KR20230122772A - 금선련 캘러스 추출물 및 이를 포함하는 항염증제 - Google Patents

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KR20230122772A
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Abstract

본 발명은 금선련 캘러스 추출물, 이를 포함하는 항염증제 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 염증성 물질들의 생성을 억제하여 세포 생존율을 높이고 염증 증상을 약화시킬 수 있는 항염증제를 제공한다.

Description

금선련 캘러스 추출물 및 이를 포함하는 항염증제{Jewel Orchid(Anoectochilus Formosanus) Callus Extract and Anti-inflammatory Agent containing the same}
본 발명은 금선련 캘러스 추출물 및 이를 포함하는 항염증제에 관한 것으로, 구체적으로는 염증 매개체로 알려진 NO(Nitric Oxide), PGE2(Prostagladin E2), 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-6 및 IL-1β), iNOS 및 COX-2와 같은 염증성 물질의 활성을 억제할 수 있는 금선련 캘러스 추출물 및 이를 포함하는 항염증제에 관한 것이다.
염증은 외부에서 체내로 들어온 해로운 물질이나 유기체와 같은 여러 요인에 의하여 세포나 조직이 손상을 입거나 파괴되었을 경우, 손상을 최소화하고 부위를 원상복구하기 위하여 국소적으로 발생하는 면역반응이다. 이는 생체를 보호하고 조직 손상으로 생성되는 반응 산물들을 제거하는데 매우 유용한 방어 기제이나, 이러한 방어 기제가 지나쳐 통증, 부종, 발적 또는 발열과 같은 장기의 기능장애를 유발하기도 한다.
정상적인 경우 염증은 생체 내에서 염증반응을 통해 발병의 요인을 중화 또는 제거하고 상한 세포 또는 조직을 재생하여 정상적인 구조와 기능을 회복시키는 작용을 수행하지만, 염증의 정도가 심해지거나 만성화되는 경우 건강상 문제가 발생할 수 있다.
최근 밝혀진 바에 따르면, 체내 염증반응의 진행은 COX-2(cyclooxygenase) 효소 활성, NO(Nitric Oxide)를 합성하는 NOS에 의한 강력한 염증 반응이 나타날 수 있는 것으로 알려졌다.
효과적인 염증의 완화를 위해서는 NO의 생성을 억제하고, 이로 인한 COX-2 효소의 연쇄적인 생성 억제를 기대할 수 있는 바, 이러한 기작의 항염증제의 연구 개발이 필요한 실정이다.
단, 일반적으로 사용하는 물질 중 인도메타신은 일반의약품이나 화장품으로는 사용할 수 없는 물질이며, 하이드로코티존은 사용량에 제한이 있으며, 감초산 및 그 유도체는 안정화가 매우 어렵거나 용해도가 매우 낮아 실제 제품 적용시 농도를 맞추기 어려워 실질적 효과가 적다는 문제점이 있다. 즉, 이와 같은 대부분의 항염증제는 피부 안전성 또는 배합 시의 안정성에 문제점이 있어 자유로운 사용이 제약되는 문제점이 있다.
따라서, 천연 유래 물질로써, 전술한 부작용이나 세포 독성이 적으며 효과적인 항염증 성능을 갖는 물질의 연구 개발이 필요한 실정이다.
(0001) 대한민국 등록특허공보 제10-0414453호 (1998. 04. 30. 공개) (0002) 대한민국 공개특허공보 제10-2021-0142362호 (2020. 05. 18. 공개) (0003) 대한민국 등록특허공보 제10-1093901호 (2010. 09. 24. 공개)
상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 본 발명은 금선련으로부터 추출한 추출물로 효과가 우수한 항염증제를 제조하여 이를 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 양태는 금선련 캘러스 추출물에 관한 것이다.
상기 일 양태에 있어, 상기 금선련으로부터 추출하여 농축 후 건조하여 분말화된 것일 수 있다.
상기 일 양태에 있어, 상기 금선련 캘러스 추출물은 금선련의 뿌리, 잎, 가구경, 신아, 포의, 꽃대 및 꽃으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상으로부터 생성된 것일 수 있다.
상기 일 양태에 있어, 상기 금선련 캘러스 추출물의 분말 직경은 100nm ~ 5μm일 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 일 양태는 상기 금선련 캘러스 추출물을 포함하는 항염증제에 관한 것이다.
상기 다른 일 양태에 있어, 상기 항염증제는 금선련으로부터 C1-C4 알코올을 사용하여 추출한 금선련 캘러스 추출물을 포함하며, 상기 금선련 캘러스 추출물의 농축물을 분말화함으로써 형성된 것일 수 있다.
상기 다른 일 양태에 있어, 상기 항염증제는 NO(Nitric Oxide) 및 PGE2(Prostaglandin E2)의 생성을 억제하는 것일 수 있다.
상기 다른 일 양태에 있어, 상기 항염증제는 TNF-α, IL-6 및 IL-1β로 이루어진 염증성 사이토카인 군의 활성을 억제하는 것일 수 있다.
상기 다른 일 양태에 있어, 상기 항염증제는 NOS(Nitric Oxide Synthase) 및 COX-2(Cyclooxygenase-2) 단백질 발현을 억제하는 것일 수 있다.
상기 다른 일 양태에 있어, 상기 항염증제는 배지에 1 내지 1,000 mg/ml의 농도로 존재하는 것일 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 일 양태는 상기 금선련 캘러스 추출물 및 상기 항염증제의 제조방법에 관한 것이다.
상기 또 다른 일 양태에 있어, 상기 금선련 캘러스 추출물의 제조방법은 구체적으로 원료 물질을 건조 분쇄하는 단계; 분쇄된 추출물과 증류수를 1:5~15의 중량비 또는 부피비로 혼합하여 1차 추출하는 단계; 1차 추출액을 2차 추출하는 단계; 2차 추출액을 여과하여 상등액을 수득하는 단계; 상등액을 농축하는 단계; 및 농축된 상등액을 건조하여 분말화하는 단계;를 포함하는 것일 수 있다.
상기 또 다른 일 양태에 있어, 상기 1차 추출 및 2차 추출은 100~140℃에서 수행되는 것일 수 있다.
상기 또 다른 일 양태에 있어, 상기 1차 추출 및 2차 추출은 1 내지 5시간 동안 수행되는 것일 수 있다.
상기 또 다른 일 양태에 있어, 상기 건조는 동결건조법으로 수행되며, 영하 80~150℃에서 수행되는 것일 수 있다.
또한, 상기 항염증제의 제조방법은, 전술한 금선련 캘러스 추출물의 제조방법에 더하여, 금선련 캘러스 추출물을 배지에 희석함으로써 항염증제를 제조하는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 항염증제는 염증성 물질을 감소시키고 세포 독성을 완화하여 염증으로 인한 세포 괴사를 막고 환부의 고통을 줄일 수 있는 장점이 있다.
도 1은 본 발명의 실시예 및 비교예의 세포 생존율 및 NO 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예 및 비교예의 PGE2 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예 및 비교예의 COX-2 및 iNOS 단백질 발현의 억제율을 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예 및 비교예의 염증성 Cytokine 생성량을 나타낸 그래프이다.
이하 본 발명에 따른 금선련 캘러스 추출물, 이를 포함하는 항염증제 및 이의 제조방법에 대하여 상세히 설명한다. 다음에 소개하는 도면들은 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 예로써 제공하는 것이다. 따라서, 본 발명은 이하 제시되는 도면들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있으며, 이하 제시되는 도면들은 본 발명의 사상을 명확히 하기 위해 과장되어 도시될 수 있다. 이때, 본 발명에서 사용하는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가지며, 하기의 설명 및 첨부 도면에서 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 설명은 생략한다.
본 발명은 금선련으로부터 추출한 금선련 캘러스 추출물과, 상기 금선련 캘러스 추출물을 주성분으로 하는 항염증제를 제공한다.
본 발명에 있어, 상기 금선련 캘러스 추출물은 금선련 식물의 모종으로부터 취한 뿌리, 잎, 가구경, 신아, 포의, 꽃대 및 꽃으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상으로부터 생성된 것일 수 있다.
이때, 상기 금선련 캘러스 추출물은 물 또는 C1-C4 알코올을 사용하여 금선련으로부터 추출한 것일 수 있으며, 이는 당업계에 공지된 추출 및 분리 방법을 사용한 것일 수 있다. 상기 추출물의 추출에 사용되는 추출 용매는 구체적으로, 물 또는 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로필 알코올(propanol), 이소프로필 알코올(isopropanol), 1부틸 알코올(butanol), n-부틸 알코올(n-butanol) 및 tert-부틸 알코올(tert-butanol)과 같은 C1-C4 알코올계 유기용매를 사용하는 것일 수 있다.
바람직하게는 본 발명의 추출을 위한 유기용매로는 증류수를 사용할 수 있으나, 이에 반드시 제한되는 것은 아니다. 증류수를 추출 용매로 사용함으로써 추출 시 금선련 식물에 존재하는 수용성 활성 성분이 충분히 추출될 수 있으면서 불필요한 지용성 성분을 배제할 수 있어 더 우수한 항염증 성능을 발현할 수 있다.
상기 금선련 캘러스 추출물의 분말 직경은 100nm ~ 5μm일 수 있다. 분말의 직경을 이와 같이 유지함으로써 염증과 관련된 단백질과의 접촉성이 향상될 수 있다.
상기 항염증제는 분말화된 금선련 캘러스 추출물을 포함하며, 상기 금선련 캘러스 추출물을 배지에 희석함으로써 제조되는 것일 수 있다.
위와 같은 구성을 갖는 상기 항염증제는 NO(Nitric Oxide)의 활성을 억제하는 것일 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 항염증제는 지질다당류로 인해 유도되는 NO의 생성을 농도 의존적으로 감소시킬 수 있으며, 일 예시로 Raw 264.7 세포의 생존율을 80 % 이상으로 유지할 수 있다.
또한, 상기 항염증제는 PGE2(Prostaglandin E2)의 생성을 억제할 수 있다. 구체적으로, 세포에 지질다당류가 첨가되는 경우 PGE2의 생성이 약 40 내지 80% 증가할 수 있으나, 이러한 PGE2 생성량이 증가하는 현상을 본 발명에 따른 항염증제를 첨가함으로써 농도 의존적으로 감소시킬 수 있다.
상기 항염증제는 NOS(Nitric Oxide Synthase) 및 COX-2(Cyclooxygenase-2) 단백질 발현을 억제하는 것일 수 있다. 구체적으로, western blot과 같은 시험을 수행하는 경우, 본 발명에 따른 항염증제가 NOS 및 COX-2의 발현을 농도 의존적으로 감소시킬 수 있다.
상기 항염증제는 TNF-α, IL-6 및 IL-1β로 이루어진 염증성 사이토카인 군의 활성을 억제하는 것일 수 있다. 전술한 세포 독성 경향과 연관되어 본 발명의 따른 항염증제가 염증성 사이토카인을 농도 의존적으로 감소시킬 수 있다.
본 발명에 따른 상기 항염증제는 배지에 1 내지 1,000 mg/ml의 농도로 존재하는 것일 수 있다. 이때, 바람직하게는 10 내지 800 mg/ml, 더욱 바람직하게는 50 내지 500 mg/ml일 수 있으며, 상기 배지는 MEM(Minimal Essential Medium), 또는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)과 같은 최소 필수 배지를 의미하는 것일 수 있다. 이와 같은 농도를 유지함으로써 본 발명에 따른 항염증제의 성능이 극대화될 수 있다.
본 발명은 상기 금선련 캘러스 추출물 및 항염증제의 제조방법을 제공한다.
상기 금선련 캘러스 추출물은 금선련으로부터 물 또는 C1-C4 알코올을 사용하여 추출하는 것으로, 구체적으로 본 발명에서 제공하는 금선련 캘러스 추출물의 제조방법은 상기 금선련 캘러스 추출물을 건조 분쇄하는 단계; 분쇄된 추출물과 증류수를 1:5~15의 중량비 또는 부피비로 혼합하여 1차 추출하는 단계; 1차 추출액을 2차 추출하는 단계; 2차 추출액을 여과하여 상등액을 수득하는 단계; 상등액을 농축하는 단계; 및 농축된 상등액을 건조하여 분말화하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 1차 추출 및 2차 추출은 100 ~ 140℃에서 수행되는 것일 수 있다. 이때, 상기 추출 시 바람직하게는 105 ~ 135℃를 유지하는 것일 수 있으며, 이와 같은 온도에서 추출을 수행함으로써 항염증성을 갖는 성분들의 추출이 원활하게 이루어질 수 있다.
상기 1차 추출 및 2차 추출은 1 내지 5시간 동안 수행되는 것일 수 있으며, 추출 시간이 1시간보다 적은 경우 추출이 충분하게 수행되지 않아 추출물의 항염증 성능이 낮을 수 있으며, 5시간보다 많은 경우 시간 경과에 따른 추출량이 점차 낮아져 효율적이지 않다.
상기 건조는 동결건조법으로 수행되며, 구체적으로 영하 80~150℃에서 수행되는 것일 수 있다.
상기 항염증제의 제조방법은 전술한 금선련 캘러스 추출물의 제조방법에 더하여, 금선련 캘러스 추출물을 배지에 희석하는 단계를 더 포함한다.
전술한 바와 같이, 상기 항염증제는 금선련 캘러스 추출물이 배지 내에 1 내지 1,000 mg/ml의 농도로 존재하는 것일 수 있다. 이때, 바람직하게는 10 내지 800 mg/ml, 더욱 바람직하게는 50 내지 500 mg/ml일 수 있으며, 상기 배지는 MEM(Minimal Essential Medium), 또는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)과 같은 최소 필수 배지를 의미하는 것일 수 있다.
이하, 실시예를 통해 본 발명에 따른 금선련 캘러스 추출물 및 이를 포함하는 항염증제에 대하여 더욱 상세히 설명한다. 다만 하기 실시예는 본 발명을 상세히 설명하기 위한 하나의 참조일 뿐 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니며, 여러 형태로 구현될 수 있다.
또한, 달리 정의되지 않은 한, 모든 기술적 용어 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당업자 중 하나에 의해 일반적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 설명에 사용되는 용어는 단지 특정 실시예를 효과적으로 기술하기 위함이고 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
[금선련 캘러스 추출물의 제조]
건조 분쇄한 금선련 원료 분말에 10배의 증류수를 가하여 121℃를 유지하며 3시간 동안 2회 반복 추출하였다. 회수한 추출액은 5.0㎛의 공극 크기를 갖는 필터(TOYO, Japan)로 여과하여 상등액을 수득하였으며, 상등액을 감압농축기로 농축한 다음, -110℃에서 동결 건조하여 분말화하여 금선련 캘러스 추출물을 제조하였다.
[실시예 1]
금선련 캘러스 추출물을 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's medium)에 400 mg/ml 농도로 희석하였다.
[실시예 2]
금선련 캘러스 추출물을 DMEM에 200 mg/ml 농도로 희석하였다.
[실시예 3]
금선련 캘러스 추출물을 DMEM에 100 mg/ml 농도로 희석하였다.
[비교예 1]
Sigma-Aldrich에서 구입한 지질다당류를 사용하였다.
[비교예 2]
별도의 시료를 첨가하지 않았다.
[세포 배양]
RAW 264.7 세포를 한국세포주은행에서 분양받아 10% fetal bovine serum(FBS)과 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL 스트렙토마이신을 DMEM에 첨가한 배양액을 사용하여 37 ℃, 5 % CO2 인큐베이터에서 배양하였으며, 2일을 주기로 계대 배양하여 안정화하였다.
[특성 평가 방법]
A.Nitric Oxide (NO) 생성 억제 활성 측정
24-well plate에 RAW 264.7 세포를 8.0 × 104 cells/well 농도로 분주하여 37℃, 5% CO2 조건의 인큐베이터에서 24시간 전 배양하였다. 이후 시료와 LPS (1 μg/mL)를 동시 처리하여 24 시간 동안 배양하였으며, 세포독성 측정을 위해 thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT)시약을 첨가하여 위와 동일한 조건의 인큐베이터에서 3시간 동안 반응하였다. 이후 상층액을 제거한 세포에 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 첨가하여 용해하였다. 용해된 세포는 96-well plate에 옮겨 담아 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) reader를 사용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 각 시료 군에 대한 평균 흡광도를 측정하여 대조군의 흡광도 측정값과 비교함으로써 세포독성을 평가하였다.
도 1을 참조하면, 세포 생존율은 지질다당류가 첨가되는 비교예 1의 경우 약 80 % 이하로 낮아지나, 실시예 1 내지 3과 같은 항염증제가 추가되면서 농도 의존적으로 세포 생존율이 높아지는 것을 알 수 있다. 또한, 지질다당류가 첨가됨으로써 급격하게 증가하였던 NO 생성량이, 항염증제의 농도와 반비례하여 점차 줄어드는 것을 알 수 있다.
B.Prostaglandin E 2 (PGE 2 ) 생성 억제 활성 측정
24-well plate에 RAW 264.7 세포를 8.0 × 104 cells/well 농도로 분주하여 37℃, 5% CO2 조건의 인큐베이터에서 24시간 전 배양하였다. 이후 시료와 LPS (1 μg/mL)를 동시 처리하여 24 시간 동안 배양하였으며, 배양된 배지를 10,000 rpm으로 3분 동안 원심분리하여 침전물을 제거한 상등액을 회수하였으며, 회수한 상등액에서 PGE2의 함량을 ELISA kit을 사용하여 측정하였다.
도 2를 참조하면, 비교예 1 내지 3을 비교하였을 때 PGE2가 항염증제의 농도에 의존적으로 생성량이 감소하는 것을 알 수 있다. 단, 비교예 1의 경우 PGE2의 생성량이 낮아 억제 활성 효과가 뛰어난 것은 아니었다.
C.Western blot 분석
RAW 264.7 세포를 4.0 Х 105 cells/well농도로 분주하여 24시간 동안 전 배양한 후 시료와 LPS (1 μg/mL)를 동시 처리하여 24시간 배양하였다. 이후 세포를 PBS로 2회 세척한 뒤, lysis buffer [1ХRIPA (Upstate Cell Signaling Solution, NY, USA), 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), 1 mM Na3VO4, 1 mM NaF, 1 μg/mL aprotinin, 1 μg/mL pepstatin, and 1 μg/mL leupeptin]를 첨가하여 1시간 동안 lysis 시킨 후 원심 분리하여 단백질 상층액을 분리하였다. 단백질 농도는 BCA kit (Bio-Rad, USA)를 사용하여 정량 하였으며, 정량 한 단백질을 10%의 polyacrylamide gel에 전기영동 하였다. 이 후, poly-vinylidene difluoride (PVDF) membrane (Milipore, Burlington, MA, USA)에 200mA, 2시간 동안 전이하였다. 단백질이 전이된 membrane을 5% 탈지 분유를 포함한 0.05% Tween 20/Tris-buffered saline (0.05% T/TBS)에 넣고 상온에서 1시간 blocking 시킨 후 1차 항체와 반응하였으며, 1차 항체 반응은 iNOS antibody (1:1,000, Bio-Rad, USA), COX-2 antibody (1:1,000, Rockland Immunochemicals, Inc. USA), β-actin antibody clone AC-74 (1:5,000, Sigma, USA)를 이용하여 4℃에서 overnight하였다. 이후 0.05% T/TBS 용액으로 3회 세척한 후 2차 항체 (Jackson ImmunoResearch, USA)를 1:10,000으로 희석하여 상온에서 2시간 반응한 뒤, 0.05% T/TBS 용액으로 3회 세척 한 membrane을 ECL kit (Bio-Rad, USA)와 반응시켜 imaging densitometer (model GS-700, Bio-rad, USA)를 통해 현상하였다. 이후 imageJ program (NIH, Bethesda, MD, USA)을 이용하여 β-actin 대비 iNOS와 COX-2의 발현량의 면적을 정량화하여 그래프로 나타내었다.
도 3을 참조하면, 항염증제의 농도가 증가함에 따라 iNOS 및 C0X-2의 생성량이 큰 폭으로 줄어드는 것을 알 수 있다.
D.염증성 사이토카인(TNF-α, IL-6, IL-1 ) 생성 억제 활성 측정
24-well plate에 RAW 264.7 세포를 8.0 Х 104 cells/well의 농도로 분주하여 37℃, 5 % CO2 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 농도 별로 희석한 시료와 LPS (1 μg/mL)를 동시에 처리하여 24 시간 배양하였으며, 배양 배지를 원심분리(10,000 rpm, 3 min)하여 침전물을 제거한 상등액을 염증성 cytokine 측정에 사용하였다. 염증성 cytokine의 측정에는 Mouse TNF-α ELISA Kit (Invitrogen, California, USA), Mouse IL-6 ELISA Kit (BD Biosciences, California, USA), Mouse IL-1β ELISA Kit (R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA)를 이용하였다.
도 4를 참조하면, 모든 염증성 사이토카인을 대상으로 실험한 결과, 항염증제의 농도에 의존적으로 사이토카인 생성이 억제되는 것을 알 수 있다.
종합적으로, 본 발명에서 제공하는 항염증제는 독성이 나타나지 않는 농도에서 LPS에 의해 증가된 NO의 생성을 유의하게 감소시켰다. 이후, 이들의 감소 기전을 확인하기 위하여 western blot assay를 진행한 결과, iNOS와 COX-2의 발현이 농도 의존적으로 감소하였으며, iNOS의 경우 400 μg/ml의 농도에서 무처리군과 유사한 억제 수준을 보였다. 또한, iNOS와 COX-2의 감소 경향이 NO, PGE2 와 유사한 것으로 보아 AFH 처리에 의한 NO, PGE2의 억제 활성이 iNOS와 COX-2의 감소 기전을 통해 조절되었음을 입증하였다.
항염증제가 NO, PGE2외에 염증반응 시 증가하는 것으로 알려진 염증 매개성 사이토카인의 생성에 미치는 영향을 조사하고자 TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 생성을 조사한 결과, IL-1β, IL-6 및 TNF-α의 생성이 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인하였으며, 특히 IL-6의 억제에 가장 효과적인 것으로 확인된다. 반면 TNF-α의 억제에는 뛰어난 활성을 보이지 않았다. 따라서 본 발명에서 제공하는 항염증제는 iNOS와 COX-2의 감소 기전을 통해 NO, PGE2의 생성을 저해하며 IL-1β 및 IL-6의 생성을 효과적으로 억제함으로써 항염증 활성을 나타내는 것으로 사료된다.
이상과 같이 특정된 사항들과 한정된 실시예를 통해 본 발명을 설명하였으나, 이는 본 발명의 전반적인 이해를 돕기 위해서 제공된 것일 뿐, 본 발명은 상기의 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이러한 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다.
따라서, 본 발명의 사상은 설명된 실시예에 국한되어 정해져서는 아니되며, 후술하는 특허청구범위뿐 아니라 이 특허청구범위와 균등하거나 등가적 변형이 있는 모든 것들은 본 발명 사상의 범주에 속한다고 할 것이다.

Claims (13)

  1. 금선련으로부터 추출한 금선련 캘러스 추출물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 금선련 캘러스 추출물은 금선련의 뿌리, 잎, 가구경, 신아, 포의, 꽃대 및 꽃으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상으로부터 형성된 것인 금선련 캘러스 추출물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 금선련 캘러스 추출물의 분말 직경은 100nm ~ 5μm인 금선련 캘러스 추출물.
  4. 금선련으로부터 추출, 농축 후 건조하여 분말화된 금선련 캘러스 추출물을 포함하며, 상기 금선련 캘러스 추출물의 농축물을 건조한 분말을 포함하는 항염증제.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 항염증제는 NO(Nitric Oxide) 및 PGE2(Prostaglandin E2)의 생성을 억제하는 항염증제.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 항염증제는 TNF-α, IL-6 및 IL-1β로 이루어진 염증성 사이토카인 군의 활성을 억제하는 항염증제.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 항염증제는 NOS(Nitric Oxide Synthase) 및 COX-2(Cyclooxygenase-2) 단백질 발현을 억제하는 항염증제.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 항염증제는 배지에 1 내지 1,000 mg/ml의 농도로 존재하는 항염증제.
  9. 금선련으로부터 추출, 농축 후 건조하여 분말화된 금선련 캘러스 추출물의 제조방법에 있어서,
    원료를 건조 및 분쇄하는 단계;
    분쇄된 원료와 증류수를 1:5 ~ 15의 중량비 또는 부피비로 혼합하여 1차 추출하는 단계;
    1차 추출액을 2차 추출하는 단계;
    2차 추출액을 여과하여 상등액을 수득하는 단계;
    상등액을 농축하는 단계; 및
    농축된 상등액을 건조하여 분말화하여 금선련 캘러스 추출물을 제조하는 단계;
    를 포함하는 금선련 캘러스 추출물의 제조 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 1차 추출 및 2차 추출은 100 ~ 140℃에서 수행되는 것인 금선련 캘러스 추출물의 제조 방법.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 1차 추출 및 2차 추출은 1 내지 5시간 동안 수행되는 금선련 캘러스 추출물의 제조 방법.
  12. 제9항에 있어서,
    상기 건조는 동결건조법으로 수행되며, 영하 80 ~ 150℃에서 수행되는 것인 금선련 캘러스 추출물의 제조 방법.
  13. 금선련으로부터 추출하여 농축 후 건조하여 분말화된 금선련 캘러스 추출물을 포함하는 항염증제의 제조방법에 있어서,
    원료를 건조 및 분쇄하는 단계;
    분쇄된 원료와 증류수를 1:5 ~ 15의 중량비 또는 부피비로 혼합하여 1차 추출하는 단계;
    1차 추출액을 2차 추출하는 단계;
    2차 추출액을 여과하여 상등액을 수득하는 단계;
    상기 상등액을 농축하는 단계;
    상기 농축된 상등액을 건조하여 분말화하여 금선련 캘러스 추출물을 제조하는 단계; 및
    상기 금선련 캘러스 추출물을 배지에 희석하여 항염증제를 제조하는 단계;
    를 포함하는 항염증제의 제조 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100414453B1 (ko) 1996-07-12 2004-04-03 동아제약 주식회사 염증성장질환치료제용쑥추출물
KR101093901B1 (ko) 2009-03-11 2011-12-13 주식회사 한국화장품제조 조직배양한 금선련 추출물을 포함하는 화장료 조성물 및 상기 조직배양한 금선련 추출물의 제조방법
KR20210142362A (ko) 2020-05-18 2021-11-25 성균관대학교산학협력단 후베리아 페루비아나 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

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