KR20230107589A - 트랜스페린 수용체 1 (TfR1)에 특이적인 비시클릭 펩티드 리간드 - Google Patents

트랜스페린 수용체 1 (TfR1)에 특이적인 비시클릭 펩티드 리간드 Download PDF

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Abstract

본 발명은 스캐폴드에 대한 부착 지점 사이에 2개 이상의 펩티드 루프가 마주 대하도록 분자 스캐폴드에 공유 결합된 폴리펩티드에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 TfR1에 결합하는 펩티드를 기재한다. 본 발명은 또한 상기 비시클릭 펩티드 리간드 중 적어도 2개를 포함하는 다량체성 결합 복합체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 펩티드 리간드 및 다량체성 결합 복합체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 치료제의 TfR1 매개 전달을 통해 질환 또는 장애를 예방, 억제 또는 치료하는데 있어서 상기 펩티드 리간드, 및 다량체성 결합 복합체 및 약제학적 조성물의 용도를 포함한다.

Description

트랜스페린 수용체 1 (TfR1)에 특이적인 비시클릭 펩티드 리간드
본 발명은 스캐폴드(scaffold)에 대한 부착 지점 사이에 2개 이상의 펩티드 루프(peptide loop)가 마주 대하도록 분자 스캐폴드에 공유 결합된 폴리펩티드에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 TfR1에 결합하는 펩티드를 기재한다. 본 발명은 또한 상기 비시클릭(bicyclic) 펩티드 리간드 중 적어도 2개를 포함하는 다량체성 결합 복합체(multimeric binding complex)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 펩티드 리간드 및 다량체성 결합 복합체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 치료제의 TfR1 매개 전달(TfR1 mediated delivery)을 통해 질환 또는 장애를 예방, 억제 또는 치료하는데 있어서 상기 펩티드 리간드, 및 다량체성 결합 복합체 및 약제학적 조성물의 용도를 포함한다.
시클릭 펩티드는 단백질 표적에 높은 친화도 및 특이성으로 결합할 수 있으므로 치료제 개발을 위한 매력적인 분자 클래스이다. 사실은, 예를 들어 항박테리아성 펩티드 반코마이신, 면역억제제 약물인 시클로스포린 또는 항암 약물인 옥트레오티드와 같은 몇 가지 시클릭 펩티드가 임상에서 이미 성공적으로 사용되고 있다 (Driggers et al. (2008), Nat. Rev. Drug. Discov. 7(7), 608-24). 양호한 결합 특성은 펩티드와 표적 사이에 형성된 상대적으로 큰 상호작용 표면뿐만 아니라 시클릭 구조의 감소된 입체형태적 유연성(flexibility)으로 인해 발생한다. 전형적으로, 거대고리(macrocycle)는 수백 제곱 옹스트롬의 표면에 결합하는데, 예를 들어 시클릭 펩티드 CXCR4 길항제 CVX15 (400 Å2; Wu et al. (2007), Science 330, 1066-71), 인테그린 αVb3에 대한 Arg-Gly-Asp 모티프 결합을 가진 시클릭 펩티드 (355 Å2) (Xiong et al. (2002), Science 296(5565), 151-5) 또는 우로키나제-유형 플라스미노겐 활성제에 대해 결합하는 시클릭 펩티드 억제제 우페인(upain)-1 (603 Å2; Zhao et al. (2007), J. Struct. Biol. 160(1), 1-10)과 같다.
이의 시클릭 배위로 인해, 펩티드 마크로사이클은 선형 펩티드보다 덜 유연하여, 표적에 결합시 엔트로피의 더 적은 손실을 야기하고 더 높은 결합 친화도를 발생시킨다. 감소된 유연성은 또한 표적-특이적 입체형태(conformation)를 고정시켜(locking), 선형 펩티드와 비교하여 결합 특이성을 증가시킨다. 이 효과는 이의 고리가 개방되었을 때 다른 MMP에 비해 이의 선택성을 상실한 매트릭스 메탈로프로테이나제 8 (MMP-8)의 강력하고 선택적인 억제제에 의해 예시되었다 (Cherney et al. (1998), J. Med. Chem. 41(11), 1749-51). 거대고리화(macrocyclization)를 통해 달성된 유리한 결합 특성은 예를 들어 반코마이신, 니신 및 악티노마이신에서와 같이 하나 초과의 펩티드 고리를 갖는 멀티시클릭 펩티드에서 훨씬 더 두드러진다.
상이한 연구팀이 이전에 합성 분자 구조에 시스테인 잔기를 가진 폴리펩티드를 구속하였다 (Kemp and McNamara (1985), J. Org. Chem; Timmerman et al. (2005), ChemBioChem). 멜로엔(Meloen)과 동료들은 단백질 표면의 구조적 모방을 위해 합성 스캐폴드에 대한 다중 펩티드 루프의 신속하고 정량적인 고리화를 위해 트리스(브로모메틸)벤젠 및 관련 분자를 사용하였다 (Timmerman et al. (2005), ChemBioChem). 예를 들어 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리프롭-2-엔-1-원 (TATA)과 같은 분자 스캐폴드에 시스테인 함유 폴리펩티드를 연결함으로써 생성된 후보 약물 화합물의 생성 방법 (Heinis et al. (2014) Angewandte Chemie, International Edition 53(6) 1602-1606).
관심 표적에 대한 비시클릭 펩티드의 큰 라이브러리를 생성하고 스크리닝하기 위해 파지 디스플레이-기반 조합 접근법이 개발되었다 (Heinis et al. (2009), Nat. Chem. Biol. 5(7), 502-7 및 WO 2009/098450). 간단히 말해서, 3개의 시스테인 잔기와 2개의 영역의 6개의 무작위 아미노산(Cys-(Xaa)6-Cys-(Xaa)6-Cys)을 함유하는 선형 펩티드의 조합 라이브러리를 파지 상에 표시하고 시스테인 측쇄를 소 분자 스캐폴드에 공유 연결함으로써 고리화하였다.
본 발명의 제1 측면에 따르면, 적어도 2개의 루프 서열에 의해 분리된 적어도 3개의 반응성 기(reactive group)를 포함하는 폴리펩티드, 및 적어도 2개의 폴리펩티드 루프가 분자 스캐폴드 상에 형성되도록 폴리펩티드의 반응성 기와 공유 결합을 형성하는 분자 스캐폴드를 포함하는 트랜스페린 수용체 1 (TfR1)에 특이적인 펩티드 리간드가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에 따르면, 적어도 2개의 비시클릭 펩티드 리간드를 포함하는 다량체성 결합 복합체로서, 여기서 상기 펩티드 리간드는 동일하거나 상이할 수 있고, 그 각각이 적어도 2개의 루프 서열에 의해 분리된 적어도 3개의 반응성 기를 포함하는 폴리펩티드, 및 적어도 2개의 폴리펩티드 루프가 분자 스캐폴드 상에 형성되도록 폴리펩티드의 반응성 기와 공유 결합을 형성하는 분자 스캐폴드를 포함하는 트랜스페린 수용체 1 (TfR1)에 특이적인 펩티드 리간드를 포함하는, 다량체성 결합 복합체를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본원에 정의된 바와 같은 펩티드 리간드 또는 다량체성 결합 복합체를 1종 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 조합하여 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 발명의 추가 측면에 따르면, 치료제의 TfR1 매개 전달을 통해 질환 또는 장애를 예방, 억제 또는 치료하는데 사용하기 위한, 본원에 정의된 바와 같은 펩티드 리간드, 또는 다량체성 결합 복합체 또는 약제학적 조성물이 제공된다.
도 1: 인간 근위 회선형 세포(human proximal convoluted cell)의 1차 배양에서 BCY17986을 사용한 통과세포외배출(transcytosis) 검정의 결과.
도 2: 인간 근위 회선형 세포의 1차 배양에서 BCY17988을 사용한 통과세포외배출 검정의 결과.
도 3: 인간 근위 회선형 세포의 1차 배양에서 BCY17989를 사용한 통과세포외배출 검정의 결과.
도 4: 인간 근위 회선형 세포의 1차 배양에서 BCY17994를 사용한 통과세포외배출 검정의 결과.
본 발명이 "단량체성" 비시클릭 펩티드, 즉 단일 (단량체성) 비시클릭 펩티드 리간드를 함유하는 것들 및 "다량체성" 비시클릭 펩티드, 즉 '하나 이상의 링커를 통해 접합된 하나 초과의 비시클릭 펩티드 (예를 들어, 2, 3 또는 4개)를 함유하는 것들 둘 다에 관한 것으로 인식될 것이다.
단량체성 비시클릭 펩티드 리간드
본 발명의 제1 측면에 따르면, 적어도 2개의 루프 서열에 의해 분리된 적어도 3개의 반응성 기를 포함하는 폴리펩티드, 및 적어도 2개의 폴리펩티드 루프가 분자 스캐폴드 상에 형성되도록 폴리펩티드의 반응성 기와 공유 결합을 형성하는 분자 스캐폴드를 포함하는 트랜스페린 수용체 1 (TfR1)에 특이적인 펩티드 리간드가 제공된다.
한 실시양태에서, 상기 반응성 기는 시스테인 잔기를 포함한다.
용어 "TfR1에 특이적"이 트랜스페린 수용체 1 (TfR1)에 결합하는 펩티드 리간드의 능력을 지칭하는 것으로 인식될 것이다. 또한, 펩티드 리간드가 결합의 정확한 에피토프에 따라 TfR1에 대해 상이한 영향을 미칠 것으로 인식될 것이다. 예를 들어, 영향은 억제성 (즉, 펩티드 리간드가 TfR1에 대한 트랜스페린의 결합을 방해/억제함) 또는 비억제성 (즉, 펩티드 리간드가 TfR1에 대한 트랜스페린의 결합을 방해/억제하지 않음)일 것이다.
억제성 펩티드 리간드
한 실시양태에서, 펩티드 리간드는 TfR1에 특이적이며 TfR1에 대한 트랜스페린의 결합을 방해/억제하는 방식으로 TfR1에 결합한다.
추가 실시양태에서, 상기 루프 서열은 2, 3, 6, 8 또는 9개의 아미노산을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 루프 서열은 2개의 루프 서열에 의해 분리된 3개의 시스테인 잔기를 포함하며 이들 루프 서열의 첫 번째는 2개의 아미노산으로 이루어지고 이의 두 번째는 9개의 아미노산으로 이루진다.
한 실시양태에서, 상기 루프 서열은 둘 다 6개의 아미노산으로 이루어진 2개의 루프 서열에 의해 분리된 3개의 시스테인 잔기를 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 루프 서열은 2개의 루프 서열에 의해 분리된 3개의 시스테인 잔기를 포함하며 이들 루프 서열의 첫 번째는 3개의 아미노산으로 이루어지고 이의 두 번째는 8개의 아미노산으로 이루진다.
한 실시양태에서, 펩티드 리간드는 하기 아미노산 서열, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하며:
CiALCiiNDWTLPWHHCiii (서열번호: 1);
CiREFFDTCiiGLAFIECiii (서열번호: 2); 및
CiLEACiiYDGVYWYSCiii (서열번호: 3);
여기서 Ci, Cii 및 Ciii는 각각 제1, 제2 및 제3 시스테인 잔기를 나타낸다.
추가 실시양태에서, 분자 스캐폴드는 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리프로프-2-엔-1-온 (TATA)이고 펩티드 리간드는 N- 및/또는 C-말단 부가(C-terminal addition)를 포함하고 다음으로부터 선택된다:
A-(서열번호: 1)-A (본원에서는 BCY12455로 지칭됨);
A-(서열번호: 1)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY12652로 지칭됨);
A-(서열번호: 2)-A (본원에서는 BCY12452로 지칭됨);
A-(서열번호: 2)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY12650으로 지칭됨);
A-(서열번호: 3)-A (본원에서는 BCY12454로 지칭됨); 및
A-(서열번호: 3)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY12651로 지칭됨).
여기서 Sar는 사르코신을 나타내고 Fl은 플루오레세인을 나타낸다.
이 설명의 목적을 위해, 억제성 비시클릭 펩티드는 TATA로 고리화되고 삼-치환된 구조를 산출하는 것으로 가정된다. 그러나, 본원에 제시된 본 발명의 설명으로부터 분명한 바와 같이, 고리화는 적어도 2개의 폴리펩티드 루프가 형성되도록 폴리펩티드의 반응성 기와 공유 결합을 형성하는 임의의 적합한 분자 스캐폴드로 수행될 수 있다. 고리화는 Ci, Cii, 및 Ciii 상에서 발생한다.
비억제성 펩티드 리간드
한 실시양태에서, 펩티드 리간드는 TfR1에 특이적이며 TfR1에 대한 트랜스페린의 결합을 억제/방해하지 않는 방식으로 TfR1에 결합한다.
추가 실시양태에서, 상기 루프 서열은 3개 또는 7개의 아미노산을 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 루프 서열은 2개의 루프 서열에 의해 분리된 3개의 시스테인 잔기를 포함하며 이들 루프 서열의 첫 번째는 7개의 아미노산으로 이루어지고 이의 두 번째는 3개의 아미노산으로 이루어진다.
한 실시양태에서, 펩티드 리간드는 하기 아미노산 서열, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하며:
CiSADDWLGCiiISWCiii (서열번호: 4);
CiSSDAYLGCiiISWCiii (서열번호: 5);
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CiPQDAYLGCiiISWCiii (서열번호: 7);
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CiS[K(N3)]DAHLGCiiISYCiii (서열번호: 66); 및
CiSPD[K(N3)]HLGCiiISYCiii (서열번호: 67);
여기서 Abu는 아미노부티르산을 나타내고, Aib는 아미노이소부티르산을 나타내고, Aze는 아제티딘을 나타내고, B-MeIle은 베타-메틸 이소류신을 나타내고, C5g는 시클로펜틸 글리신을 나타내고, Cba는 β-시클로부틸알라닌을 나타내고, Cbg는 시클로부틸 글리신을 나타내고, Chg는 시클로헥실 글리신을 나타내고, Cpg는 시클로프로프릴 글리신을 나타내고, EPA는 2-아미노-3-에틸-펜탄산을 나타내고, HyP는 트랜스-4-히드록시-L-프롤린을 나타내고, [K(N3)]는 6-아지도 리신을 나타내고, 1Nal은 1-나프틸알라닌을 나타내고, 2Nal은 2-나프틸알라닌을 나타내고, 4Pal은 4-피리딜알라닌을 나타내고, tBuAla는 t-부틸-알라닌을 나타내고, tBuGly는 t-부틸-글리신을 나타내고, 3tBuTyr는 3-t-부틸-티로신을 나타내고, Ci, Cii 및 Ciii는 각각 제1, 제2 및 제3 시스테인 잔기를 나타낸다.
추가 실시양태에서, 펩티드 리간드는 하기 아미노산 서열, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하며:
CiSADDWLGCiiISWCiii (서열번호: 4);
CiSSDAYLGCiiISWCiii (서열번호: 5);
CiPPDAHLGCiiISWCiii (서열번호: 6);
CiPQDAYLGCiiISWCiii (서열번호: 7);
CiPPDSWQGCiiISYCiii (서열번호: 8);
CiSPDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 9);
CiPGDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 10);
CiPPDSHLGCiiISYCiii (서열번호: 11); 및
CiSADDWLGCiiISYCiii (서열번호: 12);
여기서 Ci, Cii 및 Ciii는 각각 제1, 제2 및 제3 시스테인 잔기를 나타낸다.
추가 실시양태에서, 분자 스캐폴드는 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리스(2-브로모에타논) (TATB)이고 펩티드 리간드는 N- 및/또는 C-말단 부가를 포함하고 다음으로부터 선택되며:
A-(서열번호: 4)-A (본원에서는 BCY13983으로 지칭됨);
A-(서열번호: 4)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY14474로 지칭됨);
A-(서열번호: 5)-A (본원에서는 BCY13986으로 지칭됨);
A-(서열번호: 5)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY14475로 지칭됨);
A-(서열번호: 6)-A (본원에서는 BCY15466으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 6) (본원에서는 BCY15889로 지칭됨);
A-(서열번호: 7)-A (본원에서는 BCY15467로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 7) (본원에서는 BCY15890으로 지칭됨);
A-(서열번호: 8)-A (본원에서는 BCY13989로 지칭됨);
A-(서열번호: 8)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY14476로 지칭됨);
A-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY15468로 지칭됨);
A-(서열번호: 9)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15768로 지칭됨);
(서열번호: 9)-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15934로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15937로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15938로 지칭됨);
[Fl]G[Sar5]-A-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY15940으로 지칭됨);
N[1Nal]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18030으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-E[Pip]W (본원에서는 BCY18039로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-EPW (본원에서는 BCY17994로 지칭됨);
NWN-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18029로 지칭됨);
NWN-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY17109로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-E[Aze]W (본원에서는 BCY18037로 지칭됨);
Ac-NWN-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY17992로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-E[dP]W (본원에서는 BCY18038로 지칭됨);
Ac-N[1Nal]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18034로 지칭됨);
N[dW]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18031로 지칭됨);
Ac-N[dW]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18035로 지칭됨);
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Ac-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY15891로 지칭됨);
HTS-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY17111로 지칭됨);
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ESF-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY17113으로 지칭됨);
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Ac-N[dY]N-(서열번호: 9)-[K(N3)] (본원에서는 BCY17882로 지칭됨);
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Ac-(서열번호: 9)-E-[Aze]-W-[K(N3)] (본원에서는 BCY17892로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-E-[Pip]-W-[K(N3)] (본원에서는 BCY17894로 지칭됨);
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Ac-(서열번호: 9)-EPW-[Peg24]-[K(N3)] (본원에서는 BCY19406으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-EPWGGSGGS-[K(N3)] (본원에서는 BCY19407로 지칭됨);
A-(서열번호: 10)-A (본원에서는 BCY15469로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 10) (본원에서는 BCY15892로 지칭됨);
A-(서열번호: 11)-A (본원에서는 BCY15470으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 11) (본원에서는 BCY15893으로 지칭됨);
A-(서열번호: 12)-A (본원에서는 BCY15471로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 12) (본원에서는 BCY15894로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 13) (본원에서는 BCY17991로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 13)-EPW (본원에서는 BCY17995로 지칭됨);
Ac-NWN-(서열번호: 13) (본원에서는 BCY17993으로 지칭됨);
NWN-(서열번호: 13) (본원에서는 BCY18033으로 지칭됨);
A-(서열번호: 13)-A (본원에서는 BCY16754로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 13)-[K(N3)] (본원에서는 BCY17896으로 지칭됨);
Ac-NWN-(서열번호: 13)-[K(N3)] (본원에서는 BCY17899로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 13)-EPW-[K(N3)] (본원에서는 BCY17901로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 14) (본원에서는 BCY17990으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 14)-[K(N3)] (본원에서는 BCY17875로 지칭됨);
[AzPro]-(서열번호: 14) (본원에서는 BCY17876으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 15) (본원에서는 BCY17989로 지칭됨);
A-(서열번호: 15)-A (본원에서는 BCY16047로 지칭됨);
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[AzPro]-(서열번호: 15) (본원에서는 BCY17878로 지칭됨);
A-(서열번호: 16)-A (본원에서는 BCY16962로 지칭됨);
TYMN-(서열번호: 17)-A (본원에서는 BCY17117로 지칭됨);
A-(서열번호: 17)-A (본원에서는 BCY16048로 지칭됨);
A-(서열번호: 18)-A (본원에서는 BCY16963으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 19) (본원에서는 BCY17987로 지칭됨);
A-(서열번호: 20)-A (본원에서는 BCY16753으로 지칭됨);
A-(서열번호: 21)-A (본원에서는 BCY16046으로 지칭됨);
A-(서열번호: 22)-A (본원에서는 BCY16964로 지칭됨);
A-(서열번호: 23)-A (본원에서는 BCY16965으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 24) (본원에서는 BCY17986으로 지칭됨);
A-(서열번호: 25)-A (본원에서는 BCY16550으로 지칭됨);
A-(서열번호: 26)-A (본원에서는 BCY16966으로 지칭됨);
A-(서열번호: 27)-A (본원에서는 BCY16051로 지칭됨);
IDSN-(서열번호: 28)-A (본원에서는 BCY17118로 지칭됨);
WGKS-(서열번호: 29)-A (본원에서는 BCY17116으로 지칭됨);
A-(서열번호: 30)-A (본원에서는 BCY16053으로 지칭됨);
A-(서열번호: 31)-A (본원에서는 BCY16557로 지칭됨);
A-(서열번호: 32)-A (본원에서는 BCY16035으로 지칭됨);
A-(서열번호: 33)-A (본원에서는 BCY1604로 지칭됨3);
A-(서열번호: 34)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15769로 지칭됨);
A-(서열번호: 35)-A (본원에서는 BCY15648로 지칭됨);
A-(서열번호: 36)-A (본원에서는 BCY16031로 지칭됨);
A-(서열번호: 37)-A (본원에서는 BCY16079로 지칭됨);
A-(서열번호: 38)-A (본원에서는 BCY16036으로 지칭됨);
A-(서열번호: 39)-A (본원에서는 BCY16029로 지칭됨);
A-(서열번호: 40)-A (본원에서는 BCY16089로 지칭됨);
A-(서열번호: 41)-A (본원에서는 BCY16088로 지칭됨);
A-(서열번호: 42)-A (본원에서는 BCY16052로 지칭됨);
A-(서열번호: 43)-A (본원에서는 BCY16033으로 지칭됨);
A-(서열번호: 44)-A (본원에서는 BCY16039로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 44) (본원에서는 BCY17988로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 44)-[K(N3)] (본원에서는 BCY17879로 지칭됨);
[AzPro]-(서열번호: 44) (본원에서는 BCY17880으로 지칭됨);
A-(서열번호: 45)-A (본원에서는 BCY16038로 지칭됨);
A-(서열번호: 46)-A (본원에서는 BCY16050으로 지칭됨);
A-(서열번호: 47)-A (본원에서는 BCY16034로 지칭됨);
A-(서열번호: 48)-A (본원에서는 BCY16032로 지칭됨);
A-(서열번호: 49)-A (본원에서는 BCY16049로 지칭됨);
A-(서열번호: 50)-A (본원에서는 BCY16558로 지칭됨);
A-(서열번호: 51)-A (본원에서는 BCY16041로 지칭됨);
A-(서열번호: 52)-A (본원에서는 BCY16042로 지칭됨);
A-(서열번호: 53)-A (본원에서는 BCY16045로 지칭됨);
A-(서열번호: 54)-A (본원에서는 BCY16037로 지칭됨);
A-(서열번호: 55)-A (본원에서는 BCY1604로 지칭됨4);
A-(서열번호: 56)-A (본원에서는 BCY1604로 지칭됨0);
A-(서열번호: 57)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15771로 지칭됨);
A-(서열번호: 58)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15772로 지칭됨);
A-(서열번호: 59)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15773으로 지칭됨);
A-(서열번호: 60)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15774로 지칭됨);
A-(서열번호: 61)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15775로 지칭됨);
A-(서열번호: 62)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15776으로 지칭됨);
A-(서열번호: 63)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15777로 지칭됨);
A-(서열번호: 64)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15770으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 65) (본원에서는 BCY17903으로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 66) (본원에서는 BCY17904로 지칭됨); 및
Ac-(서열번호: 67) (본원에서는 BCY17905로 지칭됨);
여기서 AzPro는 아지도프로필을 나타내고, Aze는 아제티딘을 나타내고, 1Nal은 1-나프틸알라닌을 나타내고, NMeTrp는 N-메틸-트립토판을 나타내고, [K(N3)]는 6-아지도 리신을 나타내고,
Peg는 폴리에틸렌 글리콜을 나타내고, Pip는 피페콜산을 나타내고, Sar는 사르코신을 나타내고,
Fl은 플루오레세인을 나타내고 [K(N3)(PYA-말레이미드)]는 하기 구조식을 갖는 변형된 리신을 나타낸다:
Figure pct00001
.
또 다른 실시양태에서, 분자 스캐폴드는 TATB이고 펩티드 리간드는 N- 및/또는 C-말단 부가를 포함하고 다음으로부터 선택되며:
A-(서열번호: 4)-A (본원에서는 BCY13983으로 지칭됨);
A-(서열번호: 4)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY14474로 지칭됨);
A-(서열번호: 5)-A (본원에서는 BCY13986으로 지칭됨);
A-(서열번호: 5)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY14475로 지칭됨);
A-(서열번호: 6)-A (본원에서는 BCY15466으로 지칭됨);
A-(서열번호: 7)-A (본원에서는 BCY15467로 지칭됨);
A-(서열번호: 8)-A (본원에서는 BCY13989로 지칭됨);
A-(서열번호: 8)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY14476로 지칭됨);
A-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY15468로 지칭됨);
A-(서열번호: 9)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15768로 지칭됨);
(서열번호: 9)-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15934로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15937로 지칭됨);
Ac-(서열번호: 9)-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15938로 지칭됨);
[Fl]G[Sar5]-A-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY15940으로 지칭됨);
A-(서열번호: 10)-A (본원에서는 BCY15469로 지칭됨);
A-(서열번호: 11)-A (본원에서는 BCY15470으로 지칭됨); 및
A-(서열번호: 12)-A (본원에서는 BCY15471로 지칭됨);
여기서 Sar는 사르코신을 나타내고 F1은 플루오레세인을 나타낸다.
대안적 실시양태에서, 분자 스캐폴드는 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리프로프-2-엔-1-온 (TATA)이고 펩티드 리간드는 N- 및/또는 C-말단 부가를 포함하고 다음과 같다:
Ac-(서열번호: 13) (본원에서는 BCY20546으로 지칭됨).
이 설명의 목적을 위해, 비억제성 비시클릭 펩티드는 TATA 또는 TATB로 고리화되고 삼-치환 구조를 산출하는 것으로 가정된다. 그러나, 본원에 제시된 본 발명의 설명으로부터 분명한 바와 같이, 고리화는 적어도 2개의 폴리펩티드 루프가 형성되도록 폴리펩티드의 반응성 기와 공유 결합을 형성하는 임의의 적합한 분자 스캐폴드로 수행될 수 있다. 고리화는 Ci, Cii, 및 Ciii 상에서 발생한다.
추가 실시양태에서, 약제학적으로 허용되는 염은 유리 산 또는 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 암모늄 염으로부터 선택된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 펩티드 화학, 세포 배양 및 파지 디스플레이, 핵산 화학 및 생화학 분야와 같은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 표준 기술은 분자 생물학, 유전 및 생화학적 방법에 사용되며 (문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology (1999) 4th ed., John Wiley & Sons, Inc.]), 상기 문헌은 본원에 참조로 포함된다.
다량체성 비시클릭 펩티드 리간드
본 발명의 추가 측면에 따르면, 적어도 2개의 비시클릭 펩티드 리간드를 포함하는 다량체성 결합 복합체가 제공되며, 여기서 상기 펩티드 리간드는 동일하거나 상이할 수 있고, 그 각각은 적어도 2개의 루프 서열에 의해 분리된 적어도 3개의 반응성 기를 포함하는 폴리펩티드, 및 적어도 2개의 폴리펩티드 루프가 분자 스캐폴드 상에 형성되도록 폴리펩티드의 반응성 기와 공유 결합을 형성하는 분자 스캐폴드를 포함하는 트랜스페린 수용체 1 (TfR1)에 특이적인 펩티드 리간드를 포함한다.
따라서, 본 발명의 이러한 측면에서 다량체성 결합 복합체는 본원에 정의된 바와 같은 단량체성 비시클릭 펩티드 리간드 중 어느 하나의 적어도 2개 (즉, 2개, 3개 또는 4개)를 포함한다.
본 발명의 이러한 측면은 광범위한 효능 및 효험으로 TfR1에 결합하고 이를 활성화시키는 상기 비시클릭 펩티드 내의 상이한 부착 부위를 사용하여 다양한 길이 및 강성(rigidity)의 힌지(hinge) 및 다양한 화학적 링커를 가진 일련의 다량체화된 비시클릭 펩티드를 기재한다.
본 발명의 이러한 측면이 단일 비시클릭을 함유하는 상응하는 단량체성 결합 복합체와 비교하여 상기 다량체성 결합 복합체의 생성된 특성으로 인해 상승작용적 이점을 제공하는 다중 배열된 (다량체성) 비시클릭 펩티드를 제시한다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인식될 것이다. 예를 들어, 본 발명의 이러한 측면의 다량체성 결합 복합체는 전형적으로 그들의 단량체성 대응물보다 더 높은 수준의 결합 효능 또는 결합력 (본원에서 Kd 값에 의해 측정된 바와 같음)을 갖는다. 더욱이, 본 발명의 다량체성 결합 복합체는 신장에 의해 청소될 만큼 충분히 작게 설계된다.
이론에 얽매이지 않고, 다량체화된 비시클릭 펩티드는 동일한 수용체 중 하나 초과를 동종-가교결합함으로써 수용체를 활성화시킬 수 있는 것으로 여겨진다. 따라서, 한 실시양태에서, 상기 비시클릭 펩티드 리간드는 TfR1 내의 동일한 표적에 대해 특이적이다. 추가 실시양태에서, 다량체성 결합 복합체는 적어도 2개의 동일한 비시클릭 펩티드 리간드를 포함한다. "동일한"이란 동일한 아미노산 서열을 갖는 비시클릭 펩티드를 의미하며, 가장 결정적으로 동일한 아미노산 서열은 상기 비시클릭 펩티드의 결합 부분을 지칭한다 (예를 들어, 서열은 부착 위치에서 변할 수 있음). 이 실시양태에서, 다량체성 결합 복합체 내의 비시클릭 펩티드 각각은 TfR1의 동일한 표적 상에서 정확하게 동일한 에피토프에 결합할 것이며 - 따라서 생성된 표적 결합 복합체는 동종이량체 (다량체성 복합체가 2개의 동일한 비시클릭 펩티드를 포함하는 경우), 동종삼량체 (다량체성 복합체가 3개의 동일한 비시클릭 펩티드를 포함하는 경우) 또는 동종사량체 (다량체성 복합체가 4개의 동일한 비시클릭 펩티드를 포함하는 경우) 등을 생성할 것이다.
대안적 실시양태에서, 다량체성 결합 복합체는 적어도 2개의 상이한 비시클릭 펩티드 리간드를 포함한다. "상이하다"란 상이한 아미노산 서열을 갖는 비시클릭 펩티드를 의미한다. 이 실시양태에서, 다량체성 결합 복합체 내의 상이한 비시클릭 펩티드 리간드는 TfR1 상의 상이한 에피토프에 결합할 것이며 - 따라서 생성된 표적 결합 복합체는 비파라토프(biparatopic) (다량체성 복합체가 2개의 상이한 비시클릭 펩티드를 포함하는 경우), 트리파라토프(triparatopic) (다량체성 복합체가 3개의 상이한 비시클릭 펩티드를 포함하는 경우) 또는 테트라파라토프(tetraparatopic) (다량체성 복합체가 4개의 상이한 비시클릭 펩티드를 포함하는 경우) 등을 생성할 것이다.
이론에 얽매이지 않고, 다량체화된 비시클릭 펩티드는 TfR1 상의 상이한 표적 부위와 같은 상이한 표적을 헤테로-가교결합함으로써 수용체를 활성화시킬 수 있는 것으로 여겨진다. 따라서, 한 실시양태에서, 상기 비시클릭 펩티드 리간드는 TfR1 상의 상이한 표적에 대해 특이적이다. 이 실시양태에서, 다량체성 결합 복합체는 적어도 2개의 상이한 비시클릭 펩티드 리간드 (즉, 상이한 아미노산 서열을 갖는 비시클릭 펩티드 리간드)를 포함하는 것으로 인식될 것이다. 이 실시양태에서, 다량체성 결합 복합체 내의 각각의 비시클릭 펩티드는 TfR1 상에서 상이한 에피토프에 결합할 것이며 - 따라서 생성된 표적 결합 복합체는 이중특이적 다량체성 결합 복합체 (다량체성 복합체가 2개의 상이한 비시클릭 펩티드를 포함하는 경우), 삼중특이적 다량체성 결합 복합체 (다량체성 복합체가 3개의 상이한 비시클릭 펩티드를 포함하는 경우), 사중특이적 다량체성 결합 복합체 (다량체성 복합체가 4개의 상이한 비시클릭 펩티드를 포함하는 경우) 등을 생성할 것이다.
본 발명의 다량체성 결합 복합체는 TfR1 상의 다양한 상이한 표적에 결합할 수 있도록 설계될 수 있다는 것이 인식될 것이다.
본 발명의 다량체성 결합 복합체 내의 비시클릭 펩티드는 다수의 상이한 옵션을 통해 어셈블리될 수 있다. 예를 들어, 스페이서 또는 아암 요소를 가진 중앙 힌지(central hinge) 또는 분지 모이어티(branching moiety)가 있을 수 있으며 상기 요소들은 상기 힌지 또는 분지 지점으로부터 방사되며 그 지점 각각은 비시클릭 펩티드를 함유할 것이다. 대안적으로, 원형 지지체 구성원(circular support member)이 다수의 내향 또는 외향으로 돌출된 비시클릭 펩티드를 보유할 수 있는 것으로 구상될 수 있을 것이다.
한 실시양태에서, 각각의 비시클릭 펩티드 리간드는 스페이서 기에 의해 중앙 힌지 모이어티에 연결된다.
스페이서 기는 선형일 수 있고 단일 비시클릭 펩티드를 중앙 힌지 모이어티와 연결할 수 있는 것으로 인식될 것이다. 따라서, 한 실시양태에서, 다량체성 결합 복합체는 화학식 (I)의 화합물을 포함한다:
Figure pct00002
(I)
여기서 CHM은 중앙 힌지 모이어티를 나타내고;
비사이클은 본원에 정의된 바와 같은 비시클릭 펩티드 리간드를 나타내고;
m은 2 내지 10으로부터 선택된 정수를 나타낸다.
한 실시양태에서, m은 2, 3 또는 4로부터 선택된 정수를 나타낸다.
추가 실시양태에서, m은 2를 나타낸다.
m이 2를 나타내는 경우, 중앙 힌지 모이어티는 2개의 부착 지점을 필요로 한다는 것이 인식될 것이다. 따라서, 한 실시양태에서 m은 2를 나타내고 CHM은 화학식 (A)의 모티프이다:
Figure pct00003
이량체
한 실시양태에서, 다량체성 결합 복합체는 2개의 동일한 비시클릭 펩티드를 포함하고 하기 표 A에 기재된 이량체 결합 복합체를 포함한다:
표 A: 본 발명의 예시된 이량체 결합 복합체
Figure pct00004
넘버링
본 발명의 펩티드 내의 아미노산 잔기 위치를 언급할 때, 시스테인 잔기 (Ci, Cii 및 Ciii)는 이들이 불변임에 따라 넘버링에서 생략되므로, 본 발명의 펩티드 내의 아미노산 잔기의 넘버링은 하기와 같이 언급된다:
-C-i--A1-L2-Cii-N3-D4-W5-T6-L7-P8-W9-H10-H11-Ciii- (서열번호: 1).
분자 형식
비사이클 코어 서열에 대한 N- 또는 C-말단 연장은 하이픈에 의해 구분된 서열의 좌측 또는 우측에 부가된다. 예를 들어, N-말단 비오틴-G-Sar5 꼬리는 다음과 같이 표시될 것이다:
[Biot]-G-[Sar5]-A-(서열번호: X).
역(Inversed) 펩티드 서열
문헌 [Nair et al. (2003) J. Immunol. 170(3), 1362-1373]에서의 개시내용에 비추어, 본원에 개시된 펩티드 서열은 이의 레트로-인버소(retro-inverso) 형태에서도 유용성을 발견할 것으로 구상된다. 예를 들어, 서열이 뒤바뀌고 (즉, N-말단이 C-말단이 되고 그 역도 마찬가지임) 이의 입체화학 또한 마찬가지로 뒤바뀐다 (즉, D-아미노산이 L-아미노산이 되고 그 역도 마찬가지임).
펩티드 리간드 정의
본원에서 지칭되는 바와 같은 펩티드 리간드는 분자 스캐폴드에 공유 결합된 펩티드, 펩티드함유체(peptidic) 또는 펩티드모방체(peptidomimetic)를 지칭한다. 전형적으로, 이러한 펩티드, 펩티드함유체 또는 펩티드모방체는 천연 또는 비-천연 아미노산, 스캐폴드에 대한 공유 결합을 형성할 수 있는 2개 이상의 반응성 기 (즉, 시스테인 잔기), 및 펩티드, 펩티드함유체 또는 펩티드모방체가 스캐폴드에 결합할 때 루프를 형성하기 때문에 루프 서열로 지칭되는 상기 반응성 기 사이에 마주 대하는 서열을 갖는 펩티드를 포함한다. 본 경우에, 펩티드, 펩티드함유체 또는 펩티드모방체는 적어도 3개의 시스테인 잔기 (본원에서 Ci, Cii 및 Ciii로 지칭됨)를 포함하고, 스캐폴드 상에서 적어도 2개의 루프를 형성한다.
펩티드 리간드의 이점
본 발명의 특정 비시클릭 펩티드는 주사, 흡입, 비강, 안구, 경구 또는 국소 투여에 적합한 약물-유사 분자로 간주될 수 있게 하는 다수의 유리한 특성을 갖는다. 이러한 이점은 다음을 포함한다:
- 종 교차-반응성(Species cross-reactivity). 이것은 전임상 약력학 및 약동학 평가를 위한 전형적인 요건이다;
- 프로테아제 안정성. 비시클릭 펩티드 리간드는 대부분의 환경에서 혈장 프로테아제, 상피 ("막-고정") 프로테아제, 위 및 장 프로테아제, 폐 표면 프로테아제, 세포내 프로테아제 등에 대한 안정성을 입증하여야 한다. 프로테아제 안정성은 동물 모델에서 비시클릭 펩티드 리드(lead) 후보가 개발될 수 있을 뿐만 아니라 인간에게 확실하게 투여될 수 있도록 상이한 종 간에 유지되어야 한다;
- 바람직한 용해도 프로파일. 이것은 하전 및 친수성 대 소수성 잔기 및 분자내/분자간 H-결합의 비율의 함수이며, 이는 제제화 및 흡수 목적에 중요하다; 그리고
- 순환에서 최적의 혈장 반감기. 임상 적응증 및 치료 요법에 따라, 만성 또는 급성 질환 상태 관리를 위해 생체내 노출 시간이 짧거나 연장된 비시클릭 펩티드를 개발할 필요가 있을 수 있다. 최적의 노출 시간은 작용제에 대한 지속적인 노출로 인해 발생하는 독성학적 영향을 최소화하기 위한 짧은 노출 시간에 대한 요건에 비해 지속적인 노출 (최대 치료 효율을 위한)에 대한 요건에 의해 좌우될 것이다.
약제학적으로 허용되는 염
염 형태는 본 발명의 범위 내에 있으며, 펩티드 리간드에 대한 언급은 상기 리간드의 염 형태를 포함하는 것으로 인식될 것이다.
본 발명의 염은 문헌 [Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002]에 기재된 방법과 같은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 물 또는 유기 용매, 또는 이 둘의 혼합물 중 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
산 부가염 (일염 또는 이염)은 무기 산 및 유기 산 둘 다의 매우 다양한 산으로 형성될 수 있다. 산 부가염의 예는 아세트산, 2,2-디클로로아세트산, 아디프산, 알긴산, 아스코르브산 (예를 들어 L-아스코르브산), L-아스파르트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 4-아세트아미도벤조산, 부탄산, (+) 캄포르산, 캄포르-술폰산, (+)-(1S)-캄포르-10-술폰산, 카프르산, 카프로산, 카프릴산, 신남산, 시트르산, 시클람산, 도데실술푸르산, 에탄-1,2-디술폰산, 에탄술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 포름산, 푸마르산, 갈락타르산, 젠티스산, 글루코헵톤산, D-글루콘산, 글루쿠론산 (예를 들어 D-글루쿠론산), 글루탐산 (예를 들어 L-글루탐산), α-옥소글루타르산, 글리콜산, 히푸르산, 할로겐화수소산 (예를 들어 브로민화수소산, 염산, 아이오딘화수소산), 이세티온산, 락트산 (예를 들어 (+)-L-락트산, (±)-DL-락트산), 락토비온산, 말레산, 말산, (-)-L-말산, 말론산, (±)-DL-만델산, 메탄술폰산, 나프탈렌-2-술폰산, 나프탈렌-1,5-디술폰산, 1-히드록시-2-나프토산, 니코틴산, 질산, 올레산, 오로트산, 옥살산, 팔미트산, 파모산, 인산, 프로피온산, 피루브산, L-피로글루탐산, 살리실산, 4-아미노-살리실산, 세박산, 스테아르산, 숙신산, 황산, 타닌산, (+)-L-타르타르산, 티오시안산, p-톨루엔술폰산, 운데실렌산 및 발레르산, 뿐만 아니라 아실화된 아미노산 및 양이온 교환 수지로 이루어진 군으로부터 선택된 산으로 형성된 일염 또는 이염을 포함한다.
염의 한 특정한 군은 아세트산, 염산, 수소화아이오딘산, 인산, 질산, 황산, 시트르산, 락트산, 숙신산, 말레산, 말산, 이세티온산, 푸마르산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 황산, 메탄술폰산 (메실레이트), 에탄술폰산, 나프탈렌술폰산, 발레르산, 프로판산, 부탄산, 말론산, 글루쿠론산 및 락토비온산으로부터 형성된 염으로 이루어진다. 한 특정한 염은 히드로클로라이드 염이다. 또 다른 특정한 염은 아세테이트 염이다.
화합물이 음이온성이거나, 음이온성일 수 있는 관능기를 갖는 경우 (예를 들어 -COOH는 -COO-일 수 있음), 염은 유기 또는 무기 염기로 형성되어, 적합한 양이온을 생성할 수 있다. 적합한 무기 양이온의 예는 알칼리 금속 이온 예컨대 Li+, Na+ 및 K+, 알칼리 토금속 양이온 예컨대 Ca2+ 및 Mg2+, 및 다른 양이온 예컨대 Al3+ 또는 Zn+를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 적합한 유기 양이온의 예는 암모늄 이온 (즉 NH4 +) 및 치환된 암모늄 이온 (예를 들어 NH3R+, NH2R2 +, NHR3 +, NR4 +)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 적합한 치환된 암모늄 이온의 예는 메틸아민, 에틸아민, 디에틸아민, 프로필아민, 디시클로헥실아민, 트리에틸아민, 부틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 벤질아민, 페닐벤질아민, 콜린, 메글루민, 및 트로메타민, 뿐만 아니라 아미노산, 예컨대 리신 및 아르기닌으로부터 유도된 것들이다. 통상적인 4급 암모늄 이온의 예는 N(CH3)4 +이다.
본 발명의 펩티드가 아민 관능기를 함유하는 경우, 이들은, 예를 들어 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법에 따라 알킬화제와의 반응에 의해 4급 암모늄 염을 형성할 수 있다. 이러한 4급 암모늄 화합물은 본 발명의 펩티드의 범위 내에 있다.
변형 유도체
본원에 정의된 바와 같은 펩티드 리간드의 변형 유도체는 본 발명의 범위 내에 있음이 인식될 것이다. 이러한 적합한 변형 유도체의 예는 N-말단 및/또는 C-말단 변형; 하나 이상의 아미노산 잔기를 하나 이상의 비-천연 아미노산 잔기로 대체 (예컨대 하나 이상의 극성 아미노산 잔기를 하나 이상의 등입체성(isosteric) 또는 등전자성(isoelectronic) 아미노산으로 대체; 하나 이상의 비극성 아미노산을 다른 비-천연 등입체성 또는 등전자성 아미노산으로 대체); 스페이서 기의 부가; 하나 이상의 산화 민감성 아미노산 잔기를 하나 이상의 산화 저항성 아미노산 잔기로 대체; 하나 이상의 아미노산 잔기를 알라닌과 같은 하나 이상의 대체 아미노산으로 대체, 하나 이상의 L-아미노산 잔기를 하나 이상의 D-아미노산 잔기로 대체; 비시클릭 펩티드 리간드 내에서 하나 이상의 아미드 결합의 N-알킬화; 하나 이상의 펩티드 결합을 대용 결합(surrogate bond)으로 대체; 펩티드 백본 길이 변형; 하나 이상의 아미노산 잔기의 알파-탄소에 있는 수소를 또 다른 화학 기로 치환; 시스테인, 리신, 글루타메이트/아스파르테이트 및 티로신과 같은 아미노산을 적합한 아민, 티올, 카르복실산 및 페놀-반응성 시약으로 변형시켜 상기 아미노산을 관능화하는 것; 및 관능화에 적합한 직교 반응성을 도입하는 아미노산, 예를 들어 각각 알킨 또는 아지드-함유 모이어티로 관능화를 허용하는 아지드 또는 알킨-기 함유 아미노산의 도입 또는 대체로부터 선택된 하나 이상의 변형을 포함한다.
한 실시양태에서, 변형 유도체는 N-말단 및/또는 C-말단 변형을 포함한다. 추가 실시양태에서, 여기서 변형 유도체는 적합한 아미노-반응성 화학을 사용한 N-말단 변형, 및/또는 적합한 카르복시-반응성 화학을 사용한 C-말단 변형을 포함한다. 추가 실시양태에서, 상기 N-말단 또는 C-말단 변형은 세포독성제, 방사성 킬레이트제 또는 발색단을 포함하나 이에 제한되지는 않는 이펙터 기의 부가를 포함한다.
추가 실시양태에서, 변형 유도체는 N-말단 변형을 포함한다. 추가 실시양태에서, N-말단 변형은 N-말단 아세틸 기를 포함한다. 이 실시양태에서, N-말단 잔기는 N-말단이 아세틸화된 분자를 야기하는 펩티드 합성 동안 아세트산 무수물 또는 다른 적절한 시약으로 캡핑된다. 이 실시양태는 아미노펩티다제에 대한 잠재적인 인식 지점을 제거하는 이점을 제공하고 비시클릭 펩티드의 분해 가능성을 피한다.
대안적 실시양태에서, N-말단 변형은 이펙터 기의 접합 및 이의 표적에 대한 비시클릭 펩티드의 효능 유지를 용이하게 하는 분자 스페이서 기의 부가를 포함한다.
추가 실시양태에서, 변형 유도체는 C-말단 변형을 포함한다. 추가 실시양태에서, C-말단 변형은 아미드 기를 포함한다. 이 실시양태에서, C-말단 잔기는 C-말단 아미드화되는 분자를 야기하는 펩티드 합성 동안 아미드로서 합성된다. 이 실시양태는 카르복시펩티다제에 대한 잠재적인 인식 지점을 제거하는 이점을 제공하고 비시클릭 펩티드의 단백질분해성 분해 가능성을 감소시킨다.
한 실시양태에서, 변형 유도체는 하나 이상의 아미노산 잔기를 하나 이상의 비-천연 아미노산 잔기로 대체하는 것을 포함한다. 이 실시양태에서, 분해성 프로테아제에 의해 인식되지 않고 표적 효능에 어떠한 역효과도 갖지 않는 등입체성/등전자성 측쇄를 갖는 비-천연 아미노산이 선택될 수 있다.
대안적으로, 인접한 펩티드 결합의 단백질분해성 가수분해가 입체형태적으로 및 입체적으로 방해되도록, 구속된 아미노산 측쇄를 갖는 비-천연 아미노산이 사용될 수 있다. 특히, 이들은 프롤린 유사체, 부피가 큰 측쇄, Cα-이치환 유도체 (예를 들어, 아미노이소부티르산, Aib), 및 시클로 아미노산, 아미노-시클로프로필카르복실산인 단순 유도체에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 변형 유도체는 스페이서 기의 부가를 포함한다. 추가 실시양태에서, 변형 유도체는 N-말단 시스테인 (Ci) 및/또는 C-말단 시스테인 (Ciii)에 스페이서 기의 부가를 포함한다.
한 실시양태에서, 변형 유도체는 하나 이상의 산화 민감성 아미노산 잔기를 하나 이상의 산화 저항성 아미노산 잔기로 대체하는 것을 포함한다. 추가 실시양태에서, 변형 유도체는 트립토판 잔기를 나프틸알라닌 또는 알라닌 잔기로 대체하는 것을 포함한다. 이 실시양태는 생성된 비시클릭 펩티드 리간드의 제약 안정성 프로파일을 개선하는 이점을 제공한다.
한 실시양태에서, 변형 유도체는 하나 이상의 하전된 아미노산 잔기를 하나 이상의 소수성 아미노산 잔기로 대체하는 것을 포함한다. 대안적인 실시양태에서, 변형 유도체는 하나 이상의 소수성 아미노산 잔기를 하나 이상의 하전된 아미노산 잔기로 대체하는 것을 포함한다. 소수성 아미노산 잔기에 대한 하전된 아미노산 잔기의 정확한 균형은 비시클릭 펩티드 리간드의 중요한 특성이다. 예를 들어, 소수성 아미노산 잔기는 혈장 단백질 결합 정도에 영향을 미치므로 혈장에서 자유 이용가능한 분획의 농도에 영향을 미치며, 한편 하전된 아미노산 잔기 (특히 아르기닌)는 세포 표면 상에 인지질 막과 펩티드의 상호작용에 영향을 미칠 수 있다. 조합에서의 상기 둘은 펩티드 약물의 반감기, 분포 부피 및 노출에 영향을 미칠 수 있으며, 임상 종점에 따라 맞춤화될 수 있다. 게다가, 하전된 아미노산 잔기에 대한 소수성 아미노산 잔기의 정확한 조합 및 수는 주사 부위에서의 자극을 감소시킬 수 있다 (펩티드 약물이 피하 투여된 경우).
한 실시양태에서, 변형 유도체는 하나 이상의 L-아미노산 잔기를 하나 이상의 D-아미노산 잔기로 대체하는 것을 포함한다. 이 실시양태는 입체 장애 및 D-아미노산의 성향에 의해 β-회전 입체형태를 안정화함으로써 단백질분해 안정성을 증가시키는 것으로 여겨진다 (Tugyi et al. (2005) PNAS, 102(2), 413-418).
한 실시양태에서, 변형 유도체는 임의의 아미노산 잔기의 제거 및 D-알라닌과 같은 알라닌으로의 치환을 포함한다. 이 실시양태는 핵심 결합 잔기를 확인하고 잠재적인 단백질분해 공격 부위(들)를 제거하는 이점을 제공한다.
상기 언급된 변형 각각은 펩티드의 효능 또는 안정성을 의도적으로 개선하는 역할을 한다는 점에 유의하여야 한다. 하기 메커니즘을 통해 변형을 기반으로 한 추가 효능 개선을 달성할 수 있다:
- 소수성 효과를 이용하고 더 낮은 오프율(off rate)을 야기하는 소수성 모이어티를 혼입하여 더 높은 친화도가 달성된다;
- 장거리 이온 상호작용을 이용하는 하전된 기를 혼입하여, 더 빠른 속도와 더 높은 친화도를 야기한다 (예를 들어 문헌 [Schreiber et al., Rapid, electrostatically assisted association of proteins (1996), Nature Struct. Biol. 3, 427-31] 참조); 및
- 예를 들어 표적 결합시 엔트로피 손실이 최소화되도록 아미노산의 측쇄를 올바르게 구속하고, 표적 결합시 엔트로피 손실이 최소화되도록 백본의 비틀림 각(torsional angle)을 구속하고 동일한 이유로 분자에서 추가 고리화를 도입함으로써, 펩티드에 추가 구속을 혼입한다.
(검토를 위해 문헌 [Gentilucci et al., Curr. Pharmaceutical Design, (2010), 16, 3185-203], 및 [Nestor et al., Curr. Medicinal Chem (2009), 16, 4399-418] 참조).
동위원소 변화
본 발명은 하나 이상의 원자가 동일한 원자 번호를 가지나, 원자 질량 또는 질량수가 대개 자연에서 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자에 의해 대체되는, 본 발명의 모든 제약상 허용가능한 (방사성)동위원소-표지된 펩티드 리간드, 및 관련 (방사성)동위원소를 보유할 수 있는 금속 킬레이트 기가 부착된 ("이펙터"로 칭함) 본 발명의 펩티드 리간드, 및 특정 관능기가 관련된 (방사선)동위원소 또는 동위원소로 표지된 관능기로 공유 대체되는 본 발명의 펩티드 리간드를 포함한다.
본 발명의 펩티드 리간드에 포함시키기에 적합한 동위원소의 예는 수소의 동위원소, 예컨대 2H (D) 및 3H (T), 탄소의 동위원소, 예컨대 11C, 13C 및 14C, 염소의 동위원소, 예컨대 36Cl, 플루오린의 동위원소, 예컨대 18F, 아이오딘의 동위원소, 예컨대 123I, 125I 및 131I, 질소의 동위원소, 예컨대 13N 및 15N, 산소의 동위원소, 예컨대 15O, 17O 및 18O, 인의 동위원소, 예컨대 32P, 황의 동위원소, 예컨대 S, 구리의 동위원소, 예컨대 64Cu, 갈륨의 동위원소, 예컨대 67Ga 또는 68Ga, 이트륨의 동위원소, 예컨대 90Y 및 루테튬의 동위원소, 예컨대 177Lu, 및 비스무스의 동위원소, 예컨대 213Bi이다.
본 발명의 특정 동위원소-표지된 펩티드 리간드, 예를 들어 방사성 동위원소를 포함하는 것들은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하고, 질환이 생긴 조직에서 표적의 존재 및/또는 부재를 임상적으로 평가하는 데 유용하다. 본 발명의 펩티드 리간드는 표지된 화합물과 다른 분자, 펩티드, 단백질, 효소 또는 수용체 사이의 복합체 형성을 검출하거나 확인하는 데 사용될 수 있다는 점에서 귀중한 진단 특성을 추가로 가질 수 있다. 검출 또는 확인 방법은 표지 작용제(labelling agent) 예컨대 방사성동위원소, 효소, 형광 물질, 발광 물질 (예를 들어, 루미놀, 루미놀 유도체, 루시페린, 에쿠오린 및 루시페라제) 등으로 표지된 화합물을 사용할 수 있다. 방사성 동위원소 삼중수소, 즉 3H (T), 및 탄소-14, 즉 14C는 혼입이 쉽고 검출이 용이하다는 점에서 이러한 목적에 특히 유용하다.
중수소, 즉 2H (D)와 같은 더 무거운 동위원소로의 치환은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건으로 인한 특정 치료 이점을 제공할 수 있으므로, 일부 상황에서 선호될 수 있다.
11C, 18F, 15O 및 13N과 같은 양전자 방출 동위원소로의 치환은 표적 점유율(target occupancy)을 조사하기 위한 양전자 단층 촬영(Positron Emission Topography) (PET) 연구에 유용할 수 있다.
본 발명의 펩티드 리간드의 동위원소-표지 화합물은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 이전에 이용되었던 비표지 시약 대신 적절한 동위원소-표지 시약을 사용하여 첨부된 실시예에 기재된 것들과 유사한 공정에 의해 제조될 수 있다.
분자 스캐폴드
한 실시양태에서, 분자 스캐폴드는 비방향족 분자 스캐폴드를 포함한다. 본원에서 "비방향족 분자 스캐폴드"에 대한 언급은 방향족 (즉, 불포화) 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리 시스템을 함유하지 않는 본원에 정의된 바와 같은 임의의 분자 스캐폴드를 지칭한다.
비방향족 분자 스캐폴드의 적합한 예는 문헌 [Heinis et al. (2014) Angewandte Chemie, International Edition 53(6) 1602-1606]에 기재되어 있다.
전술한 문헌에서 언급한 바와 같이, 분자 스캐폴드는 작은 유기 분자와 같은 소분자일 수 있다.
한 실시양태에서 분자 스캐폴드는 거대분자일 수 있다. 한 실시양태에서 분자 스캐폴드는 아미노산, 뉴클레오티드 또는 탄수화물로 구성된 거대분자이다.
한 실시양태에서 분자 스캐폴드는 공유 결합을 형성하기 위해 폴리펩티드의 관능기(들)와 반응할 수 있는 반응성 기를 포함한다.
분자 스캐폴드는 아민, 티올, 알코올, 케톤, 알데히드, 니트릴, 카르복실산, 에스테르, 알켄, 알킨, 아지드, 무수물, 숙신이미드, 말레이미드, 알킬 할라이드 및 아실 할라이드와 같은 펩티드와 연결을 형성하는 화학 기를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 분자 스캐폴드는 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리프로프-2-엔-1-온 (트리아크릴로일헥사히드로-s-트리아진 (TATA)로도 공지됨)이다:
Figure pct00005
따라서, Ci, Cii, 및 Ciii 시스테인 잔기 상에서 본 발명의 비시클릭 펩티드로 고리화한 후, 분자 스캐폴드는 하기 구조식을 갖는 TATA의 삼-치환 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리프로판-1-온 유도체를 형성한다:
Figure pct00006
여기서 *는 3개의 시스테인 잔기의 부착 지점을 나타낸다.
대안적인 실시예에서, 분자 스캐폴드는 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리스(2-브로모에타논) (TATB)이다.
따라서, Ci, Cii, 및 Ciii 시스테인 잔기 상에서 본 발명의 비시클릭 펩티드로 고리화한 후, 분자 스캐폴드는 하기 구조식을 갖는 TATB의 삼-치환 유도체를 형성한다:
Figure pct00007
합성
본 발명의 펩티드는 표준 기술에 이어서 시험관내에서 분자 스캐폴드와의 반응에 의해 합성적으로 제조될 수 있다. 이 작업을 수행할 때, 표준 화학을 사용할 수 있다. 이는 추가 하류 실험 또는 검증을 위해 용해성 물질을 신속하게 대규모로 제조가능하게 한다. 이러한 방법은 문헌 [Timmerman et al. (상기 문헌)]에 개시된 바 같은 통상적인 화학을 사용하여 완수될 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 본원에 제시된 바와 같이 선택된 폴리펩티드 또는 접합체(conjugate)의 제조에 관한 것이며, 여기서 제조는 하기에 설명된 바와 같은 임의의 추가 단계를 포함한다. 한 실시양태에서, 이들 단계는 화학적 합성에 의해 제조된 최종 생성물 폴리펩티드/접합체에서 수행된다.
임의로 관심 폴리펩티드의 아미노산 잔기는 접합체 또는 복합체를 제조할 때 치환될 수 있다.
예를 들어, 또 다른 루프를 혼입하기 위해 펩티드를 또한 연장할 수 있으므로 여러 특이성을 도입할 수 있다.
펩티드를 연장하기 위해, 표준 고체상 또는 용액상 화학을 사용하여 직각으로 보호된 리신 (및 유사체)을 사용하여 루프 내에서 또는 이의 N-말단 또는 C-말단에서 이를 화학적으로 단순히 연장할 수 있다. 표준 (생물)접합 기술을 사용하여 활성화되거나 활성화가능한 N- 또는 C-말단을 도입할 수 있다. 대안적으로, 예를 들어 문헌 (Dawson et al. 1994. Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation. Science 266:776-779)에 기재된 바와 같이 단편 응축 또는 천연 화학적 라이게이션에 의해, 또는 효소에 의해, 예를 들어 문헌 ([Chang et al.　 Proc Natl Acad Sci U S A. 1994 Dec 20; 91(26):12544-8] 또는 [Hikari et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters　 Volume 18, Issue 22, 15 November 2008, Pages 6000-6003])에 기재된 바와 같이 서브틸리가제를 사용하여 부가가 이루어질 수 있다.
대안적으로, 펩티드는 디술피드 결합을 통한 추가 접합에 의해 연장되거나 변형될 수 있다. 이것은 세포의 환원 환경 내에서 첫 번째 및 두 번째 펩티드가 서로 한 번 해리되도록 하는 추가 이점을 갖는다. 이 경우에 분자 스캐폴드 (예를 들어 TATA 또는 TATB)는 3개의 시스테인 기와 반응하기 위해 첫 번째 펩티드의 화학적 합성 동안에 부가될 수 있으며; 이어서 추가 시스테인 또는 티올은 첫 번째 펩티드의 N- 또는 C-말단에 부가될 수 있으므로, 이 시스테인 또는 티올은 두 번째 펩티드의 자유 시스테인 또는 티올과 단지 반응하여 디술피드-연결 비시클릭 펩티드-펩티드 접합체를 형성한다.
더욱이, 다른 관능기 또는 이펙터 기의 부가는 적절한 화학, N- 또는 C-말단에서의 커플링 또는 측쇄를 통해 동일한 방식으로 완수될 수 있다. 한 실시양태에서, 커플링은 어느 실체(entity)의 활성도 차단하지 않는 그러한 방식으로 수행된다.
약제학적 조성물
본 발명의 추가 측면에 따르면, 1종 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 조합하여 본원에 정의된 바와 같은 펩티드 리간드를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
일반적으로, 본 펩티드 리간드는 약리학상 적절한 부형제 또는 담체와 함께 정제된 형태로 이용될 것이다. 전형적으로, 이들 부형제 또는 담체는 식염수 및/또는 완충 매질을 포함한, 수성 또는 알코올성/수성 용액, 에멀젼 또는 현탁액을 포함한다. 비경구 비히클(vehicle)은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨 및 락테이트화 링거(lactated Ringer's)를 포함한다. 폴리펩티드 복합체를 현탁 상태로 유지하기 위해 필요한 경우, 적합한 생리학상 허용되는 아주반트(adjuvant)는 증점제 예컨대 카르복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴 및 알기네이트로부터 선택될 수 있다.
정맥내 비히클은 유체 및 영양 보충물(nutrient replenisher) 및 전해질 보충물(electrolyte replenishe), 예컨대 링거 덱스트로스를 기반으로 하는 것들을 포함한다. 보존제 및 기타 첨가제, 예컨대 항균제, 항산화제, 킬레이트화제 및 불활성 기체가 또한 존재할 수 있다 (Mack (1982) Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition).
본 발명의 펩티드 리간드는 별도로 투여되는 조성물로서 또는 다른 작용제와 함께 사용될 수 있다. 이들은 항체, 항체 단편 및 다양한 면역치료 약물, 예컨대 시클로스포린, 메토트렉세이트, 아드리아마이신 또는 시스플라티늄 및 면역독소를 포함할 수 있다. 별도로 또는 본 발명의 펩티드 리간드와 함께 투여될 수 있는 다른 작용제의 추가 예는 시토카인, 림포카인, 기타 조혈 인자, 혈전용해 및 항혈전 인자를 포함한다. 약제학적 조성물은 본 발명의 단백질 리간드와 함께 다양한 세포독성제 또는 다른 작용제의 "칵테일", 또는 상이한 특이성을 갖는 본 발명에 따른 선택된 폴리펩티드, 예컨대 상이한 표적 리간드를 사용하여 선택된 폴리펩티드의 조합까지도, 이들이 투여 전에 풀링되는지 여부에 관계없이 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물의 투여 경로는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 통상적으로 공지된 것들 중 임의의 것일 있다. 치료를 위해, 본 발명의 펩티드 리간드는 표준 기술에 따라 임의의 환자에게 투여될 수 있다. 투여는 비경구, 정맥내, 근육내, 복강내, 경피, 폐 경로를 통한, 또는 또한 적절하게는, 카테터를 통한 직접 주입에 의함을 포함한, 임의의 적절한 방식에 의할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 정맥내로 투여될 것이다. 투여량 및 빈도는 환자의 연령, 성별 및 상태, 다른 약물의 공동 투여, 반대적응증 및 임상의가 고려해야 할 기타 파라미터에 따라 달라진다.
본 발명의 펩티드 리간드는 보관을 위해 동결건조될 수 있고 사용 전에 적합한 담체에서 재구성될 수 있다. 이 기술은 효과적인 것으로 나타났으며 관련 기술분야에 공지된 동결건조 및 재구성 기술이 이용될 수 있다. 동결건조 및 재구성이 다양한 정도의 활성 손실을 야기할 수 있고 보상을 위해 수준을 상향 조정하여야 할 수 있는 것으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인식될 것이다.
본 펩티드 리간드 또는 이의 칵테일을 함유하는 조성물은 예방적 및/또는 치료적 치료를 위해 투여될 수 있다. 특정 치료 적용에서, 선택된 세포 집단의 적어도 부분적인 억제, 진압, 조정, 사멸, 또는 일부 다른 측정가능한 파라미터를 완수하기 위한 적절한 양은 "치료-유효 용량"으로서 정의된다. 이 투여량을 달성하는 데 필요한 양은 질환의 중증도에 따라 달라질 것이나, 일반적으로 체중 킬로그램당 선택된 펩티드 리간드 0.005 내지 5.0 mg의 범위이며 0.05 내지 2.0 mg/kg/용량이 더 통상적으로 사용된다. 예방적 적용을 위해, 본 펩티드 리간드 또는 이의 칵테일을 함유하는 조성물은 또한 유사하거나 약간 더 낮은 투여량으로 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 펩티드 리간드를 함유하는 조성물은 예방 및 치료 환경에서 포유동물에서 선택된 표적 세포 집단의 변경, 불활성화, 사멸 또는 제거를 돕기 위해 이용될 수 있다. 게다가, 본원에 기재된 펩티드 리간드는 체외적으로 또는 시험관내에서 선택적으로 사용되어 이질적인 세포 수집으로부터 표적 세포 집단을 사멸시키거나, 고갈시키거나 또는 달리 효과적으로 제거할 수 있다. 포유동물로부터의 혈액은 선택된 펩티드 리간드와 체외적으로 조합될 수 있으며, 이에 의해 원하지 않는 세포는 사멸되거나 달리 표준 기술에 따라 포유동물에게 반환하기 위해 혈액으로부터 제거된다.
치료 용도
본 발명의 비시클릭 펩티드는 트랜스페린 수용체 1 (TfR1) 결합제로서 특정한 유용성을 갖는다. 본 발명의 추가 측면에 따르면, 치료제의 TfR1 매개 전달을 통해 질환 또는 장애를 예방, 억제 또는 치료하는데 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 펩티드 리간드 또는 약제학적 조성물이 제공된다.
트랜스페린은 혈장을 통해 철 (Fe)에 결합하여 결과적으로 수송을 매개하는 척추동물에서 발견되는 당단백질이다. 그것은 간에서 생성되며 두 개의 Fe3+ 원자에 대한 결합 부위를 함유한다. 인간 트랜스페린은 TF 유전자에 의해 코딩되고 76 kDa 당단백질로서 생성된다.
트랜스페린 당단백질은 철과 단단히 결합하나, 가역적으로 결합한다. 트랜스페린에 결합된 철은 전체 신체 철의 0.1% (4 mg) 미만이긴 하지만, 가장 높은 전환율 (25 mg/24 h)로 가장 필수적인 철 풀(vital iron pool)을 형성한다. 트랜스페린은 약 80 kDa의 분자량을 가지며 두 개의 특이적 고-친화도 Fe (III) 결합 부위를 포함한다. Fe (III)에 대한 트랜스페린의 친화도는 극히 높으나 (회합 상수는 pH 7.4에서 1020　M-1임) 중성 미만으로 pH가 감소함에 따라 점진적으로 감소한다. 트랜스페린은 철에만 결합하는 것이 아니라 상이한 금속 이온에도 결합한다. 이들 당단백질은 척추동물의 다양한 체액에 위치한다. 철에 결합되지 않은 경우, 트랜스페린은 "아포트랜스페린"으로 공지되어 있다.
한 실시양태에서, 트랜스페린은 포유동물 트랜스페린이다. 추가 실시양태에서, 포유동물 트랜스페린은 인간 트랜스페린이다. 한 실시양태에서, 인간 트랜스페린은 인간 트랜스페린 수용체 1 (TfR1; CD71로도 공지됨)이다.
TfR1 결합 펩티드가 신경학적 장애(neurological disorder)의 치료에 유용할 수 있다는 것이 인식될 것이다. 이러한 신경학적 장애의 예는 다음을 포함하나 이에 제한되지는 않는다:
신경병증 장애(neuropathy disorder), 신경퇴행성 질환(neurodegenerative disease), 암, 안구 질환 장애(ocular disease disorder), 발작 장애(seizure disorder), 리소좀 보관 질환(lysosomal storage disease), 아밀로이드증(amyloidosis), 바이러스 또는 미생물 질환(viral or microbial disease), 허혈(ischemia), 거동 장애(behavioural disorder) 및 CNS 염증(inflammation).
한 실시양태에서, 신경학적 장애는 인간 대상체에 있다. 용량 양 및/또는 투여 빈도는 적혈구가 노출되는 펩티드 리간드의 농도를 감소시키기 위해 조정된다는 것이 인식될 것이다. 추가 실시양태에서, 치료는 적혈구 고갈에 대해 인간 대상체를 모니터링하는 단계를 추가로 포함한다.
본원에서 용어 "예방"에 대한 언급은 질환 유도 전에 보호 조성물을 투여하는 것을 포함한다. "진압"은 유도 사건(inductive event) 후, 그러나 질환의 임상적 출현 이전에 조성물을 투여하는 것을 지칭한다. "치료"는 질환 증상이 명백해진 후 보호 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
질환에 대한 보호 또는 치료에서 펩티드 리간드의 유효성을 스크리닝하는 데 사용할 수 있는 동물 모델 시스템이 이용가능하다. 동물 모델 시스템의 사용은 인간 및 동물 표적과 교차 반응할 수 있는 폴리펩티드 리간드의 개발을 가능하게 하는 본 발명에 의해 촉진되어, 동물 모델의 사용을 가능하게 한다.
트랜스페린 수용체 1 (TfR1)은 광범위하게 연구된 모델 수용체-리간드 시스템이며 영양소/스캐빈저 수용체 화물(cargo) 내재화 및 세포내이입 분류의 세포 특성 및 메커니즘에 대한 상당한 통찰력을 제공하였다 (Qian et al (2002) Pharmacological Reviews 54(4), 561-587). TfR1은 구성적 세포내이입(constitutive endocytosis) 및 원형질막으로의 재순환(recycling)을 겪는 것으로 공지되어 있으며 세포내이입된 화물의 적절한 분류를 가능하게 하는 pH-의존적 리간드 결합을 가지고 있다. 항-TfR1 항체는 이전에 올리고뉴클레오티드 치료제의 TfR1 표적화를 위한 1차 작용제인 것으로 여겨져 왔으나, 본 발명의 현재 Tfr1 결합 펩티드 리간드는 전신 전달된 TfR1-비시클릭 펩티드-siRNA 접합체를 통해 골격 및 심근에서 유전자 발현의 효율적이고 심오한 녹다운을 입증할 가능성을 가진다.
따라서, 이 메카니즘에 비추어 본 발명의 펩티드 리간드는 Tfr1-펩티드 리간드-페이로드(payload) (즉, siRNA) 복합체를 조직 세포, 특히 근육 세포로 전달하는 것과 같은 조직 전달 복합체로서의 유용성을 찾을 수 있다고 여겨진다.
따라서, 본 발명의 추가 측면에 따르면, 페이로드, 예컨대 또 다른 펩티드, 소분자 약물 또는 올리고뉴클레오티드, 특히 siRNA와 조합하여 TfR1에 결합된 본 발명의 펩티드 리간드를 포함하는 조직 전달 복합체가 제공된다.
따라서 상기 조직 전달 복합체는 근골격계 장애(musculoskeletal disorder)의 치료에 유용성을 발견한다. 적합한 근골격계 장애의 예는 다음을 포함하나 이에 제한되지는 않는다:
12q14 미세결실 증후군(microdeletion syndrome)
2q37 결실 증후군(deletion syndrome)
3M 증후군
경골 결손(Absence of Tibia)
다지증을 동반한 경골 결손(Absence of tibia with polydactyly)
무슬개골(Absent patella)
무수족증(Acheiropody)
1A형 연골무발생증(Achondrogenesis type 1A) - 연골무발생증 참조
1B형 연골무발생증 - 연골무발생증 참조
2형 연골무발생증 - 연골무발생증 참조
연골무형성증(Achondroplasia)
말단-흉곽-신장 부위 결손(Acro-pectoro-renal field defect)
뇌량무형성 증후군(Acrocallosal syndrome), 쉰젤형(Schinzel type)
말단두대퇴 이형성증(Acrocapitofemoral dysplasia)
첨두다지증(Acrocephalopolydactyly)
말단골형성부전증(Acrodysostosis)
말단형성부전 척추측만증(Acrodysplasia scoliosis)
얼굴말단 골형성부전증 카타니아형(Acrofacial dysostosis Catania type)
얼굴말단 골형성부전증 팔라고니아형(Acrofacial dysostosis Palagonia type)
얼굴말단 골형성부전증 로드리게즈형(Acrofacial dysostosis Rodriguez type)
말단전두안면비골 골형성부전증 증후군(Acrofrontofacionasal dysostosis syndrome)
지단 전두비골 골형성부전증(Acromelic frontonasal dysostosis)
전완하퇴말단 이형성증(Acromesomelic dysplasia)
전완하퇴말단 이형성증 헌터 톰슨형(Hunter Thompson type)
전완하퇴말단 이형성증 마로토형(aroteaux type)
말단왜소 이형성증(Acromicric dysplasia)
말단골용해 우성 유형(Acroosteolysis dominant type)
말단흉근 증후군(Acropectoral syndrome)
말단흉근척추 이형성증 F형(Acropectorovertebral dysplasia F form)
급성 열성 호중구성 피부병(Acute febrile neutrophilic dermatosis)
편측성 무지증(Adactylia unilateral)
아담스-올리버 증후군(Adams-Oliver syndrome)
아데노신 데아미나제 2 결핍(Adenosine Deaminase 2 deficiency)
성인 증후군(ADULT syndrome)
성인 발병 스틸병(Adult-onset Still's disease)
아이카디-구티에레스 증후군(Aicardi-Goutieres syndrome)
알 가잘리 사브리나단 나이르 증후군(Al Gazali Sabrinathan Nair syndrome)
알랭-바빈-데마르케즈 증후군(Allain-Babin-Demarquez syndrome)
알파-만노시다증(Alpha-mannosidosis)
근위축, 신경인성 견갑골, 뉴잉글랜드형(Amyotrophy, neurogenic scapuloperoneal, New England type)
성장결핍 이형성증(Anauxetic dysplasia)
천사 형상의 지골골단 이형성증(Angel shaped phalangoepiphyseal dysplasia)
안검유착-외배엽 결손-구순/구개열 증후군(Ankyloblepharon-ectodermal defects-cleft lip/palate syndrome)
강직성 척추염(Ankylosing spondylitis) - 희귀 질환이 아님
변지증(tylosis)을 동반한 강직성 척추 뼈과다증(Ankylosing vertebral hyperostosis)
형성저하증(hypoplasia) 또는 말단 지골(distal phalange)의 부재를 동반한 무손톱-손톱이영양증(Anonychia-onychodystrophy)
앤틀리 빅슬러 증후군(Antley Bixler syndrome)
에이퍼트 증후군(Apert syndrome)
선천성 다발성 관절구축증(Arthrogryposis multiplex congenita)
아트 증후군(Arts syndrome)
아스파르틸글리코사민뇨증(Aspartylglycosaminuria)
1형 불완전골형성증(Atelosteogenesis type 1)
2형 불완전골형성증
3형 불완전골형성증
첨두합지증(Auralcephalosyndactyly)
귓바퀴-관절돌기 증후군(Auriculo-condylar syndrome)
귓바퀴골이형성증(Auriculoosteodysplasia)
상염색체 우성 만기발현형 척추골단 이형성증(Autosomal dominant spondyloepiphyseal dysplasia tarda)
상염색체 열성 조기-발병 염증성 장 질환(Autosomal recessive early-onset inflammatory bowel disease)
상염색체 열성 단백질 C 결핍(Autosomal recessive protein C deficiency)
축성 골연화증(Axial osteomalacia)
축성 척추골간단 이형성증(Axial spondylometaphyseal dysplasia
)
아기 딸랑이 골반 이형성증(Baby rattle pelvic dysplasia)
밸라-제롤드 증후군(Baller-Gerold syndrome)
뱅키 증후군(Banki syndrome)
비아레-스티븐슨 뇌회상 두피 증후군(Beare-Stevenson cutis gyrata syndrome)
베체트 질환(Behcet disease)
베날리그 라세테 증후군(Benallegue Lacete syndrome)
베들렘 근병증(Bethlem myopathy)
뷰커스 가족성 고관절 이형성증(Beukes familial hip dysplasia)
블라우 증후군(Blau syndrome)
블라운트병(Blount disease)
BOD 증후군
골 이형성증 아주즈 유형(Bone dysplasia Azouz type)
골 이형성증 치명적인 홈그렌 유형(Bone dysplasia lethal Holmgren type
)
부메랑 이형성증(Boomerang dysplasia)
왜소증을 동반한 전방 다리 휨(Bowing of legs, anterior with dwarfism)
단두전두비골 이형성증(Brachycephalofrontonasal dysplasia)
단지증 왜소증 므셀레니 유형(Brachydactylous dwarfism Mseleni type)
단지증 팔꿈치 손목 이형성증(Brachydactyly elbow wrist dysplasia)
긴 엄지손가락 유형의 단지증(Brachydactyly long thumb type)
단지증 모노넨 유형(Brachydactyly Mononen type)
A1형 단지증(Brachydactyly type A1)
A2형 단지증
A4형 단지증
A5형 단지증
A6형 단지증
A7형 단지증
B형 단지증
C형 단지증
E형 단지증
B형과 E형이 조합된 단지증(Brachydactyly types B and E combined)
3형 브라키올미아(Brachyolmia type 3)
X-연관 새궁 증후군(Branchial arch syndrome X-linked)
브로디 근병증(Brody myopathy)
브루크 증후군(Bruck syndrome) 1
부슈케-올렌도르프 증후군(Buschke-Ollendorff syndrome)
C 증후군
카페이병(Caffey disease)
캄포멜리아 커밍 타입(Campomelia Cumming type)
굴지 이형성증(Campomelic dysplasia)
캡프토단지증(Camptobrachydactyly)
굴지증 관절병증 내반고 심낭염 증후군(Camptodactyly arthropathy coxa vara pericarditis syndrome)
굴지증 증후군 과달라하라 2형(Camptodactyly syndrome Guadalajara type 2)
굴지증, 큰 키, 및 청력 손실 증후군(Camptodactyly, tall stature, and hearing loss syndrome)
카무라티-엥겔만병(Camurati-Engelmann disease)
칸투 증후군(Cantu syndrome)
카펜터 증후군(Carpenter syndrome)
손발뼈 골연골종증(Carpotarsal osteochondromatosis)
연골-모발형성 부전증(Cartilage-hair hypoplasia)
카텔 만즈케 증후군(Catel Manzke syndrome)
내골 경화증을 동반한 소뇌 형성부전(Cerebellar hypoplasia with endosteal sclerosis)
뇌-늑골-하악 증후군(Cerebro-costo-mandibular syndrome)
자궁경부 긴장이상(Cervical dystonia)
찰리 M 증후군(Charlie M syndrome)
가족섬유형성이상증(Cherubism)
아동 증후군(CHILD syndrome)
아동기 저인산혈증(Childhood hypophosphatasia)
연골 석회화증(Chondrocalcinosis) 2
연골이형성증 블롬스트랜트형(Chondrodysplasia Blomstrand type)
점상 연골이형성증 1, X-연관 열성(Chondrodysplasia punctata 1, X-linked recessive)
점상 연골이형성증 셰필드형(Chondrodysplasia punctata Sheffield type)
관절 탈구를 동반한 연골이형성증, GPAPP형(Chondrodysplasia with joint dislocations, GPAPP type)
연골이형성증, 그레베형(Chondrodysplasia, Grebe type)
연골육종(Chondrosarcoma)
척색종(Chordoma)
지방이영양증(lipodystrophy) 및 체온 상승을 동반한 만성 비정형 호중구성 피부병(Chronic atypical neutrophilic dermatosis)
만성 재발성 다발성 골수염(Chronic recurrent multifocal osteomyelitis)
파열 수 부재 경골(Cleft hand absent tibia)
쇄골두개 이형성증(Cleidocranial dysplasia)
쇄골두개 이형성증 열성 형태(Cleidocranial dysplasia recessive form)
쇄골지근 증후군(Cleidorhizomelic syndrome)
블로베스 증후군(CLOVES syndrome)
미골통(Coccygodynia)
코다스 증후군(CODAS syndrome)
코핀-시리스 증후군(Coffin-Siris syndrome)
COG1-CDG (CDG-IIg)
콜 카펜터 증후군(Cole Carpenter syndrome)
콜라겐병증 2형 알파 1(Collagenopathy type 2 alpha 1)
쇄골의 응축성 골염(Condensing osteitis of the clavicle)
시토크롬 P450 산화환원효소 결핍증(cytochrome P450 oxidoreductase deficiency)으로 인한 선천성 부신 과형성(Congenital adrenal hyperplasia)
선천성 수축성 거미가락증(Congenital contractural arachnodactyly)
선천성 대퇴골 결손(Congenital femoral deficiency)
선천성 원발성 실어증(Congenital primary aphakia)
선천성 요척골 유합증(Congenital radioulnar synostosis)
코넬리아 드 랑에 증후군(Cornelia de Lange syndrome)
커즌 증후군(Cousin syndrome)
두개골간 이형성증(Craniodiaphyseal dysplasia)
두개외배엽 이형성증(Cranioectodermal dysplasia)
골간 증식(diaphyseal hyperplasia)을 동반한 두개안면 골형성부전증(Craniofacial dysostosis)
두개안면 유합장애(Craniofacial dyssynostosis)
두개전두비골 이형성증(Craniofrontonasal dysplasia)
두개골간단 이형성증(Craniometaphyseal dysplasia), 상염색체 우성
두개골간단 이형성증, 상염색체 열성
두개골유합증(Craniosynostosis), 항문 기형(anal anomalies), 및 한공각화증(porokeratosis)
두개종뇌강 이형성증(Craniotelencephalic dysplasia)
크루존 증후군(Crouzon syndrome)
컬러-존스 증후군(Culler-Jones syndrome)
큐라리노 트라이어드(Currarino triad)
커리 존스 증후군(Curry Jones syndrome)
체코 이형성증 중족골 유형(Czech dysplasia metatarsal type)
축후 다지증(postaxial polydactyly)을 동반한 댄디-워커 기형(Dandy-Walker malformation)
시상 두개골유합증(sagittal craniosynostosis)및 수두증(hydrocephalus)을 동반한 댄디-워커 기형
인터루킨-1 수용체 길항제의 결핍(Deficiency of interleukin-1 receptor antagonist)
지연된 막성 두개골 골화(Delayed membranous cranial ossification)
치상핵적핵-담창구루이체 위축증(Dentatorubral-pallidoluysian atrophy)
드뷔쿠아 증후군(Desbuquois syndrome)
데스모스테롤증(Desmosterolosis)
악성 섬유성 조직구종(malignant fibrous histiocytoma)을 동반한 골간 수질 협착증(Diaphyseal medullary stenosis)
이영양성 이형성증(Diastrophic dysplasia)
디히드로피리미딘 탈수소효소 결핍증(Dihydropyrimidine dehydrogenase deficiency) - 희귀 질환이 아님
다이그브-멜키오르-클라우젠 이형성증(Dyggve-Melchior-Clausen syndrome)
이상 연골 골형성증 신염(Dyschondrosteosis nephritis)
디스페린병증(Dysferlinopathy)
이상골경화증(Dysosteosclerosis)
편지성 골단 이형성증(Dysplasia epiphysealis hemimelica)
분절장애 이형성증 롤랑-드뷔쿠아 유형(Dyssegmental dysplasia Rolland-Desbuquois type)
분절장애 이형성증 실버만-핸드메이커 유형(Dyssegmental dysplasia Silverman-Handmaker type)
DYT-GNAL
EEC 증후군
EEM 증후군
엘리스-반 클레벨드 증후군(Ellis-Van Creveld syndrome)
골부착부염증-관련 소아 특발성 관절염(Enthesitis-related juvenile idiopathic arthritis)
근이영양증(muscular dystrophy)을 동반한 단순 수포성 표피박리증(Epidermolysa bullosa simplex)
조기 발병 진성 당뇨병(early-onset diabetes mellitus)을 동반한 다발성 골단 이형성증(Epiphyseal dysplasia multiple)
에드하임-체스터병(Erdheim-Chester disease)
유잉 육종(Ewing sarcoma)
대퇴골두의 가족성 무혈성 괴사(Familial avascular necrosis of the femoral head)
가족성 감기 자가염증 증후군(Familial cold autoinflammatory syndrome)
가족성 저칼슘뇨성 고칼슘혈증 1형(Familial hypocalciuric hypercalcemia type 1)
가족성 저칼슘뇨성 고칼슘혈증 2형
가족성 저칼슘뇨성 고칼슘혈증 3형
가족성 지중해열(Familial Mediterranean fever)
가족성 해리성 골연골염(Familial osteochondritis dissecans)
가족성 종양성 석회화(Familial tumoral calcinosis)
판코니 빈혈(Fanconi anemia)
파인골드 증후군(Feingold syndrome)
펠티 증후군(Felty's syndrome)
대퇴부 안면 증후군(Femoral facial syndrome)
단지 지결손증(monodactylous ectrodactyly)을 동반한 대퇴골 이열증(Femur bifid)
대퇴골 비골 척골 증후군(Femur fibula ulna syndrome)
태아 탈리도미드 증후군(Fetal thalidomide syndrome)
섬유연골형성(Fibrochondrogenesis)
진행성 골화성 섬유이형성증(Fibrodysplasia ossificans progressiva)
비골 무형성 지결손증(Fibular aplasia ectrodactyly)
비골 무형성증(Fibular aplasia), 경골 캄포멜리아(tibial campomelia), 및 올리고합지증 증후군(oligosyndactyly syndrome)
비골 반지증(Fibular hemimelia)
비골 형성부전(Fibular hypoplasia) 및 복합단지증(complex brachydactyly)
필리피 증후군(Filippi syndrome)
피츠시몬스-길버트 증후군(Fitzsimmons-Guilbert syndrome)
국소 분절성 사구체경화증(Focal segmental glomerulosclerosis)
프랭크 터하르 증후군(Frank Ter Haar syndrome)
프라이베르그병(Freiberg's disease)
전두안면비골 이형성증(Frontofacionasal dysplasia)
전두골간단 이형성증(Frontometaphyseal dysplasia)
전두비골 이형성증(Frontonasal dysplasia)
탈모증(alopecia) 및 생식기 기형(genital anomaly)을 동반한 전두비골 이형성증 - 전두비골 이형성증 참조
전두비골 이형성증-중증 소안구증(severe microphthalmia)-중증 안면 개열 증후군(facial clefting syndrome) - 전두비골 이형성증 참조
프론토리니(Frontorhiny) - 전두비골 이형성증 참조
프린스 호프켄스 파브리 증후군(Fryns Hofkens Fabry syndrome)
푸코시다증(Fucosidosis)
푸어만 증후군(Fuhrmann syndrome)
갈락토시알리도증(Galactosialidosis)
1형 고셔병(Gaucher disease type 1)
3형 고셔병
젤레오피직 왜소증(Geleophysic dwarfism)
생식기 슬개골 증후군(Genitopatellar syndrome)
제노아 증후군(Genoa syndrome)
유전연골종증(Genochondromatosis)
골이형성 노인성 피부(Geroderma osteodysplastica)
고살 혈액골간 이형성증 증후군(Ghosal hematodiaphyseal dysplasia syndrome)
뼈의 거대 세포 종양(Giant cell tumor of bone)
GM1 강글리오시드증 1형(GM1 gangliosidosis type 1)
GM1 강글리오시드증 2형
GM1 강글리오시드증 3형
골든하르병(Goldenhar disease)
고함병(Gorham's disease)
가냘픈 뼈(Gracile bone) 이형성증
그랜트 증후군(Grant syndrome)
그린버그 이형성증(Greenberg dysplasia)
그리그 두부다합지 증후군(Greig cephalopolysyndactyly syndrome)
구리에리 증후군(Gurrieri syndrome)
할러만-스트레이프 증후군(Hallermann-Streiff syndrome)
수족 자궁 증후군(Hand foot uterus syndrome0
한하르트 증후군(Hanhart syndrome)
심장-손 증후군, 슬로베니아 유형(Heart-hand syndrome, Slovenian type)
심장-손 증후군, 스페인 유형(Heart-hand syndrome, Spanish type
반안면 왜소증(Hemifacial microsomia)
반안면 근이형성증(Hemifacial myohyperplasia)
유전성 항트롬빈 결핍(Hereditary antithrombin deficiency)
유전성 다발성 골연골종(Hereditary multiple osteochondromas)
홀트-오람 증후군(Holt-Oram syndrome)
헌터-맥알파인 증후군(Hunter-McAlpine syndrome)
헐러 증후군(Hurler syndrome)
헐러-샤이에 증후군(Hurler-Scheie syndrome)
유리질 섬유종증 증후군(Hyaline fibromatosis syndrome)
고-IgD 증후군(Hyper-IgD syndrome)
전신성 피질성 과골증(Hyperostosis corticalis generalisata)
고인산혈증 가족성 종양성 석회화(Hyperphosphatemic familial tumoral calcinosis)
저연골형성증(Hypochondroplasia)
저인산증(Hypophosphatasia)
저인산혈 구루병(Hypophosphatemic rickets)
I 세포 질환(I cell disease)
IMAGe 증후군(IMAGe syndrome)
구인두 막힘-늑골척추 기형(Imperforate oropharynx-costo vetebral anomalies)
봉입체 근병증 3(Inclusion body myopathy 3)
조기-발병 파제트병(early-onset Paget disease) 및 전측두엽 치매(frontotemporal dementia)를 동반한 봉입체 근병증
봉입체 근염(Inclusion body myositis)
지적 장애-경련-외지증 증후군(Intellectual disability-spasticity-ectrodactyly syndrome)
1형 홍채앞방각발생장애(Iridogonidysgenesis type 1)
IVIC 증후군(IVIC syndrome)
잭슨-바이스 증후군(Jackson-Weiss syndrome)
얀센형 골단부 연골이형성증(Jansen type metaphyseal chondrodysplasia)
쥐느 증후군(Jeune syndrome)
존슨 먼슨 증후군(Johnson Munson syndrome)
청소년 피부근염(Juvenile dermatomyositis)
청소년 골다공증(Juvenile osteoporosis)
청소년 파제트병(Juvenile Paget disease)
카플란 플라우추 피치 증후군(Kaplan Plauchu Fitch syndrome)
케니-카페이 증후군 1형(Kenny-Caffey syndrome type 1)
케니-카페이 증후군 2형(Kenny-Caffey syndrome type 2)
카이텔 증후군(Keutel syndrome)
키엔벡병(Kienbock's disease)
클라이너 홈즈 증후군(Kleiner Holmes syndrome)
클리펠 페일 증후군(Klippel Feil syndrome)
클리펠-트레노네이 증후군(Klippel-Trenaunay syndrome)
니스트 이형성증(Kniest dysplasia)
니스트 유사 치명적 이형성증(Kniest like dysplasia lethal)
쾰러병(Kohler disease)
키포멜성 이형성증(Kyphomelic dysplasia)
눈물관-귓바퀴-치아-손발가락 증후군(Lacrimo-auriculo-dento-digital (Lacrimo-auriculo-dento-digital syndrome)
시옷봉합 유합증(Lambdoid synostosis)
램버트 이튼 근무력증 증후군(Lambert Eaton myasthenic syndrome)
랑거 중간체 이형성증(Langer mesomelic dysplasia)
라센 증후군(Larsen syndrome)
측면 수막류 증후군(Lateral meningocele syndrome)
로린-샌드로우 증후군(Laurin-Sandrow syndrome)
레그-칼베-페르트병(Legg-Calve-Perthes disease)
렌즈 마세브스키 과골성 왜소증(Lenz Majewski hyperostotic dwarfism)
레리 플레노골증(Leri pleonosteosis)
레리 웨일 연골이상증(Leri Weill dyschondrosteosis)
치명적인 연골이형성증 모어먼 유형(Lethal chondrodysplasia Moerman type)
치명적인 연골이형성증 셀러 유형(Lethal chondrodysplasia Seller type)
거근 증후군(Levator syndrome)
지대형 근이영양증 1A형(Limb-girdle muscular dystrophy type 1A)
지대형 근이영양증 2A형
지대형 근이영양증 2B형
지대형 근이영양증 2E형
지대형 근이영양증 2F형
지대형 근이영양증 2H형
지대형 근이영양증 2C형
지대형 근이영양증 2D형
사지-유방 증후군(Limb-mammary syndrome)
로이스-디에츠 증후군(Loeys-Dietz syndrome)
로리 매클린 증후군(Lowry Maclean syndrome)
로리 우드 증후군(Lowry Wood syndrome)
대식성 근막염(Macrophagic myofasciitis)
마푸치 증후군(Maffucci syndrome)
매직 증후군(MAGIC syndrome)
마지드 증후군(Majeed syndrome)
A형 지방이영양증(type A lipodystrophy)을 동반한 하악견골 이형성증(Mandibuloacral dysplasia)
B형 지방이영양증을 동반한 하악견골 이형성증
소두증(microcephaly)을 동반한 하악안면 골형성부전증(Mandibulofacial dysostosis)
만노시다증, 베타 A, 리소좀(Mannosidosis, beta A, lysosomal)
마셜 증후군(Marshall syndrome)
마셜-스미스 증후군(Marshall-Smith syndrome)
맥큔-올브라이트 증후군(McCune-Albright syndrome)
메켈 증후군(Meckel syndrome)
얼굴 피부와 코 점막의 폴립을 동반한 윗입술 중앙 갈라짐(Median cleft of upper lip with polyps of facial skin and nasal mucosa)
마이어-골린 증후군(Meier-Gorlin syndrome)
멜닉-니들 증후군(Melnick-Needles syndrome)
유선상과골증(Melorheostosis)
골반문증(osteopoikilosis)을 동반한 유선상과골증
중간지절 형성 부전-골유합 증후군(Mesomelia-synostoses syndrome)
중간지절성 왜소증 구개열 굴지증(Mesomelic dwarfism cleft palate camptodactyly)
중간지절성 이형성증 칸타푸트라형(Mesomelic dysplasia Kantaputra type)
중간지절성 이형성증 사바리라얀형(Mesomelic dysplasia Savarirayan type)
중수골 4번 및 5번 융합(Metacarpals 4 and 5 fusion)
메타연골종증(Metachondromatosis)
골간단 말단낭종이형성증(Metaphyseal acroscyphodysplasia)
골간단 연골이형성증 슈미드형(Metaphyseal chondrodysplasia Schmid type)
골간단 연골이형성증 스파르형(Metaphyseal chondrodysplasia Spahr type)
골간단 골형성부전증-지적 장애-전도성 난청 증후군(Metaphyseal dysostosis-intellectual disability-conductive deafness syndrome)
골간단 이형성증 상악 저형성증 단지증(Metaphyseal dysplasia maxillary hypoplasia brachydactyly)
감모증(hypotrichosis) 없는 골간단 이형성증
영양위축성 이형성증(Metatropic dysplasia)
메발론 산뇨증(Mevalonic aciduria)
소두증 골이형성 원시 왜소증 1형(Microcephalic osteodysplastic primordial dwarfism type 1)
소두증 골이형성 원시 왜소증 2형
소두증 원시 왜소증 토리엘로형(Microcephalic primordial dwarfism Toriello type)
반안면 왜소증 요골 결함(Microsomia hemifacial radial defects)
밀러 증후군(Miller syndrome)
외안근마비(external ophthalmoplegia)를 동반한 소핵 근병증(Minicore myopathy)
단일사지 근위축증(Monomelic amyotrophy)
머클-웰스 증후군(Muckle-Wells syndrome)
점액지질증 III 알파/베타(Mucolipidosis III alpha/beta)
점액지질증 4형(Mucolipidosis type 4)
뮤코다당질축적증 III형 (Mucopolysaccharidosis type III)
뮤코다당질축적증 IIIA형
뮤코다당질축적증 IIIB형
뮤코다당질축적증 IIIC형
뮤코다당질축적증 IIID형
뮤코다당질축적증 IV형
뮤코다당질축적증 IVA형
뮤코다당질축적증 VII형
뮌케 증후군(Muenke Syndrome)
다심성 수근골족근골 골용해 증후군(Multicentric carpotarsal osteolysis syndrome)
다발성 골단 이형성증(Multiple epiphyseal dysplasia)
다발성 골단 이형성증 2
다중 술파타제 결핍(Multiple sulfatase deficiency)
다발성 골융합 증후군(Multiple synostoses syndrome) 1
다계통 위축(Multiple system atrophy)
근이영양증(Muscular dystrophy)
근이영양증, 선천성, 거대원형(Muscular dystrophy, congenital, megaconial type)
MYH7-관련 어깨종아리 근병증(MYH7-related scapuloperoneal myopathy)
마이어 증후군(Myhre syndrome)
미오신병증(Myosinopathies)
미오스타틴-관련 근육 비대(Myostatin-related muscle hypertrophy)
근긴장성 이영양증(Myotonic dystrophy)
근긴장성 이영양증 2
네이거 사지안면 골형성부전증(Nager acrofacial dysostosis)
손발톱 슬개골 증후군(Nail-patella syndrome)
나카조 니시무라 증후군(Nakajo Nishimura syndrome)
신생아 발병 다기관 염증성 질환(Neonatal Onset Multisystem Inflammatory disease)
신생아 중증 부갑상선기능항진증(Neonatal severe hyperparathyroidism)
네스토-길러모 조로증 증후군(Nestor-guillermo progeria syndrome)
신경섬유종증 1형(Neurofibromatosis type 1)
니베르겔트 증후군(Nievergelt syndrome)
정상 인산염의 가족성 종양성 석회화(Normophosphatemic familial tumoral calcinosis)
뒤통수 뿔 증후군(Occipital horn)
안구귓바퀴전두비골 증후군(Oculoauriculofrontonasal syndrome)
안구치아손발가락 이형성증(Oculodentodigital dysplasia)
안구상악안면 골형성부전증(Oculomaxillofacial dysostosis)
안인두 근이영양증(Oculopharyngeal muscular dystrophy)
올리버 증후군(Oliver syndrome)
올리에병(Ollier disease)
견갑이형성증(Omodysplasia) 1
견갑이형성증 2
골화지연이형성증(Opsismodysplasia)
입얼굴손발가락 증후군(Orofaciodigital syndrome) 1
입얼굴손발가락 증후군 10
입얼굴손발가락 증후군 11
입얼굴손발가락 증후군 2
입얼굴손발가락 증후군 3
입얼굴손발가락 증후군 4
입얼굴손발가락 증후군 6
입얼굴손발가락 증후군 8
입얼굴손발가락 증후군 9
오슬람 증후군(Oslam syndrome)
OSMED 증후군(Syndrome)
척추의 후종인대 골화증(Ossification of the posterior longitudinal ligament of the spine) - 희귀 질환이 아님
가족성 손가락의 골관절병증(Osteoarthropathy of fingers familial)
해리성 골연골염(Osteochondritis dissecans)
골이형성증 가족성 앤더슨형(Osteodysplasia familial Anderson type)
댕크스 메인 및 코즐로브스키의 조숙한 골이형성술(Osteodysplasty precocious of Danks Mayne and Kozlowski)
골섬유이형성증
골형성 부전증 I형(Osteogenesis imperfecta type I)
골형성 부전증 II형
골형성 부전증 III형
골형성 부전증 IV형
골형성 부전증 V형
골형성 부전증 VI형
골성 이형성증(Osteoglophonic dysplasia)
오스테오메소피크노시스(Osteomesopyknosis)
두개골 경화증(cranial sclerosis)을 동반한 선조체 골병증(Osteopathia striata)
골감소증(Osteopenia) 및 희박한 모발(sparse hair)
골화석증 상염색체 우성 1형(Osteopetrosis autosomal dominant type 1)
골화석증 상염색체 우성 2형
골화석증 상염색체 열성 3(Osteopetrosis autosomal recessive 3)
골화석증 상염색체 열성 4(Osteopetrosis autosomal recessive 4)
골화석증 상염색체 열성 7(Osteopetrosis autosomal recessive 7)
골반문증(Osteopoikilosis) 및 누낭염(dacryocystitis)
Osteoporosis oculocutaneous hypopigmentation syndrome(골다공증 눈피부 저색소침착 증후군)
골다공증-가성교종 증후군(Osteoporosis-pseudoglioma syndrome)
골육종(Osteosarcoma)
이구개지단 증후군 1형(Oto-palato-digital syndrome type 1)
이구개지단 증후군 2형(Oto-palato-digital syndrome type 2)
경피골막증(Pachydermoperiostosis)
팩맨 이형성증(Pacman dysplasia)
팔리스터-홀 증후군(Pallister-Hall syndrome)
선천성 근긴장증(Paramyotonia congenita)
극단성 왜소증(Parastremmatic dwarfism)
PARC 증후군
파크스 웨버 증후군(Parkes Weber syndrome)
패터슨-스티븐슨-폰테인 증후군(Patterson-Stevenson-Fontaine syndrome)
하지의 골반 이형성증 관절만곡증(Pelvic dysplasia arthrogryposis of lower limbs)
주기적인 발열(Periodic fever), 아프타성 구내염(aphthous stomatitis), 인두염(pharyngitis) 및 선염(adenitis)
파이퍼형 심두개 증후군(Pfeiffer-type cardiocranial syndrome)
단지증 지결손증 난청 부비동 부정맥(Phocomelia ectrodactyly deafness sinus arrhythmia)
색소성 융모결절성 윤활막염(Pigmented villonodular synovitis)
이상근 증후군(Piriformis syndrome)
편평척추 치명적인 골격 이형성증 토런스형(Platyspondylic lethal skeletal dysplasia Torrance type)
염분 갈망(salt craving)을 동반한 다원추 근병증(Pleoconial myopathy)
폴란드 증후군(Poland syndrome)
다낭성 골질환(Polycystic bone disease)
경화성 백질뇌증(sclerosing leukoencephalopathy)을 동반한 다낭성 지방막성 골이형성증(Polycystic lipomembranous osteodysplasia)
다지증 근시 증후군(Polydactyly myopia syndrome)
다골성 골용해 이형성증, 유전 팽창성(Polyostotic osteolytic dysplasia, hereditary expansile)
칼륨 악화 근긴장증(Potassium aggravated myotonia)
축전 결핍증(Preaxial deficiency), 축후 다지증(postaxial polydactyly) 및 요도하열(hypospadias)
축전 다지증 1형(Preaxial polydactyly type 1)
축전 다지증 2형
축전 다지증 3형
축전 다지증 4형
조로증(Progeria)
진행성 골 이형성증(Progressive osseous heteroplasia)
진행성 가성류마티스 이형성증(Progressive pseudorheumatoid dysplasia)
단백질 C 결핍(Protein C deficiency) - 희귀 질환이 아님
프로테우스 증후군(Proteus syndrome)
근위부 지절유합증(Proximal symphalangism)
가성연골무형성증(Pseudoachondroplasia)
슈도아미노프테린 증후군(Pseudoaminopterin syndrome)
가성이영양증 이형성증(Pseudodiastrophic dysplasia)
가성 부갑상선기능저하증 1A형(Pseudohypoparathyroidism type 1A)
가성 부갑상선기능저하증 1C형(Pseudohypoparathyroidism type 1C)
가성 부갑상선기능저하증(Pseudopseudohypoparathyroidism)
건선 소아 특발성 관절염(Psoriatic juvenile idiopathic arthritis)
피크노디소토시스(Pycnodysostosis)
결여연골무발생증(Pyknoachondrogenesis)
파일병(Pyle disease)
괴저성 농피증(Pyoderma gangrenosum)
화농성 관절염(Pyogenic arthritis), 괴저성 농피증(pyoderma gangrenosum) 및 여드름(acne)
요척골 유합증 1형(Radio-ulnar synostosis type 1) - 선천성 요척골 유합증 참조
요척골 유합증 2형 - 선천성 요척골 유합증 참조
요척골 유합증-소두증-척추측만증 증후군(Radioulnar synostosis-microcephaly-scoliosis syndrome)
레인 증후군(Raine syndrome)
라몬 증후군(Ramon Syndrome)
라파딜리노 증후군(Rapadilino syndrome)
반응성 관절염(Reactive arthritis)
신장 이형성증(Renal dysplasia), 망막 색소 이영양증(retinal pigmentary dystrophy), 소뇌 운동실조증(cerebellar ataxia) 및 골격 이형성증(skeletal dysplasia)
전신 증상(systemic manifestations)을 동반한 대뇌 백질이영양증(cerebral leukodystrophy)을 동반한 망막 혈관병증(Retinal vasculopathy)
지근 연골이형성증 점상 1형(Rhizomelic chondrodysplasia punctata type 1)
지근 이형성증 패터슨 라우리형(Rhizomelic dysplasia Patterson Lowry type)
지근 증후군(Rhizomelic syndrome)
리치에리 코스타 다 실바 증후군(Richieri Costa Da Silva syndrome)
경직 척추 증후군(Rigid spine syndrome)
로버츠 증후군(Roberts syndrome)
세트리-크라존 증후군(Saethre-Chotzen syndrome)
살라병(Salla disease) - 유리 시알산 축적병(Free sialic acid storage disease) 참조
SAPHO 증후군
사르코이드증(Sarcoidosis) - 희귀 질환이 아님
세이 마이어 증후군(Say Meyer syndrome)
세이-필드-콜드웰 증후군(Say-Field-Coldwell syndrome)
두피 결손 후축 다지증(Scalp defects postaxial polydactyly)
SCARF 증후군
샤이에 증후군(Scheie syndrome)
슈어만병(Scheuermann disease)
쉼케 면역골성 이형성증(Schimke immunoosseous dysplasia)
쉰젤 기디온 증후군(Schinzel Giedion syndrome)
쉰젤형 해표상지증(Schinzel type phocomelia)
슈네켄베켄 이형성증(Schneckenbecken dysplasia)
슈니츨러 증후군(Schnitzler syndrome)
슈바르츠 잼펠 증후군(Schwartz Jampel syndrome)
골경화증(Sclerosteosis)
세켈 증후군(Seckel syndrome)
세피압테린 환원효소 결핍증(Sepiapterin reductase deficiency)
짧은 늑골-다지증 증후군 3형(Short rib-polydactyly syndrome type 3)
짧은 늑골-다지증 증후군 1형
짧은 늑골-다지증 증후군 4형
짧은 늑골-다지증 증후군, 마제스키형(Short rib-polydactyly syndrome, Majewski type)
단신 증후군 브뤼셀형(Short stature syndrome, Brussels type)
슈프린첸-골드베르크 두개골유합증 증후군(Shprintzen-Goldberg craniosynostosis syndrome)
슈와크만-다이아몬드 증후군(Shwachman-Diamond syndrome)
겸상 베타 지중해빈혈(Sickle beta thalassemia)
겸상 적혈구 빈혈(Sickle cell anemia)
침묵 증후군(Sillence syndrome)
싱글톤-메르텐 증후군(Singleton-Merten syndrome)
대퇴골두 골단 분리증(Slipped capital femoral epiphysis) - 희귀 질환이 아님
작은 슬개골 증후군(Small patella syndrome)
스미스 맥코트 이형성증(Smith McCort dysplasia)
스미스-렘리-오피츠 증후군(Smith-Lemli-Opitz syndrome)
소토스 증후군(Sotos syndrome)
회전타원체 근병증(Spheroid body myopathy)
척수성 근위축 류큐형(Spinal muscular atrophy Ryukyuan type)
선천성 골절(congenital bone fractures)을 동반한 1형 척수성 근위축증(Spinal muscular atrophy type 1)
3형 척수성 근위축증(Spinal muscular atrophy type 3)
4형 척수성 근위축증
호흡 곤란(respiratory distress)을 동반한 척수성 근위축증 1
비장생식선 융합 사지 결함 소악증(Splenogonadal fusion limb defects micrognatia)
손 발가락 결손증(Split hand foot malformation)
열지증 안진증(Split hand split foot nystagmus)
척추성 굴지 (Spondylocamptodactyly)
척추수족골 유합 증후군(Spondylocarpotarsal synostosis syndrome)
척추늑골 골형성부전증(Spondylocostal dysostosis) 1 - 척추늑골 골형성부전증 참조
척추늑골 골형성부전증 2 - 척추늑골 골형성부전증 참조
척추늑골 골형성부전증 3 - 척추늑골 골형성부전증 참조
척추늑골 골형성부전증 4 - 척추늑골 골형성부전증 참조
척추늑골 골형성부전증 5 - 척추늑골 골형성부전증 참조
척추늑골 골형성부전증 6 - 척추늑골 골형성부전증 참조
척추이형성 엘러스-단로스 증후군(Spondylodysplastic Ehlers-Danlos syndrome)
면역 조절장애(immune dysregulation)를 동반한 척추내연골 이형성증(Spondyloenchondrodysplasia)
척추골단골간단 이형성층 제네비에브형(Spondyloepimetaphyseal dysplasia Genevieve type)
척추골단골간단 이형성층 관절 이완(Spondyloepimetaphyseal dysplasia joint laxity)
척추골단골간단 이형성층 마트릴린-3 관련(Spondyloepimetaphyseal dysplasia Matrilin-3 related)
척추골단골간단 이형성층 미주리형(Spondyloepimetaphyseal dysplasia Missouri type)
척추골단골간단 이형성층 소햇형(Spondyloepimetaphyseal dysplasia Shohat type)
척추골단골간단 이형성증 스포나스트림형(Spondyloepimetaphyseal dysplasia Sponastrime type)
척추골단골간단 이형성증 스트루드빅형(Spondyloepimetaphyseal dysplasia Strudwick type)
감모증(hypotrichosis)을 동반한 척추골단골간단 이형성증(Spondyloepimetaphyseal dysplasia)
다발성 탈구(multiple dislocation)를 동반한 척추골단골간단 이형성증
X-연관 척추골단골간단 이형성증(Spondyloepimetaphyseal dysplasia X-linked)
어그래칸형 척추골단골간단 이형성증(Spondyloepimetaphyseal dysplasia, Aggrecan type)
선천성 척추골단 이형성증(Spondyloepiphyseal dysplasia congenita)
마로형 척추골단 이형성증 마로토형(Spondyloepiphyseal dysplasia Maroteaux type)
X-연관 말기발현형 척추골단 이형성증(Spondyloepiphyseal dysplasia tarda X-linked)
척추골단 이형성증-단지증 및 특유의 언어(Spondyloepiphyseal dysplasia-brachydactyly and distinctive speech)
척추골간단골단 이형성증 짧은 팔다리-손 유형(Spondylometaepiphyseal dysplasia short limb-hand type)
척추골간단 이형성증 알제리형(Spondylometaphyseal dysplasia Algerian type)
척추골간단 이형성증 코너 골절 유형(Spondylometaphyseal dysplasia corner fracture type)
척추골간단 이형성증 세다가티안형(Spondylometaphyseal dysplasia Sedaghatian type)
A4형 척추골간단 이형성증(Spondylometaphyseal dysplasia type A4)
콘-로드 이영양증(cone-rod dystrophy)을 동반한 척추골간단 이형성증(Spondylometaphyseal dysplasia)
상아질형성 부전증(dentinogenesis imperfecta)을 동반한 척추골간단 이형성증
X-연관 척추골간단 이형성증(Spondylometaphyseal dysplasia X-linked)
코즐로브스키형 척추골간단 이형성증(Spondylometaphyseal dysplasia, Kozlowski type)
척추말초 이형성증(Spondyloperipheral dysplasia)
척추흉부 골형성부전증(Spondylothoracic dysostosis)
스프렝겔 변형(Sprengel deformity)
STAR 증후군
스티프맨 증후군(Stiff person syndrome)
스투브-비데만 증후군(Stuve-Wiedemann syndrome)
손과 발의 다중 기형을 동반한 지절유합증(Symphalangism with multiple anomalies of hands and feet)
세라니 렌즈형 합지증(Syndactyly Cenani Lenz type)
3형 합지증(Syndactyly type 3)
5형 합지증(Syndactyly type 5)
9형 합지증(Syndactyly type 9)
합지증-다지증-귓불 증후군(Syndactyly-polydactyly-earlobe syndrome)
악골유합 다발성 기형(Syngnathia multiple anomalies)
윤활막 연골종증(Synovial Chondromatosis)
전신 발병 소아 특발성 관절염(Systemic onset juvenile idiopathic arthritis)
타르 증후군(TAR syndrome)
타르프 증후군(TARP syndrome)
발목 손목 연합 증후군(Tarsal carpal coalition syndrome)
족근관 증후군(Tarsal tunnel syndrome)
테트라-아멜리아 증후군(Tetra-amelia syndrome)
테트라아멜리아-다발성 기형 증후군(Tetraamelia-multiple malformations syndrome)
사지 단지(Tetramelic monodactyly)
1형 치사성 이형성증(Thanatophoric dysplasia type 1)
2형 치사성 이형성증(Thanatophoric dysplasia type 2)
흉부 이형성증 수두증 증후군(Thoracic dysplasia hydrocephalus syndrome)
흉부인두골반 이형성증(Thoracolaryngopelvic dysplasia)
다지증 지주막 낭종이 없는 경골(Tibia absent polydactyly arachnoid cyst)
티체 증후군(Tietze syndrome)
TMEM165-CDG (CDG-IIk)
타운즈-브록스 증후군(Townes-Brocks syndrome)
트리처 콜린스 증후군(Treacher Collins syndrome)
모발-치아-골 증후군(Tricho-dento-osseous syndrome)
모발간장 증후군(Trichohepatoenteric syndrome)
모발비지절증후군 1형(Trichorhinophalangeal syndrome type 1)
모발비지절증후군 2형
모발비지절증후군 3형
삼궁 단두증(Trigono Brachycephaly), 구근이열코(bulbous bifid nose), 소악증(micrognathia), 손과 발의 이상(abnormalities of the hands and feet)
삼지절 엄지 근외지증(Triphalangeal thumbs brachyectrodactyly)
하기의 상완골 무형성증의 활차(Trochlea of the humerus aplasia)
활차 이형성증(Trochlear dysplasia)
트로이어 증후군(Troyer syndrome)
관상 골재 근병증(Tubular aggregate myopathy)
종양 괴사 인자 수용체-연관 주기적 증후군(Tumor necrosis factor receptor-associated periodic syndrome)
하기의 척골 및 비골, 발육부전(Ulna and fibula, hypoplasia of)
척골형성부전-지적장애 증후군(Ulna hypoplasia-intellectual disability syndrome)
척골 골간단 이형성 증후군(Ulna metaphyseal dysplasia syndrome)
발의 척골 발육 부전 가재 발톱 기형(Ulnar hypoplasia lobster claw deformity of feet)
척골-유방 증후군(Ulnar-mammary syndrome)
미분화 다형성 육종(Undifferentiated pleomorphic sarcoma)
우핑턴병(Upington disease)
베를로스 부르귀논 증후군(Verloes Bourguignon syndrome)
빌조엔 칼리스 보게 증후군(Viljoen Kallis Voges syndrome)
워먼 멀리켄 헤이워드 증후군(Warman Mulliken Hayward syndrome)
위버 증후군(Weaver syndrome)
웨일-마르케사니 증후군(Weill-Marchesani syndrome)
바이센바허-쯔바이뮐러 증후군(Weissenbacher-Zweymuller syndrome)
웨이어 사지안면 골형성부전증(Weyers acrofacial dysostosis)
빌더방크 증후군(Wildervanck syndrome)
워스형 상염색체 우성 골경화증(Worth type autosomal dominant osteosclerosis)
주름진 피부 증후군(Wrinkly skin syndrome)
X-연관 우성 점상연골이형성증 2(X-linked dominant chondro이형성증 punctata 2)
X-연관 우성 견갑골 근병증(X-linked dominant scapuloperoneal myopathy)
X-연관 저인산혈증(X-linked hypophosphatemia)
X-연관 지적 장애-사두증 증후군(X-linked intellectual disability-plagiocephaly syndrome)
X-연관 골격 이형성증-지적 장애 증후군(X-linked skeletal dysplasia-intellectual disability syndrome)
유니스-바론 증후군(Yunis-Varon syndrome)
본 발명은 하기 실시예를 참조하여 하기에 추가로 기재된다.
실시예
재료 및 방법
비시클릭 펩티드 리간드의 제조 (일반적인 방법)
표준 Fmoc (9-플루오레닐메틸옥시카르보닐) 고상 펩티드 합성을 사용하여, 수동 커플링 (대규모용)에 의해 또는 비오티지 시로II(Biotage SyroII) 자동 펩티드 합성기 (소규모용)를 사용하여, 링크(Rink) 아미드 수지 상에서 비사이클 펩티드를 합성하였다. 수지로부터의 TFA-기반 절단 후, 펩티드를 디에틸 에테르로 침전시키고 50:50 아세토니트릴/물에 용해시켰다. 이어서 중탄산암모늄 (100 mM)을 염기로서 사용하여, 조 펩티드 (~1 mM 농도)를 1.3 당량의 스캐폴드로 고리화하였다. 스캐폴드의 고리화의 완료는 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화 비행시간(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight) (MALDI-TOF) 또는 LC-MS에 의해 결정되었다. 일단 완료되면, N-아세틸 시스테인 (펩티드에 대해 10 당량)을 사용하여 고리화 반응을 켄칭하고, 용액을 동결건조시켰다. 잔류물을 적절한 용매에 용해시키고 RP-HPLC에 의해 정제하였다. 순도가 충분하고 분자량이 정확한 펩티드 분획 (MALDI-TOF 및 HPLC 또는 LC-MS에 의해 확인됨)을 풀링하고 동결건조시켰다. 농도는 Trp/Tyr 함량을 기반으로 한, 280 nm에서의 흡광 계수를 사용하여 UV 흡수에 의해 결정되었다.
달리 명시되지 않는 한, 모든 아미노산은 L-배위에서 사용되었다.
생물학적 데이터
1. TfR1직접 결합 검정
인간 또는 시노몰구스(cynomolgus) TfR1 (Kd)에 대한 본 발명의 펩티드의 친화도는 하기 방법에 따라 형광 편광 검정을 사용하여 결정하였다. 본 발명의 펩티드를 형광 태그 (플루오레세인)로 표지하고 100 mM NaCl, 4 mM CaCl2 및 0.005% P20, pH 7.4를 가진 25 mM HEPES에서 2.5 nM로 희석하였다. TfR1 단백질 (인간: 알앤디 시스템즈(R&D Systems), 2474-TR 또는 아크로 바이오시스템즈(Acro Biosystems), CD1-H5243; 시노(Cyno): 아크로 바이오시스템즈, TFR-C524a)을 펩티드와 동일한 검정 완충제에서 1-5 μM부터 시작하여 적정하여 흑색 벽과 바닥이 있는 낮은 결합 낮은 부피 384-웰 플레이트에서 25 μL의 총 부피에서 1 nM 펩티드를 검정하였다. 검정은 전형적으로 5 μL 검정 완충제, 10 μL TfR1 단백질 이어서 10 μL 형광 펩티드를 첨가하여 설정하였다. TfR1 단백질의 농도는 1-5 μM에서 시작하는 12가지 상이한 농도를 제공하기 위해 2/1 연속 희석하였다. 측정은 FP 485 520 520 광학 모듈이 장착된 BMG PHERAstar FS에서 25℃에서 웰당 200회 플래시와 0.1초의 위치설정 지연으로 수행되었다. 각각의 웰을 60분 동안 5분마다 측정하였다. 분석에 사용된 수득값은 웰에 단백질이 없는 60분이 끝날 때 각각의 추적자(tracer)에 대해 결정되었다. mP는 Kd 값을 생성하기 위해 이차 방정식을 사용하여 표준 1:1 결합 모델에 피팅되었다. 본 발명의 선택된 펩티드를 상기 언급된 검정에서 시험하고 그 결과를 표 1에 나타냈다:
본 발명의 선택된 펩티드 리간드의 FP 직접 결합
펩티드 리간드 기하평균 Kd (μM) 인간 TfR1 표준 편차 (SD) 기하평균 Kd (μM) 시노몰구스 TfR1 표준 편차 (SD)
BCY12652 0.298 0.215 (n = 9) 0.098 0.035 (n = 3)
BCY12650 0.862 0.118 (n = 3) nd nd
BCY12651 0.971 0.633 (n = 5) nd nd
BCY14474 0.751 2.1419 (n= 2) nd nd
BCY14475 0.078 0.0664 (n= 2) 2.617 0 (n = 1)
BCY14476 0.087 0.0327 (n= 8) 3.6549 0 (n = 1)
BCY15768 0.047 0.0171 (n= 6) 0.70684 0 (n = 1)
BCY15934 0.064 0.0067 (n= 2) nd nd
BCY15937 0.034 0.0000 (n= 1) nd nd
BCY15938 0.060 0.0014 (n= 2) nd nd
BCY15940 0.054 0.0002 (n= 2) nd nd
nd = 결정되지 않음
2. TfR1SPR 결합 검정
비아코어(Biacore) 실험을 수행하여 TfR1에 결합하는 다양한 펩티드의 ka (M-1s-1), kd (s-1), KD (nM) 값을 결정하였다.
재조합 인간 및 시노몰구스 TfR1은 비사이클(Bicycle)로부터 His6-태그부착된 TfR1 (a.a. 89-760) (아크로 바이오시스템즈, CD1-H5243 및 TFR-C524a)로서 입수하였다.
TfR1 펩티드 결합의 분석을 위해, 시행 완충제로서 25 mM HEPES, 0.1M NaCl, 0.05% Tween 20 pH 7.4와 함께 25℃에서 시티바(Cytiva) NTA 칩으로 포획/커플링 접근법을 활용하여 비아코어 T200 또는 S200 기기를 사용하였다. 고정화는 다음과 같이 수행하였다. 칩은 5 mM NiSO4로 활성화하기 전에, 500 mM EDTA (pH 8) 주입으로 사전 평형화되었다. 이어서 표준 아민-커플링 화학을 사용하여 표면을 활성화하였다. 간단히 말하자면, 카르복시메틸 덱스트란 표면은 0.4 M 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC)/0.1 M N-히드록시 숙신이미드 (NHS)의 1:1 비로 활성화되었다. 이어서 TfR1 단백질 (인간 또는 시노몰구스)을 각각 200 nM 및 250 nM으로 시행 완충제로 희석한 후 활성화된 표면에 포획하였다. 잔류 활성화 기를 1 M 에탄올아민 (pH 8.5):HBS-N (1:1)의 7분 주입으로 차단하였다. 참조 표면은 TfR1 단백질 포획 없이 상기와 같이 활성화되고 차단되었다. 포획 수준은 개별 연구 완충제가 25 mM HEPES, 0.1M NaCl, 0.05% Tween 20 pH 7.4 1% DMSO로 변경됨에 따라 1,500-5,000 RU의 범위였다.
5 μM의 최고 펩티드 농도와 6개의 추가 2배 희석액을 사용하여 이 완충제에서 시험 펩티드의 연속 희석액을 준비하였다. SPR 분석은 160초 회합 및 700-800초 해리로 30 μl/min의 유량으로 25℃에서 시행하였다. DMSO 제외 부피 효과에 대한 데이터가 보정되었다. 표준 처리 절차를 사용하여 블랭크 주입 및 참조 표면에 대해 모든 데이터를 이중-참조하고 스크러버(Scrubber) 소프트웨어 버전 2.0c (비오로직 소프트웨어(BioLogic Software))를 사용하여 데이터 처리 및 동역학 피팅을 수행하였다. 데이터는 간단한 1:1 결합 모델을 사용하여 피팅되어 적절한 경우 대량 수송 효과를 허용하였다.
본 발명의 선택된 펩티드를 상기 언급된 검정에서 시험하고 그 결과를 표 2에 나타냈다:
본 발명의 선택된 펩티드 리간드의 SPR 결합
펩티드 리간드 기하평균 Kd (μM) 인간 TfR1 표준 편차 (SD) 기하평균 Kd (μM) 시노몰구스 TfR1 표준 편차 (SD)
BCY12455 65.600 72.8 42.384 34.0
BCY13983 450.0 0 (n = 1) 4580 0 (n = 1)
BCY13986 132.0 148 (n = 4) 2590 0 (n = 1)
BCY15466 32.1 6.7 (n = 4) 1394.3 465.6 (n = 4)
BCY15467 29.5 29.5 (n = 5) 1580.8 516.6 (n = 3)
BCY13989 376.3 44.5 (n = 4) 3440.5 2347.6 (n = 2)
BCY15468 37.8 28.4 (n = 5) 1717.6 2143.6 (n = 4)
BCY15469 54.3 29.9 (n = 4) 2117.7 1347.0 (n = 4)
BCY15470 36.4 16.1 (n = 4) 1615.1 1036.7 (n = 4)
BCY15471 262.9 109.8 (n = 5) 4660 0 (n = 1)
본 발명의 추가로 선택된 펩티드를 상기 언급된 검정에서 시험하고 그 결과를 표 3에 나타냈다:
본 발명의 선택된 펩티드 리간드의 SPR 결합
펩티드 리간드 인간 TfR1 Kd (nM) 시노몰구스 TfR1 Kd (nM)
BCY13989 nd ~11000
BCY 15768 nd 3800
BCY 15769 70 2200
BCY 15771 65 4000
BCY 15772 nd 99000
BCY 15773 178 2600
BCY 15774 nd 41000
BCY 15775 nd NB
BCY 15776 nd NB
BCY 15777 nd NB
BCY 15770 nd >100000
BCY 15891 46 3990
BCY 17992 42 535
BCY 17993 9 235
BCY 18033 nd 589
BCY 18034 25 2080
BCY 18035 77 10300
BCY 18036 422 7310
BCY 17994 6.6, 22 688
BCY 17995 3.4 nd
BCY 18037 11 1080
BCY 18038 9.7 1650
BCY 18039 8.6 819
BCY 17109 3.2 281*/535
BCY 17114 48 845
BCY 17110 15 232
BCY 17111 8.3 907
BCY 17112 4.6 2604
BCY 17113 308 1664
BCY 17115 60 1242
BCY 17116 1 474
BCY 17117 4.2 805
BCY 17118 120 1959
BCY 17119 212 5653
BCY 17120 32 1257
BCY 15468 29 4015
BCY 16048 28 1280
BCY 16049 175 28000
BCY 16035 37 4600
BCY 16047 49 4828
BCY 16039 89 10234
BCY 16036 83 5902
BCY 16033 82 6664
BCY 16038 210 ~10000
BCY 16050 210 25800
BCY 16053 33 3120
BCY 16089 63 7466
BCY 16088 67 5878
BCY 16034 238 25000
BCY 16045 nd 10000
BCY 16046 32 2089
BCY 16051 25 1820
BCY 16031 68 6481
BCY 16079 60 5665
BCY 16029 47 5483
BCY 16052 73 7478
BCY 16032 305 30000
BCY 16550 18 682
BCY 16753 12 1700
BCY 16962 6.1 599
BCY 16963 nd 501
BCY 16964 6.6 514
BCY 16966 11 1900
BCY 16557 20 1180
BCY 16558 20000 50000
BCY 17986 52 4660
BCY 17987 50 5140
BCY 17988 649 nd
BCY 17991 3.4 35
BCY 20546 1660 nd
BCY 17986 52 4660
BCY 17988 649 nd
BCY 17994 6.6, 22 688
nd = 결정되지 않음
NB = 결합 없음
3. TfR1억제 검정
본 발명의 펩티드의 TfR1 억제 활성 (IC50)은 하기 방법에 따라 알파 검정(Alpha assay)을 사용하여 결정하였다. 단백질, 펩티드 및 알파 시약을 5X 농도로 준비하고 각각의 시약 5 μl를 백색 384-웰 옵티플레이트(Optiplate)에서 25 μl의 총 부피에 첨가하여 1X 최종 농도로 만들었다. 형광 표지된 인간 트랜스페린 (인비트로겐(Invitrogen), T2871)을 100 mM NaCl, 4 mM CaCl2, 0.5% BSA 및 0.05% P20, pH 7.4를 가진 25 mM HEPES에서 2.5 nM로 희석하였다. 인간 또는 시노몰구스 TfR1 단백질을 50 nM로 희석하고 비표지 인간 트랜스페린 (알앤디 시스템즈, 2914-HT)을 동일한 검정 완충제에서 500 nM로 희석하였다. DMSO 스톡으로부터의 비표지 펩티드를 동일한 검정 완충제에서 20배 희석한 후에, 5% DMSO를 함유하는 검정 완충제에서 1/3 연속 희석하여 11가지의 상이한 농도를 제공하였다. 5 μl의 형광 표지된 트랜스페린, 5 μl의 인간 또는 시노몰구스 TfR1, 5 μl의 비표지 펩티드 또는 비표지 인간 트랜스페린 (알앤디 시스템즈, 2914-HT)를 백색 384-웰 옵티플레이트에 첨가하고 30분 동안 인큐베이션하였다. 항-FITC 수용체(Acceptor) (퍼킨엘머(PerkinElmer), AL127)를 검정 완충제에 50배 희석하고, 검정 플레이트에 5 μl를 첨가하고 30분 동안 인큐베이션하였다. 니켈 킬레이트 공여자 (퍼킨엘머, AS101)를 분석 검정제에 50배 희석하고, 검정 플레이트에 5 μl를 첨가하고 180분 동안 인큐베이션하였다. 680 nm에서 여기 후 25℃에서 알파스크린(AlphaScreen) 520-620 모듈이 장착된 BMG PHERAstar FS 또는 FSX 상에서 발광 측정을 수행하였다. 미가공 데이터를 100 nM 비표지 트랜스페린 및 완충제로 정규화하였다. 데이터를 100 nM 비표지 트랜스페린 및 완충제 대조군으로 표준화하고 IC50 값을 생성하기 위해 표준 4 파라미터에 피팅하였다.
본 발명의 선택된 펩티드를 상기 언급된 검정에서 시험하고 그 결과를 표 4에 나타냈다:
본 발명의 선택된 펩티드 리간드에 대한 트랜스페린 억제 검정
펩티드 리간드 기하평균 IC50 (μM) 인간 TfR1 표준 편차 (SD) 기하평균 IC50 (μM) 시노몰구스 TfR1 표준 편차 (SD)
BCY12455 0.673 0.147 (n = 4) nd nd
BCY12452 1.215 0.564 (n = 2) nd nd
BCY12454 0.893 0.356 (n = 2) nd nd
nd = 결정되지 않음
4. TfR1 경쟁 결합 검정
형광 태그가 없는 펩티드를 공지된 Kd (BCY15768) 및 형광 태그를 가진 1 nM의 펩티드와 경쟁하여 시험하였다. 펩티드를 먼저 100% DMSO로 희석한 다음에 최대 2.5% DMSO를 사용하여 직접 결합 검정에 기재된 바와 같이 검정 완충제에서 적절한 농도로 희석한 다음에 1/2로 연속 희석하였다. 10 μL의 희석된 펩티드를 플레이트에 첨가한 후에 고정 농도 (200 nM)에서 직접 결합 검정에 기재된 바와 같이 10 μL의 인간 TfR1을 첨가하였다. 이어서 5 μl 형광 펩티드를 첨가하였다. 측정은 직접 결합 검점의 경우와 같이 수행되었으나, 수득값은 첫 번째 측정 전에 결정되었다. 데이터 분석은 방정식이 쳉-프루소프(Cheng-Prusoff)에 피팅된 도트매틱스(Dotmatics)에서 이루어졌다.
본 발명의 선택된 펩티드를 상기 언급된 검정에서 시험하고 그 결과를 표 5에 나타냈다:
본 발명의 선택된 펩티드 리간드에 대한 TfR1 경쟁 결합 검정
펩티드 리간드 기하평균 Ki (μM) 표준 편차 (SD)
BCY17991 0.002 0.001
BCY17995 0.002 0.003
BCY17993 0.003 0.002
BCY18033 0.004 0.002
BCY18030 0.005 0.003
BCY18039 0.008 n=1
BCY17994 0.008 0.010
BCY18029 0.008 0.004
BCY17109 0.009 0.006
BCY18037 0.011 0.000
BCY17990 0.011 0.010
BCY17992 0.012 0.007
BCY18038 0.012 0.001
BCY18034 0.014 0.006
BCY18031 0.020 0.006
BCY18035 0.020 0.005
BCY17110 0.022 0.005
BCY17115 0.030 0.012
BCY17989 0.030 0.019
BCY16962 0.036 0.025
BCY17117 0.037 0.003
BCY16963 0.039 0.030
BCY15889 0.040 0.005
BCY17114 0.041 0.012
BCY17987 0.042 0.015
BCY15893 0.044 0.006
BCY16754 0.044 0.024
BCY17112 0.047 n=1
BCY15890 0.047 0.014
BCY16753 0.048 0.021
BCY16046 0.049 0.008
BCY15466 0.050 0.013
BCY17120 0.052 0.002
BCY16964 0.052 0.008
BCY16965 0.052 0.018
BCY17986 0.054 0.021
BCY15470 0.055 0.007
BCY16550 0.056 0.029
BCY16966 0.063 0.017
BCY15892 0.063 0.005
BCY16051 0.066 0.018
BCY15891 0.067 0.027
BCY17118 0.070 0.017
BCY16048 0.071 0.016
BCY17116 0.075 0.016
BCY16053 0.075 0.021
BCY16557 0.078 0.058
BCY17111 0.086 0.010
BCY18036 0.090 0.012
BCY16035 0.091 0.007
BCY17113 0.103 0.028
BCY18032 0.105 0.046
BCY15648 0.107 0.028
BCY15469 0.119 0.032
BCY16031 0.119 0.014
BCY16079 0.123 0.012
BCY15939 0.125 0.028
BCY16036 0.127 0.031
BCY16029 0.131 0.009
BCY16047 0.133 0.039
BCY15467 0.133 0.036
BCY16089 0.136 0.018
BCY17119 0.160 0.012
BCY16088 0.161 0.026
BCY16052 0.169 0.034
BCY16033 0.180 0.010
BCY16039 0.219 0.021
BCY16038 0.221 0.030
BCY17988 0.272 0.099
BCY15935 0.300 0.333
BCY15894 0.392 0.202
BCY15471 0.434 0.124
BCY16050 0.473 0.091
BCY16034 0.510 0.202
BCY13989 0.565 0.550
BCY16032 0.654 0.042
BCY16049 0.805 0.728
BCY16558 1.623 n=1
BCY16041 2.189 0.629
BCY16042 3.451 0.783
BCY16045 6.866 7.594
BCY16037 9.220 8.922
BCY16044 13.900 0.000
BCY16040 20.000 0.000
BCY16043 23.600 0.000
본 발명의 선택된 펩티드는 인간 및/또는 시노몰구스 TfR1을 사용하여 상기 언급된 검정에서 시험하고 그 결과를 표 6에 나타냈다:
본 발명의 선택된 펩티드 리간드에 대한 TfR1 경쟁 결합 검정
펩티드 리간드 인간 TfR1 Ki (nM) 시노몰구스 TfR1 Ki (nM)
BCY 13989 565 3440
BCY 14476 79 nd
BCY 15469 119 2117
BCY 15892 63 nd
BCY 15470 55 1615
BCY 15893 44 nd
BCY 15471 434 4660
BCY 15894 392 nd
BCY 15468 103 1230
BCY 15768 44 1075
BCY 15769 32 1120
BCY 15771 32 1065
BCY 15772 926 7084
BCY 15773 83 2301
BCY 15774 269 3471
BCY 15775 6342 >250μM
BCY 15776 1334 >90μM
BCY 15777 2652 2910
BCY 15770 651 4042
BCY 15935 300 nd
BCY 15891 94 nd
BCY 15939 125 nd
BCY 15934 63 nd
BCY 15938 60 nd
BCY 15937 34 nd
BCY 15940 54 nd
BCY 17870 9 nd
BCY 17871 9 nd
BCY 17872 14 nd
BCY 17992 11 nd
BCY 17993 5 nd
BCY 18029 6 nd
BCY 18030 7 nd
BCY 18031 17 nd
BCY 18032 77 nd
BCY 18033 6 nd
BCY 18034 10 nd
BCY 18035 17 nd
BCY 18036 82 nd
BCY 17873 13 nd
BCY 17874 13 nd
BCY 17994 8 nd
BCY 17995 5 nd
BCY 18037 11 nd
BCY 18038 11 nd
BCY 18039 8 nd
BCY 17868 23 nd
BCY 17869 30 nd
BCY 17875 13 nd
BCY 17876 16 nd
BCY 17877 29 nd
BCY 17878 28 nd
BCY 17879 32 nd
BCY 17880 29 nd
BCY 17109 11 nd
BCY 17114 32 nd
BCY 17110 22 nd
BCY 17111 86 nd
BCY 17112 47 nd
BCY 17113 103 nd
BCY 17115 30 nd
BCY 17116 75 nd
BCY 17117 37 nd
BCY 17118 70 nd
BCY 17119 160 nd
BCY 17120 52 nd
BCY 16048 71 621
BCY 16049 805 nd
BCY 16035 91 nd
BCY 16047 42 nd
BCY 16039 72 nd
BCY 16036 127 nd
BCY 16033 180 nd
BCY 16038 221 nd
BCY 16050 473 nd
BCY 16053 75 nd
BCY 16089 136 nd
BCY 16088 161 nd
BCY 16034 510 nd
BCY 16037 9220 nd
BCY 16045 6866 nd
BCY 16046 49 746
BCY 16051 66 482
BCY 16041 2189 nd
BCY 16042 3451 nd
BCY 16031 119 nd
BCY 16079 123 nd
BCY 16029 131 nd
BCY 16052 169 nd
BCY 16032 654 nd
BCY 16550 56 nd
BCY 16753 48 nd
BCY 16754 18 nd
BCY 16962 36 nd
BCY 16963 39 nd
BCY 16964 52 nd
BCY 16965 52 nd
BCY 16966 63 nd
BCY 16557 37 nd
BCY 16558 1623 nd
BCY 17986 33 nd
BCY 17987 383 (n = 2) nd
BCY 17988 213 nd
BCY 17989 24 nd
BCY 17990 8 nd
BCY 17991 3 nd
BCY 17986 33 nd
BCY 17988 213 nd
BCY 17989 24 nd
BCY 17994 8 nd
nd = 결정되지 않음
5. 인간 근위 회선형 세포의 1차 배양에서 TfR1 결합 비시클릭 펩티드를 사용한 통과세포외배출 검정
TfR1 결합 비시클릭 펩티드의 취급을 이해하기 위해, 인간 근위 세뇨관 세포 단층의 편광 단층을 가로질러 경상피 플럭스(transepithelial flux)를 측정하였다. 2개의 플럭스 JAB (흡수 방향 플럭스) 및 JBA (분비 방향 플럭스)가 180분의 플럭스 기간에 걸쳐 측정되었다. 이들 플럭스로부터, 순 방향(net direction) (흡수 또는 분비) 및 TA 플럭스의 크기를 결정하였다. 실험 세부사항은 하기에 개요가 설명되어 있다:
· TA의 흡수 플럭스 (JAB) 및 분비 플럭스 (JBA) 플럭스는 전면생장(confluent) 단층의 정단 또는 기저측면에 화합물을 적용하고 두 구획 사이의 기질의 시간-분해 분포를 모니터링하여 결정하였다. 이들로부터 순 플럭스(net flux) (Jnet)를 계산하였다. 비사이클 펩티드를 세 가지 농도 0.1, 1 및 10 μM에서 시험하였다.
· 흡수 플럭스 (JAB) 및 분비 플럭스 (JBA) 측정에 사용된 단층이 유사한 TEER 값을 갖도록 전면생장 단층을 쌍으로 만들었다.
· 약 100 ml의 가온 변형-크렙스(modified-Krebs) 완충제의 3개의 비이커에 삽입물을 순차적으로 옮기기 전에 삽입물 웰로부터 배양 배지를 흡인하였다.
· 인간 근위 세뇨관 세포 단층이 있는 삽입물을 새로운 24-웰 플레이트에 배치하고, pH 7.4의 800 μl의 가온 변형-크렙스 완충제, 및 pH 7.4의 200 μl의 변형-크렙스 완충제를 함유하는 각각의 웰을 삽입물의 상부 챔버 (정단 챔버)에 첨가하였다. 실험 온도는 37℃로 유지하였다.
· 시험 물품의 플럭스를 시작하기 전에, 단층을 크렙스 완충제만 사용하거나 크렙스 완충제와 비히클을 함께 사용하여 사전 인큐베이션하였다. 단층을 pH7.4의 크렙스와 함께 적절하게 정단 또는 기저측 막에서 인큐베이션하였다.
· 변형-크렙스 완충제가 정단 또는 기저측 챔버로부터 흡인되고 적절한 pH에서 비시클릭 펩티드의 필수 시험 농도와 동일한 부피로 대체되었을 때 플럭스가 시작되었다.
· 이 챔버를 공여자 챔버라고 지칭한다. 비시클릭 펩티드에 더하여, 동일한 농도의 비시클릭 펩티드를 가진 루시퍼 옐로우(Lucifer Yellow)를 또한 공동-투여하여 세포주위 플럭스(paracellular flux)를 결정하였다.
· 이어서, 실험 시작 후 미리 결정된 시점에서 반대측 챔버 (수용자 챔버(receiver chamber)라고 지칭함)로부터 50 μl 샘플링을 수행하였다. 완충제를 혼합하기 위해 2회 부드러운 피펫팅 후 샘플을 수집하였다.
· 각각의 샘플링 후, 적절한 pH 및 기질을 가진 동일한 양의 신선한 크렙스를 대체하였다. 마지막 샘플링에서, 삽입물을 얼음처럼 차가운 크렙스 완충제의 3개의 비이커에 순차적으로 옮기고 건조되도록 두어 반응을 종료하였다.
· 50 μl 샘플을 96-웰 PCR 플레이트에 보관하고 5.6 μl의 0.1% 트리플루오로아세트산 (TFA)을 스파이킹하여 0.01% TFA의 최종 농도를 제공한 후에, 드라이아이스에서 급속 냉동하여 보관하였다.
· 단층을 50 μl의 0.01% TFA로 용해시켜 비시클릭 펩티드의 세포내 양을 결정하고, 상기에 기재된 바와 같이 급속 동결하였다.
· 모든 샘플은 -80℃에서 보관하였다. 비시클릭 펩티드 농도의 LC-MS/MS 결정을 위해 샘플을 제출하였다.
6. LC-MS/MS에 의한 비시클릭 펩티드 검출
LC-MS/MS 분석을 위해 총 648개의 샘플을 받았다.
BCY17986, BCY17988, BCY17989 및 BCY17994는 DMSO에서 1 mg/mL 용액으로서 개별적으로 제공되었다. 이들은 작업 용액을 제조하기 위해 아세토니트릴/DMSO (50/50, v/v)에서 추가로 희석되었다.
매트릭스 농도 범위가 1.00 - 1000 nmol/L인 수송 매질 (변형 크렙스 완충제)에서 BCY17986, BCY17988, BCY17989 및 BCY17994에 대한 벌크 보정 표준은 적절한 양의 BCY17986, BCY17988, BCY17989 및 BCY17994 작업 용액으로 수송 매질을 강화하여 준비하였다.
공여자 챔버, 수용자 챔버 및 용해된 신장 세포 샘플은 모두 벌크 보정 표준 및 수송 매질에서 준비된 QC 샘플을 사용하여 정량화되었다. 초기 분석에서 ULOQ 초과일 것으로 예상되는 임의의 샘플은 재분석 전에 최대 20배까지 희석하였다. BCY17986, BCY17988, BCY17989 및 BCY17994가 용량 투여 후 시험관내 신장 단층의 모든 시험 항목-용량으로부터 수송 매질 및 용해된 신장 세포 샘플에서 검출되었다.
각각의 챔버에 대한 총 비시클릭 펩티드 함량은 분석된 농도로부터 계산되었고 루시퍼 옐로우의 누출 백분율을 사용하여 세포주위 누출에 대해 보정되어, 각각의 비시클릭 펩티드 농도에서 각각의 방향으로의 진정한 순 플럭스를 유도하였다. 순 플럭스는 pmol/cm2로 표시하였고 정단에서 기저측 (A-B) 방향 및 기저측에서 정단 (B-A) 방향에 대한 시간에 대해 플로팅하였다.
상기 섹션 5 및 섹션 6의 분석 결과는 도 1 내지 도 4에 도시되어 있으며, 여기서 4개의 시험된 비시클릭 펩티드 모두가 A-B 및 B-A 방향 둘 다에서 농도 및 시간 의존적 통과세포외배출을 나타냈음을 알 수 있다. 이것은 두 막 모두에 편재된 TfR1에 대한 FITC 트랜스페린의 결합을 나타낸 병렬 연구와 일치한다. 일반적으로 기저측에서 정단으로의 플럭스는 정단에서 기저측으로의 플럭스보다 더 컸다. 이전 연구는 이들 비시클릭 펩티드의 내재화를 나타냈다. 이 데이터는 TfR1을 발현하는 인간 1차 배양에서 TfR1 결합 비시클릭 펩티드의 통과세포외배출를 나타내며, 이는 말초 및 대뇌 맥관구조의 내피 세포를 가로지르는 가능성이 있는 수송을 나타내는, 편광된 세포를 가로지르는 통과와 함께 나타난다.
SEQUENCE LISTING <110> BicycleTx Limited <120> BICYCLIC PEPTIDE LIGANDS SPECIFIC FOR TRANSFERRIN RECEPTOR 1 (TfR1) <130> BIC-C-P2924PCT <150> GB 2017927.1 <151> 2020-11-13 <150> GB 2106903.4 <151> 2021-05-14 <150> US 63/261,820 <151> 2021-09-29 <160> 67 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 1 Cys Ala Leu Cys Asn Asp Trp Thr Leu Pro Trp His His Cys 1 5 10 <210> 2 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 2 Cys Arg Glu Phe Phe Asp Thr Cys Gly Leu Ala Phe Ile Glu Cys 1 5 10 15 <210> 3 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 3 Cys Leu Glu Ala Cys Tyr Asp Gly Val Tyr Trp Tyr Ser Cys 1 5 10 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 4 Cys Ser Ala Asp Asp Trp Leu Gly Cys Ile Ser Trp Cys 1 5 10 <210> 5 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 5 Cys Ser Ser Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Ile Ser Trp Cys 1 5 10 <210> 6 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 6 Cys Pro Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Trp Cys 1 5 10 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 7 Cys Pro Gln Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Ile Ser Trp Cys 1 5 10 <210> 8 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 8 Cys Pro Pro Asp Ser Trp Gln Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 9 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 10 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 10 Cys Pro Gly Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 11 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 11 Cys Pro Pro Asp Ser His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 12 Cys Ser Ala Asp Asp Trp Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is HyP <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is tBuGly <400> 13 Cys Pro Xaa Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is HyP <400> 14 Cys Pro Xaa Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is HyP <400> 15 Cys Ser Xaa Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 16 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is Aib <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is tBuGly <400> 16 Cys Pro Xaa Asp Ala His Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 17 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 17 Cys Pro Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 18 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is Aib <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is tBuGly <400> 18 Cys Pro Xaa Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 19 Cys Ser Ala Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 20 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is Aib <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is tBuGly <400> 20 Cys Ser Xaa Asp Ala His Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 21 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is EPA <400> 21 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 22 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is tBuGly <400> 22 Cys Pro Pro Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 23 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is Aib <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is tBuGly <400> 23 Cys Ser Xaa Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 24 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 24 Cys Ala Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 25 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is Aib <400> 25 Cys Pro Xaa Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 26 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is tBuGly <400> 26 Cys Ser Pro Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 27 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is tBuGly <400> 27 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 28 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 28 Cys Pro Asn Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 29 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 29 Cys Pro Ile Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 30 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 30 Cys Ser Pro Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 31 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 31 Cys Pro Pro Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 32 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is Aib <400> 32 Cys Ser Xaa Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 33 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is Chg <400> 33 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 34 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 34 Cys Ala Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 35 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (7)..(7) <223> Xaa is tBuAla <400> 35 Cys Tyr Leu Pro Asp Trp Xaa Cys Gly Asp Glu Tyr Cys 1 5 10 <210> 36 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (12)..(12) <223> Xaa is 2Nal <400> 36 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Xaa Cys 1 5 10 <210> 37 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (12)..(12) <223> Xaa is 3tBuTyr <400> 37 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Xaa Cys 1 5 10 <210> 38 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (5)..(5) <223> Xaa is Aib <400> 38 Cys Ser Pro Asp Xaa His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 39 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (12)..(12) <223> Xaa is 1Nal <400> 39 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Xaa Cys 1 5 10 <210> 40 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (7)..(7) <223> Xaa is tBuAla <400> 40 Cys Ser Pro Asp Ala His Xaa Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 41 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (7)..(7) <223> Xaa is Cba <400> 41 Cys Ser Pro Asp Ala His Xaa Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 42 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 42 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Trp Cys 1 5 10 <210> 43 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (5)..(5) <223> Xaa is Abu <400> 43 Cys Ser Pro Asp Xaa His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 44 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is Aze <400> 44 Cys Ser Xaa Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 45 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 45 Cys Ser Pro Asp Asp His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 46 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 46 Cys Ser Pro Asp Ser His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 47 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (7)..(7) <223> Xaa is Abu <400> 47 Cys Ser Pro Asp Ala His Xaa Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 48 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (12)..(12) <223> Xaa is 4Pal <400> 48 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Xaa Cys 1 5 10 <210> 49 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 49 Cys Pro Ala Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 50 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is tBuAla <400> 50 Cys Ser Pro Asp Ala Tyr Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 51 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is C5g <400> 51 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 52 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is Cbg <400> 52 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 53 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 53 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Ala Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 54 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (7)..(7) <223> Xaa is Aib <400> 54 Cys Ser Pro Asp Ala His Xaa Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 55 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is Cpg <400> 55 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 56 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (10)..(10) <223> Xaa is B-Melle <400> 56 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Xaa Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 57 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 57 Cys Ser Ala Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 58 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 58 Cys Ser Pro Ala Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 59 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 59 Cys Ser Pro Asp Ala Ala Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 60 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 60 Cys Ser Pro Asp Ala His Ala Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 61 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 61 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Ala Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 62 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 62 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ala Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 63 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 63 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ala Tyr Cys 1 5 10 <210> 64 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <400> 64 Cys Ser Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Ala Cys 1 5 10 <210> 65 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (2)..(2) <223> Xaa is K(N3) <400> 65 Cys Xaa Pro Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 66 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (3)..(3) <223> Xaa is K(N3) <400> 66 Cys Ser Xaa Asp Ala His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10 <210> 67 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic Peptide <220> <221> Xaa <222> (5)..(5) <223> Xaa is K(N3) <400> 67 Cys Ser Pro Asp Xaa His Leu Gly Cys Ile Ser Tyr Cys 1 5 10

Claims (21)

  1. 적어도 2개의 루프 서열(loop sequence)에 의해 분리된 적어도 3개의 반응성 기(reactive group)를 포함하는 폴리펩티드, 및 적어도 2개의 폴리펩티드 루프가 분자 스캐폴드(molecular scaffold) 상에 형성되도록 폴리펩티드의 반응성 기와 공유 결합을 형성하는 분자 스캐폴드를 포함하는 트랜스페린 수용체 1 (TfR1)에 특이적인 펩티드 리간드.
  2. 제1항에 있어서, 상기 반응성 기가 시스테인 잔기를 포함하는, 펩티드 리간드.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, TfR1에 대한 트랜스페린의 결합을 억제하는, 펩티드 리간드.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 루프 서열이 2, 3, 6, 8 또는 9개의 아미노산을 포함하는, 펩티드 리간드.
  5. 제4항에 있어서, 상기 루프 서열이 2개의 루프 서열에 의해 분리된 3개의 시스테인 잔기를 포함하며 이들 루프 서열의 첫 번째는 2개의 아미노산으로 이루어지고 이의 두 번째는 9개의 아미노산으로 이루어진, 펩티드 리간드.
  6. 제4항에 있어서, 상기 루프 서열이, 둘 다가 6개의 아미노산으로 이루어진 2개의 루프 서열에 의해 분리된 3개의 시스테인 잔기를 포함하는, 펩티드 리간드.
  7. 제4항에 있어서, 상기 루프 서열이 2개의 루프 서열에 의해 분리된 3개의 시스테인 잔기를 포함하며 이들 루프 서열의 첫 번째는 3개의 아미노산으로 이루어지고 이의 두 번째는 8개의 아미노산으로 이루어지는, 펩티드 리간드.
  8. 제4항에 있어서, 펩티드 리간드가 하기 아미노산 서열, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하며:
    CiALCiiNDWTLPWHHCiii (서열번호: 1);
    CiREFFDTCiiGLAFIECiii (서열번호: 2); 및
    CiLEACiiYDGVYWYSCiii (서열번호: 3);
    여기서 Ci, Cii 및 Ciii는 각각 제1, 제2 및 제3 시스테인 잔기를 나타내며, 예컨대 여기서 분자 스캐폴드가 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리프로프-2-엔-1-온 (TATA)이고 펩티드 리간드가 N- 및/또는 C-말단 부가(C-terminal addition)를 포함하고 다음으로부터 선택되는 펩티드 리간드:
    A-(서열번호: 1)-A (본원에서는 BCY12455로 지칭됨);
    A-(서열번호: 1)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY12652로 지칭됨);
    A-(서열번호: 2)-A (본원에서는 BCY12452로 지칭됨);
    A-(서열번호: 2)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY12650으로 지칭됨);
    A-(서열번호: 3)-A (본원에서는 BCY12454로 지칭됨); 및
    A-(서열번호: 3)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY12651로 지칭됨);
    여기서 Sar는 사르코신을 나타내고 Fl은 플루오레세인을 나타낸다.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서, TfR1에 대한 트랜스페린의 결합을 억제하지 않는 펩티드 리간드.
  10. 제9항에 있어서, 상기 루프 서열이 3개 또는 7개의 아미노산을 포함하는, 펩티드 리간드.
  11. 제10항에 있어서, 상기 루프 서열이 2개의 루프 서열에 의해 분리된 3개의 시스테인 잔기를 포함하며 이들 루프 서열의 첫 번째는 7개의 아미노산으로 이루어지고 이의 두 번째는 3개의 아미노산으로 이루어지는, 펩티드 리간드.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드 리간드가 하기 아미노산 서열, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하며:
    CiSADDWLGCiiISWCiii (서열번호: 4);
    CiSSDAYLGCiiISWCiii (서열번호: 5);
    CiPPDAHLGCiiISWCiii (서열번호: 6);
    CiPQDAYLGCiiISWCiii (서열번호: 7);
    CiPPDSWQGCiiISYCiii (서열번호: 8);
    CiSPDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 9) (본원에서는 BCY15935로 지칭됨);
    CiPGDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 10);
    CiPPDSHLGCiiISYCiii (서열번호: 11);
    CiSADDWLGCiiISYCiii (서열번호: 12);
    CiP[HyP]DAYLGCii[tBuGly]SYCiii (서열번호: 13);
    CiP[HyP]DAYLGCiiISYCiii (서열번호: 14);
    CiS[HyP]DAHLGCiiISYCiii (서열번호: 15);
    CiP[Aib]DAHLGCii[tBuGly]SYCiii (서열번호: 16);
    CiPPDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 17);
    CiP[Aib]DAYLGCii[tBuGly]SYCiii (서열번호: 18);
    CiSADAHLGCiiISYCiii (서열번호: 19);
    CiS[Aib]DAHLGCii[tBuGly]SYCiii (서열번호: 20);
    CiSPDAHLGCii[EPA]SYCiii (서열번호: 21);
    CiPPDAYLGCii[tBuGly]SYCiii (서열번호: 22);
    CiS[Aib]DAYLGCii[tBuGly]SYCiii (서열번호: 23);
    CiAPDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 24);
    CiP[Aib]DAHLGCiiISYCiii (서열번호: 25);
    CiSPDAYLGCii[tBuGly]SYCiii (서열번호: 26);
    CiSPDAHLGCii[tBuGly]SYCiii (서열번호: 27);
    CiPNDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 28);
    CiPIDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 29);
    CiSPDAYLGCiiISYCiii (서열번호: 30);
    CiPPDAYLGCiiISYCiii (서열번호: 31);
    CiS[Aib]DAHLGCiiISYCiii (서열번호: 32);
    CiSPDAHLGCii[Chg]SYCiii (서열번호: 33);
    CiAPDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 34);
    CiYLPDW[tBuAla]CiiGDEYCiii (서열번호: 35);
    CiSPDAHLGCiiIS[2Nal]Ciii (서열번호: 36);
    CiSPDAHLGCiiIS[3tBuTyr]Ciii (서열번호: 37);
    CiSPD[Aib]HLGCiiISYCiii (서열번호: 38);
    CiSPDAHLGCiiIS[1Nal]Ciii (서열번호: 39);
    CiSPDAH[tBuAla]GCiiISYCiii (서열번호: 40);
    CiSPDAH[Cba]GCiiISYCiii (서열번호: 41);
    CiSPDAHLGCiiISWCiii (서열번호: 42);
    CiSPD[Abu]HLGCiiISYCiii (서열번호: 43);
    CiS[Aze]DAHLGCiiISYCiii (서열번호: 44);
    CiSPDDHLGCiiISYCiii (서열번호: 45);
    CiSPDSHLGCiiISYCiii (서열번호: 46);
    CiSPDAH[Abu]GCiiISYCiii (서열번호: 47);
    CiSPDAHLGCiiIS[4Pal]Ciii (서열번호: 48);
    CiP[dA]DAHLGCiiISYCiii (서열번호: 49);
    CiSPDAYLGCii[tBuAla]SYCiii (서열번호: 50);
    CiSPDAHLGCii[C5g]SYCiii (서열번호: 51);
    CiSPDAHLGCii[Cbg]SYCiii (서열번호: 52);
    CiSPDAHL[dA]CiiISYCiii (서열번호: 53);
    CiSPDAH[Aib]GCiiISYCiii (서열번호: 54);
    CiSPDAHLGCii[Cpg]SYCiii (서열번호: 55);
    CiSPDAHLGCii[B-MeIle]SYCiii (서열번호: 56);
    CiSADAHLGCiiISYCiii (서열번호: 57);
    CiSPAAHLGCiiISYCiii (서열번호: 58);
    CiSPDAALGCiiISYCiii (서열번호: 59);
    CiSPDAHAGCiiISYCiii (서열번호: 60);
    CiSPDAHLACiiISYCiii (서열번호: 61);
    CiSPDAHLGCiiASYCiii (서열번호: 62);
    CiSPDAHLGCiiIAYCiii (서열번호: 63);
    CiSPDAHLGCiiISACiii (서열번호: 64);
    Ci[K(N3)]PDAHLGCiiISYCiii (서열번호: 65);
    CiS[K(N3)]DAHLGCiiISYCiii (서열번호: 66); 및
    CiSPD[K(N3)]HLGCiiISYCiii (서열번호: 67);
    여기서 Abu는 아미노부티르산을 나타내고, Aib는 아미노이소부티르산을 나타내고, Aze는 아제티딘을 나타내고, B-MeIle은 베타-메틸 이소류신을 나타내고, C5g는 시클로펜틸 글리신을 나타내고, Cba는 β-시클로부틸알라닌을 나타내고, Cbg는 시클로부틸 글리신을 나타내고, Chg는 시클로헥실 글리신을 나타내고, Cpg는 시클로프로프릴 글리신을 나타내고, EPA는 2-아미노-3-에틸-펜탄산을 나타내고, HyP는 트랜스-4-히드록시-L-프롤린을 나타내고, [K(N3)]는 6-아지도 리신을 나타내고, 1Nal은 1-나프틸알라닌을 나타내고, 2Nal은 2-나프틸알라닌을 나타내고, 4Pal은 4-피리딜알라닌을 나타내고, tBuAla는 t-부틸-알라닌을 나타내고, tBuGly는 t-부틸-글리신을 나타내고, 3tBuTyr는 3-t-부틸-티로신을 나타내고, Ci, Cii 및 Ciii는 각각 제1, 제2 및 제3 시스테인 잔기를 나타내고,
    예컨대 여기서 분자 스캐폴드가 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리스(2-브로모에타논) (TATB)이고 펩티드 리간드가 N- 및/또는 C-말단 부가를 포함하고 다음으로부터 선택되며:
    A-(서열번호: 4)-A (본원에서는 BCY13983으로 지칭됨);
    A-(서열번호: 4)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY14474로 지칭됨);
    A-(서열번호: 5)-A (본원에서는 BCY13986으로 지칭됨);
    A-(서열번호: 5)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY14475로 지칭됨);
    A-(서열번호: 6)-A (본원에서는 BCY15466으로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 6) (본원에서는 BCY15889로 지칭됨);
    A-(서열번호: 7)-A (본원에서는 BCY15467로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 7) (본원에서는 BCY15890으로 지칭됨);
    A-(서열번호: 8)-A (본원에서는 BCY13989로 지칭됨);
    A-(서열번호: 8)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY14476로 지칭됨);
    A-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY15468로 지칭됨);
    A-(서열번호: 9)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15768로 지칭됨);
    (서열번호: 9)-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15934로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 9)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15937로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 9)-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15938로 지칭됨);
    [Fl]G[Sar5]-A-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY15940으로 지칭됨);
    N[1Nal]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18030으로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 9)-E[Pip]W (본원에서는 BCY18039로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 9)-EPW (본원에서는 BCY17994로 지칭됨);
    NWN-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18029로 지칭됨);
    NWN-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY17109로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 9)-E[Aze]W (본원에서는 BCY18037로 지칭됨);
    Ac-NWN-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY17992로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 9)-E[dP]W (본원에서는 BCY18038로 지칭됨);
    Ac-N[1Nal]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18034로 지칭됨);
    N[dW]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18031로 지칭됨);
    Ac-N[dW]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18035로 지칭됨);
    HWM-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY17110으로 지칭됨);
    A-(서열번호: 9)-PHP (본원에서는 BCY17115로 지칭됨);
    A-(서열번호: 9)-EPW (본원에서는 BCY17114로 지칭됨);
    NEV-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY17112로 지칭됨);
    A-(서열번호: 9)-PIVH (본원에서는 BCY17120으로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY15891로 지칭됨);
    HTS-(서열번호: 9)-A (본원에서는 BCY17111로 지칭됨);
    Ac-N[NMeTrp]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18036으로 지칭됨);
    N[NMeTrp]N-(서열번호: 9) (본원에서는 BCY18032로 지칭됨);
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    A-(서열번호: 55)-A (본원에서는 BCY1604로 지칭됨4);
    A-(서열번호: 56)-A (본원에서는 BCY1604로 지칭됨0);
    A-(서열번호: 57)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15771로 지칭됨);
    A-(서열번호: 58)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15772로 지칭됨);
    A-(서열번호: 59)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15773으로 지칭됨);
    A-(서열번호: 60)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15774로 지칭됨);
    A-(서열번호: 61)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15775로 지칭됨);
    A-(서열번호: 62)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15776으로 지칭됨);
    A-(서열번호: 63)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15777로 지칭됨);
    A-(서열번호: 64)-A-[Sar6]-[K-Fl] (본원에서는 BCY15770으로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 65) (본원에서는 BCY17903으로 지칭됨);
    Ac-(서열번호: 66) (본원에서는 BCY17904로 지칭됨); 및
    Ac-(서열번호: 67) (본원에서는 BCY17905로 지칭됨);
    여기서 AzPro는 아지도프로필을 나타내고, Aze는 아제티딘을 나타내고, 1Nal은 1-나프틸알라닌을 나타내고, NMeTrp는 N-메틸-트립토판을 나타내고, [K(N3)]는 6-아지도 리신을 나타내고,
    Peg는 폴리에틸렌 글리콜을 나타내고, Pip는 피페콜산을 나타내고, Sar는 사르코신을 나타내고,
    Fl은 플루오레세인을 나타내고 [K(N3)(PYA-말레이미드)]는 하기 구조식을 갖는 변형된 리신을 나타내거나:
    Figure pct00008
    ;
    또는 여기서 분자 스캐폴드가 1,1',1''-(1,3,5-트리아지난-1,3,5-트리일)트리프로프-2-엔-1-온 (TATA)이고 펩티드 리간드가 N- 및/또는 C-말단 부가를 포함하고 다음과 같은, 펩티드 리간드:
    Ac-(서열번호: 13) (본원에서는 BCY20546으로 지칭됨).
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 염이 유리 산 또는 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 암모늄 염으로부터 선택되는, 펩티드 리간드.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 리간드 중 적어도 2개를 포함하는 다량체성 결합 복합체(multimeric binding complex).
  15. 제14항에 있어서, 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 다량체성 결합 복합체:
    Figure pct00009

    (I)
    여기서 CHM은 중심 힌지 모이어티(central hinge moiety)를 나타내고;
    비사이클은 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 비시클릭 펩티드 리간드를 나타내고;
    m은 2 내지 10, 예컨대 2, 3 또는 4로부터 선택된 정수를 나타낸다.
  16. 제15항에 있어서, m이 2이고 CHM이 화학식 (A)의 모티프(motif), 예컨대 BCY19409인, 다량체성 결합 복합체:
    Figure pct00010
    .
  17. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 펩티드 리간드 또는 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 다량체성 결합 복합체를 1종 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 조합하여 포함하는 약제학적 조성물.
  18. 치료제의 TfR1 매개 전달(TfR1 mediated delivery)을 통해 질환 또는 장애를 예방, 억제 또는 치료하는데 사용하기 위한, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 펩티드 리간드, 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 다량체성 결합 복합체, 또는 제17항의 약제학적 조성물.
  19. 페이로드(payload), 예컨대 올리고뉴클레오티드, 특히 siRNA와 조합하여 TfR1에 결합된, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 펩티드 리간드 또는 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 다량체성 결합 복합체를 포함하는 조직 전달 복합체(tissue delivery complex).
  20. 제19항에 있어서, 근육 조직 전달 복합체인, 조직 전달 복합체.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, 근골격계 장애(musculoskeletal disorder)의 치료에 사용하기 위한, 조직 전달 복합체.
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