KR100612373B1 - 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 유효성분으로 하는 급성호흡기 질환의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 유효성분으로 하는 급성호흡기 질환의 예방 및 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 유효성분으로 하는 급성 호흡기 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물은 백혈구의 수를 감소시키고, 사이토킨의 농도를 현저히 감소시킴으로, 급성 호흡기 염증 억제 효과가 우수하다.
따라서, 본 발명의 조성물은 감기, 급성 인두염, 급성 비염, 급성 부비강염, 급성 편도염, 급성 후두염, 급성 후두개염, 급성 기관지염, 급성 상기도 감염증 및 급성 호흡 궁박증후군과 같은 급성 호흡기 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 유효성분으로 하는 급성 호흡기 질환의 예방 및 치료용 조성물{Composition comprising hot water extract of Phellinus mushroom fruit body for preventing and treating acute resparatory disease}
도 1은 본 발명의 진흙버섯 자실체 열수 추출물의 항암활성에 대한 반응표면분석(a) 및 등고선도(b)를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 진흙버섯 자실체 열수 추출물의 총당에 대한 반응표면분석 (a) 및 등고선도(b)를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 진흙버섯 자실체 열수 추출물의 환원당에 대한 반응표면분석(a) 및 등고선도(b)를 나타낸 도이다.
본 발명은 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 유효성분으로 하는 급성 호흡기 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
현대인들은 산업의 발달로 대기오염, 알레르기원(동물의 털, 꽃가루 등), 흡 연 등으로 인한 알레르기성 기관지 질환에 노출되어 있으며, 감기, 후두염, 급성 후두개염, 세기관지염, 폐렴, 천식, 편도선염 등과 같은 호흡기 질환은 선진국에서 가장 빈번하게 발생하는 질환 중 하나로 성인보다는 어린아이에게서 많이 발생된다는 보고가 있다(Sears, 1997).
매년 5세 이하의 1,500만명의 어린이 중 약 400만명이 급성 호흡기질환 (acute resparatory disease)으로 사망하고 있으며, 이 사망자 중 90% 이상이 개발도상국가에서 일어난다. 또한, 이러한 호흡기 질환은 특히 대기 환경 오염이 심각한 지역에서 발생빈도가 높다.
예로부터 버섯은 항암, 항산화, 콜레스테롤 저하, 혈압강하, 면역강화, 종양저지, 자궁출혈, 월경불순 등의 치료에 효과가 좋은 것으로 알려져 왔다.
최근에는 이들 버섯 중 진흙버섯류의 추출물이 건강보조식품으로 각광을 받고있다. 진흙버섯은 민주름버섯목(Aphylophorales), 소나무비닐버섯과 (Hymenochaetaceae), 진흙버섯(Phellinus)에 속하는 백색 부후균으로 주로 참나무, 뽕나무와 같은 활엽수에 발생하는데, 표고버섯 재배시 참나무 골목에 발생하여 병을 일으킨다(차 등, 1994). 자실체는 코르크질로 단년생 또는 다년생으로 알려져 있으며, 나무에 부착된 편반구형으로 보통 상하가 서로 연결되어 있는 군생형으로 발생하며 크기는 지름 5~12㎝ 정도로 상층표면은 암황갈색으로 융모가 있고 가장 자리는 갓에 비해서 색이 엷고 관공의 표면은 암자갈색으로 ㎜당 6~8개가 있으며 포자는 4~5 x 3~3.5 ㎛로 타원형이며 표면은 평활하다고 알려져 있다(Ryvardan, 1993).
이에, 본 발명자들은 반응표면분석법에 의한 최적의 추출조건으로 진흙버섯 자실체로부터 얻은 열수 추출물에서 급성 호흡기 염증을 억제하는 효과가 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 유효성분으로 하는 급성 호흡기 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 유효성분으로 하는 급성 호흡기 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.
상기 진흙버섯 자실체의 열수 추출물은 반응표면분석법을 이용하여 추출조건을 최적화하여 추출함을 특징으로 한다.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명에서 사용되는 진흙버섯 자실체는 참나무 톱밥을 121℃에서 90분간 고압살균하여 참나무 톱밥배지를 만든 후 버섯균을 접종하여 3개월 만에 속성으로 재배한 것을 사용한다.
본 발명에서 사용되는 진흙버섯은 펠리너스 린테우스(Phellinus linteus), 펠리너스 바우미(Phellinus baumii), 펠리너스 길버스(Phellinus gilvus) 중에서 선택된 것을 사용한다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물은 중심합성계획법에 의한 반응표면분석법을 이용하여 다음과 같은 방법으로 추출조건을 최적화하여 추출한다.
중심합성계획에 의한 독립변수(Xi)는 추출시간(X1; 8, 10, 12시간), 추출온도(X2; 80, 90, 100℃) 및 추출부피(X3; 10, 20, 30㎖/g)로 구성하며, 이들 독립변수에 의해 영향을 받는 종속변수(Yn)는 항암활성(Y1), 총당(Y2) 및 환원당(Y 3)으로 하고, 이들은 3회 반복 측정하여 그 평균값을 회귀분석에 사용한다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 항암활성의 회귀계수는 0.9578 이며, 추출온도와 추출부피에 비례한다. 항암활성에 대한 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 최적 조건은 추출시간 10.24시간, 추출온도 99.46℃, 추출부피 23.00㎖/g 이며, 85.5%에서 최대반응이 나타난다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 총당의 회귀계수는 0.9276 이며, 추출온도에만 비례한다. 총당에 대한 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 최적 조건은 추출시간 10.70시간, 추출온도 99.13℃, 추출부피 17.90㎖/g 이며, 2.08㎎/㎖의 농도에서 최대반응이 나타난다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 환원당의 회귀계수는 0.9832 이며, 추출온도와 추출부피에 비례한다. 환원당에 대한 진흙버섯 자실체의 열수 추출의 최적 조건은 추출시간 10.27시간, 추출온도 96.11℃, 추출부피 27.80㎖/g 이며, 890.6ppm에서 최대반응이 나타난다.
따라서, 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 최적의 추출조건은 추출시간 10~11시간, 추출온도 96~100℃, 추출부피 17~28㎖/g 로 결정할 수 있다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물은 백혈구의 수를 감소시키고, 사이토킨의 농도를 현저히 감소시킴으로, 감기, 급성 인두염, 급성 비염, 급성 부비강염, 급성 편도염, 급성 후두염, 급성 후두개염, 급성 기관지염, 급성 상기도 감염증 및 급성 호흡 궁박증후군과 같은 급성 호흡기 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 진흙버섯 자실체의 열수 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은, 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적 또는 식품에서 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함할 수 있다. 약제학적 또는 식품에서 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 경구투여가 바람직하다. 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하나, 일일 투여량은 0.01 ~ 5 g/㎏의 양을 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물은 급성 호흡기 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 급성 호흡기 질환의 개선을 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물은 원료에 대하여 1~20 중량%, 바람직하게는 5~10 중량%의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식 품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 : 중심합성계획법에 의한 반응표면분석법을 이용한 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 제조
본 발명에서 사용한 진흙버섯(Phellinus baumii)은 경상북도 농업기술원에서 속성으로 재배한 자실체를 공급받아 사용하였다.
1. 중심합성계획법에 의한 반응표면분석법을 이용한 진흙버섯 자실체의 열수 추출 조건의 최적화
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물은 반응표면분석법(response surface methodology, RSM)을 이용하여 최적의 추출조건의 예측과 추출물의 이화학적 특성을 모니터링하였다.
추출조건의 최적화를 위한 실험계획은 중심합성계획법(central composite design)에 의하여 설계하였고, 반응표면분석 회귀분석을 위해서는 SAS(statistical analysis system) 프로그램을 사용하였다.
중심합성계획에 의한 독립변수(Xi)의 실험계획은 추출공정에서 중요한 변수로 고려되는 인자, 즉 추출시간(X1), 추출온도(X2) 및 추출부피(X3)를 -1, 0, 1의 3 단계로 부호화하여 중심합성계획에 따라 16구로 설정하여 추출실험을 실시하였다. 추출시간(X1)은 8, 10, 12시간, 추출온도(X2)는 80, 90, 100℃ 및 추출부피(X3 )는 10, 20, 30㎖/g 으로 구성하였다.
또한 이들 요인변수에 의해 영향을 받는 종속변수(Yn)는 추출물의 품질인자로서 항암활성(Y1), 총당(Y2) 및 환원당(Y3)으로 하였으며, 이들은 3회 반복 측정하여 그 평균값을 회귀분석에 사용하였다.
진흙버섯 자실체의 열수추출을 최적화하기 위한 중심합성계획은 표 1에 나타내었다.
진흙버섯 자실체의 열수추출을 최적화 하기 위한 중심합성계획
추출시간(X1) (hr) 추출온도(X2) (℃) 추출부피(X3) (㎖/g)
1 8(-1) 80(-1) 10(-1)
2 12(1) 80(-1) 10(-1)
3 8(-1) 100(1) 10(-1)
4 12(1) 100(1) 10(-1)
5 8(-1) 80(-1) 30(1)
6 12(1) 80(-1) 30(1)
7 8(-1) 100(1) 30(1)
8 12(1) 100(1) 30(1)
9 8(-1) 90(0) 20(0)
10 12(1) 90(0) 20(0)
11 10(0) 80(-1) 20(0)
12 10(0) 100(1) 20(0)
13 10(0) 90(0) 10(-1)
14 10(0) 90(0) 30(1)
15 10(0) 90(0) 20(0)
16 10(0) 90(0) 20(0)
2. 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 제조
진흙버섯의 자실체를 1~2㎝의 크기로 절편한 다음, 흐르는 물에 세척하여 불순물을 제거하였다. 절편된 진흙버섯 자실체는 중심합성계획에 따른 조건에 따라 하기와 같은 열수 추출 순환법으로 추출하였다.
절편된 진흙버섯 자실체 100g에 2ℓ의 증류수를 첨가하여(진흙버섯 자실체 : 증류수 = 1 : 20), 열수 추출 순환법으로 추출하였다.
열수 추출 순환법은 증류수가 2ℓ에서 0.5ℓ로 증류되면 다시 순환하여 2ℓ가 되게 하는 방법으로, 추출조건에 따라 총 8시간 동안 90℃에서 열수 추출하였다.
상기 얻어진 열수 추출액은 1500 xg, 20분동안 원심분리하여 상층액을 얻었다. 얻어진 상층액을 60℃에서 감압농축한 후, 동결건조하여 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 얻었다.
실험예 1 : 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 항암활성, 총당 및 환원당 측정
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 성분변화를 알아보기 위하여, 항암활성, 총당 및 환원당의 함량을 측정하였다.
진흙버섯 성분에 항암활성이 있음은 이미 공지된 사실로서, 진흙버섯 추출물의 항암활성이 높으면 유효성분의 함량도 높다고 판단할 수 있으므로, 진흙버섯 성분의 대표적 활성으로써 항암활성을 측정하였다.
마찬가지로, 진흙버섯의 유효성분의 함량을 반영하는 기준으로 총당 및 환원당의 함량을 측정하여 유효성분의 함량이 가장 높은 최적의 추출조건을 결정하였다.
1. 항암활성 측정
항암활성은 쥐의 육종 180 암세포주(murine sarcoma 180 cells)에서 SRB (sulforhodamine B) 방법으로 측정하였다.
96 웰 플레이트의 각 웰에 1×104의 세포가 포함된 180㎕의 RPMI 1640 배지(페니실린 10,000 units/㎖, 스트렙토마이신 10㎎/㎖ 및 10% FBS)를 가하여 37℃, 5% CO2 가스 존재하에서 24시간 배양하였다. 상기 실시예에서 제조한 진흙버섯 열수 추출물을 PBS로 희석하여 5가지 농도로 만들고 각각 20 ㎕씩 배지에 가하여 48시간 더 배양하였다. 배양이 종료된 후 50 ㎕의 차가운 50% TCA(trichloroacetic acid)를 위에서부터 천천히 가해 주고 잠시 기다린 후 조심스럽게 냉장고로 옮겨 1시간 동안 충분히 고정시키고, 고정이 끝난 후에는 증류수로 5회 이상 세척하여 0.4% SRB 용액 100㎕를 가하여 상온에서 30분 이상 염색하였다. 염색이 끝난 후 1% 아세트산으로 5회 세척하여 잘 건조시키고, 150㎕의 10mM 완충안된 Tris 용액으로 SRB 염료를 잘 녹여내어 96 웰 플레이트용 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 490㎚의 범위에서 흡광도를 측정하였다.
2. 총당 측정
총당은 글루코스를 표준물질로 하여 안트론 방법(Anthrone method)으로 측정하였다.
상기 실시예에서 제조한 진흙버섯 열수 추출물 200㎕를 안트론 시약(0.1g 안트로/76% 황산) 1㎖와 혼합하였다. 혼합물을 12분동안 가열하고, 분광광도계로 620㎚에서 흡광도를 측정하였다.
3. 환원당 측정
환원당은 글루코스를 표준물질으로 하여 DNS(dinitrosalicylic acid) 분석으로 측정하였다.
상기 실시예에서 제조한 진흙버섯 열수 추출물 500㎕를 DNS 시약 0.5㎖와 혼합하였다. 혼합물을 5분동안 가열하고, 분광광도계로 575㎚에서 흡광도를 측정하였다.
항암활성, 총당 및 환원당의 측정 결과는 표 2에 나타내었다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출 조건에 따른 항암활성, 총당 및 환원당의 함량
항암활성(Y1) (%) 총당(Y2) (㎍/㎖) 환원당(Y3) (ppm)
1 60.5 0.67 352.2
2 55.2 0.76 394.5
3 71.7 1.29 494.5
4 77.7 3.07 422.2
5 80.0 0.46 429.7
6 77.9 0.50 496.3
7 86.7 1.59 983.0
8 91.1 1.71 1220
9 67.3 0.90 486.4
10 72.0 1.14 539.8
11 66.9 0.76 384.2
12 89.2 1.84 693.1
13 62.0 1.00 455.2
14 78.3 0.99 746.3
15 66.3 1.16 508.7
16 66.3 1.16 508.7
총 모델 1차 2차 백터곱 (cross-product) ** *** * NS ** ** NS NS *** *** NS **
F-비율 15.13 8.54 39.05
추출시간 추출온도 추출부피 NS ** ** NS ** NS NS *** ***
※ *** : p<0.001, ** : p<0.01, * : p<0.05 NS : 유의성 없음.
표 2에 나타난 바와 같이, 항암활성은 추출온도와 추출부피에서 유의성이 나타났으며(p<0.01), 총당은 추출온도에서 유의성이 나타났다(p<0.01). 또한, 환원당은 추출온도와 추출부피에서 유의성이 나타났다(p<0.001).
따라서, 추출온도와 추출부피가 반응요인에 유의한 영향을 끼치고 있음을 알 수 있다.
실험예 2 : 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 항암활성, 총당 및 환원당의 회귀분석
상기 실험예 1에서 측정된 항암활성, 총당 및 환원당의 평균값을 이용하여 표면반응곡선에 대한 회귀분석을 수행하였다.
회귀분석 결과는 표 3에 나타내었고, 최적의 추출반응조건은 표 4에 나타내었다.
항암활성, 총당 및 환원당에 의하여 계산된 회귀계수 값
2차 반응식 회귀계수(R2) 유의성
항암활성(Y1, %) Y 1 = 639.535** - 5.5775X 1- 13.5985*X 2+ 2.4615X 3- 0.2125X 1 2+ 0.11125X 1 X 2+ 0.0755*X 2 2+ 0.01X 1 X 3- 0.01725X 2 X 3- 0.0035X 3 2 0.9578 0.0018
총당(Y2, ㎍/㎖) Y 2= 20.10856-0.508892X 1- 0.478961X 2+ 0.180609X 3- 0.007974X 1 2+ 0.011063X 1 X 2+ 0.002481X 2 2- 0.010688X 1 X 3- 0.000738X 2 X 3- 0.000569X 3 2 0.9276 0.0084
환원당(Y3, ppm) Y 3= 2908.373276 - 4.151293X 1- 40.662466X 2- 158.673603***X 3- 2.62931X 1 2+ 0.34875X 1 X 2+ 0.150328X 2 2+ 2.085X 1 X 3+ 1.383750***X 2 X 3+ 0.771328*X 3 2 0.9832 0.0001
※ *** : p<0.001, ** : p<0.01, * : p<0.05
표 3에 나타난 바와 같이, 항암활성의 회귀계수는 0.9578로, 추출시간이 적을수록(p<0.01), 추출온도가 낮을수록(p<0.05) 항암활성은 저하되었다.
그러나 총당의 회귀계수는 0.9276으로, 추출조건에 대하여 유의성이 인정되지 않았다.
또한, 환원당의 회귀계수는 0.9832로, 추출부피가 클수록(p<0.01) 환원당의 농도가 저하되었다.
실험예 3 : 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 최적의 추출조건
반응표면분석법은 그래프로서 최적화를 이루는 한 방법으로, 등고선도를 이용하여 최적조건을 결정할 수 있다. 그러나 각 반응변수들의 반응표면은 정확하게 일치하지 않으므로 적절한 제한조건을 필요로 한다. 따라서, 주어진 실험조건내에서 예비실험을 통해 얻어진 결과를 바탕으로 제한영역을 설정하고, 각 조건이 일치하는 지역을 중첩되는 등고선도(contour map)로 구하였다.
항암활성을 종속변수(Y1)로 하여 반응표면분석 및 등고선도를 작성하여 도 1에 나타내었다.
총당을 종속변수(Y2)로 하여 반응표면분석 및 등고선도를 작성하여 도 2에 나타내었다.
환원당을 종속변수(Y3)로 하여 반응표면분석 및 등고선도를 작성하여 도 3에 나타내었다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 최적의 추출조건은 표 4에 나타내었다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 최적의 추출조건
추출시간(X1) (hr) 추출온도(X2) (℃) 추출부피(X3) (㎖/g) 최대반응 반응형태
항암활성 (Y1, %) 10.24 99.46 23.00 85.5 안장점 (saddle point)
총당 (Y2, ㎍/㎖) 10.70 99.13 17.90 2.08 안장점
환원당 (Y3, ppm) 10.27 96.11 27.80 890.6 안장점
도 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 진흙버섯 열수 추출물의 항암활성은 추출온도와 추출부피가 증가할수록 증가하는 경향을 보여, 추출온도와 추출부피에 비례함을 알 수 있다.
도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 총당은 추출온도가 증가할수록 증가하나 추출용매는 영향을 주지 않았다. 따라서, 총당은 추출온도에만 비례함을 알 수 있다.
도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 환원당은 추출온도와 추출부피가 증가할수록 증가하는 경향을 보여, 추출온도와 추출부피에 비례함을 알 수 있다.
또한, 표 4에 나타난 바와 같이, 항암활성에 대한 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 최적 조건은 추출시간 10.24시간, 추출온도 99.46℃, 추출부피 23.00㎖/g 이며, 85.5%에서 최대반응이 나타났다.
총당에 대한 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 최적의 조건은 추출시간 10.70시간, 추출온도 99.13℃, 추출부피 17.90㎖/g 이며, 2.08㎎/㎖의 농도에서 최대반응이 나타났다.
환원당에 대한 진흙버섯 자실체의 열수 추출의 최적 조건은 추출시간 10.27시간, 추출온도 96.11℃, 추출부피 27.80㎖/g 이며, 890.6ppm에서 최대반응이 나타났다.
따라서, 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 최적의 추출조건은 항암활성, 총당 및 환원당을 기준으로 할 경우 추출시간 10~11시간, 추출온도 96~100℃, 추출부피 17~28㎖/g 로 결정할 수 있다.
실험예 4 : 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물이 급성 호흡기 염증 반응 억제에 미치는 효과
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물이, 랫트에서 급성 호흡기 염증 반응 억제에 미치는 효과를 알아보기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.
1. 백혈구수 측정
24 마리의 스프라-돌리(Sprague-Dawley) 랫트를 3개의 그룹으로 나누어, 대조군은 생리적 식염수를, 실험군 1은 50㎍의 LPS(lipopolysaccharide)를, 실험군 2는 상기 실시예에서 제조한 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 투여한 후 50㎍의 LPS를 랫트의 기관지에 투여하여, 기관지 삼출액에서 백혈구 수를 측정하였다.
백혈구의 수는 급성 호흡기 염증 반응시 지표가 된다.
결과는 표 5에 나타내었다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 총 백혈구수 및 중호성 백혈구수
총 백혈구 수(x 106) 중호성 백혈구 수(x 106)
대조군 0.30±0.10* 0.09±0.06*
실험군 1 2.44±0.39 1.82±0.34
실험군 2 0.28±0.14* 0.05±0.03*
※ 수치 : 평균±표준편차, * : p<0.05
표 5에 나타난 바와 같이, LPS를 투여한 실험군 1에서 총백혈구의 수는 생리적 식염수를 투여한 대조군에 비하여 8배 증가하였다. 그러나 진흙버섯 자실체의 열수 추출물로 전처리한 후, LPS를 투여한 실험군 2에서는 대조군보다도 백혈구의 수가 오히려 감소하였다.
또한, 중호성 백혈구 수에 있어서도 총 백혈구 수와 같은 양상의 결과를 보여주었다.
일반적으로 리포폴리사카라이드는 사람 또는 동물에서 염증반응을 일으켜 여러 질병의 원인이 되며, 호흡기에 염증이 생기면 백혈구 수가 증가하게 된다.
따라서, 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물은 백혈구의 수를 감소시킴으로, 급성 호흡기 염증 억제 효과가 우수함을 알 수 있다.
2. 사이토킨 측정
24 마리의 스프라-돌리(Sprague-Dawley) 랫트를 3개의 그룹으로 나누어, 대조군은 생리적 식염수를, 실험군 1은 50㎍의 LPS(lipopolysaccharide)를, 실험군 2 는 상기 실시예에서 제조한 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 투여한 후 50㎍의 LPS를 랫트의 기관지에 투여하여, 기관지 삼출액에서 염증매개인자로서 사이토킨 (cytokine)인 조직괴사인자(Tissue Necrotic Factor-α; TNF-α)와 인터루킨-1β (interleukin-1β; IL-1β)의 억제 정도를 측정하였다.
회수된 기관지액은 10분동안 4℃에서 350 xg로 원심분리한 후, 상층액을 측정전까지 -20℃에 보관하였으며, 사이토킨(TNF-α와 IL-1β)의 변화를 효소결합면역흡수분석법 키트(Enzyme-linked immunosorbent assay kits)로 측정하였다. 이때 측정 한계치는 TNF-α는 12 pg/㎖, IL-1β는 32 pg/㎖ 이었다.
IL-1β는 급성 호흡기 염증 반응시 지표가 된다.
측정 결과는 표 6에 나타내었다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 TNF-α 및 IL-1β의 변화
TNF-α(pg/㎖) IL-1β(pg/㎖)
대조군 200±180 220±98**
실험군 1 1,180±140* 650±76*
실험군 2 1,360±120* 380±46**
※ 수치 : 평균±표준편차, *,** : p<0.05
표 6에 나타난 바와 같이, TNF-α의 농도는 실험군 1 및 실험군 2에서 대조군보다 증가하여, 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물이 염증반응에 영향을 미치지 않음을 알 수 있다.
또한, IL-1β의 농도는 실험군 1에서 대조군보다 3배 정도 증가하였고, 실험 군 2에서는 대조군보다 1.7배 정도 증가하여, 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물이 염증반응을 효과적으로 억제함을 알 수 있다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.
제제예 1 : 약학적 제제의 제조
1. 산제의 제조
진흙버섯 자실체의 열수 추출물 2g
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2. 정제의 제조
진흙버섯 자실체의 열수 추출물 100㎎
옥수수전분 100㎎
유 당 100㎎
스테아린산 마그네슘 2㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3. 캡슐제의 제조
진흙버섯 자실체의 열수 추출물 100㎎
옥수수전분 100㎎
유 당 100㎎
스테아린산 마그네슘 2㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예 2 : 식품의 제조
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
1. 조리용 양념의 제조
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물 20 ~ 95 중량%로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
2. 토마토 케찹 및 소스의 제조
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물 0.2 ~ 1.0 중량%를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.
3. 밀가루 식품의 제조
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물 0.5 ~ 5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
4. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물 0.1 ~ 5.0 중량%를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
5. 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물 10 중량%를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
6. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물 5 ~ 10 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
7. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 마른진흙버섯 자실체의 추출물을 진공 농축기에서 감압·농축하 고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),
종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),
진흙버섯 자실체의 열수 추출물의 건조분말(3 중량%),
영지(0.5중량%),
지황(0.5중량%)
제제예 3 : 음료의 제조
1. 탄산음료의 제조
설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98℃에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82%를 주입하여 본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.
2. 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 진흙버섯 자실체의 열수 추출물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.
3. 야채쥬스의 제조
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물 5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.
4. 과일쥬스의 제조
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물 1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.
본 발명의 진흙버섯 자실체의 열수 추출물은 백혈구의 수를 감소시키고, 사이토킨의 농도를 현저히 감소시킴으로, 급성 호흡기 염증 억제 효과가 우수함을 알 수 있다.
따라서, 본 발명의 조성물은 감기, 급성 인두염, 급성 비염, 급성 부비강염, 급성 편도염, 급성 후두염, 급성 후두개염 및 급성 기관지염, 급성 상기도 감염증 및 급성 호흡 궁박증후군과 같은 급성 호흡기 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (4)

  1. 펠리너스 바우미 자실체의 열수 추출물을 유효성분으로 하는 급성 호흡기 염증의 예방 및 치료용 약학 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 펠리너스 바우미 자실체의 열수 추출물은 최적의 추출조건으로 추출시간 10~11시간, 추출온도 96~100℃, 추출부피 17~28㎖/g 인 반응표면분석법을 이용하여 추출한 것임을 특징으로 하는 급성 호흡기 염증의 예방 및 치료용 약학 조성물.
  3. 삭제
  4. 삭제
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