤모글로빈 및 헤마토크리트 데이터와 일치).
헤마토크리트 : 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료는 헤마토크리트가 감소하지만(주로 남성에서) 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료에서는 현저한 영향이 관찰되지 않았다. 따라서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료는 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료에 비해 임상에서 빈혈이 적을 것으로 예상된다(적혈구, 헤모글로빈 및 헤마토크리트 데이터와 일치).
호산구 : 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료는 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료와 비교하여 더 낮은 호산구 수를 초래한다. 이것이 백혈구에 대한 일반화된 효과라고 가정할 때, 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료는 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료에 비해 임상에서 호중구 감소증이 적을 것으로 예상된다.
APTT : 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료는 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료와 비교하여 더 낮은 APTT 값을 초래한다. 브렌툭시맙 베도틴은 임상에서 응고 시간/APTT에 영향을 미치지 않기 때문에, 제공된 데이터를 고려할 때 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC도 혈액 응고 시간과 관련하여 어떠한 우려도 일으키지 않을 것으로 예상된다.
포도당 : 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료는 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료와 비교하여 더 높은 포도당 수준을 초래한다. 따라서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료는 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료에 비해 더 낮은 포도당 수준을 초래한다. 따라서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료는 임상에서 브렌툭시맙 베도틴으로 치료하는 동안 관찰된 고혈당증이 발생할 것으로 예상되지 않는다.
흉선 : 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료는 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료와 비교하여 더 낮은 흉선 중량을 초래한다. MMAE를 포함하는 ADC로 치료하는 동안 관찰되는 흉선 중량 변화는 전형적인 표적 비의존성/유리 독소 관련 독성이며, 이는 MMAE에 의해 유발되는 세포 고갈로 인해 발생한다. 따라서, 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC는 브렌툭시맙 베도틴과 비교하여 덜 표적 비의존성/유리 MMAE 관련 독성과 관련하여 더 유리한 임상 안전성 프로파일을 가질 것으로 예상된다.
고환 : 브렌툭시맙 베도틴을 사용한 치료는 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC를 사용한 치료와 비교하여 더 낮은 고환 중량을 초래한다. MMAE를 포함하는 ADC로 치료하는 동안 관찰되는 고환 무게 변화는 전형적인 표적 비의존성/유리 독소 관련 독성이다. 따라서, 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC는 브렌툭시맙 베도틴과 비교하여 덜 표적 비의존성/유리 MMAE 관련 독성과 관련하여 더 유리한 임상 안전성 프로파일을 가질 것으로 예상된다.
전반적으로, 제공된 데이터는 래트에서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC가 브렌툭시맙베도틴에 비해 더 나은 안전성 프로파일을 가지고 있음을 보여준다. 따라서 임상에서 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC는 빈혈, 호중구 감소증 및 고혈당증을 포함하여 브렌툭시맙 베도틴의 특정 용량 제한 독성을 유발할 것으로 예상되지 않는다. 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC의 경우, 브렌툭시맙 베도틴과 관련된 표적 비의존성/유리 독소 관련 독성이 없기 때문에 브렌툭시맙 베도틴을 비롯해 MMAE를 포함하는 많은 ADC에서 나타나는 말초 신경병증과 같은 특성 변화를 상쇄할 수 있다.
실시예 7: 사이노몰구스(cynomolgus) 원숭이에서 브레툭시맙 Tub-태그 MMAE의 반복 투여 독성 연구
다음으로, 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)의 독성을 사이노몰구스 원숭이에서 평가하였다. 이 연구의 목적은 사이노몰구스 원숭이에서 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)의 독성 및 독성동태(TK)를 평가하는 것이었다. 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC는 6, 12 및 15 mg/kg(6mg/kg의 경우 Q3Wx4, 12 및 15 mg/kg의 경우 Q3Wx2)으로 투여되었다. 임상 상태(체중, 음식 소비 및 임상 관찰 포함), 임상 병리학 및 면역표현형(T, B 및 NK 세포)을 TK 및 항약물 항체 결정을 위해 빈번하게 샘플링하면서 연구 전반에 걸쳐 평가했다. 모든 동물은 자세한 거시적 관찰과 함께 전체 부검을 받았다. 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)는 6, 12 및 15 mg/kg에서 임상적으로 체중에 영향을 주지 않고 내약성이 우수했다. Adcetris는, FDA PharmTox 검토에 따르면 사이노몰구스 원숭이에서 6 mg/kg으로 내약성이 좋지 않았으며(MTD는 3 mg/kg), 첫 번째 투여 후 11일과 15일 사이에 사망 및 조기 안락사가 발생했다. 대조적으로, 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)에 대한 이 연구에서 사망률 및 거시적 또는 현미경적 소견은 관찰되지 않았다. 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)에 대하여 12 및 15 mg/kg에서 적혈구(RBC), 헤모글로빈 및 호중구의 감소가 나타났으며 Adcetris 3 mg/kg에서 관찰된 것(과거 데이터)과 비교적 일치했다. 더욱이, 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)는 도 19에 나타낸 바와 같이 독성동태학 분석에서 높은 안정성을 특징으로 하였다.
시간 경과에 따라 사이노몰구스 원숭이 혈청에서 ADC 함량을 분석하기 위해, 항체 및 온전한 ADC 함량을 검출하는 ELISA 기반 검정이 개발되었다(항체에 연결된 페이로드를 측정함으로써; 래트에서의 약동학 및 반복 투여 독성 연구에서 동일한 ELISA 검정 설정이 사용되었으며, 상기 검정은 사이노몰구스 원숭이 혈청에서 사용하기 위해 분석이 추가로 검증된 점에서 차이가 있다). 전체 항체 분석은 항체 클리어런스에 대한 유용한 정보를 제공하며 온전한 ADC 분석과 비교한 검출 차이로써 항체의 페이로드 손실을 설명할 수 있다. 도 19에서 온전한 ADC와 전체 mAb 곡선의 높은 중첩은 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE의 최소 페이로드 손실 및 높은 ADC 안정성을 보여준다.
도 19는 12 및 15 mg/kg을 투여한 사이노몰구스 원숭이에서 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(즉, Bren. LC-2)의 독성동태학 분석을 나타낸다. mAb 및 온전한 ADC의 총량을 ELISA로 평가했다. 온전한 ADC와 총 mAb 곡선의 높은 중첩은 두 용량 수준에서 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE의 높은 안정성을 보여준다. 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren LC-2)의 반복 용량 연구 동안, 사이노몰구스 원숭이의 체중 및 다양한 혈액 값, 즉 림프구, 호중구 및 백혈구의 농도를 모니터링했다.
도 20은 사이노몰구스 원숭이에서 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(즉, Bren. LC-2)의 반복 투여 연구를 통해 수집된 다양한 혈액 값의 선택 및 체중에 대해 수득된 값을 나타낸다. 보다 상세하게는, 도 20, 왼쪽 상단 패널은 시간에 따른 체중을 나타낸다. 도 20, 오른쪽 상단 패널은 시간 경과에 따른 림프구 농도를 나타낸다. 도 20, 왼쪽 하단 패널은 시간 경과에 따른 호중구 농도를 나타낸다. 도 20, 오른쪽 하단 패널은 시간 경과에 따른 백혈구 농도를 나타낸다. 데이터는 각각의 경우에, FDA 보고서 "Clinical Pharmacology And Biopharmaceutics Review(s) for application number 125388Orig1S00 (https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/nda/2011/125388orig1s000clinpharmr.pdf 에서 확인가능) 에 기술된 브렌툭시맙 베도틴(Adcetris)에 대한 독성 연구 결과와 비교하여, 6, 12 및 15 mg/kg 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)를 반복적으로 투여한 2마리 암컷 동물의 3개 그룹의 평균 및 오차로 제시된다. 체중은 킬로그램 단위로, 림프구는 리터당 10억 단위로, 호중구는 리터당 10억 단위로, 백혈구는 리터당 10억 단위로 표시된다.
임상에서 브렌툭시맙 베도틴의 용량 제한 독성 중 하나는 호중구 감소증이다. 도 20, 좌측 하단 패널에 도시된 데이터세트는 브렌툭시맙 베도틴 용량(3 mg/kg)의 2배(6 mg/kg), 4배(12 mg/kg) 및 5배(15 mg/kg)를 적용하더라도 브렌툭시맙 Tub-태그 MMAE(Bren. LC-2)가 유리하게도 브렌툭시맙 베도틴과 직접 비교하여 더 많은 양의 호중구 감소를 야기하지 않는다는 것을 보여준다. 또한, 체중 증가가 관찰되었다(도 20, 왼쪽 상단 패널). 림프구 농도와 백혈구 농도의 유의한 변화는 확인되지 않았다. (도 20, 오른쪽 상단 패널과 오른쪽 하단 패널).
관찰된 호중구 농도의 조합, 연구 전반에 걸쳐 모든 동물에 대한 체중 증가, 및 백혈구 및 림프구 농도의 유의한 변화 없음은 본 발명의 ACD의 양호한 내약성을 분명히 보여주며, 이는 브렌툭시맙 베도틴의 내약성을 능가한다. 따라서 데이터는 브렌툭시맙 베도틴을 능가하는 임상에서의 양호한 내약성을 명확하게 시사한다.
요약하면, 제시된 결과는 브렌툭시맙 Tub-태그 ADC가 우수한 생체내 효능 및 독성 프로파일로 해석되는 시험관내 및 생체내 예기치 않게 높은 안정성을 특징으로 한다는 것을 보여준다.
SEQUENCE LISTING <110> Ludwig-Maximilians-Universitaet Muenchen Forschungsverbund Berlin e.V. <120> IMPROVED CD30 TARGETING ANTIBODY DRUG CONJUGATES AND USES THEREOF <130> IPA-0286-EP/TUB17066PCT <160> 14 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Brentuximab/cAC10 heavy chain <400> 1 Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu 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Claims (46)

  1. (a) 브렌툭시맙; 및
    (b) 적어도 하나의 약물 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)로서,
    상기 브렌툭시맙은 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 중쇄와 경쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열 및 비천연 아미노산을 포함하고,
    상기 약물 모이어티는 링커를 통해 각각의 비천연 아미노산에 커플링되는, 항체-약물 접합체(ADC).
  2. 제1항에 있어서, 브렌툭시맙의 중쇄는 서열 번호 1을 포함하거나, 서열 번호 1로 이루어지거나, 서열 번호 1과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖고/갖거나,
    브렌툭시맙의 경쇄는 서열 번호 2를 포함하거나, 서열 번호 2로 이루어지거나, 서열 번호 2와 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는, 항체-약물 접합체(ADC).
  3. 제2항에 있어서, 브렌툭시맙은 서열 번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 및 서열 번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄로 이루어진 것인, 항체-약물 접합체(ADC).
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 약물 모이어티는 캄프토테신, 메이탄시노이드, 칼리케아마이신, 듀오카르마이신, 튜불리신, 아마톡신, 돌라스타틴 및 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 피롤로벤조디아제핀 이량체, 인돌리노-벤조디아제핀 이량체, 방사성동위원소, 치료용 단백질 및 펩티드(또는 이의 단편), 핵산, PROTAC, 키나아제 억제제, MEK 억제제, KSP 억제제, 및 이의 유사체 또는 전구약물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체-약물 접합체(ADC).
  5. 제4항에 있어서, 약물은 MMAE인, 항체-약물 접합체(ADC).
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열은 적어도 아미노산 서열 X1X2X3X4(서열 번호 3)를 가지며, 여기서 X1 및 X2는 임의의 아미노산이고, X3은 E, D 또는 C이고, X4는 E인, 항체-약물 접합체(ADC).
  7. 제6항에 있어서, X2는 G, S, A, V 또는 F이고/이거나 X1은 E, D, A, K 또는 P인, 항체-약물 접합체(ADC).
  8. 제7항에 있어서, 인식 서열은 EGEE (서열 번호 4)인, 항체-약물 접합체(ADC).
  9. 제7항에 있어서, 인식 서열은 VDSVEGEGEEEGEE (서열 번호 5), SVEGEGEEEGEE (서열 번호 6), SADGEDEGEE (서열 번호 7), SVEAEAEEGEE (서열 번호 8), SYEDEDEGEE (서열 번호 9), 또는 SFEEENEGEE (서열 번호 10)인, 항체-약물 접합체(ADC).
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 비천연 아미노산은 2-치환, 3-치환 또는 4-치환 티로신 또는 벤질 위치에서 치환된 티로신 유도체인, 항체-약물 접합체(ADC).
  11. 제10항에 있어서, 상기 3- 또는 4-치환 티로신 유도체는 3-니트로티로신, 3-아미노티로신, 3-아지도티로신, 3-포르밀티로신, 3-아세틸티로신 또는 4-아미노페닐알라닌인, 항체-약물 접합체(ADC).
  12. 제11항에 있어서, 상기 3- 또는 4-치환 티로신 유도체는 3-포르밀티로신인, 항체-약물 접합체(ADC).
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 절단가능한, 항체-약물 접합체(ADC).
  14. 제13항에 있어서, 링커는 프로테아제에 의해 절단가능한, 항체-약물 접합체(ADC).
  15. 제14항에 있어서, 프로테아제는 카텝신 B와 같은 카텝신인, 항체-약물 접합체(ADC).
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 발린-시트룰린 모이어티를 포함하는, 항체-약물 접합체(ADC).
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 하이드록실아민기를 포함하고 비천연 아미노산은 방향족 고리 내 하이드록실기의 오르토 포르밀기를 포함하고, 링커의 하이드록실아민기는 접합 후 비천연 아미노산의 포르밀기와 옥심을 형성하는, 항체-약물 접합체(ADC).
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 브렌툭시맙은 2개, 4개, 6개 또는 8개의 약물 모이어티에 접합되는, 항체-약물 접합체(ADC).
  19. 제18항에 있어서, 브렌툭시맙은 2개 또는 4개의 약물 모이어티에 접합되는, 항체-약물 접합체(ADC).
  20. 제19항에 있어서, 브렌툭시맙은 2개의 약물 모이어티에 접합되는, 항체-약물 접합체(ADC).
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 1에 나타낸 바와 같은 구조를 갖는, 항체-약물 접합체(ADC):

    상기 식에서, R은 하나 이상의 약물 모이어티로, 이는 하나 이상의 절단 부위에 의해 구조 1의 하이드록실아민에 임의로 커플링된다.
  22. 제21항에 있어서, 구조 1의 하이드록실아민은 비천연 아미노산에 접합되는, 항체-약물 접합체(ADC).
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 한에 있어서, 링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 2 또는 3에 나타낸 바와 같은 구조를 갖는, 항체-약물 접합체(ADC):

    상기 식에서, Z는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 사이클로알킬, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로사이클릴, 치환 또는 비치환 헤테로알킬, 치환 또는 비치환 헤테로알케닐 및 치환 또는 비치환 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    D는 하나 이상의 약물 모이어티이고;
    Y는 카텝신 B와 같은 카텝신에 대한 절단 부위와 같은 절단 부위이다.
  24. 제23항에 있어서, 구조 2 또는 3의 하이드록실아민은 비천연 아미노산에 접합되는, 항체-약물 접합체(ADC).
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 비천연 아미노산에 커플링되기 전에 구조 4 또는 5에 나타낸 바와 같은 구조를 가지며, 여기서 D는 약물 모이어티인, 항체-약물 접합체(ADC).
  26. 제25항에 있어서, 비천연 아미노산은 3-포르밀티로신이고 링커의 하이드록실아민기는 비천연 아미노산의 3-포르밀기와 옥심을 형성하는, 항체-약물 접합체(ADC).
  27. 제26항에 있어서, 약물 모이어티는 MMAE인, 항체-약물 접합체(ADC).
  28. 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
    (a) 브렌툭시맙; 및
    (b) 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:

    여기서 물결선은 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타내고,
    상기 브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고; 인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 11을 갖고; 브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 1을 가진다.
  29. 하기를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC):
    (a) 브렌툭시맙; 및
    (b) 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단은 하기 구조를 갖는 기에 아미드 결합을 통해 결합됨:

    여기서 물결선은 각 경쇄의 인식 서열의 C-말단에 대한 부착을 나타내고,
    상기 브렌툭시맙은 각 경쇄의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 포함하고; 인식 서열을 포함하는 각 경쇄는 서열 번호 11을 갖고; 브렌툭시맙의 각 중쇄는 서열 번호 1을 가진다.
  30. 하기를 포함하는, 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 정의된 항체-약물 접합체(ADC)의 제조 방법:
    (a) 브렌툭시맙의 경쇄, 중쇄 또는 경쇄와 중쇄 모두의 C-말단에 튜불린 티로신 리가아제에 대한 인식 서열을 도입하거나 부가하는 단계;
    (b) 단계 (a)에서 얻은 브렌툭시맙을, 튜불린 티로신 리가아제가 상기 브렌툭시맙을 비천연 아미노산과 결찰시키기에 적합한 조건 하에 튜블린 티로신 리가아제 및 비천연 아미노산의 존재 하에서 접촉시키는 단계; 및
    (c) 약물 모이어티를 포함하는 선택적으로 절단가능한 링커를 단계 (b)에서 얻은 상기 결찰된 브렌툭시맙에 접합시키는 단계.
  31. 제30항의 방법에 의해 얻을 수 있거나 얻어지는 항체-약물 접합체(ADC).
  32. 제1항 내지 제29항 또는 제31항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체(ADC)를 포함하는 약학적 조성물.
  33. 제1항 내지 제29항 또는 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 질환의 치료 방법에서의 사용을 위한 항체-약물 접합체(ADC).
  34. 제33항에 있어서, 질환은 CD30의 과발현과 관련된 것인, 사용을 위한 항체-약물 접합체(ADC).
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 사용을 위한 항체-약물 접합체(ADC).
  36. 제35항에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)이거나; 또는
    질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL); 또는 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)인, 사용을 위한 항체-약물 접합체(ADC).
  37. 제32항에 있어서, 질환의 치료 방법에서의 사용을 위한 약학적 조성물.
  38. 제37항에 있어서, 질환은 CD30의 과발현과 관련된 것인, 약학적 조성물.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 사용을 위한 약학적 조성물.
  40. 제39항에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)이거나; 또는
    질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL); 또는 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)인, 사용을 위한 약학적 조성물.
  41. CD30의 과발현과 관련된 질환의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 제1항 내지 제29항 또는 제31항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체(ADC)의 용도.
  42. 제41항에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
  43. 제42항에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)이거나; 또는
    질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL); 또는 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)인, 용도.
  44. CD30의 과발현과 관련된 질환의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 제32항의 약학적 조성물의 용도.
  45. 제44항에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성 대세포 림프종(ALCL), 대형 B 세포 림프종, 소아 림프종, T 세포 림프종 및 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL)과 같은 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 비만 세포 백혈병과 같은 백혈병, 생식세포암, 이식편대숙주병(GvHD) 및 루푸스, 특히 전신성 홍반루푸스(SLE)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    질환은 말초 T 세포 림프종 - 달리 명시되지 않은 (PTCL-NOS), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종(AITL), 장질환 관련 T 세포 림프종(EATL), 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL), 결절외 자연 살해/T 세포 림프종(ENKTCL), 간비장 및 장 γ/δ-T 세포 림프종, TFH 표현형을 갖는 림프절 말초 T 세포 림프종, 및 여포성 T 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
  46. 제45항에 있어서, 질환은 호지킨 림프종(HL) 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)이거나; 또는
    질환은 역형성 대세포 림프종(ALCL)을 포함하는 말초 T 세포 림프종(PTCL); 또는 원발성 피부 역형성 대세포 림프종(pcALCL)을 포함하는 피부 T 세포 림프종(CTCL)인, 용도.
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117843513B (zh) * 2024-03-07 2024-05-28 深圳创元生物医药科技有限公司 一种(S)-3-Carboxytyrosine的制备方法

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US633410A (en) 1898-09-22 1899-09-19 George A Ames Ice-cutter.
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
WO2004010957A2 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
SI2281006T1 (sl) 2008-04-30 2017-12-29 Immunogen, Inc. Premreževalci in njihova uporaba
TWI535445B (zh) 2010-01-12 2016-06-01 安可美德藥物股份有限公司 Ｗｎｔ拮抗劑及治療和篩選方法
AU2013206976A1 (en) 2012-01-06 2014-07-24 Linxis B.V. Method for preparing cell targeting conjugates, and the complexes obtained
JP6239597B2 (ja) 2012-05-15 2017-11-29 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． 薬物コンジュゲート、コンジュゲーション方法およびその使用
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
WO2014177771A1 (en) 2013-05-02 2014-11-06 Glykos Finland Oy Conjugates of a glycoprotein or a glycan with a toxic payload
WO2015057063A1 (en) 2013-10-14 2015-04-23 Synaffix B.V. Modified glycoprotein, protein-conjugate and process for the preparation thereof
CN105829543B (zh) 2013-10-14 2021-06-01 西纳福克斯股份有限公司 糖基改造的抗体、抗体-缀合物及其制备方法
CA2921707C (en) 2013-10-15 2023-03-28 Seattle Genetics, Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
IL290330B2 (en) 2013-12-19 2023-09-01 Seagen Inc Methylene carbamate binders for use with drug-targeting conjugates
DK3160513T3 (da) 2014-06-30 2020-04-06 Glykos Finland Oy Saccharidderivat af en toksisk payload og antistofkonjugater deraf
ES2740907T3 (es) 2014-10-03 2020-02-07 Synaffix Bv Enlazador de sulfamida, conjugados de los mismos y métodos de preparación
PL3212659T3 (pl) 2014-10-29 2020-09-21 Ludwig-Maximilians-Universität München Środki i sposoby miejscowo-specyficznej funkcjonalizacji polipeptydów
CN109069658B (zh) * 2016-02-08 2022-10-14 西纳福克斯股份有限公司 用于靶向her2肿瘤的具有改善的治疗指数的抗体-缀合物以及用于改善抗体-缀合物的治疗指数的方法
CA3021526A1 (en) * 2016-04-28 2017-11-02 Forschungsverbund Berlin E.V. Unusual substrates of tubulin tyrosine ligase
SG11201908520TA (en) * 2017-03-14 2019-10-30 Shimadzu Corp Method for simultaneous quantification of monoclonal antibodies
GB201820864D0 (en) * 2018-12-20 2019-02-06 J A Kemp Antibody-drug conjugates

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