KR20230004686A - 인간화 항-보체 인자 Bb 항체 및 그의 용도 - Google Patents

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스티븐 무어
마이클 스토렉
니나 씨. 렉사
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젠자임 코포레이션
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Abstract

인간화 항-인자 Bb 항체, 항체를 생산하는 방법 및 항체를 사용하는 방법이 본원에 제공된다.

Description

인간화 항-보체 인자 Bb 항체 및 그의 용도
관련 출원
본 출원은 2020년 4월 20일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 63/012,590을 우선권 주장하며, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 출원은 인간화 항-인자 Bb 항체 및 항체의 용도에 관한 것이다.
보체계는 선천성 면역계의 일부이다. 그의 주요 역할은 유기체로부터 유해 병원체를 제거하는 항체 및 식세포의 능력을 "보완하는" 것이다. 보체계는 3개의 별개의 상류 활성화 경로 (전형적 경로, 대체 경로 및 렉틴 경로)를 포함하며, 이들 모두는 공통 말단 경로에 수렴한다. 인자 B는 보체의 대체 경로의 성분이고, 인자 Ba 및 인자 Bb로 절단될 수 있다. 인자 B는 또한 세린 프로테아제 (SP) 도메인을 함유하고, 활성화되는 경우에 이는 대체 경로 C3 및 C5 컨버타제의 촉매 활성을 제공한다. 보체계의 이상 활성화는 자가면역 질환에서 기관 이식에 이르는 광범위한 병리학적 환경에서 숙주 조직에 대한 손상을 유발할 수 있다. 보체계와 연관된 질환 또는 장애를 치료할 필요가 여전히 존재한다. 본 발명은 이러한 필요 등을 다룬다.
본 개시내용은, 일부 측면에서, 인간화 항-인자 Bb 항체, 상기 항체를 포함하는 조성물, 상기 항체를 생산하는 방법 및 예를 들어 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하기 위해 상기 항체를 사용하는 방법을 제공한다. 본원에 제공된 데이터에 제시된 바와 같이, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 모 항체의 결합 친화도의 2배 내의 결합 친화도를 갖는다. 예상외로, 모 마우스 항-인자 Bb 항체를 인간화하기 위한 초기 시도는 허용되는 결합 친화도가 결여된 대다수의 변이체를 생산하였다. 따라서, (예를 들어, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하기 위해) 적합한 결합 친화도를 갖는 인간화 버전을 생산하기 위해, 다중 라운드의 인간화가 요구되었다. 추가로, 허용되는 결합 친화도로 인자 Bb에 결합하는 항체를 생산하기 위해, 단지 특정 VH 및 VL 도메인만이 조합될 수 있다 (예를 들어, 실시예 1, 표 9에서 시험된 항체 참조).
본 개시내용의 일부 측면은 인간 보체 인자 Bb 단백질에 특이적으로 결합하고, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는 인간화 항체를 제공한다.
본 개시내용의 다른 측면은 인간 보체 인자 Bb 단백질에 특이적으로 결합하고, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항체를 제공한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 인간 보체 인자 Bb 단백질에 10-6 내지 10-9 M의 친화도로 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 보체 경로 활성을 억제한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성은 대체 경로 (AP) 활성이다.
일부 실시양태에서, 보체 AP 활성은 AP-매개 말단 막 공격 복합체 (MAC) 침착, AP-매개 용혈, 적혈구 또는 다른 세포 유형 상의 C3 단편 침착, C3의 C3b/Bb-매개 절단 및 C5의 C3bBb3b-매개 절단으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체이다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 Ig 단량체, Fab 단편, F(ab')2 단편, scFv, scAb 및 Fv로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 이소형 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 IgG4 불변 영역 또는 그의 변이체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 서열식별번호: 28-30 중 어느 하나에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 서열식별번호: 32-34 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 서열식별번호: 36-38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
또한, 본 개시내용의 인간화 항체를 포함하는 접합체가 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 접합체의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 접합체의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 접합체의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 접합체의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
본원에 기재된 인간화 항체 또는 본원에 기재된 접합체를 포함하는 제약 조성물이 본원에 추가로 제공된다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제약상 허용되는 부형제를 추가로 포함한다.
또한, 본원에 기재된 인간화 항체, 본원에 기재된 접합체 또는 본원에 기재된 제약 조성물을 포함하는 장치가 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물을 포함한다.
일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 장치는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물을 포함한다.
일부 실시양태에서, 장치는 주사가능한 장치, 예를 들어 시린지, 펜 또는 전자 주사 장치 (e-장치)이다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체에게 유효량의 본원에 기재된 인간화 항체, 본원에 기재된 접합체 또는 본원에 기재된 제약 조성물을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함하는, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 접합체의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 접합체의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 접합체의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하여 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환은 IgA 신병증 (베르게르병), 비정형 용혈성 요독성 증후군 (aHUS), 발작성 야간 혈색소뇨 (PNH), 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 루푸스 신염, ANCA 혈관염, 막성 신병증, C3 사구체신염 (C3GN), 초점성 분절성 사구체경화증 (FSGS), 다발성 경화증, 황반 변성, 연령-관련 황반 변성 (AMD), 류마티스 관절염, 항인지질 항체 증후군, 천식, 허혈-재관류 손상, 제II형 막증식성 사구체신염 (GN), 자발적 태아 손실, 소수-면역 혈관염, 수포성 표피박리증, 재발성 태아 손실 및 외상성 뇌 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 대상체에서 보체 경로 활성을 억제하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성은 대체 경로 (AP) 활성이다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 유효량의 인간화 항-인자 Bb 항체, 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체 또는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법은 대상체에게 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하여 보체 경로 활성을 억제하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체 AP 활성은 AP-매개 말단 막 공격 복합체 (MAC) 침착, AP-매개 용혈, 적혈구 또는 다른 세포 유형 상의 C3 단편 침착, C3의 C3b/Bb-매개 절단 및 C5의 C3bBb3b-매개 절단으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는다.
일부 실시양태에서, 방법은 대상체에게 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 투여는 정맥내, 피하 또는 근육내이다.
또한, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체가 본원에 제공된다. 추가로, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체가 본원에 제공된다. 추가로, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 추가로, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 장치가 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 접합체는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 접합체는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 접합체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 접합체는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 장치는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 장치는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 장치는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 장치는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환은 IgA 신병증 (베르게르병), 비정형 용혈성 요독성 증후군 (aHUS), 발작성 야간 혈색소뇨 (PNH), 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 루푸스 신염, ANCA 혈관염, 막성 신병증, C3 사구체신염 (C3GN), 초점성 분절성 사구체경화증 (FSGS), 다발성 경화증, 황반 변성, 연령-관련 황반 변성 (AMD), 류마티스 관절염, 항인지질 항체 증후군, 천식, 허혈-재관류 손상, 제II형 막증식성 GN, 자발적 태아 손실, 소수-면역 혈관염, 수포성 표피박리증, 재발성 태아 손실 및 외상성 뇌 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또한, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체가 본원에 제공된다. 추가로, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 접합체가 본원에 제공된다. 추가로, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다. 추가로, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 장치가 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 접합체는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 접합체는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 접합체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 접합체는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 보체 경로 활성 (예를 들어, AP 활성)을 억제하는 방법에 사용하기 위한 제약 조성물은 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
또한, 본원에 기재된 인간화 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트; 본원에 기재된 핵산 또는 핵산 세트를 포함하는 벡터 또는 벡터 세트; 본원에 기재된 바와 같은 인간화 항체, 핵산 또는 핵산 세트 또는 벡터 또는 벡터 세트를 발현하는 세포가 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 핵산 또는 핵산 세트는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩한다. 일부 실시양태에서, 핵산 또는 핵산 세트는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩한다.
일부 실시양태에서, 핵산 또는 핵산 세트는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩한다. 일부 실시양태에서, 핵산 또는 핵산 세트는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩한다.
일부 실시양태에서, 벡터 또는 벡터 세트는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 벡터 또는 벡터 세트는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 벡터 또는 벡터 세트는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 벡터 또는 벡터 세트는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함하는 벡터 또는 벡터 세트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함하는 벡터 또는 벡터 세트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함하는 벡터 또는 벡터 세트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트를 포함하는 벡터 또는 벡터 세트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포는, 예를 들어 인간 배아 신장 (HEK) 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, NS0 골수종 세포, SP2 세포, COS 세포 및 유방 상피 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 포유동물 세포이다.
본 개시내용의 다른 측면은 본원에 기재된 세포를 배양하여 인간화 항체를 생산하는 것을 포함하는, 본원에 기재된 인간화 항체를 생산하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 인간화 항체를 단리하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체를 생산하는 방법은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하는 핵산 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 세트를 포함하는 세포를 배양하여 인간화 항-인자 Bb 항체를 생산하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체를 생산하는 방법은 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하는 핵산 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 세트를 포함하는 세포를 배양하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체를 생산하는 방법은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하는 핵산 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 세트를 포함하는 세포를 배양하여 인간화 항-인자 Bb 항체를 생산하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체를 생산하는 방법은 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하는 핵산 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 세트를 포함하는 세포를 배양하는 것을 포함한다.
상기 개요는 본원에 개시된 기술의 실시양태, 이점, 특색 및 용도의 일부를 비제한적 방식으로 예시하는 것으로 의도된다. 본원에 개시된 기술의 다른 실시양태, 이점, 특색 및 용도는 상세한 설명, 도면, 실시예 및 청구범위로부터 분명할 것이다.
첨부 도면은 일정한 비율로 그려진 것으로 의도되지 않는다. 도면에서, 다양한 도면에 도시된 각각의 동일한 또는 거의 동일한 성분은 같은 숫자로 나타내어진다. 명확성의 목적으로, 모든 성분이 모든 도면에서 표지되지는 않을 수 있다. 도면에서:
도 1a-1d는 단일 사이클 동역학을 사용한 보체 인자 Bb (인자 Bb)에 대한 인간화 항체 변이체 (군 1)의 결합을 보여준다. 인간화 변이체 및 대조군 항체의 인자 Bb에의 결합에 대한 미가공 센소그램 및 피팅된 곡선 (1:1 결합 모델)이 제시된다. 동역학 분석을 비아코어(Biacore) T200 상에서 수행하였다. 각각의 항체를 단백질 A CM5 칩 상에 포획한 후, 증가하는 농도의 인자 Bb를 주사하고, 단일 오프-레이트를 결정하였다. *스케일은 각각의 섹션에 대해 동일하고, x는 -200 내지 1400이고, y는 -5 내지 40이다.
도 2a-2c는 단일 사이클 동역학을 사용한 인자 Bb에 대한 인간화 변이체 (군 2)의 결합을 보여준다. 재설계된 변이체 및 대조군 항체의 인자 Bb에의 결합에 대한 미가공 센소그램 및 피팅된 곡선 (1:1 결합 모델)이 제시된다. 동역학 분석을 비아코어 T200 상에서 수행하였다. 각각의 항체를 단백질 A CM5 칩 상에 포획한 후, 증가하는 농도의 인자 Bb를 주사하고, 단일 오프-레이트를 결정하였다.
도 3은 단백질 A/SEC-후-정제된 항체의 SDS-PAGE 겔을 보여준다. 1 μg의 각각의 환원된 항체 샘플을 NuPage 4-12% 비스-트리스 겔 (써모피셔(ThermoFisher), 영국 러프버러) 상에 로딩하고, 200 V에서 35분 동안 전개시켰다. 겔을 인스턴트블루 (엑스페데온(Expedeon), 영국 스와베시)로 염색하였다. Mk: PAGERuler™ 플러스 사전-염색된 단백질 래더 (써모피셔, 영국 러프버러).
도 4a-4c는 다중-사이클 동역학을 사용한 인자 Bb에 대한 리드 항체 (모두 군 2로부터의 것)의 결합을 보여준다. 인간화 변이체의 인자 Bb에의 결합에 대한 다중 사이클 센소그램 데이터 및 피팅된 곡선 (1:1 결합 모델)이 제시된다. 도 4a: 키메라 VH0/Vκ0, VH4/Vκ6; 도 4b: VH4/Vκ7, VH6/Vκ6; 도 4c: VH6/Vκ7, VH7/Vκ7.
도 5는 모 항체 대비 인간화 변이체의 인자 Bb 경쟁 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)을 보여준다. 고정 농도의 뮤린 모 항체 대비 항-인자 Bb 변이체의 일련의 희석물을 인자-Bb에의 결합에 대해 시험하였다. 결합된 뮤린 항체를 항-마우스 퍼옥시다제 접합체 및 테트라메틸벤지딘 (TMB) 기질을 사용하여 검출하였다.
도 6a-6c는 인간 혈청을 사용한 위스랩(WIESLAB)® 보체 대체 경로 (CAP) (도 6a) 및 AP-매개 용혈 (도 6b-6c)에서의 인간화 항-인자 Bb 항체의 활성을 보여준다.
도 7a-7d는 표면 플라즈몬 공명에 의한 인간 인자 B (도 7a 및 7b) 또는 시노몰구스 원숭이 인자 B (도 7c 및 7d)의 활성 형태 (인자 Bb)에 대한 리드 인간화 변이체의 특이성을 보여준다.
도 8a-8b는 단지 다양한 보체 단백질 중에서 인자 Bb에 대한 키메라 모 항체 VH0/VK0-IgG4v1 (도 8a) 및 대표적인 인간화 변이체 항체 VH6/VK7-IgG4v2 (도 8b)의 결합의 특이성을 보여준다.
도 9a-9b는 정상 인간 혈청 (도 9a) 및 정상 시노 혈청 (도 9b)을 사용한 위스랩® 보체 대체 경로 (CAP) 검정에서의 VH6/VK7-IgG4v2 (HEK 세포로부터 생산됨) 및 VH6/VK7-IgG4v2_CHO (CHO 세포로부터 생산됨)의 활성을 보여준다.
도 10a-10b는 정상 인간 혈청 (도 10a) 및 정상 시노 혈청 (도 10b)을 사용한 위스랩® 보체 전형적 경로 (CCP) 검정에서의 VH6/VK7-IgG4v2 (HEK로부터 생산됨) 및 VH6/VK7-IgG4v2_CHO의 활성을 보여준다.
도 11은 정상 인간 혈청에서의 VH6/VK7-IgG4v2_HEK 및 VH6/VK7-IgG4v2_CHO에 의한 토끼 RBC의 용혈을 보여준다.
도 12는 VH6/VK7-IgG4v2_CHO(좌측) 및 VH6/VK7-IgG4v2_HEK(우측)의 인간 Bb 단백질에의 결합에 대한 피팅된 곡선을 사용한 친화도 및 다중 사이클 센소그램 미가공 데이터를 보여준다.
본 개시내용은 보체 인자 Bb 단백질에 결합하는 인간화 항체를 제공한다. 이들 항체는 본원에서 "인간화 항-인자 Bb 항체"로 지칭된다. 본 개시내용은 또한 인간화 항-인자 Bb 항체를 코딩하는 핵산, 상기 항체를 포함하는 조성물, 상기 항체를 생산하는 방법 (예를 들어, 재조합 생산 방법) 및 상기 항체를 사용하는 방법, 예컨대 (적어도 하나의) 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
"항체"는 인간화 항체 및 키메라 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 이소형의 항체 또는 이뮤노글로불린을 포괄한다. 항체는 단일-쇄 항체 (scAb) 또는 단일 도메인 항체 (dAb) (예를 들어, 단일 도메인 중쇄 항체 또는 단일 도메인 경쇄 항체; 문헌 [Holt et al. (2003) Trends Biotechnol. 21:484] 참조)일 수 있다. 용어 "항체"는 또한 항원에 대한 특이적 결합을 보유하는 항체의 단편 (항체 단편)을 포괄한다. "항체"는 짧은 링커 펩티드와 연결된 항체의 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)의 융합 단백질인 단일-쇄 가변 단편 (scFv) 및 소형 펩티드 링커에 의해 연결된 VH 및 VL을 포함하는 scFv 단편의 비공유 이량체인 디아바디를 추가로 포함한다 (Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)). 항체의 항원-결합 부분 및 비-항체 단백질을 포함하는 다른 융합 단백질이 또한 용어 "항체"에 포괄된다.
"항체 단편"은 무손상 항체의 한 부분, 예를 들어 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 항원-결합 단편 (Fab), Fab', F(ab')2, 가변 도메인 Fv 단편 (Fv), Fd 단편 및 키메라 항원 수용체의 항원 결합 단편을 포함한다.
항체의 파파인 소화는 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는 "Fab" 단편으로 지칭되는 2개의 동일한 항원-결합 단편 및 용이하게 결정화되는 능력을 반영하는 명칭인 나머지 "Fc" 단편을 생산한다. 펩신 처리는 2개의 항원 결합 부위를 갖고 여전히 항원에 가교할 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 1개의 중쇄 가변 도메인 및 1개의 경쇄 가변 도메인의 이량체를 단단하게 비-공유 회합으로 포함한다. 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR이 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상에 항원-결합 부위를 규정하는 것이 이러한 구성이다. 집합적으로, 6개의 CDR은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 심지어 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 단지 3개의 CDR을 포함하는 Fv의 절반)도 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도이긴 하지만 항원을 인식하고 이에 결합하는 능력을 갖는다.
"Fab" 단편은 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. Fab 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 적어도 1개의 시스테인을 포함한 중쇄 CH1 도메인의 카르복실 말단에 소수의 잔기가 부가된다는 점에서 Fab' 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올 기를 보유하는 Fab'에 대한 본원의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 그 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
"scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL을 포함하며, 여기서 이들 영역은 단일 폴리펩티드 쇄로 존재한다. 일부 경우에, Fv 폴리펩티드는 VH 및 VL 영역 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함하며, 이는 scFv가 항원 결합을 위한 목적하는 구조를 형성하는 것을 가능하게 한다. scFv의 검토를 위해, 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.
"디아바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 지칭하며, 이 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄에서 VL에 연결된 VH (VH-VL)를 포함한다. 동일한 쇄 상의 2개의 도메인 사이의 쌍형성을 허용하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍형성하여 2개의 항원-결합 부위를 생성하도록 강제된다. 디아바디는, 예를 들어 문헌 [Hollinger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]에 보다 상세하게 기재되어 있다.
항체는 1가 또는 2가일 수 있다. 항체는 4개의 폴리펩티드 쇄: 디술피드 결합에 의해 연결된 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄로 이루어진 "Y-형상" 분자인 Ig 단량체일 수 있다.
항체는, 예를 들어 방사성동위원소, 검출가능한 생성물을 생성하는 효소 및/또는 형광 단백질로 검출가능하게 표지될 수 있다. 항체는 다른 모이어티, 예컨대 특이적 결합 쌍의 구성원, 예를 들어 비오틴-아비딘 특이적 결합 쌍의 비오틴 구성원에 추가로 접합될 수 있다. 항체는 또한 폴리스티렌 플레이트 및/또는 비드를 포함하나 이에 제한되지는 않는 고체 지지체에 결합될 수 있다.
"단리된" 항체는 그의 자연 환경의 성분으로부터 확인되고 분리 및/또는 회수된 것이다 (즉, 자연 발생이 아님). 그의 자연 환경의 오염 성분은 항체의 용도 (예를 들어, 진단 또는 치료 용도)를 방해할 물질이고, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 항체는 (1) 로우리 방법에 의해 결정 시에 항체의 90 중량% 초과, 95 중량% 초과 또는 98 중량% 초과, 예를 들어 99 중량% 초과로, (2) 스피닝 컵 서열분석기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루 또는 은 염색을 사용하여 환원 또는 비-환원 조건 하에 소듐 도데실 술페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)에 의해 균질성으로 정제된다. 단리된 항체는 재조합 세포 내의 계내 항체를 포괄하는 데, 이는 항체의 자연 환경의 적어도 1종의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. 일부 실시양태에서, 단리된 항체는 적어도 1개의 정제 단계에 의해 제조된다.
"모노클로날 항체"는 동일한 세포의 군에 의해 생산된 항체이며, 이들 모두는 반복적 세포 복제에 의해 단일 세포로부터 생산되었다. 즉, 세포의 클론은 단일 항체 종만을 생산한다. 모노클로날 항체는 하이브리도마 생산 기술을 사용하여 생산될 수 있지만, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 생산 방법이 또한 사용될 수 있다 (예를 들어, 항체 파지 디스플레이 라이브러리로부터 유래된 항체).
"상보성 결정 영역 (CDR)"은 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견되는 비-인접 항원 결합 부위이다. CDR은 문헌 [Lefranc et al. (2003) Developmental and Comparative Immunology 27:55; Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat et al., U. S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" (1991); Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); 및 MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)]에 기재되었으며, 여기서 정의는 서로에 대해 비교하였을 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 하위세트를 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 그라프트된 항체 또는 그의 변이체의 CDR을 지칭하기 위한 어느 하나의 정의의 적용은 본원에 정의되고 사용된 용어의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 용어 "CDR-L1", "CDR-L2" 및 "CDR-L3"은 각각 경쇄 가변 영역 내의 제1, 제2 및 제3 CDR을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "CDR-H1", "CDR-H2" 및 "CDR-H3"은 각각 중쇄 가변 영역 내의 제1, 제2 및 제3 CDR을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "CDR-1", "CDR-2" 및 "CDR-3"은 각각 어느 하나의 쇄의 가변 영역의 제1, 제2 및 제3 CDR을 지칭한다.
항체 가변 영역과 관련하여 사용될 때 "프레임워크"는 항체의 가변 영역 내의 CDR 영역 외부의 모든 아미노산 잔기를 포함한다. 가변 영역 프레임워크는 일반적으로 CDR 외부의 아미노산만을 포함하는 불연속 아미노산 서열이다. "프레임워크 영역"은 CDR에 의해 분리된 프레임워크의 각각의 도메인을 포함한다.
"인간화 항체"는 상이한 기원의 항체의 부분을 포함하는 항체이며, 여기서 적어도 하나의 부분은 인간 기원의 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 인간화 항체는 통상적인 기술 (예를 들어, 합성)에 의해 화학적으로 함께 연결되거나 또는 유전자 조작 기술을 사용하여 인접 폴리펩티드로서 제조된 (예를 들어, 키메라 항체의 단백질 부분을 코딩하는 DNA가 발현되어 인접 폴리펩티드 쇄를 생산할 수 있음), 필수적인 특이성을 갖는 비인간 기원의 항체, 예컨대 마우스로부터의 항체 및 인간 기원의 항체 서열 (예를 들어, 키메라 이뮤노글로불린)로부터 유래된 부분을 포함할 수 있다. 인간화 항체의 또 다른 예는 비인간 기원의 항체로부터 유래된 CDR 및 인간 기원의 경쇄 및/또는 중쇄로부터 유래된 프레임워크 영역을 포함하는 적어도 1개의 쇄를 함유하는 항체 (예를 들어, 프레임워크 변화를 갖거나 갖지 않는 CDR-그라프트된 항체)이다. 키메라 또는 CDR-그라프트된 단일 쇄 항체가 또한 용어 인간화 이뮤노글로불린에 포괄된다. 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 (Cabilly et al.); 유럽 특허 번호 0,125,023 B1 (Cabilly et al.); 미국 특허 번호 4,816,397 (Boss et al.); 유럽 특허 번호 0,120,694 B1 (Boss et al.); WO 86/01533 (Neuberger, M. S. et al.); 유럽 특허 번호 0,194,276 B1 (Neuberger, M. S. et al.); 미국 특허 번호 5,225,539 (Winter); 유럽 특허 번호 0,239,400 B1 (Winter); 유럽 특허 출원 번호 0,519,596 A1 (Padlan, E. A. et al.)을 참조한다. 또한, 단일 쇄 항체에 관하여, 미국 특허 번호 4,946,778 (Ladner et al.); 미국 특허 번호 5,476,786 (Huston); 및 문헌 [Bird, R. E. et al., Science, 242: 423-426 (1988)]을 참조한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 목적하는 인간화 쇄를 코딩하는 유전자 (예를 들어, cDNA)를 제조하기 위해 합성 및/또는 재조합 핵산을 사용하여 생산된다. 예를 들어, 인간화 가변 영역을 코딩하는 핵산 (예를 들어, DNA) 서열을 PCR 돌연변이유발 방법을 사용하여 구축하여 인간 또는 인간화 쇄를 코딩하는 DNA 서열, 예컨대 이전에 인간화된 가변 영역으로부터의 DNA 주형을 변경시킬 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Kamman, M., et al., Nucl. Acids Res., 17: 5404 (1989); Sato, K., et al., Cancer Research, 53: 851-856 (1993); Daugherty, B. L. et al., Nucleic Acids Res., 19(9): 2471-2476 (1991); 및 Lewis, A. P. and J. S. Crowe, Gene, 101: 297-302 (1991)] 참조). 이들 또는 다른 적합한 방법을 사용하여, 변이체를 또한 용이하게 생산할 수 있다. 예를 들어, 클로닝된 가변 영역을 돌연변이유발시킬 수 있고, 목적하는 특이성을 갖는 변이체를 코딩하는 서열을 선택할 수 있다 (예를 들어, 파지 라이브러리로부터; 예를 들어, 미국 특허 번호 5,514,548 (Krebber et al.); WO 93/06213 (Hoogenboom et al., 1993년 4월 1일 공개) 참조).
인간화 항-인자 Bb 항체
본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체가 유래된 마우스 모노클로날 항-인자 Bb 항체의 아미노산 서열이 표 1에 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 인간 이뮤노글로불린 프레임워크로부터 유래된 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역의 프레임워크 영역을 포함한다.
표 1. 마우스 모노클로날 항-인자 Bb 항체
Figure pct00001
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역의 중쇄 상보성 결정 영역 1 (CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2 (CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3 (CDR-H3)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역의 경쇄 상보성 결정 영역 1 (CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2 (CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3 (CDR-L3)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 인간화 중쇄 프레임워크 영역 및/또는 인간화 경쇄 프레임워크 영역을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 카바트 정의에 따르면, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 카바트 정의에 따르면, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 인간화 중쇄 프레임워크 영역 및/또는 인간화 경쇄 프레임워크 영역을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, IMGT 정의에 따르면, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IMGT 정의에 따르면, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 인간화 중쇄 프레임워크 영역 및/또는 인간화 경쇄 프레임워크 영역을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 12에 제시된 VH와 비교하여 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 13에 제시된 VL과 비교하여 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 12에 제시된 바와 같은 VH에 대해 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb는 서열식별번호: 13에 제시된 바와 같은 VL에 대해 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 (카바트 정의 시스템에 따름)을 포함하고, 서열식별번호: 12에 제시된 바와 같은 VH와 비교하여 프레임워크 영역에 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 인간화 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2 (카바트 정의 시스템에 따름) 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3 (카바트 정의 시스템에 따름)을 포함하고, 서열식별번호: 13에 제시된 바와 같은 VL과 비교하여 프레임워크 영역에 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 (카바트 정의 시스템에 따름)을 포함하는 인간화 VH를 포함하며, 여기서 VH의 프레임워크 영역은 서열식별번호: 12에 제시된 바와 같은 VH의 프레임워크 영역에 대해 집합적으로 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일하다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2 (카바트 정의 시스템에 따름) 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3 (카바트 정의 시스템에 따름)을 포함하는 인간화 VL을 포함하며, 여기서 VL의 프레임워크 영역은 서열식별번호: 13 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VL의 프레임워크 영역에 대해 집합적으로 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일하다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 (IMGT 정의 시스템에 따름)을 포함하고, 서열식별번호: 12에 제시된 바와 같은 VH와 비교하여 프레임워크 영역에 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 인간화 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2 (IMGT 정의 시스템에 따름) 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3 (IMGT 정의 시스템에 따름)을 포함하고, 서열식별번호: 13에 제시된 바와 같은 VL과 비교하여 프레임워크 영역에 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 (IMGT 정의 시스템에 따름)을 포함하는 인간화 VH를 포함하며, 여기서 VH의 프레임워크 영역은 서열식별번호: 12에 제시된 바와 같은 VH의 프레임워크 영역에 대해 집합적으로 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일하다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2 (IMGT 정의 시스템에 따름) 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3 (IMGT 정의 시스템에 따름)을 포함하는 인간화 VL을 포함하며, 여기서 VL의 프레임워크 영역은 서열식별번호: 13 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VL의 프레임워크 영역에 대해 집합적으로 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일하다.
본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체의 인간화 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열 및 DNA 코딩 서열의 예가 표 2에 제공된다. 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체의 인간화 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 및 DNA 코딩 서열의 예가 표 3에 제공된다.
표 2. 인간화 중쇄 가변 영역의 예
Figure pct00002
Figure pct00003
카바트 정의에 따른 CDR은 아미노산 및 DNA 서열에서 볼드체이다.
표 3. 인간화 경쇄 가변 영역의 예
Figure pct00004
Figure pct00005
카바트 정의에 따른 CDR은 아미노산 및 DNA 서열에서 볼드체이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 (카바트 정의 시스템에 따름)을 포함하고, 서열식별번호: 14-20 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VH와 비교하여 프레임워크 영역에 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 인간화 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2 (카바트 정의 시스템에 따름) 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3 (카바트 정의 시스템에 따름)을 포함하고, 서열식별번호: 21-27 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VL과 비교하여 프레임워크 영역에 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 (카바트 정의 시스템에 따름)을 포함하는 인간화 VH를 포함하며, 여기서 VH의 프레임워크 영역은 서열식별번호: 14-20 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VH의 프레임워크 영역에 대해 집합적으로 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일하다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1 (카바트 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2 (카바트 정의 시스템에 따름) 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3 (카바트 정의 시스템에 따름)을 포함하는 인간화 VL을 포함하며, 여기서 VL의 프레임워크 영역은 서열식별번호: 21-27 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VL의 프레임워크 영역에 대해 집합적으로 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일하다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 (IMGT 정의 시스템에 따름)을 포함하고, 서열식별번호: 14-20 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VH와 비교하여 프레임워크 영역에 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 인간화 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2 (IMGT 정의 시스템에 따름) 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3 (IMGT 정의 시스템에 따름)을 포함하고, 서열식별번호: 21-27 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VL과 비교하여 프레임워크 영역에 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3 (IMGT 정의 시스템에 따름)을 포함하는 인간화 VH를 포함하며, 여기서 VH의 프레임워크 영역은 서열식별번호: 14-20 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VH의 프레임워크 영역에 대해 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일하다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1 (IMGT 정의 시스템에 따름), 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2 (IMGT 정의 시스템에 따름) 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3 (IMGT 정의 시스템에 따름)을 포함하는 인간화 VL을 포함하며, 여기서 VL의 프레임워크 영역은 서열식별번호: 21-27 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 VL의 프레임워크 영역에 대해 집합적으로 적어도 80% (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 동일하다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 14-20 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 인간화 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 21-27 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 인간화 VL을 포함한다. 표 4는 표 2에 제공된 인간화 VH 중 하나 및 표 3에 제공된 인간화 VL 중 하나를 포함하는 인간화 항-인자 Bb 항체의 예를 제공한다.
표 4. 인간화 항-인자 Bb 항체의 가변 영역의 예
Figure pct00006
Figure pct00007
- 카바트 정의에 따른 CDR은 아미노산 서열에서 볼드체이다
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 21 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 22 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 23 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 24 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VH 및 서열식별번호: 25 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 전장 IgG, Ig 단량체, Fab 단편, F(ab')2 단편, scFv, scAb 또는 Fv이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 전장 IgG이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 인간화 항-인자 Bb 항체 중 어느 것의 중쇄는 중쇄 불변 영역 (CH) 또는 그의 부분 (예를 들어, CH1, CH2, CH3 또는 그의 조합)을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 임의의 적합한 기원, 예를 들어 인간, 마우스, 래트 또는 토끼의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 인간 IgG (감마 중쇄), 예를 들어 IgG1, IgG2 또는 IgG4로부터의 것이다.
일부 실시양태에서, 돌연변이는 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체 중 어느 하나의 중쇄 불변 영역 내로 도입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1, 2개 또는 그 초과의 돌연변이 (예를 들어, 아미노산 치환)가 중쇄 불변 영역 (예를 들어, CH2 도메인 (인간 IgG1의 잔기 231-340) 및/또는 CH3 도메인 (인간 IgG1의 잔기 341-447) 및/또는 힌지 영역 (카바트 넘버링 시스템 (예를 들어, 카바트에서의 EU 인덱스)에 따라 넘버링함)) 내로 도입되어 이펙터 세포의 표면 상의 Fc 수용체 (예를 들어, 활성화된 Fc 수용체)에 대한 항체의 친화도를 증가 또는 감소시킨다. Fc 수용체에 대한 항체의 친화도를 감소 또는 증가시키는 항체의 Fc 영역 내의 돌연변이 및 이러한 돌연변이를 Fc 수용체 또는 그의 단편 내로 도입하기 위한 기술은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. Fc 수용체에 대한 항체의 친화도를 변경시키기 위해 이루어질 수 있는 항체의 Fc 수용체 내의 돌연변이의 예는, 예를 들어 문헌 [Smith P et al., (2012) PNAS 109: 6181-6186], 미국 특허 번호 6,737,056 및 국제 공개 번호 WO 02/060919; WO 98/23289; 및 WO 97/34631에 기재되어 있으며, 이들은 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 미국 특허 번호 5,677,425에 기재된 바와 같이, 1, 2개 또는 그 초과의 돌연변이 (예를 들어, 아미노산 치환)가 중쇄 불변 영역 (CH1 도메인)의 힌지 영역 내로 도입되어 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수가 변경 (예를 들어, 증가 또는 감소)된다. CH1 도메인의 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수는, 예를 들어 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하거나 또는 항체의 안정성을 변경 (예를 들어, 증가 또는 감소)시키거나 또는 링커 접합을 용이하게 하도록 변경될 수 있다.
일부 실시양태에서, 1, 2개 또는 그 초과의 아미노산 돌연변이 (즉, 치환, 삽입 또는 결실)가 IgG 불변 도메인 또는 그의 FcRn-결합 단편 내로 도입되어 생체내 항체의 반감기를 변경 (예를 들어, 감소 또는 증가)시킨다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 돌연변이는 Fc 또는 힌지-Fc 도메인 단편 내로 도입된다. 예를 들어, 항체의 생체내 반감기를 변경 (예를 들어, 감소 또는 증가)시킬 돌연변이의 예에 대해서는 국제 공개 번호 WO 02/060919; WO 98/23289; 및 WO 97/34631; 및 미국 특허 번호 5,869,046; 6,121,022; 6,277,375; 및 6,165,745를 참조한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 불변 영역 항체는 IgG1 불변 영역이고, 카바트에서와 같은 EU 인덱스에 따라 넘버링된, 위치 252에서의 메티오닌 (M)에서 티로신 (Y)으로의 치환, 위치 254에서의 세린 (S)에서 트레오닌 (T)으로의 치환 및 위치 256에서의 트레오닌 (T)에서 글루탐산 (E)으로의 치환을 포함한다. 본원에 참조로 포함된 미국 특허 번호 7,658,921을 참조한다. "YTE 돌연변이체"로 지칭되는 이러한 유형의 돌연변이체 IgG는 동일한 항체의 야생형 버전과 비교하여 4배 증가된 반감기를 나타내는 것으로 제시되었다 (문헌 [Dall'Acqua W F et al., (2006) J Biol Chem 281: 23514-24] 참조). 일부 실시양태에서, 항체는 카바트에서와 같은 EU 인덱스에 따라 넘버링된 위치 251-257, 285-290, 308-314, 385-389 및 428-436에서의 아미노산 잔기의 1, 2, 3개 또는 그 초과의 아미노산 치환을 포함하는 IgG 불변 도메인을 포함한다. 항체의 반감기를 증가시킬 중쇄 불변 영역에 도입될 수 있는 추가의 돌연변이, 예를 들어 문헌 [Zalevsky et al., Nat Biotechnol. 2010 Feb; 28(2): 157-159]에 기재된 바와 같은 M428L/N434S (EU 넘버링; M459L/N466S 카바트 넘버링) 돌연변이는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 1, 2개 또는 그 초과의 아미노산 치환이 IgG 불변 도메인 Fc 영역 내로 도입되어 항체의 이펙터 기능(들)을 변경시킨다. 친화도가 변경된 이펙터 리간드는, 예를 들어 Fc 수용체 또는 보체의 C1 성분일 수 있다. 이러한 접근법은 미국 특허 번호 5,624,821 및 5,648,260에 추가로 상세하게 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 불변 영역 도메인의 (점 돌연변이 또는 다른 수단을 통한) 결실 또는 불활성화는 순환 항체의 Fc 수용체 결합을 감소시켜 종양 국재화를 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 불변 도메인을 결실 또는 불활성화시켜 종양 국재화를 증가시키는 돌연변이의 설명에 대해서는 미국 특허 번호 5,585,097 및 8,591,886을 참조한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 아미노산 치환이 본원에 기재된 항체의 Fc 영역 내로 도입되어 Fc 영역 상의 잠재적 글리코실화 부위를 제거할 수 있으며, 이는 Fc 수용체 결합을 감소시킬 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Shields R L et al., (2001) J Biol Chem 276: 6591-604] 참조).
일부 실시양태에서, 불변 영역 내의 적어도 1개의 아미노산은 항체가 변경된 Clq 결합 및/또는 감소 또는 제거된 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 갖도록 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 이러한 접근법은 미국 특허 번호 6,194,551 (Idusogie et al.)에 추가로 상세하게 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 CH2 도메인의 N-말단 영역 내의 적어도 1개의 아미노산 잔기는 변경되어 보체를 고정시키는 항체의 능력을 변경시킨다. 이러한 접근법은 국제 공개 번호 WO 94/29351에 추가로 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 Fc 영역은 변형되어 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC)을 매개하는 항체의 능력을 증가시키고/거나 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화도를 증가시킨다. 이러한 접근법은 국제 공개 번호 WO 00/42072에 추가로 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 천연 IgG4 mAb에서 발생하는 것으로 공지된 Fab-아암 교환으로 인한 잠재적 합병증을 피하기 위해, 본원에 제공된 항체는 세린 228 (EU 넘버링; 잔기 241 카바트 넘버링)이 프롤린으로 전환되어 IgG1-유사 힌지 서열을 생성하는 안정화 'Adair' 돌연변이를 포함할 수 있다 (Angal S., et al., "A single amino acid substitution abolishes the heterogeneity of chimeric mouse/human (IgG4) antibody," Mol Immunol 30, 105-108; 1993). 일부 실시양태에서, 잔류 항체-의존성 세포성 세포독성을 감소시키기 위해, 예를 들어 문헌 [Benhnia et al., JOURNAL OF VIROLOGY, Dec. 2009, p. 12355-12367]에 기재된 바와 같이, L235E (EU 넘버링, 카바트 넘버링에서 L248E에 상응함) 돌연변이가 중쇄 불변 영역에 도입된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체 중 어느 하나에서의 중쇄 불변 영역은 IgG4 불변 영역 또는 그의 변이체이다. IgG4 불변 영역 및 변이체의 예가 표 5에 제공된다.
표 5. 중쇄 불변 영역의 예
Figure pct00008
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 인간화 항-인자 Bb 항체의 경쇄는 경쇄 불변 영역 (CL)을 추가로 포함할 수 있다. 일부 예에서, CL은 카파 경쇄이다. 다른 예에서, CL은 람다 경쇄이다. 일부 실시양태에서, CL은 카파 경쇄이며, 이의 서열은 하기에 제공된다:
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 31)
다른 항체 중쇄 및 경쇄 불변 영역, 예를 들어 IMGT 데이터베이스 (www.imgt.org) 또는 www.vbase2.org/vbstat.php. (이들 둘 다 본원에 참조로 포함됨)에 제공된 것은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 표 2에 열거된 바와 같은 VH 중 어느 하나 또는 그의 임의의 변이체를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 28-30 중 어느 하나에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 표 2에 열거된 VH 중 어느 하나 또는 그의 임의의 변이체를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 28-30 중 어느 하나와 비교하여 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 표 2에 열거된 VH 중 어느 하나 또는 그의 임의의 변이체를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 28-30 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 표 3에 열거된 바와 같은 VL 중 어느 하나 또는 그의 임의의 변이체를 포함하는 경쇄 및 서열식별번호: 31에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 표 3에 열거된 VL 중 어느 하나 또는 그의 임의의 변이체를 포함하는 경쇄 및 서열식별번호: 31과 비교하여 20개 이하의 아미노산 변이 (예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변이)를 함유하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체는 표 3에 열거된 VL 중 어느 하나 또는 그의 임의의 변이체를 포함하는 경쇄 및 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열의 예가 표 6에 제공된다.
표 6. 인간화 항-인자 Bb 항체의 중쇄 및 경쇄의 예
Figure pct00009
Figure pct00010
표 6에서:
- 볼드체: 카바트 정의에 따른 CDR
- 이탤릭체: VH/VL
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 인자 Bb 단백질 (예를 들어, 보체계를 갖는 포유동물, 어류 또는 무척추동물로부터의 인자 Bb 단백질)에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 포유동물 인자 Bb 단백질에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 인간 인자 Bb 단백질에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 갖는 인자 Bb 단백질에 결합한다.
호모 사피엔스 인자 Bb 단백질 (서열식별번호: 40)
KIVLDPSGSMNIYLVLDGSDSIGASNFTGAKKCLVNLIEKVASYGVKPRYGLVTYATYPKIWVKVSEADSSNADWVTKQLNEINYEDHKLKSGTNTKKALQAVYSMMSWPDDVPPEGWNRTRHVIILMTDGLHNMGGDPITVIDEIRDLLYIGKDRKNPREDYLDVYVFGVGPLVNQVNINALASKKDNEQHVFKVKDMENLEDVFYQMIDESQSLSLCGMVWEHRKGTDYHKQPWQAKISVIRPSKGHESCMGAVVSEYFVLTAAHCFTVDDKEHSIKVSVGGEKRDLEIEVVLFHPNYNINGKKEAGIPEFYDYDVALIKLKNKLKYGQTIRPICLPCTEGTTRALRLPPTTTCQQQKEELLPAQDIKALFVSEEEKKLTRKEVYIKNGDKKGSCERDAQYAPGYDKVKDISEVVTPRFLCTGGVSPYADPNTCRGDSGGPLIVHKRSRFIQVGVISWGVVDVCKNQKRQKQVPAHARDFHINLFQVLPWLKEKLQDEDLGFL
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 약 10-6 내지 10-11 nM, 예를 들어 약 10-6 M 내지 약 10-7 M, 약 10-7 M 내지 약 10-8 M, 약 10-8 M 내지 약 10-9 M, 약 10-9 M 내지 약 10-10 M 또는 약 10-10 M 내지 약 10-11 M의 친화도로 보체 Bb 단백질에 결합한다. 수치 앞의 용어 "약"은 언급된 수치의 ±10%를 의미한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 인자 B에 대한 결합과 비교하여 인자 Bb에 대한 우선적 결합을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 인자 Bb에 결합하지만, 가용성 인자 B에는 실질적으로 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 인자 B에 대한 항체의 친화도보다 적어도 2배, 적어도 2.5배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 7.5배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 25배, 적어도 50배, 적어도 75배 또는 적어도 100배 더 높은 친화도로 인자 Bb에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 인자 B에 대한 항체의 친화도보다 2배 내지 2.5배, 2.5배 내지 5배, 5배 내지 10배, 10배 내지 15배, 15배 내지 20배, 20배 내지 25배, 25배 내지 50배, 50배 내지 75배 또는 75배 내지 100배 더 높은 친화도로 인자 Bb에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 보체 경로 활성을, 인간화 항-인자 Bb 항체의 부재 하의 보체 활성의 수준과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 대체 경로 (AP) 활성을, 인간화 항-인자 Bb 항체의 부재 하의 AP 활성의 수준과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 10-7 M 내지 10-9 M의 IC50, 예를 들어 10-7 M 내지 5 x 10-7 M, 5 x 10-7 M 내지 10-8 M, 10-8 M 내지 5 x 10-8 M 또는 5 x 10-8 M 내지 10-9 M의 IC50으로 AP 활성을 억제한다. 일부 실시양태에서, 보체 AP 활성은 AP-매개 말단 막 공격 복합체 (MAC) 침착, AP-매개 용혈, 적혈구 또는 다른 세포 유형 상의 C3 단편 침착, C3의 C3b/Bb-매개 절단 및 C5의 C3bBb3b-매개 절단으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체에 의한 보체 AP 활성의 억제는 보체계 대체 경로 위스랩® 키트를 사용하여 측정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 막 공격 복합체 (MAC)의 형성을, 항-인자 Bb 항체의 부재 하에 형성된 MAC의 양과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 C3의 C3b/Bb-매개 절단을 억제한다. C3b/Bb는 또한 "C3 컨버타제"로 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 C3의 C3b/Bb-매개 절단을, 항-인자 Bb 항체의 부재 하의 C3의 절단과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 10-7 M 내지 10-9 M의 IC50, 예를 들어 10-7 M 내지 5 x 10-7 M, 5 x 10-7 M 내지 10-8 M, 10-8 M 내지 5 x 10-8 M 또는 5 x 10-8 M 내지 10-9 M의 IC50으로 C3의 C3b/Bb-매개 절단을 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 C3의 C3b/Bb-매개 절단을 억제하여, C3 절단 생성물의 생산을 감소시킨다. 예를 들어, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 C3의 C3b/Bb-매개 절단을 억제하여, C3 절단 생성물 (예를 들어, C3a 및/또는 C3b)의 생산을, 항-인자 Bb 항체의 부재 하의 C3 절단 생성물의 생산과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 감소시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 보체 AP-매개 세포 용해를, 항-인자 Bb 항체의 부재 하의 세포 용해의 정도와 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 억제한다. 세포 용해 검정을 사용하여 AP-매개 세포 용해의 억제 정도를 결정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 10-7 M 내지 10-9 M의 IC50, 예를 들어 10-7 M 내지 5 x 10-7 M, 5 x 10-7 M 내지 10-8 M, 10-8 M 내지 5 x 10-8 M 또는 5 x 10-8 M 내지 10-9 M의 IC50으로 AP-매개 세포 용해를 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 보체 AP-매개 용혈을, 항-인자 Bb 항체의 부재 하의 용혈의 정도와 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 억제한다. 토끼 적혈구 (RBC) 용혈 검정을 사용하여 AP-매개 용혈의 억제 정도를 결정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 10-7 M 내지 10-9 M의 IC50, 예를 들어 10-7 M 내지 5 x 10-7 M, 5 x 10-7 M 내지 10-8 M, 10-8 M 내지 5 x 10-8 M 또는 5 x 10-8 M 내지 10-9 M의 IC50으로 AP-매개 용혈을 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 세포 또는 조직 상의 C3b, C3d 또는 다른 C3 분할 생성물의 AP-매개 침착을 억제한다. 예를 들어, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 세포 또는 조직 상의 C3b, C3d 또는 다른 C3 분할 생성물의 AP-매개 침착을, 항-인자 Bb 항체의 투여 부재 하의 또는 항-인자 Bb 항체의 투여 전의 세포 또는 조직 상의 C3b, C3d 또는 다른 C3 분할 생성물의 침착의 양과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 10-7 M 내지 10-9 M의 IC50, 예를 들어 10-7 M 내지 5 x 10-7 M, 5 x 10-7 M 내지 10-8 M, 10-8 M 내지 5 x 10-8 M 또는 5 x 10-8 M 내지 10-9 M의 IC50으로 세포 또는 조직 상의 C3b, C3d 또는 다른 C3 분할 생성물의 AP-매개 침착을 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 세포 또는 조직 상의 AP-매개 C3b 침착을, 인간화 항-인자 Bb 항체의 부재 하의 세포 또는 조직 상의 C3b 침착의 양과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 10-7 M 내지 10-9 M의 IC50, 예를 들어 10-7 M 내지 5 x 10-7 M, 5 x 10-7 M 내지 10-8 M, 10-8 M 내지 5 x 10-8 M 또는 5 x 10-8 M 내지 10-9 M의 IC50으로 세포 또는 조직 상의 AP-매개 C3b 침착을 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 적혈구 (RBC) 또는 다른 세포 유형 상의 AP-매개 C3b 침착을, 인간화 항-인자 Bb 항체의 부재 하의 RBC 상의 C3b 침착의 양과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%만큼 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 10-7 M 내지 10-9 M의 IC50, 예를 들어 10-7 M 내지 5 x 10-7 M, 5 x 10-7 M 내지 10-8 M, 10-8 M 내지 5 x 10-8 M 또는 5 x 10-8 M 내지 10-9 M의 IC50으로 RBC 상의 AP-매개 C3b 침착을 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는, 그를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 경우에, 대상체에서 순환 중인 인자 Bb의 양을 감소시킨다. 예를 들어, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는, 그를 필요로 하는 대상체에게 투여되는 경우에, 대상체에서 순환 중인 인자 Bb의 양을, 인간화 항-인자 Bb 항체의 투여 부재 하의 대상체에서의 순환 중인 인자 Bb의 양과 비교하여 또는 인간화 항-인자 Bb 항체의 투여 전의 대상체에서의 순환 중인 인자 Bb의 양과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%만큼 감소시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 C5의 C3bBb3b-매개 절단을 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 C5의 C3bBb3b-매개 절단을, 인간화 항-인자 Bb 항체의 부재 하의 C5의 C3bBb3b-매개 절단과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%만큼 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 이중특이적 또는 다중특이적 항체이다. 예를 들어, 인간화 항-인자 Bb 항체는 보체 Bb 단백질 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부분 및 제2 항원에 결합하는 제2 항원-결합 부분을 포함하는 이중특이적 항체일 수 있다.
면역접합체
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 또 다른 작용제와 접합되어 면역접합체를 형성한다. 예를 들어, 인간화 항-인자 Bb 항체는 카르복실 말단에 유리 티올 (-SH) 기를 포함할 수 있으며, 여기서 유리 티올 기는 항체를 제2 폴리펩티드 (예를 들어, 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함한 또 다른 항체), 스캐폴드, 담체 등에 부착시키는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 적어도 1개의 비-자연 발생 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 비-자연 코딩된 아미노산은 카르보닐 기, 아세틸 기, 아미노옥시 기, 히드라진 기, 히드라지드 기, 세미카르바지드 기, 아지드 기 또는 알킨 기를 포함한다. 예를 들어, 적합한 비-자연 발생 아미노산에 대해서는 미국 특허 번호 7,632,924를 참조한다. 비-자연 발생 아미노산의 포함은 중합체, 제2 폴리펩티드, 스캐폴드 등에 대한 연결을 제공할 수 있다. 예를 들어, 수용성 중합체에 연결된 인간화 항-인자 Bb 항체는 카르보닐 기를 포함하는 수용성 중합체 (예를 들어, PEG)를 항체에 반응시킴으로써 제조될 수 있으며, 여기서 항체는 아미노옥시, 히드라진, 히드라지드 또는 세미카르바지드 기를 포함하는 비-자연 코딩된 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 수용성 중합체에 연결된 인간화 항-인자 Bb 항체는 알킨-함유 아미노산을 포함하는 항체를 아지드 모이어티를 포함하는 수용성 중합체 (예를 들어, PEG)와 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 아지드 또는 알킨 기는 아미드 연결을 통해 PEG 분자에 연결된다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 중합체 (예를 들어, 폴리펩티드 이외의 중합체)에 연결 (예를 들어, 공유 연결)된다. 적합한 중합체는, 예를 들어 생체적합성 중합체 및 수용성 생체적합성 중합체를 포함한다. 적합한 중합체는 합성 중합체 및 자연 발생 중합체를 포함한다. 적합한 중합체는 500 Da 내지 50,000 Da, 예를 들어 5,000 Da 내지 40,000 Da 또는 25,000 내지 40,000 Da 범위의 평균 분자량을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는, 예를 들어 "방사선비투과성" 표지, 예를 들어 X선을 사용하여 용이하게 가시화될 수 있는 표지를 포함한다. 방사선비투과성 물질은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 가장 흔한 방사선비투과성 물질은 아이오다이드, 브로마이드 또는 바륨 염을 포함한다. 다른 방사선비투과성 물질이 또한 공지되어 있고, 유기 비스무트 유도체 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,939,045 참조), 방사선비투과성 멀티우레탄 (미국 특허 번호 5,346,981 참조), 유기비스무트 복합체 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,256,334 참조) 및/또는 방사선비투과성 바륨 다량체 복합체 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,866,132 참조)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는, 예를 들어 글루타르알데히드, 동종이관능성 가교제 또는 이종이관능성 가교제를 사용하여 제2 모이어티 (예를 들어, 지질, 인간화 항-인자 Bb 항체 이외의 폴리펩티드, 합성 중합체 및/또는 탄수화물)에 공유 연결된다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 고체 지지체 상에 고정화된다. 적합한 지지체는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 특히 상업적으로 입수가능한 칼럼 물질, 폴리스티렌 비드, 라텍스 비드, 자기 비드, 콜로이드 금속 입자, 유리 및/또는 규소 칩 및 표면, 니트로셀룰로스 스트립, 나일론 막, 시트, 듀라사이트, 반응 트레이의 웰 (예를 들어, 다중-웰 플레이트), 플라스틱 튜브 등을 포함한다. 고체 지지체는, 예를 들어 유리, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리카르보네이트, 덱스트란, 나일론, 아밀로스, 천연 및 변형된 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 아가로스 및 마그네타이트를 포함한 임의의 다양한 물질을 포함할 수 있다. 인간화 항-인자 Bb 항체를 고체 지지체 상에 고정화시키는 적합한 방법은 널리 공지되어 있고, 이온성, 소수성 및/또는 공유 상호작용을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 고체 지지체는, 예를 들어 수용액에서 가용성 또는 불용성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 적합한 고체 지지체는 일반적으로 수용액에서 불용성이다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 검출가능한 표지를 포함한다. 적합한 검출가능한 표지는 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 전기적, 광학적 또는 화학적 수단에 의해 검출가능한 임의의 조성물을 포함한다. 적합한 것은 자기 비드 (예를 들어, 디나비즈(DYNABEADS)™), 형광 염료 (예를 들어, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 텍사스 레드, 로다민, 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질 및/또는 황색 형광 단백질), 방사성표지 (예를 들어, 3H, 125I, 35S, 14C 또는 32P), 효소 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 루시페라제 및 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA)에 통상적으로 사용되는 다른 것) 및 비색 표지, 예컨대 콜로이드성 금 또는 착색 유리 또는 플라스틱 (예를 들어, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 라텍스 등) 비드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 조영제 또는 방사성동위원소를 포함하며, 여기서 조영제 또는 방사성동위원소는 영상화, 예를 들어 인간에 대해 수행되는 영상화 절차에 사용하기에 적합한 것이다. 표지의 비제한적 예는 방사성동위원소, 예컨대 123I (아이오딘), 18F (플루오린), 99Tc (테크네튬), 111In (인듐) 및 67Ga (갈륨) 및 조영제, 예컨대 가돌리늄 (Gd), 디스프로슘 및 철을 포함한다. 방사성 Gd 동위원소 (153Gd)가 또한 이용가능하고, 비-인간 포유동물에서의 영상화 절차에 적합하다. 인간화 항-인자 Bb 항체는 표준 기술을 사용하여 표지될 수 있다. 예를 들어, 인간화 항-인자 Bb 항체는 클로라민 T 또는 1,3,4,6-테트라클로로-3α,6α-디페닐글리코우릴을 사용하여 아이오딘화될 수 있다. 플루오린화를 위해, 플루오라이드 이온 치환 반응에 의한 합성 동안 플루오린이 인간화 항-인자 Bb 항체에 첨가된다. 이러한 방사성동위원소를 갖는 단백질의 합성의 검토에 대해서는 문헌 [Muller-Gartner, H., TIB Tech., 16:122-130 (1998) 및 Saji, H., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 16(2):209-244 (1999)]을 참조한다. 인간화 항-인자 Bb 항체는 또한 표준 기술을 통해 조영제로 표지될 수 있다. 예를 들어, 인간화 항-인자 Bb 항체는 저분자량 Gd 킬레이트, 예컨대 Gd 디에틸렌 트리아민 펜타아세트산 (GdDTPA) 또는 Gd 테트라아자시클로도데칸테트라아세트산 (GdDOTA)을 항체에 접합시킴으로써 Gd로 표지될 수 있다. 문헌 [Caravan et al., Chem. Rev. 99:2293-2352 (1999) 및 Lauffer et al., J. Magn. Reson. Imaging, 3:11-16 (1985)]을 참조한다. 인간화 항-인자 Bb 항체는, 예를 들어 폴리리신-Gd 킬레이트를 항체에 접합시킴으로써 Gd로 표지될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Curtet et al., Invest. Radiol., 33(10):752-761 (1998)]을 참조한다. 대안적으로, 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 Gd 킬레이트화제 지질을 포함하는 상자성 중합된 리포솜을 아비딘 및 비오티닐화 항체와 함께 인큐베이션함으로써 Gd로 표지될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Sipkins et al., Nature Med., 4:623-626 (1998)]을 참조한다.
적합한 형광 단백질은 녹색 형광 단백질 (GFP) 또는 그의 변이체, GFP의 청색 형광 변이체 (BFP), GFP의 시안색 형광 변이체 (CFP), GFP의 황색 형광 변이체 (YFP), 증강 GFP (EGFP), 증강 CFP (ECFP), 증강 YFP (EYFP), GFPS65T, 에메랄드, 토파즈 (TYFP), 비너스, 시트린, m시트린, GFPuv, 탈안정화 EGFP (dEGFP), 탈안정화 ECFP (dECFP), 탈안정화 EYFP (dEYFP), mCFPm, 세룰리안, T-사파이어, CyPet, YPet, mKO, HcRed, t-HcRed, DsRed, DsRed2, DsRed-단량체, J-Red, 이량체2, t-이량체2(12), mRFP1, 포실로포린, 레닐라 GFP, 몬스터 GFP, paGFP, 카에데 단백질 및 킨들링 단백질, 피코빌리단백질 및 피코빌리단백질 접합체, 예컨대 B-피코에리트린, R-피코에리트린 및 알로피코시아닌을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 형광 단백질의 다른 예는 m허니듀, m바나나, m오렌지, d토마토, td토마토, m탄제린, m스트로베리, m체리, m그레이프1, m라즈베리, m그레이프2 및/또는 m플룸을 포함한다 (Shaner et al. (2005) Nat. Methods 2:905-909). 예를 들어, 문헌 [Matz et al. (1999) Nature Biotechnol. 17:969-973]에 기재된 바와 같은 안토조안(Anthozoan) 종으로부터의 임의의 다양한 형광 및 착색 단백질이 사용하기에 적합하다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 치료제에 접합된다. 본원에 개시된 임의의 인간화 항-인자 Bb 항체는 항체-작용제 접합체를 형성하는 데 사용될 수 있다. 작용제는 경쇄의 N 말단, 경쇄의 C 말단, 중쇄의 N 말단 또는 중쇄의 C 말단에 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 작용제는 항체의 힌지 또는 항체 상의 적어도 1개의 다른 부위에 부착된다. 단일 쇄 항체의 경우, 작용제는 단일 쇄 항체의 N 또는 C 말단에 부착될 수 있다. 작용제는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술을 사용하여 직접적으로 또는 링커를 통해 항체에 접합될 수 있다. 링커는 절단성 또는 비-절단성일 수 있다. 이러한 치료제 (예를 들어, 요법에 사용하기 위한 것)의 예는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 융합 파트너, 예를 들어 리간드; 에피토프 태그; 펩티드; 및/또는 항체 이외의 단백질에 연결된다 (예를 들어, 공유 또는 비-공유 연결됨). 적합한 융합 파트너는 생체내에서 증진된 안정성 (예를 들어, 증진된 혈청 반감기)을 부여하고/거나; 정제의 용이성, 예를 들어 (His)n, 예를 들어 6His를 제공하고/거나; 세포로부터 융합 단백질의 분비를 제공하고/거나; 에피토프 태그, 예를 들어 GST, 헤마글루티닌 (HA; 예를 들어 YPYDVPDYA; 서열식별번호: 55), FLAG (예를 들어, DYKDDDDK; 서열식별번호: 56) 및/또는 c-myc (예를 들어, EQKLISEEDL; 서열식별번호: 57)를 제공하고/거나; 검출가능한 신호, 예를 들어 검출가능한 생성물을 생성하는 효소 (예를 들어, β-갈락토시다제, 루시페라제) 또는 그 자체가 검출가능한 단백질, 예를 들어 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질, 황색 형광 단백질 등을 제공하고/거나; 다량체화, 예를 들어 다량체화 도메인, 예컨대 이뮤노글로불린의 Fc 부분을 제공하는 펩티드 및 폴리펩티드를 포함한다. 융합체는 또한, 확인 또는 정제에 유용한 결합 파트너, 예를 들어, 예컨대 고체 지지체 상에 고정화된 것과 상호작용할 수 있는 펩티드 서열을 포함한 친화성 도메인을 포함할 수 있다. 연속 단일 아미노산, 예컨대 히스티딘은, 단백질에 융합된 경우에, 수지 칼럼, 예컨대 니켈 세파로스에 대한 고친화도 결합에 의한 융합 단백질의 1-단계 정제에 사용될 수 있다. 예시적인 친화성 도메인은 His5 (HHHHH) (서열식별번호: 58), HisX6 (HHHHHH) (서열식별번호: 59), C-myc (EQKLISEEDL) (서열식별번호: 60), Flag (DYKDDDDK) (서열식별번호: 61), 스트렙태그 (WSHPQFEK) (서열식별번호: 62), 헤마글루티닌, 예를 들어 HA 태그 (YPYDVPDYA; 서열식별번호: 63), 글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST), 티오레독신, 셀룰로스 결합 도메인, RYIRS (서열식별번호: 66), Phe-His-His-Thr (서열식별번호: 64), 키틴 결합 도메인, S-펩티드, T7 펩티드, SH2 도메인, C-말단 RNA 태그, WEAAAREACCRECCARA (서열식별번호: 65), 금속 결합 도메인, 예를 들어 아연 결합 도메인 또는 칼슘 결합 도메인, 예컨대 칼슘-결합 단백질, 예를 들어 칼모듈린, 트로포닌 C, 칼시뉴린 B, 미오신 경쇄, 레코베린, S-모듈린, 비시닌, VILIP, 뉴로칼신, 히포칼신, 프레퀘닌, 칼트락틴, 칼파인 대형-서브유닛, S100 단백질, 파르브알부민, 칼빈딘 D9K, 칼빈딘 D28K 및 칼레티닌으로부터의 것, 인테인, 비오틴, 스트렙타비딘, MyoD, 류신 지퍼 서열 및 말토스 결합 단백질을 포함한다.
인간화 항-인자 Bb 항체를 생산하는 방법
일부 실시양태에서, 완전 인간 항체는 특이적 인간 이뮤노글로불린 단백질을 발현하도록 조작된 상업적으로 입수가능한 마우스를 사용함으로써 수득될 수 있다. 보다 바람직한 (예를 들어, 완전 인간 항체) 또는 보다 강건한 면역 반응을 생성하도록 설계된 트랜스제닉 동물이 또한 인간화 또는 인간 항체의 생성을 위해 사용될 수 있다. 이러한 기술의 예는 암젠, 인크.(Amgen, Inc.) (캘리포니아주 프리몬트)로부터의 제노마우스R™ 및 메다렉스, 인크.(Medarex, Inc.) (뉴저지주 프린스턴)로부터의 HuMAb-마우스R™ 및 TC 마우스™ 또는 하버 안티바디즈 비브이(Harbour Antibodies BV) (홀랜드)로부터의 H2L2 마우스이다. 또 다른 대안에서, 항체는 파지 디스플레이 또는 효모 기술에 의해 재조합적으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,565,332; 5,580,717; 5,733,743; 및 6,265,150; 및 문헌 [Winter et al., (1994) Annu. Rev. Immunol. 12:433-455]을 참조한다. 대안적으로, 파지 디스플레이 기술 (McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-553)을 사용하여 비면역화 공여자로부터의 이뮤노글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 인간 항체 및 항체 단편을 시험관내 생산할 수 있다.
무손상 항체 (전장 항체)의 항원-결합 단편은 상용 방법을 통해 제조될 수 있다. 예를 들어, F(ab')2 단편은 항체 분자의 펩신 소화에 의해 생산될 수 있고, Fab 단편은 F(ab')2 단편의 디술피드 가교를 환원시킴으로써 생성될 수 있다. 유전자 조작된 항체, 예컨대 인간화 항체, 키메라 항체, 단일-쇄 항체 및 이중특이적 항체는, 예를 들어 통상적인 재조합 기술을 통해 생산될 수 있다. 한 예에서, 표적 항원에 특이적인 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여 (예를 들어, 모노클로날 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리 및 서열분석될 수 있다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서의 역할을 한다. 단리되면, DNA를 적어도 1개의 발현 벡터 내로 넣을 수 있고, 이어서 이를 달리 이뮤노글로불린 단백질을 생산하지 않는 숙주 세포, 예컨대 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) (이. 콜라이) 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 인간 HEK293 세포 또는 골수종 세포 내로 형질감염시켜, 재조합 숙주 세포에서의 모노클로날 항체의 합성을 수득한다. 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 87/04462를 참조한다. 이어서, DNA는, 예를 들어 상동 뮤린 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 치환시키거나 (Morrison et al., (1984) Proc. Nat. Acad. Sci. 81:6851) 또는 이뮤노글로불린 코딩 서열에 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 모두 또는 일부를 공유 연결함으로써 변형될 수 있다. 그러한 방식으로, 표적 항원의 결합 특이성을 갖는 유전자 조작된 항체, 예컨대 "키메라" 또는 "하이브리드" 항체가 제조될 수 있다.
단일-쇄 항체는 재조합 기술을 통해, 예를 들어 중쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 연결함으로써 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 가요성 링커가 2개의 가변 영역 사이에 혼입된다.
대안적으로, 단일 쇄 항체의 생산을 위해 기재된 기술 (미국 특허 번호 4,946,778 및 4,704,692)은, 예를 들어 파지 또는 효모 scFv 라이브러리를 생산하도록 적합화될 수 있고, 인자 Bb에 특이적인 scFv 클론은 상용 절차에 따라 라이브러리로부터 확인될 수 있다. 양성 클론은 높은 인자 Bb 결합 친화도를 갖는 것을 확인하기 위한 추가의 스크리닝에 적용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 하기 예시된 바와 같은 재조합 기술에 의해 제조된다. 본원에 기재된 바와 같은 항-인자 Bb 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산은 하나의 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있으며, 각각의 뉴클레오티드 서열은 적합한 프로모터에 작동가능하게 연결된다. 한 예에서, 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 각각의 뉴클레오티드 서열은 별개의 프로모터에 작동가능하게 연결된다. 대안적으로, 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 단일 프로모터와 작동가능하게 연결되어, 중쇄 및 경쇄 둘 다가 동일한 프로모터로부터 발현되도록 할 수 있다. 필요한 경우에, 내부 리보솜 진입 부위 (IRES)가 중쇄 및 경쇄 코딩 서열 사이에 삽입될 수 있다.
일부 예에서, 항체의 2개의 쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 2개의 벡터 내로 클로닝되며, 이는 동일하거나 상이한 세포 내로 도입될 수 있다. 2개의 쇄가 상이한 세포에서 발현되는 경우에, 이들 각각은 이를 발현하는 숙주 세포로부터 단리될 수 있고, 단리된 중쇄 및 경쇄는 항체의 형성을 허용하는 적합한 조건 하에 혼합 및 인큐베이션될 수 있다.
일반적으로, 항체의 하나 또는 모든 쇄를 코딩하는 핵산 서열은 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 적합한 프로모터와 작동가능하게 연결된 적합한 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 예를 들어, 뉴클레오티드 서열 및 벡터를 적합한 조건 하에 제한 효소와 접촉시켜, 서로 쌍을 형성할 수 있고 리가제로 함께 연결될 수 있는 상보적 말단을 각각의 분자 상에 생성할 수 있다. 대안적으로, 합성 핵산 링커는 유전자의 말단에 라이게이션될 수 있다. 이들 합성 링커는 벡터 내의 특정한 제한 부위에 상응하는 핵산 서열을 함유한다. 발현 벡터/프로모터의 선택은 항체를 생산하는 데 사용하기 위한 숙주 세포의 유형에 좌우될 것이다.
시토메갈로바이러스 (CMV) 극초기 프로모터, 바이러스 LTR, 예컨대 라우스 육종 바이러스 LTR, HIV-LTR, HTLV-1 LTR, 원숭이 바이러스 40 (SV40) 초기 프로모터, 이. 콜라이 lac UV 프로모터 및 단순 포진 tk 바이러스 프로모터를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 프로모터가 본원에 기재된 항체의 발현에 사용될 수 있다.
조절성 프로모터가 또한 사용될 수 있다. 이러한 조절성 프로모터는 포유동물 세포 프로모터를 보유하는 lac 오퍼레이터로부터의 전사를 조절하기 위한 전사 조정제로서 이. 콜라이로부터의 lac 리프레서를 사용하는 것 [Brown, M. et al., Cell, 49:603-612(1987)], 테트라시클린 리프레서 (tetR)를 사용하는 것 [Gossen, M., and Bujard, H., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5547-555115 (1992); Yao, F. et al., Human Gene Therapy, 9:1939-1950 (1998); Shockelt, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:6522-6526 (1995)]을 포함한다. 다른 시스템은 아스트라디올, RU486, 디페놀 무리슬레론 또는 라파마이신을 사용하는 FK506 이량체, VP16 또는 p65를 포함한다. 유도성 시스템은 특히 인비트로젠(Invitrogen), 클론테크(Clontech) 및 아리아드(Ariad)로부터 입수가능하다.
오페론과 함께 리프레서를 포함하는 조절성 프로모터가 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 이. 콜라이로부터의 lac 리프레서는 lac 오퍼레이터-보유 포유동물 세포 프로모터로부터의 전사를 조절하는 전사 조정제로서 기능할 수 있고 [M. Brown et al., Cell, 49:603-612 (1987); Gossen and Bujard (1992); M. Gossen et al., Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551(1992)], 테트라시클린 리프레서 (tetR)를 전사 활성화제 (VP 16)와 조합하여 tetR-포유동물 세포 전사 활성화제 융합 단백질인 tTa (tetR-VP16)를 생성하고, 인간 시토메갈로바이러스 (hCMV) 프로모터로부터 유래된 tetO 보유 최소 프로모터와 조합하여 tetR-tet 오퍼레이터 시스템을 생성하여 포유동물 세포에서 유전자 발현을 제어한다. 한 실시양태에서, 테트라시클린 유도성 스위치가 사용된다. tetR-포유동물 세포 전사 인자 융합 유도체보다는, 테트라시클린 리프레서 (tetR) 단독이, 테트라시클린 오퍼레이터가 CMVIE 프로모터의 TATA 요소에 대해 하류에 적절하게 위치하는 경우에 포유동물 세포에서 유전자 발현을 조절하기 위한 강력한 트랜스-조정제로서 기능할 수 있다 (Yao et al., Human Gene Therapy). 이러한 테트라시클린 유도성 스위치의 하나의 특정한 이점은, 그의 조절가능한 효과를 달성하기 위해, 일부 경우에 세포에 독성일 수 있는 테트라시클린 리프레서-포유동물 세포 전사활성인자 또는 리프레서 융합 단백질의 사용을 요구하지 않는다는 것이다 (Gossen 5 et al., Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551 (1992); Shockett et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:6522-6526 (1995)).
추가적으로, 벡터는, 예를 들어 하기 중 일부 또는 모두를 함유할 수 있다: 선택 마커 유전자, 예컨대 포유동물 세포에서 안정한 또는 일시적 형질감염체의 선택을 위한 네오마이신 유전자; 높은 수준의 전사를 위한 인간 CMV의 극초기 유전자로부터의 인핸서/프로모터 서열; mRNA 안정성을 위한 SV40으로부터의 전사 종결 및 RNA 프로세싱 신호; 적절한 에피솜 복제를 위한 SV40 폴리오마 복제 기점 및 ColE1; 내부 리보솜 결합 부위 (IRES), 다목적 다중 클로닝 부위; 및 센스 및 안티센스 RNA의 시험관내 전사를 위한 T7 및 SP6 RNA 프로모터. 트랜스진을 함유하는 벡터를 생산하기 위한 적합한 벡터 및 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고 이용가능하다. 본원에 기재된 방법을 실시하는 데 유용한 폴리아데닐화 신호의 예는 인간 콜라겐 I 폴리아데닐화 신호, 인간 콜라겐 II 폴리아데닐화 신호 및 SV40 폴리아데닐화 신호를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
임의의 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 적어도 1개의 벡터 (예를 들어, 발현 벡터)가 항체를 생산하는 데 적합한 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 숙주 세포는 항체 또는 그의 임의의 폴리펩티드 쇄의 발현에 적합한 조건 하에 배양될 수 있다. 이러한 항체 또는 그의 폴리펩티드 쇄는 통상적인 방법, 예를 들어 친화도 정제를 통해 배양된 세포에 의해 (예를 들어, 세포 또는 배양물 상청액으로부터) 회수될 수 있다. 필요한 경우에, 항체의 폴리펩티드 쇄는 항체의 생산을 허용하는 적합한 기간 동안 적합한 조건 하에 인큐베이션될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체를 제조하는 방법은 또한 본원에 기재된 바와 같은 항-인자 Bb 항체의 중쇄 및 경쇄 둘 다를 코딩하는 재조합 발현 벡터를 포함한다. 재조합 발현 벡터는 통상적인 방법, 예를 들어 인산칼슘 매개 형질감염에 의해 적합한 숙주 세포 (예를 들어, 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR)-CHO 세포) 내로 도입될 수 있다. 양성 형질전환체 숙주 세포는 항체를 형성하는 2개의 폴리펩티드 쇄의 발현을 허용하는 적합한 조건 하에 선택 및 배양될 수 있으며, 항체는 세포로부터 또는 배양 배지로부터 회수될 수 있다. 필요한 경우에, 숙주 세포로부터 회수된 2개의 쇄는 항체의 형성을 허용하는 적합한 조건 하에 인큐베이션될 수 있다.
일부 실시양태에서, 하나는 항-인자 Bb 항체의 중쇄를 코딩하고 다른 하나는 항-인자 Bb 항체의 경쇄를 코딩하는 2개의 재조합 발현 벡터가 제공된다. 2개의 재조합 발현 벡터 둘 다는 통상적인 방법, 예를 들어 인산칼슘-매개 형질감염에 의해 적합한 숙주 세포 (예를 들어, DHFR-CHO 세포) 내로 도입될 수 있다.
대안적으로, 각각의 발현 벡터가 적합한 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 양성 형질전환체는 항체의 폴리펩티드 쇄의 발현을 허용하는 적합한 조건 하에 선택 및 배양될 수 있다. 2개의 발현 벡터가 동일한 숙주 세포 내로 도입되는 경우에, 그 안에서 생산된 항체는 숙주 세포로부터 또는 배양 배지로부터 회수될 수 있다. 필요한 경우에, 폴리펩티드 쇄는 숙주 세포로부터 또는 배양 배지로부터 회수된 다음, 항체의 형성을 허용하는 적합한 조건 하에 인큐베이션될 수 있다. 2개의 발현 벡터가 상이한 숙주 세포 내로 도입되는 경우에, 이들 각각은 상응하는 숙주 세포로부터 또는 상응하는 배양 배지로부터 회수될 수 있다. 이어서, 2개의 폴리펩티드 쇄는 항체의 형성에 적합한 조건 하에 인큐베이션될 수 있다.
표준 분자 생물학 기술을 사용하여 재조합 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키고, 형질전환체를 선택하고, 숙주 세포를 배양하고, 배양 배지로부터 항체를 회수한다. 예를 들어, 일부 항체는 단백질 A 또는 단백질 G 커플링된 매트릭스를 사용한 친화성 크로마토그래피에 의해 단리될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 (예를 들어, 표 2 및 3에 제공된 바와 같은) 항-인자 Bb 항체의 중쇄, 경쇄 또는 둘 다를 코딩하는 핵산 중 임의의 것, 이를 함유하는 벡터 (예를 들어, 발현 벡터); 및 벡터를 포함하는 숙주 세포는 본 개시내용의 범주 내에 있다.
제약 조성물 및 치료 방법
본 개시내용의 다른 측면은 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체 중 어느 하나를 포함하는 제약 조성물을 포함한 조성물을 제공한다. 일반적으로, 본원에서 제제로도 지칭되는 제약 조성물은 유효량의 본원에 기재된 인간화 항-인자 Bb 항체 중 어느 하나를 포함한다. "유효량"은 목적하는 결과, 예를 들어 보체-매개 질환 또는 장애와 연관된 유해 증상의 감소, 보체-매개 질환 또는 장애의 증상의 호전, 보체-매개 질환 또는 장애의 진행의 둔화 등을 가져오기에 충분한 투여량을 의미한다. 일반적으로, 목적하는 결과는 대조군과 비교하여 적어도 보체-매개 질환 또는 장애의 증상의 감소이다.
본 개시내용의 방법에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 목적하는 치료 효과 또는 진단 효과를 유발할 수 있는 편리한 수단을 사용하여 대상체에게 투여될 수 있다. 따라서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 치료적 투여를 위해 다양한 제제에 혼입될 수 있다. 보다 특히, 인간화 항-인자 Bb 항체는 적절한 제약상 허용되는 담체, 제약상 허용되는 희석제 또는 다른 제약상 허용되는 부형제와 조합되어 제약 조성물로 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 인간화 항-인자 Bb 항체 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한다.
제약 투여 형태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 그의 제약상 허용되는 염의 형태로 투여될 수 있거나 또는 이들은 또한 단독으로 사용될 수 있거나 또는 다른 제약 활성 화합물과 적절하게 회합되어 뿐만 아니라 조합되어 사용될 수 있다. 하기 방법 및 부형제는 단지 예시적이며, 어떠한 방식으로도 제한적이지 않다.
경구 제제의 경우, 인간화 항-인자 Bb 항체는 단독으로 사용될 수 있거나 또는 정제, 분말, 과립 또는 캡슐을 제조하기 위해 적절한 첨가제와 조합되어 사용될 수 있다.
인간화 항-인자 Bb 항체는 항체를 수성 또는 비수성 용매 중에; 및 목적하는 경우 통상적인 첨가제, 예컨대 가용화제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제 및 보존제와 함께 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 주사용 제제로 제제화될 수 있다.
인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 제약 조성물은 목적하는 정도의 순도를 갖는 인간화 항-인자 Bb 항체를 임의적인 생리학상 허용되는 담체, 다른 부형제, 안정화제, 계면활성제, 완충제 및/또는 장성 작용제와 혼합함으로써 제조된다. 허용되는 담체, 다른 부형제 및/또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 완충제, 항산화제, 아미노산 또는 그의 조합을 포함한다.
제약 조성물은 액체 형태, 동결건조 형태 또는 동결건조 형태로부터 재구성된 액체 형태일 수 있으며, 여기서 동결건조 제제는 투여 전에 멸균 용액으로 재구성되어야 한다. 동결건조 조성물을 재구성하기 위한 표준 절차는 소정 부피의 순수한 물 (전형적으로 동결건조 동안 제거된 부피와 동등함)을 다시 첨가하는 것이지만; 항박테리아제를 포함하는 용액이 비경구 투여를 위한 제약 조성물의 생산에 사용될 수도 있다; 또한 문헌 [Chen (1992) Drug Dev Ind Pharm 18, 1311-54] 참조.
장성 작용제는 제제의 등장성을 조정하기 위해 항체 제제에 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 수성 제제는 등장성이지만, 고장성 또는 저장성 용액이 적합할 수도 있다. 용어 "등장성"은 생리학적 염 용액 또는 혈청과 같이 비교되는 일부 다른 용액과 동일한 장성을 갖는 용액을 나타낸다.
계면활성제는 또한 제제화된 항체의 응집을 감소시키고/거나 제제 중 미립자의 형성을 최소화하고/거나 흡착을 감소시키기 위해 항체 제제에 첨가될 수 있다.
동결건조보호제는 또한 동결건조 공정 동안 불안정성 활성 성분 (예를 들어, 단백질)을 탈안정화 조건에 대해 보호하기 위해 첨가될 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상 제제는 인간화 항-인자 Bb 항체 및 상기 확인된 작용제 중 적어도 1종 (예를 들어, 계면활성제, 완충제, 안정화제, 장성 작용제)을 포함하고, 적어도 1종의 보존제를 본질적으로 함유하지 않는다.
인간화 항-인자 Bb 항체는 흡입을 통해 투여될 에어로졸 제제에 이용될 수 있다. 인간화 항-인자 Bb 항체는 가압된 허용되는 추진제로 제제화될 수 있다.
추가로, 인간화 항-인자 Bb 항체는 다양한 염기, 예컨대 유화 염기 또는 수용성 염기와 혼합함으로써 좌제로 제조될 수 있다. 인간화 항-인자 Bb 항체는 좌제를 통해 직장으로 투여될 수 있다.
다른 투여 방식이 또한 본 개시내용의 방법에 사용될 것이다. 예를 들어, 인간화 항-인자 Bb 항체는 좌제 및 일부 실시양태에서 에어로졸 및 비강내 조성물로 제제화될 수 있다. 좌제의 경우, 비히클 조성물은 전통적인 결합제 및 담체를 포함할 수 있다.
비강내 제제는 통상적으로 비점막에 대한 자극을 유발하지도 않고 섬모 기능을 유의하게 방해하지도 않는 비히클을 포함할 것이다. 희석제, 예컨대 물, 수성 염수 또는 다른 공지된 물질이 사용될 수 있다. 비강 제제는 또한 보존제를 함유할 수 있다. 계면활성제는 비점막에 의한 인간화 항-인자 Bb 항체의 흡수를 증진시키기 위해 제공될 수 있다.
인간화 항-인자 Bb 항체는 주사가능한 제제로서 투여될 수 있다. 전형적으로, 주사가능한 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 제조되며; 주사 전 액체 비히클 중의 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태가 또한 제조될 수 있다. 제제는 또한 유화될 수 있거나 또는 항체는 리포솜 비히클 내에 캡슐화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 제어 방출 제제로 제제화된다. 본 개시내용의 범주 내의 제어 방출은 다수의 연장-방출 투여 형태 중 어느 하나를 의미하는 것으로 간주될 수 있다.
인간화 항-인자 Bb 항체는 생체내 및 생체외 방법을 포함한 약물 전달에 적합한 방법 및 경로, 뿐만 아니라 전신 및 국부 투여 경로를 사용하여 대상체에게 투여된다.
통상적인 및 제약상 허용되는 투여 경로는 비강내, 근육내, 기관내, 척수강내, 두개내, 피하, 피내, 국소, 정맥내, 복강내, 동맥내 (예를 들어, 경동맥을 통해), 척수 또는 뇌 전달, 직장, 비강, 경구 및 다른 경장 및 비경구 투여 경로를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본 개시내용의 항체는 전신 또는 국부 경로를 포함한, 통상적인 약물의 전달에 적합한 임의의 이용가능한 통상적인 방법 및 경로를 사용하여 대상체에게 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 개시내용에 의해 고려되는 투여 경로는 경장, 비경구 또는 흡입 경로를 포함하나 반드시 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체는 주사 및/또는 전달에 의해, 예를 들어 뇌 동맥 내의 부위로 또는 뇌 조직 내로 직접 투여된다. 인간화 항-인자 Bb 항체는 또한, 예를 들어 표적 부위로의 바이오리스틱 전달에 의해 표적 부위에 직접 투여될 수 있다.
다양한 대상체가 본원에 제공된 방법에 따라 치료될 수 있다. 일반적으로, 이러한 대상체는 "포유동물" 또는 "포유류"이며, 여기서 이들 용어는 육식동물 (예를 들어, 고양이), 초식동물 (예를 들어, 소, 말 및 양), 잡식동물 (예를 들어, 개, 염소 및 돼지), 설치류 (예를 들어, 마우스, 기니 피그 및 래트) 및 영장류 (예를 들어, 인간, 침팬지 및 원숭이) 목을 포함한, 포유동물 강 내에 있는 유기체를 기재하는 것으로 광범위하게 사용된다. 일부 실시양태에서, 대상체, 예컨대 포유동물, 어류 또는 무척추동물은 보체계를 갖는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 보체계-함유 포유동물, 어류 또는 무척추동물 반려 동물, 농업 동물, 작업 동물, 동물원 동물 또는 실험실 동물이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
"치료"는 대상체가 앓는 병적 상태와 연관된 증상의 적어도 호전을 지칭하며, 여기서 호전은 넓은 의미에서 치료될 병적 상태, 예컨대 보체-매개 질환 또는 장애와 연관된 파라미터, 예를 들어 증상의 크기의 적어도 감소를 지칭하는 것으로 사용된다. 따라서, 치료는 또한 병적 상태 또는 그와 연관된 적어도 증상 및/또는 2차 효과가 완전히 억제되거나, 예를 들어 발생이 방지되거나 또는 정지되어, 예를 들어 종결되어, 대상체가 더 이상 병적 상태 또는 적어도 병적 상태를 특징화하는 증상을 앓지 않는 상황을 포함한다.
일부 실시양태에서, "대상체"는 뮤린 (래트, 마우스), 비-인간 영장류, 인간, 개, 고양이, 유제류 (예를 들어, 말, 소, 양, 돼지, 염소) 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 포유동물이다. 또한, 이들 용어는 보체계를 갖는 임의의 동물, 예컨대 포유동물, 어류 및 일부 무척추동물을 포괄한다. 따라서, 이들 용어는 보체계-함유 포유동물, 어류 및 무척추동물 반려 동물, 농업 동물, 작업 동물, 동물원 동물 및 실험실 동물을 포함한다.
"생물학적 샘플"은 대상체로부터 수득된 다양한 샘플 유형을 포괄하고, 진단 또는 모니터링 검정에 사용될 수 있다. 상기 정의는 혈액 및 생물학적 기원의 다른 액체 샘플, 고체 조직 샘플, 예컨대 생검 시편 또는 조직 배양물 또는 그로부터 유래된 세포 및 그의 자손을 포괄한다. 정의는 또한 입수 후 임의의 방식으로, 예컨대 시약으로의 처리, 가용화 또는 특정 성분, 예컨대 폴리뉴클레오티드의 풍부화에 의해 조작된 샘플을 포함한다. 용어 "생물학적 샘플"은 임상 샘플을 포괄하고, 또한 배양물 중의 세포, 세포 상청액, 세포 용해물, 혈청, 혈장, 생물학적 유체 및 조직 샘플을 포함한다. 용어 "생물학적 샘플"은 소변, 타액, 뇌척수액, 간질액, 안구액, 활액 및/또는 혈액 분획, 예컨대 혈장 및 혈청을 포함한다. 용어 "생물학적 샘플"은 또한 고체 조직 샘플, 조직 배양 샘플 및 세포 샘플을 포함한다.
본 개시내용은 대상체에게 투여하기 위한 인간화 항-인자 Bb 항체를 포함하는 조성물을 함유하기에 적합한 장치 또는 용기를 제공한다. 예를 들어, 인간화 항-인자 Bb 항체는 제약 조성물을 함유하기에 적합한 용기 내에 배치될 수 있다. 용기는, 예를 들어 병 (예를 들어, 폐쇄 장치, 예컨대 캡을 가짐), 블리스터 팩 (예를 들어, 블리스터당 적어도 1회 용량의 봉입을 제공할 수 있음), 바이알, 가요성 패키징 (예를 들어, 밀봉된 마일라 또는 플라스틱 백), 앰플 (용액 중 단일 용량용), 점적기, 시린지, 박막 및/또는 튜브일 수 있다. 일부 실시양태에서, 용기, 예컨대 멸균 용기는 대상 제약 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 용기는 병 또는 시린지이다. 일부 실시양태에서, 용기는 병이다. 일부 실시양태에서, 용기는 시린지이다. 일부 실시양태에서, 장치는 주사가능한 장치, 예컨대 시린지 (예를 들어, 사전-충전된 시린지), 펜 (예를 들어, 사전-충전된 펜) 또는 전자 주사 장치 (e-장치)이다.
본 개시내용은 보체-매개 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 일반적으로 유효량의 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체를 그를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-인자 Bb 항체의 투여는 대상체의 세포, 조직 또는 유체에서 보체 경로 활성의 활성을 조정하고, 보체-매개 질환 또는 장애를 치료한다.
"유효량"은 질환을 치료하기 위해 포유동물 또는 다른 대상체에게 투여되는 경우에 질환에 대한 상기 치료를 수행하기에 충분한 항-보체 인자 Bb 항체의 양을 지칭한다. "치료 유효량"은 항-보체 Bb 항체, 질환 및 그의 중증도 및 치료될 대상체의 연령, 체중 등에 따라 달라질 것이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 대상체의 세포, 조직 또는 유체에서 보체 경로 활성을 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 대상체의 세포, 조직 또는 유체에서 MAC의 형성을 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 대상체의 세포, 조직 또는 유체에서 C3의 C3b/Bb-매개 절단을 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 C3의 C3b/Bb-매개 절단을 감소시키거나 억제함으로써 C3 절단 생성물의 생산을 감소시키기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 대상체에서 세포의 보체 AP-매개 용해를 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 대상체의 세포, 조직 또는 유체 (예를 들어, RBC-함유 유체)에서 보체 AP-매개 용혈을 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 아나필라톡신의 생산을 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 대상체의 세포 또는 조직 상의 C3b, C3d 또는 다른 C3 분할 생성물의 AP-매개 침착을 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 대상체의 세포 또는 조직 상의 AP-매개 C3b 침착을 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 대상체에서 RBC 상의 C3b, C3d 또는 다른 C3 분할 생성물의 AP-매개 침착을 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체의 유효량은 대상체에서 RBC 상의 AP-매개 C3b 침착을 감소시키거나 억제하기에 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 그를 필요로 하는 대상체에게 적어도 1회의 용량으로 투여되는 경우에, 대상체에서 순환 중인 인자 Bb의 양을 감소시킨다. 예를 들어, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는, 그를 필요로 하는 대상체에게 적어도 1회의 용량으로 투여되는 경우에, 대상체에서 순환 중인 인자 Bb의 양을, 인간화 항-인자 Bb 항체의 투여 부재 하의 대상체에서의 순환 중인 인자 Bb의 양과 비교하여 또는 인간화 항-인자 Bb 항체의 투여 전의 대상체에서의 순환 중인 인자 Bb의 양과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%만큼 감소시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는, 그를 필요로 하는 대상체에게 적어도 1회의 용량으로 투여되는 경우에, 대상체에서 혈장 중 인자 Bb의 양을 감소시킨다. 예를 들어, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는, 그를 필요로 하는 대상체에게 적어도 1회의 용량으로 투여되는 경우에, 대상체에서 혈장 중 인자 Bb의 양을, 인간화 항-인자 Bb 항체의 투여 부재 하의 대상체에서의 혈장 중 인자 Bb의 양과 비교하여 또는 인간화 항-인자 Bb 항체의 투여 전의 대상체에서의 혈장 중 인자 Bb의 양과 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%만큼 감소시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 본 개시내용의 방법은 대상체에게 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체 또는 a) 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체; 및 b) 이러한 대상체에게 투여하기에 적합한 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 포유동물이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 투여는 본원에 개시된 것을 포함한, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 경로에 의한 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 정맥내이다. 일부 실시양태에서, 투여는 척수강내이다. 일부 실시양태에서, 투여는 근육내이다. 일부 실시양태에서, 투여는 피하이다.
본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체를 사용한 치료에 적합한 보체-매개 질환 및 장애는 대체 보체 경로와 연관된 질환 및 장애를 포함한다. 전임상 동물 모델 및 임상 시험에서의 연구는 대체 경로가 조직 손상 및 여러 상태의 발병기전의 발생에서 중요한 역할을 한다는 것을 나타낸다 (Holers et al., Immunological Reviews 223: 300-316; Cao et al., (2016) Haematologica 101(11): 1319-1326; Schubart et al., (2019) PNAS 116(16): 7926-7931; Thurman, (2015) Am J Kidney Dis 65(1): 156-168; Vriese et al., (2015) Am J Kidney Dis 65(1): 156-168; 및 Gold et al., (2006) Nat. Genet. 38(4): 458-462). 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체를 사용한 치료에 적합한 보체-매개 질환은 IgA 신병증 (베르게르병), 비정형 용혈성 요독성 증후군 (aHUS), 발작성 야간 혈색소뇨 (PNH), 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 루푸스 신염, ANCA 혈관염, 막성 신병증, C3 사구체신염 (C3GN), 초점성 분절성 사구체경화증 (FSGS), 다발성 경화증, 황반 변성, 연령-관련 황반 변성 (AMD), 류마티스 관절염, 항인지질 항체 증후군, 천식, 허혈-재관류 손상, 제II형 막증식성 GN, 자발적 태아 손실, 소수-면역 혈관염, 수포성 표피박리증, 재발성 태아 손실 및 외상성 뇌 손상을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본 개시내용의 인간화 항-인자 Bb 항체는 그를 필요로 하는 대상체에게 단독으로 (예를 들어, 단독요법으로서); 또는 적어도 1종의 추가의 치료제와의 조합 요법으로 투여될 수 있다.
본원에 사용된 "와 조합하여"는, 예를 들어 제1 화합물이 제2 화합물의 전체 투여 과정 동안 투여되고; 제1 화합물이 제2 화합물의 투여와 중첩되는 기간 동안 투여되고, 예를 들어 제1 화합물의 투여가 제2 화합물의 투여 전에 시작되고, 제1 화합물의 투여가 제2 화합물의 투여 종료 전에 종료되고; 제2 화합물의 투여가 제1 화합물의 투여 전에 시작되고, 제2 화합물의 투여가 제1 화합물의 투여 종료 전에 종료되고; 제1 화합물의 투여가 제2 화합물의 투여 시작 전에 시작되고, 제2 화합물의 투여가 제1 화합물의 투여 종료 전에 종료되고; 제2 화합물의 투여가 제1 화합물의 투여 시작 전에 시작되고, 제1 화합물의 투여가 제2 화합물의 투여 종료 전에 종료되는 것인 사용을 지칭한다. 따라서, "조합하여"는 또한 2종 이상의 화합물의 투여를 수반하는 요법을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 "와 조합하여"는 또한 동일하거나 상이한 제제로, 동일하거나 상이한 경로에 의해 및 동일하거나 상이한 투여 형태 유형으로 투여될 수 있는 2종 이상의 화합물의 투여를 지칭한다.
인간화 항-인자 Bb 항체를 사용한 치료에 적합한 대상체는 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 것으로 진단된 대상체; 보체-매개 질환 또는 장애가 발생할 위험이 일반적 집단보다 더 큰 대상체 (예를 들어, 보체-매개 질환 또는 장애가 발생할 유전적 소인을 갖는 대상체)를 포함한다. 본원 상기에 열거된 보체-매개 질환 또는 장애 중 어느 하나를 갖는 대상체가 또한 포함된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 성인 인간이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간 소아이다.
실시예
실시예 1: 마우스 모노클로날 항-인자 Bb 항체의 인간화
모 항-인자 Bb 항체 (표 1 참조) 하이브리도마로부터의 가변 영역 유전자를 증폭시키고, 클로닝하고, 서열분석하여, 단일의 특유한 VH 도메인 및 단일의 특유한 Vκ 도메인을 확인하였다.
처음에, 복합 인간 항체(COMPOSITE HUMAN ANTIBODY)™ 기술을 사용하여 설계된 3개의 인간화 VH 영역 및 5개의 인간화 Vκ 영역을 IgG4v1 중쇄 및 카파 경쇄 벡터 내로 클로닝하였다. 모 항체인 2종의 대조군 항체 및 모든 15종의 인간화 항체 조합을 HEK EBNA 세포에서 일시적으로 발현시켰다.
모든 인간화 변이체의 결합을 평가하기 위해, 형질감염된 세포 배양물로부터의 상청액에 대해 단일 사이클 동역학 분석을 수행하였다. 비아코어 T200 제어 소프트웨어 V2.0.1 및 평가 소프트웨어 V3.0 (지이 헬스케어(GE Healthcare), 스웨덴 웁살라)을 실행하는 비아코어 T200 (일련 번호 1909913) 상에서 동역학 실험을 수행하였다. HBS-P+ 실행 완충제 (pH 7.4) (지이 헬스케어, 영국 리틀 찰폰트)를 사용하여 25℃에서 모든 단일 사이클 동역학 실험을 실행하였다.
항체를 ELISA 역가에 의해 평가된 농도에 기초하여 실행 완충제 중에 1 μg/ml의 최종 농도로 희석하였다. 각각의 사이클의 시작 시에, 항체를 단백질 A 칩 (지이 헬스케어, 영국 리틀 찰폰트)의 Fc2, Fc3 및 Fc4 상에 로딩하였다. IgG를 10 μl/분의 유량으로 포획하여, ~50 RU의 Rmax를 수득하기 위한 이론적 값인 ~63 RU의 고정화 수준 (RL)을 얻었다. 이어서, 표면을 안정화시켰다. 분석물로서 인자 Bb (콤프테크(CompTech), 미국 타일러)를, 임의의 잠재적 물질 수송 한계를 최소화하기 위해 30 μl/분의 유량으로 사용하여, 단일 사이클 동역학 데이터를 수득하였다. 참조 키메라 항체로의 다중 반복을 수행하여 동역학 사이클에 걸쳐 표면 및 분석물의 안정성을 검사하였다. 참조 채널 Fc1 (항체 부재)로부터의 신호를 Fc2, Fc3 및 Fc4의 것으로부터 차감하여 참조 표면에 대한 비-특이적 결합의 차이를 보정하였다. 0.78 nM에서 6.25 nM 인자 Bb까지의 4 포인트, 2배 희석 범위를 각각의 농도 사이에 재생 없이 사용하였다. 증가하는 농도의 인자 Bb의 4회 주사에 대한 회합 상을 매회 200초 동안 모니터링하고, 인자 Bb의 마지막 주사 후 단일 해리 상을 200초 동안 측정하였다. 10 mM 글리신-HCl pH 1.5의 2회 주사를 사용하여 단백질 A 표면의 재생을 수행하였다.
단일 사이클 동역학에 대한 센소그램 및 피팅된 데이터가 도 1a-1d에 제시되고, 인자 Bb와 각각의 항체의 상호작용에 대해 측정된 동역학 파라미터가 표 7에 제시된다. VH0/Vκ0 참조 항체의 KD를 동일한 실험에서 검정된 인간화 변이체의 것으로 나눔으로써 상대 KD를 계산하였다.
표 7. 인자 Bb에 대한 인간화 변이체 및 참조 항체 결합의 단일 사이클 동역학 파라미터.
Figure pct00011
비아코어 분석은 모든 인간화 변이체가 인자 Bb에 결합하였다는 것을 나타냈지만, 모든 경우에 상대 KD는 키메라보다 2배 초과로 상이하였으며, 이는 일부 결합 친화도가 상실되었다는 것을 시사한다. 이를 해결하기 위해, 추가의 4개의 중쇄 (VH4 내지 VH7) 및 2개의 경쇄 (Vκ6 내지 Vκ7) 서열을 설계하고, 적절한 발현 벡터 내로 클로닝하였다. 변이체 서열이 표 2 및 3에 제시된다.
재설계된 변이체의 발현 및 단일 사이클 동역학 분석
5종의 대조군 항체 (VH0/Vκ6, VH0/Vκ7, VH5/Vκ0, VH6/Vκ0, VH7/Vκ0) 및 인간화 중쇄 및 경쇄의 조합물 (총 8종의 인간화 쌍형성물, 표 8)을 PEI 형질감염 방법을 사용하여 HEK EBNA 부착 세포 (ATCC® 카탈로그 번호 CRL-10852™) 내로 일시적으로 형질감염시켰다. IgG 상청액 역가를 IgG ELISA에 의해 모니터링하고 (표 9), 형질감염물을 최대 10일 동안 배양한 후에 상청액을 수거하였다.
표 8. 일시적 형질감염에 의해 생산된 변이체의 항체 역가 (μg/mL).
Figure pct00012
세포 배양물 상청액을 사용한 단일 사이클 동역학을 상기 기재된 바와 같이 수행하였다. 단일 사이클 동역학에 대한 센소그램 및 피팅된 데이터가 도 2a-2c에 제시된다. 모든 변이체는 인자 Bb에 결합하는 것으로 나타났다. 단일 사이클 동역학 데이터 (표 9)는 5종의 항체 (VH4/Vκ6, VH4/Vκ7, VH6/Vκ6, VH6/Vκ7 및 VH7/Vκ7)가 참조 키메라 항체의 ~2배 이내로 인자 Bb에 결합하였다는 것을 입증하였다. VH0/Vκ0 참조 항체의 KD를 동일한 실험에서 검정된 인간화 변이체의 것으로 나눔으로써 상대 KD를 계산하였다.
표 9. 인자 Bb에 대한 인간화 변이체 및 참조 항체 결합의 단일 사이클 동역학 파라미터.
Figure pct00013
항체의 정제
VH4/Vκ6, VH4/Vκ7, VH6/Vκ6, VH6/Vκ7 및 VH7/Vκ7 뿐만 아니라 키메라 항체를 단백질 A 세파로스 칼럼 (지이 헬스케어, 영국 리틀 찰폰트) 상에서 세포 배양물 상청액으로부터 정제하고, 이어서 이동상으로서 PBS pH 7.4를 사용하여 16/60 슈퍼덱스 200 칼럼 (지이 헬스케어, 영국 리틀 찰폰트)을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피하였다. 항체를 예측 아미노산 서열에 기초한 흡광 계수를 사용하여 OD280nm에 의해 정량화하였다. SDS-PAGE를 사용하여 겔 상에 각각의 항체 1 μg을 로딩함으로써 환원된 항체를 분석하였으며 (도 3), 전형적 항체의 프로파일에 상응하는 밴드를 관찰하였다.
항체의 다중사이클 동역학 분석
인자 Bb에 대한 정확한 친화도를 확립하기 위해, 비아코어 T200 평가 소프트웨어 V3.0.1 (스웨덴 웁살라)을 실행하는 비아코어 T200 (일련 번호 1909913) 기기를 사용하여 정제된 키메라 항체 및 5종의 리드 항체에 대해 다중사이클 동역학 분석을 수행하였다. 항체를 실행 완충제 중에 0.5 μg/ml의 최종 농도로 희석하였다. 각각의 사이클의 시작 시에, 항체를 단백질 A 칩 (지이 헬스케어, 영국 리틀 찰폰트)의 Fc2, Fc3 및 Fc4 상에 로딩하였다. IgG를 10 μl/분의 유량으로 포획하여, ~50 RU의 Rmax를 수득하기 위한 이론적 값인 ~63 RU의 고정화 수준 (RL)을 얻었다. 이어서, 표면을 안정화시켰다. 분석물로서 인자 Bb를 사용하고, 임의의 잠재적 물질 전달 효과를 최소화하기 위해 30 μl/분의 유량을 사용하여, 동역학 데이터를 수득하였다. 블랭크의 다중 반복 및 분석물의 단일 농도의 반복을 동역학 실행으로 프로그램화하여 동역학 사이클에 걸쳐 표면 및 분석물 둘 다의 안정성을 검사하였다. 동역학 분석을 위해, 12.5 nM에서 0.391 nM 인자 Bb까지 2배 희석 범위를 선택하였다. 인자 Bb의 회합 상을 360초 동안 모니터링하고, 해리 상을 600초 동안 모니터링하였다. 10 mM 글리신-HCl pH 1.5의 2회 주사를 사용하여 단백질 A 표면의 재생을 수행하였다. 참조 채널 Fc1로부터의 신호를 Fc2, Fc3 및 Fc4의 것으로부터 차감하여 참조 표면에 대한 비-특이적 결합의 차이를 보정하고, 전반적 Rmax 파라미터를 1-대-1 결합 모델에서 사용하였다.
인자 Bb에의 키메라 항체 및 인간화 변이체의 결합에 대한 센소그램 및 피팅된 데이터가 도 4a-4c에 제시된다. 인간화 변이체의 KD를 동일한 칩 상의 키메라 항체의 것으로 나눔으로써 상대 KD를 계산하였다. 인자 Bb와 키메라 항체 및 인간화 변이체의 상호작용에 대해 측정된 동역학 파라미터가 표 10에 제시된다. 2종의 인간화 변이체인 VH4/Vκ6 및 VH4/Vκ7 (볼드체)은 참조 키메라 항체의 2배 내의 상대 KD를 나타냈다.
표 10. 인자 Bb에 대한 인간화 변이체 및 참조 항체 결합의 다중 사이클 동역학 파라미터
Figure pct00014
인자 Bb 경쟁 ELISA
리드 정제 변이체 및 키메라 항체를 뮤린 모 항체에 대한 경쟁을 사용하여 인자 Bb에의 그의 결합에 대해 시험하였다.
인자 Bb를 1x PBS 중에 1.0 μg/ml로 희석하고, 100 μl/웰을 4℃에서 밤새 96-웰 ELISA 플레이트 상에 코팅하였다. 다음 날, 플레이트를 1% 카세인/PBS로 실온에서 2시간 동안 차단한 후, PBS pH 7.4로 2x 세척하였다.
96-웰 희석 플레이트에서, 고정 농도의 뮤린 모 항체 (0.5 μg/ml, 최종 농도)를 차단 완충제 중에 희석된 4배 적정의 일련의 시험 항체 (45 μg/ml에서 시작하여 최종 농도 0.01 μg/ml까지)에 동등 부피로 첨가하였다. 플레이트를 PBS-T로 3x 세척한 후, 100 μl의 키메라/시험 항체 혼합물을 ELISA 플레이트에 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 플레이트를 PBS-T로 3x 세척하고, PBS-T 중에 1:1000 희석된 항-마우스 IgG Fc-특이적 HRP (시그마(Sigma), 영국 도셋) 100 μl를 실온에서 1시간 동안 적용하여 결합된 마우스 항체를 검출하였다. 발색을 위해, 플레이트를 PBS-T로 3x 세척한 후, 100 μl의 TMB 기질을 첨가하고, 실온에서 대략 5분 동안 인큐베이션하였다. 반응을 50 μl의 3.0 M 염산으로 정지시키고, 흡광도를 다이넥스(DYNEX)® 플레이트 판독기를 사용하여 450 nm에서 즉시 판독하였다.
결과를 플롯팅하였으며, 이는 도 5에 제시된다. 각각의 변이체에 대해 IC50 값을 계산하고, 인간화 변이체의 IC50을 동일한 플레이트 상에서 검정된 키메라 항체의 것으로 나눔으로써 상대 IC50 값을 계산하였다 (표 11). 모든 리드 변이체는 모 항체의 2배 내의 IC50 값을 나타냈다.
표 11. 인자 Bb에 대한 인간화 리드의 경쟁 ELISA로부터 수득된 반수 최대 억제 농도 (IC50) 값.
Figure pct00015
실시예 2: 인간화 변이체의 활성
인간 혈청에서 항-인자 Bb 인간화 변이체에 의한 위스랩® AP의 억제
보체 AP 활성을 억제하는 인간화 변이체의 능력을 보체계 대체 경로 위스랩® 키트를 사용하여 측정하였다. 이 플레이트-기반 검정에서, 리포폴리사카라이드 (LPS) 코팅된 웰은 판독물로서의 역할을 하는 막 공격 복합체 (MAC) 침착의 검출과 함께 대체 경로의 특이적 활성화를 유도하였다. 5.56% 정상 인간 혈청 (NHS)을 인간 IgG4 대조군 항체와 함께 100 μg/mL에서 시작하는 모 항체 및 인간화 변이체의 일련의 희석물과 함께 인큐베이션하였다. OD 405 nm를 측정하고, 키트 양성 및 음성 대조군과 비교하였다. 데이터를 플레이트 양성 대조군에 대해 플롯팅하였다 (도 6a). 모든 인간화 변이체는 인간 혈청에서 모 항체와 유사한 AP-매개 MAC 침착의 억제를 나타냈다 (표 13).
표 12. 위스랩® AP 검정에서 인간화 항-인자 Bb 항체의 활성.
Figure pct00016
인간 혈청에서 인간화 변이체에 의한 AP-매개 용혈의 억제
전형적 경로를 억제하기 위한 EGTA-함유 완충제 중에서 인간 또는 시노몰구스 원숭이 혈청 및 토끼 적혈구를 사용하여 AP 경로-매개 용혈의 억제를 결정하였다. 200 μg/mL에서 시작하는 모 항체 및 인간화 변이체의 일련의 희석물을 20% 인간 혈청 및 10 x 106개의 토끼 적혈구 (RBC)와 함께 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 540 nm에서의 상청액의 흡광도를 측정하고, 에틸렌 디아민 테트라아세트산 (EDTA)을 함유하는 대조군 웰에서의 배경 흡광도를 차감함으로써 용해의 양을 결정하였다. 결과가 도 6b에 제시된다. 도 6c에서, 100 μg/mL에서의 각각의 변이체에 대해 용혈의 양을 나타내는 A540이 제시된다. A540의 최대 감소로 반영되는 바와 같이 VH4/VK6 및 VH6/VK7이 용혈의 최대 억제를 나타낸다.
시노몰구스 원숭이 인자 Bb에 대한 모 항체 및 인간화 변이체의 결합
인간화 과정이 종 교차-반응성에 영향을 미치지 않았다는 것을 보장하기 위해, 옥테트 레드를 사용하여 생물층 간섭측정법 (BLI)에 의해 모 항체 및 인간화 유도체를 인간 및 시노몰구스 원숭이 인자 Bb에의 결합에 대해 시험하였다. 간략하게, 비오티닐화 항체를 PBS, 0.1% BSA, 0.02% 트윈-20 (검정 완충제) 중에 평형화된 SA 바이오센서 상에 로딩하였다. 검정 완충제 중 60초 기준선 후, 항체를 프로브 상에 180초 동안 로딩한 후, 또 다른 60초 기준선이 이어졌다. 인간 인자 Bb (콤프테크) 또는 시노몰구스 원숭이 인자 Bb (사내 정제됨)에 대한 회합을 300초 동안 측정한 후, 300초 해리를 측정하였다. 1:1 결합 모델을 사용하는 옥테트 분석 소프트웨어에 의해 동역학 파라미터를 계산하였다. 데이터가 표 13에 요약되며, 이는 인간화가 시노몰구스 원숭이로부터의 인자 Bb에 대한 교차-반응성에 영향을 미치지 않았다는 것을 보여준다.
표 13. BLI에 의한 인간 및 시노몰구스 Bb에 대한 인간화 변이체의 결합.
Figure pct00017
인간 및 시노몰구스 원숭이 인자 Bb에 대한 VH4/VK6-IgG4v2 및 VH6/VK7-IgG4v2의 결합
항체의 Fc 부분의 변형이 친화도 및 종 교차-반응성에 영향을 미쳤는지 여부를 결정하기 위해, VH4/VK6-IgG4v2 및 VH6/VK7-IgG4v2를 각각 그의 모 항체인 VH4/VK6 및 VH6/VK7과 함께 BLI에 의해 인간 및 시노몰구스 원숭이 인자 Bb에 결합하는 그의 능력에 대해 시험하였다. VH4/VK6-IgG4v2 및 VH6/VK7-IgG4v2는 Fc 수용체에 대한 친화도를 증가시키는 Fc 영역 내의 돌연변이를 함유한다. 실험을 상기 실시예에 기재된 바와 같이 수행하였으며, 결과가 표 14에 요약된다. 예상된 바와 같이, Fc의 변형은 결합에 영향을 미치지 않았다.
표 14. BLI에 의한 인간 및 시노몰구스 인자 Bb에 대한 인간화 항-인자 Bb 항체의 결합.
Figure pct00018
인자 Bb (인자 B의 활성화 형태)에 대한 VH4/VK6 및 VH6/VK7의 특이성
인간 및 시노몰구스 원숭이 둘 다로부터의 지모겐 인자 B 및 인자 Bb에 결합하는 VH4/VK6 및 VH6/VK7의 능력을 비아코어 T200을 사용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정하였다. 인간 인자 B 및 인자 Bb를 콤프테크로부터 구입하고, 시노몰구스 원숭이 인자 B 및 인자 Bb를 사내 정제하였다. 간략하게, 모노클로날 항체를 HBSP+ (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 0.05% P20 pH 7.4) 중 비아코어 시리즈 S 단백질 A 칩 상에서 30 μL/분의 유량으로 포획하였다. 5-포인트 농도 시리즈의 각각의 분석물을 농도당 180초의 접촉 시간, 이어서 25℃ 및 60 μL/초의 유량에서 600초 해리로 단일 사이클 동역학을 사용하여 결합에 대해 시험하였다. 인간 및 시노몰구스 원숭이 인자 B 둘 다를 500 nM의 농도에서 시작한 후 2배 희석하였고, 한편 인간 및 시노몰구스 원숭이 인자 Bb를 각각 30 nM 및 150 nM의 농도에서 시작한 후 2배 희석하였다. 1:1 결합 모델을 사용하는 비아코어 평가 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다. 센소그램이 도 7a-7d에 제시된다. 결과가 표 15에 요약된다. 간략하게, 인간화 변이체 둘 다는 시노몰구스 원숭이 인자 Bb와 비교하여 인간 인자 Bb에 대해 대략 10배 더 높은 친화도를 나타낸다. 인간 또는 시노몰구스 원숭이 인자 B에 대한 결합은 거의 검출가능하지 않았고, 관찰된 작은 신호는 비-특이적 결합이 지배하였다.
표 15. 인간 또는 시노몰구스 원숭이 인자 Bb에 대한 리드 인간화 변이체의 특이성
Figure pct00019
다양한 보체 단백질에 대한 키메라 모 항체 및 대표적인 인간화 변이체의 결합
인간화가 다른 보체 또는 혈장 단백질에 비-특이적 결합 또는 교차-반응성을 도입하지 않았다는 것을 보장하기 위해, 키메라 모 항체 및 대표적인 인간화 변이체 VH6/VK7-IgG4v2를 aC1s (콤프테크 A104), C1r (콤프테크 A102), C2 (콤프테크 A112), C2a (C2로부터 제조됨), 트롬빈 (EMD 밀리포어(EMD Millipore) 605195), 엘라스타제 (EMD 밀리포어 324682), 인자 D (콤페테크 A136) 및 인자 Bb (콤프테크 A155)에의 결합에 대해 시험하였다. 간략하게, 보체 및 혈장 단백질을 4℃에서 밤새 PBS 중 2.5 μg/mL로 ELISA 플레이트 상에 코팅하였다. 이어서, 플레이트를 실온에서 1시간 동안 카세인으로 차단하고, 1X DPBS/0.05% 트윈-20으로 4회 세척하고, 이어서 1X DPBS로 단일 세척하였다. PBS/0.1% 카세인/0.1% 트윈-20 중 50 μg/ml의 비오티닐화 키메라 모 항체 또는 VH6/VK7-IgG4v2에서 시작하는 일련의 희석물을 플레이트에 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 기재된 바와 같이 세척하고, PBS/0.1% 카세인/0.1% 트윈-20 중 스트렙타비딘-HRP (서던 바이오테크(Southern Biotech) 7100-05)의 1:10,000 희석물을 플레이트에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 다시 세척하고, 울트라 TMP ELISA (써모 34028)를 플레이트에 1분 동안 첨가한 후, 정지 용액을 첨가하였다. OD 450 nm를 플레이트 판독기에서 판독하고, 620 nm에서의 배경을 차감하였다. 키메라 모 항체 (도 8a) 및 인간화 변이체 (도 8b) 둘 다는 인자 Bb에 대한 완전한 특이성을 나타낸다.
실시예 3: CHO 대 HEK로부터 생산된 VH6/VK7-IgG4v2는 동일하게 거동한다
HEK 세포에서 생산된 VH6/VK7-IgG4v2가 CHO 세포에서 생산된 경우에 동일하게 거동하였는지 여부를 결정하기 위해, 표준 방법을 사용하여 HEK 세포에서의 일시적 발현 또는 CHO 세포에서의 안정한 발현에 의해 VH6/VK7-IgG4v2를 생성하였다.
항체의 보체 대체 경로 (CAP) 및 전형적 경로 (CCP) 활성을 각각 보체계 대체 경로 및 전형적 경로 위스랩® 키트를 사용하여 제조업체의 지침에 따라 결정하였다. CAP 활성을 결정하기 위해, 항체를 5.56% 정상 인간 혈청 (도 9a) 및 5.56% 정상 시노몰구스 원숭이 혈청 (도 9b)에서 시험하였다. CCP 활성을 결정하기 위해, 항체를 1% 정상 인간 혈청 (도 10a) 및 1% 정상 시노몰구스 원숭이 혈청 (도 10b)에서 시험하였다. OD405nm를 측정하고, 결과를 항체 주사 전 혈청 활성에 대해 정규화하였다. CHO 및 HEK에서 생산된 VH6/VK7-IgG4v2는 유사한 활성을 나타냈다. 두 항체 세트에 대한 IC50 값을 계산하였으며, 이는 도 10a-10b에 제시된다. CHO에서 생산된 VH6/VK7-IgG4v2는 HEK에서 생산된 VH6/VK7-IgG4v2와 유사한 효력을 나타냈다. CHO 및 HEK에서 생산된 VH6/VK7-IgG4v2의 AP 경로-매개 용혈을 또한 비교하였다. 전형적 경로를 억제하기 위한 EGTA를 함유하는 완충제 중 20% 정상 인간 혈청 및 토끼 적혈구를 사용하여 용혈을 결정하였다. 상청액의 흡광도를 측정하고, 에틸렌 디아민 테트라아세트산 (EDTA)을 함유하는 대조군 웰에서의 배경 흡광도를 차감함으로써 용해의 양을 결정하였다. CHO 및 HEK에서 생산된 VH6/VK7-IgG4v2는 유사한 % 용혈을 나타냈다 (도 11).
CHO 및 HEK-생산된 VH6/VK7-IgG4v2 항체에 대해 생물층 간섭측정법을 사용하여 다중사이클 동역학 분석을 수행하였다. 항체를 PBS+ 0.02% 중에 10 μg/mL로 희석하였다. 트윈20, 0.1% BSA, 0.05% 아지드화나트륨을 항-hIgG Fc 센서 (동일한 완충제 중에서 사전-평형화됨) 상에 90초 동안 로딩한 후, 완충제 중 60분 기준선이 이어졌다. 2배 희석으로 100 nM에서 0.14 nM까지 범위의 농도 시리즈의 인간 인자 Bb (컴플리먼트 테크놀로지스(Complement Technologies), #A155)의 결합을 동일한 완충제 중 300초 회합에 이어서 300초 해리 단계에서 측정하였다. 항체 둘 다에 대한 결합 곡선 및 피팅된 데이터, 뿐만 아니라 계산된 Kd가 도 12에 제시된다.
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국제 공개 번호 WO 02/060919
국제 공개 번호 WO 98/23289
국제 공개 번호 WO 97/34631
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관련 기술분야의 통상의 기술자는 상용 실험만을 사용하여 본원에 기재된 실시양태의 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 본 개시내용의 범주는 상기 설명에 제한되는 것으로 의도되지 않으며, 오히려 첨부된 청구범위에 제시된 바와 같다.
단수 형태는 달리 나타내지 않는 한 또는 달리 문맥으로부터 명백하지 않는 한 적어도 하나 또는 하나 초과를 의미할 수 있다. 군의 2개 이상의 구성원 사이에 "또는"을 포함하는 청구항 또는 설명은 달리 나타내지 않는 한 또는 달리 문맥으로부터 명백하지 않는 한, 군 구성원 중 1개, 1개 초과 또는 모두가 존재하는 경우에 충족된 것으로 간주된다. 2개 이상의 군 구성원 사이에 "또는"을 포함하는 군의 개시내용은 군의 정확하게 1개의 구성원이 존재하는 실시양태, 군의 1개 초과의 구성원이 존재하는 실시양태 및 군 구성원 모두가 존재하는 실시양태를 제공한다. 간결성의 목적으로 이들 실시양태는 본원에 개별적으로 설명되지 않았지만, 이들 실시양태 각각은 본원에 제공되고, 구체적으로 청구되거나 비청구될 수 있는 것으로 이해될 것이다.
본 개시내용은 청구항 중 적어도 하나 또는 설명의 적어도 하나의 관련 부분으로부터의 적어도 하나의 제한, 요소, 절 또는 서술적 용어가 또 다른 청구항에 도입되는 모든 변형, 조합 및 순열을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 또 다른 청구항에 종속항인 청구항은 동일한 기본 청구항에 종속항인 임의의 다른 청구항에서 발견되는 제한 중 적어도 하나를 포함하도록 변형될 수 있다. 추가로, 청구항이 조성물을 인용하는 경우에, 달리 나타내지 않는 한 또는 모순 또는 불일치가 발생할 것임이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백하지 않는 한, 본원에 개시된 제조 또는 사용 방법 중 임의의 것에 따라 또는 존재하는 경우 관련 기술분야에 공지된 방법에 따라 조성물을 제조 또는 사용하는 방법이 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
요소가 목록으로서, 예를 들어 마쿠쉬 군 포맷으로 제시되는 경우에, 요소의 모든 가능한 하위군이 또한 개시되고, 임의의 요소 또는 요소의 하위군이 군으로부터 제거될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 용어 "포함하는"은 개방적인 것으로 의도되며, 추가의 요소 또는 단계의 포함을 허용한다는 것을 주목한다. 일반적으로, 실시양태, 생성물 또는 방법이 특정한 요소, 특색 또는 단계를 포함하는 것으로 언급되는 경우에, 이러한 요소, 특색 또는 단계로 이루어지거나 또는 본질적으로 이루어진 실시양태, 생성물 또는 방법이 또한 제공되는 것으로 이해되어야 한다. 간결성의 목적으로 이들 실시양태는 본원에 개별적으로 설명되지 않았지만, 이들 실시양태 각각은 본원에 제공되고, 구체적으로 청구되거나 비청구될 수 있는 것으로 이해될 것이다.
청구범위 뿐만 아니라 상기 명세서에서, 모든 연결 어구, 예컨대 "포함하는", "포함한", "보유하는", "갖는", "함유하는", "수반하는", "보유한", "로 구성된"은 개방형인 것으로, 즉 포함하나 이에 제한되지는 않는 것을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 단지 연결 어구 "로 이루어진" 및 "로 본질적으로 이루어진"은 각각 미국 특허청 특허 심사 절차 매뉴얼, 섹션 2111. 03에 제시된 바와 같이 폐쇄형 또는 반-폐쇄형 연결 어구일 것이다.
범위가 주어지는 경우에, 종점이 포함된다. 추가로, 달리 나타내지 않는 한 또는 달리 문맥 및/또는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 이해로부터 명백하지 않는 한, 범위로서 표현된 값은 일부 실시양태에서 언급된 범위 내의 임의의 구체적 값을, 달리 문맥이 명확하게 지시하지 않는 한, 범위의 하한치 단위의 1/10까지 가정할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 간결성의 목적으로, 각각의 범위 내의 값은 본원에 개별적으로 설명되지 않았지만, 이들 값 각각은 본원에 제공되고, 구체적으로 청구되거나 비청구될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 또한, 달리 나타내지 않는 한 또는 달리 문맥 및/또는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 이해로부터 명백하지 않는 한, 범위로서 표현된 값은 주어진 범위 내의 임의의 하위범위를 가정할 수 있으며, 여기서 하위범위의 종점은 범위의 하한치의 단위의 1/10과 동일한 정도의 정확도로 표현되는 것으로 이해되어야 한다.
웹 사이트가 제공되는 경우, URL 주소는 브라우저가 실행되지 않는 코드로서 제공되며, 각각의 웹 주소의 기간은 괄호 안에 표시된다. 실제 웹 주소는 이러한 괄호를 함유하지 않는다.
추가로, 본 개시내용의 임의의 특정한 실시양태는 청구항 중 임의의 적어도 하나로부터 명백하게 배제될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 범위가 주어지는 경우에, 범위 내의 임의의 값은 청구항 중 임의의 적어도 하나로부터 명백하게 배제될 수 있다. 본 개시내용의 조성물 및/또는 방법의 임의의 실시양태, 요소, 특색, 적용 또는 측면은 임의의 적어도 하나의 청구항으로부터 배제될 수 있다. 간결성의 목적으로, 적어도 하나의 요소, 특색, 목적 또는 측면이 배제된 모든 실시양태가 본원에 명백하게 제시되지는 않는다.
수치 앞의 용어 "약" 및 "실질적으로"는 언급된 수치의 ±10%를 의미한다.
SEQUENCE LISTING <110> GENZYME CORPORATION <120> HUMANIZED ANTI-COMPLEMENT FACTOR BB ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> B1553.70014WO00 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 63/012,590 <151> 2020-04-20 <160> 66 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Asn Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Thr Ile Ser Asn Arg Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Glu Arg Pro Met Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 His Gln His Ser Ser Asn Pro Leu Thr 1 5 <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Ile Ser Asn Arg Gly Ser 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cctatggact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cctca 345 <210> 43 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 43 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatgcca tgtcttgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaacc attagtaatc gtggtagtta cacctactac 180 gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctttgt attactgtgc gagagagagg 300 cctatggact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cctca 345 <210> 44 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 44 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatgcca tgtcttgggt ccgccaggct 120 ccagggaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtaatc gtggtagtta cacctactac 180 ccagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga gcagcctgag atctgaggac acggctttgt attactgtgc gagagagagg 300 cctatggact actggggcca aggaacctca gtcaccgtct cctca 345 <210> 45 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 45 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatgcca tgtcttgggt ccgccagact 120 ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtaatc gtggtagtta cacctactac 180 ccagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga gcagcctgag atctgaggac acggctttgt attactgtgc gagagagagg 300 cctatggact actggggcca aggaacctca gtcaccgtct cctca 345 <210> 46 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 46 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatgcca tgtcttgggt ccgccaggct 120 ccagggaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtaatc gtggtagtta cacctactac 180 ccagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctttgt attactgtgc gagagagagg 300 cctatggact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cctca 345 <210> 47 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 47 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatgcca tgtcttgggt ccgccagact 120 ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtaatc gtggtagtta cacctactac 180 ccagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctttgt attactgtgc gagagagagg 300 cctatggact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cctca 345 <210> 48 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 48 gacatcgtga tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca ggatgtgggt actgctgtag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggcaacctc ctaagctcct gatctattgg gcatccactc ggcacactgg ggtcccagat 180 aggttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca caatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtcaccaa catagcagca atcctctcac gtttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 49 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 49 gacatcgtga tgacccagtc tccatccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca ggatgtgggt actgctgtag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggcaacctc ctaagctcct gatctattgg gcatccactc ggcacactgg ggtcccagat 180 aggttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca caatcagcag cctgcaggct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtcaccaa catagcagca atcctctcac gtttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 50 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 50 gacatccaga tgacccagtc tccatccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca ggatgtgggt actgctgtag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggcaacctc ctaagctcct gatctattgg gcatccactc ggcacactgg ggtcccagat 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca caatcagcag cctgcaggct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtcaccaa catagcagca atcctctcac gtttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 51 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 51 gacatccaga tgacccagtc tccatccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca ggatgtgggt actgctgtag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggcaacctc ctaagctcct gatctattgg gcatccactc ggcacactgg ggtcccagat 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca caatcagcag cctgcaggct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcaccaa catagcagca atcctctcac gtttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 52 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 52 gacatccaga tgacccagtc tccatccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca ggatgtgggt actgctgtag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggcaacctc ctaagctcct gatctattgg gcatccactc ggcacactgg ggtcccagat 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca caatcagcag cctgcaggct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaccaa catagcagca atcctctcac gtttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 53 <211> 322 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 53 gacatcgtga tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca ggatgtgggt actgctgtag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctattgg gcatccactc ggcacactgg ggtcccagat 180 aggttcacag gcagtggatc atgggacaga tttcactctc acaatcagca gcctgcagtc 240 tgaagatttt gcagtttatt tctgtcacca acatagcagc aatcctctca cgtttggcca 300 ggggaccaag ctggagatca aa 322 <210> 54 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 54 gacatccaga tgacccagtc tccatccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca ggatgtgggt actgctgtag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctattgg gcatccactc ggcacactgg ggtcccagat 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca caatcagcag cctgcaggct 240 gaagattttg cagtttattt ctgtcaccaa catagcagca atcctctcac gtttggccag 300 gggaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 55 Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala 1 5 <210> 56 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 56 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 57 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 57 Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 1 5 10 <210> 58 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 58 His His His His His 1 5 <210> 59 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 59 His His His His His His 1 5 <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 60 Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 1 5 10 <210> 61 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 61 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 62 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 62 Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys 1 5 <210> 63 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 63 Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala 1 5 <210> 64 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 64 Phe His His Thr 1 <210> 65 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 65 Trp Glu Ala Ala Ala Arg Glu Ala Cys Cys Arg Glu Cys Cys Ala Arg 1 5 10 15 Ala <210> 66 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 66 Arg Tyr Ile Arg Ser 1 5

Claims (33)

  1. 인간 보체 인자 Bb 단백질에 특이적으로 결합하고, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는 인간화 항체.
  2. 인간 보체 인자 Bb 단백질에 특이적으로 결합하고, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하는 인간화 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 인간 보체 인자 Bb 단백질에 10-6 내지 10-9 M의 친화도로 특이적으로 결합하는 인간화 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 보체 경로 활성을 억제하는 인간화 항체.
  5. 제4항에 있어서, 보체 활성이 AP-매개 말단 막 공격 복합체 (MAC) 침착, AP-매개 용혈, 적혈구 또는 다른 세포 유형 상의 C3 단편 침착, C3의 C3b/Bb-매개 절단 및 C5의 C3bBb3b-매개 절단으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 인간화 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 이중특이적 항체 또는 다중특이적 항체인 인간화 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 단량체, Fab 단편, F(ab')2 단편, scFv, scAb 및 Fv로 이루어진 군으로부터 선택되는 인간화 항체.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 이소형 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 중쇄 불변 영역을 포함하는 인간화 항체.
  9. 제8항에 있어서, IgG4 불변 영역 또는 그의 변이체를 포함하는 인간화 항체.
  10. 제9항에 있어서, 중쇄 불변 영역이 서열식별번호: 28-30 중 어느 하나에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 인간화 항체.
  11. 제1항 및 제3항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 서열식별번호: 32-34 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항체.
  12. 제2항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 서열식별번호: 36-38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 인간화 항체를 포함하는 접합체.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 인간화 항체 또는 제13항의 접합체를 포함하는 제약 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  16. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 인간화 항체, 제13항의 접합체 또는 제14항 또는 제15항의 제약 조성물을 포함하는 장치.
  17. 제16항에 있어서, 주사가능한 장치인 장치.
  18. 제17항에 있어서, 주사가능한 장치가 시린지, 펜 또는 전자 주사 장치 (e-장치)인 장치.
  19. 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 인간화 항체, 제14항의 접합체 또는 제15항 또는 제16항의 제약 조성물을 투여하여 보체-매개 질환을 치료하는 것을 포함하는, 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 보체-매개 질환이 IgA 신병증 (베르게르병), 비정형 용혈성 요독성 증후군 (aHUS), 발작성 야간 혈색소뇨 (PNH), 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 루푸스 신염, ANCA 혈관염, 막성 신병증, C3 사구체신염 (C3GN), 초점성 분절성 사구체경화증 (FSGS), 다발성 경화증, 황반 변성, 연령-관련 황반 변성 (AMD), 류마티스 관절염, 항인지질 항체 증후군, 천식, 허혈-재관류 손상, 제II형 막증식성 GN, 자발적 태아 손실, 소수-면역 혈관염, 수포성 표피박리증, 재발성 태아 손실 및 외상성 뇌 손상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  21. 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 인간화 항체, 제14항의 접합체 또는 제15항 또는 제16항의 제약 조성물을 투여하여 보체 활성을 억제하는 것을 포함하는, 대상체에서 보체 경로 활성을 억제하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 대상체가 보체-매개 질환 또는 장애를 갖는 것인 방법.
  23. 제22항에 있어서, 보체-매개 질환이 IgA 신병증 (베르게르병), 비정형 용혈성 요독성 증후군 (aHUS), 발작성 야간 혈색소뇨 (PNH), 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 루푸스 신염, ANCA 혈관염, 막성 신병증, C3 사구체신염 (C3GN), 초점성 분절성 사구체경화증 (FSGS), 다발성 경화증, 황반 변성, 연령-관련 황반 변성 (AMD), 류마티스 관절염, 항인지질 항체 증후군, 천식, 허혈-재관류 손상, 제II형 막증식성 GN, 자발적 태아 손실, 소수-면역 혈관염, 수포성 표피박리증, 재발성 태아 손실 및 외상성 뇌 손상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 보체 활성이 AP-매개 말단 막 공격 복합체 (MAC) 침착, AP-매개 용혈, 적혈구 또는 다른 세포 유형 상의 C3 단편 침착, C3의 C3b/Bb-매개 절단 및 C5의 C3bBb3b-매개 절단으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  25. 제19항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  26. 제19항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 정맥내, 피하 또는 근육내인 방법.
  27. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 인간화 항체를 코딩하거나 또는 집합적으로 코딩하는 핵산 또는 핵산 세트.
  28. 제27항의 핵산 또는 핵산 세트를 포함하는 벡터 또는 벡터 세트.
  29. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 인간화 항체, 제27항의 핵산 또는 핵산 세트 또는 제28항의 벡터 또는 벡터 세트를 발현하는 세포.
  30. 제29항에 있어서, 포유동물 세포인 세포.
  31. 제30항에 있어서, 포유동물 세포가 인간 배아 신장 (HEK) 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, NS0 골수종 세포, SP2 세포, COS 세포 및 유방 상피 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 세포.
  32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항의 세포를 배양하여 인간화 항체를 생산하는 것을 포함하는, 인간화 항체를 생산하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 인간화 항체를 단리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
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