KR20230027322A - 암-표적화된 ｉｌ-12 면역요법 - Google Patents

암-표적화된 ｉｌ-12 면역요법 Download PDF

Info

Publication number
KR20230027322A
KR20230027322A KR1020237005155A KR20237005155A KR20230027322A KR 20230027322 A KR20230027322 A KR 20230027322A KR 1020237005155 A KR1020237005155 A KR 1020237005155A KR 20237005155 A KR20237005155 A KR 20237005155A KR 20230027322 A KR20230027322 A KR 20230027322A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
cancer
leu
tumor
cells
Prior art date
Application number
KR1020237005155A
Other languages
English (en)
Inventor
볼프강 슈트리트마터
루퍼트 한드그레팅거
카린 쉴바흐-슈튀클레
Original Assignee
메르크 파텐트 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메르크 파텐트 게엠베하 filed Critical 메르크 파텐트 게엠베하
Publication of KR20230027322A publication Critical patent/KR20230027322A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5434—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2046—IL-7
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/208—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/246—IL-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K2039/55527—Interleukins
    • A61K2039/55533—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K2039/55527—Interleukins
    • A61K2039/55538—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

본 발명은 암 면역요법에 관한 것이다. 본 발명은 구체적으로 근육, 뼈, 신경, 연골, 힘줄, 혈관 등의 암, 바람직하게는 육종을 앓는 암 환자에 대해 표적화된 IL-12 분자의, 바람직하게는 IL-2 및/또는 IL-7 와의 병용 투여에 의한 선천적 또는 후천적 항종양 면역력의 유도에 관한 것이다.
본 발명은 구체적으로는 상기 암 질환의 치료를 위해 연장되는 약동학을 나타내는, 바람직하게는 IL-2 및/또는 IL-7 의 형태와 조합되는, NHS-IL12 로 지칭되는 특이적 면역글로불린 싸이토카인 융합 단백질 형태의 IL-12 의 사용에 관한 것이다.

Description

암-표적화된 ＩＬ-12 면역요법 {CANCER-TARGETED IL-12 IMMUNOTHERAPY}
본 발명은 암 면역요법에 관한 것이다. 본 발명은 구체적으로는, 바람직하게는 IL-2 및/또는 IL-7 와 함께 표적화된 IL-12 분자를, 근육, 뼈, 신경, 연골, 힘줄, 혈관 등의 암, 바람직하게는 육종을 앓는 암 환자에 투여함으로써 개시되는 선천적 또는 후천적의 항종양 면역력의 유도에 관한 것이다.
본 발명은 구체적으로는, 상기 암 질환, 특히 육종의 치료를 위한 장기적으로 지속되는 약동학을 나타내는 IL-2 및/또는 IL-7 의 형태와 조합되어, NHS-IL12 로 지칭되는 특정한 면역글로불린 싸이토카인 융합 단백질의 형태인 IL-12 의 용도에 관한 것이다.
암 면역요법은 종양-특이적 모노클로날 항체 및 타 면역 시스템 구성요소의 '소극적' 투여, 종양 세포에 대한 특이적 T 세포-중재 면역 응답을 이끌어내거나 또는 증가시키기 위한 '능동적' 투여, 생체외 개질된 T 세포의 후천적 이동, 및 면역 조절제를 이용한 면역 응답성의 비-특이적 강화를 포함하는 여러가지 다양한 치료 접근법을 포함한다. 면역요법은 이미 광범위한 암의 관리에 주된 장점을 갖고 있으나, 이는 대개 모노클로날 항체를 이용하는 소극적 면역요법에 국한되어 있다. 암 면역요법의 분야는 복합적이며 빠르게 진화 중이다. 면역요법은 그들의 작용 메커니즘 뿐 아니라 제공되는 응답의 유형에 있어서 통상적인 화학요법과 상이하며, 통상적인 응답 기준은 면역치료제의 질병-변경 활성의 신뢰할 만한 평가를 제공하지 못할 수 있다. 다수의 능동적 면역요법은 다중적인 구성요소들을 포함한다 (예를 들어, 항원, 아쥬반트 및 전달 비히클). 나아가, 강건한 치료 활성은 일반적인 면역 응답성을 강화하고 종양이 면역관용원 환경을 촉진하는 면역억제 메커니즘을 회복시키는 것을 지향하는 타 면역조절 전략과의 조합을 필요로 한다는 점이 점점 증가하여 인식된다.
횡문근육종 (RMS) 은 소아에서 가장 보편적인 연조직 종양으로, 단계가 진행되면서 매우 좋지 않은 예후를 동반한다 (Oberlin 등, 2008, J. Clin. Oncol. 26 :2384-2389). 외과적인 절제술, 화학- 및 방사요법은 종종 다치기 쉬운 해부학적 부위에서의 종양 위치 및 만연의 경향성 때문에 실패하곤 한다. 따라서, 대안적인 치료 전략에 대해 충족되지 않는 높은 요구가 있다.
최근의 데이터는 RMS 를 포함하는 진행이 된 고형 종양에서 실현가능한 전략으로서 동종이계 줄기세포 이식 (alloSCT) 을 제안한다 (Koscielniak 등, 2005, J. Clin. Oncol. 23 :242-244). 하지만, 그러한 설정에서 종양 제어의 메커니즘은 별로 잘 설명되어 있지 않다. RMS 에 대한 세포독성 T- 및 천연 킬러 (NK)-세포 응답이 시험관내에서 생성될 수 있지만 (van den Broeke 등, 2006, Cancer Res. 66 :1818-1823), 면역 효과기 세포의 항종양 활성은 수많은 양상을 갖고 있다. 살상시, 인터페론-감마 (IFN-γ) 및 종양 괴사 인자 수용체 1 (TNFR1)-의존성 경로를 통한 조합된 신호전달은 종양 휴면을 결과로서 제공하여 (Muller-Hermelink, 등, 2008, Cancer Cell 13 :507-518), 그러한 싸이토카인들의 유도된 분비는 종양 성장을 국지적으로 제어하기 위해 중요한 경로일 수 있다. 물론, 몇가지 연구에서 alloSCT 후 IFN-γ 생산 T 세포의 빈도가 증가한 환자의 개선된 생존을 보여준 바 있다 (Wiegering 등, 2011, Cancer Immunol. Immunother. 60 :693-703). 이로써, CD4+ T 세포는 CD8+ CTL 만큼이나 중요할 수 있다.
상기 넷트워크에서 주된 참여자인 IL-12 은 종양 퇴행을 유도할 수 있고, 선천적 그리고 후천적 면역력에 영향을 준다 (예를 들어, Trinchieri,G. 2003, Nat. Rev. Immunol. 3 :133-146). T-세포 프라이밍에서의 그의 역할 이외에도, IL-12 는 TH17 세포를 TH1 표현형으로 되돌리고, M1 마크로파지 기능을 회복시키며, DC-NK 상호작용을 중재한다.
인터류킨-12 (IL-12) 는 식세포, B 세포 및 활성화된 수지상 세포를 포함하는 면역계의 다양한 세포에 의한 감염에 응답하여 생성되는 다면 발현성 전염증 싸이토카인이다 (Colombo and Trinchieri (2002), Cytokine & Growth Factor Reviews, 13: 155-168). IL-12 은 면역계의 선천적 및 후천적 부분의 상호작용을 중재하고, T-세포 및 천연 살상 (NK) 세포에 작용하고, 세포독성 림프구의 증식 및 활성 및 여타 염증 싸이토카인, 특히 인터페론-γ 의 생산을 강화함에 있어서 핵심적인 역할을 한다. IL-12 은 디설파이드 다리에 의해 공유결합으로 연결되어 생물학적 활성 74 kDa 이종이량체를 형성하는 α-사슬 (p35 서브유닛, IL-12p35) 및 β-사슬 (p40 서브유닛, IL-12p40) 로 이루어진 이종이량체 분자이다.
내생 IL-12 의 존재는 광범위한 병원체 뿐 아니라 이식되고 화학적으로 유도된 종양에 대한 면역학적 내성에 필요한 것으로 나타났다 (Gateley 등, (1998), Annu. Rev. Immunol., 16: 495-521). IL-12 는 IFN-γ 의 유도 및 CD8+ T-세포 및 NK 세포와 같은 효과기 세포의 활성화에 기초하여 강력한 항-종양 활성을 갖는 것으로 입증되었다 (Brunda 등, (1993), J. Exp. Med., 178: 1223-30). 높은 수준의 IFN-감마는 IL-12 에 대한 응답으로 T 세포 및 NK 세포에 의해 제공되어 [Kobayashi 등, 1989, J Exp Med;170:827-45], MHC 클래스 I 및 클래스 II 발현의 파라크린 상향조절을 통한 강화된 항원-제시를 유도한다 [Wallach 등, 1982 Nature 1982;299:833-69]. 그의 입증된 항-종양 활성의 결과, IL-12 은 신장암, 결장암, 난소암, 흑색종 및 T-세포 림프종을 포함하는 광범위한 암의 치료를 위한 면역치료제로서 (Atkins 등, (1997), Clin. Cancer Res., 3: 409-17; Gollob 등, (2000), Clin. Cancer Res., 6: 1678-92; 및 Hurteau 등, (2001), Gynecol. Oncol., 82: 7-10), 그리고 암 백신용 아쥬반트로서 인간 임상 시도에서 시험되었다 (Lee 등, (2001), J. Clin. Oncol. 19: 3836-47).
IL-12 의 전신 투여는 주로 일부 고형 종양에 대한 효능을 나타낸 바 있지만, 그의 투여량-제한 독성으로 인해 치료요법에서 그의 이용은 제한된다 (Gollob 등, 2000, Clin. Cancer Res. 6 :1678-1692). 초기 임상 개발의 십수년 후, 심각한 독성 및 rIL-12 에 대한 일반적으로 낮은 응답율의 기록된 사례들로 더이상의 그의 임상용 개발을 막게 되었다.
따라서, 종양 미세환경에 표적화된 IL-12 의 전달은 종양 면역요법에 대한 매우 유망한 접근법을 나타내는데, 이는 그것이 싸이토카인을 더욱 유효하고 덜 독성이 되도록 하기 때문이다. 따라서, 본 발명의 주된 사안은, 유효하며 무엇보다도 약물의 효율적 항종양 면역력을 이용함으로써 운용가능한 치료용 암-면역요법 접근법을 제공하는 것이다.
발명의 개요
IL-2 및 IL-12 와 같은 전염증 싸이토카인의 안전성을 개선하는 한가지 전략은, 종양-표적화 항체에 대한 융합을 통한 종양에 대한 그들의 전달을 지령하는 것이다. 그러한 항체-싸이토카인 융합 단백질, 또는 "면역싸이토카인" 은 선행기술에서 전임상 모델에서 항-종양 면역력을 강화하는 능력을 입증한 바 있다 (Gillies SD. In Lustgarten J, Cui Y, Li S, eds. Targeted Cancer Immune Therapy. New York, New York, USA: Springer; 2009:241-256). 면역싸이토카인 용인능을 최대화하기 위해, 비히클로서 선택된 항체는 반드시 종양에서만 독특하게 발견되는 항원에 특이적으로 결합하다. 괴사-회합 항원에 대한 항체는, 종양에서는 풍부하게 존재하나 정상 조직에서는 그렇지 않아, 매력적인 전달 접근법을 제공한다 (예를 들어, Epstein 등, 1988, Cancer Res 1988;48:5842-48).
종양 괴사 영역에 선택적으로 표적화하기 위한 DNA/히스톤-결합 항체의 능력은 전임상 및 임상에서 모두 연구가 꽤 되어 있다. 그러한 개념을 이용하여, NHS-IL12 로 지칭되는 괴사-표적화된 IL-12 면역싸이토카인이 2 인간 IL-12 이종이량체를 NHS76 항체의 중쇄의 C-말단에 유전자적으로 융합함으로써 조작된다 (WO 2000/001822). NHS76 은 DNA/히스톤에 결합하여 생체내 종양에 표적화하는 그의 특이적 능력에 대해 선택되는 전면적 인간 파지 디스플레이-유도 IgG1 항체이다 [Sharifi 등, 2001, Hybrid Hybridomics; 20: 305-12].
상기 기술된 표적화된 IL-12 약물을 투여함으로써 IL-12-구동 인간 면역계는 암 세포를 살상할 뿐 아니라, 예를 들어 암 세포에서의 노쇠 및/또는 분화를 유도해 암 성장을 약화시키는 대안적 메커니즘을 이용하여, 암 세포 또는 암 조직의 본래 세포 또는 조직으로의 차도를 유도하는 것으로 나타났다. 제안된 표적화된 IL12 요법은 특이적으로 TH1-유도되는 성장 정지 및 암 세포의 분화를 유발한다. 그러한 유효성은 표적화된 IL-12 가 면역 조절제, 예컨대 인터류킨, 예를 들어 IL-2 및 IL-7 과 함께 투여되거나 또는 조합되는 경우 특이적으로 증가된다.
본 발명에 따르면, IL-12 는 IL12- 융합 단백질, 바람직하게는 환자의 조직에 의해 발현되는 항원 또는 특이적 수용체 분자를 표적화할 수 있는 면역글로불린 및 IL-12 으로 이루어진 융합 단백질과 같은 결합되어 표적화된 형태로 이용되는데, 여기서 바람직하게는 면역글로불린의 C 말단이 면역싸이토카인의 N-말단에 연결되어 있다. 본 발명에 따르면, 종양-표적화된 IL-12 은 IL-12 에 연결되는, 치료적으로 유효한 모노클로날 항체 또는 그의 생물학적 활성 부분 (예컨대 Fab 단편, 또는 scFv) 이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 치료적으로 유효한 항체 또는 그의 표적화 부분이 종양 괴사에서 노출되는 DNA-히스톤 H1 복합체에 겨냥된다. 더욱 특이적인 구현예에서, 표적화된 IL-12 분자는 IL-12 및 상기에 기재되었고 하기에 더욱 상세히 기재되는 공지된 전면적 인간 IgG1 항체 NHS76 로 이루어진 각 융합 단백질이다.
본 발명에 따르면, 표적화된 IL-12 는 암 면역요법에 이용될 수 있다. 본 발명에 따르면, 표적화된 IL-12 는 암 면역 요법에 이용될 수 있으며, 여기서 암은 근육, 뼈, 신경, 연골, 힘줄, 혈관 등에 관련된 것이며, 바람직하게는 육종이고, 더욱 바람직하게는 횡문근육종 (RMS) 이다. 본 발명에 따르면, 표적화된 IL-12 는 단독요법에 또는 인터류킨, 인터페론, CpG, 케모카인 또는 글루칸과 같은 면역-조절제와 조합되어 이용될 수 있다.
본 발명의 특별한 구현예에 따르면, 면역 조절제는 IL-2 및/또는 IL-7, 바람직하게는 IL-2 이다. 더욱 특별하고 바람직한 구현예에서, 면역조절제는 IL-2 이다. 면역 조절제는 바람직하게는 더 큰 단백질 또는 면역글로불린 또는 그의 단편 (예컨대 Fab, scFv, Fc) 에 공유결합되어 있거나 또는 융합되어 있거나, 또는 면역글로불린과의 복합체이다. 본 발명의 한 구현예에서, IL-2 는 항체의 Fc 부분에 공유적으로 융합되어 있다. 본 발명의 추가 구현예에서, IL-2 는 항-IL2 항체에 복합체 형태로 결합되어 있다. 본 발명의 추가 구현예에서, IL-7 은 항체의 Fc 부분에 공유적으로 융합되어 있다.
따라서, 본 발명은 암 치료요법에 이용하기 위한 종양-표적화된 IL-12 에 관한 것이며, 여기서 약물은 환자에서 육종과 같은 암 질환 뿐 아니라 고형 종양에 대한 면역 응답을 유도 및/또는 자극하는데, 여기서 면역 응답의 상기 유도 또는 자극이 암 세포의 노쇠 및/또는 암 세포 또는 암 조직의 본래의 세포 또는 조직으로의 놀라운 차도를 개시하며, 여기서 종양-표적화된 IL-12 는 종양 괴사에 노출되어 있고, 바람직하게는 그의 C-말단을 통해 IL-12 에, 바람직하게는 IL-12 의 p35 서브유닛에 융합되어 있는 인간 DNA-히스톤 H1 복합체에 겨냥되는 치료 유효성인 모노클로날 항체 또는 그의 생물학적 활성 부분이다.
본 발명은 나아가 상기 암 질환을 앓는 환자에서 암 질환에 대한 면역 응답을 유도 및/또는 자극하기 위한 인터류킨, 인터페론 또는 케모카인과 같은 면역 조절 및/또는 면역 보완제를 이용한 병용 치료에 사용하기 위한 종양-표적화된 IL-12 에 대한 것이며, 여기서 상기 유도 또는 자극이 암 세포의 노쇠 및 암 세포 또는 암 조직의 본래 세포 또는 조직으로의 차도를 유발하며, 상기 종양-표적화된 IL-12 는 종양 괴사에 노출되며, 그의 C-말단을 통해 IL-12 에 융합되어 있는 인간 DNA-히스톤 H1 복합체에 겨냥되는, 치료 유효 모노클로날 항체 또는 그의 생물학적 활성 부분이다.
본 발명에 따르면, 상기 종양-표적화된 IL-12 치료요법은, 바람직하게는 상기 표적화된 IL-12 치료요법에 의해 촉발되는 환자의 면역 시스템의 상기 자극 또는 유도에 후속하여 증가되는 내생 IFNy 및/또는 TNF 의 증가된 생산에 의해 생성되는 암 세포 노쇠를 유발하기에 유용하다. 본 발명에 따른 상기 치료에 의해 암 세포의 노쇠가 안정한 성장 정지를 결과로서 제공하는 것으로 나타났다. 나아가, 암 세포의 노쇠 및 조직 차도는 NK-세포 및 마크로파지가 IL-12 에 의해 촉발되기는 하지만 그들의 생성 및 활성화와 같은 직접적인 면역 특이적 세포독성 효과와는 독립적인 것으로 나타났다.
본 발명에 따르면, 종양-표적화된 IL-12 치료요법은 암 면역요법에서 유용한데, 여기서 암 질환은 고형 종양 또는 근육, 뼈, 신경, 연골, 힘줄, 혈관 및 지방 또는 섬유 조직의 종양과 관련되어 있다. 본 발명의 특별한 구현예에서, 치료요법은 육종, 바람직하게는 횡문근육종 (RMS) 의 치료에 유용하다.
상기 및 하기에 기재한 바와 같은 NHS-IL12 및 IL-2 또는 IL-7 이 조합되어 사용되는 제안된 암 면역요법은 암 세포의 노쇠를 유발할 뿐 아니라, 추가로 근원성 분화의 유발 및 암 세포의 본래 조직 세포로의 차도를 개시하여, IL-12-구동성 인간 면역 시스템은 암 세포를 살상할 뿐 아니라 암 성장을 약화시키는 대안적인 메커니즘을 이용한다는 것을 나타내는 것이 발견되었다. 종양-표적화된 IL-12 은 적어도 완전히 인간화된 동종이계 면역계로 재건된 NSG 마우스에서 암 성장을 유의하게 방해한다.
본 발명에 따르면, IL-2 및 IL-7 는 모두 단독으로는 종양 성장을 막거나 또는 유효한 항-종양 면역 응답성을 유도하지 않는다. IL-12 를 이용한 동종이계 인간 면역계의 자극은 인간화된 마우스에서 종양 성장을 효율적으로 제어하기 위해 필요하다. 그러한 맥락에서 더욱 효율적인 것은, IL-2 또는 IL-7 가 체내 그들의 반감기가 증가되도록 하는 형태일 때 무엇보다도 NHS-IL12 및 IL-2 또는 IL-7 의 조합이다. 한 구현예에서, IL-2 또는 IL-7 가 면역글로불린에 커플링되어 있거나 또는 결합되어 있으며, 바람직하게는 IL-2 또는 IL-7 이 면역글로불린의 Fc 단편의 C-말단에 융합되어 있다. 또다른 구현예에서, IL-2 은 항-IL2 항체, 예컨대 MAb602 와 복합체를 형성한다.
NHS-IL12/ILMAB602 조합은 전반적인 생존 및 줄어드는 종양 부피와 관련하여 유의한 우월성을 나타낸다. 조직학에서는 IL-12 가 NK 세포 또는 CD68+ 마크로파지에 의한 암 침윤에 필요한 것은 아님을 제안한다. 극명히 대조적으로, 본 발명에 따른 IL-12 구축물은 마크로파지를, 효과기 분자 및 염증 싸이토카인 (TNF, IL-12, IL-6, IL-1β) 을 효율적으로 생산하는 MHC-클래스-II-발현 M1-타입으로 구동하기 위해 필요하다.
본 발명에 따른 데이터는 IL-12 이, 동종이계 면역 시스템이 암 세포, 예컨대 근육, 뼈, 신경, 연골, 힘줄, 혈관 및 지방 또는 섬유 조직의 암 세포, 바람직하게는 적어도 사용되는 그러한 특별한 시스템에서의 RMS 세포를 살상하도록 부추긴다는 제안을 이끌어낼 수 있다. 흥미롭게도, 면역조직학에서는 암 세포 살상, 아폽토시스 또는 괴사에 대한 증거를 나타내지 않아, 바람직하게는 결합되거나 또는 복합체의 형태로 IL-2 또는 IL-7 와 조합된 표적화된 IL-12 암 면역요법이 살상과는 독립적인 암 제어의 중요한 메커니즘을 구동함을 제안한다. 그러나, 가장 중요한 점은, 본 발명에 따른 표적화된 IL-12 치료요법의 투여에 의한 암 성장-중단이 입체상 교차-선형 배치 (steric cross-striated configuration) 로 근육-특이적 단백질이며, 심근, 골격근 및 평활근에서의 중간 섬유의 중요 서브유닛인 데스민의 새로운 발현을 출발시킨다는 점이다. 특별하게는, 선형으로 데스민이 존재한다는 것은 근육 세포에서의 분화 정도가 높음을 가리킨다 (van,d., V, Schaart, 등, 1992, Cell Tissue Res. 270:189-1981).
요약하면, 본 발명자들에 의해 제공되는 데이터는 우선 TH1-유도성 성장 중단 및 암 세포의 분화에 대한 생체내 증거이다. 이는, 바람직하게는 IL-2 또는 IL-7 와 조합된 IL-12 의 종양 미세환경으로의 표적화된 전달 및 후속하는 p16INK4a 경로의 활성화에 의해 달성될 수 있다.
구체적으로, 본 발명은 이하의 발명을 포함한다.
[1] 환자에서 암 질환에 대항하는 면역 응답성을 유도 및/또는 자극함에 의한 암 치료요법에 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12 로서,
여기서 상기 유도 및 자극이 상기 약물에 의해 유발되는:
(i) 암 세포의 노쇠, 및/또는
(ii) 암 세포 또는 암 조직의 본래 세포 또는 조직으로의 차도
를 개시하고,
종양-표적화 IL12 이 종양 괴사에 노출되는 인간 DNA-히스톤 H1 복합체에 겨냥되며, 그의 C-말단을 통해 IL12 에 융합되는 치료 유효성 모노클로날 항체 또는 그의 생물학적 활성 부분인, 종양-표적화된 IL12.
[2] 암 질환을 앓는 환자에서 상기 암 질환에 대한 면역 응답을 유도 및/또는 자극하기 위한 면역 조절제 및/또는 면역 보완제와의 병용 치료에 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12 로서, 상기 유도 또는 자극이 상기 약물에 의해 유발되는:
(i) 암 세포의 노쇠 또는 성장 중단, 및/또는
(ii) 암 세포 또는 암 조직의 본래 세포 또는 조직으로의 차도,
를 유발하고,
종양-표적화된 IL12 이 종양 괴사에 노출되는 인간 DNA-히스톤 H1 복합체에 겨냥되며, 그의 C-말단을 통해 IL12 에 융합되는 치료 유효성 모노클로날 항체 또는 그의 생물학적 활성 부분인, 종양-표적화된 IL12.
[3] [2] 에 있어서, 면역 조절제 및/또는 면역 보완제가 인터류킨 패밀리로부터 선택되는 싸이토카인인, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[4] [3] 에 있어서, 싸이토카인이 IL-2 및/또는 IL-7 또는 그의 유도체인, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL-12.
[5] [4] 에 있어서, IL-2 및 IL-7 이 네이키드 형태, 공유결합으로 결합된 형태 또는 복합체 형태로 이용되는, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[6] [5] 에 있어서, 상기 IL-2 또는 IL-7 이 면역글로불린 중쇄 또는 그의 일부분, 예를 들어 Fc 부분에 공유결합으로 융합되어 있거나, 또는 항-IL2 항체와 복합체를 형성하는, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[7] [1] 내지 [6] 중 어느 하나에 있어서, 상기 암 세포 노쇠가 상기 약물에 의해 촉발되는 환자의 면역계의 상기 자극 또는 유도에 후속하여 내생 IFNy 및/또는 TNF 의 생성에 의해 유발되는, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[8] [1] 내지 [7] 중 어느 하나에 있어서, 암 세포의 노쇠가 안정한 성장 중단을 초래하는, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[9] [1] 내지 [8] 중 어느 하나에 있어서, 암 세포의 노쇠가 직접적인 면역 특이적 세포독성 효과와 독립적인, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[10] [1] 내지 [9] 중 어느 하나에 있어서, 암 질환이 고형 종양 또는 근육, 뼈, 신경, 연골, 힘줄, 혈관 및 지방 또는 섬유 조직의 종양과 관련된 것인, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[11] [10] 에 있어서, 암이 육종인, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[12] [10] 또는 [11] 에 있어서, 치료요법이 근원성 분화의 유도를 개시하는, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[13] [1] 내지 [12] 중 어느 하나에 있어서, 방사요법 또는 방사-화학요법과 조합되는, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[14] [1] 내지 [13] 중 어느 하나에 있어서, IL-12 이 그의 p40 및/또는 p30 서브유닛의 N-말단을 통해 항체 또는 그의 생물학적 유효 부분의 C-말단에 융합되는, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[15] [1] 내지 [14] 중 어느 하나에 있어서, 항체가 전면적 인간 NHS76 항체이고, NHS-IL12 로 명명되는, 사용되기 위한 종양-표적화된 IL12.
[16] 하기의 것을 포함하는 약제학적 키트:
(i) 종양 괴사에 노출되며, 그의 C-말단을 통해 IL12 의 p40 및/또는 p30 서브유닛의 N-말단으로 융합되는 인간 DNA-히스톤 H1 복합체에 겨냥되는 전면적 인간 모노클로날 항체 NHS76 를 포함하는 제 1 패키지, 및
(ii) 암 질환에 대한 면역 응답성을 유도 및/또는 자극하기 위한 면역 조절 및/또는 면역 보완제를 포함하는 제 2 패키지.
[17] [16] 에 있어서, 면역 조절제가 싸이토카인인 약제학적 키트.
[18] [17] 에 있어서, 면역 조절 싸이토카인이 네이키드 형태, 공유결합으로 결합된 형태 또는 복합체 형태인 IL-2 또는 IL-7 인 약제학적 키트.
상세한 설명
용어 "노쇠" 는 본 발명에 따르면 암 세포의 수명을 제한하고, 비제한적 세포 급증을 방지하는 성장-중단 프로그램을 의미한다.
용어 "직접적인 면역 특이적 세포독성 유효성" 은 본 발명에 따르면 면역 응답 동안의 NK 세포 마크로파지, T-세포독성 세포 또는 수지상 세포와 같은 면역 특이적 세포독성 세포의 능동적인 관여 및 작용을 의미한다.
용어 "암 면역요법" 은 본 발명에 따르면 면역 응답성을 유도, 강화 또는 억제함으로써 암과 싸우는 면역계의 능력을 자극하거나 또는 회복시키는 치료적인 처치를 의미한다. 암 면역요법은 표적의 면역 세포 인식을 증가시키거나 또는 질환-관련 면역 억제를 감소시켜 질환-특이적 항원에 대한 표적화된 면역 활성을 결과로서 제공하게 된다.
본 발명에 따르면, 상기 및 하기에 상세하게 기술된 바와 같이 결합, 융합 또는 복합체화된 형태로 NHS-IL12 와 같은 표적화된 IL-12 의 투여를, IL-2 또는 IL-7, 바람직하게는 IL-2 및 IL-7 와 조합하는 것이 본 발명에 바람직하다. 병용-투여는 동시에 또는 순차적으로 실시될 수 있는데, 후자의 경우 면역조절제는 NHS-IL12 와 같은 표적화된 IL-12 분자의 투여 이전 또는 이후 수시간 또는 수일에 특별한 투여량 및 시간 투약 계획에 따라 투여될 수 있다.
본 발명에 따르면, NHS-IL12 와 같은 표적화된 IL-12 의 투여를 방사요법 및/또는 화학요법과 조합하는 것이 원칙적으로 가능하다.
본 발명에 따른 상기 언급된 표적화된 IL-12 융합 분자와의 조합에 이용되는 화학요법제는 예를 들어 메토트렉세이트, 빈크리스틴, 아드리아마이신, 시스플라틴, 무가당 클로로에틸니트로소우레아, 5-플루오로우라실, 미토마이신 C, 블레오마이신, 독소루비신, 다카르바진, 택솔, 프라글린, 메글라민 GLA, 발루비신, 카르무스테인, UFT(테가푸르/우라실), ZD 9331, 택소테레/데세택셀, 플루오로우라실 (5-FU), 빈블라스틴, 및 해당 클래스의 여타 널리 공지된 화합물들일 수 있다. 화학요법제는 본 발명에 따르면 2 회 이상의 순환, 바람직하게는 2 내지 8 회 순환, 더욱 바람직하게는 2 내지 5 회 순환으로 적용된다. 1 회 순환은 21 내지 35 일, 바람직하게는 21 내지 28 일 사이이다. 화학요법제의 투여량 요법은 다양한 가능한 환자- 및 약물-관련 조건 및 특성에 좌우된다.
방사요법은 본 발명에 따르면 표준 조사에 의해 실시되는데, 여기서 총 40 내지 120 Gy 가 적용되며, 바람직하게는 50 Gy 이상, 더욱 바람직하게는 50 내지 75 Gy 가 적용된다. 조사 치료요법은 일반적으로 분할되는데, 여기서 4 일 이상, 바람직하게는 5 내지 7 일 동안 차례차례 매일 1.5 내지 3.5 Gy 이 적용된다. 전체 조사량이 본 발명에 따르면 21 내지 35 일 이내에, 바람직하게는 28 일 이내에 적용된다. 필요에 따라 또는 선호도에 따라, 조사 개시시에 또는 중간 간격에 3.5 내지 15 Gy, 바람직하게는 5 내지 10 Gy 의 부양 투여가 적용된다. 방사요법은 본 발명에 따르면, 임의로는 본 발명의 면역 조절제와 조합한 IL-12 분자 투여 이전에 또는 이후에 또는 동시에 실시된다.
화학-방사요법 처치에는 면역계를 조절할 수 있는 약제의 투여가 동반될 수 있다. 예를 들어, 비교적 저용량의 100 내지 400 mg/m2, 바람직하게는 250 mg/m2 의 시클로포스파미드를 적용하여, 환자의 면역계가 활성화되거나 또는 강화될 수 있다. 일반적으로, 백신접종 개시 전 보통 1 내지 5 일, 바람직하게는 2 내지 5 일 단일 투여량이 유효성 면에서 충분하다.
본 발명에 따른 바람직한 표적화된 IL-12 는 상기 기재된 바와 같이 NHS-IL12 이다. 상기 언급된 바와 같이, IL-12 은 디설파이드 다리결합에 의해 공유결합으로 연결되어 있는 α-사슬 (p35 서브유닛, IL-12p35) 및 β-사슬 (p40 서브유닛, IL-12p40) 으로 이루어진 이종이량체 분자이다. 본 발명의 융합 단백질 내에서는 p35 서브유닛이 (이량체) 항체 NHS76 의 2 개 중쇄 각각의 C-말단에 연결되어 있다. p40 서브유닛이 공유결합 연결에 의해 p35 서브유닛에 연결되어 있다. 실제는 융합 단백질로서 중쇄 및 p35 서브유닛 및 별도로 p40 서브유닛을 발현하는 DNA 구축물을 이용하는 재조합 방법에 의해 분자가 제조되며, 이는 기재된 바와 같이 발현되는 NHS-p35 서브유닛 융합체에 현장에서 결합한다.
SEQ ID NO.1 은 성숙형 (야생형) 인간 IL-12 의 α 사슬, 즉 인간 p35 서브유닛의 성숙형 아미노산 서열을 제공한다:
Figure pat00001
SEQ ID NO. 2 은 성숙형 (야생형) 인간 IL-12 의 β 사슬, 즉 인간 p40 서브유닛의 성숙형 아미노산 서열을 제공한다:
Figure pat00002
SEQ ID NO. 3 은 신호 서열 (이탤릭체, 처음의 19 aa), 가변 도메인 (밑줄), 및 탈-면역화 L103V 돌연변이 (진한 글자) 를 포함하는 본 발명에 따라 사용되고 개질된 Mab NHS 의 람다 경쇄의 아미노산 서열을 제공한다:
Figure pat00003
SEQ ID NO. 4 은 신호 서열 (이탤릭체, 처음 19 aa), 가변 도메인 (밑줄), 및 hu p35 의 첫번째 아미노산의 R 에서 A 로의 치환 (진한 글자), hu p35 (밑줄 및 이탤릭체) 를 포함하는 중쇄/인간 p35 융합체의 아미노산 서열을 제공한다. 신호 서열은 성숙형 폴리펩티드 사슬의 일부분이 아니다:
Figure pat00004
SEQ ID NO. 5 는 신호 서열 (이탤릭체) 및 진하게 표시된 변이 서열 (KSKREKKDRV 를 KDNTEGRV 로 돌연변이화) 을 가진 인간 p40 의 아미노산 서열을 제공한다. 신호 서열은 성숙형 폴리펩티드 사슬의 일부분이 아니다:
Figure pat00005
NSG 마우스에서의 완전 기능 면역계의 확립
인간 계에서 생체내에서의 NHS-IL12 구축물의 독성 및 잠재적 치료 효능을 시험하기 위해, NSG 마우스에 huCD34+ 줄기 세포를 이식하고, FcIL-7 를 이용해 생착을 자극했다 (도 1A). 순도가 99.9% 를 초과하는 huCD34+ 세포의 NSG 마우스로의 이식은 12 주 이내에 전부 조혈 계통을 확립했다. 추가로, 복합체 T-세포 수용체 (TCR) 레퍼토리가 골수, 흉선 및 비장 및 흉선 등가물에서 발견되었다. 이와 함께, 데이터는 이식된 마우스에서 인간 생체내 상황과 매우 흡사한 인간 T-세포 면역계가 발생했음을 보여준다. 마우스는 또한 수용자의 NK 레퍼토리를 반영하는 NKp 수용체 및 킬러-세포 면역글로불린-형 수용체 (KIR) 로 제시되는 바와 같이 정상적 NK 세포도 발생시켰다.
종양 접종
줄기 세포 이식 후 12 주째에 1×106 동종이계 A204 세포의 피하 접종은 3 주 이내 모든 마우스에서 적극적으로 성장하는 종양을 초래했다. 환자의 RMS 를 이용한 줄기 세포 이식 (SCT) 을 한 계통에서, 면역계는 동종이계 A204 를 거부함에 있어 실패했다. 표면 HLA 클래스 I 및 II, MICA/B, Nectin-2 (CD112) 및 폴리오바이러스 수용체 (PVR, CD155) 의 공고한 발현에도 불구하고 종양이 신속히 성장했지만, UL16-결합 단백질 (ULBP) 1-4 은 전적으로 결핍되었다.
히스톤-표적화된 IL-12 융합 단백질을 이용한 육종 치료요법
종양 접종에 후속하여, 고형 A204 RMS 종양을 3 주 후에 확립했다. 후속하여, 마우스를 5 주 동안 FcIL-7 단독으로 (대조군), NHS-IL12/FcIL-7 또는 NHS-IL12/IL-2MAB602 로 매주 처리했다 (도 1A). 구축물의 정맥내 주사는 급성으로든 경시적으로든 육안으로 확인되는 전신 독성을 유발하지 않았다 (도 1B: 4 마리의 마우스/코호트, 100 일). FcIL-7 만을 처리한 마우스에서, 육종이 지수적 성장을 나타냈다. 7 마리 중 4 마리는 5 주 이전에 폐사했고, 3 마리는 52 일째에 육종 부담으로 인해 종점 기준에 도달했다 (도 1C). Fc-IL7 군에서, 6.5-배 종양 성장이 제 25 일 내지 제 52 일에서 관찰된 반면, NHS-IL12/IL-2MAB602 에서는 성장이 1.8-배 감소되었다 (P<0.05, 한쪽꼬리 t-테스트). 따라서, 육종은 NHS-IL12/IL-2MAB602 를 수용한 마우스 (n=11) 에서 현저히 성장-중단된 채 있어 (도 1C), 마우스가 전부 생존하는 결과를 제공했다 (도 1B 및 1D). NHS-IL12/FcIL-7 는 11 마리 중 2 마리의 마우스만을 오직 단기간 동안에만 보호했는데 (도 1B 및 1C), 그들은 각각 제 43 일 및 제 49 일에 폐사했다. 모든 3 개 군을 분석하기 위해, 마우스를 제 52 일에 희생시키고 (단기 처리), NHS-IL12 처리 군마다 4 마리씩만은 예외로 하여, 살아있게 하여 제 100 일째까지 치료요법을 수용하도록 했다 (장기간 처리). NHS-IL12/FcIL-7 장기간 처리는 4 마리 중 1 마리에서 종양 성장을 성공적으로 중단시켰고, 4 마리 중 2 마리에서는 종양 성장을 지연시켰으며, 1 마리에서는 종양을 제거했다. NHS-IL12/IL-2MAB602 장기간 처리는 4 마리 중 3 마리의 마우스에서 종양을 제거했고, 나머지 마우스에서는 종양 성장을 중단시켰다 (도 1D).
NHS-IL12 구축물의 생물학적 분배
모노클로날 항체 NHS76 는 괴사성 암 영역에서 세포내 항원을 인식한다. 따라서, NHS-IL12 가 육종의 부위에 선호하여 결합하는지 여부를 분석했다. 123I-표지된 NHS-IL12 를 이용한 SPECT/CT 생물학적 분배 연구는 육종 미세환경 내부에서의 NHS-IL12 의 유의한 생체내 풍부화를 밝혀냈다 (도 2A). 123I-표지된 NHS-IL12 의 정량은 반대쪽 근육에 비해 종양에서의 4- 내지 6-배 방사핵종 풍부화를 나타냈다. 123I 카운트는 정맥내 NHS-IL12 적용 후 26 시간에 종양 영역에서 정점을 나타낸 반면, 일반적인 근육 조직에서는 123I 카운트가 경시적으로 안정하게 남아 있어서 (도 2B), NHS-IL12 이 인간 육종에 선호하여 결합되어 있음을 확인했다.
종양-특이적 면역 응답성
상이한 치료 프로토콜의 치료 효능에 있어서의 차이를 이해하기 위해, 본 발명의 발명자들은 인간 면역 세포 침윤성 A204 육종의 조직학, 면역조직화학 (IHC) 및 집중적인 분자 및 기능 특징분석을 실시했다.
현저하게, FcIL-7-처리 마우스의 육종은 독보적으로 마크로파지 (CD68+) 및 NK 세포 (CD56+) 를 포함하는 미량의 침윤을 갖고 있었다. 확연히 대조적으로, NHS-IL12 투약계획으로 치료한 마우스의 육종은 NK 세포, 마크로파지 및 다수의 CD4+ 및 CD8+ T 세포가 있는 밀집된 단핵 침윤을 나타냈다. 모든 처리 군의 NK 세포들은 NKG2D mRNA 및 DNAM-1 (도 3A), 육종-회합된 표면 분자 넥틴-2 에 대한 리간드 (CD112) 및 PVR (CD155) 를 발현했다. NK-세포 분화 및 활성화를 조종하는 표면 분자의 mRNA 발현은 엄격하게 NHS-IL12 구축물을 필요로 했다. 이어서, FcIL-7 또는 IL-2MAB602 이 침윤 NK-세포 모집단에 대한 NHS-IL12 구축물의 영향을 조절했다. NKG2E, NKp44 및 NKp46 은 NHS-IL12/FcIL-7 를 처리한 마우스의 종양에서만 발견된 반면, NKp30 발현은 NHS-IL12/IL-2MAB602-처리 및 NHS-IL12/FcIL-7 장기간 처리 마우스의 육종에 제한되었다 (도 3A). FcIL-7-처리 마우스의 육종은 CD161 (도 3B) 및 TH17-마스터 전사 인자 RORC (도 4A) 를 강력하게 발현하여 IL-17-제공 표현형을 특징지었다 (Billerbeck 등, (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107:3006-11). 명백히 대조적으로, NHS-IL12/FcIL-7-처리 마우스는 강력한 CD161 발현 (도 4B) 은 있지만, RORC 발현이 현저히 더 낮아 (도 4A), 효과기 및 중심 메모리 T 세포가 높은 수준의 IFN-γ 및 TNF 를 분비하나, 용균 활성은 결핍되어 있음을 특징지었다 (Takahashi 등, (2006) J. Immunol 176:211-216). NHS-IL12/IL-2MAB602 를 처리한 마우스에서는 CD161 mRNA (도 3B) 및 RORC mRNA (도 4A) 가 없어서, IL-17-제공 NK- 또는 T-세포 표현형이 그러한 마우스에서는 억제됨을 강력하게 시사했다 (Laurence 등, (2007) Immunity 26:371-381; Ghoreschi 등, (2010) Nature 467:967-971).
KIR 분자는 MHC-I-결핍 환경에서 조차 NK-세포 기능을 악화시키기 때문에 (27), FcIL-7- 또는 NHS-IL12/FcIL-7-처리 마우스의 육종에서의 KIR 발현을 분석했다. 전체 육종의 qRT-PCR 은 두 그룹 모두에서 유사한 수준을 밝혀냈다. 예상했던 바와 같이, 마우스 근육이 KIR2DL3 및 KIR2DL4 를 나타낸 반면, 인간 육종은 KIR2DL1 및 KIR3DL1 를 추가로 나타내므로, NK 세포에 귀소하는 정상 마우스 근육 조직 및 인간 육종 이종이식의 림프구 침윤 종양의 KIR-발현은 상이하다. 다양한 KIR 의 발현에도 불구하고, 육종 조직으로부터 새롭게 단리된 NK 세포들이 NHS-IL12 를 이용한 시험관내 자극 후에 IFN-γ 를 방출하기 때문에 NK 세포는 기능성으로 남아 있었다. NK 세포 이외에도, NHS-IL12/FcIL-7 를 처리한 마우스의 육종에서만 거의 독보적으로 TCRVα24-발현 iNKT 세포, NKp46+ NK 또는 γδT 세포와 마찬가지로 TH17 선천적 림프구 모집단을 특징짓는 mRNA 발현이 발견되었다 (도 3A, 3C, 3D).
모든 NHS-IL12-처리된 코호트의 종양은, 선천적 림프구 모집단 이외에도, 광범위한 CD3+ T 세포를 나타냈다 (도 4B 및 4C). 그들은 Vβ 분광형 분석에서 드문 신호를 나타내고 (도 4B 및 4C), 침습형 CD8+ T 세포를 나타내지 않는 FcIL-7 를 처리한 마우스의 육종에는 부재했다. NHS-IL12-처리 육종은 다양한 Vβ-패밀리 내에서의 올리고클로날 또는 모노클로날 정점에 의해 입증되는 (도 4C) 광범위한 TCR 레퍼토리를 나타내는데, 이는 제한된 T-세포 클론의 우선적인 확장 동안 일어난다. CDR3 영역의 클로닝 및 서열분석은 정점이 NHS-IL12/FcIL-7 코호트의 모든 개체에서의 TRBV29-1, 또는 NHS-IL12/IL-2MAB602 코호트에서의 TRBV5-5 및 TRBV18 과 같은, 두 처리 군에서의 강력하게 증폭된 TRBV 분절이 있는 제한된 수의 상이한 T-세포 클론을 포함한다는 것을 확인해 준다 (도 4B 및 4C). IFN-γ 및 IL-17 를 각각 조절하는 전사 인자 T-bet 및 RORC 의 상대적 발현이 각 코호트의 종양 침습 림프구에서의 TH1 바이어스 정도를 반영한다. T-bet/RORC 비율이 FcIL-7 만을 수용한 코호트에서는 0.05 미만인 반면, Fc-IL7 또는 IL-2MAB602 와 함께 NHS-IL12 를 수용한 마우스에서는 19-배 (0.8) 및 44-배 (2.2) 더 높았다 (도 4D). T-bet/RORC 발현과 함께, Foxp3 은 두 NHS-IL12 군에서 모두 FcIL-7 만을 제공한 코호트에서보다 약 10-배 더 낮았다 (도 4A). 따라서, 낮은 Foxp3 발현은 T-세포 활성화 마커 CD40L 의 강력한 발현과는 역의 상관관계가 있었다 (도 4A 및 4D).
NHS-IL12-처리 육종에서의 노쇠-유도
NHS-IL12 구축물은 모든 처리 마우스에서 육종 발생을 강력하게 억제했다 (도 1). 놀랍게도, NHS-IL12/IL-2MAB602-군의 유일한 육종은 다량의 퍼포린 단백질 및 그랜자임 K mRNA (도 4A) 을 포함하는 반면, NHS-IL12/FcIL-7 를 처리한 마우스에서는 퍼포린 단백질이 실질적으로 없었으며, 낮은 수준의 그랜자임 mRNA 를 발현했다 (도 4A). 이는 육종-제어 면역 응답성이 세포 용해와는 상이한 메커니즘을 포함한다는 것을 강력하게 시사한다. 나아가, 육종은 충분한 갯수의 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 포함하지 않아서, 살상 또는 아폽토시스에 의한 암 제어를 설명하게 된다. .
따라서, 세포 핵 항원 (PCNA) 및 Ki67 을 증식시키는 증식 마커에 의해 결정되는 바와 같이 육종 세포 증식에 대한 면역 응답성의 유효성을 분석했다. 신속하게 성장하는 FcIL-7-대조군 종양에서, 50% 의 육종 세포가 PCNA 또는 Ki67 에 대해 양성으로 염색되어, 대부분의 세포가 증식 중임을 나타냈다 (도 5A 및 5B). NHS-IL12-처리된 군에서, PCNA- (도 5A) 및 Ki67- 염색된 육종 세포 모두 FcIL-7-대조군 (도 5A 및 5B) 에서보다 현저히 더 낮았다. 면역 응답성이 세포 순환을 단지 중단시킨 것인지 또는 싸이토카인-유도성 노쇠에서 나타나는 바와 같이 안정한 성장 중단을 유도한 것인지 여부를 결정하기 위해, 육종을 1 개의 증식 마커 및, 노쇠-연관성 포스포릴화 이질 염색질 단백질 1 중 하나 (p-HP1γ 또는 p16INK4a, 세포 순환 조절자 싸이클린-의존성 키나아제 저해제 2A (CDKN2A) 로도 공지됨)에 대해 이중 염색했다. FcIL-7 만을 처리한 육종은 높은 PCNA/Ki67 발현을 나타냈고, 동시에 매우 낮은 p16INK4a/핵 p-HP-1γ 의 발현을 나타내어, 그러한 육종 세포들이 신속히 증식 중임을 확인해 줬다 (도 5A 및 5B). 확연히 대조적으로, NHS-IL12/IL-2MAB602 또는 NHS-IL12/FcIL-7 를 처리한 마우스 유래의 육종 세포의 70% 까지는 PCNA (PCNA-/p-HP1γ+) (도 5A, 상단 선 삽입) 및 Ki67 (Ki67-/p16INK4a) (도 5A, 하단 선 삽입) 의 부재 하에 노쇠 마커 p-HP1γ 또는 p16INK4a(도 5A 및 5B) 를 발현했다.
데이터는 인간 면역계의 IL-12-구동 자극이 암 성장을 제한하는 중요한 메커니즘으로서 암 세포에서 노쇠를 이용할 수 있음을 보여준다.
IFN-γ 및 TNF 가 IL-12-구동 TH1-면역력의 두가지 주된 효과기 싸이토카인이며, 그들 두가지 싸이토카인이 노쇠를 유도할 수 있으므로, 매우 이른 계대의 다양한 환자로부터 유도된 인간 RMS 세포주를 IFN-γ 및 TNF 을 증량시키면서 인큐베이션했다. 싸이토카인 단독으로는 성장 저해가 없거나 미약할 뿐이었다. 그러나, 조합되면 그들은 3 개의 육종 중 2 개에서 영구적인 노쇠-규정 성장 중단을 유발했다 (도 5C). 중요한 점은, 노쇠-내성 육종이 세포 순환 조절자 p16INK4a 을 발현하지 않아서 (제시되지 않음), IFN-γ 및 TNF-유도성 노쇠가 엄격하게 p16INK4a 의 활성화를 필요로 한다는 점을 확인해 준다는 것이다.
A204 횡문근육종에서의 분화-유도
IFN-γ- 및 TNF-지배 면역 응답이 RMS 에서의 영구적 세포 순환 중단을 유발하고, 골격근 분화가 근육-특이적 유전자의 발현 및 다핵 근육 대롱 세포로의 세포 융합을 허용하기 위해 초기에 세포 순환으로부터의 근아세포 제거에 좌우되므로, 그러한 성장 중단이 A204 육종의 분화에도 영향을 주는지 여부가 의문이었다. 데스민은 비-분화 또는 열악-분화 RMS 에 부재하는 봉상체 아세포 분화에 대한 신뢰할 만한 마커이다. 따라서, A204 육종은 근세포를 특징짓는 횡문을 나타내지도 않았고, 이식 전에 데스민을 발현하지도 않았다 (제시하지는 않음). 인간화된 마우스로의 이식 후, FcIL-7-처리된 증식 중의 육종은 열악하게 분화되었으며, 횡문 없이 종양 내에 약간의 단일 데스민+ 세포들이 확산하여 분포되어 있을 뿐이었다 (도 6A 및 6B). 확연히 대조적으로, NHS-IL12 처리는 종양 성장 및 유도된 노쇠를 억제할 뿐만 아니라, A204 육종에서 근원성 구조 및 마커 발현을 점진적으로 회복시켰다. NHS-IL12/FcIL-7 는 명백하게 데스민을 발현하는 성숙화된 RMS 세포의 무작위로 분포된 선형 영역 및 횡문이 있는 영역을 유도했다. 기능성 근육 조직으로의 그러한 분화는 NHS-IL12/IL-2MAB602 로 처리한 마우스 유래의 육종에서 더욱더 두드러졌다. 그러한 성장-중단된 육종은 종양을 집중적으로 침입하는 사상/관형 구조를 가진 분화 구역의 삭상/로프형 증식을 나타냈다 (도 6A 및 6B). 따라서, 생체내에서의 육종의 성장 중단은 노쇠를 유도했으며, A204 RMS 의 근원인 근세포의 세포-운명 특이적 마커의 회복과 관련되어 있었다.
시험관 내에서는, 조합된 IFN-γ/TNF 의 단일 적용이 A204 육종 세포를 변경불가하게 성장 중단시켰고, 싸이클린 의존성 키나아제 저해제 p21CIP1/WAF1 의 mRNA 를 급격히 증가시켰으며 (+1 일에 미처리 대조군의 7-배, 5 일째에는 10-배), 이는 골격근에서의 순환으로부터 세포를 내재적으로 배제시킨다 (도 7A 및 7B). 현저하게, 5 일 이내에 IFN-γ/TNF 가 또한 육종 배양에서 후기 말에 나타내는 바와 같은 중심쪽에 핵을 가진 이중- 및 다중핵 세포를 발현시켜서 (세포의 80% 초과에서 다중핵 형성) (도 7C 및 7D), 싸이토카인분해의 p16INK4a-중재 비가역적 차단을 시사했다. 추가로, 육종 세포들은 새로이 두가지 추가적인 근육-세포-분화-조절 마커 (Myf-6 및 Myosin Heavy Chain-II) 를 발현했으며(도 7E), 가늘고 긴 다중핵 세포인 SA-β-갈락토시다아제+ 로 변하여, 근육 세포 분화에 앞선 단계에 근원 거대 세포를 형성했다 (도 7C 및 7D). IFN-γ/TNF 의 시험관내 단독투여는 RMS 세포주 RH30 및 환자-유도성 RMS 세포주 SRH (계대 14) (도 8) 를 비가역적으로 성장 중단시켰지만, ZCRH (p16 결핍, 계대 9) 는 그렇지 않았다.
세가지 배엽의 조직을 나타내는 종양 세포주의 패널에서의 분화-유도
IFN-γ/TNF 에 의해 유도되는 성장 중단 및 분화가 광범위한 관련성을 갖는지 여부를 시험하기 위해, 두 TH1 싸이토카인 조합 IFN-γ/TNF 을 세가지 배엽층의 조직을 나타내는 종양 세포주의 패널 상에서 시험관내 시험했다. 3/3 교아세포종 세포주 (T98G, Ln229, A172), 2/2 신경아세포종 세포주 (LS 및 LAN-1), 및 암 세포주 MCF-7 (유방), HCT-116 (직장), 및 Hep3b (간세포 암종) 은 증식을 중단했고, 일제히 SA-β-Gal 를 발현했으며, 퇴행 유형의 세포 및 핵 이형성을 나타냈다 (도 8). 조직병리학적 특징은 대형 다염색성 세포질 및 세포 손상에 의해 유발되는 반응성/비-신생물 다중핵 근원 거대 세포를 닮은 형태를 포함한다. 교아세포종에서는, 핵 이형성이 말초 신경의 양성 "고대 신경초종" 에서 나타나는 유형과 닮았다 (도 8). 다중핵 거대 세포의 발생은 다수의 장기에서 보고된 바 있고, 감염, 손상, 자가면역 및 종양와 연계되어 있다.
약제학적 조성물
본 발명에 따른 표적화된 IL-12 융합 단백질은 투여에 적합한 약제학적 조성물에 혼입될 수 있다. 그러한 조성물은 일반적으로 항체 가변 영역 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 담체" 는 약제학적 투여와 상용성인 임의의 모든 용매, 분산매, 코팅, 항바이러스 및 항진균제, 등장성의 흡수 지연제 등을 포함하는 것을 의도한다. 약제학적 활성 물질에 대한 그러한 매질 및 약제의 이용은 당업계에 널리 공지되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그의 의도하는 투여 경로와 상용성이 되도록 제형화된다. 투여 경로의 예시에는, 비경구, 예를 들어 정맥내, 피내, 피하, 경구 (예를 들어, 흡입), 경피 (국소), 경점막 및 직장내 투여가 포함된다. 비경구, 피내 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 하기의 구성성분들을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 식염수 용액, 비휘발성유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 여타 합성 용매; 항박테리아제, 예컨대 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 산화방지제, 예컨대 아스코르브산 또는 나트륨 비설파이트; 킬레이트제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 등장성 조정제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로오스. pH 는 산 또는 염기, 예컨대 염산 또는 수산화나트륨을 이용해 조정될 수 있다. 비경구 제제는 앰플, 1 회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱제 다회용 용량의 바이알에 밀봉될 수 있다.
본 발명의 표적화된 IL-12 융합 단백질 및 IL-7/IL-2 분자를 포함하는 의약은, 의약의 투약 형태에 따라 해당량이 가변적일 수 있지만, 0.01 내지 100% (w/w) 의 농도를 가질 수 있다.
투여는 바람직하게는 2 주 1 회 또는 매달 1 회이나, 주어진 개체에서의 약동학적 거동에 따라 빈도를 늘이거나 또는 줄일 수 있다. 약 70 킬로그램의 성인에 대해 본 출원에서 서술한 항체 융합 단백질의 투여량은 투여량 당 약 50 내지 1000 밀리그램의 범위이며, 바람직하게는 투여량 당 약 100 내지 500 밀리그램의 범위이다. 가장 바람직한 투여량은 매월 1 회 치료받는 70 kg 성인에 대해 약 200 내지 400 밀리그램이다.
도 1
연구 디자인, RMS 공격 및 치료요법 후의 종양 성장 및 생존. (A) 4 내지 6 주령 NSG 마우스에 치명적이지 않을 정도로 조사하고, CD34+ CD3- 그라프트로 인간화했다. 완전히 생착된 마우스에 제 12 주에 1x106 A204 세포를 접종했다. 면역요법은 종양 부피가 50 내지 200 mm3 일 때 18 일 뒤에 시작했다. 마우스는 5 주 치료 후 희생시켰는데, 그 때 FcIL-7 코호트의 종양은 체중의 20% 에 도달했다. NHS-IL12/FcIL-7 및 NHS-IL12/IL-2MAB602 코호트의 마우스 4 마리가 살아있었고, 종양 접종 후 적어도 95 일째 될 때까지는 치료했다. (B) 생존에 대한 FcIL-7, NHS-IL12/FcIL-7 및 NHS-IL12/IL-2MAB602 의 영향. 생존 곡선은 로그 순위법 (log-rank test) 을 이용해 비교했다. 생존은 FcIL-7 코호트에 비해 NHS-IL12 코호트에 대해서 훨씬 유의하게 더 나았다. FcIL-7 대조군에서, 4 마리의 동물이 52 일 전에 폐사했고, 3 마리는 과도한 종양 성장으로 인해 52 일째에 희생되었다. NHS-IL12/FcIL-7 처리 코호트에서, 2 마리의 마우스가 52 일 전에 폐사했고, 56 일에 1 마리, 74 일에 1 마리가 장기간 처리 군에 있었다. (C) 종양 성장에 대한 FcIL-7, NHS-IL12/FcIL-7 및 NHS-IL12/IL-2MAB602 의 영향. 인간 RMS A204 를 보유하는 마우스를 매주 i.v.로 FcIL-7 (20 ㎍) (원), NHS-IL12 (20 ㎍)/FcIL-7 (20 ㎍) (삼각형), 또는 NHS-IL12 (20 ㎍) 및 IL-2 (1.5 ㎍) 을 MAB602 (15 ㎍) 와 복합체로 하여 (사각형) 투여했다. 단기간 처리한 군마다 7 마리의 평균 ± SD 로 나타낸 mm3 의 종양 크기 (5 주). (D) 장기간 처리 (14 주, 95 일 초과) 동안 NHS-IL12 군 (NHS-IL12/FcIL-7: 사각형; NHS-IL12/IL-2MAB602: 원) 마다 4 마리 마우스의 개별 종양 크기.
도 2 :
123I-표지된 NHS-IL12 이 인간 A204 종양 이종이식의 병소에서 축적한다. (A) 치료 투여량 (30 ㎍) 의 123I-표지된 NHS-IL12 의 주사 2, 26 및 46 시간 후 실시된 생체내 SPECT 스캔이, 근육 조직 (점 표시된 원) 과 비교해 종양 (색칠된 원) 에서 NHS-IL12 의 특이적인 축적을 나타낸다. (B) 123I-NHS-IL12 의 흡수가 투여 26 시간 후 종양 병소에서 그의 최대값에 도달한 반면, 근육에서는 전체 스캔 시간에 걸쳐 특이적 신호가 검출되지 않았다. 측정 시점 (n=2) 사이에서의 123I 의 방사활성 붕괴에 대한 조정을 위해 카운트를 붕괴-보정했다. * P≤ 0.05.
도 3
선천적 면역에 대한 FcIL-7, NHS-IL12/FcIL-7 및 NHS-IL12/IL-2MAB602 의 영향. (A) 각 코호트에서의 개체의 종양 균질현탁액을 주된 촉발 수용체 NKG2C, -D 및 -E, DNAM-1 및 자연 살상자 수용체 NKp30, -44 및 -46 에 대한 RT-PCR-기반의 단편 길이 분석을 이용해 시험했다. 코호트 내에서의 높은 일치도에 유의. (B) 종양 및 근육의 균질현탁액에서의 CD161 의 발현. 양은 평균 형광 강도로서 제공된다. 각 점은 1 개의 개별 종양을 나타낸다. ** P≤ 0.01, *** P≤ 0.001, 한쪽꼬리 스튜던트 t 검정 (one-tailed student`s t test) 을 이용해 평가. (C) 제 52 일의 iNKT 세포 (불변량 Vα24 및 Vβ11), Vδ1 및 -2 사슬, 및 NKp46 의 TCR 전사물 표시. T = 종양 조직, M = 근육 조직, LT = 100 일의 장기간 처리 마우스, S = 단일 정점, G = Vα24 사슬 발현의 정규 분포. (D) 단일 정점으로 또는 정규 분포에서 검출된 A204 종양에서의 TCRVα24 mRNA 발현. 인간 iNKT 에서, TCRVα24 는 TCRVβ11 사슬과 우선적으로 회합되어 있다.
도 4
FcIL-7, NHS-IL12/FcIL-7 및 NHS-IL12/IL-2MAB602 의 영향 하의 αβT 세포의 클론형성능 분석. (A) 종양 균질현탁액 중의 다양한 면역 마커들의 실시간 PCR-기반 검출. (B) 표적 유전자의 발현은 인간 CD45 의 발현에 대해 정규화했다. CDR3-크기 분광형으로 결정되는 25 TRBV 분절의 발현. 색칠된 사각형은 12 개 이하의 단편의 발현을 나타낸다. 각 세로 줄은 1 마리의 마우스를, 짙게 색칠된 사각형은 CDR3 서열 분석을 위해 선택된 TRBV 분절을 나타낸다. (C) 선택된 TRBV 분절의 CDR3 영역 단백질 서열, 진한 글자의 아미노산 코드가 동종 서열을 표시한다. (SEQ ID NO. 6: LDKVGQETQYF; SEQ ID NO. 7: VDRTGEPFYGYTF; SEQ ID NO. 8: STRTGSYNYPLHF; SEQ ID NO. 9: LAEGVTEAFF; SEQ ID NO.10: LAKGVTEAFF; SEQ ID NO. 11: SLNLVLPGGAEAFF; SEQ ID NO. 12: PRFSMNTEAFF; SEQ ID NO. 13: SRGSFESYNEAVLRAQ; SEQ ID NO. 14: SRGSFESYNEQFF; SEQ ID NO. 15: SRGSFESYNEQVLR; SEQ ID NO. 16: RTVANGFSPLHF). (D) 종양 균질현탁액에서의 T-bet/RORC- 및 Foxp3/CD40L-발현 비율 (n=4). * P≤ 0.05, ** P≤ 0.01, *** P≤ 0.001.
도 5
노쇠 마커의 유도 및 NHS-IL12/FcIL-7 및 NHS-IL12/IL-2MAB602 처리에 의한 증식방지 유효성. (A) 종양 절편에서의 세포의 노쇠 및 증식을 PCNA 와 조합한 핵 p-HP1γ 에 대한 (상단 패널) 면역형광 이중염색 또는 Ki67 와 조합한 p16INK4a 에 대한 (하단 패널) 면역형광 이중-염색 (1:100) 으로 결정했다. 삽입도는 p-HP1γ 또는 p16INK4a 염색의 핵에서의 점들을 가시화하는 더 높은 배율 (1:300) 의 도면을 보여준다. (B) FcIL-7, NHS-IL12/FcIL-7 또는 NHS-IL12/IL-2MAB602 (n=3) 처리 후 p-HP1γ-양성 세포 (즉, 핵에서의 5 개 초과의 점들을 보유한 세포), p16INK4a -양성 세포 (더 높은 배율 (1:300) 로 결정됨) 또는 Ki67-양성 세포의 평균 백분율. ** P≤ 0.01, *** P≤ 0.001, 한쪽꼬리 스튜던트 t 검정으로 평가. (C) 초대 인간 RMS 암 세포 제제에서의 싸이토카인-유도성 성장 중단. CCA 세포 (eRMS, 제 7 계대), SRH (eRMS, 제 8 계대), 또는 ZCRH 세포 (aRMS, 제 9 계대 초과의 계대) 를 2x104 세포/9.6 cm2 의 밀도로 시딩했다. 제 3 일 및 제 4 일에, 세포를 100 ng/ml IFN-γ 및 10 ng/ml TNF 또는 배지로만 (대조군) 처리했다. 제 7 일에 싸이토카인을 제거하고, 세포에 트립신처리하고, 카운트하고, 2x104 세포/9.6 cm2 로 다시 시딩했다. 4 일 더 (ZCRH 및 SRH) 또는 10 일 더 (CCA) 인큐베이션 후, 살아있는 세포를 카운트했다. IFN-γ 및 TNF 의 부재 또는 존재 하의 응답자 세포 CCA 및 SRH 및 비응답자 세포 ZCRH 의 성장 곡선. 평균 세포 수 ± SEM (n=3) 를 제시한다.
도 6
A204 RMS 에서의 근원성 분화의 마커로서의 데스민의 생체내 발현 및 조직화. (A) 모든 코호트 (FcIL-7, NHS-IL12/FcIL-7, 또는 NHS-IL12/IL-2MAB602 처리) 의 종양 (n=3/코호트) 유래의 조직학적 슬라이드를 데스민에 대해 염색하고, (B) 맹검으로 병리학자가 분석했다. LT: 장기간 처리; ST: 단기간 처리.
도 7
다중핵의, 노쇠 A204 세포, 및 본연 및 싸이토카인-처리 A204 세포에서의 p21 및 근원성 마커의 발현. (A) 정량 RT-PCR (n=3) 로 측정한, IFN-γ 및 TNF (++) 또는 대조군으로서의 배지 (-) 처리 이전 및 이후의 p21 의 상대적 발현. (B) IFN-γ 및 TNF 처리 (역삼각형) 가 암 세포 증식은 종결시켰으나, 육종 세포를 살상하지는 않는다 (n=3). 비교를 위해, 정상 세포 배양 (원) 은 방해받지 않은 증식을 보여준다 (n=3). (C) 상단 레인: 싸이토카인-처리 A204 암 세포가 노쇠하며 (흑색 화살표: 회색 염색) 다중핵임 (백색 화살표, DAPI 염색). 하단 레인: 음성 대조군으로서 배지를 처리한 A204 육종 세포가 SA-β-Gal 에 대해 음성이며 단핵성임 (DAPI-염색). (D) A204 세포에서의 싸이토카인-유도성의 신장된 다중핵 및 합포체 형태 (중간 및 우측) 를 표준 배양의 A204 세포 (좌측)와 비교함, 투과 현미경으로부터 제공됨. (E) A204 및 RH30 육종 세포주에서의 근원성 전사 인자의 상대적 발현. 100 ng/ml IFN-γ 및 10 ng/ml TNF (++) 에 의한, 3 일에 걸쳐 배지 (-) 와 비교한 A204 세포에서의 MHCII 및 MYF-6 mRNA 발현의 유도 (n=3).
도 8
중배엽, 내배엽 및 외배엽 기원을 나타내는 세포주들이, 10ng/ml TNF 와 조합한 단일 투여량의 100 ng/ml IFN-γ (제 1 일) 로 처리 후 배지 대조군 (미처리) 와 비교한 다중핵 표현형 및 성장 중단을 제시했다.
교아 세포종의 도면들은 제 37 일에 촬영했고, 모든 다른 것들은 치료 후 제 6 일째에 했다. 모든 처리된 세포주의 세포들이 제 43 일에 생존했으며, 그 시점은 세포 시험을 종결할 때였다.
RMS: 횡문근육종, GBM: 교아 세포종, BC: 유방암, CRC: 대장암, HCC: 간세포 암종, NB: 신경아 세포종
실시예:
(1) NSG 마우스의 인간화. HuCD34+ 줄기 세포를 CD34+ 선별에 의해 T-세포가 고갈된 부모 공여자 유래의 G-CSF 고정화된 잉여의 말초혈 줄기 세포 (CliniMACS, Miltenyi 사 제조, 독일) 로부터 유도했다. 세포를 20% DMSO / 80% 5%-HSA 용액 중에 1:2 로 현탁시키고, 후속하여 Sylab 각빙 기기 및 제어되는 동결 속도를 이용해 저온보존했다. 해동 후, 세포를 트립판 블루로 염색하고, Neubauer 세포 카운트 챔버에서 카운트했다. 헬싱키 선언에 따라 잉여 세포의 과학에서의 이용에 관한 고지에 입각한 동의를 모든 공여자로부터 받았다. CD34+ 모집단의 순도는 해동 후 제 2 라운드의 CD3+ 고갈에 의해 99.99% 를 초과하도록 추가로 증가시켰다 (LS MACS 사 제조, Miltenyi, 독일). 줄기 세포 공여자들은 전부 RMS A204 세포주에 대해 HLA-미스매치였다. 승온 전 100 ㎕ PBS 중의 1x106 huCD34+ 세포를 치사량 미만으로 조사한 (250 cGy) NSG 마우스의 꼬리정맥에 주사했다. 20 ㎍ FcIL-7 (Merck 사 제조, 독일) 의 매주 적용으로 생착을 보조했다. 각각의 NHS-IL12 처리 군에서, 4 마리의 동물이 Fc-IL7 또는 IL-2MAB602 를 이용하는 장기간 NHS-IL12 싸이토카인 처리를 최대 15 주 (100 일) 동안 수용했다.
(2) 종양 이식 및 측정. 태아의 소아 RMS A204 세포를 ATCC (HTB 82) 로부터 입수해, 해동하고, RPMI 1640+10% FBS 중에 1 계대 동안 서브-컬쳐 (sub-cultured) 하고, 멸균 식염수로 3 회 세척하고, PCR Mycoplasma Test Kit AppliChem (독일) 을 이용하여 마이코플라즈마에 대해 시험하고, 생착된 NSG 마우스에 이식했다. 마우스마다, 1x106 개의 종양 세포를 s.c.주사에 의해 우측 옆구리에 이식했다. 종양 부피는 하기의 등식으로 결정했다: VT = a × b × d × π/6, 식 중, a, b 및 d 는 종양의 길이, 너비 및 높이임. 마우스를 종양 접종 52 일 후 희생시키고, 그 시점에 FcIL-7 코호트의 동물들의 종양은 체중의 20% 이상에 도달했다. NHS-IL12 군마다 4 마리 마우스를 장기 처리용으로 추가로 더 생존하게 두었다.
(3) 항-인간 히스톤/인간IL-12 융합 단백질 및 IL-2/항-IL-2 항체 복합체의 투여. 종양이 150 ㎕ 이상으로 성장 후 생착된 인간화된 NSG 마우스에서 꼬리 정맥의 천자를 통해 주 1 회, 20 ㎍ 의 NHS-IL12 융합 단백질을 20 ㎍ FcIL-7 (두가지 모두 Merck 사 제조, 독일) 과 함께 투여했다. 상기 언급된 바와 같이, 마우스의 추가적인 코호트 하나에서 1.5 ㎍ IL-2 과 15 ㎍ 항-IL-2 mAB MAB602 의 혼합물을 매주 수용하도록 했다. 재조합 인간 IL-2 (PROLEUKIN, Aldesleukin, Chiron 사 제조, USA) 및 MAB602 (항-hIL-2 mABCD122, 클론 5355, R&D Systems 사 제조) 을 주사 전에 15 분 동안 실온에서 함께 인큐베이션했다.
(4) 생체내 SPECT/CT 영상촬영. 접종된 마우스의 생체내 영상촬영을 Inveon Multimodality SPECT/CT (Siemens Healthcare 사 제조, Knoxville, TN, USA) 을 이용해 실시했다. 담체가 없는 요오드화 나트륨 (123I) 을 GE Healthcare 사에서 구매하고, Pierce® Iodination Reagent (Thermo Scientific 사 제조) 를 이용하여 NHS-IL12 의 방사선동위원소 요오드 표지를 수행했다. 18 MBq 123I 로 표지된 30 ㎍ NHS-IL12 를 꼬리 정맥을 통해 마우스에 주사하고, 생체내 SPECT/CT 영상은 트레이서 투여 후 2, 26 및 46 시간 째에 수득했다. 주사 및 측정 동안, 마우스는 산소 중 1.5% 이소플루란 (0.5 l/min) 을 이용해 마취했다. 관심대상의 영역 (ROI) 을, 전체 종양을 포함하도록 한 여러 조각들 상에서 CT 정보를 바탕으로 재건된 SPECT 영상 상에서 윤곽을 잡았다. 참조를 위해, 평균 크기의 ROI 를 동일한 동물의 왼쪽 뒷다리에서 영향을 받지 않은 근육 조직 상에 위치시켰다. 123I-NHS-IL12 흡수의 평가를 위해, 붕괴 보정 카운트를 이용했다.
(5) 육색 유세포분석. 이식 후 10 내지 12 주 째에 여러 개체에 대해 면역 재건을 평가하고, 쥐과동물과는 비-교차-반응성이나 인간 에피토프에는 특이적인 하기와 같은 마우스 mAbs 를 이용하여 말초혈, 비장, 골수 및 흉선을 분석했다: CD62L(Dreg56)-FITC, CD25(2A3)-APC, CD3(SK7)-PerCP, CD8(SK1)-PerCP, CD8(SK1)-APC-H7, CD4(SK3)-FITC, CD4(SK3)-PerCP, CD14(M5E2)-PE, CD56(My31)-PE, HLA-DR(L243)-PerCp, NKp30(P30-15)-PE, NKp44(P44-8)-APC, NKp46(9E2)-PE 및 이들의 대응하는 IgG 이소타입 (전부 BD Pharmingen 사 제조, 독일). CD45(MEM-28)-Pacific Blue, CD19(HIB19)-PerCP, CD3(MEM-57)-Alexa Fluor 700, CD4(MEM-241)-Alexa Fluor 700 (Exbio 사 제조, 체코). CD45(HI30)-PE 과 각 이소타입 IgG (Biolegend 사 제조, 독일). 생착은 안와 뒤쪽 채혈 (retro-orbital bleeding) 및 FACS 염색으로 이식 12 내지 14 주 후에 일과로 체크했다. A204 세포주를 ULBP-1(Z-9), ULBP-2(2F9), ULBP-3(F16), ULBP-4(6E6) (전부 Santa Cruz 사 제조, USA), MICA/B(6D4)APC CD112(R2.525)PE, CD155(SKII.4)PE (전부 Biolegend 사 제조, 독일), HLA-ABC(W6/32)PE (DAKO Cytomation 사 제조, 독일), 2 차 항체 RAM-PE(X56) (BD Pharmingen 사 제조, 독일), 및 이소타입 대조군 (Beckman Coulter and R&D Systems 사 제조, 독일) 을 이용하여 특징분석했다. 유세포분석은 Divaⓒ 소프트웨어를 이용해 LSR II (BD Biosciences) 상에서 수행했다.
(6) 면역조직학 염색. 냉동된 조직 슬라이스 (두께 5 ㎛) 를 4% 완충 포르말린 (2 분) 에서 인큐베이션하고, 증류수로 세척하고, 가압 챔버 중의 시트레이트 완충액 pH 6.0 에서 끓여 (4 분), Tris-NaCl-Tween 로 세척했다. 시료 슬라이드를 젖어있는 챔버로 이동시키고, Zytochem-Plus AP Polymer-Kit (Zytomed Systems 사 제조, 독일) 로 염색했다. 1 차 항체는 하기와 같았다: CD3 (SP7, 1:50; DCS Innovative Diagnostic Systeme GmBH 사 제조, 독일), 모노클로날 토끼 항-인간 CD4 (SP35, 1:50, Zytomed Systems 사 제조), CD8 (C8/144B, 1:100), CD56 (123C3-D5, 1:20), CD68 (PG-M1, 1:150), HLA-DR-α (TAL.1B5, 1:200), 데스민 (D33, 1:100, 전부 DAKO 사 제조, 독일), Perforin (5810, 1:200, Novocastra/Leica 사 제조, 독일). 최종 염색을 Permanent AP Red Kit (Zytomed Systems 사 제조, 독일) 을 이용해 수행했다. 단일-맹검을 면역조직학적 슬라이스의 분석을 위해 수행했다.
(7) 면역형광. 인간 이종이식된 A204 종양의 신선한 냉동 저온유지 절편을 선행기술에 기재된 바와 같이 염색했다 (Zhang and Adams (2007) Cell Cycle 6:784-789). 간략하게, 저온유지 절편을 과옥소산염-라이신-파라포름알데히드로 고정시키고, 당나귀 혈청 (1:20) 을 이용하여 30 분 동안 실온 (RT) 에서 블로킹했다. 이어서, 슬라이드를 토끼-항-p-HP1γ (1:80; Abcam 사 제조, UK), 마우스-항-PCNA (1:50; Cell Signaling Technology 사 제조, USA), 마우스-항-p16INK4a (1:50; Santa Cruz Biotechnology 사 제조, 독일), 또는 토끼-항-Ki67 (1:100; Abcam 사 제조, USA) 을 이용하여 1 시간 동안 RT 에서 인큐베이션했다. 3 회의 세척 후, 절편들을 Cy3- 또는 Cy5-콘쥬게이션된 당나귀-항-토끼 항체 및 Cy3- 또는 Cy5-콘쥬게이션된 당나귀-항-마우스 항체 (전부 Dianova 사 제조, 독일) 와 인큐베이션했다. 슬라이드를 Mowiol (Hoechst 사 제조, 독일) 을 이용하여 마운팅하기 전에, 핵을 Yopro (1:2000; Invitrogen 사 제조, 독일) (5 분) 로 염색하고, 절편들을 Leica TCS-Sp/Leica DM RB 공초점 레이저 스캐닝 현미경 (Leica Microsystems 사 제조, 독일) 을 이용하여 분석했다. 영상은 Leica Confocal Software LCS (Version 2.61) 를 이용해 가공했다.
(8) 환자-유도성 초대 RMS 및 암 세포주의 TNF 및 IFN-γ 을 이용한 처리. 싸이토카인 처리 후 상이한 암 세포주들 (횡문근육종 RH30, SRH; 교아 세포종 T98G, Ln229, A172; 유방암 MCF-7; 대장암 HCT-116; 간 세포 암종 Hep3b 및 신경아세포종 LAN-1, LS) 의 영구적인 성장 중단을 선행기술에 정확하게 기재된 과정을 이용해 결정했다 (Braumuller 등, 2013, Nature 494:361-365). RMS 에서의 조기 분화 이벤트를 연구하기 위한 단기간 배양을 적은 수 (4.000 또는 8.000 세포/㎠) 로 종양 세포를 시딩하고 배지를 10 ng/ml TNF + 100 ng/ml IFN-γ 의 존재 및 부재 하에 인큐베이션하여 수행했다.
(8) KIR 발현 분석. 발현 분석을 선행 기술 (77) 에 기재된 바와 같이 실시했다. NKp30, -44, -46, DNAM-1, CD161 전사물들을 5' FAM-표지된 역방향 프라이머를 이용하는 종점 PCR (end-point PCR) 에서 특이적 프라이머를 이용해 결정했다. PCR 산물들은 길이 표준에 대한 Gene Scan-600 LIZ 및 GeneMapper 소프트웨어를 갖춘 ABI 서열분석기 (모두 Applied Biosystems 사 제조, 독일) 에서 분석했고; MFI 를 반-정량 분석 (semi-quantitative analysis) 을 위해 이용했다.
(9) T-bet, RORC, Foxp3, CD40L, granzyme B, granzyme K 의 발현. 종양내 유전자 발현을 cDNA 특이적 프라이머 (모든 서열은 주문하여 입수가능) 를 이용하는 BioRad C1000 Thermal cycler/CFX96 real-time System (Munich 사 제조, 독일) 상의 실시간 PCR 및 iQ SYBR Green Supermix BioRad (Munich 사 제조, 독일) 을 이용하여 결정했다. 발현은 인간 CD45 발현에 대하여 정규화했다. RORC 발현은 특이적 프라이머 셋트 (Search LC 사 제조, 독일) 및 FastStart DNA SYBR Green I (Roche 사 제조, 독일) 을 이용하여 검출했다.
(10) Vα-24 사슬 식별. 이를 위해 Han 등의 공개된 프로토콜 (Han 등, 1999, J. Immunol. 163:301-31) 을 이용했다.
(11) Vβ 분광형 분석. TCR Vβ-사슬 발현의 다변성 및 TCR 레퍼토리의 복합성을, 미미한 변화를 주면서 Gorski 등의 문헌 (Gorsk 등, 1994, J. Immunol. 152:5109-511) 에 따르며 분석했다. 5' FAM-표지된 Cβ-프라이머를 이용했고, Gene Scan-600 LIZ 및 GeneMapper 소프트웨어를 갖춘 ABI 서열분석기를 앰플리콘 검출에 이용했다 (전부 Applied Biosystems 사 제조, 독일).
(12) γδ 이뮤노스코프. 이뮤노스코프는 선행기술 (Dechanet 등, ,J., 1999, J. Clin. Invest 103:1437-1449) 에 공개된 바와 같이 결정했다.
(13) TCR-CDR3 영역의 식별. Vβ PCR 산물을 pGEMTeasy (Promega 사 제조, 독일) 로 클로닝하고, XL1-Blue 컴피턴트 세포 (Stratagene 사 제조, USA) 에서 표준 과정을 이용해 증폭했다. 삽입체-양성 클론을 재증폭 Vβ PCR 로 직접 옮겼다. 5 ㎕ PCR 분취물을 2.5% 아가로스 겔 상에서 분석하고, 관련된 길이의 PCR 산물을 서열 분석을 위해 독일의 Seqlab 에 보냈다. cDNA 의 단백질 서열로의 번역을 EMBOSS Transeq 무료 소프트웨어를 이용해 실시했다.
SEQUENCE LISTING <110> Merck Patent GmbH STRITTMATTER, Wolfgang HANDGRETINGER, Rupert SCHILBACH-STUECKLE, Karin <120> CANCER-TARGETED IL-12 IMMUNOTHERAPY <130> P 14/030 WO <140> PCT/EP2015/000363 <141> 2015-02-18 <150> EP 14000585.1 <151> 2014-02-19 <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 197 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Arg Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro Cys Leu 1 5 10 15 His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu Gln Lys 20 25 30 Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu Ile Asp 35 40 45 His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala Cys Leu 50 55 60 Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg Glu Thr 65 70 75 80 Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr Ser Phe 85 90 95 Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys Met Tyr 100 105 110 Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp Pro Lys 115 120 125 Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp Glu Leu 130 135 140 Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys Ser Ser 145 150 155 160 Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys Ile Leu 165 170 175 Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val Met Ser 180 185 190 Tyr Leu Asn Ala Ser 195 <210> 2 <211> 306 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 2 Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr 1 5 10 15 Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu 20 25 30 Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly 35 40 45 Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly 50 55 60 Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu 65 70 75 80 Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp Ser Thr Asp Ile Leu Lys 85 90 95 Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys 100 105 110 Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr Ile Ser Thr 115 120 125 Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln 130 135 140 Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly 145 150 155 160 Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala 165 170 175 Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile Glu Val Met Val Asp Ala 180 185 190 Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe Ile Arg 195 200 205 Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu 210 215 220 Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp 225 230 235 240 Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln 245 250 255 Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr 260 265 270 Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile Ser Val Arg Ala 275 280 285 Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro 290 295 300 Cys Ser 305 <210> 3 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: lambda light chain amino acid sequence of monoclonal antibody NHS variant, including signal sequence (first 19 amino acids), variable domain, and de-immunizing L103V mutation (position 124 in this sequence) <400> 3 Met Glu Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala 20 25 30 Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu 50 55 60 Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe 65 70 75 80 Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala 85 90 95 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser 100 105 110 Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly 115 120 125 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 130 135 140 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 145 150 155 160 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 165 170 175 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 180 185 190 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 195 200 205 His Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 210 215 220 Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 4 <211> 663 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic: engineered antibody NHS heavy chain - human p35 fusion polypeptide, including signal sequence (first 19 amino acids), VH, constant regions, and hu p35 with an R to A substitution of first residue (position 467 in this sequence) <400> 4 Met Glu Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala 1 5 10 15 Ser Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 20 25 30 Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile 35 40 45 Ser Ser Gly Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly 50 55 60 Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn 65 70 75 80 Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn 85 90 95 Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Lys Trp Ser Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 130 135 140 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 145 150 155 160 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 180 185 190 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 195 200 205 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 210 215 220 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 225 230 235 240 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 245 250 255 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 260 265 270 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 275 280 285 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 290 295 300 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 305 310 315 320 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 340 345 350 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 355 360 365 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 370 375 380 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 385 390 395 400 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 405 410 415 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 420 425 430 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 435 440 445 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ala Thr Ala Thr Pro 450 455 460 Gly Ala Ala Asn Leu Pro Val Ala Thr Pro Asp Pro Gly Met Phe Pro 465 470 475 480 Cys Leu His His Ser Gln Asn Leu Leu Arg Ala Val Ser Asn Met Leu 485 490 495 Gln Lys Ala Arg Gln Thr Leu Glu Phe Tyr Pro Cys Thr Ser Glu Glu 500 505 510 Ile Asp His Glu Asp Ile Thr Lys Asp Lys Thr Ser Thr Val Glu Ala 515 520 525 Cys Leu Pro Leu Glu Leu Thr Lys Asn Glu Ser Cys Leu Asn Ser Arg 530 535 540 Glu Thr Ser Phe Ile Thr Asn Gly Ser Cys Leu Ala Ser Arg Lys Thr 545 550 555 560 Ser Phe Met Met Ala Leu Cys Leu Ser Ser Ile Tyr Glu Asp Leu Lys 565 570 575 Met Tyr Gln Val Glu Phe Lys Thr Met Asn Ala Lys Leu Leu Met Asp 580 585 590 Pro Lys Arg Gln Ile Phe Leu Asp Gln Asn Met Leu Ala Val Ile Asp 595 600 605 Glu Leu Met Gln Ala Leu Asn Phe Asn Ser Glu Thr Val Pro Gln Lys 610 615 620 Ser Ser Leu Glu Glu Pro Asp Phe Tyr Lys Thr Lys Ile Lys Leu Cys 625 630 635 640 Ile Leu Leu His Ala Phe Arg Ile Arg Ala Val Thr Ile Asp Arg Val 645 650 655 Met Ser Tyr Leu Asn Ala Ser 660 <210> 5 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: engineered variant of human p40 subunit of IL-12, with signal sequence (first 19 amino acids) <400> 5 Met Cys His Gln Gln Leu Val Ile Ser Trp Phe Ser Leu Val Phe Leu 1 5 10 15 Ala Ser Pro Leu Val Ala Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val 20 25 30 Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu 35 40 45 Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln 50 55 60 Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys 65 70 75 80 Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val 85 90 95 Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp 100 105 110 Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe 115 120 125 Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp 130 135 140 Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg 145 150 155 160 Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser 165 170 175 Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu 180 185 190 Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile 195 200 205 Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr 210 215 220 Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn 225 230 235 240 Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp 245 250 255 Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr 260 265 270 Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Asp Asn Thr Glu Gly Arg Val Phe 275 280 285 Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala Ser Ile 290 295 300 Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser Glu Trp 305 310 315 320 Ala Ser Val Pro Cys Ser 325 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 6 Leu Asp Lys Val Gly Gln Glu Thr Gln Tyr Phe 1 5 10 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 7 Val Asp Arg Thr Gly Glu Pro Phe Tyr Gly Tyr Thr Phe 1 5 10 <210> 8 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 8 Ser Thr Arg Thr Gly Ser Tyr Asn Tyr Pro Leu His Phe 1 5 10 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 9 Leu Ala Glu Gly Val Thr Glu Ala Phe Phe 1 5 10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 10 Leu Ala Lys Gly Val Thr Glu Ala Phe Phe 1 5 10 <210> 11 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 11 Ser Leu Asn Leu Val Leu Pro Gly Gly Ala Glu Ala Phe Phe 1 5 10 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 12 Pro Arg Phe Ser Met Asn Thr Glu Ala Phe Phe 1 5 10 <210> 13 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 13 Ser Arg Gly Ser Phe Glu Ser Tyr Asn Glu Ala Val Leu Arg Ala Gln 1 5 10 15 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 14 Ser Arg Gly Ser Phe Glu Ser Tyr Asn Glu Gln Phe Phe 1 5 10 <210> 15 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 15 Ser Arg Gly Ser Phe Glu Ser Tyr Asn Glu Gln Val Leu Arg 1 5 10 <210> 16 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Other Information: synthetic: amino acid sequence of CDR3 region <400> 16 Arg Thr Val Ala Asn Gly Phe Ser Pro Leu His Phe 1 5 10

Claims (8)

  1. 암 질환을 앓는 환자에서 상기 암 질환에 대한 면역 응답을 유도 또는 자극함으로써 암을 치료하기 위한, 종양-표적화된 IL-12 를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 약제학적 조성물은 IL-7 와의 병용 치료에 사용되기 위한 것이고, 상기 유도 또는 자극이 상기 종양-표적화된 IL-12 에 의해 유발되는:
    (i) 암 세포의 노쇠 또는 성장 중단,
    (ii) 암 세포 또는 암 조직의 본래 세포 또는 조직으로의 차도, 또는 (i) 및 (ii) 모두
    를 유발하고,
    종양-표적화된 IL-12 은 종양 괴사에 노출되는 인간 DNA-히스톤 H1 복합체에 겨냥되며, 그의 C-말단을 통해 IL-12 의 p35 서브유닛에 융합된 치료 유효성 모노클로날 항체 또는 그의 생물학적 활성 부분이고,
    상기 항체는 전면적 인간 NHS76 항체이고, 상기 종양-표적화된 IL-12 는 NHS-IL12 로 명명되고,
    상기 IL-7 은 면역글로불린의 Fc 단편의 C-말단에 공유결합으로 융합된 것인, 약제학적 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 암 세포 노쇠가 상기 종양-표적화된 IL-12 에 의해 촉발되는 환자의 면역계의 상기 자극 또는 유도에 후속하여 내생성 (endogenous) IFNγ, TNF 또는 양자 모두의 생성에 의해 유발되는, 약제학적 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 암 세포의 노쇠가 안정한 성장 중단을 초래하는, 약제학적 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서, 암 세포의 노쇠가 직접적인 면역 특이적 세포독성 효과와 독립적인, 약제학적 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서, 암 질환이 고형 종양 또는 근육, 뼈, 신경, 연골, 힘줄, 혈관 및 지방 또는 섬유 조직의 종양과 관련된 것인, 약제학적 조성물.
  6. 제 5 항에 있어서, 암이 육종인, 약제학적 조성물.
  7. 제 5 항에 있어서, 치료요법이 근원성 분화의 유도를 개시하는, 약제학적 조성물.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 방사요법 또는 방사-화학요법과 조합되는, 약제학적 조성물.
KR1020237005155A 2014-02-19 2015-02-18 암-표적화된 ｉｌ-12 면역요법 KR20230027322A (ko)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14000585 2014-02-19
EP14000585.1 2014-02-19
KR1020167025301A KR20160120335A (ko) 2014-02-19 2015-02-18 암-표적화된 ｉｌ-12 면역요법
PCT/EP2015/000363 WO2015124297A1 (en) 2014-02-19 2015-02-18 Cancer-targeted il-12 immunotherapy

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167025301A Division KR20160120335A (ko) 2014-02-19 2015-02-18 암-표적화된 ｉｌ-12 면역요법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230027322A true KR20230027322A (ko) 2023-02-27

Family

ID=50151085

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167025301A KR20160120335A (ko) 2014-02-19 2015-02-18 암-표적화된 ｉｌ-12 면역요법
KR1020237005155A KR20230027322A (ko) 2014-02-19 2015-02-18 암-표적화된 ｉｌ-12 면역요법

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167025301A KR20160120335A (ko) 2014-02-19 2015-02-18 암-표적화된 ｉｌ-12 면역요법

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20170166620A1 (ko)
EP (1) EP3107573B1 (ko)
JP (1) JP6416926B2 (ko)
KR (2) KR20160120335A (ko)
CN (1) CN105992590B (ko)
AU (1) AU2015221181B2 (ko)
CA (1) CA2940018C (ko)
ES (1) ES2703826T3 (ko)
MX (1) MX2016010674A (ko)
PT (1) PT3107573T (ko)
RU (1) RU2689160C2 (ko)
WO (1) WO2015124297A1 (ko)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20190336552A1 (en) 2016-05-30 2019-11-07 Astellas Pharma Inc. Genetically engineered vaccinia viruses
US10888594B2 (en) * 2016-05-30 2021-01-12 National University Corporation Tottori University Genetically engineered vaccinia viruses
IL268206B2 (en) * 2017-01-23 2024-05-01 Carsgen Therapeutics Co Ltd Antibodies directed against BCMA and their use
CN108686202A (zh) 2017-04-06 2018-10-23 张晋宇 肿瘤免疫疗法
CN111164100B (zh) 2017-08-03 2024-03-12 美国安进公司 白介素-21突变蛋白和治疗方法
JP7150823B2 (ja) 2017-09-08 2022-10-11 アムジエン・インコーポレーテツド ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃの阻害剤及びそれを使用する方法
CR20210319A (es) 2018-01-12 2021-07-27 Amgen Inc ANTICUERPOS ANTI-PD-1 Y MÉTODOS DE TRATAMIENTO (Div. 2020-330)
CN110396133B (zh) * 2018-04-25 2021-07-23 免疫靶向有限公司 一种以白介素12为活性成分的融合蛋白型药物前体
EP3831945A4 (en) * 2018-07-30 2022-05-04 Jinyu Zhang PROTEIN HETERODIMER AND ITS USE
US20220289805A1 (en) * 2018-09-07 2022-09-15 Nantbio, Inc. Targeted IL-12 Treatments and Methods to Stimulate haNK and NK92mi Cells
CN112739360A (zh) 2018-09-26 2021-04-30 安斯泰来制药株式会社 基于溶瘤性牛痘病毒与免疫检查点抑制剂的联用的癌症疗法以及其中使用的药物组合物和组合药物
CN111848810A (zh) * 2019-04-28 2020-10-30 张晋宇 一种蛋白质分子及其用途
WO2021232200A1 (en) * 2020-05-18 2021-11-25 Guangdong Tcrcure Biopharma Technology Co., Ltd. Il-12 armored immune cell therapy and uses thereof
WO2024086739A1 (en) * 2022-10-20 2024-04-25 Synthekine, Inc. Methods and compositions of il12 muteins and il2 muteins

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8795672B2 (en) * 2003-02-14 2014-08-05 University Of Southern California Compositions and methods for cancer immunotherapy
CA2607448C (en) * 2005-04-22 2014-11-18 Eli Lilly And Company Tgf beta 1 specific antibodies
DK1966238T3 (da) * 2005-12-30 2012-07-16 Merck Patent Gmbh INTERLEUKIN-12P40-varianter med forbedret stabilitet
US20100330029A1 (en) * 2008-10-21 2010-12-30 Merck Patent Gmbh Cancer Treatments with Radiation and Immunocytokines
CA2933705A1 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Merck Patent Gmbh Survivin-directed cancer vaccine therapy

Also Published As

Publication number Publication date
RU2689160C2 (ru) 2019-05-24
MX2016010674A (es) 2016-11-08
EP3107573A1 (en) 2016-12-28
RU2016136990A3 (ko) 2018-10-10
RU2016136990A (ru) 2018-03-22
CA2940018C (en) 2018-12-04
ES2703826T3 (es) 2019-03-12
CN105992590A (zh) 2016-10-05
CA2940018A1 (en) 2015-08-27
EP3107573B1 (en) 2018-09-26
US20170166620A1 (en) 2017-06-15
CN105992590B (zh) 2019-12-31
JP6416926B2 (ja) 2018-10-31
KR20160120335A (ko) 2016-10-17
AU2015221181B2 (en) 2020-08-20
WO2015124297A1 (en) 2015-08-27
AU2015221181A1 (en) 2016-09-29
PT3107573T (pt) 2019-01-10
JP2017507937A (ja) 2017-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3107573B1 (en) Cancer-targeted il-12 immunotherapy
JP6963051B2 (ja) 免疫療法のための組成物および方法
Guo et al. Immunobiology of the IL-15/IL-15Rα complex as an antitumor and antiviral agent
Maggs et al. CAR T cell-based immunotherapy for the treatment of glioblastoma
CN111094345B (zh) 具有人结构域的抗b细胞成熟抗原嵌合抗原受体
Lu Impact of IL-12 in Cancer
Sim et al. The IL-2 cytokine family in cancer immunotherapy
Schilbach et al. Cancer-targeted IL-12 controls human rhabdomyosarcoma by senescence induction and myogenic differentiation
KR20170015460A (ko) 방사선 치료와 조합된 ｐｄ-1 및 ｐｄ-ｌ1에 대한 길항제를 이용하는 암 치료 방법
Mazzolini et al. Gene therapy of cancer with interleukin-12
JP2020528744A (ja) がん細胞を標的化するキメラ抗原受容体のための方法および組成物
TW201716072A (zh) 治療腹膜癌之組成物和方法
ES2910227T3 (es) Composición y métodos para la estimulación y expansión de células T
JP2022506777A (ja) がんの処置において使用するための微生物および免疫モジュレーターの併用療法
C Ochoa et al. Interleukin-15 in gene therapy of cancer
CN115552017A (zh) 经修饰的b细胞及其使用方法
Kim et al. Nanoparticle delivery of recombinant IL-2 (BALLkine-2) achieves durable tumor control with less systemic adverse effects in cancer immunotherapy
Pistoia et al. Cytokines in neuroblastoma: from pathogenesis to treatment
CN111655845A (zh) 代谢调节剂在肿瘤微环境中的表达以改善肿瘤的治疗
Jiang et al. Expansion of NK cells by engineered K562 cells co-expressing 4-1BBL and mMICA, combined with soluble IL-21
US10155024B2 (en) Composition for preventing or treating B-cell lymphoma comprising IL-21 expressing mesenchymal stem cells
WO2023164503A2 (en) Method of reducing bispecific t cell engager or chimeric antigen receptor t cell mediated cytokine release syndrome using interleukins-4, -10, or a fusion protein thereof
CN111836888B (zh) 用于癌症治疗的工程化干细胞
TWI734027B (zh) 用於治療癌症之組合物
Ganss Cytokine Therapy in the Tumor Microenvironment: Old Players, New Tricks

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal