KR20230035355A - 인자 xii 항원 결합 단백질의 고농도 제형 - Google Patents

인자 xii 항원 결합 단백질의 고농도 제형 Download PDF

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마이클 존스톤
다이애나 그레이스 구달
나탄 애론 에드워드
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씨에스엘 이노베이션 피티와이 엘티디
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Abstract

본원의 개시내용은 고농도 단백질 제형 및 이의 용도에 관한 것이다. 특히, 본원 개시내용은 인자 XII 및/또는 FXII에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질에 대한 약제학적 제형의 확인을 기반으로 한다.

Description

인자 XII 항원 결합 단백질의 고농도 제형
본원의 개시내용은 고농도 단백질 제형 및 이의 용도에 관한 것이다.
정상 혈액 응고는 궁극적으로 섬유소 형성 및 혈소판 응집을 유도하는 응고(coagulation) 인자 (또는 응고 (clotting) 인자) 캐스케이드의 활성화를 포함하는 복잡한 생리학적 및 생화학적 공정이 관여하는 포유동물 생물학에서 고도로 보존된 공정이다. 혈액 응고 캐스케이드는 응고 개시의 주요 수단인 “외인성” 경로 및 섬유소 응고 (clot)의 안정화에 기여하는 “내인성” 경로를 포함한다.
응고 캐스케이드에 관여하는 대다수의 응고 인자는 자이모겐으로서 공지된 단백질용해 효소의 전구체이다. 이들 효소는 비활성화된 형태로 혈액 중에서 순환하고, 단지 이들이 활성화되면 (예를 들어, 단백질용해 절단에 의해) 응고 캐스케이드에 참여한다.
인자 XII (FXII, 하게만 인자)는 내인성 응고 캐스케이드의 개시를 위한 필수 응고 단백질이다. 활성화된 FXII (FXIIa)를 생성하기 위한 FXII의 활성화는 C1 및 고전적 보체 경로의 거대분자 복합체의 제1의 성분들인, 인자 XIa와 C1 에스테라제 (C1r, C1s)로의 인자 XI의 활성화를 유도한다. FXI의 활성화는 트롬빈 생성 및 지혈 경로를 유도하는 일련의 단백질용해 반응을 유도하고, 보체계의 활성화는 증가된 혈관 투과성, 식세포의 화학주성, 염증 세포의 활성화, 외래 입자의 옵소닌화, 세포의 직접적인 사멸 및 조직 손상을 유도한다.
내인성 응고 캐스케이드의 활성화 및 고전적 보체 경로의 활성화에서 이의 역할에도 불구하고, FXII에서의 결핍은 출혈 이상과 관련이 없다. 그러나 이들 경로의 조절 장애는 중증의 병태로 이어질 수 있다.
FXII 및/또는 FXIIa에 대한 항체 및 억제제가 존재하지만 의약품 제조업체를 위한 제형 개발에서 점점 더 많은 문제가 발생하고 있다. 예를 들어, FXII/FXIIa의 이상적인 억제제는 출혈 위험을 증가시키지 않고 면역원성이 없으며 가능한 한 적게 투여되어야 한다. 또한, 피하 투여는 빠르게 정맥 투여에 대한 대안으로 선호되고 있다. 자가 주사기, 펜, 또는 사전 채워진 주사기와 같은 자가 투여형 전달 장치를 이용한 약물의 피하 주사는 환자에게 보다 편리할 뿐만 아니라 병원 방문을 최소화하여 의료비를 절감시킨다.
그러나 피하 투여에 적합한 고농도 항체 제형(예를 들어, ≥100 mg/ml 단백질)을 제형화하는 것과 관련된 수많은 과제가 있다. 피하 투여를 위한 제형은 일반적으로 더 작은 주사 용적을 달성하기 위해 보다 높은 농도의 제품을 필요로 하지만, 단백질 농도를 증가시키는 것은 종종 단백질 응집 및 분해, 용해도, 안정성 및 점도에 부정적인 영향을 미친다. 고유 단백질 성질의 변화 외에도 가공 및 보관의 어려움, 제형 조성의 변화, 최종 제형의 유동학적 및 주사 가능성 성질을 포함한 제조상의 문제도 존재한다. 예를 들어, 점성이 있는 용액은 일반적으로 투여하는 데 보다 높은 주사력이 필요하므로 환자의 고통과 불편함을 유발하는 주사 시간이 길어질 수도 있다.
고농도 항체 제형을 제조하기 위한 다양한 해결책은 재구성을 위한 동결건조 제형, 완충제가 없는 제형 및 제형의 응집 및/또는 점도를 감소시키기 위한 고농도 염 또는 기타 첨가제의 첨가를 포함한다. 그러나 과도한 양의 부형제를 사용하면 고장성 제제 또는 제형의 이온 강도 변화 및 관련 단백질 응집 문제가 발생할 수 있다.
따라서, 단백질 치료제, 예를 들어 응고 경로를 표적화하는 항체를 포함하는 제형이 필요하며, 이는 장기간 안정하고 높은 항체 농도에서 응집이 없다.
본 발명의 개요
본원 개시내용은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태(즉, 활성화된 FXII; FXIIa)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질에 대한 약제학적 제형의 확인을 기반으로 한다.
적합한 제형을 생성함에 있어서, 본원 발명자들은 이들이 FXII 및/또는 FXIIa에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 고농도의 단백질(즉, 적어도 약 100 mg/ml의 농도)을 포함하고, 가용성을 유지하고 주사(예를 들어, 피하 투여)에 적합한 점도를 유지하는 약제학적 제형, 예를 들어, 액체 약제학적 제형을 생성할 수 있음을 밝혔다. 본원 개시내용의 고농도 제형은 유기산, 비이온성 계면활성제, 아미노산 안정화제 및 임의로 폴리올을 포함한다. 특히, 본원 개시내용의 제형을 생성함에 있어서, 본원 발명자들은 추가의 염 및/또는 안정화제가 필요하지 않다는 것을 밝혔다. 또한, 제형 중 항체의 단백질 농도를 증가시키는데 있어서(예를 들어, 약 100 mg/ml에서 약 170 mg/ml로), 본원 발명자들은 부형제의 농도에 대한 변화(즉, 증가 또는 감소)가 항상 요구되는 것이 아님을 밝혔다.
본원 발명자들에 의한 발견은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 적어도 약 100 mg/ml의 단백질을 포함하는 약제학적 제형에 대한 기초를 제공하고, 여기서 제형은 20°C에서 약 30mPa*s 미만의 역학적(즉, 절대) 점도를 갖는다. 본원 발명자들에 의한 발견은 또한 대상체에서 병태 또는 장애, 예를 들어, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 치료하기 위한 방법의 기초를 제공한다.
본원 개시내용은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 적어도 약 100 mg/ml의 단백질, 유기산 완충제, 비-이온성 계면활성제 및 아미노산 안정화제를 포함하는 액체 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 5.0 내지 6.5의 pH 및 20℃에서 약 30mPa*s 미만의 역학적 점도를 갖는다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 단백질은 적어도 100mg/ml의 농도로 제형에 존재한다. 예를 들어, 단백질은 100 mg/ml 내지 200 mg/ml의 농도로 제형에 존재한다. 예를 들어, 단백질은 약 100 mg/ml, 또는 약 110 mg/ml, 또는 약 120 mg/ml, 또는 약 130 mg/ml, 또는 약 140 mg/ml, 또는 약 150 mg/ml, 또는 약 160 mg/ml, 또는 약 170 mg/ml, 또는 약 180 mg/ml, 또는 약 190 mg/ml, 또는 약 200 mg/ml의 농도로 제형에 존재한다. 하나의 예에서, 단백질은 약 100 mg/ml, 또는 약 120 mg/ml, 또는 약 150 mg/ml, 또는 약 170 mg/ml의 농도로 제형에 존재한다. 하나의 예에서, 단백질은 약 100 mg/ml의 농도로 제형에 존재한다. 하나의 예에서, 단백질은 약 150 mg/ml의 농도로 제형에 존재한다. 하나의 예에서, 단백질은 적어도 약 150 mg/ml의 농도로 제형에 존재한다. 하나의 예에서, 단백질은 약 160 mg/ml 내지 약 180 mg/ml의 농도로 제형에 존재한다. 예를 들어, 단백질은 약 170 mg/ml의 농도로 제형에 존재한다. 하나의 예에서, 단백질은 200 mg/ml 초과의 농도로 제형에 존재한다. 예를 들어, 단백질은 약 200 mg/ml, 또는 약 210 mg/ml, 또는 약 220 mg/ml의 농도로 제형에 존재한다.
하나의 예에서, 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질은 인자 XII 또는 활성화된 인자 XII(인자 XIIa)에 결합한다. 하나의 예에서, 인자 XII/XIIa에 결합하는 단백질은 인자 XII에 결합하거나 특이적으로 결합한다. 하나의 예에서, 인자 XII/XIIa에 결합하는 단백질은 활성화된 인자 XII (인자 XIIa)에 결합하거나 특이적으로 결합한다.
하나의 예에서, 단백질은 인자 XII에 결합하거나 특이적으로 결합하고 인자 XII 및/또는 인자 XIIa의 활성에 길항작용한다. 하나의 예에서, 단백질은 인자 XII에 결합하거나 특이적으로 결합하고 인자 XII 및/또는 인자 XIIa의 활성화에 길항작용한다. 본원에서 인자 XII에 “결합하는” 단백질 또는 항체에 대한 언급은 인자 XII에 “특이적으로 결합하는” 단백질 또는 항체에 대한 기본 뒷받침을 제공한다.
하나의 예에서, 단백질은 활성화된 인자 XII에 결합하거나 특이적으로 결합하고 인자 XII 및/또는 인자 XIIa의 활성에 길항작용한다. 하나의 예에서, 단백질은 활성화된 인자 XII에 결합하거나 특이적으로 결합하고 인자 XII 및/또는 인자 XIIa의 활성화에 길항작용한다. 본원에서 활성화된 인자 XIIa에 “결합하는” 단백질 또는 항체에 대한 언급은 활성화된 인자 XIIa에 “특이적으로 결합하는” 단백질 또는 항체에 대한 기본 뒷받침을 제공한다.
하나의 예에서, 단백질은 항체의 항원 결합 도메인을 포함한다. 예를 들어, 단백질은 적어도 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서, VH 및 VL은 항원 결합 도메인을 포함하는 Fv를 형성하기 위해 결합한다.
하나의 예에서, VH 및 VL은 단일 폴리펩타이드 쇄에 있다. 예를 들어, 단백질은 다음과 같다:
(i) 단일쇄 Fv 단편 (scFv);
(ii) 이량체 scFv (di-scFv); 또는
(iii) 항체의 불변 영역, Fc 또는 중쇄 불변 도메인 (CH) CH2 및/또는 CH3에 연결된 (i) 및/또는 (ii) 중 적어도 하나.
하나의 예에서, VL 및 VH는 별도의 폴리펩타이드 쇄에 있다. 예를 들어, 단백질은 다음과 같다:
(i) 디아바디;
(ii) 트리아바디;
(iii) 테트라바디;
(iv) Fab;
(v) F(ab’)2;
(vi) Fv; 또는
(vii) 항체의 불변 영역, Fc 또는 CH 2 및/또는 CH3에 연결된 (i) 내지 (vi) 중 하나.
이전의 단백질 (이전의 2개의 목록에 기재된)은 또한 항체의 항원 결합 도메인으로서 언급될 수 있다.
하나의 예에서, 단백질은 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 항체의 가변 영역을 포함하는 scFv)이다. 예시적인 항체는 예를들어, 본원에 참조로 인용된 WO 2013/014092 및 WO 2017/173494에 기재되어 있다.
하나의 예에서, 단백질은 scFv를 포함한다. 하나의 예에서, 단백질은 인자 XII 및/또는 인자 FXIIa에 결합하거나 특이적으로 결합하는(예를 들어, 인자 XII 및/또는 인자 XIIa의 활성에 길항작용을 하거나 인자 XII 및/또는 인자 XIIa의 활성화에 길항작용한다) scFv를 포함한다.
하나의 예에서, 인자 XII 및/또는 인자 XIIa에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질은 항체, 즉, 전장 항체이다. 예를 들어, 상기 항체는 항-FXII 항체이다. 또 다른 예에서, 상기 항체는 항-FXIIa 항체이다.
하나의 예에서, 단백질은 재조합, 키메라성이거나, 탈면역화되거나, 사람화되어 있거나, 사람 또는 영장류화된다. 하나의 예에서, 단백질 또는 항체는 사람이다. 하나의 예에서, 단백질 또는 항체는 사람화된다.
하나의 예에서, 상기 항체는 모노클로날 항체이다.
하나의 예에서, 상기 항체는 IgG 항체이다. 예를 들어, 항체는 IgG1, 또는 IgG2, 또는 IgG3, 또는 IgG4 항체이다.
하나 예에서, 상기 항체는 IgG4 항체이다.
하나의 예에서, 상기 항체는 모노클로날 IgG4 항체이다.
하나의 예에서, 단백질은 Fc 영역을 포함한다. 예를 들어, Fc 영역은 사람 IgG1 Fc 영역 또는 사람 IgG4 Fc 영역 또는 안정화된 사람 IgG4 Fc 영역이다. 예를 들어, Fc 영역은 사람 IgG4 Fc 영역이다. 하나의 예에서, 상기 항체 Fc 영역은 이량체화를 방지하기 위해 (예를 들어, 본원에서 논의된 바와 같이) 변형된다.
하나의 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG4 불변 영역을 포함한다.
하나의 예에서, IgG4 불변 영역은 안정화된 IgG4 불변 영역이다. 예를 들어, IgG4 불변 영역은 안정화된 힌지 영역을 포함한다. 예를 들어, 상기 안정화된 IgG4 불변 영역은 카밧 시스템에 따른 힌지 영역의 241번 위치에 프롤린을 포함한다 (문헌참조: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 1987 and/or 1991).
하나의 예에서, 단백질은 적어도 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 이것은 본원 개시내용의 단백질이 다른 단백질에 결합하지 않는다는 것을 의미하는 것이 아니라, 단지 단백질(또는 이의 일부)이 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII에 특이적이고 일반적으로 단백질에 결합하지 않는다는 것을 의미한다. 이 용어는 또한 예를 들어, 하나(또는 그 이상) 결합 도메인을 갖는 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII에 특이적으로 결합할 수 있고 또 다른 결합을 갖는 또 다른 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 항원 결합 도메인을 포함하는 이특이적 항체 또는 단백질을 배제하지 않는다.
하나의 예에서, 단백질은 단일특이적, 이특이적 또는 다중특이적이다. 예를 들어, 단백질은 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII에 특이적으로 결합할 수 있는 항원 결합 도메인 및 또 다른 단백질에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
하나의 예에서, 항원 결합 도메인은 단일특이적, 이특이적 또는 다중특이적이다. 예를 들어, 항원 결합 도메인은 단일특이적이다. 하나의 예에서, 항원 결합 도메인은 다중특이적이고, 예를 들어, 항원 결합 도메인은 이특이적이다.
하나의 예에서, 항원 결합 도메인은 단일특이적이다.
하나의 예에서, 항원 결합 도메인은 이특이적이지 않다.
하나의 예에서, 단백질은 서열번호 1에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호 2에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항체 3F7의 인자 XII로의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항체 가변 영역을 포함한다.
하나의 예에서, 단백질은 서열번호 3에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호 4에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 생식세포계열 항체 3F7(3F7G)의 인자 XII로의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항체 가변 영역을 포함한다.
하나의 예에서, 단백질은 서열번호 5에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호 6에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 친화성 성숙화된 항체 3F7(3F7aff)의 인자 XII로의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항체 가변 영역을 포함한다.
하나의 예에서, 단백질은 가라다시맙의 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII로의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항체 가변 영역을 포함한다.
하나의 예에서, 단백질은 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다.
하나의 예에서, 단백질은 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 여역(VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
예를 들어, 단백질은 하기를 포함한다:
(i) 하기를 포함하는 VH:
(a) 서열번호 1의 아미노산 25-34에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 1의 아미노산 49-65에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 1의 아미노산 98-108에 제시된 서열을 포함하는 CDR3;
및/또는
(ii) 하기를 포함하는 VL:
(a) 서열번호 2의 아미노산 23-33에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 2의 아미노산 49-55에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 2의 아미노산 88-96에 제시된 서열을 포함하는 CDR3.
하나의 예에서, 단백질은 다음을 포함한다:
(i) 하기를 포함하는 VH:
(a) 서열번호 1에 제시된 서열; 또는
(b) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 8에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 CDR3; 또는
(c) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 10에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 11에 제시된 서열을 포함하는 CDR3;
및/또는
(ii) 하기를 포함하는 VL:
(a) 서열번호 2에 제시된 서열; 또는
(b) 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 13에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 14에 제시된 서열을 포함하는 CDR3; 또는
(c) 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 13에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 15에 제시된 서열을 포함하는 CDR3.
하나의 예에서, 단백질은 하기를 포함하는 항체이다:
(i) 하기를 포함하는 VH:
(a) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 8에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 CDR3;
및/또는
(ii) 하기를 포함하는 VL:
(a) 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 13에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 14에 제시된 서열을 포함하는 CDR3.
하나의 예에서, 단백질은 하기를 포함하는 항체이다:
(i) 하기를 포함하는 VH:
(a) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 10에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 11에 제시된 서열을 포함하는 CDR3;
및/또는
(ii) 하기를 포함하는 VL:
(a) 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 13에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 15에 제시된 서열을 포함하는 CDR3.
하나의 예에서, 상기 단백질은 서열번호 10에 제시된 바와 같은 CDR2를 포함하는 VH를 포함한다.
하나의 예에서, VH CDR2의 아미노산 서열은 3번 위치에 아르기닌 (R), 아스파라긴 (N) 또는 아스파르트산 (D) 및/또는 4번 위치에 프롤린 (P), 발린 (V), 이소류신 (I) 또는 메티오닌 (M) 및/또는 5번 위치에 세린 (S), 프롤린 (P) 또는 알라닌 (A) 및/또는 6번 위치에 글리신 (G), 류신 (L), 발린 (V) 또는 트레오닌 (T) 및/또는 7번 위치에 임의의 아미노산 및/또는 8번 위치에 트레오닌 (T), 글리신 (G) 또는 세린 (S)을 포함한다.
하나의 예에서, VH CDR2의 아미노산 서열은 3번 위치에 아스파라긴 (N) 및 4번 위치에 발린 (V) 및 5번 위치에 프롤린 (P) 및 6번 위치에 류신 (L) 및 7번 위치에 티로신 (Y) 및 8번 위치에 글리신 (G)을 포함한다.
하나의 예에서, VH CDR2의 아미노산 서열은 3번 위치에 아스파라긴 (N) 및 4번 위치에 발린 (V) 및 5번 위치에 프롤린 (P) 및 6번 위치에 발린 (V) 및 7번 위치에 글루타민 (Q) 및 8번 위치에 글리신 (G)을 포함한다.
하나의 예에서, VH CDR2의 아미노산 서열은 3번 위치에 아스파르트산 (D) 및 4번 위치에 이소류신 (I) 및 5번 위치에 프롤린 (P) 및 6번 위치에 트레오닌 (T) 및 7번 위치에 리신 (K) 및 8번 위치에 글리신 (G)을 포함한다.
하나의 예에서, VH CDR2의 아미노산 서열은 3번 위치에 아스파르트산 (D) 및 4번 위치에 메티오닌 (M) 및 5번 위치에 프롤린 (P) 및 6번 위치에 트레오닌 (T) 및 7번 위치에 리신 (K) 및 8번 위치에 글리신 (G)을 포함한다.
하나의 예에서, 단백질은 하기를 포함하는 항체이다:
(i) 하기를 포함하는 VH:
(a) 서열번호 7에 제시된 CDR1;
(b) 서열번호 10에 제시된 CDR2 (여기서, 3번 위치의 X는 D이고, 4번 위치의 X는 I이고, 5번 위치의 X는 P이고, 6번 위치의 X는 T이고, 7번 위치의 X는 K이고, 8번 위치의 X는 G이다); 및
(c) 서열번호 9에 제시된 CDR3;
및/또는
(ii) 하기를 포함하는 VL:
(a) 서열번호 12에 제시된 CDR1;
(b) 서열번호 13에 제시된 CDR2; 및
(c) 서열번호 14에 제시된 CDR3.
하나의 예에서, 상기 단백질은 서열번호 11에 제시된 바와 같은 CDR3을 포함하는 VH를 포함한다.
하나의 예에서, VH CDR3의 아미노산 서열은 9번 위치에 이소류신 (I), 메티오닌 (M) 또는 발린 (V) 및/또는 10번 위치에 세린 (S) 또는 리신 (K) 및/또는 11번 위치에 프롤린 (P), 리신 (K), 트레오닌 (T) 또는 히스티딘 (H) 및/또는 12번 위치에 히스티딘 (H), 아스파라긴 (N), 글리신 (G) 또는 글루타민 (Q)을 포함한다.
하나의 예에서, 상기 단백질은 서열번호 15에 제시된 바와 같은 CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
하나의 예에서, VL CDR3의 아미노산 서열은 2번 위치에 알라닌 (A) 또는 세린 (S) 및/또는 4번 위치에 아스파르트산 (D), 티로신 (Y), 글루탐산 (E), 트레오닌 (T), 트립토판 (W) 또는 세린 (S) 및/또는 5번 위치에 알라닌 (A), 아스파라긴 (N), 이소류신 (I), 류신 (L), 발린 (V), 프롤린 (P), 글루타민 (Q) 또는 글루탐산 (E) 및/또는 6번 위치에 세린 (S), 아스파르트산 (D), 프롤린 (P), 글루탐산 (E), 글루타민 (Q) 또는 아르기닌 (R) 및/또는 7번 위치에 류신 (L) 또는 발린 (V) 및/또는 9번 위치에 글리신 (G), 류신 (L) 또는 리신 (K) 및/또는 10번 위치에 발린 (V), 알라닌 (A), 아스파르트산 (D), 트레오닌 (T), 메티오닌 (M) 또는 글리신 (G)을 포함한다.
하나의 예에서, 단백질은 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다.
하나의 예에서, 단백질은 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 VH 및 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL의 CDR을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 예를 들어, 단백질은 하기를 포함한다:
(i) 하기를 포함하는 VH:
(a) 서열번호 3의 아미노산 25-34에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 3의 아미노산 49-65에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 3의 아미노산 98-108에 제시된 서열을 포함하는 CDR3;
및/또는
(ii) 하기를 포함하는 VL:
(a) 서열번호 4의 아미노산 23-33에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 4의 아미노산 49-55에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 4의 아미노산 88-96에 제시된 서열을 포함하는 CDR3.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 단백질은 친화도가 성숙화된, 키메라, CDR 접목된, 또는 사람화된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편이다. 하나의 예에서, 상기 단백질은 친화도가 성숙화된 형태의 항체 3F7이다. 하나의 예에서, 상기 단백질은 가라다시맙이다.
하나의 예에서, 단백질은 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다.
하나의 예에서, 단백질은 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL의 CDR을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
하나의 예에서, 단백질은 하기를 포함한다:
(i) 하기를 포함하는 VH:
(a) 서열번호 5의 아미노산 25-34에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 5의 아미노산 49-65에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 5의 아미노산 98-108에 제시된 서열을 포함하는 CDR3;
및/또는
(ii) 하기를 포함하는 VL:
(a) 서열번호 6의 아미노산 23-33에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 6의 아미노산 49-55에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 6의 아미노산 88-96에 제시된 서열을 포함하는 CDR3.
하나의 예에서, 단백질은 하기를 포함한다:
(i) 하기를 포함하는 VH:
(a) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 16에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 CDR3; 및/또는
(ii) 하기를 포함하는 VL:
(a) 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 CDR1;
(b) 서열번호 13에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및
(c) 서열번호 14에 제시된 서열을 포함하는 CDR3.
하나의 예에서, 단백질, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 임의의 이전의 단백질, 항체 또는 기능성 단편을 암호화하는 핵산에 의해 암호화된 임의의 형태의 단백질, 항체 또는 이의 기능성 단편이다.
하나의 예에서, 유기산 완충제는 히스티딘 완충제, 글루타메이트 완충제, 석시네이트 완충제 및 시트레이트 완충제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 히스티딘 완충제 및 글루타메이트 완충제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
하나의 예에서, 유기산 완충제는 아미노산 완충제이다. 예를 들어, 아미노산 완충제는 히스티딘 완충제 및 글루타메이트 완충제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
유리하게는, 히스티딘 완충제 및 글루타메이트 완충제는 시트레이트 완충제 및/또는 석시네이트 완충제에 비해 보다 높은 열 및 응집 안정성(즉, 응집에 대한 감소된 성향)을 갖는다.
하나의 예에서, 유기산 완충제는 히스티딘 완충제이다. 본원 개시내용에 사용하기에 적합한 히스티딘 완충제는 당업자에게 자명할 것이고, 예를 들어, 히스티딘 클로라이드, 히스티딘 아세테이트, 히스티딘 포스페이트 및 히스티딘 설페이트를 포함한다. 하나의 예에서, 히스티딘 완충제는 L-히스티딘이다.
하나의 예에서, 유기산 완충제는 글루타메이트 완충제이다. 본원 개시내용에 사용하기 위해 적합한 글루타메이트 완충제는 당업자에게 자명하고 예를 들어, 일나트륨 글루타메이트를 포함한다.
하나의 예에서, 유기산 완충제는 석시네이트 완충제이다. 본원 개시내용에 사용하기에 적합한 석시네이트 완충제는 당업자에게 자명할 것이고, 예를 들어 석신산-일나트륨 석시네이트 혼합물, 석신산-수산화나트륨 혼합물, 석신산-이나트륨 석시네이트 혼합물을 포함한다.
하나의 예에서, 유기산 완충제는 시트레이트 완충제이다. 본원 개시내용에 사용하기에 적합한 시트레이트 완충제는 당업자에게 자명할 것이고, 예를 들어 일나트륨 시트레이트-이나트륨 시트레이트 혼합물, 시트르산-삼나트륨 시트레이트 혼합물, 시트르산 일나트륨 시트레이트 혼합물을 포함한다.
본원 개시내용에 사용하기에 적합한 완충제가 생성물의 제형화 및 저장 동안 노출될 조건 범위에 걸쳐 목적하는 pH를 유지하기에 충분한 완충 능력을 제공할 것이라는 것이 당업자에게 자명할 것이다. 하나의 예에서, 본원 개시내용의 제형은 약 5.0 내지 약 7.0의 pH를 갖는다. 예를 들어, 제형은 약 5.0 내지 6.5의 pH, 또는 약 5.8 내지 약 6.4의 pH를 갖는다. 예를 들어, 유기산 완충제는 pH가 약 5.5 내지 약 5.7인 히스티딘 완충제이다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 pH가 약 5.5인 글루타메이트 완충제이다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 pH가 약 5.5인 석시네이트 완충제이다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 pH가 약 5.5인 시트레이트 완충제이다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 약 5.5 내지 6.5의 pH, 또는 약 5.6 내지 약 6.4의 pH, 또는 약 5.8 내지 약 6.4의 pH를 갖는다. 하나의 예에서, 상기 제형은 5.8 내지 6.4의 pH를 갖는다. 예를 들어, 상기 제형은 약 5.8, 또는 약 5.9, 또는 약 6.0, 또는 약 6.1, 또는 약 6.2, 또는 약 6.3, 또는 약 6.4의 pH를 갖는다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 히스티딘 완충제이고 제형은 약 5.8 내지 약 6.4의 pH를 갖는다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 글루타메이트 완충제이고 제형은 약 5.8 내지 약 6.4의 pH를 갖는다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 석시네이트 완충제이고 제형은 약 5.8 내지 약 6.4의 pH를 갖는다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 시트레이트 완충제이고 제형은 약 5.8 내지 약 6.4의 pH를 갖는다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형 중 유기산 완충제의 농도는 약 2 mM 내지 120 mM이다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 최소 2 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 유기산 완충제는 약 2mM 내지 약 10mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 유기산 완충제는 약 2 mM, 또는 약 3 mM, 또는 약 4　mM, 또는 약 5 mM, 또는 약 6 mM, 또는 약 7 mM, 또는 약 8 mM, 또는 약 9 mM, 또는 약 10　mM의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 적어도 10 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 유기산 완충제는 약 10 mM 내지 약 30 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 유기산 완충제는 약 10 mM, 또는 약 12 mM, 또는 약 14　mM, 또는 약 16 mM, 또는 약 18 mM, 또는 약 20 mM, 또는 약 25 mM, 또는 약 30 mM의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 약 12 mM 내지 약 25 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 유기산 완충제는 약 20 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 유기산 완충제는 약 10 mM 내지 약 60 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 유기산 완충제는 약 10 mM, 또는 약 15 mM, 또는 약 20 mM, 또는 약 25 mM, 또는 약 30　mM, 또는 약 35 mM, 또는 약 40 mM, 또는 약 45 mM, 또는 약 50 mM, 또는 약 55 mM, 또는 약 60　mM의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 약 20 mM의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 약 60 mM 내지 약 120 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 유기산 완충제는 약 60 mM, 또는 약 65 mM, 또는 약 70 mM, 또는 약 80 mM, 또는 약 85　mM, 또는 약 90 mM, 또는 약 95 mM, 또는 약 100 mM, 또는 약 105 mM, 또는 약 110 mM, 또는 약 115 mM, 또는 약 120　mM의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 약 100 mM의 농도로 존재한다.
하나의 예에서, 유기산 완충제는 L-히스티딘이고, 약 12 mM 내지 약 25 mM의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 L-히스티딘이고 약 20 mM의 농도로 존재한다.
하나의 예에서, 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르(예를 들어, 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80), 폴리에틸렌-폴리프로필렌 공중합체, 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌-스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 모노라우릴 에테르, 알킬페닐폴리옥시에틸렌 에테르(Triton-X), 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체(Poloxamer, Pluronic), 나트륨 도데실 설페이트(SDS)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 예를 들어, 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르 및 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
하나의 예에서, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80 및 폴록사머 188로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 예를 들어, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형 중에 비이온성 계면활성제의 농도는 약 0.01 % (w/v) 내지 약 1.00 % (w/v)이다. 하나의 예에서, 비이온성 계면활성제는 적어도 약 0.01% (w/v)의 농도로 존재한다. 예를 들어, 비이온성 계면활성제는 약 0.01 % (w/v) 내지 약 0.10 % (w/v)의 농도로 존재한다. 예를 들어, 비이온성 계면활성제는 약 0.01 % (w/v), 또는 약 0.02 % (w/v), 또는 약 0.03 % (w/v), 또는 약 0.04 % (w/v), 또는 약 0.05 % (w/v), 또는 약 0.06 % (w/v), 또는 약 0.07 % (w/v), 또는 약 0.08 % (w/v), 또는 약 0.09 % (w/v), 또는 약 0.10 % (w/v)의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 비이온성 계면활성제는 약 0.02 % (w/v) 또는 약 0.05 % (w/v)의 농도로 존재한다. 예를 들어, 비이온성 계면활성제는 약 0.02 % (w/v)의 농도로 존재한다. 또 다른 예에서, 비이온성 계면활성제는 약 0.05% (w/v)의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 비이온성 계면활성제는 약 0.01　% (w/v) 내지 약 0.03 % (w/v)의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 80이고 약 0.01 % (w/v) 내지 약 0.03 % (w/v)의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 80이고 약 0.02 % (w/v)의 농도로 존재한다.
하나의 예에서, 약제학적 제형은 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 메티오닌, 트레오닌, 페닐알라닌, 티로신, 세린, 시스테인, 히스티딘, 트립토판, 프롤린, 아스파르트산, 글루탐산, 아르기닌, 리신, 오미틴 및 아스파라긴으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 안정화제를 포함한다. 예를 들어, 아미노산 안정화제는 프롤린, 아르기닌, 이의 염 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 하나의 예에서, 아미노산 안정화제는 본원에 논의된 아미노산의 염 형태이다.
하나의 예에서, 아미노산 안정화제는 프롤린이다. 하나의 예에서, 아미노산 안정화제는 L-프롤린이다.
하나의 예에서, 아미노산 안정화제는 아르기닌이다. 하나의 예에서, 아미노산 안정화제는 L-아르기닌이다. 하나의 예에서, 아미노산 안정화제는 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드이다.
하나의 예에서, 상기 제형은 프롤린 및 아르기닌을 포함한다. 예를 들어, 상기 제형은 L-프롤린 및 L-아르기닌 또는 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함한다.
유리하게, 프롤린은 페닐알라닌, 아르기닌 및 소르비톨과 비교하여 열 및 응집 안정성 (즉, 응집에 대한 감소된 경향)에 상당한 영향을 미친다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형 중 아미노산 안정화제의 농도는 약 50 mM 내지 250 mM이다. 하나의 예에서, 아미노산 안정화제는 약 90 mM 내지 약 200 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 아미노산 안정화제는 약 90 mM, 또는 약 100 mM, 또는 약 110 mM, 또는 약 120 mM, 또는 약 130 mM, 또는 약 140　mM, 또는 약 150 mM, 또는 약 160 mM, 또는 약 170 mM, 또는 약 180 mM, 또는 약 190 mM, 또는 약 200　mM의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 아미노산 안정화제는 약 100 mM 내지 약 160 mM의 농도로 존재한다. 또 다른 예에서, 아미노산 안정화제는 약 90 mM 내지 약 150 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 아미노산 안정화제는 약 140 mM의 농도로 존재한다. 또 다른 예에서, 아미노산 안정화제는 약 150 mM의 농도로 존재한다.
전술한 농도에 대한 논의는 또한 아미노산 안정화제의 염 형태에 관한 것이며 본원에서 언급된 농도는 아미노산 자체의 농도라기보다는 아미노산의 염 형태의 농도이다.
하나의 예에서, 제형은 110 mM 내지 170 mM의 농도, 예를 들어 약 140 mM 또는 약 150 mM의 농도로 프롤린을 포함한다. 또 다른 예에서, 제형은 90 mM 내지 150 mM의 농도, 예를 들어 약 140 mM의 농도로 프롤린을 포함한다.
하나의 예에서, 제형은 110mM 내지 170mM의 농도, 예를 들어 약 150mM의 농도로 아르기닌을 추가로 포함한다. 또 다른 예에서, 제형은 110mM 내지 160mM의 농도, 예를 들어 약 150mM의 농도로 아르기닌을 추가로 포함한다. 하나의 예에서, 아르기닌은 아르기닌의 염 형태, 예를 들어, 아르기닌 모노하이드로클로라이드이고 본원에 언급된 농도는 아르기닌 자체의 농도라기보다는 아르기닌의 염 형태의 농도이다.
하나의 예에서, 제형은 90 mM 내지 150 mM의 농도로 프롤린 및 100 mM 내지 160 mM의 농도로 아르기닌을 포함한다. 예를 들어, 제형은 140mM의 L-프롤린 및 150 mM의 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함한다.
하나의 예에서, 약제학적 제형은 폴리올을 추가로 포함한다. 예를 들어, 폴리올은 당, 당 알콜 및 사카릭산(즉, 알다릭산)으로부터 선택된다.
하나의 예에서, 폴리올은 당이다. 예를 들어, 당은 환원 또는 비환원 당이다. 하나의 예에서, 폴리올은 프럭토스, 만노스, 말토스, 락토스, 아라비노스, 크실로스, 리보스, 람노스, 갈락토스 및 글루코스로 이루어진 군으로부터 선택되는 비환원 당이다. 하나의 예에서, 폴리올은 슈크로스, 트레할로스, 소르보스, 멜레지토스 및 라피노스로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 환원당이다.
하나의 예에서, 폴리올은 당 알콜이다. 예를 들어, 당 알코올은 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 트레이톨, 소르비톨 및 글리세롤로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 하나의 예에서, 상기 당 알콜은 소르비톨이다.
하나의 예에서, 폴리올은 사카릭산, 예를 들어, L-글루콘산 및 이의 금속 염이다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형 중 폴리올의 농도는 약 50 mM 내지 250 mM이다. 하나의 예에서, 폴리올은 약 60 mM 내지 약 140 mM의 농도로 존재한다. 예를 들어, 폴리올은 약 60 mM, 또는 약 70 mM, 또는 약 80　mM, 또는 약 90 mM, 또는 약 100 mM, 또는 약 110 mM, 또는 약 120 mM, 또는 약 130 mM, 또는 약 140　mM의 농도로 존재한다. 하나의 예에서, 폴리올은 약 80 mM의 농도로 존재한다.
하나의 예에서, 제형은 폴리올을 포함하지 않는다. 예를 들어, 제형은 당, 당 알콜 또는 사카릭산을 포함하지 않는다.
하나의 예에서, 제형은 염을 포함하지 않는다. 예를 들어, 제형은 예를 들어 염화나트륨, 염화칼슘 및/또는 염화칼륨을 포함하지 않는다. 이전의 논의는 본원에 기재된 아미노산의 염 형태에 관한 것이 아니다.
하나의 예에서, 제형은 20℃에서 약 30mPa*s 미만의 역학적(즉, 절대) 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 20 °C에서 약 30 mPa*s, 또는 약 28 mPa*s, 또는 약 26 mPa*s, 또는 약 24 mPa*s, 또는 약 22 mPa*s, 또는 약 20　mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 20℃에서 약 20mPa*s 미만의 역학적(즉, 절대) 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 20 °C에서 약 20 mPa*s, 또는 약 19 mPa*s, 또는 약 18 mPa*s, 또는 약 17 mPa*s, 또는 약 16　mPa*s, 또는 약 15 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 20℃에서 약 15mPa*s 미만의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 20 °C에서 약 15 mPa*s, 또는 약 14 mPa*s, 또는 약 13 mPa*s, 또는 약 12 mPa*s, 또는 약 11 mPa*s, 또는 약 20　mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 20℃에서 약 10 mPa*s 미만의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 20°C에서 약 10 mPa*s, 또는 약 9 mPa*s, 또는 8 mPa*s, 또는 약 7 mPa*s, 또는 약 6 mPa*s, 또는 약 5 mPa*s, 또는 약 4 mPa*s, 또는 약 3　mPa*s, 또는 약 2 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 20℃에서 약 3.0 mPa*s 내지 약 4.0 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 20℃에서 약 3.3 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 또 다른 예에서, 제형은 20℃에서 약 8.0 mPa*s 내지 약 10.0 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 20℃에서 약 8.9 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 20℃에서 약 9 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다.
하나의 예에서, 제형은 약 100mg/ml의 양으로 단백질 또는 항체를 포함하고 20℃에서 약 10.0mPa*s 미만의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 상기 제형은 20℃에서 약 3.3 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다.
하나의 예에서, 제형은 약 170mg/ml의 양으로 단백질 또는 항체를 포함하고 20℃에서 약 10.0mPa*s 미만의 역학적적 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 20℃에서 약 8.9 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다.
하나의 예에서, 제형은 25℃에서 약 30mPa*s 미만의 역학적(즉, 절대) 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 25°C에서 약 30mPa*s, 또는 약 28 mPa*s, 또는 약 26 mPa*s, 또는 약 24 mPa*s, 또는 약 22　mPa*s, 또는 약 20 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 25℃에서 약 20mPa*s 미만의 역학적(즉, 절대) 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 25°C에서 약 20 mPa*s, 또는 약 19 mPa*s, 또는 약 18 mPa*s, 또는 약 17 mPa*s, 또는 약 16　mPa*s, 또는 약 15 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 25°C에서 약 15mPa*s 미만의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 25 °C에서 약 15 mPa*s, 또는 약 14 mPa*s, 또는 약 13 mPa*s, 또는 약 12 mPa*s, 또는 약 11 mPa*s, 또는 약 20　mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 25℃에서 약 10 mPa*s 미만의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 25°C에서 약 10 mPa*s, 또는 약 9 mPa*s, 또는 8 mPa*s, 또는 약 7 mPa*s, 또는 약 6 mPa*s, 또는 약 5 mPa*s, 또는 약 4 mPa*s, 또는 약 3　mPa*s, 또는 약 2 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 25℃에서 약 2 mPa*s 내지 약 9 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 하나의 예에서, 제형은 25℃에서 약 1.0 mPa*s 내지 약 3.0 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 25℃에서 약 2.8 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 또 다른 예에서, 제형은 25℃에서 약 7.0 mPa*s 내지 약 8.0 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 제형은 25℃에서 약 7.5 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다.
하나의 예에서, 제형은 약 100mg/ml의 양으로 단백질 또는 항체를 포함하고 25℃에서 약 10.0mPa*s 미만의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 상기 제형은 25℃에서 약 2.8 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다.
하나의 예에서, 제형은 약 170mg/ml의 양으로 단백질 또는 항체를 포함하고 25℃에서 약 10.0mPa*s 미만의 역학적 점도를 갖는다. 예를 들어, 상기 제형은 25℃에서 약 7.5 mPa*s의 역학적 점도를 갖는다.
점도를 평가하는 방법은 당업자에게 자명하고/하거나 본원에 기재되어 있다. 예를 들어, 점도는 미세점도측정기, 예를 들어, 롤링-볼 점도 측정기를 사용하여 평가될 수 있다. 롤링-볼 점도측정기는 호플러(Hoppler) 낙하 볼 원리에 따라 투명 및 불투명 액체를 통해 볼의 롤링 시간을 측정한다. 롤링-볼 점도측정기의 예는 안톤 파르 로비스(Anton Par Lovis) 2000 M 미세점도측정기이다.
하나의 예에서, 제형은 20℃에서 약 1.00 내지 약 1.10 g/cm3의 밀도를 갖는다. 예를 들어, 제형의 밀도는 20 °C에서 약 1.01 g/cm3 , 또는 약 1.02 g/cm3, 또는 약 1.03 g/cm3, 또는 약 1.04 g/cm3, 또는 약 1.05 g/cm3, 또는 약 1.06 g/cm3, 또는 약 1.07　g/cm3, 또는 약 1.08 g/cm3, 또는 약 1.09 g/cm3, 또는 약 1.10 g/cm3이다. 하나의 에에서, 제형의 밀도는 약 1.04 g/cm3, 또는 약 1.05 g/cm3, 또는 약 1.06　g/cm3, 또는 약 1.07 g/cm3이다. 예를 들어, 제형의 밀도는 약 1.06　g/cm3이다. 제형의 밀도를 평가하는 방법은 당업자에게 자명하고/하거나 본원에 기재되어 있다. 하나의 예에서, 밀도는 밀도 측정기, 예를 들어, 메틀러 톨레도 DA-100M 밀도 측정기를 사용하여 결정된다.
하나의 예에서, 본원 개시내용은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, 히스티딘 완충제 및 글루타메이트 완충제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 유기산 완충제, 프롤린, 아르기닌, 이들의 염 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 안정화제, 비이온성 계면활성제로서의 폴리소르베이트 80을 포함하는 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 20℃에서 약 10 mPa*s 미만의 점도를 갖는다.
하나의 예에서, 제형은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, 히스티딘 완충제 또는 글루타메이트 완충제, 프롤린 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 예를 들어, 제형은 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 히스티딘 완충제, 프롤린 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 또 다른 예에서, 제형은 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 글루타메이트 완충제, 프롤린 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 임의로, 제형은 아르기닌 또는 소르비톨을 추가로 포함한다.
본원 개시내용은 약 170 mg/ml의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서의 프롤린을 포함하는 액체 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 pH가 5.5 내지 6.5이고 점도는 20 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 제형은 pH가 5.8 내지 6.4인 약 20mM L-히스티딘 완충제, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80 및 140mM 또는 150mM L-프롤린을 포함한다. 하나의 예에서, 제형은 150 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 추가로 포함한다. 또 다른 예에서, 제형은 80 mM 소르비톨을 추가로 포함한다.
본원 개시내용은 본원 개시내용의 항원 결합 도메인을 포함하는 약 100 mg/ml 내지 약 110 mg/ml의 단백질, L-히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서의 L-프롤린 및 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 액체 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 pH가 5.5 내지 6.5이고 점도는 20 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다.
본원 개시내용은 본원 개시내용의 항원 결합 도메인을 포함하는 약 160 mg/ml 내지 약 180 mg/ml의 단백질, L-히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서의 L-프롤린 및 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 액체 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 pH가 5.5 내지 6.5이고 점도는 20 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다.
본원 개시내용은 또한 약 170 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, 글루타메이트 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서의 프롤린을 포함하는 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 pH가 5.5 내지 6.5이고 점도는 20 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 제형은 pH가 5.5인 약 100mM 글루타메이트 완충제, 0.05 %(w/v) 폴리소르베이트 80 및 150mM L-프롤린을 포함한다.
본원 개시내용은 pH가 5.5 내지 6.5이고, 약 160 mg/ml 내지 약 180 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서의 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20°C 및 25 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 제형은 5.8 내지 6.4의 pH를 갖고 약 12 내지 약 25mM L-히스티딘 완충제, 0.01% 내지 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 110mM 내지 170mM L-프롤린 및 110mM 내지 170mM의 L-아르기닌을 포함한다. 하나의 예에서, 제형은 pH가 5.8 내지 6.4인 12 내지 25 mM L-히스티딘 완충제, 0.01 % 내지 0.03　% (w/v) 폴리소르베이트 80, 90 mM 내지 150 mM L-프롤린 및 100 mM 내지 160 mM L-아르기닌을 포함한다. 하나의 예에서, 상기 제형의 오스몰 농도는 약 430-530 mOsm/kg, 예를 들어 약 450 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
본원 개시내용은 pH가 5.5 내지 6.5이고, 약 170 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서의 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20°C 및 25 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 제형은 5.8 내지 6.4의 pH를 갖고 약 20mM L-히스티딘 완충제, 0.02 %(w/v) 폴리소르베이트 80, 140mM L-프롤린 및 150mM의 L-아르기닌을 포함한다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 450 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
본원 개시내용은 pH가 5.5 내지 6.5이고, 약 100 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서의 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20°C 및 25 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 제형은 5.8 내지 6.4의 pH를 갖고 약 12 내지 약 25mM 히스티딘 완충제, 0.01% 내지 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 110mM 내지 170mM 프롤린 및 110mM 내지 170mM 아르기닌을 포함한다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 430 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
본원의 개시내용은 약 100 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, pH가 5.5 내지 6.5인 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌을 포함하는 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20 °C 및 25 °C에서 약 5 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 제형은 pH가 5.8 내지 6.4인 약 20 mM L-히스티딘 완충제, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80 및 140 mM L-프롤린 및 150 mM 아르기닌을 포함한다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 430 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
본원 개시내용은 pH가 5.5 내지 6.5이고, 본원에 기재된 항원 결합 도메인을 포함하는 약 100 mg/ml 내지 약 170 mg/ml의 단백질, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서의 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20°C에서 약 30 mPa*s 미만이고, 상기 단백질은 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, 제형은 5.8 내지 6.4의 pH를 갖고 약 20mM L-히스티딘 완충제, 0.02 %(w/v) 폴리소르베이트 80, 140mM L-프롤린 및 150mM의 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함한다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 430 내지 약 450 mOsm/kg이다.
본원 개시내용은 pH가 5.5 내지 6.5이고, 본원에 기재된 항원 결합 도메인을 포함하는 약 100 mg/ml 내지 약 170 mg/ml의 단백질, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서의 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20°C에서 약 30 mPa*s 미만이고, 상기 단백질은
(i) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 16에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 VH; 및
(ii) 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 13에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 14에 제시된 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 고농도의 제형은 안정한 제형이다. 예를 들어, 제형은 물리적으로 및/또는 열적으로 안정하다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 제형은 액체 제형이다. 예를 들어, 제형은 수성 제형이다.
하나의 예에서, 제형은 이전에 동결건조되지 않았다. 하나의 예에서, 제형은 재구성된 제형이 아니다. 예를 들어, 제형은 액체 제형이다.
열 안정성을 평가하는 방법은 당업자에게 자명하고/하거나 본원에 기재되어 있다. 하나의 예에서, 열 응집 안정성은 시차 주사 형광측정법(DSF)에 의해 결정된다. 예를 들어, 고유 단백질 형광성의 변화는 온도 범위 (예를 들어, 20-95 °C; 예를 들어, 0.5　°C/min의 비율로 온도 증가와 함께)에 걸쳐 모니터링하여 열 전이 (Tm; 즉, 용융 온도)의 중간지점 및 용융 온도의 개시점(T개시점)을 결정한다. 정적 광 산란은 266 nm 및 473 nm에서 모니터링하여 응집 온도(Tagg)의 개시점을 결정한다.
하나의 예에서, 시차 주사 형광측정법에 의해 결정된 바와 같은 제형의 Tm은 약 55.0 °C 내지 약 70.0 °C, 예를 들어, 약 59 °C 내지 약 67 °C이다. 예를 들어, 제형의 Tm은 약 59.0 °C, 또는 약 60.0 °C, 또는 약 61.0 °C, 또는 약 62.0 °C, 또는 약 63.0 °C, 또는 약 64.0 °C, 또는 약 65.0 °C, 또는 약 66.0 °C, 또는 약 67 °C이다.
하나의 예에서, 시차 주사 형광측정법에 의해 결정된 바와 같은 제형의 T개시점은 약 55.0 °C 내지 약 70.0 °C, 예를 들어, 약 58.0 °C 내지 약 63.0 °C이다. 예를 들어, 제형의 T개시점은 약 58.0 °C, 또는 약 59.0 °C, 또는 약 60.0 °C, 또는 약 61.0 °C, 또는 약 62.0 °C, 또는 약 63.0 °C이다.
하나의 예에서, 시차 주사 형광측정법에 의해 결정된 바와 같이 266 nm에서 제형의 T응집점은 약 56.0 °C 내지 약 65.0 °C이다. 예를 들어, 제형의 266nm에서의 T응집점은 약 56.0 °C, 또는 약 57.0 °C, 또는 약 58.0 °C, 또는 약 60.0 °C, 또는 약 61.0 °C, 또는 약 62.0 °C, 또는 약 63.0 °C, 또는 약 64.0 °C, 또는 약 65.0 °C이다.
하나의 예에서, 시차 주사 형광측정법에 의해 결정된 바와 같이 473 nm에서 제형의 T응집점은 약 58.0 °C 내지 약 64.0 °C이다. 예를 들어, 제형의 266nm에서 T응집점은 약 58.0 °C, 또는 약 60.0 °C, 또는 약 61.0 °C, 또는 약 62.0 °C, 또는 약 63.0 °C, 또는 약 64.0 °C이다.
하나의 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 응집체의 형성(즉, 입자 크기 분포)은 역학적 광 산란(DLS)을 사용하여 평가된다. 예를 들어, 디지털 상관기(예를 들어, Malvern Zetasizer 소프트웨어)를 사용하여 광 강도의 변동을 측정하고 Z-평균 유체역학적 직경 및 다분산도 지수(예를 들어, 누적 분석을 사용하여)를 결정한다. 하나의 예에서, 유기산 완충제는 항체 또는 항원 결합 단편의 Z-평균 유체역학적 직경을 유의적으로 변화(즉, 증가 또는 감소)시키지 않는다.
제형의 안정성은 총 응집체 및/또는 단량체 함량을 측정하여 평가할 수도 있다. 제형의 응집체 및 단량체 함량의 축적을 평가하기 위한 방법은 당업자에게 자명하고/하거나 본원에 기재되어 있다. 하나의 예에서, 제형 중 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 총 응집체 퍼센트는 크기 배제 크로마토그래피(SEC 또는 SE-HPLC)에 의해 결정된다. 또 다른 예에서, 제형 중 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 총 단량체 퍼센트는 크기 배제 크로마토그래피(SEC 또는 SE-HPLC)에 의해 결정된다. 예를 들어, 본원 개시내용의 제형은 적어도 90%의 단량체 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 10% 미만(즉, 이하) 응집체 및/또는 분해된(예를 들어, 단편화된) 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 하나의 예에서, 본원 개시내용의 제형은 적어도 95%의 단량체 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및/또는 5 % 미만(즉, 이하) 응집체 및/또는 분해된(예를 들어, 단편화된) 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
하나의 예에서, 제형은 항체의 약 10% 미만의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 약 10 % 미만, 또는 약 9　% 미만, 또는 8 % 미만, 또는 약 7 % 미만, 또는 약 6 % 미만, 또는 약 5 % 미만, 또는 약 4 % 미만, 또는 약 3 % 미만, 또는 약 2 % 미만, 또는 약 1 % 미만의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 조성물 내의 응집체는 고분자량 종 및/또는 분해된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
하나의 예에서, 제형은 5°C에서 4-5주 저장 후 약 0.5% 내지 약 3.0%의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 5°C에서 4-5주 저장 후 약 0.5 %, 또는 약 1.0　%, 또는 약 1.5 %, 또는 약 2.0 %, 또는 약 2.5 %, 또는 약 3.0 % 총 응집체를 포함한다. 하나의 예에서, 제형은 5°C에서 4-5주 저장 후 약 1.5 % 내지 약 2.0%의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 5°C에서 4-5주 저장 후 약 1.7%의 총 응집체를 포함한다.
하나의 예에서, 제형은 5°C에서 24개월 저장 후 항체의 약 10% 미만의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 5°C에서 24개월 저장 후 약 10 % 미만, 또는 약 9 % 미만, 또는 8 % 미만, 또는 약 7 % 미만, 또는 약 6 % 미만, 또는 약 5 % 미만, 또는 약 4 % 미만, 또는 약 3 % 미만, 또는 약 2 % 미만, 또는 약 1 % 미만의 총 응집체를 포함한다. 하나의 예에서, 제형은 5°C에서 24개월 저장 후 약 1.5 % 내지 약 2.0%의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 5°C에서 24개월 저장 후 약 2.0%의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 조성물 내의 응집체는 고분자량 종 및/또는 분해된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
하나의 예에서, 제형은 35-40°C에서 4-5주 저장 후 약 2.0 % 내지 약 7.0%의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 35-40°C에서 4-5주 저장 후 약 2.0 %, 또는 약 2.5 %, 또는 약 3.0 %, 또는 약 3.5 %, 또는 약 4.0 %, 또는 약 4.5 %, 또는 약 5.0 %, 또는 약 5.5 %, 또는 약 6.0 %, 또는 약 6.5 %, 또는 약 7.0 %의 총 응집체를 포함한다.
하나의 예에서, 제형은 25°C에서 24개월 저장 후 항체의 약 10% 미만의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 5°C에서 24개월 저장 후 약 10 % 미만, 또는 약 9 % 미만, 또는 8 % 미만, 또는 약 7 % 미만, 또는 약 6 % 미만, 또는 약 5 % 미만, 또는 약 4 % 미만, 또는 약 3 % 미만, 또는 약 2 % 미만, 또는 약 1 % 미만의 총 응집체를 포함한다. 하나의 예에서, 제형은 25°C에서 24개월 저장 후 약 1.5 % 내지 약 3.5%의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 25°C에서 24개월 저장 후 약 3.1%의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 조성물 내의 응집체는 고분자량 종 및/또는 분해된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
하나의 예에서, 제형은 25°C에서 36개월 저장 후 항체의 약 10% 미만의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 5°C에서 36개월 저장 후 약 10 % 미만, 또는 약 9 % 미만, 또는 8 % 미만, 또는 약 7 % 미만, 또는 약 6 % 미만, 또는 약 5 % 미만, 또는 약 4 % 미만, 또는 약 3 % 미만을 포함한다. 하나의 예에서, 제형은 25°C에서 24개월 저장 후 약 1 % 내지 약 5%의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 제형은 25°C에서 24개월 저장 후 약 2.4%의 총 응집체를 포함한다. 예를 들어, 조성물 내의 응집체는 고분자량 종 및/또는 분해된 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
하나의 예에서, 제형 중에 항체의 적어도 약 90 %는 단량체이다. 예를 들어, 제형 중에 항체의 적어도 약 90 %, 또는 약 91 %, 또는 약 92 %, 또는 약 93 %, 또는 약 94 %, 또는 약 95 %, 또는 약 96 %, 또는 약 97 %, 또는 약 98 %, 또는 약 99 %, 또는 약 99.5 %는 단량체이다. 하나의 예에서, 제형 중에 항체의 적어도 약 95 %는 단량체이다.
하나의 예에서, 제형 중에 항체의 적어도 약 95 %는 5°C에서 4-5주 저장 후 단량체이다. 예를 들어, 제형 중에 항체의 적어도 약 95 %, 또는 약 95.5 %, 또는 약 96 %, 또는 약 96.5 %, 또는 약 97 %, 또는 약 97.5 %, 또는 약 98 %, 또는 약 98.5 %, 또는 약 99　%, 또는 약 99.5 %는 5°C에서 4-5주 저장 후 단량체이다. 하나의 예에서, 제형 중에 항체의 약 98 % 내지 99%는 5°C에서 4-5주 저장 후 단량체이다. 예를 들어, 제형 중에 항체의 적어도 약 98.3 %는 5°C에서 4-5주 저장 후 단량체이다. 하나의 예에서, 제형 중에 항체의 약 98 %는 5°C에서 24개월 저장 후 단량체이다.
하나의 예에서, 제형 중에 항체의 적어도 약 92 %는 35-40°C에서 4-5주 저장 후 단량체이다. 예를 들어, 제형 중에 항체의 적어도 약 92%, 또는 약 92.5%, 또는 약 93%, 또는 약 93.5%, 또는 약 94%, 또는 약 94.5%, 또는 약 95 %, 또는 약 95.5 %, 또는 약 96　%, 또는 약 96.5 %, 또는 약 97 %, 또는 약 97.5 %, 또는 약 98 %, 또는 약 98.5 %, 또는 약 99 %, 또는 약 99.5 %는 35-40°C에서 4-5주 저장 후 단량체이다.
하나의 예에서, 제형 중에 항체의 적어도 약 96 %는 25°C에서 24개월 저장 후 단량체이다. 예를 들어, 제형 중에 항체의 적어도 약 96 %, 또는 약 96.5 %, 또는 약 97 %, 또는 약 97.5 %, 또는 약 98 %, 또는 약 98.5 %, 또는 약 99 %, 또는 약 99.5 %는 25°C에서 24개월 저장 후 단량체이다. 예를 들어, 제형 중에 항체의 적어도 약 96.9 %는 25°C에서 24개월 저장 후 단량체이다.
하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 150 mOsm/kg 내지 약 550 mOsm/kg이다. 예를 들어, 제형의 오스몰 농도는 약 150 mOsm/kg, 또는 약 175 mOsm/kg, 또는 약 200 mOsm/kg, 또는 약 225 mOsm/kg, 또는 약 250 mOsm/kg, 또는 약 275 mOsm/kg, 또는 약 300 mOsm/kg, 또는 약 325 mOsm/kg, 또는 약 350 mOsm/kg, 또는 약 375 mOsm/kg, 또는 약 400 mOsm/kg, 또는 약 425 mOsm/kg, 또는 약 450　mOsm/kg, 또는 약 475 mOsm/kg, 또는 약 500 mOsm/kg, 또는 약 550 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 400 mOsm/kg 내지 약 550 mOsm/kg이다. 예를 들어, 제형의 오스몰 농도는 약 400 mOsm/kg, 또는 약 410 mOsm/kg, 또는 약 420 mOsm/kg, 또는 약 430 mOsm/kg, 또는 약 440 mOsm/kg, 또는 약 450 mOsm/kg, 또는 약 460 mOsm/kg, 또는 약 470 mOsm/kg, 또는 약 480 mOsm/kg, 또는 약 490 mOsm/kg, 또는 약 500 mOsm/kg, 또는 약 550 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 오스몰 농도는 약 400 mOsm/kg 내지 약 500 mOsm/kg이다. 예를 들어, 오스몰 농도는 약 430 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 450 mOsm/kg이다.
하나의 예에서, 본원의 개시내용은 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는데 사용하기 위한 본원 개시내용의 약제학적 제형을 제공한다.
하나의 예에서, 본원 개시내용은 대상체에서 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성을 길항시키는데 사용하기 위한 본원 개시내용의 약제학적 제형을 제공한다.
하나의 예에서, 본원 개시내용은 대상체에서 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성화를 길항작용하는데 사용하기 위한 본원 개시내용의 약제학적 제형을 제공한다.
본원의 개시내용은 또한 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본원 개시내용의 고농도 제형을 투여함을 포함한다.
본원의 개시내용은 또한 대상체에서 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성을 길항시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본원 개시내용의 고농도 제형을 투여함을 포함한다.
본원의 개시내용은 또한 대상체에서 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성을 길항시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본원 개시내용의 고농도 제형을 투여함을 포함한다.
하나의 예에서, 본원의 개시내용은 대상체에서 질환 또는 병태의 치료 또는 예방을 위한 약물의 제조에 있어서 본원 개시내용의 약제학적 제형의의 용도를 제공한다.
하나의 예에서, 본원의 개시내용은 대상체에서 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성을 길항시키는 약물의 제조에 있어서 본원 개시내용의 약제학적 제형의 용도를 제공한다.
하나의 예에서, 본원의 개시내용은 대상체에서 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성화를 길항시키는 약물의 제조에 있어서 본원 개시내용의 약제학적 제형의 용도를 제공한다.
하나의 예에서, 대상체는 본원 개시내용의 약제학적 제형을 사용한 치료를 필요로 한다(즉, 이를 필요로 한다).
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애이다. 예를 들어, 대상체는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 앓거나 이의 위험에 처해 있다.
하나의 예에서, 대상체는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 앓는다. 하나의 예에서, 대상체는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 앓는 것으로서 진단되었다. 하나의 예에서, 대상체는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 치료를 받고 있다.
본원에 기재된 임의의 방법의 하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형은 질환 또는 병태, 예를 들어, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 발형 전 또는 발병 후 투여된다. 본원에 기재된 임의의 방법의 하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형은 질환 또는 병태의 발병 전에 투여된다. 본원에 기재된 임의의 방법의 하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형은 질환 또는 병태의 발병 후에 투여된다.
하나의 예에서, 약제학적 제형은 질환 또는 병태, 예를 들어, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 발형 전 또는 발병 후 투여된다. 하나의 예에서, 약제학적 제형은 질환 또는 병태, 예를 들어, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 증상 개시 전 투여된다. 하나의 예에서, 약제학적 제형은 질환 또는 병태, 예를 들어, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 증상 개시 후 투여된다. 하나의 예에서, 약제학적 제형은 질환 또는 병태, 예를 들어, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 하나의 이상의 증상을 완화시키거나 감소시키는 용량으로 투여된다.
혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 증상은 당업자에게 자명하고 병태에 의존한다. 병태 또는 장애의 예시적인 증상은 예를 들어 다음을 포함한다:
· 재발성 감염;
· 관절 염증;
· 근육 약화;
· 피부의 발진 또는 변색;
· 특히 사지 (예를 들어, 발, 손, 다리 또는 팔) 또는 눈에서의 부종;
· 복통;
· 환부에서 통증, 부종 및 압통(tenderness);
· 환부에서 둔하거나 심한 통증;
· 혈전 영역 내 따뜻한 피부;
· 붉은 피부;
· 흉통;
· 호흡 곤란 (예를 들어, 무호흡 및/또는 흉부 압박);
· 하나의 팔 또는 다리에서 순간적인 힘 상실;
· 구역질;
· 피로;
· 혈뇨;
· 부분 또는 완전 마비; 및
· 불량한 인지 능력.
하나의 예에서, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애는 정맥, 동맥 또는 모세혈관 혈전 형성(예를 들어, 뇌졸중, 심근 경색, 심부 정맥 혈전증(DVT), 문맥 혈전증, 신정맥 혈전증, 경정맥 혈전증, 대뇌동 혈전증, 버드 키아리(Budd-Chiari) 증후군, 파렛 슈로에터(Paget-Schroetter) 질환 또는 무증상 뇌 허혈), 심장의 혈전 형성, 혈전색전증, 사람 또는 동물 대상체의 혈액과 인공 표면과 접촉하는 동안 및/또는 후에 혈전 형성, 파종성 혈관내 응고(DIC), 심방세동, 급성관상동맥증후군(ACS), 죽상경화성 질환, 재관류를 동반한 허혈성 뇌졸중, 허혈-재관류 손상(외상, 장기 이식과 같은 IRI) 관련 질환, 신경외상성 장애 (예를 들어, 외상성 뇌 손상, 척수 손상), 신경 염증성 질환(예를 들어, 다발성 경화증), 간질성 폐질환(예를 들어, 특발성 폐섬유증(IPF)), 폐렴, 섬유소용해, FXII/FXIIa-유도 키닌 형성 관련 질환(예를 들어, 유전성 혈관부종(HAE)), 패혈증, FXII/FXIIa-매개 보체 활성화와 관련된 질환, 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 기관 및 세포 이식, 겸상 세포 질환 및 증가된 혈관 투과성과 관련된 병태. 섬유소용해, 증가된 혈관 투과성과 관련된 병태로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 정맥, 동맥 또는 모세혈관 혈전이다. 예를 들어, 정맥 또는 동맥 혈전은 뇌졸중, 심근경색, 심부정맥 혈전증(DVT), 문맥 혈전증, 혈전색전증, 신정맥 혈전증, 경정맥 혈전증, 대뇌 정맥동 혈전증, 버드-키아리(Budd-Chiari) 증후군, 무증상 뇌 허혈(SBI) 및 파게트-쇼로에터(Paget-Schroetter) 질환으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 질환 또는 병태와 관련된다.
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 대상체의 혈액이 인공 표면과 접촉하는 동안 및/또는 접촉한 후에 혈전 형성이다. 하나의 예에서, 혈전 형성은 대상체에 대해 수행되는 의료 절차를 수행하는 동안 및/또는 수행한 후 상기 사람 또는 동물 대상체의 혈액을 인공 표면과 접촉시키는 동안 및/또는 접촉시킨 후에 발생하고, 본원 개시내용의 제형은 상기 의료 절차을 수행하기 전 및/또는 수행하는 동안 및/또는 수행한 후에 투여된다. 예를 들어, 판막 교체, 스텐트, 경피적 관상동맥 중재(PCI), 체외막 산소 공급(ECMO) 또는 심폐 우회술(CPB 수술)을 받는 대상체에서.
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 만성 및/또는 급성 혈전색전증이다. 예를 들어, 만성 및/또는 급성 혈전색전증은 폐색전증, 심방세동 유발 혈전 형성 이후의 뇌 혈전색전증(예를 들어, 심방세동에서 뇌졸중 예방(SPAF))이다.
하나의 예에서, 뇌졸중은 혈전성 뇌졸중이다. 또 다른 예에서 뇌졸중은 심방세동에서 뇌졸중 예방(SPAF)이다.
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 재관류와 함께 허혈성 뇌졸증이다. 예를 들어, 질환 또는 병태는 뇌졸중의 2차 양상 (예를 들어, 허혈성 또는 출혈 뇌졸중의 2차 양상)이다.
하나의 예에서, 상기 질환 또는 병태는 신경외상성 장애이다. 예를 들어, 신경 외상성 장애는 척수 손상 및 외상성 뇌 손상을 포함하는 중추 신경계(CNS)의 외상성 손상이다. 하나의 예에서, 상기 질환 또는 병태는 척수 손상이다. 또 다른 예에서, 상기 질환 또는 병태는 외상성 뇌 손상이다.
하나의 예에서, 상기 질환 또는 병태는 허혈-재관류 손상(IRI)이다. 예를 들어, IRI는 자연적 이벤트(예를 들어, 심근경색 후 혈류의 회복), 외상, 또는 혈액 공급이 감소된 조직 또는 기관으로의 혈류를 회복시키는 하나 이상의 외과적 절차 (예를 들어, 기관 이식) 또는 기타 치료학적 중재에 의해 유발된다. 이러한 수술 절차는 예를 들어 관상동맥 우회 이식술, 관상동맥성형술, 장기 이식 수술, 대기 수술, 재건 수술, 혈관 수술, 심장 수술, 외상 수술, 충돌 또는 압착 수술, 암 수술, 정형외과 수술, 이식, 또는 최소 침습 수술을 포함할 수 있다. 하나의 예에서, 외과적 절차는 혈전용해제 또는 혈관확장제와 같은 약리학적 활성 물질의 전달을 위한 장치의 삽입, 또는 혈관의 폐색과 같은 완전하거나 부분적인 폐색을 기계적으로 제거하는 장치의 삽입을 포함할 수 있다.
하나의 예에서, 혈전색전증은 폐색전증이다. 또 다른 예에서, 혈전색전증은 전신 색전증이다. 추가의 예에서, 혈전색전증은 만성 혈전색전성 폐 고혈압이다.
하나의 예에서, 상기 질환 또는 병태는 접촉 매개된 혈전 염증이다.
하나의 예에서, 상기 질환 또는 병태는 심방 세동이다.
하나의 예에서, 상기 질환 또는 병태는 급성 관상 증후군(ACS)이다.
하나의 예에서, 상기 질환 또는 병태는 간질성 폐 질환(ILD)이다. 예를 들어, 간질성 폐 질환은 섬유증식성 및/또는 특발성 폐 섬유증이다. 하나의 예에서, 질환 또는 병태는 특발성 폐 섬유증(IPF)이다. 예를 들어, 대상체는 특발성 폐 섬유증(IPF)을 앓는다.
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 염증성 장애이다. 예를 들어, 염증성 장애는 신경학적 염증성 질환(또는 신경염증성 질환)이다. 하나의 예에서, 신경학적 염증성 질환은 척수 손상(SCI), 뇌졸중, 외상성 뇌 손상(TBI), 2차성 뇌 부종, 중추 신경계의 부종, 다발성 경화증(MS), 횡단 척수염 또는 시신경 척수염(데빅 질환)이다. 하나의 예에서, 염증성 장애는 폐렴이다.
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 섬유소용해이다.
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 혈관형성이다.
하나의 예에서, 질환 또는 병태 장애는 FXII/FXIIa-유도된 키닌 형성과 관련된 질환이다. 예를 들어, 상기 질환 또는 병태는 유전성 혈관부종, 폐의 세균 감염, 트리파노소마 감염, 저혈압 쇼크, 췌장염, 샤가스 질환, 관절통풍, 관절염, 파종성 혈관내 응고 (DIC) 및 패혈증으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 유전성 혈관부종(HAE)이다. 예를 들어, 대상체는 유전성 혈관부종(HAE)을 앓는다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 제형은 이를 필요로 하는 대상체에게 피하 투여된다. 하나의 예에서, 본원 개시내용의 제형은 이를 필요로 하는 대상체에게 정맥내 투여된다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 제형은 자가 투여된다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 제형은 피하 자가 투여된다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 제형은 미리 채워진 주사기에 제공된다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 제형은 미리 채워진 주사기로 피하 자가투여된다.
본원에 기재된 임의의 방법의 하나의 예에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어, 영장류, 예를 들어, 사람이다.
본원에 기재된 치료 방법은 추가로 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 효과를 감소시키거나, 치료하거나 예방하기 위해 추가의 화합물을 투여함을 포함할 수 있다.
본원의 개시내용은 대상체에서 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태의 활성을 길항시키고/시키거나 활성화를 길항시키는데 사용하기 위한 지침서가 팩킹된 본원 개시내용의 적어도 하나의 약제학적 제형을 포함하는 키트를 제공한다. 임의로, 상기 키트는 치료학적 활성 화합물 또는 약물을 추가로 포함한다.
또한, 본원의 개시내용은 대상체에서 장애를 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 지침서와 함께 팩키징된 본원의 개시내용의 적어도 하나의 약제학적 제형을 포함하는 키트를 제공한다. 임의로, 상기 키트는 치료학적 활성 화합물 또는 약물을 추가로 포함한다.
또한, 본원의 개시내용은 장애를 앓고 있거나 그러한 위험에 처해 있는 대상체에게 접합체 또는 조성물을 투여하기 위해 지침서와 팩키징된 본원의 개시내용의 적어도 하나의 약제학적 제형을 임의로 추가로 치료학적 활성 화합물 또는 약물과 함께 포함하는 키트를 제공한다.
하나의 예에서, 제형은 바이알, 주사기 또는 자동주사기 장치에 존재한다. 예를 들어, 주사기는 미리 채워진 주사기이다.
본원의 개시내용은 본원 개시내용의 약제학적 제형을 포함하는 바이알을 제공한다. 예를 들어, 바이알은 단일 용도 바이알이다.
본원의 개시내용은 본원 개시내용의 약제학적 제형을 포함하는 주사기를 제공한다.
본원의 개시내용은 또한 본원 개시내용의 약제학적 제형을 포함하는 자동주사기 장치를 제공한다.
본원의 개시내용은 약 170 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, pH가 5.5 내지 6.5인 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌을 포함하는 약제학적 제형을 포함하는 미리 채워진 주사기를 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20 °C 및 25 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 미리 채워진 주사기는 pH가 5.8 내지 6.4인 12 mM 내지 25 mM L-히스티딘 완충제, 0.01 % 내지 0.03 % (w/v) 폴리소르베이트 80, 110 mM 내지 170 mM 프롤린 및 110 mM 내지 170 mM의 아르기닌을 포함하는 제형을 포함한다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 450 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 예에서, 미리 채워진 주사기의 용적은 0.5 ml 내지 2 ml이다.
본원의 개시내용은 약 160 mg/ml 내지 180 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, pH가 5.8 내지 6.4인 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80, 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형을 포함하는 미리 채워진 주사기를 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20 °C 및 25 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 미리 채워진 주사기는 pH가 5.8 내지 6.4인 12 내지 25 mM 히스티딘 완충제, 0.01 % 내지 0.03 % (w/v) 폴리소르베이트 80, 90 mM 내지 150 mM 프롤린 및 100 mM 내지 160 mM의 아르기닌을 포함하는 제형을 포함한다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 430 내지 530 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 예에서, 미리 채워진 주사기의 용적은 0.5 ml 내지 2 ml이다.
본원의 개시내용은 약 170 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, pH가 5.5 내지 6.5인 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌을 포함하는 약제학적 제형을 포함하는 미리 채워진 주사기를 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20 °C 및 25 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 미리 채워진 주사기는 pH가 5.8 내지 6.4인 약 20 mM 히스티딘 완충제, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80, 140 mM 프롤린 및 150 mM 아르기닌을 포함하는 제형을 포함한다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 450 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 예에서, 미리 채워진 주사기의 용적은 0.5 ml 내지 2 ml이다.
본원의 개시내용은 약 100 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, pH가 5.5 내지 6.5인 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌을 포함하는 약제학적 제형을 포함하는 바이알을 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20 °C 및 25 °C에서 약 10 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 바이알은 pH가 5.8 내지 6.4인 12 내지 25 mM 히스티딘 완충제, 0.01 % 내지 0.03 % (w/v) 폴리소르베이트 80, 90 mM 내지 150 mM 프롤린 및 100 mM 내지 160 mM의 아르기닌을 포함하는 제형을 포함한다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 450 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 예에서, 바이알은 2 ml의 용적을 갖는다.
본원의 개시내용은 약 100 mg/ml의 항체 또는 본원에 기재된 이의 항원 결합 단편, pH가 5.5 내지 6.5인 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌을 포함하는 약제학적 제형을 포함하는 바이알을 제공하고, 여기서 상기 제형은 점도가 20 °C 및 25 °C에서 약 5 mPa*s 미만이다. 예를 들어, 바이알은 pH가 5.8 내지 6.4인 약 20 mM 히스티딘 완충제, 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80, 140 mM 프롤린 및 150 mM 아르기닌을 포함하는 제형을 포함한다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 450 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 제형의 오스몰 농도는 약 450 mOsm/kg이다. 하나의 예에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 하나의 예에서, 바이알은 2 ml의 용적을 갖는다.
본원 개시내용의 약제학적 제형의 예시적 효과는 본원에 기재되어 있고, 필요한 부분만 약간 수정하여 이전의단락에서 제시된 본원 개시내용의 예에 적용되어야 한다.
서열 목록 정보
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일반사항
본 명세서 전반에 걸쳐, 특별히 달리 언급되거나 문맥에서 다르게 요구되지 않는한, 단일 단계, 물질의 조성물, 단계들의 그룹 또는 물질의 조성물들의 그룹에 대한 언급은 하나 및 복수 (즉, 하나 이상)의 상기 단계들, 물질의 조성물들, 상기 단계들의 그룹 또는 상기 물질 조성물들의 그룹을 망라하는 것으로 이해해야 할 것이다.
당업자라면 본 명세서가 구체적으로 기재된 것 이외의 변형 및 변경의 여지가 있다는 점을 알 수 있을 것이다. 본 개시내용에는 이러한 모든 변형 및 변경을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 개시내용에는 본 명세서 내에 개별적으로 또는 총괄적으로 언급되거나 나타낸 모든 단계, 특징, 조성물 및 화합물, 및 상기 단계 또는 특징들의 모든 조합과 임의의 2종 이상의 임의의 조합을 포함한다.
본원 개시내용은 본원에 기재된 구체적인 예들에 의해 그 범위가 제한되지 않으며, 이러한 예들은 단지 예시의 목적을 위한 것이다. 기능적으로 균등한 생성물, 조성물 및 방법들도 분명히 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본원 개시내용의 임의의 예는 특별히 달리 언급하지 않는 한 본 발명의 다른 예에 필요한 변경을 가하는 것을 취할 것이다. 진술된 또 다른 방식으로서 본원 개시내용의 임의의 특정 예는 본원 개시내용의 임의의 다른 특정 예와 조합될 수 있다 (상호 배척하는 경우를 제외하고는).
특정 특성 또는 특성들 그룹 또는 방법 또는 방법 단계를 기재하는 본원 개시내용의 임의의 예는 특정 특성 또는 특성들의 그룹 또는 방법 또는 방법 단계를 제외시키기 위한 명백한 기반을 제공하기 위해 취해진다.
구체적으로 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 당업계 (예를 들어, 세포 배양학, 분자 유전학, 면역학, 면역조직화학, 단백질 화학 및 생화학)의 숙련자들에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 가질 것이다.
달리 지시하지 않는 한, 본 명세서에 이용되는 재조합 단백질, 세포 배양물 및 면역학적 기법은 당업계의 숙련자들에게 잘 알려진 표준 절차이다. 이러한 기법들은 문헌 [J. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984)], [J. Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harb또는 Laboratory Press (1989)], [T.A. Brown (editor), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volumes 1 and 2, IRL Press (1991)], [D.M. Glover and B.D. Hames (editors), DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes 1-4, IRL Press (1995 및 1996)] 및 [F.M. Ausubel et al. (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and WileyInterscience (1988, 현재까지의 모든 최신정보 포함)], [Ed Harlow and David Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harb또는 Laboratory, (1988)] 및 [J.E. Coligan et al. (editors) Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (현재까지의 모든 최신정보 포함)]와 같은 문헌 자료 전반에 걸쳐 기재되고 설명되어 있다.
본원에서 가변 영역 및 이의 부분, 항체 및 이의 단편의 기재 및 정의는 추가로 문헌(Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991)에서 논의함에 의해 명백해질 수 있다.
용어 “카밧의 EU 넘버링 시스템”은 항체 중쇄의 넘버링을 의미하는 것으로 이해되고, 문헌(참조: Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda)에 교시된 바와 같이 EU 지수에 따른다. EU 지수는 사람 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 기초로 한다.
"및/또는"이라는 용어, 예를 들어, "X 및/또는 Y"는 "X 및 Y" 또는 "X 또는 Y"를 의미하는 것으로 이해해야 하며, 양자 모두의 의미 또는 둘 중 하나의 의미를 위해 명확한 근거를 제공하기 위하여 취하는 것이다.
본 명세서 전반에 걸쳐, “포함하다”라는 단어, 또는 “포함하는” 또는 “포함하고”와 같은 용어는 언급된 구성요소, 또는 정수 또는 단계, 또는 상기 구성요소, 또는 정수 또는 단계들의 그룹을 포함하지만 임의의 다른 구성요소, 또는 정수 또는 단계, 또는 상기 구성요소, 또는 정수 또는 단계들의 그룹을 배제하지는 않음을 의미하는 것으로 이해해야 할 것이다.
본 명세서에 사용되는 "로부터 유래된"이라는 용어는 공급원으로부터 반드시 직접적으로 얻는 것이 반드시 필요한 것은 아니지만, 명시된 정수값이 특정 공급원으로부터 얻어질 수 있다는 것을 나타내기 위해 취하는 것이다.
선택된 정의
하게만 인자로도 알려진 응고 인자 XII, 즉 FXII는 혈장 단백질이다. 이는 세린 프로테아제 (또는 세린 엔도펩티다아제) 부류의 효소인 인자 XIIa의 효소 전구체 형태이다. 사람에서, 인자 XII는 F12 유전자에 의해 암호화되어 있다. 제한할 의도없이 단지 명명법상의 목적으로, 사람 인자 XII의 예시적인 서열들은 NCBI 기준 서열: NP_000496.2; NCPI 단백질 승인 번호 NP_000496 및 서열번호 17에 기재되어 있다. 인자 XII의 추가의 서열들은 본원에 제공된 서열 및/또는 공중이 이용가능한 데이터베이스의 서열을 이용하여 확인될 수 있고/있거나, 표준 기법들 (예를 들어, 문헌 [Ausubel et al., (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988, 현재까지 모든 최신정보 포함)] 또는 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harb또는 Laboratory Press (1989)]에 기재됨)을 이용하여 확인될 수 있다.
본원에서, “인자 XII 억제제” 또는 “FXII 억제제” 또는 “FXII의 억제제”라는 용어는 인자 XII (활성화 이전, 즉, 이의 효소 전구체) 및 활성화된 인자 XII (FXIIa) 중 하나 또는 양자 모두에 대한 억제제 뿐만 아니라 FXII의 활성화에 대한 억제제를 지칭한다. 따라서, “FXII의 억제제(들)”은 FXII 및 FXIIa (αFXIIa로도 불림) 중 하나 또는 양자 모두에 대한 억제제 뿐만 아니라 FXII의 활성화에 대한 억제제, 예를 들어 상기 FXIIa 분해 생성물 FXIIa 알파 및 FXIIa 베타 (FXIIf로도 불림)를 포함할 수 있다. FXII 억제제는 야생형 억제제에 대한 기능적 변이체 및 단편을 망라한다. 기능적 변이체 또는 단편이라는 것은 FXII, FXIIa 또는 FXII의 활성화를 억제하는 야생형 분자의 능력의 적어도 50% (예를 들어, 약 50%, 또는 약 60%, 또는 약 70%, 또는 약 80%, 또는 약 90%, 또는 약 95%, 또는 약 99%, 또는 약 100%)를 보유하는 분자이다. 한 예에서, 상기 FXII 억제제는 비내인성 억제제인데; 즉, 이들은 사람체 또는 동물체 내에서 자연적으로 발생하는 억제제가 아니다.
“아미도용해 활성”이라는 용어는 또 다른 폴리펩타이드에서 적어도 하나의 펩타이드 결합의 가수분해를 촉매하는 본원 개시내용의 단백질의 능력을 언급한다. 용어 “유기산 완충제”는 유기산 및 염의 통상적인 완충제를 언급한다.
본원에서 사용되는 용어 "비이온성 계면활성제"는 하전되지 않은 극성 헤드를 갖는 임의의 세제를 언급한다.
“안정한” 제형은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 저장 시 이의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 필수적으로 보유하는 제형이다.
본원의 개시내용과 관련하여, 용어 “단량체” 또는 “단량체성”은 올바르게 폴딩된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다. 예를 들어, 본원 개시내용에 따른 항체의 단량체는 2개의 동일한 글리코실화된 중쇄 및 경쇄를 각각 포함하는 표준 사량체 항체에 관한 것이다. "응집체"는 이어서 2개 항체 분자(예를 들어, 고분자량 종)의 비특이적 회합이다.
본원에서 사용되는 용어 "아미노산 안정화제"는 제형의 안정성을 개선하거나 증진시키는 아미노산 또는 이의 유도체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 "폴리올"이라는 용어는 복수의 하이드록실 그룹을 갖는 물질을 지칭한다.
"역학적 점도" 또는 "절대 점도"라는 용어는 특정 온도(예를 들어, 20°C)에서 유체가 나타내는 흐름에 대한 내부 저항성, 전단 응력 대 전단 속도의 비율을 지칭한다. 1 다인/제곱센티미터의 힘이 1제곱센티미터의 면적과 1제곱센티미터 떨어진 2개의 평행한 액체 표면이 1cm/초의 속도로 서로를 지나쳐 이동하는 경우 액체의 역학적 점도는 1포이즈이다. 시스템 국제 (SI) SI(System International) 유닛에서 1포아즈는 100센티포이즈(cP)와 균등하고 1센티포이즈는 1밀리파스칼초(mPa*s)와 균등하다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 제형의 "밀도"라는 용어는 용량 질량 밀도 또는 단위 용적당 질량(g/cm3)을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "오스몰 농도"는 용매 킬로그램당 용질의 오스몰(Osm)의 척도(osmol/kg 또는 Osm/kg)이다.
본원에 사용된 바와 같이, 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 항원의 상호 작용에 대해 언급할 때 "결합한다"라는 용어는, 상기 상호작용이 항원 상의 특정 구조 (예를 들어, 항원성 결정인자 또는 에피토프)의 존재에 의존한다라는 것을 의미한다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 일반적으로 단백질을 인지하여 결합한다기 보다는 특정한 단백질 구조를 인지하여 결합한다. 항체가 에피토프 "A"에 결합하는 경우, 표지된 "A" 및 상기 단백질을 포함하는 반응 중에서 에피토프 "A" (또는 비표지된 유리된 "A")를 포함하는 분자의 존재는 항체에 결합되는 표지된 "A"의 양을 감소시킬 것이다.
본원에서 사용된 바와 같은 "특이적으로 결합한다(specifically binds)" 또는 "특이적으로 결합한다(binds specifically)"라는 용어는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 다른 항원 또는 세포와 반응하거나 연합하는 것보다 특정 항원 또는 이를 발현하는 세포와 더욱 빈번하게, 보다 신속하게, 보다 긴 지속기간 동안 및/또는 보다 큰 친화도로 반응하거나 결합한다는 것을 의미하는 것으로 해석해야 한다. 예를 들어, 단백질 또는 이의 항원 결합 단편은 다반응성 천연 항체 (즉, 사람에서 천연적으로 발견되는 다양한 항원에 결합하는 것으로 공지된 천연적으로 존재하는 항체)에 의해 일반적으로 인지되는 항원, 또는 다른 혈액 응고 인자에 결합하는 것보다 상당히 더 큰 친화도 (예를 들어, 1.5배 또는 2배 또는 5배 또는 10배 또는 20배 또는 40배 또는 60배 또는 80배 내지 100배 또는 150배 또는 200배)로 FXII (또는 FXIIa)와 결합한다. 반드시 그러한 것은 아니지만 일반적으로, 결합에 대한 언급은 특이적 결합을 의미하며, 각 용어는 다른 용어에 대한 분명한 근거를 제공하는 것으로 이해될 것이다.
"재조합체"라는 용어는 인위적인 유전자 재조합의 생성물을 의미하는 것으로 이해해야 한다. 따라서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 관련하여, 상기 용어는 B 세포 성숙화 동안에 발생하는 천연 재조합 생성물인 대상체 체내에서 천연적으로 존재하는 항체는 포함하지 않는다. 그러나, 이러한 항체가 단리되는 경우에는, 이는 항체 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로 간주되어야 한다. 유사하게, 상기 단백질을 암호화하는 핵산을 단리시켜 재조합 수단을 사용하여 발현되는 경우, 생성된 단백질은 항체 항원 결합 도메인을 포함하는 재조합 단백질이다. 재조합체 단백질은, 예를 들어 단백질이 발현되는 세포, 조직 또는 대상체 내에 있는 경우, 인위적인 재조합 수단에 의해 발현되는 단백질도 포함한다.
용어 “단백질"은 단일 폴리펩타이드 쇄, 즉, 펩타이드 결합에 의해 연결된 일련의 인접한 아미노산들 또는 서로 공유 또는 비공유 결합된 일련의 폴리펩타이드 쇄 (즉, 폴리펩타이드 복합체)를 포함하는 것으로 해석되야 할 것이다. 예를 들어, 상기 일련의 폴리펩타이드 쇄는 적합한 화학 결합 또는 디설파이드 결합을 이용하여 공유 결합될 수 있다. 비공유 결합의 예로는 수소 결합, 이온 결합, 반데르발스힘 및 소수성 상호작용을 포함한다.
“폴리펩타이드" 또는 "폴리펩타이드 쇄"라는 용어는 상기 단락으로부터 펩타이드 결합에 의해 결합된 일련의 연속하는 아미노산을 의미하는 것으로 이해된다.
본원 개시내용의 목적을 위해, 용어 "항체"는 Fv 내에 함유된 항원 결합 도메인에 의해 하나 또는 몇 개의 밀접하게 관련된 항원(예를 들어, 혈액 응고 인자)에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질을 포함한다. 상기 용어는 4개의 쇄 항체(예를 들어 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄), 재조합 또는 변형된 항체(예를 들어, 키메라 항체, 사람화된 항체, 사람 항체, CDR 이식 항체, 영장류화된 항체, 탈면역화 항체, 합성사람화 항체, 절반 항체, 이특이적 항체)를 포함한다. 항체는 임의의 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 임의의 부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 임의의 하위 부류일 수 있다. 하나의 예에서, 항체는 뮤린 (마우스 또는 래트) 항체 또는 영장류(예를 들어, 사람) 항체이다. 하나의 예에서, 항체 중쇄는 C-말단 리신 잔기가 누락되어 있다. 하나의 예에서, 항체는 사람화된, 합성사람화된, 키메라, CDR-이식되거나 탈면역화되어 있다.
“항-FXII 항체”는 FXII의 효소 전구체 및 활성화된 단백질 (FXIIa), 예를 들어 FXIIa 알파 및 FXIIa 베타 분해 단편 중 하나 또는 양자 모두에 결합하고/결합하거나 이들을 억제하는 항체를 포함한다. 일부 예에서, 상기 항체는 FXIIa 또는 FXIIa의 알파 또는 베타 쇄 단편에 특이적으로 결합한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “생식세포 계열(germlined)” 항체는 프레임워크 잔기 내로 변화가 도입된 일부 또는 전부의 체세포 돌연변이 항체가 게놈, 예를 들어, 사람 게놈중에 존재하는 본래의 서열로 뒤바뀐 항체를 언급한다. 이와 관련하여, 모든 변화들이 생식세포 계열 항체에서 뒤바뀔 필요는 없다.
본원에서, “가변 영역"은 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 본원에 정의된 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 부분을 가리키며, 상보성 결정 영역 (CDR); 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 프레임워크 영역(FR)의 아미노산 서열을 포함한다.
본원에서 사용된 "상보성 결정 영역” (동의어, CDR; 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3)이라는 용어는 이의 존재가 특이적 항원 결합에 필요한 것인 항체 가변 영역의 아미노산 잔기를 지칭한다. 각각의 가변 영역은 통상적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 동정된 3개의 CDR 영역을 갖는다. 하나의 예에서, CDR 및 FR에 할당된 아미노산 위치는 문헌(참조: Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991 (또한 “카밧 넘버링 시스템”으로서 본원에 지칭됨)에 따라 정의된다. 카밧의 넘버링 시스템에 따라, VH FR 및 CDR은 하기와 같이 위치한다: 잔기 1-30 (FRl), 31-35 (CDR1), 36-49 (FR2), 50-65 (CDR2), 66-94 (FR3), 95-102 (CDR3) 및 103-113 (FR4). 카밧의 넘버링 시스템에 따라, VL FR 및 CDR은 하기와 같이 위치한다: 잔기 1-23 (FRl), 24-34 (CDR1), 35-49 (FR2), 50-56 (CDR2), 57-88 (FR3), 89-97 (CDR3) 및 98-107 (FR4).
“프레임워크 영역" (이후 FR)은 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기들이다.
항체의 “항원 결합 단편”은 온전한 항체의 하나 이상의 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 단일쇄 항체 분자, 절반 항체 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “Fv”는 다중 폴리펩타이드 또는 단일 폴리펩타이드로 구성되든 상관 없이 임의의 단백질을 의미하는 것으로 이해될 것이고, 여기서, 경쇄 (VL)의 가변 영역 및 중쇄 (VH)의 가변 영역은 연합하여 항원 결합 도메인를 갖는, 즉, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 복합체를 형성한다. 항원 결합 도메인을 형성하는 VH 및 VL은 단일 폴리펩타이드 쇄에 존재하거나 상이한 폴리펩타이드 쇄에 존재할 수 있다. 추가로, 본원 개시내용의 Fv (뿐만 아니라 본원 개시내용의 임의의 단백질)는 동일한 항원에 결합할 수 있거나 결합할 수 없는 다수의 항원 결합 부위를 가질 수 있다. 상기 용어는 항체로부터 직접 유도되는 단편뿐만 아니라 재조합 수단을 이용하여 생성되는 상기 단편에 상응하는 단백질을 망라하는 것으로 이해해야 할 것이다. 예시적인 Fv 함유 폴리펩타이드 또는 단백질로는 Fab 단편, Fab’ 단편, F(ab’) 단편, scFv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 또는 보다 고차원의 복합체, 또는 이의 불변 영역 또는 도메인에 결합된 상기된 것들 중 임의의 것, 예를 들어, CH2 또는 CH3 도메인, 예를 들어, 미니항체를 포함한다. “Fab 단편"은 면역글로불린의 1가의 항원 결합 단편으로 이루어지며, 효소 파파인으로 전항체를 분해함으로써 온전한 경쇄 및 중쇄의 일부로 이루어진 단편을 수득하도록 제조될 수 있거나, 또는 재조합 수단을 이용하여 제조될 수도 있다. 항체의 "Fab' 단편"은 전항체를 펩신으로 처리한 후 환원시켜 온전한 경쇄 및 VH를 포함하는 중쇄의 일부 및 단일 불변 도메인으로 이루어진 분자를 생성하도록 수득될 수 있다. 2개의 Fab' 단편은 각 항체마다 이러한 방식으로 처리하여 수득된다. Fab’ 단편도 재조합 수단으로 제조될 수 있다. 항체의 "F(ab')2 단편”은 2개의 이황화 결합에 의해 함께 유지된 2개의 Fab' 단편의 이량체로 이루어지며, 후속 환원 없이 전항체 분자를 효소 펩신으로 처리하여 수득된다. “Fab2” 단편은 예를 들어, 류신 지퍼 또는 CH3 도메인을 사용하여 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 재조합 단편이다. “단일쇄 Fv” 또는 “scFv”는 경쇄의 가변 영역 및 중쇄의 가변 영역이 적합한 가요성 폴리펩타이드 링커에 의해 공유 결합된 항체의 가변 영역 단편(Fv)을 포함하는 재조합 분자이다.
용어 "결정화가능한 단편" 또는 "Fc" 또는 "Fc 영역" 또는 "Fc 부분"(본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있음)은 적어도 하나의 불변 도메인을 포함하는 항체의 영역을 지칭하고, 이는 일반적으로(반드시 그런 것은 아님) 글리코실화되고 하나 이상의 Fc 수용체 및/또는 보체 캐스케이드의 성분에 결합할 수 있다. 중쇄 불변 영역은 5개의 이소타입 중 어느 하나로부터 선택될 수 있다: α, δ, ε, γ, 또는 μ. 또한, 다양한 서브클래스(예를 들어, 중쇄의 IgG 서브클래스)의 중쇄는 상이한 이펙터 기능을 관여하므로 목적하는 중쇄 불변 영역을 선택하여 목적하는 이펙터 기능을 가진 단백질을 생성할 수 있다. 예시적인 중쇄 불변 영역은 감마 1 (IgG1), 감마 2 (IgG2), 감마 3 (IgG3) 및 감마 4 (IgG4), 또는 이의 하이브리드이다.
본원에서 사용되는 용어 "불변 영역"은 가변 영역 이외의 항체의 중쇄 또는 경쇄의 일부를 지칭한다. 중쇄에서, 불변 영역은 일반적으로 복수의 불변 도메인 및 힌지 영역을 포함하고, 예를 들어, IgG 불변 영역은 하기의 연결된 성분, 불변 중쇄 (CH) CH1, 링커, CH2 및 CH3을 포함한다. 중쇄에서, 불변 영역은 Fc를 포함한다. 경쇄에서, 불변 영역은 일반적으로 하나의 불변 도메인(CL1)을 포함한다.
용어 “안정화된 IgG4 불변 영역”은 Fab 아암(arm) 교환 또는 Fab 아암 교환을 겪게될 경향, 또는 절반 항체(half antibody)의 형성 또는 절반 항체를 형성하는 경향을 감소시키도록 변형된 IgG4 불변 영역을 의미하는 것으로 이해된다. “Fab 아암 교환”은 IgG4 중쇄 및 부착된 경쇄 (절반 분자)가 또 다른 IgG4 분자의 중쇄-경쇄 쌍으로 교체된, 사람 IgG4에 대한 단백질 변형의 한 유형을 지칭한다. 따라서, IgG4 분자는 2개의 다른 항원을 인지하는 2개의 다른 Fab 아암 (이특이적 분자를 유도)을 획득할 수 있다. Fab 아암 교환은 생체내에서 천연적으로 존재하고, 정제된 혈액 세포 또는 환원제, 예를 들어, 환원된 글루타티온에 의해 시험관내에서 유도될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "단일특이적"은 각각 동일한 에피토프 특이성을 갖는 하나 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 도메인을 지칭한다. 따라서, 단일특이적 결합 도메인은 단일 항원 결합 부위(예를 들어, Fv, scFv, Fab 등)를 포함할 수 있거나 동일한 에피토프를 인지하는(예를 들어, 서로 동일함) 여러 항원 결합 부위, 예를 들어, 디아바디 또는 항체를 포함할 수 있다. 결합 영역이 "단일특이적"이라는 요구 사항은 그것이 단 하나의 항원에만 결합한다는 것을 의미하지 않는데, 이는 다중 항원이 공유되거나 단일 항원 결합 부위에 의해 결합될 수 있는 매우 유사한 에피토프를 가질 수 있기 때문이다. 단지 하나의 항원에만 결합하는 단일특이적 결합 도메인은 해당 항원에 "배타적으로 결합"하는 것으로 일컬어진다.
용어 "다중특이성"은 각각이 별개의 에피토프에 결합하는, 예를 들어 각각이 별개의 항원에 결합하는 2개 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 도메인을 지칭한다. 예를 들어, 다중특이적 결합 도메인은 동일한 단백질의 2개 이상의 상이한 에피토프(예를 들어, 응고 인자)를 인지하거나 상이한 단백질의 2개 이상의 상이한 에피토프(즉, 별개의 응고 인자)를 인지할 수 있는 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 하나의 예에서, 결합 도메인은 "이특이적"일 수 있는데, 즉 2개의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합하는 2개의 항원 결합 부위를 포함한다. 예를 들어, 이특이적 결합 도메인은 동일한 단백질 상의 2개의 상이한 에피토프에 대해 특이적으로 결합하거나 특이성을 갖는다. 또 다른 예에서, 이특이적 결합 도메인은 2개의 상이한 단백질 상의 2개의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합한다.
본원에 사용된 바와 같이, 화합물 또는 이의 항원 결합 부위와 항원의 상호 작용에 대해 언급할 때 "결합하다"라는 용어는, 해당 상호작용이 항원 상의 특정 구조 (예를 들어, 항원성 결정인자 또는 에피토프)의 존재에 의존한다라는 것을 의미한다. 예를 들어, 항체는 단백질을 전체로서 인지하여 결합한다기 보다는 특정한 단백질 구조를 인지하여 결합한다. 항체가 에피토프 "A"에 결합하는 경우, 표지된 "A" 및 상기 단백질을 포함하는 반응 중에서 에피토프 "A" (또는 비표지된 자유 "A")를 포함하는 분자의 존재는 항체에 결합되는 표지된 "A"의 양을 감소시킬 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, "특이적으로 결합한다(specifically binds)" 또는 "특이적으로 결합한다(binds specifically)"이라는 용어는, 본원 개시내용의 단백질이 다른 항원 또는 세포와 반응하거나 결합하는 것보다 특정 항원 또는 이를 발현하는 세포와 더욱 빈번하게, 보다 신속하게, 보다 긴 지속기간 동안 및/또는 보다 큰 친화도로 반응하거나 결합한다는 것을 의미하는 것으로 해석해야 한다. 예를 들어, 항체 Fc를 포함하는 접합체는 인자 XII(예를 들어, 사람 인자 XII)에 결합하고 다반응성 천연 항체 (즉, 사람에서 천연적으로 발견되는 다양한 항원에 결합하는 것으로 알려진 천연적으로 존재하는 항체에 의해)에 의해 일반적으로 인지되는 항원, 또는 다른 사이토킨 수용체에 결합하는 것보다 상당히 더 큰 친화도 (예를 들어, 20배 또는 40배 또는 60배 또는 80배 내지 100배 또는 150배 또는 200배)를 갖는다. 반드시 그러한 것은 아니지만 일반적으로, 결합에 대한 언급은 특이적 결합을 의미하며, 각 용어는 다른 용어에 대한 분명한 근거를 제공하는 것으로 이해될 것이다.
용어 “경쟁적으로 억제한다”는 본원 개시내용의 단백질 (또는 이의 항원 결합 부위)가 언급된 항체 또는 단백질의 인자 XII 및/또는 인자 XIIa로의 결합을 감소시키거나 차단함을 의미하는 것으로 이해된다. 이것은 단백질 (또는 항원 결합 부위) 및 항체의 동일하거나 중첩 에피토프로의 결합으로 인한 것일 수 있다. 이전의 기재로부터 단백질이 항체의 결합을 완전히 억제할 필요는 없고 이것이 단지 결합을 통계학적으로 유의적인 양, 예를 들어, 적어도 약 10 %, 또는 약 20 %, 또는 약 30　%, 또는 약 40 %, 또는 약 50 %, 또는 약 60 %, 또는 약 70 %, 또는 약 80 %, 또는 약 90 %, 또는 약 95%까지 감소시킬 필요가 있다는 것은 자명할 것이다. 바람직하게, 상기 단백질은 항체의 결합을 적어도 약 30 %, 보다 바람직하게 적어도 약 50　%, 보다 바람직하게 적어도 약 70 %, 여전히 보다 바람직하게 적어도 약 75 %, 보다 더 바람직하게 적어도 약 80 % 또는 85 % 및 보다 더 바람직하게 적어도 약 90 % 까지 감소시킨다. 결합의 경쟁 억제를 결정하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있고/있거나 본원에 기재되어 있다. 예를 들어, 항체는 단백질의 존재 또는 부재하에 인자 XII에 노출된다. 적은 항체가 단백질의 부재하에서 보다 단백질의 존재하에 결합하는 경우, 단백질은 항체의 결합을 경쟁적으로 억제하는 것으로 고려된다. 하나의 예에서, 경쟁 억제는 입체 장애로 인한 것이 아니다.
2개의 에피토프와 관련하여 “중첩”은 2개의 에피토프가 충분한 수의 아미노산 잔기를 공유하여 하나의 에피토프에 결합하는 단백질 (또는 이의 항원 결합 단편)이 다른 에피토프에 결합하는 단백질(또는 항원 결합 부위)의 결합을 경쟁적으로 억제함을 의미하는 것으로 이해된다. 예를 들어, “중첩” 에피토프는 적어도 1 또는 2 또는 3 또는 4 또는 5 또는 6 또는 7 또는 8 또는 9 또는 10개 아미노산을 공유한다.
용어 “보존성 아미노산 치환”은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄 및/또는 소수성 및/또는 친수성을 갖는 아미노산으로 대체되거나 치환된 것을 언급한다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기들의 계열은 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 그룹(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄 그룹(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄 그룹(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), β-측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 갖는 아미노산을 포함한다. 수치료 지수(Hydropathic indices)는 예를 들어, 문헌(참조: Kyte and Doolittle J. Mol. Biol., 157: 105-132, 1982)에 기재되어 있고 친수성 지수는 예를 들어, US4554101에 기재되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “질환”, “장애” 또는 “병태”는 정상 기능의 방해 또는 간섭을 지칭하고 임의의 특정 병태로 제한되지 말아야 하고 질환 또는 장애를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "혈전성 장애"는 혈액 응고의 발생 또는 혈액 응고를 발생시키는 가능성을 특징으로 하는 병태를 지칭한다. 혈액 응고는 또한 “혈전(thrombi)”, “혈전(thrombus)” 또는 “혈전증(thrombosis)”로서 지칭된다.
본원에서 사용되는 용어 "염증성 장애"는 염증의 발생 또는 염증을 발생시키는 가능성을 특징으로 하는 병태를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "혈전-염증성 장애"는 염증 및 혈전 경향을 모두 갖는 것을 특징으로 하는 임의의 병태를 지칭한다.
본원에 사용된 "혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전성 염증성 장애"라는 어구는 혈전성 장애, 염증성 장애 또는 혈전-염증성 장애 중 하나 이상으로 분류되는 질환 또는 병태를 지칭한다.
본원에서, "치료하는", "치료한다" 또는 "치료"라는 용어는 본원에 기술된 단백질의 투여로 특정 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 감소 또는 제거하거나, 또는 해당 질환 또는 질병의 진행을 늦추는 것을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “예방하는”, “예방한다” 또는 “예방”은 개체에서 특정 질환 또는 병태의 발생 또는 재발과 관련된 예방을 제공함을 포함한다. 개체는 질환을 발병하거나 질환을 재발할 성향이 있을 수 있거나 위험에 처한 것일 수 있지만 질환 또는 재발을 갖는 것으로 아직 진단되지 않았다.
본원에 사용 된 바와 같이, 질환 또는 병태가 발병되거나 재발 또는 재발 할 "위험에 처한” 대상체는 검출 가능한 질환 또는 질환의 증상을 갖거나 갖지 않을 수 있고, 본원 개시내용에 따른 치료 전에 검출 가능한 질환 또는 질환의 증상을 나타내거나 나타내지 않을 수있다. “위험에 처한”은 대상체가 당업계에 공지된 바와 같고/같거나 본원에 기재된 바와 같은, 질환 또는 병태의 발병과 상호관련된 측정가능한 파라미터인 하나 이상의 위험 인자를 가짐을 지칭한다.
"유효량"은 목적하는 결과를 달성하기 위해 필요한 용량 및 기간 동안 유효한 양을 지칭한다. 예를 들어, 목적하는 결과는 치료학적 또는 예방학적 결과일 수 있다. 유효량은 하나의 투여로 제공될 수 있다. 본원 개시내용의 일부 예에서, 용어 "유효량"은 이전에 기재된 바와 같은 질환 또는 병태의 치료를 달성하는데 필요한 양을 의미한다. 본원 개시내용의 일부 예에서, 용어 "유효량"은 이전에 기재된 바와 같은 질환 또는 병태와 관련된 인자에서 변화를 유발하기에 필요한 양을 의미한다. 유효량은 치료할 질환 또는 병태 또는 변경할 요인에 따라, 및 또한 체중, 연령, 인종적 배경, 성별, 건강 및/또는 신체 상태 및 치료할 포유류와 관련된 기타 요인에 따라 다양할 수 있다. 일반적으로 유효량은 의사의 일상적인 시험 및 실험을 통해 결정할 수 있는 비교적 넓은 범위(예를 들어, "투여량" 범위)에 속한다. 따라서, 상기 용어로 본원 개시내용을 특정한 양, 예를 들어, 중량과 수로 한정하는 것으로 해석해서는 안된다. 유효량은 단일 용량으로 또는 치료 기간 동안 1회 또는 수회 반복 용량으로 투여될 수 있다.
"치료학적 유효량"은 특정 질환 또는 병태의 측정 가능한 개선을 달성하는 데 필요한 적어도 최소 농도이다. 본원에서 치료학적 유효량은 환자의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 유발하는 항체 또는 항원의 능력과 같은 인자에 따라 다양할 수 있다. 치료학적 유효량은 또한 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 임의의 독성 또는 치명적 효과가 치료학적으로 이로운 효과에 의해 능가되는 양이다.
본원에서,“대상체”라는 용어는 사람을 포함한 모든 동물, 예를 들어, 포유동물을 의미하는 것으로 해석해야 할 것이다. 예시적인 대상체로는, 이에 제한되지는 않지만, 사람 및 사람이 아닌 영장류를 포함한다. 예를 들어, 상기 대상체는 사람이다.
약제학적 제형의 단백질
본원에 논의된 바와 같이 본원 개시내용은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태(즉, 활성화된 FXII; FXIIa)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 적어도 100 mg/ml의 단백질을 포함하는 액체 약제학적 제형을 제공한다.
항원 결합 도메인을 포함하는 단백질
본원 개시내용은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 포함하는 약제학적 제형을 제공한다. 예를 들어, 단백질은 적어도 VH 및 VL을 포함하고, 여기서, VH 및 VL은 항원 결합 도메인을 포함하는 Fv를 형성하기 위해 결합한다.
하나의 예에서, 항원 결합 도메인은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하고 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성을 길항한다. 예를 들어, 단백질은 인자 XI에 결합하거나 특이적으로 결합하고, 인자 XII 활성을 길항시킨다. 또 다른 예에서, 단백질은 활성화된 인자 XII(FXIIa)에 결합하거나 특이적으로 결합하고, 인자 XIIa 활성을 길항시킨다.
하나의 예에서, 항원 결합 도메인은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하고 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성화를 길항한다. 예를 들어, 단백질은 인자 XII에 결합하거나 특이적으로 결합하고 인자 XII의 인자 XIIa로의 활성화를 억제한다.
항체 또는 항원 결합 단편
하나의 예에서, 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질은 항체 또는 항원 결합 단편이다. 예를 들어, 단백질은 인자 XII 및/또는 활성화된 XII (FXIIa)에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 예를 들어, 단백질은 인자 XII에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 또 다른 예에서, 단백질은 활성화된 인자 XII (FXIIa)에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다.
항체를 생성하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있고/있거나 문헌(참조: Harlow and Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988))에 기재되어 있다. 일반적으로, 상기 방법에서, 임의로 임의의 적합한 또는 목적하는 담체, 보조제 또는 약제학적으로 허용되는 부형제와 제형화된, 인자 XII (예를 들어, hFXII) 또는 이의 영역(예를 들어, 세포외 도메인) 또는 이의 면역원성 단편 또는 에피토프 또는 동일한 것(즉, 면역원)을 발현하고 나타내는 세포는 비-사람 동물, 예를 들어, 마우스, 닭, 래트, 토끼, 기니아 피그, 개, 말, 소, 염소 또는 돼지에게 투여된다. 면역원은 비강내, 근육내, 피하, 정맥내, 피내, 복막내 또는 다른 공지된 경로에 의해 투여될 수 있다.
모노클로날 항체는 본원의 개시내용에 의해 고려되는 하나의 예시적인 형태의 항체이다. 용어 “모노클로날 항체" 또는 “mAb”는 동일한 항원(들)에, 예를 들어, 항원 내 동일한 에피토프에 결합할 수 있는 균일한 항체 집단을 언급한다. 상기 용어는 항체의 공급원 또는 이것이 제조된 방식과 관련하여 제한되는 것으로 의도되지 않는다.
mAb의 생성을 위해, 예를 들어, 문헌(참조: US4196265 or Harlow and Lane (1988), supra)에 예시된 절차와 같은 다수의 공지된 기술의 임의의 하나가 사용될 수 있다.
대안적으로, ABL-MYC 기술(문헌참조: NeoClone, Madison WI 53713, USA)은 MAb를 분비하는 세포주를 생성하기 위해 사용된다(예를 들어, 문헌(참조: Largaespada et al, J. Immunol. Methods. 197: 85-95, 1996)에 기재된 바와 같이).
항체는 또한 디스플레이 라이브러리, 예를 들어, 파아지 디스플레이 라이브러리를 스크리닝함에 의해, 예를 들어, 문헌(참조: US6300064 및/또는 Us5885793에 기재된 바와 같이 생성되거나 단리될 수 있다. 예를 들어, 본원의 발명자들은 파아지 디스플레이 라이브러리로부터 완전한 사람 항체를 단리하였다.
본원 개시내용의 항체는 합성 항체일 수 있다. 예를 들어, 항체는 키메라 항체, 사람화된 항체, 사람 항체 또는 탈면역화된 항체이다.
본원 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 사람화될 수 있다.
용어 "사람화된 항체"는 사람 항체로부터의 FR상에 이식되거나 삽입된 비사람 종(예를 들어, 마우스 또는 래트 또는 비사람 영장류)으로부터의 항체로부터의 CDR을 포함하는 사람 유사 가변 영역을 포함하는 단백질을 지칭하는 것으로 이해된다(이러한 유형의 항체는 "CDR 이식 항체"라고도 함). 사람화된 항체는 또한 사람 단백질의 하나 이상의 잔기가 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 변형되고/되거나 사람 항체의 하나 이상의 FR 잔기가 상응하는 비사람 잔기로 대체된 항체를 포함한다. 사람화된 항체는 또한 사람 항체와 비사람 항체 둘다에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 항체의 임의의 추가의 영역(예를 들어, Fc 영역)은 일반적으로 사람이다. 사람화는 당업계에 공지된 방법, 예를 들어, US5225539, US6054297, US7566771 또는 US5585089에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 용어 “사람화된 항체”는 또한 예를 들어, US7732578에 기재된 바와 같이 슈퍼(super)-사람화된 항체를 포괄한다. 유사한 의미가 용어 "사람화된 항원 결합 단편"에 적용되는 것으로 간주될 것이다.
본원 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 사람 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "사람 항체"는 사람, 예를 들어, 사람 생식계열 또는 체세포에서 또는 그러한 영역을 사용하여 생산된 라이브러리에서 발견되는 가변 및 임의로 불변 항체 영역을 갖는 항체를 지칭한다. "사람" 항체는 사람 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기, 예를 들어, 시험관 내 무작위 또는 부위 지정 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이(특히, 단백질의 소수 잔기, 예를 들어 단백질 잔기의 1, 2, 3, 4 또는 5에서 보존적 치환 또는 돌연변이를 포함하는 돌연변이)에 의해 도입된 돌연변이를 포함할 수 있다. 이들 "사람 항체"는 반드시 사람의 면역 반응의 결과로 생성될 필요는 없고, 오히려 이들은 재조합 수단(예를 들어, 파아지 디스플레이 라이브러리 스크리닝)을 사용하고/하거나 사람 항체 불변 및/또는 가변 영역을 암호화하는 핵산을 포함하는 유전자전이 동물(예를 들어, 마우스)에 의해 및/또는 유도 선택(예를 들어, 또는 US5565332에 기재된 바와 같음)을 사용하여 생성될 수 있다. 상기 용어는 또한 친화도 성숙화된 형태의 상기 항체를 포함한다. 본원 개시내용의 목적을 위해, 사람 항체는 또한 사람 항체 기원의 FR 또는 사람 FR의 컨센서스 서열 기원의 서열을 포함하는 FR을 포함하는 단백질을 포함하는 것으로 고려되고, 여기서 CDR 중 하나 이상은 예를 들어, 문헌(US6300064 및/또는 US6248516)에 기재된 바와 같이 무작위 또는 반-무작위 배정이다. 유사한 의미가 용어 "사람 항원 결합 단편"에 적용되는 것으로 간주될 것이다.
본원 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 합성사람화된 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 용어 “합성사람화된 항체”는 WO2007019620에 기재된 방법에 의해 제조된 항체를 지칭한다. 합성사람화된 항체는 항체의 가변 영역을 포함하고, 여기서 가변 영역은 신세계 영장류 항체 가변 영역 기원의 FR 및 비신세계 영장류 항체 가변 영역 기원의 CDR을 포함한다.
본원 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 영장류화될 수 있다. “영장류화된 항체”는 비-사람 영장류 (예를 들어, 시노몰구스 마카쿠에)의 면역화 후 생성된 항체 기원의 가변 영역(들)을 포함한다. 임의로, 비-사람 영장류 항체의 가변 영역은 사람 불변 영역에 연결시켜 영장류화된 항체를 생성한다. 영장류화된 항체를 생성하기 위한 예시적인 방법은 US6113898에 기재되어 있다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 키메라 항체 또는 단편이다. 용어 “키메라 항체” 또는 “키메라 항원 결합 단편”은 가변 도메인의 하나 이상이 특정 종 (예를 들어, 뮤린, 예를 들어, 마우스 또는 래트)로부터 기원하거나 특정 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체 또는 단편으로서, 상기 항체 또는 단편의 나머지가 또 다른 종 (예를 들어, 사람 또는 비-사람 영장류와 같은)으로부터 기원하거나 또 다른 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체 또는 단편을 지칭한다. 하나의 예에서, 비-사람 항체 (예를 들어, 뮤린 항체)로부터의 VH 및/또는 VL을 포함하는 키메라 항체 및 항체의 나머지 영역은 사람 항체 기원이다. 상기 키메라 항체 및 이의 항원 결합 단편의 생성은 당업계에 공지되어 있고 표준 수단에 의해 성취될 수 있다(예를 들어, 문헌(참조: US6331415; US5807715; US4816567 및 US4816397)에 기재된 바와 같이).
본원의 개시내용은 또한 예를 들어, WO2000034317 및 WO2004108158에 기재된 바와 같은 탈면역화된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 고려한다. 탈면역화된 항체 또는 단편은 하나 이상의 에피토프, 예를 들어, 제거되어 항체 또는 단백질에 대한 면역 반응을 나타낼 가능성을 감소시키는 B 세포 에피토프 또는 T 세포 에피토프를 갖는다. 예를 들어, 본원 개시내용의 항체는 하나 이상의 B 또는 T 세포 에피토프를 동정하기 위해 분석되고 에피토프 내의 하나 이상의 아미노산 잔기가 돌연변이되어 항체의 면역원성을 감소시킨다.
예시적인 사람 항체는 본원에 기재되어 있고, 3F7, 3F7G 및 친화도 성숙화된 3F7 및/또는 이의 가변 영역을 포함한다. 추가의 예시적인 항체는 항-FXII 항체 가라다시맙이다. 이들 사람 항체는 비-사람 항체와 비교하여 사람에서 감소된 면역원성의 이점을 제공한다. 예시적인 항체는 본원에 참조로 인용된 WO 2013/014092 및 WO 2017/173494에 기재되어 있다. 가변 영역을 포함하는 추가의 항체 및 단백질은 문헌(참조: WO2006/066878, 및 Ravon et al., Blood 86: 4134-43 (1995))에 기재되어 있다.
이특이적 항체
하나의 예에서, 본원 개시내용의 단백질은 이특이적 항체 또는 이의 단편일 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 단편은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태, 및 또 다른 표적에 결합할 수 있다. 이특이적 항체는 상이한 항원 또는 에피토프에 대해 특이성을 갖는 2개 유형의 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, 2개의 절반 항체)를 포함하는 분자이다. 예시적인 이특이적 항체는 동일한 단백질의 2개의 상이한 에피토프에 결합한다. 대안적으로 이특이적 항체는 2개의 상이한 단백질 상에 2개의 상이한 에피토프에 결합한다.
예시적인 “키 및 홀” 또는 “크놉 및 홀” 이특이적 단백질은 US5731168에 기재되어 있다. 하나의 예에서, 불변 영역(예를 들어, IgG4 불변 영역)은 T366W 돌연변이 (또는 크놉)를 포함하고, 불변 영역(예를 들어, IgG4 불변 영역)은 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이(또는 홀)을 포함한다. 또 다른 예에서, 제1 불변 영역은 T350V, T366L, K392L 및 T394W 돌연변이 (크놉)을 포함하고, 제2 불변 영역은 T350V, L351Y, F405A 및 Y407V 돌연변이 (홀)을 포함한다.
이특이적 항체를 생성하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있고 예시적인 방법은 본원에 기재되어 있다.
하나의 예에서, IgG 유형의 이특이적 항체는 IgG 항체를 생성하는 2개 유형의 하이브리도마를 융합하여 형성된 하이브리드 하이브리도마(쿠아드로마)에 의해 분비된다(문헌참조: Milstein C et al., Nature 1983, 305: 537-540). 또 다른 예에서, 항체는 공동-발현을 위해 관심 대상의 2개의 IgG를 구성하는 L 쇄 및 H 쇄의 유전자를 세포 내로 도입함으로써 분비될 수 있다(문헌참조: Ridgway, JB et al. Protein Engineering 1996, 9: 617-621; Merchant, AM et al. Nature Biotechnology 1998, 16: 677-681).
하나의 예에서, 이특이적 항체 단편은 상이한 항체로부터 유래된 Fab들을 화학적으로 가교 결합시킴에 의해 제조된다(문헌참조: Keler T et al. Cancer Research 1997, 57: 4008-4014).
하나의 예에서, Fos 및 Jun 등으로부터 유래된 류신 지퍼는 이특이적 항체 단편을 형성하기 위해 사용된다(문헌참조: Kostelny SA et al. J. of Immunology, 1992, 148: 1547-53).
하나의 예에서, 이특이적 항체 단편은 2개의 교차 scFv 단편을 포함하는 디아바디 형태로 제조된다(Holliger P et al. Proc. of the National Academy of Sciences of the USA 1993, 90: 6444-6448).
항체 단편
본원에 기재된 바와 같이, 본원 개시내용의 단백질은 항체의 불변 영역, Fc 또는 중쇄 불변 도메인 CH2 및/또는 CH3에 연결된 항원 결합 단편을 포함한다. 본원 개시내용에 사용하기 위한 예시적인 항원 결합 단편은 하기에 기재되어 있다.
단일-도메인 항체
일부 예에서, 본원 개시내용의 항체의 항원 결합 단편은 단일-도메인 항체(이는 용어 “도메인 항체” 또는 “dAb”와 상호교환적으로 사용되는)이거나 이를 포함한다. 단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인 모두 또는 일부를 포함하는 단일 폴리펩타이드 쇄이다.
디아바디, 트리아바디, 테트라바디
일부 예에서, 본원 개시내용의 항원 결합 단편은 문헌(참조: WO98/044001 및/또는 WO94/007921)에 기재된 것들과 같이 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 또는 보다 높은 등급의 단백질 복합체이거나 이를 포함한다.
예를 들어, 디아바디는 2개의 연합된 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 단백질이고, 각각의 폴리펩타이드 쇄는 구조 VL-X-VH 또는 VH-X-VL을 포함하고, 여기서 X는 단일 폴리펩타이드 쇄에서 VH 및 VL이 연합하도록하기에 불충분한 잔기를 포함하는 링커이거니 부재이고, 하나의 폴리펩타이드 쇄의 VH는 다른 폴리펩타이드 쇄의 VL에 결합하여 항원 결합 부위를 형성하고, 즉 하나 이상의 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 Fv 분자를 형성한다. VL 및 VH는 각각의 폴리펩타이드 쇄에서 동일할 수 있거나, VL 및 VH는 각각의 폴리펩타이드 쇄에서 상이하여 이특이적 디아바디(즉, 상이한 특이성을 갖는 2개의 Fv를 포함하는)를 형성할 수 있다.
단일쇄 Fv (scFv) 단편
당업자는 scFv가 단일 폴리펩타이드 쇄에서 VH 및 VL 영역 및 VH와 VL 사이에 상기 scFv가 항원 결합을 위해 목적하는 구조를 형성하도록 할 수 있는 (즉, 단일 폴리펩타이드 쇄의 VH 및 VL이 서로 연합하여 Fv를 형성하는) 폴리펩타이드 링커를 포함함을 알 것이다. 예를 들어, 링커는 12개 과량의 아미노산 잔기를 포함하고 (Gly4Ser)3는 scFv에 대해 보다 선호된 링커 중 하나이다.
하나의 예에서, 링커는 서열 SGGGGSGGGGSGGGGS를 포함한다.
본원의 개시내용은 또한 단일 시스테인 잔기가 VH의 FR 및 VL의 FR에 도입된 디설파이드 안정화된 Fv를 고려하고 상기 시스테인 잔기는 디설파이드 결합에 의해 연결되어 안정한 Fv를 생성한다.
대안적으로 또는 추가로, 본원의 개시내용은 이량체 scFv, 즉 비공유 또는 공유 결합에 의해, 예를 들어 류신 지퍼 도메인(예를 들어, Fos 또는 Jun으로부터 유래된)에 의해 연결된 2개의 scFv 분자를 포함하는 단백질을 포함한다. 대안적으로, 2개의 scFv는 예를 들어 US20060263367에 기재된 바와 같이 scFv 둘다가 항원을 형성하고 이에 결합하도록하기에 충분한 길이의 펩타이드 링커에 의해 연결된다.
중쇄 항체
일부 예에서, 본원 개시내용의 항원 결합 단편은 중쇄 항체이거나 이를 포함한다. 중쇄 항체는 이들이 중쇄를 포함하지만 경쇄를 포함하지 않는다는 점에서 많은 다른 형태의 항체와는 구조적으로 상이하다. 따라서, 이들 항체는 또한 “중쇄 유일 항체”로서 언급된다. 중쇄 항체는 예를 들어, 낙타 및 연골어류 (또한 IgNAR로 불리우는)에서 발견된다. 낙타로부터의 중쇄 항체 및 이의 가변 영역 및 이들의 제조 및/또는 단리 및/또는 사용 방법의 일반 기재는 특히 하기의 문헌에 기재되어 있다: WO 94/04678, WO 97/49805 및 WO 97/49805에 기재되어 있다. 연골어류로부터의 중쇄 항체 및 이의 가변 영역 및 이들의 제조 및/또는 단리 및/또는 사용 방법의 일반 기재는 특히 하기의 문헌에 기재되어 있다: WO2005/118629.
절반-항체
일부 예에서, 본원 개시내용의 항원 결합 단편은 절반 항체 또는 절반 분자이다. 당업자는 절반 항체가 단일 중쇄 및 단일 경쇄를 포함하는 단백질을 지칭함을 알 것이다. 용어 “절반 항체”는 또한 항체 경쇄 및 항체 중쇄를 포함하는 단백질을 포함하고, 여기서 항체 중쇄는 돌연변이되어 또 다른 항체 중쇄와 연합되는 것을 방지한다. 하나의 예에서, 절반 항체는 항체가 해리되어 단일 중쇄 및 단일 경쇄를 각각 함유하는 2개의 분자를 형성하는 경우에 형성된다.
절반 항체를 생성하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있고 예시적인 방법은 본원에 기재되어 있다.
하나의 예에서, 절반 항체는 세포에 발현을 위해 관심 대상의 IgG를 구성하는 단일 중쇄 및 단일 경쇄의 유전자를 도입함에 의해 분비될 수 있다. 하나의 예에서, 불변 영역 (예를 들어, IgG4 불변 영역)은 이종이량체 형성을 방지하기 위해 “키 또는 홀” (또는 “크놉 또는 홀”) 돌연변이를 포함한다. 하나의 예에서, 불변 영역(예를 들어, IgG4 불변 영역)은 T366W 돌연변이 (또는 크놉)을 포함한다. 또 다른 예에서, 불변 영역(예를 들어, IgG4 불변 영역)은 T366S, L368A 및 Y407V 돌연변이 (또는 홀)을 포함한다. 또 다른 예에서, 불변 영역은 T350V, T366L, K392L 및 T394W 돌연변이 (크놉)를 포함한다. 또 다른 예에서, 불변 영역은 T350V, L351Y, F405A 및 Y407V 돌연변이 (홀)를 포함한다. 예시적인 불변 영역 아미노산 치환은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링한다.
다른 항체 및 항체 단편
본원의 개시내용은 또한 다른 항체 및 항체 단편을 고려하고 예를 들어, 다음과 같다:
(i) 예를 들어, US5837821에 기재된 바와 같은 미니바디;
(ii) 예를 들어, US4676980에 기재된 바와 같은 이종접합체 단백질;
(iii) 예를 들어, US4676980에 기재된 바와 같은 화학적 가교 링커를 사용하여 생성된 이종접합체 단백질; 및
(iv) Fab3 (예를 들어, EP19930302894에 기재된 바와 같이).
안정화된 단백질
본원 개시내용의 단백질은 IgG4 불변 영역 또는 안정화된 IgG4 불변 영역을 포함할 수 있다. 용어 “안정화된 IgG4 불변 영역”은 Fab 아암(arm) 교환 또는 Fab 아암 교환을 겪게될 경향, 또는 절반 항체(half antibody)의 형성 또는 절반 항체를 형성하는 경향을 감소시키도록 변형된 IgG4 불변 영역을 의미하는 것으로 이해된다. “Fab 아암 교환”은 IgG4 중쇄 및 부착된 경쇄 (절반 분자)가 또 다른 IgG4 분자의 중쇄-경쇄 쌍으로 교체된, 사람 IgG4에 대한 단백질 변형의 한 유형을 지칭한다. 따라서, IgG4 분자는 2개의 다른 항원을 인지하는 2개의 다른 Fab 아암 (이특이적 분자를 유도)을 획득할 수 있다. Fab 아암 교환은 생체내에서 천연적으로 존재하고, 정제된 혈액 세포 또는 환원제, 예를 들어, 환원된 글루타티온에 의해 시험관내에서 유도될 수 있다.
하나의 예에서, 안정화된 IgG4 불변 영역은 카밧 시스템에 따른 힌지 영역의 241번 위치에 프롤린을 포함한다(문헌참조: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 1987 및/또는 1991). 상기 위치는 EU 넘버링 시스템에 따른 경첩 영역의 228번 위치에 상응한다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 2001] 및 [Edelman et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85, 1969). 사람 IgG4에서, 상기 잔기는 일반적으로 세린이다. 프롤린을 세린으로 치환한 후, IgG4 힌지 영역은 서열 CPPC를 포함한다. 이와 관련하여, 당업자라면 “힌지 영역”이 항체의 2개의 Fab 아암 상에 이동성을 부여하는 Fc 및 Fab 영역을 연결하는 항체 중쇄 불변 영역의 프롤린이 풍부한 부분이라는 것을 인지할 것이다. 상기 힌지 영역은 중쇄간 디설파이드 결합에 관여하는 시스테인 잔기를 포함한다. 이는 일반적으로 카밧의 넘버링 시스템에 따라 사람 IgG1의 Glu226으로부터 Pro243까지의 구간으로 정의된다. 다른 IgG 이소타입의 힌지 영역은 동일한 위치에 중쇄 간 디설파이드 (S-S) 결합을 형성하는 처음과 마지막 시스테인 잔기를 위치시킴으로써 IgG1 서열과 정렬될 수 있다(예를 들어, WO 2010/080538 참조).
약제학적 제형의 제조
본원 개시내용은 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태(즉, 활성화된 FXII; FXIIa)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 적어도 약 100 mg/ml의 단백질, 유기산 완충제, 비-이온성 계면활성제 및 아미노산 안정화제를 포함하는 액체 약제학적 제형을 제공하고, 여기서 상기 제형은 pH가 5.0 내지 6.5이고, 점도가 20℃에서 약 30mPa*s 미만이다.
약제학적 제형의 제조는 당업계에 공지된 표준 방법에 따라 및/또는 본원에 기재된 방법에 따라 수행된다.
유기산 완충제
하나의 예에서, 본원의 개시내용은 본원 개시내용의 적어도 100 mg/ml의 단백질 및 pH가 5.0 내지 6.5인 유기산 완충제를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다.
당업자는 본원의 개시내용에 사용하기에 적합한 유기산 완충제가 염기성 아미노 그룹이 없는 하나 이상의 카복실산 또는 산 페놀 그룹을 포함하는 것으로 이해할 것이다. 산성 그룹에 의해 제공되는 완충 능력에 더하여, 본원에서 사용되는 그러한 유기 완충제는 예를 들어 아미노 그룹에 의해 제공되는 추가의 이온화 가능한 작용기를 함유할 수 있다.
본원 개시내용에 사용하기에 적합한 완충제가 목적하는 pH에서 안정하고 효과적이고, 생성물의 제형화 및 저장 동안 노출될 조건 범위에 걸쳐 목적하는 pH를 유지하기에 충분한 완충 능력을 제공한다는 것이 당업자에게 자명할 것이다. 예를 들어, 안정한 완충제는 물리적 분해(예를 들어, 불용성 미립자 형성)의 산화에 의해 영향을 받지 않는 열 응집 안정성 (예를 들어, 동결/해동 또는 승온 동안에)을 제공하고 목적하는 다중분산성 (즉, 입자 분포)을 제공한다. 적합한 완충제는 금속 이온과 유해한 착물을 형성하지 않거나, 독성이 없거나, 막이나 다른 표면에 과도하게 침투, 용해 또는 흡수되지 않는다. 또한, 당업자는 이러한 완충제가 이들의 가용성 또는 유효성을 감소시키는 임으의 방식으로 조성물의 다른 성분과 상호작용하지 않아야 한다는 것을 인지할 것이다. 추가로, 약제학적 제형의 완충제는 투여에 안전하고, 제품의 저장 수명 동안 조성물의 다른 성분과 상용성이고, 대상체에게 투여하기에 허용되어야 한다.
본원 개시내용에 사용하기 위해 적합한 유기산 완충제는 당업자에게 자명할 것이고, 예를 들어, 히스티딘 완충제 (예를 들어, 히스티딘 클로라이드, 히스티딘 아세테이트, 히스티딘 설페이트 등), 글루타메이트 완충제(예를 들어, 일나트륨 글루타메이트 등), 시트레이트 완충제(예를 들어, 일나트륨 시트레이트-이나트륨 시트레이트 혼합물, 시트르산-삼나트륨 시트레이트 혼합물, 시트르산-일나트륨 시트레이트 혼합물 등), 석시네이트 완충제(예를 들어, 석신산-일나트륨 석시네이트 혼합물, 석신산-수산화나트륨 혼합물, 석신산-이나트륨 석시네이트 혼합물 등), 타르트레이트 완충제(예를 들면, 타르타르산-나트륨 타르트레이트 혼합물, 타르타르산-칼륨 타르트레이트 혼합물, 타르타르산-수산화나트륨 혼합물 등), 푸마레이트 완충제(예를 들어, 푸마르산-일나트륨 푸마레이트 혼합물, 푸마르산-이나트륨 푸마레이트 혼합물 등), 글루코네이트 완충제(예를 들어, 글루콘산-나트륨 글루코네이트 혼합물, 글루콘산-수산화나트륨 혼합물, 글루콘산-칼륨 글루코네이트 혼합물 등), 옥살레이트 완충제(예를 들면, 옥살산-나트륨 옥살레이트 혼합물, 옥살산-수산화나트륨 혼합물, 옥살산-칼륨 옥사레이트 혼합물 등), 락테이트 완충제(예를 들어, 락트산-나트륨 락테이트 혼합물, 락트산-수산화나트륨 혼합물, 락트산-칼륨 락테이트 혼합물 등) 및 아세테이트 완충제(예를 들어, 아세트산-나트륨 아세테이트 혼합물, 아세트산-수산화나트륨 혼합물 등)를 포함한다.
본원 개시내용의 하나의 예에서, 유기산 완충제는 히스티딘 완충제, 글루타메이트 완충제, 석시네이트 완충제 및 시트레이트 완충제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 예를 들어, 유기산 완충제는 글루타메이트 완충제이다. 예를 들어, 유기산 완충제는 히스티딘 완충제이다. 예를 들어, 유기산 완충제는 L-히스티딘이다.
완충제의 적합성을 평가하는 방법은 당업자에게 명백하고/하거나 본원에 기재될 것이며, 예를 들어 시차 주사 형광측정법 및 역학적 광 산란법을 포함한다.
비이온성 계면활성제
하나의 예에서, 본원의 개시내용은 본원 개시내용의 적어도 100 mg/ml의 단백질 및 비이온성 계면활성제를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다.
약제학적 제형에 첨가되는 계면활성제의 양은 당업자에게 자명할 것이고 응집을 억제하고(예를 들어, 표면 변성을 방지함으로써), 안정화를 증가시키고(예를 들어, 열적 및/또는 물리적 스트레스 동안), 제형에서 미립자의 형성(예를 들어, 눈에 보이지 않는 입자 형성)을 최소화하고 표면 흡착을 감소시키고/시키거나 단백질 재폴딩을 도와주는 양으로 존재한다.
본원 개시내용에 사용하기 위해 적합한 비이온성 계면활성제는 당업자에게 자명하고 예를 들어, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르(예를 들어, 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80), 폴리에틸렌-폴리프로필렌 공중합체, 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌-스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 모노라우릴 에테르, 알킬페닐폴리옥시에틸렌 에테르(Triton-X), 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체(Poloxamer, Pluronic), 나트륨 도데실 설페이트(SDS)를 포함한다.
본원 개시내용의 하나의 예에서, 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르 및 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 예를 들어, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트 (즉, 폴리소르베이트 80) 또는 폴리오깃에틸렌 소르비탄 모노라우레이트 (폴리소르베이트 20)이다.
아미노산 안정화제
하나의 예에서, 본원의 개시내용은 본원 개시내용의 적어도 100 mg/ml의 단백질 및 아미노산 안정화제를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다.
약제학적 제형에 첨가되는 아미노산 안정화제의 양은 당업자에게 자명할 것이고 열적 및/또는 물리적 스트레스(예를 들어, 동결/해동 또는 교반)를 감소시키고/시키거나 단백질의 안정성을 증진시키는 양으로 존재한다.
본원 개시내용에 사용하기에 적합한 아미노산은 당업자에게 자명할 것이고, 예를 들어 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 메티오닌, 트레오닌, 페닐알라닌, 티로신, 세린, 시스테인, 히스티딘, 트립토판, 프롤린, 아스파르트산, 글루탐산, 아르기닌, 리신, 오르니틴 및 아스파라긴 및 이들의 염을 포함한다.
본원 개시내용의 하나의 예에서, 아미노산은 프롤린, 아르기닌 및 메티오인으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 예를 들어, 아미노산 안정화제는 프롤린 또는 이의 염 형태이다. 예를 들어, 아미노산 안정화제는 아르기닌 또는 이의 염 형태이다. 예를 들어, 아미노산 안정화제는 프롤린 및 아르기닌 또는 이의 염 형태이다.
폴리올
하나의 예에서, 본원의 개시내용은 본원 개시내용의 적어도 100 mg/ml의 단백질 및 폴리올을 포함하는 약제학적 제형을 제공한다.
약제학적 제형에 첨가되는 폴리올의 양은 당업자에게 자명할 것이고 응집을 감소시키는데 효과적이고 항체 또는 이의 단편의 안정화를 증가시키는데 효과적인 양이다. 예를 들어, 본원 개시내용에 사용하기 위한 폴리올은 항체 또는 이의 단편을 컴팩트한 상태로 유지하는 것을 돕는다(예를 들어, 언폴딩 및/또는 응집을 감소시킨다).
본원 개시내용에 사용하기 위해 적합한 폴리올은 당업자에게 자명하고 예를 들어, 당 (환원 또는 비환원 당), 당 알콜 및 사카릭산을 포함한다. “환원 당”은 금속 이온을 환원시킬 수 있는 당 또는 단백질 및 다른 아미노 그룹 내 리신과 공유적으로 반응할 수 있는 헤미아세탈 그룹을 함유하는 당을 의미한다. 환원 당의 예는 예를 들어, 프럭토스, 만노스, 말토스, 락토스, 아라비노스, 크실로스, 리보스, 람노스, 갈락토스 및 글루코스를 포함한다. “비환원 당”은 어떠한 상기 성질을 갖지 않는다. 비환원 당의 예는 예를 들어, 슈크로스, 트레할로스, 소르보스, 멜레지토스 및 라피노스를 포함한다. 당 알콜의 예는 만니톨, 크실리톨, 에리트리톨, 트레이톨, 소르비톨 및 글리세롤을 포함한다. 본원 개시내용의 하나의 예에서, 폴리올은 소르비톨이다. 사카릭산의 예는 L-글루콘산 및 이의 금속 염을 포함한다
본원 개시내용의 약제학적 제형 및 단백질 검정
본원 개시내용의 고농도 약제학적 제형 및 단백질은 당업계에 공지된 방법 및/또는 하기 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 물리적 및 생물학적 활성 및/또는 안정성에 대해 용이하게 스크리닝된다.
인자 XII 및/또는 인자 XIIa로의 결합
본원의 개시내용으로부터 당업자에게는 본원 개시내용의 단백질이 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII(즉, 인자 XIIa)의 리간드 결합 도메인에 결합(또는 특이적으로 결합)한다는 것이 명백할 것이다. 단백질로의 결합을 평가하기 위한 방법은 예를 들어, 문헌(참조: Scopes (In: Protein purification: principles and practice, Third Edition, Springer Verlag, 1994))에 기재된 바와 같이 당업계에서 공지되어 있다. 상기 방법은 일반적으로 단백질을 표지화시키고 이를 고정화된 화합물과 접촉시킴을 포함한다. 비-특이적 결합된 단백질을 제거하기 위한 세척 후, 일정양의 표지 및 결과로서 결합된 단백질이 검출된다. 물론, 단백질은 고정화될 수 있고 인자 XII 및/또는 인자 XIIa에 결합하는 화합물은 표지될 수 있다. 패닝-유형 검정이 또한 사용될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 표면 플라스몬 공명 검정이 사용될 수 있다.
상기된 검정은 또한 인자 XII 및/또는 인자 XIIa 또는 이의 리간드 결합 도메인에 대한 본원 개시내용의 단백질의 결합 수준을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 결합 수준을 검출하는 방법은 당업자에게 자명하고/하거나 본원에 기재되어 있다. 예를 들어, 결합 수준은 바이오센서를 사용하여 결정된다.
인자 XII/XIIa 활성의 측정
단백질의 길항 활성을 평가하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 발색 검정을 포함한다. 억제 활성을 측정하기 위한 발색 검정은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Chromogenix S-2302TM; Diapharma).
하나의 예에서, 검정 완충제는 인자 XIIa와 예비 혼합한다. 본원 개시내용의 접합체가 첨가되고 이어서 발색 기질이 첨가된다. 발색 반응의 중단 후, 접합체의 억제 활성을 평가한다.
경쟁 결합 결정
항체 3F7 및/또는 3F7G (또는 본원에 기재된 임의의 다른 항체)의 결합을 경쟁적으로 억제하는 단백질을 결정하기 위한 검정은 당업자에게 자명할 것이다. 예를 들어, 3F7 또는 3F7G은 검출가능한 표지, 예를 들어, 형광성 표지 또는 방사성 표지에 접합된다. 이어서 표지된 항체 및 시험 단백질은 혼합하고 인자 XII 또는 이의 영역 또는 이를 발현하는 세포와 접촉시킨다. 이어서 표지된 3F7 또는 3F7G의 수준을 결정하고 표지된 항체가 단백질의 부재하에 인자 XII, 영역 또는 세포와 접촉되는 경우 결정된 수준과 비교한다. 표지된 3F7 또는 3F7G의 수준이 단백질의 부재와 비교하여 시험 단백질의 존재하에 감소되는 경우, 단백질은 3F7 또는 3F7G의 인자 XII로의 결합을 경쟁적으로 억제하는 것으로 고려된다.
임의로, 시험 단백질은 3F7 또는 3F7G에 대해 상이한 표지에 접합된다. 상기 대안적 표지화는 상기 시험 단백질의 인자 XII 또는 이의 영역 또는 세포로의 결합 수준의 검출을 가능하게 한다.
또 다른 예에서, 상기 단백질은 인자 XII, 영역 또는 세포를 3F7 또는 3F7G와 접촉시키기 전 인자 XII 또는 이의 영역 또는 이를 발현하는 세포에 결합하도록 허용된다. 단백질의 부재와 비교하여 단백질의 존재 하에 결합된 3F7 또는 3F7G의 양의 감소는 단백질이 3F7 또는 3F7G의 인자 XII로의 결합을 경쟁적으로 억제함을 지적한다. 상호 검정은 또한 표지된 단백질을 사용하고 먼저 3F7 또는 3F7G가 인자 XII에 결합하도록 하여 수행할 수 있다. 이 경우에, 3F7 또는 3F7G의 부재와 비교하여 3F7 또는 3F7G의 존재 하에서 인자 XII에 결합된 표지된 단백질의 감소된 양은 단백질이 3F7 또는 3F7G의 인자 XII로의 결합을 경쟁적으로 억제함을 지적한다.
FXIIa 아미도용해 활성
하나의 예에서, 본원 개시내용의 단백질은 사람 인자 XIIa의 아미도용해 활성을 억제한다. 본원 개시내용의 접합체의 아미도용해 활성을 결정하는 방법은 당업자에게 자명하고/하거나 본원에 기재되어 있다.
하나의 예에서, 시험관내 검정을 사용하여 FXIIa 아미도용해 활성 수준을 결정한다. 예를 들어, 아미도용해 활성은 본원 개시내용의 접합체 및 완충제의 존재하에 FXII의 절단 검정에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, FXII는 본원 개시내용의 접합체의 부재 또는 대조군의 존재하에 항온처리한다. 항온처리 및 검출 기질의 첨가 후, 아미도용해 활성을 광학 밀도에서의 변화 (즉, 색상 변화)로서 분광측정으로 결정한다. 아미도용해 활성을 효율적으로 억제하는 것으로 밝혀진 화합물을 FXII 활성을 억제하는 단백질로서 동정된다.
시각적 외관
본원 개시내용에 포함되는 약제학적 제형은 예를 들어 색상 및 선명도를 결정하기 위해 시각적 외관에 대해 평가된다.
역학적 광 산란
하나의 예에서, 입자 크기 분포는 역학적 광 산란(DLS)을 사용하여 평가된다. DLS는 브라운 운동을 기반으로 입자에서 산란된 광을 측정하고 입자와 제형 간의 굴절 지수의 차이에 의존한다. 예를 들어, 디지털 상관기를 사용하여 광 강도의 변동을 측정한다. 상관 함수(correlation function)는 입자 크기 분포를 계산하기 위해 분석 프로그램(예를 들어, 맬버른 제타사이저(Malvern Zetasizer) 소프트웨어)에 피팅한다. Z-평균 유체역학(hydrodynamic) 직경의 결정을 위해 큐물런트 (cumulant) 분석 및 스톡스 아인슈타인 방정식은 예를 들어 25°C에서 물의 점도(0.8872mPa*s)를 사용하여 수행된다. 다분산도 지수는 동일한 큐뮬런트 분석으로부터 수득될 수 있다. 피팅 양상은 크기 분포 대 강도의 플롯을 기반으로 평가된다: 양상은 단일 모드(즉, 하나의 피크) 또는 다중 모드(즉, 2개 이상의 피크)로 기재될 수 있다.
마이크로-유동 이미지화
하나의 예에서, 마이크로-유동 이미지화(MFI)를 사용하여 눈에 보이지 않는 입자를 평가한다. 예를 들어, 유체에 현탁된 입자의 디지털 이미지를 캡처하고 종횡비(AR) 및 강도와 같은 입자 파라미터에 대해 자동으로 분석한다. 크기(예를 들어, μm 단위) 및 수(즉, ml당 입자 수)도 얻을 수 있다. 상기 방법에 따르면 데이터는 형태학적으로 단백질성(즉, 원형) 및 비단백질성(즉, 기포 또는 실리콘 오일 액적과 같은 비단백질성 입자)로 분류되고 단백질성 입자에 대한 비단백질성 입자의 비율(즉, 원형 분수(circular fraction)을 결정할 수 있다. 낮은 원형 분수 값은 시험 항목이 대부분 비원형의 단백질성 입자일 가능성이 있는 입자로 구성되어 있음을 지적한다.
크기 배제 크로마토그래피
하나의 예에서 가용성 응집체는 단백질의 저분자량 및 고분자량 변이체와 임의의 불순물을 분리하는 크기 배제 크로마토그래피(SEC 또는 SE-HPLC)를 사용하여 평가된다. 이러한 방법에 따르면 결과는 응집 피크(AP)의 합과 분해 피크(DP)의 합으로 기재된다. 예를 들어, 본원 개시내용의 약제학적 제형의 정체는 주요 피크의 크로마토그래피 체류 시간을 참조 표준의 주요 피크 체류 시간과 비교함으로써 결정된다.
시차 주사 형광측정법(DSF)
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형의 열 안정성은 시차 주사 형광측정법(DSF)을 사용하여 평가된다. DSF는 언폴딩된(unfolded) 단백질에 우선적으로 결합하는 염료의 형광 변화를 측정하여 열로 유도된 단백질 변성을 모니터링하기 위해 실시간 PCR을 사용하는 형광 기반 검정이다. 예를 들어, 열 언폴딩 및 응집은 각각 온도의 함수로서 고유 단백질 형광 및 정적 광 산란의 변화에 의해 모니터링된다. 상기 방법에 따르면 고유 형광을 모니터링하여 열 전이의 중간 지점(Tm)과 용융 온도의 개시점(T개시점)을 결정한다. 응집 온도(Tagg)의 개시점은 예를 들어 266nm 및 473nm에서 정적 광 산란을 모니터링하여 결정된다. 약제학적 제형의 샘플은 예를 들어 0.5℃/분의 속도로 온도를 증가시키면서 온도 범위(예를 들어, 20-95℃)에 걸쳐 평가될 수 있다.
모세관 겔 전기영동
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형은 모세관 겔 전기영동(CGE)을 사용하여 불순물의 안정성 및/또는 총 축적에 대해 평가된다. 예를 들어 환원-CGE(R-CGE)와 비-환원-CGE(NR-CGE)를 둘다 수행할 수 있다. 하나의 예에서, R-GCE 및 NR-CGE는 모세관 길이가 예를 들어 입구에서 검출 윈도우까지 각각 20.2 cm 및 10 cm이고, 온도 제어가 예를 들어, 20 내지 40°C(±2°C)인 모세관 전기영동 시스템(예를 들어, Beckman P/ACE MDQ 또는 PA800) 및 예를 들어, 488nm 여기에서의 검출기를 사용하여 수행된다.
양이온 교환 크로마토그래피
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형은 양이온 교환 (CEX) 크로마토그래피를 사용하여 총 하전된 변이체에 대해 평가된다. CEX 크로마토그래피는 기본 조건에서 전체 전하에 따라 단백질을 분리한다. CEX 분석은 산성 및 염기성 변이체를 분리하여 생성물의 순도를 결정하는 데 사용된다. 관심 단백질이 결합하기 위해서는 컬럼의 수지에 부착된 기능성 그룹과 반대 전하를 가져야 한다. 단백질의 용출은 단백질과 수지 사이의 이온 상호 작용을 파괴시키는 이온 강도를 증가시킴으로써 달성된다. 크로마토그래피 기술은 이온 강도를 기준으로 샘플의 산성, 중성 및 염기성 변이체를 분리한다. 관심 대상의 피크는 280nm에서 UV 검출에 의해 관찰되고, 여기서, 산성 변이체가 먼저 용출된 다음 중성 및 염기성 변이체가 용출된다. 하나의 예에서, CEX 크로마토그래피는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 시스템(예를 들어, Dionex UltiMate 3000 BioRS (U) HPLC)을 사용함에 의해 수행된다.
깁스 자유 에너지(Gibbs Free Energy) (ΔG 경향 ; HUNK)
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형의 화학적 안정성 및 응집 거동은 깁스 자유 에너지 또는 ΔG경향 (HUNK) 분석에서의 변화에 의해 평가된다. ΔG경향 분석은 단백질 농도의 함수로서 단백질 언폴딩 및 단백질 응집의 ΔG 간의 관계를 측정한다. 응집의 부재하에, 단백질 언폴딩의 ΔG는 단백질 농도와는 무관하게 단일분자 과정이다. ΔG에서의 변화가 단백질 농도의 함수로서 관찰되는 경우, 이것은 응집의 존재를 나타낸다. 상기 방법에 따르면 응집이 발생하는 경우 단백질 언폴딩과 단백질 농도의 ΔG간에 2개의 가능한 관계가 있다:
1. ΔG경향은 단백질 농도와 함께 증가한다: 상기 관계는 고유 상태 응집의 존재를 지적한다 - 단백질 언폴딩의 ΔG는 단백질 농도의 함수로서 증가하거나(보다 양성이 된다)(즉, 고유 단백질 응집체의 농도는 단백질 농도의 함수로서 증가한다);
2. ΔG경향은 단백질 농도와 함께 감소한다: 상기 관계는 변성된 상태 응집의 존재를 지적한다 - 단백질 언폴딩의 ΔG는 단백질 농도의 함수로서 감소한다(덜 양성이 된다)(즉, 변성된 단백질 응집체의 농도는 단백질 농도의 함수로서 증가한다).
HUNK 실험에서 단백질 언폴딩의 ΔG는 변성제의 양이 증가할 때 단백질이 언폴딩됨으로써 단백질의 고유 형광 스펙트럼(즉, 트립토판 잔기에서 방출)의 변화를 측정하여 등온적으로 결정된다.
하나의 예에서, ΔG경향은 본원 개시내용의 약제학적 제형의 완충제 중에서 표적 농도로 희석된 다양한 농도 (예를 들어, 0.25, 0.6, 2.5, 6.0, 25.0 mg/ml)로 단백질 언폴딩의 ΔG를 측정함에 의해 결정된다. 각 농도 수준은 증가하는 변성제 농도(예를 들어, 우레아 농도 2.00-8.74M에 걸친 32점 곡선)로 적정되는 반면 형광 스펙트럼은 10nm의 슬릿 폭으로 300-500nm(여기 280nm)에서 측정된다. 350 nm/330 nm의 방출 스펙트럼 파장 비율은 각 샘플 농도 수준에 대한 우레아 농도에 대해 플롯팅되고 단백질 언폴딩의 ΔG는 2 상태(즉, 하나의 전이) 모델 피팅을 사용하여 결정된다. 결정된 ΔG 값은 샘플 농도에 대해 플롯팅하여 ΔG경향을 결정한다.
오스몰 농도
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형의 오스몰 농도를 평가한다.
550 nm에서 흡광도에 의해 평가된 탁도
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형의 탁도를 평가한다. 예를 들어, , 탁도는 분광 광도측정기를 사용하고 550 nm에서 흡광도를 측정하여 평가한다.
주사능
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형의 주사능을 평가한다. 예를 들어, 제형은 2ml 주사기, 10ml 주사기로 배출되거나 사전 배출 대조군으로서 처리되지 않은 상태로 남아 있다. 상기 방법에 따르면, 플런저가 바닥에 도달하고 30N의 힘에 도달할 때까지 주사기 플런저는 0.2 in/min의 선형 속도로 2ml 주사기를 통해, 및 0.6 in/min의 속도로 10ml 주사기를 통해 밀어진다. 브레이크 루스(Break-loose) (BF) 및 글라이드(glide) (GF) 힘은 배출 동안에 측정되고, 적용 적합성을 평가하기 위해 사용된다. 브레이크-루스 힘은 플런저의 이동 (2 ml 주사기에 대해 초기 0.3 mm 및 10 ml 주사기에 대해 0.5 mm)을 개시하기 위해 요구되는 힘을 기재한다. 글라이드 힘 맥스(Glide force Max)는 플런저 이동을 지탱하기 위해 요구되는 최대 힘을 언급한다. 최대 힘 값은 힘이 30N에 도달하는 지점 이전에 브레이크 루스 영역의 말단에서 글라이드 힘 영역의 말단까지(2ml 주사기에 대해 26mm, 10ml 주사기에 대해 24mm)까지 측정된다.
약제학적 제형의 사용
본원에서 논의된 바와 같이, 본원 개시내용은 대상체에게 본원 개시내용의 약제학적 제형을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 하나의 예에서, 본원의 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다.
본원의 개시내용은 대상체에게 본원 개시내용의 약제학적 제형을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 본원 개시내용의 약제학적 제형의 용도를 제공한다. 하나의 예에서, 본원의 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 본원 개시내용의 약제학적 제형의 용도를 제공한다.
본원의 개시내용은 또한 대상체에서 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성을 길항시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 대상체에게 본원 개시내용의 고농도 제형을 투여함을 포함한다. 하나의 예에서, 본원의 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 인자 XII 및/또는 활성화된 인자 XII의 활성을 길항시키는 방법을 제공한다.
하나의 예에서, 질환 또는 병태는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애이다.
하나의 예에서, 대상체는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 앓는다. 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애는 유전되거나 후천적일 수 있다. 예를 들어, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 앓고 있는 대상체는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 증상을 앓았다.
하나의 예에서, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애는 정맥, 동맥 또는 모세혈관 혈전 형성(예를 들어, 뇌졸중, 심근 경색, 심부 정맥 혈전증(DVT), 문맥 혈전증, 신정맥 혈전증, 경정맥 혈전증, 대뇌동 혈전증, 버드 키아리(Budd-Chiari) 증후군, 파렛 슈로에터(Paget-Schroetter) 질환 또는 무증상 뇌 허혈), 심장의 혈전 형성, 혈전색전증, 사람 또는 동물 대상체의 혈액과 인공 표면과 접촉하는 동안 및/또는 후에 혈전 형성, 파종성 혈관내 응고(DIC), 심방세동, 급성관상동맥증후군(ACS), 죽상경화성 질환, 재관류를 동반한 허혈성 뇌졸중, 허혈-재관류 손상(외상, 장기 이식과 같은 IRI) 관련 질환, 신경외상성 장애 (예를 들어, 외상성 뇌 손상, 척수 손상), 신경 염증성 질환(예를 들어, 다발성 경화증), 간질성 폐질환(예를 들어, 특발성 폐섬유증(IPF)), 폐렴, 섬유소용해, FXII/FXIIa-유도 키닌 형성 관련 질환(예를 들어, 유전성 혈관부종(HAE)), 패혈증, FXII/FXIIa-매개 보체 활성화와 관련된 질환, 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 기관 및 세포 이식, 겸상 세포 질환 및 증가된 혈관 투과성과 관련된 병태로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형은 대상체에서 질환 또는 병태의 중증도를 감소시키는 양으로 대상체에게 투여된다.
하나의 예에서, 대상체는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 발병할 위험에 처해 있다. 대상체는 대조군 집단 보다 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 발병할 위험이 보다 높은 경우 위험에 처해 있다. 대조군 집단은 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 앓지 않거나 가족력을 갖는 일반 집단 (예를 들어, 연령, 성별, 인종 및/또는 민족성에 의해 매칭시킴)에서 무작위로 선택된 하나 이상의 대상체를 포함할 수 있다. 대상체는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애와 연관된 “위험 인자”가 대상체와 연관되어 있는 것으로 밝혀진 경우 질환 또는 병태에 대한 위험에 처한 것으로 고려될 수 있다. 위험 인자는 대상체의 개체군에 대한 통계학적 또는 역학적 연구를 통해 특정 질환과 연관된 임의의 활성, 형질, 사건 또는 특성을 포함할 수 있다. 대상체는 따라서 기저 위험 인자를 동정하는 연구가 구체적으로 대상체를 포함하지 않은 경우라도 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애에 대한 위험에 처해 있는 것으로서 분류될 수 있다.
하나의 예에서, 대상체는 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 발병할 위험에 처해 있고, 본원 개시내용의 약제학적 제형은 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 증상의 개시 전 또는 개시 후 투여된다. 하나의 예에서, 약제학적 제형은 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 증상 개시 전 투여된다. 하나의 예에서, 약제학적 제형은 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 증상 개시 후 투여된다. 하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형은 위험에 처한 대상체에서 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 증상 중 하나 이상을 완화시키거나 감소시키는 용량으로 투여된다.
본원 개시내용의 방법은 대상체에서 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 임의의 형태에 용이하게 적용될 수 있다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 방법은 당업계에 공지되고/되거나 본원에 기재된 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 임의의 증상을 감소시킨다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 대상체에서 장애의 증상에서의 “감소”는 장애를 또한 앓지만 본원에 기재된 방법을 사용한 치료를 받지 않은 또 다른 대상체와 비교된다. 이는 반드시 2명의 대상체를 병행하여 비교할 필요는 없다. 오히려 집단 데이터를 신뢰할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법으로 치료받지 않은 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 앓는 대상체의 집단(임의로, 예를 들어, 연령, 체중, 인종이 치료된 대상체와 유사한 대상체의 집단)을 평가하고, 평균 값은 본원에 기재된 방법으로 치료받은 대상체 또는 대상체의 집단의 결과와 비교한다.
본원 개시내용의 방법은 또한 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 예방 또는 치료를 위한 또 다른 치료학적으로 유효한 제제의 투여와 함께 본원 개시내용에 따른 약제학적 제형의 공동 투여를 포함할 수 있다.
하나의 예에서, 본원 개시내용의 약제학적 제형은 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애 또는 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태의 길항 활성을 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되거나 개발 중에 있는 적어도 하나의 추가의 공지된 화합물 또는 치료학적 단백질과 함께 사용된다. 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 치료에 현재 사용되는 화합물은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 비타민 K 길항제 (예를 들어, 와파린), 헤파린 (예를 들어, 분획되지 않거나 저분자량의 헤파린), 합성 펜타사카라이드 (예를 들어, 폰다파리눅스 및 이드라파리눅스), 인자 Xa 및 트롬빈의 직접적인 억제제(예를 들어, 리바록사반, 레피루딘, 데시루딘 및 다비가트란), 사이클로옥시게나제 억제제(예를 들어, 아스피린, 로페콕십 및 발데콕십), ADP-수용체 길항제(클로피도그렐, 프라수그렐), 프로테아제-활성화된-수용체-1 억제제 (즉, PAR1), αIIbβ3-인테그린 억제제(예를 들어, 아브식시맙 및 엡티피바티드) 및 스타틴(예를 들어, 로바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴 및 플루바스타틴)을 포함한다.
이전의 기재로부터 자명한 바와 같이, 본원의 개시내용은 대상체의 동시 치료학적 치료 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 제1 제제 및 제2 제제를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하고, 여기서, 상기 제1 제제는 본원 개시내용의 약제학적 제형이고, 제2 제제는 또한 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애의 예방 또는 치료를 위한 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 어구 "동시 치료학적 치료”에서와 같이 용어 “동시”는 제2 제제의 존재 하에 제1 제제를 투여하는 것을 포함한다. 동시 치료학적 치료 방법은 제1, 제2, 제3 또는 추가의 제제를 동시 투여하는 방법을 포함한다. 동시 치료학적 치료 방법은 제1 제제 또는 추가의 제제가 제2 제제 또는 추가의 제제 존재 하에 투여되는 방법도 포함하고, 여기서 상기 제2 제제 또는 추가의 제제는 예를 들어, 이전에 투여되었을 수도 있다. 병용 치료학적 치료는 서로 다른 행위자에 의해 단계적으로 실행될 수 있다. 예를 들어, 한 행위자가 제1 제제를 대상체에 투여할 수 있고, 두번째 행위자가 제2 제제를 대상체에 투여할 수 있으며, 상기 투여 단계는 제2 제제 (및/또는 추가의 제제)의 존재 하에 제1 제제 (및/또는 추가의 제제)의 투여를 하는 한, 동시에, 또는 거의 동시에, 또는 다른 시간에 수행될 수 있다. 상기 행위자와 대상체는 동일한 실체 (예를 들어, 사람)일 수 있다.
키트 및 기타 물질 조성
본원 개시내용의 또 다른 예는 상기된 바와 같이 질환 또는 병태의 치료 또는 예방을 위해 유용한 본원 개시내용의 약제학적 제형을 포함하는 키트를 제공한다.
하나의 예에서, 키트는 (a) 본원 개시내용의 약제학적 제형을 포함하는 컨테이너; 및 (b) 대상체에서 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 지침서를 갖는 팩키지 삽입물을 포함한다.
하나의 예에서, 키트는 (a) 본원 개시내용의 적어도 하나의 약제학적 제형; (b) 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는데 키트를 사용하기 위한 지침서; 및 (c) 임의로 적어도 하나의 추가의 치료학적 활성 화합물 또는 약물을 포함한다.
본원 개시내용의 실시예에 따르면, 상기 팩키지 삽입물은 컨테이너 상에 존재하거나 이에 부착되어 있다. 적합한 컨테이너는 예를 들어, 병, 바이알, 주사기등을 포함한다. 컨테이너는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로부터 형성될 수 있다. 컨테이너는 혈액 응고 장애를 치료 또는 예방하는 데 효과적인 조성물을 보유하거나 포함하고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 컨테이너는 정맥 용액 백 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 바이알일 수 있음). 표지 또는 팩키지 삽입물은 상기 조성물이 치료에 적격인 대상체, 예를 들어, 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애를 갖거나 걸리기 쉬운 대상체의 치료에 사용됨을 지적하고, 약제학적 제형 및 임의의 다른 약물의 투여량 및 간격에 관한 구체적인 지침이 제공되어 있다. 상기 키트는 필터, 바늘 및 주사기를 포함한 상업적 관점 및 사용자 관점에서 바람직한 기타 물질을 추가로 포함할 수 있다. 본원 개시내용의 일부 예에서, 제형은 주사가능한 장치(예를 들어, 주사가능한 주사기, 예를 들어, 사전 채워진 주사가능한 주사기)에 존재할 수 있다. 주사기는 예를 들어 자동주사기(예를 들어, 펜 주사기 장치)를 포함하는 단일 바이알 시스템으로서 개별 투여에 적합할 수 있다. 하나의 예에서, 주사 가능한 장치는 임의로 사용 및 투여 지침이 있는 미리 채워진 펜 또는 다른 적합한 자동 주사 가능한 장치이다.
상기 키트는 임의로 추가로 제2 약물을 포함하는 컨테이너를 포함하고, 여기서, 상기 약제학적 제형은 제1 약물이고 상기 제품은 추가로 유효량의 제2 약물을 사용하여 대상체를 치료하기 위한 팩키지 삽입물에 대한 지침서를 추가로 포함한다. 제2 약물은 상기 제시된 치료학적 단백질일 수 있다.
하나의 예에서, 본원 개시내용은 본원 개시내용의 제형을 포함하는 사전충전형 주사기 또는 자동주사기를 제공한다. 하나의 예에서, 사전충전형 주사기는 플런저를 갖는 유리 루어 주사기이다.
하나의 예에서, 본원 개시내용은 본원 개시내용의 제형을 포함하는 바이알을 제공한다.
본원의 개시내용은 하기의 비제한적인 예를 포함한다.
실시예
실시예 1: 제형의 부형제의 물리적 및 화학적 안정성
제형 부형제를 평가하기 위해 생물물리학적 및 부형제 스크리닝 연구와 용해도 연구를 수행하였다. 제형화 전 실험은 모노클로날 항-인자 XII 항체(본원에 기재된 친화성 성숙화된 3F7 또는 3F7aff)를 사용하여 수행하였다.
기준선 생물물리학적 스크리닝 연구
10개 완충제 유형(F1-F10, 표 1)에서 항-인자 XII 항체의 물리적 및 열 안정성을 평가하였다. 용량 희석 및 320nm 기준선 보정을 사용하여 각 제형에 대해 100mg/ml의 농도 목표를 달성하였다.
제형의 단백질 농도는 흡광도 (A280/320)를 측정함에 의해 결정하였고, pH는 보정된 pH 측정기를 사용하여 평가하였다.
pH 5.5(F1)에서 20mM 글루타메이트 완충제로 완충제 교환한 경우, 100mg/ml로 제형화된 항체 용액은 광범위한 완충제 교환 후에도 pH 목표(측정된 pH는 5.65)에 도달하지 못하는 것으로 관찰되었다.
항체 용액의 입자 분포 및 열 안정성은 역학적 광 산란 (DLS) 및 시차 주사 형광측정법(DSF)에 의해 주사하였다.
역학적 광 산란은 광학 품질 플라스틱 큐벳에서 최소 100μl의 희석되지 않은 샘플을 사용하여 수행하였다. 각각의 샘플 측정을 위해, 25°C(맬버른의 자동 감쇠 선택 설정 활용)에서 각 측정 시작 시 3분의 평형 상태에서 5회 연속 스캔을 획득하였다. 단백질 분석 알고리즘(Malvern Zetasizer 소프트웨어)은 데이터 처리를 위한 모델로서 사용하였다. Z-평균 유체역학 직경은 25°C에서 물의 점도(0.8872mPa*s)를 사용하여 큐물런트 분석 및 스톡스 아인슈타인 방정식으로부터 계산하였다. 다분산도 지수(PDI)는 동일한 큐뮬런트 분석으로부터 수득하였다. 피팅 양상은 크기 분포 대 강도의 플롯을 기반으로 평가된다: 양상은 단일 모드(즉, 하나의 피크) 또는 다중 모드(즉, 2개 이상의 피크)로 기재될 수 있다.
DLS 연구에서 Z-평균 직경 및 PDI와 관련하여 제형을 비교하였다(표 1). 석시네이트(F2-F4) 및 시트레이트 완충제(F8-F10)에서 Z-평균에 대해 pH와 관련된 명확한 경향이 관찰되었고, 여기서 Z-평균 값은 pH가 증가함에 따라 증가하였다. 그러나 Z-평균 값에 대해 관찰된 경향은 PDI의 변화와 일치하지 않았고, 이는 상승된 Z-평균 값이 보다 높은 pH에서 항체 분자 사이의 더 강력하고 비특이적인 정전기적 상호작용과 관련이 있음을 시사한다. 석시네이트 및 시트레이트 완충제에서 제형화된 샘플과 대조적으로, Z-평균 값의 변화 없이 히스티딘 완충제(F5-F7)에서 PDI에 대해 pH의 함수로서 약간의 상향 경향이 관찰되었고, 이는 석시네이트 및 시트레이트 제형에 비해 보다 낮았다. 히스티딘 완충제에 대한 것과 유사한 결과가 글루타메이트 완충제(F1)에 대해 관찰되었고, 여기서, PDI 상승(석시네이트 및 시트레이트 완충제와 비교) 및 낮은 Z-평균이 측정되었다.
DSF 실험은 언체인드 랩스 UNlt을 사용하여 수행되었다. 열 안정성 및 가용성 응집체의 형성에 대해 시험된 제형을 스크리닝하였다. 열 언폴딩 및 응집은 각각 온도의 함수로서 고유 단백질 형광 및 정적 광 산란의 변화에 의해 모니터링하였다. 고유 형광을 모니터링하여 열 전이의 중간 지점(Tm)과 용융 온도의 개시점(T개시점)을 결정하였다. 응집 온도(Tagg)의 개시점은 266nm 및 473nm에서 정적 광 산란을 모니터링하여 결정하였다. 각 DSF 분석은 100 mg/ml의 단백질 농도에서 8.8 μl를 사용하여 3회 수행하였다. 0.5 °C/분의 속도로 온도를 증가시키면서 온도 범위(20-95 °C)에서 샘플을 분석하였다.
DSF 분석에서 열 안정성 및 가용성 응집체 형성을 평가하였다. 모든 시험된 제형에 대해 결정된 Tm, T개시점, 및 Tagg 값은 표 1에 나타낸다.
글루타메이트 및 히스티딘 완충제에 대해 수득된 T개시점 및 Tm 값은 석시네이트 및 시트레이트에 비해 약간 보다 높았고, 제형 F1 및 F5-F7의 보다 높은 열 안정성을 지적한다. 열 안정성에서 어떠한 유의적 차이는 상이한 pH 값에 대해 관찰되지 않았다. 266 nm 및 473 nm에서의 개시 응집 온도 및 정적 광 산란 강도는 글루타메이트(F1) 및 히스티딘 완충제에 대해 보다 높은 Tagg 값 및 보다 낮은 SLS 강도를 보여주었다.
표 1
생물물리학적 스크리닝에서 결과의 요약
Figure pct00002
(F5-F7)은 석시네이트 (F2-F4) 및 시트레이트 (F8-F10)와 비교되고 항체의 보다 높은 열 응집 안정성을 지적하였다. 열 응집 안정성에서 어떠한 유의적 차이는 소정의 완충제에서 상이한 pH 값에 대해 관찰되지 않았다.
DLS 및 DSF 결과에 기초하여 pH 5.5에서 글루타메이트 및 히스티딘을 함유하는 제형은 항-FXII 항체의 열 및 응집 안정성에 가장 양성의 효과를 나타냈다.
부형제 스크리닝
기준선 생물물리학적 스크리닝을 기준으로 pH 5.5에서 3가지 다른 완충제(글루타메이트, 석시네이트 및 히스티딘) 중 4가지 다른 부형제(페닐알라닌, 프롤린, 아르기닌 및 소르비톨)가 100 mg/ml의 농도에서 항체의 안정성에 미치는 영향을 평가하기 위해 12개 제형(F11-F22, 표 2)을 평가하였다. 추가로, pH 5.5에서 글루타메이트 및 히스티딘을 함유하는 제형을 평가하였다(F23). 항체 안정성에 대한 5개의 다른 부형제의 효과는 상기된 방법을 사용하여 DLS 및 DSF로 분석하였다.
DLS 연구에서, (±) 부형제가 있는 제형과 없는 제형 사이에 Z-평균 및 PDI에서 유의적인 차이가 관찰되지 않았다(표 2). 유사하게, 시험된 완충제 간에 인지할만한 차이가 관찰되지 않았다. Z-평균 및 PDI에 대한 가장 인지할만한 효과는 석시네이트 완충제(F17)에서 아르기닌에 대해 관찰되었고, 여기서 2개의 파라미터는 다른 부형제에 비해 감소되었다. 전반적으로, 시험된 제형 간에 입자 크기 분포의 유의적인 차이는 관찰되지 않았다.
DSF 분석에 의해 시험된 제형에 대해 결정된 T개시점 및 Tm이 표 2에 제시되어 있다. T개시점 및 Tm 값의 비교는 페닐알라닌, 프롤린 및 소르비톨을 함유하는 모든 제형에 대해 유사한 열 안정성을 보여주었다. 히스티딘 및 글루타메이트를 함유하는 제형 F23에 대해 유사한 안정성이 관찰되었다. 최저 열 안정성은 아르기닌을 함유하는 제형에서 관찰되었다. 수득된 결과의 비교는 다른 시험된 제형과 비교하여 석시네이트 및/또는 아르기닌을 함유하는 모든 제형에서 항체의 상승된 열 응집을 보여주었다. 히스티딘 및 글루타메이트를 함유하는 제형 F23에 대해 유사한 결과가 수득되었다.
DLS 및 DSF 결과에 기초하여 석시네이트 완충제는 상승된 온도에서 언폴딩된 단백질의 응집 경향 증가로 인해 추가 조사에서 제외되었다. 시험된 제형에서 소르비톨 및 페닐알라닌의 존재는 나타나지 않았다.
표 2
부형제 스크리닝에서 결과의 요약
Figure pct00003
프롤린에 비해 항체 안정성에 상당한 영향을 미치므로 2개 부형제 모두 추가 조사에서 제외되었다.
용해도 연구
부형제 스크리닝 연구의 결과에 기초하여 ≥200mg/ml의 농도에서 항체의 용해도를 평가하기 위해 6개 제형을 평가하였다. 시험된 제형 중 2개는 pH 5.5에서 20mM 히스티딘(F23)이 있고 20mM 히스티딘이 없는(F24) 150mM 글루타메이트 완충제를 함유하였다. 4개의 다른 제형은 부형제로서 프롤린 또는 아르기닌과 함께 pH 5.5의 글루타메이트 또는 히스티딘 완충제를 함유하였다(F12, F13, F20, F21; 표 3). 2개 세트의 샘플을 준비하고 외관을 평가하였다. 6개의 대조군 샘플의 첫 번째 세트는 100mg/ml로 농축시켰다. 6개 용해도 샘플의 제2 세트는 ≥ 200 mg/ml의 항체 농도로 농축시켰다.
시각적 외관(즉, 색상, 투명도 및 미립자)은 GTM-0033-03, "시각적 평가에 의한 외관"에 따라 평가하였다. 관찰된 입자의 유형은 생성물 또는 비생성물 관련으로 판단되었다. 대조군 용액(즉, 100mg/ml)은 약간 황색이인 반면 농축 용해도 용액(즉, 200 mg/ml)은 높은 단백질 농도로 인해 약간 갈색이었다. 대조군 및 농축 용해도 용액은 각각 약간 흐릿하고 흐릿한 액체였으며 생성물 관련 가시적 입자가 없었다. 외관 시험을 수행한 후, 농축된 용해도 용액(200 mg/ml)을 상응하는 완충제에서 100 mg/ml(용해도 용액)로 희석하고 위에서 기술한 바와 같이 DLS 및 하기된 SEC 방법에 의해 대조군 샘플로 시험하였다.
DLS 분석은 각 대조군 및 용해도 용액 세트에 대해 수행되었고 결과는 표 3에 나타낸다. 모든 대조군 및 용해도 용액에 대해 수득된 결과는 유사한 Z-평균 및 PDI(≤ 0.13) 값을 보여주었다.
크기 배제 크로마토그래피(SEC)는 Dionex UltiMate 3000 BioRS HPLC 시스템을 사용하여 자연 조건에서 고분자량 종, 주요 단량체 및 단편을 분리하여 수행하였다. 표 3에 나타낸 바와 같이, 대조군과 비교하여 0.4-1.0%까지 용해도 용액에서 고분자량 종의 약간 증가가 있었다. 용해도 샘플과 대조군 샘플 간에 단편 퍼센트에서 유의적인 변화가 관찰되지 않았다.
요약하면, 농축된 샘플(≥200mg/ml)은 가용성을 유지하였고, 모든 시험된 제형에 대해 항체 안정성에 대한 음성 영향이 관찰되지 않았다.
표 3
용해도 스크리닝에서 결과의 요약
Figure pct00004
계면활성제 스크리닝
항체 가용성 및 불용성 응집체 형성에 대한 비이온성 계면활성제의 보호 효과는 동결-해동 및 교반 연구에서 폴리소르베이트 80(PS-80), 폴리소르베이트 20(PS-20) 및 폴록사머 188에 대해 평가하였다. 100 mg/ml의 항체 농도를 갖는 총 14개의 제형을 동결-해동 및 교반 연구에서 스크리닝하였다(F21 및 F24 내지 F36; 표 4). 동결-해동 연구를 위해, 모든 제형은 -75±10 °C에서 3회 동결-해동 사이클에 적용하였다. 샘플은 최소 1시간 동안 -75±10°C에서 저장한 다음 실온에서 1시간 동안 해동하였다. 각각의 대조군 샘플은 5±3 °C에서 항온처리함에 의해 제조하였다. 교반 연구를 위해 제형을 실험실 회전기(약 50rpm)에서 약 50시간 동안 실온에서 교반하였다. 각각의 대조군 샘플은 5±3 °C에서 항온처리함에 의해 제조하였다. 모든 샘플은 상기된 바와 같이 외관, 크기 배제 크로마토그래피 및 차등 광 산란에 의해 분석하였다.
동결-해동 및 교반 연구 둘다에서 스트레스를 받은 모든 샘플은 대조군 샘플과 비교하여 색상(즉, 약간 노란색), 투명도(즉, 투명) 및 입자 함량(즉, 눈에 보이는 입자가 없음) 측면에서 변화되지 않았다.
DLS 결과는 PDI의 증가가 대조군 샘플과 비교하여 F/T 및 교반 스트레스를 받은 계면활성제가 없는 히스티딘 및 글루타메이트 제형에서 나타남을 보여주었다. 대조군에 비해 F21 교반 샘플에서 PDI의 가장 높은 증가(0.09까지)가 관찰되었고, 이는 스트레스를 받은 샘플에 입자가 존재함을 시사할 수 있다. 계면활성제를 함유한 임의의 동결-해동 및 교반 샘플에 대해 유사한 차이가 관찰되지 않았다. 스트레스를 받은 샘플에 대해 측정된 Z-평균 및 PDI 값은 대조군과 유사하였다.
상응하는 대조군과 비교하여 동결-해동 및 교반 샘플에 대해 SEC에 의해 응집체 농도의 유의적인 변화가 검출되지 않았다. 단량체 피크의 면적 퍼센트는 97.5%에서 98.4% 범위였고, 고분자량 종의 면적 퍼센트는 1.0%에서 1.9% 범위였고, 저분자량 종의 면적 퍼센트는 0.6%에서 0.8% 범위였다.
샘플에 존재하는 입자의 크기, 농도 및 형태를 특성화하기 위해 자동화 피펫 시스템(Automated Pipet System)이 있는 MFI 5200을 사용하여 마이크로-유동 이미지화 (MFI)로 육안으로 보이지 않는 입자를 측정하였다. 700 또는 1000 μl의 순수한 샘플을 사용하여 단일 측정으로 분석을 수행하고 ≥2 μm, ≥5 μm, ≥10 μm 및 ≥25 μm 크기 입자(1-100 μm 크기 입자의 경우)에 대한 ml당 누적 계수를 결정하였다. 또한 종횡비(AR)가 ≥0.85인 ≥5 μm 크기의 입자를 MFI 소프트웨어(MVAS) 내의 형태 분류 파라미터를 사용하여 처리하여 원형 분수를 결정하였다. 낮은 원형 분수 값은 시험 항목이 대부분 비원형의 단백질성 입자일 가능성이 있는 입자로 구성되어 있음을 지적한다.
동결-해동 및 교반 스트레스를 받은 대조군 샘플(F21 및 F24)에서 계면활성제의 부재는 육안으로 보이지 않는 입자 형성에 상당한 영향을 미치는 것으로 나타났다. 입자 수의 증가는 계면활성제가 없는 제형 둘다에 대해 관찰되었다. 유일한 예외는 교반 스트레스를 받는 제형 F24였고, 이는 대조군 샘플에 필적하는 입자 수를 나타냈다. 대조군 샘플에 대해 얻은 결과와 대조적으로, 동결-해동 및 교반 스트레스를 받은 샘플에 존재하는 임의의 유형의 계면활성제는 육안으로 보이지 않는 입자의 형성을 상당히 억제하였다. 억제 효과는 시험된 모든 계면활성제에 대해 유사하였지만, PS-80을 함유하는 제형에 대해 관찰된 입자의 감소가 가장 유익하였다. 또한 보호 효과는 0.02%보다 0.05%의 PS-80 농도에서 약간 더 우수하였다.
표 4
동결-해동 및 교반 연구에 사용된 제형
Figure pct00005
실시예 2: 실험 연구의 디자인
기준선 생물물리학적 스크리닝, 부형제 스크리닝, 용해도 및 계면활성제 스크리닝 연구의 결과를 사용하여 본 연구를 위한 제형 완충제를 디자인하였다. 총 30개 제형은 항체의 가속화된 안정성에 대해 시험하였다(표 5). 제형 FDOE12는 중앙 지점으로서 선택하였다(100 mg/ml 항체, 20 mM 글루타메이트, 100 mM 아르기닌, 0.05% PS-80, pH 5.5). 추가로, 본래의 제형(F본래의)은 대조군으로서 사용하였다. 샘플은 5 °C 및 40 °C에서 저장하고, 시간 제로, 2주 및 4주에 분석하였다.
표 5
실험 연구의 디자인에 사용된 제형
Figure pct00006
하기의 분석은 선택된 샘플에 대해 수행하였다:
· 시간-제로: 오스몰 농도, pH, UV, 외관 및 ΔG경향 HUNK 분석
· 2주에: 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 모세관 겔 전기영동(환원(R-CGE) 및 비환원(NR-CGE))
· 4주에: 역학적 광 산란 (DLS), 마이크로-유동 이미지화 (MFI), SEC, 양이온 교환 크로마토그래피 (CEX), pH, R-CGE, NR-CGE 및 외관
선택된 제형(FDOE9, FDOE15, FDOE19, 및 FDOE25)의 오스몰 농도는 저장 전에 결정하였고, 선택된 제형의 오스몰 농도는 296 mOsm/kg (FDOE9), 435 mOsm/kg (FDOE15), 154 mOsm/kg (FDOE19) 및 240 mOsm/kg (FDOE25)이었다.
상이한 제형 (FDOE3, FDOE6, FDOE9, FDOE12 및 FDOE15) 중에 항체의 화학적 안정성 및 응집 거동은 또한 저장 전에 ΔG경향 (HUNK) 분석을 사용하여 평가하였다.
ΔG경향은 0.25, 0.6, 2.5, 6.0, 25.0 mg/ml의 농도에서 언폴딩의 Δg를 측정함에 의해 결정하였다. 모든 샘플은 제형 완충제 중에서 목표 농도로 희석하였다. 각 농도 수준은 증가하는 변성제 농도(우레아 농도 2.00-8.74M에 걸친 32점 곡선)로 적정한 반면 형광 스펙트럼은 10nm의 슬릿 폭으로 300-500nm(여기 280nm)에서 측정하였다. 게인(Gain)은 검출기를 포화시키지 않고 최대 신호를 제공하기 위해 샘플 농도에 따라 조정하였다(0.25 및 0.6mg/ml의 경우 100, 2.5 및 6.0mg/ml의 경우 10, 25.0mg/ml의 경우 1). 350 nm/330 nm의 방출 스펙트럼 파장 비율은 각 샘플 농도 수준에 대한 우레아 농도에 대해 플롯팅하였고, 단백질 언폴딩의 ΔG는 2개 상태(즉, 하나의 전이) 모델 피팅을 사용하여 결정하였다. 결정된 ΔG 값은 ΔG경향을 결정하기 위해 샘플 농도에 대해 플로팅되었고, 양성의 ΔG경향(즉, 샘플 농도에 따라 ΔG 증가) 고유 상태의 자가 연합을 나타내고 음성의 ΔG경향(즉, 샘플 농도에 따라 ΔG 감소)은 변성된 상태로부터의 응집을 지적한다.
FDOE3에 대해 수행된 ΔG경향 분석은 항체 농도와 함께 ΔG의 점진적인 증가를 보여주었고, 시험된 샘플에서 고유 단백질 응집체의 형성을 시사한다. 관찰된 효과는 FDOE3(FDOE6 및 FDOE9)에 프롤린을 추가한 후 크게 감소하였다. 제형 FDOE6(100mM 프롤린 함유) 및 FDOE9(200mM 프롤린 함유)에 대해 관찰된 ΔG경향은 항체 농도에 의존하지 않았고 응집체 형성의 결여를 보여주었다. 흥미롭게도, 아르기닌을 FDOE3(FDOE12 및 FDOE15)에 추가하면 항체 농도에 따라 ΔG가 점진적으로 감소하는 것으로 나타났다. 감소 효과는 FDOE15(200mM 아르기닌 포함)에서 극적이었고 시험된 플에서 변성 단백질 응집체의 형성에 대한 증거이다. 이 결과는 아르기닌을 함유한 모든 제형에 대해 항체의 열 응집이 관찰된 부형제 스크리닝 연구에서 얻은 DSF 데이터와 잘 일치한다.
샘플의 pH는 초기(즉, 저장 전) 및 4주 시점에 대해 측정되었다. 5±3°C 및 40°C/75% 상대 습도(RH)에서 4주 동안 저장된 샘플의 경우 측정된 pH는 각각의 제형에 대해 초기 값의 0.11 pH 단위 이내였다.
초기 및 4주 시점 샘플의 외관을 상기 기재된 바와 같이 색상, 투명도 및 입자 함량에 대해 평가하였다. 5±3°C 및 40°C/75% RH에서 4주 동안 유지된 샘플은 초기 시점의 샘플과 비교하여 차이를 나타내지 않았다. 각 샘플은 약간 노란색의 투명한 액체로 나타나며 눈에 보이는 단백질 관련 입자가 없다.
MFI는 상기된 바와 같이 수행되었고, 5±3°C 및 40°C/75% RH에서 저장된 샘플에 대해 얻은 결과는 저장 온도, 완충제 또는 부형제 유형과 관련하여 누적 입자 수의 명확한 경향을 나타내지 않았다. pH의 함수로서 입자 축적의 인지할만한 경향은 모든 시험된 제형에 대해 관찰되었다. 일반적으로 5±3°C 및 40°C/75% RH에서 저장된 샘플의 입자 수에서 가장 작은 차이는 모든 입자 크기에 대해 글루타메이트 완충제의 경우 pH 5.5, 히스티딘 완충제의 경우 pH 5.5 및 pH 5.7에서 관찰되었다.
R-CGE, NR-CGE, SEC, DLS, 및 CEX에 대해 수득된 결과는 통계학적으로 Stat-Ease, Inc. Design-Expert® 버전 7.0.3에 의해 분석하였다. 반응의 유의성은 95% 신뢰 구간에서 ANOVA 기술을 사용하여 평가하였다(0.05 미만의 p 값은 통계적으로 유의한 상관 관계를 나타냈다). 상기 유의성 임계값을 충족하는 반응은 선형 디자인 모드에서 소프트웨어로 분석하였다. pH, 프롤린 및 아르기닌 농도의 3개의 인자 및 총 불순물 축적(R-CGE), 총 불순물 축적(SEC), PDI 차이(DLS) 및 총 전하 변이체 축적(CEX)의 4개의 반응을 사용하여 계산을 수행하였다. NR-CGE로 측정한 총 불순물 퍼센트에 대해 ANOVA로 얻은 p-값은 통계적으로 유의하지 않았으므로(p 값 = 글루타메이트의 경우 0.34, 히스티딘 완충제의 경우 0.47), 따라서 데이터는 추가 분석에서 제외되었다.
글루타메이트 완충제 ± 프롤린에 대한 R-CGE 및 SEC 분석에서 검출된 총 불순물 축적(5±3°C 및 40°C/75% RH에서 저장된 샘플에 대해 얻은 총 불순물 간의 차이)에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 점진적인 불순물의 감소 경향을 보여주었다. 시험된 모든 pH 수준에서 글루타메이트 완충제 ± 프롤린 간에 불순물 축적의 차이는 관찰되지 않았다.
R-CGE 분석에서 히스티딘 완충제 ± 프롤린에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 불순물 감소의 얕은 경향을 보인 반면, SEC 분석에서는 히스티딘 완충제 ± 프롤린에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 불순물의 감소 경향을 나타내지 않았다. 글루타메이트와는 대조적으로 히스티딘 완충제에 프롤린이 존재하면 불순물 축적이 약간 감소하였고, 주로 pH 5.5와 pH 5.7에서 관찰되었다. pH 5.5에서, 불순물의 축적은 각각 프롤린이 있고 없는 글루타메이트 및 히스티딘 완충제 간에 유사하였다.
R-CGE 및 SEC 분석에서, 글루타메이트 완충제 ± 아르기닌에서 총 불순물의 축적에 대해 생성된 모델은 글루타메이트 완충제 ± 프롤린에 대해 관찰된 효과와 유사하게 pH의 함수로서 불순물의 점진적인 감소 경향을 보여주었다. 프롤린과 비교하여, 글루타메이트 완충제에 아르기닌이 존재하면 시험된 모든 pH 수준에서 총 불순물 축적이 증가하였다.
R-CGE 분석에서, 불순물의 감소에서 약간의 pH 의존적 경향이 히스티딘 완충제 ± 아르기닌에 대해 관찰되었다. 시험된 모든 pH 수준에서 히스티딘 완충제 ± 아르기닌 간에 유의적인 불순물 축적의 차이는 관찰되지 않았다. pH 5.5에서 불순물의 축적은 각각 아르기닌이 있고 없는 글루타메이트 및 히스티딘 완충제 간에 유사하였다. 대조적으로, SEC 분석은 히스티딘 완충제 ± 아르기닌에 대해 생성된 모델에서 관찰된 바와 같이 불순물의 감소에서 pH 의존적 경향을 보여주지 않았다. 프롤린과 대조적으로, 히스티딘 완충제에 아르기닌이 존재하면 시험된 모든 pH 수준에서 총 불순물 축적이 증가하였다.
pH 5.5에서 불순물의 축적은 각각 아르기닌이 있고 없는 글루타메이트 및 히스티딘 완충제 간에 유사하였다.
글루타메이트 완충제 ± 프롤린에 대한 DLS 분석에서 결정된 PDI(5±3°C 및 40°C/75% RH에서 저장된 샘플에 대해 얻은 PDI 간의 차이)에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 PDI 값이 약간 감소하는 경향을 보여주었다. PDI 값에서 어떠한 유의적인 차이는 시험된 모든 pH 수준에서 글루타메이트 완충제 ± 프롤린 간에 관찰되지 않았다. 유사하게, 글루타메이트 완충제 ± 아르기닌에서 PDI에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 PDI 값에서 약간 감소하는 경향을 보여주었다. 프롤린과 대조적으로, 글루타메이트 완충제에 아르기닌이 존재하면 시험된 모든 pH 수준에서 PDI 값이 유의적으로 증가하였다.
히스티딘 완충제 ± 프롤린에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 PDI 값에서 약간 증가하는 경향을 보여주었다. PDI 값에서 어떠한 유의적인 차이는 시험된 모든 pH 수준에서 히스티딘 완충제 ± 프롤린 간에 관찰되지 않았다. 유사하게, 히스티딘 완충제 ± 아르기닌에서 PDI에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 PDI 값에서 약간 증가하는 경향을 보여주었다. 프롤린과 대조적으로, 히스티딘 완충제에 아르기닌이 존재하면 시험된 모든 pH 수준에서 PDI 값이 유의적으로 증가하였다.
pH 5.5에서 PDI 값은 각각 아르기닌이 있고 없을 뿐만 아니라 프롤린이 있고 없는 글루타메이트와 히스티딘 완충제 간에 유사하였다.
글루타메이트 완충제 ± 프롤린에 대한 CEX 분석에서 검출된 총 하전된 변이체의 축적(5±3°C 및 40　°C/75　% RH에서 저장된 샘플에 대해 얻은 총 하전된 변이체 간의 차이)에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 하전된 변이체의 점진적인 감소 경향을 보여주었다. 하전된 변이체의 감소에 대한 프롤린의 약간의 이로운 효과는 모든 시험된 pH 수준에서 관찰되었다. 유사하게, 글루타메이트 완충제 ± 아르기닌에서 하전된 변이체의 축적에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 불순물의 점진적인 감소 경향을 보여주었다.
히스티딘 완충제 ± 프롤린에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 하전된 변이체의 축적에서 상승된 경향을 보여주었다. 글루타메이트 완충제와 유사하게, 히스티딘 완충제에서 프롤린이 존재하면 시험된 모든 pH 수준에서 하전된 변이체의 축적을 감소시켰다. 프롤린과 유사하지만 보다 유의적으로 아르기닌의 존재는 모든 시험된 pH 수준에서 총 하전된 변이체의 축적을 감소시켰다. 히스티딘 완충제 ± 아르기닌에 대해 생성된 모델은 pH의 함수로서 하전된 변이체의 축적에서 상승된 경향을 보여주었다. 시험된 모든 pH 수준에서 히스티딘 완충제 ± 아르기닌 간에 불순물 축적의 차이는 관찰되지 않았다.
하전된 변이체의 가장 낮은 축적은 모든 시험된 제형에 대해 pH 5.5에서 관찰되었다. pH 5.5에서 프롤린 함유 및 프롤린 함유 및 프롤린 비함유 글루타메이트 및 히스티딘 완충제 간의 유의한 차이가 관찰되지 않았고, pH 5.5에서 각각 아르기닌이 있고 없는 글루타메이트 및 히스티딘 완충제 사이에서도 유의한 차이가 관찰되지 않았다. 유일한 예외는 아르기닌이 없는 글루타메이트 완충제가 하전된 종의 농도가 아르기닌이 있는 히스티딘 완충제에 비해 인지할만하게 보다 높다는 것이다.
이 연구의 결과는 pH 5.5의 글루타메이트 완충제와 pH 5.5-5.7의 히스티딘 완충제에서 항체 안정성에 대한 프롤린의 가장 이로운 효과를 보여주었다. 아르기닌의 보호 효과는 CEX 분석에 대해서만 관찰되었다. DLS, SEC, 및 R-CGE 결과는 글루타메이트 및 히스티딘 완충제 (시험된 pH 범위에서)에서 아르기닌의 존재가 단백질의 안정성을 감소시킬 수 있음을 보여주었다.
실시예 3: 고농도 제형의 주사능의 결정
100mg/ml에서 액체 제형에서 제조 및 임상 적용을 위한 항체의 제형 F37 및 F38의 적합성을 평가하였다. 위약 용액(활성 약제학적 성분이 없는 제형 F37 및 F38)을 펌핑, 필터 적합성 및 주사능 연구의 일부로 동시에 시험하였다.
제형 37: 100 mg/ml 항체; pH 5.6에서 100 mM 글루타메이트; 150 mM 프롤린 및 0.05% PS-80.
제형 38: 100 mg/ml의 항체; pH 5.8에서 20 mM 히스티딘; 150 mM 프롤린, 80 mM 소르비톨 및 0.05% PS-80.
펌핑 연구
펌핑 연구는 특정 제조 공정에서 처리되는 것처럼 항체 함유 물질을 펌핑하는 물리적 공정 중에 응집 또는 분해의 변화가 발생할 수 있는지를 평가하기 위해 수행하였다. 각 제형의 안정성을 평가하기 위해 초기 시점(T0)에 수거하고 일련의 분석 시험에서 펌핑 60분 및 120분 후에 채취한 샘플과 비교하였다.
외관
위약 및 항체 함유 샘플 둘다의 외관을 색상, 투명도 및 가시적 입자의 상대적 수에 의해 평가하였다. 60분 및 120분 후에 평가된 모든 항체 함유 샘플은 초기 시점 샘플과 비교할 때 색상 및 투명도에 차이가 없음을 보여주었다. 각 위약 샘플은 투명한 무색 액체로 나타났고 각 항체 함유 샘플은 약간 노란색의 약간 불투명한 액체로 나타났다. 모든 위약 및 항체 함유 샘플에서 입자 또는 비생성물 관련 입자가 관찰되지 않았다.
550 nm에서 흡광도에 의해 평가된 탁도
항체 함유 및 위약 제형의 탁도는 550 nm에서 흡광도를 측정하여 평가하였다. 모든 항체 함유 및 위약 샘플에 대한 탁도 값은 초기 시점 대조군과 비교하여 차이를 나타내지 않았다. A550는 모든 샘플에 대한 모든 시점에서 0.07 AU 미만이었다.
크기 배제 크로마토그래피
각 제형의 항체 함유 샘플에서 용해성 고분자량 및 저분자량 종의 형성에 대한 펌핑의 효과를 상기된 바와 같이 SEC에 의해 평가하였다. 고분자량 종 또는 저분자량 종의 총 퍼센트 피크 면적의 유의적인 변화는 어느 제형에서든 샘플에 대한 초기 시점과 120분 시점 사이에 관찰되지 않았다. 제형 F38은 제형 F37(2.5% 대 1.5%)보다 보다 큰 분율의 고분자량 종을 함유하고, 보다 낮은 분자량 종의 분율은 2개 제형(0.7% 대 0.7%)의 샘플 사이에서 크게 변하지 않았다. 고분자량 종의 총 피크 면적의 이러한 차이는 일관되었고 펌핑, 필터 상용성 및 주사능 연구의 모든 샘플에서 관찰되었다.
역학적 광 산란
펌핑 스트레스의 영향을 평가하기 위해 상기한 바와 같이 항체 함유 샘플의 입자 분포를 DLS로 조사하였다. 제형은 Z-평균 유체역학적 직경, 평균 다분산도(PDI) 및 피팅 양상과 관련하여 비교하였다. (강도에 의한 크기 분포의 플롯을 기반으로 평가된 바와 같이) 피팅 양상의 변화가 관찰되었다. 2개 제형 둘다에 대한 샘플은 T0에서 단일모드였지만, 60분에 F38 샘플은 다중모드이고 120분에는 F37 및 F38 샘플 둘다 다중모드였다. Z-평균 직경 값은 2개 제형 둘다의 모든 시험된 샘플에 대해 유사하였고, 스트레스 시간의 함수로서 약간의 상승 경향을 나타냈다. 유사하지만 훨씬 더 현저한 증가 경향은 시험된 2개 제형의 샘플에 대해 수득된 PDI 값에 대해 관찰되었다. 제형 F37의 경우 PDI는 60분 및 120분 동안 펌핑한 후 0.087(T0에서)로부터 0.120 및 0.136으로 증가하였다(각각 대략 1.4배 및 1.6배 증가). 제형 F38에 대해 수득된 PDI 값은 60분 및 120분 동안 펌핑한 후 0.129(T0에서)로부터 0.238 및 0.242로 증가하였다(각각 대략 1.8배 및 1.9배 증가). 함께 펌핑 스트레스는 F37 및 F38의 입자 분포에 약간의 영향을 미쳤다.
펌핑 연구 과정에 걸쳐 항체 함유 샘플에 존재하는 입자의 크기와 농도를 특징 분석하기 위해 MFI 실험을 수행하였다. 시간 경과에 따라 F37 및 F38 위약에 대해 눈에 보이지 않는 입자 축적의 명백한 경향이 관찰되지 않았다. 대조적으로, 펌핑 기간 동안 F37 및 F38 제형에 대해 눈에 보이지 않는 농도가 점진적으로 증가하는 점진적 경향이 관찰되었다. 눈에 보이지 않는 입자의 증가는 제형 둘다에 대해 유사하였다.
전반적으로, 수득된 결과는 펌핑 스트레스를 받는 F37 및 F38에서 가시적 또는 비가시적 입자의 증가를 나타내지 않는다.
필터 상용성 연구
필터 상용성 연구는 최종 API 제형에 대한 필터 재료의 상용성 및 수행능을 평가하기 위해 디자인하였다. 위약 및 항체 함유 제형의 샘플은 0.22 μm PES 필터, 0.22 μm PVDF 필터에 통과시키거나, 대조군으로서 여과되지 않은 상태로 유지하였다. 이어서 분석 시험을 수행하여 상용성 및 여과 수행능을 평가하였다.
외관
샘플 외관은 물리적 상태, 색상, 투명도 및 상기된 가시적 입자의 상대적 수에 의해 평가되었다. PES 필터 또는 PVDF 필터를 통해 여과된 샘플은 비여과된 대조군 샘플과 비교하여 색상 및 투명도에서 어떠한 차이를 보여주지 않았다. 각 위약 샘플은 투명한 무색 액체로 나타났고, 각 항체 함유 샘플은 약간 노란색의 약간 불투명한 액체로 나타났다. 모든 샘플에서 입자 또는 비생성물 관련 입자가 관찰되지 않았다.
탁도
샘플 탁도는 상기된 바와 같이 평가하였다. 모든 항체 함유 및 위약 샘플에 대한 탁도 값은 초기 시점 대조군과 비교하여 차이를 나타내지 않았다. A550 값은 모든 샘플에 대한 모든 시점에서 0.05 AU 미만이었다. 시점 또는 제형 조성과 관련하여 위약 샘플에서는 명확한 경향이 관찰되지 않았다.
크기 배제 크로마토그래피
각 제형의 항체 함유 샘플에서 용해성 고분자량 및 저분자량 종의 형성에 대한 여과의 효과를 상기된 바와 같이 SEC에 의해 평가하였다. 고분자량 종 또는 저분자량 종의 총 퍼센트 피크 면적의 유의적인 변화는 어느 제형에서든 여과되지 않은 대조군과 막 여과된 샘플 간에 관찰되지 않았다.
역학적 광 산란 및 마이크로 유동 이미지화
DLS는 상기된 바와 같이 수행하였고 결과는 여과가 필터 재료에 관계없이 어느 제형에서든 피팅 양상을 변화시키지 않았고, 대조군 샘플과 여과된 샘플의 Z-평균 직경의 차이가 유의적이지 않음을 보여주었다. 제형 F37에 대한 PDI 값은 대조군에 대한 0.106으로부터 PES 및 PVDF로 여과된 샘플의 경우 각각 0.049 및 0.050으로 감소하였다. 제형 F37에 대한 PDI 값은 대조군 샘플에 대한 0.087으로부터 PES 및 PVDF로 여과된 샘플의 경우 각각 0.081 및 0.063으로 감소하였다.
필터 상용성 연구로부터 취한 항체 함유 샘플에 존재하는 입자의 크기와 농도를 특징 분석하기 위해 상기된 바와 같은 MFI 실험을 수행하였다. 제형 둘다에 대해 여과된 샘플과 대조군 위약 샘플 간에 누적 입자 수의 유의한 차이는 관찰되지 않았다. 제형 F37 및 F38 둘다에서 항체 샘플은 대조군 샘플과 비교하여 여과된 샘플에서 모든 크기의 누적 입자 수의 전반적인 감소를 나타냈다. 제형 F37에서 관찰된 입자 감소는 PES 여과보다 PVDF 여과에서 보다 컸다. 대조적으로, 제형 F38에서 항체-함유 샘플의 입자의 전체 감소는 하나의 여과 물질에 대해 다른 것보다 유의적으로 보다 크지 않았다.
DLS 및 MFI 분석에서 관찰된 입자 분포의 전반적인 변화는 항체 여과가 필터 상용성 연구에 의해 시뮬레이션된 바와 같이 재료 가공 중 잠재적 응집을 감소시키는데 유익하다는 것을 입증한다. 전반적으로, 제형 둘다 및 여과 물질 둘다에 대해 유사한 감소가 관찰되었다.
주사능 연구
주사능 연구는 최종 제형의 약물 적용을 시뮬레이션하고 2개의 상이한 크기의 Injekt Solo 주사기로 DP 적용을 위한 각 제형의 적합성을 결정하도록 디자인하였다. 위약 및 항체 함유 제형의 샘플은 2ml 주사기, 10ml 주사기로 배출되거나 사전 배출 대조군으로서 처리되지 않은 상태로 남아 있다. 이를 성취하기 위해, 플런저가 바닥에 도달하고 30N의 힘에 도달할 때까지 주사기 플런저는 0.2 in/min의 선형 속도로 2ml 주사기를 통해, 및 0.6 in/min의 속도로 10ml 주사기를 통해 밀어진다.
힘
브레이크 루스(Break-loose) (BF) 및 글라이드(glide) (GF) 힘은 배출 동안에 측정되고, 적용 적합성을 평가하기 위해 사용된다. 브레이크-루스 힘은 플런저의 이동 (2 ml 주사기에 대해 초기 0.3 mm 및 10 ml 주사기에 대해 0.5mm)을 개시하기 위해 요구되는 힘을 기재한다. 글라이드 힘 맥스(Glide force Max)는 플런저 이동을 지탱하기 위해 요구되는 최대 힘을 언급한다. 최대 힘 값은 힘이 30N에 도달하는 지점 이전에 브레이크 루스 영역의 말단에서 글라이드 힘 영역의 말단까지(2ml 주사기에 대해 26mm, 10ml 주사기에 대해 24mm)까지 측정된다.
모든 시험 조건에서, 항체 함유 또는 위약 샘플을 배출하는 데 필요한 피크 BF 및 최대 GF는 12N 미만이었고 피크 BF는 최대 GF 미만이었다: 이들은 주사기 중 하나에서 제형 둘다가 주사능 연구에서 시뮬레이션된 바와 같은 적용에 적합할 수 있다는 지표이다. 시험 조건의 비교는 BF 및 GF 값이 제형에 관계없이 2ml 주사기에 비해 10ml 주사기를 통한 배출에 대해 보다 컸음을 보여준다.
외관
위약 및 항체 함유 샘플 둘다의 외관을 색상, 투명도 및 가시적 입자의 상대적 수에 의해 평가하였다. 대조군과 배출 후 샘플 사이에 식별할 수 있는 차이는 관찰되지 않았다. 모든 위약 샘플은 투명한 무색 액체로 나타났고 모든 항체 함유 샘플은 약간 노란색의 약간 불투명한 액체였다. 모든 샘플에서 입자 또는 비생성물 관련 입자가 관찰되지 않았다.
탁도
샘플 탁도는 상기된 바와 같이 평가하였다. 550 nm에서의 흡광도는 0.137 AU인 제형 F37의 항체의 대조군 조건 샘플을 제외하고 모든 샘플에 대해 0.05 AU 미만이었다. 조건 또는 제형 조성과 관련하여 위약 및 항체 함유 샘플에서는 명확한 경향이 관찰되지 않았다.
크기 배제 크로마토그래피
가용성 고분자량 및 저분자량 종의 형성에 대한 주사기를 통한 항체 함유 샘플 통과의 효과는 SEC에 의해 평가하였다. 고분자량 종 또는 저분자량 종의 총 퍼센트 피크 면적의 유의적인 변화는 어느 제형에서든 대조군과 막 배출 후 샘플 간에 관찰되지 않았다.
역학적 광 산란
DLS를 사용하여 다양한 크기(2 및 10ml)의 주사기를 통한 배출 전후 항체 함유 샘플의 입자 분포를 평가하였다. 샘플은 Z-평균 직경, 평균 다분산도(PDI) 및 피팅 양상과 관련하여 비교하였다. 주사기 배출은 어느 제형에서든 피팅 양상을 변화시키지 않았고, 어느 제형에서든 대조군 샘플의 Z-평균 평균 직경 및 PDI와 주사기 샘플에서 유의적인 차이가 없었다.
마이크로-유동 이미지화
샘플에 존재하는 입자의 크기 및 농도를 특징분석하기 위해 MFI 실험을 수행하였다. F37 및 F38 제형의 위약 샘플은 대조군 샘플과 비교하여 배출 후 샘플 내 누적 입자 수의 증가를 나타냈고, 증가는 2 ml 주사기 샘플과 비교하여 10 ml 주사기 샘플에서 보다 컸다. 제형 F37의 항체 대조군 및 2ml 주사기 샘플은 유의적인 차이를 나타내지 않았지만, 10ml 주사기 샘플은 누적 입자 수에서 전반적으로 약간의 증가를 보여준다.
제형 F38의 항체 샘플은 주사기 적용에 대해 보다 현저한 반응을 보여주었다. 2ml 주사기를 통과한 샘플은 대조군에 비해 누적 수가 2.7 내지 3.6배 증가함을 보여주었고, 10ml 주사기를 통과한 샘플은 누적수가 10 내지 12배 증가함을 보여주었다.
주사능 연구에서 얻은 결과는 항체 응집에 대한 전단 응력의 영향을 나타내지 않았다. 상승된 농도의 눈에 보이지 않는 입자는 MFI에 의해 F38에서만 검출되었다.
실시예 4: 보다 높은 농도 제형의 제조
약 116 mg/ml 항체, 20mM 히스티딘, 140mM 프롤린, 150mM 아르기닌 및 0.02% w/v 폴리소르베이트 80을 포함하는 항체 제형을 약 200mg/ml 항체를 포함하는 제형('고농도 2')으로 농축하기 위해 접선 유동 여과(TFF)를 사용하였다. TFF 동안에, 중간의 고농도 제형은 약 150 mg/ml (‘고농도 1’)에서 제조하였다. 고농도 2 제형은 100 mg/ml 항체 (‘DP 시험’)를 포함하는 제형을 제조하기 위해 희석하였다. 본래의 출발 물질도 희석하여 100mg/ml 항체를 포함하는 제형('DP 대조군')을 제조하였다.
농축 후, 각 제형의 농도, 밀도 및 점도를 표 6에 나타낸 바와 같이 평가하였다. 점도는 폴리소르베이트 80을 포함하지 않는, 20 mM 히스티딘, 140 mM 프롤린 및 20mM 히스티딘, 140mM 프롤린 및 150mM 아르기닌에서 정제된 항체 제형과 비교하였다.
표 6
항체 제형의 특징 분석
Figure pct00007
고농도 제형(DP 대조군; DP 시험, 고농도 1 및 고농도 2)의 스트레스 안정성은 유리 바이알과 사전 충전 유리 주사기(PFS)에서 제형을 최대 5주 동안 35°C에 적용하여 평가하였다. 35°C에서 5주 후 주사기나 바이알에서 단백질 농도 또는 pH(pH 6.1)에 대한 영향은 없었다.
마이크로 유동 이미지화(MFI)는 샘플에 존재하는 입자의 크기, 농도 및 형태를 특징 분석하기 위해 상기된 바와 같이 사용하였다. 35°C에서 5주 후 상이한 농도 제형 간에 존재하는 입자의 크기, 수 및/또는 형태에서 유의한 차이가 관찰되지 않았다.
%고분자량 종 및 단량체는 상기된 바와 같이 SEC를 사용하여 결정하였다. 제형은 시간 제로 및 5°C 또는 35°C에서 유지된 5주 후에 평가하였고 결과는 표 7에 나타낸다.
표 7
고농도 제형에서 단량체 및 고분자량 종 퍼센트
Figure pct00008
상기된 바와 같이, 고농도 항체 제형은 장기간 열 안정성을 나타냈다.
실시예 5: 바이알 중에 고농도 제형의 장기 안정성
실시예 4로부터의 고농도 DP 대조군 제형의 장기 안정성은 제형을 5℃(±3℃) 또는 25℃(±2℃)에서 각각 36개월 및 24개월 동안 유지함으로써 상기된 방법론을 사용하여 평가하였고, 그 결과를 표 8 및 9에 나타낸다.
표 8
5 °C ± 3 °C에서 36개월 후 DP 대조군 제형의 장기 안정성
Figure pct00009
Figure pct00010
표 9
25 °C ± 2 °C에서 24개월 후 DP 대조군 제형의 장기 안정성
Figure pct00011
Figure pct00012
실시예 6: 미리 채워진 주사기에서 고농도 제형의 안정성
미리 채워진 주사기에서 고농도 DP 대조군 제형(실시예 4)의 안정성은 제형을 5℃(±3℃) 또는 25℃(±2°C)에서 유지함으로써 상기된 방법론을 사용하여 3, 6 및 12개월에 평가하였다. 결과는 표 10 내지 15에 나타낸다.
표 10.1
5 °C ± 3 °C에서 미리 채워진 주사기에서 DP 대조군 제형의 안정성
Figure pct00013
표 10.2:
Figure pct00014
표 11.1
Figure pct00015
표 11.2
Figure pct00016
표 12
Figure pct00017
표 13
25　°C ± 2 °C에서 12개월 후 미리 채워진 주사기에서 DP 대조군 제형의 안정성
Figure pct00018
표 14
5 °C ± 2 °C에서 12개월 후 수동으로 채워진 주사기에서 DP 대조군 제형의 안정성
Figure pct00019
표 15
25 °C ± 2 °C에서 12개월 후 수동으로 채워진 주사기에서 DP 대조군 제형의 안정성
Figure pct00020
실시예 7: 예시적 제형
본원에 제공된 데이터를 기반으로 2개의 안정한 고농도 제형은 표 16에 나타낸다. 이들 제형에 대한 허용 기준은 표 17에 나타낸다.
표 16
예시적 고농도 제형
Figure pct00021
표 17
예시적 고농도 제형에 대한 허용 기준
Figure pct00022
실시예 8: 토끼에게 피하 투여 후 고농도 제형의 단일 용량 약동학적 연구.
본 연구의 목적은 토끼에게 단일 피하 투여 후 2개의 고농도 제형(실시예 7에 나타낸 바와 같은 100 및 170 mg/ml)의 약동학적(PK) 성질을 평가하는 것이었다.
뉴질랜드 흰색 토끼의 혈액 샘플을 혈장에 대해 처리하고 분석하였다. 혈장 샘플의 분석은 항-FXII 항체 농도의 2개 그룹에 대한 약물 농도 프로필의 유사한 증가를 보여주었다. 토끼 혈장 샘플에서 항-FXII 항체 항원의 수준은 확증된 검정(ELISA)를 사용함에 의해 결정하였다. 항-FXII 항체의 최대 혈장 농도(Cma)는 일반적으로 투여 후 24 또는 48시간에 관찰되었다. 그룹 1 및 그룹 2에 대한 Cmax 및 곡선 이하 면적 (AUC)은 시험 1일째에 대략 동일한 정도로 증가하였다. 항-FXII 항체의 평균 말단 혈장 제거 반감기 t½은 모든 처리에 걸쳐 유사하였다. 어떠한 약동력학 파라미터에 대해서도 주목할만한 성별 차이는 나타나지 않았다. 몇 가지 약동력학 파라미터에 대해 시험된 다양한 처리 사이에서 주지된 한계 차이는 모두 상기 샘플 크기(성별 및 시점당 3마리의 동물)에 대한 정상적인 가변성 내에 있는 것으로 간주된다. 토끼 혈청에서 CSL312의 약동력학 평가 결과는 표 18에 요약되어 있다.
표 18
DP (평균 ± 표준 편차)의 약동력학적 분석
Figure pct00023
전반적으로, 고농도의 제형 둘다는 SC 투여 후 유사한 PK 프로필을 보여주었다.
실시예 9: 토끼에서 피하 투여 후 고농도 제형의 반복 투여 국소 관용성
1주 간격으로 별도의 2일에 토끼에게 피하 투여한 후 2개의 고농도 제형(실시예 7에 나타낸 바와 같은 100 및 170 mg/mL)의 국소 관용성을 평가하였다. 뉴질랜드 백색 토끼는 투여 후 1, 2, 6, 24, 48 및 72 시간에 등 피부 아래에 피하 주사를 위해 거시적으로 조사하였다. 전체 관찰 기간(첫 투여 후 11일) 후, 모든 동물을 희생시키고 주사 부위를 거시적으로 및 현미경적으로 검사하였다.
관찰 기간 동안 어떤 토끼에서도 독성 징후가 없었고 체중에 대한 효과도 관찰되지 않았다. 어떠한 동물도 미성숙하게 죽지 않았다. 임의의 적용 부위에서 어떠한 국소 자극도 2개의 고농도 제형과 함께 투여 후 연구 기간 동안에 임의의 시점에서 명백하지 않았다. 부검에서도 어떤 변화도 나타나지 않았다. 2개의 제형으로 피하로 처리된 토끼 피부의 조직병리학적 검사는 피하 투여 후 어떠한 약물 관련 형태학적 변화를 밝히지 못하였다. 우측면상의 약물 처리된 피부와 좌측면상의 0.9% NaCl 용액으로 처리된 음성 대조군에 대해 약간의 경증 내지 중등도의 형태학적 변화가 관찰되었다. 모든 이들 변화는 기술적 적용에 의해 유발되는 과정과 관련되는 것으로 고려되고 약물과는 관련이 없다.
전반적으로, 2일에 걸쳐 투여된 2개의 고농도 제형을 사용한 피하 투여는 관용성이 양호하였고 주사 부위에서 약물 관련 변화가 나타나지 않았다.
SEQUENCE LISTING <110> CSL Innovation Pty Ltd. <120> HIGH CONCENTRATION FORMULATION AND USES THEREOF <130> 2020_P002_A299 <150> EP20184004.8 <151> 2020-07-03 <160> 17 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7 VH <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Ile Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Arg Pro Ser Gly Gly Thr Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Ile Ser Pro His Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 2 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7 VL <400> 2 Gln Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Val Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Arg Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 3 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7G VH <400> 3 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Ile Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Arg Pro Ser Gly Gly Thr Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Ile Ser Pro His Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 4 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7G VL <400> 4 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Arg Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 5 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of affinity matured 3F7 VH <400> 5 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr 20 25 30 Ile Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Asp Ile Pro Thr Lys Gly Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Ile Ser Pro His Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 6 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of affinity matured 3F7 VL <400> 6 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn 20 25 30 Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Arg Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7 VH CDR1 <400> 7 Lys Tyr Ile Met Gln 1 5 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7 VH CDR2 <400> 8 Gly Ile Arg Pro Ser Gly Gly Thr Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7 VH CDR3 <400> 9 Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Ile Ser Pro His Tyr Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Ala Leu Asp Val 20 <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid consensus sequence of 3F7 variant VH CDR2 <220> <221> X <222> (3)..(3) <223> R or N or D <220> <221> X <222> (4)..(4) <223> P or V or I or M <220> <221> X <222> (5)..(5) <223> S or P or A <220> <221> X <222> (6)..(6) <223> G or L or V or T <220> <221> X <222> (7)..(7) <223> Y or Q or K <220> <221> X <222> (8)..(8) <223> G or S <400> 10 Gly Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 11 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid consensus sequence of 3F7 variant VH CDR3 <220> <221> X <222> (9)..(9) <223> I or M or V <220> <221> X <222> (10)..(10) <223> S or K <220> <221> X <222> (11)..(11) <223> P or K or T or H <220> <221> X <222> (12)..(12) <223> H or N or G or Q <400> 11 Ala Leu Pro Arg Ser Gly Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Ala Leu Asp Val 20 <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7 VL CDR1 <400> 12 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Arg Asn Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7 VL CDR2 <400> 13 Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of 3F7 VL CDR3 <400> 14 Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu Arg Gly Val 1 5 10 <210> 15 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid consensus sequence of 3F7 variant VL CDR3 <220> <221> X <222> (2)..(2) <223> A or S <220> <221> X <222> (4)..(4) <223> D or Y or E or T or W or S <220> <221> X <222> (5)..(5) <223> A or N or I or L or V or P or Q or E <220> <221> X <222> (6)..(6) <223> S or D or P or E or Q or R <220> <221> X <222> (7)..(7) <223> L or V <220> <221> X <222> (9)..(9) <223> G or L or K <220> <221> X <222> (10)..(10) <223> V or A or D or T or M or G <400> 15 Ala Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Xaa 1 5 10 <210> 16 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of affinity matured 3F7 VH CDR2 <400> 16 Gly Ile Asp Ile Pro Thr Lys Gly Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 17 <211> 615 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Met Arg Ala Leu Leu Leu Leu Gly Phe Leu Leu Val Ser Leu Glu Ser 1 5 10 15 Thr Leu Ser Ile Pro Pro Trp Glu Ala Pro Lys Glu His Lys Tyr Lys 20 25 30 Ala Glu Glu His Thr Val Val Leu Thr Val Thr Gly Glu Pro Cys His 35 40 45 Phe Pro Phe Gln Tyr His Arg Gln Leu Tyr His Lys Cys Thr His Lys 50 55 60 Gly Arg Pro Gly Pro Gln Pro Trp Cys Ala Thr Thr Pro Asn Phe Asp 65 70 75 80 Gln Asp Gln Arg Trp Gly Tyr Cys Leu Glu Pro Lys Lys Val Lys Asp 85 90 95 His Cys Ser Lys His Ser Pro Cys Gln Lys Gly Gly Thr Cys Val Asn 100 105 110 Met Pro Ser Gly Pro His Cys Leu Cys Pro Gln His Leu Thr Gly Asn 115 120 125 His Cys Gln Lys Glu Lys Cys Phe Glu Pro Gln Leu Leu Arg Phe Phe 130 135 140 His Lys Asn Glu Ile Trp Tyr Arg Thr Glu Gln Ala Ala Val Ala Arg 145 150 155 160 Cys Gln Cys Lys Gly Pro Asp Ala His Cys Gln Arg Leu Ala Ser Gln 165 170 175 Ala Cys Arg Thr Asn Pro Cys Leu His Gly Gly Arg Cys Leu Glu Val 180 185 190 Glu Gly His Arg Leu Cys His Cys Pro Val Gly Tyr Thr Gly Ala Phe 195 200 205 Cys Asp Val Asp Thr Lys Ala Ser Cys Tyr Asp Gly Arg Gly Leu Ser 210 215 220 Tyr Arg Gly Leu Ala Arg Thr Thr Leu Ser Gly Ala Pro Cys Gln Pro 225 230 235 240 Trp Ala Ser Glu Ala Thr Tyr Arg Asn Val Thr Ala Glu Gln Ala Arg 245 250 255 Asn Trp Gly Leu Gly Gly His Ala Phe Cys Arg Asn Pro Asp Asn Asp 260 265 270 Ile Arg Pro Trp Cys Phe Val Leu Asn Arg Asp Arg Leu Ser Trp Glu 275 280 285 Tyr Cys Asp Leu Ala Gln Cys Gln Thr Pro Thr Gln Ala Ala Pro Pro 290 295 300 Thr Pro Val Ser Pro Arg Leu His Val Pro Leu Met Pro Ala Gln Pro 305 310 315 320 Ala Pro Pro Lys Pro Gln Pro Thr Thr Arg Thr Pro Pro Gln Ser Gln 325 330 335 Thr Pro Gly Ala Leu Pro Ala Lys Arg Glu Gln Pro Pro Ser Leu Thr 340 345 350 Arg Asn Gly Pro Leu Ser Cys Gly Gln Arg Leu Arg Lys Ser Leu Ser 355 360 365 Ser Met Thr Arg Val Val Gly Gly Leu Val Ala Leu Arg Gly Ala His 370 375 380 Pro Tyr Ile Ala Ala Leu Tyr Trp Gly His Ser Phe Cys Ala Gly Ser 385 390 395 400 Leu Ile Ala Pro Cys Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu Gln Asp 405 410 415 Arg Pro Ala Pro Glu Asp Leu Thr Val Val Leu Gly Gln Glu Arg Arg 420 425 430 Asn His Ser Cys Glu Pro Cys Gln Thr Leu Ala Val Arg Ser Tyr Arg 435 440 445 Leu His Glu Ala Phe Ser Pro Val Ser Tyr Gln His Asp Leu Ala Leu 450 455 460 Leu Arg Leu Gln Glu Asp Ala Asp Gly Ser Cys Ala Leu Leu Ser Pro 465 470 475 480 Tyr Val Gln Pro Val Cys Leu Pro Ser Gly Ala Ala Arg Pro Ser Glu 485 490 495 Thr Thr Leu Cys Gln Val Ala Gly Trp Gly His Gln Phe Glu Gly Ala 500 505 510 Glu Glu Tyr Ala Ser Phe Leu Gln Glu Ala Gln Val Pro Phe Leu Ser 515 520 525 Leu Glu Arg Cys Ser Ala Pro Asp Val His Gly Ser Ser Ile Leu Pro 530 535 540 Gly Met Leu Cys Ala Gly Phe Leu Glu Gly Gly Thr Asp Ala Cys Gln 545 550 555 560 Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Glu Asp Gln Ala Ala Glu Arg 565 570 575 Arg Leu Thr Leu Gln Gly Ile Ile Ser Trp Gly Ser Gly Cys Gly Asp 580 585 590 Arg Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Asp Val Ala Tyr Tyr Leu Ala Trp 595 600 605 Ile Arg Glu His Thr Val Ser 610 615

Claims (44)

  1. 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 적어도 100 mg/ml의 단백질, 유기산 완충제, 비-이온성 계면활성제 및 아미노산 안정화제를 포함하는 액체 약제학적 제형으로서, 여기서 상기 제형이 5.0 내지 6.5의 pH 및 20℃에서 약 30mPa*s 미만의 점도를 갖는, 액체 약제학적 제형.
  2. 제1항에 있어서, 상기 단백질이 적어도 150mg/ml의 농도로 제형에 존재하는, 제형.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단백질이 160 mg/ml 내지 180 mg/ml의 농도로 제형에 존재하는, 제형.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 수성 제형인, 제형.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유기산 완충제가 히스티딘 완충제 및 글루타메이트 완충제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 제형.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유기산 완충제가 히스티딘 완충제인, 제형.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20 및 폴록사머 188로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 제형.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트 80인, 제형.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산 안정화제가 프롤린, 아르기닌, 이의 염 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 제형.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산 안정화제가 프롤린인, 제형.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 폴리올을 추가로 포함하는, 제형.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 히스티딘 완충제, 프롤린 및 폴리소르베이트 80을 포함하는, 제형.
  13. 제12항에 있어서, 상기 제형이 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 추가로 포함하는, 제형.
  14. 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 약 100 mg/ml 내지 110 mg/ml의 단백질, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형으로서, 여기서 상기 제형이 5.5 내지 6.5의 pH 및 20℃에서 약 10mPa*s 미만의 점도를 갖는, 약제학적 제형.
  15. 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 약 160 mg/ml 내지 180 mg/ml의 단백질, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80, 및 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형으로서, 여기서 상기 제형이 5.5 내지 6.5의 pH 및 20℃에서 약 10mPa*s 미만의 점도를 갖는, 약제학적 제형.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 5.8 내지 6.4의 pH를 갖고, 12　mM 내지 25　mM의 L-히스티딘 완충제, 0.01　% 내지 0.03　% (w/v)의 폴리소르베이트 80, 90　mM 내지 150　mM의 L-프롤린 및 100　mM 내지 160　mM의 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는, 제형.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 5.8 내지 6.4의 pH를 갖고 약 20mM의 L-히스티딘 완충제, 0.02　%(w/v)의 폴리소르베이트 80, 140mM의 L-프롤린 및 150mM의 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는, 제형.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형의 점도가 20°C에서 약 9 mPa*s 미만인, 제형.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 20°C에서 약 1.00 내지 약 1.10 g/cm3의 밀도를 갖는, 제형.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 단백질의 약 10% 미만의 총 응집체를 포함하는, 제형.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형 중 단백질의 적어도 90%가 단량체인, 제형.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 도메인이 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하고 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태의 활성을 길항시키고/시키거나 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태의 활성화를 길항시키는, 제형.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질이 항체의 항원 결합 도메인을 포함하는, 제형.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질이 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 제형:
    (i) 단일쇄 Fv 단편 (scFv);
    (ii) 이량체 scFv (di-scFv);
    (iii) 디아바디;
    (iv) 트리아바디;
    (v) 테트라바디;
    (vi) Fab;
    (vii) F(ab’)2;
    (viii) Fv;
    (ix) 항체의 불변 영역, Fc 또는 중쇄 불변 도메인 (CH) CH2 및/또는 CH3에 결합된 (i) 내지 (viii) 중 하나; 또는
    (x) 항체.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질이 다음을 포함하는, 제형:
    (i) 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL;
    (ii) 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는
    (iii) 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL.
  26. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질이 다음을 포함하는, 제형:
    (i) 하기를 포함하는 VH:
    (a) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 8에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 CDR3; 또는
    (b) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 10에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 11에 제시된 서열을 포함하는 CDR3; 또는
    (c) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 10에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 CDR3; 또는
    (d) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 16에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 CDR3; 및/또는
    (ii) 하기를 포함하는 VL:
    (a) 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 13에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 14에 제시된 서열을 포함하는 CDR3; 또는
    (b) 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 13에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 15에 제시된 서열을 포함하는 CDR3.
  27. 제26항에 있어서, 상기 단백질이 서열번호 10에 제시된 CDR2를 포함하는 VH를 포함하고, 여기서 3번 위치의 X는 D이고, 4번 위치의 X는 I이고, 5번 위치의 X는 P이고, 6번 위치의 X는 T이고, 7번 위치의 X는 K이고, 8번 위치의 X는 G인, 제형.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질이 IgG4 불변 영역을 포함하는, 제형.
  29. 제28항에 있어서, 상기 IgG4 불변 영역이 안정화된 IgG4 불변 영역인, 제형.
  30. 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 약 100 mg/ml 내지 약 170 mg/ml의 단백질, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형으로서, 여기서 상기 제형이 5.5 내지 6.5의 pH 및 20℃에서 약 30mPa*s 미만의 점도를 갖고. 상기 단백질이 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는, 약제학적 제형.
  31. 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 약 100 mg/ml 내지 약 170 mg/ml의 단백질, 히스티딘 완충제, 폴리소르베이트 80 및 안정화제로서 프롤린 및 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 약제학적 제형으로서, 여기서 상기 제형이 5.5 내지 6.5의 pH 및 20℃에서 약 30mPa*s 미만의 점도를 갖고, 상기 단백질이 하기를 포함하는, 약제학적 제형:
    (i) 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 16에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 VH; 및
    (ii) 서열번호 12에 제시된 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호 13에 제시된 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호 14에 제시된 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 VL.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태의 활성을 길항시키고/시키거나 활성화를 길항시키는데 사용하기 위?h 약제학적 제형.
  33. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 제형을 투여함을 포함하는, 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태의 활성을 길항시키고/시키거나 활성화를 길항시키는, 방법.
  34. 대상체에서 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태의 활성화를 길항시키기 위한 약물의 제조에서 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 제형의 용도.
  35. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서. 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는데 사용하기 위한, 약제학적 제형.
  36. 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법이 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 제형을 투여함을 포함하는, 방법.
  37. 대상체에서 질환 또는 병태의 치료 또는 예방을 위한 약물의 제조에서 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 제형의 용도.
  38. 질환 또는 병태가 혈전성 장애, 염증성 장애 및/또는 혈전-염증성 장애인, 제35항에 따라 사용하기 위한 제형, 제36항에 따른 방법 또는 제37항에 따른 용도.
  39. 제38항에 있어서, 상기 질환 또는 병태가 정맥, 동맥 또는 모세혈관 혈전 형성(예를 들어, 뇌졸중, 심근 경색, 심부 정맥 혈전증(DVT), 문맥 혈전증, 신정맥 혈전증, 경정맥 혈전증, 대뇌동 혈전증, 버드 키아리(Budd-Chiari) 증후군, 파렛 슈로에터(Paget-Schroetter) 질환 또는 무증상 뇌 허혈), 심장의 혈전 형성, 혈전색전증, 사람 또는 동물 대상체의 혈액과 인공 표면과 접촉하는 동안 및/또는 후에 혈전 형성, 파종성 혈관내 응고(DIC), 심방세동, 급성관상동맥증후군(ACS), 죽상경화성 질환, 재관류를 동반한 허혈성 뇌졸중, 허혈-재관류 손상(외상, 장기 이식과 같은 IRI) 관련 질환, 신경외상성 장애 (예를 들어, 외상성 뇌 손상, 척수 손상), 신경 염증성 질환(예를 들어, 다발성 경화증), 간질성 폐질환(예를 들어, 특발성 폐섬유증(IPF)), 폐렴, 섬유소용해, FXII/FXIIa-유도 키닌 형성 관련 질환(예를 들어, 유전성 혈관부종(HAE)), 패혈증, FXII/FXIIa-매개 보체 활성화와 관련된 질환, 급성 호흡곤란 증후군(ARDS), 기관 및 세포 이식, 겸상 세포 질환 및 증가된 혈관 투과성과 관련된 병태로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 제형, 또는 방법 또는 용도.
  40. 대상체에서 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태의 활성을 길항시키고/시키거나 활성화를 길항시키는데 사용하기 위한 키트로서, 상기 키트가 다음을 포함하는, 키트:
    (a) 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 약제학적 제형;
    (b) 대상체에서 인자 XII 및/또는 이의 활성화된 형태의 활성을 길항시키고/시키거나 활성화를 길항시키는데 키트를 사용하기 위한 지침서; 및
    (c) 임의로 적어도 하나의 추가의 치료학적 활성 화합물 또는 약물.
  41. 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는데 사용하기 위한 키트로서, 상기 키트가 다음을 포함하는, 키트:
    (a) 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 약제학적 제형;
    (b) 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는데 키트를 사용하기 위한 지침서; 및
    (c) 임의로 적어도 하나의 추가의 치료학적 활성 화합물 또는 약물.
  42. 제40항 또는 제41항에 있어서, 상기 제형이 바이알, 미리 채워진 주사기 또는 자동주사기 장치에 존재하는, 키트.
  43. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 제형을 포함하는 미리 채워진 주사기.
  44. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 약제학적 제형을 포함하는 자동주사기 장치.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022241148A1 (en) * 2021-05-12 2022-11-17 Anaptysbio, Inc. Antibody composition
WO2023115112A1 (en) * 2021-12-20 2023-06-29 CSL Innovation Pty Ltd Protein formulations and uses thereof

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2841185C (en) * 2011-07-22 2021-05-25 Csl Behring Gmbh Inhibitory anti -factor xii/xiia monoclonal antibodies and their uses
RU2014140137A (ru) * 2012-03-08 2016-04-27 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Лекарственный препарат антитела к бета-амилоиду
US8613919B1 (en) * 2012-08-31 2013-12-24 Bayer Healthcare, Llc High concentration antibody and protein formulations
EA201890340A1 (ru) * 2015-07-21 2018-09-28 Дайэкс Корп. Моноклональное антитело-ингибитор фактора xiia
CN109311986A (zh) * 2016-03-25 2019-02-05 威特拉公司 登革热病毒抗体分子的制剂
WO2017173494A1 (en) * 2016-04-06 2017-10-12 Csl Limited Method of treating atherosclerosis
MX2019007564A (es) * 2016-12-23 2019-09-06 Serum Institute Of India Pvt Ltd Metodos mejorados para estimular la productividad de anticuerpos en el cultivo de celulas de mamiferos y reducir la agregacion durante los procesos de formulacion corriente abajo y formulaciones de anticuerpos estables obtenidas a partir de los mismos.
US20220089776A1 (en) * 2018-11-28 2022-03-24 Oregon Health & Science University Therapeutic factor xii antibody

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