KR20220146479A - 화합물 및 그의 용도 - Google Patents

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cancer
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mmol
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KR1020227029590A
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케빈 제이. 윌슨
숀 이.알. 쉴러
솔리마르 네그레티
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포그혼 쎄라퓨틱스 인크.
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Abstract

본 개시내용은 BAF 복합체-관련 장애의 치료에 유용한 화합물을 특색으로 한다.

Description

화합물 및 그의 용도
본 발명은 BRG1- 또는 BRM-연관 인자 (BAF) 복합체를 조정하는 데 유용한 화합물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 BAF 복합체 기능과 연관된 장애의 치료에 유용한 화합물에 관한 것이다.
염색질 조절은 유전자 발현에 필수적이고, ATP-의존성 염색질 재형성은 이러한 유전자 발현이 일어나는 메카니즘이다. BAF 복합체로도 공지된 인간 스위치/수크로스 비-발효성(Switch/Sucrose Non-Fermentable) (SWI/SNF) 염색질 재형성 복합체는 BRG1 (브라마-관련 유전자-1) 및 BRM (브라마)으로 공지된 2종의 SWI2-유사 ATPase를 갖는다. ATP-의존성 염색질 재형성자 SMARCA4로 또한 공지된 전사 활성화인자 BRG1은 염색체 19 상의 SMARCA4 유전자에 의해 코딩된다. BRG1은 일부 암 종양에서 과다발현되고, 암 세포 증식에 필요하다. 가능한 전반적 전사 활성화인자 SNF2L2 및/또는 ATP-의존성 염색질 재형성자 SMARCA2로 또한 공지된 BRM은 염색체 9 상의 SMARCA2 유전자에 의해 코딩되고, BRG1 기능 돌연변이의 상실을 특징으로 하는 세포에서 종양 세포 성장에 필수적인 것으로 밝혀졌다. BRG 및/또는 BRM의 탈활성화는 세포에서 하류 효과, 예컨대 세포 주기 정지 및 종양 억제를 유발한다.
본 발명은 BAF 복합체를 조정하는 데 유용한 화합물을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 화합물은 BAF 복합체에서의 변경과 연관된 장애, 예를 들어 BRG1 및 BRM 단백질 중 하나 또는 둘 다에서의 변경과 연관된 장애의 치료에 유용하다. 본 발명의 화합물은 단독으로 또는 다른 제약 활성제와 조합하여 이러한 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 특징으로 한다:
Figure pct00001
여기서,
A는
Figure pct00002
이고;
m은 0, 1, 2, 또는 3이고;
n은 1 또는 2이고;
o는 0 또는 1이고;
X는 O, CH2, 또는 NR7이고;
X'는 N, CH, 또는 CRX이고, 여기서 RX는 할로겐이고;
B는 임의로 치환된 6-원 모노시클릭 헤테로아릴렌 또는 임의로 치환된 9- 또는 10-원 비시클릭 헤테로아릴렌이고;
L은 공유 결합, 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌, C2 알키닐렌, 임의로 치환된 C2 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-C3 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 C3-C5 시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴렌이고;
C는 임의로 치환된 3- 내지 10-원 시클로알킬; 임의로 치환된 6- 내지 10-원 아릴; 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로아릴; 또는 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로시클릴이고;
R1 및 R7은 독립적으로 수소 또는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
각각의 R2 및 R3은 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 또는 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬이고;
R4는 시아노, 플루오로, 히드록시, 또는 -CH2OH이고;
R5는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 플루오로 기로 임의로 치환된 C1-C3 알킬이고;
R6은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 플루오로 기로 임의로 치환된 C1-C3 알킬이다.
일부 실시양태에서, R1은 수소이다. 일부 실시양태에서, m은 1이다. 일부 실시양태에서, R3은 수소이다. 일부 실시양태에서, R2는 수소이다. 일부 실시양태에서, R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬 (예를 들어, 메틸)이다. 일부 실시양태에서, R2는 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬 (예를 들어, -CH2OCH3)이다.
일부 실시양태에서, A는
Figure pct00003
이다. 일부 실시양태에서, R6은 -CHF2이다.
일부 실시양태에서, A는
Figure pct00004
이다. 일부 실시양태에서, R5는 메틸 또는 -CHF2이다. 일부 실시양태에서, X는 O이다. 일부 실시양태에서, X는 CH2이다. 일부 실시양태에서, X는 NR7이다. 일부 실시양태에서, X'는 N이다. 일부 실시양태에서, X'는 CH이다. 일부 실시양태에서, X'는 CRX (예를 들어, RX는 플루오로임)이다. 일부 실시양태에서, R7은 수소이다. 일부 실시양태에서, R7은 메틸이다. 일부 실시양태에서, o는 0이다. 일부 실시양태에서, o는 1이다. 일부 실시양태에서, n은 1이다. 일부 실시양태에서, n은 2이다. 일부 실시양태에서, R4는 시아노이다. 일부 실시양태에서, R4는 플루오로이다. 일부 실시양태에서, R4는 히드록시이다. 일부 실시양태에서, R4는 -CH2OH이다. 일부 실시양태에서, A는
Figure pct00005
Figure pct00006
이다.
일부 실시양태에서, C는 임의로 치환된 3- 내지 10-원 시클로알킬 (예를 들어, 시클로프로필)이다.
일부 실시양태에서, C는 임의로 치환된 6- 내지 10-원 아릴 (예를 들어, 페닐, 3-디플루오로메틸-페닐, 4-디플루오로메틸페닐, 2-메톡시-페닐, 3-메톡시-페닐, 4-메톡시-페닐, 3,5-디플루오로페닐, 3-디플루오로메틸페닐, 2-메톡시-5-메틸-페닐, 2-메톡시-4-클로로-페닐, 3-시아노-페닐, 3-플루오로-5-메톡시-페닐, 3-플루오로-5-아지티디닐-페닐, 3-아제티딜-페닐, 4-아제티딜-2-메톡시-페닐, 4-모르폴린-4-일-2-메톡시-페닐, 4-tert-부틸-2-메톡시-페닐, 4-아제티딜-페닐, 2-메톡시-4-옥세탄-3-일-페닐, 2-아제티딘-2-온-1-일-페닐, 3-(3-디플루오로메틸옥세탄-3-일)-페닐, 3-(3-메톡시옥세탄-3-일)-페닐, 3-(N-메틸-N-아세트아미도)-페닐, 3-시클로프로필페닐, 3-(N-메틸아제티딘-3-일)-페닐, 3-(N-메틸-N'-피페라지닐)-페닐, 3-플루오로-5-아제티딜-페닐, 3-메틸 에스테르-페닐,
Figure pct00007
)이다.
일부 실시양태에서, C는 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로아릴 (예를 들어,
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
)이다. 일부 실시양태에서, C는
Figure pct00012
이다.
일부 실시양태에서, C는 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로시클릴 (예를 들어,
Figure pct00013
또는 N-피롤리디닐)이다. 일부 실시양태에서, C는
Figure pct00014
이다.
일부 실시양태에서, B는 임의로 치환된 6-원 모노시클릭 헤테로아릴렌이다. 일부 실시양태에서, B는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00015
여기서, Ra는 수소 또는 플루오로이고;
Rb는 수소, 플루오로, 또는 C1-C3 알킬이고;
Xa는 N 또는 CH이다.
일부 실시양태에서, Ra는 수소이다. 일부 실시양태에서, Ra는 플루오로이다. 일부 실시양태에서, Rb는 수소이다. 일부 실시양태에서, Rb는 플루오로이다. 일부 실시양태에서, C1-C3 알킬 (예를 들어, 메틸)이다. 일부 실시양태에서, Xa는 N이다. 일부 실시양태에서, Xa는 CH이다. 일부 실시양태에서, B는
Figure pct00016
이다. 일부 실시양태에서, B는
Figure pct00017
이다.
일부 실시양태에서, B는 임의로 치환된 9- 또는 10-원 비시클릭 헤테로아릴렌이다. 일부 실시양태에서, B는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00018
여기서, D는 임의로 치환된 5- 또는 6-원 헤테로아릴 또는 임의로 치환된 5- 또는 6-원 헤테로시클릴 (예를 들어,
Figure pct00019
)이다.
일부 실시양태에서, L은 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌, C2 알키닐렌, 임의로 치환된 C2 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-C3 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 C3-C5 시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴렌이다. 일부 실시양태에서, L은 공유 결합이고, 예를 들어 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00020
여기서, 모든 가변기는 본원에 기재된 바와 같다.
일부 실시양태에서, L은 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌 (예를 들어, 에틸렌)이다. 일부 실시양태에서, C2 알키닐렌이다. 일부 실시양태에서, L은 임의로 치환된 C2 알케닐렌 (예를 들어,
Figure pct00021
)이다. 일부 실시양태에서, L은 임의로 치환된 C2-C3 헤테로알킬렌 (예를 들어,
Figure pct00022
)이다. 일부 실시양태에서, L은 임의로 치환된 C3-C5 시클로알킬렌 (예를 들어,
Figure pct00023
)이다. 일부 실시양태에서, L은 임의로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴렌 (예를 들어,
Figure pct00024
)이다.
일부 실시양태에서, 화합물은 표 1의 화합물 1-48 중 어느 하나이다.
표 1. 본 발명의 화합물
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
일부 실시양태에서, 화합물은 표 2의 화합물 49-84 중 어느 하나이다.
표 2. 본 발명의 화합물
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
일부 실시양태에서, 화합물은 표 3의 화합물 85-126 중 어느 하나이다.
표 3. 본 발명의 화합물
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
일부 실시양태에서, 화합물은 표 3a의 화합물 127-525 중 어느 하나이다.
표 3a. 본 발명의 화합물
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또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 화합물 중 어느 하나 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 특징으로 한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 세포를 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포에서 BAF 복합체의 활성을 감소시키는 방법을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, 세포는 암 세포이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 BAF 복합체-관련 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 BAF 복합체-관련 장애를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, BAF 복합체-관련 장애는 암이다.
추가 측면에서, 본 발명은 세포를 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, BRM을 억제하는 방법을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, 세포는 암 세포이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 세포를 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, BRG1을 억제하는 방법을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, 세포는 암 세포이다.
추가 측면에서, 본 발명은 세포를 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, BRM 및 BRG1을 억제하는 방법을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, 세포는 암 세포이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 BRG1 기능 상실 돌연변이와 관련된 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 BRG1 기능 상실 돌연변이와 관련된 장애를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, BRG1 기능 상실 돌연변이와 관련된 장애는 암이다. 다른 실시양태에서, 대상체는 BRG1 기능 상실 장애를 갖는 것으로 결정되고, 예를 들어 BRG1 기능 상실 암 (예를 들어, 암은 BRG1 기능 상실을 갖는 암 세포를 포함하는 것으로 결정됨)을 갖는 것으로 결정된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 세포를 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포에서 아폽토시스를 유도하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 세포는 암 세포이다.
추가 측면에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법을 특징으로 한다.
상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암, 결장직장암, 방광암, 원인불명 원발성 암, 신경교종, 유방암, 흑색종, 비-흑색종 피부암, 자궁내막암, 식도위암, 췌장암, 간담도암, 연부 조직 육종, 난소암, 두경부암, 신세포 암종, 골암, 비-호지킨 림프종, 소세포 폐암, 전립선암, 배아성 종양, 배세포 종양, 자궁경부암, 갑상선암, 타액선암, 위장 신경내분비 종양, 자궁 육종, 위장 기질 종양, CNS암, 흉선 종양, 부신피질 암종, 충수암, 소장암 또는 음경암이다.
상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암, 결장직장암, 방광암, 원인불명 원발성 암, 신경교종, 유방암, 흑색종, 비-흑색종 피부암, 자궁내막암 또는 음경암이다.
상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 암은 약물 저항성 암이거나, 또는 선행 요법 (예를 들어, 베무라페닙, 다카르바진, CTLA4 억제제, PD1 억제제, 인터페론 요법, BRAF 억제제, MEK 억제제, 방사선요법, 테모졸이미드, 이리노테칸, CAR-T 요법, 헤르셉틴, 페르제타, 타목시펜, 젤로다, 도세탁솔, 백금 작용제, 예컨대 카르보플라틴, 탁산, 예컨대 파클리탁셀 및 도세탁셀, ALK 억제제, MET 억제제, 알림타, 아브락산, 아드리아마이신(Adriamycin)®, 겜시타빈, 아바스틴, 할라벤, 네라티닙, PARP 억제제, ARN810, mTOR 억제제, 토포테칸, 겜자르, VEGFR2 억제제, 폴레이트 수용체 길항제, 뎀시주맙, 포스브레타불린 또는 PDL1 억제제)에 반응하지 않았다.
상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 암은 BRG1 돌연변이를 갖거나 또는 갖는 것으로 결정되었다. 상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, BRG1 돌연변이는 동형접합이다. 상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 암은 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 돌연변이를 갖지 않거나 또는 갖지 않는 것으로 결정되었다. 상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 암은 역형성 림프종 키나제 (ALK) 드라이버 돌연변이를 갖지 않거나 또는 갖지 않는 것으로 결정되었다. 상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 암은 KRAS 돌연변이를 갖거나 또는 갖는 것으로 결정되었다. 상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, BRG1 돌연변이는 단백질의 ATPase 촉매 도메인 내에 있다. 상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, BRG1 돌연변이는 BRG1의 C-말단에서의 결실이다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 BAF와 관련된 장애 (예를 들어, 암 또는 바이러스 감염)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 이 방법은 세포를 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 임의의 상기 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 장애는 바이러스 감염이고, 이는 레트로비리다에 과의 바이러스, 예컨대 렌티바이러스 (예를 들어, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 및 델타레트로바이러스 (예를 들어, 인간 T 세포 백혈병 바이러스 I (HTLV-I), 인간 T 세포 백혈병 바이러스 II (HTLV-II)), 헤파드나비리다에 과 (예를 들어, B형 간염 바이러스 (HBV)), 플라비비리다에 과 (예를 들어, C형 간염 바이러스 (HCV)), 아데노비리다에 과 (예를 들어, 인간 아데노바이러스), 헤르페스비리다에 과 (예를 들어, 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV), 엡스타인-바르 바이러스, 단순 포진 바이러스 1 (HSV-1), 단순 포진 바이러스 2 (HSV-2), 인간 헤르페스바이러스 6 (HHV-6), 헤르페스비투스 K*, CMV, 수두 대상포진 바이러스), 파필로마비리다에 과 (예를 들어, 인간 유두종바이러스 (HPV, HPV E1)), 파르보비리다에 과 (예를 들어, 파르보바이러스 B19), 폴리오마비리다에 과 (예를 들어, JC 바이러스 및 BK 바이러스), 파라믹소비리다에 과 (예를 들어, 홍역 바이러스), 토가비리다에 과 (예를 들어, 풍진 바이러스)로의 감염이다. 일부 실시양태에서, 장애는 코핀 시리스, 신경섬유종증 (예를 들어, NF-1, NF-2 또는 슈반세포종증) 또는 다발성 수막종이다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 이 방법은 대상체에게 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 임의의 상기 제약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 바이러스 감염은 레트로비리다에 과의 바이러스, 예컨대 렌티바이러스 (예를 들어, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 및 델타레트로바이러스 (예를 들어, 인간 T 세포 백혈병 바이러스 I (HTLV-I), 인간 T 세포 백혈병 바이러스 II (HTLV-II)), 헤파드나비리다에 과 (예를 들어, B형 간염 바이러스 (HBV)), 플라비비리다에 과 (예를 들어, C형 간염 바이러스 (HCV)), 아데노비리다에 과 (예를 들어, 인간 아데노바이러스), 헤르페스비리다에 과 (예를 들어, 인간 시토메갈로바이러스 (HCMV), 엡스타인-바르 바이러스, 단순 포진 바이러스 1 (HSV-1), 단순 포진 바이러스 2 (HSV-2), 인간 헤르페스바이러스 6 (HHV-6), 헤르페스비투스 K*, CMV, 수두 대상포진 바이러스), 파필로마비리다에 과 (예를 들어, 인간 유두종바이러스 (HPV, HPV E1)), 파르보비리다에 과 (예를 들어, 파르보바이러스 B19), 폴리오마비리다에 과 (예를 들어, JC 바이러스 및 BK 바이러스), 파라믹소비리다에 과 (예를 들어, 홍역 바이러스), 또는 토가비리다에 과 (예를 들어, 풍진 바이러스)로의 감염이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암을 치료하는 방법을 특징으로 한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 종양 성장의 감소를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 종양 성장을 감소시키는 방법을 특징으로 한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 전이성 진행을 억제하는 방법을 특징으로 한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 전이성 콜로니화를 억제하는 방법을 특징으로 한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암 세포를 유효량의 임의의 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 세포에서 BRG1 및/또는 BRM의 수준 및/또는 활성을 감소시키는 방법을 특징으로 한다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액 세포는 대상체 내에 있다.
상기 측면 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 화합물의 유효량은 BRG1의 수준 및/또는 활성을 참조와 비교하여 적어도 5% (예를 들어, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)만큼 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 화합물의 유효량은 BRG1의 수준 및/또는 활성을 참조와 비교하여 적어도 50% (예를 들어, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)만큼 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 화합물의 유효량은 BRG1의 수준 및/또는 활성을 적어도 90% (예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)만큼 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 화합물의 유효량은 적어도 12시간 (예를 들어, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 30시간, 36시간, 48시간, 72시간 또는 그 초과) 동안 참조와 비교하여 BRG1의 수준 및/또는 활성을 적어도 5% (예를 들어, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)만큼 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 화합물의 유효량은 BRG1의 수준 및/또는 활성을 적어도 4일 (예를 들어, 5일, 6일, 7일, 14일, 28일 또는 그 초과) 동안 참조와 비교하여 적어도 5% (예를 들어, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)만큼 감소시킨다.
임의의 상기 측면의 일부 실시양태에서, 화합물의 유효량은 BRM의 수준 및/또는 활성을 참조와 비교하여 적어도 5% (예를 들어, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)만큼 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 화합물의 유효량은 BRM의 수준 및/또는 활성을 참조와 비교하여 적어도 50% (예를 들어, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)만큼 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 유효량의 화합물은 BRM의 수준 및/또는 활성을 적어도 90% (예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)만큼 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 화합물의 유효량은 BRM의 수준 및/또는 활성을 적어도 12시간 (예를 들어, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 30시간, 36시간, 48시간, 72시간 또는 그 초과) 동안 참조와 비교하여 적어도 5% (예를 들어, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)만큼 감소시킨다. 일부 실시양태에서, BRM의 수준 및/또는 활성을 적어도 4일 (예를 들어, 5일, 6일, 7일, 14일, 28일 또는 그 초과) 동안 참조와 비교하여 적어도 5% (예를 들어, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%)만큼 감소시키는 화합물의 유효량.
일부 실시양태에서, 대상체는 암을 갖는다. 일부 실시양태에서, 암은 BRG1 및/또는 BRM 단백질을 발현하고/거나 세포 또는 대상체는 BRG1 및/또는 BRM을 발현하는 것으로 확인되었다. 일부 실시양태에서, 암은 BRG1 단백질을 발현하고/거나 세포 또는 대상체는 BRG1을 발현하는 것으로 확인되었다. 일부 실시양태에서, 암은 BRM 단백질을 발현하고/거나 세포 또는 대상체는 BRM을 발현하는 것으로 확인되었다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종 (예를 들어, 포도막 흑색종, 점막 흑색종 또는 피부 흑색종)이다. 몇몇 실시양태에서, 암은 전립선암이다. 일부 실시양태에서, 암은 혈액암, 예를 들어 다발성 골수종, 대세포 림프종, 급성 T-세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군, 이뮤노글로불린 A 람다 골수종, 미만성 혼합 조직구성 및 림프구성 림프종, B-세포 림프종, 급성 림프모구성 백혈병 (예를 들어, T-세포 급성 림프모구성 백혈병 또는 B-세포 급성 림프모구성 백혈병), 미만성 대세포 림프종 또는 비-호지킨 림프종이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암 (예를 들어, ER 양성 유방암, ER 음성 유방암, 삼중 양성 유방암 또는 삼중 음성 유방암)이다. 일부 실시양태에서, 암은 골암 (예를 들어, 유잉 육종)이다. 일부 실시양태에서, 암은 신세포 암종 (예를 들어, 소안구증 전사 인자 (MITF) 패밀리 전위 신세포 암종 (tRCC))이다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성이다 (예를 들어, 암이 간으로 확산됨). 전이성 암은 이동 세포의 이동 및/또는 침습을 나타내는 세포를 포함할 수 있고/거나 내피 동원 및/또는 혈관신생을 나타내는 세포를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 이동 암은 세포 이동 암이다. 또 다른 실시양태에서, 세포 이동 암은 비-전이성 세포 이동 암이다. 전이성 암은 복막, 흉막, 심막 또는 지주막하 공간의 표면을 시딩하는 것을 통해 확산된 암일 수 있다. 대안적으로, 전이성 암은 림프계를 통해 확산된 암, 또는 혈행성으로 확산된 암일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 유효량은 암의 간으로의 전이성 콜로니화를 억제하는 데 효과적인 양이다.
일부 실시양태에서, 암은 GNAQ에서의 돌연변이를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 GNA11에서의 돌연변이를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 PLCB4에서의 돌연변이를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 CYSLTR2에서의 돌연변이를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 BAP1에서의 돌연변이를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 SF3B1에서의 돌연변이를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 EIF1AX에서의 돌연변이를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 TFE3 전위를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 TFEB 전위를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 MITF 전위를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 EZH2 돌연변이를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 SUZ12 돌연변이를 보유한다. 일부 실시양태에서, 암은 EED 돌연변이를 보유한다.
상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 방법은 대상체에게 항암 요법, 예를 들어 화학요법제 또는 세포독성제, 면역요법, 수술, 방사선요법, 열요법 또는 광응고, 또는 그의 조합을 투여하거나 또는 세포와 접촉시키는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항암 요법은 화학요법제 또는 세포독성제, 예를 들어 항대사물, 항유사분열제, 항종양 항생제, 아스파라긴-특이적 효소, 비스포스포네이트, 항신생물제, 알킬화제, DNA-복구 효소 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제, 코르티코스테로이드, 탈메틸화제, 면역조정제, 야누스-연관 키나제 억제제, 포스피노시티드 3-키나제 억제제, 프로테아솜 억제제 또는 티로신 키나제 억제제, 또는 그의 조합이다.
상기 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 포도막 흑색종의 치료에 사용되는 또 다른 항암 요법, 예컨대 수술, MEK 억제제 및/또는 PKC 억제제, 또는 그의 조합과 조합하여 사용된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 방법은 본 발명의 화합물의 투여 전에, 그 후에 또는 그와 동시에 수술을 수행하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 본 발명의 화합물의 투여 전에, 그 후에 또는 그와 동시에 MEK 억제제 및/또는 PKC 억제제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항암 요법 및 본 발명의 화합물은 서로 28일 이내에 함께 대상체를 치료하는 데 효과적인 양으로 각각 투여된다.
일부 실시양태에서, 대상체 또는 암은 BRG1 기능 상실 돌연변이를 갖고/거나 갖는 것으로 확인되었다. 일부 실시양태에서, 대상체 또는 암은 BRM 기능 상실 돌연변이를 갖고/거나 갖는 것으로 확인되었다.
일부 실시양태에서, 암은 1종 이상의 화학요법제 또는 세포독성제에 대해 저항성이다 (예를 들어, 암은 예컨대 유전자 마커에 의해 화학요법제 또는 세포독성제에 대해 저항성인 것으로 결정되거나, 또는 화학요법제 또는 세포독성제, 예컨대 화학요법제 또는 세포독성제에 반응하는 데 실패한 암에 대해 저항성일 가능성이 있음). 일부 실시양태에서, 암은 1종 이상의 화학요법제 또는 세포독성제에 반응하는 데 실패하였다. 일부 실시양태에서, 암은 다카르바진, 테모졸로미드, 시스플라틴, 트레오술판, 포테무스틴, IMCgp100, CTLA-4 억제제 (예를 들어, 이필리무맙), PD-1 억제제 (예를 들어, 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙), PD-L1 억제제 (예를 들어, 아테졸리주맙, 아벨루맙 또는 두르발루맙), 미토겐-활성화 단백질 키나제 (MEK) 억제제 (예를 들어, 셀루메티닙, 비니메티닙 또는 타메티닙) 및/또는 단백질 키나제 C(PKC) 억제제 (예를 들어, 소트라스타우린 또는 IDE196)에 저항성이거나 또는 그에 반응하는 데 실패하였다.
일부 실시양태에서, 암은 포도막 흑색종, 예컨대 MEK 억제제 또는 PKC 억제제의 치료에 사용되는 이전에 투여된 치료제에 대해 저항성이거나 또는 그에 반응하는 데 실패한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 암은 미토겐-활성화 단백질 키나제 (MEK) 억제제 (예를 들어, 셀루메티닙, 비니메티닙, 또는 타메티닙), 및/또는 단백질 키나제 C(PKC) 억제제 (예를 들어, 소트라스타우린 또는 IDE196)에 저항성이거나 또는 그에 반응하는 데 실패한다.
화학적 용어
본원에 사용된 용어는 특정한 실시양태를 기재하기 위한 것이며, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
하기 임의의 화학적 정의에서, 원자 기호 뒤의 숫자는 특정한 화학 모이어티에서 존재하는 해당 원소의 총 원자 개수를 나타낸다. 이해되는 바와 같이, 본원에 기재된 바와 같은 다른 원자, 예컨대 H 원자, 또는 치환기는 원자의 원자가를 충족시키기 위해 필요에 따라 존재할 수 있다. 예를 들어, 비치환된 C2 알킬 기는 화학식 -CH2CH3을 갖는다. 본원에 정의된 기와 함께 사용되는 경우에, 탄소 원자의 수에 대한 언급은 아세탈 및 케탈 기 내의 2가 탄소를 포함하지만, 아실, 에스테르, 카르보네이트 또는 카르바메이트 기 내의 카르보닐 탄소는 포함하지 않는다. 헤테로아릴 기 내의 산소, 질소 또는 황 원자의 개수에 대한 언급은 헤테로시클릭 고리의 일부를 형성하는 원자를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "아실"은 H, 또는 본원에 정의된 바와 같은 카르보닐 기를 통해 모 분자 기에 부착된 알킬 기를 나타내고, 포르밀 (즉, 카르복시알데히드 기), 아세틸, 트리플루오로아세틸, 프로피오닐 및 부타노일로 예시된다. 예시적인 비치환된 아실 기는 1 내지 6, 1 내지 11, 또는 1 내지 21개의 탄소를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은 1 내지 20개의 탄소 원자 (예를 들어, 1 내지 16개의 탄소 원자, 1 내지 10개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자 또는 1 내지 3개의 탄소 원자)의 분지쇄 또는 직쇄 1가 포화 지방족 탄화수소 라디칼을 지칭한다.
알킬렌은 2가 알킬 기이다. 본원에 단독으로 또는 다른 기와 조합하여 사용된 용어 "알케닐"은 탄소-탄소 이중 결합을 갖고 2 내지 20개의 탄소 원자 (예를 들어, 2 내지 16개의 탄소 원자, 2 내지 10개의 탄소 원자, 2 내지 6개의 탄소 원자 또는 2개의 탄소 원자)를 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 잔기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "알킬술핀이미드"는 화학식 -N=S(O)R2의 기를 지칭하며, 여기서 각각의 R은 독립적으로 알킬이다.
본원에 단독으로 또는 다른 기와 조합하여 사용된 용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합을 갖고 2 내지 20개의 탄소 원자 (예를 들어, 2 내지 16개의 탄소 원자, 2 내지 10개의 탄소 원자, 2 내지 6개의 탄소 원자 또는 2개의 탄소 원자)를 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 잔기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "아미노"는 -N(RN1)2를 나타내고, 여기서 각각의 RN1은 독립적으로 H, OH, NO2, N(RN2)2, SO2ORN2, SO2RN2, SORN2, N-보호기, 알킬, 알콕시, 아릴, 아릴알킬, 시클로알킬, 아실 (예를 들어, 아세틸, 트리플루오로아세틸, 또는 본원에 기재된 다른 것)을 나타내고, 여기서 각각의 이들 언급된 RN1 기는 임의로 치환될 수 있거나; 또는 2개의 RN1는 조합하여 알킬렌 또는 헤테로알킬렌을 형성하고, 여기서 각각의 RN2는 독립적으로 H, 알킬, 또는 아릴이다. 본 발명의 아미노 기는 비치환된 아미노 (즉, -NH2) 또는 치환된 아미노 (즉, -N(RN1)2)일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아릴"은 적어도 1개의 방향족 고리를 갖는, 6 내지 12개의 탄소 원자의 방향족 모노- 또는 폴리카르보시클릭 라디칼을 지칭한다. 이러한 기의 예는 페닐, 나프틸, 1,2,3,4-테트라히드로나프틸, 1,2-디히드로나프틸, 인다닐 및 1H-인데닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "아릴알킬"은 아릴 기로 치환된 알킬 기를 나타낸다. 예시적인 비치환된 아릴알킬 기는 7 내지 30개의 탄소 (예를 들어, 7 내지 16개 또는 7 내지 20개의 탄소, 예컨대 C1-C6 알킬 C6-C10 아릴, C1-C10 알킬 C6-C10 아릴, 또는 C1-C20 알킬 C6-C10 아릴), 예컨대 벤질 및 페네틸이다. 일부 실시양태에서, 알킬 및 아릴 각각은 각각의 기에 대해 본원에 정의된 바와 같은 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아지도"는 -N3 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "가교된 폴리시클로알킬"은 1 내지 3개의 가교를 함유하는 5 내지 20개의 탄소의 가교된 폴리시클릭 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "시아노"는 -CN 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "카르보시클릴"은 고리가 탄소 원자에 의해 형성된 비-방향족 C3-C12 모노시클릭, 비시클릭 또는 트리시클릭 구조를 지칭한다. 카르보시클릴 구조는 시클로알킬 기 및 불포화 카르보시클릴 라디칼을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은 3 내지 10개, 바람직하게는 3 내지 6개의 탄소 원자의 포화, 비-방향족 및 1가 모노- 또는 폴리카르보시클릭 라디칼을 지칭한다. 이 용어는 추가로 라디칼 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 노르보르닐 및 아다만틸에 의해 예시된다.
본원에 사용된 용어 "할로"는 플루오린 (플루오로), 염소 (클로로), 브로민 (브로모) 또는 아이오딘 (아이오도) 라디칼을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로알킬"은 구성성분 탄소 원자 중 1개 이상이 질소, 산소 또는 황에 의해 대체된, 본원에 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 헤테로알킬 기는 알킬 기에 대해 본원에 기재된 바와 같은 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 헤테로알킬 기의 예는 알킬-O- (예를 들어, 메톡시 및 에톡시)를 지칭하는 본원에 사용된 "알콕시"이다. 헤테로알킬렌은 2가 헤테로알킬 기이다. 본원에 사용된 용어 "헤테로알케닐"은 구성성분 탄소 원자 중 1개 이상이 질소, 산소 또는 황에 의해 대체된, 본원에 정의된 바와 같은 알케닐 기를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 헤테로알케닐 기는 알케닐 기에 대해 본원에 기재된 바와 같이 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 헤테로알케닐 기의 예는 알케닐-O-를 지칭하는 본원에 사용된 "알켄옥시"이다. 헤테로알케닐렌은 2가 헤테로알케닐 기이다. 본원에 사용된 용어 "헤테로알키닐"은 구성성분 탄소 원자 중 1개 이상이 질소, 산소 또는 황에 의해 대체된, 본원에 정의된 바와 같은 알키닐 기를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 헤테로알키닐 기는 알키닐 기에 대해 본원에 기재된 바와 같이 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 헤테로알키닐 기의 예는 알키닐-O-를 지칭하는 본원에 사용된 "알키닐옥시"이다. 헤테로알키닐렌은 2가 헤테로알키닐 기이다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 원자를 함유하는 적어도 1개의 방향족 고리를 갖고 나머지 고리 원자는 탄소인, 5 내지 12개의 원자의 방향족 모노- 또는 폴리시클릭 라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴 기의 1 또는 2개의 고리 탄소 원자는 카르보닐 기로 대체될 수 있다. 헤테로아릴 기의 예는 피리딜, 피라조일, 벤조옥사졸릴, 벤조이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 티아졸릴이다. 헤테로아릴렌은 2가 헤테로아릴이다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴알킬"은 헤테로아릴 기로 치환된 알킬 기를 나타낸다. 예시적인 비치환된 헤테로아릴알킬 기는 7 내지 30개의 탄소 (예를 들어, 7 내지 16개 또는 7 내지 20개의 탄소, 예컨대 C1-C6 알킬 C2-C9 헤테로아릴, C1-C10 알킬 C2-C9 헤테로아릴, 또는 C1-C20 알킬 C2-C9 헤테로아릴)이다. 일부 실시양태에서, 알킬 및 헤테로아릴 각각은 각각의 기에 대해 본원에 정의된 바와 같은 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴"은 N, O 및 S로부터 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 고리 원자를 함유하는 적어도 1개의 비-방향족 고리를 갖고 임의의 N, O 또는 S 고리 원자를 함유하는 방향족 고리를 갖지 않는 3 내지 12개의 원자를 갖는 모노- 또는 폴리시클릭 라디칼을 지칭한다. 헤테로시클릴 기의 예는 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피라닐, 피롤리디닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로푸라닐 및 1,3-디옥사닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 헤테로시클릴렌은 2가 헤테로시클릴이다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴알킬"은 헤테로시클릴 기로 치환된 알킬 기를 나타낸다. 예시적인 비치환된 헤테로시클릴알킬 기는 7 내지 30개의 탄소 (예를 들어, 7 내지 16개 또는 7 내지 20개의 탄소, 예컨대 C1-C6 알킬 C2-C9 헤테로시클릴, C1-C10 알킬 C2-C9 헤테로시클릴, 또는 C1-C20 알킬 C2-C9 헤테로시클릴)이다. 일부 실시양태에서, 알킬 및 헤테로시클릴은 각각 각각의 기에 대해 본원에 정의된 바와 같은 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "히드록시알킬"은 -OH 기로 치환된 알킬 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "히드록실"은 -OH 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "N-보호기"는 합성 절차 동안 목적하지 않은 반응에 대해 아미노기를 보호하기 위한 기를 나타낸다. 통상적으로 사용되는 N-보호기는 문헌 [Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis," 3rd Edition (John Wiley & Sons, New York, 1999)]에 개시되어 있다. N-보호기는 아실, 아릴로일 또는 카르바밀 기, 예컨대 포르밀, 아세틸, 프로피오닐, 피발로일, t-부틸아세틸, 2-클로로아세틸, 2-브로모아세틸, 트리플루오로아세틸, 트리클로로아세틸, 프탈릴, o-니트로페녹시아세틸, α-클로로부티릴, 벤조일, 4-클로로벤조일, 4-브로모벤조일, 4-니트로벤조일, 및 키랄 보조제, 예컨대 보호 또는 비보호된 D, L 또는 D, L-아미노산, 예컨대 알라닌, 류신 및 페닐알라닌; 술포닐-함유 기, 예컨대 벤젠술포닐 및 p-톨루엔술포닐; 카르바메이트 형성 기, 예컨대 벤질옥시카르보닐, p-클로로벤질옥시카르보닐, p-메톡시벤질옥시카르보닐, p-니트로벤질옥시카르보닐, 2-니트로벤질옥시카르보닐, p-브로모벤질옥시카르보닐, 3,4-디메톡시벤질옥시카르보닐, 3,5-디메톡시벤질옥시카르보닐, 2,4-20 디메톡시벤질옥시카르보닐, 4-메톡시벤질옥시카르보닐, 2-니트로-4,5-디메톡시벤질옥시카르보닐, 3,4,5-트리메톡시벤질옥시카르보닐, 1-(p-비페닐릴)-1-메틸에톡시카르보닐, α,α-디메틸-3,5-디메톡시벤질옥시카르보닐, 벤즈히드릴옥시 카르보닐, t-부틸옥시카르보닐, 디이소프로필메톡시카르보닐, 이소프로필옥시카르보닐, 에톡시카르보닐, 메톡시카르보닐, 알릴옥시카르보닐, 2,2,2,-트리클로로에톡시카르보닐, 페녹시카르보닐, 4-니트로페녹시 카르보닐, 플루오레닐-9-메톡시카르보닐, 시클로펜틸옥시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 시클로헥실옥시카르보닐 및 페닐티오카르보닐, 아릴알킬 기, 예컨대 벤질, 트리페닐메틸 및 벤질옥시메틸, 및 실릴 기, 예컨대 트리메틸실릴을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 N-보호기는 알록, 포르밀, 아세틸, 벤조일, 피발로일, t-부틸아세틸, 알라닐, 페닐술포닐, 벤질, t-부틸옥시카르보닐 (Boc) 및 벤질옥시카르보닐 (Cbz)이다.
본원에 사용된 용어 "니트로"는 -NO2 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "옥소"는 =O 기를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "티올"은 -SH 기를 나타낸다.
알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 카르보시클릴 (예를 들어, 시클로알킬), 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 치환되는 경우에, 달리 명시되지 않는 한 일반적으로 1 내지 4개의 치환기가 존재할 것이다. 치환기는, 예를 들어 알킬 (예를 들어, 비치환 및 치환되고, 여기서 치환기는 본원에 기재된 임의의 기, 예를 들어 아릴, 할로, 히드록시를 포함함), 알키닐 (예를 들어, 비치환 및 치환되고, 여기서 치환기는 본원에 기재된 임의의 기, 예를 들어 아릴, 할로, 히드록시 또는 알콕시를 포함함), 아릴 (예를 들어, 치환 및 비치환된 페닐), 카르보시클릴 (예를 들어, 치환 및 비치환된 시클로알킬), 할로 (예를 들어, 플루오로), 히드록실, 헤테로알킬 (예를 들어, 치환 및 비치환된 메톡시, 에톡시 또는 티오알콕시), 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 아미노(예를 들어, NH2 또는 모노- 또는 디알킬 아미노), 알킬술핀이미드, 아지도, 시아노, 니트로, 옥소 또는 티올을 포함한다. 일부 실시양태에서 (예를 들어, 화학식 Ia의 화합물에 대해), 치환기는, 예를 들어 알킬 (예를 들어, 비치환 및 치환되고, 여기서 치환기는 본원에 기재된 임의의 기, 예를 들어 아릴, 할로, 히드록시를 포함함), 아릴 (예를 들어, 치환 및 비치환된 페닐), 카르보시클릴 (예를 들어, 치환 및 비치환된 시클로알킬), 할로 (예를 들어, 플루오로), 히드록실, 헤테로알킬 (예를 들어, 치환 및 비치환된 메톡시, 에톡시, 또는 티오알콕시), 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 아미노(예를 들어, NH2 또는 모노- 또는 디알킬 아미노), 아지도, 시아노, 니트로, 또는 티올을 포함한다. 아릴, 카르보시클릴 (예를 들어, 시클로알킬), 헤테로아릴 및 헤테로시클릴 기는 또한 알킬 (비치환 및 치환된, 예컨대 아릴알킬 (예를 들어, 치환 및 비치환된 벤질))로 치환될 수 있다.
본 발명의 화합물은 1개 이상의 비대칭 탄소 원자를 가질 수 있고, 광학적으로 순수한 거울상이성질체, 거울상이성질체의 혼합물, 예컨대 예를 들어 라세미체, 광학적으로 순수한 부분입체이성질체, 부분입체이성질체의 혼합물, 부분입체이성질체 라세미체, 또는 부분입체이성질체 라세미체의 혼합물의 형태로 존재할 수 있다. 광학 활성 형태는 예를 들어 라세미체의 분해에 의해, 비대칭 합성 또는 비대칭 크로마토그래피(키랄 흡착제 또는 용리액을 사용하는 크로마토그래피)에 의해 수득될 수 있다. 특정의 개시된 화합물은 다양한 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 입체이성질체는 단지 그의 공간 배열만이 상이한 화합물이다. 거울상이성질체는 거울 상이 중첩불가능한 입체이성질체의 쌍이며, 이는 가장 통상적으로 이들이 키랄 중심으로서 작용하는 비대칭적으로 치환된 탄소 원자를 함유하기 때문이다. "거울상이성질체"는 서로 거울상이며 중첩불가능한 한 쌍의 분자 중 하나를 의미한다. 부분입체이성질체는 거울상과 관련되지 않는 입체이성질체이며, 이는 가장 통상적으로 이들이 2개 이상의 비대칭적으로 치환된 탄소 원자를 함유하고 1개 이상의 키랄 탄소 원자 주위에 치환기의 배치를 나타내기 때문이다. 화합물의 거울상이성질체는 예를 들어 1종 이상의 잘 알려진 기술 및 방법, 예컨대 예를 들어, 키랄 크로마토그래피 및 그에 기반한 분리 방법을 사용하여 라세미체로부터 거울상이성질체를 분리함으로써 제조될 수 있다. 라세미 혼합물로부터 본원에 기재된 화합물의 거울상이성질체를 분해하기 위한 적절한 기술 및/또는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. "라세미체" 또는 "라세미 혼합물"은 2종의 거울상이성질체를 함유하는 화합물을 의미하고, 여기서 이러한 혼합물은 광학 활성을 나타내지 않고; 즉, 이들은 편광면을 회전시키지 않는다. "기하 이성질체"는 탄소-탄소 이중 결합, 시클로알킬 고리, 또는 브릿징된 비시클릭 시스템과의 관계에서 치환기 원자의 배향이 상이한 이성질체를 의미한다. 탄소-탄소 이중 결합의 각 측 상의 원자 (H 이외의 것)는 E (치환기는 탄소-탄소 이중 결합의 반대 측 상에 있음) 또는 Z (치환기는 동일한 측 상에 배향됨) 배위일 수 있다. "R", "S", "S*", "R*", "E", "Z", "시스", 및 "트랜스"는 코어 분자에 대한 배위를 나타낸다. 특정한 개시된 화합물은 회전장애이성질체 형태로 존재할 수 있다. 회전장애이성질체는 회전에 대한 입체적 스트레인 장벽이 충분히 높아서 이형태체의 단리를 가능하게하는, 단일 결합에 대한 장애 회전으로부터 생성된 입체이성질체이다. 본 발명의 화합물은 또한 이성질체-특이적 합성에 의해 개별 이성질체로서 제조되거나 또는 이성질체 혼합물로부터 분해될 수 있다. 통상적인 분해 기술은 광학 활성 산을 사용하여 이성질체 쌍의 각각의 이성질체의 유리 염기의 염을 형성시키는 것 (뒤이어 분별 결정화 및 유리 염기의 재생), 광학 활성 아민을 사용하여 이성질체 쌍의 각각의 이성질체의 산 형태의 염을 형성시키는 것 (뒤이어 분별 결정화 및 유리 산의 재생), 광학적으로 순수한 산, 아민 또는 알콜을 사용하여 이성질체 쌍의 이성질체 각각의 에스테르 또는 아미드를 형성시키는 것 (뒤이어 크로마토그래피 분리 및 키랄 보조제의 제거), 또는 다양한 널리 공지된 크로마토그래피 방법을 사용하여 출발 물질 또는 최종 생성물의 이성질체 혼합물을 분해하는 것을 포함한다. 개시된 화합물의 입체화학이 명명되거나 구조에 의해 도시되는 경우에, 명명되거나 도시된 입체이성질체는 다른 입체이성질체에 대해 적어도 60 중량%, 70 중량%, 80 중량%, 90 중량%, 99 중량% 또는 99.9 중량%이다. 단일 거울상이성질체가 명명되거나 구조에 의해 도시되는 경우, 도시되거나 명명된 거울상이성질체는 적어도 60 중량%, 70 중량%, 80 중량%, 90 중량%, 99 중량% 또는 99.9 중량% 광학적으로 순수하다. 단일 부분입체이성질체가 명명되거나 구조에 의해 도시되는 경우, 도시되거나 명명된 부분입체이성질체는 적어도 60 중량%, 70 중량%, 80 중량%, 90 중량%, 99 중량% 또는 99.9 중량% 순수하다. 퍼센트 광학 순도는 거울상이성질체의 중량/거울상이성질체의 중량 플러스 그의 광학 이성질체의 중량의 비이다. 중량 기준 부분입체이성질체 순도는 1종의 부분입체이성질체의 중량/모든 부분입체이성질체의 중량의 비이다. 개시된 화합물의 입체화학이 명명되거나 구조에 의해 도시되는 경우, 명명되거나 도시된 입체이성질체는 다른 입체이성질체에 대해 몰 분율 기준으로 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 99%, 또는 99.9% 순수하다. 단일 거울상이성질체가 명명되거나 구조에 의해 도시되는 경우, 도시되거나 명명된 거울상이성질체는 몰 분율 기준으로 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 99%, 또는 99.9% 순수하다. 단일 부분입체이성질체가 명명되거나 구조에 의해 도시되는 경우, 도시되거나 명명된 부분입체이성질체는 몰 분율 기준으로 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 99%, 또는 99.9% 순수하다. 몰 분율 기준 퍼센트 순도는 거울상이성질체의 몰/거울상이성질체의 몰 플러스 그의 광학 이성질체의 몰의 비이다. 유사하게, 몰 분율 기준 퍼센트 순도는 부분입체이성질체의 몰/부분입체이성질체의 몰 플러스 그의 이성질체의 몰의 비이다. 개시된 화합물이 입체화학을 나타내지 않고 명명되거나 구조에 의해 도시되고, 화합물이 적어도 1개의 키랄 중심을 갖는 경우에, 명칭 또는 구조는 상응하는 광학 이성질체가 없는 화합물의 거울상이성질체, 화합물의 라세미 혼합물, 또는 그의 상응하는 광학 이성질체에 비해 1종의 거울상이성질체가 풍부한 혼합물을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 개시된 화합물이 입체화학을 나타내지 않고 명명되거나 구조에 의해 도시되고, 2개 이상의 키랄 중심을 갖는 경우에, 명칭 또는 구조는 다른 부분입체이성질체가 없는 부분입체이성질체, 다른 부분입체이성질체 쌍이 없는 다수의 부분입체이성질체, 부분입체이성질체의 혼합물, 부분입체이성질체 쌍의 혼합물, 1종의 부분입체이성질체가 다른 부분입체이성질체(들)에 비해 풍부한 부분입체이성질체의 혼합물, 또는 1종 이상의 부분입체이성질체가 다른 부분입체이성질체에 비해 풍부한 부분입체이성질체의 혼합물을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명은 모든 이들 형태를 포괄한다.
본 개시내용의 화합물은 또한 중간체 또는 최종 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 포함한다. "동위원소"는 동일한 원자 번호를 갖지만 핵에서 상이한 수의 중성자로부터 생성된 상이한 질량수를 갖는 원자를 지칭한다. 예를 들어, 수소의 동위원소로는 삼중수소 및 중수소가 있다.
달리 언급하지 않는 한, 본원에 나타낸 구조는 또한 하나 이상의 동위원소-풍부 원자의 존재만이 상이한 화합물을 포함한다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 예시적인 동위원소는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 플루오린, 염소 및 아이오딘의 동위원소, 예컨대 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 32P, 33P, 35S, 18F, 36Cl, 123I 및 125I를 포함한다. 동위원소-표지된 화합물 (예를 들어, 3H 및 14C로 표지된 것)은 화합물 또는 기질 조직 분포 검정에 유용할 수 있다. 삼중수소 (즉, 3H) 및 탄소-14 (즉, 14C) 동위원소는 그의 제조 용이성 및 검출감도로 인해 유용할 수 있다. 추가로, 보다 무거운 동위원소, 예컨대 중수소 (즉, 2H)로의 치환은 보다 큰 대사 안정성으로부터 생성된 특정의 치료 이점 (예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건)을 제공할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 수소 원자는 2H 또는 3H에 의해 대체되거나, 또는 1개 이상의 탄소 원자는 13C- 또는 14C-풍부 탄소에 의해 대체된다. 양전자 방출 동위원소, 예컨대 15O, 13N, 11C, 및 18F는 기질 수용체 점유율을 조사하기 위한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 연구에 유용하다. 동위원소 표지된 화합물의 제조는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 동위원소 표지된 화합물은 일반적으로 비-동위원소 표지된 시약을 동위원소 표지된 시약으로 치환함으로써 본원에 기재된 본 발명의 화합물에 대해 개시된 것과 유사한 하기 절차에 의해 제조될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어들은 본 발명이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 보편적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 본 개시내용에서 사용하기 위한 방법 및 물질은 본원에 기재되어 있으며; 관련 기술분야에 공지된 다른 적합한 방법 및 물질이 또한 사용될 수 있다. 물질, 방법 및 실시예는 단지 예시하는 것이며, 제한하려는 것이 아니다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허, 서열, 데이터베이스 엔트리, 및 다른 참고문헌은 전문이 참조로 포함된다. 상충되는 경우, 정의를 포함한 본 명세서가 우선될 것이다.
정의
본 출원에서, 문맥으로부터 달리 명백하지 않는 한, (i) 단수 용어는 "적어도 하나"를 의미하는 것으로 이해될 수 있고; (ii) 용어 "또는"은 "및/또는"을 의미하는 것으로 이해될 수 있고; (iii) 용어 "포함하는" 및 "포함한"은 항목화된 성분 또는 단계 (그 자체로 제시되든지 또는 하나 이상의 추가의 성분 또는 단계와 함께 제시되든지)를 포괄하는 것으로 이해될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "약" 및 "대략"은 기재된 값의 10% 초과 또는 미만 내에 있는 값을 지칭한다. 예를 들어, 용어 "약 5 nM"은 4.5 내지 5.5 nM의 범위를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "투여"는 대상체 또는 계에 대한 조성물 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 화합물을 포함하는 화합물 또는 제제)의 투여를 지칭한다. 동물 대상체 (예를 들어, 인간)에 대한 투여는 임의의 적절한 경로에 의한 것일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 투여는 기관지 (기관지 점적주입에 의한 것 포함), 협측, 경장, 피간, 동맥내, 피내, 위내, 수질내, 근육내, 비강내, 복강내, 척수강내, 종양내, 정맥내, 뇌실내, 점막, 비강, 경구, 직장, 피하, 설하, 국소, 기관 (기관내 점적주입에 의한 것 포함), 경피, 질 및 유리체 내일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "BAF 복합체"는 인간 세포에서의 BRG1- 또는 HBRM-연관 인자 복합체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "BAF 복합체-관련 장애"는 BAF 복합체의 활성의 수준에 의해 유발되거나 또는 영향을 받는 장애를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "BRG1 기능 상실 돌연변이"는 감소된 활성 (예를 들어, BRG1 활성의 적어도 1% 감소, 예를 들어 BRG1 활성의 2%, 5%, 10%, 25%, 50%, 또는 100% 감소)을 갖는 단백질로 이어지는 BRG1에서의 돌연변이를 지칭한다. 예시적인 BRG1 기능 상실 돌연변이는 동형접합성 BRG1 돌연변이 및 BRG1의 C-말단에서의 결실을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "BRG1 기능 상실 장애"는 BRG1 활성의 감소 (예를 들어, BRG1 활성의 적어도 1% 감소, 예를 들어 BRG1 활성의 2%, 5%, 10%, 25%, 50%, 또는 100% 감소)를 나타내는 장애 (예를 들어, 암)를 지칭한다.
용어 "암"은 악성 신생물성 세포, 예컨대 종양, 신생물, 암종, 육종, 백혈병 및 림프종의 증식에 의해 유발된 상태를 지칭한다.
본원에 사용된 "조합 요법" 또는 "조합하여 투여되는"은 2종 (또는 그 초과)의 상이한 작용제 또는 치료가 특정한 질환 또는 상태에 대해 정의된 치료 요법의 일부로서 대상체에게 투여되는 것을 의미한다. 치료 요법은 대상체에 대한 개별 작용제의 효과가 중첩되도록 각각의 작용제의 투여 용량 및 주기를 정의한다. 일부 실시양태에서, 2종 이상의 작용제의 전달은 동시 또는 공동이고, 작용제는 공동-제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 2종 이상의 작용제는 공동-제제화되지 않고, 처방된 요법의 일부로서 순차적 방식으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 2종 이상의 작용제 또는 치료를 조합하여 투여하는 것은 증상, 또는 장애와 관련된 다른 파라미터의 감소가 단독으로 또는 다른 것의 부재 하에 전달된 하나의 작용제 또는 치료에서 관찰될 것보다 더 크도록 한다. 2종 치료의 효과는 부분적으로 상가적이거나, 완전히 상가적이거나, 또는 상가적보다 더 클 수 있다 (예를 들어, 상승작용적). 각각의 치료제를 순차적으로 투여하는 것 또는 실질적으로 동시에 투여하는 것은 경구 경로, 정맥 경로, 근육내 경로 및 점막 조직을 통한 직접 흡수가 포함되지만, 이에 제한되지 않는 임의의 적절한 경로에 의해서 수행될 수 있다. 치료제들은 동일한 경로에 의해서 또는 상이한 경로에 의해서 투여될 수 있다. 예를 들어, 조합물의 제1 치료제는 정맥내 주사에 의해 투여될 수 있는 반면, 조합물의 제2 치료제는 경구로 투여될 수 있다.
단백질 또는 RNA의 "수준 결정"은 관련 기술분야에 공지된 방법에 의한 단백질 또는 RNA의 직접 또는 간접 검출을 의미한다. "직접적으로 결정하는"은 물리적 실체 또는 값을 수득하기 위해 과정을 수행하는 것 (예를 들어, 그 용어가 본원에 정의된 바와 같이 샘플에 대해 검정 또는 시험을 수행하거나 또는 샘플을 "분석하는 것")을 의미한다. "간접적으로 결정하는"은 또 다른 당사자 또는 공급원 (예를 들어, 물리적 실체 또는 값을 직접 획득한 제3자 실험실)으로부터 물리적 실체 또는 값을 받는 것을 지칭한다. 단백질 수준을 측정하는 방법은 일반적으로 웨스턴 블롯팅, 이뮤노블롯팅, 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA), 방사선면역검정 (RIA), 면역침전, 면역형광, 표면 플라즈몬 공명, 화학발광, 형광 편광, 인광, 면역조직화학적 분석, 매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 (MALDI-TOF) 질량 분광측정법, 액체 크로마토그래피 (LC)-질량 분광측정법, 마이크로세포측정법, 현미경검사, 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 및 유동 세포측정법, 뿐만 아니라 효소적 활성 또는 다른 단백질 파트너와의 상호작용을 포함하나 이에 제한되지는 않는 단백질의 특성에 기초한 검정을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. RNA 수준을 측정하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 정량적 폴리머라제 연쇄 반응 (qPCR) 및 노던 블롯 분석을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
단백질 또는 RNA의 "감소된 수준" 또는 "증가된 수준"은 참조와 비교하여 각각 단백질 또는 RNA 수준의 감소 또는 증가 (예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 100%, 약 150%, 약 200%, 약 300%, 약 400%, 약 500% 또는 그 초과만큼의 감소 또는 증가; 참조와 비교하여 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 50%, 약 75%, 약 100% 또는 약 200% 초과만큼의 감소 또는 증가; 약 0.01배, 약 0.02배, 약 0.1배, 약 0.3배, 약 0.5배, 약 0.8배 또는 그 미만만큼의 감소 또는 증가; 또는 약 1.2배, 약 1.4배, 약 1.5배, 약 1.8배, 약 2.0배, 약 3.0배, 약 3.5배, 약 4.5배, 약 5.0배, 약 10배, 약 15배, 약 20배, 약 30배, 약 40배, 약 50배, 약 100배, 약 1000배 또는 그 초과만큼의 증가)를 의미한다. 단백질의 수준은 질량/부피 (예를 들어, g/dL, mg/mL, μg/mL, ng/mL) 또는 샘플 내의 총 단백질에 대한 백분율로 표현될 수 있다.
"BAF 복합체의 활성의 감소"는 BAF 복합체와 관련된 활성의 수준 또는 관련된 하류 효과의 감소를 의미한다. BAF 복합체의 활성을 감소시키는 비제한적 예는 Sox2 활성화이다. BAF 복합체의 활성 수준은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 문헌 [Kadoch et al. Cell, 2013, 153, 71-85]에 기재된 방법을 사용하여 측정될 수 있으며, 상기 방법은 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 용어 "BRM을 억제하는"은 단백질의 ATPase 촉매 결합 도메인 또는 브로모도메인의 수준 또는 활성을 차단하거나 감소시키는 것을 지칭한다. BRM 억제는 관련 기술분야에 공지된 방법, 예를 들어 BRM ATPase 검정, 나노 DSF 검정 또는 BRM 루시페라제 세포 검정을 사용하여 결정될 수 있다.
IDE196으로도 공지된 본원에 사용된 용어 "LXS196"은 하기 구조를 갖는 PKC 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 지칭한다:
Figure pct00066
본원에 사용된 용어 "제약 조성물"은 제약상 허용되는 부형제와 함께 제제화되고 포유동물, 예를 들어 인간에게 투여하기에 적절한 본원에 기재된 화합물을 함유하는 조성물을 나타낸다. 전형적으로, 제약 조성물은 포유동물에서의 질환의 치료를 위한 치료 요법의 일부로서 정부 규제 기관의 승인 하에 제조 또는 판매된다. 제약 조성물은, 예를 들어 경구 투여를 위해 단위 투여 형태 (예를 들어, 정제, 캡슐, 캐플릿, 겔캡 또는 시럽); 국소 투여를 위해 (예를 들어, 크림, 겔, 로션 또는 연고로서); 정맥내 투여를 위해 (예를 들어, 미립자 색전이 없는 멸균 용액으로서 및 정맥내 사용에 적합한 용매계 중에서); 또는 임의의 다른 제약상 허용되는 제제로 제제화될 수 있다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는 부형제"는 본원에 기재된 화합물 이외의 임의의 성분 (예를 들어, 활성 화합물을 현탁 또는 용해시킬 수 있는 비히클)을 지칭하며, 환자에서 실질적으로 비독성 및 비-염증성인 특성을 갖는다. 부형제는, 예를 들어 항부착제, 항산화제, 결합제, 코팅제, 압축 보조제, 붕해제, 염료 (착색제), 연화제, 유화제, 충전제 (희석제), 필름 형성제 또는 코팅제, 향미제, 향료, 활택제 (유동 증진제), 윤활제, 보존제, 인쇄 잉크, 흡수제, 현탁 또는 분산제, 감미제, 및 수화 물을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 화합물, 예를 들어 화학식 I의 임의의 화합물의 임의의 제약상 허용되는 염을 의미한다. 본원에 기재된 임의의 화합물의 제약상 허용되는 염은 타당한 의학적 판단의 범주 내에 있고, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비에 상응하는 것들을 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 제약상 허용되는 염은 문헌 [Berge et al., J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19, 1977 and in Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (Eds. P.H. Stahl and C.G. Wermuth), Wiley-VCH, 2008]에 기재되어 있다. 염은 본원에 기재된 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 계내 제조될 수 있거나, 또는 별도로 유리 염기 기를 적합한 유기 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 제약상 허용되는 염으로서 제조될 수 있도록 이온화성 기를 가질 수 있다. 이들 염은 무기 또는 유기 산을 포함하는 산 부가염일 수 있거나, 또는 본 발명의 화합물의 산성 형태의 경우에 염은 무기 또는 유기 염기로부터 제조될 수 있다. 빈번하게, 화합물은 제약상 허용되는 산 또는 염기의 부가 생성물로서 제조된 제약상 허용되는 염으로서 제조되거나 사용된다. 적합한 제약상 허용되는 산 및 염기 및 적절한 염의 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 염은 무기 및 유기 산 및 염기를 포함한 제약상 허용되는 비독성 산 및 염기로부터 제조될 수 있다.
"참조"는 단백질 또는 RNA 수준을 비교하는 데 사용되는 임의의 유용한 참조를 의미한다. 참조는 비교 목적을 위해 사용되는 임의의 샘플, 표준, 표준 곡선, 또는 수준일 수 있다. 참조는 정상 참조 샘플 또는 참조 표준 또는 수준일 수 있다. "참조 샘플"은, 예를 들어 대조군, 예를 들어 미리 결정된 음성 대조군 값, 예컨대 "정상 대조군" 또는 동일한 대상체로부터 채취한 이전 샘플; 정상의 건강한 대상체, 예컨대 정상 세포 또는 정상 조직으로부터의 샘플; 질환을 갖지 않는 대상체로부터의 샘플 (예를 들어, 세포 또는 조직); 질환으로 진단되었지만 본 발명의 화합물로 아직 치료되지 않은 대상체로부터의 샘플; 본 발명의 화합물에 의해 치료된 대상체로부터의 샘플; 또는 공지된 정상 농도의 정제된 단백질 또는 RNA (예를 들어, 본원에 기재된 임의의 것)의 샘플일 수 있다. "참조 표준 또는 수준"이란, 참조 샘플로부터 유래된 값 또는 수를 의미한다. "정상 대조군 값"은 비-질환 상태를 나타내는 미리 결정된 값, 예를 들어 건강한 대조군 대상체에서 예상되는 값이다. 전형적으로, 정상 대조군 값은 소정 범위 ("X 내지 Y"), 높은 한계치 ("X" 이하), 또는 낮은 한계치 ("X" 이상)로서 표현된다. 특정 바이오마커에 대한 정상 대조군 값 내의 측정된 값을 갖는 대상체는 전형적으로 그러한 바이오마커에 대해 "정상 한계치 내"라 지칭된다. 정상 참조 표준 또는 수준은 질환 또는 장애 (예를 들어, 암)를 갖지 않는 정상 대상체; 본 발명의 화합물로 치료된 대상체로부터 유래된 값 또는 수일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 참조 샘플, 표준 또는 수준은 다음 기준: 연령, 체중, 성별, 질환 단계, 및 전반적 건강 중 적어도 하나 의해 샘플 대상체 샘플과 매칭된다. 정상 참조 범위 내의 정제된 단백질 또는 RNA, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 것의 수준의 표준 곡선이 또한 참조로서 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "대상체"는 본 발명에 따른 조성물이, 예를 들어 실험, 진단, 예방 및/또는 치료 목적을 위해 투여될 수 있는 임의의 유기체를 지칭한다. 전형적인 대상체는 임의의 동물 (예를 들어, 포유동물, 예컨대 마우스, 래트, 토끼, 비-인간 영장류 및 인간)을 포함한다. 대상체는 치료를 추구 또는 필요로 할 수 있거나, 치료를 요구할 수 있거나, 치료를 받고 있을 수 있거나, 향후에 치료를 받을 수 있거나, 또는 특정 질환 또는 상태에 대해 훈련된 전문가에 의한 관리 하에 있는 인간 또는 동물일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료된" 또는 "치료하는"은 치유적 치료, 또는 목적이 바람직하지 않은 생리학적 상태, 장애 또는 질환을 둔화 (경감)시키거나, 또는 유익한 또는 목적하는 임상 결과를 얻는 것인 임의의 수단을 의미한다. 유익한 또는 목적하는 임상 결과는 증상의 완화; 상태, 장애, 또는 질환의 정도의 감소; 상태, 장애, 또는 질환의 안정화된 (즉, 악화되지 않는) 상태; 상태, 장애, 또는 질환 진행의 발병 지연 또는 저속화; (부분적이든 전체적이든) 상태, 장애, 또는 질환 상태의 호전 또는 완화; 환자에 의해 반드시 식별가능한 것은 아닌 적어도 1종의 측정가능한 물리적 파라미터의 호전; 또는 상태, 장애, 또는 질환의 증진 또는 개선을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 치료는 과도한 수준의 부작용 없이 임상적으로 유의한 반응을 도출하는 것을 포함한다. 치료는 치료를 받지 않을 경우에 예상되는 것에 비해 생존을 연장시키는 것을 또한 포함한다. 본 발명의 화합물은 또한, 예를 들어 장애가 발생할 위험이 증가된 대상체에서 장애를 "예방적으로 치료" 또는 "예방"하는 데 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "변이체" 및 "유도체"는 상호교환가능하게 사용되고, 본원에 기재된 화합물, 펩티드, 단백질 또는 다른 물질의 자연 발생, 합성 및 반합성 유사체를 지칭한다. 본원에 기재된 화합물, 펩티드, 단백질 또는 다른 물질의 변이체 또는 유도체는 원래 물질의 생물학적 활성을 보유하거나 개선할 수 있다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태의 세부사항이 아래의 설명에 나타나 있다. 본 발명의 다른 특징, 목적 및 이점은 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다.
도 1은 BRG1/BRM 억제제 (화합물 A)에 의한 여러 암 세포주의 세포 증식의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 2a는 BRG1/BRM 억제제 (화합물 A), MEK 억제제 (셀루메티닙) 및 PKC 억제제 (LXS196)에 의한 포도막 흑색종 세포주 92-1의 세포 증식의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 2b는 BRG1/BRM 억제제 (화합물 A), MEK 억제제 (셀루메티닙) 및 PKC 억제제 (LXS196)에 의한 포도막 흑색종 세포주 MP41의 세포 증식의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 3은 BRG1/BRM 억제제 (화합물 B)에 의한 여러 암 세포주의 세포 증식의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 4는 BRG1/BRM 억제제로 처리된 암 세포주에 대한 용량-반응 곡선으로부터 계산된 곡선하 면적 (AUC)을 예시하는 그래프이다.
도 5는 BRG1/BRM 억제제 (화합물 B)에 의한 포도막 흑색종 및 비소세포 폐암 세포주의 세포 증식의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 6a는 BRG1/BRM 억제제 (화합물 B), MEK 억제제 (셀루메티닙) 및 PKC 억제제 (LXS196)에 의한 포도막 흑색종 세포주 92-1의 세포 증식의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 6b는 BRG1/BRM 억제제 (화합물 B), MEK 억제제 (셀루메티닙) 및 PKC 억제제 (LXS196)에 의한 포도막 흑색종 세포주 MP41의 세포 증식의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 7a는 PKC 억제제 (LXS196)에 의한 모 및 PKC-억제제 불응성 포도막 흑색종 세포주의 세포 증식의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 7b는 BRG1/BRM 억제제 (화합물 B)에 의한 모 및 PKC-억제제 불응성 포도막 흑색종 세포주의 세포 증식의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 8a는 포도막 흑색종 세포주가 생착된 마우스에서 BRG1/BRM 억제제 (화합물 C)에 의한 종양 성장의 억제를 예시하는 그래프이다.
도 8b는 포도막 흑색종 세포주가 생착되고 BRG1/BRM 억제제 (화합물 C)가 투여된 마우스로부터의 종양 크기의 예시이다.
도 8c는 포도막 흑색종 세포주가 생착되고 BRG1/BRM 억제제 (화합물 C)가 투여된 마우스의 체중 변화를 예시하는 그래프이다.
본 개시내용은 BRG1 및/또는 BRM의 억제에 유용한 화합물을 특색으로 한다. 이들 화합물은, 예를 들어 BAF-관련 장애, 예컨대 암의 치료를 위해 BAF 복합체의 활성을 조정하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 예시적인 화합물은 하기 화학식 I에 따른 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
Figure pct00067
여기서,
A는
Figure pct00068
이고;
m은 0, 1, 2, 또는 3이고;
n은 1 또는 2이고;
o는 0 또는 1이고;
X는 O, CH2, 또는 NR7이고;
X'는 N, CH, 또는 CRX이고, 여기서 RX는 할로겐이고;
B는 임의로 치환된 6-원 비시클릭 헤테로아릴렌 또는 임의로 치환된 9- 또는 10-원 비시클릭 헤테로아릴렌이고;
L은 공유 결합, 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌, C2 알키닐렌, 임의로 치환된 C2 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-C3 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 C3-C5 시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴렌이고;
C는 임의로 치환된 3- 내지 10-원 시클로알킬; 임의로 치환된 6- 내지 10-원 아릴; 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로아릴; 또는 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로시클릴이고;
R1 및 R7은 독립적으로 수소 또는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
각각의 R2 및 R3은 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 또는 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬이고;
R4는 시아노, 플루오로, 히드록시, 또는 -CH2OH이고;
R5는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 플루오로 기로 임의로 치환된 C1-C3 알킬이고;
R6은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 플루오로 기로 임의로 치환된 C1-C3 알킬이다.
바람직하게는, B가 임의로 치환된 6-원 비시클릭 헤테로아릴렌인 경우, L은 공유 결합, 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌, C2 알키닐렌, 임의로 치환된 C2 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-C3 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 C3-C5 시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴렌이다. 또한 바람직하게는, B가 임의로 치환된 9- 또는 10-원 비시클릭 헤테로아릴렌인 경우, L은 공유 결합이고, 예를 들어 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
Figure pct00069
여기서, 모든 가변기는 본원에 기재된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염은 표 1에서의 화합물 1-48, 표 2에서의 화합물 49-84, 또는 표 3에서의 화합물 85-126 중 어느 하나의 구조를 갖는다.
다른 실시양태, 뿐만 아니라 이들 화합물의 제조를 위한 예시적인 방법이 본원에 기재된다.
제약 용도
본원에 기재된 화합물은 본 발명의 방법에 유용하며, 이론에 얽매이지는 않지만, BAF 복합체의 수준, 상태 및/또는 활성을 조정하는, 즉 포유동물에서 BAF 복합체 내의 BRG1 및/또는 BRM 단백질의 활성을 억제하는 그의 능력을 발휘하는 것으로 여겨진다. BAF 복합체-관련 장애는 BRG1 기능 상실 돌연변이-관련 장애를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 한 측면은 BRG1 기능 상실 돌연변이와 관련된 장애, 예컨대 암 (예를 들어, 비소세포 폐암, 결장직장암, 방광암, 원인불명 원발성 암, 신경교종, 유방암, 흑색종, 비-흑색종 피부암, 자궁내막암, 또는 음경암)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 (a) 감소된 종양 크기, (b) 감소된 종양 성장 속도, (c) 증가된 종양 세포 사멸, (d) 감소된 종양 진행, (e) 감소된 전이 수, (f) 감소된 전이 속도, (g) 감소된 종양 재발, (h) 대상체의 증가된 생존, (i) 대상체의 증가된 무진행 생존 중 1종 이상 (예를 들어, 2종 이상, 3종 이상, 4종 이상)을 유발하는 데 효과적인 양으로 및 효과적인 시간 동안 투여된다.
암을 치료하는 것은 종양의 크기 또는 부피를 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 치료 후, 종양 크기는 치료 전 그의 크기에 비해 5% 이상 (예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상) 감소된다. 종양의 크기는 임의의 재현가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 종양의 크기는 종양의 직경으로서 측정될 수 있다.
암을 치료하는 것은 추가로 종양 수의 감소를 유발할 수 있다. 예를 들어, 치료 후, 종양 수는 치료 전의 수에 비해 5% 이상 (예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상) 감소된다. 종양의 수는 임의의 재현가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있고, 예를 들어, 종양의 수는 육안으로 또는 명시된 배율 (예를 들어, 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, 또는 50x)에서 가시적인 종양을 계수함으로써 측정될 수 있다.
암을 치료하는 것은 원발성 종양 부위로부터 떨어진 다른 조직 또는 기관에서 전이성 결절의 수를 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 치료 후, 전이성 결절의 수는 치료 전의 수에 비해 5% 이상 (예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상) 감소된다. 전이성 결절의 수는 임의의 재현가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 육안으로 또는 특정 배율 (예를 들어, 2x, 10x, 또는 50x)에서 가시적인 전이성 결절을 계수함으로써 전이성 결절의 개수를 측정할 수 있다.
암을 치료하는 것은 비치료된 대상체의 집단과 비교하여 본 발명에 따라 치료된 대상체의 집단의 평균 생존 시간의 증가를 유발할 수 있다. 예를 들어, 평균 생존 시간은 30일 초과 (60일, 90일 또는 120일 초과) 증가된다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 임의의 재현가능한 수단에 의해 측정될 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는, 예를 들어 본 발명의 화합물로의 치료 개시 후 집단에 대한 평균 생존 기간을 계산함으로써 측정될 수 있다. 집단의 평균 생존 시간의 증가는 또한, 예를 들어 본 발명의 제약상 허용되는 염을 사용한 치료의 제1 라운드의 완료 후 집단에 대한 평균 생존 기간을 계산함으로써 측정될 수 있다.
암을 치료하는 것은 또한 비치료된 집단과 비교하여 치료된 대상체의 집단의 사망률의 감소를 유발할 수 있다. 예를 들어, 사망률은 2% 초과 (예를 들어, 5%, 10%, 또는 25% 초과)만큼 감소된다. 치료된 대상체의 집단의 사망률의 감소는 임의의 재현가능한 수단에 의해, 예를 들어 본 발명의 제약상 허용되는 염으로의 치료 개시 후 집단에 대해 단위 시간당 질환-관련 사망의 평균 수를 계산함으로써 측정될 수 있다. 집단의 사망률의 감소는 또한, 예를 들어 본 발명의 제약상 허용되는 염을 사용한 치료의 제1 라운드의 완료 후 집단에 대한 단위 시간당 질환-관련 사망의 평균 수를 계산함으로써 측정될 수 있다.
본 발명에 의해 치료될 수 있는 예시적인 암은 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 결장직장암, 방광암, 신경교종, 유방암, 흑색종, 비-흑색종 피부암, 자궁내막암, 식도위암, 췌장암, 간담도암, 연부 조직 육종, 난소암, 두경부암, 신세포 암종, 골암, 비-호지킨 림프종, 전립선암, 배아성 종양, 배세포 종양, 자궁경부암, 갑상선암, 타액선암, 위장 신경내분비 종양, 자궁 육종, 위장 기질 종양, CNS 암, 흉선 종양, 부신피질 암종, 충수암, 소장암 및 음경암을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
조합 제제 및 그의 용도
본 발명의 화합물은 1종 이상의 치료제와 조합될 수 있다. 특히, 치료제는 본원에 기재된 임의의 암을 치료 또는 예방적으로 치료하는 것일 수 있다.
조합 요법
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 추가의 치료제, 예를 들어 암 또는 그와 연관된 증상을 치료하는 다른 작용제와 조합하여, 또는 암을 치료하기 위한 다른 유형의 치료와 조합하여 사용될 수 있다. 조합 치료에서, 1종 이상의 치료 화합물의 투여량은 단독으로 투여되는 경우의 표준 투여량보다 감소될 수 있다. 예를 들어, 용량은 약물 조합 및 순열로부터 실험적으로 결정될 수 있거나, 또는 이소볼로그래픽 분석에 의해 추론될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Black et al., Neurology 65:S3-S6, 2005]). 이 경우, 조합된 경우의 화합물의 투여량은 치료 효과를 제공해야 한다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 화학요법제 (예를 들어, 세포독성제 또는 암의 치료에 유용한 다른 화학적 화합물)이다. 이들은 알킬화제, 항대사물, 폴산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 관련 억제제, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신, 항생제, L-아스파라기나제, 토포이소머라제 억제제, 인터페론, 백금 배위 착물, 안트라센디온 치환된 우레아, 메틸 히드라진 유도체, 부신피질 억제제, 아드레노코르티코스테로이드, 프로게스틴, 에스트로겐, 항에스트로겐, 안드로겐, 항안드로겐 및 고나도트로핀-방출 호르몬 유사체를 포함한다. 또한, 5-플루오로우라실 (5-FU), 류코보린 (LV), 이레노테칸, 옥살리플라틴, 카페시타빈, 파클리탁셀 및 독세탁셀이 포함된다. 화학요법제의 비제한적 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드; 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (예컨대 합성 유사체 토포테칸); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (예컨대 그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (예컨대 합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴; 항생제 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마몰 및 칼리케아미신 오메갈 (예를 들어 [Agnew, Chem. Intl. Ed Engl. 33:183-186 (1994)] 참조); 디네미신, 예컨대 디네미신 A; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신(Adriamycin)® (독소루비신, 예컨대 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제 예컨대 프롤린산 산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산 산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체 (JHS 내츄럴 프로덕츠(Natural Products), 오리건주 유진); 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산 산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T- 2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, 탁솔(Taxol)® 파클리탁셀 (브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 뉴저지주 프린스턴), 아브락산(ABraxane)®, 파클리탁셀의 크레모포르-무함유, 알부민-조작된 나노입자 제제 (아메리칸 파마슈티칼 파트너스(American Pharmaceutical Partners), 일리노이주 샴버그), 및 탁소테레(Taxotere)® 도세탁셀 (론-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 안토니); 클로란부실; 겜자르(Gemzar)® 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 배위 착물 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 나벨빈(Navelbine)® 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 이리노테칸 (예를 들어, CPT-11); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 및 임의의 상기의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 2종 이상의 화학요법제가 본원에 기재된 제1 치료제와 조합하여 투여될 칵테일에 사용될 수 있다. 조합 화학요법의 적합한 투여 요법은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Saltz et al. (1999) Proc ASCO 18:233a and Douillard et al. (2000) Lancet 355:1041-7]에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 암 치료에 사용되는 생물제제 예컨대 시토카인 (예를 들어, 인터페론 또는 인터류킨 (예를 들어, IL-2))인 치료제이다. 일부 실시양태에서, 생물제제는 항혈관신생제, 예컨대 항-VEGF 작용제, 예를 들어 베바시주맙 (아바스틴(Avastin)®)이다. 일부 실시양태에서, 생물제제는 이뮤노글로불린-기반 생물제제, 예를 들어 항암 반응을 자극하는 표적에 효능작용하거나 또는 암에 중요한 항원에 길항작용하는 모노클로날 항체 (예를 들어, 인간화 항체, 완전 인간 항체, Fc 융합 단백질 또는 그의 기능적 단편)이다. 이러한 작용제는 리툭산 (리툭시맙); 제나팍스 (다클리주맙); 시뮬렉트 (바실릭시맙); 시나기스 (팔리비주맙); 레미케이드 (인플릭시맙); 헤르셉틴 (트라스투주맙); 밀로타르그 (겜투주맙 오조가미신); 캄파트 (알렘투주맙); 제발린 (이브리투모맙 티욱세탄); 휴미라 (아달리무맙); 졸레어 (오말리주맙); 벡사르 (토시투모맙-I-131); 랍티바 (에팔리주맙); 에르비툭스 (세툭시맙); 아바스틴 (베바시주맙); 티사브리 (나탈리주맙); 악템라 (토실리주맙); 벡티빅스 (파니투무맙); 루센티스 (라니비주맙); 솔리리스 (에쿨리주맙); 심지아 (세르톨리주맙 페골); 심포니 (골리무맙); 일라리스 (카나키누맙); 스텔라라 (우스테키누맙); 아르제라 (오파투무맙); 프롤리아 (데노수맙); 누막스 (모타비주맙); 아브트락스(ABThrax) (락시바쿠맙); 벤리스타 (벨리무맙); 예르보이 (이필리무맙); 애드세트리스 (브렌툭시맙 베도틴); 페르제타 (페르투주맙); 카드실라 (아도-트라스투주맙 엠탄신); 및 가지바 (오비누투주맙)를 포함한다. 또한, 항체-약물 접합체가 포함된다.
제2 작용제는 비-약물 치료인 치료제일 수 있다. 예를 들어, 제2 치료제는 방사선 요법, 동결요법, 온열요법 및/또는 종양 조직의 외과적 절제이다.
제2 작용제는 체크포인트 억제제일 수 있다. 한 실시양태에서, 체크포인트의 억제제는 억제 항체 (예를 들어, 단일특이적 항체, 예컨대 모노클로날 항체)이다. 항체는 예를 들어 인간화 또는 완전 인간 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 체크포인트의 억제제는 융합 단백질, 예를 들어 Fc-수용체 융합 단백질이다. 일부 실시양태에서, 체크포인트의 억제제는 체크포인트 단백질과 상호작용하는 작용제, 예컨대 항체이다. 일부 실시양태에서, 체크포인트의 억제제는 체크포인트 단백질의 리간드와 상호작용하는 작용제, 예컨대 항체이다. 일부 실시양태에서, 체크포인트의 억제제는 CTLA-4의 억제제 (예를 들어, 억제 항체 또는 소분자 억제제) (예를 들어, 항-CTLA4 항체, 예컨대 이필리무맙/예르보이 또는 트레멜리무맙)이다. 일부 실시양태에서, 체크포인트의 억제제는 PD-1의 억제제 (예를 들어, 억제 항체 또는 소분자 억제제) (예를 들어, 니볼루맙/옵디보(Opdivo)®; 펨브롤리주맙/키트루다(Keytruda)®; 피딜리주맙/CT-011)이다. 일부 실시양태에서, 체크포인트의 억제제는 PDL1의 억제제 (예를 들어, 억제 항체 또는 소분자 억제제) (예를 들어, MPDL3280A/RG7446; MEDI4736; MSB0010718C; BMS 936559)이다. 일부 실시양태에서, 체크포인트의 억제제는 PDL2의 억제제 (예를 들어, PDL2/Ig 융합 단백질, 예컨대 AMP 224) (예를 들어, 억제 항체 또는 Fc 융합체 또는 소분자 억제제)이다. 일부 실시양태에서, 체크포인트의 억제제는 B7-H3의 억제제 (예를 들어, 억제 항체 또는 소분자 억제제) (예를 들어, MGA271), B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, B-7 패밀리 리간드, 또는 그의 조합이다.
본원에 기재된 임의의 조합 실시양태에서, 제1 및 제2 치료제는 동시에 또는 순차적으로 임의의 순서로 투여된다. 제1 치료제는 제2 치료제의 투여 직전, 1시간 이하, 2시간 이하, 3시간 이하, 4시간 이하, 5시간 이하, 6시간 이하, 7시간 이하, 8시간 이하, 9시간 이하, 10시간 이하, 11시간 이하, 12시간 이하, 13시간 이하, 14시간 이하, 16시간 이하, 17시간 이하, 18시간 이하, 19시간 이하, 20시간 이하, 21시간 이하, 22시간 이하, 23시간 이하, 24시간 이하 또는 1 내지 7, 1 내지 14, 1 내지 21, 또는 1 내지 30일 전 또는 후에 투여될 수 있다.
제약 조성물
본 발명의 화합물은 바람직하게는 포유동물, 바람직하게는 인간에게 투여하기 위한 제약 조성물로 생체내 투여에 적합한 생물학적으로 상용성인 형태로 제제화된다. 따라서, 한 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 적합한 희석제, 담체 또는 부형제와 혼합하여 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 화합물은 유리 염기 형태로, 염, 용매화물 형태로, 및 전구약물로서 사용될 수 있다. 모든 형태는 본 발명의 범주 내이다. 본 발명의 방법에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 기재된 화합물 또는 그의 염, 용매화물 또는 전구약물은 선택된 투여 경로에 따라 다양한 형태로 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은, 예를 들어 경구, 비경구, 협측, 설하, 비강, 직장, 패치, 펌프 또는 경피 투여로 투여될 수 있고, 제약 조성물은 그에 따라 제제화된다. 비경구 투여는 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 경상피, 비강, 폐내, 척수강내, 직장 및 국소 투여 방식을 포함한다. 비경구 투여는 선택된 기간에 걸친 연속 주입에 의한 것일 수 있다.
본 발명의 화합물은, 예를 들어 불활성 희석제 또는 동화성 식용 담체와 함께 경구로 투여될 수 있거나, 또는 경질- 또는 연질-쉘 젤라틴 캡슐에 봉입될 수 있거나, 또는 정제로 압축될 수 있거나, 또는 식이 식품과 직접 혼입될 수 있다. 경구 치료적 투여의 경우, 본 발명의 화합물은 부형제와 함께 혼입될 수 있으며, 섭취가능한 정제, 협측 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 비경구로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물의 용액은 계면활성제와 적합하게 혼합된 물 중에서 제조될 수 있다. 통상적인 저장 및 사용의 조건 하에서 이들 제제는 미생물의 성장을 방지하기 위해 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 제제의 선택 및 제조를 위한 통상적인 절차 및 성분은, 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (2003, 20th ed.)] 및 문헌 [The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NF19), published in 1999]에 기재되어 있다. 주사가능한 용도에 적합한 제약 형태는 멸균 수용액 또는 분산액, 및 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 모든 경우에 상기 형태는 멸균되어야만 하며 시린지를 통해 용이하게 투여될 수 있을 정도로 유동성이어야만 한다. 비강 투여용 조성물은 에어로졸, 점적제, 겔 및 분말로서 편리하게 제제화될 수 있다. 에어로졸 제제는 전형적으로 생리학상 허용되는 수성 또는 비-수성 용매 중 활성 물질의 용액 또는 미세 현탁액을 포함하고, 통상적으로 밀봉된 용기 내에 멸균 형태로 단일 또는 다중용량의 양으로 존재하며, 이는 분무화 장치에 사용하기 위한 카트리지 또는 리필의 형태를 취할 수 있다. 대안적으로, 밀봉된 용기는 사용 후에 폐기되는 것으로 의도되는 계량 밸브가 장착된 단일 분배 장치, 예컨대 단일 용량 비강 흡입기 또는 에어로졸 분배기일 수 있다. 투여 형태가 에어로졸 분배기를 포함하는 경우, 이는 압축 기체, 예컨대 압축 공기 또는 유기 추진제일 수 있는 추진제를 함유할 것이다. 에어로졸 투여 형태는 또한 펌프-아토마이저의 형태를 취할 수 있다. 협측 또는 설하 투여에 적합한 조성물은 정제, 로젠지 및 파스틸을 포함하고, 여기서 활성 성분은 담체와 함께 제제화된다. 직장 투여를 위한 조성물은 편리하게는 통상적인 좌제 베이스를 함유하는 좌제 형태이다. 본원에 기재된 화합물은 종양내로, 예를 들어 종양내 주사로서 투여될 수 있다. 종양내 주사는 종양 혈관계 내로 직접 주사되고, 특히 별개의, 고형, 접근가능한 종양에 대해 고려된다. 국부, 국부 또는 전신 투여가 또한 적절할 수 있다. 본원에 기재된 화합물은 종양에, 예를 들어 대략 1 cm 간격으로 주사 또는 다중 주사를 투여함으로써 유리하게 접촉될 수 있다. 외과적 개입의 경우에, 본 발명은 수술전에, 예컨대 수술불가능한 종양 대상체가 절제되도록 하기 위해 사용될 수 있다. 연속 투여는 또한 적절한 경우에, 예를 들어 카테터를 종양 또는 종양 혈관계 내로 이식함으로써 적용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 동물, 예를 들어 인간에게 단독으로 또는 본원에 언급된 바와 같은 제약상 허용되는 담체와 조합하여 투여될 수 있으며, 그의 비율은 화합물의 용해도 및 화학적 성질, 선택된 투여 경로, 및 표준 제약 실시에 의해 결정된다.
투여량
본 발명의 화합물 및/또는 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물의 투여량은 다수의 요인, 예컨대 화합물의 약역학적 특성; 투여 방식; 수용자의 연령, 건강 및 체중; 증상의 특성 및 정도; 치료 빈도 및 존재하는 경우에 공동 치료의 유형; 및 치료될 동물에서의 화합물의 클리어런스율에 따라 달라질 수 있다. 통상의 기술자는 상기 요인에 기초하여 적절한 투여량을 결정할 수 있다. 본 발명의 화합물은 먼저 적합한 투여량으로 투여될 수 있고, 임상 반응에 따라 필요한 경우에 조절될 수 있다. 일반적으로, 인간에게 본 발명의 화합물을 예를 들어, 0.05 mg 내지 3000 mg의 1일 투여량으로 투여할 때 만족스러운 결과가 수득될 수 있다. 용량 범위는, 예를 들어 10-1000 mg을 포함한다.
대안적으로, 투여량은 환자의 체중을 사용하여 계산될 수 있다. 예를 들어, 환자에게 투여되는 화합물 또는 그의 제약 조성물의 용량은 0.1-100 mg/kg 범위일 수 있다.
실시예
하기 반응식 및 본원의 다른 곳에서 사용된 정의는 다음과 같다:
MeCN 또는 ACN 아세토니트릴
AIBN 아조비스이소부티로니트릴
Boc tert-부톡시카르보닐
n-BuLi n-부틸리튬
t-BuOK 칼륨 tert-부톡시드
t-BuONa 소듐 tert-부톡시드
t-BuXPhos Pd G3 [(2-디-tert-부틸포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄술포네이트
tBuphos Pd G3 [(2-디-tert-부틸포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)-2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄술포네이트
DAST 디에틸아미노황 트리플루오라이드
DCE 디클로로에탄
DCM 디클로로메탄
DCPP-2HBF4 1,3-비스(디시클로헥실포스피노)프로판 비스(테트라플루오로보레이트)
DEA N,N-디에틸아민
DMP 데스-마르틴 퍼아이오디난, 1,1,1-트리스(아세틸옥시)-1,1-디히드로-1,2-
DIAD 디이소프로필 아조디카르복실레이트
DIBAL-H 디이소부틸알루미늄 히드라이드
DIEA 또는 DIPEA N,N-디이소프로필에틸아민
DMA 디메틸아세트아미드
DMAP 4-(디메틸아미노)피리딘
DME 1,2-디메톡시에탄
DMF N,N-디메틸포름아미드
DMSO 디메틸술폭시드
dppf 비스(디페닐포스피노)페로센
dtbpf 1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센
EDCl 1-에틸-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드
ESI 전기분무 이온화
Et3N 또는 TEA 트리에틸아민
EA 에틸 아세테이트
EtOH 에틸 알콜
FA 포름산
FCC 플래쉬 칼럼 크로마토그래피
g 그램
HATU 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄
HCl 염산
HOAc 아세트산
HOBt 히드록시벤조트리아졸
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
IPA 이소프로필 알콜
L 리터
LCMS 액체 크로마토그래피/질량 분광측정법
LiHMDS 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드
m-CPBA 3-클로로퍼옥시벤조산
MeCN 아세토니트릴
MeI 메틸 아이오다이드
MeOH 메틸 알콜
mL 밀리리터
mmol 밀리몰
mg 밀리그램
MHz 메가헤르츠
MS 질량 분광측정법
MTBE 메틸 tert-부틸 에테르
m/z 질량/전하 비
NBS N-브로모숙신이미드
NIS N-아이오도숙신이미드
nm 나노미터
NMR 핵 자기 공명
PdCl2(dtbpf) [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)
PE 석유 에테르
PhMe 톨루엔
ppm 백만분율
rt 실온
RT 체류 시간
SFC 초임계 유체 크로마토그래피
SPhos Pd G3 (2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디메톡시비페닐) [2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐 (II) 메탄술포네이트
TBS tert-부틸디메틸실릴
TBSCl tert-부틸디메틸실릴 클로라이드
TBDMS tert-부틸디메틸실릴 클로라이드
TCCA 또는 TCICA 트리클로로이소시아누르산
TFA 트리플루오로아세트산
TFAA 트리플루오로아세트산 무수물
THF 테트라히드로푸란
TMSCN 트리메틸실릴 시아나이드
TosMIC 톨루엔술포닐메틸 이소시아나이드
지람 아연 디메틸디티오카르바메이트
물질
달리 나타내지 않는 한, 모든 물질은 상업적 공급업체로부터 입수하였고, 추가 정제 없이 사용하였다. 공기- 또는 수분-민감성 시약을 수반하는 모든 반응은 질소 분위기 하에 수행하였다.
실시예 1. 중간체의 제조
중간체 1 및 2: (4S)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 및 (4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산
Figure pct00070
단계 1. 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)벤조에이트 및 메틸 5-브로모-2-(디브로모메틸)벤조에이트
N-브로모숙신이미드 (130.5 g, 733 mmol) 및 AIBN (11.47 g, 69.8 mmol)을 CCl4 (1.6 L) 중 메틸 5-브로모-2-메틸-벤조에이트 (160 g, 698 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 8시간 동안 교반하였다. 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (215 g, 조 물질)의 혼합물을 황색 오일로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
단계 2. 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)벤조에이트
디이소프로필에틸 아민 (48.6 mL, 279 mmol) 및 1-에톡시포스포노일옥시에탄 (36.0 mL, 279 mmol)을 0℃에서 THF (1 L) 중 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)벤조에이트 및 메틸 5-브로모-2-(디브로모메틸)벤조에이트 (215 g, 조 물질)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 8시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (1 L)로 희석하고, EA (1 L x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (1 L)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 PE:EA = 10:1 (1 L)로 용해시켰다. 혼합물을 짧은 실리카 겔 칼럼을 통해 여과하고, PE:EA = 10:1 (2 L)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (210 g, 682 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 7.99 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.82-7.79 (m, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 3.88 (s, 3H) ppm.
단계 3. 메틸 6-브로모-4-옥소-이소크로만-3-카르복실레이트
수소화나트륨 (39 g, 974 mmol, 60% 순도)을 0℃에서 DMF (1.5 L) 중 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)벤조에이트 (150 g, 487 mmol) 및 메틸 2-히드록시아세테이트 (75 mL, 974 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl (수성, 6 L)에 부은 다음, MTBE (3 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (140 g, 조 물질)을 갈색 오일로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
단계 4. 6-브로모이소크로만-4-온
EtOH (500 mL) 및 HCl (12 M, 1 L) 중 메틸 6-브로모-4-옥소-이소크로만-3-카르복실레이트 (140 g, 487 mmol)의 혼합물을 120℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 여과하였다. 필터 케이크를 보관하였다. 여과물을 물 (2 L)로 희석하고, MTBE (1.5 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 갈색 오일을 수득하였다. 갈색 오일을 필터 케이크와 합한 다음, EtOH (200 mL)로 0℃에서 0.5시간 동안 연화처리하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, EtOH (50 mL x 2)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (50 g, 242 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.17 (d, J = 20 Hz, 1H), 7.69-7.67 (m, 1H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.85 (s, 2H), 4.37 (s, 2H) ppm.
단계 5. 6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-올
메틸마그네슘 브로마이드 (THF 중 3 M, 440 mL)를 -50℃에서 THF (2 L) 중 6-브로모이소크로만-4-온 (100 g, 440 mmol) 및 CeCl3 (54.3 g, 220 mmol, 머플 퍼니스에서 300℃로 3시간 동안 건조됨)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 20℃로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (2 L)에 부은 다음, 디아토마이트를 통해 여과하였다. 이어서, 디아토마이트를 EA (2L)로 세척하였다. 여과물을 분리하고, 수성 층을 EA (1 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2 L)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 조 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 50:1에서 3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (105 g, 432 mmol)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 7.67 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.38-7.35 (m, 1H), 6.99 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.71 - 4.58 (m, 2H), 3.68 - 3.59 (m, 1H), 3.58 - 3.50 (m, 1H), 1.38 (s, 3H) ppm.
단계 6. 6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-카르보니트릴
TMSCN (102.9 mL, 823 mmol)을 0℃에서 DCM (2 L) 중 6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-올 (100 g, 411 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, InBr3 (29.2 g, 82.3 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 가온하고, 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (2 L)에 붓고, DCM (1 L x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1 L)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 20:1에서 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (55 g, 218 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 7.82 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55-7.52 (m, 1H), 7.13 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.83 - 4.68(m, 2H), 4.17 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.79 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.65 (s, 3H) ppm.
단계 7. (4S)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 및 (4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산
아세트산팔라듐 (490 mg, 2.18 mmol) 및 K2CO3 (9.05 g, 65.4 mmol)을 DMSO (110 mL) 및 H2O (5.5 mL) 중 6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-카르보니트릴 (11 g, 43.6 mmol) 및 DCPP-2HBF4 (2.67 g, 4.36 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, CO (g)로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 CO (15 psi)의 분위기 하에 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 수성 층을 EA (1 L x 2)로 추출하였다. 수성 상을 pH = 3이 달성될 때까지 HCl (2 N)로 산성화시켰다. 이어서, 수성 층을 EA (1 L x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (1 L)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 20℃에서 15분 동안 EA (100 mL)로 연화처리한 다음, 고체를 여과에 의해 수집하고, EA (50 mL)로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (30 g, 138 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 입체이성질체의 혼합물을 SFC 분리 (칼럼: 다이셀 키랄팩 AD-H (250 mm x 30 mm, 5 μm); 이동상: [0.1%NH3-H2O MEOH]; B%: 20%-20%, 3.52분; 514분)에 의해 정제하였다. 피크 1을 감압 하에 농축시켜 오일을 수득하였다. 오일을 물 (200 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 HCl (2 N)을 사용하여 pH = 3으로 산성화시키고, EA (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켜 중간체 1 (4.15 g, 19.1 mmol)을 회백색 고체로서 수득하였다. 피크 2를 감압 하에 농축시켜 오일을 수득하였다. 오일을 물 (200 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 HCl (2 N)을 사용하여 pH = 3으로 산성화시키고, EA (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 중간체 2 (4.1 g, 18.9 mmol)를 회백색 고체로서 수득하였다.
중간체 1: 키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH(DEA)_5_40_3ML_AT35.M; RT = 0.89분
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 218.3.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 13.17 (br s, 1H), 8.07 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.89-7.87 (m, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.95 - 4.79 (m, 2H), 4.19 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.88 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.67 (s, 3H) ppm.
중간체 2: 키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH(DEA)_5_40_3ML_AT35.M; RT = 1.03분
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 218.3.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 13.17 (br s, 1H), 8.07 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.89-7.87 (m, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.95 - 4.79 (m, 2H), 4.19 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.88 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.67 (s, 3H) ppm.
중간체 3 및 4: (4R)-4-히드록시-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 및 (4S)-4-히드록시-4-메틸이소크로만-6-카르복실산
Figure pct00071
(4R)-4-히드록시-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 및 (4S)-4-히드록시-4-메틸이소크로만-6-카르복실산
DMSO (10 mL) 중 6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-올 (1.00 g, 4.11 mmol), dccp·2BF4 (252 mg, 0.41 mmol), K2CO3 (853 mg, 6.17 mmol), Pd(OAc)2 (92.4 mg, 0.41 mmol) 및 H2O (1.48 mL, 82.3 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, CO (g)로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 CO 분위기 하에 100℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하여 흑색 고체를 제거한 다음, 물 (60 mL)로 희석하고, EA (60 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 버리고, 수성 상을 수성 HCl을 사용하여 pH = 6으로 조정하였다. 이어서, 수용액을 EA (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL x 2)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물의 혼합물 (550 mg, 2.43 mmol)을 담황색 고체로서 수득하였다. 입체이성질체를 키랄 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 AD (250 mm*30 mm, 10 μm); 이동상: [0.1%NH3·H2O IPA]; B%: 40%-40%,4.0분; 60분)에 의해 분리하였다. 목적 분획을 수집하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성물을 물로 희석하고, 수성 HCl을 사용하여 pH = 4로 조정한 다음, EA (80 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 3 (260 mg, 1.18 mmol)을 황색 고체로서, 및 중간체 4 (240 mg, 1.04 mmol)를 황색 고체로서 수득하였다.
중간체 3: 키랄 SFC: AD-3_5CM_IPA (DEA)_5_40_3ML_AT35.M; RT = 1.537분.
LCMS (ESI) m/z: [M-18+H]+ = 191.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.19 - 12.40 (m, 1H), 8.15 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.75 - 7.73 (m, 1H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.34 (s, 1H), 4.82 - 4.68 (m, 2H), 3.71 - 3.65 (m, 1H), 3.61 - 3.54 (m, 1H), 1.40 (s, 3H) ppm.
중간체 4: 키랄 SFC: AD-3_5CM_IPA (DEA)_5_40_3ML_AT35.M; RT = 1.926분.
LCMS (ESI) m/z: [M-17+H]+ = 191.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.86 (br s, 1H), 8.15 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.75 - 7.73 (m, 1H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.34 (s, 1H), 4.84 - 4.67 (m, 2H), 3.73 - 3.62 (m, 1H), 3.62 - 3.53 (m, 1H), 1.40 (s, 3H) ppm.
중간체 5 및 6: (S)-4-시아노-4-메틸크로만-6-카르복실산 및 (R)-4-시아노-4-메틸크로만-6-카르복실산
Figure pct00072
단계 1. 6-브로모크로만-4-카르보니트릴
칼륨 tert-부톡시드 (54.4 g, 484 mmol)를 0℃에서 DME (2.5 L) 및 EtOH (100 mL) 중 6-브로모크로만-4-온 (50 g, 220 mmol) 및 1-(이소시아노메틸술포닐)-4-메틸-벤젠 (64.5 g, 330 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 가온하고, 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (2 L)에 붓고, NH4Cl (56.9 g)을 사용하여 pH=6~7로 조정하였다. 유기 용매를 진공 하에 제거하였다. 수성 상을 EA (1.5 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 20:1)에 의해 정제하였다. 정제된 잔류물을 또 다른 배치와 합하고, 이를 동일한 조건 하에 구동시키고, MTBE (150 mL)로 연화처리하였다. 고체를 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (40 g, 151 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.43 - 7.42 (m, 1H), 7.33 - 7.31 (m, 1H), 6.76 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.30 (m, 1H), 4.26 - 4.21 (m, 1H), 4.01 - 3.98 (m, 1H), 2.35 - 2.31 (m, 2H) ppm.
단계 2. 6-브로모-4-메틸-크로만-4-카르보니트릴
수소화나트륨 (8.40 g, 210 mmol, 60% 순도)을 0℃에서 THF (250 mL) 중 6-브로모크로만-4-카르보니트릴 (25 g, 105 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, MeI (32.7 mL, 525 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (수성, 800 mL)로 희석하고, EA (800 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 FCC (용리액: PE/EA = 1:0에서 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (18 g, 69.2 mmol)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.69 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.41 - 7.38 (m, 1H), 6.83 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.33 - 4.25 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 2.41 - 2.35 (m, 1H), 2.17 - 2.11 (m, 1H), 1.75 (s, 3H) ppm.
단계 3. (S)-4-시아노-4-메틸크로만-6-카르복실산 및 (R)-4-시아노-4-메틸크로만-6-카르복실산
DMSO (85 mL) 중 6-브로모-4-메틸-크로만-4-카르보니트릴 (8.5 g, 33.7 mmol), dccp·2HBF4 (2.06 g, 3.37 mmol), K2CO3 (6.99 g, 50.6 mmol), Pd(OAc)2 (757 mg, 3.37 mmol), 및 H2O (1.22 mL, 67.4 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, CO (g)로 3회 퍼징하였다. 이어서, 혼합물을 CO (15 psi) 분위기 하에 100℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 제2 배치와 합하고, 여과하여 흑색 고체를 제거하였다. 여과물을 물 (60 mL)로 희석하고, EA (60 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 버리고, 수성 상의 pH를 수성 HCl을 사용하여 pH=4로 조정하여 침전물을 생성하였다. 혼합물을 여과하고, 백색 고체를 물 (40 mL x 2)로 세척하고, 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물의 혼합물 (12 g, 51.2 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 중간체 5 및 6을 키랄 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 AD-H (250 mm*30 mm,5 μm);이동상: [0.1%NH3-H2O MEOH];B%: 30%-30%,4.7분; 600분)에 의해 분리하였다. 분획을 감압 하에 농축시켜 중간체 5 (5.3 g, 24.3 mmol)를 회백색 고체로서, 및 중간체 6 (5.2 g, 23.6 mmol)을 회백색 고체로서 수득하였다.
중간체 5: 키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH (DEA)_5_40_3ML_AT35.M, RT = 0.958분
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 218.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 8.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79 - 7.76 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.37 - 4.22 (m, 2H), 2.45 - 2.39 (m, 1H), 2.22 - 1.75 (m, 1H), 1.76 (s, 3H) ppm.
중간체 6: 키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH (DEA)_5_40_3ML_AT35.M, RT = 1.294
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 218.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 8.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79 - 7.76 (m, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.37 - 4.23 (m, 2H), 2.50 - 2.41 (m, 1H), 2.22 - 2.18 (m, 1H), 1.76 (s, 3H) ppm.
중간체 7 및 8: (4R)-4-플루오로-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 및 (4S)-4-플루오로-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산
Figure pct00073
단계 1. 6-브로모-4-플루오로-4-메틸-이소크로만
DAST (52.2 mL, 395 mmol)를 DCM (320 mL) 중 중간체 8 (32 g, 132 mmol)의 혼합물에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 가온하고, 25℃에서 20분 동안 교반하였다. 혼합물을 빙수 (600 mL)에 붓고, DCM (250 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 30:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (24.5 g, 99.96 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M-18+H]+ = 226.9.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.72 (s, 1H), 7.45 - 7.42 (m, 1H), 6.93 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.84 - 4.74 (m, 1H), 4.73 - 4.64 (m, 1H), 4.06 - 4.00 (m, 1H), 3.86 - 3.78 (m, 1H), 1.76 - 1.64 (m, 3H) ppm.
단계 2. (4R)-4-플루오로-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 및 (4S)-4-플루오로-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산
아세트산팔라듐 (687 mg, 3.06 mmol), dccp·2HBF4 (1.87 g, 3.06 mmol), K2CO3 (6.34 g, 45.9 mmol), 및 H2O (7.50 mL)를 25℃에서 DMSO (75 mL) 중 6-브로모-4-플루오로-4-메틸-이소크로만 (7.5 g, 30.6 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 CO (g)로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 가열하고, CO (15 psi)의 분위기 하에 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (1.2 L)에 붓고, EA (400 mL x 2)로 추출하였다. 수성 상을 1 N HCl을 사용하여 pH=5로 산성화시키고, EA (300 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL x 2)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물의 혼합물 (2.6 g, 12.2 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.42 - 12.67 (m, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.92 - 7.88 (m, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.91 - 4.82 (m, 1H), 4.77 - 4.68 (m, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 1H), 3.89 - 3.76 (m, 1H), 1.70 - 1.58 (m, 3H) ppm.
중간체 7 및 8을 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 IG (250 mm*30 mm, 10 μm); 이동상: [0.1%NH3-H2O MeOH];B%: 20%-20%, 3.4분; 2300분)에 의해 분리하여 2개의 피크를 수득하였다. 피크 1을 감압 하에 농축시켜 95% MeOH를 제거하고, H2O (500 mL)에 부었다. 혼합물을 HCl (1 N)을 사용하여 pH=5로 산성화시키고, EA (150 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 7 (1.06 g, 5.04 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 피크 2를 감압 하에 농축시키고, H2O (500 mL)에 부었다. 혼합물을 HCl (1 N)을 사용하여 pH=5로 산성화시키고, EA (150 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 8 (1.07 g, 5.09 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 7: 키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH (DEA)_5_40_3ML_AT35.M, RT = 0.819분.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 13.08 (br s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.92 - 7.88 (m, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.90 - 4.81 (m, 1H), 4.78 - 4.68 (m, 1H), 4.05 - 4.01 (m, 1H), 3.87 - 3.78 (m, 1H), 1.72 - 1.58 (m, 3H) ppm.
중간체 8: 키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH (DEA)_5_40_3ML_AT35.M, RT = 0.903분.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 13.31 - 12.88 (m, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.92 - 7.88 (m, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.90 - 4.81 (m, 1H), 4.78 - 4.68 (m, 1H), 4.08 - 4.01 (m, 1H), 3.89 - 3.77 (m, 1H), 1.72 - 1.58 (m, 3H) ppm.
중간체 9 및 10: (R)-1-(tert-부톡시카르보닐)-4-시아노-4-메틸-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-6-카르복실산 및 (S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-4-시아노-4-메틸-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-6-카르복실산
Figure pct00074
단계 1. tert-부틸 6-브로모-4-옥소-3,4-디히드로퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트
DCM (20 mL) 중 6-브로모-2,3-디히드로-1H-퀴놀린-4-온 (2 g, 8.85 mmol), Boc2O (3.86 g, 17.7 mmol), DMAP (108 mg, 0.88 mmol), 및 DIEA (3.1 mL, 17.7 mmol)의 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시킨 다음, 물 (5 mL)에 부었다. 이어서, 수용액을 EA (5 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE 중 0에서 12% EA)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.75 g, 5.37 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 326.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.89 - 7.88 (m, 1H), 7.75 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 4.11 - 4.07 (m, 2H), 2.79 - 2.75 (m, 2H), 1.51 (s, 9H) ppm.
단계 2. tert-부틸 6-브로모-4-시아노-3,4-디히드로퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트
칼륨 tert-부톡시드 (1.38 g, 12.26 mmol)를 0℃에서 DME (100 mL) 및 EtOH (4 mL) 중 tert-부틸 6-브로모-4-옥소-3,4-디히드로퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (2 g, 6.13 mmol) 및 1-(이소시아노메틸술포닐)-4-메틸-벤젠 (1.80 g, 9.20 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (5 mL)에 붓고, EA (5 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE 중 0에서 20% EA)에 의해 정제하여 표제 화합물 (900 mg, 2.67 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M-55]+ = 281.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.67 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.51 - 7.47 (m, 1H), 4.48 - 4.44 (m, 1H), 3.74 - 3.69 (m, 2H), 2.21 - 2.15 (m, 2H), 1.48 (s, 9H) ppm.
단계 3. tert-부틸 6-브로모-4-시아노-4-메틸-3,4-디히드로퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트
수소화나트륨 (89 mg, 2.22 mmol, 60% 순도)을 0℃에서 THF (5 mL) 중 tert-부틸 6-브로모-4-시아노-3,4-디히드로퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (500 mg, 1.48 mmol)의 혼합물에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, MeI (0.14 mL, 2.22 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (20 mL)로 켄칭하고, EA (10 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 오일을 FCC (용리액: PE 중 0에서 50% EA)에 의해 정제하여 표제 화합물 (370 mg, 1.01 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M-55]+=295.0
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.66 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.36 (m, 1H), 3.89 - 3.80 (m, 2H), 2.40 - 2.34 (m, 1H), 2.04 - 2.00 (m, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.53 (s, 9H) ppm.
단계 4. (R)-1-(tert-부톡시카르보닐)-4-시아노-4-메틸-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-6-카르복실산 & (S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-4-시아노-4-메틸-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-6-카르복실산
아세트산팔라듐 (11.8 mg, 0.053 mmol) 및 dccp·2HBF4 (64.5 mg, 0.11 mmol)를 25℃에서 DMSO (3 mL) 및 H2O (1 mL) 중 tert-부틸 6-브로모-4-시아노-4-메틸-3,4-디히드로퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (370 mg, 1.05 mmol) 및 K2CO3 (218 mg, 1.58 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, CO (g, 15 psi)로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 CO (g) 하에 100℃에서 12시간 동안 가온 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물의 혼합물 (190 mg, 0.60 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 입체이성질체를 키랄 SFC (다이셀 키랄팩 AD (250 mm*30 mm,10 μm); 이동상: [0.1%NH3-H2O MEOH]; B%: 20%-20%,1.75분; 75분)를 통해 분리하여 중간체 9 (80 mg, 0.25 mmol)를 담황색 고체로서, 및 중간체 10 (90 mg, 0.28 mmol)을 담황색 고체로서 수득하였다.
중간체 9: LCMS (ESI) m/a: [M-55]+=261.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.96 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.80 - 7.78 (m, 1H), 7.69 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.79 - 3.74 (m, 2H), 2.36 - 2.32 (m, 1H), 2.07 - 2.05 (m, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.47 (s, 9H) ppm.
키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH(DEA)_5_40_3ML_AT35.M, Rt = 0.766분, ee 값 = 98.82%.
중간체 10: LCMS (ESI) m/a: [M-55]+=261.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.96 (br s, 1H), 7.81 - 7.78 (m, 1H), 7.71 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.80 - 3.74 (m, 2H), 2.36 - 2.31 (m, 1H), 2.07 - 2.04 (m, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.48 (s, 9H) ppm.
키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH(DEA)_5_40_3ML_AT35.M. Rt = 0.916분, ee 값 = 93.82%.
중간체 11: tert-부틸 N-[1-(4-브로모-2-피리딜)-2-메톡시-에틸]카르바메이트
Figure pct00075
단계 1. 1-(4-브로모-2-피리딜)-2-메톡시-에타논
n-부틸 리튬 (2.5 M, 16.9 mL)을 -60℃에서 톨루엔 (400 mL) 중 2,4-디브로모피리딘 (10.0 g, 42.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 -60℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 메틸 2-메톡시아세테이트 (7.53 mL, 76.0 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 -60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1 L)을 첨가하여 켄칭한 다음, EA (1 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1 L)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 FCC (용리액: PE:EA = 3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (5 g, 21.7 mmol)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.45 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.68 - 7.66 (m, 1H), 5.01 (s, 2H), 3.54 (s, 3H) ppm.
단계 2. tert-부틸 N-[1-(4-브로모-2-피리딜)-2-메톡시-에틸]카르바메이트
아세트산암모늄 (13.4 g, 174 mmol) 및 NaBH3CN (10.93 g, 174 mmol)을 20℃에서 THF (120 mL) 중 1-(4-브로모-2-피리딜)-2-메톡시-에타논 (4 g, 17.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. Boc2O (22.8 g, 104 mmol) 및 포화 NaHCO3 (60 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 20℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (300 mL)로 희석하고, EA (300 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 FCC (용리액: PE:EA = 3:1)에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 백색 고체를 수득하였다. 이어서, 백색 고체를 RPC에 의해 재정제하였다. 표제 화합물을 함유하는 분획을 수집하고, 농축시켜 MeCN을 제거하였다. 수성 층을 pH = 9.0이 달성될 때까지 탄산나트륨 (고체)으로 염기성화시켰다. 수용액을 EA (100 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (1.5 g, 4.19 mmol)을 갈색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [Br81M+H]+ = 333.1.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 8.41 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.58 - 7.56 (m, 1H), 7.37 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.81 - 4.76 (m, 1H), 3.56 - 3.54 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 1.40 - 1.37 (m, 9H) ppm.
중간체 12 및 13: (S)-4-(디플루오로메틸)-4-플루오로이소크로만-6-카르복실산 및 (R)-4-(디플루오로메틸)-4-플루오로이소크로만-6-카르복실산
Figure pct00076
단계 1. 6-브로모-4-(디플루오로(페닐술포닐)메틸)이소크로만-4-올
LiHMDS (1 M, 26.4 mL)를 -78℃에서 THF (30 mL) 중 6-브로모이소크로만-4-온 (3 g, 13.2 mmol), 디플루오로메틸술포닐벤젠 (2.8 mL, 19.8 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (50 mL)에 붓고, EA (50 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 10:1에서 3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (3 g, 6.70 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H2O]+ = 435.8, 437.8.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.90 - 7.89 (m, 1H), 7.85 - 7.76 (m, 1H), 7.71 - 7.62 (m,2H), 7.49 - 7.47 (m, 1H), 6.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.00 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.93 - 4.73 (m, 2H), 3.93 - 3.88 (m, 1H), 3.83 (s,1H).
단계 2. 6-브로모-4-(디플루오로메틸)이소크로만-4-올
마그네슘 (2.61 g, 107 mmol)을 DMF (100 mL) 중 6-브로모-4-(디플루오로(페닐술포닐)메틸)이소크로만-4-올 (3 g, 7.16 mmol) 및 NaOAc/HOAc (수성, 8 M, 44.7 mL)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 부은 다음, EA (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 10:1에서 3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.5 g, 5.37 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM-H2O]+ = 260.9.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.83 - 7.60 (m, 1H), 7.51 - 7.33 (m, 1H), 7.11 - 6.93 (m, 1H), 6.25 - 5.88 (m, 1H), 4.92 - 4.70 (m, 2H), 4.26 - 4.17 (m, 1H), 3.87 - 3.66 (m, 1H), 2.75 - 2.58 (m, 1H).
단계 3. 6-브로모-4-(디플루오로메틸)-4-플루오로이소크로만
DAST (1.33 mL, 10.0 mmol)를 0℃에서 DCM (20 mL) 중 6-브로모-4-(디플루오로메틸)이소크로만-4-올 (1.4 g, 5.02 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고, DCM (20 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 10:1에서 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (900 mg, 2.88 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.73 - 7.51 (m, 1H), 7.48 - 7.28 (m, 1H), 7.08 - 6.89 (m, 1H), 6.20 - 5.80 (m, 1H), 4.82 - 4.61 (m, 2H), 4.33 - 4.18 (m, 1H), 4.01 - 3.82 (m, 1H).
단계 4. (S)-4-(디플루오로메틸)-4-플루오로이소크로만-6-카르복실산 및 (R)-4-(디플루오로메틸)-4-플루오로이소크로만-6-카르복실산
아세트산팔라듐 (34.0 mg, 0.15 mmol), K2CO3 (627 mg, 4.54 mmol) 및 dccp·2HBF4 (185 mg, 0.30 mmol)를 H2O (0.11 mL) 및 DMSO (10 mL) 중 6-브로모-4-(디플루오로메틸)-4-플루오로이소크로만 (850 mg, 3.02 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 CO (g, 15 psi) 하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, EA (20 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 역상 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물의 혼합물 (450 mg, 1.64 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다. 입체이성질체의 혼합물을 SFC 분리 (칼럼: 다이셀 키랄팩 IG (250 mm*30 mm,10 μm); 이동상: [0.1%NH3-H2O MEOH];B%: 20%-20%,3분;36분)에 의해 정제하여 중간체 12 (220 mg, 0.89 mmol)를 무색 오일로서, 및 중간체 13 (220 mg, 0.89 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 12: 키랄 SFC: 키랄팩 IG-3 50x4.6 mm I.D., RT = 0.928분.
LCMS (ESI) m/z: [M+H2O]+ = 247.2.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.36 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.38 - 5.96 (m, 1H), 5.01 - 4.76 (m, 2H), 4.40 - 4.35 (m, 1H), 4.18 - 4.01 (m, 1H).
중간체 13: 키랄 SFC: 키랄팩 IG-3 50x4.6 mm I.D., RT = 1.115분.
LCMS (ESI) m/z: [M+H2O]+ = 247.2.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.36 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.38 - 5.96 (m, 1H), 5.01 - 4.76 (m, 2H), 4.40 - 4.35 (m, 1H), 4.18 - 4.01 (m, 1H).
중간체 14 및 15: (R)-3-시아노-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-카르복실산 & (S)-3-시아노-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-카르복실산
Figure pct00077
단계 1. 메틸 5-브로모-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르복실레이트
마그네슘 (9.53 g, 392 mmol)을 MeOH (400 mL) 중 메틸 5-브로모벤조푸란-3-카르복실레이트 (10 g, 39.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 용액을 25℃에서 6시간 동안 교반하였다. 4 N HCl (200 mL)을 용액에 조심스럽게 첨가하였다. 마그네슘 금속의 완전 용해 후, 용액을 감압 하에 농축시켜 MeOH를 제거하였다. 생성된 혼합물을 EA (200 mL x 3)와 물 (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상들을 분리하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 MeCN을 제거하였다. 이어서, 수성 층을 EA (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL x 2)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (6 g, 23.3 mmol)을 적색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.41 - 7.40 (m, 1H), 7.25 - 7.16 (m, 1H), 6.62 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.89 - 4.85 (m, 1H), 4.61 - 4.60 (m, 1H), 4.28 - 4.24 (m, 1H), 3.73 (s, 3H) ppm.
단계 2. 메틸 5-브로모-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르복실레이트
수소화나트륨 (350 mg, 8.75 mmol, 60% 순도)을 0℃에서 THF (15 mL) 중 메틸 5-브로모-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르복실레이트 (1.5 g, 5.83 mmol)의 혼합물에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, MeI (0.54 mL, 8.75 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (30 mL)로 켄칭하고, EA (10 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 오일을 FCC (용리액: 0에서 40% EA/PE)에 의해 정제하여 표제 화합물 (670 mg, 2.43 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+=271.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.43 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.29 - 7.27 (m, 1H), 6.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.08 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 1.61 (s, 3H) ppm.
단계 3. 5-브로모-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르복실산
MeOH (5 mL) 및 H2O (2 mL) 중 메틸 5-브로모-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르복실레이트 (650 mg, 2.40 mmol) 및 NaOH (240 mg, 5.99 mmol)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하였다. HCl (1 M)을 첨가하여 pH를 4로 조정한 다음, 용액을 EA (10 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 농축시켜 표제 화합물 (600 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.44 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.34 - 7.31 (m, 1H), 6.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 1.53 (s, 3H) ppm.
단계 4. 5-브로모-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르복스아미드
염화암모늄 (1.25 g, 23.3 mmol)을 25℃에서 DMF (6 mL) 중 5-브로모-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르복실산 (600 mg, 2.33 mmol), DIPEA (2.0 mL, 11.7 mmol), 및 HATU (1.33 g, 3.50 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, EA (10 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (580 mg)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+=257.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.24 (m, 3H), 6.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 1.52 (s, 3H) ppm.
단계 5. 5-브로모-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르보니트릴
트리에틸아민 (0.95 mL, 6.79 mmol)을 0℃에서 DCM (6 mL) 중 5-브로모-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르복스아미드 (580 mg, 2.26 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 이어서, TFAA (0.79 mL, 5.66 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, DCM (10 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 오일을 FCC (용리액: PE 중 0에서 20% EA)에 의해 정제하여 표제 화합물 (500 mg, 1.89 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.47 - 7.44 (m, 1H), 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.74 (s, 3H) ppm.
단계 6. (R)-3-시아노-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-카르복실산 및 (S)-3-시아노-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-5-카르복실산
아세트산팔라듐 (18.9 mg, 0.084 mmol) 및 dccp·2HBF4 (103 mg, 0.17 mmol)를 25℃에서 DMSO (3.2 mL) 및 H2O (0.8 mL) 중 5-브로모-3-메틸-2,3-디히드로벤조푸란-3-카르보니트릴 (400 mg, 1.68 mmol) 및 K2CO3 (348 mg, 2.52 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, CO (g)로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 CO 분위기 (15 psi) 하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 목적 분획을 농축시켜 MeCN을 제거하고, 동결건조시켜 표제 화합물의 혼합물 (210 mg, 1.02 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 입체이성질체를 키랄 SFC (다이셀 키랄팩 IG (250 mm*30 mm,10 μm); 이동상: [0.1%NH3-H2O MEOH];B%: 20%-20%,3.9분)에 의해 분리하였다. 용리액을 농축시켜 중간체 14 (90 mg, 0.44 mmol)를 적색 고체로서 및 중간체 15 (100 mg, 0.49 mol)를 담황색 고체로서 수득하였다.
중간체 14: 키랄 SFC: AD-3_5CM_ETOH(DEA)_5_40_3ML_AT35.M, RT = 0.924분.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+=204.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.02 (s, 1H), 7.90 - 7.88 (m, 1H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.99 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.75 (s, 3H) ppm.
중간체 15: 키랄 SFC: AD-3_5CM_ETOH(DEA)_5_40_3ML_AT35.M, RT = 1.078분.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+=204.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.02 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.89 - 7.87 (m, 1H), 6.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.99 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 1.75 (s, 3H) ppm.
중간체 16: 3-[3-(디플루오로메틸)옥세탄-3-일]벤조산
Figure pct00078
단계 1. 3-(3-브로모페닐)옥세탄-3-카르브알데히드
DMP (1.66 mL, 5.35 mmol)를 0℃에서 DCM (10 mL) 중 [3-(3-브로모페닐)옥세탄-3-일]메탄올 (1 g, 4.11 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 100:1에서 1:100)에 의해 정제하여 표제 화합물 (850 mg, 3.53 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 259.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.71 (s, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.24 (t, J = 8.0 Hz, 1H),7.18 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 6.99 - 6.92 (m, 1H), 5.08 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.91 (d, J = 6.4 Hz, 2H) ppm.
단계 2. 3-(3-브로모페닐)-3-(디플루오로메틸)옥세탄
DAST (1.15 mL, 8.71 mmol)를 -78℃에서 DCM (7 mL) 중 3-(3-브로모페닐)옥세탄-3-카르브알데히드 (700 mg, 2.90 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 가온하고, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 NaHCO3의 포화 수용액 (5 mL)에 부었다. 유기 층을 수집하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 100:1에서 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (500 mg, 1.90 mmol)을 갈색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.59 - 7.45 (m, 1H), 7.34 - 7.29 (m, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.11 -6.94 (m, 1H), 6.43 - 5.96 (m, 1H), 4.99 (s, 4H) ppm.
단계 3. 3-[3-(디플루오로메틸)옥세탄-3-일]벤조산
아세트산팔라듐 (6.40 mg, 0.029 mmol), dccp·2HBF4 (34.9 mg, 0.057 mmol), 및 K2CO3 (118 mg, 0.86 mmol)을 25℃에서 DMSO (5 mL) 및 H2O (2.5 mL) 중 3-(3-브로모페닐)-3-(디플루오로메틸)옥세탄 (150 mg, 0.57 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, CO (g)로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 CO 분위기 (15 psi) 하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA (5 ml)로 추출하였다. 수성 층을 수성 HCl (1 M)을 사용하여 pH 5-6으로 조정하고, EA (5 ml x 3)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (120 mg, 0.53 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 229.1.
중간체 17: 4-(3-옥소시클로부틸)피콜리노니트릴
Figure pct00079
단계 1: 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피콜리노니트릴
디옥산 (250 mL) 중 4-브로모피리딘-2-카르보니트릴 (25 g, 136.61 mmol) 및 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (41.63 g, 163.93 mmol)의 용액에 KOAc (40.22 g, 409.82 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2 (3 g, 3.67 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1000 mL)에 붓고, 용액을 EA (1000 mL * 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 (2000 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1-1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (24 g, 104.32 mmol, 76.36% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 231.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.79 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.87 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 1.31 (s, 12H) ppm
단계 2: N'-(3-(벤질옥시)시클로부틸리덴)-4-메틸벤젠술포노히드라지드
MeOH (150 mL) 중 3-벤질옥시시클로부타논 (15 g, 85.13 mmol)의 용액에 4-메틸벤젠술포노히드라지드 (15.85 g, 85.13 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (30 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (23 g, 66.78 mmol, 78.45% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 3: 4-(3-(벤질옥시)시클로부틸)피콜리노니트릴
디옥산 (450 mL) 중 N'-(3-(벤질옥시)시클로부틸리덴)-4-메틸벤젠술포노히드라지드 (23 g, 66.78 mmol) 및 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피콜리노니트릴 (23.05 g, 100.17 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (65.27 g, 200.33 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 48시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 물 (800 mL)로 희석하고, EA (300 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/EA=1/0에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (3.7 g, 13.29 mmol, 19.90% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 265.1
단계 4: 4-(3-히드록시시클로부틸)피콜리노니트릴
DCM (120 mL) 및 H2O (12 mL) 중 4-(3-(벤질옥시)시클로부틸)피콜리노니트릴 (3.7 g, 14.00 mmol)의 용액에 DDQ (17.48 g, 76.99 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaSO3 용액 (500 mL)에 붓고, DCM (500 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (500 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5:1-0:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.4 g, 8.04 mmol, 57.41% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 5: 4-(3-옥소시클로부틸)피콜리노니트릴
DCM (15 mL) 중 4-(3-히드록시시클로부틸)피콜리노니트릴 (1.4 g, 5.44 mmol)의 용액에 데스-마르틴 (6.92 g, 16.31 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 Na2SO3 용액 (100 mL)에 붓고, EA (100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5:1-0:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (900 mg, 4.98 mmol, 91.62% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 173.1
중간체 18: 2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-1(2H)-온
Figure pct00080
단계 1: 2-메틸-2,6-나프티리딘-1(2H)-온
DMF (10 mL) 중 2,6-나프티리딘-1(2H)-온 (200 mg, 1.37 mmol)의 혼합물에 30℃에서 Cs2CO3 (668.82 mg, 2.05 mmol) 및 MeI (291.36 mg, 2.05 mmol, 127.79 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고, DCM (10 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (DCM/MeOH = 20/1, Rf = 0.4)에 의해 정제하여 표제 화합물 (160 mg, 946.72 umol, 69.18% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 161.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.98 (s, 1H), 8.69 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H) ppm.
단계 2: 2-벤질-6-메틸-5-옥소-5,6-디히드로-2,6-나프티리딘-2-윰 브로마이드
EtOH (0.5 mL) 중 2-메틸-2,6-나프티리딘-1(2H)-온 (50 mg, 312.16 umol)의 혼합물을 70℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 벤질 브로마이드 (720.00 mg, 4.21 mmol, 0.5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 MTBE (10 mL)로 처리하고, 여과하였다. 필터 케이크를 감압 하에 건조시켜 표제 화합물 (130 mg, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.87 (s, 1H), 8.98 - 8.97 (m, 1H), 8.68 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.59 - 7.42 (m, 5H), 6.96 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.96 (s, 2H), 3.60 (s, 3H) ppm.
단계 3: 6-벤질-2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-1(2H)-온
MeOH (1 mL) 중 2-벤질-6-메틸-5-옥소-5,6-디히드로-2,6-나프티리딘-2-윰 브로마이드 (70 mg, 211.35 umol)의 혼합물에 NaBH4 (39.98 mg, 1.06 mmol)를 0℃에서 여러 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 1 M HCl 수용액 (5 mL)에 붓고, 포화 NaHCO3을 사용하여 pH=8로 염기성화시켰다. 혼합물을 EA (10 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (35 mg, 137.62 umol, 65.1% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 255.3.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.40 - 7.28 (m, 5H), 7.07 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.69 (s, 2H), 3.52 (s, 3H), 3.39 (s, 2H), 2.79 - 2.64 (m, 4H) ppm.
단계 4: 2-메틸-2,6-나프티리딘-1(2H)-온
MeOH (1 mL) 중 6-벤질-2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-1(2H)-온 (35 mg, 137.62 umol)의 혼합물에 TFA (31.38 mg, 275.24 umol, 20.38 uL) 및 Pd/C (20 mg, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 H2로 3회 퍼징하고, H2 (15 psi) 하에 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 모액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (30 mg, 107.83 umol, 78.4% 수율, TFA 염)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 165.1.
중간체 19: 7-플루오로-5-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린 히드로클로라이드
Figure pct00081
단계 1: (E)-N-(2,2-디메톡시에틸)-1-(3-플루오로-5-메톡시페닐)메탄이민
톨루엔 (20 mL) 중 3-플루오로-5-메톡시-벤즈알데히드 (2 g, 12.98 mmol)의 용액에 2,2-디메톡시에탄아민 (1.50 g, 14.27 mmol, 1.56 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (3 g, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 2: N-(3-플루오로-5-메톡시벤질)-2,2-디메톡시에탄-1-아민
MeOH (30 mL) 중 (E)-N-(2,2-디메톡시에틸)-1-(3-플루오로-5-메톡시페닐)메탄이민 (3 g, 12.43 mmol)의 용액에 0℃에서 NaBH4 (564.53 mg, 14.92 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, 혼합물을 EA (100 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (2.2 g, 9.04 mmol, 72.73% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ=6.66 - 6.63 (m, 2H), 6.51 - 6.48 (m, 1H), 4.49 - 4.46 (m, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.76 (s, 2H), 3.47 - 3.37 (m, 6H), 2.73 (d, J = 5.4 Hz, 2H) ppm.
단계 3: 7-플루오로-5-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-4-올
HCl (10 mL) 중 N-(3-플루오로-5-메톡시벤질)-2,2-디메톡시에탄-1-아민 (1 g, 4.11 mmol)의 혼합물을 40℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (810 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 4: 7-플루오로-5-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린
DCM (8 mL) 중 7-플루오로-5-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-4-올 (810 mg, 4.11 mmol)의 용액에 Et3SiH (1.43 g, 12.32 mmol, 1.97 mL) 및 TFA (5.39 g, 47.27 mmol, 3.5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (744 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 182.3
단계 5: tert-부틸 7-플루오로-5-메톡시-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트
DCM (10 mL) 중 7-플루오로-5-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린 (744 mg, 4.11 mmol)의 용액에 Et3N (2.08 g, 20.53 mmol, 2.86 mL) 및 Boc2O (1.08 g, 4.93 mmol, 1.13 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5:1-1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (150 mg, 494.22 umol, 12.04% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 226.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 6.45 - 6.42 (m, 2H), 4.54 - 4.51 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.63 - 3.60 (m, 2H), 2.69 - 2.66 (m, 2H), 1.49 (s, 9H) ppm.
단계 6: 7-플루오로-5-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린 히드로클로라이드
HCl/디옥산 (2 mL) 중 tert-부틸 7-플루오로-5-메톡시-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (150 mg, 533.20 umol)의 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 MTBE (10 mL)로 연화처리하여 표제 화합물 (60 mg, 263.71 umol, 49.46% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 182.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 6.53 - 6.43 (m, 2H), 4.28 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.43 (s, 2H), 3.00 (s, 2H) ppm
중간체 20: 3-메톡시-3-페닐피롤리딘 히드로클로라이드
Figure pct00082
단계 1: tert-부틸 3-메톡시-3-페닐피롤리딘-1-카르복실레이트
DMF (3 mL) 중 tert-부틸 3-히드록시-3-페닐피롤리딘-1-카르복실레이트 (200 mg, 759.50 umol)의 용액에 0℃에서 NaH (42.53 mg, 1.06 mmol, 60% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. MeI (161.70 mg, 1.14 mmol, 70.92 uL)를 혼합물에 첨가하고, 교반을 25℃에서 16시간 동안 계속하였다. 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고, EA (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코(ISCO)®; 12 g 세파플래쉬(SepaFlash)® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60%에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액, 60 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (180 mg, 648.98 umol, 85.45% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.43 - 7.29 (m, 5H), 3.97 - 3.78 (m, 1H), 3.64 - 3.45 (m, 3H), 3.02 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 2.48 - 2.36 (m, 1H), 2.24 - 2.09 (m, 1H), 1.48 (d, J = 4.8 Hz, 9H) ppm.
단계 2: 3-메톡시-3-페닐피롤리딘 히드로클로라이드
MeOH (2 mL) 중 tert-부틸 3-메톡시-3-페닐피롤리딘-1-카르복실레이트 (170 mg, 612.93 umol)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (120 mg, 조 물질, HCl)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.89 (br s, 1H), 9.48 (br s, 1H), 7.47 - 7.34 (m, 4H), 3.80 - 3.67 (m, 1H), 3.40 - 3.14 (m, 3H), 2.92 (s, 3H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.24 - 2.10 (m, 1H) ppm.
중간체 21: 1-(아제티딘-3-일)-1H-인돌
Figure pct00083
단계 1: tert-부틸 3-(1H-인돌-1-일)아제티딘-1-카르복실레이트
DMF (5 mL) 중 인돌 (500 mg, 4.27 mmol)의 용액에 NaH (256.06 mg, 6.40 mmol, 60% 순도)를 0℃에서 여러 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카르복실레이트 (1.33 g, 4.69 mmol)를 적가하였다. 반응 용액을 25℃에서 12.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (10 mL)에 의해 켄칭하고, H2O (10 mL)로 희석하고, EA (10 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피 (FA 조건)에 의해 정제하였다. 분획을 감압 하에 농축시켜 MeCN을 제거하고, EA (25 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜, 표제 화합물 (520 mg, 1.77 mmol, 41.41% 수율)을 적색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+=273.1
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 7.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.22 (m, 1H), 7.19 - 7.11 (m, 1H), 6.60 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.22 - 5.18 (m, 1H), 4.52 - 4.48 (m, 2H), 4.36 - 4.32 (m, 2H), 1.50 (s, 9H)
단계 2: 1-(아제티딘-3-일)-1H-인돌
DCM (3 mL) 중 tert-부틸 3-(1H-인돌-1-일)아제티딘-1-카르복실레이트 (220 mg, 807.81 umol)의 용액에 TFA (92.11 mg, 807.81 umol, 59.81 uL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 10시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 크로마토그래피 (FA 조건)에 의해 정제하였다. 분획을 감압 하에 농축시켜 MeCN을 제거하고, 동결건조시켜 표제 화합물 (110 mg, 504.01 umol, 62.39% 수율, FA)을 적색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+=173.1
중간체 22: 7-(디플루오로메틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린 히드로클로라이드
Figure pct00084
단계 1: tert-부틸 7-포르밀-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트
N2 하에 -78℃에서 THF (40 mL) 중 tert-부틸 7-브로모-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (1 g, 3.20 mmol)의 용액에 n-BuLi (2.5 M, 2.56 mL)를 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, DMF (468.25 mg, 6.41 mmol, 492.89 uL)를 -78℃에서 적가하고, -78℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고 (60 mL), EA (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0~1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (280 mg, 1.01 mmol, 31.46% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H-56]+= 206.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.95 (s, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 2H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.59 (s, 2H), 3.58 - 3.55 (m, 2H), 2.88 - 2.85 (m, 2H), 1.46 - 1.41 (m, 9H) ppm.
단계 2: tert-부틸 7-(디플루오로메틸)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트
DCM (1.5 mL) 중 tert-부틸 7-포르밀-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (150 mg, 574.02 umol)의 용액에 DAST (157.29 mg, 975.83 umol, 128.93 uL) 및 EtOH (5.29 mg, 114.80 umol, 6.71 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 추가의 DAST (92.53 mg, 574.02 umol, 75.84 uL)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0에서 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (120 mg, 388.11 umol, 67.61% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H-56]+= 228.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.40 - 7.34 (m, 2H), 7.32 - 7.28 (m, 1H), 7.12 - 6.82 (m, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.57 - 3.52 (m, 2H), 2.83 - 2.80 (m, 2H), 1.43 (s, 9H) ppm.
단계 3: 7-(디플루오로메틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린 히드로클로라이드
디옥산 (1 mL) 중 tert-부틸 7-(디플루오로메틸)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (120 mg, 423.56 umol)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 756.34 uL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (90 mg, 378.26 umol, 89.30% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 184.0.
중간체 23: 7-브로모-1,5-나프티리딘-2(1H)-온
Figure pct00085
단계 1. 3-브로모-1,5-나프티리딘
붕산 (5.72 g, 92.5 mmol), FeSO4·7H2O (2.09 g, 7.51 mmol), 및 나트륨 3-니트로벤젠술포네이트 수화물 (28.1 g, 116 mmol)을 진한 H2SO4 (50 mL)의 용액에 첨가하고 혼합물을 0.5시간 동안 30℃에서 교반하였다. 글리세롤 (20.3 mL, 272 mmol), 5-브로모피리딘-3-아민 (10.0g, 57.8 mmol) 및 H 2O (50 mL)를 상기 반응 용액에 첨가하고, 상기 혼합물을 135℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 30℃로 냉각시키고, NaOH를 사용하여 pH를 pH=14로 조정하였다. 수성 층을 EA (300 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 (500 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 10:1에서 2:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (4.50 g, 19.9 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [Br79M+H]+ = 209.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 8.98 - 8.97 (m, 2H), 8.58 (d, J 1.6 Hz, 1H), 8.40 - 8.37 (m, 1H), 7.67 - 7.64 (m, 1H).
단계 2. 7-브로모-1,5-나프티리딘 1-옥시드
m-CPBA (5.24 g, 25.8 mmol, 85% 순도)를 DCM (45.0 mL) 중 3-브로모-1,5-나프티리딘 (4.50 g, 21.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 Na2SO3 (100 mL)에 붓고, DCM (100 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 MTBE (50 mL)로 연화처리하고, 고체를 여과하였다. 고체를 수집하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (3.3 g, 14.66 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 9.23 - 9.22 (m, 1H), 9.03 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.55 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.99 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.57 - 7.53 (m, 1H).
단계 3. 7-브로모-1,5-나프티리딘-2(1H)-온
물 (25 mL) 중 탄산칼륨 (6.89 g, 49.86 mmol)을 CHCl3 중 7-브로모-1,5-나프티리딘 1-옥시드 (3.30 g, 14.7 mmol) 및 TosCl (3.35 g, 17.6 mmol)의 용액 (60 mL)에 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (2.5 g, 10.0 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [Br79M+H]+ = 225.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.21 - 11.78 (m, 1H), 8.54 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.78 - 6.74 (m, 1H).
중간체 24: tert-부틸 N-[1-(2-페닐-1,6-나프티리딘-7-일)에틸]카르바메이트
Figure pct00086
tert-부틸 N-[1-(2-페닐-1,6-나프티리딘-7-일)에틸]카르바메이트
메틸마그네슘 브로마이드 (3 M, 1.73 mL)를 0℃에서 THF (6 mL) 중 2-페닐-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (300 mg, 1.30 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 가온하고, 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 무수 MeOH (3 mL)를 첨가하여 켄칭한 후, NH4OAc (1 g, 13.0 mmol) 및 NaBH3CN (815 mg, 13.0 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. Boc2O (1.70 g, 7.78 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 켄칭하고, EA (100 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (250 mg, 0.68 mmol)을 담황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 350.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.34 (s, 1H), 8.63 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.33 - 8.24 (m, 3H), 7.84 (s, 1H), 7.62 - 7.53 (m, 4H), 4.87 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 1.47 - 1.37 (m, 12H) ppm.
중간체 25 및 26: (3S)-3-(히드록시메틸)-3-메틸-인단-5-카르복실산 및 (3R)-3-(히드록시메틸)-3-메틸-인단-5-카르복실산
Figure pct00087
단계 1. 6-브로모인단-1-카르보니트릴
칼륨 tert-부톡시드 (53.2 g, 474 mmol)를 0℃에서 DME (2.5 L) 및 EtOH (100 mL) 중 6-브로모인단-1-온 (50 g, 237 mmol) 및 1-(이소시아노메틸술포닐)-4-메틸-벤젠 (69.4 g, 356 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (2 L)에 붓고, EA (2 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 EA (500 mL)로 희석하고, 염수 (500 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 20:1)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 수집하고, 진공 하에 농축시켰다. 이어서, 고체를 MTBE (100 mL)로 연화처리하여 표제 화합물 (29 g, 130 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.58 (s, 1H), 7.42 - 7.40 (m, 1H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.12 - 4.08 (m, 1H), 3.10 - 3.00 (m, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 1H), 2.65 - 2.55 (m, 1H), 2.43 - 2.37 (m, 1H) ppm.
단계 2. 6-브로모-1-메틸-인단-1-카르보니트릴
수소화나트륨 (10.8 g, 270 mmol, 60% 순도)을 0℃에서 THF (300 mL) 중 6-브로모인단-1-카르보니트릴 (30 g, 135 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 가온하고, 10℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. CH3I (42.1 mL, 675.43 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 가온하고, 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 NH4Cl (수성, 800 mL)로 희석하고, EA (500 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:0에서 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (27 g, 114 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.70 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.50 - 7.48 (m, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.97 - 2.93 (m, 2H), 2.60 - 2.53 (m, 1H), 2.18 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.64 (s, 3H) ppm.
단계 3. 3-시아노-3-메틸-인단-5-카르복실산
DMSO (60 mL) 중 6-브로모-1-메틸-인단-1-카르보니트릴 (6.5 g, 27.5 mmol), dccp·2HBF4 (1.69 g, 2.75 mmol), 탄산칼륨 (5.71 g, 41.3 mmol), Pd(OAc)2 (618 mg, 2.75 mmol), 및 물 (0.99 mL)의 혼합물을 탈기시키고, CO (g)로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 CO (15 psi) 분위기 하에 100℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하여 흑색 고체를 제거한 다음, 물 (60 mL)로 희석하고, EA (80 mL x 3)로 추출하였다. 유기 층을 버리고, 수성 상을 수성 HCl을 사용하여 pH=4로 조정하였다. 이어서, 수용액을 EA (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (500 mL x 2)로 세척한 다음, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (4.5 g, 20.7 mmol)을 갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 202.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.04 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.91 - 7.88 (m, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.07 - 3.04 (m, 2H), 2.64 - 2.53 (m, 1H), 2.28 - 2.19 (m, 1H), 1.65 (s, 3H) ppm.
단계 4. 3-포르밀-3-메틸-인단-5-카르복실산
DIBAL-H (1 M, 159.03 mL)를 -70℃에서 톨루엔 (160 mL) 중 3-시아노-3-메틸-인단-5-카르복실산 (16 g, 79.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 -70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 HCl (2 M, 323 mL)의 첨가를 통해 켄칭하였다. 반응 혼합물을 가온하고, 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (2 L)로 희석하고, EA (1.5 L x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (14 g, 58.2 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 205.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.91 (br s, 1H), 9.58 (s, 1H), 7.85 - 7.83 (m, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.06 - 2.90 (m, 2H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.39 (s, 3H) ppm.
단계 5. (3S)-3-(히드록시메틸)-3-메틸-인단-5-카르복실산 및 (3R)-3-(히드록시메틸)-3-메틸-인단-5-카르복실산
수소화붕소나트륨 (2.49 g, 65.8 mmol)을 0℃에서 THF (150 mL) 중 3-포르밀-3-메틸-인단-5-카르복실산 (14 g, 58.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 가온하고, 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (200 mL)로 희석하고, EA (80 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 버리고, 수성 상을 수성 HCl을 사용하여 pH=4로 조정하였다. 이어서, 수용액을 EA (300 mL x 3)로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM (50 mL x 3)으로 세척하고, 여과하고, 농축시켜 백색 고체를 수득하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:0에서 1:5)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 수집하고, 감압 하에 농축시켜 회백색 고체를 수득하였다. 이어서, 고체를 MTBE (20 mL x 2)로 세척하였다. 이 고체를 여과된 고체와 합하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물의 혼합물 (9.5 g, 44.3 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 입체이성질체를 키랄 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 AD-H (250 mm*30 mm,5 μm); 이동상: [0.1%NH3-H2O MEOH]; B%: 40%-40%,5분; 540분)에 의해 분리하여 순수한 표제 화합물을 수득하였다.
중간체 25: (4.0 g, 19.40 mmol, 백색 고체)
키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH (DEA)_5_40_3ML_AT35.M, Rt = 1.575분, ee% = 100%.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 207.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 7.74 - 7.68 (m, 2H), 7.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.39 - 3.31 (m, 2H), 2.87 - 2.80 (m, 2H), 2.15 - 2.12 (m, 1H), 1.73 - 1.65 (m, 1H), 1.20 (s, 3H) ppm.
중간체 26: ((4.3 g, 20.44 mmol, 담황색 고체)
키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH (DEA)_5_40_3ML_AT35.M, Rt = 1.799분, ee% = 97.93%.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 207.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 7.73 - 7.64 (m, 2H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.44 - 3.25 (m, 2H), 2.88 - 2.78 (m, 2H), 2.15 - 2.12 (m, 1H), 1.73 - 1.65 (m, 1H), 1.20 (s, 3H) ppm.
중간체 27 및 28: (S)-3-시아노-1,3-디메틸인돌린-5-카르복실산 및 (R)-3-시아노-1,3-디메틸인돌린-5-카르복실산
Figure pct00088
단계 1. 메틸 3-((4-브로모페닐)(메틸)아미노)-3-옥소프로파노에이트
TCFH (22.6 g, 80.6 mmol) 및 NMI (12.5 mL, 161.2 mmol)를 MeCN (150 mL) 중 4-브로모-N-메틸-아닐린 (10 g, 53.8 mmol) 및 3-에톡시-3-옥소-프로판산 (8.52 g, 64.5 mmol)의 혼합물에 20℃에서 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 물 (10 mL)로 희석하였다. 이어서, 수용액을 DCM (15 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 5:1에서 3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (13 g, 43.3 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 286.0.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.56 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.14 (d, J=8.4 Hz, 2H), 4.13 (d, J=7.2 Hz, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.21 (s, 2H), 1.29 - 1.15 (m, 3H) ppm.
단계 2. 메틸 3-((4-브로모페닐)(메틸)아미노)-2-메틸-3-옥소프로파노에이트
탄산칼륨 (4.14 g, 30.0 mmol), 및 MeI (3.7 mL, 59.9 mmol)를 0℃에서 DMF (60 mL) 중 메틸 3-((4-브로모페닐)(메틸)아미노)-3-옥소프로파노에이트 (6 g, 20.0 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (100 mL)로 희석하고, EA (60 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 5:1에서 3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (4 g, 12.7 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 300.0.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.57 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.18 - 7.11 (m, 2H), 4.19 - 4.03 (m, 2H), 3.40 - 3.28 (m, 1H), 3.28 (s, 3H), 1.31 (d, J=7.2 Hz, 3H), 1.27 - 1.21 (m, 3H) ppm.
단계 3. 에틸 5-브로모-1,3-디메틸-2-옥소인돌린-3-카르복실레이트
t-BuOK (2.86 g, 25.5 mmol) 및 아세트산구리(II) 1수화물 (5.08 g, 25.5 mmol)을 20℃에서 DMF (120 mL) 중 메틸 3-((4-브로모페닐)(메틸)아미노)-2-메틸-3-옥소프로파노에이트 (4 g, 12.7 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 물 (150 mL)로 희석한 다음, EA (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 5:1에서 3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (2 g, 5.77 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 312.0.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.46 - 7.44 (m, 1H), 7.38 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.75 (d, J=8.4 Hz, 1H), 4.23 - 4.09 (m, 2H), 3.26 - 3.19 (m, 3H), 1.66 (s, 3H), 1.21 - 1.16 (m, 3H) ppm.
단계 4. 에틸 5-브로모-1,3-디메틸인돌린-3-카르복실레이트
BH3·THF (1 M, 9.61 mL)를 0℃에서 THF (20 mL) 중 에틸 5-브로모-1,3-디메틸-2-옥소인돌린-3-카르복실레이트 (2 g, 6.41 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 MeOH (30 mL)로 천천히 켄칭한 다음, 농축시켰다. 조 생성물을 FCC (용리액: PE:EA = 10:1에서 3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (300 mg, 0.86 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 298.0.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.34 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.23 - 7.20 (m, 1H), 6.35 (d, J=8.4 Hz, 1H), 4.26 - 4.15 (m, 2H), 3.89 (d, J=9.2 Hz, 1H), 3.19 - 3.12 (m, 1H), 2.78 - 2.72 (m, 3H), 1.54 (s, 3H), 1.33 - 1.25 (m, 3H) ppm.
단계 5. 5-브로모-1,3-디메틸인돌린-3-카르복실산
LiOH·H2O (126.66 mg, 3.02 mmol)를 20℃에서 MeOH (3 mL) 및 물 (1 mL) 중 에틸 5-브로모-1,3-디메틸인돌린-3-카르복실레이트 (300 mg, 1.01 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 15시간 동안 교반하였다. MeOH를 진공 하에 제거하고, 용액을 물 (1 mL)로 희석하였다. 1 N HCl을 사용하여 pH를 3으로 조정하고, 용액을 EA (5 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (220 mg, 0.70 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 270.0.
단계 6. 5-브로모-1,3-디메틸인돌린-3-카르복스아미드
염화암모늄 (436 mg, 8.14 mmol), HATU (465 mg, 1.22 mmol), 및 DIPEA (0.56 mL, 4.07 mmol)를 20℃에서 DMF (4 mL) 중 5-브로모-1,3-디메틸인돌린-3-카르복실산 (220 mg, 0.81 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 15시간 동안 교반하였다. 물 (5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EA (5 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (210 mg, 0.47 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 269.0.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.29 (br d, J=2.0 Hz, 1H), 7.22 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.44 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.84 (d, J=9.2 Hz, 1H), 3.10 (d, J=9.2 Hz, 1H), 2.76 (s, 3H), 1.57 (s, 3H) ppm.
단계 7. 5-브로모-1,3-디메틸인돌린-3-카르보니트릴
트리에틸아민 (0.33 mL, 2.34 mmol)을 0℃에서 DCM (3 mL) 중 5-브로모-1,3-디메틸인돌린-3-카르복스아미드 (210 mg, 0.78 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. TFAA (0.27 mL, 1.95 mmol)를 천천히 첨가하고, 생성된 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고, DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 10:1에서 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (100 mg, 0.39 mol)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 251.1.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.33 (d, J=2.0 Hz), 7.31 - 7.28 (m, 1H), 6.42 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.70 (d, J=9.2 Hz, 1H), 3.32 (d, J=9.2 Hz, 1H), 2.77 (s, 3H), 1.68 (s, 3H) ppm.
단계 8. 3-시아노-1,3-디메틸인돌린-5-카르복실산
아세트산팔라듐 (2.2 mg, 0.010 mol), dccp·2HBF4 (12.2 mg, 0.020 mmol), 및 탄산칼륨 (41.3 mg, 0.30 mmol)을 DMSO (1 mL) 및 물 (0.007 mL) 중 5-브로모-1,3-디메틸인돌린-3-카르보니트릴 (50 mg, 0.20 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, CO (g)로 3회 플러싱하였다. 이어서, 혼합물을 100℃에서 CO 분위기 (15 psi) 하에 15시간 동안 교반하였다. 물 (3 mL)을 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 EA (3 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (5 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 목적 분획을 수집하고, DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (5 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물의 혼합물 (40 mg)을 백색 고체로서 수득하였다. 입체이성질체를 SFC 조건 (칼럼: 다이셀 키랄팩 IC (250 mm*30 mm,5 μm); 이동상: [0.1%NH3·H2O IPA]; B%: 20%-20%,5분;85분)에 의해 분리하여 중간체 27 (20 mg, 0.09 mmol)을 백색 고체로서, 및 중간체 28 (15 mg, 0.07 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 27: 키랄 SFC: IC-3-IPA (DEA)-5-40-3 mL-35T.lcm; RT = 1.517분.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 217.1.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 12.39 (br s, 1H), 7.85 - 7.76 (m, 2H), 6.66 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.87 (d, J=10.0 Hz, 1H28 3.44 (d, J=10.0 Hz, 1H), 2.83 (s, 3H), 1.68 (s, 3H) ppm.
중간체 28: 키랄 SFC: IC-3-IPA (DEA)-5-40-3 mL-35T.lcm; RT = 1.608분.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 217.1.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 12.39 (br s, 1H), 7.85 - 7.76 (m, 2H), 6.66 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.87 (d, J=10.0 Hz, 1H), 3.44 (d, J=10.0 Hz, 1H), 2.83 (s, 3H), 1.68 (s, 3H) ppm.
중간체 29 및 30: (R)-5-시아노-5-메틸-6,8-디히드로-5H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산 및 (S)-5-시아노-5-메틸-6,8-디히드로-5H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산
Figure pct00089
단계 1. 5-브로모-N-메톡시-N,2-디메틸니코틴아미드
옥살릴 클로라이드 (12.2 mL, 139 mmol)를 DCM (100 mL) 중 5-브로모-2-메틸-피리딘-3-카르복실산 (10 g, 46.29 mmol) 및 DMF (0.036 mL, 0.46 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 DCM (100 mL) 중에 용해시켰다. 유기 용액을 DCM (50 mL) 중 N-메톡시메탄아민 (6.77 g, 69.4 mmol, HCl 염) 및 DIEA (40.3 mL, 231 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (500 mL)에 붓고, DCM (500 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:0에서 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (11.5 g, 44.4 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 259.0.
단계 2. 1-(5-브로모-2-메틸피리딘-3-일)에테논
메틸마그네슘 브로마이드 (3 M, 21.2 mL)를 0℃에서 THF (100 mL) 중 5-브로모-N-메톡시-N,2-디메틸니코틴아미드 (11 g, 42.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (400 mL)에 붓고, EA (400 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:0에서 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (9 g, 41.5 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 214.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.66 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.60 (s, 3H) ppm.
단계 3. 2-(5-브로모-2-메틸피리딘-3-일)프로판니트릴
tBuOK (9.23 g, 82.2 mmol)를 0℃에서 DME (400 mL) 및 EtOH (16 mL) 중 1-(5-브로모-2-메틸피리딘-3-일)에테논 (8 g, 37.4 mmol) 및 1-(이소시아노메틸술포닐)-4-메틸벤젠 (11.0 g, 56.1 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (400 mL)에 부었다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 DME 및 EtOH를 제거하였다. 수성 상을 EA (400 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:0에서 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (7 g, 31.1 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI)3m/z: [79BrM+H]+ = 225.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.55 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.03 - 3.98 (m, 1H), 2.57 (s, 3H), 1.66 (d, J = 7.2 Hz, 3H) ppm.
단계 4. 2-(5-브로모-2-메틸피리딘-3-일)-3-히드록시-2-메틸프로판니트릴
파라포름알데히드 (1.12 g, 37.3 mmol)를 DMSO (60 mL) 중 2-(5-브로모-2-메틸피리딘-3-일)프로판니트릴 (7 g, 31.1 mmol) 및 NaHCO3 (261 mg, 3.11 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (400 mL)에 붓고, EA (400 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:0에서 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (7.5 g, 29.4 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 255.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.54 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.14 - 4.09 (m, 1H), 3.96 - 3.92 (m, 1H), 2.80 (s, 3H), 2.69 - 2.66 (m, 1H), 1.81 (s, 3H) ppm.
단계 5. 2-(5-브로모-2-(브로모메틸)피리딘-3-일)-3-히드록시-2-메틸프로판니트릴
NBS (1.40 g, 7.84 mmol) 및 AIBN (64.4 mg, 0.39 mmol)을 MeCN (10 mL) 중 2-(5-브로모-2-메틸피리딘-3-일)-3-히드록시-2-메틸프로판니트릴 (1 g, 3.92 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:0에서 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.25 g, 0.76 mmol)을 갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 335.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.71 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.00 - 4.85 (m, 2H), 4.21 - 4.06 (m, 2H), 2.24 - 2.21 (m, 1H), 1.89 (s, 3H) ppm.
단계 6. 3-브로모-5-메틸-6,8-디히드로-5H-피라노[3,4-b]피리딘-5-카르보니트릴
탄산칼륨 (1.61 g, 11.7 mmol)을 DMF (65 mL) 중 2-(5-브로모-2-(브로모메틸)피리딘-3-일)-3-히드록시-2-메틸프로판니트릴 (1.3 g, 3.89 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (300 mL)에 붓고, EA (300 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: PE:EA = 1:0에서 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (350 mg, 1.27 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 253.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.59 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.85 - 4.76 (m, 2H), 4.12 - 3.94 (m, 2H), 1.75 (s, 3H) ppm.
단계 7. (R)-5-시아노-5-메틸-6,8-디히드로-5H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산 및 (S)-5-시아노-5-메틸-6,8-디히드로-5H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산
DMSO (3 mL) 중 3-브로모-5-메틸-6,8-디히드로-5H-피라노[3,4-b]피리딘-5-카르보니트릴 (270 mg, 1.07 mmol), dccp·2HBF4 (65.3 mg, 0.11 mmol), Pd(OAc)2 (23.9 mg, 0.11 mmol), H2O (0.038 mL), 및 K2CO3 (221 mg, 1.60 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, CO (g)로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 CO 분위기 (15 psi) 하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 물 (80 mL)에 붓고, EA (30 mL x 2)로 추출하였다. EA 상을 버렸다. 수성 상을 수성 HCl (1 M)을 사용하여 pH = 5로 조정하였다. 수성 상을 EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물의 혼합물 (130 mg, 0.57 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다. 입체이성질체를 키랄 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 AD (250 mm*30 mm,10 μm); 이동상: [0.1% NH3·H2O MEOH]; B%: 30%-30%, 4.2분; 55분)에 의해 분리하여 중간체 29 (55 mg, 0.24 mmol)를 황색 고체로서, 및 중간체 30 (50 mg, 0.22 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
중간체 29: 키랄 SFC: AD-3-MeOH(DEA)-5-40-3 mL-35T.lcm; RT = 1.055분.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 219.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 8.99 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.96 - 4.75 (m, 2H), 4.26 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 3.92 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 1.70 (s, 3H).
중간체 30: 키랄 SFC: AD-3-MeOH(DEA)-5-40-3 mL-35T.lcm; RT = 1.666분.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 219.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 8.99 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.96 - 4.75 (m, 2H), 4.26 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 3.92 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 1.70 (s, 3H).
중간체 31 및 32: (4S)-4-(히드록시메틸)-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 및 (4R)-4-(히드록시메틸)-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산
Figure pct00090
단계 1. 6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-카르복실산
수산화칼륨 (수성, 9 M, 5.29 mL)을 EtOH (12 mL) 중 6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-카르보니트릴 (1.2 g, 4.76 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 버리고, 수성 상을 1 N HCl을 사용하여 pH = 4로 조정하였다. 수성 층을 EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (60 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (800 mg, 2.95 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.11 - 12.45 (m, 1H), 7.52 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.03 (d, J =8.4 Hz, 1H), 4.75 - 4.62 (m, 2H), 4.16 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.59 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 1.41 (s, 3H).
단계 2. (6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-일)메탄올
6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-카르복실산 (800 mg, 2.95 mmol)을 0℃에서 BH3·THF (1 M, 8.85) 중에 용해시키고, 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 1 N HCl (25 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, EA (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 FCC (용리액: DCM:MeOH = 100:1에서 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (400 mg, 1.56 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.47 (d, J = 2.0, 1H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H),4.79 - 4.68 (m, 2H), 4.05 (d, J = 11.6 z, 1H), 3.82 - 3.75 (m, 1H), 3.71 - 3.63 (m, 1H), 3.53 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.21 (s, 3H).
단계 3. 4-(히드록시메틸)-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산
물 (1 mL), K2CO3 (185 mg, 1.34 mmol), Pd(OAc)2 (20.1 mg, 0.089 mmol), 및 dccp·2HBF4 (110 mg, 0.18 mmol)를 DMSO (5 mL) 중 (6-브로모-4-메틸-이소크로만-4-일)메탄올 (230 mg, 0.89 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 CO (g)로 3회 퍼징하고, 생성된 혼합물을 CO 분위기 (15 psi) 하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고, EA (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 버리고, 수성 층을 HCl (1 N)을 사용하여 pH = 4로 조정하였다. 수성 층을 EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (60 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물의 혼합물 (150 mg, 0.62 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다. 입체이성질체를 키랄 SFC (칼럼:다이셀 키랄팩 IG (250 mm x 30 mm,10 μm); 이동상: [0.1%NH3-H2O IPA];B%: 25%-25%,6.65분;66분)에 의해 분리하였다. 이동상을 감압 하에 농축시켜 대부분의 MeOH를 제거하였다. 물 (40 mL)을 첨가하고, 각각의 목적 화합물 혼합물을 동결건조시켜 중간체 31 (44 mg, 0.20 mmol)을 회백색 고체로서, 및 중간체 32 (48 mg, 0.21 mmol)를 회백색 고체로서 수득하였다.
중간체 31:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.02 - 12.77 (m, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.72 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H),4.88 - 4.87 (m, 1H), 4.74 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.90 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.58 - 3.50 (m, 1H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 1.14 (s,3H).
중간체 32:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.02 - 12.77 (m, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.72 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H),4.88 - 4.87 (m, 1H), 4.74 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.90 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.58 - 3.50 (m, 1H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 1.14 (s,3H).
중간체 33: 2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-1(2H)-온
Figure pct00091
단계 1: 2-메틸-2,6-나프티리딘-1(2H)-온
DMF (10 mL) 중 2,6-나프티리딘-1(2H)-온 (200 mg, 1.37 mmol)의 혼합물에 30℃에서 Cs2CO3 (668.82 mg, 2.05 mmol) 및 MeI (291.36 mg, 2.05 mmol, 127.79 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고, DCM (10 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (DCM/MeOH = 20/1, Rf = 0.4)에 의해 정제하여 표제 화합물 (160 mg, 946.72 umol, 69.18% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 161.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.98 (s, 1H), 8.69 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H) ppm.
단계 2: 2-벤질-6-메틸-5-옥소-5,6-디히드로-2,6-나프티리딘-2-윰 브로마이드
EtOH (0.5 mL) 중 2-메틸-2,6-나프티리딘-1(2H)-온 (50 mg, 312.16 umol)의 혼합물을 70℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 벤질 브로마이드 (720.00 mg, 4.21 mmol, 0.5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 MTBE (10 mL)로 처리하고, 여과하였다. 필터 케이크를 감압 하에 건조시켜 표제 화합물 (130 mg, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.87 (s, 1H), 8.98 - 8.97 (m, 1H), 8.68 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.59 - 7.42 (m, 5H), 6.96 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.96 (s, 2H), 3.60 (s, 3H) ppm.
단계 3: 6-벤질-2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-1(2H)-온
MeOH (1 mL) 중 2-벤질-6-메틸-5-옥소-5,6-디히드로-2,6-나프티리딘-2-윰 브로마이드 (70 mg, 211.35 umol)의 혼합물에 NaBH4 (39.98 mg, 1.06 mmol)를 0℃에서 여러 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 1 M HCl 수용액 (5 mL)에 붓고, 포화 NaHCO3을 사용하여 pH=8로 염기성화시켰다. 혼합물을 EA (10 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (35 mg, 137.62 umol, 65.1% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 255.3.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.40 - 7.28 (m, 5H), 7.07 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.69 (s, 2H), 3.52 (s, 3H), 3.39 (s, 2H), 2.79 - 2.64 (m, 4H) ppm.
단계 4: 2-메틸-2,6-나프티리딘-1(2H)-온
MeOH (1 mL) 중 6-벤질-2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-1(2H)-온 (35 mg, 137.62 umol)의 혼합물에 TFA (31.38 mg, 275.24 umol, 20.38 uL) 및 Pd/C (20 mg, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 H2로 3회 퍼징하고, H2 (15 psi) 하에 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 모액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (30 mg, 107.83 umol, 78.4% 수율, TFA 염)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 165.1.
중간체 34: 1-브로모-4-시클로부틸-2-메톡시벤젠
Figure pct00092
단계 1: 1-(4-브로모-3-메톡시페닐)시클로부탄-1-올
THF (25 mL) 중 1-브로모-4-아이오도-2-메톡시-벤젠 (2.4 g, 7.67 mmol, 5.41 mL)의 혼합물에 i-PrMgCl-LiCl (1.3 M, 6.19 mL)을 -40℃에서 적가하였다. 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 시클로부타논 (591.30 mg, 8.44 mmol)을 -40℃에서 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl (200 mL)에 붓고, EA (150 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (250 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1에서 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.9 g, 6.65 mmol, 86.71% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+=211.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.98-6.96 (m, 1H),4.14-4.12 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.61 - 2.48 (m, 2H), 2.43 - 2.30 (m, 2H), 2.12 - 1.97 (m, 3H), 1.80 - 1.68 (m, 1H) ppm
단계 2: 1-브로모-4-시클로부틸-2-메톡시벤젠
DCM (20 mL) 중 1-(4-브로모-3-메톡시페닐)시클로부탄-1-올 (400 mg, 1.56 mmol)의 혼합물에 0℃에서 Et3SiH (1.81 g, 15.56 mmol) 및 TFA (1.77 g, 15.56 mmol)를 첨가한 다음, 혼합물을 25℃에서 8시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM (150 mL)으로 희석한 다음, 포화 NaHCO3 (100 mL * 2)으로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 (150 mg, 622.09 umol, 39.99% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.78 - 6.68 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.55 - 3.47 (m, 1H), 2.39 - 2.32 (m, 2H), 2.15 - 2.07(m, 2H), 2.06-1.98 (m, 1H), 1.90 - 1.85 (m, 1H) ppm
중간체 35: 4-브로모-7-플루오로-1,2-디메틸-1H-인돌
Figure pct00093
단계 1: 4-브로모-7-플루오로-2-메틸-1H-인돌
THF (20 mL) 중 4-브로모-1-플루오로-2-니트로-벤젠 (2 g, 9.09 mmol, 1.12 mL)의 혼합물에 N2 하에 -40℃에서 브로모 (이소프로페닐)마그네슘 (0.5 M, 72.73 mL)을 적가하였다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl (100 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (50 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL*1)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (500 mg, 2.19 mmol, 24.12% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 2: 4-브로모-7-플루오로-1,2-디메틸-1H-인돌
THF (1 mL) 중 4-브로모-7-플루오로-2-메틸-1H-인돌 (80 mg, 350.78 umol)의 용액에 NaH (28.06 mg, 701.57 umol, 60% 순도)를 0℃에서 첨가하고, 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, MeI (149.37 mg, 1.05 mmol)를 0℃에서 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (10 mL)로 희석하고, EA (10 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (60 mg, 247.84 umol, 70.65% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.08 - 7.06 (m 1H), 6.71 - 6.66 (m, 1H), 6.30 - 6.29 (m, 1H), 3.87 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 2.41(s, 3H) ppm.
중간체 36: 4-브로모-2-에틸-1-메틸-1H-인돌
Figure pct00094
단계 1: 4-브로모-1-토실-1H-인돌
DMF (10 mL) 중 4-브로모-1H-인돌 (1 g, 5.10 mmol, 641.03 uL)의 용액에 NaH (244.82 mg, 6.12 mmol, 60% 순도)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 N2 분위기 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드 (1.16 g, 6.08 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl (30 mL)에 붓고, EA (40 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.6 g, 4.02 mmol, 78.73% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.99 - 7.93 (m, 2H), 7.89 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.49 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.29 - 7.27 (m, 1H), 6.77 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 2.31 (s, 3H) ppm.
단계 2: 4-브로모-2-에틸-1-토실-1H-인돌
THF (12 mL) 중 4-브로모-1-토실-1H-인돌 (1.2 g, 3.43 mmol)의 용액에 N2 하에 -20℃에서 LDA (2 M, 2.06 mL)를 첨가하고, 혼합물을 N2 분위기 하에 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 아이오도에탄 (801.58 mg, 5.14 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고, EA (40 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (220 mg, 581.58 umol, 16.97% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.15 - 7.10 (m, 1H), 6.47 (s, 1H), 3.06 - 3.01 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 1.39 - 1.35 (m, 3H) ppm.
단계 3: 4-브로모-2-에틸-1H-인돌
MeOH (60 mL) 중 4-브로모-2-에틸-1-토실-1H-인돌 (220.00 mg, 581.58 umol)의 용액에 KOH (1.63 g, 29.08 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 2 N HCl (20 mL)로 처리하고, EA (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (100 mg, 446.24 umol, 76.73% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.09 - 7.95 (m, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.03 - 6.92 (m, 1H), 6.32 (s, 1H), 2.84 - 2.79 (m, 2H), 1.40 - 1.36 (m, 3H) ppm.
단계 4: 4-브로모-2-에틸-1-메틸-1H-인돌
DMF (2 mL) 중 4-브로모-2-에틸-1H-인돌 (150 mg, 669.35 umol)의 용액에 NaH (40.16 mg, 1.00 mmol, 60% 순도)를 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 아이오도메탄 (114.01 mg, 803.22 umol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl (30 mL)에 붓고, EA (40 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (150 mg, 629.93 umol, 94.11% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 37: 4-클로로-2-시클로프로필-1-메틸-1H-인돌
Figure pct00095
단계 1: 3-클로로-2-(시클로프로필에티닐)아닐린
MeCN (40 mL) 중 3-클로로-2-아이오도-아닐린 (2 g, 7.89 mmol) 및 에티닐시클로프로판 (521.57 mg, 7.89 mmol)의 혼합물에 TEA (7.98 g, 78.91 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (553.84 mg, 789.06 umol) 및 CuI (150.28 mg, 789.06 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, N2 3회 퍼징하고, 혼합물을 N2 분위기 하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, EA (30 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1에서 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.3 g, 6.78 mmol, 85.96% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 6.97 - 6.95 (m, 1H), 6.59 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.50 (s, 2H), 1.63 - 1.61 (m, 1H), 0.95 - 0.86 (m, 2H), 0.83 - 0.76 (m, 2H) ppm.
단계 2: 4-클로로-2-시클로프로필-1H-인돌
DMF (10 mL) 중 3-클로로-2-(시클로프로필에티닐)아닐린 (1 g, 5.22 mmol)의 용액에 CuI (2.98 g, 15.65 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, EA (30 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (600 mg, 2.71 mmol, 52.01% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 191.9.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.37 - 7.67 (m, 1H), 7.18 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.11 - 6.98 (m, 2H), 6.25 (s, 1H), 2.03 - 1.87 (m, 1H), 1.08 - 0.95 (m, 2H), 0.89 - 0.72 (m, 2H) ppm.
단계 3: 4-클로로-2-시클로프로필-1-메틸-1H-인돌
DMF (2 mL) 중 4-클로로-2-시클로프로필-1H-인돌 (180 mg, 939.18 umol)의 용액에 NaH (56.35 mg, 1.41 mmol, 60% 순도)를 0℃에서 N2 하에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 N2 분위기 하에 교반하였다. 이어서, 아이오도메탄 (199.96 mg, 1.41 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl (30 mL)에 붓고, EA (40 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (190 mg, 864.18 umol, 92.01% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 206.0.
중간체 38: 4-브로모-3-(디플루오로메틸)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
Figure pct00096
단계 1: 1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸-3-카르브알데히드
DMF (200 mL) 중 1H-피라졸-3-카르브알데히드 (10 g, 104.07 mmol) 및 Cs2CO3 (67.82 g, 208.14 mmol)의 혼합물에 3-아이오도옥세탄 (28.72 g, 156.11 mmol)을 첨가한 다음, 혼합물을 60℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1000 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 생성된 혼합물을 EA (400 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (3.1 g, 20.37 mmol, 19.58% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 10.01 (s, 1H), 7.63 - 7.62 (m, 1H), 6.86 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.57 - 5.50 (m, 1H), 5.09 (d, J = 6.4 Hz, 4H) ppm.
단계 2: 3-(디플루오로메틸)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
DCM (12 mL) 중 1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸-3-카르브알데히드 (600 mg, 3.94 mmol)의 혼합물에 -50℃에서 DAST (1.91 g, 11.83 mmol, 1.56 mL)를 첨가한 다음, 혼합물을 5℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NaHCO3 (100 mL)에 붓고, EA (50 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (40 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 EA (150 mL * 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 (150 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (170 mg, 898.09 umol, 22.77% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 175.1
단계 3: 4-브로모-3-(디플루오로메틸)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
MeCN (4 mL) 중 3-(디플루오로메틸)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸 (170 mg, 976.18 umol)의 혼합물에 NBS (191.12 mg, 1.07 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1에서 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (200 mg, 735.05 umol, 75.30% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [81BrM+H]+ = 255.0
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 7.68 (s, 1H), 6.84 - 6.58 (m, 1H), 5.46-5.51 (m, 1H), 5.07 - 4.99 (m, 4H) ppm
중간체 39: 4-브로모-3-(2,2-디플루오로에틸)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
Figure pct00097
단계 1: 3-(2,2-디플루오로비닐)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
DMF (10 mL) 중 1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸-3-카르브알데히드 (1 g, 6.57 mmol) 및 나트륨 2-클로로-2,2-디플루오로아세테이트 (1.50 g, 9.86 mmol)의 혼합물에 PPh3 (2.59 g, 9.86 mmol)을 N2 하에 첨가한 다음, 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (250 mL)로 희석하고, EA (150 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (150 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (700 mg, 3.12 mmol, 47.49% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 187.1
단계 2: 3-(2,2-디플루오로에틸)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
MeOH (10 mL) 및 EA (10 mL) 중 3-(2,2-디플루오로비닐)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸 (250 mg, 1.34 mmol)의 혼합물에 Pd/C (100 mg, 1.34 mmol, 10% 순도)를 H2 (15 psi) 하에 첨가한 다음, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (230 mg, 조 물질)을 무색 오일로서 수득하고, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 189.1
단계 3: 4-브로모-3-(2,2-디플루오로에틸)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
MeCN (4 mL) 중 3-(2,2-디플루오로에틸)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸 (210 mg, 1.12 mmol) 및 NBS (218.49 mg, 1.23 mmol)의 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (150 mg, 544.80 umol, 48.82% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [81BrM+H]+ = 269.0
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 7.61 (s, 1H), 6.280 - 5.97 (m, 1H), 5.40 - 5.36 (m, 1H), 5. 50 - 4.98 (m, 4H), 3.27-3.17 (m, 2H) ppm
중간체 40: 4-브로모-3-플루오로-1-메틸-1H-인돌
Figure pct00098
단계 1: 4-브로모-3,3-디플루오로인돌린-2-온
DCM (10 mL) 중 4-브로모인돌린-2,3-디온 (1 g, 4.42 mmol)의 용액에 N2 하에 0℃에서 DAST (1.78 g, 11.06 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (30 mL)에 붓고 DCM (30 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1 g, 4.03 mmol, 91.13% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.41 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 7.6 Hz, 1H) ppm.
단계 2: 4-브로모-3-플루오로-1H-인돌
THF (2 mL) 중 NaBH4 (91.52 mg, 2.42 mmol)의 혼합물에 BF3·Et2O (343.34 mg, 2.42 mmol)를 0℃에서 N2 하에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 THF (2 mL) 중 4-브로모-3,3-디플루오로인돌린-2-온 (200 mg, 806.37 umol)의 용액에 N2 하에 0℃에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 16시간 후, THF (2 mL) 중 NaBH4 (152.54 mg, 4.03 mmol)의 용액에 BF3·Et2O (572.23 mg, 4.03 mmol)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 이 혼합물을 0℃에서 이전 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 추가로 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 2 N HCl의 첨가에 의해 켄칭하고, H2O (30 mL)로 희석하고, EA (40 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1에서 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (100 mg, 420.07 umol, 52.09% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.18 (s, 1H), 7.46 - 7.45 (m, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 1H), 7.22 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.10 - 7.01 (m, 1H) ppm.
단계 3: 4-브로모-3-플루오로-1-메틸-1H-인돌
DMF (1 mL) 중 4-브로모-3-플루오로-1H-인돌 (100 mg, 467.22 umol)의 용액에 NaH (28.03 mg, 700.82 umol, 60% 순도)를 0℃에서 N2 하에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 아이오도메탄 (79.58 mg, 560.66 umol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl (30 mL)에 붓고, EA (40 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (60 mg, 263.09 umol, 56.31% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.56 - 7.44 (m, 2H), 7.25 (d, J =7.6 Hz, 1H), 7.16 - 7.06 (m, 1H), 3.74 (s, 3H) ppm.
중간체 41: 4-브로모-2-(디플루오로메틸)-1-메틸-1H-인돌
Figure pct00099
단계 1: (4-브로모-1H-인돌-2-일)메탄올
THF (20 mL) 중 4-브로모-1H-인돌-2-카르복실산 (2 g, 8.33 mmol)의 용액에 N2 하에 0℃에서 LiAlH4 (948.65 mg, 24.99 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O의 첨가에 의해 켄칭하고, 혼합물을 HCl (2 N)을 사용하여 pH=2로 조정하고, EA (30 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (60 mL*2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH=100:1-10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1 g, 4.24 mmol, 50.86% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 235.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 11.40 (s, 1H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.16 - 7.15 (m, 1H), 6.98 - 6.94 (m, 1H), 6.25 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.34 - 5.31 (m, 1H), 4.61 (d, J = 5.6 Hz, 2H) ppm.
단계 2: 4-브로모-1H-인돌-2-카르브알데히드
DCM (3 mL) 중 (4-브로모-1H-인돌-2-일)메탄올 (300 mg, 1.33 mmol)의 용액에 0℃에서 데스-마르틴 (675.42 mg, 1.59 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (30 mL)에 붓고, DCM (30 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (297 mg, 조 물질)을 갈색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
단계 3: 4-브로모-2-(디플루오로메틸)-1H-인돌
DCM (3 mL) 중 4-브로모-1H-인돌-2-카르브알데히드 (290 mg, 1.29 mmol)의 용액에 0℃에서 DAST (625.90 mg, 3.88 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (30 mL)에 붓고, DCM (30 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (110 mg, 408.13 umol, 31.53% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.56 (s, 1H), 7.40 - 7.35 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 1H), 7.05 - 6.68 (m, 2H) ppm.
단계 4: 4-브로모-2-(디플루오로메틸)-1-메틸-1H-인돌
DMF (1 mL) 중 4-브로모-2-(디플루오로메틸)-1H-인돌 (110 mg, 447.06 umol)의 용액에 0℃에서 NaH (26.82 mg, 670.59 umol, 60% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, N2로 3회 퍼징하고, N2 분위기 하에 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 아이오도메탄 (69.80 mg, 491.77 umol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl (30 mL)에 붓고, EA (40 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (110 mg, 422.95 umol, 94.61% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 261.9.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.20 (m, 4H), 6.80 (s, 1H), 3.86 (s, 3H) ppm.
중간체 42: 4-브로모-1-(2,2-디플루오로시클로프로필)-3-메톡시-1H-피라졸
Figure pct00100
단계 1: 3-메톡시-1-비닐-1H-피라졸
DCE (10 mL) 중 3-메톡시-1H-피라졸 (500 mg, 5.10 mmol), 칼륨 트리플루오로(비닐)보레이트 (1.02 g, 7.65 mmol), Cu(OAc)2 (1.02 g, 5.61 mmol), Na2CO3 (1.19 g, 11.21 mmol) 및 2,2'-비피리딜 (875.60 mg, 5.61 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, O2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 O2 분위기 하에 교반하였다. 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, EA (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 25 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~20% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 50 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (400 mg, 3.22 mmol, 63.22% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [ M+H]+ = 125.0
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 7.33 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.94 - 6.72 (m, 1H), 5.78 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.44 - 5.32 (m, 1H), 4.67 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H) ppm.
단계 2: 1-(2,2-디플루오로시클로프로필)-3-메톡시-1H-피라졸
THF (5 mL) 중 3-메톡시-1-비닐-1H-피라졸 (400 mg, 3.22 mmol)의 혼합물에 NaI (169.04 mg, 1.13 mmol)를 첨가하였다. 이어서, TMSCF3 (1.60 g, 11.28 mmol)을 N2 하에 80℃에서 천천히 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 30분 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 25 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~20% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 50 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (200 mg, 1.15 mmol, 35.64% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [ M+H]+ = 175.0
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 7.32 - 7.13 (m, 1H), 5.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.91 - 3.83 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.08 - 1.99 (m, 1H), 1.97 - 1.88 (m, 1H) ppm.
단계 3: 4-브로모-1-(2,2-디플루오로시클로프로필)-3-메톡시-1H-피라졸
MeCN (5 mL) 중 1-(2,2-디플루오로시클로프로필)-3-메톡시-1H-피라졸 (100 mg, 574.22 umol)의 혼합물에 NBS (112.42 mg, 631.65 umol)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 20 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~20% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 50 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (120 mg, 474.23 umol, 82.59% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 253.0
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 7.34 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.94 - 3.88 (m, 1H), 2.15 - 1.97 (m, 2H) ppm.
중간체 43:1-(4-브로모-3-메톡시페닐)아제티딘
Figure pct00101
단계 1: 1-(4-브로모-3-메톡시페닐)아제티딘
톨루엔 (5 mL) 중 1-브로모-4-아이오도-2-메톡시-벤젠 (500 mg, 1.60 mmol) 및 아제티딘 (91.35 mg, 1.60 mmol)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (146.52 mg, 160.00 umol), Xantphos (185.16 mg, 320.00 umol) 및 Cs2CO3 (1.56 g, 4.80 mmol)을 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)에 천천히 첨가하고, EA (50 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA=10:1-1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (150 mg, 619.55 umol, 38.72% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z= [M+H]+ = 242.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.25 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.06 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.93-5.90 (m, 1H), 3.81 - 3.78 (m, 7H), 2.32-2.24 (m, 2H) ppm.
중간체 44: 1-브로모-4-(tert-부틸)-2-메톡시벤젠
Figure pct00102
단계 1: 2-브로모-5-(tert-부틸)페놀
DCM (50 mL) 중 3-tert-부틸페놀 (5 g, 33.29 mmol)의 용액에 DCM (25 mL) 중 Br2 (5.59 g, 34.95 mmol, 1.80 mL)의 용액을 0℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 포화 Na2SO3 (200 mL)에 붓고, DCM (100 mL * 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (8 g, 조 물질)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.98 (s, 1H), 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.77-6.74 (m, 1H), 1.22 (s, 9H) ppm.
단계 2: 1-브로모-4-(tert-부틸)-2-메톡시벤젠
THF (5 mL) 중 2-브로모-5-(tert-부틸)페놀 (1 g, 4.36 mmol)의 용액에 t-BuOK (494.66 mg, 4.41 mmol), 및 이어서 MeI (631.90 mg, 4.45 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, EA (100 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (750 mg, 3.08 mmol, 70.67% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.07 - 7.04 (m, 1H), 6.91-6.88 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.28 (s, 9H) ppm
중간체 45: 4-브로모-3-(디플루오로메톡시)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
Figure pct00103
단계 1: 1-(3-히드록시-1H-피라졸-1-일)에탄-1-온
피리딘 (15 mL) 중 1H-피라졸-3-올 (3 g, 35.68 mmol)의 용액에 피리딘 (6 mL) 중 Ac2O (3.82 g, 37.47 mmol, 3.51 mL)의 용액을 95℃에서 30분에 걸쳐 첨가한 다음, 혼합물을 95℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 MeOH (20 mL)로 연화처리하여 표제 화합물 (3.8 g, 30.13 mmol, 84.45% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 10.97 (s, 1H), 8.12 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 2.47 (s, 3H) ppm.
단계 2: 3-(디플루오로메톡시)-1H-피라졸
DMF (10 mL) 중 1-(3-히드록시-1H-피라졸-1-일)에탄-1-온 (1000 mg, 7.93 mmol) 및 나트륨 2-클로로-2,2-디플루오로아세테이트 (1.45 g, 9.52 mmol)의 혼합물에 K2CO3 (3.29 g, 23.79 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 10시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl (150 mL)에 붓고, EA (100 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (150 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1에서 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (270 mg, 2.01 mmol, 25.39% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 135.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.49 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.41 - 7.04 (m, 1H), 5.97-5.96 (m, 1H) ppm.
단계 3: 3-(디플루오로메톡시)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
DMF (5 mL) 중 3-(디플루오로메톡시)-1H-피라졸 (270 mg, 2.01 mmol), 3-아이오도옥세탄 (555.70 mg, 3.02 mmol)의 혼합물에 Cs2CO3 (1.31 g, 4.03 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 8시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고, EA (50 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (270 mg, 1.18 mmol, 58.53% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 427.1
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 7.41 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.07 - 6.70 (m, 1H), 5.93 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.34 - 5.27 (m, 1H), 5.08 - 4.97 (m, 4H) ppm.
단계 4: 4-브로모-3-(디플루오로메톡시)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸
MeCN (5 mL) 중 3-(디플루오로메톡시)-1-(옥세탄-3-일)-1H-피라졸 (270 mg, 1.42 mmol)의 혼합물에 NBS (278.00 mg, 1.56 mmol)를 첨가한 다음, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1에서 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (300 mg, 1.05 mmol, 73.82% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 269.0
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 7.49 (s, 1H), 7.16 - 6.80 (m, 1H), 5.29 - 5.26 (m, 1H), 5.00 (d, J = 6.0 Hz, 4H) ppm.
중간체 46: 피라졸로[1,5-a]피리딘-2-일 트리플루오로메탄술포네이트
Figure pct00104
단계 1: 피라졸로[1,5-a]피리딘-2-일 트리플루오로메탄술포네이트
DMF (1 mL) 및 THF (1 mL) 중 피라졸로[1,5-a]피리딘-2-올 (200 mg, 1.49 mmol)의 용액에 NaH (65.60 mg, 1.64 mmol, 60% 순도)를 0℃에서 N2 하에 첨가한 다음, 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-(트리플루오로메틸술포닐)메탄술폰아미드 (639.21 mg, 1.79 mmol)를 반응 혼합물에 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)의 첨가에 의해 켄칭한 다음, EA (20 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA=5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (300 mg, 1.06 mmol, 71.05% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 267.1
중간체 47: 3-(4-브로모-3-메톡시페닐)옥세탄
Figure pct00105
단계 1: 3-(4-브로모-3-메톡시페닐)옥세탄
DMA (4 mL) 중 1-브로모-4-아이오도-2-메톡시-벤젠 (500 mg, 1.60 mmol) 및 3-아이오도옥세탄 (352.75 mg, 1.92 mmol)의 혼합물에 N2 하에 25℃에서 염화니켈(II) 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르 착물 (35.11 mg, 159.78 umol), 피리딘-2-카르복스아미딘 히드로클로라이드 (25.18 mg, 159.78 umol), TFA (18.22 mg, 159.78 umol, 11.83 uL), Zn (208.96 mg, 3.20 mmol) 및 NaI (119.75 mg, 798.90 umol)를 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 칼럼 (0.1% FA)으로 정제하였다. 생성물 분획을 농축시켜 MeCN을 제거하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (20 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (200 mg, 668.21 umol, 41.82% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ =242.8, 244.9.
중간체 48: 1-(8-브로모-2,3-디히드로-4H-벤조[b][1,4]옥사진-4-일)에탄-1-온
Figure pct00106
단계 1: N-(3-브로모-2-히드록시페닐)아세트아미드
DCM (10 mL) 중 2-아미노-6-브로모-페놀 (1 g, 5.32 mmol)의 용액에 Ac2O (651.56 mg, 6.38 mmol, 597.76 uL) 및 TEA (1.61 g, 15.96 mmol, 2.22 mL)를 0℃에서 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 25℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 디클로로메탄 (50 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL * 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (300 mg, 1.11 mmol, 20.84% 수율)을 담갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 229.9.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.96 (br s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.59 - 7.53 (m, 1H), 7.32 - 7.28 (m, 1H), 6.80 - 6.72 (m, 1H), 2.24 (s, 3H).
단계 2: 1-(8-브로모-2,3-디히드로-4H-벤조[b][1,4]옥사진-4-일)에탄-1-온
DMF (2 mL) 중 N-(3-브로모-2-히드록시페닐)아세트아미드 (100 mg, 434.67 umol)의 용액에 K2CO3 (180.22 mg, 1.30 mmol) 및 1,2-디브로모에탄 (163.32 mg, 869.35 umol, 65.59 uL)을 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 80℃로 가열하고, 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (5 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (10 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL * 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (SiO2, PE/EA=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (100 mg, 351.43 umol, 26.95% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 255.9
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.77 - 7.67 (m, 1H), 7.33 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.82 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.40 - 4.33 (m, 2H), 3.89 (t, J = 4.5 Hz, 2H), 3.09 (s, 1H), 2.25 (s, 3H)
중간체 49: 7-브로모-5-플루오로-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온
Figure pct00107
단계 1: 3-브로모-N-(2,2-디메톡시에틸)-5-플루오로벤즈아미드
DCM (50 mL) 중 3-브로모-5-플루오로-벤조산 (5 g, 22.83 mmol), 2,2-디메톡시에탄아민 (2.40 g, 22.83 mmol, 2.49 mL)의 용액에 EDCI (8.75 g, 45.66 mmol), HOBt (6.17 g, 45.66 mmol) 및 DIEA (7.38 g, 57.08 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, DCM (30 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (6.1 g, 19.93 mmol, 87.28% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H-OMe]+ = 275.9.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ = 7.84 (s, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 2H), 4.57 - 4.53 (m, 1H), 3.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.40 (s, 6H) ppm.
단계 2: 7-브로모-5-플루오로이소퀴놀린-1(2H)-온 및 5-브로모-7-플루오로이소퀴놀린-1(2H)-온
H2SO4 (34 mL) 중 3-브로모-N-(2,2-디메톡시에틸)-5-플루오로벤즈아미드 (5.6 g, 18.29 mmol)의 용액을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물에 붓고, 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 표제 화합물의 혼합물 (3.5 g, 14.46 mmol, 79.05% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 3: 7-브로모-5-플루오로-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온 및 5-브로모-7-플루오로-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온
THF (15 mL) 중 7-브로모-5-플루오로이소퀴놀린-1(2H)-온 및 5-브로모-7-플루오로이소퀴놀린-1(2H)-온 (1.5 g, 6.20 mmol)의 용액에 0℃에서 KHMDS (1 M, 7.44 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 교반한 다음, 아이오도메탄 (3.52 g, 24.79 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 물 (5 mL)에 붓고, EA (10 mL*3)로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:1, Rf = 0.3)에 의해 정제하여 표제 화합물의 혼합물 (750 mg, 2.93 mmol, 47.26% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 256.1.
단계 4: 7-브로모-5-플루오로-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온
7-브로모-5-플루오로-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온 및 5-브로모-7-플루오로-2-메틸이소퀴놀린-1(2H)-온의 혼합물 (750 mg, 2.93 mmol)을 SFC 분리: {방법 칼럼: 다이셀 키랄팩 AD (250 mm*30 mm,10 um); 이동상: [0.1% NH3H2O MEOH]; B%: 40%-40%,4.25;105분}에 의해 정제하여 표제 화합물 (270 mg, 1.05 mmol, 35.95% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 256.2.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ = 8.22 (s, 1H), 7.67 - 7.63 (m, 1H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H) ppm.
중간체 50: 6-브로모-7-메톡시-1-메틸-1H-인다졸
Figure pct00108
단계 1: 2-브로모-3-(디메톡시메틸)페놀
MeOH (30 mL) 중 2-브로모-3-히드록시벤즈알데히드 (2 g, 9.95 mmol) 및 트리메톡시메탄 (5.28 g, 49.75 mmol, 5.45 mL)의 용액에 TsOH (171.33 mg, 994.94 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 100 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.6 g, 6.48 mmol, 65.08% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 214.9
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 7.29 - 7.24 (m, 1H), 7.23 - 7.18 (m, 1H), 7.07 - 7.02 (m, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.53 (s, 1H), 3.40 (s, 6H) ppm.
단계 2: 2,4-디브로모-3-히드록시벤즈알데히드
CHCl3 (7 mL) 중 2-브로모-3-(디메톡시메틸)페놀 (1.4 g, 5.67 mmol)의 용액에 0℃에서 CHCl3 (7 mL) 중 Br2 (1.18 g, 7.37 mmol, 379.72 uL)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 수성 Na2S2O3 (80 mL)에 의해 켄칭하고, EA (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 25 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 100 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.3 g, 4.64 mmol, 81.97% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [Br M+H]+ = 280.8.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.44 (s, 1H), 10.17 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.83 - 7.65 (m, 1H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H) ppm.
단계 3: 2,4-디브로모-3-메톡시벤즈알데히드
DMF (15 mL) 중 2,4-디브로모-3-히드록시벤즈알데히드 (1.3 g, 4.64 mmol) 및 K2CO3 (1.28 g, 9.29 mmol)의 용액에 MeI (988.80 mg, 6.97 mmol, 433.69 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 물 (60 mL)에 붓고, EA (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 12 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 60 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.2 g, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.17 (s, 1H), 7.89 - 7.82 (m, 1H), 7.53 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H) ppm.
단계 4: (E)-1-(2,4-디브로모-3-메톡시벤질리덴)-2-메틸히드라진
EtOH (5 mL) 중 2,4-디브로모-3-메톡시벤즈알데히드 (500 mg, 1.70 mmol) 및 메틸히드라진 (391.84 mg, 3.40 mmol, 447.82 uL)의 용액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (80 mL)에 붓고, EA (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 12 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~50% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 60 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (250 mg, 776.41 umol, 45.64% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [Br M+H]+ = 322.8.
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 7.72 (s, 1H), 7.58 - 7.51 (m, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 5.90 (br s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.02 (s, 3H) ppm.
단계 5: 6-브로모-7-메톡시-1-메틸-1H-인다졸
DMF (4 mL) 중 (E)-1-(2,4-디브로모-3-메톡시벤질리덴)-2-메틸히드라진 (230 mg, 714.29 umol)의 용액에 K2CO3 (296.16 mg, 2.14 mmol) 및 CuI (13.60 mg, 71.43 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (40 mL)을 첨가하고, 생성물을 EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 12 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60%에틸아세테이트/석유 에테르구배의 용리액, 40 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (120 mg, 497.75 umol, 69.68% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [Br M+H]+ = 242.9.
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 7.98 (s, 1H), 7.41 - 7.35 (m, 1H), 7.30 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.33 (s, 3H), 4.05 (s, 3H) ppm.
중간체 51: 2-(3-메틸옥세탄-3-일)피리미딘-4-일 트리플루오로메탄술포네이트
Figure pct00109
단계 1: 4-(벤질옥시)-2-클로로피리미딘
THF (80 mL) 중 페닐메탄올 (29.03 g, 268.50 mmol, 27.92 mL) 및 t-BuOK (15.06 g, 134.25 mmol)의 혼합물을 70℃로 가열하고, 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서 DMF (100 mL) 중 2,4-디클로로피리미딘 (20 g, 134.25 mmol)의 용액에 천천히 적가하였다. 0.5시간 동안 교반한 후, 반응물을 25℃로 가온되도록 하고, 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (150 mL)에 적가하였고, 백색 고체가 형성되었다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 표제 화합물 (22 g, 84.75 mmol, 63.13% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 221.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.49 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.50 - 7.46 (m, 2H), 7.42 - 7.35 (m, 3H), 7.06 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.41 (s, 2H) ppm.
단계 2: 4-(벤질옥시)-2-(옥세탄-3-일)피리미딘
DMA (400 mL) 중 4-(벤질옥시)-2-클로로피리미딘 (20 g, 90.64 mmol) 및 3-아이오도옥세탄 (20.01 g, 108.77 mmol)의 혼합물에 25℃에서 염화니켈(II) 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르 착물 (1.99 g, 9.06 mmol), 피리딘-2-카르복스아미딘 히드로클로라이드 (1.43 g, 9.06 mmol), TFA (1.03 g, 9.06 mmol, 671.08 uL), Zn (11.85 g, 181.28 mmol) 및 NaI (6.79 g, 45.32 mmol)를 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, H2O (800 mL)에 붓고, EA (800 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (800 mL) 및 염수 (800 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (용리액: 0~20% EA/석유 에테르 구배)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1 g, 2.48 mmol, 2.73% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 243.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.61 - 8.47 (m, 1H), 7.49 - 7.31 (m, 5H), 7.14 - 6.84 (m, 1H), 5.49 - 5.38 (m, 2H), 4.96 - 4.66 (m, 4H), 4.37 (d, J = 8.8 Hz, 1H) ppm.
단계 3: 4-(벤질옥시)-2-(3-메틸옥세탄-3-일)피리미딘
THF (4 mL) 중 4-(벤질옥시)-2-(옥세탄-3-일)피리미딘 (1 g, 4.13 mmol)의 용액에 -68℃에서 KHMDS (1 M, 6.19 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 -68℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 아이오도메탄 (2.93 g, 20.64 mmol, 1.28 mL)을 -68℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 수성 NH4Cl (40 mL)로 켄칭하고, EA (40 mL*3)로 추출하였다. 합한 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0에서 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (220 mg, 858.37 umol, 20.80% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 257.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.53 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.50 - 7.44 (m, 2H), 7.43 - 7.32 (m, 3H), 6.86 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 4.96 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.66 (s, 3H) ppm.
단계 4: 2-(3-메틸옥세탄-3-일)피리미딘-4-올
MeOH (15 mL) 중 4-(벤질옥시)-2-(3-메틸옥세탄-3-일)피리미딘 (200 mg, 780.34 umol)의 용액에 Pd/C (40 mg, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, H2 풍선으로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 H2 분위기 (15 psi) 하에 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 여과하여 Pd/C를 제거하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (110 mg, 661.95 umol, 84.83% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 167.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.89 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.19 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.89 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.38 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.61 (s, 3H) ppm.
단계 5: 2-(3-메틸옥세탄-3-일)피리미딘-4-일 트리플루오로메탄술포네이트
DCM (1 mL) 중 2-(3-메틸옥세탄-3-일)피리미딘-4-올 (50 mg, 300.88 umol) 및 DIEA (116.66 mg, 902.65 umol, 157.22 uL)의 용액에 0℃에서 Tf2O (101.87 mg, 361.06 umol, 59.57 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (20 mL)으로 켄칭하고 DCM (20 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (88 mg, 295.07 umol, 98.07% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 299.0.
중간체 52: 4-클로로-2-(1-플루오로시클로프로필)피리미딘
Figure pct00110
단계 1: 메틸 1-플루오로시클로프로판-1-카르복실레이트
DCM (20 mL) 중 1-플루오로시클로프로판카르복실산 (4 g, 38.43 mmol)의 혼합물에 0℃에서 옥살릴 디클로라이드 (7.32 g, 57.65 mmol, 5.05 mL)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시킨 다음, DCM (20 mL) 중에 용해시켰다. 이어서, MeOH (3.69 g, 115.30 mmol, 4.67 mL)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 수성 NaHCO3 (50 mL)의 첨가로 켄칭하고 생성물을 DCM (30 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 25℃에서 농축시켜 표제 생성물 (2 g, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 3.76 (s, 3H), 1.39 - 1.29 (m, 4H) ppm.
단계 2: 1-플루오로시클로프로판-1-카르복스이미드아미드
톨루엔 (30 mL) 중 NH4Cl (4.53 g, 84.67 mmol)의 혼합물에 0℃에서 AlMe3 (2 M, 42.33 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 메틸 1-플루오로시클로프로판-1-카르복실레이트 (2 g, 16.93 mmol)를 상기 혼합물에 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, MeOH (50 mL)를 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 생성물 (2.1 g, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 3: 2-(1-플루오로시클로프로필)피리미딘-4-올
EtOH (30 mL) 중 1-플루오로시클로프로판-1-카르복스이미드아미드 (2.02 g, 19.77 mmol) 및 K2CO3 (5.46 g, 39.54 mmol)의 혼합물에 25℃에서 에틸 (E)-3-에톡시프로프-2-에노에이트 (0.95 g, 6.59 mmol, 951.90 uL)를 첨가하였다. 반응물을 75℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~20% DCM/MeOH 구배의 용리액, 100 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (140 mg, 908.26 umol, 13.78% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [ M+H]+ = 155.1
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 11.80 - 10.90 (m, 1H), 7.85 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.33 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.68 - 1.52 (m, 4H) ppm.
단계 4: 4-클로로-2-(1-플루오로시클로프로필)피리미딘
DCM (1 mL) 중 2-(1-플루오로시클로프로필)피리미딘-4-올 (70 mg, 454.13 umol) 및 DMF (3.32 mg, 45.41 umol, 3.49 uL)의 혼합물에 0℃에서 옥살릴 클로라이드 (63.41 mg, 499.54 umol, 43.73 uL)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 NaHCO3 (30 mL)에 붓고, EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 4 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~50% PE/EA 구배의 용리액, 36 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (35 mg, 202.80 umol, 44.66% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 8.58 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 1.68 - 1.61 (m, 2H), 1.58 - 1.52 (m, 2H) ppm.
중간체 53: 3-(디메틸아미노)피리딘-2(1H)-온
Figure pct00111
단계 1: 2-(벤질옥시)-3-브로모피리딘
THF (50 mL) 중 페닐메탄올 (3.37 g, 31.18 mmol, 3.24 mL)의 혼합물에 NaH (1.25 g, 31.18 mmol, 60% 순도)를 0℃에서 N2 하에 여러 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 혼합물에 3-브로모-2-클로로-피리딘 (5 g, 25.98 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 11.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (300 mL)에 붓고, 생성물을 에틸 아세테이트 (100 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL*1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (5.2 g, 19.69 mmol, 75.78% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다.
단계 2: 2-(벤질옥시)-N,N-디메틸피리딘-3-아민
톨루엔 (10 mL) 중 2-(벤질옥시)-3-브로모피리딘 (500 mg, 1.89 mmol) 및 디메틸아민 히드로클로라이드 (255.62 mg, 5.67 mmol, 287.22 uL)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (86.54 mg, 94.50 umol), BINAP (117.68 mg, 189.00 umol) 및 t-BuONa (908.15 mg, 9.45 mmol)를 N2 하에 25℃에서 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 생성물을 에틸 아세테이트 (10 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL*1)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 15/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (200 mg, 876.08 umol, 46.35% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 3: 3-(디메틸아미노)피리딘-2(1H)-온
2-(벤질옥시)-N,N-디메틸피리딘-3-아민 (100 mg, 438.04 umol) 및 MeOH (2 mL)의 용액에 Pd/C (10 mg, 438.04 umol, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, H2로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 H2 (15 psi) 하에 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (50 mg, 361.88 umol, 82.61% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 139.0
중간체 54: 1-시클로프로필이미다졸리딘-2-온
Figure pct00112
단계 1: 1-(2-클로로에틸)-3-시클로프로필우레아
THF (10 mL) 중 시클로프로판아민 (541.06 mg, 9.48 mmol)의 혼합물에 1-클로로-2-이소시아네이토-에탄 (1 g, 9.48 mmol)을 적가한 다음, 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (1.52 g, 9.35 mmol, 98.63% 수율)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.30 (s, 1H), 6.13 (s, 1H), 3.61 - 3.53 (m, 2H), 3.33 - 3.28 (m, 2H), 2.43 - 2.35(m, 1H), 0.61 - 0.53 (m, 2H), 0.37 - 0.29 (m, 2H) ppm.
단계 2: 1-시클로프로필이미다졸리딘-2-온
THF (50 mL) 중 1-(2-클로로에틸)-3-시클로프로필우레아 (1.5 g, 9.22 mmol)의 혼합물에 0℃에서 NaH (442.76 mg, 11.07 mmol, 60% 순도)를 조금씩 첨가한 다음, 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl (30 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 생성물을 DCM (30 mL * 5)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 20에서 PE (10 mL)로 연화처리하고, 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 표제 화합물 (0.8 g, 6.34 mmol, 68.75% 수율)을 회색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 127.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 6.28 (s, 1H), 3.30 - 3.23 (m, 2H), 3.20 - 3.12 (m, 2H), 2.36 - 2.27 (m, 1H), 0.58 - 0.51 (m, 4H) ppm.
중간체 55: 2-시클로프로필-1,2,5-티아디아졸리딘 1,1-디옥시드
Figure pct00113
단계 1: tert-부틸 (N-시클로프로필술파모일)카르바메이트
DCM (60 mL) 중 황이소시아네이티드산 클로라이드 (5 g, 35.33 mmol, 3.07 mL)의 용액에 0℃에서 2-메틸프로판-2-올 (2.62 g, 35.33 mmol, 3.38 mL)을 첨가하였다. 90분 동안 교반한 후, 생성된 용액 및 DCM (60 mL) 중 TEA (10.91 g, 107.77 mmol)를 DCM (75 mL) 중 시클로프로판아민 (2.02 g, 35.33 mmol, 2.45 mL)의 용액 및 TEA (6.54 g, 64.66 mmol)에 적가하였다. 반응 혼합물을 5℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 물 200 mL에 붓고, DCM (200 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (500 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 PE (100 mL)로 연화처리하고, 고체를 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (2.5 g, 10.58 mmol, 29.95% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.17 (br s, 1H), 5.47 (s, 1H), 2.46 - 2.43 (m, 1H), 1.52 (s, 9H), 0.79 - 0.72 (m, 4H) ppm
단계 2: tert-부틸 5-시클로프로필-1,2,5-티아디아졸리딘-2-카르복실레이트 1,1-디옥시드
아세톤 (3 mL) 중 tert-부틸 (N-시클로프로필술파모일)카르바메이트 (200 mg, 846.42 umol) 및 1,2-디브로모에탄 (182.20 mg, 969.84 umol)의 용액에 K2CO3 (346.34 mg, 2.51 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 생성물을 EA (20 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (120 mg, 457.45 umol, 54.04% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 3.77 - 3.73 (m, 2H), 3.41 - 3.38 (m, 2H), 2.37 - 2.34 (m, 1H), 1.54 (s, 9H), 0.89 - 0.84 (m, 2H), 0.77 - 0.77 (m, 2H) ppm.
단계 3: 2-시클로프로필-1,2,5-티아디아졸리딘 1,1-디옥시드
DCM (1.5 mL) 중 tert-부틸 5-시클로프로필-1,2,5-티아디아졸리딘-2-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (120 mg, 457.45 umol)의 용액에 TFA (1.5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (74 mg, 456.20 umol, 99.73% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 3.52 - 3.45 (m, 4H), 2.35 - 2.28 (m, 1H), 0.82 - 0.79 (m, 2H), 0.74 - 0.72 (m, 2H) ppm.
중간체 56: 3-(디플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피라진 히드로클로라이드
Figure pct00114
단계 1: tert-부틸 3-포르밀-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트
THF (30 mL) 중 tert-부틸 3-브로모-6,7-디히드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-5-카르복실레이트 (3000 mg, 9.93 mmol)의 용액에 N2 하에 -78℃에서 n-BuLi (2.5 M, 8.34 mL)를 첨가하고, -78℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, DMF (798.27 mg, 10.92 mmol, 840.28 uL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 켄칭하고, 생성물을 EA (200 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (400 mg, 1.45 mmol, 14.59% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 252.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.88 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.23 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.93 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 1.51 (s, 9H) ppm
단계 2: tert-부틸 3-(디플루오로메틸)-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트
DCM (8 mL) 중 tert-부틸 3-포르밀-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트 (400 mg, 1.59 mmol)의 용액에 0℃에서 DAST (1.28 g, 7.96 mmol, 1.05 mL)를 첨가하고, 혼합물을 30℃에서 4시간 동안 교반하였다. 추가의 DAST (2.57 g, 15.92 mmol, 2.10 mL)를 혼합물에 첨가하고, 교반을 30℃에서 12시간 동안 계속하였다. 혼합물을 포화 NaHCO3 (200 mL)으로 켄칭하고, EA (200 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 200 (mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA=2:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (250 mg, 850.78 umol, 53.45% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 274.0.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.60 (s, 1H), 6.88 - 6.51 (m, 1H), 4.76 (br s, 2H), 4.21 (br t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.91 (br t, J = 5.2 Hz, 2H), 1.51 (s, 9H) ppm.
단계 3: 3-(디플루오로메틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피라진 히드로클로라이드
4 M HCl/디옥산 (2 mL) 중 tert-부틸 3-(디플루오로메틸)-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트 (100 mg, 365.93 umol)의 용액을 30℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (120 mg, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 57 및 58: (R)-5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산 및 (S)-5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산
Figure pct00115
단계 1: 메틸 5-브로모-2-메틸니코티네이트
MeOH (100 mL) 중 5-브로모-2-메틸니코틴산 (10 g, 46.29 mmol, 1 당량)의 용액에 SOCl2 (8.26 g, 69.43 mmol, 5.04 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온을 달성하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 수성 NaHCO3 (200 mL)에 용해시키고, EA (100 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (8.8 g, 38.25 mmol, 82.63% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [Br M+H]+ = 229.9
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ = 8.66 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.78 (s, 3H) ppm.
단계 2: 메틸 5-브로모-2-(디브로모메틸)니코티네이트
CCl4 (60 mL) 중 메틸 5-브로모-2-메틸니코티네이트 (5.6 g, 24.34 mmol)의 용액에 NBS (4.77 g, 26.78 mmol) 및 AIBN (399.71 mg, 2.43 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (10 g, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 3: 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)니코티네이트
THF (100 mL) 중 메틸 5-브로모-2-(디브로모메틸)니코티네이트 (11 g, 28.36 mmol) 및 DIEA (1.47 g, 11.34 mmol, 1.98 mL)의 용액에 0℃에서 디에틸 포스포네이트 (1.57 g, 11.34 mmol, 1.46 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 물 (300 mL)에 붓고, EA (150 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 120 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~50% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 120 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (7.4 g, 23.95 mmol, 84.46% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [Br M+H]+ = 309.7
단계 4: 메틸 3-브로모-5-히드록시-8H-피라노[3,4-b]피리딘-6-카르복실레이트
DMF (100 mL) 중 메틸 5-브로모-2-(브로모메틸)니코티네이트 (9.9 g, 32.04 mmol) 및 메틸 2-히드록시아세테이트 (5.77 g, 64.09 mmol, 4.93 mL)의 용액에 0℃에서 NaH (2.56 g, 64.09 mmol, 60% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 NaHCO3 (600 mL)에 붓고, EA (200 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (7.6 g, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 5: 3-브로모-6H-피라노[3,4-b]피리딘-5(8H)-온
EtOH (80 mL) 중 메틸 3-브로모-5-히드록시-8H-피라노[3,4-b]피리딘-6-카르복실레이트 (7.6 g, 26.57 mmol)의 용액에 HCl (12 M, 152.00 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 NaHCO3을 사용하여 PH=8로 조정하고, 생성물을 EA (300 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 80 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 60 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (3.3 g, 14.47 mmol, 54.47% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
단계 6: 3-브로모-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-5-올
THF (60 mL) 중 3-브로모-6H-피라노[3,4-b]피리딘-5(8H)-온 (3.3 g, 14.47 mmol) 및 CeCl3 (1.78 g, 7.24 mmol)의 용액에 N2 하에 -50℃에서 MeMgBr (3 M, 14.47 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 물 (150 mL)을 첨가하고, 혼합물을 여과하고, 생성물을 EA (80 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (80 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 80 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (2.9 g, 11.88 mmol, 82.10% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 7: 3-브로모-5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘
DCM (30 mL) 중 3-브로모-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-5-올 (2.9 g, 11.88 mmol)의 용액에 0℃에서 DAST (2.11 g, 13.07 mmol, 1.73 mL)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 NaHCO3 (100 mL)에 붓고, DCM (50 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~60% EA/석유 에테르 구배의 용리액, 100 mL/분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (2.4 g, 9.75 mmol, 82.09% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 8: 5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산
DMSO (40 mL) 중 3-브로모-5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘 (2.4 g, 9.75 mmol), 1,3-비스(디시클로헥실포스피노)프로판 비스(테트라플루오로보레이트) (597.14 mg, 975.31 umol), Pd(OAc)2 (218.97 mg, 975.31 umol), H2O (351.50 mg, 19.51 mmol, 351.50 uL) 및 K2CO3 (2.02 g, 14.63 mmol)의 혼합물을 탈기하고, CO로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 CO 분위기 (15Psi) 하에 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 물 (100 mL)에 붓고, EA (60 mL*2)로 추출하였다. EA 층을 버렸다. 수성 상을 수성 HCl (1 M)에 의해 PH=5로 조정하고, EA (60 mL*5)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (60 mL*2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (1.6 g, 7.27 mmol, 74.57% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 212.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 14.29 - 12.75 (m, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 4.93 - 4.69 (m, 2H), 4.24 - 4.03 (m, 1H), 3.97 - 3.79 (m, 1H), 1.76 - 1.57 (m, 3H) ppm.
단계 9: (R)-5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산 및 (S)-5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산
5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산 (1.6 g, 7.58 mmol)을 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 IG (250 mm*30 mm,10 um); 이동상: [0.1%NH3H2O MeOH];B%: 30%-30%,4분;150분) 및 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 IG (250 mm*30 mm,10 um);이동상: [0.1%NH3H2O EtOH];B%: 20%-20%,3.8분;80분)에 의해 분리하였다. 생성물 분획을 진공 하에 농축시키고, 수성 HCl (1 M)에 의해 PH=5로 조정하고, EA (50 mL*6)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 중간체 50 (610 mg, 2.88 mmol, 37.96% 수율)을 백색 고체로서, 및 중간체 51 (400 mg, 1.83 mmol, 62.21% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 입체화학을 임의적으로 할당하였다.
(R)-5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 212.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 14.20 - 12.71 (m, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 4.87 - 4.71 (m, 2H), 4.16 - 4.05 (m, 1H), 3.97 - 3.82 (m, 1H), 1.75 - 1.63 (m, 3H) ppm.
키랄 SFC: IG-3_5CM_MEOH(DEA)_5_40_3ML_T35.M; Rt = 1.251분, ee% = 100%.
(S)-5-플루오로-5-메틸-5,8-디히드로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-3-카르복실산
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 212.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.97 - 13.03 (m, 1H), 9.04 - 8.98 (m, 1H), 8.51 - 8.38 (m, 1H), 4.87 - 4.71 (m, 2H), 4.16 - 4.04 (m, 1H), 3.98 - 3.81 (m, 1H), 1.74 - 1.61 (m, 3H) ppm.
키랄 SFC: IG-3_5CM_MEOH(DEA)_5_40_3ML_T35.M; Rt = 1.597분, ee% = 100%.
중간체 59 및 60: (R)-4-시아노-8-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 및 (S)-4-시아노-8-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복실산
Figure pct00116
단계 1: 메틸 5-브로모-3-플루오로-2-메틸벤조에이트
DCM (500 mL) 중 메틸 3-아미노-5-브로모-2-메틸-벤조에이트 (50 g, 204.85 mmol)의 혼합물에 니트로소늄 테트라플루오로보레이트 (31.11 g, 266.30 mmol)를 0℃에서 N2 하에 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, o-크실렌 (869.90 g, 8.19 mol, 990.78 mL)을 첨가하고, 혼합물을 130℃로 천천히 가열한 후, 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)에 붓고, EA (100 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA = 50/1에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (49 g, 198.33 mmol, 96.82% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름 -d) δ = 7.75 (s, 1H), 7.29-7.26 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 2.37
(d, J = 2.4 Hz, 3H) ppm.
단계 2: 5-브로모-3-플루오로-2-메틸벤조산
MeOH (10 mL), THF (10 mL) 및 H2O (5 mL) 중 메틸 5-브로모-3-플루오로-2-메틸벤조에이트 (10 g, 40.48 mmol)의 혼합물에 LiOH·H2O (5.10 g, 121.43 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (80 mL)에 붓고, 1 N HCl에 의해 pH = 4로 조정하였다. 이어서, 혼합물을 EA (30.0 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기물을 염수 (80 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (8.5 g, 36.48 mmol, 90.12% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.54 - 13.49 (m, 1H), 7.76 - 7.73 (m, 2H), 2.36 (d, J = 2.4 Hz, 3H) ppm.
단계 3: 5-브로모-3-플루오로-N-메톡시-N,2-디메틸벤즈아미드
DCM (150 mL) 중 5-브로모-3-플루오로-2-메틸벤조산 (14.7 g, 63.08 mmol) 및 DMF (46.11 mg, 630.81 umol)의 혼합물에 (COCl)2 (24.02 g, 189.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM (150 mL) 중에 용해시키고, 생성된 용액을 DCM (50 mL) 중 N-메톡시메탄아민 (9.23 g, 94.62 mmol, 1.5 당량) 및 DIEA (32.61 g, 252.32 mmol, 43.95 mL)의 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (400 mL)에 붓고, DCM (300 mL*2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (400 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EtOAc = 100:1-8:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (11.5 g, 41.65 mmol, 66.03% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.58-7.55 (m, 1H), 7.40 (s, 1H), 3.43 (br s, 3H), 3.29 (br d, J = 8.8 Hz, 3H), 2.09 (d, J = 2.0 Hz, 3H) ppm.
단계 4: 1-(5-브로모-3-플루오로-2-메틸페닐)에탄-1-온
THF (100 mL) 중 5-브로모-3-플루오로-N-메톡시-N,2-디메틸벤즈아미드 (11 g, 39.84 mmol)의 용액에 0℃에서 MeMgBr (3 M, 19.92 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (300 mL)에 붓고, EA (80 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EtOAc = 100:1-5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (9.1 g, 39.38 mmol, 98.85% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.81 (s, 1H), 7.71-7.68 (m, 1H), 2.57 (s, 3H), 2.23 (d, J = 2.0 Hz, 3H) ppm.
단계 5: 2-(5-브로모-3-플루오로-2-메틸페닐)프로판니트릴
DME (500 mL) 및 EtOH (15.95 g, 346.23 mmol) 중 1-(5-브로모-3-플루오로-2-메틸페닐)에탄-1-온 (10 g, 43.28 mmol) 및 p-톨루엔술포닐메틸 이소시아나이드 (12.67 g, 64.92 mmol)의 혼합물에 t-BuOK (10.68 g, 95.21 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (400 mL)에 붓고, EtOAc (200 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EtOAc = 30:1-5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (7.7 g, 31.81 mmol, 73.49% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.54-7.51 (m, 1H), 7.45 (s, 1H), 4.53-4.47 (m, 1H), 2.20 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 1.54 (d, J = 7.2 Hz, 3H) ppm.
단계 6: 2-(5-브로모-3-플루오로-2-메틸페닐)-3-히드록시-2-메틸프로판니트릴
DMSO (60 mL) 중 2-(5-브로모-3-플루오로-2-메틸페닐)프로판니트릴 (7.7 g, 31.81 mmol) 및 NaHCO3 (267.20 mg, 3.18 mmol)의 혼합물에 파라포름알데히드 (1.15 g, 38.17 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (400 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (200 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (400 mL*2)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE;EtOAc = 10:1-3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (8.0 g, 29.40 mmol, 92.43% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.58-7.56 (m, 1H), 7.36 (s, 1H), 5.84-5.81 m, 1H), 3.95-3.91 (m, 1H), 3.69-3.66 (m, 1H), 2.40 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 1.70 (s, 3H) ppm.
단계 7: 2-(5-브로모-2-(브로모메틸)-3-플루오로페닐)-3-히드록시-2-메틸프로판니트릴
MeCN (80 mL) 중 2-(5-브로모-3-플루오로-2-메틸페닐)-3-히드록시-2-메틸프로판니트릴 (8 g, 29.40 mmol)의 혼합물에 NBS (10.99 g, 61.74 mmol) 및 AIBN (1.45 g, 8.82 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EtOAc = 10:1-3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (8.5 g, 24.22 mmol, 82.37% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.74-7.71 (m, 1H), 7.44 (s, 1H), 5.93 (br s, 1H), 4.97 - 4.86 (m, 2H), 3.95-3.91 (m, 1H), 3.77-3.73 (m, 1H), 1.76 (s, 3H) ppm.
단계 8: 6-브로모-8-플루오로-4-메틸이소크로만-4-카르보니트릴
DMF (320 mL) 중 2-(5-브로모-2-(브로모메틸)-3-플루오로페닐)-3-히드록시-2-메틸프로판니트릴 (6.3 g, 17.95 mmol)의 혼합물에 K2CO3 (7.44 g, 53.84 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (3000 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (500 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (1000 mL*2)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE;EtOAc = 10:1-3:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (2.5 g, 9.26 mmol, 51.57% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.75 (s, 1H), 7.61-7.59 (m, 1H), 4.87 - 4.71 (m, 2H), 4.20 (d, J = 11.2 Hz, 1H),3.81 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.67 (s, 3H) ppm.
단계 9: (R)-4-시아노-8-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 및 (S)-4-시아노-8-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복실산
DMSO (40 mL) 및 H2O (4 mL) 중 6-브로모-8-플루오로-4-메틸이소크로만-4-카르보니트릴 (2.1 g, 7.77 mmol), K2CO3 (1.61 g, 11.66 mmol), Pd(OAc)2 (174.55 mg, 777.50 umol) 및 1,3-비스(디시클로헥실포스피노)프로판 비스(테트라플루오로보레이트) (952.06 mg, 1.55 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, CO로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 100℃에서 CO (15 psi) 분위기 하에 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (300 mL)에 붓고, EA (50.0 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기부를 버리고, 수성부를 수성 HCl (1 M)에 의해 pH = 5로 조정하고, 생성물을 EA (50.0 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (100.0 mL*2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켜 라세미 4-시아노-8-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복실산을 수득하였다. 라세미체를 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 IC (250 mm*30 mm,5 um);이동상: [0.1% NH3H2O EtOH];B%: 20%-20%,3.1분;600분)에 의해 분리하였다. 피크 1 (Rt=1.120분)의 용리액을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 H2O (50 mL)로 희석하고, 1 N HCl을 사용하여 pH = 5로 조정한 다음, 혼합물을 EA (50 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (570 mg, 2.30 mmol, 29.58% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. 피크 2 (Rt=1.258분)의 용리액을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 H2O (50 mL)로 희석하고, 1 N HCl을 사용하여 pH = 5로 조정한 다음, 혼합물을 EA (50 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 이 생성물을 추가로 SFC 분리 (칼럼: 다이셀 키랄팩 IC (250 mm*30 mm,5 um); 이동상: [0.1%NH3H2O EtOH];B%: 20%-20%,3.2분;73분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (590 mg, 2.48 mmol, 31.84% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. 입체화학을 임의적으로 할당하였다.
(R)-4-시아노-8-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복실산
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.84 - 13.85 (m, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.66-7.64 (m, 1H), 4.97 - 4.84 (m, 2H), 4.21 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.69 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: IC-3-EtOH(DEA)-5-40-3 mL-35T.lcm, Rt = 1.120분, ee% = 95.99%.
(S)-4-시아노-8-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복실산
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.58 - 13.50 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.67-7.64 (m, 1H), 4.97 - 4.84 (m, 2H), 4.21 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.69 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: IC-3-EtOH(DEA)-5-40-3 mL-35T.lcm, Rt = 1.159분, ee% = 99.13%.
중간체 61: 3-브로모-6H-피라노[3,4-b]피리딘-5(8H)-온-6,6-d2
Figure pct00117
단계 1: 3-브로모-6H-피라노[3,4-b]피리딘-5(8H)-온-6,6-d2
THF (250.00 mL) 중 3-브로모-6H-피라노[3,4-b]피리딘-5(8H)-온 (3.00 g, 13.155 mmol, 1.00 당량)의 용액에 질소 하에 0℃에서 NaHDMS (52 mL, 1 M, 52.620 mmol, 4.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, D2O (100.00 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 16시간 동안 교반을 계속하였다. 수성 층을 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 0에서 50% EtOAc의 용리 구배로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 표제 화합물 (1.1g, 36.35%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 230.
중간체 62: 3-클로로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-5(8H)-온-8,8-d2
Figure pct00118
단계 1: (3-브로모-5-클로로피리딘-2-일)메탄-d2-올
CD3OD (10.00 mL) 중 메틸 3-브로모-5-클로로피리딘-2-카르복실레이트 (1.00 g, 3.992 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 N2 분위기 하에 0℃에서 NaBD4 (670.71 mg, 15.969 mmol, 4.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온에서 물로 켄칭하였다. 수성 혼합물을 EtOAc (3x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (12:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (644 mg, 71.86%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =224.
단계 2: tert-부틸 2-((3-브로모-5-클로로피리딘-2-일)메톡시-d2)아세테이트
톨루엔 (30.00 mL) 중 (3-브로모-5-클로로피리딘-2-일)메탄-d2-올 (5.10 g, 22.719 mmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 2-브로모아세테이트 (8.86 g, 45.438 mmol, 2.00 당량)의 교반 용액에 0℃에서 Bu4NHSO4 (0.77 g, 2.272 mmol, 0.10 당량) 및 10 M NaOH (30 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 실온에서 포화 NH4Cl (10 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 수성 층을 EtOAc (3x10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (12:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (6.5g, 조 물질)을 담황색 오일로서 수득하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =338.
단계 3: 2-((3-브로모-5-클로로피리딘-2-일)메톡시-d2)아세트산
DCM (40.00 mL) 중 tert-부틸 2-((3-브로모-5-클로로피리딘-2-일)메톡시-d2)아세테이트 (6.50 g, 19.196 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 실온에서 TFA (10.00 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (6.4g, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =282.
단계 4: 2-((3-브로모-5-클로로피리딘-2-일)메톡시-d2)-N-메톡시-N-메틸아세트아미드
DMF (60.00 mL) 중 2-((3-브로모-5-클로로피리딘-2-일)메톡시-d2)아세트산 (6.40 g, 22.654 mmol, 1.00 당량) 및 N,O-디메틸히드록실아민 (1.66 g, 27.185 mmol, 1.20 당량)의 교반 용액에 실온에서 HATU (10.34 g, 27.185 mmol, 1.20 당량) 및 DIEA (8.78 g, 67.962 mmol, 3.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 수성 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 (4.45g, 60.33%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =325.
단계 5: 3-클로로-6H-피라노[3,4-b]피리딘-5(8H)-온-8,8-d2
THF (40.00 mL) 중 2-((3-브로모-5-클로로피리딘-2-일)메톡시-d2)-N-메톡시-N-메틸아세트아미드 (3 g, 9.214 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 -78℃에서 nBuLi (4.42 mL, 11.057 mmol, 1.20 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온에서 포화 NH4Cl (10 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 수성 혼합물을 EtOAc (3x10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 (380 mg, 22.22%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =187.
중간체 63: 에틸 2-아자비시클로[2.2.2]옥탄-4-카르복실레이트
Figure pct00119
단계 1. 2-tert-부틸 4-에틸 2-아자비시클로[2.2.2]옥탄-2,4-디카르복실레이트
2-[(tert-부톡시)카르보닐]-2-아자비시클로[2.2.2]옥탄-4-카르복실산 (0.2 g, 0.783 mmol)을 EtOH (2.6 mL) 중에 용해시켰다. 촉매 황산 (0.26 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 이어서, 과량의 용매를 진공 하에 제거하였다. 조 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, 유기 층을 포화 NaHCO3으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물을 황색 오일 (0.14 g)로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H-Boc]+ = 184.2.
단계 2. 에틸 2-아자비시클로[2.2.2]옥탄-4-카르복실레이트
2-아자비시클로[2.2.2]옥탄-2,4-디카르복실레이트 (0.065 g, 0.24 mmol)를 DCM (1.2 mL) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 트리플루오로아세트산 (0.19 mL, 2.4 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 진공 하에 제거하였다. 조 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, 유기 층을 포화 NaHCO3으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물을 황색 오일 (0.04 g)로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 184.2.
중간체 64: 2-클로로-8-플루오로-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴
Figure pct00120
단계 1: 2-클로로-3-플루오로-5-아이오도피리딘-4-아민
에탄올 (150 mL) 중 2-클로로-3-플루오로피리딘-4-아민 (6.00 g, 40.942 mmol, 1.00 당량) 및 Ag2SO4 (12.77 g, 40.956 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 I2 (10.39 g, 40.942 mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 55℃에서 2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM (300 mL)에 용해시키고, 물 (50 mL x 2) 및 포화 염수 (30 mL x 1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (8.8 g, 78.89%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 273.
단계 2: 에틸 (E)-3-(4-아미노-6-클로로-5-플루오로피리딘-3-일)아크릴레이트
DME (90 mL) 및 H2O (30 mL) 중 2-클로로-3-플루오로-5-아이오도피리딘-4-아민 (6.00 g, 22.022 mmol, 1.00 당량) 및 에틸 (2E)-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)프로프-2-에노에이트 (6.47 g, 28.629 mmol, 1.3 당량)의 교반 용액에 Pd(PPh3)4 (2.54 g, 2.202 mmol, 0.1 당량) 및 Na2CO3 (4.67 g, 44.045 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (5:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (5.0 g,92.80%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 245.
단계 3: 7-클로로-8-플루오로-1,6-나프티리딘-2(1H)-온
에탄올 (60 mL) 중 에틸 (E)-3-(4-아미노-6-클로로-5-플루오로피리딘-3-일)아크릴레이트 (5.00 g, 20.437 mmol, 1.00 당량) 및 NaSMe(17.88 g, 51.093 mmol, 2.5 당량, H2O 중 20%)의 용액을 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 1 N HCl을 사용하여 pH 7로 산성화시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc (200 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (5:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (2.23 g, 54.95%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 199.
단계 4: 8-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴
DMF (5 mL) 중 7-클로로-8-플루오로-1,6-나프티리딘-2(1H)-온 (1.00 g, 5.036 mmol, 1.00 당량) 및 Zn(CN)2 (1.18 g, 10.072 mmol, 2 당량)의 교반 용액에 Pd2(dba)3 (0.92 g, 1.007 mmol, 0.2 당량) 및 XPhos (0.96 g, 2.014 mmol, 0.4 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 (561 mg,58.90%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 190.
단계 5: 2-클로로-8-플루오로-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴
톨루엔 (1 mL) 중 트리클로로이소시아누르산 (568.01 mg, 2.444 mmol, 0.67 당량) 및 PPh3 (1913.59 mg, 7.296 mmol, 2 당량)의 용액을 질소 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 혼합물에 8-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (690.00 mg, 3.648 mmol, 1.00 당량)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 추가로 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (1:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (346 mg, 45.69%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 208.
중간체 65: tert-부틸 ((6-브로모이소퀴놀린-3-일)메틸)카르바메이트
Figure pct00121
단계 1: 6-브로모-3-메틸이소퀴놀린
DCM (500 mL) 중 (4-브로모페닐)메탄아민 (30 g, 161.25 mmol)의 용액에 1,1-디메톡시프로판-2-온 (20.95 g, 177.37 mmol) 및 MgSO4 (60.00 g, 498.47 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, NaBH3CN (12.16 g, 193.50 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 30℃에서 5시간 동안 교반한 후에 여과하였다. 여과물을 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 클로로술폰산 (157.50 g, 1.35 mol)을 -10℃로 냉각시키고, 상기 조 생성물을 N2 하에 3시간 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 120℃로 10분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 빙수 (2 L)에 부었다. 용액을 2 M NaOH로 중화시키고, EA (1000 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2000 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1-5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (8.5 g, 38.27 mmol, 23.74% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.06 (s, 1H), 7.8 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.52 - 7.50 (m, 1H), 7.30 (s, 1H), 2.62 (s, 3H) ppm.
단계 2: 6-브로모-3-(브로모메틸)이소퀴놀린
트리플루오로메틸벤젠 (200 mL) 중 6-브로모-3-메틸이소퀴놀린 (8.3 g, 37.37 mmol)의 용액에 NBS (7.97 g, 44.77 mmol) 및 AIBN (919.64 mg, 5.60 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=40:1-20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (3 g, 9.22 mmol, 24.68% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 301.9
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.22 (s, 1H), 8.02 - 8.00 (m, 2H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.72 - 7.68 (m, 2H), 4.72 (s, 2H) ppm.
단계 3: 2-((6-브로모이소퀴놀린-3-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온
DMF (65 mL) 중 6-브로모-3-(브로모메틸)이소퀴놀린 (3 g, 9.97 mmol) 및 (1,3-디옥소이소인돌린-2-일)칼륨 (2.03 g, 10.96 mmol)의 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 용액 (200 mL)에 붓고, 생성물을 DCM (200 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (500 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (3.6 g, 9.80 mmol, 98.36% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.15 (s, 1H), 7.95 - 7.89 (m, 3H), 7.76 - 7.74 (m, 3H), 7.65 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.30 (s, 2H) ppm.
단계 4: (6-브로모이소퀴놀린-3-일)메탄아민
EtOH (60 mL) 중 2-((6-브로모이소퀴놀린-3-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온 (3.6 g, 9.80 mmol)의 용액에 NH2NH2·H2O (1.72 g, 34.31 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (2.32 g, 9.79 mmol, 100.00% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.25 - 9.23 (m, 1H), 8.22 - 8.20 (m, 1H), 8.05 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.78 - 7.71 (m, 2H), 3.95 (s, 2H) ppm.
단계 5: tert-부틸 ((6-브로모이소퀴놀린-3-일)메틸)카르바메이트
THF (25 mL) 중 (6-브로모이소퀴놀린-3-일)메탄아민 (2.32 g, 9.79 mmol)의 용액에 NaHCO3 (1.64 g, 19.57 mmol) 및 Boc2O (2.56 g, 11.74 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, 생성물을 EA (50 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20:1-2:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (2.2 g, 6.25 mmol, 63.87% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 339.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.17 (s, 1H), 7.97 - 7.95 (m, 1H), 7.83 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.67 - 7.64 (m, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.58 (br d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H) ppm.
중간체 66: 2-((6-브로모신놀린-3-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온
Figure pct00122
단계 1: 디에틸 히드라지닐포스포네이트
히드라진 수화물 (21.32 g, 362.05 mmol, 20.70 mL)을 25℃에서 CCl4 (180 mL), DCM (300 mL), 무수 K2CO3 (75.06 g, 543.08 mmol) 및 벤질 (트리에틸)암모늄 클로라이드 (824.66 mg, 3.62 mmol)의 혼합물에 효율적으로 교반하면서 적가하였다. 25℃에서 15분 동안 교반을 계속한 다음, DCM (60 mL) 중 디에틸 포스포네이트 (50 g, 362.05 mmol, 46.73 mL)의 용액을 25℃에서 때때로 외부 냉각시키면서 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 25℃에서 4시간 동안 교반을 계속하였다. 이어서, 탄산칼륨을 여과하고, 필터 케이크를 DCM으로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (56 g, 333.07 mmol, 92.00% 수율)을 담황색 오일로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
단계 2: 디에틸 (Z)-(2-(1-(3-브로모페닐)프로판-2-일리덴)히드라지닐)포스포네이트
EtOH (400 mL) 중 1-(3-브로모페닐)프로판-2-온 (20.9 g, 98.09 mmol), 디에틸 히드라지닐포스포네이트 (17.32 g, 102.99 mmol) 및 HCl (0.6 mL)의 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 오일을 물 (100 mL) 중에 용해시키고, 포화 NaHCO3을 첨가하여 pH를 9로 조정하였다. 생성물을 DCM (50 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 갈색 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 1/0에서 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (26.65 g, 66.04 mmol, 67.33% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H] + = 362.9/364.9
단계 3: (6-브로모신놀린-3-일)메틸 아세테이트
톨루엔 (92 mL) 중 디에틸 (Z)-(2-(1-(3-브로모페닐)프로판-2-일리덴)히드라지닐)포스포네이트 (3.65 g, 10.05 mmol)의 용액에 25℃에서 Cu(OAc)2.H2O (2.01 g, 10.05 mmol, 2.01 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 12시간 동안 O2 (15psi) 하에 교반하였다. 혼합물을 H2O (500 mL)로 희석하고, EA (500 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/EA = 1/0에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1 g, 3.56 mmol, 17.70% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.45 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.94-7.91 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 5.70 (s, 2H), 2.20 (s, 3H) ppm.
단계 4: (6-브로모신놀린-3-일)메탄올
MeOH / THF / H2O = 2 / 2 / 1 (10 mL) 중 (6-브로모신놀린-3-일)메틸 아세테이트 (1 g, 3.56 mmol)의 용액에 NaOH (213.44 mg, 5.34 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고, DCM (30 mL*2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 MTBE (20 mL)로 연화처리하고, 황색 고체를 여과에 의해 수집하여 표제 화합물 (580 mg, 2.43 mmol, 68.20% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H] + =238.8/240.8.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.47 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.41 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.03-8.01 (m, 1H), 5.82-5.79 (m, 1H), 5.07 (d, J = 5.6 Hz, 2H) ppm.
단계 5: 2-((6-브로모신놀린-3-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온
THF (20 mL) 중 (6-브로모신놀린-3-일)메탄올 (580 mg, 2.43 mmol), 이소인돌린-1,3-디온 (392.65 mg, 2.67 mmol) 및 PPh3 (954.51 mg, 3.64 mmol)의 용액에 0℃에서 THF (10 mL) 중 DEAD (633.79 mg, 3.64 mmol, 661.58 uL)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고, DCM (100 mL*2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 MeOH (20 mL)로 연화처리하고, 회백색 고체를 여과에 의해 수집하여 표제 화합물 (550 mg, 1.49 mmol, 61.57% 수율)을 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H] + =369.9.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.39-8.37 (m, 2H), 8.21 (s, 1H), 8.04-8.02 (m, 1H), 7.96-7.93 (m, 2H), 7.90-7.89 (m, 2H), 5.34 (s, 2H) ppm.
중간체 67: tert-부틸 ((3-브로모-1,7-나프티리딘-6-일)메틸)카르바메이트
Figure pct00123
단계 1: 5-브로모-3-아이오도피콜린산
10% H2SO4 중 3-아미노-5-브로모-피리딘-2-카르복실산 (4 g, 18.43 mmol)의 용액 (30 mL)에 NaNO2 (1.91 g, 27.65 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. KI (9.18 g, 55.29 mmol)를 첨가하고, 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 80℃로 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 빙수 (80 mL)에 천천히 부었다. 생성된 황색 고체를 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 표제 화합물 (4.5 g, 13.72 mmol, 74.46% 수율)을 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 327.8.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.73 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.70 (d, J=2.0 Hz, 1H) ppm.
단계 2: 5-브로모-3-아이오도-N-메톡시-N-메틸피콜린아미드
DCM (15 mL) 중 5-브로모-3-아이오도피콜린산 (2 g, 6.10 mmol)의 용액에 HATU (3.48 g, 9.15 mmol), DIPEA (3.94 g, 30.50 mmol) 및 N,O-디메틸히드록실아민 (713.95 mg, 7.32 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 물 (30 mL)을 첨가하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (2.2 g, 5.93 mmol, 97.23% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [81BrM+H]+ = 372.8.
단계 3: 5-브로모-3-아이오도피콜린알데히드
THF (10 mL) 중 5-브로모-3-아이오도-N-메톡시-N-메틸피콜린아미드 (1 g, 2.70 mmol)의 용액에 N2 하에 -70℃에서 DIBAL-H (1 M, 5.39 mL, 5.39 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (50 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.6 g, 1.92 mmol, 71.36% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 311.8.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.98 (s, 1H), 8.83 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.53 (d, J=2.0 Hz, 1H) ppm.
단계 4: tert-부틸 (3-(5-브로모-2-포르밀피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)카르바메이트
CH3CN (6 mL) 중 5-브로모-3-아이오도피콜린알데히드 (150 mg, 480.92 umol), tert-부틸 N-프로프-2-이닐카르바메이트 (74.64 mg, 480.92 umol), Et3N (486.64 mg, 4.81 mmol, 669.39 uL), CuI (9.16 mg, 48.09 umol) 및 Pd(PPh3)2Cl2 (33.76 mg, 48.09 umol)를 탈기시키고, N2로 퍼징한 후, N2 하에 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (30 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (0.2 g, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 339.0.
단계 5: tert-부틸 ((3-브로모-1,7-나프티리딘-6-일)메틸)카르바메이트
tBuOH (5 mL) 중 tert-부틸 (3-(5-브로모-2-포르밀피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (0.2 g, 589.65 umol)의 용액에 NH4OAc (68.18 mg, 884.48 umol) 및 AgOTf (30.30 mg, 117.93 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (110 mg, 315.49 umol, 53.51% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 338.1.
중간체 68:2-((2-클로로티아졸로[5,4-c]피리딘-6-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온
Figure pct00124
단계 1: 6-메틸티아졸로[5,4-c]피리딘-2(1H)-티온
DMF (75 mL) 중 5-브로모-2-메틸피리딘-4-아민 (7.50 g, 40.098 mmol, 1.00 당량) 및 포타슘 에틸 크산테이트 (25.71 g, 160.393 mmol, 4 당량)의 용액을 130℃에서 15시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고, EtOAc (300 mL)로 추출하였다. 유기 층을 버리고, 수성 층을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (500 mL)로 슬러리화하고, 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (3.5 g, 47.89%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 183.
단계 2: 2-클로로-6-메틸티아졸로[5,4-c]피리딘
술포닐 클로라이드 (20.00 mL) 중 6-메틸티아졸로[5,4-c]피리딘-2(1H)-티온 (2.10 g, 11.522 mmol, 1.00 당량)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 빙수 (200 mL)에 부었다. 수성 혼합물을 Na2CO3을 사용하여 pH 9로 염기성화시켰다. EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL x1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (0.726 g, 34.13%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 185.
단계 3: 6-(브로모메틸)-2-클로로티아졸로[5,4-c]피리딘 및 2-클로로-6-(디브로모메틸)티아졸로[5,4-c]피리딘
CCl4 (30 mL) 중 2-클로로-6-메틸티아졸로[5,4-c]피리딘 (1.83 g, 9.911 mmol, 1.00 당량) 및 NBS (1.76 g, 9.911 mmol, 1 당량)의 교반 용액에 AIBN (0.16 g, 0.991 mmol, 0.1 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, DCM (60 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL x 1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (10:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물의 혼합물 (1.57g, 60.11%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 265.
단계 4: 6-(브로모메틸)-2-클로로티아졸로[5,4-c]피리딘
THF (25 mL) 중 6-(브로모메틸)-2-클로로티아졸로[5,4-c]피리딘 및 2-클로로-6-(디브로모메틸)티아졸로[5,4-c]피리딘 (1.87 g, 5.461 mmol, 1.00 당량) 및 디에틸 포스포네이트 (4.53 g, 32.766 mmol, 6 당량)의 혼합물의 교반 용액에 DIEA (4.23 g, 32.766 mmol, 6 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (12:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (1.42g, 98.67%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 265.
단계 5: 2-((2-클로로티아졸로[5,4-c]피리딘-6-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온
DMF (1 mL) 중 6-(브로모메틸)-2-클로로티아졸로[5,4-c]피리딘 (100.00 mg, 0.379 mmol, 1.00 당량) 및 칼륨 프탈이미드 (84.34 mg, 0.455 mmol, 1.2 당량)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (2 mL)에 붓고, 10분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 물 (5 mL x 2)로 세척하였다. 고체를 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (114 mg, 91.11%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 330.
중간체 69: tert-부틸 ((6-클로로피리도[3,2-c]피리다진-3-일)메틸)카르바메이트
Figure pct00125
단계 1: 에틸 (E)-3-(4-아미노-6-클로로피리다진-3-일)아크릴레이트
DME (270.00 mL) 및 H2O (90.00 mL) 중 3,6-디클로로피리다진-4-아민 (24.00 g, 146.350 mmol, 1.00 당량), 에틸 (2E)-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)프로프-2-에노에이트 (39.70 g, 175.620 mmol, 1.20 당량)의 교반 용액에 Pd(PPh3)4 (16.91 g, 14.635 mmol, 0.10 당량) 및 Na2CO3 (31.02 g, 292.701 mmol, 2.00 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 (300 mL)로 희석하고, EtOAc (300 mL x 5)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (80 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 0에서 100% EtOAc의 용리 구배로 정제하여 3,6-디클로로피리다진-4-아민 및 표제 화합물 (15 g, 조 물질)의 혼합물을 황색 고체로서 수득하였다. 혼합물을 EtOAc (260 mL)로부터 재결정화하여 표제 화합물 (10 g, 30.02%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 228.
단계 2: 3-클로로피리도[3,2-c]피리다진-6-올
EtOH (150 mL) 중 에틸 (E)-3-(4-아미노-6-클로로피리다진-3-일)아크릴레이트 (11.80 g, 51.834 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 NaSMe(9.08 g, 129.548 mmol, 2.50 당량)를 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고, 1 M HCl (수성)을 사용하여 pH 7로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 tert-부틸 메틸 에테르 (10 mL x 3)로 세척하였다. 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (6.3 g, 63.59%)을 회색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ =182.
단계 3: 6-히드록시피리도[3,2-c]피리다진-3-카르보니트릴
DMF (40 mL) 중 3-클로로피리도[3,2-c]피리다진-6-올 (3500.00 mg, 19.275 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 Zn(CN)2 (4527.53 mg, 38.551 mmol, 2 당량), Pd2(dba)3 (3530.15 mg, 3.855 mmol, 0.2 당량) 및 XPhos (3675.53 mg, 7.710 mmol, 0.40 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 (900 mg, 31.64%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 173.
단계 4: 6-클로로피리도[3,2-c]피리다진-3-카르보니트릴
1,4-디옥산 (100 mL) 중 PPh3 (3047.23 mg, 11.618 mmol, 2 당량)의 교반 용액에 트리클로로이소시아누르산 (904.51 mg, 3.892 mmol, 0.67 당량)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 23시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 6-히드록시피리도[3,2-c]피리다진-3-카르보니트릴 (1000.00 mg, 5.809 mmol, 1.00 당량)을 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 108℃에서 추가로 4시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc 중 0에서 100% PE의 용리 구배로 정제하여 표제 화합물 (581 mg, 52.48%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 191.
단계 5: tert-부틸 ((6-클로로피리도[3,2-c]피리다진-3-일)메틸)카르바메이트 및 tert-부틸 ((6-클로로-1,2-디히드로피리도[3,2-c]피리다진-3-일)메틸)카르바메이트
THF (8 mL) 중 6-클로로피리도[3,2-c]피리다진-3-카르보니트릴 (300.00 mg, 1.574 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 THF 중 LiAlH4의 2.5 M 용액 (1.9 mL, 4.722 mmol, 3.00 당량)을 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 포화 NaHCO3 (수성) (10 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 상기 혼합물에 Boc2O (1030.60 mg, 4.722 mmol, 3.00 당량)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물의 혼합물 (231 mg, 조 물질)을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 295.
단계 6: tert-부틸 ((6-클로로피리도[3,2-c]피리다진-3-일)메틸)카르바메이트
DCM (8 mL) 중 tert-부틸 ((6-클로로피리도[3,2-c]피리다진-3-일)메틸)카르바메이트 및 tert-부틸 ((6-클로로-1,2-디히드로피리도[3,2-c]피리다진-3-일)메틸)카르바메이트 (231 mg, 조 물질)의 혼합물의 교반 용액에 DDQ (714.64 mg, 3.148 mmol, 2.00 당량)를 여러 부분으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 DCM (5 mL x 3)으로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 (112 mg, 24.14%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 295.
중간체 70: tert-부틸 ((5-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트
Figure pct00126
단계 1: 2-벤질-7-(((tert-부톡시카르보닐)아미노)메틸)-2,6-나프티리딘-2-윰 브로마이드
DCM (10 mL) 중 tert-부틸 ((2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트 (3.6 g, 13.88 mmol)의 용액에 (브로모메틸)벤젠 (3.56 g, 20.83 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 MTBE (50 mL)로 연화처리하여 표제 화합물 (4.5 g, 조 물질)을 회색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M]+ = 350.3.
단계 2: tert-부틸 ((6-벤질-5-메틸-5,6-디히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트
2-벤질-7-(((tert-부톡시카르보닐)아미노)메틸)-2,6-나프티리딘-2-윰 브로마이드 (2.0 g, 4.65 mmol)를 THF (50 mL) 중 MeMgBr (3 M, 9.30 mL)의 용액에 N2 하에 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl (50 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (50 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (2 g, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 366.3.
단계 3: tert-부틸 ((6-벤질-5-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트
MeOH (20 mL) 및 포스페이트 완충제 pH 7.0 (20 mL) 중 tert-부틸 ((6-벤질-5-메틸-5,6-디히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트 (2 g, 5.47 mmol)의 용액에 0℃에서 NaBH4 (828.09 mg, 21.89 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 0.5 N HCl (50 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.3 g, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 368.2.
단계 4: tert-부틸 ((5-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트
MeOH (15 mL) 중 tert-부틸 ((6-벤질-5-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트 (0.5 g, 1.36 mmol) 및 Pd/C (666.67 mg, 634.92 umol, 10% 순도)의 혼합물을 탈기하고, H2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 H2 분위기 (15 psi) 하에 40℃에서 40시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (0.35 g, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 278.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.10 (s, 1H), 7.40 - 7.22 (m, 1H), 7.01 (s, 1H), 4.18 - 4.12 (m, 2H), 3.93 -3.82 (m, 1H), 3.20 - 3.15 (m, 1H), 3.13 - 3.04 (m, 1H), 2.82 - 2.74 (m, 1H), 2.70 - 2.65 (m, 1H), 2.59 (br s, 1H), 1.44 - 1.38 (m, 9H), 1.32 - 1.29 (m, 3H) ppm.
중간체 71: 2-((5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-c]피리다진-3-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온 히드로클로라이드
Figure pct00127
단계 1: 벤질 3-옥소-3,5,7,8-테트라히드로피리도[4,3-c]피리다진-6 (2H)-카르복실레이트
벤질 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (25 g, 107.18 mmol), KOAc (0.4 g, 4.08 mmol) 및 글리옥실산 1수화물 (10 g, 135.07 mmol)의 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, N2H4·H2O (5.67 g, 96.19 mmol, 5.5 mL)를 90℃에서 혼합물에 적가한 후, 90℃에서 추가로 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 MeOH (100 mL)로 희석하고, 25℃로 냉각시키고, 여과하였다. 고체를 MeOH로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (10 g, 35.05 mmol, 32.70% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 286.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 7.48 - 7.25 (m, 5H), 6.80 (s, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.54 (br s, 2H), 3.67 (br s, 2H), 2.75-2.72 (m,2H).
단계 2: 벤질 3-클로로-7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-6(5H)-카르복실레이트
POCl3 (38.61 g, 251.81 mmol, 23.40 mL) 중 벤질 3-옥소-3,5,7,8-테트라히드로피리도[4,3-c]피리다진-6 (2H)-카르복실레이트 (9 g, 31.55 mmol)의 혼합물에 N2 하에 25℃에서 Et3N (65.43 mg, 646.61 umol)을 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (2000 mL, 25℃)에 붓고, 5분 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3을 혼합물에 첨가하여 pH=7로 조정하였다. 수성 상을 EA (1000 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (1000 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (7.7 g, 25.35 mmol, 80.36% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 304.0.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ = 7.75 - 7.63 (m, 1H), 7.46 - 7.28 (m, 5H), 5.23 - 5.15 (m, 2H), 4.82 - 4.74 (m, 2H),4.63 - 4.57 (m, 1H), 3.96 - 3.84 (m, 2H), 3.24 - 3.12 (m, 2H).
단계 3: 6-벤질 3-메틸 7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-3,6(5H)-디카르복실레이트
DMSO (225 mL) 중 벤질 3-클로로-7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-6(5H)-카르복실레이트 (7.5 g, 24.69 mmol)의 용액에 Pd(OAc)2 (277.18 mg, 1.23 mmol), K2CO3 (5.12 g, 37.04 mmol), 1,3-비스(디시클로헥실포스피노)프로판 비스(테트라플루오로보레이트) (1.51 g, 2.47 mmol) 및 MeOH (11.88 g, 370.69mmol, 15.00 mL)를 N2 하에 25℃에서 첨가하였다. 현탁액을 진공 하에 탈기하고, CO로 수회 퍼징하였다. 혼합물을 100℃에서 CO (15 psi) 하에 1.5시간 동안 교반하였다. 합한 혼합물을 물 (1500 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (500 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (500 mL*2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/2)에 의해 정제하여 표제 화합물 (3.3 g, 9.92 mmol, 40.16% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 327.9.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.21 - 8.12 (m, 1H), 7.43 - 7.28 (m, 5H), 5.17 - 5.10 (m, 2H), 4.89 - 4.68 (m, 2H), 3.99 -3.90 (m, 3H), 3.86 - 3.75 (m, 2H), 3.26 - 3.13 (m, 2H).
단계 4: 6-(tert-부틸) 3-메틸 7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-3,6(5H)-디카르복실레이트
MeOH (65 mL) 중 6-벤질 3-메틸 7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-3,6(5H)-디카르복실레이트 (3.2 g, 9.78 mmol)의 용액에 Boc2O (3.20 g, 14.66 mmol, 3.37 mL) 및 Pd/C (300 mg, 10% 순도)를 N2 하에 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고, H2로 수 회 퍼징하였다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (2.9 g, 조 물질)을 담황색 오일로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 294.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.89 - 7.84 (m, 1H), 4.66 - 4.60 (m, 2H), 3.79 - 3.72 (m, 2H), 3.32 - 3.21 (m, 2H),1.44 - 1.42 (m, 9H).
단계 5: tert-부틸 3-(히드록시메틸)-7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-6(5H)-카르복실레이트
MeOH (28 mL)/THF (14 mL) 중 6-(tert-부틸) 3-메틸 7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-3,6(5H)-디카르복실레이트 (2.8 g, 9.55 mmol) 및 CaCl2 (4.24 g, 38.18 mmol)의 혼합물에 N2 하에 0℃에서 NaBH4 (722.29 mg, 19.09 mmol)를 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl (100 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (100 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL*1)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 칼럼 (FA)에 의해 정제하였다. 용리액을 농축시켜 MeCN을 제거하고, 수성 상을 에틸 아세테이트 (50 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL*1)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (1.3 g, 4.90 mmol, 51.33% 수율)을 담황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 266.0.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ = 7.68 - 7.60 (m, 1H), 4.85 - 4.84 (m, 2H), 4.75 - 4.66 (m, 2H), 3.85 - 3.77 (m, 2H),3.21 - 3.08 (m, 2H), 2.03 - 1.99 (m, 2H), 1.51 - 1.49 (m, 9H).
단계 6: tert-부틸 3-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)메틸)-7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-6(5H)-카르복실레이트
THF (12 mL) 중 tert-부틸 3-(히드록시메틸)-7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-6(5H)-카르복실레이트 (1.15 g, 4.33 mmol), PPh3 (1.71 g, 6.50 mmol) 및 이소인돌린-1,3-디온 (701.53 mg, 4.77 mmol)의 혼합물에 DEAD (1.13 g, 6.50 mmol, 1.18 mL)를 N2 하에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 합한 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (30 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (30 mL*1)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.2 g, 3.04 mmol, 70.19% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 395.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.85 - 7.75 (m, 2H), 7.71 - 7.65 (m, 2H), 7.13 - 7.08 (m, 1H), 5.14 - 5.08 (m, 2H),4.56 - 4.48 (m, 2H), 3.75 - 3.64 (m, 2H), 3.17 - 3.07 (m, 2H), 1.43 - 1.39 (m, 9H).
단계 7: 2-((5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-c]피리다진-3-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온 히드로클로라이드
디옥산 (5 mL) 중 tert-부틸 3-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)메틸)-7,8-디히드로피리도[4,3-c]피리다진-6 (5H)-카르복실레이트 (950 mg, 2.41 mmol)의 혼합물에 HCl/디옥산 (4 M, 5 mL)을 N2 하에 25℃에서 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 고체를 MTBE (5 mL)로 세척하여 표제 화합물 (360 mg, 1.09 mmol, 45.19% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 294.9.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ = 8.11 - 8.04 (m, 1H), 7.96 - 7.81 (m, 4H), 5.25 (s, 2H), 4.62 (s, 2H), 3.77 - 3.68 (m, 2H), 3.57 - 3.49 (m, 2H).
중간체 72: 2-브로모-6-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)시클로프로필)피리딘
Figure pct00128
단계 1: 2-브로모-6-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)비닐)피리딘
MeCN (100 mL) 중 1-(6-브로모-2-피리딜)에타논 (5 g, 25.00 mmol), TBSCl (15.07 g, 99.98 mmol, 12.25 mL) 및 NaI (14.99 g, 99.98 mmol)의 용액에 TEA (11.38 g, 112.48 mmol, 15.66 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (500 mL)에 붓고, EA (500 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (800 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 40 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~10% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)에 의해 정제하여 표제 화합물 (7.5 g, 23.79 mmol, 95.16% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [81BrM+H]+ = 316.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.53 (s, 2H), 7.37 - 7.35 (m, 1H), 5.69 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 1.01 (s, 9H), 0.25 (s, 6H) ppm.
단계 2: 2-브로모-6-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)시클로프로필)피리딘
0℃에서 DCM (180 mL) 중 디에틸아연 (1 M, 38.18 mL)의 용액에 DCM (60 mL) 중 클로로(아이오도)메탄 (13.47 g, 76.36 mmol, 5.54 mL)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물에 DCM (180 mL) 중 2-브로모-6-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)비닐)피리딘 (4 g, 12.73 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (200 mL)에 붓고, DCM (100 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (400 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 120 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~10%에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)에 의해 정제하여 표제 화합물 (700 mg, 2.13 mmol, 16.75% 수율)을 무색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 328.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.60 - 7.58 (m, 1H), 7.49 - 7.45 (m, 1H), 7.23 - 7.21 (m, 1H), 1.45 - 1.39 (m, 2H), 1.27 - 1.23 (m, 2H), 0.95 (s, 9H), 0.10 (s, 6H) ppm.
중간체 73: 6-페닐-2,7-나프티리딘-3-카르보니트릴
Figure pct00129
단계 1: 2,7-나프티리딘-1,3,6,8-테트라올
EtOH (70 mL) 중 프로판디니트릴 (5.39 g, 81.60 mmol, 5.13 mL)의 용액에 디에틸 3-옥소펜탄디오에이트 (15 g, 74.18 mmol, 13.51 mL) 및 에틸아민 (167.21 mg, 3.71 mmol, 242.68 uL)을 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 H2SO4 (70%, 20 mL)에 첨가하고, 100℃에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 빙수 (180 mL)에 천천히 부어 켄칭하여 황색 고체를 생성하였다. 고체를 수집하고, 건조시켜 표제 화합물 (14 g, 72.11 mmol, 97.21% 수율)을 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 195.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.38 (s, 2H), 5.79 (s, 2H) ppm.
단계 2: 1,3,6,8-테트라클로로-2,7-나프티리딘
2,7-나프티리딘-1,3,6,8-테트라올 (5 g, 25.75 mmol) 및 POCl3 (49.50 g, 322.83 mmol, 30.00 mL)의 혼합물을 160℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (1000 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (300 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.6 g, 5.97 mmol, 23.19% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 268.9.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.58 (s, 2H) ppm.
단계 3: 3,6-디클로로-2,7-나프티리딘
THF (10 mL) 중 1,3,6,8-테트라클로로-2,7-나프티리딘 (1 g, 3.73 mmol), NaBH3CN (1.17 g, 18.66 mmol), Pd(dppf)Cl2 (273.10 mg, 373.24 umol) 및 TMEDA (1.08 g, 9.33 mmol, 1.41 mL)의 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 30℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.6 g, 2.83 mmol, 75.92% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 199.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.30 - 9.20 (m, 2H), 7.68 (m, 2H) ppm.
단계 4: 3-클로로-6-페닐-2,7-나프티리딘
DMA (5 mL) 중 3,6-디클로로-2,7-나프티리딘 (150 mg, 753.63 umol), 트리페닐비스무트 (109.50 mg, 248.70 umol), Cs2CO3 (982.19 mg, 3.01 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (87.09 mg, 75.36 umol)의 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (15 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL*3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (160 mg, 664.76 umol, 88.21% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 241.1.
단계 5: 6-페닐-2,7-나프티리딘-3-카르보니트릴
DMA (3 mL) 중 3-클로로-6-페닐-2,7-나프티리딘 (50 mg, 207.74 umol), Pd(dppf)Cl2 (15.20 mg, 20.77 umol), Zn (2.72 mg, 41.55 umol) 및 Zn(CN)2 (48.79 mg, 415.48 umol, 26.37 uL)의 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (10 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (35 mg, 148.32 umol, 71.40% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 232.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.61 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 8.22 - 8.17 (m, 3H), 8.12 (s, 1H), 7.60 - 7.49 (m, 3H) ppm.
실시예 2. 메틸 (R)-3-((2-((4-시아노-4-메틸크로만-6-카르복스아미도)메틸)피리딘-4-일)에티닐)벤조에이트
Figure pct00130
단계 1. 메틸 3-[2-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸]-4-피리딜]에티닐]벤조에이트
Pd(PPh3)2Cl2 (73.3 mg, 0.10 mmol) 및 메틸 3-에티닐벤조에이트 (669 mg, 4.18 mmol)를 DMF (3 mL) 중 tert-부틸 N-[(4-브로모-2-피리딜)메틸]카르바메이트 (300 mg, 1.04 mmol), CuI (19.9 mg, 0.10 mmol), 및 Et3N (0.44 mL, 3.13 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과된 액체를 물 (20 mL)로 희석하고, EA (20 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0에서 0/1)에 의해 정제하였다. 용리액을 농축시켜 표제 화합물 (300 mg, 0.54 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 367.1.
단계 2. 메틸 3-[2-[2-(아미노메틸)-4-피리딜]에티닐]벤조에이트
TFA (0.24 mL, 3.28 mmol)를 DCM (1 mL) 중 메틸 3-[2-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸]-4-피리딜]에티닐]벤조에이트 (120 mg, 0.33 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (3 mL)로 희석하고, DCM (3 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 버렸다. 수성 층을 포화 NaHCO3 용액을 사용하여 pH=10으로 조정하고, DCM (3 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 (40 mg, 0.14 mmol)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 267.1.
단계 3. 메틸 3-[2-[2-[[(4R)-4-시아노-4-메틸-크로만-6-카르보닐]아미노]메틸]-4-피리딜]에티닐]벤조에이트
HOBt (30.4 mg, 0.23 mmol), EDCI (43.2 mg, 0.23 mmol), 및 DIPEA (0.078 mL, 0.45 mmol)를 DCM (0.5 mL) 중 메틸 3-[2-[2-(아미노메틸)-4-피리딜]에티닐]벤조에이트 (40 mg, 0.15 mmol) 및 (4R)-4-시아노-4-메틸-크로만-6-카르복실산 (35.9 mg, 0.17 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, DCM (10 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (FA 조건) (칼럼: 3_페노메넥스 루나 C18 75*30 mm*3 um; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 45%-75%, 7분)에 의해 정제하였다. 용리액을 동결건조시켜 표제 화합물 (23.5 mg, 0.051 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 466.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.15 - 9.12 (m, 1H), 8.60 - 8.58 (m, 1H), 8.12 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.03 - 8.01 (m, 1H), 7.89 - 7.86 (m, 2H), 7.63 - 7.59 (m, 1H), 7.47 - 7.44 (m, 2H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.35 - 4.33 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 2.47 - 2.41 (m, 1H), 2.23 - 2.21 (m, 1H), 1.79 (s, 3H) ppm.
하기 표 4의 실시예를 실시예 2의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 4. 본 발명의 화합물
Figure pct00131
Figure pct00132
Figure pct00133
실시예 3. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-(2-페닐-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-7-일)-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00134
단계 1. (4R)-N-[(4-브로모-2-피리딜)메틸]-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복스아미드
EDCI (1.54 g, 8.02 mmol), HOBt (1.08 g, 8.02 mmol), DIEA (4.66 mL, 26.7 mmol), 및 (4-브로모-2-피리딜)메탄아민 (1 g, 5.35 mmol, HCl)을 DCM (10 mL) 중 (4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 (1.28 g, 5.88 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (40 mL)로 희석한 다음, DCM (40 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0에서 1/10)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.2 g, 3.10 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [81BrM+H]+ = 388.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.39 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.78 - 7.76 (m, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.42 - 7.40 (m, 1H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.87 (s, 2H), 4.74 (d, J = 5.2Hz, 2H), 4.14 - 4.11 (m, 1H), 3.94 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 1.76 (s, 3H) ppm.
단계 2. tert-부틸 7-[2-[[(4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르보닐]아미노]메틸]-4-피리딜]-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트
[2-(2-아미노페닐)페닐]-메틸술포닐옥시-팔라듐;디tert-부틸-[2-(2,4,6-트리이소프로필페닐)페닐]포스판 (41.1 mg, 51.8 μmol) 및 tBuONa (149.3 mg, 1.55 mmol)를 디옥산 (4 mL) 중 (4R)-N-[(4-브로모-2-피리딜)메틸]-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복스아미드 (200 mg, 0.52 mmol) 및 tert-부틸 2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (220 mg, 1.04 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (80 mL)에 붓고, EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 역상 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, EA (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (80 mg, 0.11 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 518.2.
단계 3. (4R)-4-시아노-N-[[4-(2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-2-피리딜]메틸]-4-메틸-이소크로만-6-카르복스아미드
TFA (0.5 mL)를 DCM (1 mL) 중 tert-부틸 7-[2-[[(4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르보닐]아미노]메틸]-4-피리딜]-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (80 mg, 0.11 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 PE (2 mL) 및 MTBE (1 mL)의 혼합물로 연화처리하였다. 잔류물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (70 mg, TFA)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 418.2.
단계 4. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-(2-페닐-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-7-일)-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
디옥산 (1.5 mL) 중 (4R)-4-시아노-N-[[4-(2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-2-피리딜]메틸]-4-메틸-이소크로만-6-카르복스아미드 (65 mg, 0.12 mmol, TFA), 브로모벤젠 (57.6 mg, 0.37 mmol, 39 μL), [2-(2-아미노페닐)페닐]-메틸술포닐옥시-팔라듐;디tert-부틸-[2-(2,4,6-트리이소프로필페닐)페닐]포스판 (9.7 mg, 12 μmol), 및 t-BuONa (58.8 mg, 0.61 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징하였다. 이어서, 반응 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 물 (80 mL)에 붓고, EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (칼럼: 워터스 엑스브리지 C18 150*50 mm* 10 um; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 46%-66%, 10분)에 의해 정제하고, 분획을 동결건조시켜 표제 화합물 (3.62 mg, 7.13 μmol, 5.83% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 494.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.17 - 9.07 (m, 1H), 8.12 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 - 7.12 (m, 2H), 6.72 - 6.64 (m, 1H), 6.52 - 6.39 (m, 4H), 4.92 - 4.78 (m, 2H), 4.52 - 4.42 (m, 2H), 4.20 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.85 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.77 (s, 4H), 3.54 (s, 2H), 3.40 - 3.35 (m, 2H), 2.27 - 2.18 (m, 2H), 1.67 (s, 3H) ppm.
하기 표 5의 실시예를 실시예 3의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 5. 본 발명의 화합물
Figure pct00135
실시예 4. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-(1-페닐아제티딘-3-일)-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00136
단계 1. tert-부틸 3-(2-시아노-4-피리딜)아제티딘-1-카르복실레이트
DMA (80 mL) 중 4-브로모피리딘-2-카르보니트릴 (4 g, 21.9 mmol), tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카르복실레이트 (7.43 g, 26.2 mmol), 디클로로니켈;1,2-디메톡시에탄 (480 mg, 2.19 mmol), 피리딘-2-카르복스아미딘 히드로클로라이드 (344 mg, 2.19 mmol), NaI (1.64 g, 10.9 mmol), Zn (2.86 g, 43.7 mmol), 및 TFA (249 mg, 2.19 mmol, 162 μL)의 혼합물을 탈기시키고, N2로 3회 퍼징하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 물 (500 mL)로 희석하고, EA (500 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 1/0에서 0/1)에 의해 정제하였다. 용리액을 농축시켜 표제 화합물 (3.8 g, 14.6 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ =260.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 8.70 - 7.68 (m, 1H), 8.08 - 8.07 (m, 1H), 7.72 - 7.70 (m, 1H), 4.24 - 4.23 (m, 2H), 3.93 - 3.90 (m, 3H), 1.40 (s, 9H) ppm.
단계 2. 4-(아제티딘-3-일)피리딘-2-카르보니트릴
HCl/디옥산 (4 N, 20 mL) 중 tert-부틸 3-(2-시아노-4-피리딜)아제티딘-1-카르복실레이트 (2.0 g, 7.71 mmol)의 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (1.6 g, 조 물질, HCl)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 160.0.
단계 3. 4-(1-페닐아제티딘-3-일)피리딘-2-카르보니트릴
피리딘 (16 mL) 중 페닐보론산 (3.0 g, 24.5 mmol) 및 4-(아제티딘-3-일)피리딘-2-카르보니트릴 (1.6 g, 8.18 mmol, HCl)의 용액에 아세트산구리 (II) (1.71 g, 9.40 mmol) 및 4A 분자체 (1.6 g)를 첨가하였다. 혼합물을 산소 분위기 하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고, EA (100 mL x 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0에서 0/1)에 의해 정제하였다. 용리액을 농축시켜 표제 화합물 (120 mg, 0.45 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 236.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.71 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.12 - 8.11 (m, 1H), 7.78 - 7.77 (m, 1H), 7.21 - 7.17 (m, 2H), 6.74 - 6.70 (m, 1H), 6.50 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.22 - 4.19 (m, 2H), 4.04 - 4.01 (m, 1H), 3.87 - 3.84 (m, 2H) ppm.
단계 4. tert-부틸 N-[[4-(1-페닐아제티딘-3-일)-2-피리딜]메틸]카르바메이트
MeOH (2 mL) 중 4-(1-페닐아제티딘-3-일)피리딘-2-카르보니트릴 (100 mg, 0.43 mmol) 및 NiCl2·6H2O (253 mg, 1.06 mmol)의 용액에 0℃에서 NaBH4 (161 mg, 4.25 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. Boc2O (1.39 g, 6.38 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. THF (2 mL) 및 NaHCO3 (2 mL)을 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl 용액 (30 mL)으로 희석하고, EA (30 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 12 g 세파플래쉬® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~100%에틸아세테이트/석유 에테르구배의 용리액, 40 mL/분)에 의해 정제하였다. 용리액을 농축시켜 표제 화합물 (50 mg, 0.12 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 340.3.
단계 5. [4-(1-페닐아제티딘-3-일)-2-피리딜]메탄아민
TFA (168 mg, 1.47 mmol, 109 μL)를 DCM (1 mL) 중 tert-부틸 N-[[4-(1-페닐아제티딘-3-일)-2-피리딜]메틸]카르바메이트 (50 mg, 0.15 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 N2 기류에 의해 건조시켰다. 조 생성물을 PE/MTBE=1:1 (3 mL)로 연화처리하여 표제 화합물 (30 mg, 0.085 mmol, TFA)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 240.0.
단계 6. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-(1-페닐아제티딘-3-일)-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
HOBt (17.2 mg, 0.13 mmol), EDCI (24.4 mg, 0.13 mmol), 및 DIPEA (32.9 mg, 0.25 mmol, 44 μL)를 DCM (0.5 mL) 중 [4-(1-페닐아제티딘-3-일)-2-피리딜]메탄아민 (30 mg, 0.085 mmol, TFA 염) 및 (4R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (20.3 mg, 0.093 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, DCM (10 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (중성 조건) (칼럼: 워터스 엑스브리지 C18 150*50 mm* 10 μm; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 36%-66%, 10분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (12.8 mg, 0.030 mmol)을 황색 검으로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 439.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.46 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.82 - 7.80 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.38 - 7.37 (m, 1H), 7.21 - 7.17 (m, 3H), 6.75 - 6.70 (m, 1H), 6.52 - 6.50 (m, 2H), 4.88 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.26 - 4.24 (m, 2H), 4.18 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.91 - 3.83 (m, 4H), 1.71 (s, 3H) ppm.
하기 표 6의 실시예를 실시예 4의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 6. 본 발명의 화합물
Figure pct00137
실시예 5. (R,E)-4-시아노-N-((4-(1,2-디플루오로-2-페닐비닐)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00138
단계 1. tert-부틸 N-[[4-[(E)-1,2-디플루오로-2-페닐-비닐]-2-피리딜]메틸]카르바메이트
Pd(PPh3)4 (53 mg, 0.046 mmol) 및 K3PO4 (292 mg, 1.37 mmol)를 N2 하에 25℃에서 디옥산 (3 mL) 중 (Z)-(2-클로로-1,2-디플루오로비닐)벤젠 (80 mg, 0.46 mmol) 및 (2-(((tert-부톡시카르보닐)아미노)메틸)피리딘-4-일)보론산 (173 mg, 0.69 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, EA (30 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (석유 에테르/EA = 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (60 mg, 0.14 mmol)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 347.2.
단계 2. [4-[(E)-1,2-디플루오로-2-페닐-비닐]-2-피리딜]메탄아민
4 N HCl/디옥산 (0.22 mL)을 25℃에서 디옥산 (1 mL) 중 tert-부틸 N-[[4-[(E)-1,2-디플루오로-2-페닐-비닐]-2-피리딜]메틸]카르바메이트 (60 mg, 0.17 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (40 mg, 0.14 mmol, HCl 염)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 247.2.
단계 3. (4R)-4-시아노-N-[[4-[(E)-1,2-디플루오로-2-페닐-비닐]-2-피리딜]메틸]-4-메틸-이소크로만-카르복스아미드
HOBt (28.7 mg, 0.21 mmol), EDCI (40.7 mg, 0.21 mmol), 및 DIEA (0.12 mL, 0.71 mmol)를 25℃에서 DCM (2 mL) 중 [4-[(E)-1,2-디플루오로-2-페닐-비닐]-2-피리딜]메탄아민 (40 mg, 0.14 mmol, HCl 염) 및 (4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 (36.9 mg, 0.17 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, DCM (10 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용리액을 동결건조시켜 표제 화합물 (22.3 mg, 0.050 mmol, FA 염)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 446.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.68 - 8.56 (m, 1H), 8.17 - 8.08 (m, 1H), 7.90 - 7.84 (m, 1H), 7.82 - 7.73 (m, 3H), 7.68 - 7.60 (m, 1H), 7.56 - 7.42 (m, 3H), 7.33 - 7.19 (m, 1H), 4.92 - 4.88 (m, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.20 - 3.90 (m, 2H), 1.75 (s, 3H) ppm.
하기 표 7의 실시예를 실시예 5의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 7. 본 발명의 화합물
Figure pct00139
실시예 6. (4R)-N-[(4-벤질옥시-2-피리딜)메틸]-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00140
단계 1. 4-벤질옥시피리딘-2-카르보니트릴
t-BuOK (2.43 g, 21.65 mmol)를 0℃에서 THF (10 mL) 중 4-클로로피리딘-2-카르보니트릴 (1 g, 7.2 mmol) 및 페닐메탄올 (0.90 mL, 8.7 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (수성, 20 mL)에 붓고, EA (7 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 10/1에서 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.1 g, 4.24 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.63 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.78 - 7.76 (m, 1H), 7.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.45 - 7.39 (m, 2H), 7.23 - 7.21 (m, 1H), 5.29 (s, 2H) ppm.
단계 2. (4-벤질옥시-2-피리딜)메탄아민
BH3·THF (1 M, 4.76 mL)를 THF (2 mL) 중 4-벤질옥시피리딘-2-카르보니트릴 (200 mg, 0.95 mmol)의 용액에 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃로 가온하고, 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 2 N HCl (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 30분 동안 가열한 다음, 25℃로 냉각시켰다. pH = 12가 달성될 때까지 2 N NaOH를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 EA (5 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (170 mg, 0.56 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 215.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.48 - 8.43 (m, 1H), 8.30 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.44 - 7.39 (m, 5H), 7.25 - 7.21 (m, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.50 (d, J = 2.8 Hz, 2H) ppm.
단계 3. (4R)-N-[(4-벤질옥시-2-피리딜)메틸]-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복스아미드
DIEA (0.41 mL, 2.3 mmol)를 DMF (2 mL) 중 (4-벤질옥시-2-피리딜)메탄아민 (100 mg, 0.47 mmol), (4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 (101 mg, 0.47 mmol), EDCI (179 mg, 0.93 mmol), 및 HOBt (126 mg, 0.93 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC (칼럼: 페노메넥스 시너지 C18 150*25*10 μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 20%-50%, 9분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (51.8 mg, 0.11 mmol, FA 염)을 황색 검으로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 414.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.21 - 9.18 (m, 1H), 8.40 - 8.30 (m, 1H), 8.14 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.89 - 7.88 (m, 1H), 7.48 - 7.39 (m, 2H), 7.38 - 7.32 (m, 3H), 7.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.99 - 6.91 (m, 2H), 5.17 (s, 2H), 4.95 - 4.80 (m, 2H), 4.58 - 4.49 (m, 2H), 4.22 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.69 (s, 3H) ppm.
하기 표 8의 실시예를 실시예 6의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 8. 본 발명의 화합물
Figure pct00141
실시예 7. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-[(1S,2S)-2-페닐시클로프로필]-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드 및 (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-[(1R,2R)-2-페닐시클로프로필]-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00142
단계 1. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-[(1S,2S)-2-페닐시클로프로필]-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드 및 (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-[(1R,2R)-2-페닐시클로프로필]-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
PdCl2 (dtbpf) (33.7 mg, 0.052 mmol) 및 K3PO4 (165 mg, 0.78 mmol)를 디옥산 (1 mL) 및 H2O (0.1 mL) 중 (4R)-N-[(4-브로모-2-피리딜)메틸]-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복스아미드 (100 mg, 0.26 mmol), 및 (2-페닐시클로프로필)보론산 (83.9 mg, 0.52 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 세척하고, EA (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (칼럼: 페노메넥스 루나 C18 150*25 mm* 10 μm; 이동상: [물 (0.1%TFA)-ACN]; B%: 32%-52%, 10분)에 의해 정제하여 표제 화합물의 혼합물 (60 mg, 132.24 μmol, 51.08% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다. 혼합물을 키랄 SFC (칼럼: 다이셀 키랄셀 OJ-H (250 mm x 30 mm, 5 μm); 이동상: [0.1%NH3·H2O MeOH]; B%: 40%-40%, 3.9분; 70분)에 의해 분리하고, 용액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다.
제1 용리 화합물 (12.9 mg, 0.029 mmol, 회백색 고체):
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 424.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.18 - 9.14 (m, 1H), 8.37 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.90 - 7.86 (m, 1H), 7.29 - 7.25 (m, 3H), 7.19 - 7.15 (m, 4H), 7.07 - 7.04 (m, 1H), 4.91 - 4.79 (m, 2H), 4.57 - 4.53 (m, 2H), 4.21 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.85 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.29 - 2.21 (m, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.57 - 1.52 (m, 2H) ppm.
제2 용리 화합물 (11.3 mg, 0.027 mmol, 황색 고체):
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 424.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.25 - 9.21 (m, 1H), 8.43 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.90 - 7.87 (m, 1H), 7.30 - 7.25 (m, 3H), 7.20 - 7.16 (m, 4H), 7.07 - 7.03 (m, 1H), 4.91 - 4.79 (m, 2H), 4.60 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.21 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.85 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.36 - 2.30 (m, 2H), 1.67 (s, 3H), 1.64 - 1.59 (m, 2H) ppm.
하기 표 9의 실시예를 실시예 7의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 9. 본 발명의 화합물
Figure pct00143
실시예 8. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-(2-페닐에틸)-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00144
단계 1. tert-부틸 N-[[4-[(E)-스티릴]-2-피리딜]메틸]카르바메이트
Pd(OAc)2 (7.8 mg, 0.0325 mmol)를 DMF (2 mL) 중 tert-부틸 ((4-브로모피리딘-2-일)메틸)카르바메이트 (200 mg, 0.70 mmol), 스티렌 (363 mg, 3.48 mmol), Et3N (0.14 mL, 1.04 mmol), 및 트리스-o-톨릴포스판 (21.2 mg, 0.070 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고, DCM (10 mL x 2)으로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 1/0에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (200 mg, 0.64 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 311.4
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.51 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.42 - 7.40 (m, 2H), 7.38 - 7.28(m, 4H), 7.04 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H) ppm.
단계 2. tert-부틸 N-[[4-(2-페닐에틸)-2-피리딜]메틸]카르바메이트
Pd(OH)2/C (30 mg)를 MeOH (2 mL) 중 tert-부틸 N-[[4-[(E)-스티릴]-2-피리딜]메틸]카르바메이트 (100 mg, 0.32 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, H2로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 H2 분위기 (15 psi) 하에 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (90 mg, 0.29 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 313.0.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.41 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.31-7.27(m, 2H), 7.21 - 7.18 (m, 1H), 7.16- 7.14 (m, 2H), 7.06 (s, 1H), 6.98-6.97 (m, 1H), 4.41 (br d, J = 5.2 Hz, 2H), 2.92 (s, 4H), 1.47 (s, 9H) ppm.
단계 3. [4-(2-페닐에틸)-2-피리딜]메탄아민
4 N HCl/디옥산 (5.0 mL) 중 tert-부틸 N-[[4-(2-페닐에틸)-2-피리딜]메틸]카르바메이트 (90 mg, 0.29 mmol)의 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (70 mg, 0.28 mmol, HCl 염)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 213.3.
단계 4. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-(2-페닐에틸)-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
DIEA (0.14 mL, 0.80 mmol), EDCI (46.2 mg, 0.24 mmol), 및 HOBt (32.6 mg, 0.24 mmol)를 DCM (0.5 mL) 중 [4-(2-페닐에틸)-2-피리딜]메탄아민 (40 mg, 0.16 mmol, HCl 염) 및 (4R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (38.4 mg, 0.18 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (3 mL)로 희석하고, DCM (3 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 1/0에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (23.5 mg, 0.054 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 412.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.34 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.85 - 7.83 (m, 1H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 - 7.16 (m, 3H), 7.14 - 7.12 (m, 3H), 7.10 - 7.07 (m, 1H), 4.90 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 4.64 (s, 2H), 4.20 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.92 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.95 - 2.92 (m, 4H), 1.74 (s, 3H) ppm.
실시예 9. 메틸 3-[(E)-2-[2-[[(4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르보닐]아미노]메틸]-4-피리딜]비닐]벤조에이트
Figure pct00145
단계 1. 메틸 3-[(E)-2-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸]-4-피리딜]비닐]벤조에이트
Pd(OAc)2 (15.6 mg, 0.070 mmol), 트리스-o-톨릴포스판 (42.4 mg, 0.14 mmol) 및 Et3N (0.19 mL, 1.39 mmol)을 DMF (2 mL) 중 tert-부틸 N-[(4-브로모-2-피리딜)메틸]카르바메이트 (200 mg, 0.70 mmol) 및 메틸 3-비닐벤조에이트 (226 mg, 1.39 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, EA (20 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/EA = 10/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (200 mg, 0.54 mmol)을 담황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 369.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.52 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.00 (d, J = 7.6Hz, 1H), 7.71 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.48 - 7.46 (m, 1H), 7.39 - 7.28 (m, 3H), 7.10 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.12 (s, 3H), 1.55 (s, 9H) ppm.
단계 2. 메틸 3-[(E)-2-[2-(아미노메틸)-4-피리딜]비닐]벤조에이트
TFA (0.50 mL, 6.75 mmol)를 DCM (1 mL) 중 메틸 3-[(E)-2-[2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸]-4-피리딜]비닐]벤조에이트 (100 mg, 0.27 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NaHCO3 (30 mL)에 붓고, DCM (20 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (60 mg, 0.22 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 269.1.
단계 3. 메틸 3-[(E)-2-[2-[[(4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르보닐]아미노]메틸]-4-피리딜]비닐]벤조에이트
HOBt (22.7 mg, 0.17 mmol), EDCI (32.1 mg, 0.17 mmol, 및 DIEA (0.058 mL, 0.33 mmol)를 DCM (1 mL) 중 메틸 3-[(E)-2-[2-(아미노메틸)-4-피리딜]비닐]벤조에이트 (30 mg, 0.11 mmol) 및 (4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 (29.1 mg, 0.13 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, DCM (20 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 TLC (DCM/MeOH = 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (25.2 mg, 0.052 mmol)을 청색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 468.3.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.52 - 8.46 (m, 1H), 8.30 - 8.24 (m, 1H), 8.18 - 8.14 (m, 1H), 8.01 - 7.95 (m, 1H), 7.93 - 7.85 (m, 2H), 7.64 - 7.60 (m, 1H), 7.59 - 7.49 (m, 3H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 4.94 - 4.91 (m, 2H), 4.74 (s, 2H), 4.25 - 3.90 (m, 5H), 1.77 (s, 3H) ppm.
하기 표 10의 실시예를 실시예 9의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 10. 본 발명의 화합물
Figure pct00146
실시예 10. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-(페녹시메틸)-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드.
Figure pct00147
단계 1. 2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸]피리딘-4-카르복실산
Pd(OAc)2 (62.6 mg, 0.28 mmol), DCPP (171 mg, 0.28 mmol), H2O (2 mL), 및 K2CO3 (578 mg, 4.18 mmol)을 DMSO (8 mL) 중 2 tert-부틸 N-[(4-브로모-2-피리딜)메틸]카르바메이트 (800 mg, 2.79 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 CO (g)로 3회 퍼징하였다. 생성된 혼합물을 CO 분위기 (15psi) 하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고, EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 버리고, 수성 층을 합하고, 1 N HCl을 pH=4가 달성될 때까지 첨가하였다. 반응 혼합물을 EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (60 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (436 mg, 1.68 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ =253.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.63-13.56 (m, 1H), 8.67-8.66 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.68-7.66 (m, 1H), 7.55-7.53 (m, 1H), 4.29 (br d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H) ppm.
단계 2. tert-부틸 N-[[4-(히드록시메틸)-2-피리딜]메틸]카르바메이트
BH3·Me2S (10 M, 0.18 mL)를 THF (2 mL) 중 2-[(tert-부톡시카르보닐아미노)메틸]피리딘-4-카르복실산 (150 mg, 0.59 mmol)의 용액에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 25℃로 가온하고, 12시간 동안 교반하였다. MeOH (5 mL)를 반응 혼합물에 0℃에서 첨가한 다음, 가온하고, 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 H2O (40 mL)로 희석하고, EA (40 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 1/0에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (100 mg, 0.42 mmol)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ =239.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.50 (d, J = 5.2Hz, 1H), 7.29 - 7.27 (m, 1H), 7.19 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.56 (br s, 1H), 4.74 (s, 2H), 4.44 (br d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H) ppm.
단계 3. tert-부틸 N-[[4-(페녹시메틸)-2-피리딜]메틸]카르바메이트
DIAD (0.098 mL, 0.50 mmol)를 0℃에서 THF (1 mL) 중 tert-부틸 N-[[4-(히드록시메틸)-2-피리딜]메틸]카르바메이트 (80 mg, 0.34 mmol), PPh3 (132 mg, 0.50 mmol), 및 페놀 (0.060 mL, 0.67 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 가온하고, 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고, EA (10 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 1/0에서 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (75 mg, 0.24 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ =315.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.54 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.34-7.29 (m, 3H), 7.25 (br s, 1H), 7.00-6.94 (m, 3H), 5.54 (br s, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.47 (br d, J =4.8 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H) ppm.
단계 4. [4-(페녹시메틸)-2-피리딜]메탄아민
HCl/디옥산 (4 N, 1 mL) 중 tert-부틸 N-[[4-(페녹시메틸)-2-피리딜]메틸]카르바메이트 (40 mg, 0.13 mmol)의 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (30 mg, 0.12 mmol, HCl 염)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ =215.3.
단계 5. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[4-(페녹시메틸)-2-피리딜]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
DIEA (0.10 mL, 0.60 mmol), EDCI (34.4 mg, 0.18 mmol), 및 HOBt (24.2 mg, 0.18 mmol)를 DCM (0.5 mL) 중 (4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 (26 mg, 0.12 mmol) 및 [4-(페녹시메틸)-2-피리딜]메탄아민 (30 mg, 0.12 mmol, HCl 염)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (3 mL)로 희석하고, DCM (3 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 1/0에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (18.8 mg, 0.045 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 414.4.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.49 (d, J = 5.12 Hz, 1H),8.10(d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.84-7.82 (m, 1H),7.51-7.40(m, 1H),7.26-7.21(m,3H),6.95-6.91(m,3H) ,5.17 (s, 2H), 4.90 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.20 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.92 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.74 (s, 3H) ppm.
실시예 11 및 12: (R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-((1r,3R)-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드 및 (R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-((1s,3S)-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00148
단계 1: 4-(6-브로모피리딘-2-일)모르폴린
DMSO (20 mL) 중 2,6-디브로모피리딘 (2 g, 8.44 mmol) 및 모르폴린 (2.94 g, 33.77 mmol, 2.97 mL)의 혼합물에 DIEA (3.27 g, 25.33 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 10시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (150 mL)에 부은 다음, EA (100 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (250 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/에틸 아세테이트=50/1에서 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.6 g, 6.58 mmol, 77.96% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.34 - 7.30 (m, 1H), 6.80 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.87 - 3.75(m, 4H), 3.52 - 3.49 (m, 4H) ppm.
단계 2: 4-(3-히드록시-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피콜리노니트릴
THF (10 mL) 중 4-(6-브로모피리딘-2-일)모르폴린 (1.41 g, 5.81 mmol)의 혼합물에 N2 하에 -70℃에서 n-BuLi (2.5 M, 2.32 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 -70℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 생성된 용액을 THF (10 ml) 중 4-(3-옥소시클로부틸)피콜리노니트릴 (500 mg, 2.90 mmol)의 용액에 -70℃에서 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 -70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl (100 mL)에 붓고, EA (100 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (150 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (430 mg, 1.25 mmol, 43.14% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 337.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.68 (d, J = 5.2Hz, 1H), 8.08 - 8.07 (m, 1H), 7.73-7.71( m, 1H), 7.58 - 7.54 (m,1H), 6.94 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.84 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 3.74 - 3.72 (m, 4H), 3.49 - 3.47 (m, 4H), 2.95-2.90 (m, 2H), 2.42 - 2.37 (m, 2H) ppm.
단계 3: O-(3-(2-시아노피리딘-4-일)-1-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸) S-메틸 카르보노디티오에이트
THF (2 mL) 중 NaH (59.45 mg, 1.49 mmol, 60% 순도)의 혼합물에 N2 하에 0℃에서 THF (2 mL) 중 4-(3-히드록시-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피콜리노니트릴 (200 mg, 594.55 umol)을 첨가하였다. 혼합물을 10℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, CS2 (242.19 mg, 3.18 mmol, 192.22 uL)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반한 다음, MeI (219.41 mg, 1.55 mmol, 96.23 uL)를 혼합물에 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (40 mL)로 희석하고, EA (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1-1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (250 mg, 533.34 umol, 89.70% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 427.1
단계 4: 4-(3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피콜리노니트릴
톨루엔 (3 mL) 중 O-(3-(2-시아노피리딘-4-일)-1-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸) S-메틸 카르보노디티오에이트 (125 mg, 293.05 umol)의 혼합물에 Bu3SnH (255.88 mg, 879.14 umol, 232.62 uL) 및 AIBN (9.62 mg, 58.61 umol)을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 KF 용액 (50 mL)에 붓고, 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 EA (50 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (80 mg, 187.27 umol, 63.91% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 321.2
단계 5: tert-부틸 ((4-(3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)카르바메이트
MeOH (2 mL) 및 EA (2 mL) 중 4-(3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피콜리노니트릴 (80 mg, 249.70 umol)의 혼합물에 TEA (75.80 mg, 749.09 umol), (Boc)2O (108.99 mg, 499.40 umol) 및 라니-Ni (50 mg, 583.60 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA로 희석한 다음, EA (15 mL * 3)로 조심스럽게 여과하였다. 여과물을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (90 mg, 188.68 umol, 75.56% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 425.3.
단계 6: (4-(3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메탄아민 히드로클로라이드
HCl/디옥산 (4 M, 4 mL) 중 tert-부틸 ((4-(3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)카르바메이트 (90 mg, 212.00 umol)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (76 mg, 조 물질, HCl 염)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 325.2
단계 7: (R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-((1r,3R)-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드 및 (R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-((1s,3S)-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
DCM (3 mL) 중 (4-(3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메탄아민 히드로클로라이드 (76 mg, 210.60 umol), (4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 (54.89 mg, 252.72 umol) 및 DIEA (81.65 mg, 631.79 umol, 110.05 uL)의 혼합물에 EDCI (60.56 mg, 315.89 umol) 및 HOBt (42.68 mg, 315.89 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 DCM을 제거하였다. 잔류물을 정제용 TLC (DCM:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 조 라세미 생성물 (34 mg)을 수득하였다. 라세미 생성물을 추가로 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 AD (250 mm*30 mm,10 um); 이동상: [0.1%NH3H2O IPA];B%: 50%-50%,4.5분;25분)에 의해 분리하여 피크 1 (Rf=0.743분) 및 피크 2 (Rf=1.102분)를 수득하였다. 피크 1의 분획 (Rf=0.743분)을 진공 하에 농축시켜 잔류물을 수득한 다음, 역상 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하고, 동결건조시켜 (R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-((1r,3R)-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드 (3.10 mg, 5.92 umol, 2.81% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. 피크 2의 분획 (Rf=1.102분)을 진공 하에 농축시켜 잔류물을 수득한 다음, 역상 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하고, 동결건조시켜 (R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-((1s,3S)-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드 (7.55 mg, 14.42 umol, 6.85% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
(R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-((1r,3R)-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 524.2
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ = 8.43 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.88-7.85 (m, 1H), 7.49-7.45(m, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.32 - 7.30 (m, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.62 - 6.58 (m, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.19 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.92 - 3.78 (m, 5H), 3.55 - 3.51 (m, 5H), 2.79-2.72 (m, 2H), 2.56 - 2.49 (m, 2H), 1.74 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: AD-3_5CM_IPA(DEA)_40_3ML_T35.M, Rt = 0.743분, ee% = 100%.
(R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-((1s,3S)-3-(6-모르폴리노피리딘-2-일)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 524.2
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ = 8.40 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.86-7.83 (m, 1H), 7.44-7.41(m, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.27 - 7.24 (m, 2H), 6.58 - 6.53 (m, 2H), 4.90 (s, 1H), 4.66 (m, 2H), 4.18 (d, J =11.2 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.76 - 3.73 (m, 4H), 3.56 - 3.42 (m, 6H), 2.72 - 2.64 (m, 2H), 2.50 - 2.42 (m, 2H), 1.72 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: AD-3_5CM_IPA(DEA)_40_3ML_T35.M, Rt = 1.100분, ee% = 100%.
하기 표 11의 실시예를 실시예 11 및 12의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 11. 본 발명의 화합물
Figure pct00149
실시예 13 및 14: (R)-4-시아노-N-((4-((1r,3R)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 및 (R)-4-시아노-N-((4-((1s,3S)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00150
단계 1: 4-브로모-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피리딘
DCM (75 mL) 중 (4-브로모-2-피리딜)메탄올 (3 g, 15.96 mmol) 및 이미다졸 (1.63 g, 23.93 mmol)의 혼합물에 15℃에서 TBSCl (2.89 g, 19.15 mmol, 2.35 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 모액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE/EA = 20/1-5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (5.4 g, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 302.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.32 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 1H), 4.82 (s, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.14 (s, 6H) ppm.
단계 2: 1-메톡시-3-비닐벤젠
THF (100 mL) 중 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드 (25.19 g, 70.51 mmol)의 혼합물에 t-BuOK (8.57 g, 76.39 mmol)를 N2 하에 0℃에서 여러 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 3-메톡시벤즈알데히드 (8 g, 58.76 mmol, 7.14 mL)를 N2 하에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 PE (100 mL)로 희석하고, 여과하였다. 모액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE-PE/EA = 100/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (4 g, 29.81 mmol, 50.7% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.27 - 7.22 (m, 1H), 7.02 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.98 - 6.94 (m, 1H), 6.84 - 6.81 (m, 1H), 6.73 - 6.66 (m, 1H), 5.78-5.73 (m, 1H), 5.26 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H) ppm.
단계 3: 3-(3-메톡시페닐)시클로부탄-1-온
트리플루오로메탄술폰산 무수물 (14.72 g, 52.17 mmol, 8.61 mL)을 DMA (3.90 g, 44.72 mmol, 4.16 mL) 및 DCE (50 mL)의 혼합물에 N2 하에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, DCE (25 mL) 중 1-메톡시-3-비닐벤젠 (5 g, 37.26 mmol, 5.17 mL) 및 2,4,6-트리메틸피리딘 (6.32 g, 52.17 mmol, 6.89 mL)의 혼합물을 N2 하에 적가하였다. 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 CCl4 (50 mL) 및 H2O (50 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고, DCM (100 mL*2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE-PE/EA = 20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (3.2 g, 18.16 mmol, 48.7% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.32 - 7.28 (m, 1H), 6.91 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.88 - 6.78 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.71 - 3.65 (m, 1H), 3.56 - 3.44 (m, 2H), 3.33 - 3.22 (m, 2H) ppm.
단계 4: 1-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피리딘-4-일)-3-(3-메톡시페닐)시클로부탄-1-올
THF (30 mL) 중 4-브로모-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피리딘 (3.29 g, 10.90 mmol)의 혼합물에 n-BuLi (2.5 M, 5.45 mL)를 -70℃에서 적가하였다. 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, THF (10 mL) 중 3-(3-메톡시페닐)시클로부탄-1-온 (1.6 g, 9.08 mmol)의 용액을 -70℃에서 적가하였다. 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (150 mL)에 적가하고, EA (100 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE/EA = 10/1-2/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.6 g, 4.00 mmol, 44.1% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 400.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.56 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.43 - 7.40 (m, 1H), 7.30 - 7.27 (m, 1H), 6.90 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.86 - 6.83 (m, 1H), 6.80 - 6.77 (m, 1H), 4.90 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.27 - 3.16 (m, 1H), 3.06 - 2.94 (m, 2H), 2.66 - 2.55 (m, 2H), 2.19 (s, 1H), 0.99 (s, 9H), 0.16 (s, 6H) ppm.
단계 5: O-(1-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피리딘-4-일)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸) S-메틸 카르보노디티오에이트
THF (8 mL) 중 NaH (250.23 mg, 6.26 mmol, 60% 순도)의 혼합물에 THF (12 mL) 중 1-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피리딘-4-일)-3-(3-메톡시페닐)시클로부탄-1-올 (1 g, 2.50 mmol)의 용액을 N2 하에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 N2 하에 10℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, CS2 (1.02 g, 13.39 mmol, 809.05 uL)를 상기 혼합물에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, MeI (923.53 mg, 6.51 mmol, 405.06 uL)를 혼합물에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH (2 mL)로 켄칭하고, H2O (40 mL)로 희석하고, EA (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE/EA = 10/1-3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.08 g, 2.21 mmol, 88.1% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 490.5.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.52 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.23 (m, 2H), 6.87 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.82 - 6.78 (m, 2H), 4.88 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.44 - 3.34 (m, 1H), 3.23 - 3.18 (m, 2H), 2.93 - 2.86 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 0.99 (s, 9H), 0.14 (s, 6H) ppm.
단계 6: 2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘
톨루엔 (11 mL) 중 O-(1-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피리딘-4-일)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸) S-메틸 카르보노디티오에이트 (1.08 g, 2.21 mmol)의 혼합물에 25℃에서 Bu3SnH (1.93 g, 6.62 mmol, 1.75 mL) 및 트리에틸보란 (1 M, 6.62 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 KF 수용액 (30 mL)에 붓고, 15℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 EA (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE/EA = 20/1-5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (740 mg, 1.88 mmol, 85.0% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 384.2.
단계 7: (4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메탄올
DCM (4 mL) 및 TFA (12.32 g, 108.05 mmol, 8 mL) 중 2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘 (740 mg, 1.93 mmol)의 혼합물을 25℃에서 72시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (50 mL)에 붓고, NaHCO3을 사용하여 pH를 9로 조정하였다. 혼합물을 DCM (30 mL*2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE/EA = 5/1-EA)에 의해 정제하여 표제 화합물 (470 mg, 1.75 mmol, 90.5% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 270.0.
단계 8: 2-((4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온
THF (4 mL) 중 (4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메탄올 (200 mg, 742.56 umol), 이소인돌린-1,3-디온 (163.88 mg, 1.11 mmol) 및 PPh3 (292.15 mg, 1.11 mmol)의 혼합물에 N2 하에 0℃에서 DIAD (225.23 mg, 1.11 mmol, 216.57 uL)를 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE/EA = 10/1-1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (245 mg, 582.96 umol, 78.5% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 399.3.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.50 - 8.39 (m, 1H), 7.94 - 7.86 (m, 2H), 7.80 - 7.69 (m, 2H), 7.26 - 6.70 (m, 6H), 5.04 - 4.98 (m, 2H), 3.87 - 3.77 (m, 3H), 3.69 - 3.41 (m, 2H), 2.86 - 2.15 (m, 4H) ppm.
단계 9: (4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메탄아민
MeOH (3 mL) 중 2-((4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온 (245 mg, 614.88 umol)의 혼합물에 NH2NH2·H2O (307.81 mg, 6.15 mmol, 298.84 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고, EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (170 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 269.2.
단계 10: (R)-4-시아노-N-((4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DMF (1.5 mL) 중 (4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메탄아민 (80 mg, 298.12 umol) (4R)-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복실산 (64.76 mg, 298.12 umol), EDCI (85.72 mg, 447.17 umol) 및 HOBt (60.42 mg, 447.17 umol)의 혼합물에 DIEA (115.59 mg, 894.35 umol, 155.78 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (15 mL)에 붓고, EA (10 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE/EA = 5/1-EA)에 의해 정제하여 표제 화합물 (85 mg, 175.04 umol, 58.7% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 468.4.
단계 11: (R)-4-시아노-N-((4-((1r,3R)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 및 (R)-4-시아노-N-((4-((1s,3S)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
(R)-4-시아노-N-((4-(3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (85 mg, 181.80 umol)를 SFC (칼럼: 다이셀 키랄셀 OD (250 mm*30 mm, 10 um); 이동상: [0.1%NH3H2OIPA]; B%: 50%-50%, 5.0분; 30분)에 의해 분리하였다. 이동상 (피크 1, Rt=0.487분)을 감압 하에 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 황색 고체를 역상 칼럼 (0.1% FA 조건)으로 정제하였다. 용리액을 감압 하에 농축시켜 MeCN을 제거하고, 동결건조시켜 (R)-4-시아노-N-((4-((1s,3S)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (34.42 mg, 73.62 umol, 40.5% 수율, 100% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. 이동상 (피크 2, Rt=0.679분)을 감압 하에 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 황색 고체를 역상 칼럼 (0.1% FA 조건)으로 정제하였다. 용리액을 감압 하에 농축시켜 MeCN을 제거하고, 동결건조시켜 (R)-4-시아노-N-((4-((1r,3R)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (14.46 mg, 30.93 umol, 17.01% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
(R)-4-시아노-N-((4-((1s,3S)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드:
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 468.3.
1H NMR (400 MHz, Me OD-d4) δ = 8.40 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.86 - 7.83 (m, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.28 - 7.21 (m, 2H), 7.18 - 7.14 (m, 1H), 6.81 - 6.80 (m, 1H), 6.77 - 6.70 (m, 2H), 4.90 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.69 (s, 2H), 4.19 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.61 - 3.48 (m, 2H), 2.86 - 2.74 (m, 2H), 2.26 - 2.15 (m, 2H), 1.73 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: AD-3_5CM_MEOH(DEA)_5_40_3ML_AT35.M, Rt = 0.493분, ee% = 100%.
(R)-4-시아노-N-((4-((1r,3R)-3-(3-메톡시페닐)시클로부틸)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드:
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 468.3.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ = 8.46 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.90 - 7.87 (m, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.37 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.32 - 7.21 (m, 2H), 6.92 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.78 - 6.75 (m, 1H), 4.92 - 4.91 (m, 2H), 4.74 (s, 2H), 4.20 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.73 - 3.61 (m, 2H), 2.72 - 2.58 (m, 4H), 1.76 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: 셀루코트-IPA+ACN(DEA)-50-3 mL-35T, Rt = 0.639분, ee% = 100%.
표 12의 하기 실시예를 실시예 13 및 14의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 12. 본 발명의 화합물
Figure pct00151
실시예 15: (R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-(6-메틸-5-옥소-3,4,5,6-테트라히드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00152
단계 1: (R)-4-시아노-4-메틸-N-((4-(6-메틸-5-옥소-3,4,5,6-테트라히드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)피리딘-2-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
DMSO (1 mL) 중 (4R)-N-[(4-브로모-2-피리딜)메틸]-4-시아노-4-메틸-이소크로만-6-카르복스아미드 (30 mg, 77.67 umol)의 혼합물에 30℃에서 2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-1(2H)-온 (43.22 mg, 155.34 umol, TFA 염) 및 DIEA (50.19 mg, 388.36 umol, 67.64 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 40시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고, EA (10 mL*2)로 추출하였다. 수성상을 역상 칼럼 (0.1% FA 조건)으로 정제하였다. 용리액을 감압 하에 농축시켜 MeCN을 제거하고, 동결건조시켜 표제 화합물 (10.33 mg, 20.04 umol, 25.8% 수율, FA 염)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 470.2.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ = 8.65 - 8.41 (m, 1H), 8.18 - 8.09 (m, 2H), 7.87 - 7.84 (m, 1H), 7.50 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.98 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.28 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 4.64 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.19 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.92 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.78 - 3.75 (m, 2H), 3.55 (s, 3H), 2.74 - 2.71 (m, 2H), 1.75 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: AD-3-MeOH+ACN(DEA)-50-3 mL-35T, Rt = 0.893분, ee% = 100%.
하기 표 13의 실시예를 실시예 15의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 13. 본 발명의 화합물
Figure pct00153
Figure pct00154
Figure pct00155
실시예 16: (4R)-4-시아노-N-((4-(3-플루오로-3-페닐피롤리딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00156
단계 1: (4R)-4-시아노-N-((4-(3-플루오로-3-페닐피롤리딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DCM (0.5 mL) 중 (4R)-4-시아노-N-((4-(3-히드록시-3-페닐피롤리딘-1-일)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (20 mg, 42.69 umol)의 용액에 -78℃에서 DAST (34.40 mg, 213.43 umol, 28.20 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 물 (30 mL)에 붓고, EA (10 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (칼럼: 페노메넥스 제미니 NX-C18 (75*30 mm*3 um); 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 38%-58%, 8분)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 진공 하에 농축시켜 MeCN을 제거하고, 동결건조시켜 표제 화합물 (3.55 mg, 7.27 umol, 17.04% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 471.1.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ = 8.15 - 8.03 (m, 2H), 7.89 - 7.77 (m, 1H), 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.48 - 7.34 (m, 3H), 7.25 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.56 - 6.44 (m, 1H), 4.88 (br d, J = 3.2 Hz, 3H), 4.17 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.96 - 3.79 (m, 3H), 3.78 - 3.58 (m, 3H), 2.74 - 2.47 (m, 2H), 1.72 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: IC-3-EtOH (DEA)-60-3 mL-35T.lcm; Rt = 1.386분, Rt = 1.826분.
실시예 17: (R)-4-시아노-N-((4-((3-시아노벤질)옥시)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00157
단계 1: (R)-4-시아노-N-((4-((3-시아노벤질)옥시)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DMSO (1 mL) 중 (R)-N-((4-브로모피리딘-2-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (100 mg, 258.91 umol)의 혼합물에 Cs2CO3 (168.71 mg, 517.81 umol) 및 3-(히드록시메틸) 벤조니트릴 (68.94 mg, 517.81 umol)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (20 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (FA 조건)로 정제하고, 생성물 분획을 진공 하에 농축시켜 MeCN을 제거한 다음, 동결건조시켜 표제 화합물 (15.18 mg, 31.74 umol, 12.26% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+=439.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.18-9.15 (m, 1H), 8.36 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.90 - 7.86 (m, 2H), 7.81 - 7.76 (m, 2H), 7.59 - 7.55 (m, 1H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.97-6.95 (m, 2H), 5.23 (s, 2H), 4.91 - 4.80 (m, 2H), 4.54 - 4.52 (m, 2H), 4.21 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.85 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.68 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: 셀루코트-MeOH(DEA)-40-3 mL-35T.lcm, Rt = 0.680분, ee 값 = 100%.
하기 표 14의 실시예를 실시예 17의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 14. 본 발명의 화합물
Figure pct00158
실시예 18: (R)-N-((4-(벤질티오)피리딘-2-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00159
단계 1: (R)-N-((4-(벤질티오)피리딘-2-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DMF (0.5 mL) 중 페닐메탄티올 (28.94 mg, 233.01 umol, 27.30 uL)의 용액에 0℃에서 NaH (8.70 mg, 217.48 umol, 60% 순도)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, (R)-N-((4-브로모피리딘-2-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (30 mg, 77.67 umol)를 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (60 mL)에 붓고, EA (30 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 TLC (PE/EA=0/1)에 의해 정제하고, 동결건조시켜 표제 화합물 (23.19 mg, 53.16 umol, 68.45% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 430.0
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ = 8.23 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.90 - 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.29 - 7.24 (m, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 4H), 4.90 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.61 (s, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.19 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 1.74 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: AD-3-MeOH+ACN (DEA)-60-3 mL-35T.lcm; Rt = 0.585분, ee% = 100%.
실시예 19: (4R)-4-시아노-N-((4-(1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)피롤리딘-3-일)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00160
단계 1: 2-((4-브로모피리딘-2-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온
THF (400 mL) 중 (4-브로모피리딘-2-일)메탄올 (20 g, 106.37 mmol), 이소인돌린-1,3-디온 (23.48 g, 159.56 mmol) 및 PPh3 (41.85 g, 159.56 mmol)의 용액에 0℃에서 DIAD (32.26 g, 159.56 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1000 mL) 및 EA (1000 mL)에 붓고, 용액을 여과하고, 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (32 g, 100.90 mmol, 94.86% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 2: tert-부틸 3-(2-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)메틸)피리딘-4-일)-2,5-디히드로-1H-피롤-1-카르복실레이트
디옥산 (8 mL) 및 H2O (2 mL) 중 2-((4-브로모피리딘-2-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온 (700 mg, 2.21 mmol) 및 tert-부틸 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2,5-디히드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (977.31 mg, 3.31 mmol)의 용액에 N2 분위기 하에 25℃에서 [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (143.86 mg, 220.72 umol) 및 K3PO4 (937.06 mg, 4.41 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1에서 1/100)에 의해 정제하여 표제 화합물 (890 mg, 2.20 mmol, 99.45% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 406.0.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ = 8.43 - 8.37 (m, 1H), 7.93 - 7.88 (m, 2H), 7.86 - 7.81 (m, 2H), 7.46 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.33 (m, 1H), 6.66 - 6.58 (m, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.55 - 4.43 (m, 2H), 4.36 - 4.27 (m, 2H), 1.51 (d, J = 5.6 Hz, 9H) ppm.
단계 3: tert-부틸 3-(2-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)메틸)피리딘-4-일)피롤리딘-1-카르복실레이트
MeOH (150 mL) 중 tert-부틸 3-(2-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)메틸)피리딘-4-일)-2,5-디히드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (890 mg, 2.20 mmol)의 용액에 Pd/C (100 mg, 220.35 umol, 10% 순도)를 H2 분위기 하에 첨가한 다음, 혼합물을 수소 분위기 (20 Psi) 하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (890 mg, 2.18 mmol, 99.51% 수율)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 408.0.
단계 4: 2-((4-(피롤리딘-3-일)피리딘-2-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온 히드로클로라이드
디옥산 (3 mL) 중 tert-부틸 3-(2-((1,3-디옥소이소인돌린-2-일)메틸)피리딘-4-일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (300 mg, 515.39 umol)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 3.00 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 농축시켜 표제 화합물 (160 mg, 465.38 umol, 90.30% 수율)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 308.0.
단계 5: 2-((4-(1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)피롤리딘-3-일)피리딘-2-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온
DMSO (2 mL) 중 2-((4-(피롤리딘-3-일)피리딘-2-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온 히드로클로라이드 (160 mg, 465.38 umol) 및 2-브로모-6-(디플루오로메틸)피리딘 (387.20 mg, 1.86 mmol)의 용액에 25℃에서 DIEA (601.45 mg, 4.65 mmol, 810.59 uL)를 첨가한 다음, 혼합물을 140℃에서 12시간 동안 교반하였다. 물 (3 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EA (5 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE: EA=1:1, Rf=0.3)에 의해 정제하여 표제 화합물 (200 mg, 460.37 umol, 98.92% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 435.0.
단계 6: (4-(1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)피롤리딘-3-일)피리딘-2-일)메탄아민
EtOH (0.5 mL) 중 2-((4-(1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)피롤리딘-3-일)피리딘-2-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온 (50 mg, 115.09 umol)의 용액에 25℃에서 N2H4·H2O (8.82 mg, 172.64 umol, 8.56 uL, 98% 순도)를 첨가한 다음, 혼합물을 75℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (30 mg, 98.57 umol, 85.65% 수율)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 305.0.
단계 7: (4R)-4-시아노-N-((4-(1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)피롤리딘-3-일)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DMF (0.2 mL) 중 (4-(1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)피롤리딘-3-일)피리딘-2-일)메탄아민 (20 mg, 65.72 umol), (R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (14.27 mg, 65.72 umol)의 용액에 EDCI (25.20 mg, 131.43 umo), HOBt (17.76 mg, 131.43 umol) 및 DIEA (21.23 mg, 164.29 umol, 28.62 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 물 (3 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EA (5 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC (칼럼: 페노메넥스 시너지 C18 150*25*10 um; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 33%-63%, 8.5분)에 의해 정제하고, 동결건조시켜 표제 화합물 (8 mg, 15.77 umol, 24.00% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 504.3.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ = 8.46 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.84 - 7.80 (m, 1H), 7.61 - 7.55 (m, 1H), 7.39 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.84 - 6.81 (m, 1H), 6.60 - 6.30 (m, 2H), 4.91 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.23 - 4.19 (m, 1H), 3.98 - 3.90 (m, 2H), 3.70 - 3.54 (m, 4H), 2.55 - 2.44 (m, 1H), 2.21 - 2.08 (m, 1H), 1.75 (d, J = 1.6 Hz, 3H) ppm.
키랄 SFC: AD-3-MeOH+ACN (DEA)-40-3ML-35T.lcm; Rt = 0.974분/Rt = 1.137분.
하기 표 15의 실시예를 실시예 19의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 15. 본 발명의 화합물
Figure pct00161
실시예 20: (R)-4-시아노-N-((4-((3-((2-메톡시에틸)카르바모일)페닐)에티닐)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00162
단계 1: (R)-3-((2-((4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미도)메틸)피리딘-4-일)에티닐)벤조산
THF (5.00 mL) 중 메틸 (R)-3-((2-((4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미도)메틸)피리딘-4-일)에티닐)벤조에이트 (226.00 mg, 0.485 mmol, 1.00 당량), LiOH·H2O (61.12 mg, 1.456 mmol, 3.00 당량) 및 H2O (1.00 mL)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 2 M HCl (수성)을 사용하여 pH 5로 산성화시켰다. 생성된 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (3 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (60 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여과물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (208 mg, 94.89%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 452.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.23 (s, 1H), 9.28 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.60 (dd, J = 5.0, 0.9 Hz, 1H), 8.19 - 8.07 (m, 2H), 8.01 (dt, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.85 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.54 - 7.44 (m, 2H), 7.29 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.98 - 4.75 (m, 2H), 4.63 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 4.22 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.70 (s, 3H).
단계 2: (R)-4-시아노-N-((4-((3-((2-메톡시에틸)카르바모일)페닐)에티닐)피리딘-2-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DMF (1.00 mL) 중 (R)-3-((2-((4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미도)메틸)피리딘-4-일)에티닐)벤조산 (20.00 mg, 0.044 mmol, 1.00 당량) 및 2-메톡시에탄-1-아민 (3.99 mg, 0.053 mmol, 1.2 당량)의 용액에 실온에서 HATU (25.27 mg, 0.066 mmol, 1.5 당량) 및 DIEA (17.18 mg, 0.133 mmol, 3 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 역 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (10 mg, 44.39%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =509.10.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.30 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.63 (dd, J = 22.5, 5.2 Hz, 2H), 8.16 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.92 (dq, J = 8.0, 1.7 Hz, 2H), 7.75 (dt, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 6.9, 1.7 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.96 - 4.78 (m, 2H), 4.63 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.22 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.45 (tt, J = 9.6, 4.2 Hz, 4H), 3.26 (s, 3H), 1.69 (s, 3H).
하기 표 16의 실시예를 실시예 20의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 16. 본 발명의 화합물
Figure pct00163
실시예 21. (R)-4-시아노-4-메틸-N-((2-페닐-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00164
단계 1. 2-브로모-5-아이오도-피리딘-4-아민
NIS (93.6 g, 416 mmol)를 80℃에서 MeCN (1.5 L) 중 2-브로모피리딘-4-아민 (60 g, 347 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 36시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 포화 Na2SO3 (1.5 L)으로 희석하고, EA (1.5 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1 L)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA = 20:3)에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (65 g, 217 mmol)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.31 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 4.75 (br s, 2H) ppm.
단계 2. 에틸-3-(4-아미노-6-브로모-3-피리딜)프로프-2-에노에이트
에틸 프로프-2-에노에이트 (45.1 mL, 415 mmol), Et3N (43.3 mL, 311 mmol), Pd(OAc)2 (2.3 g, 10.4 mmol), 및 트리스-o-톨릴포스판 (6.3 g, 20.7 mmol)을 DMF (620 mL) 중 2-브로모-5-아이오도-피리딘-4-아민 (62 g, 207 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (4 L)로 희석하고, EA (2 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2 L)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA = 20:3)에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (50 g, 170 mmol)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 271.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.23 (s, 1H), 7.73 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.90 - 6.67 (m, 3H), 6.52 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.25 (d, J = 7.2 Hz, 3H) ppm.
단계 3. 7-브로모-1H-1,6-나프티리딘-2-온
NaSMe(24.2 mL, 380 mmol)를 EtOH (200 mL) 중 에틸-3-(4-아미노-6-브로모-3-피리딜)프로프-2-에노에이트 (40 g, 148 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (400 mL)로 희석한 다음, 1 N HCl을 사용하여 pH = 7.0으로 중화시켰다. 고체를 여과하고, 필터 케이크를 물 (50 mL)로 세척하였다. 필터 케이크를 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (22 g, 96.8 mmol)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 224.9.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.08 (br s, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.99 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.62 (d, J = 9.6 Hz, 1H) ppm.
단계 4. 2-옥소-1H-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴
Zn (406.80 mg, 6.22 mmol)을 DMA (140 mL) 중 7-브로모-1H-1,6-나프티리딘-2-온 (7 g, 31.1 mmol), Zn(CN)2 (3.95 mL, 62.2 mmol), 및 Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2 (5.08 g, 6.22 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 탈기하고, N2로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고, DCM/이소프로판올 (v/v=3:1) (150 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 여과하고, 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA=1:1)에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (3 g, 17.5 mmol)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.37 (br s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.09 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 6.77 (d, J = 9.6 Hz, 1H) ppm.
단계 5. 2-클로로-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴
2-옥소-1H-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (3.0 g, 17.5 mmol) 및 POCl3 (30 mL, 323 mmol)의 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (2 L)에 붓고, NaHCO3을 사용하여 pH = 7로 조정하였다. 용액을 EA (1.5 L x 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 (2 L)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (1.1 g, 5.76 mmol)을 갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 190.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.58 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 1H) ppm.
단계 6. 2-페닐-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴
디옥산 (3 mL) 중 2-클로로-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (270 mg, 1.42 mmol), 페닐보론산 (208.4 mg, 1.71 mmol), K3PO4 (907 mg, 4.27 mmol), 디-tert-부틸 (시클로펜틸)포스판의 혼합물; 디클로로팔라듐;철 (92.8 mg, 142 μmol), 및 H2O (0.3 mL)를 탈기시키고, N2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고, EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (60 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=30/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (248 mg, 1.07 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 232.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.52 (s, 1H), 8.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.53 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.37 - 8.30 (m, 2H), 7.65 - 7.60 (m, 3H) ppm.
단계 7. tert-부틸 N-[(2-페닐-1,6-나프티리딘-7-일)메틸]카르바메이트
Boc2O (340 mg, 1.56 mmol) 및 Et3N (0.29 mL, 2.08 mmol)을 MeOH (10 mL) 중 2-페닐-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (240 mg, 1.04 mmol)의 용액에 첨가하였다. Ni (305 mg, 5.19 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 탈기하고, H2로 3회 퍼징하였다. 반응 혼합물을 H2 분위기 (15 psi) 하에 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (2 mL x 3)로 세척하고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1에서 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (110 mg, 0.33 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 336.2.
단계 8. (2-페닐-1,6-나프티리딘-7-일)메탄아민
HCl/디옥산 (4 N, 5 mL) 중 tert-부틸 N-[(2-페닐-1,6-나프티리딘-7-일)메틸]카르바메이트 (110 mg, 328 μmol)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (118 mg, 조 물질, HCl)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 236.2.
단계 9. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[(2-페닐-1,6-나프티리딘-7-일)메틸]크로만-6-카르복스아미드
EDCI (27.5 mg, 0.14 mmol), HOBt (19.4 mg, 0.14 mmol), 및 DIEA (0.058 mL, 0.33 mmol)를 DCM (1 mL) 중 (4R)-4-시아노-4-메틸-크로만-6-카르복실산 (28.8 mg, 0.13 mmol)의 용액에 첨가하였다. (2-페닐-1,6-나프티리딘-7-일)메탄아민 (30 mg, 0.11 mmol, HCl 염)을 반응 혼합물에 첨가하고, 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, EA (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 역상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용리액을 감압 하에 농축시켜 MeCN을 제거하고, 잔류물을 동결건조시켜 표제 화합물 (13.6 mg, 0.030 mmol)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 435.1.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 9.34 - 9.25 (m, 1H), 8.60 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 8.22 - 8.14 (m, 4H), 7.95 (s, 1H), 7.88 (d, J = 2.4, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 3H), 6.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.91 (s, 3H), 4.41 - 4.36 (m, 2H), 2.52 - 2.44 (m, 1H), 2.27 - 2.18 (m, 1H), 1.85 (s, 3H) ppm.
하기 표 17의 실시예를 실시예 21의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 17. 본 발명의 화합물
Figure pct00165
Figure pct00166
Figure pct00167
Figure pct00168
실시예 22. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[2-(1-피페리딜)-1,6-나프티리딘-7-일]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00169
단계 1. 2-(1-피페리딜)-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴
DIEA (0.37 mL, 2.11 mmol) 및 피페리딘 (0.31 mL, 3.16 mmol)을 20℃에서 DMSO (2 mL) 중 2-클로로-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (200 mg, 1.05 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 가열하고, 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (20 mL)에 붓고, 여과하였다. 필터 케이크를 MTBE (20 mL)로 세척하였다. 필터 케이크를 감압 하에 건조시켜 표제 화합물 (170 mg, 0.62 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 239.7.
단계 2. tert-부틸 N-[[2-(1-피페리딜)-1,6-나프티리딘-7-일]메틸]카르바메이트
MeOH (20 mL) 및 EA (20 mL) 중 2-(1-피페리딜)-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (170 mg, 0.71 mmol), Et3N (0.20 mL, 1.43 mmol), Boc2O (234 mg, 1.07 mmol), 및 라니-Ni (61.1 mg)의 혼합물을 H2 분위기 (15 psi) 하에 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소로 환기시킨 다음, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/EA = 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (165 mg, 0.48 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 343.4.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.72 (s, 1H), 8.02 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.21 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.40 (s, 2H), 3.87 - 3.79 (m, 4H), 1.81 - 1.73 (m, 2H), 1.72 - 1.63 (m, 4H), 1.49 (s, 9H) ppm.
단계 3. [2-(1-피페리딜)-1,6-나프티리딘-7-일]메탄아민
HCl/디옥산 (4 N, 2 mL) 중 tert-부틸 N-[[2-(1-피페리딜)-1,6-나프티리딘-7-일]메틸]카르바메이트 (165 mg, 0.48 mmol)의 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (135 mg, 0.56 mmol, HCl 염)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 243.0.
단계 4. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[[2-(1-피페리딜)-1,6-나프티리딘-7-일]메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
DIEA (0.047 mL, 0.27 mmol)를 DMF (0.5 mL) 중 [2-(1-피페리딜)-1,6-나프티리딘-7-일]메탄아민 (25 mg, 0.090 mmol, HCl 염), (4R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (21.4 mg, 0.099 mmol), EDCI (25.8 mg, 0.3 mmol), 및 HOBt (18.2 mg, 0.13 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)에 붓고, 여과하였다. 필터 케이크를 정제용 HPLC (칼럼: 워터스 엑스브리지 150*25 mm* 5 μm; 이동상: [물 (10 mM NH4-HCO3)-ACN];B%: 28%-58%,9분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (20.2 mg, 0.046 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 442.4.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.77 (s, 1H), 8.15 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.92-7.88 (m, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.20 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.86 - 3.77 (m, 4H), 1.79 - 1.70 (m, 5H), 1.69 - 1.60 (m, 4H) ppm.
실시예 23. (R)-4-시아노-4-메틸-N-((2-페닐-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00170
단계 1. 3-클로로-6-페닐이소퀴놀린
6-브로모-3-클로로이소퀴놀린 (0.500 g, 2.06 mmol), Pd(PPh3)4 (0.476 g, 0.412 mmol), 페닐보론산 (0.500 g, 2.06 mmol), 및 아연 (6.3 mg, 0.096 mmol)을 40 mL 바이알에 첨가하고, 이를 질소로 퍼징하였다. DME/물의 1:1 혼합물 10 mL를 바이알에 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃로 가열하고, 질소 분위기 하에 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 헵탄 중 0-60% EtOAc)에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (310 mg, 1.29 mmol)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 240.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.09 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.86 (dd, J = 8.5, 1.7 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.74 - 7.67 (m, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.49 - 7.41 (m, 1H) ppm.
단계 2. 6-페닐이소퀴놀린-3-카르보니트릴
3-클로로-6-페닐이소퀴놀린 (0.23 g, 0.9595 mmol), 탄산칼륨 (0.263 g, 1.91 mmol), Pd(PPh3)4 (0.221 g, 0.1919 mmol), 및 Zn(CN)2 (0.167 g, 1.43 mmol)를 20 mL 바이알에 첨가하고, 이를 질소로 퍼징하였다. DMF (4.8 mL)를 첨가하고, 혼합물을 100℃로 가열하고, 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물의 첨가에 의해 켄칭하고, 조 혼합물을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 헵탄 중 0-70% EtOAc)에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (140 mg, 0.608 mmol, 64% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 231.2.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ = 9.30 (t, J = 0.9 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.17 - 8.11 (m, 1H), 8.10 - 8.03 (m, 2H), 7.75 - 7.69 (m, 2H), 7.58 - 7.51 (m, 2H), 7.51 - 7.45 (m, 1H) ppm.
단계 3. (6-페닐이소퀴놀린-3-일)메탄아민
THF 중 LiAlH4 용액 (1.0 M, 0.22 mL, 0.22 mmol)을 THF (1 mL) 중 6-페닐이소퀴놀린-3-카르보니트릴 (0.050 g, 0.217 mmol)의 용액에 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반되도록 하고, 이 시점에 이를 실온으로 가온하였다. 반응물을 물 1 mL에, 및 이어서 6 N NaOH 수용액 0.5 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 반응 혼합물을 DCM 중 10% MeOH 용액 (3 x 5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 아민 (51.2 mg)을 갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [79BrM+H]+ = 224.9.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ = 9.25 (s, 1H), 8.09 - 7.91 (m, 1H), 7.88 - 7.79 (m, 1H), 7.72 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.56 - 7.39 (m, 4H), 3.75 (s, 2H) ppm.
단계 4. (R)-4-시아노-4-메틸-N-((6-페닐이소퀴놀린-3-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
EDCI (49.0 mg, 0.256 mmol), HOBt (34.5 mg, 0.256 mmol), 및 DIEA (66.1 mg, 0.512 mmol, 89 μL)를 DCM (1 mL) 중 (4R)-4-시아노-4-메틸-크로만-6-카르복실산 (46.3 mg, 0.2133 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1-(6-페닐이소퀴놀린-3-일)메탄아민 (50.0 mg, 0.2133 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (5 mL)로 희석하고, EA (5 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 역상 플래쉬 (0.1% FA 조건)에 의해 정제하였다. 용리액을 감압 하에 농축시켜 MeCN을 제거하고, 잔류물을 동결건조시켜 표제 화합물 (39.4 mg, 0.0909 mmol)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 434.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.56 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 2H), 7.21 (ddd, J = 13.1, 8.3, 1.8 Hz, 2H), 7.10 (dd, J = 8.3, 1.3 Hz, 2H), 7.04 (s, 1H), 6.77 (dd, J = 8.3, 6.8 Hz, 2H), 6.71 - 6.65 (m, 1H), 6.54 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.01 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 3.46 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.11 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 2.75 (s, 1H), 0.94 (s, 3H) ppm.
실시예 24. (R)-4-시아노-4-메틸-N-((6-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00171
단계 1. 7-클로로-2-페닐-1,2,3,4-테트라히드로-2,6-나프티리딘
7-클로로-1,2,3,4-테트라히드로-2,6-나프티리딘 히드로클로라이드 (0.300 g, 1.46 mmol), 아이오도벤젠 (0.455 g, 2.19 mmol), Pd-RuPhos G3 (0.183 g, 0.219 mmol), 및 탄산세슘 (0.951 g, 2.92 mmol)을 20 mL 바이알에 첨가하였다. 바이알을 질소로 퍼징한 후, 디옥산/물의 5:1 혼합물 (7.3 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃로 가열하고, 이 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 물 5 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 DCM 중 10% MeOH 용액 (3 x 5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (80.0 mg, 0.327 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 245.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.20 (s, 1H), 7.35 - 7.28 (m, 1H), 7.28 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.26 (s, 2H), 7.14 (s, 1H), 7.00 - 6.93 (m, 2H), 6.89 (td, J = 7.3, 1.1 Hz, 1H), 4.36 (s, 2H), 3.58 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.95 (t, J = 5.8 Hz, 2H) ppm.
단계 2. 6-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-카르보니트릴
7-클로로-2-페닐-1,2,3,4-테트라히드로-2,6-나프티리딘 (0.026 g, 0.106 mmol), Pd(PPh3)4 (0.0245 g, 0.0212 mmol), 아연 (1.0 mg, 0.0159 mmol) 및 Zn(CN)2 (18.7 mg, 0.159 mmol)를 1 mL 바이알에 첨가하고, 이를 질소로 퍼징하였다. DMF (4.8 mL)를 첨가하고, 혼합물을 100℃로 가열하고, 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물의 첨가에 의해 켄칭하고, 조 혼합물을 DCM (3 x 5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 헵탄 중 0-70% EtOAc)에 의해 정제하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (15.1 mg, 0.0642 mmol)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 236.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.54 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.37 (dd, J = 8.7, 7.3 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.03 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 3.65 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.15 (t, J = 5.8 Hz, 2H) ppm.
단계 3. (6-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메탄아민
0℃에서 THF (0.5 mL) 중 6-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-카르보니트릴 (0.015 g, 0.0642 mmol)에 THF (1.0 M, 0.22 mL, 0.22 mmol) 중 LiAlH4 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반되도록 하고, 이 시점에 이를 실온으로 가온하였다. 반응물을 물 1 mL에, 및 이어서 6 N NaOH 수용액 0.5 mL의 첨가에 의해 켄칭하였다. 반응 혼합물을 DCM 중 10% MeOH 용액 (3 x 5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 아민 (15.0 mg)을 갈색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 240.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.55 - 8.28 (m, 1H), 7.26 (s, 2H), 7.07 - 6.76 (m, 4H) ppm, 4.40 (dd, J = 23.8, 6.7 Hz, 2H), 4.03 - 3.34 (m, 4H), 3.08 - 2.88 (m, 2H).
단계 4. (R)-4-시아노-4-메틸-N-((6-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
DIEA (19.4 mg, 0.150 mmol, 26 μL)를 DCM (0.5 mL) 중 1-(6-페닐-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메탄아민 (15.0 mg, 0.0627 mmol), EDCI (14.5 mg, 0.0752 mmol), HOBt (10.4 mg, 0.0752 mmol), 및 (4R)-4-시아노-4-메틸-크로만-6-카르복실산 (13.6 mg, 0.0627 mmol)을 함유하는 바이알에 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 역상 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (6.2 mg, 0.0141 mmol)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 439.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.38 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.09 - 8.00 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 3H), 7.13 (dd, J = 15.5, 8.1 Hz, 2H), 7.02 - 6.95 (m, 2H), 6.89 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 4.87 (d, J = 15.6 Hz, 4H), 4.75 (dd, J = 5.5, 3.1 Hz, 2H), 4.42 (s, 2H), 4.14 (dd, J = 11.3, 6.4 Hz, 2H), 3.93 (dd, J = 14.3, 11.3 Hz, 2H), 3.59 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.00 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 1.78 (s, 3H) ppm.
실시예 25. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[(2-페닐티아졸로[5,4-c]피리딘-6-일)메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00172
단계 1. 2,5-디클로로-4-이소티오시아네이토-피리딘
티오카르보닐 디클로라이드 (0.94 mL, 12.3 mmol)를 25℃에서 DCM (15 mL) 중 2,5-디클로로피리딘-4-아민 (1 g, 6.13 mmol) 및 Na2CO3 (2.60 g, 24.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 10/1에서 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (750 mg, 3.66 mmol)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.63 (s, 1H), 7.85 - 7.76 (m, 1H) ppm.
단계 2. N-(2,5-디클로로-4-피리딜)벤젠카르보티오아미드
페닐마그네슘 브로마이드 (3 M, 1.6 mL)를 THF (8 mL) 중 2,5-디클로로-4-이소티오시아네이토-피리딘 (650 mg, 3.17 mmol)의 혼합물에 -40℃에서 천천히 첨가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 25℃로 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (5 mL)의 첨가를 통해 켄칭하고, EA (5 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 10/1에서 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (650 mg, 2.30 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 8.55 - 8.51 (m, 1H), 8.08 - 8.03 (m, 1H), 7.97 - 7.90 (m, 2H), 7.60 - 7.53 (m, 1H), 7.50 - 7.43 (m, 2H) ppm.
단계 3. 6-클로로-2-페닐-티아졸로[5,4-c]피리딘
Na2CO3 (412 mg, 3.88 mmol)을 25℃에서 DMA (8 mL) 중 N-(2,5-디클로로-4-피리딜)벤젠카르보티오아미드 (550 mg, 1.94 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 가온하고, 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (20 mL)로 켄칭하고, EA (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 10/1에서 5/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (250 mg, 1.01 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 247.0.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.25 (d, J = 0.4 Hz, 1H), 8.21 - 8.16 (m, 3H), 7.70 - 7.59 (m, 3H) ppm.
단계 4. tert-부틸 N-[(2-페닐티아졸로[5,4-c]피리딘-6-일)메틸]카르바메이트
SPhos Pd G3 (25.3 mg, 0.032 mmol) 및 Cs2CO3 (211 mg, 0.65 mmol)을 20℃에서 디옥산 (3 mL) 및 H2O (0.5 mL) 중 6-클로로-2-페닐-티아졸로[5,4-c]피리딘 (80 mg, 0.32 mmol) 및 칼륨;2-(tert부톡시카르보닐아미노)에틸-트리플루오로-보라누이드 (122 mg, 0.49 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 가온하고, 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/EA = 5/1에서 3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (60 mg, 0.18 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 342.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.13 (s, 1H), 8.15 - 8.13 (m, 2H), 7.94 (s, 1H), 7.62 - 7.49 (m, 4H), 5.50 (s, 1H), 4.62 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H) ppm.
단계 5. (2-페닐티아졸로[5,4-c]피리딘-6-일)메탄아민
HCl/디옥산 (4 N, 2 mL) 중 tert-부틸 N-[(2-페닐티아졸로[5,4-c]피리딘-6-일)메틸]카르바메이트 (60 mg, 0.18 mmol)의 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (30 mg, 0.11 mmol, HCl 염)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 242.1
단계 6. (4R)-4-시아노-4-메틸-N-[(2-페닐티아졸로[5,4-c]피리딘-6-일)메틸]이소크로만-6-카르복스아미드
EDCI (20.7 mg, 0.11 mmol), HOBt (14.6 mg, 0.11 mmol), 및 DIPEA (0.047 mL, 0.27 mmol)를 20℃에서 DMF (1 mL) 중 (2-페닐티아졸로[5,4-c]피리딘-6-일)메탄아민 (15 mg, 0.054 mmol, HCl 염), 및 (4R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (11.7 mg, 0.054 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (5 mL)의 첨가를 통해 켄칭한 다음, EA (3 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC (칼럼: 페노메넥스 시너지 C18 150*25*10 μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 39%-69%, 10분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (20.8 mg, 0.047 mmol)을 회색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+=441.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.41 - 9.30 (m, 2H), 8.21 - 8.13 (m, 3H), 7.96 - 7.90 (m, 2H), 7.68 - 7.57 (m, 3H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.94 - 4.80 (m, 2H), 4.75 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.22 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.70 (s, 3H) ppm.
하기 표 18의 실시예를 실시예 25의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 18. 본 발명의 화합물
Figure pct00173
실시예 26: (R)-4-시아노-N-((2-(4-시클로부틸-2-메톡시페닐)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00174
단계 1: 2-(4-시클로부틸-2-메톡시페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란
디옥산 (2 mL) 중 1-브로모-4-시클로부틸-2-메톡시벤젠 (88.46 mg, 348.37 umol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (88.46 mg, 348.37 umol) 및 KOAc (85.47 mg, 870.92 umol)의 혼합물에 N2 하에 [1,1-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (23.71 mg, 29.03 umol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA (20 mL)로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (83 mg, 조 물질)을 흑색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z= [M+H]+ = 289.1.
단계 2: (2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메탄아민
DCM (1000 mL) 중 2-클로로-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (25 g, 131.86 mmol)의 용액에 N2 하에 -70℃에서 DIBAL-H (1 M, 329.64 mL, 2.5 당량)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (500 mL) 및 포화 타르타르산나트륨칼륨 (1500 mL)으로 켄칭하고, 추가로 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM:MeOH=10:1 (6000 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (51 g, 조 물질)을 갈색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [35ClM+H]+ =194.2
단계 3: tert-부틸 ((2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)카르바메이트
DCM (1500 mL) 중 (2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메탄아민 (51 g, 263.39 mmol)의 용액에 (Boc)2O (172.45 g, 790.16 mmol) 및 DIEA (102.12 g, 790.16 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1500 mL)로 희석한 다음, 여과하였다. 여과물을 DCM (1000 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1500 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1에서 2/1에서 1/3)에 의해 정제하여 표제 화합물 (21 g, 64.34 mmol, 24.43% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ =293.9.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ=9.37 (s, 1H), 8.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 2H), 4.39 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.20 - 4.25 (m, 2H), 1.41 (s, 9H) ppm
단계 4: tert-부틸 ((2-(4-시클로부틸-2-메톡시페닐)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)카르바메이트
H2O (0.4 mL) 및 디옥산 (2 mL) 중 tert-부틸 ((2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)카르바메이트 (45 mg, 153.19 umol), 2-(4-시클로부틸-2-메톡시페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (79.47 mg, 275.75 umol), [1,1-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (9.98 mg, 15.32 umol) 및 K3PO4 (97.55 mg, 459.58 umol)의 혼합물을 탈기하고, N2로 3회 퍼징하였다. 이어서, 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1에서 0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (55 mg, 120.62 umol, 78.73% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z= [M+H]+ = 420.3
단계 5: (2-(4-시클로부틸-2-메톡시페닐)-1,6-나프티리딘-7-일)메탄아민 히드로클로라이드
HCl/디옥산 (4 M, 4 mL) 중 tert-부틸 ((2-(4-시클로부틸-2-메톡시페닐)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)카르바메이트 (55 mg, 131.10 umol)의 혼합물을 N2 분위기 하에 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (46 mg, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z= [M+H]+ = 320.3
단계 6: (R)-4-시아노-N-((2-(4-시클로부틸-2-메톡시페닐)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DCM (1 mL) 중 (2-(4-시클로부틸-2-메톡시페닐)-1,6-나프티리딘-7-일)메탄아민 히드로클로라이드 (46 mg, 129.26 umol), EDCI (37.17 mg, 193.90 umol), (R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (33.69 mg, 155.12 umol) 및 DIEA (83.53 mg, 646.32 umol)의 혼합물에 EDCI (37.17 mg, 193.90 umol) 및 HOBt (26.20 mg, 193.90 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 진공 하에 농축시켜 MeCN을 제거한 다음, 동결건조시켜 표제 화합물 (27.13 mg, 52.31 umol, 40.47% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z= [M+H]+ = 519.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.39-9.36 (m, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.95-7.93 (m, 1H), 7.77 - 7.75 (m, 2H), 7.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.92 - 4.79 (m, 4H), 4.22 (d, J = 11.2Hz, 1H), 3.84 - 3.84 (m, 4H), 3.62-3.57 (m, 1H), 2.34-2.31 (m, 2H), 2.21-2.12 (m, 2H), 2.03 - 1.964 (m, 1H), 1.87 - 1.83 (m, 1H), 1.69 (s, 3H) ppm
실시예 27: (R)-4-시아노-N-((2-(7-플루오로-1,2-디메틸-1H-인돌-4-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00175
단계 1: 7-플루오로-1,2-디메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌
디옥산 (1 mL) 중 4-브로모-7-플루오로-1,2-디메틸-1H-인돌 (60 mg, 247.84 umol) 및 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (69.23 mg, 272.63 umol)의 용액에 KOAc (72.97 mg, 743.53 umol) 및 [1,1-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (16.15 mg, 24.78 umol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA (10 mL)로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (70 mg, 조 물질)을 갈색 오일로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다.
단계 2: (R)-N-((2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
1-(2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메탄아민 (0.040 g, 0.207 mmol, 1 당량)을 함유한 건조 4 mL 바이알에 (R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (0.045 g, 0.207 mmol, 1 당량), EDCI (0.048 g, 0.248 mmol, 1.2 당량), DIEA (0.087 mL, 0.496 mmol, 2.4 당량), HOBt (0.034 g, 0.248 mmol, 1.2 당량) 및 DCM (1.4 mL, 0.15 M)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 정제용 실리카 겔 상에 직접 로딩하여 (용리액으로서 DCM 중 5% MeOH) (4R)-N-[(2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메틸]-4-시아노-4-메틸-3,4-디히드로-1H-2-벤조피란-6-카르복스아미드 (68.4 mg, 0.207 mmol, 84% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (m/z) 393.17 [M+H]
단계 3: (R)-4-시아노-N-((2-(7-플루오로-1,2-디메틸-1H-인돌-4-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
디옥산 / H2O = 4 / 1 (1 mL) 중 (R)-N-((2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (40 mg, 101.82 umol) 및 7-플루오로-1,2-디메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌 (58.88 mg, 203.65 umol)의 용액에 K3PO4 (64.84 mg, 305.47 umol) 및 [1,1-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (6.64 mg, 10.18 umol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NaHCO3 (10 mL)으로 희석하고, DCM (10 mL*2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 역상 정제용 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 농축시켜 ACN을 제거하고, 동결건조시켜 표제 화합물 (12.07 mg, 22.87 umol, 22.46% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 520.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.40 - 9.35 (m, 2H), 8.60 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.20 - 8.16 (m, 2H), 7.95 - 7.93 (m, 1H), 7.84 (s,1H), 7.69 - 7.68 (m, 1H), 7.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.08 - 7.01 (m, 2H), 4.92 - 4.81 (m, 4H), 4.23 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.89 - 3.84 (m,4H), 2.44 (s, 3H), 1.70 - 1.68 (m, 3H) ppm.
키랄 SFC: 셀루코트-MeOH(DEA)-40-3 mL-35T.lcm, Rt = 1.380; ee% = 100%.
실시예 28: (R)-4-시아노-N-((2-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00176
단계 1: 3-(트리부틸스탄닐)이미다조[1,2-b]피리다진
THF (2 mL) 중 3-브로모이미다조[1,2-b]피리다진 (200 mg, 1.01 mmol) 및 Bu3SnH (411.56 mg, 1.41 mmol, 374.14 uL)의 용액에 25℃에서 LiCl (64.22 mg, 1.51 mmol, 31.02 uL) 및 Pd(PPh3)4 (116.71 mg, 101.00 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 물 (5 mL)을 첨가하고, 생성물을 EA (10 mL*3)로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EA=5:1, Rf = 0.5)에 의해 정제하고, 농축시켜 표제 화합물 (100 mg, 245.00 umol, 24.26% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 410.0.
단계 2: (R)-4-시아노-N-((2-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
디옥산 (0.5 mL) 중 3-(트리부틸스탄닐)이미다조[1,2-b]피리다진 (37.41 mg, 91.64 umol)의 용액에 N2 하에 25℃에서 (R)-N-((2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (30 mg, 76.37 umol) 및 Pd(PPh3)4 (4.41 mg, 3.82 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃로 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 KF (5 mL)로 켄칭한 다음, EA (10 mL*3)로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 잔류물을 정제용 HPLC (FA 방법)에 의해 정제하여 표제 화합물 (12 mg, 20.89 umol, 27.35% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 476.3.
1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ = 9.34 - 9.28 (m, 1H), 8.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.75 - 8.62 (m, 3H), 8.54 - 8.44 (m, H), 8.23 - 8.17 (m, 2H), 7.97 - 7.91 (m, 2H), 7.47 - 7.43 (m, 1H), 7.30 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.93 - 4.91 (m, 4H), 4.21 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: 셀루코트-MeOH+ACN(DEA)-40-3 mL-35T.lcm; Rt = 1.034분, ee% = 100%.
하기 표 19의 실시예를 실시예 21, 26, 27 및 28의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 19. 본 발명의 화합물
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
Figure pct00180
Figure pct00181
Figure pct00182
Figure pct00183
Figure pct00184
Figure pct00185
Figure pct00186
Figure pct00187
Figure pct00188
Figure pct00189
Figure pct00190
Figure pct00191
Figure pct00192
Figure pct00193
Figure pct00194
Figure pct00195
Figure pct00196
Figure pct00197
Figure pct00198
Figure pct00199
Figure pct00200
Figure pct00201
Figure pct00202
Figure pct00203
Figure pct00204
Figure pct00205
Figure pct00206
Figure pct00207
Figure pct00208
Figure pct00209
Figure pct00210
Figure pct00211
Figure pct00212
Figure pct00213
Figure pct00214
Figure pct00215
Figure pct00216
Figure pct00217
Figure pct00218
Figure pct00219
Figure pct00220
Figure pct00221
Figure pct00222
Figure pct00223
Figure pct00224
Figure pct00225
Figure pct00226
Figure pct00227
Figure pct00228
Figure pct00229
Figure pct00230
Figure pct00231
Figure pct00232
Figure pct00233
Figure pct00234
Figure pct00235
Figure pct00236
Figure pct00237
Figure pct00238
Figure pct00239
Figure pct00240
Figure pct00241
Figure pct00242
Figure pct00243
Figure pct00244
실시예 29: (R)-4-시아노-N-((2-(3-(디메틸아미노)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00245
단계 1: (R)-4-시아노-N-((2-(3-(디메틸아미노)-2-옥소피리딘-1(2H)-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
디옥산 (1 mL) 중 (R)-N-((2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (30 mg, 76.37 umol) 및 3-(디메틸아미노)피리딘-2(1H)-온 (21.10 mg, 152.73 umol)의 용액에 Cs2CO3 (74.65 mg, 229.10 umol) 및 XantPhos Pd G3 (7.24 mg, 7.64 umol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고, EA (10 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 역상 정제용 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하여 표제 화합물 (12.66 mg, 22.61 umol, 29.61% 수율, FA 염)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 495.4.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ = 9.39 (s, 1H), 8.65 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.91 - 7.89 (m, 2H), 7.60 - 7.58 (m, 1H), 7.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.93 - 6.91 (m, 1H), 6.46 - 6.43 (m, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.90 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.21 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.85 (s, 6H), 1.75 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: 셀루코트-MeOH+ACN(DEA)-40-3 mL-35T.lcm, Rt = 0.908분, ee 값 = 100%.
하기 표 20의 실시예를 실시예 29의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 20. 본 발명의 화합물
Figure pct00246
Figure pct00247
Figure pct00248
실시예 30: (R)-4-시아노-4-메틸-N-((2-(6-메틸-5-옥소-3,4,5,6-테트라히드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00249
단계 1: (R)-4-시아노-4-메틸-N-((2-(6-메틸-5-옥소-3,4,5,6-테트라히드로-2,6-나프티리딘-2(1H)-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
DMSO (1 mL) 중 2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-1(2H)-온 (30 mg, 107.83 umol, TFA 염)의 혼합물에 (R)-N-((2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (28.24 mg, 71.88 umol) 및 DIEA (46.45 mg, 359.42 umol, 62.60 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (15 mL)에 붓고, EA/MeOH = 10/1 (15 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (DCM/MeOH = 10/1, Rf=0.3)에 의해 정제하여 황색 고체를 수득하였다. 황색 고체를 역상 칼럼 (0.1% FA 조건)에 의해 추가로 정제하였다. 생성물 분획을 감압 하에 농축시켜 MeCN을 제거하고, 동결건조시켜 표제 화합물 (8.23 mg, 15.81 umol, 22.0% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 521.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.31 - 9.28 (m, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.20 - 8.17 (m, 2H), 7.95 - 7.92 (m, 1H), 7.54 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.33 - 7.27 (m, 2H), 6.17 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.94 - 4.80 (m, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.69 - 4.61 (m, 2H), 4.23 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.98 - 3.94 (m, 2H), 3.87 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.40 (s, 3H), 2.54 (br s, 2H), 1.70 (s, 3H) ppm.
키랄 SFC: 셀루코트-MeOH+ACN(DEA)-40-3 mL-35T, Rt = 1.153분, ee% = 100%.
하기 표 21의 실시예를 실시예 30의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 21. 본 발명의 화합물
Figure pct00250
Figure pct00251
Figure pct00252
실시예 31: (R)-N-((2-(6-(아제티딘-1-일)피리딘-2-일)-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00253
단계 1: 1-(6-클로로피리딘-2-일)-1H-피라졸-3-올
메틸 프로프-2-이노에이트 (1.29 g, 15.32 mmol, 1.28 mL)를 t-BuOH (10 mL) 중 (6-클로로-2-피리딜)히드라진 (2 g, 13.93 mmol)의 용액에 20℃에서 적가하였다. 이어서, t-BuOK (3.13 g, 27.86 mmol)를 0℃에서 첨가한 후, 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (100 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 혼합물을 1 N HCl 용액을 사용하여 pH 9로 조정하여 황색 침전물을 형성하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 (20 mL)로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (1.6 g, 8.18 mmol, 58.72% 수율)을 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 196.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.38 - 8.36 (m, 1H), 7.83 - 7.71 (m, 1H), 7.57 - 7.48 (m, 1H), 7.21 - 7.11 (m, 1H), 6.06 - 5.89 (m, 1H), 4.71 (br s, 1H) ppm.
단계 2: 2-(3-(벤질옥시)-1H-피라졸-1-일)-6-클로로피리딘
NaH (173.21 mg, 4.33 mmol, 60% 순도)를 DMF (10 mL) 중 1-(6-클로로피리딘-2-일)-1H-피라졸-3-올 (0.77 g, 3.94 mmol)의 용액에 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. (브로모메틸)벤젠 (673.27 mg, 3.94 mmol, 467.55 uL)을 0℃에서 적가하고, 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (50 mL)에 부어 켄칭하고, 황색 침전물이 형성되었다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 (20 mL)로 세척하고, 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (0.5 g, 1.75 mmol, 44.45% 수율)을 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 286.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.38 - 8.36 (m, 1H), 7.76 - 7.67 (m, 2H), 7.55 - 7.46 (m, 2H), 7.44 - 7.34 (m, 4H), 7.14 - 7.05 (m, 1H), 6.00 - 5.97 (m, 1H), 5.32 (s, 2H) ppm.
단계 3: 3-(벤질옥시)-1-(6-클로로피리딘-2-일)-1H-피라졸-4-카르브알데히드
POCl3 (429.30 mg, 2.80 mmol, 260.18 uL)을 DMF (204.64 mg, 2.80 mmol, 215.41 uL)의 용액에 -10℃에서 적가하고, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 2-(3-(벤질옥시)-1H-피라졸-1-일)-6-클로로피리딘 (0.2 g, 699.97 umol)을 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 (20 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 황색 침전물이 형성되었다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 (10 mL)로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (0.21 g, 669.35 umol, 95.63% 수율)을 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 314.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.92 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 7.84 - 7.74 (m, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.45 - 7.36 (m, 3H), 7.26 - 7.24 (m, 1H), 5.46 (s, 2H) ppm.
단계 4: 1-(6-클로로피리딘-2-일)-3-히드록시-1H-피라졸-4-카르브알데히드
TFA (3.39 g, 29.71 mmol, 2.20 mL)를 톨루엔 (2.2 mL) 중 3-(벤질옥시)-1-(6-클로로피리딘-2-일)-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (110 mg, 350.61 umol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 20℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 MTBE (5 mL)로 연화처리하여 표제 화합물 (50 mg, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 224.0.
단계 5: 1-(6-클로로피리딘-2-일)-4-포르밀-1H-피라졸-3-일 트리플루오로메탄술포네이트
DCM (3 mL) 중 1-(6-클로로피리딘-2-일)-3-히드록시-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (40 mg, 178.88 umol)의 용액에 TEA (54.30 mg, 536.64 umol)를 첨가하고, Tf2O (75.70 mg, 268.32 umol)를 적가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (50 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (30 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (30 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 6: tert-부틸 (3-(1-(6-클로로피리딘-2-일)-4-포르밀-1H-피라졸-3-일)프로프-2-인-1-일)카르바메이트
CH3CN (2 mL) 중 tert-부틸 프로프-2-인-1-일카르바메이트 (13.74 mg, 88.56 umol), 1-(6-클로로피리딘-2-일)-4-포르밀-1H-피라졸-3-일 트리플루오로메탄술포네이트 (30 mg, 84.35 umol), Et3N (85.35 mg, 843.46 umol), CuI (1.61 mg, 8.43 umol) 및 Pd(PPh3)2Cl2 (5.92 mg, 8.43 umol)의 혼합물을 탈기하고, N2로 퍼징하였다. 혼합물을 N2 하에 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 (물 30 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (30 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (40 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+Na]+ = 383.1.
단계 7: tert-부틸 ((2-(6-클로로피리딘-2-일)-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)메틸)카르바메이트
t-BuOH (2 mL) 중 tert-부틸 (3-(1-(6-클로로피리딘-2-일)-4-포르밀-1H-피라졸-3-일)프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (40 mg, 110.87 umol)의 용액에 N2 하에 NH4OAc (12.82 mg, 166.30 umol) 및 AgOTf (5.70 mg, 22.17 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을NaHCO3 (0.2 g)의 첨가에 의해 켄칭하고, 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 고체를 에틸 아세테이트 (30 mL * 3)로 세척하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (35 mg, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 360.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.27 (s, 1H), 9.24 - 9.14 (m, 1H), 8.28 - 8.18 (m, 1H), 7.97 - 7.84 (m, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 1H), 5.48 - 5.29 (m, 1H), 4.58 - 4.48 (m, 2H), 1.48 (s, 9H) ppm.
단계 8: tert-부틸 ((2-(6-(아제티딘-1-일)피리딘-2-일)-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)메틸)카르바메이트
아제티딘 (15.23 mg, 266.81 umol) 및 DIEA (114.94 mg, 889.36 umol)를 DMSO (2 mL) 중 tert-부틸 ((2-(6-클로로피리딘-2-일)-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)메틸)카르바메이트 (32 mg, 88.94 umol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 물 (20 mL)에 부었다. 생성물을 에틸 아세테이트 (20 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 물 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (22 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 381.2.
단계 9: (2-(6-(아제티딘-1-일)피리딘-2-일)-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)메탄아민
TFA (410.67 mg, 3.60 mmol, 266.67 uL)를 DCM (2 mL) 중 tert-부틸 ((2-(6-(아제티딘-1-일)피리딘-2-일)-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)메틸)카르바메이트 (20 mg, 52.57 umol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 N2 기체의 유동에 의해 증발시켜 표제 화합물 (12 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 281.2.
단계 10: (R)-N-((2-(6-(아제티딘-1-일)피리딘-2-일)-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DCM (2 mL) 중 (2-(6-(아제티딘-1-일)피리딘-2-일)-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)메탄아민 (12 mg, 42.81 umol)의 용액에 (R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (11.16 mg, 51.37 umol), DIEA (27.66 mg, 214.04 umol), HOBt (6.94 mg, 51.37 umol) 및 EDCI (9.85 mg, 51.37 umol)를 첨가하였다. 물 (30 mL)을 첨가하고, 생성물을 에틸 아세테이트 (30 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 ml * 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (0.1% NH3·H2O 조건)에 의해 정제하여 표제 화합물 (4.44 mg, 9.26 umol, 21.63% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 480.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.38 (s, 1H), 9.30 - 9.22 (m, 2H), 8.21 - 8.15 (m, 1H), 7.95 - 7.90 (m, 1H), 7.80 - 7.73 (m, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 1H), 6.51 - 6.43 (m, 1H), 4.93 - 4.81 (m, 2H), 4.72 - 4.65 (m, 2H), 4.27 - 4.21 (m, 1H), 4.11 - 4.07 (m, 4H), 3.90 - 3.84 (m, 1H), 2.42 - 2.38 (m, 2H), 1.70 (s, 3H) ppm.
하기 표 22의 실시예를 실시예 31의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 22. 본 발명의 화합물
Figure pct00254
실시예 32: (R)-4-시아노-N-((6-(2-메톡시페닐)-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00255
단계 1: tert-부틸 (3-(4-포르밀피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)카르바메이트
CH3CN (120 mL) 중 3-브로모피리딘-4-카르브알데히드 (15 g, 80.64 mmol), tert-부틸 프로프-2-인-1-일카르바메이트 (13.14 g, 84.67 mmol), Et3N (81.60 g, 806.43 mmol, 112.25 mL), CuI (1.54 g, 8.06 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2 (5.66 g, 8.06 mmol)의 혼합물을 N2 하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (300 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (300 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (18 g, 69.15 mmol, 85.75% 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 261.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 10.48 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.78 - 8.68 (m, 1H), 7.78 - 7.62 (m, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.32 - 4.18 (m, 2H), 1.46 (s, 9H) ppm.
단계 2: tert-부틸 ((2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트
t-BuOH (60 mL) 중 tert-부틸 (3-(4-포르밀피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (17 g, 65.31 mmol)의 용액에 NH4OAc (7.55 g, 97.97 mmol) 및 AgOTf (3.36 g, 13.06 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 (22 g)의 첨가에 의해 켄칭하고, 반응 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (30 mL * 3)로 세척하였다. 합한 유기 상을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=0/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (8.5 g, 32.39 mmol, 49.59% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 260.1.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.36 - 9.25 (m, 2H), 8.75 - 8.61 (m, 1H), 7.82 - 7.71 (m, 1H), 5.46 (br s, 1H), 4.64 - 4.62 (m, 2H), 1.46 (s, 9H) ppm.
단계 3: tert-부틸 ((5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트
MeOH (80 mL) 중 tert-부틸 ((2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트 (8 g, 30.85 mmol) 및 PtO2 (700.59 mg, 3.09 mmol)의 혼합물을 탈기시키고, H2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 H2 분위기 (15 psi) 하에 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (50 mL * 2)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM:MeOH=10/1)에 의해 정제하여 조 생성물 (5 g)을 흑색 오일로서 수득하였다. 조 생성물을 역상 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하였다. 목적 분획을 포화 NaHCO3을 사용하여 pH 9로 조정하고, DCM (200 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜, 표제 화합물 (3.8 g, 14.43 mmol, 46.77% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 264.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.26 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 5.46 (br s, 1H), 4.37 - 4.35 (m, 2H), 3.98 (s, 2H), 3.17 - 3.13 (m, 2H), 2.79 - 2.75 (m, 2H), 1.46 (s, 9H) ppm.
단계 4: tert-부틸 ((6-(2-메톡시페닐)-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트
디옥산 (3 mL) 중 tert-부틸 ((5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트 (100 mg, 379.75 umol), 1-브로모-2-메톡시-벤젠 (213.08 mg, 1.14 mmol, 142.05 uL), BINAP (47.29 mg, 75.95 umol), Pd2(dba)3 (34.77 mg, 37.97 umol) 및 Cs2CO3 (371.18 mg, 1.14 mmol)의 혼합물을 탈기하고, N2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (40 mL)에 붓고, EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 역상 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하여 표제 화합물 (80 mg, 155.90 umol, 41.06% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 370.1
단계 5: (6-(2-메톡시페닐)-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메탄아민 히드로클로라이드
MeOH (0.5 mL) 중 tert-부틸 ((6-(2-메톡시페닐)-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)카르바메이트 (35 mg, 94.73 umol)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 0.5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하여 표제 화합물 (30 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 270.2.
단계 6: (R)-4-시아노-N-((6-(2-메톡시페닐)-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DCM (1 mL) 중 (6-(2-메톡시페닐)-5,6,7,8-테트라히드로-2,6-나프티리딘-3-일)메탄아민 히드로클로라이드 (30 mg, 98.10 umol) 및 ((R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (27.70 mg, 127.53 umol)의 용액에 EDCI (28.21 mg, 147.15 umol), DIEA (63.40 mg, 490.51 umol, 85.44 uL) 및 HOBt (19.88 mg, 147.15 umol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (칼럼: 페노메넥스 제미니-NX C18 75*30 mm*3 um; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3)-ACN];B%: 26%-56%,8분)에 의해 정제하여 표제 화합물 (15.64 mg, 31.70 umol, 32.31% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 469.3
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 8.31 (s, 1H), 8.11 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.90 - 7.81 (m, 1H), 7.29 - 7.20 (m, 2H), 7.08 - 6.96 (m, 3H), 6.94 - 6.86 (m, 1H), 4.89 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 4.19 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 3.03 - 2.94 (m, 2H), 1.74 (s, 3H) ppm.
하기 표 23의 실시예를 실시예 32의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 23. 본 발명의 화합물
Figure pct00256
Figure pct00257
Figure pct00258
Figure pct00259
실시예 33: (R)-4-시아노-4-메틸-N-((6-페닐티아졸로[5,4-c]피리다진-3-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00260
단계 1: 3-클로로티아졸로[5,4-c]피리다진-6 (5H)-티온
DMF (10 mL) 중 3,6-디클로로피리다진-4-아민 (5.00 g, 30.490 mmol, 1.00 당량) 및 포타슘 에틸 크산토게네이트 (14.78 g, 121.957 mmol, 4.00 당량)의 혼합물을 130℃에서 12시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (500 mL)로 희석하고, EtOAc (500 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL x 1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (4.8 g, 79.67%)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =204.
단계 2: 3,6-디클로로티아졸로[5,4-c]피리다진
술포닐 클로라이드 (3.00 mL) 중 3-클로로티아졸로[5,4-c]피리다진-6(5H)-티온 (2.00 g, 9.820 mmol, 1.00 당량)의 혼합물을 질소 분위기 하에 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 잔류물을 포화 수성 Na2CO3을 사용하여 pH 9로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 (1 L x 3)로 추출하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 0에서 100% EtOAc의 용리 구배로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 중간체 3 (1.3 g, 61.68%)을 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z [M+H] + =206.
단계 3: 3-클로로-6-페닐티아졸로[5,4-c]피리다진
디옥산 (4.00 mL) 및 H2O (1.00 mL) 중 3,6-디클로로티아졸로[5,4-c]피리다진 (800.00 mg, 3.883 mmol, 1.00 당량) 및 Cs2CO3 (2530.15 mg, 7.765 mmol, 2.00 당량)의 교반 혼합물에 Pd(dppf)Cl2 (284.10 mg, 0.388 mmol, 0.10 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (30.0 mL)로 희석하고, EtOAc (30.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (25.0 mL x 1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 (320 mg, 29.95%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =248.
단계 4: 6-페닐티아졸로[5,4-c]피리다진-3-카르보니트릴
DMF (4.00 mL) 중 3-클로로-6-페닐티아졸로[5,4-c]피리다진 (310.00 mg, 1.252 mmol, 1.00 당량) 및 Zn(CN)2 (293.97 mg, 2.503 mmol, 2.00 당량)의 교반 혼합물에 Pd2(dba)3 (229.21 mg, 0.250 mmol, 0.20 당량) 및 XPhos (238.65 mg, 0.501 mmol, 0.40 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (30.0 mL)로 희석하고, EtOAc (30.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (25.0 mL x 1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피, 용리 구배 석유 에테르 중 0에서 100% EtOAc에 의해 정제하여 표제 화합물 (150 mg, 48.29%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z [M+H]+ = 239.
단계 5: (6-페닐티아졸로[5,4-c]피리다진-3-일)메탄아민
DCM (4.00 mL) 중 6-페닐티아졸로[5,4-c]피리다진-3-카르보니트릴 (130.00 mg, 0.546 mmol, 1.00 당량)의 교반 혼합물에 DIBAL-H (77.59 mg, 0.546 mmol, 1.00 당량)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물 (30.0 mL)로 희석하고, EtOAc (30.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (25.0 mL x 1)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 0에서 100% EtOAc의 용리 구배로 정제하여 표제 화합물 (40 mg, 29.05%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z [M+H]+ = 243.
단계 6: (R)-4-시아노-4-메틸-N-((6-페닐티아졸로[5,4-c]피리다진-3-일)메틸)이소크로만-6-카르복스아미드
DMF (1.50 mL) 중 (R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (16.14 mg, 0.025 mmol, 1.00 당량) 및 (6-페닐티아졸로[5,4-c]피리다진-3-일)메탄아민 (18 mg, 0.025 mmol, 1.00 당량)의 교반 혼합물에 HATU (22.55 mg, 0.021 mmol, 1.00 당량) 및 DIEA (24.00 mg, 0.062 mmol, 3.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 임의의 추가 후처리 없이, 혼합물을 정제용 HPLC (칼럼: 엑스셀렉트 CSH F-페닐 OBD 칼럼, 19*250, 5 um; 이동상 A: 물 (0.05% FA), 이동상 B: ACN; 유량: 25 mL/분; 구배: 10분 동안 27 B에서 55 B, 분 동안 55 B에서 B, 분 동안 B에서 B, 분 동안 B에서 B, 분 동안 B에서 B; 254/220 nm; RT1:8.4; RT2:; 주입 부피: mL; 실행 수:)에 의해 정제하여 표제 화합물 (6.0 mg, 31.71%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z [M+H]+ = 443.05.
1H NMR (300 MHz, 메탄올-d4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 8.22 (s, 1H), 8.16 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 8.1, 1.8 Hz, 1H), 7.66 (dt, J = 14.7, 7.1 Hz, 3H), 7.30 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.92 (s, 2H), 4.22 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.94 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H).
실시예 34: (S)-N-((2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸)-4-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00261
단계 1: (4,5-디아미노피리딘-2-일)메탄올
THF (80 mL) 중 메틸 4,5-디아미노피리딘-2-카르복실레이트 (8.00 g, 47.856 mmol, 1.00 당량)의 교반 혼합물에 LiBH4 (THF 중 2 M, 119.64 mL, 239.280 mmol, 5.00 당량)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 13시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (500 mL)으로 켄칭하고, 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 산화알루미늄 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH 20/1에서 2/1로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (6 g, 90.10%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 140.
단계 2: 7-(히드록시메틸)피리도[3,4-b]피라진-2-올
n-BuOH (500.00 mL) 중 (4,5-디아미노피리딘-2-일)메탄올 (5.00 g, 35.930 mmol, 1.00 당량)의 용액에 에틸 글리옥실레이트 (7.70 g, 37.727 mmol, 1.05 당량, 50%)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉각시키고, 여과하고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (3.1 g, 48.70%)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 178.
단계 3: (2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸 아세테이트
DCM (50 mL) 중 7-(히드록시메틸)피리도[3,4-b]피라진-2-올 (3.10 g, 17.498 mmol, 1.00 당량) 및 DMAP (1068.85 mg, 8.749 mmol, 0.50 당량)의 용액에 TEA (2.66 g, 26.287 mmol, 1.50 당량) 및 Ac2O (5.36 g, 52.503 mmol, 3.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH=50/1로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (3.1 g, 80.82%)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 220.
단계 4: (2-클로로피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸 아세테이트
톨루엔 (100.00 mL) 중 PPh3 (5.80 g, 22.112 mmol, 4.8 당량)의 용액에 트리클로로이소시아누르산 (1.71 g, 7.371 mmol, 1.60 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에, (2-옥소-1,2-디히드로피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸 아세테이트 (1.53 g, 6.97 mmol, 1.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 추가로 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 50/1에서 8/1의 PE/EA로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (610 mg, 55.72%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 238.
단계 5: (2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸 아세테이트
디옥산 (2.00 mL) 중 (2-클로로피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸 아세테이트 (250.00 mg, 1.052 mmol, 1.00 당량) 및 Sn2Me6 (413.60 mg, 1.262 mmol, 1.20 당량)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 실온에서 Pd(PPh3)4 (121.57 mg, 0.105 mmol, 0.10 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 추가의 (2-클로로피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸 아세테이트 (250.00 mg, 1.052 mmol, 1.00 당량)를 실온에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (12:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (298 mg, 조 물질)을 담황색 고체로서 수득하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =321.
단계 6: (2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메탄올
MeOH (5.00 mL) 중 (2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸 아세테이트 (285.00 mg, 0.887 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 K2CO3 (245.15 mg, 1.774 mmol, 2.00 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (48 mg, 30.32%)을 담황색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =280.
단계 7: (2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸 메탄술포네이트
DCM (5.00 mL) 중 (2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메탄올 (270.00 mg, 0.967 mmol, 1.00 당량) 및 TEA (195.64 mg, 1.934 mmol, 2.00 당량)의 교반 용액에 MsCl (166.10 mg, 1.451 mmol, 1.50 당량)을 실온에서첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EtOAc (1:1)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (115 mg, 33.29%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =358.
단계 8: 2-((2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온
DMF (2.00 mL) 중 (2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸 메탄술포네이트 (105.00 mg, 0.294 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 칼륨 1,3-디옥소이소인돌린-2-이드 (108.84 mg, 0.588 mmol, 2.00 당량)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고, H2O (3x10 mL)로 세척하였다. 생성된 고체를 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (69 mg, 57.50%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =409.
단계 9: (2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메탄아민
EtOH (5.00 mL) 중 2-((2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸)이소인돌린-1,3-디온 (60.00 mg, 0.147 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 히드라진 수화물 (0.50 mL)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 담황색 고체로서의 표제 화합물 (72 mg, 조 물질)로 농축시키고, 이를 추가 정제 없이 직접 사용하였다.
(LCMS (ESI) m/z [M+H]+ =279.
단계 10: (S)-N-((2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메틸)-4-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DMF (2.00 mL) 중 (S)-4-플루오로-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (20.00 mg, 0.095 mmol, 1.00 당량) 및 HATU (43.41 mg, 0.114 mmol, 1.20 당량)의 교반 용액에 DIEA (36.89 mg, 0.285 mmol, 3.00 당량) 및 (2-(6-시클로프로필피라진-2-일)피리도[3,4-b]피라진-7-일)메탄아민 (29.13 mg, 0.105 mmol, 1.10 당량)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 임의의 추가의 후처리 없이, 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 (20 mg, 44.68%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ =471.20.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.84 (s, 1H), 9.55 (s, 1H), 9.46 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.28 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.02 - 7.90 (m, 2H), 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.95 - 4.81 (m, 3H), 4.79 - 4.69 (m, 1H), 4.08 (t, J = 13.0 Hz, 1H), 3.85 (dd, J = 25.1, 12.5 Hz, 1H), 2.43 - 2.31 (m, 1H), 1.70 (d, J = 20.7 Hz, 3H), 1.29 - 1.09 (m, 4H).
하기 표 24의 실시예를 실시예 34의 제조에 사용된 것과 유사한 표준 화학적 조작 및 절차를 사용하여 제조하였다.
표 24. 본 발명의 화합물
Figure pct00262
Figure pct00263
실시예 35 및 36: (R)-4-시아노-N-((2-(4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 및 (R)-4-시아노-N-((2-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
Figure pct00264
단계 1: (R)-N-((2-(3-브로모-4-플루오로-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
DMSO (0.5 mL) 중 (R)-N-((2-클로로-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (30 mg, 76.37 umol), 3-브로모-4-플루오로-1H-피라졸 (62.99 mg, 381.85 umol) 및 DIEA (98.70 mg, 763.70 umol, 133.02 uL)의 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (4 mL)에 붓고, EA (4 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (FA 조건)에 의해 정제하여 표제 화합물 (30 mg, 56.38 umol, 73.83% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [81BrM+H]+ = 523.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.45 - 9.42 (m, 1H), 9.41 (s, 1H), 9.08 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.23 - 8.16 (m, 2H), 7.97 - 7.94 (m, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.95 - 4.83 (m, 2H), 4.81 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.24 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.88 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.71 (s, 3H) ppm.
단계 2: (R)-4-시아노-N-((2-(4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 및 (R)-4-시아노-N-((2-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
디옥산 (1 mL) 중 (R)-N-((2-(3-브로모-4-플루오로-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (30 mg, 57.54 umol), 메틸보론산 (4.13 mg, 69.05 umol), K3PO4 (36.64 mg, 172.62 umol) 및 [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (37.50 mg, 57.54 umol)의 혼합물을 탈기하고, N2로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O 4 mL에 붓고, EA (4 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (칼럼: 페노메넥스 루나 C18 150*25 mm*10 um; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 38%-68%,10분)에 의해 정제하여 (R)-4-시아노-N-((2-(4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (2.83 mg, 5.35 umol, 9.30% 수율, FA 염)를 황색 고체로서, 및 (R)-4-시아노-N-((2-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드 (4.77 mg, 9.44 umol, 16.41% 수율, FA 염)를 황색 고체로서 수득하였다.
(R)-4-시아노-N-((2-(4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 457.3.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 9.23 (s, 1H), 8.65 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.93 - 7.90 (m, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 4.89 (s, 2H), 4.21 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.77 (s, 3H) ppm.
(R)-4-시아노-N-((2-(4-플루오로-1H-피라졸-1-일)-1,6-나프티리딘-7-일)메틸)-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미드
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+= 443.2.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 9.26 (s, 1H), 8.75 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.62 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.93 - 7.90 (m, 1H), 7.86 - 7.80 (m, 2H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.21 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 1.77 (s, 3H) ppm.
실시예 37: 메틸 1-(7-(((R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미도)메틸)-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트
Figure pct00265
단계 1: tert-부틸 5-(7-시아노-1,6-나프티리딘-2-일)-3,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트
디옥산 (4 mL) 및 H2O (0.4 mL) 중 2-클로로-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (400 mg, 2.11 mmol) 및 tert-부틸 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,6-디히드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (848.03 mg, 2.74 mmol)의 혼합물에 [1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (137.50 mg, 210.97 umol) 및 K3PO4 (1.34 g, 6.33 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 1분 동안 퍼징하고, 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고, EA (40 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL*2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 MeOH (8 mL) 중에 슬러리화하고, 침전물을 여과에 의해 수집하고, 건조시켰다. 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EtOAc = 20:1-1:1)에 의해 추가로 정제하여 표제 화합물 (460 mg, 1.37 mmol, 64.82% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 337.2.
단계 2: tert-부틸 1-(7-시아노-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트
DMSO (2 mL) 중 t-BuOK (70.05 mg, 624.28 umol)의 혼합물에 트리메틸술폭소늄 아이오다이드 (137.39 mg, 624.28 umol)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 DMSO (1 mL) 중에 용해시킨 tert-부틸 5-(7-시아노-1,6-나프티리딘-2-일)-3,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트 (210 mg, 624.28 umol)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 45℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고, EA (40 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EtOAc = 20:1-1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (80 mg, 215.17 umol, 34.47% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 351.2.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.21 (s, 1H), 8.30 - 8.19 (m, 2H), 7.71 - 7.40 (m, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.24 - 4.14 (m, 1H), 3.76 - 3.52 (m, 1H), 3.20 - 2.96 (m, 1H), 2.18 - (m, 1H), 1.97 - 1.82 (m, 2H), 1.78 - 1.60 (m, 1H), 1.54 - 1.46 (m, 10H) ppm.
단계 3: 2-(3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴
DCM (2 mL) 중 tert-부틸 1-(7-시아노-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트 (120 mg, 342.45 umol)의 혼합물에 TFA (770.00 mg, 6.75 mmol, 0.5 mL)를 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (20 mL)에 붓고, EA (20 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (85 mg, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다.
단계 4: 메틸 1-(7-시아노-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트
DCM (1 mL) 중 2-(3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-1-일)-1,6-나프티리딘-7-카르보니트릴 (85 mg, 339.60 umol) 및 TEA (171.82 mg, 1.70 mmol, 236.34 uL)의 혼합물에 메틸 클로로포르메이트 (96.27 mg, 1.02 mmol, 78.91 uL)를 0℃에서 적가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고, EA (40 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL * 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE: EtOAc = 20:1-1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (55 mg, 173.78 umol, 51.17% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 309.1.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.43 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.76 - 7.60 (m, 1H), 4.35 - 4.15 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.63 - 3.50 (m, 1H), 3.16 - 2.97 (m, 1H), 2.18 - 2.06 (m, 1H), 1.96 - 1.78 (m, 2H), 1.54 - 1.53 (m, 1H), 1.10 - 1.08(m, 1H) ppm.
단계 5: 메틸 1-(7-(((tert-부톡시카르보닐)아미노)메틸)-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트
MeOH (10 mL) 중 메틸 1-(7-시아노-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트 (55 mg, 178.38 umol)의 혼합물에 TEA (36.10 mg, 356.76 umol, 49.66 uL) 및 Boc2O (58.40 mg, 267.57 umol, 61.47 uL)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 퍼징하고, 라니-Ni (76.41 mg, 891.89 umol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 H2 3회 퍼징하고, 생성된 혼합물을 H2 (15 psi) 하에 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE: EtOAc = 20:1-1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (35 mg, 84.27 umol, 47.24% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 413.2.
단계 6: 메틸 1-(7-(아미노메틸)-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자바이시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트
DCM (3 mL) 중 메틸 1-(7-(((tert-부톡시카르보닐)아미노)메틸)-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트 (35 mg, 84.85 umol)의 용액에 TFA (1 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (20 mL)에 붓고, EA (20 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (28 mg, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 313.2.
단계 7: 메틸 1-(7-(((R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복스아미도)메틸)-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트
DCM (1 mL) 중 (R)-4-시아노-4-메틸이소크로만-6-카르복실산 (23.37 mg, 107.57 umol)의 용액에 EDCI (22.34 mg, 116.53 umol), HOBt (15.75 mg, 116.53 umol) 및 DIEA (34.76 mg, 268.92 umol,46.84 uL)를 첨가하였다. 이어서, 메틸 1-(7-(아미노메틸)-1,6-나프티리딘-2-일)-3-아자비시클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트 (28 mg, 89.64 umol)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 (30 mL)에 붓고, EA (20 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (0.1% FA 조건)에 의해 정제하여 표제 화합물 (5.30 mg, 10.36 umol, 11.56% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 512.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.41 - 9.32 (m, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.45 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.94(d, J = 1.6, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.51 - 7.39 (m, 1H), 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.94 - 4.81 (m, 2H), 4.77 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.33 - 4.19 (m, 2H), 4.18 - 4.07 (m, 1H), 3.87 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.52 - 3.43 (m, 1H), 3.13 - 2.97 (m, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 1.88 - 1.76 (m, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.53 - 1.43 (m, 1H), 1.04 - 0.96 (m, 1H) ppm.
실시예 38. BRM 및 BRG-1의 ATPase 촉매 활성에 대한 검정
BRM 또는 BRG-1의 ATPase 촉매 활성을 ADP-글로(ADP-Glo)™ (프로메가, V9102)를 사용하여 시험관내 생화학적 검정에 의해 측정하였다. 반응이 완료되면 ADP-글로™ 키나제 검정을 2 단계로 수행하였다. 제1 단계는 반응에서 임의의 소비되지 않은 ATP를 고갈시키는 것이다. 제2 단계는 반응 생성물 ADP를 ATP로 전환시키는 것이며, 이는 루시페라제에 의해 사용되어 발광을 생성하고, 발광 판독기, 예컨대 엔비전(Envision)에 의해 검출될 것이다.
검정 반응 혼합물 (10 μL)은 20 mM 트리스, pH 8, 20 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0.1% 트윈-20, 및 1 mM 신선한 DTT (피어스(Pierce)™ DTT (디티오트레이톨), cat# 20290)를 포함하는 ATPase 검정 완충제 중 30 nM의 BRM 또는 BRG-1, 20 nM 연어 정자 DNA (인비트로젠으로부터, 울트라퓨어(UltraPure)™ 연어 정자 DNA 용액, cat# 15632011), 및 400 μM의 ATP를 함유하였다. 2.5 μL ATPase 용액을 저부피 백색 프록시플레이트-384 플러스 플레이트 (퍼킨엘머,cat# 6008280) 상의 2.5 μL ATP/DNA 용액에 첨가하여 반응을 개시하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 키트에 제공된 ADP-글로™ 시약 5 μL를 첨가한 후, 반응물을 실온에서 40분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 키트에 제공된 키나제 검출 시약 10 μL를 첨가하여 ADP를 ATP로 전환시키고, 반응물을 실온에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 마지막으로, 발광 측정을 플레이트-판독 발광측정기, 예컨대 엔비전으로 수집하였다.
BRM 및 BRG-1을 하이 파이브(high five) 곤충 세포주로부터 90% 초과의 순도로 합성하였다. 본원에 기재된 ATPase 촉매 활성 검정으로부터 화합물 1-126에 대한 IC50 데이터를 하기 표 25에 나타냈다.
표 25. 본 발명의 화합물에 대한 BRM 및 BRG-1 억제 데이터
Figure pct00266
Figure pct00267
Figure pct00268
Figure pct00269
Figure pct00270
Figure pct00271
Figure pct00272
Figure pct00273
Figure pct00274
Figure pct00275
Figure pct00276
Figure pct00277
Figure pct00278
Figure pct00279
"+"는 > 1 μM의 억제 효과를 나타내고; "++"는 0.5-1 μM의 억제 효과를 나타내고; "+++"는 0.1-0.5 μM의 억제 효과를 나타내고, "++++"는 < 0.1 μM의 억제 효과를 나타낸다.
실시예 39. 화합물 A의 합성
BRG1/BRM 억제제 화합물 A는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00280
화합물 A를 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이 합성하였다.
반응식 1. 화합물 A의 합성
Figure pct00281
화합물 A의 존재 하에 BRM 또는 BRG-1의 ATPase 촉매 활성을 상기 기재된 ADP-글로™ (프로메가, V9102)를 사용하여 시험관내 생화학적 검정에 의해 측정하였다. 화합물 A는 검정에서 BRM에 대해 10.4 nM 및 BRG1에 대해 19.3 nM의 IC50을 갖는 것으로 밝혀졌다.
실시예 40. 포도막 흑색종 및 혈액암 세포주의 성장에 대한 BRG1/BRM ATPase 억제의 효과
절차: 포도막 흑색종 세포주 (92-1, MP41, MP38, MP46), 전립선암 세포주 (LNCAP), 폐암 세포주 (NCI-H1299), 및 불멸화 배아 신세포주 (HEK293T)를 성장 배지를 함유한 96 웰 플레이트에 플레이팅하였다 (표 5 참조). BRG1/BRM ATPase 억제제인 화합물 A를 DMSO 중에 용해시키고, 플레이팅 시점에 0 내지 10 마이크로몰의 농도 구배로 세포에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 3일 처리 후, 배지를 세포로부터 제거하고, 30 마이크로리터의 TrypLE (깁코)를 10분 동안 세포에 첨가하였다. 세포를 플레이트로부터 탈착시키고, 170 마이크로리터의 성장 배지를 첨가하여 재현탁시켰다. 2개의 DMSO-처리된 대조군 웰로부터의 세포를 계수하고, 실험 시작 시에 플레이팅된 초기 수의 세포를 37℃에서 추가 4일 동안 신선한-화합물 함유 플레이트에 재플레이팅하였다. 제7일에, 세포를 상기 기재된 바와 같이 수거하였다. 제3일 및 제7일에, 상대 세포 성장을 셀-타이터 글로 (프로메가)의 첨가에 의해 측정하고, 발광을 엔비전 플레이트 판독기 (퍼킨 엘머) 상에서 측정하였다. 각각의 세포주의 성장이 50% 억제된 화합물의 농도 (GI50)를 그래프패드 프리즘을 사용하여 계산하고, 하기에 플롯팅하였다. 다발성 골수종 세포주 (OPM2, MM1S, LP1), ALL 세포주 (TALL1, JURKAT, RS411), DLBCL 세포주 (SUDHL6, SUDHL4, DB, WSUDLCL2, PFEIFFER), AML 세포주 (OCIAML5), MDS 세포주 (SKM1), 난소암 세포주 (OV7, TYKNU), 식도암 세포주 (KYSE150), 횡문근양 종양 세포주 (RD, G402, G401, HS729, A204), 간암 세포주 (HLF, HLE, PLCRPF5), 및 폐암 세포주 (SW1573, NCIH2444)에 대해, 상기 방법을 다음의 변형으로 수행하였다: 세포를 96 웰 플레이트에 플레이팅하고, 다음날, BRG1/BRM ATPase 억제제, 화합물 A를 DMSO 중에 용해시키고, 0 내지 10 마이크로몰의 농도 구배로 세포에 첨가하였다. 제3일 및 제7일에 세포 분할 시, 세포를 새로운 96 웰 플레이트로 분할하고, 새로운 화합물을 재플레이팅 4시간 후에 첨가하였다.
표 26은 시험된 세포주 및 사용된 성장 배지를 열거한다.
표 26. 세포주 및 성장 배지
Figure pct00282
결과: 도 1에 도시된 바와 같이, 포도막 흑색종 및 혈액암 세포주가 다른 시험된 세포주보다 BRG1/BRM 억제에 더 감수성이었다. 포도막 흑색종 및 혈액암 세포주의 억제는 제7일까지 유지되었다.
실시예 41. 포도막 흑색종 세포주에서 BRG1/BRM 억제제와 임상 PKC 및 MEK 억제제의 비교
절차: 포도막 흑색종 세포주인 92-1 또는 MP41을 성장 배지의 존재 하에 96 웰 플레이트에 플레이팅하였다 (표 26 참조). BAF ATPase 억제제 (화합물 A), PKC 억제제 (LXS196; 메드켐익스프레스), 또는 MEK 억제제 (셀루메티닙; 셀렉 케미칼스)를 DMSO 중에 용해시키고, 플레이팅 시점에 0 내지 10 마이크로몰의 농도 구배로 세포에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 3일 처리 후, 세포 성장을 셀-타이터 글로우 (프로메가)로 측정하고, 발광을 엔비전 플레이트 판독기 (퍼킨 엘머) 상에서 판독하였다.
결과: 도 2a 및 도 2b에 도시된 바와 같이, 화합물 A는 임상 PKC 및 MEK 억제제와 유사한 포도막 흑색종 세포의 성장 억제를 나타냈다. 추가로, 화합물 A는 임상 PKC 및 MEK 억제제보다 빠른 억제 개시를 유발하는 것으로 밝혀졌다.
실시예 42. 화합물 B의 합성
BRG1/BRM 억제제 화합물 B는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00283
화합물 B를 하기 반응식 2에 나타낸 바와 같이 합성하였다.
반응식 2. 화합물 B의 합성
Figure pct00284
단계 1: (S)-1-(메틸술포닐)-N-(4-(메틸티오)-1-옥소-1-((4-(3-(피리딘-4-일)페닐)티아졸-2-일)아미노)부탄-2-일)-1H-피롤-3-카르복스아미드 (화합물 B)의 제조
Figure pct00285
DMF (20 mL) 중 (2S)-2-아미노-4-메틸술파닐-N-[4-[3-(4-피리딜)페닐]티아졸-2-일]부탄아미드 (2 g, 4.75 mmol, HCl 염) 및 1-메틸술포닐피롤-3-카르복실산 (898.81 mg, 4.75 mmol)의 혼합물에 EDCI (1.37 g, 7.13 mmol), HOBt (962.92 mg, 7.13 mmol), 및 DIEA (2.46 g, 19.00 mmol, 3.31 mL)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (100 mL)에 붓고, 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 고체를 MeOH (20 mL)로 연화처리하고, 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 고체를 DMSO (10 mL) 중에 용해시킨 다음, 혼합물을 MeOH (50 mL)에 붓고, 형성된 침전물을 여과에 의해 수집하고, 동결건조시켜 화합물 B (2.05 g, 3.66 mmol, 77.01% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H]+=555.9. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.49 (s, 1H), 8.68-8.66 (m, 2H), 8.46 (d, J=7.2 Hz, 1H), 8.31-8.30 (m, 1H), 8.02-8.00 (m, 1H), 7.94-7.96 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.73-7.74 (m, 3H), 7.61-7.57 (m, 1H), 7.31-7.29 (m, 1H), 6.79-6.77 (m, 1H), 4.74-4.69 (m, 1H), 3.57 (s, 3H), 2.67-2.53 (m, 2H), 2.13-2.01 (m, 5H). SFC: AS-3-MeOH (DEA)-40-3 mL-35T.lcm, t = 0.932분, ee% = 100%.
실시예 43. 포도막 흑색종, 혈액암, 전립선암, 유방암 및 유잉 육종 세포주의 성장에 대한 BRG1/BRM ATPase 억제의 효과
절차: 상기 실시예 28에 기재된 모든 세포주를 또한 화합물 B를 사용하여 상기 기재된 바와 같이 시험하였다. 추가로, 하기 세포주를 또한 다음과 같이 시험하였다. 간략하게, 유잉 육종 세포주 (CADOES1, RDES, SKES1), 망막모세포종 세포주 (WERIRB1), ALL 세포주 (REH), AML 세포주 (KASUMI1), 전립선암 세포주 (PC3, DU145, 22RV1), 흑색종 세포주 (SH4, SKMEL28, WM115, COLO829, SKMEL3, A375), 유방암 세포주 (MDAMB415, CAMA1, MCF7, BT474, HCC1419, DU4475, BT549), B-ALL 세포주 (SUPB15), CML 세포주 (K562, MEG01), 버킷 림프종 세포주 (RAMOS2G64C10, DAUDI), 외투 세포 림프종 세포주 (JEKO1, REC1), 방광암 세포주 (HT1197) 및 폐암 세포주 (SBC5)에 대해, 상기 방법을 다음의 변형으로 수행하였다: 세포를 96 웰 플레이트에 플레이팅하고, 다음날, BRG1/BRM ATPase 억제제, 화합물 B를 DMSO 중에 용해시키고, 0 내지 10 마이크로몰의 농도 구배로 세포에 첨가하였다. 제3일 및 제7일에 세포 분할 시, 세포를 새로운 96 웰 플레이트로 분할하고, 새로운 화합물을 재플레이팅 4시간 후에 첨가하였다.
표 27은 시험된 세포주 및 사용된 성장 배지를 열거한다.
표 27. 세포주 및 성장 배지
Figure pct00286
결과: 도 3에 도시된 바와 같이, 포도막 흑색종, 혈액암, 전립선암, 유방암 및 유잉 육종 세포주가 다른 시험된 세포주보다 BRG1/BRM 억제에 더 감수성이었다. 포도막 흑색종, 혈액암, 전립선암, 유방암 및 유잉 육종 세포주의 억제는 제7일까지 유지되었다.
실시예 44. 암 세포주의 성장에 대한 BRG1/BRM ATPase 억제의 효과.
절차: 풀링된 세포 생존율 검정을 이전에 기재된 바와 같이 (문헌 ["High-throughput identification of genotype-specific cancer vulnerabilities in mixtures of barcoded tumor cell lines", Yu et al., Nature Biotechnology 34, 419-423, 2016]) PRISM (혼합물 내 동시적인 상대 억제 프로파일링(Profiling Relative Inhibition Simultaneously in Mixtures))을 사용하여 다음의 변형과 함께 수행하였다. 세포주를 암 세포주 백과사전 (CCLE) 수집물로부터 수득하고, 10% 열-불활성화 태아 소 혈청 (FBS)으로 보충된 페놀 레드 무함유 RPMI-1640 배지에 적응시켜 이러한 세포주의 큰 개요에 고유한 감염 및 풀링 프로토콜을 적용하였다. 렌티바이러스 스핀-감염 프로토콜을 실행하여, 선택 마커로서 블라스티시딘을 사용해 모든 세포주에 대해 추정된 감염 다중도 (MOI) 1로 각각의 세포주에 24개 뉴클레오티드-바코드를 도입하였다. 이어서, 안정하게 바코딩된 750개 초과의 PRISM 암 세포주를 25개의 풀에서 배가 시간에 따라 함께 풀링하였다. 스크린 실행을 위해, 이전에 기재된 바와 같이 (문헌 [Yu et al.]) 각각의 웰에 25개 세포주의 풀을 플레이팅하는 대신에, 모든 부착 세포주 또는 모든 현탁 세포주 풀을 각각 T25 플라스크 (100,000개 세포/플라스크) 또는 6-웰 플레이트 (50,000개 세포/웰)를 사용하여 함께 플레이팅하였다. 세포를 DMSO 또는 화합물로 10 μM의 최고 농도로부터 출발하여 8-포인트 3배 용량 반응으로 삼중으로 처리하였다. 검정 강건성에 대한 대조군으로서, 세포를 2종의 이전에 검증된 화합물인 범-Raf 억제제 AZ-628 및 프로테아솜 억제제 보르테조밉으로 각각 2.5 μM 및 0.039 μM의 최고 농도를 사용하여 병행 처리하였다.
화합물로의 3일 처리 후, 세포를 용해시키고, 게놈 DNA를 추출하고, 바코드를 PCR에 의해 증폭시키고, 차세대 서열분석으로 검출하였다. 처리된 샘플 내의 세포주 특이적 바코드의 계수를 DMSO-대조군 및 제0일 대조군 내의 것과 비교함으로써 세포 생존율을 결정하였다. 용량-반응 곡선을 각각의 세포주에 대해 피팅하고, 상응하는 곡선하 면적 (AUC)을 계산하여 모든 세포주의 중앙 AUC와 비교하였다 (도 4). 중앙값 미만의 AUC를 갖는 세포주가 가장 감수성인 것으로 간주되었다.
실시예 45. 포도막 흑색종 세포주의 성장에 대한 BRG1/BRM ATPase 억제제의 효과.
절차: 포도막 흑색종 세포주 (92-1, MP41, MP38, MP46) 및 비소세포 폐암 세포 (NCIH1299)를 성장 배지를 함유한 96 웰 플레이트에 플레이팅하였다 (표 27 참조). BRG1/BRM ATPase 억제제인 화합물 67을 DMSO 중에 용해시키고, 플레이팅 시점에 0 내지 10 마이크로몰의 농도 구배로 세포에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 3일 처리 후, 세포 성장을 셀-타이터 글로우 (프로메가)로 측정하고, 발광을 엔비전 플레이트 판독기 (퍼킨 엘머) 상에서 판독하였다.
결과: 도 5에 도시된 바와 같이, 화합물 B는 포도막 흑색종 세포주에서 강력한 성장 억제를 유발하였다.
실시예 46. 포도막 흑색종 세포주에서 BRG1/BRM 억제제와 임상 PKC 및 MEK 억제제의 비교
절차: 포도막 흑색종 세포주인 92-1 또는 MP41을 성장 배지의 존재 하에 96 웰 플레이트에 플레이팅하였다 (표 27 참조). BAF ATPase 억제제 (화합물 B), PKC 억제제 (LXS196; 메드켐익스프레스), 및 MEK 억제제 (셀루메티닙; 셀렉 케미칼스)를 DMSO 중에 용해시키고, 플레이팅 시점에 0 내지 10 마이크로몰의 농도 구배로 세포에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 3일 처리 후, 세포 성장을 셀-타이터 글로우 (프로메가)로 측정하고, 발광을 엔비전 플레이트 판독기 (퍼킨 엘머) 상에서 판독하였다.
결과: 도 6a 및 도 6b에 도시된 바와 같이, 화합물 B는 임상 PKC 및 MEK 억제제와 비교하여 포도막 흑색종 세포의 성장 억제에 대해 보다 강력한 효과를 나타냈다. 추가로, 화합물 B는 임상 PKC 및 MEK 억제제보다 빠른 성장 억제 개시를 유발하는 것으로 밝혀졌다.
실시예 47. BRG1/BRM ATPase 억제제는 PKC 억제제-저항성 세포의 성장을 억제하는 데 효과적임.
절차: MP41 포도막 흑색종 세포를 1 마이크로몰 이하의 증가하는 농도의 화합물을 함유하는 성장 배지 (표 27 참조)에서의 장기간 배양에 의해 PKC 억제제 (LXS196; 메드켐익스프레스)에 대해 저항성이 되도록 하였다. 3개월 후, PKC 억제제 (LXS196) 또는 BRG1/BRM ATPase 억제제 (화합물 B)에 대한 모 MP41 세포 및 PKC 억제제 (PKCi)-저항성 세포의 감수성을 상기 실시예 9에 기재된 바와 같이 7-일 성장 억제 검정에서 시험하였다.
결과: PKCi-저항성 세포는 모 MP41 세포주보다 높은 농도의 LXS196에서 성장을 견딜 수 있었지만 (도 7a), BRG1/BRM ATPase 억제제 (화합물 B)는 여전히 PKCi-저항성 및 모 세포주 둘 다의 강한 성장 억제를 유발하였다 (도 7b). PKCi-저항성 세포는 모 MP41 세포보다 화합물 B에 대해 더 감수성이었다 (도 7b).
실시예 48. 화합물 C의 합성
Figure pct00287
단계 1: 6-플루오로피리딘-2-카르보닐 클로라이드 (중간체 B)의 제조
Figure pct00288
디클로로메탄 (500 mL) 및 N,N-디메틸포름아미드 (0.26 mL, 3.54 mmol) 중 6-플루오로피리딘-2-카르복실산 (50.00 g, 354.36 mmol)의 냉각된 (0℃) 용액에 옥살릴 클로라이드 (155.10 mL, 1.77 mol)를 첨가하였다. 옥살릴 클로라이드의 완전한 첨가 후, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 중간체 B (56.50 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다.
단계 2: 2-클로로-1-(6-플루오로-2-피리딜)에테논 (중간체 C)의 제조
Figure pct00289
1,4-디옥산 (800 mL) 중 중간체 B (56.00 g, 351.00 mmol)의 냉각된 (0℃) 혼합물에 헥산 중 2 M 트리메틸실릴 디아조메탄의 용액 (351 mL)을 적가 방식으로 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 25℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 후속적으로 1,4-디옥산 중 4 M HCl의 용액 (500 mL)으로 켄칭하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 진공 하에 농축시켜 오일을 수득하였다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3으로 희석하고 (500 mL), 에틸 아세테이트 (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 중간체 C (35.50 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 직접 사용하였다. LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 173.8.
단계 3: 4-(6-플루오로-2-피리딜)티아졸-2-아민 (중간체 E)의 제조
Figure pct00290
실온에서 MeOH (250 mL) 및 H2O (250 mL)의 혼합물 중 중간체 C (35.50 g, 204.53 mmol) 및 티오우레아 (14.01 g, 184.07 mmol)의 용액에 NaF (3.56 g, 84.82 mmol)를 첨가하였다. 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 진공 하에 부분적으로 농축시켜 MeOH를 제거하고, 생성된 용액을 수성 2 M HCl을 사용하여 pH ~3으로 산성화시켰다. 15분 후, 용액을 에틸 아세테이트 (200 mL x 3)로 추출하고, 유기 층을 버리고, 수성 상을 NaHCO3 (500 mL)로 알칼리화시키고, 30분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트 (325 mL*3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 (225 mL * 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 (300 mL)로 연화처리하고, 25℃에서 10분 동안 교반하고, 여과하였다. 생성된 고체를 진공 하에 건조시켜 중간체 E (28.00 g, 143.43 mmol, 70.13% 수율, 100% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 195.8.; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.00-7.96 (m, 1H), 7.72 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.16 (s, 2H), 7.02 (d, J= 8.0 Hz, 1H).
단계 4: tert-부틸 N-[2-[[4-(6-플루오로-2-피리딜)티아졸-2-일]아미노]-2-옥소-에틸]카르바메이트 (중간체 G)의 제조
Figure pct00291
디클로로메탄 (100 mL) 중 N-Boc-글리신 (5.92 g, 33.81 mmol), HATU (12.86 g, 33.81 mmol), 및 DIEA (15.89 g, 122.94 mmol, 21.41 mL)의 용액에 중간체 E (6.00 g, 30.74 mmol)를 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 후속적으로 물 (100 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (60 mL x 4)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 석유 에테르 및 MeOH의 1:1 혼합물 (40 mL)로 연화처리하였다. 25℃에서 20분 동안 교반한 후, 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 MTBE (20 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 중간체 G (7.7 g, 21.63 mmol, 70.4% 수율, 99.0% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 353.1.
단계 5: 2-((4-(6-플루오로피리딘-2-일)티아졸-2-일)아미노)-2-옥소에탄-1-아미늄 클로라이드 (중간체 H)의 제조
Figure pct00292
1,4-디옥산 중 4 M HCl (35 mL) 중 중간체 G (5.40 g, 15.32 mmol)의 용액을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 중간체 H (4.42 g)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 추가 정제 없이 직접 사용하였다. LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 252.9.
단계 6: 1-tert-부틸-N-[2-[[4-(6-플루오로-2-피리딜)티아졸-2-일]아미노]-2-옥소-에틸]피롤-3-카르복스아미드 (중간체 J)의 제조
Figure pct00293
디클로로메탄 (40 mL) 중 중간체 H (3.00 g, 10.39 mmol), 1-tert-부틸피롤-3-카르복실산 (1.74 g, 10.39 mmol), 및 DIEA (6.71 g, 51.95 mmol, 9.05 mL)의 용액에 HOBt (1.68 g, 12.47 mmol) 및 EDCI (2.39 g, 12.47 mmol)를 순차적으로 첨가하였다. 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 (250 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (300 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 고체를 MTBE/에틸 아세테이트의 1:1 혼합물 (400 mL)로 연화처리하고, 30분 후, 현탁액을 여과하였다. 고체를 MTBE (85 mL x 3)로 세척한 다음, 진공 하에 건조시켜 중간체 J (3.10 g, 7.64 mmol, 73.6% 수율, 99.0% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 402.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.40 (s, 1H), 8.18 - 8.15 (m, 1H), 8.09-8.08 (m, 1H), 7.87-7.83 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.11 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.97 (m, 1H), 6.47 (s, 1H), 4.10 (d, J=5.6 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H).
단계 7: 1-(tert-부틸)-N-(2-((4-(6-(시스-2,6-디메틸모르폴리노)피리딘-2-일)티아졸-2-일)아미노)-2-옥소에틸)-1H-피롤-3-카르복스아미드 (화합물 C)의 제조
Figure pct00294
DMSO (1 mL) 중 중간체 J (0.100 g, 0.249 mmol)의 용액에 DIEA (0.130 mL, 0.747 mmol) 및 시스-2,6-디메틸모르폴린 (0.057 g, 0.498 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 교반하였다. 12시간 후, 용액을 실온으로 냉각시키고, 반응 혼합물을 MeOH (3 mL)로 희석하였다. 잔류물을 정제용 HPLC (0.1% TFA; 칼럼: 루나 C18 150*25 5 u; 이동상: [물 (0.075% TFA) - ACN]; B%: 30%-60%, 2분)에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 수집하고, 동결건조시켜 화합물 C (0.079 g, 0.129 mmol, 51.94% 수율, 100% 순도)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI) m/z: [M+H]+ = 497.5.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.27 (s, 1H), 8.17 - 8.14 (m, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.63 - 7.59 (m, 1H), 7.51 (s, 1H),7.25 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.47 (s, 1H), 4.24 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 4.08 (d, J =5.6 Hz, 2H), 3.64 - 3.61 (m, 2H), 2.44 - 2.38 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.18 (d, J = 5.6 Hz, 6H).
실시예 49. BRG1/BRM ATPase 억제제는 생체내 포도막 흑색종 종양 성장 억제를 유발함.
절차: 누드 마우스 (엔비고)의 액와 영역에 50% 매트리겔 중 5x106개 92-1 포도막 흑색종 세포를 피하 이식하였다. 종양을 평균 ~200 mm3로 성장시키고, 이 시점에 마우스를 그룹화하고, 투여를 개시하였다. 마우스에게 비히클 (20% 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린) 또는 증가하는 용량의 화합물 C를 경구 위관영양에 의해 1일 1회 투여하였다. 종양 부피 및 체중을 3주의 과정에 걸쳐 측정하고, 용량을 체중에 따라 조정하여 mg/kg의 적절한 용량을 달성하였다. 이 때, 동물을 희생시키고, 종양을 절개하고 영상화하였다.
결과: 화합물 C로의 처리는 용량-의존성 방식으로 종양 성장 억제를 유도하였으며, 종양 퇴행은 최고 (50 mg/kg) 용량에서 관찰되었다. (도 8a 및 도 8b). 모든 처리는 체중 감소가 관찰되지 않으면서 내약성이 우수하였다 (도 8c).
다른 실시예
본 발명이 그의 구체적 실시양태와 관련하여 기재되었지만, 본 발명은 추가의 변형이 가능하고, 본 출원은, 일반적으로 본 발명의 원리를 따르며, 본 발명이 속하는 관련 기술분야 내에서 공지되거나 통상적인 실시에 속하고 앞서 기술되고 청구범위의 범주로 하기되는 본질적인 특색에 적용될 수 있는 본 개시내용으로부터의 이탈을 포함하는 본 발명의 임의의 변경, 사용, 또는 변형을 포함하도록 의도되는 것으로 이해될 것이다.
다른 실시양태는 청구범위 내에 있다.

Claims (115)

  1. 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00295

    여기서,
    A는
    Figure pct00296
    이고;
    m은 0, 1, 2, 또는 3이고;
    n은 1 또는 2이고;
    o는 0 또는 1이고;
    X는 O, CH2, 또는 NR7이고;
    X'는 N, CH, 또는 CRX이고, 여기서 RX는 할로겐이고;
    B는 임의로 치환된 6-원 모노시클릭 헤테로아릴렌 또는 임의로 치환된 9- 또는 10-원 비시클릭 헤테로아릴렌이고;
    L은 공유 결합, 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌, C2 알키닐렌, 임의로 치환된 C2 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-C3 헤테로알킬렌, 임의로 치환된 C3-C5 시클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴렌이고;
    C는 임의로 치환된 3- 내지 10-원 시클로알킬; 임의로 치환된 6- 내지 10-원 아릴; 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로아릴; 또는 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로시클릴이고;
    R1 및 R7은 독립적으로 수소 또는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
    각각의 R2 및 R3은 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 또는 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬이고;
    R4는 시아노, 플루오로, 히드록시, 또는 -CH2OH이고;
    R5는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 플루오로 기로 임의로 치환된 C1-C3 알킬이고;
    R6은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개의 플루오로 기로 임의로 치환된 C1-C3 알킬이다.
  2. 제1항에 있어서, R1이 수소인 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, m이 1인 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 수소인 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 수소인 화합물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 임의로 치환된 C1-C6 알킬인 화합물.
  7. 제6항에 있어서, R2가 메틸인 화합물.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬인 화합물.
  9. 제8항에 있어서, R2가 -CH2OCH3인 화합물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, A가
    Figure pct00297
    인 화합물.
  11. 제10항에 있어서, R6이 -CHF2인 화합물.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, A가
    Figure pct00298
    인 화합물.
  13. 제12항에 있어서, R5가 메틸 또는 -CHF2인 화합물.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, X가 O인 화합물.
  15. 제12항 또는 제13항에 있어서, X가 CH2인 화합물.
  16. 제12항 또는 제13항에 있어서, X가 NR7인 화합물.
  17. 제16항에 있어서, R7이 수소인 화합물.
  18. 제16항에 있어서, R7이 메틸인 화합물.
  19. 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, o가 0인 화합물.
  20. 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, o가 1인 화합물.
  21. 제12항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, n이 1인 화합물.
  22. 제12항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, n이 2인 화합물.
  23. 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 시아노인 화합물.
  24. 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 플루오로인 화합물.
  25. 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 히드록시인 화합물.
  26. 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 -CH2OH인 화합물.
  27. 제12항에 있어서, A가
    Figure pct00299
    인 화합물.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, C가 임의로 치환된 3- 내지 10-원 시클로알킬인 화합물.
  29. 제28항에 있어서, C가 시클로프로필인 화합물.
  30. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, C가 임의로 치환된 6- 내지 10-원 아릴인 화합물.
  31. 제30항에 있어서, C가 페닐, 3-디플루오로메틸-페닐, 4-디플루오로메틸페닐, 2-메톡시-페닐, 3-메톡시-페닐, 4-메톡시-페닐, 3,5-디플루오로페닐, 3-디플루오로메틸페닐, 2-메톡시-5-메틸-페닐, 2-메톡시-4-클로로-페닐, 3-시아노-페닐, 3-플루오로-5-메톡시-페닐, 3-플루오로-5-아지티디닐-페닐, 3-아제티딜-페닐, 4-아제티딜-2-메톡시-페닐, 4-모르폴린-4-일-2-메톡시-페닐, 4-tert-부틸-2-메톡시-페닐, 4-아제티딜-페닐, 2-메톡시-4-옥세탄-3-일-페닐, 2-아제티딘-2-온-1-일-페닐, 3-(3-디플루오로메틸옥세탄-3-일)-페닐, 3-(3-메톡시옥세탄-3-일)-페닐, 3-(N-메틸-N-아세트아미도)-페닐, 3-시클로프로필페닐, 3-(N-메틸아제티딘-3-일)-페닐, 3-(N-메틸-N'-피페라지닐)-페닐, 3-플루오로-5-아제티딜-페닐, 3-메틸 에스테르-페닐,
    Figure pct00300
    인 화합물.
  32. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, C가 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로아릴인 화합물.
  33. 제32항에 있어서, C가
    Figure pct00301

    Figure pct00302

    Figure pct00303

    Figure pct00304
    인 화합물.
  34. 제32항에 있어서, C가
    Figure pct00305
    인 화합물.
  35. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, C가 임의로 치환된 5- 내지 10-원 헤테로시클릴인 화합물.
  36. 제35항에 있어서, C가
    Figure pct00306
    또는 N-피롤리디닐인 화합물.
  37. 제35항에 있어서, C가
    Figure pct00307
    인 화합물.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, B가 임의로 치환된 6-원 모노시클릭 헤테로아릴렌인 화합물.
  39. 제38항에 있어서, B가 하기 구조를 갖는 것인 화합물:
    Figure pct00308

    여기서, Ra는 수소 또는 플루오로이고;
    Rb는 수소, 플루오로, 또는 C1-C3 알킬이고;
    Xa는 N 또는 CH이다.
  40. 제39항에 있어서, Ra가 수소인 화합물.
  41. 제39항에 있어서, Ra가 플루오로인 화합물.
  42. 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, Rb가 수소인 화합물.
  43. 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, Rb가 플루오로인 화합물.
  44. 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, Rb가 C1-C3 알킬인 화합물.
  45. 제44항에 있어서, Rb가 메틸인 화합물.
  46. 제39항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, Xa가 N인 화합물.
  47. 제39항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, Xa가 CH인 화합물.
  48. 제39항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, B가
    Figure pct00309
    인 화합물.
  49. 제48항에 있어서, B가
    Figure pct00310
    인 화합물.
  50. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, B가 임의로 치환된 9- 또는 10-원 비시클릭 헤테로아릴렌인 화합물.
  51. 제50항에 있어서, B가 하기 구조를 갖는 것인 화합물:
    Figure pct00311

    여기서, D는 임의로 치환된 5- 또는 6-원 헤테로아릴 또는 임의로 치환된 5- 또는 6-원 헤테로시클릴이다.
  52. 제51항에 있어서, B가
    Figure pct00312
    인 화합물.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
    Figure pct00313
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, L이 임의로 치환된 C1-C3 알킬렌인 화합물.
  55. 제54항에 있어서, L이 에틸렌인 화합물.
  56. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, L이 C2 알키닐렌인 화합물.
  57. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, L이 임의로 치환된 C2 알케닐렌인 화합물.
  58. 제57항에 있어서, L이
    Figure pct00314
    인 화합물.
  59. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, L이 임의로 치환된 C2-C3 헤테로알킬렌인 화합물.
  60. 제59항에 있어서, L이
    Figure pct00315
    인 화합물.
  61. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, L이 임의로 치환된 C3-C5 시클로알킬렌인 화합물.
  62. 제61항에 있어서, L이
    Figure pct00316
    인 화합물.
  63. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, L이 임의로 치환된 4- 내지 10-원 헤테로시클릴렌인 화합물.
  64. 제63항에 있어서, L이
    Figure pct00317
    인 화합물.
  65. 제1항에 있어서, 표 1의 화합물 1-48, 표 2의 화합물 49-84 및 표 3의 화합물 85-126 중 어느 하나인 화합물.
  66. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  67. 세포를 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포에서 BAF 복합체의 활성을 감소시키는 방법.
  68. 제67항에 있어서, BAF 복합체가 암 세포에 존재하는 것인 방법.
  69. BAF 복합체-관련 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 BAF 복합체-관련 장애를 치료하는 방법.
  70. 제69항에 있어서, BAF 복합체-관련 장애가 암 또는 바이러스 감염인 방법.
  71. 세포를 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, BRM을 억제하는 방법.
  72. 제71항에 있어서, 세포가 암 세포인 방법.
  73. BRG1 기능 상실 돌연변이와 관련된 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 BRG1 기능 상실 돌연변이와 관련된 장애를 치료하는 방법.
  74. 제6736항에 있어서, BRG1 기능 상실 돌연변이와 관련된 장애가 암인 방법.
  75. 세포를 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포에서 아폽토시스를 유도하는 방법.
  76. 제75항에 있어서, 세포가 암 세포인 방법.
  77. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  78. 제67항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 비소세포 폐암, 결장직장암, 방광암, 원인불명 원발성 암, 신경교종, 유방암, 흑색종, 비-흑색종 피부암, 자궁내막암, 식도위암, 췌장암, 간담도암, 연부 조직 육종, 난소암, 두경부암, 신세포 암종, 골암, 비-호지킨 림프종, 소세포 폐암, 전립선암, 배아성 종양, 배세포 종양, 자궁경부암, 갑상선암, 타액선암, 위장 신경내분비 종양, 자궁 육종, 위장 기질 종양, CNS 암, 흉선 종양, 부신피질 암종, 충수암, 소장암 또는 음경암인 방법.
  79. 제78항에 있어서, 암이 비소세포 폐암, 결장직장암, 방광암, 원인불명 원발성 암, 신경교종, 유방암, 흑색종, 비-흑색종 피부암, 자궁내막암, 연부 조직 육종 또는 음경암인 방법.
  80. 제79항에 있어서, 암이 비소세포 폐암인 방법.
  81. 제79항에 있어서, 암이 연부 조직 육종인 방법.
  82. 바이러스 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 바이러스 감염을 치료하는 방법.
  83. 제82항에 있어서, 바이러스 감염이 레트로비리다에 과, 헤파드나비리다에 과, 플라비비리다에 과, 아데노비리다에 과, 헤르페스비리다에 과, 파필로마비리다에 과, 파르보비리다에 과, 폴리오마비리다에 과, 파라믹소비리다에 과 또는 토가비리다에 과의 바이러스에 의한 감염인 방법.
  84. 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암을 치료하는 방법.
  85. 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 종양 성장의 감소를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 종양 성장을 감소시키는 방법.
  86. 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 전이성 진행을 억제하는 방법.
  87. 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암의 전이성 콜로니화를 억제하는 방법.
  88. 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암 세포를 유효량의 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 세포에서 BRG1 및/또는 BRM의 수준 및/또는 활성을 감소시키는 방법.
  89. 제88항에 있어서, 세포가 대상체 내에 있는 것인 방법.
  90. 제84항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암이 전이성인 방법.
  91. 제84항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에게 항암 요법을 투여하거나 또는 세포를 항암 요법과 접촉시키는 것을 추가로 포함하는 방법.
  92. 제91항에 있어서, 항암 요법이 화학요법제 또는 세포독성제, 면역요법, 수술, 방사선요법, 열요법, 또는 광응고, 또는 그의 조합인 방법.
  93. 제92항에 있어서, 항암 요법이 수술인 방법.
  94. 제92항에 있어서, 항암 요법이 화학요법제 또는 세포독성제인 방법.
  95. 제94항에 있어서, 화학요법제 또는 세포독성제가 항대사물, 항유사분열제, 항종양 항생제, 아스파라긴-특이적 효소, 비스포스포네이트, 항신생물제, 알킬화제, DNA-복구 효소 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제, 코르티코스테로이드, 탈메틸화제, 면역조정제, 야누스-연관 키나제 억제제, 포스피노시티드 3-키나제 억제제, 프로테아솜 억제제 또는 티로신 키나제 억제제 또는 그의 조합인 방법.
  96. 제94항 또는 제95항에 있어서, 1종 이상의 화학요법제 또는 세포독성제가 다카르바진, 테모졸로미드, 시스플라틴, 트레오술판, 포테무스틴, IMCgp100, CTLA-4 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 미토겐-활성화 단백질 키나제 억제제 및/또는 단백질 키나제 C 억제제인 방법.
  97. 제91항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 항암 요법 및 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제66항의 제약 조성물이 서로 28일 이내에 대상체를 함께 치료하는 데 효과적인 양으로 각각 투여되는 것인 방법.
  98. 제84항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체 또는 암이 BRG1 기능 상실 돌연변이를 갖고/거나 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  99. 제84항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체 또는 암이 BRM 기능 상실 돌연변이를 갖고/거나 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  100. 제84항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암이 1종 이상의 화학요법제 또는 세포독성제의 투여 후에 반응하지 않거나 진행된 것인 방법.
  101. 제84항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암이 1종 이상의 화학요법제에 대해 저항성이거나 또는 그에 대해 저항성인 것으로 예측되는 것인 방법.
  102. 제100항 또는 제101항에 있어서, 1종 이상의 화학요법제 또는 세포독성제가 다카르바진, 테모졸로미드, 시스플라틴, 트레오술판, 포테무스틴, IMCgp100, CTLA-4 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 미토겐-활성화 단백질 키나제 억제제 및/또는 단백질 키나제 C 억제제인 방법.
  103. 제84항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암이 흑색종인 방법.
  104. 제103항에 있어서, 흑색종이 포도막 흑색종인 방법.
  105. 제103항에 있어서, 흑색종이 점막 흑색종인 방법.
  106. 제103항에 있어서, 흑색종이 피부 흑색종인 방법.
  107. 제84항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암이 혈액암인 방법.
  108. 제107항에 있어서, 혈액암이 다발성 골수종, 대세포 림프종, 급성 T-세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군, 이뮤노글로불린 A 람다 골수종, 미만성 혼합 조직구성 및 림프구성 림프종, B-세포 림프종, 급성 림프모구성 백혈병, 미만성 대세포 림프종 또는 비-호지킨 림프종인 방법.
  109. 제84항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암이 전립선암인 방법.
  110. 제84항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암이 유방암인 방법.
  111. 제110항에 있어서, 유방암이 ER 양성 유방암, ER 음성 유방암, 삼중 양성 유방암 또는 삼중 음성 유방암인 방법.
  112. 제84항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암이 골암인 방법.
  113. 제112항에 있어서, 골암이 유잉 육종인 방법.
  114. 제84항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 흑색종, 전립선암, 유방암, 골암, 신세포 암종 또는 혈액암이 신세포 암종인 방법.
  115. 제114항에 있어서, 신세포 암종이 소안구증 전사 인자 (MITF) 패밀리 전위 신세포 암종인 방법.
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