KR20230064281A - 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 지방간 개선용 조성물 - Google Patents
인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 지방간 개선용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 관한 것으로, 다양한 생리활성 단백질을 함유하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 효과적으로 제조하는 방법을 제공하기 위해 (1) 분쇄된 인삼 또는 홍삼을 1X PBS(phosphate buffer saline)에 혼합하는 단계; (2) 상기 (1) 단계의 혼합액을 300 g 내지 500 g의 조건으로 5 분 내지 15분 동안 원심분리하는 단계; (3) 상기 (2) 단계 후에 생성된 상등액을 분리하여 1,000 g 내지 3,000 g의 조건으로 10분 내지 30분 동안 원심분리하는 단계; (4) 상기 (3) 단계 후에 생성된 상등액을 분리하여 9,000 g 내지 11,000 g의 조건으로 20분 내지 40분 동안 원심분리하는 단계; (5) 상기 (4) 단계 후에 생성된 상등액을 0.1 μm 내지 0.5 μm 크기의 필터로 정제하는 단계; (6) 상기 (5) 단계에 정제된 용액을 9,000 g 내지 11,000 g의 조건으로 1 시간 내지 3 시간 동안 원심분리하는 단계; 및 (7) 상기 (6) 단계에서 생성된 침전물을 분리하는 단계를 포함하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법을 제공하고, 상기 제조 방법으로 제조된 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선용 조성물 및 이를 포함하는 기능성 식품 조성물을 제공한다.
Description
본 발명은 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 지방간 개선용 조성물에 관한 것이다.
인삼(人蔘)은 오갈피나무과(Araliaceae) 인삼속(Panax genus)에 속하는 다년생 초본으로 한반도를 중심으로 한 동아시아로부터 시베리아 동부, 북미에 이르기까지 광범위한 지역에서 재배되고 있다. 인삼의 종류에는 주산지가 한반도인 고려인삼(Panax ginseng C.A. Mayer), 중국의 전철삼(Panax notoginseng F.H. Chen), 일본의 죽절삼(Panax japonincus C.A. Mayer) 및 미국과 캐나다의 서양삼(Panax quinquefolium L.) 등이 있다.
인삼의 화학성분 함량은 일반적으로 사포닌이 3~6%(프로토파낙사다이올계 24종, 프로토파낙사트 리올계 사포닌 11종, 올레아놀린산계 사포닌 1종), 함 질소화합물이 12~16%(단백질, 아미노산, 펩타이드, 핵산, 알칼로이드), 지용성 성분 1~2%(지질, 지방산, 정유성분, 테르페노이드, 폴리아세틸렌 페놀화합물 등), 비타민 0.05%, 탄수화물 60~70%, 회분 4~6% 등으로 이루어져 있다. 인삼은 과거로부터 효능이 인정된 약용식물로 인삼의 구성 성분인 사포닌(saponin) 성분과 비사포닌 성분인 페놀, 플라보노이드, 산성다당체 등의 효과가 널리 알려져 있다. 인삼의 생리활성은 체계적인 약리학적 접근으로 중추신경계 안정화 작용, 뇌기능 활성화, 항암, 면역기능조절, 항당뇨, 간기능 개선, 심혈관 장애개선, 항동맥경화, 항고지혈, 혈압조절, 갱년기 장애 개선, 골다공증 개선, 항스트레스 및 항피로도 작용, 항염증 작용, 마약해독 작용, 항산화 및 노화억제 작용 등 광범위하다. 이러한 인삼의 생리활성의 주요 약리 성분은 담마란(dammarane)계열의 사포닌으로 구분되는 진세노사이드(ginsenoside)인데 이는 타 식물과 구별하기 위해 인삼에서 분리된 배당체(glycoside)란 의미로 붙여진 이름이다. 지금까지 인삼의 뿌리, 잎, 줄기, 열매, 꽃으로부터 약 150 종 이상이 보고되고 있으나 인삼에는 진세노사이드(ginsenoside) Rb1, Rb2, Rc, Re 등이 주로 존재하고 이들을 주요 진세노사이드(ginsenoside)라 부르고 있다. 인삼은 가공 방법에 따라 백삼, 홍삼, 태극삼 등으로 분류되고 특히 인삼을 증삼하여 건조시킨 홍삼이 수삼에 비해 효능이 좋다고 알려져 있다. 이러한 증삼 과정을 거치는 동안 열에 의한 진세노사이드(ginsenoside)의 당 부분의 가수분해가 일어나고 주요 진세노사이드(ginsenoside)로부터 당이 제거된 작은 분자량의 진세노사이드(ginsenoside) Rd, Rg3, compound K 등의 주요 진세노사이드(ginsenoside)가 생성이 된다. 마이너 진세노사이드(Minor ginsenoside)는 주요 진세노사이드(ginsenoside)에 비해 작은 분자량으로 체내 흡수율이 높고 효능이 뛰어나다고 알려져 있다. 특히 진세노사이드 Rd는 주오 진세노사이드인 진세노사이드 Rb1의 20 번 탄소 위치에 외부에 있는 당부분이 가수분해되어 glucose 1분자가 남아있는 배당체로 특히 항염, 상처 치유 및 보호 효과, 주름 생성 억제 및 탈모 방지 효과 등이 보고되고 있다.
한편, 엑소좀, 나노베지클은 비만 세포, 수지상 세포, B 림프구, 뉴런, 지방 세포, 내피 세포 및 상피 세포를 포함한 여러 유형의 세포에 의해 방출되는 약 30-100 nm의 막 유래 나노 소포이다. 엑소좀은 지질, 단백질, mRNA, non-coding RNA, 심지어 DNA를 세포 밖으로 운반하는 것뿐만 아니라 분비된 엑소좀이 다른 세포에 의해 흡수될 수 있다. 따라서 엑소좀은 생물학적 정보를 이웃 세포로 전달하는 세포 간 신호전달과 같은 생리적 기능뿐만 아니라 종양 및 신경 퇴행성 상태를 포함한 일부 질병의 병인에도 관여한다. 엑소좀은 혈액, 양수, 소변, 악성 복수, 뇌척수액, 모유, 타액, 림프 및 담즙을 포함한 수많은 체액에서 건강 및 병적 상태 모두에서 발견되며, 크기에 따라 미세 소포(microvesicles)와 다른 별개의 소포 집단으로 간주되는데 나노소포체(nanovesicles)는 30-100nm 범위 엑소좀으로 정의되는 반면 미세 소포(microvesicles)는 100-1000nm 범위의 소포로 정의된다.
최근 식품에서 나노베지클 분비가 보고되었는데 식품 유래 나노베지클은 50~300 nm 전후로 분비되며, 여러 식물 세포에서 생리 활성이 보고되었다. 또한 현재 약물을 delivery할 수 있는 천연 리포좀으로 임상적용 가능성이 증가하고 있다.
본 발명의 목적은 다양한 생리활성 단백질을 함유하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 효과적으로 제조하는 방법 및 이를 통해 제조된 나노베지클을 포함하는 지방간 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법으로서, (1) 분쇄된 인삼 또는 홍삼을 1X PBS(phosphate buffer saline)에 혼합하는 단계; (2) 상기 (1) 단계의 혼합액을 300 g 내지 500 g의 조건으로 5 분 내지 15분 동안 원심분리하는 단계; (3) 상기 (2) 단계 후에 생성된 상등액을 분리하여 1,000 g 내지 3,000 g의 조건으로 10분 내지 30분 동안 원심분리하는 단계; (4) 상기 (3) 단계 후에 생성된 상등액을 분리하여 9,000 g 내지 11,000 g의 조건으로 20분 내지 40분 동안 원심분리하는 단계; (5) 상기 (4) 단계 후에 생성된 상등액을 0.1 μm 내지 0.5 μm 크기의 필터로 정제하는 단계; (6) 상기 (5) 단계에 정제된 용액을 9,000 g 내지 11,000 g의 조건으로 1 시간 내지 3 시간 동안 원심분리하는 단계; 및 (7) 상기 (6) 단계에서 생성된 침전물을 분리하는 단계를 포함하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 제조 방법에 따라 제조된 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 제조 방법에 따라 제조된 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선용 기능성식품 조성물을 제공한다
본 발명에 따르면, 본원발명에 따른 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법으로 제조된 나노베지클은 나노베지클의 크기가 작은 사이즈(100 nm 내지 300 nm) 거나 큰 사이즈(1,000 nm 내지 1,300 nm)여도 단백질의 함량이 높은 나노베지클이 제조될 수 있으며, 상기 제조된 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클이 지방간 마우스 모델에서 지방간의 생성을 억제하는 효과를 확인함으로써, 지방간 개선용 조성물 및 이를 포함하는 지방간 개선용 기능성 식품을 제공할 수 있다.
도 1은 본원발명에 따른 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법을 나타내는 그림이다.
도 2는 본원발명의 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클이 분리된 펠릿(침전물)이다.
도 3a는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클을 작은 사이즈(100 nm 내지 300 nm)로 분류해서 평균 크기를 측정한 결과이다.
도 3b는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클을 큰 사이즈(1,000 nm 내지 1,300 nm)로로 분류해서 평균 크기를 측정한 결과이다.
도 4는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클을 작은 사이즈(100 nm 내지 300 nm) 및 큰 사이즈(1,000 nm 내지 1,300 nm)로 분류하고 단백질 함량을 측정한 결과이다.
도 5는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클이 지방간 마우스 모델에서 지방간 개선 효과를 평가한 결과이다.
도 2는 본원발명의 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클이 분리된 펠릿(침전물)이다.
도 3a는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클을 작은 사이즈(100 nm 내지 300 nm)로 분류해서 평균 크기를 측정한 결과이다.
도 3b는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클을 큰 사이즈(1,000 nm 내지 1,300 nm)로로 분류해서 평균 크기를 측정한 결과이다.
도 4는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클을 작은 사이즈(100 nm 내지 300 nm) 및 큰 사이즈(1,000 nm 내지 1,300 nm)로 분류하고 단백질 함량을 측정한 결과이다.
도 5는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법에 따라 제조된 나노베지클이 지방간 마우스 모델에서 지방간 개선 효과를 평가한 결과이다.
본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명의 발명자들은 건강기능식품인 인삼 또는 홍삼에서 나노베지클을 효과적으로 분리하는 방법을 제공함으로써, 인삼 또는 홍삼에 존재하는 약용 성분을 손쉽게 추출하고, 이를 이용한 각종 질병의 치료제 또는 예방제로 사용할 수 있는 나노베지클을 제조하는 방법을 제공하고자 하였다.
본 발명은 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법으로서, (1) 분쇄된 인삼 또는 홍삼을 1X PBS(phosphate buffer saline)에 혼합하는 단계; (2) 상기 (1) 단계의 혼합액을 300 g 내지 500 g의 조건으로 5 분 내지 15분 동안 원심분리하는 단계; (3) 상기 (2) 단계 후에 생성된 상등액을 분리하여 1,000 g 내지 3,000 g의 조건으로 10분 내지 30분 동안 원심분리하는 단계; (4) 상기 (3) 단계 후에 생성된 상등액을 분리하여 9,000 g 내지 11,000 g의 조건으로 20분 내지 40분 동안 원심분리하는 단계; (5) 상기 (4) 단계 후에 생성된 상등액을 0.1 μm 내지 0.5 μm 크기의 필터로 정제하는 단계; (6) 상기 (5) 단계에 정제된 용액을 9,000 g 내지 11,000 g의 조건으로 1 시간 내지 3 시간 동안 원심분리하는 단계; 및 (7) 상기 (6) 단계에서 생성된 침전물을 분리하는 단계를 포함하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법을 제공한다.
상기 나노베지클은 인삼 또는 홍삼에서 분리된 것으로, 10 nm 내지 13,000 nm 크기의 엑소좀을 포함하는 베지클 형태의 구조 및 그 조성이 유사한 모든 베지클을 포함한다.
상기 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클은 인삼 또는 홍삼에서 유래되는 생리 활성 성분을 다수 포함할 수 있으며, 예컨대 다양한 단백질, 유전자, 생리활성 물질을 포함한다.
상기 인삼은 경상북도 풍기 또는 충청남도 금산에서 재배된 인삼이고, 상기 홍삼은 홍삼 추출물을 포함하는 엑기스 형태일 수 있다.
상기 (4) 단계는 2회 이상 반복할 수 있다.
상기 나노베지클은 크기가 10 nm 내지 1,400 nm 크기일 수 있으며, 바람직하게는 크기가 100 nm 내지 300 nm일 수 있고, 또는 크기가 1,000 nm 내지 1,300 nm일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 상기 제조 방법에 따라 제조된 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선용 조성물을 제공한다.
상기 제조된 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클은 지방간 마우스 모델에서 지방간의 범위를 감소시키고 간 손상 수치인 ALT 수치를 감소시키는 효과를 나타내므로, 상기 나노베지클을 포함하는 조성물은 지방간 개선 용도로 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 제조 방법에 따라 제조된 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선용 기능성식품 조성물
본 발명은 통상적으로 이용되는 식품으로써 일반적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품으로서 사용될 수 있다. 상기 "건강기능 식품"이라 함은 건강기능 식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 "식품 첨가물"로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 "식품 첨가물 공전"에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류들을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.
예를 들어, 캡슐 형태의 건강기능 식품 중 경질캡슐제는 통상의 경질캡슐에 본 발명에 따른 조성물을 부형제 등의 첨가제와 혼합 및 충진하여 제조할 수 있으며, 연질캡슐제는 본 발명에 따른 조성물의 부형제 등의 첨가제와 혼합하고 젤라틴 등 캡슐기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질캡슐제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 교미제, 착향제 등에 대한 용어 정의는 당업계에 공지된 문헌에 기재된 것으로 그 기능 등이 동일 내지 유사한 것들을 포함한다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
실시예 1. 인삼 유래 나노베지클(Navovesicles) 분리
실험에 사용된 인삼(Panax Ginseng)은 경상북도 풍기(실시예 1-1)와 충청남도 금산(실시예 1-2)에서 재배된 6년근 인삼으로 각각 풍기인삼농협과 백제금산인삼농협을 통해 구입하였다. 도 1에 나타난 바와 같이, 구입한 인삼을 깨끗한 물에 세척하고, 인삼 200 g와 iced 1X PBS(phosphate buffer saline) 500 ml를 믹서기에 넣고 5분동안 분쇄하였다. 분쇄 후, 50 ml conical tube에 분쇄한 인삼을 50 ml씩 담고, 무게를 일정하게 맞춘 후, 원심분리기를 이용하여 500 g에서 10 분 동안 1회 원심분리하고 상층액을 새로운 50 ml conical tube로 옮겼다. 그 후, 10,000 g에서 30분으로 2회 원심분리하고, 0.2 μm pore의 필터로 정제한 후, 새로운 100,000 g tube에 상층액을 담고 100,000 g로 2시간 원심분리 후 상층액을 제거하고 펠릿 형태(침전물)의 나노베지클을 1 ml의 1X PBS에 재현탁하였다.
실시예 2. 홍삼 유래 나노베지클(Navovesicles) 분리
본 실험에 사용된 홍삼은 정관장에서 판매하는 홍삼정 에브리타임 순수 홍삼엑기스 상품(실시예 2)을 구매하여 사용하였다. 홍삼 유래 나노베지클은 도 1과 같은 방법으로 분리하였다. 50 ml conical tube에 홍삼엑기스를 50 ml씩 담고, 무게를 일정하게 맞춘 후, 원심분리기를 이용하여 500 g에서 10 분 동안 1회 원심분리하고 상층액을 새로운 50 ml conical tube로 옮겼다. 그 후, 2,000 g에서 20분 동안 1회 원심분리하고 상층액을 새로운 50 ml conical tube로 옮겼다. 그 후, 10,000 g에서 30분으로 2회 원심분리하고, 0.2 μm pore의 필터로 정제한 후, 새로운 100,000 g tube에 상층액을 담고 100,000 g로 2시간 원심분리 후 상층액을 제거하고 펠릿 형태(침전물)의 나노베지클 1 ml의 1X PBS에 재현탁하였다.
실험예 1. 나노베지클의 크기 비교
상기 실시예 1 및 2의 방법에 따라 제조된 풍기(실시예 1-1), 금산(실시예 1-2) 및 정관장 홍삼(실시예 2)에서 분리된 나노베지클 (도 2)을 작은 사이즈(100 nm 내지 300 nm) 및 큰 사이즈(1,000 nm 내지 1,300 nm)로 분리를 한 후, DLS (dynamic light scattering)를 이용하여 나노 크기를 확인하였다. 도 3a에 나타난 바와 같이, 작은 사이즈(100 nm 내지 300 nm) 나노베지클의 크기는 풍기(실시예 1-1)에서 평균 229.8 mm로 나타났고, 금산(실시예 1-2)에서 평균 361.3 nm로 나타났고, 홍삼(실시예 2)에서 평균 169.9 nm로 나타났다. 도 3b에 나타난 바와 같이, 큰 사이즈(1,000 nm 내지 1,300 nm) 나노베지클의 크기는 풍기(실시예 1-1)에서 평균 1209 mm로 나타났고, 금산(실시예 1-2)에서 평균 1200 nm로 나타났고, 홍삼(실시예 2)에서 평균 1039 nm로 나타났다.
실험예 2. 나노베지클을 함유된 단백질 함량 측정
상기 실시예 1 및 2의 방법에 따라 제조된 풍기(실시예 1-1), 금산(실시예 1-2) 및 정관장 홍삼(실시예 2)에서 분리된 나노베지클을 작은 사이즈(100 nm 내지 300 nm) 및 큰 사이즈(1,000 nm 내지 1,300 nm)로 분리를 한 후, 함유된 단백질 함량을 BCA(bicinchoninic acid, Termo Fishers) 방법으로 정량 하였다. 도 4에 나타난 바와 같이, 사이즈(100 nm 내지 300 nm) 및 큰 사이즈(1,000 nm 내지 1,300 nm)의 나노베지클에 모두 단백질이 함유된 것으로 나타났다. 특히, 풍기(실시예 1-1) 인삼 유래 나노베지클에서 단백질 함량이 매우 높게 나타났다.
실험예 3. 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클의 지방간 생성 억제 효과
상기 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클이 지방간을 개선하는 효과를 나타내는지 확인하기 위해 풍기 인삼(실시예 1-1) 및 정관장 홍삼(실시예 2)에서 분리된 나노베지클을 지방간 마우스 모델에 구강 투여하여 지방간의 개선 정도를 확인하였다. 과당 옥수수 시럽 및 고 지방-콜레스테롤 식이로 유도된 지방간 마우스 모델에 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 (1 mg/g/day)만큼 구강 투여하고, 마우스의 지방간이 감소되는 것을 확인하였다. 도 5에 나타난 바와 같이, 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 투여한 경우, H&E 염색법을 통해 지방간의 범위가 감소하고, 높을수록 간 손상을 의미하는 ALT 수치가 감소하는 것으로 확인되었다. 상기 결과는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클이 지방간을 개선시키는 기능성이 있다는 것을 입증하며, 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 이용하여 지방간 개선과 같은 다양한 기능석 식품 소재에 활용할 수 있음을 입증한다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.
Claims (8)
- 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법으로서,
(1) 분쇄된 인삼 또는 홍삼을 1X PBS(phosphate buffer saline)에 혼합하는 단계;
(2) 상기 (1) 단계의 혼합액을 300 g 내지 500 g의 조건으로 5 분 내지 15분 동안 원심분리하는 단계;
(3) 상기 (2) 단계 후에 생성된 상등액을 분리하여 1,000 g 내지 3,000 g의 조건으로 10분 내지 30분 동안 원심분리하는 단계;
(4) 상기 (3) 단계 후에 생성된 상등액을 분리하여 9,000 g 내지 11,000 g의 조건으로 20분 내지 40분 동안 원심분리하는 단계;
(5) 상기 (4) 단계 후에 생성된 상등액을 0.1 μm 내지 0.5 μm 크기의 필터로 정제하는 단계;
(6) 상기 (5) 단계에 정제된 용액을 9,000 g 내지 11,000 g의 조건으로 1 시간 내지 3 시간 동안 원심분리하는 단계; 및
(7) 상기 (6) 단계에서 생성된 침전물을 분리하는 단계를 포함하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법. - 제1항에 있어서, 상기 인삼은 경상북도 풍기 또는 충청남도 금산에서 재배된 인삼인 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 홍삼은 홍삼 추출물을 포함하는 엑기스 형태인 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 (4) 단계는 2회 반복하는 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 나노베지클은 크기가 100 nm 내지 300 nm인 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 나노베지클은 크기가 1,000 nm 내지 1,300 nm인 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클 제조 방법.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 제조 방법에 따라 제조된 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선용 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 제조 방법에 따라 제조된 인삼 또는 홍삼 유래 나노베지클을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선용 기능성식품 조성물.
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|---|---|---|---|---|
| CN117982555A (zh) * | 2024-04-03 | 2024-05-07 | 广东医科大学附属医院 | 丹参来源类外泌体纳米囊泡在制备抗gc性肌病药物中的应用 |
Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
| KR20130030729A (ko) | 2011-09-19 | 2013-03-27 | 건국대학교 산학협력단 | 인삼에서 분리 동정한 당지질단백질 진토닌의 천연 약용식물 유래 리간드로서의 용도 |
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2021
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| CN117982555B (zh) * | 2024-04-03 | 2024-06-25 | 广东医科大学附属医院 | 丹参来源类外泌体纳米囊泡在制备抗gc性肌病药物中的应用 |
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