KR20230118134A - CD6 high 세포 선택적 표적화 및 T eff 세포의 활성감소 방법 - Google Patents

CD6 high 세포 선택적 표적화 및 T eff 세포의 활성감소 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20230118134A
KR20230118134A KR1020237022621A KR20237022621A KR20230118134A KR 20230118134 A KR20230118134 A KR 20230118134A KR 1020237022621 A KR1020237022621 A KR 1020237022621A KR 20237022621 A KR20237022621 A KR 20237022621A KR 20230118134 A KR20230118134 A KR 20230118134A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cells
lymphocytes
itolizumab
cell surface
subject
Prior art date
Application number
KR1020237022621A
Other languages
English (en)
Inventor
스테펀 코널리
지넷 암푸디아
뉴 추 (달레나) 고
쉐리 티 엔지
Original Assignee
이퀼리엄 아이엔씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 이퀼리엄 아이엔씨 filed Critical 이퀼리엄 아이엔씨
Publication of KR20230118134A publication Critical patent/KR20230118134A/ko

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G01N33/56972—White blood cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/04—Screening involving studying the effect of compounds C directly on molecule A (e.g. C are potential ligands for a receptor A, or potential substrates for an enzyme A)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/24—Immunology or allergic disorders
    • G01N2800/245—Transplantation related diseases, e.g. graft versus host disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
    • G01N2800/7095—Inflammation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rehabilitation Therapy (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

이톨리주맙과 같은 항-CD6 항체를 포함하는 방법 및 조성물이 제공되며, 이는 CD6high T세포를 표적화하여, 예를 들어, 세포 상의 세포 표면 CD6 수준을 감소시키고, CD6high T세포의 전체 수준 및 병원성 활성 감소 또는 개체 또는 생체외에서 CD6high:CD6low T 세포의 비율 감소, 및/또는 Treg 세포의 생성 증가, 및 다른 측면들을 포함하여 개체 내 병원성 면역 반응을 조절한다.

Description

CD6 high 세포 선택적 표적화 및 T eff 세포의 활성 감소 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 12월 4일에 제출된 미국 가출원 No.63/121,567의 35 U.S.C.§119(e) 하에 이익을 주장하며, 이는 그 전체가 참조로 포함된다.
서열 목록에 관한 진술
본 출원과 관련된 서열 목록은 서류 사본 대신 텍스트 형식으로 제공되며, 이에 따라 본 명세서에 참조로 포함된다. 서열 목록이 포함된 텍스트 파일명은 EQIL_010_01WO_ST25.txt 이다. 상기 텍스트 파일은 약 10.8 KB이며, 2021년 12월 2일에 생성되었고, EFS-Web을 통해 전자적으로 제출되었다.
기술 분야
본 개시의 실시예는 일반적으로 어떤 세포의 세포 표면 CD6의 수준을 감소시키기 위해 예를 들어, 개체 또는 세포 외(ex vivo) 내 CD6high T 세포 또는 CD6high:CD6low 비율 전체 수준 및 병원 활성을 감소시키는, 개체 또는 세포 외(ex vivo) 내 Teff 세포 또는 Teff:Treg 비율 전체 수준 및 병원 활성을 감소시키는 및 또는 개체 또는 세포 외(ex vivo) 내 Treg 세포 생성을 증가시키는 다른 측면 중 선택적으로 CD6high T세포를 표적화하는 예컨대 이톨리주맙 같은 항-CD6 항체를 포함하는 방법 및 조성물을 제공한다.
관련 기술의 설명
T 세포 또는 T-림프구는 림프구로 알려진 백혈구 그룹에 속하며, 적응 면역에서 중심 역할을 한다. 그들은 T 세포 수용체 (TCR)라고 하는 세포 표면의 특수 수용체의 존재에 의해 B 세포와 같은 다른 림프구 유형과 구별될 수 있다. 감마 델타 T 세포 (γδΤ 세포)와 알파 베타 T 세포 (αβ T 세포) 두 가지 주요 그룹이 있으며; 후자는 CD4 및 CD8 세포를 포함한다. CD4 T 세포는 Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Tfh, 및 Tph와 같은 T 헬퍼 (Th) 아형을 포함하며, 이들은 각각 고유한 사이토카인 프로필을 갖고 면역 반응에서 역할을 한다. CD8 세포는 세포독성 T 세포 (Tc 세포 또는 CTLs)를 포함한다. T 세포는 또한 미감작(naive), 효과 및 기억 (중심, 효과 및 줄기 기억) 아형을 포함하는 활성 상태에 따라 정의된다. 다른 관련 세포는 자연 살해 T 세포 (NKT 세포)와 선천성 림프구 세포(ILC)가 있다. ILC는 TCR 음성 림프구이지만 그들이 분비하는 사이토카인 면에서는 다른 Th 아형과 유사한 아형인 ILC1, ILC2 및 ILC3를 가지고 있다. 활성화된 (더 이상 미감작이 아닌 > 민감화된) 모든 T 세포 (또는 ILC)를 총칭하여 효과 T 세포 (Teff)라고 한다.
억제 T 세포로도 알려진, 조절 T 세포는 (Treg 세포) 다른 T 세포의 면역 반응을 억제하는 T 세포로 특화된 아집단이다. 예를 들어, Treg 세포는 면역 반응 동안 T 세포 매개 면역을 억제하고 흉선에서 음성 선택 과정을 벗어난 자가-반응성 T 세포를 억제하는데 중요한 역할을 한다. 이와 같이, Treg 세포는 과도한 면역원성 반응을 예방하기 위한 중요한 “자체-검사”를 제공하므로 면역 시스템의 항상성 유지 및 자기 항원에 대한 내성에 중요하다. Teff:Treg 세포의 비율 증가로 이어지는 Teff 세포의 수 및 활성 증가는 자가면역 및 염증성 질환을 예고한다.
Treg 세포의 두 가지 주요 클래스는 자연-발생 Treg 세포와 유도된 Treg 세포이다. 자연-발생 Treg 세포에 대해 가장 널리 사용되는 마커는 분화 클러스터 4 (CD4), 분화 클러스터 25 (CD25), forkhead/winged-helix transcription factor box P3 (FoxP3), 전사 인자 Helios, 세포독성 T-림프구 관련 항원 4 (CTLA-4), 글루코코르티코이드 유도 종양 괴사 인자 수용체 패밀리-관련 유전자 (GITR), 림프구 활성 유전자-3 (LAG-3), 및 분화 클러스터 127 (CD127) 이다. 자연 발생 Treg 세포 (CD4+CD25+FoxP3+ Treg 세포로도 알려진)는 흉선에서 발생합니다. 유도된 Treg 세포 (Tr1 세포, Th3 세포, 및 HLA-G+ Treg 세포를 포함함)는 항원 제시 세포 및 사이토카인과의 상호작용에 대한 반응으로 정상적인 면역 반응 동안 말초에서 기원한다.
유도된 Treg 세포는 자연-발생 Treg 세포와 많은 특성을 공유하지만 중요한 세포 표면 및 핵 바이오마커 및 기능적 특성이 다를 수 있다. 예를 들어, IL-10 및 ΤGF-β를 각각 생산하는 Tr1 및 Th3 세포가 기술되었다. 이러한 세포 아형을 분리, 풍부화 및 확장하는 능력은 면역 질환을 치료하는 새로운 치료법으로 이어졌다.
자체내성(self-tolerance)의 중요한 구성 요소로서 자연 발생 Treg 세포의 식별은 면역학 및 면역 관용을 제어하는 기본 프로세스에서 조사의 주요 영역을 열었다. 조절 T 세포는 독특하고 강력한 치료 프로필을 가지고 있다. 세포는 조절 활성을 발달시키기 위해 특정 T 세포 수용체(TCR)-매개 활성화를 필요로 하지만, 이들의 효과기 기능은 비특이적인 것으로 보이며, 세포-세포 접촉 및 억제성 사이토카인 생성의 조합을 통해 국소 염증 반응을 조절한다. 수많은 연구는 자가 면역 질환, 이식 및 이식편대숙주병에서 병리학적 면역 반응을 억제하는 자연 발생 Treg 세포의 강력한 영향을 입증하였다. 그러나, 인간 환경에서 자연 발생 Treg 세포의 연구 및 응용에 있어 주요 장애물은 Treg 세포의 다른 아집단 사이에서 구별하는 것 뿐만 아니라 Treg 세포를 T세포의 다른 아형 (예를 들어, Th 세포, Tc 세포 등)과 구분 및 분리하기 위한 단일 특이적 세포 표면 바이오마커의 부재이다.
Treg 세포를 식별, 분리, 풍부화, 또는 다르게 이용하기 위해 연구에서 다양한 방법이 이용된다. 마커 CD4, CD25, FoxP3, 전사 인자 Helios, CTLA-4, GITR, LAG-3, 및 CD127은 Treg 세포를 식별하기 위해 함께 사용되지만, 위에 나열된 마커 아무도 정확히 Treg 세포-특이적이지 않기 때문에 Treg 세포를 식별에 단독으로 사용할 수 없다. 예를 들어, CD25 및 CD4 표면 마커(CD4+CD25+세포)의 높은 발현은 본래 자연-발생 Treg 세포를 식별하는데 사용되었다. 그러나, CD4는 Th 세포 및 TM 세포의 아집단에서도 발현된다. CD25는 또한 병원체에 대한 면역 반응과 같은 면역 활성화 설정에서 비-조절 T 세포에서도 발현된다. 따라서, CD4 및 CD25 발현에 의해 정의된 바와 같이, Treg 세포는 성숙한 Th 세포의 약 5-10%를 구성한다. Foxp3의 세포 발현에 대한 추가 측정으로 자연-발생 Treg 세포 (CD4+CD25+FoxP3+ 세포)에 대한 보다 구체적인 분석이 가능해졌다. 그러나, Foxp3활성화된 TEM 세포에서도 일시적으로 발현되며 CD4+ CD25 low/~ T 세포, Th 세포, Tc 세포, 및 기억 T 세포를 비롯하여, 대부분의 인간 CD4+ 및 CD8+ T 세포 활성시 Foxp3를 일시적으로 발현한다는 것에 대해서 현재 관련 증거가 많다. 또한, FoxP3는 염색 전에 세포막 투과성을 필요로 하는 핵 마커이다. 따라서 이 바이오마커를 사용하면 생존 세포를 분리, 구분, 풍부화 또는 확장하는 것과 같은 후속 처리 단계를 생략할 수 있다.
개인의 면역 반응을 조절하는 방법과 마찬가지로 T 세포의 아형을 선택적으로 표적화하는 개선된 방법 및 Treg 세포 집단을 선택적으로 억제하는 방법에 대한 필요성이 존재한다. 추가적으로, 개체에서 면역 반응을 조절하기 위한 면역억제 조절 T-세포 집단을 포함하는 조성물을 개발할 필요가 있다.
본 발명의 실시예는 자가면역, 면역-염증, 또는 염증성 질환, 이식편대숙주병(GVHD) 또는 장기 이식 거부를 갖는 인간 개체에 이톨리주맙의 최적 투여량을 결정하는 방법을 포함하며, 이는 다음을 포함한다:
(a) 개체의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준의 기준선을 결정하는 단계, 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함하고, 및 개체에서 세포 표면 CD6의 목표 수준을 선택적으로 정의하는 단계;
(b) 2회 또는 3회 이상 용량의 이톨리주맙을 순차적으로 개체에 투여하고, 용량을 선택적으로 증가시키는 단계;
(c) 일련의 투여량 사이에 개체로부터의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준을 모니터링하는 단계로, 여기서 조직 샘플은 T-림프구를 포함하고;
(d) (c) 단계에서 세포 표면 CD6 수준이 (a)에서의 기준선의 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 45 또는 50% 미만이거나, (a)에서의 선택적 목표 수준의 약 5, 10, 15 또는 20 % 이내로 유지되며, 일련의 투여량 내에서 세포 표면 CD6 수준의 추가 감소가 관찰되지 않은 경우, 일련의 투여량 중 최저 투여량을 최적 용량으로 식별하는 단계.
일부 실시예는 개체의 조직 샘플에서 CD4 세포 및/또는 CD8 세포 상의 세포 표면 CD6의 수준을 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 조직 샘플은 혈액 샘플이다. 일부 실시예는 질환의 임상적 매개변수 또는 증상에 기초하여 개체에서 세포 표면 CD6의 목표 수준을 정의하는 것을 포함한다.
또한 이를 필요로 하는 인간 개체에 자가면역, 면역-염증, 또는 염증성 질환, 이식편대숙주병(GVHD) 또는 장기 이식 거부 치료를 위한 투여 요법을 포함하며, 다음을 포함한다:
(a) 개체의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준의 기준선을 결정하는 단계, 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함하고, 및 개체의 세포 표면 CD6의 목표 수준을 선택적으로 정의하는 단계;
(b) 개체의 T-림프구에서 세포 표면 CD6 수준을 (a)에서의 기준선의 5, 10, 15, 20, 25 % 이하로 감소시키는 이톨리주맙의 투여량을 개체에 투여하는 단계;
(c) 개체의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준을 모니터링하는 단계로; 여기서 조직 샘플은 T-림프구를 포함한다; 및
(d) (a)에서의 기준선의 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 % 이상으로 회복되거나, 또는 (a)에서의 목표 수준 이상으로 상승하기 전에 개체에 이톨리주맙의 추가 투여량을 투여하는 단계.
일부 실시예에서, 투여 요법은 T-림프구 (선택적으로 CD4 및/또는 CD8 세포)의 세포 표면 CD6 수준을 개체로부터 (a) 기준선의 약 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 또는 75% 이하로 유지하거나, 또는 (a)의 선택적 표적 수준의 약 5, 10, 15 또는 20% 이내로 유지하며, 선택적으로 개체의 세포 표면 CD6 수준의 표적 수준을 질병의 임상적 매개변수 또는 증상을 기반으로 정의한다.
일부 실시예는 이를 필요로 하는 인간 개체에 면역-염증, 또는 염증성 질환, 이식편대숙주병(GVHD) 또는 장기 이식 거부 치료를 위한 투여 요법에 관한 것으로서, 다음을 포함한다.
(a) 개체의 혈액 샘플에서 CD6high T-림프구의 기준선을 결정하는 단계, 및 CD6high T-림프구의 목표 수준을 선택적으로 정의하는 단계;
(b) 개체 내 CD6high T-림프구의 수준을 (a) 로부터의 기준선의 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 또는 40% 이하로 감소시키는 이톨리주맙 투여량을 개체에 투여하는 단계;
(c) 개체로부터의 혈액 샘플에서 CD6high T-림프구의 수준을 모니터링하는 단계; 및
(d) (c) 로부터의 CD6high T-림프구의 수준이 (a) 로부터의 기준선 수준의 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75% 이상으로 회복하거나, (a) 로부터의 목표 수준 이상으로 상승하기 전에 개체에 이톨리주맙의 추가 투여량을 투여하며, 선택적으로 임상 매개변수 또는 질병의 증상에 기반하여 개체의 CD6high T-림프구의 목표 수준을 정의하는 단계.
일부 실시예에서, 투여 요법은 개체 내 CD6high T-림프구의 수준을 (a)에서의 기준선 수준의 약 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 % 이하로 유지하며, 여기서 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다. 일부 실시예에서, 상기 투여 요법은 개체 내 CD6high:CD6low T-림프구의 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선에 비해 적어도 약10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 또는 적어도 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키며, 여기서 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다. 일부 실시예에서, 투여 방법은 개체에서 Teff:Treg 세포의 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 또는 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키며, 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이고, 여기서 Teff 세포는선택적으로 Th17 세포이다.
일부 실시예는 인간 이식 환자에서 이식편대숙주병(GVHD)을 예방 또는 개선하는 방법을 포함하며, 이는 다음을 포함한다:
(a) 이식 조직 내 CD6high T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 감소시키기 위해 이식 조직을 항-CD6 항체, 선택적으로 이톨리주맙과 함께 충분한 시간 동안 배양하는 단계; 및
(b) 이식 조직을 환자에게 이식하는 단계.
일부 실시예는 단계 (a) 전후 이식 조직 내 T 림프구의 세포 표면 CD6 수준을 결정하는 단계, 및 단계 (a) 이후 세포 표면 CD6의 수준이 단계 (a) 이전에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 감소하는 경우 단계 (b)를 수행하는 단계.
일부 실시예에서, 이식 조직은 제대혈 세포, 골수 세포, 말초 혈액 세포, 이동성 말초 혈액 세포, 중간엽 줄기세포, 조혈 줄기세포, 줄기세포/전구세포에서 분화된 세포, 조작된 세포(선택적으로 키메라 항원 수용체 (CAR) 세포), 또는 해당 세포들의 임의의 조합으로 이루어질 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 이식 조직은 인간 이식 환자의 자가 조직이다. 일부 실시예에서, 이식 조직은 인간 이식 환자의 동종이계(allogeneic)이다.
또한, 이를 필요로 하는 인간 환자의 자가면역, 면역-염증성, 또는 염증성 질환의 치료 또는 개선를 위한 방법으로, 다음을 포함한다:
(a) 이식 조직 내 CD6high T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 감소시키기 위해 이식 조직을 항-CD6항체, 선택적으로 이톨리주맙과 함께 충분한 시간 동안 배양하여 CD6low T-림프구가 풍부한 이식 조직을 생성하는 단계;
(b) CD6low T- 림프구로부터 Treg 림프구를 생성하기 위해 충분한 시간 동안 (a)로부터의 이식 조직을 처리하는 단계; 및
(c) (c)로부터의 이식 조직을 환자에게 이식하는 단계.
일부 실시예는 단계 (a) 전후 이식 조직 내 T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 결정하고, 단계 (a) 이후의 세포 표면 CD6 수준이 단계 (a) 전에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소한 경우, 단계 (b)를 수행하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 (b)는 CD6low T-림프구가 풍부화된 이식 조직을 사이토카인, 성장인자 및 전사인자의 조합과 함께 Treg 림프구를 생성하기에 충분한 시간 동안 배양하는 단계를 포함한다.
일부 실시예에서, 이식 조직은 제대혈 세포, 골수 세포, 말초 혈액 세포, 이동성 말초 혈액 세포, 중간엽 줄기세포, 조혈 줄기세포, 줄기세포/전구세포에서 분화된 세포, 조작된 세포(선택적으로 키메라 항원 수용체 (CAR) 세포), 또는 해당 세포들의 임의의 조합으로 이루어질 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 이식 조직은 인간 환자의 자가 조직이다. 일부 실시예에서, 상기 이식 조직은 인간 환자의 동종이계이다.
또한 이를 필요로 하는 인간 개체에 자기 면역, 면역-염증, 또는 염증성 질환, 이식편대숙주병(GVHD), 또는 장기 이식 거부의 치료를 위한 방법을 포함하며, 이는 다음을 포함한다:
(a) 개체에 이톨리주맙을 투여하는 단계; 및
(b) 개체로부터 조직 샘플 내 T-림프구의 세포 표면 CD6의 수준을 결정하는 단계, 개체로부터의 조직 샘플에서 선택적으로 CD6high 및 CD6low T-림프구의 수준을 결정하는 단계, 및/또는 개체에서 Teff 및 Treg 세포의 수준을 결정하는 단계, 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함한다;
여기서 이톨리주맙의 투여는 (i) T-림프구, 선택적으로 CD4 및/또는 CD8 세포의 세포 표면 CD6의 수준; (ii) 개체의 CD6high T-림프구 수준; (iii) 개체의 CD6high:CD6low T-림프구 비율; 및/또는 (iv) 개체의 Teff :Treg 세포 비율 중 어느 하나를 감소시킴으로써 개체의 병원성 면역 반응을 감소시킨다.
일부 실시예에서, 상기 이톨리주맙의 투여는:
개체의 T-림프구 상 세포 표면 CD6 수준을 대조군이나 표준 또는 기준선 대비 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키고, 여기서 상기 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다;
개체의 CD6high T-림프구의 수준을 대조군이나 표준 또는 기준선 대비 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키고, 여기서 상기 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다;
개체의 CD6high:CD6low T-림프구의 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선 대비 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 또는 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키고, 여기서 상기 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다; 및/또는
개체에서 Teff:Treg 세포의 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선 대비 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 또는 약1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키고, 여기서 Teff 세포는 선택적으로 Th17세포이다.
일부 실시예는 많은 이톨리주맙 시험 배치를 분석하기 위한 생체 외 세포-기반 (즉, 세포 배양-기반) 방법을 포함한다.
(a) 세포 표면에 CD6를 발현하는 세포와 이톨리주맙의 시험 배치를 함께 배양하는 단계;
(b) 세포의 세포 표면 CD6 발현을 측정하는 단계; 및
(c) 시험 배치가 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현을 감소시키는 경우 이톨리주맙의 시험 배치를 약학적 조성물로 제형화하는 단계, 및 시험 배치 용량이 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현을 감소시키지 않는 경우 시험 배치의 이톨리주맙을 폐기하는 단계.
일부 실시예에서, 상기 (b)는 유세포 분석, 시간-비행에 의한 사이토메트리(cytometry by time-of-flight, CyToF), 세포 ELISA, 또는 면역형광 현미경을 통해 직접적으로 세포 표면 CD6 발현을 측정하는 것을 포함하거나, 여기서 (b)는 선택적으로 효소결합면역흡착측정법 (ELISA), 화학 발광 검사, 전기화학 발광 검사, 고성능 액체 크로마토그래피, 웨스터 블롯 및 면역 침전 후 웨스턴 블롯을 통해 세포 표면 CD6 발현 표지로서 상층액 내 가용성 CD6을 측정하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 세포는 인간 T 세포주 또는 CD6, 선택적으로 인간 CD6,를 발현하는 세포주를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 세포주는 MOLT-4, MOLT-3, MOLT-16, HuT 78, HuT 102, Jurkat, Jurkat NFAT, CCRF-CEM, 12.1, MJ (G11), LOUCY, SUP-T1, HEL.92.1.7, EF0-21, RPMI-8226, HPB-ALL, HH, KE37, P12ICHIKAWA, PEER, ALLSIL, RPMI8402, CMLT1, PF382, EHEB 및 DU4475 세포로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 세포는 단핵구 (monocytes), 선택적으로 단핵구 세포주를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 단핵구 세포주는 U937, THP1, MC-1010, TUR, AML-193, 및 MV-4-11에서 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 (a) 인간 T 세포주 또는 CD6을 발현하도록 조작된 세포주 및 (b) 상기 단핵구, 선택적으로 단핵구 세포주는 약 30:1, 25:1, 20:1, 15:1, 10:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 또는 1:10의 비율로 존재한다.
일부 실시예는 시험 배치 이톨리주맙이 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현을 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키는 경우 및/또는 대조군 또는 표준에 비해 상층액 내 용해성 CD6를 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 증가시키는 경우 약학적 조성물로서 시험 배치 이톨리주맙을 제형화하는 것을 포함한다.
또한 다음을 포함하는, 생물학적 치료제로 사용하기 위한 항-CD6 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 스크리닝하는 방법을 포함한다:
(a) 후보 항-CD6 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 세포 표면에서 CD6을 발현하는 세포와 함께 배양하는 단계;
(b) 상기 세포의 세포 표면 CD6 발현을 측정하는 단계; 및
(c) 대조군 또는 표준 대비 세포 표면 CD6 발현을 감소시키는 경우 약학적 조성물로서 후보 항-CD6 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제형화하는 단계.
일부 실시예에서, 상기 (b)는 유세포 분석, 시간-비행에 의한 사이토메트리(cytometry by time-of-flight, CyToF), 세포 ELISA, 또는 면역형광 현미경을 통해 직접적으로 세포 표면 CD6 발현을 측정하는 것을 포함하거나, 여기서 (b)는 선택적으로 효소결합면역흡착측정법 (ELISA), 화학 발광 검사, 전기화학 발광 검사, 고성능 액체 크로마토그래피, 웨스터 블롯 및 면역 침전 후 웨스턴 블롯을 통해 세포 표면 CD6 발현 표지로서 상층액 내 가용성 CD6를 측정하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 세포는 인간 T 세포주 또는 CD6, 선택적으로 인간 CD6,를 발현하는 세포주를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 세포주는 MOLT-4, MOLT-3, MOLT-16, HuT 78, HuT 102, Jurkat, Jurkat NFAT, CCRF-CEM, 12.1, MJ (G11), LOUCY, SUP-T1, HEL.92.1.7, EF0-21, RPMI-8226, HPB-ALL, HH, KE37, P12ICHIKAWA, PEER, ALLSIL, RPMI8402, CMLT1, PF382, EHEB 및 DU4475 세포로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 세포는 단핵구 (monocytes), 선택적으로 단핵구 세포주를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 단핵구 세포주는 U937, THP1, MC-1010, TUR, AML-193, 및 MV-4-11에서 선택된다. 일부 실시예에서, (a) 상기 인간 T 세포주 또는 CD6을 발현하도록 조작된 세포주 및 (b) 상기 단핵구, 선택적으로 단핵구 세포주는 약 30:1, 25:1, 20:1, 15:1, 10:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 또는 1:10의 비율로 존재한다.
일부 실시예는 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현을 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키는 경우 및/또는 대조군 또는 표준에 비해 상층액 내 용해성 CD6을 약10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 퍼센트 이상 증가시키는 경우 약학적 조성물로서 후보 항-CD6 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제형화하는 것을 포함한다.
일부 방법 또는 투여 요법에서, 자가면역, 면역-염증성 또는 염증성 질환을 가진 개체 또는 환자는 표준 또는 건강한 개체와 비교하여 Teff :Treg 세포의 비율이 증가하며, 여기서 Teff 는 Th17 세포를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 Teff :Treg 세포 비율은 표준 또는 건강한 개체와 비교하여 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 배 이상 증가된다. 일부 실시예에서 자가면역, 면역-염증성 또는 염증성 질환은 염증성 장 질환 (IBD), 선택적으로 크론병 또는 궤양성 대장염, 전신 홍반 루푸스(SLE), 선택적으로 루푸스 신염을 동반한 SLE, 류마티스 관절염 (RA), 다발성 경화증 (MS), 건선, 건선 관절염, 강직성 척추염, 또는 천식이다.
이톨리주맙은 세포 표면 CD6 발현의 손실을 유도한다. 도 1은 아이소타입 대조군과 비교하여 이톨리주맙을 단일 처리 후 CD4+CD45RA-세포 (효과기(effector) 및 기억 CD4 T 세포)에서 CD6의 표면 발현 수준과 유세포 분석기로 측정한 10분부터 24시간 동안의 세포 표면 CD6의 손실을 나타낸다.
이톨리주맙은 체외(in vitro)에서 CD4 및 CD8 T 세포에 대한 CD6 발현의 용량-의존적 손실을 유발한다. 도 2A-2D는 4개의 다른 농도의 이톨리주맙을 처리한 후 세포 표면 CD6의 평균 형광 강도 그래프이다; 0.01, 0.1, 1, 10, 및 100 ug/mL. 도 2A는 CD4+CD45RA+ 세포 (나이브 T 세포); 도 2B는 CD4+CD45RA- 세포; 도2C는 CD8+CD45RA+ 세포 (나이브 CD8 T 세포); 및 도 2D는 CD8+CD45RA- 세포 (효과기 및 기억 CD8 세포)이다. 각각의 세포 표면 CD6의 평균 형광 강도는 아형 (10 ug/mL) 처리된 세포에 대해 정규화된다. 도 2E는 세포 표면의 CD6 손실 (왼쪽 그래프)이 전기화학발광 분석에 의해 상층액 (오른쪽 그래프)의 가용성 CD6 (sCD6)의 증가와 관련이 있음을 나타낸다. 여기서, 3명의 서로 다른 기부자에서의 PBMC를 10 ug/mL의 이톨리주맙과 함께 배양하였고 CD4 T 세포에서 CD6의 세포 표면 발현 (왼쪽 그래프)을 평가하고 표시된 시점에 PBMC 상층액에서 용해성 CD6 (오른쪽 그래프)를 정량화 하였다. 유세포분석기로 평가한 기준선에서 CD4 T 세포의 CD6 수용체 수를 계산하여 3명의 기증자에서의 값을 정규화하는데 사용하였다. *** p<0.001, ** p<0.01, * p<0.05.
이톨리주맙으로 치료받은 환자는 CD4 및 CD8 T 세포에서 CD6 발현이 감소하였다. 도 3A-3J는 이톨리주맙으로 치료를 받은 GVHD 환자로부터 분리한 모든 CD4 양성 세포와 CD8 양성 세포에서 측정된 것으로, Y 축은 세포 표면 CD6의 평균 형광 강도에 대한 기준선의 퍼센트이고 X 축은 처음 처리 후 일자인 그래프를 나타낸다. 도 3A-3D는 격주로 0.4 mg/kg 이톨리주맙을 1 회 내지 5 회 투여하여 치료한 4 명의 환자를 대상으로 한 그래프이다. 도 3A는 1, 15, 29, 43 및 57 일 째에 0.4 mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다. 도 3B는 1, 15 및 29 일 째에 0.4 mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다. 도 3C는 1, 15, 29, 43 및 57일 째에 0.4 mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다. 도 3D는 1일째에 0.4 mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다. 도 3E 내지 3G는 격주 또는 간헐적 격주로 0.8 mg/kg 이톨리주맙을 2 회 내지 4 회 투여하여 치료한 3 명의 환자를 대상으로 한 그래프이다. 도 E는 1, 15, 및 29 일 째에 0.8 mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다. 도 3F는 1, 15, 43 및 57 일 째에 0.8mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다. 도3G는 1 및 15 일 째에 0.8 mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다. 도 3H 내지 3J는 격주로 1.6 mg/kg 이톨리주맙을 2 회 내지 5 회 투여하여 치료한 3 명의 환자를 대상으로 한 그래프이다. 도 3H는 1, 15, 29, 43 및 57 일 째에 1.6 mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다. 도 3I는 1 및 15 일 째에 1.6 mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다. 도 3J는 1, 15, 29 내지 43 일 째에 1.6 mg/kg 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 기준선 대비 CD4 및 CD8 양성 세포에서 세포 표면 CD6의 %를 그래프로 나타낸 것이다.
이톨리주맙 치료 환자에서 CD6의 용량 반응성 손실. 도 4A-4D는 0.4 mg/kg, 0.8 mg/kg, 및 1.6 mg/kg 이톨리주맙(각 그래프의 부분에서 왼쪽에서 오른쪽)으로 치료된 환자에 대한 세포 표면 CD6의 평균 형광 강도의 막대그래프이다. 도 4A는 기준선과 비교하였을 때 0.4 mg/kg, 0.8 mg/kg, 또는 1.6 mg/kg 이톨리주맙의 1회 투여 후 24 시간에 CD4 양성 세포 및 CD8 양성 세포 내 CD6 표면 발현 막대 그래프이다. 도4B는 0.4 mg/kg, 0.8 mg/kg, 또는 1.6 mg/kg 이톨리주맙의 1 회 투여 후 8 일 째에 CD4 양성 세포 및 CD8 양성세포에서 기준선과 비교하여 표면 CD6 발현 강도 %의 막대 그래프이다. 도 4C는 0.4 mg/kg, 0.8 mg/kg, 또는 1.6 mg/kg 이톨리주맙의 1회 투여 후 15일 째에 CD4 양성 세포 및 CD8 양성 세포에서 기준선과 비교하여 표면 CD6 발현 강도 %의 막대 그래프이다. 도 4D는 0.4 mg/kg, 0.8 mg/kg, 또는 1.6 mg/kg 이톨리주맙의 2 회 격주 투여 후 29 일 째에 CD4 양성 세포 및 CD8 양성 세포에서 기준선과 비교한 표면 CD6 발현 강도 %의 막대 그래프이다.
이톨리주맙의 결합은 CD6 손실 속도보다 빠르게 감소한다. 도 5A-5F는 2가지 다른 농도의 이톨리주맙에서 2 가지 다른 세포 유형의 비결합 수용체 및 비경쟁적 항-CD6 항체 클론에 결합한 수용체 모두의 CD6 표지화를 보여주는 각각의 시점에서의 양성 이벤트 %의 데이터 포인트를 표시한 것이다. 결합되지 않은 수용체(사각형)는 형광 표지된 이톨리주맙으로 세포를 염색함으로써 각 시점에서 검출되었다. 형광 표지된 이톨리주맙은 CD6가 세포 표면에 여전히 존재하는 표지되지 않은 이톨리주맙에 의해 아직 결합되지 않은 사용 가능한 모든 CD6에 결합한다. 독점적인 비경쟁 항체 (동그라미)의 결합은 각 시점에서 세포 표면의 총 CD6 수준을 검출하는데 사용된다. 세포를 이톨리주맙으로 처리하면, 표면 CD6의 총 수준이 감소하며 이는 결합되지 않은 수용체(사각형) 양 감소에도 반영된다. CD6의 손실률은 각 라인의 10 분에서 120 분 사이의 기울기를 통해 계산된다. 도 5A는 CD4+CD45RA+ 세포에 1.0 ug/mL의 아이소타입으로 처리 후 데이터 포인트를 표지한 것으로, 계산된 기울기는 항체 결합 수용체 및 결합하지 않은 수용체 각각 0.00 및 -0.01이다. 도 5B는 CD4+CD45RA+ 세포를 0.1 ug/mL 이톨리주맙으로 처리 후 데이터 포인트를 표지한 것으로, 계산된 기울기는 항체 결합 수용체 및 결합하지 않은 수용체 각각 -0.05 및 -0.18이다. 도 C는 CD4+CD45RA+ 세포를 1.0 ug/mL 이톨리주맙으로 처리 후 데이터 포인트를 표지한 것으로 계산된 기울기는 항체 결합 수용체 및 결합하지 않은 수용체 각각 -0.20 및 -0.33이다. 도 5D는 CD4+CD45RA- 세포를 1.0 ug/mL 아이소타입으로 처리 후 데이터 포인트를 표지한 것으로, 계산된 기울기는 항체 결합 수용체 및 결합하지 않은 수용체 각각 0.00 및 -0.03이다. 도 5E는 CD4+CD45RA- 세포를 0.1 ug/mL 이톨리주맙으로 처리한 후 데이터 포인트를 표지한 것으로, 계산된 기울기는 항체 결합 수용체 및 결합되지 않은 수용체 각각 -0.09 및 -0.30 이다. 도 5F는 CD4+CD45RA- 세포를 1.0 ug/mL 이톨리주맙으로 처리한 후 데이터 포인트를 표지한 것으로 계산된 기울기는 각각 항체 결합 수용체 및 결합되지 않은 수용체 각각 -0.36 및 -0.49 이다.
도 6A-6D에 나타낸 바와 같이 이톨리주맙의 수용체 점유율은 더 낮은 세포 표면 CD6의 밀도 및 양을 갖는 세포에서 더 낮다. 도 6A는 CD8 세포가 CD4 세포에 비해 낮은 수준의 세포 표면 CD6을 가진다는 것을 보여주고, 도 6B는 유세포 분석기로 측정한 것으로 이톨리주맙이 CD4 세포보다 훨씬 더 낮은 점유율로 CD8 세포에 결합한다는 것을 나타낸다 (세포는 모두 같은 튜브에서 배양 및 염색되었다). 여기서, 만약 이톨리주맙이 세포 표면 밀도와 관계없이 CD6에 결합한다면, 점유율 % (이톨리주맙에 의해 결합된 CD6 분자의 비율)는 CD8 세포에서 동일하거나 더 높아야 한다. 그러나, CD8 T 세포의 상기 점유율 %는 CD4 T 세포보다 낮으며, 이는 이톨리주맙 결합이 세포 표면 CD6 밀도에 의해 영향을 받는다는 것을 증명하는 것이다.
도 6C는 투약 환자에서 점유율이 낮다는 것을 나타낸다. 점선은 각 환자에서 최대 가능한 수용체 점유율을 결정하기 위해 50 ug/ml의 이톨리주맙과 섞은 후 투여 전 1 일의 혈액 기준선을 나타낸다. 1 일차에 CD4 T 세포의 CD6 평균 형광 강도는 높지만 첫번째 투여 후 24 시간 이내에 감소하여, 세포 표면의 CD6이 감소함을 나타낸다. CD6 투여 후 CD4 T 세포에서 여전히 검출가능하다(as indicated by MFI and gating against controls, squares); 그러나, 수용체 점유율(동그라미)은 본질적으로 결합된 이톨리주맙이 적거나 없음을 나타낸다. 만약 이톨리주맙이 수용체 밀도에 관계 없이 CD6에 결합할 수 있다면, 일정 수준의 점유율이 예상될 것이다. 도 6D는 CD6이 존재할 때 점유율이 검출되는 것을 나타낸다. 정상 개체로부터의 전혈을 EDTA 또는 시트르산나트륨이 들어 있는 튜브에 수집하고 이톨리주맙과 함께 25 분 동안 배양하였다. 그런 다음 혈액을 용해하고 수용체 점유율에 대해 세포를 분석하였다.
이톨리주맙은 CD4 T 세포의 말초 감소를 유도한다. 도 7A-7D는 말초 혈액 채취로부터 CD4+ 세포를 측정하고 4가지 다른 조건(위약 및 1.6, 2.4, 및 3.6 mg/kg 이톨리주맙)에서 6명의 다른 환자에 대한 기준선의 %를 계산함으로써 이톨리주맙으로 치료한 후 환자의 말초에서 CD4+ T 세포의 감소를 나타낸다. 도 7A는 위약으로 치료한 후 8 일 차 및 15 일 차에 1 일 차에 설정된 기준선에서 기준선에 대한 % 변화를 나타낸다. 도 7B는 1.6 mg/kg 이톨리주맙으로 치료한 후 8 일 차 및 15 일 차에 1 일 차에 설정된 기준선에서 기준선에 대한 % 변화를 나타낸다. 도 7C는 2.4 mg/kg 이톨리주맙으로 치료한 후 8 일 차 및 15 일 차에 1일 차에 설정된 기준선에서 기준선에 대한 % 변화를 나타낸다. 도 7D는 3.2 mg/kg 이톨리주맙으로 치료한 후 8일 차 및 15 일 차에 1 일 차에 설정된 기준선에서 기준선에 대한 % 변화를 나타낸다.
이톨리주맙은 CD8 T 세포의 말초 감소를 유도한다. 도 8A-8D는 말초 혈액 채취로부터 CD8+ 세포를 측정하고 4 가지 다른 조건(위약 및 1.6, 2.4, 및 3.6 mg/kg 이톨리주맙)에서 6 명의 다른 환자에 대한 기준선의 퍼센트를 계산함으로써 이톨리주맙으로 치료한 후 환자의 말초에서 CD8+ T 세포의 감소를 나타낸다. 도 8A는 위약으로 치료한 후 8 일 차 및 15 일 차에 1 일 차에 설정된 기준선에서 기준선에 대한 % 변화를 나타낸다. 도 8B는 1.6 mg/kg 이톨리주맙으로 치료한 후 8 일 차 및 15 일 차에 1일 차에 설정된 기준선에서 기준선에 대한 % 변화를 나타낸다. 도 8C는 2.4 mg/kg 이톨리주맙으로 치료한 후 8 일 차 및 15 일 차에 1일 차에 설정된 기준선에서 기준선에 대한 % 변화를 나타낸다. 도 8D는 3.2 mg/kg 이톨리주맙으로 치료한 후 8 일 차 및 15 일 차에 1일 차에 설정된 기준선에서 기준선에 대한 % 변화를 나타낸다.
말초 Tregs 계수는 이톨리주맙 치료에 영향을 받지 않는다. 도 9A-9D는 위약, 1.6 mg/kg 이톨리주맙, 2.4 mg/kg 이톨리주맙, 및 3.2 mg/kg 이톨리주맙의 4가지 치료 조건에 따른 1일 차 (기준선) Tregs 세포 수의 %로 계산된 8 일 차 및 15 일 차 변화를 나타낸다. 도 9A는 위약으로 치료한 대조군의 Tregs 세포 수의 가변성을 나타낸다. 도 9B는 1.6 mg/kg 이톨리주맙으로 치료한 후 8일 차 및 15일 차에 6명의 다른 환자에 대한 기준선 내 퍼센트의 변화를 나타낸다. 도 9C는 2.4 mg/kg 이톨리주맙으로 처리한 후 8 일 차 및 15 일 차에 6명의 다른 환자에 대한 기준선 내 퍼센트 변화를 나타낸다. 도 9D는 3.2 mg/kg 이톨리주맙으로 처리한 후 8일 차 및 15일 차에 6명의 다른 환자에 대한 기준선 내 퍼센트 변화를 나타낸다.
이톨리주맙은 CD4:Treg 세포 비율을 감소시킨다. 도 10A-10D는 4가지 처리 조건 (위약, 1.6 mg/kg 이톨리주맙, 2.4 mg/kg 이톨리주맙, 및 3.2 mg/kg 이톨리주맙) 후 6명의 환자에서 CD4+ T 세포 대 Treg 세포의 비율에서 8 일 차 및 15 일 차에 1일 차 기준선으로부터의 변화를 나타낸다. 도 10A는 위약 처리 후 기준선의 %로서 CD4:Treg 세포의 비율을 나타낸다. 도 10B는 1.6 mg/kg 이톨리주맙 처리 후 기준선 %로서 CD4:Treg 세포의 비율을 나타낸다. 도 10C는 2.4 mg/kg 이톨리주맙 처리 후 기준선 %로서 CD4:Treg 세포의 비율을 나타낸다. 도 10D는 3.2 mg/kg 이톨리주맙 처리 후 기준선 %로서 CD4:Treg 세포의 비율을 나타낸다.
이톨리주맙으로 치료받은 환자에서 Treg:CD4 T 세포의 비율이 증가한다. 도 11A-11D는 0.8 mg/kg 이톨리주맙 또는 위약으로 치료한 후 1, 8, 15, 29, 및 57일 째에 환자의 Tregs:CD4의 비율 및 Th17:CD4 세포 비율을 나타낸다. 상기 데이터는 지정된 시점으로부터 냉동 보존된 PBMC를 취하여 DNA를 분리하고 독점적인 qPCR 분석법인 Epiontis ID를 사용하여 DNA에서 세포-특이적 후생유전학적 마커를 측정하여 수집하였다. 도 11A는 이톨리주맙 처리 후 Treg:CD4 비율을 보여주며, 11B는 위약 처리 후 동일한 비율을 나타낸다. 도 11C는 이톨리주맙 처리 후 Th17:CD4 비율을 보여주며, 도 11D는 위약 처리 후 비율을 나타낸다.
이톨리주맙은 CD6 밀도가 높을수록 분리 속도가 느리다. 도 12A-12F는 표면 플라스몬 공명을 통해 3가지 다른 CD6 밀도에 따른 이톨리주맙(상단 선) 및 이톨리주맙 fab(하단선)의 분리 속도 시간을 나타낸다. 저밀도는 평방 마이크로미터당 7 rhu CD6 및 120 개의 결합 부위로 구성된다. 중간 밀도는 평방 마이크로미터당 55 rhu CD6 및 783 개의 결합 부위로 구성된다. 고밀도는 평방 마이크로미터당 255 rhu CD6 및 3493 개의 결합 부위로 구성된다. 도 12A는 2000초 동안 저밀도 칩의 분리 속도를 나타낸다. 도 12B는 2000 초 동안 중간 밀도 칩의 분리 속도를 나타낸다. 도 12C는 2000 초 동안 고밀도 칩의 분리 속도를 나타낸다. 12D는 12000 초 동안 저밀도 칩의 분리 속도를 나타낸다. 도 12E는 12000 초 동안 중간 밀도 칩의 분리 속도를 나타낸다. 도 12F는 12000 초 동안 고밀도 칩의 분리 속도를 나타낸다.
이톨리주맙의 더 복잡한 결합은 고밀도의 CD6 에서 관찰된다. 도 13A-13F는 저밀도의 CD6과 비교하여 더 높은 밀도의 CD6에서의 이톨리주맙의 복잡한 결합을 나타낸다. 상기 데이터는 3개의 다른 CD6 밀도에 대한 240 초 결합 단계 및 1800 초 분리 단계를 사용하여 수집되었다. 도 13A-13C는 900 nM 내지 0.137 nM 범위의 이톨리주맙 농도의 중복 주입에 관한 것이다. 도 13D-13F는 900 nM 내지 11.1 nM 범위의 이톨리주맙 fab 농도의 중복 주입에 관한 것이다. 도 13A는 낮은 밀도의 CD6에 대한 다른 농도의 이톨리주맙의 결합을 나타낸다. 도 13B는 중간 밀도의 CD6에 대한 다른 농도의 이톨리주맙의 결합을 나타낸다. 도 13C는 고밀도의 CD6에 대한 다른 농도의 이톨리주맙의 결합을 나타낸다. CD6에 결합하는 이톨리주맙에 대한 센서그램은 CD6의 가장 높은 칩 밀도에서 복잡한 결합을 나타낸다. 도 13D는 낮은 밀도의 CD6에 대한 다른 농도의 이톨리주맙 fab의 결합을 나타낸다. 도 13E는 중간 밀도의 CD6에 대한 다른 농도의 이톨리주맙 fab의 결합을 나타낸다. 도 13F는 고밀도의 CD6에 대한 다른 농도의 이톨리주맙 fab의 결합을 나타낸다. CD6에 결합하는 이톨리주맙 fab에 대한 센서그램은 CD6의 3가지 (낮음, 중간, 높음) 칩 농도 모두에서 최소 복합 결합을 나타낸다. 이러한 결과는 이톨리주맙이 칩에서 더 높은 밀도의 CD6에 대한 우선적 결합을 부여하는 강한 결합력 효과를 나타내고 따라서 생체 내에서 CD6high 세포에 대한 이톨리주맙의 우선적 결합 및 선택성의 관찰을 뒤받침한다는 것을 입증한다.
이톨리주맙은 세포주에서 세포 표면 CD6 손실을 유발한다. 도 14는 이톨리주맙이 CD6을 발현하는 T세포주에서 세포 표면 CD6 수준을 감소시킨다는 것을 나타낸다. 여기에서, Jurkat NFAT 세포를 해동하고 1x106 세포/ml의 농도로 재현탁 한 다음 1x106 세포/ml로 단일 튜브에 분주하였다. 이톨리주맙 또는 아이소타입 대조군 항체를 첨가하고, 세포는 부드럽게 그리고 37 ℃에서 6 시간 동안 배양하였다. 총 세포 표면 CD6은 유세포분석기로 평가하였다 (세포는 염색동안 4 ℃로 유지시킴).
CD6low 세포는 TCR 자극에 저반응적이다. 도 15A-15B는 CD6low 세포가 자극에 대해 반응성이 낮다는 것을 나타낸다. 여기서, PBMC는 세포 표면 CD6을 제거하기 위해 24 시간 동안 이톨리주맙과 함께 배양하였고(도 15A 참조; CD6high 왼쪽 칼럼; CD6low 오른쪽 칼럽), 과량 및 결합된 이톨리주맙을 제거하기 위해 적어도 3회 세척하고, 24 시간 동안 0.25 μg/ml 항-CD3 및 1 μg/ml ALCAM으로 자극하였다. 활성 마커는 유세포분석기로 평가하고 사이토카인은 유동-기반 ELISA로 평가하였다. 도 15B에 나타낸 바와 같이, CD6low 세포 (각 그래프의 오른쪽 칼럼)는 CD6high 세포(각 그래프의 왼쪽 칼럼)에 비해 표면 활성화 마커 및 사이토카인 방출의 감소를 나타내며, 이는 이톨리주맙이 PBMC에서 세포 표면 CD6 수준을 감소시킬 뿐 아니라 세포가 CD3와 같은 T 세포 활성화 인자에 덜 반응하도록 한다.
CD6 발현에 기초한 용량 선택의 다이어그램. 도 16은 이톨리주맙의 용량 선택을 알려주기 위해 세포 표면 CD6의 사용을 나타낸다. 한가지 접근법은 환자 또는 환자 그룹에 증가된 양의 이톨리주맙을 투여하는 것이다. 증가된 투여량 또는 고정된 간격의 후속 투여량에 의해 더 많은 약물을 추가해도 CD6 수준의 더 이상의 감소가 관찰되지 않을 때, CD6의 최저 수준이 결정된다. CD6 수준을 가장 낮은 수준으로 감소시키는 최적 투여량이 결정되면, 상기 CD6 수준은 최적의 투여 방법을 결정하는데 사용될 수 있다.
CD6 발현에 기반한 투약 방법의 다이어그램. 도 17A-17B는 적합한 투여 방법의 선택을 나타낸다. 한가지 접근법은 어떤 정해진 용량이 얼마나 오래 세포 표면 CD6의 손실에 지속적인 약리 역학적 효과를 제공하는지 결정하기 위해 시간 경과에 따른 세포 표면 CD6 수준을 모니터링하는 것이다. 도 17A의 예시적인 그래프는 격주 및 월별 투여량은 적합할 것이지만 그 수준에서 분기별 투여량은 세포 표면 CD6 수준이 8주에서 역치를 넘기기 때문에 적합하지 않을 것임을 나타낸다. 상기 정보는 분기별 투여를 위해 세포 표면 CD6의 지속적인 손실을 달성하기 위해 더 많은 약물이 필요함을 나타낼 수 있다. 일부의 경우에, 상한 또는 역치는 세포 표면 CD6의 기준선 수준의 약, 미만 또는 약 25-50 % 사이이다. 도 17B는 이톨리주맙 요법의 단기 과정에서 이러한 접근법을 보여주며, 여기서 세포 표면 CD6의 수준은 투여를 재개할 필요성 또는 질병 발적에 대한 가능성을 알려주기 위해 사용될 수 있다. 초기 투여 기간이 종료된 후, 세포 표면 CD6의 수준은 시간 경과에 따라 모니터링할 수 있으며, 이러한 수준이 기준선 (예를 들어, 치료 전 세포 표면 CD6 수준) 이나 정의된 역치 또는 목표 수준 (예를 들어, 다른 질병 매개변수 또는 증상에 따라 정의된 임상적으로 적합하거나 바람직한 세포 표면 CD6 수준)에 비해 상승하거나 역치에 접근하면 환자에게 이톨리주맙을 다시 투여할지 여부를 결정 할 수 있다.
도 18A-18B는 이톨리주맙 치료 후 CD6 단백질 수준을 나타낸다. 도 18A는 세포 연관 CD6 수준을 보여주고 도 18B는 세포 상층액 내 용해성 CD6(sCD6) 수준을 나타낸다.
도 19는 이톨리주맙이 세포 표면 CD6의 절단을 유도하고 이에 수반하는 용해성 CD6의 증가를 나타낸다.
도 20A-20B는 이톨리주맙이 유도하는 T-림프구의 세포 표면에서의 CD6의 절단에서 단핵구의 역할을 나타낸다.
도 21A-21E는 이톨리주맙이 유도하는 세포 표면 CD6의 수준 감소가 T 세포 활성화 감소와 상관관계가 있음을 나타낸다.
도 22 는 이톨리주맙으로 초기 배양하여 생성된 CD6low 세포가 CD6low 로 남아있을 뿐만 아니라 CD3 + ALCAM으로 후속 자극한 후에도 낮은 Teff-유사성 (예를 들어, 낮은 Th1 및 Th17-유사성)을 나타낸다.
도 23A-23D은 이톨리주맙이 T 림프구의 동종 반응성을 감소시킨다는 것을 나타낸다.
도 24A-24B는 초기 이톨리주맙 치료가 후속 세대의 Treg 림프구 생성에 미치는 영향을 나타낸다. 도 24A는 미감작 CD4+ T 세포 분리 및 CD6high 또는 CD6low 미감작 T 세포를 각각 생성하기 위해 이전에 아이소타입 또는 이톨리주맙으로 처리한 PBMC로부터 분리한 미감작 CD4+ T 세포 (CD3+CD4+CD45RA+CD45RO-) 내에서의 CD6 손실을 나타낸다. 도 24B는 FoxP3 및 Helios의 양성 염색으로 표시된 바와 같이, 아이소타입 대조군 (CD6high) 또는 이톨리주맙 (CD6low)으로 전처리 한 후 Tregs 가 생성되는 것을 보여 준다.
도 25는 CD6low Tregs가 CD6high Tregs에 비해 증가된 억제 활성을 가짐을 나타낸다.
도 26A는 이톨리주맙으로 유도된 CD6 세포 표면 손실이 용량-의존적 방식으로 발생함을 나타낸다 (제시된 바와 같은 이톨리주맙 농도 범위로 24 시간 배양 후 두 기증자의 PBMC에서 CD6 검출). 도 26B는 상기 검정이 글루코실화 상태의 변화를 구별할 수 있음을 나타낸다.
도 27A-27E는 이톨리주맙으로 치료한 SLE 환자의 T 세포 내 세포 표면 CD6의 손실을 나타낸다.
도 28A-28B는 SLE 환자에 이톨리주맙을 처음 투여한 다음 CD4(28A) 및 CD8(28B) T 세포의 세포 표면 CD6가 감소하고 이톨리주맙의 용량이 높을수록 표면 CD6의 손실이 더 많이 관찰됨을 나타낸다.
도 29A-29B는 이톨리주맙 0.8 mg/kg으로의 치료가 위약에 비해 Th17 세포의 3배 감소 및 Treg 세포의 2.5 배 증가를 야기하였음을 나타낸다.
다음은 본 개시를 실시함에 있어서 당업자를 돕기 위해 제공되는 상세한 설명이다. 당업자는 본 발명의 사상 또는 범위를 벗어나지 않고 본 명세서에 기술된 실시예를 수정 및 변형할 수 있다. 여기에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 도면 및 기타 참고문헌은 그 전체가 참조로 명시적으로 포함된다.
일부 실시예는 최적화된 항-CD6 항체를 식별하는 방법을 포함한다. 일부 실시예에서, 최적화된 항-CD6 항체를 식별하는 방법은 결합활성의 측정을 포함하는 선택성의 측정에 근거한다. 일부 실시예에서, 최적화된 항-CD6 항체를 식별하는 방법은 치료 후 시간 경과에 따른 세포 표면 CD6의 손실을 측정하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 최적화된 항-CD6 항체는 fab, f(ab)2 또는 융합 단백질이다.
일부 실시예는 높은 수준의 세포 표면 CD6을 갖는 세포 또는 CD6high 세포에 선택적으로 결합하는 방법을 포함한다. 일부 실시예에서, CD6high 세포의 세포 표면으로부터 CD6을 제거하거나 다른 방법으로 감소시키는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, CD6high 세포는 T-림프구이다. 일부 실시예에서, T-림프구는 CD4 T 헬퍼 (Th1, Th2, Th22, Th9, Th17, Tfh, Tph), CD8 미감작(naive), 효과기, 효과기 기억, 줄기 기억 또는 중앙 기억 CD4 또는 CD8 세포, 자연 살해 (NK) 세포, 및 선천성 림프구 세포(ILC), 예를 들어 ILC1, ILC2, 및/또는 ILC3 세포, 중 하나 이상이다.
일부 실시예는 CD6high 세포의 세포 표면 CD6을 선택적으로 제거하거나 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 최적화된 항-CD6 항체로 처리하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, CD6 표면 발현을 측정한다. 일부 실시예는 처리 후 시간 경과에 따른 세포 표면 CD6의 손실을 측정하는 것을 포함하는 최적화된 항-CD6 항체의 치료 용량을 결정하는 방법을 제공한다. 일부 실시예에서, 항체는 이톨리주맙이다. 일부 실시예는 최적화된 항-CD6 항체를 투여하는 것을 포함하는 세포의 병원성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시예는 다음을 포함하는 생물학적 치료제로 사용하기 위한 항-CD6 항체, 또는 이의 항원 결합 단편의 스크리닝 방법을 포함한다: 후보 항-CD6 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 세포 표면에서 CD6을 발현하는 세포와 함께 배양하는 단계; 세포 상의 세포 표면 CD6 발현을 측정하는 단계; 및 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현을 감소시키는 경우 후보 항-CD6 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제약 조성물로서 제형화하는 단계.
일부 실시예는 T-림프구 상의 세포 표면 CD6 수준을 선택적으로 감소시키는 방법, 및 개체에서 CD6high T-림프구 및/또는 Teff 세포 수준을 선택적으로 감소시키는 방법을 포함한다. 본 발명에서 사용되는 “Teff 세포"는 Th1 세포 및 Th17 세포와 같은 활성화된 T 헬퍼 세포를 포함한다. 일부 실시예에서, “Teff 세포"는 Th17 세포이다.
일부 실시예는 기준선 세포 표면 CD6 측정치를 수득하는 것 및/또는 세포 표면 CD6의 역치 또는 표적 수준을 정의하는 것, 그리고 이톨리주맙과 같은 항-CD6 항체의 치료 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 개체의 조직 샘플에서 CD6 수준을 모니터링하는 것을 포함하며, 여기서 조직 샘플은 T-림프구를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 세포 표면 CD6 수준이 세포 표면 CD6 측정치 기준선의 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 % 또는 그 이상으로 되돌아오는 경우 개체에 이톨리주맙의 추가 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시예는 세포 표면 CD6 수준이 세포 표면 CD6의 표적 수준 이상으로 상승하는 경우 이톨리주맙의 추가 투여량을 투여하는 것을 포함한다 (예를 들어, 도 17A-17B 참조).
일부 실시예는 CD6high 세포로부터 세포 표면 CD6을 선택적으로 벗겨내거나 제거하거나 또는 달리 감소시키는 항-CD6 항체와 함께 이식할 조직을 배양하는 단계; 및 상기 조직을 환자에게 이식하는 단계를 포함하는 이식이 필요한 환자에서 GVHD를 예방하거나 완화하는 방법을 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 환자의 CD6 수준을 측정하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 기준선 측정을 포함한다.
일부 실시예는 Teff 세포와 Treg 세포의 비율을 조절하는 방법을 제공한다. 또한 Treg 세포와 Teff 세포의 비율을 증가시키는 방법이 본원에 개시되어 있다.
또한 최적화된 항-CD6 항체로 처리하는 것을 포함하는 Teff 세포를 Treg 세포로 전환시키는 방법을 포함한다. 일부 실시예에서, 최적화된 항-CD6 항체는 이톨리주맙이다.
일부 실시예는 Teff 세포를 선택적으로 표적화하는 방법을 포함한다. 일부 실시예는 최적화된 항-CD6 항체를 투여하는 것을 포함하는 Teff 세포 선택적으로 표적화하는 방법을 제공한다. 일부 실시예에서, 항-CD6 항체는 이톨리주맙이다.
일부 실시예는 병원성 T 세포로부터 CD6을 선택적으로 제거하는 방법을 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 최적화된 항-CD6 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 항체는 이톨리주맙이다. 일부 실시예는 병원성 T세포를 선택적으로 약화시키는 방법을 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 최적화된 항-CD6 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항체는 이톨리주맙이다.
일부 실시예는 저반응성 T 세포를 생성하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시예에서, 상기 방법은 최적화된 항-CD6 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 항체는 이톨리주맙이다. 일부 실시예는 T 세포에서 자가-반응성을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시예는 T 세포에서 동종이식편반응을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 발명에는 CD6high 세포를 선택적으로 표적화하는 방법이 개시된다. 일부 실시예에서, 선택적으로 표적화된 CD6 세포는 CD4 T 헬퍼 (Th1, Th2, Th22, Th9, Th17, Tfh, Tph)의 아형 및 CD8의 아류형(미감작, 효과기, 효과기 기억, 줄기 기억 및 중앙 기억); 자연 살해 T 세포 및 선천성 림프 세포를 포함한다. 또한, 본 발명에는 Teff 세포와 Treg 세포의 비율을 조절하는 방법이 개시되어 있다. 또한 본 발명에는 Teff 세포를 Treg 세포로 전환시키는 방법이 개시되어 있다. 또한 본 발명에서는 T 세포 반응을 변형시키고 질환을 약화시키기 위해 최적화된 항-CD6 항체를 사용하는 방법이 개시되어 있다.
일부 실시예에서, 본 개시는 항-CD6 항체가 세포 표면 CD6 발현 수준이 높은 세포에만 결합하고, 항체가 세포 표면 CD6dml 지속적인 손실을 유도하도록 CD6를 항-CD6 항체와 결합시키는 방법을 제공한다. 본 개시의 다른 측면이 여기에 설명되어 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본 발명에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당해 기술 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 발명에 기술된 것과 유사하거나 같은 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료가 설명되어 있다. 본 발명에서 인용된 특허 및 특허 출원을 포함하나, 이에 한정되지 않는, 모든 공개 문헌 및 참고 문헌은, 마치 각각의 개별 공개 문헌 및 참고 문헌이 전체가 개재되어 있는 것으로 본 발명에서 참조로 포함되어 있다고 구체적으로 및 개별적으로 명시되어 있는 것과 같이, 그 전문이 본 발명에서 참고로 포함된다. 본 출원의 우선권 주장의 대상이 되는 임의의 특허 출원 또한 공개 문헌 및 참고 문헌에 대해 상기 기술되어 있는 것과 같은 방식으로 그의 전문이 본 발명에 참고로 포함된다. 본 발명의 목적을 위해 다음 용어는 아래에 정의되어 있다.
관사 “a” 및 “an”은 본 발명에서 관사의 문법적 대상 중 하나 또는 둘 이상 (즉, 적어도 하나)를 지칭하는 데 사용된다. 예를 들어, “요소 (an element)”는 하나의 요소 또는 하나 이상의 요소를 의미한다.
본 발명에서 “및/또는” 이라는 용어는 달리 나타내지 않는 한 “및” 또는 “또는”을 의미하는 것으로 사용된다.
본 발명에서 “예 (e.g.)”라는 용어는 “예를 들어 (for example)”라는 의미로 사용되며, 명시된 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 그룹을 포함하되 다른 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 그룹을 제외하지 않는 것을 의미하는 것으로 이해된다.
“약 (about)”은 수량, 수준, 값, 숫자, 빈도, %, 치수, 크기, 양, 무게 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 만큼 변화하는 수량, 수준, 값, 숫자, 빈도, %, 치수, 크기, 양, 무게 또는 길이를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 “투여하는”은 화합물과 같은 물질, 예를 들어 약제학적 화합물, 또는 항원과 같은 다른 제제를 개체에 운반, 전달, 도입 또는 수송하는 어떤 방식을 나타낸다. 투여 방식은 경구 투여, 국소 접촉, 정맥내, 복강내, 근육내, 비강내 또는 피하 투여를 포함한다. 하나 이상의 치료학적 제제와 같은 추가 물질과의 “조합” 투여는 동시에 (같이) 및 임의의 순서로 연속 투여하는 것을 포함한다.
본 발명에서 사용되는 용어 “결합력(avidity)”은 항원-결합 분자 (항-CD6 항체와 같은) 와 관련된 항원 사이의 결합 강도의 측정치를 의미한다. 결합력은 항원 결정기와 항원 결합 분자 상 그의 항원 결합 부위 사이의 친화성 및 항원-결합 분자 상에 존재하는 관련 결합 부위의 수와 관련된다.
본 발명에 사용되는 "결합 파트너(binding partner)”라는 용어는 일반적으로 비공유 결합을 통해 약제가 핵산 분자, 펩티드, 단백질 또는 당류, 다당류 또는 지질과 복합체를 형성할 수 있도록 허용하기에 충분한 상호작용을 통해 단백질, 당류, 다당류 또는 지질 뿐만 아니라 DNA 또는 mRNA 분자를 포함하는 RNA 같은 핵산 분자에 결합할 수 있는 분자, 특히 고분자와 같은 물질을 지칭한다. 일부 실시예에서, 결합 파트너는 압타머이다. 일부 실시예에서, 결합 파트너는 특정 표적에 특이적이다. 일부 실시예에서, 결합 파트너는 복수의 결합 부위를 포함하며, 각 결합 부위는 특정 표적에 특이적이다. 예시로서, 결합 파트너는 두개의 결합 부위를 갖는 면역 글로불린 유사 기능을 갖는 단백질성 제제일 수 있다. 예를 들어, 이는 항체의 항원 결합 단편일 수 있다. 예를 들어, 이는 이중 특이적 단일 사슬 이량항체 같은 이중 특이적 이량항체 일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 “담체(carrier)”라는 용어는 담체, 부형제, 및 희석제를 포함하며, 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질과 같이 약제를 개체의 한 기관 또는 신체 일부에서 다른 기관 또는 신체 일부로 전달하거나 운반하는데 관여하는 물질, 조성물 또는 매개체를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 "키메라 항체"라는 용어는 두개 이상의 종의 서열을 포함하는 면역 글로불린 폴리펩티드 또는 도메인 항체를 지칭한다. 키메라 항체에서 중쇄 또는 경쇄는 인간과 같은 한 종의 가변 영역 서열과 마우스와 같은 다른 종의 불변 영역 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, “키메라 항체”는 렛(rat) 또는 마우스(mouse)와 같은 동물 항체에서 유래한 가변 영역이 다른 분자, 예를 들어, 인간 항체로부터 유래한 불변 영역에 융합된 면역 글로불린 일 수 있다. “키메라 항체”라는 용어는 다음과 같은 항체를 포함하기 위한 것이다: (i) 중쇄는 키메라이지만 경쇄는 오직 한 종의 Y 및 C 영역으로 구성된 것, (ii)경쇄는 키메라이지만 중쇄는 오직 한 종의 Y 및 C 영역으로 구성된 것, (iii) 중쇄와 경쇄 모두 키메라인 것.
"유효량(effective amount)"는 화합물과 관련하여 사용될 때, 원하는 반응을 유도하는 데 필요한 항-CD6 항체(예를 들어, 이톨리주맙 또는 EQ001)와 같은 화합물의 양을 의미한다. 일부 실시예에서, 원하는 반응은 예를 들어 개체에서의 생물학적 반응이다. 일부 실시예에서, 화합물(예를 들어, 항-CD6 항체)은 개체에서 생물학적 반응을 일으키기 위한 유효량으로 개체에 투여될 수 있다. 일부 실시예에서, 유효량은 “치료적으로 효과적인 양”이다.
"치료학적으로 효과적인 양(therapeutically effective amount) 및 “치료 용량(therapeutic dose)”이라는 용어는 본 발명에서 기술된 바와같이 개체의 질병 또는 장애를 치료하기 위해 개체에 투여한 다음 효과가 있는 항-CD6 항체(예를 들어, 이톨리주맙 또는 EQ001)와 같은 화합물의 양을 지칭하기 위해 본 발명에서 상호 교환적으로 사용된다.
본 발명에서 "병원성"이라는 용어는 사이토카인의 확산 및 분비 증가에 관하여 병원성 반응을 나타내는 T 세포의 능력을 지칭하기 위해 사용된다.
"예방적 유효량(prophylactically effective amount)”이라는 용어는 본 발명에서 기술된 바와 같이 개체에 투여한 후 개체의 질병 또는 장애의 발병을 예방하거나 지연시키는데 효과적인 항-CD6 항체 (예를 들어, 이톨리주맙 또는 EQ001) 같은 화합물의 양을 지칭하기 위해 본 발명에서 사용된다.
이와 관련하여, 본 발명에서 사용되는 "인간화 항체"는 인간 항체의 구조적 요소와 비인간 항체의 항원 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 폴리펩타이드 또는 도메인 항체이다. "인간화 항체"는 그들이 유래된 비인간 항체로부터의 최소한의 잔기를 포함한다. 예를 들어, 인간화 항체는 비인간 항체의 CDR 영역만 포함하거나 비인간 항체의 과변이 영역을 구성하는 잔기만 포함할 수 있다. 그들은 또한 비인간 항체의 구조를 모방하거나 입체 간섭을 최소화하는데 필요한 잔기 같은, 비인간 폴리펩타이드의 가변 영역 외부의 특정 잔기를 포함 할 수 있다. 전형적으로 인간화 항체는 인간 프레임워크, 비인간 항체로부터 적어도 하나의 CDR을 포함하며, 존재하는 모든 불변 영역은 인간 면역글로불린 불변 영역과 실질적으로 동일하다 (즉, 적어도 약 85-90%, 예컨대 적어도 95% 동일함). 따라서, 일부 경우에서 아마도 CDR을 제외한 인간화 면역글로불린의 모든 부분은 하나 이상의 네이티브 인간 면역글로불린 서열의 상응하는 부분과 실질적으로 동일하다. 게다가, 인간화 항체는 인간 또는 비인간 항체와 상응하지 않는 잔기가 포함될 수 있다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, “항체 단편(antibody fragment)”이라는 용어는 전장 형태 이외의 모든 형태의 항체를 의미한다. 여기서 항원 단편은 전장 항체 내에 존재하는 더 작은 구성 요소인 항체 및 조작된 항체를 포함한다. 항체 단편은 Fv, Fc, Fab, and (Fab')2, 단일 사슬 Fv (scFv), 이량체, 삼량체, 사량체, 이작용 하이브리드 항체, CDR1, CDR2, CDR3, CDR들의 조합, 가변 영역, 프레임워크 영역, 불변 영역, 중쇄, 경쇄, 대체 스캐폴드 비항체 분자(alternative scaffold non-antibody molecules) 및 이중 특이적 항체가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 특별히 달리 명시되지 않는 한, “항체(antibody)”또는 “항체들(antibodies)”이라는 용어를 사용하는 서술 및 청구항에는 구체적으로 “항체 단편 antibody fragment)”및 “항체 단편들(antibody fragments)”이 포함될 수 있다.
용어 “VH”는 본 발명에서 항체의 가변 중쇄를 나타내기 위해 사용 사용된다.
용어 “VL”은 본 발명에서 항체의 가변 경쇄를 나타내기 위해 사용된다.
항체와 관련하여 용어 "항원 결합 단편"은 모(parent) 전장 항체가 결합하는 항원에 대한 결합 친화성을 유지하는 임의의 항체 단편을 의미하며, 항원 결합 단편은 Fv, Fab, (Fab')2, scFv, 이량체, 삼량체, 사량체, 이작용 하이브리드 항체, CDR1, CDR2, CDR3, CDR들의 조합, 가변 영역, 중쇄, 경쇄 및 이중 특이적 항체를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본 명세서 전체에서, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, “포함하다 (comprise)”, “포함하다 (comprises)” 및 “포함하는 (comprising)”이라는 단어는 명시된 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 그룹을 포함하지만 어떤 다른 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 그룹을 제외하지 않는 것을 의미하는 것으로 이해된다. “~로 구성된 (consisting of)”은 “~로 구성된 (consisting of)”이라는 문구 뒤에 오는 모든 것을 포함하며 이에 제한됨을 의미한다. 따라서, 상기 문구 “~로 구성된 (consisting of)”은 나열된 요소는 필수 또는 의무적이며, 다른 요소는 존재하지 않을 수 있음을 나타낸다. “필수적으로 구성된(consisting essentially of)”은 상기 문구 뒤에 나열된 모든 요소를 포함하는 것을 의미하며 나열된 요소에 대한 공개에 명시된 활동 또는 작용을 방해하거나 이에 기여하지 않는 다른 요소는 제한된다는 의미이다. 따라서, 문구 “필수적으로 구성된(consisting essentially of)”은 나열된 요소는 필수 또는 의무적이지만 다른 요소는 선택사항이며 나열된 요소의 활동 또는 작용에 실질적으로 영향을 미치는지 여부에 따라 포함될 수도 있고 포함되지 않을 수도 있음을 나타낸다.
용어 “조절(modulating)”은 전형적으로 대조군과 비교하여 통계적으로 유의미한 양 또는 생리적으로 유의미한 양의 “감소(decreasing)” 또는 “감소(reducing)”뿐만 아니라 “증가(increasing)”, “강화(enhancing)” 또는 “자극 (stimulating)”을 포함한다. “증가된(increased)”, “자극된(stimulated)” 또는 “강화된(enhanced)” 양은 전형적으로 “통계적으로 유의미한” 양이며, 무조성(예를 들어, 본 개시의 항-CD6 항체 중 어느 것도 없는 경우) 또는 대조 조성물, 샘플 또는 시험 대상에 의해 생성된 양의 1.1, 1.2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30배 이상 (예를 들어, 500, 1000배) (1 사이 및 1 이상의 모든 정수 및 소수점 포함, 예를 들어: 1.5, 1.6, 1.7. 1.8 등)의 증가를 포함할 수 있다. 증가”감소된” 또는 “줄어든” 양은 일반적으로 “통계적으로 유의미한 양”이며, 무조성(약제 또는 화합물의 부재) 또는 대조 조성물에 의해 생성된 양의 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 감소를 포함할 수 있다.
용어 “폴리펩타이드”와 “단백질”은 본 발명에서 아미노산 잔기의 중합체와 그의 변이체 및 합성 유사체를 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 따라서, 이러한 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 합성된 자연-발생 아미노산 중합체뿐만 아니라 자연-발생 아미노산에 상응하는 화학적 유사체와 같은 합성 비-자연-발생 아미노산인 아미노산 중합체에 적용된다.
본 발명에서 사용되는 “개체” 또는 “환자”는 증상을 나타내거나 증상을 나타낼 위험이 있는 어떤 동물을 포함하며, 이는 항-CD6 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 치료 또는 진단할 수 있다. 적합한 개체 (환자)는 가급적이면 인간 환자를 포함한다. 적합한 개체는 또한 실험동물 (예컨대 마우스, 렛, 토끼, 기니피그), 농장동물 (예컨대 돼지, 말, 소), 가축 또는 반려동물 (예컨대 고양이, 개)도 포함된다. 인간이 아닌 영장류(예컨대 원숭이 침팬지, 개코원숭이, 붉은털원숭이)도 포함된다.
“실질적으로 (Substantially)” 또는 “본질적으로(essentially)”는 거의 전부의 또는 완전히를 의미하며, 예를 들면 어떤 주어진 양의 95% 이상이다.
본 발명에서 사용되는 “치료” 또는 “치료하는”은 질병 또는 상태의 증상 또는 병리에 대한 어떤 바람직한 효과를 포함하며, 치료 중인 질병 또는 상태의 하나 이상의 측정 가능한 마커에 대한 최소한의 변화 또는 개선도 포함될 수 있다. “치료” 또는 “치료하는”이 반드시 질병 또는 상태, 또는 그와 관련된 증상의 완전한 근절 또는 완치를 의미하지는 않는다. 이 치료를 받는 개체는 이를 필요로 하는 어떤 개체다. 임상적 개선의 예시적인 표지는 당업자에게 명백할 것이다.
본 발명은 예를 들어 CD6high 세포로부터 세포 표면 CD6을 제거할 수 있는 항-CD6 항체를 식별 방법과 항-CD6 항체를 사용하여 Teff를 Treg| 세포로 전환하는 방법 및 항-CD6 항체를 개체에 투여하여 자가 또는 동종반응 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 또는 선천성 림프구 세포 (ILC)의 치료, 예방 또는 완화 방법에 관한 것이다.
CD6은 인간 NK 세포, ILC, T 세포 및 B 세포의 아형뿐만 아니라 일부 B 세포 만성 림프구성 백혈병 및 뉴런에 의해 우세하게 발현되는 중요한 세포 표면 단백질이다. [Aruffo et ah, J. Exp. Med. 1991, 174:949; Kantoun et ah, J. Immunol. 1981, 127:987; Mayer et al., J. Neuroimmunol. 1990. 29: 193]. CD6은 타입 I 대식세포의 스캐빈저 수용체 시스테인-풍부 도메인 (SRCR)에 상동이 있는 적어도 하나의 도메인을 갖는 것을 특징으로 하는 단백질의 큰 패밀리 구성원이다 [Matsumoto, et al., J. Exp. Med. 1991, 173 :55 and Resnick et al., Trends Biochem. Sci. 1994, 19:5]. 이 패밀리의 다른 구성원에는 CD5 [Jones et al., Nature. 1986, 323 :346]; 사이클로필린 C [Friedman et al. 1993, PNAS 90:6815]; 활성화된 보체 단백질 C3b 및 C4b에 결합하는 보체 인자 I [Goldberger, et al., J. Biol. Chem. 1987, 262: 10065]; .타우./.델타. T 세포로 표현되는 소의 WC-l [Wijingaard et al., J. Immunol. 1992, 149:3273] 및 M130 [Law et al., Eur J. Immunol. 1993, 23 :2320], 대식세포 활성 마커를 포함한다.
성숙한 CD6 단백질의 세포외 도메인은 3개의 SRCR 도메인 (이하 D1, D2 및 D3로 명명됨)으로 구성된다. D3는 막 근위 SRCR 도메인에 상응하며 짧은 33-아미노산 스토킹 영역(stalk region)이 뒤따른다. 이러한 세포 외 도메인은 가변 길이의 세포질 도메인이 뒤따르는 짧은 막 관통 도메인을 통해 세포막에 고정되어 있다 [Aruffo et al., J. Exp. Med. 1991, 174:949].
기원을 알 수 없는 가용성 형태의 CD6(sCD6)는 건강한 개인으로부터의 혈청에서 매우 낮은 수준(피코/나노 몰 범위)으로 순환하는 것으로 보고되었다. 높은 수준의 sCD6은 전신 염증 반응 증후군 및 원발성 쇼그렌 증후군이 있는 개인에서 관찰되었지만, 이러한 사건 사이의 직접적인 기계론적 및 기능적 관계는 부족한다. 보고서는 sCD6이 메탈로프로테이나제의 ADAM 패밀리 구성원의 단백질 가수 분해 작용을 통해 막 결합 수용체의 발산에 의해 형성됨을 시사한다 (Carrasco, et al., Frontiers in Immunology 2017. 8:769). 또한, T 세포 생리학에서 sCD6의 기능적 역할은 아직 알려지지 않았지만, 시험관 내 결과는 sCD6는 T 세포 활성화 및 면역 시냅스의 성숙을 억제하여 일부 연구자들이 sCD6 염증 부위 근처의 방관자 T 세포를 비활성화하는 미끼 수용체로 작용함을 시사한다.
인간 IgG1 불변 도메인 (CD6-Rgs)에 융합된 CD6의 선택된 세포 외 도메인을 포함하는 CD6-면역글로불린 융합 단백질을 사용한 연구는 CD166으로도 알려졌으며 “활성화된 백혈구 세포 부착 분자”(ALCAM)로 지정된 CD6 리간드의 식별 및 복제로 이어졌다 [Patel, et al. , J . Exp. Med. 1995. 181 : 1563-1568; Bowen et al., J . Exp. Med 1995, 181 :2213-2220].
ALCAM은 면역글로불린 수퍼패밀리의 구성원이며 5개의 세포 외 면역 글로불린 도메인 (2 NH2 - 말단, 막 원위 가변성-(V)-유형 (VI, V2 또는 Dl, D2) 및 3개의 막 근위 불변-(C2)-유형 Ig 접힘) [C1, C2, C3], 막 통과 영역, 및 짧은 세포질 꼬리를 포함하는 100-105 kD 유형 I 막 통과 당단백질이다. N-말단 도메인 (Dl)은 독점적으로 리간드 결합에만 관여하는 반면, 막 근위 도메인 (C2, C3 또는 D4, D5)은 상동성 상호작용이 필요하다.
ALCAM은 막 근위 SRCR 도메인에 해당하는 CD6의 도메인 3에 결합한다 [Whitney, et. al., J. Biol. Chem 1995, 270: 18187-18190].
T-세포 조절에서 CD6/ALCAM 상호작용의 역할에 대한 연구는 이 수용체-리간드 쌍은 CD6을 발현하는 세포가 흉선 상피 세포에 부착하는 것을 매개할 수 있음을 나타낸다. 이는 CD6/ALCAM 상호작용이 T-세포 발달 및 활성화를 조절하는 데 중요한 역할을 한다는 것을 시사한다. 더욱이 ALCAM 쉐딩(shedding) 또한 보고되었으며, sCD6와 마찬가지로, 상기 과정은 ADAM 패밀리 메탈로프로테아제-매개 절단의 산물인 것으로 보인다.
CD6은 생체 내 (in vivo) T-세포 기능을 조절하는데 중요한 역할을 한다. CD6은 또한 초기 및 후기 T-세포-항원 제시 세포 (APC) 상호작용을 매개하는 면역학적 시냅스의 일부인 것으로 보고되었다. 더욱이, CD6high T 세포는 병원성이 있고 CD6low T는 병원성이 없는 것으로 보여졌다 (예를 들어, Ma et al., Journal of Crohn's and Colitis. 13: 510-524, 2019).). CD6 high 대 low CD6 발현을 설정하는 방법은 당업자에게 알려져 있으며, 다양한 세포 아형에서 단백질 및/또는 mRNA 발현을 비교함으로써 CD6high 및 CD6low 세포를 정의할 수 있다.
미국 특허 NO. 6,372,215는 인간 CD6 (hCD6) 또는 인간 CD6 줄기 도메인 (CD6S)의 SRCR 도메인3 (D3)에 특이적으로 결합하고 CD6에 결합하는 활성화된 백혈구 세포 부착 분자 (ALCAM)를 억제하는 항원 및 다른 결합제를 개시한다.
이전의 간행물 및 특허는 마우스 항-CD6 (IOR-Tl) 모노클로날 항체의 서열 및 IOR-T1을 T1h(인간화 IOR-T1)로 인간화하기 위해 수행된 아미노산 변형을 개시하였다. 미국 특허 NO. 5,712,120 및 이에 상응하는 EP 0699755는 쥐 (murine) 단일 클론 항체를 인간화 하는 구체적인 방법과 IOR-T1 및 Tlh 서열을 개시하였다. 미국 특허 No. 6,572,857 및 이에 상응하는 EP 0807125는 IOR-T1 및 Tlh (인간화 IOR-T1)의 서열을 개시하였다. “단일클론 항체 및 그 방법”이라는 제목의 PCT/IN2008/00562는 SEQ ID NOS: 1 및 2로 본 발명에 제공된 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는 NS0 세포에서 항-CD6 항체를 생산하는 방법을 개시하였다. 이 항체의 INN명은 이톨리주맙이다. 이톨리주맙은 마우스 유래 NS0 세포주 및 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서 생산되며, 본 발명에서는 CHO 세포에서 생산되는 경우 상품명 EQ001로, NS0 세포주에서 생산되는 경우 상품명 ALZUMAB으로 지칭한다. EQ001 (즉, CHO 세포에서 생산되는 이톨리주맙)은 당업계에서는 “Bmab-600”으로도 알려져 있다. 일부 실시예에서는 생산 방법에 관계 없이 항체 자체를 INN명으로서 이톨리주맙으로 지칭한다. 따라서, 본 발명에서 사용되는 용어 이톨리주맙은 각각 이톨리주맙과 동일한 서열을 갖는 ALZUMAB 및 EQ001을 포함한다 (표 S1 참조). 이톨리주맙 (및 EQ001 / ALZUMAB)의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL)의 아미노산 서열은 본 발명에 각각 SEQ ID NOS: 1 및 2로 제공된다. 이톨리주맙(및 EQ001 / ALZUMAB)의 VH 및 VL의 뉴클레오티드 (DNA) 서열은 본 발명에 각각 SEQ ID NOS: 3 및 4로 제공된다. 이톨리주맙(및 EQ001 / ALZUMAB) VH CDR 1-3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOS: 5-7로 제공된다. 이톨리주맙(및 EQ001 / ALZUMAB) VL CDR 1-3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOS: 8-10으로 제공된다.
CD6을 표적으로 하는 항체는 적어도 부분적으로는 비정상 T 세포 활성으로 유도되는 광범위한 질병 및 질환에 대한 치료제로서 가능성을 보여주었다. 예를 들어, PCT/IN2008/000562는 미감작(naive) T 세포의 증식을 억제하기 위해 그리고 다발성 경화증, 이식 거부증, 류마티스 관절염 및 건선을 포함한 다양한 염증성 질환을 치료하기 위해 이톨리주맙을 사용하는 방법을 개시하고 있다. 실제로 ALZUMAB은 현재 인도에서 건선 치료제로 시판되고 있다. 또한, 루푸스 치료를 위한 이톨리주맙의 사용이 PCT/IB2017/056428에 개시되어 있다. 그러나, 이러한 질병의 이질성과 T 세포, B세포, 수지상 세포, 단핵구 및 호중구에 의해 매개되는 다른 질병 형태 사이를 순환하는 경향으로 인해 이러한 항체의 잠재력을 더 완전하게 타진하기 위해 더 많은 표적 치료 요법이 필요하다.
아직까지 항-CD6 항체 (예를 들어, 이톨리주맙)를 이용한 치료 또는 보다 일반적으로 CD6high 세포의 세포 표면 CD6 발현 감소에 대해 환자가 가장 유리하게 반응할 수 있을 때를 결정하기 위해 임상적으로 사용하는 바이오마커 전략이 없다. 본 발명의 실시예는 CD6high 세포의 원하는 감쇠를 얻기 위한 투여 방법을 식별하는 방법을 포함한다.
일부 실시예는 자가면역, 면역-염증, 또는 염증성 질환, 이식편대숙주질환 (GVHD), 또는 장기 이식 거부를 갖는 인간 개체에 이톨리주맙의 최적 투여량을 결정하는 방법을 포함하며, 이는 다음을 포함한다:
(a) 개체의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준의 기준선을 결정하는 단계, 여기서 상기 조직 샘플은 T림프구를 포함하고, 및 개체의 세포 표면 CD6의 표적 수준을 선택적으로 정의하는 단계;
(b) 2회 또는 3회 이상 투여량 (예를 들어, 3, 4, 5 또는 6회 투여량)의 이톨리주맙을 순차적으로 개체에 투여하고, 투여량을 선택적으로 증가시키는 단계로 (예를 들어, 최대 약 4 mg/kg), 예를 들어, 서로 다른 투여량 또는 매번 다른 투여량으로 증가시키는 단계 (예를 들어, 투여량 당 또는 매번 다른 투여량 당 약 0.1 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.6 mg/kg, 0.7 mg/kg, 0.8 mg/kg, 0.9 mg/kg, 또는 1.0 mg/kg 이상 증가시키는 것);
일련의 투여 사이에 개체의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준을 모니터링하는 단계로, 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함한다;
단계 (c)의 세포 표면 CD6 수준이 (a)로부터의 기준선의 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 45, 또는 50 % 이하이거나, (a)로부터의 목표 수준의 약 5, 10, 15, 또는 20 % 이내 또는 이하인 경우, 그리고 일련의 투여량 사이에서 세포 표면 CD6 수준의 추가 감소(예를 들어, 통계적으로 유의한 감소)가 관찰되지 않는 경우 일련의 투여량에서 최저 투여량을 최적 투여량으로 식별하는 단계;
일부 실시예는 이를 필요로 하는 인간 개체에 자기 면역, 면역-염증, 또는 염증성 질환, 이식편대숙주질환 (GVHD) 또는 장기 이식 거부 치료를 위한 투여 요법에 관한 것으로서, 다음을 포함한다:
(a) 개체의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준의 기준선을 결정하는 단계, 여기서 조직 샘플은 T-림프구를 포함하고, 및 개체의 세포 표면 CD6의 목표 수준을 선택적으로 정의하는 단계;
(b) 개체에 (a) 에서의의 기준선의 약 5, 10, 15, 20, 25퍼센트 이하로 개체 내 T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 감소시키는 이톨리주맙 투여량을 투여하는 단계;
(c) 개체로부터의 조직 샘플의 세포 표면 CD6 수준을 모니터링하는 단계로; 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함한다; 및
(d) (c)의 세포 표면 CD6 수준이 (a)에서의 기준선의 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 % 이상으로 회복하거나 (a)에서의 목표 수준 이상으로 상승하기 전에 개체에 이톨리주맙의 추가 용량을 투여하는 단계;
일부 실시예에서, 투여 요법은 개체의 T-림프구 (예를 들어, CD4 및/또는 CD8 세포)의 세포 표면 CD6 수준이 (a)에서의 기준선의 약 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75% 이하 또는 (a)로부터의 선택적 목표 수준의 약 5, 10, 15, 또는 20 % 이내로 유지하고, 일부 실시예는 임상 매개변수 또는 질병의 증상에 기초하여 개체에서 세포 표면 CD6의 목표 수준을 정의하는 단계를 포함한다.
또한, 이를 필요로 하는 인간 개체에 자가면역, 면역-염증 또는 염증성 질환, 이식편대숙주질환 (GVHD) 또는 장기이식거부반응증의 치료를 위한 투여 요법을 포함하며, 이는 다음을 포함한다:
(a) 개체의 혈액 샘플에서 CD6high T-림프구의 기준선 수준을 결정하는 단계 및 CD6high T-림프구의 목표 수준을 선택적으로 정의하는 단계;
(b) 개체의 CD6high T-림프구 수준을 (a)에서의 기준선의 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 또는 40 % 이하로 감소시키는 이톨리주맙 투여량을 개체에 투여하는 단계;
(c) 개체의 혈액 샘플 내 CD6high T-림프구의 수준을 모니터링하는 단계; 및
(d) (c)에서의 CD6high T- 림프구의 수준이 (a)에서의 기준선 수준의 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 % 이상으로 회복하거나, (a)로부터의 표적 수준 이상으로 상승하기 전에 개체에 이톨리주맙의 추가 투여량을 투여하는 단계, 그리고 경우에 따라서는 임상 매개변수 또는 질병의 증상에 기반하여 개체의 CD6high T-림프구의 목표 수준을 정의하는 단계;
일부 실시예에서, 투여 방법은 개체 내 CD6high T-림프구의 수준을 (a)에서의 기준선 수준의 약 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 % 이하로 유지하며, 여기서 T-림프구는 CD4 세포 및/또는 CD8 세포를 포함한다. 일부 실시예에서, 투여 방법은 개체 내 CD6high:CD6low T-림프구 비율을 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키거나 대조군이나 표준 또는 기준선의 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키며, 여기서 상기 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다.
일부 실시예에서, 투여 요법은 개체에서 Teff:Treg 세포의 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선의 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키거나 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키며, 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포.
또한 인간 이식 환자의 이식편대숙주질환 (GVHD)을 예방 또는 개선하기 위한 세포-기반 치료 방법을 포함하며, 이는 다음을 포함한다:
(a) 이식 조직 내 CD6high T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 감소시키기에 충분한 시간 동안 이식 조직을 항-CD6 항체, 선택적으로 이톨리주맙과 함께 배양하는 단계; 및
(b) 이식 조직을 환자에게 이식하는 단계.
일부 방법은 단계 (a) 전 및 후에 이식 조직 내 T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 결정하고, 단계 (a) 후 세포 표면 CD6 수준이 단계 (a) 전에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500% 이상 감소하는 경우 단계 (b)를 수행하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 이식 조직은 제대혈 세포, 골수 세포, 말초 혈액 세포, 이동성 말초 혈액 세포, 중간엽 줄기 세포, 조혈 줄기 세포, 줄기 세포/전구 세포로부터 분화된 세포, 조작된 세포 (예를 들어, CAR T 세포 같은 키메라 항원 수용체 (CAR) 세포) 또는 언급된 세포의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 이식 조직은 인간 이식 환자 자가 조직으로, 즉, 여기서 상기 이식 조직은 환자로부터 제거되고, 본 발명에서 개시한 바와 같이 처리되며, 나중에 동일한 환자에게 투여된다. 일부 실시예에서, 상기 이식 조직은 동종이식 조직 또는 인간 이식 환자와 동종인 조직이며, 예를 들어, 여기서 상기 이식 조직은 유전적으로 동일하지 않은 인간 기증자로부터 수득되었고, 본 발명에서 기술된 바와 같이 처리된 후 상기 인간 환자에게 투여된다.
또한 이를 필요로 하는 인간 환자의 자가면역, 면역 염증 또는 염증성 질환을 치료하거나 개선하기 위한 세포 기반 치료 방법 (예를 들어, Treg 치료법)을 포함하며, 이는 다음을 포함한다:
(a) 이식 조직 내 CD6high T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 감소시키기 충분한 시간 동안 이식 조직을 항-CD6 항체, 선택적으로 이톨리주맙과 함께 배양하여 CD6low (naive) T-림프구가 풍부화된 이식 조직을 생성하는 단계;
(b) 상기 CD6low (미감작) T-림프구로부터 Treg 림프구를 생성하기 위해 충분한 시간 동안 (a) 에서의 이식 조직을 처리하는 단계; 및
(c) 에서의 이식 조직을 환자에게 이식하는 단계.
상기와 유사하게, 일부 실시예는 단계 (a) 전 및 후에 이식 조직 내 T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 결정하고, 단계 (a) 후 세포 표면 CD6 수준이 단계 (a) 전에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소되는 경우 단계 (b)를 수행하는 단계(들)을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 단계 (b)는 CD6low (미감작) T-림프구를 T 세포 활성화제/자극 신호, 사이토카인, 성장 인자, 전사 인자, 및/또는 안정화제 (예를 들어, CD3/CD28 활성화제, STEMCELL TECHNOLOGIESTM 의 ImmunoCult™ 인간 Treg 분화 보충제 같은 Treg 분화 칵테일)의 조합과 함께 Treg 림프구가 생성 또는 풍부화되기 위한 충분한 시간 동안 배양하는 단계를 포함한다. Tregs 를 생성 (예를 들어, 분화, 확장)하기 위한 그러한 치료법 또는 프로토콜의 예는 당업자에게 알려져 있다 (예를 들어, Golovina et al., PLoS ONE (2011) 6:e15868. doi: 10.1371/journal.pone.0015868; Scott et al., Haematologica 98:1291-9, 2013; Dons et al., Hum Immunol. 73:328-34, 2012; Fraser et al., Mol Ther Methods Clin Dev. 8:198-209, 2018; Romano et al., Front. Immunol. 31 January 2019, doi.org/10.3389/fimmu.2019.00043; Haddadi et al., Clinical and Experimental Immunol. 201(2):205-221, 2020), including a protocol that combines RORγspecific inverse agonist (SR) and a TGF-βsignaling promoter [N-acetyl puromycin (N-Ac)]).
Treg 림프구 생성을 위한 추가 프로토콜이 개시되어 있으며, 예를 들어, 미감작 T 세포를 TCR 및 TGF-β와 함께 공동자극하는 것을 개시하는 Chen 외 (The Journal of Experimental Med. 198(12):1875-1886, 2003); IL-2 및 TGF-β를 사용한 자극을 개시하는 Zheng 외 (J. Immunol. 178:2018-2027, 2007); IL-2, TGF-β및 PGE2를 사용한 자극을 개시하는 Schiavon et al. (PNAS. 116:6298-6307, 2019) 및 생체 외 (ex vivo) Treg 림프구 생성을 예시하는 다양한 기법과 임상 시험을 개시하는 Ferreira 외 (Nat Rev Drug Discov. 18(10): 749-769, 2019). Zagury 외 (WO 2018/024896)는 γδ T 세포 활성화제 및 다음 제제를 사용한 T 세포 배양을 포함하는 예시적인 프로토콜을 개시한다: i) cAMP(고리모양아데노신1인산)활성화제, ii) TGFP(형질전환 생장인자-베타) 경로 활성화제, iii) mTOR 억제제, 선택적으로 iv) IL-2, IL-7, IL-15 및 TSLP 그룹에서 선택된 적어도 하나의 사이토카인, 선택적으로 v) 적어도 하나의 TET 효소 활성화제 및/또는 적어도 하나의 DNMT 억제제. Alvarez-Salazer 외 (Front. Immunol. 11:375. doi: 10.3389/fimmu.2020.00375)는 이식에서 면역 요법에 사용하기 위한 기능적 안정성을 갖는 인간 Treg 림프구의 대규모 생성, 예를 들어, TGF-βIL-2 및 레티노산의 존재 하에서 미감작 T 세포를 수지상 세포와 공동 배양하여 Treg를 생성하고, TGF-βIL-2 및 라파마이신의 존재 하에서 Treg를 확장하는 방법을 개시한다.
일부 실시예에서, 이식 조직은 제대혈 세포, 골수 세포, 말초 혈액 세포, 이동성 말초 혈액 세포, 중간엽 줄기 세포 조혈 줄기세포, 줄기 세포/전구 세포로부터 분화된 세포, 조작된 세포 (예를 들어, CAR T 세포와 같은 키메라 항원 수용체(CAR) 세포) 또는 상기 세포의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 이식 조직은 인간 환자의 자가 조직, 예를 들어 자가 조직의 Treg 요법이다. 일부 실시예에서, 이식 조직은 동종 이식 조직 또는 인간 환자와 동종인 조직이다.
일부 실시예는 이를 필요로 하는 인간 개체에 자가면역, 면역염증 또는 염증성 질환, 이식편대숙주질환 (GVHD) 또는 장기 이식 거부 치료를 위한 방법을 포함하며, 이는 다음을 포함한다:
(a) 개체에 이톨리주맙을 투여하는 단계;
(b) 개체의 조직 샘플에서 T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 결정하는 단계, 개체의 조직 샘플 내 CD6high 및 선택적으로 CD6low T-림프구의 수준을 결정하는 단계, 및/또는 개체에서 Teff 및 Treg 세포 수준/비율을 결정하는 단계이며, 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함한다;
여기서 이톨리주맙의 투여는 (i) T-림프구, 선택적으로 CD4 및/또는 CD8 세포, 상의 세포 표면 CD6의 수준; (ii) 개체의 CD6high T-림프구의 수준; (iii) 개체의 CD6high:CD6low T-림프구 비율; 및 또는 (iv) 개체의 Teff :Treg 세포 비율 중 하나 이상을 감소시키고, 이로써 개체의 병원성 면역 반응을 감소시킨다. 상기 (i)-(iv) 중 임의의 하나 이상을 결정하는 방법은 본 발명 (실시예 참조)에 개시되어 있으며, 당업자에게 알려져 있다.
일부 경우에서, 이톨리주맙의 투여는 개체 내 T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 대조군이나 표준 또는 기준선에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키며, 여기서 상기 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다; 개체 내 CD6high T-림프구 수준을 대조군이나 표준 또는 기준선에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키며, 여기서 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다; 개체 내 CD6high:CD6low T-림프구 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 퍼센트 이상 또는 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키며, 여기서 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다; 및/또는 개체에서 Teff:Treg 세포 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 이상 또는 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시킨다.
일부 실시예에서, 환자 또는 개체 내 자가면역, 면역-염증 또는 염증성 질환은 표준 또는 건강한 개체와 비교하여 증가된 Teff :Treg 세포 비율을 특징으로 한다. 일부 실시예에서, 개체 또는 환자에서 Teff :Treg 세포의 비율은 표준 또는 건강한 개체에 비해 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10-배 이상 증가한다. 일부 실시예에서, 자가 면역, 면역-염증 또는 염증성 질환은 염증성 장 질환 (IBD), 선택적으로 크론병 또는 궤양성 대장염, 전신홍반루푸스 (SLE), 선택적으로 루푸스 신염을 수반하는 SLE, 류마티스 관절염 (RA), 다발성 경화증(MS), 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염 또는 천식이다.
일부 실시예는 이톨리주맙의 시험 배치를 분석하기 위한 시험관 내(in vitro) 세포 기반 (즉, 세포 배양-기반) 방법을 포함하며, 이는 다음을 포함한다.
(a) 이톨리주맙 시험 배치를 세포 표면에서 CD6을 발현하는 (배양된) 세포와 함께 배양하는 단계;
(b) 상기 세포의 세포 표면 CD6 발현을 측정하는 단계; 및
(c) 상기 시험 배치가 세포 표면 CD6 발현 (예를 들어, T-림프구 상의)을 대조군 또는 표준에 비해 감소시키는 경우 약학적 조성물로서 이톨리주맙의 시험배치를 제형화하는 단계 및 상기 시험배치가 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현을 감소시키지 않는 경우 이톨리주맙의 시험 배치를 거부하는 단계를 포함한다.
일부 실시예에서, 단계 (b)는 세포, 예를 들어 T-림프구의 세포 표면 CD6 발현을 직접 측정하는 단계를 포함한다. 세포 표면 CD6 수준은 당업자의 다양한 기술에 따라, 예를 들어 유세포 분석법, 시간-비행에 의한 사이토메트리(cytometry by time-of-flight, CyToF), 세포 ELISA 또는 면역 형광 현미경에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시예에서, 단계 (b)는 세포 표면 CD6 발현의 지표 또는 프록시 역할을 하는 세포 상층액의 용해성 CD6을 측정함으로써 세포 표면 CD6 발현을 간접적으로 측정/결정하는 것을 포함한다. 이들 및 관련된 실시예에서, 상층액 내 가용성 CD6의 증가는 세포 표면 CD6 발현의 감소를 나타낸다. 세포 상층액에서 가용성 CD6를 측정하는 예시적인 방법으로는 효소결합면역흡착분석법(ELISA), 화학 발광분석, 전기 발광 분석, 고성능 액체 크로마토그래피, 웨스턴 블롯, 면역 침전 후 웨스턴 블롯 등 당업자에의해 알려진 것들 중에서 포함된다.
일부 실시예에서, 세포는 말초 혈액 단핵구 (PBMC)를 포함하며, 이는 전형적으로 CD14+ 단핵구 및 CD19+ B 세포 CD4+ 헬퍼 T 세포, CD8+세포독성 T 세포 및 CD56+ 자연살해(NK) 세포와 같은 림프구 등 전구체 집단을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 세포는 인간 T 세포주 또는 CD6 (예를 들어, 인간 CD6)를 발현하도록 조작된 세포주를 포함한다. 세포주의 예로는 MOLT-4, MOLT-3, MOLT-16, HuT 78, HuT 102, Jurkat, Jurkat NFAT, CCRF-CEM, 12.1, MJ (G11), LOUCY, SUP-T1, HEL.92.1.7, EF0-21, RPMI-8226, HPB-ALL, HH, KE37, P12ICHIKAWA, PEER, ALLSIL, RPMI8402, CMLT1, PF382, EHEB, 및 DU4475 세포를 포함한다.
일부 실시예에서, 세포는 단핵구, 예를 들어 인간 단핵구, 예컨대 단핵구 세포주를 포함한다. 일부 실시예에서, 단핵구 세포주는 U937, THP1, MC-1010, TUR, AML-193, and MV-4-11 세포 중에서 선택된다. 일부 실시예에서, 세포는 (a) 인간 T 세포 (예를 들어, 인간 T 세포 주) 또는 CD6을 발현하도록 조작된 다른 인간 세포주 및 (b) 인간 단핵구 (예를 들어 인간 단핵구 세포주)의 혼합물을 포함한다. 일부 실시예에서 (a):(b)의 혼합물은 약, 최소, 또는 최대 약 30:1, 25:1, 20:1, 15:1, 10:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 또는 1:10 이다.
일부 실시예는 이톨리주맙 시험 배치가 대조군 또는 표준에 비해 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500% 이상 세포 표면 CD6 발현을 감소시키는 경우 및/또는 이톨리주맙 시험 배치가 대조군 또는 표준에 비해 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500% 이상 상층액 내 용해성 CD6을 증가시키는 경우 이톨리주맙 시험 배치를 약학적 조성물로 제형화하는 단계를 표함한다.
보다 일반적으로, 일부 실시예는 생물학적 치료제로 사용하기 위해 항-CD6 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 스크리닝하는 방법을 포함하며, 이는 다음을 포함한다:
(a) 세포 표면에서 CD6을 발현하는 (배양된) 세포와 함께 후보 항-CD6 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 배양하는 단계;
(b) 세포 상 세포 표면 CD6 발현을 측정하는 단계; 및
(c) 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현을 감소시키는 경우, 후보 항-CD6 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 약학적 조성물로 제형화하는 단계. 이러한 방법은 이톨리주맙에 대해 본 발명에서 개시된 바와 같이 임상적 관련성이 있는 생물학적 특성을 갖는 후보 항-CD6 항체를 식별하는데 사용될 수 있다.
상기와 같이, 세포 표면 CD6 발현 수준은 당업자의 다양한 기술에 따라 직접 또는 간접적으로 측정할 수 있다. 예를 들어, 세포 표면 CD6 발현 수준은 유세포분석법, cytometry by time-of-flight (CyToF), 세포 ELISA 또는 면역 형광 현미경으로 직접 측정할 수 있다. 또한, 세포 표면 CD6 발현 수준은 예를 들어, 당업계의 다른 기술들 중에서 ELISA, 화학발광 분석, 전기발광 분석, 고성능 액체 크로마토그래피, 웨스턴 블롯, 면역 침전 후 웨스턴 블롯을 통해 세포 상층액에서 용해성 CD6을 측정하여 간접적으로 결정할 수 있다.
일부 실시예에서, 세포는 PBMC를 포함함다. 일부 실시예에서, 세포는 인간 T 세포 주 또는 CD6을 발현하도록 조작된 세포주 (예를 들어, 인간 CD6)를 포함한다. 세포주의 예로는 MOLT-4, MOLT-3, MOLT-16, HuT 78, HuT 102, Jurkat, Jurkat NFAT, CCRF-CEM, 12.1, MJ (G11), LOUCY, SUP-T1, HEL.92.1.7, EF0-21, RPMI-8226, HPB-ALL, HH, KE37, P12ICHIKAWA, PEER, ALLSIL, RPMI8402, CMLT1, PF382, EHEB, 및 DU4475 세포를 포함한다.
일부 실시예에서, 세포는 단핵구, 예를 들어 인간 단핵구, 예컨대 단핵구 세포주를 포함한다. 일부 실시예에서, 단핵구 세포주는 U937, THP1, MC-1010, TUR, AML-193, 및 MV-4-11 세포 중에서 선택된다. 일부 실시예에서, 세포주는 (a) 인간 T 세포 (예를 들어, 인간 T 세포주) 또는 CD6을 발현하도록 조작된 다른 인간 세포주 및 (b) 인간 단핵구 (예를 들어, 인간 단핵구 세포주)의 혼합물을 포함한다. 일부 실시예에서 (a):(b)의 혼합물은 약, 최소 또는 최대 약 30:1, 25:1, 20:1, 15:1, 10:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 또는 1:10 비율로, 그 사이의 모든 비율 범위 (예를 들어, 9:1)를 포함한다.
일부 실시예는 후보 항-CD6 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 대조군 또는 표준에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 세포 표면 CD6 발현을 증가시키는 경우 및/또는 대조군 또는 표준에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 이상 세포 상층액 내 용해성 CD6을 증가시키는 경우 이를 약학적 조성물로 제형화하는 것을 포함한다.
일부 실시예에서, 본 발명 개시는 피하 또는 정맥투여를 통해 이톨리주맙의 치료적 투여량을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 T 세포의 CD6 수준을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시예에서, 치료적으로 효과적인 양의 항-CD6 단일클론 항체는 환자가 회복 중이거나 퇴원할 것으로 결정될 때까지 2주마다 투여된다. 일부 실시예에서, 투여량은 3.2 mg/kg 이하이다. 일부 실시예에서, 환자에게는 0.1 내지 3.2 mg/kg 사이의 투여량이 투여된다. 일부 실시예에서, 단일 투여량이 투여된다. 일부 실시예에서, 2회 투여량이 투여된다. 일부 실시예에서 1-12회 사이의 투여량이 투여된다. 일부 실시예에서 2회 투여량이 투여된다. 일부 실시예에서 3회 투여량이 투여된다. 일부 실시예에서 4회 투여량이 투여된다. 일부 실시예에서 투여는 장기적으로 이루어진다. 일부 실시예에서, 투여량은 100mg이다. 일부 실시예에서, 투여량은 200mg이다. 일부 실시예에서 투여량은 격주로 투여된다. 일부 실시예에서 투여량은 매월 투여된다. 일부 실시예에서 투여량은 6주마다 투여된다. 일부 실시예에서 투여량은 8주마다 투여된다. 일부 실시예에서 투여량은 10주마다 투여된다. 일부 실시예에서 투여량은 12주마다 투여된다. 일부 실시예에서 투여량은 3개월마다 투여된다. 일부 실시예에서 투여량은 4개월마다 투여된다. 일부 실시예에서 투여량은 5개월마다 투여된다. 일부 실시예에서 투여량은 6개월마다 투여된다. 일부 실시예에서, 투여량은 6개월 이상 간격으로 투여된다.
예시적으로, 본 개시에서 사용되는 항-CD6 단일클론 항체의 치료학적으로 효과적인 양에 대한 비제한적인 범위는 개체의 체중당 약 0.01-100 mg/kg, 예컨대 약 0.01-50 mg/kg, 예를 들어 약 0.01-25 mg/kg이다. 일부 실시예에서, 환자의 키에 대한 이상적인 체중은 투여량을 결정하는 데 사용된다. 일부 실시예에서, 개체에 하나 이상의 투여량이 정해진다. 일부 실시예에서, 환자에게 더 큰 초기 투여량이 정해진다. 일부 실시예에서, 두번째 투여량은 1주일 후에 투여된다. 일부 실시예에서 두번째 투여량은 2주 후에 투여된다. 일부 실시예에서, 제 2 투여량은 제 1 투여량과 동일한 강도이다. 일부 실시예에서, 제2 투여량은 초기 투여량의 3/4 이하이다. 일부 실시예에서, 제2 투여량은 초기 투여량의 절반이다. 일부 실시예에서, 3번째 치료제가 투여된다. 일부 실시예에서, 치료적으로 효과적인 양의 항-CD6 단일클론 항체는 환자가 회복 중이거나 퇴원하는 것으로 결정될 때까지 2주마다 투여된다. 일부 실시예에서, 투여량은 0.8 mg/kg 또는 1.6 mg/kg이다. 일부 실시예에서, 투여량은 1.6 mg/kg 및 0.8 mg/kg이다. 모범적인, 항-CD6 단일클론 항체의 치료적으로 효과적인 양에 대한 비제한적인 용량은 약 0.8 mg/kg 내지 1.6 mg/kg 사이이다. 당업계의 통상의 기술을 가진 의료 전문가는 필요한 약학적 조성물의 유효량을 쉽게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사는 원하는 치료 효과를 달성하기 위해 필요한 수준보다 낮은 수준에서 항-CD6 단일클론 항체의 투여를 시작하고 원하는 효과에 도달할 때까지 점차적으로 투여량을 증가시킬 수 있다.
일부 실시예에서, 투여되는 용량은 0.1 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.3 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.6 mg/kg, 0.7 mg/kg, 0.8 mg/kg, 0.9 mg/kg, 1.0 mg/kg, 1.1 mg/kg, 1.2 mg/kg, 1.3 mg/kg, 1.4 mg/kg, 1.5 mg/kg, 1.6 mg/kg, 1.7 mg/kg, 1.8 mg/kg, 1.9 mg/kg, 2.0 mg/kg, 2.1 mg/kg, 2.2 mg/kg, 2.3 mg/kg, 2.4 mg/kg, 2.5 mg/kg, 2.6 mg/kg, 2.7 mg/kg, 2.8 mg/kg, 2.9 mg/kg, 3.0 mg/kg, 3.1 mg/kg, 3.2 mg/kg, 3.3 mg/kg, 3.4 mg/kg, 3.5 mg/kg, 3.6 mg/kg, 3.7 mg/kg, 3.8 mg/kg, 3.9 mg/kg, 또는 4.0 mg/kg이다. 일부 실시예에서, 투여되는 용량은 0.2 mg/kg, 0.4 mg/kg, 0.8 mg/kg, 1.2 mg/kg, 1.6 mg/kg, 2.0 mg/kg, 또는 2.2 mg/g이다. 일부 실시예에서, 이톨리주맙 용량은 0.4 mg/kg, 0.8 mg/kg, 1.6 mg/kg, 또는 3.2 mg/kg이다. 일부 실시예에서, 투여되는 용량은 약 25mg, 50mg, 75mg, 100mg, 125mg, 150mg, 175mg, 200mg, 225mg, 250mg, 275mg, 300mg, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 또는 500mg이다. 본 출원에는 본 개시에서 사용되는 항-CD6 단일클론 항체의 치료적으로 효과적인 양에 대한 비제한적인 용량이 포함되어 있다. 당업계의 통상의 기술을 가진 의료 전문가는 필요한 약학적 조성물의 유효량을 쉽게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사는 원하는 치료 효과를 달성하기 위해 필요한 수준보다 낮은 수준에서 항-CD6 단일클론 항체의 투여를 시작하고 원하는 효과에 도달할 때까지 점차적으로 투여량을 증가시킬 수 있다. 일부 실시예에서, 방법은 투여 빈도를 결정하기 위해 환자의 혈액 분석을 포함한다. 일부 실시예에서, 환자 샘플은 세포 표면 CD6 발현에 대해 분석된다. 일부 실시예에서, 환자의 혈청은 용해성 CD6에 대해 분석된다.
일부 실시예에서, 항-CD6 단일클론 항체는 개체 체중 당 0.1 내지 50 mg/kg, 예컨대 0.5 to 3 mg/kg의 주간 투여량으로 주입하여 투여된다. 이러한 투여는 예를 들어, 1내지 8회, 예컨대 2 내지 4회 또는 3 내지 5회 반복될 수 있다. 경우에 따라, 투여는 2 내지 24시간, 예컨대 2 내지 12시간에 걸쳐 연속 주입에 의해 수행될 수 있다.
일부 실시예에서, 항-CD6 단일클론 항체는 주 1회 투여량으로 투여된다. 일부 실시예에서, 항-CD6 단일클론 항체는 격주 투여량으로 투여된다. 일부 실시예에서, 항-CD6 단일클론 항체는 간헐적으로 주 1회 투여량으로 투여된다. 일부 실시예에서, 항-CD6 단일클론 항체는 간헐적 격주 투여량으로 투여된다. 이들 및 관련 일부 실시예에서, 이톨리주맙의 약 50mg 내지 약 350mg의 투여량은 최대 7회, 예컨대 2 내지 4회까지 투여된다. 일부 실시예에서, 항-CD6 항체는 격주로 투여된다. 일부 실시예에서, 항-CD6 항체는 간헐적 격주로 투여된다. 일부 실시예에서, 간헐적 격주 투여는 첫번째 투여에 뒤이어 후속 투여가 필요한지 여부를 결정하기 위한 격주 평가이다. 투여는 약 1시간 동안 또는 약 1 내지 24시간, 약 1 내지 12 시간, 약 1 내지 6시간, 약 1 내지 2시간, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 시간 동안 연속 주입함으로써 수행될 수 있다. 이러한 방법은 필요에 따라 한번 이상 반복할 수 있다 (예를 들어, 1 주일 후 또는 2 주 후).
본 발명에서 사용된 섹션 제목은 구성적인 목적으로만 사용되었으며, 기술된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
다음 실시예는 개시 내용을 이해하는 데 도움을 주기 위해 제시된 것으로, 어떤 방식으로든 공개 범위를 제한하려는 의도가 아니며 그렇게 해석되어서도 안된다. 실시예에는 분석 절차에 사용되는 통상적인 방법에 대한 상세한 설명이 포함되어 있지 않다. 이러한 방법은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 실시예를 포함하여 많은 출판물에 개시되어 있다.
실시예
이러한 실시예는 설명 목적으로만 제공되며 여기에 제공된 청구 범위의 범위를 제한하기 위한 것이 아니다.
실시예 1
CD6 표면 수준의 시험관 내 손실은 동결 보존된 PBMC를 이용하여 유세포분석기를 사용하여 분석하였다.
동결 보존된 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 해동하고 완전 배지 (RPMI + 10% FBS + 1X 페니실린/스트렙토마이신)에 재현탁하였다. PBMC를 계수하여 상기 세포 농도를 완전 배지에서 mL당 4백만 세포로 조정하였다. 이톨리주맙 및 아이소타입 처리는 최종 처리 농도 2배(2X)로 완전한 배지에서 준비하였다. PBMC를 이톨리주맙 또는 이소타입으로 처리한 후 24W TC 처리 플레이트에서 PBMC 250uL와 2X 처리액 250uL를 하나의 웰에 혼합하여 최종 500uL의 용량을 만들었다. 처리된 PBMC는 특정 시점 (10, 30, 60, 120, 180, 1440분) 동안 37oC에서 배양되었다. 각 시점에서, 모든 세포를 지정된 웰에서 수확하고 4oC에서 FACs 워시 버퍼(FWB, 1X PBS + 2% FBS + 0.5g NaN3)로 이동시켰다. 세포를 1500rpm에서 5분동안 펠릿화하고 상층액을 제거하였다. 생존율 염색 및 Fc 차단은 실온에서 이루어졌다. 이톨리주맙과 경쟁하지 않는 고유의 PE-결합 항-CD6 항체 클론을 사용하여 표면 CD6 수준을 검출하였다. 상기 결과는 도 1에 나타나 있다. 세포주에서도 실험을 수행하였다 (도 14 참조).
실시예 2
이톨리주맙 치료 후 환자의 CD6 표면 수준은 신선한 전혈에 대해 유세포 분석법을 사용하여 분석하였다.
임상 프로토콜에 따라 특정 시점에 환자로부터 전혈(WB)를 수집하고 다음날 분석을 위해 밤새 배송하였다. 적혈구 (RBC)는 9:1 비율로 용해하였다 (1X lyse buffer to WB). RBC 용해 후, 세포를 염색 버퍼에 재현탁하고 CD6의 표면 수준 검출을 위해 염색 플레이트로 옮겼다. 세포 표면의 CD6 수용체 총량을 측정하기 위해 고유의 비-경쟁 항-CD6 항체 클론으로 세포를 염색하고 PE로 형광 표지하였다.
실시예 3
이톨리주맙 치료 후 면역 세포 집단의 변화를 확인하기 위해 정상적인 건강한 지원자의 PBMC를 면역표현형으로 분석하였다.
이톨리주맙으로 치료한 후 정상적인 건강한 지원자로부터 전혈을 수집하고 PBMC를 밀도 구배 원심분리로 WB에서 분리하고, 표준 방식으로 동결보존하였다. 분석을 위해, 동결 보전된 PBMC를 해동, 세척하고 CD3, CD4, CD6, CD8, CD25, CCR6, HELIOS, 및 FOXP3를 표적으로 하는 항체로 형광 표지하여, 유세포 분석으로 미감작 T 세포, Teff 및 Treg 세포와 같은 면역 세포 아형의 변화를 식별하였다.
실시예 4
Epiontis ID를 사용하여 DNA 내 세포 유형-특이적 후성유전학적 마커를 측정하여CD4+ 세포에 대한 T reg 세포의 비율을 결정하였다.
Epiontis ID는 qPCR을 사용하여 세포 유형-특이적 후성유전학적 마커를 측정하여 정확한 세포 유형 계수를 가능하게 한다. 이톨리주맙으로 치료받은 환자의 동결 보존된 PBMC는 표적 세포와 비표적 세포의 혼합물을 포함하고 있으며, 표적 세포에서만 탈메틸화된 특이적 탈메틸화된 DNA 서열의 중아황산염 서열 전환을 거쳤다. DNA를 정제하고, 중아황산염-전환된 표적만을 증폭시키는 특수 설계된 PCR 프라이머를 추가하고 qPCR을 수행하였다. 환자 샘플(분석/세포 유형)을 분석하기 위해 다음의 후생유전학적 qPCR 분석을 사용하였다: FOXP3 (Treg 세포), CD4 (CD4 T 세포), CD8B (CD8 T 세포), PD1 양성 세포, LRP5 (B 세포), LCN2 (호중구), MVD (NK 세포), S1PR1 양성 세포, PRG2 (호산구), CBX6 (기억 B 세포), CCR7 양성 세포, S1PR5 양성 세포, IL17A (Th17 세포).
실시예 5
표면 플라스몬 공명(SPR)을 이용하여 CD6의 저밀도, 중밀도, 고밀도에 대한 이톨리주맙의 결합 특성을 분석하였다.
스트랩트아비딘(SA) 센서 칩이 장착된 Biacore 3000 광학 바이오센서를 사용하여 HBS-P 버퍼 시스템 (10 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 및 0.05 % Surfactant P20)에서 25oC로 분석을 수행하였다. 비오티닐화된 재조합 인간 CD6는 센서 칩의 Fc2, Fc3, 및 Fc4에 각각 낮은 (7 RU), 중간 (55 RU), 및 높은 (255 RU) 밀도로 포획되었다. 이러한 밀도는 T 세포에서 관찰되는 CD6의 낮음, 중간 및 높음 수준과 유사하다.
900 nM 또는 0.137 nM 범위의 분석물 농도 시리즈는 실행 버퍼에서 3 배 희석을 사용하여 준비되었다. 모든 분석물 농도에 대한 결합 단계는 50 uL/분의 유속으로 240 초 동안 모니터링되었으며, 해리 단계는 50 uL/분의 유속으로 1800 초 동안 수집되었다. 표면은 50 uL/분의 유속으로 15초 동안 1 M MgCl2로 재생되었다. 결과는 도 12A-12F 및 도 13A-13F에서 나타낸다.
실시예 6
이톨리주맙은 세포 표면 CD6의 절단을 유도한다.
PBMC는 37oC에서 72시간동안 아이소타입 또는 이톨리주맙으로 처리되었다. 72시간 후, 세포 및 상층액을 수집하였다.
CD6 관련 세포. 세포 표면의 CD6 수준을 유세포분석기로 분석하였다. 세포 펠릿은 0.1% 트리톤이 포함된 RIPA 버퍼를 사용하여 전체 단백질을 분리하는 데 사용되었다. CD6의 세포 외 부분을 인식하는 특이적 항-CD6 항체를 사용하여 상층액으로부터 가용성 CD6을 면역침전시켰다. 상층액의 용해성 CD6 수준도 MSD로 분석하였다.
세포 상층액의 CD6. CD6 수준은 웨스턴 블롯으로 면역침전된 상층액 및 세포 용해물에서 추가로 분석되었다. 단백질을 4-12% Nu-Page 겔에 로딩하고 PVDF 막 상에 옮겼다. 상기 막을 Ponceau로 염색한 다음 4C에서 1차 항체 항-CD6 또는 항- gapdh와 함께 밤새 배양하였다. 그 다음날, 상기 막을 TBS+tween으로 세척하고 HRP-결합된 2차 항체와 함께 RT에서 1시간 배양한 후 TBS+tween으로 다시 세척하고 HRP 기질을 추가 한 후 화학발광 이미저를 사용하여 신호를 획득하였다. 상기 결과는 도 18A-18B 및 도 19에 제시하였다.
실시예 7
이톨리주맙에 의해 유도된 CD6 절단에서 단핵구의 역할
이톨리주맙에 의해 유도된 CD6 절단에 대한 다른 세포 유형의 기여도를 평가하기 위해, T 세포, 단핵구, NK 세포 및 B 세포를 음성 자기 분리에 의해 PBMC로부터 분리하였다. 그런 다음 분리된 T 세포를 단핵구, NK 세포 또는 B 세포의 존재 하에 아이소타입 또는 이톨리주맙으로 처리하였다. 분리된 T 세포는 또한 단핵구에 대비 증가하는 비율의 T 세포의 존재 하에 아이소타입 또는 이톨리주맙으로 처리되었다.
처리 후, CD6의 표면 수준은 이톨리주맙 결합을 방해하지 않는 항-CD6 검출 항체를 사용하여 유동 세포측정법으로 T 세포 표면에서 검출하였다. 상기 결과는 20A-20B에 제시되어 있다. 도 20A는 치료하는 동안 단핵구, 그리고 더 적은 범위에서 NK 세포가 존재할 때만 T 세포 상의 CD6의 손실이 관찰됨을 나타낸다. 도 20 B는 단핵구의 수가 증가함에 따라 증가된 CD6 손실이 관찰됨을 나타낸다.
실시예 8
T 세포 특성 및 기능에 대한 이톨리주맙의 효과
96 웰의 평평한 바닥 플레이트를 37 ℃에서 2 시간 동안 CD3 + ALCAM(PBS에서)으로 코팅하였다. 2 시간 배양 후, 플레이트를 1X PBS로 1 회 세척한 후 37 ℃에서 30 분 동안 5 % BSA로 차단 단계를 수행하였다. 차단 후, 플레이트를 1X PBS로 2회 세척하였다.
동결된 PBMC는 완전한 RPMI에서 부드럽게 해동되었다. 세포는 2x10^6 세포/ml로 조절되었다. 그런 다음 세포를 100 ul에 200 k 세포/웰로 시딩하였다. 이톨리주맙은 3x 완전 배지에서 3 배 희석 곡선으로 준비되었다. 최종 분석 부피는 96 평면 바닥 플레이트에서 200 ul이다.
PBMC를 37 ℃에서 총 24 시간 동안 배양하였다. 사이토카인을 검출하기 위해 플레이트를 스핀다운하고 여기서 상층액을 수집하였다. 그런 다음 CD4 및 CD8 T 세포에서 CD6의 손실을 검출하기 하고 활성화 마커의 감소를 검출하기 위해 세포를 수집하였다. 비-경쟁 CD6 항체는 유동 세포측정법에 의해 CD6의 손실을 평가하기 위해 사용되었다. CD6은 기하 평균 형광 (gMFI)으로 보고되었다. 상기 결과는 도 21A-21E에 보여주었으며, 이는 CD6의 감소된 세포 표면 수준이 감소된 T 세포 활성화 마커 CD71, PD-1, CD25, IL-2, 및 TNFa와 상관관계가 있다는 증거이다.
PBMC를 아이소타입 대조군 또는 이톨리주맙으로 24 시간 동안 처리하여 CD6high 및 CD6low 세포를 생성하였다. 24 시간 처리 후, 세포를 수집하고 배지로 반복적으로 세척하여 잔류하는 항체 처리를 제거하였다. 세척된 세포를 계수하고 농도를 1x10^6 세포/mL로 조정하였다.
96 웰 편평한-바닥 플레이트를 PBS에서 CD3 + ALCAM으로 37 ℃에서 2시간 동안 코팅하였다. 2 시간 배양 후, 플레이트를 PBS로 2 회 세척하였다. 세척된 CD6high 및 CD6low 세포를 200k 세포/웰로 도말하고 24, 48, 72, 및 96 시간 동안 배양하였다. 각각의 지정된 시점에서, 유세포 분석기를 사용하여 전사 인자를 위한 표면 및 세포 내 염색을 통해 T 세포 활성화를 평가하였다. 상기 결과는 도 22에 나타나 있으며, 이는 이톨리주맙과의 초기 배양으로 생성된 CD6low 세포가 CD3 + ALCAM에 대한 후속 자극 이후에도 CD6low로 유지되었을 뿐만 아니라 Teff-유사도(예를 들어, Th1 및 Th17과 유사도가 적음)가 적다는 증거이다. 대조적으로, 아이소타입 대조군과의 배양에 의해 생성된 CD6high 세포는 후속 자극 후 더욱 Teff와 유사하였다.
실시예 9
이톨리주맙은 T림프구의 동종이식편반응을 감소시킨다.
단방향 혼합 림프구 반응을 사용하여 T 세포의 동종이식편반응을 감소시키는 이톨리주맙의 유용성을 평가하였다. PBMC 반응자와 자극자 쌍이 식별되었으며, 테이크다운 시점의 반응자 수가 판독값으로 사용되었다. 반응자 PBMC를 해동하고, 세포 트레이스 바이올렛으로 표지하고, 아이소타입 또는 이톨리주맙으로 2 시간 동안 전처리하였다. 자극자 PBMC를 해동하고 미토마이신 C로 20 분 동안 처리하여 증식을 억제하였다. 미토마이신 C 처리 후, 자극자 PBMC를 배지로 반복해서 세척하였다. 반응자 및 자극자의 PBMC를 계수하고 96 웰 U-바닥에서 이톨리주맙 또는 아이소타입 처리와 함께 1:1 비율로 혼합하였다.
반응자 세포는 대략 96-168 시간 후에 자극자 세포의 존재 하에 자극되었다. 각 시점에서, 세포를 수집하고 반응자 세포의 증식 및 활성화를 유세포 분석기로 평가하였다. 상기 결과는 도 23A-23D에 나타냈다. 여기에서, 이톨리주맙으로 처리된 반응자 세포는 낮은 수준의 CD6을 발현했고 (23A), 낮은 CD4+ 수(23B) 및 168시간 후 CD71 수준(23D)에서 보여진 바와 같이 덜 증식했으며, 168 시간 후 낮은 수준의 CD25(23C)에서 보여진 바와 같이 덜 활성화 되었다.
실시예 10
이톨리주맙은 T reg 림프구 강화에 유용하다.
CD6low T 세포를 풍부화하는 이톨리주맙의 능력은 CD6high T 세포로부터 Treg 림프구를 생성하는 것과 비교하여, 이톨리주맙-풍부화 CD6low T 세포로부터 Treg 림프구를 생성하는 유용성을 시험하기 위한 기초로서 사용되었다.
CD6 low 및 CD6 high T 세포의 생성. 동결 PBMC를 완전한 RPMI에서 부드럽게 해동하였다. 총 PBMC를 아이소타입 대조군 또는 이톨리주맙으로 37 ℃ 에서 24 시간 동안 처리하였다. 24 시간 후 CD4 T 세포에서 CD6의 손실을 확인하고 미감작 T 세포를 분리하기 위해 세포를 수집하였다.
미감작 T 세포로부터 T regs 의 분화. 상기 언급된 바와 같이 처리된 PBMC는 STEMCELL 키트를 사용하여 미감작 T 세포에 대해 풍부화되었다. Tregs 를 CD6low 및 CD6high 으로부터 구별하기 위해 총 7 일 동안 STEMCELL로부터의 Treg 분화 혼합제와 함께 CD3/CD28 활성제를 첨가하였다.
T reg 표현형 확인
Treg 분화 조건 하에서 7일 후, CD6low 및 CD6high을 세포 내 염색을 위해 수집하고 유세포 분석기로 획득하였다. 세포는 Foxp3 및 Helios 공동-발현에 의해 확인되었다. 도 24A-24B의 결과는 PBMC를 이톨리주맙으로 전처리하면 CD6low 나이브 T 세포가 풍부해지고, 이는 아이소타입 대조군으로 전처리한 것에 비해 더 많은 수의 Tregs를 효율적으로 생성하는데 사용될 수 있다는 증거이다.
T reg 억제 검정. 분화 7일째에 CD6low 및 CD6high Treg를 수집하였다. Treg를 계수하고 100k, 50k, 및 25k에서 시딩하여 1:1, 1:2, 및 1:4의 세가지 비율을 생성하였다.
T 반응자 세포의 생성. 동일한 기증자로부터의 냉동 PBMC를 부드럽게 해동하였다. PBMC는 CD25-인 CD4 T 세포에 대해 풍부화되었으며, 총 2개의 키트를 결합하여 이러한 세포를 생성하였다. 두 키트 모두 STEMCELL에서 왔다. 일단 이들 세포가 분리되면, 세포를 Cell Trace Violet 으로 표지하였다.
T 반응자의 자극 및 T regs 와의 공동-배양. T 반응자를 Tregs와 함께 웰에 추가하였다. 테스트된 조건은 자극이 없는 것과 다양한 수준의 자극들이다. 억제 분석은 37 ℃에서 총 4 일 동안 배양되었다.
T responders 의 억제 계산. 다양한 자극 수준으로 단독 배양된 T 반응자는 이의 cell trace violet의 증식에 대해 측정되었다. 기존의 게이팅 방법은 T 반응자의 증식 억제를 계산하였다. 상기 결과는 도 25에 나타냈다. 여기서, CD6low 미감작 T 세포에서 생성된 Treg 는 모든 Treg 대 반응자 T 세포 비율에서 CD6high T regs 에 비해 억제 활성이 증가하였다; 가장 큰 억제 효과는 Treg:Tresponder 비율이 1:1에서 관찰되었다.
이러한 관찰은 (이톨리주맙에 의해 유도된) 표면 CD6의 손실이 미감작 T 세포가 과활성화 & 병원성 면역 세포 기능을 억제할 수 있는 더 큰 능력을 가진 Tregs로의 분화로 왜곡하여 면역 체계의 균형 회복에 기여함을 입증한다.
요약하면, 이톨리주맙으로 미감작 T 세포를 전처리하면 Foxp3 및 HELIOS 공동-발현이 증가한 Treg 표현형이 형성되며, 이 빈도 및 MFI의 증가는 더 큰 억제 활성과 관련이 있다는 것을 나타낸다.
실시예 11
이식할 조직에서 선택적으로 CD6 low 세포의 풍부화/CD6 high 세포의 감소를 사용하여 위험에 처한 환자의 이식편대숙주질환(GVHD) 예방
이식 전 제대혈 세포 또는 골수 세포 또는 HLA-일치 형제 세포의 집단 내 CD6high 세포로부터 CD6을 제거하기 위해 최적화된 항-CD6 항체를 사용함으로써 환자의 GVHD 위험을 감소시키는 본 개시된 방법과 조합하여 공지된 방법을 사용하는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 이식 수여자의 GVHD를 예방하기 위해 CD6의 세포 표면 발현을 감소시키기 위한 최적의 항-CD6 항체로 처리하기 전 또는 후에 세포를 생체 외에서 확장될 수 있다.
예를 들어, 이톨리주맙은 정상-만기 분만에서 수득한 인간 제대혈 샘플을 치료하는 데 사용할 수 있다. 상기 제대혈은 단위(unit)는 적혈구가 고갈될 수 있으며 항-CD6 항체, 항원-결합 단편, 또는 융합 항-CD6 항체로 치료하기 전에 CD34+ 세포의 임상 등급 선택을 거칠 수 있다.
CD6가 제거된 샘플은 줄기세포 치료가 필요하고 이식편대숙주질환의 위험이 있는 환자에게 투여할 수 있다. 하나 이상의 바이오마커를 측정하고 환자의 양성 및 음성 임상 반응에 대해 면밀히 모니터링한다.
항-CD6 항체, 그의 항원 결합 단편 또는 융합 항체로 전처리된 전구 세포는 줄기세포 이식이 필요한 환자의 이식편대숙주질환을 예방하기 위해 사용될 수 있다. 제대혈 이식 또는 골수 이식 또는 HLA-일치 형제 세포이식은 이식 전에 이식되는 CD6의 양을 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 80% 이상 감소시키기에 충분한 양의 이톨리주맙으로 치료한다. CD6 수준은 당업자에게 알려진 종래의 기술을 사용하여, 예컨대 환자로부터 채취한 혈액 샘플의 세포 FACS 분석 또는 혈청 분석, 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 해당분야의 의사는 다양한 시점에서 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고 FACS 분석을 수행하여 세포 표면 CD6의 정도를 결정할 수 있다. 해당분야 의사는 환자에게 CD6에 결합할 수 있는 항체, 그의 항원-결합 단편, ADC, 또는 가용성 리간드, 예컨대 본 발명에서 개시하는 항-CD6 항체, 를 투여한 후 GVHD의 임상 증상을 평가할 수 있다.
실시예 12
이톨리주맙 역가 분석
CD6 손실에 따른 이톨리주맙의 기능을 평가하기 위한 역가 분석법이 개발되었다. PBMC를 100ul에서 200k 세포/웰로 시딩하였다. 이톨리주맙은 완전 배지에서 3배 희석 곡선으로 3배로 준비하였다. 최종 분석 부피는 96 평평한 바닥 플레이트에 200ul이다.
PBMC를 37 ℃ 에서 24 시간 동안 배양하였다. 용해성 CD6을 검출하기 위해 플레이트를 회전 (spun down) 시켜 상층액을 수집하였다. 그런 다음 CD4 및 CD8 T 세포의 CD6 손실을 검출하기 위해 세포를 수집하였다. 유세포분석법으로 CD6 손실을 평가하기 위해 비경쟁 CD6 항체를 사용하였다. CD6은 기하학적 평균 형광 (gMFI)으로 보고되었다. 상기 결과는 도 26A-26B에 나타나있다. 여기서 상기 결과는 상기 분석이 강력하고 재현가능하고, 단백질 농도 변화에 대해 탁월한 감도를 보여주며 (26A 참조), 그리고 항체의 Fc 영역 내 변화를 검출할 수 있을 만큼 충분히 민감하다는 것을 (26B 참조) 증명한다. CD6 또는 Fc-수용체에 대한 결합에 영향을 미치는 mAb의 변화는 CD6의 손실 감소로 이어지므로 이톨리주맙 배치의 효능을 측정하는 좋은 척도가 될 수 있다.
요약하면, 이톨리주맙은 용량 의존적이고 시간 의존적인 방식으로 CD6의 분해를 유도하며, CD6 손실 정도는 T 세포 활성화 및 사이토카인 발현의 감소와 상관관계가 있다. 이톨리주맙을 투여한 환자에서 CD6의 손실이 관찰되며, 이톨리주맙은 여러 기증자들에 걸쳐 강력한 방식으로 분해를 유도한다. 본 발명에서 살펴본 바와 같이, CD6의 분해는 약물의 효과를 대변하는 것으로, CD6의 분해를 측정하는 시험관 내 분석은 임상과 관련된 강력하고 재현 가능한 접근법을 제공한다.
실시예 13
이톨리주맙으로 치료받은 루푸스(SLE) 환자는 CD4 및 CD8 T 세포에서 CD6 발현이 감소하였다.
이톨리주맙 치료 후 SLE 개체의 CD4 및 CD8 T 세포에서 CD6의 표면 수준을 분석하고CD6의 평균 형광으로 표현하였다. CD6의 기준선 (약물 전) 수준은 개체에 따라 다양하지만, 모든 용량에서 표면 CD6의 손실이 관찰되었다 (도 27A-27E 참조). 연구 과정 동안 저용량의 이톨리주맙 (0.4 mg/kg)으로 치료받은 개체에서 CD6의 표면 수준이 더 가변적이다. 고용량의 이톨리주맙 (0.8 - 3.2 mg/kg)으로 치료 받은 개체는 마지막 투여 후 몇 주 후에도 낮은 수준의 CD6을 유지한다. 화살표는 개체가 이톨리주맙을 투여받은 시기를 나타낸다. 점선은 FMO (fluorescence minus one) 대조군에 의해 결정된 것 대로 표면 CD6이 없음을 나타낸다. 통계는 기준선과 비교하여 CD4 T 세포의 CD6을 나타낸다. 5 개의 투여량 코호트에서 분석에 포함된 총 개체 수는 26 명이다. 도 28A-28B은 이톨리주맙의 첫 투여 후 CD4(28A) 및 CD8(28B) T 세포의 세포 표면 CD6가 감소하고, 이톨리주맙의 용량이 높을수록 표면 CD6의 손실이 더 많이 관찰됨을 나타낸다. 데이터는 기준선 (약물-전)의 %로 표시되며 15 일 째 (첫 번째 투여 후 14 일 후, 두 번째 투여 전)를 나타낸다. **p<0.01, *p<0.05.
실시예 14
이톨리주맙은 환자의 T h 17:T reg 비율을 조절한다.
EQUIP 연구에 참여한 개체 (0.8 mg/kg 투여 개체 4 명 및 위약 개체 1 명)로부터 샘플링한 PBMC를 epiontisID를 사용하여 면역 표현형으로 분석하였다. 도 29A-29B에서 보여준 바와 같이, 0.8 mg/kg의 이톨리주맙 치료는 위약에 비해 Th17 세포의 3 배 감소 및 Treg 세포의 2.5 배 증가를 야기하였다.
본 개시의 일부 실시예가 본 발명에서 도시되고 설명되었지만, 그러한 실시예가 오직 예시로서만 제공된다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 이제 상기 개시를 벗어나지 않고 당업자에게 수많은 변형, 변경 및 치환이 일어날 것이다. 여기 기술된 본 개시의 실시예에 대한 다양한 대안이 본 개시를 실시하는데 사용될 수 있음을 이해해야 한다. 다음의 청구범위는 본 개시의 범위를 정하고, 이들 청구범위 및 그 등가물 범위 내의 방법 및 구조가 이에 의해 포함되도록 의도된다.
본 발명에 언급된 모든 특허, 특허 출원 및 간행물은 그 전체가 참고로 포함된다.
개시는 이해를 명확히 하기 위해 예시 및 실시예를 통해 일부 상세하게 제공되었지만, 본 개시의 사상이나 범위를 벗어나지 않고 다양한 변경 및 수정이 실시될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 따라서, 전술한 설명 및 실시예는 제한적인 것으로 해석되어서는 안된다.

Claims (44)

  1. 자가 면역, 면역-염증, 또는 염증성 질환, 이식편대숙주병(GVHD) 또는 장기 이식 거부 반응이 있는 인간 개체에 이톨리주맙의 최적의 투여량을 결정하는 방법으로, 다음을 포함한다:
    (a) 개체의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준의 기준선을 결정하는 단계, 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함하고, 및 선택적으로 개체의 세포 표면 CD6의 목표 수준을 선택적으로 정의하는 단계;
    (b) 2회 또는 3회 이상 용량의 이톨리주맙을 순자적으로 개체에 투여하고, 용량을 선택적으로 증가시키는 단계;
    (c) 일련의 투여량 사이에 피험자로부터의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준을 모니터링하는 단계로, 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함하고;
    (d) 단계 (c)에서 세포 표면 CD6 수준이 (a)로부터의 기준선의 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 45, 또는 50% 미만이거나 (a)로부터의 선택적 목표 수준의 5, 10, 15, 또는 20 % 이내이고, 일련의 투여량 사이에 세포 표면 CD6 수준의 추가 감소가 관찰되지 않는 경우 일련의 투여량으로부터 최저 투여량을 최적 투여량으로 식별하는 단계.
  2. 제1항에 있어서, 상기 방법은 개체로부터 조직 샘플 내 CD4 세포 및/또는 CD8 세포의 세포 표면 CD6 수준을 결정하는 단계를 포함하는, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조직 샘플은 혈액 샘플인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 질병의 임상적 매개변수 또는 증상에 기반하여 개체의 세포 표면 CD6의 표적 수준을 정의하는 단계를 포함하는, 방법.
  5. 다음을 포함하는, 자가면역, 면역-염증, 또는 염증성 질환, 이식편대숙주병(GVHD) 또는 장기 이식 거부 반응의 치료를 필요로 하는 인간 개체에 대한 투여 요법.
    (a) 개체의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준의 기준선을 결정하는 단계, 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함하고, 및 개체의 세포 표면 CD6의 목표 수준을 선택적으로 정의하는 단계;
    (b) 개체의 T-림프구에서 세포 표면 CD6 수준을 (a)에서의 기준선의 5, 10, 15, 20, 25 % 이하로 감소시키는 이톨리주맙의 투여량을 개체에 투여하는 단계;
    (c) 개체의 조직 샘플에서 세포 표면 CD6 수준을 모니터링하는 단계로; 여기서 조직 샘플은 T-림프구를 포함한다; 및
    (d) (a)에서의 기준선의 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 % 이상으로 회복되거나, 또는 (a)에서의 목표 수준 이상으로 상승하기 전에 개체에 이톨리주맙의 추가 투여량을 투여하는 단계.
  6. 제5항에 있어서, T-림프구(선택적으로 CD4 및/또는 CD8 세포)의 세포 표면 CD6 수준을 개체로부터 (a) 기준선의 약 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 또는 75% 이하로 유지하거나, 또는 (a)의 선택적 표적 수준의 약 5, 10, 15 또는 20% 이내로 유지하며, 선택적으로 개체의 세포 표면 CD6 수준의 표적 수준을 질병의 임상적 매개변수 또는 증상을 기반으로 정의하는, 투여 요법.
  7. 다음을 포함하는, 자가 면역, 면역 염증 또는 염증성 질환, 이식편대숙주질환(GVHD) 또는 장기 이식 거부 반응의 치료를 필요로 하는 인간 개체를 위한 투여 요법.
    (a) 개체의 혈액 샘플에서 CD6high T-림프구의 기준선을 결정하는 단계, 및 CD6high T-림프구의 목표 수준을 선택적으로 정의하는 단계;
    (b) 개체 내 CD6high T-림프구의 수준을 (a) 로부터의 기준선의 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 또는 40% 이하로 감소시키는 이톨리주맙 투여량을 개체에 투여하는 단계;
    (c) 개체로부터의 혈액 샘플에서 CD6high T-림프구의 수준을 모니터링하는 단계; 및
    (d) (c) 로부터의 CD6high T-림프구의 수준이 (a) 로부터의 기준선 수준의 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75% 이상으로 회복하거나, (a) 로부터의 목표 수준 이상으로 상승하기 전에 개체에 이톨리주맙의 추가 투여량을 투여하며, 선택적으로 임상 매개변수 또는 질병의 증상에 기반하여 개체의 CD6high T-림프구의 목표 수준을 정의하는 단계.
  8. 제5항에 있어서, 개체 내 CD6high T-림프구의 수준을 (a)에서의 기준선 수준의 약 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 % 이하로 유지하며, 여기서 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포인, 투여 요법.
  9. 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 개체 내 CD6high T-림프구의 수준을 (a)에서의 기준선 수준의 약 45, 50, 55, 60, 65, 70, 또는 75 % 이하로 유지하며, 여기서 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이다. 일부 실시예에서, 상기 투여 요법은 개체 내 CD6high:CD6low T-림프구의 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선에 비해 적어도 약10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 또는 적어도 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키며, 여기서 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포인, 투여 요법.
  10. 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에서 Teff:Treg 세포의 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 또는 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키며, 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이고, 여기서 Teff 세포는 선택적으로 Th17 세포인, 투여 요법.
  11. 다음을 포함하는, 인간 이식 환자의 이식편대숙주질환 (GVHD)을 예방하거나 개선하는 방법:
    (a) 이식 조직 내 CD6high T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 감소시키기 위해 이식 조직을 항-CD6 항체, 선택적으로 이톨리주맙과 함께 충분한 시간 동안 배양하는 단계; 및
    (b) 이식 조직을 환자에게 이식하는 단계.
  12. 제11항에 있어서, 단계 (a) 전후 이식 조직 내 T 림프구의 세포 표면 CD6 수준을 결정하는 단계, 및 단계 (a) 이후 세포 표면 CD6의 수준이 단계 (a) 이전에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500% 감소하는 경우 단계 (b)를 수행하는 단계를 포함하는, 방법.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 이식 조직은 제대혈 세포, 골수 세포, 말초혈액 세포, mobilized 말초혈액 세포, 중간엽 줄기 세포, 조혈 줄기 세포, 줄기 세포/전구 세포로부터 분화된 세포, 조작된 세포 (선택적으로 키메라 항원 수용체 (CAR) 세포), 또는 언급된 세포의 임의의 조합을 포함하는, 방법.
  14. 제11 항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식 조직은 인간 이식 환자의 자가 조직인, 방법.
  15. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식 조직은 인간 이식 환자의 동종이계(allogeneic)인, 방법.
  16. 다음을 포함하는, 이를 필요로 하는 인간 환자의 자가 면역, 면역 염증, 또는 염증성 질환의 치료 및 개선 방법:
    (a) 이식 조직 내 CD6high T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 감소시키기 위해 이식 조직을 항-CD6항체, 선택적으로 이톨리주맙과 함께 충분한 시간 동안 배양하여 CD6low T-림프구가 풍부한 이식 조직을 생성하는 단계;
    (b) CD6low T- 림프구로부터 Treg 림프구를 생성하기 위해 충분한 시간 동안 (a)로부터의 이식 조직을 처리하는 단계; 및
    (c) (c)로부터의 이식 조직을 환자에게 이식하는 단계.
  17. 제16항에 있어서, 단계 (a) 전후 이식 조직 내 T-림프구의 세포 표면 CD6 수준을 결정하고, 단계 (a) 이후의 세포 표면 CD6 수준이 단계 (a) 전에 비해 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소한 경우, 단계 (b)를 수행하는 것을 포함하는, 방법.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 상기 (b)는 CD6low T-림프구가 풍부화된 이식 조직을 사이토카인, 성장인자 및 전사인자의 조합과 함께 Treg 림프구를 생성하기에 충분한 시간 동안 배양하는 단계를 포함하는, 방법.
  19. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식 조직은 제대혈 세포, 골수 세포, 말초혈액 세포, 이동성 말초 혈액 세포, 중간엽 줄기세포, 조혈 줄기 세포, 줄기 세포/전구 세포로부터 분화된 세포, 조작된 세포(선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR) 세포) 또는 해당 세포들의 임의의 조합을 포함하는 이식 조직을 포함하는, 방법.
  20. 제16항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식 조직은 인간 환자의 자가 조직인, 방법.
  21. 제16항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이식 조직은 인간 환자의 동종 이계인, 방법.
  22. 다음을 포함하는, 이를 필요로 하는 인간 개체의 자가면역, 면역-염증 또는 염증성 질환, 이식편대숙주질환(GVHD) 또는 장기 이식 거부 반응을 치료하기 위한 방법으로, 다음을 포함한다:
    (a) 개체에 이톨리주맙을 투여하는 단계; 및
    (b) 개체로부터의 조직 샘플 내 T-림프구의 세포 표면 CD6의 수준을 결정하는 단계, 개체로부터 조직 샘플 내 CD6high 및 선택적으로 CD6low T-림프구의 수준을 결정하는 단계, 및/또는 개체 내 Teff 및 Treg 세포의 수준을 결정하는 단계로, 여기서 상기 조직 샘플은 T-림프구를 포함한다;
    여기서 이톨리주맙의 투여는 (i) T-림프구, 선택적으로 CD4 및/또는 CD8 세포의 세포 표면 CD6의 수준; (ii) 개체의 CD6high T-림프구 수준; (iii) 개체의 CD6high:CD6low T-림프구 비율; 및/또는 (iv) 개체의 Teff :Treg 세포 비율 중 어느 하나를 감소시킴으로써 개체의 병원성 면역 반응을 감소시키는, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 이톨리주맙의 투여는:
    개체의 T-림프구 상 세포 표면 CD6 수준을 대조군이나 표준 또는 기준선 대비 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키고, 여기서 상기 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이고;
    개체의 CD6high T-림프구의 수준을 대조군이나 표준 또는 기준선 대비 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키고, 여기서 상기 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이고;
    개체의 CD6high:CD6low T-림프구의 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선 대비 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 또는 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키고, 여기서 상기 T-림프구는 선택적으로 CD4 세포 및/또는 CD8 세포이고; 및/또는
    개체에서 Teff:Treg 세포의 비율을 대조군이나 표준 또는 기준선 대비 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 또는 약1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10-배 이상 감소시키고, 여기서 Teff 세포는 선택적으로 Th17세포인, 방법.
  24. 다음을 포함하는, 이톨리주맙의 시험 배치를 분석하기 위한 생체외 세포-기반 방법.
    (a) 세포 표면에 CD6를 발현하는 세포와 이톨리주맙의 시험 배치를 함께 배양하는 단계;
    (b) 세포의 세포 표면 CD6 발현을 측정하는 단계; 및
    (c) 시험 배치가 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현을 감소시키는 경우 이톨리주맙의 시험 배치를 약학적 조성물로 제형화하는 단계, 및 시험 배치 용량이 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현을 감소시키지 않는 경우 시험 배치의 이톨리주맙을 폐기하는 단계.
  25. 제24항에 있어서, 상기 (b)는 유세포 분석법, 시간-비행에 의한 사이토메트리(cytometry by time-of-flight, CyToF), 세포 ELISA, 또는 면역 형광 현미경에 의해 세포 표면 CD6 발현을 직접 측정하는 것을 포함하거나, 여기서 (b)는 선택적으로 효소결합면역흡착측정법 (ELISA), 화학 발광 검사, 전기화학 발광 검사, 고성능 액체 크로마토그래피, 웨스터 블롯 및 면역 침전 후 웨스턴 블롯을 통해 세포 표면 CD6 발현 표지로서 상층액 내 가용성 CD6을 측정하는 것을 포함하는, 방법.
  26. 제24항 또는 제25항에 있어서, 상기 세포는 말초혈액 단핵구(PBMCs)를 포함하는, 방법.
  27. 제24항 내지 제 26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 인간 T 세포주 또는 CD6, 선택적으로 인간 CD6을 발현하도록 조작된 세포주를 포함하는, 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 세포주는 MOLT-4, MOLT-3, MOLT-16, HuT 78, HuT 102, Jurkat, Jurkat NFAT, CCRF-CEM, 12.1, MJ (G11), LOUCY, SUP-T1, HEL.92.1.7, EF0-21, RPMI-8226, HPB-ALL, HH, KE37, P12ICHIKAWA, PEER, ALLSIL, RPMI8402, CMLT1, PF382, EHEB, 및 DU4475 세포 중에서 선택되는, 방법.
  29. 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 단핵구, 선택적으로 단핵구 세포주를 포함하는, 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 단핵구 세포주는 U937, THP1, MC-1010, TUR, AML-193, 및 MV-4-11중에서 선택되는, 방법.
  31. 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 (a) 인간 T 세포주 또는 CD6을 발현하도록 조작된 세포주 및 (b) 단핵구, 선택적으로 단핵구 세포주는 약 30:1, 25:1, 20:1, 15:1, 10:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 또는 1:10 비율로 존재하는, 방법.
  32. 제24항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 시험 배치 이톨리주맙이 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6발현을 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 감소시키는 경우 및/또는 대조군 또는 표준에 비해 상층액 내 용해성 CD6를 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 % 이상 증가시키는 경우 약학적 조성물로서 시험 배치 이톨리주맙을 제형화하는 것을 포함하는, 방법.
  33. 다음을 포함하는, 생물학적 치료제로 사용하기 위한 항-CD6 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 스크리닝하는 방법:
    (a) 후보 항-CD6 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 세포 표면에서 CD6을 발현하는 세포와 함께 배양하는 단계;
    (b) 상기 세포의 세포 표면 CD6 발현을 측정하는 단계; 및
    (c) 대조군 또는 표준 대비 세포 표면 CD6 발현을 감소시키는 경우 약학적 조성물로서 후보 항-CD6 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제형화하는 단계.
  34. 제21항에 있어서, 상기 (b)는 유세포 분석법, 시간-비행에 의한 사이토메트리(cytometry by time-of-flight, CyToF), 세포 ELISA, 또는 면역 형광 현미경에 의해 세포 표면 CD6 발현을 직접 측정하는 것을 포함하거나, 여기서 (b)는 선택적으로 효소결합면역흡착측정법 (ELISA), 화학 발광 검사, 전기화학 발광 검사, 고성능 액체 크로마토그래피, 웨스터 블롯 및 면역 침전 후 웨스턴 블롯을 통해 세포 표면 CD6 발현 표지로서 상층액 내 가용성 CD6을 측정하는 것을 포함하는 방법.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 세포는 말초혈액 단핵구(PBMCs)를 포함하는, 방법.
  36. 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 인간 T 세포주 또는 CD6, 선택적으로 인간 CD6을 발현하도록 조작된 세포주를 포함하는, 방법.
  37. 제36항에 있어서, 상기 세포주는 MOLT-4, MOLT-3, MOLT-16, HuT 78, HuT 102, Jurkat, Jurkat NFAT, CCRF-CEM, 12.1, MJ (G11), LOUCY, SUP-T1, HEL.92.1.7, EF0-21, RPMI-8226, HPB-ALL, HH, KE37, P12ICHIKAWA, PEER, ALLSIL, RPMI8402, CMLT1, PF382, EHEB, 및 DU4475 중에서 선택되는, 방법.
  38. 제33항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 단핵구, 선택적으로 단핵구 세포주를 포함하는, 방법.
  39. 제38항의 방법에 있어서, 상기 단핵구 세포주는 U937, THP1, MC-1010, TUR, AML-193, 및 MV-4-11 중에서 선택되는, 방법.
  40. 제33항 내지 제 39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 (a) 인간 T 세포주 또는 CD6을 발현하도록 조작된 세포주 및 (b) 상기 단핵구, 선택적으로 단핵구 세포주는 약 30:1, 25:1, 20:1, 15:1, 10:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 또는 1:10 비율로 존재하는, 방법.
  41. 제33항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 대조군 또는 표준에 비해 세포 표면 CD6 발현이 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500% 이상 감소하는 경우 및/또는 대조군 또는 표준에 비해 상층액 내 용해성 CD6이 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500% 이상 증가하는 경우 후보 항-CD6 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 약학적 조성물로 제형화하는 단계를 포함하는, 방법.
  42. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 자가면역, 면역-염증 또는 염증성 질환을 가진 개체 또는 환자는 표준 또는 건강한 개체와 비교하여 Teff :Treg 세포 비율이 증가하며, 여기서 Teff 세포는 선택적으로 Th17 세포인, 방법 또는 투여 요법.
  43. 제42항에 있어서, Teff :Treg 세포 비율은 표준 또는 건강한 개체와 비교하여 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10-배 이상 증가된, 방법 또는 투여 요법.
  44. 제1항 내지 제23항 또는 제42항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자가면역, 면역-염증 또는 염증성 질환은 염증성 장 질환(IBD), 선택적으로 크론병 또는 궤양성 대장염, 전신 홍반 루프스(SLE), 선택적으로 루프스 신염을 동반한 SLE, 류마티스 관절염 (RA), 다발성 경화증 (MS), 건선, 건선 관절염, 강직성 척추염 또는 천식인, 방법 또는 투여 요법.
KR1020237022621A 2020-12-04 2021-12-03 CD6 high 세포 선택적 표적화 및 T eff 세포의 활성감소 방법 KR20230118134A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063121567P 2020-12-04 2020-12-04
US63/121,567 2020-12-04
PCT/US2021/061904 WO2022120240A1 (en) 2020-12-04 2021-12-03 Methods of selectively targeting cd6 high cells and decreasing activity of t eff cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230118134A true KR20230118134A (ko) 2023-08-10

Family

ID=81853605

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237022621A KR20230118134A (ko) 2020-12-04 2021-12-03 CD6 high 세포 선택적 표적화 및 T eff 세포의 활성감소 방법

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20240053360A1 (ko)
EP (1) EP4255452A1 (ko)
JP (1) JP2023552762A (ko)
KR (1) KR20230118134A (ko)
CN (1) CN116963746A (ko)
AU (1) AU2021392748A1 (ko)
CA (1) CA3201076A1 (ko)
IL (1) IL303290A (ko)
MX (1) MX2023006595A (ko)
WO (1) WO2022120240A1 (ko)
ZA (1) ZA202306735B (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY159517A (en) 2008-03-14 2017-01-13 Biocon Ltd A monoclonal antibody and a method thereof

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010054010A1 (en) * 2008-11-07 2010-05-14 Fabrus Llc Anti-dll4 antibodies and uses thereof
WO2018024896A1 (en) * 2016-08-05 2018-02-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) EX VIVO GENERATION OF γδ FOXP3+ REGULATORY T CELLS AND THERAPEUTIC USES THEREOF
CN112424226A (zh) * 2018-02-27 2021-02-26 平衡生物科技股份有限公司 用于治疗重度哮喘的抗cd6抗体

Also Published As

Publication number Publication date
IL303290A (en) 2023-07-01
US20240053360A1 (en) 2024-02-15
EP4255452A1 (en) 2023-10-11
AU2021392748A1 (en) 2023-06-29
MX2023006595A (es) 2023-08-11
CA3201076A1 (en) 2022-06-09
ZA202306735B (en) 2024-02-28
JP2023552762A (ja) 2023-12-19
CN116963746A (zh) 2023-10-27
WO2022120240A1 (en) 2022-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bu et al. Pre-clinical validation of B cell maturation antigen (BCMA) as a target for T cell immunotherapy of multiple myeloma
TWI485160B (zh) 抗cd6單株抗體於治療疾病之用途
JP2021502343A (ja) 細胞療法とガンマセクレターゼ阻害剤との組み合わせ
Cabrera-Perez et al. Alterations in antigen-specific naive CD4 T cell precursors after sepsis impairs their responsiveness to pathogen challenge
CN107406505A (zh) 用于治疗疾病的针对CD3ε和BCMA的双特异性抗体
JP2023036841A (ja) キナーゼ阻害剤との組み合わせで治療用ｔ細胞を使用するための方法および組成物
US8969531B2 (en) Anti-CD80 antibody
CN106068276A (zh) 具有针对T细胞受体beta恒定区的抗原结合域的嵌合抗原受体(CAR)
JP2022513685A (ja) 養子細胞療法を用いた処置のための方法
EP1648507A1 (en) Methods and compositions for increasing the efficiency of therapeutic antibodies using nk cell potentiating compounds
JP2019513400A (ja) エクスビボのｂｉｔｅ活性化ｔ細胞
US7488474B2 (en) Method for detecting regulatory T cells using expression of folate receptor 4 as indicator, method for treating diseases using the detection method, pharmaceutical composition for immunostimulation, and method for treating diseases using the composition
JP2021534802A (ja) 複数のｈｌａ−ｇアイソフォームに対するキメラ抗原レセプター
KR20200046045A (ko) 유전자 조작된 세포를 제조하기 위한 방법 및 조성물
CN115003698A (zh) 抗tcr抗体分子及其用途
KR20230118134A (ko) CD6 high 세포 선택적 표적화 및 T eff 세포의 활성감소 방법
Kung et al. Athymic nude CD4+ 8-T cells produce IL-2 but fail to proliferate in response to mitogenic stimuli.
WO2020069000A9 (en) Mot cells as a therapeutic screening tool for regulatory t-cell activity
JP2023553634A (ja) 治療用のｃａｒ ｔ細胞を特徴付けるための方法および試薬
US9658228B2 (en) Method to detect the onset and to monitor the recurrence of chronic graft versus host disease in transplantation patients
US20240158869A1 (en) Factors for optimizing immunotherapy
Padilla Characterization of a New Suppressor Myeloid Dendritic Cell Population in Pediatrics
MXPA06000841A (es) Metodos y composiciones para aumentar la eficiencia de anticuerpos terapeuticos que utilizan compuestos para potenciar celulas nk

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination