KR20220108849A - 장수진흙버섯 추출물을 포함하는 항바이러스용 조성물 - Google Patents
장수진흙버섯 추출물을 포함하는 항바이러스용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 장수진흙버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 항바이러스용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 장수진흙버섯 추출물은 세포독성 없이 콕사키바이러스(CVB3), 인간 라이노바이러스(HRV1B), 인플루엔자바이러스(Inf/PR8) 및 인간 코로나바이러스(coronavirus 229E)에 대한 항바이러스 효과를 나타내므로, 장수진흙버섯 추출물을 포함하는 조성물을 항바이러스제 및 바이러스성 질환 예방, 치료 또는 개선 용도로 이용할 수 있다.
Description
본 발명은 장수진흙버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 항바이러스용 조성물 및 바이러스성 질환 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.
콕사키바이러스(coxsackievirus) 및 라이노바이러스(Rhinovirus)는 피코르나비리대과(피코르나바이러스과; picornavirus) 엔테로바이러스속(Enterovirus)에 속하는 바이러스로 지름이 27~30 nm 크기의 아주 작은 바이러스이다.
엔테로바이러스는 주로 하절기에 유ㆍ소아 층에 침범하여 감염자의 면역학적 특성에 따라 중증감염을 초래하기도 한다. 특히 위생이 나쁜 환경에서 흔하게 전파되는 전염성 병원체로써 감염경로는 분변-구강이며, 오염된 물과 토양을 통한 경구적인 전파로 이어진다. 감염자에서 배출된 분변속의 바이러스가 오수나 폐수를 통해 지하수, 하천, 해수로 흘러들어가 다시 사람에게로 전염되는데, 드물게는 호흡기 분비물을 통해서도 감염 된다. 엔테로바이러스는 소화기를 통해 감염된 후 인후두 부위나 소장의 림프절에서 일차적으로 증식한 후 신체의 각 장기로 이동 한다. 임상증상은 경증질환으로는 발진, 감기, 근육통, 불명열등을 유발하고 심각한 질환으로는 뇌수막염, 뇌염, 간염, 췌장염, 늑막염, 심근염, 심외막염, 심근증을 유발한다.
콕사키바이러스는 뉴욕주의 콕사키에서 감염된 어린이의 대변에서 분리되었으며, 엔테로바이러스속에 속하는 바이러스로, 입자는 지름 27~28nm의 정20면체로 유전체는 7,401염기의 (＋)사슬 RNA이며, 경구적으로 감염된다. 콕사키바이러스는 콕사키바이러스 A와 콕사이바이러스 B의 두가지 그룹으로 존재하며, 콕사키바이러스 A는 이완마비, B는 경련성마비를 일으킨다. 콕사키바이러스 B3(coxsackievirus B3; CVB3)는 인간뿐 아니라 마우스에서도 감염이 되는 것으로 알려져 있으며, 간, 심장, 뇌, 척수 및 췌장에 감염되는 것으로 알려져 있다. 유발 질환으로는, 수막염, 근육염, 심근염 마비 등이 있으며, 특히, 콕사키바이러스 B는 심각할 경우 심장이식까지 필요한 특발성 확장성 심근증(idiopathic dilated cardiomyopathy)인 심근염(myocarditis)의 원인으로 알려져 있다. 현재, 효과적인 치료제는 아직 개발되지 않았다.
인간 라이노바이러스(human rhinovirus)는 사람 대 사람 접촉을 통하여 전염되는 것이 가장 흔하고 때로는 손에 묻은 오염된 분비물에 의하여 자가접종됨으로써 전염될 수 있다. 연중 발생하지만 섭씨 33~35℃에서 가장 잘 증식하는 병원체의 특성상 가을부터 봄에 이르는 기간에 계절성 역학을 보이고, 성인과 소아에서 피로감, 두통, 근육통, 미열 등의 비교적 경한 증상을 보이는 상기도 감염증의 주된 원인 바이러스로 알려져 있었다. 최근에는 기관지 과민성을 가진 환자에서 천명 및 천식 병증의 악화요인 중 하나일 뿐만 아니라 만성 폐쇄성 폐질환의 악화 원인으로도 알려져 왔다.
인플루엔자바이러스(influenza virus)는 오르토믹소비리대과(오르토믹소바이러스과; Orthomyxovirus)의 RNA 바이러스로서 전염성 호흡기 질병을 유발하며, 이러한 바이러스로 인한 호흡기 질병의 종류로는 폐기종, 만성기관지염, 기관지선종, 고립성폐결절, 폐결핵, 농흉, 폐농양, 감기, 독감 및 폐의 조직구 증식증 등이 있다. 상기 인플루엔자바이러스는 A, B 및 C형으로 분류되며, A형 바이러스의 경우 사람에게 주로 감염이 확인되는 바이러스이며, 매년 전세계적으로 독감 유행을 일으켜 높은 비율로 감염 환자를 발생시키며 특히 노인과 영유아, 각종 호흡기 또는 내과 질환이 있는 환자의 사망률을 높이고 있다.
코로나바이러스(coronavirus)는 외피가 있는 단일가닥의 양성 RNA 바이러스이며 게놈 크기는 25-32kb로 지금까지 알려진 RNA 바이러스 중에서는 비교적 큰 바이러스에 속한다. 외피에 곤봉모양의 돌기인 스파이크(spike) 단백질이 박혀 있어 화염 또는 왕관 모양의 특이적 구조를 가지고 있고, 라틴어 Corona로부터 바이러스 이름이 유래되었다고 한다. 사람에게 감염되는 인간 코로나바이러스는 1960대 발견된 HCoV-229E와 HCoV-OC43, 사스 대유행 이후 발견된 HCoV-NL63(2004년)과 HCoV-HKU1(2005년) 등이 알려져있다. 최근의 코로나바이러스감염증-19(coronavirus disease 2019, COVID-19) 바이러스는 2019년 중국 후베이성의 우한시에서 처음 발견된 코로나바이러스(Coroviridae) 군에 속하는 바이러스이다. 이들로 인한 증상은 일반적으로 상기도감염증과 관계가 있으며, 발열을 동반한 기침, 호흡곤란, 숨가쁨, 가래 등 호흡기 증상을 주로 보이고, 이외에도 두통, 오한, 콧물, 근육통뿐만 아니라 식욕부진, 메스꺼움, 구토, 복통, 설사 등 소화기 증상도 나타날 수 있다.
이러한 각종 바이러스는 인체에서 각종 질환을 유발시키는 임상적으로 매우 중요한 바이러스임에도 불구하고 치료법에 관한 연구는 거의 없고 치료법 역시 아직 확정되어 있지 않다. 현재까지 바이러스 질환의 치료방법은 백신에 의한 예방과 극소수의 약제만 존재하나, 바이러스 내성의 증가로 인하여 사용에 제한이 있다. 그러므로 최근에는 안전성과 보다 높은 효과, 그리고 저렴한 생산비용을 갖는 항바이러스제제들이 개발 중이지만 아직도 많은 바이러스들에서 치료 효과를 갖는 제제는 없다.
이에, 본 발명자들은 부작용과 내성의 잠재성이 적고 생산비용이 낮은 약용식물을 기반으로 한 항바이러스 제제를 개발하기 위하여 연구한 결과, 장수진흙버섯 추출물이 항바이러스 활성을 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 항바이러스용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 바이러스성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 바이러스성 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 장수진흙버섯(Phellinus baumii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항바이러스용 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 상기 항바이러스용 조성물은 유효성분으로서 장수진흙버섯 추출물을 포함하므로, 피코르나바이러스(피코르나비리대과, picornaviridae), 오르토믹소바이러스(오르토믹소비리대과, Orthomyxoviridae) 및 코로나바이러스(코로나비리대과, Coronaviridae)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 가지는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 바이러스는 콕사키바이러스(coxsackievirus), 라이노바이러스(rhinovirus), 인플루엔자바이러스(influenza virus) 및 알파 코로나바이러스(alpha coronavirus)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스일 수 있다.
또한, 본 발명은 장수진흙버섯 추출물을 포함하는 바이러스성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 장수진흙버섯 추출물을 포함하는 바이러스성 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 상기 바이러스성 질환은 피코르나바이러스(피코르나비리대과, picornaviridae), 오르토믹소바이러스(오르토믹소비리대과, Orthomyxoviridae) 및 코로나바이러스(코로나비리대과, Coronaviridae)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스로 인하여 유발되는 질환일 수 있고, 바람직하게는, 콕사키바이러스(coxsackievirus), 라이노바이러스(rhinovirus), 인플루엔자바이러스(influenza virus) 및 알파 코로나바이러스(alpha coronavirus)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스로 인하여 유발되는 질환일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 바이러스성 질환은 바이러스성 수막염, 간염, 근육염, 심근염, 심근증, 췌장염, 당뇨, 유행성 근육통, 뇌염, 감기, 독감, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐렴, 상기도감염증, 폐기종, 만성기관지염, 기관지선종, 고립성폐결절, 폐결핵, 농흉, 폐농양, 폐의 조직구 증식증, 축농증, 중이염, 소아마비, 포진성 구협염, 구제역, 급성출혈성 결막염, 수족구병 및 수포병으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 장수진흙버섯(Phellinus baumii) 추출물은 세포독성 없이 콕사키바이러스 B3형(coxsackievirus B3; CVB3), 인간 라이노바이러스 1B형(human rhinovirus 1B; HRV1B), 인플루엔자바이러스 A형 H1N1(influenza virus A/H1N1/PR8; Inf/PR8) 및 인간 코로나바이러스 229E(human coronavirus 229E)에 대하여 항바이러스 효과를 나타내므로, 상기 장수진흙버섯 추출물을 포함하는 조성물을 항바이러스제 및 바이러스성 질환 예방, 치료 또는 개선 용도로 이용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 장수진흙버섯 추출물의 콕사키바이러스 B3형(CVB3)에 대한 항바이러스 활성을 확인하기 위하여, 세포 대조구(Ctrl)와 바이러스 대조구(Veh) 및 장수진흙버섯 추출물 처리 농도에 따른 vero 세포의 감염후 세포 생존율(cell viability, %)을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 장수진흙버섯 추출물의 인간 라이노바이러스 1B형(HRV1B)에 대한 항바이러스 활성을 확인하기 위하여, 장수진흙버섯 추출물 처리 농도에 따른 hela 세포의 감염후 세포 생존율(cell viability, %)을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 장수진흙버섯 추출물의 인플루엔자바이러스 A형(Inf/PR8)에 대한 항바이러스 활성을 확인하기 위하여, 세포 대조구(Ctrl)와 바이러스 대조구(Veh) 및 장수진흙버섯 추출물 처리 농도에 따른 A549 세포의 감염후 세포 생존율(cell viability, %)을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 장수진흙버섯 추출물의 인간 알파 코로나바이러스(coronavirus 229E)에 대한 항바이러스 활성을 확인하기 위하여, 세포 대조구(Ctrl)와 바이러스 대조구(Veh) 및 장수진흙버섯 추출물 처리 농도에 따른 Huh7 세포의 감염후 세포 생존율(cell viability, %)을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 장수진흙버섯 추출물의 세포독성을 확인하기 위하여, 장수진흙버섯 추출물 처리 농도에 따른 A549 세포, Huh7 세포, hela 세포 및 vero 세포의 세포 생존율(cell viability, %)을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 장수진흙버섯 추출물의 인간 라이노바이러스 1B형(HRV1B)에 대한 항바이러스 활성을 확인하기 위하여, 장수진흙버섯 추출물 처리 농도에 따른 hela 세포의 감염후 세포 생존율(cell viability, %)을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 장수진흙버섯 추출물의 인플루엔자바이러스 A형(Inf/PR8)에 대한 항바이러스 활성을 확인하기 위하여, 세포 대조구(Ctrl)와 바이러스 대조구(Veh) 및 장수진흙버섯 추출물 처리 농도에 따른 A549 세포의 감염후 세포 생존율(cell viability, %)을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 장수진흙버섯 추출물의 인간 알파 코로나바이러스(coronavirus 229E)에 대한 항바이러스 활성을 확인하기 위하여, 세포 대조구(Ctrl)와 바이러스 대조구(Veh) 및 장수진흙버섯 추출물 처리 농도에 따른 Huh7 세포의 감염후 세포 생존율(cell viability, %)을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 장수진흙버섯 추출물의 세포독성을 확인하기 위하여, 장수진흙버섯 추출물 처리 농도에 따른 A549 세포, Huh7 세포, hela 세포 및 vero 세포의 세포 생존율(cell viability, %)을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 일 측면에서, 장수진흙버섯(Phellinus baumii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항바이러스용 조성물을 제공한다.
본 발명의 '장수진흙버섯(Phellinus baumii)'은 뽕나무, 느릅나무, 사시나무, 오리나무 등의 활엽수의 심재부에 자생하는 버섯으로 소나무비늘버섯과(Hymenochaetaceae)의 진흙버섯속(Phellinus Ouel. Em.lmaz)에 속하는 백색부후 균이다. 장수진흙버섯은 옛날부터 자궁출혈, 월경불순 등의 부인병치료제로 사용되어 왔으며 최근에는 높은 항암 효과 때문에 각광을 받고 있다.
본 발명에 있어서, 상기 장수진흙버섯은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있으며, 장수진흙버섯의 자실체 및 균사체 모두를 이용하는 것일 수 있고, 바람직하게는 자실체를 이용하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명에서 사용되는 용어 "추출물(extract)"은 생약을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출 처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. 상기 추출물은 통상의 기술분야에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 장수진흙버섯 추출물은 추출용매로 추출하거나 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획함으로써 제조할 수 있다. 상기 추출용매는 이에 제한되지 않으나, 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매 등을 사용할 수 있으며, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 4의 알코올이나, 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 극성용매, 헥산 또는 디클로로메탄의 비극성용매 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있다. 또한, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 탄소수 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다.
본 발명의 일실시예에서는 추출용매로서 주정(에탄올)을 이용하여 분쇄된 장수진흙버섯을 추출한 뒤 여과 및 농축하여 장수진흙버섯 추출물을 제조하였다. 이때, 장수진흙버섯 분쇄물 중량 기준 1 내지 10배 부피에 해당하는 양의 주정을 혼합하여 2시간 이상, 바람직하게는 20 내지 30시간 침지하여 상온에서 추출하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
일 구현예에서, 상기 항바이러스용 조성물은 유효성분으로서 장수진흙버섯 추출물을 포함하므로, 피코르나바이러스(피코르나비리대과, picornaviridae), 오르토믹소바이러스(오르토믹소비리대과, Orthomyxoviridae) 및 코로나바이러스(코로나비리대과, Coronaviridae)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 가지는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 피코르나바이러스는 바람직하게는 엔테로바이러스(enterovirus)일 수 있고, 보다 바람직하게는, 콕사키바이러스(coxsackievirus) 및 라이노바이러스(rhinovirus)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 오르토믹소바이러스는 인플루엔자바이러스(influenza virus)일 수 있고, 상기 코로나바이러스는 알파 코로나바이러스(alpha coronavirus)일 수 있다.
특히 바람직하게는, 상기 항바이러스용 조성물은 콕사키바이러스 B3형(coxsackievirus B3; CVB3), 인간 라이노바이러스 1B형(human rhinovirus 1B; HRV1B), 인플루엔자바이러스 A형(influenza virus A/H1N1/PR8; Inf/PR8) 및 인간 코로나바이러스 229E(human coronavirus 229E)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 가지는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 콕사키바이러스 B3형(CVB3), 인간 라이노바이러스 1B형(HRV1B), 인플루엔자바이러스 A형(Inf/PR8) 및 인간 코로나바이러스 229E(coronavirus 229E)으로 각각 감염된 vero 세포, hela 세포, A549 세포 및 Huh7 세포에서, 장수진흙버섯 추출물이 바이러스 증식에 의한 세포의 생존율 감소를 억제하여 세포 생존율을 효과적으로 증가시키는 것을 확인함으로써, 장수진흙버섯 추출물이 우수한 항바이러스 활성을 가짐을 입증하였다(실시예 2 및 도 1 내지 4 참조).
일 구현예에서, 상기 장수진흙버섯 추출물은 바이러스의 증식을 억제시킴으로써 콕사키바이러스, 라이노바이러스, 인플루엔자바이러스 및 알파 코로나바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 바이러스에 대한 항바이러스 효과를 발휘하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서는 vero 세포, hela 세포, A549 세포 및 Huh7 세포에 장수진흙버섯 추출물을 처리하여도 세포독성이 나타나지 않음을 확인함으로써, 부작용과 내성의 잠재성이 낮은 항바이러스제로로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다(실시예 2 및 도 5 참조).
또한, 본 발명의 다른 측면에서, 장수진흙버섯 추출물을 포함하는 바이러스성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 상기 바이러스성 질환은 피코르나바이러스(피코르나비리대과, picornaviridae), 오르토믹소바이러스(오르토믹소비리대과, Orthomyxoviridae) 및 코로나바이러스(코로나비리대과, Coronaviridae)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스로 인하여 유발되는 질환일 수 있고, 바람직하게는, 콕사키바이러스(coxsackievirus), 라이노바이러스(rhinovirus), 인플루엔자바이러스(influenza virus) 및 알파 코로나바이러스(coronavirus)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스로 인하여 유발되는 질환일 수 있다.
특히 바람직하게는, 상기 바이러스성 질환은 콕사키바이러스 B3형(coxsackievirus B3; CVB3), 인간 라이노바이러스 1B형(human rhinovirus 1B; HRV1B), 인플루엔자바이러스 A형(influenza virus A/H1N1/PR8; Inf/PR8) 및 인간 코로나바이러스 229E(human coronavirus 229E)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스로 인하여 유발되는 질환일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 바이러스성 질환은 바이러스성 수막염, 간염, 근육염, 심근염, 심근증, 췌장염, 당뇨, 유행성 근육통, 뇌염, 감기, 독감, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐렴, 상기도감염증, 폐기종, 만성기관지염, 기관지선종, 고립성폐결절, 폐결핵, 농흉, 폐농양, 폐의 조직구 증식증, 축농증, 중이염, 소아마비, 포진성 구협염, 구제역, 급성출혈성 결막염, 수족구병 및 수포병으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.
상기 “예방”은 병리학적 현상의 발생 빈도 또는 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 예방은 완전할 수 있으며 또는 부분적일 수도 있다. 이 경우에는 개체 내의 콕사키바이러스 및/또는 라이노바이러스에 의해 발생되는 증상이 상기 조성물을 사용하지 않은 경우와 비교하여 감소하는 현상을 의미할 수 있다.
상기 “치료”는 치료하고자 하는 대상(또는 개체) 또는 세포의 천연 과정을 변경시키기 위하여 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하며, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위하여 수행할 수 있다. 목적하는 치료 효과는 질병의 발생 또는 재발을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과를 저하시키거나, 전이를 예방하거나, 질병 진행 속도를 감소시키거나, 질병 상태를 경감 또는 일시적 완화시키거나, 예후를 개선시키는 것을 포함할 수 있다.
상기, "개체"란, 상기 질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함한 모든 동물을 의미하는 것일 수 있고, 본 발명의 약학적 조성물을 개체에게 투여함으로써 상기 질환들을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다.
상기 조성물은 경구적 전달, 비경구적 전달의 형태로 투여될 수 있다. 상기 조성물은 전신 또는 국소 투여될 수 있으며, 상기 투여는 경구 투여 및 비경구 투여를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 적절한 투여 형태를 제공하도록 적합한 양의 약학적으로 허용되는 비히클 또는 담체와 함께 제형화될 수 있다.
상기 조성물은 약학 조성물의 제조에 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화 하여 사용할 수 있다.
경구 투여를 위한 고형제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 사용될 수 있고, 상기 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예컨대, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 또는 젤라틴 등을 혼합하여 조제할 수 있다. 또한, 상기 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제가 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 사용될 수 있고, 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 외에 여러 가지 부형제, 예컨대 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 사용될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 사용될 수 있다.
상기 비수성용제, 현탁제는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르가 사용될 수 있다. 상기 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴이 사용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양이 대상체에 투여될 수 있다. 상기 “약제학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
상기 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 바람직하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 장수진흙버섯 추출물을 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스성 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
나아가, 본 발명의 또 다른 측면에서, 장수진흙버섯 추출물을 포함하는 바이러스성 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 상기 바이러스성 질환은 엔테로바이러스(enterovirus)로 인하여 유발되는 질환일 수 있고, 바람직하게는 콕사키바이러스(coxsackievirus) 및 라이노바이러스(rhinovirus)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스로 인하여 유발되는 질환일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 바이러스성 질환은 바이러스성 수막염, 간염, 근육염, 심근염, 심근증, 췌장염, 당뇨, 유행성 근육통, 뇌염, 감기, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐렴, 축농증, 중이염, 소아마비, 포진성 구협염, 구제역, 급성출혈성 결막염, 수족구병 및 수포병으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 조성물을 식품 조성물로 사용하는 경우, 상기 장수진흙버섯 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다.
상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 포함할 수 있으며, 유효성분의 혼합량은 사용목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품을 포함하는 의미인 것일 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어 "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 '기능성'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다.
본 발명의 건강기능식품은 통상의 기술분야에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조 시에는 통상의 기술분야에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다.
본 발명의 식품용 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 항바이러스제 또는 바이러스성 질환 치료제의 효과를 증진 시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
또한, 본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 건강식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 장수진흙버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 건강기능식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다.
첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림 류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.
본 발명의 장수진흙버섯 추출물은 천연 약용 식물을 원료로 하므로 약학 조성물 또는 식품 조성물로 사용할 경우에도 일반적인 합성 화합물에 비하여 부작용 및 내성이 덜할 수 있으므로, 안전하게 약학적 조성물 및 건강기능식품에 포함되어 유용하게 사용될 수 있다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 장수진흙버섯 추출물의 제조
장수진흙버섯(장수상황버섯, Phellinus baumii)을 잘게 분쇄한 다음, 상기 장수진흙버섯 분쇄물에 주정을 추출용매로 부가하여 24시간 동안 침지하여 추출하였다. 추출된 추출물을 여과하고 여과물을 농축한 후 동결건조하여 장수진흙버섯 추출물을 제조하였다.
<준비예 1> 바이러스와 세포주 및 시약 준비
항바이러스 활성 분석에 이용한 콕사키바이러스 B3형(CVB3), 인간 라이노바이러스 1B형(HRV1B), 인플루엔자바이러스 A형 H1N1/PR8(Inf/PR8) 및 인간 코로나바이러스 229E(coronavirus 229E)는 ATCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA)에서 구매하였다. 콕사키바이러스 B3형은 vero 세포에 감염시켜 37℃에서 증식시켰고, 라이노바이러스 1B형은 hela 세포에 감염시켜 32℃에서 증식시켰으며, 인플루엔자바이러스 PR8은 A549 세포에, 인간 코로나바이러스 229E는 Huh7 세포에 각각 감염시켜 37℃에서 증식시켰다.
Vero 세포, hela세포, A549 세포 및 Huh7 세포는 각각 1% 소태아혈청(FBS) 및 0.01% 항생제가 첨가된 최소 필수 배지(MEM media)에서 유지하였다. 항생제와 trypsin-EDTA, FBS 및 MEM media는 Gibco사 제품을 사용 하였다. 조직 배양 플레이트(Tissue culture plates)는 Falcon(BD Biosciences, San Jose, CA, 미국)에서 구입하였다. 술포로다민 B(sulforhodamine B; SRB)는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, 미국)에서 구매 하였다. 트립신-EDTA를 사용하여 세포를 탈착시켰다.
추출물은 DMSO를 용해용액으로 사용하여 MEM 배지(MEM media)에 희석하였다. DMSO의 최종 농도는 세포배양에 전혀 영향이 없는 최대 농도인 0.1%로 사용하였다. 또한 0.1% DMSO는 세포대조군으로 사용하였다.
<실시예 2> 장수진흙버섯 추출물의 항바이러스 활성 및 세포독성 측정
바이러스에 의해 일어나는 세포 병변을 억제시키는 능력을 분석하는 방법인 SRB assay를 이용하여, 장수진흙버섯 추출물의 콕사키바이러스 B3형, 라이노바이러스 1B형, 인플루엔자바이러스 A형(PR8) 및 인간 코로나바이러스(229E)에 대한 항바이러스 활성 및 세포독성을 평가하였다.
96-웰 배양 플레이트(Nunc, Denmark) 각각의 웰(well)에 콕사키바이러스 B3형(CVB3) 및 라이노바이러스 1B형(HRV1B) 각 바이러스에 감수성을 갖는 세포인 vero 세포와 hela 세포를 3×104의 수로 준비하였다. 24시간 후 96-웰 배양 플레이트에 각각의 세포가 90%정도 자랐을 때 실험에 이용하였다. 각 웰의 배지(media)를 제거한 후, 각 세포에 대하여 PBS로 1회 세척하였다. 그 후, 1% FBS 및 각각의 바이러스가 포함된 90μL의 MEM을 각 웰에 넣고, 장수진흙버섯 추출물을 0.4, 2, 10 및 50 μg/ml의 농도가 되도록 각 웰에 10μL 첨가하였다. 한편, 4개의 웰은 추출물을 처리하지 않고 바이러스만 처리한 바이러스대조구(Vehicle; Veh)로 사용하였고 또 다른 4개의 웰은 바이러스와 추출물을 모두 처리하지 않고 추출물 대신 1% DMSO를 처리한 세포대조구(Control; Ctrl)로 사용하였다. 각 웰은 CO2 배양기 (VS-9108MS, Vision, Korea)에서 37℃, 5% CO2의 조건으로 2일 동안 배양하였다.
또한, 추출물의 세포독성을 알아보기 위하여, 바이러스가 첨가되지 않은 배양액을 이용하여 상기와 동일한 방법으로 hela 세포 및 vero 세포에 각각 0.4~50 μg/ml 농도의 추출물 또는 1% DMSO를 첨가하고 37℃, 5% CO2의 조건으로 CO2 배양기에서 2일 동안 배양하였다.
각 배양종료 후, 각 웰의 배양 상등액을 제거하고 웰에 남아있는 세포를 70% 아세톤 용액 100 μL로 고정하고 SRB 용액 100 μL을 각 웰에 가하여 세포단백질을 염색시켰다. 세포단백질과 결합하지 않은 SRB 염색제를 세척하여 제거한 후 10 mM 트리스 용액(pH 10.5) 100 μL를 각 웰에 가하여 세포와 결합되어 있는 염색제를 용해시켜서 565 nm에서 ELISA reader로 각 웰의 흡광도를 측정하여 항바이러스 활성 및 세포독성을 계산하였다. 이때, 항바이러스 활성의 측정은 바이러스를 감염시키지 않은 웰의 흡광도 (B), 바이러스를 감염시킨 웰의 흡광도 (C), 추출물과 바이러스를 같이 투여한 웰의 흡광도 (D)로 표시하고 하기 수학식 1에 따라 감염후 세포 생존율(cell viability, %)을 계산하여 평가하였다. 여기서 생존율이 100%인 경우 항바이러스 효과 100%이고, 생존율이 0%인 경우 항바이러스 효과가 없는 것을 의미한다.
[수학식 1]
그 결과, 콕사키바이러스 B3형(CVB3)에 대하여 장수진흙버섯 추출물이 50 μg/mL의 농도에서 약 25%의 항바이러스 활성을 나타내었다(도 1). 또한 라이노바이러스 1B형(HRV1B)에 대하여, 장수진흙버섯 추출물 50 μg/mL의 농도에서 약 70%, 10 μg/mL의 농도에서 약 40%, 2 μg/mL 및 0.4 μg/mL의 농도에서 각각 약 20%의 항바이러스 활성을 나타내는 것을 확인하였다(도 2). 또한, 인플루엔자 바이러스 A형(Inf/PR8)에 대하여, 장수진흙버섯 추출물 50 μg/mL의 농도에서 약 80%, 10 μg/mL의 농도에서 약 30%, 2 μg/mL의 농도에서 약 20%의 항바이러스 활성을 나타내는 것을 확인하였다(도 3). 마지막으로, 인간 코로나바이러스 229E(Coronavarius 229E)에 대하여, 장수진흙버섯 추출물 50 μg/mL의 농도에서 약 40%의 항바이러스 활성을 나타내었다(도 4).
한편, 장수진흙버섯 추출물의 세포독성을 각각의 항바이러스 활성 실험에 사용한 vero 세포와 hela 세포 및 A549세포에서 확인한 결과, 장수진흙버섯 추출물은 본 발명의 실험에서 사용한 0.4 내지 50 μg/mL의 농도에서 거의 모두 세포독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다(도 5). 따라서, 본 발명의 실시예의 방법으로 제조된 장수진흙버섯 추출물을 CVB3, HRV1B, Inf/PR8, Coronavirus 229E 등에 의해 유발된 바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위한 효과적인 항바이러스제로 이용할 수 있음을 확인하였다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (11)
- 장수진흙버섯(Phellinus baumii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항바이러스용 조성물.
- 제1항에 있어서,
피코르나바이러스(picornaviridae), 오르토믹소바이러스(Orthomyxoviridae) 및 코로나바이러스(Coronaviridae)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 가지는 항바이러스용 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 피코르나바이러스는 콕사키바이러스(coxsackievirus) 및 라이노바이러스(rhinovirus)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 항바이러스용 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 오르토믹소바이러스는 인플루엔자바이러스(influenza virus)인 항바이러스용 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 코로나바이러스는 알파 코로나바이러스(alpha coronavirus)인 항바이러스용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 탄소수 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인 항바이러스용 조성물. - 장수진흙버섯 추출물을 포함하는 바이러스성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제7항에 있어서,
상기 바이러스성 질환은 피코르나바이러스, 오르토믹소바이러스 및 코로나바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스로 인하여 유발되는 질환인 것인 약학 조성물. - 제9항에 있어서,
상기 바이러스성 질환은 콕사키바이러스, 라이노바이러스, 인플루엔자바이러스 및 알파 코로나바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 바이러스로 인하여 유발되는 질환인 것인 약학 조성물. - 제7항에 있어서,
상기 바이러스성 질환은 바이러스성 수막염, 간염, 근육염, 심근염, 심근증, 췌장염, 당뇨, 유행성 근육통, 뇌염, 감기, 독감, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐렴, 상기도감염증, 폐기종, 만성기관지염, 기관지선종, 고립성폐결절, 폐결핵, 농흉, 폐농양, 폐의 조직구 증식증, 축농증, 중이염, 소아마비, 포진성 구협염, 구제역, 급성출혈성 결막염, 수족구병 및 수포병으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 약학 조성물. - 장수진흙버섯 추출물을 포함하는 바이러스성 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |