KR20230028793A - 항-b7-h3 항체를 포함하는 항체-약물 접합체 - Google Patents

항-b7-h3 항체를 포함하는 항체-약물 접합체 Download PDF

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KR20230028793A
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김선영
박수호
정두환
서동훈
이상광
윤상현
하지현
이향숙
박옥구
서범석
김세나
설민아
송지나
우성호
조종운
이재호
이현미
박재은
송영자
이은진
이현주
심은영
고윤정
이민주
박영우
류요섭
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Abstract

본 개시내용은 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이되, 하나 이상의 활성제는 링커를 통해 항-B7-H3 항체에 접합된다. 링커는 활성제를 항체에 공유적으로 연결하는 단위를 포함할 수 있다. 본 개시내용은 추가로 B7-H3에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체 및 이의 항원 결합 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성뿐만 아니라 다양한 치료적, 진단적 및 예방적 적응증에서 이러한 항-B7-H3 항체 및 이의 항원-결합 단편을 제조하고 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

항-B7-H3 항체를 포함하는 항체-약물 접합체
본 출원은 2020년 6월 26일자로 출원된 미국 특허 가출원 제63/044,764호의 우선권의 이익을 주장한다. 본 출원은 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate: ADC)는 항체의 결합 특이성과 화학치료제의 효능을 결합한 것이다. ADC 기술은 약물이 표적 암세포에 정확하게 전달되고 특정 조건하에서 방출되도록 하는 동시에 건강한 세포에 대한 부수적 손상을 최소화하므로, ADC 기술은 치료적 항체의 효능을 증가시키고 이상 반응의 위험을 감소시킨다.
B7-H3(CD276)은 B7 패밀리의 신규한 구성원이며, 대략 최대 30%의 서열 상동성을 공유한다. B7-H3은 처음에 T 세포에 대한 공동자극 분자로 도입되었지만, 인간 면역에서 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포뿐만 아니라 자연 살해 세포를 조절할 수 있는 공동 저해성 관문 리간드로 입증되었다. B7-H3 단백질의 발현은 정상 조직에서는 매우 제한적이지만, 항원 제시 세포의 세포 표면에서 유도되어 원발성 및 전이성 암을 포함한 다양한 고형 종양에 널리 퍼져 있다, 또한, B7-H3 발현은 암 줄기 세포 및 종양 맥관구조를 포함하여 여러 암세포 유형에서 검출된다. B7-H3 과발현은 종양의 질환 중증도 및 불량한 임상 결과와 깊은 상관관계가 있는 것으로 보인다.
따라서, 표적 B7-H3을 표적으로 하는 개선된 항체-약물 접합체가 필요하다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 항체, 링커 및 활성제(예를 들어, 약물)를 포함하는 항체-약물 접합체에 관한 것이다. 항체-약물 접합체는, 예를 들어, 항체 및 링커로부터 활성제를 방출하는 데 사용하기 위한 자가-희생 기(self-immolative group)를 포함할 수 있다.
본 개시내용은 B7-H3에 결합하는 단일클론 항체 및 이의 항원 결합 단편 또는 임의의 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성을 제공한다. 이러한 항체 및 이의 항원 결합 단편 또는 임의의 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성은 본 명세서에서 집합적으로 항-B7-H3 단일클론 항체 또는 항-B7-H3 mAb 또는 이의 항원 결합 단편 또는 임의의 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성으로 지칭된다. 바람직하게는, 단일클론 항체 및 이의 항원-결합 단편 또는 임의의 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성은 적어도 인간 B7-H3에 특이적이다. 일부 실시형태에서, 인간 B7-H3를 인식하는 단일클론 항체 및 이의 항원-결합 단편 또는 임의의 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성은 또한 비제한적인 예로서, 비인간 영장류 B7-H3, 예를 들어, 사이노몰구스 원숭이 B7-H3 및/또는 설치류 B7-H3와 같은 적어도 하나의 다른 비인간 B7-H3 단백질에 대해 교차-반응성이다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 항체, 항체에 공유적으로 커플링된 적어도 하나의 분지형 링커 및 분지형 링커에 공유적으로 커플링된 적어도 1개 또는 2개의 활성제를 포함하는 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다. 분지형 링커는 2차 링커를 통해 분지 단위에 커플링된 적어도 하나의 약물을 갖는 분지 단위를 포함할 수 있고; 분지 단위는 1차 링커에 의해 항체에 커플링된다. 1차 및/또는 2차 링커는 적어도 하나의 폴리에틸렌 글리콜 단위를 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 I로 표시되는 항체 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물에 관한 것이다:
Ab-(G) n
화학식 I
식 중,
Ab는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDRH1), 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDRH2), 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDRH3), 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDRL1), 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDRL2) 및 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDRL3)을 포함하는 항-B7-H3 항체 또는 이의 항원-결합 단편이되;
CDRH1은 서열번호 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37 또는 43의 아미노산 서열을 포함하고;
CDRH2는 서열번호 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38 또는 44의 아미노산 서열을 포함하며;
CDRH3은 서열번호 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39 또는 45의 아미노산 서열을 포함하고;
CDRL1은 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40 또는 46의 아미노산 서열을 포함하며,
CDRL2는 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41 또는 47의 아미노산 서열을 포함하고;
CDRL3은 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42 또는 48의 아미노산 서열을 포함하며;
각각의 G는 독립적으로 활성제 및 링커를 포함하는 화학적 모이어티이되, 링커는 Ab를 활성제에 연결하고; 그리고
n은 1 내지 20의 정수이다.
도 1은 JIMT-1에서 T-Int-102-D1-5 AB2.1에 대한 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.(GraphPad Software Inc.))을 사용하여 생성된 IC50을 보여준다.
도 2는 JIMT-1에서 T-Int-112-AB2.1에 대한 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.)을 사용하여 생성된 IC50을 보여준다.
도 3은 NCI-N87에서 T-Int-112-AB2.1에 대한 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.)을 사용하여 생성된 IC50을 보여준다.
도 4는 HCT-116에서 T-Int-102-D1-5 AB2.1에 대한 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.)을 사용하여 생성된 IC50을 보여준다.
도 5는 HCT-116에서 T-Int-112-AB2.1에 대한 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.)을 사용하여 생성된 IC50을 보여준다.
도 6은 NCI-H23에서 T-Int-102-D1-5 AB2.1에 대한 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.)을 사용하여 생성된 IC50을 보여준다.
도 7은 NCI-H460에서 T-Int-102-D1-5 AB2.1에 대한 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.)을 사용하여 생성된 IC50을 보여준다.
도 8은 NCI-H23에서 T-Int-112-AB2.1에 대한 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.)을 사용하여 생성된 IC50을 보여준다.
도 9는 NCI-H460에서 T-Int-112-AB2.1에 대한 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.)을 사용하여 생성된 IC50을 보여준다.
도 10은 JIMT-1 이종이식편에서 종양 부피에 대한 T-20-AB2.1 및 T-21-AB2.1의 효과를 보여준다.
도 11은 JIMT-1 이종이식편에서 체중에 대한 T-20-AB2.1 및 T-21-AB2.1의 효과를 보여준다.
도 12는 HCT-116 이종이식편에서 종양 부피에 대한 T-Int-102-D1-5 AB2.1 및 T-Int-112-AB2.1의 효과를 보여준다.
도 13은 HCT-116 이종이식편에서 체중에 대한 T-Int-102-D1-5 AB2.1 및 T-Int-112-AB2.1의 효과를 보여준다.
도 14는 NCI-H23 이종이식편에서 종양 부피에 대한 T-Int-112-AB2.1의 효과를 보여준다.
도 15는 NCI-H23 이종이식편에서 체중에 대한 T-Int-112-AB2.1의 효과를 보여준다.
도 16은 NCI-H460 이종이식편에서 종양 부피에 대한 T-Int-112-AB2.1의 효과를 보여준다.
도 17은 NCI-H460 이종이식편에서 체중에 대한 T-Int-112-AB2.1의 효과를 보여준다.
항체-약물 접합체의 기본 구조는 다음과 같다: 항체-링커-저분자량 약물 또는 독소. 링커는 이상적으로, 예를 들어, 약물이 표적 세포에 도달한 후 항체로부터 분리된 후에 표적 암세포에 대한 효과를 나타낼 수 있게 한다. 링커는 또한 항체와 약물을 연결하는 기능적 역할을 한다.
B7-H3(CD276)은 B7 패밀리의 구성원이며, 패밀리와 높은 서열 상동성[최대 약 30%]을 나타낸다. B7-H3의 발현은 정상 조직에서는 매우 제한적이지만, 유방암, 폐암, 췌장암, 전립선암, 신장암 및 결장암뿐만 아니라 흑색종 및 교아종을 포함한 다양한 고형암에 널리 퍼져 있다. B7-H3는 종양 상피뿐만 아니라 종양 관련 맥관구조 및 기질(stroma)에서 관찰되었다. 또한, B7-H3의 과발현은 많은 암 질환에서 불량한 결과와 상관관계가 있었다. NSCLC에서 일반적(약 85%)인 높은 B7-H3 발현은 전이 및 진행 단계와 관련이 있다. B7-H3의 더 높은 발생률 및 발현 수준은 항-PD-1 요법에 저항성이 있는 암에서 관찰되었다. 따라서, B7-H3의 표적화는 재발성 또는 불응성 NSCLC에 대해 보장된다. 일련의 항-B7-H3 ADC가 제조되고 테스트되었다. ADC의 주요 성분은 OHPAS 링커 및 OHPAS 호환성 작용기가 있는 벤조다이아제핀이다. 혈장에서 입증된 안정성으로, ADC는 표적 종양 세포에서 독소를 효율적으로 방출하며, 이는 치료창의 잠재적인 증폭을 암시한다. ADC는 생체내에서 체중 변화를 최소화하면서 우수한 효능을 보였으며, 이는 항-PD-1 요법에 대해 불응성인 NSCLC 환자에게 새로운 옵션을 제공한다.
일련의 단단한 결합 항-B7-H3 mAb 및 이들의 티오맙 버전이 생성되었다(Kd 약 1.7 내지 5.4×10-11 M). 새로 발견된 OHPAS 링커 및 OHPAS-호환성 벤조다이아제핀 페이로드를 활용하여, 일련의 항-B7-H3 ADC가 제조되고 테스트되었다. 예시적인 OHPAS 링커는 본 명세서에 추가로 기재되어 있으며, 예를 들어, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 국제 공개 WO 2019/008441에도 개시되어 있다. 예시적인 OHPAS-호환성 벤조다이아제핀 페이로드는 본 명세서에 추가로 기술되어 있으며, 예를 들어, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 미국 공개 US2019/0367488호에도 개시되어 있다. ADC는 시험관내에서 B7-H3-양성 종양 세포주에 대해 매우 강력하였다. ADC는 NSCLC의 마우스 이종이식 모델에서 테스트되었을 때 효과적이었다.
본 명세서에 개시된 ADC는 B7-H3를 발현하는 특정 종양(예를 들어, 유방암, 폐암, 췌장암, 전립선암, 신장암 및 결장암뿐만 아니라 흑색종 및 교아종)을 표적으로 할 수 있다(Cancer Cell. 2017 Apr 10; 31(4): 501-515.e8). B7-H3의 과발현은 질환 중증도 및 불량한 결과와 좋은 상관관계를 나타낸다. B7-H3는 광범위한 종양에서 높은 빈도로 강력하게 발현된다. 암 요법을 위한 B7-H3는 표적화는 암 줄기 세포 집단과 종양 맥관구조 및 기질에 대한 발현 때문에 유익하다(Journal of Clinical Oncology 35, no. 15_suppl). 종양 세포 및 종양 맥관구조 둘 다 B7-H3(CD276) 양성이다(Cancer Cell. 2017 Apr 10; 31(4): 501-515.e8). 개시된 B7-H3 항체는 Fab-검정에 의해 확인된 개선된 내재화 능력을 갖는다. 따라서, B7-H3를 표적으로 하는 본 명세서에 개시된 개선된 항체-약물 접합체는 암과 관련된 증상을 치료하거나 또는 완화시키는 방법에 유용할 것으로 예상된다.
B7-H3 항체 및 이의 용도의 예는 표 1에 열거되어 있다.
표 1은 B7-H3 ADC의 개발 상태를 보여준다.
Figure pct00001
B7-H3 발현은 종양 침습 및 전이에 기여한다. 암세포에서 B7-H3 퓨코실화의 상이한 패턴 또는 상이한 아이소형 발현은 상충되는 동시자극 및 동시저해 기능을 나타낸다(Immunological Reviews 2017; 276: 52-65). B7-H3는 종양 조직에서 고도로 발현된다(도 26A 내지 도 26B). B7-H3 발현은 RCC, 폐암, 전립선암, 결장직장암종, 담낭암, 식도 편평세포암, 자궁경부암, 골육종, 유방암, 두경부암, 췌장암 및 난소암 환자에서의 불량한 결과와 상당한 관련이 있다(Clin Cancer Res 2008;14:5150-7; J. Cell. Mol. Med. Vol 21, No 9, 2017 pp. 2199-2210; OncoTargets and Therapy 2014:7 1465-1472; Cell Research volume 27, pages 1034-1045(2017); Am J Transl Res 2015;7(12):2646-2660; Clin Cancer Res, 2012, 18(14): 3834-3845).
B7-H3는 많은 혈액 세포주에서 발현되지 않는다(Tissue Antigens 2005: 66: 83-92). 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia: AML) 및 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia: ALL)의 44.8%가 B7-H3 발현을 나타내고, 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma: MCL) 사례의 65%가 B7-H3 발현을 나타낸다. B 세포, T 세포 및 단핵구에서는 B7-H3의 발현이 없다(CMI 2005 2(4) 307-311). B7-H3는 대식세포, DCsm 및 종양에서 유도적으로 발현된다. B7-H3는 단핵구(Mo-DC)로부터 유래되는 수지상 세포에서 구성적으로 발현된다. B7-H3는 단핵구 유래 DC에서 약하게 발현된다(Clin Cancer Res 18(14); 3834-45, 2012).
본 개시내용 또한 B7-H3에 특이적인 적어도 제1 암(arm)을 포함하는 1가 항체 및/또는 이중특이성 항체를 제공한다. 바람직하게는, 1가 항체 및/또는 이중특이성 항체는 적어도 인간 B7-H3에 특이적이다. 일부 실시형태에서, 인간 B7-H3를 인식하는 1가 항체 및/또는 이중특이성 항체는 또한 비제한적인 예로서 비인간 영장류 B7-H3, 예를 들어, 사이노몰구스 원숭이 B7-H3 및/또는 설치류 B7-H3와 같은 적어도 하나의 다른 비인간 B7-H3 단백질에 대해 교차-반응성이다. 본 개시내용 또한 본 명세서에 개시된 항-B7-H3 1가 및/또는 항-B7-H3 이중특이성 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다.
본 개시내용의 예시적인 항-B7-H3 단일클론 항체 및 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어, 표 19 내지 표 24에 열거된 항체를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 예시적인 항-B7-H3 단일클론 항체 및 이의 항원 결합 단편은 표 19에 나타낸 CDR 서열로부터 선택된 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 표 19에 나타낸 CDR 서열로부터 선택된 경쇄 CDR의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 예시적인 항-B7-H3 단일클론 항체 및 이의 항원 결합 단편은 표 20 내지 표 24에 나타낸 중쇄 도메인 및 경쇄 도메인의 가변 서열의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 예시적인 항-B7-H3 단일클론 항체는 표 21 내지 표 24에 나타낸 중쇄 도메인 및 경쇄 도메인의 불변 서열의 조합을 포함한다.
항체-약물 접합체
소정의 양태에서, 본 명세서에 개시된 항체-약물 접합체는 하기 화학식 I 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물로 표시된다:
Ab-(G) n
화학식 I
식 중,
Ab는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDRH1), 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDRH2), 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDRH3), 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDRL1), 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDRL2) 및 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDRL3)를 포함하는 항-B7-H3 항체 또는 이의 항원-결합 단편이되;
CDRH1은 서열번호 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37 또는 43의 아미노산 서열을 포함하고;
CDRH2는 서열번호 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38 또는 44의 아미노산 서열을 포함하며;
CDRH3은 서열번호 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39 또는 45의 아미노산 서열을 포함하고;
CDRL1은 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40 또는 46의 아미노산 서열을 포함하며,
CDRL2는 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41 또는 47의 아미노산 서열을 포함하고;
CDRL3은 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42 또는 48의 아미노산 서열을 포함하며;
각각의 G는 독립적으로 하나 이상의 활성제 및 링커를 포함하는 화학적 모이어티이되, 링커는 Ab를 활성제(들)에 공유적으로 연결하고; 그리고
n은 1 내지 20의 정수이다.
일부 실시형태에서, Ab는 단일클론 항체, 도메인 항체(dAb), 단일쇄 항체(scAb), Fab 단편, F(ab')2 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), scFv-Fc 단편, 단일 도메인 중쇄 항체, 단일 도메인 경쇄 항체, 변이체 항체, 다량체 항체 또는 이중특이성 항체이다. Ab는 토끼, 마우스, 키메라, 인간화된 또는 완전 인간 단일클론 항체일 수 있다. 일부 실시형태에서, Ab는 IgG1 아이소타입과 같은 IgG 아이소타입이다.
일부 실시형태에서, Ab는 서열번호 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79 또는 81의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95 또는 97의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄의 조합을 포함한다.
일부 실시형태에서, Ab는 다음으로부터 선택되는 가변 중쇄 서열과 가변 경쇄 서열의 조합을 포함한다:
(a) 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 및 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
(b) 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
(c) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
(d) 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
(e) 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄; 및
(f) 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
(g) 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄; 및
(h) 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄.
일부 실시형태에서, B7-H3는 인간 B7-H3이다.
일부 실시형태에서, 절단기는 표적 세포 내에서 절단할 수 있다. 일부 실시형태에서, 절단기는 하나 이상의 활성제를 방출할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 접합체는 Ab; Ab에 공유적으로 커플링된 적어도 하나의 분지형 링커; 그리고 분지형 링커에 공유적으로 커플링된 적어도 2개의 활성제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 2개의 분지형 링커는 Ab에 커플링되며, 각 분지형 링커는 적어도 2개의 활성제에 커플링된다. 일부 실시형태에서, 3개의 분지형 링커가 Ab에 커플링된다. 다른 실시형태에서, 4개의 분지형 링커가 Ab에 커플링된다. 또 다른 실시형태에서, 정확하게 1개의 분지형 링커가 Ab에 커플링된다. 또 다른 실시형태에서, 각 분지형 링커는 정확하게 2개의 활성제에 커플링된다. 일부 실시형태에서, 접합체는 적어도 2개의 상이한 활성제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 분지형 링커는 2개의 상이한 활성제에 커플링된다.
일부 실시형태에서, 각 활성제는 절단성(예를 들어, 가수분해성) 결합에 의해 분지형 링커에 커플링된다. 일부 실시형태에서, 각 분지형 링커는 분지 단위를 포함하고, 각 활성제는 2차 링커를 통해 분지 단위에 커플링되며, 분지 단위는 1차 링커에 의해 항-B7-H3 항체에 커플링된다. 일부 실시형태에서, 분지 단위는, 예를 들어, 아민 또는 아마이드의 질소 원자이다. 일부 실시형태에서, 분지 단위는 아마이드이고, 1차 링커는 아마이드의 카보닐을 포함한다. 일부 실시형태에서, 분지 단위는 아마이드이고, 2차 링커는 아마이드의 카보닐을 포함한다. 일부 바람직한 실시형태에서, 분지 단위는 라이신 단위이다.
링커 및 접합 파트너
일부 바람직한 실시형태에서, 각각의 G는 독립적으로 하기 화학식 (II)의 구조를 갖는 기이다:
Figure pct00002
각각의 Q는 독립적으로 헤테로원자, 바람직하게는 O 또는 N을 통해 L'에 연결된 활성제이고;
Z'는 연결기이며;
L'는 O, S 및 N, 바람직하게는 O 또는 N으로부터 선택되는 헤테로원자를 통해 SO2에 부착된 스페이서 모이어티이며, L'와 SO2 사이의 결합의 절단이 L'와 Q 사이의 결합의 절단을 촉진하여 활성제를 방출하도록 선택되고;
X는 -O-, -C(Rb)2- 또는 -N(Rc)-, 바람직하게는 -O-이며;
Ar은 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬과 같은 고리를 나타내며, 바람직하게는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
Y'는 -(CRb 2)yN(Ra)-, -(CRb 2)yO- 또는 -(CRb 2)yS-이고, y가 1인 경우 N, O 또는 S 원자가 TG에 부착되도록 위치하며;
X 및 Y'는 Ar의 인접한 원자에 위치하고;
TG는 활성화될 때 SO2와 반응하여 (Q)q-(L')w를 대체하고 X-SO2를 포함하는 5-6-원 고리를 형성할 수 있는 N, O 또는 S 원자 및 Ar의 개재 원자를 생성하는 촉발기(triggering group)이며;
q는 1 내지 약 20, 바람직하게는 1 내지 약 10의 값을 갖는 정수이고;
w, x 및 y는 각각 독립적으로 0 또는 1의 값을 갖는 정수이며;
각각의 Ra 및 Rc는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬이고; 그리고
각각의 Rb는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬이거나; 또는
2개의 Rb는 이들이 부착된 원자와 함께 3-5-원 고리, 바람직하게는 3-4-원 고리를 형성하되,
단, w가 0일 때, q는 1이다.
각각의 활성제는 아래에 더 자세히 기재되는 바와 같이 임의의 적합한 활성제일 수 있다. 많은 전통적인 접합 방법이 안정적인 연결을 형성하기 위해 아민 또는 하이드록실기와 같은 작용기의 존재를 필요로 하지만, 본 명세서의 본 개시내용은 지금까지 이러한 목적에 사용할 수 없었던 작용기, 예컨대, 페놀 및 3차 아민을 사용하여 연결을 형성하기 위한 전략을 제공한다. 이러한 작용기는 본 명세서에 개시된 접합체에서 안정적인 연결을 형성하는 반면, 촉발기를 활성화하는 미리 결정된 조건하에서 여전히 방출을 허용한다.
많은 적합한 촉발기가 당업계에 공지되어 있으며, 예시적인 촉발기 및 이들을 활성화하는 조건은 아래 Y에 대해 기술된 모이어티와 같이 아래에서 논의된다. 일부 촉발기는 N, O 또는 S 원자를 포함하지만, 비친핵성 형태이다. 예를 들어, NO2 기는 환원 조건하에 SO2와 반응할 수 있는 NH2 또는 NHOH 기로 환원되는 촉발기이고, 아세테이트 기는 가수분해 조건하에 SO2와 반응할 수 있는 하이드록실기로 가수분해되는 촉발기이다. 다른 촉발기는 N, O 또는 S 원자를 포함하지 않지만, 활성화될 때 친핵성 N, O 또는 S 원자로 전환된다. 예를 들어, 보로네이트 기는 산화 조건(예컨대, 퍼옥사이드)하에 SO2와 반응할 수 있는 하이드록실기로 전환되는 촉발기이다. 바람직하게는, 촉발기는 이를 활성화하는 조건이 표적화 모이어티와 같은 접합체의 다른 부분을 절단하거나 또는 분해하지 않고 선택적으로 그렇게 하도록 선택된다. 친핵성 N, O 또는 S 원자가 생성되면, 해당 원자는 분자내에서 SO2 모이어티를 공격하여 고리를 형성하고, 모이어티(Q)q-(L')w-H를 방출하며, 여기서 H는 이전에 SO2 모이어티에 부착된 Q 또는 L'의 헤테로원자에 결합된다.
w가 0인 실시형태에서, q는 1이고, Q는 헤테로원자를 통해 SO2에 직접 부착된다. 따라서, 촉발기를 활성화하면 분자내에서 SO2 모이어티를 공격하여 고리를 형성하고 활성제 Q-H를 방출하는 친핵성 헤테로원자를 생성하며, 여기서 H는 이전에 SO2에 부착된 헤테로원자에 결합된다.
w가 1인 실시형태에서, L'는 동일하거나 상이할 수 있는 Q의 다중 발생의 부착을 허용하도록 선택될 수 있다. 따라서, 각각의 경우 Q는 스페이서 모이어티를 통해 SO2에 간접적으로 부착된다. 이러한 실시형태에서, 촉발기를 활성화하면 분자내에서 SO2 모이어티를 공격하여 고리를 형성하고, 모이어티(Q)q-L'-H를 방출하는 친핵성 헤테로원자를 생성하며, 여기서 H는 이전에 SO2에 부착된 L'의 헤테로원자에 결합된다. 이러한 실시형태에서, 방출된 헤테로원자는 활성제(들) Q(예컨대, Q가 4차 암모늄으로 L'에 부착된 3차 아민을 갖는 경우) 또는 Q-H를 방출하는 분자내 반응을 촉발한다. 예를 들어, 헤테로원자는 Q-H의 하이드록실로 형성된 에스터 모이어티와 분자내 고리화 반응을 일으켜 고리를 형성하고 활성제 Q-H를 방출할 수 있다. 대안적으로, 헤테로원자는 활성제 Q 또는 Q-H를 방출하는 분자내 호변이성질화를 겪을 수 있다.
Ar은 분자내 고리화를 겪는 모이어티가 촉발기의 활성화 후 해당 반응을 촉진하기 위해 근접하게 유지되도록 이중고리 또는 다른 다중고리의 고리를 포함하는 임의의 적합한 고리일 수 있다. 사이클로알켄일 또는 헤테로사이클로알켄일과 같은 다른 유형의 고리가 유사한 기하학을 시행할 수 있지만 이러한 고리에 있는 치환기의 단단한 기하학이 반응성 모이어티의 유리한 배치를 보장하기 때문에, 방향족 및 헤테로방향족 고리의 평면 특성이 바람직하다. 5-원 또는 6-원 고리, 및/또는 고리 내 헤테로원자의 수 또는 실체 및/또는 다른 고리 상의 치환기(예를 들어, 전자-공여 또는 전자-끄는 치환기)는 고리의 생성된 결합 각에 기초하여 고리화의 속도를 조절하도록 선택될 수 있다. 유사하게는, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴 고리의 보다 유연한 형태는 분자내 고리화의 속도를 늦추는 것이 바람직할 때 유용할 수 있다.
Z'는 Ar을 하나 이상의 Ab 기에 연결하는 임의의 적합한 연결기일 수 있다. 전형적으로, 연결기는 포함될 수 있는 임의의 알킬 사슬의 소수성 특성의 균형을 맞추기 위해 폴리에틸렌 글리콜 모이어티, 펩타이드 서열, 전하-보유 모이어티(예컨대, 카복실레이트, 아민, 질소-함유 고리 등) 등과 같은 모이어티를 포함함으로써 수용성을 촉진하고 접합체의 응집을 억제하기에 충분히 친수성이어야 한다. 모듈식 방식으로 접합체를 제조하는 것이 종종 유리하기 때문에, Z'는 하나의 반응성 모이어티가 또 다른 반응성 모이어티에 접합되어 생성되는 작용기인 연결 단위를 포함할 수 있다. 대표적인 연결 단위는 (예를 들어, 변수 Z와 관련하여) 아래에 더 자세히 논의되며, 일반적인 연결기는 아마이드, 트라이아졸, 옥심, 카바메이트 등을 포함한다. 대표적인 Z'기는 아래에 더 상세하게 논의되는 바와 같이 L1'-Z기를 포함한다. 일부 실시형태에서, 각각의 Ab에 부착되는 모든 G기는 동일한 반면, 다른 실시형태에서, 각각의 Ab는 2개 이상의 별개의 G기에 부착될 수 있다. 예를 들어, 일부 G기는 제1 조건하에 활성화되는 촉발기를 가질 수 있는 반면, 다른 G기는 제2 조건하에 활성화되는 촉발기를 가질 수 있으므로, 예를 들어, 하나의 활성제는 제1 조건하에 선택적으로 방출될 수 있지만, 제2 활성제는 제2 조건하에 선택적으로 방출될 수 있다.
화학식 (II)의 소정의 실시형태에서, -Y'는 -(CH2)yNR"-, -(CH2)yO- 또는 -(CH2)yS-이고, y가 1인 경우 N, O 또는 S 원자가 TG에 부착되도록 위치하며; R"는 수소 또는 C1-C6-알킬이고; y는 0 또는 1의 값을 갖는 정수이다. 일부 이러한 실시형태에서, TG는 β-갈락토시드, β-글루쿠로나이드 또는 β-갈락토시드와 β-글루쿠로나이드의 조합이다.
화학식 (II)의 일부 실시형태에서, (L')w는 각각의 Q를 -SO2-에 연결하고; 각각의 Q는 헤테로원자, 바람직하게는 O 또는 N을 통해 L'기 중 하나에 연결되어 Q의 헤테로원자를 포함하는 -O-, -OC(O)-, -OC(O)O- 또는 -OC(O)NH- 연결을 형성하는 활성제이다. 다른 실시형태에서, (Q)q-(L')w-는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00003
;
Figure pct00004
;
Figure pct00005
및
Figure pct00006
식 중,
Q는 헤테로원자, 바람직하게는 O 또는 N을 통해 L'에 연결된 활성제이고,
X4는 존재하지 않거나 또는 Q의 헤테로원자를 포함하는 -O-, -OC(O)-, -OC(O)O- 또는 -OC(O)NH- 연결을 형성하며;
X1은 -O- 또는 -NRa-이고;
X2는 -O-, -OC(O)-, -OC(O)O- 또는 -OC(O)NH-이며;
X3는 -OC(=O)-이고;
w'는 1, 2, 3, 4 또는 5의 값을 갖는 정수이며;
R9 및 R10은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 알킬, 아릴 및 헤테로아릴은 비치환되거나 또는, 예를 들어, 알킬, -(CH2)uNH2, -(CH2)uNRu1Ru2 및 -(CH2)uSO2Ru3로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환되고;
Ru1, Ru2 및 Ru3는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이며; 그리고
u는 1 내지 약 10의 값을 갖는 정수이다.
일부 이러한 실시형태에서, (Q)q-(L')w-는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00007
;
Figure pct00008
.
소정의 실시형태에서, Z'는 화합물을 촉발제, 고체 표면(예를 들어, 고체-지지된 어레이 또는 센서 입자를 형성하기 위해) 또는 임의의 다른 분자 또는 관심 지지체에 부착하는 데 사용될 수 있는 반응성 기(예를 들어, Z와 관련하여 아래에 더 상세하게 논의되는 바와 같은 전구체 기)를 포함한다.
소정의 실시형태에서, Z'는 하기 화학식 (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg) 또는 (IIh)의 구조를 갖는 연결기이다:
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
식 중,
*는 Ab에 대한 부착점이고;
**는 Ar에 대한 부착점이며;
Re는 알킬이고;
X"는 -O-, -S-, -NH- 또는 -CH2-이며;
X4는 -NHC(O)-(CH2)g-NH- 또는 -C(O)NH-(CH2)h-NH-이고;
Wb1 및 Wb2는 각각 독립적으로 -C(O)NH-, -NHC(O)-,
Figure pct00017
,
Figure pct00018
,
Figure pct00019
또는
Figure pct00020
이며;
L2는 선택적으로 존재하는 스페이서 모이어티이며, C1-C6 알킬, C5-C14 아릴 및 C3-C8 헤테로아릴과 같은 하나 이상의 치환기로 추가로 치환될 수 있되, 알킬, 아릴 및 헤테로아릴은, 예를 들어, C1-C10 알킬, -(CH2)uNH2, -(CH2)uNRu1Ru2, -(CH2)uCO2H, -(CH2)uCO2Ru1 및 -(CH2)uSO2Ru3로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환기로 추가로 치환될 수 있고, Ru1, Ru2 및 Ru3는 각각 독립적으로 수소, C1-C15 알킬, C6-C20 아릴 또는 C3-C10 헤테로아릴이며; u는 1 내지 약 10의 값을 갖는 정수이고;
R12는 수소, C1-C8 알킬 또는 천연 아미노산 모이어티와 같은 아미노산 모이어티이며;
a, b, c, d, e, g, h, o 및 qq는 각각 독립적으로 1 내지 약 10의 값을 갖는 정수이고; 그리고
s'는 1 내지 약 10의 값을 갖는 정수이다.
바람직한 실시형태에서, Wb1 및 Wb2는 각각 독립적으로
Figure pct00021
,
Figure pct00022
,
Figure pct00023
또는
Figure pct00024
이다.
다른 실시형태에서, Z'는 하기 화학식 (IIa'), (IIb'), (IIc'), (IId'), (IIe'), (IIf'), (IIg') 또는 (IIh')의 구조를 갖는 연결기이다:
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
식 중,
*는 Ab에 대한 부착점이고;
**는 Ar에 대한 부착점이다.
일부 바람직한 실시형태에서, Z'는 다음으로부터 선택되는 연결기이다:
Figure pct00033
,
Figure pct00034
,
Figure pct00035
,
Figure pct00036
,
Figure pct00037
,
Figure pct00038
,
Figure pct00039
,
Figure pct00040
,
Figure pct00041
,
Figure pct00042
,
Figure pct00043
,
Figure pct00044
,
Figure pct00045
,
Figure pct00046
,
Figure pct00047
,
Figure pct00048
,
Figure pct00049
및
Figure pct00050
,
식 중,
Rza는 H 또는 메틸이고;
Rzb는 -OH, =O 또는 =NHOH이며;
Figure pct00051
는 단일 결합 또는 이중 결합이고;
a"는 화학식 (II)의 Z'와 Ar 사이의 결합을 나타내며;
b"는 Z'와 Ab 사이의 결합을 나타내고; 그리고
Z"는,
어느 한쪽 방향으로 배치된,
Figure pct00052
및
Figure pct00053
로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, G는 다음으로부터 선택되는 모이어티를 포함한다:
Figure pct00054
,
Figure pct00055
및
Figure pct00056
식 중, Q는 활성제이고,
Figure pct00057
는 Z'를 치환된 페닐기에 연결하는 연결기 Z'의 단편(화학식 (II)에서 Ar로 표시됨)이다.
소정의 실시형태에서, Ab-(G)n은 하기 화학식 (III)의 화합물 또는 이의 염으로 표시된다:
Figure pct00058
식 중,
A는
Figure pct00059
,
Figure pct00060
,
Figure pct00061
,
Figure pct00062
,
Figure pct00063
,
Figure pct00064
이고;
M은 N, CR30 또는 C(-L-Q)이며;
각각의 L은 스페이서 모이어티로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Q는 활성제이며;
J는 본 명세서에 기재된 바와 같은 B7-H3 항체이고;
R30 및 R31은 각각 독립적으로 전자 끄는 기, 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되며;
R42 및 R43은 각각 독립적으로 -OH, 알콕시, -NR44R45, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택되되, R44와 R45는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 아릴 또는 헤테로아릴 고리와 선택적으로 융합된 5-8-원 고리를 형성할 수 있고;
R32, R44 및 R45는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되며; 그리고
n은 1 내지 4이다.
일부 실시형태에서, M은 N이다.
소정의 실시형태에서, M은 CR30이고, R30은 전자 끄는 기이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00065
,
Figure pct00066
및
Figure pct00067
로부터 선택되되,
R31은 전자 끄는 기이고, 바람직하게는 L은 아마이드 또는 에스터로부터 선택되는 전자 끄는 기에 의해 C에 커플링된다.
일부 실시형태에서, M은 C(-L-Q)이되, L은 전자 끄는 기에 의해 C에 커플링된다.
일부 실시형태에서, R30은 -CO2NR33R34 또는 -CO2R35이고, R33, R34 및 R35는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 각각의 전자 끄는 기는 -NO2, -CN, -할로알킬, -CO2NR33R34, -CO2R35, -C(=O)R36, -S(=O)R37, -S(=O)2OR38 및 -NR39R40R41로부터 독립적으로 선택되고; R36 , R37, R38, R39 , R40 및 R41은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 각각의 전자 끄는 기는 -CN, -CONR33R34 및 -CO2R35로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시형태에서, 각각의 전자 끄는 기는 -CN, -CONH2 및 -CO2Me로부터 독립적으로 선택된다.
소정의 실시형태에서, Q는 작용제이다.
일부 실시형태에서, Q는 L' 및 Q'를 포함하되, L'는 링커이고, Q'는 활성제이다.
소정의 실시형태에서, L'는 커플링 기를 포함하되, 커플링 기는 L에 커플링된다.
일부 실시형태에서, 커플링 기는 -C(=O)NR32-, -C(=O)O-, -C(=NR32)-, -C=NO-, -NR32-C(=O)-NR32-, -OC(=O)O-, -S-S-, -NR32S(=O)2O- 및 -OS(=O)2O-로부터 선택된다.
소정의 바람직한 실시형태에서, 커플링 기는,
어느 한쪽 방향으로 배향된,
Figure pct00068
및
Figure pct00069
로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, L'는 절단성 기를 추가로 포함하되, 절단성 기는 Q'에 커플링된다.
소정의 실시형태에서, 절단성 기-Q' 모이어티는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00070
,
Figure pct00071
및
Figure pct00072
식 중,
R49는 수소 또는 -C(=O)R50이고; 그리고
R50은 저급 알킬이다.
일부 실시형태에서, L'는 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)- 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 추가로 포함한다.
소정의 실시형태에서, L은 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)- 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 포함한다. 예를 들어, L은
Figure pct00073
,
Figure pct00074
또는
Figure pct00075
를 포함하며, 식 중,
a'는 M-함유 방향족 고리에 결합하고, b'는 L'에 결합하고; 그리고
n은 2 내지 20이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00076
,
Figure pct00077
,
Figure pct00078
,
Figure pct00079
,
Figure pct00080
또는
Figure pct00081
이다. 예를 들어, A는
Figure pct00082
또는
Figure pct00083
일 수 있다. 대안적으로, A는
Figure pct00084
일 수 있다. 다른 실시형태에서, A는
Figure pct00085
,
Figure pct00086
,
Figure pct00087
또는
Figure pct00088
일 수 있다. 일부 실시형태에서, A는
Figure pct00089
또는
Figure pct00090
이다.
소정의 실시형태에서, R42는 -OH 또는 -NR44R45이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체를 하기 화학식 (IV) 또는 화학식 (V)의 화합물과 반응시키는 단계를 포함하는, 본 명세서에 개시된 바와 같은 ADC를 제조하는 방법에 관한 것이다:
Figure pct00091
,
Figure pct00092
식 중, A'는
Figure pct00093
,
Figure pct00094
,
Figure pct00095
,
Figure pct00096
,
Figure pct00097
또는
Figure pct00098
이고,
M은 N, CR30 또는 C(-L-Q)이며;
각각의 L은 스페이서 모이어티로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Q는 활성제 또는 반응성 기로부터 독립적으로 선택되며;
X는 -Cl, -Br 및 -I로부터 선택되고;
R30 및 R31은 각각 독립적으로 전자 끄는 기, 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되며;
R46은 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
R32는 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되며;
R47은 O-, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴이고; 그리고
n은 1 내지 4이다.
일부 실시형태에서, M은 N이다.
소정의 실시형태에서, M은 CR30이고, R30은 전자 끄는 기이다.
일부 실시형태에서, A'는
Figure pct00099
및
Figure pct00100
로부터 선택되되, R31은 전자 끄는 기이고, 바람직하게는 L은 아마이드 또는 에스터로부터 선택되는 전자 끄는 기에 의해 C에 커플링된다.
일부 실시형태에서, A'는
Figure pct00101
이되, R46은 C1-3 알킬로 치환된 아릴기이다.
일부 실시형태에서, A'는
Figure pct00102
이다.
일부 실시형태에서, A'는
Figure pct00103
이되, X는 -C(O)NH2이다.
일부 실시형태에서, M은 C(-L-Q)이되, L은 전자 끄는 기에 의해 C에 커플링된다.
일부 실시형태에서, R30은 -CO2NR33R34 또는 -CO2R35이고, R33, R34 및 R35는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 각각의 전자 끄는 기는 -NO2, -CN, -할로알킬, -CO2NR33R34, -CO2R35, -C(=O)R36, -S(=O)R37, -S(=O)2OR38 및 -NR39R40R41로부터 독립적으로 선택되고; R36 , R37, R38, R39 , R40 및 R41은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 각각의 전자 끄는 기는 -CN, -CONR33R34 및 -CO2R35로부터 독립적으로 선택된다.
일부 실시형태에서, 각각의 전자 끄는 기는 -CN, -CONH2 및 -CO2Me로부터 독립적으로 선택된다.
소정의 실시형태에서, Q는 활성제이다.
일부 실시형태에서, Q는 L' 및 Q'를 포함하되, L'는 링커이고, Q'는 활성제이다.
소정의 실시형태에서, L'는 커플링 기를 포함하되, 커플링 기는 L에 커플링된다.
일부 실시형태에서, 커플링 기는 -C(=O)NR32-, -C(=O)O-, -C(=NR32)-, -C=NO-, -NR32-C(=O)-NR32-, -OC(=O)O-, -S-S-, -NR32S(=O)2O- 및 -OS(=O)2O-로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 커플링 기는
어느 한쪽 방향으로 배향된,
Figure pct00104
및
Figure pct00105
로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, L'는 절단성 기를 추가로 포함하되, 절단성 기는 Q'에 커플링된다.
소정의 실시형태에서, Q'에 커플링된 절단성 기는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00106
,
Figure pct00107
및
Figure pct00108
,
식 중,
R49는 수소 또는 -C(=O)R50이고; 그리고
R50은 저급 알킬이다.
일부 실시형태에서, L'는 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)- 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 추가로 포함한다.
소정의 실시형태에서, L은 -NH-, -C(=O)-, -O-, -S-, -S(O)- 및 -S(=O)2-로부터 선택되는 적어도 하나의 기를 포함하는 C6-C100 알킬렌을 포함한다. 예를 들어, L은
Figure pct00109
,
Figure pct00110
또는
Figure pct00111
를 포함하되, 식 중,
a는 M-함유 방향족 고리에 결합하고, b는 L'에 결합하고; 그리고
n은 2 내지 20이다.
일부 실시형태에서, Q'는 호르몬, 올리고뉴클레오타이드, 독소, 친화성 리간드, 검출용 프로브 또는 이들의 조합이다.
소정의 실시형태에서, Q'는 사이토카인, 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 구충제 또는 이들의 조합으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, Q는 반응성 기이다.
일부 실시형태에서, 반응성 기는 -N3,
Figure pct00112
,
Figure pct00113
, -S(O)2Hal, -NH2, -CO2Hal, -OH, -C(O)H, -SH, -N=C=O 및 -N=S=C로부터 선택되되, Hal은 -Cl, -Br 또는 -I이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00114
이다.
소정의 실시형태에서, R31은 -CN, -CO2NR33R34 또는 -CO2R35이다.
소정의 실시형태에서, A는
Figure pct00115
이다.
일부 실시형태에서, R32는 수소 또는 C1-3 알킬이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00116
이다.
소정의 실시형태에서, R46은 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 선택적으로 치환된 C6-C12 아릴 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다.
일부 실시형태에서, A는
Figure pct00117
이다.
소정의 실시형태에서, R47은 O- 또는 C1-3 알킬이다.
소정의 실시형태에서, A는
Figure pct00118
이다.
활성제
위에 기재된 바와 같이, 본 개시내용의 바람직한 실시형태에서, Q는 본 명세서에 개시된 ADC의 일부를 형성하는 활성제이다. 일부 실시형태에서, 활성제는 화학치료제 및 독소로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시형태에서, 활성제는 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 항기생충제 또는 이들의 조합이다.
접합을 위한 예시적인 약물
본 발명의 ADC는, 예를 들어, 하나 이상의 활성제(들)가 특정 세포에 전달됨에 따라 항암 요법에서 종종 나타나는 부작용을 감소시킬 수 있는 표적화된 요법을 제공한다.
예를 들어, 활성제는 에를로티닙(TARCEVA; 제넨테크(Genentech)/오에스아이 팜. (OSI Pharm.)); 보르테조밉(VELCADE; 밀레니엄팜.(MilleniumPharm.)); 풀베스트란트(FASLODEX; 아스트라제네카(AstraZeneca)); 수텐트(SU11248; 화이자(Pfizer)); 레트로졸(FEMARA; 노바티스(Novartis)); 이마티닙 메실레이트(GLEEVEC; 노바티스); PTK787/ZK 222584(노바티스); 옥살리플라틴(엘록사틴; 사노피(Sanofi)); 5-플루오로우라실(5-FU); 류코보린; 라파마이신(시롤리무스, RAPAMUNE; 와이어스(Wyeth)); 라파티닙(타이커브, GSK572016; 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)); 로나파닙(SCH 66336); 소라페닙(BAY43-9006; 바이엘 랩스.(Bayer Labs.)); 게피티닙(IRESSA; 아스트라제네카); AG1478, AG1571(SU 5271; 수젠(Sugen)); 알킬화제(예를 들어, 티오테파 또는 CYTOXAN® 사이클로포스파마이드); 알킬 설포네이트(예를 들어, 뷰설판, 임프로설판 또는 피포설판); 아지리딘(예를 들어, 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파 또는 우레도파); 에틸렌이민, 메틸멜라민, 알트레타민, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포라마이드, 트라이에틸렌티오포스포라마이드, 트라이메틸올멜라민; 아세토게닌(예를 들어, 불라타신 또는 불라타시논); 합성 유사체 토포테칸을 포함하는 캄프토테신; 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카르젤레신 또는 바이젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(예를 들어, 크립토피신 1 또는 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴; 질소 머스타드(예를 들어, 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드 또는 우라실 머스타드); 나이트로소우레아(예를 들어, 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 또는 라니무스틴); 항생제(예를 들어, 칼리케아마이신 감마1 I 및 칼리케아마이신 오메가 I 1으로부터 선택되는 칼리케아미신 또는 에네다이인 항생제로서 다이네미신 A를 포함하는 다이네미신); 비스포스포네이트(예를 들어, 클로드로네이트); 에스페라미신, 네오카르지노스타틴 발색단 또는 관련 색소단백질 에네다이인 항생제 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 안트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르니노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루부신, 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, ADRLIMYCIN® 독소루비신(예를 들어, 모폴리노-독소루비신, 사이아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루부신, 리포솜 독소루비신 또는 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신(예를 들어, 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토미그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴 또는 조루비신); 항대사물질(예를 들어, 5-플루오로우라실(5-FU)); 엽산 유사체(예를 들어, 데놉테린, 메토트렉세이트, 프테롭테린 또는 트라이메트렉세이트); 퓨린 유사체(예를 들어, 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린 또는 티구아닌); 피리미딘 유사체(예를 들어, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모퓨르, 사이타라빈, 다이데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈 또는 플록수리딘); 안드로겐(예를 들어, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피티오스테인 또는 테스토락톤); 항부신제(예를 들어, 아미노글루테티미드, 미토테인 또는 트릴로스테인); 엽산 보충제(예를 들어, 폴린산); 아세글라톤; 알도포스파마이드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 바이산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 다이아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 나이트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드(예를 들어, 메이탄신 또는 안사미토신; 트라이코테센(예를 들어, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 또는 안귀딘); 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 나이트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK® 다당류; 라족세인; 리족신; 시조피란; 스피로저마늄; 테누아존산; 트라이아지쿠온; 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민; 트라이코테센(특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 또는 안귀딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노사이드('Ara-C'); 사이클로포스파마이드; 티오테파; 탁소이드(예를 들어, TAXOL® 파클리탁셀(브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 뉴저지주 프린스턴 소재), ABRAXANE™ 크레모포르-무함유, 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형(아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 샴버그 소재, I11) 또는 TAXOTERE® 도세탁셀((롱-프랑 로라(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 앙토니 소재))); 클로람부실; 젬시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 백금 유사체(예를 들어, 시스플라틴 또는 카보플라틴); 빈블라스틴; 백금; 에토포시드, 이포스파마이드; 미톡산트론; 빈크리스틴; NAVELBINE® 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미놉테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포아이소머레이스 저해제 RFS 2000; 다이플루오로메틸오르니틴(DFMO); 레티노이드(예를 들어, 레티노산); 카페시타빈; 그리고 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 이들의 용매화물, 이들의 산 또는 이들의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
유사분열 저해제
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 링커는 항체를 하나 이상의 유사분열 저해제(들)에 접합하여 암의 치료를 위한 ADC를 형성하는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "유사분열 저해제"는 암세포에 특히 중요한 생물학적 과정인 유사 분열 또는 세포 분열을 차단하는 세포독성제 및/또는 치료제를 지칭한다. 유사분열 저해제는 종종 미세소관 중합 또는 미세소관 탈중합에 영향을 미침으로써 세포 분열이 방지되도록 미세소관을 방해한다. 따라서, 소정의 실시형태에서, 항체는 튜불린 중합을 저해함으로써 미세소관 형성을 방해하는 하나 이상의 유사분열 저해제(들)에 접합된다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 ADC에 사용되는 유사분열 저해제는 Taxol®(파클리탁셀), Taxotere®(도세탁셀) 또는 Ixempra®(이사베필론)이다. 본 명세서에 개시된 ADC에 사용될 수 있는 유사분열 저해제의 예는 아래에 제공된다. 위에 기재된 아우리스타틴이 유사분열 저해제의 종류에 포함된다.
아우리스타틴
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 아우리스타틴에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 아우리스타틴은 일반적으로 미세소관 동역학 및 GTP 가수분해를 방해하여 세포 분열을 저해함으로써 항암 활성을 갖는 것으로 나타난 돌라스타틴 유사체의 그룹을 나타낸다. 예를 들어, 아우리스타틴 E(미국 특허 제5,635,483호)는 항암 약물 빈크리스틴과 동일한 튜불린 부위에 결합함으로써 튜불린 중합을 저해하는 화합물인 해양 천연물 돌라스타틴 10의 합성 유사체이다(G. R. Pettit, Prog. Chem. Org. Nat. Prod, 70: 1-79(1997)). 돌라스타틴 10, 아우리스타틴 PE 및 아우리스타틴 E는 4개의 아미노산을 갖는 선형 펩타이드이며, 이 중 3개는 돌라스타틴 클래스의 화합물에 고유하다. 유사분열 저해제의 아우리스타틴 하위클래스의 예시적인 실시형태는 모노메틸 아우리스타틴 D(MMAD 또는 아우리스타틴 D 유도체), 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE 또는 아우리스타틴 E 유도체), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF 또는 아우리스타틴 F 유도체), 아우리스타틴 F 페닐렌다이아민(AFP), 아우리스타틴 EB(AEB), 아우리스타틴 EFP(AEFP) 및 5-벤조일발레르산-AE 에스터(AEVB)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 아우리스타틴 유도체의 합성 및 구조는 미국 공개 제2003-0083263호, 제2005-0238649호 및 제2005-0009751호; 국제 특허 제WO 04/010957호, 국제 특허 제WO 02/088172호 및 미국 특허 제6,323,315호; 제6,239,104호; 제6,034,065호; 제5,780,588호; 제5,665,860호; 제5,663,149호; 제5,635,483호; 제5,599,902호; 제5,554,725호; 제5,530,097호; 제5,521,284호; 제5,504,191호; 제5,410,024호; 제5,138,036호; 제5,076,973호; 제4,986,988호; 제4,978,744호; 제4,879,278호; 제4,816,444호; 및 제4,486,414호에 기술되어 있으며, 이들 각각은 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
돌라스타틴
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 ADC의 활성제는 돌라스타틴이다. 돌라스타틴은 인도양 군소 돌라벨라 오리쿨라리아(Dolabella auricularia)로부터 단리된 짧은 펩타이드 화합물이다(문헌[Pettit et al., J. Am. Chem. Soc., 1976, 98, 4677] 참조). 돌라스타틴의 예는 돌라스타틴 10 및 돌라스타틴 15를 포함한다. 돌라벨라 오리쿨라리아로부터 유래된 7개 서브유닛 뎁시펩타이드인 돌라스타틴 15는 동일한 유기체로부터 얻어진 5개 서브유닛 펩타이드인 항튜불린제 돌라스타틴 10과 구조적으로 관련된 강력한 항유사분열제이다. 따라서, 소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 ADC는 항체, 본 명세서에 기재된 바와 같은 링커 및 적어도 하나의 돌라스타틴을 포함한다. 위에 기재된 아우리스타틴은 돌라스타틴 10의 합성 유도체이다.
메이탄시노이드
본 개시내용의 링커는 ADC를 형성하기 위해 항체를 적어도 하나의 메이탄시노이드에 접합하는 데 사용될 수 있다. 메이탄시노이드는 원래 고등 식물 과인 노박덩굴과(Celastraceae), 갈매나무과(Rhamnaceae) 및 대극과(Euphorbiaceae)의 구성원뿐만 아니라 일부 이끼 종으로부터 단리된 강력한 항종양제이다(Kupchan et al, J. Am. Chem. Soc. 94:1354-1356 [1972]; Wani et al, J. Chem. Soc. Chem. Commun 390: [1973]; Powell et al, J. Nat. Prod. 46:660-666 [1983]; Sakai et al, J. Nat. Prod. 51:845-850 [1988]; 및 Suwanborirux et al, Experientia 46:117-120 [1990]). 증거는 메이탄시노이드가 미세소관 단백질 튜불린의 중합을 저해하여 유사 분열을 억제함으로써 미세소관의 형성을 방지함을 시사한다(예를 들어, 미국 특허 제6,441,163호 및 문헌[Remillard et al., Science, 189, 1002-1005 (1975)] 참조). 메이탄시노이드는 세포 배양 모델을 사용하여 시험관내에서 그리고 실험실 동물 시스템을 사용하여 생체내에서 종양 세포 성장을 저해하는 것으로 나타났다. 또한, 메이탄시노이드의 세포독성은, 예를 들어, 메토트렉세이트, 다우노루비신 및 빈크리스틴과 같은 종래의 화학치료제보다 1,000-배 더 크다(예를 들어, 미국 특허 제5,208,020호 참조).
메이탄시노이드는 메이탄신, 메이탄신올, 메이탄신올의 C-3 에스터, 및 기타 메이탄신올 유사체 및 유도체를 포함한다(예를 들어, 각각 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 미국 특허 제5,208,020호 및 제6,441,163호 참조). 메이탄신올의 C-3 에스터는 자연 발생적일 수 있거나 또는 합성적으로 유래될 수 있다. 또한, 자연 발생적 및 합성 C-3 메이탄신올 에스터는 둘 다 단순 카복실산을 갖는 C-3 에스터 또는 N-메틸-L-알라닌의 유도체를 갖는 C-3 에스터로 분류될 수 있으며, 후자는 전자보다 더 세포독성이다. 합성 메이탄시노이드 유사체는, 예를 들어, 문헌[Kupchan et al., J. Med. Chem., 21, 31-37 (1978)]에 기술되어 있다.
본 개시내용의 ADC에 사용하기에 적합한 메이탄시노이드는 천연 공급원으로부터 단리되거나, 합성적으로 생산되거나 또는 반-합성적으로 생산될 수 있다. 또한, 메이탄시노이드는 궁극적인 접합체 분자에서 충분한 세포독성이 보존되는 한 임의의 적합한 방식으로 변형될 수 있다. 예시적인 메이탄시노이드, 메르탄신(DM1)의 구조는 아래에 제공된다.
Figure pct00119
메이탄시노이드의 대표적인 예는 DM1(N2'-데아세틸-N2'-(3-머캅토-1-옥소프로필)-메이탄신; 메르탄신, 약물 메이탄시노이드 1로도 지칭됨; 이뮤노겐, 인크.(ImmunoGen, Inc.); 또한 문헌[Chari et al. (1992) Cancer Res 52:127] 참조), DM2, DM3(N2'-데아세틸-N2'-(4-머캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신), DM4(4-메틸-4-머캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신) 및 메이탄신올(합성 메이탄시노이드 유사체)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 메이탄시노이드의 다른 예는 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 미국 특허 제8,142,784호에 기술되어 있다.
안사미토신은 다양한 세균 공급원으로부터 단리되는 메이탄시노이드 항생제 그룹이다. 이러한 화합물은 강력한 항종양 활성을 갖는다. 대표적인 예는 안사미토신 P1, 안사미토신 P2, 안사미토신 P3 및 안사미토신 P4를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
식물 알칼로이드
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 식물 알칼로이드, 예를 들어, 탁세인 또는 빈카(vinca) 알칼로이드에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 식물 알칼로이드는 소정의 유형의 식물로부터 유래되는 화학요법 치료제이다. 빈카 알칼로이드는 페리윙클(periwinkle) 식물(카타란투스 로세아(catharanthus rosea))에서 만들어지는 반면, 탁세인은 주목나무(Pacific Yew tree taxus)의 껍질에서 만들어진다. 빈카 알칼로이드 및 탁세인은 모두 항미세소관제로도 알려져 있으며, 아래에서 더 자세히 설명된다.
탁세인
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 탁세인에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "탁세인"은 미세소관 작용 메커니즘을 가지며, 탁세인 고리 구조 및 세포증식억제 활성에 필요한 입체특이적 측쇄를 포함하는 구조를 갖는 항신생물제의 클래스를 지칭한다. 또한, 친수성 유도체 및 소수성 유도체를 모두 포함하는 다양한 공지된 유도체도 용어 "탁세인"에 포함된다. 탁세인 유도체는 국제 출원 제WO 99/18113호에 기술되어 있는 갈락토스 및 만노스 유도체; WO 99/14209에 기술되어 있는 피페라지노 및 기타 유도체; WO 99/09021, WO 98/22451 및 미국 특허 제5,869,680호에 기술되어 있는 탁세인 유도체; WO 98/28288에 기술되어 있는 6-티오 유도체; 미국 특허 제5,821,263호에 기술되어 있는 설펜아마이드 유도체; 및 미국 특허 제5,415,869호에 기술되어 있는 탁솔 유도체를 포함하지만 이들로 제한되지 않으며, 이들 각각은 참조에 의해 본 명세서에 원용된다. 탁세인 화합물은 또한 이전에 미국 특허 제5,641,803호, 제5,665,671호, 제5,380,751호, 제5,728,687호, 제5,415,869호, 제5,407,683호, 제5,399,363호, 제5,424,073호, 제5,157,049호, 제5,773,464호, 제5,821,263호, 제5,840,929호, 제4,814,470호, 제5,438,072호, 제5,403,858호, 제4,960,790호, 제5,433,364호, 제4,942,184호, 제5,362,831호, 제5,705,503 및 5,278,324호에 기술되어 있으며, 이들 모두는 참조에 의해 명시적으로 원용된다. 탁세인의 추가 예는 도세탁셀(Taxotere®; 사노피 아벤티스(Sanofi Aventis)), 파클리탁셀(Abraxane® 또는 Taxol®; 아브락시스 온콜로지(Abraxis Oncology)) 및 나노입자 파클리탁셀(ABI-007/Abraxene®; 아브락시스 바이오사이언스(Abraxis Bioscience))를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 도세탁셀에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 파클리탁셀에 접합시키는 데 사용될 수 있다.
빈카 알칼로이드
소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 링커는 접합체 항체를 적어도 하나의 빈카 알칼로이드에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 빈카 알칼로이드는 튜불린에 작용하여 암세포가 분열하는 능력을 저해하고 미세소관의 형성을 방지함으로써 작용하는 세포-주기-특이적 약물의 클래스이다. 본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 빈카 알칼로이드의 예는 빈데신 설페이트, 빈크리스틴, 빈블라스틴 및 비노렐빈을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
항종양 항생제
본 개시내용의 링커는 암의 치료를 위해 항체를 1종 이상의 항종양 항생제(들)에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "항종양 항생제"는 DNA를 간섭하여 세포 성장을 차단하는 항신생물 약물을 의미하며, 미생물로부터 만들어진다. 종종, 항종양 항생제는 DNA 가닥을 분해하거나 또는 DNA 합성을 늦추거나 중단시킨다. 본 명세서에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 항종양 항생제의 예는 악티노마이신(예를 들어, 피롤로[2,1-c][1,4]벤조다이아제핀), 안트라사이클린, 칼리케아미신 및 듀오카르마이신을 포함하지만 이들로 제한되지 않으며, 아래에 더 자세히 설명된다.
악티노마이신
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 악티노마이신에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 악티노마이신은 스트렙토마이세스(Streptomyces) 속 세균으로부터 단리된 항종양 항생제의 하위클래스이다. 악티노마이신의 대표적인 예는 악티노마이신 D(코스메겐[악티노마이신, 닥티노마이신, 악티노마이신 IV, 악티노마이신 C1로도 알려져 있음], 룬드벡 인크.(Lundbeck, Inc).), 안트라마이신, 치카마이신 A, DC-81, 마제트라마이신, 네오트라마이신 A, 네오트라마이신 B, 포로트라마이신, 프로트라카르신 B, SG2285, 시바노미신, 시비로마이신 및 토메이마이신을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 소정의 실시형태에서, D는 피롤로벤조다이아제핀(PBD)이다. PBD의 예는 안트라마이신, 치카마이신 A, 네오트라마이신 B, 포로트라마이신, 프로트라카르신 B, SG2000(SJG-136), SG2202(ZC-207), SG2285(ZC-423), 시바노미신, 시비로마이신 및 토메이마이신을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, D는 악티노마이신, 예를 들어, 악티노마이신 D 또는 PBD, 예를 들어, 피롤로벤조다이아제핀(PBD) 이량체이다.
PBD의 구조는, 예를 들어, 각각 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 미국 공개 제2013/0028917 및 2013/0028919호 및 WO 2011/130598 A1에서 찾을 수 있다. PBD의 일반 구조는 아래에 제공된다.
Figure pct00120
PBD는 방향족 A 고리와 피롤로 C 고리 모두에서의 치환기의 수, 유형 및 위치, 및 C 고리의 포화 정도가 상이하다. B-고리에는 일반적으로 DNA의 알킬화를 담당하는 친전자성 중심인 N10-C11 위치에 이민(N-C), 카비놀아민(NH―CH(OH)) 또는 카비놀아민 메틸 에터(NH―CH(OMe))가 있다. 알려진 모든 천연물은 카이랄 C11α 위치에 (S)-배열을 가지며, 이는 C 고리에서 A 고리 쪽으로 볼 때 우회전 꼬임이 있는 것들을 제공한다. 본 명세서에 개시된 링커를 통해 항체에 접합될 수 있는 PBD의 추가의 예는, 예를 들어, 미국 공개 제2013/0028917 A1호 및 제2013/0028919 A1호, 미국 특허 제7,741,319 B2호 및 WO 2011/130598 A1 및 WO 2006/111759 A1에서 찾을 수 있으며, 이들 각각은 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
안트라사이클린
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 안트라사이클린에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 안트라사이클린은 스트렙토마이세스 속의 세균으로부터 단리되는 항종양 항생제의 하위클래스이다. 대표적인 예는 다우노루비신(세루비딘, 베드포드 래보래토리즈(Bedford Laboratories)), 독소루비신(아드리아마이신, 베드포드 래보래토리즈; 독소루비신 하이드로클로라이드, 하이드록시다우노루비신 및 루벡스로도 지칭됨), 에피루비신(엘렌스, 화이자) 및 이다루비신(이다마이신; 화이자 인크.)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, D는 안트라사이클린, 예를 들어, 독소루비신이다.
칼리케아미신
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 칼리케아미신에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 칼리케아미신은 토양 유기체 마이크로모노스포라 에키노스포라(Micromonospora echinospora)로부터 유래되는 에네다이인 항생제 계열이다. 칼리케아미신은 DNA의 작은 홈에 결합하고 이중-가닥 DNA 절단을 유도하여, 다른 화학치료제보다 100배 증가된 세포 사멸을 초래한다(Damle et al. (2003) Curr Opin Pharmacol 3:386). 본 개시내용에서 약물 접합체로서 사용될 수 있는 칼리케아미신의 제조는 참고로 미국 특허 제5,712,374호; 제5,714,586호; 제5,739,116호; 제5,767,285호; 제5,770,701호; 제5,770,710호; 제5,773,001호; 및 제5,877,296호에 기술되어 있다. 사용될 수 있는 칼리케아미신의 구조적 유사체는 γ1 I, α2 I, α3 I, N-아세틸-γ1 I, PSAG 및 θI 1을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다(문헌[Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998)] 및 전술한 미국 특허 제5,712,374호; 제5,714,586호; 제5,739,116호; 제5,767,285호; 제5,770,701호; 제5,770,710호; 제5,773,001호; 및 제5,877,296호). 따라서, 소정의 실시형태에서, D는 칼리케아미신이다.
듀오카르마이신
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 듀오카르마이신에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 듀오카르마이신은 스트렙토마이세스 속의 세균으로부터 단리되는 항종양 항생제의 하위클래스이다(문헌[Nagamura and Saito (1998) Chemistry of Heterocyclic Compounds, Vol. 34, No. 12] 참조). 듀오카르마이신은 DNA의 작은 홈에 결합하여 N3 위치에서 핵염기 아데닌을 알킬화한다(Boger (1993) Pure and Appl Chem 65(6):1123; 및 Boger and Johnson (1995) PNAS USA 92:3642). 듀오카르마이신의 합성 유사체는 아도젤레신, 바이젤레신 및 카르젤레신을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, D는 듀오카르마이신이다.
기타 항종양 항생제
전술한 것에 더하여, 본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 추가적인 항종양 항생제는 블레오마이신(블레녹세인, 브리스톨-마이어스 스큅), 미토마이신 및 플리카마이신(미트라마이신으로도 알려져 있음)을 포함한다.
면역조절제
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 면역조절제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "면역조절제"는 면역 반응을 자극 또는 변형시킬 수 있는 작용제를 지칭한다. 소정의 실시형태에서, 면역조절제는 대상체의 면역 반응을 향상시키는 면역자극제이다. 일부 실시형태에서, 면역조절제는 대상체의 면역 반응을 방지하거나 또는 감소시키는 면역억제제이다. 면역조절제는 골수성 세포(단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 거핵구 및 과립구) 또는 림프구 세포(T 세포, B 세포 및 자연 살해(NK) 세포) 및 이들의 임의의 추가의 분화된 세포를 조절할 수 있다. 대표적인 예는 칼메트-게랭균(bacillus calmette-guerin: BCG) 및 레바미솔(Ergamisol)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 면역조절제의 다른 예는 암 백신, 사이토카인 및 면역조절 유전자 요법을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
암 백신
본 개시내용의 링커는 항체를 암 백신에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "암 백신"은 종양-특이적 면역 반응을 이끌어내는 조성물(예를 들어, 종양 항원 및 사이토카인)을 지칭한다. 반응은 암 백신을 투여함으로써, 또는 본 개시내용의 경우 항체 및 암 백신을 포함하는 ADC를 투여함으로써 대상체 자신의 면역계로부터 유도된다. 바람직한 실시형태에서, 면역 반응은 신체에서 종양 세포(예를 들어, 원발성 또는 전이성 종양 세포)를 박멸한다. 암 백신의 사용은 일반적으로, 예를 들어, 특정 암세포의 표면에 존재하거나 또는 암 형성을 촉진하는 것으로 나타난 특정 감염원의 표면에 존재하는 특정 항원 또는 항원 그룹의 투여를 포함한다. 일부 실시형태에서, 암 백신의 사용은 예방적 목적을 위한 것이지만, 다른 실시형태에서, 이의 사용은 치료적 목적을 위한 것이다. 본 명세서에 개시된 ADC에 사용될 수 있는 암 백신의 비제한적인 예는 재조합 2가 인간 유두종바이러스(human papillomavirus: HPV) 백신 16형 및 18형 백신(서바릭스, 글락소스미스클라인), 재조합 4가 인간 유두종바이러스(HPV) 6형, 11형, 16형 및 18형 백신(가다실, 머크 앤 컴퍼니(Merck & Company)) 및 시푸류셀-T(Provenge, 덴드리온(Dendreon))를 포함한다. 따라서, 소정의 실시형태에서, D는 면역자극제 또는 면역억제제인 암 백신이다.
사이토카인
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 사이토카인에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 용어 "사이토카인"은 일반적으로 세포간 매개체로서 또 다른 세포에 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출되는 단백질을 지칭한다. 사이토카인은 종양 부위에서 면역 효과기 세포 및 기질 세포를 직접 자극하며, 세포독성 효과기 세포에 의한 종양 세포 인식을 향상시킨다(Lee and Margolin (2011) Cancers 3:3856). 수많은 동물 종양 모델 연구에서 사이토카인이 광범위한 항-종양 활성을 가지고 있음이 입증되었으며, 이는 암 요법을 위한 여러 사이토카인-기반 접근법으로 해석되었다(Lee and Margoli, 상기). 최근 몇 년 동안 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 및 IL-21을 포함하는 많은 사이토카인이 진행성 암 환자에 대한 임상 시험에 들어갔다(Lee and Margoli, 상기).
본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 사이토카인의 예는 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 릴랙신; 프로릴랙신; 당단백질 호르몬, 예컨대, 여포 자극 호르몬(follicle stimulating hormone: FSH), 갑상선 자극 호르몬(thyroid stimulating hormone: TSH) 및 황체형성 호르몬(luteinizing hormone: LH); 간 성장 인자; 섬유아세포 성장 인자; 프로락틴; 태반 락토겐; 종양 괴사 인자; 뮐러-저해 물질; 마우스 성선자극 호르몬-관련 펩타이드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴(thrombopoietin: TPO); 신경 성장 인자, 예컨대, NGF; 혈소판-성장 인자; 전환 성장 인자(transforming growth factor: TGF); 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴(erythropoietin: EPO); 골 유도성 인자; 인터페론, 예컨대, 인터페론 α, β 및 γ, 콜로니 자극 인자(colony stimulating factor: CSF); 과립구-대식세포-C-SF(GM-CSF); 그리고 과립구-CSF(G-CSF); 인터류킨(IL), 예컨대, IL-1, IL-1a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12; 종양 괴사 인자; 및 LIF 및 키트 리간드(kit ligand: KL)를 포함하는 기타 폴리펩타이드 인자를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 용어 사이토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연 서열 사이토카인의 생물학적으로 활성인 등가물을 포함한다. 따라서, 소정의 실시형태에서, D는 사이토카인이다.
콜로니 자극 인자(CSF)
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 콜로니 자극 인자(CSF)에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 콜로니 자극 인자(CSF)는 골수가 적혈구를 만드는 것을 돕는 성장 인자이다. 일부 암 치료(예를 들어, 화학요법)는 백혈구에 영향을 미칠 수 있으므로(감염과 싸우는 데 도움이 됨), 백혈구 수준을 지원하고 면역계를 강화시키기 위해 콜로니 자극 인자가 도입될 수 있다. 콜로니 자극 인자는 또한 골수 이식 후 새로운 골수가 백혈구를 생성하기 시작하도록 돕기 위해 사용될 수 있다. 본 명세서에 개시된 ADC에 사용될 수 있는 CSF의 대표적인 예는 에리트로포이에틴(Epoetin), 필그라스팀(Neopogen(과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF)로도 알려짐; 암젠, 인크.(Amgen, Inc.)), 사르그라모스팀(류킨(과립구-대식세포 콜로니 자극 인자 및 GM-CSF); 젠자임 코포레이션(Genzyme Corporation)), 프로메가포이에틴 및 Oprelvekin(재조합 IL-11; 화이자, 인크.)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 따라서, 소정의 실시형태에서, D는 CSF이다.
유전자 요법
본 개시내용의 링커는 유전자 요법을 위해 항체를 적어도 하나의 핵산(담체를 통해 직접 또는 간접적으로)에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 유전자 요법은 일반적으로 유전 물질을 세포에 도입하여 유전 물질이 질환을 치료하도록 설계된 것을 지칭한다. 면역조절제와 관련하여, 유전자 요법은 암세포 증식을 저해하거나 또는 암세포를 죽이는 대상체의 자연적 능력을 자극하는 데 사용된다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 ADC는 암과 관련된 돌연변이되거나 또는 그렇지 않으면 기능장애(예를 들어, 절단됨)가 있는 유전자를 대체하는 데 사용되는 기능적 치료 유전자를 암호화하는 핵산을 포함한다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용의 ADC는 암을 치료하기 위한 치료적 단백질을 암호화하거나 또는 그렇지 않으면 이의 생산을 제공하는 핵산을 포함한다. 치료적 유전자를 암호화하는 핵산은 항체에 직접 접합될 수 있거나 또는 대안적으로 담체를 통해 항체에 접합될 수 있다. 유전자 요법을 위한 핵산을 전달하는 데 사용될 수 있는 담체의 예는 바이러스 벡터 또는 리포솜을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
알킬화제
본 개시내용의 링커는 항체를 1종 이상의 알킬화제(들)에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 알킬화제는 DNA에 알킬기를 부착시키는 항신생물 화합물의 클래스이다. 본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 알킬화제의 예는 알킬 설포네이트, 에틸렌이민, 메틸아민 유도체, 에폭사이드, 질소 머스타드, 나이트로소우레아, 트라이아진 및 하이드라진을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
알킬 설포네이트
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 알킬 설포네이트에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 알킬 설포네이트는 다음 일반식을 갖는 알킬화제의 하위클래스이며: R―SO2―O―R1, 여기서 R 및 R1은 전형적으로 알킬 또는 아릴기이다. 알킬 설포네이트의 대표적인 예는 뷰설판(Myleran®, 글락소스미스클라인; Busulfex IV®, 피디엘 바이오파마, 인크.(PDL BioPharma, Inc.))이다.
질소 머스타드
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 질소 머스타드에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 이러한 항암 화합물의 하위클래스의 대표적인 예는 클로람부실(Leukeran®, 글락소스미스클라인), 사이클로포스파마이드(Cytoxan®, 브리스톨-마이어스 스큅; 네오사르, 화이자, 인크.), 에스트라무스틴(에스트라무스틴 포스페이트 소듐 또는 Estracyt®), 화이자, 인크.), 이포스파마이드(Ifex®, 브리스톨-마이어스 스큅), 메클로레타민(Mustargen®, 룬드벡 인크.) 및 멜팔란(Alkeran® 또는 L-Pam® 또는 페닐알라닌 머스타드; 글락소스미스클라인)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
나이트로소우레아
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 나이트로소우레아에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 나이트로소우레아는 지용성인 알킬화제의 하위클래스이다. 대표적인 예는 카무스틴(BCNU[BiCNU, N,N-비스(2-클로로에틸)-N-나이트로소우레아 또는 1,3-비스(2-클로로에틸)-1-나이트로소우레아로도 알려져 있음], 브리스톨-마이어스 스큅), 포테무스틴(Muphoran®으로도 알려져 있음), 로무스틴(CCNU 또는 1-(2-클로로-에틸)-3-사이클로헥실-1-나이트로소우레아, 브리스톨-마이어스 스큅), 니무스틴(ACNU로도 알려져 있음) 및 스트렙토조신(Zanosar®, 테바 파마슈티칼스(Teva Pharmaceuticals))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
트라이아진 및 하이드라진
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 트라이아진 또는 하이드라진에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 트라이아진 및 하이드라진은 질소-함유 알킬화제의 하위클래스이다. 일부 실시형태에서, 이러한 화합물은 자발적으로 분해되거나 또는 알킬기를 핵산, 펩타이드 및/또는 폴리펩타이드로 전달하는 것을 촉진하는 알킬 다이아조늄 중간체를 생성하기 위해 대사되어 돌연변이유발, 발암 또는 세포독성 효과를 유발할 수 있다. 대표적인 예는 다카르바진(DTIC-Dome, 바이엘 헬스케어 파마슈티칼스 인크.(Bayer Healthcare Pharmaceuticals Inc.)), 프로카바진(Mutalane®, 시그마-타우 파마슈티칼스, 인크.(Sigma-Tau Pharmaceuticals, Inc.)) 및 테모졸로미드(Temodar®, 셰링 플라우(Schering Plough))를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
기타 알킬화제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 에틸렌이민, 메틸아민 유도체 또는 에폭사이드에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 에틸렌이민은 전형적으로 적어도 하나의 아지리딘 고리를 포함하는 알킬화제의 하위클래스이다. 에폭사이드는 고리 원자가 3개뿐인 고리형 에터로 특징지어지는 알킬화제의 하위클래스를 나타낸다.
에틸렌이민의 대표적인 예는 티오테파(티오플렉스, 암젠), 다이아지쿠온(아지리딘일 벤조퀴논(AZQ)으로도 알려져 있음) 및 미토마이신 C를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 미토마이신 C는 아지리딘 고리를 포함하는 천연물이며, DNA 가교를 통해 세포독성을 유발하는 것으로 나타났다(Dorr R T, et al. Cancer Res. 1985; 45:3510; Kennedy K A, et al Cancer Res. 1985; 45:3541). 메틸아민 유도체 및 이의 유사체의 대표적인 예는 헥사메틸아민 및 헥사스타트로도 알려져 있는 알트레타민(헥살렌, 엠지아이 파마, 인크.(MGI Pharma, Inc.)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 이러한 클래스의 항암 화합물의 에폭사이드의 대표적인 예는 다이안하이드로갈락티톨을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 다이안하이드로갈락티톨(1,2:5,6-다이안하이드로둘시톨)은 아지리딘과 화학적으로 관련되어 있으며, 일반적으로 위에 기재된 것과 유사한 메커니즘을 통해 알킬기의 전달을 촉진한다. 다이브로모둘시톨은 다이안하이드로갈락티톨로 가수분해되므로, 이는 에폭사이드의 프로드러그이다(Sellei C, et al. Cancer Chemother Rep. 1969; 53:377).
항신생혈관제
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 항신생혈관제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 항신생혈관제는 새로운 혈관의 성장을 저해한다. 항신생혈관제는 다양한 방식으로 효과를 발휘한다. 일부 실시형태에서, 이러한 작용제는 표적에 도달하는 성장 인자의 능력을 방해한다. 예를 들어, 혈관 내피 성장 인자(VEGF)는 세포 표면 상의 특정 수용체에 결합함으로써 혈관신생을 개시하는 데 관여하는 주요 단백질 중 하나이다. 따라서, VEGF와 이의 동족 수용체의 상호작용을 방지하는 소정의 항신생혈관제는 VEGF가 혈관신생을 개시하는 것을 방지한다. 다른 실시형태에서, 이러한 작용제는 세포내 신호전달 캐스케이드를 방해한다. 예를 들어, 세포 표면 상의 특정 수용체가 촉발되면, 혈관의 성장을 촉진하기 위해 다른 화학적 신호의 캐스케이드가 개시된다. 따라서, 예를 들어, 세포 증식에 기여하는 세포내 신호전달 캐스케이드를 촉진하는 것으로 알려진 소정의 효소, 예를 들어, 일부 타이로신 카이네이스는 암 치료의 표적이다. 다른 실시형태에서, 이러한 작용제는 세포간 신호전달 캐스케이드를 방해한다. 그러나, 다른 실시형태에서, 이러한 작용제는 세포 성장을 활성화 및 촉진하거나 또는 혈관 세포의 성장을 직접적으로 방해함으로써 특정 표적을 무력화시킨다. 수많은 직접 및 간접 저해 효과가 있는 300개 초과의 물질에서 혈관신생 저해 특성이 발견되었다.
본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 항신생혈관제의 대표적인 예는 안지오스타틴, ABX EGF, C1-1033, PKI-166, EGF 백신, EKB-569, GW2016, ICR-62, EMD 55900, CP358, PD153035, AG1478, IMC-C225(Erbitux, ZD1839(IRESSA), OSI-774, 에를로티닙(tarceva), 안지오스타틴, 어레스틴, 엔도스타틴, BAY 12-9566 및 w/플루오로우라실 또는 독소루비신, 칸스타틴, 카복시아미도트라이아졸 및 파클리탁셀, EMD121974, S-24, 비탁신, 다이메틸잔테논 아세트산, IM862, 인터류킨-12, 인터류킨-2, NM-3, HuMV833, PTK787, RhuMab, 안지오자임(리보자임), IMC-1C11, 네오바스타트, 마림스타트, 프리노마스타트, BMS-275291, COL-3, MM1270, SU101, SU6668, SU11248, SU5416, 파클리탁셀, 젬시타빈 및 시스플라틴 및 이리노테칸 및 시스플라틴 및 방사선, 테코갈란, 테모졸로미드 및 PEG 인터페론 α2b, 테트라티오몰리브데이트, TNP-470, 탈리도마이드, CC-5013 및 탁소테레, 툼스타틴, 2-메톡시에스트라다이올, VEGF 트랩, mTOR 저해제(데포롤리무스, 에베롤리무스(Afinitor, 노바티스 파마슈티칼 코포레이션(Novartis Pharmaceutical Corporation)) 및 템시롤리무스(Torisel, 화이자, 인크.)), 타이로신 카이네이스 저해제(예를 들어, 에를로티닙(Tarceva, 제넨테크, 인크.), 이마티닙(Gleevec, 노바티스 파마슈티칼 코포레이션), 게피티닙(Iressa, 아스트라제네카 파마슈티칼스), 다사티닙(Sprycel, 브리스톨-마이어스 스큅), 수니티닙(Sutent, 화이자, 인크.), 닐로티닙(Tasigna, 노바티스 파마슈티칼 코포레이션), 라파티닙(Tykerb, 글락소스미스클라인 파마슈티칼스), 소라페닙(Nexavar, 바이엘 앤드 오닉스(Bayer and Onyx)), 포스포이노시티드 3-카이네이스(PI3K)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
항대사물질
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 항대사물질에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 항대사물질은 세포 내 정상 물질과 매우 유사한 화학요법 치료의 유형이다. 세포가 항대사물질을 세포 대사에 혼입시키면, 결과는 세포에 대해 음성이며, 예를 들어, 세포는 분열할 수 없다. 항대사물질은 방해하는 물질에 따라 분류된다. 본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 항대사물질의 예는 아래에 더 자세히 설명되는 바와 같이 엽산 길항제(예를 들어, 메토트렉세이트), 피리미딘 길항제(예를 들어, 5-플루오로우라실, 폭스우리딘, 사이타라빈, 카페시타빈 및 젬시타빈), 퓨린 길항제(예를 들어, 6-머캅토퓨린 및 6-티오구아닌) 및 아데노신 데아미네이스 저해제(예를 들어, 클라드리빈, 플루다라빈, 넬라라빈 및 펜토스타틴)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
항엽산제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 항엽산제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 항엽산제는 엽산과 구조적으로 유사한 항대사물질의 하위클래스이다. 대표적인 예는 메토트렉세이트, 4-아미노-엽산(아미놉테린 및 4-아미노프테로산으로도 알려져 있음), 로메트렉솔(LMTX), 페메트렉세이드(Alimpta, 엘리 릴리 앤드 컴퍼니(Eli Lilly and Company)) 및 트라이메트렉세이트(Neutrexin, 벤 베뉴 래보래토리스, 인크.(Ben Venue Laboratories, Inc.))를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
퓨린 길항제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 퓨린 길항제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 퓨린 유사체는 퓨린으로 알려진 화합물의 그룹과 구조적으로 유사한 항대사물질의 하위클래스이다. 퓨린 길항제의 대표적인 예는 아자티오프린(Azasan, 살릭스(Salix); Imuran, 글락소스미스클라인), 클라드리빈(Leustatin[2-CdA로도 알려져 있음], 얀센 바이오테크, 인크.(Janssen Biotech, Inc.)), 머캅토퓨린(퓨린톨[6-머캅토에탄올로도 알려져 있음], 글락소스미스클라인), 플루다라빈(Fludara, 젠자임 코포레이션), 펜토스타틴(Nipent, 2'-데옥시코포마이신(DCF)으로도 알려져 있음), 6-티오구아닌(Lanvis[티오구아닌으로도 알려져 있음], 글락소스미스클라인)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
피리미딘 길항제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 피리미딘 길항제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 피리미딘 길항제는 퓨린으로 알려진 화합물의 그룹과 구조적으로 유사한 항대사물질의 하위클래스이다. 피리미딘 길항제의 대표적인 예는 아자시티딘(Vidaza, 셀진 코포레이션(Celgene Corporation)), 카페시타빈(Xeloda, 로슈 래보래토리즈(Roche Laboratories)), 사이타라빈(사이토신 아라비노사이드 및 아라비노실사이토신으로도 알려져 있음, 베드포드 래보래토리즈), 데시타빈(Dacogen, 에자이 파마슈티칼스(Eisai Pharmaceuticals)), 5-플루오로우라실(Adrucil, 테바 파마슈티칼스; Efudex, 밸리언트 파마슈티칼스, 인크(Valeant Pharmaceuticals, Inc)), 5-플루오로-2'-데옥시우리딘 5'-포스페이트(FdUMP), 5-플루오로우리딘 트라이포스페이트 및 젬시타빈(Gemzar, 엘리 릴리 앤드 컴퍼니)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
붕소-함유 작용제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 붕소 함유 작용제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 붕소-함유 작용제는 세포 증식을 방해하는 암 치료 화합물의 클래스를 포함한다. 붕소 함유 작용제의 대표적인 예는 보로피신 및 보르테조밉(VELCADE, 밀레니엄 파마슈티칼스)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
화학보호제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 화학보호제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 화학보호 약물은 화학요법의 특정 독성 효과로부터 신체를 보호하는 데 도움이 되는 화합물의 클래스이다. 화학보호제는 화학요법 약물의 독성 효과로부터 건강한 세포를 보호하는 동시에 암세포가 투여된 화학치료제로 치료될 수 있도록 하기 위해 다양한 화학요법과 함께 투여될 수 있다. 대표적인 화학보호제는 시스플라틴의 누적 용량과 관련된 신장 독성을 감소시키기 위해 사용되는 아미포스틴(Ethyol, 메드이뮨, 인크.(Medimmune, Inc.)), 안트라사이클린(Totect)의 투여에 의해 유발된 혈관외 유출의 치료를 위한 그리고 항종양 항생제 독소루비신(Zinecard) 및, 이포스파마이드를 이용한 화학요법 치료 동안 출혈성 방광염을 예방하기 위해 사용되는 메스나(Mesnex, 브리스톨-마이어스 스큅)의 투여로 인한 심장-관련 합병증의 치료를 위한 덱스라족세인(Totect, 아프리쿠스 파마(Apricus Pharma); Zinecard)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
호르몬제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 호르몬제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 호르몬제(합성 호르몬 포함)는 내분비계의 내인성으로 생산되는 호르몬의 생산 또는 활성을 방해하는 화합물이다. 일부 실시형태에서, 이러한 화합물은 세포 성장을 방해하거나 또는 세포독성 효과를 생성한다. 비제한적인 예는 안드로겐, 에스트로겐, 메드록시프로게스테론 아세테이트(Provera, 화이자, 인크.) 및 프로게스틴을 포함한다.
항호르몬제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 항호르몬제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. "항호르몬" 작용제는 소정의 내인성 호르몬의 생성을 억제하고/하거나 기능을 방지하는 작용제이다. 소정의 실시형태에서, 항호르몬제는 안드로겐, 에스트로겐, 프로게스테론 및 고나도트로핀-방출 호르몬으로부터 선택되는 호르몬의 활성을 방해하여 다양한 암세포의 성장을 방해한다. 항호르몬제의 대표적인 예는 아미노글루테티미드, 아나스트로졸(Arimidex, 아스트라제네카 파마슈티칼스), 바이칼루타마이드(Casodex, 아스트라제네카 파마슈티칼스), 사이프로테론 아세테이트(Cyprostat, 바이엘 피엘씨(Bayer PLC)), 데가렐릭스(Firmagon, 페링 파마슈티칼스(Ferring Pharmaceuticals)), 엑스메스테인(Aromasin, 화이자 인크.), 플루타마이드(Drogenil, 셰링-플라우 엘티디), 풀베스트란트(Faslodex, 아스트라제네카 파마슈티칼스), 고세렐린(Zolodex, 아스트라제네카 파마슈티칼스), 레트로졸(Femara, 노바티스 파마슈티칼스 코포레이션), 류프롤라이드(Prostap), 루프론, 메드록시프로게스테론 아세테이트(Provera, 화이자 인크.), 메게스트롤 아세테이트(Megace, 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니), 타목시펜(Nolvadex, 아스트라제네카 파마슈티칼스) 및 트립토렐린(Decapetyl, 페링)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
코르티코스테로이드
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 코르티코스테로이드에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 코르티코스테로이드는 염증을 감소시키기 위해 본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있다. 코르티코스테로이드의 예는 글루코코르티코이드, 예를 들어, 프레드니손(Deltasone, 화이자, 인크.의 사업부 파마시아 앤 업존 컴퍼니(Pharmacia & Upjohn Company))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
광활성 치료제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 광활성 치료제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 광활성 치료제는 특정 파장의 전자기 방사선에 노출시 처리된 세포를 죽이기 위해 전개될 수 있는 화합물을 포함한다. 치료적으로 관련된 화합물은 조직을 투과하는 파장에서 전자기 방사선을 흡수한다. 바람직한 실시형태에서, 화합물은 충분히 활성화시 세포 또는 조직에 독성인 광화학적 효과를 생성할 수 있는 무독성 형태로 투여된다. 다른 바람직한 실시형태에서, 이러한 화합물은 암성 조직에 의해 유지되며 정상 조직으로부터 쉽게 제거된다. 비제한적인 예는 다양한 크로마젠 및 염료를 포함한다.
올리고뉴클레오타이드
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 올리고뉴클레오타이드에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 유전 정보의 처리를 방해함으로써 작동하는 짧은 핵산 사슬로 구성된다. 일부 실시형태에서, ADC에 사용하기 위한 올리고뉴클레오타이드는 변형되지 않은 단일-가닥 및/또는 이중-가닥 DNA 또는 RNA 분자인 반면, 다른 실시형태에서, 이러한 치료적 올리고뉴클레오타이드는 화학적으로-변형된 단일-가닥 및/또는 이중-가닥 DNA 또는 RNA 분자이다. 소정의 실시형태에서, ADC에 사용되는 올리고뉴클레오타이드는 상대적으로 짧고(19개 내지 25개의 뉴클레오타이드), 세포에 존재하는 핵산 표적의 전체 풀에서 고유한 핵산 서열에 혼성화한다. 일부 중요한 올리고뉴클레오타이드 기술은 안티센스 올리고뉴클레오타이드(RNA 간섭(RNAi) 포함), 압타머, CpG 올리고뉴클레오타이드 및 리보자임을 포함한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 왓슨-크릭(Watson-Crick) 혼성화를 통해 RNA에 결합하도록 설계된다. 일부 실시형태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 접합된 항체의 영역, 도메인, 부분 또는 분절을 암호화하는 뉴클레오타이드에 상보적이다. 일부 실시형태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 약 5개 내지 약 100개의 뉴클레오타이드, 약 10개 내지 약 50개의 뉴클레오타이드, 약 12개 내지 약 35개 및 약 18개 내지 약 25개의 뉴클레오타이드를 포함한다.
올리고뉴클레오타이드가 표적 RNA에 결합하면 RNA의 기능을 저해하기 위해 이용될 수 있는 여러 메커니즘이 있다(Crooke ST. (1999). Biochim. Biophys. Acta, 1489, 30-42). 가장 잘 특성화된 안티센스 메커니즘은 RNA 간섭 메커니즘과 관련된 RNase H 또는 뉴클레이스와 같은 내인성 세포 뉴클레이스에 의해 표적화된 RNA의 절단을 초래한다. 그러나, 스플라이싱의 조절 또는 번역 정지와 같은 비촉매적 메커니즘에 의해 표적 유전자의 발현을 저해하는 올리고뉴클레오타이드는 또한 유전자 기능의 강력하고 선택적인 조절제가 될 수 있다.
최근에 많은 관심을 받고 있는 또 다른 RNase-의존적 안티센스 메커니즘은 RNAi이다(Fire et al. (1998). Nature, 391, 806-811; Zamore PD. (2002). Science, 296, 1265-1269.). RNA 간섭(RNAi)은 이중 가닥 RNA가 서열 특이적 방식으로 유전자 발현을 저해하는 전사 후 과정이다. 일부 실시형태에서, RNAi 효과는 상대적으로 더 긴 이중-가닥 RNA(dsRNA)의 도입을 통해 달성되는 반면, 바람직한 실시형태에서 이 RNAi 효과는 더 짧은 이중-가닥 RNA, 예를 들어, 작은 간섭 RNA(siRNA) 및/또는 마이크로RNA(miRNA)의 도입에 의해 달성된다. 또 다른 실시형태에서, RNAi는 또한 표적 유전자에 상보적인 dsRNA를 생성하는 플라스미드의 도입에 의해 달성될 수 있다. 전술한 실시형태 각각에서, 이중-가닥 RNA는 세포 내 특정 표적 서열의 유전자 발현을 방해하도록 설계된다. 일반적으로, 메커니즘은 리보뉴클레이스를 상동 mRNA 표적으로 지시하는 짧은 RNA로의 dsRNA의 전환을 수반하며(문헌[Ruvkun, Science 2294:797 (2001)]에 요약됨), 이는 이어서 상응하는 내인성 mRNA를 분해하여 유전자 발현의 조절을 초래한다. 특히, dsRNA는 항증식 특성을 갖는 것으로 보고되었으며, 이는 또한 치료적 응용을 구상하는 것을 가능하게 한다(Aubel et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA 88:906 (1991)). 예를 들어, 합성 dsRNA는 마우스에서 종양 성장을 저해하는 것으로 나타났으며(Levy et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 62:357-361 (1969)), 백혈병 마우스의 치료에 활성이 있고(Zeleznick et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 130:126-128 (1969)), 마우스 피부에서 화학적으로 유도된 종양형성을 저해한다(Gelboin et al., Science 167:205-207 (1970)). 따라서, 바람직한 실시형태에서, 본 개시내용은 유방암의 치료를 위한 ADC에서의 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 용도를 제공한다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료를 개시하기 위한 조성물 및 방법을 제공하되, dsRNA는 mRNA 수준에서 EGFR의 표적 세포 발현을 방해한다. 위에서 사용된 바와 같은 dsRNA는 자연 발생적 RNA, 부분적으로 정제된 RNA, 재조합적으로 생산된 RNA, 합성 RNA뿐만 아니라 비-표준 뉴클레오타이드, 비-뉴클레오타이드 물질, 뉴클레오타이드 유사체(예를 들어, 잠금 핵산(locked nucleic acid: LNA)), 데옥시리보뉴클레오타이드 및 임의의 이들의 조합을 포함하여 자연 발생적 RNA와 상이한 변경된 RNA를 지칭한다. 본 개시내용의 RNA는 본 명세서에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오타이드-기반 조절을 매개하는 능력을 갖는 천연 RNA와 충분히 유사할 필요가 있다.
압타머
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 압타머에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 압타머는 다른 분자와 결합하는 능력에 기초하여 무작위 풀로부터 선택된 핵산 분자이다. 항체와 마찬가지로, 압타머는 특별한 친화성 및 특이성으로 표적 분자에 결합할 수 있다. 많은 실시형태에서, 압타머는 표적 단백질과 상호작용할 수 있는 복잡하고, 서열-의존적인 3차원 모양을 가정하여, 항체-항원 상호작용과 유사하게 단단히 결합된 복합체를 생성하여 상기 단백질의 기능을 방해한다. 압타머가 표적 단백질에 단단하고 특이적으로 결합하는 특별한 능력은 표적화된 분자 요법으로서의 잠재력을 강조한다.
CpG 올리고뉴클레오타이드
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 CpG 올리고뉴클레오타이드에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 세균 및 바이러스 DNA는 인간의 선천적 및 특정 면역 모두의 강력한 활성제인 것으로 알려져 있다. 이러한 면역학적 특성은 세균 DNA에서 발견되는 메틸화되지 않은 CpG 다이뉴클레오타이드 모티프와 관련이 있다. 이러한 모티프가 인간에서는 드물기 때문에, 인간 면역계는 이러한 모티프를 감염의 초기 적응증으로 인식하고 이후에 면역 반응을 개시하는 능력을 진화시켰다. 따라서, 이 CpG 모티프를 함유하는 올리고뉴클레오타이드는 항종양 면역 반응을 개시하기 위해 이용될 수 있다.
리보자임
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 하나의 리보자임에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 리보자임은 약 40개 내지 155개 뉴클레오타이드 길이 범위의 촉매적 RNA 분자이다. 특정 RNA 분자를 인식하고 절단하는 리보자임의 능력은 이들을 잠재적인 치료제의 후보로 만든다. 대표적인 예는 안지오자임을 포함한다.
방사성핵종 작용제(방사성 동위원소)
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 방사성핵종 작용제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 방사성핵종 작용제는 방사성 붕괴를 겪을 수 있는 불안정한 핵을 특징으로 하는 작용제를 포함한다. 성공적인 방사성핵종 치료의 기초는 암세포에 의한 방사성핵종의 충분한 농도 및 장기간 체류에 의존한다. 고려해야 할 다른 인자는 방사성핵종 반감기, 방출된 입자의 에너지 및 방출된 입자가 이동할 수 있는 최대 범위를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 치료제는 111In, 177Lu, 212Bi, 213Bi, 211At, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 90Y, 125I, 131I, 32P, 33P, 47Sc, 111Ag, 67Ga, 142Pr, 153Sm, 161Tb, 166Dy, 166Ho, 186Re, 188Re, 189Re, 212Pb, 223Ra, 225Ac, 59Fe, 75Se, 77As, 89Sr, 99Mo, 105Rh, 109Pd, 143Pr, 149Pm, 169Er, 194Ir, 198Au, 199Au 및 211Pb로 이루어진 군으로부터 선택되는 방사성핵종이다. 또한, 오거(Auger)-방출 입자로 실질적으로 붕괴하는 방사성핵종도 바람직하다. 예를 들어, Co-58, Ga-67, Br-80m, Tc-99m, Rh-103m, Pt-109, In-111 1, Sb-119, 1-125, Ho-161, Os-189m 및 Ir-192가 있다. 유용한 베타-입자-방출 핵종의 붕괴 에너지는 바람직하게는 Dy-152, At-211, Bi-212, Ra-223, Rn-219, Po-215, Bi-211, Ac-225, Fr-221, At-217, Bi-213 및 Fm-255이다. 유용한 알파-입자-방출 방사성핵종의 붕괴 에너지는 바람직하게는 2,000keV 내지 10,000keV, 보다 바람직하게는 3,000keV 내지 8,000keV, 가장 바람직하게는 4,000keV 내지 7,000keV이다. 사용할 수 있는 추가적인 방사성 동위원소는 11C, 13N, 150, 75Br, 198Au, 95Ru, 97Ru, 103Ru, 105Ru, 107Hg, 203Hg, 121mTe, 122mTe, 125mTe, 165Tm, 167Tm, 168Tm, 197Pt, 109Pd, 105Rh, 142Pr, 143Pr, 161Tb, 166Ho, 199Au, 57Co, 58Co, 51Cr, 59Fe, 75Se, 201Tl, 225Ac, 76Br, 169Yb 등을 포함한다.
방사선 증감제(Radiosensitizer)
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 방사선 증감제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "방사선 증감제"는 전자기 방사선에 대해 방사선 감작될 세포의 민감성을 증가시키고/시키거나 전자기 방사선으로 치료할 수 있는 질환의 치료를 촉진하기 위해 치료학적 유효량으로 동물에게 투여되는 분자, 바람직하게는 저분자량 분자로 정의된다. 방사선 증감제는 전형적으로 정상 세포에 미치는 영향이 훨씬 적으면서 암세포를 방사선 요법에 더 민감하게 만드는 작용제이다. 따라서, 방사선 증감제는 방사성 표지된 항체 또는 ADC와 조합하여 사용될 수 있다. 방사선 증감제의 첨가는 방사성 표지된 항체 또는 항체 단편 단독으로의 치료와 비교할 때 향상된 효능을 초래할 수 있다. 방사선 증감제는 문헌[D. M. Goldberg (ed.), Cancer Therapy with Radiolabeled Antibodies, CRC Press (1995)]에 기술되어 있다. 방사선 증감제의 예는 젬시타빈, 5-플루오로우라실, 탁세인 및 시스플라틴을 포함한다.
방사선 증감제는 X-선의 전자기 방사선에 의해 활성화될 수 있다. X-선 활성화된 방사선 증감제의 대표적인 예는 다음을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 메트로니다졸, 미소니다졸, 데스메틸미소니다졸, 피모니다졸, 에타니다졸, 니모라졸, 미토마이신 C, RSU 1069, SR 4233, E09, RB 6145, 나이코틴아마이드, 5-브로모데옥시우리딘(BUdR), 5-아이오도데옥시우리딘(IUdR), 브로모데옥시사이티딘, 플루오로데옥시우리딘(FUdR), 하이드록시우레아, 시스플라틴 및 이들의 치료적으로 유효한 유사체 및 유도체. 대안적으로, 방사선 증감제는 광역학 요법(photodynamic therapy: PDT)을 사용하여 활성화될 수 있다. 광역학 방사선 증감제의 대표적인 예는 헤마토포르피린 유도체, 포토프린(r), 벤조포르피린 유도체, NPe6, 주석 에티오포르피린(SnET2), 페오포르바이드 a, 박테리오클로로필 a, 나프탈로사이아닌, 프탈로사이아닌, 아연 프탈로사이아닌 및 이들의 치료적으로 유효한 유사체 및 유도체를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
토포아이소머레이스 저해제
본 개시내용의 링커는 접합체 항체를 적어도 1종의 토포아이소머레이스 저해제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 토포아이소머레이스 저해제는 토포아이소머레이스 효소(토포아이소머레이스 I 및 II)의 작용을 방해하도록 설계된 화학요법제이며, 이는 정상적인 세포 주기 동안 DNA 가닥의 포스포다이에스터 백본을 촉매한 다음 끊고 다시 결합시킴으로써 DNA 구조의 변화를 제어하는 효소이다. DNA 토포아이소머레이스 I 저해제의 대표적인 예는 캄프토테신 및 이의 유도체 이리노테칸(CPT-11, Camptosar, 화이자, 인크.) 및 토포테칸(Hycamtin, 글락소스미스클라인 파마슈티칼스)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. DNA 토포아이소머레이스 II 저해제의 대표적인 예는 암사크린, 다우노루비신, 독소루비신, 에피포도필로톡신, 엘립티신, 에피루비신, 에토포시드, 라족세인 및 테니포시드를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
타이로신 카이네이스 저해제
본 개시내용의 링커는 항체를 적어도 1종의 타이로신 카이네이스 저해제에 접합시키는 데 사용될 수 있다. 타이로신 카이네이스는 포스페이트기를 아미노산 타이로신에 부착시키는 기능을 하는 세포 내의 효소이다. 단백질 타이로신 카이네이스의 기능을 차단함으로써, 종양 성장이 저해될 수 있다. 본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 타이로신 카이네이스의 예는 악시티닙, 보수티닙, 세디라닙, 다사티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 이마티닙, 라파티닙, 레스타우르티닙, 닐로티닙, 세막사닙, 수니티닙 및 반데타닙을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
기타 작용제
본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 기타 작용제의 예는 아브린(예를 들어, 아브린 A 사슬), 알파 독소, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 아마톡신, 크로틴, 커신, 다이안틴 단백질, 디프테리아 독소(예를 들어, 디프테리아 A 사슬 및 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편), 데옥시리보뉴클레이스(Dnase), 젤로닌, 미토겔린, 모데신 A 사슬, 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 저해제, 네오마이신, 온코네이스, 페노마이신, 피토라카 마에리카나(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 포케위드 항바이러스 단백질, 슈도모나스 내독소, 슈도모나스 외독소(예를 들어, 외독소 A 사슬(슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래)), 레스트릭토신, 리신(ricin) A 사슬, 리보뉴클레이스(Rnase), 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 저해제, 사포린, 알파-사르신, 스태필로코커스 장독소-A, 파상풍 독소, 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴(Eloxatin, 사노피 아벤티스), 프로테아솜 저해제(예를 들어, PS-341[보르테조밉 또는 VELCADE]), HDAC 저해제(보리노스타트(Zolinza, 머크 앤 컴퍼니, 인크.)), 벨리노스타트, 엔티노스타트, 모세티노스타트 및 파노비노스타트), COX-2 저해제, 치환된 우레아, 열 충격 단백질 저해제(예를 들어, 겔다나마이신 및 이들의 수많은 유사체), 부신피질 억제제 및 트라이코테센(예를 들어, WO 93/21232 참조)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 기타 작용제는 또한 아스파라기네이스(Espar, 룬드벡 인크.), 하이드록시우레아, 레바미솔, 미토테인(Lysodren, 브리스톨-마이어스 스큅) 및 트레티노인(Renova, 밸리언트 파마슈티칼스 인크.(Valeant Pharmaceuticals Inc.))을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 개시내용의 ADC에 사용될 수 있는 약물 모이어티 그룹은 약물의 소정의 예가 하나 초과의 카테고리에서 발견될 수 있다는 점, 예를 들어, 안사미토신은 유사분열 저해제 및 항종양 항생제라는 점에서 배타적이지 않음에 유의하여야 한다.
위의 약물 모이어티의 모든 입체이성질체가 본 개시내용의 화합물, 즉, D의 카이랄 탄소에서 R 및 S 배열의 임의의 조합에 대해 상정된다.
"검출 가능한 모이어티" 또는 "마커"는 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 방사성 또는 화학적 수단에 의해 검출 가능한 조성물을 지칭한다. 예를 들어, 유용한 표지는 32P, 35S, 형광 염료, 전자-밀도 시약, 효소(예를 들어, ELISA에서 일반적으로 사용되는 효소), 바이오틴-스트렙타비딘, 다이곡시게닌, 합텐 및 항혈청 또는 단일클론 항체가 이용 가능한 단백질 또는 표적에 상보적인 서열을 가진 핵산 분자를 포함한다. 검출 가능한 모이어티는 종종 측정 가능한 신호, 예를 들어, 방사성 신호, 색상 신호 또는 형광 신호를 생성하며, 이는 샘플에 결합하는 검출 가능한 모이어티의 양을 정량화하는 데 사용할 수 있다. 신호의 정량화는, 예를 들어, 섬광 계수, 밀도 게이지, 유세포 분석, ELISA, 또는 순환하거나 또는 후속적으로 소화된 펩타이드의 질량 분광법에 의한 직접 분석(하나 이상의 펩타이드가 검정될 수 있음)에 의해 달성될 수 있다. 당업자는 관심 표지 화합물에 대한 기법 및 검출 수단에 익숙하다. 이러한 기법 및 방법은 종래의 기술이며, 당업계에 잘 알려져 있다.
검출용 프로브는 (i) 검출 가능한 신호를 제공할 수 있는 물질, (ii) 형광 공명 에너지 전달(fluorescence resonance energy transfer: FRET)과 같은 제1 프로브 또는 제2 프로브와 상호작용하여 제1 프로브 또는 제2 프로브에 의해 제공되는 검출 가능한 신호를 변경할 수 있는 물질, (iii) 항원 또는 리간드와의 상호작용을 안정화시키거나 또는 결합 친화성을 증가시킬 수 있는 물질, (iv) 전하, 소수성 등과 같은 물리적 매개변수에 의해 전기 이동성 또는 세포-침습 작용에 영향을 미칠 수 있는 물질, 또는 (v) 리간드 친화성, 항원-항체 결합 또는 이온 복합체 형성을 조정할 수 있는 물질을 지칭한다.
일부 실시형태에서, 각 활성제는 다음으로부터 독립적으로 선택된다:
(a) 에를로티닙, 보르테조밉, 풀베스트란트, 수텐트, 레트로졸, 이마티닙 메실레이트, PTK787/ZK 222584, 옥살리플라틴, 5-플루오로우라실, 류코보린, 라파마이신, 라파티닙, 로나파닙, 소라페닙, 게피티닙, AG1478, AG1571, 티오테파, 사이클로포스파마이드, 뷰설판, 임프로설판, 피포설판, 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파, 우레도파, 에틸렌이민, 알트레타민, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포아마이드, 트라이에틸렌티오포스포라마이드, 트라이메틸올멜라민, 불라타신, 불라타시논, 캄프토테신, 토포테칸, 브리오스타틴, 칼리스타틴, CC-1065, 아도젤레신, 카르젤레신, 바이젤레신, 크립토피신 1, 크립토피신 8, 돌라스타틴, 듀오카르마이신, KW-2189, CB1-TM1, 엘류테로빈, 판크라티스타틴, 사르코딕틴, 스폰지스타틴, 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드, 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴, 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마 1, 칼리케아미신 오메가 1, 다이네미신, 다이네미신 A, 클로드로네이트, 에스페라미신, 네오카르지노스타틴 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 안트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르니노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루부신, 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 모폴리노-독소루비신, 사이아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루부신, 리포솜 독소루비신, 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토미그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신, 5-플루오로우라실, 데놉테린, 메토트렉세이트, 프테롭테린, 트라이메트렉세이트, 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티구아닌, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모퓨르, 사이타라빈, 다이데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피티오스테인, 테스토락톤, 아미노글루테티미드, 미토테인, 트릴로스테인, 폴린산, 아세글라톤, 알도포스파마이드 글리코시드, 아미노레불린산, 에닐우라실, 암사크린, 베스트라부실, 바이산트렌, 에다트락세이트, 데포파민, 데메콜신, 다이아지쿠온, 엘포르니틴, 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드, 갈륨 나이트레이트, 하이드록시우레아, 렌티난, 로니다이닌, 메이탄신, 안사미토신, 미토구아존, 미톡산트론, 모피단몰, 나이트라에린, 펜토스타틴, 페나메트, 피라루비신, 로속산트론, 2-에틸하이드라자이드, 프로카바진, 다당류-k, 라족세인, 리족신, 시조피란, 스피로저마늄, 테누아존산, 트라이아지쿠온, 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안귀딘, 우레탄, 빈데신, 다카르바진, 만노무스틴, 미토브로니톨, 미토락톨, 피포브로만, 가사이토신, 아라비노사이드, 사이클로포스파마이드, 티오테파, 파클리탁셀, 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형, 도세탁셀, 클로람부실, 젬시타빈, 6-티오구아닌, 머캅토퓨린, 시스플라틴, 카보플라틴, 빈블라스틴, 백금, 에토포시드, 이포스파마이드, 미톡산트론, 빈크리스틴, 비노렐빈, 노반트론, 테니포시드, 에다트렉세이트, 다우노마이신, 아미놉테린, 젤로다, 이반드로네이트, CPT-11, 토포아이소머레이스 저해제 RFS 2000, 다이플루오로메틸오르니틴, 레티노산, 카페시타빈 또는 임의의 전술한 것의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 산;
(b) 모노카인, 림포카인, 전통적인 폴리펩타이드 호르몬, 부갑상선 호르몬, 티록신, 릴랙신, 프로릴랙신, 당단백질 호르몬, 여포 자극 호르몬, 갑상선 자극 호르몬, 황체형성 호르몬, 간 성장 인자 섬유아세포 성장 인자, 프로락틴, 태반 락토겐, 종양 괴사 인자-α, 종양 괴사 인자-β, 뮐러-저해 물질, 마우스 성선자극 호르몬-관련 펩타이드, 인히빈, 액티빈, 혈관 내피 성장 인자, 트롬보포이에틴, 에리트로포이에틴, 골 유도성 인자, 인터페론, 인터페론-α, 인터페론-β, 인터페론-γ, 콜로니 자극 인자("CSF"), 대식세포-CSF, 과립구-대식세포-CSF, 과립구-CSF, 인터류킨("IL"), IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, 종양 괴사 인자, TNF-α, TNF-β, 폴리펩타이드 인자, LIF, 키트 리간드 또는 임의의 전술한 것의 조합;
(c) 디프테리아 독소, 보툴리눔 독소, 파상풍 독소, 이질 독소, 콜레라 독소, 아마니틴, 아마니틴 유도체, α-아마니틴, 피롤로벤조다이아제핀, 피롤로벤조다이아제핀 유도체, 테트로도톡신, 브레베톡신, 시구아톡신, 리신, AM 독소, 아우리스타틴, 튜불리신, 겔다나마이신, 메이탄시노이드, 칼리케아미신, 다우노마이신, 독소루비신, 메토트렉세이트, 빈데신, SG2285, 돌라스타틴, 돌라스타틴 유사체, 크립토피신, 캄프토테신, 캄프토테신 유도체 및 대사산물, 리족신, 리족신 유도체, CC-1065, CC-1065 유사체 또는 유도체, 듀오카르마이신, 에네다이인 항생제, 에스페라미신, 에포틸론, 아조나피드, 아플리딘, 톡소이드 또는 임의의 전술한 것들의 조합;
(d) 친화성 리간드, 여기서 친화성 리간드는 기질, 저해제, 자극제, 신경전달물질, 방사성 동위원소 또는 임의의 전술한 것들의 조합임;
(e) 방사성 표지, 32P, 35S, 형광 염료, 전자 밀도 시약, 효소, 바이오틴, 스트렙타비딘, 다이곡시게닌, 합텐, 면역원성 단백질, 표적에 상보적인 서열을 갖는 핵산 분자 또는 임의의 전술한 것들의 조합;
(f) 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제 및 항기생충제 또는 임의의 전술한 것들의 조합;
(g) 타목시펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트라이옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 또는 토레미펜;
(h) 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트, 엑스메스테인, 레트로졸 또는 아나스트로졸;
(i) 플루타마이드, 닐루타마이드, 바이칼루타마이드, 류프롤라이드, 고세렐린 또는 트록사시타빈;
(j) 아로마테이스 저해제;
(k) 단백질 카이네이스 저해제;
(l) 지질 카이네이스 저해제;
(m) 안티센스 올리고뉴클레오타이드;
(n) 리보자임;
(o) 백신; 및
(p) 항신생혈관제.
일부 바람직한 실시형태에서, G는 다음으로부터 선택되는 모이어티를 포함한다:
Figure pct00121
(OHPAS-MMAF),
Figure pct00122
(OHPAS-α-아만틴),
Figure pct00123
(OHPAS-β-아만틴),
Figure pct00124
(OHPAS-Q-α-아만틴),
Figure pct00125
(OHPAS-Q-아우리스타틴 F),
Figure pct00126
(OHPAS-CA4-CA4),
Figure pct00127
(OHPAS-CA4-SN38),
Figure pct00128
(OHPAS-Q-PNU),
Figure pct00129
(OHPAS-CBI 인돌),
Figure pct00130
(OHPAS-CBI 이량체),
Figure pct00131
(OHPAS-펜판스타틴),
Figure pct00132
(OHPAS-dPBD),
Figure pct00133
(OHPAS-Q-dPBD),
Figure pct00134
(OHPAS-dTBD),
Figure pct00135
(OHPAS-Q-dTBD),
Figure pct00136
(OHPAS-adTBD, 비대칭 dTBD),
Figure pct00137
(OHPAS-adTBD DMBA),
Figure pct00138
(OHPAS-dTBD 알킬 아민),
Figure pct00139
(OHPAS-dThBD),
Figure pct00140
(OHPAS-Q-dThBD),
Figure pct00141
(OHPAS-Q-dThBD NaSO3),
Figure pct00142
(OHPAS-dImBD),
Figure pct00143
(OHPAS-ImBD-TBD) 및
Figure pct00144
(OHPAS-Q-dFuBD),
식 중,
Figure pct00145
은 Z'를 Ar에 연결하는 연결기 Z'의 단편이며, 이 경우에는 치환된 Ph기이다.
접합 전략
화학식 I의 화합물은 1단계 또는 2단계 접합 절차로 제조될 수 있다.
1단계 접합
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 항체와 링커 사이의 1단계 접합을 포함하는 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 위에 기재된 화학식 (II) 및 (III)의 화합물은 항체와의 1단계 접합에 적합하다.
예를 들어, 메틸 페닐 설폰 모이어티(methyl phenyl sulfone moiety: MPS)를 포함하는 전구체는 반응식 1에 표시된 일련의 단계에 따라 접합될 수 있다. 단계 A는 p-메틸페닐 설폰일기의 인시추(in situ) 제거를 포함하고, 반응성 중간체를 형성하며; 단계 B에서 중간체는 항체의 티올 잔기와 접합된다.
반응식 1.
Figure pct00146
생성된 ADC는 반응식 2에 나타낸 바와 같이 하이드록실아민 또는 환원제로 처리함으로써 추가로 안정화될 수 있다:
반응식 2
Figure pct00147
일부 실시형태에서, MPS-함유 전구체는 설핀산의 제거시 활성화된 Michael 수용체(acceptor)를 생성하는 모이어티를 포함한다. 이러한 전구체의 예는 반응식 3에 나타나 있다.
반응식 3.
Figure pct00148
일부 실시형태에서, 전구체는 접합 반응에서 활성화된 Michael 수용체로 작용하는 모이어티를 포함한다. 활성화된 Michael 수용체와의 접합 반응의 예는 반응식 4에 나타나 있다.
반응식 4.
Figure pct00149
일부 실시형태에서, 1단계 접합을 위한 전구체는 말레이미드를 포함한다. 티올-함유 항체와 말레이미드-함유 전구체 접합의 예는 반응식 5에 나타나 있다. 말레이미도메틸 사이클로헥세인-1-카복실레이트(Mal-mcc) 링커를 포함하는 전구체가 A 부분에 나타나 있고; PEG 스페이서에 직접 결합된 말레이미드 모이어티를 갖는 전구체가 B 부분에 나타나 있다.
반응식 5.
Figure pct00150
2단계 접합
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 2단계 접합을 포함하는 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 제1 단계는 항체와 링커의 접합을 포함하되, 링커는 아자이드 또는 알킨과 같은 반응성 기로 종결된다. 제2 단계에서, 항체-함유 전구체는 활성제를 포함하는 전구체와 반응하여 최종 ADC를 생성한다.
일부 실시형태에서, 2단계 절차의 제1 단계는 "1단계 접합" 부문에서 위에 개시된 임의의 반응성 기를 포함하는 전구체와 항체의 접합을 포함한다. 제1 접합 단계를 위한 예시적인 전구체는 반응식 6에 나타나 있다.
반응식 6.
Figure pct00151
일부 실시형태에서, 접합 과정의 제2 단계는 제1 단계에서 수득된 항체-함유 전구체를 활성제-함유 전구체와 반응시키는 단계를 포함한다. 활성제-함유 전구체는 제1 단계에서 수득된 전구체의 반응성 기에 상보적인 반응성 기를 포함한다. 예를 들어, 항체-함유 전구체는 아자이드로 종결되며, 활성제-함유 전구체는 알킨으로 종결되거나 또는 그 반대도 마찬가지이다. 활성제-함유 전구체의 예는 반응식 7에 나타나 있다.
반응식 7.
Figure pct00152
Figure pct00153
Figure pct00154
Figure pct00155
Figure pct00156
항-B7-H3 항체
예시적인 항-B7-H3 항체는 본 명세서에서 표 19 내지 표 24에 언급된 항체 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성을 포함한다. 유사하게는, 항-B7-H3 항체는 표 19 내지 표 24에 열거된 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성 변이체일 수 있다. 본 개시내용의 적합한 항-B7-H3 항체는 완전 인간 단일클론 항체뿐만 아니라 인간화된 단일클론 항체 및 키메라 항체 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성을 포함한다. 이들 항체는 인간 B7-H3에 대한 특이성을 나타내며, 이들은 B7-H3의 적어도 하나의 생물학적 기능 또는 활성을 조절, 예를 들어, 차단, 저해, 감소, 길항, 중화 또는 그렇지 않으면 방해하는 것으로 나타났다.
항체는 항체의 존재하에 B7-H3의 기능적 활성 수준이 본 명세서에 기재된 항체와의 결합의 부재하에 B7-H3의 기능적 활성 수준과 비교하여 적어도 95%, 예를 들어, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 감소되는 경우, B7-H3의 적어도 하나의 기능적 활성을 완전히 조절, 차단, 저해, 감소, 길항, 중화 또는 그렇지 않으면 방해하는 것으로 간주된다. 항체는 항체의 존재하에 B7-H3의 기능적 활성 수준이 본 명세서에 기재된 항체와의 결합의 부재하에 B7-H3의 기능적 활성 수준과 비교하여 95% 미만, 예를 들어, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 85% 또는 90% 감소되는 경우, B7-H3의 적어도 하나의 기능적 활성을 부분적으로 조절, 차단, 저해, 감소, 길항, 중화 또는 그렇지 않으면 방해하는 것으로 간주된다.
본 명세서에 기재된 항-B7-H3 단일클론 항체 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 다량체 버전 또는 이중특이성 변이체 각각은 표 20 내지 표 24에 열거된 아미노산 및 상응하는 핵산 서열에 나타낸 바와 같은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
정의
본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 본 출원에서 사용되는 과학 및 기술 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에 기재된 화학, 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 세포 및 암 생물학, 신경생물학, 신경화학, 바이러스학, 면역학, 미생물학, 약리학, 유전학 및 단백질과 핵산 화학과 관련하여 사용되는 명명법 및 기법은 당업계에 잘 알려져 있으며 통상적으로 사용되는 것들이다.
본 개시내용의 방법 및 기법은 일반적으로 달리 나타내지 않는 한, 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 그리고 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되고 논의된 다양한 일반적이고 보다 구체적인 참고문헌에 기재된 바와 같이 수행된다. 예를 들어, 문헌["Principles of Neural Science", McGraw-Hill Medical, New York, N.Y. (2000); Motulsky, "Intuitive Biostatistics", Oxford University Press, Inc. (1995); Lodish et al., "Molecular Cell Biology, 4th ed.", W. H. Freeman & Co., New York (2000); Griffiths et al., "Introduction to Genetic Analysis, 7th ed.", W. H. Freeman & Co., N.Y. (1999); 및 Gilbert et al., "Developmental Biology, 6th ed.", Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA (2000)] 참조.
본 명세서에 사용된 화학 용어는 본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한 문헌["The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms", Parker S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco, C.A. (1985)]에 의해 예시된 바와 같이 당업계의 통상적인 용법에 따라 사용된다
위의 모든 것 및 본 출원에서 언급된 임의의 다른 간행물, 특허 및 공개된 특허 출원은 참조에 의해 본 명세서에 구체적으로 원용된다. 상충하는 경우, 특정 정의를 포함하여 본 명세서가 우선할 것이다.
용어 "작용제"는 본 명세서에서 화학적 화합물(예컨대, 유기 또는 무기 화합물, 화학적 화합물의 혼합물), 생물학적 거대분자(예컨대, 핵산, 항체의 일부뿐만 아니라 인간화된, 키메라 및 인간 항체 및 단일클론 항체를 비롯한 항체, 단백질 또는 이의 일부, 예를 들어, 펩타이드, 지질, 탄수화물), 또는 세균, 식물, 진균 또는 동물(특히 포유동물) 세포 또는 조직과 같은 생물학적 물질로부터 만들어진 추출물을 나타내기 위해 사용된다. 작용제는, 예를 들어, 구조가 알려진 작용제 및 구조가 알려지지 않은 작용제를 포함한다. AR을 저해하거나 또는 AR 분해를 촉진하는 이러한 작용제의 능력은 이들을 본 개시내용의 방법 및 조성물에서 "치료제"로서 적합하게 만들 수 있다.
"환자", "대상체" 또는 "개체"는 상호교환적으로 사용되며, 인간 또는 비인간 동물을 지칭한다. 이러한 용어는 인간, 영장류, 가축 동물(소, 돼지 등을 포함), 반려 동물(예를 들어, 개, 고양이 등) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 포함한다.
병태 또는 환자를 "치료하는" 것은 임상 결과를 포함하여 유익하거나 또는 목적하는 결과를 얻기 위한 조치를 취하는 단계를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되고 당업계에서 잘 이해되는 바와 같이, "치료"는 임상 결과를 포함하여 유익하거나 또는 목적하는 결과를 얻기 위한 접근법이다. 유익하거나 또는 목적하는 임상 결과는 검출 가능 여부에 상관없이 하나 이상의 증상 또는 병태의 완화 또는 개선, 질환 정도의 감소, 질환의 안정화된(즉, 악화되지 않는) 상태, 질환의 확산 방지, 질환 진행의 지연 또는 둔화, 질환 상태의 개선 또는 경감 및 관해(부분적이든 또는 전체적이든)를 포함할 수 있지만 이들로 제한되지 않는다. "치료"는 또한 치료를 받지 않을 경우 예상되는 생존과 비교하여 생존을 연장하는 것을 의미할 수 있다.
용어 "예방하는"은 당업계에서 잘 인식되고 있고, 국부 재발(예를 들어, 통증)과 같은 병태, 암과 같은 질환, 심부전 또는 임의의 다른 의학적 병태와 같은 복합 증후군과 관련하여 사용될 때 당업계에서 잘 이해되고 있으며, 이는 조성물을 투여받지 않은 대상체에 비해 대상체에서 의학적 병태의 증상의 빈도를 감소시키거나 또는 이의 발병을 지연시키는 조성물의 투여를 포함한다. 따라서, 암의 예방은, 예를 들어, 치료되지 않은 대조군 집단에 비해 예방적 치료를 받은 환자 집단에서 검출 가능한 암 성장의 수를 감소시키고/시키거나 치료된 집단 대 치료되지 않은 대조군 집단에서 검출 가능한 암 성장의 출현을, 예를 들어, 통계적으로 그리고/또는 임상적으로 유의한 양으로 지연시키는 것을 포함한다.
물질, 화합물 또는 작용제를 대상체에게 "투여하는 것" 또는 이들의 "투여"는 당업자에게 공지된 다양한 방법 중 하나를 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 화합물 또는 작용제는 정맥내로, 동맥내로, 피내로, 근육내로, 복강내로, 피하로, 안구로, 설하로, 경구로(섭취에 의해), 비강으로(흡입에 의해), 척수내로, 뇌내로 및 경피로(예를 들어, 피부 관을 통한 흡수에 의해) 투여될 수 있다. 화합물 또는 작용제는 또한 적절하게 재충전 가능하거나 또는 생분해성 중합체 장치 또는 기타 장치, 예를 들어, 화합물 또는 작용제의 연장된, 느린 또는 제어된 방출을 제공하는 패치 및 펌프 또는 제형에 의해 적절하게 도입될 수 있다. 투여는 또한, 예를 들어, 1회, 복수 회 및/또는 하나 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.
물질, 화합물 또는 작용제를 대상체에게 투여하는 적절한 방법은 또한, 예를 들어, 대상체의 연령 및/또는 신체 상태 및 화합물 또는 작용제의 화학적 및 생물학적 특성(예를 들어, 용해도, 소화율, 생체이용률, 안정성 및 독성)에 따라 달라질 것이다. 일부 실시형태에서, 화합물 또는 작용제는 경구로, 예를 들어, 섭취에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 경구로 투여된 화합물 또는 작용제는 연장 방출 또는 서방형 제형이거나, 또는 이러한 느리거나 또는 연장된 방출을 위한 장치를 사용하여 투여된다.
본 명세서에서 사용되는 어구 "공동 투여(conjoint administration)"는 이전에 투여된 치료제가 신체에서 여전히 효과적인 동안 제2 작용제가 투여되도록 2개 이상의 상이한 치료제를 투여하는 임의의 형태를 지칭한다(예를 들어, 2개의 작용제가 환자에서 동시에 효과적이며, 이는 2개의 작용제의 상승효과를 포함할 수 있음). 예를 들어, 상이한 치료적 화합물은 동일한 제형 또는 별개의 제형으로 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 따라서, 이러한 치료를 받는 개체는 상이한 치료제의 조합된 효과로부터 이익을 얻을 수 있다.
약물 또는 작용제의 "치료학적 유효량" 또는 "치료학적 유효 용량"은 대상체에게 투여되었을 때 의도된 치료적 효과를 가질 약물 또는 작용제의 양이다. 완전한 치료 효과는 한 번의 투여로 반드시 나타나는 것은 아니며, 일련의 투여 후에만 나타날 수 있다. 따라서, 치료학적 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 대상체에게 필요한 정확한 유효량은, 예를 들어, 대상체의 크기, 건강과 연령 및 암 또는 MDS와 같은 치료될 병태의 특성 및 정도에 따라 달라질 것이다. 당업자는 일상적인 실험에 의해 주어진 상황에 대한 유효량을 쉽게 결정할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "선택적" 또는 "선택적으로"는 이후에 설명된 사건 또는 상황이 발생할 수 있거나 또는 발생하지 않을 수 있음을 의미하며, 설명은 사건 또는 상황이 발생하는 경우뿐만 아니라 발생하지 않는 경우도 포함한다. 예를 들어, "선택적으로 치환된 알킬"은 알킬이 치환될 수 있을 뿐만 아니라 알킬이 치환되지 않은 경우도 지칭한다.
본 발명의 화합물에 대한 치환기 및 치환 패턴은 당업계에 공지된 기법뿐만 아니라 아래 제시된 방법에 의해 쉽게 입수 가능한 출발 물질로부터 용이하게 합성될 수 있는 화학적으로 안정적인 화합물을 생성하기 위해 당업자에 의해 선택될 수 있는 것으로 이해된다. 치환기 자체가 하나 이상의 기로 치환되는 경우, 이러한 다중 기는 안정적인 구조가 생성되는 한 동일한 탄소 또는 상이한 탄소 상에 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "선택적으로 치환된"은 주어진 구조에서 1개 내지 6개의 수소 원자를 다음을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 특정 치환기로 대체하는 것을 지칭한다: 하이드록실, 하이드록시알킬, 알콕시, 할로겐, 알킬, 나이트로, 실릴, 아실, 아실옥시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아미노, 아미노알킬, 사이아노, 할로알킬, 할로알콕시, -OCO-CH2-O-알킬, -OP(O)(O-알킬)2 또는 -CH2-OP(O)(O-알킬)2. 바람직하게는, "선택적으로 치환된"은 주어진 구조에서 1개 내지 4개의 수소 원자를 위에 언급된 치환기로 대체하는 것을 지칭한다. 보다 바람직하게는, 1개 내지 3개의 수소 치환기는 위에 언급된 바와 같은 치환기로 대체된다. 치환기는 추가로 치환될 수 있는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "알킬"은 C1-C10 직쇄 알킬기 또는 C1-C10 분지쇄 알킬기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 포화 지방족기를 지칭한다. 바람직하게는, "알킬"기는 C1-C6 직쇄 알킬기 또는 C1-C6 분지쇄 알킬기를 지칭한다. 가장 바람직하게는, "알킬"기는 C1-C4 직쇄 알킬기 또는 C1-C4 분지쇄 알킬기를 지칭한다. "알킬"의 예는 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, n-뷰틸, sec-뷰틸, tert-뷰틸, 1-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 네오-펜틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 1-헵틸, 2-헵틸, 3-헵틸, 4-헵틸, 1-옥틸, 2-옥틸, 3-옥틸 또는 4-옥틸 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. "알킬"기는 선택적으로 치환될 수 있다.
용어 "아실"은 당업계에서 인식되며, 일반식 하이드로카빌C(O)-, 바람직하게는 알킬C(O)-로 표시되는 기를 지칭한다.
용어 "아실아미노"는 당업계에서 인식되며, 아실기로 치환된 아미노기를 지칭하고, 예를 들어, 화학식 하이드로카빌C(O)NH-로 표시될 수 있다.
용어 "아실옥시"는 당업계에서 인식되며, 일반식 하이드로카빌C(O)O-, 바람직하게는 알킬C(O)O-로 표시되는 기를 지칭한다.
용어 "알콕시"는 산소가 부착된 알킬기를 지칭한다. 대표적인 알콕시기는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, tert-뷰톡시 등을 포함한다.
용어 "알콕시알킬"은 알콕시기로 치환된 알킬기를 지칭하며, 일반식 알킬-O-알킬로 표시될 수 있다.
용어 "알킬"은 직쇄 알킬기, 분지쇄 알킬기, 사이클로알킬(지환족)기, 알킬-치환된 사이클로알킬기 및 사이클로알킬-치환된 알킬기를 포함하는 포화 지방족기를 지칭한다. 바람직한 실시형태에서, 직쇄 또는 분지쇄 알킬은 백본에 30개 이하(예를 들어, 직쇄의 경우 C1-30, 분지쇄의 경우 C3-30), 보다 바람직하게는 20개 이하의 탄소 원자를 갖는다.
또한, 명세서, 실시예 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용되는 용어 "알킬"은 비치환 및 치환된 알킬기 모두를 포함하는 것으로 의도되며, 후자는 트라이플루오로메틸 및 2,2,2-트라이플루오로에틸 등과 같은 할로알킬기를 포함하는, 탄화수소 백본의 하나 이상의 탄소에서 수소를 대체하는 치환기를 갖는 알킬 모이어티를 지칭한다.
용어 "Cx-y" 또는 "Cx-Cy"는 아실, 아실옥시, 알킬, 알켄일, 알킨일 또는 알콕시와 같은 화학적 모이어티와 함께 사용될 때 사슬에 x개 내지 y개의 탄소를 포함하는 기를 포함하는 것을 의미한다. C0알킬은 기가 말단 위치에 있는 수소를 나타내며, 내부인 경우 결합이다. 예를 들어, C1-6알킬기는 사슬에 1개 내지 6개의 탄소 원자를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "알킬아미노"는 적어도 하나의 알킬기로 치환된 아미노기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "알킬티오"는 알킬기로 치환된 티올기를 지칭하며, 일반식 알킬S-로 표시될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "아마이드"는
Figure pct00157
의 기를 지칭하되, 식 중, R9 및 R10은 각각 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌기를 나타내거나, 또는 R9과 R10은 이들이 부착된 N 원자와 함께 고리 구조에 4개 내지 8개의 원자를 갖는 완전한 헤테로사이클을 나타낸다.
용어 "아민" 및 "아미노"는 당업계에서 인식되며, 비치환 및 치환된 아민 및 이의 염, 예를 들어,
Figure pct00158
또는
Figure pct00159
로 나타낼 수 있는 모이어티 모두를 지칭하되,
식 중, R9, R10 및 R10'은 각각 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌기를 나타내거나, 또는 R9과 R10은 이들이 부착된 N 원자와 함께 고리 구조에 4개 내지 8개의 원자를 갖는 완전한 헤테로사이클을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "아미노알킬"은 아미노기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "아르알킬"은 아릴기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "아릴"은 고리의 각 원자가 탄소인 치환 또는 비치환된 단일-고리 방향족기를 포함한다. 바람직하게는, 고리는 5-원 내지 7-원 고리, 보다 바람직하게는 6-원 고리이다. 용어 "아릴"은 또한 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에 공통적인 2개 이상의 고리형 고리를 갖는 다중고리형 고리 시스템을 포함하되, 고리 중 적어도 하나는 방향족이고, 예를 들어, 다른 고리형 고리는 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 사이클로알킨일, 아릴, 헤테로아릴 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 아릴기는 벤젠, 나프탈렌, 페난트렌, 페놀, 아닐린 등을 포함한다.
용어 "카바메이트"는 당업계에서 인식되며,
Figure pct00160
또는
Figure pct00161
기를 지칭하되,
식 중, R9 및 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "카보사이클릴알킬"은 카보사이클기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
용어 "카보사이클"은 5원 내지 7원 단일고리형 및 8원 내지 12원 이중고리형 고리를 포함한다. 이중고리형 카보사이클의 각 고리는 포화, 불포화 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 카보사이클은 2개의 고리 사이에 1개, 2개의 또는 3개 이상의 원자가 공유되는 이중고리형 분자를 포함한다. 용어 "융합된 카보사이클"은 각각의 고리가 다른 고리와 2개의 인접한 원자를 공유하는 이중고리형 카보사이클을 지칭한다. 융합된 카보사이클의 각 고리는 포화, 불포화 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 예시적인 실시형태에서, 방향족 고리, 예를 들어, 페닐은 포화 또는 불포화 고리, 예를 들어, 사이클로헥세인, 사이클로펜테인 또는 사이클로헥세인에 융합될 수 있다. 원자가가 허용하는 한 포화, 불포화 및 방향족 이중고리형 고리의 임의의 조합은 카보사이클릭의 정의에 포함된다. 예시적인 "카보사이클"은 사이클로펜테인, 사이클로헥세인, 바이사이클로[2.2.1]헵테인, 1,5-사이클로옥타다이엔, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌, 바이사이클로[4.2.0]옥트-3-엔, 나프탈렌 및 아다만테인을 포함한다. 예시적인 융합된 카보사이클은 데칼린, 나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌, 바이사이클로[4.2.0]옥테인, 4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인덴 및 바이사이클로[4.1.0]헵트-3-엔을 포함한다. "카보사이클"은 수소 원자를 보유할 수 있는 임의의 하나 이상의 위치에서 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "카보사이클릴알킬"은 카보사이클기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
용어 "카보네이트"는 당업계에서 인식되며, -OCO2- 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "카복시"는 화학식 -CO2H로 표시되는 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "에스터"는 -C(O)OR9 기를 지칭하되, R9은 하이드로카빌기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "에터"는 산소를 통해 또 다른 하이드로카빌기에 연결된 하이드로카빌기를 지칭한다. 따라서, 하이드로카빌기의 에터 치환기는 하이드로카빌-O-일 수 있다. 에터는 대칭적 또는 비대칭적일 수 있다. 에터의 예는 헤테로사이클-O-헤테로사이클 및 아릴-O-헤테로사이클을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 에터는 "알콕시알킬"기를 포함하며, 이는 일반식 알킬-O-알킬로 표시될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "할로" 및 "할로겐"은 할로겐을 의미하며, 클로로, 플루오로, 브로모 및 아이오도를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "헤트아르알킬" 및 "헤테로아르알킬"은 헤트아릴기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
용어 "헤테로아릴" 및 "헤트아릴"은 치환 또는 비치환된 방향족 단일 고리 구조, 바람직하게는 5-원 내지 7-원 고리, 보다 바람직하게는 5-원 내지 6-원 고리를 포함하며, 이들의 고리 구조는 적어도 하나의 헤테로원자, 바람직하게는 1개 내지 4개의 헤테로원자, 보다 바람직하게는 1개 또는 2개의 헤테로원자를 포함한다. 용어 "헤테로아릴" 및 "헤트아릴"은 또한 2개 이상의 탄소가 2개의 인접한 고리에 공통인 2개 이상 고리형 고리를 갖는 다중고리형 고리 시스템을 포함하되, 고리 중 적어도 하나는 헤테로방향족이고, 예를 들어, 다른 고리형 고리는 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 사이클로알킨일, 아릴, 헤테로아릴 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 헤테로아릴기는, 예를 들어, 피롤, 퓨란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진 및 피리미딘 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "헤테로원자"는 탄소 또는 수소 이외의 임의의 원소의 원자를 의미한다. 바람직한 헤테로원자는 질소, 산소 및 황이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "헤테로사이클릴알킬"은 헤테로사이클기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클릴", "헤테로사이클" 및 "헤테로사이클릭"은 치환 또는 비치환된 비방향족 고리 구조, 바람직하게는 3-원 내지 10-원 고리, 보다 바람직하게는 3-원 내지 7-원 고리를 지칭하며, 이들의 고리 구조는 적어도 하나의 헤테로원자, 바람직하게는 1개 내지 4개의 헤테로원자, 보다 바람직하게는 1개 또는 2개의 헤테로원자를 포함한다. 용어 "헤테로사이클릴" 및 "헤테로사이클릭"은 또한 2개 이상 탄소가 2개의 인접한 고리에 공통인 2개 이상의 고리형 고리를 갖는 다중고리형 고리 시스템을 포함하되, 고리 중 적어도 하나는 헤테로사이클릭이고, 예를 들어, 다른 고리형 고리는 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 사이클로알킨일, 아릴, 헤테로아릴 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 헤테로사이클릴 기는, 예를 들어, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 모폴린, 락톤, 락탐 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "하이드로카빌"은 =O 또는 =S 치환기를 갖지 않는 탄소 원자를 통해 결합된 기를 지칭하며, 전형적으로 적어도 하나의 탄소-수소 결합 및 주로 탄소 백본을 갖지만, 선택적으로 헤테로원자를 포함할 수 있다. 따라서, 메틸, 에톡시에틸, 2-피리딜 및 심지어 트라이플루오로메틸과 같은 기는 본 출원의 목적을 위해 하이드로카빌로 간주되지만, 아세틸(연결 탄소에 =O 치환기를 가짐) 및 에톡시(탄소가 아닌 산소를 통해 연결됨)와 같은 치환기는 아니다. 하이드로카빌기는 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클, 헤테로사이클, 알킬, 알켄일, 알킨일 및 이들의 조합을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "하이드록시알킬"은 하이드록시기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
용어 "저급"은 아실, 아실옥시, 알킬, 알켄일, 알킨일 또는 알콕시와 같은 화학적 모이어티와 함께 사용될 때 치환기에 10개 이하, 바람직하게는 6개 이하의 원자가 있는 기를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, "저급 알킬"은 10개 이하, 바람직하게는 6개 이하의 탄소 원자를 포함하는 알킬기를 지칭한다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에서 정의된 아실, 아실옥시, 알킬, 알켄일, 알킨일 또는 알콕시 치환기는 각각 단독으로 또는 하이드록시알킬 및 아르알킬 인용에서와 같이 다른 치환기와의 조합으로 나타나는지 여부에 관계없이(이 경우, 예를 들어, 알킬 치환기 내 탄소 원자를 계산할 때 아릴기 내의 원자는 계산되지 않음), 저급 아실, 저급 아실옥시, 저급 알킬, 저급 알켄일, 저급 알킨일 또는 저급 알콕시이다.
용어 "폴리사이클릴", "폴리사이클" 및 "다중고리형"은 2개 이상 원자가 2개의 인접한 고리에 공통인 2개 이상의 고리(예를 들어, 사이클로알킬, 사이클로알켄일, 사이클로알킨일, 아릴, 헤테로아릴 및/또는 헤테로사이클릴)를 지칭하며, 예를 들어, 고리는 "융합된 고리"이다. 폴리사이클의 각 고리는 치환되거나 또는 비치환될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 폴리사이클의 각 고리는 고리에 3개 내지 10개, 바람직하게는 5개 내지 7개의 원자를 포함한다.
용어 "설페이트"는 당업계에서 인식되며, -OSO3H 기 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 지칭한다.
용어 "설폰아마이드"는 당업계에서 인식되며, 하기 일반식
Figure pct00162
또는
Figure pct00163
로 표시되는 기를 지칭하며,
식 중, R9 및 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌을 나타낸다.
용어 "설폭사이드"는 당업계에서 인식되며, -S(O)- 기를 지칭한다.
용어 "설포네이트"는 당업계에서 인식되며, SO3H 기 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 지칭한다.
용어 "설폰"은 당업계에서 인식되며, -S(O)2- 기를 지칭한다.
용어 "치환된"은 백본의 하나 이상의 탄소에서 수소를 대체하는 치환기를 갖는 모이어티를 지칭한다. "치환" 또는 "~로 치환된"은 이러한 치환이 치환된 원자 및 치환기의 허용된 원자가에 따르며, 해당 치환이, 예를 들어, 재배열, 고리화, 제거 등과 같이 자발적으로 변환되지 않는 안정적인 화합물을 생성한다는 암시적 단서를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "치환된"은 유기 화합물의 모든 허용 가능한 치환기를 포함하는 것으로 상정된다. 광범위한 양태에서, 허용 가능한 치환기는 유기 화합물의 비고리형 및 고리형, 분지형 및 비분지형, 카보사이클릭 및 헤테로사이클릭, 방향족 및 비방향족 치환기를 포함한다. 허용 가능한 치환기는 하나 이상일 수 있고, 적절한 유기 화합물에 대해 동일하거나 상이할 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 질소와 같은 헤테로원자는 수소 치환기 및/또는 헤테로원자의 원자가를 충족시키는 본 명세서에 기재된 유기 화합물의 임의의 허용 가능한 치환기를 가질 수 있다. 치환기는 본 명세서에 기재된 임의의 치환기, 예를 들어, 할로겐, 하이드록실, 카보닐(예컨대, 카복실, 알콕시카보닐, 폼일 또는 아실), 티오카보닐(예컨대, 티오에스터, 티오아세테이트 또는 티오폼에이트), 알콕실, 포스포릴, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 아미노, 아미도, 아미딘, 이민, 사이아노, 나이트로, 아지도, 설피드릴, 알킬티오, 설페이트, 설포네이트, 설파모일, 설폰아미도, 설폰일, 헤테로사이클릴, 아르알킬 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티를 포함할 수 있다. 탄화수소 사슬에 치환된 모이어티는 적절한 경우 그 자체로 치환될 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "티오알킬"은 티올기로 치환된 알킬기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "티오에스터"는 -C(O)SR9 또는 -SC(O)R9 기를 지칭하되, R9은 하이드로카빌을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "티오에터"는 산소가 황으로 대체된 에터와 동일하다.
용어 "우레아"는 당업계에서 인식되며, 하기 일반식
Figure pct00164
로 표시될 수 있되,
R9 및 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카빌을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "조절하다"는 기능 또는 활성(예컨대, 세포 증식)의 저해 또는 억제뿐만 아니라 기능 또는 활성의 향상을 포함한다.
"약제학적으로 허용 가능한 염" 또는 "염"은 본 명세서에서 환자의 치료에 적합하거나 또는 양립 가능한 산 부가염 또는 염기 부가염을 지칭하는 데 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용 가능한 산 부가염"은 화학식 I으로 표시되는 임의의 염기 화합물의 임의의 무독성 유기염 또는 무기염을 의미한다. 적합한 염을 형성하는 예시적인 무기산은 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산뿐만 아니라 오쏘인산 일수소나트륨 및 황산수소칼륨과 같은 금속염을 포함한다. 적합한 염을 형성하는 예시적인 유기산은 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 퓨마르산, 말산, 타타르산, 시트르산, 아스코르브산, 말레산, 벤조산, 페닐아세트산, 신남산 및 살리실산과 같은 모노-, 다이- 및 트라이카복실산뿐만 아니라 p-톨루엔 설폰산 및 메테인설폰산과 같은 설폰산을 포함한다. 일산염 또는 이산염이 모두 형성될 수 있으며, 이러한 염은 수화, 용매화 또는 실질적으로 무수 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 화학식 I의 화합물의 산 부가염은 물 및 다양한 친수성 유기 용매에 더 잘 용해되고, 일반적으로 유리 염기 형태에 비해 더 높은 녹는점을 나타낸다. 적절한 염의 선택은 당업자에게 공지되어 있을 것이다. 다른 비-약제학적으로 허용 가능한 염, 예를 들어, 옥살레이트는, 예를 들어, 실험실 사용을 위한 화학식 I의 화합물의 단리에서 또는 약제학적으로 허용 가능한 산 부가염으로의 후속적인 전환을 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용 가능한 염기 부가염"은 화학식 I로 표시되는 임의의 산 화합물 또는 이들의 임의의 중간체의 임의의 무독성 유기 또는 무기 염기 부가염을 의미한다. 적합한 염을 형성하는 예시적인 무기 염기는 리튬, 소듐, 포타슘, 칼슘, 마그네슘 또는 바륨 하이드록사이드를 포함한다. 적합한 염을 형성하는 예시적인 유기 염기는 지방족, 지환족 또는 방향족 유기 아민, 예컨대, 메틸아민, 트라이메틸아민 및 피콜린 또는 암모니아를 포함한다. 적절한 염의 선택은 당업자에게 공지되어 있을 것이다.
본 개시내용의 방법 및 조성물에 유용한 많은 화합물은 그 구조에 적어도 하나의 입체 중심을 갖는다. 이 입체 중심은 R 배열 또는 S 배열로 존재할 수 있으며, 상기 R 및 S 표기법은 문헌[Pure Appl. Chem. (1976), 45, 11-30]에 기술되어 있는 규칙에 따라 사용된다. 본 개시내용은 화합물, 이의 염, 전구약물 또는 혼합물의 거울상이성질체 및 부분입체이성질체 형태와 같은 모든 입체이성질체 형태(입체이성질체의 모든 가능한 혼합물을 포함)를 상정한다. 예를 들어, WO 01/062726 참조.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물은 라세미일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물은 하나의 거울상이성질체가 풍부할 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 화합물은 약 30% ee, 40% ee, 50% ee, 60% ee, 70% ee, 80% ee, 90% ee, 95%, 96% ee, 97% ee, 98% ee, 99% 초과의 ee 또는 그 이상의 ee를 가질 수 있다.
당업계에서 일반적으로 이해되는 바와 같이, 입체화학 없이 유도된 단일 결합은 화합물의 입체화학을 나타내지 않는다. 화학식 I의 화합물은 입체화학이 표시되지 않은 화합물의 예를 제공한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 조성물 또는 화합물은 주로 화합물의 하나의 거울상이성질체를 제공하도록 농축될 수 있다. 거울상이성질체가 풍부한 조성물 또는 화합물은, 예를 들어, 적어도 60몰% 또는 보다 바람직하게는 적어도 75몰%, 90몰%, 95몰% 또는 심지어 99몰%의 하나의 거울상이성질체를 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 하나의 거울상이성질체가 풍부한 화합물은 실질적으로 다른 거울상이성질체가 없으며, 여기서 실질적으로 없다는 것은 해당 물질이, 예를 들어, 조성물 또는 화합물 혼합물에서 다른 거울상이성질체의 양과 비교하여 10% 미만, 또는 5% 미만, 또는 4% 미만, 또는 3% 미만, 또는 2% 미만 또는 1% 미만을 구성함을 의미한다. 예를 들어, 조성물 또는 화합물이 98그램의 제1 거울상이성질체 및 2그램의 제2 거울상이성질체를 포함하는 경우, 이는 98몰%의 제1 거울상이성질체 및 단지 2몰%의 제2 거울상이성질체를 포함한다고 할 수 있다.
또한, 알켄일기를 포함하는 소정의 화합물은 Z(동일한 측(zusammen)) 또는 E(반대 측(entgegen)) 이성질체로 존재할 수 있다. 각각의 경우에, 본 개시내용은 혼합물 및 별개의 개별 이성질체를 모두 포함한다.
일부 화합물은 또한 호변이성질체 형태로 존재할 수 있다. 이러한 형태는 본 명세서에 기재된 화학식에 명시적으로 나타내지는 않았지만, 본 개시내용의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.
"전구약물" 또는 "약제학적으로 허용 가능한 전구약물"은 투여 후 숙주에서 대사, 예를 들어, 가수분해 또는 산화되어 본 개시내용의 화합물(예를 들어, 화학식 I의 화합물)을 형성하는 화합물을 지칭한다. 전구약물의 전형적인 예는 활성 화합물의 기능적 모이어티에 생물학적으로 불안정하거나 또는 절단 가능한(보호) 기를 갖는 화합물을 포함한다. 전구약물은 산화, 환원, 아민화, 탈아민화, 하이드록실화, 탈하이드록실화, 가수분해, 탈가수분해, 알킬화, 탈알킬화, 아실화, 탈아실화, 인산화 또는 탈인산화되어 활성 화합물을 생성할 수 있는 화합물을 포함한다. 생물학적으로 불안정하거나 또는 절단 가능한(보호) 기로서 에스터 또는 포스포라미데이트를 사용하는 전구약물의 예는 미국 특허 제6,875,751호, 제7,585,851호 및 제7,964,580호에 개시되어 있으며, 이들의 개시내용은 참조에 의해 본 명세서에 원용된다. 본 개시내용의 전구약물은 대사되어 화학식 I의 화합물을 생성한다. 본 개시내용은 이의 범위 내에 본 명세서에 기재된 화합물의 전구약물을 포함한다. 적합한 전구약물의 선택 및 제조를 위한 종래의 절차는, 예를 들어, 문헌["Design of Prodrugs" Ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985]에 기술되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "용해도의 로그(Log)", "로그S(LogS)" 또는 "로그S(logS)"는 화합물의 수용해도를 정량화하기 위해 당업계에서 사용된다. 화합물의 수용해도는 흡수 및 분포 특성에 상당한 영향을 미친다. 낮은 용해도는 종종 불량한 흡수율과 함께 나타난다. 로그S 값은 몰/리터 단위로 측정된 용해도의 단위 스트립 로그(기본 10)이다.
항체를 제조하는 일반적인 방법
당업계에 공지된 다양한 절차가 주어진 표적, 예컨대, 예를 들어, B7-H3, 종양 관련 항원 또는 기타 표적에 대해 또는 이의 유도체, 단편, 유사체 상동체 또는 오쏘로그에 대한 다중클론 또는 단일클론 항체의 생산에 사용될 수 있다(예를 들어, 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow E, and Lane D, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY] 참조).
항체는 주로 면역 혈청의 IgG 분획을 제공하는 단백질 A 또는 단백질 G를 사용하는 친화성 크로마토그래피와 같은 잘 알려진 기법에 의해 정제될 수 있다. 후속적으로 또는 대안적으로, 추구하는 면역글로불린의 표적인 특정 항원 또는 이의 에피토프는 면역친화성 크로마토그래피에 의해 면역 특이적 항체를 정제하기 위해 칼럼에 고정될 수 있다. 면역글로불린의 정제는, 예를 들어, D. Wilkinson(The Scientist, published by The Scientist, Inc., Philadelphia PA, Vol. 14, No. 8 (April 17, 2000), pp. 25-28)에 의해 논의되었다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체는 단일클론 항체이다. 단일클론 항체는, 예를 들어, 본 명세서에 제공된 실시예에 제시된 절차를 사용함으로써 생성된다. 항체는 또한, 예를 들어, BALB/c 마우스를 표면에서 높은 수준의 주어진 표적을 발현하는 세포 형질감염체의 조합으로 면역화함으로써 생성된다. 그런 다음, 골수종/B 세포 융합으로 인해 생성된 하이브리도마는 선택된 표적에 대한 반응성에 대해 스크리닝된다.
단일클론 항체는, 예를 들어, 문헌[Kohler and Milstein, Nature, 256:495 (1975)]에 기술되어 있는 바와 같은 하이브리도마 방법을 사용하여 제조된다. 하이브리도마 방법에서, 마우스, 햄스터 또는 기타 적절한 숙주 동물은 전형적으로 면역화제로 면역화되어 면역화제에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 또는 생산할 수 있는 림프구를 유도한다. 대안적으로, 림프구가 시험관내에서 면역화될 수 있다.
면역화제는 전형적으로 단백질 항원, 이의 단편 또는 이의 융합 단백질을 포함할 것이다. 일반적으로, 인간 기원의 세포가 필요한 경우 말초 혈액 림프구가 사용되거나 또는 비인간 포유동물 공급원이 필요한 경우 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 그런 다음, 림프구는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 융합제를 사용하여 불멸화된 세포주와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103). 불멸화된 세포주는 일반적으로 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 일반적으로, 래트 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 하이브리도마 세포는 융합되지 않은 불멸화된 세포의 성장 또는 생존을 저해하는 하나 이상의 물질을 포함하는 적합한 배양 배지에서 배양될 수 있다. 예를 들어, 모 세포에 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼레이스(HGPRT 또는 HPRT)가 결여되어 있는 경우, 하이브리도마를 위한 배양 배지는 전형적으로 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지하는 물질인 하이포잔틴, 아미놉테린 및 티미딘을 포함할 것이다("HAT 배지").
바람직한 불멸화된 세포주는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생산 세포에 의한 안정적인 높은 수준의 항체 발현을 지원하며, HAT 배지와 같은 배지에 민감한 것들이다. 보다 바람직한 불멸화된 세포주는 뮤린 골수종 세포주이며, 이는, 예를 들어, 살크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)(캘리포니아주 샌디에고 소재) 및 아메리칸 타입 컬처 콜렉션(American Type Culture Collection)(버지니아주 머내서스 소재)으로부터 얻을 수 있다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주도 또한 단일클론 항체의 생산에 대해 기술된 바 있다(문헌[Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody 생산 Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63)] 참조).
이어서, 하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 항원에 대한 단일클론 항체의 존재에 대해 검정될 수 있다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생산된 단일클론 항체의 결합 특이성은 면역침강 또는 방사성면역검정(RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)과 같은 시험관내 결합 검정에 의해 결정된다. 이러한 기법 및 검정은 당업계에 공지되어 있다. 단일클론 항체의 결합 친화성은, 예를 들어, 문헌[Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)]의 Scatchard 분석에 의해 결정될 수 있다. 또한, 단일클론 항체의 치료적 적용에 있어서, 표적 항원에 대한 높은 특이성 및 높은 결합 친화성을 갖는 항체를 확인하는 것이 중요하다.
목적하는 하이브리도마 세포가 확인된 후, 클론은 제한 희석 절차에 의해 서브클로닝되고 표준 방법에 의해 성장될 수 있다(문헌[Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103] 참조). 이러한 목적에 적합한 배양 배지는, 예를 들어, 둘베코의 변형된 이글 배지 및 RPMI-1640 배지를 포함한다. 대안적으로, 하이브리도마 세포는 포유동물에서 복수(ascite)로서 생체내에서 성장될 수 있다.
서브클론에 의해 분비된 단일클론 항체는, 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화성 크로마토그래피와 같은 종래의 면역글로불린 정제 절차에 의해 배양 배지 또는 복수액으로부터 단리 또는 정제될 수 있다.
단일클론 항체는 미국 특허 제4,816,567호에 기술되어 있는 것과 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 개시내용의 단일클론 항체를 암호화하는 DNA는 종래의 절차를 사용하여(예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용하여) 쉽게 단리되고 시퀀싱될 수 있다. 본 개시내용의 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로 작용한다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터에 배치된 다음, 유인원 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 달리 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포에 형질감염시켜 재조합 숙주 세포에서 단일클론 항체의 합성을 얻을 수 있다. DNA는 또한, 예를 들어, 상동 뮤린 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 대체하거나(미국 특허 제4,816,567호; 문헌[Morrison, Nature 368, 812-13 (1994)] 참조) 또는 비-면역글로불린 폴리펩타이드에 대한 코딩 서열의 전부 또는 일부를 면역글로불린 코딩 서열에 공유적으로 연결시킴으로써 변형될 수 있다. 이러한 비-면역글로불린 폴리펩타이드는 본 개시내용의 항체의 불변 도메인을 대체할 수 있거나 또는 키메라 2가 항체를 생성하기 위해 본 개시내용의 항체의 하나의 항원-결합 부위의 가변 도메인을 대체할 수 있다.
본 개시내용의 단일클론 항체는 인간화된 항체 또는 인간 항체를 포함한다. 이러한 항체는 투여된 면역글로불린에 대한 인간의 면역 반응을 일으키지 않고 인간에게 투여하기에 적합하다. 항체의 인간화된 형태는 주로 인간 면역글로불린의 서열로 구성되며 비인간 면역글로불린으로부터 유래되는 최소한의 서열을 포함하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 기타 항원-결합 하위서열)이다. 인간화는, 예를 들어, Winter 및 동료들의 방법(Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988))에 따라 인간 항체의 상응하는 서열을 설치류의 CDR 또는 CDR 서열로 치환함으로써 수행된다(또한 미국 특허 제5,225,539호 참조). 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기가 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 인간화된 항체는 또한, 예를 들어, 수용자 항체에서도 외래의 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함한다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함하고, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비인간 면역글로불린의 것에 상응하며, 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 영역은 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 것이다. 인간화된 항체는 또한 최적으로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 일부를 포함한다(Jones et al., 1986; Riechmann et al., 1988; 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992)).
완전 인간 항체는 CDR을 포함하여 경쇄 및 중쇄 모두의 전체 서열이 인간 유전자로부터 유래되는 항체 분자이다. 이러한 항체는 본 명세서에서 "인간 항체" 또는 "완전 인간 항체"로 지칭된다. 단일클론 항체는 트리오마(trioma) 기법; 인간 B-세포 하이브리도마 기법(문헌[Kozbor, et al., 1983 Immunol Today 4: 72] 참조); 및 단일클론 항체를 생산하기 위한 EBV 하이브리도마 기법(문헌[Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96] 참조)을 사용함으로써 제조될 수 있다. 단일클론 항체가 이용될 수 있으며, 인간 하이브리도마를 사용하거나(문헌[Cote, et al., 1983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030] 참조) 또는 시험관내에서 엡스타인 바 바이러스로 인간 B-세포를 형질전환시킴으로써(문헌[Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96] 참조) 생산될 수 있다.
또한, 인간 항체는 또한 파지 디스플레이 라이브러리를 포함하는 추가적인 기법을 사용하여 생산될 수 있다(문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)] 참조). 유사하게는, 인간 항체는 인간 면역글로불린 유전자좌를 내인성 면역글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전히 비활성화된 형질전환 동물, 예를 들어, 마우스에 도입함으로써 만들어질 수 있다. 유발시험(유발시험)시, 유전자 재배열, 조립 및 항체 레퍼토리를 포함한 모든 측면에서 인간에서 보이는 것과 매우 유사한 인간 항체 생산이 관찰된다. 이러한 접근법은, 예를 들어, 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,661,016호 및 문헌[Marks et al., Bio/Technology 10, 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368 856-859 (1994); Morrison, Nature 368, 812-13 (1994); Fishwild et al, Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996); 및 Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995)]에 기술되어 있다.
인간 항체는 항원에 의한 유발시험에 대한 반응으로 동물의 내인성 항체가 아닌 완전 인간 항체를 생산하도록 변형된 형질전환 비인간 동물을 사용하여 추가적으로 생산될 수 있다(PCT 공개 WO94/02602 참조). 비인간 숙주에서 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 사슬을 암호화하는 내인성 유전자가 무력화되고, 인간 중쇄 및 경쇄 면역글로불린을 암호화하는 활성 유전자좌가 숙주의 게놈에 삽입된다. 인간 유전자는, 예를 들어, 필요한 인간 DNA 분절을 포함하는 효모 인공 염색체를 사용하여 통합된다. 그런 다음, 목적하는 모든 변형을 제공하는 동물은 변형의 완전한 보완물보다 적은 수를 포함하는 중간 형질전환 동물을 교배함으로써 자손으로 얻어진다. 이러한 비인간 동물의 예는 PCT 공개 WO 96/33735 및 WO 96/34096에 개시된 바와 같은 Xenomouse™로 지칭되는 마우스이다. 이 동물은 완전한 인간 면역글로불린을 분비하는 B 세포를 생산한다. 항체는 관심 면역원으로 면역화한 후 동물로부터, 예를 들어, 다중클론 항체의 제제로 또는 대안적으로 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마와 같은 동물로부터 유래된 불멸화된 B 세포로부터 직접 얻을 수 있다. 추가적으로, 인간 가변 영역을 갖는 면역글로불린을 암호화하는 유전자는 항체를 직접 얻기 위해 회수 및 발현될 수 있거나 또는, 예를 들어, 단일쇄 Fv(scFv) 분자와 같은 항체의 유사체를 얻기 위해 추가로 변형될 수 있다.
내인성 면역글로불린 중쇄의 발현이 결여되어 있는 마우스로 예시되는 비인간 숙주를 생산하는 방법의 예는 미국 특허 제5,939,598호에 개시되어 있다. 이는 유전자좌의 재배열을 방지하고 및 재배열된 면역글로불린 중쇄 유전자좌의 전사체의 형성을 방지하기 위해 배아 줄기 세포에서 적어도 하나의 내인성 중쇄 유전자좌로부터 J 분절 유전자를 결실시키는 단계로서, 결실은 선별 마커를 암호화하는 유전자를 포함하는 표적화 벡터에 의해 수행되는, 결실시키는 단계; 및 배아 줄기 세포로부터 체세포 및 생식 세포가 선별 마커를 암호화하는 유전자를 포함하는 형질전환 마우스를 생산하는 단계를 포함하는 방법에 의해 얻어질 수 있다.
인간 항체와 같은 관심 항체를 생산하는 한 가지 방법은 미국 특허 제5,916,771호에 개시되어 있다. 이 방법은 중쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 배양 중인 하나의 포유동물 숙주 세포에 도입하는 단계, 경쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터를 또 다른 포유동물 숙주 세포에 도입하는 단계 및 2개의 세포를 융합하여 하이브리드 세포를 형성하는 단계를 포함한다. 하이브리드 세포는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체를 발현한다.
이 절차에 대한 추가의 개선에서, 면역원 상의 임상적으로 관련된 에피토프를 확인하는 방법 및 높은 친화성을 갖는 관련 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 선택하는 상관적 방법이 미국 공개 US 2003/009212에 개시되어 있다.
항체는 위에 기재된 단일쇄 항체를 암호화하는 DNA 분절을 포함하는 벡터에 의해 발현될 수 있다.
이는 벡터, 리포솜, 네이키드 DNA, 보조제-보조 DNA, 유전자 총, 카테터 등을 포함할 수 있다. 벡터는 WO 93/64701에 기술되어 있는 바와 같은 화학적 접합체를 포함하며, 이는 표적화 모이어티(예를 들어, 세포 표면 수용체에 대한 리간드) 및 핵산 결합 모이어티(예를 들어, 폴리라이신), 바이러스 벡터(예를 들어, DNA 또는 RNA 바이러스 벡터), 표적 모이어티(예를 들어, 표적 세포에 특이적인 항체) 및 핵산 결합 모이어티(예를 들어, 프로타민)를 포함하는 융합 단백질인 미국 특허 제7,186,697호에 기술되어 있는 바와 같은 융합 단백질, 플라스미드, 파지 등을 갖는다. 벡터는 염색체, 비염색체 또는 합성일 수 있다.
바람직한 벡터는 바이러스 벡터, 융합 단백질 및 화학적 접합체를 포함한다. 레트로바이러스 벡터는 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스를 포함한다. DNA 바이러스 벡터가 바람직하다. 이러한 벡터는 오쏘폭스 또는 아비폭스 벡터와 같은 폭스 벡터, 단순 헤르페스 I 바이러스(HSV) 벡터와 같은 헤르페스바이러스 벡터(문헌[Geller, A. I. et al., J. Neurochem, 64:487 (1995); Lim, F., et al., DNA Cloning: Mammalian Systems, D. Glover, Ed. (Oxford Univ. Press, Oxford England) (1995); Geller, A. I. et al., Proc Natl. Acad. Sci.: U.S.A. 90:7603 (1993); Geller, A. I., et al., Proc Natl. Acad. Sci USA 87:1149 (1990)] 참조), 아데노바이러스 벡터(문헌[LeGal LaSalle et al., Science, 259:988 (1993); Davidson, et al., Nat. Genet 3:219 (1993); Yang, et al., J. Virol. 69:2004 (1995)] 참조) 및 아데노-관련 바이러스 벡터(문헌[Kaplitt, M. G. et al., Nat. Genet. 8:148 (1994)] 참조)를 포함한다.
폭스 바이러스 벡터는 유전자를 세포 세포질에 도입한다. 아비폭스 바이러스 벡터는 핵산의 단기간 발현만을 초래한다. 아데노바이러스 벡터, 아데노-관련 바이러스 벡터 및 단순 헤르페스 바이러스(HSV) 벡터는 핵산을 신경 세포에 도입하는 데 바람직하다. 아데노바이러스 벡터는 결과 아데노-관련 바이러스(약 4개월)보다 발현 기간이 짧으며(약 2개월), 이는 결국 HSV 벡터보다 짧다. 선택되는 특정 벡터는 표적 세포 및 처리될 병태에 따라 달라질 것이다. 도입은 표준 기법, 예를 들어, 감염, 형질감염, 형질도입 또는 형질전환에 의한 것일 수 있다. 유전자 전달 방식의 예는, 예를 들어, 네이키드 DNA, CaPO4 침전, DEAE 덱스트란, 전기천공, 원형질체 융합, 리포펙션, 세포 미세주입 및 바이러스 벡터를 포함한다.
벡터는 본질적으로 임의의 목적하는 표적 세포를 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 벡터(예를 들어, 아데노바이러스, HSV)를 목적하는 위치로 보내기 위해 정위 주입(stereotaxic injection)이 사용될 수 있다. 추가적으로, 입자는 SynchroMed 주입 시스템과 같은 미니펌프 주입 시스템을 사용하여 뇌실내(intracerebroventricular: icv) 주입에 의해 전달될 수 있다. 대류(convection)라고 하는 벌크 흐름에 기반한 방법이 또한 큰 분자를 뇌의 확장된 영역으로 전달하는 데 효과적인 것으로 입증되었으며, 이는 벡터를 표적 세포로 전달하는 데 유용할 수 있다(문헌[Bobo et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:2076-2080 (1994); Morrison et al., Am. J. Physiol. 266:292-305 (1994)] 참조). 사용될 수 있는 다른 방법은 카테터, 정맥내, 비경구, 복강내 및 피하 주사 및 경구 또는 다른 적합한 투여 경로를 포함한다.
이중특이성 항체는 적어도 2개의 상이한 항원에 대해 결합 특이성을 갖는 항체이다. 본 경우에, 결합 특이성 중 하나는 B7-H3 또는 임의의 이의 단편과 같은 표적에 대한 것이다. 제2 결합 표적은 임의의 다른 항원이며, 유리하게는 세포-표면 단백질 또는 수용체 또는 수용체 서브유닛이다.
이중특이성 항체를 제조하는 많은 방법이 당업계에 공지되어 있다. 전통적으로, 이중특이성 항체의 재조합 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 공동 발현을 기반으로 하며, 여기서 2개의 중쇄는 서로 다른 특이성을 갖는다(Milstein and Cuello, Nature, 305:537-539 (1983)). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류로 인해, 이러한 하이브리도마(쿼드로마)는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적인 혼합물을 생성하며, 이 중 하나만이 올바른 이중특이성 구조를 갖는다. 올바른 분자의 정제는 일반적으로 친화성 크로마토그래피 단계에 의해 달성된다. 유사한 절차는 1993년 5월 13일자로 공개된 WO 93/08829 및 문헌[Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다.
본 개시내용의 이중특이성 및/또는 1가 항체는 그 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 2011년 8월 16일자로 출원된 출원 WO 2012/023053에 개시된 것을 포함하는 임의의 다양한 당업계에서 인식되는 기법을 사용하여 제조될 수 있다. WO 2012/023053에 기술되어 있는 방법은 인간 면역글로불린과 구조가 동일한 이중특이성 항체를 생성한다. 이러한 유형의 분자는 2개 카피의 고유한 중쇄 폴리펩타이드, 불변 카파 도메인에 융합된 제1 경쇄 가변 영역 및 불변 람다 도메인에 융합된 제2 경쇄 가변 영역으로 구성된다. 각 결합 부위는 중쇄 및 경쇄가 모두 기여하는 다른 항원 특이성을 나타낸다. 경쇄 가변 영역은 람다 또는 카파 패밀리일 수 있으며, 바람직하게는 각각 람다 및 카파 불변 도메인에 융합된다. 이는 비천연 폴리펩타이드 접합부의 생성을 피하기 위해 바람직하다. 그러나, 제1 특이성을 위해 카파 경쇄 가변 도메인을 불변 람다 도메인에 융합시키고 제2 특이성을 위해 람다 경쇄 가변 도메인을 불변 카파 도메인에 융합시킴으로써 본 개시내용의 이중특이성 항체를 얻는 것도 가능하다. WO 2012/023053에 기술되어 있는 이중특이성 항체는 새로운 완전 인간 이중특이성 IgG 형식인 IgGκλ 항체 또는 "κλ 바디"로 지칭된다. 이러한 κλ-바디 형식은 표준 단일클론 항체와 구별할 수 없는 특성을 가진 표준 IgG 분자와 구별할 수 없는 이중특이성 항체의 친화성 정제를 가능하게 하므로 이전의 형식에 비해 유리하다.
방법의 필수 단계는 동일한 중쇄 가변 도메인을 공유하는 상이한 항원 특이성을 갖는 2개의 항체 Fv 영역(각각 가변 경쇄 및 가변 중쇄 도메인으로 구성됨)을 식별하는 것이다. 단일클론 항체 및 이의 단편의 생성을 위한 수많은 방법이 기술되어 있다(예를 들어, 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow E, and Lane D, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY] 참조). 완전 인간 항체는 CDR 1 및 2를 포함한 경쇄 및 중쇄 모두의 서열이 인간 유전자로부터 유래하는 항체 분자이다. CDR3 영역은 인간 기원일 수 있거나 또는 합성 수단에 의해 설계된다. 이러한 항체는 본 명세서에서 "인간 항체" 또는 "완전 인간 항체"로 지칭된다. 인간 단일클론 항체는 트리오마 기법; 인간 B-세포 하이브리도마 기법(문헌[Kozbor, et al., 1983 Immunol Today 4: 72] 참조); 및 인간 단일클론 항체를 생산하기 위한 EBV 하이브리도마 기법(문헌[Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96] 참조)을 사용함으로써 제조될 수 있다. 인간 단일클론 항체가 사용될 수 있으며, 이는 인간 하이브리도마를 사용하거나(문헌[Cote, et al., 1983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030] 참조) 또는 시험관내에서 엡스타인 바 바이러스로 인간 B-세포를 형질전환시킴으로써(문헌[Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96] 참조) 생산될 수 있다.
단일클론 항체는, 예를 들어, 표적 항원 또는 이의 면역원성 단편, 유도체 또는 변이체로 동물을 면역화함으로써 생성된다. 대안적으로, 동물은 표적 항원이 발현되어 형질감염된 세포의 표면과 회합되도록 표적 항원을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 벡터로 형질감염된 세포로 면역화된다. 이종성 비인간 동물을 생산하기 위한 다양한 적합한 기법이 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호 참조한다.
대안적으로, 항체는 표적 항원에 결합하기 위한 항체 또는 항원 결합 도메인 서열을 포함하는 라이브러리를 스크리닝함으로써 얻어진다. 이 라이브러리는, 예를 들어, 조립된 파지 입자의 표면 및 파지 입자 내에 포함된 암호화 DNA 서열에서 발현되는 박테리오파지 외피 단백질에 대한 단백질 또는 펩타이드 융합으로서 박테리오파지에서 제조된다(즉, "파지 디스플레이 라이브러리").
그런 다음, 골수종/B 세포 융합으로부터 생성된 하이브리도마는 표적 항원에 대한 반응성에 대해 스크리닝된다. 단일클론 항체는, 예를 들어, 문헌[Kohler and Milstein, Nature, 256:495 (1975)]에 기술되어 있는 것과 같은 하이브리도마 방법을 사용하여 제조된다. 하이브리도마 방법에서, 마우스, 햄스터 또는 기타 적절한 숙주 동물은 전형적으로 면역화제로 면역화되어 면역화제에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 또는 생산할 수 있는 림프구를 유도한다. 대안적으로, 림프구가 시험관내에서 면역화될 수 있다.
엄격하게 불가능한 것은 아니지만, 동일한 중쇄 가변 도메인을 갖지만 상이한 항원에 대해 지시된 상이한 항체의 우연한 식별은 거의 불가능하다. 실제로, 대부분의 경우 중쇄는 항원 결합 표면에 크게 기여하며, 또한 서열에서 가장 가변적이다. 특히 중쇄의 CDR3는 서열, 길이 및 구조가 가장 다양한 CDR이다. 따라서, 상이한 항원에 특이적인 2개의 항체는 거의 변함없이 상이한 중쇄 가변 도메인을 보유할 것이다.
미국 특허 제9,926,382호에 개시된 방법은 이러한 한계를 극복하고, 모든 라이브러리 구성원에 대해 중쇄 가변 도메인이 동일한 항체 라이브러리를 사용함으로써 동일한 중쇄 가변 도메인을 갖는 항체의 단리를 매우 용이하게 하였으므로, 다양성은 경쇄 가변 도메인에 국한되었다. 이 라이브러리는, 예를 들어, 각각 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 미국 특허 제8,921,281호 및 출원 WO 2011/084255에 기술되어 있다. 그러나, 경쇄 가변 도메인이 중쇄 가변 도메인과 함께 발현되기 때문에, 두 도메인은 모두 항원 결합에 기여할 수 있다. 과정을 더욱 용이하게 하기 위해, 동일한 중쇄 가변 도메인 및 다양한 람다 가변 경쇄 또는 카파 가변 경쇄를 포함하는 항체 라이브러리가 상이한 항원에 대한 항체의 시험관내 선택을 위해 동시에 사용될 수 있다. 이 접근법은 공통 중쇄를 갖지만 하나는 람다 경쇄 가변 도메인을 보유하고 다른 하나는 본 개시내용의 완전 면역글로불린 형식으로 이중특이성 항체를 생성하기 위한 빌딩 블록으로 사용될 수 있는 카파 경쇄 가변 도메인을 보유하는 2개의 항체를 식별할 수 있게 한다. 본 개시내용의 이중특이성 항체는 상이한 아이소타입일 수 있고, 이의 Fc 부분은 상이한 Fc 수용체에 대한 결합 특성을 변경하기 위해 변형될 수 있으며, 이러한 방식으로 항체의 효과기 기능뿐만 아니라 약동학적 특성을 변형시킨다. Fc 부분의 변형을 위한 수많은 방법이 기술되어 있으며 본 개시내용의 항체에 적용 가능하다(예를 들어, 문헌[Strohl, WR Curr Opin Biotechnol 2009 (6):685-91]; 미국 특허 제6,528,624호; 2009년 6월 9일자로 출원된 PCT/US2009/0191199). 본 개시내용의 방법은 Fc 부분이 결여되어 있는 F(ab')2 형식으로 이중특이성 항체 및 항체 혼합물을 생성하기 위해 사용될 수 있다.
공통 중쇄 및 2개의 상이한 경쇄는 단일 세포로 공동 발현되어 본 개시내용의 이중특이성 항체의 조립을 가능하게 한다. 모든 폴리펩타이드가 동일한 수준으로 발현되고 동일하게 잘 조립되어 면역글로불린 분자를 형성한다면, 단일특이성(동일한 경쇄) 및 이중특이성(2개의 상이한 경쇄)의 비는 50%여야 한다. 그러나, 서로 다른 경쇄가 서로 다른 수준으로 발현되고/되거나 동일한 효율로 조립되지 않을 가능성이 있다. 따라서, 상이한 폴리펩타이드의 상대적인 발현을 조절하기 위한 수단이 이들의 고유한 발현 특성 또는 공통 중쇄와 조립하는 상이한 성향을 보상하기 위해 사용된다. 이러한 조절은 프로모터 강도, 상이한 효율을 특징으로 하는 내부 리보솜 진입 부위(internal ribosome entry site: IRES), 또는 전사 또는 번역 수준에서 작용할 뿐만 아니라 mRNA 안정성에 작용할 수 있는 다른 유형의 조절 요소의 사용을 통해 달성될 수 있다. 상이한 강도의 상이한 프로모터는 CMV(급초기 사이토메갈로바이러스 바이러스 프로모터); EF1-1α(인간 신장 인자 1α-서브유닛 프로모터); Ubc(인간 유비퀴틴 C 프로모터); SV40(유인원 바이러스 40 프로모터)를 포함할 수 있다. 포유동물 및 바이러스 기원의 상이한 IRES가 또한 기술되어 있다(예를 들어, 문헌[Hellen CU and Sarnow P. Genes Dev 2001 15: 1593-612] 참조). 이러한 IRES는 이들의 길이 및 리보솜 동원 효율이 크게 다를 수 있다. 또한, IRES의 여러 카피를 도입함으로써 활성을 추가로 조정할 수 있다(Stephen et al. 2000 Proc Natl Acad Sci USA 97: 1536-1541). 발현의 조절은 또한 세포의 다중 순차적 형질감염에 의해 하나 또는 다른 경쇄를 발현하는 개별 유전자의 카피 수를 증가시킴으로써 이들의 상대적인 발현을 변형시킴으로써 달성될 수 있다. 본 명세서에 제공된 예는 상이한 사슬의 상대적인 발현을 제어하는 것이 이중특이성 항체의 조립 및 전체 수율을 최대화하는 데 중요하다는 것을 보여준다.
중쇄 및 2개의 경쇄의 공동 발현은 3개의 상이한 항체의 혼합물을 세포 배양 상청액으로 생성한다: 2개의 단일특이성 2가 항체 및 1개의 이중특이성 2가 항체. 후자는 관심 분자를 얻기 위해 혼합물로부터 정제되어야 한다. 본 명세서에 기재된 방법은 CaptureSelect Fab 카파 및 CaptureSelect Fab 람다 친화성 매트릭스(BAC BV, 홀랜드(Holland))와 같은 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인과 특이적으로 상호작용하는 친화성 크로마토그래피 매질의 사용에 의해 이러한 정제 절차를 매우 용이하게 한다. 이러한 다단계 친화성 크로마토그래피 정제 접근법은 효율적이며, 일반적으로 본 개시내용의 항체에 적용 가능하다. 이는 항체 혼합물을 발현하는 쿼드로마 또는 다른 세포주로부터 유래된 각각의 이중특이성 항체에 대해 개발되고 최적화되어야 하는 특정 정제 방법과 뚜렷한 대조를 이룬다. 실제로, 혼합물 내 상이한 항체의 생화학적 특성이 유사한 경우, 이온 교환 크로마토그래피와 같은 표준 크로마토그래피 기법을 사용하는 분리는 어렵거나 또는 완전히 불가능할 수 있다.
다른 적합한 정제 방법은 그 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US2013/0317200에 개시되어 있는 것들을 포함한다.
이중특이성 항체를 생산하는 다른 실시형태에서, 목적하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인(항체-항원 결합 부위)은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합될 수 있다. 힌지, CH2 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과의 융합이 바람직하다. 적어도 하나의 융합에 존재하는 경쇄 결합에 필요한 부위를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역(CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합 및 필요한 경우 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 DNA가 별개의 발현 벡터에 삽입되고, 적합한 숙주 유기체에 공동 형질감염된다. 이중특이성 항체의 생성에 대한 추가의 세부사항은, 예를 들어, 문헌[Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)]을 참조한다.
WO 96/27011에 기술되어 있는 또 다른 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 사이의 계면은 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 이종이량체의 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다. 이 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터의 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄는 더 큰 측쇄(예를 들어, 타이로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 측쇄(들)와 동일하거나 또는 유사한 크기의 보상적 "공동"은 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 아미노산 측쇄(예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체함으로써 제2 항체 분자의 계면에 생성된다. 이는 동종이량체와 같은 다른 원치 않는 최종 산물보다 이종이량체의 수율을 증가시키는 메커니즘을 제공한다.
항체 단편으로부터 이중특이성 항체를 생성하는 기법은 문헌에 기술되어 있다. 예를 들어, 이중특이성 항체는 화학적 연결을 사용하여 제조될 수 있다. 생산된 이중특이성 항체는 효소의 선택적 고정화를 위한 작용제로서 사용될 수 있다.
재조합 세포 배양물로부터 직접 이중특이성 항체 단편을 제조하고 단리하기 위한 다양한 기법이 또한 기술되어 있다. 예를 들어, 이중특이성 항체는 류신 지퍼를 사용하여 생산되었다(Kostelny et al., J. Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)). Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩타이드는 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결되었다. 항체 동종이량체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성한 다음 재산화되어 항체 이종이량체를 형성하였다. 이 방법은 또한 항체 동종이량체의 생산에도 사용될 수 있다. 문헌[Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)]에 기술되어 있는 "다이어바디" 기술은 이중특이성 항체 단편을 제조하기 위한 대안적인 메커니즘을 제공하였다. 단편은 동일한 사슬에 있는 2개의 도메인 사이의 페어링을 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 따라서, 한 단편의 VH 및 VL 도메인은 또 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 강제로 쌍을 이루어 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일-사슬 Fv(sFv) 이량체의 사용에 의해 이중특이성 항체 단편을 제조하기 위한 또 다른 전략이 또한 보고되어 있다. 문헌[Gruber et al., J. Immunol. 152:5368 (1994)] 참조.
2개 초과의 원자가를 갖는 항체가 상정된다. 예를 들어, 삼중특이성 항체가 제조될 수 있다(Tutt et al., J. Immunol. 147:60 (1991)).
예시적인 이중특이성 항체는 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있으며, 이 중 적어도 하나는 본 개시내용의 단백질 항원에서 유래한다. 대안적으로, 면역글로불린 분자의 항-항원성 암(arm)은 특정 항원을 발현하는 세포에 세포 방어 메커니즘을 집중시키기 위해 T-세포 수용체 분자(예를 들어, CD2, CD3, CD28 또는 B7) 또는 FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 FcγRIII(CD16)와 같은 IgG에 대한 Fc 수용체(FcγR)와 같은 백혈구 상의 촉발 분자에 결합하는 암과 조합될 수 있다. 이중특이성 항체는 또한 특정 항원을 발현하는 세포로 세포독성제를 지시하는 데 사용될 수 있다. 이러한 항체는 항원-결합 암과 세포독성제 또는 방사성핵종 킬레이터, 예컨대, EOTUBE, DPTA, DOTA 또는 TETA에 결합하는 암을 갖는다. 또 다른 관심 이중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 단백질 항원에 결합하고 추가로 조직 인자(tissue factor: TF)에 결합한다.
이종접합체 항체도 본 개시내용의 범위 내에 있다. 이종접합체 항체는 2개의 공유적으로 연결된 항체로 구성된다. 예를 들어, 이러한 항체는 면역계 세포를 원치 않는 세포에 표적화하고(미국 특허 제4,676,980호 참조) HIV 감염을 치료하기 위해(WO 91/00360; WO 92/200373; EP 03089 참조) 제안되었다. 항체는 가교제를 수반하는 것을 포함하는 합성 단백질 화학을 사용하여 시험관내에서 제조될 수 있는 것으로 상정된다. 예를 들어, 면역독소는 이황화물 교환 반응을 사용하거나 또는 티오에터 결합을 형성함으로써 구성될 수 있다. 이러한 목적에 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토뷰티르이미데이트 및, 예를 들어, 미국 특허 제4,676,980호에 개시된 것들을 포함한다.
예를 들어, 비정상적인 B7-H3 발현 및/또는 활성과 관련된 암 및/또는 기타 질환 및 장애를 치료하는 항체의 효능을 향상시키기 위해, 효과기 기능과 관련하여 본 개시내용의 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 시스테인 잔기(들)는 Fc 영역에 도입되어 이 영역에서 사슬간 이황화 결합 형성을 가능하게 할 수 있다. 이렇게 생성된 동종이량체 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개성 세포 살해 및 항체-의존적 세포독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity: ADCC)을 가질 수 있다(문헌[Caron et al., J. Exp Med., 176: 1191-1195 (1992) 및 Shopes, J. Immunol., 148: 2918-2922 (1992)] 참조). 대안적으로, 이중 Fc 영역을 갖는 항체가 조작될 수 있고, 이에 의해 향상된 보체 용해 및 ADCC 능력을 가질 수 있다(문헌[Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3: 219-230 (1989)] 참조).
접합된 항체
본 개시내용은 독소(예를 들어, 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소 또는 이의 단편) 또는 방사성 동위원소(즉, 방사성 접합체)와 같은 세포독성제에 접합된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 본 명세서에서 면역접합체로도 지칭되는 접합된 항체에 관한 것이다.
일부 실시형태에서, 독소는 미세소관 저해제 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 독소는 돌라스타틴 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 독소는 아우리스타틴 E, 아우리스타틴 F, AFP, MMAF, MMAE, MMAD, DMAF 또는 DMAE이다. 일부 실시형태에서, 독소는 메이탄시노이드 또는 메이탄시노이드 유도체이다. 일부 실시형태에서, 독소는 DM1 또는 DM4이다. 일부 실시형태에서, 독소는 핵산 손상 독소이다. 일부 실시형태에서, 독소는 듀오카르마이신 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 독소는 칼리케아미신 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 작용제는 피롤로벤조다이아제핀 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 작용제는 엑사테칸 또는 이의 유도체이다.
사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 이의 단편은 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 사슬(슈도모나스 아에루기노사 유래), 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모데신 A 사슬, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이 단백질, 다이안틴 단백질, 피토라카 마에리카나 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아 저해제, 커신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 저해제, 젤로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트라이코테센을 포함한다. 다양한 방사성핵종을 방사성 접합 항체의 생산에 이용할 수 있다. 예는 212Bi, 131I, 131In, 90Y 및 186Re를 포함한다.
항체와 세포독성제의 접합체는 다양한 이작용성 단백질-커플링제, 예컨대, N-석신이미딜-3-(2-피리딜다이티올) 프로피오네이트(SPDP), 이미노티올레인(IT), 이미도에스터의 이작용성 유도체(예컨대, 다이메틸 아디피미데이트 HCL), 활성 에스터(예컨대, 다이석신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예컨대, 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예컨대, 비스-(p-아지도벤조일) 헥세인다이아민), 비스-다이아조늄 유도체(예컨대, 비스-(p-다이아조늄벤조일)-에틸렌다이아민), 다이아이소사이아네이트(예컨대, 톨루엔 2,6-다이아이소사이아네이트) 및 비스-활성 플루오린 화합물(예컨대, 1,5-다이플루오로-2,4-다이나이트로벤젠)을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌[Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987)]에 기술되어 있는 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-아이소티오사이아나토벤질-3-메틸다이에틸렌 트라이아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 방사성뉴클레오타이드를 항체에 접합시키기 위한 예시적인 킬레이트제이다(WO94/11026 참조).
당업자는 매우 다양한 가능한 모이어티가 본 개시내용의 생성된 항체에 커플링될 수 있음을 인식할 것이다(예를 들어, 그 전체 내용이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌["Conjugate Vaccines", Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse and R. E. Lewis, Jr (eds), Carger Press, New York, (1989)] 참조).
커플링은 항체 및 다른 모이어티가 이들 각각의 활성을 유지하는 한 2개의 분자를 결합할 임의의 화학적 반응에 의해 달성될 수 있다. 이러한 연결은 많은 화학적 메커니즘, 예를 들어, 공유 결합, 친화성 결합, 삽입(intercalation), 배위 결합 및 복합체화를 포함할 수 있다. 그러나, 바람직한 결합은 공유 결합이다. 공유 결합은 기존 측쇄의 직접 응축 또는 외부 브리지 분자의 혼입에 의해 달성될 수 있다. 많은 2가 또는 다가 연결제가 본 개시내용의 항체와 같은 단백질 분자를 다른 분자에 커플링시키는 데 유용하다. 예를 들어, 대표적인 커플링제는 유기 화합물, 예컨대, 티오에스터, 카보다이이미드, 석신이미드 에스터, 다이아이소사이아네이트, 글루타르알데하이드, 다이아조벤젠 및 헥사메틸렌 다이아민을 포함할 수 있다. 이 목록은 당업계에 공지된 다양한 클래스의 커플링제를 망라하는 것이 아니라, 오히려 보다 일반적인 커플링제의 예시이다(문헌[Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984); Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982); 및 Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)] 참조).
적합한 링커는 문헌에 기술되어 있다(예를 들어, MBS(M-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스터의 사용을 기술하고 있는 문헌[Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984)] 참조). 또한, 올리고펩타이드 링커에 의해 항체에 커플링된 할로겐화된 아세틸 하이드라자이드 유도체의 사용을 기술하고 있는 미국 특허 제5,030,719호 참조. 특히 바람직한 링커는 (i) EDC(1-에틸-3-(3-다이메틸아미노-프로필) 카보다이이미드 하이드로클로라이드; (ii) SMPT(4-석신이미딜옥시카보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-다이티오)-톨루엔(피어스 켐. 컴퍼니(Pierce Chem. Co.), Cat. (21558G); (iii) SPDP(석신이미딜-6 [3-(2-피리딜다이티오)프로피온아미도]헥사노에이트(피어스 켐. 컴퍼니, Cat #21651G); (iv) 설포-LC-SPDP(설포석신이미딜 6 [3-(2-피리딜다이티오)-프로피온아마이드]헥사노에이트(피어스 켐. 컴퍼니 Cat. #2165-G); 및 (v) EDC에 접합된 설포-NHS(N-하이드록시설포-석신이미드: 피어스 켐. 컴퍼니, Cat. #24510)를 포함한다.
위에 기재된 링커는 상이한 속성을 가진 구성요소를 포함하므로, 상이한 물리-화학적 특성을 갖는 접합체를 생성한다. 예를 들어, 알킬 카복실레이트의 설포-NHS 에스터는 방향족 카복실레이트의 설포-NHS 에스터보다 더 안정적이다. NHS-에스터 함유 링커는 설포-NHS 에스터보다 용해도가 낮다. 또한, 링커 SMPT는 입체 장애가 있는 이황화 결합을 포함하며, 증가된 안정성을 갖는 접합체를 형성할 수 있다. 이황화 연결은 일반적으로 이황화 연결이 시험관내에서 절단되어 이용 가능한 접합체가 적기 때문에 다른 연결보다 덜 안정적이다. 특히, 설포-NHS는 카보다이이미드 커플링의 안정성을 향상시킬 수 있다. 카보다이이미드 커플링(예컨대, EDC)은 설포-NHS와 함께 사용될 때 카보다이이미드 커플링 반응 단독보다 가수분해에 더 저항성이 있는 에스터를 형성한다.
본 명세서에 개시된 항체는 또한 면역리포솜으로 제형화될 수 있다. 항체를 포함하는 리포솜은 문헌[Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980)]; 및 미국 특허 제4,485,045호 및 제4,544,545호에 기술되어 있는 바와 같은 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 향상된 순환 시간을 갖는 리포솜은 미국 특허 제5,013,556호에 개시되어 있다.
특히 유용한 리포솜은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 이용하는 역상 증발 방법에 의해 생성될 수 있다. 리포솜은 목적하는 직경의 리포솜을 생성하기 위해 정의된 기공 크기의 필터를 통해 압출된다. 본 개시내용의 항체의 Fab' 단편은 이황화-교환 반응을 통해 문헌[Martin et al., J. Biol. Chem., 257: 286-288 (1982)]에 기술되어 있는 바와 같은 리포솜에 접합될 수 있다.
항-B7-H3 항체의 용도
본 개시내용에 따른 치료제(therapeutic entity)의 투여는 적합한 담체, 부형제 및 개선된 전달(transfer), 전달(delivery), 내약성 등을 제공하기 위해 제형에 혼입되는 기타 작용제와 함께 투여될 것임을 이해할 것이다. 다수의 적절한 제형은 모든 제약 화학자들에게 공지된 의약품집에서 찾을 수 있다: 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975)), 특히 Blaug, Seymour에 의한 Chapter 87]. 이러한 제형은, 예를 들어, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질들, 소포를 포함하는 지질(양이온성 또는 음이온성)(예컨대, Lipofectin™), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀션, 에멀션 카보왁스(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 카보왁스를 포함하는 반-고체 겔 및 반-고체 혼합물을 포함한다. 임의의 전술한 혼합물은 본 개시내용에 따른 치료 및 요법에 적절할 수 있되, 단, 제형 내 활성 성분은 제형에 의해 불활성화되지 않고, 제형은 생리학적으로 적합하며, 투여 경로를 견딜 수 있다. 또한, 문헌[Baldrick P. "Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance." Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals." Int. J. Pharm. 203(1-2):1-60 (2000), Charman WN "Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts." J Pharm Sci. 89(8):967-78 (2000), Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)] 및 제약 화학자에게 잘 알려져 있는 제형, 부형제 및 담체와 관련된 추가적인 정보에 대한 인용을 참조.
본 개시내용의 접합체를 포함하는 본 개시내용의 치료적 제형은 비제한적인 예로서, 백혈병, 림프종, 유방암, 결장암, 난소암, 방광암, 전립선암, 신경교종, 폐 및 기관지암, 결장직장암, 췌장암, 식도암, 간암, 비뇨기 방광암, 신장암 및 신우암, 구강 및 인두암, 자궁체부암 및/또는 흑색종과 같은 암과 관련된 증상을 치료하거나 또는 완화시키는 데 사용된다. 본 개시내용은 또한 암과 관련된 증상을 치료하거나 또는 완화시키는 방법을 제공한다. 치료적 양생법은, 예를 들어, 표준 방법을 사용하여, 대상체, 예를 들어, 암을 앓고 있는(또는 암 발생의 위험이 있는) 인간 환자를 확인하는 것을 포함할 수 있다.
B7-H3를 인식하는 본 개시내용의 접합체 및 선택적으로 제2 표적을 포함하는 본 개시내용의 치료적 제형은, 예를 들어, 비제한적인 예로서 전신 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus: SLE), 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis: RA), 특발성 혈소판감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenic purpura: ITP), 발덴스트롬 고감마글로불린혈증, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증(multiple sclerosis: MS) 및/또는 홍반성 신염(lupus nephritis)을 포함하는 B-세포 매개성 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환과 같은 자가면역 질환 및/또는 염증성 질환과 관련된 증상을 치료하거나 또는 완화시키는 데 사용될 수 있다.
치료의 효능은 특정 면역-관련 장애를 진단 또는 치료하기 위한 임의의 적합한 방법과 관련하여 결정될 수 있다. 면역-관련 장애의 하나 이상의 증상의 완화는 접합체가 임상적 이점을 부여함을 나타낸다.
B7-H3, 종양 관련 항원 또는 다른 항원과 같은 표적에 대한 접합체는, 예를 들어, 적절한 생리학적 샘플 내에서 이러한 표적의 수준을 측정하는 데 사용하기 위해, 진단 방법에 사용하기 위해, 단백질 등을 영상화하기 위해 이러한 표적의 국부화 및/또는 정량화와 관련된 방법에 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체 유래 항원-결합 도메인을 포함하는 임의의 이러한 표적 또는 이의 유도체, 단편, 유사체 또는 상동체에 특이적인 접합체는 약리학적으로 활성인 화합물(이하 "치료제"로 지칭됨)로 이용될 수 있다.
본 개시내용의 접합체는 면역친화성, 크로마토그래피 또는 면역침강과 같은 표준 기법을 사용하여 특정 표적을 단리하는 데 사용될 수 있다. 본 개시내용의 접합체는, 예를 들어, 주어진 치료 양생법의 효능을 결정하기 위해 임상 시험 절차의 일부로서 조직 내 단백질 수준을 모니터링하기 위해 진단적으로 사용될 수 있다. 검출은 항체를 검출 가능한 물질에 커플링(즉, 물리적으로 연결)시킴으로써 용이해질 수 있다. 검출 가능한 물질의 예는 다양한 효소, 보결 원자단(prosthetic group), 형광 물질, 발광 물질, 생물발광 물질 및 방사성 물질을 포함한다. 적합한 효소의 예는 서양고추냉이 과산화수소, 알칼리 포스파테이스, β-갈락토시데이스 또는 아세틸콜린에스터레이스를 포함하고; 적합한 보결 원자단 복합체의 예는 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴을 포함하며; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 아이소티오사이아네이트, 로다민, 다이클로로트라이아진일아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함하고; 발광 물질의 예는 루미놀을 포함하며; 생물발광 물질의 예는 루시퍼레이스, 루시페린 및 에쿼린을 포함하고, 적합한 방사성 물질의 예는 125I, 131I, 35S 또는 3H를 포함한다.
본 개시내용의 접합체는 치료제로서 사용될 수 있다. 이러한 작용제는 일반적으로 대상체에서 주어진 표적의 비정상적인 발현 또는 활성화와 관련된 질환 또는 병리를 치료 또는 예방하기 위해 사용될 것이다. 접합체 제제, 바람직하게는 표적 항원에 대해 높은 특이성 및 높은 친화성을 갖는 것이 대상체에게 투여되며, 일반적으로 표적과의 결합으로 인해 효과를 가질 것이다. 접합체의 투여는 표적의 신호전달 기능을 폐지, 저해 또는 방해할 수 있다. 접합체의 투여는 그것이 자연적으로 결합하는 내인성 리간드와 표적의 결합을 폐지, 저해 또는 방해할 수 있다.
본 개시내용의 접합체의 치료학적 유효량은 일반적으로 치료 목적을 달성하는 데 필요한 양과 관련된다. 위에서 언급한 바와 같이, 이는 소정의 경우에 표적의 기능 및/또는 항체에 접합된 활성제의 효과를 방해하는 항체와 이의 표적 항원 사이의 결합 상호작용일 수 있다. 투여하는 데 필요한 양은 또한 이의 특정 항원에 대한 항체의 결합 친화성 및/또는 활성제의 효능에 따라 달라질 것이며, 또한 투여된 항체가 그것이 투여된 다른 대상체로부터 자유 부피(free volume)가 고갈되는 속도에 따라 달라질 것이다. 본 개시내용의 접합체의 치료학적 유효 용량에 대한 일반적인 범위는 비제한적인 예로서 약 0.1 ㎎/㎏ 체중 내지 약 50 ㎎/㎏ 체중일 수 있다. 일반적인 투여 빈도는, 예를 들어, 1일 2회 내지 주 1회의 범위일 수 있다.
본 개시내용의 접합체는 다양한 질환 및 장애의 치료를 위해 약제학적 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 조성물을 제조하는 것과 관련된 원칙 및 고려사항뿐만 아니라 성분의 선택에 대한 지침은, 예를 들어, 문헌[Remington: The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa.: 1995; Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa., 1994; 및 Peptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New York]에 제공되어 있다.
제형은 또한 치료되는 특정 적응증에 필요한 하나 이상의 활성 화합물, 바람직하게는 서로 역효과를 내지 않는 보완적 활성을 갖는 것들을 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 조성물은, 예를 들어, 세포독성제, 사이토카인, 화학치료제 또는 성장 저해제와 같은 기능을 향상시키는 작용제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 적절하게 조합되어 존재한다.
활성 성분은, 예를 들어, 액적형성 기법 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어, 각각 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀션, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀션 중 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에 포획될 수 있다.
생체내 투여를 위해 사용되는 제형은 바람직하게는 멸균이다. 이는 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다.
지속-방출 제제가 제조될 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 포함하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 지속-방출 매트릭스의 예는 폴리에스터, 하이드로겔(예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(바이닐알코올)), 폴리락타이드(미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산과 γ 에틸-L-글루타메이트, 비분해성 에틸렌-바이닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대, 루프론 데포™(주사 가능한 마이크로스피어는 락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤라이드 아세테이트로 구성됨) 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시 뷰티르산을 포함한다. 에틸렌-바이닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산과 같은 중합체는 100일 이상 분자를 방출할 수 있는 반면, 소정의 하이드로겔은 더 짧은 시간 동안 단백질을 방출한다.
본 개시내용에 따른 접합체는 샘플에서 주어진 표적(또는 단백질 이의 단편)의 존재를 검출하기 위한 작용제로서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 접합체는 검출 가능한 표지를 포함한다. 항체는 다중클론 또는 보다 바람직하게는 단일클론일 수 있다. 온전한 항체 또는 이의 단편(예를 들어, Fab, scFv 또는 F(ab)2)이 사용될 수 있다. 용어 "생물학적 샘플"은 대상체로부터 단리된 조직, 세포 및 생물학적 유체뿐만 아니라 대상체 내에 존재하는 조직, 세포 및 유체를 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 용어 "생물학적 샘플"의 사용에는 혈액 및 혈액 혈청, 혈액 혈장 또는 림프를 포함하는 혈액의 분획 또는 성분이 포함된다. 즉, 본 개시내용의 검출 방법은 시험관내뿐만 아니라 생체내 생물학적 샘플에서 분석물 mRNA, 단백질 또는 게놈 DNA를 검출하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 분석물 mRNA의 검출을 위한 시험관내 기법은 노던 혼성화 및 인시추 혼성화를 포함한다. 분석물 단백질의 검출을 위한 시험관내 기법은 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), 웨스턴 블롯, 면역침강 및 면역형광을 포함한다. 분석물 게놈 DNA의 검출을 위한 시험관내 기법은 서던 혼성화를 포함한다. 면역검정을 수행하기 위한 절차는, 예를 들어, 문헌["ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology", Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995; "Immunoassay", E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996; 및 "Practice and Theory of Enzyme Immunoassays", P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985]에 기술되어 있다. 또한, 분석물 단백질의 검출을 위한 생체내 기법은 표지된 항-분석물 접합체를 대상체에게 도입하는 것을 포함한다. 예를 들어, 항체는 대상체에서 그 존재 및 위치가 표준 영상화 기법에 의해 검출될 수 있는 방사성 마커로 표지될 수 있다.
약제학적 조성물
항체-약물 접합체는 조성물을 제조하는 임의의 적합한 방법을 사용하여 대상체를 치료하기 위해 대상체의 표적 세포에 활성제를 전달하는 데 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체-약물 접합체를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)에 관한 것이다.
본 개시내용의 조성물 및 방법은 이를 필요로 하는 개체를 치료하는 데 이용될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 개체는 인간 또는 비인간 포유동물과 같은 포유동물이다. 인간과 같은 동물에게 투여될 때, 조성물 또는 화합물은 바람직하게는, 예를 들어, 본 개시내용의 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서 투여된다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 물 또는 생리학적 완충 식염수와 같은 수용액 또는 글리콜, 글리세롤, 올리브유와 같은 오일 또는 주사 가능한 유기 에스터와 같은 기타 용매 또는 비히클을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 이러한 약제학적 조성물이 인간 투여, 특히 침습적 투여 경로(즉, 상피 장벽을 통한 수송 또는 확산을 우회하는 주사 또는 이식과 같은 경로)를 위한 것인 경우, 수용액은 발열원이 없거나 또는 실질적으로 발열원이 없다. 부형제는, 예를 들어, 작용제의 지연 방출을 수행하거나 또는 하나 이상의 세포, 조직 또는 기관을 선택적으로 표적화하도록 선택될 수 있다. 약제학적 조성물은 재구성을 위한 동결건조물, 분말, 용액, 주사 등과 같은 투여 단위 형태일 수 있다.
약제학적으로 허용 가능한 담체는, 예를 들어, 본 개시내용의 화합물과 같은 화합물을 안정화시키거나, 이의 용해도를 증가시키거나 또는 이의 흡수를 증가시키는 작용을 하는 생리학적으로 허용 가능한 작용제를 포함할 수 있다. 이러한 생리학적으로 허용 가능한 작용제는, 예를 들어, 탄수화물, 예컨대, 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대, 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이트제, 저분자량 단백질 또는 다른 안정화제 또는 부형제를 포함한다. 생리학적으로 허용 가능한 작용제를 포함하는 약제학적으로 허용 가능한 담체의 선택은, 예를 들어, 조성물의 투여 경로에 따라 달라진다. 제제 또는 약제학적 조성물은 자가유화 약물 전달 시스템 또는 자가미세유화 약물 전달 시스템일 수 있다. 약제학적 조성물(제제)은 또한, 예를 들어, 본 개시내용의 화합물이 그 안에 혼입될 수 있는 리포솜 또는 다른 중합체 매트릭스일 수 있다. 예를 들어, 인지질 또는 다른 지질을 포함하는 리포솜은 무독성이고, 생리학적으로 허용 가능하며, 비교적 간단하게 제조하고 투여할 수 있는 대사 가능한 담체이다.
어구 "약제학적으로 허용 가능한"은 본 명세서에서 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 합리적인 이익/위험 비에 상응하는 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하기 위해 사용된다.
약제학적 조성물(제제)은 임의의 다수의 투여 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 화합물은 단순히 멸균수에 용해 또는 현탁될 수 있다. 적절한 투여 경로 및 이에 적합한 조성물에 대한 자세한 사항은, 예를 들어, 미국 특허 제6,110,973호, 제5,763,493호, 제5,731,000호, 제5,541,231호, 제5,427,798호, 제5,358,970호 및 제4,172,896호뿐만 아니라 여기에 인용된 특허에서 찾을 수 있다.
제형은 편리하게 단위 투여 형태로 제공될 수 있고, 약학 분야의 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 배합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 숙주, 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 배합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료적 효과를 생성하는 화합물의 양일 것이다. 일반적으로, 100% 중에서, 이 양은 활성 성분의 약 1% 내지 약 99%, 바람직하게는 약 5% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약 10% 내지 약 30% 범위일 것이다.
이러한 제형 또는 조성물을 제조하는 방법은 본 개시내용의 화합물과 같은 활성 화합물을 담체 및 선택적으로 하나 이상의 보조 성분과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 본 개시내용의 화합물을 액체 담체, 또는 미분화된 고체 담체 또는 둘 다와 균일하고 긴밀하게 회합시킨 다음, 필요한 경우 생성물을 성형함으로써 제조된다.
본 명세서에서 사용되는 어구 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은 일반적으로 주사에 의한 장관 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하며, 제한 없이 정맥내, 안구내(예컨대, 유리체내), 근육내, 동맥내, 경막내, 낭내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 기관내, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 비경구 투여에 적합한 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 멸균 등장성 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀션, 또는 사용 직전에 멸균 주사용 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말과 조합된 하나 이상의 활성 화합물을 포함하며, 이는 항산화제, 완충액, 정균제, 의도된 수용자의 혈액과 제형을 등장성으로 만드는 용질 또는 현탁제 또는 증점제를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이들의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대, 올리브유 및 주사 가능한 유기 에스터, 예컨대, 에틸 올레이트를 포함한다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅 물질의 사용에 의해, 분산액의 경우 필요한 입자 크기를 유지함으로써, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이러한 조성물은 또한 방부제, 습윤제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 포함할 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로뷰탄올, 페놀 소르브산 등을 포함시킴으로써 보장될 수 있다. 또한, 당, 소듐 클로라이드 등과 같은 등장화제를 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 작용제를 포함시킴으로써 주사 가능한 약제학적 형태의 연장된 흡수를 야기할 수 있다.
일부 경우에, 약물의 효과를 지속시키기 위해, 피하 또는 근육내 주사로부터 약물의 흡수를 늦추는 것이 바람직하다. 이는 불량한 수용해도를 갖는 결정질 또는 비정질 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 그런 다음, 약물 흡수의 속도는 용해 속도에 따라 달라지며, 결국 결정 크기 및 결정질 형태에 따라 달라질 수 있다. 대안적으로, 비경구적으로 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클에 용해 또는 현탁시킴으로써 달성된다.
주사 가능한 데포 형태는 폴리락타이드-폴리글리콜라이드와 같은 생분해성 중합체에서 대상 화합물의 마이크로캡슐화된 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 약물 대 중합체의 비 및 사용된 특정 중합체의 특성에 따라, 약물 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오쏘에스터) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 데포 주사 가능한 제형은 또한 신체 조직에 적합한 리포솜 또는 마이크로에멀션에 약물을 포획함으로써 제조된다.
본 개시내용의 방법에 사용하기 위해, 활성 화합물은 그 자체로 또는, 예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 0.1% 내지 99.5%(보다 바람직하게는, 0.5% 내지 90%)의 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물로서 제공될 수 있다.
도입 방법은 또한 재충전식 또는 생분해성 장치에 의해 제공될 수 있다. 다양한 서방형 중합체 장치가 최근 몇 년 동안 단백질성 생물약제를 포함한 약물의 제어된 전달을 위해 개발되고 생체내에서 테스트되었다. 생분해성 및 비분해성 중합체를 포함한 다양한 생체적합성 중합체(하이드로겔 포함)가 특정 표적 부위에서 화합물을 지속적으로 방출하기 위한 임플란트를 형성하는 데 사용될 수 있다.
약제학적 조성물 내 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에게 독성을 나타내지 않고 특정 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해 목적하는 치료적 반응을 달성하는 데 효과적인 활성 성분의 양을 얻기 위해 변경될 수 있다.
선택된 투여량 수준은 사용된 특정 화합물 또는 화합물의 조합 또는 이의 에스터, 염 또는 아마이드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용 중인 특정 화합물(들)의 배설 속도, 처리 그룹간, 사용된 특정 화합물(들)과 함께 사용되는 기타 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 병태, 일반 건강 및 이전 병력, 의학 분야에서 잘 알려진 유사한 인자들을 포함한 다양한 인자에 따라 달라질 것이다.
당업계의 숙련된 의사 또는 수의사는 필요한 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 쉽게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 목적하는 치료적 효과를 달성하기 위해 필요한 것보다 낮은 수준에서 약제학적 조성물 또는 화합물의 용량을 시작하고, 목적하는 효과가 달성될 때까지 용량을 점진적으로 증가시킬 수 있다. "치료학적 유효량"은 목적하는 치료적 효과를 이끌어내기에 충분한 화합물의 농도를 의미한다. 일반적으로 화합물의 유효량은 대상체의 체중, 성별, 연령 및 병력에 따라 달라질 것으로 이해된다. 유효량에 영향을 미치는 다른 인자는 환자 병태의 중증도, 치료될 장애, 화합물의 안정성 및 원하는 경우 본 개시내용의 화합물과 함께 투여되는 또 다른 유형의 치료제를 포함할 수 있지만 이들로 제한되지 않는다. 작용제의 다회 투여에 의해 더 큰 총 용량이 전달될 수 있다. 효능 및 투여량을 결정하는 많은 방법이 당업자에게 공지되어 있다(Isselbacher et al. (1996) Harrison's Principles of Internal Medicine 13 ed., 1814-1882, 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음).
일반적으로, 본 개시내용의 조성물 및 방법에 사용되는 활성 화합물의 적합한 1일 투여량은 치료적 효과를 생성하는 데 효과적인 가장 낮은 투여량인 화합물의 양일 것이다. 이러한 유효 용량은 일반적으로 위에 기재된 인자에 따라 달라질 것이다.
이러한 치료를 받는 환자는 영장류, 특히 인간; 및 말, 소, 돼지, 양, 고양이 및 개와 같은 기타 포유동물; 가금류; 그리고 일반적으로 반려 동물을 포함하여 도움이 필요한 임의의 동물일 수 있다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물은 단독으로 사용되거나 또는 또 다른 유형의 치료제와 공동으로 투여될 수 있다.
습윤제, 유화제 및 윤활제, 예컨대, 소듐 라우릴 설페이트 및 마그네슘 스테아레이트뿐만 아니라 착색제, 이형제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 향료, 방부제 및 항산화제가 또한 조성물에 존재할 수 있다.
약제학적으로 허용 가능한 항산화제의 예는 다음을 포함한다: (1) 수용성 항산화제, 예컨대, 아스코르브산, 시스테인 하이드로클로라이드, 소듐 바이설페이트, 소듐 메타바이설파이트, 소듐 설파이트 등; (2) 유용성 항산화제, 예컨대, 아스코르빌 팔미테이트, 뷰틸화된 하이드록시아니솔(BHA), 뷰틸화된 하이드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속-킬레이트제, 예컨대, 시트르산, 에틸렌다이아민 테트라아세트산(EDTA), 소르비톨, 타타르산, 인산 등.
조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사 가능한 형태로 제조될 수 있다. 주사하기에 적합한 고체 형태는 또한, 예를 들어, 에멀션으로서 또는 리포솜에 캡슐화된 항체-약물 접합체와 함께 제조될 수 있다. 항체-약물 접합체는 약제학적으로 허용 가능한 담체와 조합될 수 있으며, 이는 담체를 투여받는 대상체에게 유해한 항체의 생성을 유도하지 않는 임의의 담체를 포함한다. 적합한 담체는 전형적으로 천천히 대사되는 큰 거대분자, 예를 들어, 단백질, 다당류, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체 아미노산, 아미노산 공중합체, 지질 응집체 등을 포함한다.
조성물은 또한 희석제, 예를 들어, 물, 식염수, 글리세롤 및 에탄올을 포함할 수 있다. 보조 물질, 예를 들어, 습윤제 또는 유화제, pH 완충 물질 등이 또한 그 내부에 존재할 수 있다. 조성물은 주사에 의해 비경구적으로 투여될 수 있되, 이러한 주사는 피하 또는 근육내 주사일 수 있다. 일부 실시형태에서, 조성물은 종양에 투여될 수 있다. 조성물은 종양에 삽입(예를 들어, 주사)될 수 있다. 추가적인 제형은 좌약 또는 경구 투여와 같은 다른 형태의 투여에 적합하다. 경구 조성물은 용액, 현탁액, 정제, 알약, 캡슐 또는 지속 방출 제형으로 투여될 수 있다.
조성물은 용량 및 제형에 적합한 방식으로 투여될 수 있다. 조성물은 바람직하게는 치료학적 유효량의 항체-약물 접합체를 포함한다. 용량은 치료되는 대상체, 대상체의 건강 및 신체 상태, 목적하는 보호 정도 및 기타 관련 인자에 따라 달라질 수 있다. 활성 성분(예를 들어, 항체-약물 접합체)의 정확한 양은 의사의 판단에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 치료학적 유효량의 항체-약물 접합체 또는 이를 포함하는 조성물은 암 또는 종양을 치료하기 위해 암 또는 종양을 앓고 있는 환자에게 투여될 수 있다.
본 개시내용에 따른 항체-약물 접합체 또는 이를 포함하는 조성물은 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 형태로 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체-약물 접합체 또는 이를 포함하는 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체, 약제학적으로 허용 가능한 부형제 및/또는 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 투여될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 염, 부형제 및 첨가제의 유효량 및 종류는 표준 방법을 사용하여 측정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th Edition, 1990] 참조).
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체-약물 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 대상체는 포유동물이다. 예를 들어, 대상체는 설치류, 토끼목, 고양이, 개, 돼지, 양, 소, 말 및 영장류로부터 선택될 수 있다. 소정의 바람직한 실시형태에서, 대상체는 인간이다.
본 개시내용의 접합체(또한 본 명세서에서 "활성 화합물"로도 지칭됨) 및 이의 유도체, 단편, 유사체 및 상동체는 투여에 적합한 약제학적 조성물에 혼입될 수 있다. 이러한 조성물은 전형적으로 접합체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 약제학적 투여에 적합한 임의의 및 모든 용매, 분산액 배지, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함하는 것으로 의도된다. 적합한 담체는 본 명세서에 참조에 의해 원용되어 있는 해당 분야의 표준 참고문헌인 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences]의 가장 최신판에 기술되어 있다. 이러한 담체 또는 희석제의 바람직한 예는 물, 식염수, 링거액, 덱스트로스 용액 및 5% 인간 혈청 알부민을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 리포솜 및 고정 오일과 같은 비수성 비히클이 또한 사용될 수 있다. 약제학적으로 활성인 물질에 대한 이러한 매질 및 작용제의 사용은 당업계에 잘 알려져 있다. 임의의 종래의 배지 또는 작용제가 활성 화합물과 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 조성물에서의 이들의 사용이 상정된다. 보조 활성 화합물이 또한 조성물에 혼입될 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물 의도된 투여 경로에 적합하도록 제형화된다. 투여 경로의 예는 비경구, 예를 들어, 정맥내, 피내 및 피하 투여를 포함한다. 비경구, 피내 또는 피하 적용을 위해 사용되는 용액 또는 현탁액은 다음 성분을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대, 주사용수, 식염수 용액, 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항균제, 예컨대, 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대, 아스코르브산 또는 소듐 바이설파이트; 킬레이트제, 예컨대, 에틸렌다이아민테트라아세트산(EDTA); 완충액, 예컨대, 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 긴장성을 조정하기 위한 작용제, 예컨대, 소듐 클로라이드 또는 덱스트로스. pH는 염산 또는 소듐 하이드록사이드와 같은 산 또는 염기로 조정될 수 있다. 비경구 제제는 앰플, 일회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱으로 만든 다회 용량 바이알에 동봉될 수 있다.
주사용으로 적합한 약제학적 조성물은 멸균 수용액(수용성인 경우) 또는 분산액 및 멸균 주사용 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여에 적합한 담체는 생리학적 식염수, 정균수, 크레모포르 EL™(바스프(BASF), 뉴저지주 파시패니 소재) 또는 포스페이트 완충 식염수(PBS)를 포함한다. 모든 경우에, 조성물은 멸균이어야 하며, 주사 용이성이 존재할 정도로 유동적이어야 한다. 이는 제조 및 보관 조건하에 안정적이어야 하며, 세균 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이들의 적합한 혼합물을 포함하는 용매 또는 분산액 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅제의 사용에 의해, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로뷰탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에, 조성물에 등장화제, 예를 들어, 당, 폴리알코올, 예컨대, 만니톨, 소르비톨, 소듐 클로라이드를 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사용 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 야기될 수 있다.
멸균 주사용 용액은 필요에 따라 위에 열거된 성분 중 하나 또는 이의 조합과 함께 적절한 용매에 필요한 양의 활성 화합물을 혼입한 후 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 기본 분산 매질과 위에 열거된 것들로부터 필요한 기타 성분을 포함하는 멸균 비히클에 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사용 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 제조 방법은 진공 건조 및 사전에 멸균-여과된 이의 용액으로부터 임의의 추가적인 목적하는 성분을 더한 활성 성분의 분말을 생성하는 동결 건조이다.
소정의 실시형태에서, 활성 화합물은 이식물 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형과 같은 신체로부터의 급속한 제거로부터 화합물을 보호할 담체와 함께 제조된다. 에틸렌 바이닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오쏘에스터 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체적합성 중합체가 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조 방법은 당업자에게 명백할 것이다. 물질은 또한 알자 코포레이션(Alza Corporation) 및 노바 파마슈티칼스, 인크(Nova Pharmaceuticals, Inc)로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 리포솜 현탁액(바이러스 항원에 대한 단일클론 항체로 감염된 세포를 표적화하는 리포솜을 포함)가 또한 약제학적으로 허용 가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이들은, 예를 들어, 미국 특허 제4,522,811호에 기술되어 있는 바와 같은 적합한 방법에 따라 제조될 수 있다.
투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 경구 또는 비경구 조성물을 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 투여 단위 형태는 치료되는 대상체에 대한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며; 각 단위는 필요한 약제학적 담체와 관련하여 목적하는 치료적 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 화합물을 포함한다. 본 개시내용의 투여 단위 형태에 대한 사양은 활성 화합물의 고유한 특성, 달성하고자 하는 특정 치료적 효과 및 개체의 치료를 위한 이러한 활성 화합물을 배합하는 기술에 내재된 한계에 의해 좌우되며 이에 직접적으로 의존한다.
약제학적 조성물은 투여를 위한 지침서와 함께 용기, 팩 또는 디스펜서에 포함될 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 약물 접합체를 포함하고, 선택적으로 치료학적 유효량의 화학치료제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 항체-약물 접합체 또는 이의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 이러한 실시형태에서, 암은 백혈병, 림프종, 유방암, 결장암, 난소암, 방광암, 전립선암, 신경교종, 폐암, 기관지암, 결장직장암, 췌장암, 식도암, 간암, 비뇨기 방광암, 신장암, 신우암, 구강암, 인두암, 자궁체부암 또는 흑색종으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 항체 약물 접합체 또는 이의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 자가면역 질환 또는 염증성 질환은 B-세포 매개성 자가면역 질환 또는 염증성 질환, 예를 들어, 전신 홍반성 루푸스(SLE), 류마티스성 관절염(RA), 특발성 혈소판감소성 자반증(ITP), 발덴스트롬 고감마글로불린혈증, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증(MS) 또는 홍반성 신염으로부터 선택된다.
이하, 본 개시내용의 구성은 실시예를 통하여 상세히 설명될 것이지만, 하기 실시예는 본 개시내용의 이해를 돕기 위한 것일 뿐이다. 본 개시내용의 범위는 이에 제한되지 않는다. 또한, 달리 구체적으로 기재되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 시약, 용매 및 출발 물질은 상업적 공급자로부터 용이하게 입수할 수 있다.
예시
아래 표에는 다음 실시예 전체에서 사용되는 약어가 열거되어 있다.
Figure pct00165
Figure pct00166
실시예
실시예 1. MPS 유도체의 합성
실시예 1.1. MPS-D1의 제조
Figure pct00167
화합물 MPS-D1a의 제조
EtOH(50㎖) 중 4-아세틸벤조산(9g, 54.82m㏖)의 용액에 피페리딘 하이드로클로라이드(6.66g, 54.82m㏖), 파라폼알데하이드(4.95g, 164.5m㏖) 및 진한 HCl(0.6㎖)을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 아세톤(90㎖)을 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 다이에틸 에터(30㎖×2)로 세척하여 화합물 MPS-D1a(6.11g, 38%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, DMSO-d6) δ 8.08 (s, 4H), 5.73 (s, 1H), 3.65 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.35 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.31 (m, 6H), 1.74 (s, 4H).
화합물 MPS-D1b의 제조
EtOH(40㎖)와 MeOH(26㎖) 중 MPS-D1a(6.11g, 20.52m㏖)의 용액에 4-메톡시벤젠티올(2.55g, 20.52m㏖) 및 피페리딘(0.3㎖, 3.08m㏖)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 추가적으로 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 에터(30㎖×2)로 세척하여 화합물 MPS-D1b(5.56g, 90%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 8.04-7.99 (m, 4H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 3.39-3.36 (m, 2H), 3.25-3.21 (m, 2H), 2.27 (s, 3H).
화합물 MPS-D1의 제조
MeOH(90㎖)와 증류수(90㎖) 중 MPS-D1b(5.56g, 18.51m㏖)의 용액에 옥손(25.03g, 40.72m㏖)을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 14시간 동안 교반한 후, 증류수(100㎖) 및 클로로폼(150㎖×3)으로 혼합물의 반응을 중지시켰다. 유기층을 염수(200㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 MPS-D1(5.29g, 86%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 8.04-7.99 (m, 4H), 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.63 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.41 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.44 (s, 3H). ESI-MS m/z: 333 (M+).
실시예 1.2. BCN-PNP의 제조
Figure pct00168
(1R,8S,9S)-바이사이클로[6.1.0]비-4-인-9-일 메탄올(800㎎, 5.3m㏖)을 N2 분위기하에 실온에서 DCM(125㎖)에 용해시켰다. 피리딘(1.22㎖, 15.9m㏖) 및 4-나이트로페닐 클로로폼에이트(1.75g, 8.74m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 동일한 온도에서 4시간 동안 교반한 후, 포화 NH4Cl 용액(100㎖)을 첨가하여 반응을 중지시키고, EA(100㎖×4)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 10:1)에 의해 정제하여 화합물 BCN-PNP(1.34g, 84%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.29 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 9 Hz, 2H), 4.41 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.36 - 2.24 (m, 6H), 1.62 - 1.55 (m, 2H), 1.53 - 1.49 (m, 1H), 1.07 (t, J = 10.2 Hz, 2H).
실시예 1.3. MPS-D1-1의 제조
Figure pct00169
DMF(8㎖) 중 화합물 MPS-D1(500㎎, 1.50m㏖)의 용액에 프로파길 아민(106㎕, 1.65m㏖)을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, PyBop(1.17g, 2.26m㏖) 및 DIPEA(524㎕, 3.01m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, EA(30㎖×2) 및 증류수(20㎖)로 희석하였다. 유기층을 추출하고, 염수(50㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 MPS-D1-1(510㎎, 92%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 9.11 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.98-7.89 (m, 4H), 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.05-4.03 (m, 2H), 3.60 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.39 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.12 (s, 1H), 2.38 (s, 3H).
실시예 1.4. L-2 및 L-2a의 제조
Figure pct00170
화합물 L-2를 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Journal of Polymer Science, Part A: Polymer Chemistry, 2012, 50(19), 3986-3995]에 기술되어 있는 바와 같은 유사한 합성 경로에 의해 합성하였다.
화합물 L-2-1의 제조
수율 30%
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.16 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.74-3.58 (m, 14H), 2.45 (s, 3H).
화합물 L-2-2의 제조
수율 68%
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 3.74-3.61 (m, 14H), 3.40 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.45 (t, J = 6.0Hz, 2H).
화합물 L-2-3의 제조
수율 63%
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 4.21 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.72-3.67 (m, 14H), 3.39 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 2.4 Hz, 1H).
화합물 L-2의 제조
수율 76%
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.71-3.61 (m, 12H), 3.51 (t, J =4.8 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.43 (t, J = 2.4 Hz, 1H).
화합물 L-2a의 제조
0℃ N2 분위기에서 아세톤(100㎖) 중 화합물 L-2-2(3.0g, 13.7m㏖)의 용액을 Jones 시약(20㎖)을 처리하고, 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 DCM(50㎖×2) 및 증류수(15㎖)로 추출하였다. 유기층을 염수(50㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-2a(2.8g, 88%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 4.22-4.14 (m, 2H), 3.80-3.64 (m, 10H), 3.42 (t, J = 4.4 Hz, 2H).
실시예 1.5. L-3의 제조
Figure pct00171
화합물 L-3-1의 제조
무수 DCM(178㎖) 중 헥사에틸렌 글리콜(5.0g, 17.71m㏖)의 용액에 KI(294㎎, 1.77m㏖) 및 Ag2O(4.92g, 19.48m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 Celite®를 통해 여과하고, DCM(100㎖)으로 세척하였다. 여과액을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-3-1(5.98g, 73%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.16 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.71-3.58 (m, 22H), 2.88 (br, 1H), 2.45 (s, 3H).
화합물 L-3-2의 제조
DMF(30㎖) 중 화합물 L-3-1(5.98g, 13.7m㏖)의 용액에 NaN3(1.34g, 20.55m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-3-2(4.1g, 97%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 3.72 - 3.60 (m, 22H), 3.39 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.78 (br, 1H).
화합물 L-3-3의 제조
5% Pd/C(1.04g, 0.49m㏖)를 실온에서 EtOH(5㎖) 중 L-3-2(1.0g, 3.25m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물에 수소 가스를 4시간 동안 버블링시켰다. 혼합물을 Celite®를 통해 여과하여 Pd/C를 제거하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 DCM(25㎖)에 용해시킨 후, BOC2O(852.1㎎, 3.9m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-3-3(330㎎, 28%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 5.19 (brs, 1H), 3.73 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.67 (s, 12H), 3.63 - 3.60 (m, 6H), 3.54 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.34 - 3.27 (m, 1H), 1.44 (s, 9H).
ESI-MS m/z: 382 (M++1).
화합물 L-3-4의 제조
화합물 L-3-2(1.9g, 6.18m㏖)을 N2 분위기하에 DCM(20㎖)에 용해시켰다. 트라이에틸아민(2.0㎖, 14.22m㏖) 및 p-TsCl(2.4g, 12.36m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-3-4(2.58g, 91%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.16 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.70 - 3.61 (m, 16H), 3.56 (s, 1H), 3.39 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 462 (M++1).
화합물 L-3-5의 제조
N2 분위기하에서 무수 THF(30㎖) 중 L-2(1.1g, 3.4m㏖)의 균질 용액을 NaH(미네랄 오일 중 60% 분산액, 135㎎, 3.4m㏖)로 처리하고, 0℃로 냉각시켰다. 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반한 후, L-3-4(1.56g, 3.4m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 반응물을 냉각시키고, MeOH(5㎖)로 반응을 중지시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-3-5(1.91g, 93%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 610 (M++1).
화합물 L-3의 제조
0℃에서, N2 분위기하에 EA(4㎖)와 에터(4㎖) 중 화합물 L-3-5(906.7㎎, 1.49m㏖)의 용액에 5% HCl 용액(8㎖) 및 트라이페닐포스핀(390㎎, 1.49m㏖)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM(10㎖)으로 희석하였다. 수성층을 DCM(10㎖×3)으로 추출하였다. 수성상을 고진공하에 농축시켜 화합물 L-3(495㎎, 54%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 584 (M++1).
실시예 1.6. L-4의 제조
Figure pct00172
화합물 L-4-1의 제조
N2 분위기하에 -20℃에서, 무수 THF(50㎖) 중 KOtBu(943㎎, 8.41m㏖)의 용액에 테트라에틸렌 글리콜(4.35㎖, 25.22m㏖)에 이어 프로파길 브로마이드(1.0g, 8.41㎖)를 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고, 17시간 동안 교반하였다. MeOH(1㎖) 및 H2O(50㎖)를 첨가하고 얼음 수조에서 냉각시켜 반응을 중지시키고, EA(100㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-4-1(1.46g, 75%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.26 - 4.20 (m, 2H), 3.78 - 3.60 (m, 16H), 2.42 - 2.40 (m, 1H).
화합물 L-4-2의 제조
얼음 수조에서 냉각된 무수 DCM(20㎖) 중 CBr4(1.43g, 4.31m㏖)의 용액에 트라이페닐포스핀(1.13g, 4.31m㏖)에 이어 L-4-1(500㎎, 2.15m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 가온시키고, 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(50㎖)로 희석하고, DCM(100㎖)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-4-2(410㎎, 65%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 4.21 (s, 2H), 3.82 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.74 - 3.64 (m, 12H), 3.45 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.45 - 2.42 (m, 1H).
화합물 L-4의 제조
DMF(10㎖) 중 화합물 L-4-2(300㎎, 1.02m㏖)의 용액에 N,N-다이메틸에틸렌다이아민(555㎕, 5.08m㏖)을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-4(218㎎, 71%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 303 (M+1).
실시예 1.7. L-5의 제조
Figure pct00173
화합물 L-5-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 무수 THF(100㎖) 중 메틸 2,4-다이브로모뷰티레이트(10g, 38.47m㏖)의 균질 용액에 무수 THF(50㎖) 중 티오아세트산(2.75㎖, 38.47m㏖, 1.0당량) 및 DIPEA(8.5㎖, 48.9m㏖, 1.3당량)의 혼합물을 1.5시간 동안 적가하였다. N2 분위기하에 -20℃에서 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시키고, 물(100㎖)로 희석하고, EA(200㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 12:1)에 의해 정제하여 화합물 L-5-1(9.67g, 98%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.38 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.46-3.39 (m, 2H), 2.56 - 2.47 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.32 - 2.23 (m, 1H).
화합물 L-5-2의 제조
N2 분위기하에 실온에서 AcOH(80㎖) 중 L-5-1(9.67g, 37.90m㏖)을 35% 수소 퍼옥사이드(40㎖)에 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반한 다음, 농축시키고, 물(20㎖)로 희석하고, NaHCO3로 중화하고, EA/Hex(1/1, 30㎖×2)로 세척하였다. 수성층을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM:MeOH:AcOH = 8:1:0.01 내지 5:1:0.01)에 의해 정제하여 화합물 L-5-2(7.0g, 71%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 4.11 (dd, J = 5.4, 4.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.65 - 3.62 (m, 1H), 3.52 - 3.47(m, 1H), 2.62 - 2.48 (m, 2H).
화합물 L-5-3의 제조
DMF(20㎖) 중 L-5-2(7.0g, 26.81m㏖)의 용액에 NaN3(4.5g, 69.71m㏖, 2.6당량)를 N2 분위기하에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM:MeOH:AcOH = 7:1:0.01 내지 5:1:0.01)에 의해 정제하여 화합물 L-5-3(5.4g, 90%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, D2O) δ 3.82 (dd, J = 4.2, 6.0 Hz, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.36 - 3.26 (m, 2H), 2.29 - 2.02 (m, 2H).
화합물 L-5-4의 제조
50㎖ 둥근 바닥 플라스크에 L-5-3(500㎎, 2.24m㏖), 10㎖의 MeOH, 5% Pd/C(715㎎, 0.34m㏖, 0.15당량) 및 Boc2O(538㎎, 2.46m㏖, 1.1당량)를 첨가하였다. 공기를 빼낸 후, 혼합물을 H2하에 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 촉매 Celite®를 통해 여과하고, Celite®를 MeOH(20㎖×2)로 세척하였다. 용매를 회전 증발기로 제거하고, 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM:MeOH:AcOH = 7:1:0.01 내지 5:1:0.01)에 의해 정제하여 화합물 L-5-4(450.2㎎, 68%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 6.79 (s, 1H), 4.13 (brs, 1H), 3.55 (s, 3H), 2.88 - 2.80 (m, 2H), 1.96 - 1.88 (m, 2H), 1.3 6(s, 9H).
화합물 L-5-5의 제조
N2하에 실온에서 THF/물(4㎖/8㎖) 중 L-5-4(100㎎, 0.34m㏖)의 균질 용액을 LiOH(21.2㎎, 0.50m㏖, 1.5당량)로 처리하고, 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 2N HCl로 중화하고 용액 및 감압하에 농축시켰다. 화합물 L-5-5를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
ESI-MS m/z: 284 (M++1).
화합물 L-5-6의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(2㎖) 중 L-5-5(0.34m㏖), N-하이드록시석신이미드(77.4㎎, 0.67m㏖, 2.0당량) 및 EDCI-HCl(260.7㎎, 1.36m㏖, 4.0당량)의 균질 용액을 밤새 교반하였다. 혼합물을 L-3(210.8㎎, 0.34m㏖, 1.0당량), DIPEA(177.6㎕, 1.02m㏖, 3.0당량)로 처리하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM:MeOH:AcOH = 12:1:0.01 내지 5:1:0.01)에 의해 정제하여 화합물 L-5-6(159.1㎎, 55%)을 황색 오일로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 850 (M++1).
화합물 L-5의 제조
N2 분위기하에 실온에서 1,4-다이옥세인(2㎖) 중 L-5-6(100㎎, 0.12m㏖)의 균질 용액을 c-HCl(500㎕)로 처리하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 화합물 L-5(92㎎, 99%)를 황색 오일로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 749 (M++1).
실시예 1.8. L-6의 제조
Figure pct00174
화합물 L-6-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DCM(30㎖) 중 Boc-L-세린 메틸 에스터(5.0g, 22.8m㏖)의 균질 용액을 피리딘(8㎖), P-톨루엔 설폰일 클로라이드(5.22g, 27.4m㏖, 1.2당량)로 처리하고, 밤새 교반하였다. 물(50㎖)을 첨가하여 반응을 중지시키고, EA(100㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 9:1 내지 2:1)에 의해 정제하여 화합물 L-6-1(7.0g, 82%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 5.29 (S, 1H), 4.53 - 4.47 (m, 1H), 4.39 (dd, J = 2.4, 7.8 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 7.2, 2.4 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.45 (s, 3H).
화합물 L-6-2의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(12㎖) 중 CsCO3(1.05g, 3.21m㏖, 0.6당량)의 현탁액을 DMF(8㎖) 중 티오아세트산(498㎕, 6.96m㏖, 1.3당량) 및 L-6-1(2.0g, 5.36m㏖)로 처리하고, 밤새 교반하였다. 물(50㎖)을 첨가하여 혼합물의 반응을 중지시키고, EA(100㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 5:1)에 의해 정제하여 화합물 L-6-2(1.4g, 95%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 5.24 (s, 1H), 4.53-4.49 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 4.41-4.31 (m, 2H).
화합물 L-6-3의 제조
N2 분위기하에 실온에서 AcOH(10㎖) 중 L-6-2(1.2g, 4.33m㏖)를 35% 수소 퍼옥사이드(4㎖)에 첨가하였다. 혼합물을 7시간 동안 교반한 다음, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 물(5㎖)로 희석하고, 0℃에서 NaHCO3의 포화 수용액을 사용하여 pH 9까지 염기성화하였다. Boc2O(1.4g, 6.49m㏖, 1.5당량)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 밤새 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 2N HCl로 중화하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM:MeOH:AcOH = 8:1:0.01 내지 5:1:0.01)에 의해 정제하여 화합물 L-6-3(521.5㎎, 42%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.96 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.20 (q, J = 6.8, 4.8 Hz, 1H), 3.58 (s, 3H), 2.84 (dd, J = 14, 6.4 Hz, 1H), 2.76 (dd, J = 9.2, 4.4 Hz, 1H), 1.37 (s, 9H).
화합물 L-6-4의 제조
N2 분위기하에 실온에서 THF/H2O(2.0㎖/4.0㎖) 중 L-6-3(71㎎, 0.25m㏖)의 균질 용액을 LiOH(17.3㎎, 0.41, 1.5당량)로 처리하고, 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 2N HCl로 중화하고, 감압하에 농축시켜 화합물 L-6-4(67㎎, 99%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.40 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.96 (q, J = 6.4, 5.6 Hz, 1H), 2.88 - 2.78 (n, 2H), 1.36 (s, 9H).
화합물 L-6-5의 제조
L-6-4(35㎎, 0.13m㏖), N-하이드록시석신이미드(22.4㎎, 0.19m㏖, 1.5당량) 및 EDCI-HCl(50㎎, 0.26m㏖, 2.0당량)을 N2 분위기하에 실온에서 DMF(2㎖)에 용해시켰다. 혼합물을 밤새 교반한 후, 화합물 L-6-5를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
ESI-MS m/z: 367 (M++1).
화합물 L-6-6의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(2㎖) 중 L-6-5(0.13m㏖)의 교반된 용액에 L-2(0.19m㏖, 1.5당량) 및 EDCI-HCl(50㎎, 0.26m㏖, 2.0당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압하에 농축시킨 후, 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM:MeOH:AcOH = 12:1:0.01 내지 5:1:0.01)에 의해 정제하여 화합물 L-6-6(34.8㎎, 64%)을 황색 오일로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 483 (M++1).
화합물 L-6의 제조
c-HCl(300㎕)을 N2 분위기하에 실온에서 1,4-다이옥세인(1.2㎖) 중 L-6-6(29.6mg 0.061m㏖)의 교반된 용액에 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축시켜 화합물 L-6(25.4㎎, 99%)을 황색 오일로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 382 (M++1).
실시예 1.9. MPS-D1-10의 제조
Figure pct00175
화합물 L-1-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 1,4-다이옥세인(100㎖)과 H2O(25㎖) 중 11-아지도-3,6,9-트라이옥사운데칸-1-아민(알드리치, CAS 134179-38-7, 5.0g, 22.9m㏖)의 투명한 용액을 NaHCO3(3.8g, 45.8m㏖, 2.0당량) 및 BOC2O(6.0g, 27.5m㏖, 1.2당량)로 처리한 다음, 6시간 동안 교반하였다. 물(50㎖)로 반응을 중지시키고, DCM(100㎖×3)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM 중 1% 내지 3% MeOH)에 의해 정제하여 화합물 L-1-1(7.2g, 99%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.03 (brs, 1H), 3.72 - 3.60 (m, 10H), 3.98 - 3.52 (m, 1H), 3.43 - 3.36 (m, 1H), 3.35 - 3.24 (m, 1H), 1.26 (s, 9H).
ESI-MS m/z: 319 (M++1).
화합물 L-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 THF(30㎖), 에터(15㎖) 및 H2O(15㎖) 중 L-1-1(7.2g, 22.6m㏖)의 투명한 용액을 트라이페닐포스핀(6.5g, 24.9m㏖, 1.1당량)으로 처리한 다음, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물(10㎖)로 희석하고, DCM(60㎖×3)으로 추출하였다. 수층을 감압하에 농축시켜 화합물 L-1-1(6.3g, 95%)을 무색 오일로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 293 (M++1)
화합물 MPS-D1-10a를 실시예 2의 화합물 MPS-D1-1의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
화합물 MPS-D1-10a의 제조
수율 71%, 옅은 황색 오일
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 - 7.93 (m, 4H), 7.83 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.30 (brs, 1H), 5.01 (brs, 1H), 3.74 - 3.46 (m, 26H), 3.34 - 3.26 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.43 (s, 9H); ESI-MS m/z: 695 (M++1).
화합물 MPS-D1-10b를 실시예 1.8의 화합물 L-6의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
화합물 MPS-D1-10b의 제조
수율 99%, 옅은 황색 오일.
1H NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ 8.74 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (dd, J = 12, 8.4 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 3.68 - 3.36 (m, 24H), 3.01 - 2.94 (m, 2H), 2.22 (s, 3H); ESI-MS m/z: 595 (M++1).
화합물 MPS-D1-10의 제조
N2 분위기하에 실온에서 무수 DMF(2.0㎖) 중 MPS-D1-10b(63㎎, 0.10m㏖) 및 BCN-PNP(31.5㎎, 0.10m㏖, 1.0당량)의 균질 용액을 DIPEA(52㎕, 0.3m㏖, 3당량) 및 HBTU(57㎎, 0.15m㏖, 1.5당량)로 처리하고, 2시간 동안 교반하였다. H2O(20㎖)로 반응을 중지시키고, EA(30㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(10㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 분취 TLC에 의해 정제하여 화합물 MPS-D1-10(57㎎, 74%)을 수득하였다. ESI-MS m/z: 771 (M++1).
실시예 1.10. L-11의 제조
Figure pct00176
화합물 L-11-1의 제조
무수 DCM(178㎖) 중 헥사에틸렌 글리콜(5.0g, 17.71m㏖)의 용액에 KI(294㎎, 1.77m㏖), Ag2O(4.92g, 19.48m㏖) 및 p-TsCl(3.7g, 19.48m㏖)을 N2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 Celite®를 통해 여과하고, Celite® 플러그를 DCM(100㎖)으로 세척하였다. 여과액을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-1(5.98g, 73%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.16 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.71 - 3.58 (m, 22H), 2.88 (br, 1H), 2.45 (s, 3H).
화합물 L-11-2의 제조
DMF(30㎖) 중 화합물 L-11-1(5.98g, 13.7m㏖)의 용액에 NaN3(1.34g, 20.55m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-2(4.1g, 97%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 3.72 - 3.60 (m, 22H), 3.39 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.78 (br, 1H).
화합물 L-11-2a의 제조
화합물 L-11-2(1.9g, 6.18m㏖)를 N2 분위기하에 DCM(20㎖)에 용해시키고, 트라이에틸아민(2.0㎖, 14.22m㏖) 및 p-TsCl(2.4g, 12.36m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-2a(2.58g, 91%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.16 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.70 - 3.61 (m, 16H), 3.56 (s, 1H), 3.39 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 462 (M++1).
화합물 L-11-3의 제조
EtOH(5㎖) 중 화합물 L-11-2(1.0g, 3.25m㏖)의 용액에 5% Pd/C(1.04g, 0.49m㏖)를 H2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 Celite®를 통해 여과하여 Pd/C를 제거하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 DCM(25㎖)에 용해시켰다. BOC2O(852.1㎎, 3.9m㏖)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-3(330㎎, 28%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 5.19 (brs, 1H), 3.73 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.67 (s, 12H), 3.63 - 3.60 (m, 6H), 3.54 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.34 - 3.27 (m, 1H), 1.44 (s, 9H).
ESI-MS m/z: 382 (M++1).
화합물 L-11-4의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 THF(10㎖) 중 화합물 L-11-3(450㎎, 1.18m㏖)의 균질 용액을 NaH(미네랄 오일 중 60% 분산액, 47.2㎎, 1.18m㏖)로 처리하였다. 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반한 후, L-11-2a(544.5㎎, 1.18m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 반응물을 냉각시키고, MeOH(5㎖)로 반응을 중지시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-11-4(582.9㎎, 74%)를 수득하였다.
화합물 L-11의 제조
DCM(3㎖) 중 화합물 L-11-4(582.9㎎, 0.87m㏖)의 용액에 4M-HCl(1,4-다이옥세인 중, 1㎖)을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 화합물 L-11(527.6㎎, 정량)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 571 (M++1).
아래 표 2는 실시예 2에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 화합물을 열거하고 있다.
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
실시예 2. 말레이미드-유도체 및 POS-유도체의 합성
실시예 2.1. Mal-1의 제조
Figure pct00180
화합물 L-4를 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Journal of Medicinal Chemistry, 52(19), 5816-5825; 2009]에 기재된 것과 유사한 합성 경로에 의해 합성하였다.
화합물 Mal-1a의 제조
수율 55%
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 4.21 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 3.72-3.60 (m, 24H), 2.79 (brs, 1H), 2.43 (t, J = 2.4 Hz, 1H).
화합물 Mal-1의 제조
ESI-MS m/z: 400(M+)
실시예 2.2. Mal-2의 제조
Figure pct00181
N2 분위기하에 실온에서 무수 DCM 중 N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥세인-카복실레이트(85.5㎎, 0.26m㏖) 및 L-2(75.3㎎, 0.28m㏖)의 균질 용액을 DIPEA(44.5㎕, 0.26m㏖, 1당량)로 처리하고, 실온에서 45분 동안 교반하였다. 반응물을 DCM(32㎖)으로 희석하고, 1N HCl(30㎖), 염수(30㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 분취-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 L-5(70.8㎎, 61%, 혼합물 9㎎)를 백색 검으로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 451(M+1)
실시예 2.3. Mal-3의 제조
Figure pct00182
화합물 Mal-3-1의 제조
0℃에서 THF(50㎖) 중 BOC2O(9.6g, 44.0m㏖)의 용액에 2,2'-다이아미노-N-메틸다이에틸아민(10.3g, 88.0m㏖)을 N2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. H2O(100㎖) 및 DCM(150㎖×2)으로 혼합물의 반응을 중지시켰다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼에 의해 정제하여 화합물 Mal-3-1(3.3g, 35%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 5.04 (brs, 1H), 3.26-3.16 (m, 2H), 2.78 (t, J =6.0 Hz, 2H), 2.47 (t, J =6.0 Hz, 2H), 2.43 (t, J =6.0 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.45 (s, 9H).
화합물 Mal-3-2의 제조
실온에서 AcOH(3.0㎖) 중 Mal-3-1(500㎎, 2.3m㏖)의 용액에 말레산 무수물(248㎎, 2.53m㏖)을 N2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축시키고, 잔사를 실온에서 아세트산 무수물(5.0㎖)에 용해시켰다. NaOAc(95.7㎎, 1.17m㏖)를 반응 혼합물에 첨가하고, 75℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼에 의해 정제하여 화합물 Mal-3-2(415㎎, 60%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 6.70 (s, 2H), 3.63 (t, J =6.4 Hz, 2H), 3.18-3.10 (m, 2H), 2.57 (t, J =6.4 Hz, 2H), 2.48 (t, J =6.0 Hz, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.44 (s, 9H).
ESI-MS m/z: 298(M+).
화합물 Mal-3-3의 제조
DCM(4.0㎖) 중 화합물 Mal-3-2(370㎎, 1.24m㏖)의 용액에 TFA(3.0㎖)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고, 2.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축시키고, 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다(387㎎, 정량).
ESI-MS m/z: 198(M+).
화합물 Mal-3의 제조
DMF(3.0㎖) 중 화합물 Mal-3-3(50㎎, 0.16m㏖) 및 BCN-PNP(50.6㎎, 0.16m㏖)의 용액에 DIPEA(57㎕, 0.32m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 2.5시간 동안 교반하고, EA(50㎖×2) 및 H2O(30㎖)를 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Mal-3(13.2㎎, 22%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 6.70 (s, 2H), 5.12 (brs, 1H), 4.14 (d, J =8.0 Hz, 2H), 3.63 (t, J =6.0 Hz, 2H), 3.24-3.18 (m, 2H), 2.58 (t, J =6.4 Hz, 2H), 2.50 (t, J =6.0 Hz, 2H), 2.30-2.20 (m, 9H), 1.28-1.22 (m, 3H), 0.98-0.94 (m, 1H).
ESI-MS m/z: 374(M+).
실시예 2.4. POS-1의 제조
Figure pct00183
화합물 POS-1-1의 제조
EtOH(60㎖) 중 에틸 4-하이드로벤조에이트(20g, 120.35m㏖)의 용액에 NH2NH2·H2O(88㎖, 1805.4m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 밤새 환류 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압하에 농축시킨 후, EtOH 분쇄하여 화합물 POS-1-1(17.54g, 9 6%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, DMSO-d 6 ) δ 9.50 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.78 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.37 (s, 2H). ESI-MS m/z: 431 (M++1).
화합물 POS-1-2의 제조
EtOH(200㎖)와 DMF(100㎖) 중 화합물 POS-1-1(17.54g, 115.28m㏖)의 용액에 CS2(45㎖, 749.32m㏖) 및 KOH(6.5g, 115.28m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 85℃에서 18시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물에 1M HCl 용액을 첨가하여 pH 4로 조정하고, 증류수(500㎖) 및 EA(500㎖×2)로 희석하였다. 유기층을 H2O(500㎖) 및 염수(500㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 에터/Hex로 분쇄하여 화합물 POS-1-2(20.7g, 93%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, DMSO-d 6 ) δ 10.44 (s, 1H), 7.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 8.0 Hz, 2H). ESI-MS m/z: 195(M++1).
화합물 POS-1-3의 제조
THF(100㎖) 중 화합물 POS-1-2(5g, 25.75m㏖)의 용액에 Et3N(4.3㎖, 30.9m㏖) 및 MeI(1.76㎖, 28.33m㏖)를 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 실온까지 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O(150㎖)로 희석하고, EA(100㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 에터로 분쇄하여 화합물 POS-1-3(5.15g, 96%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, DMSO-d 6 ) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.74 (s, 3H). ESI-MS m/z: 209 (M++1).
화합물 POS-1-4의 제조
EtOH(150㎖) 중 화합물 POS-1-3(3.2g, 15.37m㏖)의 용액에 70% m-CPBA(11.4g, 46.11m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 5시간 동안 교반한 후, 70% m-CPBA(11.4g, 46.11m㏖)를 추가로 첨가하였다. 그런 다음, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, H2O(500㎖), 포화 NaHCO3(300㎖)로 반응을 중지시키고, EA(500㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 염수(300㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 Hex/EA = 1:1(100㎖)로 분쇄하여 화합물 POS-1-4(3.2g, 89%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, DMSO-d 6 ) δ 7.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.01 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.69 (4s, 3H). ESI-MS m/z: 241 (M++1).
화합물 POS-1의 제조
THF(8㎖)와 DMF(0.8㎖) 중 POS-1-4(310㎎, 1.29m㏖) 및 L-8-1(660㎎, 2.84m㏖)의 용액에 PPh3(667㎎, 2.58m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, DEAD(1.17㎖, 2.58m㏖)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(15㎖)로 희석하고, EA(15㎖×2)로 추출하였다. 수득된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 POS-1(205㎎, 30%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 455 (M++1).
실시예 2.5. Int-3의 제조
Figure pct00184
화합물 Int-3-a의 제조
N2 분위기하에 실온에서 ACN(150㎖) 중 Int-TG(18.5g, 45.0m㏖), 4-하이드록시벤즈알데하이드(5.0g, 40.9m㏖) 분자체(10.0g)의 용액에 Ag2O(38.0g, 0.164㏖)를 처리하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과액을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-3-a(16.0g, 86%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.93 (s, 1H), 7.86 (d, J = 6.8 Hz, 2H). 7.11 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 5.52-5.47 (m, 2H), 5.18-5.14 (m, 2H), 4.24-4.11 (m, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.07(s, 6H), 2.02 (s, 3H).
화합물 Int-3-b의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 THF(15㎖) 중 Int-3-a(540㎎, 1.19m㏖)의 용액에 NaBH4(113㎎, 2.98m㏖)를 처리하고, 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 반응물을 H2O 및 EA로 희석하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(EA:HEX=1:1)에 의해 정제하여 화합물 Int-3-b(430㎎, 79%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H). 5.51-5.54 (m, 2H), 5.11 (dd, J = 10.8 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 5.6 2H) 4.25-4.04 (m, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.01 (s, 3H).
화합물 Int-3의 제조
N2 분위기하에 실온에서 무수 DMF(6.0㎖) 중 Int-3-b(1.0g, 2.2m㏖)의 용액에 비스(펜타플루오로페닐카보네이트)(1.3g, 3.3m㏖)를 처리하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20㎖×2), H2O(30㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 반응 혼합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 Int-3(1.4g, 98%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.384 (d, J = 8.8Hz, 2H), 7.039 (d, J = 8.4Hz, 2H), 5.529-5.465 (m, 2H), 5.280 (s, 2H), 5.141-5.068 (m, 2H), 4.262-4.070 (m, 4H), 2.195 (s, 3H), 2.078 (s, 3H), 2.073 (s, 3H), 2.025 (s, 3H).
실시예 2.6. Int-4의 제조
Figure pct00185
화합물 Int-4를 실시예 2.5에 기재된 것과 유사한 방법을 통해 합성하였다.
수율 72%.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.93 (s, 1H), 7.86 (d, J = 6.8 Hz, 2H). 7.11 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 5.52-5.47 (m, 2H), 5.18-5.14 (m, 2H), 4.24-4.11 (m, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.07(s, 6H), 2.02 (s, 3H).
실시예 2.7. Int-5의 제조
Figure pct00186
화합물 Int-5-1의 제조
메탄올(150㎖) 중 4-하이드록시벤조산(5.0g, 36.2m㏖)의 용액에 티오닐 클로라이드(26.3㎖, 362m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 수성 NaHCO3로 반응을 중지시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-5-1(4.87g, 89%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.87 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 153 (M++1).
화합물 Int-5-2의 제조
DCM(22.0㎖) 중 화합물 Int-5-1(1.0g, 6.57m㏖)의 용액에 DIPEA(2.3㎖, 13.4m㏖) 및 MOM-Cl(0.55㎖, 7.23m㏖)을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 물로 반응을 중지시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-5-2(1.14g, 88%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 8.01-7.97 (m, 2H), 7.07-7.04 (m, 2H), 5.23 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.48 (s, 3H).
화합물 Int-5의 제조
메탄올/H2O/1,4-다이옥세인(16.0㎖/8.0㎖/16.0㎖) 중 화합물 Int-5-2(1.14g, 5.81m㏖)의 용액에 리튬 하이드록사이드 모노하이드레이트(975㎎, 23.2m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 2N HCl로 반응을 중지시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 화합물 Int-5를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다(995㎎, 94%).
1H NMR (400 Hz, MeOH-D 4 ) δ 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.55 (s, 3H).
실시예 3. OHPAS-링커 유도체의 합성
실시예 3.1. Int-TG의 제조
Figure pct00187
β-D-갈락토스 펜타아세테이트(알파(Alfa), CAS 4163-60-4, 5.0g, 12.81m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 AcOH(20㎖) 중 33% HBr에 용해시켰다. 혼합물을 실온까지 가온시켰다. 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 감압하에 농축시킨 다음, EA(1000㎖) 및 포화 소듐 바이카보네이트(1000㎖)를 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG(5.2g, 99%)를 수득하였다.
실시예 3.1.2 Int-TG2의 제조
Figure pct00188
화합물 Int-TG2를 실시예 3.1.1에 기재된 것과 유사한 방법을 통해 합성하였다.
수율 80%
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.654 (d, J = 4.0Hz, 1H), 5.627 (t, J = 10.0Hz, 1H), 5.252 (dd, J = 10.4Hz, 9.6Hz, 1H), 4.865 (dd, J = 10.0Hz, 4.0Hz, 1H), 4.593 (d, J = 10.4Hz, 1H), 3.777 (s, 3H), 2.113 (s, 3H), 2.071 (s, 3H), 2.065 (s, 3H)
실시예 3.1.3 Int-TG3의 제조
Figure pct00189
화합물 Int-TG3-1의 제조
THF(10㎖) 중 베타-D-갈락토스 펜타아세테이트(1g, 2.56m㏖)의 용액에 3-(다이메틸아미노)1-프로필아민(1.61㎖, 12.8m㏖)을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 3시간 동안 교반한 후, 반응물을 EA(250㎖×3), H2O(200㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 화합물 Int-TG3-1(891㎎, 100%)을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
ESI-MS m/z: 371 (M++Na).
화합물 Int-TG3의 제조
DCM(10㎖) 중 Int-TG3-1(891㎎, 2.56m㏖)의 용액에 트라이클로로아세토나이트릴(2.57㎖, 25.6m㏖) 및 DBU(0.3㎖, 2.05m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후, 반응물을 DCM(250㎖×3), H2O(200㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG3(880㎎, 70%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.70 (s, 1H), 6.61 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.57 (dd, J = 2.8, 0.8 Hz, 1H), 5.55 - 5.35 (m, 2H), 4.44 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.19 - 4.06 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 2.02 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 515 (M++Na).
실시예 3.1.3 Int-TG4의 제조
Figure pct00190
화합물 Int-TG4-1의 제조
메탄올(150㎖) 중 4-하이드록시벤조산(5.0g, 36.2m㏖)의 용액에 티오닐 클로라이드(26.3㎖, 362m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 수성 NaHCO3로 반응을 중지시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG4-1(4.87g, 89%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.87 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H)
EI-MS m/z: 153 (M++1).
화합물 Int-TG4-2의 제조
DCM(22.0㎖) 중 화합물 Int-TG4-1(1.0g, 6.57m㏖)의 용액에 DIPEA(2.3㎖, 13.4m㏖) 및 MOM-Cl(0.55㎖, 7.23m㏖)을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 물로 반응을 중지시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-TG4-2(1.14g, 88%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 8.01-7.97 (m, 2H), 7.07-7.04 (m, 2H), 5.23 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.48 (s, 3H)
화합물 Int-TG4의 제조
메탄올/H2O/1,4-다이옥세인(16.0㎖/8.0㎖/16.0㎖) 중 화합물 Int-TG4-2(1.14g, 5.81m㏖)의 용액에 리튬 하이드록사이드 모노하이드레이트(975㎎, 23.2m㏖)를 N2 분위기 하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 2N HCl로 반응을 중지시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 화합물 Int-TG4를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다(995㎎, 94%).
1H NMR (400 Hz, MeOH-D 4 ) δ 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.25 (s, 2H), 3.55 (s, 3H)
실시예 3.2. OHPAS-D1, OHPAS-D1a 및 OHPAS-D2의 제조
Figure pct00191
화합물 OHPAS-D1a-1의 제조
DMF(25㎖) 중 L-1-1(2g, 6.282m㏖)의 용액에 소듐 하이드라이드(301㎎, 12.56m㏖, 60%)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 10분 후, 아이오도메테인(3.9㎖, 62.82m㏖)을 N2 분위기하에 동일한 온도에서 첨가하였다. 반응물을 N2 분위기하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 2N HCl(10㎖)로 반응 혼합물의 반응을 중지시키고, EA(500㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 화합물 OHPAS-D1a-1(황색 오일)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.70 - 3.62 (m, 12H), 3.4 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.91(s, 3H), 1.46 (s, 9H). ESI-MS m/z: 333 (M+1)
화합물 OHPAS-D1a-2의 제조
DCM(70㎖) 중 화합물 OHPAS-D1a-1(3.3g, 6.282m㏖)의 용액에 다이옥세인(25㎖) 중 4N HCl을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 N2 분위기하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 화합물 OHPAS-D1a-2를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.92 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.73 - 3.69 (m, 10H), 3.45 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.22 - 3.16 (m, 2H), 2.77 (t, J = 5.6 Hz, 3H), 2.35 (brs, 1H). ESI-MS m/z: 233 (M+1)
화합물 OHPAS-D1-1의 제조
DMF(100㎖) 중 3-폼일-4-하이드록시벤조산(5g, 43.06m㏖)의 용액에 벤질 브로마이드(5.1㎖, 43.06m㏖) 및 NaHCO3(2.53g, 43.06m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EA(200㎖×2) 및 증류수(100㎖)로 추출하였다. 수득된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D1-1(2.56g, 39%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 11.41 (s, 1H), 9.95 (s, 1H), 8.34 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.23 (dd, J = 6.4 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.46 - 7.35 (m, 5H), 7.04 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H).
화합물 OHPAS-D1-2의 제조
무수 ACN(30㎖) 중 화합물 Int-TG-1(1.0g, 3.90m㏖) 및 화합물 Int-TG(1.6g, 3.90m㏖)의 용액에 분자체(8g) 및 Ag2O(3.62g, 15.61m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, Celite®에 의해 여과하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D1-2(2.1g, 92%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 10.34 (s, 1H), 8.55 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.26 (dd, J = 6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.35 (m, 5H), 7.17 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.63 - 5.60 (m, 1H), 5.50 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.16 (dd, J = 7.2, 3.6 Hz, 1H) 4.24 - 4.10 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 2.10 - 2.03 (m, 9H).
화합물 OHPAS-D1-3의 제조
DCM(30㎖) 중 화합물 OHPAS-D1-2(2.1g, 3.58m㏖)의 용액에 m-CPBA(2.65g, 10.74m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 7시간 동안 교반한 후, 포화 소듐 바이카보네이트(40㎖×2)를 첨가하여 혼합물을 반응을 중지시켰다. 혼합물을 분리하고, 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 DCM(5㎖)에 용해시키고, 하이드라진-하이드레이트(261㎕, 5.37m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, EA(30㎖×2) 및 1M HCl 수용액(10㎖)을 첨가하였다. 수득된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 OHPAS-D1-3(1.1g, 55%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 574 (M++Na)
화합물 OHPAS-D1-4의 제조
DCM(5㎖) 중 화합물 OHPAS-D1-3(280㎎, 0.49m㏖)의 용액에 TBDMS-OTf(224㎕, 0.97m㏖) 및 Et3N(207㎕, 1.46m㏖)을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 시트르산(20㎖)을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 유기층을 염수(20㎖)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D1-4(246.3㎎, 68%)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.67 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 5H), 7.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.49 - 5.44 (m, 2H), 5.30 (s, 2H), 5.19 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 6.8, 3.2 Hz, 1H) 4.20 - 4.11 (m, 2H), 4.05 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.04(s, 3H), 2.01 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.02 (s, 9H), 0.20 (d, J = 15.6 Hz, 6H).
화합물 OHPAS-D1-5의 제조
EA(5㎖) 중 화합물 OHPAS-D1-4(283.2㎎, 0.41m㏖)의 용액에 Pd/C(5%, 87.5㎎, 0.04m㏖)를 H2하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, Celite®에 의해 여과한 다음, 감압하에 농축시켰다. 화합물 OHPAS-D1-5를 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다(246㎎, 정량).
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.67 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.49 - 5.45 (m, 2H), 5.22 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.12 (dd, J = 7.2, 3.6 Hz, 1H) 4.20 - 4.06 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 2.05(s, 3H), 2.02 (d, J = 7.6 Hz, 6H), 1.01 (s, 9H), 0.21 (d, J = 15.2 Hz, 6H).
화합물 OHPAS-D1의 제조
DMF(5㎖) 중 화합물 OHPAS-D1-5(243.2㎎, 0.41m㏖) 및 11-아지도-3,6,9-트라이옥사운데칸-1-아민(알드리치, CAS 134179-38-7, 89.5㎎, 0.41m㏖)의 용액에 PyBOP(275㎎, 0.53m㏖) 및 DIPEA(176㎕, 1.02m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 EA(30㎖×2) 및 증류수(10㎖)로 추출하였다. 수득된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D1(272.8㎎, 84%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.34(s, 1H), 7.31 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.73(s, 1H), 5.48 - 5.44 (m, 2H), 5.19 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 6.4, 3.6 Hz, 1H), 4.20 - 4.10 (m, 2H), 4.06 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.66 (s, 14H), 3.38 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.02 (t, J = 8.4 Hz, 9H), 1.00 (s, 9H), 0.20 (d, J = 14.4 Hz, 6H).
ESI-MS m/z: 799 (M++1).
화합물 OHPAS-D1a 및 OHPAS-D2를 화합물 OHPAS-D1의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
화합물 OHPAS-D1a의 제조
수율: 83%;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.00 - 6.96 (m, 2H), 6.90 (s, 1H), 5.48 - 5.43 (m, 2H), 5.16 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 3.2, 10.4 Hz, 1H), 4.20 - 4.11 (m, 2H), 4.05 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.76 - 3.49 (m, 14H), 3.46 - 3.39 (m, 2H), 3.10 - 3.04 (m, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 0.99 (s, 9H), 0.21 (s, 3H), 0.17 (s, 3H). ESI-MS m/z: 813 (M+1)
화합물 OHPAS-D2의 제조
수율: 81%, ESI-MS m/z: 1152 (M+1).
실시예 3.3. OHPAS-D3, OHPAS-D3a 및 OHPAS-D4의 제조
Figure pct00192
화합물 OHPAS-D3-1의 제조
DCM(3㎖) 중 4-하이드록시벤즈알데하이드(1g, 8.19m㏖)의 용액에 Et3N(2.28㎖, 16.38m㏖)을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. SO2F2 가스를 풍선을 통해 도입시키고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 DCM(30㎖×3) 및 염수(30㎖)로 세척하고, 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D3-1(790㎎, 63%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 10.06 (s, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 8.8 Hz, 2H).
화합물 OHPAS-D3-2의 제조
무수 ACN(3㎖) 중 화합물 OHPAS-D1(100㎎, 0.13m㏖) 및 화합물 OHPAS-D3-1(26㎎, 0.13m㏖)의 용액에 DBU(4㎕, 25μ㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 증류수(10㎖) 및 EA(10㎖×2)로 세척하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D3-2(103㎎, 94%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 869(M+).
화합물 OHPAS-D3-3의 제조
THF(8㎖) 중 화합물 OHPAS-D3-2(103㎎, 0.12m㏖)의 용액에 NaBH4(9㎎, 0.24m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 증류수(10㎖) 및 EA(10㎖×2) 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 OHPAS-D3-3(101㎎, 98%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 871(M+).
화합물 OHPAS-D3의 제조
DCM(3㎖) 중 화합물 OHPAS-D3-3(320.5㎎, 0.0.37m㏖)의 용액에 DCM(165㎕, 0.19m㏖) 중 1M PBr3를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 포화 소듐 바이카보네이트(8㎖×2)를 첨가하여 혼합물의 반응을 중지시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D3(202.6㎎, 59%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 934 (M+).
화합물 OHPAS-D4의 제조
DMF(2㎖) 중 화합물 OHPAS-D3-3(47㎎, 54μ㏖)의 용액에 비스(4-나이트로페닐) 카보네이트(25㎎, 81μ㏖) 및 DIPEA(14㎕, 81μ㏖)를 질소 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그런 다음, 증류수(10㎖) 및 EA(10㎖×2)를 첨가하고, 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D3-4(53㎎, 94%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1036(M+).
화합물 OHPAS-D3a 및 OHPAS-D4a를 화합물 OHPAS-D3 또는 OHPAS-D4를 제조하는 유사한 합성 경에 의해 제조하였다.
화합물 OHPAS-D3a-1의 제조
수율 80%; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.04 (s, 1H), 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.44 - 7.27 (m, 3H), 5.57 - 5.51 (m, 1H), 5.47 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.14 - 5.10 (m, 2H), 4.27 - 4.09 (m, 3H), 3.76 - 3.53 (m, 14H), 3.42 - 3.36 (m, 2H), 3.12 - 3.04 (m, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.02 (s, 3H). ESI-MS m/z: 883 (M+1)
화합물 OHPAS-D3a-2의 제조
수율 81%; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.47 - 7.42 (m, 2H), 7.40 - 7.31 (m, 3H), 7.24 - 7.21 (m, 2H), 5.54 - 5.45 (m, 2H), 5.11 - 5.07 (m, 2H), 4.74 - 4.70 (m, 2H), 4.25 - 4.21 (m, 1H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.06 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.74 - 3.44 (m, 12H), 3.37 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.07 - 3.04 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.06 (s, 6H), 2.02 (s, 3H). ESI-MS m/z: 885(M+1).
화합물 OHPAS-D3a의 제조
수율 90%; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 - 7.41 (m, 2H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.29 - 7.21 (m, 2H), 5.59 - 5.55 (m, 1H), 5.47 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.13 - 5.09 (m, 2H), 4.26 - 4.22 (m, 1H), 4.18 - 4.08 (m, 2H), 3.80 - 3.48 (m, 12H), 3.37 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.12 - 3.06 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.02 (s, 3H). ESI-MS m/z: 948 (M+1)
화합물 OHPAS-D4a의 제조
수율 94%; ESI-MS m/z: 1036 (M+1)
실시예 3.4. OHPAS-D5의 제조
Figure pct00193
화합물 OHPAS-D5-1의 제조
MeOH(40㎖)와 THF(245㎖) 중 화합물 OHPAS-D3-1(5g, 24.49m㏖)의 용액에 NaBH4(1.85g, 48.98m㏖)를 N2 분위기하에 -78℃에서 첨가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 2N HCl(5㎖)을 첨가하여 반응 혼합물의 반응을 중지시키고, H2O(250㎖) 및 EA(250㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D5-1(5.01g, 99%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.50 - 7.46 (m, 2H), 7.34 - 7.31 (m, 2H), 4.75 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.90 (t, J = 5.6 Hz, 1H).
화합물 OHPAS-D5-2의 제조
에터(32㎖) 중 화합물 OHPAS-D5-1(2g, 9.7m㏖)의 용액에 DCM(3.88㎖, 3.88m㏖) 중 1.0M PBr3를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 에터(100㎖) 및 NaHCO3(100㎖×3)를 첨가하여 추출을 수행하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D5-2(2.35g, 90%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 - 7.49 (m, 2H), 7.34 - 7.31 (m, 2H), 4.49 (s, 2H).
화합물 OHPAS-D5-3의 제조
DMF(5㎖) 중 4-하이드록시아이소프탈알데하이드(112㎎, 0.746m㏖, CAS No: 3328-70-9) 및 소듐 하이드라이드(45㎎, 1.12m㏖, 60%)의 용액에 DMF(2㎖) 중 OHPAS-D5-2(280㎎, 0.97m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. N2 분위기하에 실온에서 4시간 동안 교반한 후, H2O(10㎖)를 첨가하여 반응 혼합물의 반응을 중지시키고, H2O(100㎖) 및 EA(100㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D5-3(180㎎, 71%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.54 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.38 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.33 (s, 2H).
화합물 OHPAS-D5의 제조
THF(8㎖) 중 화합물 OHPAS-D5-3(1g, 2.96m㏖)의 용액에 MeOH(1.5㎖)와 THF(1㎖) 중 소듐 보로하이드라이드(391㎎, 10.35m㏖)를 N2 분위기하에 -78℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 2N HCl(2㎖)로 혼합물의 반응을 중지시키고, H2O(100㎖) 및 EA(100㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D5(850㎎, 85%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.39 - 7.37 (m, 3H), 7.30 - 7.28 (m, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.76 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.65 (d, J = 5.6 Hz, 2H).
실시예 3.5. OHPAS-D6의 제조
Figure pct00194
화합물 OHPAS-D6-1의 제조
DCM(8㎖) 중 2,6-다이메톡시-4-하이드록시벤즈알데하이드(0.5g, 2.74m㏖)의 용액에 Et3N(3.8㎖, 27.4m㏖)을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. SO2F2 가스를 풍선을 통해 도입시키고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 DCM(30㎖×3) 및 염수(30㎖)로 세척하고, 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D6-1(728㎎, 99%)을 수득하였다.
수율 99%
ESI-MS m/z: 265(M+). 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.41 (s, 1H), 6.54 (s, 2H), 3.91 (s, 6H).
화합물 OHPAS-D6-2의 제조
아세토나이트릴(6㎖) 중 화합물 OHPAS-D6-1(101㎎, 0.38m㏖) 및 화합물 OHPAS-D1(254㎎, 0.32m㏖)의 용액에 BEMP(19㎕, 0.064m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 수성 시트르산(8㎖)으로 희석하고, EtOAc(2×8㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D6-2(295㎎, 99%)를 수득하였다. ESI-MS m/z: 929(M+).
화합물 OHPAS-D6를 실시예 3.3에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성하였다.
화합물 OHPAS-D6-3의 제조
수율 96%; ESI-MS m/z: 931 (M+).
화합물 OHPAS-D6의 제조
수율 75%; ESI-MS m/z: 750 (M+).
실시예 3.6. OHPAS-D7의 제조
Figure pct00195
화합물 OHPAS-D7-1의 제조
EA(240㎖) 중 화합물 OHPAS-D1-3(3g, 5.22m㏖)의 용액에 Pd/C(300㎎, 10wt%)를 0℃에서 첨가하고, H2 가스를 주입하면서 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 Celite®를 통해 여과한 다음, 감압하에 농축시켰다. 화합물 OHPAS-D7-1을 추가 정제 없이 다음 반응에 직접 사용하였다(2.84g, 100%, 베이지색 거품)
ET-MS m/z: 507.2(M+1+Na)
OHPAS-D7-2를 실시예 3.2의 화합물 OHPAS-D1을 제조하는 것과 유사한 방법에 의해 제조하였다.
화합물 OHPAS-D7-2의 제조
수율 84%, 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 - 7.34 (m, 2H), 7.00 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.10 (brs, 1H), 5.49 - 5.45 (m, 2H), 5.14 (dd, J = 3.6, 10.4 Hz, 1H), 4.99 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.27 - 4.08 (m, 3H), 3.74 - 3.63 (m, 14H), 3.37 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.03 (s, 3H). ET-MS m/z: 685.3 (M+1).
OHPAS-D7-3은 실시예 3.3의 화합물 OHPAS-D3-2를 제조하는 것과 유사한 방법에 의해 제조하였다.
화합물 OHPAS-D7-3의 제조
수율 81%, 백색 고체; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 2.4, 8.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 2H) 7.43 - 7.40 (m, 2H), 7.37 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.29 - 7.25 (m, 2H), 7.08 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.60 - 5.56 (m, 1H), 5.47 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.17 - 5.10 (m, 4H), 4.74 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.64 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.26 - 4.08 (m, 3H), 3.71 - 3.58 (m, 14H), 3.34 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.41 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 2.18 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.77 (t, J = 6.0 Hz, 1H). ET-MS m/z: 1007.2 (M+1).
화합물 OHPAS-D7-4의 제조
CH2Cl2(3㎖) 중 화합물 OHPAS-D7-3(150㎎, 0.15m㏖)의 용액에 메테인설폰일 클로라이드(150㎎, 0.15m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기하에 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, H2O(50㎖)로 혼합물의 반응을 중지시키고, CH2Cl2(50㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 OHPAS-D7-4(214㎎, 100%)를 베이지색 거품으로 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 OHPAS-D7-5의 제조
ACN(3㎖) 중 화합물 OHPAS-D7-4(214㎎, 0.15m㏖)의 용액에 포타슘 티오아세테이트(43㎎, 0.37m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. N2 분위기하에 실온에서 3시간 동안 교반한 후, H2O(50㎖)로 혼합물의 반응을 중지시키고, EA(50㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D7(147㎎, 88%)을 옅은 황색 거품으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.43 - 7.41 (m, 2H), 7.31 - 7.27 (m, 2H), 7.15 (dd, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.07 - 7.06 (m, 1H), 6.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.61 - 5.56 (m, 1H), 5.47 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.14 - 5.10 (m, 3H), 4.26 - 4.09 (m, 5H), 4.05 (s, 2H), 3.66 - 3.59 (m, 14H), 3.34 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.01 (s, 3H). ET-MS m/z: 1123.2 (M+1).
화합물 OHPAS-D7-6의 제조
ACN(2㎖) 중 화합물 OHPAS-D7-5(100㎎, 0.089m㏖)의 용액에 N-클로로석신이미드(90㎎, 0.676m㏖) 및 2N HCl(356㎕, 0.712m㏖)을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. N2 분위기하에 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 다이메틸설파이드(19.6㎕, 0.267m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 동일한 온도에서 5분 동안 추가로 교반하였다. H2O(20㎖) 및 EA(20㎖×3)를 첨가하여 추출을 수행하고, 수득된 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 OHPAS-D7(140㎎, 100%)을 백색 거품으로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
ET-MS m/z: 1173.9 (M+1).
화합물 OHPAS-D7의 제조
ACN(2㎖) 중 화합물 OHPAS-D7-6(140㎎, 0.089m㏖)의 용액에 H2O(0.2㎖) 중 포타슘 하이드로겐 플루오라이드(41.7㎎, 0.534m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D7(42㎎, 41%)을 백색 거품으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.86 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.53 - 7.43 (m, 6H), 7.29 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.13 - 7.11 (m, 1H), 7.05 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.61 - 5.56 (m, 1H), 5.48 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 5.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.12 (dd, J = 3.2, 10.4 Hz, 1H), 4.78 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.26 - 4.09 (m, 3H), 3.70 - 3.60 (m, 14H), 3.5 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.01 (s, 3H). ET-MS m/z: 1139.1 (M+1).
실시예 3.7. OHPAS-D9 및 OHPAS-D10의 제조
Figure pct00196
화합물 OHPAS-D9-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(10㎖) 중 화합물 OHPAS-D1-5(1.0g, 0.26m㏖) 및 L-1(586㎎, 2.0m㏖, 1.2당량)의 균질 용액을 PyBOP(1.13g, 2.17m㏖, 1.3당량), DIPEA(873㎕, 5.01m㏖, 3.0당량)로 처리하고, 4시간 동안 교반하였다. 물(20㎖)로 반응을 중지시키고, EA(30㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 1:1 내지 1:3)에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D9-1(1.05g, 72%)을 백색 거품 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 874 (M++1).
화합물 OHPAS-D9-2의 제조
N2 분위기하에 실온에서 무수 ACN(10㎖) 중 화합물 OHPAS-D9-1(500㎎, 0.57m㏖) 및 화합물 OHPAS-D3-1(140㎎, 0.69m㏖, 1.2당량)의 균질 용액을 BEMP(66.3㎕, 0.23m㏖, 0.4당량)로 처리하고, 4시간 동안 교반하였다. 물(20㎖)로 반응을 중지시키고, EA(30㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM 중 4% MeOH)에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D9-2(495㎎, 85%)를 백색 거품 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 869 (M++1).
화합물 OHPAS-D9-3의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 THF(5.0㎖) 중 화합물 OHPAS-D9-2(495㎎, 0.52m㏖)의 용액에 NaBH4(39.7㎎, 1.05m㏖, 2.0당량)를 처리하고, 2시간 동안 교반하였다. 물(20㎖)로 반응을 중지시키고, EA(30㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM 중 2% 내지 3% MeOH)에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D9-3(418㎎, 91%)을 백색 거품 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 945 (M++1).
화합물 OHPAS-D9-4의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 THF(5.0㎖) 중 화합물 OHPAS-D9-3(214.2㎎, 0.23m㏖)의 용액에 메테인 설폰일 클로라이드(24.6㎕, 0.32m㏖, 1.4당량) 및 TEA(79.2㎕, 0.57m㏖, 1.5당량)를 처리하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 물(10㎖)로 반응을 중지시키고, DCM(20㎖×2)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM 중 100% DCM 내지 5% MeOH)에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D9-4(164㎎, 70%)를 백색 거품 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1024 (M++1).
화합물 OHPAS-D9의 제조
N2 분위기하에 실온에서 무수 THF(10㎖) 중 화합물 OHPAS-D9-4(164㎎, 0.16m㏖)의 용액에 LiBr(69.6㎎, 0.80m㏖, 5.0당량)을 처리하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(10㎖)로 희석하고, DCM(20㎖×2)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(DCM 중 3% 내지 5% MeOH)에 의해 정제하여 화합물 OHPAS-D9(161㎎, 99%)를 백색 거품 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1008 (M++1).
화합물 OHPAS-D10을 화합물 OHPAS-D9의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
화합물 OHPAS-D10-1의 제조
수율 72%, 무색 오일
ESI-MS m/z: 1226 (M++1).
화합물 OHPAS-D10-2의 제조
수율 82%, 무색 오일
ESI-MS m/z: 1296 (M++1).
화합물 OHPAS-D10-3의 제조
수율 75%, 무색 오일
ESI-MS m/z: 1298 (M++1).
화합물 OHPAS-D10-4의 제조
수율 82%, 무색 오일
ESI-MS m/z: 1376 (M++1).
화합물 OHPAS-D10의 제조
수율 82%, 무색 오일
ESI-MS m/z: 1361 (M++1).
실시예 3.8. OHPAS-D11의 제조
Figure pct00197
화합물 OHPAS-D11을 실시예 3.3의 화합물 OHPAS-D3-1의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
화합물 OHPAS-D11의 제조
수율 81%, 백색 거품 고체
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.88 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.05 (brs, 1H), 5.62 - 5.56 (m, 1H), 5.48 (d, J = 2.8 Hz 1H), 5.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.12 (dd, J = 7.2, 3.2 Hz, 1H), 4.26 - 4.08 (m, 3H), 3.72 - 3.60 (m, 14H), 3.36 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.08 (s, 6H), 2.02 (s, 3H) ; ESI-MS m/z:767(M++1).
실시예 3.9. OHPAS-D12 및 OHPAS-D13의 제조
Figure pct00198
화합물 OHPAS-D12를 실시예 3.2에 기재된 것과 유사한 방법을 통해 합성하였다.
화합물 OHPAS-D12-1
수율 65%
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.32 (s, 1H), 8.54 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.28 (dd, J = 8.8 Hz, 1H), 7.45 - 7.35 (m, 5H), 7.16 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.39 - 5.34 (m, 6H), 4.28 - 4.26 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.11 - 2.06 (m, 9H).
화합물 OHPAS-D12-2
수율 63%
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.66 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 8.4 Hz, 1H), 7.43 - 7.31 (m, 5H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.41 - 5.28 (m, 5H), 5.12 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.06 (d, J = 3.6 Hz, 6H).
화합물 OHPAS-D12-3
수율 70%
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.60 (dd, J = 2.0, 2.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.48 - 7.32 (m, 5H), 7.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.40 - 5.26 (m, 6H), 4.18 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.09 - 2.04 (m, 9H). 0.99 (s, 9H), 0.18 (d, J = 12.8 Hz, 1H).
화합물 OHPAS-D12-4
수율 정량
ESI-MS m/z: 607 (M++Na)
화합물 OHPAS-D13-1
수율 96%
1H NMR (400 Hz, DMSO-d6) δ 9.73 (brs, 1H), 7.44 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 2.4, 6.4 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.61 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.45 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 5.15 - 5.02 (m, 2H), 4.67 (d, J = 10 Hz, 1H) 3.63 (s, 3H), 2.04 - 1.98 (m, 9H).
ESI-MS m/z: 785(M++1)
화합물 OHPAS-D13-2
수율 78%
ESI-MS m/z: 685 (M++1)
화합물 OHPAS-D12
수율 85%
ESI-MS m/z: 785 (M++1)
화합물 OHPAS-D12a
수율 70%
ESI-MS m/z: 559 (M++1)
실시예 4. 약물 유도체의 합성
실시예 4.1.1 Q-1 및 Q-2의 제조
Figure pct00199
Q-1-1 및 Q-2-1를 실시예 3.3의 화합물 OHPAS-D3-1을 제조하는 것과 유사한 방법에 의해 β-아마니틴 및 α-아마니틴으로부터 제조하였다.
화합물 Q-1-1의 제조
수율 89%; ESI-MS m/z: 1002 (M+1).
화합물 Q-2-1의 제조
수율 88%; ESI-MS m/z: 1003 (M+1).
Q-1-2 및 Q-2-2를 실시예 3.3의 화합물 OHPAS-D3-2를 제조하는 것과 유사한 방법에 의해 제조하였다.
화합물 Q-1-2의 제조
수율 62%; ESI-MS m/z: 1666(M+1).
화합물 Q-2-2의 제조
수율 41%; ESI-MS m/z: 1667(M+1).
화합물 Q-1의 제조
MeOH(4㎖) 중 화합물 Q-1-2(50㎎, 0.30μ㏖)의 용액에 K2CO3(21㎎, 1.5μ㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 0.5시간 동안 교반한 후, 생성된 잔사를 DMSO(0.5㎖)로 희석하고, 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 Q-1(10.5㎎, 19%)을 옅은 황색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1498 (M+1).
화합물 Q-2의 제조
2 단계에 걸쳐 수율 61%; ESI-MS m/z: 1499(M+1).
실시예 4.1.2. Q-1a의 제조
화합물 Q-1a를 실시예 4.1.1에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성하였다.
Figure pct00200
화합물 Q-1a의 제조
수율 83%; ESI-MS m/z: 756(M/2+1).
실시예 4.2. Q-3의 제조
Figure pct00201
화합물 Q-3-1의 제조
DMF(3㎖) 중 β-아마니틴(40㎎, 43.5μ㏖)의 용액에 N,N-다이메틸에틸렌다이아민(10㎕, 47.83μ㏖) 및 TBTU(46㎎, 0.11m㏖) 및 TEA(18㎕, 0.13m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 40℃에서 가열하면서 밤새 교반한 후, 혼합물을 분리하고, 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 Q-3-1(28㎎, 65%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 991 (M+1)
화합물 Q-3-2의 제조
DMF(2㎖) 중 화합물 Q-3-1(20㎎, 20.2μ㏖) 및 OHPAS-D3(30㎎, 24.2μ㏖)의 용액에 DIPEA(11㎕, 60.6m㏖)를 N2 분위기하에 적가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 분리하고, 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 Q-3-2(34㎎, 수율 65%)를 수득하였다, ESI-MS m/z: 992(M/2+1).
화합물 Q-3을 실시예 4.1.1에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성하였다.
화합물 Q-3의 제조
수율 71%; ESI-MS m/z: 838(M/2+1)
실시예 4.3. Q-4 및 Q-4a의 제조
Figure pct00202
화합물 Q-4-1의 제조
DMF(1㎖) 중 화합물 OHPAS-D4(65㎎, 0.063m㏖) 및 MMAF-OMe(52㎎, 0.069m㏖)의 용액에 HOBt(2㎎, 0.013m㏖), DIPEA(12㎕, 0.069m㏖) 및 피리딘(330㎕)을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 밤새 교반한 후, 1N HCl로 혼합물의 pH를 2 내지 3으로 조정하고, EA(8㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 증류수(8㎖) 및 염수(12㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피하여 화합물 Q-4-1(73㎎, 71%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1644(M+1).
화합물 Q-4를 실시예 4.2에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성하였다.
화합물 Q-4의 제조
수율 69%; ESI-MS m/z: 1462(M+1).
화합물 Q-4a를 위에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성하였다.
화합물 Q-4-1a의 제조
수율 99%; ESI-MS m/z: 828 (M/2+1).
화합물 Q-4a의 제조
수율 46%; ESI-MS m/z: 738 (M/2+1).
실시예 4.4. Q-5의 제조
Figure pct00203
Q-5-1 및 Q-5-2를 실시예 3.5에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성하였다.
화합물 Q-5-1의 제조
수율 98%
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.37 (brs, 1H) 8.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.2, 1H), 7.51 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.32 (brs, 1H), 4.18 (t, J = 8.8, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.93 (dd, J = 11.2, 2.8 Hz, 1H), 3.52 (t, J = 10.8 Hz, 1H), 1.61 (s, 9H). ESI-MS m/z: 438.2(M+1+Na).
화합물 Q-5-2의 제조
수율 79%
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (brs, 1H) 7.77 (m, 3H), 7.57 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 (m, 1H), 6.78 (m, 1H), 5.56 (m, 1H), 5.46 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.12 (dd, J = 10.4, 3.2 Hz, 1H), 4.30 (brs, 1H), 4.25 - 4.02 (m, 5H), 3.93 (m, 1H), 3.60 (m, 15H), 3.31 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.95 (s, 6H), 1.56 (s, 9H). ESI-MS m/z: 1080.6(M+1).
화합물 Q-5의 제조
화합물 Q-5-2(50㎎, 0.046m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 1,4-다이옥세인(1㎖) 중 4N HCl에 용해시켰다. 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 DCM(5㎖)으로 희석하고, 농축시켰다. 화합물 Q-5를 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다(47㎎, 99%).
ESI-MS m/z: 980.5(M+1).
실시예 4.5. Q-6의 제조
Figure pct00204
화합물 Q-6a의 제조
화합물 Q-6a를 문헌에 기재된 것과 유사한 합성 경로에 의해 합성하였다(문헌[Mol. Pharmaceutics 2015, 12, 1813-1835] 참조).
화합물 Q-6-1의 제조
화합물 Q-6-1 문헌에 기재된 것과 유사한 합성 경로에 의해 합성하였다(문헌[Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 7336-7339] 및 WO2015110935A1 참조).
화합물 Q-6-2의 제조
DCM(10㎖) 중 화합물 Q-6a(80㎎, 0.239m㏖) 및 화합물 Q-6-1(118㎎, 0.239m㏖)의 용액에 분자체 및 BF3·OEt2(14.8㎕, 0.12m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 Celite®를 통해 여과하고, DCM(50㎖)으로 세척하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Q-6-2(105㎎, 66%)를 백색 거품으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (brs, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.35 (m, 1H), 5.70 (m, 1H), 5.51 (s, 1H), 5.33 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.23 (m, 3H), 4.11 (m, 2H), 3.93 (m, 2H), 3.42 (t, J = 10.8 Hz, 1H), 2.18 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.55 (s, 9H). ESI-MS m/z: 564.4(M+1).
화합물 Q-6-3의 제조
화합물 Q-6-2(100㎎, 0.15m㏖)를 DCM(2㎖)에 용해시킨 다음, 1,4-다이옥세인(1㎖) 중 4N HCl을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 4시간 동안 교반한 후, 반응물을 감압하에 농축시켰다. 반응 혼합물을 N2하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 화합물 Q-6-2를 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다(90㎎, 99%).
ESI-MS m/z: 564.2(M+1).
화합물 Q-6-4의 제조
THF(5㎖) 중 화합물 Q-6-3(90㎎, 0.149m㏖)의 용액에 글루타르산 무수물(18.8㎕, 0.164m㏖), Et3N(52㎕, 0.373m㏖) 및 4-DMAP(2㎎, 0.015m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 Q-6-4(30㎎, 30%)를 백색 고체로서 수득하였다.
화합물 Q-6-5의 제조
DMF(3㎖) 중 화합물 Q-6-4(30㎎, 0.043m㏖) 및 화합물 Q-5(51㎎, 0.05m㏖)의 용액에 EDC·HCl(27.2㎎, 0.142m㏖)을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 11시간 동안 교반한 후, 혼합물을 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 Q-6-5(20㎎, 28%)를 옅은 갈색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 821.7(M+1/2).
화합물 Q-6의 제조
MeOH(1.5㎖) 중 화합물 Q-6-5(10㎎, 0.006m㏖)의 용액에 MeOH(11㎕, 0.048m㏖) 중 NaOMe 25%를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기하에 실온에서 1시간 동안 교반하고, ACN 용액 중 5% TFA를 첨가하여 pH 7로 조정하였다. 혼합물을 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 Q-6(5㎎, 63%)을 옅은 황색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1305.3(M+1).
실시예 4.6. Q-7의 제조
Figure pct00205
화합물 Q-7a의 제조
MeOH(5㎖)/증류수(3㎖) 중 PNU-159682(52㎎, 0.081m㏖)의 용액에 NaIO4(18㎎, 0.081m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 감압하에 농축시켜 미정제 화합물 Q-7a(51㎎, 99%)를 수득하였다. ESI-MS m/z: 628(M+1).
화합물 Q-7b의 제조
무수 DCM(5㎖) 중 화합물 Q-7a(51㎎, 0.081m㏖)의 용액에 2-(다이메틸아미노)에틸 아민(6.1㎕, 0.089m㏖) 및 TEA(34㎕, 0.243m㏖), TBTU(52㎎, 0.162m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 DCM(2×8㎖)으로 희석하였다. 유기층을 H2O(8㎖)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Q-7b(38㎎, 67%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 698(M+1).
Q-7을 실시예 4.2의 화합물 Q-3-2를 제조하는 것과 유사한 방법에 의해 제조하였다.
화합물 Q-7-1의 제조
수율 38%; ESI-MS m/z: 1551(M+1).
화합물 Q-7의 제조
수율 54%; ESI-MS m/z: 1383 (M+1).
실시예 4.7. Q-8의 제조
Figure pct00206
화합물 Q-8을 실시예 4.6에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성하였다.
화합물 Q-8-1의 제조
수율 42%; ESI-MS m/z: 837 (M/2+1).
화합물 Q-8의 제조
수율 81%; ESI-MS m/z: 746 (M/2+1).
실시예 4.8. 벤조다이아제핀 단량체 유도체의 제조
실시예 4.8.1 피롤로-벤조다이아제핀 단량체(이하 "PBD-단량체")의 제조
Figure pct00207
EP20071813614에 기재된 것과 유사한 방법으로 반응을 수행하여 PBD 단량체를 수득하였다.
실시예 4.8.2 인돌리노-벤조다이아제핀 단량체(이하 "IBD-단량체")의 제조
Figure pct00208
WO2010091150에 기재된 것과 유사한 합성 방법으로 반응을 수행하여 IBD 단량체를 수득하였다.
실시예 4.8.3 MCBI-단량체의 제조
Figure pct00209
US5985908에 기재된 것과 유사한 합성 방법으로 반응을 수행하여 IBD 단량체를 수득하였다.
실시예 4.8.4 테트라하이드로아이소퀴놀리노-벤조다이아제핀 단량체(이하 "TBD-단량체")의 제조
Figure pct00210
화합물 M-1-1의 제조
MeOH(140㎖) 중 (s)-(-)-1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린-3-카복실산(5.0g, 28.22m㏖)의 용액에 SOCl2(2.30㎖, 31.04m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 적가하였다. 40℃에서 21시간 동안 교반한 후, 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 다이에틸 에터(50㎖)를 첨가하여 침전시키고, 이를 다이에틸 에터로 여과하여 화합물 M-1-1(6.42g, 수율 99%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.02 (s, 2H), 7.27 (s, 4H), 4.60 - 4.56 (m, 1H), 4.39 - 4.29 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.19 - 3.12 (m, 2H); ESI-MS m/z: 192 (M++1).
화합물 M-1-2의 제조
무수 THF(50㎖) 중 화합물 Int-1(9.07g, 28.22m㏖)의 용액에 THF(100㎖)와 TEA(7.9㎖, 56.43m㏖) 중 화합물 M-1-1(6.42g, 28.22m㏖)을 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물을 증류수(500㎖)로 희석하고, EA(800㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-1-2(12.01g, 90%)를 수득하였다. ESI-MS m/z: 477 (M++1).
화합물 M-1-3의 제조
무수 DCM(18㎖)과 톨루엔(52㎖) 중 화합물 M-1-2(4g, 8.39m㏖)의 용액에 DIBAL(16.8㎖, 16.79m㏖, 톨루엔 중 1.0M)을 N2 분위기하에 -78℃에서 적가하였다. -78℃에서 4시간 동안 교반한 후, -78℃에서 MeOH(0.4㎖) 및 2N HCl(25㎖)로 반응을 중지시켰다. 혼합물을 물(100㎖)로 희석하고, EA(500㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-1-3(3.07g, 82%)을 수득하였다. ESI-MS m/z: 447(M++1).
화합물 M-1-4의 제조
THF(130㎖)와 증류수(86㎖) 중 화합물 M-1-3(3g, 6.72m㏖)의 용액에 Na2S2O4·2H2O(11.3g, 53.76m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 5시간 동안 교반한 후, 공용매로서 톨루엔을 사용하여 반응물을 감압하에 4회 농축시켜 물을 제거하였다. 그런 다음, 수득된 황색 고체를 무수 MeOH(220㎖)에 용해시키고, 아세틸 클로라이드(4.8㎖, 67.19m㏖)를 첨가하였다. 15분 교반한 후, 반응 혼합물에 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 pH 7로 조정하고, 증류수(100㎖)로 희석하고, EA(250㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-1-4(2.48g, 93%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (s, 1H), 7.45 - 7.27 (m, 10H), 6.84 (s, 1H), 5.24 - 5.15 (m, 2H), 5.00 (d, J = 15.2, 1H), 4.56 (d, J = 15.6, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.93 - 3.92 (m, 1H), 3.31 - 3.12 (m, 2H). ESI-MS m/z: 399(M++1).
화합물 M-1의 제조
무수 DCM(10㎖) 중 화합물 M-1-4(1g, 2.51m㏖)의 용액에 DCM(10㎖) 중 메테인 설폰산(5㎖)을 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 3시간 동안 교반한 후, NaHCO3 용액, 물(100㎖)로 혼합물의 반응을 중지시키고, EA(400㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-1(703㎎, 91%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (s, 1H), 7.48 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 4H), 6.88 (s, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.00 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.95 - 3.90 (m, 1H), 3.30 - 3.13 (m, 2H). ESI-MS m/z: 309(M++1).
실시예 4.8.5 C2-아릴 치환기를 보유하는 PBD 화합물의 제조
Figure pct00211
화합물 M-2-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 H2O/톨루엔(500㎖/120㎖) 중 트랜스-4-하이드록시-L-프롤린(30g, 230m㏖) 및 NaHCO3(43g, 570m㏖, 2.5당량)의 교반된 용액에 Cbz-Cl(37.4㎖, 260m㏖, 1.15당량)을 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 이 온도에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 EA(500㎖×3)로 추출하였다. 유기층을 물(500㎖×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 M-2-1(57.5g, 95%)을 옅은 갈색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.7 (brs, 1H), 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.18 - 5.02 (m, 2H), 4.31 - 4.24 (m, 2H), 3.51 - 3.35 (m, 2H), 2.23 - 2.10 (m, 1H), 2.00 - 1.87 (m, 1H); ESI-MS m/z: 266 (M++1).
화합물 M-2-2의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 MeOH(400㎖) 중 화합물 M-2-1(57.5g, 220m㏖)의 갈색 용액을 티오닐 클로라이드(45.3㎖, 610m㏖, 2.8당량)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온시키고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 감압하에 농축시켜 화합물 M-2-2(60.5g, 정량)를 옅은 갈색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.28 (m, 5H), 5.23 - 5.09 (m, 2H), 4.56 - 4.47 (m, 2H), 3.80 (s, 1H), 3.76 - 3.66 (m, 2H), 3.58 - 3.52 (m, 1H) 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.16 - 2.08 (m, 1H); ESI-MS m/z: 270 (M++1).
화합물 M-2-3의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 THF(500㎖) 중 화합물 M-2-2(60.5g, 220m㏖)의 갈색 용액을 LiBH4(3.9g, 180m㏖, 0.8당량)로 처리하고, 30분 동안 교반하였다. 그런 다음, 혼합물을 실온에서 추가로 2일 동안 교반하였다. 물(200㎖) 및 2N HCl(100㎖)로 혼합물의 반응을 중지시켰다. 회전 증발기에 의해 유기 용매를 증발시켰다. 잔사를 EA(500㎖×3)로 추출한 다음, 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 M-2-3(54.6g, 98%)을 옅은 갈색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39-7.30 (m, 5H), 5.21-5.12 (m, 2H), 4.66 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.21 (q, J = 7.6, 7.2 Hz, 1H), 3.76 (t, J = 9.6 Hz, 2H), 3.66 - 3.58 (m, 1H), 3.50 (dd, J = 8.0, 4.0 Hz, 1H), 2.10 - 2.23 (m, 1H), 1.78 - 1.64 (m, 1H); ESI-MS m/z: 252 (M++1).
화합물 M-2-4의 제조
N2 분위기하에 실온에서 무수 DCM(500㎖) 중 M-2-3(53g, 210m㏖)의 갈색 용액을 t-뷰틸다이메틸실릴 클로라이드(25.4g, 170m㏖, 0.8당량), TEA(30㎖, 210m㏖, 1.0당량) 및 DBU(6.3㎖, 42.2m㏖, 0.2당량)로 처리하였다. 첨가 후, 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl(300㎖)에 이어 염수(300㎖)로 세척한 다음, 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 1:1)에 의해 정제하여 화합물 M-2-4(48.2g, 63%)를 옅은 갈색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.28 (m, 5H), 5.20-5.08 (m, 2H), 4.50 (s, 1H), 4.12-4.00 (m, 1H), 3.97 (dd, J = 6.4, 4.0 Hz, 1H), 3.71 (dd, J = 5.6, 4.8 Hz, 1H), 3.66-3.58 (m, 1H), 3.52-3.48 (m, 1H), 2.28 - 2.18 (m, 1H), 2.02 - 1.92 (m, 1H), 0.10 -0.08 (m, 6H); ESI-MS m/z: 366 (M++1).
화합물 M-2-5의 제조
탄소 담지 팔라듐 5% Pd/C(1.3g, 1.23m㏖, 0.03당량)를 N2 분위기하에 EA(50㎖) 중 M-2-4(15g, 41.0m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 실온에서 용액을 통해 수소 가스를 버블링시킴으로써 플라스크를 플러싱하였다. 혼합물을 동일한 온도에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA(30㎖)로 희석하고, Celite®를 통해 여과하고, Celite® 플러그를 EA(50㎖×2)로 세척하였다. 여과액을 감압하에 농축시켜 화합물 M-2-5(9.5g, 정량)를 옅은 갈색 오일로서 수득하였다.
1H NMR 400 MHz, CDCl3) δ 4.41 (brs, 1H), 3.60 - 3.44 (m, 3H), 3.12 (dd, J = 7.2 Hz, 4.8 Hz, 1H), 2.89 (d, J = 12 Hz, 1H), 1.84-1.79 (m, 1H), 1.74 - 1.67 (m, 1H), 0.89 (s, 9H), 0.06 (s, 6H) ; ESI-MS m/z: 232 (M++1).
화합물 M-2-6의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 THF(400㎖) 중 화합물 M-2-5(11.9g, 51.42m㏖) 및 Int-2(14.4g, 56.6m㏖, 1.1당량)의 갈색 용액을 DIPEA(26.9㎖, 154.3m㏖, 3.0당량)로 처리하고, 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증류수(50㎖)로 희석하고, EA(150㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 2:1 내지 2:1)에 의해 정제하여 화합물 M-2-6(20g, 8 3%)을 황색 거품 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.95 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.60-4.51(m, 1H), 4.49- 4.41 (m, 1H), 4.24-4.08 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.80-3.68 (m, 1H), 3.37 (dd, J = 7.6 Hz, 4.0 Hz, 1H), 3.14 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.18-2.08 (m, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.1 (s 6H); ESI-MS m/z: 469 (M++1).
화합물 M-2-7의 제조
탄소 담지 팔라듐 5% Pd/C(9.1g, 4.27m㏖, 0.1당량)를 N2 분위기하에 EA(213㎖) 중 M-2-6(20g, 42.68m㏖)의 교반된 용액에 첨가하였다. 실온에서 용액을 통해 수소 가스를 버블링시킴으로써 플라스크를 플러싱하였다. 8시간 동안 교반한 후, 혼합물을 EA(50㎖)로 희석하고, Celite®를 통해 여과하고, Celite® 플러그를 EA(50㎖×2)로 세척하였다. 여과액을 감압하에 농축시켜 화합물 M-2-7(18.5g, 99%)을 황색 거품 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.81 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.79 (brs, 1H), 4.58 - 4.50 (m, 1H), 4.42 - 4.36 (m, 1H), 4.10 (brs, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.59 (dd, J = 8.4 Hz, 2.8 Hz, 1H), 3.50 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.30 - 2.24 (m, 1H), 2.06 - 2.01 (m, 1H), 0.89 (s, 9H), 0.05 (d, J = 1.6 Hz, 6H) ; ESI-MS m/z: 439 (M++1).
화합물 M-2-8의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 DCM(210㎖) 중 M-2-7(18.5g, 42.18m㏖)의 황색 용액을 2,2,2-트라이클로로에틸 클로로폼에이트(6.4㎖, 46.4m㏖, 1.1당량) 및 피리딘(6.9㎖, 87.4m㏖, 2.0당량)으로 처리한 다음, 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CuSO4 용액(50㎖) 및 염수(100㎖×2)로 세척하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 2:1)에 의해 정제하여 화합물 M-2-8(21.2g, 82%)을 갈색 거품 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.87 (brs, 1H), 7.86 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.84 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 4.61 (brs, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.20 (brs, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.70-3.62 (m, 1H), 3.57 (s, 2H), 2.32 (s, 4H), 2.11 - 2.02 (m, 1H), 1.80 (s, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.05 (s, 6H) ; ESI-MS m/z: 615(M++1).
화합물 M-2-9의 제조
N2 분위기하에 -78℃에서 무수 DCM(50㎖) 중 옥살일 클로라이드(21㎖, 24.4m㏖, 1.5당량)의 균질 용액을 무수 DCM(20㎖) 중 DMSO(3.5㎖, 48.9m㏖, 3.0당량)로 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. 무수 DCM(100㎖) 중 M-2-8(10g, 0.33m㏖)의 용액을 반응 혼합물에 적가하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 TEA(22.7㎖, 162.9m㏖, 10당량)로 처리하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 NH4Cl 용액(30㎖) 및 DCM(100㎖×2)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 4:1 내지 1:1)에 의해 정제하여 화합물 M-2-9(8.2g, 83%)를 갈색 거품 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (brs, 1H), 7.91 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 5.12 (brs, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.13 (brs, 1H), 4.04 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.98 -3.86 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.76-3.62 (m, 1H), 2.84-2.72 (m, 2H), 2.54 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.08-1.98 (m, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.21 (s, 6H) ; ESI-MS m/z: 612 (M++1).
화합물 M-2-10의 제조
N2 분위기하에 -10℃에서 무수 DCM(100㎖) 중 M-2-9(2.0g, 3.27m㏖) 및 2,6-루티딘(4.6㎖, 12당량)의 황색 용액을 트리플산 무수물(5.5㎖, 32.68m㏖, 10당량)로 처리하고, 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온시키고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증류수(50㎖)로 희석하고, DCM(100㎖×2)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 4:1)에 의해 정제하여 화합물 M-2-10(502㎎, 21%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.78 (brs, 1H), 7.97 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.86 - 4.72 (m, 3H), 4.20 - 4.32 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.76 - 3.68 (m, 1H), 3.20 - 3.00 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.06 (d, J = 10.6 Hz 6H); ESI-MS m/z: 745 (M++1).
화합물 M-2-11의 제조
N2 분위기하에 실온에서 톨루엔(4.0㎖), H2O(0.6㎖) 및 에탄올(4.0㎖) 중 M-2-10(500㎎, 0.67m㏖)의 황색 용액을 4,4,5,5-테트라메틸-2-페닐-1,3,2-다이옥사보롤레인(164.6㎎, 0.81m㏖, 1.2당량), Pd(TPP)4(77.5㎎, 0.067m㏖, 0.1당량) 및 TEA(234.2㎕, 1.68m㏖, 2.5당량)로 처리한 다음, 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증류수(100㎖)로 희석하고, EA(100㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 3:1)에 의해 정제하여 화합물 M-2-11(343㎎, 76%)을 황색 거품 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.76 (brs, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 5H), 6.98 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.78 - 4.68 (m, 3H), 4.16 - 4.04 (m, 2H), 3.92 - 3.84 (m, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.24 - 3.12 (m, 1H), 3.08 - 2.90 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 0.85 (s, 9H), 0.05 (s, 6H); ESI-MS m/z: 673 (M++1).
화합물 M-2-12의 제조
N2 분위기하에 실온에서 THF(4.0㎖)와 H2O(2.0㎖) 중 M-2-11(340㎎, 0.505m㏖)의 황색 용액을 아세트산(8.0㎖)으로 처리하고, 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증류수(10㎖)로 희석하고, EA(20㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 2:1)에 의해 정제하여 화합물 M-2-12(250㎎, 89%)를 황색 거품 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.86 (brs, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 5H), 7.00 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.93 (brs, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.16 - 4.10 (m, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.64 (s, 1H), 3.33 (t, J = 13.6, 5.6 Hz, 1H), 2.77 (d, J = 17.2 Hz, 1H) 2.34 (s, 3H); ESI-MS m/z: 558 (M++1).
화합물 M-2-13의 제조
N2 분위기하에 -78℃에서 무수 DCM(1.0㎖) 중 옥살일 클로라이드(58㎕, 0.67m㏖, 1.5당량)의 균질 용액을 무수 DCM(1.0㎖) 중 DMSO(80㎕, 1.12m㏖, 3.0당량)로 처리하고, 15분 동안 교반하였다. 무수 DCM(3.0㎖) 중 M-2-12(250㎎, 0.45m㏖)의 용액을 반응 혼합물에 적가하고, 3시간 동안 교반한 후 TEA(500㎕, 3.58m㏖, 8.0당량)를 첨가하고 실온에서 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증류수(5.0㎖)로 희석하고, EA(15㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 3:1)에 의해 정제하여 화합물 M-2-13(202㎎, 81%)을 황색 거품 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45 (s, 1H), 7.38 (s, 5H), 7.12 (s, 1H), 5.84 (brs, 1H), 5.18 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.18 - 4.06 (m, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.72 (s, 1H), 3.43 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 3.12 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H); ESI-MS m/z: 556 (M++1)
화합물 M-2의 제조
N2 분위기하에 실온에서 MeOH(16㎖)와 H2O(3.0㎖) 중 M-2-13(175㎎, 0.31m㏖)의 황색 용액을 K2CO3(109㎎, 0.79m㏖, 2.5당량)로 처리하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(5㎖)로 희석하고, EA(10㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(Hex:EA = 2:1)에 의해 정제하여 화합물 M-2(135㎎, 85%)를 황색 거품 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.49 (s, 1H), 7.37 (s, 5H), 6.94 (s, 1H), 5.93 (brs, 1H), 5.88 - 5.82 (m, 1H), 5.14 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 4.18-4.00 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.41 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 3.10 (d, J = 16.0 Hz, 1H); ESI-MS m/z: 514 (M++1)
M-2a를 화합물 M-2를 제조하는 것과 유사한 방법에 의해 제조하였다.
화합물 M-2-11a의 제조
황색 거품 고체로서 수율 59%; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.78 (brs, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.97 (s, 1H), 6.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.87 - 4.69 (m, 3H), 4.09 - 4.02 (m, 1H), 3.93 - 3.88 (m, 1H), 3.80 (d, J = 8.0 Hz, 6H), 3.20 - 3.12 (m, 1H), 3.05 - 2.97 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 0.85 (s, 9H), 0.60 (d, J = 8.4 Hz, 6H) ; ESI-MS m/z: 703(M++1).
화합물 M-2-12a의 제조
황색 거품 고체로서 수율 79%.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.85 (brs, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.2 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.00 (s, 1H), 6.85 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.95 - 4.87 (m, 1H), 4.74 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 4.04 - 3.84 (m, 3H), 3.81 (d, J = 3.6 Hz, 6H), 3.34 - 3.24 (m, 1H), 2.72 (dd, J = 13.2, 3.2 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H) ; ESI-MS m/z: 588(M++1).
화합물 M-2-13a의 제조
황색 거품 고체로서 수율 80%.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (s, 2H), 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.11 (s, 1H), 6.90 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 5.86 - 5.81 (m, 1H), 5.18 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.10 - 4.05 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.73 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.44 - 3.35 (m, 1H), 3.12 - 3.05 (m, 1H), 2.37 (s, 3H) ; ESI-MS m/z: 586(M++1)
화합물 M-2a의 제조
황색 거품 고체로서 수율 75%.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.89 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.93 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 5.2, 4.4 Hz, 1H), 5.14 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 12 Hz, 1H), 4.07 - 3.99 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.83 (s, 1H), 3.64 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.43 - 3.34 (m, 1H), 3.10 - 3.03 (m, 1H); ESI-MS m/z: 544(M++1)
실시예 4.8.6 화합물 M-3의 제조
Figure pct00212
화합물 M-3-1의 제조
진한 수성 HCl(90㎖) 중 (S)-2-아미노-3-(4-하이드록시-3,5-다이아이오도페닐)프로파논산(8.0g, 18.48m㏖)의 용액에 w1,2-다이메톡시에테인(7.5㎖) 및 파라폼알데하이드(H2O 중 37중량%, 92.38m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 격렬하게 교반하고, 천천히 72℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 72℃에서 밤새 교반하였다. 그런 다음, 현탁액을 얼음 수조에서 냉각시키고, 여과에 의해 고체를 수집하고, 1,2-다이메톡시에테인(3×10㎖)으로 철저하게 세척하고, 진공하에 건조시켜 화합물 M-3-1(2.49g, 수율 28%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.02 (brs, 1H), 9.69 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 4.31 (dd, J = 6.8 Hz, 4.4 Hz, 1H), 4.05 (q, J = 18.8 Hz, 16 Hz, 2H), 3.21 (dd, J = 12 Hz, 4.8 Hz, 1H), 3.12 - 3.02 (m, 1H); ESI-MS m/z: 446 (M++1).
화합물 M-3-2의 제조
EtOH/H2O(40㎖/㎖) 중 M-3-1(1.4g, 3.1m㏖), TEA(1.4㎖, 10.38m㏖) 및 5% Pd/C(335㎎, 0.16m㏖)의 혼합물을 H2 분위기하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 Celite®를 통해 여과하고, 여과액을 농축시켰다. 생성된 잔사를 물로 희석하고, 침전물을 여과하였다. 고체를 차가운 물로 세척하고, 고진공하에 건조시켜 화합물 M-3-2(337.3㎎, 60%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.55 (brs, 1H), 9.69 (s, 1H), 6.98 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.06 (s, 2H), 3.46 (dd, J = 6.0 Hz, 4.8 Hz, 1H), 3.46 (dd, J = 11.6 Hz, 5.2 Hz, 1H), 2.82 - 2.75 (m, 1H); ESI-MS m/z: 194 (M++1).
화합물 M-3-3의 제조
MeOH(5.0㎖) 중 M-3-2(337.3㎎, 1.74m㏖)의 용액에 SOCl2(380㎕, 5.24m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 적가하였다. 2시간 동안 환류시킨 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시키고, 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다(406㎎, 수율 96%).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.83 (brs, 2H), 9.56 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.53 - 4.49 (m, 1H), 4.28 - 4.22 (m, 2H), 3.81 (s, 1H), 3.18 (dd, J = 11.6 Hz, 5.2 Hz, 1H), 3.04 - 2.97 (m, 1H); ESI-MS m/z: 208 (M++1).
화합물 M-3-4의 제조
무수 THF(4.0㎖) 중 화합물 Int-1(640.9㎎, 1.86m㏖)의 용액에 DMF(5.0㎖) 중 화합물 M-3-3(350㎎, 1.43m㏖)에 이어 DIPEA(750㎕, 4.3m㏖)를 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 증류수(10㎖) 및 EA(2×50㎖)로 희석하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-3-4(616㎎, 87%)를 수득하였다; ESI-MS m/z: 493 (M++1).
화합물 M-3-5의 제조
t-뷰틸다이메틸실릴 클로라이드(188.5㎎, 1.25m㏖)를 0℃에서 무수 DCM(6.0㎖) 중 M-3-4(616㎎, 1.25m㏖) 및 이미다졸(102.2㎎, 1.50m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 2N HCl(5㎖) 및 염수(10㎖)로 반응을 중지시키고, DCM(10㎖×2)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-3-5(655.2㎎, 86%)를 수득하였다. ESI-MS m/z: 607 (M++1).
화합물 M-3-6의 제조
N2 분위기하에 -78℃에서 무수 DCM(1.5㎖)과 톨루엔(3.5㎖) 중 화합물 M-3-5(309㎎, 0.51m㏖)의 용액에 DIBAL(990㎕, 0.99m㏖, 톨루엔 중 1.0M)을 적가하였다. 1.5시간 동안 교반한 후, -78℃에서 MeOH(0.4㎖) 및 2N HCl(15㎖)로 반응을 중지시킨 다음, H2O(20㎖) 및 EA(30㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-3-6(280.4㎎, 95%)를 수득하였다; ESI-MS m/z: 577 (M++1).
화합물 M-3-7의 제조
THF(6.0㎖)와 증류수(86㎖) 중 화합물 M-3-6(280.4㎎, 0.49m㏖)의 용액에 Na2S2O4(677.2㎎, 3.89m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 5시간 동안 교반한 후, 공용매로서 톨루엔을 사용하여 혼합물을 감압하에 4회 농축시켜 물을 제거하였다. 수득된 황색 고체를 무수 MeOH(12㎖)에 용해시켰다. 아세틸 클로라이드(345.6㎕, 4.86m㏖)를 첨가하였다. 15분 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 1시간 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 반응 혼합물을 pH 7로 조정하고, 증류수(10㎖) 및 EA(2×50㎖)로 희석하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-3-7(107.7㎎, 42%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (s, 1H), 7.48-7.31 (m, 6H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.82-6.76 (m, 2H), 5.28-5.15 (m, 2H), 4.93 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.92-3.86 (m, 1H), 3.18 (dd, J = 9.6 Hz, 5.6 Hz, 1H), 3.10-3.02 (m, 1H), 0.99 (s, 9H), 0.21 (s, 6H); ESI-MS m/z: 529 (M++1).
화합물 M-3의 제조
EtOH(6.0㎖) 중 화합물 M-3-7(53.4㎎, 0.1m㏖)의 용액에 5% Pd/C(107.5㎎, 0.05m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 그런 다음, 1,4-사이클로헥사다이엔(764.4㎕, 8.08m㏖)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 혼합물을 Celite®를 통해 여과하여 Pd/C를 제거하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-3(30.3㎎, 68%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (s, 1H), 7.47 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.82 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.84-6.75 (m, 2H), 5.98 (s, 1H), 4.93 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.94-3.85 (m, 1H), 3.19 (dd, J = 11.2 Hz, 5.2 Hz, 1H), 3.12-3.02 (m, 1H), 0.99 (s, 9H), 0.21 (s, 6H); ESI-MS m/z: 439 (M++1).
실시예 4.8.7 화합물 Int-1의 제조
Figure pct00213
화합물 Int-1-1의 제조
MeOH(700㎖) 중 바닐산(50.0g, 0.30몰)의 용액에 SOCl2(207㎖, 2.85몰)를 N2 분위기하에 0℃에서 적가하였다. 실온에서 15시간 동안 교반한 후, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 반응물의 pH를 7 내지 8로 조정한 다음, 증류수(100㎖) 및 EA(400㎖)로 희석하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-1-1(54.2g, 정량)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.64 (dd, J = 6.4, 1.6 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (s, 3H).
화합물 Int-1-2의 제조
DMF(200㎖) 중 화합물 Int-1-1(54.2g, 0.30몰)의 용액에 K2CO3(61.6g, 0.45몰) 및 벤질 브로마이드(39.0㎖, 0.33몰)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 100℃에서 6시간 동안 교반한 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 증류수(100㎖) 및 EA(400㎖)로 희석하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-1-2(79.8g, 98%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.60 (dd, J = 6.4, 2.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.31 (m, 5H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).
화합물 Int-1-3의 제조
화합물 Int-1-2(79.8g, 0.29몰)를 N2 분위기하에 아세트산 무수물(550㎖)에 용해시킨 다음, 0℃로 냉각시켰다. 구리(II) 나이트레이트 반-(펜타하이드레이트)(75.0g, 0.32몰)를 부분적으로 첨가하였다. 0℃에서 6시간 동안 교반한 후, 얼음물(800㎖)로 반응을 중지시켰다. 고체를 여과하고, 증류수(100㎖) 및 헥세인(400㎖)으로 세척하여 화합물 Int-1-3(85.5g, 92%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (s, 1H), 7.45-7.35 (m, 5H), 7.08 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.91 (s, 3H).
화합물 Int-1-4의 제조
THF(800㎖)와 MeOH(300㎖) 중 화합물 Int-1-3(85.5g, 0.27몰)의 용액에 2N NaOH(404㎖, 0.81몰)를 첨가하였다. 65℃에서 5시간 동안 교반한 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 2N HCl 용액을 첨가하여 pH 2로 조정한 다음, 증류수(100㎖) 및 EA(300㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사 고체를 수집하고, 헥세인으로 세척하여 \화합물 Int-1-4(79.2g, 97%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 (s, 1H), 7.47-7.35 (m, 5H), 7.03 (s, 1H), 5.24 (s, 2H), 3.91 (s, 3H).
화합물 Int-1의 제조
무수 THF(500㎕)와 무수 DCM(1.5㎖) 중 화합물 Int-1-4(100㎎, 0.33m㏖)의 용액에 옥살일 클로라이드(42.4㎕)를 천천히 적가하고, N2 분위기하에 0℃에서 한 방울의 DMF를 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 화합물 Int-1을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 Int-1-5의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 DCM(300㎖) 중 화합물 Int-1-3(5.0g, 15.8m㏖)의 용액에 DCM(100㎖) 중 메테인-설폰산(50㎖)의 용액을 천천히 적가하고, 2시간 동안 교반하였다. NaHCO3 용액으로 반응 혼합물의 반응을 중지시키고, H2O(100㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 Int-1-5(2.54g, 71%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.89 (s, 3H).
화합물 Int-1-6의 제조
N2 분위기하에 1,4-다이옥세인(28㎖) 중 Int-1-5(2.0g, 8.8m㏖)의 용액에 6N NaOH 용액(4.4㎖, 26.4m㏖)을 처리하고, 40℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 2N HCl로 산성화하였다. 혼합물을 EA/H2O로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시키고, 진공 건조시켜 백색 고체 Int-1-6(2.0g, 정량)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.60 (s, 1H), 7.305 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.89 (s, 3H)
화합물 Int-2의 제조
N2 분위기하에 아세트산 무수물(1.0㎖, 10.5m㏖) 중 Int-1-6(1.8 7g, 8.77m㏖)의 용액에 TEA(1.8㎖, 13.1m㏖), DMAP(0.2g, 1.75m㏖)를 처리하고, 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA/H2O로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시키고, 진공 건조시켜 백색 고체 Int-2(2.2g 갈색 고체, 49%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.981 (s, 1H), 7.451 (s, 1H), 3.933 (s, 3H), 2.294 (s, 3H).
실시예 4.8.8 화합물 M-4의 제조
Figure pct00214
화합물 M-4-1의 제조
증류수(5.0㎖) 중 티엔일알라닌(500㎎, 2.92m㏖)의 용액에 진한 HCl(206㎕)을 적가하고, N2 분위기하에 0℃에서 교반한 다음, 폼알데하이드(37%, 261㎕, 3.5m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 IPA(3.0㎖)에 현탁시키고, 4M HCl(1,4-다이옥세인 중, 1.0㎖)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 고체를 여과하고, IPA(5㎖), 에터(20㎖)로 세척하여 화합물 M-4-1(495.7㎎, 77%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.95 (brs, 1H), 7.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.48-4.44 (m, 1H), 4.28 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.39 (dd, J = 11.6, 5.2 Hz, 1H), 3.17-3.10 (m, 1H). ESI-MS m/z: 184 (M++1).
화합물 M-4-2의 제조
화합물 M-4-1(495.7㎎, 2.25m㏖)을 N2 분위기하에 MeOH(10.0㎖)에 용해시킨 다음, 0℃로 냉각시켰다. SOCl2(491.3㎕, 6.76m㏖)를 0℃에서 적가하였다. 그런 다음, 반응 혼합물을 3시간 동안 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 에터(5㎖×2)로 세척하여 화합물 M-4-2(521.5㎎, 99%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.22 (brs, 2H), 7.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.65-4.61 (m, 1H), 4.30 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.19 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.60 (dd, J = 11.6, 5.2 Hz, 1H), 3.21-3.14, (m, 1H). ESI-MS m/z: 198 (M++1).
화합물 M-4-3의 제조
무수 THF(3.0㎖) 중 화합물 Int-1(856.5㎎, 2.66m㏖)의 용액에 화합물 M-4-2(518.5㎎, 2.22m㏖)를 첨가하고, 0℃에서 DMF(3.0㎖), DIPEA(772.8㎕, 4.44m㏖)에 용해시켰다. 그런 다음, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이후에, 반응이 완료되었다. 증류수(20㎖) 및 EA(50㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-4-3(888.5㎎, 89%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 483 (M++1).
화합물 M-4-4의 제조의 제조
무수 DCM(5.0㎖)과 톨루엔(15.0㎖) 중 화합물 M-4-3(880㎎, 1.82m㏖)의 용액에 DIBAL(3.6㎖, 3.6m㏖, 톨루엔 중 1.0M)을 N2 분위기하에 -78℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반하였다. -78℃에서 MeOH(5㎖), 2N HCl(20.0㎖)로 반응을 중지시켰다. 그런 다음, 증류수(20㎖) 및 EA(50㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-4-4(701.9㎎, 85%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 453(M++1).
화합물 M-4-5의 제조
THF(15.0㎖)와 증류수(3.0㎖) 중 화합물 M-4-4(700㎎, 1.55m㏖)의 용액에 Na2S2O4(2.2g, 12.4m㏖)를 실온에서 4시간 동안 첨가하였다. 이후에, 반응이 완료되었다. MeOH(5㎖)로 반응을 중지시켰다. 그런 다음, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 톨루엔(20㎖)에 현탁시키고 증발시켜 임의의 남아있는 물을 제거하였다. 수득된 백색 고체를 고진공하에 밤새 방치하여 추가로 완전히 건조시켰다. 잔사를 무수 MeOH(10㎖)에 현탁시킨 후, 아세틸 클로라이드(1.1㎖, 15.5m㏖)를 첨가하였다. 15분 후, 탁한 용액 여과하고, 고체를 무수 MeOH(5㎖×2)로 세척하였다. 여과액을 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되었다. NaHCO3 용액(약 pH 7)으로 반응 혼합물의 반응을 중지시켰다. 증류수(20㎖) 및 EA(50㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-4-5(701.9㎎, 85%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.47 (m, 5H), 7.22 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.26-5.14 (m, 2H), 4.98 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 4.08-4.02 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.32-3.26 (m, 1H).
ESI-MS m/z: 453 (M++1).
화합물 M-4의 제조의 제조
무수 DCM(3㎖) 중 화합물 M-4-5(60㎎, 0.15m㏖)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 그런 다음, DCM(2.0㎖) 중 메테인설폰산(700㎕)을 첨가하고, 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이후에, 반응이 완료되었다. NaHCO3 용액(약 pH 7)으로 반응을 중지시켰다. 그런 다음, 증류수(5㎖) 및 EA(20㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-4(38.3㎎, 82%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.23 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.30 (s, 1H), 4.99 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.10-4.04 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.32-3.26 (m, 1H).
ESI-MS m/z: 315(M+1).
화합물 M-4-6의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 20㎖의 무수 THF 중 M-4-2(1g, 4.28m㏖)의 용액에 THF(5.31㎖, 5.31m㏖) 중 1M LAH 용액을 처리하고, 15시간 동안 교반하였다. 물(5.3㎖), 15% NaOH(5.3㎖), H2O(16.0㎖)로 반응 혼합물의 반응을 중지시키고, 30분 동안 교반하였다. 무기 고체를 여과하고, EA로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 M-4-6(652㎎, 3.85m㏖, 90%)을 적색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.08 (d, J = 4.8, 1H), 6.73(d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.01- 3.88 (m, 2H), 3.80 (dd, J = 11.2 Hz, 1H), 3.55 (dd, J = 8.4 Hz, 1H), 3.13 - 3.07 (m, 1H), 2.78 - 2.74 (m, 1H), 2.60 - 2.51 (m, 1H); ET-MS m/z: 170.0(M+1).
화합물 M-4-7의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 DCM(20㎖) 중 용액 M-4-6(700㎎, 4.14m㏖)에 이미다졸(844㎎, 12.41m㏖), TBDMS-Cl(686㎎, 4.55m㏖)을 처리하고, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(100㎖), DCM(100㎖×3)으로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-4-7(792㎎, 67%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.07 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.04 - 3.92 (m, 2H), 3.77 (dd, J = 9.6 Hz, 1H), 3.65 (dd, J = 9.6 Hz, 1H), 3.05 - 3.00 (m, 1H), 2.75 - 2.71 (m, 1H), 2.65 - 2.59 (m, 1H); ET-MS m/z: 284.1(M+1).
화합물 M-4-8의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 DMF(1.8㎖) 중 Int-2(536㎎, 1.96m㏖) 및 M-4-7(666㎎, 2.35m㏖)의 용액에 DIPEA(0.85㎖, 4.89m㏖)를 처리하고, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA/H2O로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 반응 혼합물을 칼럼 크로마토그래피(EA/HEX: 1/1)에 의해 정제하여 황색 고체 M-4-8(758.5㎎, 76%)을 수득하였다; EI-MS m/z: 521 (M++1).
화합물 M-4a의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 MeOH(4.5㎖) 중 M-4-8(200㎎, 0.384m㏖)의 용액에 K2CO3(63.7㎎, 0.461m㏖)를 처리하고, 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA/H2O로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시키고, 진공 건조시켜 황색 고체 M-4a(189.8㎎, 정량)를 수득하였다; EI-MS m/z: 479 (M++1).
아래 표 3은 실시예 4.8.7에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성한 단량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00215
실시예 4.8.9 M-10 및 M-10a의 제조
Figure pct00216
화합물 M-10-1의 제조
DCM(15.0㎖) 중 화합물 MCBI-단량체(330㎎, 0.907m㏖)의 용액에 Et3N(0.510㎖, 3.63m㏖)을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. SO2F2 가스를 풍선을 통해 도입시키고, 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-10-1(306㎎, 76%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 8.20-7.82 (m, 1H), 7.93 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.31 (brs, 1H), 4.18-4.11 (m, 1H), 4.01-3.89 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.50 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 1.60 (s, 9H)
ESI-MS m/z: 468 (M++Na).
화합물 M-10-2의 제조
DMF(1.50㎖) 중 화합물 M-10-1(150㎎, 0.336m㏖)의 용액에 OHPAS-D1a(247㎎, 0.353m㏖) 및 BEMP(84㎕, 0.302m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하였다. 물로 반응을 중지시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-10-2(344㎎, 91%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1124 (M+).
화합물 M-10의 제조
DCM(6.0㎖) 중 화합물 M-10-2(140㎎, 0.124m㏖)의 용액에 1,4-다이옥세인(2.0㎖) 중 수소 클로라이드 4.0M 용액을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 1.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 감압하에 농축시켰다. 화합물 M-10을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다(128㎎, 97%).
ESI-MS m/z: 1024 (M+).
화합물 M-10-3의 제조
DMF(0.30㎖) 중 화합물 M-10-1(30.2㎎, 0.068m㏖)의 용액에 OHPAS-D13(37.8㎎, 0.068m㏖), BEMP(23.5㎕, 0.081m㏖) 및 K2CO3(9.35㎎, 0.068m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 M-10-3(10㎎, 15%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 984 (M+).
화합물 M-10-4의 제조
피리딘(0.65㎖) 중 화합물 M-10-3(32.1㎎, 0.033m㏖)의 용액에 아세트산 무수물(24.7㎕, 0.261m㏖) 및 DMAP(0.40㎎, 0.033m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 M-10-4(35.0㎎, 97%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1110 (M+).
화합물 M-10a의 제조
DCM(0.50㎖) 중 화합물 M-10-4(19.8㎎, 0.018m㏖)의 용액에 1,4-다이옥세인(0.20㎖) 중 수소 클로라이드 4.0M 용액을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 1.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 감압하에 농축시켰다. 화합물 M-10a를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다(14.5㎎, 78%).
ESI-MS m/z: 1010 (M+).
실시예 4.8.10 M-11의 제조
Figure pct00217
화합물 M-11-1의 제조
메탄올(52.8㎖, 26.4m㏖) 중 소듐 메톡사이드 0.5M 용액의 용액에 MeOH(5.30㎖) 중 3,4,5-트라이메톡시벤즈알데하이드(650㎎, 3.31m㏖) 및 메틸 아지도아세테이트(3.81g, 33.1m㏖, CAS No. 1816-92-8)의 용액을 N2 분위기하에 -20℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 6시간 동안 교반하였다. 냉수를 첨가한 후, 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 고체를 물로 세척하고, 진공 건조시켜 화합물 M-11-1(640㎎, 66%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.10 (s, 2H), 6.85 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.90 (s, 6H), 3.89 (s, 3H)
화합물 M-11-2의 제조
N2 분위기하에 실온에서 p-자일렌(3.40㎖) 중 화합물 M-11-1(100㎎, 0.341m㏖)의 용액에. 반응 혼합물을 180℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온에서 냉각시키고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-11-2(92.0㎎, 정량)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.10 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.08 (s, 3H), 3.93 (d, J = 1.2 Hz, 6H), 3.90(s, 3H)
ESI-MS m/z: 266 (M++1).
화합물 M-11의 제조
메탄올/H2O/1,4-다이옥세인(10.0㎖/5.00㎖/10.0㎖) 중 화합물 M-11-2(1.0g, 3.77m㏖)의 용액에 리튬 하이드록사이드 모노하이드레이트(316㎎, 7.54m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. HCl로 반응을 중지시킨 후, 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 고체를 물로 세척하고, 진공 건조시켜 화합물 M-11(830㎎, 88%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.91 (s, 3H)
ESI-MS m/z: 252 (M++1).
실시예 4.8.11 M-12의 제조
Figure pct00218
화합물 M-12-1의 제조
1.6N NaOH 용액(41.1㎖) 중 아이소바닐린(5.0g, 32.9m㏖)의 용액에 1,2-다이브로모에테인(17.1㎖, 197m㏖)을 N2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 밤새 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 실온에서 냉각시켰다. 반응 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-12-1(5.60g, 66%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 9.85 (s, 1H), 7.53-7.50 (m, 1H), 7.42 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.70 (t, J = 6.8 Hz, 2H)
ESI-MS m/z: 260 (M++1).
화합물 M-12-2 및 M-12-3를 실시예 4.8.10의 화합물 M-11-1 및 M-11-2의 제조 방법과 유사한 방식으로 합성하였다.
화합물 M-12-2
수율 18%
1 H NMR (400 Hz, CDCl 3 ) δ 7.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 4.38 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.69 (t, J = 6.8 Hz, 2H)
화합물 M-12-3
수율 73%
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.14 (s, 1H), 7.11-7.10 (m, 1H), 6.86 (s, 1H), 4.35 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.69 (t, J = 6.8 Hz, 2H)
ESI-MS m/z: 329 (M++1).
화합물 M-12-4의 제조
DMF(2.50㎖) 중 화합물 M-12-3(100㎎, 0.305m㏖)의 용액에 다이메틸아민(0.77㎖, 1.53m㏖) 및 포타슘 카보네이트(42.2㎎, 0.305m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물로 반응을 중지시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-12-4(90.0㎎, 정량)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 293 (M++1).
화합물 M-12의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 메탄올(1.0㎖) 중 화합물 M-12-4(45.0㎎, 0.154m㏖)의 용액에 2N NaOH 용액(0.92㎖, 1.85m㏖)을 처리하고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 M-12(53㎎, 정량)를 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 11.6 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 4.24 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.48-3.44 (m, 2H), 2.86 (s, 6H)
ESI-MS m/z: 279 (M++1).
아래 표 4는 실시예 4.8.9에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 단량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00219
실시예 4.8.12 M-19의 제조
Figure pct00220
화합물 M-19-1의 제조
DMF(2㎖) 중 화합물 M-18(90㎎, 0.411m㏖)의 용액에 DIPEA(0.193㎖, 1.13m㏖) 및 벤질 브로마이드(0.079㎖, 0.658m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 반응물을 N2 분위기하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 EA(50㎖×3), H2O(50㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-19-1(99㎎, 78%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 9.06 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.36 (m, 5H), 7.27 (s, 1H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 2.82 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 310 (M++1).
화합물 M-19-2의 제조
무수 DMF(2㎖) 중 화합물 M-19-1(5㎎, 0.411m㏖)의 용액에 Int-TG(66.5㎎, 0.162m㏖), 실버 옥사이드(56.3㎎, 0.243m㏖) 및 분자체(200㎎)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 18시간 동안 교반한 후, 반응물을 Celite®를 통해 여과한 다음, 감압하에 농축시켰다. 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 M-19-2(3.2㎎, 31%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.95 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.33 (m, 5H), 7.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.61 (dd, J = 10.4, 8.0 Hz, 1H), 5.49 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.39 (s, 2H), 5.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.17 (dd, J = 10.4, 3.6 Hz, 1H), 4.31 - 4.05 (m, 3H), 2.71 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.03 (s, 3H).
ESI-MS m/z: 662 (M++Na).
화합물 M-19의 제조
MeOH(1㎖) 중 화합물 M-19-2(3.2㎎, 0.005m㏖)의 용액에 Pd/C(5%, 1㎎, 0.0005m㏖)를 H2하에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, Celite®를 통해 여과한 다음, 감압하에 농축시켰다. 화합물 M-19를 추가 정제 없이 다음 단계에 직접 사용하였다(2.7㎎, 100%).
ESI-MS m/z: 572 (M++Na).
아래 표 5는 실시예 4.8.12에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 단량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00221
실시예 4.8.13 M-22의 제조
Figure pct00222
화합물 M-22-1의 제조
무수 DCM(5.5㎖) 중 MCBI-단량체(100㎎, 0.274m㏖)의 용액에 수소 클로라이드 용액(3㎖, 다이옥세인 중 4.0M)을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 화합물 M-22-1(82㎎, 100%)을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
ESI-MS m/z: 264 (M++1).
화합물 M-22의 제조
DMF(1㎖) 중 M-22-1(7.0㎎, 0.023m㏖)의 용액에 화합물 M-11(8.6㎎, 0.035m㏖) 및 EDCI(13.2㎎, 0.069m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 M-22(6.5㎎, 58%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.09 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.60 (brs, 1H), 7.06 - 6.98 (m, 4H), 4.65 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 4.10 - 4.07 (m, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.97 (dd, J = 11.2, 3.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.64 (dd, J = 11.2, 9.2 Hz, 1H).
ESI-MS m/z: 496 (M+).
아래 표 6은 실시예 4.8.13에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00223
Figure pct00224
실시예 4.8.14 M-29의 제조
Figure pct00225
화합물 M-29-1의 제조
에탄올(72.0㎖) 중 2-아미노-5-나이트로피리딘(5.0g, 35.9m㏖)의 용액에 에틸 브로모피루베이트(6.31㎖, 50.3m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 혼합물을 밤새 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 실온에서 냉각시켰다. 냉수를 첨가한 후, 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 고체를 물로 세척하고, 진공 건조시켜 화합물 M-29-1(6.28g, 74%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 9.30-9.29 (m, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.05 (dd, J = 10, 2.4 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 10 Hz, 1H), 4.53-4.47 (m, 2H), 1.44 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
ESI-MS m/z: 236 (M++1).
화합물 M-29-2의 제조
메탄올(20.0㎖) 중 화합물 M-29-1(2.0g, 8.50m㏖)의 현탁액을 0℃로 냉각시키고, 염산(6.4㎖)을 한 방울씩 첨가한 후, 아연(2.22g, 34.0m㏖)을 소량으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 다음으로, 메탄올(14㎖)을 첨가하고, 진한 암모니아로 반응을 중지시켰다. 현탁액을 여과하고, 잔사를 메탄올로 세척하였다. 합한 여과액을 농축시키고, 잔사를 클로로폼(70㎖), 물(30㎖) 및 진한 암모니아(30㎖, 30% 용액)의 혼합물에 현탁시켰다. 혼합물을 투명해질 때까지 교반하였다. 층을 분리하고, 수층을 클로로폼으로 1회 추출하였다. 합한 유기층을 포화 수성 NaCl로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 화합물 M-29-2를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다(1.12g, 64%).
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 8.01 (s, 1H), 7.54-7.51 (m, 2H), 6.86 (dd, J = 9.6, 2.4 Hz, 1H), 4.45 (m, 2H), 3.53 (s, 2H), 1.47 (t, J = 6.8 Hz, 3H)
화합물 M-29-3의 제조
DMA(18㎖) 중 M-29-2(1.12g, 5.46m㏖)의 용액에 화합물 Int-TG4(995㎎, 5.46m㏖) 및 EDC·HCl(1.26g, 6.55m㏖)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이후에, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔사를 물과 CH2Cl2에 용해시키고, 층을 분리하였다. 유기층을 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 M-29-3(927㎎, 46%)을 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 9.33-9.32 (m, 1H), 8.45 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.97-7.93 (m, 2H), 7.61-7.52 (m, 2H), 7.18-7.15 (m, 2H), 5.28 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.44-4.38 (m, 2H), 3.48 (s, 3H), 1.41 (t, J = 6.8 Hz, 3H)
화합물 M-29의 제조
1,4-다이옥세인/H2O(1.5㎖/1.5㎖) 중 M-29-3(300㎎, 0.812m㏖)의 용액에 2N NaOH(3.0㎖)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 다음으로, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물을 첨가하고, 혼합물을 4M 염산 용액으로 산성화하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 잔사를 건조시켜 화합물 M-29(242㎎, 87%)를 황갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 Hz, DMSO) δ 10.37 (s, 1H), 9.47 (s, 1H), 7.99 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.67 (t, J = 14 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.26 (s, 2H), 3.38 (s, 3H)
ESI-MS m/z: 342 (M++1).
실시예 4.8.15 M-30의 제조
Figure pct00226
화합물 M-30을 실시예 4.8.13에 기재된 것과 유사한 방법을 통해 합성하였다.
수율 23%; ESI-MS m/z: 588 (M++1).
실시예 4.9. 벤조다이아제핀 이량체 유도체의 제조
실시예 4.9.1 L-1의 제조
Figure pct00227
화합물 L-1-1의 제조
무수 THF(300㎖) 중 다이메틸 5-하이드록시아이소프탈레이트(5g, 23.79m㏖)의 용액에 LAH(3.6g, 95.15m㏖)를 N2 분위기하에 -78℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 15% NaOH 용액(4㎖), H2O(8㎖) 및 EA(100㎖)를 첨가한 다음, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-1-1(3.02g, 82%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.21 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.58 (s, 2H), 5.07 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.38 (d, J = 4.6 Hz, 4H).
화합물 L-1-2의 제조
화합물 L-1-1(2g, 12.97m㏖)의 용액을 N2 분위기하에 HBr(5.0㎖, AcOH 중 33%)에 용해시켰다. 60℃에서 18시간 동안 교반한 후, NaHCO3 용액(약 pH 8)을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 그런 다음, 증류수(50㎖) 및 EA(100㎖×2)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-1-2(2.9g, 80%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.99 (s, 1H), 6.81 (s, 2H), 4.85 (s, 1H), 4.41 (s, 2H).
화합물 L-1의 제조
무수 DCM(3㎖) 중 화합물 L-1-2(100㎎, 0.36m㏖)의 용액에 이미다졸(27㎎, 0.39m㏖) 및 TBDMS-Cl(59㎎, 0.39m㏖)을 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 16시간 동안 교반한 후, 증류수(50㎖) 및 EA(100㎖)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-1(110㎎, 79%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.00 (s, 1H), 6.80 (s, 2H), 4.41 (s, 4H), 0.99 (s, 9H), 0.21 (s, 6H).
실시예 4.9.2 L-7의 제조
Figure pct00228
화합물 L-7-1의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 THF(50㎖) 중 3,5-피리딘다이카복실산(1.0g, 5.98m㏖)의 용액에 붕소 트라이플루오라이드 테트라하이드로퓨란 복합체(30.0㎖, 30.0m㏖, 1M THF)를 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고, 18시간 동안 교반하였다. pH 2가 될 때까지 2N HCl로 혼합물의 반응을 중지시키고, 증류수(20㎖) 및 EA(50㎖×2)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 분취 TLC에 의해 정제하여 화합물 L-7-1(363㎎, 48%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.38 (s, 2H), 7.99 (s, 1H), 5.59 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 4.61 (d, J = 5.2 Hz, 2H).
화합물 L-7을 실시예 4.9.1에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성하였다.
화합물 L-7의 제조
수율 65%; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.56 (s, 2H), 7.77 (s, 1H), 4.47(s, 2H).
실시예 4.9.3 L-8의 제조
Figure pct00229
화합물 L-8-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 H2O(12㎖) 중 4-클로로피리딘-하이드로클로라이드(1.0g, 6.67m㏖) 및 다이에탄올아민(1.05g, 10.00m㏖)의 용액에 NaOH(1.07g, 26.67m㏖)를 처리하고, 마이크로파 반응기를 사용하여 110℃에서 1시간 동안 가열하였다. 증류수(18㎖)/메탄올(10㎖)로 반응을 중지시킨 후, EA(200㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 L-8-1(160㎎, 13%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 6.83 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.91 (brs, 2H), 3.57 (s, 8H). ESI-MS m/z: 183 (M++1).
화합물 L-8을 실시예 4.9.1에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성하였다.
화합물 L-8의 제조
수율 70%; ESI-MS m/z: 309 (M++1).
실시예 4.9.4 L-9의 제조
Figure pct00230
화합물 L-9를 실시예 3.5의 화합물 OHPAS-D6-1의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
수율 73%; 1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ 7.47 (s, 1H), 7.32 (s, 2H), 4.46 (s, 4H).
실시예 4.9.5 L-10의 제조
Figure pct00231
화합물 L-10을 실시예 4.9.1의 화합물 L-1-2의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
ESI-MS m/z: 245 (M++1).
실시예 4.9.6 이량체 유도체의 제조
Figure pct00232
DMF(1.0㎖) 중 화합물 M-1(31㎎, 0.10m㏖) 및 화합물 L-1(20㎎, 0.05m㏖)의 용액에 K2CO3(14㎎, 0.10m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 실온에서 7시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 50×250㎜; 유속: 40 ㎖/분, A 완충액 물 중 0.1% 폼산/B 완충액 ACN 중 0.1% 폼산, 방법 구배, 용매 A:용매 B 80:20 내지 20:80, 45분, 파장 214㎚)에 의해 정제하여 화합물 D-3(13㎎, 30%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 734(M++1).
실시예 4.9.7 이량체 유도체의 제조
Figure pct00233
화합물 D-14를 실시예 4.9.6의 화합물 D-1의 합성과 유사한 방식으로 합성하였다.
화합물 D-14-1
수율 32%, 백색 고체. ESI-MS m/z: 494 (M++1).
화합물 D-14
수율 7%, 백색 고체. ESI-MS m/z: 725 (M++1)
아래 표 7은 실시예 4.9.6 또는 4.9.7에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 이량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00234
Figure pct00235
실시예 4.9.8 이량체 유도체의 제조
Figure pct00236
화합물 D-101-1의 제조
DMF(1㎖) 중 화합물 M-1(100㎎, 0.32m㏖) 및 1,3,5-트리스(브로모메틸)벤젠(57㎎, 0.16m㏖)의 용액에 K2CO3(45㎎, 0.32m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 4시간 동안 교반한 후, EA(100㎖), H2O(50㎖) 및 2N HCl 수용액(5㎖)을 첨가하여 추출을 수행하고, 수득된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 D-101-1(54㎎, 42%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 812 (M+).
화합물 D-101의 제조
화합물 D-101-1(50㎎, 0.01m㏖)을 N2 분위기하에 실온에서 다이메틸아민(1㎖)에 용해시켰다. 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 분취 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 50×250㎜; 유속: 40 ㎖/분, A 완충액 물 중 0.1% 폼산/B 완충액 ACN 중 0.1% 폼산, 방법 구배, 용매 A:용매 B 80:20 내지 20:80, 45분, 파장 214㎚)에 의해 정제하여 화합물 D-101(2.2㎎, 17%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 776 (M++1).
실시예 4.9.9 이량체 유도체의 제조
Figure pct00237
화합물 D-111-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(1㎖) 중 화합물 M-4(10㎎, 0.032m㏖) 및 1,3,5-트리스(브로모메틸)벤젠(11.35㎎, 0.032m㏖, 1.0당량)의 황색 용액에 K2CO3(4.4㎎, 0.032m㏖, 1.0당량)를 처리하고, 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분취 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 21.2×250㎜; 유속: 15 ㎖/분, A 완충액 물 중 0.1% 폼산/B 완충액 ACN 중 0.1% 폼산, 방법 구배, 용매 A:용매 B 95:5 내지 5:95, 1시간, 파장 214㎚)에 의해 정제하여 화합물 D-111-1(20.9㎎, 22%)을 백색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 591(M++1).
화합물 D-111-2의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(1㎖) 중 화합물 D-111-1(20㎎, 0.034m㏖) 및 M-2(18.4㎎, 0.034m㏖)의 균질 용액을 K2CO3(4.7㎎, 0.034m㏖)로 처리하고, 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 THF(0.5㎖) 중 1M 다이메틸아민으로 처리하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분취 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 21.2×250㎜; 유속: 15 ㎖/분, A 완충액 물 중 0.1% 폼산/B 완충액 ACN 중 0.1% 폼산, 방법 구배, 용매 A:용매 B 95:5 내지 5:95, 1시간, 파장 214㎚)에 의해 정제하여 화합물 D-111-2(3.4㎎, 9.8%)를 백색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1018(M++1).
화합물 D-111의 제조
N2 분위기하에 실온에서 THF(0.5㎖) 중 화합물 D-111-2(3.4㎎, 0.003m㏖) 및 10% Cd/Pb(100㎎)의 용액을 1N NH4OAc(300㎕)로 처리하고, 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분취 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 21.2×250㎜; 유속: 15 ㎖/분, A 완충액 물 중 0.1% 폼산/B 완충액 ACN 중 0.1% 폼산, 방법 구배, 용매 A:용매 B 95:5 내지 5:95, 1시간, 파장 214㎚)에 의해 정제하여 화합물 D-111(0.8㎎, 29%)을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-MS m/z: 824 (M++1).
아래 표 8은 실시예 4.9.8 또는 4.9.9에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 이량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00238
Figure pct00239
실시예 4.9.10 D-112의 제조
Figure pct00240
화합물 D-112-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(10.0㎖) 중 1,3,5-트리스(브로모메틸)벤젠(3.9g, 11.0m㏖), 화합물 Int-2(4.96g, 21.9m㏖)의 용액에 K2CO3(44.2㎎, 0.32m㏖, 1.0당량)를 처리하고, 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다이메틸 아민(5.0㎖)으로 처리하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증류수(50㎖) 및 DCM(100㎖×2)으로 희석하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 D-112-1(2.74g, 41%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.50 (s, 2H), 7.41 (d, J = 12.0 Hz, 3H), 7.08 (s, 2H), 5.20 (s, 4H), 3.97 (s, 6H), 3.91 (s, 6H), 3.47 (s, 2H), 2.25 (s 6H) ; ESI-MS m/z: 614(M++1).
화합물 D-112-2의 제조
THF(75㎖)와 H2O(50㎖) 화합물 D-112-1(2.74g, 4.46몰)의 용액에 LiOH(937㎎, 22.33몰)를 첨가하였다. 이후에, 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 0℃로 냉각시키고, 2N HCl 용액을 첨가하여 pH 2로 조정한 다음, 고체를 여과하고, H2O(30㎖), EA(100㎖)로 세척하여 화합물 D-112-2(2.5g, 96%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.71 (s, 2H), 7.60 (d, J = 17.6 Hz, 3H), 7.32 (s, 2H), 5.30 (s, 4H), 3.91 (s, 6H), 2.67 (s, 6H); ESI-MS m/z: 586(M++1).
화합물 D-112-3의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(50.0㎖) 중 화합물 D-112-2(1.5g, 2.56m㏖), 화합물 M-4a(1.52g, 5.38m㏖)의 용액에 PyBop(3.5g, 6.40m㏖), DIPEA(2.2㎖, 12.8m㏖)를 처리하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증류수(100㎖) 및 EA(100㎖×2)로 희석하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 D-112-3(2.7g, 94%)을 수득하였다; ESI-MS m/z: 1116(M+).
화합물 D-112-4의 제조
EA(50.0㎖) 중 화합물 D-112-3(2.7g, 2.42m㏖)의 용액에 5% Pd/C(5.1g, 2.42m㏖)를 H2하에 실온에서 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CELITE®을 통해 여과한 다음, 감압하에 농축시켜 화합물 D-112-4(1.87g, 93%)를 수득하였다; ESI-MS m/z: 1056(M+).
화합물 D-112-5의 제조
N2 분위기하에 실온에서 무수 THF(3.0㎖) 중 화합물 D-112-4(100㎎, 0.095m㏖), Int-3(189㎎, 0.28m㏖)의 용액에 HOBT(13.0㎎, 0.095m㏖), DIPEA(36㎕, 0.208m㏖)를 처리하고, 44시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증류수(10㎖) 및 EA(20㎖×2)로 추출하고, 유기층을 포화 NH4Cl(50㎖)로 세척하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 D-112-5(76㎎, 40%)를 수득하였다; ESI-MS m/z: 2017(M+).
화합물 D-112-6의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 ACN(2.0㎖), H2O(800㎕) 중 화합물 D-112-5(116.7㎎, 0.06m㏖)의 용액에 TFA/ACN(1.0㎖)을 처리하고, 2시간 동안 교반하였다. 잔사를 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 D-112-6(83.3㎎, 80%)을 수득하였다; ESI-MS m/z: 1788(M+).
화합물 D-2의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 DCM(3.0㎖) 중 화합물 D-112-6(83.3㎎, 0.046m㏖)의 용액에 Dess-Martin 페리오디네인(45.4㎎, 0.11m㏖)을 처리하고, 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증류수(10㎖) 및 EA(30㎖×2)로 희석하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 D-112(59.3㎎, 71%)를 수득하였다; ESI-MS m/z: 1784(M+).
아래 표 9는 실시예 4.9.10에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 이량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00241
실시예 4.10.
실시예 4.10.1 T-Int-1의 제조
Figure pct00242
화합물 T-Int-1-1의 제조
ACN(1㎖) 중 화합물 D-7(10㎎, 0.01m㏖) 및 화합물 OHPAS-D1(11㎎, 0.01m㏖)의 용액에 BEMP(0.8㎎, 0.003m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-Int-1-1(12㎎, 63%)을 수득하였다. ESI-MS m/z: 1382 (M+1).
화합물 T-Int-1의 제조
MeOH(1.0㎖) 중 화합물 T-Int-1-1(10㎎, 0.007m㏖)의 용액에 K2CO3(5㎎, 0.036m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-Int-1(7.4㎎, 85%)을 수득하였다. ESI-MS m/z: 1214 (M+1).
아래 표 10은 실시예 4.10.1에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 이량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00243
Figure pct00244
실시예 4.10.2 T-Int-101의 제조
Figure pct00245
화합물 T-Int-101-1의 제조
DMF(1㎖) 중 화합물 D-101(8.0㎎, 0.01m㏖) 및 화합물 OHPAS-D3(11.5㎎, 0.01m㏖)의 용액에 DIPEA(5.4㎕, 0.03m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 실온에서 6시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-Int-101-1(11.9㎎, 71%)을 수득하였다. ESI-MS m/z: 1630 (M+1).
화합물 T-Int-101의 제조
MeOH(1㎖) 중 화합물 T-Int-101-1(11.9㎎, 0.01m㏖)의 용액에 K2CO3(5㎎, 0.04m㏖)를 N2 분위기하에 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 50×250㎜; 유속: 15 ㎖/분, A 완충액 물 중 0.1% 폼산/B 완충액 ACN 중 0.1% 폼산, 방법 구배, 용매 A:용매 B 80:20 내지 20:80, 45분, 파장 214㎚)에 의해 정제하여 화합물 T-Int-101(6.4㎎, 60%)을 수득하였다. ESI-MS m/z: 1462 (M+1).
실시예 4.10.3 T-Int-102, T-Int-104 및 T-Int-105의 제조
Figure pct00246
T-Int-102-2 및 T-Int-103-2를 화합물 T-Int-101의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
화합물 T-Int-102-1의 제조
백색 고체로서 수율 70%.
ESI-MS m/z: 1704 (M++1).
화합물 T-Int-102-2의 제조
수율 81%, 백색 고체
ESI-MS m/z: 1536 (M++1).
화합물 T-Int-103-1의 제조
수율 84%, 황색 고체
ESI-MS m/z: 2057 (M++1), 1029 (M/2++1).
화합물 T-Int-103-2의 제조
수율 84%, 무색 오일
ESI-MS m/z: 1889 (M++1), 945 (M/2++1).
화합물 T-Int-102-3의 제조
N2 분위기하에 0℃에서 무수 DCM(1.0㎖) 중 화합물 T-Int-102-2(56㎎, 0.036m㏖)의 균질 용액을 DCM(1㎖) 중 TFA(0.2㎖)으로 처리하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분취 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 21.2×250㎜; 유속: 15 ㎖/분, A 완충액 물 중 0.1% 폼산/B 완충액 ACN 중 0.1% 폼산, 방법 구배, 용매 A:용매 B 95:5 내지 5:95, 1시간, 파장 214㎚)에 의해 정제하여 화합물 T-Int-102-3(44.4㎎, 82%)을 아이보리색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1436 (M++1).
T-Int-103-3을 화합물 T-Int-102-3의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
화합물 T-Int-103-3의 제조
수율 74%, 아이보리색 고체
ESI-MS m/z: 1789 (M++1), 895 (M/2++1).
화합물 T-Int-102의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(3.0㎖) 중 화합물 T-Int-102-3(50㎎, 0.035m㏖) 및 BCN-PNP(11㎎, 0.035m㏖, 1.0당량)의 균질 용액을 DIPEA(11㎕, 0.068m㏖, 2.0당량)로 처리하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 분취 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 21.2×250㎜; 유속: 15 ㎖/분, A 완충액 물 중 0.1% 폼산/B 완충액 ACN 중 0.1% 폼산, 방법 구배, 용매 A:용매 B 95:5 내지 5:95, 1시간, 파장 214㎚)에 의해 정제하여 화합물 T-Int-102(22㎎, 39%)를 베이지색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1612 (M++1).
화합물 T-Int-104-1의 제조
N2 분위기하에 실온에서 DMF(2.0㎖) 중 T-Int-103-3(20㎎, 0.014m㏖) 및 L-6-5(5.1㎎, 0.014m㏖, 1.0당량)의 균질 용액을 DIPEA(7.3㎕, 0.042m㏖, 3.0당량)로 처리하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 분취 HPLC(칼럼: Innoval ODS-2 10㎛, 100Å, 21.2×250㎜; 유속: 15 ㎖/분, A 완충액 물 중 0.1% 폼산/B 완충액 ACN 중 0.1% 폼산, 방법 구배, 용매 A:용매 B 95:5 내지 5:95, 1시간, 파장 214㎚)에 의해 정제하여 화합물 T-Int-104-1(19.9㎎, 85%)을 황색 고체로서 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1687 (M++1), 844 (M/2++1).
화합물 T-Int-104의 제조
T-Int-104를 화합물 T-Int-102-3의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
수율 72%, 아이보리색 고체
ESI-MS m/z: 1789 (M++1), 895 (M/2++1).
T-Int-105를 화합물 T-Int-104의 제조 방법과 유사한 방식을 통해 합성하였다.
화합물 T-Int-105-1의 제조
수율 75%, 아이보리색 고체
ESI-MS m/z: 2040 (M++1), 1010 (M/2++1).
화합물 T-Int-105의 제조
수율 60%, 아이보리색 고체
ESI-MS m/z: 1940 (M++1), 970 (M/2++1).
아래 표 11은 실시예 4.10.1에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 이량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00247
Figure pct00248
Figure pct00249
실시예 4.11.
실시예 4.11.1 T-1의 제조
Figure pct00250
DMSO(2㎖) 중 T-Int-1(2.3㎎, 0.002m㏖)의 용액에 5m㏖의 농도로 준비된 (BimC4A)3를 첨가하였다. 그런 다음, 여기에 100m㏖의 농도로 준비된 CuBr을 189㎕의 양으로 첨가하였다. 그런 다음, 혼합물을 2분 동안 교반하였다. 화합물 MPS-D1-2(3.7㎎, 0.007m㏖)를 DMSO(674㎕)에 용해시켜 첨가한 후 10분 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합된 용액을 분리하고, 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-1(1.0㎎, 32%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1868 (M++1).
아래 표 12는 실시예 4.11.1에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 이량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00251
Figure pct00252
Figure pct00253
Figure pct00254
Figure pct00255
Figure pct00256
Figure pct00257
Figure pct00258
Figure pct00259
Figure pct00260
Figure pct00261
Figure pct00262
Figure pct00263
Figure pct00264
Figure pct00265
실시예 4.11.2 A4, A5, A6 및 A7의 제조
Figure pct00266
화합물 A-1, A-2 및 A-3의 제조
각각의 물질을 대한민국 공개특허공보 제10-2015-0137015호의 실시예 2 및 3에 기재된 것과 유사한 방법으로 제조하여 수득하였다.
화합물 A-4, A-5, A-6 및 A-7는 실시예 3.2 또는 실시예 4.1.1의 화합물 OHPAS-D1 또는 Q-1을 제조하는 것과 유사한 합성 경로에 의해 제조하였다.
화합물 A-4의 제조
ESI-MS m/z: 1426(M+1).
화합물 A-5의 제조
수율 75%, ESI-MS m/z: 1457(M+1).
화합물 A-6의 제조
수율 63%, ESI-MS m/z: 1272(M+1).
화합물 A-5의 제조
수율 89%, ESI-MS m/z: 1303(M+1).
아래 표 9는 실시예 4.11.1에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 이량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00267
실시예 4.11.3 T-88의 제조
Figure pct00268
화합물 T-88을 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 WO2015/095227 A2에 기술되어 있는 것과 유사한 합성 경로에 의해 합성하였다.
화합물 T-88-2의 제조
DMF(5㎖) 중 T-88-1(320㎎, 0.84m㏖)의 용액에 L-2a(280㎎, 0.85m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 N2 분위기하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, DMF를 감압하에 제거하였다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 T-88-2(310㎎, 62%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 595 (M++1).
화합물 T-88-3의 제조
N2 분위기하에 DMF(3㎖) 중 T-88-2(70㎎, 0.12m㏖)의 용액에 비스(4-나이트로페닐) 카보네이트(54㎎, 0.18m㏖)에 이어 DIPEA(41㎕, 0.24m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 염수(50㎖) 및 EA(50㎖)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 T-88-3(44㎎, 49%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 760(M++1).
화합물 T-88-4의 제조
T-88-3(40㎎, 0.05m㏖)의 용액을 질소 분위기하에 실온에서 DMF(1㎖)에 용해시켰다. MMAF-OMe(43㎎, 0.06m㏖) 및 HOBt(1.4㎎, 0.01m㏖)를 첨가한 후, 피리딘(0.33㎖) 및 DIPEA(10㎕, 0.06m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 22시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 혼합물을 EA(100㎖), 증류수(300㎖), 염수(100㎖) 및 1N 염산 수용액(20㎖)으로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 T-88-4(47㎎, 65%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1367(M++1).
화합물 T-88-5의 제조
메탄올(1㎖) 중 화합물 T-88-4(40㎎, 0.03m㏖)의 용액에 LiOH.H2O(10㎎, 0.23m㏖)를 첨가하고 N2 분위기하에 0℃에서 물(0.5㎖)에 용해시켰다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 생성된 잔사를 2N 염산 수용액(2㎖)으로 희석하고, 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-88-5(29.5㎎, 75%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1353(M++1).
화합물 T-88의 제조
DMSO(1.5㎖)와 H2O(0.1㎖) 중 화합물 T-88-5(3.0㎎, 2.20μ㏖) 및 Mal-1(1.85㎎, 4.60μ㏖)의 균질 용액을 질소 분위기하에 실온에서 (BimC4A)3(5.67㎎, 6.90μ㏖), CuBr(3.32㎎, 23.10μ㏖)에 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분취 HPLC 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 T-88(3.0㎎, 77%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 877 (M/2+1).
실시예 4.11.4 T-89의 제조
Figure pct00269
실온에서 H2O(1.0㎖) 중 0.1% 폼산 중 화합물 T-42(2.4㎎, 0.0013m㏖)의 용액에 NaHSO3를 처리하고, 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 동결 건조시켜 화합물 T-89(2.7㎎, 정량)를 수득하였다.
실시예 4.11.5 T-200의 제조
Figure pct00270
화합물 T-200a의 제조
DMF(0.3㎖) 중 M-10(35㎎, 0.033m㏖)의 용액에 화합물 M-17(8.7㎎, 0.04m㏖) 및 EDCI(19㎎, 0.099m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-200a(29㎎, 69%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1225 (M+).
화합물 T-200b의 제조
MeOH(0.5㎖) 중 T-200a(4㎎, 0.0032m㏖)의 용액에 포타슘 카보네이트(4.5㎎, 0.032m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-200b(2.8㎎, 82%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1057 (M+).
화합물 T-200의 제조
N2 질소 분위기하에 실온에서 DMSO(2㎖) 중 화합물 T-200b(6.3㎎, 0.006m㏖), Mal-1(4.8㎎, 0.012m㏖)의 용액에 CuBr(5.1㎎, 0.036m㏖)을 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-200(5.3㎎, 61%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1456 (M+).
아래 표 14는 실시예 4.11.5에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 단량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00271
Figure pct00272
실시예 4.11.6 T-212의 제조
Figure pct00273
화합물 T-212-1의 제조
DMF(1.2㎖) 중 M-10(70㎎, 0.0660m㏖)의 용액에 화합물 M-29(22.5㎎, 0.0660m㏖) 및 EDCI(37.9㎎, 0.198m㏖)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-212-1(48.3㎎, 54%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1347 (M+)
화합물 T-212-2의 제조
DCM(2.0㎖) 중 T-212-1(48.3㎎, 0.0358m㏖)의 용액에 4N 1,4-다이옥세인(0.7㎖) 중 HCl을 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-212-2(43.5㎎, 93%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1303 (M+).
화합물 T-212-3의 제조
무수 ACN(1.0㎖) 중 화합물 T-212-2(43.5㎎, 0.0334m㏖)의 용액에 βGal-Br(192㎎, 0.468m㏖), 실버 옥사이드(171㎎, 0.73m㏖) 및 분자체(90㎎)를 N2 분위기하에 실온에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 밤새 교반한 후, 반응 Celite®를 통해 여과한 다음, 감압하에 농축시켰다. 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-212-3(33.1㎎, 61%)을 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1635 (M++1).
화합물 T-212-4의 제조
메탄올(2.0㎖) 중 T-212-3(33.1㎎, 0.0203m㏖)의 용액에 포타슘 카보네이트(28.1㎎, 0.203m㏖)를 N2 분위기하에 0℃에서 첨가하였다. 동일한 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 분취 HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-212-4(21.2㎎, 81%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1297 (M+).
화합물 T-212의 제조
N2 질소 분위기하에 실온에서 DMSO(2㎖) 중 화합물 T-212-4(5.0㎎, 0.00385m㏖), Mal-1(3.08㎎, 0.00771m㏖)의 용액에 CuBr(3.3㎎, 0.0231m㏖)을 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 분취-HPLC에 의해 정제하여 화합물 T-212(5.4㎎, 82%)를 수득하였다.
ESI-MS m/z: 1697 (M+).
아래 표 15는 실시예 4.11.6에 기재된 것과 유사한 합성 경로를 통해 합성된 단량체 유도체를 열거하고 있다.
Figure pct00274
Figure pct00275
실시예 5. 접합을 위한 항체의 환원/산화:
시스테인 조작된 단일클론 항체를 37℃에서 1시간 동안 1mM EDTA가 포함된 4mM 트리스(pH 7.3)에서 약 20배 내지 50배 과량의 TCEP(트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드 또는 DTT(다이티오트레이톨)로 환원시켰다. 환원된 티오맙을 희석하고, PBS 중 PD-10 칼럼에 로딩하였다. 칼럼을 10mM PBS(pH 7.3)로 용출시켰다. 용출된 환원된 티오맙을 공기 산화에 의해 재확립시켰다. 티올/Ab 값을 용액의 280㎚에서의 흡광도에서 감소된 항체 농도 및 DTNB(알드리치, CAS No D8130)와의 반응에 의한 티올 농도를 결정하고, 412㎚에서의 흡광도를 결정함으로써 확인하였다.
실시예 6. ADC의 제조를 위한 1단계 접합 방법
실시예 6.1.
Figure pct00276
항체 약물 접합체(ADC)를 표 15A 내지 표 15E에 요약된 접합 절차에 따라 합성하였다. 표 15A는 접합 방법 1 및 2에 대해 나타내고; 표 15B는 접합 방법 2, 3 및 4를 나타내며; 표 15C는 접합 방법 5 및 6을 나타내고; 표 15D는 접합 방법 3 및 4를 나타내며; 표 15E는 접합 방법 3 및 4를 나타낸다. ADC에 대한 시험관내 데이터는 표 15F 내지 표 15J에 나타나 있다.
접합 방법 1 : MPS 접합 프로토콜. (NaBH4)
환원 및 재산화 반응 후, 항체를 PBS에 용해시켰다. DMSO 중 실시예 4.11.1에서 수득된 화합물 T-47(3.80㎕, 3.0m㏖, 링커-독소 중간체로서)을 환원된, 재산화된 항체(45㎕, 0.053m㏖)로 처리하고, 실온에서 3시간 동안 부드럽게 교반하였다. 소듐 보로하이드라이드(3.80㎕, 300m㏖)를 반응 혼합물의 용액에 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하여 가역적 탈접합 반응을 차단하였다. 접합 혼합물을 로딩하고, PD-10 칼럼을 통해 용출시켜 과량의 약물-링커 중간체 및 기타 불순물을 제거하였다.
접합 방법 2 : MPS 접합 프로토콜. (NH 2 OH)
환원 및 재산화 반응 후, 항체를 PBS에 용해시켰다. DMSO 중 실시예 4.11.1에서 수득된 화합물 T-11(8.86㎕, 3.0m㏖, 링커-독소 중간체로서)의 용액을 환원된, 재산화된 항체(70㎕, 0.053m㏖)로 처리하고, 실온에서 3시간 동안 부드럽게 교반하였다. 하이드록실아민(8.86㎕, 1,500m㏖)을 반응 혼합물의 용액에 첨가하고, 37℃에서 8시간 동안 인큐베이션하여 가역적 탈접합 반응을 차단하였다. 접합 혼합물을 로딩하고, PD-10 칼럼을 통해 용출시켜 과량의 약물-링커 중간체 및 기타 불순물을 제거하였다.
실시예 6.2.
Figure pct00277
접합 방법 3 : 말레이미드 접합 프로토콜.
환원 및 재산화 반응 후, 항체를 PBS에 용해시켰다. DMSO 중 실시예 4.11.1에서 수득된 화합물 T-48(5.04㎕, 3.0m㏖, 링커-독소 중간체로서)의 용액을 환원된, 재산화된 항체(36㎕, 0.12m㏖)로 처리하고, 40℃에서 1시간 동안 부드럽게 교반하였다. 접합 혼합물을 로딩하고, PD-10 칼럼을 통해 용출시켜 과량의 약물-링커 중간체 및 기타 불순물을 제거하였다. 접합된 항체의 DAR(약물 대 항체 비)을 HIC에 의해 분석하였다.
접합 방법 4 : 말레이미드 접합 프로토콜. (가수분해)
말레이미드 접합 후, 항체 약물 접합체를 37℃에서 16시간 동안 보레이트 완충액(pH 9.2)에서 인큐베이션하여 말레이미드 고리를 가수분해하였다. 그리고, 보레이트 완충액을 viva-spin 칼럼(지이 헬스케어(GE Healthcare))을 통해 PBS(pH 7.3)로 교체하였다.
실시예 7. ADC의 제조를 위한 2단계 접합 방법
Figure pct00278
접합 방법 5 : MPS-N 3 +BCN-약물. (NaBH 4 )
환원 및 재산화 반응 후, 실시예 2에서 수득된 화합물 MPS-D1-11(표 2)을 사용하여 항체의 조작된 시스테인의 티올기와 1차 접합 반응을 수행하였다. PBS 중 항체를 DMSO 중 각 화합물(6.62㎕, 3.0m㏖)로 처리하였다. 3시간 후, 소듐 보로하이드라이드(6.62㎕, 300m㏖)를 접합된 용액에 첨가하여 실온에서 1시간 동안 가역적 탈접합 반응을 차단하였다. 그리고, 1차 접합된 항체를 PD-10 칼럼에 의해 정제하였다. 2차 접합을 위해, Cu(I) 촉매의 부재하에 고리화 첨가가 촉진되도록 N3와 같은 작용기를 갖는 실시예 4.10.2에서 수득된 T-Int-102(13.24㎕, 3.0m㏖)를 T-Int-102-D1-11 AB2.1 접합된 항체(7.4㎕, 0.117m㏖)에 적용하고, 37℃에서 인큐베이션하였다. 대략 24시간 후, 항체 약물 접합체를 PD-10 칼럼에 의해 정제하고, 원심 한외여과에 의해 농축시켰다. 접합된 항체의 DAR(약물 대 항체 비)을 HIC에 의해 분석하였다.
접합 방법 6 : MPS-BCN+N 3 -약물. (NaBH 4 )
환원 및 재산화 반응 후, 실시예1.9에서 수득된 화합물 MPS-D1-10을 사용하여 항체의 조작된 시스테인의 티올기와 1단계 접합 반응을 수행하였다. PBS 중 항체를 DMSO 중 각 화합물(6.62㎕, 3.0m㏖)로 처리하였다. 3시간 후, 소듐 보로하이드라이드(6.62㎕, 300m㏖)를 접합된 용액에 첨가하여 실온에서 1시간 동안 가역적 탈접합 반응을 차단하였다. 그리고, 1차 접합된 항체를 PD-10 칼럼에 의해 정제하였다. 2차 접합을 위해, Cu(I) 촉매의 부재하에 고리화 첨가를 촉진되도록 BCN과 같은 작용기를 갖는 실시예 4.6에서 수득된 Q-7(13.24㎕, 3.0m㏖)을 Q-7 AB2.1 접합된 항체(7.4㎕, 0.117m㏖)에 적용하고, 37℃에서 인큐베이션하였다. 대략 24시간 후, 항체 약물 접합체를 PD-10 칼럼에 의해 정제하고, 원심 한외여과에 의해 농축시켰다. 접합된 항체의 DAR(약물 대 항체 비)를 HIC에 의해 분석하였다.
Figure pct00279
Figure pct00280
Figure pct00281
Figure pct00282
Figure pct00283
Figure pct00284
Figure pct00285
Figure pct00286
Figure pct00287
Figure pct00288
Figure pct00289
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Figure pct00291
Figure pct00292
Figure pct00293
Figure pct00294
실시예 8. 항체 약물 접합체의 정제
혼합물을 원심 한외여과에 의해 농축시키고, 접합체를 HIC NPR 칼럼(TOSOH #0007656 TSKgel Phenyl-5PW, 21.5×150㎜, 13㎛)으로 정제하고, 0.8 ㎖/분에서 40% 내지 100% B의 선형 구배로 용출시켰다(A 완충액 50mM 소듐 포스페이트(pH 7.0) 중 1.5M 암모늄 설페이트; B 완충액 50mM 소듐 포스페이트(pH 7.0) 중 20% 아세토나이트릴). 접합된 항체의 DAR(약물 대 항체 비)를 HIC에 의해 분석하였다.
실시예 9. 단 백질-약물 접합체의 시험관내 분석
HEK293(B7-H3 과발현됨), NCI-N87, JIMT-1, Calu-6, NCI-H460, A549, HCT-116, DU-145, NCI-H23 및 NCI-H358 암세포를 100㎕의 배지에 웰당 2,000개 내지 8,000개의 세포 밀도로 96-웰 플레이트에 시딩하고, 24시간 동안 배양하였다. ADC는 50nM에서 0.0003nM까지 1:4의 연속 희석액으로 처리하고, 항체 약물 접합체 T-DM1은 50nM에서 0.0007nM까지 1:4의 연속 희석액으로 처리하였다. DMSO 중 일련의 화합물 희석액을 웰당 5㎕로 24-웰 플레이트의 웰에 3회 반복 첨가하였다. 각 개별 플레이트의 3개의 웰에 대조군으로서 화합물 없이 5㎕의 DMSO를 넣었다. DMSO 웰당 DMSO의 최종 농도는 0.5%였다. 플레이트를 가습된 5% CO2 공기 분위기에서 37℃에서 6일 동안 인큐베이션하였다. 세포 생존력을 MTT 검정에 의해 결정하였다. PBS 완충 용액(5 mg/㎖)에 용해시킨 0.2㎖의 3-(4,5-다이메틸티아졸-2-일)-2,5-다이페닐테트라졸륨 브로마이드(MTT) 염료를 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 살아있는 세포에서 미토콘드리아 산화환원효소에 의해 MTT 염료의 환원에 의해 형성된 포마잔을 DMSO에 용해시키고, 550㎚에서 흡광도를 측정하였다. 에스자형 용량-반응 비선형 회귀 곡선 피팅(그래프패드 소프트웨어 인크.)을 사용하여 IC50을 생성하였으며, 결과를 도 1 내지 도 9 및 아래 표 17 내지 표 27에 나타내었다.
Figure pct00295
Figure pct00296
Figure pct00297
Figure pct00298
Figure pct00299
Figure pct00300
Figure pct00301
Figure pct00302
Figure pct00303
Figure pct00304
Figure pct00305
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Figure pct00307
Figure pct00308
Figure pct00309
실시예 10. 생체내 효능
T-20-AB2.1, T-23-AB2.1, T-Int-102-D1-5 AB2.1 및 T-Int0112-AB2.1을 20㎎ 규모의 반응으로 제조하였다. HIC 칼럼에 의한 정제 후, 최종 샘플을 5 ㎎/㎖ 내지 10 ㎎/㎖의 단백질로 농축시켰다.
T-20-AB2.1 및 T-23-AB2.1의 생체내 효능을 마우스에서 종양 이종이식편 연구에 의해 측정하였다. 암컷 BALB/c nu/nu에 PBS 중 각각 5×106개 JIMT-1 세포의 현탁액을 오른쪽 옆구리에 피하로 주사하였다. 대략 150㎣에 도달했을 때 마우스를 연구 그룹에 무작위로 나누었다. T-DM1(5 ㎎/㎏), T-20-AB2.1 및 T-23-AB2.1 접합체(0.3 ㎎/㎏, QW X4)를 그룹당 6마리 내지 10마리의 동물로 구성된 모든 처리 그룹에 i.v로 투여하고, 캘리퍼 측정을 사용하여 종양 크기를 주 2회 모니터링하였다. 종양 질량은 부피 = (너비×너비×길이)/2로 계산하였다. 본 개시내용의 접합체는 관찰 기간, 즉, 실험 개시로부터 80일 이내에 종양 퇴행을 유도하였다. 대조군 접합체인 T-DM1은 본 발명의 접합체보다 활성이 낮았다. 이러한 결과는 도 10 및 도 11에 도시되어 있다.
HCT-116, NCI-H23 및 NCI-H460 모델은 T-Int-102-D1-5 AB2.1 및 T-Int-112-AB2.1에 대해 유사한 방법으로 진행하였다.
접합체는 실험 개시로부터 60일 내지 90일 동안 종양을 퇴행시켰다. 이러한 결과는 도 12 내지 도 17에 도시되어 있다.
이러한 생체내 실험은 CACT(아산 병원 암치료 진흥센터, 프로젝트 코드 번호: HI15C0972) 및 바이오톡스텍(Biotoxtech)이 수행하였다
실시예 11. 항-B7-H3 단일클론 항체의 생성
B7-H3 특이적 항체는 Ymax-ABL 라이브러리(와이-바이오로직스 인크.(Y-Biologics Inc.))에 의해 세 번의 연속적인 바이오패닝(biopanning) 과정 및 추가적인 친화성-성숙 기술을 통해 발견되었다.
염기 서열이 상이할 뿐만 아니라 B7-H3에 특이적인 약 140개의 scFv 항체 히트(hit)를 스크리닝한 후, 이를 완전 인간 IgG 형태로 전환하고, Ymax-tEXPRESS 시스템(와이-바이오로직스 인크.)을 사용하여 생산하였다.
B7-H3 특이적 항체를 DNA 서열 분석 및 시험관내 특성화 검정에 의해 선택하고, 티오맙 IgG(IgG_A1C)의 형태로 생산하였다(표 28, 표 29, 표 30 및 표 31).
Figure pct00310
선택된 항체의 중쇄 및 경쇄-사슬 CDR 서열 및 이를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체는 표 29 및 표 30에 나타나 있다.
Figure pct00311
Figure pct00312
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방법: Ymax-ABL 라이브러리를 사용한 바이오패닝
대장균 세포를 다양한 약 3×10E10의 인간 scFv 파지 라이브러리(와이-바이오로직스 인크.)로 감염시킨 다음, 30℃에서 16시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배양액을 원심분리하고, 생성된 상청액을 PEG로 농축시킨 다음, PBS 완충액에 용해시켜 인간 scFv 파지 디스플레이를 얻었다. 라이브러리 파지를 인간 B7-H3 단백질(시노 바이올로지칼 인크.(Sino biological Inc.) 또는 와이-바이오로직스 인크.)로 코팅된 면역 튜브에 넣은 후, 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 1 X PBS/T 및 1 X PBS로 세척한 후, 항원에 특이적으로 결합한 scFv-파지만을 용출시켰다.
용출된 파지를 대장균 세포에 다시 감염시키고, 및 증폭(패닝 과정)시켜 양성 파지의 풀을 얻었다. PBST 세척 단계의 횟수만 최대 25회로 증가시킨 것을 제외하고는, 기재된 바와 동일한 방식으로 1차 패닝 과정에서 증폭된 파지를 사용하여 2차 및 3차 패닝 과정을 수행하였다. 항원에 결합한 파지의 수(산출량(output))는 3차 패닝 과정 동안 증가하였다.
다중-파지 ELISA(효소 결합 면역검정)를 수행하여 패닝 과정의 각 라운드에서 얻은 각각의 양성 폴리 scFv-파지 항체 풀의 항원 특이성을 조사하였다. 1차 내지 3차 패닝 과정 후 동결된 세포 스톡을 5㎖의 2 x YTCM, 2% 글루코스 및 5mM MgCl2를 포함하는 배지에 OD600이 0.1이 되도록 첨가한 다음, 37℃에서 2시간 내지 3시간 동안 배양하였다(OD600 = 0.5 내지 0.7). 세포를 M1 헬퍼 파지로 감염시키고, 2 x YTCMK, 5mM MgCl2 및 1mM IPTG를 포함하는 배지에서 30℃에서 16시간 동안 배양하였다. 생성된 세포 배양물을 원심분리하고(4,500rpm, 15분, 4℃), 상청액을 새로운 튜브로 옮겼다(1차 내지 3차 패닝된 폴리 scFv-파지). 코팅 완충액이 담긴 96-웰 면역-플레이트(NUNC 439454)에 항원을 100 ng/웰의 밀도로 4℃에서 16시간 동안 코팅하고, 각 웰을 PBS에 용해시킨 4% 탈지유를 사용하여 차단하였다. 각 웰을 0.2㎖의 PBS/T로 세척하고, 100㎕의 1차 내지 3차 패닝된 폴리 scFv-파지를 각 웰에 첨가한 후, 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 그런 다음, 각 웰을 0.2㎖의 PBS/T로 4회 세척하고, 4% 탈지유/PBS로 1:2000(v/v)으로 희석한 2차 항체 항-M13-HRP(Amersham 27-9421-01)를 각 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. PBS/T로 세척한 후, PC 완충액에 용해시킨 OPD 정제(Sigma. 8787-TAB)의 용액을 100 ㎕/웰의 농도로 웰에 첨가하여 10분 동안 발색을 유도하였다. 그런 다음, 분광 광도계(몰리큘러 디바이스(Molecular Device))로 490㎚에서 흡광도를 측정하였다. ELISA는 B7-H3 항원에 대한 결합 친화성이 3차 패닝된 폴리 scFv-파지에서 풍부함을 보여주었다.
높은 결합 친화성을 갖는 다중클론 파지 항체 그룹(3차 패닝)으로부터 얻은 콜로니를 1㎖ 96-딥 웰 플레이트(Bioneer 90030)에서 37℃에서 16시간 동안 배양하였다. 이렇게 성장한 100㎕ 내지 200㎕의 세포를 2 x YTCM, 2% 글루코스 및 5mM MgCl2를 포함하는 배지에 OD600이 0.1이 되도록 첨가하고, 이를 1㎖의 2 x YTCM, 2% 글루코스 및 5mM MgCl2를 포함하는 배지에 첨가한 다음, 96-딥 웰 플레이트에서 37℃에서 2시간 내지 3시간 동안 OD600이 0.5 내지 0.7이 되도록 배양하였다. 세포를 M1 헬퍼 파지로 1:20의 MOI로 감염시키고, 2 x YTCMK, 5mM MgCl2, 1mM IPTG를 포함하는 배지에서 30℃에서 16시간 동안 배양하였다. 항원 B7-H3를 96-웰 면역플레이트에 100 ng/웰의 밀도로 4℃에서 16시간 동안 코팅하고, 각 웰을 PBS에 용해시킨 4% 탈지유를 사용하여 차단하였다. 0.2㎖ PBS/T로 세척하고 16시간 동안 배양한 각각의 단일클론 scFv-파지(100개의 scFv-파지)를 각 웰에 100㎕씩 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 그런 다음, 각 웰을 0.2㎖의 PBS/T로 4회 세척하고, 2차 항체, 항-M13-HRP, 4% 탈지유/PBS로 1/2000(v/v)으로 희석하고, 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 0.2㎖의 PBS/T로 세척한 후, 발색을 수행하고, 490㎚에서 흡광도를 측정하였다. 각 항원에 대해 높은 결합 친화성을 갖는 단일-파지 클론으로서 총 수십 개의 B7-H3에 대한 단일-파지 클론을 얻었다.
방법: DNA 서열 분석에 의한 선택
선택된 단일 클론에 대해 DNA 정제 키트(퀴아젠, 독일)를 사용하여 DNA-프렙을 수행하여 DNA를 얻고, DNA에 대한 서열 분석은 (솔젠트(Solgent))에서 수행하였다. 선택된 항체의 VH 및 VL의 CDR 영역을 서열 분석의 결과에 기초하여 확인하였고, Ig BLAST 프로그램을 이용하여 이들 항체와 생식세포계열 항체 그룹 사이의 유사성(동일성)을 조사하였다(Nucleic Acids Res., 2013, 41, W34-40). B7-H3에 특이적인 9종의 파지 항체를 수득하였으며, 이는 표 18, 표 19 및 표 20에 요약되어 있다.
방법: B7-H3 특이적 항체의 작제 및 생산
선택된 항체 클론의 중쇄 및 경쇄에 대해 PCR(iCycler iQ, 바이오-래드(BIO-RAD))을 수행하였다. 그 결과, 중쇄 및 경쇄를 수득하고, 벡터(pNATVH 및 pNATVL) 및 2개의 사슬을 제한 효소로 절단(소화)하였다. DNA를 DNA-겔 추출 키트(퀴아젠)로 용출시켰다. 1㎕(10ng)의 벡터, 15㎕(100ng 내지 200ng)의 중쇄 또는 경쇄, 2㎕의 10 x 결찰 완충액, 1㎕의 라이게이스(1 U/㎕) 및 증류수를 혼합하여 결찰을 수행하고, 혼합물을 실온에서 1시간 내지 2시간 동안 방치하고, 생성된 혼합물을 컴피턴트 세포(XL1-blue)에 주입하고, 세포를 얼음 위에 5분 동안 방치하고, 42℃에서 90초 동안 세포에 열충격을 가하였다. 열 충격 후, 1㎖의 배지를 세포에 첨가한 다음, 세포를 37℃에서 1시간 동안 성장시키고, LB Amp 플레이트에 도말하고, 37℃에서 16시간 동안 인큐베이션하였다. 수득된 콜로니를 5㎖의 LB Amp 배지에 접종하고, 37℃에서 16시간 동안 배양하고, DNA-프렙 키트(뉴클레오젠(Nucleogen))를 사용하여 DNA-프렙을 수행하였다. 수득된 DNA의 서열 분석은 (솔젠트)에서 수행하였다. 선택된 항체 클론의 각각의 티오맙 IgG를 부위-돌연변이유발 방법으로 작제하였다. 선택된 클론의 파지 항체의 서열에 상응하는 티오맙을 포함하는 전환된 전체 IgG 클론 작제물을 서열 분석에 의해 확인하였다(표 21 및 표 22). HEK 293F 세포에 형질감염시키기 위해, 전체 IgG 또는 티오맙 IgG로 전환된 각 클론의 중쇄(pNATVH) 및 경쇄(pNATVL)를 100㎖의 LB Amp 배지에서 성장시키고, Midi-프렙 키트(퀴아젠)를 사용하여 DNA를 얻었다.
클로닝된 pNATVH 및 pNATVL 벡터를 HEK293F 세포에 6:4의 비로 공동 형질감염시키고, 상청액을 제7일에 수집하고, 세포 및 찌꺼기를 원심분리 및 0.22㎛ 탑 필터를 통해 제거하고, 상청액을 수집하여 단백질 A 친화성 크로마토그래피에 적용하여 IgG 항체를 정제하였다. 정제 과정 동안, 글리신 완충액을 사용하여 항체를 분리하고, 최종 재현탁 완충액이 PBS가 되도록 완충액을 교환하였다. 정제된 항체를 BCA 및 나노 드롭에 의해 정량화하고, 각 항체를 환원 및 비환원 조건하에 5㎍의 용량으로 겔에 로딩하고, SDS-PAGE에 의해 분석하여 정제된 단백질의 순도 및 이동성을 결정하였다. 선택된 항체는 모두 비환원 조건하에서 150kDa 이상의 분자량으로 검출되었으며, 대조군 항체로서 SC0041 또는 SC0041.01을 생산하였다(표 33 및 표 34).
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실시예 12: 항-B7-H3 단일클론 항체의 시험관내 결합 친화성
정제된 항-B7-H3 단일클론 항체의 결합 친화성을 BLI-기반 OCTET 또는 SPR-기반 Biacore에 의해 결정하였다. OCTET에 의해 선택된 항-B7-H3 mAb의 결합 동역학은 표 36에 나타나 있다. 인간, 사이노몰구스 원숭이 및 마우스 B7-H3 항원에 결합하는 항체의 추가 결합 동역학은 표 37에 나타나 있다.
Figure pct00331
방법: OCTET 결합 동역학
ForteBio Octet QKe 기기를 사용하여 항-B7-H3 항체에 대한 인간 B7-H3의 결합 동역학을 측정하였다. Octet QKe 시스템은 동역학 분석을 위해 실시간으로 분자 상호작용을 측정하는 무표지 바이오센서 기술인 BLI(Bio-Layer Interferometry: 생물층 간섭계)를 기반으로 한다.
AHC(Anti-hIgG capture: 항-hIgG 포획) 바이오센서(포르테바이오 인크(ForteBio Inc), 18-5060)를 1X 동역학 완충액(포르테바이오 인크.)에서 10분 동안 평형화하고, 인간 B7-H3(와이-바이오로직스 인크.)를 1X 동역학 완충액에 2배 연속 희석액(0.94nM 내지 30nM)으로 준비하였다. 1.5나노미터의 광학 이동이 달성될 때까지 B7-H3 항체 리간드를 AHC 바이오센서에 10 ㎍/㎖로 로딩하였다. 로딩 후, 바이오센서를 10분 동안 정의된 농도의 인간 B7-H3에서 기준을 정하고 결합시킨 다음, 완충액에서 10분 동안 해리시켰다. 전체 실험은 96-웰 검은색 평평한 바닥의 폴리프로필렌 마이크로플레이트(Greiner Bio-One part no. 655209)를 1,000rpm의 속도로 진탕하면서 30℃에서 수행하였다. 모든 용액의 최종 부피는 웰당 200㎕였다.
전개 완충액에만 노출된 대조군 센서를 빼서 기준선 이동에 대해 모든 측정값을 수정하였다. 센서 표면에 대한 항-B7-H3 항체의 결합 여부를 확인하기 위해 블랭크 센서를 사용하여 비특이적 결합 테스트를 수행하였다.
Octet 데이터 분석 소프트웨어 9.0을 사용하여 데이터 분석 및 곡선 피팅을 수행하였다. 수득된 데이터를 처리하여 중첩된 피팅 및 KD, Kon 및 Koff 값을 결정하였다. 완충액 아티팩트(artifact)에 대해 분석물 웰에서 참조 웰을 뺐다. 그런 다음, y-축 정렬, 단계간 보정 및 Savitzky-Golay 필터링도 또한 데이터에 적용하였다. 그런 다음, 처리된 데이터를 글로벌 피팅과 함께 1:1 모델 피팅을 사용하여 결합 및 해리에 대한 곡선에 피팅하였다. 기준선-보정된 결합 곡선을 GraphPad Prism 8로 분석하였다.
Figure pct00332
방법: Biacore 결합 동역학
Biacore 8K(지이 라이프 사이언스(GE Life science)) 기기를 사용하여 다양한 mAb(리간드)에 결합하는 여러 B7-H3 변이체(분석물)에 대한 결합 동역학을 측정하였다. 항체를 고정화된 항-인간 Fc 항체(지이 라이프 사이언스) 상에 포획하였다. 항-Fc 항체를 활성 세포 및 참조 세포 모두에서 표준 아민 커플링 방법을 사용하여 CM5 센서 칩에 대략 7,000RU로 고정화시켰다. 결합 동역학 측정을 위해, HBS-EP+를 전개 완충액(10mM Hepes, pH 7.4, 150mM NaCl, 3mM EDTA, 0.05% 폴리소르베이트20)에 사용하였다. 항-B7-H3 항체를 전개 완충액에 0.5 ㎍/㎖로 희석하고, 활성 세포에만 110초 동안 주입하였다. 리간드 포획 후, 다양한 B7-H3 항원을 120초 동안 분석하고, 해리를 30 ㎕/분의 유속으로 600초 동안 모니터링하였다. 재생을 위해 3M MgCl2 용액을 30 ㎕/분에서 30초 동안 활성 세포 및 참조 세포 모두에 주입하였다. 동역학 분석을 위해, 20nM의 인간 4Ig B7-H3(와이-바이오로직스 인크.), 320nM의 인간 2Ig B7-H3(아크로바이오시스템즈(Acrobiosystems)), 40nM의 사이노몰구스 원숭이 B7-H3(시노 바이올로지칼 인크.) 및 160nM의 마우스 B7-H3(시노 바이올로지칼 인크.) 범위의 포획된 리간드 위로 5 포인트의 2-배 희석된 분석물을 흘렸다. Biacore Insight Evaluation 소프트웨어(지이 라이프 사이언스)를 사용하여 데이터를 1:1 결합 모델에 피팅함으로써 동역학 정보를 계산하여 ka(결합 상수), kd(해리 상수) 및 KD(평형 해리 상수)를 결정하였다.
참조에 의한 원용
본 명세서에 언급된 모든 간행물 및 특허는 각각의 개별 간행물 또는 특허가 구체적이고 개별적으로 참조에 의해 원용되는 것으로 표시되는 것처럼 그 전체가 참조에 의해 원용된다. 상충하는 경우, 본 명세서의 임의의 정의를 포함하여 본 출원이 우선한다.
등가물
본 개시내용의 특정 실시형태가 논의되었지만, 위의 명세서는 예시적이며 제한적이지 않다. 본 명세서 및 아래 청구범위의 검토시 본 개시내용의 많은 변형이 당업자에게 명백해질 것이다. 본 개시내용의 전체 범위는 등가물의 전체 범위와 함께 청구범위를 참조하고 이러한 변형과 함께 명세서를 참조하여 결정되어야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> INTOCELL, INC. Y-BIOLOGICS INC. <120> ANTIBODY-DRUG CONJUGATES COMPRISING ANTI-B7-H3 ANTIBODIES <130> WO 2021/260438 <140> PCT/IB2021/000445 <141> 2021-06-25 <150> 63/044,764 <151> 2020-06-26 <160> 109 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Arg 1 5 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Ala Ser His Thr Ile Pro Gly Ala Trp Asp Val 1 5 10 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Thr Arg Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr 1 5 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide 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Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 42 Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Ile Thr 1 5 <210> 43 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 43 Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 44 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 44 Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala 1 5 <210> 45 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 45 Ala Asn Gly Gly Asp Ser Ser Ser Trp Tyr Thr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 46 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 46 Gln Ser Ile Asp Asn Trp 1 5 <210> 47 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 47 Lys Ala Ser 1 <210> 48 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 48 Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Pro Leu Thr 1 5 <210> 49 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 49 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ser Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser His Thr Ile Pro Gly Ala Trp Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 50 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 50 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly 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Sequence: Synthetic polypeptide <400> 84 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 85 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 85 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Thr Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ala 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 92 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 93 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 93 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser 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Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Thr Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 96 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 96 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 97 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 97 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asp Asn Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Asn Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 98 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 98 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 99 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 99 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Gly Ser Tyr His Met Asp Val Trp Gly Lys Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 100 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 100 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 101 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 101 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Gly Ser Tyr His Met Asp Val Trp Gly Lys Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 102 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 102 Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 103 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 103 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Gly Ser Tyr His Met Asp Val Trp Gly Lys Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 104 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 104 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Cys Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 105 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 105 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 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Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95 Arg Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 108 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 108 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 109 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 109 Gly Gly Pro Gly 1

Claims (26)

  1. 하기 화학식 I로 표시되는 항체 접합체, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물:
    Ab-(G) n
    화학식 I
    식 중,
    Ab는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDRH1), 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDRH2), 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDRH3), 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDRL1), 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDRL2) 및 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDRL3)을 포함하는 항-B7-H3 항체 또는 이의 항원-결합 단편이되;
    CDRH1은 서열번호 1, 7, 13, 19, 25, 31, 37 또는 43의 아미노산 서열을 포함하고;
    CDRH2는 서열번호 2, 8, 14, 20, 26, 32, 38 또는 44의 아미노산 서열을 포함하며;
    CDRH3은 서열번호 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39 또는 45의 아미노산 서열을 포함하고;
    CDRL1은 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40 또는 46의 아미노산 서열을 포함하며,
    CDRL2는 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41 또는 47의 아미노산 서열을 포함하고;
    CDRL3은 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42 또는 48의 아미노산 서열을 포함하며;
    각각의 G는 독립적으로 하나 이상의 활성제 및 링커를 포함하는 화학적 모이어티이되, 상기 링커는 Ab를 상기 활성제(들)에 연결하고; 그리고
    n은 1 내지 20의 정수이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 Ab는 서열번호 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79 또는 81의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95 또는 97의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄의 조합을 추가로 포함하는, 항체 접합체.
  3. 제1항에 있어서, 상기 Ab는 다음으로부터 선택되는 가변 중쇄 서열과 가변 경쇄 서열의 조합을 추가로 포함하는, 항체 접합체:
    (a) 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (b) 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (c) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (d) 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (e) 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄; 및
    (f) 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (g) 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (h) 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (i) 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (j) 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (k) 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (l) 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (m) 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (n) 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (o) 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄;
    (p) 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄; 및
    (q) 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄와 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항-B7-H3 항체는 AB1, AB2, AB3, AB4, AB5, AB6, AB7 또는 AB8인, 항체 접합체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 B7-H3는 인간 B7-H3인, 항체 접합체.
  6. 제1항에 있어서, 상기 Ab는 단일클론 항체, 도메인 항체(dAb), 단일쇄 항체(scAb), Fab 단편, F(ab')2 단편, 단일쇄 가변 단편(scFv), scFv-Fc 단편, 단일 도메인 중쇄 항체, 단일 도메인 경쇄 항체, 변이체 항체 또는 다량체 항체인, 항체 접합체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ab는 토끼, 마우스, 키메라, 인간화된 또는 완전 인간 단일클론 항체인, 항체 접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ab는 IgG 아이소타입인, 항체 접합체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ab는 IgG1 아이소타입인, 항체 접합체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Ab와 상기 활성제 사이의 상기 연결은 절단성인, 항체 접합체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, G는 하기 화학식 II로 표시되는, 항체 접합체:
    Figure pct00333

    식 중,
    각각의 Q는 독립적으로 헤테로원자, 바람직하게는 O 또는 N에 의해 L'에 연결된 활성제이고;
    Z'는 연결기이며;
    L'는 O, S 및 N, 바람직하게는 O 또는 N으로부터 선택된 헤테로원자를 통해 SO2에 부착된 스페이서 모이어티이며, L'와 SO2사이의 결합의 절단이 L'와 Q 사이의 결합의 절단을 촉진하여 활성제를 방출하도록 선택되고;
    X는 -O-, -C(Rb)2- 또는 -N(Rc)-, 바람직하게는 -O-이며;
    Ar은 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬과 같은 고리를 나타내며, 바람직하게는 아릴 또는 헤테로아릴이고;
    Y'는 -(CRb 2)yN(Ra)-, -(CRb 2)yO- 또는 -(CRb 2)yS-이고, y가 1인 경우 N, O 또는 S 원자가 TG에 부착되도록 위치하며;
    X 및 Y'는 Ar의 인접한 원자에 위치하고;
    TG는 활성화될 때 SO2와 반응하여 (Q)q-(L')w를 대체하고 X-SO2를 포함하는 5-6-원 고리를 형성할 수 있는 N, O 또는 S 원자 및 Ar의 개재 원자를 생성하는 촉발기(triggering group)이며;
    q는 1 내지 약 20, 바람직하게는 1 내지 약 10의 값을 갖는 정수이고;
    w, x 및 y는 각각 독립적으로 0 또는 1의 값을 갖는 정수이며;
    각각의 Ra 및 Rc는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬이고; 그리고
    각각의 Rb는 독립적으로 수소 또는 저급 알킬이거나; 또는
    2개의 Rb는 이들이 부착된 원자와 함께 3-5-원 고리, 바람직하게는 3-4-원 고리를 형성하되,
    단, w가 0일 때, q는 1이다.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, Ab-(G)n은 하기 화학식 (III)으로 표시되는 화합물 또는 이의 염인, 항체 접합체:
    Figure pct00334

    식 중,
    A는
    Figure pct00335
    ,
    Figure pct00336
    ,
    Figure pct00337
    ,
    Figure pct00338
    ,
    Figure pct00339
    ,
    Figure pct00340
    이고;
    M은 N, CR30 또는 C(-L-Q)이며;
    각각의 L은 스페이서 모이어티로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 Q는 활성제이며;
    X는 -Cl, -Br 및 -I로부터 선택되고;
    J는 Ab이며;
    R30 및 R31은 각각 독립적으로 전자 끄는 기, 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고;
    R42 및 R43은 각각 독립적으로 -OH, 알콕시, -NR44R45, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택되되, R44와 R45는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 아릴 또는 헤테로아릴 고리와 선택적으로 융합된 5-8-원 고리를 형성할 수 있으며;
    R32, R44 및 R45는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클릴, 헤테로사이클릴 및 할로알킬로부터 선택되고; 그리고
    n은 1 내지 4이다.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, Z'는 하기로부터 선택되는, 항체 접합체:
    Figure pct00341
    ,
    Figure pct00342
    ,
    Figure pct00343
    ,
    Figure pct00344
    ,
    Figure pct00345
    ,
    Figure pct00346
    ,
    Figure pct00347
    ,
    Figure pct00348
    ,
    Figure pct00349
    ,
    Figure pct00350
    ,
    Figure pct00351
    ,
    Figure pct00352
    ,
    Figure pct00353
    ,
    Figure pct00354
    ,
    Figure pct00355
    ,
    Figure pct00356
    ,
    Figure pct00357
    및
    Figure pct00358

    식 중,
    Rza는 H 또는 메틸이고;
    Rzb는 -OH, =O 또는 =NHOH이며;
    Figure pct00359
    는 단일 결합 또는 이중 결합이고;
    a"는 화학식 (II)의 Z'와 Ar 사이의 결합을 나타내며;
    b"는 Z'와 Ab 사이의 결합을 나타내고; 그리고
    Z"는,
    어느 한쪽 방향으로 배향된,
    Figure pct00360
    및
    Figure pct00361
    로부터 선택된다.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, G는 하기로부터 선택되는 모이어티를 포함하는, 항체 접합체:
    Figure pct00362
    ,
    Figure pct00363
    및
    Figure pct00364
    ,
    식 중,
    Q는 활성제이고, 그리고
    Figure pct00365
    는 Z'를 Ar에 연결하는 Z'의 단편이다.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, G는 하기로부터 선택되는 모이어티를 포함하는, 항체 접합체:
    Figure pct00366
    ,
    Figure pct00367
    ,
    Figure pct00368
    ,
    Figure pct00369
    ,
    Figure pct00370
    ,
    Figure pct00371
    ,
    Figure pct00372
    ,
    Figure pct00373
    ,
    Figure pct00374
    ,
    Figure pct00375
    ,
    Figure pct00376
    ,
    Figure pct00377
    ,
    Figure pct00378
    ,
    Figure pct00379
    ,
    Figure pct00380
    ,
    Figure pct00381
    ,
    Figure pct00382
    ,
    Figure pct00383
    ,
    Figure pct00384
    ,
    Figure pct00385
    ,
    Figure pct00386
    ,
    Figure pct00387
    ,
    Figure pct00388
    및
    Figure pct00389
    ,
    식 중,
    Figure pct00390
    는 Z'를 Ar에 연결하는 Z'의 단편이다.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 활성제는 화학치료제 및 독소로부터 선택되는, 항체 접합체.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 활성제는 화학치료제인, 항체 접합체.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 활성제는 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 항기생충제 또는 이들의 조합인, 항체 접합체.
  19. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 활성제는 하기로부터 선택되는, 항체 접합체:
    (a) 에를로티닙, 보르테조밉, 풀베스트란트, 수텐트, 레트로졸, 이마티닙 메실레이트, PTK787/ZK 222584, 옥살리플라틴, 5-플루오로우라실, 류코보린, 라파마이신, 라파티닙, 로나파닙, 소라페닙, 게피티닙, AG1478, AG1571, 티오테파, 사이클로포스파마이드, 뷰설판, 임프로설판, 피포설판, 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파, 우레도파, 에틸렌이민, 알트레타민, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포아마이드, 트라이에틸렌티오포스포라마이드, 트라이메틸올멜라민, 불라타신, 불라타시논, 캄프토테신, 토포테칸, 브리오스타틴, 칼리스타틴, CC-1065, 아도젤레신, 카르젤레신, 바이젤레신, 크립토피신 1, 크립토피신 8, 돌라스타틴, 듀오카르마이신, KW-2189, CB1-TM1, 엘류테로빈, 판크라티스타틴, 사르코딕틴, 스폰지스타틴, 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드, 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴, 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마 1, 칼리케아미신 오메가 1, 다이네미신, 다이네미신 A, 클로드로네이트, 에스페라미신, 네오카르지노스타틴 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 안트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르니노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루부신, 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 모폴리노-독소루비신, 사이아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루부신, 리포솜 독소루비신, 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토미그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신, 5-플루오로우라실, 데놉테린, 메토트렉세이트, 프테롭테린, 트라이메트렉세이트, 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티구아닌, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모퓨르, 사이타라빈, 다이데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피티오스테인, 테스토락톤, 아미노글루테티미드, 미토테인, 트릴로스테인, 폴린산, 아세글라톤, 알도포스파마이드 글리코시드, 아미노레불린산, 에닐우라실, 암사크린, 베스트라부실, 바이산트렌, 에다트락세이트, 데포파민, 데메콜신, 다이아지쿠온, 엘포르니틴, 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드, 갈륨 나이트레이트, 하이드록시우레아, 렌티난, 로니다이닌, 메이탄신, 안사미토신, 미토구아존, 미톡산트론, 모피단몰, 나이트라에린, 펜토스타틴, 페나메트, 피라루비신, 로속산트론, 2-에틸하이드라자이드, 프로카바진, 다당류-k, 라족세인, 리족신, 시조피란, 스피로저마늄, 테누아존산, 트라이아지쿠온, 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안귀딘, 우레탄, 빈데신, 다카르바진, 만노무스틴, 미토브로니톨, 미토락톨, 피포브로만, 가사이토신, 아라비노사이드, 사이클로포스파마이드, 티오테파, 파클리탁셀, 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형, 도세탁셀, 클로람부실, 젬시타빈, 6-티오구아닌, 머캅토퓨린, 시스플라틴, 카보플라틴, 빈블라스틴, 백금, 에토포시드, 이포스파마이드, 미톡산트론, 빈크리스틴, 비노렐빈, 노반트론, 테니포시드, 에다트렉세이트, 다우노마이신, 아미놉테린, 젤로다, 이반드로네이트, CPT-11, 토포아이소머레이스 저해제 RFS 2000, 다이플루오로메틸오르니틴, 레티노산, 카페시타빈 또는 임의의 전술한 것들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 산;
    (b) 모노카인, 림포카인, 전통적인 폴리펩타이드 호르몬, 부갑상선 호르몬, 티록신, 릴랙신, 프로릴랙신, 당단백질 호르몬, 여포 자극 호르몬, 갑상선 자극 호르몬, 황체형성 호르몬, 간 성장 인자 섬유아세포 성장 인자, 프로락틴, 태반 락토겐, 종양 괴사 인자-α, 종양 괴사 인자-β, 뮐러-저해 물질, 마우스 성선자극 호르몬-관련 펩타이드, 인히빈, 액티빈, 혈관 내피 성장 인자, 트롬보포이에틴, 에리트로포이에틴, 골 유도성 인자, 인터페론, 인터페론-α, 인터페론-β, 인터페론-γ, 콜로니 자극 인자("CSF"), 대식세포-CSF, 과립구-대식세포-CSF, 과립구-CSF, 인터류킨("IL"), IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, 종양 괴사 인자, TNF-α, TNF-β, 폴리펩타이드 인자, LIF, 키트 리간드 또는 임의의 전술한 것들의 조합;
    (c) 디프테리아 독소, 보툴리눔 독소, 파상풍 독소, 이질 독소, 콜레라 독소, 아마니틴, 아마니틴 유도체, α-아마니틴, 피롤로벤조다이아제핀, 피롤로벤조다이아제핀 유도체, 테트로도톡신, 브레베톡신, 시구아톡신, 리신, AM 독소, 아우리스타틴, 튜불리신, 겔다나마이신, 메이탄시노이드, 칼리케아미신, 다우노마이신, 독소루비신, 메토트렉세이트, 엑사테칸, 엑사테칸 유도체, 빈데신, SG2285, 돌라스타틴, 돌라스타틴 유사체, 크립토피신, 캄프토테신, 캄프토테신 유도체 및 대사산물, 리족신, 리족신 유도체, CC-1065, CC-1065 유사체 또는 유도체, 듀오카르마이신, 에네다이인 항생제, 에스페라미신, 에포틸론, 아조나피드, 아플리딘, 톡소이드 또는 임의의 전술한 것들의 조합;
    (d) 기질, 저해제, 자극제, 신경전달물질, 방사성 동위원소 또는 임의의 전술한 것들의 조합인 친화성 리간드;
    (e) 방사성 표지, 32P, 35S, 형광 염료, 전자 밀도 시약, 효소, 바이오틴, 스트렙타비딘, 다이곡시게닌, 합텐, 면역원성 단백질, 표적에 상보적인 서열을 갖는 핵산 분자 또는 임의의 전술한 것들의 조합;
    (f) 면역조절 화합물, 항암제, 항바이러스제, 항균제, 항진균제 및 항기생충제 또는 임의의 전술한 것들의 조합;
    (g) 타목시펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트라이옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 또는 토레미펜;
    (h) 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트, 엑스메스테인, 레트로졸 또는 아나스트로졸;
    (i) 플루타마이드, 닐루타마이드, 바이칼루타마이드, 류프롤라이드, 고세렐린 또는 트록사시타빈;
    (j) 아로마테이스 저해제;
    (k) 단백질 카이네이스 저해제;
    (l) 지질 카이네이스 저해제;
    (m) 안티센스 올리고뉴클레오타이드;
    (n) 리보자임;
    (o) 백신; 및
    (p) 항신생혈관제.
  20. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 활성제는 표 3 내지 표 5에 열거된 화합물, 아우리스타틴 F, PNU, α-아마니틴, Q-α-아마니틴, β-아마니틴, CBI 인돌, CBI 이량체, (CA4-CA4), (CA4-SN38), 펜판스타틴, 엑사테칸, dPBD, Q- dPBD, dTBD, Q-dTBD, adTBD, adTBD DMBA, dTBD 알킬 아민, dThBD, dThBD, Q-dThBD NaSO3, dImBD, Q-dFuBD 및 ImBD-TBD로부터 선택되는, 항체 접합체.
  21. 약제학적 조성물로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체 접합체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 치료학적 유효량의 화학치료제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
  23. 암을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체 접합체 또는 제21항 또는 제22항의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 암은 백혈병, 림프종, 유방암, 결장암, 난소암, 방광암, 전립선암, 신경교종, 폐암, 기관지암, 결장직장암, 췌장암, 식도암, 간암, 비뇨기 방광암, 신장암, 신우암, 구강암, 인두암, 자궁체부암 또는 흑색종으로부터 선택되는, 방법.
  25. 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체 접합체 또는 제21항 또는 제22항의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 자가면역 질환 또는 염증성 질환은 B-세포 매개성 자가면역 질환 또는 염증성 질환, 예를 들어, 전신 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus: SLE), 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis: RA), 특발성 혈소판감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenic purpura: ITP), 발덴스트롬 고감마글로불린혈증, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증(multiple sclerosis: MS) 또는 홍반성 신염으로부터 선택되는, 방법.
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