KR20230019145A

KR20230019145A - 항체 제형 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20230019145A
Application number: KR1020227045934A
Authority: KR
Inventors: 안나 입; 케타키 파텔; 클리아 탤리; 마이클 제이. 트로이하이트; 준 장
Original assignee: 암젠 인크
Priority date: 2020-05-29
Filing date: 2021-05-28
Publication date: 2023-02-07
Also published as: JP2023528305A; AU2021281445A1; CN115697406A; WO2021243284A1; EP4157353A1; CA3183934A1; BR112022024296A2

Abstract

항체 제형 및 상기 제형의 제조 방법 및 사용 방법이 본 명세서에 제공된다. 상기 제형은 정맥내 투여용일 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 제형은 피하 투여용이다. 일부 실시형태에서, 상기 제형은 항-C5 항체, 예컨대, 에쿨리주맙을 포함한다.

Description

항체 제형 및 이의 용도

관련 출원

본 출원은 2020년 5월 29일자로 출원된 미국 가출원 특허 제63/031,634호의 이익을 주장하며, 상기 기초출원은 전문이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.

서열 목록

본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 제출된다. 서열 목록은 2021년 5월 28일자에 작성된 A-2590-WO-PCT_Final_SeqListing_05282021이라는 파일명의 파일로서 제공되며, 이의 크기는 21.3KB이다. 전자 형식 서열 목록의 정보 전체는 본 명세서에 참조에 의해 포함된다.

기술분야

본 개시내용은 항체를 위한 제형 및 이러한 항체의 제조 방법 및 사용 방법에 관한 것이다.

보체 시스템은 면역 반응의 일부로서 캐스케이드 방식으로 서로 상호작용하는 일련의 단백질을 포함하며, 항체 면역 반응과 함께 보완적인 역할을 하며, 미생물에 대한 숙주 방어 및 염증 반응의 조절에 중요한 역할을 한다. 보체는 고전적 경로, 대체 경로 및 렉틴 경로의 세 가지 경로에 의해 활성화되며, 각각의 경로는 처음에 초기에는 상이한 단백질을 포함하지만 모든 경로는 보체 성분 C3의 절단으로 수렴된다. C3는 염증을 촉진하고 순환하는 면역 세포를 동원하는 C3a로 분해되는 반면, C3b는 다른 성분과 복합체를 형성하여 보체 시스템의 후기 성분들 사이에서 일련의 반응을 시작한다. C3b는 다른 보체 성분과 복합체를 형성하여 C5-컨버타제 복합체를 형성한다. 보체 성분 C5는 C5-컨버타제 복합체에 의해 C5a 및 C5b로 절단된다. C5a는 예컨대, 염증 세포에 대한 화학 유인 물질로 작용함으로써 염증을 촉진한다. C5b는 세포 표면에 부착되어 유지되는데, 여기에서 이것은 막 공격 복합체(membrane attack complex: MAC)의 형성을 촉발한다. MAC는 막을 관통하고 유체가 세포 내부 및 외부로 자유롭게 유동하는 것을 촉진함으로써 세포를 파괴하는 친수성 기공이다.

보체 시스템 조절 장애는 다른 병리학적 병태를 초래할 수 있다. 세포는 보체 시스템의 표적이 병원성 세포에 제한되도록 하기 위해서 보체 캐스케이드의 효과로부터 세포를 보호하는 단백질을 발현한다. 많은 보체-관련 장애 및 질환은 보체 캐스케이드에 의한 자기 세포의 비정상적인 파괴와 관련이 있다. 이러한 장애의 예는 발작성 야간 혈색소뇨증(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria: PNH)인데, PNH는 보체-매개 공격으로부터 적혈구, 혈소판 및 기타 혈액 세포의 파괴를 방지하는 하나 이상의 세포 보호 단백질을 고갈시키는 유전적 돌연변이로부터 발생할 수 있고, 용혈성 빈혈(세포 용해로 인한 RBC 수 감소), 헤모글로빈뇨(RBC 용해로 인한 소변 내 헤모글로빈) 및/또는 혈색소혈증(RBC 용해로 인한 혈류 내 유리 헤모글로빈)을 특징으로 할 수 있다.

보체-관련 장애를 치료하는 데 사용할 수 있는 치료제는 C5 절단을 저해할 수 있는 작용제, 예컨대, 보체 C5에 결합하는 항체이다. 이러한 치료제의 일례는 에쿨리주맙인데, 이것은 Soliris^®(Alexion Pharmaceuticals, Inc., 미국 코네티컷주 뉴 해븐 소재)로 판매된다. 또 다른 예는 라불리주맙인데, 이것은 Ultomiris^®(Alexion Pharmaceuticals, Inc., 미국 코네티컷주 뉴 해븐 소재)로 판매된다.

본 개시내용은 안정적이고/이거나, 응집이 적고/거나 다른 이점이 있는 항체 제형에 대한 필요성을 충족시키는 제형을 제공한다.

본 명세서에는 항체 제형 및 이러한 제형의 제조 방법 및 사용 방법이 제공된다. 제형은 약제학적 제형 또는 약제학적 조성물일 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 항-C5 항체이다.

일 실시형태에서, 제형은 완충제, 안정화제 및 킬레이팅제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 완충제는 아세테이트를 포함한다. 아세테이트의 농도는 0.1 mM 내지 50 mM, 예컨대, 0.5 mM 내지 50 mM, 1 mM 내지 50 mM, 2.5 mM 내지 40 mM, 5 mM 내지 30 mM, 또는 10 mM 내지 20 mM일 수 있다. 일 실시형태에서, 아세테이트 농도는 약 10 mM이다. 일부 실시형태에서, 제형의 안정화제는 폴리올, 예컨대, 소르비톨이다. 일 실시형태에서, 폴리올, 예컨대, 소르비톨의 농도는 약 5% (w/v)이다. 일 실시형태에서, 제형에서 킬레이팅제의 농도는 0.01 mM 내지 0.05 mM, 예컨대, 약 0.05 mM이다. 일 실시형태에서, 킬레이팅제는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)이다. 일부 실시형태에서, 계면활성제의 농도는 0.001% 내지 0.1% (w/v), 예컨대, 0.01% (w/v)이다. 일부 실시형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 제형은 아세테이트의 완충 능력 내의 pH를 가질 수 있다. 일 실시형태에서, pH는 4.5 내지 5.8이다. 일 실시형태에서, pH는 약 5.2이다.

일부 실시형태에서, 항체는 에쿨리주맙 또는 라불리주맙이다. 일부 실시형태에서, 항체는 CDRH1 내지 3을 포함할 수 있고, CDRH1 내지 3은 각각 서열번호 1 내지 3 또는 4, 5 및 3의 아미노산 서열을 갖는다. 일 실시형태에서, 항체는 CDRL1 내지 3을 포함하고, CDRL1 내지 3의 아미노산 서열은 각각 서열번호 12 내지 14이다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 6 또는 7의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 15의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 8 또는 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 10 또는 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 항체는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 항체는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체의 농도는 약 10 ㎎/㎖이다.

도 1은 6개월 동안, 검출 가능한 미량 금속이 없는 소르비톨 제형, 검출 가능한 미량 금속이 있는 소르비톨 제형(2개의 상이한 로트인 로트 A 및 로트 B로부터의 에쿨리주맙) 및 PBS 제형 중의 에쿨리주맙 10 ㎎/㎖에 대해서 25℃에서 SE-UHPLC에 의해서 측정된 바와 같은 고분자량 종의 백분율을 도시한 도면.
도 2는 50℃에서 PBS 제형, EDTA가 없는 소르비톨 제형 및 EDTA가 있는 소르비톨 제형에서 에쿨리주맙의 상대 역가(potency)(%)를 도시한 도면.
도 3은 40℃에서 13주 동안 다양한 수준의 EDTA를 갖는 소르비톨 제형에서 HIC-HPLC 프리 피크에 의해 측정된 바와 같은 에쿨리주맙의 산화 형태의 백분율을 도시한 도면.
도 4는 40℃에서 13주 동안 다양한 수준의 EDTA를 갖는 소르비톨 제형에서 SE-UHPLC로 측정된 바와 같은 고분자량 종의 백분율을 도시한 도면.
도 5는 14일 동안 50℃의 인큐베이션의 강제 분해 조건(FD) 하에서 비-SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 약물 제품(DP)(GMP DP1, GMP DP2, GMP DP3) 및 SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP(SUS DP)에 대해 SE-UHPLC에 의해 측정된 바와 같은 고분자량 종의 백분율을 도시한 도면.
도 6a는 2주 동안 50℃의 인큐베이션의 강제 분해 조건(FD) 하에서 비-SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 약물 제품(DP)(GMP 1 DP, GMP 2 DP) 및 SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP(SUS DP)의 W107의 산화 백분율을 도시한 도면.
도 6b는 2주 동안 50℃의 인큐베이션의 강제 분해 조건(FD) 하에서 비-SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 약물 제품(DP)(GMP 1 DP, GMP 2 DP) 및 SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP(SUS DP)의 상대 역가(%)를 도시한 도면.
도 7은 2주 동안 50℃의 인큐베이션의 강제 분해 조건(FD) 하에서 비-SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 약물 제품(DP)(GMP 2 DP) 및 SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP(SUS DP)의 HIC-HPLC에 의해서 측정된 바와 같은 주 피크의 백분율을 도시한 도면.
도 8은 2주 동안 50℃의 인큐베이션의 강제 분해 조건(FD) 하에서 비-SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 약물 제품(DP)(GMP 2 DP) 및 SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP(SUS DP)의 HIC-HPLC에 의해서 측정된 바와 같은 프리 피크의 백분율을 도시한 도면.

본 개시내용은 항체 제형 및 이러한 제형의 제조 방법 및 사용 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 항체는 보체 단백질 C5에 특이적으로 결합하는 항체이다. 항체는 항-C5 항체일 수 있다. 일 실시형태에서, 항체는 에쿨리주맙이다. 또 다른 실시형태에서, 항체는 라불리주맙이다.

일 실시형태에서, 항체는 CDRH1의 경우 GYIFSNYWIQ(서열번호 1)의 아미노산, CDRH2의 경우 EILPGSGSTEYTENFKD(서열번호 2)의 아미노산 서열 및 CDRH3의 경우 YFFGSSPNWYFDV(서열번호 3)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 CDRH1의 경우 GHIFSNYWIQ(서열번호 4)의 아미노산 서열, CDRH2의 경우 EILPGSGHTEYTENFKD(서열번호 5)의 아미노산 서열 및 CDRH3의 경우 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR을 포함한다.

일 실시형태에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함한다:

일 실시형태에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다:

일 실시형태에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함한다:

일 실시형태에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함한다:

일부 실시형태에서, 항체는 CDRL1의 경우 GASENIYGALN(서열번호 12)의 아미노산 서열, CDRL2의 경우 GATNLAD(서열번호 13)의 아미노산 서열 및 CDRL2의 경우 QNVLNTPLT(서열번호 14)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR을 포함한다.

일 실시형태에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다:

일 실시형태에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함한다:

일 실시형태에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다:

일 실시형태에서, 항체는 CDRH1 내지 3을 포함하는 중쇄(CDRH1 내지 3은 각각 서열번호 1 내지 3의 아미노산 서열을 포함함); 및 CDRL 1 내지 3을 포함하는 경쇄(CDRL1 내지 3은 각각 서열번호 12 내지 14의 아미노산 서열을 포함함)를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 항체는 CDRH1 내지 3을 포함하는 중쇄(CDRH1 내지 3은 각각 서열번호 4, 5 내지 3의 아미노산 서열을 포함함); 및 CDRL 1 내지 3을 포함하는 경쇄(CDRL1 내지 3은 각각 서열번호 12 내지 14의 아미노산 서열을 포함함)를 포함한다.

또 다른 실시형태에서, 항체는 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.

추가의 또 다른 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 6 및 8의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 중쇄 및 각각 서열번호 15 및 16의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다. 추가의 또 다른 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 7 및 9의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 중쇄 및 각각 서열번호 15 및 16의 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 경쇄를 포함한다.

또 다른 실시형태에서, 항체는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 항체는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일부 실시형태에서, 1 내지 300 ㎎/㎖의 항-C5 항체가 본 명세서에 개시된 제형에 존재한다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 제형은 1 내지 50 ㎎/㎖, 1 내지 300 ㎎/㎖, 1 내지 250 ㎎/㎖, 1 내지 200 ㎎/㎖, 1 내지 100 ㎎/㎖의 항-C5 항체를 포함한다. 일 실시형태에서, 제형은 10 내지 50 ㎎/㎖의 항-C5 항체를 포함한다. 일 실시형태에서, 제형은 300 ㎎/㎖ 미만, 250 ㎎/㎖ 미만, 200 ㎎/㎖ 미만, 100 ㎎/㎖ 미만, 50 ㎎/㎖ 미만, 45 ㎎/㎖ 미만, 40 ㎎/㎖ 미만, 30 ㎎/㎖ 미만 또는 25 ㎎/㎖ 미만의 항-C5 항체를 포함한다. 일 실시형태에서, 제형은 약 300 ㎎/㎖, 약 250 ㎎/㎖, 약 200 ㎎/㎖, 약 100 ㎎/㎖, 약 50 ㎎/㎖, 약 45 ㎎/㎖, 약 40 ㎎/㎖, 약 30 ㎎/㎖, 약 25 ㎎/㎖, 약 10 ㎎/㎖ 또는 약 5 ㎎/㎖의 항-C5 항체를 포함한다. 일 실시형태에서, 제형은 약 10 ㎎/㎖의 항-C5 항체를 포함한다.

일부 실시형태에서, 제형은 항-C5 항체(예를 들어, 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 17의 경쇄 서열을 포함하는 항체 약 10 ㎎/㎖), 완충제(예를 들어, 10 mM의 아세테이트를 포함하는 완충제), 킬레이팅제(예를 들어, 0.05 mM의 EDTA) 및 선택적으로, 안정화제(예를 들어, 5% (w/v) 소르비톨) 및/또는 계면활성제(예를 들어, 0.01%의 폴리소르베이트 80)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제형의 pH는 약 5.2이다.

일부 실시형태에서, 제형은 완충제, 예컨대, 아세테이트를 포함한다. 일 실시형태에서, 아세테이트 또는 아세테이트 완충제의 농도는 0.1 mM 내지 50 mM, 0.5 mM 내지 50 mM, 1 mM 내지 50 mM, 1 mM 내지 40 mM, 2.5 mM 내지 40 mM, 1 mM 내지 30 mM, 1 mM 내지 20 mM, 1 mM 내지 10 mM, 1 mM 내지 5 mM, 5 mM 내지 30 mM 또는 10 mM 내지 20 mM이다. 일 실시형태에서, 아세테이트 또는 아세테이트 완충제의 농도는 약 0.5 mM, 약 1 mM, 약 2.5 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 40 mM 또는 약 50 mM이다. 일 실시형태에서, 아세테이트 또는 아세테이트 완충제의 농도는 10 mM이다.

일부 실시형태에서, 제형은 4.5 내지 5.8인 pH를 갖는다. 일부 실시형태에서, 제형은 약 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7 또는 5.8인 pH를 갖는다. 일 실시형태에서, 제형의 pH는 약 5.2이다.

일부 실시형태에서, 제형은 안정화제를 포함한다. 일 실시형태에서, 안정화제는 폴리올 또는 당이다. 일부 실시형태에서, 안정화제는 수크로스, 소르비톨, 글리세롤, 트레할로스(예를 들어, α,α-트레할로스 또는 트레할로스 디하이드레이트), 만니톨, 덱스트로스, 덱스트란, 글루코스 또는 이들의 임의의 조합이다. 일 실시형태에서, 안정화제는 소르비톨이다. 안정화제의 농도는 안정화제 0 내지 50% (w/v)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 제형은 0 내지 25% (w/v)의 안정화제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제형은 0 내지 20% (w/v), 5 내지 50% (w/v), 10 내지 20% (w/v), 0 내지 10% (w/v), 5 내지 10% (w/v) 또는 2 내지 10% (w/v)의 안정화제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제형은 약 1.5%, 약 2%, 약 2.5%, 약 3%, 약 3.5%, 약 4%, 약 4.5%, 약 5%, 약 5.5%, 약 6%, 약 6.5%, 약 7%, 약 7.5%, 약 8%, 약 8.5%, 약 9%, 약 9.5%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 또는 약 20% (w/v)의 안정화제, 예컨대, 소르비톨을 포함한다. 일 실시형태에서, 제형은 약 5% (w/v)의 소르비톨을 포함한다.

일 실시형태에서, 제형은 킬레이팅제를 포함한다. 킬레이팅제는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산(DOTA), 1,4,7-트리아자시클로노난, 1-글루타르산-4,7 아세트산(NODAGA), 1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리아세트산(NOTA), 하이드라진-니코틴산(HYNIC), 머캅토아세틸글리실트리글리신(MAG3), 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 트리에틸렌테트라민(TETA), 이미노디아세트산, 디에틸렌트리아민-N,N,N',N',N''-펜타아세트산(DTPA) 및/또는 이들의 조합일 수 있다. 일 실시형태에서, 킬레이팅제는 EDTA이다. 킬레이팅제의 농도는 0.01 mM 내지 0.10 mM, 예컨대, 약 0.01 mM, 0.02 mM, 0.03 mM, 0.04 mM, 0.05 mM, 0.06 mM, 0.07 mM, 0.08 mM, 0.09 mM 또는 0.10 mM일 수 있다. 일 실시형태에서, 킬레이팅제, 예컨대, EDTA의 농도는 약 0.05 mM이다.

일 실시형태에서, 제형은 또한 계면활성제를 포함한다. 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 글리콜 알킬 에테르, 폴리옥시프로필렌 글리콜 알킬 에테르, 글루코시드 알킬 에테르, 폴리옥시에틸렌 글리콜 옥틸페놀 에테르, 폴리옥시에틸렌 글리콜 알킬페놀 에테르, 글리세롤 알킬 에스테르, 폴리옥시에틸렌 글리콜 소르비탄 알킬 에스테르, 소르비탄 알킬 에스테르, 코카미드 MEA, 코카미드 DEA, 도데실디메틸아민 옥시드, 폴록사머, 폴리에톡실화 탈로우 아민(POEA) 또는 이들의 조합일 수 있다. 일 실시형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트이다. 일 실시형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다. 또 다른 실시형태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 추가의 또 다른 실시형태에서, 계면활성제는 폴록사머, 예컨대, 폴록사머 188이다. 일 실시형태에서, 계면활성제는 Pluronic® F-68이다. 일부 실시형태에서, 제형은 0.001 내지 3% (w/v), 0.001 내지 2% (w/v), 0.001 내지 1% (w/v), 0.001 내지 0.5% (w/v) 또는 0.01% 내지 0.1% (w/v)의 계면활성제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 제형은 약 0.01% (w/v)의 계면활성제, 예컨대, 폴리소르베이트 80을 포함한다.

일부 실시형태에서, 제형은 1종 이상의 추가 부형제(들) 또는 작용제(들), 예컨대, 보존제, 완충제, 등장화제, 항산화제, 안정화제, 비이온성 습윤 또는 청징제 및/또는 점도 증가제를 더 포함한다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 제형은 정맥내 주사 또는 주입(IV), 피하 주사(SC), 복강내(IP) 주사, 안내 주사, 동맥내 주사 또는 근육내 주사(IM)용으로 사용된다.

제형은 보체-연관 질환, 예컨대, 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis: RA); 항인지질 항체 증후군; 홍반성 신염; 천식; 허혈-재관류 손상; 비전형적 용혈성 요독 증후군(atypical hemolytic uremic syndrome: aHUS); 전형적 또는 감염성 용혈성 요독 증후군(typical or infectious hemolytic uremic syndrome: tHUS); 고밀도 침착병(dense deposit disease: DDD); 발작성 야간 혈색뇨증(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria: PNH); 시신경척수염(neuromyelitis optica: NMO) 또는 시신경 척수염 스펙트럼 장애(neuromyelitis optica spectrum disorder: NMOSD); 다초점 운동 신경병증(multifocal motor neuropathy: MMN); 다발성 경화증(multiple sclerosis: MS); 황반 변성(예를 들어, 연령-관련 황반 변성(age-related macular degeneration: AMD)); 용혈, 상승된 간 효소 및 저혈소판(hemolysis, elevated liver enzymes, and low platelets: HELLP) 증후군; 혈전성 혈소판감소성 자반(thrombotic thrombocytopenic purpura: TTP); 자연 유산; 소수 면역 혈관염(Pauci-immune vasculitis); 수포성 표피박리증; 재발성 유산; 또는 외상성 뇌 손상을 치료 또는 예방하기 위해서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 보체-연관 장애는 보체-연관 혈관 장애, 예컨대, 당뇨병-연관 혈관 장애, 중심 망막 정맥 폐색, 심혈관 장애, 심근염, 뇌혈관 장애, 말초혈관 장애, 신혈관 장애, 장간막/장 혈관 장애, 이식편 및/또는 재이식편으로의 혈관재생술, 혈관염, 헤노호-쉔라인 자반병성 신염(Henoch-Schonlein purpura nephritis), 전신 홍반성 루프스-연관 혈관염, 류마티스 관절염 연관 혈관염, 면역 복합체 혈관염, 타카야스병(Takayasu's disease), 확장성 심근병증, 당뇨병성 혈관병, 가와사키병(Kawasaki's disease)(동맥염), 정맥 가스 색전증(venous gas embolus: VGE) 및 스텐트 배치 후 재협착증, 회전죽상반제술(rotational atherectomy) 또는 경피경혈관심장동맥확장술(percutaneous transluminal coronary angioplasty: PTCA)이다. 일부 실시형태에서, 보체-연관 장애는 중증근무력증(myasthenia gravis: MG), 한랭 응집소 질환(cold agglutinin disease), 피부근염, 그레이브스병, 죽상 동맥 경화증, 알츠하이머병, 길랑-바레 증후군, 데고스병(Degos' disease), 이식편 거부(예를 들어, 이식 거부), 패혈증, 화상(예를 들어, 심한 화상), 전신 염증 반응 패혈증, 패혈성 쇼크, 척수 손상, 사구체신염, 하시모토 갑상선염, I형 당뇨병, 건선, 천포창, 자가면역성 용혈성 빈혈(AIHA), 특발성 혈소판 감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenic purpura: ITP), 굿파스쳐 증후군(Goodpasture syndrome), 항인지질 증후군(antiphospholipid syndrome: APS) 또는 파국성(catastrophic) APS (CAPS)이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 제형은 혈전성 미세혈관증(thrombotic microangiopathy: TMA), 예컨대, 보체-연관 장애와 연관된 TMA의 치료 방법에서 사용될 수 있다. 일 실시형태에서, 제형은 PNH, aHUS, 전신형(generalized) MG(gMG) 또는 불응성 gMG 및/또는 NMOSD의 치료용이다.

일부 실시형태에서, 제형은 예를 들어, 대상체에게 항체를 전신으로 전달하기 위한 약제학적으로 허용 가능한 희석액에 희석될 수 있는 항-C5 항체의 농축 용액이다. 일 실시형태에서, 제형은 10 ㎎/㎖의 농도로 300 ㎎의 항-C5 항체의 단일 단위 바이알 내에 존재하고, 5 ㎎/㎖의 최종 농도로 희석될 수 있다. 희석액은 염화나트륨 용액(예를 들어, 0.45% 또는 0.9% 염화나트륨), 덱스트로스 용액(예를 들어, 수 중의 5% 덱스트로스) 또는 링거액일 수 있다.

일부 실시형태에서, 킬레이팅제(예를 들어, EDTA)와 함께 항-C5 항체를 포함하는 제형은 킬레이팅제를 포함하지 않는 제형보다 더 큰 안정성을 갖는다. 예를 들어, 특정 pH(예를 들어, 약 5.2)에서 항-C5 항체(예를 들어, 10 ㎎/㎖ 에쿨리주맙), 완충제(예를 들어, 10 mM 아세테이트), 안정화제(예를 들어, 5% (w/v) 소르비톨), 계면활성제(예를 들어, 0.01% (w/v)의 폴리소르베이트 80) 및 킬레이팅제(예를 들어, 0.05 mM EDTA)를 포함하는 제형은 EDTA를 포함하지 않는 동일한 제형(즉, 10 ㎎/㎖ 에쿨리주맙, 10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% PS80, pH 5.2), 또는 완충제, 등장화제 및 계면활성제를 포함하고 킬레이팅제를 포함하지 않는 또 다른 제형(예를 들어, 10 mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% PS 80, pH 7.0))보다 더 안정적일 수 있다.

일 실시형태에서, 킬레이팅제(예를 들어, EDTA)와 함께 항-C5 항체를 포함하는 제형은 주어진 시간 지속 기간(예를 들어, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일 또는 약 15일; 또는 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주 또는 약 15주) 후에 킬레이팅제가 없는 제형보다 더 큰 안정성을 갖는다. 일 실시형태에서, 킬레이팅제(예를 들어, EDTA)와 함께 항-C5 항체를 포함하는 제형은 주어진 온도 또는 스트레스 조건, 예컨대, 약 50℃, 40℃, 약 30℃, 약 25℃, 약 5℃, 약 -20℃ 또는 약 -30℃에서 킬레이팅제가 없는 제형보다 더 큰 안정성을 갖는다.

일 실시형태에서, 킬레이팅제(예를 들어, EDTA)와 함께 항-C5 항체를 포함하는 제형은 주어진 온도에서 주어진 시간 지속 기간 후(예를 들어, 약 50℃, 40℃, 약 30℃, 약 25℃, 약 5℃, 약 -20℃ 또는 약 -30℃에서 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일 또는 약 15일; 또는 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주 또는 약 15주 후)에 킬레이팅제가 없는 제형보다 더 큰 안정성을 갖는다.

제형의 안정성은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해서 결정될 수 있다. 일 실시형태에서, 제형의 안정성은 크로마토그래피, 예컨대, 크기 배제 크로마토그래피, 예를 들어, 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SE-HPLC) 또는 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피(SE-UHPLC) 또는 소수성 고성능 액체 크로마토그래피(HIC-HPLC)에 의해서 결정되는데, 여기서 각각 스트레스 공정 및/또는 저장 조건 전 및 후에 제1 피크와 제2 피크에서 더 큰 변화 또는 차이를 갖는 제2 제형과 비교할 때 스트레스 공정 및/또는 저장 조건 후 동일한 제형으로부터의 제2 피크에 비해서 스트레스 공정 및/또는 저장 조건 이전의 제1 제형으로부터의 제1 피크에서의 더 낮은 변화 또는 차이는 제1 제형이 제2 제형보다 더 안정적이라는 것을 나타낸다.

또 다른 실시형태에서, 제형의 안정성은 제형의 탁도(turbidity)(예를 들어, 예컨대, OD₄₀₅ nm에서 측정됨), 회수된 단백질 백분율(예를 들어, SE-HPLC에 의해 결정됨) 및/또는 단백질의 순도(예를 들어, SE-HPLC에 의해 결정됨)에 의해서 결정되고, 여기서 더 낮은 탁도, 더 높은 회수 백분율 및 더 높은 순도는 더 높은 안정성을 나타낸다. 일부 실시형태에서, SDS-PAGE(환원 또는 비환원)를 사용하여 제형의 안정성을 결정한다. 일부 실시형태에서, CE-SDS(환원 또는 비환원)를 사용하여 제형의 안정성을 결정한다. 일부 실시형태에서, 비대칭 유동장-유동 분별법(asymmetric flow field-flow fractionation: AF4)이 사용된다. 다른 실시형태에서, 등전 포커싱(isoelectric focusing: IEF), 예를 들어, 모세관 등전 포커싱(capillary isoelectric focusing: cIEF)이 사용된다. 일부 실시형태에서, AEX-HPLC가 사용된다. 제2 제형과 비교할 때 제1 제형에서 IEF에서의 증가된 단편 및/또는 변화는 제1 제형이 덜 안정적이는 것을 나타낼 것이다. 임의의 하나의 방법 또는 방법의 조합을 사용하여 제형의 안정성을 결정할 수 있다.

일부 실시형태에서, 킬레이팅제(예를 들어, EDTA)와 함께 항-C5 항체를 포함하는 제형은 킬레이팅제를 포함하지 않는 제형보다 더 큰 역가를 갖는다. 예를 들어, 특정 pH(예를 들어, 약 5.2)에서 항-C5 항체(예를 들어, 10 ㎎/㎖ 에쿨리주맙), 완충제(예를 들어, 10 mM 아세테이트), 안정화제(예를 들어, 5% (w/v) 소르비톨), 계면활성제(예를 들어, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80) 및 킬레이팅제(예를 들어, 0.05 mM EDTA)를 포함하는 제형은 킬레이팅제, 예컨대, EDTA를 포함하지 않는 동일한 제형(즉, 10 ㎎/㎖ 에쿨리주맙, 10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% PS80, pH 5.2), 또는 완충제, 등장화제 및 계면활성제를 포함하고 킬레이팅제를 포함하지 않는 또 다른 제형(예를 들어, 10 mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% PS 80, pH 7.0))보다 더 강력하다. 역가는 당업계에 공지된 임의의 검정에 의해서 결정될 수 있다. 역가는 또한 보체 단백질 C5의 활성을 저해하는 항-C5 항체의 능력을 측정함으로써 결정될 수 있다.

일 실시형태에서, 용혈 검정을 사용하여 항-C5 항체의 역가를 측정한다. 일 실시형태에서, 이 검정은 항-C5 항체에 의한, 말단 보체 활성화의 하류 종점인 닭 적혈구 용해의 저해를 정량하기 위한 생물학적 특징규명 방법이다.　 이 검정에서, 다양한 농도의 항-C5 항체를 고정된 농도의 정상 인간 혈청과 함께 인큐베이션시킨다. 그 다음 이 혼합물을 토끼 항-닭 적혈구 항체로 코팅된 닭 적혈구와 함께 인큐베이션시킨다. 인큐베이션 후, 혼합물을 원심분리시키고, 상청액에 방출된 헤모글로빈의 흡광도(예를 들어, A405 nm에서)를 측정함으로써 용혈 정도를 정량한다. 보체 활성화의 양은 흡광도의 강도와 상관관계가 있다. 결과는 백분율 상대 역가(역가%) 값으로 보고될 수 있다.

다른 실시형태에서, 역가는 말단 보체 활성화로부터 생성된 생성물의 검출을 통한 보체 활성화에 대한 용혈 검정에 의해 결정되는데, 여기서 생성된 생성물의 양은 보체의 기능적 활성에 비례한다. 일 실시형태에서, 검정은 인간 혈청에서 보체 단백질 C5의 활성화를 저해하는 항-C5 항체의 능력을 측정하는 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)이다. 검정은 말단 보체 활성화의 결과로 생성된 생성물(예를 들어, 인간 C5b-9 단클론성 항체가 특이적인 신생항원)에 대해 표지된 검출제(예를 들어, 특정 알칼리 포스파타제 표지된 인간 C5b-9 단클론성 항체)를 사용할 수 있는데, 여기서 생성된 생성물(예를 들어, C5b-9 신생항원)의 양은 보체의 기능적 활성에 비례한다. 일 실시형태에서, 다양한 농도의 항-C5 항체를 보체 활성화제(예를 들어, 자이모산)의 존재 하에서 고정된 농도의 정상 인간 혈청과 함께 인큐베이션시킨다. 인큐베이션 동안, 정상 인간 혈청 보체는 자이모산에 의해 활성화되고, 말단 보체 활성화의 결과로 생성된 C5b-9 복합체는 자이모산에 결합한다. C5b-9는 알칼리 포스파타제 표지된 C5b-9 항체로 검출되며, 검출된 C5b-9의 양은 보체 활성화의 양과 상관관계가 있다. 검정은 표지된 C5b-9의 항-C5 항체 용량 의존적 검출(즉, 항체 용량 증가, C5b-9 검출 감소 및 이에 따른 보체 활성화)을 측정한다. 시험 샘플 활성은 시험 샘플 반응을 참조 표준으로 얻은 반응과 비교하여 결정할 수 있다(즉, 상대 역가).

일 실시형태에서, 킬레이팅제(예를 들어, EDTA)와 함께 항-C5 항체를 포함하는 제형은 주어진 시간 지속 기간(예를 들어, 약 1주, 약 2주; 또는 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일 또는 약 15일) 동안 킬레이팅제가 없는 제형보다 더 큰 역가를 갖는다.

예를 들어, 특정 pH(예를 들어, 약 5.2)에서 항-C5 항체(예를 들어, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙), 완충제(예를 들어, 10 mM 아세테이트), 안정화제(예를 들어, 5% (w/v) 소르비톨), 계면활성제(예를 들어, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80) 및 킬레이팅제(예를 들어, 0.05 mM EDTA)를 포함하는 제형은 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일 또는 약 15일 후에 킬레이팅제, 예컨대, EDTA를 포함하지 않는 동일한 제형(즉, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙, 10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% PS80, pH 5.2), 또는 완충제, 등장화제 및 계면활성제를 포함하고 킬레이팅제를 포함하지 않는 또 다른 제형(예를 들어, 10 mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% PS 80, pH 7.0))보다 더 강력할 수 있다.

일부 실시형태에서, 킬레이팅제(예를 들어, EDTA)와 함께 항-C5 항체를 포함하는 제형은 킬레이팅제를 포함하지 않는 제형보다 감소된 응집을 갖는다. 예를 들어, 특정 pH(예를 들어, 약 5.2)에서 항-C5 항체(예를 들어, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙), 완충제(예를 들어, 10 mM 아세테이트), 안정화제(예를 들어, 5% (w/v) 소르비톨), 계면활성제(예를 들어, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80) 및 킬레이팅제(예를 들어, 0.05 mM EDTA)를 포함하는 제형은 킬레이팅제, 예컨대, EDTA를 포함하지 않는 동일한 제형(즉, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙, 10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% PS80, pH 5.2), 또는 완충제, 등장화제 및 계면활성제를 포함하고 킬레이팅제를 포함하지 않는 또 다른 제형(예를 들어, 10 mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% PS 80, pH 7.0))보다 더 적은 응집을 갖는다. 응집 수준은 당업계에 공지된 방법, 예컨대, 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피(SE-UHPLC) 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피 고성능 액체 크로마토그래피(HIC-HPLC)에 의해 결정될 수 있다.

일 실시형태에서, 킬레이팅제(예를 들어, EDTA)와 함께 항-C5 항체를 포함하는 제형은 주어진 시간 지속 기간(예를 들어, 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주 또는 약 15주) 후에 킬레이팅제가 없는 제형보다 더 적은 응집을 갖는다.

예를 들어, 특정 pH(예를 들어, 약 5.2)에서 항-C5 항체(예를 들어, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙), 완충제(예를 들어, 10 mM 아세테이트), 안정화제(예를 들어, 5% (w/v) 소르비톨), 계면활성제(예를 들어, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80) 및 킬레이팅제(예를 들어, 0.05 mM EDTA)를 포함하는 제형은 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주 또는 약 15주 후에 킬레이팅제, 예컨대, EDTA를 포함하지 않는 동일한 제형(즉, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙, 10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% PS80, pH 5.2), 또는 완충제, 등장화제 및 계면활성제를 포함하고 킬레이팅제를 포함하지 않는 또 다른 제형(예를 들어, 10 mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% PS 80, pH 7.0))보다 더 적은 응집을 가질 수 있다.

또 다른 예에서, 특정 pH(예를 들어, 약 5.2)에서 항-C5 항체(예를 들어, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙), 완충제(예를 들어, 10 mM 아세테이트), 안정화제(예를 들어, 5% (w/v) 소르비톨), 계면활성제(예를 들어, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80) 및 킬레이팅제(예를 들어, 0.05 mM EDTA)를 포함하는 제형은 약 50℃, 40℃, 약 30℃, 약 25℃, 약 5℃, 약 -20℃ 또는 약 -30℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주 또는 약 15주 후에 킬레이팅제, 예컨대, EDTA를 포함하지 않는 동일한 제형(즉, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙, 10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% PS80, pH 5.2), 또는 완충제, 등장화제 및 계면활성제를 포함하고 킬레이팅제를 포함하지 않는 또 다른 제형(예를 들어, 10 mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% PS 80, pH 7.0))보다 더 적은 응집을 가질 수 있다.

이론에 얽매이고자 함은 아니지만, 특정 pH(예를 들어, 약 5.2)에서 항-C5 항체(예를 들어, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙), 완충제(예를 들어, 10 mM 아세테이트), 안정화제(예를 들어, 5% (w/v) 소르비톨), 계면활성제(예를 들어, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80) 및 킬레이팅제(예를 들어, 0.05 mM EDTA)는 킬레이팅제, 예컨대, EDTA를 포함하지 않는 동일한 제형(즉, 10 ㎎/㎖의 에쿨리주맙, 10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% PS80, pH 5.2), 또는 완충제, 등장화제 및 계면활성제를 포함하고 킬레이팅제를 포함하지 않는 또 다른 제형(예를 들어, 10 mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% PS 80, pH 7.0))보다 증가된 역가 및/또는 더 적은 응집을 가질 수 있는데, 그 이유는 항-C5 항체가 미량 금속의 존재로 인해 중쇄 내에 산화 변형을 가질 수 있으며, 이것이 구조적 변화로 이어져서 응집체 형성의 증가 및/또는 생체활성의 감소를 초래할 수 있기 때문이다. 예를 들어, 에쿨리주맙은 중쇄 CDR3(CDRH-3) 트립토판(서열번호 3의 9번 위치, 서열번호 10의 107번 위치에 상응함)인 W107 상에 산화 변형을 가질 수 있는데, 이는 미량 금속의 존재로 인해서 구조적 변화 및 응집체 형성으로 이어져서 생체활성의 감소를 초래할 수 있다. 에쿨리주맙을 갖는 제형에서 미량 금속의 존재는 CDRH-3의 산화로 인해, 검출 가능한 미량 금속이 없는 제형과 비교할 때 더 높은 백분율의 HMW 종 및/또는 더 낮은 역가를 초래할 수 있다. 검출 가능한 미량 금속을 갖는 제형에서 에쿨리주맙의 불안정성은 에쿨리주맙의 금속-촉매 산화(예를 들어, 철-촉매 산화, 펜톤(Fenton) 반응)로 인한 것일 수 있다. 제형에서 킬레이팅제의 존재는 미량 금속의 존재 효과를 중화(예를 들어, 철-촉매 산화, 펜톤 반응 저해)하여, W107의 산화와 같은 에쿨리주맙의 산화 변형을 감소시킬 수 있다.

일부 실시형태에서, 에쿨리주맙은 단일-사용 시스템(single-use system: SUS)에서 제조된다. 일부 실시형태에서, SUS에서 제조된 에쿨리주맙은 비-SUS에서 제조된 에쿨리주맙과 비교할 때 에쿨리주맙의 감소된 산화 변형(예를 들어, W107의 산화)을 갖는다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, SUS에서 제조된 에쿨리주맙은 비-SUS에서 제조된 에쿨리주맙과 비교할 때 금속 함량이 감소된다.　 일부 실시형태에서, 미량 금속은 SUS에서 제조된 에쿨리주맙 약물 제품 또는 약물 물질에서 유도 결합 플라즈마 질량 분석법(IPC-MS)과 같은 통상적인 수단에 의해 존재하지 않거나 검출할 수 없다. 감소된 미량 금속으로 그리고/또는 검출 가능한 미량 금속 존재 없이 제조된 에쿨리주맙은 검출 가능한 미량 금속을 갖는 에쿨리주맙과 비교할 때 증가된 안정성 및/또는 역가를 가질 수 있다(예를 들어, CRH-3 트립토판(서열번호 3의 9번 위치, 서열번호 10의 105번 위치에 상응함)에서 에쿨리주맙의 금속-촉매 산화, 예컨대, 철-촉매 산화 또는 펜톤 반응으로 인한 것임).

일부 실시형태에서, 에쿨리주맙 약물 물질은 SUS에서 제조된다. 일부 실시형태에서, 에쿨리주맙 약물 제품은 SUS에서 제조된다. 일부 실시형태에서, 에쿨리주맙 약물 물질 및 약물 제품은 SUS에서 제조된다. 일부 실시형태에서, SUS는 플라스틱 재료로부터 제조되고, 일회용인 재료의 사용을 포함한다. 예를 들어, SUS에 사용되는 용기는 상업적으로 입수 가능한 단일-사용 공정 용기, 예컨대, EMD Millipore(미국 매사추세츠주 벌링턴 소재)로부터 입수 가능한 것, 예를 들어, PureFlex^TM필름으로 제조된 용기, 예컨대, 초저밀도 폴리에틸렌(ULDPE)을 포함하는 제품 층을 갖는 PureFlex^TM 백일 수 있는데, 이것은 완충제, 제형화, 공정 중 보유 및 충전(예를 들어, 서지 용기) 유닛 작업을 위한 약물 제품 제조 또는 생산 공정에서 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, SUS에 사용되는 용기는 금속을 갖지 않거나 금속을 침출하지 않는 재료로 제조된다. 일부 실시형태에서, 재료는 플라스틱이다. 일부 실시형태에서, 재료는 에틸 비닐 아세테이트(EVA)이다.

일 실시형태에서, SUS(예를 들어, 공정의 하나 이상의 단계에서 금속보다는 플라스틱으로 제조된 용기를 사용하는 것과 같음)를 사용하여 제조된 약물 물질(예를 들어, 에쿨리주맙 약물 물질)에서 검출된 금속의 수준은 비-SUS(예를 들어, 공정의 동일한 해당 단계(들) 중 하나 이상에서 스테인리스강 용기를 사용하는 것과 같음)를 사용하여 제조된 약물 물질보다 더 낮다. 일 실시형태에서, SUS 공정은 스테인리스강 용기 또는 용기(예를 들어, 서지 용기) 대신에 SUS 용기 또는 용기(예를 들어, 서지 용기)를 통해 바이러스 여과 생성물을 통과시키는 것을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, SUS 공정은 UF/DF 후 생성물의 회수를 위해 스테인리스강 용기 또는 용기(예를 들어, 잔류물 용기) 대신 SUS 용기 또는 용기(예를 들어, 잔류물 용기)를 포함한다. 일부 실시형태에서, DS는 SUS 용기(예를 들어, 백)에 저장된다.

또 다른 실시형태에서, SUS(예를 들어, 공정의 하나 이상의 단계에서 금속보다는 플라스틱으로 제조된 용기를 사용하는 것과 같음)를 사용하여 제조된 약물 제품(예를 들어, 에쿨리주맙 약물 제품)에서 검출된 금속의 수준은 비-SUS(예를 들어, 공정의 동일한 해당 단계(들) 중 하나 이상에서 스테인리스강 용기를 사용하는 것과 같음)를 사용하여 제조된 약물 제품보다 더 낮다. 예컨대, 일정 지속 기간 동안 약물 제품이 유지되는 제형 및/또는 보유 탱크(들)는 SUS에서 이러한 플라스틱 재료(예를 들어, EVA)로부터 제조될 수 있다. 플라스틱 재료는 금속이 침출되지 않도록 약물 제품이 금속 접촉을 최소화하거나 전혀 접촉되지 않도록 할 수 있다. 일 실시형태에서, 금속의 수준은 SUS를 사용하여 제조된 약물 제품(예를 들어, 에쿨리주맙)에서는 검출할 수 없는 것과 같은 최소 수준이다. 비-SUS는 주로 단일-사용 용기 대신 스테인리스강(SS) 성분의 사용을 포함한다. 예를 들어, 약물 제품이 일정 기간 동안 보유되는 제형 및/또는 보유 탱크(들)는 플라스틱 재료로부터 제조된 용기와 같은 단일-사용 용기가 아닌 SS로부터 제조된다. 일부 실시형태에서, 이들 SS 성분은 제형화되거나 여과된 약물 제품으로 금속을 침출할 가능성이 있으며, 이는 단백질의 분해를 증가시킬 수 있다.

상세한 설명 및 다음의 실시예는 본 발명을 예시하며, 이에 대해 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 설명에 기반하여 당업자에 의해 다양한 변화와 변형이 만들어질 수 있으며, 이러한 변화와 변형이 또한 본 발명에 포함된다.

실시예

실시예 1

동결-해동 안정성 및 상이한 온도 조건에서 저장되는 능력을 갖는 제형의 개발을 수행하였다. 소르비톨 제형에서 10 ㎎/㎖ 농도에서 에쿨리주맙(서열번호 10)의 액체 안정성을 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피(SE-UHPLC), 펩티드 매핑, 소수성 상호작용 크로마토그래피-고성능 액체 크로마토그래피(HIC-HPLC) 및 ELISA-기반 효능 검정에 의해 평가하였다.

소르비톨 제형(10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80, pH 5.2)에서 10 ㎎/㎖ 농도의 에쿨리주맙은 ELISA-기반 역가 검정으로부터 생성된 역가 데이터에 기초하여 PBS 제형(10 mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% (w/v) 폴리소르베이트 80, pH 7.0) 중의 10 ㎎/㎖의 농도의 에쿨리주맙과 비교할 때 5℃의 저장 조건 및 40℃의 가속 조건 및 50℃의 강제 분해 조건 하에서 모두에서 제품 안정성을 나타내었다.

이러한 ELISA-기반 역가 검정에서, 보체의 기능적 활성에 비례하는 생성된 C5b-9 신생항원의 양을 결정함으로써 인간 혈청에서 보체 단백질 C5의 활성화를 저해하는 에쿨리주맙의 능력을 측정하였다. 다양한 농도의 에쿨리주맙을 자이모산(보체 활성화제)의 존재 하에서 고정 농도의 정상 인간 혈청(NHS)과 함께 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 동안, 정상 인간 혈청 보체는 검정 플레이트 상의 자이모산 코팅 및 자이모산에 대한 말단 보체 활성화 결합의 결과로서 생성된 C5b-9 복합체에 의해 활성화되었다. 그 다음 플레이트 웰을 세척하고, C5b-9를 알칼리 포스파타제 표지된 C5b-9 항체로 검출하였다. 알칼리 포스파타제 기질 용액을 플레이트 웰에 첨가한 후, 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 보체 활성화의 양은 405 nm에서의 흡광도와 상관관계가 있는데, 이는 405 nm에서의 흡광도에서 에쿨리주맙 용량 의존적 감소의 측정치를 제공한다. 그 다음 참조 표준으로 얻은 반응에 대한 샘플 반응을 비교하여 활성(상대 효능)을 결정하였다.

불안정성은 낮은 수준의 미량 금속(1 ppm 미만)에 의해 야기될 수 있다고 생각되었는데, 그 이유는 에쿨리주맙을 갖는 PBS 제형에 철을 소량 첨가(spiking)하면 소르비톨 제형 중의 에쿨리주맙으로 관찰된 펩티드 매핑 분석 및 HIC-HPLC에 의해 결정된 바와 같이 동일한 분해 프로파일을 생성하였기 때문이다.

이것이 사실인지 결정하기 위해, 검출 가능한 미량 금속, 예를 들어, 철(IPC-MS에 의해 검출됨)이 없는 소르비톨 제형(10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80, pH 5.2) 중의 에쿨리주맙 10 ㎎/㎖, 검출 가능한 미량 금속을 갖는 소르비톨 제형(10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80, pH 5.2) 중의 에쿨리주맙 10 ㎎/㎖(2개의 상이한 에쿨리주맙 로트를 소르비톨 제형으로 제형화함, 로트 A 및 로트 B) 및 PBS 제형(10mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% (w/v) 폴리소르베이트 80, pH 7.0) 중의 에쿨리주맙 10 ㎎/㎖를 25℃에서 6개월 동안 저장하고, 2주, 1개월, 2개월, 3개월 및 6개월에 SE-UHPLC에 의해서 분석하였다(도 1). SE-UHPLC는 유체역학적 부피의 차이에 기초하여 단백질을 분리하는데, 여기서는 유체역학적 부피가 큰 분자가 부피가 작은 분자보다 먼저 용리된다. 샘플을 SE-UHPLC 칼럼(BEH200, UPLC 칼럼, 4.6 mm x 150 mm, 1.7 ㎛(Waters Corp., 186005225)에 로딩하고, 인산나트륨/염화나트륨 완충액으로 등용매 분리시키고, 용리액을 UV 흡광도(280 nm)에 의해서 모니터링하였다. 총 적분 면적과 비교하여 각각의 분리된 성분의 백분율을 계산함으로써 순도를 결정하였다(총 피크 면적에 대한 HMW 피크의 총 면적을 결정하여 HMW 응집체의 수준을 계산하였다).

SEC-UHPLC에 의해 검출된 고분자량(HMW) 종의 백분율은 검출 가능한 미량 금속이 없는 소르비톨 제형과 비교할 때 검출 가능한 미량 금속을 갖는 소르비톨 제형에서 더 빠른 속도로 증가하였다.

검출 가능한 미량 금속(예를 들어, 철)을 갖는 소르비톨 제형은 검출 가능한 미량 금속이 없는 소르비톨 제형에 비해서 더 높은 백분율의 HMW 종을 생성하기 때문에, 검출 가능한 미량 금속을 갖는 소르비톨 제형에서 에쿨리주맙의 불안정성은 에쿨리주맙의 금속-촉매 산화(예를 들어, 철-촉매 산화, 펜톤 반응)로 인한 것일 수 있다고 생각되었다. 소르비톨 제형에서 에쿨리주맙의 펩티드 매핑을 수행하였다. 샘플을 환원시키고, 그 다음 크기 배제-기반 탈염 칼럼으로 과량의 시약을 제거한 후 트립신 또는 Asp-N으로 분해시켰다. 그 다음 생성된 펩티드를 트리플루오로아세트산/아세토니트릴(TFA/ACN) 구배에서 RP-HPLC에 의해 분리시키고, MS 및 MS/MS 데이터 수집과 함께 214 nm에서 UV에 의해 모니터링한다. 질량 분석기 소프트웨어를 사용하여 얻은 관심 잔기를 함유하는 변형된 펩티드의 UV 트레이스(trace)에서 적분된 피크 면적을 비변형 잔기 및 변형된 잔기를 모두 함유하는 펩티드의 것과 비교함으로써 번역 후 변형(PTM)의 각각의 유형의 수준을 비교하였다.

결과는 중쇄 CDR3(CDRH-3) 트립토판(서열번호 3의 9번 위치, 서열번호 10의 107번 위치에 상응함)인 W107 상의 산화 변형을 나타내는 +16 Da, +32 Da 및 +14 Da 펩티드의 형성을 나타내었다. 이러한 변형은 구조적 변화 및 응집체 형성으로 이어져 생체활성을 감소시킬 가능성이 있다. 검출 가능한 미량 금속을 갖는 소르비톨 제형 중의 에쿨리주맙의 상대 역가는 검출 가능한 미량 금속이 없는 소르비톨 제형 중의 에쿨리주맙보다 낮은 것으로 결정되었으며, 이러한 역가 손실은 환원 펩티드 매핑에 의해 결정된 바와 같이 W107의 산화로 인한 것으로 결정되었다.

(예를 들어, 에쿨리주맙의 금속-촉매 산화를 저해함으로써) 검출 가능한 미량 금속을 갖는 소르비톨 제형 중의 에쿨리주맙의 역가 감소가 감소될 수 있는지를 결정하기 위해, EDTA를 소르비톨 제형에 첨가하였다. EDTA를 갖는 소르비톨 제형(10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80, 0.05 mM EDTA, pH 5.2) 중의 에쿨리주맙(10 ㎎/㎖)의 상대 역가를 50℃의 가속 조건에서 2주 동안 PBS 제형(10 mM 인산나트륨, 150 mM 염화나트륨, 0.02% (w/v) 폴리소르베이트 80, pH 7.0) 및 EDTA가 없는 소르비톨 제형(10 mM 아세테이트, 5% 소르비톨, 0.01% 폴리소르베이트 80, pH 5.2) 중의 에쿨리주맙(10 ㎎/㎖)과 비교하였다(도 2). 소르비톨 제형 중의 에쿨리주맙의 역가는 EDTA를 갖는 소르비톨 제형 중의 에쿨리주맙 및 PBS 제형 중의 에쿨리주맙에 비해서 훨씬 더 빠른 속도로 감소하였다.

제형 중의 EDTA의 양이 에쿨리주맙의 산화 수준을 제어할 수 있는지 결정하기 위해, 다양한 양의 EDTA(0, 0.01 mM, 0.03 mM 및 0.05 mM)를 에쿨리주맙이 10 ㎎/㎖로 존재하는 소르비톨 제형(10 mM 아세테이트, 5% (w/v) 소르비톨, 0.01% (w/v) 폴리소르베이트 80, pH 5.2)에 포함시켰다. 제형을 40℃에서 13주 동안 저장하였다. 산화된 형태의 에쿨리주맙의 형성을 HIC-HPLC 프리피크로 측정하였다(도 3). HIC-HPLC를 ABP 959 트립토판 산화 종의 정량적 순도 분석에 사용하였다. 샘플을 직렬로 연결된 2개의 HIC-HPLC 칼럼(Propac HIC-10, 5 ㎛, 4.6 x 100 mm(Thermo, 063655))에 로딩하고, 황산암모늄 및 아세트산나트륨 완충액의 감소하는 염 구배로 분리시키고, 용리액을 220 nm에서의 자외선(UV) 흡광도에 의해 모니터링한다. 총 적분 면적과 비교하여 각각의 분리된 성분의 백분율을 계산함으로써 순도를 결정하였다 산화된 트립토판의 수준은 HIC-HPLC 분석에 의해 결정된 백분율 프리-피크의 수준과 선형 상관관계를 갖는다(프리-피크의 백분율은 총 적분 피크 면적에 대한 프리-피크 면적과 동일함). 응집 수준(HMW 종의 백분율로 측정됨)을 SEC-UHPLC로 결정하였다(도 4). 도 3 및 도 4에 각각 도시된 바와 같이, 산화 및 HMW 종의 가장 많은 양은 EDTA가 없는 제형에서 발견되었다.

본 실시예는 (펜톤 반응을 통한) 금속 촉매 산화 및 후속 응집, 침전 및 다른 화학적 변형을 방지함으로써 우수한 단백질 용해도 및 안정성을 제공하는 에쿨리주맙을 위한 EDTA를 갖는 소르비톨 제형이 개발되었음을 입증한다. EDTA를 갖는 이러한 에쿨리주맙 제형은 PBS 제형뿐만 아니라 EDTA가 없는 소르비톨 제형보다 우수한 안정성을 제공한다.

실시예 2

비-단일 사용 시스템(SUS)을 사용하여 생산된 에쿨리주맙 약물 제품(DP)과 SUS를 사용하는 에쿨리주맙 DP의 비교를 수행하였다.

SUS 및 비-SUS DP 둘 다에 대해 동일한 약물 물질 공정을 수행하였다. 진탕 플라스크, Wave Bioreactor^TM(Cytvia, 미국 매사추세츠주 말보로 소재), 500ℓ 단일 사용 생물반응기(SUB) 및 2000ℓ생산 SUB에서 세포 배양 공정을 수행하였다. 세포를 교류 접선 흐름(alternating tangential flow: ATF) 필터를 사용하여 수거하고, SUS(폴리에틸렌(PE) 필름, Thermo Scientific^TM ASI^TM imPULSE Single Use Mixer)에 유지시킨 후, Protein A로의 정제를 위해 처리하였다. Protein A 정제로부터의 용출액(elutate)을 바이러스 불활성화 및 중화를 위해 낮은 pH로 적정하고, 그 다음 여과하고 양이온 교환 칼럼(CEX)에서 처리하였다. 그 다음 CEX의 용출액을 Mixed Mode Anion Exchange Chromatography(MMA)로 처리하였다. 그 다음 MMA 통과액을 바이러스 여과를 통해 처리하였다. 바이러스 여과된 풀을 연결된 공정에서 한외여과/정용여과(UF/DF)하였는데, 이는 바이러스 여과된 풀이 제형 완충액 교환되고 에쿨리주맙 약물 물질(DS)의 목표 농도로 농축되도록 하였다. 그 다음 회수된 UF/DF 풀에 폴리소르베이트 80(PS80)을 소량 첨가하고, SUS 백에 여과하고, -30℃에서 저장하였다.

비-SUS DP에서, DS를 비-SUS 제형 탱크(스테인리스강, SS)에서 소르비톨 제형(10 mM 아세테이트, 5% 소르비톨, 0.01% 폴리소르베이트 80, pH 5.2) 중에 10 ㎎/㎖의 농도로 제형화한 후 0.22 ㎛ PVDF 필터로 여과하고, 그 다음 비-SUS(SS) 보유 탱크에서 유지시키고, 0.22 ㎛ PVDF 필터로 다시 여과하고, 그 다음 서지 SUS 백에서 유지시킨 후 충전한다. 이 방법을 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP를 GMP 로트로 지정하였다(도 5 내지 도 8 참조).

DP용 SUS에서, 공정은 SS 탱크 대신 SUS 에틸 비닐 아세테이트(EVA) 백을 사용한 것(즉, SS 제형 탱크 대신 SUS EVA 백을 사용한 것; SS 보유 탱크 대신 SUS EVA 백을 사용한 것)을 제외하고는 비-SUS DP와 동일하였다. 이 방법을 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP를 SUS 로트로 지정하였다(도 5 내지 도 8 참조).

비-SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP 로트(GMP DP1, GMP DP2 및 GMP DP3)에서 SE-UHPLC 방법(실시예 1에 기재된 바와 같음)에 의해 결정된 고분자량(HMW) 종의 백분율을, 14일 동안 50℃의 강제 분해 조건 하에서 SUS(SUS DP)를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP 로트의 HMW 백분율과 비교하였다. HMW 종 또는 응집체의 백분율을 측정하여 도 5에 도시한다. 도 5에 나타난 바와 같이, 강제 분해 조건 하에서 SUS 에쿨리주맙 DP 로트의 HMW의 백분율은 강제 분해 조건 하에서의 비-SUS 에쿨리주맙 DP 로트에 비해 크게 감소하였다.

비-SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP 로트(GMP 1 DP, GMP 2 DP)에서 중쇄 CDR3(CDRH-3) 트립토판(서열번호 3의 9번 위치, 서열번호 10의 107번 위치에 상응함)인 W107 상의 산화 변형의 양을, 펩티드 매핑(실시예 1에 기재된 바와 같은)에 의해서 또한 결정된 강제 분해 조건 하에서 SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP 로트(SUS DP)와 비교하였다. 도 6a는 W107 산화 수준이 강제 분해 조건 하에서 비-SUS 에쿨리주맙 DP 로트(GMP 1 DP, GMP 2 DP)의 수준과 비교하여 강제 분해 조건 하에서 SUS 에쿨리주맙 DP 로트의 경우 훨씬 더 낮다는 것을 나타낸다.

강제 분해 조건 하에서 비-SUS를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP 로트(GMP 1 DP, GMP 2 DP)의 역가를 실시예 1에 기재된 ELISA-기반 역가 검정을 사용하여 강제 분해 조건 하에서 SUS(SUS DP)를 사용하여 생산된 에쿨리주맙 DP 로트와 비교하였다. 도 6b에 나타난 바와 같이, 비-SUS 에쿨리주맙 DP 로트와 대조적으로, SUS 에쿨리주맙 DP 로트에서는 역가 손실이 관찰되지 않았다.

또한, HIC-HPLC 분석(실시예 1에서 수행된 바와 같음)은 도 7에 도시된 바와 같이 강제 분해 조건 하에서의 SUS 에쿨리주맙 DP 로트가 강제 분해 조건 하에서의 비-SUS 에쿨리주맙 DP 로트(GMP 2 DP)에 비해서 HIC 주 피크에서 손실을 나타내지 않았음을 나타내었고, 강제 분해 조건 하에서의 SUS 에쿨리주맙 DP 로트는 HIC 프리-피크의 백분율로 입증된 바와 같이 순도 손실을 나타내지 않았다(도 8).

본 발명은 다양한 실시형태에 관해 기재하였지만, 당업자에 의해 변화와 변형이 일어날 수 있다는 것이 이해된다. 따라서, 첨부하는 청구범위는 청구하는 바와 같은 본 발명의 범주 내인 모든 이러한 동등한 변형을 아우르는 것으로 의도된다. 게다가, 본 명세서에서 사용되는 부문 표제는 단지 체계화 목적을 위한 것이고 기재한 대상을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 출원에 인용된 모든 참고문헌은 본 명세서에서 임의의 목적을 위해 참고로 분명하게 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> Amgen Inc. IP, Anna PATEL, Ketaki TALLEY, Clea TREUHEIT, Michael J. Zhang, Jun <120> ANTIBODY FORMULATIONS AND USES THEREOF <130> A-2590-WO-PCT <150> 63/031634 <151> 2020-05-29 <160> 17 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 1 Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr Trp Ile Gln 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 2 Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 3 Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 4 Gly His Ile Phe Ser Asn Tyr Trp Ile Gln 1 5 10 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 5 Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly His Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 6 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 6 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 7 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 7 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly His Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 8 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 9 <211> 326 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 9 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 10 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 210 215 220 Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 11 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> DOE Sequence <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly His Ile Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly His Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 210 215 220 Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr 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Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims

제형으로서.
a) 항-C5 항체,
b) 완충제,
c) 안정화제 및
d) 킬레이팅제
를 포함하는, 제형.
제1항에 있어서, 상기 항체는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하되, 상기 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3의 아미노산 서열은 각각 서열번호 1, 2 및 3 또는 각각 서열번호 4, 5 및 3인, 제형.
제2항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 6 또는 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 제형.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 8 또는 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 제형.
제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 10 또는 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는, 제형.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하되, 상기 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3의 아미노산 서열은 각각 서열번호 12, 13 및 14인, 제형.
제6항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 제형.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 제형.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 제형.
제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 10 또는 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 제형.
제10항에 있어서, 상기 중쇄는 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는, 제형.
제10항에 있어서, 상기 중쇄는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는, 제형.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제는 아세테이트를 포함하는, 제형.
제13항에 있어서, 상기 아세테이트의 농도는 5 mM 내지 20 mM인, 제형.
제14항에 있어서, 상기 아세테이트의 농도는 약 10 mM인, 제형.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화제는 폴리올인, 제형.
제16항에 있어서, 상기 폴리올은 소르비톨인, 제형.
제17항에 있어서, 상기 소르비톨의 농도는 약 5% (w/v)인, 제형.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 킬레이팅제의 농도는 0.01 mM 내지 0.05 mM인, 제형.
제19항에 있어서, 상기 킬레이팅제의 농도는 약 0.05 mM인, 제형.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 킬레이팅제는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)인, 제형.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제를 더 포함하되, 상기 계면활성제의 농도는 0.001% 내지 0.1% (w/v)인, 제형.
제22항에 있어서, 상기 계면활성제의 농도는 약 0.01%인, 제형.
제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 80인, 제형.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형의 pH는 4.5 내지 5.8인, 제형.
제25항에 있어서, 상기 제형의 pH는 약 5.2인, 제형.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 10 ㎎/㎖인, 제형.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 따른 제형의 제조 방법.
항-C5 항체 약물 제품의 제조 방법으로서,
a) 항-C5 항체 약물 물질을 단일 사용 시스템 제형 용기 내에서 완충제, 안정화제 및 선택적으로 킬레이팅제를 포함하는 제형으로 제형화하는 단계;
b) 생성된 약물 제품을 첫 번째로 여과하는 단계;
c) 상기 약물 제품을 단일 사용 시스템 보유 용기에서 유지시키는 단계;
d) 상기 약물 제품을 두 번째로 여과하는 단계; 및
e) 상기 약물 제품을 서지 용기(surge container)에서 유지시키는 단계
를 포함하는, 방법.
제29항에 있어서, 상기 제형 용기, 상기 보유 용기 또는 상기 제형 용기 및 상기 보유 용기 둘 다는 금속을 함유하지 않는, 방법.
제30항에 있어서, 상기 제형 용기, 상기 보유 용기 또는 상기 제형 용기 및 상기 보유 용기 둘 다는 플라스틱인, 방법.
제29항에 있어서, 상기 제형 용기, 상기 보유 용기 또는 상기 제형 용기 및 상기 보유 용기 둘 다는 에틸 비닐 아세테이트(EVA)를 포함하는, 방법.
제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약물 제품은 금속을 포함하는 제형 용기, 보유 용기 또는 제형 용기 및 보유 용기 둘 다를 사용하는 것을 제외하고는 동일한 방법으로 제조된 약물 제품과 비교할 때 더 적은 응집체, 더 낮은 산화 수준, 감소된 역가(potency) 손실 또는 감소된 순도 손실을 갖는, 방법.
제33항에 있어서, 상기 금속은 스테인리스강인, 방법.
제29항에 있어서, 상기 항체는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하되, 상기 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3의 아미노산 서열은 각각 서열번호 1, 2 및 3 또는 각각 서열번호 4, 5 및 3인, 방법.
제35항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 6 또는 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 8 또는 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 방법.
제37항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 10 또는 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는, 방법.
제29항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하되, 상기 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3의 아미노산 서열은 각각 서열번호 12, 13 및 14인, 방법.
제39항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
제39항 또는 제40항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 방법.
제41항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 방법.
제29항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 10 또는 11의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 방법.
제29항에 있어서, 상기 중쇄는 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
제29항에 있어서, 상기 중쇄는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
제29항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제는 아세테이트를 포함하는, 방법.
제46항에 있어서, 상기 아세테이트의 농도는 5 mM 내지 20 mM인, 방법.
제47항에 있어서, 상기 아세테이트의 농도는 약 10 mM인, 방법.
제29항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화제는 폴리올인, 방법.
제49항에 있어서, 상기 폴리올은 소르비톨인, 방법.
제50항에 있어서, 상기 소르비톨의 농도는 약 5% (w/v)인, 방법.
제29항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 킬레이팅제의 농도는 0.01 mM 내지 0.05 mM인, 방법.
제52항에 있어서, 상기 킬레이팅제의 농도는 약 0.05 mM인, 방법.
제29항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 킬레이팅제는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)인, 방법.
제29항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 계면활성제를 더 포함하되, 상기 계면활성제의 농도는 0.001% 내지 0.1% (w/v)인, 방법.
제55항에 있어서, 상기 계면활성제의 농도는 약 0.01%인, 방법.
제55항 또는 제56항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 80인, 방법.
제29항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형의 pH는 4.5 내지 5.8인, 방법.
제58항에 있어서, 상기 제형의 pH는 약 5.2인, 방법.
제29항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체의 농도는 약 10 ㎎/㎖인, 방법.