KR20220141035A - 과산화효소 활성에 의한 발색반응 기반의 하이포잔틴 검출방법 - Google Patents

과산화효소 활성에 의한 발색반응 기반의 하이포잔틴 검출방법 Download PDF

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김성현
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Abstract

본 발명은 하이포잔틴을 검출하는 방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 잔틴 산화효소(xanthine oxidase), 과산화효소(peroxidase) 또는 그 유사체 및 발색물질을 함유하는 조성물을 이용하여, 하이포잔틴을 검출하는 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 잔틴 산화효소와 과산화효소 및 그 유사체를 이용하여 시료 내 하이포잔틴을 검출 또는 정량하는 방법은 하이포잔틴을 단시간 내에 육안으로 간단하게 확인할 수 있고, 발색반응 신호 기반의 간편한 분석방법으로써 법의학 수사를 비롯하여 다양한 분야의 현장 진단용 기술로 활용 가능하다.

Description

과산화효소 활성에 의한 발색반응 기반의 하이포잔틴 검출방법{Method for Detecting Hypoxanthine Based on Colorimetric Reaction by Peroxidase Activity}
본 발명은 하이포잔틴을 검출하는 방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 잔틴 산화효소(xanthine oxidase), 과산화효소(peroxidase) 또는 그 유사체 및 발색물질을 함유하는 조성물을 이용하여, 하이포잔틴을 검출하는 방법에 관한 것이다.
시신의 사후 경과시간을 정확하게 판단하는 것은 사망사건의 수사에 있어 아주 중요한 일이다. 사후 경과시간의 추정을 위해 체온강하, 시반, 시체 강직, 부패 진행 등의 시체 현상 분석이 보편적으로 사용되고 있다. 그러나 시체 현상들은 외부 환경을 비롯하여 매우 다양한 인자들에 의해 민감하게 영향을 받고, 시신마다 개인차가 존재하기 때문에 정확한 사후 경과시간 추정을 어렵게 만든다.
위와 같은 문제점을 해결하기 위하여, 뇌척수액(cerebrospinal fluid, CSF)이나 유리체액(vitreous humor, VH)과 같은 체액의 사후 성분 변화를 분석하여 사후 경과시간을 추정하는 방법이 제시되었다. 특히, 유리체는 해부학적으로 격리되어 있어(isolated) 외부 환경에 따른 오염이나 자가융해(autolysis) 같은 사후 변화가 다른 체액에서보다 천천히 일어나는 것으로 알려져 있어, 생화학 분석에 적합한 시료로서 연구되고 있다.
하이포잔틴(hypoxanthine)은 아데노신 삼인산(adenosine 5'-triphosphate, ATP)이 분해되어 생성되는 퓨린 유도체로, 유리체액 내의 하이포잔틴 농도는 사망 직후부터 경과시간에 따라 일정하게 증가하므로, 하이포잔틴을 사후 경과시간 추정을 위한 바이오마커로서 활용할 수 있다 (Rognum et al., Forensic Science International, 51, 139-146, 1991).
하이포잔틴의 검출 및 정량을 위해 가장 널리 사용되는 방법으로는 고성능 액체 크로마토그래피(high-performance liquid chromatography, HPLC), 액체 크로마토그래피-질량 분석법(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS) 등이 있으나, 상기 방법은 고가의, 대형의 장비가 요구되며, 전문 연구소나 병원과 같은 대형 기관에서 사용되는 등 사건 현장에서 직접 사용하기에는 적합하지 않다는 한계를 가지고 있다.
이에, 본 발명자들은 상기 종래 기술들의 한계점을 해결하며 간편하게 하이포잔틴의 유무를 검출할 수 있는 방법을 개발하기 위하여 예의 노력한 결과, 하이포잔틴이 잔틴 산화효소의 작용에 의해 잔틴을 거쳐 요산으로 전환되며 발생하는 과산화수소가 과산화효소의 작용에 의해 발색기질을 산화시켜 흡광도가 변화하는 것을 이용하여 하이포잔틴을 간편하게 측정할 수 있다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 고가의 대형 장비를 필요로 하지 않는 과산화효소의 작용을 이용한 하이포잔틴의 검출 또는 정량방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 하이포잔틴 검출용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 하이포잔틴의 검출 또는 정량방법을 이용한 시신의 사후 경과시간을 측정하는 방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 시신의 사후 경과시간 측정용 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 하이포잔틴의 검출 또는 정량방법을 제공한다:
(a) 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 함유하는 하이포잔틴 검출용 조성물에 하이포잔틴 함유 시료를 첨가하여 반응시키는 단계; 및
(b) 상기 시료가 첨가된 조성물의 발색정도를 흡광도로 측정하여, 시료 내의 하이포잔틴을 검출 또는 정량하는 단계.
본 발명은 또한, 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 유효성분으로 포함하는 하이포잔틴의 검출용 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 다음 단계를 포함하는 시신의 사후 경과시간을 측정하는 방법을 제공한다:
(a) 사체 유래의 체액을 포함하는 시료를 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 함유하는 하이포잔틴 검출용 조성물과 반응시키는 단계; 및
(b) 상기 시료가 첨가된 조성물의 색변화를 흡광도를 이용하여 측정하여, 시료 내의 하이포잔틴을 검출 또는 정량하여, 시신의 사후 경과시간을 측정하는 단계.
본 발명은 또한, 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 유효성분으로 포함하는 시신의 사후 경과시간 측정용 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 잔틴 산화효소와 과산화효소 및 그 유사체를 이용하여 시료 내 하이포잔틴을 검출 또는 정량하는 방법은 하이포잔틴을 단시간 내에 육안으로 간단하게 확인할 수 있고, 발색반응 신호 기반의 간편한 분석 방법으로써 법의학 수사를 비롯하여 다양한 분야의 현장 진단용 기술로 활용 가능하다.
도 1은 본 발명에 따른 하이포잔틴 검출과정을 도식화한 것이다. 시료 내 하이포잔틴이 존재하면 하이포잔틴이 잔틴 산화효소에 의해 산화될 때 과산화수소(H2O2)가 발생하고, 과산화수소와 과산화효소에 의해 발색기질이 산화되어 발색되면, 색변화를 흡광도 측정을 통해 분석한다.
도 2는 잔틴 산화효소, 과산화효소, 하이포잔틴의 유무 및 조합에 따른 흡광도 변화를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명에 따른 하이포잔틴 검출방법을 이용하여 하이포잔틴 검출 민감도를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명에 따른 하이포잔틴 검출방법을 이용하여 하이포잔틴 검출 선택도를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
하이포잔틴(hypoxanthine)의 농도는 사망 시신의 유리체액 내에서 사망 직후부터 경과시간에 따라 일정하게 증가하므로, 하이포잔틴을 사후 경과시간 추정을 위한 바이오마커로서 활용할 수 있으나, 현재까지 고성능 크로마토그래피(HPLC)나 액체크로마토그래피-질량분석법(LS-MS)등의 고가의 장비를 이용하여 전문연구소에서만 분석이 가능하였다.
본 발명에서는 잔틴 산화효소 작용에 의해 시료 내에 존재하는 하이포잔틴의 산화, 이에 따른 과산화수소의 생성 및 과산화효소 작용에 의한 발색 기질의 산화에 따라 색변화 및 흡광도를 측정하여 시료 내 존재하는 하이포잔틴 존재 유무를 확인하고 정량하는 방법을 개발하였다.
시료 내 하이포잔틴이 존재하면 하이포잔틴이 잔틴 산화효소에 의해 산화될 때 과산화수소가 발생하고, 과산화수소와 과산화효소에 의해 발색 기질이 산화되며, 이로 인해 발색반응을 유도하고 색변화를 흡광도 측정을 통해 측정하여 하이포잔틴을 정량할 수 있으며, 정량된 하이포잔틴의 농도를 통해 시신의 사망경과 시간을 측정할 수 있다.
따라서, 본 발명은 일관점에서, 다음 단계를 포함하는 하이포잔틴의 검출 또는 정량방법에 관한 것이다:
(a) 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 함유하는 하이포잔틴 검출용 조성물에 하이포잔틴 함유 시료를 첨가하여 반응시키는 단계; 및
(b) 상기 시료가 첨가된 조성물의 발색정도를 흡광도로 측정하여, 시료 내의 하이포잔틴을 검출 또는 정량하는 단계.
본 발명에서는 잔틴 산화효소, 과산화효소와 그 유사체 및 발색 기질을 포함하는 하이포잔틴 검출용 조성물에 검출 시료를 첨가하여, 시료 내 하이포잔틴을, 잔틴을 거쳐 요산으로 산화시켜 과산화수소를 발생시키고, 생성된 과산화수소가 과산화효소의 작용에 의해 발색기질을 산화시키며, 하이포잔틴 검출용 조성물의 색변화를 흡광도를 이용해 측정하여, 시료 내 하이포잔틴을 검출 또는 정량할 수 있다.
본 발명의 하이포잔틴 검출방법은 도 1에 나타낸 반응에 의하여 수행되며, 본 발명의 상기 (a)단계는 하기와 같은 반응단계를 포함한다:
(i) 잔틴 산화효소에 의해 하이포잔틴이 잔틴으로, 연속하여 잔틴이 요산으로 산화되며 과산화수소가 생성되는 단계; 및 (ii) 과산화효소에 의해 과산화수소가 환원됨과 동시에 발색 기질이 산화하여 흡광도가 변화하는 단계.
본 발명의 (b) 단계에서는 상기 (a) 반응을 통해 변화한 흡광도를 측정하고, 흡광도의 변화 정도를 통하여 시료 내 하이포잔틴을 검출 및 정량할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 "잔틴 산화효소"는 하이포잔틴을 잔틴으로 전환시키며 과산화수소를 부산물로 생성시키며, 상기 생성된 잔틴을 다시 요산으로 산화시키며 과산화수소를 생성시키는 기능을 한다.
본 발명에서 사용되는 "과산화효소"는 상기 생성된 과산화수소를 물로 전환시키면서 발색물질에 전자를 전달하여 발색시키는 기능을 한다.
본 발명에서 사용되는 과산화 효소는 호스래디쉬 과산화효소, 콩 과산화효소 , 땅콩 과산화효소, 애기장대 과산화효소 등을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 과산화효소 또는 그 유사체는 과산화효소, 과산화효소 활성을 가지는 자성 나노입자 및 과산화효소 활성을 가지는 산화 그래핀으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 사용할 수 있고, 상기 발색 기질은 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), TMB( 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine), OPD(o-phenylenediamine dihydrochloride), DAB(3,3'-diaminobenzidine) 및 ADHP(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서는 잔틴 산화효소에 의해서 하이포잔틴이 잔틴으로, 연속하여 잔틴이 요산으로 산화되어 과산화수소가 발생하고, 상기 반응과 동시에 과산화효소에 의해서 잔틴 산화효소 반응으로 생성된 과산화수소는 다시 환원되고, 발색 기질이 산화된다. 시료 내 상기 두 효소 중 하나 이상 또는 하이포잔틴이 존재하지 않는 경우, 발색 기질의 산화가 진행되지 않아 흡광도가 변하지 않는 반면, 상기 두 효소와 하이포잔틴이 모두 존재하는 경우에만, 발색 기질이 산화하여 흡광도가 증가한다. 이러한 현상을 통하여 본 발명에 따른 잔틴 산화효소와 과산화효소 조합을 이용하여 하이포잔틴의 존재 유무를 흡광도를 측정하여 판단할 수 있다는 것을 규명하였다 (도 2).
다른 관점에서, 본 발명은 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 유효성분으로 포함하는 하이포잔틴의 검출용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 과산화효소 또는 그 유사체는 과산화효소, 과산화효소 활성을 가지는 자성 나노입자 및 과산화효소 활성을 가지는 산화 그래핀으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 사용할 수 있고, 상기 발색 기질은 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), TMB( 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine), OPD(o-phenylenediamine dihydrochloride), DAB(3,3'-diaminobenzidine) 및 ADHP(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 또한, 다음 단계를 포함하는 시신의 사후 경과시간을 측정하는 방법에 관한 것이다:
(a) 사체 유래의 체액을 포함하는 시료를 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 함유하는 하이포잔틴 검출용 조성물과 반응시키는 단계; 및
(b) 상기 시료가 첨가된 조성물의 색변화를 흡광도를 이용하여 측정하여, 시료 내의 하이포잔틴을 검출 또는 정량하여, 시신의 사후 경과시간을 측정하는 단계.
본 발명에서 "시신의 사후 경과시간"은 사망한 후 경과된 시간을 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 체액은 사체유래의 유리체액인 것을 특징으로 할 수 있다. 유리체액 내의 하이포잔틴 농도는 사망 직후부터 경과시간에 따라 일정하게 증가하여, 하이포잔틴의 농도를 측정하면 사후 경과시간을 추정할 수 있다.
아울러, 본 발명의 다른 실시예에서는, 서로 다른 농도의 표적 하이포잔틴을 첨가하였을 때 흡광도 변화를 측정하였다. 본 발명의 하이포잔틴 검출 한계 (limit of detection, LOD)가 10.81 nM인 것을 확인하였으며, 이러한 결과는 본 발명의 하이포잔틴 검출 기술이 유리체액 내의 하이포잔틴을 검출 및 정량하기에 충분한 검출 민감도를 가지는 것을 의미한다 (도 3).
본 발명에 있어서, 상기 과산화효소 또는 그 유사체는 과산화효소, 과산화효소 활성을 가지는 자성 나노입자 및 과산화효소 활성을 가지는 산화 그래핀으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 사용할 수 있고, 상기 발색 기질은 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), TMB( 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine), OPD(o-phenylenediamine dihydrochloride), DAB(3,3'-diaminobenzidine) 및 ADHP(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 또한, 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 유효성분으로 포함하는 시신의 사후 경과시간 측정용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 과산화효소 또는 그 유사체는 과산화효소, 과산화효소 활성을 가지는 자성 나노입자 및 과산화효소 활성을 가지는 산화 그래핀으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 사용할 수 있고, 상기 발색 기질은 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), TMB( 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine), OPD(o-phenylenediamine dihydrochloride), DAB(3,3'-diaminobenzidine) 및 ADHP(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
[실시예]
실시예 1. 하이포잔틴 검출 및 정량을 위한 반응 조건
본 하이포잔틴 검출 기술 반응 용액 제조 과정은 다음과 같으며, 이에 한정되지는 않는다. 하이포잔틴 검출 및 정량을 위한 반응용액 90μL를 제조하였다. 반응 용액은 포스페이트 버퍼(50mM, pH 7.4) 60μL, 호스래디쉬 과산화효소(20μg/mL, Sigma-Aldrich) 10μL, 잔틴 산화효소 (25U/mL, Sigma-Aldrich) 10μL, ABTS(10mM, Sigma-Aldrich) 10μL를 포함한다. 상기 제조된 반응용액에 하이포잔틴을 포함하는 분석시료 10μL를 넣어주고, 37℃에서 10분 동안 반응을 진행시킨다. 반응이 완료된 후, 파장에 따른 흡광도를 측정함으로써, 발색 기질 ABTS의 흡수파장 420nm에서 높은 흡광도를 나타내는 것을 확인하였다.
실시예 2. 하이포잔틴 검출의 민감도 및 선택도 검증
실시예 1에서 언급된 반응조건을 이용하여 분석시료에 포함된 하이포잔틴의 농도를 달리하여, 반응 후 흡광도를 측정하여 민감도 검증 실험을 진행하였다. 다양한 농도(0, 1, 2, 5, 7, 10, 20, 50, 70, 100μM)의 하이포잔틴을 포함하는 분석시료(10 μL)를 제조한 후, 본 하이포잔틴 검출 기술 반응을 수행한 결과, 본 기술의 표적 하이포잔틴 검출 한계(limit of detection, LOD)는 10.81nM인 것을 확인하였다 (도 3).
또한, 하이포잔틴을 포함하는 분석시료 10μL를 대신하여, ATP, GTP, CTP, TTP 및 UTP 중 1종을 포함하는 분석시료(10μL)를 이용하여 본 하이포잔틴 검출 기술 반응을 수행한 결과, 오직 하이포잔틴을 포함하는 분석시료에서만 발색 기질의 흡수파장인 420nm에서 증가한 흡광도 변화를 확인하였다 (도 4).
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (13)

  1. 다음 단계를 포함하는 하이포잔틴의 검출 또는 정량방법:
    (a) 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 함유하는 하이포잔틴 검출용 조성물에 하이포잔틴 함유 시료를 첨가하여 반응시키는 단계; 및
    (b) 상기 시료가 첨가된 조성물의 발색정도를 흡광도로 측정하여, 시료 내의 하이포잔틴을 검출 또는 정량하는 단계.
  2. 제1항에 있어서, 상기 과산화효소 또는 그 유사체는 과산화효소, 과산화효소 활성을 가지는 자성 나노입자 및 과산화효소 활성을 가지는 산화 그래핀으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 하이포잔틴의 검출 또는 정량방법
  3. 제1항에 있어서, 상기 발색 기질은 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), TMB( 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine), OPD(o-phenylenediamine dihydrochloride), DAB(3,3'-diaminobenzidine) 및 ADHP(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 하이포잔틴의 검출 또는 정량방법.

  4. 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 유효성분으로 포함하는 하이포잔틴의 검출용 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 과산화효소 또는 그 유사체는 과산화효소, 과산화효소 활성을 가지는 자성 나노입자 및 과산화효소 활성을 가지는 산화 그래핀으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 제4항에 있어서, 상기 발색 기질은 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), TMB( 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine), OPD(o-phenylenediamine dihydrochloride), DAB(3,3'-diaminobenzidine) 및 ADHP(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 다음 단계를 포함하는 시신의 사후 경과시간을 측정하는 방법:
    (a) 사체 유래의 체액을 포함하는 시료를 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 함유하는 하이포잔틴 검출용 조성물과 반응시키는 단계; 및
    (b) 상기 시료가 첨가된 조성물의 색변화를 흡광도를 이용하여 측정하여, 시료 내의 하이포잔틴을 검출 또는 정량하여, 시신의 사후 경과시간을 측정하는 단계.
  8. 제7항에 있어서, 상기 체액은 유리체액인 것을 특징으로 하는 시신의 사후 경과시간을 측정하는 방법.
  9. 제7항에 있어서, 상기 과산화효소 또는 그 유사체는 과산화효소, 과산화효소 활성을 가지는 자성 나노입자 및 과산화효소 활성을 가지는 산화 그래핀으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 시신의 사후 경과시간을 측정하는 방법.
  10. 제7항에 있어서, 상기 발색 기질은 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), TMB( 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine), OPD(o-phenylenediamine dihydrochloride), DAB(3,3'-diaminobenzidine) 및 ADHP(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 시신의 사후 경과시간을 측정하는 방법.
  11. 잔틴 산화효소, 과산화효소 또는 그 유사체 및 발색기질을 유효성분으로 포함하는 시신의 사후 경과시간 측정용 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 과산화효소 또는 그 유사체는 과산화효소, 과산화효소 활성을 가지는 자성 나노입자 및 과산화효소 활성을 가지는 산화 그래핀으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 시신의 사후 경과시간 측정용 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 상기 발색 기질은 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), TMB( 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine), OPD(o-phenylenediamine dihydrochloride), DAB(3,3'-diaminobenzidine) 및 ADHP(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine)로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 시신의 사후 경과시간 측정용 조성물.
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