KR20220145898A

KR20220145898A - 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (adm) 결합제

Info

Publication number: KR20220145898A
Application number: KR1020227033527A
Authority: KR
Inventors: 안드레아스 베르크만
Original assignee: 아드레노메드 아게
Priority date: 2020-02-27
Filing date: 2021-03-01
Publication date: 2022-10-31
Also published as: MX2022010564A; US20230250166A1; WO2021170880A3; JP2023515985A; AU2021227279A1; BR112022016843A2; IL295951A; CA3169447A1; EP4110812A2; WO2021170880A2; CN115244081A

Abstract

본 발명의 주제는 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 및/또는 환자가 ICU에 입원할 필요가 있게 만드는 질환의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다.

Description

쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 결합제

다양한 질환 또는 질병은 그를 앓고 있는 개체에 대해 불쾌함에서부터 참을 수 없음에까지 이를 수 있는 공통된 부분적으로 비특이적인 증상을 가질 수 있다. 종종 1 가지 초과의 증상을 경험하는 개체는 이들 증상의 완화를 경험하기 위해 몇몇 약물을 복용해야 한다. 여러 상이한 기저 질환 또는 질병과 연관된 증상의 치료 또는 예방이 지속적으로 요구된다. 특히, 기저 질환 또는 질병과 연관된 1 가지 초과의 증상의 치료 또는 예방에 사용될 수 있는 의약 또는 약물을 제공하는 것이 도움이 될 것이다. 본 발명은 이러한 필요를 다룬다.

펩티드 아드레노메둘린 (ADM)은 인간 크롬친화세포종으로부터 단리된 52 개 아미노산을 포함하는 신규한 혈압강하 펩티드로서 1993 년도에 최초로 기재되었다 ( Kitamura K. et al. 1993. Biochemical and Biophysical Research Communications Vol. 192 (2): 553-560 ). 같은 해에, 185 개 아미노산을 포함하는 전구체 펩티드 및 이 전구체 펩티드의 완전 아미노산 서열을 코딩하는 cDNA 또한 기재되었다. 특히 N-말단에서 21 개 아미노산의 신호 서열을 포함하는 전구체 펩티드는 "프리-프로아드레노메둘린" (프리-프로ADM)으로 지칭된다. 본 명세서에서, 명시된 모든 아미노산 위치는 일반적으로 185 개 아미노산을 포함하는 프리-프로ADM에 관한 것이다. 펩티드 아드레노메둘린 (ADM)은 52 개 아미노산 (서열식별번호(SEQ ID NO): 1)을 포함하고 단백질 분해 절단에 의해 형성되는 프리-프로ADM의 아미노산 95 내지 146을 포함하는 펩티드이다. 지금까지, 실질적으로 프리-프로ADM의 절단에서 형성된 펩티드 단편 중 단지 몇 개의 단편, 특히 프리-프로ADM에서 신호 펩티드의 21 개 아미노산 뒤에 있는 20 개 아미노산 (22-41)을 포함하는 펩티드인 생리학적으로 활성인 펩티드 ADM 및 "PAMP"가 보다 정확하게 조사되었다. 1993 년도에 ADM의 발견 및 특징분석은 집중적인 연구 활동을 촉발시켰고, 그 결과, 다양한 검토 논문에서 요약되었으며, 본 명세서의 맥락에, 특히 ADM에 전념한 "펩티드" 호에서 찾을 수 있는 기사를 특히 참고한다 ( Editorial, Takahashi K. 2001. Peptides 22:1691 ) and (Eto T. 2001. Peptides 22: 1693-1711 ). 추가의 검토는 ( Hinson et al. 2000. Endocrine Reviews 21(2):138-167 )이다. 지금까지의 과학적 조사에서, 특히 ADM이 다기능성 조절 펩티드로서 간주될 수 있음이 밝혀졌다. 이는 글리신에 의해 확장된 불활성 형태로 순환으로 방출된다 ( Kitamura K. et al. 1998. Biochem. Biophys. Res. Commun. 244(2):551-555 ). ADM에 대해 특이적이며, 아마도 ADM의 효과를 조절할 가능성이 있는 결합 단백질 또한 있다 ( Pio R. et al. 2001. The Journal of Biological Chemistry 276(15):12292-12300 ). 지금까지의 조사에서 가장 중요한 ADM 뿐만 아니라 PAMP의 이들 생리학적 효과는 혈압에 영향을 미치는 것이었다.

ADM은 효과적인 혈관확장제이며, 혈압강하 효과가 ADM의 C-말단 부분에서 특정한 펩티드 세그먼트와 연관이 있을 가능성이 있다. 추가로, 심지어 ADM과는 상이한 작용 메카니즘을 갖는 것으로 보이더라도, 프리-프로ADM으로부터 형성된 상기 언급된 추가로 생리학적으로 활성인 펩티드 PAMP도 마찬가지로 혈압강하 효과를 나타낸다는 것이 확인되었다.

추가로, 순환 및 다른 생물학적 액체에서 측정될 수 있는 ADM의 농도는 수많은 병리학적 상태에 있으며, 건강한 대조군 사람에서 확인된 농도보다 훨씬 높다는 것이 확인되었다. 따라서, 급성 쇼크 단계에서 및 패혈증 및 패혈성 쇼크에서 울혈성 심부전, 심근 경색, 신장 질환, 고혈압 장애, 진성 당뇨병을 가진 환자에서 ADM 수준은 정도가 상이하긴 하지만 상당히 증가한다. PAMP 농도 또한 상기 병리학적 상태 중 일부에서 증가하지만, 혈장 수준은 ADM에 비해 낮다 ((Eto, T., supra). 비정상적으로 높은 농도의 ADM이 패혈증에서 관찰되고, 패혈성 쇼크에서 농도가 가장 높았다고 보고되었다 ((Eto, T., "supra) 및 ( Hirata et al. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 1996. 81(4): 1449-1453; Ehlenz K. et al. 1997. Exp Clin Endocrinol Diabetes 105: 156-162 ); Tomoda Y. et al. 2001. Peptides 22: 1783-1794 ; Ueda S. et al. 1999. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 160: 132-136; and Wang P. Peptides 2001. 22: 1835-1840 ) 참고).

WO-A1 2004/097423은 심혈관 장애의 진단, 예후 및 치료를 위해 아드레노메둘린에 대한 항체의 사용을 기재한다. ADM 수용체를 차단함으로써 질환의 치료는 또한 관련 기술분야에 기재되어 있으며 (예를 들어 WO-A1 2006/027147, PCT/EP2005/012844), 상기 질환은 패혈증, 패혈성 쇼크, 심혈관 질환, 감염, 피부 질환, 내분비 질환, 대사 질환, 위장 질환, 암, 염증, 혈액학적 질환, 호흡기 질환, 근육 골격 질환, 신경계 질환, 비뇨기 질환이다.

패혈증의 초기 단계에서, ADM이 심장 기능, 및 간, 비장, 신장 및 소장에서 혈액 공급을 개선시키는 것으로 보고된다. ADM-중화 항체는 패혈증의 초기 단계 동안에 앞서 언급된 효과를 중화시킨다 (Wang, P., "Adrenomedullin and cardiovascular responses in sepsis", Peptides, Vol. 22, pp. 1835-1840 (2001)).

다른 질환의 경우 ADM의 차단이 어느 정도 유익할 수 있다. 그러나, 몇몇 생리학적 기능에는 특정량의 ADM이 필요할 수 있기 때문에, ADM이 완전히 중화되면 이는 또한 유해할 수 있다. 여러 보고에서, ADM의 투여가 특정한 질환에서 유익할 수 있음이 강조되었다. 그와 대조적으로, 다른 보고에서는 ADM이 특정한 상태에서 투여될 때 생명을 위협하는 것으로 보고되었다.

관련 기술분야에서 ADM-결합-단백질-1과 조합한 ADM의 투여가 패혈증 및 패혈성 쇼크의 치료를 위해 기재된다. ADM 및 ADM-결합-단백질-1에 의한 패혈증 동물의 치료가 패혈증의 후기 단계로의 전이를 방지하는 것으로 추정된다. 살아있는 유기체에서 ADM 결합 단백질 (보체 인자 H)이 고농도로 상기 유기체의 순환에 존재한다는 것을 주목해야 한다 (Pio et al.: Identification, characterization, and physiological actions of factor H as an Adrenomedullin binding Protein present in Human Plasma; Microscopy Res. and Technique, 55:23-27 (2002) and Martinez et al.; Mapping of the Adrenomedullin-Binding domains in Human Complement factor H; Hypertens Res Vol. 26, Suppl (2003), S56-59).

ADM의 N-말단에 대해 표적화된 비-중화 항체의 효능은 마우스에서 CLP-유도된 패혈증에 대한 생존 연구에서 조사되었다. 비-중화 항체로의 전처리는 감소된 카테콜아민 주입 속도, 신장 기능장애, 및 궁극적으로 개선된 생존을 일으켰다 ( Struck et al. 2013. Intensive Care Med Exp 1(1):22; Wagner et al. 2013. Intensive Care Med Exp 1(1):21 ).

이들 긍정적인 결과로 인해, 아드레시주맙으로 명명되는 N-말단 항-ADM 항체의 인간화 버전은 추가의 임상 개발을 위해 개발되었다. 혈관 장벽 기능 및 생존에 대한 아드레시주맙의 유익한 효과는 전신 염증 및 패혈증의 임상전 모델에서 최근에 입증되었다 ( Geven et al. 2018. Shock 50(6):648-654 ). 이 연구에서, 아드레시주맙으로의 전처리는 내독소혈증 래트에서 뿐만 아니라 CLP-유도된 패혈증을 가진 마우스에서 신장 혈관 누출을 약화시켰고, 이는 보호성 펩티드 Ang-1의 증가된 신장 발현 및 유해한 펩티드 혈관 내피 성장 인자의 감소된 발현과 일치하였다. 또한, 아드레시주맙으로의 전처리는 마우스에서 CLP-유도된 패혈증의 7 일 생존을 단일 용량 투여의 경우 10에서 50% 및 반복 용량 투여의 경우 0에서 40% 개선시켰다. 아드레시주맙의 제안된 작용 메카니즘이 특히 관심의 대상이다. 동물 및 인간 데이터 둘 다 이 항체의 투여 후 순환 ADM의 잠재적인 용량-의존적인 증가를 나타내었다. 약동학적 데이터, 및 MR-프로ADM (ADM과 동일한 프로호르몬으로부터 유래된 불활성 펩티드 단편)의 증가 결여를 기반으로 하여, 보다 높은 순환 ADM 수준은 증가된 생성에 의해 설명될 수 없다.

이 증가에 대한 메카니즘적 설명은 ADM이 내피 장벽을 가로지를 만큼 충분히 작지만, 항체는 그렇지 않기 때문에, 순환에서 과잉 항체가 ADM을 간질에서 순환으로 배출시킬 수 있다는 것이다 (Geven et al. 2018. Shock. 50(2):132-140; and Voors et al. (J. Eur J Heart Fail. 2019 Feb; 21(2):163-171)). 또한, 항체와 ADM의 결합은 ADM의 반감기를 연장시킨다. NT-ADM 항체가 부분적으로 ADM-매개된 신호전달을 억제하지만, 순환 ADM의 더 큰 증가는 혈액 구획에서 ADM 활성의 전반적인 "순" 증가를 일으켜서, EC의 유익한 효과 (주로 장벽 안정화)를 발휘하는 반면에, 간질에서 VSMC에 대한 ADM의 유해한 효과 (혈관 확장)는 감소된다.

그러나, 본 발명의 한 목적은 환자가 상기 메카니즘으로부터 최적의 이익을 얻을 수 있도록 ADM에 대한 항체를 투여하는 최상의 시기를 확인하는 것이다.

WO2013/072510은 환자의 사망 위험을 감소시키기 위해 상기 환자의 중증 만성 또는 급성 질환 또는 급성 상태의 치료에 사용하기 위한 비-중화 항-ADM 항체를 기재한다.

WO2013/072511은 장기 기능장애 또는 장기 부전의 예방 또는 감소를 위해 환자의 만성 또는 급성 질환 또는 급성 상태의 치료에 사용하기 위한 비-중화 항-ADM 항체를 기재한다.

WO2013/072512는 혈청, 혈액, 혈장에서 아드레노메둘린의 반감기 (t_1/2 절반 체류 시간)를 증강시키는 ADM 안정화 항체인 비-중화 항-ADM 항체를 기재한다. 이 ADM 안정화 항체는 ADM의 생물활성을 80% 미만 차단한다.

WO2013/072513은 순환의 안정화를 필요로 하는 만성 또는 급성 질환 또는 급성 상태를 가진 환자에서 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-lg 스캐폴드가 환자의 혈액 순환을 안정화시키고, 상기 환자의 혈관수축제, 예를 들어 카테콜아민의 요구량을 감소시킴을 나타낸다.

WO2013/072514는 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-lg 스캐폴드가 만성 또는 급성 질환 또는 급성 상태를 가진 환자, 특히 유체 불균형으로 고통받고 있는 ICU (중환자실)에 있는 환자에서 유체 균형을 조절하기 위해 효율적으로 사용될 수 있음을 나타낸다.

WO2017/182561은 괴사 과정과 관련된 질환의 진단을 위해 환자의 샘플에서 총량 또는 활성 DPP3을 결정하는 방법을 기재한다. 이는 DPP3에 대한 항체에 의한 괴사-관련 질환의 치료 방법을 추가로 기재한다.

본 발명에 이르러 본 발명자들은 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-lg 스캐폴드의 처리가 특정한 기간 내에 투여될 때 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 특히 효과적일 수 있다는 것을 발견하였다.

따라서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 환자가 항-ADM 치료를 필요로 하는 시점에, 특히 ICU 입원 후에 투여될 수 있다. 본 발명에 따라 상기 환자는 쇼크 후에 및/또는 ICU 입원 후에 최적의 시기에 치료된다.

상기 효과 외에도 및/또는 그와 관련하여, 체액 샘플에서 DPP3의 수준이 역치보다 낮은 경우에, 쇼크를 가진 환자가 항-ADM 항체에 의한 치료로부터 가장 큰 이점을 가질 것이라는 것 또한 본 발명의 놀라운 발견이다.

정의

본 발명을 상세하게 기재하기 전에, 본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 특정한 기술적 용어들에 대한 정의를 제공하는 것이 편리한 것으로 간주된다. 본 발명이 특정한 실시양태와 관련하여 기재될 것이지만, 이러한 기재는 제한적인 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 예시적인 실시양태를 상세하게 기재하기 전에, 본 발명을 이해하는데 중요한 정의가 제공된다.

본 명세서 및 첨부된 청구항에서 사용된 바와 같이, 문맥상 명백히 달리 지시되지 않는다면, 단수 형태는 각각의 복수 형태를 또한 포함한다.

본 발명의 맥락에서, 용어 "약" 및 "대략"은 해당 특징의 기술적 효과를 여전히 보장하기 위해 관련 기술분야의 기술자가 이해하는 정확도의 간격을 나타낸다. 상기 용어는 전형적으로 지정된 수치 값으로부터 ±20%, 바람직하게는 ±15%, 더욱 바람직하게는 ±10%, 및 훨씬 더 바람직하게는 ±5%의 편차를 나타낸다.

용어 "포함하는"은 비제한적인 것으로 이해되어야 한다. 본 발명의 목적을 위해, 용어 "이루어지는"은 용어 "포함하는"의 바람직한 실시양태인 것으로 고려된다. 이후 적어도 특정한 수의 실시양태를 포함하기 위해 그룹으로 정의되는 경우, 이는 바람직하게는 이들 실시양태만으로 이루어지는 그룹 또한 포함하는 것을 의미한다.

또한, 본원에서 사용된 용어가 특정한 실시양태만을 기재하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 첨부된 청구항으로만 제한되는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않음을 이해해야 한다.

본 발명에 따라, ADM-결합-단백질-1은 또한 ADM-결합-단백질-1 (보체 인자 H)로 지칭될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "쇼크"는 감소된 산소 전달 및/또는 증가된 산소 소비 또는 부적절한 산소 이용에 의해 세포 및 조직 저산소증으로 이어지는 것을 특징으로 한다. 이는 생명을 위협하는 순환 장애이며, 가장 흔하게는 저혈압으로 나타난다 (수축기 혈압 90 mm Hg 미만 또는 MAP 65 mmHg 미만). 쇼크는 근본적인 원인을 기반으로 하여 4 가지 주요 유형으로 나뉘어진다: 저혈량성, 심인성, 폐쇄성, 및 분포성 쇼크 ( Vincent and De Backer 2014. N. Engl. J. Med. 370(6): 583 ).

용어 "심인성 쇼크"는 환자가 급성 관상동맥 증후군 (예를 들어 급성 심근 경색)을 앓았을 수 있거나, 또는 상기 환자가 심부전 (예를 들어 급성 비대상성 심부전), 심근염, 부정맥, 심근병증, 판막성 심장 질환, 급성 대동맥 협착을 동반한 대동맥 박리, 외상성 건삭 파열 또는 대규모 폐 색전증을 갖고 있는 것인 쇼크를 지칭한다. 심인성 쇼크 (CS)는 감소된 심박출량으로 인해 치명적인 내기관 저관류 상태로서 정의된다. 특히, CS는 가벼운 저관류에서 심각한 쇼크에 이르는 범위를 형성한다. CS의 진단을 위해 확립된 기준은 다음과 같다: (i) 수축기 혈압, >30 분 동안 ≤90 mmHg, 또는 혈압 ≥90 mmHg를 달성하기 위해 혈관수축제 필요; (ii) 폐 울혈 또는 상승된 좌심실 충만압; (iii) 하기 기준 중 적어도 하나를 갖는 손상된 장기 관류의 징후: (a) 변경된 정신 상태; (b) 차갑고 축축한 피부; (c) 핍뇨 (< 0.5 mL/kg/h 또는 <30 mL/h); (d) 증가된 혈청-락테이트 ( Reynolds and Hochman 2008. Circulation 117: 686-697 ). 후속적인 심실 기능장애를 갖는 급성 심근 경색 (AMI)은 사례의 대략 80%를 차지하는 CS의 가장 흔한 원인이다. 기계적 합병증, 예컨대 심실 중격 (4%) 또는 자유벽 파열 (2%), 및 급성 중증 승모판 역류 (7%)는 AMI 이후 CS의 덜 흔한 원인이다. ( Hochman et al. 2000. J Am Coll Cardiol 36: 1063-1070 ). 비-AMI-관련 CS는 치료 옵션이 이질적인 비대상성 판막성 심장 질환, 급성 심근염, 부정맥 등에 의해 발생할 수 있다. 이는 미국에서 연간 40 000 내지 50 000 명의 환자 및 유럽에서 60 000 내지 70 000 명의 환자로 해석된다. 주로 초기 혈관재생과 후속적인 사망률 감소에 의한 치료에서의 진보에도 불구하고, CS는 AMI의 주요 사망 원인으로 남아 있으며, 최근 등록 및 무작위 실험에 따르면 사망률이 여전히 40-50%에 근접한다 (Goldberg et al. 2009. Circulation 119: 1211-1219).

용어 "저혈량성 쇼크"는 환자가 위장 출혈, 외상, 혈관 병인 (예를 들어 파열된 복부 대동맥 동맥류, 주요 혈관으로 침식하는 종양) 및 항응고제 사용 환경에서의 자발성 출혈을 포함한 출혈성 질환, 또는 구토, 설사, 신장 손실, 피부 손실/불감성 손실 (예를 들어 화상, 열사병), 또는 췌장염, 간경변, 장 폐색, 외상 환경에서의 제3 공간 손실을 포함한 비-출혈성 질환을 앓았을 수 있는 것인 쇼크를 지칭한다. 저혈량성 쇼크는 감소된 혈관내 부피를 특징으로 하며, 2 가지 광범위한 하위 유형으로 나뉘어질 수 있다: 출혈성 및 비-출혈성. 출혈성 저혈량성 쇼크의 일반적인 원인에는 위장 출혈, 외상, 혈관 병인 (예를 들어 파열된 복부 대동맥 동맥류, 주요 혈관으로 침식하는 종양) 및 항응고제 사용 환경에서의 자발성 출혈이 포함된다. 비-출혈성 저혈량성 쇼크의 일반적인 원인에는 구토, 설사, 신장 손실, 피부 손실/불감성 손실 (예를 들어 화상, 열사병), 또는 췌장염, 간경변, 장 폐색, 외상 환경에서의 제3 공간 손실이 포함된다. 검토를 위해 [ Koya and Paul 2018. Shock. StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2019-2018 Oct 27 ]을 참고한다.

용어 "폐쇄성 쇼크"는 환자가 심장 압전증, 긴장성 기흉, 폐 색전증 또는 대동맥 협착을 앓았을 수 있는 것인 쇼크를 지칭한다. 폐쇄성 쇼크는 큰 혈관 또는 심장 자체의 물리적 폐쇄로 인한 것이다. 몇몇 상태는 이러한 형태의 쇼크 (예를 들어 심장 압전증, 긴장성 기흉, 폐 색전증, 대동맥 협착)를 발생시킬 수 있다. 검토를 위해서는 [ Koya and Paul 2018. Shock. StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2019-2018 Oct 27 ]를 참고한다.

용어 "분포성 쇼크"는 환자가 패혈성 쇼크, 신경성 쇼크, 아나필락시스성 쇼크 또는 부신 발증으로 인한 쇼크를 가질 수 있는 것인 쇼크를 지칭한다. 원인에 따라, 4 가지 유형의 분포성 쇼크가 있다: 신경성 쇼크 (교감신경 자극의 감소로 인해 혈관 긴장도 감소가 유발됨), 아나필락시스성 쇼크, 패혈성 쇼크 및 부신 발증으로 인한 쇼크. 패혈증 외에도, 분포성 쇼크는 췌장염, 화상 또는 외상과 같이 감염 이외의 상태로 인해 전신 염증 반응 증후군 (SIRS)에 의해 유발될 수 있다. 다른 원인에는 독성 쇼크 증후군 (TSS), 아나필락시스 (갑작스러운 중증 알러지 반응), 부신 기능부전 (만성 부신 기능부전의 급성 악화, 부신의 파괴 또는 제거, 외인성 스테로이드로 인한 부신 기능의 억제, 뇌하수체 기증부전증 및 호르몬 생성의 대사 장애), 약물 또는 독소에 대한 반응, 중금속 중독, 간의 (간) 기능부전 및 중추 신경계에 대한 손상이 포함된다. 검토를 위해서는 [ Koya and Paul 2018. Shock. StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2019-2018 Oct 27 ]를 참고한다.

불응성 쇼크는 적절한 체적 소생술에도 불구하고 >0.5 μg/kg/min의 노르아드레날린 주입을 필요로 하는 것으로 정의되었다. 이들 환자의 사망률은 94%만큼 높을 수 있고, 이들 환자의 평가 및 관리는 생존을 위해 훨씬 더 적극적인 접근법을 필요로 한다. 용어 "불응성 쇼크"는 조직 관류가 초기 교정 조치 (예를 들어 혈관수축제)의 사용에 의해 회복될 수 없을 때 사용되며, 따라서 "높은 혈관수축제-의존성" 또는 "혈관수축제-내성" 쇼크로 지칭될 수 있다 ( Udupa and Shetty 2018. Indian J Respir Care 7: 67-72 ). 불응성 쇼크를 가진 환자는 부적절한 관류의 특징, 예컨대 저혈압 (평균 동맥 혈압 <65 mmHg), 빈맥, 저온 말초, 연장된 모세관 재충전 시간, 및 저산소증 및 산증으로 인한 빈호흡을 가질 수 있다. 패혈성 쇼크에서는 열이 나타날 수 있다. 저관류의 다른 징후, 예컨대 변경된 감각, 고락테이트혈증, 및 핍뇨 또한 나타날 수 있다. 이들 널리 공지된 쇼크 징후는 문제가 펌프 (심장)에 있는지 또는 순환 (혈관 및 조직)에 있는지 여부를 확인하는데 도움이 되지 않는다. 고용량 혈관수축제에 대한 무반응에 의해 입증된 바와 같이, 상이한 유형의 쇼크가 공존할 수 있고, 모든 형태의 쇼크가 불응성이 될 수 있다 ( Udupa and Shetty 2018. Indian J Respir Care 7: 67-72 ).

쇼크의 바람직한 예는 저혈량증으로 인한 쇼크, 심인성 쇼크, 폐쇄성 쇼크 및 분포성 쇼크, 특히 심인성 쇼크, 패혈성 쇼크, 코비드-19로 인한 쇼크, 화상으로 인한 쇼크 및 외상성 쇼크이다. 이들 예는 하기에 더욱 상세하게 정의된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "ICU에 입원"은 중환자실에 입원한 환자가 장기 지지 방법의 사용을 필요로 하는 하나 또는 몇몇의 급성인 직접적으로 생명을 위협하는 기능장애를 갖고 있거나 또는 가질 가능성이 있는 환자인 것을 지징한다. 환자를 중환자실에 입원시키기 위한 기준은 개발되어 있고, 관련 기술분야에서 잘 문서화되어 있다 (Nates et al. (2016), Critical care medicine 44: 1553-1602). 용어 "ICU에 입원"은 이들 기준에 따른 입원을 포함한다.

장기 지지의 유형에는 하기가 포함된다:

ㆍ 호흡기 지지 요법:

ㆍ 고급 호흡기 지지 요법, 예컨대 기관 삽관 및 기계적 환기 지원을 포함

ㆍ 기본 호흡기 지지 요법, 예컨대 보조 산소의 사용, 강화 폐활량계의 사용, 흉부 충격 분무 등

ㆍ 순환 지지 요법, 예컨대 기계적 순환 지지 (예를 들어 대동맥내 벌룬 펌프 및 심실 보조 기기의 사용) 및 의학적 요법, 예컨대 안지오텐신 전환 효소, 베타 차단제 등의 사용

ㆍ 신장 지원 요법, 예컨대 혈액 투석 및 복막 투석,

ㆍ 혈역학적 모니터링 또는 지지 요법, 예컨대 혈액의 압력, 흐름 및 산소 함량의 측정, 유체 소생술 또는 수혈, 및 혈관작용 약물 (예를 들어 니트로글리세린, 산화질소 등)의 사용,

ㆍ 신경계 모니터링 또는 지지, 예컨대 뇌실내 카테터.

체외 장기 지지는 예를 들어 [ICU Management & Practice, Volume 18 - Issue 1, 2018]에 상세하게 기재되어 있다.

SIRS, 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크에 대해 하기 임상적 기준이 정의될 것이다.

1) 하기 증상 중 적어도 2 가지를 특징으로 하는 전신 염증성 숙주 반응 (SIRS)

ㆍ 환자는 저혈압 (평균 동맥압 < 65 mm Hg)을 나타낸다

ㆍ > 4 mmol/L의 상승된 혈청 락테이트 수준

ㆍ 혈액 글루코스 > 7.7 mmol/L (당뇨병의 부재하에)

ㆍ 중심 정맥압이 8-12 mm Hg의 범위 내에 있지 않다

ㆍ 소변 배출량이 < 0.5 mL x kg^-1 x hr^-1이다

ㆍ 중심 정맥 (상대정맥) 산소 포화도가 < 70%이거나 또는 혼합 정맥은 < 65%이다

ㆍ 심박수가 > 90 박동/분이다

ㆍ 체온이 < 36℃ 또는 > 38℃이다

ㆍ 호흡율이 > 20/분이다

ㆍ 백혈구 카운트 < 4 또는 > 12x10⁹/L (백혈구); > 10% 미성숙 호중구

2) 패혈증

1)에 언급된 증상 중 적어도 2 가지에 해당하고, 추가로 새로운 감염이 임상적으로 의심되는 경우:

ㆍ 기침/가래/흉통

ㆍ 복통/팽만감/설사

ㆍ 라인 감염

ㆍ 심내막염

ㆍ 배뇨 곤란

ㆍ 목이 뻣뻣한 두통

ㆍ 연조직염/창상/관절 감염

ㆍ 임의의 감염에 대한 양성 미생물학

3) 중증 패혈증

패혈증이 환자에서 나타나고, 추가로 임의의 장기 기능장애가 임상적으로 의심되는 경우:

ㆍ 혈압 수축기 < 90/평균; < 65mmHG

ㆍ 락테이트 > 2 mmol/L

ㆍ 빌리루빈 > 34μmol/L

ㆍ 소변 배출량 < 0.5 mL/kg/h for 2h

ㆍ 크레아티닌 > 177 μmol/L

ㆍ 혈소판 < 100x10⁹/L

ㆍ O₂가 제공되지 않는 경우 SpO₂ > 90%

4) 패혈성 쇼크

"패혈성 쇼크"는 감염에 대한 반응으로 장기 손상 또는 훼손인 패혈증이 위험하게 낮은 혈압 및 세포 대사 이상을 유발할 때 발생하는 잠재적으로 치명적인 의학적 상태이다. 패혈증 및 패혈성 쇼크에 대한 제3차 국제 합의 정의(Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock, Sepsis-3)는 특히 심각한 순환, 세포 및 대사 이상이 패혈증 단독에 비해 더 큰 사망 위험과 연관된 것인 패혈증의 하위집합으로 패혈성 쇼크를 정의한다. 패혈성 쇼크를 가진 환자는 저혈량증의 부재하에 65 mm Hg 이상의 평균 동맥압 및 2 mmol/L 초과의 (>18 mg/dL) 혈청 락테이트 수준을 유지하기 위해 혈관수축제를 필요로 하는 것으로 임상적으로 확인될 수 있다. 이 조합은 40% 초과의 병원 사망률과 연관이 있다 ( Singer et al. 2016. JAMA. 315 (8): 801-10 ). 일차 감염은 가장 흔하게는 박테리아에 의해 발생하지만, 진균, 바이러스 또는 기생충에 의해서도 발생할 수 있다. 이는 신체의 어느 부위에서는 위치할 수 있지만, 가장 흔하게는 폐, 뇌, 요로, 피부 및 복부 장기에 위치한다. 이는 다발성 장기 기능장애 증후군 (이전에는 다발성 장기 부전으로 공지되었음) 및 사망을 유발할 수 있다. 빈번하게, 패혈성 쇼크를 가진 사람은 중환자실에서 치료를 받는다. 이는 어린이, 면역손상된 개체, 및 노인에서 가장 흔하게 영향을 미치며, 이들의 면역계가 건강한 성인만큼 효과적으로 감염을 처리할 수 없기 때문이다. 패혈성 쇼크로 인한 사망률은 대략 25-50%이다. "패혈성 쇼크"는 또한 적어도 평균 동맥압 (MAP)을 < 65 mmHg로 감소시키고, 유체 소생술에 대해 불응성이며, 혈관수축제를 필요로 하는 증명된 또는 의심되는 감염에 대한 숙주 반응의 조절장애로 인한 생명을 위협하는 장기 기능장애를 지칭한다. 유체 소생술에 대한 불응성은 체중 킬로그램당 30 mL의 유체의 투여에 대한 반응의 결여로서 정의되거나 또는 부적절한 혈역학적 결과에 대한 암상의의 평가에 따라 결정된다. 본 발명에 따른 패혈성 쇼크에서, 3)에서 언급된 말단-장기 기능장애의 적어도 1 가지 징후가 나타난다. 치료에 반응하지 않는 불응성 저혈압이 있고, 정맥내 유체 투여만으로는 혈압강하로부터 환자의 혈압을 유지하기에 불충분한 경우에 패혈성 쇼크가 나타나고, 또한 본 발명에 따른 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드의 투여를 제공한다.

항-아드레노메둘린 (ADM) 항체는 ADM에 특이적으로 결합하는 항체이고, 항-아드레노메둘린 항체 단편은 항-ADM 항체의 단편이며, 상기 단편은 ADM에 특이적으로 결합한다. 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM에 특이적으로 결합하는 비-Ig 스캐폴드이다.

한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항-ADM 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자의 혈관수축제 요구량, 예를 들어 카테콜아민 요구량을 감소시킨다. 환자의 혈관수축제 요구량, 예를 들어 카테콜아민 요구량은 상기 환자의 순환 상태에 대한 지표이다. 따라서, 항-ADM 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 환자가 혈관수축제, 예를 들어 카테콜아민을 필요로 하는 시점에 투여될 수 있다.

본 발명의 한 실시양태에서, 상기 환자는 혈압의 증가를 필요로 하는 쇼크 환자이다.

패혈성 쇼크-유도된 저관류를 갖는 일부 환자는 적절한 유체 보충에도 불구하고 혈압강하를 유지할 수 있다. 이들 경우에, MAP를 증가시키기 위해 혈관수축제가 필요하다. 따라서, 본 발명의 한 실시양태에서, 만성 또는 급성 질환 또는 급성 상태를 가진 환자는 MAP를 증가시키기 위해 혈관수축제를 필요로 하는 환자이다. 카테콜아민, 예컨대 도파민, 에피네프린 (아드레날린), 노르에피네프린 (노르아드레날린), 및 페닐레프린은 전통적으로 패혈성 쇼크를 가진 환자에서 혈압을 상승시키기 위해 사용되어 왔다. 최근에 바소프레신 또한 순환 안정화를 필요로 하는 쇼크 환자에서 잠재적인 혈관수축제로서 제안되었다.

카테콜아민과 같은 혈관수축제는 만성 또는 급성 질환 또는 급성 상태를 가진 환자의 순환을 안정화시킬 수 있다. 환자의 상태 (저혈압)가 매우 심각한 경우, 혈관수축제 투여, 예를 들어 카테콜아민 투여 단독은 순환의 붕괴를 예방할 수 없다. 예를 들어 카테콜아민의 투여와 함께 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드의 추가의 투여는 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드의 투여없이 카테콜아민 투여가 상기 환자의 순환을 안정화시키는데 충분하지 않은 정도로 상태가 매우 심각한 환자의 순환을 안정화시키는데 도움이 될 수 있다.

추가로, 혈관수축제는 중증 부작용을 가질 수 있다. 도파민은 신장 지역 순환에서 D1 수용체를 자극하여, 혈관을 확장시키고, 혈류를 증가시킨다. 이는 임상의가 신장 기능을 보호하기 위해 저용량의 도파민을 사용하는 이유 중 하나이다. 또는, 다른 혈관수축제의 경우, 특정한 약물에 의해 혈압을 증가시키는 것이 뭔가 유익하다는 직관적 호소에도 불구하고 더 나쁜 결과와 연관이 있을 수 있다는 것이 제안되었다.

따라서, 본 발명의 주제는 혈관수축제의 투여를 완전히 또는 부분적으로 대체하기 위해 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다. 이는 본 발명에 따른 환자가 혈관수축제를 필요로 하거나 또는 그에 의한 치료를 필요로 하는 환자, 또는 혈관수축제에 의한 치료를 제공받고 있는 환자일 수 있다.

따라서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드의 순환 안정화 효과는 쇼크의 일차 요법을 지지할 수 있다. 한 실시양태에서, 이는 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 제1 선 치료 (일차 요법)에 대해 추가로 투여됨을 의미한다. 쇼크, 예를 들어 패혈성 쇼크 등의 경우, 일차 요법은 예를 들어 항생제의 투여일 것이다. 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 순환을 안정화시키고, 예를 들어 항생제 투여가 효과를 나타낼 때까지 상기 환자의 심각한 상태의 악화를 예방하는데 도움이 될 것이다. 상기 언급된 바와 같이, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 예방적으로 또는 치료적으로 투여될 수 있으며, 이는 순환 문제를 예방하기 위한, 또는 상기 환자에게 순환 문제가 존재할 때 순환을 안정화시키기 위한 것을 의미한다.

본 발명에 포함되는 순환 문제는 본 발명의 구체적인 실시양태에 따른 급성 순환 문제일 수 있음이 강조되어야 한다.

본 발명의 한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 혈관수축제, 예를 들어 카테콜아민과 조합하여 사용되며, 상기 조합물은 상기 환자의 순환을 안정화시키기 위해 쇼크 환자의 치료에 사용된다.

본 발명의 한 실시양태에서, 순환의 안정화를 필요로 하는 상기 쇼크 환자는 상기 환자가 혈관수축제 투여, 예를 들어 카테콜아민 투여를 받을 필요가 있는 것을 특징으로 한다.

따라서, 한 구체적인 실시양태에서, 본 발명의 주제는 혈관수축제 투여, 예를 들어 카테콜아민 투여를 필요로 하는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체, 또는 ADM에 결합하는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다.

추가로, 본 발명의 한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 정맥내로 투여되는 유체와 조합되어 사용되며, 상기 조합물은 상기 환자의 순환을 안정화시키기 위해 쇼크 환자의 치료에 사용된다. 본 발명의 한 실시양태에서, 쇼크 갖고 있고 순환 안정화를 필요로 하는 상기 환자는 상기 환자가 정맥내 유체를 제공받을 필요가 있는 것을 특징으로 한다.

따라서, 한 구체적인 실시양태에서, 본 발명의 주제는 특히 정맥내 유체를 필요로 하는 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다.

하기에, 본 발명의 실시양태가 제공된다. 일반적으로 실시양태가 동일한 카테고리 (생성물, 공정, 용도, 방법)의 임의의 다른 실시양태와 조합될 수 있음을 주목한다.

본 발명의 한 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 가진 환자의 치료에 사용하기 위한 아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는

ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 10 시간 이하로 앓았고/거나,

ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나,

ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고,

상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 부분 (aa 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 4)에 결합한다.

ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 8.4 시간 이하로 앓았고/거나,

ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 시간 이하로 입원하였고/거나,

ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 8.4 시간 이하로 제공받았고,

바람직한 실시양태에서, 아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 가진 환자의 치료에 사용되고, 상기 환자는

상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 부분 (aa 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 4)에 결합하고,

환자가 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 a) 10 시간 이하로 앓았고, ICU에 b) 10 시간 이하로 입원하였을 때, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점은 a) 및 b) 중 가장 짧을 때이다.

또 다른 실시양태에서, 환자가 ICU에 a) 10 시간 이하로 입원하였고, c) 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았을 때, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점은 a) 및 c) 중 가장 짧을 때이다.

또 다른 실시양태에서, 환자가 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 b) 10 시간 이하로 앓았고, c) 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았을 때, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점은 b) 및 c) 중 가장 짧을 때이다.

또 다른 실시양태에서, 환자가 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 a) 10 시간 이하로 앓았고, 환자가 쇼크에 b) 10 시간 이하로 있었고, c) 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았을 때, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점은 a), b) 및 c) 중 가장 짧을 때이다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 가진 환자의 치료에 사용하기 위한 아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는

ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나,

바람직한 실시양태에서, 환자는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.24 일), 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 이하로 앓았다.

바람직한 실시양태에서, 환자는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일) 이하로 앓았다.

바람직한 실시양태에서, 환자는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 ICU에 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344 일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.24 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 이하로 입원하였다.

바람직한 실시양태에서, 환자는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 이하로, 바람직하게는 8.26 (0.344 일) 이하로 입원하였다.

바람직한 실시양태에서, 환자는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344 일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.24 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 이하로 제공받았다.

바람직한 실시양태에서, 환자는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 8.4 이하로, 바람직하게는 8.26 (0.344 일) 이하로 제공받았다.

또 다른 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 -아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용되고, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는

ㆍ 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간 내에 및/또는

ㆍ 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간 내에, 및/또는

ㆍ 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간 이하 내에 투여되고,

ㆍ 상기 환자에서 쇼크 발생 후 8.4 시간 내에 및/또는

ㆍ 상기 환자가 ICU에 입원한 후 8.4 시간 내에, 및/또는

바람직한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 -아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용되고, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는

ㆍ 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간 내에 및/또는

ㆍ 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간 내에, 및/또는

ㆍ 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 a) 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간 내에 및 b) 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간 내에 투여될 수 있을 때, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 a) 및 b) 중 가장 짧을 때 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 a) 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간 내에 및 c) 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간 이하 내에 투여될 수 있을 때, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 a) 및 c) 중 가장 짧을 때 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 b) 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간 내에 및 c) 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간 이하 내에 투여될 수 있을 때, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 b) 및 c) 중 가장 짧을 때 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 a) 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간 내에 및 b) 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간 내에 및 c) 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간 이하 내에 투여받을 수 있을 때, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 a), b) 및 c) 중 가장 짧을 때 투여된다.

ㆍ 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간 내에 및/또는

ㆍ 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간 내에, 및/또는

바람직한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 및/또는 패혈증의 발생 후 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344 일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.25 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 내에 투여된다.

바람직한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 및/또는 패혈증의 발생 후 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344 일) 시간 내에 투여된다.

바람직한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344 일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.25 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 내에 투여된다.

바람직한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344 일) 시간째에 투여된다.

바람직한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 환자가 장기 지지를 제공받은 후 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344 일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.25 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 내에 투여된다.

바람직한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 환자가 장기 지지를 제공받은 후 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344 일) 시간째에 투여된다.

본 발명의 또 다른 구체적인 실시양태에서, 상기 쇼크는 저혈량증으로 인한 쇼크, 심인성 쇼크, 폐쇄성 쇼크 및 분포성 쇼크를 포함하는 군으로부터 선택되고, 특히 심인성 또는 패혈성 쇼크이다.

본 발명의 구체적인 실시양태에서, 상기 쇼크는 하기를 포함하는 군으로부터 선택된다:

ㆍ 심인성 쇼크의 경우, 상기 환자는 급성 관상동맥 증후군 (예를 들어 급성 심근 경색)을 앓았거나 또는 심부전 (예를 들어 급성 비대상성 심부전), 심근염, 부정맥, 심근병증, 판막성 심장 질환, 급성 대동맥 협착을 동반한 대동맥 박리, 외상성 건삭 파열 또는 대규모 폐 색전증을 갖고 있거나, 또는

ㆍ 저혈량성 쇼크의 경우, 상기 환자는 위장 출혈, 외상, 혈관 병인 (예를 들어 파열된 복부 대동맥 동맥류, 주요 혈관으로 침식하는 종양) 및 항응고제 사용 환경에서의 자발성 출혈을 포함한 출혈성 질환, 또는 구토, 설사, 신장 손실, 피부 손실/불감성 손실 (예를 들어 화상, 열사병), 또는 췌장염, 간경변, 장 폐색, 외상 환경에서의 제3 공간 손실을 포함한 비-출혈성 질환을 앓았을 수 있거나, 또는

ㆍ 폐쇄성 쇼크의 경우, 상기 환자는 심장 압전증, 긴장성 기흉, 폐 색전증 또는 대동맥 협착을 앓았을 수 있거나, 또는

ㆍ 분포성 쇼크의 경우, 상기 환자는 패혈성 쇼크, 신경성 쇼크, 아나필락시스성 쇼크 또는 부신 발증으로 인한 쇼크를 갖는다.

더욱 바람직한 실시양태에서, 쇼크는 패혈성 쇼크, 코비드-19로 인한 쇼크, 화상으로 인한 쇼크 또는 외상성 쇼크이다.

가장 바람직한 실시양태에서, 쇼크는 패혈증과 연관이 있었다.

추가의 실시양태에서, 본 발명은 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 환자에서 취한 체액 샘플은 > 70 pg/mL의 바이오ADM 수준을 나타내고, 상기 체액은 전혈, 혈장, 혈청을 포함하는 군으로부터 선택된다.

많은 수의 마커가 쇼크와 관련이 있는 것으로 선행 기술에서 공지되어 있지만, 특히 DPP3을 쇼크의 마커로서 제시한 것은 없다. 이러한 바이오마커의 예에는 최근의 검토에서 인용된 MR-프로ADM, 락테이트, C-반응성 단백질 (CRP) 및 프로칼시토닌 (PCT) (Ana Maria Navio Serano,1 Joaquin Valle Alonso,2,* Gustavo Rene Pinero,3 Alejandro Rodriguez Camacho,4 Josefa Soriano Benet,5 and Manuel Vaquero6 Bull Emerg Trauma. 2019 Jul; 7(3): 232-239.) 및 펜트락신 3, 헤파린-결합 단백질, 가용성 촉발 수용체, PARK7 및 IL-8이 포함된다 (Charalampos Pierrakos, Dimitrios Velissaris, Max Bisdorff, John C. Marshall & Jean-Louis Vincent Critical Care volume 24, Article number: 287 (2020) Biomarkers of sepsis: time for a reappraisal).

바람직한 실시양태에서, 바이오-ADM은 혈장으로부터 측정된다. 그러나, 혈장에서만이 아니라 적어도 혈액-기반의 다른 매트릭스에서 피분석물을 측정할 가능성이 존재한다는 것은 이러한 피분석물 측정의 기술적 수명주기 개선에서 전형적이다. 예를 들어, 바이오-ADM의 경우에, IB10 스핑고테스트(sphingotest)® 바이오-ADM으로 지칭되는 전체 (EDTA-) 혈액을 사용하는 또 다른 기술이 개발되었다 (https://www.nexus-dx.com/wp-content/uploads/2020/07/bio-ADM-IFU-REV-A.pdf). IB10 스핑고테스트® 바이오-ADM®은 인간 EDTA 전혈 및 혈장에서 인간 아미드화 아드레노메둘린 펩티드 (1-52) (이후 생물활성 아드레노메둘린 (바이오-ADM®)으로 지칭됨)의 시험관내 정량적인 결정을 위한 신속한 현장 진단 (POC) 면역검정이다.

디펩티딜 아미노펩티다제 III, 디펩티딜 아릴아미다제 III, 디펩티딜 펩티다제 III, 엔케팔리나제 B 또는 적혈구 안지오텐시나제; 짧은 명칭: DPP3, DPPIII으로도 공지된 디펩티딜 펩티다제 3은 생리학적으로 활성인 펩티드, 예컨대 엔케팔린 및 안지오텐신으로부터 디펩티드를 제거하는 메탈로펩티다제이다. DPP3은 [Ellis & Nuenke 1967]에 의해 정제된 소 뇌하수체 전엽의 추출물에서 처음 확인되고, 그의 활성이 측정되었다. EC 3.4.14.4로서 나열된 효소는 약 83 kDa의 분자량을 갖고, 원핵생물 및 진핵생물에서 고도로 보존된다 ( Prajapati & Chauhan 2011 ). 인간 변이체의 아미노산 서열은 서열식별번호(SEQ ID NO) 1에 제시된다. 디펩티딜 펩티다제 III은 편재하여 발현되는 주요 세포질 펩티다제이다. 신호 서열의 결여에도 불구하고, 몇몇 연구는 막 활성을 보고하였다 ( Lee & Snyder 1982 ).

DPP3은 펩티다제 패밀리 M49에 속하는 아연-의존성 엑소-펩티다제이다. 이는 다양한 조성의 3/4 내지 10 개 아미노산의 올리고펩티드에 대해 광범위한 기질 특이성을 가지며, 또한 프롤린 후에 절단될 수 있다. DPP3은 안지오텐신 II, III 및 IV; Leu- 및 Met-엔케팔린; 엔도모르핀 1 및 2를 포함하여 그의 기질의 N-말단으로부터 디펩티드를 가수분해하는 것으로 공지되어 있다. 메탈로펩티다제 DPP3은 pH 8.0-9.0에서 그의 최적 활성을 갖고, 2가 금속 이온, 예컨대 Co²⁺ 및 Mg²⁺의 첨가에 의해 활성화될 수 있다.

DPP3의 구조 분석은 기질 결합 및 가수분해에 중요한 촉매적 모티프 HELLGH (hDPP3 450-455) 및 EECRAE (hDPP3 507-512), 뿐만 아니라 하기 아미노산: Glu316, Tyr, 318, Asp366, Asn391, Asn394, His568, Arg572, Arg577, Lys666 및 Arg669을 밝혀 내었다 ( Prajapati & Chauhan 2011; Kumar et al. 2016 ; 넘버링은 인간 DPP3의 서열을 나타냄, 서열식별번호 1 참고). 기질 결합 및 가수분해에 관여하는 공지된 모든 아미노산 또는 서열 영역을 고려하여, 인간 DPP3의 활성 부위는 아미노산 316과 669 사이의 영역으로서 정의될 수 있다.

DPP3의 가장 두드러진 기질은 레닌-안지오텐신 시스템 (RAS)의 주요 이펙터인 안지오텐신 II (Ang II)이다. RAS는 심혈관 질환 ( Dostal et al. 1997. J Mol Cell Cardiol;29:2893-902; Roks et al. 1997. Heart Vessels. Suppl 12:119-24 ), 패혈증, 및 패혈성 쇼크 ( Correa et al. 2015. Crit Care 2015;19:98 )에서 활성화된다. 특히, Ang II는 혈압 및 심장 리모델링의 제어를 포함한 여러 심혈관 기능을 조절하는 것으로 나타났다.

최근에, 인간 체액 (예를 들어, 혈액, 혈장, 혈청)에서 DPP3을 특이적으로 검출하기 위해 2 가지 검정이 생성되고, 특징분석되고, 검증되었다: DPP3 단백질 농도를 검출하기 위한 발광 면역검정 (LIA) 및 특이적인 DPP3 활성을 검출하기 위한 효소 포획 활성 검정 (ECA) ( Rehfeld et al. 2019. JALM 3(6): 943-953 ). 세척 단계는 DPP3 활성의 실제 검출을 수행하기 전에 모든 간섭 물질을 제거한다. 두 방법 모두 고도로 특이적이며, 혈액 샘플에서 DPP3의 재현가능한 검출을 가능하게 한다.

순환 DPP3 수준은 심인성 쇼크 환자에서 증가하는 것으로 나타났고, 단기 사망 및 중증 장기 기능장애의 증가된 위험과 연관이 있었다 (Deaniau et al. 2019. Eur J Heart Fail. in press). 더욱이, 포함시에 측정된 DPP3은 불응성 쇼크 대 비-불응성 쇼크가 발생한 심인성 쇼크 환자를 구별하였고, DPP3 농도 ≥ 59.1 ng/mL는 증가된 사망 위험과 연관이 있었다 (Takagi et al. Eur J Heart Fail. 2020 Feb;22(2):279-286).

본 발명은 또한 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 9 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 9 시간 이하로 제공받았고, 상기 환자에서 취한 체액 샘플은 역치 미만의 DPP3 수준을 나타내고, 상기 체액은 전혈, 혈장, 혈청을 포함하는 군으로부터 선택된다.

가장 바람직한 실시양태에서, 상기 환자는 체액 샘플 중 DPP3의 수준이 역치 미만인 것을 특징으로 하고, 상기 상기 환자의 체액 샘플에서 DPP3의 역치는 20 내지 120 ng/mL, 더욱 바람직하게는 30 내지 80 ng/mL, 훨씬 더 바람직하게는 40 내지 60 ng/mL이고, 가장 바람직하게는 상기 역치는 50 ng/mL이다.

본 발명의 구체적인 실시양태에서, DPP3의 수준에 대한 역치는 정상의 건강한 집단의 5배 중간 농도, 바람직하게는 4배 중간 농도, 더욱 바람직하게는 3배 중간 농도, 가장 바람직하게는 2배 중간 농도이다.

상기 대상체의 체액 샘플에서 DPP3 단백질 및/또는 DPP3 활성의 양으로서 DPP3의 수준은 상이한 방법, 예를 들어 면역검정, 활성 검정, 질량 분광분석 방법 등에 의해 결정될 수 있다.

본 발명에 따라, 임의의 유형의 결합 검정 (항체 대신에 다른 유형의 항원-특이적인 결합제를 사용하는 면역검정 및 유사한 검정), 및 b) 효소 활성의 결정 이전에 특이적인 결합제 (항-DPP3 항체 또는 다른 유형의 결합제)를 사용하여 샘플로부터 DPP3을 특이적으로 포획함으로써 DPP3에 대해 특이적인 DPP3 효소 활성 검정.

DPP3 활성은 DPP3 특이적인 기질의 절단 생성물의 검출에 의해 측정될 수 있다. 공지된 펩티드 호르몬 기질에는 Leu-엔케팔린, Met-엔케팔린, 엔도모르핀 1 및 2, 발로르핀, β-카소모르핀, 디노르핀, 프록톨린, ACTH (부신피질자극 호르몬) 및 MSH (멜라닌 세포-자극 호르몬; Abramic et al. 2000, Barsun et al. 2007, Dhanda et al. 2008 )가 포함된다. 모니터링된 펩티드 호르몬 뿐만 아니라 다른 태그 부착되지 않은 올리고펩티드 (예를 들어 Ala-Ala-Ala-Ala, Dhanda et al. 2008 )의 절단은 각각의 절단 생성물의 검출에 의해 모니터링될 수 있다. 검출 방법에는 HPLC 분석 (예를 들어 Lee & Snyder 1982 ), 질량 분광분석 (예를 들어 Abramic et al. 2000 ), H1-NMR 분석 (예를 들어 Vandenberg et al. 1985 ), 모세관 구역 전기영동 (CE; 예를 들어 Barsun et al. 2007 ), 박층 크로마토그래피 (예를 들어 Dhanda et al. 2008 ) 또는 역상 크로마토그래피 (예를 들어 Mazocco et al. 2006 )가 포함되나 이로 제한되지 않는다.

DPP3에 의한 형광성 기질의 가수분해로 인한 형광의 검출은 DPP3 활성을 모니터링하기 위한 표준 절차이다. 이들 기질은 형광단에 커플링된 특이적인 디- 또는 트리펩티드 (Arg-Arg, Ala-Ala, Ala-Arg, Ala-Phe, Asp-Arg, Gly-Ala, Gly-Arg, Gly-Phe, Leu-Ala, Leu-Gly, Lys-Ala, Phe-Arg, Suc-Ala-Ala-Phe)이다. 형광단에는 β-나프틸아미드 (2-나프틸아미드, βNA, 2NA), 4-메톡시-β-나프틸아미드 (4-메톡시-2-나프틸아미드) 및 7-아미도-4-메틸코우마린 (AMC, MCA; Abramic et al. 2000, Ohkubo et al. 1999 )이 포함되나 이로 제한되지 않는다. 이들 형광성 기질의 절단은 각각 형광 β-나프틸아민 또는 7-아미노-4-메틸코우마린의 방출을 유발한다. 액상 검정 또는 ECA에서 기질 및 DPP3은 예를 들어 96 웰 플레이트 포맷에서 인큐베이션되고, 형광 검출기를 사용하여 형광을 측정한다 ( Ellis & Nuenke 1967 ). 추가로, DPP3 보유 샘플은 전기영동에 의해 겔 상에 고정되고 분할될 수 있으며, 겔은 형광성 기질 (예를 들어 Arg-Arg-βNA) 및 패스트 가넷(Fast Garnet) GBC에 의해 염색되고, 형광 단백질 밴드는 형광 판독기에 의해 검출된다 ( Ohkubo et al. 1999 ). 동일한 펩티드 (Arg-Arg, Ala-Ala, Ala-Arg, Ala-Phe, Asp-Arg, Gly-Ala, Gly-Arg, Gly-Phe, Leu-Ala, Leu-Gly, Lys-Ala, Phe-Arg, Suc-Ala-Ala-Phe)는 발색단, 예컨대 p-니트로아닐리드 디아세테이트에 커플링될 수 있다. 발색 기질의 가수분해로 인한 색상 변화의 검출을 이용하여 DPP3 활성을 모니터링할 수 있다.

DPP3 활성의 검출을 위한 또 다른 옵션은 프로테아제-글로(Protease-Glo)^TM 검정 (프로메가(Promega)에서 상업적으로 입수가능함)이다. 상기 방법의 이 실시양태에서, DPP3 특이적인 디- 또는 트리펩티드 (Arg-Arg, Ala-Ala, Ala-Arg, Ala-Phe, Asp-Arg, Gly-Ala, Gly-Arg, Gly-Phe, Leu-Ala, Leu-Gly, Lys-Ala, Phe-Arg, Suc-Ala-Ala-Phe)는 아미노루시페린에 커플링된다. DPP3에 의한 절단시, 아미노루시페린이 방출되어, 검출가능한 발광을 방출하는 커플링된 루시페라제 반응에 대한 기질로서 작용한다.

바람직한 실시양태에서, DPP3 활성은 형광성 기질 Arg-Arg-βNA의 부가 및 실시간 형광 모니터링에 의해 측정된다.

대상체의 체액 샘플에서 활성 DPP3을 결정하기 위한 상기 방법의 구체적인 실시양태에서, DPP3과 반응성인 상기 포획 결합제는 고체 상에 고정된다.

시험 샘플은 고정된 결합제 위를 통과하고, DPP3은 존재하는 경우 결합제에 결합하고, 그 자체로 검출을 위해 고정된다. 이어서, 기질을 첨가할 수 있고, 시험 샘플에서 DPP3의 존재 또는 양을 나타내기 위해 반응 생성물을 검출할 수 있다. 본 설명의 목적을 위해, 용어 "고체 상"은 검정이 수행될 수 있는 임의의 물질 또는 용기를 포함하기 위해 사용될 수 있고, 다공성 물질, 비다공성 물질, 시험 튜브, 웰, 슬라이드, 아가로스 수지 (예를 들어 지이 헬쓰케어 라이프 사이언시즈(GE Healthcare Life Sciences)로부터의 세파로스), 자성 입자 (예를 들어 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific)으로부터의 디나비즈(Dynabeads)^TM 또는 피어스(Pierce)^TM 자성 비드) 등이 포함되나 이로 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, DPP3의 수준은 상기 체액 샘플을 DPP3에 특이적으로 결합하는 포획 결합제와 접촉시킴으로써 결정된다.

본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에서, DPP3의 수준을 결정하기 위한 상기 포획 결합제는 항체, 항체 단편 또는 비-IgG 스캐폴드의 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 구체적인 실시양태에서, 상기 포획 결합제는 항체이다.

상기 대상체의 체액 샘플에서 DPP3 단백질 및/또는 DPP3 활성의 양은 예를 들어 하기 방법 중 하나에 의해 결정될 수 있다:

1. DPP3 단백질 농도의 정량화를 위한 발광 면역검정 (LIA) ( Rehfeld et al., 2019 JALM 3(6): 943-953 ).

LIA는 고체 상으로서 백색 고결합 폴리스티렌 미세역가 플레이트를 사용하는 1-단계 화학발광 샌드위치 면역검정이다. 이들 플레이트는 모노클로날 항-DPP3 항체 AK2555 (포획 항체)로 코팅된다. 추적자 항-DPP3 항체 AK2553은 MA70-아크리디늄-NHS-에스테르로 표지되고, 웰당 20 ng의 농도로 사용된다. 20 마이크로리터의 샘플 (예를 들어 환자의 혈액으로부터 유래된 혈청, 헤파린-혈장, 시트레이트-혈장 또는 EDTA-혈장) 및 캘리브레이터를 코팅된 백색 미세역가 플레이트에 피펫팅한다. 추적자 항체 AK2553을 첨가한 후, 미세역가 플레이트를 실온에서 3 시간 동안 600 rpm에서 인큐베이션한다. 이어서, 결합되지 않은 추적자를 4 회 세척 단계 (350 μL/웰)에 의해 제거한다. 잔류 화학발광은 미세역가 플레이트 광도계를 사용하여 웰당 1 초 동안 측정한다. DPP3의 농도는 6-점 보정 곡선으로 결정된다. 캘리브레이터 및 샘플은 바람직하게는 이중으로 작동된다.

2. DPP3 활성의 정량화를 위한 효소 포획 활성 검정 (ECA) ( Rehfeld et al., 2019 JALM 3(6): 943-953 ).

ECA는 고체 상으로서 흑색 고결합 폴리스티렌 미세역가 플레이트를 사용하는 DPP3-특이적인 활성 검정이다. 이들 플레이트는 모노클로날 항-DPP3 항체 AK2555 (포획 항체)로 코팅된다. 20 마이크로리터의 샘플 (예를 들어 혈청, 헤파린-혈장, 시트레이트-혈장, EDTA-혈장, 뇌척수액 및 소변) 및 캘리브레이터를 코팅된 흑색 미세역가 플레이트에 피펫팅한다. 검정 완충제 (200 μL)를 첨가한 후, 미세역가 플레이트를 22℃에서 2 시간 동안 600 rpm에서 인큐베이션한다. 샘플에 존재하는 DPP3은 포획 항체에 대한 결합에 의해 고정된다. 결합되지 않은 샘플 성분은 4 회 세척 단계 (350 μL/웰)에 의해 제거된다. 고정된 DPP3의 특이적인 활성은 반응 완충제 중에 형광성 기질, Arg-Arg-β-나프틸아미드 (Arg2-βNA)를 첨가한 후, 37℃에서 1 시간 동안 인큐베이션함으로써 측정된다. DPP3은 Arg2-βNA를 Arg-Arg 디펩티드 및 형광 β-나프틸아민으로 특이적으로 절단한다. 형광은 340 nm의 여기 파장을 이용하여 형광계에 의해 측정되고, 방출은 410 nm에서 검출된다. DPP3의 활성은 6-점 보정 곡선에 의해 결정된다. 캘리브레이터 및 샘플은 바람직하게는 이중으로 작동된다.

3. DPP3 활성의 정량화를 위한 액상 검정 (LAA) ([ Jones et al., Analytical Biochemistry, 1982 ]로부터 변형됨).

LAA는 DPP3 활성을 측정하기 위해 흑색 비-결합 폴리스티렌 미세역가 플레이트를 사용하는 액상 검정이다. 20 마이크로리터의 샘플 (예를 들어 혈청, 헤파린-혈장, 시트레이트-혈장) 및 캘리브레이터를 비-결합 흑색 미세역가 플레이트에 피펫팅한다. 검정 완충제 (200 μL) 중에 형광성 기질, Arg2-βNA를 첨가한 후, 초기 βNA 형광 (T=0)은 340 nm의 여기 파장을 이용하여 형광계에서 측정되고, 방출은 410 nm에서 검출된다. 이어서, 플레이트를 37℃에서 1 시간 동안 인큐베이션한다. (T=60)의 최종 형광을 측정한다. 최종 및 초기 형광의 차이를 계산한다. DPP3의 활성은 6-점 보정 곡선에 의해 결정된다. 캘리브레이터 및 샘플은 바람직하게는 이중으로 작동된다.

구체적인 실시양태에서, DPP3의 수준을 결정하기 위해 검정이 이용되며, 상기 검정의 검정 민감도는 건강한 대상체의 DPP3을 정량화할 수 있고, < 20 ng/ml, 바람직하게는 < 30 ng/ml, 더욱 바람직하게는 < 40 ng/ml이다.

4. 전혈 샘플의 혈장으로부터 DPP3을 측정하기 위한 또 다른 면역검정 방법, IB10 스핑고테스트® DPP3이 이용가능하다 (https://www.nexus-dx.com/wp-content/uploads/2020/11/DPP3-022-00072-IFU-REV-B_8x11.pdf). IB10 스핑고테스트® DPP3은 인간 EDTA 전혈 및 혈장에서 디펩티딜 펩티다제 3 (DPP3)의 시험관내 정량적인 결정을 위한 신속한 현장 진단 (POC) 면역검정이다. 넥서스(Nexus) IB10 면역화학 시스템은 화학과 미세유체역학 및 원심형 유동을 조합하여, 전혈로부터 무세포 혈장을 신속하게 준비하며, 이어서 이는 채널을 통해 이동하여 재수화되고, 가용화되고, 냉동 건조된 면역접합체와 혼합될 수 있다.

구체적인 실시양태에서, 상기 결합제는 적어도 10⁷ M^-1, 바람직하게는 10⁸ M^-1의 DPP3에 대한 결합 친화도를 나타내고, 더욱 바람직한 친화도는 10⁹ M^-1 초과이고, 가장 바람직하게는 10¹⁰ M^-1 초과이다. 관련 기술분야의 기술자는 더 높은 용량의 화합물을 적용함으로써 더 낮은 친화도를 보완하는 것이 고려될 수 있음을 알고 있으며, 이 수단은 본 발명의 범위를 벗어나지 않는다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 상기 체액 샘플은 전혈, 혈장 및 혈청의 군으로부터 선택된다.

구체적인 실시양태에서, DPP3의 수준은 면역검정에 의해 측정된다. DPP3을 결정하기 위한 면역검정은 문헌에 공지되어 있다. 더욱 구체적으로, 면역검정은 예를 들어 WO2017/182561에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. DPP3 또는 적어도 5 개 아미노산의 그의 단편의 수준을 결정하는데 유용할 수 있는 면역검정은 실시예에서 사용되고 청구항에서 언급된 단계를 포함할 수 있다. 모든 역치 및 값은 실시예에 따라 사용된 시험 및 보정과 상관관계가 있는 것으로 보인다. 관련 기술분야의 기술자는 역치의 절대값이 사용된 보정에 의해 영향을 받을 수 있음을 알고 있을 수 있다. 이는 본원에 제공된 모든 값 및 역치가 사용된 보정의 맥락에서 이용되어야 함을 의미한다.

역치는 건강한 대조군에서 DPP3 농도 및 또는 DPP3 활성을 측정하고, 예를 들어 그에 따른 75-백분위수, 더욱 바람직하게는 90-백분위수, 훨씬 더 바람직하게는 95-백분위수를 계산함으로써 사전 결정된다. 75-백분위수, 더욱 바람직하게는 90-백분위수, 훨씬 더 바람직하게는 95-백분위수의 상위 경계는 건강한 대 발병한 환자에 대한 역치를 정의한다. 상기 백분위수와 관련하여, 건강한 및 발병한 환자를 나누는 역치는 샌드위치 유형 항-DPP3 면역검정을 이용하여 혈장에서 5 내지 25 ng/ ml, 더욱 바람직하게는 7 내지 20 ng/ ml, 더욱 바람직하게는 8 내지 18 ng/ ml, 가장 바람직하게는 10 내지 15 ng/ ml일 수 있다 (실시예 3 참고). 혈장에서 DPP3 특이적인 효소 포획 활성 검정에서, 건강한 및 발병한 환자를 나누는 역치는 0.5 내지 2 nmol βNA min^-1 ml^-1, 더욱 바람직하게는 0.7 내지 1.8 nmol βNA min^-1 ml^-1, 더욱 바람직하게는 0.8 내지 1.5 nmol βNA min^-1 ml^-1, 가장 바람직하게는 1.0 내지 1.3 nmol βNA min^-1 ml^-1일 수 있다 (실시예 5 참고).

관련 기술분야의 기술자는 수행된 이전의 연구로부터 역치를 어떻게 결정하는지를 알고 있다. 관련 기술분야의 기술자는 특이적인 역치 값이 나중에 일상적으로 사용될 수 있는 사전 결정된 역치를 계산하기 위해 사용된 코호트에 따라 좌우될 수 있음을 알고 있다. 관련 기술분야의 기술자는 특이적인 역치 값이 검정에서 사용된 보정에 따라 좌우될 수 있음을 알고 있다. 관련 기술분야의 기술자는 특이적인 역치 값이 의사가 허용가능한 것으로 보이는 민감도 및/또는 특이성에 따라 좌우될 수 있음을 알고 있다.

진단 시험의 민감도 및 특이성은 시험의 분석적 "품질" 이상에 따라 좌우되며, 이들은 또한 비정상적인 결과를 구성하는 것의 정의에 따라 좌우된다. 실제로, 수신자 작용 특징 곡선 (ROC 곡선)은 전형적으로 "정상" (즉, 외관상 건강한) 및 "질환" 집단 (즉, 감염을 앓고 있는 환자)에서 변수 값 대 그의 상대적 빈도를 플롯함으로써 계산된다. 다루어질 특정한 해당 진단에 따라, 기준 그룹은 반드시 "정상"일 필요는 없지만, 또 다른 질환 또는 상태를 앓고 있는 환자의 그룹일 수 있으며, 발병한 관심 그룹은 그로부터 구별되어야 한다. 임의의 특정한 마커의 경우, 질환이 있는 및 없는 대상체에 대한 마커 수준의 분포는 겹칠 가능성이 있다. 이러한 조건하에, 시험은 질환으로부터 정상을 절대적으로 100% 정확도로 구별하지 못하며, 겹치는 영역은 시험이 질환으로부터 정상을 구별할 수 없는 영역을 나타낸다. 역치는 시험이 비정상인 것으로 고려되는 것보다 높게 (또는 마커가 질환에 의해 어떻게 변하는징 따라 낮게), 그리고 시험이 정상인 것으로 고려되는 것보다 낮게 선택된다. ROC 곡선하 면적은 인지된 측정이 상태의 정확한 확인을 가능하게 할 것이라는 가능성의 척도이다. ROC 곡선은 심지어 시험 결과가 반드시 정확한 수치를 제공하지 않을 때에도 사용될 수 있다. 결과의 순위를 매길 수 있는 한, ROC 곡선을 생성할 수 있다. 예를 들어, "질환" 샘플에 대한 시험 결과는 정도에 따라 순위를 매길 수 있다 (예를 들어 l=낮은, 2=정상, 및 3=높은). 이 순위는 "정상" 집단에서의 결과와 상관관계가 있을 수 있으며, ROC 곡선을 생성할 수 있다. 이들 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, [Hartley et al., 1982] 참고). 바람직하게는, 역치는 약 0.5 초과, 더욱 바람직하게는 약 0.7 초과의 ROC 곡선 면적을 제공하도록 선택된다. 용어 "약"은 이 맥락에서 주어진 측정의 +/- 5%를 나타낸다.

역치 값이 이전의 연구 코호트를 사용하여 결정되면, 상기 언급된 모든 사항을 고려하여, 의사는 본 발명에 따른 질환 진단 방법에 대해 사전 결정된 역치를 사용할 것이고, 적당한 진단을 내리기 위해 대상체가 상기 사전 결정된 역치 값보다 높거나 또는 낮은 값을 갖는지 여부를 결정할 것이다.

본 출원의 한 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고, 상기 환자는 추가로 체액 샘플에서 역치보다 높은 ADM-NH₂ 수준을 갖는 것을 특징으로 하고, 상기 체액은 전혈, 혈장, 혈청을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 출원의 한 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 8.4 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 시간 이하로 입원하였고, 상기 환자는 추가로 체액 샘플에서 역치보다 높은 ADM-NH₂ 수준을 갖는 것을 특징으로 하고, 상기 체액은 전혈, 혈장, 혈청을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 출원의 한 바람직한 실시양태에서 상기 환자의 체액 샘플에서 ADM-NH₂의 상기 역치는 40 내지 100 pg/mL, 더욱 바람직하게는 50 내지 90 pg/mL, 훨씬 더 바람직하게는 60 내지 80 pg/mL이고, 가장 바람직하게는 상기 역치는 70 pg/mL이다.

본 출원의 또 다른 실시양태는 환자에서 쇼크의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, ADM-NH₂ 수준은 상기 체액 샘플을 ADM-NH₂에 특이적으로 결합하는 포획 결합제와 접촉시킴으로써 결정된다.

상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 하기에 상세히 기재된 바와 같이 N-말단 ADM (서열식별번호: 4)에 결합한다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체, 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 아드레노메둘린의 중간 부분, aa 21-42: CTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVA (서열식별번호 3)에 결합하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 8.4 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 8.4 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체, 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 아드레노메둘린의 중간 부분, aa 21-42: CTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVA (서열식별번호 3)에 결합하는 것을 특징으로 한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 단일특이적인, 특히 모노클로날이다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 8.4 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 8.4 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 단일특이적인, 특히 모노클로날이다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 비아코어(Biacore) 2000 시스템을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 적어도 10^-7 M의 ADM에 대한 결합 친화도를 나타낸다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 비아코어 2000 시스템을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 ADM에 대한 결합 친화도를 나타내고, 1 x 10^-9 내지 3 x 10^-9의 ADM에 대한 결합 친화도를 나타낸다. 더욱 바람직하게는, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 IgG1 항체이다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM-결합-단백질-1 (보체 인자 H)이 아니다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 8.4 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 8.4 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM-결합-단백질-1 (보체 인자 H)이 아니다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 단부 (aa 1)를 인식하고, 그에 결합한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 8.4 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 8.4 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 단부 (aa 1)를 인식하고, 그에 결합한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 혈청, 혈액, 혈장에서 ADM의 반감기 (t_1/2 절반 체류 시간)를 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 바람직하게는 > 50%, 가장 바람직하게는 > 100% 증강시키는 ADM 안정화 항체 또는 단편 또는 스캐폴드이다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 인간 재조합 ADM 수용체를 발현하는 CHO-K1 세포에서 기준 길항제로서 hADM 22-52를 사용하여 ADM의 생물활성을 80% 이하, 바람직하게는 50% 이하 차단한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편은 ADM의 N-말단 영역 (aa 1-21) (서열식별번호 4)에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편이며, 중쇄는 하기 서열을 포함하고:

경쇄는 하기 서열을 포함한다:

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 바람직한 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 8.4 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 8.4 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편은 ADM의 N-말단 영역 (aa 1-21) (서열식별번호 4)에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편이며, 중쇄는 하기 서열을 포함하고:

경쇄는 하기 서열을 포함한다:

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편은 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열을 포함하고:

VL 영역으로서 하기 서열을 포함한다:

.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 8.4 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 8.4 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편은 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열을 포함하고:

VL 영역으로서 하기 서열을 포함한다:

.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편은 중쇄로서 하기 서열을 포함하고:

경쇄로서 하기 서열을 포함한다:

.

본 발명의 구체적인 실시양태에서, 항체는 중쇄로서 하기 서열:

또는 그와 > 95%, 바람직하게는 > 98%, 바람직하게는 > 99% 동일한 서열을 포함하고,

경쇄로서 하기 서열:

또는 그와 > 95%, 바람직하게는 > 98%, 바람직하게는 > 99% 동일한 서열을 포함한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 8.4 시간 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 8.4 시간 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 8.4 시간 이하로 제공받았고, 상기 항체 또는 단편은 중쇄로서 하기 서열을 포함하고:

경쇄로서 하기 서열을 포함한다:

.

경쇄로서 하기 서열:

두 아미노산 서열 사이의 동일성을 평가하기 위해, 쌍별 정렬이 수행된다. 동일성은 정렬에서 직접적인 매칭을 갖는 아미노산의 백분율을 정의한다.

또 다른 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 환자에서 쇼크의 치료 또는 예방에 사용되며, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 N-말단 부분 (아미노산 1-10): YRQSMNNFQG (서열식별번호 25)에 결합한다.

그러나, 본 발명은 구체적으로 아드레시주맙의 사용으로 제한되지 않는다. 아드레시주맙에 대해 사실인 것이 주요 필수 특징 (특히 친화도 및 에피토프 특이성)을 공유하는 항체에 대해서도 사실이라는 것은 의심의 여지가 없으며, 동일한 영역을 표적화하는 항체는 동일한 친화도 및 동일한 또는 매우 비슷한 구조적 특징 (크기, 형태,…)을 갖는다면, 이들은 동일한 기술적 효과를 갖는 것으로 예상되어야 한다.

상기 설명된 바와 같은 항체를 포함하는 제약 조성물.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 공지된 의약 또는 다른 중재와 조합되어 사용되는, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았다. 특히, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 항미생물 요법 (항생제, 항진균제,…), 미생물 공급원의 수술적 또는 다른 기계적 박멸, 혈관수축제/승압제, 유체 소생술을 위한 콜로이드 또는 결정질, 기계적 환기, ECMO (체외막 산소공급), 체외간 지지, 신장 대체 요법과 조합되어 사용될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 일차 의약과 조합되어 사용된다. 상기 일차 의약은 감염의 경우 항생제일 수 있으며; 혈관수축제, 예를 들어 카테콜아민 및/또는 유체가 정맥내로 투여된다. 본 발명의 주제는 또한 TNF-알파-항체와 조합되어 사용되는 본 발명에 따른 항-ADM 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 임의의 이전의 실시양태에 따른 항체 또는 단편 또는 스캐폴드를 포함하는, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이고, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았고, 상기 제약 제형은 용액, 바람직하게는 사용 준비된 용액이다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았고, 상기 제약 제형은 냉동 건조된 상태이다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았고, 상기 제약 제형은 근육내로 투여된다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았고, 상기 제약 제형은 혈관내로 투여된다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았고, 상기 제약 제형은 주입을 통해 투여된다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았고, 상기 제약 제형은 전신으로 투여된다.

추가로, 본 발명의 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 단일특이적이다. 단일특이적인 항-ADM 항체 또는 단일특이적인 항-ADM 항체 단편 또는 단일특이적인 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드가 표적 ADM 내의 적어도 5 개 아미노산을 포함하는 1 개의 특이적인 영역에 결합하는 것을 의미한다. 단일특이적인 항-ADM 항체 또는 단일특이적인 항-ADM 항체 단편 또는 단일특이적인 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 모두 동일한 항원에 대해 친화도를 갖는 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다.

구체적이고 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 단일특이적인 항-ADM 항체 또는 단일특이적인 항-ADM 항체 단편 또는 단일특이적인 항-ADM 비-Ig 스캐폴드를 제공하며, 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드가 표적 ADM 내의 적어도 4 개 아미노산을 포함하는 1 개의 특이적인 영역에 결합한다는 것을 특징으로 한다. 또 다른 특별한 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 ADM에 결합하는 항체 단편은 단일특이적 항체이다. 단일특이적인 것은 상기 항체 또는 항체 단편이 표적 ADM 내의 바람직하게는 적어도 4, 또는 적어도 5 개 아미노산을 포함하는 1 개의 특이적인 영역에 결합한다는 것을 의미한다. 단일특이적 항체 또는 단편은 모두 동일한 항원에 대해 친화도를 갖는 항체 또는 단편이다. 모노클로날 항체는 단일특이적이지만, 단일특이적 항체는 공통 생식 세포로부터 그를 생성하는 것 이외의 다른 방법에 의해 또한 생성될 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 부분 (aa 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 4)에 결합한다.

증상은 저혈량증으로 인한 쇼크, 심인성 쇼크, 폐쇄성 쇼크 및 분포성 쇼크를 포함하는 군으로부터 선택된 쇼크의 군으로부터 선택될 수 있다.

ㆍ 분포성 쇼크의 경우, 상기 환자는 패혈성 쇼크, 신경성 쇼크, 아나필락시스성 쇼크 또는 부신 발증으로 인한 쇼크를 갖고 있다.

더욱 바람직한 실시양태에서, 쇼크는 패혈성 쇼크, 코비드-19로 인한 쇼크, 화상으로 인한 쇼크 또는 외상성 쇼크이다. 가장 바람직한 실시양태에서, 쇼크는 패혈성 쇼크와 연관이 있었다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명은 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 환자는 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받은 것을 특징으로 한다.

가장 바람직한 실시양태에서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 미만 내에 투여된다. 추가로 또는 또 다른 실시양태에서, 상기 치료는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 미만 내에 투여된다.

추가의 실시양태에서, 본 발명은 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 환자에서 취한 체액 샘플은 > 70 pg/mL의 바이오ADM 수준을 나타내고, 상기 체액은 전혈, 혈장, 혈청을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명은 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 환자에서 취한 체액 샘플은 > 70 pg/mL의 바이오ADM 수준을 나타내고, 상기 체액은 전혈, 혈장, 혈청을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 환자에서 취한 체액 샘플은 역치 미만의 DPP3 수준을 나타내고, 상기 체액은 전혈, 혈장, 혈청을 포함하는 군으로부터 선택된다.

상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 하기에 상세한 바와 같이 성숙한 ADM, 예를 들어 아미노산 1 내지 52 (서열식별번호: 1)의 ADM, 또는 성숙한 ADM의 단편, 예를 들어 ADM의 중간부 (MR-ADM) (서열식별번호: 3), 또는 N-말단 ADM (서열식별번호: 4)에 결합한다.

따라서, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 상기 정의된 성숙한 ADM, 예를 들어 아미노산 1 내지 52 (서열식별번호: 1)의 ADM, 또는 그의 단편에 결합한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 부분 (aa 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 4)에 결합한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체, 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 아드레노메둘린의 중간 부분, aa 21-42: CTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVA (서열식별번호 3)에 결합하는 것을 특징으로 한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 단일특이적인, 특히 모노클로날이다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 비아코어 2000 시스템을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 적어도 10^-7 M의 ADM에 대한 결합 친화도를 나타낸다.

더욱 바람직한 실시양태에서, 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 비아코어 2000 시스템을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 ADM에 대한 결합 친화도를 나타내고, 1 x 10^-9 내지 3 x 10^-9의 ADM에 대한 결합 친화도를 나타낸다. 더욱 바람직하게는, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 IgG1 항체이다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM-결합-단백질-1 (보체 인자 H)이 아니다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 단부 (aa 1)를 인식하고, 그에 결합한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 혈청, 혈액, 혈장에서 ADM의 반감기 (t_1/2 절반 체류 시간)를 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 바람직하게는 > 50%, 가장 바람직하게는 > 100% 증강시키는 ADM 안정화 항체 또는 단편 또는 스캐폴드이다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 인간 재조합 ADM 수용체를 발현하는 CHO-K1 세포에서 기준 길항제로서 hADM 22-52를 사용하여 ADM의 생물활성을 80% 이하, 바람직하게는 50% 이하 차단한다.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편은 ADM의 N-말단 영역 (aa 1-21) (서열식별번호 4)에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편이며, 중쇄는 하기 서열을 포함하고:

경쇄는 하기 서열을 포함한다:

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 패혈증 및/또는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편은 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열을 포함하고:

VL 영역으로서 하기 서열을 포함한다:

.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편은 중쇄로서 하기 서열을 포함하고:

경쇄로서 하기 서열을 포함한다:

.

경쇄로서 하기 서열:

또는 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6 및/또는 서열식별번호:7과 100% 동일한 CDR-서열을 포함하고, 서열식별번호: 22와 > 95%, 바람직하게는 > 98%, 바람직하게는 > 99% 동일한 서열을 포함하고,

경쇄로서 하기 서열:

또는 서열식별번호: 8 및/또는 서열식별번호: 9와 100% 동일한 CDR-서열을 포함하고, 서열식별번호: 23과 > 95%, 바람직하게는 > 98%, 바람직하게는 > 99% 동일한 서열을 포함한다.

상기 설명된 바와 같은 항체를 포함하는 제약 조성물.

임의의 이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 공지된 의약 또는 다른 중재와 조합되어 사용되는, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 특히, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 항미생물 요법 (항생제, 항진균제,…), 미생물 공급원의 수술적 또는 다른 기계적 박멸, 혈관수축제/승압제, 유체 소생술을 위한 콜로이드 또는 결정질, 기계적 환기, ECMO (체외막 산소공급), 체외간 지지, 신장 대체 요법과 조합되어 사용될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 일차 의약과 조합되어 사용된다. 상기 일차 의약은 감염의 경우 항생제일 수 있으며; 혈관수축제, 예를 들어 카테콜아민 및/또는 유체가 정맥내로 투여된다. 본 발명의 주제는 또한 TNF-알파-항체와 조합되어 사용되는 본 발명에 따른 항-ADM 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 임의의 이전의 실시양태에 따른 항체 또는 단편 또는 스캐폴드를 포함하는, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여된다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 제약 제형은 용액, 바람직하게는 사용 준비된 용액이다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 제약 제형은 냉동 건조된 상태이다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 제약 제형은 근육내로 투여된다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 제약 제형은 혈관내로 투여된다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 제약 제형은 주입을 통해 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형에 관한 것이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 제약 제형은 전신으로 투여된다.

본 발명에 따른 항체는 항원에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 유전자에 의해 실질적으로 코딩되는 1 개 이상의 폴리펩티드를 포함하는 단백질이다. 인식된 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파 (IgA), 감마 (IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄), 델타 (IgD), 엡실론 (IgE) 및 뮤 (IgM) 불변 영역 유전자, 뿐만 아니라 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함한다. 전장 면역글로불린 경쇄는 일반적으로 약 25 kDa 또는 214 개 아미노산 길이이다. 전장 면역글로불린 중쇄는 일반적으로 약 50 kDa 또는 446 개 아미노산 길이이다. 경쇄는 NH₂-말단에서 가변 영역 유전자 (약 110 개 아미노산 길이)에 의해 및 COOH-말단에서 카파 또는 람다 불변 영역 유전자에 의해 코딩된다. 중쇄는 유사하게 가변 영역 유전자 (약 116 개 아미노산 길이)에 의해 및 다른 불변 영역 유전자 중 하나에 의해 코딩된다.

항체의 기본 구조 단위는 일반적으로 면역글로불린 쇄의 2 개의 동일한 쌍으로 이루어진 사량체이며, 각각의 쌍은 1 개의 경쇄 및 1 개의 중쇄를 갖는다. 각각의 쌍에서, 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 항원에 결합하고, 불변 영역은 이펙터 기능을 매개한다. 면역글로불린은 또한 예를 들어 Fv, Fab, 및 (Fab')2, 뿐만 아니라 이관능성 혼성체 항체 및 단일 쇄를 포함한 다양한 다른 형태로 존재한다 (예를 들어, [ Lanzavecchia et al. 1987. Eur. J. Immunol. 17: 105; Huston et al. 1988. PNAS 85:5879-5883; Bird et al. 1988. Science 242:423-426; Hood et al. 1984. Immunology, Benjamin, N.Y., 2nd ed.; Hunkapiller and Hood, 1986. Nature 323: 15-16 ]). 면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역 (CDR)으로도 지칭되는 3 개의 초가변 영역에 의해 개재된 프레임워크 영역을 포함한다 ([Sequences of Proteins of Immunological Interest, E. Kabat et al., U.S. Department of Health and Human Services, 1983] 참고). 상기 언급된 바와 같이, CDR은 주로 항원의 에피토프에 대한 결합을 담당한다. 면역 복합체는 항체, 예컨대 모노클로날 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체, 또는 항원에 특이적으로 결합하는 기능적 항체 단편이다.

키메라 항체는 경쇄 및 중쇄 유전자가 전형적으로 유전자 조작에 의해 상이한 종에 속하는 면역글로불린 가변 및 불변 영역 유전자로부터 구축된 것인 항체이다. 예를 들어, 마우스 모노클로날 항체로부터의 유전자의 가변 세그먼트는 인간 불변 세그먼트, 예컨대 카파 및 감마 1 또는 감마 3에 결합할 수 있다. 따라서, 한 예에서, 치료 키메라 항체는 마우스 항체로부터의 가변 또는 항원-결합 도메인, 및 인간 항체로부터의 불변 또는 이펙터 도메인으로 구성된 혼성체 단백질이지만, 다른 포유동물 종이 사용될 수 있거나, 또는 가변 영역이 분자 기술에 의해 생성될 수 있다. 키메라 항체의 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어 미국 특허 번호 5,807,715를 참고한다. "인간화" 면역글로불린은 인간 프레임워크 영역 및 비-인간 (예컨대 마우스, 래트 또는 합성) 면역글로불린으로부터의 1 개 이상의 CDR을 포함하는 면역글로불린이다. CDR을 제공하는 비-인간 면역글로불린은 "공여자"로 명명되고, 프레임워크를 제공하는 인간 면역글로불린은 "수용자"로 명명된다. 한 실시양태에서, 모든 CDR은 인간화 면역글로불린에서 공여자 면역글로불린으로부터의 것이다. 불변 영역은 존재할 필요는 없지만, 존재한다면, 그들은 인간 면역글로불린 불변 영역과 실질적으로 동일해야 하고, 즉, 적어도 약 85-90%, 예컨대 약 95% 또는 그 초과로 동일해야 한다. 따라서, 가능하게는 CDR을 제외한 인간화 면역글로불린의 모든 부분은 천연 인간 면역글로불린 서열의 상응하는 부분과 실질적으로 동일하다. "인간화 항체"는 인간화 경쇄 및 인간화 중쇄 면역글로불린을 포함하는 항체이다. 인간화 항체는 CDR을 제공하는 공여자 항체와 동일한 항원에 결합한다. 인간화 면역글로불린 또는 항체의 수용자 프레임워크는 공여자 프레임워크로부터 취한 제한된 수의 아미노산 치환을 가질 수 있다. 인간화 또는 다른 모노클로날 항체는 추가의 보존적 아미노산 치환을 가질 수 있으며, 이는 항원 결합 또는 다른 면역글로불린 기능에 실질적인 영향을 미치지 않는다. 예시적인 보존적 치환은 gly, ala; val, ile, leu; asp, glu; asn, gln; ser, thr; lys, arg; 및 phe, tyr과 같은 것들이다. 인간화 면역글로불린은 유전자 조작 수단에 의해 구축될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,585,089 참고). 인간 항체는 경쇄 및 중쇄 유전자가 인간 기원인 항체이다. 인간 항체는 관련 기술분야에 공지된 방법을 이용하여 생성될 수 있다. 인간 항체는 관심 항체를 분비하는 인간 B 세포를 불멸화시킴으로써 생성될 수 있다. 불멸화는 예를 들어 EBV 감염에 의해 또는 인간 B 세포를 흑색종 또는 하이브리도마 세포와 융합시켜 트리오마 세포를 생성함으로써 달성될 수 있다. 인간 항체는 또한 파지 디스플레이 방법에 의해 생성될 수 있거나 (예를 들어 Dower 등의 PCT 공개 번호 WO　91/17271; McCafferty 등의 PCT 공개 번호 WO92/001047; 및 Winter 등의 PCT 공개 번호 WO　92/20791 참고), 또는 인간 조합 모노클로날 항체 라이브러리로부터 선택될 수 있다 (모르포시스(Morphosys) 웹사이트 참고). 인간 항체는 또한 인간 면역글로불린 유전자를 보유하는 트랜스제닉 동물을 사용하여 제조될 수 있다 (예를 들어, PCT 공개 번호 WO　93/12227; 및 PCT 공개 번호 WO　91/10741 참고).

따라서, 항-ADM 항체는 관련 기술분야에 공지된 포맷을 가질 수 있다. 예는 인간 항체, 모노클로날 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, CDR-그래프팅된 항체이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체는 재조합적으로 생성된 항체, 예를 들어 IgG, 전형적인 전장 면역글로불린, 또는 중쇄 및/또는 경쇄의 적어도 F-가변 도메인을 함유하는 항체 단편, 예를 들어 화학적으로 커플링된 항체 (단편 항원 결합), 예컨대 비제한적으로 Fab-단편, 예컨대 Fab 미니바디, 단일 쇄 Fab 항체, 에피토프 태그를 갖는 1가 Fab 항체, 예를 들어 Fab-V5Sx2; CH3 도메인과 이량체화된 2가 Fab (미니-항체); 예를 들어 이종성 도메인의 도움에 의해 다량체화를 통해, 예를 들어 dHLX 도메인의 이량체화를 통해 형성된 2가 Fab 또는 다가 Fab, 예를 들어 Fab-dHLX-FSx2; F(ab')2-단편, scFv-단편, 다량체화된 다가 또는/및 다중특이적인 scFv-단편, 2가 및/또는 이중특이적인 디아바디, 바이트(BITE)^® (이중특이적인 T-세포 인게이저), 삼관능성 항체, 예를 들어 G와는 상이한 부류로부터의 다가 항체; 단일-도메인 항체, 예를 들어 낙타 또는 어류 면역글로불린으로부터 유래된 나노바디 및 수많은 다른 것들이다.

항-ADM 항체 외에도 표적 분자와 착화하기 위한 다른 생체고분자 스캐폴드가 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 고도로 표적 특이적인 생체고분자의 생성을 위해 사용되었다. 예는 압타머, 스피겔머, 안티칼린 및 코노톡신이다. 항체 포맷의 예시에 대해서는 WO 2013/072513의 도 1a, 1b 및 1c를 참고한다.

본 발명에 따른 항체 단편은 본 발명에 따른 항체의 항원 결합 단편이다.

바람직한 실시양태에서, ADM 항체 포맷은 Fv 단편, scFv 단편, Fab 단편, scFab 단편, F(ab)2 단편 및 scFv-Fc 융합 단백질을 포함하는 군으로부터 선택된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 항체 포맷은 scFab 단편, Fab 단편, scFv 단편 및 생체이용률 최적화된 그의 접합체, 예컨대 PEG화 단편을 포함하는 군으로부터 선택된다. 가장 바람직한 포맷 중 하나는 scFab 포맷이다.

비-Ig 스캐폴드는 단백질 스캐폴드일 수 있고, 이들이 리간드 또는 항원에 결합할 수 있기 때문에 항체 모방체로서 사용될 수 있다. 비-Ig 스캐폴드는 테트라넥틴-기반 비-Ig 스캐폴드 (예를 들어 US 2010/0028995에 기재됨), 피브로넥틴 스캐폴드 (예를 들어 EP 1266025에 기재됨; 리포칼린-기반 스캐폴드 (예를 들어 WO 2011/154420에 기재됨); 유비퀴틴 스캐폴드 (예를 들어 WO 2011/073214에 기재됨), 트랜스페린 스캐폴드 (예를 들어 US 2004/0023334에 기재됨), 단백질 A 스캐폴드 (예를 들어 EP 2231860에 기재됨), 안키린 반복부 기반 스캐폴드 (예를 들어 WO 2010/060748에 기재됨), 미세단백질, 바람직하게는 시스테인 노트를 형성하는 미세단백질) 스캐폴드 (예를 들어 EP 2314308에 기재됨), Fyn SH3 도메인 기반 스캐폴드 (예를 들어 WO 2011/023685에 기재됨) EGFR-A-도메인 기반 스캐폴드 (예를 들어 WO 2005/040229에 기재됨) 및 쿠니츠(Kunitz) 도메인 기반 스캐폴드 (예를 들어 EP 1941867에 기재됨)를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체는 하기와 같이 생성될 수 있다: Balb/c 마우스를 0 및 14 일째에 100μg ADM-펩티드-BSA-접합체로 (100μl 완전 프로인트(Freund) 아주반트에 유화됨) 및 21 및 28 일째에 50μg으로 (100μl 불완전 프로인트 아주반트에 유화됨) 면역화시켰다. 융합 실험을 수행하기 3 일 전에, 동물에게 100μl 식염수에 용해된 50μg의 접합체를 1 회 복강내 및 1 회 정맥내 주사로서 제공하였다. 면역화된 마우스로부터의 비장세포 및 흑색종 세포주 SP2/0으로부터의 세포와 1ml 50% 폴리에틸렌 글리콜을 37℃에서 30 초 동안 융합시켰다. 세척 후에, 세포를 96-웰 세포 배양 플레이트에 시딩하였다. HAT 배지 (20% 태아 소 혈청 및 HAT-보충제로 보충된 RPMI 1640 배양 배지)에서 성장시킴으로써 혼성체 클론을 선택하였다. 2 주 후에, HAT 배지를 3 회 계대 동안에 HT 배지로 교체한 후, 정상 세포 배양 배지로 되돌렸다. 융합 3 주 후에 세포 배양물 상청액을 항원 특이적인 IgG 항체에 대해 일차 스크리닝하였다. 양성으로 시험된 미세배양물을 증식을 위해 24-웰 플레이트로 옮겼다. 재시험한 후, 선택된 배양물을 제한-희석 기술을 이용하여 클로닝 및 재클로닝하였고, 이소타입을 결정하였다 ([ Lane, R.D. 1985. J. Immunol. Meth. 81: 223-228; Ziegler B. et al. l996. Horm. Metab. Res. 28: 11-15 ] 또한 참고).

항체는 또한 하기 절차에 따라 파지 디스플레이에 의해 생성될 수 있다: 인간 나이브 항체 유전자 라이브러리 HAL7/8은 ADM 펩티드에 대한 재조합 단일 쇄 F-가변 도메인 (scFv)의 단리를 위해 사용되었다. 2 가지 상이한 스페이서를 통해 ADM 펩티드 서열에 연결된 비오틴 태그를 함유하는 펩티드의 사용을 포함하는 패닝 전략에 의해 항체 유전자 라이브러리를 스크리닝하였다. 비특이적으로 결합된 항원 및 스트렙타비딘 결합된 항원을 사용하는 패닝 라운드의 혼합을 이용하여, 비특이적인 결합제의 백그라운드를 최소화하였다. 패닝의 제3 라운드로부터 용리된 파지를 모노클로날 scFv 발현 이. 콜라이(E. coli) 균주의 생성을 위해 사용하였다. 이들 클론 균주의 배양으로부터의 상청액을 항원 ELISA 시험을 위해 직접적으로 사용하였다 (WO 2013/072513에 인용된 참고문헌을 참고하며, 그들의 전문이 본원에 참고로 포함됨).

뮤린 항체의 인간화는 하기 절차에 따라 수행될 수 있다: 뮤린 기원 항체의 인간화를 위해, 항체 서열을 프레임워크 영역 (FR)과 상보성 결정 영역 (CDR) 및 항원 사이의 구조적 상호작용에 대해 분석한다. 구조적 모델링을 기반으로 하여, 인간 기원의 적당한 FR이 선택되고, 뮤린 CDR 서열은 인간 FR로 번역된다. CDR 또는 FR의 아미노산 서열에서의 변형이 도입되어, FR 서열에 대한 종 스위치에 의해 폐지된 구조적 상호작용을 회복할 수 있다. 구조적 상호작용의 이러한 회복은 파지 디스플레이 라이브러리를 이용하는 무작위 접근법에 의해 또는 분자 모델링에 의해 안내되는 직접적인 접근법을 통해 달성될 수 있으며 ( Almagro and Fransson 2008. Front Biosci. 13: 1619-33 ), 바람직한 실시양태에서, ADM 항체 포맷은 Fv 단편, scFv 단편, Fab 단편, scFab 단편, F(ab)2 단편 및 scFv-Fc 융합 단백질을 포함하는 군으로부터 선택된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 항체 포맷은 scFab 단편, Fab 단편, scFv 단편 및 생체이용률 최적화된 그의 접합체, 예컨대 PEG화 단편을 포함하는 군으로부터 선택된다. 가장 바람직한 포맷 중 하나는 scFab 포맷이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 항-ADM 항체, 항-ADM 항체 단편, 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 전장 항체, 항체 단편, 또는 비-Ig 스캐폴드이다.

바람직한 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM에 함유된 적어도 5 개 아미노산 길이의 에피토프에 대해 지시되고, 그에 결합할 수 있다.

더욱 바람직한 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM에 함유된 적어도 4 개 아미노산 길이의 에피토프에 대해 지시되고, 그에 결합할 수 있다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 한 구체적인 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료를 위해 제공되며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 시간 이하로 입원하였고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 성숙한 인간 ADM의 aa 1-21의 서열: YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호: 4) 내의 바람직하게는 적어도 4 개, 또는 적어도 5 개 아미노산의 영역에 결합한다.

이전의 실시양태에 따라, 본 발명의 한 구체적인 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료를 위해 사용되며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에 투여되고, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 성숙한 인간 ADM의 aa 1-21의 서열: YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호: 4) 내의 바람직하게는 적어도 4 개, 또는 적어도 5 개 아미노산의 영역에 결합한다.

본 발명의 바람직한 실시양태에서 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 N-말단 부분 (아미노산 1-21)에 위치한 ADM의 영역에 결합한다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 N-말단 단부 (aa1)를 인식하고, 그에 결합한다. N-말단 단부는 아미노산 1, 즉, 각각 서열식별번호 1 또는 4의 "Y"를 의미하고, 항체 결합에 필수적이다. 상기 항체 또는 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 N-말단 연장된 및 N-말단 변형된 ADM 및 N-말단 분해된 ADM에 전혀 결합하지 않을 것이다.

바람직한 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM에, 바람직하게는 인간 ADM에 함유된 적어도 5 개 아미노산 길이의 에피토프에 대해 지시되고, 그에 결합할 수 있다.

바람직한 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM에, 바람직하게는 인간 ADM에 함유된 적어도 4 개 아미노산 길이의 에피토프에 대해 지시되고, 그에 결합할 수 있다.

한 구체적인 실시양태에서, 본 발명에 따른 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드를 사용하는 것이 바람직하며, 상기 항-ADM 항체 또는 상기 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 혈청, 혈액, 혈장에서 ADM의 반감기 (t_1/2; 절반 체류 시간)를 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 바람직하게는 >50%, 가장 바람직하게는 >100% 증강시키는 ADM 안정화 항체 또는 ADM 안정화 항체 단편 또는 ADM 안정화 비-Ig 스캐폴드이다. ADM의 반감기 (절반 체류 시간)는 ADM의 정량화를 위한 면역검정을 이용하여 각각 ADM 안정화 항체 또는 ADM 안정화 항체 단편 또는 ADM 안정화 비-Ig 스캐폴드의 부재 및 존재하에 인간 혈청, 혈액 또는 혈장에서 결정될 수 있다.

하기 단계를 수행할 수 있다:

- ADM을 각각 ADM 안정화 항체 또는 ADM 안정화 항체 단편 또는 ADM 안정화 비-IG 스캐폴드의 부재 및 존재하에 인간 시트레이트 혈장에 희석시킬 수 있고, 24℃에서 인큐베이션할 수 있다.

- 분취물을 선택된 시점에서 (예를 들어 24 시간 내에) 취하고, -20℃에서 냉동시킴으로써 상기 분취물에서 ADM의 분해를 중단시킬 수 있다.

- 선택된 검정이 안정화 항체에 의해 영향을 받지 않는다면, ADM의 양은 hADM 면역검정에 의해 직접적으로 결정될 수 있다. 대안적으로, 분취물은 변성제 (예컨대 HCl)로 처리될 수 있고, 샘플을 (예를 들어 원심분리에 의해) 제거한 후에, pH를 중화시킬 수 있고, ADM을 ADM 면역검정에 의해 정량화할 수 있다. 대안적으로, 비-면역검정 기술 (예를 들어 RP-HPLC)은 ADM-정량화를 위해 사용될 수 있다.

- ADM의 반감기는 각각 ADM 안정화 항체 또는 ADM 안정화 항체 단편 또는 ADM 안정화 비-IG 스캐폴드의 부재 및 존재하에 인큐베이션한 ADM에 대해 계산된다.

반감기의 증강은 ADM 안정화 항체 또는 ADM 안정화 항체 단편 또는 ADM 안정화 비-Ig 스캐폴드의 부재하에 인큐베이션한 ADM과 비교하여 안정화된 ADM에 대해 계산된다.

ADM의 반감기의 2 배 증가는 반감기의 100% 증강이다. 반감기 (절반 체류 시간)는 지정된 화학물질 또는 약물의 농도가 지정된 유체 또는 혈액에서 그의 기준선 농도의 절반으로 떨어지는 기간으로 정의된다.

구체적인 실시양태에서, 상기 항-ADM 항체, 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 비-중화 항체, 단편 또는 비-Ig 스캐폴드이다. 중화 항-ADM 항체, 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 생물활성을 거의 100%, 적어도 90% 초과, 바람직하게는 적어도 95% 초과 차단할 것이다.

대조적으로, 비-중화 항-ADM 항체, 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 생물활성을 100% 미만, 바람직하게는 95% 미만, 바람직하게는 90% 미만, 더욱 바람직하게는 80% 미만 및 훨씬 더 바람직하게는 50% 미만 차단한다. 이는 비-중화 항-ADM 항체, 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 결합된 ADM의 잔류 생물활성이 0% 초과, 바람직하게는 5% 초과, 바람직하게는 10% 초과, 더욱 바람직하게는 20% 초과, 더욱 바람직하게는 50% 초과임을 의미한다. 이 맥락에서 (a) 간편성을 위해 본원에서 집합적으로 "비-중화" 항-ADM 항체, 항체 단편, 또는 비-Ig 스캐폴드로 명명되며, 예를 들어 ADM의 생물활성을 80% 미만 차단하는 "비-중화 항-ADM 활성"을 갖는 항체, 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드인 분자(들)은 다음과 같이 정의된다 - 진핵생물 세포주의 배양물에 첨가시, CRLR (칼시토닌 수용체 유사 수용체) 및 RAMP3 (수용체-활성 변형 단백질 3)으로 구성된 기능적 인간 재조합 ADM 수용체를 발현하고, 병행 첨가된 인간 합성 ADM 펩티드의 작용을 통해 세포주에 의해 생성된 cAMP의 양을 감소시키는, ADM에 결합하는 분자 또는 분자들이며, 상기 첨가된 인간 합성 ADM은 분석할 비-중화 항체의 부재하에 cAMP 합성의 최대-절반 자극을 유도하는 양으로 첨가되고, 심지어 분석할 ADM에 결합하는 비-중화 분자(들)이 분석할 비-중화 항체에 의해 수득가능한 cAMP 합성의 최대 감소를 수득하기 위해 필요한 양의 10 배 초과인 양으로 첨가될 때에도, ADM에 결합하는 상기 분자(들)에 의한 cAMP의 감소는 80% 이하인 정도로 일어난다. 동일한 정의가 다른 범위; 95%, 90%, 50% 등에 적용된다.

본 발명에 따른 구체적인 실시양태에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 사용되며, 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 생물활성을 (기준선 값의) 80% 미만, 바람직하게는 50% 미만 차단한다. 이는 순환 ADM을 각각 80% 이하 또는 50% 이하 차단하는 것을 의미한다. ADM의 상기 제한된 생물활성 차단이 심지어 과잉 농도의 항체, 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드에서도 발생한다는 것을 이해해야 하며, 이는 ADM에 비해 과잉의 항체, 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드를 의미한다. 상기 제한된 차단은 ADM 결합제 자체의 고유한 성질이다. 이는 상기 항체, 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드가 각각 80% 또는 50%의 최대 억제를 가짐을 의미한다. 함축적으로, 이는 적당량 또는 과잉의 항체, 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드가 각각 투여되더라도, 각각 20% 또는 50% 잔류 ADM 생물활성이 존재함을 의미한다.

바람직한 실시양태에서, 상기 항-ADM 항체, 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 생물활성을 적어도 5% 차단할 것이다. 함축적으로, 이는 잔류 95% 순환 ADM 생물활성이 존재함을 의미한다. 이는 상기 항-ADM 항체, 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드의 투여 후 남아있는 생물활성의 보다 낮은 역치이다. 생물활성은 그의 상호작용 후에 생체내 또는 시험관내에서 (예를 들어 검정에서) 살아있는 유기체 또는 조직 또는 장기 또는 기능적 단위에 대한 물질의 효과로서 정의된다. ADM 생물활성의 경우, 이는 인간 재조합 ADM 수용체 cAMP 기능적 검정에서 ADM의 효과일 수 있다. 따라서, 본 발명에 따라 생물활성은 ADM 수용체 cAMP 기능적 검정을 통해 정의된다. 하기 단계는 이러한 검정에서 ADM의 생물활성을 결정하기 위해 수행될 수 있다:

- 용량 반응 곡선은 상기 인간 재조합 ADM 수용체 cAMP 기능적 검정에서 ADM에 의해 수행된다.

- 최대-절반 cAMP 자극의 ADM 농도가 계산될 수 있다.

- 일정한 최대-절반 cAMP-자극 ADM 농도에서 용량 반응 곡선 (100 μl 최종 농도까지)은 각각 ADM 안정화 항체 또는 ADM 안정화 항체 단편 또는 ADM 안정화 비-Ig 스캐폴드에 의해 수행된다.

상기 ADM 안정화 항체에 의한 50%의 최대 (최대 용량에서) 억제는 상기 ADM 항체 또는 상기 ADM 항체 단편 또는 상기 ADM 비-Ig 스캐폴드 각각이 생물활성을 기준선 값의 50% 차단한다는 것을 의미한다. 상기 ADM 생물검정에서 80%의 최대 억제는 상기 항-ADM 항체 또는 상기 항-ADM 항체 단편 또는 상기 항-ADM 비-Ig 스캐폴드 각각이 ADM의 생물활성을 80% 차단한다는 것을 의미한다. 이는 80% 이하의 ADM 생물활성의 차단을 의미한다.

바람직한 실시양태에서, 조절 항-ADM 항체 또는 조절 항-ADM 항체 단편 또는 조절 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 사용된다. "조절" 항-ADM 항체 또는 조절 항-ADM 항체 단편 또는 조절 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 혈청, 혈액, 혈장에서 ADM의 반감기 (t 절반 체류 시간)를 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 바람직하게는 >50%, 가장 바람직하게는 >100% 증강시키고, ADM의 생물활성을 80% 미만, 바람직하게는 50% 미만 차단하는 항체 또는 ADM 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항-ADM 항체, 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 생물활성을 적어도 5% 차단할 것이다. 반감기 및 생물활성 차단관 관련된 이들 값은 이들 값을 결정하기 위해 상기 언급된 검정과 관련있는 것으로 이해되어야 한다. 이는 각각 80% 이하 또는 50% 이하의 순환 ADM의 차단을 의미한다. 이는 각각 20% 잔류 ADM 생물활성이 존재하거나 또는 50% 잔류 ADM 생물활성이 존재함을 의미한다. 이러한 조절 항-ADM 항체 또는 조절 항-ADM 항체 단편 또는 조절 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 투여를 투여하는 것이 용이하다는 이점을 제공한다. ADM 생물활성의 부분적인 차단 또는 부분적인 감소 및 생체내 반감기의 증가 (ADM 생물활성의 증가)의 조합은 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드 투여의 유익한 간편성을 유발한다. 과량의 내인성 ADM 상황에서, 활성 저하 효과는 항체 또는 단편 또는 스캐폴드의 주요한 영향이며, 이는 ADM의 (부정적인) 효과를 제한한다. 낮은 또는 정상의 내인성 ADM 농도에서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드의 생물학적 효과는 ADM 반감기를 (부분적으로 차단함으로써) 저하시키고 증가시킴으로써 증가시키는 것의 조합이다. 따라서, 비-중화 및 조절 ADM 항체 또는 ADM 항체 단편 또는 ADM 비-Ig 스캐폴드는 ADM의 생물활성을 특정한 생리학적 범위 내에서 유지시키기 위해 ADM 생물활성 완충제처럼 작용한다.

본 발명에 따른 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 친화도 상수가 10^-7 M, 바람직하게는 10^-8 M 초과이고, 바람직한 친화도가 10^-9 M 초과이고, 가장 바람직하게는 10^-10 M보다 높은 인간 ADM에 대한 친화도를 나타낸다. 관련 기술분야의 기술자는 더 높은 용량의 화합물을 적용함으로써 더 낮은 친화도를 보완하는 것이 고려될 수 있음을 알고 있으며, 이 수단은 본 발명의 범위를 벗어나지 않는다. 친화도 상수는 WO 2013/072513의 실시예 1에 기재된 방법에 따라 결정될 수 있다.

용어 "ADM 결합 단백질"이 ADM-결합-단백질-1 (보체 인자 H)을 포함한다는 것이 강조되어야 한다. 그러나, 본 발명에 따른 정의에 의한 상기 ADM 결합 단백질은 비-중화 항-ADM 항체/항체 단편/비-Ig 스캐폴드도 조절 항-ADM 항체/항체 단편/비-Ig 스캐폴드도 아니다. 본 발명의 주제는 추가로 본 발명에 따라 환자의 급성 질환 또는 급성 상태의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드는 추가의 활성 성분과 조합되어 사용될 수 있다.

본 발명의 주제는 추가로 본 발명에 따른 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드를 포함하는 제약 제형이다. 본 발명의 주제는 추가로 본 발명에 따른 제약 제형이며, 상기 제약 제형은 용액, 바람직하게는 사용 준비된 용액이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 주제는 추가로 본 발명에 따른 제약 제형이며, 상기 제약 제형은 사용하기 전에 재구성되는 건조된 상태이다. 상기 제약 제형은 근육내로 투여될 수 있다. 상기 제약 제형은 혈관내로 투여될 수 있다. 상기 제약 제형은 주입을 통해 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 주제는 추가로 본 발명에 따른 제약 제형이며, 상기 제약 제형은 냉동 건조된 상태이다.

이전의 실시양태에 따라, 또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드를 포함하는 제약 제형을 제공하며, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 환자는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았고, 상기 제약 제형은 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제약 제형, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형이 치료를 위해 환자에게 투여되고, 상기 정의된 바와 같이, 상기 환자는 상기 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 있었고/거나, 환자는 상기 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 입원하였고/거나, 환자는 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하로 제공받았고, 단, 상기 환자는 이러한 치료를 필요로 한다.

이전의 실시양태에 따라, 또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 항-ADM 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드를 포함하는 제약 제형을 제공하며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 상기 제약 제형은 그를 필요로 하는 환자에게 투여된다.

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 제약 제형, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크 환자의 치료에 사용하기 위한 제약 제형은 치료를 위해 환자에게 투여되고, 상기 정의된 바와 같이, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 내에, 및/또는 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간, 바람직하게는 8.4 시간 (0.35 일) 이하 내에 투여되고, 단, 상기 환자는 이러한 치료를 필요로 한다.

한 실시양태에서, 본 발명에 따른 ADM 항체 또는 ADM 항체 단편 또는 ADM 비-IG 스캐폴드는 비-중화 ADM 항체 또는 비-중화 ADM 항체 단편 또는 비-중화 ADM 비-Ig 스캐폴드이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 항체 포맷은 Fv 단편, scFv 단편, Fab 단편, scFab 단편, (Fab)2 단편 및 scFv-Fc 융합 단백질을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 실시양태에서, 치료를 필요로 하는 환자의 치료에 사용하기 위한 임의의 이전의 실시양태에 따른 ADM 항체 또는 ADM 항체 단편 또는 비-Ig-스캐폴드, 상기 항체 또는 단편은 적어도 0.5 mg / Kg 체중, 특히 적어도 1.0 mg/kg 체중, 더욱 특히 1.0 내지 20.0 mg/kg 체중, 예를 들어 2.0 내지 10 mg/kg 체중, 2.0 내지 8.0 mg/kg 체중, 또는 2.0 내지 5.0 mg/kg 체중의 용량으로 투여될 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시양태에서, 임의의 이전의 실시양태에 따른 임의의 ADM 항체 또는 ADM 항체 단편 또는 비-Ig-스캐폴드를 사용하여 치료되거나 또는 예방되는 쇼크의 증상은 바이러스 감염과 연관이 있으며, 상기 바이러스는 헤파드나비리다에(hepadnaviridae), 아데노비리다에(adenoviridae), 헤르페스비리다에(herpesviridae), 인플루엔자(influenza) 바이러스, 아레나비리다에(arenaviridae), 필로비리다에(filoviridae), 토가비리다에(togaviridae), 노로바이러스(noroviruse), 플라비비리다에(flaviviridae), 레트로비리다에(retroviridae), 홍역 바이러스, 레오비리다에(reoviridae), 엔테로비리다에(enteroviridae), 피코르나비리다에(picornaviridae), 칼리시비리다에(caliciviridae) 등을 포함하는 군으로부터 선택된다.

본 발명의 바람직한 실시양태에서, 임의의 이전의 실시양태에 따른 임의의 ADM 항체 또는 ADM 항체 단편 또는 비-Ig-스캐폴드를 사용하여 치료되거나 또는 예방되는 쇼크의 증상은 일차 질환의 약물 치료, 예컨대 화학요법, 생물제제 (예를 들어, 항체 또는 그의 단편), 항생제에 의한 치료, 또는 상기 언급된 임의의 질병 증상을 유발하는 임의의 의약과 연관이 있다.

본 발명의 추가로 바람직한 실시양태는 임의의 이전의 실시양태에 따른 ADM 항체 또는 ADM 항체 단편 또는 비-Ig-스캐폴드를 그를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 임의의 이전의 실시양태에서 정의된 증상을 치료 (예를 들어, 치료, 치유, 완화, 개선, 개량 등) 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 대상체는 바람직하게는 인간이다.

ADM 항체 또는 ADM 항체 단편 또는 비-Ig-스캐폴드는 관련 기술분야에 공지된 임의의 수단, 예컨대 경구, 정맥내, 피하, 동맥내, 근육내, 심장내, 척수내, 흉강내, 복강내, 뇌실내, 설하, 경피 및/또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 전신으로, 예를 들어 정맥내로, 또는 국소적으로 투여될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 약물, 화합물, 또는 제약 조성물의 "유효 용량" 또는 "유효량"은 유익한 또는 원하는 결과를 달성하는데 충분한 양이다. 예방적 사용의 경우, 유익한 또는 원하는 결과에는 위험의 제거 또는 감소, 중증도의 감소, 또는 질환, 예컨대 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 거동적 증상, 질환의 발달 동안에 나타나는 그의 합병증 및 중간 병리학적 표현형의 발생의 지연과 같은 결과가 포함된다. 치료적 사용의 경우, 유익한 또는 원하는 결과에는 두통 발작의 통증 강도, 지속기간 또는 빈도의 감소, 및 두통으로 인한 하나 이상의 증상 (생화학적, 조직학적 및/또는 거동적), 예컨대 질환의 발달 동안에 나타나는 그의 합병증 및 중간 병리학적 표현형의 감소, 질환을 앓고 있는 사람들의 삶의 질의 증가, 질환을 치료하기 위해 필요한 다른 의약의 용량 감소, 또 다른 의약의 효과 증강, 및/또는 환자의 질환 진행의 지연과 같은 임상적 결과가 포함된다. 유효 용량은 1 회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 약물, 화합물, 또는 제약 조성물의 유효 용량은 예방적 또는 치료적 처치를 직접적으로 또는 간접적으로 달성하는데 충분한 양이다. 임상적 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물, 또는 제약 조성물의 유효 용량은 또 다른 약물, 화합물, 또는 제약 조성물과 함께 달성되거나 또는 달성되지 않을 수 있다. 따라서, "유효 용량"은 하나 이상의 치료제를 투여하는 맥락에서 고려될 수 있고, 단일 작용제는 하나 이상의 다른 작용제와 함께 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 또는 달성되는 경우에 유효량으로 제공되는 것으로 고려될 수 있다.

하기 실시양태는 본 발명의 주제이다:

1. 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 가진 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 환자는

ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 10 시간 이하로 앓았고/거나

ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나

상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 부분 (aa 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 4)에 결합하는 것인, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

2. 실시양태 1에 있어서, 상기 환자가 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.24 일), 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 이하로 앓았던 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

3. 실시양태 1 또는 2에 있어서, 상기 환자가 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 ICU에 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.24 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 이하로 입원하였던 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 환자가 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.24 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 이하로 제공받았던 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

5. 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는

ㆍ 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간 내에 및/또는

ㆍ 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간 내에, 및/또는

6. 실시양태 5에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 상기 환자에서 쇼크 발생 후 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.25 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 내에 투여되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

7. 실시양태 5 또는 6에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 상기 환자가 ICU에 입원한 후 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.25 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 내에 투여되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

8. 실시양태 5 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 환자가 장기 지지를 제공받은 후 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.25 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 내에 투여되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

9. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 환자가 저혈량증으로 인한 쇼크, 심인성 쇼크, 폐쇄성 쇼크 및 분포성 쇼크, 특히 심인성 쇼크, 패혈성 쇼크, 코비드-19로 인한 쇼크, 화상으로 인한 쇼크 및 외상성 쇼크를 포함하는 군으로부터 선택된 쇼크를 갖는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

10. 실시양태 9에 있어서, 상기 환자가 패혈성 쇼크를 갖는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

11. 실시양태 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 환자에서 취한 체액 샘플이 >70 pg/mL의 바이오ADM 수준을 나타내고, 상기 체액이 전혈, 혈장 또는 혈청을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

12. 실시양태 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 환자에서 취한 체액 샘플이 <50 ng/mL의 DPP3 수준을 나타내고, 상기 체액이 전혈, 혈장 또는 혈청을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

13. 실시양태 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드가 단일특이적인 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

14. 실시양태 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 비아코어 2000 시스템을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 적어도 10^-7 M의 ADM에 대한 결합 친화도를 나타내는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

15. 실시양태 14에 있어서, 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 비아코어 2000 시스템을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 ADM에 대한 결합 친화도를 나타내고, 1 x 10^-9 내지 3 x 10^-9의 ADM에 대한 결합 친화도를 나타내는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

16. 실시양태 13 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 IgG1 항체인, 환자에서 쇼크의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

17. 실시양태 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 ADM-결합-단백질-1 (보체 인자 H)이 아닌 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

18. 이전의 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 ADM의 N-말단 단부 (aa 1)를 인식하고, 그에 결합하는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

19. 이전의 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 혈청, 혈액, 혈장에서 ADM의 반감기 (t1/2 절반 체류 시간)를 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 바람직하게는 > 50%, 가장 바람직하게는 > 100% 증강시키는 ADM 안정화 항체 또는 단편 또는 스캐폴드인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

20. 이전의 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 인간 재조합 ADM 수용체를 발현하는 CHO-K1 세포에서 기준 길항제로서 hADM 22-52를 사용하여 ADM의 생물활성을 80% 이하, 바람직하게는 50% 이하 차단하는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

21. 이전의 항목 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 화학요법, 혈관수축제, 생물제제, 항생제에 의한 치료, 또는 항바이러스 화합물에 의한 치료를 겪는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

22. 이전의 항목 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편이고, 중쇄가 하기 서열을 포함하고:

경쇄가 하기 서열을 포함하는 것인:

치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

23. 실시양태 22에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열을 포함하고:

VL 영역으로서 하기 서열을 포함하는 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 것인:

치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편.

24. 실시양태 22 또는 23에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 중쇄로서 하기 서열:

또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하고,

경쇄로서 하기 서열:

또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하는 것인, 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편.

25. 실시양태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 ADM의 N-말단 부분 (아미노산 1-10): YRQSMNNFQG (서열식별번호 25)에 결합하는 것인, 환자에서 쇼크의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.

26. 실시양태 1 내지 25 중 어느 하나에 따른 질병의 증상의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 또는 치료에 사용하기 위한 제약 제형.

도면의 설명

도 1은 처리가 쇼크가 진단된 후 0 내지 10 시간 사이에 (도 1A) 및 쇼크 후 10 내지 12,2 시간 사이에 (도 1B) 투여되었을 때, 위약과 비교하여 아드레시주맙 처리하에 환자에서 시간에 걸친 사망률을 도시한다. HR [95% CI] 및 로그-순위 p-값은 다음과 같았다: 쇼크 진단 후 0-10 시간째 그룹: HR=0.439 [0.174-1.11], 로그 순위 p=0.072; 쇼크 진단 후 10-12.2 시간째 그룹: HR=0.711 [0.326-1.55], 로그 순위 p=0.387.

도 2는 쇼크 진단 후 10 시간 초과시에 투여된 처리 (도 2B)와 비교하여 아드레시주맙 처리가 쇼크 진단 후 10 시간 내에 투여될 때 (도 2A)의 SOFA 점수의 변화를 도시한다. SOFA 점수는 투여 직전과 다음 날에 결정되었다. 각각의 시점에 대한 SOFA 점수와 투여 전/위약 SOFA 점수 사이의 차이는 각각의 환자에 대해 계산되었고, 생성된 값으로부터의 평균을 그래프에 나타낸다. 분석에서 모든 SOFA 성분에 대해 기록된 값을 갖는 환자만이 포함되었다. "SOFA+" 점수는 누락된 데이터를 다음과 같이 처리함으로써 정의되었다: 퇴원한 환자의 경우, SOFA는 각각의 시점에서 0으로 설정되고, 사망한 환자의 경우, SOFA는 24로 설정되었다.

도 3은 처리가 ICU 입원 후 0 내지 0.344 일 사이에 (8.3 시간) (도 3A) 및 ICU 입원 후 0.344 일 내지 29 일 사이에 (도 3B) 투여되었을 때, 위약과 비교하여 아드레시주맙 처리하에 환자에서 시간에 걸쳐 28 일 사망률을 도시한다. HR [95% CI] 및 로그-순위 p-값은 다음과 같았다: 처리시까지 0-0.34 일 ICU 입원 그룹/28 일 사망률: HR=0.263 [0.077-0.898], 로그 순위 p=0.022; 처리시까지 0.34-29 일 ICU 입원 그룹/28 일 사망률: HR=0.734 [0.358-1.5], 로그 순위 p=0.399.

도 4는 처리가 ICU 입원 후 0 내지 0.344 일 사이에 (8.3 시간) (도 4A) 및 ICU 입원 후 0.344 일 내지 29 일 사이에 (도 4B) 투여되었을 때, 위약과 비교하여 아드레시주맙 처리하에 환자에서 시간에 걸쳐 90 일 사망률을 도시한다. 처리시까지 0-0.34 일 ICU 입원 그룹/90 일 사망률: HR=0.364 [0.137-0.97], 로그 순위 p=0.035; 처리시까지 0.34-29 일 ICU 입원 그룹/90 일 사망률: HR=0.826 [0.469-1.45], 로그 순위 p=0.51.

도 5는 ICU 입원 후 0.344 일 초과시에 투여된 처리 (도 5B)와 비교하여 아드레시주맙 처리가 ICU 입원 후 0.344 일 내에 투여되었을 때 (도 5A) SOFA 점수의 변화를 도시한다. SOFA 점수는 투여 직전과 다음 날에 결정되었다. 각각의 시점에 대한 SOFA 점수와 투여 전/위약 SOFA 점수 사이의 차이는 각각의 환자에 대해 계산되었고, 생성된 값으로부터의 평균을 그래프에 나타낸다. 분석에서 모든 SOFA 성분에 대해 기록된 값을 갖는 환자만이 포함되었다. "SOFA+" 점수는 누락된 데이터를 다음과 같이 처리함으로써 정의되었다: 퇴원한 환자의 경우, SOFA는 각각의 시점에서 0으로 설정되고, 사망한 환자의 경우, SOFA는 24로 설정되었다.

도 6은 ICU 입원 후 0.344 일 초과시에 투여된 처리 (도 6B)와 비교하여 아드레시주맙 처리가 ICU 입원 후 0.344 일째에 투여되었을 때 (도 6A), 치료 시작 후 7 일째의 평균 유체 균형을 도시한다. 유체 균형 (유체 투입량에서 유체 배출량을 차감함)은 ICU에서 각각 24 시간 동안 기록되었다. 아드레시주맙/위약 주입 후 7 일째까지 평균 유체 균형은 환자마다 계산되었다. 예를 들어 ICU 퇴원 또는 사망으로 인해 유체 균형이 누락된 날은 고려되지 않았다. 중간값 + IQR은 막대 플롯으로 도시된다.

도 7은 쇼크 진단 후 10 시간 초과시에 투여된 처리 (도 7B)와 비교하여 아드레시주맙 처리가 쇼크 진단 후 10 시간 내에 투여되었을 때 (도 7A), 처리 시작 후 7 일째의 평균 유체 균형을 도시한다. 아드레시주맙/위약 주입 후 7 일째까지 평균 유체 균형은 환자마다 계산되었다. 예를 들어 ICU 퇴원 또는 사망으로 인해 유체 균형이 누락된 날은 고려되지 않았다. 중간값 + IQR은 막대 플롯으로 도시된다.

도 8은 ICU 입원한 날과 다음 날에 패혈성 쇼크 환자로부터의 DPP3 농도를 도시한다.

도 9는 패혈성 쇼크 환자로부터의 DPP3 농도의 개별 궤적을 도시한다. x-축은 ICU 입원 후 날짜를 나타낸다 (1 일째는 입원한 날임).

실시예

항체의 생성 및 그들의 친화도 상수의 결정

몇몇 인간 및 뮤린 항체를 생성하였고, 그들의 친화도 상수를 결정하였다 (표 1 참고).

면역화를 위한 펩티드 / 접합체:

소 혈청 알부민 (BSA)에 대한 펩티드의 접합을 위해 추가의 N-말단 시스테인 (선택된 ADM-서열 내에 시스테인이 존재하지 않는 경우) 잔기를 사용하여 면역화를 위한 펩티드를 합성하였다 (표 1 참고, 제이피티 테크놀로지즈(JPT Technologies), 독일 베를린). 술포인크-커플링 겔 (퍼바이오-사이언스(Perbio-Science), 독일 본)을 사용하여 펩티드를 BSA에 공유 연결시켰다. 커플링 절차는 퍼바이오의 매뉴얼에 따라 수행하였다.

뮤린 항체를 하기 방법에 따라 생성하였다:

Balb/c 마우스를 0 및 14 일째에 100μg 펩티드-BSA-접합체로 (100μl 완전 프로인트(Freund) 아주반트에 유화됨) 및 21 및 28 일째에 50μg으로 (100μl 불완전 프로인트 아주반트에 유화됨) 면역화시켰다. 융합 실험을 수행하기 3 일 전에, 동물에게 100μl 식염수에 용해된 50μg의 접합체를 1 회 복강내 및 1 회 정맥내 주사로서 제공하였다.

면역화된 마우스로부터의 비장세포 및 흑색종 세포주 SP2/0으로부터의 세포와 1ml 50% 폴리에틸렌 글리콜을 37℃에서 30 초 동안 융합시켰다. 세척 후에, 세포를 96-웰 세포 배양 플레이트에 시딩하였다. HAT 배지 (20% 태아 소 혈청 및 HAT-보충제로 보충된 RPMI 1640 배양 배지)에서 성장시킴으로써 혼성체 클론을 선택하였다. 2 주 후에, HAT 배지를 3 회 계대 동안에 HT 배지로 교체한 후, 정상 세포 배양 배지로 되돌렸다.

융합 3 주 후에 세포 배양물 상청액을 항원 특이적인 IgG 항체에 대해 일차 스크리닝하였다. 양성으로 시험된 미세배양물을 증식을 위해 24-웰 플레이트로 옮겼다. 재시험한 후, 선택된 배양물을 제한-희석 기술을 이용하여 클로닝 및 재클로닝하였고, 이소타입을 결정하였다 ([ Lane, R.D. 1985. J. Immunol. Meth. 81: 223-228; Ziegler et al. 1996. Horm. Metab. Res. 28: 11-15 ] 또한 참고).

마우스 모노클로날 항체 생성:

항체는 표준 항체 생성 방법을 통해 생성하고 ( Marx et al., 1997. Monoclonal Antibody Production, ATLA 25, 121 ), 단백질 A를 통해 정제하였다. 항체 순도는 SDS 겔 전기영동 분석을 기반으로 하여 > 95%였다.

인간 항체:

인간 항체는 하기 절차에 따라 파지 디스플레이에 의해 생성되었다: 인간 나이브 항체 유전자 라이브러리 HAL7/8은 ADM 펩티드에 대한 재조합 단일 쇄 F-가변 도메인 (scFv)의 단리를 위해 사용되었다. 2 가지 상이한 스페이서를 통해 ADM 펩티드 서열에 연결된 비오틴 태그를 함유하는 펩티드의 사용을 포함하는 패닝 전략에 의해 항체 유전자 라이브러리를 스크리닝하였다. 비특이적으로 결합된 항원 및 스트렙타비딘 결합된 항원을 사용하는 패닝 라운드의 혼합을 이용하여, 비특이적인 결합제의 백그라운드를 최소화하였다. 패닝의 제3 라운드로부터 용리된 파지를 모노클로날 scFv 발현 이. 콜라이 균주의 생성을 위해 사용하였다. 이들 클론 균주의 배양으로부터의 상청액을 항원 ELISA 시험을 위해 직접적으로 사용하였다 ([ Hust et al. 2011. Journal of Biotechnology 152, 159-170; Schutte et al. 2009. PLoS One 4, e6625 ] 또한 참고).

양성 클론은 항원에 대한 양성 ELISA 신호 및 스트렙타비딘 코팅된 미세 역가 플레이트에 대한 음성을 기반으로 하여 선택되었다. scFv를 추가로 특징분석하기 위해 오픈 리딩 프레임을 발현 플라스미드 pOPE107로 클로닝하고 ( Hust et al. 2011. Journal of Biotechnology 152, 159-170 ), 고정된 금속 이온 친화도 크로마토그래피를 통해 배양물 상청액으로부터 포획하고, 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하였다.

친화도 상수:

ADM에 대한 항체의 친화도를 결정하기 위해, 고정된 항체에 대한 ADM의 결합의 동역학은 비아코어 2000 시스템 (지이 헬쓰케어 유럽 게엠베하, 독일 프라이부르크)을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되었다. 항체의 가역적인 고정은 제조자의 지침 (마우스 항체 포획 키트; 지이 헬쓰케어)에 따라 CM5 센서 표면에 고밀도로 공유적으로 커플링된 항-마우스 Fc 항체를 사용하여 수행되었다 ( Lorenz et al. 2011. Antimicrob Agents Chemother. 55(1): 165-173 ).

모노클로날 항체는 각각 인간 및 뮤린 ADM의 하기 나타낸 ADM 영역에 대해 생성되었다. 하기 표는 추가의 실험에서 사용되는 수득된 항체의 선택을 나타낸다. 선택은 표적 영역을 기반으로 하였다:

표 1:

효소적 소화에 의한 항체 단편의 생성:

Fab 및 F(ab)2 단편의 생성은 뮤린 전장 항체 NT-M의 효소적 소화에 의해 수행되었다. 항체 NT-M은 a) 펩신-기반 F(ab)2 제조 키트 (피어스 44988) 및 b) 파파인-기반 Fab 제조 키트 (피어스 44985)를 사용하여 소화되었다. 단편화 절차는 공급자에 의해 제공된 지침에 따라 수행되었다. 소화는 F(ab)2-단편화의 경우 37℃에서 8 시간 동안 수행되었다. Fab-단편화 소화는 각각 16 시간 동안 수행되었다.

Fab 생성 및 정제를 위한 절차:

0.5 ml의 소화 완충제로 수지를 세척하고, 컬럼을 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리함으로써 고정된 파파인을 평형화시켰다. 완충제를 나중에 폐기하였다. 탈염 컬럼은 보관 용액을 제거하고, 그를 소화 완충제로 세척한 후, 그를 매회 1000 x g에서 2 분 동안 원심분리함으로써 제조되었다. 0.5ml의 제조된 IgG 샘플을 평형화된 고정된 파파인을 함유하는 스핀 컬럼 튜브에 첨가하였다. 소화 반응의 인큐베이션 시간은 탁상용 로커 상에서 37℃에서 16 시간 동안 수행되었다. 컬럼을 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리하여, 고정된 파파인으로부터 소화물을 분리하였다. 그 후, 수지를 0.5ml PBS로 세척하고, 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리하였다. 세척 분획을 총 샘플 부피 1.0ml의 소화된 항체에 첨가하였다. NAb 단백질 A 컬럼을 PBS 및 IgG 용리 완충제로 실온에서 평형화시켰다. 컬럼을 1 분 동안 원심분리하여 보관 용액 (0.02% 아지드화나트륨을 함유함)을 제거하고, 2ml의 PBS를 첨가하여 평형화시키고, 1 분 동안 다시 원심분리하고, 통과액 폐기하였다. 샘플을 컬럼에 적용하고, 뒤집어서 재현탁시켰다. 인큐베이션을 실온에서 10 분 동안 회전(end-over-end) 혼합에 의해 수행하였다. 컬럼을 1 분 동안 원심분리하고, Fab 단편을 갖는 통과액을 저장하였다. (참고문헌: Coulter and Harris 1983. J. Immunol. Meth. 59, 199-203.; Lindner et al. 2010. Cancer Res. 70, 277-87; Kaufmann et al. 2010. PNAS. 107, 18950-5.; Chen et al. 2010. PNAS. 107, 14727-32; Uysal et al. 2009 J. Exp. Med. 206, 449-62; Thomas et al. 2009. J. Exp. Med. 206, 1913-27; Kong et al. 2009 J. Cell Biol. 185, 1275-840 ).

F(ab') ₂ 단편의 생성 및 정제를 위한 절차:

수지를 0.5 ml의 소화 완충제로 세척하고, 컬럼을 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리함으로써 고정된 펩신을 평형화시켰다. 완충제를 나중에 폐기하였다. 탈염 컬럼은 보관 용액을 제거하고, 그를 소화 완충제로 세척한 후, 그를 매회 1000 x g에서 2 분 동안 원심분리함으로써 제조되었다. 0.5ml의 제조된 IgG 샘플을 평형화된 고정된 파파인을 함유하는 스핀 컬럼 튜브에 첨가하였다. 소화 반응의 인큐베이션 시간은 탁상용 로커 상에서 37℃에서 16 시간 동안 수행되었다. 컬럼을 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리하여, 고정된 파파인으로부터 소화물을 분리하였다. 그 후, 수지를 0.5ml PBS로 세척하고, 5000 x g에서 1 분 동안 원심분리하였다. 세척 분획을 총 샘플 부피 1.0ml의 소화된 항체에 첨가하였다. NAb 단백질 A 컬럼을 PBS 및 IgG 용리 완충제로 실온에서 평형화시켰다. 컬럼을 1 분 동안 원심분리하여 보관 용액 (0.02% 아지드화나트륨)을 제거하고, 2ml의 PBS를 첨가하여 평형화시키고, 1 분 동안 다시 원심분리하고, 통과액 폐기하였다. 샘플을 컬럼에 적용하고, 뒤집어서 재현탁시켰다. 인큐베이션을 실온에서 10 분 동안 회전 혼합에 의해 수행하였다. 컬럼을 1 분 동안 원심분리하고, Fab 단편을 갖는 통과액을 저장하였다. (참고문헌: Mariani et al. 1991. Mol. Immunol. 28: 69-77; Beale 1987. Exp Comp Immunol 11:287-96; Ellerson et al. 1972. FEBS Letters 24(3):318-22; Kerbel and Elliot 1983. Meth Enzymol 93:113-147; Kulkarni et al. 1985. Cancer Immunol Immunotherapy 19:211-4; Lamoyi 1986. Meth Enzymol 121:652-663; Parham et al. 1982. J Immunol Meth 53:133-73; Raychaudhuri et al. 1985. Mol Immunol 22(9):1009-19; Rousseaux et al. 1980. Mol Immunol 17:469-82; Rousseaux et al. 1983. J Immunol Meth 64:141-6; Wilson et al. 1991. J Immunol Meth 138:111-9 ).

NT-H-항체 단편 인간화:

항체 단편은 CDR-그래프팅 방법에 의해 인간화되었다 ( Jones et al. 1986. Nature 321, 522-525 ).

하기 단계를 수행하여 인간화 서열을 달성하였다:

- 총 RNA 추출: 퀴아젠(Qiagen) 키트를 사용하여 NT-H 하이브리도마로부터 총 RNA를 추출하였다.

- 제1 라운드 RT-PCR: 퀴아젠® 원스텝(OneStep) RT-PCR 키트 (카탈로그 번호 210210)를 사용하였다. RT-PCR은 중쇄 및 경쇄에 대해 특이적인 프라이머 세트에 의해 수행되었다. 각각의 RNA 샘플에 대해, 가변 영역의 리더 서열을 덮는 축퇴 정방향 프라이머 혼합물을 사용하여 12 개의 개별 중쇄 및 11 개의 경쇄 RT-PCR 반응을 설정하였다. 역 프라이머는 중쇄 및 경쇄의 불변 영역에 위치한다. 제한 부위는 프라이머로 조작되지 않았다.

- 반응 설정: 5x 퀴아젠® 원스텝 RT-PCR 완충제 5.0 μl, dNTP 혼합물 (10 mM의 각각의 dNTP 함유) 0.8 μl, 프라이머 세트 0.5 μl, 퀴아젠® 원스텝 RT-PCR 효소 혼합물 0.8 μl, 주형 RNA 2.0 μl, RNase-무함유 물 20.0 μl까지, 총 부피 20.0 μl PCR 조건: 역전사: 50℃, 30 min; 초기 PCR 활성화: 95℃, 15 min 사이클링: 94℃, 25 sec; 54℃, 30 sec; 72℃, 30 sec의 20 사이클; 최종 연장: 72℃, 10 min 제2 라운드 세미-네스티드 PCR: 제1 라운드 반응으로부터의 RT-PCR 생성물을 제2 라운드 PCR에서 추가로 증폭시켰다. 항체 가변 영역에 대해 특이적인 세미-네스티드 프라이머 세트를 사용하여 12 개의 개별 중쇄 및 11 개의 경쇄 RT-PCR 반응을 설정하였다.

- 반응 설정: 2x PCR 혼합물 10 μl; 프라이머 세트 2 μl; 제1 라운드 PCR 생성물 8 μl; 총 부피 20 μl; 하이브리도마 항체 클로닝 보고서 PCR 조건: 95℃에서 5 min의 초기 변성; 25 sec 동안 95℃, 30 sec 동안 57℃, 30 sec 동안 68℃의 25 사이클; 최종 연장은 10 min 68℃이었다.

- PCR이 완료된 후, PCR 반응 샘플을 아가로스 겔 상에서 실행하여, 증폭된 DNA 단편을 시각화하였다. 시퀀싱한 후, 15 개 초과의 클로닝된 DNA 단편을 네스티드 RT-PCR에 의해 증폭시키고, 몇몇 마우스 항체 중쇄 및 경쇄를 클로닝하였고, 정확한 것으로 나타났다. 단백질 서열 정렬 및 CDR 분석은 1 개의 중쇄 및 1 개의 경쇄를 확인하였다. 가변 중쇄에서 위치 26, 40 및 55의 아미노산 및 가변 경쇄에서 위치 40의 아미노산이 결합 성질에 중요하기 때문에, 이들은 원래의 뮤린으로 되돌릴 수 있다. 생성된 후보는 하기와 같다. ( Padlan 1991. Mol. Immunol. 28, 489-498; Harris and Bajorath.1995. Protein Sci. 4, 306-310 ).

항체 단편 서열 (서열식별번호: 10 내지 17)에 대한 주석: 굵게 및 밑줄은 N-말단에서 C-말단까지 숫자 순서로 CDR 1, 2, 3이고; 이탤릭체는 불변 영역이며; 힌지 영역은 굵은 밑줄 친 문자로 강조하고; C-말단의 히스티딘 태그는 굵은 이탤릭체로 나타낸다.

실시예 2

방법

설계

AdrenOSS-2 실험은 초기 패혈성 쇼크 및 상승된 바이오-ADM 수준을 갖는 환자에서 아드레시주맙의 안전성, 내약성, 효능 및 약동학을 조사하기 위한 이중 맹검, 위약-대조군, 무작위화, 다기관, 개념 증명, 바이오마커-유도된 및 용량-확인 II 상 실험이었다. 상기 실험은 벨기에, 프랑스, 독일 및 네덜란드에서 의학적, 수술적 및/또는 혼합된 ICU를 갖는 30 개의 병원에서 수행되었다. 실험 설정에 대한 추가의 상세한 내용은 [Geven et al. (Geven C, Blet A, Kox M, Hartmann O, Scigalla P, Zimmermann J, Marx G, Laterre PF, Mebazaa A, Pickkers P, (2019) A double-blind, placebo-controlled, randomised, multicentre, proof-of-concept and dose-finding phase II clinical trial to investigate the safety, tolerability and efficacy of adrecizumab in patients with septic shock and elevated adrenomedullin concentration (AdrenOSS-2). BMJ Open 0: e024475)]에 의해 이미 이전에 보고되었다.

윤리적 고려사항

각각의 독립적인 윤리 위원회 (IEC)에 의해 승인된 실험 절차 및 사전 동의서 (ICF) 과정은 국제 표준 및 각각의 참여 국가의 국가 요구사항을 따랐다.

참가자

포함 및 제외 기준을 충족하는 초기 패혈성 쇼크 (<12h) 및 상승된 바이오-ADM 값 (>70 pg/mL)으로 진단된 남성 및 여성 환자 (>18 세)는 ICU 입원시 및 혈관수축제 요법의 시작시에 스크리닝되었다. 포함 및 제외 기준의 목록은 [Geven et al. (Geven C, Blet A, Kox M, Hartmann O, Scigalla P, Zimmermann J, Marx G, Laterre PF, Mebazaa A, Pickkers P, (2019) A double-blind, placebo-controlled, randomised, multicentre, proof-of-concept and dose-finding phase II clinical trial to investigate the safety, tolerability and efficacy of adrecizumab in patients with septic shock and elevated adrenomedullin concentration (AdrenOSS-2). BMJ Open 0: e024475)]에 의해 이전에 공개되었다.

서면 ICF가 환자 또는 그의/그녀의 법적 대리인에 의해 제공된 후 (IEC 공인 현지 절차에 따라), 혈장 바이오-ADM 농도가 >70 pg/mL (스핑고테스트® 바이오-ADM, 스핑고텍 게엠베하(sphingotec GmbH), 독일 헨니그스도르프)일 때, 임상 조정 센터 (CCC)는 환자 적격성을 확인하였다. 모든 실험 관련 데이터는 가명 방식으로 수득되었다.

중재

환자를 처리 아암 A (아드레시주맙 2 mg/kg), 처리 아암 B (아드레시주맙 4 mg/kg) 또는 위약으로 1:1:2 비로 무작위로 배정하였다. 환자는 혈관수축제 요법의 시작 후 12 시간 내에 단일 정맥내 주입 (지속기간: 대략 1 시간)으로 배정된 실험 약물을 제공받았다. 적용 방식의 상세한 설명은 Geven 등에 의해 이미 공개되었다 [2].

결과 측정

무엇보다도, 7, 28 및 90 일 사망률, 뿐만 아니라 포함시 SOFA 점수에 대한 SOFA 점수의 일일 변화가 기록되었다 (SOFA = 순차적인 장기 부전 평가). 또 다른 종점은 아드레시주맙/위약 주입 후 7 일까지 평균 유체 균형이었다.

결과 측정에 대한 쇼크 진단에서부터 처리까지의 시간 및 ICU 입원에서부터 처리까지의 시간의 영향 각각이 특히 관심의 대상이었다.

통계 및 데이터 분석

본 실시예의 분석은 조합된 아드레시주맙 용량과 위약의 비교를 포함하였다. 프로토콜별 (PP) 분석은 프로토콜에 따른 실험 의약을 제공받은 모든 환자를 포함하였고, 사소한 편차만이 있었고, 모든 주요 진입 기준을 충족하였다. 순환 디펩티딜-펩티다제 3 (DPP3) 농도가 50 ng/mL 초과인 환자를 제외시킴으로써 환자 집단은 추가로 강화되었다.

연속 데이터는 환자 수, 산술 평균, 표준 편차 (SD) 또는 사분위수 범위의 중간값에 의해 적절한 경우 분석되었고, 처리 아암 및 위약 사이의 탐색 비교는 크루스칼-월리스(Kruskal-Wallis) 시험을 이용하여 수행되었다. 카테고리 변수는 카테고리별로 요약되어 숫자 및 백분율을 제공하고, 분할표에 대해 Chi² 시험을 이용하여 비교된다. 두 처리 아암 (2 mg/kg 및 4 mg/kg) 모두 효능 분석을 위해 조합되었다. 로그-순위 시험은 처리 그룹 사이의 사망률에서의 차이를 나타내기 위해 선택되었고, 카플란-마이어 플롯은 설명을 위해 사용되었다. 조정되지 않은 및 조정된 유해 비 (HR)는 콕스(Cox) 비례 유해 모델을 통해 추정되었다. 사망 또는 ICU 퇴원으로 인한 SOFA 점수 누락이 전가되었다 (이들은 각각 24 또는 0으로 설정됨, 예를 들어 [de Grooth et al. (de Grooth HJ, Geenen IL, Girbes AR, Vincent JL, Parienti JJ, Oudemans-van Straaten HM, (2017) SOFA and mortality endpoints in randomized controlled trials: a systematic review and meta-regression analysis. Critical care 21: 38)]에 의해 제안됨). 기록된 모든 p-값은 2-측이었다. 0.05 미만의 P-값은 유의한 것으로 고려되었다. 통계적 분석은 SAS 버전 9.3, 및 R 버전 3.4.3를 이용하여 수행되었다 (http://www.r-project.org).

환자 및 연구 처리

첫번째 환자는 2017년 12월 8일에 무작위화되었다. 마지막 환자는 2019년 9월 25일에 등록되었다. 총 459 명의 환자가 스크리닝되었다. 이들 중에서 158 명은 부적격이었고, 따라서 무작위화되지 않았다 (바이오-ADM <70 pg/mL의 경우 n=91; 포함/제외 기준을 충족하지 않는 경우 n=67). 총 301 명의 환자가 4 개국에서 위약 (n=152), 2 mg/kg (n=72) 또는 4 mg/kg의 아드레시주맙 (n=77)으로 무작위화되었고, 이는 치료 의도 (ITT) 집단을 정의하였다. 프로토콜별 분석 (PP)을 위해 n=7 환자를 제외시켰다. 최종적으로, >50 ng/mL의 DPP3의 투여 전 수준을 갖는 n=50 환자가 제외되었고, 이로써 n=244의 총 환자 집단이 분석되었다. DPP3의 상승된 혈장 농도는 유해한 경로를 촉발시키며, 이는 ADM 경로와는 메카니즘적으로 상이하며, 따라서 아드레시주맙에 의해 해결될 수 없다.

결과

대부분의 약물로부터 이익을 얻는 환자 집단을 좁히는 1 가지 중요한 측면은 환자의 특정한 임상적 상태와 관련된 치료 범위를 정의하는 것이다. 이는 급성으로 변하고 생명을 위협하는 상태, 예컨대 패혈증, 패혈성 쇼크 또는 다른 급성 순환 장애에서 특히 중요하다. 본 발명자들은 패혈성 쇼크에서 질환 진행의 함수로서 아드레시주맙의 효능을 연구하였다. 작동상, 질환 진행은 장기 지지의 필요성, 패혈성 쇼크 발병 이후의 시간, ICU 입원 이후의 시간에서의 변화로 해석된다.

상기 기재된 문제의 평가를 위해, 본 발명자들은 AdrenOSS-2 임상 실험의 하위 집단을 연구하였다.

쇼크 진단과 아드레시주맙에 의한 처리 시작 사이의 시간 길이의 영향을 조사하기 위해, 집단을 쇼크 진단과 처리 시작 사이의 시간의 길이의 중간값, 즉, 8.4 시간에서 두 그룹으로 분할하였고, 두 그룹을 비교하였다. 쇼크가 진단된 후 0 내지 10 시간째에 처리가 투여되었을 때, 28 일 사망률은 위약에 비해 아드레시주맙 처리에서 더 낮았다 (HR 0.439 (0.174-1.11)) (도 1A). 쇼크 진단과 처리 사이의 시간이 10 내지 12.2 시간 사이일 때, 위약과 비교한 아드레시주맙 처리 사이의 사망률에서의 차이는 덜 현저하였다 (HR 0.711 (0.326-1.55)) (도 1B).

도 2는 쇼크 진단 후 8.4 시간 초과시 처리 (도 2B)와 비교하여 아드레시주맙 처리가 쇼크 진단 후 8.4 시간 내에 투여되었을 때 (도 2A) SOFA 점수에서의 변화를 도시하며, 이는 놀랍게도 본 발명의 항체의 유익한 효과를 뒷받침한다.

환자의 ICU 입원과 아드레시주맙에 의한 처리 시작 사이의 시간의 길이의 영향을 조사하기 위해, 집단을 환자의 ICU 입원과 처리 시작 사이의 시간 길이의 중간값, 즉, 0.344 일 (8.3 시간)에서 두 그룹으로 분할하였고, 두 그룹을 비교하였다. 처리가 ICU 입원 후 0 내지 0.344 일 (8.3 시간) 사이에 투여되었을 때, 28 일 사망률은 위약과 비교하여 아드레시주맙 처리에서 유의하게 더 낮았다 (HR 0.263 (0.077-0.898), 로그 순위 p-값 0.022) (도 3A). ICU 입원과 처리 사이의 시간이 0.344 일 내지 29 일 사이일 때, 위약과 비교하여 아드레시주맙 처리 사이의 사망률에서의 차이는 덜 현저하였다 (HR 0.734 (0.358-1.50)) (도 3B). ICU 입원 후 0.344 일 (8.3 시간) 이내에 처리를 제공받은 환자 그룹에서 과비례적으로 유익한 처리 효과는 90 일의 전체 관찰 기간에 걸쳐 적용되었다: 90 일 사망률은 ICU 입원 후 0 내지 0.344 일 (8.3 시간) 사이에 처리가 투여되었을 때 위약과 비교하여 아드레시주맙 처리에서 유의하게 더 낮았다 (HR 0.364 (0.137-0.970), 로그 순위 p-값 0.035) (도 4A). ICU 입원과 처리 사이의 시간이 0.344 일 내지 29 일 사이일 때, 위약과 비교하여 아드레시주맙 처리 사이의 사망률에서의 차이는 덜 현저하였다 (HR 0.826 (0.469-1.45)) (도 4B).

도 5는 ICU 입원 후 0.344 일 초과시의 처리 (도 5B)와 비교하여 아드레시주맙 처리가 ICU 입원 후 0.344 일 내에 투여되었을 때 (도 5A) SOFA 점수의 변화를 도시한다. 아드레시주맙 처리가 ICU 입원 후 0.344 일 내에 투여되었을 때, SOFA 점수가 신속하게 지속적으로 감소하였으며, 이는 놀랍게도 본 발명의 항체의 유익한 효과를 뒷받침한다.

도 6은 ICU 입원 후 0.344 일 초과시에 투여된 처리 (도 6B)와 비교하여 아드레시주맙 처리가 ICU 입원 후 0.344 일 내에 투여되었을 때 (도 6A), 치료 시작 후 7 일째의 평균 유체 균형을 도시한다. 유체 균형 (유체 투입량에서 유체 배출량을 차감함)은 ICU에서 각각 24 시간 동안 기록되었다. 아드레시주맙/위약 주입 후 7 일째까지 평균 유체 균형은 환자마다 계산되었다. 예를 들어 ICU 퇴원 또는 사망으로 인해 유체 균형이 누락된 날은 고려되지 않았다. 아드레시주맙 처리가 ICU 입원 후 0.344 일 내에 투여되었을 때, 유체 균형이 유의하게 70.2%만큼 감소하였지만, 처리가 ICU 입원 후 나중에 투여되었을 때는 감소하지 않았으며, 이는 놀랍게도 본 발명의 항체의 유익한 효과를 뒷받침한다.

도 7은 쇼크 진단 후 8.4 시간 초과시에 투여된 처리 (도 7B)와 비교하여 아드레시주맙 처리가 쇼크 진단 후 8.4 시간 내에 투여되었을 때 (도 7A), 처리 시작 후 7 일째의 평균 유체 균형을 도시한다. 유체 균형 (유체 투입량에서 유체 배출량을 차감함)은 ICU에서 각각 24 시간 동안 기록되었다. 아드레시주맙/위약 주입 후 7 일째까지 평균 유체 균형은 환자마다 계산되었다. 예를 들어 ICU 퇴원 또는 사망으로 인해 유체 균형이 누락된 날은 고려되지 않았다. 아드레시주맙 처리가 쇼크 진단 후 10 시간 내에 투여되었을 때, 유체 균형이 58.2%만큼 감소하였지만, 처리가 쇼크 진단 후 나중에 투여되었을 때에는 훨씬 덜 하였고 (30.4%), 이는 놀랍게도 본 발명의 항체의 유익한 효과를 뒷받침한다.

더 높은 APACHE II 점수 및 다른 중증도-연관된 변수에 의해 나타나는 바와 같이, 쇼크 진단 또는 ICU 입원 후 초기에 아드레시주맙 또는 위약 주입을 제공받은 환자는 나중에 처리된 환자에 비해 아드레시주맙 또는 위약 주입 시작 시점에서 더 중증의 임상적 상태를 나타내었다. 이는 표준 치료 조치로서 일반적으로 환자의 임상적 상태를 비록 지속적이지는 않지만 단기적으로 개선을 유도할 것으로 예상되었다.

아드레시주맙을 제공받은 환자와 위약을 제공받은 환자의 비교는 그들의 기준선 특징과 관련하여 관련 차이를 나타내지 않았으며, 따라서 아드레시주맙의 관찰된 유익한 처리 효과는 다른 인자에 의해 혼동되지 않는다.

아드레시주맙의 유익한 처리 효과는 처리가 시작된 초기에 더욱 현저하였다. 예시적인 분석에서, 집단은 ICU 입원에서부터 처리 시작시까지의 시간에 따라 환자의 순위를 매긴 후 3 개의 그룹으로 분할하였다. 28 일 사망률을 이 집단의 첫번째, 두번째, 및 세번째와 네번째 사분위수의 조합에 대해 분석하였다. 사분위수 1은 ICU 입원 후 0-0.24 일의 기간을 포함하였고, 사분위수 2는 ICU 입원 후 0.25-0.34 일의 기간을 포함하였고, 사분위수 3/4는 ICU 입원 후 >0.35 일의 기간을 포함하였다. 사망률은 사분위수 1에서 가장 현저하게 감소하였으며 (85%), 사분위수 2에서는 명확하게 검출가능하지만 덜 현저하였고 (53%), 사분위수 3/4에서 가장 덜 현저하였지만 여전히 분명하였다 (23%) (표 2).

표 2: ICU 입원에서부터 처리 시작까지의 시간에 따른 아드레시주맙에 의한 사망률 감소. 환자를 ICU 입원에서부터 처리 시작까지의 시간에 의해 순위를 매겼고, 3 개의 그룹 (사분위수 1, 2 및 3+4)으로 분할하였다. 28 일 사망률 데이터가 도시된다.

실시예 3

AdrenOSS-1 실험으로부터, ICU에 입원하였고 바이오-ADM 농도가 70 pg/mL 초과이고 DPP3 농도가 50 ng/mL 미만인 패혈성 쇼크 환자가 선택되었고, 이들을 추가로 분석하였으며 (n=7), 이는 다음 날 70 ng/mL 초과로 DPP3의 증가를 나타내었다. 중간값 농도는 41.0 ng/mL에서 129.7 ng/mL로 증가하였다 (도 8 및 표 3 참고).

표 3: ICU 입원한 날 및 다음 날에 패혈성 쇼크 환자로부터 DPP3 농도

이는 도 9에서 개별 환자 과정으로 추가로 예시된다.

데이터는 ICU 입원시 아드레시주맙으로 처리가능한 패혈성 쇼크 환자에서 DPP3의 병리학적으로 상승된 혈장 수준을 발생시킬 수 있음을 입증한다. 이들은 문헌에 기재된 바와 같이 쇼크 및 사망을 유도할 수 있다 (Blet et al., Crit Care. 2021 Feb 15;25(1):61). 따라서, 이는 치명적인 발달, 예컨대 DPP3의 증가 및 후속적인 쇼크 및 사망을 피하기 위해 나중이 아니라 초기에 아드레시주맙에 의해 패혈성 쇼크 환자의 처리를 시작한다는 개념을 뒷받침한다.

SEQUENCE LISTING <110> AdrenoMed AG <120> Anti-Adrenomedullin (ADM) binder for use in therapy of patients in shock <130> A75433WO <150> 20159913.1 <151> 2020-02-27 <150> 20206317.8 <151> 2020-11-06 <160> 23 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 52 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys 1 5 10 15 Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln 20 25 30 Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser 35 40 45 Pro Gln Gly Tyr 50 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser Pro Gln Gly Tyr 1 5 10 <210> 3 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln Phe Thr Asp Lys 1 5 10 15 Asp Lys Asp Asn Val Ala 20 <210> 4 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys 1 5 10 15 Arg Phe Gly Thr Cys 20 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Gly Tyr 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Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Glu Gly Tyr Glu Tyr Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys His His His His His 210 215 220 His 225 <210> 12 <211> 225 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AM-VH2-E40 <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Glu Gly Tyr Glu Tyr Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys His His His His His 210 215 220 His 225 <210> 13 <211> 225 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AM-VH3-T26-E55 <400> 13 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val 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Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 17 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AM-VL2-E40 <400> 17 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 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<211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human antibody heavy chain with grafted mouse CDR <400> 22 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Glu Gly Tyr Glu Tyr Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 23 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human antibody light chain with grafted mouse CDRs <400> 23 Asp Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 24 <211> 14 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 24 Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe 1 5 10 <210> 25 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly 1 5 10

Claims

쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 가진 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 환자는
ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 10 시간 이하로 앓았고/거나
ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 ICU에 10 시간 이하로 입원하였고/거나
ㆍ 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 전혀 제공받지 않았거나 또는 장기 지지를 10 시간 이하로 제공받았고,
상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 부분 (aa 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 4)에 결합하는 것인, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항에 있어서, 상기 환자가 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.24 일), 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 이하로 앓았던 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 환자가 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 ICU에 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.24 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 이하로 입원하였던 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 장기 지지를 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.24 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 이하로 제공받았던 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드이며, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드는
ㆍ 상기 환자에서 쇼크 발생 후 10 시간 내에 및/또는
ㆍ 상기 환자가 ICU에 입원한 후 10 시간 내에, 및/또는
ㆍ 환자가 장기 지지를 제공받기 전에 또는 장기 지지 10 시간 이하 내에 투여되고,
상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드는 ADM의 N-말단 부분 (aa 1-21): YRQSMNNFQGLRSFGCRFGTC (서열식별번호 4)에 결합하는 것인, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제5항에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 상기 환자에서 쇼크 발생 후 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.25 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 내에 투여되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 상기 환자가 ICU에 입원한 후 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.25 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 내에 투여되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 상기 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드에 의한 처리 시작 시점에서 환자가 장기 지지를 제공받은 후 9, 바람직하게는 8.4, 바람직하게는 8.26 (0.344일), 바람직하게는 8, 바람직하게는 7, 바람직하게는 6, 바람직하게는 5.76 (0.25 일), 바람직하게는 5.75 (0.25 일), 바람직하게는 5, 바람직하게는 4, 바람직하게는 3 시간 내에 투여되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 저혈량증으로 인한 쇼크, 심인성 쇼크, 폐쇄성 쇼크 및 분포성 쇼크, 특히 심인성 쇼크, 패혈성 쇼크, 코비드-19로 인한 쇼크, 화상으로 인한 쇼크 및 외상성 쇼크를 포함하는 군으로부터 선택된 쇼크를 갖는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제9항에 있어서, 상기 환자가 패혈성 쇼크를 갖는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 ADM에 결합하는 항-ADM 항체 단편 또는 아드레노메둘린에 결합하는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자에서 취한 체액 샘플이 >70 pg/mL의 바이오ADM 수준을 나타내고, 상기 체액이 전혈, 혈장 또는 혈청을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자에서 취한 체액 샘플이 <50 ng/mL의 DPP3 수준을 나타내고, 상기 체액이 전혈, 혈장 또는 혈청을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 쇼크, 특히 패혈성 쇼크를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편 또는 비-Ig 스캐폴드가 단일특이적인 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 비아코어 2000 시스템을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 적어도 10^-7 M의 ADM에 대한 결합 친화도를 나타내는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제14항에 있어서, 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 비아코어 2000 시스템을 이용하여 무표지 표면 플라즈몬 공명에 의해 ADM에 대한 결합 친화도를 나타내고, 1 x 10^-9 내지 3 x 10^-9의 ADM에 대한 결합 친화도를 나타내는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항-ADM 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 IgG1 항체인, 환자에서 쇼크의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 ADM-결합-단백질-1 (보체 인자 H)이 아닌 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 ADM의 N-말단 단부 (aa 1)를 인식하고, 그에 결합하는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 혈청, 혈액, 혈장에서 ADM의 반감기 (t1/2 절반 체류 시간)를 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 50%, 더욱 바람직하게는 > 50%, 가장 바람직하게는 > 100% 증강시키는 ADM 안정화 항체 또는 단편 또는 스캐폴드인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편 또는 스캐폴드가 인간 재조합 ADM 수용체를 발현하는 CHO-K1 세포에서 기준 길항제로서 hADM 22-52를 사용하여 ADM의 생물활성을 80% 이하, 바람직하게는 50% 이하 차단하는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 화학요법, 혈관수축제, 생물제제, 항생제에 의한 치료, 또는 항바이러스 화합물에 의한 치료를 겪는 것인, 치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편이고, 중쇄가 하기 서열을 포함하고:

경쇄가 하기 서열을 포함하는 것인:

치료에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-아드레노메둘린 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제22항에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 VH 영역으로서 하기를 포함하는 군으로부터 선택된 서열을 포함하고:

VL 영역으로서 하기 서열을 포함하는 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 것인:

치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편.
제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 중쇄로서 하기 서열:

또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하고,
경쇄로서 하기 서열:

또는 그와 > 95% 동일한 서열을 포함하는 것인, 치료에 사용하기 위한 ADM에 결합하는 인간 모노클로날 항체 또는 단편, 또는 그의 항체 단편.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드가 ADM의 N-말단 부분 (아미노산 1-10): YRQSMNNFQG (서열식별번호 25)에 결합하는 것인, 환자에서 쇼크의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (ADM) 항체 또는 항-ADM 항체 단편 또는 항-ADM 비-Ig 스캐폴드.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 질병의 증상의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 또는 치료에 사용하기 위한 제약 제형.