TW202116358A - 抗體-干擾素基因刺激蛋白(sting)促效劑結合物及其於免疫療法之用途 - Google Patents

抗體-干擾素基因刺激蛋白(sting)促效劑結合物及其於免疫療法之用途 Download PDF

Info

Publication number
TW202116358A
TW202116358A TW109124478A TW109124478A TW202116358A TW 202116358 A TW202116358 A TW 202116358A TW 109124478 A TW109124478 A TW 109124478A TW 109124478 A TW109124478 A TW 109124478A TW 202116358 A TW202116358 A TW 202116358A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
group
adc
cdn
alkyl
formula
Prior art date
Application number
TW109124478A
Other languages
English (en)
Inventor
志堅 陳
史和平
琦 魏
綽 陳
立軍 孫
鍵 邱
吳又桐
Original Assignee
美商免疫感應治療公司
美國德州系統大學評議委員會
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商免疫感應治療公司, 美國德州系統大學評議委員會 filed Critical 美商免疫感應治療公司
Publication of TW202116358A publication Critical patent/TW202116358A/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本發明除了其他事項外尤其係關於包含與抗體結合之干擾素基因刺激蛋白(STING)促效劑環狀二核苷酸之抗體-藥物結合物、其相應製備方法及其用途。

Description

抗體-干擾素基因刺激蛋白(STING)促效劑結合物及其於免疫療法之用途
本發明除其他事項外尤其係關於抗體-藥物結合物(ADC)中之干擾素基因刺激蛋白(STING)促效劑用於免疫療法之用途、包括ADC之組合物、製造ADC之方法及使用ADC治療癌症之方法。
除了在針對含DNA微生物之侵襲之宿主防禦中的初級功能以外，胞溶質DNA感測路徑在針對惡性病之免疫反應之起始及維持方面發揮關鍵作用。來自受損腫瘤細胞之胞溶質DNA觸發稱為環狀AMP-GMP合成酶(cGAS)之酶的活化，其合成2'3'-環狀AMP-GMP (cGAMP)。作為內源性配位體，cGAMP結合至ER接附蛋白干擾素基因刺激蛋白(STING)並將其活化，且引起干擾素及發炎性細胞介素之誘導、抗原呈現細胞之募集及成熟及最終由T細胞及自然殺手(NK)細胞進行之抗腫瘤免疫。正在開發類似於cGAMP但具有改良之治療特性的多種STING促效劑以用於癌症免疫療法。儘管此等藥物對於治療一系列實體腫瘤為有前景的，但其具有顯而易見的限制。此等化合物依賴於瘤內投與，因為其在另外注射時有可能誘導全身性細胞介素反應。由於快速滲漏至周邊組織，所以即使進行瘤內注射，仍可誘導非所需細胞介素反應。此等化合物在腫瘤環境中短暫暴露於免疫細胞亦降低其作用。因此，迫切需要可特異性地遞送STING促效劑至腫瘤環境且滯留時間延長的新穎治療劑。
本發明提供特定環狀二核苷酸(CDN)，其可與靶向患病細胞或組織之微環境中之特異性抗原的抗體或抗原結合片段結合。舉例而言，抗體或其抗原結合片段可靶向存在於腫瘤微環境中之細胞(諸如腫瘤細胞或免疫細胞)上的癌症相關抗原。本發明之CDN能夠促效STING，從而刺激免疫系統。當本發明之CDN與靶向患病細胞或組織中之抗原之抗體結合時，其提供CDN在患病細胞或組織之微環境中之充分暴露，同時減少伴隨的與大量CDN滲漏至周邊組織中相關之副作用。
在一個態樣中，本發明提供具有式I結構之抗體-藥物結合物(ADC)： (式I)     Ab-[-L-(D)m ]n 其中： 「D」表示CDN (例如，如本文所描述之CDN，諸如式II之CDN)； 「Ab」表示結合目標抗原之抗體或其結合片段； 「L」在每次出現時獨立地表示連接一或多次出現之D與Ab之連接子； 「m」表示連接至給定連接子之D之出現次數；且 「n」表示連接至Ab之連接子之數目。
在某些實施例中，本發明提供具有式Ia結構之ADC： (式Ia)    Ab-[-L-D]n 其中： 「D」表示CDN (例如，如本文所描述之CDN，諸如式II之CDN)； 「Ab」表示結合目標抗原之抗體或其結合片段； 「L」在每次出現時獨立地表示連接D與Ab之連接子；及 「n」表示經由連接子(L)連接至Ab之D之出現次數。
在另一態樣中，本發明提供特異性CDN (D)，其自身或作為式I之ADC之部分投與。此等CDN可具有式II之結構：
Figure 02_image003
式II 其中 R1 為經羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團取代之C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基或C2-3 烷基； R3 及R4 獨立地為氫、鹵素、C1-6 烷基、C2-6 烯基或C2-6 炔基，其中C1-6 烷基、C2-6 烯基及C2-6 炔基獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基； R2 、R5 及R6 獨立地為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基或C3-6 炔基-O-，其中C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基及C3-6 炔基-O-獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或R6 及R5 一起為=CH2 ；或R6 及R4 一起形成跨越含有選自以下之V2 之環的橋：伸乙基、-O-CH2 -及-NH-CH2 -； V1 及V2 獨立地為O、S或CH2 ； 以含有V1 之環中的碳為起始物質的BG1 及以含有V2 之環中的碳為起始物質的BG2 獨立地為-O-P(O)Rp -O-、-O-P(S)Rp -O-、-O-P(O)Rp -S-、-O-P(S)Rp -S-、-S-P(O)Rp -O-、-S-P(S)Rp -O-、-S-P(O)Rp -S-、-S-P(S)Rp -S-或-NH-SO2 -NH-；其中 Rp 在每次出現時獨立地為羥基、硫醇基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C3-6 烯基-O-、C3-6 炔基-O-、-PEG-OH、硼烷并(-BH3 − )或-NR'R"，其中C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C3-6 烯基-O-及C3-6 炔基-O-獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；及 R'及R"獨立地為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代的C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環； Ra1 、Rb1 、Ra2 及Rb2 獨立地為氫或C1-3 烷基；及 B1 及B2 獨立地選自：
Figure 02_image005
，其中 V3 為O或S，尤其為O； Z1 、Z2 、Z3 、Z4 、Z5 及Z6 在每次出現時獨立地為CRz 或N； Za 為O (除了Z5 為N時以外)或NR'；其中 Rz 在每次出現時獨立為氫、鹵素、疊氮基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基、C3-6 炔基-O-、-NO2 、-CN、-C(O)C1-6 烷基、-CO2 H、-CO2 C1-6 烷基、-S(O)C1-6 烷基、-S(O)2 C1-6 烷基、-C(O)NR'、-C(O)NR'R"、-SO2 NR'R"、-OC(O)C1-6 烷基、-NR'C(O)C1-6 烷基、-N(R')C(O)NR'R"、-N(R')SO2 NR'R"、-N(R)SO2 C1-6 烷基或-OC(O)NR'R"，其中 C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基及C3-6 炔基-O-在每次出現時獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；及 R'及R"在每次出現時獨立為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代的C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環； 或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明提供藉由經由連接子將式II之CDN結合與抗體結合來製備式I之ADC的方法。式II之CDN可經由可裂解或不可裂解的連接子與抗體結合。在特定實施例中，CDN在連接子裂解後釋放至腫瘤細胞、癌症相關免疫細胞或腫瘤微環境中。
在式I之ADC中，其中CDN (D)具有式II，CDN可在式II之CDN之R1 位置處共價結合於羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團處之連接子(L)。
在本發明之一個實施例中，式II之CDN具有式IIe：
Figure 02_image007
式IIe 其中R1 、R5 及R6 、RP 以及B1 及B2 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在本發明之一個實施例中，式II之CDN具有式IIk：
Figure 02_image009
式IIk 其中 W、X、Y及Z獨立地為CH或N；且 RP 在每次出現時獨立地如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，本發明提供一種組合物，其包含CDN及鹼，其中CDN為式II化合物，諸如上述式IIe或IIk，或以下式IIn或IIo的化合物。在某些此類實施例中，組合物由CDN及鹼組成。在一些實施例中，鹼為胺鹼，諸如吡啶。在一些此等實施例中，組合物為無水的。
在某些實施例中，本發明提供一種組合物，其包含CDN及連接子或偶合劑，或連接子及偶合劑兩者，其中CDN為式II化合物，諸如上述式IIe或IIk或以下式IIn或IIo的化合物，且其中偶合劑例如藉由在連接子上產生活化酯而促進CDN與連接子之偶合。在一些實施例中，組合物進一步包含非質子極性溶劑。在某些實施例中，組合物為無水的。
在一些實施例中，本發明提供一種化合物，其為偶合至式L-CDN之連接子(L)之環狀二核苷酸(CDN)。在某些實施例中，CDN經由硫醚基、醯胺基、酯基、胺基甲酸酯基、碳酸酯基、脲基、二硫基或醚基，尤其醯胺基、胺基甲酸酯基或二硫基偶合至連接子L。在某些實施例中，CDN具有式II，諸如上述式IIe或IIk，或以下式IIm、IIn或IIo，且CDN在式II之R1 之硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基處偶合至L，且L包括能夠偶合至抗體上之互補位點的位點。
在一個實施例中，式I之ADC具有式III之結構：
Figure 02_image001
式III 其中變數W、X、Y、Z、RP 及n係如上文關於式I及II所定義。
在一個實施例中，式I之ADC具有式IV之結構：
Figure 02_image012
式IV 其中變數W、X、Y、Z、RP 及n係如上文關於式I及II所定義。
在一個實施例中，式I或III之ADC來源於具有以下結構(CDN-A)之CDN (D)：
Figure 02_image014
或其醫藥學上可接受之鹽。應理解，片語「來源於」指示在CDN之R1 位置處之胺基(-NH2 )官能基共價結合至連接子中之相應位置。舉例而言，在一些實施例中，胺基共價鍵結於連接子之羰基部分，由此形成醯胺或胺基甲酸酯鍵。
在另一實施例中，式I或IV之ADC來源於具有以下結構(CDN-B)之CDN (D)：
Figure 02_image016
或其醫藥學上可接受之鹽。應理解，片語「來源於」指示在CDN之R1 位置處之硫醇基(-SH)官能基共價結合至連接子中之相應位置。舉例而言，在一些實施例中，CDN之硫醇基共價結合至連接子之硫醇基，由此形成二硫鍵。
在另一實施例中，式I或III之ADC來源於具有以下結構之CDN (D)：
Figure 02_image018
或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，式I或III之ADC來源於具有以下結構之CDN (D)：
Figure 02_image020
或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，式I或III之ADC來源於具有以下結構之CDN (D)：
Figure 02_image022
或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，式I、III或IV之ADC之抗體或抗原結合片段靶向在腫瘤微環境中之腫瘤細胞或免疫細胞上表現之特異性抗原。在特定實施例中，式I、III或IV之ADC之抗體或抗原結合片段靶向受體PD-L1。在其他特定實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於癌症相關腫瘤抗原，其為生長因子受體(GFR)。在某些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為EGFR/ErbB/HER家族GFR。
在一個態樣中，本發明提供藉由投與治療有效量之式I、III或IV之ADC來誘導個體(例如，人類患者)之免疫反應的方法。舉例而言，式I、III或IV之ADC可用於誘導人類個體中之干擾素-β (IFNβ)。
式I、III或IV之ADC可與一或多種其他治療劑組合使用。其他治療劑可在投與其他治療劑之前、同時或之後投與。在特定實施例中，式I、III或IV之ADC可與免疫檢查點抑制劑組合使用。舉例而言，式I、III或IV之ADC可與PD-1、PD-L1或CTLA-4之抑制劑或其組合一起投與。
在另一實施例中，式I、III或IV之ADC可與未結合至式I之抗體或抗原結合片段之游離CDN一起投與。在此類情況下，游離CDN可與結合至式I、III或IV之ADC之抗體的CDN相同或不同。
序列表
本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式以電子方式提交且其全文以引用的方式併入本文中。2020年7月17日創建之該ASCII複本名稱為400160_005US_SL_ST25.txt且大小為44,502個位元組。
本發明提供抗體-藥物結合物(ADC)，其各自包含抗體、一或多個環狀二核苷酸(CDN)及將一或多個CDN連接至抗體之一或多個連接子。本發明之ADC具有促效及/或結合STING且促進免疫反應之能力。 6.1       抗體-藥物結合物(ADC)
在某些實施例中，本發明之ADC一般具有式I之結構： (式I)     Ab-[-L-(D)m ]n 其中： 「D」表示CDN (例如，如本文所描述之CDN，諸如式II之CDN)； 「Ab」表示結合目標抗原之抗體或其結合片段； 「L」在每次出現時獨立地表示連接一或多次出現之D與Ab之連接子； 「m」表示連接至給定連接子之D之出現次數；且 「n」表示連接至Ab之連接子之數目。
在式I之某些實施例中，m表示選自1至10之整數，包括1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些個例中，m在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9或1至10，諸如1至2、1至3、1至4、1至5或1至6之範圍內。在其他實施例中，式I描述ADC混合物中之ADC，其展現m之一系列值，使得m在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9或1至10，諸如1至2、1至3、1至4、1至5或1至6之範圍內。在某些實施例中，式I描述ADC混合物中之ADC，使得該混合物中超過60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之ADC的m值為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，式I描述ADC混合物中之ADC，使得該混合物中超過60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之ADC的m值在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9或1至10，諸如1至2、1至3、1至4、1至5或1至6之範圍內。
在其他實施例中，式I描述ADC混合物中之ADC且m由「mave 」替換，其表示混合物之m值之平均值，亦即，混合物中連接至給定連接子(L)之CDN的平均數目，其可藉由將抗體連接之CDN的總數除以混合物中之含CDN連接子(L)的總數來計算。在此類實施例中，mave 表示在1至10的範圍內，諸如在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8或1至9，諸如1至2、1至3、1至4、1至5或1至6的範圍內之整數或非整數值。
在式I之一些實施例中，n表示選自1至20之整數，包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些個例中，n在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、1至16、1至17、1至18、1至19或1至20，諸如1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7或1至8的範圍內。在其他實施例中，式I描述ADC混合物中之ADC，其展現n之一系列值，使得n在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、1至16、1至17、1至18、1至19或1至20，諸如1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9或1至10之範圍內。在某些實施例中，式I描述ADC混合物中之ADC，使得該混合物中超過60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之ADC的n值為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些實施例中，式I描述ADC混合物中之ADC，使得該混合物中超過60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之ADC的n值在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、1至16、1至17、1至18、1至19或1至20，諸如1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9或1至10的範圍內。
在其他實施例中，式I描述ADC混合物中之ADC且n由「nave 」替換，其表示混合物之n值之平均值，亦即，混合物中連接至給定抗體(Ab)之連接子(L)的平均數目，其可藉由將抗體連接之連接子(L)的總數除以混合物中之含連接子之抗體(Ab)的總數來計算。在此類實施例中，nave 表示在1至20的範圍內，諸如在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、1至16、1至17、1至18、1至19或1至20，諸如1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9或1至10的範圍內之整數或非整數值。
在某些實施例中，m為1，在此情況下，ADC具有1:1之連接子與CDN之比率且可由式Ia表示： (式Ia)    Ab-[-L-D]n 其中： 「D」表示CDN (例如，如本文所描述之CDN，諸如式II之CDN)； 「Ab」表示結合目標抗原之抗體或其結合片段； 「L」在每次出現時獨立地表示連接一或多次出現之D與Ab之連接子；及 「n」表示經由連接子(L)連接至Ab之D之出現次數。
在式Ia之一些實施例中，n表示選自1至20之整數，包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些個例中，n在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、1至16、1至17、1至18、1至19或1至20，諸如1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7或1至8的範圍內。在其他實施例中，式Ia描述ADC混合物中之ADC，其展現n之一系列值，使得n在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、1至16、1至17、1至18、1至19或1至20，諸如1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7或1至8的範圍內。在某些實施例中，式Ia描述ADC混合物中之ADC，使得該混合物中超過60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之ADC的n值為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在一些實施例中，式Ia描述ADC混合物中之ADC，使得該混合物中超過60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之ADC的n值在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、1至16、1至17、1至18、1至19或1至20，諸如1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7或1至8的範圍內。
在其他實施例中，式Ia描述ADC混合物中之ADC且n由「nave 」替換，其表示混合物之n值之平均值，亦即，混合物中連接至給定抗體(Ab)之連接子(L)的平均數目，其可藉由將抗體連接之連接子(L)的總數除以混合物中之含連接子之抗體(Ab)的總數來計算。在此類實施例中，nave 表示在1至20的範圍內，諸如在1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、1至11、1至12、1至13、1至14、1至15、1至16、1至17、1至18、1至19或1至20，諸如1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9或1至10的範圍內之整數或非整數值。
本文所揭示之ADC在本質上為「模組化的」，係因為各自具有以上模組化組分Ab、L及D。在本發明通篇中，描述此等模組化組分之各種特定非限制性實施例及實例。預期所有所描述之具體實施例的模組可以彼此組合，就如同明確地個別描述每一特定組合。
熟習此項技術者亦應瞭解，本文所描述之各種ADC可呈鹽形式，且在一些具體實施例中，呈醫藥學上可接受之鹽形式。 6.2       環狀二核苷酸(CDN)
本文所使用之CDN包含由兩個橋連基接合之兩個核苷。在某些實施例中，CDN為2'3'-CDN，意謂各核苷包括環狀5-碳糖(戊醣)，其中第一核苷在其糖之2'-位置處例如藉由插入橋連基團連接至第二核苷糖之5'-位置，以形成2'-5'鍵，且第二核苷在其糖之3'-位置處例如藉由插入橋連基團連接至第一核苷糖之5'-位置，以形成3'-5'鍵。適合的2'3'-CDN之實例包括2'3'-cGAMP及其類似物或衍生物，包括醫藥學上可接受之鹽。以下式II之CDN為2'3'-CDN。
在其他實施例中，CDN為3'3'-CDN，其中第一核苷酸係例如藉由插入橋連基團，藉由3'-5'鍵，以如上文所描述之類似方式連接至第二核苷酸，且第二核苷酸係例如藉由插入橋連基團，亦藉由3'-5'鍵，以如上文所描述之類似方式連接至第一核苷酸。適合的3'3'-CDN之實例包括3'3'-cGAMP及其類似物或衍生物，包括醫藥學上可接受之鹽。
在其他實施例中，CDN為2'2'-CDN，其中第一核苷酸係例如藉由插入橋連基團，藉由2'-5'鍵，以如上文所描述之類似方式連接至第二核苷酸，且第二核苷酸係例如藉由插入橋連基團，亦藉由2'-5'鍵，以如上文所描述之類似方式連接至第一核苷酸。適合的2'2'-CDN之實例包括2'2'-cGAMP及其類似物或衍生物，包括醫藥學上可接受之鹽。
在其他實施例中，CDN為3'2'-CDN，其中第一核苷酸係例如藉由插入橋連基團，藉由3'-5'鍵，以如上文所描述之類似方式連接至第二核苷酸，且第二核苷酸係例如藉由插入橋連基團，藉由2'-5'鍵，以如上文所描述之類似方式連接至第一核苷酸。適合的3'2'-CDN之實例包括3'2'-cGAMP及其類似物或衍生物，包括醫藥學上可接受之鹽。 6.2.1.  核苷
在一些個例中，CDN之各核苷包括可彼此獨立地為嘧啶鹼基或嘌呤鹼基之核鹼基。舉例而言，各核鹼基可為典型核鹼基(諸如腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶或胞嘧啶)或非典型的經修飾之非天然核鹼基(諸如黃嘌呤、次黃嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5,6-二氫尿嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-羥基甲基胞嘧啶、1-甲基胞嘧啶、2,6-二胺基嘌呤、6,8-二胺基嘌呤、2-胺基咪唑并[1,2a][1,3,5]三嗪-4(1H)-酮、6-胺基-5-硝基吡啶-2-酮、異鳥嘌呤、異胞嘧啶、5-(2,4-二胺基嘧啶)、4-硫尿嘧啶、假尿嘧啶等)。適合的核鹼基包括下文針對變數B1 及B2 所描述之核鹼基。
在某些個例中，CDN包含兩個核苷，其包含兩個嘧啶鹼基或兩個嘌呤鹼基或一個嘧啶鹼基及一個嘌呤鹼基。在一些實施例中，兩個核苷包含兩個嘌呤鹼基，諸如腺嘌呤及鳥嘌呤、兩個腺嘌呤或兩個鳥嘌呤，尤其是腺嘌呤及鳥嘌呤或兩個腺嘌呤。應理解，特定核鹼基或其他明確的化學結構(例如「腺嘌呤」)之前的不定冠詞「一(a/an)」之敍述指示涵蓋典型核鹼基及其經修飾變異體兩者。
在一些實施例中，CDN包含兩個核苷，其各自包括環狀5-碳糖(戊醣)，諸如D-核糖或L-核糖或去氧核糖、D-阿拉伯糖或L-阿拉伯糖、D-來蘇糖或L-來蘇糖、D-木糖或L-木糖或其經修飾形式。在某些個例中，CDN之一個戊糖(例如核糖)諸如經由3'位置處之C1-6 烷基(例如C2-6 烷基)連接至糖之3'-位置處的連接子(L)，該C1-6 烷基視情況經以下取代：羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團；羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；或硫醇基或胺基。在其他實施例中，CDN之一個戊糖(例如核糖)諸如經由2'-位置處之C1-6 烷基(例如C2-6 烷基)連接至糖之2'-位置處的連接子(L)，該C1-6 烷基視情況經以下取代：羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團；羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；或硫醇基或胺基。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團之質子而連接至CDN。
戊醣之3'-位置處之基團的以下描述亦可適用於戊醣之2'-位置處之基團。
在某些個例中，戊糖(例如核糖)之3'-位置處之基團為經羥基(諸如，-伸乙基-OH、-伸丙基-OH、-伸丁基-OH或-伸戊基-OH)取代的C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代以上基團中之一者中之羥基之質子連接。
在一些個例中，戊糖(例如核糖)之3'-位置處之基團為經硫醇基(諸如，-伸乙基-OH、-伸丙基-OH、-伸丁基-OH或-伸戊基-OH)取代的C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代以上基團中之一者中之硫醇基之質子連接。
在某些個例中，戊糖(例如核糖)之3'-位置處之基團為經胺基(諸如，-伸乙基-NH2 、-伸丙基-NH2 、-伸丁基-NH2 或-伸戊基-NH2 )取代的C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代以上基團中之一者中之胺基之質子連接。
在一些實施例中，戊糖(例如核糖)之3'-位置處之基團為經C1-6 烷胺基(諸如，-伸乙基-N(C1-6 烷基)H、-伸丙基-N(C1-6 烷基)H、-伸丁基-N(C1-6 烷基)H或-伸戊基-N(C1-6 烷基)H)取代的C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代以上基團中之一者中的C1-6 烷胺基之質子連接。
在某些實施例中，戊醣(例如核糖)之3'-位置處之基團為經-PEG-OH基團(諸如，-伸乙基-PEG-OH、-伸丙基-PEG-OH、-伸丁基-PEG-OH或-伸戊基-PEG-OH)取代的C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代-PEG-OH基團之末端羥基之質子連接。應理解，「PEG」係指聚合物聚乙二醇、聚氧化乙烯(polyethylene oxide)或聚氧乙烯(polyoxyethylene)且具有重複結構−(O−CH2 −CH2 )x −及範圍為200至10000 g/mol，諸如200、400、800、1000、2000或4000至5000、6000、8000或10000 g/mol，包括400至8,000 g/mol、400至2000 g/mol、5000至10000 g/mol、1000至4000 g/mol、1000至6000 g/mol、或2000至6000 g/mol，包括小於4000、5000或6000 g/mol的平均分子量。
在一些個例中，戊醣(例如核糖)之3'-位置處之基團為經以下取代之C2-3 烷基：羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團，諸如-伸乙基-OH、-伸丙基-OH、-伸乙基-SH、-伸丙基-SH、-伸乙基-NH2 、-伸丙基-NH2 、-伸乙基-N(C1-6 烷基)H、-伸丙基-N(C1-6 烷基)H、-伸乙基-PEG-OH或-伸丙基-PEG-OH。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代以上基團中之一者中之羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團之質子而連接。
在一些個例中，戊醣(例如核糖)之3'-位置處之基團為經以下取代之C2 烷基(乙基)：羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團，諸如-伸乙基-OH、-伸乙基-SH、-伸乙基-NH2 、-伸乙基-N(C1-6 烷基)H或-伸乙基-PEG-OH。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代以上基團中之一者中之羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團之質子而連接。
在一些個例中，戊醣(例如核糖)之3'-位置處之基團為經以下取代之C3 烷基(丙基)：羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團，諸如-伸丙基-OH、-伸丙基-SH、-伸丙基-NH2 、-伸丙基-N(C1-6 烷基)H或-伸丙基-PEG-OH。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代以上基團中之一者中之羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團之質子而連接。
在某些實施例中，CDN之一個戊糖(例如核糖)經由3'位置處之經取代甲基連接至糖之3'-位置處的連接子(L)，該甲基例如經以下取代：羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團；羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；硫醇基或胺基；或硫醇基。在一些實施例中，連接子(L)藉由取代羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團之質子而連接至CDN。
在某些實施例中，CDN包含兩個核苷，其各自包括核糖，其中一個核糖經由核糖環之3'-位置處之C2-6 烷基(諸如C2 烷基、C3 烷基或C2-3 烷基)連接至連接子(L)，該C2-6 烷基視情況經以下取代：羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團；羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；或硫醇基或胺基；其中連接子(L)藉由取代羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團之質子而連接至CDN。
在某些實施例中，CDN包含兩個核苷，其各自包括核糖，其中一個核糖經由核糖環之3'-位置處之經取代乙基連接至連接子(L)，該乙基例如經以下取代：羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團；羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基；或硫醇基或胺基；其中連接子(L)藉由取代羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團之質子而連接至CDN。
在某些實施例中，CDN包含兩個核苷，其各自包括核糖，其中一個核糖經由核糖環之3'-位置處之經取代乙基連接至連接子(L)，該核糖環選自-CH2 CH2 -OH、-CH2 CH2 -SH及-CH2 CH2 -NH2 ，尤其選自-CH2 CH2 -SH及-CH2 CH2 -NH2 ；其中連接子(L)藉由取代羥基、硫醇基或胺基之質子而連接至CDN。 6.2.2.  橋連基團
由於其環狀結構，CDN包括接合上文所述之核苷以形成CDN巨環之兩個橋連基團。在某些實施例中，橋連基團獨立地包括核苷之兩個糖之間的橋中之2至5個原子，諸如3個原子。舉例而言，-O-P(=O)(OH)-O-可為橋連基團，其中應理解，糖鍵結在末端氧原子處，且在橋中存在三個原子。橋連基團可獨立地僅包括該橋中之雜原子、該橋中之雜原子及碳原子兩者，或僅包括該橋中之碳原子。
在某些個例中，橋連基團為二價磷酸酯基或硫代磷酸酯基或其經修飾之變異體，例如-O-P(=O)(OH)-O-或-O-P(=O)(SH)-O-。舉例而言，兩個橋連基團可獨立地選自-O-P(O)Rp -O-、-O-P(S)Rp -O-、-O-P(O)Rp -S-、-O-P(S)Rp -S-、-S-P(O)Rp -O-、-S-P(S)Rp -O-、-S-P(O)Rp -S-或-S-P(S)Rp -S-，其中Rp 係如下進一步定義。在一些實施例中，以上橋連基團中之Rp 在每次出現時獨立地選自羥基或硫醇基。
應理解，當兩個橋連基團皆為磷酸酯基或其經修飾之變異體時，則各橋連基團與上文所述之核苷組合表示核苷酸，其中兩組橋連基團及核苷提供環狀二核苷酸。然而，本文中揭示之CDN未必限於作為磷酸酯基之橋連基團。 6.2.3.  特異性CDN
本發明提供CDN (D)，其自身或作為式I之ADC之部分投與。在某些個例中，CDN具有下文式II之結構。應理解，提及式I亦包括提及子式Ia。同樣，提及式II亦包括提及其子式，諸如式IIa、IIb等。式II具有以下結構：
Figure 02_image024
式II 其中 R1 為經羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團取代之C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基或C2-3 烷基； R3 及R4 獨立地為氫、鹵素、C1-6 烷基、C2-6 烯基或C2-6 炔基，其中C1-6 烷基、C2-6 烯基及C2-6 炔基獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基； R2 、R5 及R6 獨立地為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基或C3-6 炔基-O-，其中C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基及C3-6 炔基-O-獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或R6 及R5 一起為=CH2 ；或R6 及R4 一起形成跨越含有選自以下之V2 之環的橋：伸乙基、-O-CH2 -及-NH-CH2 -； V1 及V2 獨立地為O、S或CH2 ； 以含有V1 之環中的碳為起始物質的BG1 及以含有V2 之環中的碳為起始物質的BG2 獨立地為-O-P(O)Rp -O-、-O-P(S)Rp -O-、-O-P(O)Rp -S-、-O-P(S)Rp -S-、-S-P(O)Rp -O-、-S-P(S)Rp -O-、-S-P(O)Rp -S-、-S-P(S)Rp -S-、-NH-P(O)Rp -O-、-O-P(O)Rp -NH-、-NH-P(S)Rp -O-、-O-P(S)Rp -NH-或-NH-SO2 -NH-；其中 Rp 在每次出現時獨立地為羥基、硫醇基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C3-6 烯基-O-、C3-6 炔基-O-、-PEG-OH、硼烷并(-BH3 − )或-NR'R"，其中C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C3-6 烯基-O-及C3-6 炔基-O-獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；及 R'及R"獨立地為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代的C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環； Ra1 、Rb1 、Ra2 及Rb2 獨立地為氫或C1-3 烷基；及 B1 及B2 獨立地選自：
Figure 02_image026
，其中 V3 為O或S，尤其為O； Z1 、Z2 、Z3 、Z4 、Z5 及Z6 在每次出現時獨立地為CRz 或N； Za 為O (除了Z5 為N時以外)或NR'；其中 Rz 在每次出現時獨立為氫、鹵素、疊氮基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基、C3-6 炔基-O-、-NO2 、-CN、-C(O)C1-6 烷基、-CO2 H、-CO2 C1-6 烷基、-S(O)C1-6 烷基、-S(O)2 C1-6 烷基、-C(O)NR'、-C(O)NR'R"、-SO2 NR'R"、-OC(O)C1-6 烷基、-NR'C(O)C1-6 烷基、-N(R')C(O)NR'R"、-N(R')SO2 NR'R"、-N(R)SO2 C1-6 烷基或-OC(O)NR'R"，其中 C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基及C3-6 炔基-O-在每次出現時獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；及 R'及R"在每次出現時獨立為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代的C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些個例中，當式II之CDN (D)共價結合至式I或Ia之ADC中之連接子(L)時，CDN共價結合至R1 位置之羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團處的連接子。
在某些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團取代之C2-6 烷基。在一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基取代之C2-6 烷基。在某些實施例中，R1 為經硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基取代之C2-6 烷基。在一些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-6 烷基。在某些實施例中，R1 為經硫醇基取代之C2-6 烷基。在一些實施例中，R1 為經胺基取代之C2-6 烷基。對於此等實施例中之任一者，R1 可為經羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基取代之C2-4 烷基，諸如C2-3 烷基，諸如經羥基、硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基取代之乙基。
在一些實施例中，R1 為經羥基取代之C2-4 烷基。在一些此類實施例中，R1 為經羥基取代之C2 烷基。在其他此類實施例中，R1 為經羥基取代之C3 烷基。在其他此類實施例中，R1 為經羥基取代之C4 烷基。
在一些實施例中，R1 為經胺基(-NH2 基團)取代之C2-4 烷基。在一些此類實施例中，R1 為經胺基取代之C2 烷基。在其他此類實施例中，R1 為經胺基取代之C3 烷基。在其他此類實施例中，R1 為經胺基取代之C4 烷基。
在一些實施例中，R1 為經硫醇基(-SH基團)取代之C2-4 烷基。在一些此類實施例中，R1 為經硫醇基取代之C2 烷基。在其他此類實施例中，R1 為經硫醇基取代之C3 烷基。在其他此類實施例中，R1 為經硫醇基取代之C4 烷基。
在一些實施例中，R1 為經C1-6 烷胺基取代之C2-4 烷基。在一些此類實施例中，R1 為經甲胺基取代之C2 烷基。在其他此類實施例中，R1 為經甲胺基取代之C3 烷基。在其他此類實施例中，R1 為經甲胺基取代之C3 烷基。
在一些實施例中，R3 及R4 獨立地為氫、鹵素、C1-6 烷基、C2-6 烯基或C2-6 炔基，其中C1-6 烷基、C2-6 烯基及C2-6 炔基未經取代。在某些實施例中，R3 及R4 獨立地為氫、C1-6 烷基或C2-6 炔基，其中C1-6 烷基及C2-6 炔基未經取代。
在一些實施例中，R3 及R4 中之一者為氫且另一者為鹵素、C1-6 烷基、C2-6 烯基或C2-6 炔基，其中C1-6 烷基、C2-6 烯基及C2-6 炔基獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基。在一些實施例中，R3 及R4 中之一者為氫且另一者為鹵素、C1-6 烷基、C2-6 烯基或C2-6 炔基，其中C1-6 烷基、C2-6 烯基及C2-6 炔基未經取代。在某些實施例中，R3 及R4 中之一者為氫且另一者為C1-6 烷基或C2-6 炔基，其中C1-6 烷基及C2-6 炔基未經取代。在一些實施例中，R3 及R4 兩者皆為氫。
在某些實施例中，R2 為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基，其中C1-6 烷基及C1-6 烷氧基獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基。在一些實施例中，R2 為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基，其中C1-6 烷基及C1-6 烷氧基未經取代。在某些實施例中，R2 為氫或鹵素，諸如氟。在個例中，R2 為氫。
在一些實施例中，R5 及R6 獨立地為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基，其中C1-6 烷基及C1-6 烷氧基獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基。在某些實施例中，R5 及R6 獨立地為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基，其中C1-6 烷基及C1-6 烷氧基未經取代。在一些實施例中，R5 及R6 獨立地為氫、鹵素或羥基。在某些實施例中，R5 及R6 一起為=CH2 。
在某些實施例中，R5 為氫且R6 為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基或C3-6 炔基-O-，其中C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基及C3-6 炔基-O-獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基。在一些實施例中，R5 為氫且R6 為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基，其中C1-6 烷基及C1-6 烷氧基獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基。在某些實施例中，R5 為氫且R6 為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基，其中C1-6 烷基及C1-6 烷氧基未經取代。在一些實施例中，R5 為氫且R6 為氫、鹵素(諸如氟或氯)、羥基或未經取代之C1-6 烷氧基(諸如甲氧基)。在一些實施例中，R5 為氫且R6 為鹵素，諸如氟或氯。在某些個例中，R5 為氫且R6 為羥基。在其他實施例中，R5 為氫且R6 為未經取代之C1-6 烷氧基，諸如甲氧基。
在某些實施例中，R6 為氫且R5 為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基或C3-6 炔基-O-，其中C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、C2-6 烯基、C3-6 烯基-O-、C2-6 炔基及C3-6 炔基-O-獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基。在一些實施例中，R6 為氫且R5 為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基，其中C1-6 烷基及C1-6 烷氧基獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基。在某些實施例中，R6 為氫且R5 為氫、鹵素、羥基、疊氮基、胺基、C1-6 烷基或C1-6 烷氧基，其中C1-6 烷基及C1-6 烷氧基未經取代。在一些實施例中，R6 為氫且R5 為氫、鹵素(諸如氟或氯)、羥基或未經取代之C1-6 烷氧基(諸如甲氧基)。在一些實施例中，R6 為氫且R5 為鹵素，諸如氟或氯。在某些個例中，R6 為氫且R5 為羥基。在其他實施例中，R5 為氫且R6 為未經取代之C1-6 烷氧基，諸如甲氧基。
在一些實施例中，R5 及R6 中之一者為氫且另一者為鹵素，諸如氟。在某些實施例中，R5 為氫且R6 為鹵素，諸如氟。在某些實施例中，R6 為氫且R5 為鹵素，諸如氟。
在某些個例中，R5 及R6 兩者皆為氫或鹵素，諸如R5 及R6 兩者皆為氫，或R5 及R6 兩者皆為鹵素，諸如氟。
在一些實施例中，R5 為氫。在其他實施例中，R5 為羥基。在其他實施例中，R5 為鹵素。舉例而言，R5 可為氟、溴或氯。
在一些實施例中，R6 為氫。在其他實施例中，R6 為羥基。在其他實施例中，R6 為甲氧基。在其他實施例中，R6 為鹵素。舉例而言，R6 可為氟、溴或氯。
在某些實施例中，V1 及V2 獨立地為O或S。在一些實施例中，V1 及V2 獨立地為O或CH2 。在一些實施例中，V1 及V2 皆為O。在某些實施例中，V1 及V2 皆為S。在某些實施例中，V1 及V2 中之至少一者為O。在一些實施例中，V1 及V2 中之至少一者為S。在某些實施例中，V1 及V2 中之至少一者為CH2 。
在一些實施例中，BG1 及BG2 獨立地為-O-P(O)Rp -O-或-O-P(S)Rp -O-。在某些實施例中，BG1 及BG2 中之至少一者為-O-P(O)Rp -O-。在一些實施例中，BG1 及BG2 中之至少一者為-O-P(S)Rp -O-。在某些實施例中，BG1 為-O-P(O)Rp -O-且BG2 為-O-P(S)Rp -O-。在一些實施例中，BG1 為-O-P(O)Rp -O-且BG2 為-O-P(S)Rp -O-。在某些實施例中，BG1 及BG2 兩者皆為-O-P(O)Rp -O-。
在某些實施例中，Rp 在每次出現時獨立地為羥基、硫醇基、C1-6 烷基、硼烷并(-BH3 − )或-NR'R"。在一些實施例中，Rp 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基。在某些實施例中，Rp 為羥基。在一些實施例中，Rp 為硫醇基。在一些實施例中，一個Rp 為羥基且另一者為硫醇基。
在一些實施例中，BG1 及BG2 兩者皆為-O-P(O)Rp -O-且Rp 在每次出現時獨立地為羥基、硫醇基、C1-6 烷基、硼烷并(-BH3 − )或-NR'R"。在某些實施例中，BG1 及BG2 兩者皆為-O-P(O)Rp -O-且Rp 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基。在一些實施例中，BG1 及BG2 兩者皆為-O-P(O)Rp -O-且Rp 為羥基。在其他實施例中，BG1 及BG2 兩者皆為-O-P(O)Rp -O-且Rp 為硫醇基。在一些實施例中，BG1 為-O-P(O)Rp -O-，其中Rp 為羥基，且BG2 為-O-P(O)Rp -O-，其中Rp 為硫醇基。在其他實施例中，BG1 為-O-P(O)Rp -O-，其中Rp 為硫醇基，且BG2 為-O-P(O)Rp -O-，其中Rp 為羥基。
在某些個例中，BG1 及BG2 中之至少一者為-NH-P(O)Rp -O-、-O-P(O)Rp -NH-、-NH-P(S)Rp -O-或-O-P(S)Rp -NH-。在一些個例中，BG1 及BG2 中之至少一者為-NH-P(O)Rp -O-或-O-P(O)Rp -NH-。在某些實施例中，BG1 及BG2 兩者皆為-NH-P(O)Rp -O-或-O-P(O)Rp -NH-。在某些個例中，BG1 及BG2 中之至少一者為-NH-P(O)Rp -O-、-O-P(O)Rp -NH-、-NH-P(S)Rp -O-或-O-P(S)Rp -NH-；且Rp 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基。在一些個例中，BG1 及BG2 中之至少一者為-NH-P(O)Rp -O-或-O-P(O)Rp -NH-；且Rp 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基。在某些實施例中，BG1 及BG2 兩者皆為-NH-P(O)Rp -O-或-O-P(O)Rp -NH-且Rp 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基。在一些實施例中，BG1 及BG2 兩者皆為-NH-P(O)Rp -O-或-O-P(O)Rp -NH-；且Rp 為羥基。在其他實施例中，BG1 及BG2 兩者皆為-NH-P(O)Rp -O-或-O-P(O)Rp -NH-；且Rp 為硫醇基。
在某些實施例中，當Rp 為-NR'R"時，R'及R"獨立地為氫或未經取代之C1-6 烷基，或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環，諸如嗎啉、吡咯啶或哌嗪。
在某些實施例中，B1 及B2 為同一核鹼基。在其他實施例中，B1 及B2 為不同核鹼基。在一些實施例中，B1 及B2 皆為嘌呤核鹼基。在某些實施例中，B1 及B2 皆為嘧啶核鹼基。在一些實施例中，B1 為嘌呤核鹼基，且B2 為嘧啶核鹼基。在某些實施例中，B1 為嘧啶核鹼基，且B2 為嘌呤核鹼基。
在一些個例中，B1 及B2 獨立地選自腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶及胞嘧啶及其經修飾之變異體。在某些實施例中，B1 及B2 兩者皆為腺嘌呤或其經修飾之變異體。在一些實施例中，B1 及B2 兩者皆為鳥嘌呤或其經修飾之變異體。在某些實施例中，B1 為鳥嘌呤或其經修飾之變異體，且B2 為腺嘌呤或其經修飾之變異體。在一些實施例中，B1 為腺嘌呤或其經修飾之變異體，且B2 為鳥嘌呤或其經修飾之變異體。
在一些實施例中，B1 及B2 獨立地選自：
Figure 02_image028
，其中 Z1 、Z2 、Z3 、Z4 、Z5 及Z6 在每次出現時獨立地為CRz 或N； Za 為O (除了Z5 為N時以外)或NR'；其中 Rz 在每次出現時獨立地為氫、鹵素、疊氮基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、-C(O)C1-6 烷基、-CO2 H、-CO2 C1-6 烷基、-C(O)NR'、-C(O)NR'R"、-OC(O)C1-6 烷基、-NR'C(O)C1-6 烷基、-N(R')C(O)NR'R"或-OC(O)NR'R"，其中 C1-6 烷基及C1-6 烷氧基在每次出現時獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；及 R'及R"在每次出現時獨立地為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代之C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環。
在一些實施例中，對於B1 及B2 ，一或兩次出現之Z1 為CRz (諸如CH或CNH2 )。在某些實施例中，一或兩次出現之Z5 為CRz (諸如CH或CNH2 )。在一些實施例中，一或兩次出現之Z1 為CRz (諸如CH或CNH2 )，且一或兩次出現之Z5 為CRz (諸如CH或CNH2 )。在某些實施例中，兩次出現之Z1 為CRz (諸如CH或CNH2 )，且兩次出現之Z5 為CRz (諸如CH或CNH2 )。
在某些個例中，對於B1 及B2 ，Z3 為CRz (諸如CH或CNH2 )。在某些實施例中，Z3 為CRz (諸如CH或CNH2 )，且一或兩次出現之Z1 為CRz (諸如CH或CNH2 )。在某些實施例中，Z3 為CRz (諸如CH或CNH2 )，且一或兩次出現之Z5 為CRz (諸如CH或CNH2 )。在某些實施例中，Z3 為CRz (諸如CH或CNH2 )，兩次出現之Z1 為CRz (諸如CH或CNH2 )，且兩次出現之Z5 為CRz (諸如CH或CNH2 )。
在一些個例中，對於B1 及B2 ，Za 為NR'，諸如NH或NC1-6 烷基。在其他實施例中，Za 為O。
在實施例個例中，一或兩次出現之Z2 為N。在某些實施例中，Z4 為N。在一些實施例中，一或兩次出現之Z2 為N，且Z4 為N。在某些實施例中，兩次出現之Z2 為N，且Z4 為N。
在實施例個例中，一或兩次出現之Z6 為N。在某些實施例中，Z4 為N。在一些實施例中，一或兩次出現之Z6 為N，且Z4 為N。在某些實施例中，兩次出現之Z6 為N，且Z4 為N。在一些實施例中，一或兩次出現之Z6 為N，且一或兩次出現之Z2 為N。在一些實施例中，兩次出現之Z6 為N，且兩次出現之Z2 為N。
在一些實施例中，B1 及B2 獨立地選自：
Figure 02_image030
，其中 Z1 、Z3 及Z5 在每次出現時獨立地為CRz 或N； Za 為O (除了Z5 為N時以外)或NR'；其中 Rz 在每次出現時獨立地為氫、鹵素、疊氮基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、-C(O)C1-6 烷基、-CO2 H、-CO2 C1-6 烷基、-C(O)NR'、-C(O)NR'R"、-OC(O)C1-6 烷基、-NR'C(O)C1-6 烷基、-N(R')C(O)NR'R"或-OC(O)NR'R"，其中 C1-6 烷基及C1-6 烷氧基在每次出現時獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；及 R'及R"在每次出現時獨立地為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代之C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環。
在一些實施例中，B1 及B2 獨立地選自：
Figure 02_image032
，其中 Za 為NR'；其中 Rz 在每次出現時獨立地為氫、鹵素、疊氮基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、C1-6 烷基、C1-6 烷氧基、-C(O)C1-6 烷基、-CO2 H、-CO2 C1-6 烷基、-C(O)NR'、-C(O)NR'R"、-OC(O)C1-6 烷基、-NR'C(O)C1-6 烷基、-N(R')C(O)NR'R"或-OC(O)NR'R"，其中 C1-6 烷基及C1-6 烷氧基在每次出現時獨立地視情況經一或多個選自以下之基團取代：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；及 R'及R"在每次出現時獨立地為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代之C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環。
在某些實施例中，B1 及B2 獨立地選自：
Figure 02_image034
Figure 02_image036
。
在某些實施例中，Ra1 、Rb1 、Ra2 及Rb2 皆為氫。在一些實施例中，Ra1 、Rb1 、Ra2 及Rb2 中之至少一者為C1-3 烷基，諸如甲基。在某些個例中，Ra1 及Ra2 為C1-3 烷基，諸如甲基。在一些實施例中，Ra1 、Rb1 、Ra2 及Rb2 中之一者為C1-3 烷基，諸如甲基。
在某些個例中，CDN具有式IIa之結構：
Figure 02_image038
式IIa 其中R1 、R2 、R3 、R4 、R5 及R6 、V1 及V2 、BG1 及BG2 ，以及B1 及B2 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIa之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIa之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIb之結構：
Figure 02_image040
式IIb 其中R1 、R5 及R6 、V1 及V2 、BG1 及BG2 ，以及B1 及B2 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIb之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIb之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIc之結構：
Figure 02_image042
式IIc 其中R1 、R5 及R6 、BG1 及BG2 ，以及B1 及B2 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIc之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIc之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IId之結構：
Figure 02_image044
式IId 其中R1 、R5 、R6 及RP 、V1 及V2 ，以及B1 及B2 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IId之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IId之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIe之結構：
Figure 02_image046
式IIe 其中R1 、R5 、R6 及RP ，以及B1 及B2 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIe之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIe之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIf之結構：
Figure 02_image048
式IIf 其中 Y及Z獨立地為CH或N；且 R1 、R5 、R6 、RP 及B1 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIf之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIf之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIg之結構：
Figure 02_image050
式IIg 其中 W及X獨立地為CH或N；且 R1 、R5 、R6 、RP 及B2 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIg之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIg之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIh之結構：
Figure 02_image052
式IIh 其中 W、X、Y及Z獨立地為CH或N；且 R1 、R5 、R6 及RP 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIh之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIh之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIi之結構：
Figure 02_image054
式IIi 其中 W、X、Y及Z獨立地為CH或N；且 R1 、R5 、R6 及RP 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIi之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIi之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIj之結構：
Figure 02_image056
式IIj 其中 W、X、Y及Z獨立地為CH或N；且 R1 、R5 、R6 及RP 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIj之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIj之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIk之結構：
Figure 02_image058
式IIk 其中 W、X、Y及Z獨立地為CH或N；且 R1 及RP 係如上文關於式II所定義； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在式IIk之一些實施例中，R1 為經羥基、硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。在式IIk之某些實施例中，R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基。
在某些個例中，CDN具有式IIm之結構：
Figure 02_image060
式IIm 其中 R1 為經硫醇基或胺基取代之C2-4 烷基，諸如乙基； X及Z獨立地為CH或N； RP 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，CDN具有式IIn之結構：
Figure 02_image062
式IIn 其中 X及Z獨立地為CH或N；且 RP 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，CDN具有式IIo之結構：
Figure 02_image064
式IIo 其中 X及Z獨立地為CH或N；且 RP 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基； 或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，在式IId-k及IIm-o中，兩次出現之RP 為羥基。在某些實施例中，在式IId-k及IIm-o中，兩次出現之RP 為硫醇基。在一些實施例中，在式IId-k及IIm-o中，所出現的與BG1 相對應之RP (左上方RP )為羥基且所出現的與BG2 相對應之RP (右下方RP )為硫醇基。在某些實施例中，在式IId-k及IIm-o中，所出現的與BG1 相對應之RP 為硫醇基且所出現的與BG2 相對應之RP 為羥基。
在一個實施例中，CDN具有以下結構(CDN-A)：
Figure 02_image066
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，CDN具有以下結構：
Figure 02_image068
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，CDN具有以下結構：
Figure 02_image070
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，CDN具有以下結構：
Figure 02_image072
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，CDN具有以下結構(CDN-B)：
Figure 02_image074
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，CDN具有以下結構：
Figure 02_image076
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，CDN具有以下結構：
Figure 02_image078
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，CDN具有以下結構：
Figure 02_image080
或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明提供藉由經由連接子將式II之CDN (例如CDN-A或CDN-B)結合至抗體來製備式I之ADC的方法。式II之CDN可經由可裂解或不可裂解的連接子與抗體結合。在特定實施例中，CDN在連接子裂解後釋放至腫瘤細胞、癌症相關免疫細胞或腫瘤微環境中。
在式I之ADC中，其中CDN (D)具有式II (例如CDN-A或CDN-B)，CDN可共價結合於在式II之CDN之R1 的羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團處之連接子(L)。應理解，式II之CDN亦可不結合至連接子(L)或ADC，且可藉由本文所描述之方法按以下方式投與：單獨地投與；與本文所描述之ADC組合投與；與其他活性劑(諸如免疫腫瘤學藥劑，諸如免疫檢查點抑制劑，包括抗PD1、抗PD-L1及抗CTLA-4抗體)組合投與；或與本文所描述之ADC組合且與其他活性劑(諸如免疫腫瘤學藥劑)組合投與。
式II之CDN (例如CDN-A或CDN-B)在單獨使用或作為式I之ADC之組分使用時能夠促效STING。在特定實施例中，CDN可經由連接子與抗體或抗原結合片段結合。如本文所揭示，CDN可經由式II之CDN之R1 的羥基、胺基、硫醇基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團與連接子中之相應基團之間的化學反應共價鍵結至連接子。換言之，在一些實施例中，CDN藉由在CDN之R1 處發生之以下鍵中之一者連接至連接子(L)：R1 -O-L、R1 -NH-L、R1 -S-L、R1 -N(C1-6 烷基)-L或R1 -PEG-O-L，其中R1 表示R1 部分中排除了R1 之羥基、胺基、硫醇基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團外之剩餘部分。下文描述特定抗體、抗原結合片段及連接子。 6.3       抗體及抗原結合片段
如本文所用，術語「抗體」係指特異性結合於特定目標抗原之免疫球蛋白分子。抗體可具有人類或非人類來源。抗體可經由連接子與部分6.2中所述之CDN結合。抗體可為多株、單株、經基因工程改造的及/或在自然界中在其他方面經修飾。構成本發明之ADC的抗體適合於投與人類，例如呈人類化抗體或完全人類抗體形式。
抗體包含具有稱為互補決定區(CDR)之高變區的重鏈及輕鏈，該等互補決定區介導抗體與目標抗原之結合。抗體通常包含重鏈，其包含具有三個CDR之可變區(VH)，亦即，VH CDR#1、VH CDR#2及VH CDR#3；及輕鏈，其包含具有三個CDR之可變區(VL)，亦即VL CDR#1、VL CDR#2及VL CDR#3。本發明之ADC之具體實施例包括(但不限於)包含抗體及/或抗原結合片段之實施例，該等抗體及/或抗原結合片段包括此等例示性CDR及/或VH 及/或VL 序列。
構成本發明之ADC的抗體可呈全長抗體形式，其可具有或來源於任何抗體同型，包括例如IgA、IgD、IgE、IgG、IgM或IgY。在一些實施例中，構成ADC之抗體為IgG (例如IgG1 、IgG2 、IgG3 或IgG4 )。在一些實施例中，抗體包含抗體之恆定區之全部或一部分。
構成本發明之ADC的抗體可為雙特異性抗體、雙可變域抗體、多鏈或單鏈抗體、單域抗體、駱駝化抗體、scFv-Fc抗體、替代性抗體(包括替代性輕鏈構築體)及其類似物。
本發明之ADC可包含全長(完整)抗體分子以及抗原結合片段。如本文所用，術語「片段」係指完整抗體中包含比完整抗體更少之胺基酸殘基的一部分。如本文所用，術語「抗原結合片段」係指介導與抗原之結合或與完整抗體競爭抗原結合的抗體之多肽片段。適合的例示性抗原結合片段包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、dAb、Fd或具有足夠的構架進行結合之經分離之互補決定區(CDR)。如熟習此項技術者將瞭解，片段可藉由分子工程改造或經由完整抗體或抗體鏈之化學或酶處理或藉由重組方式獲得。
抗體或其抗原結合片段不限於特定產生或製造方法，且可使用熟知技術製備，諸如融合瘤技術、重組技術、噬菌體呈現技術、轉殖基因動物或其某一組合。 6.4       目標抗原及抗體
如本發明中所涵蓋的構成ADC之抗體或其抗原結合片段特異性結合於一或多種癌症相關腫瘤或免疫細胞相關抗原。
在某些實施例中，癌症相關腫瘤或免疫細胞相關抗原為T細胞共抑制分子。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於選自以下之腫瘤相關抗原：PD-L1、PD-L2、CD47、CD80、CD86、HVEM、UL144、CD155、CD112、CD113、半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-3、半乳糖凝集素-9、CD48、LIGHT、BTLA及CD160。在一些實施例中，腫瘤相關抗原為結合於選自以下之T細胞分子的分子：BTLA、Tim-3、PD-1、CTLA-4、TIGIT、CD244及CD223。
在一些實施例中，抗體為抗PDP-L1抗體，諸如阿特珠單抗(atezolizumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、阿維魯單抗(avelumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體為抗CD47抗體，諸如Hu5F9-G4、IBI188、CC-90002、ZL1201、TTI-621、AO-176、SGN-CD47M之抗體、ALX148之抗原結合域或其抗原結合片段；或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。
在其他實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於癌症相關腫瘤抗原，其為生長因子受體(GFR)。在某些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為EGFR/ErbB/HER家族GFR。在一些實施例中，癌症相關腫瘤抗原選自EGFR/HER1 (ErbB1)、HER2/c-Neu (ErbB2)、Her3 (ErbB3)及Her4 (ErbB4)受體。在某些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為IGFR家族GFR。在一些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為IGF1R或IGF2R受體。在某些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為TGF-βR (TβR)家族GFR。在一些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為TβR I或TβR II受體。在某些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為VEGFR家族GFR。在一些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為VEGFR1、VEGFR2或VEGFR3受體。在某些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為PDGFR家族GFR。在一些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為PDGFR-α或PDGFR-β受體。在某些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為FGFR家族GFR。在一些實施例中，癌症相關腫瘤抗原為FGFR1、FGFR2、FGFR3或FGFR4受體。
在一些實施例中，抗體為抗EGFR/HER1 (ErbB1)抗體，諸如西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、萊西單抗(necitumumab)或其抗原結合片段、或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體為抗HER2 (ErbB2)抗體，諸如曲妥珠單抗(trastuzumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體為抗VEGFR2抗體，諸如雷莫蘆單抗(ramucirumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體為抗PDGFR-α抗體，諸如奧拉單抗(olaratumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。
在其他實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於淋巴瘤相關抗原。在某些實施例中，淋巴瘤相關抗原為CD20、CD30、CD19/CD3、CD22或CD33。
在一些實施例中，抗體為抗CD20抗體，諸如利妥昔單抗、替伊莫單抗(ibritumomab)、奧伐木單抗(ofatumumab)、奧比珠單抗(obinutuzumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體為抗CD30抗體，諸如貝倫妥單抗(brentuximab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體為抗CD19/CD3抗體，諸如博納吐單抗(blinatumomab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體為抗CD22抗體，諸如伊諾妥珠單抗(inotuzumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體為抗CD33抗體，諸如吉妥珠單抗(gemtuzumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列之抗體或其抗原結合片段。
在其他實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於骨髓瘤相關抗原。在某些實施例中，淋巴瘤相關抗原為SLAMF7或CD38。
在一些實施例中，抗體為抗SLAMF7抗體，諸如埃羅妥珠單抗(elotuzumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，抗體為抗CD38抗體，諸如達土木單抗(daratumumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。
在其他實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於母細胞瘤相關抗原。在某些實施例中，母細胞瘤相關抗原為GD2。
在一些實施例中，抗體為抗GD2抗體，諸如迪奴圖單抗(dinutuximab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或其抗原結合片段。
在其他實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於RANK配位體。
在一些實施例中，抗體為抗RANK配位體抗體，諸如德諾單抗(denosumab)或其抗原結合片段，或具有與其等效之胺基酸序列的抗體或抗原結合片段。
在某些實施例中，抗體為結合於在癌細胞(諸如PD-L1及EGFR)中優先表現或過度表現之抗原的抗體。
在一些實施例中，抗體為結合於來源於感染人類細胞之微生物之抗原的抗體。
如本文所用，「α」及「抗」可互換地使用，例如在描述「抗PD-L1」抗體或「α-PD-L1」抗體時互換地使用。
如本文所用，具有連字符之蛋白質名稱與其不加連字符之形式可互換地使用(亦即，「PD-L1」及「PDL1」可互換地使用)。
如本文所用，除非另外指明，否則根據Eu編號系統進行免疫球蛋白胺基酸殘基之編號。 6.5.      連接子
在本文所描述之ADC中，CDN藉助於多原子連接子連接至抗體或抗原結合片段。連接子藉由在連接子上之一個位置處與CDN形成共價鍵且在連接子上之另一位置處與抗體或抗原結合片段形成共價鍵來將CDN連接至抗體或抗原結合片段。連接子相對於CDN (例如在式Ia中)可為單價的，使得其將單一CDN共價連接至抗體或其片段上之單一位點。連接子相對於CDN (例如，在式I中當m＞1時)亦可為多價的，使得其將超過一個CDN共價連接至抗體或其片段上之單一位點。如本文所用，表現「連接子」意欲包括未結合、部分結合(亦即僅結合至CDN或Ab)及完全結合形式之連接子(亦即結合至CDN及Ab兩者)。在具體實施例中，抗體上包含官能基之部分及在抗體與連接子之間形成共價鍵之連接子分別具體地經說明為RX 及RY 。
將CDN連接至抗體或其片段之連接子本質上可為長的、短的、可撓性的、剛性的、親水性的或疏水性的，或可包含具有不同特徵之區段。在ADC之情形下，適用於將藥物連接至抗體或其片段之多種連接子為此項技術中已知的。此等連接子以及其他連接子可用於將CDN連接至本文所描述之ADC之抗原結合片段之抗體。
在某些實施例中，連接子包括將CDN連接至抗體或抗原結合片段之鏈中之2至100、2至75、2至50、2至25、2至10、5至100、5至75、5至50、5至25、5至10、10至100、10至75、10至50或10至25個原子(包括可來源於CDN或抗體或抗原結合片段之連接子之末端處的任何原子)。同樣，用於CDN偶合連接子中之連接子(如下文所論述)亦可包括將CDN連接至連接子上能夠偶合至抗體上之互補位點之位點的鏈中之2至100、2至75、2至50、2至25、2至10、5至100、5至75、5至50、5至25、5至10、10至100、10至75、10至50或10至25個原子。
連接子對於細胞外環境及血清可為化學穩定的，或可包括有意不穩定且可將CDN釋放於細胞外環境或腫瘤微環境中之鍵。
在一些實施例中，連接子包括經設計以在ADC內化於細胞內之後釋放CDN的鍵。在一些具體實施例中，連接子包括經設計以裂解及/或分解或以其他方式特異性或非特異性地降解內部細胞之連接子。
連接至ADC之抗體或其抗原結合片段之CDN的數目可變化(稱為「藥物-抗體比」或「DAR」)且將受抗體或其抗原結合片段上可獲得之連接位點的數目及連接至單一連接子之CDN的數目限制。在包括多於一個CDN之ADC中，各CDN可相同或不同。只要CDN在使用及/或儲存條件下沒有展現出不可接受之聚集程度，則涵蓋DAR為10或甚至更高之ADC。在一些實施例中，本文所描述之ADC之DAR可在1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5或1至4範圍內。在一些實施例中，本文所描述之ADC之DAR可在2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5或2至4範圍內。在某些具體實施例中，ADC之DAR可為1、2、3或4。在其他具體實施例中，ADC之DAR可為5、6、7或8。在一些具體實施例中，ADC之DAR可為1。
藉助於實例(且非限制)，可包括於本文中所描述之ADC中的一些可裂解連接子及不可裂解連接子描述於下。 6.5.1     可裂解連接子
在某些實施例中，連接子可藉由化學或酶方法活體內裂解以釋放CDN。在某些個例中，CDN自連接子裂解以在與連接子偶合之前再生相同CDN。在其他實施例中，所釋放CDN為自最初與連接子偶合的CDN修飾之CDN，該經修飾CDN具有來自連接子之殘餘官能基但保持功效或甚至展現優於原始CDN之增強功效。大體而言，可裂解連接子併入以化學方式或酶可裂解之一或多個化學鍵，而連接子之其餘部分為不可裂解的。
在某些實施例中，可裂解連接子包含化學不穩定基團。化學不穩定基團在血漿與一些細胞質隔室之間具有不同特性，例如核內體及溶酶體之酸性環境，或胞溶質(例如麩胱甘肽)中之高硫醇濃度。在某些實施例中，包含化學不穩定基團之連接子的血漿穩定性可藉由使用取代基改變靠近化學不穩定基團之位阻而增加或降低。
在一些實施例中，可裂解連接子之化學不穩定基團為酸不穩定基團。酸不穩定基團可在血液中和pH之循環期間保持完整，且在酸性條件下進行水解以釋放CDN，諸如在酸性腫瘤微環境內釋放或在內化至核內體(pH 5.0至6.5)及溶酶體(pH 4.5至5.0)細胞隔室中之後釋放。可裂解連接子之此pH依賴性釋放機制可藉由化學修飾(例如取代)最佳化，以調節CDN按特定pH的釋放。在一些實施例中，可裂解連接子包含酸不穩定基團，諸如腙、肼、順-烏頭醯基、縮醛、原酸酯或亞胺基。在一些實施例中，酸不穩定基團在腫瘤微環境中、腫瘤或免疫細胞之核內體中、腫瘤或免疫細胞之溶酶體中、腫瘤或免疫細胞之酸性細胞內隔室中或其任何組合中進行裂解。在一些實施例中，酸不穩定基團並未在腫瘤微環境中、腫瘤或免疫細胞之核內體中、腫瘤或免疫細胞之溶酶體中及/或腫瘤或免疫細胞之酸性細胞內隔室中進行裂解。如本文所涵蓋，酸不穩定基團之可裂解性可藉由ADC中之完全結合連接子之pH敏感性來測定。酸不穩定連接子可含有額外裂解位點，諸如額外的酸不穩定裂解位點及/或酶不穩定裂解位點。
在某些實施例中，可裂解連接子包含二硫基。二硫化物經設計以在內化至細胞中時釋放藥物，其中胞溶質提供與細胞外環境相比更多的還原環境。二硫鍵之斷裂一般需要存在胞溶質硫醇輔因子，諸如(還原)麩胱甘肽(GSH)，以使得含二硫基之連接子在循環中適度的穩定且在胞溶質中選擇性地釋放藥物。細胞內酶蛋白二硫鍵異構酶，或能夠裂解二硫鍵之類似酶亦可促成二硫裂解。腫瘤細胞可由於不規律血流而誘導低氧狀態，產生增強之還原酶活性及甚至更高之麩胱甘肽濃度。
包括例示性含二硫基之連接子的ADC包括下式：
Figure 02_image082
Figure 02_image084
其中 D表示CDN (例如CDN-A或CDN-B)； S-D之S來自CDN，Ab-NH之NH來自Ab，Ab-S之S來自Ab； Ab表示抗體或其結合片段； 「n」表示經由連接子連接至Ab之D之出現次數；且 R在每次出現時獨立地為氫或C1-3 烷基。
在某些實施例中，連接子包含以下結構
Figure 02_image086
，其中*-NH之NH可來自Ab，且
Figure 02_image088
表示連接子直接或間接地連接至CDN (例如在CDN (例如CDN-A或CDN-B)之R1 之羥基、胺基、硫醇基等處)之連接點。在某些實施例中，
Figure 02_image090
表示連接子與CDN之R1 基團之硫醇基的直接連接點，其中鄰近
Figure 02_image092
之S為R1 基團之硫醇基的一部分。
針對所揭示之ADC所預期之另一類型的可裂解連接子為酶可裂解連接子。此類連接子通常為基於肽的或包括肽區域，且在血漿及細胞外環境中可比化學上不穩定連接子更穩定。由於比溶酶體高的pH值及溶酶體蛋白水解酶之內源性抑制劑之存在，肽鍵在血清中通常為穩定的。CDN自ADC釋放可藉由溶酶體蛋白酶(例如組織蛋白酶及纖維蛋白溶酶)之作用發生，該等溶酶體蛋白酶可以較高含量存在於某些腫瘤細胞中。在一些實施例中，可裂解肽藉由溶酶體酶裂解。在某些實施例中，可裂解肽藉由組織蛋白酶(例如組織蛋白酶B)或纖維蛋白溶酶裂解。
如熟習此項技術者將認識到，直接連接至CDN之肽連接子之蛋白水解裂解可在醯胺鍵水解時產生CDN之胺基酸加合物。因此，亦針對本發明之ADC預期酶可裂解連接子，其包含自分解型間隔基以將CDN與裂解位點在空間上分離。自分解型間隔基之使用允許在醯胺鍵水解後消除具有完全活性的未經化學修飾之式II之CDN。
一種預期之自分解型間隔基為雙官能對胺基苯甲醇基團，其在一端上在苯甲基羥基處連接至經胺基甲酸酯官能化之CDN上的胺基，且在另一端上在胺基處連接形成與肽之醯胺鍵(亦即PABC基團)。在肽之蛋白質介導之裂解後，所得CDN活化，引起1,6-消除反應，該反應釋放未經修飾之CDN、二氧化碳及連接子之剩餘部分。在一些實施例中，可裂解連接子包含PABC基團。另外，所預期的自我解型間隔基為PABC之已描述之雜環變異體(參見例如以引用之方式併入本文中之US 7,989,434)。
在一些實施例中，酶可裂解連接子為非肽連接子。在某些實施例中，非肽連接子為肽模擬物。在某些實施例中，非肽連接子藉由腫瘤特異性蛋白酶裂解。在某些實施例中，非肽連接子藉由腫瘤及/或腫瘤微環境中豐度提高之腫瘤特異性蛋白酶裂解。在某些實施例中，非肽連接子藉由組織蛋白酶B裂解。在某些實施例中，非肽連接子為環丁烷-1,1-二甲醯胺。
在一些實施例中，酶可裂解連接子係基於ß-葡糖醛酸之連接子。ß-葡萄糖苷酸醣苷鍵之裂解可經由溶酶體酶ß-葡糖苷酸酶發生，該ß-葡糖苷酸酶充分存在於溶酶體內且在一些腫瘤類型中過度表現，同時在細胞外部具有低活性。
可裂解連接子可以包括不可裂解部分或區段，及/或可裂解區段或部分可以包括在另外的不可裂解連接子中以使其可裂解。僅舉例而言，聚乙二醇(PEG)及相關聚合物可以在聚合物主鏈中包括可裂解基團。舉例而言，聚乙二醇或聚合物連接子可包括一或多個可裂解基團，諸如二硫化物、肼、腙、二肽或環丁烷-1,1-二甲醯胺。
在某些實施例中，連接子包含酶可裂解肽部分，例如包含式VIIIa、VIIIb、VIIIc、VIIId、VIIIe、VIIIf或VIIIg之連接子：
(VIIIa)
Figure 02_image094
(VIIIb)
Figure 02_image096
(VIIIc)
Figure 02_image098
(VIIId)
Figure 02_image100
(VIIIe)
Figure 02_image102
(VIIIf)
Figure 02_image104
(VIIIg)
Figure 02_image106
其中： 「肽」表示可藉由溶酶體酶裂解之肽或肽模擬物鏈(以N→C說明且不展示羧基及胺基「末端」)； T表示包含一或多個乙二醇單元或伸烷基鏈或其組合之鏈(例如聚合物鏈)； Ra 係選自氫、C1-6 烷基、磺酸酯及甲基磺酸酯； Rb 係選自氫、
Figure 02_image108
Figure 02_image110
； n為在2至10，諸如3至6之範圍內之整數，特定言之，5； p為在0至5範圍內之整數； q為在0至5範圍內之整數，特定言之，3； w為0或1，且*-S-之-s-可來自Ab； x為0或1，且*-NH之NH可來自Ab； y為0或1；且*-NH之NH可來自Ab； z為0或1；
Figure 02_image112
表示連接子直接或間接地連接至CDN (例如在CDN (例如CDN-A或CDN-B)之R1 之羥基、胺基、硫醇基等處)之連接點；及 *表示連接至連接子之其餘部分或直接或間接地連接至抗體的連接點； 或其鹽。
在一些實施例中，式VIIIa-d中之可裂解肽部分或「肽」包含以下結構：
Figure 02_image114
，其中若x、y及w為0，則末端-NH-可來自Ab。
在一些實施例中，式VIIIe中之可裂解肽部分或「肽」包含以下結構：
Figure 02_image116
，其中w為1。
在某些實施例中，式VIIIa-g中之可裂解肽部分或「肽」包含2至20個胺基酸殘基，諸如2至15、2至10、2至7或2至5個殘基，包括四肽、三肽或二肽。在特定實施例中，可裂解肽部分或「肽」包含二肽，諸如選自以下之二肽：Ala-Ala、Ala-(D)Asp、Ala-Cit、Ala-Lys、Ala-Val、Asn-Cit、Asp-Cit、Asn-Lys、Asn-(D)Lys、Asp-Val、Cit-Ala、Cit-Asn、Cit-Asp、Cit-Cit、Cit-Lys、Cit-Ser、Cit-Val、Glu-Val、苯基Gly-(D)Lys、His-Val、Ile-Cit、Ile-Pro、Ile-Val、Leu-Cit、Lys-Cit、Me3Lys-Pro、Met-Lys、Met-(D)Lys、Phe-Arg、Phe-Cit、Phe-Lys、Pro-(D)Lys、Ser-Cit、Trp-Cit、Val-Ala、Val-(D)Asp、NorVal-(D)Asp、Val-Cit、Val-Glu、Val-Lys，及其鹽。在某些實施例中，二肽為Val-Cit。在某些實施例中，可裂解肽部分或「肽」包含三肽，諸如Glu-Val-Cit。在某些實施例中，可裂解肽部分或「肽」包含四肽，諸如Gly-Phe-Leu-Gly或Ala-Leu-Ala-Leu。
在某些實施例中，連接子具有式VIIIa且包含以下結構：
Figure 02_image118
，其中「肽」為Glu-Val-Cit。
在某些實施例中，連接子具有式VIIIc且包含以下結構：
Figure 02_image120
，其中「肽」為Val-Cit。
在某些實施例中，式VIIId中之可裂解肽部分或「肽」包含二肽，諸如選自以下之二肽：Ala-Ala、Ala-(D)Asp、Ala-Cit、Ala-Lys、Ala-Val、Asn-Cit、Asp-Cit、Asn-Lys、Asn-(D)Lys、Asp-Val、Cit-Ala、Cit-Asn、Cit-Asp、Cit-Cit、Cit-Lys、Cit-Ser、Cit-Val、Glu-Val、苯基Gly-(D)Lys、His-Val、Ile-Cit、Ile-Pro、Ile-Val、Leu-Cit、Lys-Cit、Me3Lys-Pro、Met-Lys、Met-(D)Lys、Phe-Arg、Phe-Cit、Phe-Lys、Pro-(D)Lys、Ser-Cit、Trp-Cit、Val-Ala、Val-(D)Asp、NorVal-(D)Asp、Val-Cit、Val-Glu、Val-Lys，及其鹽。在某些實施例中，式VIIId中之二肽為Val-Cit。在某些實施例中，式VIIId中之可裂解肽部分或「肽」包含三肽，諸如Glu-Val-Cit。在某些實施例中，式VIIId中之可裂解肽部分或「肽」包含四肽，諸如Gly-Phe-Leu-Gly或Ala-Leu-Ala-Leu。
在某些實施例中，連接子具有式VIIId且包含以下結構：
Figure 02_image122
，其中「肽」為Val-Cit。
在某些實施例中，連接子具有式VIIIe且包含以下結構：
Figure 02_image124
，其中「肽」為
Figure 02_image126
。 6.5.2     用於將連接子連接至抗體之基團
多種連接基團可用於將連接子-CDN合成子連接至抗體以產生ADC。連接子-CDN合成子上之連接基團在本質上一般為親電子的。在一些實施例中，連接基團係選自順丁烯二醯亞胺基；活化二硫化物，諸如DSDM、SPDB或磺酸基-SPDB；活性酯，諸如NHS酯或HOBt酯；鹵化甲酸酯、酸鹵化物及烷基或苯甲基鹵化物，諸如鹵乙醯胺。在某些實施例中，連接子(L)與抗體(Ab)之間的所得鍵為硫醚、醯胺、酯、胺基甲酸酯、碳酸酯、脲、二硫化物或醚。
亦針對所揭示之ADC預期「自穩定」順丁烯二醯亞胺及「橋接二硫化物」。「自穩定」順丁烯二醯亞胺基之實例提供於US 2013/0309256中，其特此以引用之方式併入。「橋接二硫化物」之實例提供於Badescu等人，2014, Bioconjugate Chem. 25:1124-1136及WO 2013/085925中，其各者特此以引用之方式併入。 6.5.3.    具有組織蛋白酶可裂解連接子之ADC
如上文所闡述，在本發明之一些實施例中，CDN (例如CDN-A或CDN-B)及包含本發明之ADC的抗體經由組織蛋白酶可裂解連接子連接。在一個此類實施例中，ADC具有式III之結構：
Figure 02_image128
式III 其中變數W、X、Y、Z、RP 及n係如上文關於式I及II所定義。在以上示意圖中，
Figure 02_image130
表示組織蛋白酶可裂解連接子與抗體或其抗原結合片段(Ab)之共價連接。
在一個實施例中，式III之連接子之吡咯啶-2,5-二酮基團在其3-位置處藉由硫醇基連接至抗體(Ab)。舉例而言，吡咯啶-2,5-二酮可在其3-位置處經由抗體上之半胱胺酸殘基共價連接至抗體。所得ADC具有式IIIa之結構：
Figure 02_image132
式IIIa 其中變數W、X、Y、Z、RP 及n係如上文關於式I及II所定義。
在一個實施例中，ADC具有以下結構：
Figure 02_image134
。 6.5.4.    具有麩胱甘肽可裂解連接子之ADC
如上文所闡述，在本發明之一些實施例中，CDN (例如CDN-A或CDN-B)及包含本發明之ADC的抗體係經由麩胱甘肽可裂解連接子連接。在一個此類實施例中，ADC具有式IV之結構：
Figure 02_image136
式IV 其中變數W、X、Y、Z、RP 及n係如上文在式I及II中所定義。在以上示意圖中，
Figure 02_image138
表示麩胱甘肽可裂解連接子與抗體(Ab)之共價連接。
在一個實施例中，式IV中之連接子之羰基可經由攜帶含胺基側鏈之抗體上之離胺酸或其他胺基酸殘基，諸如藉由在連接至羰基之
Figure 02_image140
鍵處與胺基形成醯胺鍵而共價連接至抗體。所得ADC具有式IVa之結構：
Figure 02_image142
式IVa 其中變數W、X、Y、Z、RP 及n係如上文在式I及II中所定義。
在一個實施例中，ADC具有以下結構：
Figure 02_image144
。 6.6       製造抗體-藥物結合物之方法
大體而言，根據式I之ADC可根據以下流程製備： Ab-RX +RY -L-(D)m → (式I) Ab-[-L-(D)m ]n 其中Ab、L、D、m及n係如先前關於式I所定義，且RX 及RY 表示能夠與彼此形成共價鍵之互補基團。
相關地，根據式Ia之ADC可根據以下流程製備： Ab-RX +RY -L-D → (式Ia) Ab-[-L-D]n 其中Ab、L、D及n係如先前關於式I所定義，且RX 及RY 表示能夠彼此形成共價鍵之互補基團，如上文所描述。
基團RX 及RY 之標識將取決於用於將合成子RY -L-(D)m 或RY -L-D連接至抗體之化學反應。合成子通常連接至抗體之胺基酸殘基之側鏈，包括例如可達半胱胺酸殘基之游離硫醇基或可達離胺酸殘基之第一胺基。在一些實施例中，RX 為抗體之胺基酸之側鏈上的基團，諸如胺基或硫醇基。在某些實施例中，RX 為胺基酸(諸如離胺酸、5-羥基離胺酸、鳥胺酸或他汀(statine)，尤其離胺酸)之側鏈上的胺基。在一些實施例中，RX 為胺基酸(諸如半胱胺酸或高半胱胺酸，尤其半胱胺酸)之側鏈上之硫醇基。在此類鍵中，游離硫醇基可藉由首先完全或部分地還原抗體以破壞半胱胺酸殘基之間的鏈間二硫橋鍵而獲得。多種官能基RY 及化學物質可用於與硫醇基形成鍵，且包括例如(但不限於)順丁烯二醯亞胺及鹵乙醯基。
亦針對所揭示之ADC預期具有突變或更多個密碼子以破壞一或多個二硫橋鍵的經工程改造之抗體，且包括例如(但不限於)鏈間二硫橋鍵之單一半胱胺酸殘基突變為絲胺酸殘基以產生來自未配對半胱胺酸之游離硫醇基。亦針對所揭示之ADC預期具有突變或更多個密碼子以引入具有用於連接子結合之硫醇基之殘基的經工程改造之抗體，且包括例如(但不限於)一或多個殘基突變成半胱胺酸殘基，或將額外半胱胺酸殘基併入至抗體或其抗原結合片段之胺基酸序列中。
在某些實施例中，RX 為硫醇基，諸如來自抗體上之半胱胺酸殘基，且RY 為選自以下之基團：鹵乙醯基、順丁烯二醯亞胺、氮丙啶、丙烯醯基、乙烯基碸、吡啶基二硫化物、TNB-硫醇基及烷基化或芳基化劑。在一些實施例中，RX 為硫醇基，諸如來自抗體上之半胱胺酸殘基，且RY 為順丁烯二醯亞胺基。在一些實施例中，RX 為離胺酸殘基之第一胺基。多個官能基RX 及化學物質可用於離胺酸鍵，且包括例如(但不限於) NHS-酯及異硫氰酸酯。
在某些實施例中，RX 為胺，諸如來自抗體上之離胺酸殘基，且RY 為能夠使胺烷基化或醯基化之基團。在一些實施例中，RX 為胺，諸如來自抗體上之離胺酸殘基，且RY 係選自以下之基團：異硫氰酸酯、異氰酸酯、醯基疊氮化物、NHS酯、磺醯氯、醛、乙二醛、環氧化物、環氧乙烷、碳酸酯、芳基鹵化物、亞胺酸酯、碳化二亞胺、酐及氟苯基酯。在某些實施例中，RX 為胺，諸如來自抗體上之離胺酸殘基，且RY 為NHS酯。
如針對本發明之ADC所預期，結合化學物質不限於可用的側鏈基團。抗體亦可經工程改造以包括用於結合之胺基酸殘基，且包括例如(但不限於)藉由將適當小分子連接至胺而將側鏈(諸如胺)轉化成其他適用基團，諸如硫醇基。舉例而言，胺基酸之含第一胺基之側鏈可轉化為含硫醇基之側鏈，諸如-NH-C1-6 烷基-SH，包括-NH-CH2 -CH2 -SH，其中-NH-來自第一胺基。
如熟習此項技術者應瞭解，連接至抗體分子之CDN的數目可變化，產生異質ADC製劑，其中一些抗體含有一個經連接CDN，一些含有兩個經連接CDN、一些含有三個經連接CDN等等(且一些不含經連接CDN)。不均勻性程度將尤其取決於用於連接CDN之化學物質。舉例而言，當IgG1抗體經還原以產生用於連接之硫醇基時，常常產生每分子具有0、1、2、3、4、5、6、7或8個經連接CDN的抗體之非均質混合物。此外，藉由調整RX 與RY 之莫耳比，可產生每分子具有0、1、2、3、4、5、6、7或8個經連接CDN之ADC。因此，應理解，視上下文而定，所陳述之藥物-抗體比(DAR)可為用於收集ADC之平均值。舉例而言，「DAR3」係指其中平均藥物-抗體比為3之異質ADC製劑，例如具有相等數目之DAR2及DAR4之ADC混合物。
純度可藉由此項技術中已知之多種方法評定。作為一具體實例，ADC製劑可經由HPLC、疏水性交換、離子交換、尺寸排阻或其他層析來分析，且純度藉由分析所得峰之曲線下面積來評定。
在一些實施例中，本發明係針對一種製造ADC之方法，其包含(a)將本發明之一或多個CDN (亦即式II之CDN)偶合至連接子(例如，如本文所描述之L)以產生一或多個CDN偶合之連接子；及(b)將一或多個CDN偶合之連接子偶合至抗體或其抗原結合片段(例如，如本文所描述之Ab)以產生ADC。
在某些實施例中，本發明係針對一種製造ADC之方法，其包含(b)將一或多個CDN偶合之連接子(亦即，式II之CDN及例如，如本文所描述之L)偶合至抗體或其抗原結合片段(例如，如本文所描述之Ab)以產生ADC。
在某些實施例中，本發明係針對一種製造一或多個CDN偶合之連接子的方法，該方法包含(a)將本發明之一或多個CDN (亦即式II之CDN)偶合至連接子(例如，如本文所描述之L)以產生一或多個CDN偶合之連接子。
在其他實施例中，本發明係針對一種製造ADC之方法，其包含(a)將一或多個連接子(例如，如本文所描述之L)偶合至抗體或其抗原結合片段(例如，如本文所描述之Ab)以產生連接子偶合之抗體；及(b)將本發明之一或多個CDN (亦即式II之CDN)偶合至連接子偶合之抗體以產生ADC。
在某些實施例中，本發明係針對一種製造ADC之方法，其包含(b)將本發明之一或多個CDN (亦即式II之CDN)偶合至連接子偶合之抗體或其抗原結合片段(例如，如本文所描述之一或多個L，及例如，如本文所描述之Ab)以產生ADC。
在某些實施例中，本發明係關於一種製造連接子偶合之抗體的方法，其包含(a)將一或多個連接子(例如，如本文所描述之L)偶合至抗體或其抗原結合片段(例如，如本文所描述之Ab)以產生連接子偶合之抗體。
在一些實施例中，本發明係針對一種製造ADC之方法，其包含(a)將本發明之CDN (亦即式II之CDN)偶合至連接子(例如，如本文所描述之L)以產生CDN偶合之連接子；及(b)將複數個CDN偶合之連接子偶合至抗體或其抗原結合片段(例如，如本文所描述之Ab)以產生ADC。
在其他實施例中，本發明係針對一種製造ADC之方法，其包含(a)將複數個連接子(例如，如本文所描述之L)偶合至抗體或其抗原結合片段(例如，如本文所描述之Ab)以產生連接子偶合之抗體；及(b)將本發明之一或多個CDN(亦即式II之CDN)偶合至連接子偶合之抗體以產生ADC。 6.1.1     在偶合之前用於處理CDN之CDN組合物
如上文所描述，本發明之CDN (亦即式II之CDN，諸如CDN-A或CDN-B)可偶合至連接子(例如，如本文所描述之L)以產生一或多個CDN偶合之連接子，或可偶合至連接子偶合之抗體(例如，如本文所描述之一或多種L及例如，如本文所描述之Ab)以產生ADC。因此，本發明提供促進用於此等偶合步驟中之CDN之純化、乾燥或處理的CDN組合物。
在該上下文中，本發明提供一種CDN組合物，其包含式II之CDN (包括式II之子式，諸如式IIa、IIb等)及鹼，諸如胺鹼。在一些實施例中，胺鹼在室溫及壓力下為液體，諸如吡啶、哌啶、吡咯啶、嗎啉、二甲基吡啶(例如2,6-二甲基吡啶)、三乙胺(TEA)或二異丙基乙胺(DIPEA)，尤其吡啶。在某些實施例中，包含CDN及鹼之CDN組合物為具有少於100、50、25或10 ppm之水的無水組合物。在用於偶合步驟中之前，包含CDN及鹼之CDN組合物可藉由在高真空下濃縮來乾燥。
在一些實施例中，CDN組合物包含式II (諸如式IIk、IIm、IIn或IIo)之CDN，及諸如吡啶之胺鹼。在某些實施例中，CDN組合物包含：式II之CDN，其在R1 位置處具有胺基；及諸如吡啶之胺鹼。在某些實施例中，CDN組合物包含式IIn或IIo之CDN (且視情況在R1 位置處具有胺基的CDN)及諸如吡啶之胺鹼。在一些實施例中，CDN組合物包含如本文所描述之CDN-A或其醫藥學上可接受之鹽及諸如吡啶之胺鹼，且視情況為無水的。在一些實施例中，CDN組合物包含如本文所描述之CDNB或其醫藥學上可接受之鹽及諸如吡啶之胺鹼，且視情況為無水的。
本發明亦提供一種CDN組合物，其為水溶液，包含式II之CDN (包括式II之子式，諸如式IIa、IIb等)及適合於實現5至10、包括5至8範圍內之pH值(諸如pH為5、5.5、5.8、6、6.2、6.5、7、7.5或8，包括藉由使用此等pH值作為終點產生之任何pH值範圍，諸如5至7)的緩衝液。在某些實施例中，緩衝液適合於實現6+/-0.2之pH。在一些實施例中，該緩衝液為磷酸鹽緩衝液。在一些實施例中，CDN組合物為水溶液，其包含在R1 位置處具有硫醇基之式II (諸如式IIo)之CDN；及適合於實現6+/-0.2之pH的緩衝液，諸如磷酸鹽緩衝液。在特定實施例中，CDN組合物為水溶液，其包含式IIo之CDN及適合於實現6 +/- 0.2之pH的緩衝液，諸如磷酸鹽緩衝液。在一個實施例中，CDN組合物為水溶液，其包含CDN-B或其醫藥學上可接受之鹽及適合於實現6+/- 0.2之pH的緩衝液，尤其磷酸鹽緩衝液。 6.6.2     用於將CDN偶合至連接子之CDN組合物
製備如上文所描述之CDN偶合之連接子(亦即，包含式II之CDN，諸如CDN-A或CDN-B，偶合至連接子，例如，如本文所描述之L)可包括製備一或多個CDN組合物以用於將CDN偶合至連接子。
在該上下文中，本發明提供一種CDN組合物，其包含式II之CDN (包括式II之子式，諸如式IIa、IIb等)及連接子(例如，如本文所描述之L)或偶合劑、或連接子及偶合劑兩者，其中偶合劑促進CDN與連接子之偶合。在一些實施例中，偶合劑能夠(諸如)藉由在連接子上產生活化酯來活化連接子以便與CDN偶合，使得CDN接著能夠與連接子之活化酯反應以將CDN偶合至連接子。適合的偶合劑之實例包括羥基苯并三唑(HOBt)、N-羥基丁二醯亞胺(NHS)、二環己基碳化二亞胺(DCC)、二異丙基碳化二亞胺(DIC)、1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺(EDC)及六氟磷酸氮雜苯并三唑四甲基鈾(HATU)。在某些實施例中，CDN組合物進一步包含非質子極性溶劑，諸如二甲基甲醯胺(DMF)、二甲基乙醯胺(DMA)、乙腈或四氫呋喃(THF)，特定言之，DMF。在某些實施例中，包含CDN及連接子及偶合劑中之任一者或兩者的CDN組合物為具有少於100、50、25或10 ppm之水的無水組合物。
在某些實施例中，CDN組合物包含式II (諸如式IIk、IIm、IIn或IIo)之CDN (且在R1 位置處具有胺基或硫醇基)，及連接子(例如，如本文所描述之L)或偶合劑、或連接子及偶合劑兩者。在一些實施例中，CDN組合物包含：式II之CDN，其在R1 位置具有胺基或硫醇基；及連接子或偶合劑；或連接子及偶合劑兩者。在某些實施例中，CDN組合物包含式IIn或式IIo之CDN (且視情況在R1 位置處具有胺基或硫醇基)，及連接子或偶合劑、或連接子及偶合劑兩者。在某些實施例中，CDN組合物包含如本文所描述之CDN-A或CDN-B或任一者之醫藥學上可接受之鹽，及連接子或偶合劑，或連接子及偶合劑兩者，及視情況選用之如上文所描述之非質子極性溶劑。在某些實施例中，CDN組合物包含CDN-A或CDN-B或任一者之醫藥學上可接受之鹽、連接子及非質子極性溶劑。在某些實施例中，CDN組合物包含CDN-A或CDN-B或任一者之醫藥學上可接受之鹽、偶合劑及非質子極性溶劑。 6.6.3.    CDN偶合之連接子
如上文所論述，CDN偶合之連接子可為用於製備本文所描述之ADC的適用中間物。在一些實施例中，CDN偶合之連接子包含偶合至連接子(例如，如本文所描述之L)的式II之CDN (例如CDN-A或CDN-B)。舉例而言，CDN偶合之連接子可具有式V-CDN，其中L包括能夠偶合至抗體或抗原結合片段上之互補位點的位點，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm、IIn及IIo)，且其中CDN共價鍵結至式II之R1 位置的羥基、硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基或-PEG-OH基團處的連接子。
在某些實施例中，CDN及CDN偶合之連接子經由硫醚基、醯胺基、酯基、胺基甲酸酯基、碳酸酯基、脲基、二硫基或醚基(特定言之，醯胺基、胺基甲酸酯基或二硫基)偶合。舉例而言，在某些實施例中，CDN及CDN偶合之連接子經由醯胺基偶合。在此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-C(O)NH-CDN或L-C(O)N(C1-6 烷基)-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基或C2-3 烷基，其經胺基或C1-6 烷胺基取代，該胺基或該C1-6 烷胺基中之任一者形成該式中之醯胺基的胺部分。在一個此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-C(O)NH-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C2-3 烷基，諸如乙基，其經胺基取代，該胺基形成該式中之醯胺基的胺部分。
在一些實施例中，CDN偶合之連接子具有式IXa之結構：
Figure 02_image146
式IXa 其中RL 表示連接子L之其餘部分，且變數W、X、Y、Z及RP 係如上文關於式I及II所定義。
在其他實施例中，CDN及CDN偶合之連接子經由胺基甲酸酯基偶合。在此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-OC(O)NH-CDN或L-OC(O)N(C1-6 烷基)-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基或C2-3 烷基，其經胺基或C1-6 烷胺基取代，該胺基或該C1-6 烷胺基中之任一者形成該式中之胺基甲酸酯基的胺部分。在一個此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-C(O)NH-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C2-3 烷基，諸如乙基，其經胺基取代，該胺基形成該式中之胺基甲酸酯基的胺部分。
在一些實施例中，CDN偶合之連接子具有式IXb之結構：
Figure 02_image148
式IXb 其中RL 表示連接子L之其餘部分，且變數W、X、Y、Z及RP 係如上文關於式I及II所定義。
在一些實施例中，CDN偶合之連接子具有以下結構：
Figure 02_image150
其中變數W、X、Y、Z及RP 係如上文關於式I及II所定義。
在其他實施例中，CDN及CDN偶合之連接子經由脲基偶合。在此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-OC(O)NH-CDN或L-OC(O)N(C1-6 烷基)-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基或C2-3 烷基，其經胺基或C1-6 烷胺基取代，該胺基或該C1-6 烷胺基中之任一者形成該式中之脲基的最右胺部分。在一個此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-C(O)NH-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C2-3 烷基，諸如乙基，其經胺基取代，該胺基形成該式中之脲基的最右胺部分。
在一些實施例中，CDN偶合之連接子具有式IXc之結構：
Figure 02_image152
式IXc 其中RL 表示連接子L之其餘部分，且變數W、X、Y、Z及RP 係如上文關於式I及II所定義。
在其他實施例中，CDN及CDN偶合之連接子經由酯基偶合。在此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-C(O)O-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基或C2-3 烷基，其經羥基或-PEG-OH基團取代，該羥基或-PEG-OH基團中之任一者形成該式中之酯基的醇部分。在一個此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-C(O)NH-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C2-3 烷基，諸如乙基，其經羥基取代，該羥基形成該式中之酯基的醇部分。
在一些實施例中，CDN偶合之連接子具有式IXd結構：
Figure 02_image154
式IXd 其中RL 表示連接子L之其餘部分，且變數W、X、Y、Z及RP 係如上文關於式I及II所定義。
在其他實施例中，CDN及CDN偶合之連接子經由碳酸酯基偶合。在此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-OC(O)O-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基或C2-3 烷基，其經羥基或-PEG-OH基團取代，該羥基或-PEG-OH基團中之任一者形成該式中之碳酸酯基的最右醇部分。在一個此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-OC(O)O-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C2-3 烷基，諸如乙基，其經羥基取代，該羥基形成該式中之碳酸酯基的最右醇部分。
在一些實施例中，CDN偶合之連接子有式IXe之結構：
Figure 02_image156
式IXe 其中RL 表示連接子L之其餘部分，且變數W、X、Y、Z及RP 係如上文關於式I及II所定義。
在其他實施例中，CDN及CDN偶合之連接子經由二硫基偶合。在此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-S-S-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C1-6 烷基，諸如C2-6 烷基或C2-3 烷基，其經硫醇基取代，該羥基形成該式中之二硫基的最右部分。在一個此類實施例中，CDN偶合之連接子可具有式L-S-S-CDN，其中CDN具有式II (包括子式，諸如式IIk、IIm及IIn)，其中式II之R1 為C2-3 烷基，諸如乙基，其經硫醇基取代，該硫醇基形成該式中之二硫基的最右部分。
在一些實施例中，CDN偶合之連接子具有式IXf之結構：
Figure 02_image158
式IXf 其中RL 表示連接子L之其餘部分，且變數W、X、Y、Z及RP 係如上文關於式I及II所定義。
在一些實施例中，CDN偶合之連接子具有以下結構：
Figure 02_image160
其中變數W、X、Y、Z及RP 係如上文關於式I及II所定義。 6.7.      醫藥組合物及藥劑
本文所描述之ADC及/或CDN可呈醫藥組合物之形式，該等醫藥組合物包含ADC或CDN及一或多種載劑、賦形劑及/或稀釋劑。該等組合物可經調配以用於人類之醫藥用途，且可包括醫藥學上可接受之載劑，諸如水溶液、視情況經緩衝之溶液、懸浮液或分散液。組合物亦可為凍乾固體組合物，其可在使用之前復原。
本發明醫藥組合物可呈任何適合之形式，且可藉由多種途徑，諸如靜脈內、瘤內、皮下、肌肉內、經口、鼻內、鞘內、經皮、表面或局部向患者投與。在任何給定情況下投與之途徑可視特定抗體及/或ADC、個體及疾病之性質及嚴重程度及個體之身體狀況而定。在某些實施例中，醫藥組合物將呈液體調配物形式經靜脈內、瘤內、皮下或肌肉內投與。
在一些實施例中，本文所描述之ADC及/或CDN (包括其醫藥組合物)係全身性投與，諸如經皮下、腹膜內、肌肉內或靜脈內投與，特定言之，經靜脈內投與。在其他實施例中，本文所描述之ADC及/或CDN (包括其醫藥組合物)係在腫瘤部位，諸如瘤內或在腫瘤微環境中局部投與。
本發明亦提供式II之CDN (包括式II之子式，諸如式IIa、IIb等)，其用於製造用於療法之藥劑，諸如用於促進免疫反應及/或用於治療個體之癌症，該等癌症包括下文所描述之各種癌症中之一或多者，且與如下文所描述之一或多種額外治療劑組合。 6.8.      治療方法
在某些實施例中，本發明之ADC (亦即式I之ADC)或本發明之CDN (亦即式II之CDN，諸如CDN-A或CDN-B)可用於療法中。在一些實施例中，本發明係關於本文所描述之醫藥組合物，其包含本發明之ADC (亦即式I之ADC)或本發明之CDN (亦即式II之CDN)，其適用於療法中。
本文所揭示之ADC及/或CDN可單獨地使用或彼此組合及/或與其他治療劑組合使用。如下文所論述之實例中所示，ADC及CDN在遞送至個體時能夠促進免疫反應。舉例而言，本發明之ADC及CDN單獨地或以組合方式能夠在人類個體中誘導干擾素-β (IFNβ)。本發明之ADC及CDN促進免疫反應之能力部分歸因於其促效STING之能力。ADC能夠將本發明之CDN (例如，式II化合物)遞送至目標腫瘤或癌症相關免疫細胞或腫瘤微環境，以觸發STING活化及所帶來的免疫反應。CDN與結合至與癌症相關腫瘤或免疫細胞抗原的抗體或其抗原結合片段之結合靶向CDN之遞送且延長並增強免疫反應。
本發明之ADC能夠促進大於未結合CDN或包含ADC之抗體的免疫反應。出人意料地，已發現，本發明之ADC可促進大於未結合CDN及包含ADC之抗體之相加性免疫反應的免疫反應。換言之，藉由將本發明之CDN與特異性免疫治療抗體結合，可實現協同效應。在其他實施例中，如本文所論述，本發明之CDN亦可不作為ADC之部分投與。
因此，在一個態樣中，本發明提供誘導或促進個體之免疫反應之方法，其包含投與有效量之本發明之ADC (亦即式I之ADC)。在另一態樣中，本發明提供誘導或促進個體之免疫反應的方法，其包含投與有效量之本發明之CDN (亦即式II之CDN)。且在另一態樣中，本發明提供誘導或促進個體之免疫反應之方法，其包含投與有效量之本發明之ADC與本發明之CDN的組合。在一些實施例中，向有需要之哺乳動物投與ADC及/或CDN。在特定實施例中，向有需要之人類投與ADC及/或CDN。
在特定實施例中，本發明之ADC或CDN用於治療癌症。舉例而言，本發明之ADC或CDN可用於治療肺、骨骼、胰臟、皮膚、頭部、頸部、子宮、卵巢、胃、結腸、乳房、食道、小腸、腸、內分泌系統、甲狀腺、副甲狀腺、腎上腺、尿道、前列腺、陰莖、睪丸、尿管、膀胱、腎臟或肝之癌症。可藉由本發明之ADC或CDN治療之其他癌症包括直腸癌；肛門區癌；輸卵管、子宮內膜、子宮頸、陰道、外陰、腎盂及腎細胞之癌瘤；軟組織肉瘤；黏液瘤；橫紋肌瘤；纖維瘤；脂肪瘤；畸胎瘤；膽管癌；肝母細胞瘤；血管肉瘤；血管瘤；肝癌；纖維肉瘤；軟骨肉瘤；骨髓瘤；慢性或急性白血病；淋巴球性淋巴瘤；原發性CNS淋巴瘤；CNS贅瘤；脊髓軸腫瘤；鱗狀細胞癌；滑膜肉瘤；惡性肋板間皮瘤；腦幹神經膠質瘤；垂體腺瘤；支氣管腺瘤；軟骨錯骨瘤(chondromatous hanlartoma)；內皮瘤；霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)；或前述癌症中之一或多者的組合。
因此，在一個態樣中，本發明提供治療個體之癌症的方法，其包含投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之量的本發明之ADC (亦即式I之ADC)。在另一態樣中，本發明提供治療個體之癌症的方法，其包含投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之量的本發明之CDN (亦即式II之CDN)。在一些實施例中，向有需要之哺乳動物投與醫藥組合物。在特定實施例中，向有需要之人類投與醫藥組合物。
在另一態樣中，本發明提供藉由向個體(例如人類)投與醫藥組合物及至少一種其他抗癌劑來治療該個體之癌症的方法，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之量的本發明之ADC (亦即式I之ADC)。ADC及一或多種其他抗癌劑可一起投與或分開投與，且當分開投與時，投與可藉由任何適宜途徑以單獨或組合醫藥組合物的形式同時或按任何次序依序進行。在一些實施例中，其他抗癌劑增強式I之ADC之抗體或其抗原結合片段之目標抗原的表現。將選擇ADC及其他醫藥學上具有活性之抗癌劑的量及投與之相對時序以便達成所期望的組合治療作用。
在一些個例中，本發明提供藉由向個體(例如人類)投與醫藥組合物及至少一種其他抗癌劑來治療個體之癌症的方法，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之量的本發明之CDN (亦即式II之CDN)。CDN及一或多種其他抗癌劑可一起投與或分開投與，且當分開投與時，投與可藉由任何適宜途徑以單獨或組合醫藥組合物的形式同時或按任何次序依序進行。將選擇CDN及其他抗癌劑之量及投與之相對時序以便達成所期望的組合治療作用。
本發明之ADC或CDN與一或多種抗癌劑之組合可以單一醫藥組合物形式一起投與。可替代地，可分開調配ADC或CDN及一或多種抗癌劑。當分開調配時，其可提供於任何適宜組合物中，宜以諸如在此項技術中關於此類化合物已知的方式提供。
因此，本發明之ADC或CDN可與癌症治療之其他治療方法一起使用，例如用於抗贅生性療法中，與免疫檢查點抑制劑、其他化學療法、激素、抗體藥劑之組合療法中以及手術及/或輻射治療中，特定言之，輻射。
在一個實施例中，本發明之ADC (亦即式I之ADC)或本發明之CDN (亦即式II之CDN)，或本發明之ADC及CDN兩者與免疫檢查點抑制劑組合使用以治療癌症。免疫檢查點抑制劑，諸如針對PD-1、PD-L1及CTLA4之人類化抗體，近來已顯示在治療數種類型之轉移性癌症中高度成功，轉移性癌症包括黑素瘤、非小細胞肺癌、腎細胞癌及膀胱癌(Sharma and Allison, 2015, Science 348, 56)。然而，仍有僅小百分比之癌症患者得益於檢查點抑制劑療法，部分係因為不足數目之抗腫瘤免疫細胞(諸如CD8 T細胞)產生及/或浸潤至腫瘤中。如本文所描述之實例中所示，本發明之ADC及/或CDN與免疫檢查點抑制劑之組合能夠協同起作用以治療難以用免疫檢查點抑制劑之單藥療法進行治療之癌症。
在一個實施例中，本發明提供藉由投與醫藥組合物與PD-L1抑制劑的組合來治療個體之癌症的方法，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之量的本發明之ADC (亦即式I之ADC)或本發明之CDN (亦即式II之CDN)或本發明之ADC及CDN兩者。可與本發明之ADC組合使用之PD-L1抑制劑之實例包括(但不限於)阿特珠單抗(Tecentriq®)、阿維魯單抗(Bavencio®)、德瓦魯單抗(Imfinzi®)、BMS-936559及CK-301。在某些實施例中，本發明之ADC及/或CDN並不與PD-L1抑制劑(包括上文所提及之抑制劑)組合投與。
在一個實施例中，本發明提供藉由投與醫藥組合物與PD-1抑制劑的組合來治療個體之癌症的方法，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之量的本發明之ADC (亦即式I之ADC)或本發明之CDN (亦即式II之CDN)或本發明之ADC及CDN兩者。可與本發明之ADC組合使用的PD-1抑制劑之實例包括(但不限於)帕博利珠單抗(pembrolizumab) (Keytruda®)、納武單抗(nivolumab)(Opdivo®)、測米匹單抗(cemiplimab)(Libtayo®)、AMP-224、AMP-514及PDR001。在某些實施例中，本發明之ADC及/或CDN並不與PD-1抑制劑(包括上文所提及之抑制劑)組合投與。
在一個實施例中，本發明提供藉由投與醫藥組合物與CTLA-4抑制劑的組合來治療個體之癌症的方法，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之量的本發明之ADC (亦即式I之ADC)或本發明之CDN (亦即式II之CDN)或本發明之ADC及CDN兩者。可與本發明之ADC組合使用的CTLA-4抑制劑之實例包括(但不限於)伊派利單抗(ipilmumab) (Yervoy®)及曲美單抗(tremelimumab)。在某些實施例中，本發明之ADC及/或CDN並不與CTLA-4抑制劑(包括上文所提及之抑制劑)組合投與。
在另一實施例中，本發明提供藉由投與醫藥組合物及以下各者來治療個體之癌症的方法，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之量的本發明之ADC (亦即式I之ADC)或本發明之CDN (亦即式II之CDN)或本發明之ADC及CDN兩者：一或多種抗微管劑，諸如雙萜(diterpenoid)及長春花生物鹼(vinca alkaloid)；鉑配位複合物；烷基化劑，諸如氮芥、氧氮磷雜環己烷、烷基磺酸酯、亞硝基脲及三氮烯；抗生素藥劑，諸如蒽環黴素(anthracyclin)、放線菌素(actinomycin)及博萊黴素(bleomycin)；拓樸異構酶II抑制劑，諸如表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)；抗代謝物，諸如嘌呤及嘧啶類似物及抗葉酸化合物；拓樸異構酶I抑制劑，諸如喜樹鹼(camptothecin)；激素及激素類似物；信號轉導路徑抑制劑；非受體酪胺酸血管生成抑制劑；免疫治療劑；促凋亡劑；及/或細胞週期信號傳導抑制劑。
式I之ADC可與未結合至抗體或抗原結合片段之STING促效劑組合用於例如治療癌症或用於誘導或促進免疫反應。在某些實施例中，未結合至抗體或抗原結合片段之STING促效劑為CDN，諸如本文所描述之CDN中之一者，亦即2'3'-CDN。在其他實施例中，STING促效劑為3'3'-CDN、2'2'-CDN或3'2'-CDN。在一些實施例中，STING促效劑為二苯甲酮類似物。在其他實施例中，STING促效劑為二聚醯胺基苯并咪唑。可與本發明之ADC組合使用之未結合至抗體或抗原結合片段的STING促效劑之實例包括IMSA101、ADU-S100 (MIW815)、BMS-986301、CRD5500、CMA (10-羧甲基-9-氮蒽酮)、diABZI STING促效劑-1 (例如CAS No.: 2138299-34-8)、DMXAA (ASA404/瓦迪美占(vadimezan))、E7766、GSK-532、GSK-3745417、MK-1454、MK-2118、SB-11285、SRCB-0074、TAK-676及TTI-10001。STING促效劑可在投與式I之ADC之前、同時或之後投與。
式I之ADC可與未結合至式I之抗體或抗原結合片段的「游離」CDN組合用於例如治療癌症或用於誘導或促進免疫反應。游離CDN可在投與式I之ADC之前、同時或之後投與。在此類情況下，游離CDN可與結合至式I之ADC之抗體的CDN相同或不同。游離CDN可為cGAMP，例如2'3'-cGAMP或其類似物或衍生物，或其醫藥學上可接受之鹽。在其他實施例中，游離CDN為3'3'-cGAMP、2'2'-cGAMP、3'2'-cGAMP或此等中之任一者之類似物或衍生物，或其醫藥學上可接受之鹽。
因此，本發明提供藉由投與醫藥組合物來治療個體中癌症的方法，該醫藥組合物包含醫藥學上可接受之量的本發明之ADC (亦即式I之ADC)及至少一個未結合於抗體之CDN (「游離CDN」)。式I之ADC及游離CDN可一起投與或分別投與，且當分別投與時，投與可藉由任何適宜途徑以單獨或組合方式同時或按任何次序依序進行。
在一個實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image162
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image164
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image166
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image168
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image170
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image172
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image174
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image176
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image178
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image180
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image182
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image184
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image186
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image188
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image190
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image192
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image194
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image196
。
在另一實施例中，與式I之ADC組合投與之游離CDN為以下化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image198
。 7.   實例
出於說明而非限制之目的，提供強調CDN、ADC及使用此等ADC治療患者之方法之例示性實施例之某些特徵及特性的以下實例。 縮寫1 H-NMR      質子核磁共振光譜學19 F-NMR19 F核磁共振光譜學31 P-NMR31 P核磁共振光譜學 G                鳥嘌呤 A                腺嘌呤 ABz 6N-苯甲醯基腺嘌呤 Gib             2N-異丁醯基 Bz              苯甲醯基 DCA           二氯乙酸 DCM           二氯甲烷 DMOCP      2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧磷雜環己烷2-氧化物 DMT           4,4'-二甲氧基三苯甲基 DMTCl        4,4'-二甲氧基三苯甲氯 PBS            磷酸鹽緩衝鹽水 Py.              吡啶 TBS            第三丁基二甲基矽烷基 TrCl            參(羥甲基)胺基甲烷鹽酸鹽 IBX            2-碘氧基苯甲酸 LAH           氫化鋰鋁 DMF           二甲基甲醯胺 NMM               N-甲基嗎啉 Et3 N           三乙胺 實例1. CDN-A之製備
以下流程A1及A2描繪本文所揭示之CDN (「CDN-A」)之合成。CDN及合成中間物之合成及表徵描述於下文中。自 1 合成中間物 19
Figure 02_image200
流程A1.中間物19 之合成
Figure 02_image202
流程A1.中間物19 之合成(續)
步驟 1 ：合成 (3aR,5R,6S,6aR)-5-( 羥甲基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [2,3-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -6- 醇
Figure 02_image204
在20℃下將(2R,4S,5R)-5-(羥甲基)四氫呋喃-2,3,4-三唑(100 g，0.67 mol)於含H2 SO4 (經濃縮，184.00 g，1.88 mol，100 mL，2.8當量)之丙酮(2.6 L)中之溶液攪拌1 h。在0℃下小心地添加Na2 CO3 (130 g，1.23 mol，1.8當量)於H2 O (600 mL)中之溶液。在添加第二批Na2 CO3 (70 g，0.66 mol)之前，再攪拌混合物2.5 h。0.5 h之後，藉由過濾收集沈澱且藉由丙酮(0.5 L × 3)洗滌。濃縮濾液且藉由管柱層析(SiO2 ，DCM:MeOH=10:1至5:1)純化，得到呈黃色油狀物之(3aR,5R,6R)-5-(羥甲基)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-醇(53.5 g，0.28 mol，85%產率)。(MS: [M+Na]+ 213.0)。
步驟 2 ：合成 (3aR,5R,6S,6aR)-2,2- 二甲基 -5-(( 三苯甲基氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃并 [2,3-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -6- 醇
Figure 02_image206
向(3aR,5R,6R)-5-(羥甲基)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-醇(125 g，0.66 mol)於吡啶(600 mL)中之溶液中添加TrCl (219.9 g，0.79 mol，1.2當量)。在60℃下16 h之後，冷卻混合物且濃縮。將殘餘物分配於CH2 Cl2 (400 mL)與NaHCO3 水溶液(飽和，800 mL)之間。用CH2 Cl2 (600 mL × 2)萃取水相。將合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，濃縮且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=10:1至5:1)純化，得到呈白色固體之(3aR,5R,6R)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-醇(250 g，0.58 mol，88%產率)。(MS: [M+Na]+ 455.0)。
步驟 3 ：合成 (3aR,5R,6aS)-2,2- 二甲基 -5-(( 三苯甲基氧基 ) 甲基 ) 二氫呋喃并 [2,3-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -6(3aH)- 酮
Figure 02_image208
向(3aR,5R,6R)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-醇(250 g，0.58 mol)於CH3 CN (1.5 L)中之溶液中添加IBX (323 g，1.2 mol，2.00當量)。在90℃下攪拌混合物6 h。冷卻之後，過濾混合物。濃縮濾液且得到呈淡黃色油狀物之(3aR,5R,6aS)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,6a-二氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-酮(240 g，0.56 mol，96.5%產率)。(MS: [M+Na]+ 453.0)。
步驟 4 ： 合成 (E)- 甲基 -2-((3aR,5S,6aR)-2,2- 二甲基 -5-(( 三苯甲基氧基 ) 甲基 ) 呋喃并 [2,3-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -6(3aH,5H,6aH)- 亞基 ) 乙酸酯
Figure 02_image210
在0℃下經15 min向NaH (14.5 g，0.36 mol，60%於油中，1.3當量)及THF (1.00 L)之混合物中逐滴添加2-二甲氧基磷醯基乙酸甲酯(66 g，0.36 mol，52.4 mL，1.3當量)。在相同溫度下攪拌混合物45 min，隨後逐滴添加(3aR,5R,6aS)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,6a-二氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-酮(120 g，0.28 mol，1當量)於THF (500 mL)中之溶液。在25℃下15 h後，在0℃下藉由NH4 Cl (飽和，50 mL)淬滅反應物。濃縮混合物且分配於鹽水(500 mL)與CH2 Cl2 (500 mL × 3)之間。將合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，濃縮且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=15:1至5:1)純化，得到(2E)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,6a-二氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-亞基]乙酸甲酯(65 g，0.53 mol，96%產率)。(MS: [M+Na]+ 509.0)。
步驟 5 ： 合成 2-((3aR,5S,6R,6aR)-2,2- 二甲基 -5-(( 三苯甲基氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃并 [2,3-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -6- 基 ) 乙酸甲酯
Figure 02_image212
在N2 氛圍下向(2E)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,6a-二氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-亞基]乙酸甲酯(260 g，0.53 mol)於EtOAc (700 mL)中之溶液中添加Pd/C (10%/碳，10 g)。將懸浮液脫氣且用H2 吹掃3次。在H2 (20 psi)下於25℃攪拌混合物16 h。藉由過濾移除催化劑。濃縮濾液且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=15:1至10:1)純化，得到呈白色固體之2-[(3aR,5S,6S)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-基]乙酸甲酯(210 g，0.43 mol，80.4%產率)。(MS: [M+Na]+ 511.1)。
步驟 6 ： 合成 2-((3aR,5S,6R,6aR)-2,2- 二甲基 -5-(( 三苯甲基氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃并 [2,3-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -6- 基 ) 乙醇
Figure 02_image214
在0℃下向LiAlH4 (15.5 g，0.41 mol，2當量)及THF (500 mL)之混合物中緩慢添加2-[(3aR,5S,6S)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-基]乙酸甲酯(100 g，0.20 mol)於THF (20 mL)中之溶液。在25℃下攪拌2.5 h之後，在0℃下藉由水(15 mL)及NaOH (水溶液，15%，15 mL)淬滅反應物。粗物質經Na2 SO4 乾燥，過濾，濃縮且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=5:1至2:1)純化，得到呈淡黃色油狀物之2-[(3aR,5S,6S)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-基]乙醇(80 g，0.35 mol，85%產率)。1 HNMR (400MHz, CDCl3 ) δ = 7.43 - 7.35 (m, 6H), 7.25 - 7.18 (m, 6H), 7.18 - 7.11 (m, 3H), 5.82 (d,J = 3.8 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 3.86 (td,J = 3.5, 10.2 Hz, 1H), 3.61 - 3.47 (m, 2H), 3.37 (dd,J = 2.8, 10.7 Hz, 1H), 3.02 (dd,J = 4.1, 10.7 Hz, 1H), 2.13 (tt,J = 4.8, 9.9 Hz, 1H), 1.73 - 1.62 (m, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.40 - 1.31 (m, 1H), 1.26 (s, 3H)。MS: [M+Na]+ 483.2
步驟 7 ： 合成 (3aR,5S,6R,6aR)-6-(2-( 苯甲氧基 ) 乙基 )-2,2- 二甲基 -5-(( 三苯甲基氧基 ) 甲基 ) 四氫呋喃并 [2,3-d][1,3] 間二氧雜環戊烯
Figure 02_image216
在-20℃下經5 min向NaH (27.1 g，0.68 mol，60%於油中，4.00當量)及THF (500 mL)之混合物中逐滴添加2-[(3aR,5S,6S)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-6-基]乙醇(78 g, 0.17 mol)於THF (200 mL)中之溶液。添加之後，在25℃下攪拌混合物2 h。逐滴添加BnBr (60.3 mL，0.51 mol，3.00當量)。在80℃下攪拌混合物14 h。在冷卻至0℃之後，藉由NH4 Cl水溶液(飽和，20 mL)淬滅反應物，用H2 O (400 mL)稀釋且用CH2 Cl2 (400 mL × 3)萃取。將合併之有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾，濃縮且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=15:1至5:1)純化，得到呈白色固體之(3aR,5S,6S)-6-(2-苯甲氧基乙基)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯(90 g，0.16 mol，97%產率)。(MS: [M+Na]+ = 573.1)。
步驟 8 ： 合成 (3aR,5S,6R,6aR)-6-(2-( 苯甲氧基 ) 乙基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [2,3-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 甲醇
Figure 02_image218
向(3aR,5S,6S)-6-(2-苯甲氧基乙基)-2,2-二甲基-5-(三苯甲基氧基甲基)-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯(90 g，0.16 mol)於CH2 Cl2 (300 mL)中之溶液中添加CHCl2 COOH (30 mL，0.16 mol，1.00當量)。在25℃下3 h之後，在0℃下用NaHCO3 水溶液(飽和，500 mL)將反應混合物中和至pH約7.0。用CH2 Cl2 (100 mL × 3)萃取粗物質。將合併之有機層經MgSO4 乾燥，過濾，濃縮且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=5:1至2:1)純化，得到呈黃色油狀物之[(3aR,5S,6S)-6-(2-苯甲氧基乙基)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-5-基]甲醇(44 g，0.14 mol，87%產率)。
步驟 9 ： 合成 苯甲酸 (3aR,5S,6R,6aR)-6-(2-( 苯甲氧基 ) 乙基 )-2,2- 二甲基四氫呋喃并 [2,3-d][1,3] 間二氧雜環戊烯 -5- 基 ) 甲酯
Figure 02_image220
向[(3aR,5S,6S)-6-(2-苯甲氧基乙基)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-5-基]甲醇(62 g，0.2 mol)於CH2 Cl2 (200 mL)中之溶液中添加BzCl (35 mL，0.3 mol，1.50當量)及Et3 N (55.7 mL，0.4 mol，2當量)。在25℃下1 h之後，濃縮反應混合物且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=15:1至10:1)純化，得到苯甲酸[(3aR,5S,6S)-6-(2-苯甲氧基乙基)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-5-基]甲酯(80 g，0.19 mol，97產率)。(MS: [M+Na]+ 435.1)。
步驟 10 ： 合成 苯甲酸 ((2S,3S,4R)-3-(2-( 苯甲氧基 ) 乙基 )-4,5- 二羥基四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯
Figure 02_image222
向苯甲酸[(3aR,5S,6S)-6-(2-苯甲氧基乙基)-2,2-二甲基-3a,5,6,6a-四氫呋喃并[2,3-d][1,3]間二氧雜環戊烯-5-基]甲酯(20 g，49 mmol)與H2 O (6 mL)之混合物中添加HOAc (28 mL，10當量)。在100℃下攪拌混合物5 h。在冷卻之後，用NaHCO3 水溶液(飽和，2 L)中和反應混合物且用CH2 Cl2 (400 mL × 3)萃取。濃縮經合併之有機層且得到呈淡黃色油狀物之苯甲酸[(2S,3R,5R)-3-(2-苯甲氧基乙基)-4,5-二羥基-四氫呋喃-2-基]甲酯(17.5 g，47 mmol，96%產率)，其不經純化即用於下一步驟。(MS: [M+ Na]+ 395.1)。
步驟 11 ： 合成 (3R,4R,5S)-5-(( 苯甲醯氧基 ) 甲基 )-4-(2-( 苯甲氧基 ) 乙基 ) 四氫呋喃 -2,3- 二基乙酸酯
Figure 02_image224
向苯甲酸[(2S,3R,5R)-3-(2-苯甲氧基乙基)-4,5-二羥基-四氫呋喃-2-基]甲酯(70 g，0.19 mol)於吡啶(300 mL)中之溶液中添加Ac2 O (0.75 mol，70.4 mL，4.0當量)。在60℃下攪拌混合物4 h。冷卻至25℃之後，用NaHCO3 水溶液(飽和)將反應混合物中和至pH約7且用CH2 Cl2 (300 mL × 3)萃取。濃縮有機層且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=10:1至5:1)純化，得到呈白色固體之苯甲酸[(2S,3S,5S)-4,5-二乙醯氧基-3-(2-苯甲氧基乙基)四氫呋喃-2-基]甲酯(80 g，93%產率)。(MS: [M+ Na]+ 479.1)。
步驟 12 ： 合成 苯甲酸 ((2S,3R,4R,5R)-4- 乙醯氧基 -3-(2-( 苯甲氧基 ) 乙基 )-5-(2- 異丁醯胺基 -6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9(6H)- 基 ) 四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯
Figure 02_image226
在20℃下向2-甲基-N-(6-側氧基-1,9-二氫嘌呤-2-基)丙醯胺(18.9 g，85.4 mmol，1.30當量)於CH3 CN (300 mL)中之溶液中添加BSA (84.5 mL，341.7 mmol，5.2當量)。在65℃下攪拌0.5 h後，冷卻混合物且濃縮。將殘餘物溶解於MeCN (600 mL)中，隨後在-15℃下添加苯甲酸[(2S,3S,5S)-4,5-二乙醯氧基-3-(2-苯甲氧基乙基)四氫呋喃-2-基]甲酯(30 g，65.7 mmol)於MeCN (150 mL)及TMSOTf (17.8 mL，98.6 mmol，1.5當量)中之溶液。在65℃下攪拌混合物15 h。冷卻後，濃縮混合物且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=5:1至1:1)純化，得到呈白色固體之苯甲酸((2S,3R,4R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-(苯甲氧基)乙基)-5-(2-異丁醯胺基-6-側氧基-1H-嘌呤-9(6H)-基)四氫呋喃-2-基)甲酯(30 g，48.6 mmol，74%產率)。(MS: [M+1]+ 618.1)。1 HNMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 12.00 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 7.92 - 7.84 (m, 2H), 7.82 - 7.76 (m, 1H), 7.58 (t,J = 7.1 Hz, 1H), 7.46 - 7.37 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 5H), 5.90 - 5.85 (m, 1H), 5.74 (d,J = 5.3 Hz, 1H), 4.78 - 4.61 (m, 2H), 4.55 - 4.38 (m, 3H), 3.55 (t,J = 5.8 Hz, 2H), 3.23 - 3.14 (m, 1H), 2.47 (spt,J = 6.9 Hz, 1H), 2.22 - 2.10 (m, 3H), 1.83 (q,J = 6.1 Hz, 2H) , 1.17 (dd,J = 6.9, 8.9 Hz, 6H)。
步驟 13 ： 合成 苯甲酸 ((2S,3R,4R,5R)-4- 乙醯氧基 -3-(2- 羥基乙基 )-5-(2- 異丁醯胺基 -6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9(6H)- 基 ) 四氫呋喃 -2- 基 ) 甲酯
Figure 02_image228
在N2 下向苯甲酸[(2S,3S,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-苯甲氧基乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(25 g，40.5 mmol)於EtOH (500 mL)中之溶液中添加Pd/C (38 g，10%/碳)及HOAc (25.00 mL，437.1 mmol，11當量)。將懸浮液用H2 吹掃3次且在H2 (40 Psi)下於50℃攪拌48 h。冷卻之後，過濾反應混合物。濃縮濾液且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=5:1至2:1)純化，得到呈白色固體之苯甲酸[(2S,3S,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-羥基乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(20 g，37.9 mmol，94%產率)。(MS: [M+1]+ 528.3)。
步驟 14 ： 合成 苯甲酸 [(2S,3R,5R)-4- 乙醯氧基 -3-(2- 碘乙基 )-5-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ] 四氫呋喃 -2- 基 ] 甲酯
Figure 02_image230
向苯甲酸[(2S,3R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-羥基乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(3 g，5.69 mmol，1當量)於THF (90 mL)中之溶液中一次性緩慢添加咪唑(1.16 g，17.06 mmol，3當量)及三苯膦(4.47 g，17.06 mmol，3當量)，接著緩慢添加I2 (2.60 g，10.24 mmol，1.8當量)於THF (10 mL)中之溶液。在25℃下攪拌反應混合物16 h，用Na2 SO3 飽和水溶液(8 mL)淬滅且蒸發，得到殘餘物。將殘餘物溶解於乙酸乙酯(80 mL)中且用水(80 mL)洗滌。用EtOAc (150 mL × 3)萃取水層。將合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=1:1至1:3)純化殘餘物，得到呈黃色固體之苯甲酸[(2S,3R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-碘乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(2.3 g，64%產率)。(MS: [M+1]+ 638.2)。
步驟 15 ： 合成 苯甲酸 [(2S,3R,4R,5R)-4- 乙醯氧基 -3-(2- 疊氮基乙基 )-5-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ] 四氫呋喃 -2- 基 ] 甲酯
Figure 02_image232
向苯甲酸[(2S,3R,4R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-碘乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(3.8 g，5.96 mmol，1當量)於THF (40 mL)中之溶液中添加NaN3 (2.52 g，38.75 mmol，6.5當量)及H2 O (10 mL)。在50℃下攪拌混合物2 h。用Na2 CO3 飽和水溶液(50 mL)淬滅混合物且用EtOAc (100 mL × 3)萃取。將合併之有機層經無水Na2 SO4 乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色固體之苯甲酸[(2S,3R,4R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-疊氮基乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(2 g，61%產率)。(MS: [M+1]+ 553.1)。
步驟 16 ： 合成 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-4-(2- 疊氮基乙基 )-3- 羥基 -5-( 羥甲基 ) 四氫呋喃 -2- 基 ]-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -2- 基 ]-2- 甲基 - 丙醯胺
Figure 02_image234
在0℃下向苯甲酸[(2S,3R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-疊氮基乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(2.55 g，4.62 mmol，1當量)於EtOH (220 mL)中之溶液中添加NaOH水溶液(2M，23 mL，10水溶液)。在環境溫度下攪拌所得混合物0.5 h。在0℃下向反應混合物中添加HCOOH以調節pH=7至8，且在減壓下濃縮混合物，得到殘餘物。藉由製備型HPLC (含0.1% FA之MeCN及水，0%至70%)純化殘餘物，得到呈白色固體之N-[9-[(2R, 3R,4S,5S)-4-(2-疊氮基乙基)-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺(1.6 g，3.94 mmol，85%產率)。(MS: [M+1]+ 407.1)。
步驟 17 ： 合成 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-4-(2- 疊氮基乙基 )-5-[[ 雙 (4- 甲氧基苯基 )- 苯基 - 甲氧基 ] 甲基 ]-3- 羥基 - 四氫呋喃 -2- 基 ]-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -2- 基 ]-2- 甲基 - 丙醯胺
Figure 02_image236
向N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-4-(2-疊氮基乙基)-3-羥基-5-(羥甲基)四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺(1.6 g，3.94 mmol)於吡啶(15 mL)中之溶液中添加DMTCl (1.60 g，4.72 mmol，1.2當量)。在25℃下攪拌混合物3 h。在25℃下藉由添加MeOH (10 mL)來淬滅反應混合物。在減壓下濃縮混合物，得到呈黃色油狀物之殘餘物。藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=1/1至EtOH/乙酸乙酯=1:250)純化殘餘物，得到呈黃色固體之N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-4-(2-疊氮基乙基)-5-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-3-羥基-四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺(950 mg，1.34 mmol，34%產率)。(MS: [M+1]+ 709.4)。
步驟 18 ： 合成 [(2R,3R,4R,5S)-4-(2- 疊氮基乙基 )-5-( 羥甲基 )-2-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ] 四氫呋喃 -3- 基 ] 氧基膦酸
Figure 02_image238
向N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-4-(2-疊氮基乙基)-5-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-3-羥基四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺(700 mg，988 μmol)於吡啶(6 mL)中之溶液中添加亞磷酸二苯酯(809.5 mg，3.46 mmol，664 μL，3.5當量)。在25℃下1 h之後，添加DCM (5 mL)及Et3 N (3 mL)且在25℃下再攪拌混合物1.5 h。濃縮混合物且將殘餘物分配於DCM (20 mL)與NaHCO3 水溶液(5%，20 mL)之間。蒸發有機相，得到粗中間物，將其再溶解於H2 O (3 mL)及2,2-二氯乙酸(382 mg，2.96 mmol，243 μL，3當量)於DCM (10 mL)中之混合物中。在25℃下攪拌混合物0.5 h。用Et3 N (3.0 mL)淬滅反應物，隨後蒸發混合物，得到殘餘物。藉由逆相管柱(含0.1% TEA之MeCN及水，0%至70%)純化殘餘物，得到呈白色固體之[(2R,3R,4R,5S)-4-(2-疊氮基乙基)-5-(羥甲基)-2-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-3-基]氧基膦酸(400 mg，82%產率，95%純度)。(MS: [M+1]+ 471.0)。自中間物 19 合成 CDN - A
Figure 02_image240
流程A2. 合成CDN-A
步驟 1 ： 合成 [(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,4R,5S)-4-(2- 疊氮基乙基 )-5-( 羥甲基 )-2-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ] 四氫呋喃 -3- 基 ] 氧基 -(2- 氰基乙氧基 ) 磷醯基 ] 氧基甲基 ]-5-(6- 苯甲醯胺基嘌呤 -9- 基 )-4-[ 第三丁基 ( 二甲基 ) 矽烷基 ] 氧基 - 四氫呋喃 -3- 基 ] 氧基膦酸
Figure 02_image242
向[(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基嘌呤-9-基)-4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基]氧基膦酸(400 mg，727.8 μmol)於CH3 CN (3 mL)中之溶液中添加四唑溶液(0.45M於MeCN中，6.47 mL，4當量)。在25℃下攪拌混合物5 min。添加N-[9-[(2R,3R,4R,5S)-4-(2-疊氮基乙基)-5-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-3-[2-氰基乙氧基-(二異丙基胺基)磷烷基]氧基四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺(595 mg，655 μmol，0.9當量)。在25℃下0.5 h之後，添加2-氫過氧基-2-甲基-丙烷(197 mg，2.18 mmol，209 μL，3當量)且在25℃下攪拌混合物0.5 h。隨後添加含2,2-二氯乙酸(938 mg，7.28 mmol，598 μL，10當量)之DCM (10 mL)。在25℃下攪拌混合物25 min且用Na2 SO3 飽和水溶液(2.0 mL)淬滅，隨後用吡啶(2.0 mL)淬滅以用於中和。蒸發混合物，得到殘餘物。藉由逆相管柱(含0.1% TEA之MeCN及水，0%至70%)純化殘餘物，得到呈白色固體之[(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,4R,5S)-4-(2-疊氮基乙基)-5-(羥基-甲基)-2-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-3-基]氧基-(2-氰基乙氧基)磷醯基]氧基甲基]-5-(6-苯甲醯胺基嘌呤-9-基)-4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-四氫呋喃-3-基]氧基膦酸(600 mg，62%產率，80%純度)。(MS: [M+1]+ 1071.5)。
步驟 2 ： 合成 N-[9-[(27S,28R,29R,30R, 31R,32R,33R,34R)-29-(2- 疊氮基乙基 )-32-[ 第三丁基 ( 二甲基 ) 矽烷基 ] 氧基 -67,68- 二羥基 -33-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ]-67,68- 二側氧基 -59,60,61,62,63,64- 六氧雜 -67,68- 二磷雜三環十八烷 -34- 基 ] 嘌呤 -6- 基 ] 苯甲醯胺
Figure 02_image244
向[(2R,3R,4R,5S)-4-(2-疊氮基乙基)-5-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基嘌呤-9-基)-4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基]氧基-(2-氰基乙氧基)磷醯基]氧基甲基]-2-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-3-基]氧基膦酸(400 mg，373.48 μmol)於吡啶(9 mL)中之溶液中添加2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷2-氧化物(345 mg，1.87 mmol，5當量)。在25℃下15 min之後，添加I2 (379 mg，1.49 mmol，4當量)及H2 O (13.5 mg，747.0 μmol，13.5 μL，2當量)且在25℃下攪拌混合物0.5 h。用NaHCO3 飽和水溶液(2.0 mL)及Na2 SO3 飽和水溶液(2.0 mL)淬滅反應物。蒸發後，將殘餘物溶解於CH3 CN (10 mL)中且添加2-甲基丙-2-胺(10 mL)。在25℃下攪拌混合物1 h。蒸發反應混合物，得到殘餘物。藉由逆相管柱(含0.1% TEA之MeCN及水，0%至70%)純化殘餘物，得到呈白色固體之N-[9-[(27S,28R,29R,30R, 31R,32R,33R,34R)-29-(2-疊氮基乙基)-32-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-67,68-二羥基-33-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]-67,68-二側氧基-59,60,61,62,63,64-六氧雜-67,68二磷雜三環十八烷-34-基]嘌呤-6-基]苯甲醯胺(350 mg，310 μmol，83%產率，90%純度)。(MS: [M+1]+ 1016.4)。
步驟 3 ： 合成 2- 胺基 -9-[(19S,20R,21R,22R, 23R,24R,25R,26R)-26-(6- 胺基嘌呤 -9- 基 )-21-(2- 疊氮基乙基 )-24-[ 第三丁基 ( 二甲基 ) 矽烷基 ] 氧基 -54,55- 二羥基 -54,55- 二側氧基 -46,47,48,49,50,51- 六氧雜 -54,55- 二磷雜三環十八烷 -25- 基 ]-1H- 嘌呤 -6- 酮
Figure 02_image246
將N-[9-[(27S,28R,29R,30R,31R,32R,33R,34R)-29-(2-疊氮基乙基)-32-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-67,68-二羥基-33-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]-67,68-二側氧基-59,60,61,62,63,64-六氧雜-67,68二磷雜三環十八烷-34-基]嘌呤-6-基]苯甲醯胺(300 mg，295 μmol)溶解於MeNH2 /EtOH (5M，2.95 mL)中，且在25℃下攪拌混合物2 h。蒸發混合物，得到殘餘物。藉由逆相管柱(含0.1% TEA之MeCN及水，0%至35%)純化殘餘物，得到呈白色固體之2-胺基-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-胺基嘌呤-9-基)-21-(2-疊氮基乙基)-24-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-54,55-二羥基-54,55-二側氧基-46,47,48,49,50,51-六氧雜-54,55二磷雜三環十八烷-25-基]-1H-嘌呤-6-酮(160 mg，52%產率，80%純度)。(MS: [M+1]+ 842.3)。
步驟 4 ： 合成 2- 胺基 -9-[(19S,20R,21R,22R, 23R,24R,25R,26R)-21-(2- 胺基乙基 )-26-(6- 胺基嘌呤 -9- 基 )-24-[ 第三丁基 ( 二甲基 ) 矽烷基 ] 氧基 -52,53- 二羥基 -52,53- 二側氧基 -44,45,46,47,48,49- 六氧雜 -52,53- 二磷雜三環十八烷 -25- 基 ]-1H- 嘌呤 -6- 酮
Figure 02_image248
向2-胺基-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-胺基嘌呤-9-基)-21-(2-疊氮基乙基)-24-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-54,55-二羥基-54,55-二側氧基-46,47,48,49,50,51-六氧雜-54,55二磷雜三環十八烷-25-基]-1H嘌呤-6-酮(100 mg，118.8 μmol)於MeOH (8 mL)中之溶液中一次性添加Pd/C (30 mg，10%純度)，且在H2 (10 psi)下於25℃攪拌混合物5 h。過濾混合物且蒸發濾液，得到殘餘物。藉由逆相管柱(含0.1% TEA之MeCN及水，0%至30%)純化殘餘物，得到呈白色固體之2-胺基-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-21-(2-胺基乙基)-26-(6-胺基嘌呤-9-基)-24-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-52,53-二羥基-52,53-二側氧基-44,45,46,47,48,49-六氧雜-52,53二磷雜三環十八烷-25-基]-1H-嘌呤-6-酮(70 mg，77.2 μmol，65%產率，90%純度)。(MS: [M+1]+ 816.5)。
步驟 5 ： 合成 2- 胺基 -9-[(14S,15R,16R,17R,18S, 19R,20R,21R)-16-(2- 胺基乙基 )-20-(6- 胺基嘌呤 -9- 基 )-17,45,46- 三羥基 -45,46- 二側氧基 -39,40,41,42,43,44- 六氧雜 -45,46- 二磷雜三環十八烷 -21- 基 ]-1H- 嘌呤 -6- 酮 (CDN-A)
Figure 02_image250
向2-胺基-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-21-(2-胺基乙基)-26-(6-胺基嘌呤-9-基)-24-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-52,53-二羥基-52,53-二側氧基-44,45,46,47,48,49-六氧雜-52,53二磷雜三環十八烷-25-基]-1H嘌呤-6-酮(35 mg，42.9 μmol)於MeOH (3 mL)中之溶液中一次性添加NH4 F (127 mg，3.43 mmol，80當量)，且在70℃下攪拌混合物0.25 h。在冷卻至室溫之後，蒸發混合物，得到殘餘物。藉由逆相管柱(含0.1% HCOOH之MeCN及水，0%至30%)純化殘餘物，得到呈白色固體之2-胺基-9-[(14S,15R,16R,17R,18S,19R,20R,21R)-16-(2-胺基乙基)-20-(6-胺基嘌呤-9-基)-17,45,46-三羥基-45,46-二側氧基-39,40,41,42,43,44-六氧雜-45,46二磷雜三環十八烷-21-基]-1H-嘌呤-6-酮(CDN-A ，8.6 mg，11.9 μmol，28%產率，97%純度)。(MS: [M+1]+ 702.0)。1 H NMR (D2 O+緩衝液，400MHz): δ (ppm) 8.19 (s, 1H), 8.18 (s, 1H),7.76 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.83-5.81 (m, 1H), 5.71-5.67 (m, 1H), 5.03-5.01 (m, 1H), 4.42-4.37 (m, 2H) , 4.30-4.28 (m, 1H), 4.18-4.16 (m, 1H), 4.07-4.01 (m, 2H), 3.13-3.11 (m, 2H), 2.68-2.66 (m, 1H), 2.33-2.30 (m, 1H), 1.85-1.83 (m, 1H)。31 P NMR (D2 O+緩衝液): δ (ppm) -1.15,-2.47 實例2. CDN-B之製備
以下流程B1及B2描繪本文中所揭示之CDN (「CDN-B」)之合成。此CDN及所採用之合成中間物之合成及表徵描述於下文中。自中間物 14 合成中間物 29
Figure 02_image252
流程B1：合成中間物29
步驟 1 ： 合成苯甲酸 [(2S,3R,4R,5R)-4- 乙醯氧基 -3-(2- 氯乙基 )-5-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ] 四氫呋喃 -2- 基 ] 甲酯
Figure 02_image254
向苯甲酸[(2S,3R,4R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-羥基乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(19 g，36.0 mmol)於DMF (100 mL)中之溶液中添加PPh3 (23.6 g，90.0 mmol，2.5當量)及CCl4 (17.3 mL，180.1 mmol，5當量)。在25℃下攪拌16 h之後，藉由NaHCO3 飽和水溶液(150 mL)淬滅反應物且用EtOAc (80 mL × 2)萃取。濃縮經合併之有機層且藉由管柱層析(SiO2 ，石油醚/乙酸乙酯=10:1至1:1)純化，得到呈淡黃色固體之苯甲酸[(2S,3R,4R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-氯乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(13 g，23.8 mmol，66%產率)。(MS: [M+1]+ 546.2)。
步驟 2 ： 合成苯甲酸 [(2S,3R,4R,5R)-4- 乙醯氧基 -3-(2- 乙醯基硫基乙基 )-5-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ] 四氫呋喃 -2- 基 ] 甲酯
Figure 02_image256
向苯甲酸[(2S,3R,4R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-氯乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(15 g，27.5 mmol)於DMF (100 mL)中之溶液中添加AcSK (7.84 g，68.7 mmol，2.5當量)。在50℃下攪拌反應混合物16 h。冷卻後，用DCM (200 mL)稀釋反應混合物且用NaHCO3 水溶液(飽和，200 mL)洗滌。濃縮有機層，得到呈淡黃色油狀物之苯甲酸[(2S,3R,4R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-乙醯基硫基乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(16 g)，其不經純化即用於下一步驟。(MS: [M+1]+ 586.3)。
步驟 3 ： 合成 N-[9-[(2R,3R, 4S,5S)-3- 羥基 -5-( 羥甲基 )-4-(2- 硫基乙基 ) 四氫呋喃 -2- 基 ]-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -2- 基 ]-2- 甲基 - 丙醯胺
Figure 02_image258
在0℃下向苯甲酸[(2S,3R,4R,5R)-4-乙醯氧基-3-(2-乙醯基硫基乙基)-5-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-2-基]甲酯(16 g，27.3 mmol)於EtOH (160 mL)中之溶液中添加NaOH (2 M，68.3 mL，5當量)。在0℃下攪拌反應混合物0.5 h。藉由HOAc將pH調整至7。真空濃縮混合物以移除大部分溶劑。收集棕色沈澱且用DCM/TBME (1/100，V/V，200 mL)處理。過濾之後，濃縮濾液，得到呈棕色固體之N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3-羥基-5-(羥甲基)-4-(2-硫基乙基)四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺(11 g，粗物質，約10%二硫化物)，其不經進一步純化即用於下一步驟。(MS: [M+1]+ 398.1)。
步驟 4 ： 合成 N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3- 羥基 -5-[[(3- 甲氧基苯基 )-(4- 甲氧基苯基 )- 苯基 - 甲氧基 ] 甲基 ]-4-[2-[(3- 甲氧基苯基 )-(4- 甲氧基苯基 )- 苯基 - 甲基 ] 硫基乙基 ] 四氫呋喃 -2- 基 ]-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -2- 基 ]-2- 甲基 - 丙醯胺
Figure 02_image260
向N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3-羥基-5-(羥甲基)-4-(2-硫基乙基)四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺(11 g，27.7 mmol)於吡啶(110 mL)中之溶液中添加DMTCl (28.1 g，83.0 mmol，3當量)。在25℃下16 h之後，用NaHCO3 水溶液(飽和，200 mL)淬滅反應物且用EtOAc (200 mL × 2)萃取。將有機相經Na2 SO4 乾燥，過濾且藉由矽膠層析PE:EE (EA:EtOH=3:1)=10:1至2:1純化，得到呈淡黃色固體之化合物N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3-羥基-5-[[(3-甲氧基苯基)-(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-4-[2-[(3-甲氧基苯基)-(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺(14 g，47.0%產率，93%純度)。(MS: [M+1]+ 1002.5)。
步驟 5 ： 合成 [(2R,3R,4R,5S)-5-( 羥甲基 )-4-[2-[(3- 甲氧基苯基 )-(4- 甲氧基苯基 )- 苯基 - 甲基 ] 硫基乙基 ]-2-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ] 四氫呋喃 -3- 基 ] 氧基膦酸
Figure 02_image262
Figure 02_image264
在25℃下向N-[9-[(2R,3R,4S,5S)-3-羥基-5-[[(3-甲氧基苯基)-(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-4-[2-[(3-甲氧基苯基)-(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]四氫呋喃-2-基]-6-側氧基-1H-嘌呤-2-基]-2-甲基-丙醯胺(12 g，8.4 mmol)於吡啶(120 mL)中之溶液中添加苯氧基膦醯基氧基苯(7.51 mL，29.3 mmol，3.5當量)。1 h之後，添加Et3 N/H2 O (100 mL，1:1)。0.5 h之後，用EtOAc (200 mL×2)萃取混合物。濃縮有機相且隨後溶解於AcOH水溶液(80%，120 mL)中。在25℃下攪拌混合物1 h。藉由在0℃下添加Na2 CO3 飽和水溶液中和反應混合物，直至pH值約7為止。藉由逆相管柱(CH3 CN/H2 O，0至60%)直接純化混合物且得到[(2R,3R,4R,5S)-5-(羥甲基)-4-[2-[(3-甲氧基苯基)-(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]-2-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-3-基]氧基膦酸(4.2 g，5.5 mmol，65%產率)。(MS: [M+1]+ 764.4)。自中間物 29 合成 CDN-B
Figure 02_image266
流程B2. 合成CDN-B
步驟 1 ： 合成 [(2R,3R, 4R,5S)-5-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(6- 苯甲醯胺基嘌呤 -9- 基 )-4-[ 第三丁基 ( 二甲基 ) 矽烷基 ] 氧基 -2-( 羥甲基 ) 四氫呋喃 -3- 基 ] 氧基 -(2- 氰基乙氧基 ) 磷醯基 ] 氧基甲基 ]-4-[2-[ 雙 (4- 甲氧基苯基 )- 苯基 - 甲基 ] 硫基乙基 ]-2-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ] 四氫呋喃 -3- 基 ] 氧基膦酸
Figure 02_image268
向[(2R,5S)-4-[2-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]-5-(羥甲基)-2-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-3-基]氧基膦酸(0.75 g，0.98 mmol)於1H-四唑(0.45 M於MeCN中，22.50 mL，10當量)中之溶液中添加N-[9-[(2R,3R,4R,5R)-5-[[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲氧基]甲基]-3-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-4-[2-氰基乙氧基-(二異丙基胺基)磷烷基]氧基-四氫呋喃-2-基]嘌呤-6-基]苯甲醯胺(1.1 g，1.1 mmol，1.1當量)。1 h之後，添加TBHP (0.43 ml，65%於癸烷中，3當量)。在25℃下攪拌反應混合物0.5 h。在0℃下藉由亞硫酸氫鈉水溶液(33%，4 mL)淬滅反應物且用EtOAc (100 mL × 2)萃取。濃縮有機相且溶解於AcOH水溶液(80%，20 mL)中。1 h之後，在0℃下藉由Na2 CO3 水溶液(飽和)中和反應混合物。藉由逆相管柱(CH3 CN/H2 O，中性條件，0至60%)純化混合物，得到呈白色固體之[(2R,3R,4R,5S)-5-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基嘌呤-9-基)-4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基]氧基-(2-氰基乙氧基)磷醯基]氧基甲基]-4-[2-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]-2-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-3-基]氧基膦酸(0.79 g，48%產率，80%純度)。(MS: [M+1]+ 1364.0)。
步驟 2 ： 合成 N-[9-[(47S,48R,49R,50R, 51R,52R,53R,54R)-49-[2-[ 雙 (4- 甲氧基苯基 )- 苯基 - 甲基 ] 硫基乙基 ]-52-[ 第三丁基 ( 二甲基 ) 矽烷基 ] 氧基 -87,88- 二羥基 -53-[2-(2- 甲基丙醯基胺基 )-6- 側氧基 -1H- 嘌呤 -9- 基 ]-87,88- 二側氧基 -77,78,79,80,81,82- 六氧雜 -87, 88- 二磷雜三環十八烷 -54- 基 ] 嘌呤 -6- 基 ] 苯甲醯胺
Figure 02_image270
向[(2R,3R,4R,5S)-5-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(6-苯甲醯胺基嘌呤-9-基)-4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-2-(羥甲基)四氫呋喃-3-基]氧基-(2-氰基乙氧基)磷醯基]氧基甲基]-4-[2-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]-2-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]四氫呋喃-3-基]氧基膦酸(0.79 g，0.58 mmol)於吡啶(16 mL)中之溶液中添加2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷雜環己烷2-氧化物(0.7 g，3.8 mmol，6.5當量)。0.5 h之後，添加CCl4 (3.2 g，20.6 mmol，1.98 mL，35.5當量)、H2 O (0.16 mL，8.79 mmol)及NMM (0.79 mL)。在25℃下攪拌反應混合物0.5 h，隨後倒入NaHSO3 水溶液(飽和，10 mL)中。5 min之後，緩慢添加NaHCO3 水溶液(飽和，20 mL)。用EtOAc (30 mL×2)萃取混合物。濃縮有機相且溶解於CH3 CN (8 mL)及t -BuNH2 (8 mL)中。0.5 h之後，濃縮混合物且藉由逆相管柱(CH3 CN/H2 O，中性條件，0至40%)純化，得到呈白色固體之N-[9-[(47S,48R,49R,50R,51R,52R,53R,54R)-49-[2-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]-52-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-87,88-二羥基-53-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]-87,88-二側氧基-77,78,79,80,81,82-六氧雜-87,88二磷雜三環十八烷-54-基]嘌呤-6-基]苯甲醯胺(0.5 g，60%產率，90.8%純度)。(MS: [M+1]+ 1309.8)。
步驟 3 ： 合成 2- 胺基 -9-[(39S,40R,41R,42R, 43R,44R,45R,46R)-46-(6- 胺基嘌呤 -9- 基 )-41-[2-[ 雙 (4- 甲氧基苯基 )- 苯基 - 甲基 ] 硫基乙基 ]-44-[ 第三丁基 ( 二甲基 ) 矽烷基 ] 氧基 -74,75- 二羥基 -74,75- 二側氧基 -64,65,66,67,68,69- 六氧雜 -74,75- 二磷雜三環十八烷 -45- 基 ]-1H- 嘌呤 -6- 酮
Figure 02_image272
在25℃下將N-[9-[(47S,48R,49R,50R,51R,52R,53R,54R)-49-[2-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]-52-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-87,88-二羥基-53-[2-(2-甲基丙醯基胺基)-6-側氧基-1H-嘌呤-9-基]-87,88-二側氧基-77,78,79,80,81,82-六氧雜-87,88二磷雜三環十八烷-54-基]嘌呤-6-基]苯甲醯胺(500 mg，0.38 mmol)及甲胺醇溶液(10 mL，30%)之混合物攪拌4 h。真空濃縮反應混合物。藉由逆相管柱(CH3 CN/H2 O，中性條件，0至30%)純化殘餘物，得到呈白色固體之2-胺基-9-[(39S,40R,41R,42R,43R,44R,45R,46R)-46-(6-胺基嘌呤-9-基)-41-[2-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]-44-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-74,75-二羥基-74,75-二側氧基-64,65,66,67,68,69-六氧雜-74,75二磷雜三環十八烷-45-基]-1H-嘌呤-6-酮(220 mg，48%產率，95%純度)。
步驟 4 ： 合成 2- 胺基 -9-[(19S,20R,21R,22R, 23R,24R,25R,26R)-26-(6- 胺基嘌呤 -9- 基 )-24-[ 第三丁基 ( 二甲基 ) 矽烷基 ] 氧基 -51,52- 二羥基 -51,52- 二側氧基 -21-(2- 硫基乙基 )-43,44,45,46,47,48- 六氧雜 -51,52- 二磷雜三環十八烷 -25- 基 ]-1H- 嘌呤 -6- 酮
Figure 02_image274
向2-胺基-9-[(39S,40R,41R,42R,43R,44R,45R,46R)-46-(6-胺基嘌呤-9-基)-41-[2-[雙(4-甲氧基苯基)-苯基-甲基]硫基乙基]-44-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-74,75-二羥基-74,75-二側氧基-64,65,66,67,68,69-六氧雜-74,75二磷雜三環十八烷-45-基]-1H-嘌呤-6-酮(190 mg，0.17 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液中添加2,2-二氯乙酸(0.8 mL，9.74 mmol，58當量)。在25℃下攪拌混合物1 h且在0℃下藉由水/Et3 N (1:1，V/V，3 mL)中和。濃縮混合物且藉由逆相管柱(CH3 CN/H2 O，含有0.05% TEA，0%至40%)純化，得到呈白色固體之2-胺基-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-胺基嘌呤-9-基)-24-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-51,52-二羥基-51,52-二側氧基-21-(2-硫基乙基)-43,44,45,46,47,48-六氧雜-51,52二磷雜三環十八烷-25-基]-1H-嘌呤-6-酮(36 mg，25%產率，98%純度，TEA鹽)。(MS: [M+1]+ 833.3)。
步驟 5 ： 合成 2- 胺基 -9-[(14S,15R,16R,17R, 18S,19R,20R,21R)-20-(6- 胺基嘌呤 -9- 基 )-17,44,45- 三羥基 -44,45- 二側氧基 -16-(2- 硫基乙基 )-38,39,40,41,42,43- 六氧雜 -44,45- 二磷雜三環十八烷 -21- 基 ]-1H- 嘌呤 -6- 酮 (CDN-B)
Figure 02_image276
向2-胺基-9-[(19S,20R,21R,22R,23R,24R,25R,26R)-26-(6-胺基嘌呤-9-基)-24-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-51,52-二羥基-51,52-二側氧基-21-(2-硫基乙基)-43,44,45,46,47,48-六氧雜-51,52二磷雜三環十八烷-25-基]-1H-嘌呤-6-酮(36 mg，0.043 mmol)於MeOH (4 mL)中之溶液中添加NH4 F (0.16 g，4.32 mmol，100當量)。在70℃下攪拌混合物1 h，濃縮且藉由逆相管柱(CH3 CN/H2 O，含有0.05% FA，0%至30%)純化，得到呈白色固體之2-胺基-9-[(14S,15R,16R,17R,18S,19R,20R,21R)-20-(6-胺基嘌呤-9-基)-17,44,45-三羥基-44,45-二側氧基-16-(2-硫基乙基)-38,39,40,41,42,43-六氧雜-44,45二磷雜三環十八烷-21-基]-1H-嘌呤-6-酮(CDN-B ，7 mg，22.5%產率，99.8%純度)。1 H NMR (400 MHz, D2 O) δ = 8.25 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.80 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 5.67 (q,J = 8.2 Hz, 1H), 5.05 - 4.98 (m, 1H), 4.43 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 4.36 (d,J = 12.1 Hz, 1H), 4.31 (brs, 1H), 4.18 (d,J = 11.7 Hz, 1H), 4.08 - 3.97 (m, 2H), 3.11 (q,J = 7.2 Hz, 1H), 2.79 - 2.66 (m, 2H), 2.62 - 2.51 (m, 1H), 2.28 - 2.13 (m, 1H), 1.84 - 1.73 (m, 1H), 1.19 (t,J = 7.3 Hz, 1H)。31 P NMR: -0.951, -2.201。MS: [M+1]+ 718.9。 實例3.目標結合抗體之製備 抗 PD-L1 抗體
Ab-A1 (mu- 抗 PDL1) ： 藉由分別將編碼SEQ ID NO:1之可變重鏈(VH)及SEQ ID NO:2之可變輕鏈(VL)的cDNA選殖至單獨的pFUSEss-CHIg-mG2a (小鼠IgG2a重鏈恆定區)及pFUSE2ss-CLIg-mk (小鼠κ輕鏈恆定區)表現載體中來製備編碼具有SEQ ID NO:3之重鏈及SEQ ID NO:5之輕鏈的鼠類抗人類PD-L1抗體Ab-A1 (mu-抗PDL1)的表現載體。Ab-A1之VH及VL係基於阿特珠單抗。
Ab-A2 (mu- 抗 PDL1-cys) ： 使用與Ab-A1類似之技術製備編碼具有SEQ ID NO:4之重鏈及SEQ ID NO:5之輕鏈的鼠類抗人類PD-L1抗體Ab-A2 (mu-抗PDL1-cys)之表現載體。Ab-A2之VH及VL序列係基於阿特珠單抗。Ab-A2之重鏈恆定區具有相對於野生型小鼠IgG2a之兩個突變，第一個突變為CH2域中位置234處之白胺酸對苯丙胺酸之取代(亦即，L234F，使用Eu編號根據與人類IgG1序列比對之野生型小鼠IgG2a序列進行編號)，且第二個突變為CH2域中位置239處之絲胺酸對半胱胺酸之取代，以呈現用於結合之另一半胱胺酸(亦即S239C，使用同一編號)。
抗人類PD-L1抗體Ab-A1及Ab-A2之重鏈的序列分別係以SEQ ID NO: 3及4展示如下。重鏈可變區在各序列中係加下劃線的，其對於兩者而言相同，且對應於SEQ ID NO:1。SEQ ID NO:4中針對Ab-A2之L234F及S239C CH2域突變係以粗體展示。 Ab-A1之重鏈(SEQ ID NO:3)
Figure 02_image278
Ab-A2之重鏈(SEQ ID NO:4)
Figure 02_image280
抗人類PD-L1抗體Ab-A1及Ab-A2之輕鏈序列係以SEQ ID NO:5展示如下。輕鏈可變區在序列中係加下劃線的且對應於SEQ ID NO:2。 Ab-A1及Ab-A2之輕鏈(SEQ ID NO:5)
Figure 02_image282
Ab-A3 (rt- 抗 PDL1) ：具有大鼠IgG2b重鏈恆定區之大鼠抗小鼠PD-L1抗體Ab-A3商購自BioXcell (BE0101)。抗 EGFR 抗體
Ab-B1 (mu- 抗 EGFR) ： 具有小鼠IgG2a重鏈恆定區之鼠類抗人類EGFR抗體Ab-B1商購自BioXcell (BE0279)。
Ab-B2 (mu- 抗 EGFR-cys) ： 藉由分別將編碼SEQ ID NO:6之可變重鏈(VH)及SEQ ID NO:7之可變輕鏈(VL)的cDNA選殖至單獨的pFUSEss-CHIg-mG2a (小鼠IgG2a重鏈恆定區)及pFUSE2ss-CLIg-mk (小鼠κ輕鏈恆定區)表現載體中來製備編碼具有SEQ ID NO:8之重鏈及SEQ ID NO:9之輕鏈的鼠類抗人類EGFR抗體Ab-A2的表現載體。Ab-B2之VH及VL序列係基於西妥昔單抗。Ab-B2重鏈之CH2域的特徵在於相對於野生型小鼠IgG2a之突變L234F及S239C，如先前針對Ab-A2所描述。
抗人類EGFR抗體Ab-B2之重鏈的序列係以SEQ ID NO:8展示如下。重鏈可變區係加下劃線的且對應於SEQ ID NO: 6。CH2域中之L234F及S239C突變係以粗體展示。 Ab-B2之重鏈(SEQ ID NO:8)
Figure 02_image284
Ab-B2之輕鏈的序列係以SEQ ID NO:9展示如下。可變區係加下劃線的且對應於SEQ ID NO:7。 Ab-B2之輕鏈(SEQ ID NO:9)
Figure 02_image286
Ab-B3 (hu- 抗 EGFR) ： 藉由分別將編碼SEQ ID NO:10之可變重鏈(VH)加上人類IgG1重鏈恆定區及SEQ ID NO:11之可變輕鏈(VL)加上人類Ig κ輕鏈恆定區的cDNA選殖至單獨的pcDNA3.4表現載體中來製備編碼具有SEQ ID NO:12之重鏈及SEQ ID NO:13之輕鏈的鼠類-人類嵌合抗人類EGFR抗體Ab-A3的表現載體。Ab-B2之全長重鏈及輕鏈序列係基於西妥昔單抗。
抗人類EGFR抗體Ab-B3之重鏈的序列以SEQ ID NO:12展示如下。重鏈可變區係加下劃線的且對應於SEQ ID NO:10。 Ab-B3之重鏈(SEQ ID NO:12)
Figure 02_image288
Figure 02_image290
Ab-B3之輕鏈的序列係以SEQ ID NO:13展示如下。可變區係加下劃線的且對應於SEQ ID NO: 11。 Ab-B3之輕鏈(SEQ ID NO:13)
Figure 02_image292
Ab-B4 (hu- 抗 EGFR-A/C,V/C) ： 藉由分別將編碼SEQ ID NO:14之可變重鏈(VH)加上人類IgG1重鏈恆定區及SEQ ID NO:15之可變輕鏈(VL)加上經修飾之人類Ig κ輕鏈恆定區的cDNA選殖至單獨的pcDNA3.4表現載體中來製備編碼具有SEQ ID NO:16之重鏈及SEQ ID NO:17之輕鏈的人類抗人類EGFR抗體Ab-A4的表現載體。Ab-B4之VH及VL係基於西妥昔單抗，其中VH在與CH1域相鄰之位置109 (亦即A109C)處具有丙胺酸至半胱胺酸突變。Ab-B4之輕鏈之特徵在於位置205 (亦即，V205C)處之纈胺酸至半胱胺酸突變。
抗人類EGFR抗體Ab-B4之重鏈的序列係以SEQ ID NO:16展示如下。重鏈可變區係加下劃線的且對應於SEQ ID NO:14。A109C突變係以粗體展示。 Ab-B4之重鏈(SEQ ID NO:16)
Figure 02_image294
Figure 02_image296
Ab-B4之輕鏈的序列係以SEQ ID NO:17展示如下。可變區係加下劃線的且對應於SEQ ID NO:15。V205C突變係以粗體展示。 Ab-B4之輕鏈(SEQ ID NO:17)
Figure 02_image298
抗 HER2 抗體
Ab-C1 ( 抗 HER2) ： 人類化抗人類HER2抗體Ab-C1可作為曲妥珠單抗商購(Herceptin®)。
抗人類HER2抗體Ab-C1之重鏈的序列係以SEQ ID NO:20展示如下。重鏈可變區係加下劃線的且對應於SEQ ID NO:18。 Ab-C1之重鏈(SEQ ID NO:20)
Figure 02_image300
Ab-C1之輕鏈的序列係以SEQ ID NO:21展示如下。可變區係加下劃線的且對應於SEQ ID NO: 19。 Ab-C1之輕鏈(SEQ ID NO:21)
Figure 02_image302
抗 CD47 抗體
Ab-D1 (rt- 抗 CD47) ：具有大鼠IgG2b重鏈恆定區之大鼠抗小鼠CD47抗體Ab-D1商購自BioXcell(BE0270)。表現及純化
編碼目標結合抗體之重鏈及輕鏈的質體經轉染至CHO細胞中以用於使用根據製造商方案之ExpiFectamine™ CHO轉染套組(ThermoFisher Scientific, 目錄號：A29129)表現抗體。用於轉染之質體之總量為0.5 ug/mL CHO細胞，其中重鏈與輕鏈質體之間的比率為2:3。在轉染之後六天，將CHO細胞短暫離心且經培養基過濾，隨後裝載至蛋白質A珠粒(HiTrap Protein A HP, GE, 目錄號：17-0403-01)上且用0.1 M甘胺酸(pH 3.0)溶離。合併溶離之抗體溶離份且濃縮至1 ml，並藉由尺寸排阻(ENrich Sec650,Bio-Rad, 目錄號：780-1650)將緩衝液更換成PBS，隨後儲存在-80℃下。 實例4.  CDN-A ADC之製備
合成 CDN-A- 連接子
Figure 02_image304
將CDN-A (27 mg，0.0385 mmol)與吡啶(3 × 3 ml)一起蒸發，且在使用之前在高真空下乾燥。添加碳酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲酯(4-硝基苯酯)(54 mg，0.0732 mmol，2.0當量)、HOBt (5.2 mg，0.0385 mmol，1.0當量)及DMF (2.5 ml)。隨著攪拌添加DIPEA (67 µl，0.385 mmol，10當量)。在N2 下於室溫攪拌混合物42小時。藉由乙酸乙酯(25 ml)、第三丁基甲基醚(75 ml)及乙酸(30 µL，0.521 mmol)之溶劑混合物稀釋反應混合物。藉由離心收集固體且用第三丁基甲基醚(3 × 75 ml)洗滌，得到44 mg粗物質。藉由逆相管柱(CH3 CN/H2 O，0.1% FA，0%至30%)進一步純化20 mg粗物質，得到所期望產物(7 mg，31%產率，97%純度)。(MS: [M-1]- 1298.2)。抗體與 CDN-A 之結合
抗體二硫化物之還原 ： 首先在室溫下用參-(2-羧基乙基)-膦鹽酸鹽(TCEP)對目標結合抗體進行還原(在室溫下用2.3莫耳當量之TCEP進行還原，持續1.5小時，或在37℃下用40莫耳當量之TCEP進行還原，持續2小時)。使用脫鹽管柱(HiTrap脫鹽管柱，GE，目錄號：29048684)移除多餘TCEP。
鉸鏈半胱胺酸之再氧化 ： 在37℃下用200莫耳當量之去氫抗壞血酸(DHA，0.5 M於DMSO中)將經還原抗體之鉸鏈半胱胺酸再氧化4小時。在非還原條件下使用SDS-PAGE驗證再氧化。經由30 Kd MWCO止透離心過濾器(Amicon Ultra-15, Merck Millipore, 目錄號：UFC903024)移除多餘DHA。
與 CDN-A 之結合 ： (用於經還原抗體之I型)在4℃下冷卻經還原抗體反應混合物，持續20 min。添加含CDN-A-連接子(4.8莫耳當量之抗體)之組胺酸緩衝液(20 mM，pH 7.4)且在4℃下培育80 min。(用於再氧化抗體之II型)將經再氧化之抗體與10莫耳當量之CDN-A-連接子混合且在室溫下培育4小時。在結合之後，用N-乙醯基半胱胺酸淬滅反應物，且在PBS中之FPLC系統之控制下，用5 ml脫鹽管柱(GE)移除多餘的CDN-A-連接子及N-乙醯基半胱胺酸。濃縮所產生之ADC且儲存在4℃下。DAR 量測
為了測定攜帶CDN-A作為CDN之ADC的DAR，在UV光譜儀上量測OD260/OD280比率，且將其與使用呈已知比率的CDN-A與抗體之混合物產生的標準曲線進行比較。如下表中所示，例示性ADC之DAR值在1至6.3範圍內。使用藉由取代而具有額外半胱胺酸的Ab-A2抗體(mu-抗PDL1-cys)之ADC的DAR值展示比使用野生型Ab-A1抗體(mu-抗PDL1)更大的DAR值。表 1 ： 例示性 CDN-A ADC
ADC ID Ab ID Ab附注 CDN DAR
ADC-IV Ab-B1 mu-抗EGFR (BioXcellBE0279) CDN-A 1
ADC-V Ab-A3 rt-抗PDL1 (BioXcellBE0101) CDN-A 1
ADC-VI Ab-A2 mu-抗PDL1-cys CDN-A 2~4
ADC-VII Ab-B2 mu-抗EGFR-cys CDN-A 2
ADC-VIII Ab-B3 hu-抗EGFR CDN-A 6.3
ADC-IX Ab-B4 hu-抗EGFR-A/C,V/C CDN-A 3
ADC-X Ab-C1 hu-抗HER2 (曲妥珠單抗) CDN-A 4.8
ADC-XI Ab-D1 rt-抗CD47 (BioXCellBE0270) CDN-A 2.5
實例5. CDN-B ADC之製備
合成 4-( 吡啶 -2- 基二硫烷基 ) 戊酸 2,5- 二側氧基吡咯啶 -1- 基 酯 ( 連接子 I)
Figure 02_image306
向4-(吡啶-2-基二硫烷基)戊酸(24 mg，0.1 mmol)及NHS (14 mg，0.12 mmol)於DMA中之溶液中添加EDC (HCl鹽，61 mg，0.32 mmol)。將溶液在室溫下攪拌隔夜。過濾之後，濃縮濾液且藉由管柱(MeOH/DCM = 0%至10%)純化，獲得呈白色固體之4-(吡啶-2-基二硫烷基)戊酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(8 mg，23.5%)。(MS: [M+1]+ 341.1)。抗體與 CDN-B 之結合
將0.2 ml的3 mM 2-胺基-9-[(14S,15R,16R, 17R,18S,19R,20R,21R)-20-(6-胺基嘌呤-9-基)-17,44,45-三羥基-44,45-二側氧基-16-(2-硫基乙基)-38,39,40,41,42,43-六氧雜-44,45二磷雜三環十八烷-21-基]-1H-嘌呤-6-酮於pH 6.0之磷酸鹽緩衝液中之溶液與0.2 ml的含2 mM 4-(吡啶-2-基二硫烷基)戊酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯之DMA混合。在室溫下培育隔夜之後，添加3.6 mg含目標結合抗體之2 ml PBS且在室溫下再培育2小時。濃縮混合物且在用PBS平衡之FPLC系統上受控的5 ml脫鹽管柱上純化結合物。濃縮所產生之ADC且儲存在4℃下。DAR 量測
為了自ADC釋放CDN-B，向ADC中添加DTT以達到10 mM之最終濃度，在95℃下培育5 min，且使其通過30KD止透過濾器。稀釋濾液且將其添加至用0.5 nM裂解素(Perfringolysin) (PFO)滲透之THP1-Lucia ISG細胞中。16小時後，量測螢光素酶活性，藉由與標準曲線比較來計算自ADC釋放之活性化合物之濃度及DAR值。如上表中所示，例示性ADC之DAR值在0.33至1.66範圍內。表 2 ： 例示性 CDN-B ADC
ADC ID Ab ID Ab附注 CDN DAR
ADC-I Ab-A1 mu-抗PDL1 CDN-B 1.66
ADC-II Ab-A3 rt-抗PDL1 (BioXcellBE0101) CDN-B 0.36
ADC-III Ab-B1 mu-抗EGFR (BioXcellBE0279) CDN-B 0.33
實例6. CDN-A及CDN-B ADC之細胞活性 IFN 刺激活性
使用兩個報導細胞株(小鼠巨噬細胞RAW-Lucia ISG及人類單核球THP1-Lucia ISG)來評定ADC之活性。兩個細胞株皆具有融合至ISG54最小啟動子之IFN刺激反應元(ISRE)。將不同濃度(0.3、1.0及/或3 μM)之ADC添加至報導細胞中且培育16 h。將表示干擾素表現之誘導之螢光素酶活性與標準化合物(cGAMP)之連續稀釋液進行比較。
ADC-I至ADC-XI展現具有不同效能之有效干擾素刺激活性，如表3中所概述。報導之「cGAMP當量」值經定義為誘導與1 μM ADC所誘導的反應水準相同之反應所需的cGAMP濃度(μM)。表 3 ： 報導細胞中 IFN 刺激活性之效能
ADC ID 小鼠 RAW-Lucia ISG (cGAMP當量) 人類 THP1-Lucia ISG (cGAMP當量)
ADC-I 89 28
ADC-II 3.4 4.2
ADC-III ~7 0.58
ADC-IV ~10 弱
ADC-V ~10 弱
ADC-VI ＞100 弱
ADC-VII 3.1 n.d.
ADC-VIII 33 n.d.
ADC-IX 31 n.d.
ADC-X 10 n.d.
ADC-XI 3 n.d.
所有ADC在小鼠RAW-Lucia ISG報導分析中展現強效干擾素刺激活性(表3)。ADC-I及ADC-VI具有最高效能(分別為圖1B及圖6B)，接著為ADC-VIII、ADC-IX (分別為圖8B及圖9B)，接著為ADC-IV、ADC-V及ADC-X (分別為圖4B、圖5B及圖10)，且接著為ADC-III (圖3B)、ADC-II (圖IIB)及ADC-XI。如圖3B、圖4B、圖5B及圖6B中所示，用所揭示之ADC進行治療展現在與用單獨的抗體或單獨的CDN治療比較時，干擾素刺激活性之協同作用，或抗體及促效劑效能之組合值。
CDN-A抗體結合物亦展現在使用人類單核球THP1-Lucia ISG細胞之報導分析中之干擾素刺激活性(表3)。在彼等測試中，ADC-I具有最高效能(圖1C)，接著為ADC-II (圖1C)及ADC-III。
在穩定表現人類EGFR之THP1-lucia ISG細胞株中進一步測試ADC-VIII及ADC-IX之活性。兩種ADC均在此等細胞中展現強干擾素刺激活性(表4)。報導之「cGAMP當量」值經定義為誘導與1 nM ADC所誘導的反應水準相同之反應所需的cGAM濃度(nM)。EC50為半數最大有效濃度。表 4 ： THP1-EGFR-lucia ISG 細胞 之 ADC-VIII 及 ADC-IX 之活性
ADC ID cGAMP 當量 EC50
ADC-VIII 977 11.7 nM
ADC-IX 912 8.2nM
實例7. CDN-A及CDN-B ADC之抗腫瘤功效
在小鼠同基因型腫瘤模型B16-F10轉移性黑素瘤、人類經EGFR轉染之B16F10 (B16F10-EGFR)及人類經HER2轉染之路易斯肺癌(LLC1-HER2)中測試所選ADC的抗腫瘤功效。簡言之，將100 μL PBS中之106 個對數期腫瘤細胞經皮下注射至C57BL6小鼠之右側腹中。四至六天後，當腫瘤體積為50至100 mm3 時，小鼠根據其腫瘤尺寸再分組且腹膜內使用50至200 μg ADC，或使用未結合抗體、未結合CDN或模擬PBS作為對照進行治療(關於治療細節，參見圖例)。
監測腫瘤體積及小鼠存活率。ADC-IV、ADC-VI、ADC-VII、ADC-VIII及ADC-IX展現在消退與存活方面的強抗腫瘤功效且為治療人類腫瘤之潛在候選。表明ADC-X會減緩腫瘤進展。亦表明ADC-I會減緩腫瘤進展，但觀測到毒性。腫瘤體積
在負載B16F10腫瘤之小鼠中，相較於用模擬物、單獨的抗PDL1抗體、單獨的CDN-B以及抗PDL1抗體與未結合之CDN-B之組合進行的治療，用ADC-I (抗PDL1-CDN-B)治療使腫瘤進展減慢(圖1C)。
在負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠中，相較於模擬物治療或用抗PDL1抗體治療，用ADC-IV(抗EGFR-CDN-A)治療減緩腫瘤進展且減小腫瘤體積(圖4C及圖4E)。使用抗EGFR抗體加上未結合CDN之比較性治療未能終止腫瘤生長(圖4C)，表明在使用ADC進行靶向CDN遞送時的經改良功效。當ADC-IV與抗PDL1抗體組合時，觀測到腫瘤擴展之完全抑制(圖4E)，表明在組合CDN ADC與檢查點抑制劑時的經改良功效。
在負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠中，ADC-VI (抗PDL1-CDN-A)以200 μg之劑量經腹膜內投與(圖6C)或以10 μg或50 μg之劑量經瘤內投與(圖6D)，防止腫瘤擴展。在用ADC-VI治療兩週之後，B16F10-EGFR腫瘤展示完全緩解，而用單獨的抗PDL1抗體或模擬物治療未能終止腫瘤擴展。
在負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠中，相較於模擬物治療或用抗PDL1抗體治療，ADC-VII (抗EGFR-CDN-A)使得腫瘤擴展顯著減少(圖7C及圖7E)。使用抗EGFR抗體加上未結合CDN之比較性治療未能終止腫瘤生長(圖7C)，表明在使用ADC進行靶向CDN遞送時的經改良功效。在ADC-VII與抗PDL1抗體組合時觀測到腫瘤抑制增強，而用單獨的抗PDL1抗體或模擬物治療未能終止腫瘤擴展(圖7E)，表明在組合CDN ADC與檢查點抑制劑時的經改良功效。
在負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠中，ADC-VIII (抗EGFR-CDN-A)使得腫瘤擴展顯著減少(圖8C)。當ADC-VIII與抗PDL1抗體組合時，此作用增強，而用單獨的抗PDL1抗體或模擬物治療未能終止腫瘤擴展，表明當組合CDN ADC與檢查點抑制劑時的經改良功效。
在負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠中，ADC-IX (抗EGFR-CDN-A)使得腫瘤擴展減少，且當ADC-IX與抗PD-L1抗體組合時觀測到類似作用(圖9C)。用單獨的抗PDL1抗體或模擬物治療未能終止腫瘤擴展。
在負載LLC1-HER2腫瘤之小鼠中，ADC-X (抗HER2-CDN-A)在兩個獨立小鼠研究中減少腫瘤擴展(圖10C及圖10E)，而用單獨的抗PDL1抗體或模擬物治療未能終止腫瘤擴展。使用抗HER2抗體加上未結合CDN之比較性治療未能終止腫瘤生長，表明在使用ADC進行靶向CDN遞送時的經改良功效。圖10E進一步展示以30 μg之劑量經瘤內投與ADC-X使得腫瘤完全緩解。存活率
監測負載B16F10-EGFR或LLC1-HER2腫瘤之小鼠的存活率。相較於用單獨的抗PDL1抗體治療(第26天為0/5，圖4D；第29天為0/5，圖4F)及用模擬物治療(第23天為0/5，圖4D；第20天為0/5，圖4F)，用ADC-IV (抗EGFR-CDN-A)治療使負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠的存活時間增加(第37天為3/5，圖4D；第39天為0/5，圖4F)。ADC-IV治療後之存活率超過使用抗EGFR抗體加上未結合CDN之比較性治療的存活率(第34天0/5，圖4D)，表明使用ADC進行靶向CDN遞送時的經改良功效。用ADC-IV與抗PDL1抗體之組合治療使小鼠存活率提高至80% (第42天4/5)，表明在將CDN ADC與檢查點抑制劑組合時的經改良功效。
相較於用單獨的抗PDL1抗體治療(第29天0/5)或用模擬物治療(第27天0/5)，使用經腹膜內投與之ADC-VI (抗PDL1-CDN-A)治療產生負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠的總存活率(第43天5/5)(圖6D)。同樣，經瘤內投與之ADC-VI治療產生負載腫瘤小鼠之總存活率(圖6F)。
相較於用單獨的抗PDL1抗體治療(第27天0/5，圖7F)或用模擬物治療(第23天0/5，圖7D及圖7F)，用ADC-VII (抗EGFR-CDN-A)治療使負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠在終點的存活率提高(第36天2/5，圖7D及圖7F)。ADC-VII治療後之存活率超過使用抗EGFR抗體加上未結合CDN之比較性治療的存活率(第22天0/5，圖7D)，表明使用ADC進行靶向CDN遞送時的經改良功效。與用ADC-VII治療相比，用ADC-VII與抗PDL1抗體之組合治療使小鼠存活率提高至60% (第36天3/5，圖7F)，表明在將CDN ADC與檢查點抑制劑組合時的經改良功效。
相較於用單獨的抗PDL1抗體治療(第27天0/5)或用模擬物治療(第25天0/5)，用ADC-VIII (抗EGFR-CDN-A)治療使負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠的存活率提高(第35天1/5) (圖8D)。用ADC-VIII與抗PD-L1抗體之組合治療使小鼠存活率提高至80% (第35天4/5)，表明在將CDN ADC與檢查點抑制劑組合時的經改良功效。
相較於用單獨的抗PDL1抗體治療(第23天0/5)或用模擬物治療(第19天0/5)，用ADC-IX (抗EGFR-CDN-A)治療使負載B16F10-EGFR腫瘤之小鼠的存活率提高(第30天3/5) (圖9D)。用ADC-IX與抗PD-L1抗體之組合治療使小鼠存活率提高至60% (第30天3/5)，表明在將CDN ADC與檢查點抑制劑組合時的經改良功效。
相較於用模擬物治療(第32天0/5)，用ADC-X (抗HER2-CDN-A)治療使負載LLC1-HER2腫瘤之小鼠之存活時間增加(第41天0/5) (圖10D)。ADC-X治療後之存活時間超過使用抗HER2抗體加上未結合CDN之比較性治療的存活時間(第32天0/5)，表明在使用ADC進行靶向CDN遞送時的經改良功效。
圖1A至圖1D展示ADC-I之結構表徵及活性。圖1A展示ADC-I之化學結構。圖1B及圖1C展示分別使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞及人類THP1-Lucia ISG細胞的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。圖1D展示處於指定治療下的負載B16-F10腫瘤之C57BL6小鼠的腫瘤進展。比較抗PDL1抗體為Ab-A1。
圖2A至圖2C展示ADC-II之結構表徵及活性。圖2A展示ADC-II之化學結構。圖2B及圖2C展示分別使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞及人類THP1-Lucia ISG細胞的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。
圖3A至圖3B展示ADC-III之結構表徵及活性。圖3A展示ADC-III之化學結構。圖3B展示使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。比較抗EGFR抗體為Ab-B1。
圖4A至圖4F展示ADC-IV之結構表徵及活性。圖4A展示ADC-IV之化學結構。圖4B展示使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞(倍數變化對比PBS刺激細胞)的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。圖4C及圖4D分別展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展及存活期。圖4E及圖4F分別展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展及存活期。比較抗EGFR抗體為Ab-B1，且比較抗PDL1抗體為Ab-A3。
圖5A至圖5B展示ADC-V之結構表徵及活性。圖5A展示ADC-V之化學結構。圖5B展示使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。比較抗PDL1抗體為Ab-A3。
圖6A至圖6F展示ADC-VI之結構表徵及活性。圖6A展示ADC-VI之化學結構。圖6B展示使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。圖6C及圖6D分別展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展及存活期。比較抗PDL1抗體為Ab-A2。圖6E及圖6F分別展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展及存活期。
圖7A至圖7F展示ADC-VII之結構表徵及活性。圖7A展示ADC-VII之化學結構。圖7B展示使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞(倍數變化對比PBS刺激細胞)的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。圖7C及圖7D分別展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展及存活期。I.p. (腹膜內)注射在第7天、第11天及第15天進行。圖7E及圖7F分別展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展及存活期。I.p.注射在第7天、第11天及第15天進行。比較抗EGFR抗體為Ab-B2，且比較抗PDL1抗體為Ab-A3。
圖8A至圖8D展示ADC-VIII之結構表徵及活性。圖8A展示ADC-VIII之化學結構。圖8B展示使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。圖8C及圖8D分別展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展及存活期。I.p.注射在第7天、第11天及第15天進行。比較抗PDL1抗體為Ab-A3。
圖9A至圖9D展示ADC-IX之結構表徵及活性。圖9A展示ADC-IX之化學結構。圖9B展示使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。圖9C及圖9D分別展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展及存活期。I.p.注射在第6天、第9天及第13天進行。比較抗PDL1抗體為Ab-A3。
圖10A至圖10E展示ADC-X之結構表徵及活性。圖10A展示ADC-X之化學結構。圖10B展示使用小鼠RAW-Lucia ISG細胞的螢光素酶報導分析中IFN刺激活性之效能。圖10C及圖10D分別展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展及存活期。I.p.注射在第6天、第10天及第13天進行。比較抗HER2抗體為Ab-C1 (曲妥珠單抗(trastuzumab))，且比較抗PDL1抗體為Ab-A3。圖10E展示處於指定治療下之負載表現EGFR之B16F10腫瘤的C57BL6小鼠的腫瘤進展。I.p.及瘤內(i.t.)注射在第7天及第11天進行。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 109124478-A0101-11-0002-1

Claims (111)

  1. 一種抗體-藥物結合物(antibody-drug conjugate；ADC)，其具有式Ia之結構： (式Ia)    Ab-[-L-D] n 其中： 「D」表示具有式IIk之結構的環狀二核苷酸(cyclic di-nucleotide；CDN)：
    Figure 03_image308
    式IIk 其中 W、X、Y及Z獨立地為CH或N； R1 為經硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基取代之C2-4 烷基； Rp 在每次出現時獨立地為羥基、硫醇基、C1-6 烷基、硼烷并(-BH3 − )或-NR'R"，其中R'及R"在每次出現時獨立地為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代的C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環； 或其醫藥學上可接受之鹽； 「Ab」表示結合目標抗原之抗體或其結合片段； 「L」在每次出現時獨立地表示連接一或多次出現之D與Ab之連接子； 「n」表示經由連接子(L)連接至Ab之D之出現次數； 其中該CDN (D)共價結合至該CDN之R1 位置處之硫醇基、胺基、C1-6 烷胺基處的連接子(L)。
  2. 如請求項1之ADC，其中R1 為經胺基取代之C2-4 烷基。
  3. 如請求項1之ADC，其中R1 為經C1-6 烷胺基取代之C2-4 烷基。
  4. 如請求項1之ADC，其中R1 為經甲胺基取代之C2-4 烷基。
  5. 如請求項1之ADC，其中R1 為經硫醇基取代之C2-4 烷基。
  6. 如請求項1之ADC，其中D為CDN，其具有式IIm之結構：
    Figure 03_image310
    式IIm 其中 R1 為經硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基取代之乙基；且 RP 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  7. 如請求項6之ADC，其中該ADC來源於式IIn之結構：
    Figure 03_image312
    式IIn 或其醫藥學上可接受之鹽。
  8. 如請求項6之ADC，其中該ADC來源於式IIo之結構：
    Figure 03_image314
    式IIo 或其醫藥學上可接受之鹽。
  9. 如請求項1之ADC，其中該ADC具有式III之結構：
    Figure 03_image316
    式III。
  10. 如請求項1之ADC，其中該ADC具有式IIIa之結構：
    Figure 03_image318
    式IIIa。
  11. 如請求項1之ADC，其中該ADC具有式IV之結構：
    Figure 03_image320
    式IV。
  12. 如請求項1之ADC，其中該ADC具有式IVa之結構：
    Figure 03_image322
    式IVa。
  13. 如請求項1至12中任一項之ADC，其中X及Z為N。
  14. 如請求項1至12中任一項之ADC，其中X及Z為CH。
  15. 如請求項1至12中任一項之ADC，其中X為N且Z為CH。
  16. 如請求項1至15中任一項之ADC，其中RP 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基。
  17. 如請求項16之ADC，其中兩次出現之RP 為羥基。
  18. 如請求項16之ADC，其中兩次出現之RP 為硫醇基。
  19. 如請求項16之ADC，其中一次出現之RP 為羥基且另一次為硫醇基。
  20. 如請求項1之ADC，其中該ADC來源於具有以下結構之CDN：
    Figure 03_image324
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  21. 如請求項1之ADC，其中該ADC來源於具有以下結構之CDN：
    Figure 03_image326
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  22. 如請求項1之ADC，其中該ADC來源於具有以下結構之CDN：
    Figure 03_image328
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  23. 如請求項1之ADC，其中該ADC來源於具有以下結構之CDN：
    Figure 03_image330
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  24. 如請求項1之ADC，其中該ADC來源於具有以下結構之CDN：
    Figure 03_image332
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  25. 如請求項1之ADC，其中該ADC來源於具有以下結構之CDN：
    Figure 03_image334
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  26. 如請求項1至25中任一項之ADC，其中L包含一或多個可裂解連接子。
  27. 如請求項26之ADC，其中該可裂解連接子為酸可裂解連接子。
  28. 如請求項26之ADC，其中該可裂解連接子為含腙或肼之連接子。
  29. 如請求項26之ADC，其中該可裂解連接子為可還原連接子。
  30. 如請求項29之ADC，其中該可還原連接子為二硫化物連接子。
  31. 如請求項26之ADC，其中該可裂解連接子為酶可裂解連接子。
  32. 如請求項31之ADC，其中該酶可裂解連接子係選自多肽、四肽、二肽及β-葡萄糖苷酸連接子。
  33. 如請求項31或請求項32之ADC，其中該酶可裂解連接子可藉由溶酶體酶裂解。
  34. 如請求項33之ADC，其中該溶酶體酶為組織蛋白酶(cathepsin)。
  35. 如請求項34之ADC，其中該連接子包含根據結構式VIIIa、VIIIb、VIIIc或VIIId中之一或多者之區段： (VIIIa)
    Figure 03_image336
    、 (VIIIb)
    Figure 03_image338
    、 (VIIIc)
    Figure 03_image340
    、 (VIIId)
    Figure 03_image342
    ， 或其鹽，其中： 「肽」表示可藉由組織蛋白酶B裂解之肽； T表示包含一或多個乙二醇單元或伸烷基鏈或其組合之聚合物； Ra 係選自氫、C1-6 烷基、磺酸酯及甲基磺酸酯； p為在0至5範圍內之整數； x為0或1； y為0或1； z為0或1；
    Figure 03_image112
    表示該連接子與D之連接點；且 *表示與該連接子之其餘部分的連接點。
  36. 如請求項32之ADC，其中該酶可裂解連接子為選自以下之二肽：Ala-Ala、Ala-(D)Asp、Ala-Cit、Ala-Lys、Ala-Val、Asn-Cit、Asp-Cit、Asn-Lys、Asn-(D)Lys、Asp-Val、Cit-Ala、Cit-Asn、Cit-Asp、Cit-Cit、Cit-Lys、Cit-Ser、Cit-Val、Glu-Val、苯基Gly-(D)Lys、His-Val、Ile-Cit、Ile-Pro、Ile-Val、Leu-Cit、Lys-Cit、Me3Lys-Pro、Met-Lys、Met-(D)Lys、Phe-Arg、Phe-Cit、Phe-Lys、Pro-(D)Lys、Ser-Cit、Trp-Cit、Val-Ala、Val-(D)Asp、NorVal-(D)Asp、Val-Cit、Val-Glu及Val-Lys。
  37. 如請求項1至36中任一項之ADC，其中L包含一或多個自分解型間隔基。
  38. 如請求項1至37中任一項之ADC，其中L經由順丁烯二醯亞胺基、經活化二硫化物、活性酯、鹵化甲酸酯、酸鹵化物及烷基鹵化物或苯甲基鹵化物偶合至Ab。
  39. 如請求項38之ADC，其中L經由選自DSDM、SPDB及磺酸基-SPDB之經活化二硫化物偶合至Ab。
  40. 如請求項38之ADC，其中L經由選自NHS酯及HOBt酯之活性酯偶合至Ab。
  41. 如請求項40之ADC，其中L經由順丁烯二醯亞胺基己醯基(mc)或N-丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯(SPDB)基團偶合至Ab。
  42. 如請求項1至41中任一項之ADC，其具有在L與Ab之間與Ab上之硫醇基或第一胺基形成的共價鍵。
  43. 如請求項42之ADC，其中該共價鍵為硫醚。
  44. 如請求項1之ADC，其中該ADC具有以下結構：
    Figure 03_image344
    。
  45. 如請求項1之ADC，其中該ADC具有以下結構：
    Figure 03_image346
    。
  46. 如請求項1至45中任一項之ADC，其中n為1、2、3、4、5、6、7或8。
  47. 如請求項46之ADC，其中n為2。
  48. 如請求項46之ADC，其中n為4。
  49. 如請求項1至48中任一項之ADC，其中Ab為結合至PD-L1之抗體。
  50. 如請求項1至48中任一項之ADC，其中Ab為結合至抗原之抗體，該抗原為生長因子受體(Growth Factor Receptor；GFR)。
  51. 如請求項50之ADC，其中該GFR為EGFR。
  52. 如請求項50之ADC，其中該GFR為ErbB。
  53. 如請求項50之ADC，其中該GFR為ErbB2。
  54. 如請求項50之ADC，其中該GFR為HER家族受體。
  55. 如請求項1至48中任一項之ADC，其中Ab為結合至CD47之抗體。
  56. 如請求項1至48中任一項之ADC，其中Ab為結合至在癌細胞中優先表現或過度表現之抗原之抗體。
  57. 如請求項1至48中任一項之ADC，其中Ab為結合至源於感染人類細胞之微生物之抗原的抗體。
  58. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至57中任一項之ADC。
  59. 一種刺激有需要之人類患者之免疫反應的方法，其包含向該患者投與有效量之如請求項58之醫藥組合物。
  60. 一種治療有需要之人類患者之癌症的方法，其包含向該患者投與有效量之如請求項58之醫藥組合物。
  61. 如請求項59或60之方法，其中該醫藥組合物係經靜脈內投與。
  62. 如請求項59或60之方法，其中該醫藥組合物係經皮下投與。
  63. 如請求項59或60之方法，其中該醫藥組合物係經瘤內投與。
  64. 如請求項59至63中任一項之方法，其進一步包含向該患者投與PD-1抑制劑。
  65. 如請求項59至63中任一項之方法，其進一步包含向該患者投與PD-L1抑制劑。
  66. 如請求項59至63中任一項之方法，其進一步包含向該患者投與CTLA-4抑制劑。
  67. 如請求項59至63中任一項之方法，其進一步包含向該患者投與另一抗癌劑。
  68. 如請求項59至67中任一項之方法，其進一步包含向該患者進行放射療法。
  69. 如請求項59至68中任一項之方法，其進一步包含向該患者投與第二CDN，其中該第二CDN未結合於抗體。
  70. 一種化合物，其中該化合物具有式IIk：
    Figure 03_image348
    式IIk 其中 W、X、Y及Z獨立地為CH或N； R1 為經胺基或C1-6 烷胺基取代之乙基； Rp 在每次出現時獨立地為羥基、硫醇基、C1-6 烷基、硼烷并(-BH3 − )或-NR'R"，其中R'及R"在每次出現時獨立地為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代的C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環； 或其醫藥學上可接受之鹽。
  71. 如請求項70之化合物，其中RP 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基。
  72. 如請求項70或71之化合物，其中Y及W兩者皆為CH。
  73. 如請求項70至72中任一項之化合物，其中X及Z兩者皆為N。
  74. 如請求項70至73中任一項之化合物，其中R1 為經胺基取代之乙基。
  75. 如請求項70至73中任一項之化合物，其中R1 為經C1-6 烷胺基取代之乙基。
  76. 如請求項75之化合物，其中R1 為經甲胺基取代之乙基。
  77. 如請求項70至76中任一項之化合物，其中至少一次出現之RP 為羥基。
  78. 如請求項77之化合物，其中兩次出現之RP 為羥基。
  79. 如請求項77之化合物，其中一次出現之RP 為羥基且另一次為硫醇基。
  80. 如請求項70至76中任一項之化合物，其中至少一次出現之RP 為硫醇基。
  81. 如請求項80之化合物，其中兩次出現之RP 為硫醇基。
  82. 如請求項70之化合物，其中該化合物係選自：
    Figure 03_image350
    Figure 03_image352
    ， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  83. 如請求項82之化合物，其中該化合物為
    Figure 03_image354
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  84. 一種包含環狀二核苷酸(CDN)及鹼之組合物，其中該CDN為如請求項70至83中任一項之化合物。
  85. 如請求項84之組合物，其中該組合物由該CDN及該鹼組成。
  86. 如請求項84或85之組合物，其中該鹼為胺鹼。
  87. 如請求項86之組合物，其中該胺鹼選自吡啶、哌啶、吡咯啶、嗎啉、二甲基吡啶、三乙胺(triethylamine；TEA)及二異丙基乙胺(diisopropylethylamine；DIPEA)。
  88. 如請求項87之組合物，其中該胺鹼為吡啶。
  89. 一種組合物，其包含： 環狀二核苷酸(CDN)；及 連接子或偶合劑，或連接子及偶合劑兩者； 其中該CDN為如請求項70至83中任一項之化合物，且該偶合劑促進該CDN與該連接子之偶合。
  90. 如請求項89之組合物，其中該偶合劑能夠在該連接子上產生活化酯。
  91. 如請求項89或90之組合物，其中該組合物進一步包含非質子極性溶劑。
  92. 如請求項91之組合物，其中該非質子極性溶劑係選自二甲基甲醯胺(dimethylformamide；DMF)、二甲基乙醯胺(dimethylacetamide；DMA)、乙腈或四氫呋喃(tetrahydrofuran；THF)。
  93. 如請求項84至92中任一項之組合物，其中該組合物為無水的。
  94. 如請求項84至93中任一項之組合物，其中該CDN具有以下結構：
    Figure 03_image356
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  95. 一種式L-CDN之化合物，其中 L為連接子，其包括能夠偶合至抗體或抗原結合片段上之互補位點的位點； CDN為具有式IIk之結構的環狀二核苷酸：
    Figure 03_image358
    式IIk 其中 W、X、Y及Z獨立地為CH或N； R1 為經硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基取代之C1-6 烷基； Rp 在每次出現時獨立地為羥基、硫醇基、C1-6 烷基、硼烷并(-BH3 − )或-NR'R"，其中R'及R"在每次出現時獨立地為氫或視情況經一或多個選自以下之基團取代的C1-6 烷基：鹵素、硫醇基、羥基、羧基、C1-6 烷氧基、C1-6 羥基烷氧基、-OC(O)C1-6 烷基、-N(H)C(O)C1-6 烷基、-N(C1-3 烷基)C(O)C1-6 烷基、胺基、C1-6 烷胺基、二(C1-6 烷基)胺基、側氧基及疊氮基；或同一氮上之R'及R"一起形成C3-5 雜環； 或其醫藥學上可接受之鹽；及 CDN偶合至R1 之硫醇基、胺基或C1-6 烷胺基處的L。
  96. 如請求項95之化合物，其中CDN經由硫醚基、醯胺基、酯基、胺基甲酸酯基、碳酸酯基、脲基、二硫基或醚基偶合至L。
  97. 如請求項96之化合物，其中該化合物具有式IXb之結構：
    Figure 03_image360
    式IXb 其中RL 表示該連接子L之其餘部分。
  98. 如請求項96之化合物，其中該化合物具有式IXf之結構：
    Figure 03_image362
    式IXf 其中RL 表示該連接子L之其餘部分。
  99. 如請求項95至98中任一項之化合物，其中RP 在每次出現時獨立地為羥基或硫醇基。
  100. 如請求項95至99中任一項之化合物，其中Y及W兩者皆為CH。
  101. 如請求項95至100中任一項之化合物，其中X及Z兩者皆為N。
  102. 如請求項95至101中任一項之化合物，其中R1 為經胺基取代之乙基。
  103. 如請求項95至101中任一項之化合物，其中R1 為經C1-6 烷胺基取代之乙基。
  104. 如請求項103之化合物，其中R1 為經甲胺基取代之乙基。
  105. 如請求項95至104中任一項之化合物，其中至少一次出現之RP 為羥基。
  106. 如請求項105之化合物，其中兩次出現之RP 為羥基。
  107. 如請求項105之化合物，其中一次出現之RP 為羥基且另一次為硫醇基。
  108. 如請求項95至104中任一項之化合物，其中至少一次出現之RP 為硫醇基。
  109. 如請求項108之化合物，其中兩次出現之RP 為硫醇基。
  110. 如請求項95之化合物，其中該CDN具有以下結構：
    Figure 03_image364
    或其醫藥學上可接受之鹽。
  111. 如請求項95之化合物，其中該CDN具有以下結構：
    Figure 03_image366
    或其醫藥學上可接受之鹽。
TW109124478A 2019-07-19 2020-07-20 抗體-干擾素基因刺激蛋白(sting)促效劑結合物及其於免疫療法之用途 TW202116358A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962876590P 2019-07-19 2019-07-19
US62/876,590 2019-07-19
US202063019212P 2020-05-01 2020-05-01
US63/019,212 2020-05-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202116358A true TW202116358A (zh) 2021-05-01

Family

ID=71995149

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW109124478A TW202116358A (zh) 2019-07-19 2020-07-20 抗體-干擾素基因刺激蛋白(sting)促效劑結合物及其於免疫療法之用途

Country Status (13)

Country Link
US (3) US11033635B2 (zh)
EP (1) EP3999118A1 (zh)
JP (1) JP2022541517A (zh)
KR (1) KR20220054794A (zh)
CN (2) CN114786729B (zh)
AU (1) AU2020315802A1 (zh)
BR (1) BR112022000854A2 (zh)
CA (1) CA3147890A1 (zh)
IL (1) IL289866A (zh)
MX (1) MX2022000815A (zh)
TW (1) TW202116358A (zh)
WO (1) WO2021016204A1 (zh)
ZA (1) ZA202201988B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114786729B (zh) * 2019-07-19 2023-12-19 免疫传感器治疗股份有限公司 抗体-sting激动剂缀合物及其在免疫疗法中的用途
WO2022225827A1 (en) * 2021-04-21 2022-10-27 Merck Sharp & Dohme Llc Novel forms of cyclic dinucleotide compounds
CA3233464A1 (en) * 2021-10-04 2023-04-13 Bolt Biotherapeutics, Inc. Asymmetric bis-benzimidazole sting agonist immunoconjugates and uses thereof
WO2023109942A1 (en) * 2021-12-17 2023-06-22 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. Compound-linker constructs comprising novel compounds useful as sting agonists and uses thereof
CN117343111B (zh) * 2023-12-04 2024-02-06 康羽生命科学技术(苏州)有限公司 核苷修饰物n2-异丁酰-2'-甲氧基鸟苷的制备方法

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
CA2580141C (en) * 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2013085925A1 (en) 2011-12-05 2013-06-13 Igenica, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
AU2016304899B2 (en) 2015-08-13 2018-11-08 Merck Sharp & Dohme Llc Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
WO2017100305A2 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Opi Vi - Ip Holdco Llc Composition of antibody construct-agonist conjugates and methods of use thereof
GB2552041A (en) * 2015-12-07 2018-01-10 Opi Vi - Ip Holdco Llc Compositions of antibody construct-agonist conjugates and methods thereof
US20170158772A1 (en) 2015-12-07 2017-06-08 Opi Vi - Ip Holdco Llc Compositions of antibody construct - agonist conjugates and methods of use thereof
NZ746112A (en) 2016-03-18 2023-01-27 Immune Sensor Llc Cyclic di-nucleotide compounds and methods of use
DK3506884T3 (da) 2016-08-30 2021-07-26 Dana Farber Cancer Inst Inc Sammensætninger til indgivelse af medicin og anvendelser af disse
JOP20170192A1 (ar) * 2016-12-01 2019-01-30 Takeda Pharmaceuticals Co داي نوكليوتيد حلقي
RU2019122602A (ru) 2016-12-20 2021-01-22 Мерк Шарп И Доум Корп. Комбинации антагонистов pd-1 и циклических динуклеотидных агонистов sting для лечения рака
RU2019122598A (ru) * 2016-12-20 2021-01-22 Мерк Шарп И Доум Корп. Циклические динуклеотидные агонисты sting для лечения рака
WO2018140831A2 (en) 2017-01-27 2018-08-02 Silverback Therapeutics, Inc. Tumor targeting conjugates and methods of use thereof
AR113224A1 (es) 2017-04-28 2020-02-19 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo que comprenden un agonista de sting
EP3621624B1 (en) 2017-05-12 2023-08-30 Merck Sharp & Dohme LLC Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists
EP3505188A1 (en) 2017-12-29 2019-07-03 Invivogen Pro-cyclic dinucleotide conjugates for cytokine induction
CN114786729B (zh) * 2019-07-19 2023-12-19 免疫传感器治疗股份有限公司 抗体-sting激动剂缀合物及其在免疫疗法中的用途

Also Published As

Publication number Publication date
US11213592B2 (en) 2022-01-04
US20220105198A1 (en) 2022-04-07
CN117838878A (zh) 2024-04-09
CA3147890A1 (en) 2021-01-28
US20210290774A1 (en) 2021-09-23
ZA202201988B (en) 2023-10-25
EP3999118A1 (en) 2022-05-25
MX2022000815A (es) 2022-05-03
CN114786729B (zh) 2023-12-19
CN114786729A (zh) 2022-07-22
WO2021016204A1 (en) 2021-01-28
US20210015941A1 (en) 2021-01-21
JP2022541517A (ja) 2022-09-26
BR112022000854A2 (pt) 2022-03-08
KR20220054794A (ko) 2022-05-03
AU2020315802A1 (en) 2022-02-24
IL289866A (en) 2022-03-01
US11033635B2 (en) 2021-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW202116358A (zh) 抗體-干擾素基因刺激蛋白(sting)促效劑結合物及其於免疫療法之用途
JP7254818B2 (ja) 新規環状ジヌクレオチド誘導体及びその抗体薬物コンジュゲート
CN107922457B (zh) 用于控制药物释放的递送系统
EP4115909A1 (en) Antibody-drug conjugate including novel cyclic dinucleotide derivative
JP2019537622A (ja) 非線状自壊性リンカーおよびそのコンジュゲート
CN116194149A (zh) 具有溶解性标签的分子和相关方法
JP2024506300A (ja) 免疫刺激化合物及びコンジュゲート体
WO2022163846A1 (ja) 抗体－免疫賦活化剤コンジュゲートの新規製造方法
RU2809547C2 (ru) Новое производное циклического динуклеотида и его конъюгат антитело-лекарственное средство
WO2024127332A1 (en) Cytotoxic compounds