KR20230062673A - 글루카곤 수용체 신호전달을 간섭함에 의한 중증 인슐린 저항성의 치료 방법 - Google Patents

글루카곤 수용체 신호전달을 간섭함에 의한 중증 인슐린 저항성의 치료 방법 Download PDF

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Abstract

본원에는 중증 인슐린 저항성을 가진 환자의 치료 방법이 제공된다. 이 방법은 치료를 필요로 하는 환자에게 GCG/GCGR 신호전달 경로 억제제의 치료량을 투여하여서, 혈당 또는 베타-하이드록시부티레이트 수준이 저하되거나 또는 중증 인슐린 저항성이 중재되거나, 또는 중증 인슐린 저항성을 특징으로 하는 질병 또는 질환이 중재되거나, 또는 그 질변 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 완화되거나 중증도가 감소하도록 하는 단계를 포함한다. GCG/GCGR 신호전달 경로 억제제는 신호전달 경로의 소분자 억제제, 신호전달 경로의 안티센스 억제제, GCG 중화 단클론성 항체, GCGR 길항물질, 신호전달 경로의 펩타이드 억제제, DARPin, 스피에겔머, 압타머, 엔지니어링된 Fn 타입-III 도메인, 등일 수 있다. 치료 방법은 중증 인슐린 저항성을 앓는 인간을 치료하는 데 유용하다.

Description

글루카곤 수용체 신호전달을 간섭함에 의한 중증 인슐린 저항성의 치료 방법 {METHODS OF TREATING SEVERE INSULIN RESISTANCE BY INTERFERING WITH GLUCAGON RECEPTOR SIGNALING}
본 발명은 중증 인슐린 저항성을 치료하거나 진행을 둔화시키기 위하여 글루카곤 (GCG) 억제제 또는 글루카곤 수용체 (GCGR) 길항물질을 사용하는 방법, 및/또는 그것을 필요로 하는 환자에서 치료적 인슐린 용량을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
서열 목록
서열 목록의 공식적인 사본이 2017년 8월 25일에 생성되고, 약 116 킬로바이트의 크기의, 10282WO01_SEQ_LIST_ST25의 파일명으로 ASCII 포맷화된 서열 목록으로서 EFS-Web을 통해 전자 명세서와 동시에 제출된다. 이 ASCII 포맷화된 문서에 함유된 서열 목록은 명세서의 일부이며 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
글루카곤은 29개 잔기의 폴리펩타이드 호르몬으로, 인슐린과 협력하여, 혈당의 양의 항상성 조절을 매개한다. 글루카곤은 정상 혈당 수준을 유지하기 위하여 혈당 수준이 떨어졌을 때 글루코오스를 방출하도록 특정 세포, 예를 들어, 간세포를 자극함으로써 주로 작용한다. 글루카곤의 작용은 인슐린의 작용과 반대인데, 혈당 수준이 상승하면 언제나 글루코오스를 흡수하고 저장하도록 세포를 자극한다. 글루카곤은 췌장의 알파 세포에서 생성되는 반면, 인슐린은 인접한 베타 세포로부터 분비된다.
여러 질환, 예컨대 당뇨병 및 당뇨병성 케톤산증(diabetic ketoacidosis)에서 중요한 역할을 할 수 있는 것은 바로 글루카곤 및 인슐린의 불균형이다. 특히, 더 높은 수준의 기저 글루카곤 및 식후의 글루카곤 분비의 억제 결핍은 인간에서 당뇨병성 질병의 원인이 되는 것으로 연구 결과 밝혀졌다 (Muller et al. (1970), N Eng J Med, 283: 109-115).
혈당 수준을 상승시키는 데 미치는 글루카곤의 영향은 부분적으로는 글루카곤 (GCG)이 그것의 수용체 (GCGR로 나타냄)에 결합한 후에 특정 세포의 경로의 활성화에 의해 중재되는 것으로 여겨진다. GCGR은 G-단백질-결합 수용체의 세크레틴(secretin) 하위패밀리 (패밀리 B)의 구성원이고 대부분 간에서 발현된다. 글루카곤의 그것의 수용체에의 결합은 G-단백질 신호 변환 캐스케이드를 촉발시키고, 세포내 고리형 AMP를 활성화하며 새로운(de novo) 합성 (글루코오스 신생합성) 및 글리코겐 파괴 (글리코겐 분해)를 통해 글루코오스 생산의 증가를 유발한다 (Wakelam et al., (1986) Nature, 323:68-71; Unson et al., (1989) Peptides, 10:1171-1177; 및 Pittner and Fain, (1991) Biochem. J., 277:371-378).
글루카곤의 작용은 본원에서 기술되는 바와 같이, 길항물질, 예컨대 소분자 억제제, GCG 항체, 또는 GCGR 항체를 제공함으로써 억제될 수 있다. 항-GCG 항체들은, 예컨대 미국 특허 번호 4,206,199; 4,221,777; 4,423,034; 4,272,433; 4,407,965; 5,712,105; 및 PCT 공보 WO2007/124463 및 WO2013/081993에서 언급된다. 항-GCGR 항체들은 미국 특허 번호 5,770,445, 7,947,809, 및 8,545,847; 유럽 특허 출원 EP2074149A2; 유럽 특허 EP0658200B1; 미국 특허 출원 공보 2009/0041784; 2009/0252727; 및 2011/0223160; 및 PCT 공보 WO2008/036341에서 기술된다. GCG 또는 GCGR의 소분자 억제제는 예컨대 WO 07/47676; WO 06/86488; WO 05/123688; WO 05/121097; WO 06/14618; WO 08/42223; WO 08/98244; WO 2010/98948; US 20110306624; WO 2010/98994; WO 2010/88061; WO 2010/71750; WO 2010/30722; WO 06/104826; WO 05/65680; WO 06/102067; WO 06/17055; WO 2011/07722; 또는 WO 09/140342에서 언급된다.
중증 인슐린 저항성 증후군은 환자들이 인슐린에 잘 반응하지 않는 희귀한 대사 장애이다. 중증 인슐린 저항성 증후군에 대해 활용할 수 있는 현재의 치료로는 적당한 혈당 조절을 제공하기 위한 시도로 정규적인 급식 및 초고용량의 인슐린을 포함한다. IGF-I의 투여는, 단기적으로는 효과적인 한편, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자들에게서 장기간 혈당 조절을 제공하지 못하였다. Vestergaard et al., (1997) European Journal of Endocrinology, 136:475-482. 재조합 렙틴(recombinant leptin)의 투여는 랍슨-멘덴할 증후군 (Rabson-Mendenhall syndromee, RMS)을 가진 환자에게서 여러 달에 걸쳐 혈당 수준을 감소시킴으로써 약간의 성공을 나타냈다. Cochran et al., (2004) Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 89:1548-1554.
중증 인슐린 저항성 질환을 치료하기 위해, 또는 그 질환의 진행을 둔화시키기 위해, 즉, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자의 생명을 연장시키고 및/또는 환자의 삶의 질을 개선시키기 위해 효율적인 치료법이 없다는 전제 하에, 이런 질환을 치료하기 위한 다른 작용제들, 예컨대 본원에서 기술되는 GCG/GCGR 신호전달 경로 억제제 및 길항물질의 사용을 확인하고 탐색할 필요가 있다.
본원에는 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질, 예컨대 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질을 포함하는 제약학적 조성물을 투여함으로써, 중증 인슐린 저항성을 특징으로 하는 질병 또는 질환을 가진 환자의 치료 방법이 제공된다. GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 글루카곤 수용체 신호전달 경로를 차단하거나 억제할 수 있는 화합물이다. 길항물질은 소분자 억제제, 펩타이드 억제제, CRISPR 기술 (규칙적인 간격을 갖는 짧은 회문구조 반복단위의 서열; CRISPR 기술은 GCGR 녹다운 또는 GCGR 활성에 영향을 영향을 미치는 조절 서열의 결실을 유발할 수 있다), 안티센스 억제제, DARPin, 및 GCG 또는 GCGR 중화 단클론성 항체의 형태를 가질 수 있다. GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 단독으로, 제약학적 조성물로, 또는 중증 인슐린 저항성과 관련된 질병 또는 질환을 치료하기에, 또는 중증 인슐린 저항성과 관련된 질병 또는 질환을 가진 환자에서 혈당 및/또는 케톤을 저하시키는 데 유용한 하나 이상의 치료제와 함께 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 혈당 수준 및/또는 베타-하이드록시부티레이트 수준을 저하시키기 위한, 또는 케톤혈증 및/또는 케톤산증을 감소시키기 위한, 또는 고 혈당 및/또는 케톤혈증 및/또는 케톤산증과 관련된, 또는 부분적으로 그것을 특징으로 하는 질병 또는 질환을 치료하기 위한, 또는 그 질병 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 방법들이 제공된다. 일부 측면으로, 방법은 중증 인슐린 저항성을 가진 환자에게 GCG/GCGR 신호전달의 억제제를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하여서, 혈당 또는 베타-하이드록시부티레이트 수준이 저하되거나 또는 질병 또는 질환이 중재되거나, 또는 그 질병 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 완화되거나 중증도가 감소되도록 하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, GCGR 신호전달의 억제제는 GCGR 길항물질, 예컨대 항-GCGR 항체이다. 일부 구체예에서, 항-GCGR 항체는 SEQ ID NO: 86/88의 HCVR/LCVR 서열 쌍을 가진다. 일부 구체예에서, GCGR 신호전달의 억제제는 GCG 억제제, 예컨대 항-GCG 항체이다. 일부 구체예에서, 항-GCG 항체는 SEQ ID NO: 182/190의 HCVR/LCVR 서열 쌍을 가진다. 일부 구체예에서, 항-GCG 항체는 SEQ ID NO: 166/174의 HCVR/LCVR 서열 쌍을 가진다.
일부 측면으로, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자를 치료하는 방법이 제공되는데, 이때 환자는 상승된 수준의 혈당을 나타낸다. 그 방법은 환자에게 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 측면으로, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자를 치료하는 방법이 제공되는데, 이때 환자는 상승된 수준의 혈당을 나타내지 않는다. 그 방법은 환자에게 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자를 치료하기 위해 필요한 인슐린의 양 및/또는 투여량을 감소시키는 방법이 제공되는데, 이때 환자는 중증 인슐린 저항성 및/또는 상승된 수준의 혈당을 나타낸다. 일부 측면으로, 방법은 환자에게 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 측면으로, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 인슐린과 함께 투여된다. 인슐린의 양 및/또는 투여량은 GCGR에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 단클론성 항체와 함께 투여될 때, 약 30% 내지 약 95%, 또는 약 90% 만큼 감소될 수 있다.
일부 측면으로, GCGR 길항물질은 항-GCGR 항체일 수 있다. 항-GCGR 항체는 GCGR을 억제 또는 길항할 수 있다. 항-GCGR 항체는 GCGR 신호전달 경로를 억제 또는 차단할 수 있다. 일부 측면으로, GCG 억제제는 항-GCG 항체일 수 있다. 항-GCG 항체는 GCGR에 대한 GCG의 결합을 억제할 수 있다.
특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 hGCGR에 특이적으로 결합하고, SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/68, 70/78, 86/88, 90/98, 106/108, 110/118, 126/128, 130/138 및 146/148로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 서열 쌍 내에 함유된 중쇄 및 경쇄 CDR 도메인을 포함한다.
특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 86/88의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍 내에 함유된 중쇄 및 경쇄 CDR 도메인을 포함한다.
특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 86/88의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
한 구체예에서, hGCGR에 결합하는 인간 항체 또는 인간 항체의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 가지는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함한다.
한 구체예에서, hGCGR에 결합하는 인간 항체 또는 인간 항체의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 가지는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함한다.
특정 구체예에서, hGCGR에 결합하는 인간 항체 또는 그것의 단편은 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/68, 70/78, 86/88, 90/98, 106/108, 110/118, 126/128, 130/138, 및 146/148로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
특정 구체예에서, hGCGR에 특이적으로 결합하는 인간 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하는 HCVR; 및/또는 SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 LCVR 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 LCVR을 포함한다.
특정 구체예에서, 본원에 제공된 방법들은 SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 76, 96, 116 및 136으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 가지는 HCDR3 도메인; 및/또는 SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 84, 104, 124 및 144로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 가지는 LCDR3 도메인을 포함하는 hGCGR에 결합하는 분리된 인간 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 사용을 고려한다.
한 구체예에서, 본원에 제공된 방법들은 SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 72, 92, 112 및 132로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 가지는 HCDR1 도메인; SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 74, 94, 114 및 134로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 가지는 HCDR2 도메인; SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 80, 100, 120 및 140으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 가지는 LCDR1 도메인; 및 SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 82, 102, 122 및 142로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 가지는 LCDR2 도메인을 추가로 포함하는 항체 또는 그것의 단편의 사용을 고려한다.
한 구체예에서, 항체 또는 항체의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 76, 96, 116 및 136으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR3 도메인; 및
(b) SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 84, 104, 124 및 144로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR3 도메인을 포함한다.
관련된 구체예에서, 항체 또는 항체의 항원-결합 단편은 추가로:
(c) SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 72, 92, 112 및 132로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR1 도메인;
(d) SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 74, 94, 114 및 134로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR2 도메인;
(e) SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 80, 100, 120 및 140으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR1 도메인; 및
(f) SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 82, 102, 122 및 142로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR2 도메인을 포함한다.
한 구체예에서, 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 72, 92, 112 및 132로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR1 도메인; SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 74, 94, 114 및 134로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR2 도메인; SEQ ID NO: 8, 24, 40, 56, 76, 96, 116 및 136으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR3 도메인을 포함하는 HCVR; 및 SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 80, 100, 120 및 140으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR1 도메인; SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 82, 102, 122 및 142로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR2 도메인; 및 SEQ ID NO: 16, 32, 48, 64, 84, 104, 124 및 144로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR3 도메인을 포함하는 LCVR을 포함한다.
특정 구체예에서, 인간 GCGR에 결합하는 인간 항체 또는 인간 항체의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 8/16, 24/32, 40/48, 56/64, 76/84, 86/88, 96/104, 116/124 및 136/144로 구성되는 군으로부터 선택된 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍을 포함한다. 이러한 HCDR3/LCDR3 쌍을 가지는 항-GCGR 항체들의 비제한적 실례는 각각 H4H1345N, H4H1617N, H4H1765N, H4H1321B 및 H4H1321P, H4H1327B 및 H4H1327P, H4H1328B 및 H4H1328P, H4H1331B 및 H4H1331P, H4H1339B 및 H4H1339P로 지정된 항체들이다.
한 구체예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 유용한, GCG에 특이적으로 결합하고 GCG와 관련된 적어도 하나의 활성을 중화시키는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은: (a) SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 (b) SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다.
일부 구체예에서, GCG에 특이적으로 결합하고 GCG와 관련된 적어도 하나의 활성을 중화시키는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은, SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및 SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함한다.
일부 구체예에서, GCG에 특이적으로 결합하고 GCG와 관련된 적어도 하나의 활성을 중화시키는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은, SEQ ID NO: 150/158; 166/174; 182/190; 198/206; 214/222; 230/238; 246/254; 262/270; 278/286 및 294/302로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
일부 구체예에서, HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍은 SEQ ID NO: 166/174를 포함한다.
일부 구체예에서, HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍은 SEQ ID NO: 182/190을 포함한다.
한 구체예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 및 296으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR1 도메인;
(b) SEQ ID NO: 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 및 298로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR2 도메인;
(c) SEQ ID NO: 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 및 300으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR3 도메인;
(d) SEQ ID NO: 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 및 304로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR1 도메인;
(e) SEQ ID NO: 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 및 306으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR2 도메인; 및
(f) SEQ ID NO: 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 및 308로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR3 도메인을 포함한다.
한 구체예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 168의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(b) SEQ ID NO: 170의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(c) SEQ ID NO: 172의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(d) SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(e) SEQ ID NO: 178의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(f) SEQ ID NO: 180의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
한 구체예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 분리된 항체 또는 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 184의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(b) SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(c) SEQ ID NO: 188의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(d) SEQ ID NO: 192의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(e) SEQ ID NO: 194의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(f) SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인을 포함한다.
또한 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 것은 GCG에 특이적으로 결합하고, 본원에 제공된 HCDR1 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 (HCDR1)을 포함하는 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들이다.
또한 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 것은 GCG에 특이적으로 결합하고, 본원에 제공된 HCDR2 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 (HCDR2)를 포함하는 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들이다.
또한 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 것은 GCG에 특이적으로 결합하고, 본원에 제공된 HCDR3 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 (HCDR3)을 포함하는 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들이다.
또한 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 것은 GCG에 특이적으로 결합하고, 본원에 제공된 LCDR1 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 (LCDR1)을 포함하는 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들이다.
또한 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 것은 GCG에 특이적으로 결합하고, 본원에 제공된 LCDR2 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 (LCDR2)를 포함하는 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들이다.
또한 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 것은 GCG에 특이적으로 결합하고, 본원에 제공된 LCDR3 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 (LCDR3)을 포함하는 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들이다.
또한 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 것은 GCG에 특이적으로 결합하고, 본원에 제공된 LCDR3 아미노산 서열들 중 임의의 것과 쌍을 이룬 본원에 제공된 HCDR3 아미노산 중 임의의 것을 포함하는 HCDR3 및 LCDR3 아미노산 서열 쌍 (HCDR3/LCDR3)을 포함하는 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들이다. 특정 구체예에 따르면, 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들은 본원에 제공된 예시적인 항-GCG 항체들 중 임의의 것 내에 함유된 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍을 포함한다. 특정 구체예에서, HCDR3/LCDR3 아미노산 서열 쌍은 SEQ ID NO: 172/180을 포함한다.
또한 본원에 제공된 방법에 따라 유용한 것은 GCG에 특이적으로 결합하고, 본원에 제공된 예시적인 항-GCG 항체들 중 임의의 것 내에 함유된 6개의 CDR의 세트 (즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하는 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들이다. 특정 구체예에서, HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 아미노산 서열 세트는 SEQ ID NO: 168/170/172/176/178/180을 포함한다. 특정 구체예에서, HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 아미노산 서열 세트는 SEQ ID NO: 184/186/188/192/194/196을 포함한다.
관련된 구체예에서, GCG에 특이적으로 결합하는 항체들, 또는 그것들의 항원-결합 단편들은 본원에 제공된 예시적인 항-GCG 항체들 중 임의의 것에 의해 정의되는 것과 같이 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍 내에 함유된 6개의 CDR의 세트 (즉, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함한다. 예를 들어, GCG에 특이적으로 결합하는 항체들 또는 그것들의 항원-결합 단편들은 166/174; 182/190; 198/206; 214/222; 230/238; 246/254; 262/270; 278/286 및 294/302로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍 내에 함유된 HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 아미노산 서열 세트를 포함한다.
GCG에 특이적으로 결합하고 상기 제공된 CDR 서열들을 포함하는 항체들의 비제한적인 실례로는 HIH059P, H4H10223P, H4H10231P, H4H10232P, H4H10236P, H4H10237P, H4H10238P, H4H10250P, H4H10256P, 및 H4H10270P를 들 수 있다.
HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 내의 CDR을 확인하기 위한 방법 및 기법들은 당업계에 잘 알려져 있고 본원에 개시된 명시된 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열 내에서 CDR을 확인하기 위해 사용될 수 있다. CDR의 경계를 확인하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 관례들로는, 예컨대 Kabat 정의, Chothia 정의, 및 AbM 정의를 들 수 있다. 일반적으로, Kabat 정의는 서열 가변성을 기반으로 하고, Chothia 정의는 구조적 루프 영역의 위치를 기반으로 하며, AbM 정의는 Kabat 및 Chothia 접근법 사이의 절충이다. 예컨대 Kabat, (1991) "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md.; Al-Lazikani et al., (1997) J. Mol. Biol. 273:927-948; 및 Martin et al., (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272 참조. 공공 데이터베이스 또한 항체 내 CDR 서열들을 확인하기 위해 이용될 수 있다.
일부 구체예에서, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자는 다음으로부터 선택된 질병 또는 질환 중 하나를 앓을 수 있다: 도노휴 증후군(Donohue syndrome), 랍슨-멘덴할 증후군, A형 인슐린 저항성, B형 인슐린 저항성, HAIR-AN (고안드로겐혈증(hyperandrogenism), 인슐린 저항성, 및 흑색 가시세포증 (acanthosis nigricans) 증후군, 가짜말단비대증(pseudoacromegaly), 알스트롬 증후군(Alstrom syndrome), 근긴장성 이영양증(myotonic dystrophy), 베르너 증후군(Werner's syndrome), 지방이영양증(lipodystrophy), 간경변(cirrhosis), 단일인자 병적 비만(monogenic morbid obesity), 고전구인슐린혈증(hyperproinsulinemia), 카르복시펩티다제 E 결핍증(carboxypeptidase E deficiency), 결핍성 아르기닌 대사(defective arginine metabolism), 바르데-비들 증후군(Bardet-Biedl syndrome), 및 중증 인슐린 저항성을 유발하는 것으로 보고된 하나 이상의 유전자 변종의 존재와 관련된 질병 또는 질환. 일부 구체예에서, 인슐린 분해 프로테아제 활성은 환자의 혈청에서 검출된다. 일부 구체예에서, 중화 항-인슐린 항체들 또는 항-인슐린 수용체 항체들은 환자의 혈청에서 검출된다. 일부 환자에게서, 중증 인슐린 저항성은 지방이영양증으로 이어지는 지방 세포의 자가면역 파괴의 맥락에서 발생한다.
일부 측면으로, 중증 인슐린 저항성과 관련된 유전자 변종은 다음으로부터 선택된다: INSR, PSMD6, ADRA2A, AGPAT2 (지방이영양증 및 인슐린 저항성과 관련됨), AKT2, APPL1, BBS1 (바르데-비들 증후군 1과 관련됨), BSCL2, CIDEC, GRB10, IRS2, KLF14, LEP, LEPR, LMNA (지방이영양증과 관련됨), MC4R, PCNT, PIK2CA, POLD1 (지방이영양증과 관련됨), PPARG, PTPRD, PTRF (지방이영양증과 관련됨), RASGRP1, TBC1D4, 및 TCF7L2.
일부 측면으로, 글루카곤/GCGR 길항물질을 포함하는 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 환자에게 투여된다. 추가의 치료제는 중증 인슐린 저항성과 관련된 증상들 및 신호들을 완화 또는 감소시키는 임의의 작용제일 수 있다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 추가 치료제는 다음으로부터 선택된다: 인슐린, 비구아니드(biguanide), hIGF1, 렙틴(leptin), 메트라렙틴(metraleptin), 피오글리타존(pioglitazone), 빌다글립틴(vildagliptin), 아카보즈(acarbose), 알파-글리코시다제 억제제, L-아르기닌, 다이펩티딜-펩티다제-4 억제제, 인슐린 분비 촉진제, (secretagogues), 아밀린 수용체 작용물질(agonist), 인슐린 감작제(sensitizer), FGF21, SGLT2 억제제, SGLT1 억제제, GLP-1 수용체 작용물질, GLP-1 수용체 활성화제, 제 2 GCG 억제제, 및 제 2 GCGR 길항물질. 일부 측면으로, 인슐린 분비 촉진제는 설포닐우레아, ATP-민감성 K 채널 길항물질, 및 메글리티니드(meglitinides)로부터 선택된다. 일부 측면으로, 인슐린 감작제는 티아졸리딘다이온 및 로시글리타존(rosiglitazone)으로부터 선택된다. 일부 측면으로, 추가 치료제는 에너지 지출 및/또는 갈색 지방 활성을 증가시키는 작용제, 예를 들면, β3 아드레날린작용성 작용물질 (예컨대 미글리톨(miglitol)), NPR1 작용물질, NPR3 길항물질, 트라이요오드티로닌(triiodothyronine), 티아졸리딘다이온, VEGF, 이리신(Irisin), 메테오린(meteorin)-유사, 나트륨이뇨성 펩타이드(natriuretic peptides), 오렉신(orexin), 노르에피네프린, T4, 담즙산, FGF-21, 멘톨, 슬릿2-C BMP7, BMP8β, 및 FnIII 도메인-유사/Tn3 스캐폴드 (인간 테나신(tenascin) C의 제 3 피브로넥틴 유형 III 도메인을 기반으로 한 결합 분자)일 수 있다.
다른 목적 및 장점들은 이어지는 상세한 설명을 개관함으로써 명백해질 것이다.
도 1A 내지 1E는 중증 인슐린 저항성의 마우스 모델에서, 혈당 수준, 인슐린 수준, 글루카곤 수준, 및 B-하이드록시부티레이트 수준, 뿐만 아니라 체중을 도시한다. 도 1A에서, 인슐린 수용체 길항물질인 S961, 및 GCGR에 대한 항체인 H4H1327P로 치료된 마우스 (개방 삼각형)가 인슐린 수용체 길항물질 및 아이소타입 (isotype) 대조군 항체로 치료된 마우스 (폐쇄 사각형)에서의 혈당 수준에 비해 혈당 수준의 상승을 나타냈다. 도 1B에서, 마우스의 S961로의 치료는 H4H1327P의 존재하에서도 (개방 삼각형), 시간 경과에 따라 인슐린 수준의 증가를 나타냈다 (폐쇄 사각형). 도 1C에서, H4H1327P로 치료된 마우스는, S961의 부재시에 (개방 원형) 또는 존재하에 (개방 삼각형), 아이소타입 대조군 치료된 (폐쇄 원형) 또는 S961 치료된 (폐쇄 사각형) 마우스보다 더 높은 수준의 글루카곤을 나타낸다. 도 1D에서, S961 및 H4H1327P로 치료된 마우스 (개방 삼각형)는 아이소타입 대조군 치료된 (폐쇄 원형) 및 항체 단독 대조군 (개방 원형)의 것과 같은 베타-하이드록시부티레이트 수준을 유지하였다. GCGR 항체의 부재시에 인슐린 수용체 길항물질로 치료된 마우스는 다른 치료군에 비해 더 높은 수준의 베타-하이드록시부티레이트 (폐쇄 사각형)를 나타냈다. 4개의 치료군 중에서 체중은 변함이 없었다. 도 1E 참조.
도 2A 내지 2F는 중증 인슐린 저항성의 마우스 모델에서, 혈당 수준, 인슐린 수준, 글루카곤 수준, B-하이드록시부티레이트 수준, 및 아미노산 수준, 뿐만 아니라 체중을 도시한다. 인슐린 수용체 길항물질 (S961) 치료는 항체 치료, H4H1327P에 선행되었고, 증가된 혈당 수준을 유발하였으며, 항체가 혈당 수준을 감소시키는 능력은 항체 치료를 개시한 날들 내에 증명되었다 (개방 삼각형). 도 2A 참조. 도 2B에서, S961로의 치료는 인슐린 수준이 상승하는 것을 유발하였고 (폐쇄 사각형), GCGR 항체인 H4H1327P로의 후속적인 치료는 인슐린 수준을 낮추지 못하였다 (개방 삼각형). 도 2C에서 알 수 있는 것과 같이, 글루카곤 수준은 H4H1327P로 치료된 마우스에서 더 높았고 (개방 원형), 항체와 S961 둘 다로 치료된 마우스에서도 여전히 높았다 (개방 삼각형). 도 2D는 혈장 베타-하이드록시부티레이트 수준이 S961로의 치료에 대한 반응으로 상승하였지만 (폐쇄 사각형), H4H1327P로 치료한 날들 내에서, 미치료된 대조군 및 항체 단독 대조군의 수준으로 떨어졌음을 보여준다. 도 2E는 아미노산 수준이 H4H1327P로 치료된 마우스에서 더 높았고 (개방 원형), 항체와 S961 둘 다로 치료된 마우스에서도 여전히 높았음 (개방 삼각형)을 보여준다. 체중의 변화는 관찰되지 않았다. 도 2F 참조.
도 3A 및 3B는 S961 및 H4H1327P 중 하나 또는 둘 다로 치료된 마우스로부터 얻어진 마우스의 간 샘플에 대한 웨스턴 블롯 분석의 결과를 제공한다. H4H1327P로의 치료는 마우스 간에서의 포스포에놀피루브산 카르복시키나아제 (Pepck)를 아이소타입 치료된 대조군 그룹에 비해 70% 감소시켰고, S961로의 치료는 Pepck 수준의 2.3배 증가를 유발하였다. H4H1327P로의 치료는 S961에 의해 유발된 증가된 수준을 기준선 아래 30%로 반전시켰다. 도 3A 및 3B 참조.
도 4A 내지 4D는 췌장 조직에 대한 4가지 치료 효과를 도시한다: 췌장 중량, 도 4A; 췌장 α-세포량, 도 4B; 췌장 β-세포량, 도 4C; 및 총 췌장 면적에 대한 샘(islet) 수, 도 4D. β-세포량은 S961 단독과 비교할 때 S961 및 H4H1327P의 존재하에 배가되었고 대조군 마우스보다 5.8배 증가하였다. 도 4C 참조.
본 발명의 방법이 기술되기 전에, 본 발명은 기술된 특정 방법, 및 실험적 질병에 국한되지 않는데, 그러한 방법 및 질병이 달라질 수 있다는 것이 인지되어야 한다. 또한 본원에서 사용된 용어는, 본 발명의 범주는 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에, 단지 특정 구체예들을 기술할 목적을 위한 것이며, 제한하기 위해 의도된 것이 아니라는 것이 인지되어야 한다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 것과 같이, 단일한 것을 나타내는 형태의 단어들은 맥락이 분명하게 다르게 표시하지 않는 한 복수의 대상물을 포함한다. 그러므로, 예를 들어, "방법"에 대한 언급은 하나 이상의 방법, 및/또는 본원에 기술된 및/또는 본 개시를 읽을 때 당업자들에게 분명해질 유형의 단계들 등을 포함한다.
다르게 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적이고 과학적인 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야의 통상적인 지식을 가진자에 의해 일반적으로 인지되는 것과 같은 의미를 가진다. 비록 본원에 기술된 것들과 유사하거나 그것들에 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 실험에 사용될 수 있긴 하지만, 바람직한 방법 및 물질을 이제 기술한다. 본 명세서에서 언급된 모든 특허, 출원 및 비특허 공개물들은 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
일반적인 설명
중증 인슐린 저항성은 다양한 생리적 및 병리적 상태와 관련하여 발생한다. 임상적인 발견은 고인슐린혈증, 흑색 가시세포증, 난소의 고안드로겐증, 다낭성 난소, 및 결과적인 고혈당증을 포함하고, 드문 경우지만, 환자들은 케톤산증을 보일 수 있다. 비록 중증 인슐린 저항성을 보다 일반적인 인슐린 저항성과 구별하기 위해 일치되는 정의는 없지만, 증후군성 인슐린 저항성은 일차 인슐린-신호전달 결핍 (인슐린 수용체-병증 또는 인슐린 신호전달 경로의 부분적인 파괴)으로서 또는 지방 조직 비정상 (중증 비만 또는 지방이영양증)에 이차적인 인슐린 저항성으로서 분류되었다. Semple et al., (2011), Genetic syndrome of Severe Insulin Resistance, Endocrine Reviews, 32(4):498-514 참조.
중증 인슐린 저항성의 증거는 1일당 100 이상 내지 200 유닛의 용량의 외래 인슐린을 필요로 하는 환자들 또는 내인성 인슐린의 만성적으로 상승된 순환 수준을 가진 환자들에서 볼 수 있다. Moller and Flier, (1991) New England Journal of Medicine, 325:938-948. 50 내지 70 μU/mL을 넘는 공복 인슐린 수준 또는 350 μU/mL을 넘는 피크 (경구 당부하 검사 후) 인슐린 수준이 중증 인슐린 저항성으로 제시된다. 2x104 μU/mL.분 아래의 인슐린 민감성 지수 값은 전형적으로 중증 인슐린 저항성의 존재시에 발생한다. 중증 인슐린 저항성을 가진 환자들은 또한 2 mg/kg.분 아래의 글루코오스 이용률(glucose disposal rate)을 나타낸다. Tritos and Mantzoros, (1998) Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 83:3025-3030 참조.
인슐린은 표적 세포의 원형질막 상의 인슐린 수용체와 상호작용한다. 인슐린 수용체는 경막 티로신 키나아제 수용체이고, 글루코오스 항상성을 조절하는 기능을 한다. 인슐린 수용체는 인슐린 결합을 위한 부위를 함유한 2개의 α 하위유닛, 및 티로신 키나아제 도메인을 함유한 2개의 β 하위유닛으로 구성되며; 하위유닛들은 350 kDa β-α-α-β 테트라머(tetramer)를 형성하기 위하여 이황화 브릿지에 의해 연결된다. 수용체의 2개의 아이소폼(isoform), 즉 엑손 11을 가진 아이소폼 (IR-B) 및 엑손 11이 없는 아이소폼 (TR-A)이 존재하며, 아이소폼들의 수준은 다양한 조적에서 다르게 발현된다. IR-B 아이소폼은 IR-A 아이소폼보다 높은 더 효율적인 신호전달 활성을 나타내며, IR-B 아이소폼은 간, 지방 조직, 및 근육 조직에서 대부분 발현된다. IR-A 아이소폼은 CNS 세포 및 조혈 세포에서 발현되며, 약간 더 높은 인슐린 결합 친화성을 가진다.
활성화된 인슐린 수용체의 티로신 키나아제 활성은 글루코오스 수송의 경막 신호전달 및 글루코오스 항상성의 조절에 기여한다.
중증 인슐린 저항성은 전형적으로 인슐린 수용체 돌연변이와 관련되어, 세포 표면 상의 감소된 발현 또는 수용체의 신호전달 능력을 초래한다. 다른 돌연변이로는 인슐린 신호 변환 경로, 예컨대 인슐린 수용체의 티로신 키나아제 도메인의 보존된 영역에 포함된 단백질의 수용체 결합 친화성의 결핍 또는 돌연변이를 포함한다.
중증 인슐린 저항성을 가진 환자들은 다음으로부터 선택된 질병 또는 질환을 앓을 수 있다: 도노휴 증후군, 랍슨-멘덴할 증후군, A형 인슐린 저항성, B형 인슐린 저항성, HAIR-AN (고안드로겐혈증, 인슐린 저항성, 및 흑색 가시세포증) 증후군, 가짜말단비대증, 알스트롬 증후군, 근긴장성 이영양증, 베르너 증후군, 지방이영양증, 간경변, 단일인자 병적 비만, 고전구인슐린혈증, 카르복시펩티다제 E 결핍증, 결핍성 아르기닌 대사, 또는 바르데-비들 증후군.
중증 인슐린 저항성의 유전적 및 후천적 상태는 체조직 및 기관이 인슐린에 적절하게 반응하지 못하는 드문 장애이다. 중증 인슐린 저항성과 관련된 임상적 발견은 성장 지연, 장기 비대(organomegaly), 골격 및 지방 조직의 손상된 발달, 연조직 과도성장, 당뇨병, 간 지방증(hepatic steatosis), 흑색 가시세포증, 난소 고안드로겐증, 및 다모증(hirsutism)을 포함한다. 실험실 발견은 고인슐린혈증, 감소된 인슐린 제거율, 고혈당증, 이상지혈증(dyslipidemia), 및 상승된 안드로겐을 포함한다. 중증 인슐린 저항성과 관련된 다양한 증후군의 각각은 일반적인 임상 및 실험실 특징의 일부 또는 전부 외에도, 특유한 특징을 가진다.
도노휴 증후군 (DS, 때로 레프리코니즘으로도 불림) 및 랍슨-멘덴할 증후군 (RMS)은 인슐린 수용체에 대한 두 대립유전자가 모두 비정상이고, 환자들이 내인성 및 외래 인슐린에 반응하지 못하는 희귀한 상염색체 열성 질병이다. DS 및 RMS를 가진 개체들은 출생 전에 발달이 충분하지 않다가, 나중에는 영유아로서 잘 자라지 못한다. 환자들은 극히 높은 수준, 정상 수준의 최대 1000배까지의 순환하는 인슐린으로 나타난다. DS의 일차 대사 결과는 공복 저혈당이고, 이차적으로는, 식후의 고혈당이다. DS로 진단받은 개체들은 보통 1세 이전에 사망하고 당뇨성 케톤산증을 나타내지 않는다. RMS를 가진 개체들은 또한 공복 저혈당을 겪고 전형적으로 유아기에 생존하지만, 시간이 지남에 따라, 중증의 난치성 당뇨성 케톤산증 및 인슐린 수준의 약화를 나타낸다.
케톤혈증은 케톤체가 지방산의 파괴 및 아미노산의 탈아민화에 의해 형성되어 혈액에 축적될 때 발생한다. 이것이 치료되지 않은 상태로 지속되면, 환자들은 당뇨성 케톤산증으로 이어질 수 있다. 베타-하이드록시부티레이트 및 아세토아세트산은 보다 일반적인 케톤류 중 두 가지이고, 상승된 수준은 케톤혈증의 중증도를 측정하기 위해 및 케톤산증의 지표로서 사용될 수 있다.
A형 인슐린 저항성 증후군은 중증 인슐린 저항성을 특징으로 하는 또 다른 희귀한 장애로, 증상들은 전형적으로 여성의 경우 청소년기에, 또는 남성의 경우 성인기에 나타난다. 여성들은 일차 무월경(amenorrhea) 또는 희발월경(oligomenorrhea), 난소 낭종, 다모증, 및 흑색 가시세포증으로 나타나지만, 전형적으로 과체중은 아니다. 병에 걸린 남성들은 그들이 당뇨병이 발생했을 때 나타난다. DS 및 RMS와 같이, 인슐린 수용체 유전자 돌연변이는 A형 인슐린 저항성 증후군의 원인이 된다.
지방이영양증은 인슐린 수용체 자체 또는 인슐린 신호전달 캐스케이드의 하류 구성요소의 결핍으로 인해, 비정상적인 지방조직 분포, 활용, 및 대사를 특징으로 하는 장애들의 그룹을 나타낸다. 지방이영양증을 앓는 환자들은 지방 조직의 전신성 또는 부분적인 부재, 인슐린 저항성 (당뇨병이 있거나 없음), 유의미한 이상지혈증, 및 지방간으로 나타난다. 일부 지방이영양증 증후군은, 베라르디네이-세이프 증후군(Berardinelli-Seip syndromee) 증후군과 같이, 유전되는 한편, 로렌스 증후군(Lawrence syndromee)을 포함한 다른 것들은 때로 감염성 전구증(infectious prodrome) 후에 획득된다. 추가의 지방이영양증 증후군으로는 코벌링-두니간 증후군(Kobberling-Dunnigan syndromee), 다른 이형증(dysmorphic) 특징을 가진 지방이영양증, 및 두흉부의(cephalothoracic) 지방이영양증을 들 수 있다.
B형 인슐린 저항성 증후군은 이것이 인슐린 수용체에 대한 혈청 자가-항체들의 존재와 관련되고, 자가면역 질환의 맥락에서 발생할 수 있다는 점에서 DS, RMS, 및 A형 인슐린 저항성 증후군과 상이하다. 증상은 다른 인슐린 저항성 증후군과 유사하며, 기회성 역설적 저혈당증(occasional paradoxal hypoglycemia)에 더불어 비케톤성(non-ketotic) 및 중증의 인슐린-저항성 당뇨병, 흑색 가시세포증, 및 다모증을 포함한다.
HAIR-AN (고안드로겐혈증, 인슐린 저항성, 및 흑색 가시세포증) 증후군은 전형적으로 비만인 젊은 여성에게서, 상이한 형태를 갖는 인슐린 저항성을 나타낸다; 일부 개체는 고농도의 인슐린을 갖지만 정상 수준의 글루코오스를 갖는 한편, 다른 개체들은 당뇨병 증상들로 나타난다. 중증 인슐린 저항성의 다른 증후군의 희귀성과 달리, HAIR-AN 증후군은 전세계적으로 청소년기 소녀들의 약 5%가 앓는 것으로 추정된다. 이 증후군은 인슐린 수용체 유전자의 티로신 키나아제 도메인의 돌연변이와 관련이 있다.
가짜말단비대증은 유거단증(類巨端症, acromegaloidism)과 관련이 있는 중증 인슐린 저항성으로 나타나며, 인슐린 신호전달 경로의 결핍에 의해 또는 IGF-1 수용체를 통한 고인슐린 수준 신호전달로부터 유발되는 가능성이 있다.
다른 중증 인슐린 저항성 증후군으로는, 몇 가지 예를 들면 알스트롬 증후군, 근긴장성 이영양증, 및 베르너 증후군을 포함한다.
일부 환자에서, 질병 또는 질환은 중증 인슐린 저항성을 유발하는 것으로 보고된 유전자 변종의 존재와 관련된다. 예시적인 유전자 변종으로는 INSR, PSMD6, ADRA2A, AGPAT2 (지방이영양증 및 인슐린 저항성과 관련됨), AKT2, APPL1, BBS1 (바르데-비들 증후군 1과 관련됨), BSCL2, CIDEC, GRB10, IRS2, KLF14, LEP, LEPR, LMNA (지방이영양증과 관련됨), MC4R, PCNT, PIK2CA, POLD1 (지방이영양증과 관련됨), PPARG, PTPRD, PTRF (지방이영양증과 관련됨), RASGRP1, TBC1D4, 및 TCF7L2를 들 수 있다.
일부 환자에서, 인슐린 분해 프로테아제 활성이 환자 혈청에서 검출된다. 일부 환자에서, 중화 항-인슐린 항체들 또는 항-인슐린 수용체 항체들이 환자 혈청에서 검출된다. 일부 환자에서, 중증 인슐린 저항성은 지방이영양증으로 이어지는 지방세포의 자가면역 파괴의 맥락에서 발생한다.
중증 인슐린 저항성 환자는 결국 고혈당증, 및 일부 증후군에서는 케톤산증이 발생한다. 예를 들어, RMS를 가진 환자에서, 인슐린 수준은 인생의 매우 조기에 시작되며, 역설적인 공복 저혈당의 기간 중에도 시작된다. 질환이 진전됨에 따라, 인슐린 수준은 여전히 상승하는 한편, 떨어진다. 게다가, 부분적으로 산화된 지방산 수준이 증가하는데, 인슐린이 지방세포로부터의 지방산의 방출을 억제할 수 없다는 것을 가리키고, 궁극적으로 끊임없는 케톤산증을 유발한다. 마찬가지로, 인슐린 수준으로서 끊임없는 고혈당증 결과는 더 이상 간의 글루코오스 생성 및 방출을 억제할 수 없다. 그러나, 극히 고농도의 인슐린 (9.5 U/kg.hr)의 연속적인 주입은 증가된 지방산 산화를 반전시키고 케톤뇨증을 차단할 수 있다. Longo et al., (1991) Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 84:2623-2629. 게다가, 고중성지방혈증 및 저 고밀도 지단백질 콜레스테롤 수준은 중증 인슐린 저항성과 관련이 있다.
중증 인슐린 저항성 증후군 환자는 고혈당증에도 불구하고 정상적인 또는 심지어 약간 상승된 혈장내 글루카곤 수준을 갖는다. West et al., (1975) Arch. Dis. Child., 50(9):703-708; Desbois-Mouthon et al., (1997) Pediatr. Res., 42(1):72-77. 고혈당증은 인슐린 억제의 결핍 및 비정상적으로 높은 글루카곤 신호전달로 인한 향상된 간의 글루코오스 생산으로부터 유발된다.
지금까지, 중증 인슐린 저항성 질병 또는 질환에 대한 GCG/GCGR 신호전달 경로를 길항하는 효과를 조사한 연구는 없었다. 하기 실시예에서 기술된 연구들은, 여러 주의 치료기간에 걸쳐 혈장 베타-하이드록시부티레이트 수준에 의해 측정되는 바, 혈당 수준 및 케톤혈증에 미치는 영향을 증명하기 위한 중증 인슐린 저항성의 마우스 모델에서, GCG/GCGR 신호전달 경로의 예시적인 억제제로서, GCGR의 길항물질을 사용한다.
정의
본원에서 "GCGR"로도 언급되는 "글루카곤 수용체"는 G 단백질-결합 수용체 부류 2 패밀리에 속하고 긴 아미노 말단 세포외 도메인, 7개의 경막 분절, 및 세포내 C-말단 도메인으로 구성된다. 글루카곤 수용체는 특별히 그것들이 글루카곤에 결합하는 간세포 표면상에서 발현되고 그로써 제공된 신호를 세포 안으로 변환시킨다. 따라서, 용어 "글루카곤 수용체"는 또한 글루카곤과 특이적으로 상호작용하여 생물학적 신호를 유발하는 하나 이상의 수용체를 나타낸다. 래트 및 인간 기원의 글루카곤 수용체들을 암호화하는 DNA 서열들이 분리되었고 당업계에 개시되어 있다 (EP0658200B1). 쥐과 및 시노몰구스 원숭이 상동체들 또한 분리되어 있고 서열이 알려져 있다 (Burcelin, et al., (1995) Gene 164:305-310); McNally et al., (2004) Peptides 25:1171-1178). 본원에서 사용되는 바 "글루카곤 수용체" 및 "GCGR"은 상호교환적으로 사용된다. 본원에서 사용되는 표현 "GCGR", "hGCGR" 또는 그것의 단편들은 비-인간 종으로부터 유래되는 것, 예컨대 "마우스 GCGR", "래트 GCGR", 또는 "원숭이 GCGR"로서 명시되지 않는 한, 인간 GCGR 단백질 또는 그것의 단편을 나타낸다.
구절 "GCGR 길항물질"은 GCGR 신호전달 경로의 억제제, 길항물질, 또는 역 작용물질을 나타낸다. "GCG 억제제"는 글루카곤의 수용체에의 결합을 방지할 수 있다. GCGR 억제제는 또한 글루카곤의 수용체에의 결합을 방지할 수 있다. 그러나, 둘 다 수용체의 활성화를 효과적으로 차단 또는 약화시키거나, 또는 GCGR 활성화의 신호전달 캐스케이드 하류를 간섭할 수 있다.
GCGR 길항물질은 글루카곤 수용체에 결합할 수 있고 그로써 GCGR에 의해 매개된 GCG의 활성을 길항할 수 있다. GCGR에서 GCG의 결합 및 활성을 길항함으로써 GCG의 활성을 억제하는 것은 글루코오스 신생합성 및 글리코겐 분해의 속도, 및 혈장내 글루코오스 농도를 감소시킨다. 가상의 길항물질과 글루카곤 수용체와의 결합을 측정하는 방법들은 당업계에 알려져 있고 글루카곤 수용체에서 글루카곤 활성을 간섭하는 것을 측정하기 위한 수단은 공공연하게 이용할 수 있다; 예컨대 S. E. de Laszlo et al., (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:641-646 참조. 본원에서 유용한 것으로 고려하는 것은 그것의 기능성 성분으로서 소분자 화합물, 또는 달리 말해서 저분자량 유기 화합물을 가지는 GCGR 길항물질 또는 GCG 억제제이다. 소분자는 전형적으로 800 달톤 미만이다. 추가적으로, CRISPR 기술이 GCG 또는 GCGR 발현을 녹다운시키기 위해 사용될 수 있다.
용어 "억제제" 또는 "길항물질"은 화학적 또는 생리적 반응 또는 응답을 지연 또는 방지하는 물질을 포함한다. 일반적인 억제제 또는 길항물질로는, 한정하는 것은 아니지만, 안티센스 분자, 항체들, 소분자 억제제, 펩타이드 억제제, DARPin, 스피에겔머(Spiegelmer), 압타머(aptamer), 엔지니어링된 Fn 타입-III 도메인, 및 그것들의 유도체를 들 수 있다.
GCG 억제제 또는 GCGR 신호전달 경로 길항물질의 실례는, 한정하는 것은 아니지만, GCGR 신호전달 경로의 결합을 차단하거나 활성을 억제하는, GCG 또는 GCGR에 대한 항체 (인간 또는 인간화된) 또는 그것의 항원 결합 단백질을 포함한다. 본원에서 기술된 방법에 사용될 수 있는 예시적인 GCGR 길항물질은 다음을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함한다: (a) SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCVR; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCVR. 본원에서 기술된 방법에 사용될 수 있는 예시적인 GCG 억제제는 다음을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함한다: (a) SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCVR; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCVR.
"치료적으로 유효한 용량"은 그것이 투여되어 원하는 효과를 생성하는 용량이다. 정확한 용량은 치료 목적에 따라 좌우될 것이고, 공지 기법들을 사용하여 당업자에 의해 확인될 수 있을 것이다 (예를 들어, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding 참조).
구절 "실질적으로 동일한"이란 (a) SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCVR; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCVR에 대해 적어도 95% 동일성을 가지며, GCGR에 결합할 수 있고 GCGR의 생물학적 활성을 억제할 수 있는 단백질 서열을 의미한다. 구절 "실질적으로 동일한"은 또한 (a) SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 HCVR; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 LCVR에 대해 적어도 95% 동일성을 가지며, GCGR에 결합할 수 있고 GCGR의 생물학적 활성을 억제할 수 있는 단백질 서열을 의미한다.
용어 "동일성" 또는 "상동성"은 서열들이 일렬배열되고 갭이 도입된 후에, 필요하다면 전체 서열에 대한 최대 퍼센트 동일성을 이루기 위하여, 서열 동일성의 부분으로서 임의의 보존성 치환을 고려하지 않고, 그것이 비교되는 상응하는 서열의 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기들의 백분율을 의미하는 것ㅇ로 해석된다. N-말단 또는 C-말단 연장 또는 삽입은 그 어느 것도 동일성 또는 상동성을 감소시키는 것으로서 해석되지 않을 것이다. 일렬배열을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 당업계에 잘 알려져 있다. 서열 동일성은 서열 분석 소프트웨어 (예컨대 서열 분석 소프트웨어 패키지, Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Ave., Madison, Wis. 53705)를 사용하여 측정될 수 있다. 이 소프트웨어는 다양한 치환, 결실, 및 다른 변형에 대한 상동성의 정도를 배정함으로써 유사한 서열들을 매치시킨다.
용어 "치료하는" (또는 "치료하다" 또는 "치료")은 기존의 증상, 장애, 질병 또는 질환의 진행, 지속 기간, 또는 중증도를 둔화, 간섭, 억제, 저지, 제어, 중단, 감소, 개선, 또는 반전시키는 것을 포함하는 과정을 나타내지만, 본질적으로 본원에 기술된 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질의 사용을 통해 모든 질환-관련 증상, 질병, 또는 장애의 총체적인 제거를 포함하는 것은 아니다. 나아가 "치료하는" 또는 "치료" 또는 "치료하다"는 임상 결과를 포함하여 유익한 또는 원하는 결과를 얻기 위한 접근법을 나타내며, 한정하는 것은 아니지만, 다음 중 하나 이상을 포함한다: 중증 인슐린 저항성의 진전을 억제, 지연 또는 방지하는 것; 중증 인슐린 저항성과 관련된, 또는 상승된 혈장내 인슐린 수준, 상승된 혈당 수준, 및/또는 케톤혈증 또는 케톤산증 (상승된 베타-하이드록시부티레이트 수준에 의해 측정되는 경우)을 특징으로 하는 질환, 예컨대 도노휴 증후군, 랍슨-멘덴할 증후군, A형 인슐린 저항성, B형 인슐린 저항성, HAIR-AN (고안드로겐혈증, 인슐린 저항성, 및 흑색 가시세포증) 증후군, 가짜말단비대증, 알스트롬 증후군, 근긴장성 이영양증, 베르너 증후군, 지방이영양증, 간경변, 단일인자 병적 비만, 고전구인슐린혈증, 카르복시펩티다제 E 결핍증, 결핍성 아르기닌 대사, 또는 바르데-비들 증후군, 또는 중증 인슐린 저항성을 유발하는 것으로 보고된 유전자 변종의 존재와 관련된 질병 또는 질환의 진전을 억제, 지연 또는 방지하는 것; 또는 중증 인슐린 저항성과 관련된 질환과 관련된 적어도 하나의 증상을 억제, 방지, 또는 개선하는 것; 또는 혈당 수준 및/또는 베타-하이드록시부티레이트 수준 (케톤산증의 지표로서)을 저하시켜서, 고혈당 수준 및 케톤혈증과 관련된 질병 또는 질환이 중재되거나, 적어도 그 질병 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 완화되거나 중증도가 감소되는 것. 본원에서 사용되는 바, "치료" 또는 "치료하는"은 또한 질환에 걸린 환자들의 삶의 질을 증가시키는 것, 질환을 치료하는 데 필요한 다른 약물의 용량을 감소시키는 것 및/또는 환자들의 생존을 연장시키는 것을 나타낸다. 예를 들어, "치료" 또는 "치료하는"은 중증 인슐린 저항성을 가진 환자를 치료하기 위해 필요한 인슐린의 양 및/또는 투여량을 감소시키는 것을 포함할 수 있다.
구절 "인슐린 저항성"은 정량적으로 정상적인 반응을 유도하기 위하여 정상적인 양보다 더 많은 양의 인슐린이 필요한 상태이다. 구절 "중증 인슐린 저항성"은 일반적으로 내인성 인슐린 분비 및/또는 인슐린의 혈장 수준의 현저한 상승에도 불구하고 거의 정상이거나 상승된 혈당 수준으로 전형적으로 나타나는 임상 상태를 나타낸다. 중증 인슐린 저항성의 증거는 하루에 100 내지 200 유닛 이상의 용량의 외래 인슐린을 필요로 하는 환자들, 또는 만성적으로 상승된 순환 수준의 내인성 인슐린을 가진 환자들에게서 볼 수 있다. Moller and Flier, (1991) New England Journal of Medicine, 325:938-948. 50 내지 70 μU/mL의 공복 인슐린 수준 또는 350 μU/mL을 넘는 피크 (경구 당부하 검사 후) 인슐린 수준이 중증 인슐린 저항성으로 제시된다. 2x104 μU/mL.분 미만의 인슐린 민감성 지수 값은 전형적으로 중증 인슐린 저항성의 존재 하에 발생한다. 중증 인슐린 저항성 환자들은 또한 2 mg/kg.분 아래의 글루코오스 이용률을 나타낸다. Tritos and Mantzoros, (1998) Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 83:3025-3030 참조.
GCG/GCGR 신호전달 경로 억제제
본원에는 중증 인슐린 저항성을 특징으로 하는 질병 또는 질환 의 치료를 위해 GCG 억제제 및 GCGR 길항물질이 제공된다. 일부 구체예에서, 길항물질은 글루카곤의 억제제이다. 일부 구체예에서, 길항물질은 GCGR의 억제제이다. 일부 구체예에서, GCGR 길항물질은 MK-0893, PF-06291874, LGD-6972, 또는 LY2409021이다.
일부 구체예에서, 길항물질은 GCG 또는 GCGR에 결합할 수 있는 항체, 또는 그것의 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 신호전달 경로는, 예를 들어, CRISPR 기술 또는 안티센스를 사용함으로써, GCG 또는 GCGR 발현의 간섭에 의해 억제된다.
일부 구체예에서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 안티센스 분자, 항체, 소분자 억제제, 펩타이드 억제제, DARPin, 스피에겔머, 압타머, 엔지니어링된 Fn 타입-III 도메인, 또는 그것들의 유도체이다.
항-GCGR 항체들, 항-GCG 항체들, 및 항체 단편들
일부 구체예에서, GCGR 길항물질은, 본원에 그 전문이 참조로 포함된 미국 특허 제 8,545,847호에서 개시된 항체 또는 그것의 항체 단편이다. 그 특허에 개시된 항체들은 표 1에 제시된다.
SEQ ID NO:
항체 지정 HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3
H4H1345N 2 4 6 8 10 12 14 16
H4H1617N 18 20 22 24 26 28 30 32
H4H1765N 34 36 38 40 42 44 46 48
H4H1321B 50 52 54 56 58 60 62 64
H4H1321P 66 52 54 56 68 60 62 64
H4H1327B 70 72 74 76 78 80 82 84
H4H1327P 86 72 74 76 88 80 82 84
H4H1328B 90 92 94 96 98 100 102 104
H4H1328P 106 92 94 96 108 100 102 104
H4H1331B 110 112 114 116 118 120 122 124
H4H1331P 126 112 114 116 128 120 122 124
H4H1339B 130 132 134 136 138 140 142 144
H4H1339P 146 132 134 136 148 140 142 144
본원에서 유용한 것으로 고려된 추가적인 GCGR 항체들 또는 항체 단편들은 미국 특허 제 5,770,445호 및 7,947,809호; 유럽 특허 출원 EP2074149A2; 유럽 특허 제 EP0658200B1호; 미국 특허 출원 공보 2009/0041784; 2009/0252727; 및 2011/0223160; 및 PCT 공보 WO2008/036341에서 개시된 것들을 포함한다. 상기 특허 및 공보들은 본원에 그 전문이 참조로 포함된다.
일부 구체예에서, GCG 억제제는 미국 특허 출원 2016/0075778에 개시된 항체 또는 그것의 항체 단편이다. 상기 특허 출원에 개시된 항체들이 표 2에 제시된다.
SEQ ID NO:
항체 지정 HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3
H1H059P 150 152 154 156 158 160 162 164
H4H10223P 166 168 170 172 174 176 178 180
H4H10231P 182 184 186 188 190 192 194 196
H4H10232P 198 200 202 204 206 208 210 212
H4H10236P 214 216 218 220 222 224 226 228
H4H10237P 230 232 234 236 238 240 242 244
H4H10238P 246 248 250 252 254 256 258 260
H4H10250P 262 264 266 268 270 272 274 276
H4H10256P 278 280 282 284 286 288 290 292
H4H10270P 294 296 298 300 302 304 306 308
본원에서 유용한 것으로 고려된 추가적인 GCG 항체들 또는 항체 단편들은 미국 특허 제 4,206,199호; 4,221,777호; 4,423,034호; 4,272,433호; 4,407,965호; 5,712,105호; 및 PCT 공보 WO2007/124463 및 WO2013/081993에 개시된 것들을 포함한다.
항체 단편들로는 필요한 표적 특이성을 가진 임의의 단편, 예컨대 전체 항체들의 변형(예컨대 효소적 소화)에 의해 생성된 항체 단편, 또는 재조합 DNA 방법을 사용하여 새롭게 합성된 것들 (scFv, 단일 도메인 항체들, DVD (이중 가변 도메인 면역글로불린), 또는 dAbs (단일 가변 도메인 항체들)) 또는 인간 파지 또는 효모 디스플레이 라이브러리를 사용하여 확인된 것들을 포함한다 (예를 들어 McCafferty et al. (1990) Nature 348:552-554 참조). 대안적으로, 항체들은, 한정하는 것은 아니지만 하이브리도마를 제조하는 것을 포함하거나, 또는 B 세포 스크리닝 기술, 예컨대 SLAM을 사용하는 표준 면역화 및 항체 분리 방법을 사용하여 인간, 인간-마우스, 인간-래트, 및 인간-토끼 키메릭 항체들을 생성하는 마우스로부터 분리될 수 있다. 면역글로불린 결합 도메인은 또한, 한정하는 것은 아니지만, 면역글로불린의 중쇄 (VH) 또는 경쇄 (VL)의 가변 영역을 포함한다. 또는 사람들의 면역화 및 항원 양성 B 세포의 분리 및 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 cDNA의 클로닝 및 그것들의 세포, 예컨대 CHO에서의 공동발현에 의해.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 항원에 특이적으로 결합하고 인식하는 면역글로불린 유전자 또는 그것의 단편들로부터의 프레임워크 영여을 포함하는 폴리펩타이드를 나타낸다. 인식된 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론, 및 뮤 불변 영역, 뿐만 아니라 수많은 면역글로불린 가변 영역 유전자들을 포함한다. 경쇄는 카파 또는 람다로서 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로서 분류되고, 그것들은 계속해서 면역글로불린 부류, IgG, IgM, IgA, IgD, 및 IgE를 각각 규정한다. 각각의 IgG 부류 내에는, 상이한 아이소타입들이 있다 (예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4). 전형적으로, 항체의 항원-결합 영역은 결합의 특이성 및 친화성을 측정하는데 가장 결정적일 것이다.
예시적인 면역글로불린 (항체) 구조 단위는 테트라머를 포함한다. 각 테트라머는 폴리펩타이드 사슬의 2개의 동일한 쌍으로 구성되며, 각각의 쌍은 하나의 경쇄 (약 25 kD) 및 하나의 중쇄 (약 50 내지 70 kD)를 가진다. 각 사슬의 N-말단은 주로 항원 인식에 기여하는 약 100 내지 100 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 규정한다. 용어 "가변 경쇄" (VL) 및 가변 중쇄 (VH)는 각각 이러한 경쇄 및 중쇄를 나타낸다.
항체들은 온전한 면역글로불린으로서, 또는 다양한 펩티다아제로의 소화에 의해 생성된, 특성화가 잘 이루어진 많은 단편들로서 존재한다. 예를 들어, 펩신은 힌지 영역의 이황화 결합 아래에서 항체를 소화시켜서 이황화 결합에 의해 VH -CH1에 연합된 경쇄 자체인 Fab의 다이머인 F(ab)'2를 생성한다. F(ab)'2는 가벼운 조건하에서 환원되어 힌지 영역의 이황화 결합이 깨질 수 있고, 그로써 F(ab)'2 다이머는 Fab' 단량체로 전환될 수 있다. Fab' 단량체는 본질적으로 힌지 영역의 일부가 포함된 Fab이다. 다양한 항체 단편들이 온전한 항체의 소화의 관점에서 규정되는 한편, 당업자는 그러한 단편들이 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법론을 사용함으로써 새롭게 합성될 수 있음을 인지할 것이다.
본원의 방법에 따라 유용한 항체들을 제조하기 위한 방법들은 업계에 알려져 있다. 예를 들어, Kohler & Milstein (1975) Nature 256:495-497; Harlow & Lane (1988) Antibodies: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Lab., Cold Spring Harbor, N.Y. 참조. 관심의 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자들은 세포로부터 클로닝될 수 있는데, 예컨대 단클론성 항체를 암호화하는 유전자들은 하이브리도마로부터 클로닝될 수 있고 재조합 단클론성 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 단클론성 항체들은 CDR 영역의 인간 스캐폴드 안으로의 표준 클로닝을 사용하여 인간화될 수 있다. 단클론성 항체들의 인간 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자 라이브러리는 또한 하이브리도마 또는 플라즈마 세포로부터 제조될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 유전자 생성물의 무작위 조합은 상이한 항원 특이성을 가진 항체들의 큰 모음(pool)을 유발한다. 단일 사슬 항체들 또는 재조합 항체들의 생성을 위한 기법 (미국 특허 제 4,946,778호; 미국 특허 제 4,816,567호)은 본원에 개시된 방법에 사용된 항체들을 사용하기 위해 조정될 수 있다. 또한, 형질전환 마우스, 또는 기타 포유류와 같은 기타 유기체들이 인간, 인간-마우스 키메릭, 인간-래트 키메릭, 인간-토끼 키메릭, 또는 인간화된 항체들을 발현시키기 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 파지 디스플레이 또는 효모 디스플레이 기술이 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 인간 항체들 및 헤테로머릭(heteromeric) Fab 단편들을 확인하기 위해 사용될 수 있다.
면역콘쥬게이트
본 개시는 치료 모이어티 ("면역콘쥬게이트"), 예컨대 혈당 수준을 감소시킬 수 있거나 중증 인슐린 저항성의 또 다른 증상을 해결할 수 있는 작용제에 콘쥬게이트된 인간 항-GCGR 단클론성 항체로 중증 인슐린 저항성을 치료하는 것을 포함한다. 항-GCGR 항체에 콘쥬게이트될 수 있는 치료 모이어티의 유형은 치료되는 질병 및 이루고자 하는 원하는 치료 효과를 고려할 것이다. 예를 들어, 혈당을 낮추기 위해, 및/또는 정상 혈당 수준을 유지하기 위한 노력으로, 비구아니드 (예컨대 메트포르민(metformin)), 설포닐우레아 (예컨대 글리부리드(glyburide), 글리피지드(glipizide)), PPAR 감마 작용물질 (예컨대 피오글리타존(pioglitazone), 로시글리타존(rosiglitazone)); 알파 글루코시다제 억제제 (예컨대 아카보즈(acarbose), 보글리보스(voglibose), 진전된 당화(advanced glycation) 최종 생성물 형성의 억제제 (예컨대 아미노구아니딘), 또는 제 2 GCGR 억제제 또는 GCG 억제제와 같은 작용제가 GCGR 항체에 콘쥬게이트될 수 있다. 대안적으로, 만약 원하는 치료 효과가 케톤혈증 또는 중증 인슐린 저항성과 관련된 임의의 다른 증상 또는 질병을 치료하기 위한 것이라면, 적절한 작용제를 항-GCGR 항체에 콘쥬게이션시키는 것이 유리할 수 있다. 면역콘쥬게이트를 형성하기에 적합한 작용제의 실례들은 당업계에 알려져 있고, 예를 들어 WO 05/103081을 참조한다.
다중-특이적 항체들
본원에 제공된 방법들에 따라 유용한 항체들은 단일-특이적, 이중-특이적, 또는 다중-특이적일 수 있다. 다중-특이적 항체들은 하나의 표적 폴리펩타이드의 상이한 에피토프들에 대해 특이적일 수 있거나 하나 이상의 표적 폴리펩타이드에 특이적인 항원-결합 도메인을 함유할 수 있다. 예컨대 Tutt et al., (1991) J. Immunol. 147:60-69; Kufer et al., (2004) Trends Biotechnol. 22:238-244 참조. 항-GCGR 항체들은 다른 기능성 분자, 예컨대 다른 펩타이드 또는 단백질과 연결되거나 또는 동시 발현될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 그것의 단편은 제 2 결합 특이성을 가진 이중-특이적 또는 다중-특이적 항체를 생성하기 위하여 하나 이상의 다른 분자 실체, 예컨대 또 다른 항체 또는 그것의 항체 단편에 (예컨대 화학 결합, 유전자 융합, 비공유 회합 또는 그 밖의 다른 것에 의하여) 기능적으로 연결될 수 있다. 예를 들어, 면역글로불린의 한쪽 팔(arm)은 인간 GCGR 또는 그것의 단편에 특이적이고, 면역글로불린의 다른쪽 팔은 제 2 치료제에 특이적이거나 치료 모이어티에 콘쥬게이션되는 이중-특이적 항체들이 고려된다. 특정 구체예에서, 면역글로불린의 한쪽 팔은 hGCGR 또는 그것의 단편의 N-말단 도메인 상의 에피토프에 대해 특이적이고, 면역글로불린의 다른쪽 팔은 hGCGR 또는 그것의 단편의 EC 루프들 중 한 루프 상의 에피토프에 대해 특이적이다. 특정 구체예에서, 면역글로불린의 한쪽 팔은 하나의 EC 루프, 또는 그것의 단편에 대해 특이적이고, 두 번째 팔은 제 2 EC 루프, 또는 그것의 단편에 대해 특이적이다. 특정 구체예에서, 면역글로불린의 한쪽 팔은 hGCGR의 한 EC 상의 하나의 에피토프에 대해 특이적이고 다른 팔은 hGCGR의 동일한 EC 루프 상의 제 2 에피토프에 대해 특이적이다.
본원에 기술된 방법에 따라 사용될 수 있는 예시적인 이중-특이적 항체 방식은 제 1 면역글로불린 (Ig) CH3 도메인 및 제 2 Ig CH3 도메인의 사용을 포함하고, 이때 제 1 및 제 2 Ig CH3 도메인은 적어도 하나의 아미노산만큼 서로 상이하고, 적어도 하나의 아미노산 차이는 아미노산 차이가 없는 이중-특이적 항체와 비교하여 단백질 A에 대한 이중-특이적 항체의 결합을 감소시킨다. 한 구체예에서, 제 1 Ig CH3 도메인은 단백질 A에 결합하고 제 2 Ig CH3 도메인은 단백질 A 결합을 감소시키거나 제거하는 돌연변이, 예컨대 H95R 변형 (IMGT 엑손 넘버링에 의한 것임; EU 넘버링에 의하면 H435R)을 함유한다. 제 2 CH3은 추가로 Y96F 변형 (IMGT에 의해; EU에 의하면 Y436F)을 포함할 수 있다. 제 2 CH3 내에서 찾을 수 있는 추가의 변형은 IgG1 항체들의 경우에 D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, 및 V82I (IMGT에 의해; EU에 의하면 D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, 및 V422I); IgG2 항체들의 경우에 N44S, K52N, 및 V821 (IMGT; EU에 의하면 N384S, K392N, 및 V422I); 및 IgG4 항체들의 경우에 Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, 및 V82I (IMGT에 의해; EU에 의하면 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q, 및 V422I)를 포함한다. 상기 기술된 이중-특이적 항체 방식에 대한 변형은 본 개시의 범주 내에 포함된다.
항체 스크리닝 및 선택
본원에 제공된 방법에 따라 유용한, 바람직한 항체들의 스크리닝 및 선택은 업계에 알려져 있는 다양한 방법들에 의해 수행될 수 있다. 표적 항원에 특이적인 단클론성 항체들의 존재에 대한 초기 스크리닝은 예를 들어 ELISA-기방 방법의 사용을 통해 수행될 수 있다. 이차 스크린은 바람직하게는 항체-약물 콘쥬게이트의 제조에 사용하기 위한 원하는 단클론성 항체를 확인 및 선택하기 위해 수행된다. 이차 스크리닝은 당업계에 알려져 있는 임의의 적합한 방법으로 수행될 수 있다. "바이오센서 변형-보조 프로파일링(Biosensor Modification-Assisted Profiling, "BiaMAP")으로 불리는 한 가지 바람직한 방법은, 미국 특허 출원 공개 공보 2004/0101920에서 기술되고, 그 전문이 참조로 본원에 구체적으로 포함된다. BiaMAP는 원하는 특징들을 가진 단클론성 항체들을 생성하는 하이브리도마 클론들의 신속한 확인을 허용한다. 보다 구체적으로, 단클론성 항체들은 항체:항원 상호작용의 평가를 기반으로 별개의 에피토프-관련 그룹들로 분류된다. 리간드 또는 수용체 중 어느 하나를 차단할 수 있는 항체들은 세포 기반 검정, 예컨대 NFκB 유래 프로모터 또는 cAMP 반응 유래 프로모터의 제어 하에 루시페라제 유전자를 사용하는 루시페라제 검정에 의해 확인될 수 있다. 글루카곤에 의한 GCGR의 자극은 NFκB/cAMP/CREB를 통한 신호로 이어지고 그로써 세포에서 루시페라제 수준을 증가시킨다. 차단 항체들은 루시페라제 활성의 글루카곤 유도를 차단한 항체들로서 확인된다.
치료 집단
본원에 제공된 치료 방법은 중증 인슐린 저항성 또는 중증 인슐린 저항성과 관련된 질병 또는 질환에 걸린 개체들을 치료하는 데 유용하다. 예시적인 질병 또는 질환으로는 도노휴 증후군, 랍슨-멘덴할 증후군, A형 인슐린 저항성, B형 인슐린 저항성, HAIR-AN (고안드로겐혈증, 인슐린 저항성, 및 흑색 가시세포증) 증후군, 가짜말단비대증, 알스트롬 증후군, 근긴장성 이영양증, 베르너 증후군, 지방이영양증, 간경변, 단일인자 병적 비만, 고전구인슐린혈증, 카르복시펩티다제 E 결핍증, 결핍성 아르기닌 대사, 또는 바르데-비들 증후군, 및 중증 인슐린 저항성을 유발하는 것으로 보고된 유전자 변종의 존재와 관련된 질병 또는 질환을 들 수 있다. 일부 구체예에서, 인슐린 분해 프로테아제 활성이 환자 혈청에서 검출된다. 일부 구체예에서, 중화 항-인슐린 항체들이 환자 혈청에서 검출된다. 중증 인슐린 저항성은 지방이영양증으로 이어지는 지방세포의 자가면역 파괴의 맥락에서 발생한다.
치료적 투여 및 제제
본원에 제공된 방법에 따라 유용한 것은 글루카곤/GCGR 길항물질, 예를 들면 항-GCGR 항체를 포함하는 치료 조성물이다. 본원에 기술된 방법에 따르는 치료 조성물의 투여는, 한정하는 것은 아니지만, 정맥내, 피하, 근육내, 척수강내, 뇌내, 심실내, 비강내, 또는 경구를 포함한 적합한 경로를 통해, 적합한 담체, 부형제 및 개선된 수송, 전달, 저항력, 등을 제공하기 위해 제제에 포함되는 다른 작용제들과 함께 투여될 것이다. 아주 많은 적절한 제제가 모든 약사들에게 알려져 있는 처방집에서 찾아볼 수 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa. 이러한 제제들은, 예를 들면, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 지질 (양이온성 또는 음이온성) 함유 소포체 (예컨대 LIPOFECTINTM), DNA 콘쥬게이트, 무수 흡수 페이트스, 수중유 및 유중수 에멀션, 에멀션 카르보왁스 (다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고체 겔, 및 카르보왁스를 함유한 반-고체 혼합물을 포함한다. 또한 Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311 참조.
항체의 용량은 투여되는 대상체의 연령 및 크기, 표적 질환, 질병, 투여 경로, 등에 따라 다를 수 있다. 환자에서, 항체가 혈당 수준을 저하시키고 및/또는 다양한 질병 및 질환, 예컨대 형 인슐린 저항성 증후군, RMS, 또는 DS에서 중증 인슐린 저항성과 관련된 케톤혈증 (예를 들어 베타-하이드록시부티레이트 수준에 의해 측정됨)을 감소시키기 위해 사용될 때, 항체는 정상적으로 약 0.01 내지 약 30 mg/kg 체중, 보다 바람직하게는 약 0.02 내지 약 7, 약 0.03 내지 약 5, 또는 약 0.05 내지 약 3 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는 것이 유익하다. 질병의 중증도 및 치료에 대한 반응에 따라, 치료 빈도 및 기간이 조정될 수 있다. 특정 구체예에서, 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 적어도 약 0.1 mg 내지 약 800 mg, 약 1 내지 약 500 mg, 약 5 내지 약 300 mg, 또는 약 10 내지 약 200 mg, 내지 약 100 mg, 또는 내지 약 50 mg의 초기 용량으로서 투여될 수 있다.
특정 구체예에서, 초기 용량 후에 초기 용량과 대략 동일하거나 또는 그것보다 적을 수 있는 양으로 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 제 2 또는 복수의 후속 용량의 투여가 이어질 수 있고, 후속 용량들은 적어도 1일 내지 3일; 적어도 1주; 적어도 2주; 적어도 3주; 적어도 4주; 적어도 5주; 적어도 6주; 적어도 7주; 적어도 8주; 적어도 9주; 적어도 10주; 적어도 12주; 또는 적어도 14주만큼 분리된다.
다양한 전달 시스템이 알려져 있고 항체를 포함한 제약학적 조성물을 투여하기 위해 사용될 수 있는데, 예컨대 리포좀에의 캡슐화, 미세입자, 미세캡슐, 돌연변이 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개된 식세포작용이 있다 (예컨대 Wu et al. (1987) J. Biol. Chem. 262:4429-4432 참조). 도입 방법으로는, 한정하는 것은 아니지만, 데포 제제, 에어로졸, 피내, 경피, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외, 척수강내, 심실내, 및 구강 경로가 있다. 조성물은 임의의 편리한 경로에 의하여, 예를 들어 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막 라이닝 (예컨대 구강 점막, 직장 및 장 점막, 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고 다른 생물학적 활성제들과 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신성이거나 국소적일 수 있다.
제약학적 조성물은 또한 소포체, 특히 리포좀으로 전달될 수 있다 (예를 들어 Langer (1990) Science 249:1527-1533 참조).
특정 상황에서, 제약학적 조성물은 방출 제어 시스템으로 전달될 수 있다. 한 구체예에서, 펌프가 사용될 수 있다. 다른 구체예에서, 중합체 물질이 사용될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 방출 제어 시스템은 조성물의 표적과 근접하여 배치될 수 있고, 그로써 전신성 용량의 부분만이 필요해진다.
주사용 조제물은 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 점적 주입 등을 위한 투여 형태를 포함할 수 있다. 이러한 주사용 조제물은 공공연하게 알려져 있는 방법들에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 주사용 조제물은 예컨대 상기 기술된 항체 또는 그것의 염을 주사를 위해 종래 사용된 멸균된 수성 매질 또는 유성 매질에 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제조될 수 있다. 주사용 수성 매질로서, 예를 들어 생리 식염수, 글루코오스 및 기타 보조제를 함유한 등장성 용액, 등이 있고, 이것들은 알코올 (예컨대 에탄올), 폴리알코올 (예컨대 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제 [예컨대 폴리소르베이트 80, HCO-50 (수소화된 캐스터유의 폴리옥시에틸렌 (50 mol) 부가물)], 등과 같은 적절한 가용화제와 함께 사용될 수 있다. 유성 매질로서, 예컨대 참깨 기름, 대두유, 등이 사용되고, 이것들은 벤질 벤조에이트, 벤질 알코올, 등과 같은 가용화제와 함께 사용될 수 있다. 그렇게 제조된 주사는 바람직하게는 적절한 앰플에 채워진다.
본원에 유용한 제약학적 조성물은 피하로 또는 정맥내로 표준 바늘 및 주사기를 사용하여 전달될 수 있다. 게다가, 피하 전달과 관련하여, 펜 전달 장치가 본원에 기술된 방법에 유용한 제약학적 조성물을 전달하는데 쉽게 적용될 수 있다. 그러한 펜 전달 장치는 재사용이 가능하거나 일회용일 수 있다. 재사용이 가능한 펜 전달 장치는 제약학적 조성물을 함유하는 교체 가능한 카트리지를 일반적으로 사용한다. 일단 카트리지 내의 모든 제약학적 조성물이 투여되고 나면 카트리지는 비게 되고, 빈 카트리지는 쉽게 버려지거나 제약학적 조성물을 함유한 새로운 카트리지와 교체될 수 있다. 펜 전달 장치는 그런 후 재사용될 수 있다. 일회용 펜 전달 장치에서는 교체 가능한 카트리지가 없다. 오히려, 일회용 펜 전달 장치는 장치 내의 저장소에 보유된 제약학적 조성물로 사전 충전된다. 일단 저장소의 제약학적 조성물이 비워지면, 전체 장치는 폐기된다.
수많은 재사용 가능한 펜 및 자기주사기 전달 장치가 본원에 기술된 방법에 따라 유용한 제약학적 조성물의 피하 전달에 적용될 수 있다. 그 예로는, 특히 한정하는 것은 아니지만, 몇 가지 예를 들자면 AUTOPENTM (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONICTM 펜 (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25TM 펜, HUMALOGTM 펜, HUMALIN 70/30TM 펜 (Eli Lilly and Co., Indianapolis, Inn.), NOVOPENTM I, II 및 III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIORTM (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BDTM 펜 (Becton Dickinson, Franklin Lakes, N.J.), OPTIPENTM, OPTIPEN PROTM, OPTIPEN STARLETTM, 및 OPTICLIKTM (Sanofi-Aventis, Frankfurt, Germany)이 있다. 본원에 기술된 방법에 따라 유용한 제약학적 조성물의 피하 전달에 적용되는 일회용 펜 전달 장치의 실례로는, 특별히 한정하는 것은 아니지만, 몇 가지 예를 들자면 SOLOSTARTM 펜 (Sanofi-Aventis), FLEXPENTM (Novo Nordisk), 및 KWIKPENTM (Eli Lilly), SURECLICKTM 자기주사기 (Amgen, Thousand Oaks, Calif.), PENLETTM (Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.) 및 HUMIRATM 펜 (Abbott Labs, Abbott Park, Ill.)이 있다.
유리하게도, 상기 기술된 경구 또는 비경구 사용을 위한 제약학적 조성물은 활성 성분들의 용량을 맞추기 위해 조정된 단위 용량의 투여 형태로 제조된다. 단위 용량의 그러한 투여 형태는, 예를 들면 정제, 환, 캡슐, 주사액 (앰플), 좌제, 등이다. 함유된 상기 항체의 양은 일반적으로 단위 용량으로, 특히 주사액 형태로, 약 5 내지 약 750 mg/투여 형태이고; 상기 항체는 다른 투여 형태의 경우 약 5 내지 약 100 mg으로 및 약 10 내지 약 250 mg으로 함유된다.
조합 치료법
많은 구체예에서, 본원에 유용한 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 하나 이상의 추가 화합물 또는 치료법과 함께 투여될 수 있다. 조합 치료법은 동시적이거나 순차적일 수 있다.
일부 구체예에서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 투여된다: 인슐린, 비구아니드, hIGF1, 렙틴, 피오글리타존, 빌다글립틴, 아카보즈, 알파-글리코시다제 억제제, L-아르기닌, 다이펩티딜-펩티다제-4 억제제, 인슐린 분비 촉진제, 아밀린 수용체 작용물질, 인슐린 감작제, SGLT2 억제제, SGLT1 억제제, GLP-1 유사체, GLP-1 수용체 활성화제, 제 2 GCG 억제제, 및 제 2 GCGR 길항물질. 일부 구체예에서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 투여된다: 바나데이트 또는 바나듐 염, 페니토인(phenytoin), 벤자피브레이트(benzafibrate). 일부 구체예에서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 ω-3 지방산 풍부 어유(fish oil)와 같은 식이 보충물과 함께 투여된다.
일부 구체예에서, 인슐린 감작제는 티아졸리딘다이온, 예컨대 트로글리타존이다. 일부 구체예에서, 인슐린 감작제는 로시글리타존이다.
일부 구체예에서, 인슐린 분비 촉진제는 설포닐우레아, ATP-민감성 K 채널 길항물질, 또는 메글리티니드이다.
추가적인 치료적 활성 성분(들)은 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질의 투여 전, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 투여될 수 있다. 본 개시의 목적에 대해, 그러한 투여 처방은 제 2 치료적 활성 성분"과 함께" GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질의 투여인 것으로 여겨진다.
투여 처방
본원에 기술된 특정 구체예들에 따르면, 글루카곤/GCGR 길항물질의 다중 용량이 규정된 기간에 걸쳐 대상체에게 투여될 수 있다. 그 방법은 대상체에게 다중 용량의 글루카곤/GCGR 길항물질을 순차적으로 투여하는 단계를 포함한다. 본원에서 사용되는 바, "순차적으로 투여하는 단계"는 길항물질의 각 용량이 상이한 시점에, 예컨대 예정된 간격 (예컨대 시간, 일, 주 또는 개월)만큼 분리된 상이한 날에 대상체에게 투여되는 것을 의미한다. 본원에 기술된 방법은 환자에게 단일 초기 용량의 글루카곤/GCGR 길항물질과, 이어서 1회 이상의 이차 용량의 글루카곤/GCGR 길항물질, 그리고 선택적으로 이어서 1회 이상의 삼차 용량의 글루카곤/GCGR 길항물질을 순차적으로 투여하는 단계를 포함한다.
용어 "초기 용량", "이차 용량", 및 "삼차 용량"은 본원에서 유용한 글루카곤/GCGR 길항물질의 일시적인 투여 순서를 나타낸다. 그러므로, "초기 용량"은 치료 처방을 시작할 때 투여되는 용량 (또한 "기준선 용량"으로서도 언급됨)이고; "이차 용량"은 초기 용량 후 투여된 용량이며; "삼차 용량"은 이차 용량 후 투여된 용량이다. 초기, 이차, 및 삼차 용량은 모두 동일한 양의 글루카곤/GCGR 길항물질을 함유할 수 있지만, 일반적으로 투여 빈도와 관련하여 서로 상이할 수 있다. 그러나, 특정 구체예에서, 초기, 이차 및/또는 삼차 용량에 함유된 글루카곤/GCGR 길항물질의 양은 치료 기간 중에 서로 달라진다 (예컨대 적절하게 상향 또는 하향 조정된다). 특정 구체예에서, 둘 이상 (예컨대 2, 3, 4, 또는 5회) 용량이 치료 처방을 시작할 때 "로딩 용량"으로서 투여된 후 후속 용량들이 더 적은 빈도 기준으로 투여된다 (예컨대 "유지 용량").
제약학적 조성물
본원에 개시된 방법들은 중증 인슐린 저항성을 치료하는데 유용항 활성제, 예컨대 글루카곤/GCGR 길항물질의 적어도 치료적 유효량, 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물의 사용을 고려한다. 용어 "제약학적으로 허용되는"은 미국 연방 정부 또는 주정부의 규제 기관에 의해 승인된 또는 미국 약전 또는 동물, 보다 구체적으로는 인간에서의 사용에 대해, 다른 일반적으로 인식된 약전에서 열거된 것을 의미한다. 용어 "담체"는 치료제와 함께 투여되는 희석제, 보조제, 부형제, 또는 비히클을 나타낸다. 그러한 제약학적 담체는 멸균된 액체, 예컨대 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 오일, 예컨대 땅콩 기름, 대두유, 미네랄 오일, 참깨 기름 등을 포함하여, 물 및 오일일 수 있다. 적합한 제약학적 부형제로는 전분, 글루코오스, 락토오스, 수크로오스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카겔, 스테아르산 나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등이 있다. 조성물은, 필요하다면, 또한 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 이러한 조성물은 용액, 현탁액, 에멀션, 정제, 환, 캡슐, 분말, 지속성 방출 제제 등의 형태를 가질 수 있다. 조성물은 좌제로서, 전통적인 결합제 및 트라이글리세리드와 같은 담체와 함께 제제화될 수 있다. 경구용 제제는 제약 등급의 만니톨, 락토오스, 전분, 스테아르산 마그네슘, 사카린 나트륨, 셀룰로오스, 탄산 마그네슘, 등과 같은 표준 담체를 포함할 수 있다. 적합한 제약학적 담체의 실례는 "Remington's Pharmaceutical Sciences" by E. W. Martin에서 기술된다.
한 구체예에서, 조성물은 인간에게 정맥내 투여하기 위해 조정된 제약학적 조성물로서 기본적인 과정에 따라 제제화된다. 필요한 경우, 조성물은 또한 가용화제 및 주사 부위에서 통증을 덜어 주기 위한 리도카인과 같은 국소 마취제를 포함할 수 있다. 조성물이 주입에 의해 투여되어야 하는 경우에, 멸균된 제약학적 등급의 물 또는 염수를 함유한 주입 병으로 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우에, 주사용 멸균수 또는 염수의 앰플이 제공되어서 성분들이 투여 전에 혼합될 수 있다.
본원에 기술된 방법에 따라 유용한 활성제들은 중성 또는 염 형태로서 제제화될 수 있다. 제약학적으로 허용되는 염으로는 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 등으로부터 유래된 것들과 같이 유리 아미노기로 형성된 것들, 및 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화 철, 아이소프로필아민, 트라이에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인, 등으로부터 유래된 것들과 같이 유리 카르복실기로 형성된 것들이 있다.
중증 인슐린 저항성의 치료에 효과적일 활성제의 양은 본 설명을 기반으로 한 표준 임상 기법들에 의해 결정될 수 있다. 게다가, 최적의 투여량 범위를 확인하는 것을 보조하기 위하여 시험관내 검정이 선택적으로 사용될 수 있다. 제제에 사용될 정확한 용량은 또한 투여 경로, 및 질병의 중대성에 따라 좌우될 것이고, 의사의 판단 및 각 대상체의 상황에 따라 결정되어야 한다. 그러나, 정맥내 투여의 경우 적합한 투여량 범위는 일반적으로 체중 킬로그램당 약 20 마이크로그램 내지 2그램의 활성 화합물이다. 비강내 투여에 적합한 투여량 범위는 일반적으로 약 0.01 pg/kg 체중 내지 1 mg/kg 체중이다. 유효량은 시험관내 또는 동물 모델 테스트 시스템으로부터 유래된 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
전신성 투여의 경우, 치료적 유효량은 시험관내 검정으로부터 초기에 산정될 수 있다. 예를 들어, 용량은 세포 배양에서 측정되는 바 IC50을 포함하는 순환 농도 범위를 이루기 위해 동물 모델에서 공식화될 수 있다. 그러한 정보는 인간에서 유용한 용량을 보다 정확하게 측정하기 위해 사용될 수 있다. 초기 투여량은 또한 생체내 데이터로부터, 예컨대 동물 모델로부터, 당업계에 잘 알려져 있는 기법들을 사용하여 산정될 수 있다. 당업자는 동물 데이터를 기반으로 인간에 대한 투여를 쉽게 최적화할 수 있을 것이다.
투여량 및 간격은 치료 효과를 유지하기에 충분한 화합물의 혈장 수준을 제공하기 위해 개별적으로 조정될 수 있다. 국소 투여 또는 선택적 흡수의 경우에, 화합물의 유효한 국소 농도는 혈장 농도와 관련이 없을 수 있다. 당업자는 불필요한 실험 없이 치료적으로 유효한 국소 투여량을 최적화할 수 있을 것이다.
투여되는 화합물의 양은, 물론, 대상체의 체중, 질병의 중증도, 투여 방식, 및 처방하는 의사의 판단을 기반으로, 치료되는 대상체에 따라 좌우될 것이다. 증상들이 검출 가능하거나 심지어 검출할 수 없을 때에도 치료법은 간헐적으로 반복될 수 있다. 치료법은 단독으로 또는 다른 약물과 함께 제공될 수 있다.
키트
또한 본원에는 포장 물질 및 그 포장 물질 내에 함유된 제약학적 작용제를 포함하는 제조 물품이 제공되는데, 여기서 제약학적 작용제는 본원에 개시된 방법에 따라 유용한 적어도 하나의 GCG/GCGR 길항물질을 포함하고, 포장 물질은 그 GCG/GCGR 길항물질이 중증 인슐린 저항성을 특징으로 하는 질병 또는 질환을 치료하는 데 사용될 수 있음을 나타내는 라벨 또는 포장 삽입물을 포함한다.
발명이 많은 구체예들을 참조로 구체적으로 제시되고 기술된 한편, 당업자들에게는 본원에 개시된 다양한 구체예들에 대해 발명의 사상 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 형태와 세부 사항의 변화가 이루어질 수 있고 본원에 개시된 다양한 구체예들은 청구범위의 범주에 대한 한계로서 작용하는 것으로 의도되지 않는 것이 인지될 것이다.
실시예
다음의 실시예들은 당업자들이 본원에 개시된 방법들을 실행하는 방법의 완전한 개시 및 설명을 알 수 있도록 제공된다. 사용된 숫자 (예컨대 양, 온도, 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위한 노력이 기울여졌지만, 일부 실험적 오류 및 편차들이 확인되어야 한다. 다르게 표시되지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 압력은 대기압이거나 거의 대기압이다.
실시예 1: 매우 심한 인슐린 저항성의 마우스 모델에서 고혈당증을 방지하는 데 있어서의 GCGR 길항물질의 평가
마우스에서 삼투 미니펌프(osmotic minipump)에 의한, 인슐린 수용체 길항물질인 S961의 투여는 중증 인슐린 저항성 및 고혈당증을 유발한다 (Gusarova V et al., (2014) Cell, 159:691-696; Yi P et al., (2013) Cell, 153:747-758; Schaffer L., (2008) Biochem. Biophys. Res. Commun., 376:380-383). 중증 인슐린 저항성의 이 모델을 사용하여 고혈당증을 방지하는 데 있어 항-GCGR 항체의 효과, 뿐만 아니라 중증 인슐린 저항성으로부터 유발되는 혈당 수준 및 혈장 베타-하이드록시부티레이트 수준 (케톤혈증의 척도임)에 대한 효과를 측정하였다.
물질:
· hIgG4 아이소타입 대조군
· H4H1327P, 항-hGCGR hIgG4
· S961, 인슐린 수용체 길항물질 (Celtek Peptides에 의해 공개된 서열 (Schaffer L., (2008) Biochem. Biophys. Res. Commun., 376:380-383)을 사용하여 관례적으로 합성됨)
동물 및 주입:
29마리의 마우스를 6 내지 8마리씩의 마우스의 4그룹으로 나누었다. 제 1 그룹을 10 mg/kg의 hIgG4 아이소타입 대조군으로 제 0, 6, 및 14일에 피하 주입하고 제 7일부터 PBS를 삼투 미니펌프 (Alzet 2002)에 의해 피하로 주입하였다. 제 2 그룹을 10 mg/kg의 H4H1327P로 제 0, 6, 및 14일에 피하 주입하고 제 7일부터 PBS를 삼투 미니펌프 (Alzet 2002)에 의해 피하로 주입하였다. 제 3 그룹을 10 mg/kg의 hIgG4 아이소타입 대조군으로 제 0, 6, 및 14일에 피하 주입하고 제 7일부터 S961을 20 nmol/주로 삼투 미니펌프 (Alzet 2002)에 의해 피하로 주입하였다. 제 4 그룹을 10 mg/kg의 H4H1327P로 제 0, 6, 및 14일에 피하 주입하고 제 7일부터 S961을 20 nmol/주로 삼투 미니펌프 (Alzet 2002)에 의해 피하로 주입하였다. 마우스들을 제 0, 3, 6, 10, 14, 17, 및 21일에 혈당 측정을 위해 출혈시켰다. 각 시점에서의 혈당 수준의 평균 ± SEM을 각 그룹에 대해 계산하고 표 3에 나타낸다. 혈장을 기준선 및 제 6, 14 및 21일에 수집하여 인슐린 및 베타-하이드록시부티레이트 수준을 측정하였다. 각 시점에서의 혈장 베타-하이드록시부티레이트 및 인슐린 수준의 평균 ± SEM을 각 그룹에 대해 계산하고 표 4 및 5에 나타낸다.
혈당 수준
시간
(경과일)		 아이소타입 대조군 + PBS H4H1327P + PBS 아이소타입 대조군 + S961 H4H1327P + S961
혈당 (mg/dL) 0 196 ± 6 191 ± 4 186 ± 5 196 ± 3
3 195 ± 7 119 ± 3 191 ± 6 124 ± 6
6 194 ± 9 126 ± 4 192 ± 5 129 ± 12
10 186 ± 4 135 ± 2 437 ± 40 185 ± 7
14 197 ± 5 128 ± 4 508 ± 53 272 ± 53
17 211± 6 144 ± 3 467 ± 41 219 ± 22
21 206 ± 5 141 ± 5 499 ± 18 209 ± 6
혈장 베타-하이드록시부티레이트 수준
시간
(경과일)		 아이소타입 대조군 + PBS H4H1327P + PBS 아이소타입 대조군 + S961 H4H1327P + S961
베타-하이드록시부티레이트 (mg/dL) 0 0.20 ± 0.02 0.20 ± 0.02 0.21 ± 0.02 0.24 ± 0.02
6 0.26 ± 0.01 0.24 ± 0.01 0.26 ± 0.01 0.27 ± 0.01
14 0.22 ± 0.02 0.23 ± 0.02 0.34 ± 0.04 0.26 ± 0.03
21 0.23 ± 0.01 0.23 ± 0.02 0.34 ± 0.04 0.25 ± 0.03
혈장 인슐린 수준
시간
(경과일)		 아이소타입 대조군 + PBS H4H1327P + PBS 아이소타입 대조군 + S961 H4H1327P + S961
인슐린 (ng/mL) 0 0.80 ± 0.14 1.90 ± 0.69 1.15 ± 0.68 1.62 ± 0.67
6 0.24 ± 0.04 0.24 ± 0.06 0.21 ± 0.10 0.24 ± 0.04
14 0.37 ± 0.09 0.36 ± 0.05 22.83 ± 4.32 18.51 ± 2.30
21 0.40 ± 0.13 0.46 ± 0.15 23.97 ± 4.36 25.11 ± 5.15
결과:
통계학적 분석을 프리즘 소프트웨어 (버전 6)로 수행하였다. 대조군 그룹 (그룹 1)에 대한 유의미성을 평가하기 위하여, 본페로니 다중 비교 테스트를 포함한 이원 변량 분석을 사용하였다. a: p<0.05, b: p<0.01, c: p<0.001, d: p<0.0001.
H4H1327P-치료된 및 PBS-주입된 동물들 (그룹 2)은 H4H1327P 투여 후에 (3일과 21일 사이) 아이소타입 대조군-투여된 및 PBS-주입된 동물 (그룹 1)에 비교하여 혈당의 감소를 나타냈고, 그것은 H4H1327P의 글루코오스 저하 효능을 확인시켜주었다. 아이소타입 대조군-투여된 및 S961-주입된 동물들 (그룹 3)은 S961의 주입 후 (10일과 21일 사이)에 아이소타입 대조군-투여된 및 PBS-주입된 동물 (그룹 1)에 비교하여 혈당의 증가를 나타냈고, 그것은 S961의 고혈당증 효과를 확인시켜주었다. H4H1327P-치료된 및 961-주입된 동물들 (그룹 4)에서, 혈당 수준은 S961 주입 후 10일과 21일 사이에 그룹 1 마우스들의 그것과 비슷하였다. 도 1A 참조.
혈장 인슐린 수준은 아이소타입 대조군-투여된 및 PBS-주입된 동물들 (그룹 1)에 비교하여 제 14 및 21일에 아이소타입 대조군-투여된 및 S961-주입된 동물들 (그룹 3)에 비교하여 상승되었고, 그것은 연구 기간 중에 인슐린 수용체를 억제하는 S961의 작용을 확인시켜주었다. 인슐린 수준은 아이소타입 대조군-투여된 및 S961-주입된 동물들 (그룹 3)과 비교하여 H4H1327P-치료된 및 S961-주입된 동물들 (그룹 4)에서 똑같이 증가하였다. 도 1B 참조.
이전 연구 (Okamoto et al., (2015) Endocrinology, 156(8): 2781-2794)와 일관되게, H4H1327P는 S961 투여와 독립적이었던 효과인, 증가된 혈장 글루카곤 수준을 증명하였다 (도 1C 참조).
혈장 베타-하이드록시부티레이트의 수준은 아이소타입 대조군-투여된 및 PBS-주입된 동물들 (그룹 1)에 비교하여 제 14 및 21일에 아이소타입 대조군-투여된 및 S961-주입된 동물들 (그룹 3)에서 상승된 반면, H4H1327P-치료된 및 S961-주입된 동물들 (그룹 4)에서는 변화하지 않았다. 도 1D 참조. 게다가, 치료 그룹들 사이에 체중의 차이는 관찰되지 않았다 (도 1E 참조).
이 데이터들은 H4H1327P가 인슐린 수용체 길항물질-유도 고혈당증 및 케톤혈증을 방지하고 중증의 고인슐린혈증의 존재하에서조차 혈당을 저하시키는 것을 나타낸다.
실시예 2: 매우 심한 인슐린 저항성의 마우스 모델에서 고혈당증을 반전시키는 데 있어서의 GCGR 길항물질의 평가
중증 인슐린 저항성에 의해 유도된 수립된 고혈당증을 반전시키는 데 있어 항-GCGR 항체의 효과를 실시예 1에서 언급한 동일한 동물 모델 및 동일한 물질을 사용하되, 인슐린 수용체 길항물질을 항-GCGR 항체의 주사 전 4일에 투여한 것을 제외하고 동일하게 측정하였다. 혈당 및 혈장 베타-하이드록시부티레이트 수준에 미치는 효과를 또한 측정하였다.
동물 및 주입:
32마리의 마우스를 8마리씩의 마우스의 4그룹으로 나누었다. 제 1 그룹을 제 0일부터 PBS를 삼투 미니펌프 (Alzet 2002)에 의해 피하로 주입하고 10 mg/kg의 hIgG4 아이소타입 대조군으로 제 4, 11 및 18일에 피하로 주입하였다. 제 2 그룹을 제 0일부터 PBS를 피하로 주입하고 10 mg/kg의 H4H1327P로 제 4, 11, 및 18일에 피하로 주입하였다. 제 3 그룹을 제 0일부터 S961을 20 nmol/주로 피하로 주입하고 10 mg/kg의 hIgG4 아이소타입 대조군으로 제 4, 11, 및 18일에 피하 주입하였다. 제 4 그룹을 제 0일부터 S961을 20 nmol/주로 피하로 주입하고 10 mg/kg의 H4H1327P로 제 4, 11, 및 18일에 피하 주입하였다. 마우스들을 제 0, 4, 7, 11, 14, 18, 및 21일에 혈당 측정을 위해 출혈시켰다. 각 시점에서의 혈당 수준의 평균 ± SEM을 각 그룹에 대해 계산하고 표 6에 나타낸다. 혈장을 기준선 및 제 4, 11, 및 21일에 수집하여 인슐린 및 베타-하이드록시부티레이트 수준을 측정하였다. 각 시점에서의 혈장 베타-하이드록시부티레이트 및 인슐린 수준의 평균 ± SEM을 각 그룹에 대해 계산하고 표 7 및 8에 나타낸다.
혈당 수준 (mg/dL)
시간
(경과일)		 PBS +
아이소타입 대조군		 PBS + H4H1327P S961 + 아이소타입 대조군 S961 + H4H1327P
0 186 ± 4 189 ± 4 192 ± 4 183 ± 4
4 196 ± 3 197 ± 3 491 ± 29 490 ± 21
7 216 ± 5 142 ± 6 523 ± 34 203 ± 6
11 206 ± 6 137 ± 4 533 ± 14 201 ± 6
14 210 ± 7 145 ± 5 595 ± 6 211 ± 9
18 202 ± 7 140 ± 4 550 ± 16 203 ± 5
21 168 ± 6 123 ± 4 526 ± 12 172 ± 5
혈장 베타-하이드록시부티레이트 수준 (mmol/L)
시간
(경과일)		 PBS +
아이소타입 대조군		 PBS + H4H1327P S961 + 아이소타입 대조군 S961 + H4H1327P
0 0.20 ± 0.01 0.22 ± 0.01 0.21 ± 0.02 0.18 ± 0.02
4 0.27 ± 0.01 0.25 ± 0.02 0.41 ± 0.02 0.37 ± 0.04
11 0.26 ± 0.02 0.24 ± 0.01 0.39 ± 0.03 0.26 ± 0.02
21 0.26 ± 0.01 0.25 ± 0.01 0.45 ± 0.06 0.26 ± 0.02
혈장 인슐린 수준 (ng/mL)
시간
(경과일)		 PBS +
아이소타입 대조군		 PBS + H4H1327P S961 + 아이소타입 대조군 S961 + H4H1327P
0 1.05 ± 0.31 0.77 ± 0.25 0.52 ± 0.08 0.42 ± 0.09
4 0.62 ± 0.32 0.50 ± 0.11 19.23 ± 3.18 21.68 ± 2.02
11 0.39 ± 0.09 0.35 ± 0.05 25.97 ± 3.48 64.25 ± 18.17
21 1.67 ± 0.47 0.37 ± 0.04 51.43 ± 15.03 64.78 ± 14.91
결과:
통계학적 분석을 프리즘 소프트웨어 (버전 6)로 수행하였다. 대조군 그룹 (그룹 1)에 대한 유의미성을 평가하기 위하여, 본페로니 다중 비교 테스트를 포함한 이원 변량 분석을 사용하였다. a: p<0.05, b: p<0.01, c: p<0.001, d: p<0.0001.
S961-주입된 및 아이소타입 대조군-투여된 동물들 (그룹 3)은 S961 주입 후 (4일과 21일 사이) PBS-주입된 및 아이소타입 대조군-투여된 동물들 (그룹 1)과 비교하여 혈당의 증가를 보였고, 그것은 S961의 고혈당 효과를 확인시켜주었다. S961-주입된 및 H4H1327P-치료된 동물들 (그룹 4)은 H4H1327P 투여 후에 PBS-주입된 및 아이소타입 대조군-투여된 및 동물들 (그룹 1)의 혈당 수준과 거의 동일한 혈당 수준을 보였다. PBS-주입된 및 H4H1327P-치료된 동물들 (그룹 2)은 H4H1327P 투여 후에 (4일과 21일 사이) 아이소타입 대조군-투여된 및 PBS-주입된 동물들 (그룹 1)과 비교하여 감소된 혈당 수준을 유지하였고, 그것은 H4H1327P의 글루코오스 저하 효능을 확인시켜 주었다. 도 2A 참조.
혈장 인슐린 수준은 PBS-주입된 및 아이소타입 대조군-투여된 동물들 (그룹 1)과 비교하여 제 4, 11 및 21일에 S961-주입된 및 아이소타입 대조군-투여된 동물들 (그룹 3)에서 상승되었고, 이것은 연구 기간 중에 인슐린 수용체를 억제하는 S961의 작용을 확인시켜 주었다. 도 2B 참조. 고인슐린혈증 (표 8 및 도 2B) 및 고글루카곤혈증 (도 2C 참조)은 수용체 두 길항물질을 모두 받은 마우스에서 뚜렷하였다.
혈장 베타-하이드록시부티레이트의 수준은 PBS-주입된 및 아이소타입 대조군-투여된 동물들 (그룹 1)에 비교하여 제 11 및 21일에 S961-주입된 및 아이소타입 대조군-투여된 동물들 (그룹 3)에서 상승한 반면, 그룹 1 동물들과 관련하여 이 동일한 시점에서 S961-주입된 및 H4H1327P-치료된 동물들 (그룹 4)에서는 변화가 없었다. 도 2D 참조.
이전의 발견 (Okamoto et al., 2015)과 일관되게, H4H1327P는 S961이 그런 것처럼, 그러나 항체가 그런 것보다는 더 적은 정도로 순환하는 아미노산 수준을 증가시켰다 (도 2E 참조). 인슐린 및 글루카곤 수용체 둘 다의 억제는 혈장 아미노산 수준의 추가의 증가를 유발하였따 (도 2E 참조). 체중의 변화는 관찰되지 않았다 (도 2F 참조).
이 데이터들은 H4H1327P가 중증의 고인슐린혈증의 존재하에서도 인슐린 수용체 길항물질-유도 고혈당증 및 케톤혈증을 반전시키고 혈당을 저하시킨 것을 나타낸다.
실시예 3: 인슐린 수용체 길항물질-유도 간 Pepck 발현을 반전시키는 데 있어서의 GCGR 길항물질의 평가
실시예 1로부터의 4개의 그룹의 각각에 따라 치료된 마우스들로부터 얻어진 간 샘플을 극저온 RIPA 완충액 (50 mM Tris, 150 mM NaCl, 1 mol의 EDTA, 50 mM NaF, 10 mM β-글리세로포스페이트, 5 mM 피로인산 나트륨 2염기 및 1% NP-40)으로 프로테아제 및 포스파타제 억제제 칵테일 (Thermo-Fisher), 1 mM DTT 및 2 mM Na3VO4의 존재 하에 용해시켰다. 총 샘플 용해물을 6x SDS 로딩 완충액 (Alfa-Aesar)과 혼합하고 5분 동안 끓였다. 단백질 샘플 (10 내지 100 μg)을 로딩하고 4 내지 20% 구배 SDS-PAGE 겔 (Bio-Rad) 상에서 분리하고 폴리비닐리덴 다이플루오라이드 막으로 옮겼다. 막을 1시간 동안 0.1% Tween20 (Bio-Rad)이 보충된 1x TBS 중의 5% 소혈청 알부민으로 차단하고 포스포에놀피루브산 카르복시키나아제 (PEPCK)에 대한 항체 (1:250; Abcam)와 함께 인큐베이션하였다. 결합된 항체들을 서양고추냉이 과산화효소-콘쥬게이트된 항-토끼 또는 항-마우스 이차 항체들 (1:10,000; Jackson ImmunoResearch) 및 향상된 화학발광 시약 (Thermo-Fisher)을 사용하여 검출하였다. 밴드 세기를 Image J 소프트웨어로 정량하였다.
웨스턴 블롯 분석은 속도 제한 당신생 효소 포스포에놀피루브산 카르복시키나아제 (Pepck)가 H4H1327P로 치료된 마우스의 간에서 70% 감소되었음을 나타냈다 (도 3A 및 B 참조). 이와 대조적으로, Pepck 수준은 S961이 주입된 마우스의 간에서 2.3배 증가하였고, 이 효과는 H4H1327P에 의한 기준선보다 30% 아래로 반전된 것이었다. 그러므로, 글루카곤 및 인슐린 신호전달의 상대적 수준은 앞서 증명된 것과 같이, Pepck 발현을 조절한다 (Lynedjian et al., (1995); Rucktδschel et al., (2000); Chakravarty et al., (2005)). 이 데이터들은 H4H1327P로의 GCGR 차단이 간의 글루코오스 생산을 억제함으로써 마우스에서 중증 인슐린 저항성-유도된 고혈당증을 방지하는 것을 보여준다.
실시예 4: α- 및 β-세포량에서 GCGR 및 인슐린 수용체 길항작용의 평가
실시예 2로부터의 4개의 그룹의 각각에 따라 치료된 마우스들로부터 얻어진 췌장을 10% 중성 완충 포르말린 용액에 48시간 동안 고정시켜서 파라핀에 삽입시키고, 슬라이드 위에서 구획화하였다. 췌장 조직 및 세포를 침투할 수 있게 만들고 마우스 Gcg 및 Ins2에 대한 mRNA 프로브들의 조합으로 제조자 (Advanced Cell Diagnostics)의 지시에 따라 하이브리드를 제조하였다. 발색 키트를 사용하여 mRNA 신호를 증폭시켰다 (Advanced Cell Diagnostics). 글루카곤 및 인슐린 양성 세포의 면적을 Halo 디지털 영상화 분석 소프트웨어 (Indica Labs)를 사용하여 측정하였다. 전체 췌장에 대한 글루카곤 및 인슐린 양성 면적의 퍼센트를 계산하였다. α- 및 β-세포량을 각 동물의 상응하는 췌장 중량에 대한 그것들에 대한 α- 및 β-세포 면적을 곱함으로써 계산하였다. 섬세포 수를 인슐린 Halo 디지털 영상화 분석 소프트웨어를 사용하여 구획 상의 양성 섬세포의 수를 계수함으로써 측정하고 구획의 전체 췌장 면적에 의해 표준화하였다.
H4H1327P는 췌장 중량을 19% 증가시켰는데, 이 효과는 H4H1327P 및 S961이 둘 다 존재할 때 더 컸다 (433%) (도 4A 참조). Gcg 및 Ins2에 대한 프로브들을 사용한 RNA 제자리 하이브리드 형성 (RNA ISH)을 췌장 구획의 형태적 분석에 사용하였다. H4H1327P는 α-세포량을 5.7배 증가시켰고 (도 4B 참조), S961 투여는 β-세포량을 3배 증가시켰다 (도 4C 참조). H4H1327P 단독으로는 β-세포량에 영향을 미치지 않았지만, 예상외로, β-세포량은 S961 단독과 비교할 때 S961과 H4H1327P의 동시 존재하에 배가되었고 대조군 마우스들보다 5.8배 증가되었다 (도 4C 참조). β-세포량의 추가 팽창은 정상 혈당 수준의 고정시 일어난 것을 주지하는 것이 중요하다 (표 3). α-세포량은 S9761 처리 및 H4H1327P의 동시 존재시에 약간 (1.6배) 증가하였다 (H4H1327P 단독보다는 1.4배) (도 4B 참조). S961은 총 췌장 면적 당 섬세포 수를 49% 증가시킨 반면, S961과 H4H1327P의 조합 치료는 면적당 섬세포 수를 82% 증가시켰다 (도 4D 참조). 요약하면, α- 및 β-세포량의 보상성 증가는 글루카곤 및 인슐린 신호전달이 억제되었을 때 생성되었다. 신규한 발견은 β-세포량이 인슐린 저항성 마우스에서 글루카곤 신호전달이 차단되었을 때 배가되었고 이런 효과는 정상 혈당 수준에서 일어났다는 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Gromada, Jesper Okamoto, Haruka Jaspers, Stephen Harp, Joyce <120> Methods of Treating Severe Insulin Resistance by Interfering with Glucagon Receptor Signaling <130> 10282WO01 <140> TBD <141> 2017-08-25 <150> 62/381,263 <151> 2016-08-30 <150> 62/411,032 <151> 2016-10-21 <160> 308 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 caggtccagt tggtacagtc tggggctgac gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg tttccggaca tatcctcact gatttatcca tgcactgggt gcgacagcct 120 cctggaaaag gacttgagtg gatggcaggt tttgatcctg aagaaggtaa aataatctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accgaggaca catctacaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctggggac acggccgttt attactgtgc aacaagcgat 300 attttgactg ggtattatag agactactac ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360 ctcaccgtct cctca 375 <210> 2 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Asp Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val 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300 cccacttttg gccaggggac caagctggag atcaaa 336 <210> 254 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 254 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Phe Tyr Ser Val Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 255 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 255 cagagtgttt tatacagctc caacaataag aactac 36 <210> 256 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 256 Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 257 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 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ggctggagtg ggtggcattt atatcaaatg ataaaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgac agctgaggac acggctgttt attactgtgc gaaagagtcc 300 attttagcag ccctctttga ctcctggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357 <210> 294 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 294 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Val Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Phe Ile Ser Asn Asp Lys Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Ser Ile Leu Ala Ala Leu Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 295 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 295 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agcgggtctg gggcagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctgc agatgtggca gtttattact gtcagcaatt ttatagtgtt 300 cccacttttg gccaggggac caagctggag atcaaa 336 <210> 302 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 302 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Ala Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Phe Tyr Ser Val Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 303 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 303 cagagtgttt tatacagctc caacaataag aactac 36 <210> 304 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 304 Gln Ser Val Leu Tyr Ser 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Claims (64)

  1. 혈당 수준 및/또는 케톤체의 수준을 저하시키기 위한, 또는 고혈당 또는 상승된 케톤체와 관련된, 또는 부분적으로 고혈당 또는 상승된 케톤체를 특징으로 하는 질병 또는 질환, 또는 그 질병 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 방법으로서, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자에게 글루카곤 (GCG) 억제제 또는 글루카곤 수용체 (GCGR) 길항물질을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하여서 혈당 수준 또는 케톤체의 수준이 저하되거나 또는 그 질병 또는 질환이 중재되거나, 또는 그 질병 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 완화되거나 중증도가 감소되도록 하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자는 도노휴 증후군, 랍슨-멘덴할 증후군, A형 인슐린 저항성, B형 인슐린 저항성, HAIR-AN (고안드로겐혈증, 인슐린 저항성, 및 흑색 가시세포증) 증후군, 가짜말단비대증, 알스트롬 증후군, 근긴장성 이영양증, 베르너 증후군, 지방이영양증, 간경변, 단일인자 병적 비만, 고전구인슐린혈증, 카르복시펩티다제 E 결핍증, 결핍성 아르기닌 대사, 바르데-비들 증후군, 및 중증 인슐린 저항성을 유발하는 것으로 보고된 유전자 변종의 존재와 관련된 질병 또는 질환으로 구성되는 군으로부터 선택된 질병 또는 질환을 앓는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 인슐린 분해 프로테아제 활성이 환자 혈청에서 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1 항에 있어서, 중화 항-인슐린 항체들 또는 항-인슐린 수용체 항체들이 환자 혈청에서 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 항에 있어서, 인슐린 저항성은 INSR, PSMD6, ADRA2A, AGPAT2, AKT2, APPL1, BBS1, BSCL2, CIDEC, GRB10, IRS2, KLF14, LEP, LEPR, LMNA, MC4R, PCNT, PIK2CA, POLD1, PPARG, PTPRD, PTRF, RASGRP1, TBC1D4, 및 TCF7L2로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자의 유전자 변종과 관련된 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1 항에 있어서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 인슐린과 동시에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 1 항에 있어서, 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 치료제는 인슐린, 비구아니드, hIGF1, 렙틴, 피오글리타존, 빌다글립틴, 아카보즈, 알파-글리코시다제 억제제, L-아르기닌, 다이펩티딜-펩티다제-4 억제제, 인슐린 분비 촉진제, 아밀린 수용체 작용물질, 인슐린 감작제, FGF21, SGLT2 억제제, SGLT1 억제제, GLP-1 작용물질, GLP-1 수용체 활성화제, β3 아드레날린작용성 작용물질, NPR1 작용물질, NPR3 길항물질, 트라이-요오드티로닌, 제 2 GCG 억제제, 및 제 2 GCGR 길항물질로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 1 항에 있어서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 분리된 인간 단클론성 항체, 또는 그것의 항원 결합 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 1 항에 있어서, GCGR 길항물질은 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 상보성 결정 영역들 (CDRs); 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 CDR들을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이고, 이때 HCVR은 SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지며, LCVR은 SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 10 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 (a) SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 10 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/68, 70/78, 86/88, 90/98, 106/108, 110/118, 126/128, 130/138, 및 146/148로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 10 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 86/88에 나타낸 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 1 항에 있어서, GCG 억제제는 (a) SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 (b) SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 14 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및/또는 SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 14 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 150/158; 166/174; 182/190; 198/206; 214/222; 230/238; 246/254; 262/270; 278/286 및 294/302로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 14 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 166/174 또는 SEQ ID NO: 182/190의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 8 항에 있어서, 인슐린 분비 촉진제는 설포닐우레아, ATP-민감성 K 채널 길항물질, 및 메글리티니드로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 8 항에 있어서, 인슐린 감작제는 티아졸리딘다이온 및 로시글리타존으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 1 항에 있어서, 케톤체는 베타-하이드록시부티레이트인 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 중증 인슐린 저항성을 가지며, 상승된 혈당 수준을 나타내는 환자의 치료 방법으로서, 환자에게 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  22. 제 21 항에 있어서, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자는 도노휴 증후군, 랍슨-멘덴할 증후군, A형 인슐린 저항성, B형 인슐린 저항성, HAIR-AN (고안드로겐혈증, 인슐린 저항성, 및 흑색 가시세포증) 증후군, 가짜말단비대증, 알스트롬 증후군, 근긴장성 이영양증, 베르너 증후군, 지방이영양증, 간경변, 단일인자 병적 비만, 고전구인슐린혈증, 카르복시펩티다제 E 결핍증, 결핍성 아르기닌 대사, 바르데-비들 증후군, 및 중증 인슐린 저항성을 유발하는 것으로 보고된 유전자 변종의 존재와 관련된 질병 또는 질환으로 구성되는 군으로부터 선택된 질병 또는 질환을 앓는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제 21 항에 있어서, 인슐린 분해 프로테아제 활성이 환자 혈청에서 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제 21 항에 있어서, 중화 항-인슐린 항체들 또는 항-인슐린 수용체 항체들이 환자 혈청에서 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제 21 항에 있어서, 인슐린 저항성은 INSR, PSMD6, ADRA2A, AGPAT2, AKT2, APPL1, BBS1, BSCL2, CIDEC, GRB10, IRS2, KLF14, LEP, LEPR, LMNA, MC4R, PCNT, PIK2CA, POLD1, PPARG, PTPRD, PTRF, RASGRP1, TBC1D4, 및 TCF7L2로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자의 유전자 변종과 관련된 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제 21 항에 있어서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 인슐린과 동시에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제 21 항에 있어서, 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 제 27 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 치료제는 인슐린, 비구아니드, hIGF1, 렙틴, 피오글리타존, 빌다글립틴, 아카보즈, 알파-글리코시다제 억제제, L-아르기닌, 다이펩티딜-펩티다제-4 억제제, 인슐린 분비 촉진제, 아밀린 수용체 작용물질, 인슐린 감작제, FGF21, SGLT2 억제제, SGLT1 억제제, GLP-1 작용물질, GLP-1 수용체 활성화제, β3 아드레날린작용성 작용물질, NPR1 작용물질, NPR3 길항물질, 트라이-요오드티로닌, 제 2 GCG 억제제, 및 제 2 GCGR 길항물질로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 제 21 항에 있어서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 분리된 인간 단클론성 항체, 또는 그것의 항원 결합 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 제 21 항에 있어서, GCGR 길항물질은 HCVR의 CDR들; 및 LCVR의 CDR들을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체이고, 이때 HCVR은 SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지며, LCVR은 SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 제 30 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 (a) SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 제 30 항에 있어서, 분리된 항체 또는 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/68, 70/78, 86/88, 90/98, 106/108, 110/118, 126/128, 130/138, 및 146/148로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제 30 항에 있어서, 분리된 인간 단클론성 항체는 SEQ ID NO: 86/88에 나타낸 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 제 21 항에 있어서, GCG 억제제는 (a) SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 (b) SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제 34 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및/또는 SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 제 34 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 150/158; 166/174; 182/190; 198/206; 214/222; 230/238; 246/254; 262/270; 278/286 및 294/302로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 제 34 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 166/174 또는 SEQ ID NO: 182/190의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 제 28 항에 있어서, 인슐린 분비 촉진제는 설포닐우레아, ATP-민감성 K 채널 길항물질, 및 메글리티니드로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 제 28 항에 있어서, 인슐린 감작제는 티아졸리딘다이온 및 로시글리타존으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  40. 중증 인슐린 저항성을 가지며, 중증 인슐린 저항성 및 상승된 혈당 수준을 나타내는 환자를 치료하기 위해 필요한 인슐린의 양 및/또는 투여량을 감소시키는 방법으로서, 환자에게 GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  41. 제 40 항에 있어서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 인슐린과 동시에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  42. 제 40 항에 있어서, 인슐린의 양 및/또는 투여량은 GCGR 길항물질과 동시에 투여될 때 약 30% 내지 약 95% 감소될 수 있고, GCGR 길항물질은 GCGR에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 단클론성 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  43. 제 40 항에 있어서, 인슐린의 양 및/또는 투여량은 GCGR 길항물질과 동시에 투여될 때 약 90% 감소될 수 있고, 길항물질은 GCGR에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 단클론성 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 제 40 항에 있어서, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자는 도노휴 증후군, 랍슨-멘덴할 증후군, A형 인슐린 저항성, B형 인슐린 저항성, HAIR-AN (고안드로겐혈증, 인슐린 저항성, 및 흑색 가시세포증) 증후군, 가짜말단비대증, 알스트롬 증후군, 근긴장성 이영양증, 베르너 증후군, 지방이영양증, 간경변, 단일인자 병적 비만, 고전구인슐린혈증, 카르복시펩티다제 E 결핍증, 결핍성 아르기닌 대사, 바르데-비들 증후군, 및 중증 인슐린 저항성을 유발하는 것으로 보고된 유전자 변종의 존재와 관련된 질병 또는 질환으로 구성되는 군으로부터 선택된 질병 또는 질환을 앓는 것을 특징으로 하는 방법.
  45. 제 40 항에 있어서, 인슐린 분해 프로테아제 활성이 환자 혈청에서 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  46. 제 40 항에 있어서, 중화 항-인슐린 항체들 또는 항-인슐린 수용체 항체들이 환자 혈청에서 검출되는 것을 특징으로 하는 방법.
  47. 제 40 항에 있어서, 인슐린 저항성은 INSR, PSMD6, ADRA2A, AGPAT2, AKT2, APPL1, BBS1, BSCL2, CIDEC, GRB10, IRS2, KLF14, LEP, LEPR, LMNA, MC4R, PCNT, PIK2CA, POLD1, PPARG, PTPRD, PTRF, RASGRP1, TBC1D4, 및 TCF7L2로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자의 유전자 변종과 관련된 것을 특징으로 하는 방법.
  48. 제 40 항에 있어서, 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 환자에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  49. 제 48 항에 있어서, 적어도 하나의 추가 치료제는 인슐린, 비구아니드, hIGF1, 렙틴, 피오글리타존, 빌다글립틴, 아카보즈, 알파-글리코시다제 억제제, L-아르기닌, 다이펩티딜-펩티다제-4 억제제, 인슐린 분비 촉진제, 아밀린 수용체 작용물질, 인슐린 감작제, FGF21, SGLT2 억제제, SGLT1 억제제, GLP-1 작용물질, GLP-1 수용체 활성화제, β3 아드레날린작용성 작용물질, NPR1 작용물질, NPR3 길항물질, 트라이-요오드티로닌, 제 2 GCG 억제제, 및 제 2 GCGR 길항물질로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  50. 제 40 항에 있어서, GCG 억제제 또는 GCGR 길항물질은 분리된 인간 단클론성 항체, 또는 그것의 항원 결합 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  51. 제 40 항에 있어서, GCGR 길항물질은 HCVR의 CDR들; 및 LCVR의 CDR들을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체이고, 이때 HCVR은 SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지며, LCVR은 SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
  52. 제 51 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 (a) SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 70, 86, 90, 106, 110, 126, 130 및 146으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 68, 78, 88, 98, 108, 118, 128, 138 및 148로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  53. 제 51 항에 있어서, 분리된 항체 또는 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/68, 70/78, 86/88, 90/98, 106/108, 110/118, 126/128, 130/138, 및 146/148로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  54. 제 51 항에 있어서, 분리된 항체는 SEQ ID NO: 86/88에 나타낸 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  55. 제 40 항에 있어서, GCG 억제제는 (a) SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 (b) SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 분리된 인간 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  56. 제 55 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 및 294로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR 및/또는 SEQ ID NO: 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  57. 제 55 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 150/158; 166/174; 182/190; 198/206; 214/222; 230/238; 246/254; 262/270; 278/286 및 294/302로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 제 55 항에 있어서, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 166/174 또는 SEQ ID NO: 182/190의 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 제 49 항에 있어서, 인슐린 분비 촉진제는 설포닐우레아, ATP-민감성 K 채널 길항물질, 및 메글리티니드로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  60. 제 49 항에 있어서, 인슐린 감작제는 티아졸리딘다이온 및 로시글리타존으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  61. 혈당 수준 및/또는 베타-하이드록시부티레이트 수준을 저하시키기 위한, 또는 고혈당 또는 고수준의 케톤체와 관련된, 또는 부분적으로 고혈당 또는 고수준의 케톤체를 특징으로 하는 질병 또는 질환, 또는 그 질병 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증을 치료하기 위한 방법으로서, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자에게 GCGR 신호전달의 억제제를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하여서 혈당 수준 또는 베타-하이드록시부티레이트 수준이 저하되거나 또는 그 질병 또는 질환이 중재되거나, 또는 그 질병 또는 질환과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 합병증이 완화되거나 중증도가 감소되도록 하는 단계를 포함하는 방법.
  62. 제 60 항에 있어서, GCGR 신호전달의 억제제는 안티센스 분자, GCGR 항체들, 소분자 억제제, 펩타이드 억제제, DARPin, 스피에겔머, 압타머, 엔지니어링된 Fn 타입-III 도메인, GCG 항체들, 및 그것들의 유도체로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  63. 간의 글루코오스 생산을 억제하는 방법으로서, 중증 인슐린 저항성을 가진 환자에게 GCGR 신호전달의 억제제를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하여서, 간의 글루코오스 생산이 억제되도록 하는 단계를 포함하는 방법.
  64. 중증 인슐린 저항성을 가진 환자에서 β-세포량을 증가시키는 방법으로서, 환자에게 GCGR 신호전달의 억제제를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하여서, β-세포량이 치료전 β-세포량에 비해 증가하도록 하는 단계를 포함하는 방법.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240110661A (ko) 2016-08-30 2024-07-15 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 글루카곤 수용체 신호전달을 간섭함에 의한 중증 인슐린 저항성의 치료 방법
CN110357959B (zh) * 2018-04-10 2023-02-28 鸿运华宁（杭州）生物医药有限公司 Gcgr抗体及其与glp-1的融合蛋白质，以及其药物组合物和应用
CN113481290B (zh) * 2021-06-30 2022-08-23 华南农业大学 一种klf4基因在制备检测和/或减少母鼠不良妊娠结局的产品中的应用
CN114342875A (zh) * 2022-01-12 2022-04-15 吉林大学 一种新型妊娠糖尿病动物模型的建立方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012071372A2 (en) * 2010-11-23 2012-05-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to the glucagon receptor

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5836308B2 (ja) 1977-02-10 1983-08-08 大塚製薬株式会社 抗体の製造方法
US4206199A (en) 1977-07-22 1980-06-03 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel glucagon fragment and its derivatives
JPS56163456A (en) 1980-05-21 1981-12-16 Otsuka Pharmaceut Co Ltd Preparation of antigen
US4423034A (en) 1980-10-16 1983-12-27 Toyo Jozo Kabushiki Kaisha Process for the preparation of antibodies
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
CA2142819C (en) 1992-08-28 2003-08-19 Wayne R. Kindsvogel Glucagon receptors
JP2729159B2 (ja) 1994-10-31 1998-03-18 日清製粉株式会社 ヒトグリセンチンのモノクローナル抗体、この抗体を産生するハイブリドーマおよびそれを用いるヒトグリセンチンの定量法
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
EP1699453A4 (en) 2003-12-19 2009-07-01 Merck & Co Inc CYCLIC GUANIDINES, COMPOSITIONS AND METHOD OF ADMINISTRATION CONTAINING SUCH COMPOUNDS
WO2005103081A2 (en) 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
WO2005121097A2 (en) 2004-06-04 2005-12-22 Merck & Co., Inc. Pyrazole derivatives, compositions containing such compounds and methods of use
DE102004028862A1 (de) 2004-06-15 2005-12-29 Merck Patent Gmbh 3-Aminoindazole
ATE449604T1 (de) 2004-07-07 2009-12-15 Merck & Co Inc Pyrazolamid-derivate, diese verbindungen enthaltende zusammensetzungen und anwendungsverfahren
ATE468853T1 (de) 2004-07-22 2010-06-15 Merck Sharp & Dohme Substituierte pyrazole, derartige verbindungen enthaltende zusammensetzungen und verfahren zu ihrer verwendung
CN101115735B (zh) 2005-02-11 2013-01-09 伊莱利利公司 作为高血糖素受体拮抗剂的取代的噻吩衍生物、制备和治疗用途
WO2006102067A1 (en) 2005-03-21 2006-09-28 Merck & Co., Inc. Substituted aryl and heteroaryl derivatives
AU2006229904A1 (en) 2005-03-30 2006-10-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Glucagon receptor antagonist compounds, compositions containing such compounds and methods of use
AR056574A1 (es) 2005-10-19 2007-10-10 Merck & Co Inc Derivados de pirazol, composiciones que contienen dichos compuestos y procedimientos de uso
WO2007124463A1 (en) 2006-04-20 2007-11-01 Amgen Inc. Glp-1 compound/glucagon antibody compositions
CL2007002668A1 (es) 2006-09-20 2008-05-09 Amgen Inc Proteina de union a antigeno que se une al receptor de glucagon humano; acido nucleico que la codifica; metodo de produccion; composicion farmaceutica que la comprende; y su uso para tratar o prevenir la diabetes tipo 2.
TW200821284A (en) 2006-10-03 2008-05-16 Merck & Co Inc Glucagon receptor antagonist compounds, compositions containing such compounds and methods of use
KR20190126460A (ko) 2007-02-09 2019-11-11 메타베이시스 테라퓨틱스, 인크. 글루카곤 수용체의 길항제
AR070844A1 (es) 2008-03-27 2010-05-05 Lilly Co Eli Fragmento fab o anticuerpo monoclonal humanizado que comprende el fragmento fab, y su uso para la manufactura de un medicamento antagonista del polipeptido del receptor de glucagon para el tratamiento o prevencion de diabetes de tipo 1 o 2
AU2009246424A1 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Schering Corporation Glucagon receptor antagonists, compositions, and methods for their use
EP2346830B1 (en) 2008-09-15 2015-05-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Glucagon receptor antagonist compounds, compositions containing such compounds and methods of use
WO2010071750A1 (en) 2008-12-19 2010-06-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Glucagon receptor antagonist compounds
US20110281795A1 (en) 2009-01-28 2011-11-17 Songnian Lin Glucagon receptor antagonist compounds, compositions containing such compounds and methods of use
US8324384B2 (en) 2009-02-12 2012-12-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Glucagon receptor antagonist compounds, compositions containing such compounds and methods of use
US8809579B2 (en) 2009-02-13 2014-08-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Glucagon receptor antagonist compounds, compositions containing such compounds and methods of use
WO2010098994A1 (en) 2009-02-25 2010-09-02 Merck Sharp & Dohme Corp. Glucagon receptor antagonist compounds, compositions containing such compounds and methods of use
JP2012188352A (ja) 2009-07-13 2012-10-04 Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd ３−（４−置換アルキル−フェニル）−２−フランカルボン酸誘導体およびその薬学的に許容される塩
EP2758533B1 (en) 2011-09-20 2018-04-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of gcgr expression
WO2013081993A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Eli Lilly And Company Anti-glucagon antibodies and uses thereof
JP2016520058A (ja) * 2013-05-07 2016-07-11 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション 抗グルカゴン受容体抗体およびその使用方法
US9657099B2 (en) 2014-09-16 2017-05-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-glucagon antibodies
KR20240110661A (ko) 2016-08-30 2024-07-15 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 글루카곤 수용체 신호전달을 간섭함에 의한 중증 인슐린 저항성의 치료 방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012071372A2 (en) * 2010-11-23 2012-05-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to the glucagon receptor
KR20140009264A (ko) * 2010-11-23 2014-01-22 리제네론 파라마큐티칼스 인코포레이티드 글루카곤 수용체에 대한 인간 항체

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