KR20230072554A - 천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 또는 인플루엔자바이러스 또는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물 - Google Patents

천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 또는 인플루엔자바이러스 또는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20230072554A
KR20230072554A KR1020210158498A KR20210158498A KR20230072554A KR 20230072554 A KR20230072554 A KR 20230072554A KR 1020210158498 A KR1020210158498 A KR 1020210158498A KR 20210158498 A KR20210158498 A KR 20210158498A KR 20230072554 A KR20230072554 A KR 20230072554A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
weight
ginseng
ocd20015
cells
ginsenoside
Prior art date
Application number
KR1020210158498A
Other languages
English (en)
Inventor
정철종
박석만
공룡
유영은
Original Assignee
(주)옥천당
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)옥천당 filed Critical (주)옥천당
Priority to KR1020210158498A priority Critical patent/KR20230072554A/ko
Priority to US17/564,459 priority patent/US20220211792A1/en
Publication of KR20230072554A publication Critical patent/KR20230072554A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/34—Campanulaceae (Bellflower family)
    • A61K36/342—Adenophora
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A61K36/076—Poria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
    • A61K36/258—Panax (ginseng)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/34—Campanulaceae (Bellflower family)
    • A61K36/346—Platycodon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/481—Astragalus (milkvetch)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A61K36/734—Crataegus (hawthorn)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/80—Scrophulariaceae (Figwort family)
    • A61K36/804—Rehmannia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/324—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the immune system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 또는 인플루엔자바이러스(Influenza virus) 또는 코로나바이러스(Corona virus)에 대한 항바이러스용 조성물에 관한 것으로서, 상기 천연 복합 추출물은 선천적 방어 면역시스템에서 인터페론(interferon)의 분비를 촉진시킴으로써 바이러스 감염으로부터의 보호를 유도하므로, 이를 효과적으로 항바이러스 용도로 이용할 수 있다.

Description

천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 또는 인플루엔자바이러스 또는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물{Composition for innate immunity, or antiviral against influenza virus or corona virus containing natural extracts}
본 발명은 천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 인플루엔자바이러스(Influenza virus; PR8) 또는 코로나바이러스(Corona virus)에 대한 항바이러스, 또는 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 선천적 방어 면역시스템에서 인터페론(interferon)의 분비를 촉진시킴으로써 바이러스 감염으로부터의 보호를 유도하고, 이에 의하여 효과적으로 항바이러스 용도로 이용할 수 있는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 바이러스 감염증의 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.
면역이란 생체가 자기 성분 이외의 물질 등이 생체의 항상성을 깨뜨리거나 자기를 위협하는 것을 배제하기 위해 일어나는 일련의 생체 방어 반응을 의미한다. 체내 병원균의 유입으로 인해 활성화되었던 염증 반응을 포함한 모든 면역작용은 병원균의 제거가 이루어지고 나면 정상의 상태로 돌아오게 되지만 면역 조절에 어려움이 있는 경우, 면역 반응이 정상인 사람에 비해 현저히 높거나 낮게 발생한다.
면역기능이 결핍되거나 저하된 상태를 면역부전이라고 하며 이 상태에서는 면역반응이 제대로 활성화되지 못하여 체내에 유입되는 이물질 (세균, 바이러스 등)에 대한 반응을 제대로 못하여 감염을 일으키게 된다.
반대로 면역 과민 반응은 일부의 면역반응이 과하게 반응하여 면역체계가 불균형을 이루어 결과적으로 알레르기 반응을 일으키는 것이다. 면역 체계가 정상적으로 조절되지 못하고 불균형을 이루게 되면 체내 사이토카인의 불균형, T/B 세포의 증식 불균형, 항산화 영양소 고갈 등의 원인으로 면역 조절에 장애가 발생하여 염증성 물질 분비가 증가하여 세포와 조직에 손상을 입히게 되며 병원체 유입에 대처하지 못하여 염증의 심화가 이루어질 수 있다. 따라서 인체의 면역 반응은 균형을 이루어 조절이 정상적으로 되어야 건강을 유지할 수 있으므로 면역 조절 능력은 질병 예방과 치료에 중요시된다.
현재, 자가면역질환에 사용되는 의약품 중 가장 큰 비중을 차지하고 있는 것은 항체의약품이다. 항체의약품은 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 이용해 면역질환을 치료하는 것으로, 대표적인 항체의약품에는 암젠의 엔브렐과 존슨앤존슨의 레임케이드 등이 있다. 이들은 주로 류마티스 관절염 등의 면역질환에 사용되는 의약품으로 세포 기전 중 사이토카인인 TNF-α를 억제하여 과도한 면역반응을 조절하는 치료제로 현재 면역치료제로 각광받고 있는 의약품이다. 그러나, 이들 의약품은 면역반응을 억제하는 의약품으로 과복용시 감염질환, 알러지반응, 가려움, 주사부위홍반(출혈, 타박상, 홍반, 통증, 종창 포함), 호흡곤란, 발열 등의 증세가 나타날 수 있다.
또, 면역조절 실패로 인한 면역저하는 바이러스 등의 감염의 원인이 될 수 있다. 바이러스(virus)는 라틴어로 독성물질을 의미하며, 세균여과지(0.22 um)를 통과하는 일군의 감염형 병원성 입자이다. 바이러스는 숙주세포의 종류에 따라 박테리오파지, 식물 바이러스, 동물 바이러스로 분류하기도 하며, 핵산의 종류에 따라 DNA 바이러스, RNA 바이러스로 분류할 수 있다. 최근 COVID-19, 신종 플루, AI 및 구제역 등 다양한 바이러스 질병이 사회적으로 큰 문제를 일으켰으며, 이에 따라 바이러스 질병의 효과적인 대책에 대한 고민이 사회적으로 큰 관심을 불러일으키고 있다.
현재 바이러스성 질병을 예방하기 위한 가장 좋은 방법은 백신 접종이지만, 바이러스에 의한 질병의 경우, 대체로 많은 바이러스 혈청형(아형) 생성 등에 따른 백신의 효율성 문제가 중요하게 제기되고 있다. 이러한 백신의 문제점을 보완해 줄 수 있는 바이러스 예방용 억제제의 개발 및 보급은 중요한 사항이며, 이를 위해 특히 바이러스에 대한 초기 방어시스템인 생체 내 선천적 면역시스템을 자극하여 개체 동물의 면역력을 높여주는 것은 또 하나의 해결책이 될 수 있다.
최근 들어, 생체 내 선천적 방어 면역시스템 중에서 인터페론(interferon)에 의해 유도되는 선천성 면역분야가 주목을 받고 있는데, 이는 선천성 면역의 방어 기작 중 하나로, 면역 인자(염증 사이토카인)의 분비를 유도해 체내 염증반응을 일으켜 병원체를 방어하는 것이다. 따라서, 적정 수준의 염증 반응 유도는 바이러스 등의 병원체에 의해 발생하는 감염병의 예방에 유효할 것으로 보이며, 이는 선천성 면역 증진 제제의 연구가 필요한 이유이다. 특히, 제제의 원료로 독성 및 부작용이 거의 없는 생약 추출물 또는 식물 추출물을 활용한다면 식품이나 건강기능식품으로도 활용가능한 제제를 개발할 수 있을 것이다.
본 발명은 상술한 문제를 해결하기 위한 것으로, 본 발명자들은 종래 사용되는 의약품들의 단점인 부작용이 거의 없는 식품으로 사용 가능한 천연물들을 이용하여, 선천성 면역 증진, 항바이러스, 바이러스 감염 예방 및 치료용 조성물을 개발하는 것이며, 개발하고자 하는 추출물이 선천성 면역 증진 및 항바이러스에 우수한 효과가 있음을 확인하였다.
이에, 본 발명이 해결하고자 하는 첫 번째 과제는 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기 중 1종 이상 선택되는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 바이러스 감염증의 예방 및 치료용 조성물과 이를 이용한 건강기능식품을 제공하는 것이다.
이에, 본 발명의 목적은 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물의 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선 용도를 제공하는 것이다.
상술한 첫 번째 과제를 해결하기 위한 본 발명은 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증의 예방, 치료 또는 개선용 조성물을 제공하는 것으로써 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물을 유효성분으로 함유할 수 있는 것을 특징으로 한다. 또한, 본 발명은 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 바이러스 감염증의 예방 및 치료용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
이하 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.
본 발명의 일 양태는 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물이다.
상기 복합 추출물은 사삼 1.25 내지 5.00 중량%, 지황 12.50 내지 50.0 중량%, 인삼 1.25 내지 5.00 중량%, 도라지 6.85 내지 27.00 중량%, 복령 2.50 내지 10.00 중량%, 산사 0.65 내지 2.50 중량%, 및 황기 25.0 내지 80.0 중량%를 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 사삼 2.00 내지 3.00 중량%, 지황 20.00 내지 30.0 중량%, 인삼 2.00 내지 3.00 중량%, 도라지 10.00 내지 20.00 중량%, 복령 3.00 내지 8.00 중량%, 산사 1.00 내지 1.50 중량%, 및 황기 40.0 내지 60.0 중량%를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 복합 추출물은 클로로겐산(chlorogenic acid), 진세노사이드(ginsenoside) Rg1, 칼리코신(calycosin), 진세노사이드 Rb1, 진세노사이드 Rd, 아스트라갈로사이드(astragaloside) II, 아스트라갈로사이드 I, 및 폴리갈라신(polygalacin) D로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물을 함유하는 것일 수 있고, 예를 들어, 클로겐산 또는 진세노사이드 Rd인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서상의 용어 “사삼”은 초롱꽃과(桔梗科: Campanulaceae)에 속한 다년생 본초인 잔대(Adenophora triphylla var. japonica Hara), 모시대 (Adenophora remotiflora (Siebold & Zucc.) Miq.), 당잔대(Adenophora stricta Miq.), 털잔대(Adenophora triphylla var. hirsuta Nakai) 또는 동속근연식물로, 생김새를 보면 줄기는 곧게 서며 높이 50 내지 100 cm 정도이고 꺾으면 흰색의 액이 나온다. 잎은 긴 타원형인데 4-5개가 돌려나기하며 줄기와 잎에는 털이 있다. 7-10월에 줄기 끝에 담자색의 꽃이 여러 개 돌려 달린다. 꽃부리는 종 모양이고 길이 13 내지 22 mm이다. 암술 대는 3개로 갈라지며 꽃부리보다 다소 길고 수술은 5개이며 꽃통으로부터 떨어지며 수술대는 밑부분이 넓고 털이 있다. 사삼은 인삼(人參), 현삼(玄蔘), 단삼(丹參), 고삼(苦參)과 함께 오삼(五參)이라 부르는데, 이것은 형태는 모두 다르나 치료하는 바는 비슷하기 때문이다. 약리작용으로는 거담 작용, 항균작용, 용혈작용, 강심작용 등이 보고되었다.
본 발명에 있어서 사삼은 잔대, 모시대 또는 당잔대인 것일 수 있고, 뿌리를 선택하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서상의 용어 “인삼”은 두릅나무과(五加科: Araliaceae)에 속한 다년생 본초인 인삼(Panax ginseng C.A Mey)으로 높이는 60 cm 정도이고, 삼대(줄기)는 해마다 1개가 곧게 자라며 그 끝에 1개의 꽃대(화경)가 이어지고, 3~6개의 잎자루가 돌려난다. 잎은 잎자루가 길고 잎몸은 3 내지 5개로 갈라져서 장상복엽을 이룬다. 잎 앞면의 맥 위에는 털이 있다. 여름에 1개의 가는 꽃줄기가 나와서 그 끝에 4 내지 40개의 담황록색의 작은 꽃이 산형꽃차례에 달린다. 꽃잎과 수술은 5개이며 암술은 1개로 씨방은 하위이다. 열매는 핵과로 편구형이고 성숙하면 선홍색으로 된다. 인삼은 예로부터 불로장생, 익기(益氣), 경신(經身)의 명약으로 일컬어진다.
본 발명에 있어서 인삼은 고려삼(Panax ginseng), 회기삼(P. quiquefolius), 전칠삼(P. notoginseng), 죽절삼(P. japonicus), 삼엽삼(P. trifolium), 히말라야삼(P. pseudoginseng) 및 베트남삼(P. vietnamensis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있고, 바람직하게는 고려삼 또는 전칠삼인 것일 수 있으며, 수삼, 미삼, 백삼 및 홍삼으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있고, 뿌리를 선택하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서상의 용어 “지황”은 현삼과(Scrophulariaceae)에 속하는 다년생 본초인 지황(Rehmannia glutinosa (Gaertner) Liboschitz) 또는 회경지황 (Rehmannia glutinosa for. hueichingensis (Chao et Schih) Hsia.)으로 높이는 30 cm 정도이다. 잎은 타원형으로 뿌리에서 나오고, 6-7월에 홍자색의 꽃이 핀다. 한방에서는 뿌리의 생것을 생지황, 건조시킨 것을 건지황, 쪄서 말린 것을 숙지황이라고 한다. 숙지황은 보혈제로 쓰이고 생리불순, 허약 체질, 어린이의 발육 부진, 치매, 조루증, 발기부전에 사용하며, 생지황은 허약 체질, 토혈, 코피, 자궁 출혈, 생리불순, 변비에 사용하고, 건지황은 열병 후에 생기는 갈증과 장기 내부의 열로 인한 소갈증에 효과가 있으며 토혈과 코피를 그치게 한다고 보고되었다.
본 명세서상의 용어 “건조”는 열풍건조(AD), 냉풍건조, 진공건조(Vacuum Dry: VD), 분무건조(Spray Dry: SD) 그리고 동결건조(Freeze Dry: FD) 방법을 통하여 수행되는데, 본 발명에서는 열풍건조 방법을 사용하여 진행하였다. 열풍건조는 열풍을 이용해서 건조하는 방식으로 습도가 낮은 공기를 가열하여 이를 피 건조물 사이로 흐르게 하여 피 건조물에 함유된 수분을 증발시켜 건조하는 방식이다.
본 발명에서 지황은 생지황인 것일 수 있고, 뿌리를 선택하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서상의 용어 “복령”은 담자균류 민주름버섯목 구멍장이버섯과(多孔菌科: Polyporaceae)에 속한 진균인 복령(Poria cocos Wolf)의 균핵으로, 땅속에서 소나무 등의 나무뿌리에 기생한다. 균핵(菌核)의 크기는 10 내지 30 cm이며 둥근 모양 또는 길쭉하거나 덩어리 모양이다. 표면은 적갈색, 담갈색 또는 흑갈색이고 꺼칠꺼칠한 편이며, 때로는 근피(根皮)가 터져 있는 것도 있다. 살은 백색이고 점차 담홍색으로 변한다. 백색인 것을 백복령(白茯笭), 적색인 것을 적복령(赤茯笭)이라 한다. 또 복령 속에 소나무 뿌리가 꿰뚫고 있는 것을 복신(茯神)이라고 한다. 모두 한약재로 강장, 이뇨, 진정 등에 효능이 있어 신장병, 방광염, 요도염에 이용한다.
본 명세서상의 용어 “산사”는 장미과(薔薇科: Rosaceae)의 산사(Crataegus pinnatifida Bge), 야산사(Crataegus cuneata Sieb. et Zucc), 산리홍(Crataegus pinnatifida var. major N. E. Br), 좁은잎산사(Crataegus pinnatifida for. psilosa (C.K.Schneid.) Kitag) 및 동속 식물의 익은 열매를 말린 약재로서, 산사라는 이름은 열매가 사과 맛이 나고 색이 붉어 작은 사과와 같아서 붙여진 이름이다. 산사의 모양이 붉은 대추와 비슷하기 때문에 적조자(赤棗子)라 부르기도 하였다. 강심작용, 혈액순환개선 작용, 혈압강하작용이 보고되었다.
상기 산사는 열매를 선택하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서상의 용어 “도라지”는 초롱꽃과(桔梗科: Campanulaceae)에 속한 다년생 본초(Platycodon grandiflorum　(Jacq.) A. DC.)로, 높이가 40 내지 100 cm이며, 잎은 어긋나고 타원형이다. 뿌리는 통통하고 줄기는 한 대 또는 여러 대가 모여난다. 7-8월에 흰색이나 하늘색 꽃이 피고 열매는 삭과이다. 뿌리는 “길경”으로 칭하며 식용하거나 거담이나 진해의 약재로 쓴다.
상기 도라지는 뿌리를 선택하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서상의 용어 “황기 (Astragalus membranaceus Bunge)”는 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 여러해살이 풀로, 뿌리의 주피를 벗겨 건조한 것을 기원으로 한다. 그 뿌리는 가늘고 긴 원주형을 이루고 길이 30-100 cm, 지름 7-20 mm이며 드문드문 작은 가지뿌리가 붙어있으나 분지되는 일은 없고 근두부 가까이에서는 약간 꼬여지고 줄기의 잔기가 남아 있다. 바깥면은 엷은 회황색-엷은 황갈색이며 회갈색의 코르크층이 때때로 군데군데 남아 있고 불규칙한 거친 세로의 주름과 가로로 피목 같은 모양이 보인다. 질은 치밀하고 꺾기 힘들며 꺾은 면은 섬유성이다. 황기는 한국, 중국 등 아시아 지역과 러시아, 불가리아 등 널리 유럽까지 분포하고 있으며, 우리나라 한방에서는 황기건중탕, 황기계지오물탕, 십전대보탕, 방기황기탕, 보중익기탕 등 약 300 여종의 처방에 빈용되고 있는 중요한 약재이다. 주요성분은 이소플라보노이드와 트리터펜 사포닌이며, 그 외에도 카나바닌, 페놀 배당체 등이 함유되어 있어 이뇨작용, 혈압강하 작용, 기를 보하는 강장 작용, 세포성 및 체액성 면역 증강작용, 항염작용, 간과 비장의 alkaline RNase 활성감소 등의 효능이 보고되어 있다.
상기 황기는 뿌리를 선택하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서상의 용어 “추출”은 액체 또는 고체원료 중에 포함되어 있는 유용한 가용성 성분을 용매에 녹여 분리하는 방법으로, 일반적으로 추출은 상온추출, 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 증기추출, 환류 냉각 추출, 감압 또는 가압 추출법이 있다. 본 발명의 일 구현예에서는 환류 추출을 진행하였다. 환류 추출은 추출 용기 윗부분에 냉각장치가 부착되어 있어, 증발하는 용매를 냉각 및 농축시켜 용액에서 증발하는 용매의 양을 최소화하는 추출법이다.
본 명세서상의 용어 “추출물”은 용매 조추출물, 특정 용매 가용 추출물(용매 분획물) 및 용매 조추출물의 용매 분획물을 포함하며, 상기 추출물은 용액, 농축물 또는 분말 상태일 수 있다.
상기 추출물은 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물일 수 있고, 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 추출물은 용매 조추출물을 추가의 분획용매로 분획한 용매 분획물일 수 있으며, 예를 들면 상기 용매 조추출물에 포름산, 아세토니트릴, 에틸에테르, 아세트산에틸, 및 부탄올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 분획용매를 사용한 용매 분획물인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서상의 용어 “농축”은 액체함량이 높은 액상물질의 액체를 제거하여 고형물의 농도를 높이는 조작이다. 본 발명의 일 구현예에서는 감압 농축법을 이용하여 농축하였다. 감압 농축은 감압하여 용매의 끊는점을 내려 용매를 빠르게 증발시켜 용액의 용질 농도를 높이는 방법이다.
본 명세서상의 용어 “바이러스(virus)”는 라틴어로 독성물질을 의미하며, 세균여과지(0.22 um)를 통과하는 일군의 감염형 병원성 입자이다. 본 발명의 일 구현예에서 사용한 바이러스는 인플루엔자바이러스(Influenza virus; PR8-GFP)이다.
본 명세서상의 용어 “대식세포”는 선천 면역을 담당하는 주요한 세포로 세포 조직이나 이물질, 미생물, 암세포 등 건강한 몸에 존재하는 단백질이 아닌 것을 흡수하고 소화시키는 식세포 작용을 하는 백혈구의 한 유형이다. 본 발명의 일 구현예에서 사용한 대식세포는 RAW 264.7 세포이다.
본 발명에 있어서 약제학적 조성물은 인플루엔자바이러스(Influenza virus), 코로나바이러스(Corona virus), 수포성구내염바이러스(Vesicular stomatitis virus) 및 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상에 대한 항바이러스, 또는 이를 원인균으로 하는 바이러스 감염증 예방 또는 치료 활성을 나타내는 것일 수 있다.
상기 약제학적 조성물은 복합 추출물의 성인 기준 1일 섭취량이 0.01 내지 20.00 g, 0.01 내지 15.00 g, 0.01 내지 10.00 g, 0.01 내지 5.00 g, 0.01 내지 2.00 g, 0.10 내지 20.00 g, 0.10 내지 15.00 g, 0.10 내지 10.00 g, 0.10 내지 5.00 g, 0.10 내지 2.00 g, 0.50 내지 20.00 g, 0.50 내지 15.00 g, 0.50 내지 10.00 g, 0.50 내지 5.00 g, 0.50 내지 2.00 g, 1.00 내지 20.00 g, 1.00 내지 15.00 g, 1.00 내지 10.00 g, 1.00 내지 5.00 g, 또는 1.00 내지 2.00 g의 농도로 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 선천성 면역 증진은 TNF(Tumor necrosis factor)-α 또는 IL(interleukin)-6과 같은 면역 사이토카인의 생성에 의해 유도되는 것일 수 있다.
본 명세서상의 용어 “TNF-α”는 생체 내 다양한 면역세포에서 분비되는 사이토카인으로, 여러 면역 매개 염증성 질환에서 중요한 역할을 하는 인자이다. TNF-α는 증식, 생존, 분화 및 자멸사 (세포사)와 같은 다양한 종류의 세포 활동을 매개하며, 염증성 면역반응의 유도 및 유지에 중요한 역할을 한다.
본 명세서상의 용어 “IL-6”은 면역 매개 염증성 질환에서 핵심적 역할을 담당하는 전 염증성 사이토카인으로, 많은 만성 염증성 질환과 관련된 JAK/STAT 경로를 통해 염증 반응을 위한 신호를 전달한다. IL-6는 나이브(na
Figure pat00001
ve) T 세포를 Th17 세포로 분화하기 위해 필요한 인자이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 복합 추출물의 약제학적 유효량 및/또는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "약제학적 유효량"은 상술한 복합 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 피부, 정맥, 근육, 피하 등의 경로로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제, 캅셀제 또는 젤(예컨대, 하이드로젤) 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증 개선용 건강기능식품이다.
상기 복합 추출물은 사삼 1.25 내지 5.00 중량%, 지황 12.50 내지 50.0 중량%, 인삼 1.25 내지 5.00 중량%, 도라지 6.85 내지 27.00 중량%, 복령 2.50 내지 10.00 중량%, 산사 0.65 내지 2.50 중량%, 및 황기 25.0 내지 80.0 중량%를 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 사삼 2.00 내지 3.00 중량%, 지황 20.00 내지 30.0 중량%, 인삼 2.00 내지 3.00 중량%, 도라지 10.00 내지 20.00 중량%, 복령 3.00 내지 8.00 중량%, 산사 1.00 내지 1.50 중량%, 및 황기 40.0 내지 60.0 중량%를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 복합 추출물은 클로로겐산, 진세노사이드 Rg1, 칼리코신, 진세노사이드 Rb1, 진세노사이드 Rd, 아스트라갈로사이드 II, 아스트라갈로사이드 I, 및 폴리갈라신 D로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물을 함유하는 것일 수 있고, 예를 들어, 클로겐산 또는 진세노사이드 Rd인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 건강기능식품은 인플루엔자바이러스, 코로나바이러스, 수포성구내염바이러스 및 뉴캐슬병바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상에 대한 항바이러스, 또는 이를 원인균으로 하는 바이러스 감염증 개선 활성을 나타내는 것일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물을 건강기능식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품에 대하여 10 내지 60 중량%, 바람직하게는 30 내지 50 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
상기 음료는 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 당업자의 선택에 의해 적절하게 결정될 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율 또한 당업자에 의해 적절히 선택될 수 있다.
본 발명의 천연 복합 추출물은 선천성 면역 증진과 염증성 인자(사이토카인)의 유도에 의한 인터페론(interferon)의 분비를 촉진시킴으로써 인플루엔자바이러스(Influenza virus) 또는 코로나바이러스(Corona virus) 등과 같은 바이러스의 감염을 예방 및 치료하는 효과를 나타내므로, 효과적인 면역증진 또는 바이러스 감염의 예방 또는 치료 및 개선에 크게 도움이 될 수 있으며, 가장 큰 특징은 부작용이 거의 없다는 것이다.
도 1a는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 및 MDCK 세포에서 OCD20015-V009의 유효 세포독성 농도를 측정한 그래프이다.
도 1b는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에 대한 OCD20015-V009의 인플루엔자 A 바이러스(IAV) 복제 억제 효과를 확인한 사진이다.
도 1c는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에 대한 OCD20015-V009의 IAV 복제 억제 효과를 유세포 분석으로 확인한 그래프이다.
도 1d는 본 발명의 일 실시예에 따른 IAV 감염시킨 MDCK 세포에 대한 OCD20015-V009의 플라크 형성 감소 효과를 확인한 그래프이다.
도 1e는 본 발명의 일 실시예에 따른 IAV 감염시킨 RAW 264.7 세포에 대한 OCD20015-V009의 단백질 생산 효율을 확인한 사진이다.
도 1f는 본 발명의 일 실시예에 따른 IAV 감염시킨 RAW 264.7 세포에 대한 OCD20015-V009의 단백질 생산 효율을 확인한 그래프이다.
도 2a는 본 발명의 일 실시예에 따른 IAV 감염시킨 마우스에서 OCD20015-V009 전처리 여부에 따른 감염 후 10일까지의 일일 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2b는 본 발명의 일 실시예에 따른 IAV 감염시킨 마우스에서 OCD20015-V009 전처리 여부에 따른 폐 조직의 조직병리학적 결과를 나타낸 사진이다.
도 3a는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 처리 시 염증성 사이토카인 TNF-α의 유도 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3b는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 처리 시 염증성 사이토카인 IL-6의 유도 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3c는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 처리 후 24시간 경과 시 염증성 사이토카인 TNF-α의 유도 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3d는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 처리 후 24시간 경과 시 염증성 사이토카인 IL-6의 유도 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3e는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 전처리에 의한 I형 IFN 신호전달 분자의 활성화 수준을 나타내는 웨스턴 블롯 결과 사진이다.
도 3f는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 전처리에 의한 I형 IFN 신호전달 분자의 활성화 수준을 나타내는 웨스턴 블롯 결과 그래프이다.
도 4a는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 전처리에 의한 ISG-15 유전자의 시간별 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 4b는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 전처리에 의한 ISG-20 유전자의 시간별 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 4c는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 전처리에 의한 IFN-β유전자의 시간별 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 4d는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 전처리에 의한 ISG-56 유전자의 시간별 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 4e는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009 전처리에 의한 TNF-α 유전자의 시간별 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 5a는 본 발명의 일 실시예에 따른 OCD20015-V009의 UV 크로마토그램 및 총 이온 크로마토그램으로 식별된 물질을 나타내는 그래프이다.
도 5b는 본 발명의 일 실시예에 따른 OCD20015-V009의 PRM 크로마토그램으로 식별된 물질을 나타내는 그래프이다.
도 6a는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에 대한 OCD20015-V009 유래 8종 화합물의 IAV 복제 억제 효과를 확인한 사진이다.
도 6b는 본 발명의 일 실시예에 따른 RAW 264.7 세포에 대한 OCD20015-V009 유래 8종 화합물의 IAV 복제 억제 효과를 확인한 그래프이다.
도 6c는 본 발명의 일 실시예에 따라 분리된 OCD20015-V009에서 확인된 2종의 주요 성분을 나타내는 화학식이다.
도 6d는 본 발명의 일 실시예에 따른 IAV 감염시킨 RAW 264.7 세포에 대한 클로로겐산(CGA) 및 진세노사이드 Rd의 단백질 생산 효율을 확인한 그래프이다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "%"는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량)%, 고체/액체는 (중량/부피)%, 그리고 액체/액체는 (부피/부피)%이다.
상술한 바와 같이 종래의 면역치료제는 면역반응을 억제하는 의약품으로 과복용시 감염질환, 알러지반응, 가려움, 주사부위홍반 (출혈, 타박상, 홍반, 통증, 종창 포함), 호흡곤란, 발열 등의 증세가 나타날 수 있으며, 면역조절 실패로 인한 면역저하 등으로 인해 바이러스 감염에 노출될 위험이 있다.
이에 본 발명의 한 측면에 따르면, 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증의 예방, 치료 또는 개선용 조성물을 제공하여 상술한 문제의 해결을 모색하였다. 이를 통해 선천적 방어 면역시스템에서 인터페론의 분비를 촉진시켜 면역력 및 바이러스 감염에 대한 개선 효과가 우수함을 확인하여, 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증의 예방, 치료 또는 개선에 크게 도움이 될 수 있다.
제조예 1: OCD20015-V009의 제조
건조된 사삼 2.50 중량%, 지황 25.00 중량%, 인삼 2.50 중량%, 도라지 13.75 중량%, 복령 5.00 중량%, 산사 1.25 중량%, 황기 50.00 중량%(총 2000 g)를 10 L의 증류수에 침지하고 115℃에서 3시간 동안 열 추출하여 제조하였다. 150-μm 체를 통해 여과한 후 동결 건조시켰다. 복합 추출물의 수율은 14.1%(283.7 g)로 나타났다. KM-응용센터 식물표본관(등록번호, #OCD2020-1) 한국한의학연구원(KIOM) 데시케이터에 넣어 4℃에서 사용할 때까지 보관하였다.
시험예 1: OCD20015-V009의 세포 독성 확인
세포독성 확인 대상 세포인 RAW 264.7(뮤린 대식세포) 및 Madin-Darby 개 신장(MDCK, NBL-2) 세포(American Type Culture Collection)는 10% 소태아혈청(FBS; Biotechnics Research, USA)과 1% 페니실린 및 스트렙토마이신(Cellgro, USA)을 함유하는 배지(DMEM; Lonza, USA)에서 5% CO2, 37℃ 조건으로 인큐베이터에서 배양 후 사용하였다.
세포독성은 MTT 분석을 사용하여 결정되었다. RAW 264.7 및 MDCK 세포를 1 × 105 cells/well로 하여 24 웰 플레이트에 접종하고 OCD20015-V009를 0-400 μg/mL 농도로 각 웰에 첨가하였다. 첨가 후, 24시간 뒤에 MTT 용액을 각 웰에 첨가하고 세포를 추가로 30분 동안 배양하였다. 이어서 1 mL DMSO를 첨가하고 Epoch Microplate Reader(BioTek, USA)를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 1a에서 확인할 수 있듯이, OCD20015-V009는 RAW 264.7 세포에서 세포독성을 나타내지 않았다. 따라서 후속 실험은 100 또는 200μg/ml 미만의 OCD20015-V009로 수행되었다.
시험예 2: OCD20015-V009의 IAV 감염 억제 효과 확인
American Type Culture Collection(ATCC, VR-95™의 인플루엔자 A(A/Puerto Rico/8/34; A/PR/8/34) 및 GFP 태그가 지정된 A/PR/8/34 바이러스(A/PR/8/34-GFP)를 사용하여 OCD20015-V009의 바이러스 복제 억제 분석을 수행하였다. A/PR/8/34-GFP는 GFP 유전자를 nonstructural protein 1 open reading의 C-말단에 융합하여 간략하게 구성하였다.
구체적으로, RAW 264.7 세포는 1 × 105 cells/well로 24-웰 플레이트(well plate)에 접종하였으며, 각 웰에 DMEM 단독(미처리(CON) 또는 바이러스 단독(Vehicle) 그룹의 경우), 1,000 U의 재조합 마우스 인터페론(IFN-β양성 대조군)(Sigma-Aldrich, USA)이 포함된 DMEM, 또는 50 및 100 ㎍/mL의 OCD20015-V009가 포함된 DMEM에서 18시간 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음 세포를 10의 감염 다중도(MOI)에서 A/PR/8/34-GFP로 감염시켰다. GFP 수준은 감염 후 24시간(hpi)에 배율 200으로 형광 현미경(Nikon, 일본)을 사용하여 측정하였다. 그 후, 세포는 트립신 처리를 사용하여 수확한 후 유세포 분석법(CytoFLEX, Beckman, USA)을 사용하여 형광 검출을 수행하였다.
OCD20015-V009의 항바이러스 활성은 A/PR/8/34-GFP 복제를 억제한 후 RAW 264.7 세포에서 GFP 수준을 검출함으로써 조사되었다.
도 1b에서 확인할 수 있듯이, OCD20015-V009로 처리되지 않은 세포는 A/PR/8/34-GFP에 의한 감염 시 높은 GFP 수준을 가졌다. 반대로, OCD20015-V009로 전처리된 RAW 264.7 세포의 GFP 수준은 상당히 낮았다.
도 1c에서 확인할 수 있듯이, RAW 264.7 세포에서 A/PR/8/34-GFP의 복제는 Vehicle에 비해 각각 50 및 100 μg/mL에서 OCD20015-V009 전처리로 81.5 및 91.1% 유의하게 감소하였다.
플라크 분석을 위하여 Raw 264.7 세포를 24-웰 플레이트(1 x 105 cells/ml)에서 24시간 동안 배양하였다. 그런 다음 다양한 농도의 OCD2015-V009를 첨가하고 37℃에서 18시간 동안 인큐베이션하였다. 반응 후, 세포를 IAV로 2시간 동안 감염시키고, PBS(phosphate-buffered saline)로 헹구고, DMEM을 24시간 동안 배지에 첨가하였다. 그런 다음, MDCK 세포를 바이러스가 포함된 Raw264.7 세포 배양 상등액으로 2시간 동안 감염시켰다. 그 후, MDCK 단층을 2X의 완전한 DMEM에서 1.5% 아가로스로 코팅하고 37℃에서 5% CO2와 함께 3일 동안 인큐베이션하였다. 배양 또는 감염 후 세포를 1% 크리스탈 바이올렛 용액으로 염색하고 플라크를 계수하였다.
도 1d에서 확인할 수 있듯이, OCD20015-V009가 농도 의존적으로 MDCK 세포에서 플라크 형성을 감소시키는 것을 관찰하였다.
IAV 단백질의 생산을 검증하기 위해 면역형광(IF)염색을 수행하였다.
구체적으로, 커버 슬라이드에 1 x 105 cells/ml로 접종한 RAW 264.7 세포를 37℃, 5% CO2에서 24시간 동안 배양하였다. RAW 264.7 세포는 바이러스 흡착 전에 25, 50 또는 100 μg/mL의 OCD20015-V009, 1000U/mL 재조합 마우스 인터페론(IFN)-β 또는 배지만(음성 대조군)으로 사전 처리되었다. 그런 다음 18시간 동안 5% CO2로 37℃에서 배양한 후 MOI 10에서 2시간 동안 A/PuertoRico/8/34로 감염시켰다.
바이러스 감염 후, 바이러스와 배지를 제거하고 세포를 PBS(phosphate-buffered saline)로 3회 헹구었다. 다음으로, 완전한 배지를 첨가하고, 세포를 5% CO2와 함께 37℃에서 인큐베이션하였다. 24시간 후, 세포를 차가운 PBS로 세척하고, 실온에서 30분 동안 4% 파라포름알데히드로 고정하고, PBS 중 0.1% Triton-X100으로 15분 동안 투과화시켰다.
블로킹 후, 세포를 IAV 단백질인 M2에 대한 토끼 다클론 항체(3% BSA(Sigma-Aldrich) 중 1:250; GeneTex, USA)와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션하고, 차가운 PBS로 3회 헹구고, Alexa Fluor 568 염소 항토끼 IgG 항체(3% BSA에서 1:500, Thermo Fisher)와 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 핵은 DAPI(0.5μg/mL; Thermo Fisher)로 10분 동안 염색하여 시각화하였다. 그런 다음 형광 현미경(Nikon)을 사용하여 이미지를 캡처하였다.
RAW 264.7 세포에서 M2의 감소는 M2-특이적 항체를 사용한 형광 현미경으로 관찰되었다. RAW 264.7 세포는 DAPI(파란색)로 염색되었으며 병합된 이미지는 M2(빨간색)를 나타낸다.
도 1e에서 확인할 수 있듯이, OCD20015-V009로 사전 처리된 세포는 훨씬 적은 M2를 생성하였다.
IAV 단백질의 생산을 검증하기 위해 세포 용해물에서 인플루엔자 A 바이러스 단백질 HA, PA 및 NP의 수준을 웨스턴 블롯으로 분석하였다.
구체적으로, 6웰 플레이트에 1 × 106 세포/웰로 시딩된 RAW 264.7 세포를 5% CO2와 함께 37℃에서 OCD20015-V009 및 LPS와 함께 배양하였다. 그 후, 세포를 수확하고 프로테아제 및 포스파타제 억제제를 함유하는 RIPA 완충액(Millipore, USA)에서 용해시켰다. 샘플의 총 단백질 함량은 Bradford 시약을 사용하여 정규화되었다. 단백질을 SDS-PAGE를 사용하여 분리하고 폴리비닐리덴 플루오라이드 막(Millipore)으로 옮겼다. 3% BSA로 블로킹한 후, 4℃ 오버나잇 조건으로 블롯을 1차 항-STAT1, 항-TBK1, 항-phospho-STAT1, 항-phospho-TBK1(Cell Signaling Technology, USA), 항-β액틴, 및 M1, NA, NP 및 PA 항체(GeneTex, USA)(1:1,000 희석)와 함께 인큐베이션하였다. 튜불린 수준을 내부 대조군으로 사용하였다.
블롯을 TBS-T에서 세 번 세척한 후 HRP가 결합된 이차 항체(Cell Signaling Technology)와 함께 배양하였다. ChemiDoc™Touch Imaging System(Bio-Rad)을 사용하여 단백질을 정량하고, ImageJ를 사용하여 단백질 밴드의 상대적 강도를 측정하고, ImageJ 소프트웨어를 사용하여 정량화하였다.
도 1f에서 확인할 수 있듯이, HA, PA 및 NP의 생성은 A/PR/8/34(H1N1)-GFP로 감염되기 전에 100 μg/mL OCD20015-V009로 전처리된 RAW 264.7 세포에서 유의하게 억제되었다.
이러한 데이터는 OCD20015-V009 전처리가 RAW 264.7 세포에서 IAV 감염 및 바이러스 단백질 생산을 유의하게 억제한다는 것을 의미한다. 따라서 OCD20015-V009 전처리는 인플루엔자 H1N1 바이러스 단백질 생산을 감소시키고 감염을 억제할 가능성이 있다.
시험예 3: OCD20015-V009에 의한 IAV 감염 억제(in vivo)
BALB/c 마우스에서 IAV 감염에 대한 OCD20015-V009의 보호 효과를 조사하였다.
5주령의 암컷 BALB/c 마우스(Orient Bio Inc., Seongnam, South Korea)를 DGMIF의 LAC에서 표준 사육 조건 하에서 최소 1주일 동안 순응시키고 표준 설치류 사료 및 물을 임의로 제공하였다. OCD20015-V009의 경구 접종 및 IAV 챌린지를 위해, 마우스를 각 그룹에서 10마리의 마우스로 구성된 4개의 실험 그룹으로 분리하고 대조군, PBS, 100 또는 300 mg/kg OCD20015-V009를 IAV와 함께 각각 투여하였다. 바이러스에 감염되지 않은 마우스 그룹을 음성 대조군으로 사용하였다.
각 실험군의 마우스는 감염 전 7일 동안 PBS, 100 및 300 mg/kg OCD20015-V009를 총 부피 200 μL로 각각 1일 1회 경구 투여하였다. 마우스를 50% 마우스 치사량(LD50)에서 PBS 중 20 μL의 A/PR/8/34로 비강내 감염시켰다. 100 또는 300 mg/kg OCD20015-V009로 하루에 한 번 처리된 마우스는 이 연구에서 유의한 임상 증상 없이 비교적 안정적인 체중을 유지하였다.
도 2a에서 확인할 수 있듯이, 처리되지 않은 모든 A/PR/8/34에 감염된 마우스는 7 dpi 이내에 사망하였다. 반대로, A/PR/8/34 감염 후 OCD20015-V009로 전처리된 마우스의 사망률은 감소하였다.
생존은 고정된 시점에서 감염 후 10일(dpi) 동안 모니터링되었다. 7 dpi에서 각 그룹의 3마리의 마우스를 무작위로 선택하고 폐 조직병리학을 측정하기 위해 희생시켰다. 미처리 마우스 또는 OCD20015-V009로 사전 처리된 마우스의 절단된 폐 조직 샘플에서 바이러스 감염으로 인한 조직병리학적 변화를 조사하기 위한 염색을 위하여 7 dpi로 샘플링하였다.
구체적으로, 폐 조직 샘플을 즉시 10% 포르말린을 포함하는 파라핀이 포함된 중성 완충액에 고정하고 마이크로톰을 사용하여 4~6 μm 섹션으로 슬라이스하였다. 절편을 슬라이드에 올려 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색한 후 광학현미경으로 관찰하였다. 나머지 마우스는 10 dpi에서 생존을 측정하는 데 사용되었다.
도 2b에서 확인할 수 있듯이, 폐 염증이나 병리학적 변화는 정상 대조군에서는 발견되지 않았다. 그러나 비히클 그룹의 마우스에서 기관지 상피 세포가 두꺼워진 폐포 벽으로 괴사되었다. 또한 심한 폐 울혈 및 병변이 관찰되었다. 또한, 폐포 공간은 호중구, 대식세포 및 림프구의 중등도 염증성 침윤물로 점유되었다. 그러나 300 mg/kg OCD20015-V009로 사전 처리된 마우스의 폐 샘플은 폐 울혈 및 병변 완화를 나타내어 처리되지 않은 마우스에 비해 폐 염증이 더 낮음을 나타낸다.
시험예 4: 전염증성 사이토카인 생성 및 I형 IFN 신호전달에 대한 OCD20015-V009의 효과
RAW 264.7 뮤린 대식세포에서의 경로 활성화 전염증성 사이토카인 및 I형 IFN은 면역조절 활성 및 항바이러스 반응을 유도하는 데 중요하다. IAV 감염 치료에 대한 한약의 면역 조절 효과는 광범위하게 연구되었다. 또한 전염증성 사이토카인과 I형 IFN의 생성을 통한 선천적 면역 반응이 OCD20015-V009의 항바이러스 작용을 담당할 수 있습니다. ELISA를 사용하여 OCD20015-V009가 TNF-α 및 IL-6 분비에 미치는 영향을 평가하였다.
RAW 264.7 세포를 파종하고 18시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 6시간 또는 24시간 동안 37℃에서 200 ng/mL LPS 또는 50 또는 100 ㎍/mL의 OCD20015-V009로 처리하였다. 각 처리 그룹의 상층액을 6시간 또는 24시간에 수확하고 4℃에서 10분 동안 15,000 g에서 원심분리하였다. 정화된 상청액을 쥐 인터루킨(IL-6) 또는 종양 괴사 인자(TNF-α)의 포획된 항체로 코팅된 효소 결합 면역흡착 분석 플레이트에 분배하여 사이토카인 분비를 측정하였다. ELISA 항체 세트(#88-7324-77 및 #88-7064-77) (eBioscience, USA)를 이용하여 배양액 중 염증성 사이토카인 TNF-α 및 IL-6의 수치를 측정하였다.
도 3a 내지 3d에서 확인할 수 있듯이, 분비된 TNF-α와 IL-6의 농도는 100 ㎍/mL OCD20015-V009를 6시간 처리했을 때 대조군에 비해 각각 10,597.4±768.9 및 1,165.5±95.9 증가했으며, 24시간 후에는 대조군에 비해 12,155.13±667 및 8,250.2±975.2 증가하였다. 이러한 결과는 OCD20015-V009가 쥐 대식세포에서 TNF-α 및 IL-6에 의해 매개되는 항바이러스 반응을 유도함을 나타낸다.
또한, 웨스턴 블롯을 사용하여 OCD20015-V009로 사전 처리된 RAW 264.7 세포에서 TBK1 및 STAT1 인산화를 연구하여 I형 IFN 신호전달 분자의 활성화에 대한 OCD20015-V009의 효과를 결정하였다. Vehicle, 200 ng/mL LPS 또는 200μg/mL OCD20015-V009로 처리된 대식세포의 전체 세포 용해물에 대한 웨스턴 블롯팅을 수행하여 시간이 지남에 따라 결합 키나제 1(TBK1), STAT1 및 β액틴의 비인산화 및 인산화된 형태의 수준을 평가하였다.
도 3e 및 3f에서 확인할 수 있듯이, OCD20015-V009 처리가 STAT1 및 TBK1 인산화를 상향 조절하고, 이들은 I형 IFN 신호 전달 경로의 핵심 분자임을 보여준다.
RAW 264.7 세포에서 OCD20015-V009와 IFN 자극 유전자 사이의 상호 작용을 추가로 분석하였다. 세포를 비히클 단독(Con), 200 ng/mL 지질다당류(LPS), 또는 50 또는 100 ㎍/mL OCD20015-V009로 처리한 다음 5% CO2와 함께 37℃에서 인큐베이션하였다. OCD20015-V009 처리 후 RAW 264.7 세포에서 ISG-15, 20, 56, TNF-α 및 IFN-β 유전자의 mRNA 수준의 시간 의존적 변화를 조사하였다.
총 RNA 추출 및 cDNA 합성은 각각 Easy-BLUE™RNA 추출 키트(iNtRON Biotech) 및 AccuPower®CycleScript RT PreMix(Bioneer)를 사용하여 수행되었다. 총 1 μg의 RNA가 cDNA로 역전사되었고, 대식세포 cDNA에 대한 qPCR 올리고뉴클레오티드 프라이머가 표 1에 표시되어 있다.
서열번호 명칭 서열
1 GAPDH Forward TGACCACAGTCCATGCCATC
2 Reverse GACGGACACATTGGGGGTAG
3 ISG-15 Forward CAATGGCCTGGGACCTAAA
4 Reverse CTTCTTCAGTTCTGACACCGTCAT
5 ISG-20 Forward AGAGATCACGGACTACAGAA
6 Reverse TCTGTGGACGTGTCATAGAT
7 ISG-56 Forward AGAGAACAGCTACCACCTTT
8 Reverse TGGACCTGCTCTGAGATTCT
9 TNF-α Forward AGCAAACCACCAAGTGGAGGA
10 Reverse GCTGGCACCACTAGTTGGTTGT
11 IFN-β Forward TCCAAGAAAGGACGAACATTCG
12 Reverse TGCGGACATCTCCCACGTCAA
AccuPower®2× Greenstar qPCR 마스터 믹스(Bioneer, Korea) 10 μL, 템플릿 DNA 5 μL, RNase가 없는 물 3 μL. PCR 주기는 다음과 같습니다: 95℃ 10분, 95℃ 20초, 60℃(ISG-15), 53℃(ISG-20), 60℃(IFN-β), 56℃(ISG-56) 또는 60℃(TNF-α)에서 40초 동안 가열하고 각 실험 종료 시 용융 곡선 분석을 수행하여 프라이머 쌍당 단일 생성물이 증폭되었음을 확인하였다.
증폭 및 분석은 QuantStudio 6 Flex Real-time PCR System(Thermo Fisher)을 이용하였으며, 각 시료는 상대 CT법을 이용하여 비교하였다. 유전자 발현의 배수 변화는 2-ΔΔCt 방법을 사용하여 GAPDH 발현으로 정규화한 후 블랭크 대조군에 대해 결정되었다.
도 4a 내지 4e에서 확인할 수 있듯이, ISG (IFN-stimulated gene)-15, ISG-20, ISG-56, TNF-α, IFN-β 유전자의 발현이 OCD20015-V009를 처리한 RAW 264.7 세포가 처리되지 않은 세포 대비 증가되었으며, 시간이 지나면서도 이러한 양상이 변하지 않았다. 또한, 관찰된 패턴은 LPS 처리된 양성 대조군의 패턴과 유사했다.
ISG-15, ISG-20 및 ISG-56 유전자의 전사는 100 μg/mL OCD20015-V009로 전처리된 세포에서 6시간 동안 각각 132.9±5.2, 114.2±6.7 및 98.1±7.5배 증가했다. 전반적으로 결과는 OCD20015-V009가 대식세포에서 IFN 신호전달 경로와 ISG 발현을 조절하여 바이러스 감염을 억제함으로써 항바이러스 상태를 유도할 수 있음을 나타낸다.
시험예 5: UPLC-MS/MS 분석에 의한 OCD20015-V009의 화학 조성
OCD20015-V009의 성분은 전통적으로 사용되는 각 허브의 물 추출물을 분석하여 확인되었다. 물 추출물의 머무름 시간 및 질량 단편화를 인증된 표준과 비교한 UPLC-MS/MS 분석을 수행하였다.
OCD20015-V009의 식물화학적 분석에는 Thermo Q-Exactive 질량분석기(UHPLC-MS/MS, Thermo Fisher Scientific, USA)가 장착된 Dionex UltiMate 3000 시스템을 사용하였다. 데이터 수집 및 처리는 Xcalibur v.3.0 및 Tracefinder v.4.0을 사용하여 수행되었다.
구체적으로, Acquity BEH C18 컬럼(100 × 2.1 mm, 1.7 μm, Waters, USA)으로 크로마토그래피 분리를 달성했으며 물 중 0.1% 포름산과 아세토니트릴로 구성된 구배 용출을 사용하였다. 확인된 화합물을 인증된 표준의 머무름 시간 및 질량 스펙트럼과 비교하였다. 기준에 맞지 않는 구성요소에 대해서는 이전 보고서에서 해당 m/z 및 MS 조각 정보를 찾았다. (* 표준 머무름 시간(Rt) 및 질량 스펙트럼 데이터와 비교)
No Rt
(Min)		 Calculated
(m/z)		 Estimated
(m/z)		 Adducts Error
(ppm)		 Formula MS/MS
Fragments
(m/z)		 Identifications
1 1.92 407.120 407.118 [M+COOH]- 3.13 C15H22O10 199, 166 Catalpol*
2 4.51 393.140 393.139 [M+COOH]- 2.64 C15H24O9 347, 149, 127 Ajugol*
3 4.73 375.130 375.129 [M-H]- 2.44 C16H24O10 213, 169, 113 Loganic acid*
4 5.14 353.088 353.087 [M-H] - 2.62 C16H18O9 191 Chlorogenic Acid*
5 5.63 289.072 289.071 [M-H] - 2.47 C15H14O6 289, 245, 205 Epicatechin*
6 6.64 447.129 447.127 [M+H]+ 3.96 C22H22O10 283, 268 Calycosin-7-glucoside*
7 6.66 463.088 463.087 [M-H] - 2.51 C21H20O12 301 Isoquercitrin*
8 7.98 827.444 827.441 [M-H]- 2.92 C42H68O16 - Platy saponin A
9 8.80 991.548 991.546 [M+COOH]- 2.63 C48H82O18 946, 475, 161 Ginsenoside Re*
10 8.80 845.490 845.488 [M+COOH]- 2.66 C42H72O14 161, 101 Ginsenoside Rg*1
11 9.58 283.061 283.060 [M-H]- 3.17 C16H12O5 268 Calycosin*
12 9.94 1385.623 1385.618 [M-H]- 3.80 C63H102O33 843, 469 Platycodin D2*
13 10.03 1223.570 1223.566 [M-H]- 3.82 C57H92O28 681, 541, 469 Platycodin D*
14 11.33 845.490 845.488 [M+COOH]- 3.02 C42H72O14 799, 637 Ginsenoside Rf*
15 11.55 1153.601 1153.598 [M+COOH]- 3.13 C54H92O23 1107, 945 Ginsenoside Rb1*
16 11.69 815.480 815.477 [M+COOH]- 2.97 C41H70O13 637, 161 Notoginsenoside R2*
17 11.88 1123.591 1123.586 [M+COOH]- 3.70 C53H90O22 1077, 945 Ginsenoside Rc*
18 12.10 955.491 955.487 [M-H]- 3.59 C48H76O19 955, 793, 523 GinsenosideRo*
19 12.38 267.066 267.065 [M-H]- 3.53 C16H12O4 252 Formononetin*
20 12.97 991.548 991.546 [M+COOH]- 2.75 C48H82O18 621 Ginsenoside Rd*
21 13.71 871.470 871.467 [M+COOH]- 2.81 C43H70O15 - Astragaloside II
22 14.36 871.470 871.467 [M+COOH]- 3.02 C43H70O15 - Isoastragalosides II
23 14.96 871.470 871.467 [M+COOH]- 3.16 C43H70O15 - Astragaloside II isomer
24 15.60 913.480 913.478 [M+COOH]- 2.96 C45H72O16 - Astragaloside I
25 16.11 497.327 497.326 [M-H]- 2.72 C31H46O5 419, 405, 403 6α-Hydroxypolyporenic acid C*
26 16.20 913.480 913.477 [M+COOH]- 3.09 C45H72O16 - Isoastragaloside I
27 16.55 767.494 767.490 [M+H] + 4.67 C42H70O12 443, 425, 407 Ginsenoside Rg5*
28 16.84 913.480 913.477 [M+COOH]- 3.16 C45H72O16 - Astragaloside I isomer
29 18.19 483.348 483.346 [M-H]- 3.32 C31H48O4 437, 423, 405, 389 Dehydrotumulosic acid*
30 18.33 811.485 811.482 [M+COOH]- 3.17 C42H70O12 765, 603 Ginsenoside Rk2*
31 18.57 497.327 497.326 [M-H]- 3.03 C31H46O5 423, 379, 211 Poricoic acid A*
32 18.94 481.332 481.331 [M-H]- 3.22 C31H46O4 435, 421, 311 Polyporenic acid C*
33 19.22 483.348 483.346 [M-H]- 3.20 C31H48O4 437, 423, 337 3-Epidehydrotumulosic acid*
34 20.31 525.359 525.357 [M-H]- 3.08 C33H50O5 465, 355 Dehydropachymic acid*
35 20.54 527.374 527.373 [M-H]- 2.88 C33H52O5 527, 405 Pachymic acid*
표 2 및 도 5에서 확인할 수 있듯이, 1종의 벤조산(클로로겐산), 3종의 이리도이드(catalpol, ajugol 및 loganic acid), 5종의 플라보노이드(epicatechin, calycosin-7-glucoside, isoquercitrin, calycosin, formononetin), 7종의 트리테르페노이드(6α-hydroxypolyporenic acid C, dehydrotumulosic acid, poricoic acid A, polyporenic acid C, 3-epidemic acid, dehydrotumulosic acid , 및 파키믹산), 19종의 트리테르페노이드 사포닌(판형 사포닌 A, 진세노사이드 Re, 진세노사이드 Rg1, 플라티코딘 D2, 플라티코딘 D, 진세노사이드 Rf, 진세노사이드 Rb1, 노토진세노사이드 R2, 진세노사이드 Rc, 아스트라갈로사이드 II 이성질체, 아스트라갈로사이드 I, 이소아스트라갈로사이드 I, 진세노사이드 Rg5, 아스트라갈로사이드 I 이성질체 및 진세노사이드 Rk2)을 포함하는 성분이 나타났다.
IAV에 대한 OCD20015-V009의 항바이러스 효과는 이러한 화합물의 효과에 기인할 수 있다. OCD20015-V009에서 확인된 성분의 바이러스 복제 억제 효과 다음으로 OCD20015-V009의 주요 8종 화합물, 클로로겐산(chlorogenic acid), 진세노사이드(ginsenoside) Rg1, 칼리코신(calycosin), 진세노사이드 Rb1, 진세노사이드 Rd, 아스트라갈로사이드(astragaloside) II, 아스트라갈로사이드 I, 및 폴리갈라신(polygalacin) D가 RAW 264.7 세포에서 바이러스 단백질 생성을 억제하여 인플루엔자 바이러스 복제를 억제하는지를 분석하였다.
구체적으로, RAW 264.7 세포 단독, 10 μM의 OCD20015-V009 유래 8종 화합물 또는 1,000 U/mL의 재조합 마우스 인터페론-β의 처리 12시간 후, 10 μM 감염 다중도에서 GFP-발현 인플루엔자 바이러스 A/PR/8/34-GFP를 사용하여 RAW 264.7 세포를 감염시키고, 바이러스 감염 24시간 후 GFP 수준 및 바이러스 복제 감소를 유세포 분석을 사용하여 획득한 이미지를 분석하였다.
도 6a 및 6b에서 확인할 수 있듯이, GFP 수준은 처리되지 않은 세포보다 도 6c에 표시된 클로로겐산 또는 진세노사이드 Rd로 사전 처리된 세포에서 더 낮게 나타났다.
다양한 IAV 단백질에 대한 항체를 사용하여 웨스턴 블롯에 의해 분석된 RAW 264.7 세포의 IAV 단백질 수준을 분석하였다. RAW 264.7 세포는 바이러스 흡착 후 10 μM 및 20 μM 클로로겐산(CGA) 또는 진세노사이드 Rd, 1000 U/mL 재조합 마우스 인터페론(IFN)-β 또는 배지 단독(음성 대조군)으로 전처리되었다.
구체적으로, 세포 용해물에서 IAV 단백질 PA, PB1, PB2 및 NA의 수준을 웨스턴 블롯으로 분석하였고, 튜불린 수준을 내부 대조군으로 사용하였다. 바이러스 발현의 웨스턴 블로팅 및 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 데이터를 정량화하였다.
도 6d에서 확인할 수 있듯이, 웨스턴 블롯은 클로로겐산 및 진세노사이드 Rd로 사전 처리된 RAW 264.7 세포에서 처리되지 않은 세포에 비해 IAV 단백질의 수준이 억제되었음을 보여주었다.
<110> OKCHUNDANG <120> Composition for innate immunity, or antiviral against influenza virus or corona virus containing natural extracts <130> PN210462 <160> 12 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH Forward primer <400> 1 tgaccacagt ccatgccatc 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH Reverse primer <400> 2 gacggacaca ttgggggtag 20 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ISG-15 Forward primer <400> 3 caatggcctg ggacctaaa 19 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ISG-15 Reverse primer <400> 4 cttcttcagt tctgacaccg tcat 24 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ISG-20 Forward primer <400> 5 agagatcacg gactacagaa 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ISG-20 Reverse primer <400> 6 tctgtggacg tgtcatagat 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ISG-56 Forward primer <400> 7 agagaacagc taccaccttt 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ISG-56 Reverse primer <400> 8 tggacctgct ctgagattct 20 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-a Forward primer <400> 9 agcaaaccac caagtggagg a 21 <210> 10 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-a Reverse primer <400> 10 gctggcacca ctagttggtt gt 22 <210> 11 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-b Forward primer <400> 11 tccaagaaag gacgaacatt cg 22 <210> 12 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-b Reverse primer <400> 12 tgcggacatc tcccacgtca a 21

Claims (8)

  1. 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 복합 추출물은 사삼 1.25 내지 5.00 중량%, 지황 12.50 내지 50.0 중량%, 인삼 1.25 내지 5.00 중량%, 도라지 6.85 내지 27.0 중량%, 복령 2.50 내지 10.0 중량%, 산사 0.65 내지 2.50 중량%, 및 황기 25.0 내지 80.0 중량%를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 복합 추출물은 클로로겐산(chlorogenic acid), 진세노사이드(ginsenoside) Rg1, 칼리코신(calycosin), 진세노사이드 Rb1, 진세노사이드 Rd, 아스트라갈로사이드(astragaloside) II, 아스트라갈로사이드 I, 및 폴리갈라신(polygalacin) D로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물을 함유하는 것인, 약제학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 인플루엔자바이러스(Influenza virus), 코로나바이러스(Corona virus), 수포성구내염바이러스(Vesicular stomatitis virus) 및 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상에 대한 항바이러스, 또는 이를 원인균으로 하는 바이러스 감염증 예방 또는 치료 활성을 나타내는 것인, 약제학적 조성물.
  5. 사삼, 지황, 인삼, 도라지, 복령, 산사 및 황기로 이루어진 군으로부터 선택되는 2종 이상의 복합 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 항바이러스, 또는 바이러스 감염증 개선용 건강기능식품.
  6. 제5항에 있어서, 상기 복합 추출물은 사삼 1.25 내지 5.00 중량%, 지황 12.50 내지 50.0 중량%, 인삼 1.25 내지 5.00 중량%, 도라지 6.85 내지 27.0 중량%, 복령 2.50 내지 10.0 중량%, 산사 0.65 내지 2.50 중량%, 및 황기 25.0 내지 80.0 중량%를 포함하는 것인, 건강기능식품.
  7. 제5항에 있어서, 상기 복합 추출물은 클로로겐산(chlorogenic acid), 진세노사이드(ginsenoside) Rg1, 칼리코신(calycosin), 진세노사이드 Rb1, 진세노사이드 Rd, 아스트라갈로사이드(astragaloside) II, 아스트라갈로사이드 I, 및 폴리갈라신(polygalacin) D로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물을 함유하는 것인, 건강기능식품.
  8. 제5항에 있어서, 상기 건강기능식품은 인플루엔자바이러스(Influenza virus), 코로나바이러스(Corona virus), 수포성구내염바이러스(Vesicular stomatitis virus) 및 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상에 대한 항바이러스, 또는 이를 원인균으로 하는 바이러스 감염증 예방 또는 치료 활성을 나타내는 것인, 건강기능식품.
KR1020210158498A 2021-01-04 2021-11-17 천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 또는 인플루엔자바이러스 또는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물 KR20230072554A (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210158498A KR20230072554A (ko) 2021-11-17 2021-11-17 천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 또는 인플루엔자바이러스 또는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물
US17/564,459 US20220211792A1 (en) 2021-01-04 2021-12-29 Composition containing natural extracts for enhancement of innate immunity or antiviral use against influenza virus or corona virus

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210158498A KR20230072554A (ko) 2021-11-17 2021-11-17 천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 또는 인플루엔자바이러스 또는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230072554A true KR20230072554A (ko) 2023-05-25

Family

ID=86541803

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020210158498A KR20230072554A (ko) 2021-01-04 2021-11-17 천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 또는 인플루엔자바이러스 또는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20230072554A (ko)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7427032B2 (ja) 黒参抽出物を含む抗インフルエンザウイルス組成物、呼吸器疾患治療用組成物及び抗老化組成物
KR101901828B1 (ko) 쥐꼬리망초 추출물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102232733B1 (ko) 에키네시아 추출물을 포함하는 항바이러스용 조성물
KR20230006422A (ko) 노다케닌 또는 노다케네틴을 포함한 인플루엔자 바이러스 억제용 조성물
KR101486484B1 (ko) 삼채 추출물을 유효성분으로 포함하는 천식 예방 또는 개선용 식품조성물
KR101336094B1 (ko) 피부 개선용 건강기능식품 조성물 및 그 제조방법
CN108042661B (zh) 富含二氢杨梅素的白茶提取物和制备医药健康产品的用途
KR20210051637A (ko) 식물 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증진용 조성물 및 이의 제조방법
US20220211792A1 (en) Composition containing natural extracts for enhancement of innate immunity or antiviral use against influenza virus or corona virus
KR20230072554A (ko) 천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진, 또는 인플루엔자바이러스 또는 코로나바이러스에 대한 항바이러스용 조성물
KR20220077317A (ko) 바이러스성 질환 예방 및 개선용 조성물
KR101131719B1 (ko) 백두옹 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 치료 및 예방용 조성물
KR102587075B1 (ko) 천연 추출물을 포함하는 선천성 면역 증진용 조성물
KR20090033768A (ko) 흰목이버섯 추출물을 함유하는 기억증진용 조성물 및 이의제조방법
KR20100038633A (ko) 고삼 추출물, 고삼 분획물, 이로부터 분리한 테로카판계 및플라보노이드계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한염을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR101575702B1 (ko) 상황버섯 자실체 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 창상치료 또는 피부 활성용 약학적 조성물
KR102542119B1 (ko) 애기우산나물 추출물을 유효성분으로 포함하는 미세먼지 유발 염증성 기도 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR102366763B1 (ko) 호흡기 건강 개선용 식품 조성물
KR20190086961A (ko) 한약재 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물
KR102624173B1 (ko) 산양삼 및 산돌배 추출물 또는 그 분획물을 포함하는 면역증진용 조성물
KR20130120849A (ko) 스컬캅플라본ⅱ 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20170140651A (ko) 하니베리 추출물을 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 조성물
KR101209646B1 (ko) 야베스 추출물을 포함하는 면역세포증가 또는 암세포 전이 억제 또는 간염 바이러스 증식 억제용 약학적 조성물
KR101754652B1 (ko) 지의류 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물
KR20220161908A (ko) 면역증진 또는 항바이러스용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal