KR20220163978A

KR20220163978A - 상염색체 우성 다낭 신질환 (adpkd) 의 치료에서의 티에노피리돈 유도체의 용도

Info

Publication number: KR20220163978A
Application number: KR1020227037021A
Authority: KR
Inventors: 세바스띠앙 볼즈; 파스깔 푸께레; 소피 알라꾸-보젝
Original assignee: 폭셀
Priority date: 2020-04-02
Filing date: 2021-04-02
Publication date: 2022-12-12
Also published as: BR112022019403A2; US20230120204A1; DK4125887T3; AU2021250655A1; CA3171422A1; FI4125887T3; PT4125887T; CN115361949A; MX2022012350A; WO2021198506A1; EP4125887A1; IL296843A; JP7366290B2; JP2023510039A; EP4125887B1

Abstract

본 발명은 상염색체 우성 다낭 신질환 (ADPKD) 의 치료에서의 티에노피리돈 유도체, 또는 이를 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

상염색체 우성 다낭 신질환 (ADPKD) 의 치료에서의 티에노피리돈 유도체의 용도

본 발명은 상염색체 우성 다낭 신질환 (ADPKD) 의 치료에서의 티에노피리돈 유도체의 용도에 관한 것이다.

상염색체 우성 다낭 신질환 (ADPKD) 은 500 명 중 1 명 내지 1000 명 중 1 명의 발생 정도를 갖는 가장 흔한 단일유전자 유전성 신장 질환이다 (P. Igarashi et al., J. Am. Soc . Nephrol., 13(9), 2384-2398, 2002). 폴리시스틴-1 및 폴리시스틴-2 를 코딩하는 PKD1 및 PKD2 유전자에서의 돌연변이는 각각 ADPKD 사례의 85% 및 15% 를 차지한다. ADPKD 는 수많은 양측성 신장낭의 진행성 발달 및 성장으로 인해 급성 및 만성 통증, 신장 결석 및 요로 감염과 같은 다수의 이상을 초래하는 것을 특징으로 하며, 이 중 가장 중요한 것은 신장 기능의 손실이다. 대략 70% 의 ADPKD 환자는 58 세의 중위 연령에서 말기 신장 질환 (ESRD) 으로 진행한다 (E.M. Spithoven et al., Kidney Int., 86(6), 1244-1252, 2014).

ADPKD 에 대한 수많은 치료요법이 낭포 성장을 유도하는 다양한 신호전달 경로를 표적으로 하여 제안되었다. 이들은 바소프레신 수용체 억제제 예컨대 톨밥탄, 소마토스타틴 유사체 예컨대 옥트레오티드 및 란레오티드, 프라바스타틴 및 티로신 키나아제 억제제 예컨대 테세바티닙을 포함한다. 이들 중에서, 톨밥탄은 ADPKD 가 급속히 진행될 위험성이 있는 성인의 신장 기능 저하를 늦추기 위해 FDA 에 의해 승인된 첫 번째 약물 치료였다. 그러나, 톨밥탄은 잠재적인 간세포 독성으로 인해, 이를 치료한 환자에서 간 기능의 빈번한 모니터링을 필요로 한다. 이들 화합물은 ADPKD 의 병인론에 포함되는 것으로 생각되는 핵심 과정 (증식 또는 분비) 중 하나를 표적으로 한다.

최근, 낭포액의 분비에 관여하는 낭포성 섬유증 막횡단 전도 조절자 (CFTR) 및 낭포 상피 세포의 증식을 유도할 수 있는 포유류 라파마이신 표적 (mTOR) 경로가 모두 AMP-활성화된 단백질 키나아제 (AMPK) 에 의해 음성적으로 조절될 수 있다는 것이 나타났다. 따라서, AMPK 의 활성제는 ADPKD 의 2 개의 핵심 과정을 동시에 표적화할 수 있다. 이러한 맥락에서, AMPK 의 공지된 간접 활성제인 메트포르민을 사용하여 낭포 확장의 분비 및 증식 성분 모두를 억제함으로써 신장낭 형성을 늦추는 것이 제시되었다 (V. Takiar et al., PNAS, Vol. 108, No. 6, 2462-2467, 2011). 그러나, 메트포르민은 부작용으로 유산산증을 유도하는 것으로 알려져 있다. 메트포르민이 신장에 의해 제거되기 때문에, 만성 신장 질환은 이러한 합병증에 대한 잠재적인 소인 인자로 간주되어 왔다. 또한, 인간 신장에서 메트포르민을 이용한 치료적 AMPK 활성화는 적어도 그의 생체이용률이 감소하기 때문에 높은 경구 용량을 요구할 수 있다는 우려가 있다.

메트포르민 외에, 다른 AMPK 활성화제가 ADPKD 의 치료에 유용할 수 있다는 것이 제시되었다. 따라서, WO2017/011917 은 광범위한 화학식에 의해 정의된 다수의 티에노피리돈을 개시하고 있으며, 이들이 어떻게 합성될 수 있는지 및 어떤 특정 화합물이 포함되는지에 대해서는 나타내지 않는다.

보다 최근에, 살살레이트, 살리실레이트의 전구약물 이량체 및 직접적인 AMPK 활성화제는 메트포르민보다 돌연변이 마우스에서 낭포성 신장 질환 중증도를 감소시키는데 더 효과적인 것으로 나타났다 (W.N. Leohnard et al., EBioMedicine, Vol. 47, 436-445, 2019). 살살레이트는 AMPK β1 동형의 약물 결합 도메인과의 직접적인 상호작용을 통해 AMPK 를 활성화시킨다. 그러나, 치료 효과를 제공하는데 필요한 살살레이트의 경구 용량은, 메트포르민에 비해 생체이용률이 보다 양호함에도 불구하고, 높게 유지된다.

따라서, 이러한 목적을 위해 제안된 화합물과 비교하여 더 낮은 용량에서 및/또는 더 큰 효능으로 및/또는 감소된 부작용으로 ADPKD 의 치료에 유용할 대안적인 화합물에 대한 필요성이 남아 있다.

본 발명자들은 이제 특정 티에노피리돈 유도체가 다른 AMPK 활성제보다 더 낮은 경구 용량으로 ADPKD 의 치료에 사용될 수 있다는 것을 보여주었다. 이들 화합물은 WO 2014/001554 에서 AMPK 활성제로서 광범위하게 개시되어 있으나, ADPKD 의 치료에 이들을 사용하는 것은 지금까지 제시된 적이 없다. 이들은 β1 서브유닛을 포함하는 다양한 AMPK 동형의 직접적인 활성제인 것으로 입증되었다.

발명의 개요

본 발명은 ADPKD 의 치료에서 사용하기 위한, 식 (I) 의 티에노피리돈 유도체, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및/또는 용매화물, 또는 이를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다:

[식 중:

R1 은 수소 원자 또는 할로겐 원자를 나타내고,

R2 는 할로겐 원자, 알킬 기, 히드록시, 알콕시 기, 아미노, 모노- 또는 디-알킬아미노 기, 카르복시 기, 알킬옥시카르보닐 기, 모노- 또는 디-알킬아미노카르보닐 기, 카르복사미드, 시아노, 알킬술포닐 및 트리플루오로메틸 기에서 선택되는 하나 이상의 (예를 들어 2, 3, 4, 5, 6 또는 7 개) 기에 의해 치환되거나 미치환되는 인다닐 또는 테트랄리닐 기를 나타내고,

R3 은 할로겐 원자, 알킬 기, 히드록시, 알콕시 기, 아르알킬옥시 기, 아미노, 모노- 또는 디-알킬아미노 기, 카르복시 기, 알킬옥시카르보닐 기, 모노- 또는 디-알킬아미노카르보닐 기, 카르복사미드, 시아노, 알킬술포닐 및 트리플루오로메틸 기에서 선택되는 하나 이상의 (예를 들어 2, 3, 4 또는 5 개) 원자 또는 기에 의해 치환되거나 미치환되는 아릴 기를 나타냄].

본 발명은 또한, 상기 기재된 바와 같은 유효량의 티에노피리돈 유도체, 또는 상기 기재된 바와 같은 유효량의 티에노피리돈 유도체 및 약학적으로 허용가능한 지지체를 포함하는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 ADPKD 의 치료 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 ADPKD 치료용 약제의 제조를 위한, 상기 기재된 바와 같은 티에노피리돈 유도체, 또는 이를 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다.

도 1 은 10μM, 100μM 및 1mM 메트포르민 또는 10μM, 25μM 또는 50μM PXL770 의 존재 하에 pIMDCK 세포로부터 형성된 낭포의 부피를 대조 배지와 비교하여 나타낸다.
도 2 는 10μM, 100μM 및 1mM 메트포르민 또는 10μM, 25μM 또는 50μM PXL770 의 존재 하에 pIMDCK 세포로부터 형성된 낭포의 사진을 나타낸다.
도 3 은 유사한 화합물과 비교하여 본 발명의 다양한 티에노피리돈의 낭포 팽윤에 대한 효능을 평가하는 시험관내 실험 결과를 나타낸다.

발명의 상세한 설명

정의

본원에서 사용되는 바와 같이, 하기 용어는 명시적으로 달리 언급되지 않는 한, 하기 의미로 정의된다.

용어 "할로겐 원자" 는 플루오린, 염소, 브롬 및 요오드 원자에서 선택되는 원자를 지칭한다.

용어 "알킬 기" 는 1 내지 5 개의 탄소 원자의 선형 또는 분지형 포화 사슬, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소-부틸 또는 tert-부틸을 지칭한다. 바람직하게는, 알킬 기는 1 내지 3 개의 탄소 원자의 선형 또는 분지형 포화 사슬, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필 또는 이소-프로필 기이다.

용어 "아릴 기" 는 할로겐 원자, 알킬 기, 히드록시 (OH), 알킬옥시 기, 아미노 (NH₂), 모노- 또는 디-알킬아미노 기, 카르복시 (COOH), 알킬옥시카르보닐 기, 모노- 또는 디-알킬아미노카르보닐 기, 카르복사미드 (CONH₂), 시아노 (CN), 알킬술포닐 기 및 트리플루오로메틸 (CF₃) 에서 선택되는 하나 이상의 원자 또는 기에 의해 임의 치환되는, 페닐 또는 나프틸 기와 같은 C6-C18 방향족 기를 지칭한다. 보다 구체적으로, 아릴 기는 플루오린, 염소, 브롬 원자, 히드록시, 메톡시, 에톡시, 아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, 이소-프로필, sec-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, 카르복시, 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐, 카르복사미드, 디메틸아미노카르보닐, 메틸아미노카르보닐, 시아노, 메틸술포닐 또는 트리플루오로메틸 기에 의해 치환되거나 미치환될 수 있다.

용어 "아르알킬 기" 는 이의 수소 원자가 상기 정의된 바와 같은 아릴 기에 의해 대체되는, 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 아르알킬 기의 예는 벤질 기이다.

용어 "알킬옥시" (또는 "알콕시") 기는 산소 원자를 통해 분자의 나머지에 연결된 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 알킬옥시 기 중에서, 메톡시 및 에톡시 기가 언급될 수 있다.

용어 "아르알킬옥시" 기는 산소 원자를 통해 분자의 나머지에 연결된 상기 정의된 바와 같은 아르알킬기를 지칭한다. 아르알킬옥시 기 중에서, 벤질옥시 기가 언급될 수 있다.

용어 "알킬아미노 기" 는 질소 원자를 통해 분자의 나머지에 연결된 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 알킬아미노 기 중에서, 디메틸아미노 및 디에틸아미노 기가 언급될 수 있다.

용어 "알킬옥시카르보닐 기" 는 카르보닐 기를 통해 분자의 나머지에 연결된 상기 정의된 바와 같은 알킬옥시 기를 지칭한다.

용어 "알킬아미노카르보닐 기" 는 카르보닐 기를 통해 분자의 나머지에 연결된 상기 정의된 바와 같은 알킬아미노 기를 지칭한다.

용어 "알킬술포닐" 은 SO2 기를 통해 분자의 나머지에 연결된 상기 정의된 바와 같은 알킬을 지칭한다. 알킬술포닐 기 중에서, 메틸술포닐 및 에틸술포닐 기가 언급될 수 있다.

화합물의 "용매화물" 은 상호 인력으로 인해 형성되는, 화합물 상에의 불활성 용매 분자의 내전 (adduction) 을 의미하는 것으로 본 발명에서 취해진다. 용매화물은 예를 들어, 히드레이트 또는 알코올레이트이다.

[식 중:

R1 은 수소 원자 또는 할로겐 원자를 나타내고,

식 (I) 의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염의 예는 당업계에 통상적으로 공지된 절차에 의해 식 (I) 의 화합물을 다양한 유기 및 무기 염기와 반응시켜 수득되어, 상응하는 염기-부가 염이 제공될 수 있다. 이러한 염기는 예를 들어, 포타슘 히드록시드, 소듐 히드록시드 및 리튬 히드록시드를 포함하는 알칼리 금속 히드록시드; 포타슘 카르보네이트 및 소듐 카르보네이트를 포함하는 알칼리 금속 카르보네이트; 알칼리 토금속 히드록시드, 예컨대 바륨 히드록시드 및 칼슘 히드록시드; 알칼리 토금속 카르보네이트; 알칼리 금속 알콕시드, 예를 들어 포타슘 에톡시드 및 소듐 프로폭시드; 및 다양한 유기 염기, 예컨대 피페리딘, 디에탄올아민 및 N-메틸글루타민이다. 마찬가지로, 식 (I) 의 화합물의 알루미늄 염이 포함된다.

따라서, 식 (I) 의 화합물의 염은 알루미늄, 암모늄, 칼슘, 구리, 철(III), 철(II), 리튬, 마그네슘, 망간(III), 망간(II), 포타슘, 소듐 및 아연 염을 포함하지만, 이는 제한을 나타내는 것으로 의도되지 않는다. 상기 언급된 염 중에서, 모노-, 디- 및 트리- 소듐 또는 포타슘 염, 가장 바람직하게는 포타슘 염이 바람직하다.

식 (I) 의 화합물의 임의의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 이 화합물 자체는 그의 용매화물 중 하나의 형태로 본 발명에서 사용될 수 있다. 화합물의 "용매화물" 은 상호 인력으로 인해 형성되는, 화합물 상에의 불활성 용매 분자의 내전을 의미하는 것으로 본 발명에서 취해진다. 따라서, 용매화물의 성질은 염기와 식 (I) 의 화합물의 반응 동안 사용되는 용매에 따라 좌우된다. 용매화물의 예는 알코올 용매화물, 예를 들어 메탄올 또는 에탄올 용매화물, 및 모노-, 디-, 트리- 또는 테트라히드레이트를 포함하는 히드레이트를 포함하지만, 이는 제한을 나타내는 것으로 의도되지 않는다.

특정 구현예에서, 하기 조건 중 적어도 하나가 충족되며, 바람직하게는 이들 모두가 충족된다:

ㆍ R1 은 할로겐 원자, 특히 염소 원자를 나타냄,

ㆍ R2 는 미치환되거나 적어도 하나의 히드록시 기를 포함하는 1 또는 2 개의 치환기에 의해 치환됨,

ㆍ R2 는 테트랄리닐 기를 나타냄,

ㆍ R3 은 미치환되거나 1 또는 2 개의 치환기에 의해 치환되는 페닐 기를 나타냄,

ㆍ 식 (I) 의 화합물은 염, 바람직하게는 소듐 또는 포타슘 염, 보다 바람직하게는 포타슘 염의 형태임,

ㆍ 식 (I) 의 화합물은 용매화물, 바람직하게는 히드레이트, 보다 바람직하게는 모노히드레이트의 형태임.

보다 바람직하게는, 하기 조건 중 적어도 하나가 충족되며, 바람직하게는 이들 모두가 충족된다:

ㆍ R1 은 할로겐 원자, 특히 염소 원자를 나타냄,

ㆍ R2 는 적어도 하나의 히드록시 기를 포함하는 1 또는 2 개의 치환기에 의해 치환됨,

ㆍ R2 는 테트랄리닐 기임,

ㆍ R3 은 미치환되는 페닐 기를 나타냄,

또 다른 구현예에서, 하기 조건 중 적어도 하나가 충족되며, 바람직하게는 이들 모두가 충족된다:

ㆍ R1 은 할로겐 원자, 특히 염소 원자를 나타냄,

ㆍ R2 는 인다닐 기임,

ㆍ R3 은 미치환되거나 1 또는 2 개의 치환기에 의해 치환되는 페닐 기를 나타냄.

본 발명에 따른 티에노피리돈 유도체의 예는 하기의 것이다:

2-클로로-4-히드록시-3-인단-5-일-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-5-(4-플루오로페닐)-4-히드록시-3-인단-5-일-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-4-히드록시-3-인단-5-일-5-(3-메톡시페닐)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-4-히드록시-3-인단-5-일-5-(4-메톡시페닐)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

3-(2-클로로-4-히드록시-3-인단-5-일-6-옥소-7H-티에노[2,3-b]피리딘-5-일)벤조니트릴

2-클로로-4-히드록시-3-인단-5-일-5-(3-메틸페닐)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-5-(4-플루오로페닐)-4-히드록시-3-(4-히드록시인단-5-일)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-5-(3-플루오로페닐)-4-히드록시-3-(4-히드록시인단-5-일)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-4-히드록시-3-(4-히드록시인단-5-일)-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-5-(2-플루오로페닐)-4-히드록시-3-(4-히드록시인단-5-일)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-4-히드록시-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

3-(2-클로로-4-히드록시-6-옥소-3-테트랄린-6-일-7H-티에노[2,3-b]피리딘-5-일)벤조니트릴

트리소듐 2-클로로-3-(5-옥시도테트랄린-6-일)-5-페닐-티에노[2,3-b]피리딘-4,6-디올레이트

2-클로로-4-히드록시-5-페닐-3-테트랄린-6-일-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-5-(4-플루오로페닐)-4-히드록시-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

디소듐 2-클로로-3-(5-옥시도테트랄린-6-일)-6-옥소-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-4-올레이트

2-클로로-4-히드록시-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-5-(3-메틸페닐)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-4-히드록시-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-5-(4-메틸페닐)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

2-클로로-5-(3-플루오로페닐)-4-히드록시-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

소듐 2-클로로-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-6-옥소-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-4-올레이트

포타슘 2-클로로-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-6-옥소-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-4-올레이트.

식 (I) 의 화합물은 일반적으로 WO 2014/001554 에서 개시된 바와 같이 제조될 수 있다.

이러한 화합물의 예는 하기를 포함한다:

ㆍ 하기 식 (Ia) 의 구조에 상응하는 2-클로로-4-히드록시-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온의 모노히드레이트 포타슘 염인 PXL770:

ㆍ 식 (Ib) 를 갖는 2-클로로-5-(4-플루오로페닐)-4-히드록시-3-인단-5-일-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온:

ㆍ 식 (Ic) 를 갖는 2-클로로-4-히드록시-3-인단-5-일-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온:

PXL770 은 하기 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다:

(A) n-부틸 아세테이트 및 이소프로판올에서 선택되는 용매 및 물을 포함하는 용액 중에서 식 (II) 의 화합물을 포타슘 카르보네이트와 반응시키는 단계:

;

(B) 침전물을 형성하는 단계; 및

(C) 바람직하게는 여과에 의해, 단계 (B) 에서 수득한 침전물을 회수하는 단계.

식 (II) 의 화합물 및 이의 제조 방법은 특허 출원 WO 2014/001554 에서 개시되어 있다.

대안적으로는, 상기 식 (II) 의 화합물은 하기 단계를 포함하는 개선된 방법에 의해 수득될 수 있다:

(a) 염기의 존재 하에 6-아세틸-5-히드록시테트랄린을 친전자성 벤질 공급원, 바람직하게는 벤질 브로마이드와 반응시키는 단계;

(b) 헥사메틸디실라잔 및 아세트산의 존재 하에 단계 (a) 에서 수득한 화합물을 에틸 시아노아세테이트와 반응시키는 단계;

(c) 염기의 존재 하에 단계 (b) 에서 수득한 화합물을 황과 반응시키는 단계;

(d) 임의로는 단계 (c) 에서 수득한 화합물의 염, 바람직하게는 히드로클로라이드 염을 형성하는 단계;

(e) 단계 (c) 또는 (d) 에서 수득한 화합물을 친전자성 염소 공급원, 바람직하게는 N-클로로숙신이미드와 반응시키는 단계;

(f) 단계 (e) 에서 수득한 화합물을 페닐아세틸 클로라이드와 반응시키는 단계;

(g) 단계 (f) 에서 수득한 화합물을 염기와 반응시키는 단계;

(h) 단계 (g) 에서 수득한 화합물을 보론 트리브로마이드 또는 트리클로라이드, 바람직하게는 보론 트리클로라이드와 반응시키는 단계; 및

(i) 임의로는 단계 (h) 에서 수득한 화합물을 회수하는 단계.

전형적으로 단계 (B) 는, 바람직하게는 혼합물의 환류에 가까운 온도에서 단계 (A) 에서 수득한 혼합물을 가열하는 하위단계 (b1), 이후 예를 들어 -15℃ 내지 35℃ 의 온도에서 생성 혼합물을 냉각시키는 하위단계 (b2) 를 포함할 수 있다. 표현 "혼합물의 환류에 가까운" 은 전형적으로 단계 (A) 에서의 용매 시스템 (예를 들어, 물/이소프로판올 또는 물/n-부틸 아세테이트) 의 비등점의 90% 내지 100% 에 포함되는 온도를 지칭한다.

바람직하게는 감압 하의 증류 단계는 가열 하위단계와 하위단계 (b2) 사이에서 실행될 수 있다.

단계 (B) 는 결정질 침전물이 형성되게 하며, 이 형성은 단계 (b2) 에 시드를 첨가함으로써 선호되거나 촉발될 수 있다.

바람직한 구현예에서, 상기 침전물은 단계 (C) 에서 여과에 의해 회수된다. 이어서, 이는 하나 이상의 용매, 바람직하게는 물, n-부틸 아세테이트 및/또는 tert-부틸 메틸 에테르로 연속적으로 세척될 수 있다.

따라서, 식 (Ia) 의 화합물, 즉 PXL770 은 Cu K(알파) 방사선을 사용하여 회절계에 의해 측정되는 바와 같은, 하기 XRPD (X-선 분말 회절) 피크를 갖는 분말과 같은 고체의 형태로 수득된다:

하기 설명에서, 용어 "티에노피리돈 유도체" 는 식 (I) 의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및/또는 용매화물 중 하나를 지칭한다.

본 발명의 목적은 상염색체 우성 다낭 신질환 (ADPKD) 의 치료 방법이며, 상기 방법은 유효량의 티에노피리돈 유도체, 또는 유효량의 티에노피리돈 유도체 및 약학적으로 허용가능한 지지체를 포함하는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한, 상염색체 우성 다낭 신질환 (ADPKD) 의 치료용 약제의 제조에서의 티에노피리돈 유도체, 또는 이를 포함하는 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명에 따라 사용되는 약학 조성물은 임의의 관례적 방법에 의해 제조될 수 있다. 티에노피리돈 유도체는 적어도 하나의 고체, 액체 및/또는 반-액체 부형제 또는 아쥬반트와 함께, 및 필요시, 하나 이상의 추가 활성 성분과 조합으로 적합한 투약 형태로 전환될 수 있다.

용어 "약학적으로 허용가능한 지지체" 는 조성물, 제형, 안정성, 대상체 수용 및 생체이용률에 관한 물리적/화학적 관점에서 제약사에게 및 약리학적/독성학적 관점에서 대상체에게 허용가능한 담체, 아쥬반트 또는 부형제를 지칭한다.

용어 "담체", "아쥬반트" 또는 "부형제" 는 그 자체가 치료제가 아닌 임의의 물질을 지칭하며, 이는 그의 취급 또는 저장 특성을 개선시키거나 별개의 물품으로의 조성물의 투약 단위의 형성을 가능하게 하거나 용이하게 하기 위해 대상체에 대한 치료제의 전달을 위한 담체, 아쥬반트 및/또는 희석제로서 사용되도록 약학 조성물에 첨가된다. 본 발명의 약학 조성물은 개별적으로 또는 조합으로, 분산제, 가용화제, 안정화제, 보존제 등에서 선택되는 하나 또는 여러 제제 또는 비히클을 포함할 수 있다.

용어 "치료", "치료하는" 및 "치료하다" 는 상염색체 우성 다낭 신질환 (ADPKD) 의 치료, 방지 및 예방을 지칭한다. 본원에 개시된 바와 같이, 용어 "치료" 또는 "치료하는" 은 질환 또는 그의 증상 중 적어도 하나의 예방을 지칭한다. 이는 또한 대상체에서 식별가능하거나 식별가능하지 않은, 치료하는 질환과 관련된 적어도 하나의 측정가능한 물리적 매개변수의 개선, 방지를 의미한다. 용어 "치료" 또는 "치료하는" 은 또한 물리적으로, 질환의 진행의 억제 또는 둔화, 생리적으로, 식별가능한 증상의 안정화, 예를 들어 물리적 매개변수의 안정화, 또는 둘 모두를 지칭한다. 용어 "치료" 또는 "치료하는" 은 또한 질환 또는 장애의 발병을 지연시키는 것을 지칭한다. 일부 특정 구현예에서, 본 발명의 화합물은 예방 대책으로서 투여된다. 이러한 맥락에서, "예방" 또는 "예방하는" 은 질환과 관련된 증상 중 적어도 하나가 발생할 위험성의 감소를 지칭한다.

용어 "치료하는" 은 티에노피리돈 유도체 또는 이를 포함하는 약학 조성물로 낭포 성장을 예방 또는 제한하는 것을 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은 "치료" 는 또한 낭포 부피를 감소시키는 것을 포함한다. 따라서, 용어 "치료하다", "치료하는", "치료" 등은 ADPKD 와 관련된 증상의 치료를 포함한다.

치료는 본 발명의 티에노피리돈 유도체 또는 약학 조성물을 장애가 있다고 선언된 대상체에게 투여하여 진행을 치유, 지연 또는 늦추어, 그에 따라 환자의 병상을 개선시키는 것을 포함한다.

본 발명의 맥락에서, 용어 "대상체" 는 포유동물, 보다 특히 인간을 의미한다. 본 발명에 따라 치료할 대상체는 질환과 관련된 몇몇 기준에 기초하여 적절하게 선택될 수 있다. ADPKD 의 경우, 치료는 PKD1 및/또는 PKD2 유전자에서 적어도 하나의 돌연변이를 갖는 환자 또는 ADPKD 의 위험성이 있는 환자에게 보다 특히 적합하다. "ADPKD 의 위험성이 있는" 환자는 초음파 검사에 의해 검출된, 단측성 또는 양측성 신장낭 3 개 이상을 갖는 15-39 세 환자, 각각의 신장에서 2 개 이상의 낭포를 갖는 40-59 세 환자 및 각각의 신장에서 4 개 이상의 낭포를 갖는 60 세 이상의 환자를 포함한다. 대안적으로, 자기 공명 영상에 의해 관찰되는 바와 같이, 적어도 10 개의 신장낭을 갖는 30 세 이하의 환자는 통상 ADPKD 의 위험성이 있는 것으로 간주된다.

약학 조성물은 투약 단위 당 선결된 유효량의 활성 성분을 포함하는 투약 단위의 형태로 투여될 수 있다.

약학 조성물은 임의의 원하는 적합한 방법을 통해, 예를 들어 경구 (구강 또는 설하를 포함), 직장, 비강, 국소 (구강, 설하 또는 경피를 포함), 질 또는 비경구 (피하, 근육내, 정맥내 또는 피부내를 포함) 방법에 의해 투여하기 위해 조정될 수 있다. 이러한 조성물은, 예를 들어 활성 성분을 부형제(들) 또는 아쥬반트(들) 와 조합함으로써, 약학 분야에서 공지된 모든 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 약학 조성물은 경구 투여를 위해 조정된다.

경구 투여를 위해 조정된 약학 조성물은, 예를 들어 캡슐 또는 정제; 분말 또는 과립; 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액; 식용 폼 (foam) 또는 폼 식품; 또는 유액, 예컨대 수중유 액체 유액 또는 유중수 액체 유액과 같은 별개의 단위로서 투여될 수 있다.

따라서 예를 들어, 정제 또는 캡슐의 형태로 경구 투여하는 경우, 활성 성분은 경구, 비-독성 및 약학적으로 허용가능한 불활성 부형제와 조합될 수 있다. 분말은 화합물을 적합한 미세 크기로 분쇄하고, 이를 유사한 방식으로 분쇄된 약학적 부형제, 예를 들어 전분 또는 만니톨과 같은 식용 탄수화물과 혼합함으로써 제조된다. 향료, 보존제, 분산제 및 염료가 마찬가지로 존재할 수 있다.

캡슐은 상기 기재된 바와 같은 분말 혼합물을 제조하고, 이를 성형된 젤라틴 쉘에 충전함으로써 제조될 수 있다. 충전 작업 전에, 예를 들어 고체 형태의 고분산 규산, 탤크, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 활택제 및 윤활제를 분말 혼합물에 첨가할 수 있다. 캡슐을 취한 후, 약제의 유용성을 개선시키기 위해, 예를 들어 아가-아가 (agar-agar), 칼슘 카르보네이트 또는 소듐 카르보네이트와 같은 붕괴제 또는 가용화제를 마찬가지로 첨가할 수 있다.

또한, 원하는 경우 또는 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제 및 붕괴제 뿐만 아니라 염료를 마찬가지로 혼합물에 혼입시킬 수 있다. 적합한 결합제는 전분, 젤라틴, 천연 당, 예컨대 글루코오스 또는 베타-락토오스, 옥수수로 만들어진 감미료, 천연 및 합성 고무, 예컨대 아카시아, 트래거캔쓰 또는 소듐 알기네이트, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 포함한다. 이들 투약 형태에 사용되는 윤활제는 소듐 올레에이트, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕괴제는 전분, 메틸셀룰로오스, 아가, 벤토나이트, 잔탄 검 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 정제는, 예를 들어 분말 혼합물을 제조하고, 혼합물을 과립화 또는 건식-압착시키고, 윤활제 및 붕괴제를 첨가하고, 전체 혼합물을 압착시켜 정제를 산출함으로써 제형화된다. 분말 혼합물은, 적합한 방식으로 분쇄된 화합물을, 상기 기재된 바와 같은 희석제 또는 염기, 및 임의로 카르복시메틸셀룰로오스, 알기네이트, 젤라틴 또는 폴리비닐피롤리돈과 같은 결합제, 파라핀과 같은 용해 지연제, 4 차 염과 같은 흡수 촉진제 및/또는 벤토나이트, 카올린 또는 디칼슘 포스페이트와 같은 흡수제와 혼합함으로써 제조된다. 분말 혼합물은, 이를 결합제, 예컨대 시럽, 전분 페이스트, 아카디아 점액 또는 셀룰로오스 또는 중합체 물질의 용액으로 습윤화하고, 이를 체를 통해 압착시킴으로써 과립화될 수 있다. 과립화에 대한 대안으로서, 분말 혼합물은 타정기를 통과시키고, 분쇄된 비-균질 형상의 덩어리를 제공함으로써, 과립을 형성할 수 있다. 과립은 정제 캐스팅 몰드에 대한 부착을 방지하기 위해, 스테아르산, 스테아레이트 염, 탤크 또는 광유를 첨가하여 윤활될 수 있다. 윤활된 혼합물을 압착하여 정제를 수득한다. 본 발명에 따른 화합물을 또한 자유-유동성 불활성 부형제와 조합한 후, 과립화 또는 건식-압착 단계를 실행하지 않고, 바로 압착하여 정제를 수득할 수 있다. 셸락 밀봉층, 당 또는 중합체 물질의 층 및 왁스의 광택층으로 이루어지는 투명한 또는 불투명한 보호층이 존재할 수 있다. 상이한 투약 단위가 구별될 수 있도록, 이들 코팅에 염료를 첨가할 수 있다.

경구 투여를 위해 조정된 약학 조성물은 또한 고체 또는 액체 분산액의 분무 건조에 의해 제형화될 수 있다.

예를 들어 용액, 시럽 및 엘릭시르와 같은 경구 액체는, 소정량이 사전 명시량의 화합물을 포함하도록 투약 단위의 형태로 제조될 수 있다. 시럽은 화합물을 적합한 향료와 함께 수용액에 용해시킴으로써 제조될 수 있는 한편, 엘릭시르는 비-독성 알코올 비히클을 사용하여 제조된다. 현탁액은 화합물을 비-독성 비히클에 분산시킴으로써 제형화될 수 있다. 가용화제 및 유화제, 예컨대 에톡시화 이소스테아릴 알코올 및 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에테르, 보존제, 향료 첨가제, 예컨대 박하유 또는 천연 감미료 또는 사카린, 또는 다른 인공 감미료 등을 마찬가지로 첨가할 수 있다.

경구 투여를 위한 투약 단위 제형은, 원하는 경우, 마이크로캡슐 내에 캡슐화될 수 있다. 제형은 또한, 예를 들어 분체를 중합체, 왁스 등에 코팅 또는 포매시킴으로써, 방출이 연장 또는 지연되는 방식으로 제조될 수 있다.

본 발명에 따라 사용되는 티에노피리돈 유도체는 또한 리포좀 전달 시스템, 예컨대 작은 단층 소포, 큰 단층 소포 및 다층 소포의 형태로 투여될 수 있다. 리포솜은 다양한 인지질, 예를 들어 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린으로부터 형성될 수 있다.

"유효량" 은 인간에서 치료된 질환의 유해한 효과를 예방, 제거 또는 감소시키는 상기 정의된 바와 같은 화합물의 양을 의미한다. 투여된 용량이 환자, 병리학, 투여 방식 등에 따라 당업자에 의해 조정될 수 있다는 것이 이해된다. 예를 들어, 티에노피리돈 유도체는 인간 환자에 대해 0.5 mg 내지 300 mg, 바람직하게는 20 mg 내지 1000 mg, 보다 바람직하게는 60 mg 내지 500 mg 의 일일 용량으로 1 일 1 회 또는 2 회 투여될 수 있다. 이는 장기 약물 (long-life medication) 로서 1 주 4, 5, 6 또는 7 일 투여될 수 있다.

본 발명의 특정 구현예에서, 티에노피리돈 유도체는 0.5　mg 내지 1500 mg, 바람직하게는 20　mg 내지 1000　mg, 보다 바람직하게는 60　mg 내지 500　mg 의 티에노피리돈 유도체를 포함하는 투약 단위로서 투여된다.

본 발명은 또한 첨부된 청구범위에 의해 정의된 바와 같이, 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는 하기 실시예에서 더 상세히 설명될 것이다.

실시예

실시예 1: PXL770 의 합성

분석 방법

XRPD

Cu (K 알파 방사선) X-선 튜브 및 Pixcel 검출기 시스템이 장착된 Panalytical Xpert Pro 회절계를 사용하여 X-선 분말 회절 (XRPD) 분석을 수행하였다. 샘플을 투과 모드로 분석하고 저밀도 폴리에틸렌 필름 사이에 고정시켰다. XRPD 패턴은 HighScore Plus 2.2c 소프트웨어를 사용하여 정렬, 조작 및 인덱싱되었다.

TG/DTA

열중량 (TG) 분석을 Perkin Elmer Diamond 열중량/시차 온도 분석기 (TG/DTA) 상에서 실행하였다. 교정 표준은 인듐 및 주석이었다. 샘플을 알루미늄 샘플 팬에 넣고, TG 퍼니스에 삽입하고 정확하게 칭량하였다. 샘플을 10℃/분의 속도로 질소 스트림에서 30-300℃ 에서 가열하였다. 샘플 분석 전에 퍼니스의 온도를 30℃ 에서 평형화시켰다.

1a) 1-(5-벤질옥시테트랄린-6-일)에타논 ( 1 ) 의 합성

6-아세틸-5-히드록시테트랄린 (100 g, 1 eq.) 을 아세토니트릴 (300 mL) 에 용해하였다. K₂CO₃ (1.1 eq.) 및 벤질 브로마이드 (1.05 eq.) 를 첨가한 후, 현탁액을 가열하였다 (76℃). 48 시간 후, 벤질 브로마이드 (0.1 eq) 를 첨가하였다. 전체 74 시간 후, 고체를 여과해내고 아세토니트릴 (200 mL) 로 세척하고, 조합된 여과물을 증발시켰다.

화합물 1 을 시럽으로서 수득하였다: m = 148.6 g, 정량적 수율, 96.6% a/a 순도.

1b) 에틸 2-아미노-4-(5- 벤질옥시테트랄린 -6-일)티오펜-3- 카르복실레이트 ( 2 ) 의 합성

아세트산 (70 mL) 을 T = 65℃ 로 가열하였다. HMDS (1.5 eq.) 를 10 분에 걸쳐 첨가하였다. 그 후, 아세트산 (140 mL) 중 화합물 1 (69.5 g, 1 eq.) 및 에틸 시아노아세테이트 (1.5 eq.) 의 용액을 첨가하였다. 생성 혼합물을 T = 65℃ 에서 24 시간 동안 교반하였다.

실온으로 냉각한 후, 수성 NaOH (1 M, 140 mL) 및 TBME (210 mL) 를 첨가하였다. 층을 분리하였다. 수성 상의 pH 가 염기성 (pH = 13) 이 될 때까지 유기 층을 수성 NaOH (1 M, 4 x 140 mL) 로 세척하였다. 유기 층을 수성 HCl (1M, 140 mL) 및 H₂O (2 x 140 mL) 로 세척하였다.

EtOH (240 mL), NaHCO₃ (1.3 eq.) 및 황 (1.0 atom eq.) 을 첨가하였다. 환류로 180 분 동안 가열한 후, 반응 혼합물을 210 mL 로 농축하고 TBME (3 x 140 mL) 로 동시-증발시켰다. 실온으로 냉각한 후, 현탁액을 여과하고 고체를 TBME (70 mL) 로 세척하였다. 조합된 여과물을 210 mL 로 농축하고, 디옥산 중 HCl (1.1 eq.) 을 실온에서 적가하였다. 시딩 후, 침전이 관찰되었다. 헵탄 (350 mL) 을 실온에서 적가하였다. 14 시간 동안 교반한 후, 현탁액을 여과하였다. 헵탄 (3 x 70 mL) 으로 세척 및 건조 후, 화합물 2 를 고체로서 회수하였다. m = 83.2 g, 71% 수율, 93.7% a/a 순도.

1c) 에틸 4-(5- 벤질옥시테트랄린 -6-일)-5- 클로로 -2-[(2- 페닐아세틸 )아미노] 티오펜-3-카르복실레이트 ( 3 ) 의 합성

화합물 2 (17.69 g, 1 eq.) 를 디클로로메탄 (140 mL) 에 용해하였다. 생성 용액을 얼음/물로 냉각시켰다. 교반 하에, N-클로로숙신이미드 (1.05 eq.) 를 첨가하였다. 혼합물은 몇 분에 걸쳐 어두워졌다. 1 시간 후, 페닐아세틸 클로라이드 (1.25 eq.) 를 첨가하였다.

0℃ 에서 1 시간 및 실온에서 2 시간 후, 혼합물을 대략 35 mL 로 증발시키고 EtOH (2 x 70 mL) 를 첨가하고, 다시 증발시켰다. 혼합물을 EtOH (35 mL) 로 희석하고 얼음/물로 냉각시켰다. 생성물을 침전시켰다. 고체를 여과하고, 차가운 EtOH (3 x 18 mL) 로 세척하였다.

화합물 3 을 고체로서 수득하였다: m = 20.99 g, 94.2% 수율, 99.3% a/a 순도.

1d) 3-(5- 벤질옥시테트랄린 -6-일)-2- 클로로 -4-히드록시-5-페닐-7H- 티에 노[2,3-b]피리딘-6-온 ( 4 ) 의 합성

화합물 3 (19.88 g, 1 eq.) 을 메틸테트라히드로푸란 (120 mL) 에 가용화시키고, 반응 혼합물을 -16℃ 내지 -10℃ 의 온도로 냉각시켰다 (NaCl/얼음). 포타슘 tert-부톡시드 (5 eq.) 를 4 회분으로 첨가하였다. 그런 다음, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 65 분 동안 실온에서 교반하였다. 2N HCl (5 eq.) 의 적가를 T = 0-5℃ (물/얼음) 에서 실행하고, 생성 혼합물을 격렬하게 교반하였다. 유기 상을 NaCl_(aq) (11%, 1 x 50 mL) 및 물 (2 x 50 mL) 로 세척하였다. 유기 상을 ~50% 용액으로 농축하였다. 메틸테트라히드로푸란 (80 mL) 을 첨가하고, 생성 용액을 ~50% 용액으로 농축하였다. TBME (100 mL) 를 첨가하고, 생성 용액을 ~50% 용액으로 농축하였다 (이 단계를 3 회 반복하였다). 그런 다음, TBME (25 mL), 화합물 4 의 시드 및 n-헵탄 (20 mL) 을 첨가하고, 생성 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 대략 50 mL 로 농축하고, 여과하고, 모액으로 헹구고, n-헵탄 (2 x 40 mL) 으로 세척하고, 건조시켰다. 화합물 4 를 과립상 고체로서 수득하였다. 수율 88%, 99.5% a/a 순도.

1e) 2- 클로로 -4-히드록시-3-(5- 히드록시테트랄린 -6-일)-5-페닐-7H- 티에노[2,3-b]피리딘 -6-온 (I) 의 합성

화합물 4 (15 g, 1 eq.) 를 75 mL 의 디클로로메탄에 용해하고 T = -10℃/-15℃ (얼음/NaCl 사용) 으로 냉각시켰다. BCl₃ (1.5 eq., 용액: 디클로로메탄 중 1 mol/L) 을 적가하고, 생성 혼합물을 실온에서 15 시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 얼음/물로 냉각시키고, 물 (75 mL) 을 첨가하였다. 생성 혼합물을 격렬하게 교반하고, 유기 상을 물/MeOH (9:1 v/v, 5 x 45 mL.) 로 추출하였다. 유기 상을 농축하고, 용매 스왑을 톨루엔 (3 x 90 mL) 으로 실행하고, 톨루엔으로 희석하여 톨루엔 90 mL 의 최종 부피에 도달하게 하였다. 생성 혼합물을 환류로 가열하고 15 mL 의 메탄올을 첨가하였다. 약간의 입자를 갖는 갈색 용액을 수득하였다. 시드를 T = 40℃ 에서 첨가하고, T = 52℃ 로 가온하고 실온으로 냉각시켰다. 생성 혼합물을 밤새 교반한 다음, 얼음/NaCl (T = -10℃/-15℃) 로 100 분 동안 냉각시켰다. 침전된 생성물을 여과하고, 톨루엔/헵탄 1:2 v/v (15 mL) 및 헵탄 (15 mL) 으로 세척하고 건조시켰다. 화합물 (I) 의 결정을 수득하였다: 87% 수율, 99.0% a/a 순도.

1f) 2- 클로로 -4-히드록시-3-(5- 히드록시테트랄린 -6-일)-5-페닐-7H- 티에 노[2,3-b]피리딘-6-온 (Ia) 의 모노히드레이트 포타슘 염의 합성

화합물 (I) 을 물/이소프로판올 믹스 (1/1, 각각의 용매 5 부) 에 현탁한 다음, 0.50 내지 0.55 eq 의 포타슘 카르보네이트를 첨가하였다. pH 는 포타슘 카르보네이트 첨가 종료시 약 12 (pH 지시약 시험지) 였다. 50℃ 에서 3 시간 교반 후, 현탁액은 더 진해졌으며 pH 는 약 8 (pH 지시약 시험지) 이었다. 용액이 수득될 때까지 온도를 80℃ 로 상승시켰다 (10-15 분). 필요시 정화를 공정의 이 시점에서 수행할 수 있다. 7 부의 물을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 40℃ 로 냉각시켰다 (혼탁한 용액이 관찰됨). 7 부의 용매가 반응기에 남을 때까지 용매를 감압 (180mbar 내지 40mbar) 하에 40℃ 에서 증류하였다. 포타슘 염 모노히드레이트의 결정화가 여기서 발생할 수 있다. 4.2 부의 물을 첨가하고, 혼합물을 화합물 (I) 로 시딩하였다 (1 내지 2% 의 시드). 그런 다음, 현탁액을 7 시간에 40℃ 내지 5℃ 로 냉각시키고 (5℃/시간), 몇 시간 동안 5℃ 에서 유지하였다. 현탁액을 여과하였다. 케이크를 1.42 부의 물로 2 회 세척하였다. 수집한 고체를 진공 하에 40℃ 에서 건조시켜, 최소 80% 수율의 화합물 (Ia) 를 필요한 화학적 순도 (즉 98%+) 로 수득하였다.

실시예 2: PXL770 의 특징 분석

a) 화합물 (Ia) 의 X-선 분말 회절 (XRPD) 데이터는 이것이 결정질 물질로 구성되었음을 나타내었다. 화합물 (Ia) 의 XRPD 설명을 표 1 에 나타낸다.

표 1

b) TG/DTA 분석은 30-100℃ 에서 1.1% 의 초기 중량 손실, 이후 결합수의 손실로 인해 117-160℃ 에서 3% 의 더 큰 중량 손실을 나타내었다. 두 번째 중량 손실은 큰 온혈 동물에 의해 동반되었으며 4% 의 조합된 중량 손실은 모노히드레이트에 대한 이론적 중량 손실 (3.75% w/w) 과 비슷하였다. 화합물은 240℃ 초과에서 분해되었다.

실시예 3 : 시험관내 실험

방법:

plMDCK 세포를, "얼 평형 염 용액 (Earl's balanced salt solution)", 2mM L-글루타민, 10% 열-충격 불활성화된 FCS, 50IU/ml 페니실린 및 50μg/ml 스트렙토마이신을 함유하는 변형 MEM-배지 중에서 37℃, 21% O2 및 5% CO₂ 에서 배양하였다. 낭포 형성을 위해, plMDCK 세포를 트립신처리하고 유형 I 콜라겐 현탁액 내에 용해한 후, 24-웰 플레이트에 옮겼다. 조건 및 개별 실험 당 4 개 웰을 사용하였다. 다음으로, 10μM 포스콜린 (대조군; Ctrl) 또는 10μM 포스콜린 + 메트포르민 또는 10μM 포스콜린 + PXL770 을 주어진 농도로 함유하는 세포 배양 배지를 첨가하였다. 실험은 5 일 동안 수행하였다. 이후, Zeiss Axiocam 105 컬러 카메라를 갖는 Zeiss Primo Vert 현미경 (둘 모두 Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Deutschland) 을 사용하여 각 웰의 4 개 상이한 영역에서 사진을 찍었다 (0, 3, 6 및 9 시에). 그런 다음, 낭포의 직경을 맹검 방식으로 ImageJ (V.1.48) 로 측정하였다. 낭포의 구형을 가정하여, 식 4/3πr³ 을 사용하여 부피를 계산하였다. 각각의 조건 및 실험의 모든 낭포의 평균을 계산하였다. 대조군 낭포 부피를 100% 로 설정하였다. 결과를 도 1 에 나타낸다.

낭포의 사진을 또한 촬영하고 도 2 에 나타낸다 (기준자: 100μm).

결과:

도 1 및 2 에서 나타낸 바와 같이, PXL770 은 메트포르민보다 더 낮은 용량으로 낭포 성장을 유의하게 억제한다.

실시예 4 : 비교 실험

이 실시예에서, 다양한 티에노피리돈 화합물을 시험관내 실험에서 비교하였다:

PXL770: 포타슘 2-클로로-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-6-옥소-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-4-올레이트.

PXL700: 2-클로로-4-히드록시-3-인단-5-일-5-(3-피리딜)-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

PXL702: 2-클로로-4-히드록시-3-인단-5-일-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온

PXL695: 2-클로로-5-(4-플루오로페닐)-4-히드록시-3-인단-5-일-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온,

PXL037:

이들 화합물의 효과를 조사하기 위해, 3D 배양 매트릭스에 포매된 다낭 신질환 (PKD) 환자-유래 일차 세포를 사용하는 시험관내 3D 낭포 팽윤 어세이를 사용하였다 (huPKD 모델로서 지칭). 낭포의 팽윤이 시각화되고 고감도 현미경에 의해 정량화될 수 있다.

방법

3D huPKD 낭포 팽윤 어세이를 huPKD05 세포로 수행하였다.

3D 배양 및 화합물 노출. huPKD05 세포 (PKD1 돌연변이: c.5622G>A p.Trp1874*) 를 PrimCyst-Gel (OcellO BV) 과 혼합하였다. 15μL 의 세포-겔 믹스를, CyBio Felix 96/250 로봇식 액체 디스펜서 (Analyik Jena AG) 를 사용하여 384-웰 플레이트 (Greiner μClear, Greiner Bio-One B.V.) 에 피펫팅하였다. 겔-세포 믹스를 웰 당 450 개 낭포의 최종 세포 밀도로 플레이팅하였다. 37℃ 에서 30 분 동안 겔 중합한 후, 33μL 세포 배양물 (혈청이 포함되지 않음) 을 각각의 웰에 첨가하였다. 세포를 24 시간 동안 겔에서 성장시키고, 이후 세포를 낭포 팽윤을 자극하는 데스모프레신 (ddAVP) (Tocris), 및 하기 분자 PXL770, PXL037, PXL700, PXL695, PXL702 와 48 시간 동안 동시 노출시켰다.

표 1: 노출 조건의 개관

샘플 처리 : 48 시간 후, 배양물을 4% 포름알데히드 (Sigma Aldrich) 로 고정시키고 동시에 0.2% Triton-X100 (Sigma Aldrich) 로 투과화하고, 1x PBS (Sigma Aldrich) 중 0.1% 회흐스트 (Hoechst) 33258 (Sigma Aldrich) 및 0.25μM 로다민-팔로이딘 (Sigma Aldrich) 으로 2 일 동안 4℃ 에서 빛으로부터 보고하여 염색하였다. 고정 및 염색 후, 플레이트를 1x PBS 로 세척하고, Greiner SilverSeal (Greiner Bio-온 B.V.) 로 밀봉하고, 영상화 전에 4℃ 에서 보관하였다.

영상화 및 영상 분석 : 4x NIKON 대물렌즈를 갖는 Molecular Devices ImageXpress Micro XLS (Molecular Devices) 를 사용하여 영상화를 실시하였다. 각각의 웰에 대해 Z-방향으로의 대략 35 개 영상이 각 영상에서 전체 z-평면을 캡쳐하여 양 채널에 대해 만들어졌다. 영상 분석은 Ominer^TM 소프트웨어 (OcellO BV) 를 사용하여 수행하였다. 회흐스트-염색된 핵 및 로다민-팔로이딘-염색된 세포성 f-액틴의 검출을 사용하여 낭포를 분절화하였다. 모든 정초점 평면에서 각각의 물체의 픽셀 (px) 로 면적에 대해 계산함으로써 낭포 면적을 결정하였다. 이를 웰 당 평균화하고 용매 대조군 (0%) 과 자극제 단독 (100%) 사이에 정규화시켰다. GraphPad Prism 을 사용하여 통계를 실시하고, GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, La Jolla, CA) 으로 그래프를 준비하였다.

결과

상기 실험의 결과를 도 3 에 나타낸다.

대조군 조건 : 데스모프레신 (ddAVP) 자극과 미자극 (용매 대조군, DMSO) 사이에 유의한 어세이 윈도우가 확립되었다 (도 1) (ddAVP 단독 대 DMSO, p<0.0001).

PXL770, PXL695, PXL700, PXL702 및 PXL037:

PXL770 PXL695, PXL700, PXL702 및 PXL037 을 4 개 농도에서 시험하였다: 10, 5, 2.5, 0.5 μM, ddAVP (2.5 μM) 의 존재 하.

PXL770 은 용량-의존적으로 낭포 면적을 감소시켰으며 이러한 효과는 ddAVP 단독과 비교하여 5 및 10 μM 에서 유의하여, PXL770 5 및 10 μM 둘 모두에 대해 50% 감소에 도달하였다 (각각 p<0.01 및 p<0.05 대 ddAVP 단독). 도 3 에서 나타내지 않았으나, PXL770 이 25 μM 에서 낭포 면적을 75% 감소시켰다는 것에 주목해야 한다 (p<0.0001 대 ddAVP 단독).

PXL695 및 PXL702 는 용량 의존적으로 낭포 면적을 감소시켰다.

대조적으로, PXL037 및 PXL700 은 ddAVP 단독과 비교하여 유의한 효과를 나타내지 않았다.

결론

PXL770, PXL037, PXL770, PXL695 및 PXL702 를 huPKD 낭포 팽윤 어세이에서 평가하여, 데스모프레신 (ddAVP) 유도된 낭포 팽윤을 억제하는 이들의 효능을 조사하였다.

PXL770 은 용량 의존적으로 낭포 팽윤을 감소시켰다. 5 및 10 μM 에서의 PXL770 은 유도된 팽윤의 거의 50% 를 억제하였다.

유사한 효능 및 효험이 PXL695 및 PXL702 으로 달성되었다.

PXL037 및 PXL700 은 10μM 까지 낭포 면적에 영향을 주지 않았다.

Claims

상염색체 우성 다낭 신질환 (ADPKD) 의 치료에 사용하기 위한, 식 (I) 의 티에노피리돈 유도체, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및/또는 용매화물, 또는 이를 포함하는 약학 조성물:

[식 중:
R1 은 수소 원자 또는 할로겐 원자를 나타내고,
R2 는 할로겐 원자, 알킬 기, 히드록시, 알콕시 기, 아미노, 모노- 또는 디-알킬아미노 기, 카르복시 기, 알킬옥시카르보닐 기, 모노- 또는 디-알킬아미노카르보닐 기, 카르복사미드, 시아노, 알킬술포닐 및 트리플루오로메틸 기에서 선택되는 하나 이상의 기에 의해 치환되거나 미치환되는 인다닐 또는 테트랄리닐 기를 나타내고,
R3 은 할로겐 원자, 알킬 기, 히드록시, 알콕시 기, 아르알킬옥시 기, 아미노, 모노- 또는 디-알킬아미노 기, 카르복시 기, 알킬옥시카르보닐 기, 모노- 또는 디-알킬아미노카르보닐 기, 카르복사미드, 시아노, 알킬술포닐 및 트리플루오로메틸 기에서 선택되는 하나 이상의 원자 또는 기에 의해 치환되거나 미치환되는 아릴 기를 나타냄].
상기 화합물이 인간 환자에 대해 0.5 mg 내지 3000 mg, 바람직하게는 20 mg 내지 1000 mg, 보다 바람직하게는 60 mg 내지 500 mg 의 1 일 용량으로 1 일 1 회 또는 2 회 투여되는, 제 1 항의 티에노피리돈 유도체 또는 제 1 항에 따른 사용을 위한 이를 포함하는 약학 조성물.
상기 화합물 또는 약학 조성물이 낭포 성장을 예방 또는 제한하거나 낭포 부피를 감소시키는데 효과적인, 제 1 항의 티에노피리돈 유도체 또는 제 1 항 또는 제 2 항에 따른 사용을 위한 이를 포함하는 약학 조성물.
하기 조건 중 적어도 하나가 충족되며, 바람직하게는 이들 모두가 충족되는, 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 따른 사용을 위한 제 1 항의 티에노피리돈 유도체:
ㆍ R1 이 할로겐 원자, 특히 염소 원자를 나타냄,
ㆍ R2 가 적어도 하나의 히드록시 기를 포함하는 1 또는 2 개의 치환기에 의해 치환되거나 미치환됨,
ㆍ R2 가 테트랄리닐 기임,
ㆍ R3 이 1 또는 2 개의 치환기에 의해 치환되거나 미치환되는 페닐 기를 나타냄,
ㆍ 식 (I) 의 화합물이 염, 바람직하게는 소듐 또는 포타슘 염, 보다 바람직하게는 포타슘 염의 형태임,
ㆍ 식 (I) 의 화합물이 용매화물, 바람직하게는 히드레이트, 보다 바람직하게는 모노히드레이트의 형태임.
하기 조건 중 적어도 하나가 충족되며, 바람직하게는 이들 모두가 충족되는, 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 따른 사용을 위한 제 4 항의 티에노피리돈 유도체:
ㆍ R1 이 할로겐 원자, 특히 염소 원자를 나타냄,
ㆍ R2 가 적어도 하나의 히드록시 기를 포함하는 1 또는 2 개의 치환기에 의해 치환됨,
ㆍ R2 가 테트랄리닐 기임,
ㆍ R3 이 미치환되는 페닐 기를 나타냄,
ㆍ 식 (I) 의 화합물이 염, 바람직하게는 소듐 또는 포타슘 염, 보다 바람직하게는 포타슘 염의 형태임,
ㆍ 식 (I) 의 화합물이 용매화물, 바람직하게는 히드레이트, 보다 바람직하게는 모노히드레이트의 형태임.
식 (Ia) 를 갖는 2-클로로-4-히드록시-3-(5-히드록시테트랄린-6-일)-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온의 모노히드레이트 포타슘 염인, 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 따른 사용을 위한 제 5 항의 티에노피리돈 유도체:

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하기 조건 중 적어도 하나가 충족되며, 바람직하게는 이들 모두가 충족되는, 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 따른 사용을 위한 제 1 항의 티에노피리돈 유도체:
ㆍ R1 이 할로겐 원자, 특히 염소 원자를 나타냄,
ㆍ R2 가 적어도 하나의 히드록시 기를 포함하는 1 또는 2 개의 치환기에 의해 치환됨,
ㆍ R2 가 인다닐 기임,
ㆍ R3 이 1 또는 2 개의 치환기에 의해 치환되거나 미치환되는 페닐 기를 나타냄.
식 (Ib) 를 갖는 2-클로로-5-(4-플루오로페닐)-4-히드록시-3-인단-5-일-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온인, 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 따른 사용을 위한 제 7 항의 티에노피리돈 유도체:

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식 (Ic) 를 갖는 2-클로로-4-히드록시-3-인단-5-일-5-페닐-7H-티에노[2,3-b]피리딘-6-온인, 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 따른 사용을 위한 제 7 항의 티에노피리돈 유도체:

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