KR20230004648A

KR20230004648A - 모낭-연관 병태를 치료하기 위한 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20230004648A
Application number: KR1020227040006A
Authority: KR
Inventors: 예페 크리스티안 모우릿센; 리케 뇌레가아드-사룹; 페터 라벡 외스터가아드
Original assignee: 헨레즈 에이피에스
Priority date: 2020-04-15
Filing date: 2021-04-15
Publication date: 2023-01-06
Also published as: BR112022020900A2; US20230240966A1; AU2021257618A1; EP4135755A1; CA3180191A1; JP2023522068A; IL297330A; WO2021209548A1; MX2022012960A; CN115803048A

Abstract

각질형성세포에 의해 지원되어 생물학적 장벽, 기능 및 구조를 유지하는 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 기능과 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소를 포함하는 조성물이 개시된다. 이 조성물은 모낭성 피부병 및 모낭-연관 병태, 예컨대 조모증 및 화농성 한선염을 치료하는데 유용하다. 조성물은 또한 피부로부터 모발을 느슨하게 하는 데 사용될 수 있으며, 이에 따라 인체로부터 원하지 않는 모발을 제거하는 데 사용될 수 있다.

Description

모낭-연관 병태를 치료하기 위한 조성물 및 방법

본 발명은 전자 형식으로 제공된 출원 목록을 포함하고, 이 목록의 내용은 참조로 포함된다.

발명의 분야

본 발명은 모낭-관련 병태를 치료하기 위한 조성물에 관한 것이다. 조성물은각질화에 의한 조직 생성 과정 동안, 각질형성세포(keratinocytes)에 의해 생성된 케라틴-관련 단백질 또는 케라틴 단백질과 같은 주요 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 적어도 하나의 효소를 포함한다. 각질화는 각질형성세포로 하여금 피부층을 함께 고정할 수 있게 하고 모낭의 모발(번역자 주: 본원에서 모발(毛髮)이라 함은 머리털 뿐만 아니라 몸에 난 털을 모두 아우르는 광의의 의미로 함)과 같은 기능적 부속기(appendages)를 보장한다. 병리학적 과각화증 동안 상기 케라틴의 과잉 생산은 모낭-연관 피부병 또는 모낭성 피부병을 일으키는 모낭 폐색-의존 증후군으로 이어질 수 있다. 본 발명은 모근 조직의 파괴를 촉진하고, 동일한 개체의 모낭으로부터 미처리 모발을 제거할 때 보다 훨씬 적은 힘으로 모간(hair shafts) 전체의 제거를 용이하게 해주고, 과각화증, 모간 이상, 폐색 및 피부병 발생을 피할 수 있도록 모낭에서 모근 파괴를 용이하게 하기 위해, 효소 촉매에 의해 모발 고정 케라틴과 같은 모낭 단백질의 가수분해를 가능케 하는 조성물에 관한다.

본 발명은 또한 모낭-연관 병태 및 모낭성 피부병 예컨대 조모증(Hirsutism), 다모증(Hypertrichosis), 또는 수발 가성모낭염(가성모낭염 barbae); 또는 심상성 여드름, 모공각화증, 다울링-데고스병, 헤일리-헤일리병, 유방 누공; 또는 응괴성 여드름(acne conglobata), 모소동(Pilonidal sinus disease), 두피의 해부 봉와직염(Dissecting cellulitis of the scalp) 및 화농성 한선염(Hidradenitis suppurativa)을 포함하는 모낭 페색 테트라드 증후군(follicular occlusion tetrad syndromes)의 치료, 개재 또는 예방; 또는 인체의 피부로부터 원치 않는 털의 미적 및 미용적 제거를 위해한 조성물의 사용에 관한 것이다.

배경

인간의 피부는 환경에 대한 보호 및 조절 생물학적 장벽으로서 항상성과 건강에 필수적이다. 여기에는 손톱, 땀샘 및 모낭을 포함하여 여러 가지 부속기가 있다. 피부의 구조, 기능 및 무결성(integrity)은 소수성 지질과 각질화 단백질 모두에 의존한다. 각질화는 단백질 케라틴과 케라틴-관련 단백질의 하위 집합이 공유 및 비공유 상호작용에 의해 쌍을 이루고 가교되어 필라멘트와 저항성 조직의 구조적 네트워크를 형성하는 과정이다. 각질층은 주로 케라틴으로 채워진 상호 연결된 죽은 각질 세포로 구성된 피부의 가장 바깥쪽 죽은 층이며 외부 분자의 침투에 대한 주요 장벽이다. 이것은 내인성 프로테아제 및 억제제에 의해 조절되는 박리 수준에 의해 조절된다. 그 아래에는 시간이 지남에 따라 각질층 세포로 분화되어 각질화되는 많은 증식성 각질형성세포로 구성된 보다 활동적인 표피가 존재한다. 일부 안정적인 각질형성세포는 K1, K2, K5 및 K14와 같은 케라틴을 구성적으로 발현한다. 다른 것들은 외부 스트레스나 질병에 대한 반응으로 K17, K16 및 케라틴 6 패밀리(https://doi.org/10.5772/intechopen.79050)와 같은 케라틴을 특징적으로 발현하는 과증식 각질형성세포이다.

모낭에서 모간은 내부 뿌리초(IRS: inner root sheath)와 외부 뿌리초(ORS: outer root sheath)에 의해 형성되고 고정되어 모발(번역자 주: 본원에서 모발(毛髮; hair)이라 함은 머리카락 뿐만 아니라 몸에 난 털을 모두 아우르는 광의의 의미로 의도됨)이 진피 유두에서 자랄 수 있도록 한다. 따라서 건강한 모발 성장은 뿌리초 및 그의 각질형성세포에 달려 있다. IRS는 Henle, Huxley 및 큐티클층(CL)의 별개의 하위 층으로 구성되어 있으며 함께 모간을 둘러싸고 있다. IRS는 진피 유두에서 협부로 상방으로 표피 각질화에 의해 점차적으로 각질화되며, 협부에서 박리되어 모낭과 피부를 통해 맨모간이 쉽게 빠져나가게 해준다. 건강한 모발 성장은 IRS와 ORS 간의 양방향 세포 신호에 의해 조율된다. IRS는 주로 표피 각질화를 겪는 반면, ORS는 협부 바로 위의 누두부로부터 삼차 각질화에 의해 각질화된다. 장벽 기능과 무결성에서 각질화의 중심 역할로 인해 피부와 피부 부속기의 많은 심각한 피부병은 조절되지 않은 각질화로 인해 발생한다.

모낭 폐색은 과각화증 및 ORS 각질형성세포 단백질, 예를 들어 케라틴의 조절되지 않은 각질화로부터 발생한다는 것이 당업자에 의해 인식될 수 있다. 상기 각화이상증 부위에 도달하는 가수분해 효소에 의해 분화의 임의의 단계에서 ORS 조직을 파괴하면, 그렇지 않으면 발생할 상기 피부병의 부담과 관련된 주요 피부 병리의 발달을 피할 수 있다. 국소 효소에 대한 주요 병태생리학적 작용 부위는 ORS 이상각화증에 의해 유발되는 대부분의 모낭성 피부병에서 누두부(infundibulum)일 것이다. 대부분의 모낭-연관 병태가 발생하는 말단 모낭의 누두부는 평균 깊이가 500-660 μm이다(https://doi.org/10.1007/s00441-014-1999-1).

약물 및 화장품 개발에 있어서 광범위하게 적용된 인간 피부 및 모낭 모델 중 하나는 그의 인간과 유사한 생리학으로 인해 당업자에 있어 돼지 귀이다. 과각화증의 접근 가능한 생체내 모델은 피부 상태의 개별 요소를 별도로 연구할 수 있는 마우스이다. 마지막으로, 환자를 포함한 인간 대상체의 피부 생검은 피부 병태와 피부병이 주로 피부에 국한되기 때문에 가장 가치 있고 현실적인 조직 모델을 제공한다.

모낭은 일반적으로 모든 비점막 피부에 분포하지만 그 유형과 모양은 연령, 성별 및 호르몬 신호를 비롯한 여러 요인에 따라 다르다. 예를 들어, 성숙한 인간 남성은 얼굴, 목, 사지, 몸통, 등, 엉덩이, 사타구니와 같은 신체의 여러 부위에 주로 거칠고 색소 침착된 모발 성장이 있다는 것이 잘 알려져 있는데, 여성은 일반적으로 사춘기 이후에도 이들 부위에서 이러한 유형의 모발이 덜 분포하는 것으로 알려져 있다. 원치 않는 모발의 제거는 현재 전 세계 인구의 많은 부분이 물리적 및 화학적 방법을 사용하여 수행하고 있다. 물리적 장치를 사용하면 면도, 레이저 치료, 뽑기/제모 또는 왁싱의 형태로 제모가 가능한다. 모간을 용해하여 제모하는 것은 일반적으로 티오글리콜레이트와 높은 알칼리성 pH를 포함하는 강한 화학물질을 사용하여 수행되지만, 이는 의도한 대로 전체 모발과 모근을 제거하지 못할 뿐만 아니라, 지속 기간이 짧다는 단점에 더해, 반응성이 높아 심각한 피부 자극을 유발할 수 있는 단점이 있다. 면도는 또한 피부에 눈에 보이는 작은 털을 남기고 일상적으로 피부 자극을 일으키며 피부가 베일 위험이 있다. 기계적 수단을 사용하여 뿌리를 뽑는 제모는 고통스럽고 불편하며 다시 제거해야 하는 특정 길이의 새로운 모발에 의존한다. 레이저는 모발 성장을 억제하기 위해 모낭을 비가역적으로 손상시키기 위해 적용되지만, 이 방법은 전문의에 의한 여러 차례의 고가의 치료가 필요하고 고통스러운 데다가 화상과 흉터를 남길 수 있다. 치료된 환자의 50%만이 이 제모 방법에 유익하게 반응하는데, 이는 그 효과가 멜라닌 함량에 직접적으로 의존하기 때문에 모든 모발 색상, 피부 영역, 피부색 또는 피부 유형에 적용되지 못하기 때문이다.

다양한 병태와 질병이 기능장애 각질화 예컨대 과도하거나 병리학적인 모발 성장, 과각화증 및 예컨대 조모증, 다모증 또는 수발 가성모낭염과 같은 모낭과 피부의 폐색; 또는 모낭 과각화증 또는 모낭 폐쇄에 의해 유발되어 심상성 여드름, 모낭 각화증, 다울링-데고스병, 헤일리-헤일리 질환, 유방 누공 또는 응괴성 여드름, 모소동, 두피의 해부 봉와직염 및 화농성 한선염을 포함하는 소포 폐색 테트라드 증후군(follicular occlusion tetrad syndromes)과 연관되어 있다.

남성과 여성 모두 전 세계적으로 조모증으로 고통 받고 있다. 여성의 약 5-15%가 다양한 정도의 조모증으로 고통받는 것으로 추정된다. 이것은 윗입술과 얼굴, 가슴, 등, 팔, 다리, 사타구니, 엉덩이와 같은 신체의 특이한 부분에 거칠고 착색된 남성형 모발 성장이 특징이다. 조모증 환자에서 증상은 모낭을 자극하는 과도한 남성 안드로겐 호르몬 신호로 인해 발생한다. 미국에서만 약 400,000명의 여성이 심각한 임상적 조모증을 앓고 있다. 자가 보고서는 정상적인 웰빙을 위해는 일상적인 제모가 필요하다는 것을 보여주므로, 이는 충족되지 않은 의료적 필요성이 크다는 것을 입증하는 것이다.

전 세계 인구의 1%가 화농성 한선염을 앓고 있다. 이것은 복합적이고 심각한 동반 질환 및 매우 낮은 삶의 질과 관련된 만성, 진행성 및 재발성 모낭 질환이다. 화농성 한선염 및 여러 관련 병태에서 질병을 유발하는 특징적인 사건은 모낭 내 모낭의 각화과다증으로, 모낭 폐색을 초래한다. 화농성 한선염에서 folllicular 폐색은 folllicular 파열로 이어져 가교된 케라틴 응집체가 진피로 누출되어 강한 염증 반응을 유도하여 심부, 화농성 및 고통스러운 낭성 병변을 유발한다. 이러한 병변은 일반적으로 겨드랑이, 엉덩이, 사타구니, 피부가 접히는 부분 예컨대 여성에서 살이 많이 찐 부분 및 유방 아래에 보이는 피부 주름에 주로 위치한다. 환자의 4분의 3이 여성이다. 환자는 일반적으로 신체적, 정신적 흉터와 장애의 평생 예후와 함께 사춘기에 데뷔한다. 질병 중증도 단계는 경증(Hurley 단계 1), 중등도(Hurley 단계 2) 및 중증(Hurley 단계 3)으로 특징지어지며 환자 집단의 분포는 각각 68%, 28% 및 4%이다. 중등도에서 중증 환자에서 피부 낭종은 부비동 터널링 및 섬유화, 변형 및 비활성화 피부 흉터로 진행된다.

미국, 일본, 스페인, 이탈리아, 프랑스, 영국 및 독일에서 800,000명의 환자 또는 환자 인구의 약 10%만이 현재 다양한 수준의 질병 중증도에서 화농성한선염으로 진단 및 치료를 받고 있다. 진단된 환자와 진단되지 않은 환자 모두 매우 제한된 효과적인 치료 솔루션을 사용할 수 있고 치료 반응이 매우 개별적이기 때문에 충족되지 않은 의학적 요구가 많다. 의도하지 않게 다른 사람에게 질병을 알릴 수 있는 민감하고 노출된 피부를 치료하는 것은 환자에게 특히 어려운 일이며, 치료 결과가 좋지 않으면 환자에게 쉽게 신체적, 정신적 고통이 더 가중된다. 또한 민감한 피부로 인해 정기적인 제모가 매우 어렵다. 1선 치료법에는 전신 항생제와 호르몬의 조합이 포함되며, 항종양 괴사 인자 알파(TNFalpha) 생물학적 모노클로날 항체 약물인 Humira®는 2015년에 희귀 약물 트랙을 통해 미국 식품의약국(FDA)에 의해 중등도 내지 중증 질환에 대해 승인되었다. Humira®는 고가이고, 화농성 한선염에 대한 제한된 질병 조절 효과, 심각하고 심지어 생명을 위협하는 부작용 및 많은 금기의 위험으로 인해 사용이 크게 제한되고 있다. 서구 국가에서는 현재 유용한 치료 기회가 부족하여 환자의 46%가 질병 관리에 만족하지 못하고 43%는 질병이 삶의 질에 매우 부정적인 영향을 미친다고 보고하며 환자의 83%는 피부 수술을 받는 것으로 추산된다 (https://doi.org/10.1016/j.jaad.2019.06.1301). 따라서 더 나은 질병 통제를 허용하는 예방 요법 및 옵션이 요구되고 있다. 모발이 성장하는 동안 모낭 과각화증은 및 그의 폐색은 다양한 피부 상태의 중심 병목 현상이다. 따라서 질병 발달의 초기 단계에서 질병을 방해하는 것이 기존 치료법에 비해 훨씬 더 효과적일 것이다. 심상성 여드름 치료에도 사용되는 국소 각질용해 화학물질인 벤젠-1,3-디올은 화농성 한선염 환자에게 고용량으로 투여된 몇 가지 2상 임상 시험에서 독특하지만 불충분한 질병 조절 효과를 보였다. 국소용 벤조일 퍼옥사이드는 화농성 한선염을 완화하기 위한 한 가지 선택지로서 아직 임상 시험 조사 중이다.

레이저 제모는 현재 모낭 줄기 세포를 죽일 목적으로 임상 시험에서 연구되어 모낭 모발 성장과 각화과다증을 모두 방지한다. 그 첫 번째 결과는 화농성 한선염에 대해서는 예방 효과가 제한적임을 가리켰다. 또한, 이 치료법은 안전한 사용을 위해 값비싼 장비, 전문 지식 및 인증된 작업자가 필요하기 때문에 저개발 및 빈곤 국가의 많은 환자에게 접근할 수 없다. 아프고 염증이 있는 병변, 특히 얇고 접근하기 어렵고 민감한 피부를 가진 일반적으로 영향을 받는 친밀한 영역에서 영향을 받는 모든 신체 영역의 치료는 대부분의 경우 어렵다.

조모증과 같은 모발 병리 및 화농성 한선염 및 전술한 바와 같은 모낭-관련 피부 병태 등의 원치 않는 모발 성장을, 이에 책임이 있는 각질형성세포 및 모간을 둘러싸는 근초 단백질 케라틴과 같은 그의 이펙터 분자를 표적으로 하는 보다 나은 치료적 또는 화장용 요법으로 개재하기 위해, 효소-기반 요법은 (병의) 진행을 조기에, 안전하고, 온화하게, 사용자 친화적인 방식으로 예방 및 제어할 수 있는 큰 가능성을 지닌 새로운 중재적 치료 약물을 구성한다.

발명에 대한 간략한 설명

본 발명은 생물학적 장벽, 기능 및 구조를 유지하기 위해 각질형성세포에 의해 지원되는 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소를 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 여기서 상기 조성물은:

a. 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소에 더하여 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 성분을 포함하는, 의약 조성물; 또는

b. 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 세포 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소에 더하여 적어도 하나의 미용적으로 허용가능한 성분을 포함하는, 미용 조성물이다.

본 발명은 또한 예컨대: 효소가 내장된 용해성 미세바늘이 있는 의료용 패치; 또는 1차적인 최외곽 피부 장벽을 관통하여 작용 부위로의 효소 전달을 향상시키도록 설계된 견고한 미세바늘이 장착된 장치와 같은, 본 발명의 조성물을 포함하는 의료 장치에 관한 것이기도 하다. 본 발명은 추가로 모낭-연관 병태를 치료하기 위한, 본 발명의 조성물 또는 의료 장치의 용도에 관한 것이다. 이러한 용도는 조모증, 다모증, 또는 수발 가성모낭염과 같은 병태; 또는 모낭 과각화증에 의해 유도되는 피부 질환 또는 수발 가성모낭염과 같이 ORS, IRS 및 모간을 비롯한 모낭 모간에서의 각질화 이상에 의해 촉발되는 과도하거나 병리학적인 모발 성장의 기타 병태, 또는 모낭 과각화증 및 모낭 폐색에 의해 유도되는 피부 질환 예컨대 심상성 여드름, 모공각화증, 다울링-데고스병, 헤일리-헤일리병, 유방 누공 또는 동일한 조직이 질병 발생에 책임이 있는 응괴성 여드름, 모소동, 두피의 해부 봉와직염 및 화농성 한선염을 포함하는 모낭 폐색 테트라드 증후군과 같은 병태를 치료하기 위한 의학적 용도 있을 있고; 또는 인체에서 원하지 않는 모발을 제거하기 위한 미용 또는 화장용 용도일 수 있다.

본 발명은 또한 약제로서 사용하기 위해 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다.

도 1: 도 1은 피부에서 모발을 방출하는 효소를 동정하기 위한 스크리닝 분석을 나타낸다.
도 2: 도 2는 효소 조성물의 국소 적용 후 피부로부터의 모발 방출의 정량화를 나타낸다.
도 3: 도 3은 글루타밀 엔도펩티다제가 사람의 모발의 ORS 조직을 강력하게 파괴함을 보여준다.
도 4: 도 4는 글루타밀 엔도펩티다제가 ORS-유래 케라틴을 강력하고도 선택적으로 가수분해한다는 것을 보여준다.
도 5: 도 5는 글루타밀 엔도펩티다제가 건강한 인간 ORS 조직을 선택적으로 파괴한다는 것을 보여준다.
도 6: 도 6은 글루타밀 엔도펩티다제가 병변 부위의 화농성 한선염 피부에서 ORS 조직을 선택적으로 파괴함을 보여준다.
도 7: 도 7은 글루타밀 엔도펩티다제가 증강된 난포 효소(follicular enzyme) 전달을 촉진한다는 것을 보여준다.

발명의 상세한 설명

본 발명에 따르면, 모낭의 피부 병태와 같은 피부병은 인간의 피부 및 모낭과 같은 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소를 포함하는 조성물로 치료될 수 있다.

놀랍게도, 포유동물 피부로부터 모발을 방출할 수 있는 효소는 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 기능과 무결성을 지원하는 케라틴과 같은 I형 및 II형 각질형성세포 단백질의 가수분해를 선택적으로 그리고 강력하게 촉매함에 따라, 이 효소들이 인간 피부를 치료하고/치료하거나 모낭의 울혈을 감소시켜 피부병 및 미용 관점에서의 병태를 회피시키는데 이용될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 상기 효소는 케라틴과 같은 이들 단백질에 의해 유발되는 질병 발달을 예방 및/또는 감소 및/또는 제어하여 피부병과 그의 피부 발현 또는 기타 원치 않는 결과의 진행 및 재발을, 중대한 원치않는 손상 없이 억제함으로써, 피부 및 모낭을 비롯한 그의 부속기에서의 질병의 조기 완화를 야기할 수 있다.

효소

인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는, 기본적으로 케라틴으로 분류된 것들을 비롯하여 이러한 단백질의 가수분해를 촉매할 수 있는 능력을 갖는 효소이면 어느 것이든 무방하다. 피부병을 매개하고 모발을 둘러싸며 모발이 그의 모낭에서 자연적으로 성장하도록 촉진하는 인간 모낭 조직의 무결성을 지원하는 증식성 또는 과증식성 각질형성세포 케라틴은, 일반적으로 인간 모발 고정 조직에서 발견되며 여기에는 ORS 또는 IRS 또는 기타 특별히 정의된 피부의 기능적 조직 또는 부속기가 있는 장벽이 뚫린 피부, 이전에 예시된 상태 또는 질병 발달에 중요한 사람의 모발을 둘러싸고 있는 기능적 및 구조적 단백질 케라틴이 포함된다. 당업자는 주어진 효소가 케라틴으로 분류될 수 있는 증식성 또는 과증식성 각질형성세포 단백질로 구성된 조직을 파괴하는 능력이 있는지 여부를 실시예 1 내지 10 및 도 1-7에 개시된 실험 및 그 결과와 같은 간단한 일상 실험에 의해 결정할 수 있다. 본 발명의 목적 상 효소는 그 효소를 국소 도포한 후 털을 당길 때의 힘의 감소가, 음성 대조군과 효소 대조군에 비해 기질로서의 털이 난 돼지 피부에서 측정된 그의 활성이, 40% 초과, 좋기로는 50% 초과, 좋기로는 60% 초과, 좋기로는 70% 초과 및 가장 좋기로는 80% 초과이거나 또는 인간의 피부에서 모발을 제거할 때 식별할 수 있는 고통을 피하는데 충분히 높을 경우, 건강한 모낭의 ORS 조직을 파괴하는 능력을 갖는 것으로 간주된다.

좋기로는, 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는, 엔도펩티다제, 특히 글루타밀-특이적 프로테아제, 즉 글루타밀 잔기에 인접한 펩타이드 결합을 절단하는 높은 특이성을 갖는 프로테아제를 포함하는 프로테아제 중에서 선택되며; 더욱 좋기로는 하나 이상의 효소는, 단백질 기질 및 케라틴에서 글루타메이트 아미노산에 대한 선택성으로 인해 진피에 대한 상당한 부수적 손상을 피할 수 있는 글루타밀 엔도펩티다제 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 이러한 효소의 예는 스트렙톰세스 그리세우스(Streptomces griseus)의 글루타밀 엔도펩티다제 II sprE, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)의 V8 프로테아제, 특히 바실러스(Bacillus)의 글루타밀 엔도펩티다제, 특히 바실러스 푸밀러스(Bacillus pumilus) JA16으로부터의 글루타밀 엔도펩티다제 세린 프로테아제 bppB가 바람직하고 특히 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis)의 글루타밀 엔도펩티다제 blaSE가 선호된다.

바람직한 구체예에서, 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는, SEQ ID NO: 1 또는 SEQ ID NO: 13의 서열을 갖는 폴리펩타이드에 대해 적어도 60% 서열 동일성, 예컨대 적어도 70% 서열 동일성; 예컨대 적어도 80% 서열 동일성; 예컨대 적어도 90% 서열 동일성; 예컨대 적어도 95% 서열 동일성; 예컨대 적어도 96% 서열 동일성; 예컨대 적어도 97% 서열 동일성; 예컨대 적어도 98% 서열 동일성; 예컨대 적어도 99% 서열 동일성으 갖는 프로테아제, 좋기로는 글루타밀 엔도프로테아제로부터 선택된다.

인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는 SEQ ID NO: 1 및 SEQ ID NO: 13의 서열을 포함하는 프로테아제의 변이체, 예컨대에 비해 하나 이상 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 치환, 좋기로는 보존적 치환을 포함하는 변이체일 수 있다.

또 다른 바람직한 구체예에서 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는, SEQ ID NO: 12 또는 SEQ ID NO: 14의 서열을 갖는 폴리펩타이드에 대해 적어도 60% 서열 동일성, 예컨대 적어도 70% 서열 동일성; 예컨대 적어도 80% 서열 동일성; 예컨대 적어도 90% 서열 동일성; 예컨대 적어도 95% 서열 동일성; 예컨대 적어도 96% 서열 동일성; 예컨대 적어도 97% 서열 동일성; 예컨대 적어도 98% 서열 동일성; 예컨대 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 프로테아제, 좋기로는 글루타밀 엔도프로테아제로부터 선택된다. 바람직한 일 구체예에서, 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 케라티노-세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는 SEQ ID NO: 12 및/또는 SEQ ID NO: 14의 서열을 포함한다.

인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는 SEQ ID NO: 12 및 SEQ ID NO: 14의 서열을 포함하는 프로테아제의 변이체, 예컨대 SEQ ID NO: 12 및 SEQ ID NO: 14에 비해 하나 이상, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 치환, 좋기로는 보노ㅈ적 치환을 포함하는 변이체일 수 있다.

당업자는 실시예 3에 개시된 실험 및 그 결과와 같은 간단한 일상 실험에 의해, 주어진 효소가 각질형성세포 및 케라틴으로 분류될 수 있는 이의 이펙터 단백질로 구성된 ORS 조직을 파괴하는 능력이 있는지 여부를 결정할 수 있다. 좋기로는 효소는 효소가 적용될 때 털을 뽑을 때 양성 대조군이 음성 대조군과 상당히 다를 때 음성 대조군에 비해 40% 이상의 힘 감소를 얻을 수 있다. 효소가 1000 ppm 미만, 좋기로는 100 ppm 미만, 더욱 좋기로는 10 ppm 미만의 농도로 공급될 때 그 효소는 건강한 조직을 파괴할 수 있는 것으로 간주된다. 특히 양호한 농도 범위는 0.01 내지 1 ppm 사이이고, 더욱 좋기로는 0.01 내지 0.05 ppm 사이의 농도 범위이다.

피부 샘플 분석(실시예 6-9)을 위해 ORS 조직을 파괴하는 효소 조성물의 능력은 30-1000 ppm 효소 또는 좋기로는 1-10 ppm 효소를 사용하여, 좋기로는 1 ppm 미만의 효소, 또는 심지어 0.1 ppm 미만의 효소 및 더욱 좋기로는 0.01-0.1 ppm 효소를 사용하여 조직학에 의해 효소 인큐베이션 후 현미경으로 조직학으로 관찰할 수 있으나, 음성 대조군 완충액(효소 무첨가)에서는 관찰되지 않으며, 좋기로는 뽑힌 수염 모발 상의 ORS를 가시적으로 파괴하여, 30-1000 ppm 효소 또는 좋기로는 1-10 ppm 효소를 사용하여, 좋기로는 1 ppm 미만의 효소, 또는 심지어 0.1 ppm 미만의 효소 및 더욱 좋기로는 0.01-0.1 ppm 효소를 사용하여 효소 인큐베이션 후 현미경 하에서 유의하게 팽창하지만 음성 대조군에서는 그러하지 않으며, 또는 이것은 30-1000 ppm 효소 또는 좋기로는 1-10 ppm 효소를 사용하여, 좋기로는 1 ppm 미만의 효소, 또는 심지어 0.1 ppm 미만의 효소 및 좋기로는 0.01-0.1 ppm 효소를 사용하여 상피를 파괴함으로써 효소 인큐베이션 후 현미경 하에서 관찰된 바와 같이 ORS 세포를 유의하게 손상시킴이 없이 ORS 조직을 육안으로 감소시키나, 음성 대조군에서는 그렇지 않다.

당업자는 주어진 효소가 각질형성세포 및 케라틴으로 분류될 수 있는 이펙터 단백질을 포함하는 건강한 ORS 조직을 파괴하는 능력을 갖는지 여부를, 실시예 6-8에 개시된 실험 및 그 결과와 같은 간단한 일상 실험에 의해 결정할 수 있다.

당업자는 주어진 효소가 실시예 9에 개시된 실험 및 이의 결과와 같은 간단한 일상 실험에 의해 각질형성세포 및 케라틴으로 분류될 수 있는 이의 이펙터 단백질로 구성된 병변 ORS 조직을 파괴하는 능력을 갖는지 여부를 결정할 수 있다.

의약 조성물

본 발명의 약제학적 조성물은 치료될 피부 부위에 국소 도포하여 사용된다. 당업자는 실시예 10에 개시된 실험 및 그 결과와 같은 간단한 일상적인 실험에 의해 국소 도포된 후 주어진 효소가 모낭의 작용 부위에 전달되었는지 여부를 결정할 수 있으며, 여기서 효소는 피부 표면으로부터 적어도 300μm 떨어진 모낭으로의 금 나노입자의 전달을 촉진한다. 금 나노입자가 음성 대조군(동일한 조성에 효소 없음)에 비해 효소 활성의 결과로서 모낭으로 상당히 더 깊숙이 침투할 경우 그 효소는 본 발명에서 국소적으로 전달된 것으로 간주된다.

따라서, 본 발명의 조성물은 좋기로는 다음과 같은 형태, 즉:

- 모낭과 피부에 보다 쉽고 깊이 들어가는, 10 내지 1000 나노미터 크기의 입자, 필라멘트 또는 스피어 또는 이의 조합으로 된 크림, 로션, 겔, 연고, 거품(foam), 필름, 스프레이, 현탁액 형태와 같은 국소 적용에 적합한 형태; 또는

- 활성 부위로의 강화된 성분 및 효소의 피부 침투를 물리적 및/또는 화학적으로 촉진하는 패치 형태로서, 선택적으로 피부 팽윤을 촉진하는 폐색 수단 또는 미세한 바늘이나 유사한 뾰족한 형태 또는 조성물을 담기 위한 저장소; 또는

- 물리적 저장소, 펌프 또는 바늘과 같은 장치에 의해 배치된 입자와 같은 피부 임플란트 형태; 또는 조성물 내의 활성 성분의 국소 적용과 같은 피부 또는 병변에 표적화된 적용을 위해 미래에 공지, 허용 또는 허용되는 기타 제형 또는 투여 형태

인 것이 바람직하다.

조성물은 또한 잠재적으로 더 낮은 투과성을 갖는 진행된 병변의 원인 단백질이 가수분해되는 작용 부위에 용액을 주사하여 기존 병변을 치료하도록, 모낭내, 피내 주사, 좋기로는 중공 바늘을 사용하는 것과 같은 병변내 주사제로 제형화되는 것이 바람직하다.

좋기로는, 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는 피부 제곱센티미터 당 10 ng 내지 10,000 μg의 효소 단백질의 양으로, 좋기로는 피부 제곱센티미터 당 100 ng 내지 1,000 μg의 효소 단백질의 양으로, 더욱 좋기로는 피부 제곱센티미터 당 100 ng 내지 100 μg의 효소 단백질의 양으로 적용된다.

좋기로는, 인간 피부, 폐색된 모낭 및 낭포와 같은 피부 병변의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는 치료를 필요로 하는 피부 면적 당 10 ng 내지 10,000 μg의 효소 단백질의 양으로, 좋기로는 피부 병변 당 100 ng 내지 1,000 μg의 효소 단백질의 양으로, 더욱 좋기로는 치료를 필요로 하는 피부 면적 당 100 ng 내지 100 μg의 효소 단백질의 양으로 대상 피부(affected skin)에 주사된다.

본 발명의 조성물은 좋기로는 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소를 조성물 g 당 1 ng 내지 100 mg의 효소 단백질의 범위의 양으로 포함하거나; 또는 이를 ppm 으로 표시할 경우(본 발명에서 1 ppm = 본 발명의 조성물 1L 부피 당 1 mg 효소 단백질로서 정의됨) 좋기로는 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소를 조성물의 0.01 ppm 내지 1000 ppm 좋기로는, 조성물의 1 ppm 내지 100 ppm, 더욱 좋기로는 조성물의 30 ppm 내지 100 ppm의 양으로 포함한다.

일 구체예에서 조성물은 의약 조성물이고, 여기서 성분 및 그의 농도는 관련 및 현행 제약 규정에 따라 제약상 허용가능한 것이거나, 또는 달리 관련 시장, 병태 또는 질병에 대해 판매 및 적용될 특정 조성물에 대해 규제 당국에 의해 구체적으로 승인될 것이다.

"약학적으로 허용가능한 성분" 또는 "약학적으로 허용가능한 것인 성분" 또는 또는 문법적으로 동등한 용어는 본 명세서 및 청구범위에서 의약 조성물의 제조시 성분으로 사용되는 데 필요한 균일성과 순도를 갖는 성분을 의미하도록 의도된다. 당업자는 그러한 용도에 허용되는 적합한 성분을 선택하는 방법을 알고 있다. 미국 약전 또는 유럽 약전과 같은 인정된 약전 또는 전 세계적으로 이에 상응하는 법적 규제 기관을 사용한다.

일 구체예에서, 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 성분에 더해, 부가적인 부형제가 조성물에 첨가된다.

일 구체예에서, 조성물은 다른 약학적 활성 분자를 추가로 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 통증을 감소시키는 약학적 활성 분자를 추가로 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 염증을 감소시키는 약학적 활성 분자를 추가로 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 모발 성장을 감소시키는 약학적 활성 분자를 추가로 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 에멀젼과 같은 반고체 조성물이다.

일 구체예에서, 조성물은 분산된 고체 또는 반고체 입자, 필라멘트 또는 이들의 혼합물을 갖는 액체 또는 반고체 조성물을 포함하는 현탁액이다. 좋기로는, 입자는 10-10,000 nm, 좋기로는 50-2,000 nm, 특히 100-800 nm의 평균 크기를 갖는다.

일 구체예에서, 조성물은 국소 전달로부터 이익을 얻는 약학적 활성 분자를 추가로 포함한다.

추가적인 조성물 부형제

본 발명의 조성물은 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소 및 물, pH 조절제, 보존제, 단백질 변성제, 예를 들어 카오트로픽제, 유기 염, 환원제, 희석제, 이온 강도 조절제, 계면활성제, 알코올, 유기염, 킬레이트제, pH 조절 화합물, 효소 보조인자, 왁스, 조성 및 효소 안정화제, 에센셜 오일, 오일 및 왁스를 포함한 지질, 구조 폴리머 및 활성 폴리머, 항염 화합물과 진통 화합물과 조합, 피부 필링제, 각질용해제, 예를 들어 건강한 미생물군집 촉진제를 포함한다. 좋기로는 하나 이상의 추가 성분은: 효소 활성화제, 예컨대 칼슘 염, pH 완충 염, 안정화제, 예컨대 폴리올 및 당, 습윤제, 예컨대 계면활성제, 침투 증진 성분, 예컨대 카오트로픽 및 환원제 및 물로부터 선택된다.

일 구체예에서, 조성물은 1 내지 99% 농도, 좋기로는 1 내지 80% 농도, 좋기로는 1 내지 60% 농도, 더욱 좋기로는 1 내지 40% 농도로 조성물에 존재함으로써 수분 활성도를 낮추는 추가 부형제를 갖는데, 이는 이것이 조성물을 망칠 수 있는 미생물 성장을 감소시키고, 프로테아제와 같은 효소의 활성이 물에 의존하기 때문에 이러한 효소의 안정성을 증가시키기 때문이다. 좋기로는 이러한 부형제는 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리올로부터 선택된다.

일 구체예에서, 조성물은 계면활성제를 추가로 포함한다. 계면활성제의 친수성 친유성 밸런스(HLB)은 더 친수성이거나 더 친유성인 것을 나타내는, 당업자에게 알려진 정도의 척도이다.

일 구체예에서, 계면활성제는 양이온성이다.

다른 구체예에서, 계면활성제는 물을 함유하는 조성물의 습윤을 보장하고 외부 화합물에 대한 분자의 투과성을 촉진하는 피부 팽창을 향상시키기 위해 소듐 라우릴 설페이트와 같은 음이온성이다.

또 다른 구체예에서, 계면활성제는 물-함유 조성물의 습윤을 보장하고 모낭 피지와 같은 소수성 장벽을 통한 전달을 용이하게 하기 위해 Span 20과 같은 소르비탄 라우레이트와 같은 낮은 HLB를 갖는 비이온성 계면활성제이다. 좋기로는 비이온성 계면활성제는 0 내지 20의 HLB 값, 더욱 좋기로는 5 내지 12의 HLB 값을 갖는다. 좋기로는 비이온성 계면활성제는 0.001-10% Triton X-100과 같이 5 내지 18의 HLB를 갖는다. 좋기로는 계면활성제는 0.01-1% Triton X-100과 같이 5와 12 사이의 HLB를 갖는다. 다른 적합한 비이온성 계면활성제는 0.1-5% Span 20과 같은 소르비탄 라우레이트와 같은 낮은 HLB를 갖는 비이온성 계면활성제이다. 좋기로는 계면활성제는 0.5-2% Span 20과 같은 소르비탄 라우레이트와 같은 낮은 HLB를 갖는 비이온성 계면활성제이다.

일 구체예에서, 효소와 같은 단백질의 안정성을 방해할 수 있는 유리 단일계면활성제 농도를 낮추기 위해 상이한 계면활성제가 혼합된다. 좋은 혼합물은 0.1-5% Span 20과 같은 소르비탄 라우레이트와 같은 낮은 HLB 0-12를 갖는 비이온성 계면활성제와 0.01-1% Triton X-100과 같은 더 높은 HLB 8 ~ 20, 비이온성 계면활성제이다. 또 다른 우수한 혼합물은 수분 활성이 낮은 비이온성 및 음이온성 계면활성제를 조합한 것이다.

일 구체예에서, 조성물은 조성물 중 하나 이상의 효소가 가장 활성인 범위에서 안정한 pH를 보장하는 10-1000 mM Tris/HCl과 같은 완충 염을 추가로 포함한다. 바람직일 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 효소가 가장 활성인 범위에서 안정한 pH를 보장하는 25-200 mM Tris/HCl과 같은, 조성물로 하여금 잠재적인 피부 자극을 생리적 조건에 제한하도록 해 주는 완충 염을 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 조성물을 0.01-2% NaCl과 같은 생리학적 조건에 가까운 잠재적인 피부 자극을 제한하도록 하는 염을 추가로 포함한다. 바람직일 구체예에서, 조성물은 이온 강도를 조성물 중 하나 이상의 효소가 가장 활성인 범위로 보장하는 0.5-1.5% NaCl과 같은 생리학적으로 보다 최적인 농도로 이온 강도르 F조정하기 위해 염을 포함한다.

일 구체예에서, the 조성물은 농후제를 더 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 조성물을 손상시킬 수 있는 미생물 성장을 피하기 위해 벤조에이트, 프로피오네이트 또는 소르베이트와 같은 방부제를 추가로 포함한다. 좋기로는 0.001-10% 포타슘 소르베이트와 같은 소르베이트이다. 바람직일 구체예에서, 조성물은 0.01-2% 소르빈산칼륨과 같은 방부제를 포함한다.

일 구체예에서, the 조성물은 0.1-100 mM CaCl₂와 같은 가용성 칼슘 염을 포함하는데 이는 이것이 효소 활성화 및 안정화 보조인자이기 때문이다. 바람직일 구체예에서, 조성물은 유익한 효소를 안정화시키기 위해 1-10 mM CaCl₂와 같은 가용성 칼슘 염을 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 0.01-8 M 우레아와 같은 카오트로픽제를 포함하는데, 이는 이것이 피부 단백질의 팽윤을 부분적으로 가용화하거나 촉진하여 효소 활성에 보다 민감하게 만들 수 있기 때문이다. 바람직일 구체예에서, 조성물은 피부 팽윤을 촉진하고 케라틴의 용해를 증가시키기 위해 0.1-4 M 요소를 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 0.1-1000 mM 디티오트레이톨 또는 글리콜산과 같은 환원제를 포함하는데, 이는 이것이 효소에 대한 기질일 수 있는 화학적 환원에 의해 단백질을 가교시키는 시스틴 가교를 파괴하여 효소 활성에 보다 민감하게 만들기 때문이다. 바람직일 구체예에서, 조성물은 1-20 mM 디티오트레이톨 또는 글리콜산을 포함하여 케라틴에서 이황화 가교 결합의 환원 및 파괴를 촉진하여 효소 기질 접근성을 증가시킨다.

일 구체예에서, 조성물은 효소 활성, 안정성 및 기질 용해를 촉진하는 pH로 조정되도록 하기 위해 1-1000 mM NaOH와 같은 알칼리성 염을 포함한다. 바람직일 구체예에서, 조성물은 피부 팽윤 및 증가된 케라틴 용해를 촉진하는 알칼리성 pH 조성물을 허용하기 위해 NaOH를 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 조정되도록 하여 효소 활성, 안정성 및 기질 용해를 촉진하는 pH로 조정되도록 하기 위해 1-1000 mM HCl과 같은 산성 염을 포함한다. 바람직일 구체예에서, 조성물은 효소 활성, 안정성 및 생리학적으로 관용되는 pH를 촉진하는 산성 조성물을 허용하기 위해 HCl을 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 예컨대 벤조일 퍼옥사이드, 1,3-벤젠디올, 아젤라산, 살리실산, 레티놀 호르몬 및 이의 유도체와 같은 현재 상업적으로 사용되는 화학 및 생물학적 제제, 및 좋기로는 의약 조성물 및 미용 조성물에서 화농성 한선염 및 여드름을 치료하는 데 사용되는 임의의 여하한 화합물과 같은, 화농성 한선염 및 여드름 형태와 같은 모낭-연관 병태를 국소적으로 치료하는 데 사용되는 화학적 및 생물학적 제제를 약학적 또는 미용적으로 허용되는 농도로 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 피부 및 그의 모낭으로의 향상된 효소 전달을 촉진하기에 충분한 히알루론산을 포함한다.

일 구체예에서, 조성물은 피부 및 그의 모낭으로의 향상된 효소 전달을 촉진하는 펩타이드를 포함한다.

미용 조성물(cosmetic composition)

또 다른 구체예에서 조성물은 미용 조성물이고, 여기서 성분은 미용 조성물에 적합한 표품이며 예를 들어 유럽 위원회의 화장품 성분 데이터베이스에 존재하거나 승인을 얻은 규제 기관에 의해 승인될 수 있다.

화장용으로 허용되는 성분 또는 미용 조성물에 적합한 표준의 성분은 본 명세서 및 청구범위에서 미용 조성물의 제조시 성분으로 사용되는 데 필요한 균일성과 순도를 갖는 성분을 의미하는 것으로 의도된다. 당업자는 예를 들어 화장품 산업 및 해당 법률에 대해 인정된 표준을 사용하여 법률 분야에 따라 유럽 위원회 또는 이에 상응하는 기관에 의해, 그러한 용도에 허용되는 적합한 성분을 선택하는 방법을 알고 있다. 일 구체예에서, 미용 조성물은 의약 조성물과 동일하거나 관련되지만 화장용으로 허용되는 성분 및 농도를 포함한다.

특히 적합일 구체예에서, 본 발명은:

생물학적 장벽, 기능 및 구조를 유지하기 위해 각질형성세포에 의해 지원되는 인간 피부 및 모낭과 같은 그 부속기의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 글루타밀 엔도펩티다제를 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 여기서, 상기 조성물은:

a. 의약 조성물로서, 상기한 인간 피부 및 모낭과 같은 그 부속기의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 글루타밀 엔도펩티다제에 더해, 단백질 기질을 효소 활성에 대해 개방시키는 계면활성제, 효소 활성 증진 및 안정화제 및 효소가 피부 및 모낭의 외부층 및 작용 부위에 침투하여 조성물의 사용 및 목적을 용이하게 하는 제제로부터 선택된 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 성분을 포함하는 의약 조성물; 또는

b. 미용 조성물로서, 상기한 인간 피부 및 모낭과 같은 그 부속기의 기능 및 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 글루타밀 엔도펩티다제에 더해, 단백질 기질을 효소 활성에 대해 개방시키는 계면활성제, 효소 활성 증진 및 안정화제 및 효소가 피부 및 모낭의 외부층 및 작용 부위에 침투하여 조성물의 사용 및 목적을 용이하게 하는 제제로부터 선택된 적어도 하나의 미용적으로 허용가능한 성분을 포함하는 미용 조성물이다.

상기 구체예에서 바람직한 글루타밀 엔도펩티다제는 바실러스로부터의 글루타밀 엔도펩티다제, 바실러스 푸밀러스 JA16으로부터의 글루타밀 엔도펩티다제 세린 프로테아제 bppB 및 바실러스 리케니포르미스로부터의 글루타밀 엔도펩티다제 blaSE이다.

일반적으로 모든 구체예에 있어서 글루타밀 엔도펩티다제는 글루타밀 엔도펩티다제 비율(GR) > 5를 갖는 엔도펩티다제로서 여기서, GR = Suc-AAPE-pNA에 대한 활성/Suc-AAP(not)E-pNA에 대한 활성이 가장 높은 것으로 계산되며, 여기서 Suc-AAP(not)E-pNA는 Suc-AAPA-pNA, Suc-AAPD-pNA, Suc-AAPF-pNA, Suc-AAPI-pNA, Suc-AAPK-pNA, Suc-AAPL-pNA, Suc-AAPM-pNA, Suc-AAPR-pNA 또는 Suc-AAPV-pNA 중 하나이다.

국소 적용되거나 병변 피부에 주사되는 수성 또는 에멀젼 조성물은 효소 안정성 및 활성에 양립가능하고 조성물의 사용 및 목적을 용이하게 하기 위해 피부의 외부층 침투 및 모낭 및 작용 부위로의 전달을 용이하게 하는, 좋기로는 음이온성, 비이온성 계면활성제 및 이들의 혼합물 중에서 선택되는 적어도 하나의 계면활성제를 추가로 포함하는 것이 바람직하다.

국소 적용되거나 병변 피부에 주사되는 현탁액 조성물은 분산된 고체 또는 반고체 입자, 필라멘트 또는 이들의 혼합물을 갖는 액체 또는 반고체 조성물을 포함하는 것이 바람직하다. 좋기로는, 입자는 국소 모낭 전달의 경우 200-800 nm 및 주사가능한 조성물의 경우 80-10,000 nm의 평균 크기를 갖는다.

좋기로는 단백질 기질을 효소 활성에 대해 개방시키는 계면활성제는 Span 20, Span 40, Span 60, Span 80 및 Brij 72로부터 선택된다.

좋기로는 the 효소 활성 증진 및 안정화제는 글리세롤, 당 및 프로필렌 글리콜, 칼슘 염 및 효소 억제제로부터 선택된다.

좋기로는 효소가 피부 및 모낭의 외부층에 침투하여 작용 부위로 들어가 조성물의 사용 및 목적을 용이하게 하는 제제는 글리콜산과 같은 환원제, 우레아와 같은 카오트로픽 제제 및 소르비난 라우레이트와 같은 습윤제로부터 선택된다.

좋기로는 본 발명에 따른 조성물은:

● 안전하고 예방적 및 치료적 이점을 모두 제공할 수 있고 상업적으로 생산하기에 효율적이며 규제 기관에 잘 알려져 있기 때문에 국소 적용되거나; 또는

● 국소 크림 및 아픈 피부에 대한 가압과 달리 환자/고객 친화적이고/편하며/표적 피부 영역으로만 효소를 국한하기 때문에 마이크로니들 패치에 의해 적용되거나; 또는

● 격리되고, 주사가능한 병변/낭종이 더 자라거나 퍼질 수 있기 전에, 이들을 치료하기 위해 피하 주사바늘 주사에 의해 적용된다.

치료를 위한 조성물의 용도

본 발명의 조성물은 이러한 치료가 필요한 인간의 피부병 및 모낭-관련 병태를 치료하는 데 사용된다.

"모낭-관련 병태(hair follicle-related condition)"라는 용어는 본 출원에서 모낭, 그의 조직, 세포, 세포내 및 세포외 단백질 및 이의 변형, 모간 및 단백질, 탄수화물과 지질을 비롯한 이의 구성요소와 관련된 모든 병태를 의미하는 것으로 의도된다.

바람직한 일 구체예에서, 본 발명에 따른 용도는 조모증, 가성모낭염, 심상성 여드름 또는 응괴성 여드름, 모소동, 두피의 해부 모낭염 및 화농성 한선염을 포함하는 모낭 폐색 테트라드 증후군과 같은 병태의 약학적 치료 및/또는 예방을 포함한다.

조모증, 다모증 또는 수발 가성모낭염을 포함하는 과도하거나 병적인 모발 성장; 또는 모낭 과각화증 및 모낭 폐색에 의해 유발되는 피부 질환; 또는 심상성 여드름, 모공각화증, 다울링-데고스병, 헤일리-헤일리병, 유방 누공, 폭스 포다이스, 소극성 속모증, 필라리스 위축성 각화증, 벌레먹은 모양 피부 위축증(Atrophoderma vermiculatum) 및 응괴성 여드름, 모소동, 두피의 해부 봉와직염 및 화농성 한선염을 포함하는 모낭 폐색 테트라드 증후군으로 이어지는 부속 질환(adnexal disease), 및 모낭성 건선, 유모성 비강진, 원판형 루푸스, 편평태선, 비대성 편평태선, 모낭성 편평태선, 경화성 태선, 극상태선, Wong형 피부근염을 비롯한 염증성 모낭-연관 병태, 포스트 칼라 아자르 피부 리슈만편모충증, 경계성 결핵성 나병에서 I형 반응, 모낭 비강진을 비롯한 감염성 모낭-연관 병태; 및 면포 모반, 모낭성 균상 식육종 및 두꺼비양 피부증을 비롯한 기타 모낭-연관 질환과 같은 다발성 모낭 병태 및 질병 또는 모낭-연관 피부병이 본 발명에 따라 치료하는데 적합하다.

또 다른 바람직한 구체예에서 본 발명에 따른 용도는 인체에서 원치 않는 모발 성장의 미용적 치료를 포함한다.

본 발명의 조성물은 치료될 피부 또는 병변 부위에 조성물을 적용하고, 본 발명의 조성물이 기능을 발휘하도록 하는 기간 동안 유지되도록 피부 상에 또는 피부 내에 조성물을 남겨둠으로써 모낭성 피부병 및 모낭-관련 병태를 치료하는데 사용될 수 있다.

치료 기간 동안, 본 발명의 조성물 중의 하나 이상의 효소는 어느 시점에서 증식성 또는 과증식성 각질형성세포에 의해 생성된 케라틴으로 분류될 수 있는 단백질에 가수분해 활성을 발휘함으로써 모발이 느슨해지고 동일한 개체의 미처리 모발을 제거하는데 필요한 힘보다 현저히 적은 힘으로도 제거가능하게 되거나, 심지어 모발이 떨어질 수도 있게 된다. 또한, 모간을 둘러싸고 있는 증식성 또는 과증식성 각질세포에 의해 생성된 모낭 조직 및 그의 뿌리초-특이 케라틴의 분해로 인해, 결과적으로 모낭 폐색/플러깅의 빈도 및/또는 정도가 감소되어 폐색된 모낭이 감염되거나 질병에 걸린 모낭으로 진행하는 것을 제한시킨다. 치료는 또한 화농성 한선염 또는 관련 증후군과 같은 질병의 초기 단계에서 폐색을 줄이고 잠재적으로 모낭의 막힘 현상을 완전히 해소하여 모낭을 구제함으로써, 환자에게 더 큰 부담을 주는 질병의 보다 위중한 단계로 이어지는 조기 단계의 질병 및 그의 특징적인 병변의 진행, 재발 및 발달을 제어하고 예방할 수 있다.

본 발명의 조성물은 질병의 더 심각한 단계에 의해 영향을 받는 신체 부위, 즉 폐색 및/또는 감염된 모낭 또는 피부 낭종을 포함하는 부위에 주사되거나 국소 적용될 수 있으며; 이 구체예에서 하나 이상의 부위에서 질병의 추가 진행을 피하기 위해 질병 발달을 감소시키거나 개입하는데 사용될 수 있다.

유지 기간은 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 생물학적 장벽, 기능 및 구조의 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소를 허용하고 충분히 효과를 발휘하기에 충분히 길어야 한다. 전형적으로, 국소 도포 조성물의 유지 기간은 2분 내지 24시간의 범위, 예컨대 3-60분 범위, 예를 들어 5-30분 범위에서, 예를 들어 야간 수면 기간 범위로부터 선택된다. 예를 들어 조성물이 겔인 일부 구체예에서; 유지 기간은 실제로 효소가 불활성화될 때까지 계속되며, 이는 예컨대 젤 조성물의 경우, 피부, 점막 또는 모낭 조직이 자연적으로 박리되어 몇 시간에서 며칠 또는 몇 주 후에 효소를 밀어낼 때 및/또는 피부가 외부적으로 세척될 때 발생된다. 일부 구체예에서 예를 들어 조성물이 의료용 패치 또는 물리적 박리 또는 세척에 의해 완전히 회복될 수 있는 비액체 조성물인 경우; 유지 기간은 실제로 효소가 불활성화될 때까지, 예컨대 의료용 패치 조성물의 경우 수시간에서 수일 후에 일어난다. 예컨대 조성물이 병변내 주사제인 일부 구체예에서, 유지 기간은 관련이 없다.

여전히 모간이 있는 모낭 및 병변 조직의 ORS 무결성은 도 2 및 실시예 3에 설명된 바와 같은 간단한 기술 개념을 사용하여 당업자에 의해 평가될 수 있다. 모발을 제거하는 데 필요한 힘은 도 2에 기술된 잘 알려진 기술을 사용하여 당업자가 사용할 수 있는 편리한 기능적, 정량적 측정치이다. 처리된 모발을 제거하는 데 필요한 힘을 미처리 모발을 제거하는데 필요한 힘과 비교할 경우, 다양한 피부 생물학 및 유형, 현재 상태 및 시간이 지남에 따라 모발이 자라고, 빠지고, 다시 자라나는 자연적인 모낭 주기로 인해 발생할 모발 간 다양성을 보상하기 위해 개체의 모발 여러 개를 측정하여 평균 힘을 계산하는 것이 바람직한다. 따라서 본 발명에 따르면 처리된/미처리된 모발을 제거하는 데 필요한 힘은 좋기로는 피부 생검에서 적어도 3개 이상의 모발의 평균으로 계산되어야 한다. 피부 생검에서 사용할 수 있는 모발이 더 적은 경우 생검에서 사용 가능한 모든 모발을 기반으로 평균을 계산하는 것이 좋다. 좋기로는 처리되지 않은 모발과 비교하여 처리된 모발을 제거하는 데 필요한 힘은 적어도 10%, 좋기로는 적어도 20%, 좋기로는 적어도 30%, 좋기로는 적어도 40%, 좋기로는 적어도 50%, 좋기로는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80% 감소되거나 또는 적어도 통증 없는 제모만큼 감소된 통증 수준, 또는 증가된 모낭-관련 질환 예방 또는 조절에 상응하는 정도인 것이 바람직하다.

모발을 제거하는 데 필요한 힘을 측정하는 방법의 예가 실시예 3에 나와 있다. 인간 피부에서 ORS의 무결성은 ORS가 있는 인간의 뽑은 모발을 효소와 함께 인큐베이션한 후 조직학적 이미징에 의해 추가로 평가할 수 있다. ORS 및 주변 조직의 조직학적 무결성은 조직 및 세포 성분에 특이적인 염색과 현미경을 사용하여 당업자에 의해 검사된다. 모낭성 피부병 및 모낭-연관 병태를 치료하기 위한 조성물을 포함하는 본 발명의 목적에 유익한 것으로 간주될 수 있는 차이를 평가하기 위한 당업자에 대한 방법의 예를 실시예 1-10 및 도 3-7에 나타내었다.

일 구체예에서 본 발명의 조성물은 조모증 및 다모증의 치료에 사용된다. 이 구체예에서, 본 발명은 환부 피부 영역으로부터 과도한 모간을 그 뿌리를 포함하여 제거함으로써 통증이 적거나 전혀 없이 더 오래 지속되는 효과를 생성할 수 있게 하는 효율적인 치료법을 제공한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 조성물은 가성모낭염의 치료에 사용된다. 이 구체예에서, 본 발명은 특히 얼굴과 목의 환부 피부에서 과도한 모발을 제거할 수 있게 하거나 모낭 고정 조직, 세포 및 그 단백질의 장애에 의해 일어날 가능성이 높은, 모발의 기형 및 피부 손상에 의한 피부의 자극을 감소시키는 효율적인 치료법을 제공한다.

또 다른 구체예에서 본 발명의 조성물은 심상성 여드름의 치료에 사용된다. 이 구체예에서, 본 발명은 면포, 구진, 결절, 낭종, 기포, 병변의 완화 및 환부 피부 영역으로부터 과도한 모발을 피부 자극 위험을 낮추면서 제거하는, 효율적인 치료법을 제공한다.

또 다른 구체예에서 본 발명의 조성물은 폐색된 모낭이 가려움과 광범위한 결절을 생성하는 모공각화증의 치료에 사용된다.

또 다른 구체예에서 본 발명의 조성물은 다울링-데고스병, 헤일리-헤일리병, 유방 누공과 같은 모낭 과각화증 및 폐색 관련 질병의 치료에 사용된다.

또 다른 구체예에서 본 발명의 조성물은 화농성 한선염 및 병태의 발달이 동일한 모낭 케라틴-관련 발달에 의존하는 다른 모낭 테트라드 또는 모낭 폐색 질환의 치료에 사용된다. 이 구체예에서, 본 발명은 본 발명의 조성물이 후기 단계 및 더 심각한 증상이 나타나기 전에 모낭의 폐색을 예방하거나 감소시키기 위해 사용되는 병변 발달의 초기 단계를 치료하는 데 특히 적합하다. 화농성 한선염 및 설명된 관련 질병에 걸린 모든 환자는 성장 단계를 통해 순환하는 모낭의 결과인 재발성 병변을 갖기 때문에, 본 발명은 병태 또는 질병 중증도의 모든 단계에 이점이 있다.

또 다른 구체예에서 본 발명의 조성물은 모낭성 건선, 유모성 비강진, 원판형 루푸스, 편평태선, 비대성 편평태선, 모낭성 편평태선, 경화성 태선, 극상태선, Wong형 피부근염을 비롯한 염증성 모낭-연관 병태, 포스트 칼라 아자르 피부 리슈만편모충증, 경계성 결핵성 나병에서 I형 반응, 모낭 비강진을 비롯한 감염성 모낭-연관 병태, 및 면포 모반, 모낭성 균상 식육종 및 두꺼비양 피부증을 비롯한 기타 모낭-연관 질환을 치료하는데 사용된다.

본 발명은 본 발명을 예시하기 위해 제공되는 하기 실시예에 의해 추가로 기재되고 뒷받침되며 어떠한 방식으로도 제한하는 것으로 간주되어서는 안 된다.

실시예

실시예 1: 모발 방출에 의한 ORS 조직 활성에 대한 엔도펩티다제의 스크리닝

본 실시예는 피부에서 모발을 방출하는 능력에 대해 다양한 엔도펩티다제 패널을 스크리닝하여, 모낭의 기능과 무결성을 지원하는 모발 고정 케라틴과 같은 단백질의 가수분해 촉매의 척도를 제공한다.

실험 설계는 도 1에 설명되어 있다. 돼지 귀는 털이 많은 인간 피부의 좋은 생리학적 모델이지만 고유한 생물학적 변이를 제어해야 한다. 동물 실험을 위해 사육된 육상종 돼지의 단일 공급업체로부터 사후에 귀를 샘플링하고 물로 철저히 헹구고 밀폐 비닐 봉지에 한 쌍씩 넣고 즉시 -20℃로 냉동하였다. 동결 후 1개월 이내에 귀를 실험에 사용하였다. 각 효소 실험에 대해 한 쌍의 냉동 귀를 비닐 봉지에 담긴 250mL 생리학적 150mM NaCl(20℃oC)에서 약 1시간 동안 해동하여 해동 중에 피부가 완전히 덮이도록 하였다. 소금 용액을 버리고 귀를 100mL 샴푸 용액(디소듐 라우릴 설포숙시네이트(음이온성) 및 코코 글루코사이드(비이온성) 계면활성제가 포함된 MacUrth 순한 유기농 샴푸 4mL + 물 96mL)으로 2분 동안 철저히 세척하여 먼지와 마이크로바이옴을 줄인다. 귀를 수돗물로 헹구고 피부를 절개하기 전에 종이 타월로 건조시켰다.

효소 효과에서 생물학적 변이를 가장 잘 분리하기 위해 각 실험에 사용된 귀 쌍의 대응하는(미러) 위치를 참조 샘플과 효소 샘플에 사용하였다(1). 쌍들 간의 절대 효과의 차이를 설명하기 위해 모든 귀에 음성 및 양성 대조군을 포함시켰다. 양성 대조군은 바실러스 리케니포르미스의 글루타밀 엔도펩티다제 blaSE로서 이것은 분석의 설계 단계에서 가장 큰 효과를 보여 이 데이터 포인트가 생물학적 샘플이 귀 쌍 간에 신뢰할 수 있고 일관성이 있음을 검증할 수 있도록 하였다. 각 실험에서 귀 당 20x20 mm의 피부 조각 4개 (= 한 쌍 당 8개)를 귀의 등쪽에서 조심스럽게 잘라내고 날카로운 메스로 연골 표면 옆을 절단하여 연골에서 피부를 조심스럽게 제거하였다.

검정은 25mM Tris/HCl, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl₂, 2 mM 포타슘 소르베이트, 중성 pH=7.4로 완충된 1% Span 20(HZ 완충액 및 음성 대조군)을 사용하여 30℃의 피부 표면 온도에서 실행되었다. 이러한 조건은 각각 의약 조성물과 미용 조성물에 적합하고, 칼슘 이온에 의한 효소 안정화, 실험 중 미생물 성장 감소, 습윤 촉진 및 자극 제한에 적합하도록 선택되었다.

스크리닝된 11가지 엔도펩티다제를 표 1에 나타내었으며 UniProt 또는 MEROPS 데이터베이스에 공개적으로 주석이 달린 다양한 단백질 분해 특이성을 가진 광범위한 엔도펩티다제 클래스를 나타내었다. 이들은 SDS-PAGE 분리 및 Coomassie Blue 염색 후 단일 밴드가 관찰될 수 있는 순도로 컬럼 크로마토그래피에 의해 개별적으로 정제되었다.

2개의 피부 조각을 음성 대조군(피부 조각당 2400㎕ HZ 완충액)으로서, 2개의 피부 조각을 양성 대조군(피부 조각당 100 ppm HZ-2가 포함된 2400㎕ HZ 완충액)으로서 배양하고, 4개의 피부 조각을 엔도펩티다제((1)에서, HZ) 인큐베이션(피부 조각당 100 ppm 엔도펩티다제가 포함된 2400㎕ HZ 완충액)으로서 배양하였다. 피부 조각을 30℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 용액을 버리고 피부 조각을 수돗물로 철저히 헹구고 종이 타월을 사용하여 건조시키고 흄 후드 아래에 1시간 동안 두었다.

50x25mm 크기의 스포츠 테이프(Sportsdoc Medical Pro Deluxe, 25mm. From Svea Medical sports AB, Sweden)를 모발 방향과 같은 방향으로 각 피부 부분에 부드럽게 놓고 모발과 접착제 사이가 밀착될 수 있도록 충분한 힘을 가하여 세게 누른다(2). 모발의 자연스러운 방향과 반대 방향으로 테이프를 한 번에 잡아당겼다(3). 스포츠 테이프의 접착력은 너무 강해서 모발은 끊어지거나 피부에 모근이 남거나 또는 테이프는 뿌리초가 손상되지 않은 상태로 모발을 뽑을 것이다. 테이프를 떼어낸 후 테이프를 0.5M HCl에서 1% 파라-디메틸아미노 신남알데히드(DMACA)로 염색하였는데, 이는 IRS를 밝은 빨간색으로 염색한다(4). 적색 IRS의 수와 길이는 모낭의 기능과 무결성을 지원하는 모발 고정 케라틴과 같은 단백질의 가수분해를 촉매하는 엔도펩티다제의 능력을 확인하는 편리한 수단이다. 사진을 찍은 후 빨간색 IRS의 수를 세고 테이프의 너비를 사용하여 데이터를 정규화하는 드로잉 소프트웨어(OpenOrienteering Mapper)를 사용하여 테이프에 존재하는 전체 길이 IRS를 측정함으로써 IRS를 평가하였다. 결과를 아래 표 2에 나타내었다. 귀 쌍 대 귀 쌍의 다양성을 설명하기 위해 IRS의 상대 수와 IRS의 상대적인 총 길이를 다음과 같이 계산하였다: ((효소 - 음성 대조군)/(양성대조군 - 음성 대조군))*100%.

바실러스 리케니포르미스 유래의 글루타밀 엔도펩티다제 blaSE는 11가지 테스트된 엔도펩티다제 중에서 가장 성능이 좋은 엔도펩티다제로 확인되었으며, 모낭의 기능과 무결성을 지원하는 케라틴과 같은 고정 단백질의 가수분해를 가장 효과적으로 촉매한다.

글루타밀 엔도펩티다제가 모낭의 기능과 완전성을 지원하는 케라틴을 촉매 작용에 특히 적합한지 알아보기 위해 다른 유기체로부터의 3가지 글루타밀 엔도펩티다제(표 3 참조)를 위에서 설명한 대로 연구하였다.

표 3에 나열되고 상기 분석법으로 시험된 3가지 추가 글루타밀 엔도펩티다제의 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

상기 표들로부터 글루타밀 엔도펩티다제가 모낭의 기능과 무결성을 지원하는 모발 고정 케라틴과 같은 단백질의 가수분해 촉매 작용에 가장 적합한 엔도펩티다제임을 알 수 있다.

실시예 2: 글루타밀 엔도펩티다제 활성의 정의.

본 실시예는 본 발명의 맥락에서 엔도펩티다제가 글루타밀 엔도펩티다제인지 여부를 평가하기 위한 분석법을 설명한다. 글루타밀 엔도펩티다제는 글루탐산 잔기(또는 인산염 완충액에서 아스파르트산 잔기)의 카르복시 말단 측을 절단하는 엔도펩티다제로서, 즉, 이들은 기질의 P1 위치의 음하전된 아미노산 잔기를 선호한다. 다음의 분석법은 본 발명에서 사용된 표 1 및 표 3에 열거된 SEQ NO. 1-4, 7-8, 10, 및 12-14에 포함된 실시예 1에서 유의한 반응성을 제공한 엔도펩티다제가 글루타밀 엔도펩티다제인지를 시험하는데 사용되었다.

20μl의 각 엔도펩티다제를 0.01% Triton X-100으로 희석하고 25℃에서 마이크로타이터 플레이트의 웰에 넣고 다음의 시판 기질 (Bachem AG, Bubendorf, Switzerland): Suc-AAPA-pNA (Bachem 4015680), Suc-AAPD-pNA (Bachem 4018122), Suc-AAPE-pNA (Bachem 4017343), Suc-AAPF-pNA (Bachem 4002299), Suc-AAPI-pNA (Bachem 4017698), Suc-AAPK-pNA (Bachem 4017329), Suc-AAPL-pNA (Bachem 4003646), Suc-AAPM-pNA (Bachem 4006760), Suc-AAPR-pNA (Bachem 4017320), Suc-AAPV-pNA (Bachem 401767)을 사용하여 분석하였다.

반응은 200μl pNA 기질(1.0ml DMSO에 용해된 50mg으로서 50mM Tris/HCl, 0.01% Triton X-100, pH 8.0으로 75x 추가 희석됨)을 첨가함으로써 시작되었다. 마이크로타이터 플레이트를 Molecular Devices의 VERSAmax 마이크로타이터 판독기로 판독하고 OD405의 초기 증가는 엔도펩티다제 활성의 척도였다. 측정 시간 4분 이내에 선형 플롯이 달성되지 않으면 엔도펩티다제를 희석하고 분석을 반복하였다.

상기 분석에서 시험된 10가지 엔도펩티다제의 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 데이터는 10가지의 상이한 Suc-AAPX-pNA 기질(X = 다른 아미노산)에 대한 각 엔도펩티다제의 상대적 활성, 즉 특정 Suc-AAPX-pNA 기질의 활성을 가장 높은 활성을 갖는 10개의 Suc-AAPX-pNA 기질의 활성으로 나눈 Suc-AAPX 기질의 활성에 상응한다. 엔도펩티다제의 희석이 이 계산에서 고려되었다.

표 5에서 바실러스 리케니포르미스 유래의 글루타밀 엔도펩티다제 blaSE(HZ-2), 스트렙토마이세스 그리세우스 유래의 글루타밀 엔도펩티다제 II sprE(HZ-13), 바실러스 푸밀러스 JA16 유래의 세린 프로테아제 bppB(HZ-15) 및 스타필로코커스 아우레우스 유래의 V8 프로테아제(HZ-35)는 Suc-AAPE-pNA 기질에 대해 가장 높은 활성을 갖는 반면, 다른 기질에 대하여는 상대적으로 매우 낮은 활성을 갖는다는 것을 관찰할 수 있다. 결과적으로 이러한 엔도펩티다제는 글루타밀 엔도펩티다제로 간주된다. 어떤 엔도펩티다제가 글루타밀 엔도펩티다제인지 여부를 평가하기 위해 본 발명자들은 다음과 같이 글루타밀 엔도펩티다제 비(GR)를 정의하였다: GR = 활성이 가장 높은 Suc-AAPE-pNA에 대한 활성 / Suc-AAP(not)E-pNA에 대한 활성.

본 발명에 따른 글루타밀 엔도펩티다제는 글루타밀 엔도펩티다제 비(GR) > 5를 갖는 엔도펩티다제로서 정의된다.

실시예 3: 엔도펩티다제 국소 처리에 의한 털 방출 효과의 정량화

본 실시예는 털이 많은 돼지 피부에 효소 조성물을 국소 적용한 후 털을 뽑는 힘을 측정함으로써 선택된 엔도펩티다제에 의한 털 방출 효과의 정량화를 위한 분석을 설명한다.

효소 효과로부터 피부들 간의 생물학적 변이를 분리하기 위해 실시예 1에 기술된 것과 동일한 고려 사항이 다음 추가 고려 사항과 함께 본 실시예에 적용된다: 외피층을 천공하고(5), 다른 귀 위치가 사용되었으며(6), 국소적인 상호작용을 엄격하게 보장하기 위해 몰드를 피부에 부착시켰다.

도 2는 실험 설계의 개략적인 개요를 제공한다. 돼지 귀 피부의 최외곽층의 두께 변화를 설명하고, 엔도펩티다제의 피부 깊숙한 쪽 모낭 전달을 증가시키기 위해, 귀의 등쪽 면을 더마 롤러(RoHs의 Argador Derma Roller 시스템으로서, 유럽 연방에서 미용 용도로 승인된 540x1.5mm 미세바늘)를 이용하여 피부에 더마롤러를 수직, 수평, 2개의 대각선 방향으로 4회 롤링하되 롤러에 강한 압력을 가하여 피부가 고르게 천공되도록 한다. 효소 치료를 위해 제한된 18x18mm 피부 영역을 정의하기 위해 3개의 폴리메틸메타크릴레이트(PMMA) 정사각형 몰드를 에틸 시아노아크릴레이트 접착제를 사용하여 각 귀의 등쪽의 대칭(거울) 위치에 붙였다.

조성물의 생리학적 온도, pH 및 염 농도는 10mM DTT(HZ Buffer DTT)를 더한 실시예 1과 동일하였다. 음성 대조군, 양성 대조군 및 엔도펩티다제 샘플((6)의 HZ)의 세 가지 다른 유형의 치료를 위해 귀 쌍의 6개의 PMMA 사각형을 사용하였다. 실시예 1에서 양성 반응을 보인 표 1 및 3에 나열된 SEQ ID NO: 1, 3, 6-8, 10, 및 SEQ ID NO: 12-14를 비롯한 9개의 엔도펩티다제가 본 실시예에 포함되었다.

두 개의 사각형(square)은 음성 대조군(600μl HZ 완충액 DTT/사각형), 두 개의 사각형은 양성 대조군(600μl HZ 버퍼 DTT 및 100 ppm HZ-2/사각형), 두 개의 사각형은 엔도펩티다제 샘플 처리군(600μl HZ 버퍼 DTT 및 30 ppm 내지 100 ppm 엔도펩티다제/사각형)이었다. 사각형과 효소가 있는 피부 조각을, 귀가 손상되지 않은 상태로 4℃에서 약 20시간 동안 수평으로 보관하였다. 다음으로, 피부 조각을 피부 표면 온도와 동일한 30℃에서 4시간 동안 인큐베이션하였다.

사각형의 용액은 버리고, 풀 접착제에서 털을 떼어내기 위해 정사각형의 안쪽 면을 따라 메스로 절단하여 사각형들을 피부에서 제거하였다. 처리된 피부 부위를 탈이온수로 조심스럽게 세척하고 피부 조각을 종이 타월로 조심스럽게 건조시켰다. 마지막으로, 효소 인큐베이션 후 각 피부 조각에서 개별 털을 뽑는 데 필요한 힘을 스트링과 수직으로 움직이는 클램프로 스핀들 모터에 연결된 Sauter FK 10 Digital Force Gauge에 고정하여 측정하였다(7).

결과:

결과의 개요를 아래 표 6에 나타내었다. 음성 대조군과 비교한 힘 감소는 ((음성 대조군 - 효소)/(음성 대조군))*100%로 계산되었다. 양성 대조군과 비교한 힘 감소는 ((음성 대조군 - 효소)/(음성 대조군 - 양성 대조군))*100%로 계산되었다. 각 피부 샘플에 대해 샘플당 최소 7개 및 최대 10개의 개별 모발의 힘을 측정하고 귀 쌍 내에서 각 처리의 중복 샘플에 대해 평균을 계산하였다. 귀 쌍 대 귀 쌍 다양성으로 인해 양성 대조군과 비교한 힘 감소 데이터만이 허용되었으며, 0.05 이하의 p-값으로 스튜던트 t-검정을 사용하여 양성 대조군(100 ppm HZ-2)이 음성 대조군보다 유의하게 낮은 것으로 간주되는 경우에만 아래 표에 나타내었다.

표 6으로부터, 바실러스 리케니포르미스 유래의 글루타밀 엔도펩티다제 blaSE HZ-2(양성 대조군)은 100 ppm에서 음성 대조군에 비해 힘을 가장 많이 감소시킨 반면, HZ-10, HZ-11, HZ-15 및 HZ-35는 100 ppm에서의 HZ-2의 오직 79-86%로만 힘을 감소시킬 수 있었는데, 이는 단지 30 ppm(85%)의 HZ-2와 해당하는 것이었다. HZ-13은 실시예 1에서의 그의 성능으로부터 예측된 것보다 낮은 성능을 보였지만, 실시예 4는 본 실시예에서 테스트한 특정 조건에서 안정적이지 않은 것으로 나타났다.

실시예 4: 엔도펩티다제 활성의 안정성.

본 실시예는 엔도펩티다제가 본 발명에서 시험된 피부 적용 조건 내에서 안정적인지를 평가하기 위한 분석법을 설명한다. 하나의 관련된 피부 적용은 실시예 1에 기재된 스크리닝 분석이다. 또 다른 관련된 피부 적용은 실시예 3에 기재된 피부측 분석이다.

2개의 인큐베이션 완충액이 본 안정성 분석에 사용되었다. 인큐베이션 완충액 A: 25mM Tris/HCl, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl₂, 2mM 포타슘 소르베이트, 1% Span 20, pH 7.4(실시예 1에서 사용됨) 및 인큐베이션 완충액 B: 25 mM Tris/HCl, 150mM NaCl, 5 mM CaCl₂, 2 mM 포타슘 소르베이트, 10 mM DTT, 1% Span 20, pH 7.4 (실시예 3에서 사용됨).

각 엔도펩티다제를 0.10 mg/mL(최소 20배 희석)로 희석하고 활성 분석이 있을 때까지 얼음에 작은 부분 표본을 저장하여 두 개의 인큐베이션 버퍼 A 및 B로 옮겼다.

인큐베이션 완충액 A 희석액의 대부분은 30℃에서 3시간 동안 인큐베이션되었다(실시예 1의 피부 조각의 인큐베이션과 동일). 인큐베이션 후 엔도펩티다제의 잔류 활성을 30℃ 인큐베이션 희석액 A와 얼음(0℃)에 보관된 해당 희석액에 대해 결정하였다. 실시예 1 안정성은 30℃ 인큐베이션 희석액 A의 활성을 0℃ 인큠베이션 희석액 A의 활성으로 나눈 값으로 결정되었다.

인큐베이션 버퍼 B 희석액의 대부분은 30℃에서 4시간 동안 인큐베이션되었다. 효소 불활성화는 4℃와 같은 저온에서 최소이기 때문에 실시예 3에서 4℃에서 추가로 밤새 보관하는 것은 잔류 활성에 미미한 영향을 미쳤다. 인큐베이션 후, 엔도펩티다제의 잔류 활성을 측정하였다. 실시예 3 안정성은 30℃ 인큐베이션 희석액 B의 활성을 0℃ 인큐베이션 희석액 A의 활성으로 나눈 값으로 결정되었다. 이러한 방식으로 본 발명자들은 완충액에서 DTT로 인한 낮은 안정성과 긴 배양 시간으로 인한 낮은 안정성을 모두 설명한다.

Suc-AAPX-pNA(여기서 X는 다른 기질에서 다른 아미노산을 나타냄) 또는 Protazyme AK를 사용하여, 각 엔도펩티다제에 적합한 기질을 표 7에 나타내었다. Suc-AAPX-pNA 기질의 경우, 잔류 활성은 본 발명의 실시예 2에 기재된 활성 분석과 동일한 분석법에 의해 결정되었다. Protazyme AK의 경우, 20μl 엔도펩티다제 용액(0.01% Triton X-100에 희석)을, 1.5mL Eppendorf 튜브 중 500μl Protazyme AK 현탁액(아일랜드 위클로우에 소재하는 Megazyme Ltd.사의 Protozyme AK 정제 1개를 2.0ml 0.01% Triton X-100에 현탁시킨 것) 및 500μl 50mM MOPS/NaOH, 0.01% Triton X-100, pH 7.0의 빙냉 혼합물에 첨가함으로써 측정하였다. Protazyme AK 분석은 튜브를 37℃로 설정된 미리 데워진 Eppendorf Thermomixer로 옮기면서 개시되었다. 이어서, 튜브를 1100rpm의 열혼합기 상에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 튜브를 다시 아이스배쓰로 옮겼다. 200μl 냉각된 상등액을 마이크로타이터 플레이트로 옮기고 Molecular Devices의 VERSAmax 마이크로타이터 판독기에서 OD405를 판독하였다. 엔도펩티다제 샘플에 대한 OD405에서 완충액 블랭크에 대한 OD405를 뺀 값이 엔도펩티다제 샘플의 잔류 활성을 측정한 것이다. OD405 측정값이 1.5 OD405 유닛을 초과하는 경우, 엔도펩티다제를 추가로 희석하고 분석을 반복하였다.

데이터는 희석 인자를 고려하여 위에서 설명되고 표 8에 나열된 각 엔도펩티다제에 대한 상대적 활성에 해당한다.

모든 효소가 실시예 1과 동일한 조건에서 안정한 것을 알 수 있다. 따라서 효소는 전체 인큐베이션 기간 동안 활성적이었다.

모든 효소가 실시예 3과 동등한 조건에서 안정한 것은 아님을 알 수 있다. 이는 HZ-8, HZ-11, HZ-13 및 HZ-18이 인큐베이션 완충액 B에서 30℃에서 4시간 후에 활성이 감소되었기 때문인데, 이는 이들 엔도펩티다제가 전체 인큐베이션 기간 동안 100% 활성이 아님을 시사한다. 이들 데이터는 왜 HZ-13이 실시예 3에서 글루타밀 엔도펩티다제로서 낮은 성능을 나타내었는지를 설명해준다.

실시예 4: 엔도펩티다제 활성의 안정성.

Suc-AAPX-pNA(여기서 X는 다른 기질에서 다른 아미노산을 나타냄) 또는 Protazyme AK를 사용하여, 각 엔도펩티다제에 적합한 기질을 표 9에 나타내었다. Suc-AAPX-pNA 기질의 경우, 잔류 활성은 본 발명의 실시예 2에 기재된 활성 분석과 동일한 분석법에 의해 결정되었다. Protazyme AK의 경우, 20μl 엔도펩티다제 용액(0.01% Triton X-100에 희석)을, 1.5mL Eppendorf 튜브 중 500μl Protazyme AK 현탁액(아일랜드 위클로우에 소재하는 Megazyme Ltd.사의 Protozyme AK 정제 1개를 2.0ml 0.01% Triton X-100에 현탁시킨 것) 및 500μl 50mM MOPS/NaOH, 0.01% Triton X-100, pH 7.0의 빙냉 혼합물에 첨가함으로써 측정하였다. Protazyme AK 분석은 튜브를 37℃로 설정된 미리 데워진 Eppendorf Thermomixer로 옮기면서 개시되었다. 이어서, 튜브를 1100rpm의 열혼합기 상에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 튜브를 다시 아이스배쓰로 옮겼다. 200μl 냉각된 상등액을 마이크로타이터 플레이트로 옮기고 Molecular Devices의 VERSAmax 마이크로타이터 판독기에서 OD405를 판독하였다. 엔도펩티다제 샘플에 대한 OD405에서 완충액 블랭크에 대한 OD405를 뺀 값이 엔도펩티다제 샘플의 잔류 활성을 측정한 것이다. OD405 측정값이 1.5 OD405 유닛을 초과하는 경우, 엔도펩티다제를 추가로 희석하고 분석을 반복하였다.

결과

데이터는 희석 인자를 고려하여 위에서 설명되고 표 10에 나열된 각 엔도펩티다제에 대한 상대적 활성에 해당한다.

실시예 5: 글루타밀 엔도펩티다제는 외부 인간 피부층 단백질에 대해 미미한 활성을 갖는다

본 실시예는 엔도펩티다제가 피부 및 모낭으로의 효소 또는 기타 약제학적 화합물 전달에 대한 주요 생물학적 장벽을 포함하는 신체의 최외곽 피부층에 대해 얼마나 공격적인지를 평가하기 위한 분석을 설명한다.

실시예 1에서 ORS 조직에 대한 표적 활성을 나타낸 표 1 및 표 3에 나열된 SEQ ID NO: 1, 3, 6-8, 10 및 12-14의 9가지 엔도펩티다제를, 각 효소에 대한 각질층 단백질 가수분해 정도를 정량하기 위해 본 실시예에서 분석하였다.

딱딱하고 두꺼운 피부는 피부의 최외곽층인 각질층에 죽은 각질화 세포의 증가된 층으로 구성된다. 건강 측면에서, 이것은 손바닥과 발바닥에서 일반적으로 발견되는 보호 반응이거나 또는 피부병 병태에서 병리학의 원인이 될 수 있다. 건강한 인간 지원자의 건조한 발바닥에 금속 스크레이퍼를 사용하여 과립화되거나 또는 분말화된 굳은 기질을 준비하였다. 이 기질을 0.01% Triton X-100으로 두 번 세척하여 가용성 단백질을 제거하여 준비하였다. 0.01% Triton X-100의 25 mg/mL 현탁액을 준비하고 200μL 현탁액을 1.5 mL Eppendorf 튜브에 피펫으로 옮겼다. 짧은 원심분리에 의해 기질을 침전시키고 상등액은 버렸다. 펠렛을 Eppendorf 열혼합기(2000rpm, 2분)에서 교반하여 200㎕ 0.01% Triton X-100에 재현탁하고 현탁액을 다시 원심분리하고 상등액을 버렸다. 두 번째 침전물을 Eppendorf 혼합에 의해 180μL HZ 완충액에 재현탁하여 190μL 현탁액을 제조하고, 이를 얼음 위에 놓았다. 엔도펩티다제를 0.01% Triton X-100에서 500 ppm으로 희석하고 각 희석액 10μL를 피부 기질이 현탁된 Eppendorf 튜브에 첨가하여 이중 분석을 위한 25 ppm 엔도펩티다제의 최종 농도를 제공하였다. Eppendorf 튜브를 미리 데워진 Eppendorf 열혼합기(30분, 30℃, 2000rpm)에서 인큐베이션하고 인큐베이션 후 튜브를 다시 얼음으로 옮겨 수 분간 냉각하였다. 튜브를 원심분리하고 상등액을 0.01% Triton X-100에 10배 희석하였다.

각 엔도펩티다제에 대한 희석된 상등액의 가수분해 정도는 PIERCE BCA 단백질 분석 키트(Thermo Scientific의 23227)를 사용하여 562 nm에서 흡광도를 측정함으로써 가용화된 단백질 농도로서 표현하였다. 그 결과를 하기 표 11에 나타내었다.

표 11에서 HZ-10, HZ-11, HZ-19는 피부 외층의 대부분을 가수분해함을 확인할 수 있다. 너무 많은 비특이적 가수분해는 치료 효소 이상의 생물학적 장벽을 깨뜨릴 수 있으므로 바람직하지 않다. 글루타밀 엔도펩티다제는 현재 조건에서 피부 단백질에 대한 가수분해 활성이 4-5배 더 낮았고(HZ-2, HZ-15, HZ-13) 거의 없었다(HZ-35). 본 발명에 포함된 효소는 피부 외층 활성이 제한되어 있는 것이 유리할 수 있는데, 이는 이들 효소가 모발 방출을 촉진하기 위해 ORS를 파괴할 것이 요망될 뿐만 아니라, 일부 선택된 활성은 모낭, 각질층 세포 및 케라틴 파편이 있는 폐색된 모낭으로의 효소 전달 또는 모낭-연관 병변으로의 전달을 촉진할 것이 요망되기 때문이다.

실시예 6: 글루타밀 엔도펩티다제는 인간 수염 털의 인간 ORS 조직을 강력하게 파괴한다

본 실시예는 글루타밀 엔도펩티다제의 독특한 선택성이 어떻게 모낭-관련 질병을 유발하는 데 책임이 있는 인간 ORS 조직 및 그 케라틴 성분의 분해로 해석되는지를 설명한다. 실시예 1 및 실시예 3에서 활성을 나타내고 실시예 4에서 안정한 것으로 나타난, 표 1에 열거된 SEQ ID NO: 1 (HZ-2) 및 SEQ ID NO: 7 (HZ-10)의 2 가지 엔도펩티다제를, 본 실시예에서 현미경에 의한 분석을 위해 선택하여, 효소 인큐베이션 후 이들의 조직학적 활성을 평가하였다.

갓 뽑은 수염 털을 10개의 샘플로 수집하고 유리 슬라이드에 고정하였다(도 3). 총 6개의 샘플을 준비하였다. 하나의 샘플은 미처리 상태로 직접 염색하여 이미지화하였다(8). 또 다른 모발 샘플은 다음 용액에서 인큐베이션하였다. 하나의 샘플은 음성 대조군(200 μl 50 mM Tris pH 8, 2mM CaCl₂완충액(9))이었고, 두 개의 샘플은 HZ-2(동일한 완충액 중 200 μl 1 ppm HZ-2 (10) 또는 200 μl 30 ppm HZ-2 (11))와 함께 인큐베이션하였으며, 2개의 샘플은 HZ-10(동일한 완충액 중 200 μl 1 ppm HZ-10 (12) 또는 200 μl 30 ppm HZ-10 (13))으로 처리하였다. 증발을 피하기 위해 유리 슬라이드를 덮고 30℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 모발을 0.5M HCl IRS 염색의 적색 1% DMACA 및 McIvane 완충액 pH=3.6 중 2.5mg/ml 톨루이딘 블루와 Walpoles 완충액 pH=4.4 중 로다민 B의 1:1 혼합물을 포함하는 보라색/파란색 ORS 염색으로 염색하고 그 직후 광학 현미경 및 40X 배율을 사용하여 즉시 영상 처리하였다. 도 3의 각 샘플의 2-3개의 대표 모발에서 음성 대조군(9)의 ORS가 미처리 대조군(8)에 비해 변하지 않았음을 관찰할 수 있다. 30 ppm HZ-10 인큐베이션(13)의 경우 인큐베이션 후 완전히 각질화된 모간만 남았고 1 ppm HZ-10 인큐베이션(12)의 경우 저항성이 덜하지만 여전히 각질화된 IRS를 볼 수 있었다. 30 ppm HZ-2 인큐베이션의 경우(11) ORS의 내부 부분이 인큐베이션 후에 관찰되었고 1 ppm HZ-2 인큐베이션(10)의 경우 ORS 조직이 음성 대조군 크기의 두 배로 팽윤하는데 충분한 정도로만 가수분해되었음이 분명한다. 이들 데이터는 HZ-10과 비교하여 HZ-2가 더 좁은 특이성에도 불구하고 세포 및 조직 파괴의 관점에서 덜 공격적인 방식으로 ORS를 강력하게 파괴한다는 것을 시사한다. 선택적 조직 파괴는 원치 않는 부반응을 제한하여 더 안전한 치료를 보장하므로 본 발명에서 선호된다.

실시예 7: 글루타밀 엔도펩티다제는 인간 ORS 조직에서 I형 및 II형 케라틴을 강력하게 가수분해한다.

본 실시예는 인간 ORS 조직의 글루타밀 엔도펩티다제 단백질 기질을 문서화한다. 실시예 1 및 실시예 3에서 양성 반응을 나타내고 실시예 4에서 안정하고 실시예 5 및 실시예 6에서 상당한 활성을 나타낸 표 1의 SEQ ID NO: 1(HZ-2)의 엔도펩티다제를 SDS-PAGE를 사용하여 분석하여 ORS 조직 단백질을 특이적으로 가수분해하는 그의 능력을 조사하였다.

새로 뽑은 수염을 에펜도르프 튜브에 5개 샘플로 수집하였다. 총 3개의 샘플이 준비되었다(도 4). 샘플을 30℃에서 30분 동안 완충액에서 인큐베이션하였다. 하나의 샘플은 음성 대조군(50 mM Tris/HCl, pH 8,0.1% Triton X-100 및 2 mM CaCl₂ 완충액)이었고, 하나의 샘플은 HZ-2(동일한 완충액 중 200 μL 1 ppm)과 배양하였으며, 하나의 샘플은 HZ-2(동일한 완충액 중 200 μL 5 ppm)와 함께 배양하였다. 배양 후 상등액을 조심스럽게 제거하고 남은 조직을 8M 요소, 2% SDS, 100mM DTT 및 100mM Tris/HCl, pH 8, 30℃에서 30분 동안 용해시켰다. IRS와 모간의 덜 용해되는 특성으로 인해 추출된 단백질의 대부분은 ORS에서 파생되며, 이는 용해 전후 현미경으로 ORS의 부족이 관찰됨에 따라 확인되었다(데이터는 표시되지 않음). 단백질을 10kDa 분자 컷오프 스핀 필터를 사용하여 농축하고 쿠마시 블루로 염색된 SDS-PAGE를 사용하여 분리하여 프로테옴을 시각화하였다. MES 완충액과 10% Bolt Bis-Tris Plus 젤을 사용하였다. 결과를 도 4에 나타내었다. PageRuler Plus Prestained Protein ladder(14)(ThermoFischer Scientific)를 사용하여 겔의 밴드에 해당하는 대략적인 절대 크기를 동정하였다. 음성 대조군(15), 1 ppm HZ-2(16) 및 5 ppm HZ-2(17)를 균등하게 로딩하였다. 당업자가 주로 ORS의 I형(50-60kDa) 및 II형(60-70kDa) 케라틴에 해당한다고 결론을 내릴 두 개의 강하게 염색된 밴드 그룹이 있음을 관찰할 수 있다. 현재 조건에서 1 ppm HZ-2는 I형 케라틴을 분해한 반면, 5 ppm HZ-2는 실험 중에 I형 및 II형을 완전히 분해하여 두 가지 모두 여러 밴드를 손상시키지 않았다. 결과는 HZ-2가 강력하고 선택적인 ORS 케라티나제임을 나타낸다. ORS의 I형 및 II형 케라틴은 모발 고정에 필요하고 모낭 과각화증 및 폐색의 이펙터 분자이며 모낭의 기능 및 무결성을 지원하기 때문에, HZ-2에 의한 이들의 선택적 가수분해는 실시예 1 및 3에서 관찰된 모발 방출과, HZ-2와 같은 글루타밀 엔도펩티다제의 조성물이 모낭-연관 병태 및 모낭 피부병을 치료하는데 어떻게 사용될 수 있는지를 설명한다.

실시예 8: 글루타밀 엔도펩티다제는 건강한 인간 피부에서 ORS 조직을 선택적으로 파괴한다.

이 실시예는 인간 피부에서 글루타밀 엔도펩티다제에 의한 ORS 조직의 선택적 파괴를 설명한다. 실시예 1 및 실시예 3에서 모발을 방출할 수 있었고 실시예 4에서 안정하였으며, 실시예 5 및 6에서 유의한 활성을 나타낸, 표 1에 수록된 SEQ ID NO: 1 (HZ-2) 및 SEQ ID NO: 7 (HZ-10)의 두 가지 엔도펩티다제를, 효소 인큐베이션 후 조직학적 평가에 의해 분석하였다.

건강한 여성 지원자의 6mm 펀치 겨드랑이 피부 생검을 마이크로톰을 사용하여 10 μm 절편으로 냉동절제하였다. 피부 절편을 현미경 관찰을 위해 유리 슬라이드 위에 놓았다. 모낭을 통해 가로로 자른 3개의 대표적인 인접 피부 절편을 준비하였으며, 도 5(18)에서 40x 배율로 개략도를 나타내었다. 조직 절편을 슬라이드 상에서 완충액 한 방울에서 배양하고 증발을 방지하기 위해 30℃에서 30분 동안 덮은 다음 모간 및 ORS 주변의 동그라미 영역(18)을 광학 현미경을 사용하여 400x 배율로 시각화하였다. 하나의 절편은 음성 대조군(50 mM Tris/HCl pH 8 및 2mM CaCl₂ 완충액 (19))이었고, 다음 절편은 HZ-2(동일한 완충액 중 100 ppm HZ-2 (20))과 함께 배양되었으며, 다음 절편은 HZ-10(동일한 완충액 중 100 ppm HZ-10 (21))와 함께 배양되었다. 인큐베이션 후 절편들을 헤마톡실린 및 에오신(18-21)으로 또는 McIlvane 완충액 pH=3.6 중 2.5mg/ml 톨루이딘 블루 및 Walpoles 완충액 pH=4.4 중 0.1% 로다민 B로 10분 동안 염색한 다음, Walpoles 완충액 pH=4.4 중 1% 로다민 B로 1분간 염색하였다(22-24). 도 5에 제시된 데이터로부터 HZ-2(20)가 선택적으로 ORS 조직을 세포 덩어리(검은색 화살표)로 파괴하였음을 관찰할 수 있는데, 이는 음성 대조군에 필적하게 진피를 온전하게 남겨두면서(회색 화살표), 음성 대조군에 비해 주로 세포간 ORS 효과를 나타냄을 시사한다. 그러나 HZ-10(21)은 겉보기에 ORS 조직을 온전하게 유지하면서 ORS 세포 내용물을 파괴하였는데, 이는 주로 세포내 ORS 효과를 시사하며(검은색 화살표), 한편으로 진피의 콜라겐에 존재하는 핵을 가시적으로 제거하였다(회색 화살표). 형광 현미경을 사용하여 200x 배율로 로다민 B 염색을 녹색광으로 여기하자 콘트라스트가 향상되었고 HZ-2(23, 흰색 화살표의 ORS)가 음성 대조군(22, 검은색 화살표의 ORS) 및 현재 조건 하에서 HZ-10(24, 흰색 화살표의 ORS)과 대조적으로, 표피(표시되지 않음) 및 IRS [(23, 24)에서 흰색 화살표]와 같이 표피의 각질화를 겪은 비ORS 조직[(24)에서보다 (22, 23)에서 더 흰색인 조직]은 유의하게 파괴하지 않았음을 나타내었다. 이는 HZ-2가 HZ-10보다 비표적(off-target) 활동이 현저히 적으면서도 ORS 조직을 효과적으로 파괴함을 시사한다. HZ-2에 의해 보여지는 이러한 효과는 본 발명의 조성물 및 용도에 대해 기술된 바와 같이 모낭-연관 병태 및 모낭성 피부병의 효과적이고 안전한 치료에 가장 바람직하다.

실시예 9: 글루타밀 엔도펩티다제는 병변 화농성 한선염 피부에서 ORS 조직을 선택적으로 파괴한다.

이 실시예는 화농성 한선염 환자 피부에서 글루타밀 엔도펩티다제에 의한 ORS 조직의 선택적 파괴를 설명한다. 실시예 1 및 실시예 3에서 양성 반응을 보였고, 실시예 4에서 안정하였으며 실시예 5-6 및 실시예 8에서 유의한 활성을 나타낸, 표 1에 수록된 SEQ ID NO: 1 (HZ-2) 및 SEQ ID NO: 7 (HZ-10)의 2 가지 엔도펩티다제를, 환자 조직을 치료하는데 사용하고, 이 조직을 효소 인큐베이션 후 조직학적 평가에 의해 후속적으로 분석하였다.

명확한 염증 특성을 가진 중등도 화농성 한선염을 앓고 있는 여성 지원자로부터 10x10x8mm 겨드랑이 병변 피부 절제 생검(도 6, (25))을 (125 mM Tris/HCl pH 8, 0.25% Triton X-100 및 5 mM CaCl₂ 완충액 또는 HZ-2 (동일한 완충액 중 500 ppm HZ-2)에서 3시간 동안 30℃에 현탁하여 인큐베이션하였다. 샘플을 일주일 동안 10% 포르말린에 고정한 후 진공을 사용하여 건조하고 파라핀에 포매하였다. 유리 슬라이드에 피부부속물을 위치시킨 후마이크로톰을 이용하여 샘플을 4μm 절편으로 절제한 다음, 샘플을 60℃에서 1시간 동안 녹여 파라핀을 제거하고, Tissue Clear, 99% 에탄올, 70% 에탄올 및 탈이온수로 세척하였다. 조직을 Boin 고정액에 밤새 재고정한 후 탈이온수로 완전히 세척한 다음, 신선한 Weigert 철 헤마톡실린으로 10분 동안 염색하고, 탈이온수로 세척하고, 피크르산 10% Sirius Red로 15분 동안 대조염색하고, 99% 에탄올에서 2회 탈수하였다.

도 6에 제시된 바와 같은 치료 조건당 2 가지 상이한 대표 절편을 Sirius Red 여기 후 200x 줌 형광 현미경 이미지로부터, 음성 대조군 전병변(prelesional) 모낭(26)은 각질화, 폐색된 모낭 낭종(27)이 입증된 반면, HZ-2는 2개의 전-병변 모낭(28)에서 ORS 조직을 선택적으로 파괴하여 모간 주위에 분리된 ORS 세포를 남기는 한편, 주변 진피는 무손상인채로 그대로 두는 것으로 관찰되었다. HZ-2는 또한 초기 단계의 소포 낭종(29)을 비워둠으로써 이들을 분해하는 것으로 나타났다. 결론적으로, 실시예 8의 건강한 환자의 ORS와 같이, HZ-2는 화농성 한선염 환자의 병변 조직 및 전-모낭성 ORS 가능성이 있는 조직에서 활성을 나타내므로, 본 발명의 조성물 및 용도에 의한 치료를 목표로 하는 다수의 모낭-연관 병태 및 모낭성 피부병으로 고통받는 환자의 조직에 대해서도 동일한 효과를 나타낼 가능성이 있다.

실시예 10: 글루타밀 엔도펩티다제는 단백질의 국소 모낭 전달을 촉진한다

본 실시예는 털이 있는 돼지 피부의 모낭 내부에 반사성 나노입자의 침투 증가로 나타난 바와 같이, HZ-2를 갖는 조성물이 단백질(여기서는 효소 자체)과 같은 고분자량 화합물의 모낭 전달을 용이하게 함을 보여준다. 실시예 1 및 실시예 3에서 양성 반응을 제공하고 실시예 4에서 안정하였으며 실시예 5-6 및 실시예 8-9에서 유의한 활성을 나타 표 1에 열거된 SEQ ID NO: 1 (HZ-2) 및 7 (HZ-10)의 2 가지 엔도펩티다제를 반사 공초점 레이저 현미경으로 분석하였다..

도 7에서, 25mM Tris/HCl, pH 8, 150mM NaCl, 1% Span 20 계면활성제, 2mM 포타슘 소르베이트, 5mM CaCl₂를 포함하는 완충액을 음성 대조군으로 사용하였다. 완충액은 실시예 3의 국소 실험에 사용된 조성물과 매우 유사하며 DTT만 결여되어 있다. 음성 대조군, HZ-2(동일 완충액 중 500 ppm HZ-2) 및 HZ-10(동일 완충액 중 500 ppm HZ-10)을 도 2(6) 및 실시예 3에 도시된 바와 같이, 그러나 사전 미세바늘 천공 없이, 돼지 귀 등쪽에 엄격하게 국소적으로 추가하였다. 피부 절편을 PMMA 스퀘어에 접착하여 4℃서 20시간, 이어서 30℃에서 5시간 동안 인큐베이션하였다. 완충액을 버리고 PMMA 스퀘어를 제거한 후 생성된 효소-처리된 돼지 피부 샘플을 분석이 시작될 때까지 최대 2시간 동안 얼음에 보관하였다.

털을 3mm 길이로 다듬고 800nm에서 최대 흡수를 갖는 120nm 실리카 코어 금 나노입자(GNP)(CE 612960, SEB-250, Sebacia Inc.)를 장갑을 낀 손가락을 사용하여 2분 동안 피부에 마사지하였다. GNP 침투는, 830nm 반사 공초점 레이저 현미경을 정면으로 사용하여 분석함으로써, 피부 및 모낭 ORS 효소 활성에 대한 리포터로 사용되었다(도 7). GNP는 모낭을 침투할 때 이미지에서 모발 주위의 반사율을 증가시킴으로써 현미경 이미지의 콘트라스트를 향상시켜 준다. 스캔은 GNP 없이(30) 및 GNP 추가 후(31) 0 μm에서 수행되었다. 실험 중 피부 표면 아래 188μm(32)와 300μm(33)에서 반사율을 측정하여 각 샘플에 대한 GNP 침투 깊이를 평가하였다.

음성 대조군(37)의 경우 GNP는 188μm(34)의 깊이까지만 침투했지만 300μm는 침투하지 않은 것으로 나타났다. 놀랍게도, HZ-2는 GNP가 300μm 깊이까지 침투할 수 있도록 했는데(35, 38), 이 깊이는 모낭 누두의 많은 부분에 대응하며 화농한선염과 같은 소포성 피부병을 치료하기 위해 효소가 전달될 필요가 있는 모낭-연관 작용 부위에 해당한다. 그러나 보다 불특정한 HZ-10은 188μm(36)를 통과하지 못하여 300μm 깊이(39)에서 GNP의 흔적을 남기지 않았다. 300μm는 공초점 레이저 현미경의 기술적 한계이므로 HZ-2는 이보다 훨씬 더 깊게 침투함을 시사한다. 이 실시예는 모낭으로의 나노입자의 전달을 증가시키는 HZ-2의 능력을 추가로 설명하며, 이는 효소 기반 약물 및 기타 약물을 제형화하고 모낭 전달 또는 경우에 따라 모낭을 통한(transfollicular) 전달에 의해 질병을 치료하는 데 바람직한 방식이다. 본 실시예는 HZ-2 효소 자체와 같은 단백질 또는 글루타메이트-특이적 HZ-2의 존재 하에 안정한 임의의 다른 단백질 또는 국소적으로 전달됨으로써 산업적으로 이익을 얻을 수 있는 모든 의약품을 비롯한, 크고 작은 기타 화합물의 투과성을 향상시키기 위해 HZ-2를 사용할 가능성을 추가로 설명한다.

SEQUENCE LISTING <110> Henlez ApS <120> Compositions and methods for treating hair follicle-linked conditions <130> P023921PCT1 <150> EP 20169540.0 <151> 2020-04-15 <160> 14 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 222 <212> PRT <213> Bacillus licheniformis <400> 1 Ser Val Ile Gly Ser Asp Asp Arg Thr Arg Val Thr Asn Thr Thr Ala 1 5 10 15 Tyr Pro Tyr Arg Ala Ile Val His Ile Ser Ser Ser Ile Gly Ser Cys 20 25 30 Thr Gly Trp Met Ile Gly Pro Lys Thr Val Ala Thr Ala Gly His Cys 35 40 45 Ile Tyr Asp Thr Ser Ser Gly Ser Phe Ala Gly Thr Ala Thr Val Ser 50 55 60 Pro Gly Arg Asn Gly Thr Ser Tyr Pro Tyr Gly Ser Val Lys Ser Thr 65 70 75 80 Arg Tyr Phe Ile Pro Ser Gly Trp Arg Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asp 85 90 95 Tyr Gly Ala Ile Glu Leu Ser Glu Pro Ile Gly Asn Thr Val Gly Tyr 100 105 110 Phe Gly Tyr Ser Tyr Thr Thr Ser Ser Leu Val Gly Thr Thr Val Thr 115 120 125 Ile Ser Gly Tyr Pro Gly Asp Lys Thr Ala Gly Thr Gln Trp Gln His 130 135 140 Ser Gly Pro Ile Ala Ile Ser Glu Thr Tyr Lys Leu Gln Tyr Ala Met 145 150 155 160 Asp Thr Tyr Gly Gly Gln Ser Gly Ser Pro Val Phe Glu Gln Ser Ser 165 170 175 Ser Arg Thr Asn Cys Ser Gly Pro Cys Ser Leu Ala Val His Thr Asn 180 185 190 Gly Val Tyr Gly Gly Ser Ser Tyr Asn Arg Gly Thr Arg Ile Thr Lys 195 200 205 Glu Val Phe Asp Asn Leu Thr Asn Trp Lys Asn Ser Ala Gln 210 215 220 <210> 2 <211> 274 <212> PRT <213> Bacillus licheniformis <400> 2 Ala Gln Thr Val Pro Tyr Gly Ile Pro Leu Ile Lys Ala Asp Lys Val 1 5 10 15 Gln Ala Gln Gly Phe Lys Gly Ala Asn Val Lys Val Ala Val Leu Asp 20 25 30 Thr Gly Ile Gln Ala Ser His Pro Asp Leu Asn Val Val Gly Gly Ala 35 40 45 Ser Phe Val Ala Gly Glu Ala Tyr Asn Thr Asp Gly Asn Gly His Gly 50 55 60 Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asp Asn Thr Thr Gly Val 65 70 75 80 Leu Gly Val Ala Pro Ser Val Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Asn 85 90 95 Ser Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Ser Gly Ile Val Ser Gly Ile Glu Trp 100 105 110 Ala Thr Thr Asn Gly Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly Ala 115 120 125 Ser Gly Ser Thr Ala Met Lys Gln Ala Val Asp Asn Ala Tyr Ala Arg 130 135 140 Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Ser Gly Ser Ser Gly Asn 145 150 155 160 Thr Asn Thr Ile Gly Tyr Pro Ala Lys Tyr Asp Ser Val Ile Ala Val 165 170 175 Gly Ala Val Asp Ser Asn Ser Asn Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val Gly 180 185 190 Ala Glu Leu Glu Val Met Ala Pro Gly Ala Gly Val Tyr Ser Thr Tyr 195 200 205 Pro Thr Asn Thr Tyr Ala Thr Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser Pro 210 215 220 His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn Leu 225 230 235 240 Ser Ala Ser Gln Val Arg Asn Arg Leu Ser Ser Thr Ala Thr Tyr Leu 245 250 255 Gly Ser Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Glu Ala Ala 260 265 270 Ala Gln <210> 3 <211> 268 <212> PRT <213> Achromobacter lyticus <400> 3 Gly Val Ser Gly Ser Cys Asn Ile Asp Val Val Cys Pro Glu Gly Asp 1 5 10 15 Gly Arg Arg Asp Ile Ile Arg Ala Val Gly Ala Tyr Ser Lys Ser Gly 20 25 30 Thr Leu Ala Cys Thr Gly Ser Leu Val Asn Asn Thr Ala Asn Asp Arg 35 40 45 Lys Met Tyr Phe Leu Thr Ala His His Cys Gly Met Gly Thr Ala Ser 50 55 60 Thr Ala Ala Ser Ile Val Val Tyr Trp Asn Tyr Gln Asn Ser Thr Cys 65 70 75 80 Arg Ala Pro Asn Thr Pro Ala Ser Gly Ala Asn Gly Asp Gly Ser Met 85 90 95 Ser Gln Thr Gln Ser Gly Ser Thr Val Lys Ala Thr Tyr Ala Thr Ser 100 105 110 Asp Phe Thr Leu Leu Glu Leu Asn Asn Ala Ala Asn Pro Ala Phe Asn 115 120 125 Leu Phe Trp Ala Gly Trp Asp Arg Arg Asp Gln Asn Tyr Pro Gly Ala 130 135 140 Ile Ala Ile His His Pro Asn Val Ala Glu Lys Arg Ile Ser Asn Ser 145 150 155 160 Thr Ser Pro Thr Ser Phe Val Ala Trp Gly Gly Gly Ala Gly Thr Thr 165 170 175 His Leu Asn Val Gln Trp Gln Pro Ser Gly Gly Val Thr Glu Pro Gly 180 185 190 Ser Ser Gly Ser Pro Ile Tyr Ser Pro Glu Lys Arg Val Leu Gly Gln 195 200 205 Leu His Gly Gly Pro Ser Ser Cys Ser Ala Thr Gly Thr Asn Arg Ser 210 215 220 Asp Gln Tyr Gly Arg Val Phe Thr Ser Trp Thr Gly Gly Gly Ala Ala 225 230 235 240 Ala Ser Arg Leu Ser Asp Trp Leu Asp Pro Ala Ser Thr Gly Ala Gln 245 250 255 Phe Ile Asp Gly Leu Asp Ser Gly Gly Gly Thr Pro 260 265 <210> 4 <211> 268 <212> PRT <213> Bacillus halodurans <400> 4 Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Ser Phe Ile Asn Thr Gln Gln Ala His 1 5 10 15 Asn Arg Gly Ile Phe Gly Asn Gly Ala Arg Val Ala Val Leu Asp Thr 20 25 30 Gly Ile Ala Ser His Pro Asp Leu Arg Ile Ala Gly Gly Ala Ser Phe 35 40 45 Ile Ser Ser Glu Pro Ser Tyr His Asp Asn Asn Gly His Gly Thr His 50 55 60 Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu Gly 65 70 75 80 Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Asp Arg Asn 85 90 95 Gly Ser Gly Ser Leu Ala Ser Val Ala Gln Gly Ile Glu Trp Ala Ile 100 105 110 Asn Asn Asn Met His Ile Ile Asn Met Ser Leu Gly Ser Thr Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Thr Leu Glu Leu Ala Val Asn Arg Ala Asn Asn Ala Gly Ile 130 135 140 Leu Leu Val Gly Ala Ala Gly Asn Thr Gly Arg Gln Gly Val Asn Tyr 145 150 155 160 Pro Ala Arg Tyr Ser Gly Val Met Ala Val Ala Ala Val Asp Gln Asn 165 170 175 Gly Gln Arg Ala Ser Phe Ser Thr Tyr Gly Pro Glu Ile Glu Ile Ser 180 185 190 Ala Pro Gly Val Asn Val Asn Ser Thr Tyr Thr Gly Asn Arg Tyr Val 195 200 205 Ser Leu Ser Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val Ala 210 215 220 Ala Leu Val Lys Ser Arg Tyr Pro Ser Tyr Thr Asn Asn Gln Ile Arg 225 230 235 240 Gln Arg Ile Asn Gln Thr Ala Thr Tyr Leu Gly Ser Pro Ser Leu Tyr 245 250 255 Gly Asn Gly Leu Val His Ala Gly Arg Ala Thr Gln 260 265 <210> 5 <211> 342 <212> PRT <213> Saccharothrix variesporea <400> 5 Ala Gly Glu Thr Ala Gly Ala Leu Ala Thr Ala Cys Ala Thr Gly Thr 1 5 10 15 Trp Gly Tyr Leu Asp His Asp Gly Val Ala Arg Val Ser Pro Asn Ala 20 25 30 Lys Val Trp Ala Tyr Asp Asp Asp Ala Asn Gly Ala Asp Asp Leu Leu 35 40 45 Ala Thr Gly Leu Thr Asp Gly Asn Gly Arg Phe Asn Leu Cys Tyr Asp 50 55 60 Asn Thr Asp Asp Glu Gly Gly Gly Gln Asp Val Tyr Val Arg Thr Ala 65 70 75 80 Thr Glu Asn Thr Leu Trp Ile Ile Arg Asn Gly Arg Thr Arg Lys Ser 85 90 95 Tyr Ser Phe Tyr Thr Asp Val Ile Ala Asn Gly Gly Ser Ala Val Asp 100 105 110 Phe Gly Thr Val Arg Pro Ser Asp Pro Ala Leu Met Arg Gly Val Glu 115 120 125 Ala Phe Asp Thr Val Asn Ala Ala Trp Asn Trp Thr Pro Gly Asn Cys 130 135 140 Trp Asp Ala Arg Asp Thr Thr Cys Arg Gln Gly Lys Ile Asn Trp Ala 145 150 155 160 Pro Asp Ser Thr Asp Gly Thr Tyr Tyr Ser Leu Gln Glu Asn Ala Val 165 170 175 His Leu Ala Ala Glu Asp Pro Asp Ser Asn Ile Leu Val Leu His Glu 180 185 190 Phe Gly His Tyr Met Met Asp Asp Val Tyr Glu Asp Asp Phe Pro Pro 195 200 205 Ala Pro Asn Cys Ser Pro His Tyr Ile Thr Lys Ile Ser Ser Ala Gly 210 215 220 Cys Ala Trp Thr Glu Gly Phe Ala Thr Trp Phe Gly Val Ala Val Leu 225 230 235 240 Gly Asp Pro Thr Phe Arg Trp Pro Gly Gly Arg Thr Leu Asp Leu Glu 245 250 255 Gly Pro Thr Trp Gly Thr Ala Asn Trp Asp Asn Gly Asp Thr Val Glu 260 265 270 Gly Arg Val Leu Gly Ser Met Ile Asp Leu Tyr Asp Thr Thr Asn Glu 275 280 285 Pro Gly Asp Thr Cys Ser Glu Asn Pro Ala Gly Pro Leu Trp Thr Thr 290 295 300 Phe Leu Asn His Val Ser Asp Thr Phe Ala Gln Tyr Trp Ser His Arg 305 310 315 320 Arg Ala Asp Gly Tyr Asp Val Gly Ser Asn Ala Leu Ser Cys Leu Tyr 325 330 335 His Asn Thr Ile Asp Tyr 340 <210> 6 <211> 300 <212> PRT <213> Bacillus amyloliquefaciens <400> 6 Ala Ala Thr Thr Gly Thr Gly Thr Thr Leu Lys Gly Lys Thr Val Ser 1 5 10 15 Leu Asn Ile Ser Ser Glu Ser Gly Lys Tyr Val Leu Arg Asp Leu Ser 20 25 30 Lys Pro Thr Gly Thr Gln Ile Ile Thr Tyr Asp Leu Gln Asn Arg Glu 35 40 45 Tyr Asn Leu Pro Gly Thr Leu Val Ser Ser Thr Thr Asn Gln Phe Thr 50 55 60 Thr Ser Ser Gln Arg Ala Ala Val Asp Ala His Tyr Asn Leu Gly Lys 65 70 75 80 Val Tyr Asp Tyr Phe Tyr Gln Lys Phe Asn Arg Asn Ser Tyr Asp Asn 85 90 95 Lys Gly Gly Lys Ile Val Ser Ser Val His Tyr Gly Ser Arg Tyr Asn 100 105 110 Asn Ala Ala Trp Ile Gly Asp Gln Met Ile Tyr Gly Asp Gly Asp Gly 115 120 125 Ser Phe Phe Ser Pro Leu Ser Gly Ser Met Asp Val Thr Ala His Glu 130 135 140 Met Thr His Gly Val Thr Gln Glu Thr Ala Asn Leu Asn Tyr Glu Asn 145 150 155 160 Gln Pro Gly Ala Leu Asn Glu Ser Phe Ser Asp Val Phe Gly Tyr Phe 165 170 175 Asn Asp Thr Glu Asp Trp Asp Ile Gly Glu Asp Ile Thr Val Ser Gln 180 185 190 Pro Ala Leu Arg Ser Leu Ser Asn Pro Thr Lys Tyr Gly Gln Pro Asp 195 200 205 Asn Phe Lys Asn Tyr Lys Asn Leu Pro Asn Thr Asp Ala Gly Asp Tyr 210 215 220 Gly Gly Val His Thr Asn Ser Gly Ile Pro Asn Lys Ala Ala Tyr Asn 225 230 235 240 Thr Ile Thr Lys Ile Gly Val Asn Lys Ala Glu Gln Ile Tyr Tyr Arg 245 250 255 Ala Leu Thr Val Tyr Leu Thr Pro Ser Ser Thr Phe Lys Asp Ala Lys 260 265 270 Ala Ala Leu Ile Gln Ser Ala Arg Asp Leu Tyr Gly Ser Gln Asp Ala 275 280 285 Ala Ser Val Glu Ala Ala Trp Asn Ala Val Gly Leu 290 295 300 <210> 7 <211> 269 <212> PRT <213> Bacillus clausii <400> 7 Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala 1 5 10 15 His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp 20 25 30 Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser 35 40 45 Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr 50 55 60 His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu 65 70 75 80 Gly Val Ala Pro Ser Glu Ala Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala 85 90 95 Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala 100 105 110 Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser 115 120 125 Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly 130 135 140 Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln 165 170 175 Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile 180 185 190 Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr 195 200 205 Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala 210 215 220 Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile 225 230 235 240 Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Asp Thr Trp Glu 245 250 255 Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg 260 265 <210> 8 <211> 188 <212> PRT <213> Nocardiopsis sp NRRL 18262 <400> 8 Ala Asp Ile Ile Gly Gly Leu Ala Tyr Thr Met Gly Gly Arg Cys Ser 1 5 10 15 Val Gly Phe Ala Ala Thr Asn Ala Ala Gly Gln Pro Gly Phe Val Thr 20 25 30 Ala Gly His Cys Gly Arg Val Gly Thr Gln Val Thr Ile Gly Asn Gly 35 40 45 Arg Gly Val Phe Glu Gln Ser Val Phe Pro Gly Asn Asp Ala Ala Phe 50 55 60 Val Arg Gly Thr Ser Asn Phe Thr Leu Thr Asn Leu Val Ser Arg Tyr 65 70 75 80 Asn Thr Gly Gly Tyr Ala Thr Val Ala Gly His Asn Gln Ala Pro Ile 85 90 95 Gly Ser Ser Val Cys Arg Ser Gly Ser Thr Thr Gly Trp His Cys Gly 100 105 110 Thr Ile Gln Ala Arg Gly Gln Ser Val Ser Tyr Pro Glu Gly Thr Val 115 120 125 Thr Asn Met Thr Arg Thr Thr Val Cys Ala Glu Pro Gly Asp Ser Gly 130 135 140 Gly Ser Tyr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Gln Gly Val Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Ser Gly Asn Cys Arg Thr Gly Gly Thr Thr Phe Tyr Gln Glu Val Thr 165 170 175 Pro Met Val Asn Ser Trp Gly Val Arg Leu Arg Thr 180 185 <210> 9 <211> 185 <212> PRT <213> Streptomyces coelicolor <400> 9 Tyr Gln Pro Ser Ala Gly Ser Gly Glu Asp Ala Ala Ala Asn Arg Ala 1 5 10 15 Phe Phe Glu Ala Val Val Lys Ser Val Ala Glu Lys Arg Ala Ala Asn 20 25 30 Pro Ser Ala Ala Ala Ala Val Thr Val Tyr Tyr Ser Ala Thr Asn Ala 35 40 45 Pro Ser Phe Arg Ser Gln Ile Ser Arg Ser Ala Gln Ile Trp Asn Ser 50 55 60 Ser Val Ser Asn Val Arg Leu Ala Glu Ser Ser Ser Gly Ala Asp Phe 65 70 75 80 Ala Tyr Tyr Glu Gly Asn Asp Ser Arg Gly Ser Tyr Ala Ser Thr Asp 85 90 95 Gly His Gly Ser Gly Tyr Ile Phe Leu Asp Tyr Arg Gln Asn Gln Gln 100 105 110 Tyr Asp Ser Thr Arg Val Thr Ala His Glu Thr Gly His Val Leu Gly 115 120 125 Leu Pro Asp His Tyr Ser Gly Pro Cys Ser Glu Leu Met Ser Gly Gly 130 135 140 Gly Pro Gly Pro Ser Cys Thr Asn Pro Tyr Pro Asn Ser Thr Glu Arg 145 150 155 160 Ser Arg Val Asn Gln Leu Trp Ala Tyr Gly Phe Gln Ala Ala Leu Asp 165 170 175 Lys Ala Leu Glu Lys Ala Ser Gln Arg 180 185 <210> 10 <211> 224 <212> PRT <213> Fusarium oxysporum <400> 10 Ile Val Gly Gly Thr Ser Ala Ser Ala Gly Asp Phe Pro Phe Ile Val 1 5 10 15 Ser Ile Ser Arg Asn Gly Gly Pro Trp Cys Gly Gly Ser Leu Leu Asn 20 25 30 Ala Asn Thr Val Leu Thr Ala Ala His Cys Val Ser Gly Tyr Ala Gln 35 40 45 Ser Gly Phe Gln Ile Arg Ala Gly Ser Leu Ser Arg Thr Ser Gly Gly 50 55 60 Ile Thr Ser Ser Leu Ser Ser Val Arg Val His Pro Ser Tyr Ser Gly 65 70 75 80 Asn Asn Asn Asp Leu Ala Ile Leu Lys Leu Ser Thr Ser Ile Pro Ser 85 90 95 Gly Gly Asn Ile Gly Tyr Ala Arg Leu Ala Ala Ser Gly Ser Asp Pro 100 105 110 Val Ala Gly Ser Ser Ala Thr Val Ala Gly Trp Gly Ala Thr Ser Glu 115 120 125 Gly Gly Ser Ser Thr Pro Val Asn Leu Leu Lys Val Thr Val Pro Ile 130 135 140 Val Ser Arg Ala Thr Cys Arg Ala Gln Tyr Gly Thr Ser Ala Ile Thr 145 150 155 160 Asn Gln Met Phe Cys Ala Gly Val Ser Ser Gly Gly Lys Asp Ser Cys 165 170 175 Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Ile Val Asp Ser Ser Asn Thr Leu Ile 180 185 190 Gly Ala Val Ser Trp Gly Asn Gly Cys Ala Arg Pro Asn Tyr Ser Gly 195 200 205 Val Tyr Ala Ser Val Gly Ala Leu Arg Ser Phe Ile Asp Thr Tyr Ala 210 215 220 <210> 11 <211> 178 <212> PRT <213> Thermoascus aurantiacus <400> 11 Arg Thr Arg Ile Ser Ser Cys Ser Gly Ser Arg Gln Ser Ala Leu Thr 1 5 10 15 Thr Ala Leu Arg Asn Ala Ala Ser Leu Ala Asn Ala Ala Ala Asp Ala 20 25 30 Ala Gln Ser Gly Ser Ala Ser Lys Phe Ser Glu Tyr Phe Lys Thr Thr 35 40 45 Ser Ser Ser Thr Arg Gln Thr Val Ala Ala Arg Leu Arg Ala Val Ala 50 55 60 Arg Glu Ala Ser Ser Ser Ser Ser Gly Ala Thr Thr Tyr Tyr Cys Asp 65 70 75 80 Asp Pro Tyr Gly Tyr Cys Ser Ser Asn Val Leu Ala Tyr Thr Leu Pro 85 90 95 Ser Tyr Asn Ile Ile Ala Asn Cys Asp Ile Phe Tyr Thr Tyr Leu Pro 100 105 110 Ala Leu Thr Ser Thr Cys His Ala Gln Asp Gln Ala Thr Thr Ala Leu 115 120 125 His Glu Phe Thr His Ala Pro Gly Val Tyr Ser Pro Gly Thr Asp Asp 130 135 140 Leu Ala Tyr Gly Tyr Gln Ala Ala Met Gly Leu Ser Ser Ser Gln Ala 145 150 155 160 Val Met Asn Ala Asp Thr Tyr Ala Leu Tyr Ala Asn Ala Ile Tyr Leu 165 170 175 Gly Cys <210> 12 <211> 187 <212> PRT <213> Streptomyces griseus <400> 12 Val Leu Gly Gly Gly Ala Ile Tyr Gly Gly Gly Ser Arg Cys Ser Ala 1 5 10 15 Ala Phe Asn Val Thr Lys Gly Gly Ala Arg Tyr Phe Val Thr Ala Gly 20 25 30 His Cys Thr Asn Ile Ser Ala Asn Trp Ser Ala Ser Ser Gly Gly Ser 35 40 45 Val Val Gly Val Arg Glu Gly Thr Ser Phe Pro Thr Asn Asp Tyr Gly 50 55 60 Ile Val Arg Tyr Thr Asp Gly Ser Ser Pro Ala Gly Thr Val Asp Leu 65 70 75 80 Tyr Asn Gly Ser Thr Gln Asp Ile Ser Ser Ala Ala Asn Ala Val Val 85 90 95 Gly Gln Ala Ile Lys Lys Ser Gly Ser Thr Thr Lys Val Thr Ser Gly 100 105 110 Thr Val Thr Ala Val Asn Val Thr Val Asn Tyr Gly Asp Gly Pro Val 115 120 125 Tyr Asn Met Val Arg Thr Thr Ala Cys Ser Ala Gly Gly Asp Ser Gly 130 135 140 Gly Ala His Phe Ala Gly Ser Val Ala Leu Gly Ile His Ser Gly Ser 145 150 155 160 Ser Gly Cys Ser Gly Thr Ala Gly Ser Ala Ile His Gln Pro Val Thr 165 170 175 Glu Ala Leu Ser Ala Tyr Gly Val Thr Val Tyr 180 185 <210> 13 <211> 215 <212> PRT <213> Bacillus pumilus JA16 <400> 13 Val Val Ile Gly Asp Asp Gly Arg Thr Lys Val Thr Asn Thr Arg Val 1 5 10 15 Ala Pro Tyr Asn Ser Ile Ala Tyr Ile Thr Phe Gly Gly Ser Ser Cys 20 25 30 Thr Gly Thr Leu Ile Ala Pro Asn Lys Ile Leu Thr Asn Gly His Cys 35 40 45 Val Tyr Asn Thr Ala Thr Arg Ser Tyr Ser Ala Lys Gly Ser Val Tyr 50 55 60 Pro Gly Met Asn Asp Ser Thr Ala Val Asn Gly Ser Ala Asn Met Thr 65 70 75 80 Glu Phe Tyr Val Pro Ser Gly Tyr Ile Asn Thr Gly Ala Ser Gln Tyr 85 90 95 Asp Phe Ala Val Ile Lys Thr Asp Thr Asn Ile Gly Asn Thr Val Gly 100 105 110 Tyr Arg Ser Ile Arg Gln Val Thr Asn Leu Thr Gly Thr Thr Ile Lys 115 120 125 Ile Ser Gly Tyr Pro Gly Asp Lys Met Arg Ser Thr Gly Lys Val Ser 130 135 140 Gln Trp Glu Met Ser Gly Pro Val Thr Arg Glu Asp Thr Asn Leu Ala 145 150 155 160 Tyr Tyr Thr Ile Asp Thr Phe Ser Gly Asn Ser Gly Ser Ala Met Leu 165 170 175 Asp Gln Asn Gln Gln Ile Val Gly Val His Asn Ala Gly Tyr Ser Asn 180 185 190 Gly Thr Ile Asn Gly Gly Pro Lys Ala Thr Ala Ala Phe Val Glu Phe 195 200 205 Ile Asn Tyr Ala Lys Ala Gln 210 215 <210> 14 <211> 268 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <400> 14 Val Ile Leu Pro Asn Asn Asp Arg His Gln Ile Thr Asp Thr Thr Asn 1 5 10 15 Gly His Tyr Ala Pro Val Thr Tyr Ile Gln Val Glu Ala Pro Thr Gly 20 25 30 Thr Phe Ile Ala Ser Gly Val Val Val Gly Lys Asp Thr Leu Leu Thr 35 40 45 Asn Lys His Val Val Asp Ala Thr His Gly Asp Pro His Ala Leu Lys 50 55 60 Ala Phe Pro Ser Ala Ile Asn Gln Asp Asn Tyr Pro Asn Gly Gly Phe 65 70 75 80 Thr Ala Glu Gln Ile Thr Lys Tyr Ser Gly Glu Gly Asp Leu Ala Ile 85 90 95 Val Lys Phe Ser Pro Asn Glu Gln Asn Lys His Ile Gly Glu Val Val 100 105 110 Lys Pro Ala Thr Met Ser Asn Asn Ala Glu Thr Gln Val Asn Gln Asn 115 120 125 Ile Thr Val Thr Gly Tyr Pro Gly Asp Lys Pro Val Ala Thr Met Trp 130 135 140 Glu Ser Lys Gly Lys Ile Thr Tyr Leu Lys Gly Glu Ala Met Gln Tyr 145 150 155 160 Asp Leu Ser Thr Thr Gly Gly Asn Ser Gly Ser Pro Val Phe Asn Glu 165 170 175 Lys Asn Glu Val Ile Gly Ile His Trp Gly Gly Val Pro Asn Glu Phe 180 185 190 Asn Gly Ala Val Phe Ile Asn Glu Asn Val Arg Asn Phe Leu Lys Gln 195 200 205 Asn Ile Glu Asp Ile His Phe Ala Asn Asp Asp Gln Pro Asn Asn Pro 210 215 220 Asp Asn Pro Asp Asn Pro Asn Asn Pro Asp Asn Pro Asn Asn Pro Asp 225 230 235 240 Glu Pro Asn Asn Pro Asp Asn Pro Asn Asn Pro Asp Asn Pro Asp Asn 245 250 255 Gly Asp Asn Asn Asn Ser Asp Asn Pro Asp Ala Ala 260 265

Claims

각질형성세포에 의해 지원되어 생물학적 장벽, 그의 기능 및 구조를 유지하는 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 기능과 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소를 포함하는 조성물로서, 여기서 상기 조성물은:
a. 하나 이상의 효소에 더하여 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 성분을 포함하는 의약 조성물;
또는
b. 하나 이상의 효소에 더하여 적어도 하나의 미용적으로 허용가능한 성분을 포함하는 미용 조성물
인 것인, 조성물.
제1항에 있어서, 각질형성세포에 의해 지원되어 생물학적 장벽, 그의 기능 및 구조를 유지하는 인간 피부 및 모낭과 같은 그의 부속기의 기능과 무결성을 지원하는 단백질 케라틴과 같은 각질형성세포 이펙터 분자의 가수분해를 촉매할 수 있는 하나 이상의 효소는 글루타밀 엔도펩티다제로부터 선택되는 것인 조성물.
제2항에 있어서, 글루타밀 엔도펩티다제는 SEQ ID NO: 1의 서열을 갖는 폴리펩타이드에 대해 적어도 60% 서열 동일성, 예컨대 적어도 70% 서열 동일성; 예컨대 적어도 80% 서열 동일성; 예컨대 적어도 90% 서열 동일성; 예컨대 적어도 95% 서열 동일성; 예컨대 적어도 96% 서열 동일성; 예컨대 적어도 97% 서열 동일성; 예컨대 적어도 98% 서열 동일성; 예컨대 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 글루타밀 엔도펩티다제로부터 선택되는 것인 조성물.
제2항에 있어서, 글루타밀 엔도펩티다제는 글루타밀 엔도펩티다제는 SEQ ID NO: 13의 서열을 갖는 폴리펩타이드에 대해 적어도 60% 서열 동일성, 예컨대 적어도 70% 서열 동일성; 예컨대 적어도 80% 서열 동일성; 예컨대 적어도 90% 서열 동일성; 예컨대 적어도 95% 서열 동일성; 예컨대 적어도 96% 서열 동일성; 예컨대 적어도 97% 서열 동일성; 예컨대 적어도 98% 서열 동일성; 예컨대 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 글루타밀 엔도펩티다제로부터 선택되는 것인 조성물.
제3항에 있어서, 글루타밀 엔도펩티다제는 SEQ ID NO: 1을 포함하거나 이로 이루어진 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 1과 비교하여 하나 이상의 치환, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 치환을 포함하는 그의 변이체로부터 선택되는 것인 조성물.
제4항에 있어서, 글루타밀 엔도펩티다제는 SEQ ID NO: 13을 포함하거나 이로 이루어진 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 13과 비교하여 하나 이상의 치환, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 치환을 포함하는 그의 변이체로부터 선택되는 것인 조성물.
제2항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 글루타밀 엔도펩티다제는 조성물 g 당 1μg 내지 10 mg 효소 단백질의 범위의 양으로 존재하는 것인 조성물.
선행하는 항들 중 어느 하나의 항에 있어서, 효소의 기능 및 목적 달성을 용이하게 하기 위해 효소를 작용 부위로 전달하는 것이 촉진되도록, 조성물은 겔, 크림 예컨대 친수성 및 소수성 상의 반고체 에멀젼, 나노에멀젼 및 마이크로에멀젼및 세 개 이상의 상을 포함하는 반고체 및/또는 액체, 천, 스폰지, 페이스트, 펠릿, 샴푸, 비누, 젤리, 로션, 거품, 연고, 필름, 스프레이, 용액, 액체, 오일, 연고, 액체 또는 고체 현탁액 중 서브나노미터 내지 마이크로미터 크기 입자의 현탁액, 의료용 패치, 미세바늘이 있는 의료용 패치, 용해성 미세바늘이 있는 의료용 패치, 미세바늘이 있는 더마 롤러, 이온영동, 압축 공기압, 고형 피부 임플란트, 반고형 피부 임플란트, 액상 피부 임플란트, 피부 문신, 롤온, 면봉, 시럽, 테이프, 웨이퍼 또는 주사가능한 액체, 주사가능한 용액, 주사가능한 에멀젼 또는 주사가능한 현탁액으로 제형화되는 것인 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 따른 의약 조성물을 포함하는 의료 장치.
제9항에 있어서, 의료 장치는 조성물을 포함하는 패치 또는 주사가능한 액체인 의약 조성물.
모낭성 피부병 및 모낭-연관 병태를 치료하기 위한, 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 따른 조성물, 또는 제9항 또는 제10항에 따른 의료 장치의 용도.
제11항에 있어서, 조성물은 의약 조성물이고 모낭-연관 병태 및 모낭성 피부병은: 조모증, 다모증 또는 수발 가성모낭염; 또는 심상성 여드름, 모공각화증, 다울링-데고스병, 헤일리-헤일리병, 유방 누공 또는 응괴성 여드름, 모소동, 두피의 해부 봉와직염 및 화농성 한선염을 포함하는 모낭 폐색 테트라드 증후군의 발병을 유발하는 모낭 과각화증 또는 모낭 폐색에 의해 유도되는 모낭성 피부병; 또는 모낭성 건선, 유모성 비강진, 원판형 루푸스, 편평태선, 비대성 편평태선, 모낭성 편평태선, 경화성 태선, 극상태선, Wong형 피부근염을 포함하는 염증성 모낭-연관 병태, 포스트 칼라 아자르 피부 리슈만편모충증, 경계성 결핵성 나병에서 I형 반응, 모낭 비강진을 포함하는 감염성 모낭-연관 병태; 및 면포 모반, 모낭성 균상 식육종 및 두꺼비양 피부증을 포함하는 기타 모낭-연관 질환으로부터 선택되는 것인 용도.
모낭성 피부병 및 모낭-연관 병태를 치료하기 위한, 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 따른 조성물, 또는 제9항 또는 제10항에 따른 의료 장치의 용도.
제11항 또는 제12항에 있어서, 조성물은 감수성 있는 개체에서 모낭성 피부병 및 모낭-연관 병태의 발병을 예방하기 위해 사용되는 것인 용도.
제11항에 있어서, 조성물은 미용 조성물이고 원치 않는 모발의 제거에 사용되는 것인 용도.
제11항에 있어서, 조성물은 미용 조성물이고 피부 박피에 사용되는 것인 용도.
제11항 또는 제12항에 있어서, 조성물은 효소 자신을 포함하여 효소와 같은 하나 이상의 단백질의 피부 및 모낭 전달을 촉진하기 위해 사용되는 것인 용도.
제11항 또는 제12항에 있어서, 조성물은 다른 약제 또는 화장품 성분의 모낭 및 피부 전달을 향상시키기 위해 사용되는 용도.
제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 있어서, 인간의 모낭-연관 병태 및 모낭성 피부병의 치료를 위한 약제 또는 의약으로서 사용하기 위한 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 있어서, 조모증, 다모증 또는 수발 가성모낭염; 또는 심상성 여드름, 모공각화증, 다울링-데고스병, 헤일리-헤일리병, 유방 누공 또는 응괴성 여드름, 모소동, 두피의 해부 봉와직염 및 화농성 한선염을 포함하는 모낭 폐색 테트라드 증후군의 발병을 유발하는 모낭 과각화증 또는 모낭 폐색에 의해 유도되는 모낭성 피부병; 또는 모낭성 건선, 유모성 비강진, 원판형 루푸스, 편평태선, 비대성 편평태선, 모낭성 편평태선, 경화성 태선, 극상태선, Wong형 피부근염을 포함하는 염증성 모낭-연관 병태, 포스트 칼라 아자르 피부 리슈만편모충증, 경계성 결핵성 나병에서 I형 반응, 모낭 비강진을 포함하는 감염성 모낭-연관 병태; 및 면포 모반, 모낭성 균상 식육종 및 두꺼비양 피부증을 포함하는 기타 모낭-연관 질환을 치료하는데 사용되기 위한 것인 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 인간의 모낭-연관 병태 및 모낭성 피부병과 관련된 미용 용도를 위한 것인 조성물.