KR20220152041A - Antifreezing disinfectant composition and preparation method thereof - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 내동성 소독제 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 수산화 칼륨, 포타슘 아세테이트, 염화나트륨 및 황산나트륨을 포함하여 빙점이 낮고, 저온에서도 단시간내에 항바이러스 및 항균 효능을 갖는 소독제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a frost-resistant disinfectant composition, and more particularly, to a disinfectant composition containing potassium hydroxide, potassium acetate, sodium chloride and sodium sulfate, which has a low freezing point and has antiviral and antibacterial efficacy in a short time even at low temperature.
기존의 살균제는 크게 유기계와 무기계 살균제로 분류되는데, 2000년대 초반까지는 일반적으로 유기계 살균제가 많이 사용되었다. 다만, 유기계 살균제는 평균적인 사용량이 1000 내지 2000 ppm으로 많은 양을 필요로 하는 단점이 있으며, 또한 자연 상태에서는 잘 분해되지 않아 개체의 체내에 그대로 흡수, 축적되어 환경 문제를 야기할 가능성이 있었다. 이를 해결하고자 2000년대 이후 나노 기술을 활용한 무기계 살균제가 개발되어 사용되고 있는데, 무기계 살균제는 비교적 20 내지 50ppm의 적은 양으로도 살균 활성을 나타내긴 하나, 유기계 살균제와 마찬가지로 자연 상태에서 분해되는데 많은 시간을 필요로 하는 점에서 여전히 문제점이 있다.Existing disinfectants are largely classified into organic and inorganic disinfectants, and until the early 2000s, organic disinfectants were generally used. However, organic fungicides have the disadvantage of requiring a large amount of average usage of 1000 to 2000 ppm, and also do not decompose well in nature, so there is a possibility of being absorbed and accumulated in the body of an individual, causing environmental problems. In order to solve this problem, inorganic disinfectants using nanotechnology have been developed and used since the 2000s. Although inorganic disinfectants show bactericidal activity in relatively small amounts of 20 to 50 ppm, they take a lot of time to decompose in a natural state like organic disinfectants. There is still a problem with the point of need.
현재 농림축산 검역본부에서는 4℃, 30분간 소독제-바이러스 반응을 통하여 일정수준 이상 불활화가 확인되는 희석배수를 지정하고 있다. 하지만 이러한 조건은 한국의 겨울 기후를 제대로 반영하지 못하였으며 온돈가 낮아질수록 소독제의 효능이 떨어진다는 점을 감안하였을 때 사실상 겨울에도 효력을 발휘하는 소독제 평가를 할 수 없다.Currently, the Agriculture, Forestry and Livestock Quarantine Headquarters designates a dilution factor at which inactivation at a certain level or higher is confirmed through a disinfectant-virus reaction at 4℃ for 30 minutes. However, these conditions did not properly reflect the winter climate of Korea, and considering that the effectiveness of disinfectants decreases as the temperature decreases, it is impossible to evaluate disinfectants that are effective even in winter.
농림축산식품부에서도 겨울 철에 소독제의 효력저하가 일어나는 것에 대하여 인지하고 있으며, 소독수의 결빙을 방지하고 저온에서 상대적으로 효과적인 글루타르 알데하이드류나 산화제 성분의 소독제 사용을 권장하고 있다. 하지만 발표된 논문에 따르면 이러한 성분의 소독제 또한 저온에서 효과적이지 못하다는 결과를 보여주고 있다.The Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs is also aware of the decrease in the effectiveness of disinfectants in winter, and recommends the use of disinfectants containing glutaraldehyde or oxidizing agents that are relatively effective at low temperatures and prevent freezing of disinfectant water. However, published papers show that disinfectants with these ingredients are also not effective at low temperatures.
이에 농림축산검역본부에서는 선택시험조건을 신설하여 반응시간(1분, 5분, 15분 등) 및 반응온도 (10℃, -5℃, -10℃ 등)을 추가로 선택하여 소독제 효력시험을 실시하도록 고시하였다. 하지만 현재 국내에서 등록된 소독제 중 이러한 선택시험조건을 적용하여 판매되고 있는 소독제는 없다. 따라서 저온조건, 단시간 조건 내에서 효력을 발휘하는 소독제의 제작이 필요한 실정이다.Accordingly, the Agriculture, Forestry and Livestock Quarantine Headquarters newly established optional test conditions to additionally select the reaction time (1 minute, 5 minutes, 15 minutes, etc.) and reaction temperature (10℃, -5℃, -10℃, etc.) to conduct the disinfectant efficacy test. advised to do so. However, among the disinfectants currently registered in Korea, there is no disinfectant that is being sold by applying these selection test conditions. Therefore, it is necessary to produce a disinfectant that is effective under low temperature conditions and short time conditions.
본 발명의 목적은 수산화 칼륨을 유효성분으로하여 포타슘 아세테이트, 염화나트륨 및 황산나트륨을 혼합하여 동결방지 물질을 함유한 얼지 않는 소독제를 제작하여 저온 및 단시간에 항균 또는 항바이러스 활성을 나타내는 내동성 소독제를 제공하는 데 있다.An object of the present invention is to prepare a non-freezing disinfectant containing an anti-freezing material by mixing potassium acetate, sodium chloride and sodium sulfate with potassium hydroxide as an active ingredient to provide a frost-resistant disinfectant that exhibits antibacterial or antiviral activity at low temperature and in a short time there is
본 발명의 다른 목적은 저온 및 단시간에 저병원성 인플루엔자 바이러스 및 전염성 기관지염 바이러스를 충분히 사멸시킬 수 있는 소독제를 제공함에 있다.Another object of the present invention is to provide a disinfectant capable of sufficiently killing low-pathogenic influenza virus and infectious bronchitis virus at low temperature and in a short time.
상술한 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 저온에서도 항균 또는 항바이러스 활성을 갖는 내동성 소독제 조성물을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a frost-resistant disinfectant composition having antibacterial or antiviral activity even at low temperatures.
본 발명은 또한 저온에서도 항균 또는 항바이러스 활성을 갖는 소독제 조성물의 제조방법을 제공하며, 이는 a) 수산화 칼륨(potassium hydroxide), 아세트산 칼륨(potassium acetate), 염화나트륨(sodium chloride) 및 황산나트륨(sodium sulfate)을 용매에 용해시켜 혼합용액을 제조하는 단계, b) 상기 혼합용액을 교반하는 단계 및 c) 상기 b) 단계의 생성물을 여과하는 단계를 포함할 수 있다.The present invention also provides a method for preparing a disinfectant composition having antibacterial or antiviral activity even at low temperatures, which includes a) potassium hydroxide, potassium acetate, sodium chloride and sodium sulfate It may include preparing a mixed solution by dissolving in a solvent, b) stirring the mixed solution, and c) filtering the product of step b).
본 발명의 소독제 조성물은 수산화 칼륨(potassium hydroxide), 아세트산 칼륨(potassium acetate), 염화 나트륨(sodium chloride) 및 황산 나트륨(sodium sulfate)을 포함하여 저온에서도 항균 또는 항바이러스 활성을 갖는다.The disinfectant composition of the present invention contains potassium hydroxide, potassium acetate, sodium chloride and sodium sulfate to have antibacterial or antiviral activity even at low temperatures.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 -15℃에서 4시간 이상, -20℃에서 1시간 이상 얼지 않았으며, 상기 조성물은 -20℃이상의 온도에서 얼지 않고 항균 또는 항바이러스 효과를 나타낼 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 조성물의 빙점은 -25℃ 내지 -30℃일 수 있다. 본 발명의 소독제 조성물은 전체 조성물 100중량부에 대하여 상기 수산화 칼륨을 10 내지 20중량부, 상기 아세트산 칼륨은 50 내지 70 중량부로, 상기 염화 나트륨은 15 내지 25 중량부로, 상기 황산 나트륨은 1 내지 5 중량부로 포함할 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the composition did not freeze for more than 4 hours at -15 ° C and for more than 1 hour at -20 ° C, and the composition did not freeze at a temperature of -20 ° C or more and could exhibit antibacterial or antiviral effects. have. According to one embodiment of the present invention, the freezing point of the composition may be -25 ℃ to -30 ℃. The disinfectant composition of the present invention contains 10 to 20 parts by weight of the potassium hydroxide, 50 to 70 parts by weight of the potassium acetate, 15 to 25 parts by weight of the sodium chloride, and 1 to 5 parts by weight of the sodium sulfate, based on 100 parts by weight of the total composition It can be included in parts by weight.
본 발명의 항균 또는 항바이러스의 대상이 되는 균 또는 바이러스는 한정되지는 않으나 바람직하게는 전염성 기관지염 바이러스 또는 가금 인플루엔자 바이러스에 대해 항바이러스 활성을 나타내며, 대장균, 살모넬라, 녹농균 또는 황색포도상구균에 대해 항균 활성을 나타낼 수 있다.The antibacterial or antiviral target of the present invention is not limited to, but preferably exhibits antiviral activity against infectious bronchitis virus or poultry influenza virus, and antibacterial activity against Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas aeruginosa or Staphylococcus aureus can represent
본 발명의 상기 조성물은 10분 내지 20분 내 항균 또는 항바이러스 활성을 나타낼 수 있다.The composition of the present invention may exhibit antibacterial or antiviral activity within 10 to 20 minutes.
본 발명의 내동성 소독제 조성물은 저온에서도 항균 및 항바이러스 효과를 갖는 바, 겨울철에도 유용하게 사용될 수 있다.The freezing-resistant disinfectant composition of the present invention has antibacterial and antiviral effects even at low temperatures, so it can be usefully used even in winter.
본 발명의 조성물은 저농도, 저온에서도 단시간에 항균 및 항바이러스 효과를 나타내는 장점이 있다.The composition of the present invention has the advantage of exhibiting antibacterial and antiviral effects in a short time even at low concentration and low temperature.
본 발명은 또한 전염성 기관지염 바이러스 또는 가금 인플루엔자 바이러스 사멸에 효과적이다.The present invention is also effective in killing infectious bronchitis virus or poultry influenza virus.
본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.The terms used in this specification have been selected from general terms that are currently widely used as much as possible while considering the functions in the present invention, but these may vary depending on the intention of a person skilled in the art, precedent, or the emergence of new technologies. In addition, in a specific case, there is also a term arbitrarily selected by the applicant, and in this case, the meaning will be described in detail in the description of the invention. Therefore, the term used in the present invention should be defined based on the meaning of the term and the overall content of the present invention, not simply the name of the term.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.Unless defined otherwise, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the present invention belongs. Terms such as those defined in commonly used dictionaries should be interpreted as having a meaning consistent with the meaning in the context of the related art, and unless explicitly defined in this application, it should not be interpreted in an ideal or excessively formal meaning. don't
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 저온에서도 항균 또는 항바이러스 활성을 갖는 내동성 소독제 조성물을 제공한다.As one aspect for achieving the above object, the present invention provides a frost-resistant disinfectant composition having antibacterial or antiviral activity even at low temperatures.
본 발명에서 "저온"이란, 낮은 온도를 의미하는 것으로, 온도를 특별히 제한하지는 않으나 바람직하게는 상온 이하 내지 본 발명에 따른 조성물의 빙점 이상에 해당하는 온도를 의미한다. In the present invention, "low temperature" means a low temperature, and the temperature is not particularly limited, but preferably means a temperature corresponding to room temperature or lower to higher than the freezing point of the composition according to the present invention.
본 발명에서 "항균" 및 "항바이러스"는 각각 병원성 세균 및 바이러스의 발생, 성장 및 증식을 억제하는 효능을 통칭하는 것으로, 이하 본 발명 명세서 전반에 걸쳐 기재되는 "살균"과 의미상 혼용될 수 있다. In the present invention, "antibacterial" and "antiviral" collectively refer to the efficacy of inhibiting the development, growth, and proliferation of pathogenic bacteria and viruses, respectively, and may be used interchangeably with "sterilization" described throughout the specification of the present invention below. have.
본 발명에서 "내동성"은 저온의 환경에서 얼지 않고 견디는 성질을 의미하는 것으로, 본 발명의 내동성 살균제 조성물은 저온에서도 얼지 않고 분무 또는 살포에 적합한 형태로 유지시켜주는 성질을 의미한다. In the present invention, "freezing resistance" means a property of enduring without freezing in a low temperature environment, and the freezing resistance fungicide composition of the present invention means a property of maintaining a form suitable for spraying or spraying without freezing even at low temperatures.
본 발명의 소독제 조성물은 수산화 칼륨(potassium hydroxide), 아세트산 칼륨(potassium acetate), 염화 나트륨(sodium chloride) 및 황산 나트륨(sodium sulfate)을 포함할 수 있다.The disinfectant composition of the present invention may include potassium hydroxide, potassium acetate, sodium chloride and sodium sulfate.
상기 수산화 칼륨, 아세트산 칼륨, 염화 나트륨 및 황산 나트륨은, 본 발명의 소독제 조성물에 있어 동결 방지효과를 나타낼 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 조성물은 상기 수산화 칼륨 10 내지 20중량부에 대하여 상기 아세트산 칼륨을 50 내지 70 중량부, 10 내지 30 중량부, 15 내지 30중량부, 20 내지 50중량부, 60 내지 80중량부로 포함할 수 있으며, 상기 수산화 칼륨 10 내지 20중량부에 대하여 상기 염화나트륨을 50 내지 100 중량부, 10 내지 30 중량부, 15 내지 25중량부, 20 내지 50중량부, 60 내지 80중량부로 포함할 수 있고, 상기 수산화 칼륨 100중량부에 대하여 상기 황산 나트륨을 50 내지 100 중량부, 10 내지 30 중량부, 15 내지 30중량부, 20 내지 50중량부, 1 내지 5중량부로 포함할 수 있다.The potassium hydroxide, potassium acetate, sodium chloride and sodium sulfate may exhibit an antifreeze effect in the disinfectant composition of the present invention. According to one embodiment of the present invention, the composition contains 50 to 70 parts by weight, 10 to 30 parts by weight, 15 to 30 parts by weight, 20 to 50 parts by weight, 60 parts by weight of the potassium acetate based on 10 to 20 parts by weight of the potassium hydroxide to 80 parts by weight, and 50 to 100 parts by weight, 10 to 30 parts by weight, 15 to 25 parts by weight, 20 to 50 parts by weight, 60 to 80 parts by weight of the sodium chloride with respect to 10 to 20 parts by weight of the potassium hydroxide 50 to 100 parts by weight, 10 to 30 parts by weight, 15 to 30 parts by weight, 20 to 50 parts by weight, 1 to 5 parts by weight of the sodium sulfate based on 100 parts by weight of the potassium hydroxide. have.
본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 조성물은 -15℃에서 4시간 이상, -20℃에서 1시간 이상 얼지 않았으며, 상기 조성물은 -20℃이상의 온도에서 얼지 않고 항균 또는 항바이러스 효과를 나타낼 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 조성물의 빙점은 -25℃ 내지 -30℃ 또는 -30℃ 내지 -40℃ 일 수 있다. 상기 조성물은 빙점 이상의 온도에서 얼지 않고 항균 및 항바이러스 활성을 갖는다. According to one embodiment of the present invention, the composition did not freeze for more than 4 hours at -15 ° C and for more than 1 hour at -20 ° C, and the composition did not freeze at a temperature of -20 ° C or more and could exhibit antibacterial or antiviral effects. . According to one embodiment of the present invention, the freezing point of the composition may be -25 ° C to -30 ° C or -30 ° C to -40 ° C. The composition does not freeze at temperatures above freezing point and has antibacterial and antiviral activity.
본 발명의 조성물은 또한, 물로 1/16로 희석하는 경우에도 5℃ 이하 -20℃ 이상의 온도에서, 물로 1/32로 희석하는 경우에도 5℃ 이하 -14℃ 이상의 온도에서, 물로 1/64로 희석하는 경우에도 5℃ 이하 -13℃ 이상의 온도에서, 물로 1/128로 희석하는 경우에도 5℃ 이하 -12℃ 이상의 온도에서, 또는 물로 1/256로 희석하는 경우에도 5℃ 이하 -10℃ 이상의 온도에서, 동결되지 않고 항균 또는 항바이러스 활성을 나타낼 수 있다.The composition of the present invention can also be diluted to 1/16 with water at a temperature of 5 ° C or lower -20 ° C or higher, even when diluted 1/32 with water at a temperature of 5 ° C or lower -14 ° C or higher, and to 1/64 with water At a temperature of -13°C or higher, even when diluted, at a temperature of -13°C or higher, at a temperature of -12°C or lower, even when diluted to 1/128 with water, or at a temperature of -12°C or higher, even when diluted at a rate of 1/256 with water, at a temperature of 5°C or lower, -10°C or higher At temperature, it can exhibit antibacterial or antiviral activity without freezing.
상기 조성물의 항바이러스 활성의 대상이 되는 바이러스는, HIV, 일본 뇌염 바이러스, 사스 바이러스, 홍역바이러스, 코로나바이러스, B형간염 바이러스 및 포진바이러스가 포함되나 이에 한정되지는 않으며, 바람직하게는 전염성 기관지염 바이러스 또는 가금 인플루엔자 바이러스이다.Viruses targeted for the antiviral activity of the composition include, but are not limited to, HIV, Japanese encephalitis virus, SARS virus, measles virus, coronavirus, hepatitis B virus and herpes virus, preferably infectious bronchitis virus. or poultry influenza virus.
상기 조성물의 항균 활성의 대상이 되는 균은, 대장균, 살모넬라, 녹농균 및황색포도상구균을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.Bacteria that are subject to the antibacterial activity of the composition include, but are not limited to, Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus.
본 발명의 다른 실시예에 따르면, 본 발명의 소독제 조성물은 단시간 내에 항균 또는 항바이러스 활성을 나타낼 수 있다. 일 실시예에 따르면, 10분 내지 20분 내, 5분 내지 15분 내, 또는 5분 내지 20분 내 항균 또는 항바이러스 활성을 나타낼 수 있다. According to another embodiment of the present invention, the disinfectant composition of the present invention can exhibit antibacterial or antiviral activity within a short period of time. According to one embodiment, it may exhibit antibacterial or antiviral activity within 10 minutes to 20 minutes, within 5 minutes to 15 minutes, or within 5 minutes to 20 minutes.
본 발명은 또한, 저온에서도 항균 또는 항바이러스 활성을 갖는 소독제 조성물의 제조방법을 제공한다.The present invention also provides a method for preparing a disinfectant composition having antibacterial or antiviral activity even at low temperatures.
소독제 조성물의 제조방법에는 a) 아세트산 칼륨(potassium acetate), 염화나트륨(sodium chloride) 및 황산나트륨(sodium sulfate)을 용매에 용해시켜 혼합용액을 제조하는 단계, b) 상기 혼합용액을 교반하는 단계 및 c) 상기 b) 단계의 생성물을 여과하는 단계를 포함될 수 있다.The method for preparing a disinfectant composition includes a) preparing a mixed solution by dissolving potassium acetate, sodium chloride and sodium sulfate in a solvent, b) stirring the mixed solution, and c) A step of filtering the product of step b) may be included.
여기서 상기 용매는 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로필알콜로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 특별히 제한되지 않는다.Here, the solvent may be one or more selected from the group consisting of water, methanol, ethanol, propanol, and isopropyl alcohol, but is not particularly limited thereto.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for exemplifying the present invention, and it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.
전염성 기관지염 바이러스에 대한 소독제 효력시험Disinfectant efficacy test against infectious bronchitis virus
1-1. 실험 방법1-1. Experiment method
108.0 EID 50/ml(106.7 TCID 50/ml)의 역가를 갖는 전염성 기관지염 바이러스를 사용하였다. 4℃의 바이러스 액(요막강액)을 4℃의 바이러스 희석액(경수 희석액)과 1:1로 섞었다. 이후 희석배수 별 소독제에 동량의 바이러스액을 넣고 혼합한 다음(총 2mL), 4℃에서 정확히 30분간 반응을 시키며 도중에 10분마다 혼합하였다. 반응이 끝나면 동량의 중화배지(10% FBS 함유 DMEM)와 1:1 혼합하였다. DMEM을 사용하여 원액, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5의 농도로 희석하고, well당 25ul 희석액을 분주하였다. 반응 후 plate를 꺼내서 well당 175ul씩 유지배지(2% FBS 함유 DMEM)를 분주한뒤 37℃ 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 배양기에서 4~5일 동안 배양하며 매일 현미경으로 Cytopathic effect(CPE) 형성 유무를 확인한 뒤, Tissue culture infective does50(TCID50)/ml로 나타냈다.An infectious bronchitis virus with a titer of 10 8.0 EID 50/ml (10 6.7 TCID 50/ml) was used. A 4°C virus solution (allantoic fluid) was mixed with a 4°C virus dilution solution (hard water dilution) at a ratio of 1:1. Afterwards, the same amount of virus solution was added to the disinfectant by dilution factor and mixed (total 2mL), followed by reaction at 4 ° C for exactly 30 minutes and mixing every 10 minutes in the middle. After the reaction was completed, the same amount of neutralization medium (DMEM containing 10% FBS) was mixed 1:1. Using DMEM, the stock solution was diluted to a concentration of 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 , and 10 -5 , and 25ul of the diluted solution was dispensed per well. After the reaction, the plate was taken out, 175ul of maintenance medium (DMEM containing 2% FBS) was dispensed per well, and cultured in a 37°C 5% CO 2 incubator. After culturing in an incubator for 4 to 5 days and checking the presence or absence of Cytopathic effect (CPE) under a microscope every day, the tissue culture infective does 50 (TCID 50 )/ml was expressed.
대조군은 소독제와의 반응 없이 동일하게 실험을 진행하였다.The control group performed the same experiment without reacting with the disinfectant.
1-2. 전염성 기관지염 바이러스에 대한 소독제 효력확인1-2. Confirmation of effectiveness of disinfectant against infectious bronchitis virus
상기 실시예 1-1의 결과는 하기 표 1 및 2와 같다.The results of Example 1-1 are shown in Tables 1 and 2 below.
여기서, 감소율이 104 감소한 경우, 효력이 있다고 판단할 수 있다.Here, when the reduction rate decreases by 10 4 , it can be determined that there is an effect.
실험 결과에 따르면 대조군 바이러스 역가는 105.4 TCID50ml로 확인되었으며, 바이러스 원액, 10-1희석, 10-2 희석을 접종한 대조군에서 전염성 기관지염 바이러스 양성율은 100%로 확인되었으며, 10-3희석에서는 약 88%, 10-4희석에서는 약 38%의 양성율이 확인되었다. 반면, 소독제 실험군의 경우, 소독제 희석배수 4배와 10배에서 바이러스의 희석배수와 관계없이 모두 높은 소독 효능이 확인되었다.According to the experimental results, the control virus titer was confirmed to be 10 5.4 TCID50ml, and the infectious bronchitis virus positive rate was confirmed to be 100% in the control group inoculated with virus stock solution, 10 -1 dilution, and 10 -2 dilution, and about 88 at 10 -3 dilution %, a positive rate of about 38% was confirmed at the 10 -4 dilution. On the other hand, in the case of the disinfectant experimental group, high disinfection efficacy was confirmed regardless of the dilution factor of the virus at the disinfectant dilution factor of 4 and 10 times.
전염성 기관지염 바이러스에 대한 소독제 저온 효력시험Disinfectant low-temperature efficacy test for infectious bronchitis virus
2-1. 실험 방법2-1. Experiment method
108.0 EID 50/ml(106.7 TCID 50/ml)의 역가를 갖는 전염성 기관지염 바이러스를 사용하였다.An infectious bronchitis virus with a titer of 10 8.0 EID 50/ml (10 6.7 TCID 50/ml) was used.
4℃의 바이러스 액(요막강액)을 시험물질에 100ul를 분주한 후 상온에서 1시간 30분간 완전 건조한 후, 저온기계에서 40분간 쿨링하였다. 희석배수(경수) 별 소독제를 2ml씩 소분한 후, 저온기계에서 30분간 추가적으로 쿨링하였다. 소독제 온도가 목표치에 도달하면, 소독제 100ul를 시험물질에 분주한 후 반응하였다. 각각의 반응시간이 끝나면 시험물질을 2ml의 중화액 (10%FBS 함유 PBS)에 넣은 후 2분간 볼텍싱하였다. PBS를 사용하여 원액, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5로 희석하고 희석 배수 당 5개의 10일란 발육란에 중화된 반응액 0.1mL를 요막강 내로 접종하였다.After dispensing 100 ul of the virus liquid (allantoic fluid) at 4 ° C. to the test substance, it was completely dried at room temperature for 1 hour and 30 minutes, and then cooled in a low temperature machine for 40 minutes. After subdividing 2ml of the disinfectant for each dilution factor (hard water), it was additionally cooled in a low temperature machine for 30 minutes. When the disinfectant temperature reached the target value, 100ul of the disinfectant was dispensed to the test substance and then reacted. At the end of each reaction time, the test substance was added to 2 ml of a neutralization solution (PBS containing 10% FBS) and vortexed for 2 minutes. The stock solution, 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 , and 10 -5 were diluted with PBS, and 0.1 mL of the neutralized reaction solution was inoculated into the allantoic cavity of 5 embryonated 10-yield eggs per dilution factor.
접종 후 37℃에서 5일간 배양하며, 매일 검란을 실시하고, 접종 24시간 이내에 죽은 발육란은 사고사로 간주하고 시험성적에서 제외하였다. 접종 3일 후까지 살아남은 모든 발육란과 4℃에 보관된 죽은 접종란으로부터 요막강액을 각각 채취하고 Dot immunoblot assay를 실시하여 바이러스의 존재 유무 및 바이러스 역가를 최종 판정하였다.After inoculation, it was cultured at 37℃ for 5 days, inspected daily, and embryonated eggs that died within 24 hours of inoculation were regarded as accidental deaths and excluded from the test results. Allantoic fluid was collected from all embryonated eggs that survived up to 3 days after inoculation and from dead inoculated eggs stored at 4°C, and Dot immunoblot assay was performed to determine the presence or absence of virus and virus titer.
실험에서 반응 온도 및 시간은 하기 표 3과 같다.The reaction temperature and time in the experiment are shown in Table 3 below.
대조군은 소독제와의 반응 없이 실험을 진행하였다.The control group proceeded with the experiment without reaction with the disinfectant.
2-1. 전염성 기관지염 바이러스에 대한 소독제 저온 효력시험 결과2-1. Disinfectant low-temperature efficacy test results for infectious bronchitis virus
상기 실시예 2-1의 결과는 하기 표 4 및 표 5와 같다. 대조군의 바이러스 역가는 반응시간 5분, 10분, 15분 조건에 따라 각각 104.9EID50ml, 105.1EID50ml, 104.7EID50ml로 확인되었으며, 반응시간 5분, 10분, 15분 모두 바이러스 원액, 10-1 희석, 10-2희석을 접종한 대조군에서 조류 인플루엔자 바이러스 양성율은 100%로 확인되었으며, 10-3희석에서 반응시간 5분 및 10분에서는 100%, 15분에서는 약 75%로 확인되었다. 10-4희석에서는 반응시간 10분에서 60%, 5분과 15분에서는 약 40%의 양성율이 확인되었다. 반면 소독제 실험군의 경우, 소독제 희석 배수인 4배, 반응시간 10분 및 15분 조건에서 바이러스의 희석배수와 관계없이 모두 높은 소독 효능이 확인되었다.The results of Example 2-1 are shown in Tables 4 and 5 below. The virus titers of the control group were confirmed as 10 4.9 EID50ml, 10 5.1 EID50ml, and 10 4.7 EID50ml, respectively, according to the reaction time conditions of 5 minutes, 10 minutes, and 15 minutes . In the control group inoculated with 1 dilution and 10 -2 dilution, the avian influenza virus positive rate was confirmed to be 100%, and at 10 -3 dilution, the reaction time was 5 minutes and 100% at 10 minutes, and about 75% at 15 minutes. In the case of 10 -4 dilution, a positive rate of about 40% was confirmed at 10 minutes of reaction time and 60% at 5 minutes and 15 minutes. On the other hand, in the case of the disinfectant experimental group, high disinfection efficacy was confirmed regardless of the dilution factor of the virus under the conditions of 4 times the disinfectant dilution factor and reaction time of 10 minutes and 15 minutes.
여기서, A감소율이 104 이상 감소한 경우 효력이 있다고 판단하였다.Here, it was determined that the effect was effective when the A reduction rate decreased by 10 4 or more.
가금 인플루엔자 바이러스에 대한 소독제 효력시험Disinfectant efficacy test against poultry influenza virus
3-1. 실험 방법3-1. Experiment method
108.3 EID50/ml의 역가를 갖는 가금 인플루엔자 바이러스를 100배 희석하여 사용하였다. 4℃의 바이러스 액(요막강액)을 4℃의 바이러스 희석액(경수 희석액, 증류수 희석액)과 19mL와 섞었다. 이후 희석배수 별 소독제에 동량의 바이러스액 2.5mL을 넣고 혼합한 다음(총 5mL), 4℃에서 정확히 30분간 반응을 시키며 도중에 10분마다 혼합하였다. 반응이 끝나면 동량의 중화배지와 1:1 혼합하였다. PBSfmf 사용하여 원액, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5의 농도로 희석하고, 희석배수 당 5개의 10일란 발육란에 중화된 반응액 0.1mL를 요막강 내로 접종하였다. 접종 3일 후 혈구응집반응을 통하여 바이러스 존재 유무 및 바이러스 역가를 최종 판정하였다. 대조군은 소독제와의 반응 없이 실험하였다. A poultry influenza virus having a titer of 10 8.3 EID 50 /ml was used in a 100-fold dilution. A virus solution (allantoic fluid) at 4°C was mixed with 19 mL of a virus dilution solution (hard water dilution solution, distilled water dilution solution) at 4°C. Thereafter, 2.5 mL of the same amount of virus solution was added to the disinfectant by dilution factor and mixed (total 5 mL), followed by reaction at 4 ° C for exactly 30 minutes and mixing every 10 minutes during the process. After the reaction was completed, the same amount of neutralization medium was mixed 1:1. The stock solution was diluted to a concentration of 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 , 10 -5 using PBSfmf, and 0.1mL of the neutralized reaction solution was inoculated into the allantoic cavity in five 10-day embryonated eggs per dilution factor. did After 3 days of inoculation, the presence or absence of virus and virus titer were finally determined through hemagglutination. The control group was tested without reaction with the disinfectant.
3-2. 조류인플루엔자 바이러스에 대한 소독제 효력시험 결과3-2. Disinfectant efficacy test result for avian influenza virus
실시예 3-1의 결과는 하기 표 6 및 7과 같다.The results of Example 3-1 are shown in Tables 6 and 7 below.
여기서, A감소율이 104 이상 감소한 경우 효력이 있다고 판단하였다.Here, it was determined that the effect was effective when the A reduction rate decreased by 10 4 or more.
실험 결과에 따르면 대조군 바이러스 역가는 105.7 EID50ml로 확인되었으며, 바이러스 원액, 10-1희석, 10-2 희석, 10-3희석, 10-4희석을 접종한 대조군에서 조류 인플루엔자 바이러스 양성율은 100%로 확인되었다. 반면, 소독제 실험군의 경우, 소독제 희석배수 4배, 10배, 30배, 50배에서 바이러스의 희석배수와 관계없이 모두 높은 소독 효능이 확인되었다.According to the experimental results, the control virus titer was confirmed to be 10 5.7 EID50ml, and the avian influenza virus positive rate was 100% in the control group inoculated with virus stock solution, 10 -1 dilution, 10 -2 dilution, 10 -3 dilution, and 10 -4 dilution. Confirmed. On the other hand, in the case of the disinfectant experimental group, high disinfection efficacy was confirmed regardless of the dilution factor of the virus at 4-fold, 10-fold, 30-fold, and 50-fold disinfectant dilution factors.
4-1. 가금 인플루엔자 바이러스에 대한 소독제 저온 효력시험4-1. Low-temperature efficacy test of disinfectants against poultry influenza virus
108.3 EID 50/ml(106.7 TCID 50/ml)의 역가를 갖는 가금 인플루엔자 바이러스를 사용하였다.A poultry influenza virus with a titer of 10 8.3 EID 50/ml (10 6.7 TCID 50/ml) was used.
4℃의 바이러스 액(요막강액)340ul, BSA 25ul, 뮤신 100ul, Tryptone 35ul을 혼합하여 500ul의 바이러스 희석앨을 만든 후 시험물질에 10ul를 분주하고 상온에서 1시간 30분간 완전 건조한 뒤 저온기계에서 40분간 쿨링하였다.Mix 340ul of viral fluid (allantoic fluid) at 4℃, 25ul of BSA, 100ul of mucin, and 35ul of Tryptone to make a 500ul virus dilution egg, dispense 10ul to the test substance, dry completely at room temperature for 1 hour and 30 minutes, and then use a low-temperature machine. Cooled for 40 minutes.
희석배수(경수) 별 소독제를 2ml씩 소분한 후, 저온기계에서 30분간 추가적으로 쿨링하였다. 소독제 온도가 목표치에 도달하면, 소독제 50ul를 시험물질에 분주한 후 반응하였다. 각각의 반응시간이 끝나면 시험물질을 2ml의 중화액 (10%FBS 함유 PBS)에 넣은 후 2분간 볼텍싱하였다. PBS를 사용하여 원액, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5로 희석하고 희석 배수 당 5개의 10일란 발육란에 중화된 반응액 0.1mL를 요막강 내로 접종하였다.After subdividing 2ml of the disinfectant for each dilution factor (hard water), it was additionally cooled in a low temperature machine for 30 minutes. When the disinfectant temperature reached the target value, 50ul of the disinfectant was dispensed to the test substance and then reacted. At the end of each reaction time, the test substance was added to 2 ml of a neutralization solution (PBS containing 10% FBS) and vortexed for 2 minutes. The stock solution, 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 , and 10 -5 were diluted with PBS, and 0.1 mL of the neutralized reaction solution was inoculated into the allantoic cavity of 5 embryonated 10-yield eggs per dilution factor.
접종 3일 후 혈구응집반응을 통하여 바이러스의 존재 유무 및 바이러스의 역가를 최종 판정하였다.3 days after the inoculation, the presence or absence of the virus and the titer of the virus were finally determined through hemagglutination.
실험에서 반응 온도 및 시간은 하기 표 8과 같다.The reaction temperature and time in the experiment are shown in Table 8 below.
4-2. 가금 인플루엔자 바이러스에 대한 소독제 저온 효력 확인4-2. Confirmation of low-temperature efficacy of disinfectants against poultry influenza virus
상기 실시계 4-1.의 결과는 하기 표 9와 같다. The results of Example 4-1. are shown in Table 9 below.
여기서, A감소율이 104 이상 감소한 경우 효력이 있다고 판단하였다.Here, it was determined that the effect was effective when the A reduction rate decreased by 10 4 or more.
대조군 바이러스 역가는 반응시간 5분, 10분, 15분 조건 모두 각각 104.7EID 50/ml로 확인되었다. 반면 소독제 실험군의 경우, 소독제 희석배수 4배, 반응시간 10분 및 15분 조건 모두 감소율이 104.7이라는 높은 소독 효능이 확인되었다.The control virus titer was confirmed to be 10 4.7 EID 50/ml at reaction times of 5 minutes, 10 minutes, and 15 minutes, respectively. On the other hand, in the case of the disinfectant experimental group, high disinfection efficacy was confirmed with a decrease rate of 10 4.7 in both the disinfectant dilution factor 4 and the reaction time of 10 minutes and 15 minutes.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예 및 실험예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.The above description of the present invention is for illustrative purposes, and those skilled in the art can understand that it can be easily modified into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, it should be understood that the embodiments and experimental examples described above are illustrative in all respects and not limiting.
Claims (12)
저온에서도 항균 또는 항바이러스 활성을 갖는 내동성 소독제 조성물.including potassium hydroxide, potassium acetate, sodium chloride and sodium sulfate;
A cold-resistant disinfectant composition having antibacterial or antiviral activity even at low temperatures.
상기 수산화 칼륨 10 내지 20 중량부에 대하여 상기 아세트산 칼륨은 50 내지 70 중량부로 포함하는, 내동성 소독제 조성물.According to claim 1,
50 to 70 parts by weight of the potassium acetate based on 10 to 20 parts by weight of the potassium hydroxide.
상기 수산화 칼륨 10 내지 20 중량부에 대하여 상기 염화 나트륨은 15 내지 25 중량부로 포함하는, 내동성 소독제 조성물.According to claim 1,
The sodium chloride is contained in 15 to 25 parts by weight based on 10 to 20 parts by weight of the potassium hydroxide, antifreezing disinfectant composition.
상기 수산화 칼륨 10 내지 20 중량부에 대하여 상기 황산 나트륨은 1 내지 5 중량부로 포함하는, 내동성 소독제 조성물.According to claim 1,
1 to 5 parts by weight of the sodium sulfate relative to 10 to 20 parts by weight of the potassium hydroxide, the antifreeze disinfectant composition.
상기 조성물의 빙점은 -25℃ 내지 -30℃인, 내동성 소독제 조성물.According to claim 1,
The freezing point of the composition is -25 ° C to -30 ° C, a frost-resistant disinfectant composition.
상기 조성물은 전염성 기관지염 바이러스 또는 가금 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는, 내동성 소독제 조성물.According to claim 1,
The composition has an antiviral activity against infectious bronchitis virus or poultry influenza virus, cold-resistant disinfectant composition.
상기 조성물은 대장균, 살모넬라, 녹농균 또는 황색포도상구균에 대한 항균 활성을 갖는, 내동성 소독제 조성물.According to claim 1,
The composition has antibacterial activity against Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas aeruginosa or Staphylococcus aureus, frost-resistant disinfectant composition.
상기 조성물은 10분 내지 20분 내 항균 또는 항바이러스 활성을 나타내는, 내동성 소독제 조성물.According to claim 1,
The composition exhibits antibacterial or antiviral activity within 10 to 20 minutes, frost-resistant disinfectant composition.
a) 수산화 칼륨(potassium hydroxide), 아세트산 칼륨(potassium acetate), 염화나트륨(sodium chloride) 및 황산나트륨(sodium sulfate)을 용매에 용해시켜 혼합용액을 제조하는 단계;
b) 상기 혼합용액을 교반하는 단계; 및
c) 상기 b) 단계의 생성물을 여과하는 단계를 포함하는 내동성 소독제 조성물의 제조방법.In the method for producing a disinfectant composition having antibacterial or antiviral activity even at low temperatures,
a) preparing a mixed solution by dissolving potassium hydroxide, potassium acetate, sodium chloride and sodium sulfate in a solvent;
b) stirring the mixed solution; and
c) a method for producing a frost-resistant disinfectant composition comprising the step of filtering the product of step b).
상기 조성물의 빙점은 -10℃ 내지 -20℃인, 내동성 소독제 조성물.According to claim 9,
The freezing point of the composition is -10 ℃ to -20 ℃, frost-resistant disinfectant composition.
상기 조성물은 전염성 기관지염 바이러스 또는 가금 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 갖는, 내동성 소독제 조성물.According to claim 9,
The composition has an antiviral activity against infectious bronchitis virus or poultry influenza virus, cold-resistant disinfectant composition.
상기 조성물은 대장균, 살모넬라, 녹농균 또는 황색포도상구균에 대한 항균 활성을 갖는, 내동성 소독제 조성물.According to claim 9,
The composition has antibacterial activity against Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas aeruginosa or Staphylococcus aureus, frost-resistant disinfectant composition.
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