KR20220054794A - 항체-sting 작용제 접합체 및 면역요법에서의 이의 용도 - Google Patents

항체-sting 작용제 접합체 및 면역요법에서의 이의 용도 Download PDF

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KR20220054794A
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지안 치우
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Abstract

본 개시내용은 특히, 항체에 접합된 STING 작용제 사이클릭 디-뉴클레오티드를 포함하는 항체-약물 접합체, 그에 대한 제조 방법, 및 그에 대한 용도에 관한 것이다.

Description

항체-STING 작용제 접합체 및 면역요법에서의 이의 용도
1. 서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자 제출된 서열 목록을 함유하며, 이는 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다. 2020년 7월 17일 작성된 상기 ASCII 사본은 명칭은 400160_005US_SL_ST25.txt이고, 크기는 44,502 바이트이다.
2. 기술분야
본 개시내용은 특히, 면역요법을 위한 항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate; ADC)에서의 STING 작용제의 용도; ADC를 포함하는 조성물, ADC 제조 방법, 및 암을 치료하기 위해 ADC를 사용하는 방법에 관한 것이다.
3. 배경
사이토졸 DNA 감지 경로는 DNA 함유 미생물의 침입에 대한 숙주 방어에서의 이의 주요 기능 이외에도 악성 종양에 대한 면역 반응의 개시 및 유지에서 중추적인 역할을 한다. 손상된 종양 세포로부터의 사이토졸 DNA는 2'3'-사이클릭 AMP-GMP (cGAMP)를 합성하는 사이클릭 AMP-GMP 신타제 (cGAS)라는 효소의 활성화를 유발한다. cGAMP는 내인성 리간드로서 ER 어댑터 단백질인 인터페론 유전자의 자극인자(Stimulator of Interferon Genes: STING)에 결합하여 그를 활성화하고, 인터페론 및 염증성 사이토카인의 유도, 항원 제시 세포의 동원 및 성숙, 및 궁극적으로는 T 세포 및 자연살해 (NK) 세포에 의해 수행되는 항종양 면역을 유도한다. cGAMP와 유사하지만, 개선된 치료 특성을 갖는 다수의 STING 작용제가 암 면역요법용으로 개발 중에 있다. 비록 이들 약물이 다양한 고형 종양의 치료에 유망하지만, 분명한 한계가 있다. 이들 화합물은 다른 방식으로 주사할 경우, 전신 사이토카인 반응을 유도할 가능성이 있기 때문에 종양내 투여에 의존한다. 말초 조직으로의 빠른 누출로 인해 종양내 주사라도 원치않는 사이토카인 반응을 유발할 수 있다. 이러한 화합물이 종양 환경 중에서 면역 세포에 단기간 노출되면 이의 효과도 감소한다. 따라서, 체류 시간이 연장된, 종양 환경에 STING 작용제를 특이적으로 전달할 수 있는 신규 치료제가 긴급히 요구되고 있다.
4. 요약
본 개시내용은 이환된 세포 또는 조직의 미세환경 중의 특정 항원을 표적화하는 항체 또는 항원 결합 단편에 접합될 수 있는 특정 사이클릭 디-뉴클레오티드 (cyclic di-nucleotide; CDN)를 제공한다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 종양 미세환경 중의 세포, 예컨대, 종양 세포 또는 면역 세포에 존재하는 암 관련 항원을 표적화할 수 있다. 본 개시내용의 CDN은 STING에 효능작용할 수 있는 바, 이로써, 면역계를 자극시킬 수 있다. 본 개시내용의 CDN이 이환된 세포 또는 조직내 항원을 표적화하는 항체에 접합될 때, 이들은 말초 조직으로의 광범위한 CDN 누출과 연관된 동반되는 부작용을 감소시키면서, 이환된 세포 또는 조직의 미세환경에서 CDN을 충분히 노출시킨다.
한 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 I의 구조를 갖는 항체-약물 접합체 (ADC)를 제공한다:
(화학식 I) Ab-[-L-(D)m]n
상기 식에서,
"D"는 CDN (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 CDN, 예컨대, 화학식 II의 것)을 나타내고;
"Ab"는 표적 항원에 결합하는 항체 또는 이의 결합 단편을 나타내고;
"L"은 각각의 경우에 독립적으로 1회 이상 존재하는 D를 Ab에 연결하는 링커(linker)를 나타내고;
"m"은 주어진 링커에 연결된 D의 존재 횟수를 나타내고;
"n"은 Ab에 연결된 링커의 개수를 나타낸다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식 Ia의 구조를 갖는 ADC를 제공한다:
(화학식 Ia) Ab-[-L-D]n
상기 식에서,
"D"는 CDN (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 CDN, 예컨대, 화학식 II의 것)을 나타내고;
"Ab"는 표적 항원에 결합하는 항체 또는 이의 결합 단편을 나타내고;
"L"은 각각의 경우에 독립적으로 D를 Ab에 연결하는 링커를 나타내고;
"n"은 링커 (L)를 통해 Ab에 연결된 D의 존재 횟수를 나타낸다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 그 자체로 또는 화학식 I의 ADC의 일부로서 투여될 수 있는 특정 CDN (D)을 제공한다. 이들 CDN은 하기 화학식 II의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 가질 수 있다:
Figure pct00001
상기 식에서,
R1은 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기(group)로 치환된 C1- 6알킬, 예컨대, C2-6알킬 또는 C2-3알킬이고,
R3 및 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 또는 C2- 6알키닐이고, 여기서, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 및 C2- 6알키닐은 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되고,
R2, R5, 및 R6은 독립적으로 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, 또는 C3- 6알키닐-O-이고, 여기서, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, 및 C3- 6알키닐-O-는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1-6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 -6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되거나; 또는 R6 및 R5는 함께 =CH2이거나; 또는 R6 및 R4는 함께 에틸렌, -O-CH2-, 및 -NH-CH2-로부터 선택되는 V2 함유 고리를 가로질러 브릿지를 형성하고;
V1 및 V2는 독립적으로 O, S, 또는 CH2이고;
V1 함유 고리 중 탄소로부터 출발하는 BG1, 및 V2 함유 고리 중 탄소로부터 출발하는 BG2는 독립적으로 -O-P(O)Rp-O-, -O-P(S)Rp-O-, -O-P(O)Rp-S-, -O-P(S)Rp-S-, -S-P(O)Rp-O-,-S-P(S)Rp-O-, -S-P(O)Rp-S-, -S-P(S)Rp-S-, 또는 -NH-SO2-NH-이고; 여기서,
Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실, 티올, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C3- 6알케닐-O-, C3- 6알키닐-O-, -PEG-OH, 보라노 (-BH3 -), 또는 -NR'R"이고, 여기서, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C3- 6알케닐-O-, 및 C3- 6알키닐-O-는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되고;
R' 및 R"은 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 -6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1- 6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3-5헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
Ra1, Rb1, Ra2, 및 Rb2는 독립적으로 수소 또는 C1- 3알킬이고;
B1 및 B2는 독립적으로
Figure pct00002
로부터 선택되고,
여기서,
V3은 O 또는 S, 특히, O이고;
Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, 및 Z6은 각각의 경우에 독립적으로 CRz 또는 N이고;
Za는 O (Z5가 N일 때, 제외) 또는 NR'이고; 여기서,
Rz는 각각의 경우에 독립적으로 수소, 할로겐, 아지도, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, C3-6알키닐-O-, -NO2, -CN, -C(O)C1- 6알킬, -CO2H, -CO2C1 - 6알킬, -S(O)C1- 6알킬, -S(O)2C1-6알킬, -C(O)NR', -C(O)NR'R", -SO2NR'R", -OC(O)C1 - 6알킬, -NR'C(O)C1 - 6알킬, -N(R')C(O)NR'R", -N(R')SO2NR'R", -N(R)SO2C1 - 6알킬, 또는 -OC(O)NR'R"이고, 여기서, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, 및 C3- 6알키닐-O-는 각각의 경우에 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 - 6알킬, 아미노, C1-6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되고;
R' 및 R"은 각각의 경우에 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1- 3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1- 6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3- 5헤테로사이클릭 고리를 형성한다.
본 개시내용은 링커를 통해 화학식 II의 CDN을 항체에 접합시킴으로써 화학식 I의 ADC를 제조하는 방법을 제공한다. 화학식 II의 CDN은 절단가능한 또는 비절단가능한 링커(cleavable or non-cleavable linker)를 통해 항체에 접합될 수 있다. 특정 실시양태에서, CDN은 링커 절단시에 종양 세포, 암 관련 면역 세포 내로, 또는 종양 미세환경 내로 방출된다.
CDN (D)이 화학식 II의 것인, 화학식 I의 ADC에서, CDN은 화학식 II의 CDN의 R1 위치의 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기에서 링커 (L)에 공유적으로 결합될 수 있다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 화학식 II의 CDN은 하기 화학식 IIe, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00003
상기 식에서, R1, R5, 및 R6; RP; 및 B1 및 B2는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 화학식 II의 CDN은 하기 화학식 IIk, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00004
상기 식에서,
W, X, Y, 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
RP는 각각의 경우에 독립적으로 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 CDN 및 염기를 포함하는 조성물로서, 여기서, CDN은 예컨대, 상기 화학식 IIe 또는 IIk, 또는 하기 화학식 IIn 또는 IIo와 같은, 화학식 II의 화합물인 조성물을 제공한다. 상기 특정 실시양태에서, 조성물은 CDN 및 염기로 구성된다. 일부 실시양태에서, 염기는 아민 염기, 예컨대, 피리딘이다. 상기 실시양태 중 일부에서, 조성물은 무수 조성물이다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 CDN 및 링커 또는 커플링제, 또는 링커 및 커플링제 둘 모두를 포함하는 조성물로서, 여기서, CDN은 예컨대, 상기 화학식 IIe 또는 IIk, 또는 하기 화학식 IIn 또는 IIo와 같은, 화학식 II의 화합물이고, 여기서, 커플링제는 예를 들어, 링커 상에 활성화된 에스테르를 생성함으로써 CDN의 링커에 대한 커플링(coupling)을 촉진시키는 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 비양성자성 극성 용매를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 무수 조성물이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 화학식 L-CDN의 링커 (L)에 커플링된 사이클릭 디뉴클레오티드 (CDN)인 화합물을 제공한다. 특정 실시양태에서, CDN은 티오에테르, 아미드, 에스테르, 카르바메이트, 카르보네이트, 우레아, 디술피드(disulfide), 또는 에테르 기, 특히, 아미드, 카르바메이트, 또는 디술피드 기를 통해 링커 L에 커플링된다. 특정 실시양태에서, CDN은 예컨대, 상기 화학식 IIe 또는 IIk, 또는 하기 화학식 IIm, IIn 또는 IIo와 같은, 화학식 II의 것이고, CDN은 화학식 II의 R1의 티올, 아미노, 또는 C1-6알킬아미노 기에서 L에 커플링되고, L은 항체 상의 상보성 부위(complementary site)에 커플링할 수 있는 부위를 포함한다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 ADC는 하기 화학식 III의 구조를 갖는다:
Figure pct00005
상기 식에서, 변수 W, X, Y, Z, RP, 및 n은 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 ADC는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는다:
Figure pct00006
상기 식에서, 변수 W, X, Y, Z, RP, 및 n은 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
한 실시양태에서, 화학식 I 또는 III의 ADC는 하기 구조식 (CDN-A)를 갖는 CDN (D), 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도된다:
Figure pct00007
. "~로부터 유도되는"이라는 어구는 CDN의 R1 위치의 아미노 (-NH2) 관능기는 링커에서 상응하는 위치에 공유적으로 결합된다는 것을 나타낸다는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 아미노 기는 링커의 카르보닐 모이어티에 공유적으로 결합되어 아미드 또는 카르바메이트 결합을 형성한다.
또 다른 실시양태에서, 화학식 I 또는 IV의 ADC는 하기 구조식 (CDN-B)를 갖는 CDN (D), 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도된다:
Figure pct00008
. "~로부터 유도되는"이라는 어구는 CDN의 R1 위치의 티올 (-SH) 관능기는 링커에서 상응하는 위치에 공유적으로 결합된다는 것을 나타낸다는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 티올 기는 링커의 티올 기에 공유적으로 결합되어 디술피드 결합을 형성한다.
또 다른 실시양태에서, 화학식 I 또는 III의 ADC는 하기 구조식을 갖는 CDN (D), 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도된다:
Figure pct00009
.
또 다른 실시양태에서, 화학식 I 또는 III의 ADC는 하기 구조식을 갖는 CDN (D), 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도된다:
Figure pct00010
.
또 다른 실시양태에서, 화학식 I 또는 III의 ADC는 하기 구조식을 갖는 CDN (D), 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도된다:
Figure pct00011
.
특정 실시양태에서, 화학식 I, III, 또는 IV의 ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 종양 미세환경 중의 종양 세포 또는 면역 세포 상에서 발현되는 특정 항원을 표적화한다. 특정 실시양태에서, 화학식 I, III, 또는 IV의 ADC의 항체 또는 항원 결합 단편은 수용체 PD-L1을 표적화한다. 다른 특정 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 성장 인자 수용체 (GFR)인 암 관련 종양 항원에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 EGFR/ErbB/HER 패밀리 GFR이다.
한 측면에서, 본 개시내용은 치료 유효량의 화학식 I, III, 또는 IV의 ADC를 투여함으로써 대상체 (예컨대, 인간 환자)에서 면역 반응을 유도하는 반응을 제공한다. 예를 들어, 화학식 I, III, 또는 IV의 ADC는 인간 대상체에서 인터페론-β (IFNβ)를 유도하는 데 사용될 수 있다.
화학식 I, III, 또는 IV의 ADC는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 조합하여 사용될 수 있다. 추가 치료제(들)는 추가 치료제(들)의 투여 이전, 그와 공동으로, 또는 그 이후에 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 I, III, 또는 IV의 ADC는 면역 체크포인트 억제제와 함께 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 화학식 I, III, 또는 IV의 ADC는 PD-1, PD-L1, 또는 CTLA-4의 억제제, 또는 이의 조합과 함께 투여될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 화학식 I, III, 또는 IV의 ADC는 화학식 I의 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되지 않은 유리 CDN과 함께 투여될 수 있다. 상기 경우에서, 유리 CDN은 화학식 I, III, 또는 IV의 ADC의 항체에 접합된 CDN과 동일하거나, 또는 상이한 것일 수 있다.
5. 도면의 간단한 설명
도 1a-1d는 ADC-I의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 1a는 ADC-I의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 1b 및 1c는 각각 마우스 RAW-루시아(Lucia) ISG 세포, 및 인간 THP1-루시아 ISG 세포를 사용한 루시페라제 리포터 검정법에서 IFN 자극 활성의 효력을 보여주는 것이다. 도 1d는 명시된 처리하의 B16-F10 B16-F10 종양-보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행을 보여주는 것이다. 비교 항-PDL1 항체는 Ab-A1이다.
도 2a-2c는 ADC-II의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 2a는 ADC-III의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 2b 및 2c는 각각 마우스 RAW-루시아 ISG 세포, 및 인간 THP1-루시아 ISG 세포를 사용한 루시페라제 리포터 검정법에서 IFN 자극 활성의 효력을 보여주는 것이다.
도 3a-3b는 ADC-III의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 3a는 ADC-III의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 3b는 마우스 RAW-루시아 ISG 세포를 사용한 루시페라제 리포터 검정법에서 IFN 자극 활성의 효력을 보여주는 것이다. 비교 항-EGFR 항체는 Ab-B1이다.
도 4a-4f는 ADC-IV의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 4a는 ADC-IV의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 4b는 마우스 RAW-루시아 ISG 세포를 사용한 루시페라제 리포터 검정법에서 IFN 자극 활성의 효력 (PBS 자극받은 세포 대비 변화 배수)을 보여주는 것이다. 도 4c 및 4d는 각각 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행 및 생존을 보여주는 것이다. 도 4e 및 4f는 각각 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행 및 생존을 보여주는 것이다. 비교 항-EGFR 항체는 Ab-B1이고, 비교 항-PDL1 항체는 Ab-A3이다.
도 5a-5b는 ADC-V의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 5a는 ADC-V의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 5b는 마우스 RAW-루시아 ISG 세포를 사용한 루시페라제 리포터 검정법에서 IFN 자극 활성의 효력을 보여주는 것이다. 비교 항-PDL1 항체는 Ab-A3이다.
도 6a-6b는 ADC-VI의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 6a는 ADC-VI의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 6b는 마우스 RAW-루시아 ISG 세포를 사용한 루시페라제 리포터 검정법에서 IFN 자극 활성의 효력을 보여주는 것이다. 도 6c 및 6d는 각각 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행 및 생존을 보여주는 것이다. 비교 항-PDL1 항체는 Ab-A2이다. 도 6e 및 6f는 각각 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행 및 생존을 보여주는 것이다.
도 7a-7f는 ADC-VII의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 7a는 ADC-VII의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 7b는 마우스 RAW-루시아 ISG 세포를 사용한 루시페라제 리포터 검정법에서 IFN 자극 활성의 효력 (PBS 자극받은 세포 대비 변화 배수)을 보여주는 것이다. 도 7c 및 7d는 각각 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행 및 생존을 보여주는 것이다. i.p. (복강내) 주사는 7, 11, 및 15일째 수행되었다. 도 7e 및 7f는 각각 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행 및 생존을 보여주는 것이다. i.p. 주사는 7, 11, 및 15일째 수행되었다. 비교 항-EGFR 항체는 Ab-B2이고, 비교 항-PDL1 항체는 Ab-A3이다.
도 8a-8d는 ADC-VIII의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 7a는 ADC-VIII의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 8c 및 8d는 각각 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행 및 생존을 보여주는 것이다. i.p. 주사는 7, 11, 및 15일째 수행되었다. 비교 항-PDL1 항체는 Ab-A3이다.
도 9a-9d는 ADC-IX의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 9a는 ADC-IX의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 9b는 마우스 RAW-루시아 ISG 세포를 사용한 루시페라제 리포터 검정법에서 IFN 자극 활성의 효력을 보여주는 것이다. 도 9c 및 9d는 각각 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행 및 생존을 보여주는 것이다. i.p. (복강내) 주사는 6, 9, 및 13일째 수행되었다. 비교 항-PDL1 항체는 Ab-A3이다.
도 10a-10e는 ADC-X의 구조적 특징화 및 활성을 보여주는 것이다. 도 10a는 ADC-X의 화학 구조를 보여주는 것이다. 도 10c 및 10d는 각각 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행 및 생존을 보여주는 것이다. i.p. (복강내) 주사는 6, 9, 및 13일째 수행되었다. 비교 항-HER2 항체는 Ab-C1 (트라스투주맙)이고, 비교 항-PDL1 항체는 Ab-A3이다. 도 10e는 명시된 처리하의 EGFR 발현 B16F10 종양 보유 C57BL6 마우스에서의 종양 진행을 보여주는 것이다. i.p. 및 종양내 (i.t.) 주사는 7 및 11일째 수행되었다.
6. 상세한 설명
본 개시내용은 각각이 항체, 하나 이상의 사이클릭 디-뉴클레오티드 (CDN), 및 하나 이상의 CDN을 항체에 연결하는 하나 이상의 링커를 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC)를 제공한다. 본 개시내용의 ADC는 STING에 효능작용하고/거나, 그에 결합할 수 있고, 면역 반응을 촉진시킬 수 있는 능력을 갖는다.
6.1. 항체-약물 접합체 (ADC)
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC는 일반적으로 하기 화학식 I의 구조를 갖는다:
(화학식 I) Ab-[-L-(D)m]n
상기 식에서,
"D"는 CDN (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 CDN, 예컨대, 화학식 II의 것)을 나타내고;
"Ab"는 표적 항원에 결합하는 항체 또는 이의 결합 단편을 나타내고;
"L"은 각각의 경우에 독립적으로 1회 이상 존재하는 D를 Ab에 연결하는 링커를 나타내고;
"m"은 주어진 링커에 연결된 D의 존재 횟수를 나타내고;
"n"은 Ab에 연결된 링커의 개수를 나타낸다.
화학식 I의 특정 실시양태에서, m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10을 포함하는, 1 내지 10으로부터 선택되는 정수를 나타낸다. 일부 경우에, m 범위는 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 또는 1 내지 10, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 또는 1 내지 6이다. 다른 실시양태에서, 화학식 I은 m 범위가 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 또는 1 내지 10, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 또는 1 내지 6인 메 대한 값의 범위를 나타내는 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술한다. 특정 실시양태에서, 화학식 I은 ADC의 혼합물 중 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 초과의 ADC의 m 값이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10인 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I은 ADC의 혼합물 중 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 초과의 ADC의 m 값 범위가 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 또는 1 내지 10, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 또는 1 내지 6인 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술한다.
다른 실시양태에서, 화학식 I은 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술하고, m은 혼합물에 대한 m 값의 평균, 즉, 혼합물 중 주어진 링커 (L)에 연결된 CDN의 평균 개수를 나타내는 "mave"로 대체되며, 이는 항체-연결 CDN의 총 개수를 혼합물 중 CDN-함유 링커 (L)의 총 개수로 나눔으로써 계산될 수 있다. 상기 실시양태에서, mave는 1 내지 10 범위, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 또는 1 내지 9, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 또는 1 내지 6 범위의 정수 값 또는 정수가 아닌 값을 나타낸다.
화학식 I의 일부 실시양태에서, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20을 포함하는, 1 내지 20으로부터 선택되는 정수를 나타낸다. 일부 경우에, n 범위는 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 1 내지 13, 1 내지 14, 1 내지 15, 1 내지 16, 1 내지 17, 1 내지 18, 1 내지 19, 또는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 또는 1 내지 8이다. 다른 실시양태에서, 화학식 I은 n 범위가 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 1 내지 13, 1 내지 14, 1 내지 15, 1 내지 16, 1 내지 17, 1 내지 18, 1 내지 19, 또는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 또는 1 내지 10인 n에 대한 값의 범위를 나타내는 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술한다. 특정 실시양태에서, 화학식 I은 ADC의 혼합물 중 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 초과의 ADC의 n 값이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20인 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I은 ADC의 혼합물 중 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 초과의 ADC의 n 값 범위가 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 1 내지 13, 1 내지 14, 1 내지 15, 1 내지 16, 1 내지 17, 1 내지 18, 1 내지 19, 또는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 또는 1 내지 10인 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술한다.
다른 실시양태에서, 화학식 I은 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술하고, n은 혼합물에 대한 n 값의 평균, 즉, 혼합물 중 주어진 항체 (Ab)에 연결된 링커 (L)의 평균 개수를 나타내는 "nave"로 대체되며, 이는 항체-연결 링커 (L)의 총 개수를 혼합물 중 링커-함유 항체 (Ab)의 총 개수로 나눔으로써 계산될 수 있다. 상기 실시양태에서, nave는 1 내지 20 범위, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 1 내지 13, 1 내지 14, 1 내지 15, 1 내지 16, 1 내지 17, 1 내지 18, 1 내지 19, 또는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 또는 1 내지 10 범위의 정수 값 또는 정수가 아닌 값을 나타낸다.
특정 실시양태에서, m은 1이고, 이러한 경우, ADC의 링커 대 CDN의 비는 1:1이고, 이는 하기 화학식 Ia로 표시될 수 있다:
(화학식 Ia) Ab-[-L-D]n
상기 식에서,
"D"는 CDN (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 CDN, 예컨대, 화학식 II의 것)을 나타내고;
"Ab"는 표적 항원에 결합하는 항체 또는 이의 결합 단편을 나타내고;
"L"은 각각의 경우에 독립적으로 1회 이상 존재하는 D를 Ab에 연결하는 링커를 나타내고;
"n"은 링커 (L)를 통해 Ab에 연결된 D의 존재 횟수를 나타낸다.
화학식 Ia의 일부 실시양태에서, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20을 포함하는, 1 내지 20으로부터 선택되는 정수를 나타낸다. 일부 경우에, n 범위는 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 1 내지 13, 1 내지 14, 1 내지 15, 1 내지 16, 1 내지 17, 1 내지 18, 1 내지 19, 또는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 또는 1 내지 8이다. 다른 실시양태에서, 화학식 Ia는 n 범위가 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 1 내지 13, 1 내지 14, 1 내지 15, 1 내지 16, 1 내지 17, 1 내지 18, 1 내지 19, 또는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 또는 1 내지 8인 n에 대한 값의 범위를 나타내는 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술한다. 특정 실시양태에서, 화학식 Ia는 ADC의 혼합물 중 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 초과의 ADC의 n 값이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20인 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술한다. 일부 실시양태에서, 화학식 Ia는 ADC의 혼합물 중 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 초과의 ADC의 n 값 범위가 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 1 내지 13, 1 내지 14, 1 내지 15, 1 내지 16, 1 내지 17, 1 내지 18, 1 내지 19, 또는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 또는 1 내지 8인 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술한다.
다른 실시양태에서, 화학식 Ia는 화학식 I은 ADC의 혼합물 중의 ADC를 기술하고, n은 혼합물에 대한 n 값의 평균, 즉, 혼합물 중 주어진 항체 (Ab)에 연결된 링커 (L)의 평균 개수를 나타내는 "nave"로 대체되며, 이는 항체-연결 링커 (L)의 총 개수를 혼합물 중 링커-함유 항체 (Ab)의 총 개수로 나눔으로써 계산될 수 있다. 상기 실시양태에서, nave는 1 내지 20 범위, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 1 내지 10, 1 내지 11, 1 내지 12, 1 내지 13, 1 내지 14, 1 내지 15, 1 내지 16, 1 내지 17, 1 내지 18, 1 내지 19, 또는 1 내지 20, 예컨대, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 6, 1 내지 7, 1 내지 8, 1 내지 9, 또는 1 내지 10 범위의 정수 값 또는 정수가 아닌 값을 나타낸다.
본원에 개시된 ADC는 각각이 상기 모듈식 구성요소 Ab, L, 및 D를 갖는다는 점에서 본질적으로 "모듈식"이다. 본 개시내용 전역에 걸쳐, 이러한 모듈식 구성요소의 다양한 구체적인 비제한적인 실시양태 및 예가 기술되어 있다. 기술된 모든 구체적인 실시양태의 모듈은 각각의 특정 조합이 개별적으로 명시적으로 기술된 것처럼 서로 조합될 수 있는 것으로 의도된다.
또한, 본원에 기술된 다양한 ADC가 염의 형태, 일부 구체적인 실시양태에서, 제약상 허용되는 염의 형태일 수 있다는 것도 숙련가에 의해 이해될 것이다.
6.2. 사이클릭 디-뉴클레오티드 (CDN)
본원에서 사용된 CDN은 2개의 브릿지 기에 의해 연결된 2개의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 실시양태에서, CDN은 2'3'-CDN이며, 이는 각각의 뉴클레오시드가 사이클릭 5탄당 (펜토스)을 포함하고, 여기서, 제1 뉴클레오시드는 이의 당의 2'-위치에서 예컨대, 개재 브릿지 기에 의해 제2 뉴클레오시드의 당의 5'-위치에 연결되어 3'-5' 결합을 형성한다. 적합한 2'3'-CDN의 예로는 2'3'-cGAMP 및 이의 유사체 또는 유도체 (제약상 허용되는 염 포함)를 포함한다. 하기 화학식 II의 CDN은 2'3'-CDN이다.
다른 실시양태에서, CDN은 3'3'-CDN이고, 여기서, 제1 뉴클레오티드는 예컨대, 개재 브릿지 기에 의해, 상기 기술된 바와 유사한 방식으로 3'-5' 결합에 의해 제2 뉴클레오티드에 연결되고, 제2 뉴클레오티드는 예컨대, 개재 브릿지 기에 의해, 또한 상기 기술된 바와 유사한 방식으로 3'-5' 결합에 의해 제1 뉴클레오티드에 연결된다. 적합한 3'3'-CDN의 예로는 3'3'-cGAMP 및 이의 유사체 또는 유도체 (제약상 허용되는 염 포함)를 포함한다.
다른 실시양태에서, CDN은 2'2'-CDN이고, 여기서, 제1 뉴클레오티드는 예컨대, 개재 브릿지 기에 의해, 상기 기술된 바와 유사한 방식으로 2'-5' 결합에 의해 제2 뉴클레오티드에 연결되고, 제2 뉴클레오티드는 예컨대, 개재 브릿지 기에 의해, 또한 상기 기술된 바와 유사한 방식으로 2'-5' 결합에 의해 제1 뉴클레오티드에 연결된다. 적합한 2'2'-CDN의 예로는 2'2'-cGAMP 및 이의 유사체 또는 유도체 (제약상 허용되는 염 포함)를 포함한다.
다른 실시양태에서, CDN은 3'2'-CDN이고, 여기서, 제1 뉴클레오티드는 예컨대, 개재 브릿지 기에 의해, 상기 기술된 바와 유사한 방식으로 3'-5' 결합에 의해 제2 뉴클레오티드에 연결되고, 제2 뉴클레오티드는 예컨대, 개재 브릿지 기에 의해, 또한 상기 기술된 바와 유사한 방식으로 2'-5' 결합에 의해 제1 뉴클레오티드에 연결된다. 적합한 3'2'-CDN의 예로는 3'2'-cGAMP 및 이의 유사체 또는 유도체 (제약상 허용되는 염 포함)를 포함한다.
6.2.1. 뉴클레오시드
일부 경우에, CDN의 각각의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 피리미딘 염기 또는 퓨린 염기일 수 있는 핵염기를 포함한다. 예를 들어, 각 핵염기는 정규 핵염기 (예컨대, 아데닌, 구아닌, 티민, 우라실 또는 시토신) 또는 비-정규, 변형, 비천연 핵염기 (예컨대, 크산틴, 히포크산틴, 7-메틸구아닌, 5,6-디히드로우라실, 5-메틸시토신, 5-히드록시메틸시토신, 1-메틸시토신, 2,6-디아미노퓨린, 6,8-디아미노퓨린, 2-아미노이미다조[1,2a][1,3,5]트리아진-4(1H)-온, 6-아미노-5-니트로피리딘-2-온, 이소-구아닌, 이소-시토신, 5-(2,4-디아미노피리미딘), 4-티오우라실, 슈도우라실 등)일 수 있다. 적합한 핵염기는 하기에 변수 B1 및 B2에 대해 기술된 것을 포함한다.
특정 경우에서, CDN은 2개의 피리미딘 염기 또는 2개의 퓨린 염기, 또는 1개의 피리미딘 염기 및 1개의 퓨린 염기를 포함하는 2개의 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 2개의 뉴클레오시드는 2개의 퓨린 염기, 예컨대, 아데닌 및 구아닌, 2개의 아데닌, 또는 2개의 구아닌, 특히, 아데닌 및 구아닌 또는 2개의 아데닌을 포함한다. 특정 핵염기 또는 다른 정의된 화학 구조 (예컨대, "아데닌") 앞의 부정관사 "하나"("a" 또는 "an")라고 언급하는 것은 정규 핵염기 및 이의 변형된 변이체, 둘 모두를 고려한다는 것을 나타내는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, CDN은 각각이 사이클릭 5탄당 (펜토스), 예컨대, D- 또는 L-리보스 또는 데옥시리보스, D- 또는 L-아라비노스, D- 또는 L-릭소스, D- 또는 L-크실로스, 또는 이의 변형된 형태를 포함하는 2개의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 경우에서, CDN의 펜토스 중 하나 (예컨대, 리보스)는 3' 위치에서 예컨대, C1- 6알킬 기 (예컨대, C2- 6알킬 기)를 통해 당의 3'-위치에서 링커 (L)에 연결되고, 여기서, C1- 6알킬 기는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기로; 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로; 티올, 아미노, 또는 C1-6알킬아미노 기로; 또는 티올 또는 아미노 기로 임의적으로 치환된 것이다. 다른 실시양태에서, CDN의 펜토스 중 하나 (예컨대, 리보스)는 2' 위치에서 예컨대, C1- 6알킬 기 (예컨대, C2- 6알킬 기)를 통해 당의 2'-위치에서 링커 (L)에 연결되고, 여기서, C1- 6알킬 기는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기로; 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로; 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로; 또는 티올 또는 아미노 기로 임의적으로 치환된 것이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기의 양성자를 대신하여 치환함으로써 CDN에 연결된다.
펜토스의 3'-위치의 기에 관한 하기 설명은 펜토스의 2'-위치의 기에도 또한 적용될 수 있다.
특정 경우에서, 펜토스 (예컨대, 리보스)의 3'-위치의 기는 히드록실, 예컨대, -에틸렌-OH, -프로필렌-OH, -부틸렌-OH, 또는 -펜틸렌-OH로 치환된, C1- 6알킬 기, 예컨대, C2- 6알킬 기이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 상기 기 중 하나에서 히드록실의 양성자를 대신하여 치환함으로써 연결된다.
일부 경우에, 펜토스 (예컨대, 리보스)의 3'-위치의 기는 티올, 예컨대, -에틸렌-SH, -프로필렌-SH, -부틸렌-SH, 또는 -펜틸렌-SH로 치환된, C1- 6알킬 기, 예컨대, C2- 6알킬 기이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 상기 기 중 하나에서 티올의 양성자를 대신하여 치환함으로써 연결된다.
특정 경우에서, 펜토스 (예컨대, 리보스)의 3'-위치의 기는 아미노, 예컨대, -에틸렌-NH2, -프로필렌-NH2, -부틸렌-NH2, 또는 -펜틸렌-NH2로 치환된, C1- 6알킬 기, 예컨대, C2- 6알킬 기이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 상기 기 중 하나에서 아미노의 양성자를 대신하여 치환함으로써 연결된다.
일부 실시양태에서, 펜토스 (예컨대, 리보스)의 3'-위치의 기는 C1- 6알킬아미노, 예컨대, -에틸렌-N(C1- 6알킬)H, -프로필렌-N(C1- 6알킬)H, -부틸렌-N(C1- 6알킬)H, 또는 -펜틸렌-N(C1- 6알킬)H로 치환된, C1- 6알킬 기, 예컨대, C2- 6알킬 기이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 상기 기 중 하나에서 C1- 6알킬아미노의 양성자를 대신하여 치환함으로써 연결된다.
특정 실시양태에서, 펜토스 (예컨대, 리보스)의 3'-위치의 기는 -PEG-OH 기, 예컨대, -에틸렌-PEG-OH, -프로필렌-PEG-OH, -부틸렌-PEG-OH, 또는 -펜틸렌-PEG-OH로 치환된, C1- 6알킬 기, 예컨대, C2- 6알킬 기이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 -PEG-OH 기의 말단 히드록실의 양성자를 대신하여 치환함으로써 연결된다. "PEG"는 중합체 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 옥시드, 또는 폴리옥시에틸렌을 지칭하며, 이는 반복 구조 -(O-CH2-CH2)x- 및 200 내지 10000 g/mol, 예컨대, 200, 400, 800, 1000, 2000, 내지 4000 내지 5000, 6000, 8000 또는 10000 g/mol (400 내지 8,000 g/mol, 400 내지 2000 g/mol, 5000 내지 10000 g/mol, 1000 내지 4000 g/mol, 1000 내지 6000 g/mol, 또는 2000 내지 6000 g/mol 포함, 4000, 5000, 또는 6000 g/mol 미만 포함) 범위의 평균 분자량을 갖는 것임을 이해한다.
일부 경우에, 펜토스 (예컨대, 리보스)의 3'-위치의 기는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기, 예컨대, -에틸렌-OH, -프로필렌-OH, -에틸렌-SH, -프로필렌-SH, -에틸렌-NH2, -프로필렌-NH2, -에틸렌-N(C1- 6알킬)H, -프로필렌-N(C1-6알킬)H, -에틸렌-PEG-OH, 또는 -프로필렌-PEG-OH로 치환된 C2- 3알킬 기이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 상기 기 중 하나에서 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 또는 -PEG-OH 기의 양성자를 대신하여 치환함으로써 연결된다.
일부 경우에, 펜토스 (예컨대, 리보스)의 3'-위치의 기는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기, 예컨대, -에틸렌-OH, -에틸렌-SH, -에틸렌-NH2, -에틸렌-N(C1- 6알킬)H, 또는 -에틸렌-PEG-OH로 치환된 C2알킬 기 (에틸 기)이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 상기 기 중 하나에서 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 또는 -PEG-OH 기의 양성자를 대신하여 치환함으로써 연결된다.
일부 경우에, 펜토스 (예컨대, 리보스)의 3'-위치의 기는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기, 예컨대, -프로필렌-OH, -프로필렌-SH, -프로필렌-NH2, -프로필렌-N(C1- 6알킬)H, 또는 -프로필렌-PEG-OH로 치환된 C3알킬 기 (프로필 기)이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 상기 기 중 하나에서 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 또는 -PEG-OH 기의 양성자를 대신하여 치환함으로써 연결된다.
특정 실시양태에서, CDN의 펜토스 (예컨대, 리보스) 중 하나는 3' 위치에서 치환된 메틸 기를 통해 당의 3'-위치에서 링커 (L)에 연결되고, 여기서, 메틸 기는 예를 들어, 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기로; 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로; 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로; 티올 또는 아미노 기로; 또는 티올 기로 치환된 것이다. 일부 실시양태에서, 링커 (L)는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기의 양성자를 대신하여 치환함으로써 CDN에 연결된다.
특정 실시양태에서, CDN은 각각이 리보스를 포함하는 2개의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서, 리보스 중 하나는 리보스 고리의 3'-위치에서 C2- 6알킬 기 (예컨대, C2알킬, C3알킬, 또는 C2- 3알킬 기)를 통해 링커 (L)에 연결되고, 여기서, C2- 6알킬 기는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기로; 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로; 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로; 또는 티올 또는 아미노 기로 임의적으로 치환된 것이고; 여기서, 링커 (L)는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기의 양성자를 대신하여 치환함으로써 CDN에 연결된다.
특정 실시양태에서, CDN은 각각이 리보스를 포함하는 2개의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서, 리보스 중 하나는 리보스 고리의 3'-위치에서 치환된 에틸 기를 통해 링커 (L)에 연결되고, 여기서, 에틸 기는 예를 들어, 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기로; 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로; 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로; 또는 티올 또는 아미노 기로 임의적으로 치환된 것이고; 여기서, 링커 (L)는 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기의 양성자를 대신하여 치환함으로써 CDN에 연결된다.
특정 실시양태에서, CDN은 각각이 리보스를 포함하는 2개의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서, 리보스 중 하나는 리보스 고리의 3'-위치에서, -CH2CH2-OH, -CH2CH2-SH, 및 -CH2CH2-NH2로부터, 특히, -CH2CH2-SH 및 -CH2CH2-NH2로부터 선택되는 치환된 에틸 기를 통해 링커 (L)에 연결되고, 여기서, 링커 (L)는 히드록실, 티올, 또는 아미노 기의 양성자를 대신하여 치환함으로써 CDN에 연결된다.
6.2.2. 브릿지 기
이의 사이클릭 구조로 인해, CDN은 상기 기술된 뉴클레오시드를 연결하여 CDN 거대고리를 형성하는 2개의 브릿지 기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 브릿지 기는 독립적으로 뉴클레오시드의 2개의 당 사이의 브릿지에 2 내지 5개의 원자, 예컨대, 3개의 원자를 포함한다. 예를 들어, -O-P(=O)(OH)-O-는 브릿지 기일 수 있으며, 여기서, 당은 말단 산소 원자에서 결합되고, 브릿지에는 3개의 원자가 있는 것으로 이해된다. 브릿지 기는 독립적으로 브릿지에 헤테로원자만을 포함하거나, 브릿지에 헤테로원자와 탄소 원자 둘 모두를 포함하거나, 또는 브릿지에 탄소 원자만을 포함할 수 있다.
특정 경우에서, 브릿지 기는 2가 포스페이트 또는 티오포스페이트 기 또는 이의 변형된 변이체, 예컨대, -O-P(=O)(OH)-O- 또는 -O-P(=O)(SH)-O-이다. 예를 들어, 2개의 브릿지 기는 독립적으로 -O-P(O)Rp-O-, -O-P(S)Rp-O-, -O-P(O)Rp-S-, -O-P(S)Rp-S-, -S-P(O)Rp-O-,-S-P(S)Rp-O-, -S-P(O)Rp-S-, 또는 -S-P(S)Rp-S-로부터 선택될 수 있고, 여기서, Rp는 하기에 추가로 정의된다. 일부 실시양태에서, 상기 브릿지 기에서 Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올로부터 선택된다.
두 브릿지 기 모두 포스페이트 기 또는 이의 변형된 변이체일 때, 이 경우에 각 브릿지 기는 상기 기술된 뉴클레오시드와 함께 조합하여 뉴클레오티드를 나타내며, 브릿지 기와 뉴클레오시드로 이루어진 두 세트 모두 사이클릭 디뉴클레오티드를 제공하는 것으로 이해된다. 그럼에도 불구하고, 본원에 개시된 CDN은 포스페이트 기인 브릿지 기로 반드시 제한되는 것은 아니다.
6.2.3. 특정 CDN
본 개시내용은 그 자체로 또는 화학식 I의 ADC의 일부로서 투여될 수 있는 CDN (D)을 제공한다. 특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 II의 구조를 갖는다. 화학식 I에 대한 언급은 또한 하위 화학식 Ia에 대한 언급을 포함하는 것으로 이해된다. 유사하게, 화학식 II에 대한 언급은 이의 하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIa, IIb 등에 대한 언급 또한 포함한다. 화학식 II는 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00012
상기 식에서,
R1은 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기로 치환된 C1- 6알킬, 예컨대, C2-6알킬 또는 C2-3알킬이고,
R3 및 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 또는 C2- 6알키닐이고, 여기서, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 및 C2- 6알키닐은 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되고,
R2, R5, 및 R6은 독립적으로 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, 또는 C3- 6알키닐-O-이고, 여기서, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, 및 C3- 6알키닐-O-는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1-6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 -6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되거나; 또는 R6 및 R5는 함께 =CH2이거나; 또는 R6 및 R4는 함께 에틸렌, -O-CH2-, 및 -NH-CH2-로부터 선택되는 V2 함유 고리를 가로질러 브릿지를 형성하고;
V1 및 V2는 독립적으로 O, S, 또는 CH2이고;
V1 함유 고리 중 탄소로부터 출발하는 BG1, 및 V2 함유 고리 중 탄소로부터 출발하는 BG2는 독립적으로 -O-P(O)Rp-O-, -O-P(S)Rp-O-, -O-P(O)Rp-S-, -O-P(S)Rp-S-, -S-P(O)Rp-O-,-S-P(S)Rp-O-, -S-P(O)Rp-S-, -S-P(S)Rp-S-, -NH-P(O)Rp-O-, -O-P(O)Rp-NH-, -NH-P(S)Rp-O-, -O-P(S)Rp-NH-, 또는 -NH-SO2-NH-이고; 여기서,
Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실, 티올, C1-6알킬, C1-6알콕시, C3-6알케닐-O-, C3-6알키닐-O-, -PEG-OH, 보라노 (-BH3 -), 또는 -NR'R"이고, 여기서, C1-6알킬, C1-6알콕시, C3-6알케닐-O-, 및 C3-6알키닐-O-는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1-6알콕시, C1-6히드록시알콕시, -OC(O)C1-6알킬, -N(H)C(O)C1-6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1-6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되고;
R' 및 R"은 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1-6알콕시, C1-6히드록시알콕시, -OC(O)C1-6알킬, -N(H)C(O)C1-6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1-6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1-6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3-5헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
Ra1, Rb1, Ra2, 및 Rb2는 독립적으로 수소 또는 C1-3알킬이고;
B1 및 B2는 독립적으로
Figure pct00013
로부터 선택되고,
여기서,
V3은 O 또는 S, 특히, O이고;
Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, 및 Z6은 각각의 경우에 독립적으로 CRz 또는 N이고;
Za는 O (Z5가 N일 때, 제외) 또는 NR'이고; 여기서,
Rz는 각각의 경우에 독립적으로 수소, 할로겐, 아지도, 아미노, C1-6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, C1-6알킬, C1-6알콕시, C2-6알케닐, C3-6알케닐-O-, C2-6알키닐, C3-6알키닐-O-, -NO2, -CN, -C(O)C1-6알킬, -CO2H, -CO2C1-6알킬, -S(O)C1-6알킬, -S(O)2C1-6알킬, -C(O)NR', -C(O)NR'R", -SO2NR'R", -OC(O)C1-6알킬, -NR'C(O)C1-6알킬, -N(R')C(O)NR'R", -N(R')SO2NR'R", -N(R)SO2C1-6알킬, 또는 -OC(O)NR'R"이고, 여기서, C1-6알킬, C1-6알콕시, C2-6알케닐, C3-6알케닐-O-, C2-6알키닐, 및 C3-6알키닐-O-는 각각의 경우에 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1-6알콕시, C1-6히드록시알콕시, -OC(O)C1-6알킬, -N(H)C(O)C1-6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1-6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되고;
R' 및 R"은 각각의 경우에 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1-6알콕시, C1-6히드록시알콕시, -OC(O)C1-6알킬, -N(H)C(O)C1-6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1-6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1-6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3-5헤테로사이클릭 고리를 형성한다.
일부 경우에, 화학식 II의 CDN (D)이 화학식 I 또는 Ia의 ADC 중의 링커 (L)에 공유적으로 결합될 때, CDN은 R1 위치의 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기에서 링커에 공유적으로 결합된다.
특정 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기로 치환된 C2- 6알킬이다. 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노로 치환된 C2- 6알킬이다. 특정 실시양태에서, R1은 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노로 치환된 C2- 6알킬이다. 일부 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2- 6알킬이다. 특정 실시양태에서, R1은 티올로 치환된 C2- 6알킬이다. 일부 실시양태에서, R1은 아미노로 치환된 C2- 6알킬이다. 상기 실시양태 중 임의의 실시양태의 경우, R1은 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, C2- 3알킬, 예컨대, 히드록실, 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노로 치환된 에틸이다.
일부 실시양태에서, R1은 히드록실 기로 치환된 C2- 4알킬이다. 상기 일부 실시양태에서, R1은 히드록실로 치환된 C2알킬이다. 상기 다른 실시양태에서, R1은 히드록실로 치환된 C3알킬이다. 상기 추가의 다른 실시양태에서, R1은 히드록실로 치환된 C4알킬이다.
일부 실시양태에서, R1은 아미노 (-NH2) 기로 치환된 C2- 4알킬이다. 상기 일부 실시양태에서, R1은 아미노 기로 치환된 C2알킬이다. 상기 다른 실시양태에서, R1은 아미노 기로 치환된 C3알킬이다. 상기 추가의 다른 실시양태에서, R1은 아미노 기로 치환된 C4알킬이다.
일부 실시양태에서, R1은 티올 (-SH) 기로 치환된 C2- 4알킬이다. 상기 일부 실시양태에서, R1은 티올 기로 치환된 C2알킬이다. 상기 다른 실시양태에서, R1은 티올 기로 치환된 C3알킬이다. 상기 추가의 다른 실시양태에서, R1은 티올 기로 치환된 C4알킬이다.
일부 실시양태에서, R1은 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 C2- 4알킬이다. 상기 일부 실시양태에서, R1은 메틸아미노 기로 치환된 C2알킬이다. 상기 다른 실시양태에서, R1은 메틸아미노 기로 치환된 C3알킬이다. 상기 추가의 다른 실시양태에서, R1은 메틸아미노 기로 치환된 C4알킬이다. .
일부 실시양태에서, R3 및 R4는 독립적으로 수소, 할로겐, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 또는 C2- 6알키닐이고, 여기서, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 및 C2- 6알키닐은 비치환된 것이다. 특정 실시양태에서, R3 및 R4는 독립적으로 수소, C1- 6알킬, 또는 C2- 6알키닐이고, 여기서, C1-6알킬 및 C2-6알키닐은 비치환된 것이다.
일부 실시양태에서, R3 및 R4 중 하나는 수소이고, 나머지 다른 하나는 할로겐, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 또는 C2- 6알키닐이고, 여기서, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 및 C2- 6알키닐은 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 - 6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된다. 일부 실시양태에서, R3 및 R4 중 하나는 수소이고, 나머지 다른 하나는 할로겐, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 또는 C2- 6알키닐이고, 여기서, C1- 6알킬, C2- 6알케닐, 및 C2- 6알키닐은 비치환된 것이다. 특정 실시양태에서, R3 및 R4 중 하나는 수소이고, 나머지 다른 하나는 C1- 6알킬 또는 C2- 6알키닐이고, 여기서, C1- 6알킬 및 C2-6알키닐은 비치환된 것이다. 일부 실시양태에서, R3 및 R4 둘 모두 수소이다.
특정 실시양태에서, R2는 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬, 또는 C1- 6알콕시이고, 여기서, C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1-6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 - 6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된다. 일부 실시양태에서, R2는 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬, 또는 C1-6알콕시이고, 여기서, C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 비치환된 것이다. 특정 실시양태에서, R2는 수소 또는 할로겐, 예컨대, 플루오린이다. 일부 경우에서, R2는 수소이다.
일부 실시양태에서, R5 및 R6은 독립적으로 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬, 또는 C1- 6알콕시이고, 여기서, C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1-6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 - 6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된다. 특정 실시양태에서, R5 및 R6은 독립적으로 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬, 또는 C1- 6알콕시이고, 여기서, C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 비치환된 것이다. 일부 실시양태에서, R5 및 R6은 독립적으로 수소, 할로겐, 또는 히드록실이다. 특정 실시양태에서, R5 및 R6은 함께 =CH2이다.
특정 실시양태에서, R5는 수소이고, R6은 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, 또는 C3- 6알키닐-O-이고, 여기서, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, 및 C3- 6알키닐-O-는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된다. 일부 실시양태에서, R5는 수소이고, R6은 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬, 또는 C1- 6알콕시이고, 여기서, C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된다. 특정 실시양태에서, R5는 수소이고, R6은 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬, 또는 C1- 6알콕시이고, 여기서, C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 비치환된 것이다. 일부 실시양태에서, R5는 수소이고, R6은 수소, 할로겐 (예컨대, 플루오린 또는 염소), 히드록실, 또는 비치환된 C1- 6알콕시 (예컨대, 메톡시)이다. 일부 실시양태에서, R5는 수소이고, R6은 할로겐, 예컨대, 플루오린 또는 염소이다. 특정 경우에서, R5는 수소이고, R6은 히드록실이다. 다른 실시양태에서, R5는 수소이고, R6은 비치환된 C1- 6알콕시, 예컨대, 메톡시이다.
특정 실시양태에서, R6은 수소이고, R5는 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, 또는 C3- 6알키닐-O-이고, 여기서, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, C2- 6알케닐, C3- 6알케닐-O-, C2- 6알키닐, 및 C3- 6알키닐-O-는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된다. 일부 실시양태에서, R6은 수소이고, R5는 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬, 또는 C1- 6알콕시이고, 여기서, C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 -6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된다. 특정 실시양태에서, R6은 수소이고, R5는 수소, 할로겐, 히드록실, 아지도, 아미노, C1- 6알킬, 또는 C1- 6알콕시이고, 여기서, C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 비치환된 것이다. 일부 실시양태에서, R6은 수소이고, R5는 수소, 할로겐 (예컨대, 플루오린 또는 염소), 히드록실, 또는 비치환된 C1- 6알콕시 (예컨대, 메톡시)이다. 일부 실시양태에서, R6은 수소이고, R5는 할로겐, 예컨대, 플루오린 또는 염소이다. 특정 경우에서, R6은 수소이고, R5는 히드록실이다. 다른 실시양태에서, R5는 수소이고, R6은 비치환된 C1- 6알콕시, 예컨대, 메톡시이다.
일부 실시양태에서, R5 및 R6 중 하나는 수소이고, 나머지 다른 하나는 할로겐, 예컨대, 플루오린이다. 특정 실시양태에서, R5는 수소이고, R6은 할로겐, 예컨대, 플루오린이다. 특정 실시양태에서, R6은 수소이고, R5는 할로겐, 예컨대, 플루오린이다.
특정 경우에서, R5 및 R6 둘 모두 수소 또는 할로겐이고, 예컨대, R5 및 R6 둘 모두 수소이거나, 또는 R5 및 R6 둘 모두 할로겐, 예컨대, 플루오린이다.
일부 실시양태에서, R5는 수소이다. 다른 실시양태에서, R5는 히드록실이다. 다른 실시양태에서, R5는 할로겐이다. 예를 들어, R5는 플루오린, 브로민, 또는 염소일 수 있다.
일부 실시양태에서, R6은 수소이다. 다른 실시양태에서, R6은 히드록실이다. 다른 실시양태에서, R6은 메톡시이다. 다른 실시양태에서, R6은 할로겐. 예를 들어, R6은 플루오린, 브로민, 또는 염소일 수 있다.
특정 실시양태에서, V1 및 V2는 독립적으로 O 또는 S이다. 일부 실시양태에서, V1 및 V2는 독립적으로 O 또는 CH2이다. 일부 실시양태에서, V1 및 V2는 둘 모두 O이다. 특정 실시양태에서, V1 및 V2는 둘 모두 S이다. 특정 실시양태에서, V1 및 V2 중 적어도 하나는 O이다. 일부 실시양태에서, V1 및 V2 중 적어도 하나는 S이다. 특정 실시양태에서, V1 및 V2 중 적어도 하나는 CH2이다.
일부 실시양태에서, BG1 및 BG2는 독립적으로 -O-P(O)Rp-O- 또는 -O-P(S)Rp-O-이다. 특정 실시양태에서, BG1 및 BG2 중 적어도 하나는 -O-P(O)Rp-O-이다. 일부 실시양태에서, BG1 및 BG2 중 적어도 하나는 -O-P(S)Rp-O-이다. 특정 실시양태에서, BG1는 -O-P(O)Rp-O-이고, BG2는 -O-P(S)Rp-O-이다. 일부 실시양태에서, BG1는 -O-P(O)Rp-O-이고, BG2는 -O-P(S)Rp-O-이다. 특정 실시양태에서, BG1 및 BG2 둘 모두 -O-P(O)Rp-O-이다.
특정 실시양태에서, Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실, 티올, C1- 6알킬, 보라노 (-BH3 -), 또는 -NR'R"이다. 일부 실시양태에서, Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올이다. 특정 실시양태에서, Rp는 히드록실이다. 일부 실시양태에서, Rp는 티올이다. 일부 실시양태에서, 한 Rp는 히드록실이고, 나머지 다른 하나는 티올이다.
일부 실시양태에서, BG1 및 BG2 둘 모두 -O-P(O)Rp-O-이고, Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실, 티올, C1- 6알킬, 보라노 (-BH3 -), 또는 -NR'R"이다. 특정 실시양태에서, BG1 및 BG2 둘 모두 -O-P(O)Rp-O-이고, Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올이다. 일부 실시양태에서, BG1 및 BG2 둘 모두 -O-P(O)Rp-O-이고, Rp는 히드록실이다. 다른 실시양태에서, BG1 및 BG2 둘 모두 -O-P(O)Rp-O-이고, Rp는 티올이다. 일부 실시양태에서, BG1은 -O-P(O)Rp-O-이고, 여기서, Rp는 히드록실이고, BG2는 -O-P(O)Rp-O-이고, 여기서, Rp는 티올이다. 다른 실시양태에서, BG1은 -O-P(O)Rp-O-이고, 여기서, Rp는 티올이고, BG2는 -O-P(O)Rp-O-이고, 여기서, Rp는 히드록실이다.
특정 경우에서, BG1 및 BG2 중 적어도 하나는 -NH-P(O)Rp-O-, -O-P(O)Rp-NH-, -NH-P(S)Rp-O-, 또는 -O-P(S)Rp-NH-이다. 일부 경우에, BG1 및 BG2 중 적어도 하나는 -NH-P(O)Rp-O-, 또는-O-P(O)Rp-NH-이다. 특정 실시양태에서, BG1 및 BG2 둘 모두 -NH-P(O)Rp-O- 또는 -O-P(O)Rp-NH-이다. 특정 경우에서, BG1 및 BG2 중 적어도 하나는 -NH-P(O)Rp-O-, -O-P(O)Rp-NH-, -NH-P(S)Rp-O-, 또는 -O-P(S)Rp-NH-이고; Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올이다. 일부 경우에, BG1 및 BG2 중 적어도 하나는 -NH-P(O)Rp-O-, 또는-O-P(O)Rp-NH-이고; Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올이다. 특정 실시양태에서, BG1 및 BG2 둘 모두 -NH-P(O)Rp-O- 또는 -O-P(O)Rp-NH-이고; Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올이다. 일부 실시양태에서, BG1 및 BG2 둘 모두 -NH-P(O)Rp-O- 또는 -O-P(O)Rp-NH-이고; Rp는 히드록실이다. 다른 실시양태에서, BG1 및 BG2 둘 모두 -NH-P(O)Rp-O- 또는 -O-P(O)Rp-NH-이고; Rp는 티올이다.
특정 실시양태에서, Rp가 -NR'R"일 때, R' 및 R"은 독립적으로 수소 또는 비치환된 C1- 6알킬이거나, 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3- 5헤테로사이클릭 고리, 예컨대, 모르폴린, 피롤리딘, 또는 피페라진을 형성한다.
특정 실시양태에서, B1 및 B2는 동일한 핵염기이다. 다른 실시양태에서, B1 및 B2는 상이한 핵염기이다. 일부 실시양태에서, B1 및 B2는 둘 모두 퓨린 핵염기이다. 특정 실시양태에서, B1 및 B2는 둘 모두 피리미딘 핵염기이다. 일부 실시양태에서, B1은 퓨린 핵염기이고, B2는 피리미딘 핵염기이다. 특정 실시양태에서, B1은 피리미딘 핵염기이고, B2는 퓨린 핵염기이다.
일부 경우에, B1 및 B2는 독립적으로 아데닌, 구아닌, 티민, 우라실, 및 시토신 및 이들의 변형된 변이체로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, B1 및 B2 둘 모두 아데닌 또는 이의 변형된 변이체이다. 일부 실시양태에서, B1 및 B2 둘 모두 구아닌 또는 이의 변형된 변이체이다. 특정 실시양태에서, B1은 구아닌 또는 이의 변형된 변이체이고, B2는 아데닌 또는 이의 변형된 변이체이다. 일부 실시양태에서, B1은 아데닌 또는 이의 변형된 변이체이고, B2는 구아닌 또는 이의 변형된 변이체이다.
일부 실시양태에서, B1 및 B2는 독립적으로
Figure pct00014
로부터 선택되고, 여기서,
Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, 및 Z6은 각각의 경우에 독립적으로 CRz 또는 N이고;
Za는 O (Z5가 N일 때, 제외) 또는 NR'이고; 여기서,
Rz는 각각의 경우에 독립적으로 수소, 할로겐, 아지도, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, -C(O)C1- 6알킬, -CO2H, -CO2C1 - 6알킬, -C(O)NR', -C(O)NR'R", -OC(O)C1 - 6알킬, -NR'C(O)C1 - 6알킬, -N(R')C(O)NR'R", 또는 -OC(O)NR'R"이고, 여기서,
C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 각각의 경우에 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1- 3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되고;
R' 및 R"은 각각의 경우에 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1- 3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1- 6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3-5헤테로사이클릭 고리를 형성한다.
일부 실시양태에서, B1 및 B2의 경우, 존재하는 두 Z1 중 하나 또는 그 둘 모두는 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이다. 특정 실시양태에서, 존재하는 두 Z5 중 하나 또는 그 둘 모두는 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이다. 일부 실시양태에서, 존재하는 두 Z1 중 하나 또는 그 둘 모두는 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이고, 존재하는 두 Z5 중 하나 또는 그 둘 모두는 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이다. 특정 실시양태에서, 존재하는 두 Z1 모두 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이고, 존재하는 두 Z5 모두 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이다.
특정 경우에서, B1 및 B2의 경우, Z3은 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이다. 특정 실시양태에서, Z3은 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이고, 존재하는 두 Z1 중 하나 또는 그 둘 모두는 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이다. 특정 실시양태에서, Z3은 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이고, 존재하는 두 Z5 중 하나 또는 그 둘 모두는 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이다. 특정 실시양태에서, Z3은 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이고, 존재하는 두 Z1 모두 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이고, 존재하는 두 Z5 모두 CRz (예컨대, CH 또는 CNH2)이다.
일부 경우에, B1 및 B2의 경우, Za는 NR', 예컨대, NH 또는 NC1- 6알킬이다. 다른 실시양태에서, Za는 O이다.
실시양태의 경우에서, 존재하는 두 Z2 중 하나 또는 그 둘 모두는 N이다. 특정 실시양태에서, Z4는 N이다. 일부 실시양태에서, 존재하는 두 Z2 중 하나 또는 그 둘 모두는 N이고, Z4는 N이다. 특정 실시양태에서, 존재하는 두 Z2 모두 N이고, Z4는 N이다.
실시양태의 경우에서, 존재하는 두 Z6 중 하나 또는 그 둘 모두는 N이다. 특정 실시양태에서, Z4는 N이다. 일부 실시양태에서, 존재하는 두 Z6 중 하나 또는 그 둘 모두는 N이고, Z4는 N이다. 특정 실시양태에서, 존재하는 두 Z6 모두 N이고, Z4는 N이다. 일부 실시양태에서, 존재하는 두 Z6 중 하나 또는 그 둘 모두는 N이고, 존재하는 두 Z2 중 하나 또는 그 둘 모두 N이다. 일부 실시양태에서, 존재하는 두 Z6 모두 N이고, 존재하는 두 Z2 모두 N이다.
일부 실시양태에서, B1 및 B2는 독립적으로
Figure pct00015
로부터 선택된다:
상기 식에서,
Z1, Z3, 및 Z5는 각각의 경우에 독립적으로 CRz 또는 N이고;
Za는 O (Z5가 N일 때, 제외) 또는 NR'이고; 여기서,
Rz는 각각의 경우에 독립적으로 수소, 할로겐, 아지도, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, -C(O)C1- 6알킬, -CO2H, -CO2C1 - 6알킬, -C(O)NR', -C(O)NR'R", -OC(O)C1 - 6알킬, -NR'C(O)C1 - 6알킬, -N(R')C(O)NR'R", 또는 -OC(O)NR'R"이고, 여기서,
C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 각각의 경우에 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되고;
R' 및 R"은 각각의 경우에 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 -6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1- 6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3-5헤테로사이클릭 고리를 형성한다.
일부 실시양태에서, B1 및 B2는 독립적으로
Figure pct00016
로부터 선택된다:
상기 식에서,
Za는 NR'이고; 여기서,
Rz는 각각의 경우에 독립적으로 수소, 할로겐, 아지도, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, C1- 6알킬, C1- 6알콕시, -C(O)C1- 6알킬,
-CO2H, -CO2C1-6알킬, -C(O)NR', -C(O)NR'R", -OC(O)C1-6알킬,
-NR'C(O)C1-6알킬, -N(R')C(O)NR'R", 또는 -OC(O)NR'R"이고, 여기서,
C1- 6알킬 및 C1- 6알콕시는 각각의 경우에 독립적으로 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 -6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환되고;
R' 및 R"은 각각의 경우에 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1 - 6알킬, -N(C1- 3알킬)C(O)C1-6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1- 6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3-5헤테로사이클릭 고리를 형성한다.
특정 실시양태에서, B1 및 B2는 독립적으로
Figure pct00017
Figure pct00018
로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, Ra1, Rb1, Ra2, 및 Rb2는 모두 수소이다. 일부 실시양태에서, Ra1, Rb1, Ra2, 및 Rb2 중 적어도 하나는 C1- 3알킬, 예컨대, 메틸이다. 특정 경우에서, Ra1 및 Ra2는 C1- 3알킬, 예컨대, 메틸이다. 일부 실시양태에서, Ra1, Rb1, Ra2, 및 Rb2 중 하나는 C1-3알킬, 예컨대, 메틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIa의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00019
상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5, 및 R6; V1 및 V2; BG1 및 BG2; 및 B1 및 B2는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IIa의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IIa의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2-4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIb의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00020
상기 식에서, R1, R5, 및 R6; V1 및 V2; BG1 및 BG2; 및 B1 및 B2는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IIb의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IIb의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2-4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIc의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00021
상기 식에서, R1, R5, 및 R6; BG1 및 BG2; 및 B1 및 B2는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IIc의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IIc의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IId의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00022
상기 식에서, R1, R5, R6, 및 RP; V1 및 V2; 및 B1 및 B2는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IId의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IId의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2-4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIe의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00023
상기 식에서, R1, R5, R6, 및 RP; 및 B1 및 B2는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IIe의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IIe의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2-4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIf의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00024
상기 식에서,
Y 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
R1, R5, R6, RP, 및 B1은 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IIf의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IIf의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2-4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIg의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00025
상기 식에서,
W 및 X는 독립적으로 CH 또는 N이고;
R1, R5, R6, RP, 및 B2는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IIg의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IIg의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIh의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00026
상기 식에서,
W, X, Y, 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
R1, R5, R6, 및 RP는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IIh의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IIh의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2-4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIi의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00027
상기 식에서,
W, X, Y, 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
R1, R5, R6, 및 RP는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IIi의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IIi의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2-4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIj의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00028
상기 식에서,
W, X, Y, 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
R1, R5, R6, 및 RP는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 IIj의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. 화학식 IIj의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2-4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIk의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00029
상기 식에서,
W, X, Y, 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
R1 및 RP는 상기 화학식 II에 대해 정의된 바와 같다.
IIk의 일부 실시양태에서, R1은 히드록실, 티올, 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다. IIk의 특정 실시양태에서, R1은 티올 또는 아미노로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이다.
특정 경우에서, CDN은 하기 화학식 IIm의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00030
상기 식에서,
R1은 티올 또는 아미노 기로 치환된 C2- 4알킬, 예컨대, 에틸이고;
X 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
RP는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올이다.
일부 실시양태에서, CDN은 하기 화학식 IIn의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00031
상기 식에서,
X 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
RP는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올이다.
일부 실시양태에서, CDN은 하기 화학식 IIo의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00032
상기 식에서,
X 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
RP는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올이다.
화학식 IId-k 및 IIm-o의 일부 실시양태에서, 존재하는 두 RP 모두 히드록실이다. 화학식 IId-k 및 IIm-o의 특정 실시양태에서, 존재하는 두 RP 모두 티올이다. 화학식 IId-k 및 IIm-o의 일부 실시양태에서, BG1과 상응하여 존재하는 RP (좌측 상단 RP)는 히드록실이고, BG2와 상응하여 존재하는 RP (우측 하단 RP)는 티올이다. 화학식 IId-k 및 IIm-o의 특정 실시양태에서, BG1과 상응하여 존재하는 RP는 티올이고, BG2와 상응하여 존재하는 RP는 히드록실이다.
한 실시양태에서, CDN은 하기 구조 (CDN-A), 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00033
.
한 실시양태에서, CDN은 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00034
.
한 실시양태에서, CDN은 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00035
.
한 실시양태에서, CDN은 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00036
.
한 실시양태에서, CDN은 하기 구조 (CDN-B), 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00037
.
한 실시양태에서, CDN은 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00038
.
한 실시양태에서, CDN은 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00039
.
한 실시양태에서, CDN은 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는다:
Figure pct00040
.
본 개시내용은 화학식 II의 CDN (예컨대, CDN-A 또는 CDN-B)을 링커를 통해 항체에 접합시킴으로써 화학식 I의 ADC를 제조하는 방법을 제공한다. 화학식 II의 CDN은 절단가능한 또는 비절단가능한 링커를 통해 항체 접합될 수 있다. 특정 실시양태에서, CDN은 링커 절단시 종양 세포, 암 관련 면역 세포, 또는 종양 미세환경 내로 방출된다.
화학식 I의 ADC에서, 여기서, CDN (D)은 화학식 II (예컨대, CDN-A 또는 CDN-B)의 것이고, CDN은 화학식 II의 CDN의 R1의 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기에서 링커 (L)에 공유적으로 결합될 수 있다. 화학식 II의 CDN은 또한 링커 (L) 또는 ADC에 결합될 수 없고, 본원에 기술된 방법에서 단독으로, 본원에 기술된 ADC와 함께 조합하여, 다른 활성 작용제 (예컨대, 면역항암제, 예컨대, 면역 체크포인트 억제제, 항-PD1, 항-PD-L1, 및 항-CTLA-4 항체 포함)와 함께 조합하여, 또는 본원에 기술된 ADC와 함께 조합하여 및 다른 활성 작용제 (예컨대, 면역항암제)와 함께 조합하여, 일 둘 모두의 조합으로 투여될 수 있다는 것을 이해한다.
화학식 II의 CDN (예컨대, CDN-A 또는 CDN-B)은 단독으로 또는 화학식 I의 ADC의 성분으로서 사용될 때 STING에 효능작용할 수 있다. 특정 실시양태에서, CDN은 링커를 통해 항체 또는 항원 결합 단편에 접합될 수 있다. 본원에 개시된 바와 같이, CDN은 화학식 II의 CDN의 R1의 히드록실, 아미노, 티올, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기와 링커 중의 상응하는 기 사이의 화학 반응을 통해 링커에 공유적으로 결합될 수 있다. 달리 말하면, 일부 실시양태에서, CDN은 CDN의 R1에 존재하는 하기 결합들 중 하나에 의해 링커 (L)에 연결되고: R1-O-L, R1-NH-L, R1-S-L, R1-N(C1-6알킬)-L, 또는 R1-PEG-O-L, 여기서, R1은 R1의 히드록실, 아미노, 티올, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기를 제외한 R1 모이어티의 나머지 부분the R1 모이어티를 나타낸다. 특정 항체, 항원 결합 단편s, 및 링커는 하기에서 기술된다.
6.3. 항체 및 항원 결합 단편
본원에서 사용되는 바, 용어 "항체"는 특정 표적 항원에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 지칭한다. 항체는 인간 또는 비인간 기원일 수 있다. 항체는 링커를 통해 섹션 6.2에 기술된 CDN에 접합될 수 있다. 항체는 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 유전적으로 조작된 항체, 및/또는 자연에서 달리 변형된 항체있 수 있다. 본 개시내용의 ADC를 구성하는 항체는 예를 들어, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체로서 인간에게 투여하는 데 적합하다.
항체는 항체와 표적 항원의 결합을 매개하는 상보성 결정 영역 (CDR)으로 알려진 초가변 영역을 갖는 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 항체는 일반적으로 3개의 CDR, 즉, VH CDR#1, VH CDR#2, 및 VH CDR#3을 갖는 가변 영역 (VH)을 포함하는 중쇄, 및 3개의 CDR, 즉, VL CDR#1, VL CDR#2, 및 VL CDR#3을 갖는 가변 영역 (VL)을 포함하는 경쇄를 포함한다. 본 개시내용의 ADC의 구체적인 실시양태는 상기 예시적인 CDR 및/또는 VH 및/또는 VL 서열을 포함하는 항체 및/또는 항원 결합 단편을 포함하는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 개시내용의 ADC를 구성하는 항체는 예를 들어, IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, 또는 IgY를 포함하는 임의의 항체 이소타입이거나, 또는 그로부터 유래될 수 있는 전장 항체의 형태일 수 있다. 일부 실시양태에서, ADC를 구성하는 항체는 IgG (예컨대, IgG1, IgG2, IgG3 , 또는 IgG4)이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항체의 불변 영역의 전부 또는 그 일부를 포함한다.
본 개시내용의 ADC를 구성하는 항체는 이중특이적 항체, 이중 가변 도메인 항체, 다중 쇄 또는 단일 쇄 항체, 단일 도메인 항체, 낙타화된 항체, scFv-Fc 항체, 수로바디(surrobody) (대용 경쇄 구축물 포함) 등일 수 있다.
본 개시내용의 ADC는 전장 (무손상) 항체 분자 뿐만 아니라, 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "단편"은 무손상 항체보다 적은 수의 아미노산 잔기를 포함하는 무손상 항체의 일부를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "항원 결합 단편"은 항원에 대한 결합을 매개하거나, 항원 결합에 대해 무손상 항체와 경쟁하는 항체의 폴리펩티드 단편을 지칭한다. 적합한 예시적인 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, dAb, Fd, 또는 결합하기에 충분한 프레임워크를 갖는 단리된 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 단편은 분자 공학에 의해 또는 무손상 항체 또는 항체 쇄의 화학적 또는 효소적 처리를 통해 또는 재조합 수단에 의해 수득될 수 있다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 특정 생성 또는 생산 방법으로 제한되지 않으며, 예컨대, 하이브리도마 기술, 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 트랜스제닉 동물, 또는 이의 일부 조합과 같은 널리 공지된 기술을 사용하여 제조될 수 있다.
6.4. 표적 항원 및 항체
본 개시내용에서 고려되는 바와 같은 ADC를 구성하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 암 관련 종양 또는 면역 세포 연관 항원에 특이적으로 결합한다.
특정 실시양태에서, 암 관련 종양 또는 면역 세포 연관 항원은 T-세포 공동-억제 분자이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 PD-L1, PD-L2, CD47, CD80, CD86, HVEM, UL144, CD155, CD112, CD113, 갈렉틴-1, 갈렉틴-3, 갈렉틴-9, CD48, LIGHT, BTLA, 및 CD160으로부터 선택되는 종양 연관 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 종양 연관 항원은 BTLA, Tim-3, PD-1, CTLA-4, TIGIT, CD244, 및 CD223으로부터 선택된 T-세포 분자에 결합하는 분자이다.
일부 실시양태에서, 항체는 항-PD-L1 항체, 예컨대, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
일부 실시양태에서, 항체는 항-CD47 항체, 예컨대, Hu5F9-G4, IBI188, CC-90002, ZL1201, TTI-621, AO-176, SGN-CD47M의 항체, ALX148의 항원 결합 도메인, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다른 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 성장 인자 수용체 (GFR)인 암 관련 종양 항원에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 EGFR/ErbB/HER 패밀리 GFR이다. 일부 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 EGFR/HER1 (ErbB1), HER2/c-Neu (ErbB2), Her3 (ErbB3), 및 Her4 (ErbB4) 수용체로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 IGFR 패밀리 GFR이다. 일부 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 IGF1R 또는 IGF2R 수용체이다. 특정 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 TGF-βR (TβR) 패밀리 GFR이다. 일부 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 TβR I 또는 TβR II 수용체이다. 특정 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 VEGFR 패밀리 GFR이다. 일부 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 VEGFR1, VEGFR2, 또는 VEGFR3 수용체이다. 특정 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 PDGFR 패밀리 GFR이다. 일부 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 PDGFR-α, 또는 PDGFR-β 수용체이다. 특정 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 FGFR 패밀리 GFR이다. 일부 실시양태에서, 암 관련 종양 항원은 FGFR1, FGFR2, FGFR3, 또는 FGFR4 수용체이다.
일부 실시양태에서, 항체는 항-EGFR/HER1 (ErbB1) 항체, 예컨대, 세툭시맙, 파니투무맙, 네시투무맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-HER2 (ErbB2) 항체, 예컨대, 트라스투주맙, 페르투주맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-VEGFR2 항체, 예컨대, 라무시루맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-PDGFR-α 항체, 예컨대, 올라라투맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다른 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 림프종 관련 항원에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, 림프종 관련 항원은 CD20, CD30, CD19/CD3, CD22 또는 CD33이다.
일부 실시양태에서, 항체는 항-CD20 항체, 예컨대, 리툭시맙, 이브리투모맙, 오파투무맙, 오비누투주맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-CD30 항체, 예컨대, 브렌툭시맙 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-CD19/CD3 항체, 예컨대, 블리나투모맙, 또는 이의 항원 결합 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-CD22 항체, 예컨대, 이노투주맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-CD33 항체, 예컨대, 젬투주맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다른 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 골수종 관련 항원에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, 림프종 관련 항원은 SLAMF7 또는 CD38이다.
일부 실시양태에서, 항체는 항-SLAMF7 항체, 예컨대, 엘로투주맙 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-CD38 항체, 예컨대, 다라투무맙 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다른 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 모세포종 관련 항원에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, 모세포종 관련 항원은 GD2이다.
일부 실시양태에서, 항체는 항-GD2 항체, 예컨대, 디누툭시맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
다른 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 RANK 리간드에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 항체는 항-RANK 리간드 항체, 예컨대, 데노수맙, 또는 이의 항원 결합 단편 또는 그와 등가인 아미노 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
특정 실시양태에서, 항체는 암 세포에서 우선적으로 발현되거나, 또는 과발현(overexpressing)되는 항원, 예컨대, PD-L1 및 EGFR에 결합하는 항체이다.
일부 실시양태에서, 항체는 인간 세포를 감염시키는 미생물로부터 유래된 항원에 결합하는 항체이다.
본원에서 사용되는 바, "α" 및 "항"은 예를 들어, "항-PD-L1" 항체 또는 "α-PD-L1" 항체를 기술할 때와 같이 상호교환적으로 사용된다.
본원에서 사용되는 바, 하이픈이 있는 단백질 명칭은 하이픈이 없는 형태와 상호교환적으로 사용된다 (즉, "PD-L1" 및 "PDL1"은 상호교환적으로 사용된다).
본원에서 사용되는 바, 면역글로불린 아미노산 잔기의 넘버링은 달리 명시되지 않는 한, Eu 넘버링 체계에 따라 수행된다.
6.5. 링커
본원에 기술된 ADC에서, CDN은 다원자 링커에 의해 항체 또는 항원 결합 단편에 연결된다. 링커는 링커 상의 한 위치에서 CDN에 대한 공유 결합 및 링커 상의 또 다른 위치에서 항체 또는 항원 결합 단편에 대한 공유 결합을 형성함으로써 CDN을 항체 또는 항원 결합 단편에 연결한다. 링커는 (예컨대, 화학식 Ia에서) CDN에 대해 1가일 수 있는 바, 링커는 단일 CDN을 항체 또는 이의 단편 상의 단일 부위에 공유적으로 연결한다. 링커는 또한 (예컨대, 화학식 I에서, m > 1일 때) CDN에 대해 다가 일 수 있는 바, 링커는 1개 초과의 CDN을 항체 또는 이의 단편 상의 단일 부위에 공유적으로 연결한다. 본원에서 사용되는 바, "링커"라는 표현은 비접합, 부분적으로 접합된 (즉, CDN 또는 Ab에만 접합), 및 완전히 접합된 형태의 링커 (즉, CDN 및 Ab 둘 모두에 접합)를 포함하도록 의도된다. 구체적인 실시양태에서, 항체와 링커 사이에 공유 결합을 형성하는 항체 및 링커 상의 작용기를 포함하는 모이어티는 각각 RX 및 RY로 구체적으로 예시된다.
CDN을 항체 또는 이의 단편에 연결하는 링커는 본질적으로 길거나, 짧거나, 가요성이거나, 강성이거나, 친수성이거나, 소수성일 수 있거나, 상이한 특성을 갖는 세그먼트(segment)를 포함할 수 있다. ADC와 관련하여 약물을 항체 또는 이의 단편에 연결하는 데 유용한 매우 다양한 링커가 당업계에 공지되어 있다. 이들 링커 뿐만 아니라, 다른 링커도 CDN을 본원에 기술된 ADC의 항체 또는 항원 결합 단편에 연결하는 데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 링커는 CDN을 항체 또는 항원 결합 단편에 연결하는 쇄 중 2-100, 2-75, 2-50, 2-25, 2-10, 5-100, 5-75, 5-50, 5-25, 5-10, 10-100, 10-75, 10-50, 또는 10-25개의 원자 (CDN 또는 항체 또는 항원 결합 단편으로부터 유래될 수 있는 링커 말단의 임의의 원자 포함)를 포함한다. 유사하게, (하기 논의되는 바와 같이) CDN-커플링된 링커에 사용되는 링커 또한 항체 또는 항원 결합 단편 상의 상보성 부위에 커플링할 수 있는 링커 상의 부위에 CDN을 연결하는 쇄 중 2-100, 2-75, 2-50, 2-25, 2-10, 5-100, 5-75, 5-50, 5-25, 5-10, 10-100, 10-75, 10-50, 또는 10-25개의 원자를 포함할 수 있다.
링커는 세포외 환경 및 혈청에 대해 화학적으로 안정할 수 있거나, 또는 의도적으로 불안정하고, 세포외 환경 또는 종양 미세환경에서 CDN을 방출할 수 있는 결합을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커는 세포내 ADC의 내재화시 CDN을 방출하도록 디자인된 결합을 포함한다. 일부 구체적인 실시양태에서, 링커는 세포 내부에서 절단 및/또는 희생하거나, 또는 다르게는 특이적으로 또는 비특이적으로 분해되도록 디자인된 결합을 포함한다.
ADC의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결된 CDN의 개수는 달라질 수 있고 ("약물 대 항체 비" 또는 "DAR"로 명명), 항체 또는 이의 항원 결합 단편 상의 이용가능한 부착 부위의 개수 및 단일 링커에 연결된 CDN 개수에 의해 제한될 것이다. 1개 초과의 CDN을 포함하는 ADC에서, 각 CDN은 동일하거나, 또는 상이할 수 있다. CDN이 사용 및/또는 보관 조건에서 허용되지 않는 수준의 응집을 나타내지 않는 한, DAR이 10 이상인 ADC가 고려된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 ADC의 DAR은 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 또는 1 내지 4 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 ADC의 DAR은 2 내지 10, 2 내지 9, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 또는 2 내지 4 범위일 수 있다. 특정의 구체적인 실시양태에서, ADC의 DAR은 1, 2, 3, 또는 4일 수 있다. 다른 구체적인 실시양태에서, ADC의 DAR은 5, 6, 7, 또는 8일 수 있다. 일부 구체적인 실시양태에서, ADC의 DAR은 1일 수 있다.
예로서 및 제한 없이, 본원에 기술된 ADC에 포함될 수 있는 일부 절단가능한 및 비절단가능한 링커가 하기에 기술된다.
6.5.1. 절단가능한 링커
특정 실시양태에서, 링커는 CDN을 유리시키는 화학적 또는 효소적 프로세스에 의해 생체내에서 절단가능하다. 특정 경우에서, CDN은 링커와 커플링되기 전에 동일한 CDN을 재생하기 위해 링커로부터 절단된다. 다른 실시양태에서, 유리된 CDN은 링커에 원래 커플링된 CDN으로부터 변형된 CDN이고, 상기 변형된 CDN은 링커로부터의 잔류 작용기를 갖지만, 효능을 유지하거나, 심지어 원래 CDN보다 향상된 효능을 나타낸다. 일반적으로, 절단가능한 링커는 화학적으로 또는 효소적으로 절단가능한 하나 이상의 화학 결합을 포함하는 반면, 링커의 나머지 부분은 비절단가능한 것이다.
특정 실시양태에서, 절단가능한 링커는 화학적으로 불안정한 기를 포함한다. 화학적으로 불안정한 기는 엔도솜과 리소좀의 산성 환경 또는 사이토졸 중의 높은 티올 농도 (예컨대, 글루타티온)와 같이 혈장과 일부 세포질 구획 간의 차등적 특성을 이용한다. 특정 실시양태에서, 화학적으로 불안정한 기를 포함하는 링커의 혈장 안정성은 치환기를 사용하여 화학적으로 불안정한 기 근처의 입체 장애를 변경함으로써 증가 또는 감소될 수 있다.
일부 실시양태에서, 절단가능한 링커의 화학적으로 불안정한 기는 산 불안정한 기이다. 혈액의 중성 pH에서 순환하는 동안 무손상 상태 그대로 유지될 있고, 예컨대, 산성 종양 미세환경 내에서 또는 엔도솜 (pH 5.0-6.5) 및 리소좀 (pH 4.5-5.0) 세포 구획으로 내재화될 때와 같이 산성 조건하에서 가수분해되어 CDN을 방출할 수 있다. 절단가능한 링커의 상기와 같은 pH 의존적 방출 기전은 CDN의 방출을 특정 pH로 조정하기 위해 화학적 변형, 예컨대, 치환에 의해 최적화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 절단가능한 링커는 산 불안정한 기, 예컨대, 히드라존, 히드라진, 시스-아코니틸, 아세탈, 오르토에스테르, 또는 이민 기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 산 불안정한 기는 종양 미세환경에서, 종양 또는 면역 세포의 엔도솜에서, 종양 또는 면역 세포의 리소좀에서, 종양 또는 면역 세포의 산성 세포내 구획에서, 또는 이의 임의의 조합에서 절단이 이루어진다. 일부 실시양태에서, 산 불안정한 기는 종양 미세환경에서, 종양 또는 면역 세포의 엔도솜에서, 종양 또는 면역 세포의 리소좀에서, 및/또는 종양 또는 종양의 산성 세포내 구획에서 절단이 이루어지지 않는다. 본원에서 고려되는 바와 같이, 산 불안정한 기의 절단성은 ADC에서 완전히 접합된 링커의 pH 감수성에 의해 결정될 수 있다. 산 불안정한 링커는 추가 절단 부위, 예컨대, 추가 산 불안정한 절단 부위 및/또는 효소적으로 불안정한 절단 부위를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 절단가능한 링커는 디술피드 기를 포함한다. 디술피드는 세포 내로 내재화될 때 약물을 방출하도록 디자인된 것이며, 여기서, 사이토졸은 세포외 환경에 비해 더 환원적인 환경을 제공한다. 디술피드 결합의 절단은 일반적으로 디술피드 함유 링커가 순환에서 합리적으로 안정하고, 사이토졸에서 약물을 선택적으로 방출하도록 예컨대, (환원된) 글루타티온 (GSH)과 같은 사이토졸 티올 보조인자의 존재를 필요로 한다. 세포내 효소 단백질 디술피드 이소머라제 또는 디술피드 결합을 절단할 수 있는 유사한 효소도 또한 디술피드 절단에 기여할 수 있다. 종양 세포는 불규칙한 혈류로 인해 저산소 상태를 유도하여 환원 효소 활성을 증가시키고, 글루타티온 농도를 더 높게 증가시킬 수 있다.
예시적인 디술피드-함유 링커를 포함하는 ADC는 하기 화학식의 것을 포함한다:
Figure pct00041
Figure pct00042
상기 식에서,
D는 CDN (예컨대, CDN-A 또는 CDN-B)을 나타내고;
S-D의 S는 CDN으로부터의 것이고, Ab-NH의 NH는 Ab로부터의 것이고, Ab-S의 S는 Ab로부터의 것이고;
Ab는 항체 또는 이의 결합 단편을 나타내고;
"n"은 링커를 통해 Ab에 연결된 D의 존재 횟수를 나타내고;
R은 각각의 경우에 독립적으로 수소 또는 C1- 3알킬이다.
특정 실시양태에서, 링커는 구조
Figure pct00043
를 포함하고, 여기서, *-NH의 NH는 Ab로부터의 것일 수 있고,
Figure pct00044
는 (예컨대, CDN, 예컨대, CDN-A 또는 CDN-B,의 R1의 히드록실, 아미노, 티올 등에서의) CDN에 대해 직접 또는 간접적으로 이루어지는 링커의 부착 지점을 나타낸다. 특정 실시양태에서,
Figure pct00045
는 CDN의 R1 기의 티올에 대한 링커의 직접적인 부착 지점을 나타내고, 여기서, S 인접
Figure pct00046
는 R1 기의 티올의 일부이다.
개시된 ADC에 대해 고려되는 절단가능한 링커의 또 다른 유형은 효소적으로 절단가능한 링커이다. 상기 링커는 전형적으로 펩티드 기반이거나, 또는 펩티드 영역을 포함하고, 화학적으로 불안정한 링커보다 혈장 및 세포외 환경에서 더 안정적일 수 있다. 펩티드 결합은 일반적으로 리소좀에 비해 더 높은 pH 값과 리소좀 단백질 분해 효소의 내인성 억제제의 존재로 인해 혈청에서 안정적이다. ADC로부터의 CDN 방출은, 특정 종양 세포에서 상승된 수준으로 존재할 수 있는 리소좀 프로테아제, 예컨대, 카텝신 및 플라스민의 작용에 의해 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 절단가능한 펩티드는 리소좀 효소에 의해 절단된다. 특정 실시양태에서, 절단가능한 펩티드는 카텝신 (예컨대, 카텝신 B) 또는 플라스민에 의해 절단된다.
당업자가 인식하는 바와 같이, CDN에 직접 부착된 펩티드 링커의 단백질 분해 절단은 아미드 결합 가수분해시 CDN의 아미노산 부가물을 생성할 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 ADC에 대해서 절단 부위로부터 CDN을 공간적으로 분리하기 위한 자기 희생 스페이서를 포함하는 효소적으로 절단가능한 링커 또한 고려된다. 자기 희생 스페이서(self-immolative spacer)의 사용은 아미드 결합 가수분해시 화학식 II의 완전히 활성이고 화학적으로 변형되지 않은 CDN을 제거할 수 있다.
고려되는 한 가지 자기 희생 스페이서는, 한쪽 말단에서는 벤질 하이드록실기에서 카르바메이트로 관능화된 CDN 상의 아민 기에 연결되고, 다른 말단에서는 아미노 기에 연결되어 펩티드와 아미드 결합을 형성하는 이작용성 파라-아미노벤질 알콜 기 (즉, PABC 기)이다. 펩티드의 프로테아제 매개 절단시, 생성된 CDN이 활성화되어 1,6-제거 반응을 일으켜 비변형된 CDN, 이산화탄소 및 링커 잔여물을 방출한다. 일부 실시양태에서, 절단가능한 링커는 PABC 기를 포함한다. 추가로, 고려되는 자기 희생 스페이서는 기술된 PABC의 헤테로사이클릭 변이체이다 (예를 들어, US 7,989,434 (본원에서 참조로 포함) 참조).
일부 실시양태에서, 효소적으로 절단가능한 링커는 비-펩티드성 링커이다. 특정 실시양태에서, 비-펩티드성 링커는 펩티드모방체이다. 특정 실시양태에서, 비-펩티드성 링커는 종양-특이적 프로테아제에 의해 절단된다. 특정 실시양태에서, 비-펩티드성 링커는 종양 및/또는 종양 미세환경에서 증가된 양으로 존재하는 종양 특이적 프로테아제에 의해 절단된다. 특정 실시양태에서, 비-펩티드성 링커는 카텝신 B에 의해 절단된다. 특정 실시양태에서, 비-펩티드성 링커는 사이클로부탄-1,1-디카르복사미드이다.
일부 실시양태에서, 효소적으로 절단가능한 링커는 β-글루쿠론산 기반 링커이다. β-글루쿠로니드 글리코시드 결합의 절단은 리소좀 내에 풍부하게 존재하고, 일부 종양 유형에서 과발현되며, 동시에 세포 외부에서는 낮은 활성을 보이는 리소좀 효소 β-글루쿠로니다제를 통해 발생할 수 있다.
절단가능한 링커는 비절단가능한 부분 또는 세그먼트를 포함할 수 있고/거나, 절단가능한 세그먼트 또는 부분은 절단가능하게 만들기 위해 다른 비절단가능한 링커에 포함될 수 있다. 단지 예로서, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 관련 중합체는 중합체 골격에 절단가능한 기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 중합체 링커는 하나 이상의 절단가능한 기, 예컨대, 디술피드, 히드라진, 히드라존, 디펩티드, 또는 사이클로부탄-1,1-디카르복사미드를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 링커는 효소적으로 절단가능한 펩티드 모이어티, 예를 들어, 하기 화학식 VIIIa, VIIIb, VIIIc, VIIId, VIIIe, VIIIf, 또는 VIIIg를 포함하는 링커, 또는 이의 염을 포함한다:
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
상기 식에서,
"펩티드"는 리소좀 효소에 의해 절단가능한 펩티드 또는 펩티드모방체 쇄 (N→C로 표시되고, 카르복실 및 아미노 "말단"은 나타내지 않음)을 나타내고;
T는 하나 이상의 에틸렌 글리콜 단위 또는 알킬렌 쇄를 포함하는 쇄 (예컨대, 중합체 쇄), 또는 이의 조합을 나타내고;
Ra는 수소, C1- 6알킬, 술포네이트, 및 메틸 술포네이트로부터 선택되고;
Rb는 수소,
Figure pct00050
로부터 선택되고;
n은 2 내지 10, 예컨대, 3 내지 6 범위의 정수, 특히, 5이고;
p는 0 내지 5 범위의 정수이고;
q는 0 내지 5 범위의 정수, 특히, 3이고;
w는 0 또는 1이고, *-S-의 -S-는 Ab로부터의 것일 수 있고;
x는 0 또는 1이고, *-NH의 NH는 Ab로부터의 것일 수 있고;
y는 0 또는 1이고; *-NH의 NH는 Ab로부터의 것일 수 있고;
z는 0 또는 1이고;
Figure pct00051
는 (예컨대, CDN, 예컨대, CDN-A 또는 CDN-B,의 R1의 히드록실, 아미노, 티올 등에서의) CDN에 대해 직접 또는 간접적으로 이루어지는 링커의 부착 지점을 나타내고;
*는 링커의 나머지 부분에 대해, 또는 항체에 대해 직접 또는 간접적으로 이루어지는 부착 지점을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 화학식 VIIIa-d에서 절단가능한 펩티드 모이어티 또는 "펩티드"는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00052
여기서, x, y, 및 w가 0인 경우, 말단 -NH-는 Ab로부터의 것일 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 VIIIe에서 절단가능한 펩티드 모이어티 또는 "펩티드"는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00053
여기서, w는 1이다.
특정 실시양태에서, 화학식 VIIIa-g에서 절단가능한 펩티드 모이어티 또는 "펩티드"는 2-20개의 아미노산 잔기, 예컨대, 2-15, 2-10, 2-7, 또는 2-5개의 잔기 (테트라펩티드, 트리펩티드, 또는 디펩티드 포함)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 절단가능한 펩티드 모이어티 또는 "펩티드"는 디펩티드, 예컨대, Ala-Ala, Ala-(D)Asp, Ala-Cit, Ala-Lys, Ala-Val, Asn-Cit, Asp-Cit, Asn-Lys, Asn-(D)Lys, Asp-Val, Cit-Ala, Cit-Asn, Cit-Asp, Cit-Cit, Cit-Lys, Cit-Ser, Cit-Val, Glu-Val, 페닐Gly-(D)Lys, His-Val, Ile-Cit, Ile-Pro, Ile-Val, Leu-Cit, Lys-Cit, Me3Lys-Pro, Met-Lys, Met-(D)Lys, Phe-Arg, Phe-Cit, Phe-Lys, Pro-(D)Lys, Ser-Cit, Trp-Cit, Val-Ala, Val-(D)Asp, NorVal-(D)Asp, Val-Cit, Val-Glu, Val-Lys로부터 선택되는 디펩티드, 및 이의 염을 포함한다. 특정 실시양태에서, 디펩티드는 Val-Cit이다. 특정 실시양태에서, 절단가능한 펩티드 모이어티 또는 "펩티드"는 트리펩티드, 예컨대, Glu-Val-Cit를 포함한다. 특정 실시양태에서, 절단가능한 펩티드 모이어티 또는 "펩티드"는 테트라펩티드, 예컨대, Gly-Phe-Leu-Gly 또는 Ala-Leu-Ala-Leu를 포함한다.
특정 실시양태에서, 링커는 화학식 VIIIa의 것이고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00054
여기서, "펩티드"는 Glu-Val-Cit이다.
특정 실시양태에서, 링커는 화학식 VIIIc의 것이고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00055
여기서, "펩티드"는 Val-Cit이다.
특정 실시양태에서, 화학식 VIIId에서 절단가능한 펩티드 모이어티 또는 "펩티드"는 디펩티드, 예컨대, Ala-Ala, Ala-(D)Asp, Ala-Cit, Ala-Lys, Ala-Val, Asn-Cit, Asp-Cit, Asn-Lys, Asn-(D)Lys, Asp-Val, Cit-Ala, Cit-Asn, Cit-Asp, Cit-Cit, Cit-Lys, Cit-Ser, Cit-Val, Glu-Val, 페닐Gly-(D)Lys, His-Val, Ile-Cit, Ile-Pro, Ile-Val, Leu-Cit, Lys-Cit, Me3Lys-Pro, Met-Lys, Met-(D)Lys, Phe-Arg, Phe-Cit, Phe-Lys, Pro-(D)Lys, Ser-Cit, Trp-Cit, Val-Ala, Val-(D)Asp, NorVal-(D)Asp, Val-Cit, Val-Glu, Val-Lys로부터 선택되는 디펩티드, 및 이의 염을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 VIIId 중의 디펩티드는 Val-Cit이다. 특정 실시양태에서, 화학식 VIIId에서 절단가능한 펩티드 모이어티 또는 "펩티드"는 트리펩티드, 예컨대, Glu-Val-Cit를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 VIIId에서 절단가능한 펩티드 모이어티 또는 "펩티드"는 테트라펩티드, 예컨대, Gly-Phe-Leu-Gly 또는 Ala-Leu-Ala-Leu를 포함한다.
특정 실시양태에서, 링커는 화학식 VIIId의 것이고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00056
여기서, "펩티드"는 Val-Cit이다.
특정 실시양태에서, 링커는 화학식 VIIIe의 것이고, 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00057
여기서, "펩티드"는
Figure pct00058
이다.
6.5.2. 링커를 항체에 부착시키는 데 사용된 기
다양한 부착 기를 사용하여 링커-CDN 신톤을 항체에 부착하여 ADC를 생성할 수 있다. 링커-CDN 신톤 상의 부착 기는 일반적으로 본질적으로 친전자성이다. 일부 실시양태에서, 부착 기는 말레이미드 기; 활성화된 디술피드, 예컨대, DSDM, SPDB, 또는 술포-SPDB; 활성 에스테르 예컨대, NHS 에스테르 또는 HOBt 에스테르; 할로포르메이트, 산 할라이드, 및 알킬 또는 벤질 할라이드 예컨대, 할로아세트아미드로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 링커 (L)와 항체 (Ab) 사이의 생성된 연결부는 티오에테르, 아미드, 에스테르, 카르바메이트, 카르보네이트, 우레아, 디술피드, 또는 에테르이다.
또한 개시된 ADC에 대해 "자기-안정화" 말레이미드 및 "가교화 디술피드"가 고려된다. "자기-안정화" 말레이미드 기의 예는 US 2013/0309256 (본원에서 참조로 포함)에 제공되어 있다. "가교화 디술피드"의 예는 문헌 [Badescu et al., 2014, Bio접합체 Chem. 25:1124-1136] 및 WO 2013/085925 (이들은 각각 본원에서 참조로 포함)에 제공되어 있다.
6.5.3. 카텝신 절단가능한 링커를 포함하는 ADC
상기 기술된 바와 같이, 본 개시내용의 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC를 구성하는 CDN (예컨대, CDN-A 또는 CDN-B) 및 항체는 카텝신 절단가능한 링커를 통해 연결된다. 상기의 한 실시양태에서, ADC는 하기 화학식 III의 구조를 갖는다:
Figure pct00059
상기 식에서, 변수 W, X, Y, Z, RP, 및 n은 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다. 상기 도식에서,
Figure pct00060
은 카텝신 절단가능한 링커의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (Ab)에 대한 공유 결합을 나타낸다.
한 실시양태에서, 화학식 III의 링커의 피롤리딘-2,5-디온 기는 이의 3-위치에서 티올 기에 의해 항체 (Ab)에 연결된다. 예를 들어, 피롤리딘-2,5-디온은 이의 3-위치에서 항체 상의 시스테인 잔기를 통해 항체에 공유적으로 연결될 수 있다. 생성된 ADC 하기 화학식 IIIa의 구조를 갖는다:
Figure pct00061
상기 식에서, 변수 W, X, Y, Z, RP, 및 n은 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
한 실시양태에서, ADC는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00062
6.5.4. 글루타티온 절단가능한 링커를 포함하는 ADC
상기 기술된 바와 같이, 본 개시내용의 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC를 구성하는 CDN (예컨대, CDN-A 또는 CDN-B) 및 항체는 글루타티온 절단가능한 링커를 통해 연결된다. 상기의 한 실시양태에서, ADC는 하기 화학식 IV의 구조를 갖는다:
Figure pct00063
상기 식에서, 변수 W, X, Y, Z, RP, 및 n은 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다. 상기 도식에서,
Figure pct00064
은 글루타티온 절단가능한 링커의 항체 (Ab)에 대한 공유 결합을 나타낸다.
한 실시양태에서, 화학식 IV 중 링커의 카르보닐 기는 리신, 또는 아미노 기 함유 측쇄를 보유하는 항체 상의 다른 아미노산 잔기를 통해, 예컨대, 카르보닐 기에 부착된
Figure pct00065
결합에서 아미노 기와 함께 아미드 결합을 형성함으로써 항체에 공유적으로 연결될 수 있다. 생성된 ADC는 하기 화학식 IVa의 구조를 갖는다:
Figure pct00066
상기 식에서, 변수 W, X, Y, Z, RP, 및 n은 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
한 실시양태에서, ADC는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00067
6.6. 항체-약물 접합체를 제조하는 방법
일반적으로, 화학식 I에 따른 ADC는 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
Ab-RX + RY-L-(D)m → (화학식 I) Ab-[-L-(D)m]n
상기 식에서, Ab, L, D, m, 및 n은 앞서 화학식 I에 대해 정의된 바와 같고, RX 및 RY는 서로 공유 결합을 형성할 수 있는 상보적인 기를 나타낸다.
이와 관련하여, 화학식 Ia에 따른 ADC는 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
Ab-RX + RY-L-D → (화학식 Ia) Ab-[-L-D]n
상기 식에서, Ab, L, D, 및 n은 앞서 화학식 I에 대해 정의된 바와 같고, RX 및 RY는 서로 공유 결합을 형성할 수 있는 상보적인 기를 나타낸다.
기 RX 및 RY의 아이덴티티는 신톤 RY-L-(D)m 또는 RY-L-D를 항체에 연결시키는 데 사용되는 화학법에 의존할 것이다. 신톤은 전형적으로 예를 들어, 접근가능한 시스테인 잔기의 유리 티올 기 또는 접근가능한 리신 잔기의 1급 아미노 기를 비롯한, 항체의 아미노산 잔기의 측쇄에 연결된다. 일부 실시양태에서, RX는 항체의 아미노산의 측쇄 상의 기, 예컨대, 아미노 또는 티올 기이다. 특정 실시양태에서, RX는 아미노산, 예컨대, 리신, 5-히드록시리신, 오르니틴, 또는 스타틴, 특히, 리신의 측쇄 상의 아미노 기이다. 일부 실시양태에서, RX는 아미노산, 예컨대, 시스테인 또는 호모시스테인, 특히, 시스테인의 측쇄 상의 티올 기이다. 상기 결합에서, 유리 티올 기는 먼저 항체를 완전히 또는 부분적으로 환원시켜 시스테인 잔기 사이의 쇄간 디술피드 브릿지를 파괴시킴으로써 수득될 수 있다. 다수의 작용기 RY 및 화학법이 티올 기와의 결합을 형성하는 데 사용될 수 있고, 예로서 및 제한 없이, 말레이미드 및 할로아세틸을 포함한다.
개시된 ADC에 대해 하나 이상의 디술피드 브릿지를 파괴시키기 위해 하나 이상의 코돈에 대해 돌연변이를 갖는 조작된 항체 또한 고려되며, 예로서 및 제한 없이, 쌍을 형성하지 않은 시스테인으로부터 유리 티올을 생성하기 위해 쇄간 디술피드 브릿지의 단일 시스테인 잔기의 세린 잔기로의 돌연변이를 포함한다. 개시된 ADC에 대해 링커 접합을 위해 티올을 갖는 잔기를 도입시키기 위해 하나 이상의 코돈에 대해 돌연변이를 갖는 조작된 항체 또한 고려되며, 예로서 및 제한 없이, 하나 이상의 잔기의 시스테인 잔기로의 돌연변이, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열 내로의 추가 시스테인 잔기의 도입을 포함한다.
특정 실시양태에서, RX는 티올, 예컨대, 항체 상의 시스테인 잔기로부터의 것이고, RY는 할로아세틸, 말레이미드, 아지리딘, 아크릴로일, 비닐술폰, 피리딜 디술피드, TNB-티올, 및 알킬화제 또는 아릴화제로부터 선택된 기이다. 일부 실시양태에서, RX는 티올 기, 예컨대, 항체 상의 시스테인 잔기로부터의 것이고, RY는 말레이미드 기이다. 일부 실시양태에서, RX는 리신 잔기의 1급 아미노 기이다. 다수의 작용기 RX 및 화학법이 리신 결합을 위해 사용될 수 있고, 예로서 및 제한 없이, NHS-에스테르 및 이소티오시아네이트를 포함한다.
특정 실시양태에서, RX는 아민, 예컨대, 항체 상의 리신 잔기로부터의 것이고, RY는 아민을 알킬화 또는 아실화시킬 수 있는 기이다. 일부 실시양태에서, RX는 아민, 예컨대, 항체 상의 리신 잔기로부터의 것이고, RY는 이소티오시아네이트, 이소시아네이트, 아실 아지드, NHS 에스테르, 술포닐 클로라이드, 알데히드, 글리옥살, 에폭시드, 옥시란, 카르보네이트, 아릴 할라이드, 이미도에스테르, 카르보디이미드, 안하이드라이드, 및 플루오로페닐 에스테르로부터 선택되는 기이다. 특정 실시양태에서, RX는 아민, 예컨대, 항체 상의 리신 잔기로부터의 것이고, RY는 NHS 에스테르이다.
본 개시내용의 ADC에 대해 고려되는 바와 같이, 접합 화학법 이용가능한 측쇄 기로 제한되지 않는다. 항체는 또한 접합을 위해 아미노산 잔기를 포함하도록 조작될 수 있으며, 예로서 및 제한 없이, 적절한 소분자를 아민에 연결함으로써 예컨대, 아민과 같은 측쇄를 예컨대, 티올과 같은 다른 유용한 기로 전환시키는 것을 포함한다. 예를 들어, 아미노산의 1급 아민 함유 측쇄는 티올 함유 측쇄, 예컨대, -NH-CH2-CH2-SH를 비롯한, -NH-C1-6알킬-SH (여기서, -NH-는 1급 아민으로부터의 것이다)로 전환될 수 있다.
당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 항체 분자에 연결된 CDN의 개수는 다양할 수 있으며, 그 결과로 일부 항체는 1개의 연결된 CDN을 함유하고, 일부는 2개, 일부는 3개를 함유하는 등 (및 일부는 함유하지 않는)의 불균질 ADC 제제가 생성된다. 불균질 정도는 특히, CDN을 연결하는 데 사용되는 화학법에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, IgG1 항체가 부착을 위한 티올 기를 생성하기 위해 환원될 때, 분자당 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 연결된 CDN을 갖는 항체의 불균질 혼합물이 종종 생성된다. 추가로, RX 대 RY의 몰비를 조정함으로써 분자당 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 연결된 CDN을 갖는 ADC를 생성할 수 있다. 따라서, 맥락에 따라 언급된 약물 대 항체 비 (DAR)는 ADC 집합에 대한 평균일 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, "DAR3"은 평균 약물 대 항체 비가 3인 불균질 ADC 제제, 예컨대, 동일한 개수의 DAR2 및 DAR4를 갖는 ADC의 혼합물을 지칭한다.
순도는 당업계에 공지된 다양한 방법으로 평가될 수 있다. 구체적인 예로서, ADC 제제는 HPLC, 소수성 교환, 이온 교환, 크기 배제 또는 다른 크로마토그래피를 통해 분석될 수 있고, 생성된 피크 곡선하 면적을 분석함으로써 순도를 평가할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 (a) 본 개시내용의 하나 이상의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 링커 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L)에 커플링하여 하나 이상의 CDN-커플링된 링커를 생성하는 단계; 및 (b) CDN-커플링된 링커 중 하나 이상의 것을 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 Ab)에 커플링하여 ADC를 생성하는 단계를 포함하는, ADC를 제조하는 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 (b) CDN-커플링된 링커 (즉, 화학식 II의 CDN 및 예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L) 중 하나 이상의 것을 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 Ab)에 커플링하여 ADC를 생성하는 단계를 포함하는, ADC를 제조하는 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 (a) 본 개시내용의 하나 이상의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 링커 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L)에 커플링하여 하나 이상의 CDN-커플링된 링커를 생성하는 단계를 포함하는, 하나 이상의 CDN-커플링된 링커를 제조하는 방법에 관한 것이다.
다른 실시양태에서, 본 개시내용은 (a) 하나 이상의 링커 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L)를 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 Ab)에 커플링하여 링커-커플링된 항체를 생성하는 단계; 및 (b) 본 개시내용의 하나 이상의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 링커-커플링된 항체에 커플링하여 ADC를 생성하는 단계를 포함하는, ADC를 제조하는 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 (b) 본 개시내용의 하나 이상의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 링커-커플링된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예컨대, 하나 이상의 본원에 기술된 바와 같은 L 및 예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 Ab)에 커플링하여 ADC를 생성하는 단계를 포함하는, ADC를 제조하는 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 (a) 하나 이상의 링커 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L)를 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 Ab)에 커플링하여 링커-커플링된 항체를 생성하는 단계를 포함하는, 링커-커플링된 항체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 (a) 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 링커 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L)에 커플링하여 CDN-커플링된 링커를 생성하는 단계; 및 (b) 복수의 CDN-커플링된 링커를 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 Ab)에 커플링하여 ADC를 생성하는 단계를 포함하는, ADC를 제조하는 방법에 관한 것이다.
다른 실시양태에서, 본 개시내용은 (a) 복수의 링커 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L)를 항체 또는 이의 항원 결합 단편 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 Ab)에 커플링하여 링커-커플링된 항체를 생성하는 단계; 및 (b) 복수의 본 개시내용의 하나 이상의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 링커-커플링된 항체에 커플링하여 ADC를 생성하는 단계를 포함하는, ADC를 제조하는 방법에 관한 것이다.
6.6.1. 커플링 전에 CDN을 처리하기 위한 CDN 조성물
상기 기술된 바와 같이, 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN, 예컨대, CDN-A 또는 CDN-B)은 링커 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L)에 커플링되어 하나 이상의 CDN-커플링된 링커를 생성할 수 있거나, 또는 링커-커플링된 항체 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 하나 이상의 L, 및 예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 Ab)에 커플링되어 ADC를 생성할 수 있다. 따라서, 본 개시내용은 이러한 커플링 단계에서 사용되는 CDN의 정제, 건조 또는 처리를 용이하게 하는 CDN 조성물을 제공한다.
상기 맥락에서, 본 개시내용은 화학식 II의 CDN (화학식 II의 하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIa, IIb 등 포함), 및 염기, 예컨대, 아민 염기를 포함하는 CDN 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 예컨대, 피리딘, 피페리딘, 피롤리딘, 모르폴린, 루티딘 (예컨대, 2,6-루티딘), 트리에틸아민 (TEA), 또는 디이소프로필에틸아민 (DIPEA), 특히, 피리딘과 같은 아민 염기는 실내 온도 및 압력에서 액체이다. 특정 실시양태에서, CDN 및 염기를 포함하는 CDN 조성물은 100, 50, 25, 또는 10 ppm 미만의 물을 갖는 무수 조성물이다. CDN 및 염기를 포함하는 CDN 조성물은 커플링 단계에서 사용하기 전에 고진공 하에 농축에 의해 건조될 수 있다.
일부 실시양태에서, CDN 조성물은 화학식 II의 CDN, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, IIn, 또는 IIo의 CDN, 및 아민 염기, 예컨대, 피리딘을 포함한다. 특정 실시양태에서, CDN 조성물은 R1 위치에 아미노 기를 갖는 화학식 II의 CDN, 및 아민 염기, 예컨대, 피리딘을 포함한다. 특정 실시양태에서, CDN 조성물은 화학식 IIn 또는 IIo의 CDN (및 임의적으로, R1 위치에 아미노 기를 갖는 것), 및 아민 염기, 예컨대, 피리딘을 포함한다. 일부 실시양태에서, CDN 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 CDN-A, 또는 이의 제약상 허용되는 염, 및 아민 염기, 예컨대, 피리딘을 포함하고, 임의적으로, 무수 조성물이다. 일부 실시양태에서, CDN 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 CDN-B, 또는 이의 제약상 허용되는 염, 및 아민 염기, 예컨대, 피리딘을 포함하고, 임의적으로, 무수 조성물이다.
본 개시내용은 또한 화학식 II의 CDN (화학식 II의 하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIa, IIb 등 포함), 및 범위가 5 내지 8을 비롯한, 5 내지 10인 pH, 예컨대, pH 5, 5.5, 5.8, 6, 6.2, 6.5, 7, 7.5 또는 9 (종점으로 상기 pH 값을 사용하여 생성된 임의의 pH 범위, 예컨대, 5 내지 7 포함)를 달성하는 데 적합한 완충제를 포함하는 수용액인 CDN 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 완충제는 pH 6 +/- 0.2를 달성하는 데 적합하다. 일부 실시양태에서, 완충제는 포스페이트 완충제이다. 일부 실시양태에서, CDN 조성물은 R1 위치에 티올 기를 갖는 화학식 II의 CDN, 예컨대, 화학식 IIo의 CDN, 및 pH 6 +/- 0.2를 달성하는 데 적합한 완충제, 예컨대, 포스페이트 완충제를 포함하는 수용액이다. 특정 실시양태에서, CDN 조성물은 화학식 IIo의 CDN, 및 pH 6 +/- 0.2를 달성하는 데 적합한 완충제, 예컨대, 포스페이트 완충제를 포함하는 수용액이다. 한 실시양태에서, CDN 조성물은 CDN-B 또는 이의 제약상 허용되는 염, 및 pH 6 +/- 0.2를 달성하는 데 적합한 완충제, 특히, 포스페이트 완충제를 포함하는 수용액이다.
6.6.2. CDN을 링커에 커플링하기 위한 CDN 조성물
상기 기술된 바와 같이, CDN-커플링된 링커 (즉, 링커, 예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L에 커플링된 화학식 II의 CDN, 예컨대, CDN-A 또는 CDN-B를 포함하는 것)의 제조는 CDN을 링커에 커플링하기 위한 하나 이상의 CDN 조성물의 제조를 포함할 수 있다.
상기 맥락에서, 본 개시내용은 화학식 II의 CDN (화학식 II의 하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIa, IIb 등 포함), 및 링커 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L) 또는 커플링제, 또는 링커 및 커플링제 둘 모두를 포함하는 CDN 조성물로서, 여기서, 커플링제는 CDN의 링커에 대한 커플링을 용이하게 하는, CDN 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 커플링제는 예컨대, 링커 상에 활성화된 에스테르를 생성함으로써 CDN과의 커플링을 위해 링커를 활성화시킬 수 있고, 이로써, 이어서, CDN은 링커의 활성화된 에스테르와 반응하여 CDN을 링커에 커플링할 수 있다. 적합한 커플링제의 예로는 히드록시벤조트리아졸 (HOBt), N-히드록시숙신이미드 (NHS), 디사이클로헥실카르보디이미드 (DCC), 디이소프로필카르보디이미드 (DIC), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (EDC), 및 헥사플루오로포스페이트 아자벤조트리아졸 테트라메틸 우라늄 (HATU)을 포함한다. 특정 실시양태에서, CDN 조성물은 비양성자성 극성 용매, 예컨대, 디메틸포름아미드 (DMF), 디메틸아세트아미드 (DMA), 아세토니트릴, 또는 테트라히드로푸란 (THF), 특히, DMF를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, CDN, 및 링커 및 커플링제 중 어느 하나, 또는 그 둘 모두를 포함하는 CDN 조성물은 100, 50, 25, 또는 10 ppm 미만의 물을 갖는 무수 조성물이다.
특정 실시양태에서, CDN 조성물은 화학식 II의 CDN, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, IIn, 또는 IIo의 CDN (및 R1 위치에 아미노 또는 티올 기를 갖는 것), 및 링커 (예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L) 또는 커플링제 중 어느 하나, 또는 링커 및 커플링제 둘 모두를 포함한다. 일부 실시양태에서, CDN 조성물은 R1 위치에 아미노 또는 티올 기를 갖는 화학식 II의 CDN, 및 링커 또는 커플링제 중 어느 하나, 또는 링커 및 커플링제 둘 모두를 포함한다. 특정 실시양태에서, CDN 조성물은 화학식 IIn 또는 IIo의 CDN (및 임의적으로, R1 위치에 아미노 또는 티올 기를 갖는 것), 및 링커 또는 커플링제 중 어느 하나, 또는 링커 및 커플링제 둘 모두를 포함한다. 특정 실시양태에서, CDN 조성물은 본원에 기술된 바와 같은 CDN-A 또는 CDN-B, 또는 CDN-A 또는 CDN-B 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염, 및 링커 또는 커플링제 중 어느 하나, 또는 링커 및 커플링제 둘 모두, 및 임의적으로, 상기 기술된 바와 같은 비양성자성 극성 용매를 포함한다. 특정 실시양태에서, CDN 조성물은 CDN-A 또는 CDN-B, 또는 CDN-A 또는 CDN-B 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염, 링커, 및 비양성자성 극성 용매를 포함한다. 특정 실시양태에서, CDN 조성물은 CDN-A 또는 CDN-B, 또는 CDN-A 또는 CDN-B 중 어느 하나의 제약상 허용되는 염, 커플링제, 및 비양성자성 극성 용매를 포함한다.
6.6.3. CDN-커플링된 링커
상기에서 논의된 바와 같이, CDN-커플링된 링커는 본원에 기술된 ADC의 제조에서 유용한 중간체일 수 있다. 일부 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 링커, 예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 L에 커플링된 화학식 II의 CDN (예컨대, CDN-A 또는 CDN-B)을 포함한다. 예를 들어, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-CDN을 가질 수 있고, 여기서, L은 항체 또는 항원 결합 단편 상의 상보성 부위에 커플링할 수 있는 부위를 포함하고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, IIn, 및 IIo 포함)의 것이고, 여기서, CDN은 화학식 II의 R1 위치의 히드록실, 티올, 아미노, C1- 6알킬아미노, 또는 -PEG-OH 기에서 링커에 공유적으로 결합된다.
특정 실시양태에서, CDN-커플링된 링커의 CDN 및 링커는 티오에테르, 아미드, 에스테르, 카르바메이트, 카르보네이트, 우레아, 디술피드, 또는 에테르 기, 특히, 아미드, 카르바메이트, 또는 디술피드 기를 통해 커플링된다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, CDN-커플링된 링커의 CDN 및 링커는 아미드 기를 통해 커플링된다. 상기 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-C(O)NH-CDN 또는 L-C(O)N(C1-6알킬)-CDN을 가질 수 있고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은, 둘 중 하나의 것이 화학식 중 아미드 기의 아민 부분을 형성하는, 아미노 또는 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 C1- 6알킬, 예컨대, C2- 6알킬 또는 C2- 3알킬이다. 상기의 한 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-C(O)NH-CDN을 갖고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은, 화학식 중 아미드 기의 아민 부분을 형성하는, 아미노 기로 치환된 C2-3알킬, 예컨대, 에틸이다.
일부 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 하기 화학식 IXa의 구조를 갖는다:
Figure pct00068
상기 식에서, RL은 링커 L의 나머지 부분을 나타내고, 변수 W, X, Y, Z, 및 RP는 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
다른 실시양태에서, CDN-커플링된 링커의 CDN 및 링커는 카르바메이트 기를 통해 커플링된다. 상기 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-OC(O)NH-CDN 또는 L-OC(O)N(C1-6알킬)-CDN을 가질 수 있고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은, 둘 중 하나의 것이 화학식 중 카르바메이트 기의 아민 부분을 형성하는, 아미노 또는 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 C1- 6알킬, 예컨대, C2- 6알킬 또는 C2- 3알킬이다. 상기의 한 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-OC(O)NH-CDN을 갖고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은 화학식 중 카르바메이트 기의 아민 부분을 형성하는, 아미노 기로 치환된 C2-3알킬, 예컨대, 에틸이다.
일부 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 하기 화학식 IXb의 구조를 갖는다:
Figure pct00069
상기 식에서, RL은 링커 L의 나머지 부분을 나타내고, 변수 W, X, Y, Z, 및 RP는 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00070
상기 식에서, 변수 W, X, Y, Z, 및 RP는 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
다른 실시양태에서, CDN-커플링된 링커의 CDN 및 링커는 우레아 기를 통해 커플링된다. 상기 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-NHC(O)NH-CDN 또는 L-NHC(O)N(C1-6알킬)-CDN을 가질 수 있고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은, 둘 중 하나의 것이 화학식 중 우레아 기의 가장 오른쪽에 있는 아민 부분을 형성하는, 아미노 또는 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 C1- 6알킬, 예컨대, C2- 6알킬 또는 C2-3알킬이다. 상기의 한 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-NHC(O)NH-CDN을 갖고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은 화학식 중 우레아 기의 가장 오른쪽에 있는 아민 부분을 형성하는, 아미노 기로 치환된 C2- 3알킬, 예컨대, 에틸이다.
일부 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 하기 화학식 IXc의 구조를 갖는다:
Figure pct00071
상기 식에서, RL은 링커 L의 나머지 부분을 나타내고, 변수 W, X, Y, Z, 및 RP는 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
다른 실시양태에서, CDN-커플링된 링커의 CDN 및 링커는 에스테르 기를 통해 커플링된다. 상기 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-C(O)O-CDN을 가질 수 있고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은, 둘 중 하나의 것이 화학식 중 에스테르 기의 알콜 부분을 형성하는, 히드록실 또는 -PEG-OH 기로 치환된 C1- 6알킬, 예컨대, C2- 6알킬 또는 C2- 3알킬이다. 상기의 한 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-C(O)O-CDN을 갖고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은 화학식 중 에스테르 기의 알콜 부분을 형성하는, 히드록실 기로 치환된 C2- 3알킬, 예컨대, 에틸이다.
일부 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 하기 화학식 IXd의 구조를 갖는다:
Figure pct00072
상기 식에서, RL은 링커 L의 나머지 부분을 나타내고, 변수 W, X, Y, Z, 및 RP는 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
다른 실시양태에서, CDN-커플링된 링커의 CDN 및 링커는 카르보네이트 기를 통해 커플링된다. 상기 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-OC(O)O-CDN을 가질 수 있고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은, 둘 중 하나의 것이 화학식 중 카르보네이트 기의 가장 오른쪽에 있는 알콜 부분을 형성하는, 히드록실 또는 -PEG-OH 기로 치환된 C1- 6알킬, 예컨대, C2- 6알킬 또는 C2- 3알킬이다. 상기의 한 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-OC(O)O-CDN을 갖고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은 화학식 중 카르보네이트 기의 가장 오른쪽에 있는 알콜 부분을 형성하는, 히드록실 기로 치환된 C2-3알킬, 예컨대, 에틸이다.
일부 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 하기 화학식 IXe의 구조를 갖는다:
Figure pct00073
상기 식에서, RL은 링커 L의 나머지 부분을 나타내고, 변수 W, X, Y, Z, 및 RP는 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
다른 실시양태에서, CDN-커플링된 링커의 CDN 및 링커는 디술피드 기를 통해 커플링된다. 상기 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-S-S-CDN을 가질 수 있고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은 화학식 중 디술피드 기의 가장 오른쪽에 있는 부분을 형성하는, 티올 기로 치환된 C1- 6알킬, 예컨대, C2- 6알킬 또는 C2-3알킬이다. 상기의 한 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 화학식 L-S-S-CDN을 갖고, 여기서, CDN은 화학식 II (하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIk, IIm, 및 IIn 포함)의 것이고, 여기서, 화학식 II의 R1은 화학식 중 디술피드 기의 가장 오른쪽에 있는 부분을 형성하는, 티올 기로 치환된 C2-3알킬, 예컨대, 에틸이다.
일부 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 하기 화학식 IXf의 구조를 갖는다:
Figure pct00074
상기 식에서, RL은 링커 L의 나머지 부분을 나타내고, 변수 W, X, Y, Z, 및 RP는 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, CDN-커플링된 링커는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00075
상기 식에서, 변수 W, X, Y, Z, 및 RP는 상기 화학식 I 및 II에 대해 정의된 바와 같다.
6.7. 제약 조성물 및 의약
본원에 기술된 ADC 및/또는 CDN은 ADC 또는 CDN 및 하나 이상의 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물의 형태일 수 있다. 조성물은 인간에서 사용하기 위한 제약 용도로 제제화될 수 있고, 제약상 허용되는 담체, 예컨대, 수성, 임의로 완충처리된 용액, 현탁액 또는 분산액을 포함할 수 있다. 조성물은 또한 사용 전에 재구성될 수 있는 동결건조된 고체 조성물일 수 있다.
본 제약 조성물은 임의의 적합한 형태일 수 있고, 다양한 경로에 의해, 예컨대, 정맥내로, 종양내로, 피하로, 근육내로, 경구적으로, 비강내로, 척수강내로, 경피로, 국부적으로 또는 국소적으로 환자에게 투여될 수 있다. 임의의 주어진 경우에 투여 경로는 특정 항체 및/또는 ADC, 대상체, 질환의 성질 및 중증도 및 대상체의 신체 상태에 따라 달라질 수 있다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 액체 제제의 형태로 정맥내로, 종양내로, 피하로 또는 근육내로 투여될 것이다.
일부 실시양태에서, 이의 제약 조성물을 포함하는 본원에 기술된 ADC 및/또는 CDN은 전신으로, 예컨대, 피하로, 복강내로, 근육내로 또는 정맥내로, 특히, 정맥내로 투여된다. 다른 실시양태에서, 이의 제약 조성물을 포함하는 본원에 기술된 ADC 및/또는 CDN은 예컨대, 종양내로 또는 종양의 미세환경에서와 같이 종양 부위에 국소적으로 투여된다.
본 개시내용은 또한 하기 기술되는 바와 같은 하나 이상의 추가 치료제와 함께 조합하여, 요법을 위한, 예컨대, 면역 반응을 촉진시키기 위한 및/또는 대상체에서 하기 기술되는 다양한 암 중 하나 이상의 것을 비롯한, 암을 치료하기 위한 의약 제조에서 사용하기 위한, 화학식 II (화학식 II의 하위 화학식, 예컨대, 화학식 IIa, IIb 등 포함)의 CDN을 제공한다.
6.8. 치료 방법
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC) 또는 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN, 예컨대, CDN-A 또는 CDN-B)은 요법에서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 요법에서 사용하기 위한, 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC) 또는 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 포함하는, 본원에 기술된 제약 조성물에 관한 것이다.
본원에 기술된 ADC 및/또는 CDN은 단독으로, 또는 서로 함께 및/또는 다른 치료제와 함께 조합하여 사용될 수 있다. 하기에서 논의되는 실시예에 제시된 바와 같이, ADC 및 CDN은 대상체에게 전달될 때, 면역 반응을 촉진시킬 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 ADC 및 CDN은 단독으로, 또는 조합되어 인간 대상체에서 인터페론-β (IFNβ)를 유도할 수 있다. 면역 반응을 촉진시킬 수 있는 본 개시내용의 ADC 및 CDN의 능력은 부분적으로 STING에 효능작용할 수 있는 이의 능력에 기인한다. ADC는 본 개시내용의 CDN (예컨대, 화학식 II의 화합물)을 표적 종양 또는 암 관련 면역 세포, 또는 종양 미세환경으로 전달하여 STING 활성화 및 생성된 면역 반응을 일으킬 수 있다. 암 관련 종양 또는 면역 세포 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CDN의 접합은 CDN의 전달을 표적화하고, 면역 반응을 연장 및 증진시킨다.
본 개시내용의 ADC는 비접합 CDN 또는 ADC를 포함하는 항체보다 더 큰 면역 반응을 촉진시킬 수 있다. 놀랍게도, 본 개시내용의 ADC는 비접합 CDN 및 항체 포함 ADC의 상가적 면역 반응보다 더 큰 면역 반응을 촉진시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다. 즉, 본 개시내용의 CDN을 특정 면역요법 항체와 접합시킴으로써 시너지 효과를 달성할 수 있다. 다른 실시양태에서, 본원에 논의되는 바와 같이, 본 개시내용의 CDN 또한 ADC의 일부가 아닌 것으로서 투여될 수 있다.
따라서, 한 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC)를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 유도 또는 촉지시키는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 유도 또는 촉지시키는 방법을 제공한다. 추가로, 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 본 개시내용의 ADC를 본 개시내용의 CDN과 함께 조합하여 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 유도 또는 촉지시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, ADC 및/또는 CDN은 그를 필요로 하는 포유동물에게 투여된다. 특정 실시양태에서, ADC 및/또는 CDN은 그를 필요로 하는 인간에게 투여된다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC 또는 CDN은 암을 치료하는 데 사용된다. 예를 들어, 본 개시내용의 ADC 또는 CDN은 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부암, 경부암, 자궁암, 난소암, 위암, 결장암, 유방암, 식도암, 소장암, 장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 요도암, 전립선암, 음경암, 고환암, 요관암, 방광암, 신장암 또는 간암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 본 개시내용의 ADC 또는 CDN에 의해 치료가능한 추가 암으로는 직장암; 항문 부위의 암; 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 신우 암종, 신세포 암종; 연조직 육종; 점액종; 횡문근종; 섬유종; 지방종; 기형종; 담관암종; 간모세포종; 혈관육종; 혈종; 간암; 섬유육종; 연골육종; 골수종; 만성 또는 급성 백혈병; 림프구성 림프종; 원발성 CNS 림프종; CNS의 신생물; 척수 종양; 편평 세포 암종; 활액 육종; 악성 흉막 중피종(malignant pleural mesothelioma); 뇌간 신경교종(brain stem glioma); 뇌하수체 선종; 기관지 선종; 연골성 과오종(chondromatous hanlartoma); 이네소셀리오마(inesothelioma); 호지킨병; 또는 상기 암들 중 하나 이상의 것의 조합을 포함한다.
따라서, 한 측면에서, 본 개시내용은 제약상 허용되는 양의 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC)를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 제약상 허용되는 양의 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 포함하는 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 그를 필요로 하는 포유동물에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 그를 필요로 하는 인간에게 투여된다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 대상체 (예컨대, 인간)에게 적어도 하나의 추가의 항암제와 함께 제약상 허용되는 양의 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC)를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. ADC 및 하나 이상의 추가의 항암제는 함께 또는 별개로 투여될 수 있고, 별개로 투여되는 경우, 투여는 별개 또는 조합된 제약 조성물로 임의의 편리한 경로에 의해 동시에 또는 순차적으로 임의 순서로 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 항암제는 화학식 I의 ADC의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 표적 항원의 발현을 증진시킨다. ADC 및 다른 제약상 활성인 항암제(들)의 양 및 상대적인 투여 시기는 원하는 조합 치료 효과를 달성하도록 선택될 것이다.
일부 경우에, 본 개시내용은 대상체 (예컨대, 인간)에게 적어도 하나의 추가의 항암제와 함께 제약상 허용되는 양의 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)을 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. CDN 및 하나 이상의 추가의 항암제는 함께 또는 별개로 투여될 수 있고, 별개로 투여되는 경우, 투여는 별개 또는 조합된 제약 조성물로 임의의 편리한 경로에 의해 동시에 또는 순차적으로 임의 순서로 이루어질 수 있다. CDN 및 다른 제약상 활성인 항암제(들)의 양 및 상대적인 투여 시기는 원하는 조합 치료 효과를 달성하도록 선택될 것이다.
본 개시내용의 ADC 또는 CDN과 하나 이상의 항암제의 조합은 단일 제약 조성물로 함께 투여될 수 있다. 대안적으로, ADC 또는 CDN 및 하나 이상의 항암제는 별개로 제제화될 수 있다. 별개로 제제화되는 경우, 당업계에 상기 화합물에 대해 공지된 방식으로 편리하게는 임의의 편리한 조성물로 제공될 수 있다.
따라서, 본 개시내용의 ADC 또는 CDN은 예컨대, 항-신생물 요법, 면역 체크포인트 억제제, 다른 화학요법제, 호르몬제, 항체 제제 뿐만 아니라, 외과적 및/또는 방사선 치료, 특히 방사선과의 조합 요법에서와 같이 암 치료의 다른 치료 방법과 함께 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC) 또는 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN)은 - 또는 본 개시내용의 ADC 및 CDN 둘 모두는 암 치료를 위해 면역 체크포인트 억제제와 함께 조합하여 사용된다. 면역 체크포인트 억제제, 예컨대, PD-1, PD-L1, 및 CTLA4에 대한 인간화 항체는 최근 흑색종, 비소세포 폐암, 신세포 암종 및 방광암을 비롯한 여러 유형의 전이성 암 치료에 고도로 성공적인 것으로 나타났다 (문헌 [Sharma and Allison, 2015, Science 348, 56]). 그러나, 부분적으로는 예컨대, CD8 T와 같은 항종양 면역 세포의 수가 불충분하게 생성되고/거나, 종양으로 침윤되기 때문에, 암 환자의 적은 비율만이 체크포인트 억제제 요법의 혜택을 받는다. 본원에 기술된 실시예에 제시된 바와 같이, 본 개시내용의 ADC 및/또는 CDN과 면역 체크포인트 억제제의 조합은 면역 체크포인트 억제제를 사용한 단일요법에 대해 난치성인 암을 치료하기 위해 시너지적으로 작용할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 PD-L1 억제제와 함께 조합하여 제약상 허용되는 양의 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC) 또는 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN), 또는 본 개시내용의 ADC 및 CDN 둘 모두를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 개시내용의 ADC와 함께 조합될 수 있는 PD-L1 억제제의 예로는 아테졸리주맙 (티쎈트릭(Tecentriq)®), 아벨루맙 (바벤시오(Bavencio)®), 더발루맙 (임핀지(Imfinzi)®), BMS-936559, 및 CK-301을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC 및/또는 CDN은 상기 언급된 것을 비롯한, PD-L1 억제제와 함께 조합하여 투여되지 않는다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 PD-1 억제제와 함께 조합하여 제약상 허용되는 양의, 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC) 또는 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN), 또는 본 개시내용의 ADC 및 CDN 둘 모두를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 개시내용의 ADC와 함께 조합될 수 있는 PD-1 억제제의 예로는 펨브롤리주맙 (키트루다(Keytruda)®), 니볼루맙 (옵디보(Opdivo)®), 세미플리맙 (리브타요(Libtayo)®), AMP-224, AMP-514, 및 PDR001을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC 및/또는 CDN은 상기 언급된 것을 비롯한, PD-1 억제제와 함께 조합하여 투여되지 않는다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 CTLA-4 억제제와 함께 조합하여 제약상 허용되는 양의, 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC) 또는 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN), 또는 본 개시내용의 ADC 및 CDN 둘 모두를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 개시내용의 ADC와 함께 조합될 수 있는 CTLA-4 억제제의 예로는 이필리무맙 (여보이(Yervoy®)) 및 트레멜리무맙을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 ADC 및/또는 CDN은 상기 언급된 것을 비롯한, CTLA-4 억제제와 함께 조합하여 투여되지 않는다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 하나 이상의 항미세소관제, 예컨대, 디테르페노이드 및 빈카 알칼로이드; 백금 배위 착물; 알킬화제, 예컨대, 질소 머스타드, 옥사자포스포린, 알킬술포네이트, 니트로소우레아 및 트리아젠; 항생제, 예컨대, 안트라사이클린, 악티노마이신 및 블레오마이신; 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대, 에피포도필로톡신; 항대사물질, 예컨대, 퓨린 및 피리미딘 유사체 및 항폴레이트 화합물; 토포이소머라제 I 억제제, 예컨대, 캄프토테신; 호르몬 및 호르몬 유사체; 신호 전달 경로 억제제; 비수용체 티로신 혈관신생 억제제; 면역요법제; 아폽토시스 유발제; 및 또는 세포 주기 신호전달 억제제와 함께 조합하여 제약상 허용되는 양의, 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC) 또는 본 개시내용의 CDN (즉, 화학식 II의 CDN), 또는 본 개시내용의 ADC 및 CDN 둘 모두를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
화학식 I의 ADC는 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되지 않은 STING 작용제와 함께 조합하여, 예컨대, 암을 치료하는 데, 또는 면역 반응을 유도 또는 촉진시키는 데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되지 않은 STING 작용제는 CDN, 예컨대, 본원에 기술된 것들 중 하나, 즉, 2'3'-CDN이다. 다른 실시양태에서, STING 작용제는 3'3'-CDN, 2'2'-CDN, 또는 3'2'-CDN이다. 일부 실시양태에서, STING 작용제는 벤조페논 유사체이다. 추가 실시양태에서, STING 작용제는 이량체 아미도벤즈이미다졸이다. 본 개시내용의 ADC와 함께 조합하여 사용될 수 있는, 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되지 않은 STING 작용제의 예로는 IMSA101, ADU-S100 (MIW815), BMS-986301, CRD5500, CMA (10-카르복시메틸-9-아크리다논), 디ABZI STING 작용제-1 (예컨대, CAS 번호: 2138299-34-8), DMXAA (ASA404/바디메잔), E7766, GSK-532, GSK-3745417, MK-1454, MK-2118, SB-11285, SRCB-0074, TAK-676, 및 TTI-10001을 포함한다. STING 작용제는 화학식 I의 ADC 투여 이전, 그와 공동으로, 또는 그 이후에 투여될 수 있다.
화학식 I의 ADC는 화학식 I의 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되지 않은 "유리" CDN과 함께 조합하여, 예컨대, 암을 치료하는 데, 또는 면역 반응을 유도 또는 촉진시키는 데 사용될 수 있다. 유리 CDN은 화학식 I의 ADC 투여 이전, 그와 공동으로, 또는 그 이후에 투여될 수 있다. 상기 경우에, 유리 CDN은 화학식 I의 ADC의 항체에 접합된 CDN과 동일하거나, 또는 그와 상이할 수 있다. 유리 CDN은 cGAMP, 예컨대, 2'3'-cGAMP 또는 이의 유사체 또는 유도체 또는 이의 제약상 허용되는 염일 수 있다. 다른 실시양태에서, 유리 CDN은 3'3'-cGAMP, 2'2'-cGAMP, 3'2'-cGAMP 또는 상기 중 임의의 것의 유사체 또는 유도체 또는 이의 제약상 허용되는 염이다.
따라서, 본 개시내용은 항체에 접합되지 않은 적어도 하나의 ("유리 CDN")과 함께 제약상 허용되는 양의 본 개시내용의 ADC (즉, 화학식 I의 ADC)를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 화학식 I의 ADC 및 유리 CDN은 함께 또는 별개로 투여될 수 있고, 별개로 투여되는 경우, 투여는 별개로 또는 조합되어 임의의 편리한 경로에 의해 동시에 또는 순차적으로 임의 순서로 이루어질 수 있다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00076
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00077
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00078
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00079
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00080
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00081
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00082
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00083
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00084
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00085
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00086
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00087
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00088
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00089
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00090
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00091
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00092
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00093
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또 다른 실시양태에서, 화학식 I의 ADC와 함께 조합하여 투여되는 유리 CDN은 하기 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00094
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7. 실시예
CDN, ADC, 및 환자 치료를 위해 상기 ADC를 사용하는 방법의 예시적인 실시양태의 특정 특징 및 특성을 강조하는 하기 실시예는 제한하는 것이나 아니라, 예시 목적으로 제공된다.
약어
1H-NMR 양성자 핵 자기 공명 분광법
19F-NMR 19F 핵 자기 공명 분광법
31P-NMR 31P 핵 자기 공명 분광법
G 구아닌
A 아데닌
ABz 6N-벤조일아데닌
Gib 2N-이소부티릴
Bz 벤조일
DCA 디클로로아세트산
DCM 디클로로메탄
DMOCP 2-클로로-5,5-디메틸-1,3,2-디옥사포스피난 2-옥시드
DMT 4,4'-디메톡시트리틸
DMTCl 4,4'-디메톡시트리틸 클로라이드
PBS 포스페이트 완충처리된 염수
Py. 피리딘
TBS t-부틸디메틸실릴
TrCl 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 히드로클로라이드
IBX 2-아이오독시벤조산
LAH 리튬 알루미늄 하이드라이드
DMF 디메틸포름아미드
NMM N-메틸모르폴린
Et3N 트리에틸아민
실시예 1. CDN-A 제조
하기 반응식 A1 및 A2는 본원에 개시된 CDN ("CDN-A")의 합성을 도시한 것이다. CDN 및 합성 중간체의 합성 및 특징화는 하기 기술되어 있다.
Figure pct00095
Figure pct00096
단계 1: ( 3aR,5R,6S,6aR )-5-( 히드록시메틸 )-2,2- 디메틸테트라히드로푸 로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-올의 합성
Figure pct00097
H2SO4 (con., 184.00 g, 1.88 mol, 100 mL, 2.8 eq.)를 함유하는 아세톤 (2.6 L) 중 (2R,4S,5R)-5-(히드록시메틸)테트라히드로푸란-2,3,4-triol (100 g, 0.67 mol) 용액을 20℃에서 1 h 동안 교반한다. 0℃에서 H2O (600 mL) 중 Na2CO3 (130 g, 1.23 mol, 1.8 eq.) 용액을 조심스럽게 첨가한다. 제2 배치의 Na2CO3 (70 g, 0.66 mol)을 첨가하기 전, 혼합물을 추가로 2.5 h 동안 교반한다. 0.5 h 후, 여과에 의해 침전물을 수집하고, 아세톤 (0.5 L x 3)에 의해 세척한다. 여액을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM:MeOH = 10:1 내지 5:1)에 의해 정제하여 황색 오일로서 (3aR,5R,6R)-5-(히드록시메틸)-2,2-디메틸-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-올 (53.5 g, 0.28 mol, 85% 수율)을 수득한다. (MS: [M+Na]+ 213.0).
단계 2 : 3aR,5R,6S,6aR )-2,2-디메틸-5- ((트리틸옥시)메틸)테트라히드로푸로 [2,3-d][1,3]디옥솔-6-올의 합성
Figure pct00098
피리딘 (600 mL) 중 (3aR,5R,6R)-5-(히드록시메틸)-2,2-디메틸-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-올 (125 g, 0.66 mol) 용액에 TrCl (219.9 g, 0.79 mol, 1.2 eq.)을 첨가한다. 60℃에서 16 h 후, 혼합물을 냉각시키고, 농축시킨다. 잔류물을 CH2Cl2 (400 mL)와 aq. NaHCO3 (sat., 800 mL) 사이에 분배한다. 수성 상을 CH2Cl2 (600 mL x 2)로 추출한다. 혼합 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1 내지 5:1)에 의해 정제하여 백색 고체로서 (3aR,5R,6R)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-올 (250 g, 0.58 mol, 88% 수율)을 수득한다. (MS: [M+Na]+ 455.0).
단계 3 : ( 3aR,5R,6aS )-2,2-디메틸-5- ((트리틸옥시)메틸)디히드로푸로 [2,3-d][1,3]디옥솔-6(3aH)-온의 합성
Figure pct00099
CH3CN (1.5 L) 중 (3aR,5R,6R)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-올 (250 g, 0.58 mol) 용액에 IBX (323 g, 1.2 mol, 2.00 eq.)를 첨가한다. 혼합물을 90℃에서 6 h 동안 교반한다. 냉각시킨 후, 혼합물을 여과한다. 여액을 농축시키고, 황색 오일로서 (3aR,5R,6aS)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,6a-디히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-온 (240 g, 0.56 mol, 96.5% 수율)을 수득한다. (MS: [M+Na]+ 453.0).
단계 4 : (E)- 메틸 -2-(( 3aR,5S,6aR )-2,2-디메틸-5- ((트리틸옥시)메틸)푸로[2,3-d] [1,3]디옥솔-6(3aH,5H,6aH)-일리덴)아세테이트의 합성
Figure pct00100
NaH (14.5 g, 0.36 mol, 오일 중 60%, 1.3 eq.) 및 THF (1.00 L)의 혼합물에 메틸 2-디메톡시포스포릴아세테이트 (66 g, 0.36 mol, 52.4 mL, 1.3 eq.)를 0℃에서 15 min 동안에 걸쳐 적가한다. 혼합물을 동일한 온도에서 45 min 동안 교반한 후, THF (500 mL) 중 (3aR,5R,6aS)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,6a-디히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-온 (120 g, 0.28 mol, 1 eq.) 용액을 적가한다. 25℃에서 15 h 후, 반응물을 0℃에서 NH4Cl (sat., 50 mL)로 켄칭한다. 혼합물을 농축시키고, 염수 (500 mL)와 CH2Cl2 (500 mL x 3) 사이에 분배한다. 혼합 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 15:1 내지 5:1)에 의해 정제하여 담황색 오일로서 메틸 (2E)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,6a-디히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-일리덴]아세테이트 (65 g, 0.53 mol, 96 % 수율)를 수득하였다. (MS: [M+Na]+ 509.0).
단계 5 : 메틸 2-(( 3aR,5S,6R,6aR )-2,2-디메틸-5- ((트리틸옥시)메틸)테트라히드로푸로 [2,3-d][1,3]디옥솔-6-일)아세테이트의 합성
Figure pct00101
N2 대기하에 EtOAc (700 mL) 중 메틸 (2E)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,6a-디히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-일리덴]아세테이트 (260 g, 0.53 mol) 용액에 Pd/C (탄소상 10%, 10 g)를 첨가한다. 현탁액에서 가스를 제거하고, 3회 동안 H2로 퍼징한다. 혼합물을 25℃에서 16 h 동안 H2 (20 psi) 하에 교반한다. 여과에 의해 촉매를 제거한다. 여액을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 15:1 내지 10:1)에 의해 정제하여 백색 고체로서 메틸 2-[(3aR,5S,6S)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-일]아세테이트 (210 g, 0.43 mol, 80.4% 수율)를 수득하였다. (MS: [M+Na]+ 511.1).
단계 6: 2 -(( 3aR,5S,6R,6aR )-2,2-디메틸-5- ((트리틸옥시)메틸)테트라히드로푸로 [2,3-d][1,3]디옥솔-6-일)에탄올의 합성
Figure pct00102
LiAlH4 (15.5 g, 0.41 mol, 2 eq.) 및 THF (500 mL)의 혼합물에 THF (20 mL) 중의 메틸 2-[(3aR,5S,6S)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-일]아세테이트 (100 g, 0.20 mol) 용액을 0℃에서 천천히 첨가한다. 25℃에서 2.5 h 동안 교반한 후, 반응물을 0℃에서 물 (15 mL) 및 NaOH (aq., 15%, 15 mL)에 의해 켄칭한다. 미정제 물질을 상에서 Na2SO4 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5:1 내지 2:1)에 의해 정제하여 담황색 오일로서 2-[(3aR,5S,6S)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-일]에탄올 (80 g, 0.35 mol, 85% 수율)을 수득하였다.
Figure pct00103
단계 7: ( 3aR,5S,6R,6aR )-6-(2-( 벤질옥시 )에틸)-2,2-디메틸-5- ((트리틸옥시)메틸)테트라히드로푸로 [2,3-d][1,3]디옥솔의 합성
Figure pct00104
NaH (27.1 g, 0.68 mol, 오일 중 60%, 4.00 eq.) 및 THF (500 mL)의 혼합물에 THF (200 mL) 중의 2-[(3aR,5S,6S)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-6-일]에탄올 (78 g, 0.17 mol) 용액을 -20℃에서 5 min 동안에 걸쳐 적가한다. 첨가 후, 혼합물을 25℃에서 2 h 동안 교반한다. BnBr (60.3 mL, 0.51 mol, 3.00 eq.)을 적가한다. 혼합물을 80℃에서 14 h 동안 교반한다. 0℃로 냉각시킨 후, 반응물을 aq. NH4Cl (sat., 20 mL)에 의해 켄칭하고, H2O (400 mL)로 희석시키고, CH2Cl2 (400 mL x 3)로 추출한다. 혼합 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 , 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 15:1 내지 5:1)에 의해 정제하여 백색 고체로서 (3aR,5S,6S)-6-(2-벤질옥시에틸)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔 (90 g, 0.16 mol, 97% 수율)을 수득한다. (MS: [M+Na]+ = 573.1).
단계 8 : ( 3aR,5S,6R,6aR )-6-(2-( 벤질옥시 )에틸)-2,2- 디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔 -5-일)메탄올의 합성
Figure pct00105
CH2Cl2 (300 mL) 중의 (3aR,5S,6S)-6-(2-벤질옥시에틸)-2,2-디메틸-5-(트리틸옥시메틸)-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔 (90 g, 0.16 mol) 용액에 CHCl2COOH (30 mL, 0.16 mol, 1.00 eq.)를 첨가한다. 25℃에서 3 h 후, 0℃에서 aq. NaHCO3 (sat., 500 mL)을 이용하여 반응 혼합물을 pH ~7.0으로 중화시킨다. 미정제 물질을 CH2Cl2 (100 mL x 3)로 추출한다. 혼합 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5:1 내지 2:1)에 의해 정제하여 황색 오일로서 [(3aR,5S,6S)-6-(2-벤질옥시에틸)-2,2-디메틸-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-5-일]메탄올 (44 g, 0.14 mol, 87% 수율)을 수득한다.
단계 9 : ( 3aR,5S,6R,6aR )-6-(2-( 벤질옥시 )에틸)-2,2- 디메틸테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔 -5-일)메틸 벤조에이트 의 합성
Figure pct00106
CH2Cl2 (200 mL) 중의 [(3aR,5S,6S)-6-(2-벤질옥시에틸)-2,2-디메틸-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-5-일]메탄올 (62 g, 0.2 mol) 용액에 BzCl (35 mL, 0.3 mol, 1.50 eq.) 및 Et3N (55.7 mL, 0.4 mol, 2 eq.)을 첨가한다. 25℃에서 1 h 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 15:1 내지 10:1)에 의해 정제하여 담황색 오일로서 [(3aR,5S,6S)-6-(2-벤질옥시에틸)-2,2-디메틸-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-5-일]메틸 벤조에이트 (80 g, 0.19 mol, 97% 수율)를 수득한다. (MS: [M+Na]+ 435.1).
단계 10 : (( 2S,3S,4R )-3-(2-( 벤질옥시 )에틸)-4,5- 디히드록시테트라히드로푸란 -2-일)메틸 벤조에이트 의 합성
Figure pct00107
[(3aR,5S,6S)-6-(2-벤질옥시에틸)-2,2-디메틸-3a,5,6,6a-테트라히드로푸로[2,3-d][1,3]디옥솔-5-일]메틸 벤조에이트 (20 g, 49 mmol) 및 H2O (6 mL)의 혼합물에 HOAc (28 mL, 10 eq.)를 첨가한다. 혼합물을 100℃에서 5 h 동안 교반한다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 aq. NaHCO3 (sat., 2 L)으로 중화시키고, CH2Cl2 (400 mL x 3)로 추출한다. 혼합 층을 농축시켜 담황색 오일로서 [(2S,3R,5R)-3-(2-벤질옥시에틸)-4,5-디히드록시-테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (17.5 g, 47 mmol, 96% 수율)를 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용한다. (MS: [M+ Na]+ 395.1).
단계 11 : ( 3R,4R,5S )-5-(( 벤조일옥시 ) 메틸 )-4-(2-( 벤질옥시 )에틸)테트라히드로푸란-2,3-디일리아세테이트의 합성
Figure pct00108
피리딘 (300 mL) 중의 [(2S,3R,5R)-3-(2-벤질옥시에틸)-4,5-디히드록시-테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (70 g, 0.19 mol) 용액에 Ac2O (0.75 mol, 70.4 mL, 4.0 eq.)를 첨가한다. 혼합물을 60℃에서 4 h 동안 교반한다. 25℃로 냉각시킨 후, aq. NaHCO3 (sat.)을 이용하여 반응 혼합물을 pH ~7.0으로 중화시키고, CH2Cl2 (300 mL x 3)로 추출한다. 유기 층을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1 내지 5:1)에 의해 정제하여 백색 고체로서 [(2S,3S,5S)-4,5-디아세톡시-3-(2-벤질옥시에틸)테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (80 g, 93% 수율)를 수득한다. (MS: [M+ Na]+ 479.1).
단계 12 : (( 2S,3R,4R,5R )-4- 아세톡시 -3-(2-( 벤질옥시 )에틸)-5-(2- 이소부티르아미도 -6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)테트라히드로푸란-2-일)메틸 벤조에이트의 합성
Figure pct00109
20℃에서 CH3CN (300 mL) 중의 2-메틸-N-(6-옥소-1,9-디히드로퓨린-2-일)프로판아미드 (18.9 g, 85.4 mmol, 1.30 eq.) 용액에 BSA (84.5 mL, 341.7 mmol, 5.2 eq.)를 첨가한다. 65℃에서 0.5 h 동안 교반한 후, 혼합물을 냉각시키고, 농축시킨다. 잔류물을 MeCN (600 mL)에 용해시킨 후, -15℃에서 MeCN (150 mL) 중의 [(2S,3S,5S)-4,5-디아세톡시-3-(2-벤질옥시에틸)테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (30 g, 65.7 mmol) 용액 및 TMSOTf (17.8 mL, 98.6 mmol, 1.5 eq.)를 첨가한다. 혼합물을 65℃에서 15 h 동안 교반한다. 냉각시킨 후, 혼합물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5:1 내지 1:1)에 의해 정제하여 백색 고체로서 ((2S,3R,4R,5R)-4-아세톡시-3-(2-(벤질옥시)에틸)-5-(2-이소부티르아미도-6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)테트라히드로푸란-2-일)메틸 벤조에이트 (30 g, 48.6 mmol, 74% 수율)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 618.1).
Figure pct00110
단계 13 : (( 2S,3R,4R,5R )-4- 아세톡시 -3-(2- 히드록시에틸 )-5-(2- 이소부티르아미도 -6-옥소-1H-퓨린-9(6H)-일)테트라히드로푸란-2-일)메틸 벤조에이트 의 합성
Figure pct00111
N2 하에 EtOH (500 mL) 중의 [(2S,3S,5R)-4-아세톡시-3-(2-벤질옥시에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (25 g, 40.5 mmol) 용액에 Pd/C (38 g, 탄소상 10%) 및 HOAc (25.00 mL, 437.1 mmol, 11 eq.)를 첨가한다. 현탁액을 3회에 걸쳐 H2로 퍼징하고, H2 (40 Psi) 하에 50℃에서 48 h 동안 교반한다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과시킨다. 여액을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5:1 내지 2:1)에 의해 정제하여 백색 고체로서 [(2S,3S,5R)-4-아세톡시-3-(2-히드록시에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (20 g, 37.9 mmol, 94% 수율)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 528.3).
단계 14 : [( 2S,3R,5R )-4- 아세톡시 -3-(2- 아이오도에틸 )-5-[2-(2- 메틸프로파노일아미노 )-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트의 합성
Figure pct00112
THF (90 mL) 중의 [(2S,3R,5R)-4-아세톡시-3-(2-히드록시에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (3 g, 5.69 mmol, 1 eq.) 용액에 이미다졸 (1.16 g, 17.06 mmol, 3 eq.) 및 트리페닐포스핀 (4.47 g, 17.06 mmol, 3 eq.)을 한 번에 첨가한 후, 이어서, THF (10 mL) 중의 I2 (2.60 g, 10.24 mmol, 1.8 eq.) 용액을 천천히 첨가한다. 반응 혼합물을 25℃에서 16 h 동안 교반하고, 포화 Na2SO3 aq. 용액 (8 mL)으로 켄칭하고, 증발시켜 잔류물을 수득한다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (80 mL) 중에 용해시키고, 물 (80 mL)로 세척한다. 수성 층을 EtOAc (150 mL x 3)로 추출한다. 혼합 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압하에 농축시킨다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:1 내지 1:3)에 의해 정제하여 황색 고체로서 [(2S,3R,5R)-4-아세톡시-3-(2-아이오도에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (2.3 g, 64% 수율)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 638.2).
단계 15 : [( 2S,3R,4R,5R )-4- 아세톡시 -3-(2- 아지도에틸 )-5-[2-(2- 메틸프로파 노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트의 합성
Figure pct00113
THF (40 mL) 중의 [(2S,3R,4R,5R)-4-아세톡시-3-(2-아이오도에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (3.8 g, 5.96 mmol, 1 eq.) 용액에 NaN3 (2.52 g, 38.75 mmol, 6.5 eq.) 및 H2O (10 mL)를 첨가한다. 혼합물을 50℃에서 2 h 동안 교반한다. 혼합물을 포화 aq. Na2CO3 용액 (50 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (100 mL x 3)로 추출한다. 혼합 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압하에 농축시켜 황색 고체로서 [(2S,3R,4R,5R)-4-아세톡시-3-(2-아지도에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (2 g, 61% 수율)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 553.1).
단계 16 : N-[9-[( 2R,3R,4S,5S )-4-(2- 아지도에틸 )-3-히드록시-5-( 히드록시메틸 )테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드의 합성
Figure pct00114
0℃에서 EtOH (220 mL) 중의 [(2S,3R,5R)-4-아세톡시-3-(2-아지도에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (2.55 g, 4.62 mmol, 1 eq.) 용액에 aq. NaOH (2M, 23 mL, 10 eq.)를 첨가한다. 생성된 혼합물을 주변 온도에서 0.5 h 동안 교반한다. 0℃에서 반응 혼합물에 HCOOH를 첨가하여 pH = 7~8로 조정하고, 혼합물을 감압하에서 농축시켜 잔류물을 수득한다. 잔류물을 prep-HPLC (MeCN 및 물 중 0.1% FA, 0%~70%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 N-[9-[(2R, 3R,4S,5S)-4-(2-아지도에틸)-3-히드록시-5-(히드록시메틸)테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드 (1.6 g, 3.94 mmol, 85% 수율)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 407.1).
단계 17 : N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-4-(2-아지도에틸)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-히드록시-테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드의 합성
Figure pct00115
피리딘 (15 mL) 중의 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-4-(2-아지도에틸)-3-히드록시-5-(히드록시메틸)테르타히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드 (1.6 g, 3.94 mmol) 용액에 DMTCl (1.60 g, 4.72 mmol, 1.2 eq.)을 첨가한다. 혼합물을 25℃에서 3 h 동안 교반한다. 25℃에서 MeOH (10 mL)를 첨가하여 반응 혼합물을 켄칭한다. 혼합물을 감압하에서 농축시켜 황색 오일로서 잔류물을 수득한다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1 내지 EtOH/에틸 아세테이트 = 1:250)에 의해 정제하여 황색 고체로서 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-4-(2-아지도에틸)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시] 메틸]-3-히드록시-테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드 (950 mg, 1.34 mmol, 34% 수율)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 709.4).
단계 18 : [( 2R,3R,4R,5S )-4-(2- 아지도에틸 )-5-( 히드록시메틸 )-2-[2-(2- 메틸프로파노일아미노 )-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산의 합성
Figure pct00116
피리딘 (6 mL) 중의 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-4-(2-아지도에틸)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-히드록시테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드 (700 mg, 988 μmol) 용액에 디페닐 포스파이트 (809.5 mg, 3.46 mmol, 664 ㎕, 3.5 eq.)를 첨가한다. 25℃에서 1 h 후, DCM (5 mL) 및 Et3N (3 mL)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 추가로 1.5 h 동안 교반한다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DCM (20 mL)과 aq. NaHCO3 용액 (5%, 20 mL) 사이에 분배한다. 유기 상을 증발시켜 미정제 중간체를 수득하고, 이를 DCM (10 mL) 중의 H2O (3 mL) 및 2,2-디클로로아세트산 (382 mg, 2.96 mmol, 243 ㎕, 3 eq.)의 혼합물에 다시 용해시킨다. 혼합물을 25℃에서 0.5 h 동안 교반한다. 반응물을 Et3N (3.0 mL)으로 켄칭한 후, 이어서, 혼합물을 증발시켜 잔류물을 수득한다. 잔류물을 역상 칼럼 (MeCN 및 물 중 0.1% TEA, 0%~70%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 [(2R,3R,4R,5S)-4-(2-아지도에틸)-5-(히드록시메틸)-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산 (400 mg, 82% 수율, 95% 순도)을 수득한다. (MS: [M+1]+ 471.0).
Figure pct00117
단계 1 : [(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,4R,5S)-4-(2-아지도에틸)-5-(히드록시메틸)-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시-(2-시아노에톡시)포스포릴]옥시메틸]-5-(6-벤즈아미도퓨린-9-일)-4-[3차부틸(디메틸)실릴]옥시-테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산의 합성
Figure pct00118
CH3CN (3 mL) 중의 [(2R,3R,4R,5R)-5-(6-벤즈아미도퓨린-9-일)-4-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-2-(히드록시메틸)테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산 (400 mg, 727.8 μmol) 용액에 테트라졸 용액 (MeCN 중 0.45 M, 6.47 mL, 4 eq.)을 첨가한다. 혼합물을 25℃에서 5 min 동안 교반한다. N-[9-[(2R,3R,4R,5S)-4-(2-아지도에틸)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-[2-시아노에톡시-(디이소프로필아미노)포스파닐]옥시테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드 (595 mg, 655 μmol, 0.9 eq.)를 첨가한다. 25℃에서 0.5 h 후, 2-히드로퍼옥시-2-메틸-프로판 (197 mg, 2.18 mmol, 209 ㎕, 3 eq.)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 0.5 h 동안 교반한다. 이어서, DCM (10 mL) 중의 2,2-디클로로아세트산 (938 mg, 7.28 mmol, 598 ㎕, 10 eq.)을 첨가한다. 혼합물을 25℃에서 25 min 동안 교반하고, 중화를 위해 sat. aq. Na2SO3 (2.0 mL), 및 이어서, 피리딘 (2.0 mL)으로 켄칭한다. 혼합물을 증발시켜 잔류물을 수득한다. 잔류물을 역상 칼럼 (MeCN 및 물 중 0.1% TEA, 0%~70%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 [(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,4R,5S)-4-(2-아지도에틸)-5-(히드록실-메틸)-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시-(2-시아노에톡시)포스포릴]옥시메틸]-5-(6-벤즈아미도퓨린-9-일)-4-[3차부틸(디메틸)실릴]옥시-테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산 (600 mg, 62% 수율, 80% 순도)을 수득한다. (MS: [M+1]+ 1071.5).
단계 2 : N-[9-[(27S,28R,29R,30R,31R,32R,33R,34R)-29-(2-아지도에틸)-32-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-67,68-디히드록시-33-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]-67,68-디옥소-59,60,61,62,63,64-헥사옥사-67,68-디포스파트리사이클로옥타데칸-34-일]퓨린-6-일]벤즈아미드의 합성
Figure pct00119
피리딘 (9 mL) 중의 [(2R,3R,4R,5S)-4-(2-아지도에틸)-5-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(6-벤즈아미도퓨린-9-일)-4-[3차부틸(디메틸)실릴]옥시-2-(히드록시메틸)테트라히드로푸란-3-일]옥시-(2-시아노에톡시)포스포릴]옥시메틸]-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산 (400 mg, 373.48 μmol) 용액에 2-클로로-5,5-디메틸-1,3,2-디옥사포스피난 2-옥시드 (345 mg, 1.87 mmol, 5 eq.)를 첨가한다. 25℃에서 15 min 후, I2 (379 mg, 1.49 mmol, 4 eq.) 및 H2O (13.5 mg, 747.0 μmol, 13.5 ㎕, 2 eq.)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 0.5 h 동안 교반한다. 반응물을 포화 aq. NaHCO3 용액 (2.0 mL) 및 포화 aq. Na2SO3 용액 (2.0 mL)으로 켄칭한다. 증발 후, 잔류물을 CH3CN (10 mL) 중에 용해시키고, 2-메틸프로판-2-아민 (10 mL)과 함께 첨가한다. 혼합물을 25℃에서 1 h 동안 교반한다. 반응 혼합물을 증발시켜 잔류물을 수득한다. 잔류물을 역상 칼럼 (MeCN 및 물 중 0.1% TEA, 0%~70%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 N-[9-[(27S,28R,29R,30R,31R,32R,33R,34R)-29-(2-아지도에틸)-32-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-67,68-디히드록시-33-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]-67,68-디옥소-59,60,61,62,63,64-헥사옥사-67,68디포스파트리사이클로옥타데칸-34-일]퓨린-6-일]벤즈아미드 (350 mg, 310 μmol, 83% 수율, 90% 순도)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 1016.4).
단계 3 : 2-아미노-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-아미노퓨린-9-일)-21-(2-아지도에틸)-24-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-54,55-디히드록시-54,55-디옥소-46,47,48,49,50,51-헥사옥사-54,55-디포스파트리사이클로옥타데칸-25-일]-1H-퓨린-6-온의 합성
Figure pct00120
N-[9-[(27S,28R,29R,30R,31R,32R,33R,34R)-29-(2-아지도에틸)-32-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-67,68-디히드록시-33-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]-67,68-디옥소-59,60,61,62,63,64-헥사옥사-67,68디포스파트리사이클로옥타데칸-34-일]퓨린-6-일]벤즈아미드 (300 mg, 295 μmol)를 MeNH2/EtOH (5M, 2.95 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 25℃에서 2 h 동안 교반한다. 혼합물을 증발시켜 잔류물을 수득한다. 잔류물을 역상 칼럼 (MeCN 및 물 중 0.1% TEA, 0%~35%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 2-아미노-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-아미노퓨린-9-일)-21-(2-아지도에틸)-24-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-54,55-디히드록시-54,55-디옥소-46,47,48,49,50,51-헥사옥사-54,55디포스파트리사이클로옥타데칸-25-일]-1H-퓨린-6-온 (160 mg, 52% 수율, 80% 순도)을 수득한다. (MS: [M+1]+ 842.3).
단계 4 : 2 -아미노-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-21-(2-아미노에틸)-26-(6-아미노퓨린-9-일)-24-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-52,53-디히드록시-52,53-디옥소-44,45,46,47,48,49-헥사옥사-52,53-디포스파트리사이클로옥타데칸-25-일]-1H-퓨린-6-온의 합성
Figure pct00121
MeOH (8 mL) 중의 2-아미노-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-아미노퓨린-9-일)-21-(2-아지도에틸)-24-[3차부틸(디메틸)실릴]옥시-54,55-디히드록시-54,55-디옥소-46,47,48,49,50,51-헥사옥사-54,55디포스파트리사이클로옥타데칸-25-일]-1H퓨린-6-온 (100 mg, 118.8 μmol) 용액에 Pd/C (30 mg, 10% 순도)를 한 번에 첨가하고, 혼합물을 H2 (10 psi) 하에 25℃에서 5 h 동안 교반한다. 혼합물을 여과시키고, 여액을 증발시켜 잔류물을 수득한다. 잔류물을 역상 칼럼 (MeCN 및 물 중 0.1% TEA, 0%~30%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 2-아미노-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-21-(2-아미노에틸)-26-(6-아미노퓨린-9-일)-24-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-52,53-디히드록시-52,53-디옥소-44,45,46,47,48,49-헥사옥사-52,53디포스파트리사이클로옥타데칸-25-일]-1H-퓨린-6-온 (70 mg, 77.2 μmol, 65% 수율, 90% 순도)을 수득한다. (MS: [M+1]+ 816.5).
단계 5: 2-아미노-9-[(14S,15R,16R,17R,18S,19R,20R,21R)-16-(2-아미노에틸)-20-(6-아미노퓨린-9-일)-17,45,46-트리히드록시-45,46-디옥소-39,40,41,42,43,44-헥사옥사-45,46-디포스파트리사이클로옥타데칸-21-일]-1H-퓨린-6-온 (CDN-A)의 합성
Figure pct00122
MeOH (3 mL) 중의 2-아미노-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-21-(2-아미노에틸)-26-(6-아미노퓨린-9-일)-24-[3차부틸(디메틸)실릴]옥시-52,53-디히드록시-52,53-디옥소-44,45,46,47,48,49-헥사옥사-52,53디포스파트리사이클로옥타데칸-25-일]-1H퓨린-6-온 (35 mg, 42.9 μmol) 용액에 NH4F (127 mg, 3.43 mmol, 80 eq.)를 한 번에 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 0.25 h 동안 교반시킨다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 증발시켜 잔류물을 수득한다. 잔류물을 역상 칼럼 (MeCN 및 물 중 0.1% HCOOH, 0%~30%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 2-아미노-9-[(14S,15R,16R,17R,18S,19R,20R,21R)-16-(2-아미노에틸)-20-(6-아미노퓨린-9-일)-17,45,46-트리히드록시-45,46-디옥소-39,40,41,42,43,44-헥사옥사-45,46디포스파트리사이클로옥타데칸-21-일]-1H-퓨린-6-온 (CDN-A, 8.6 mg, 11.9 μmol, 28 % 수율, 97% 순도)을 수득한다. (MS: [M+1]+ 702.0).
Figure pct00123
실시예 2. CDN-B의 제조
하기 반응식 B1 및 B2는 본원에 개시된 CDN ("CDN-B")의 합성을 도시한 것이다. 본 CDN 및 사용된 합성 중간체의 합성 및 특징화는 하기 기술된다.
Figure pct00124
단계 1 : [( 2S,3R,4R,5R )-4- 아세톡시 -3-(2- 클로로에틸 )-5-[2-(2- 메틸프로파노일아미노 )-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트의 합성
Figure pct00125
DMF (100 mL) 중의 [(2S,3R,4R,5R)-4-아세톡시-3-(2-히드록시에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (19 g, 36.0 mmol) 용액에 PPh3 (23.6 g, 90.0 mmol, 2.5 eq.) 및 CCl4 (17.3 mL, 180.1 mmol, 5 eq.)를 첨가한다. 25℃에서 16 h 동안 교반한 후, 반응물을 sat. aq. NaHCO3 (150 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (80 mL x 2)로 추출한다. 혼합 층을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1 내지 1:1)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 [(2S,3R,4R,5R)-4-아세톡시-3-(2-클로로에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (13 g, 23.8 mmol, 66% 수율)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 546.2).
단계 2 : [( 2S,3R,4R,5R )-4- 아세톡시 -3-(2- 아세틸술파닐에틸 )-5-[2-(2- 메틸프로파노일아미노 )-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 의 합성
Figure pct00126
DMF (100 mL) 중의 [(2S,3R,4R,5R)-4-아세톡시-3-(2-클로로에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (15 g, 27.5 mmol) 용액에 AcSK (7.84 g, 68.7 mmol, 2.5 eq.)를 첨가한다. 반응 혼합물을 50℃에서 16 h 동안 교반하다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 DCM (200 mL)으로 희석시키고, aq. NaHCO3 (sat., 200 mL)으로 세척한다. 유기 층을 농축시켜 담황색 오일로서 [(2S,3R,4R,5R)-4-아세톡시-3-(2-아세틸술파닐에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (16 g)를 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용한다. (MS: [M+1]+ 586.3).
단계 3 : N-[9-[( 2R,3R,4S,5S )-3-히드록시-5-( 히드록시메틸 )-4-(2- 술파닐에 틸)테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드의 합성
Figure pct00127
0℃에서 EtOH (160 mL) 중의 [(2S,3R,4R,5R)-4-아세톡시-3-(2-아세틸술파닐에틸)-5-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-2-일]메틸 벤조에이트 (16 g, 27.3 mmol) 용액에 NaOH (2 M, 68.3 mL, 5 eq.)를 첨가한다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5 h 동안 교반한다. HOAc에 의해 pH를 7로 조정한다. 혼합물을 진공하에서 농축시켜 대부분의 용매를 제거한다. 갈색 침전물을 수집하고, DCM/TBME (1/100,V/V, 200 mL)로 처리한다. 여과 후, 여액을 농축시켜 갈색 고체로서 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3-히드록시-5-(히드록시메틸)-4-(2-술파닐에틸)테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드 (11 g, 미정제, ~10% 디술피드)를 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용한다. (MS: [M+1]+ 398.1).
단계 4 : N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3-히드록시-5-[[(3-메톡시페닐)-(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-4-[2-[(3-메톡시페닐)-(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드의 합성
Figure pct00128
py. (110 mL) 중의 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3-히드록시-5-(히드록시메틸)-4-(2-술파닐에틸)테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드 (11 g, 27.7 mmol) 용액에 DMTCl (28.1 g, 83.0 mmol, 3 eq.)을 첨가한다. 25℃에서 16 h 후, 반응물을 aq. NaHCO3 (sat., 200 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (200 mL x 2)로 추출한다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 실리카 겔 크로마토그래피 PE:EE(EA:EtOH = 3:1) = 10:1 ~ 2:1에 의해 정제하여 담황색 고체로서 화합물 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3-히드록시-5-[[(3-메톡시페닐)-(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-4-[2-[(3-메톡시페닐)-(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드 (14 g, 47.0% 수율, 93% 순도)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 1002.5).
단계 5 : [(2R,3R,4R,5S)-5-(히드록시메틸)-4-[2-[(3-메톡시페닐)-(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산의 합성
Figure pct00129
25℃에서 py. (120 mL) 중의 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3-히드록시-5-[[(3-메톡시페닐)-(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-4-[2-[(3-메톡시페닐)-(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]테트라히드로푸란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]-2-메틸-프로판아미드 (12 g, 8.4 mmol) 용액에 페녹시포스포노일옥시벤젠 (7.51 mL, 29.3 mmol, 3.5 eq.)을 첨가한다. 1 h 후, Et3N/H2O (100 mL, 1:1)를 첨가한다. 0.5 h 후, 혼합물을 EtOAc (200 mLx2)로 추출한다. 유기 상을 농축시킨 후, 수성 AcOH (80%, 120 mL) 중에 용해시킨다. 혼합물을 25℃에서 1 h 동안 교반한다. 0℃에서 pH ~7까지 포화 aq. Na2CO3 첨가에 의해 반응 혼합물을 중화시킨다. 혼합물을 역상 칼럼 (CH3CN/H2O, 0~60%)에 의해 직접 정제하고, 백색 고체로서 [(2R,3R,4R,5S)-5-(히드록시메틸)-4-[2-[(3-메톡시페닐)-(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산 (4.2 g, 5.5 mmol, 65% 수율)을 수득한다. (MS: [M+1]+ 764.4).
Figure pct00130
단계 1 : [(2R,3R,4R,5S)-5-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(6-벤즈아미도퓨린-9-일)-4-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-2-(히드록시메틸)테트라히드로푸란-3-일]옥시-(2-시아노에톡시)포스포릴]옥시메틸]-4-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산의 합성
Figure pct00131
1H-테트라졸 (MeCN 중 0.45 M , 22.50 mL, 10 eq.) 중의 [(2R,5S)-4-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-5-(히드록시메틸)-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산 (0.75 g, 0.98 mmol) 용액에 N-[9-[(2R,3R,4R,5R)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-4-[2-시아노에톡시-(디이소프로필아미노)포스파닐]옥시-테트라히드로푸란-2-일]퓨린-6-일]벤즈아미드 (1.1 g, 1.1 mmol, 1.1 eq.)를 첨가한다. 1 h 후, TBHP (0.43 ml, 데칸 중 65%, 3 eq.)를 첨가한다. 반응 혼합물을 25℃에서 0.5 h 동안 교반한다. 반응물을 0℃에서 aq. 아황산수소나트륨 용액 (33%, 4 mL)에 의해 켄칭하고, EtOAc (100 mL x 2)로 추출한다. 유기 상을 농축시키고, aq. AcOH (80%, 20 mL) 중에 용해시킨다. 1 h 후, 반응 혼합물을 0℃에서 aq. Na2CO3 (sat.)에 의해 중화시킨다. 혼합물을 역상 칼럼 (CH3CN/H2O, 중성 조건, 0~60%)에 의해 정제하여 백색 고체 [(2R,3R,4R,5S)-5-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(6-벤즈아미도퓨린-9-일)-4-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-2-(히드록시메틸)테트라히드로푸란-3-일]옥시-(2-시아노에톡시)포스포릴]옥시메틸]-4-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산 (0.79 g, 48% 수율, 80% 순도)을 수득한다. (MS: [M+1]+ 1364.0).
단계 2 : N-[9-[(47S,48R,49R,50R,51R,52R,53R,54R)-49-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-52-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-87,88-디히드록시-53-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]-87,88-디옥소-77,78,79,80,81,82-헥사옥사-87,88-디포스파트리사이클로옥타데칸-54-일]퓨린-6-일]벤즈아미드의 합성
Figure pct00132
피리딘 (16 mL) 중의 [(2R,3R,4R,5S)-5-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(6-벤즈아미도퓨린-9-일)-4-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-2-(히드록시메틸)테트라히드로푸란-3-일]옥시-(2-시아노에톡시)포스포릴]옥시메틸]-4-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-2-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]테트라히드로푸란-3-일]옥시포스핀산 (0.79 g, 0.58 mmol) 용액에 2-클로로-5,5-디메틸-1,3,2-디옥사포스피난 2-옥시드 (0.7 g, 3.8 mmol, 6.5 eq.)를 첨가한다. 0.5 h 후, CCl4 (3.2 g, 20.6 mmol, 1.98 mL, 35.5 eq.), H2O (0.16 mL, 8.79 mmol) 및 NMM (0.79 mL)을 첨가한다. 반응 혼합물을 25℃에서 0.5 h 동안 교반한 후, aq. NaHSO3 (sat., 10 mL)에 붓는다. 5 min 후, aq. NaHCO3 (sat., 20 mL)을 천천히 첨가한다. 혼합물을 EtOAc (30 mL x 2)로 추출한다. 유기 상을 농축시키고, CH3CN (8 mL) 및 t-BuNH2 (8 mL) 중에 용해시킨다. 0.5 h 후, 혼합물을 농축시키고, 역상 칼럼 (CH3CN/H2O, 중화 조건, 0~40%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 N-[9-[(47S,48R,49R,50R,51R,52R,53R,54R)-49-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-52-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-87,88-디히드록시-53-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]-87,88-디옥소-77,78,79,80,81,82-헥사옥사-87,88디포스파트리사이클로옥타데칸-54-일]퓨린-6-일]벤즈아미드 (0.5 g, 60% 수율, 90.8% 순도)를 수득한다. (MS: [M+1]+ 1309.8).
단계 3 : 2-아미노-9-[(39S,40R,41R,42R,43R,44R,45R,46R)-46-(6-아미노퓨린-9-일)-41-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-44-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-74,75-디히드록시-74,75-디옥소-64,65,66,67,68,69-헥사옥사-74,75-디포스파트리사이클로옥타데칸-45-일]-1H-퓨린-6-온의 합성
Figure pct00133
N-[9-[(47S,48R,49R,50R,51R,52R,53R,54R)-49-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-52-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-87,88-디히드록시-53-[2-(2-메틸프로파노일아미노)-6-옥소-1H-퓨린-9-일]-87,88-디옥소-77,78,79,80,81,82-헥사옥사-87,88디포스파트리사이클로옥타데칸-54-일]퓨린-6-일]벤즈아미드 (500 mg, 0.38 mmol) 및 메틸아민 알콜 용액 (10 mL, 30%) 혼합물을 25℃에서 4 h 동안 교반한다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시킨다. 잔류물을 역상 칼럼 (CH3CN/H2O, 중화 조건, 0~30%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 2-아미노-9-[(39S,40R,41R,42R,43R,44R,45R,46R)-46-(6-아미노퓨린-9-일)-41-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-44-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-74,75-디히드록시-74,75-디옥소-64,65,66,67,68,69-헥사옥사-74,75디포스파트리사이클로옥타데칸-45-일]-1H-퓨린-6-온 (220 mg, 48% 수율, 95% 순도)을 수득한다.
단계 4: 2-아미노-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-아미노퓨린-9-일)-24-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-51,52-디히드록시-51,52-디옥소-21-(2-술파닐에틸)-43,44,45,46,47,48-헥사옥사-51,52-디포스파트리사이클로옥타데칸-25-일]-1H-퓨린-6-온의 합성
Figure pct00134
DCM (4 mL) 중 2-아미노-9-[(39S,40R,41R,42R,43R,44R,45R,46R)-46-(6-아미노퓨린-9-일)-41-[2-[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메틸]술파닐에틸]-44-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-74,75-디히드록시-74,75-디옥소-64,65,66,67,68,69-헥사옥사-74,75디포스파트리사이클로옥타데칸-45-일]-1H-퓨린-6-온 (190 mg, 0.17 mmol) 용액에 2,2-디클로로아세트산 (0.8 mL, 9.74 mmol, 58 eq.)을 첨가한다. 혼합물을 25℃에서 1 h 동안 교반하고, 0℃에서 물/Et3N (1:1, V/V, 3 mL)에 의해 중화시킨다. 혼합물을 농축시키고, 역상 칼럼 (CH3CN/H2O, 0.05% TEA 함유, 0% 내지 40%)에 의해 정제하여 백색 고체 2-아미노-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-아미노퓨린-9-일)-24-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-51,52-디히드록시-51,52-디옥소-21-(2-술파닐에틸)-43,44,45,46,47,48-헥사옥사-51,52디포스파트리사이클로옥타데칸-25-일]-1H-퓨린-6-온 (36 mg, 25% 수율, 98% 순도, TEA salt)을 수득한다. (MS: [M+1]+ 833.3).
단계 5 : 2 -아미노-9-[(14S,15R,16R,17R,18S,19R,20R,21R)-20-(6- 아미노퓨린 -9-일)-17,44,45-트리히드록시-44,45-디옥소-16-(2-술파닐에틸)-38,39,40,41,42,
43-헥사옥사-44,45-디포스파트리사이클로옥타데칸-21-일]-1H-퓨린-6-온 (CDN-B)의 합성
Figure pct00135
MeOH (4 mL) 중의 2-아미노-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-아미노퓨린-9-일)-24-[3차-부틸(디메틸)실릴]옥시-51,52-디히드록시-51,52-디옥소-21-(2-술파닐에틸)-43,44,45,46,47,48-헥사옥사-51,52디포스파트리사이클로옥타데칸-25-일]-1H-퓨린-6-온 (36 mg, 0.043 mmol) 용액에 NH4F (0.16 g, 4.32 mmol, 100 eq.)를 첨가한다. 혼합물을 70℃에서 1 h에서 교반하고, 농축시키고, 역상 칼럼 (CH3CN/H2O, 0.05% FA 함유, 0% 내지 30%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 2-아미노-9-[(14S,15R,16R,17R,18S,19R,20R,21R)-20-(6-아미노퓨린-9-일)-17,44,45-트리히드록시-44,45-디옥소-16-(2-술파닐에틸)-38,39,40,41,42,43-헥사옥사-44,45디포스파트리사이클로옥타데칸-21-일]-1H-퓨린-6-온 (CDN-B, 7 mg, 22.5% 수율, 99.8% 순도)을 수득한다.
Figure pct00136
실시예 3. 표적-결합 항체의 제조
항-PD-L1 항체
Ab -A1 (mu-항- PDL1 ): 서열 번호: 1의 가변 중쇄 (VH) 및 서열 번호: 2의 가변 경쇄 (VL)를 코딩하는 cDNA를 각각 별개의 pFUSEss-CHIg-mG2a (마우스 IgG2a 중쇄 불변 영역) 및 pFUSE2ss-CLIg-mk (마우스 카파 경쇄 불변 영역) 발현 벡터로 클로닝함으로써 서열 번호: 3의 중쇄 및 서열 번호: 5의 경쇄를 갖는 뮤린 항-인간 PD-L1 항체 Ab-A1 (mu-항-PDL1)을 코딩하는 발현 벡터를 제조하였다. Ab-A1의 VH 및 VL은 아테졸리주맙에 기초한 것이다.
Ab -A2 (mu-항- PDL1 - cys ): Ab-A1과 유사한 기술을 사용하여 서열 번호: 4의 중쇄 및 서열 번호: 5의 경쇄를 갖는 뮤린 항-인간 PD-L1 항체 Ab-A2 (mu-항-PDL1-cys)를 코딩하는 발현 벡터를 제조하였다. Ab-A2의 VH 및 VL 서열은 아테졸리주맙에 기초한 것이다. Ab-A2의 중쇄 불변 영역은 야생형 마우스 IgG2a와 비교하여 2개의 돌연변이를 가지며, 첫 번째 돌연변이는 CH2 도메인 중 234번 위치에서의 류신에서 페닐알라닌으로의 치환 (즉, L234F, Eu 넘버링을 사용하여 인간 IgG1 서열과 함께 정렬된 야생형 마우스 IgG2a에 따라 넘버링)이고, 두 번째 돌연변이는 접합을 위한 추가 시스테인을 제공하는, CH2 도메인 중 239번 위치에서의 세린에서 시스테인으로의 치환 (즉, S239C, 동일 넘버링 사용)이다.
항-인간 PD-L1 항체 Ab-A1 및 Ab-A2의 중쇄 서열은 각각 하기에 서열 번호 3 및 4로 제시되어 있다. 중쇄 가변 영역은 각 서열에서 밑줄체로 표시되어 있고, 이는 둘 모두에 대해 동일하며, 서열 번호: 1에 상응한다. Ab-A2에 대한 서열 번호: 4 중 L234F 및 S239C CH2 도메인 돌연변이는 굵은체로 제시되어 있다.
Ab-A1에 대한 중쇄 (서열 번호: 3)
Figure pct00137
Ab-A2에 대한 중쇄 (서열 번호: 4)
Figure pct00138
항-인간 PD-L1 항체 Ab-A1 및 Ab-A2의 경쇄 서열은 하기 서열 번호: 5에 제시되어 있다. 경쇄 가변 영역은 서열 중 밑줄체로 표시되어 있고, 서열 번호: 2에 상응한다.
Ab-A1 및 Ab-A2에 대한 경쇄 (서열 번호: 5)
Figure pct00139
Ab -A3 (rt-항- PDL1 ): 래트 IgG2b 중쇄 불변 영역을 갖는 래트 항-마우스 PD-L1 항체 Ab-A3은 바이오X셀(BioXcell)로부터 상업적으로 공급받았다.
항- EGFR 항체
Ab -B1 (mu-항- EGFR ): 마우스 IgG2a 중쇄 불변 영역을 갖는 뮤린 항-인간 EGFR 항체 Ab-B1은 바이오X셀로부터 상업적으로 공급받았다 (BE0279).
Ab -B2 (mu-항- EGFR - cys ): 서열 번호: 6의 가변 중쇄 (VH) 및 서열 번호: 7의 가변 경쇄 (VL)를 코딩하는 cDNA를 각각 별개의 pFUSEss-CHIg-mG2a (마우스 IgG2a 중쇄 불변 영역) 및 pFUSE2ss-CLIg-mk (마우스 카파 경쇄 불변 영역) 발현 벡터로 클로닝함으로써 서열 번호: 8의 중쇄 및 서열 번호: 9의 경쇄를 갖는 뮤린 항-인간 EGFR 항체 Ab-B2를 코딩하는 발현 벡터를 제조하였다. Ab-B2의 VH 및 VL 서열은 세툭시맙에 기초한 것이다. Ab-B2의 중쇄의 CH2 도메인은 Ab-A2에 대해 앞서 기술된 바와 같이, 야생형 마우스 IgG2a와 비교하여 돌연변이 L234F 및 S239C를 특징으로 한다.
항-인간 EGFR 항체 Ab-B2의 중쇄 서열은 하기에 서열 번호: 8로서 제시되어 있다. 중쇄 가변 영역은 밑줄체로 표시되어 있고, 서열 번호: 6에 상응한다. CH2 도메인 중 L234F 및 S239C 돌연변이 굵은체로 제시되어 있다.
Ab-B2에 대한 중쇄 (서열 번호: 8)
Figure pct00140
Ab-B2의 경쇄 서열은 하기에 서열 번호: 9로서 제시되어 있다. 가변 영역은 밑줄체로 표시되어 있고, 서열 번호: 7에 상응한다.
Ab-B2에 대한 경쇄 (서열 번호: 9)
Figure pct00141
Ab -B3 ( hu -항- EGFR ): 서열 번호: 10의 가변 중쇄 (VH) + 인간 IgG1 중쇄 불변 영역, 및 서열 번호: 11의 가변 경쇄 (VL) + 인간 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 코딩하는 cDNA를 별개의 pcDNA3.4 발현 벡터로 클로닝함으로써 서열 번호: 12의 중쇄 및 서열 번호: 13의 경쇄를 갖는 뮤린-인간 키메라 항-인간 EGFR 항체 Ab-B3을 코딩하는 발현 벡터를 제조하였다. Ab-B2의 전장의 중쇄 및 경쇄 서열은 세툭시맙에 기초한 것이다.
항-인간 EGFR 항체 Ab-B3의 중쇄 서열은 하기에 서열 번호: 12로서 제시되어 있다. 중쇄 가변 영역은 밑줄체로 표시되어 있고, 서열 번호: 10에 상응한다.
Ab-B3에 대한 중쇄 (서열 번호: 12)
Figure pct00142
Ab-B3의 경쇄 서열은 하기에 서열 번호: 13으로서 제시되어 있다. 가변 영역은 밑줄체로 표시되어 있고, 서열 번호: 11에 상응한다.
Ab-B3에 대한 경쇄 (서열 번호: 13)
Figure pct00143
Ab -B4 ( hu -항- EGFR -A/ C,V /C): 서열 번호: 14의 가변 중쇄 (VH) + 인간 IgG1 중쇄 불변 영역, 및 서열 번호: 15의 가변 경쇄 (VL) + 변형된 인간 Ig 카파 경쇄 불변 영역을 코딩하는 cDNA를 별개의 pcDNA3.4 발현 벡터로 클로닝함으로써 서열 번호: 16의 중쇄 및 서열 번호: 17의 경쇄를 갖는 인간 항-인간 EGFR 항체 Ab-B4를 코딩하는 발현 벡터를 제조하였다. Ab-B4의 VH 및 VL은 세툭시맙에 기초한 것이며, 여기서, VH는 CH1 도메인에 인접한 109번 위치에 알라닌에서 시스테인으로의 돌연변이 (즉, A109C)를 갖는다. Ab-B4의 경쇄는 205번 위치에 발린에서 시스테인으로의 돌연변이 (즉, V205C)를 갖는다.
항-인간 EGFR 항체 Ab-B4의 중쇄 서열은 하기에 서열 번호: 16으로서 제시되어 있다. 중쇄 가변 영역은 밑줄체로 표시되어 있고, 서열 번호: 14에 상응한다. A109C 돌연변이는 굵은체로 제시되어 있다.
Ab-B4에 대한 중쇄 (서열 번호: 16)
Figure pct00144
Ab-B3의 경쇄 서열은 하기에 서열 번호: 17로서 제시되어 있다. 가변 영역은 밑줄체로 표시되어 있고, 서열 번호: 15에 상응한다. V205C 돌연변이는 굵은체로 제시되어 있다.
Ab-B4에 대한 경쇄 (서열 번호: 17)
Figure pct00145
항- HER2 항체
Ab -C1 (항- HER2 ): 인간화 항-인간 HER2 항체 Ab-C1은 트라스투주맙 (허셉틴(Herceptin®))으로서 상업적으로 공급받았다.
항-인간 HER2 항체 Ab-C1의 중쇄 서열은 하기에 서열 번호: 20으로서 제시되어 있다. 중쇄 가변 영역은 밑줄체로 표시되어 있고, 서열 번호: 18에 상응한다.
Ab-C1에 대한 중쇄 (서열 번호: 20)
Figure pct00146
Ab-C1의 경쇄 서열은 하기에 서열 번호: 21로서 제시되어 있다. 가변 영역은 밑줄체로 표시되어 있고, 서열 번호: 19에 상응한다.
Ab-C1에 대한 경쇄 (서열 번호: 21)
Figure pct00147
항-CD47 항체
Ab -D1 (rt-항-CD47): 래트 IgG2b 중쇄 불변 영역을 갖는 래트 항-마우스 CD47 항체 Ab-D1은 바이오X셀로부터 상업적으로 공급받았다 (BE0270).
발현 및 정제
표적-결합 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 플라스미드를 제조사의 프로토콜에 따라 엑스피펙타민™ CHO 형질감염 키트(ExpiFectamine™ CHO Transfection Kit) (써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific), 카탈로그 번호: A29129)를 사용하여 항체 발현을 위해 CHO 세포에 형질감염시켰다. 형질감염에 사용된 플라스미드의 총량은 0.5 ug/ml CHO 세포였으며, 중쇄 및 경쇄 플라스미드 사이의 비는 2:3이다. 형질감염 6일 후, CHO 세포를 스핀 다운시키고, 배지를 여과한 후, 이어서, 단백질 A 비드 (하이트랩 프로테인 A HP(HiTrap Protein A HP), GE, 카탈로그 번호: 17-0403-01)에 로딩하고, 0.1 M 글리신 (pH 3.0)으로 용출시켰다. 용출된 항체 분획을 풀링하고, 1 ml로 농축시키고, 크기 배제 (ENrich Sec650, 바이오-래드(Bio-Rad), 카탈로그 번호: 780-1650)에 의해 PBS로 완충제 교환한 후, -80℃에서 보관하였다.
실시예 4. CDN-A ADC의 제조
CDN-A-링커의 합성
Figure pct00148
CDN-A (27 mg, 0.0385 mmol)를 Py. (3 x 3 ml)로 공동 증발시키고, 고진공하에 건조시킨 후, 사용한다. 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (54 mg, 0.0732 mmol, 2.0 eq.), HOBt (5.2 mg, 0.0385 mmol, 1.0 eq.) 및 DMF (2.5 ml)를 첨가한다. 교반하면서, DIPEA (67 ㎕, 0.385 mmol, 10 eq.)를 첨가한다. 혼합물을 N2 하에 실온에서 42시간 동안 교반한다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (25 ml), t-부틸 메틸 에테르 (75 ml) 및 아세트산 (30 ㎕, 0.521 mmol)의 용매 혼합물로 희석시킨다. 고체를 원심분리에 의해 수집하고, t-부틸 메틸 에테르 (3 x 75 ml)로 세척하여 44 mg의 미정제 물질을 수득한다. 20 mg의 미정제 물질을 역상 칼럼 (CH3CN/H2O, 0.1% FA, 0% 내지 30%)에 의해 추가로 정제하여 원하는 생성물 (7 mg, 31% 수율, 97% 순수)을 수득한다. (MS: [M-1]- 1298.2).
항체의 CDN-A에 대한 접합
항체 디술피드의 환원: 표적-결합 항체를 먼저 트리스-(2-카르복시에틸)-포스핀 히드로클로라이드 (TCEP) (2.3 몰 당량의 TCEP로 실온에서 1.5시간 동안, 또는 40 몰 당량의 TCEP로 37℃에서 2시간 동안 환원시켰다. 탈염 칼럼 (하이트랩탈염(HiTrap Desalting) 칼럼, GE, 카탈로그 번호: 29048684)을 사용하여 과량의 TCEP를 제거하였다.
힌지 시스테인의 재산화: 환원된 항체의 힌지 시스테인을 37℃에서 4시간 동안 200 몰 당량의 데히드로아스코르브산 (DHA, DMSO 중 0.5 M)으로 재산화시켰다. 비환원 조건하에서 SDS-PAGE를 사용하여 재산화를 확인하였다. 30 Kd MWCO 컷오프 원심분리 필터 (아미콘 울트라-15(Amicon Ultra-15), 머크 밀리포어(Merck Millipore), 카탈로그 번호: UFC903024)를 통해 과량의 DHA를 제거하였다.
CDN-A에 대한 접합: (환원된 항체인 경우, 타입 I) 환원된 항체 반응 혼합물을 4℃에서 20 min 동안 냉각시켰다. 히스틴 완충제 (20 mM, pH 7.4) 중 CDN-A-링커 (항체 대비 4.8 몰 당량)를 첨가하고, 4℃에서 80 min 동안 인큐베이션시켰다. (재산화된 항체인 경우, 타입 II) 재산화된 항체를 10 몰 당량의 CDN-A-링커와 함께 혼합하고, 실온에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 접합 후, 반응물을 N-아세틸 시스테인으로 켄칭하였고, 과량의 CDN-A-링커 및 N-아세틸 시스테인을 PBS 중 FPLC 시스템의 제어하에 5 ml 탈염 칼럼 (GE)을 이용하여 제거하였다. 제조된 ADC를 농축시키고, 4℃에서 보관하였다.
DAR 측정
CDN으로서 CDN-A를 보유하는 ADC의 DAR을 측정하기 위해, OD260/OD280 비를 UV 분광계 상에서 측정하고, 비가 공지된 CDN-A 및 항체 혼합물을 사용하여 작성된 표준 곡선과 비교하였다. 하기 표에 제시되는 바와 같이, 예시적인 ADC의 DAR 값은 1 내지 6.3 범위였다. 치환에 의해 추가의 시스테인을 갖는 Ab-A2 항체 (mu-항-PDL1-cys)를 이용한 ADC의 DAR 값은 야생형 Ab-A1 항체 (mu-항-PDL1)를 이요하였을 때보다 더 큰 DAR 값을 보였다.
Figure pct00149
실시예 5. CDN-B ADC의 제조
2,5- 디옥소피롤리딘 -1-일 4-(피리딘-2- 일디술판일 ) 펜타노에이트 (링커 I)의 합성
Figure pct00150
DMA 중의 4-(피리딘-2-일디술판일) 펜타노산 (24 mg, 0.1 mmol) 및 NHS (14 mg, 0.12 mmol) 용액에 EDC (HCl 염, 61 mg, 0.32 mmol)를 첨가한다. 용액을 실온에서 밤새도록 교반한다. 여과 후, 여액을 농축시키고, 칼럼 (MeOH/DCM = 0% 내지 10%)에 의해 정제하여 백색 고체로서 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 4-(피리딘-2-일디술판일)펜타노에이트를 수득한다 (8 mg, 23.5%). (MS: [M+1]+ 341.1).
CDN-B에 대한 합체의 접합
포스페이트 완충제 (pH 6.0) 중의 3 mM 2-아미노-9-[(14S,15R,16R,17R,18S,19R,20R,21R)-20-(6-아미노퓨린-9-일)-17,44,45-트리히드록시-44,45-디옥소-16-(2-술파닐에틸)-38,39,40,41,42,43-헥사옥사-44,45디포스파트리사이클로옥타데칸-21-일]-1H-퓨린-6-온 용액 0.2 ml를 DMA 중의 2 mM 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 4-(피리딘-2-일디술판일)펜타노에이트 0.2 ml와 혼합하였다. 실온에서 밤새도록 인큐베이션시킨 후, 2 ml PBS 중 3.6 mg의 표적-결합 항체를 첨가하고, 실온에서 추가로 2시간 동안 인큐베이션시켰다. 혼합물을 농축시키고, PBS로 평형화된 FPLC 시스템에서 제어되는 5 ml 탈염 칼럼 상에서 접합체를 정제하였다. 제조된 ADC를 농축시키고, 4℃에서 보관하였다.
DAR 측정
ADC로부터 CDN-B를 유리시키기 위해, DTT를 최종 농도 10 mM까지 ADC에 첨가하고, 95℃에서 5 min 동안 인큐베이션시키고, 30 KD 컷오프 필터를 통과시켰다. 여액을 희석시키고, 0.5 nM의 퍼프린골리신 (PFO)으로 투과화된 THP1-루시아 ISG 세포에 첨가하였다. 16시간 후, ADC로부터 유리된 활성 화합물의 농도인 루시페라제 활성을 측정하고, DAR 값은 표적 곡선과 비교함으로써 계산하였다. 하기 표에 제시된 바와 같이, 예시적인 ADC의 DAR 값은 0.33 내지 1.66 범위였다.
Figure pct00151
실시예 6. CDN -A 및 CDN-B ADC의 세포 활성
IFN 자극 활성
2개의 리포터 세포주, 마우스 대식세포 RAW-루시아 ISG 및 인간 단핵구 THP1-루시아 ISG를 사용하여 ADC의 활성을 평가하였다. 두 세포주 모두 ISG54 최소 프로모터에 융합된 IFN 자극 반응 요소 (ISRE)를 보유한다. 상이한 농도 (0.3, 1.0, 및/또는 3 μM)의 ADC를 리포터 세포에 첨가하고, 16 h 동안 인큐베이션시켰다. 인터페론 발현의 유도를 나타내는 루시페라제 활성을 표준 화합물 (cGAMP)의 연속 희석액과 비교하였다.
ADC-I 내지 ADC-XI은 하기 표 3에 요약된 바와 같이 다양한 효력의 효과적인 인터페론 자극 활성을 입증하였다. 보고된 "cGAMP 등가량" 값은 1 μM의 ADC에 의해 유도되는 반응을 동일한 수준으로 유도하는 데 필요한 cGAMP (μM)의 농도로 정의된다.
Figure pct00152
ADC 모두 마우스 RAW-루시아 ISG 리포터 검정법에서 강력한 효력의 인터페론 자극 활성을 입증하였다 (표 3). ADC-I 및 ADC-VI은 가장 높은 효력을 보였고 (각각 도 1b 및 6b), 이어서, ADC-VIII, ADC-IX (각각 도 8b 및 9b), 이어서, ADC-IV, ADC-V, 및 ADC-X (각각 도 4b, 5b, 및 10), 및 이어서, ADC-III (도 3b), ADC-II (도 IIb), 및 ADC-XI 순으로 효력을 나타내었다. 도 3b, 4b, 5b, 및 6b에 제시된 바와 같이, 개시된 ADC로 처리한 결과, 항체 단독으로, 또는 CDN 단독으로 처리한 경우와 비교하였을 때, 또는 항체 효력 및 작용제 효력, 둘 모두의 조합된 값과 비교하였을 때, 인터페론 자극 활성의 시너지 작용이 있는 것으로 입증되었다.
CDN-A 항체 접합체는 또한 인간 단핵구 THP1-루시아 ISG 세포를 이용한 리포터 검정법에서 인터페론 자극 활성을 입증하였다 (표 3). 시험된 것 중 ADC-I이 가장 높은 효력을 보였고 (도 1c), 이어서, ADC-II (도 1c), 및 ADC-III 순으로 효력을 나타내었다.
인간 EGFR을 안정적으로 발현하는 THP1-루시아 ISG 세포주에서 ADC-VIII 및 ADC-IX의 활성을 추가로 시험하였다. ADC 둘 모두 상기 세포에서 강력한 인터페론 자극 활성을 나타내었다 (표 4). 보고된 "cGAMP 등가량" 값은 1 μM의 ADC에 의해 유도되는 반응을 동일한 수준으로 유도하는 데 필요한 cGAMP (nM)의 농도로 정의된다. EC50은 반수 최대 유효 농도이다.
Figure pct00153
실시예 7. CDN-A 및 CDN-B ADC의 항종양 효능
선택된 ADC의 항종양 효능을 마우스 동계 종양 모델 B16-F10 전이성 흑색종, 인간 EGFR-형질감염된 B16F10 (B16F10-EGFR), 및 인간 HER2-형질감염된 루이스 폐 암종 (LLC1-HER2)에서 시험하였다. 간략하면, 100 ㎕의 PBS 중 106개의 대수기 종양 세포를 C57BL6 마우스 오른쪽 옆구리에 피하 주사하였다. 4 내지 6일 후, 종양 부피가 50 내지 100 ㎣일 때, 마우스를 종양 크기에 따라 재그룹화하고, 50 내지 200 ㎍의 ADC로 또는 비접합 항체, 비접합 CDN 또는 대조군으로서 모의 PBS로 복강 내로 처리하였다 (처리 세부사항에 대하여 도면 범례 참조).
종양 부피 및 마우스 생존을 모니터링하였다. ADC-IV, ADC-VI, ADC-VII, ADC-VIII 및 ADC-IX는 퇴행과 생존, 둘 모두에서 강력한 항종양 효능을 입증하였고, 인간 종양을 치료할 수 있는 잠재적 후보물질이 된다. ADC-X은 종양 진행을 저속화시키는 것으로 나타났다. ADC-I 또한 저속화시키는 것으로 나타났지만, 독성이 관찰되었다.
종양 부피
B16F10 종양을 보유하는 마우스에서, ADC-I (항-PDL1-CDN-B) 처리는 모의, 항-PDL1 항체 단독, CDN-B 단독, 및 항-PDL1 항체 및 비접합 CDN-B의 조합과 비교하였을 때, 종양 진행을 저속화시켰다 (도 1c).
B16F10-EGFR 종양을 보유하는 마우스에서, ADC-IV (항-EGFR-CDN-A) 처리는 모의 처리, 또는 항-PDL1 항체 처리와 비교하였을 때, 종양 진행을 저속화시키고, 종양 부피를 감소시켰다 (도 4c 및 4c). 항-EGFR 항체 + 비접합 CDN을 이용한 비교 처리는 종양 성장을 정지시키지 못했고 (도 4c), 이는 표적화된 CDN 전달을 위해 ADC를 사용한 경우에 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다. ADC-IV를 항-PDL1 항체와 조합하였을 때, 종양 확장이 완전히 억제된 것이 관찰되었으며 (도 4e), 이는 CDN ADC를 체크포인트 억제제와 조합하였을 때, 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다.
B16F10-EGFR 종양을 보유하는 마우스에서, 200 ㎍의 용량으로 복강내로 (도 6c), 또는 10 ㎍ 또는 50 ㎍의 용량으로 종양내로 (도 6d) 투여된 ADC-VI (항-PDL1-CDN-A)은 종양 확장을 막았다. ADC-VI 처리 후 2주 이내에, B16F10-EGFR 종양은 완전한 관해를 보인 반면, 항-PDL1 항체 단독 또는 모의 처리는 종양 확장을 정지시키지 못했다.
B16F10-EGFR 종양을 보유하는 마우스에서, ADC-VII (항-EGFR-CDN-A)은 모의 처리 또는 항-PDL1 항체 처리와 비교하여 종양 확장을 현저히 감소시켰다 (도 7c 및 7e). 항-EGFR 항체 + 비접합 CDN을 이용한 비교 처리는 종양 성장을 정지시키지 못했고 (도 7c), 이는 표적화된 CDN 전달을 위해 ADC를 사용한 경우에 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다. ADC-VII이 항-PDL1 항체와 조합되었을 때, 종양 억제 증강이 관찰된 반면, 항-PDL1 항체 단독 또는 모의 처리는 종양 확장을 정지시키지 못했고 (도 7e), 이는 CDN ADC를 체크포인트 억제제와 조합하였을 때, 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다.
B16F10-EGFR 종양을 보유하는 마우스에서, ADC-VIII (항-EGFR-CDN-A)은 종양 확장을 현저히 감소시켰다 (도 8c). 상기 효과는 ADC-VIII을 항-PDL1 항체와 조합하였을 때, 증강된 반면, 항-PDL1 항체 단독 또는 모의 처리는 종양 확장을 정지시키지 못했고, 이는 CDN ADC를 체크포인트 억제제와 조합하였을 때, 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다.
B16F10-EGFR 종양을 보유하는 마우스에서, ADC-IX (항-EGFR-CDN-A)는 종양 확장을 현저히 감소시켰고, ADC-IX를 항-PD-L1 항체와 조합하였을 때, 유사한 효과가 관찰되었다 (도 9c). 항-PDL1 항체 단독 또는 모의 처리는 종양 확장을 정지시키지 못했다.
LLC1-HER2 종양을 보유하는 마우스에서, ADC-X (항-HER2-CDN-A)는 별개의 두 마우스 연구에서 종양 확장을 감소시킨 반면 (도 10c 및 10e), 항-PDL1 항체 단독 또는 모의 처리는 종양 확장을 정지시키지 못했다. 항-HER2 항체 + 비접합 CDN을 이용한 비교 처리는 종양 성장을 정지시키지 못했고, 이는 표적화된 CDN 전달을 위해 ADC를 사용한 경우에 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다. 도 10e는 30 ㎍ 용량의 ADC-X를 종양내로 투여하였을 ‹š, 종양이 완전히 관해되었다는 것을 추가로 보여주는 것이다.
생존
B16F10-EGFR 또는 LLC1-HER2 종양을 보유하는 마우스의 생존을 모니터링하였다. 항-PDL1 항체 단독 처리 (26일째 0/5, 도 4d; 29일째 0/5, 도 4f), 및 모의 처리 (23일째 0/5, 도 4d; 20일째 0/5, 도 4f)와 비교하였을 때, ADC-IV (항-EGFR-CDN-A) 처리는 B16F10-EGFR 종양 보유 마우스의 생존 시간을 연장시켰다 (37일째, 3/5, 도 4d; 39일째 0/5, 도 4f). ADC-IV 처리 후 생존은 항-EGFR 항체 + 비접합 CDN을 이용한 비교 처리의 것 (34일째 0/5, 도 4d)을 초과하였고, 이는 표적화된 CDN 전달을 위해 ADC를 사용한 경우에 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다. 항-PDL1 항체와 ADC-IV의 조합 처리는 마우스 중 80%에서 생존을 개선시켰고 (42일째 4/5), 이는 CDN ADC를 체크포인트 억제제와 조합하였을 때, 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다.
복강내로 투여된 ADC-VI (항-PDL1-CDN-A) 처리는 항-PDL1 항체 단독 처리 (29일째 0/5), 또는 모의 처리 (27일째 0/5)와 비교하였을 때, B16F10-EGFR 종양 보유 마우스를 완전히 생존시켰다 (43일째 5/5) (도 6d). 유사하게, 종양내로 투여된 ADC-VI 처리는 종양 보유 마우스를 완전히 생존시켰다 (도 6f).
항-PDL1 항체 단독 처리 (27일째 0/5, 도 7f), 또는 모의 처리 (23일째 0/5, 도 7d 및 7f)와 비교하였을 때, ADC-VII (항-EGFR-CDN-A) 처리는 종점에서 B16F10-EGFR 종양 보유 마우스의 생존을 증가시켰다 (36일째, 2/5, 도 7d 및 7f). ADC-VII 처리 후 생존은 항-EGFR 항체 + 비접합 CDN을 이용한 비교 처리의 것 (22일째 0/5, 도 7d)을 초과하였고, 이는 표적화된 CDN 전달을 위해 ADC를 사용한 경우에 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다. ADC-VII과 비교하였을 때, 항-PDL1 항체와 ADC-VII의 조합 처리는 마우스 중 60%에서 생존을 개선시켰고 (36일째 3/5, 도 7f), 이는 CDN ADC를 체크포인트 억제제와 조합하였을 때, 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다.
ADC-VIII (항-EGFR-CDN-A) 처리는 항-PDL1 항체 단독 처리 (27일째 0/5), 또는 모의 처리 (25일째 0/5)와 비교하였을 때, B16F10-EGFR 종양 보유 마우스의 생존을 증가시켰다 (35일째 1/5) (도 8d). ADC-VIII 및 항-PD-L1 항체의 조합 처리는 마우스 중 80%에서 생존을 개선시켰고 (35일째 4/5), 이는 CDN ADC를 체크포인트 억제제와 조합하였을 때, 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다.
ADC-IX (항-EGFR-CDN-A) 처리는 항-PDL1 항체 단독 처리 (23일째 0/5), 또는 모의 처리 (19일째 0/5)와 비교하였을 때, B16F10-EGFR 종양 보유 마우스의 생존을 증가시켰다 (30일째 3/5) (도 9d). ADC-IX 및 항-PD-L1 항체의 조합 처리는 마우스 중 60%에서 생존을 개선시켰고 (30일째 3/5), 이는 CDN ADC를 체크포인트 억제제와 조합하였을 때, 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다.
ADC-X (항-HER2-CDN-A) 처리는 모의 처리 (32일째 0/5)와 비교하였을 때, LLC1-HER2 종양 보유 마우스의 생존 시간을 연장시켰다 (41일째 0/5) (도 10d). ADC-X 처리 후 생존 시간은 항-HER2 항체 + 비접합 CDN을 이용한 비교 처리의 것 (32일째 0/5)을 초과하였고, 이는 표적화된 CDN 전달을 위해 ADC를 사용한 경우에 효능이 개선되었다는 것을 시사하는 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> ImmuneSensor Therapeutics, Inc. The Board of Regents of the University of Texas System <120> ANTIBODY-STING AGONIST CONJUGATES AND THEIR USE IN IMMUNOTHERAPY <130> 400160-005WO <150> US 63/019,212 <151> 2020-05-01 <150> US 62/876,590 <151> 2019-07-19 <160> 21 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic polypeptide <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 2 Asp Ile 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Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val 340 345 350 Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr 355 360 365 Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr 370 375 380 Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys 405 410 415 Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu 420 425 430 Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 9 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 9 Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala 100 105 110 Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly 115 120 125 Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile 130 135 140 Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu 145 150 155 160 Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr 180 185 190 Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 10 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 10 Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr 50 55 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165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 14 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 14 Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Cys 115 <210> 15 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 15 Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 16 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 16 Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Cys Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 17 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 17 Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 18 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 19 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 19 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 20 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 20 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 21 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (111)

  1. 하기 화학식 Ia의 구조를 갖는 항체-약물 접합체 (antibody-drug conjugate; ADC):
    (화학식 Ia) Ab-[-L-D] n
    상기 식에서,
    "D"는 하기 화학식 IIk의 구조를 갖는 사이클릭 디-뉴클레오티드 (cyclic di-nucleotide; CDN), 또는 이의 제약상 허용되는 염을 나타내고:
    Figure pct00154

    상기 식에서,
    W, X, Y, 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
    R1은 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기(group)로 치환된 C2- 4알킬이고;
    Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실, 티올, C1- 6알킬, 보라노 (-BH3 -), 또는 -NR'R"이고, 여기서, R' 및 R"은 각각의 경우에 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1-6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 - 6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1- 6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3- 5헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
    "Ab"는 표적 항원에 결합하는 항체 또는 이의 결합 단편을 나타내고;
    "L"은 각각의 경우에 독립적으로 1회 이상 존재하는 D를 Ab에 연결하는 링커(linker)를 나타내고;
    "n"은 링커 (L)를 통해 Ab에 연결된 D의 존재 횟수를 나타내고,
    여기서, CDN (D)은 CDN의 R1 위치의 티올, 아미노, 또는 C1-알킬아미노 기에서 링커 (L)에 공유적으로 결합된다.
  2. 제1항에 있어서, R1이 아미노 기로 치환된 C2- 4알킬인 ADC.
  3. 제1항에 있어서, R1이 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 C2- 4알킬인 ADC.
  4. 제1항에 있어서, R1이 메틸아미노 기로 치환된 C2- 4알킬인 ADC.
  5. 제1항에 있어서, R1이 티올 기로 치환된 C2- 4알킬인 ADC.
  6. 제1항에 있어서, D가 하기 화학식 IIm의 구조를 갖는 CDN 또는 이의 제약상 허용되는 염인 ADC:
    Figure pct00155

    상기 식에서,
    R1은 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 에틸이고;
    RP는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올이다.
  7. 제6항에 있어서, ADC가 하기 화학식 IIn의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도되는 ADC:
    Figure pct00156
    .
  8. 제6항에 있어서, ADC가 하기 화학식 IIo의 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도되는 ADC:
    Figure pct00157
    .
  9. 제1항에 있어서, ADC가 하기 화학식 III의 구조를 갖는 ADC:
    Figure pct00158
    .
  10. 제1항에 있어서, ADC가 하기 화학식 IIIa의 구조를 갖는 ADC:
    Figure pct00159
    .
  11. 제1항에 있어서, ADC가 하기 화학식 IV의 구조를 갖는 ADC:
    Figure pct00160
    .
  12. 제1항에 있어서, ADC가 하기 화학식 IVa의 구조를 갖는 ADC:
    Figure pct00161
    .
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, X 및 Z가 N인 ADC.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, X 및 Z가 CH인 ADC.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, X가 N이고, Z가 CH인 ADC.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, RP가 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올인 ADC.
  17. 제16항에 있어서, 존재하는 2개의 RP 모두가 히드록실인 ADC.
  18. 제16항에 있어서, 존재하는 2개의 RP 모두가 티올인 ADC.
  19. 제16항에 있어서, 존재하는 하나의 RP가 히드록실이고, 나머지 다른 하나가 티올인 ADC.
  20. 제1항에 있어서, ADC가 하기 구조를 갖는 CDN, 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도되는 ADC:
    Figure pct00162
    .
  21. 제1항에 있어서, ADC가 하기 구조를 갖는 CDN, 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도되는 ADC:
    Figure pct00163
    .
  22. 제1항에 있어서, ADC가 하기 구조를 갖는 CDN, 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도되는 ADC:
    Figure pct00164
    .
  23. 제1항에 있어서, ADC가 하기 구조를 갖는 CDN, 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도되는 ADC:
    Figure pct00165
    .
  24. 제1항에 있어서, ADC가 하기 구조를 갖는 CDN, 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도되는 ADC:
    Figure pct00166
    .
  25. 제1항에 있어서, ADC가 하기 구조를 갖는 CDN, 또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 유도되는 ADC:
    Figure pct00167
    .
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, L이 하나 이상의 절단가능한 링커(cleavable linker)를 포함하는 ADC.
  27. 제26항에 있어서, 절단가능한 링커가 산 절단가능한 링커인 ADC.
  28. 제26항에 있어서, 절단가능한 링커가 히드라존 또는 히드라진 함유 링커인 ADC.
  29. 제26항에 있어서, 절단가능한 링커가 환원가능한 링커인 ADC.
  30. 제29항에 있어서, 환원가능한 링커가 디술피드(disulfide) 링커인 ADC.
  31. 제26항에 있어서, 절단가능한 링커가 효소 절단가능한 링커인 ADC.
  32. 제31항에 있어서, 효소 절단가능한 링커가 폴리펩티드, 테트라펩티드, 디펩티드, 및 β-글루쿠로니드 링커로부터 선택되는 ADC.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 효소 절단가능한 링커가 리소좀 효소에 의해 절단가능한 ADC.
  34. 제33항에 있어서, 리소좀 효소가 카텝신인 ADC.
  35. 제34항에 있어서, 링커가 하기 구조식 VIIIa, VIIIb, VIIIc, 또는 VIIId 중 하나 이상의 것에 따른 세그먼트(segment), 또는 이의 염을 포함하는 ADC:
    Figure pct00168

    상기 식에서,
    "펩티드"는 카텝신 B에 의해 절단가능한 펩티드를 나타내고;
    T는 하나 이상의 에틸렌 글리콜 단위 또는 알킬렌 쇄를 포함하는 중합체, 또는 이의 조합을 나타내고;
    Ra는 수소, C1- 6알킬, 술포네이트, 및 메틸 술포네이트로부터 선택되고;
    p는 0 내지 5 범위의 정수이고;
    x는 0 또는 1이고;
    y는 0 또는 1이고;
    z 는 0 또는 1이고;
    Figure pct00169
    는 링커의 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
    *는 링커의 나머지 부분에 대한 부착 지점을 나타낸다.
  36. 제32항에 있어서, 효소 절단가능한 링커가 Ala-Ala, Ala-(D)Asp, Ala-Cit, Ala-Lys, Ala-Val, Asn-Cit, Asp-Cit, Asn-Lys, Asn-(D)Lys, Asp-Val, Cit-Ala, Cit-Asn, Cit-Asp, Cit-Cit, Cit-Lys, Cit-Ser, Cit-Val, Glu-Val, 페닐Gly-(D)Lys, His-Val, Ile-Cit, Ile-Pro, Ile-Val, Leu-Cit, Lys-Cit, Me3Lys-Pro, Met-Lys, Met-(D)Lys, Phe-Arg, Phe-Cit, Phe-Lys, Pro-(D)Lys, Ser-Cit, Trp-Cit, Val-Ala, Val-(D)Asp, NorVal-(D)Asp, Val-Cit, Val-Glu, 및 Val-Lys로부터 선택되는 디펩티드인 ADC.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, L이 하나 이상의 자기 희생 스페이서(self-immolative spacer)를 포함하는 ADC.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, L이 말레이미드 기, 활성화된 디술피드, 활성 에스테르, 할로포르메이트, 산 할라이드, 알킬 할라이드, 또는 벤질 할라이드를 통해 Ab에 커플링(coupling)되는 ADC.
  39. 제38항에 있어서, L이 DSDM, SPDB, 및 술포-SPDB로부터 선택되는 활성화된 디술피드를 통해 Ab에 커플링되는 ADC.
  40. 제38항에 있어서, L이 NHS 에스테르 및 HOBt 에스테르로부터 선택되는 활성 에스테르를 통해 Ab에 커플링되는 ADC.
  41. 제40항에 있어서, L이 말레이미도카프로일 (mc) 또는 N-숙신이미딜-4-(2-피리텔디티오)부타노에이트 (SPDB) 기를 통해 Ab에 커플링되는 ADC.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, L과, Ab 상에 티올 기 또는 1급 아미노 기를 갖는 Ab 사이에 형성된 공유 결합을 갖는 ADC.
  43. 제42항에 있어서, 공유 결합이 티오에테르인 ADC.
  44. 제1항에 있어서, ADC가 하기 구조를 갖는 ADC:
    Figure pct00170
    .
  45. 제1항에 있어서, ADC가 하기 구조를 갖는 ADC:
    Figure pct00171
    .
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, n이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8인 ADC.
  47. 제46항에 있어서, n이 2인 ADC.
  48. 제46항에 있어서, n이 4인 ADC.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 PD-L1에 결합하는 항체인 ADC.
  50. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 성장 인자 수용체 (GFR)인 항원에 결합하는 항체인 ADC.
  51. 제50항에 있어서, GFR이 EGFR인 ADC.
  52. 제50항에 있어서, GFR이 ErbB인 ADC.
  53. 제50항에 있어서, GFR이 ErbB2인 ADC.
  54. 제50항에 있어서, GFR이 HER 패밀리 수용체(family receptor)인 ADC.
  55. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 CD47에 결합하는 항체인 ADC.
  56. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 암 세포에서 우선적으로 발현되거나, 또는 과발현(overexpressing)되는 항원에 결합하는 항체인 ADC.
  57. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, Ab가 인간 세포를 감염시키는 미생물로부터 유래된 항원에 결합하는 항체인 ADC.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항의 ADC를 포함하는 제약 조성물.
  59. 면역 반응의 자극을 필요로 하는 인간 환자에게 유효량의 제58항의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 면역 반응의 자극을 필요로 하는 인간 환자에서 면역 반응을 자극시키는 방법.
  60. 암의 치료를 필요로 하는 인간 환자에게 유효량의 제58항의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 암을 치료하는 방법.
  61. 제59항 또는 제60항에 있어서, 제약 조성물이 정맥내로 투여되는 방법.
  62. 제59항 또는 제60항에 있어서, 제약 조성물이 피하로 투여되는 방법.
  63. 제59항 또는 제60항에 있어서, 제약 조성물이 종양내로 투여되는 방법.
  64. 제59항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 PD-1 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  65. 제59항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 PD-L1 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  66. 제59항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 CTLA-4 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  67. 제59항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 추가의 항암제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  68. 제59항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 방사선을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  69. 제59항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 제2 CDN을 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 여기서, 제2 CDN은 항체에 접합되지 않은 방법.
  70. 하기 화학식 IIk의 화합물, 또는 이의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00172

    상기 식에서
    W, X, Y, 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
    R1은 아미노 또는 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 에틸이고;
    Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실, 티올, C1- 6알킬, 보라노 (-BH3 -), 또는 -NR'R"이고, 여기서, R' 및 R"은 각각의 경우에 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1-6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 - 6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1- 6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3- 5헤테로사이클릭 고리를 형성한다.
  71. 제70항에 있어서, RP가 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올인 화합물.
  72. 제70항 또는 제71항에 있어서, Y 및 W가 둘 모두 CH인 화합물.
  73. 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, X 및 Z가 둘 모두 N인 화합물.
  74. 제70항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 아미노 기로 치환된 에틸인 화합물.
  75. 제70항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 에틸인 화합물.
  76. 제75항에 있어서, R1이 메틸아미노 기로 치환된 에틸인 화합물.
  77. 제70항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 존재하는 RP 중 적어도 하나가 히드록실인 화합물.
  78. 제77항에 있어서, 존재하는 2개의 RP 모두가 히드록실인 화합물.
  79. 제77항에 있어서, 존재하는 하나의 RP가 히드록실이고, 나머지 다른 하나가 티올인 화합물.
  80. 제70항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 존재하는 RP 중 적어도 하나가 티올인 화합물.
  81. 제80항에 있어서, 존재하는 2개의 RP 모두가 티올인 화합물.
  82. 제70항에 있어서, 화합물이
    Figure pct00173

    Figure pct00174
    또는 이의 제약상 허용되는 염으로부터 선택되는 화합물.
  83. 제82항에 있어서, 화합물이
    Figure pct00175
    또는 이의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  84. 사이클릭 디뉴클레오티드 (CDN) 및 염기를 포함하는 조성물로서, 여기서, CDN은 제70항 내지 제83항 중 어느 한 항의 화합물인 조성물.
  85. 제84항에 있어서, 조성물이 CDN 및 염기로 구성되는 조성물.
  86. 제84항 또는 제85항에 있어서, 염기가 아민 염기인 조성물.
  87. 제86항에 있어서, 아민 염기가 피리딘, 피페리딘, 피롤리딘, 모르폴린, 루티딘, 트리에틸아민 (TEA), 및 디이소프로필에틸아민 (DIPEA)으로부터 선택되는 조성물.
  88. 제87항에 있어서, 아민 염기가 피리딘인 조성물.
  89. 사이클릭 디뉴클레오티드 (CDN); 및
    링커 또는 커플링제, 또는 링커 및 커플링제 둘 모두를 포함하는 조성물로서;
    여기서, CDN은 제70항 내지 제83항 중 어느 한 항의 화합물이고, 커플링제는 CDN의 링커에 대한 커플링을 촉진시키는 조성물.
  90. 제89항에 있어서, 커플링제가 링커 상의 활성화된 에스테르를 생성할 수 있는 조성물.
  91. 제89항 또는 제90항에 있어서, 조성물이 비양성자성 극성 용매를 추가로 포함하는 조성물.
  92. 제91항에 있어서, 비양성자성 극성 용매가 디메틸포름아미드 (DMF), 디메틸아세트아미드 (DMA), 아세토니트릴, 또는 테트라히드로푸란 (THF)으로부터 선택되는 조성물.
  93. 제84항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 무수 조성물인 조성물.
  94. 제84항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, CDN이 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는 조성물:
    Figure pct00176
    .
  95. 화학식 L-CDN의 화합물로서,
    상기 식에서,
    L은 항체 또는 항원 결합 단편 상의 상보성 부위(complementary site)에 커플링할 수 있는 부위를 포함하는 링커이고;
    CDN은 하기 화학식 IIk의 구조를 갖는 사이클릭 디뉴클레오티드 또는 이의 제약상 허용되는 염이고:
    Figure pct00177

    상기 식에서,
    W, X, Y, 및 Z는 독립적으로 CH 또는 N이고;
    R1은 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 C1- 6알킬이고;
    Rp는 각각의 경우에 독립적으로 히드록실, 티올, C1- 6알킬, 보라노 (-BH3 -), 또는 -NR'R"이고, 여기서, R' 및 R"은 각각의 경우에 독립적으로 수소, 또는 할로겐, 티올, 히드록실, 카르복실, C1- 6알콕시, C1- 6히드록시알콕시, -OC(O)C1 - 6알킬, -N(H)C(O)C1-6알킬, -N(C1-3알킬)C(O)C1 - 6알킬, 아미노, C1- 6알킬아미노, 디(C1-6알킬)아미노, 옥소, 및 아지도로부터 선택되는 하나 이상의 기로 임의적으로 치환된 C1- 6알킬이거나; 또는 동일 질소 상의 R' 및 R"은 함께 C3- 5헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
    CDN은 R1의 티올, 아미노, 또는 C1- 6알킬아미노 기에서 L에 커플링되는 화합물.
  96. 제95항에 있어서, CDN이 티오에테르, 아미드, 에스테르, 카르바메이트, 카르보네이트, 우레아, 디술피드, 또는 에테르 기를 통해 L에 커플링되는 화합물.
  97. 제96항에 있어서, 화합물이 하기 화학식 IXb의 구조를 갖는 화합물:
    Figure pct00178

    상기 식에서, RL은 링커 L의 나머지 부분을 나타낸다.
  98. 제96항에 있어서, 화합물이 하기 화학식 IXf의 구조를 갖는 화합물:
    Figure pct00179

    상기 식에서, RL은 링커 L의 나머지 부분을 나타낸다.
  99. 제95항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, RP가 각각의 경우에 독립적으로 히드록실 또는 티올인 화합물.
  100. 제95항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, Y 및 W가 둘 모두 CH인 화합물.
  101. 제95항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, X 및 Z가 둘 모두 N인 화합물.
  102. 제95항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 아미노 기로 치환된 에틸인 화합물.
  103. 제95항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 C1- 6알킬아미노 기로 치환된 에틸인 화합물.
  104. 제103항에 있어서, R1이 메틸아미노 기로 치환된 에틸인 화합물.
  105. 제95항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 존재하는 RP 중 적어도 하나가 히드록실인 화합물.
  106. 제105항에 있어서, 존재하는 2개의 RP 모두가 히드록실인 화합물.
  107. 제105항에 있어서, 존재하는 하나의 RP가 히드록실이고, 나머지 다른 하나가 티올인 화합물.
  108. 제95항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 존재하는 RP 중 적어도 하나가 티올인 화합물.
  109. 제108항에 있어서, 존재하는 2개의 RP 모두가 티올인 화합물.
  110. 제95항에 있어서, CDN이 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는 화합물:
    Figure pct00180
    .
  111. 제95항에 있어서, CDN이 하기 구조, 또는 이의 제약상 허용되는 염을 갖는 화합물:
    Figure pct00181
    .
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114786729B (zh) * 2019-07-19 2023-12-19 免疫传感器治疗股份有限公司 抗体-sting激动剂缀合物及其在免疫疗法中的用途
WO2022225827A1 (en) * 2021-04-21 2022-10-27 Merck Sharp & Dohme Llc Novel forms of cyclic dinucleotide compounds
CA3233464A1 (en) * 2021-10-04 2023-04-13 Bolt Biotherapeutics, Inc. Asymmetric bis-benzimidazole sting agonist immunoconjugates and uses thereof
WO2023109942A1 (en) * 2021-12-17 2023-06-22 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. Compound-linker constructs comprising novel compounds useful as sting agonists and uses thereof
CN117343111B (zh) * 2023-12-04 2024-02-06 康羽生命科学技术(苏州)有限公司 核苷修饰物n2-异丁酰-2'-甲氧基鸟苷的制备方法

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
CA2580141C (en) * 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2013085925A1 (en) 2011-12-05 2013-06-13 Igenica, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
AU2016304899B2 (en) 2015-08-13 2018-11-08 Merck Sharp & Dohme Llc Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
WO2017100305A2 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Opi Vi - Ip Holdco Llc Composition of antibody construct-agonist conjugates and methods of use thereof
GB2552041A (en) * 2015-12-07 2018-01-10 Opi Vi - Ip Holdco Llc Compositions of antibody construct-agonist conjugates and methods thereof
US20170158772A1 (en) 2015-12-07 2017-06-08 Opi Vi - Ip Holdco Llc Compositions of antibody construct - agonist conjugates and methods of use thereof
NZ746112A (en) 2016-03-18 2023-01-27 Immune Sensor Llc Cyclic di-nucleotide compounds and methods of use
DK3506884T3 (da) 2016-08-30 2021-07-26 Dana Farber Cancer Inst Inc Sammensætninger til indgivelse af medicin og anvendelser af disse
JOP20170192A1 (ar) * 2016-12-01 2019-01-30 Takeda Pharmaceuticals Co داي نوكليوتيد حلقي
RU2019122602A (ru) 2016-12-20 2021-01-22 Мерк Шарп И Доум Корп. Комбинации антагонистов pd-1 и циклических динуклеотидных агонистов sting для лечения рака
RU2019122598A (ru) * 2016-12-20 2021-01-22 Мерк Шарп И Доум Корп. Циклические динуклеотидные агонисты sting для лечения рака
WO2018140831A2 (en) 2017-01-27 2018-08-02 Silverback Therapeutics, Inc. Tumor targeting conjugates and methods of use thereof
AR113224A1 (es) 2017-04-28 2020-02-19 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo que comprenden un agonista de sting
EP3621624B1 (en) 2017-05-12 2023-08-30 Merck Sharp & Dohme LLC Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
EP3505188A1 (en) 2017-12-29 2019-07-03 Invivogen Pro-cyclic dinucleotide conjugates for cytokine induction
CN114786729B (zh) * 2019-07-19 2023-12-19 免疫传感器治疗股份有限公司 抗体-sting激动剂缀合物及其在免疫疗法中的用途

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AU2020315802A1 (en) 2022-02-24
IL289866A (en) 2022-03-01
US11033635B2 (en) 2021-06-15

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