KR20230018411A

KR20230018411A - 항-TrkA 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이의 제조 방법과 응용

Info

Publication number: KR20230018411A
Application number: KR1020227044868A
Authority: KR
Inventors: 시아오후이 위엔; 구어용 왕; 위지아오 리우; 동홍 정
Original assignee: 시위엔 안지엔 메디슨 (상하이) 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2021-02-28
Filing date: 2022-02-23
Publication date: 2023-02-07
Also published as: TW202235443A; US20230303703A1; CN117264068A; CN112961244B; WO2022179516A1; CN112961244A; EP4155322A1; JP2023526413A; TWI820618B

Abstract

본 발명은 항-TrkA 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제조 방법 및 응용을 제공한다. 본 발명은 항-TrkA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 분리된 폴리뉴클레오티드, 및 상기 분리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 더 제공한다. 본 발명은 통증 치료용 약물 제조에서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 더 제공한다.

Description

항-TrkA 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이의 제조 방법과 응용

본 발명은 생물학적 면역 기술 분야에 속하며, 보다 상세하게는 인간 트로포미오신 수용체 키나아제 A에 특이적으로 결합할 수 있는 항-TrkA 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 관한 것이다. 본 발명은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조 방법과 용도에 더 관한 것이다.

트로포미오신 수용체 키나아제 A(Tropomyosin Receptor Kinase, TrkA이며, high affinity nerve growth factor receptor, neurotrophic tyrosine kinase receptor type 1 또는 TRK1-transforming tyrosine kinase protein으로 불리기도 함)는 트로포미오신 수용체 키나아제(Trk) 패밀리에 속하며, NTRK1(neurotrophic receptor tyrosine kinase 1) 유전자에 의해 코딩된다. Trk 계열은 TrkA, TrkB 및 TrkC의 세 가지 수용체를 포함하며, 각각 특정한 뉴로트로핀 리간드에 결합하여 상이한 생물학적 작용을 발휘한다. Trk 수용체는 리간드 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인, 막횡단 도메인(TM) 및 티로신 키나아제 도메인을 포함하는 세포내 도메인으로 구성된 막횡단 수용체이다. TrkA는 신경 능선 뉴런, 교감 신경 및 기저 전뇌 및 선조체의 콜린성 뉴런에서 주로 발현되며(Holtzman DM et al. (1992) Neuron 9(3): 465-78; Verge VM et al. (1992) J. Neurosci. 12 (10): 4011-22), B 림프구를 비롯한 일부 비뉴런 조직 및 세포에서도 발현된다(Torcia M et al. (1996) Cell 85(3): 345-56). TrkA는 신경 성장 인자(Nerve Growth Factor, NGF)에 선택적으로 결합하며 NGF에 대한 고친화성 수용체이다. NGF와 TrkA가 결합하면 TrkA 키나아제 활성이 활성화되어 Ras/MAPK, PI3K/Akt 및 PLCγ 경로를 포함한 여러 신호전달 경로가 활성화된다. TrkA에 결합하는 것 외에도 NGF는 p75 공통 뉴로트로핀 수용체(p75 neurotrophin receptor, p75NTR, "저친화성" NGF 수용체라고도 함)에도 결합된다.

NGF/TrkA 신호전달 경로는 세포 분화, 증식, 생존 및 통증 등과 관련이 있다. 여기에서 NGF/TrkA는 통증의 발생 및 말초 통각 말단 과민과 관련이 있으며 NGF/TrkA 경로의 활성화는 일시적 수용체 전위 바닐로이드 수용체 1(TRPV1) 인산화를 증가시켜 이를 민감하게 만들 수 있고 NGF/TrkA는 TRPV1, Na/Ca/K 이온 채널, CGRP, P 물질, 뇌 유래 신경 영양 인자(BDNF) 등을 포함한 다양한 단백질 발현을 증가시킬 수 있다. 이러한 단백질은 통각 수용성 뉴런을 더욱 민감하게 만들고 통증 신호를 증가시키며 후근 신경절에서 중추로 전달하여 중추 신경계에서 2차 뉴런의 활성화를 촉진한다(Denk F et al. (2017) Annu. Rev. Neurosci. 40: 307-325). 손상되고 염증이 있는 조직에서 NGF가 고도로 발현되며 TrkA에 의한 침해수용성 뉴런의 활성화는 여러 메커니즘에 의해 유발되어 통증 신호를 유발한다. NGF/TrkA 신호전달 경로와 통증 사이의 관계는 동물 모델에서 확인되었다. 래트에게 NGF를 주사한 후 열자극으로 인한 발 움츠림 잠복기가 크게 단축되었으며(Lewin et al. (1994) Eur J Neurosci, 6: 1903-1912), 래트 항-NGF 항체, TrkA-IgG, 소분자 TrkA 억제제 등을 투여하는 방식으로 NGF/TrkA 신호를 차단함으로써 통증을 억제할 수 있다(Woolf CJ et al. (1994) Neuroscience 62: 327-331; McMahon SB et al. (1995) Net. Med. 1: 774-780; Koltzenburg M et al. (1999) Eur. J. Neurosci. 11: 1698 -1704; Bagal SK et al. (2019) J Med Chem. 62(1): 247-265). 인체에서 NGF 함량은 류마티스 관절염, 간질성 방광염, 췌장염, 전립선염, 당뇨병성 신경병증 및 암 통증과 같은 통증이 있는 환자에서 모두 상승하였다(Aloe et al. (1992) Arthritis and Rheumatism 35: 351-355; Mantyh PW et al. (2011) Anesthesiology 115(1): 189-204). 건강한 사람에게 NGF 주사 후 통각 과민 및 국소 통증이 발생할 수 있으며(Petty et al. (1994) Ann Neurol, 36:244-246), 이는 NGF 레벨 증가가 통각 과민을 유발하기 위해 필요함을 시사한다. NGF β 유전자의 동형접합 미스센스 돌연변이는 인체에서 HSAN5 증상을 유발할 수 있으며 이러한 환자는 통증, 추위 및 열에 둔감하다(Larsson et al. (2009) Neurobiol Dis, 33:221-228). 선천성 무통 무한증(CIPA) 환자를 대상으로 한 유전 연구에 따르면, TrkA 유전자(NTRK1)의 세포외 도메인 또는 세포내 도메인의 돌연변이가 CIPA를 유발할 수 있으며, 이러한 환자에서 TrkA는 NGF에 의해 활성화되지 않아 환자가 통증 지각 능력을 상실하게 된다(Mardy S et al. (2001) Human mutation 18: 462-471).

전 세계적으로 수천만 명의 환자가 만성 통증으로 고통 받고 있으며 이 숫자는 인구 증가와 함께 계속 증가하고 있다. 현재 임상적으로 사용되는 만성 통증 치료 약물에는 비스테로이드성 소염진통약, 항경련약, 아편 유사 약물 등이 있다. 그러나 이러한 약물은 많은 단점이 있다. 그중 비스테로이드성 소염진통약의 치료 효능에는 한계가 있으며, 위장관 출혈, 신장 독성 등의 부작용이 있다. 반면 아편 유사 약물은 중독 등의 부작용이 있다. 30% 미만의 만성 통증 환자만이 기존 치료법의 혜택을 받고 있다(Kalso E et al. (2004) Pain 112(3): 372-80). 해당 분야에서는 통증을 경감시킬 수 있고 독성이 없으며 남용을 방지할 수 있는 비아편류 진통제가 시급히 요구되고 있는데, 새로운 진통 기전으로 NGF/TrkA가 이러한 문제를 해결할 가능성을 제시하고 있다. 지금까지 많은 항인간 NGF 항체가 연구 개발 또는 임상 개발 단계에 있으며, 임상 시험에서 NGF 항체가 퇴행성 관절 질환과 관련된 관절 통증, 만성 요통 및 간질성 방광염을 수반한 방광 통증 등에 강하고 광범위한 진통 효과가 있는 것으로 나타났다(Lane NE et al. (2010) N Engl J Med 363: 1521-1531). 한편으로는, NGF 항체에 대한 여러 임상 시험에서도 NGF 항체가 환자에서 골관절염의 가속화된 진행의 위험을 증가시킬 수 있고(Thomas JS et al. (2019) JAMA 322: 37-48), 중증 환자에 대한 제한, 장기간 사용 불가, 용량 제한 등의 문제가 있을 수 있어 NGF 항체의 임상 적용을 위해서는 추가적인 안전성 검증이 필요하다.

TrkA를 표적으로 하는 항체는 이론적으로 NGF 억제제보다 더 나은 치료 옵션이다. TrkA 항체는 NGF와 p75 수용체의 결합에 영향을 미치지 않으며, p75 수용체 기능은 뉴런 발달, 조골세포 분화, 증식, 근아세포 분화, 근육 수복 등과 관련이 있기 때문이다(Akiyama Y et al. (2014) Differentiation, 87: 111-118; Deponti et al. (2009) Molecular Biology of the Cell, 20: 3620-3627; Mikami et al. (2012) Differentiation, 84: 392-399). TrkA 항체는 안전성 면에서 더 나은 성능을 보일 것으로 기대된다.

이를 바탕으로 현재 더 높은 친화도와 더 높은 특이성을 가진 항-TrkA 항체에 대한 수요가 있다.

종래 기술의 결함을 감안하여, 본 발명의 주요 목적은 보다 높은 친화도, 보다 강한 특이성의 항-TrkA 항체를 제공하는 데에 있다. 본 발명은 상기 항체의 제조 방법 및 용도를 더 제공한다. 본 발명의 항-TrkA 항체는 염증성 통증, 수술 후 통증, 신경병증성 통증, 암 통증, 골관절염 등을 비롯한 통증을 치료하는 데 사용될 수 있다. 종래 기술에 비해 본 발명에 의해 개발된 항-TrkA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 더 높은 친화도, 더 나은 특이성 및 더 강한 활성을 갖는다.

일 양상에 있어서, 본 발명은 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(a) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고,

(i) SEQ ID NO: 1, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;

(ii) SEQ ID NO: 2, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및

(iii) SEQ ID NO: 3, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;

및/또는

(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,

(iv) SEQ ID NO: 25, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;

(v) SEQ ID NO: 26, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및

(vi) SEQ ID NO: 27, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,

바람직하게는 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 1으로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 2로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 3으로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 25로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 26으로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 27로 표시되는 VL CDR3을 포함한다.

(i) SEQ ID NO: 4, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;

(ii) SEQ ID NO: 5, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및

(iii) SEQ ID NO: 6, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 28, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;

(v) SEQ ID NO: 29, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및

(vi) SEQ ID NO: 30, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 5로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 6으로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 28로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 29로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 30으로 표시되는 VL CDR3을 포함한다.

(i) SEQ ID NO: 7, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;

(ii) SEQ ID NO: 8, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및

(iii) SEQ ID NO: 9, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 31, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;

(v) SEQ ID NO: 32, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및

(vi) SEQ ID NO: 33, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 7로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 8로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 9로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 31로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 32로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 33으로 표시되는 VL CDR3을 포함한다.

(i) SEQ ID NO: 10, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;

(ii) SEQ ID NO: 11, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및

(iii) SEQ ID NO: 12, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 34, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;

(v) SEQ ID NO: 35, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및

(vi) SEQ ID NO: 36, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 10으로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 11로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 12로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 34로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 35로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 36으로 표시되는 VL CDR3을 포함한다.

(i) SEQ ID NO: 13, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;

(ii) SEQ ID NO: 14, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및

(iii) SEQ ID NO: 15, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 37, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;

(v) SEQ ID NO: 38, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및

(vi) SEQ ID NO: 39, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 13으로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 14로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 15로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 37로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 38로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 39로 표시되는 VL CDR3을 포함한다.

(i) SEQ ID NO: 16, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;

(ii) SEQ ID NO: 17, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및

(iii) SEQ ID NO: 18, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 40, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;

(v) SEQ ID NO: 41, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및

(vi) SEQ ID NO: 42, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 17로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 18로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 41로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 42로 표시되는 VL CDR3을 포함한다.

(i) SEQ ID NO: 19, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;

(ii) SEQ ID NO: 20, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및

(iii) SEQ ID NO: 21, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 43, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;

(v) SEQ ID NO: 44, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및

(vi) SEQ ID NO: 45, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 19로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 20으로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 21로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 43으로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 44로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 45로 표시되는 VL CDR3을 포함한다.

(i) SEQ ID NO: 22, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;

(ii) SEQ ID NO: 23, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및

(iii) SEQ ID NO: 24, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 46, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;

(v) SEQ ID NO: 47, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및

(vi) SEQ ID NO: 48, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 22로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 23으로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 24로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 46으로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 47로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 48로 표시되는 VL CDR3을 포함한다.

일 양상에 있어서, 본 발명은 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함한다. 여기에서,

상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 49-56 중 어느 하나의 중쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 57-64 중 어느 하나의 경쇄 가변 영역에 포함되는 3개의 CDR을 포함한다.

바람직하게는, 상기 중쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR은 Kabat 또는 IMGT 넘버링 시스템에 의해 정의된다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),

(i) SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열;

(ii) SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(iii) SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

및/또는

(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),

(iv) SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열;

(v) SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(vi) SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열의 VL을 갖는다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(iv) SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열;

(ii) SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(iii) SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열;

(v) SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(vi) SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열의 VL을 갖는다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(i) SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열;

(ii) SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(iii) SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열;

(v) SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(vi) SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열의 VL을 갖는다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(i) SEQ ID NO: 52로 표시되는 서열;

(ii) SEQ ID NO: 52로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(iii) SEQ ID NO: 52로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 60으로 표시되는 서열;

(v) SEQ ID NO: 60으로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(vi) SEQ ID NO: 60으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 52으로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 60으로 표시되는 서열의 VL을 갖는다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(i) SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열;

(ii) SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(iii) SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열;

(v) SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(vi) SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열의 VL을 갖는다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(i) SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열;

(ii) SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(iii) SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열;

(v) SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(vi) SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열의 VL을 갖는다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(i) SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열;

(ii) SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(iii) SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열;

(v) SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(vi) SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열의 VL을 갖는다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(i) SEQ ID NO: 56으로 표시되는 서열;

(ii) SEQ ID NO: 56으로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(iii) SEQ ID NO: 56으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 64로 표시되는 서열;

(v) SEQ ID NO: 64로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(vi) SEQ ID NO: 64로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 56으로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 64로 표시되는 서열의 VL을 갖는다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,

(a) 인간 면역글로불린의 중쇄 불변 영역(CH) 또는 이의 변이체 - 상기 변이체는 그 유래하는 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어, 최대 20개, 최대 15개, 최대 10개, 또는 최대 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가, 예를 들어 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 가짐 - ; 및

(b) 인간 면역글로불린의 경쇄 불변 영역(CL) 또는 이의 변이체 - 상기 변이체는 그 유래하는 서열과 비교하여 최대 20개 아미노산의 보존적 치환(예를 들어, 최대 15개, 최대 10개, 또는 최대 5개 아미노산의 보존적 치환, 예를 들어 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 아미노산의 보존적 치환)을 가짐 - ;를 더 포함한다.

바람직하게는, 상기 중쇄 불변 영역은 IgG 중쇄 불변 영역, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 종쇄 불변 영역이다.

바람직하게는, 상기 경쇄 불변 영역은 κ 경쇄 불변 영역이다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', (Fab')2, Fv, 이황화 결합 연결의 Fv, scFv, 디아바디(diabody) 및 단일 도메인 항체(sdAb)로부터 선택되고/거나, 상기 항체는 마우스 유래 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체이다.

본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 상기 인간화 항체는,

(i) SEQ ID NO: 81, 85, 89, 97, 99 및 101 중 어느 하나로 표시되는 서열;

(ii) SEQ ID NO: 81, 85, 89, 97, 99 및 101 중 어느 하나로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(iii) SEQ ID NO: 81, 85, 89, 97, 99 및 101 중 어느 하나로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

및/또는

(iv) SEQ ID NO: 83, 87, 91, 93 및 95 중 어느 하나로 표시되는 서열;

(v) SEQ ID NO: 83, 87, 91, 93 및 95 중 어느 하나로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는

(vi) SEQ ID NO: 83, 87, 91, 93 및 95 중 어느 하나로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;

바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,

바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 81, 85, 89, 97, 99 및 101 중 어느 하나로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 83, 87, 91, 93 및 95 중 어느 하나로 표시되는 서열의 VL을 갖는다.

보다 바람직하게는, 상기 인간화 항체는 42F5-01, 42F5-03, 42F5-04, 42F5-05, 42F5-08, 42F5-11, 42F5-13, 42F5-14 또는 42F5-15로부터 선택된다.

본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표지를 갖고, 바람직하게는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 예를 들어 효소(예를 들어 양고추냉이 퍼옥시다제), 방사성핵종, 형광 염료, 발광 물질(예를 들어 화학발광 물질) 또는 비오틴과 같은 검출 가능한 표지를 갖는다.

다른 일 양상에 있어서, 본 발명은 분리된 핵산 분자를 더 제공한다. 이는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 그 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 코딩한다.

바람직하게는, 상기 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 65-80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100 및 102 중 어느 하나로 표시되는 뉴클레오티드 코딩 서열을 포함한다.

본 발명은 벡터를 더 제공한다. 여기에는 상기 분리된 핵산 분자가 포함되며, 바람직하게는 상기 벡터는 클로닝 벡터 또는 발현 벡터이다.

본 발명은 숙주 세포를 더 제공한다. 여기에는 상기 분리된 핵산 분자 또는 상기 벡터가 포함된다.

본 발명은 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조 방법을 더 제공한다. 여기에는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 발현을 허용하는 조건 하에서, 상기 숙주 세포를 배양하고, 배양된 숙주 세포 배양물에서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 회수하는 단계가 포함된다.

바람직하게는 상기 숙주 세포는 포유동물 세포이고, 보다 바람직하게는 인간, 쥐, 양, 말, 개 또는 고양이의 세포이고, 보다 바람직하게는 중국 햄스터 난소 세포이다.

본 발명은 이중특이성 또는 다중특이성 분자를 더 제공한다. 여기에는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 포함된다.

바람직하게는, 상기 이중특이성 또는 다중특이성 분자는 TrkA에 특이적으로 결합되고, 하나 이상의 다른 표적에 추가로 특이적으로 결합한다.

바람직하게는 상기 이중특이성 또는 다중특이성 분자는 제2 표적에 대해 제2 결합 특이성을 갖는 적어도 하나의 분자(예를 들어, 제2 항체)를 더 포함한다.

본 발명은 약학 조성물을 더 제공한다. 여기에는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 상기 이중특이성 또는 다중특이성 분자 및 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제가 포함된다. 본 발명은 다양한 병증 또는 질병 치료용 약물의 제조에서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 상기 이중특이성 또는 다중특이성 분자 또는 약학 조성물 또는 상기 숙주 세포의 용도를 더 제공한다.

본 발명은 다양한 병증 또는 질병의 치료 방법을 더 제공한다. 여기에는 필요로 하는 대상(이는 적합하게는 포유동물 대상, 특히 인간 대상)에게 다양한 병증 또는 질병 치료용 약물의 제조에서 치료적 유효량의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 상기 이중특이성 또는 다중특이성 분자 또는 약학 조성물 또는 상기 숙주 세포를 투여하는 용도가 포함된다. 상기 병증 또는 질병은 통증이다. 바람직하게는 만성 통증 또는 급성 통증이다. 보다 바람직하게는 만성 통증이다. 나아가 통증은 염증성 통증, 수술 후 통증, 신경병증성 통증, 암 통증 등 중 어느 하나와 관련될 수 있다. 더 나아가 바람직하게는 통증은 췌장염 통증, 신장결석 통증, 자궁내막증 통증, IBD 통증, 수술 후 유착 통증, 담낭결석 통증, 두통, 월경통, 근골격 통증, 염좌 통증, 내장 통증, 난소낭종 통증, 전립선염 통증, 방광염 통증, 간질성 방광염 통증, 수술 후 통증, 편두통, 삼차신경통, 화상 및/또는 상처 통증, 외상 관련 통증, 신경병증 통증, 근골격계 질환 관련 통증, 류마티스 관절염 통증, 골관절염 통증, 강직성 척추염 통증, 관절주위 병리학적 통증, 종양 통증, 골 전이로 인한 통증, HIV 감염 통증과 관련될 수 있다. 상기 병증 또는 질병은 신경종, 뉴런 병증이다. 본 발명에서 제공하는 항체는 약물로서 종래 항체보다 더욱 강한 결합 능력 및 특이성을 갖는다.

이하에서는 첨부 도면을 참조하여 본 발명의 실시방식을 상세하게 설명한다.
도 1는 본 발명의 항-TrkA 항체와 인간 TrkA 단백질 결합의 ELISA 실험 결과이다.
도 2는 본 발명의 항-TrkA 항체와 TrkA 단백질 세포외 도메인(192-402) 결합의 ELISA 실험 결과이다.
도 3은 본 발명의 항-TrkA 항체와 원숭이 TrkA 단백질 결합의 ELISA 실험 결과이다.
도 4는 본 발명의 항-TrkA 항체와 마우스 TrkA 단백질 결합의 ELISA 실험 결과이다.
도 5는 본 발명의 항-TrkA 항체와 래트 TrkA 단백질 결합의 ELISA 실험 결과이다.
도 6은 본 발명의 항-TrkA 항체가 인간 TrkA 단백질을 발현하는 CHO 세포와 결합한 FACS 결과이다.
도 7은 본 발명의 항-TrkA 항체 및 종래 기술의 항-TrkA 항체에 의한 인간 TrkA와 리간드 NGF의 결합을 차단하는 효율을 나타낸 개략도이다.
도 8은 본 발명의 항-TrkA 항체 및 종래 기술의 항-TrkA 항체가 NGF 유도의 TF-1 세포 증식을 억제하는 효율을 나타낸 개략도이다.
도 9는 본 발명의 항-TrkA 항체 및 종래 기술의 항-TrkA 항체가 NGF 유도의 TrkA/Ba/F3 세포 증식을 억제하는 효율을 나타낸 개략도이다.
도 10은 본 발명의 항-TrkA 항체와 인간 TrkA 결합의 ELISA 실험 결과이다.
도 11은 본 발명의 항-TrkA 항체와 인간 TrkB 결합의 ELISA 실험 결과이다.
도 12는 본 발명의 항-TrkA 항체와 인간 TrkC 결합의 ELISA 실험 결과이다.
도 13은 마우스에서 CFA-유도 염증 모델의 발바닥에 모델링 제제 CFA를 주입하기 전에 VonFrey로 통증 역치를 측정하여 획득한 기저 통증 역치를 나타낸다.
도 14는 마우스에서 CFA-유도 염증 모델이 발바닥에 모델링 제제 CFA 투여 약 24시간 후의 통증 역치를 나타내며, 이는 투여 전의 통증 역치이다.
도 15는 본 발명의 항-TrkA 항체 33H5와 42F5로 처리된 마우스에서 CFA-유도 염증 모델의 24시간 후의 통증 역치를 나타내며, 여기에서 *P<0.05 vs 생리식염수, ***P<0.001 vs 생리식염수이다.
도 16은 본 발명의 항-TrkA 항체 33H5와 42F5로 처리된 마우스에서 CFA-유도 염증 모델의 48시간 후의 통증 역치를 나타내며, 여기에서 *P<0.05 vs 생리식염수, ***P<0.001 vs 생리식염수이다.
도 17은 본 발명의 인간화 항-TrkA 항체와 인간 TrkA 결합의 ELISA 실험 결과이다.
도 18은 본 발명의 인간화 항-TrkA 항체가 인간 TrkA, TrkB 또는 TrkC 단백질을 발현하는 CHO 세포와 결합한 FACS 결과이다.
도 19는 본 발명의 인간화 항-TrkA 항체가 인간 TrkA 단백질을 발현하는 CHO 세포와 결합한 결과이다.
도 20은 본 발명의 인간화 항-TrkA 항체가 NGF 유도의 TF-1 세포 증식을 억제하는 효율을 도시한 것이다.
도 21은 본 발명의 인간화 항-TrkA 항체가 NGF 유도의 TrkA/Ba/F3 세포 증식을 억제하는 효율을 도시한 것이다.

실시예 1: 마우스 유래 항-TrkA 항체의 제조

마우스 Fc 태그를 함유하는 재조합 인간 TrkA 단백질(ACROBiosystems, TRA-H5254)을 초기 면역화를 위한 면역원으로 동일한 양의 프로인트 완전 보조제(Sigma-Alderich, F5881)와 혼합 유화시킨다. 6주령 BALB/c 및 C57 마우스(Jiangsu Huafukang)를 각각 10마리 준비하며, 각 동물에 50μg의 면역원을 피하 주사한다(보조제 질량 불포함, 이하 동일). 면역원과 Freund 불완전 보조제(Sigma-Alderich, F5506)를 혼합하고 유화시켜 후속적인 면역 강화에 사용한다. 초기 면역화 2주 후, 각 동물에 1차 면역 강화를 위해 25μg 면역원을 복강내 주사하고, 2주 후 각 동물에 2차 면역 강화를 위해 25μg 면역원을 피하 주사한다. 4 내지 5주 후 마지막 1차 면역 충격을 위해 면역원 25μg을 복강내 주사한다.

마지막 1차 면역화 후 마우스 B 세포를 분리하여 SP2/0 세포(중국과학원세포뱅크, TCM18)와 혼합하고 BTX사의 전기천공기 사용설명서에 따라 융합한다. 융합 세포는 배양 후 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)을 사용하여 TrkA에 결합하고 인간 TrkA와 리간드 NGF 결합을 억제할 수 있는 하이브리도마 세포를 스크리닝한다. 다시 제한 희석법으로 서브클로닝하고, 동일한 ELISA 방법으로 스크리닝하여 5A3, 11G8, 26E9, 33H5, 40D6, 42F5, 42H6 및 42A11로 명명된 8개의 양성 하이브리도마 단일클론 세포주를 획득한다.

하이브리도마 단일클론 세포주를 증식하여 무혈청 배지로 배양하고, 배지를 수집하여 단백질 G 컬럼으로 정제하여 마우스 유래 항-인간 TrkA 단일클론 항체 5A3, 11G8, 26E9, 33H5, 40D6, 42F5, 42H6 및 42A11를 획득한다.

실시예 2: 마우스 유래 항-TrkA 항체와 TrkA 결합의 ELISA 검출

인간 Fc를 함유하는 TrkA 세포외 도메인(33-417)(ACROBiosystems, TRA-H5259) 단백질을 사용하여 항-TrkA 항체의 결합 능력을 검출하였다. 96-웰 마이크로플레이트의 각 웰에 인간 TrkA 50ng을 도포하고, 세척 및 차단한 후 구배 희석된 항체를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 배양한다. 3회 세척 후 양고추냉이 퍼옥시다제 결합 염소 항-마우스 Fc 항체(Biolegend, 405306)를 첨가하여 상온에서 1시간 배양한다. 3회 세척 후 테트라메틸벤지딘(TMB, Biolegend, 421101)을 첨가하여 현색하고 1M HCl을 사용하여 현색을 정지시키고, 마이크로플레이트 리더로 450nm에서의 흡광도 값을 판독한다.

8개의 하이브리도마가 분비하는 항-TrkA 항체는 모두 용량 의존적인 방식으로 인간 TrkA 세포외 도메인에 결합하고(도 1), 8개의 항체와 인간 TrkA 결합의 EC50은 표 1과 같다.

인간 TrkA의 세포외 도메인과 리간드 NGF 결합의 도메인(TrkA 192-402)만 함유한 융합 단백질(융합 인간 Fc)(ACROBiosystems, TRA-H5258)을 사용하여 항-TrkA 항체의 결합 능력을 추가로 시험하였다. ELISA 결과는 항-TrkA 항체와 TrkA 세포외 도메인 192-402 아미노산 도메인이 도 2에 도시된 바와 같으며 EC50은 표 2와 같다.

또한 원숭이 TrkA(Hangzhou Healsun Biopharm, HSP037-05), 래트 TrkA(Beijing SinoBiological, 80243-R03H), 마우스 TrkA(Beijing SinoBiological, 51103-M02H) 세포외 도메인 융합 단백질(융합 인간 Fc)을 사용하여 항-TrkA 항체의 종 교차 반응성을 검출하였다. ELISA 결과, 8개의 항-TrkA 항체 모두 3개의 다른 종의 TrkA 단백질에 비교적 강하게 결합할 수 있으며 그 결과는 도 3 내지 5에 도시된 바와 같다.

표 1 8개의 항-TrkA 항체와 인간 TrkA(33-417) 결합의 EC50

표 2 8개의 항-TrkA 항체와 인간 TrkA(192-402) 결합의 EC50

실시예 3: 마우스 유래 항-TrkA 항체와 인간 TrkA 결합의 친화도 검출

생체 분자 상호 작용 검출 플랫폼인 ForteBio Octet Red96(PALL)을 사용하여 항체 친화도를 측정한다.

항-인간 Fc 포획 센서(Fortebio, 18-5088)를 사용하여 인간 Fc 태그를 포함하는 인간 TrkA 세포외 도메인(33-417) 단백질을 칩에 고정시킨 후, 농도 구배의 항-TrkA 항체를 결합한다. 완충액(1X Kinetics Buffer: PBS + 0.1% BSA + 0.05% Tween20)을 추가하여 해리하며, 마지막으로 기기 알고리즘을 통해 항원-항체 결합의 친화력 및 동역학적 상수를 계산한다. 결과는 표 3과 같다.

표 3 항-TrkA 항체와 인간 TrkA 결합 친화도

실시예 4: 마우스 유래 항-TrkA 항체와 TrkA/CHO 세포의 결합의 유세포 분석 검출

유세포 분석(FACS)을 이용해 항-TrkA 항체와 전장 TrkA를 발현하는 CHO-K1 세포(TrkA/CHO)의 결합 상황을 검출하였다. TrkA/CHO 세포를 10% FBS, 5μg/mL 퓨로마이신 함유 F12K 배지(Hyclone, SH30026)에서 배양하였다. 음성 대조군 세포 CHO-K1은 10% FBS 함유 F12K 배지에서 배양하였다. 대수 성장기에 세포를 수집하고, 2% FBS 함유하는 PBS를 사용해 세포를 재현탁하고, 96-웰 플레이트에서 웰당 10⁵개 세포(50μl)를 첨가하고, 50μl의 20μg/mL 항-TrkA 항체 또는 마우스 IgG 대조군을 첨가하였다. 실온에서 1시간 반응시키고, 1μg/mL Alexa Flour 647 표지된 염소 항-마우스 IgG 항체(Jackson, 115-605-062)를 첨가하고 실온에서 30분간 배양하였다. 유세포분석기(BioRad, ZE5)를 사용해 항체의 결합 상황을 검출하였다. 도 6에 도시된 바와 같이, 8개의 항-TrkA 항체는 모두 TrkA/CHO 세포에 결합할 수 있으나, CHO-K1 세포에는 결합할 수 없다. 대조군 항체 마우스 IgG는 CHO-K1에 결합되지 않았으며 TrkA/CHO에도 결합되지 않았다.

실시예 5: 마우스 유래 항-TrkA 항체의 인간 TrkA와 리간드 NGF의 결합 차단

출원인은 중국 특허출원 CN101939337A에서 제공하는 서열 정보에 따라 그 중 가장 바람직한 항체 BXhVH5VL1의 중쇄 가변 영역(SEQ ID NO: 5) 및 경쇄 가변 영역(SEQ ID NO: 7)을 참조하여 대조군 항체 BXhVH5VL1을 합성하였다.

96-웰 마이크로플레이트의 각 웰에 50ng의 융합 인간 Fc의 TrkA 세포외 도메인(33-417) 단백질 코팅하고, 3회 세척한 후 3% BSA로 1시간 동안 차단하였다. 10,000ng/mL(66.67 nM) 항-TrkA 항체를 순차적으로 0.17ng/mL(0.0011nM)까지 10개 농도로 3배 희석하고, 각 웰에 100μL를 첨가하고, 30분 동안 배양한 후 각 웰에 100μL의 1μg/mL 비오틴 표지 인간 NGF를 첨가하고, 상온에서 1시간 동안 배양한 후 3회 세척하였다. 스트렙타아비딘으로 표지된 양고추냉이 퍼옥시다제(Streptavidin-HRP, Biolegend, 405210)를 첨가하여 0.5시간 배양하고, 3회 세척한 후 마이크로플레이트에 TMB를 첨가하고, 현색이 종료되면 마이크로플레이트 리더로 450 nm에서의 흡광도를 판독하였다.

결과는 도 7에 도시된 바와 같이, 본 발명의 항-TrkA 항체는 인간 TrkA와 리간드 NGF의 결합을 차단할 수 있으며, 차단 효과는 항체 농도가 높아짐에 따라 현저히 향상되었다. 항체 농도가 20nM일 때 이 8개의 항-TrkA 항체는 거의 완전히 TrkA와 NGF의 결합을 차단할 수 있다. 대조군 항체 BXhVH5VL1은 TrkA와 NGF의 결합에 대해 측정한 농도(0.001-100nM) 내에서 현저한 차단 효과를 나타내지 않았다. 본 발명의 8개 항-TrkA 항체 및 BXhVH5VL1이 인간 TrkA와 리간드 NGF 결합을 차단하는 IC50은 표 4와 같다.

표 4 항-TrkA 항체의 TrkA-NGF 결합 차단의 IC50

실시예 6: 마우스 유래 항-TrkA 항체의 생체외 중화 활성 검출

A. NGF 유도의 TF-1 세포 증식 실험

TF-1 세포(인간 혈액 백혈병 세포, ATCC, CRL-2003)의 성장은 GM-CSF(과립구 대식세포 집락 자극 인자)에 크게 의존하며, NGF는 TF-1 세포 표면의 TrkA와 결합한 후 그 다운스트림 신호전달 경로를 활성화하여 TF-1의 성장을 유도할 수도 있으므로 GM-CSF에 의존할 필요가 없다. TF-1 세포를 10% FBS(Gibco, 10091148), 2μg/mL GM-CSF(R&D, 215-GM-010)를 함유한 RPMI1640 배지(HyClone, SH30027)에서 배양하고, 세포를 대수 성장기에 수집하며, 원래 성장 배지 중의 GM-CSF를 제거하기 위해 철저히 세척하고, GM-CSF를 함유하지 않은 배지로 재현탁한다. 각 웰에 5000개 세포를 80μl 배지에 희석하여 흰색 투명 바닥 96-웰 세포 배양 플레이트(Corning, 3610)에 펼친다. 항-TrkA 항체는 400μg/mL(2666.67nM)로 4배 구배 희석하여 10개 농도로 제조하고, 각 웰 세포에 10μL를 첨가하여 실온에서 0.5시간 배양한 후, 각 웰 세포에 10μL의 50ng/mL의 인간 NGF를 첨가하고, 37℃의 5% CO₂ 배양 상자에서 72시간 동안 세포를 배양한 후 CellTiter-Glo® 세포 활력 검출 시약(Promega, G7573) 100μL를 첨가한다. 다기능 마이크로플레이트 리더(SpectraMax)를 사용하여 광학 발광 신호를 판독한다. 도 8에 도시된 바와 같이, 본 발명의 항-TrkA 항체는 인간 NGF 유도의 TF-1 세포의 증식을 억제할 수 있다. IC50은 표 5와 같다. 항체 BXhVH5VL1의 TF-1 세포 증식에 대한 억제 효과는 본 발명의 항체보다 훨씬 약하다. 항체 농도가 40μg/mL(266.67nM)인 경우, 본 발명의 항-TrkA 항체는 NGF에 의해 유도된 TF-1 세포의 증식을 완전히 억제할 수 있으며, 해당 농고에서 항체 BXhVH5VL1의 NGF에 의해 유도된 TF-1 세포 증식의 억제율은 40% 미만이다.

표 5 항-TrkA 항체의 NGF 유도의 TF-1 세포 증식 억제 IC50

B. NGF 유도의 TrkA/Ba/F3 세포 증식 실험

Ba/F3 세포의 성장에는 IL-3 의존 및 IL-3 비의존의 2가지 경로가 있다. IL-3 비의존 성장은 Ba/F3 세포가 활성 키나아제를 안정적으로 발현해야 한다. 전장 인간 TrkA를 발현하는 Ba/F3(TrkA/Ba/F3) 세포를 구성하려면, 상기 세포 증식은 NGF를 추가해 유도해야 한다.

TrkA/Ba/F3 세포를 10% FBS와 100ng/mL NGF를 함유하는 RPMI1640 배지에서 배양한다. 세포를 수집하고 철저히 세척하여 원래의 성장 배지 중의 NGF를 제거한다. 각 웰에 3000개 세포를 80μL의 NGF를 함유하지 않는 배지에 재현탁시키고, 백색 투명 바닥 96-웰 세포 배양 플레이트(Corning, 3610)에 도포한다. 각 웰 세포에 10μL 구배 희석의 항-TrkA 항체를 첨가하고, 실온에서 0.5시간 배양한 후, 각 웰 세포에 10μL의 50ng/mL 인간 NGF를 첨가하여 NGF의 최종 농도를 5ng/mL로 만들었다. 구배 희석된 항-NGF 항체의 최종 농도는 최고 40μg/mL(266.67nM)이다. 37℃, 5% CO₂ 배양상자에서 48시간 동안 세포를 배양한 후 100μL CellTiter-Glo^® 세포 활력 검출 시약(Promega, G7573)을 첨가하고 다기능 마이크로플레이트 리더(SpectraMax)를 사용해 광학 발광 신호를 판독한다.

TrkA/Ba/F3 세포의 성장을 관찰하는 과정에서, 인간 NGF가 첨가된 세포는 정상적으로 증식할 수 있었다. 본 발명의 8개 항-TrkA 항체는 NGF에 의해 유도된 TrkA/Ba/F3 세포의 증식을 억제할 수 있고, 억제 작용은 농도가 높아짐에 따라 향상되었다. 항체 농도가 2.5μg/mL(16.67nM) 이상으로 높아졌을 때, 항-TrkA 항체의 TrkA/Ba/F3 세포 증식에 대한 억제 작용이 100%에 달할 수 있었다. 항체 BXhVH5VL1은 최고 농도가 40μg/mL(266.67 nM)일 때, TrkA/Ba/F3 세포 증식 억제율은 50% 미만이었다(도 9). IC50은 표 6과 같다.

표 6 항-TrkA 항체의 NGF 유도의 TrkA/Ba/F3 세포 증식 억제 IC50

실시예 7: 마우스 유래 항-TrkA 항체와 TrkA 동일 패밀리 결합의 검출

96-웰 마이크로플레이트의 각 웰은 50ng 인간 TrkA 세포외 도메인 단백질, 인간 TrkB 세포외 도메인 단백질(Beijing SinoBiological, 10047-H03H), 인간 TrkC 세포외 도메인 단백질(Beijing SinoBiological, 10048-H03H)을 코팅하고 실시예 2의 방법에 따라 항-TrkA 항체와 인간 TrkA 및 2개의 동일 패밀리 단백질 TrkB, TrkC의 결합 상황을 검출하였다.

8개의 마우스 유래 항-TrkA 항체와 TrkA(도 10)는 높은 친화도를 가지며, TrkB(도 11) 및 TrkC(도 12)와 기본적으로 결합하지 않았다.

실시예 8: 항-TrkA 항체의 CFA 유발 마우스 염증성 통증에 대한 작용

C57BL/6 마우스(Zhejiang Charles River), 수컷, SPF 등급, 6 내지 8주령, 5일 동안 적응 사육한다. 적응 기간 종료 후, 동물을 생리식염수군, 항-TrkA 항체 33H5군 및 항-TrkA 항체 42F5군으로 나누고 각 군에는 10마리의 동물을 넣었다. 모델링 제제 CFA를 마우스의 발바닥에 주입하기 전에 VonFrey를 사용하여 기저 통증 역치인 통증 역치를 측정하였다(도 13).

다음 날 마우스의 발바닥에 25μl의 CFA를 주사하여 염증을 유발하였고, 발가락이 크게 부어 오른 후(모델링 후 약 24시간), 동일한 방법으로 투여 전의 통증 역치인 마우스 발바닥의 통증 역치를 검출하였다(도 14).

이후 각 군에 생리식염수, 항-TrkA 항체 33H5, 항-TrkA 항체 42F5를 10mg/kg의 용량으로 피하주사하고, 투여 후 24시간 및 48시간 후에 통증 역치(도 15, 16)를 측정하여 피험물의 통증 역치에 대한 영향을 평가하였다.

결과는 도 13 내지 16에 도시된 바와 같이, 투여 24시간 및 48시간 후, 항-TrkA 항체 33H5 및 42F5 모두 CFA로 인한 통증 역치 감소를 유의하게 개선할 수 있고, 정상 식염수군에 비해 통계적 차이가 있었다.

실시예 9: 마우스 유래 항-TrkA 항체 가변 영역 시퀀싱 및 서열 분석

TRIzol 키트(Ambion, 15596-026)를 이용하여 하이브리도마 세포의 총 RNA를 추출하고, 이를 템플릿으로 하여 첫 번째 사슬 cDNA(Takara)를 합성한다. 항체 경쇄 및 중쇄 단편은 cDNA 말단의 급속 증폭(RACE)에 의해 수득되었고, 증폭된 단편을 각각 표준 벡터에 클로닝하였다. 시퀀싱에 의해 수득된 항-TrkA 항체 5A3, 11G8, 26E9, 33H5, 40D6, 42F5, 42H6 및 42A11의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열은 다음과 같다.

항-TrkA 항체 5A3:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLQQSGAELMKPGASVKISCKAIGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGRGVTNYNENFKGKATFTVDISSTTTYIQFSSLTSEDSAVYYCARSNYGDYDFWGQGTSLTVSS（SEQ ID NO: 49）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTATTGGGTACACATTCAGTAGGTACTGGATAGAGTGGGTAAAGCAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCTGGAAGAGGTGTTACTAACTACAATGAGAACTTCAAGGGCAAGGCCACATTCACTGTAGATATATCCTCCACCACAACCTACATTCAATTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTGCAAGATCGAATTATGGTGACTACGACTTCTGGGGCCAAGGCACCTCTCTCACAGTCTCCTCA（SEQ ID NO: 65）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QTVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSSGAVTTSNHANWVQEKPDHLFTSLMGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL（SEQ ID NO: 57）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGACTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTTCTGGGGCTGTTACAACTAGTAACCATGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCTGATCATTTATTCACTAGTCTAATGGGTGGTACCAATAACCGAGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGCGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCGCAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTCTGGTACAGCAACCATTGGGTGTTCGGTGGAGGAACTAAACTGACTGTCCTA（SEQ ID NO: 66）

항-TrkA 항체 11G8:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEINPNNGLTNYDEKFKTKATLTIDKSSRTAYIQLSSLTSEDSAVYYCAKYGNYVAFAFWGQGTLVTVSA（SEQ ID NO: 50）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACACCTTTACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTAATCCTAACAACGGTCTTACTAACTACGATGAGAAATTCAAGACCAAGGCCACACTGACCATAGACAAATCCTCCAGAACAGCCTACATACAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAAATATGGTAACTACGTCGCGTTTGCTTTCTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA（SEQ ID NO: 67）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

DIQMTQSPASLSATVGETVTITCRASENIYSYVAWYQQKQGKSPQLLVHNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKINGLHPEDFGSYYCQHHYGIPLTFGAGTKLELK（SEQ ID NO: 58）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

GACATTCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCAACTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAAAATATTTACAGTTATGTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAACTCCTGGTCCATAATGCAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTACCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACGGCCTGCACCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTATGGTATTCCGCTCACGTTCGGCGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA（SEQ ID NO: 68）

항-TrkA 항체 26E9:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKSSGYTFTNYWMHWVKQRPGQGLEWIGEIYPSNGRTNYNEKFKNRATLTVDISSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSRYDPMEDWGQGTSVTVSS（SEQ ID NO: 51）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGGCTTCTGTGAAGCTGTCCTGCAAGTCTTCTGGCTATACCTTCACCAACTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGCGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTATCCTAGCAACGGTCGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAAAACAGGGCCACACTGACTGTAGACATTTCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGGAGTAGGTACGACCCTATGGAAGACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCT（SEQ ID NO: 69）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVGYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPTRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSIPLTFGSGTKLEIK（SEQ ID NO: 59）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTGGGTTACATGCACTGGTACCAGCAGAAGTCAGGCACCTCCCCCAAAAGATGGATTTATGACACATCCAAACTGGCTTCTGGAGTCCCAACTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAGGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTATCCCACTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAG（SEQ ID NO: 70）

항-TrkA 항체 33H5:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLQQPGAELVKPGASVQLSCKASGYTFTSYWIHWVKQRPGQGLEWIGEINPNNGLTNYIEKFKNKATLTIDKSSNTAYMQLSGLTPEDSAVYYCAKYGNYVAFAYWGQGTLVTVSA（SEQ ID NO: 52）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGCAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGTTACTGGATACACTGGGTGAAACAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTAATCCTAACAACGGTCTTACTAACTACATTGAGAAATTCAAGAACAAGGCCACACTGACTATTGACAAATCCTCCAACACAGCCTACATGCAACTCAGCGGCCTGACACCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAAATATGGTAACTACGTCGCGTTTGCTTACTGGGGCCAGGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA（SEQ ID NO: 71）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

DIQMTQSPASLSASVGDTVTITCRASENIYTYLAWYQQKQGKSPQLLVHNTKTLAEGVPSRFSGSGSGTQFSLKISSLQPEDFGTYYCQHHYGVPLTFGAGTKLELK（SEQ ID NO: 60）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

GACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGACACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAAAATATCTACACTTATTTAGCTTGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAACTCCTGGTCCATAATACAAAAACCTTAGCAGAAGGTGTGCCCTCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTTTTCTCTGAAGATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGACTTATTACTGTCAACATCATTATGGTGTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA（SEQ ID NO: 72）

항-TrkA 항체 40D6:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLQQSGTELMKPGASVKISCKATGYTFSRYWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGRSSTNYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCTRVSQLHIYFDYWGQGTTVTVSS（SEQ ID NO: 53）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGAACTGAACTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTACTGGCTACACATTCAGTAGATACTGGATAGAGTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACATGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTTACCTGGAAGGAGTAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTCACTGCCGATACATCCTCCAACACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAAGAGTTTCCCAACTGCACATTTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGGACCACTGTCACAGTCTCCTCC（SEQ ID NO: 73）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

DIVMTQVVPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFQQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVAFYYCMQHLEFPLTFGAGTKLELK（SEQ ID NO: 61）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

GATATTGTGATGACTCAGGTTGTACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTATATTGGTTCCAGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACATTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGCTTTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATTTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGTTGGAGCTGAAA（SEQ ID NO: 74）

항-TrkA 항체 42F5:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKSSGYTFTNYWMHWVRQRPGQGLEWIGEIYPNNGRVNYNEKFKNRATLTVDISSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSRYDPMEDWGQGTSVTVSS（SEQ ID NO: 54）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAACCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGTCTTCTGGCTATACCTTCACCAACTACTGGATGCACTGGGTGAGGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATCTATCCTAACAACGGTCGTGTTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAACAGGGCCACACTGACTGTAGACATATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGGAGTAGGTACGACCCTATGGAAGACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCT（SEQ ID NO: 75）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVGYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPTRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYFCQQWSSIPLTFGSGTRLEIK（SEQ ID NO: 62）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAAGTTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAGGTTACATGCACTGGTACCAGCAGAAGTCAGGCACCTCCCCCAAAAGATGGATTTATGACACATCCAAACTGGCTTCTGGAGTCCCAACTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAGGATGCTGCCACTTATTTCTGCCAGCAGTGGAGTAGTATCCCACTCACGTTCGGCTCGGGGACAAGGTTGGAAATAAAG（SEQ ID NO: 76）

항-TrkA 항체 42H6:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLQQPGVELVKPGASVKLSCKTSGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGEIYSSNGLTNYNEKFKNKATLTVDKSSSTAYMQLTSLTSEDSAIYYCARHWYVFLDHWGQGTTLTVSS（SEQ ID NO: 55）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGTTGAACTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGACTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAATGGATTGGAGAGATTTATTCCAGTAACGGTCTTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAATAAGGCCACACTGACTGTAGATAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCACCAGCCTGACATCTGAAGACTCTGCGATCTATTACTGTGCAAGACATTGGTACGTCTTCCTTGACCACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA（SEQ ID NO: 77）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNHANWVQEKPDHLFTGLIGGINNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTRLTVL（SEQ ID NO: 63）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGCTGTTGTGACTCAGGAATCTGCACTCACCACATCACCTGGTGAAACAGTCACACTCACTTGTCGCTCAAGTACTGGGGCTGTTACAACTAGTAACCATGCCAACTGGGTCCAAGAAAAACCAGATCATTTATTCACTGGTCTAATAGGTGGTATCAACAACCGAGCTCCAGGTGTTCCTGCCAGATTCTCAGGCTCCCTGATTGGAGACAAGGCTGCCCTCACCATCACAGGGGCACAGACTGAGGATGAGGCAATATATTTCTGTGCTCTATGGTACAGCAATCATTGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAGACTGACTGTCCTA（SEQ ID NO: 78）

항-TrkA 항체 42A11:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNYWMHWVKQRPGQGLEWIGEIYPSNGRTNYNEKFKTKATLTVDKSSSTAYMHLSSLTSEDSAVYYCAGSRYDAMDFWGQGTSVTVSS（SEQ ID NO: 56）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAACTACTGGATGCATTGGGTGAAACAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGAGATTTATCCTAGCAACGGTCGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGACCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCATCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAGGATCGAGATACGATGCTATGGACTTCTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA（SEQ ID NO: 79）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSIISYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCHQWTSNPLTFGGGTKLELK（SEQ ID NO: 64）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAATTATAAGTTACATGCACTGGTACCAGCAGAAGTCAGGCACCTCCCCCAAAAGATGGATTTATGACACTTCCAAACTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGTGGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCACCAGTGGACTAGTAACCCGCTCACGTTCGGTGGTGGGACCAAGCTGGAACTGAAA（SEQ ID NO: 80）

서열 분석으로 Kabat 및 IMGT 시스템에 의해 정의된 CDR을 획득하였다. 하기 표(표 7)는 Kabat 및 IMGT 시스템의 정의를 기반으로 8가지 항-TrkA 항체의 CDR을 나열하였다.

표 7 Kabat 및 IMGT 시스템 기반의 항-TrkA 항체 CDR의 정의

실시예 10: 마우스 유래 항-TrkA 항체 인간화 조작 및 특성화

항체의 인간화 조작

상기에서 얻은 하이브리도마 세포에서 분비되는 항체의 경쇄 가변 영역(VL) 및 중쇄 가변 영역(VH) 서열에 따라 인간화 조작을 수행하였다. 마우스 유래 항체의 VL 및 VH의 아미노산 서열을 인간 배아 항체 아미노산 서열 데이터베이스에서 비교 및 검색하고, 높은 상동성을 갖는 인간 IGHV 및 IGKV 서열을 인간화 템플릿으로 찾는다. 컴퓨터 시뮬레이션 기술을 통해, 가변 영역과 프레임 영역 아미노산이 존재하는 공간 입체 장해 및 상호 작용을 분석하여, 인간화 항체의 활성 유지에 비교적 중요한 프레임 영역 아미노산을 결정하고, 인간화 과정에서 이러한 아미노산을 유지한다. CDR 이식 기술을 통해 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 인간화 조작을 완료한다. 그 후 선택된 항체 불변 영역 템플릿을 통해 하기 복수의 인간화 항체를 얻었다.

여기에서 항-TrkA 항체 42F5를 인간화 조작하여 예시적인 항체 42F5-01, 42F5-03, 42F5-04, 42F5-05, 43F5-08, 42F5-11을 수득하였다. 인간 IGHV1-2를 중쇄 가변 영역 템플릿으로, IGKV1-39를 경쇄 가변 영역 템플릿으로 하여 인간화 항체 42F5-01 및 42F5-03를 수득하였다. 인간 IGHV1-2를 중쇄 가변 영역 템플릿으로, IGKV1-6을 경쇄 가변 영역 템플릿으로 하여 인간화 항체 42F5-05를 수득하였다. 인간 IGHV1-2를 중쇄 가변 영역으로, IGKV3-11을 경쇄 가변 영역 템플릿으로 하여 인간화 항체 42F5-11을 수득하였다. 인간 IGHV1-69를 중쇄 가변 영역 템플릿으로, IGKV1-39을 경쇄 가변 영역 템플릿으로 하여 인간화 항체 42F5-04를 수득하였다. 인간 IGHV1-69를 중쇄 가변 영역 템플릿으로, IGKV1-6을 경쇄 가변 영역 템플릿으로 하여 인간화 항체 42F5-08를 수득하였다. 수득된 인간화 항체 중에서 42F5-01 및 42F5-05 중쇄 가변 영역의 서열이 동일하고, 인간화 항체 42F5-03 및 42F5-11 중쇄 가변 영역의 서열이 동일하며, 인간화 항체 42F5-04 및 42F5-08 중쇄 가변 영역 서열이 동일하고, 인간화 항체 42F5-03 및 42F5-04의 경쇄 가변 영역 서열이 동일하다.

IGHV1-2, IGHV1-69, IGKV1-39, IGKV1-6, IGKV3-11은 IMGT(The International ImMunoGeneTics Information System) 및 NCBI(The National Center for Biotechnology Information) 중의 인간 면역글로불린 유전자 데이터베이스 중 인간 생식계열 IgG 유전자이다. 또한 항체 42F5 중쇄의 상보성 결정 영역 서열은 탈아미드 부위 NG를 함유하기 때문에, 항체에 대한 해당 부위의 잠재적 영향을 제거하기 위해 인간화 항체 43F5-01의 중쇄 가변 영역을 추가로 조작하였다. 42F5-01을 템플릿으로 하여, 중쇄 가변 영역의 NG_55-56을 SG_55-56, 또는 QG_55-56, 또는 NA_55-56으로 돌연변이시켜 각각 인간화 항체 42F5-13, 42F5-14, 42F5-15를 획득한다.

수득된 인간화 항체 중쇄 가변 영역 서열을 인간 IgG4 중쇄 불변 영역에 이식하고, 경쇄 가변 영역 서열을 인간 Kappa 경쇄 불변 영역에 이식하여 유전자 합성을 수행하고 효소 절단을 거친 후 상응하는 플라스미드에 라이게이션한다. 구성한 플라스미드를 일시적으로 CHO 세포에 형질감염하여 발현을 수행하고, 7 내지 10일 발현을 거쳐 세포 배양 상청액은 상응하는 완충액(예를 들어 인산염 완충 식염수(pH 7.4))으로 평형화된 MabSelect 컬럼(GE Healthcare)으로 정제한다. 그 후 구연산나트륨 또는 기타 완충액으로 용출시킨다. 이 단계를 통해 얻은 항체는 SDS-PAGE 또는 SEC-HPLC를 통해 순도 등 감정을 수행하여 후속적인 기타 특성화 연구에 사용한다.

항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체 가변 영역 서열:

항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체 42F5-01, 42F5-03, 42F5-04, 42F5-05, 42F5-08, 42F5-11, 42F5-13, 42F5-14, 42F5-15 가변 영역 서열은 하기와 같다.

42F5-01:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKSSGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGEIYPNNGRVNYNEKFKNRVTMTVDISISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSRYDPMEDWGQGTTVTVSS （SEQ ID NO.81）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCAGGAGCTTCCGTGAAGGTGAGCTGCAAGTCCAGCGGCTACACCTTCACAAACTATTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATGGGCGAGATCTACCCTAACAATGGCAGGGTGAACTACAACGAGAAGTTTAAGAACAGAGTGACCATGACAGTGGACATCAGCATCTCTACCGCTTACATGGAGCTGTCTAGGCTGCGGTCCGACGATACAGCCGTGTACTATTGTGCTAGATCTCGCTATGACCCCATGGAGGATTGGGGCCAGGGCACCACAGTGACCGTGTCTTCC（SEQ ID NO.82）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

DVQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVGYMHWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQWSSIPLTFGQGTRLEIK （SEQ ID NO.83）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

GACGTGCAGCTGACCCAGTCTCCTTCCAGCCTGTCCGCCAGCGTGGGCGATAGAGTGACCATCACATGCTCCGCTTCTTCCAGCGTGGGCTACATGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGAGGCTGATCTACGACACATCTAAGCTGGCTTCCGGAGTGCCAAGCCGGTTCTCTGGCTCCGGCAGCGGAACCGACTACACCCTGACAATCTCTTCCCTGCAGCCAGAGGATTTCGCCACATATTTTTGTCAGCAGTGGAGCTCTATCCCCCTGACCTTTGGCCAGGGCACACGCCTGGAGATCAAG （SEQ ID NO.84）

42F5-03:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKSSGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWIGEIYPNNGRVNYNEKFKNRATLTVDISISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSRYDPMEDWGQGTTVTVSS （SEQ ID NO.85）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCAGGAGCTTCCGTGAAGGTGAGCTGCAAGTCCAGCGGCTACACCTTCACAAACTATTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATCGGCGAGATCTACCCTAACAATGGCAGGGTGAACTACAACGAGAAGTTTAAGAACAGAGCCACCCTGACAGTGGACATCAGCATCTCTACCGCTTACATGGAGCTGTCTAGGCTGCGGTCCGACGATACAGCCGTGTACTATTGTGCTAGATCTCGCTATGACCCCATGGAGGATTGGGGCCAGGGCACCACAGTGACCGTGTCTTCC （SEQ ID NO.86）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

DVQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVGYMHWYQQKPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQWSSIPLTFGQGTRLEIK （SEQ ID NO.87）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

GACGTGCAGCTGACCCAGTCTCCTTCCAGCCTGTCCGCCAGCGTGGGCGATAGAGTGACCATCACATGCTCCGCTTCTTCCAGCGTGGGCTACATGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGAGGTGGATCTACGACACATCTAAGCTGGCTTCCGGAGTGCCAAGCCGGTTCTCTGGCTCCGGCAGCGGAACCGACTACACCCTGACAATCTCTTCCCTGCAGCCAGAGGATTTCGCCACATATTTTTGTCAGCAGTGGAGCTCTATCCCCCTGACCTTTGGCCAGGGCACACGCCTGGAGATCAAG （SEQ ID NO.88）

42F5-04：

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKSSGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWIGEIYPNNGRVNYNEKFKNRATLTVDISTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRYDPMEDWGQGTTVTVSS （SEQ ID NO.89）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCAGGCTCCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGTCTTCCGGCTACACCTTCACAAACTATTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGACAGGGACTGGAGTGGATCGGCGAGATCTACCCTAACAATGGCAGAGTGAACTACAACGAGAAGTTTAAGAACCGCGCCACCCTGACAGTGGACATCTCTACCTCCACAGCTTACATGGAGCTGAGCTCTCTGAGAAGCGAGGATACCGCCGTGTACTATTGTGCTAGGTCTCGGTATGACCCCATGGAGGATTGGGGCCAGGGCACCACAGTGACAGTGTCCAGC （SEQ ID NO.90）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

42F5-03(SEQ ID NO.87)과 동일

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

42F5-03(SEQ ID NO.88)과 동일

42F5-05:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

42F5-01(SEQ ID NO.81)과 동일

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

42F5-01(SEQ ID NO.82)과 동일

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVGYMHWYQQKPGKAPKRLIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQWSSIPLTFGQGTRLEIK （SEQ ID NO.91）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTGCAGCTGACCCAGTCTCCTTCCAGCCTGTCCGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACATGCTCCGCTTCTTCCAGCGTGGGCTACATGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGAGGCTGATCTACGATACATCTAAGCTGGCTTCCGGAGTGCCAAGCCGGTTCTCTGGCTCCGGCAGCGGAACCGACTACACCCTGACAATCTCTTCCCTGCAGCCAGAGGATTTCGCCACATATTTTTGTCAGCAGTGGAGCTCTATCCCCCTGACCTTTGGCCAGGGCACACGCCTGGAGATCAAG （SEQ ID NO.92）

42F5-08

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

42F5-04(SEQ ID NO.89)와 동일

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

42F5-04(SEQ ID NO.90)와 동일

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVGYMHWYQQKPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQWSSIPLTFGQGTRLEIK （SEQ ID NO.93）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTGCAGCTGACCCAGTCTCCTTCCAGCCTGTCCGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACATGCTCCGCTTCTTCCAGCGTGGGCTACATGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGAGGTGGATCTACGATACATCTAAGCTGGCTTCCGGAGTGCCAAGCCGGTTCTCTGGCTCCGGCAGCGGAACCGACTACACCCTGACAATCTCTTCCCTGCAGCCAGAGGATTTCGCCACATATTTTTGTCAGCAGTGGAGCTCTATCCCCCTGACCTTTGGCCAGGGCACACGCCTGGAGATCAAG （SEQ ID NO.94）

42F5-11:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

42F5-03(SEQ ID NO.85)과 동일

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

42F5-03(SEQ ID NO.86)과 동일

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

EVVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVGYMHWYQQKPGQAPRRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYFCQQWSSIPLTFGQGTRLEIK （SEQ ID NO.95）

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

GAGGTGGTGCTGACCCAGTCCCCAGCCACACTGAGCCTGTCTCCAGGAGAGAGAGCCACCCTGTCCTGCTCCGCCTCCAGCTCTGTGGGCTACATGCACTGGTATCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCTAGGCGGTGGATCTACGACACCTCTAAGCTGGCTTCCGGAGTGCCAGCTCGCTTCTCTGGCTCCGGCAGCGGCACAGACTACACCCTGACAATCTCCAGCCTGGAGCCTGAGGATGCCGCCGTGTACTTCTGTCAGCAGTGGTCTTCCATCCCACTGACCTTTGGCCAGGGCACAAGGCTGGAGATCAAG （SEQ ID NO.96）

42F5-13:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKSSGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGEIYPNSGRVNYNEKFKNRVTMTVDISISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSRYDPMEDWGQGTTVTVSS （SEQ ID NO.97）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTTCTGTGAAGGTGAGCTGCAAGAGCTCCGGCTACACCTTTACCAATTATTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGCGAGATATATCCCAATAGCGGCCGGGTGAATTATAATGAGAAGTTTAAGAATCGGGTGACCATGACCGTGGATATCAGCATCTCCACCGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGGAGCGATGACACCGCTGTGTACTACTGCGCTAGGTCCAGGTATGACCCCATGGAGGATTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACCGTGAGCAGC （SEQ ID NO.98）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

42F5-01(SEQ ID NO.83)과 동일

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

42F5-01(SEQ ID NO.84)과 동일

42F5-14:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKSSGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGEIYPNQGRVNYNEKFKNRVTMTVDISISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSRYDPMEDWGQGTTVTVSS （SEQ ID NO.99）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTTCCGTGAAGGTGTCCTGTAAGTCCAGCGGCTATACCTTCACCAACTATTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCCAGGGACTGGAGTGGATGGGCGAGATATATCCTAACCAGGGCCGGGTGAATTATAACGAGAAGTTCAAGAATAGGGTGACCATGACCGTGGACATCTCCATCAGCACCGCTTACATGGAGCTGTCCAGGCTGCGGAGCGACGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGGTCCCGGTATGATCCCATGGAGGACTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACCGTGAGCAGC （SEQ ID NO.100）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

42F5-01(SEQ ID NO.83)과 동일

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

42F5-01(SEQ ID NO.84)과 동일

42F5-15:

중쇄 가변 영역 아미노산 서열:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKSSGYTFTNYWMHWVRQAPGQGLEWMGEIYPNNARVNYNEKFKNRVTMTVDISISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSRYDPMEDWGQGTTVTVSS （SEQ ID NO.101）

중쇄 가변 영역 핵산 서열:

CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCTTCTGTGAAGGTGTCCTGTAAGAGCAGCGGCTACACCTTTACCAATTATTGGATGCACTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCCAGGGATTGGAGTGGATGGGCGAGATATATCCTAACAATGCCAGGGTGAACTATAATGAGAAGTTTAAGAACCGGGTGACCATGACCGTGGACATCAGCATCTCCACCGCCTATATGGAGCTGAGCCGGCTGCGGTCCGACGACACCGCTGTGTACTACTGCGCCCGGTCCCGGTATGATCCTATGGAGGACTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACCGTGAGCTCC （SEQ ID NO.102）

경쇄 가변 영역 아미노산 서열:

42F5-01(SEQ ID NO.83)과 동일

경쇄 가변 영역 핵산 서열:

42F5-01(SEQ ID NO.84)과 동일

표 8 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체 가변 영역 서열

B. 인간화 항-TrkA 항체 특성화

1) 인간화 항체와 인간 TrkA 결합

마우스 Fc를 포함하는 인간 TrkA 세포외 도메인(33-417) 단백질을 사용하여 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체의 친화도를 연구하고, 96웰 마이크로플레이트의 각 웰을 50ng의 인간 TrkA로 코팅하고, 세척 및 차단한 후, 구배 희석된 인간화 항체를 첨가하며 실온에서 1시간 동안 배양한다. 3회 세척 후 양고추냉이 퍼옥시다제 결합 염소 항-인간 IgG 항체(ThermoFisher, A18817)를 첨가하여 상온에서 1시간 배양한다. 3회 세척 후 테트라메틸벤지딘(TMB, Biolegend)을 첨가하여 현색하고 1M HCl을 사용하여 현색을 정지시키고, 마이크로플레이트 리더로 450nm에서의 흡광도 값을 판독한다.

결합 상황은 표 9 및 도 17에 도시된 바와 같다. 상이한 서열의 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체는 모두 인간 TrkA와 유사한 결합을 가지며, 결합 정도는 인간-마우스 키메라 항체 42F5-Chi(마우스 유래 항-TrkA 항체 42F5 가변 영역 및 인간 항체 불변 영역 포함)에 해당한다.

표 9 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체와 TrkA 결합 EC50

2) 인간화 항체와 TrkA/TrkB/TrkC를 발현하는 세포의 결합

TrkA, TrkB 및 TrkC를 각각 발현하는 세포주 TrkA/CHO(ThermoFisher, K1516), TrkB/CHO(ThermoFisher, K1491), TrkC/CHO(ThermoFisher, K1515)를 사용하여 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체의 특이성을 연구하였으며, CHO-K1을 음성 대조군으로 사용하여 유세포 분석을 통해 인간화 항체와 4개 세포주의 결합 상황을 검출하였다.

제품 설명서에 따라 세포를 배양하고, 대수 성장기에 세포를 수집하며, 유동 완충액(PBS+2% FBS, pH 7.4)을 사용해 세포를 재현탁하고, 96웰 플레이트의 각 웰에 10⁵개 세포(50μl)를 첨가한다. 또한 50μl의 100μg/mL의 인간화 항-TrkA 항체를 첨가하여 실온에서 60분 동안 배양하고, 1200rpm에서 원심분리하여 상청액을 버리고 세포를 3회 세척하였다. FITC 표지된 염소 항-인간 Fc 항체(Abeam, ab97224)를 유동 완충액으로 5μg/mL까지 희석하여 세포를 재현탁하는 데 사용하였다. 실온에서 30분 동안 암실에서 배양하고, 원심분리하여 상청액을 버린 다음 3회 세척하였다. 7AAD 용액(Biolegend, 420403)으로 세포를 재현탁하고 실온에서 10분 동안 배양한 다음 유세포 분석기(BioRad, ZE5)를 사용하여 항체의 결합 상태를 검출하였다.

결과는 도 18에 도시된 바와 같이, 인간-마우스 키메라 항체 42F5-Chi와 유사하게, 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체는 TrkA/CHO 세포에 결합할 수 있지만, TrkB/CHO, TrkC/CHO 및 CHO-K1 세포에는 결합할 수 없으며, 이는 인간화 항-TrkA 항체의 특이성이 우수함을 의미한다.

동일한 유세포 분석법으로 인간화 항-TrkA 항체와 TrkA/CHO 세포의 결합 곡선을 검출하였다. 항체는 66.67μg/mL 농도에서 3배 구배에서 총 10개 농도로 희석하였으며 그 결과는 도 19에 도시된 바와 같다. 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체 및 TrkA/CHO 세포의 결합 정도는 인간-마우스 키메라 항체 42F5-Chi에 상당하였으며, EC50은 표 10에 요약하였다.

표 10 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체 유동 결합 EC50(nM)

3) NGF 유도의 TF-1 세포 증식 실험

실시예 6A에 설명된 바와 같이, TF-1 세포의 증식을 통해 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체의 NGF/TrkA 경로에 대한 억제 효과를 검출하였다. 결과는 도 20에 도시된 바와 같이, 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체는 NGF에 의해 유도된 TF-1 세포의 증식을 억제할 수 있으며, 억제 정도는 인간-마우스 키메라 항체 42F5-Chi에 상당하였다. IC50은 표 11과 같다.

표 11 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체의 NGF에 의해 유도된 TF-1 세포 증식 억제 IC50

4) NGF에 의해 유도된 TrkA/Ba/F3 세포 증식 실험

실시예 6B에 설명된 바와 같이, TrkA/Ba/F3의 증식을 통해 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체의 NGF/TrkA 경로에 대한 억제 효과를 검출하였다. 결과는 도 21에 도시된 바와 같이, 인간화 항-TrkA 항체는 NGF에 의해 유도된 TrkA/Ba/F3 세포의 증식을 억제할 수 있으며, 억제 정도는 인간-마우스 키메라 항체 42F5-Chi에 상당하였다. IC50은 표 12와 같다.

표 12 항-TrkA 항체 42F5 인간화 항체의 NGF에 의해 유도된 TrkA/Ba/F3 세포 증식 억제 IC50

본 발명의 구체적인 실시방식이 상세하게 예시되고 설명되었지만, 본 발명은 설명된 구체적인 실시방식으로 제한되지 않음을 이해해야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> XIYUAN ANJIAN MEDICINE (SHANGHAI) CO., LTD <120> ANTI-TRKA ANTIBODY OR ANTIGEN-BINDING FRAGMENT THEREOF, PREPARATION METHOD THEREFOR, AND APPLICATION THEREOF <160> 102 <170> SIPOSequenceListing 1.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Trp Ile Glu 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 2 Glu Ile Leu Pro Gly Arg Gly Val Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 3 Ala Arg Ser Asn Tyr Gly Asp Tyr Asp Phe 1 5 10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 4 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 5 Glu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Thr Asn Tyr Asp Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Thr <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 6 Ala Lys Tyr Gly Asn Tyr Val Ala Phe Ala Phe 1 5 10 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 7 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 8 Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 9 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp 1 5 10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 10 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile His 1 5 10 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 11 Glu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Thr Asn Tyr Ile Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 12 Ala Lys Tyr Gly Asn Tyr Val Ala Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 13 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 13 Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Trp Ile Glu 1 5 10 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 14 Glu Ile Leu Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 15 <211> 12 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 15 Thr Arg Val Ser Gln Leu His Ile Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 16 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 17 Glu Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Arg Val Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 18 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp 1 5 10 <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 19 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 20 Glu Ile Tyr Ser Ser Asn Gly Leu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 21 Ala Arg His Trp Tyr Val Phe Leu Asp His 1 5 10 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 22 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Trp Met His 1 5 10 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 23 Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Thr <210> 24 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 24 Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ala Met Asp Phe 1 5 10 <210> 25 <211> 14 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 25 Arg Ser Ser Ser Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn His Ala Asn 1 5 10 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 26 Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 27 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val 1 5 <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 28 Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Val Ala 1 5 10 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 29 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 30 Gln His His Tyr Gly Ile Pro Leu Thr 1 5 <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 31 Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met His 1 5 10 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 32 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 33 Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Leu Thr 1 5 <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 34 Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Thr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 35 Asn Thr Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 36 Gln His His Tyr Gly Val Pro Leu Thr 1 5 <210> 37 <211> 16 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 37 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 38 Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 39 Met Gln His Leu Glu Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 40 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 40 Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met His 1 5 10 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 41 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 42 Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Leu Thr 1 5 <210> 43 <211> 14 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 43 Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn His Ala Asn 1 5 10 <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 44 Gly Ile Asn Asn Arg Ala Pro 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 45 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val 1 5 <210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 46 Ser Ala Ser Ser Ile Ile Ser Tyr Met His 1 5 10 <210> 47 <211> 7 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 47 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 48 <211> 9 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 48 His Gln Trp Thr Ser Asn Pro Leu Thr 1 5 <210> 49 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 49 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ile Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Arg Gly Val Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Ile Ser Ser Thr Thr Thr Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asn Tyr Gly Asp Tyr Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 50 <211> 118 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 50 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Thr Asn Tyr Asp Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ser Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Gly Asn Tyr Val Ala Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 51 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 51 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Ile Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 52 <211> 118 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 52 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Gln Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Leu Thr Asn Tyr Ile Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Gly Asn Tyr Val Ala Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 53 <211> 119 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 53 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Val Ser Gln Leu His Ile Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 54 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 54 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Arg Val Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Ile Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 55 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 55 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Val Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Ser Ser Asn Gly Leu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Trp Tyr Val Phe Leu Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 56 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 56 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Ser Arg Tyr Asp Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 109 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 57 Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Ser Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn His Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Ser 35 40 45 Leu Met Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 58 <211> 107 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 58 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Thr Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 His Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Gly Leu His Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Ile Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 59 <211> 106 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 59 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 60 <211> 107 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 60 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 His Asn Thr Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Val Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 61 <211> 112 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 61 Asp Ile Val Met Thr Gln Val Val Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Ala Phe Tyr Tyr Cys Met Gln His 85 90 95 Leu Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 62 <211> 106 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 62 Gln Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 63 <211> 109 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 63 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn His Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Ile Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 64 <211> 106 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 64 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ile Ile Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Trp Thr Ser Asn Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 65 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 65 caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60 tcctgcaagg ctattgggta cacattcagt aggtactgga tagagtgggt aaagcagagg 120 cctggacatg gccttgagtg gattggagag attttacctg gaagaggtgt tactaactac 180 aatgagaact tcaagggcaa ggccacattc actgtagata tatcctccac cacaacctac 240 attcaattca gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtgc aagatcgaat 300 tatggtgact acgacttctg gggccaaggc acctctctca cagtctcctc a 351 <210> 66 <211> 327 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 66 cagactgttg tgactcagga atctgcactc accacatcac ctggtgaaac agtcacactc 60 acttgtcgct caagttctgg ggctgttaca actagtaacc atgccaactg ggtccaagaa 120 aaacctgatc atttattcac tagtctaatg ggtggtacca ataaccgagc tccaggtgtt 180 cctgccagat tctcaggctc cctgattggc gacaaggctg ccctcaccat cacaggggcg 240 cagactgagg atgaggcaat atatttctgt gctctctggt acagcaacca ttgggtgttc 300 ggtggaggaa ctaaactgac tgtccta 327 <210> 67 <211> 354 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 67 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagctg 60 tcctgcaagg cttccggcta cacctttacc agctactgga tgcactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gattggagag attaatccta acaacggtct tactaactac 180 gatgagaaat tcaagaccaa ggccacactg accatagaca aatcctccag aacagcctac 240 atacaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aaaatatggt 300 aactacgtcg cgtttgcttt ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgca 354 <210> 68 <211> 321 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 68 gacattcaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcaa ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtc gagcaagtga aaatatttac agttatgtag catggtatca gcagaaacag 120 ggaaaatctc ctcaactcct ggtccataat gcaaaaacct tagcagaagg tgtaccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcaacgg cctgcaccct 240 gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat cattatggta ttccgctcac gttcggcgct 300 gggaccaagc tggagctgaa a 321 <210> 69 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 69 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc tgtgaagctg 60 tcctgcaagt cttctggcta taccttcacc aactactgga tgcactgggt gaagcagcgg 120 cctggacaag gccttgagtg gattggagag atttatccta gcaacggtcg tactaactac 180 aatgagaagt tcaaaaacag ggccacactg actgtagaca tttcctccag cacagcctac 240 atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aaggagtagg 300 tacgacccta tggaagactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc t 351 <210> 70 <211> 318 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 70 caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60 atgacctgca gtgccagctc aagtgtgggt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc 120 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt cccaactcgc 180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgag 240 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtatcc cactcacgtt cggctcgggg 300 acaaagttgg aaataaag 318 <210> 71 <211> 354 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 71 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgcagctg 60 tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agttactgga tacactgggt gaaacagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gattggagag attaatccta acaacggtct tactaactac 180 attgagaaat tcaagaacaa ggccacactg actattgaca aatcctccaa cacagcctac 240 atgcaactca gcggcctgac acctgaggac tctgcggtct attactgtgc aaaatatggt 300 aactacgtcg cgtttgctta ctggggccag gggactctgg tcactgtctc tgca 354 <210> 72 <211> 321 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 72 gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga cactgtcacc 60 atcacatgtc gagcaagtga aaatatctac acttatttag cttggtatca gcagaaacag 120 ggaaaatctc ctcaactcct ggtccataat acaaaaacct tagcagaagg tgtgccctca 180 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg ggacttatta ctgtcaacat cattatggtg ttccgctcac gttcggtgct 300 gggaccaagc tggagctgaa a 321 <210> 73 <211> 357 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 73 caggttcagc tgcagcagtc tggaactgaa ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60 tcctgcaagg ctactggcta cacattcagt agatactgga tagagtgggt aaaacagagg 120 cctggacatg gccttgagtg gattggagag attttacctg gaaggagtag tactaactac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattc actgccgata catcctccaa cacagcctac 240 atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtac aagagtttcc 300 caactgcaca tttactttga ctactggggc caagggacca ctgtcacagt ctcctcc 357 <210> 74 <211> 336 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 74 gatattgtga tgactcaggt tgtaccctct gtacctgtca ctcctggaga gtcagtatcc 60 atctcctgca ggtctagtaa gagtctcctg catagtaatg gcaacactta cttatattgg 120 ttccagcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac attgagaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgtggctttt tattactgta tgcaacatct agaatttccg 300 ctcacgttcg gtgctgggac caagttggag ctgaaa 336 <210> 75 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 75 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa ctggtgaaac ctggggcttc agtgaagctg 60 tcctgcaagt cttctggcta taccttcacc aactactgga tgcactgggt gaggcagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gattggagag atctatccta acaacggtcg tgttaactac 180 aatgagaagt tcaagaacag ggccacactg actgtagaca tatcctccag cacagcctac 240 atgcaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aaggagtagg 300 tacgacccta tggaagactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc t 351 <210> 76 <211> 318 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 76 caagttgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60 atgacctgca gtgccagctc aagtgtaggt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc 120 acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt cccaactcgc 180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagcat ggaggctgag 240 gatgctgcca cttatttctg ccagcagtgg agtagtatcc cactcacgtt cggctcgggg 300 acaaggttgg aaataaag 318 <210> 77 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 77 caggtccaac tgcagcagcc tggggttgaa ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagctg 60 tcctgcaaga cttctggcta caccttcacc agctactgga tgcactgggt gaagcagagg 120 cctggacaag gccttgaatg gattggagag atttattcca gtaacggtct tactaactac 180 aatgagaagt tcaagaataa ggccacactg actgtagata aatcctccag cacagcctac 240 atgcaactca ccagcctgac atctgaagac tctgcgatct attactgtgc aagacattgg 300 tacgtcttcc ttgaccactg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351 <210> 78 <211> 327 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 78 caggctgttg tgactcagga atctgcactc accacatcac ctggtgaaac agtcacactc 60 acttgtcgct caagtactgg ggctgttaca actagtaacc atgccaactg ggtccaagaa 120 aaaccagatc atttattcac tggtctaata ggtggtatca acaaccgagc tccaggtgtt 180 cctgccagat tctcaggctc cctgattgga gacaaggctg ccctcaccat cacaggggca 240 cagactgagg atgaggcaat atatttctgt gctctatggt acagcaatca ttgggtgttc 300 ggtggaggaa ccagactgac tgtccta 327 <210> 79 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 79 caggtccaac tgcagcagcc tggggctgaa cttgtgaagc ctggggcttc agtgaagctg 60 tcctgtaagg cttctggcta caccttcacc aactactgga tgcattgggt gaaacagagg 120 cctggacaag gccttgagtg gattggagag atttatccta gcaacggtcg tactaactac 180 aatgagaagt tcaagaccaa ggccacactg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcatctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aggatcgaga 300 tacgatgcta tggacttctg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351 <210> 80 <211> 318 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 80 caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60 atgacctgca gtgccagctc aattataagt tacatgcact ggtaccagca gaagtcaggc 120 acctccccca aaagatggat ttatgacact tccaaactgg cttctggagt ccctgctcgc 180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagtggcat ggaggctgaa 240 gatgctgcca cttattactg ccaccagtgg actagtaacc cgctcacgtt cggtggtggg 300 accaagctgg aactgaaa 318 <210> 81 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 81 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Arg Val Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Val Asp Ile Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 82 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 82 caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggagcttc cgtgaaggtg 60 agctgcaagt ccagcggcta caccttcaca aactattgga tgcactgggt gaggcaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatgggcgag atctacccta acaatggcag ggtgaactac 180 aacgagaagt ttaagaacag agtgaccatg acagtggaca tcagcatctc taccgcttac 240 atggagctgt ctaggctgcg gtccgacgat acagccgtgt actattgtgc tagatctcgc 300 tatgacccca tggaggattg gggccagggc accacagtga ccgtgtcttc c 351 <210> 83 <211> 106 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 83 Asp Val Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 84 <211> 318 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 84 gacgtgcagc tgacccagtc tccttccagc ctgtccgcca gcgtgggcga tagagtgacc 60 atcacatgct ccgcttcttc cagcgtgggc tacatgcact ggtatcagca gaagcccggc 120 aaggccccta agaggctgat ctacgacaca tctaagctgg cttccggagt gccaagccgg 180 ttctctggct ccggcagcgg aaccgactac accctgacaa tctcttccct gcagccagag 240 gatttcgcca catatttttg tcagcagtgg agctctatcc ccctgacctt tggccagggc 300 acacgcctgg agatcaag 318 <210> 85 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 85 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Arg Val Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Ile Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 86 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 86 caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggagcttc cgtgaaggtg 60 agctgcaagt ccagcggcta caccttcaca aactattgga tgcactgggt gaggcaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatcggcgag atctacccta acaatggcag ggtgaactac 180 aacgagaagt ttaagaacag agccaccctg acagtggaca tcagcatctc taccgcttac 240 atggagctgt ctaggctgcg gtccgacgat acagccgtgt actattgtgc tagatctcgc 300 tatgacccca tggaggattg gggccagggc accacagtga ccgtgtcttc c 351 <210> 87 <211> 106 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 87 Asp Val Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 88 <211> 318 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 88 gacgtgcagc tgacccagtc tccttccagc ctgtccgcca gcgtgggcga tagagtgacc 60 atcacatgct ccgcttcttc cagcgtgggc tacatgcact ggtatcagca gaagcccggc 120 aaggccccta agaggtggat ctacgacaca tctaagctgg cttccggagt gccaagccgg 180 ttctctggct ccggcagcgg aaccgactac accctgacaa tctcttccct gcagccagag 240 gatttcgcca catatttttg tcagcagtgg agctctatcc ccctgacctt tggccagggc 300 acacgcctgg agatcaag 318 <210> 89 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 89 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Arg Val Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Ile Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 90 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 90 caggtgcagc tggtgcagtc cggagctgag gtgaagaagc caggctccag cgtgaaggtg 60 agctgcaagt cttccggcta caccttcaca aactattgga tgcactgggt gaggcaggct 120 ccaggacagg gactggagtg gatcggcgag atctacccta acaatggcag agtgaactac 180 aacgagaagt ttaagaaccg cgccaccctg acagtggaca tctctacctc cacagcttac 240 atggagctga gctctctgag aagcgaggat accgccgtgt actattgtgc taggtctcgg 300 tatgacccca tggaggattg gggccagggc accacagtga cagtgtccag c 351 <210> 91 <211> 106 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 91 Gln Val Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 92 <211> 318 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 92 caggtgcagc tgacccagtc tccttccagc ctgtccgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacatgct ccgcttcttc cagcgtgggc tacatgcact ggtatcagca gaagcccggc 120 aaggccccta agaggctgat ctacgataca tctaagctgg cttccggagt gccaagccgg 180 ttctctggct ccggcagcgg aaccgactac accctgacaa tctcttccct gcagccagag 240 gatttcgcca catatttttg tcagcagtgg agctctatcc ccctgacctt tggccagggc 300 acacgcctgg agatcaag 318 <210> 93 <211> 106 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 93 Gln Val Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 94 <211> 318 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 94 caggtgcagc tgacccagtc tccttccagc ctgtccgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60 atcacatgct ccgcttcttc cagcgtgggc tacatgcact ggtatcagca gaagcccggc 120 aaggccccta agaggtggat ctacgataca tctaagctgg cttccggagt gccaagccgg 180 ttctctggct ccggcagcgg aaccgactac accctgacaa tctcttccct gcagccagag 240 gatttcgcca catatttttg tcagcagtgg agctctatcc ccctgacctt tggccagggc 300 acacgcctgg agatcaag 318 <210> 95 <211> 106 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 95 Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Ile Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 96 <211> 318 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 96 gaggtggtgc tgacccagtc cccagccaca ctgagcctgt ctccaggaga gagagccacc 60 ctgtcctgct ccgcctccag ctctgtgggc tacatgcact ggtatcagca gaagccagga 120 caggctccta ggcggtggat ctacgacacc tctaagctgg cttccggagt gccagctcgc 180 ttctctggct ccggcagcgg cacagactac accctgacaa tctccagcct ggagcctgag 240 gatgccgccg tgtacttctg tcagcagtgg tcttccatcc cactgacctt tggccagggc 300 acaaggctgg agatcaag 318 <210> 97 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 97 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Asn Ser Gly Arg Val Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Val Asp Ile Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 98 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 98 caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgcttc tgtgaaggtg 60 agctgcaaga gctccggcta cacctttacc aattattgga tgcactgggt gaggcaggct 120 cccggccagg gactggagtg gatgggcgag atatatccca atagcggccg ggtgaattat 180 aatgagaagt ttaagaatcg ggtgaccatg accgtggata tcagcatctc caccgcctac 240 atggagctga gcaggctgag gagcgatgac accgctgtgt actactgcgc taggtccagg 300 tatgacccca tggaggattg gggccagggc accaccgtga ccgtgagcag c 351 <210> 99 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 99 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Asn Gln Gly Arg Val Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Val Asp Ile Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 100 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 100 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgcttc cgtgaaggtg 60 tcctgtaagt ccagcggcta taccttcacc aactattgga tgcactgggt gaggcaggcc 120 cctggccagg gactggagtg gatgggcgag atatatccta accagggccg ggtgaattat 180 aacgagaagt tcaagaatag ggtgaccatg accgtggaca tctccatcag caccgcttac 240 atggagctgt ccaggctgcg gagcgacgat accgccgtgt actactgtgc caggtcccgg 300 tatgatccca tggaggactg gggccagggc accaccgtga ccgtgagcag c 351 <210> 101 <211> 117 <212> PRT <213> (Artificial Sequence) <400> 101 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr Pro Asn Asn Ala Arg Val Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Val Asp Ile Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Tyr Asp Pro Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 102 <211> 351 <212> DNA <213> (Artificial Sequence) <400> 102 caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgcttc tgtgaaggtg 60 tcctgtaaga gcagcggcta cacctttacc aattattgga tgcactgggt gaggcaggcc 120 cccggccagg gattggagtg gatgggcgag atatatccta acaatgccag ggtgaactat 180 aatgagaagt ttaagaaccg ggtgaccatg accgtggaca tcagcatctc caccgcctat 240 atggagctga gccggctgcg gtccgacgac accgctgtgt actactgcgc ccggtcccgg 300 tatgatccta tggaggactg gggccagggc accaccgtga ccgtgagctc c 351

Claims

TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고,
(i) SEQ ID NO: 1, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;
(ii) SEQ ID NO: 2, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및
(iii) SEQ ID NO: 3, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
(iv) SEQ ID NO: 25, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;
(v) SEQ ID NO: 26, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및
(vi) SEQ ID NO: 27, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,
바람직하게는 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 1으로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 2로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 3으로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 25로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 26으로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 27로 표시되는 VL CDR3을 포함하는 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고,
(i) SEQ ID NO: 4, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;
(ii) SEQ ID NO: 5, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및
(iii) SEQ ID NO: 6, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
(iv) SEQ ID NO: 28, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;
(v) SEQ ID NO: 29, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및
(vi) SEQ ID NO: 30, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,
바람직하게는 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 4로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 5로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 6으로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 28로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 29로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 30으로 표시되는 VL CDR3을 포함하는 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고,
(i) SEQ ID NO: 7, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;
(ii) SEQ ID NO: 8, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및
(iii) SEQ ID NO: 9, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
(iv) SEQ ID NO: 31, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;
(v) SEQ ID NO: 32, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및
(vi) SEQ ID NO: 33, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,
바람직하게는 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 7로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 8로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 9로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 31로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 32로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 33으로 표시되는 VL CDR3을 포함하는 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고,
(i) SEQ ID NO: 10, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;
(ii) SEQ ID NO: 11, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및
(iii) SEQ ID NO: 12, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
(iv) SEQ ID NO: 34, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;
(v) SEQ ID NO: 35, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및
(vi) SEQ ID NO: 36, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,
바람직하게는 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 10으로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 11로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 12로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 34로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 35로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 36으로 표시되는 VL CDR3을 포함하는 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고,
(i) SEQ ID NO: 13, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;
(ii) SEQ ID NO: 14, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및
(iii) SEQ ID NO: 15, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
(iv) SEQ ID NO: 37, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;
(v) SEQ ID NO: 38, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및
(vi) SEQ ID NO: 39, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,
바람직하게는 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 13으로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 14로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 15로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 37로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 38로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 39로 표시되는 VL CDR3을 포함하는 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고,
(i) SEQ ID NO: 16, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;
(ii) SEQ ID NO: 17, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및
(iii) SEQ ID NO: 18, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
(iv) SEQ ID NO: 40, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;
(v) SEQ ID NO: 41, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및
(vi) SEQ ID NO: 42, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,
바람직하게는 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 16으로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 17로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 18로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 40으로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 41로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 42로 표시되는 VL CDR3을 포함하는 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고,
(i) SEQ ID NO: 19, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;
(ii) SEQ ID NO: 20, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및
(iii) SEQ ID NO: 21, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
(iv) SEQ ID NO: 43, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;
(v) SEQ ID NO: 44, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및
(vi) SEQ ID NO: 45, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,
바람직하게는 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 19로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 20으로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 21로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 43으로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 44로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 45로 표시되는 VL CDR3을 포함하는 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하고,
(i) SEQ ID NO: 22, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR1;
(ii) SEQ ID NO: 23, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR2; 및
(iii) SEQ ID NO: 24, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VH CDR3;
및/또는
(b) 하기 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
(iv) SEQ ID NO: 46, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR1;
(v) SEQ ID NO: 47, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR2; 및
(vi) SEQ ID NO: 48, 또는 이에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열로 이루어진 VL CDR3,
바람직하게는 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH는 SEQ ID NO: 22로 표시되는 VH CDR1, SEQ ID NO: 23으로 표시되는 VH CDR2, SEQ ID NO: 24로 표시되는 VH CDR3을 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL은 SEQ ID NO: 46으로 표시되는 VL CDR1, SEQ ID NO: 47로 표시되는 VL CDR2, SEQ ID NO: 48로 표시되는 VL CDR3을 포함하는 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하고,
상기 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 49-56 중 어느 하나의 중쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 57-64 중 어느 하나의 경쇄 가변 영역에 포함되는 3개의 CDR을 포함하고,
바람직하게는, 상기 중쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR, 및/또는 상기 경쇄 가변 영역에 포함된 3개의 CDR은 Kabat 또는 IMGT 넘버링 시스템에 의해 정의되는 TrkA에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),
(i) SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열;
(ii) SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(iii) SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
및/또는
(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),
(iv) SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열;
(v) SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(vi) SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
바람직하게는 (ii) 내지 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 49로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 57로 표시되는 서열의 VL을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제2항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),
(i) SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열;
(ii) SEQ ID NO: 5로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(iii) SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
및/또는
(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),
(iv) SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열;
(v) SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(vi) SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
바람직하게는 (ii) 내지 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 50으로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 58로 표시되는 서열의 VL을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제3항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),
(i) SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열;
(ii) SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(iii) SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
및/또는
(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),
(iv) SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열;
(v) SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(vi) SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
바람직하게는 (ii) 내지 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 51로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 59로 표시되는 서열의 VL을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제4항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),
(i) SEQ ID NO: 52로 표시되는 서열;
(ii) SEQ ID NO: 52로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(iii) SEQ ID NO: 52로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
및/또는
(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),
(iv) SEQ ID NO: 60으로 표시되는 서열;
(v) SEQ ID NO: 60으로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(vi) SEQ ID NO: 60으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
바람직하게는 (ii) 내지 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 52으로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 60으로 표시되는 서열의 VL을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제5항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),
(i) SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열;
(ii) SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(iii) SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
및/또는
(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),
(iv) SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열;
(v) SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(vi) SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
바람직하게는 (ii) 내지 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 53으로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 61로 표시되는 서열의 VL을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제6항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),
(i) SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열;
(ii) SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(iii) SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
및/또는
(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),
(iv) SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열;
(v) SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(vi) SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
바람직하게는 (ii) 내지 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 54로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 62로 표시되는 서열의 VL을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제7항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),
(i) SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열;
(ii) SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(iii) SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
및/또는
(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),
(iv) SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열;
(v) SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(vi) SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
바람직하게는 (ii) 내지 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 55로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 63으로 표시되는 서열의 VL을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제8항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),
(i) SEQ ID NO: 56으로 표시되는 서열;
(ii) SEQ ID NO: 56으로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(iii) SEQ ID NO: 56으로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
및/또는
(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),
(iv) SEQ ID NO: 64로 표시되는 서열;
(v) SEQ ID NO: 64로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(vi) SEQ ID NO: 64로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
바람직하게는 (ii) 내지 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 56으로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 64로 표시되는 서열의 VL을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은,
(a) 인간 면역글로불린의 중쇄 불변 영역(CH) 또는 이의 변이체 - 상기 변이체는 그 유래하는 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어, 최대 20개, 최대 15개, 최대 10개, 또는 최대 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가, 예를 들어 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 가짐 - ; 및
(b) 인간 면역글로불린의 경쇄 불변 영역(CL) 또는 이의 변이체 - 상기 변이체는 그 유래하는 서열과 비교하여 최대 20개 아미노산의 보존적 치환(예를 들어, 최대 15개, 최대 10개, 또는 최대 5개 아미노산의 보존적 치환, 예를 들어 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 아미노산의 보존적 치환)을 가짐 - ;를 더 포함하고,
바람직하게는, 상기 중쇄 불변 영역은 IgG 중쇄 불변 영역, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 종쇄 불변 영역이고,
바람직하게는, 상기 경쇄 불변 영역은 κ 경쇄 불변 영역인 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', (Fab')₂, Fv, 이황화 결합 연결의 Fv, scFv, 디아바디(diabody) 및 단일 도메인 항체(sdAb)로부터 선택되고/거나, 상기 항체는 마우스 유래 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체이고,
바람직하게는, 상기 인간화 항체는,
(a) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH),
(i) SEQ ID NO: 81, 85, 89, 97, 99 및 101 중 어느 하나로 표시되는 서열;
(ii) SEQ ID NO: 81, 85, 89, 97, 99 및 101 중 어느 하나로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(iii) SEQ ID NO: 81, 85, 89, 97, 99 및 101 중 어느 하나로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
및/또는
(b) 하기 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL),
(iv) SEQ ID NO: 83, 87, 91, 93 및 95 중 어느 하나로 표시되는 서열;
(v) SEQ ID NO: 83, 87, 91, 93 및 95 중 어느 하나로 표시되는 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가(예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가)를 갖는 서열; 또는
(vi) SEQ ID NO: 83, 87, 91, 93 및 95 중 어느 하나로 표시되는 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열;
바람직하게는 (ii) 또는 (v)에서 치환이 보존적 치환이고,
바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 81, 85, 89, 97, 99 및 101 중 어느 하나로 표시되는 서열의 VH 및 SEQ ID NO: 83, 87, 91, 93 및 95 중 어느 하나로 표시되는 서열의 VL을 갖고,
보다 바람직하게는, 상기 인간화 항체는 42F5-01, 42F5-03, 42F5-04, 42F5-05, 42F5-08, 42F5-11, 42F5-13, 42F5-14 또는 42F5-15로부터 선택되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표지를 갖고, 바람직하게는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 예를 들어 효소(예를 들어 양고추냉이 퍼옥시다제), 방사성핵종, 형광 염료, 발광 물질(예를 들어 화학발광 물질) 또는 비오틴과 같은 검출 가능한 표지를 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 이의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 분리된 핵산 분자에 있어서,
바람직하게는, 상기 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 65-80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100 및 102 중 어느 하나로 표시되는 뉴클레오티드 코딩 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자.
제21항에 따른 분리된 핵산 분자를 포함하며, 바람직하게는 상기 벡터는 클로닝 벡터 또는 발현 벡터인 벡터.
제21항에 따른 분리된 핵산 분자 또는 제22항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조 방법에 있어서,
상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편 발현을 허용하는 조건 하에서, 제23항에 따른 숙주 세포를 배양하고, 배양된 숙주 세포 배양물에서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 회수하는 단계를 포함하고,
바람직하게는 상기 숙주 세포는 포유동물 세포이고, 보다 바람직하게는 인간, 쥐, 양, 말, 개 또는 고양이의 세포이고, 보다 바람직하게는 중국 햄스터 난소 세포인 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 이중특이성 또는 다중특이성 분자에 있어서,
바람직하게는, 상기 이중특이성 또는 다중특이성 분자는 TrkA에 특이적으로 결합되고, 하나 이상의 다른 표적에 특이적으로 결합하고,
바람직하게는 상기 이중특이성 또는 다중특이성 분자는 제2 표적에 대해 제2 결합 특이성을 갖는 적어도 하나의 분자(예를 들어, 제2 항체)를 더 포함하는 이중특이성 또는 다중특이성 분자.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제25항에 따른 이중특이성 또는 다중특이성 분자, 및 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
다양한 병증 또는 질병 치료용 약물의 제조에서 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제25항에 따른 이중특이성 또는 다중특이성 분자 또는 제26항에 따른 약학 조성물의 용도에 있어서,
여기에서 상기 병증 또는 질병은 통증, 신경종 또는 뉴런 병증이고,
바람직하게는, 상기 통증은 만성 통증이고,
바람직하게는, 상기 통증은 염증성 통증, 수술 후 통증, 신경병증성 통증, 암 통증 등 중 어느 하나와 관련될 수 있고,
보다 바람직하게는, 상기 통증은 췌장염 통증, 신장결석 통증, 자궁내막증 통증, IBD 통증, 수술 후 유착 통증, 담낭결석 통증, 두통, 월경통, 근골격 통증, 염좌 통증, 내장 통증, 난소낭종 통증, 전립선염 통증, 방광염 통증, 간질성 방광염 통증, 수술 후 통증, 편두통, 삼차신경통, 화상 및/또는 상처 통증, 외상 관련 통증, 신경병증 통증, 근골격계 질환 관련 통증, 류마티스 관절염 통증, 골관절염 통증, 강직성 척추염 통증, 관절주위 병리학적 통증, 종양 통증, 골 전이로 인한 통증, HIV 감염 통증과 관련될 수 있는 용도.