KR20220143552A

KR20220143552A - 암 치료 방법 및 조성물

Info

Publication number: KR20220143552A
Application number: KR1020217028086A
Authority: KR
Inventors: 자끄 떼즈; 블랑슈 따마리; 필리쁘 풀레띠
Original assignee: 다이어큐레이트
Priority date: 2019-02-06
Filing date: 2020-02-05
Publication date: 2022-10-25
Also published as: CA3128857A1; JP2022519716A; EP3921036A1; IL285036A; CN113710321A; MX2021009195A; WO2020161165A1; EP3693063A1; US20220127377A1

Abstract

본 발명은 암 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명은 더욱 특히 암 치료를 필요로 하는 대상체에서 PLA2GIB 를 억제함으로써 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

암 치료 방법 및 조성물

그룹 IB 췌장 분비 포스포리파제 A2 (PLA2-GIB) 은 저분자량의 (14 kD), 매우 안정한 (7 개의 디술피드 결합), 분비된 단백질이며, 이는 인지질의 sn-2 지방 아실 결합의 가수분해를 촉매하여 유리 지방산 및 리소인지질을 방출한다 (Lambeau & Gelb 2008).

PLA2-GIB 은 HIV 감염된 환자에서 CD4 T 불활성화에 관여하는 것으로 본 발명자에 의해 확인되었다 (WO2015/097140).

이들의 연구를 계속하여, 본 발명자들은 암을 갖는 환자에서 PLA2-GIB 보조인자의 존재를 발견하였다. 본 발명자들은 이러한 보조인자가 PLA2-GIB 과 함께 암 환자에서 면역 세포의 불활성화를 유도함으로써, 종양이 면역 반응을 탈출하게 한다는 것을 밝혀내었다. 본 발명자들은 PLA2-GIB 억제가 효과적인 면역 반응을 회복할 수 있고, 따라서 암 치료에 효율적으로 기여할 수 있다는 것을 추가로 보여주었다.

본 발명의 목적은 PLA2-GIB 를 억제하는 화합물에 대상체를 노출시키는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 추가의 목적은 대상체에서 암을 치료하는데 사용하기 위한 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물에 관한 것이다.

본 발명의 추가의 목적은 대상체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물의 용도에 관한 것이다.

PLA2-GIB 를 억제하는 화합물은 단독으로 또는 추가의 항암제, 수술, 백신, 방사선 요법, 초음파 요법, 또는 PLA2-GIB 의 보조인자의 억제제와 같은 하나 이상의 다른 치료(들) 와 조합하여 사용될 수 있다.

본 발명은 임의의 종양 또는 암, 예컨대 특히 췌장암, 흑색종, 폐, 식도 또는 인두 암, 망막모세포종, 간, 유방, 난소, 신장, 위, 십이지장, 자궁, 자궁경부, 갑상선, 방광, 전립선, 골, 뇌 또는 결장직장 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명은 임의의 포유동물, 특히 인간 대상체에서 사용될 수 있다.

도 1: 대조군 코호트와 비교하여 PDAC 코호트로부터의 혈장 중 PLA2-GIB 농도 (프로-, 활성 및 총) 의 결정.
도 2: 건강한 공여자로부터의 CD4 T 세포의 IL-7 반응에 대한 PDAC 혈장의 시험관 내 효과 (A). PLA2-GIB 억제제의 효과 (B).
도 3: 건강한 공여자로부터의 CD4 T 세포의 IL-2 반응에 대한 PDAC 혈장의 시험관 내 효과 (A). PLA2-GIB 억제제의 효과 (B)

본 발명은 암 및 신생물 치료를 필요로 하는 대상체에서 암 및 신생물을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

정의

본 명세서에서 사용되는, "치료" 또는 "치료하다" 는 치료되는 개인의 자연적인 과정을 변경하려는 시도에서의 임상적 개입을 의미하며, 예방 또는 치료 목적을 위해 수행될 수 있다. 암 치료의 바람직한 효과는 암의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 전이의 예방 및 치료, 암 진행의 (속도의) 감소 또는 둔화, 암 상태의 개선 또는 완화, 암 완화의 유발 또는 허용, 또는 암 세포 파괴의 유발 또는 유도, 또는 다른 항암 치료법에 상승적 효과를 제공하는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 치료는 또한 암 발달의 임의의 지연을 포함한다.

"대상체" 는 포유동물을 말한다. 포유동물의 예는 인간 및 비인간, 예컨대 제한없이 가축 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 비인간 영장류 (예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트) 를 포함한다. 본 발명은 특히 인간을 치료하는데 적합하다.

본 명세서에서 사용된, "단리된" 이라는 용어는 자연 환경의 성분으로부터 제거되고, 단리되거나 분리된 분자 (예를 들어, 핵산 또는 아미노산) 를 의미하며, 이들이 자연적으로 회합되는 다른 성분이 적어도 60% 없고, 바람직하게는 75% 없고, 가장 바람직하게는 90% 없다. "단리된" 폴리펩티드 (또는 단백질) 은 예를 들어 자연 환경의 성분으로부터 분리된, 바람직하게는 예를 들어 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 전기영동 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC) 이동에 의해 결정되는 바와 같이, 90% 또는 95% 초과 순도로 정제된 폴리펩티드이다. "단리된" 핵산은 자연 환경의 성분으로부터 분리되거나 및/또는 다른 구성 (예를 들어, 벡터, 발현 카세트, 재조합 숙주 등) 으로 조립된 핵산 분자를 지칭한다.

핵산 또는 단백질 서열에 적용되는 "서열 동일성" 이라는 용어는, Smith-Waterman 정렬 (Smith and Waterman (1981) J Mol Biol 147:195-197), CLUSTALW (Thompson et al. (1994) Nucleic Acids Res 22:4673-4680), 또는 BLAST2 (Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res 25:3389-3402) 와 같은 표준화된 알고리즘을 사용하여 정렬된 적어도 2 개의 서열 사이의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 매치의 정량화 (보통 백분율) 를 의미한다. BLAST2 는 정렬을 최적화하고 그들 사이의 더 의미 있는 비교를 달성하기 위해 서열들 중 하나에 갭을 삽입하기 위해 표준화되고 재현가능한 방식으로 사용될 수 있다.

PLA2-GIB

본 명세서에서, "PLA2-GIB" (또는 "PLA2GIB" 또는 "GIBsPLA2") 는 그룹 IB 췌장 포스포리파제 A2 를 지칭한다. PLA2-GIB 는 다양한 포유동물 종으로부터 확인되고 클로닝되었다. 인간 PLA2-GIB 단백질은 예를 들어, Lambeau 및 Gelb (2008) 에 개시되어 있다. 이의 서열은 Genbank No. NP_000919 상에서 이용가능하다. 예시적인 인간 PLA2-GIB 의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 1 로서 하기에 제시된다.

SEQ ID NO: 1 의 아미노산 1 내지 15 (밑줄) 는 신호 서열이고, SEQ ID NO: 1 의 아미노산 16 내지 22 (굵은 글씨) 는 프로펩티드 서열이다. PLA2-GIB 의 성숙한 형태는 전형적으로 단백질분해 절단에 의해 생성되며 따라서 신호 서열 및 프로펩티드 서열이 없다. 따라서, PLA2-GIB 의 성숙한 형태의 전형적인 예는 하기 SEQ ID NO: 2 에 나타낸 바와 같이, SEQ ID NO: 1 의 아미노산 잔기 23-148 을 포함한다 (또는 이것으로 본질적으로 이루어진다).

본 발명의 문맥에서, 용어 "PLA2-GIB" 은 바람직하게는 인간 PLA2-GIB 을 그의 임의의 형태 (프로- 또는 성숙) 뿐 아니라, 그의 변이체, 예컨대 다형성 또는 스플라이싱으로부터 생성되는 임의의 천연 변이체를 지칭한다.

특정 구현예에서, 용어 "PLA2-GIB" 은 SEQ ID NO: 1 또는 2 및 다형성 또는 스플라이싱으로부터 발생하는 천연 변이체를 포함하는 인간 PLA2-GIB 을 나타낸다.

참조 단백질의 자연-발생 변이체는 상기 참조 단백질과 비교하여, 하나 또는 여러 (전형적으로 1, 2 또는 3) 개의 아미노산 잔기의 하나 이상의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실을 갖는 임의의 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 변이체는 참조 단백질과 비교하여, 하나 또는 여러 (전형적으로 1, 2 또는 3) 개의 아미노산 잔기의 10 개 이하의 구별되는 아미노산 치환(들), 부가(들) 및/또는 결실(들) 을 포함한다. 전형적인 자연-발생 변이체는 참조 단백질의 생물학적 활성을 보유한다. 이와 관련하여, 일부 구현예에서, PLA2-GIB 은 건강한 대상체로부터의 CD4 T 세포에서 막 마이크로도메인 (MMD) 의 형성을 유도하거나, 또는 건강한 대상체의 CD4 T 세포가 인터루킨 신호전달에 불응하거나, 예컨대 IL-2 신호전달에 불응하거나 IL-7 신호전달에 불응하도록 하는 것으로부터 선택된 적어도 하나의 활성을 갖는다.

특정 구현예에서, 용어 PLA2-GIB 는 인간 단백질, 특히 SEQ ID NO: 1 또는 2 를 포함하거나 또는 이들로 이루어진 단백질, 또는 이의 자연-발생 변이체를 지칭한다.

암의 치료

본 발명은 PLA2-GIB 를 억제하는 화합물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명자들은 PLA2-GIB 보조인자가 PLA2-GIB 과 함께 면역 세포의 불활성화를 유도하는 암을 갖는 환자에 존재한다는 것을 보여주었다. 본 발명자들은 PLA2-GIB 억제가 상기 환자의 혈장에서 효과적인 면역 반응을 회복할 수 있고, 따라서 암 치료에 효율적으로 기여할 수 있다는 것을 추가로 보여주었다.

특정 구현예에서, 본 발명은 PLA2-GIB 를 억제하는 화합물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암 또는 신생물 치료를 필요로 하는 대상체에서 암 또는 신생물을 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 암 또는 신생물 치료를 필요로 하는 대상체에서 암 또는 신생물을 치료하기 위해 사용하기 위한 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물에 관한 것이다.

특정 구현예에서, 본 발명의 방법은 신생물 또는 암의 위험이 있는 대상체와 같은 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 예방하거나 암 발생률을 감소시키기 위한 것이다. 이와 관련하여, 본 발명은 암에 대한 위험 인자를 치료함으로써 암의 발생 위험/비율을 회피 또는 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 위험 인자는 제한 없이, 구강-, 위장-, 및/또는 장관 염증 및 감염, 예컨대 췌장염을 포함한다.

본 발명은 또한 암 예방 또는 암 발생률 감소를 필요로 하는 대상체에서 암을 예방 또는 암 발생률을 감소시키기 위해 사용하기 위한 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물에 관한 것이다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명의 방법은 암을 갖는 대상체에서 암 진행 속도를 감소시키기 위한 것이다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명은 암을 갖는 대상체에서 암 진행 속도를 감소시키는데 사용하기 위한 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물에 관한 것이다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명의 방법은 암을 갖는 대상체에서 암 전이를 감소 또는 예방 또는 치료하기 위한, 또는 암 세포를 사멸시키기 위한 것이다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명은 암을 갖는 대상체에서 암 전이를 감소 또는 예방 또는 치료하는데, 또는 암을 갖는 대상체에서 암 세포를 사멸시키는데 사용하기 위한 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물에 관한 것이다.

본 발명자들은 췌장암과 같은 고형 종양을 갖는 환자의 여러 코호트를 분석하였다. 이들은 PLA2-GIB 수준이 건강한 기증자로부터의 혈장과 비교하여 상기 환자로부터의 혈장에서 통계적으로 상이하지 않다는 것을 발견하였다. 그러나, 이들은 놀랍게도 상기 환자로부터의 혈장이 생리학적 농도의 PLA2-GIB 에 의해 면역 세포를 불활성화에 민감하게 만들 수 있다는 것을 발견하였다. 보다 구체적으로, 상기 암 환자로부터의 혈장 및 PLA2-GIB 에 T 세포를 노출시킴으로써, 상기 면역 세포는 불활성이 되어 면역 반응을 개시할 수 없게 된다. 따라서, 상기 환자의 혈장은 면역 세포가 PLA2-GIB 불활성화에 민감하도록 되는 하나 이상의 보조인자를 함유한다. 본 발명자들은 PLA2-GIB 을 억제함으로써, 상기 면역 세포가 회복되고 그러한 불활성화가 일어나지 않는다는 것을 추가로 보여주었다.

따라서, 본 발명은 인간 암 환자의 혈장에서 PLA2-GIB 보조인자의 존재를 입증한다.

본 발명은 또한 PLA2-GIB 억제가 이러한 암을 치료하기 위해 사용될 수 있음을 입증한다.

이와 관련하여, 본 발명은 임의의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

특정 구현예에서, 암은 고형 암이다.

특정 구현예에서, 본 방법은 암을 가지고 PLA2-GIB 보조인자를 발현하는 대상체를 치료하기 위해 사용된다. 바람직한 구현예에서, 본 방법은 PLA2-GIB 보조인자 또는 PLA2-GIB 보조인자를 발현하는 원핵 또는 진핵 세포 또는 바이러스가 대상체에 존재하는, 대상체에서 암을 치료하기 위해 사용된다.

또다른 특정 구현예에서, 본 방법은 PLA2-GIB 또는 PLA2-GIB 보조인자가 암 미세환경 또는 혈액에 존재하는, 암을 가진 대상체를 치료하기 위해 사용된다.

본 발명은 또한 PLA2GIB-관련 CD4 T 세포 결핍을 갖는 대상체에서 암 또는 신생물을 치료하는데 특히 적합하다.

본 발명은 임의의 발달 단계에서 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 이와 관련하여, 대부분 고형 암은 4 병기로 발달된다:

. 제 I 기.　이 병기는 보통 작은 암이나 종양이 주변 조직으로 깊게 성장하지 않은 것이다. 이것은 또한 림프절이나 신체의 다른 부위로 퍼지지 않았다. 이것은 종종 초기 암이라고 불린다.

. 제 II 기 및 제 III 기.　일반적으로, 이들 2 병기는 좀더 큰 암이나 주변 조직으로 더 깊게 성장한 종양을 나타낸다. 이들은 또한 림프절로 퍼졌을 수는 있지만 신체의 다른 부위로는 아니다.

. 제 IV 기.　이 병기는 암이 다른 장기나 신체 부위로 퍼졌음을 의미한다. 이것은 또한 진행성 암 또는 전이성 암이라고 불릴 수 있다.

일부 암은 또한 제 0 기를 갖는다. 제 0 기 암은 이들이 시작한 곳에 여전히 위치하고 있고 주변 조직으로 퍼지지 않았다. 이 단계의 암은 보통 수술로 전체 종양을 제거함으로써, 치료가능성이 매우 높다.

본 발명은 제 0, I, II, III 또는 IV 기에서의 종양 또는 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

본 발명은 제 0, I, II 또는 III 기에서의 암의 전이를 예방 또는 감소 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다.

본 발명은 제 0, I, II 또는 III 기에서의 암의 진행 속도를 감소시키기 위해 사용될 수 있다.

본 발명은 특히, 췌장암, 흑색종, 폐, 식도 또는 인두 암, 망막모세포종, 간, 유방, 난소, 신장, 위, 십이지장, 자궁, 자궁경부, 갑상선, 방광, 전립선, 골, 뇌 또는 결장직장 암으로부터 선택되는 고형 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

특정 구현예에서, 본 발명의 방법은 췌장암을 치료하기 위한 것이다. 췌장암은 췌장 중 어떤 부분이 영향을 받는지에 따라 분류되는데: 소화 물질을 만드는 부분이 외분비 암을 일으킴, 인슐린 및 다른 호르몬을 만드는 부분이 내분비 암을 일으킴 등이다. 췌장암은 여러 종류가 있으나, 외분비 암인 췌관 선암 (PDAC) 에 의한 경우가 95% 에 달한다.

PDAC 는 암으로 인한 주요 사망 원인 중 4 위를 차지하고 있다. 연구원들은 PDAC 이 2030 년까지 미국에서 암과 관련된 사망의 두 번째 주요 원인이 될 것으로 예상된다. 발병률은 30 년 만에 두 배 이상 증가했고 현재 매년 5% 씩 증가하고 있다. 5 년 동안의 상대적 생존율은 약 5% 이고, 외과적 수술은 PDAC 의 치료를 위한 가장 효율적인 옵션이다. 진단 접근법의 제한된 이용 가능성, 및 진단 환자의 10% 에 불과한 생존 가능성을 가진 오로지 존재하는 치료적 선택으로서의 수술은 이 질환의 공포를 증가시킨다. 질환의 불량한 예후는 스크리닝 및 조기 검출을 위한 효과적인 바이오마커의 부재와 함께, 현재 이용가능한 화학요법에 대한 공격적 행동 및 내성에 의해 설명될 수 있다.

본 발명은 PLA2-GIB 억제가 췌장암을 치료하기 위해 사용될 수 있음을 보여준다. 본 발명은 췌장암의 진행 및 전이를 예방하기 위한 새로운 전략을 제시한다. 본 발명은 췌장 선암종, 신경내분비 종양, 관내 유두상-점액성 신생물, 점액성 낭성 신생물, 및 심각한 낭성 신생물과 같은 췌장암의 임의의 유형/병기와 함께 사용될 수 있다. 본 발명은 임의의 병기에서 췌장 선암을 치료하는데 특히 적합하다.

또한, 본 발명은 대장암, 폐암 및 빠르게 성장하는 암을 치료하는데 특히 적합하다. 대장암은 모든 성별에 있어서 가장 흔한 암 중 하나이다. 모든 병기에서, 5 년 생존 확률은 약 55% 다 (Bossard N, 2007). 실제로, 프랑스, 일본, 미국, 독일, 이탈리아, 스페인, 영국 등에서는 2010 년에 직장암 환자가 18 만여건 새로 진단되었다. 대장암은 하기 4 병기로 분류된다: 제 I 기, 가장 덜 진행되고 수술에 의해 1 차적으로 관리됨, 제 II 및 제 III 기, 이 환자에게는 방사선 화학요법 (RCT) 이 병행됨, 및 제 IV 기, 매우 진행되어 전이된 병기. 환자가 국소적으로 진행된 (제 II 및 제 III 기) 대장암으로 진단될 때, 환자는 전형적으로 수술 절제 전에 RCT 로 치료된다. 본 발명은 제 I, II, III 및 IV 기 대장암을 치료하는데 적합하다. 본 발명은 제 II, III 또는 IV 기에서의 대장암을 치료하는데 특히 적합하다.

본 발명은 또한 위장관 및 대사성 병리를 유도하는 암을 치료하는데 적합하다.

본 발명에서 사용하기 위해, PLA2-GIB 억제제는 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 바람직하게는, 투여는 전신 또는 비경구 주사 또는 관류, 예를 들어, 근육내, 정맥내, 동맥내, 피하, 종양내 등과 같은 주사에 의해 수행된다. 투여는 전형적으로 반복되거나, 연속적이다. 특정 구현예에서, 종양 또는 체액에서 PLA2-GIB 또는 PLA2-GIB 보조인자의 수준은 치료 요법을 안내하기 위해 치료 과정 동안 측정된다.

PLA2-GIB 억제제는 단독으로 또는 추가의 암 치료(들) 와 조합하여 사용될 수 있다.

특정 구현예에서, 본 발명은 화학요법 또는 호르몬요법과 조합하여 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물을 암을 갖는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명은 방사선요법, 초음파 요법 또는 나노입자 요법과 조합하여 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물을 암을 갖는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명은 체크-포인트 억제제, 면역요법, 또는 항암 백신과 조합하여 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물을 암을 갖는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명은 PLA2-GIB 의 보조인자의 억제제와 조합하여 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물을 암을 갖는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. PLA2-GIB 보조인자의 억제제는 상기 보조인자의 길항제, 또는 상기 PLA2-GIB 보조인자 또는 상기 PLA2-GIB 보조인자를 발현하는 원핵 세포 또는 진핵 세포 또는 바이러스에 대한 세포증식억제제 또는 세포독성제 또는 백신일 수 있다. 이와 관련하여, 보조인자가 박테리아인 경우, 저해제는 상기 박테리아에 대한 항생제일 수 있다.

"조합" 요법에서, 활성제는 동시에 또는 순차적으로, 함께 또는 교대로 사용될 수 있다. 각각의 활성제는 특정한 스케줄에 따라 사용될 수 있다. 다른 예에서, 모든 활성제는 관류와 같이, 함께 제형화 및/또는 투여될 수 있다.

추가의 구현예에서, 화합물은 수술 (종양 절제 또는 제거) 전, 그 동안 또는 그 후에 투여된다.

본 발명에 사용되는 화합물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물로 제형화될 수 있다.

"약학적 조성물" 은 생물학적 활성 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 전달하기 위한 본 발명의 화합물 (활성 성분) 및 당업계에 일반적으로 허용되는 매질의 제형을 의미한다. 이러한 담체는 모든 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 매질 또는 지지체를 포함한다. 통상적인 약학적 관행은, 예를 들어 단위 투여 형태로, 적합한 제형 또는 조성물을 대상체에게 제공하기 위해 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물 또는 조성물은 연고, 겔, 페이스트, 액체 용액, 현탁액, 정제, 젤라틴 캡슐, 캡슐, 좌제, 분말, 점비제, 또는 에어로졸의 형태로, 바람직하게는 주사가능한 용액 또는 현탁액의 형태로 제형화될 수 있다. 주사의 경우, 화합물은 일반적으로 액체 현탁액의 형태로 포장되며, 이는 예를 들어, 주사기 또는 관류를 통해 주입될 수 있다. 이와 관련하여, 화합물은 일반적으로 식염수, 생리학적, 등장성 또는 완충된 용액에 용해되며, 약학적 용도와 양립할 수 있고 당업자에게 공지되어 있다. 따라서, 조성물은 분산제, 가용화제, 안정화제, 방부제 등으로부터 선택된 하나 이상의 작용제 또는 부형제를 함유할 수 있다. 액체 및/또는 주사가능한 제형에 사용될 수 있는 작용제 또는 부형제는 특히 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리소르베이트 80, 만니톨, 젤라틴, 락토오스, 식물성 오일, 아카시아 등이다. 담체는 또한, 예를 들어 메틸-베타-시클로덱스트린, 아크릴산의 중합체 (예컨대 카르보폴), 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜의 혼합물, 모노에탄올 아민 및 히드록시메틸 셀룰로오스로부터 선택될 수 있다.

조성물은 일반적으로 약 1 ㎍ 내지 1000 mg 의 PLA2-GIB 억제제, 예컨대 0.001-0.01, 0.01-0.1, 0.05-100, 0.05-10, 0.05-5, 0.05-1, 0.1-100, 0.1-1.0, 0.1-5, 1.0-10, 5-10, 10-20, 20-50, 및 50-100 mg, 예를 들어 0.05 내지 100 mg, 바람직하게는 0.05 내지 5 mg, 예를 들어 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1, 2, 3, 4 또는 5 mg 를 포함한다. 투여량은 조절제 및 질환에 따라 당업자에 의해 조절될 수 있다.

조성물은 임의의 적합한 형태 또는 용기 (주사기, 앰플, 플라스크, 병, 파우치 등) 로 제형화될 수 있다.

바람직한 구현예에서, 치료는 임의로 하나 이상의 항암제(들) 또는 치료(들) 와 조합으로, PLA2-GIB 억제제를 함유하는 액체 제형의 1 회 또는 수 회 주사(들) 를 포함한다. 주사는 바람직하게는 전신, 예컨대 정맥내, 동맥내, 근육내, 암내, 피내 등이다.

투여량 및 투여 빈도는 의사에 의해 조정될 수 있다.

PLA2-GIB 의 억제제

본 발명에 사용하기에 적합한 PLA2-GIB 억제제는 PLA2-GIB 의 발현 또는 활성을 억제하거나 중화시키는 임의의 화합물, 예컨대 발현 억제제, 길항제, 또는 격리제일 수 있다. 바람직한 유형의 억제제는 PLA2-GIB 리간드 (공유 또는 비-공유), 항-PLA2-GIB 항체 (및 그의 단편 및 유도체), 항-PLA2-GIB 항체를 인코딩하는 핵산 (또는 그의 단편 및 유도체), 억제성 핵산, 펩티드, 또는 소형 약물, 가용성 수용체, 또는 그의 조합(들) 을 포함한다. 대안적으로 또는 추가적으로, PLA2-GIB 억제제는 대상체에 투여시 항-PLA2GIB 항체의 생산을 유도하는 PLA2-GIB 항원일 수 있다.

PLA2-GIB 억제는 전형적으로 PLA2-GIB 수준 또는 활성을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 그 이상 감소시킬 뿐만 아니라 PLA2-GIB 수준 또는 활성을 완전히 차단하거나 억제하는 것을 의미한다. 상황에 따라, 억제는 일시적이거나, 지속적이거나, 영구적일 수 있다.

PLA2-GIB 에 대항하는 항체

PLA2-GIB 억제제의 구체적인 예는 항-PLA2-GIB 항체, 예를 들어, PLA2-GIB 에 결합하고/하거나 PLA2-GIB 항원을 사용한 포유동물의 면역화에 의해 생성된 항체이다.

항체는 합성, 모노클로날, 또는 폴리클로날일 수 있고, 당업계에 널리 공지된 기술에 의해 제조될 수 있다. 이러한 항체는 (비-특이적 결합과는 대조적으로) 항체의 항원-결합 부위를 통해 특이적으로 결합한다. PLA2-GIB 폴리펩티드, 단편, 변이체, 융합 단백질 등은 이것과 면역반응성인 항체를 생산하는데 면역원으로서 사용될 수 있다. 보다 구체적으로, 폴리펩티드, 단편, 변이체, 융합 단백질 등은 항체의 형성을 유도하는 항원 결정기 또는 에피토프를 함유한다.

용어 "항체" 는 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 이의 단편, 예컨대 F(ab')2 및 Fab 단편, 단쇄 가변 단편 (scFv), 단일-도메인 항체 단편 (VHH 또는 나노바디), 이가 항체 단편 (디아바디), 및 임의의 재조합적으로 그리고 합성적으로 생성된 결합 파트너, 인간 항체 또는 인간화 항체를 포함하는 것을 의미한다.

항체는 바람직하게는 이들이 약 10⁷ M-1 이상의 Ka 로 PLA2-GIB 에 결합하는 경우에 특이적으로 결합하는 것으로 정의된다. 항체의 친화도는 통상적인 기술, 예를 들어 문헌 [Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 51:660 (1949)] 에 기재된 기술을 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.

폴리클로날 항체는 다양한 공급원, 예를 들어, 말, 소, 당나귀, 염소, 양, 개, 닭, 토끼, 마우스, 또는 래트로부터 당업계에 공지된 절차를 사용하여 용이하게 생성될 수 있다. 일반적으로, 정제된 PLA2-GIB 또는 적절하게 컨쥬게이션된 PLA2-GIB 의 아미노산 서열에 기초한 펩티드는 전형적으로 비경구 주사를 통해 숙주 동물에게 투여된다. PLA2-GIB 의 면역원성은 아주반트, 예를 들어 프로인트 완전 또는 불완전 아주반트의 사용을 통해 향상될 수 있다. 부스터 면역화 후, 혈청의 작은 샘플을 수집하고 PLA2-GIB 폴리펩티드에 대한 반응성에 대해 시험한다. 이러한 결정에 유용한 다양한 분석의 예는 문헌 [Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988] 에 기재된 것들; 뿐만 아니라 대전류 면역-전기영동 (CIEP), 방사선면역분석, 방사성-면역침전, 효소-결합 면역흡착 분석 (ELISA), 도트 블롯 분석, 및 샌드위치 분석과 같은 절차를 포함한다. 미국 특허 번호 4,376,110; 및 4,486,530 를 참고한다.

모노클로날 항체는 널리 공지된 절차를 사용하여 용이하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 RE 32,011, 4,902,614, 4,543,439, 및 4,411,993; Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Plenum Press, Kennett, McKeam, and Bechtol (eds.), 1980 에 기재된 절차들을 참조한다.

예를 들어, 숙주 동물, 예컨대 마우스는 임의로 아주반트의 존재 하에, 단리된 및 정제된 야생형 또는 돌연변이체 PLA2-GIB 단백질 또는 컨쥬게이션된 PLA2-GIB 펩티드로 적어도 1 회, 바람직하게는 적어도 2 회 약 3 주 간격으로 복강내 주사될 수 있다. 이어서, 마우스 혈청을 통상적인 도트 블롯 기술 또는 항체 포획 (ABC) 에 의해 분석하여 어느 동물이 가장 잘 융합되는지를 결정한다. 대략 2 내지 3 주 후에, 마우스에는 단백질 또는 펩티드의 정맥내 부스트가 주어진다. 마우스를 이후 희생시키고, 비장 세포를 확립된 프로토콜에 따라, Ag8.653(ATCC) 과 같은 상업적으로 이용가능한 골수종 세포와 융합시켰다. 간략하게, 골수종 세포를 배지에서 수 회 세척하고, 1 개의 골수종 세포에 대해 약 3 개의 비장 세포의 비율로 마우스 비장 세포에 융합시킨다. 융합제는 당업계에서 사용되는 임의의 적합한 작용제, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 일 수 있다. 융합물은 융합된 세포의 선택적 성장을 허용하는 배지를 함유하는 플레이트에 플레이팅된다. 이어서, 융합된 세포를 약 8 일 동안 성장시킬 수 있다. 생성된 하이브리도마로부터의 상청액을 수집하고, 염소 항-마우스 Ig 로 1 차 코팅된 플레이트에 첨가한다. 세척 후, 표지, 예컨대 표지된 PLA2-GIB 폴리펩티드를 각각의 웰에 첨가한 후 인큐베이션한다. 양성 웰은 후속하여 검출될 수 있다. 양성 클론은 대량 배양에서 성장될 수 있고, 상청액은 후속적으로 단백질 A 컬럼 (Pharmacia) 을 통해 정제된다.

본 발명의 모노클로날 항체는 본원에 참고로 인용되는 문헌 [Alting-Mees et al., "Monoclonal Antibody Expression Libraries: A Rapid Alternative to Hybridomas", Strategies in Molecular Biology 3:1-9 (1990)] 에 기재된 것과 같은 대안적인 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 유사하게, 결합 파트너는 특정 결합 항체를 인코딩하는 유전자의 가변 영역을 혼입하는 재조합 DNA 기술을 사용하여 구축될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Larrick et al., Biotechnology, 7:394 (1989)] 에 기재되어 있다.

통상적인 기술에 의해 생산될 수 있는 이러한 항체의 항원-결합 단편도 본 발명에 포함된다. 이러한 단편의 예로는 Fab 및 F(ab')2 단편이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 유전공학 기술에 의해 생산된 항체 단편 및 유도체가 또한 제공된다.

모노클로날 항체는 키메라 항체, 예를 들어 뮤린 모노클로날 항체의 인간화 버젼을 포함한다. 이러한 인간화 항체는 공지된 기술에 의해 제조될 수 있고, 항체가 인간에게 투여될 때 감소된 면역원성의 이점을 제공한다. 하나의 구현예에서, 인간화 모노클로날 항체는 뮤린 항체의 가변 영역 (또는 단지 그의 항원 결합 부위) 및 인간 항체로부터 유래된 불변 영역을 포함한다. 대안적으로, 인간화 항체 단편은 뮤린 모노클로날 항체의 항원 결합 부위 및 인간 항체로부터 유래된 가변 영역 단편 (항원-결합 부위가 결여됨) 을 포함할 수 있다. 키메라 및 추가로 조작된 모노클로날 항체의 제조 절차는 문헌 Riechmann et al. (Nature 332:323, 1988), Liu et al. (PNAS 84:3439, 1987), Larrick et al. (Bio/Technology 7:934, 1989), 및 Winter and Harris (TIPS 14:139, May, 1993) 에 기재된 것들을 포함한다. 항체를 형질전환적으로 생성하는 절차는 GB 2,272,440, 미국 특허 번호 5,569,825 및 5,545,806 에서 발견될 수 있다.

표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조될 수 있는, 인간 및 비-인간 부분을 모두 포함하는 키메라 및 인간화 모노클로날 항체와 같은 유전 공학 방법에 의해 제조된 항체가 사용될 수 있다. 이러한 키메라 및 인간화 모노클로날 항체는 당업계에 공지된 표준 DNA 기술, 예를 들어, 하기 문헌에 기재된 방법을 사용하여 유전 공학에 의해 제조될 수 있다: Robinson et al. International Publication No. WO 87/02671; Akira, et al. European Patent Application 0184187; Taniguchi, M., European Patent Application 0171496; Morrison et al. European Patent Application 0173494; Neuberger et al. PCT International Publication No. WO 86/01533; Cabilly et al. U.S. Pat. No. 4,816,567; Cabilly et al. European Patent Application 0125023; Better et al., Science 240:1041 1043, 1988; Liu et al., PNAS 84:3439 3443, 1987; Liu et al., J. Immunol. 139:3521 3526, 1987; Sun et al. PNAS 84:214 218, 1987; Nishimura et al., Canc. Res. 47:999 1005, 1987; Wood et al., Nature 314:446 449, 1985; and Shaw et al., J. Natl. Cancer Inst. 80:1553 1559, 1988); Morrison, S. L., Science 229:1202 1207, 1985; Oi et al., BioTechniques 4:214, 1986; Winter U.S. Pat. No. 5,225,539; Jones et al., Nature 321:552 525, 1986; Verhoeyan et al., Science 239:1534, 1988; 및 Beidler et al., J. Immunol. 141:4053 4060, 1988.

합성 및 반합성 항체와 관련하여, 이러한 용어는 항체 단편, 아이소타입 스위치드 항체, 인간화 항체 (예를 들어, 마우스-인간, 인간-마우스), 하이브리드, 복수의 특이성을 갖는 항체, 및 완전 합성 항체-유사 분자를 포괄하는 것으로 의도되지만, 이에 제한되지 않는다.

인간 불변 및 가변 영역을 갖는 인간 모노클로날 항체는 인간 면역글로불린 유전자를 함유하는 트랜스제닉 동물을 면역화함으로써 생성될 수 있다. Jakobovits et al. Ann NY Acad Sci 764:525-535 (1995) 을 참조한다. PLA2-GIB 폴리펩티드에 대항하는 인간 모노클로날 항체는 또한 대상체의 림프구로부터 유래된 mRNA 로부터 제조된 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 cDNA 를 사용하여 조합 면역글로불린 라이브러리, 예컨대 Fab 파지 디스플레이 라이브러리 또는 scFv 파지 디스플레이 라이브러리를 구축함으로써 제조할 수 있다. 예를 들어, McCafferty et al. PCT publication WO 92/01047; Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222:581 597; 및 Griffths et al. (1993) EMBO J 12:725 734 를 참조한다. 또한, 항체 가변 영역의 조합 라이브러리는 공지된 인간 항체를 돌연변이시킴으로써 생성될 수 있다. 예를 들어, PLA2-GIB 에 결합하는 것으로 공지된 인간 항체의 가변 영역은, 예를 들어 무작위로 변경된 돌연변이된 올리고뉴클레오티드를 사용하여 돌연변이되어, PLA2-GIB 에 결합하도록 스크리닝될 수 있는 돌연변이된 가변 영역의 라이브러리를 생성할 수 있다. 면역글로불린 중쇄 및/또는 경쇄의 CDR 영역 내에서 무작위 돌연변이유발을 유도하는 방법, 무작위 중쇄 및 경쇄를 교차시켜 페어링을 형성하는 방법 및 스크리닝 방법은 예를 들어, 하기 문헌에서 찾을 수 있다: Barbas et al. PCT publication WO 96/07754; Barbas et al. (1992) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4457 4461.

면역글로불린 라이브러리는 바람직하게는 필라멘트성 파지로부터 유래된 디스플레이 패키지의 집단에 의해 발현되어 항체 디스플레이 라이브러리를 형성할 수 있다. 항체 디스플레이 라이브러리를 생성하는데 사용하기에 특히 적합한 방법 및 시약의 예는, 예를 들어, 하기 문헌에서 찾을 수 있다: Ladner et al. U.S. Pat. No. 5,223,409; Kang et al. PCT publication WO 92/18619; Dower et al. PCT publication WO 91/17271; Winter et al. PCT publication WO 92/20791; Markland et al. PCT publication WO 92/15679; Breitling et al. PCT publication WO 93/01288; McCafferty et al. PCT publication WO 92/01047; Garrard et al. PCT publication WO 92/09690; Ladner et al. PCT publication WO 90/02809; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9:1370 1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81 85; Huse et al. (1989) Science 246:1275 1281; Griffths et al. (1993) supra; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889 896; Clackson et al. (1991) Nature 352:624 628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576 3580; Garrad et al. (1991) Bio/Technology 9:1373 1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133 4137; 및 Barbas et al. (1991) PNAS 88:7978 7982. 일단 디스플레이 패키지 (예를 들어, 필라멘트성 파지) 의 표면 상에 디스플레이되면, 항체 라이브러리를 스크리닝하여 PLA2-GIB 폴리펩티드에 결합하는 항체를 발현하는 패키지를 확인하고 단리한다. 바람직한 구현예에서, 라이브러리의 1 차 스크리닝은 고정화된 PLA2-GIB 폴리펩티드와의 패닝을 포함하고, 고정화된 PLA2-GIB 폴리펩티드에 결합하는 항체를 발현하는 디스플레이 패키지가 선택된다.

본 발명에 사용하기 위한 바람직한 항체는 PLA2-GIB 에피토프에 대한 것이고, 및/또는 성숙 PLA2-GIB 단백질, SEQ ID NO: 1 또는 2 의 적어도 8 개의 연속적인 아미노산 잔기 (또는 SEQ ID NO: 1 또는 2 의 천연 변이체의 상응하는 잔기) 를 포함하는 PLA2-GIB 의 단편으로부터 선택되는 PLA2-GIB 에피토프를 포함하는 폴리펩티드로의 면역화에 의해 생성되었고, 상기 단편은 바람직하게는 적어도 아미노산 70, 아미노산 121, 아미노산 50, 아미노산 52, 아미노산 54, 아미노산 71, 또는 이들의 조합 (SEQ ID NO: 2 를 참조하여 넘버링됨) 을 포함한다.

본 발명에 사용하기 위한 특정 항-PLA2-GIB 항체는 성숙 인간 PLA2-GIB, 보다 더 바람직하게는 아미노산 70, 아미노산 121, 아미노산 50, 아미노산 52, 아미노산 54, 아미노산 71, 또는 이들의 조합 (SEQ ID NO: 2 를 참조하여 넘버링됨) 으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하는 PLA2-GIB 의 도메인에 포함된 에피토프에 결합한다. 본 발명에 사용하기 위한 특정 항체는 성숙 인간 PLA2-GIB (SEQ ID NO: 2 를 참조하여) 의 아미노산 잔기 50-71 또는 SEQ ID NO: 2 의 천연 변이체의 상응하는 잔기 사이에 포함되는 에피토프에 결합한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 항-PLA2-GIB 항체의 예는 WO2015/097140 에 개시되어 있다.

본 발명에 사용하기 위한 추가의 특정한 항-PLA2-GIB 항체는 인간 성숙 PLA2-GIB (SEQ ID NO: 2 를 참조하여 넘버링함) 의 W3, R6, K7, K10, C77, Y75, G79 및 S80 으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프, 더욱 바람직하게는 인간 성숙 PLA2-GIB 의 W3, R6, K7, K10, C77, Y75, G79 및 S80 으로부터 선택되는 적어도 2 개 또는 적어도 3 개의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프, 더욱 더 바람직하게는 인간 성숙 PLA2-GIB 의 W3, R6, K7, K10, C77, Y75, G79 및 S80 으로부터 선택되는 적어도 4 개, 적어도 5 개, 적어도 6 개 또는 적어도 7 개의 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 본 발명에 사용하기 위한 특정 항체는 성숙 인간 PLA2-GIB (SEQ ID NO: 2 를 참조하여) 의 아미노산 1-10 또는 75-80 또는 SEQ ID NO: 2 의 천연 변이체의 상응하는 잔기 사이에 포함되는 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 이러한 항체는 강력한 중화 활성을 나타내며, 본 발명에서 사용하기 위한 유용한 치료제를 나타낸다. 본 발명에 사용하기에 적합한 항-PLA2-GIB 항체의 예는 현재 미공개된, EP18305229 에 개시되어 있다.

특정 구현예에서, 본 발명에 사용하기 위한 항체 또는 유도체는 모노클로날 항체 14G9 또는 인간 PLA2-GIB 에 대한 모노클로날 항체 14G9 의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항-PLA2-GIB 항체이고, 상기 모노클로날 항체 14G9 는 SEQ ID NO: 3 을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 4 를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 항체는 인간 또는 인간화될 수 있다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명에 사용하기 위한 항체 또는 유도체는 모노클로날 항체 #2B 또는 인간 sPLA2-GIB 에 대한 모노클로날 항체 #2B 의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항-PLA2-GIB 항체이고, 상기 모노클로날 항체 #2B 는 SEQ ID NO: 5 를 포함하는 또는 이것으로 이루어지는 경쇄 및 SEQ ID NO: 6 을 포함하는 또는 이것으로 이루어지는 중쇄를 포함한다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명에 사용하기 위한 항체 또는 유도체는 모노클로날 항체 #2B1 또는 인간 sPLA2-GIB 에 대한 모노클로날 항체 #2B1 의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항-PLA2-GIB 항체이고, 상기 모노클로날 항체 #2B1 는 SEQ ID NO: 5 를 포함하는 또는 이것으로 이루어지는 경쇄 및 SEQ ID NO: 7 을 포함하는 또는 이것으로 이루어지는 중쇄를 포함한다.

또다른 특정 구현예에서, 본 발명에 사용하기 위한 항체 또는 유도체는 모노클로날 항체 #2B2 또는 인간 sPLA2-GIB 에 대한 모노클로날 항체 #2B2 의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항-PLA2-GIB 항체이고, 상기 모노클로날 항체 #2B2 는 SEQ ID NO: 5 를 포함하는 또는 이것으로 이루어지는 경쇄 및 SEQ ID NO: 8 을 포함하는 또는 이것으로 이루어지는 중쇄를 포함한다.

용어 "경쟁적으로 억제한다" 는 항체가 sPLA2-GIB 에 대한 참조 항체의 결합을 감소시키거나 억제 또는 대체할 수 있음을 나타낸다. 경쟁 분석은 표준 기술, 예컨대, 예를 들어, 경쟁 ELISA 또는 다른 결합 분석을 사용하여 수행될 수 있다. 전형적으로, 경쟁적 결합 분석은 일반적으로 고체 기질 또는 세포에 결합된 정제된 표적 항원, 비표지된 시험 항체 및 표지된 기준 항체를 포함한다. 경쟁적 억제는 시험 항체의 존재 하에 결합된 표지된 항체의 양을 결정함으로써 측정된다. 일반적으로 시험 항체는 과량으로, 예컨대 참조 항체의 양의 약 5 내지 500 배로 존재한다. 전형적으로, ELISA 의 경우, 시험 항체는 100X 과량이고, 효소 방법의 경우, 시험 항체는 10X 과량이다. 과량으로 존재하는 시험 항체가 항원에 대한 참조 항체의 결합의 적어도 70% 를 억제하거나 대체하는 경우, 이는 상기 참조 항체를 경쟁적으로 억제하는 것으로 고려된다. 특정 구현예에서, 100X 과량으로 존재하는 시험 항체가 ELISA 에서 항원에 대한 참조 항체의 결합의 적어도 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 80% 를 억제하거나 대체하는 경우, 이는 상기 참조 항체를 경쟁적으로 억제하는 것으로 고려된다. 바람직한 경쟁 항체는 공통 아미노산 잔기를 공유하는 에피토프에 결합한다.

특정 구현예에서, 억제제는 하기를 포함하는 모노클로날 항체이다:

(i) CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 FR-L 을 포함하는 경쇄 가변 영역, 상기 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3 은 각각 SEQ ID NO: 3 또는 5 의 경쇄 가변 영역의, 각각 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 로 이루어지거나, 또는 본질적으로 이루어지고, FR-L 은 인간 면역글로불린 서열임; 및

(ii) CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3 및 FR-H 을 포함하는 중쇄 가변 영역, 상기 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3 은 각각 SEQ ID NO: 4, 6, 7 또는 8 의 중쇄 가변 영역의, 각각 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 로 이루어지거나, 또는 본질적으로 이루어지고, FR-H 은 인간 면역글로불린 서열임.

항체의 "가변 영역" 은 항원-결합 부위를 함유하는 중쇄 또는 경쇄 ("VH" 또는 "VL") 의 아미노-말단 도메인을 의미한다. 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 (VL 또는 VH) 은 일반적으로 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR" 이라고 불리는 3 개의 과가변 영역이 개입된 프레임워크 영역 ("FR") 으로 이루어진다. 프레임워크 영역 및 CDR 의 정도는, 예를 들어 Kabat (참조 "Sequences of Proteins of Immunological Interest," E. Kabat et al., U.S. Department of Health and Human Services, (1983)), 및 Chothia 에서와 같이 정확하게 정의되어 있다.

SEQ ID NO: 3 을 참조하면, 3 개의 CDR 영역은 다음의 아미노산 잔기에 상응한다:

. CDR-L1: 아미노산 잔기 QDVSTA (SEQ ID NO: 3 의 잔기 27-31),

. CDR-L2: 아미노산 잔기 WAS (SEQ ID NO: 3 의 잔기 50-52),

. CDR-L3: 아미노산 잔기 QQDYSTPPT (SEQ ID NO: 3 의 잔기 89-97),

SEQ ID NO: 4 을 참조하면, 3 개의 CDR 영역은 다음의 아미노산 잔기에 상응한다:

. CDR-H1: 아미노산 잔기 GYTFTNYW (SEQ ID NO: 4 의 잔기 26-33),

. CDR-H2: 아미노산 잔기 IDPSDTRT (SEQ ID NO: 4 의 잔기 51-58),

. CDR-H3: 아미노산 잔기 ARQTLYYEALDY (SEQ ID NO: 4 의 잔기 97-108).

특정 구현예에서, 본 발명은 하기로부터 선택되는 모노클로날 항체에 관한 것이다:

. SEQ ID NO: 3 을 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 경쇄 및 SEQ ID NO: 4 를 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 중쇄를 포함하는 모노클로날 항체 (14G9);

. SEQ ID NO: 5 을 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 경쇄 및 SEQ ID NO: 6 를 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 중쇄를 포함하는 모노클로날 항체 (#2B);

. SEQ ID NO: 5 을 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 경쇄 및 SEQ ID NO: 7 를 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 중쇄를 포함하는 모노클로날 항체 (#2B1);

. SEQ ID NO: 5 을 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 경쇄 및 SEQ ID NO: 8 를 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 이루어진 중쇄를 포함하는 모노클로날 항체 (클론 #2B2); 및

.이들의 유도체.

용어 "항체 유도체" 는, 참조 항체의 항원 특이성을 보유하지만, 하나 이상의 아미노산 잔기가 (화학적으로, 또는 생물학적으로) 변형되어 그의 특성을 개선시키는 항체를 의미한다.

이러한 화학적 변형의 예는, 예를 들어 알킬화, PEG화, 아실화, 에스테르 또는 아미드 형성 등을 포함한다. 특히, 유도체는 수용성 중합체와 같은 하나 이상의 추가적인 비-단백질성 부분을 함유하도록 변형된 본 명세서에 개시된 바와 같은 항체이다. 수용성 중합체의 예는 PEG, 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란 및 폴리비닐 알코올을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

유도체는 또한 항체가 글리코실화되는 정도를 증가 또는 감소시키기 위해 생성될 수 있다. 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성 또는 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써, 항체에 대한 글리코실화 부위의 추가 또는 결실이 편리하게 달성될 수 있다. 항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 부착된 탄수화물은 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297 에 N-연결에 의해 일반적으로 부착되는 분지형, 바이안테나형 올리고당을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Wright et al. TIBTECH, 1997, 15:26-32] 참조). 올리고당은 다양한 탄수화물, 예를 들어, 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스, 및 시알산, 뿐만 아니라, 바이안테나형 올리고당 구조의 "스템" 에서 GlcNAc 에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체에서 올리고당의 변형은 특정한 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 이루어질 수 있다.

하나의 구현예에서, Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40% 일 수 있다. 푸코스의 양은 MALDI-TOF 질량 분석법으로 측정된 바와 같은 Asn297 에 부착된 모든 당구조의 합에 대해 (예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 고 만노스 구조) Asn297 에서 당쇄 내의 푸코스의 평균 양을 계산함으로써 결정된다. Asn297 은 Fc 영역 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링) 내의 약 위치 297 에 위치하는 아스파라긴 잔기를 지칭하지만, Asn297 은 또한 항체 내 사소한 서열 변화로 인해 위치 297 의 상류 또는 하류 약 ± 3 아미노산에, 즉 위치 294 와 300 사이에 위치할 수 있다. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체와 관련된 간행물의 예는 하기 문헌을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004) 및 Yamane-Ohnuki N, Satoh M. mAbs. 2009;1:230-236. 탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예로는 단백질 푸코실화가 결핍된 Led 3 CHO 세포 (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (예를 들어, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006) 참조) 가 포함된다.

특정 구현예에서, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 시스테인 조작 항체, 예를 들어 "thioMAbs" 를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 발생한다. 이러한 잔기들을 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올 기는 항체의 접근가능한 부위에 위치되고, 본 명세서에 추가로 설명되는 바와 같이, 항체를 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 컨쥬게이션하여 면역컨쥬게이트를 생성하는데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 하기 잔기 중 임의의 하나 이상은 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (Kabat 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 7,521,541 에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.

용어 유도체는 또한 세포독성제, 검출가능한 모이어티, 예컨대 형광 모이어티, 진단적 방사성 동위원소 또는 영상화제를 포함하나 이에 한정되지 않는 하나 이상의 이종 분자(들); 또는 고체 지지체, 예컨대 아가로스 비드 등에 컨쥬게이션된 상기 정의된 항-sPLA2-GIB 항체를 포함하는 면역컨쥬게이트를 포함한다. 세포독성제의 예는 화학요법제 또는 약물, 성장 억제제, 독소 (예를 들어, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그의 단편), 또는 방사성 동위원소를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 항체와 세포독성제의 컨쥬게이트는 당업자에게 잘 알려진 다양한 이작용성 단백질 커플링제를 사용하여 제조될 수 있다. 링커는 세포 내에서 세포독성 약물의 방출을 용이하게 하는 "절단가능한 링커" 일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-민감성 링커, 광분해성 링커, 디메틸 링커 또는 디설파이드-함유 링커 (Chari et al., Cancer Res. 52: 127-131 (1992)) 를 사용할 수 있다.

본 발명에 사용하기 위한 항체는 전형적으로 "단리된", 예를 들어, 그들의 자연 환경의 적어도 하나의 성분으로부터 분리되었다. 특히, 항체는 예를 들어 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 전기영동 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC) 기술에 의해 결정되는 바와 같이 예를 들어, 적어도 95%, 적어도 96%; 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 초과 순도로 정제될 수 있다. 항체 순도 평가를 위한 방법의 리뷰를 위해서는, 예를 들어 [Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)] 을 참고한다.

본 발명의 바람직한 항체는 본질적으로 중화 항체이며, 즉, 이들은 PLA2-GIB 의 활성을 적어도 부분적으로 억제할 수 있다.

sPLA2-GIB 는 인지질의 sn-2 지방 아실 결합의 가수분해를 촉매하여 유리 지방산 및 리소인지질을 방출한다. 본 발명의 특정 항체는 인지질의 sn-2 지방 아실 결합의 가수분해와 같은 sPLA2-GIB 의 효소 활성을 억제한다. 이러한 특성을 시험하기 위한 방법은 실험 섹션에 상세히 개시된다. 본 발명에서 사용하기 위한 특정 항체는 sPLA2-GIB 의 이의 기질에의 결합을 억제한다. 본 발명에서 사용하기 위한 추가의 특정 항체는 CD4 T 세포에서 IL-7-유도된 포스포-STAT5 핵 전위의 sPLA2-GIB-매개 억제를 억제한다. 이러한 특성을 시험하기 위한 방법은 실험 섹션에 상세히 개시된다.

항체 또는 유도체의 중화 활성은 예를 들어, 결합 또는 생물학적 분석, 예를 들어, 실험 섹션에 기술된 바와 같은 시험을 사용하여 시험관 내 또는 생체 내에서 결정될 수 있다. 억제/중화는 완전하거나 부분적일 수 있다. 특히, 항체는 시험된 활성의 10% 이상, 바람직하게는 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상을 억제할 수 있다.

바람직한 구현예에서, 항체는 IgG, 예를 들어, gG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이다.

항체 또는 유도체는 통상적인 방법 및 배지를 사용하여 단리 및 보존될 수 있다. 이들은 동결건조될 수 있다. 이들은 동결될 수도 있다.

재조합 항체를 인코딩하는 핵산, 벡터 및 숙주 세포

또다른 양상에서, PLA2-GIB 억제제는 항-PLA2-GIB 항체, 또는 이의 경쇄 또는 중쇄, 또는 이의 가변 도메인을 인코딩하는 핵산 분자, 또는 상기 인코딩 서열에 상보적인 핵산이거나, 이를 포함하거나 또는 이들로 이루어진다.

핵산은 DNA (cDNA 또는 gDNA), RNA 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 이것은 단일 가닥 형태 또는 이중체 형태 또는 두 가지의 혼합물일 수 있다. 이것은 예를 들어 변형된 결합, 변형된 퓨린 또는 피리미딘 염기, 또는 변형된 당을 포함하는 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 이는 화학적 합성, 재조합, 및 돌연변이유발을 포함하는 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 핵산은 본 발명에 따른 항체의 서열로부터 추론될 수 있고, 코돈 사용은 핵산이 전사될 숙주 세포에 따라 적응될 수 있다. 이들 단계는 당업자에게 널리 공지된 방법에 따라 수행될 수 있고, 이들 중 일부는 참조 매뉴얼 Sambrook et al. 에 기재되어 있다. (Sambrook J, Russell D (2001) Molecular cloning: a laboratory manual, Third Edition Cold Spring Harbor).

핵산은 항체의 경쇄를 포함하는 아미노산 서열 및/또는 중쇄를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩할 수 있거나, 이러한 인코딩 서열에 상보적일 수 있다.

이러한 핵산 서열의 구체적인 예는 SEQ ID NO: 9-12 로서 제공된 서열을 포함한다.

본 발명은 본 발명의 핵산을 포함하는 벡터를 추가로 제공한다. 임의로, 벡터는 본 발명의 여러 핵산을 포함할 수 있다. 특히, 벡터는 조절 영역, 즉 하나 이상의 제어 서열을 포함하는 영역에 작동가능하게 연결된 본 발명의 핵산을 포함할 수 있다. 임의로, 벡터는 여러 조절 영역에 작동가능하게 연결된 본 발명의 여러 핵산을 포함할 수 있다.

"제어 서열" 이란 코딩 영역의 발현을 위해 필요한 핵산 서열을 의미한다. 제어 서열은 내인성 또는 이종성일 수 있다. 당업자가 현재 사용하는 공지의 제어 서열이 바람직할 것이다. 이러한 제어 서열은 프로모터, 신호 펩티드 서열 및 전사 종결자를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

용어 "작동가능하게 연결된" 은 제어 서열이 코딩 영역의 발현을 지시하는 방식으로 제어 서열이 코딩 서열에 대해 적절한 위치에 위치하는 배열을 의미한다.

본 발명은 또한 숙주 세포를 형질전환, 형질감염 또는 형질도입하기 위한 본 발명에 따른 핵산 또는 벡터의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 발명의 하나 또는 여러 핵산 및/또는 본 발명의 하나 또는 여러 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.

용어 "숙주 세포" 는 또한 복제 동안 발생하는 돌연변이로 인해 모체 숙주 세포와 동일하지 않은 모체 숙주 세포의 임의의 자손을 포함한다.

항체-인코딩 벡터의 클로닝 또는 발현을 위해 적합한 숙주 세포는 원핵세포 또는 진핵세포, 예컨대 박테리아, 효모, 곤충 세포, 포유동물 세포 등을 포함한다.

억제성 핵산

또다른 구현예에서, PLA2-GIB 억제제는 억제성 핵산, 즉, PLA2-GIB 유전자 또는 단백질 발현을 억제하는 임의의 핵산 분자이다. 바람직한 억제성 핵산은 안티센스 핵산, 짧은 간섭 RNA (siRNA), 작은 헤어핀 RNA (shRNA), 마이크로RNA, 앱타머 또는 리보자임을 포함한다. 특정 구현예에서, 억제성 핵산은 PLA2-GIB mRNA 의 번역을 방지하는 작은 간섭 RNA 이다. 또다른 특정 구현예에서, 억제성 핵산은 PLA2-GIB mRNA 의 번역을 방지하는 안티센스 올리고뉴클레오티드이다. 또다른 특정 구현예에서, 억제성 핵산은 PLA2-GIB mRNA 의 번역을 방지하는 작은 헤어핀 RNA 이다.

siRNA 는 관심 폴리뉴클레오티드의 센스 핵산 서열 및 안티센스 핵산 서열을 포함한다. siRNA 는 단일 전사체 (이중 가닥 RNA) 가 표적 유전자로부터의 센스 및 상보적 안티센스 서열 둘 다를 갖도록 구성된다. siRNA 의 뉴클레오티드 서열은 예를 들어, 월드 와이드 웹 상의 Ambion 웹사이트로부터 입수가능한 siRNA 디자인 컴퓨터 프로그램을 사용하여 디자인될 수 있다.

일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 siRNA 의 길이는 10 뉴클레오티드 이하이다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드및 siRNA 의 길이는 자연 발생 전사체만큼 길다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 siRNA 는 18-30 뉴클레오티드를 갖는다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 siRNA 는 25 미만의 뉴클레오티드 길이를 갖는다.

바람직한 억제성 핵산 분자는 PLA2-GIB 유전자 또는 RNA 의 영역에 완전히 상보적인 뉴클레오티드 서열을 갖는 도메인을 포함한다. 이러한 도메인은 전형적으로 4 내지 20 개의 뉴클레오티드를 함유하여, 유전자 전사 또는 RNA 번역에 대한 특이적 혼성화 및 최적 억제를 허용한다. 억제성 핵산의 서열은 SEQ ID NO: 2 와 같은 PLA2-GIB 을 인코딩하는 유전자의 서열로부터 직접 유도될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 억제성 핵산은 PLA2-GIB 유전자 또는 RNA 내의 조절 요소, 예컨대 프로모터, 스플라이싱 부위 등에 혼성화될 수 있고, 이의 효과적인 조절을 방지할 수 있다.

본 발명의 억제성 핵산 분자의 구체적인 예는 SEQ ID NO: 1 을 인코딩하는 서열의 10 내지 50 개의 연속적인 뉴클레오티드로 이루어진 단리된 단일 가닥 핵산 분자를 포함한다. 본 발명의 억제성 핵산 분자의 구체적인 예는 하기 뉴클레오티드 서열 또는 이의 완전한 상보성 가닥으로 이루어진 안티센스 핵산이다:

펩티드 및 소형 약물

대안적인 구현예에서, PLA2-GIB 억제제는 PLA2-GIB 의 활성을 억제하는 펩티드 또는 소형 약물이다. 펩티드 또는 소형 약물은 전형적으로 PLA2-GIB, 또는 PLA2-GIB 의 기질, 또는 PLA2-GIB 의 보조인자, 또는 PLA2-GIB 경로의 분해 산물 또는 대사산물에 선택적으로 결합하는 분자이다.

펩티드는 바람직하게는 3 내지 20 개의 아미노산 잔기를 함유하며, 이들의 서열은 PLA2-GIB (미끼 펩티드) 의 도메인 또는 PLA2-GIB 기질, 보조인자, 분해 산물 또는 대사산물의 도메인과 동일할 수 있다. 본 발명의 바람직한 펩티드는 SEQ ID NO: 1 또는 2 (또는 SEQ ID NO: 1 또는 2 의 천연 변이체의 상응하는 서열) 의 4 내지 30 개의 연속적인 아미노산 잔기를 함유한다. 본 발명의 가장 바람직한 펩티드는 SEQ ID NO: 2 의 (또는 SEQ ID NO: 2 의 천연 변이체의 상응하는 서열의) 5 내지 25 개의 연속 아미노산 잔기를 포함하고, SEQ ID NO: 2 의 (또는 SEQ ID NO: 2 의 천연 변이체의 상응하는 서열의) 다음의 아미노산 잔기: 아미노산 3, 아미노산 6, 아미노산 7, 아미노산 10, 아미노산 70, 아미노산 121, 아미노산 50, 아미노산 52, 아미노산 54, 아미노산 71, 아미노산 75, 아미노산 77, 아미노산 79, 아미노산 80, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 추가로 포함한다. 본 발명의 펩티드의 구체적인 예는 하기 서열 중 어느 하나를 포함하는 25 개 미만의 아미노산의 펩티드이다:

본 발명에 사용하기 위한 다른 펩티드는 WO2017/060405 호에 개시된 펜타펩티드를 포함하며, 이는 참고문헌으로 여기에 포함된다. 특정 구현예에서, 화합물은 FLSYK (SEQ ID NO: 32), FLSYR (SEQ ID NO: 33) 및 (2NapA)LS(2NapA)R (SEQ ID NO: 34) 로부터 선택된 시클릭 펩티드이다.

본 발명의 펩티드는 펩티드, 비-펩티드 및/또는 변형된 펩티드 결합을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 펩티드는 메틸렌 (-CH₂-) 또는 포스페이트 (-PO₂-) 기, 2차 아민 (-NH-) 또는 산소 (-O-), 알파-아자펩티드, 알파-알킬펩티드, N-알킬펩티드, 포스폰아미드, 뎁시펩티드, 히드록시메틸렌, 히드록시에틸렌, 디히드록시에틸렌, 히드록시에틸아민, 레트로-인버소 펩티드, 메틸렌옥시, 세토메틸렌, 에스테르, 포스피네이트, 포스피닉, 또는 포스폰아미드의 삽입으로부터 선택된 적어도 하나의 펩티도미메틱 결합을 포함한다. 또한, 펩티드는 예를 들어 아실화, 및/또는 아미드화 및/또는 에스테르화에 의해 보호된 N-ter 및/또는 C-ter 기능을 포함할 수 있다.

본 발명의 펩티드는 화학적, 생물학적, 및/또는 유전적 합성과 같은 당업계에 그 자체로 공지된 기술에 의해 생성될 수 있다.

단리된 형태의 이들 펩티드 각각은 본 발명의 특정 목적을 나타낸다.

바람직한 소형 약물은 PLA2-GIB 에 선택적으로 결합하는 탄화수소 화합물이다.

소형 약물의 예로는 참조로서 본원에 도입되는, WO2017/037041 에 개시된 것과 같은 인돌 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 3-(2-아미노-1,2-디옥소에틸)-2-에틸-1-(페닐메틸)-1H-인돌-4-일)옥시)아세트산, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 또는 이의 프로드러그, 예컨대 이의 나트륨 염 (Varespladib) 이다.

소형 약물 및 펩티드는 바람직하게는 하기 단계를 포함하는 방법에 의해 수득될 수 있다: (i) 시험 화합물을 PLA2-GIB 또는 이의 단편과 접촉시키는 단계, (ii) PLA2-GIB 또는 상기 이의 단편에 결합하는 시험 화합물을 선택하는 단계, 및 (iii) PLA2-GIB 의 활성을 억제하는 (ii) 의 화합물을 선택하는 단계. 이러한 방법은 본 발명의 특정 목적을 나타낸다.

소형 약물 및 펩티드는 또한 하기 단계를 포함하는 방법에 의해 수득될 수 있다: (i) 시험 화합물을 PLA2-GIB 기질, 보조인자 또는 분해 산물, 또는 이의 단편과 접촉시키는 단계, (ii) 상기 PLA2-GIB 기질, 보조인자 또는 분해 산물, 또는 이의 단편에 결합하는 시험 화합물을 선택하는 단계, 및 (iii) PLA2-GIB 의 활성을 억제하는 (ii) 의 화합물을 선택하는 단계. 이러한 방법은 본 발명의 특정 목적을 나타낸다.

백신접종

대안적인 (또는 누적된) 구현예에서, PLA2-GIB 억제제는 PLA2-GIB 항원이다. 상기 항원을 이용한 대상체의 백신접종 또는 면역화의 결과로서, 대상체는 PLA2-GIB 를 억제하는 항체 (또는 세포) 를 생산한다. 특히, PLA2-GIB 항원 (예를 들어, 본질적으로 생물학적 활성이 없는 면역원성 PLA2-GIB) 의 주입(들) 은 치료된 대상체에서 항체를 생성할 수 있다. 이들 항체는 과량의 PLA2-GIB 발현에 대해 보호할 것이며, 면역요법 또는 백신 예방으로서 함께 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 목적은 PLA2-GIB 항원을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 고형 암을 갖는 대상체에서 고형 암을 치료하는 방법에 있다.

본 발명의 추가의 목적은 고형 암 치료를 필요로 하는 대상체에서 고형 암을 치료하는데 사용하기 위한 PLA2-GIB 항원에 관한 것이다.

특정 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 대상체에서 PLA2-GIB 에 대한 면역 반응을 유도하는 불활성화된 면역원성 분자이다. 불활성화는, 예를 들어, PLA2-GIB 를 화학적으로 또는 물리적으로 변경시키거나, 단백질을 돌연변이 또는 절단하거나, 또는 둘 다에 의해 수득될 수 있고; 면역원성은 불활성화의 결과로서 및/또는 KLH, HSA, 폴리리신, 바이러스 아나톡신 등과 같은 적합한 담체 또는 합텐에 단백질을 추가로 컨쥬게이션시킴으로써 및/또는 중합 등에 의해 수득될 수 있다. 따라서, 항원은 예를 들어, 그의 면역원성을 개선하기 위해 화학적으로 또는 물리적으로 변형될 수 있다.

바람직한 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 PLA2-GIB 또는 에피토프-함유 단편 또는 이의 미노토프를 포함한다.

특정 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 전장 PLA2-GIB 단백질을 포함한다. 추가의 특정 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 SEQ ID NO: 2, 또는 SEQ ID NO: 2 와 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 단백질을 포함한다.

대안적인 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 적어도 6 개의 연속 아미노산 잔기를 포함하고 면역원성 에피토프를 함유하는 PLA2-GIB 단백질의 단편, 또는 이의 미노토프를 포함한다. 바람직한 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 적어도 6 내지 20 개의 아미노산 잔기를 포함한다. 본 발명의 바람직한 펩티드는 SEQ ID NO: 2 (또는 SEQ ID NO: 2 의 천연 변이체의 상응하는 서열) 의 4 내지 30 개의 연속 아미노산 잔기를 함유한다. 본 발명의 가장 바람직한 펩티드는 SEQ ID NO: 2 의 (또는 SEQ ID NO: 2 의 천연 변이체의 상응하는 서열의) 5 내지 25 개의 연속 아미노산 잔기를 포함하고, SEQ ID NO: 2 의 (또는 SEQ ID NO: 2 의 천연 변이체의 상응하는 서열의) 다음의 아미노산 잔기: 아미노산 3, 6, 7, 10, 70, 121, 50, 52, 54, 71, 75, 77, 79, 80, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 추가로 포함한다. 본 발명의 펩티드의 구체적인 예는 하기 서열 중 어느 하나를 포함하는 50 개 미만의 아미노산의 펩티드이다:

PLA2-GIB 항원은 다양한 형태, 예컨대 자유 형태, 중합된, 화학적으로 또는 물리적으로 변형된, 및/또는 담체 분자에 커플링된 (즉, 연결된) 것일 수 있다. 담체에 대한 커플링은 면역원성을 증가시키고 (추가로) PLA2-GIB 폴리펩티드의 생물학적 활성을 억제할 수 있다. 이때, 담체 분자는 면역학에 통상적으로 사용되는 임의의 담체 분자 또는 단백질, 예컨대 예를 들어 KLH (키홀 림펫 헤모시아닌), 난백알부민, 소 혈청 알부민 (BSA), 바이러스성 또는 세균성 아나톡신, 예컨대 톡소이드 테타노스, 톡소이드 디프테릭 B 콜레라 독소, 이의 돌연변이체, 예컨대 디프테리아 독소 CRM 197, 외막 소포 단백질, 폴리리신 분자, 또는 바이러스 유사 입자 (VLP) 일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 담체는 KLH 또는 CRM197 또는 VLP 이다.

담체에 대한 PLA2-GIB 의 커플링은 연결 화학기 또는 반응, 예를 들어 글루타르알데히드, 비오틴 등을 사용하는 공유 화학에 의해 수행될 수 있다. 바람직하게는, 컨쥬게이트 또는 PLA2-GIB 단백질 또는 단편 또는 미노토프는 PLA2-GIB 의 불활성화를 완료하기 위해 포름알데히드로 처리된다.

특정 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 임의로 담체 단백질에 커플링된, 전장 PLA2-GIB 단백질을 포함한다. 바람직한 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 담체 단백질에 커플링된, SEQ ID NO: 2, 또는 SEQ ID NO: 2 와 적어도 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 단백질을 포함한다.

또다른 특정 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 임의로 담체 단백질에 커플링된, PLA2-GIB 의 면역원성 펩티드 또는 미노토프를 포함한다. 더욱 바람직한 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 임의로 담체 분자에 커플링된, SEQ ID NO: 2 의 다음의 아미노산 잔기 (또는 SEQ ID NO: 2 의 천연 변이체의 상응하는 서열): 아미노산 70, 아미노산 121, 아미노산 50, 아미노산 52, 아미노산 54, 아미노산 71, 또는 이들의 조합 중 적어도 하나를 포함하는 적어도 10 개의 아미노산 길이의 폴리펩티드를 포함한다.

PLA2-GIB 항원의 면역원성은 다양한 방법, 예컨대 인간 면역 세포로 이식된 비인간 동물의 면역화, 이어서 항체의 존재의 검증, 또는 인간 또는 인간화 항체를 사용하는 샌드위치 ELISA 에 의해 시험될 수 있다. 생물학적 활성의 결여는 본 출원에 기재된 임의의 활성 시험에 의해 검증될 수 있다. 바람직한 구현예에서, PLA2-GIB 항원은 (i) CD4 T 세포에서 막 마이크로도메인 (MMD) 의 형성을 유도하거나 또는 (ii) CD4 T 세포가 IL-2 신호전달에 불응하거나 IL-7 신호전달에 불응하도록 하는 시험관 내 방법에서 야생형 PLA2-GIB 단백질의 활성의 20% 미만, 더욱 바람직하게는 15%, 10%, 5% 미만 또는 심지어 1% 미만을 갖는다.

이러한 분자 및 컨쥬게이트 및 백신은 대상체를 면역화하는데 사용하기 위한 강력한 작용제를 나타내며, 이로써 지속적인 PLA2-GIB 억제를 야기한다. 반복 시, 이러한 방법은 영구적인 PLA2-GIB 억제를 야기하는데 사용될 수 있다.

본 발명의 추가적인 양상 및 이점은 하기의 실험 섹션에 개시되며, 이는 예시적인 것으로 고려될 것이다.

실시예

A. 재료 및 방법

A1. PLA2GIB 샌드위치 ELISA

proPLA2-GIB, PLA2GIB 또는 둘 모두의 형태에 특이적인 샌드위치 ELISA 를 이전에 생성된 mAb 를 사용하여 수행하였다. proPLA2GIB 의 검출을 위해, #8G11 mAb 를 포획 항체로서 사용하였고, #1C11 mAb 를 발현 mAb 로서 사용하였다. PLA2GIB 의 검출을 위해, #14G9 mAb 를 포획 항체로서 사용하였고, #1C11 mAb 를 발현 mAb 로서 사용하였다. 두 형태의 검출을 위해, #7A10 mAb 를 포획 항체로서 사용하였고, #1C11 mAb 를 발현 mAb 로서 사용하였다. 전형적인 분석 조건은 다음과 같았다: #8G11- 또는 #14G9-코팅된 마이크로플레이트를 재조합 인간 proPLA2GIB 또는 PLA2GIB 표준 (분석 완충액 중 다양한 농도의 단백질) 과 함께 1 시간 동안 인큐베이션하여 교정 곡선을 생성하였다. EDTA 혈장 샘플을 희석 완충제 중에서 각각의 웰에 희석시키고 (5- 내지 50-배), ELISA 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 흡인 후, Tween 20 0.05% 를 포함하는 PBS 로 웰을 3 회 세척하고, 바이오티닐화 #1C11 컨쥬게이트를 실온에서 30 분 동안 웰에 첨가하였다. 0.05% Tween 20 을 함유하는 PBS 로 세척한 후, 실온에서 15 분 동안 스트렙타비딘-HRP 컨쥬게이트로 처리하여 mAb 의 결합을 검출하였다. TMB 를 첨가하고, 반응을 중단하고, 마이크로플레이트 판독기 상에서 450 nm 에서의 흡광도를 측정하였다. 신호를 Prism™ 소프트웨어 (Graph Pad) 를 사용하여 4-파라미터 피트 분석으로 분석하였다.

A2. IL7-유도된 포스포-STAT5 핵 전위

인간 CD4 를 RosetteSep 분리 키트 (Stemcell Technologies, #15062) 을 사용하여 정제하였다. 5% 우태혈청 (FBS), 50 mM HEPES pH 7.4, 글루타민, 페니실린, 스트렙토마이신 및 진균존 (완전 배지) 이 보충된 RPMI 1640 배지 (Lonza, Verviers, Belgium) 에 CD4 T-세포를 10⁶ 세포/ml 로 재현탁시키고, 5% CO2 가습 분위기에서 37℃ 에서 적어도 2 시간 평형화시켰다.

pSTAT5 핵 전위를 공초점 현미경을 사용하여 수행하였다. 평형화 후, 고정된 세포를 2 nM IL-7 로 15 분 동안 활성화시키기 전에 혈장 (최종 농도 1% 또는 3%) 의 존재 하에 폴리리신-코팅된 유리 슬라이드 상에 플레이팅하였다.

PLA2GIB 중화 실험을 위해, 10 ㎍ (최종 농도) 의 #14G9 mAb 를 실온에서 25 분 동안 1 차 인큐베이션한 후, 혈장 (PBS 중 1 또는 3% 희석 v/v) 과 함께 37℃ 에서 5 분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 평형화된 혼합물을 37℃ 에서 30 분 동안 건강한 공여자로부터 단리된 CD4 T 세포에 첨가하였다. 이어서, 세포를 2 nM IL-7 로 15분 동안 활성화시켰다.

세포를 37℃ 에서 15 분 동안, 이어서 실온에서 15 분 동안 4% PFA 에 고정시키고, -20℃ 에서 90% 메탄올/수용액에 투과시켰다. pSTAT5 는 당나귀 항-토끼-AlexaFluor 555 (Life Technologies, #A31572) 으로 표지된 토끼 항-pSTAT5 (CST, #9359) 으로 염색하여 확인하였다. 인간 CD4 T 림프구에 대해, 세포를 염소 항-마우스-AlexaFluor 488 (Life Technologies, #A11029) 으로 표지된 마우스 항-인간 CD4 (eBioscience, #14-0042-82) 로 염색하였다. 마우스 CD4 T 림프구에 대해, 세포를 닭 항-래트-AlexaFluor 488 (Life Technologies, #A21470) 으로 표지된 래트 항-마우스 CD4 (eBioscience, #14-0042-85) 로 염색하였다. 수-침식 아포크로매틱 40x/1.2 NA 대물 렌즈 (Zeiss) 또는 유-침식 계획 아포크로매틱 63x/1.4 NA 대물 렌즈 (Zeiss) 를 갖는 도립 레이저 스캐닝 공초점 현미경 (LSM700, Zeiss) 상에서 회절 한계 이상의 이미지를 획득하였다. 이미지를 획득하고 ZEN 소프트웨어 (Zeiss) 로 분석하였다.

A3. IL2-유도된 포스포-STAT5 핵 전위

IL-7 대신에 2 nM IL-2 를 사용한 것을 제외하고는, A2 에서와 동일한 프로토콜을 사용하였다.

B. 결과

B1. PDAC 환자로부터의 혈장에서 ELISA 에 의한 proPLAGIB, PLA2GIB, 또는 둘 모두의 형태의 검출

ELISA 샌드위치 방법을 사용하여 췌장 관 선암종 ("PDAC") 환자로부터 혈장 내 proPLA2GIB 및 PLA2GIB 분포를 조사하였다. 결과는 도 1 에 제시된다.

대조군 집단 (n = 99 명의 건강한 혈액 공여자) 에서, 평균 (SD) proPLA2GIB 수준은 7.8 (2.8) ng/mL 였고, 중앙값은 7.5 ng/mL 였다. 평균 (SD) PLA2GIB 는 287 (243) pg/mL 였고, 중앙값은 170 pg/mL 였다. 총 PLA2GIB 에 대한 평균 (SD) 값은 9.3 (3.2) ng/mL 였고, 중앙값은 9.1 ng/mL 였다.

PDAC 집단 (n=19) 에서, 평균 (SD) proPLA2GIB 수준은 10.1 (10.4) ng/mL 였고 중앙값은 8.9 ng/mL 였고; 평균 (SD) PLA2GIB 수준은 310 (345) pg/mL 였고 중앙값은 194 pg/mL 였고; 평균 (SD) 총 PLA2GIB 수준은 11.7 (10.5) ng/mL 였고 중앙값은 10.4 ng/mL 였다.

이 실험에서, 대조군과 PDAC 코호트 사이의 혈장에서 PLA2GIB 수준의 통계적으로 유의한 차이는 없었다.

B2. 인간 CD4 T 세포의 활성에 대한 PDAC 혈장의 시험관 내 효과.

본 발명자들은 포스포-STAT5 핵 전위 (pSTAT5 NT) 를 측정함으로써 CD4 T 세포의 IL-7 반응을 조절하기 위해 PDAC 환자로부터의 혈장의 용량을 시험하였다.

도 2A 에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들은 1% 및 3% 희석에서 CD4 T 세포 IL-7 반응에 대한 PDAC 혈장의 억제 효과를 관찰하였다. 이러한 결과는 암 환자에서 종양 미세환경 또는 혈장이 면역 조절, 예를 들어 억제를 제공한다는 것을 입증한다.

B3. 인간 CD4 T 세포의 PDAC 혈장-유도 불활성화에 대한 PLA2-GIB 억제제의 효과.

CD4 T 세포에서 IL-7 유도된 포스포-STAT5 핵 전좌에 대한 PDAC 환자로부터 단리된 혈장의 억제 효과를 상쇄하는 중화 항-PLA2GIB mAb (클론 14G9) 의 능력을 PDAC 환자로부터의 혈장 샘플을 #14G9 mAb 와 함께 인큐베이션함으로써 시험하였다.

도 2B 에 도시된 바와 같이, #14G9 mAb 는 PDAC 환자로부터의 혈장 샘플에 노출된 건강한 공여자의 인간 CD4 T 세포에서 포스포-STAT5 의 효과적인 IL-7-유도된 핵 전위를 회복시켰다. 따라서, PLA2-GIB 억제제는 암 대상체를 개선할 수 있다. 이러한 발견은 암이 T 세포를 PLA2-GIB 에 의한 불활성화에 민감하게 만드는 PLA2-GIB 보조인자를 함유한다는 것을 나타낸다.

B4. 인간 CD4 T 세포에서 IL-2-유도된 포스포-STAT5 핵 전위에 대한 PDAC 혈장의 시험관 내 효과.

본 발명자들은 포스포-STAT5 핵 전위 (pSTAT5 NT) 를 측정함으로써 CD4 T 세포의 IL-2 반응을 조절하기 위해 PDAC 환자로부터의 혈장의 용량을 시험하였다.

도 3A 에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들은 1% 및 3% 희석에서 CD4 T 세포 IL-2 반응에 대한 PDAC 혈장의 억제 효과를 관찰하였다. 이러한 결과는 암 환자에서 종양 미세환경 또는 혈장이 면역 억제를 제공한다는 것을 입증한다.

B5. 인간 CD4 T 세포의 PDAC 혈장-유도 불활성화에 대한 PLA2-GIB 억제제의 효과.

CD4 T 세포에서 IL2 유도된 포스포-STAT5 핵 전좌에 대한 PDAC 환자로부터 단리된 혈장의 억제 효과를 상쇄하는 중화 항-PLA2GIB mAb (클론 14G9) 의 능력을 PDAC 환자로부터의 혈장 샘플을 #14G9 mAb 와 함께 인큐베이션함으로써 시험하였다.

도 3B 에 도시된 바와 같이, #14G9 mAb 는 PDAC 환자로부터의 혈장 샘플에 노출된 건강한 공여자의 인간 CD4 T 세포에서 포스포-STAT5 의 효과적인 IL2-유도된 핵 전위를 회복시켰다. 따라서, PLA2-GIB 억제제는 암 대상체를 개선할 수 있다. 이러한 발견은 암이 T 세포를 PLA2-GIB 에 의한 불활성화에 민감하게 만드는 PLA2-GIB 보조인자를 함유한다는 것을 나타낸다.

B6. 인간 CD4 T 세포에 대한 암 환자로부터의 혈장의 시험관 내 효과.

상기 B2 에 개시된 바와 같이, 폐암 및 십이지장암 환자로부터의 혈장의 효과를 인간 T 세포에 대해 시험한다. 보다 구체적으로, 상기 혈장의 희석액을 제조하고 (1%), 이러한 샘플을 건강한 공여자로부터의 CD4 T 세포에 접촉시킨다. CD4 T 세포의 활성을 조절하는 이러한 샘플의 능력은 IL7 의 존재 하에 포스포-STAT5 핵 전위 (pSTAT5 NT) 를 측정함으로써 분석된다.

상기 혈장 샘플의 억제 효과는 폐암 환자에서 종양 미세환경 또는 혈장이 본 발명에 따라 회복될 수 있는 면역 억제를 제공함을 나타낼 수 있다.

<110> DIACCURATE <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING CANCER <130> B2952 <160> 34 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 148 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Lys Leu Leu Val Leu Ala Val Leu Leu Thr Val Ala Ala Ala Asp 1 5 10 15 Ser Gly Ile Ser Pro Arg Ala Val Trp Gln Phe Arg Lys Met Ile Lys 20 25 30 Cys Val Ile Pro Gly Ser Asp Pro Phe Leu Glu Tyr Asn Asn Tyr Gly 35 40 45 Cys Tyr Cys Gly Leu Gly Gly Ser Gly Thr Pro Val Asp Glu Leu Asp 50 55 60 Lys Cys Cys Gln Thr His Asp Asn Cys Tyr Asp Gln Ala Lys Lys Leu 65 70 75 80 Asp Ser Cys Lys Phe Leu Leu Asp Asn Pro Tyr Thr His Thr Tyr Ser 85 90 95 Tyr Ser Cys Ser Gly Ser Ala Ile Thr Cys Ser Ser Lys Asn Lys Glu 100 105 110 Cys Glu Ala Phe Ile Cys Asn Cys Asp Arg Asn Ala Ala Ile Cys Phe 115 120 125 Ser Lys Ala Pro Tyr Asn Lys Ala His Lys Asn Leu Asp Thr Lys Lys 130 135 140 Tyr Cys Gln Ser 145 <210> 2 <211> 126 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ala Val Trp Gln Phe Arg Lys Met Ile Lys Cys Val Ile Pro Gly Ser 1 5 10 15 Asp Pro Phe Leu Glu Tyr Asn Asn Tyr Gly Cys Tyr Cys Gly Leu Gly 20 25 30 Gly Ser Gly Thr Pro Val Asp Glu Leu Asp Lys Cys Cys Gln Thr His 35 40 45 Asp Asn Cys Tyr Asp Gln Ala Lys Lys Leu Asp Ser Cys Lys Phe Leu 50 55 60 Leu Asp Asn Pro Tyr Thr His Thr Tyr Ser Tyr Ser Cys Ser Gly Ser 65 70 75 80 Ala Ile Thr Cys Ser Ser Lys Asn Lys Glu Cys Glu Ala Phe Ile Cys 85 90 95 Asn Cys Asp Arg Asn Ala Ala Ile Cys Phe Ser Lys Ala Pro Tyr Asn 100 105 110 Lys Ala His Lys Asn Leu Asp Thr Lys Lys Tyr Cys Gln Ser 115 120 125 <210> 3 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 14G9 VL <400> 3 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Leu Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asn Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp 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325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 9 <211> 726 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2B L <400> 9 gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60 cagtgtgaga tcgtgatgac gcagtcgccg gcgacgctga gcgtgagtcc gggggagcgg 120 gcgacgctga gctgcaaggc gtcgcaggac gtgagcacgg ccgtcgcgtg gtatcaacag 180 aagccggggc aagcgccgcg gctgctgatc tactgggcga gcacgcggca cacgggcatc 240 ccggcgcgat tctcggggag ccggagcggg acggagtaca cgctgacgat ctcgtcgctg 300 caaagcgagg acttcgccgt ctactactgc cagcaggact actcgacgcc gccgacgttc 360 ggggggggta ccaaggtcga gatcaaacgt acggtcgcgg cgccttctgt gttcattttc 420 cccccatctg atgaacagct gaaatctggc actgcttctg tggtctgtct gctgaacaac 480 ttctacccta gagaggccaa agtccagtgg aaagtggaca atgctctgca gagtgggaat 540 tcccaggaat ctgtcactga gcaggactct aaggatagca catactccct gtcctctact 600 ctgacactga gcaaggctga ttacgagaaa cacaaagtgt acgcctgtga agtcacacat 660 caggggctgt ctagtcctgt gaccaaatcc ttcaataggg gagagtgctg atagtaaaag 720 ctttga 726 <210> 10 <211> 1431 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2B H <400> 10 gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60 cagtgtcaag tccagctcgt ccagagcggg gcggaagtca agaagccggg ggcgagcgtg 120 aaagtctcgt gcaaggcgag cggatatacg ttcacgaact actggattca ctgggtccgg 180 caagcgccgg ggcaggggct ggagtggatc gggaacatcg acccgtcgga cacgcggacg 240 cactacaacc agaagttcaa ggaccgggcg acgctgaccg tcgacaagag cacgagcacg 300 gcgtacatgg agctgtcgag cctgcggagc gaggacacgg ccgtctacta ctgcgcgcgg 360 cagacgctgt actacgaggc gctggactac tgggggcagg ggacgctcgt cacggtctcg 420 agcgctagca caaagggccc tagtgtgttt cctctggctc cctcttccaa atccacttct 480 ggtggcactg ctgctctggg atgcctggtg aaggattact ttcctgaacc tgtgactgtc 540 tcatggaact ctggtgctct gacttctggt gtccacactt tccctgctgt gctgcagtct 600 agtggactgt actctctgtc atctgtggtc actgtgccct cttcatctct gggaacccag 660 acctacattt gtaatgtgaa ccacaaacca tccaacacta aagtggacaa aagagtggaa 720 cccaaatcct gtgacaaaac ccacacctgc ccaccttgtc ctgcccctga actgctggga 780 ggaccttctg tgtttctgtt cccccccaaa ccaaaggata ccctgatgat ctctagaacc 840 cctgaggtga catgtgtggt ggtggatgtg tctcatgagg accctgaggt caaattcaac 900 tggtacgtgg atggagtgga agtccacaat gccaaaacca agcctagaga ggaacagtac 960 aattcaacct acagagtggt cagtgtgctg actgtgctgc atcaggattg gctgaatggc 1020 aaggaataca agtgtaaagt ctcaaacaag gccctgcctg ctccaattga gaaaacaatc 1080 tcaaaggcca agggacagcc tagggaaccc caggtctaca ccctgccacc ttcaagagag 1140 gaaatgacca aaaaccaggt gtccctgaca tgcctggtca aaggcttcta cccttctgac 1200 attgctgtgg agtgggagtc aaatggacag cctgagaaca actacaaaac aaccccccct 1260 gtgctggatt ctgatggctc tttctttctg tactccaaac tgactgtgga caagtctaga 1320 tggcagcagg ggaatgtctt ttcttgctct gtcatgcatg aggctctgca taaccactac 1380 actcagaaat ccctgtctct gtctcccggg aaatgatagt aaaagctttg a 1431 <210> 11 <211> 1426 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2B1 H <400> 11 gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60 cagtgtcaag tccagctcgt ccagagcggg gcggaagtca agaagccggg ggcgagcgtg 120 aaagtctcgt gcaaggcgag cggatatacg ttcacgaact actggattca ctgggtccgg 180 caagcgccgg ggcaggggct ggagtggatc gggaacatcg acccgtcgga cacgcggacg 240 cactacaacc agaagttcaa ggaccgggcg acgctgaccg tcgacaagag cacgagcacg 300 gcgtacatgg agctgtcgag cctgcggagc gaggacacgg ccgtctacta ctgcgcgcgg 360 cagacgctgt actacgaggc gctggactac tgggggcagg ggacgctcgt cacggtctcg 420 agcgctagca caaagggccc tagtgtgttt cctctggctc cctcttccaa atccacttct 480 ggtggcactg ctgctctggg atgcctggtg aaggattact ttcctgaacc tgtgactgtc 540 tcatggaact ctggtgctct gacttctggt gtccacactt tccctgctgt gctgcagtct 600 agtggactgt actctctgtc atctgtggtc actgtgccct cttcatctct gggaacccag 660 acctacattt gtaatgtgaa ccacaaacca tccaacacta aagtggacaa aagagtggaa 720 cccaaatcct gtgacaaaac ccacacctgc ccaccttgtc cggcgcctga agcggaagga 780 ggaccttctg tgtttctgtt cccccccaaa ccaaaggata ccctgatgat ctcgcgaacc 840 cctgaggtga catgtgtggt ggtggatgtg tctcatgagg accccgaagt caaatttaat 900 tggtatgtcg acggcgtcga ggtgcataat gccaaaacca agcctagaga ggaacagtac 960 aattcaacct acagagtcgt cagtgtgctg actgtgctgc atcaggattg gctgaatggc 1020 aaggaataca agtgtaaagt ctcaaacaag gccctgcctg ctccaattga gaaaacaatc 1080 tcaaaggcca agggacagcc tagggaaccc caggtctaca ccctgccacc ttcaagagag 1140 gaaatgacca aaaaccaggt gtccctgaca tgcctggtca aaggcttcta cccttctgac 1200 attgctgtgg agtgggagtc aaatggacag cctgagaaca actacaaaac aaccccccct 1260 gtgctggatt ctgatggctc tttctttctg tactccaaac tgactgtgga caagtctaga 1320 tggcagcagg ggaatgtctt ttcttgctct gtcatgcatg aggctctgca taaccactac 1380 actcagaaat ccctgtctct gtctcccggg aaatgataag ctttga 1426 <210> 12 <211> 1503 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2B2 H <400> 12 gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60 cagtgtcaag tccagctcgt ccagagcggg gcggaagtca agaagccggg ggcgagcgtg 120 aaagtctcgt gcaaggcgag cggatatacg ttcacgaact actggattca ctgggtccgg 180 caagcgccgg ggcaggggct ggagtggatc gggaacatcg acccgtcgga cacgcggacg 240 cactacaacc agaagttcaa ggaccgggcg acgctgaccg tcgacaagag cacgagcacg 300 gcgtacatgg agctgtcgag cctgcggagc gaggacacgg ccgtctacta ctgcgcgcgg 360 cagacgctgt actacgaggc gctggactac tgggggcagg ggacgctcgt cacggtctcg 420 agcgctagca caaagggccc tagtgtgttt cctctggctc cctcttccaa atccacttct 480 ggtggcactg ctgctctggg atgcctggtg aaggattact ttcctgaacc tgtgactgtc 540 tcatggaact ctggtgctct gacttctggt gtccacactt tccctgctgt gctgcagtct 600 agtggactgt actctctgtc atctgtggtc actgtgccct cttcatctct gggaacccag 660 acctacattt gtaatgtgaa ccacaaacca tccaacacta aagtggacaa aagagtggaa 720 cccaaatcct gtgacaaaac ccacacctgc ccaccttgtc cggcgcctga agcggaagga 780 ggaccttctg tgtttctgtt cccccccaaa ccaaaggata ccctgatgat ctcgcgaacc 840 cctgaggtga catgtgtggt ggtggatgtg tctcatgagg accccgaagt caaatttaat 900 tggtatgtcg acggcgtcga ggtgcataat gccaaaacca agcctagaga ggaacagtac 960 aattcaacct acagagtcgt cagtgtgctg actgtgctgc atcaggattg gctgaatggc 1020 aaggaataca agtgtaaagt ctcaaacaag gccctgcctg cttcaattga gaaaacaatc 1080 tcaaaggcca agggacagcc tagggaaccc caggtctaca ccctgccacc ttcaagagag 1140 gaaatgacca aaaaccaggt gtccctgaca tgcctggtca aaggcttcta cccttctgac 1200 attgctgtgg agtgggagtc aaatggacag cctgagaaca actacaaaac aaccccccct 1260 gtgctggatt ctgatggctc tttctttctg tactccaaac tgactgtgga caagtctaga 1320 tggcagcagg ggaatgtctt ttcttgctct gtcatgcatg aggctctgca taaccactac 1380 actcagaaat ccctgtctct gtctcccggg aaatgataag ctttgatgtc atgcatgagg 1440 ctctgcataa ccactacact cagaaatccc tgtctctgtc tcccgggaaa tgataagctt 1500 tga 1503 <210> 13 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 13 atgaaactcc ttgtgctag 19 <210> 14 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 14 acagcggcat cagc 14 <210> 15 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 15 ttccgcaaaa tgatcaa 17 <210> 16 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 16 cccggggagt gacccc 16 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 17 tacggctgct actgtggctt 20 <210> 18 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 18 gacacatgac aactgctacg acc 23 <210> 19 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 19 acccacacct attcatactc gt 22 <210> 20 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 20 atcacctgta gcagca 16 <210> 21 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 21 agctccatat aacaaggca 19 <210> 22 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Nucleic Acid <400> 22 caagaagtat tgtcagag 18 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 23 Asn Asn Tyr Gly Cys Tyr 1 5 <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 24 Cys Tyr Cys Gly Leu Gly 1 5 <210> 25 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 25 Tyr Asn Asn Tyr Gly Cys Tyr Cys Gly Leu Gly Gly Ser Gly 1 5 10 <210> 26 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 26 Phe Leu Glu Tyr Asn Asn Tyr Gly Cys Tyr Cys Gly Leu Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Thr Pro Val 20 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 27 Gln Thr His Asp Asn 1 5 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 28 Cys Gln Thr His Asp Asn Cys 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 29 Glu Cys Glu Ala Phe Ile Cys Asn Cys 1 5 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 30 Asp Arg Asn Ala Ala Ile 1 5 <210> 31 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 31 Asp Arg Asn Ala Ala Ile Cys Phe Ser Lys Ala Pro Tyr Asn Lys Ala 1 5 10 15 His Lys Asn Leu 20 <210> 32 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 32 Phe Leu Ser Tyr Lys 1 5 <210> 33 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <400> 33 Phe Leu Ser Tyr Arg 1 5 <210> 34 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Inhibitory Peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X is 2-NaphtylAlanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X is 2-NaphtylAlanine <400> 34 Xaa Leu Ser Xaa Arg 1 5

Claims

암 또는 신생물 치료를 필요로 하는 대상체에서 암 또는 신생물을 치료하기 위해 사용하기 위한 PLA2-GIB 을 억제하는 화합물.
제 1 항에 있어서, 화합물이 PLA2-GIB 에 결합하는 항체 또는 이의 단편 또는 유도체인 화합물.
제 2 항에 있어서, 화합물이 모노클로날 항체인 화합물.
제 3 항에 있어서, 모노클로날 항체가 인간 또는 인간화된 화합물.
제 1 항에 있어서, 화합물이 3-(2-아미노-1,2-디옥소에틸)-2-에틸-1-(페닐메틸)-1H-인돌-4-일)옥시)아세트산, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물, 또는 프로드러그, 예컨대 이의 나트륨 염인 화합물.
제 1 항에 있어서, 화합물이 PLA2-GIB 에 대항하는 백신인 화합물.
제 1 항에 있어서, 화합물이 FLSYK, FLSYR 및 (2NapA)LS(2NapA)R 로부터 선택되는 시클릭 펩티드인 화합물.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 추가의 항암제, 백신, 또는 치료제와 조합하여 투여되는 화합물.
제 8 항에 있어서, 화합물이 화학요법 또는 호르몬요법과 조합하여 투여되는 화합물.
제 8 항에 있어서, 화합물이 방사능요법, 초음파 요법 또는 나노입자 요법과 조합하여 투여되는 화합물.
제 8 항에 있어서, 화합물이 체크-포인트 억제제, 면역요법 또는 항암 백신과 조합하여 투여되는 화합물.
제 8 항에 있어서, 화합물이 PLA2-GIB 의 보조인자의 억제제와 조합하여 투여되는 화합물.
제 12 항에 있어서, 억제제가 PLA2-GIB 보조인자의 길항제, 또는 PLA2-GIB 보조인자 또는 PLA2-GIB 보조인자를 발현하는 원핵 세포 또는 진핵 세포 또는 바이러스에 대한 세포증식억제제 또는 세포독성제 또는 백신인 화합물.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 수술 전, 그 동안 또는 그 후에 투여되는 화합물.
제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물이 반복하여 투여되는 화합물.
제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 고형 암인 화합물.
제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, PLA2-GIB 보조인자 또는 PLA2-GIB 보조인자를 발현하는 원핵 또는 진핵 세포 또는 바이러스가 상기 대상체에 존재하는 화합물.
제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, PLA2-GIB 또는 PLA2-GIB 보조인자가 암 미세환경 또는 혈액 내에 존재하는 화합물.
제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 PLA2GIB-관련 CD4 T 세포 결핍을 갖는 화합물.
제 16 항에 있어서. 암이 췌장암, 흑색종, 폐, 식도 또는 인두 암, 망막모세포종, 간, 유방, 난소, 신장, 위, 십이지장, 자궁, 자궁경부, 갑상선, 방광, 전립선, 골, 뇌 또는 결장직장 암으로부터 선택되는 화합물.
제 20 항에 있어서, 암이 췌장암인 화합물.
제 21 항에 있어서, 암이 췌장 선암종, 신경내분비 종양, 관내 유두상-점액성 신생물, 점액성 낭성 신생물, 및 심각한 낭성 신생물로부터 선택되는 화합물.
제 1 항에 있어서, 암이 위장관 및 대사성 병리를 유도하는 화합물.
제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 예방하기 위한 또는 암 발생률을 감소시키기 위한 화합물.
제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 진행 속도를 감소시키기 위한 화합물.
제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 암 전이를 감소 또는 예방 또는 치료하기 위한 화합물.
제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 암 세포를 사멸시키기 위한 화합물.
제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 암, 특히 구강-위장-장관 염증 또는 감염, 예컨대 췌장염에 대한 위험 인자를 치료하기 위한 화합물.
제 1 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간인 화합물.
제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 또는 체액 중의 PLA2-GIB 또는 PLA2-GIB 보조인자의 수준을 측정하여 치료 요법을 안내하는 화합물.