KR20220044315A

KR20220044315A - 프레보텔라 히스티콜라를 사용한 건선 및 아토피성 피부염을 치료하기 위한 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20220044315A
Application number: KR1020227007202A
Authority: KR
Inventors: 에스. 엠. 아벨; 크리스티 바스; 마크 보드머; 테일러 에이. 코맥; 탄모이 강글리; 험프리 가드너; 안드레아 이타노; 던칸 맥헤일; 무스타파 누르; 홀리 포니히테라; 키리티카 라마니; 피터 샌디
Original assignee: 에벨로 바이오사이언시즈, 인크.
Priority date: 2019-08-05
Filing date: 2020-08-04
Publication date: 2022-04-07
Also published as: US20220339208A1; AU2020324970A1; WO2021026130A1; EP4010077A1; JP2022543817A; CO2022002413A2; CA3150041A1; TW202120110A; MX2022001607A; CN115515610A; BR112022002150A2

Abstract

본 명세서에는 예를 들어, 건선 또는 아토피성 피부염의 치료를 위한, 치료제로서 유용한 프레보텔라 박테리아와 관련된 방법 및 조성물이 제공된다.

Description

프레보텔라 히스티콜라를 사용한 건선 및 아토피성 피부염을 치료하기 위한 조성물 및 방법

관련 출원

본 출원은 2019년 8월 5일자로 출원된 일련 번호 62/883,085, 2019년 8월 7일자로 출원된 62/883,943 및 2019년 11월 4일자로 출원된 62/930,370, 2019년 11월 25일자로 출원된 62/940,005, 2020년 5월 12일자로 출원된 63/023,559 및 2020년 5월 27일자로 출원된 63/030,581을 갖는 미국 가특허 출원에 대한 우선권 이익을 주장하며, 이들 각각의 전문은 전문이 참조에 의해 포함된다.

특정 양상에서, 본 명세서에는 (예를 들어, 대상체에서, 예를 들어, 인간 대상체에서) 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)의 치료 및/또는 예방에 유용한 프레보텔라 히스티콜라(Prevotella histicola)를 포함하는 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물) 및 (예를 들어, 건선의 치료를 위한, 아토피성 피부염의 치료를 위한, 병변 중증도 점수(Lesion Severity Score: LSS)의 감소를 위한 또는 건선 부위 중증도 지수(Psoriasis Area Severity Index: PASI) 점수의 감소를 위한) 상기 박테리아 조성물의 사용 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 전체 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 생 박테리아, 사멸된 박테리아, 약독화된 박테리아)를 포함한다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329; 균주 B)이다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 균주는 프레보텔라 균주 B 50329의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, CRISPR 서열)과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5% 서열 동일성, 적어도 99.6% 서열 동일성, 적어도 99.7% 서열 동일성, 적어도 99.8% 서열 동일성, 적어도 99.9% 서열 동일성)을 포함하는 균주이다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 박테리아의 하나의 균주를 포함하되, 박테리아의 하나의 균주는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99.9% 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 박테리아의 하나의 균주를 포함하되, 박테리아의 하나의 균주는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)이다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 적어도 2.76 ㎎, 5 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 30 ㎎, 40 ㎎, 50 ㎎, 55 ㎎, 60 ㎎, 70 ㎎, 80 ㎎, 90 ㎎, 100 ㎎, 150 ㎎, 200 ㎎, 250 ㎎, 300 ㎎, 350 ㎎, 400 ㎎, 450 ㎎, 500 ㎎, 550 ㎎, 600 ㎎, 650 ㎎, 700 ㎎, 750 ㎎, 800 ㎎, 850 ㎎, 900 ㎎, 950 ㎎, 1000 ㎎ 또는 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 2.76 ㎎, 5 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 30 ㎎, 40 ㎎, 50 ㎎, 55 ㎎, 60 ㎎, 70 ㎎, 80 ㎎, 90 ㎎, 100 ㎎, 150 ㎎, 200 ㎎, 250 ㎎, 300 ㎎, 350 ㎎, 400 ㎎, 450 ㎎, 500 ㎎, 550 ㎎, 600 ㎎, 650 ㎎, 700 ㎎, 750 ㎎, 800 ㎎, 850 ㎎, 900 ㎎, 950 ㎎, 1000 ㎎ 또는 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 50 ㎎ 내지 약 600 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 600 ㎎ 내지 약 3 g의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 55 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 550 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1.6×10¹⁰ 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1.6×10¹⁰ 내지 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1.6×10¹¹ 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 8×10¹⁰ 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라, 예를 들어, 프레보텔라 균주 B 50329를 포함한다.

특정 실시형태에서, 약제학적 조성물(예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여되는 총 용량의 조성물)은 적어도 1×10¹⁰개 총 세포(예를 들어, 적어도 1×10¹⁰개 총 세포, 적어도 2×10¹⁰개 총 세포, 적어도 3×10¹⁰개 총 세포, 적어도 4×10¹⁰개 총 세포, 적어도 5×10¹⁰개 총 세포, 적어도 6×10¹⁰개 총 세포, 적어도 7×10¹⁰개 총 세포, 적어도 8×10¹⁰개 총 세포, 적어도 9×10¹⁰개 총 세포, 적어도 1×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 9×10¹¹개 이하의 총 세포(예를 들어, 1×10¹⁰개 이하의 총 세포, 2×10¹⁰개 이하의 총 세포, 3×10¹⁰개 이하의 총 세포, 4×10¹⁰개 이하의 총 세포, 5×10¹⁰개 이하의 총 세포, 6×10¹⁰개 이하의 총 세포, 7×10¹⁰개 이하의 총 세포, 8×10¹⁰개 이하의 총 세포, 9×10¹⁰개 이하의 총 세포, 1×10¹¹개 이하의 총 세포, 2×10¹¹개 이하의 총 세포, 3×10¹¹개 이하의 총 세포, 4×10¹¹개 이하의 총 세포, 5×10¹¹개 이하의 총 세포, 6×10¹¹개 이하의 총 세포, 7×10¹¹개 이하의 총 세포, 8×10¹¹개 이하의 총 세포)의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 6×10⁹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 1.6×10¹⁰개 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 1.6×10¹⁰개 내지 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 8×10¹⁰개 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약 1.6×10¹¹개 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 프레보텔라 박테리아를 포함하는 고체 투여 형태가 제공된다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 장용 코팅(예를 들어, HPMC 코팅)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 캡슐, 예를 들어, 장용 코팅 캡슐(예를 들어, HPMC 코팅)이다. 일부 실시형태에서, 각각의 캡슐은 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 캡슐이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 1개 캡슐(예를 들어, 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 2개 캡슐(예를 들어, 각각 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 4개 캡슐(예를 들어, 각각 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 10개 캡슐(예를 들어, 각각 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 1개 캡슐(예를 들어, 약 1.6×10¹¹개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 2개 캡슐(예를 들어, 각각 약 1.6×10¹¹개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 5개 캡슐(예를 들어, 각각 약 1.6×10¹¹개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 캡슐 내의 프레보텔라 박테리아는 (예를 들어, 분말로) 동결건조된다. 일부 실시형태에서, 캡슐 내의 프레보텔라 박테리아는 분말로 동결건조되고, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및/또는 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 캡슐을 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 장용 코팅 캡슐(예를 들어, HPMC 코팅됨)이다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 1개 캡슐 또는 복수의 캡슐의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 1개 캡슐 또는 복수의 캡슐의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 1개 캡슐 또는 복수의 캡슐의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 1개 캡슐 또는 복수의 캡슐의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐 내의 프레보텔라 박테리아는 (예를 들어, 분말로) 동결건조된다. 일부 실시형태에서, 캡슐 내의 프레보텔라 박테리아는 분말로 동결건조되고, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및/또는 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제는 장용 코팅된 정제이다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅된 정제는 5 ㎜ 내지 17 ㎜ 직경이다. 일부 실시형태에서, 정제는 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 1개 정제 또는 복수의 정제의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제는 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 1개 정제 또는 복수의 정제의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제는 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 1개 정제 또는 복수의 정제의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제는 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 1개 정제 또는 복수의 정제의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제 내의 프레보텔라 박테리아는 동결건조된다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 프레보텔라 박테리아를 포함하는 고체 투여 형태가 제공된다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 정제, 예를 들어, 장용 코팅된 정제이다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 HPMC를 포함한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 폴리메타크릴레이트계 공중합체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 메타크릴산 에틸 아크릴레이트(MAE) 공중합체(1:1)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 메타크릴산 에틸 아크릴레이트(MAE) 공중합체(1:1)(예컨대, Kollicoat MAE 100P)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 각각의 정제는 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 정제가 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 1개 정제(예를 들어, 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)가 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 2개 정제(예를 들어, 각각 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)가 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 4개 정제(예를 들어, 각각 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)가 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태 10에서, 4개 정제(예를 들어, 각각 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)가 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 각각의 정제는 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 정제가 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 1개 정제(예를 들어, 약 1.6×10¹¹개 총 세포 포함)가 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 2개 정제(예를 들어, 각각 약 1.6×10¹¹개 총 세포 포함)가 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 5개 정제(예를 들어, 각각 약 1.6×10¹¹개 총 세포 포함)가 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 정제 내의 프레보텔라 박테리아는 (예를 들어, 분말로) 동결건조된다. 일부 실시형태에서, 정제 내의 프레보텔라 박테리아는 분말로 동결건조되고, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및/또는 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 미니-정제는 장용 코팅된다. 일부 실시형태에서, 미니-정제는 1 ㎜ 내지 4 ㎜ 직경이다. 일부 실시형태에서, 미니-정제(예를 들어, 장용 코팅된 미니-정제)는 1 ㎜ 미니-정제, 1.5 ㎜ 미니-정제, 2 ㎜ 미니-정제, 3 ㎜ 미니-정제 또는 4 ㎜ 미니-정제이다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 복수의 미니-정제의 총 용량)를 포함하는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 복수의 미니-정제의 총 용량)를 포함하는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 복수의 미니-정제의 총 용량)를 포함하는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아(예를 들어, 복수의 미니-정제의 총 용량)를 포함하는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 미니-정제 내의 프레보텔라 박테리아는 동결건조된다.

일부 실시형태에서, 미니-정제(예를 들어, 장용 코팅된 미니-정제)는 캡슐에 함유된다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 크기 00, 크기 0, 크기 1, 크기 2, 크기 3, 크기 4 또는 크기 5 캡슐이다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 비-장용 코팅(예를 들어, 젤라틴)을 포함한다(예를 들어, 비-장용 코팅으로 코팅된다). 일부 실시형태에서, 캡슐은 비-장용 코팅을 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 젤라틴을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 박테리아를 포함하는 미니-정제(예를 들어, 장용 코팅된 미니-정제)가 캡슐(들)에 함유되며, 선택적으로 캡슐은 젤라틴을 포함한다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 박테리아를 포함하는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 재현탁을 위해서 또는 고체 투여 형태(예컨대, 캡슐)로 사용하기 위해서) 분말로서 또는 고체 투여 형태, 예컨대, 정제, 미니-정제, 캡슐, 환제(pill) 또는 분말로서; 또는 이들 형태의 조합(예를 들어, 캡슐에 포함된 미니-정제)으로 제조된다. 분말은 동결건조된 박테리아를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및/또는 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 경구로 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상체에게 1일 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 2회 이상의 용량(예를 들어, 3회 이상, 4회 이상 또는 5회 이상의 용량)으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 2회 이상의 용량의 대상체에 대한 투여는 적어도 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일의 간격을 둔다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일, 28일, 29일, 30일, 31일, 32일, 33일, 34일, 35일, 36일, 37일, 38일, 39일, 40일, 41일 또는 42일 동안 1일 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16주 동안 1일 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16주 동안 1일 1회 투여된다.

일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 동결건조된 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 특정 실시형태에서, 동결건조된 프레보텔라 박테리아는 고체 투여 형태, 예컨대, 정제, 미니-정제, 캡슐, 환제 또는 분말로 제형화된다. 일부 실시형태에서, 동결건조된 프레보텔라 박테리아는 캡슐에 함유된다. 일부 실시형태에서, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및/또는 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 동결건조된 프레보텔라 박테리아는 용액에 재현탁된다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 캡슐 또는 정제로서 제형화된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 제형(예를 들어, 조성물)은 장용 코팅 또는 미세 캡슐화를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 장용 코팅 캡슐이다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 박테리아 조성물이 상부 소장, 예를 들어, 십이지장에서 방출되는 것을 허용한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 HPMC를 포함한다.

일부 실시형태에서, 대상체는 포유동물이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 비인간 포유동물(예를 들어, 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 당나귀, 염소, 낙타, 마우스, 래트, 기니피그, 양, 라마, 원숭이, 고릴라 또는 침팬지)이다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에게 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)을 갖는 대상체의 치료 방법이 제공된다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에게 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체(예를 들어, 건선을 갖는 대상체)에서 병변 중증도 점수(LSS)(예를 들어, 평균 LSS)를 (예를 들어, 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여) 감소시키는 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 대상체에서 LSS는 (예를 들어, 7, 14, 21, 28 또는 35일 치료에 의해서) 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% 또는 그 초과만큼 감소된다. 특정 실시형태에서, 대상체에서 LSS는 투여 중단 후(예를 들어, 치료 중단 후 14일차) 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% 또는 그 초과만큼 감소된다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에게 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체(예를 들어, 건선을 갖는 대상체)에서 건선 부위 중증도 지수(PASI) 점수(예를 들어, 평균 PASI 점수)를 (예를 들어, 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여) 감소시키는 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 대상체에서 PASI 점수는 (예를 들어, 7, 14, 21, 28 또는 35일 치료에 의해서) 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% 또는 그 초과만큼 감소된다. 특정 실시형태에서, 대상체에서 PASI 점수는 투여 중단 후(예를 들어, 치료 중단 후 14일차) 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% 또는 그 초과만큼 감소된다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에게 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체(예를 들어, 건선을 갖는 대상체)에서 지속적인 임상 효과(예를 들어, 투여 완료 후 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주 또는 그 초과의 주 후에, 예를 들어, 평균 LSS 및/또는 PASI의 기준선(또는 위약)으로부터의 계속적인 감소)를 증가시키는 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 대상체에서 LSS 및/또는 PASI 점수는 (예를 들어, 7, 14, 21, 28 또는 35일 치료에 의해서) 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% 또는 그 초과만큼 감소된다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에서 항염증성 사이토카인 생산을 향상(예를 들어, 박테리아 조성물의 부재 하에서 생산된 (예를 들어, mRNA 및/또는 단백질) 양과 비교하여 증가)시키는 방법이 제공되며, 이 방법은 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항염증성 사이토카인은 IL-10, IL-27, 및/또는 IL1RA이다. 특정 실시형태에서, 항염증성 사이토카인은 M1형 APC에 의해서 발현된다. 일부 실시형태에서, 항염증성 사이토카인 생산을 향상시키는 것은 (예를 들어, 피부 생검에서) 항염증성 사이토카인(예를 들어, IL-10, IL-27, 및/또는 IL1RA) mRNA 수준을 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항염증성 사이토카인 생산을 향상시키는 것은 (예를 들어, 혈액 샘플에서) 항염증성 사이토카인(예를 들어, IL-10, IL-27, 및/또는 IL1RA) 단백질 수준을 증가시키는 것을 포함한다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에서 전염증성(pro-inflammatory) 사이토카인 생산을 저해하는(예를 들어, 박테리아 조성물의 부재 하에서 생산된 (예를 들어, mRNA 및/또는 단백질) 양과 비교하여 감소시키는) 방법이 제공되며, 이 방법은 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 전염증성 사이토카인은 GM-CSF, IL-17A, 및/또는 IL-13이다. 일부 실시형태에서, 전염증성 사이토카인은 IL-6, TNF, 및/또는 IL-12p70이다. 일부 실시형태에서, 전염증성 사이토카인은 IL23p40, IL17, IL-6, TNF, 및/또는 IL-13이다. 일부 실시형태에서, 전염증성 사이토카인 생산을 저해하는 것은 드레이닝 림프절(draining lymph node)(예를 들어, 경부 림프절)에서 전염증성 사이토카인 생산을 저해하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 전염증성 사이토카인 생산을 저해하는 것은 비장에서 전염증성 사이토카인 생산을 저해하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 전염증성 사이토카인 생산을 저해하는 것은 (예를 들어, 피부 생검에서) 전염증성 사이토카인(예를 들어, Il17a) mRNA 수준의 감소를 포함한다. 일부 실시형태에서, 전염증성 사이토카인 생산을 저해하는 것은 (예를 들어, 혈액 샘플에서) 전염증성 사이토카인(예를 들어, IL-17A) 단백질 수준의 감소를 포함한다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에서 전염증성 케모카인 생산을 저해하는(예를 들어, 박테리아 조성물의 부재 하에서 생산된 (예를 들어, mRNA 및/또는 단백질) 양과 비교하여 감소시키는) 방법이 제공되며, 이 방법은 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 전염증성 케모카인은 각질세포 화학유인물질(chemoattractant: KC)이다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에서 사이토카인 생산 또는 케모카인 생산을 변경하는(예를 들어, 박테리아 조성물의 부재 하에서 생산된 (예를 들어, mRNA 및/또는 단백질) 양과 비교하여 변경하는) 방법이 제공되며, 이 방법은 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체로부터의 혈액 샘플은 생체외에서 자극되고, 사이토카인 및/또는 케모카인의 수준에 대해서 분석된다. 일부 실시형태에서, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p40, IL-17A, TNFα 및/또는 IFNγ의 수준이 분석된다.

일부 실시형태에서, 인간 대상체는 적어도 18세이다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 60세 이하이다. 특정 실시형태에서, 인간 대상체는 적어도 18 ㎏/㎡의 체질량 지수를 갖는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 35 ㎏/㎡이하의 체질량 지수를 갖는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 투여 전 10주 이내에 약독화된 생 백신접종이 제공되지 않았다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 항염증 약물로의 치료가 필요하지 않다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 활성 감염을 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 투여 전 6주 이내에 항생제 치료를 필요로 하는 감염을 갖지 않았다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 신장 또는 간 손상을 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 투여 전 5년 이내에 신생물 질환 또는 신생물 질환의 이력을 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 투여 전 4주 이내에 주요 수술을 받지 않았다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 심장 기능 손상 또는 임상적으로 유의한 심장 질환을 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 활동 A형 간염, B형 간염 또는 C형 간염의 알려진 이력이 없고/없거나 HCV 리보핵산 및/또는 HBV 표면 항원에 양성이라고 알려져 있지 않다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 활성 중추 신경계(CNS) 악성종양을 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 GI관 질환을 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 예를 들어, 임의의 관련 부형제를 포함하는, 프레보텔라(또는 프레보텔라-함유 프로바이오틱스)에 대한 과민증 또는 알레르기의 이력을 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 위약 캡슐(스테아르산마그네슘 및 셀룰로스) 및/또는 경질 캡슐 쉘(히드록실 프로필 메틸 셀룰로스 및 이산화티타늄)에 대한 과민증 및 알레르기의 이력을 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 투여 전 1년 이내에 심각한 약물 남용의 이력 또는 불법 약물의 일상적인 사용 또는 알코올 남용의 이력을 갖지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 면역염증성 장애 이외의 임상적으로 유의한 질병을 갖지 않는다.

실시형태에서, 본 명세서에는 인간 대상체에게 프레보텔라 히스티콜라의 균주 및/또는 본 명세서에 제공된 프레보텔라 히스티콜라의 균주를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물 및/또는 고체 투여 형태)을 투여하는(예를 들어, 경구 투여하는) 단계를 포함하는 건선의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 적어도 6개월 동안 체표면적(BSA)(두피 제외)의 10% 이하에 발생한 경증 내지 중등도 플라크형 건선에 대해 확정 진단을 받았다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 최소 2개의 건선 병변을 갖는다. 일부 실시형태에서, 대상체는 투여 전 4주 이내에 전신 비-생물학적 건선 요법(메토트렉세이트[MTX], 스테로이드, 사이클로포스파미드) 또는 소랄렌(psoralen)과 자외선 A(PUVA)/자외선 A(UVA) 광요법을 제공받지 않았다. 일부 실시형태에서, 대상체는 제1 투여 전 12개월 이내에 생물학적 제제로의 치료를 제공받지 않았다. 일부 실시형태에서, 대상체는 투여 시작 2주 전에 국소 또는 경구 약리학적 활성제를 계속적으로 사용하지 않는다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 6개월 이상 동안 플라크 건선의 문서화된 진단을 갖는다.

일부 실시형태에서, 인간 대상체는 3% 이상 내지 10% 이하의 BSA를 덮는 플라크를 갖는 경증 내지 중등도 플라크 건선을 가졌고, 다음 추가 기준 둘 다를 충족한다: (i) PASI 점수 6 이상 내지 15 이하 및 (ii) 2 또는 3의 PGA 점수.

일부 실시형태에서, 방법은 (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 PASI(건선 부위 중증도 지수) 점수와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 PASI 점수를 감소시킨다.

일부 실시형태에서, 방법은 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, PASI 백분율 반응률(예를 들어, PASI-50, PASI-75, PASI-90 또는 PASI-100)을 증가시킨다. 예를 들어, 기준선으로부터 PASI 점수에서 75% 이상의 감소를 달성한 대상체의 백분율은 예를 들어, 16주 치료 후 PASI-75 값으로 표현된다.

일부 실시형태에서, 방법은 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 LSS(병변 중증도 점수)와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 LSS를 감소시킨다.

일부 실시형태에서, 방법은 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 PGA(의사의 종합 평가(Physician's Global Assessment)) 점수와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 PGA 점수를 감소시킨다.

일부 실시형태에서, 방법은 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 백분율 관여와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 BSA(체표면적)의 백분율 관여를 감소시킨다.

일부 실시형태에서, 방법은 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 mNAPSI(변형된 손발톱 건선 중증도 지수(Modified Nail Psoriasis Severity Index)) 점수와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 mNAPSI 점수를 감소시킨다.

일부 실시형태에서, 방법은 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 DLQI(피부과적 삶의 질 지수(Dermatology Life Quality Index)) 점수와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 DLQI 점수를 개선시킨다.

일부 실시형태에서, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 PSI(건선 증상 목록(Psoriasis Symptom Inventory)) 점수와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 PSI 점수를 개선시킨다.

일부 실시형태에서, 방법은 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 통증과 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 통증을 감소시킨다. 예를 들어, 통증은 SF-36 신체 통증 척도(SF-36 BPS) 또는 VAS 통증에 의해서 평가될 수 있다.

일부 실시형태에서, 방법은 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이, (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 피로와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 피로를 감소시킨다.

실시형태에서, 본 명세서에는 인간 대상체에게 프레보텔라 히스티콜라의 균주 및/또는 프레보텔라 히스티콜라의 균주를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물 및/또는 고체 투여 형태)을 투여하는(예를 들어, 경구 투여하는) 단계를 포함하는 아토피성 피부염의 치료 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 적어도 6개월 동안 최소 3% 내지 최대 15%의 체표면적에 발생한 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염에 대해 확정 진단을 받았다. 일부 실시형태에서, 대상체는 IGA 점수가 2 또는 3인 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염에 대해 확정 진단을 받았다. 일부 실시형태에서, 대상체는 생검에 적합한 부위에 적어도 1개를 갖는 적어도 2개의 아토피성 피부염 병변을 갖는다. 일부 실시형태에서, 대상체는 전신 비-생물학적 아토피성 피부염 요법(메토트렉세이트(MTX), 스테로이드, 사이클로포스파미드)을 제공받고 있지 않거나 투여 전 4주 이내에 요법을 제공받았다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 제1 투여 전 12개월 이내에 생물학적 제제로의 치료를 제공받고 있지 않다. 일부 실시형태에서, 인간 대상체는 투여 시작 2주 전에 국소 또는 경구 약리학적 활성제를 계속적으로 사용하지 않는다.

일부 실시형태에서, 방법은 (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 EASI(습진 부위 중증도 지수(Eczema Area and Severity Index)) 점수와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 EASI 점수를 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 IGA(연구자의 종합 평가(Investigator's Global Assessment)) 점수와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 IGA 점수를 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 방법은 (예를 들어, 치료 시작 전 대상체의 SCORAD(아토피성 피부염 지수(SCORing Atopic Dermatitis)) 점수와 비교하여) 예를 들어, 치료 16주 후에 대상체에서 SCORAD 점수를 감소시킨다.

일부 양태에서, 본 개시내용은 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)의 치료에 사용하기 위한 (예를 들어, 본 명세서에 기재된 양의) 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 제공한다.

일부 양태에서, 본 개시내용은 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 (예를 들어, 본 명세서에 기재된 양의) 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물의 용도를 제공한다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에게 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체(예를 들어, 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)을 갖는 대상체)에서 장 상피 장벽(intestinal epithelial barrier)을 강화시키는 방법이 제공되며, 여기서 박테리아 조성물의 투여는 대상체에서 장 상피 장벽을 강화시킨다.

일부 실시형태에서, 장 상피 장벽 무결성의 시험관내 모델(예를 들어, 장 상피 공배양 트랜스웰 배양 모델)에게 박테리아 조성물을 투여하는 것은 시험관내 모델에서 (예를 들어, 상피통과 전기 저항(transepithelial electrical resistance: TEER)으로 평가되는 경우) 장 상피 장벽을 강화시킨다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에게 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체(예를 들어, 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)을 갖는 대상체)에서 염증을 감소시키는 방법이 제공되며, 여기서 박테리아 조성물의 투여는 대상체에서 IL-10R 신호전달을 증가시킨다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물을 염증의 생체내 모델(예를 들어, DTH 모델)에게 투여하는 것은 생체내 모델에서 염증을 감소시키고, 생체내 모델에서 (예를 들어, IL-10R 차단 항체의 투여에 의해서) IL-10R을 차단하는 것은 염증 감소에 대한 박테리아 조성물의 효과를 감소시킨다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에게 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체(예를 들어, 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)을 갖는 대상체)에서 염증을 감소시키는 방법이 제공되며, 여기서 박테리아 조성물의 투여는 대상체에서 TLR2 신호전달을 증가시킨다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물을 염증의 생체내 모델(예를 들어, DTH 모델)에게 투여하는 것은 생체내 모델에서 염증을 감소시키고, 생체내 모델에서 (예를 들어, TLR2 차단 항체의 투여에 의해서) TLR2를 차단하는 것은 염증 감소에 대한 박테리아 조성물의 효과를 감소시킨다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에게 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체(예를 들어, 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)을 갖는 대상체)에서 염증을 감소시키는 방법이 제공되며, 여기서 박테리아 조성물의 투여는 (예를 들어, 투여 15일 후 효능 수준과 비교하여) 대상체에서 투여 30일 후 효능을 증가시킨다. 효능은, 투여 15일 후 염증 수준보다 투여 30일 후 더 큰 염증 수준의 감소에 의해서 결정될 수 있다.

일부 실시형태에서, 염증의 생체내 모델(예를 들어, DTH 모델)에게 박테리아 조성물을 투여하는 것은 생체내 모델에서 염증을 감소시키고, 박테리아 조성물의 투여 30일 후 생체내 모델에서 염증의 수준은 박테리아 조성물의 투여 15일 후의 염증 수준보다 더 낮다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 대상체에게 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체(예를 들어, 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)을 갖는 대상체)에서 염증을 감소시키는 방법이 제공되며, 여기서 박테리아 조성물의 투여의 염증에 대한 효과는 대상체에 대한 마지막 투여 후 적어도 14일 동안 지속된다(예를 들어, 염증 수준은 대상체에 대한 투여 시작 전 염증의 수준과 비교하여, 대상체에 대한 마지막 투여 14일 후에 더 낮다). 지속성은 대상체에 대한 투여 시작 전 염증의 수준보다 대상체에 대한 마지막 투여 14일 후에 더 큰 염증 수준의 감소에 의해서 결정될 수 있다.

일부 실시형태에서, 염증의 생체내 모델(예를 들어, DTH 모델)에게 박테리아 조성물을 투여하는 것은 생체내 모델에서 염증을 감소시키고, 박테리아 조성물의 마지막 투여 14일 후 생체내 모델에서 염증의 수준은 투여 시작 전 염증 수준보다 더 낮다.

도 1a 및 도 1b는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 병변 중증도 점수의 감소에 효능이 있다는 것을 나타낸다. 도 1a는 28일 동안 매일 550 ㎎의 장용 캡슐 제형의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(균주 B)를 투여한 환자가 위약을 제공받은 환자에서의 0.25점의 평균 증가와 비교하여, 28일에 2점의 평균 LSS의 통계학적으로 유의한(p<0.05) 감소를 나타내었다는 것을 도시한 그래프이다. 도 1b는 연구 과정에 걸친 병변 중증도 점수(LSS)의 평균 백분율 변화를 도시한 그래프이다.
도 2는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 투여한 환자가 투여 기간에 걸쳐서 0 내지 67% 범위의 LSS의 감소를 나타내었다는 것을 도시한 그래프이다.
도 3은 위약을 제공받은 환자에서 변화가 없는 것과 비교하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(균주 B)를 제공받은 환자에서 2.25개 세포/㎟의 평균 감소를 도시한 그래프이다.
도 4는 위약군에서 감소되지 않은 것과 비교하여, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(균주 B) 투여 환자군이 전신 항염증 반응을 나타내는 사이토카인 생산의 감소를 나타내었다는 것을 도시한 그래프이다.
도 5는 고용량(2.76 g)의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(균주 B)를 투여한 환자의 경우 제28일에 15%의 평균 LSS 감소를 나타내고, 이것은 제42일에 24%까지 계속된다는 것을 도시한 그래프이다.
도 6은 28일 동안 고용량(2.76 g)과 저용량(550 ㎎)의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(균주 B) 사이에서 일관된 LSS 감소를 도시한 그래프이고; 고용량에서 이러한 감소는 제42일까지 계속된다.
도 7은 고용량의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(균주 B)에서 제42일에 최대 80%의 LSS 감소를 나타낸 그래프이다.
도 8은 LSS와 일관된 고용량 평균 PASI 감소를 나타낸 그래프이며; PASI 감소는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(균주 B)의 투여 종료 후에 계속되었다.
도 9는 고용량의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(균주 B)에서 제42일에 최대 62%의 PASI 감소를 나타낸 그래프이다.
도 10은 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 인간 염증성 M1형 APC에 의해서 IL-10 및 IL-27 사이토카인 생산을 향상시킨다는 것을 나타낸 그래프이다.
도 11a 및 도 11b는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 말초 T 세포-매개 염증(KLH DTH) 모델에서 효능이 있다는 것을 나타낸 그래프이다. 도 11a는 키홀-림펫 헤모시아닌(Keyhole Limpet Hemocyanin: KLH)에 대한 지연형 과민증(delayed-type hypersensitivity: DTH)을 나타낸다. C57Bl/6 마우스를 KLH 및 CFA로 면역화시키고, 9일 후에 KLH를 사용하여 귀의 피부내에 시험감염시켰다. 마우스를 귀 시험감염을 통해서 면역화시킨 다음날부터 위약, 덱사메타손(1 ㎎/㎏ IP QD) 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(1.8 mg PO QD)로 처리하였다. 귀 염증을 제9일에 측정하였다. 도 11b는 KLH를 사용한 드레이닝 림프절 또는 비장 세포의 생체외 자극을 나타낸다. DTH 연구 완료 후에, 마우스를 희생시키고, 귀 드레이닝 림프절 및 비장으로부터의 총 세포를 KLH와 함께 2일 동안 인큐베이션시켰다. 상청액으로부터의 사이토카인을 MSD에 의해서 측정하였다. (다이아몬드: 위약; 사각형: 덱사메타손(Dex); 별: 프레보텔라 히스티콜라 균주 B)
도 12a 내지 도 12c는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 경구 처리가 피부 염증의 타입 17-유도 모델 피부 염증(이미퀴모드 유도 건선)에서 효능이 있다는 것을 나타낸다. 도 12a는 등 피부 및 귀를 7일 동안 5% 이미퀴모드, TLR7 및 TLR8 효능제로 국소로 처리한 BALB/c 마우스에 대한 피부 점수를 나타낸다. 마우스를 제1일 내지 제7일 동안 매일 위약, 덱사메타손(1 ㎎/㎏ IP) 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(10 ㎎ PO)로 처리하였다. 등 점수를 매일 기록하여 홍반 및 건선과 연관된 스케일링을 측정하였다. 도 12b는 마우스의 건선성 피부로부터의 Il17a mRNA 전사체를 RT-qPCR로 측정한 것을 나타낸다. 도 12c는 비장세포의 생체외 자극을 나타낸다. 연구의 종료 시, 마우스를 희생시키고, 비장세포를 PMA/이오노마이신으로 48시간 동안 자극하였다. IL-17A를 MSD에 의해서 상청액으로부터 측정하였다.
도 13a 내지 도 13f는 키홀-림펫 헤모시아닌(KLH)에 대한 지연형 과민증(DTH)을 나타낸다. C57Bl/6 마우스를 KLH 및 CFA로 면역화시키고, 9일 후에 귀를 KLH를 사용하여 피부내로 시험감염시켰다. 마우스를 귀 시험감염을 통해서 면역화시킨 다음날부터 위약, 덱사메타손(1 ㎎/㎏ IP QD) 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(1.8 ㎎ PO QD)로 처리하였다. 귀 염증을 제9일에 측정하였다. 모든 실험에서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B, 혐기성 수크로스 및 다른 언급된 균주는 제1일에 시작하여 9일 동안 매일 경구로 제공되었고, 덱사메타손은 매일 i.p. 주사에 의해서 제공되었다. 도 13a는 귀 두께의 변화를 나타내고(n=5마리 마우스/군), (B) 도 13b는 염증의 척도로서의 귀 두께 변화를 조절하는 데 있어서의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 대한 용량 반응을 나타낸다. ****p<0.001, ns: 언페어드 스튜던츠 t-검정에 의해서 결정되는 경우 유의하지 않음. 도 13c는 KLH를 사용한 드레이닝 림프절 또는 비장 세포의 생체외 자극을 나타낸다. DTH 연구 완료 후에, 조직을 수거하고, 장간막 림프절, 비장 및 귀 드레이닝 림프절로부터의 총 세포를 LPS 또는 KLH로 48 내지 72시간 동안 자극하였다. 상청액으로부터의 사이토카인을 MSD에 의해서 측정하였다. 데이터는 2 내지 4회 실험을 대표하고, n=5/군이다. 모든 데이터는 평균±SEM/SD이다. **p<0.001, ***p<0.0005, ****p<0.0001, ns: 언페어드 스튜던츠 t-검정에 의해서 결정되는 경우 유의하지 않음. 도 13d는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 IL-10을 통해서 작용하여 귀 염증을 감소시킨다는 것을 나타낸다. 마우스를 제2일, 제4일 및 제6일에 IL-10R 차단 항체로 처리하였다. n=2 실험으로부터의 대표적인 도면이며, 각각의 실험에서 5마리 마우스/군을 사용함; **p<0.01, ****p<0.0001, ns: 언페어드 스튜던츠 t-검정에 의해서 결정되는 경우 유의하지 않음. 도 13e는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리된 마우스로부터의 세포의 수동적 전달을 도시한 도면. DTH를 갖는 마우스를 8일 동안 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리하고, 그 다음 이러한 처리된 동물로부터의 세포의 상이한 세트를 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 투여되지 않은 면역화된 동물의 제2 세트에게 수동적으로 전달하였다. n=2 실험으로부터의 대표적인 도면이며, 각각의 실험에서 5마리 마우스/군을 사용함; **p<0.01, ****p<0.0001, ns: 정규 일원 ANOVA(Ordinary one-way ANOVA)에 의해서 결정되는 경우 유의하지 않음. 도 13f는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 치료적 투여를 나타낸다. KLH-DTH를 마우스에서 유도하고, 마우스를 도면의 각각의 패널 위에 나타낸 바와 같이 8, 3 또는 1일 동안 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리하였다. 데이터는 각각의 실험에서 5마리 마우스/군을 사용한 2개의 독립적인 실험을 나타낸다; *p<0.05 **p<0.01, ****p<0.0001, ns: 언페어드 스튜던츠 t-검정에 의해서 결정되는 경우 유의하지 않음.
도 14a 내지 도 14c는 지연형 과민증에서 DO11 TCR Tg 세포의 입양 전달을 나타낸다. BALB/c 마우스(n=5/군)에게 DTH를 OVA + CFA로 피하로 유도하기 24시간 전에 4×106개의 DO11 TCR Tg 세포를 입양 전달하였다. 제8일에, 마우스를 20 ㎍ OVA를 사용하여 귀에 피부내로 시험감염시켰다. 시험감염 24시간 후, 귀 측정치를 기록하였다. 비장 및 귀 드레이닝 림프절 세포를 OVA323-339 펩티드로 72시간 동안 생체외에서 재자극하여 항원 특이적 사이토카인 반응을 평가하였다. 도 14a는 막대가 귀 시험감염 24시간 후 귀 염증 변화의 평균±SEM을 나타낸다는 것을 도시한다. 도 14b는 전염증성 사이토카인 수준을 나타내고, 도 14c는 귀 드레이닝 경부 림프절 세포로부터의 상청액 중의 타입 3 사이토카인을 나타낸다. 데이터는 각각의 실험에서 5마리 마우스/군을 사용한 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. ***p<0.01, ****p<0.0001, ns: 일원 ANOVA에 의해서 결정되는 경우 유의하지 않음.
도 15a 내지 도 15d는 이미퀴모드 유도 건선 마우스 모델 BALB/c 마우스의 등 피부 및 귀를 7일 동안 5% 이미퀴모드, TLR7 및 TLR8 효능제로 국소로 처리하였다. 마우스를 제1일 내지 제7일 동안 매일 위약, 덱사메타손(1 ㎎/㎏ IP) 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(10 ㎎ PO)로 처리하였다. 도 15a는 이미퀴모드 적용 7일 후 마우스 등 피부의 표현형 표현을 나타낸다. 등 점수를 매일 기록하여 홍반 및 건선과 연관된 스케일링을 측정하였다. **p<0.01 ****p<0.001, ns: 일원 ANOVA에 의해서 결정되는 경우 유의하지 않음. 도 15b는 IMQ 적용이 각질세포의 증식 및 면역 세포의 침윤을 변경한다는 것을 나타낸다. 등 피부의 H&E 염색은 과각화증(hyperkeratosis)으로 나타나는 피부 각질층 내의 핵 증가 및 가시세포증(acanthosis)으로 나타나는 표피의 두꺼워짐을 나타내는데, 이것은 병리학자에 의해서 점수 매겨졌다. *p<0.05 **p<0.01, 일원 ANOVA에 의해서 결정되는 경우. 도 15c는 연구 종료 시, 비장세포를 PMA/이오노마이신으로 48시간 동안 생체외에서 재자극한 것을 나타낸다. 추가로, 귀를 균질화시키고, IL-17A의 단백질 수준을 MSD에 의해서 상청액으로부터 측정하였다. 도 15d는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 7일의 기간에 걸쳐서 IMQ 적용 후 귀 염증 감소에서 항-IL-17A로서 동등하게 효능이 있다는 것을 나타낸다. **p<0.01 ****p<0.001, 일원 ANOVA에 의해서 결정되는 경우.
도 16a 내지 도 16c는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 EAE의 재발 완화형 모델(relapsing remitting model)에서 신경염증을 억제하였다는 것을 나타낸다. CFA에서 PLP91-110으로의 면역화에 의해서 SJL 마우스에서 EAE를 유도하였고, 백일해 독소(pertussis toxin: PTX)를 EAE 유도 1일, 3일 및 7일 후에 투여하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 41일 동안 매일 경구 투여하였다. 대조군(비히클)의 마우스에게 혐기성 수크로스를 투여하였다. 도 16a는 비히클, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 또는 양성 대조군으로서 핑골리모드(fingolimod)로 처리된 마우스의 누적 EAE 점수를 나타낸다. 데이터는 3회 독립적인 실험을 대표한다(n=15마리 마우스/군). 실험 기간 동안 매일 임상 점수를 평가하였다. ***p≤0.0005 및 ****p≤0.00005. 도 16b는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로의 처리가 EAE 마우스의 척수에서 염증 및 침윤성 염증성 세포를 감소시켰다는 것을 나타낸다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B, 비히클 또는 핑골리모드로 처리된 마우스의 뇌와 척수의 대표적인 헤마톡실린 및 에오신(H&E)-염색 영상. 척수 부분은 염증 및 염증성 부위를 갖는 영역을 보여주기 위해서 289× 배율로 확대되어 있다. 데이터는 2회 독립적인 실험을 대표한다(n=15마리 마우스/군). 도 16c는 연구 종료 시 제42일에 qPCR에 의한 EAE의 십이지장 대 결장에서의 Treg 관련 유전자의 전사 프로파일링을 나타낸다. 언페어드 스튜던츠에 의한 *p≤0.05. 데이터는 2회 독립적인 실험을 대표한다(n=5 마우스/군). 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 EAE 처리에서 Treg 유전자의 십이지장 발현을 유도한다.
도 17a 및 도 17b는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 시험관내 활성을 나타낸다. 도 17a는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 피. 제주니(P. jejuni)에 비해서 더 강력하고, 증가된 양의 IL-10 분비를 유도한다는 것을 나타낸다. 도 17b는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 용량-의존적 방식으로 장 상피 장벽을 일관되게 강화시킨다는 것을 나타낸다. 장 상피 공배양 트랜스웰 배양물(60% Caco-2 및 40% HT-29 세포주)을 수크로스 비히클 또는 다양한 농도의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B와 함께 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 미생물과의 인큐베이션 전 및 후에, 상피통과 전기 저항(TEER)을 통해서 상피 장벽을 평가하였다. 각각 3개의 기술적인 복제물이 있는 3회의 독립적인 실험으로부터의 대표적인 데이터를 나타낸다. 장벽 무결성을 0시간으로부터의 배수 변화로 계산하고, 수크로스 비히클 백분율로서 보고한다.
도 18a 내지 도 18d는 Th2 유도 아토피성 피부염의 뮤린 모델을 나타낸다. Th2 유도 아토피성 피부염의 뮤린 모델. 도 18a 내지 도 18b에서, BALB/c 마우스를 제1일 및 제2일에 0.5% FITC로 국소로 감작시켰고, 6일 후에 귀를 0.5% FITC로 시험감염시켰다. 마우스를 매일 비히클, 덱사메타손(1 ㎎/㎏ IP) 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(10 ㎎ PO)로 처리하였다. 귀 염증을 제7일에 귀 시험감염 24시간 후에 측정하였다. 도 18a는 귀 두께 변화를 나타낸다(n=5마리 마우스/군). 도 18b는 연구 종료 시, 귀 드레이닝 림프절을 수거하고, 단일 세포 현탁액을 48시간 동안 PMA/이오노마이신으로 생체외에서 자극한 것을 나타낸다. IL-4 및 KC의 단백질 수준을 MSD에 의해서 상청액으로부터 측정하였다. 도 18c 내지 도 18d에서, BALB/c 마우스를 제1일 내지 제14일에 45 nM MC903으로 귀를 매일 국소로 감작시켰다. 마우스를 매일 비히클 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(10 ㎎ PO)로 처리하였다. 귀 염증을 제14일에 측정하였다. 도 18c는 귀 두께 변화를 나타낸다(n=5마리 마우스/군). 도 18d는 qPCR을 귀 조직으로부터 수행하여 Th2 관련 유전자 발현을 결정한 것을 도시한다. 데이터는 2개의 개별 실험을 대표한다. ***p<0.01, ****p<0.0001, ns: 정규 일원 ANOVA에 의해서 결정되는 경우 유의하지 않음.
도 19는, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 비복제 형태가 KLH-DTH에 대한 보호를 나타낸다는 것을 보여준다. KLH-DTH를 이미 기재된 바와 같이 설정하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 비복제 감마 조사 형태로 처리된 군에서의 귀 두께 변화(n=5마리 마우스/군). ****p<0.001, ns: 언페어드 스튜던츠 t-검정에 의해서 결정되는 경우 유의하지 않음.
도 20은 비히클, 덱사메타손 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B, 항-TLR2 항체, IgG1 이소타입 대조군 또는 제시된 바와 같은 조합물로의 처리 후 KLH DTH 모델에서 24시간 귀 측정을 나타낸 그래프이다.
도 21은 비히클, 덱사메타손 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B, 항-TLR2 항체, IgG1 이소타입 대조군 또는 제시된 바와 같은 조합물로의 처리 후 KLH DTH 모델에서 24시간 귀 측정을 나타낸 그래프이다.
도 22a 및 도 22b는 투여 후 제15일(도 22a) 및 제30일(도 22b)에 비히클, 덱사메타손 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로의 처리 후 KLH DTH 모델에서 24시간 귀 측정을 나타낸 그래프이다.
도 23a 및 도 23b는 투여 후 제15일(도 23a) 및 제30일(도 23b)에 비히클, 덱사메타손 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 5개의 개별 분말 제제로의 처리 후 KLH DTH 모델에서 24시간 귀 측정을 나타낸 그래프이다.
도 24a 및 도 24b는 투여 후 제8일(도 24a) 및 제23일(도 24b)에 분말 또는 고체 투여 형태의 비히클, 덱사메타손 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로의 처리 후 KLH DTH 모델에서 24시간 귀 측정을 나타낸 그래프이다.
도 25는 연구 개략도를 나타낸다.

일 양태에서, 본 명세서에는 경구 투여되는 프레보텔라 히스티콜라의 비집락화 균주인 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 기재되며, 이것은 타입 1(TH1), 타입 2(TH2) 및 타입 3(TH17) 염증의 뮤린 모델에서 전신 염증을 억제하기 위해서 소장 축을 조절한다. 지연형 과민증(타입 1, 타입 2 및 3 염증), 건선(타입 3 염증) 및 EAE(타입 3 염증)을 비롯한 질환의 마우스 모델에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 사용한 경구 요법은 염증 및 면역병리의 상당한 감소를 초래하였다. 생체외 사이토카인 분석은, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 치료가 IL-6, TNF 및 IL-12p70을 비롯한 전염증성 사이토카인의 생산을 감소시켰고, 염증 캐스케이드에 연루된 각질세포 화학유인물질(KC)을 비롯한 케모카인을 하향조절하였다는 것을 나타내었다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 치료는 또한 IL-10을 유도하였는데, 이것은 염증의 하향조절에서 역할을 한다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 시험관내에서 소화관 상피 세포의 장벽 무결성을 강화시킨다. 마지막으로, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 비복제 형태는 염증 억제에 동등하게 효능이 있었는데, 이는 집락화 생존력이 약물의 약리학적 활성에 요구되지 않는다는 것을 나타낸다. 그것은 소화관에서 지속되거나 집락화되지 않고, 주위 미생물군을 변형시키지 않는다. 이러한 결과는, 소장 축이 이전에 인지되지 않았던 전신 염증의 제어에 중요한 역할을 갖는다는 것을 나타낸다. 그것은 장 점막 상의 숙주 세포에 직접 작용하는 경구 투여된 소화관-제한된 약물에 의해서 조절될 수 있다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 광범위한 염증성 질환을 치료할 잠재력을 갖는 경구용의 강력한 항염증 약물의 최초의 차세대 약물로서 임상 개발 중이다.

특정 양상에서, 본 명세서에는 항염증 미생물인 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 사용한 경구 요법이 기재된다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 인간 공여자의 십이지장으로부터 단리된 프레보텔라 히스티콜라의 단일 균주의 약제학적 제제일 수 있다. 이러한 균주는 경구 투여될 때 트랜스제닉 뮤린 질환 모델에서 염증을 감소시키는 것으로 나타났다. 본 명세서에 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 항염증 효과의 범위 및 기전은 소장 축에 의해서 매개된 염증 수복의 관점에서 개시 및 논의되어 있다.

본 명세서에 보고된 바와 같이, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 장에서의 집락화는 이의 약리학적 활성에 필요하지 않다. 따라서, 특정 실시형태에서 미생물군의 변형이 존재하지 않는다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 비복제 감마-조사 형태의 효능은, 이의 작용이 시험관내 검정에서 인지된 효과와 일관되게, 숙주 세포와의 직접 상호작용에 의존한다는 증거이다. 이는 결장 미생물총(colonic microbiota)의 생태계를 변경하는 생 박테리아 치료제의 기록과 구별된다. 모든 실험을 온전한 장 미생물총을 갖는 특정 병원체-무함유 동물에서 수행하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 용량-의존적 효과는 이러한 미생물 배경에 중첩되었다.

지연형 과민증 모델에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효능에서 IL-10의 역할은 소장 축에 의해서 매개되는 효과와 전염증성 매개인자를 억제하는 것에 기초한 확립된 치료제 사이의 차이를 나타낸다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 활성에서 IL-10의 역할의 약리학적 입증은 이의 항염증 효과를 이용하기 위한 대안적인 방식을 나타낸다.

따라서, 특정 실시형태에서 본 명세서에는 수백만 명의 환자가 앓고 있는 일반적인 염증성 질환에 대한 치료적 접근법이 제공된다. 소장 축을 통해 작용하는 비흡수성 경구제에 의한 염증의 수복은 전세계 수백만 명의 환자가 앓고 있는 염증성 질환의 치료를 위해 합리적인 비용으로 제조될 수 있는 새로운 부류의 효과적이고 안전한 경구용 의약을 생성할 가능성이 있다.

정의

"아주반트" 또는 "아주반트 요법"은 광범위하게 환자 또는 대상체에서 면역학적 또는 생리학적 반응에 영향을 미치는 작용제를 지칭한다. 예를 들어, 아주반트는 시간이 지남에 따라 항원의 존재를 증가시키거나, 항원 제시 세포 항원을 흡수하고, 대식세포 및 림프구를 활성화시키고, 사이토카인의 생산을 지원할 수 있다. 면역 반응을 변화시킴으로써, 아주반트는 소량의 면역 상호작용제가 특정 용량의 면역 상호작용제의 효과 또는 안전성을 증가시키도록 허용할 수 있다. 예를 들어, 아주반트는 T 세포 고갈을 방지하여 특정 면역 상호작용제의 효과 또는 안전성을 증가시킬 수 있다.

"투여"는 광범위하게 대상체에 대한 조성물의 투여 경로를 지칭한다. 투여 경로의 예는 경구 투여, 직장 투여, 국소 투여, 흡입(비강) 또는 주사를 포함한다. 주사 투여는 정맥내(IV), 근육내(IM) 및 피하(SC) 투여를 포함한다. 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물은 경구, 비경구, 장내, 정맥내, 복강내, 국소, 경피(예를 들어, 임의의 표준 패치를 사용), 피부내, 안구내, 비강내, 국소, 비경구, 예컨대, 에어로졸, 흡입, 피하, 근육내, 협측, 설하, (경)직장, 질, 동맥내 및 경막내, 점막내(예를 들어, 설하, 혀, (경)협측), (경)요도, 질(예를 들어, 경질내 및 질내), 이식, 방광내, 폐내, 십이지장내, 위내 및 기관지내를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 임의의 효과적인 경로에 의해 임의의 형태로 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물은 경구, 직장, 국소, 방광내, 배액 림프절 내로 또는 인접하여 주사에 의해, 정맥내, 흡입 또는 에어로졸에 의해, 또는 피하로 투여된다. 일부 바람직한 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물은 경구로 투여된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 온전한 항체 및 이의 항원 결합 단편 둘 모두를 지칭할 수 있다. 온전한 항체는 디설파이드 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 V_H로 축약됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 명세서에서 V_L로 축약됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. V_H 및 V_L 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 지칭되는 보다 보존된 영역들과 산재된 상보성 결정 영역(CDR)으로 지칭되는 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 하기의 순서로 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 용어 "항체"는 예를 들어, 단클론성 항체, 다클론성 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 단일-쇄 항체 및 항원-결합 항체 단편을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 항체의 "항원 결합 단편" 및 "항원-결합 부분"은 항원에 결합하는 능력을 유지하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 "항원-결합 단편"이라는 용어에 포함되는 결합 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, scFv, 디설파이드 결합 Fv, Fd, 디아바디, 단일-쇄 항체, NANOBODIES®, 단리된 CDRH3, 및 온전한 항체의 가변 영역의 적어도 일부를 보유하는 다른 항체 단편을 포함한다. 이들 항체 단편은 통상적인 재조합 및/또는 효소 기술을 사용하여 수득될 수 있으며, 온전한 항체와 동일한 방식으로 항원 결합에 대해 스크리닝될 수 있다.

"세포 증대"는 조성물의 투여 전에 환경에 실질적으로 존재하지 않고 조성물 자체에 존재하지 않는 환경에서 세포의 유입 또는 세포의 확장을 광범위하게 지칭한다. 환경을 증대시키는 세포는 면역 세포, 간질 세포, 박테리아 및 진균 세포를 포함한다.

"분기군"은 계통수에서 통계적으로 유효한 노드의 하류에 있는 계통수의 OTU 또는 구성원을 지칭한다. 분기군은 상이한 단일계통 진화 단위이고 어느 정도의 서열 유사성을 공유하는 계통수에서의 말단 잎 세트를 포함한다. "조작 분류 단위" 및 "OTU"(또는 복수형 "OTU들")는 계통수에서 말단 잎을 지칭하고, 핵산 서열, 예를 들어 전체 게놈 또는 특정 유전자 서열, 및 종 수준에서 이 핵산 서열에 대한 서열 동일성을 공유하는 모든 서열에 의해 정의된다. 일부 실시형태에서, 특정 유전자 서열은 16S 서열 또는 16S 서열의 일부일 수 있다. 다른 실시형태에서, 2개의 개체의 전체 게놈이 서열분석되고 비교된다. 또 다른 실시형태에서, 다중 위치 서열 태그(MLST), 특정 유전자 또는 유전자 세트와 같은 선택된 영역은 유전자 비교될 수 있다. 16S 실시형태에서, 전체 16S 또는 16S의 일부 가변 영역에 걸쳐 97% 이상의 평균 뉴클레오티드 동일성을 공유하는 OTU들은 동일한 OTU로 간주된다(예를 들어, 문헌[Claesson M J, Wang Q, O'Sullivan O, Greene-Diniz R, Cole J R, Ros R P, and O'Toole P W. 2010. Comparison of two next-generation sequencing technologies for resolving highly complex microbiota composition using tandem variable 16S rRNA gene regions. Nucleic Acids Res 38: e200. Konstantinidis K T, Ramette A, and Tiedje J M. 2006. The bacterial species definition in the genomic era. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 361: 1929-1940] 참고). 완전한 게놈을 수반하는 실시형태에서, 95% 이상의 평균 뉴클레오티드 동일성을 공유하는 MLST, 특정 유전자 또는 유전자 세트 OTU들은 동일한 OTU로 간주된다(예를 들어, 문헌[Achtman M, and Wagner M. 2008. Microbial diversity and the genetic nature of microbial species. Nat. Rev. Microbiol. 6: 431-440. Konstantinidis K T, Ramette A, and Tiedje J M. 2006. The bacterial species definition in the genomic era. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 361: 1929-1940] 참고). OTU는 흔히 유기체 간의 서열을 비교함으로써 정의된다. 일반적으로, 95% 미만의 서열 동일성을 갖는 서열은 동일한 OTU의 일부를 형성하는 것으로 간주되지 않는다. OTU는 또한 뉴클레오티드 마커 또는 유전자의 임의의 조합, 특히 고도로 보존된 유전자(예를 들어, "하우스-키핑(house-keeping)" 유전자)의 임의의 조합, 또는 이의 조합을 특징으로 할 수 있다. 이러한 특성화는 예를 들어, WGS 데이터 또는 전체 게놈 서열을 사용한다.

둘 이상의 단클론성 미생물 균주의 "조합"은 동일한 물질 또는 제품 또는 물리적으로 연결된 제품에서의 두 단클론성 미생물 균주의 물리적 공존뿐만 아니라, 단클론성 미생물 균주의 일시적인 공동 투여 또는 공동 국소화도 포함한다.

용어 "감소시키다" 또는 "고갈시키다"는 치료 전 상태와 비교하여 치료 후, 상황에 따라 차이가 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 1/100, 1/1000, 1/10,000, 1/100,000, 1/1,000,000 또는 검출 불가가 되도록 하는 변화를 의미한다. 감소될 수 있는 특성은 면역 세포, 박테리아 세포, 기질 세포, 골수 유래 억제자 세포, 섬유아세포, 대사산물의 수; 사이토카인의 수준; 또는 또 다른 물리적 매개변수(예컨대, (예를 들어, DTH 동물 모델에서) 귀 두께 또는 (예를 들어, 동물 종양 모델에서) 종양 크기)를 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "조작된 박테리아"는 인간의 개입 및 임의의 이러한 박테리아의 자손에 의해 그들의 자연 상태로부터 유전적으로 변경된 임의의 박테리아이다. 조작된 박테리아는 예를 들어, 표적화된 유전자 변형의 생성물, 무작위 돌연변이 유발 스크린의 생성물 및 유도 진화의 생성물을 포함한다.

용어 "에피토프"는 항체 또는 T 세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 결정인자를 의미한다. 에피토프는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 기로 구성된다. 특정 에피토프는 항체가 결합할 수 있는 특정 아미노산 서열에 의해 정의될 수 있다.

용어 "유전자"는 생물학적 기능과 관련된 임의의 핵산을 지칭하기 위해 광범위하게 사용된다. 용어 "유전자"는 특정 게놈 서열뿐만 아니라 이 게놈 서열에 의해 암호화된 cDNA 또는 mRNA에도 적용된다.

2개의 핵산 분자의 핵산 서열 사이의 "동일성"은 예를 들어, 문헌[Pearson et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444]에서와 같은 기본 파라미터를 사용하여, "FASTA" 프로그램과 같은 공지된 컴퓨터 알고리즘을 사용하여 동일성 백분율로서 결정될 수 있다(다른 프로그램은 GCG 프로그램 패키지(문헌[Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12(I):387(1984)]), BLASTP, BLASTN, FASTA(문헌[Atschul, S. F., et al., J Molec Biol 215:403(1990)]; 문헌[Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop, ed., Academic Press, San Diego, 1994] 및 문헌[Carillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48:1073])를 포함함). 예를 들어, 미국 국립 생물공학 정보센터 데이터베이스의 BLAST 기능을 사용하여 동일성을 결정할 수 있다. 다른 상업적으로 또는 공개적으로 이용가능한 프로그램에는, DNAStar "MegAlign" 프로그램(미국 위스콘신주 매디슨 소재) 및 위스콘신 대학교 Genetics Computer Group(UWG)의 "Gap" 프로그램(미국 위스콘신주 매디슨 소재)이 포함된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "면역 장애"는 자가면역 질환, 염증성 질환 및 알레르기를 포함한, 면역계의 활동에 의해 유발된 임의의 질환, 장애 또는 질환 증상을 지칭한다. 면역 장애는 자가면역 질환(예를 들어, 루푸스, 공피증, 용혈빈혈, 혈관염, 1형 당뇨병, 그레이브병, 류마티스 관절염, 다발경화증, 굿파스쳐 증후군, 악성 빈혈 및/또는 근육병증), 염증성 질환(예를 들어, 보통 여드름, 천식, 복강 질환, 만성 전립선염, 사구체신염, 염증성 장 질환, 골반염 질환, 재관류 손상, 류마티스 관절염, 사코이드증, 이식 거부, 혈관염 및/또는 간질성 방광염), 및/또는 알레르기(예를 들어, 식품 알레르기, 약물 알레르기 및/또는 환경 알레르기)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

"면역요법"은 대상체의 면역계를 사용하여 질환(예를 들어, 면역 질환)을 치료하는 치료법이며, 예를 들어 관문 저해제, 사이토카인, 세포 요법, CAR-T 세포 및 수지상 세포 요법을 포함한다.

용어 "증가하다"는 치료 전 상태와 비교하여 치료 후, 상황에 따라 차이가 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 2배, 4배, 10배, 100배, 10^3배, 10^4배, 10^5배, 10^6배 및/또는 10^7배 더 크도록 되는 변화를 의미한다. 증가될 수 있는 특성은 면역 세포, 박테리아 세포, 기질 세포, 골수 유래 억제자 세포, 섬유아세포, 대사산물의 수; 사이토카인의 수준; 또는 또 다른 물리적 매개변수(예컨대, (예를 들어, DTH 동물 모델에서) 귀 두께 또는 (예를 들어, 동물 종양 모델에서) 종양 크기)를 포함한다.

"선천적 면역 효능제" 또는 "면역-아주반트"는 소분자, 단백질 또는 톨(Toll)-유사 수용체(TLR), NOD 수용체, RLR, C-타입 렉틴 수용체, STING-cGAS 경로 성분, 인플라마솜 복합체를 포함한 선천적 면역 수용체를 특이적으로 표적화하는 다른 제제이다. 예를 들어, LPS는 박테리아 유래 또는 합성된 TLR-4 효능제이며, 알루미늄은 면역 자극 아주반트로서 사용될 수 있다. 면역 아주반트는 특정 부류의 광범위한 아주반트 또는 아주반트 요법이다. STING 효능제의 예는 2'3'-cGAMP, 3'3'-cGAMP, c-디-AMP, c-디-GMP, 2'2'-cGAMP, 및 2'3'-cGAM(PS)2(Rp/Sp)(Rp, 2'3'-cGAMP의 비스-포스포로티오에이트 유사체의 Sp-이성질체)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. TLR 효능제의 예는 TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLRlO 및 TLRI l을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. NOD 효능제의 예는 N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민(무라밀디펩티드(MDP)), 감마-D-글루타밀-메소-디아미노피멜산(iE-DAP), 및 데스무라밀펩티드(DMP)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

용어 "단리된" 또는 "강화된"은 (1) 초기에 생산되었을 때(자연에서 또는 실험 설정에서) 관련된 성분 중 적어도 일부로부터 분리된, 및/또는 (2) 인간의 손에 의해 생산, 제조, 정제 및/또는 제작된 미생물, 박테리아 또는 다른 개체 또는 물질을 포함한다. 단리된 미생물은 초기에 관련된 다른 성분의 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 그 초과로부터 분리될 수 있다. 일부 실시형태에서, 단리된 미생물은 약 80% 초과, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과 순수하고, 예를 들어, 다른 성분이 실질적으로 존재하지 않는다. 용어 "정제하다", "정제하는" 및 "정제된"은 초기에 생산 또는 생성되었을 때(예를 들어, 자연에서 또는 실험 설정에서), 또는 초기 생산 후 언제든지, 관련된 성분 중 적어도 일부로부터 분리된 다른 물질 또는 미생물을 지칭한다. 미생물 또는 미생물 집단은 미생물 또는 미생물 집단을 함유하는 물질 또는 환경으로부터와 같이 생산 시 또는 생산 후에 단리된 경우 정제된 것으로 간주될 수 있으며, 정제된 미생물 또는 미생물 집단은 최대 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 약 90% 초과의 다른 물질을 함유할 수 있으며, 여전히 "단리된" 것으로 간주된다. 일부 실시형태에서, 정제된 미생물 또는 미생물 집단은 약 80% 초과, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과 순수하다. 본 명세서에 제공된 미생물 조성물의 경우에, 조성물에 존재하는 하나 이상의 미생물 유형은 미생물 유형을 함유하는 물질 또는 환경에서 생성되고/되거나 존재하는 하나 이상의 다른 미생물로부터 독립적으로 정제될 수 있다. 미생물 조성물 및 이의 미생물 성분은 일반적으로 잔류 서식지 생성물로부터 정제된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은 "대사산물"은 임의의 세포 또는 미생물 대사 반응에서 기질로서 사용되거나 또는 임의의 세포 또는 미생물 대사 반응으로부터 생성물 화합물, 조성물, 분자, 이온, 보조 인자, 촉매 또는 영양소로서 생성되는 모든 분자 화합물, 조성물, 분자, 이온, 보조 인자, 촉매 또는 영양소를 지칭한다.

"미생물"은 박테리아, 진균, 미세 조류, 원생동물, 및 유기체와 관련된 발달 단계 또는 생애주기 단계(예를 들어, 식물, 포자(포자 형성, 휴면 및 발아 포함), 잠복, 생물막)로 특징지어지는 임의의 천연 또는 조작된 유기체를 지칭한다.

"미생물군"은 광범위하게 대상체 또는 환자의 신체 부위에 또는 그 안에 존재하는 미생물을 지칭한다. 미생물군의 미생물은 박테리아, 바이러스, 진핵생물 미생물 및/또는 바이러스를 포함할 수 있다. 미생물군의 개별 미생물은 대사 활성, 휴면성, 잠복성일 수 있거나, 포자로서 존재할 수 있거나, 플랑크톤으로 또는 바이오 필름에 존재할 수 있거나, 지속 가능하거나 일시적인 방식으로 미생물군에 존재할 수 있다. 미생물군은 공생 또는 건강 상태 미생물군 또는 질환 상태 미생물군일 수 있다. 미생물군은 대상체 또는 환자에 고유할 수 있거나, 또는 건강 상태 또는 치료 조건(예를 들어, 항생제 치료, 상이한 미생물에 대한 노출)의 변화로 인해 미생물군의 성분이 조절, 도입, 또는 고갈될 수 있다. 일부 양태에서, 미생물군은 점막 표면에서 발생한다. 일부 양태에서, 미생물군은 장 미생물군이다.

조직 또는 샘플의 "미생물군 프로파일" 또는 "미생물군 서명"은 미생물군의 박테리아 구성의 적어도 부분적인 특성화를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 미생물군 프로파일은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100종 또는 그 초과의 박테리아 균주가 미생물군에 존재하는지 부재하는지를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 마이크로바이옴 프로파일은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100종 또는 그 초과의 박테리아 균주가 샘플 내에 존재하는지 여부를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 마이크로바이옴 프로파일은 샘플에서 검출된 각각의 박테리아 균주의 상대 또는 절대량을 나타낸다.

박테리아와 관련하여 "변형된"은 박테리아의 야생형으로부터 변화를 거친 박테리아를 광범위하게 지칭한다. 박테리아 변형의 예는 유전자 변형, 유전자 발현, 표현형 변형, 제형화, 화학적 변형 및 용량 또는 농축을 포함한다. 개선된 특성의 예는 본 명세서 전반에 걸쳐 기술되어 있으며, 예를 들어 약독화, 영양요구성, 회귀성 또는 항원성을 포함한다. 표현형 변형은 예로서, 병독성을 증가 또는 감소시키는 박테리아의 표현형을 변형시키는 배지에서의 박테리아 성장을 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 유전자가 동일한 조건 하에서 동일한 종의 야생형 박테리아에 의해 발현되는 것보다 적어도 일부 조건 하에서 조작된 박테리아에서 더 높은 수준으로 발현되는 경우, 유전자는 박테리아에서 "과발현"된다. 유사하게, 유전자가 동일한 조건 하에서 동일한 종의 야생형 박테리아에 의해 발현되는 것보다 적어도 일부 조건 하에서 조작된 박테리아에서 더 낮은 수준으로 발현되는 경우, 유전자는 박테리아에서 "저발현"된다.

용어들 "폴리뉴클레오티드" 및 "핵산"은 상호교환적으로 사용된다. 이들은 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체 형태, 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드, 또는 이들의 유사체를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 임의의 3차원 구조를 가질 수 있고, 임의의 기능을 수행할 수 있다. 하기는 폴리뉴클레오티드의 비-제한적인 예이다: 유전자 또는 유전자 단편의 암호화 또는 비-암호화 영역, 연결 분석으로부터 정의된 유전자좌(유전자좌들), 엑손, 인트론, 메신저 RNA(mRNA), 마이크로 RNA(miRNA), 침묵 RNA(siRNA), 전이 RNA, 리보좀 RNA, 리보자임, cDNA, 재조합 폴리뉴클레오티드, 분지형 폴리뉴클레오티드, 플라스미드, 벡터, 임의의 서열의 단리된 DNA, 임의의 서열의 단리된 RNA, 핵산 프로브 및 프라이머. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대, 메틸화된 뉴클레오티드 및 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오티드 구조에 대한 변형은 중합체의 조립 전 또는 후에 부여될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 예컨대, 표지화 성분과의 접합에 의해 추가로 변형될 수 있다. 본 명세서에 제공된 모든 핵산 서열에서, U 뉴클레오티드는 T 뉴클레오티드와 상호교환가능하다.

"조작 분류 단위" 및 "OTU(들)"는 계통수에서 말단 잎을 지칭하고, 핵산 서열, 예를 들어 전체 게놈 또는 특정 유전자 서열, 및 종 수준에서 이 핵산 서열에 대한 서열 동일성을 공유하는 모든 서열에 의해 정의된다. 일부 실시형태에서, 특정 유전자 서열은 16S 서열 또는 16S 서열의 일부일 수 있다. 다른 실시형태에서, 2개의 개체의 전체 게놈이 서열분석되고 비교된다. 또 다른 실시형태에서, 다중 위치 서열 태그(MLST), 특정 유전자 또는 유전자 세트와 같은 선택된 영역은 유전자 비교될 수 있다. 16S의 경우, 전체 16S 또는 16S의 일부 가변 영역에 걸쳐 97% 이상의 평균 뉴클레오티드 동일성을 공유하는 OTU들은 동일한 OTU로 간주된다. 예를 들어, 문헌[Claesson MJ, Wang Q, O'Sullivan O, Greene-Diniz R, Cole JR, Ross RP, and O'Toole PW. 2010. Comparison of two next-generation sequencing technologies for resolving highly complex microbiota composition using tandem variable 16S rRNA gene regions. Nucleic Acids Res 38: e200. Konstantinidis KT, Ramette A, and Tiedje JM. 2006. The bacterial species definition in the genomic era. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 361: 1929-1940] 참고. 완전한 게놈의 경우, 95% 이상의 평균 뉴클레오티드 동일성을 공유하는 MLST, 16S 이외의 특정 유전자 또는 유전자 세트의 OTU들은 동일한 OTU로 간주된다. 예를 들어, 문헌[Achtman M, and Wagner M. 2008. Microbial diversity and the genetic nature of microbial species. Nat. Rev. Microbiol. 6: 431-440. Konstantinidis KT, Ramette A, and Tiedje JM. 2006. The bacterial species definition in the genomic era. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 361: 1929-1940] 참고. OTU는 흔히 유기체 간의 서열을 비교함으로써 정의된다. 일반적으로, 95% 미만의 서열 동일성을 갖는 서열은 동일한 OTU의 일부를 형성하는 것으로 간주되지 않는다. OTU는 또한 뉴클레오티드 마커 또는 유전자의 임의의 조합, 특히 고도로 보존된 유전자(예를 들어, "하우스-키핑" 유전자)의 임의의 조합, 또는 이의 조합을 특징으로 할 수 있다. 예를 들어, 속, 종 및 계통발생적 분기군에 대한 분류학적 할당을 갖는 조작 분류 단위(OTU)가 본 명세서에 제공된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 물질은 다른 성분이 실질적으로 없는 경우 "순수"하다. 용어 "정제시키다", "정제시키는" 및 "정제된"은 초기에 생산 또는 생성되었을 때(예를 들어, 자연에서 또는 실험 설정에서), 또는 초기 생산 후 언제든지, 관련된 성분들 중 적어도 일부로부터 분리된 다른 물질 또는 미생물을 지칭한다. 미생물은 하나 이상의 다른 박테리아 성분으로부터와 같이 생산 시 또는 생산 후에 단리된 경우 정제된 것으로 간주될 수 있으며, 정제된 미생물 또는 미생물 집단은 최대 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 또는 약 90% 초과의 다른 물질을 함유할 수 있으며, 여전히 "단리된" 것으로 간주된다. 일부 실시형태에서, 정제된 미생물은 약 80% 초과, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과 순수하다. 박테리아 조성물 및 이의 미생물 성분은 예를 들어, 잔류 서식지 생성물로부터 정제된다.

"잔류 서식지 산물"은 대상체 내에서 또는 대상체에서 미생물 군에 대한 서식지로부터 유래된 물질을 지칭한다. 예를 들어, 예를 들어, 미생물은 위장관내 배설물, 피부 자체, 타액, 호흡기 점액 또는 비뇨생식관 분비물(즉, 미생물 군집과 관련된 생물학적 물질)에서 산다. 잔류 서식지 산물이 실질적으로 없음은 미생물 조성물이 더 이상 인간 또는 동물 대상체 상의 또는 내의 미생물 환경과 관련된 생물학적 물질을 더 이상 함유하지 않고, 미생물 군집과 관련된 임의의 오염 생물학적 물질이 100% 없고, 99% 없고, 98% 없고, 97% 없고, 96% 없거나, 또는 95% 없음을 의미한다. 잔류 서식지 산물은 비 생물 물질(소화되지 않은 음식 포함)을 포함하거나, 원치 않는 미생물을 포함할 수 있다. 잔류 서식지 산물이 실질적으로 없음은 또한, 미생물 조성물이 인간 또는 동물로부터 검출가능한 세포를 함유하지 않으며, 미생물 세포만이 검출될 수 있음을 의미할 수 있다. 일 실시형태에서, 잔류 서식지 산물이 실질적으로 없음은 또한, 미생물 조성물이 검출가능한 바이러스(미생물 바이러스(예를 들어, 파지) 포함) 진균류, 마이코플라즈마 오염물을 함유하지 않음을 의미할 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 이는 미생물 세포와 비교하여 미생물 조성물내 생존가능 세포의 1×10-2%, 1×10-3%, 1×10-4%, 1×10-5%, 1×10-6%, 1×10-7%, 1×10-8% 미만이 인간 또는 동물임을 의미한다. 이 정도의 순도를 달성하는 방법에는 여러 가지가 있지만 그 중 어느 것도 제한적이지 않다. 따라서, 일련의 단일 집락으로부터의 복제(예컨대, 2개, 이에 제한되지 않음) 줄무늬가 단일 집락 형태를 나타낼 때까지 고체 배지에서 단일 집락으로의 여러 단계의 스트리킹을 통해 원하는 성분을 단리함으로써 오염이 감소될 수 있다. 대안적으로, 단일의 원하는 세포에 대한 다수 라운드의 일련의 희석(예를 들어, 10-8 또는 10-9의 희석)에 의해, 예컨대, 다회의 10배 연속 희석을 통해, 오염 감소가 달성될 수 있다. 이는 다수의 단리된 집락이 유사한 세포 형태 및 그람 염색 거동을 갖는 것을 보여줌으로써 추가로 확인할 수 있다. 적절한 순도를 확인하기 위한 다른 방법으로는 유전자 분석(예를 들어, PCR, DNA 서열분석), 혈청학 및 항원 분석, 효소 및 대사 분석, 및 원하는 성분을 오염물질과 구별하는 시약을 사용한 유세포 분석과 같은 계측을 사용하는 방법이 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "특이적 결합"은 항체가 소정의 항원에 결합하는 능력 또는 폴리펩티드가 그의 소정의 결합 파트너에 결합하는 능력을 지칭한다. 전형적으로, 항체 또는 폴리펩티드는 약 10^-7 M 이하의 K_D에 상응하는 친화도로 그의 소정의 항원 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하고, 비 특이적 및 관련되지 않은 항원/결합 파트너(예를 들어, BSA, 카세인)에 대한 결합에 대한 친화도보다 적어도 10배 적거나, 적어도 100배 적거나, 또는 적어도 1000배 적은 친화도(K_D에 의해 표현됨)로 소정의 항원/결합 파트너에 결합한다. 대안적으로, 특이적 결합은 하나의 성분이 단백질, 지질 또는 탄수화물 또는 이들의 조합이며, 특이적인 방식으로 단백질, 지질, 탄수화물 또는 이들의 조합인 제2 성분과 결합하는 2개 성분 시스템에 보다 광범위하게 적용된다.

용어들 "대상체" 또는 "환자"는 임의의 동물을 지칭한다. "치료를 필요로 하는"으로 기재된 대상체 또는 환자는 질환 치료가 필요한 대상체를 지칭한다. 포유동물(즉, 포유류 동물)은 인간, 실험 동물(예를 들어, 영장류, 래트, 마우스), 가축(예를 들어, 소, 양, 염소, 돼지) 및 가정용 애완 동물(예를 들어, 개, 고양이, 설치류)을 포함한다. 예를 들어, 대상체는 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 당나귀, 염소, 낙타, 마우스, 래트, 기니피그, 양, 라마, 원숭이, 고릴라 또는 침팬지를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 비-인간 포유동물일 수 있다.

"균주"는 동일한 박테리아 종의 밀접하게 관련된 구성원과 구별될 수 있도록 유전자 서명을 갖는 박테리아 종의 구성원을 지칭한다. 유전자 서명은 적어도 하나의 유전자의 전부 또는 일부의 부재, 적어도 조절 영역(예를 들어, 프로모터, 종결자, 리보스위치, 리보솜 결합 부위)의 전부 또는 일부의 부재, 적어도 하나의 천연 플라스미드의 부재("경화"), 적어도 하나의 재조합 유전자의 존재, 적어도 하나의 돌연변이 유전자의 존재, 적어도 하나의 외래 유전자(다른 종으로부터 유래된 유전자)의 존재, 적어도 하나의 돌연변이 조절 영역(예를 들어, 프로모터, 종결자, 리보스위치, 리보솜 결합 부위), 적어도 하나의 비-천연 플라스미드의 존재, 적어도 하나의 항생제 내성 카세트의 존재 또는 이들의 조합일 수 있다. 상이한 균주 사이의 유전자 서명은 PCR 증폭에 이어, 임의로 관심 게놈 영역(들) 또는 전체 게놈의 DNA 서열분석에 의해 확인될 수 있다. (같은 종의 다른 균주와 비교하여) 하나의 균주가 항생제 내성을 얻거나 잃거나, 생합성 능력(예컨대, 영양요구성 균주)을 얻거나 잃어버린 경우, 균주는 각각 항생제 또는 영양소/대사산물을 사용한 선별 또는 역-선별에 의해 구별될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 대상체에서 질환을 "치료하는" 또는 질환을 갖는 또는 갖는 것으로 의심되는 대상체를 "치료하는"이라는 용어는 대상체에게 약제학적 치료, 예를 들어 하나 이상의 작용제의 투여를 수행하여, 질환의 적어도 하나의 증상이 감소되거나 악화되는 것을 방지하는 것을 지칭한다. 따라서, 일 실시형태에서, "치료하는"은 특히 진행 지연, 완화 촉진, 완화 유도, 완화 증가, 회복 가속화, 대안 치료제의 효능 증가 또는 내성 감소, 또는 이들의 조합을 지칭한다.

박테리아

특정 양상에서, 본 명세서에는 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)의 치료 및/또는 예방에 유용한 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물) 및 (예를 들어, 건선의 치료를 위해서, 아토피성 피부염의 치료를 위해서) 예를 들어, 대상체, 예를 들어, 인간 대상체에서 상기 박테리아 조성물을 사용하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 전체 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 생 박테리아, 사멸된 박테리아, 약독화된 박테리아)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 박테리아의 하나의 균주, 예를 들어, 프레보텔라 히스티콜라 만을 포함한다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)("프레보텔라 히스티콜라 균주 B" 또는 "프레보텔라 균주 B"라고도 지칭됨)이다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 균주는 프레보텔라 균주 B 50329의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, CRISPR 서열)과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5% 서열 동일성, 적어도 99.6% 서열 동일성, 적어도 99.7% 서열 동일성, 적어도 99.8% 서열 동일성, 적어도 99.9% 서열 동일성)을 포함하는 균주이다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 당업계에 공지된 방법에 따라 배양될 수 있다. 예를 프레보텔라 히스티콜라스는 예를 들어, 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함된 문헌[Caballero et al., 2017. "Cooperating Commensals Restore Colonization Resistance to Vancomycin-Resistant Enterococcus faecium" Cell Host & Microbe 21:592-602]에 개시된 방법을 사용하여 ATCC 배지 2722, ATCC 배지 1490, 또는 기타 배지에서 성장될 수 있다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 전체 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 생 박테리아, 사멸된 박테리아, 약독화된 박테리아)를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 1.1×10¹⁰, 1.2×10¹⁰, 1.3×10¹⁰, 1.4×10¹⁰, 1.5×10¹⁰, 1.6×10¹⁰, 1.7×10¹⁰, 1.8×10¹⁰, 1.9×10¹⁰, 2×10¹⁰, 2.1×10¹⁰, 2.2×10¹⁰, 2.3×10¹⁰, 2.4×10¹⁰, 2.5×10¹⁰, 2.6×10¹⁰, 2.7×10¹⁰, 2.8×10¹⁰, 2.9×10¹⁰, 3×10¹⁰, 3.1×10¹⁰, 3.2×10¹⁰, 3.3×10¹⁰, 3.4×10¹⁰, 3.5×10¹⁰, 3.6×10¹⁰, 3.7×10¹⁰, 3.8×10¹⁰, 3.9×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1.1×10¹¹, 1.2×10¹¹, 1.3×10¹¹, 1.4×10¹¹, 1.5×10¹¹, 1.6×10¹¹, 1.7×10¹¹, 1.8×10¹¹, 1.9×10¹¹, 2×10¹¹, 2.1×10¹¹, 2.2×10¹¹, 2.3×10¹¹, 2.4×10¹¹, 2.5×10¹¹, 2.6×10¹¹, 2.7×10¹¹, 2.8×10¹¹, 2.9×10¹¹, 3×10¹¹, 3.1×10¹¹, 3.2×10¹¹, 3.3×10¹¹, 3.4×10¹¹, 3.5×10¹¹, 3.6×10¹¹, 3.7×10¹¹, 3.8×10¹¹, 3.9×10¹¹, 4×10¹¹ 5×10¹¹, 6×10¹¹, 7×10¹¹, 8×10¹¹, 9×10¹¹, 1×10¹², 2×10¹², 3×10¹², 4×10¹², 5×10¹², 6×10¹², 7×10¹², 8×10¹², 9×10¹² 및/또는 1×10¹³개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 적어도 약 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 1.1×10¹⁰, 1.2×10¹⁰, 1.3×10¹⁰, 1.4×10¹⁰, 1.5×10¹⁰, 1.6×10¹⁰, 1.7×10¹⁰, 1.8×10¹⁰, 1.9×10¹⁰, 2×10¹⁰, 2.1×10¹⁰, 2.2×10¹⁰, 2.3×10¹⁰, 2.4×10¹⁰, 2.5×10¹⁰, 2.6×10¹⁰, 2.7×10¹⁰, 2.8×10¹⁰, 2.9×10¹⁰, 3×10¹⁰, 3.1×10¹⁰, 3.2×10¹⁰, 3.3×10¹⁰, 3.4×10¹⁰, 3.5×10¹⁰, 3.6×10¹⁰, 3.7×10¹⁰, 3.8×10¹⁰, 3.9×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1.1×10¹¹, 1.2×10¹¹, 1.3×10¹¹, 1.4×10¹¹, 1.5×10¹¹, 1.6×10¹¹, 1.7×10¹¹, 1.8×10¹¹, 1.9×10¹¹, 2×10¹¹, 2.1×10¹¹, 2.2×10¹¹, 2.3×10¹¹, 2.4×10¹¹, 2.5×10¹¹, 2.6×10¹¹, 2.7×10¹¹, 2.8×10¹¹, 2.9×10¹¹, 3×10¹¹, 3.1×10¹¹, 3.2×10¹¹, 3.3×10¹¹, 3.4×10¹¹, 3.5×10¹¹, 3.6×10¹¹, 3.7×10¹¹, 3.8×10¹¹, 3.9×10¹¹, 4×10¹¹ 5×10¹¹, 6×10¹¹, 7×10¹¹, 8×10¹¹, 9×10¹¹, 1×10¹², 2×10¹², 3×10¹², 4×10¹², 5×10¹², 6×10¹², 7×10¹², 8×10¹², 9×10¹² 및/또는 1×10¹³개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 최대 약 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 1.1×10¹⁰, 1.2×10¹⁰, 1.3×10¹⁰, 1.4×10¹⁰, 1.5×10¹⁰, 1.6×10¹⁰, 1.7×10¹⁰, 1.8×10¹⁰, 1.9×10¹⁰, 2×10¹⁰, 2.1×10¹⁰, 2.2×10¹⁰, 2.3×10¹⁰, 2.4×10¹⁰, 2.5×10¹⁰, 2.6×10¹⁰, 2.7×10¹⁰, 2.8×10¹⁰, 2.9×10¹⁰, 3×10¹⁰, 3.1×10¹⁰, 3.2×10¹⁰, 3.3×10¹⁰, 3.4×10¹⁰, 3.5×10¹⁰, 3.6×10¹⁰, 3.7×10¹⁰, 3.8×10¹⁰, 3.9×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1.1×10¹¹, 1.2×10¹¹, 1.3×10¹¹, 1.4×10¹¹, 1.5×10¹¹, 1.6×10¹¹, 1.7×10¹¹, 1.8×10¹¹, 1.9×10¹¹, 2×10¹¹, 2.1×10¹¹, 2.2×10¹¹, 2.3×10¹¹, 2.4×10¹¹, 2.5×10¹¹, 2.6×10¹¹, 2.7×10¹¹, 2.8×10¹¹, 2.9×10¹¹, 3×10¹¹, 3.1×10¹¹, 3.2×10¹¹, 3.3×10¹¹, 3.4×10¹¹, 3.5×10¹¹, 3.6×10¹¹, 3.7×10¹¹, 3.8×10¹¹, 3.9×10¹¹, 4×10¹¹ 5×10¹¹, 6×10¹¹, 7×10¹¹, 8×10¹¹, 9×10¹¹, 1×10¹², 2×10¹², 3×10¹², 4×10¹², 5×10¹², 6×10¹², 7×10¹², 8×10¹², 9×10¹² 및/또는 1×10¹³개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 1.1×10¹⁰, 1.2×10¹⁰, 1.3×10¹⁰, 1.4×10¹⁰, 1.5×10¹⁰, 1.6×10¹⁰, 1.7×10¹⁰, 1.8×10¹⁰, 1.9×10¹⁰, 2×10¹⁰, 2.1×10¹⁰, 2.2×10¹⁰, 2.3×10¹⁰, 2.4×10¹⁰, 2.5×10¹⁰, 2.6×10¹⁰, 2.7×10¹⁰, 2.8×10¹⁰, 2.9×10¹⁰, 3×10¹⁰, 3.1×10¹⁰, 3.2×10¹⁰, 3.3×10¹⁰, 3.4×10¹⁰, 3.5×10¹⁰, 3.6×10¹⁰, 3.7×10¹⁰, 3.8×10¹⁰, 3.9×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1.1×10¹¹, 1.2×10¹¹, 1.3×10¹¹, 1.4×10¹¹, 1.5×10¹¹, 1.6×10¹¹, 1.7×10¹¹, 1.8×10¹¹, 1.9×10¹¹, 2×10¹¹, 2.1×10¹¹, 2.2×10¹¹, 2.3×10¹¹, 2.4×10¹¹, 2.5×10¹¹, 2.6×10¹¹, 2.7×10¹¹, 2.8×10¹¹, 2.9×10¹¹, 3×10¹¹, 3.1×10¹¹, 3.2×10¹¹, 3.3×10¹¹, 3.4×10¹¹, 3.5×10¹¹, 3.6×10¹¹, 3.7×10¹¹, 3.8×10¹¹, 3.9×10¹¹, 4×10¹¹개 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1×10⁸, 2×10⁸, 3×10⁸, 4×10⁸, 5×10⁸, 6×10⁸, 7×10⁸, 8×10⁸, 9×10⁸, 1×10⁹, 2×10⁹, 3×10⁹, 4×10⁹, 5×10⁹, 6×10⁹, 7×10⁹, 8×10⁹, 9×10⁹, 1×10¹⁰, 1.1×10¹⁰, 1.2×10¹⁰, 1.3×10¹⁰, 1.4×10¹⁰, 1.5×10¹⁰, 1.6×10¹⁰, 1.7×10¹⁰, 1.8×10¹⁰, 1.9×10¹⁰, 2×10¹⁰, 2.1×10¹⁰, 2.2×10¹⁰, 2.3×10¹⁰, 2.4×10¹⁰, 2.5×10¹⁰, 2.6×10¹⁰, 2.7×10¹⁰, 2.8×10¹⁰, 2.9×10¹⁰, 3×10¹⁰, 3.1×10¹⁰, 3.2×10¹⁰, 3.3×10¹⁰, 3.4×10¹⁰, 3.5×10¹⁰, 3.6×10¹⁰, 3.7×10¹⁰, 3.8×10¹⁰, 3.9×10¹⁰, 4×10¹⁰, 5×10¹⁰, 6×10¹⁰, 7×10¹⁰, 8×10¹⁰, 9×10¹⁰, 1×10¹¹, 1.1×10¹¹, 1.2×10¹¹, 1.3×10¹¹, 1.4×10¹¹, 1.5×10¹¹, 1.6×10¹¹, 1.7×10¹¹, 1.8×10¹¹, 1.9×10¹¹, 2×10¹¹, 2.1×10¹¹, 2.2×10¹¹, 2.3×10¹¹, 2.4×10¹¹, 2.5×10¹¹, 2.6×10¹¹, 2.7×10¹¹, 2.8×10¹¹, 2.9×10¹¹, 3×10¹¹, 3.1×10¹¹, 3.2×10¹¹, 3.3×10¹¹, 3.4×10¹¹, 3.5×10¹¹, 3.6×10¹¹, 3.7×10¹¹, 3.8×10¹¹, 3.9×10¹¹, 4×10¹¹개 내지 약 1×10¹²개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 박테리아는 총 세포, 예를 들어, 총 세포 계수치(total cell count: TCC)(예를 들어, 쿨터 카운터(Coulter counter)에 의해 결정됨)에 기초하여 정량될 수 있다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 적어도 2.76 ㎎, 5 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 30 ㎎, 40 ㎎, 50 ㎎, 55 ㎎, 60 ㎎, 70 ㎎, 80 ㎎, 90 ㎎, 100 ㎎, 150 ㎎, 200 ㎎, 250 ㎎, 300 ㎎, 350 ㎎, 400 ㎎, 450 ㎎, 500 ㎎, 550 ㎎, 600 ㎎, 650 ㎎, 700 ㎎, 750 ㎎, 800 ㎎, 850 ㎎, 900 ㎎, 950 ㎎, 1000 ㎎ 또는 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 최대 2.76 ㎎, 5 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 30 ㎎, 40 ㎎, 50 ㎎, 55 ㎎, 60 ㎎, 70 ㎎, 80 ㎎, 90 ㎎, 100 ㎎, 150 ㎎, 200 ㎎, 250 ㎎, 300 ㎎, 350 ㎎, 400 ㎎, 450 ㎎, 500 ㎎, 550 ㎎, 600 ㎎, 650 ㎎, 700 ㎎, 750 ㎎, 800 ㎎, 850 ㎎, 900 ㎎, 950 ㎎, 1000 ㎎ 또는 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 2.76 ㎎, 5 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 30 ㎎, 40 ㎎, 50 ㎎, 55 mg, 60 ㎎, 70 ㎎, 80 ㎎, 90 ㎎, 100 ㎎, 150 ㎎, 200 ㎎, 250 ㎎, 300 ㎎, 350 ㎎, 400 ㎎, 450 ㎎, 500 ㎎, 550 ㎎, 600 ㎎, 650 ㎎, 700 ㎎, 750 ㎎, 800 ㎎, 850 ㎎, 900 ㎎, 950 ㎎, 1000 ㎎ 또는 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1 g, 2 g, 2.5 g, 2.6 g, 2.61 g, 2.62 g, 2.63g, 2.64 g, 2.65 g, 2.66 g, 2.67 g, 2.68 g, 2.69 g, 2.70 g, 2.71 g, 2.72 g, 2.73g, 2.74 g, 2.75 g, 2.76 g, 2.77 g, 2.78 g, 2.79g, 2.80, 2.81 g, 2.82 g, 2.83 g, 2.84 g, 2.85 g, 2.86 g, 2.87 g, 2.88 g, 2.89g, 2.90 g, 3 g, 4 g, 5 g, 10 g, 20 g, 30 g, 40 g 또는 50 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일, 28일, 29일, 30일, 31일, 32일, 33일, 34일, 35일, 36일, 37일, 38일, 39일, 40일, 41일 또는 42일 동안 1일 1회 투여된다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16주 동안 1일 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16주 동안 1일 1회 투여된다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 캡슐 또는 정제로서 제형화된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 제형(예를 들어, 조성물)은 장용 코팅 또는 미세 캡슐화를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 장용 코팅 캡슐이다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 박테리아 조성물이 소장에서, 예를 들어, 상부 소장에서, 예를 들어, 십이지장에서 방출되는 것을 허용한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 HPMC를 포함한다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 표 1에 열거된 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 그 초과)의 단백질 및/또는 표 1에 열거된 단백질을 암호화하는 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 또는 그 초과)의 유전자를 포함하는 프레보텔라의 균주이다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 박테리아는 표 1에 열거된 모든 단백질 및/또는 표 1에 열거된 단백질을 암호화하는 모든 유전자를 포함한다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 박테리아는 표 2에 열거된 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 또는 그 초과)의 단백질 및/또는 표 2에 열거된 단백질을 암호화하는 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 또는 그 초과)의 유전자가 없거나 실질적으로 없는 프레보텔라 박테리아의 균주이다. 일부 실시형태에서, 프레보텔 박테리아는 표 2에 열거된 모든 단백질 및/또는 표 2에 열거된 단백질을 암호화하는 모든 유전자가 없다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 박테리아는 표 1에 열거된 단백질 중 하나 이상을 포함하고, 표 2에 열거된 1종 이상의 단백질이 없거나 실질적으로 없는 프레보텔라 박테리아의 균주로부터 유래된다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 박테리아는 표 1에 열거된 단백질 모두 및/또는 표 1에 열거된 단백질을 암호화하는 유전자 모두를 포함하고, 표 2에 열거된 모든 단백질 모두 및/또는 표 2에 열거된 단백질을 암호화하는 유전자 모두가 없는 프레보텔라 박테리아의 균주로부터 유래된다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 프레보텔라 박테리아는 프레보텔라 박테리아를 개선(예를 들어, 더 높은 산소 내성, 안정성, 개선된 동결-해동 내성, 더 짧은 생성 시간)하도록 변형된다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 기재된 조작된 프레보텔라 박테리아는 하나 이상의 유전자 변화를 보유하는 박테리아를 포함하며, 상기 변화는 박테리아 염색체 또는 내인성 플라스미드 및/또는 하나 이상의 외래 플라스미드 상에 함유된 하나 이상의 뉴클레오티드의 삽입, 결실, 전위 또는 치환 또는 이들의 임의의 조합이며, 상기 유전자 변화는 하나 이상의 유전자의 과발현 및/또는 저발현을 야기할 수 있다. 조작된 미생물(들)은 부위-지향적 돌연변이유발, 트랜스포손 돌연변이유발, 넉아웃, 녹인, 폴리머라제 연쇄 반응 돌연변이유발, 화학적 돌연변이유발, 자외선 돌연변이유발, 형질 전환(화학적으로, 또는 전기천공에 의해), 파지 형질도입, 유도 진화 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 당해 분야에 공지된 임의의 기술을 사용하여 생산될 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 프레보텔라 박테리아는 치료 모이어티를 포함하고, 이에 연결되고, 및/또는 이에 의해 결합되도록 변형된다.

박테리아 조성물

특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 방법은 본 명세서에 제공된 프레보텔라 박테리아를 포함하는 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 사용을 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 전체 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 생 박테리아, 사멸된 박테리아, 약독화된 박테리아)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 생존 불가능(non-viable)하다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 (예를 들어, 본 명세서에 기재된 방법에 따라서) 감마 조사되었다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 살아있다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 박테리아의 하나의 균주, 예를 들어, 프레보텔라 히스티콜라 만을 포함한다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)이다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 균주는 프레보텔라 균주 B 50329의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, CRISPR 서열)과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5% 서열 동일성, 적어도 99.6% 서열 동일성, 적어도 99.7% 서열 동일성, 적어도 99.8% 서열 동일성, 적어도 99.9% 서열 동일성)을 포함하는 균주이다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 2.76 ㎎, 5 ㎎, 10 ㎎, 20 ㎎, 30 ㎎, 40 ㎎, 50 ㎎, 55 ㎎, 60 ㎎, 70 ㎎, 80 ㎎, 90 ㎎, 100 ㎎, 150 ㎎, 200 ㎎, 250 ㎎, 300 ㎎, 350 ㎎, 400 ㎎, 450 ㎎, 500 ㎎, 550 ㎎, 600 ㎎, 650 ㎎, 700 ㎎, 750 ㎎, 800 ㎎, 850 ㎎, 900 ㎎, 950 ㎎, 1000 ㎎ 또는 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 캡슐 또는 정제로서 제형화된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 제형(예를 들어, 조성물)은 장용 코팅 또는 미세 캡슐화를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 장용 코팅 캡슐(예를 들어, HPMC 코팅됨)이다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 박테리아 조성물이 소장에서, 예를 들어, 상부 소장에서, 예를 들어, 십이지장에서 방출되는 것을 허용한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 HPMC를 포함한다.

일부 실시형태에서, 박테리아 샘플에 존재하는 프레보텔라 히스티콜라 박테리아의 수를 정량하기 위해, 전자 현미경(예를 들어, 초박형 냉동 섹션의 EM)을 사용하여 박테리아를 가시화하고 이들의 상대 수를 계수할 수 있다. 대안적으로, 나노입자 추적 분석(NTA), 쿨터 계수, 및 동적 광 산란(DLS)의 조합 또는 이들 기술의 조합이 사용될 수 있다. NTA와 쿨터 카운터는 입자를 세고 그것들의 크기를 보여준다. DLS는 입자의 크기 분포를 제공하지만, 농도는 제공하지 않는다. 박테리아는 종종 직경이 1 내지 2 um이다. 전체 범위는 0.2 내지 20 um이다. 쿨터 계수와 NTA의 조합된 결과를 통해 주어진 샘플의 박테리아 수가 확인될 수 있다. 쿨터 계수는 0.7 내지 10 um의 직경을 가진 입자의 수를 보여준다. 쿨터 계수는 50 내지 1400 nm의 직경을 가진 입자의 수를 보여준다. 대부분의 박테리아 샘플의 경우, 쿨터 카운터만으로 샘플의 박테리아 수가 확인될 수 있다.

일부 실시형태에서, 박테리아 예를 들어, 조성물은 장용 코팅 또는 미세 캡슐화를 포함한다. 특정 실시형태에서, 장용 코팅 또는 미세 캡슐화는 위장관의 원하는 영역에 대한 표적화를 개선한다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 박테리아 조성물은 위장관의 특정 영역과 관련된 pH에서 용해되는 장용 코팅 및/또는 미세캡슐을 포함한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅 및/또는 미세캡슐은 십이지장에서 방출되도록 약 5.5 내지 6.2의 pH에서, 회장에서 방출되도록 약 7.2 내지 7.5의 pH에서, 및/또는 결장에서 방출되도록 약 5.6 내지 6.2의 pH 값에서 용해된다. 예시적인 장용 코팅 및 미세캡슐은 예를 들어 미국 특허 공보 제2016/0022592호에 기재되어 있으며, 이는 본 명세서에서 그 전체가 참조에 의해 포함된다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 HPMC를 포함한다.

특정 양태에서, 투여 대상체를 위한 박테리아 조성물이 제공된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 단일 투여 단위 또는 다중-용량 형식일 수 있는 최종 생성물을 생성하기 위해 추가의 활성 및/또는 비활성 물질과 조합된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 면역 아주반트(예를 들어, STING 효능제, TLR 효능제, NOD 효능제)와 같은 아주반트와 조합된다.

일부 실시형태에서 조성물은 적어도 하나의 탄수화물을 포함한다. "탄수화물"은 당 또는 당의 중합체를 지칭한다. 용어들 "당류", "다당류", "탄수화물" 및 "올리고당"은 상호교환적으로 사용될 수 있다. 대부분의 탄수화물은 많은 하이드록실기를 가진 알데히드 또는 케톤이며, 보통 분자의 각 탄소 원자에 하나씩 있다. 탄수화물은 일반적으로 분자식 C_nH_2nO_n을 갖는다. 탄수화물은 단당류, 이당류, 삼당류, 올리고당 또는 다당류일 수 있다. 가장 기본적인 탄수화물은 단당류, 예컨대, 글루코스, 수크로스, 갈락토스, 만노스, 리보스, 아라비노스, 자일로스, 및 프룩토스이다. 이당류는 2개의 결합된 단당류이다. 예시적인 이당류는 수크로스, 말토스, 셀로비오스 및 락토스를 포함한다. 전형적으로, 올리고당은 3 내지 6개의 단당류 단위(예를 들어, 라피노스, 스타키오스)를 포함하고, 다당류는 6개 이상의 단당류 단위를 포함한다. 예시적인 다당류는 전분, 글리코겐 및 셀룰로스를 포함한다. 탄수화물은 수산기가 제거된 2'-데옥시리보스, 수산기가 불소로 대체된 2'-플루오로리보스, 또는 글루코스의 질소-함유 형태인 N-아세틸글루코사민과 같은 변형된 당류 단위(예를 들어, 2'-플루오로리보스, 데옥시리보스 및 헥소스)를 함유할 수 있다. 탄수화물은 많은 상이한 형태, 예를 들어, 컨포머, 사이클릭 형태, 비사이클릭 형태, 입체이성질체, 호변이성질체, 아노머 및 이성질체로 존재할 수 있다.

일부 실시형태에서 조성물은 적어도 하나의 지질을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "지질"은 지방, 오일, 트리글리세리드, 콜레스테롤, 인지질, 유리 지방산을 포함하는 임의의 형태의 지방산을 포함한다. 지방, 오일 및 지방산은 포화, 불포화(시스 또는 트랜스) 또는 부분 불포화(시스 또는 트랜스)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 지질은 라우르산(12:0), 미리스트산(14:0), 팔미트산(16:0), 팔미톨레산(16:1), 마르가르산(17:0), 헵타데센산(17:1), 스테아르산(18:0), 올레산(18:1), 리놀레산(18:2), 리놀렌산(18:3), 옥타데카테트라엔산(18:4), 아라키드산(20:0), 에이코센산(20:1), 에이코사디엔산(20:2), 에이코사테트라엔산(20:4), 에이코사펜타엔산(20:5)(EPA), 도코산산(22:0), 도코센산(22:1), 도코사펜타엔산(22:5), 도코사헥사엔산(22:6)(DHA), 및 테트라코산산(24:0)으로부터 선택되는 적어도 하나의 지방산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 조성물은 적어도 하나의 변형된 지질, 예를 들어 요리에 의해 변형된 지질을 포함한다.

일부 실시형태에서, 조성물은 적어도 하나의 보충 미네랄 또는 미네랄 소스를 포함한다. 미네랄의 예는 염화물, 나트륨, 칼슘, 철, 크롬, 구리, 요오드, 아연, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨 및 셀레늄을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 상기 미네랄 중 임의의 미네랄의 적합한 형태는 가용성 미네랄 염, 약간 가용성인 미네랄 염, 불용성 미네랄 염, 킬레이트화된 미네랄, 미네랄 착물, 비-반응성 미네랄, 예컨대, 카르보닐 미네랄 및 환원된 미네랄 및 이들의 조합을 포함한다.

일부 실시형태에서, 조성물은 적어도 하나의 보충 비타민을 포함한다. 적어도 하나의 비타민은 지용성 또는 수용성 비타민일 수 있다. 적합한 비타민은 비타민 C, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 B12, 비타민 K, 리보플라빈, 니아신, 비타민 D, 비타민 B6, 엽산, 피리독신, 티아민, 판토텐산 및 비오틴을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 상기의 임의의 적합한 형태는 비타민의 염, 비타민의 유도체, 비타민의 동일하거나 유사한 활성을 갖는 화합물 및 비타민의 대사산물이다.

일부 실시형태에서, 조성물은 부형제를 포함한다. 적합한 부형제의 비-제한적인 예는 완충제, 보존제, 안정화제, 결합제, 압착제, 윤활제, 분산 증강제, 붕해제, 향미제, 감미제 및 착색제를 포함한다.

일부 실시형태에서, 부형제는 완충제이다. 적합한 완충제의 비-제한적인 예는 시트르산 나트륨, 탄산 마그네슘, 중탄산 마그네슘, 탄산 칼슘 및 중탄산 칼슘을 포함한다.

일부 실시형태에서, 부형제는 보존제를 포함한다. 적합한 보존제의 비-제한적인 예는 항산화제, 예컨대, 알파-토코페롤 및 아스코르베이트, 및 항균제, 예컨대, 파라벤, 클로로부탄올 및 페놀을 포함한다.

일부 실시형태에서, 조성물은 부형제로서 결합제를 포함한다. 적합한 결합제의 비-제한적인 예는 전분, 예비 젤라틴화 전분, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐옥소아졸리돈, 폴리비닐 알코올, C₁₂-C₁₈ 지방산 알콜, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리올, 당류 및 올리고당류 및 이들의 조합을 포함한다.

일부 실시형태에서, 조성물은 부형제로서 윤활제를 포함한다. 적합한 윤활제의 비-제한적인 예는 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아르산 아연, 수소화된 식물성 오일, 스테로텍스, 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트, 탤크, 폴리에틸렌글리콜, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 라우릴 설페이트, 마그네슘 라우릴 설페이트 및 경질 미네랄 오일을 포함한다.

일부 실시형태에서, 조성물은 부형제로서 분산 증강제를 포함한다. 적합한 분산제의 비-제한적인 예는 전분, 알긴산, 폴리비닐피롤리돈, 구아검, 카올린, 벤토나이트, 정제된 목재 셀룰로스, 나트륨 전분 글리콜레이트, 이질동상 실리케이트 및 높은 HLB 유화제 계면활성제로서의 미세결정질 셀룰로스를 포함한다.

일부 실시형태에서, 조성물은 부형제로서 붕해제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 붕해제는 비-발포성 붕해제이다. 적합한 비-발포성 붕해제의 비-제한적인 예는 옥수수 전분, 감자 전분, 이의 예비젤라틴화 및 변형된 전분과 같은 전분, 감미제, 클레이, 예컨대, 벤토나이트, 미세결정질 셀룰로스, 알기네이트, 나트륨 전분 글리콜레이트, 검, 예컨대, 한천, 구아, 로커스트 빈, 카라야, 펙틴 및 트라가칸트를 포함한다. 일부 실시형태에서, 붕해제는 발포성 붕해제이다. 적합한 발포성 붕해제의 비-제한적인 예는 시트르산과 조합된 중탄산 나트륨 및 타르타르산과 조합된 중탄산 나트륨을 포함한다.

일부 실시형태에서, 조성물은 식품(예를 들어, 음식 또는 음료), 예컨대, 건강 식품 또는 음료, 유아를 위한 음식 또는 음료, 임산부, 운동 선수, 노인 또는 기타 특정 그룹을 위한 음식 또는 음료, 기능성 식품, 음료, 특정 건강 용도를 위한 식품 또는 음료, 식이 보충제, 환자를 위한 식품 또는 음료, 또는 동물 사료이다. 음식 및 음료의 특정 예는 다양한 음료, 예컨대, 주스, 신선 음료, 차 음료, 드링크 제제, 젤리 음료 및 기능성 음료; 알코올 음료, 예컨대, 맥주; 탄수화물-함유 식품, 예컨대, 쌀 식품, 국수, 빵 및 파스타; 페이스트 제품, 예컨대, 생선 햄, 소시지, 해산물 페이스트 제품; 레토르트 파우치 제품, 예컨대, 카레, 두꺼운 전분 소스를 드레싱한 음식 및 중국 수프; 수프; 유제품, 예컨대, 우유, 유제품 음료, 아이스크림, 치즈 및 요구르트; 발효 제품, 예컨대, 발효 대두 페이스트, 요구르트, 발효 음료 및 피클; 콩 제품; 비스킷, 쿠키 등을 포함한 다양한 제과 제품, 사탕, 츄잉껌, 구미, 젤리를 포함한 차가운 디저트, 크림 카라멜 및 냉동 디저트; 인스턴트 식품, 예컨대, 인스턴트 수프 및 인스턴트 대두 수프; 전자레인지 식품; 등을 포함한다. 또한, 예들은 또한 분말, 과립, 정제, 캡슐제, 액체, 페이스트 및 젤리 형태로 제조된 건강 식품 및 음료를 포함한다.

일부 실시형태에서, 조성물은 인간을 포함한 동물용 식품이다. 인간 이외의 동물은 특별히 제한되지 않으며, 상기 조성물은 다양한 가축, 가금류, 애완동물, 실험 동물 등에 사용될 수 있다. 동물의 특정 예는 돼지, 소, 말, 양, 염소, 닭, 야생 오리, 타조, 집오리, 개, 고양이, 토끼, 햄스터, 마우스, 래트, 원숭이 등을 포함하지만, 동물은 이에 제한되지 않는다.

투여 형태

예를 들어, 대상체(예를 들어, 인간 대상체)에서 염증(예컨대, 아토피성 피부염 및/또는 건선)을 치료 또는 예방하기 위한 방법에 사용하기 위한 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함하는 투여형태가 또한 본 명세서에 제공된다. 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함하는 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 예를 들어, 경구 투여를 위한 고체 투여 형태로 제형화될 수 있다. 고체 투여 형태는 1종 이상의 부형제, 예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. 고체 투여 형태의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 단리된 프레보텔라 히스티콜라 박테리아일 수 있다. 선택적으로, 고체 투여 형태의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 동결건조될 수 있다. 선택적으로, 고체 투여 형태의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 살아있다. 선택적으로, 고체 투여 형태의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 감마 조사된다. 고체 투여 형태는 정제, 미니정제, 캡슐, 환제(pill) 또는 분말로서; 또는 이들 형태의 조합(예를 들어, 캡슐에 포함된 미니정제)을 포함할 수 있다.

고체 투여 형태의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 분말로 존재할 수 있다(예를 들어, 분말이 동결건조된 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다). 일부 실시형태에서, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및/또는 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 동결건조된 프레보텔라 박테리아는 용액에 재현탁된다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 프레보텔라 히스티콜라 박테리아 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 고체 투여 형태로 제조된다.

일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 캡슐을 포함한다. 캡슐은 장용 코팅을 포함할 수 있다. 캡슐은 크기 00, 크기 0, 크기 1, 크기 2, 크기 3, 크기 4 또는 크기 5 캡슐일 수 있다. 캡슐은 프레보텔라 히스티콜라 박테리아 분말(예를 들어, 동결건조된 프레보텔라 히스티콜라 박테리아)를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및/또는 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 고체 투여 형태는 예를 들어, 정제 또는 미니-정제일 수 있다. 일부 실시형태에서, 복수의 미니-정제가 캡슐에 존재(예를 들어, 로딩)될 수 있다.

일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 정제(4 ㎜ 초과)(예를 들어, 5 ㎜ 내지 17 mm)를 포함한다. 예를 들어, 정제는 5 mm, 6 mm, 7 mm, 8 mm, 9 mm, 10 mm, 11 mm, 12 mm, 13 mm, 14 mm, 15 mm, 16 ㎜ 또는 17 ㎜ 정제이다. 크기는 당업계에 공지된 바와 같이, 정제의 직경을 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 정제의 크기는 장용 코팅의 적용 전의 정제의 크기를 지칭한다.

일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 미니-정제를 포함한다. 미니-정제는 1 ㎜ 내지 4 ㎜ 크기 범위일 수 있다. 예를 들어, 미니-정제는 1㎜ 미니-정제, 1.5 ㎜ 미니-정제, 2㎜ 미니-정제, 3㎜ 미니-정제 또는 4㎜ 미니-정제일 수 있다. 크기는 당업계에 공지된 바와 같이, 미니-정제의 직경을 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 미니-정제의 크기는 장용 코팅의 적용 전의 미니-정제의 크기를 지칭한다.

미니-정제는 캡슐에 존재할 수 있다. 캡슐은 크기 00, 크기 0, 크기 1, 크기 2, 크기 3, 크기 4 또는 크기 5 캡슐일 수 있다. 미니-정제를 함유하는 캡슐은 단층 코팅, 예를 들어, 비-장용 코팅, 예컨대, 젤라틴을 포함할 수 있다. 미니-정제는 캡슐의 내부에 존재할 수 있고: 캡슐 내의 미니-정제의 수는 캡슐의 크기 및 미니-정제의 크기에 좌우될 것이다. 예로서, 크기 0 캡슐은 3 ㎜ 미니-정제인 31 내지 35(평균 33)개의 미니-정제를 함유할 수 있다.

본 명세서에 기재된 고체 투여 형태(예를 들어, 정제 또는 미니-정제 또는 캡슐)는 장용 코팅될 수 있다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 HPMC(히드록실 프로필 메틸 셀룰로스)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 폴리메타크릴레이트계 공중합체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 메타크릴산 에틸 아크릴레이트(MAE) 공중합체(1:1)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅은 메타크릴산 에틸 아크릴레이트(MAE) 공중합체(1:1)(예컨대, Kollicoat MAE 100P)를 포함한다.

고체 투여 형태는 코팅을 포함할 수 있다. 고체 투여 형태는 단층 코팅, 예를 들어, 장용 코팅, 예를 들어, Eudragit-기반 코팅, 예를 들어, EUDRAGIT L30 D-55, 트리에틸시트레이트 및 탤크를 포함할 수 있다. 고체 투여 형태는 2층 코팅을 포함할 수 있다. 예를 들어, 내부 코팅은 예를 들어, EUDRAGIT L30 D-55, 트리에틸시트레이트, 탤크, 시트르산 무수물 및 수산화나트륨을 포함할 수 있고, 외부 코팅은 예를 들어, EUDRAGIT L30 D-55, 트리에틸시트레이트 및 탤크를 포함할 수 있다. EUDRAGIT은 광범위한 폴리메타크릴레이트계 공중합체에 대한 브랜드명이다. 그것은 메타크릴산 및 메타크릴산/아크릴산 에스테르 또는 이의 유도체를 기반으로 하는 음이온성, 양이온성 및 중성 공중합체를 포함한다. Eudragit은 9 내지 150℃ 미만의 유리 전이 온도를 갖는 비정질 중합체이다. Eudragit은 비-생분해성, 비흡수성 및 비독성이다. 음이온성 Eudragit L은 6 초과의 pH에서 용해하고, 장용 코팅에 사용되는 반면, 7 초과의 pH에서 가용성인 Eudragit S는 결장 표적화를 위해서 사용된다. 4차 암모늄기를 갖는 Eudragit RL 및 RS는 수 불용성이지만, 지속 방출 막 코팅 적용에 적합한 팽윤성/투과성 중합체이다. 5 이상의 pH에서 불용성인 양이온성 Eudragit E는 타액에서 약물 방출을 방지할 수 있다.

고체 투여 형태(예를 들어, 캡슐)는 단층 코팅, 예를 들어, 비-장용 코팅, 예컨대, 젤라틴을 포함할 수 있다.

프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함하는 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 예를 들어, 경구 투여 또는 주사를 위한 현탁액으로 제형화될 수 있다. 주사 투여는 정맥내(IV), 근육내(IM) 및 피하(SC) 투여를 포함한다. 현탁액의 경우, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 완충액, 예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 완충액, 예를 들어, 식염수 또는 PBS에 존재할 수 있다. 현탁액은 1종 이상의 부형제, 예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. 현탁액은 예를 들어, 수크로스 또는 글루코스를 포함한다. 현택액 중의 프레보텔라 박테리아는 단리된 프레보텔라 히스티콜라 박테리아일 수 있다. 선택적으로, 현탁액 중의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 동결건조될 수 있다. 선택적으로, 고체 투여 형태의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 살아있다. 선택적으로, 현탁액 중의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 감마 조사될 수 있다.

투여량

인간 대상체에 대한 경구 투여의 경우, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아의 용량은 예를 들어, 약 2×10⁶ 내지 약 2×10¹⁶개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 1×10⁷ 내지 약 1×10¹⁵, 약 1×10⁸ 내지 약 1×10¹⁴, 약 1×10⁹ 내지 약 1×10¹³, 약 1×10¹⁰ 내지 약 1×10¹⁴ 또는 약 1×10⁸ 내지 약 1×10¹²개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 2×10⁶, 약 2×10⁷, 약 2×10⁸, 약 2×10⁹, 약 1×10¹⁰, 약 2×10¹⁰, 약 2×10¹¹, 약 2×10¹², 약 2×10¹³,약 2×10¹⁴ 또는 약 1×10¹⁵개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 2×10¹⁴개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 2×10¹²개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 2×10¹⁰개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 1×10¹⁰개 입자일 수 있다. 입자는 예를 들어, NTA에 의해서 결정될 수 있다.

인간 대상체에 대한 경구 투여의 경우, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아의 용량은 예를 들어, 총 단백질에 기초할 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 5 ㎎ 내지 약 900 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 20 ㎎ 내지 약 800 ㎎, 약 50 ㎎ 내지 약 700 ㎎, 약 75 ㎎ 내지 약 600 ㎎, 약 100 ㎎ 내지 약 500 ㎎, 약 250 ㎎ 내지 약 750 ㎎ 또는 약 200 ㎎ 내지 약 500 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 10 ㎎, 약 25 ㎎, 약 50 ㎎, 약 75 ㎎, 약 100 ㎎, 약 150 ㎎, 약 200 ㎎, 약 250 ㎎, 약 300 ㎎, 약 400 ㎎, 약 500 ㎎, 약 600 ㎎ 또는 약 750 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 10 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 총 단백질은 예를 들어, 브래드포드 검정 또는 BCA 검정에 의해서 결정될 수 있다.

인간 대상체에 대한 주사에 의한 투여(예를 들어, 정맥내 투여)의 경우, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아의 용량은 예를 들어, 약 1×10⁶ 내지 약 1×10¹⁶개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 1×10⁷ 내지 약 1×10¹⁵, 약 1×10⁸ 내지 약 1×10¹⁴, 약 1×10⁹ 내지 약 1×10¹³, 약 1×10¹⁰ 내지 약 1×10¹⁴ 또는 약 1×10⁸ 내지 약 1×10¹²개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 2×10⁶, 약 2×10⁷, 약 2×10⁸, 약 2×10⁹, 약 1×10¹⁰, 약 2×10¹⁰, 약 2×10¹¹, 약 2×10¹², 약 2×10¹³,약 2×10¹⁴ 또는 약 1×10¹⁵개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 1×10¹⁵개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 2×10¹⁴개 입자일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 2×10¹³개 입자일 수 있다. 입자는 예를 들어, NTA에 의해서 결정될 수 있다.

주사에 의한 투여(예를 들어, 정맥내 투여)의 경우, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아의 용량은 예를 들어, 약 5 ㎎ 내지 약 900 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 20 ㎎ 내지 약 800 ㎎, 약 50 ㎎ 내지 약 700 ㎎, 약 75 ㎎ 내지 약 600 ㎎, 약 100 ㎎ 내지 약 500 ㎎, 약 250 ㎎ 내지 약 750 ㎎ 또는 약 200 ㎎ 내지 약 500 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 10 ㎎, 약 25 ㎎, 약 50 ㎎, 약 75 ㎎, 약 100 ㎎, 약 150 ㎎, 약 200 ㎎, 약 250 ㎎, 약 300 ㎎, 약 400 ㎎, 약 500 ㎎, 약 600 ㎎ 또는 약 750 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 700 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 350 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 용량은 예를 들어, 약 175 ㎎의 총 단백질일 수 있다. 총 단백질은 예를 들어, 브래드포드 검정 또는 BCA 검정에 의해서 결정될 수 있다.

특정 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)(예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여되는 총 용량의 조성물)은 적어도 1×10¹⁰개 총 세포(예를 들어, 적어도 1×10¹⁰개 총 세포, 적어도 2×10¹⁰개 총 세포, 적어도 3×10¹⁰개 총 세포, 적어도 4×10¹⁰개 총 세포, 적어도 5×10¹⁰개 총 세포, 적어도 6×10¹⁰개 총 세포, 적어도 7×10¹⁰개 총 세포, 적어도 8×10¹⁰개 총 세포, 적어도 9×10¹⁰개 총 세포, 적어도 1×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 9×10¹¹개 이하의 총 세포(예를 들어, 1×10¹⁰개 이하의 총 세포, 2×10¹⁰개 이하의 총 세포, 3×10¹⁰개 이하의 총 세포, 4×10¹⁰개 이하의 총 세포, 5×10¹⁰개 이하의 총 세포, 6×10¹⁰개 이하의 총 세포, 7×10¹⁰개 이하의 총 세포, 8×10¹⁰개 이하의 총 세포, 9×10¹⁰개 이하의 총 세포, 1×10¹¹개 이하의 총 세포, 2×10¹¹개 이하의 총 세포, 3×10¹¹개 이하의 총 세포, 4×10¹¹개 이하의 총 세포, 5×10¹¹개 이하의 총 세포, 6×10¹¹개 이하의 총 세포, 7×10¹¹개 이하의 총 세포, 8×10¹¹개 이하의 총 세포)의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 6×10⁹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 1.6×10¹⁰내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 1.6×10¹⁰내지 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 8×10¹⁰내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)은 약 1.6×10¹¹내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함한다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 총 세포, 예를 들어, 총 세포 계수치(total cell count: TCC)(예를 들어, 쿨터 카운터(Coulter counter)에 의해 결정됨)에 기초하여 정량될 수 있다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에는 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함하는 고체 투여 형태가 제공된다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 장용 코팅을 포함한다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 캡슐, 예를 들어, 장용 코팅 캡슐이다. 일부 실시형태에서, 각각의 캡슐은 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다. 일부 실시형태에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 캡슐이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 1개 캡슐(예를 들어, 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 2개 캡슐(예를 들어, 각각 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 4개 캡슐(예를 들어, 각각 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 10개 캡슐(예를 들어, 각각 약 8×10¹⁰개 총 세포 포함)이 대상체에게 예를 들어, 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시형태에서, 캡슐 내의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 (예를 들어, 분말로) 동결건조된다. 일부 실시형태에서, 캡슐 내의 프레보텔라 박테리아는 분말로 동결건조되고, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및/또는 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 캡슐을 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 장용 코팅 캡슐이다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 1개 캡슐 또는 복수의 캡슐의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 1개 캡슐 또는 복수의 캡슐의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 1개 캡슐 또는 복수의 캡슐의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 1개 캡슐 또는 복수의 캡슐의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐 내의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 (예를 들어, 분말로) 동결건조된다. 일부 실시형태에서, 캡슐 내의 프레보텔라 박테리아는 분말로 동결건조되고, 분말은 만니톨, 스테아르산마그네슘 및/또는 콜로이드 이산화규소를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제는 장용 코팅된 정제이다. 일부 실시형태에서, 장용 코팅된 정제는 5 ㎜ 내지 17 ㎜ 직경이다. 일부 실시형태에서, 정제는 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라(예를 들어, 1개 정제 또는 복수의 정제의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제는 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라(예를 들어, 1개 정제 또는 복수의 정제의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제는 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라(예를 들어, 1개 정제 또는 복수의 정제의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제는 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라(예를 들어, 1개 정제 또는 복수의 정제의 총 용량)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 정제 내의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 (예를 들어, 분말로) 동결건조된다.

일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 미니-정제는 장용 코팅된다. 일부 실시형태에서, 미니-정제는 1 ㎜ 내지 4 ㎜ 직경이다. 일부 실시형태에서, 미니-정제(예를 들어, 장용 코팅된 미니-정제)는 1 ㎜ 미니-정제, 1.5 ㎜ 미니-정제, 2 ㎜ 미니-정제, 3 ㎜ 미니-정제 또는 4 ㎜ 미니-정제이다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 약 8×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 복수의 미니-정제의 총 용량)를 포함하는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 복수의 미니-정제의 총 용량)를 포함하는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 복수의 미니-정제의 총 용량)를 포함하는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 고체 투여 형태는 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아(예를 들어, 복수의 미니-정제의 총 용량)를 포함하는 미니-정제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 미니-정제 내의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 (예를 들어, 분말로) 동결건조된다.

일부 실시형태에서, 미니-정제(예를 들어, 장용 코팅된 미니-정제)는 캡슐에 함유된다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 크기 00, 크기 0, 크기 1, 크기 2, 크기 3, 크기 4 또는 크기 5 캡슐이다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 비-장용 코팅(예를 들어, 젤라틴)을 포함한다(예를 들어, 비-장용 코팅으로 코팅된다). 일부 실시형태에서, 캡슐은 비-장용 코팅을 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 젤라틴을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 박테리아를 포함하는 미니-정제(예를 들어, 장용 코팅된 미니-정제)가 캡슐(들)에 함유되며, 선택적으로 캡슐은 젤라틴을 포함한다.

감마-조사

(예를 들어, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아의) 분말은 주변 온도에서 17.5 kGy 방사선 단위(radiation unit)로 감마-조사될 수 있다.

(예를 들어, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아의) 동결된 바이오매스는 드라이 아이스의 존재 하에서 25 kGy 방사선 단위로 감마-조사될 수 있다.

치료제

특정 양태에서, 본 명세서에 제공된 방법은 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물을 대상체에게 단독으로 또는 추가의 치료제와 함께 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 추가 치료제는 면역억제제 또는 스테로이드이다.

일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 치료제가 투여되기 전에 대상체에게 투여된다(예를 들어, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간 전 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 전). 일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아는 치료제가 투여된 후에 대상체에게 투여된다(예를 들어, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간 후 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 후). 일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라 박테리아 및 치료제는 대상체에게 동시에 또는 거의 동시에 투여된다(예를 들어, 투여는 서로 1시간 이내에 일어난다). 일부 실시형태에서, 대상체는 프레보텔라 박테리아가 대상체에게 투여되기 전에 항생제를 투여받는다(예를 들어, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간 전 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 전). 일부 실시형태에서, 대상체는 프레보텔라 박테리아가 대상체에게 투여된 후에 항생제를 투여받는다(예를 들어, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간 전 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 후). 일부 실시형태에서, 프레보텔라 박테리아 및 항생제는 대상체에게 동시에 또는 거의 동시에 투여된다(예를 들어, 투여는 서로 1시간 이내에 일어난다).

일부 양태에서, 항생제는 살균 또는 정균 특성에 기초하여 선택될 수 있다. 살균 항생제는 세포벽(예를 들어, β-락탐), 세포막(예를 들어, 답토마이신) 또는 박테리아 DNA(예를 들어, 플루오로퀴놀론)를 파괴하는 작용 기전을 포함한다. 정균제는 박테리아 복제를 저해하고, 설폰아미드, 테트라시클린 및 마크로리드를 포함하고, 단백질 합성을 저해함으로써 작용한다. 또한, 일부 약물은 특정 유기체에서 살균가능하고 다른 유기체에서는 정균제일 수 있지만, 표적 유기체를 아는 것은 당업자가 적절한 특성을 갖는 항생제를 선택할 수 있게 한다. 특정 치료 조건에서, 정균 항생제는 살균 항생제의 활성을 저해한다. 따라서, 특정 실시형태에서, 살균 및 정균 항생제는 조합되지 않는다.

항생제는 아미노글리코시드, 안사마이신, 카르바세펨, 카르바페넴, 세팔로스포린, 글리코펩티드, 린코사미드, 리포펩티드, 마크로리드, 모노박탐, 니트로푸란, 옥사졸리도논, 페니실린, 폴리펩티드 항생제, 퀴놀론, 플루오로퀴놀론, 설폰아미드, 테트라시클린, 및 항-마이코박테리아 화합물 및 이들의 조합들을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

아미노글리코시드는 아미카신, 겐타미신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸미신, 토브라마이신, 파로모마이신 및 스펙티노마이신을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 아미노글리코시드는, 예를 들어, 그람-음성 박테리아, 예컨대, 에스케리치아 콜라이, 클렙시엘라, 슈도모나스 애루기노사 및 프란시셀라 툴라렌시스에 대해 효과적이며, 특정 호기성 박테리아에 대해서는 효과적이지만, 완전/조건 혐기성 미생물에 대해서는 덜 효과적이다. 아미노글리코시드는 박테리아 30S 또는 50S 리보좀 소단위에 결합하여 박테리아 단백질 합성을 저해하는 것으로 여겨진다.

안사마이신은 겔다나마이신, 허비마이신, 리파마이신 및 스트렙토바리신을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 겔다나마이신 및 허비마이신은 열충격 단백질 90의 기능을 저해 또는 변경시키는 것으로 생각된다.

카바세펨은 로라카르베프를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 카바세펨은 박테리아 세포벽 합성을 저해하는 것으로 생각된다.

카바페넴은 에르타페넴, 도리페넴, 이미페넴/실라스타틴 및 메로페넴을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 카르바페넴은 광범위한 항생제로서 그람-양성 및 그람-음성 박테리아 모두에 대해 살균성이다. 카바페넴은 박테리아 세포벽 합성을 저해하는 것으로 생각된다.

세팔로스포린은 세파드록실, 세파졸린, 세팔로틴, 세팔로신, 세팔렉신, 세파클로르, 세파만돌, 세폭시틴, 세프프로질, 세푸록심, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손, 세페핌, 세프타롤린 포사밀 및 세프토비프롤을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 선택된 세팔로스포린은 예를 들어 그람-음성 박테리아 및 슈도모나스를 포함한 그람-양성 박테리아에 대해 효과적이며, 특정 세팔로스포린은 메티실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(MRSA)에 효과적이다. 세팔로스포린은 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성을 방해함으로써 박테리아 세포벽 합성을 저해하는 것으로 여겨진다.

글리코펩티드는 테이코플라닌, 반코마이신 및 텔라반신을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 글리코펩티드는 예를 들어 MRSA 및 클로스트리디움 디피실레를 포함하는 호기성 및 혐기성 그람-양성 박테리아에 효과적이다. 글리코펩티드는 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성을 방해함으로써 박테리아 세포벽 합성을 저해하는 것으로 여겨진다.

린코사미드는 클린다마이신 및 린코마이신을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 린코사미드는 예를 들어 혐기성 박테리아뿐만 아니라 스타필로코쿠스 및 스트렙토코쿠스에 대해 효과적이다. 린코사미드는 박테리아 50S 리보좀 소단위에 결합하여 박테리아 단백질 합성을 저해하는 것으로 여겨진다.

리포펩티드는 답토마이신을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 리포펩티드는 예를 들어 그람-양성 박테리아에 효과적이다. 리포펩티드는 박테리아 막에 결합하여 급속한 탈분극을 유발하는 것으로 여겨진다.

마크로리드는 아지쓰로마이신, 클라리쓰로마이신, 디리쓰로마이신, 에리쓰로마이신, 록시쓰로마이신, 트롤레안도마이신, 텔리쓰로마이신 및 스피라마이신을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 마크로리드는 예를 들어 스트렙토코커스 및 마이코플라스마에 효과적이다. 마크로리드는 박테리아 또는 50S 리보솜 소단위에 결합하여 박테리아 단백질 합성을 저해하는 것으로 여겨진다.

모노박탐은 아즈트레오남을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 모노박탐은 예를 들어, 그람-음성 박테리아에 대해 효과적이다. 모노박탐은 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성을 방해함으로써 박테리아 세포벽 합성을 저해하는 것으로 여겨진다.

니트로푸란은 푸라졸리돈 및 니트로푸란토인을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

옥사졸리도논은 리네졸리드, 포시졸리드, 라데졸리드 및 토레졸리드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 옥사졸리도논은 단백질 합성 저해제인 것으로 여겨진다.

페니실린은 아목시실린, 암피실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린 G, 페니실린 V, 피페라실린, 테모실린 및 티카르실린을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 페니실린은 예를 들어 그람-양성 박테리아, 조건 혐기성 박테리아, 예를 들어 스트렙토코커스, 보렐리아 및 트레포네마에 효과적이다. 페니실린은 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성을 방해함으로써 박테리아 세포벽 합성을 저해하는 것으로 여겨진다.

페니실린 조합물은 아목시실린/클라불라네이트, 암피실린/설박탐, 피페라실린/타조박탐 및 티카실린/클라불라네이트를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

폴리펩티드 항생제는 바시트라신, 콜리스틴 및 폴리믹신 B 및 E를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 폴리펩티드 항생제는 예를 들어 그람-음성 박테리아에 효과적이다. 특정 폴리펩티드 항생제는 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성에 관여하는 이소프레닐 피로포스페이트를 저해하는 반면, 다른 폴리펩티드 항생제는 박테리아 반대-이온을 대체함으로써 박테리아 외막을 불안정화시키는 것으로 여겨진다.

퀴놀론 및 플루오로퀴놀론은 시프로플록사신, 에녹사신, 가티플록사신, 게미플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 목시플록사신, 날리딕시산, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 스파르플록사신 및 테마플록사신을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 퀴놀론/플루오로퀴놀론은 예를 들어, 스트렙토코쿠스 및 나이세리아에 대해 효과적이다. 퀴놀론/플루오로퀴놀론은 박테리아 DNA 기라제 또는 토포이소머라제 IV를 억제함으로써 DNA 복제 및 전사를 저해하는 것으로 여겨진다.

설폰아미드는 마페니드, 설파세타미드, 설파디아진, 은 설파디아진, 설파디메톡신, 설파메티졸, 설파메톡사졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설피속사졸, 트리메토프림-설파메톡사졸(코-트리목사졸) 및 설폰아미도크리소이딘을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 설폰아미드는 디히드로프테로에이트 합성효소의 경쟁적 저해에 의해 폴레이트 합성을 저해함으로써 핵산 합성을 저해하는 것으로 여겨진다.

테트라시클린은 데메클로시클린, 독시시클린, 미노시클린, 옥시테트라시클린 및 테트라시클린을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 테트라시클린은 예를 들어, 그람-음성 박테리아에 대해 효과적이다. 테트라시클린은 박테리아 30S 리보좀 소단위에 결합하여 박테리아 단백질 합성을 저해하는 것으로 여겨진다.

항-마이코박테리아 화합물은 클로파지민, 답손, 카프레오마이신, 사이클로세린, 에탐부톨, 에티온아미드, 이소니아지드, 피라진아미드, 리팜피신, 리파부틴, 리파펜틴 및 스트렙토마이신을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

적합한 항생제는 또한 아르스페나민, 클로람페니콜, 포스포마이신, 푸시드 산, 메트로니다졸, 무피로신, 플라텐시마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 티게시클린, 티니다졸, 트리메토프림 아목시실린/클라불라네이트, 암피실린/술박탐, 암포마이신 리스토세틴, 아지스로마이신, 바시트라신, 부포린 II, 카보마이신, 세크로핀 Pl, 클라리스로마이신, 에리스로마이신, 푸라졸리돈, 푸시드산, Na 푸시데이트, 그라미시딘, 이미페넴, 인돌리시딘, 조사마이신, 마가이난 II, 메트로니다졸, 니트로이미다졸, 미카마이신, 무타신 B-Ny266, 무타신 B-JHl 140, 무타신 J-T8, 니신, 니신 A, 노보비오신, 올레안도마이신, 오스트레오그리신, 피페라실린/타조박탐, 프리스티나마이신, 라모플라닌, 라날렉신, 로이터린, 리팍시민, 로사미신, 로사라미신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 스타필로마이신, 스트렙토그라민, 스트렙토그라민 A, 시네르기스틴, 타우롤리딘, 테이코플라닌, 텔리스로마이신, 티카르실린/클라불란산, 트리아세틸로레안도마이신, 틸로신, 티로시딘, 티로스리신, 반코마이신, 베마마이신 및 버지니아마이신을 포함한다.

일부 실시형태에서, 추가 치료제는 면역억제제, DMARD, 통증조절제, 스테로이드, 비-스테로이드 항염증제(NSAID), 또는 사이토카인 길항제 및 이들의 조합이다.대표적인 치료제는 사이클로스포린, 레티노이드, 코르티코스테로이드, 프로피온산 유도체, 아세트산 유도체, 에놀산 유도체, 페남산 유도체, Cox-2 저해제, 루미라콕시브, 이부프로펜, 콜린 마그네슘 살리실레이트, 페노프로펜, 살살레이트, 디푸니살, 톨메틴, 케토프로펜, 플루르비프로펜, 옥사프로진, 인도메타신, 술린닥, 에토돌락, 케토롤락, 나부메톤, 나프록센, 발데콕시브, 에토리콕시브, MK0966; 로페콕시브, 아세토미노펜, 셀레콕시브, 디클로페낙, 트라마돌, 피록시캄, 멜록시캄, 테녹시캄, 드록시캄, 로르녹시캄, 이속시캄, 메파남산, 메클로페남산, 플루페남산, 톨페남산, 발데콕시브, 파레콕시브, 에토돌락, 인도메타신, 아스피린, 이부프로펜, 피로콕시브, 메토트렉세이트(MTX), 항말라리아제(예를 들어, 하이드록사이클로로퀸 및 클로로퀸), 설파살라진, 레플루노미드, 아자티오프린, 사이클로스포린, 금 염, 미노시클린, 사이클로포스파미드, D-페니실라민, 미노시클린, 아우라노핀, 타크롤리무스, 미오크리신, 클로람부실, TNF 알파 길항제(예를 들어, TNF 알파 길항제 또는 TNF 알파 수용체 길항제), 예를 들어, 아달리무맙(휴미라(Humira®)), 에타네르셉트(엔브렐(Enbrel®)), 인플릭시맙(레미케이드(Remicade®); TA-650), 세르톨리주맙 페골(심지아(Cimzia®); CDP870), 골리무맙(심퍼니(Simponi®); CNTO148), 아나킨라(키네레트(Kineret®)), 리툭시맙(리툭산(Rituxan®); 맙테라(MabThera®)), 아바타셉트(오렌시아(Orencia®)), 토실리주맙(로악템라/악템라(Actemra®)), 인테그린 길항제(티사브리(TYSABRI®) (나탈리주맙)), IL-1 길항제(ACZ885 (일라리스)), 아나킨라(키네레트)), CD4 길항제, IL-23 길항제, IL-20 길항제, IL-6 길항제, BLyS 길항제(예를 들어, 아타시셉트, 벤리스타(Benlysta®)/ 림포스타트-B(LymphoStat-B®)(벨리무맙)), p38 저해제, CD20 길항제(오크렐리주맙, 오파투무맙(아르제라(Arzerra®))), 인터페론 감마 길항제(폰톨리주맙), 프레드니솔론, 프레드니손, 덱사메타손, 코르티솔, 코르티손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 트리암시놀론, 베클로메타솜, 플루드로코티손, 데옥시코르티코스테론, 알도스테론, 독시시클린, 반코마이신, 피오글리타존, SBI-087, SCIO-469, 큐라-100, 온콕신 + 비우시드, TwHF, 메톡살렌, 비타민 D-에르고칼시페롤, 밀나시프란, 파클리탁셀, 로시글리타존, 타크롤리무스(프로그라프(Prograf®)), RADOOl, 라파뮨, 라파마이신, 포스타마티닙, 펜타닐, XOMA 052, 포스타마티닙 이나트륨, 로시글리타존, 커큐민(롱비다(Longvida™)), 로수바스타틴, 마라비록, 라미프릴, 밀나시프란, 코비프로스톤, 소마트로핀, tgAAC94 유전자 요법 벡터, MK0359, GW856553, 에소메프라졸, 에베롤리무스, 트라스투주맙, JAK1 및 JAK2 저해제, 범 JAK 저해제, 예를 들어, 테트라사이클릭 피리돈 6(P6), 325, PF-956980, 데노수맙, IL-6 길항제, CD20 길항제, CTLA4 길항제, IL-8 길항제, IL-21 길항제, IL-22 길항제, 인테그린 길항제(티사브리(Tysarbri®)(나탈리주맙)), VGEF 길항제, CXCL 길항제, MMP 길항제, 데펜신 길항제, IL-1 길항제(IL-1 베타 길항제 포함), 및 IL-23 길항제(예를 들어, 수용체 디코이, 길항 항체 등)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

일부 실시형태에서, 추가 치료제는 경구 PDE4 저해제(예컨대, 아프레밀라스트)이다. 일부 실시형태에서, 추가 치료제는 아프레밀라스트, 에타너셉트, 인플릭시맙, 아달리무맙, 우스테키누맙 또는 세쿠키누맙이다.

일부 실시형태에서, 치료제는 면역억제제이다. 면역억제제의 예는 코르티코스테로이드, 메살라진, 메살라민, 설파살라진, 설파살라진 유도체, 면역억제 약물, 사이클로스포린 A, 머캅토퓨린, 아자티오퓨린, 프레드니손, 메토트렉세이트, 항히스타민제, 글루코코르티코이드, 에피네프린, 테오필린, 크로몰린 소듐, 항-류코트리엔, 비염에 대한 항콜린성 약물, TLR 길항제, 인플라마손 저해제, 항-콜린성 충혈제거제, 비만-세포 안정제, 단클론성 항-IgE 항체, 백신(예를 들어, 알레르겐의 양이 점차 증가하는 백신화에 사용되는 백신), 사이토카인 저해제, 예컨대, 항-IL-6 항체, TNF 저해제, 예컨대, 인플릭시맙, 아달리무맙, 세르톨리주맙 페골, 골리무맙 또는 에타너셉트 및 이들의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

투여

일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 캡슐 또는 정제로서 제형화된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 제형은 장용 코팅 또는 미세 캡슐화를 포함한다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 장용 코팅 캡슐이다.

본 명세서에 제공된 방법의 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 추가 치료제의 투여와 함께 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 추가의 치료제와 함께 공동-제형화된 프레보텔라 박테리아를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 추가 치료제와 함께 공동-투여된다. 일부 실시형태에서, 추가 치료제는 박테리아 조성물의 투여 전에 대상체에게 투여된다(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 또는 55분 전, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 또는 23시간 전, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일 전). 일부 실시형태에서, 추가 치료제는 박테리아 조성물의 투여 후에 대상체에게 투여된다(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 또는 55분 후, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 또는 23시간 후, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일 후). 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물 및 추가의 치료제 둘 모두를 전달하는데 동일한 전달 방식이 사용된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물 및 추가 치료제를 투여하기 위해 상이한 전달 방식이 사용된다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 경구로 투여되는 반면, 추가 치료제는 주사(예를 들어, 정맥내 및/또는 근육내 주사)를 통해 투여된다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물, 투여 형태, 및 키트는 임의의 다른 통상적인 치료와 함께 투여될 수 있다. 이들 치료는 필요에 따라 및/또는 지시된 바와 같이 적용될 수 있고, 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물, 투여 형태 및 키트의 투여 전, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 수행될 수 있다.

투여 요법은 임의의 다양한 방법 및 양일 수 있으며, 공지된 임상 인자에 따라 당업자에 의해 결정될 수 있다. 의학 분야에 공지된 바와 같이, 임의의 한 환자에 대한 투여량은 대상체의 종, 크기, 체표면적, 연령, 성별, 면역능력 및 일반적인 건강, 투여될 특정 미생물, 투여 지속 기간 및 투여경로, 질환의 종류 및 단계 및 동시에 투여되는 약물과 같은 다른 화합물을 비롯한 많은 인자에 따라 다를 수 있다. 상기 인자 이외에, 이러한 수준은 당업자의 결정에 따라 미생물의 감염성 및 미생물의 성질에 의해 영향을 받을 수 있다. 본 방법에서, 미생물의 적절한 최소 투여량 수준은 미생물이 생존, 성장 및 복제하기에 충분한 수준일 수 있다. 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물의 용량은 투여 형태, 투여 경로, 표적 질환의 정도 또는 단계 등에 따라 적절히 설정되거나 조정될 수 있다. 예를 들어, 제제의 일반적인 유효 용량은 0.01 ㎎/㎏ 체중/일 내지 1000 ㎎/㎏ 체중/일, 0.1 ㎎/㎏ 체중/일 내지 1000 ㎎/㎏ 체중/일, 0.5 ㎎/㎏ 체중/일 내지 500 ㎎/㎏ 체중/일, 1 ㎎/㎏ 체중/일 내지 100 ㎎/㎏ 체중/일, 또는 5 ㎎/㎏ 체중/일 내지 50 ㎎/㎏ 체중/일의 범위일 수 있다. 유효 용량은 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 2, 3, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 또는 1000 ㎎/㎏ 체중/일 또는 그 초과일 수 있지만, 용량은 이에 제한되지 않는다.

일부 실시형태에서, 대상체에게 투여되는 용량은 질환(예를 들어, 자가면역 질환, 염증성 질환, 대사성 질환)을 예방하거나, 질환을 치료, 예를 들어, 이의 발병을 지연시키거나, 질환의 하나 이상의 증상을 개선시키거나, 질환의 중증도(또는 이의 증상)를 경감시키거나 이의 진행을 늦추거나 중단시키기에 충분하다. 당업자는 투여량이 대상체의 연령, 종, 상태 및 체중뿐만 아니라 사용된 특정 화합물의 강도를 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 것임을 인식할 것이다. 투여량의 크기는 또한 투여 경로, 시기 및 빈도뿐만 아니라 특정 화합물의 투여에 수반될 수 있는 임의의 부작용 및 원하는 생리적 효과의 존재, 성질 및 정도에 의해 결정될 것이다.

적합한 용량 및 투여용량 요법은 당업자에게 공지된 통상적인 범위-지정 기술에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로, 치료는 화합물의 최적 용량보다 적은 소량으로 개시된다. 그 후에, 투여용량은 상황 하에서 최적의 효과에 도달할 때까지 소량씩 증가된다. 효과적인 투여량 및 치료 프로토콜은 예를 들어, 실험실 동물에서 낮은 용량으로 시작한 다음 효과를 모니터링하면서 투여용량을 증가시키고, 투여량 요법을 체계적으로 변화시키는, 일상적이고 통상적인 수단에 의해 결정될 수 있다. 동물 연구는 일반적으로, 킬로그램 중량 당 생물활성제의 최대 허용 용량("MTD")을 결정하기 위해 사용된다. 당업자는 인간을 포함한 다른 종에서 독성을 피하면서 효능에 대한 용량을 정기적으로 추정한다.

상기에 따르면, (예를 들어, 치료 및/또는 예방을 위한) 치료적 적용에서, 본 발명에 따라 사용되는 활성제의 용량은 선택된 투여용량에 영향을 미치는 다른 요인들 중에서, 활성제, 수혜 환자의 연령, 체중 및 임상 상태, 요법을 투여하는 임상의 또는 개업의의 경험 및 판단에 따라 변한다.

개별 투여는 2회, 3회, 4회, 5회 또는 6회 투여를 포함하여 임의의 수의 2회 이상의 투여를 포함할 수 있다. 당업자는 본 명세서에 제공된 치료 방법 및 다른 모니터링 방법을 모니터링하기 위해 당업계에 공지된 방법에 따라 수행할 투여 횟수 또는 하나 이상의 추가 투여를 수행하는 것이 바람직하다는 것을 쉽게 결정할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 제공된 방법은 대상체에게 박테리아 조성물의 하나 이상의 투여를 제공하는 방법(여기서 투여 횟수는 대상체를 모니터링함으로써 결정될 수 있음) 및 모니터링의 결과에 기초하여 하나 이상의 추가 투여를 제공할지 여부를 결정하는 방법을 포함한다. 하나 이상의 추가의 투여를 제공할지 여부를 결정하는 것은 다양한 모니터링 결과를 기반으로 할 수 있다.

투여 사이의 기간은 임의의 다양한 기간일 수 있다. 투여 사이의 기간은 투여 횟수, 대상체가 면역 반응을 일으키는 기간 및/또는 대상체가 정상적인 조직에서 박테리아를 제거하는 기간과 관련하여 기술된 바와 같이 모니터링 단계를 포함하는 임의의 다양한 인자의 함수일 수 있다. 일 예에서, 기간은 대상체가 면역 반응을 일으키는 시간의 함수일 수 있으며; 예를 들어, 기간은 약 1주일 초과, 약 10일 초과, 약 2주 초과, 또는 약 1개월 초과와 같은, 대상체가 면역 반응을 일으키는 기간보다 길 수 있거나; 다른 예에서, 기간은 약 1주일 미만, 약 10일 미만, 약 2주 미만, 또는 약 1개월 미만과 같은, 대상체가 면역 반응을 일으키는 기간보다 짧을 수 있다. 또 다른 예에서, 기간은 대상체가 박테리아를 정상 조직으로부터 제거하는 기간의 함수일 수 있으며; 예를 들어, 기간은 대상체가 정상 조직으로부터 박테리아를 제거하는 시간보다 길 수 있으며, 예컨대, 약 1일 초과, 약 2일 초과, 약 3일 초과, 약 5일 초과, 또는 약 1주일 초과이다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 박테리아 조성물과 조합된 추가의 치료제의 전달은 부작용을 감소시키고/시키거나 추가의 치료제의 효능을 향상시킨다.

본 명세서에 기재된 추가의 치료제의 유효 용량은 환자에게 독성이 가장 적은, 특정 환자에 대한 원하는 치료 반응, 투여 조성물 및 투여 방식을 달성하는 데 효과적인 치료제의 양이다. 유효 투여량 수준은 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 확인될 수 있으며, 투여되는 특정 조성물의 활성, 투여 경로, 투여시간, 사용되는 특정 화합물의 배출 속도, 치료 기간, 사용된 특정 조성물과 함께 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적인 건강 및 이전 병력, 및 의학 분야에서 잘 알려진 유사 인자를 포함하는 다양한 약동학적 인자에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 추가의 요법의 유효 용량은 치료 효과를 생성하는데 효과적인 최저 용량인 치료제의 양일 것이다. 이러한 유효 용량은 일반적으로, 상기 기재된 인자에 따라 달라질 것이다.

추가의 요법의 독성은 치료 동안 및 치료 후에 대상체가 경험하는 부작용의 수준이다. 추가 치료 독성과 관련된 부작용으로는 복통, 위산과다, 위산 역류, 알레르기 반응, 탈모증, 아나필락시스, 빈혈, 불안, 식욕 부진, 관절통, 무력증, 운동 실조증, 무증상, 균형 상실, 뼈 통증, 출혈, 혈전, 저혈압, 고혈압, 호흡 곤란, 기관지염, 멍, 적은 백혈구 수, 적은 적혈구 수, 적은 혈소판 수, 심장독성, 방광염, 출혈성 방광염, 부정맥, 심장 판막 질환, 심근병증, 관상 동맥 질환, 백내장, 중추 신경독성, 인지 장애, 혼동, 결막염, 변비, 기침, 경련, 방광염, 심부정맥 혈전증, 탈수, 우울증, 설사, 현기증, 구강 건조, 건조한 피부, 소화불량, 호흡곤란, 부종, 전해질 불균형, 식도염, 피로, 생식능력 상실, 열, 속이 부글거림, 홍조, 위 역류, 위식도 역류 질환, 생식기 통증, 과립구감소증, 여성형 유방, 녹내장, 탈모, 손발 증후군, 두통, 난청, 심부전, 심계항진, 속쓰림, 혈종, 출혈성 방광염, 간독성, 고아밀라아제혈증, 고칼슘혈증, 고염소혈증, 고혈당증, 고칼륨혈증, 고지혈증, 고마그네슘혈증, 고나트륨혈증, 고인산혈증, 과다색소침착, 고중성지방혈증, 고요산혈증, 저알부민혈증, 저칼슘혈증, 저염소혈증, 저혈당증, 저칼륨혈증, 저마그네슘혈증, 저나트륨혈증, 저인산혈증, 발기부전, 감염, 주사 부위 반응, 불면증, 철 결핍증, 가려움증, 관절통, 신부전, 백혈구감소증, 간기능부전증, 기억 상실, 폐경, 구강 염증, 점막염, 근육통증, 근육통, 골수억제, 심근염, 호중구 발열, 메스꺼움, 신독성, 호중구감소증, 코피, 마비, 이독성, 통증, 손발바닥 홍반성 감각이상, 범혈구감소증, 심막염, 말초신경병증, 인두염, 광선공포증, 감광성, 폐렴, 간질성 폐렴, 단백뇨, 폐색전증, 폐섬유증, 폐 독성, 발진, 빠른 심장 박동, 직장 출혈, 안절부절, 비염, 발작, 호흡 곤란, 부비동염, 혈소판감소증, 이명, 요로 감염, 질 출혈, 질 건조, 현기증, 물 정체, 쇠약, 체중 감소, 체중 증가 및 구강건조증을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일반적으로, 요법을 통해 달성된 대상체에 대한 이익이 요법으로 인해 대상체가 경험한 부작용보다 더 클 경우 독성이 허용된다.

면역 장애

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물은 자가면역 질환, 알레르기 반응 및/또는 염증성 질환과 같은 병리학적 면역 반응과 관련된 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 염증성 장 질환(예를 들어, 크론병 또는 궤양성 대장염)이다. 일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선)이다. 일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염)이다.

본 명세서에 기재된 방법은 이를 필요로 하는 임의의 대상체를 치료하는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "이를 필요로 하는 대상체"는 병리학적 면역 반응과 관련된 질환 또는 장애(건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염))를 갖는 임의의 대상체, 뿐만 아니라 이러한 질환 또는 장애를 얻을 가능성이 증가된 임의의 대상체를 포함한다.

본 명세서에 기재된 조성물은 예를 들어, 자가면역 질환, 예컨대, 만성 염증성 장 질환, 전신 홍반성 루푸스, 건선, 머클-웰스 증후군(muckle-wells syndrome), 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 또는 하시모토병; 알레르기 질환, 예컨대, 식품 알레르기, 꽃가루 알레르기, 또는 천식; 감염성 질환, 예컨대, 클로스트리듐 디피실레 감염; 염증성 질환, 예컨대, TNF 매개성 염증성 질환(예를 들어, 위장관의 염증성 질환, 예컨대, 주머니염, 심혈관 염증성 병태, 예컨대, 아테롬성 동맥경화증, 또는 염증성 폐 질환, 예컨대, 만성 폐쇄성 폐 질환)의 치료 또는 예방(이러한 질환의 부작용의 부분 또는 완전 감소)을 위한 박테리아 조성물; 장기 이식 또는 조직 거부가 발생할 수 있는 다른 상황에서 거부 억제를 위한 박테리아 조성물; 면역 기능 개선을 위한 보충제, 식품, 또는 음료; 또는 면역 세포의 증식 또는 기능 억제를 위한 시약으로서 사용될 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 방법은 염증의 치료에 유용하다. 특정 실시형태에서, 하기에 논의된 바와 같은 근골격계 염증, 혈관 염증, 신경 염증, 소화계 염증, 안구 염증, 생식계 염증, 및 기타 염증을 비롯한 신체의 임의의 조직 및 기관의 염증.

근골격계의 면역 장애는 손, 손목, 팔꿈치, 어깨, 턱, 척추, 목, 엉덩이, 무릎, 발목 및 발의 관절을 포함한 골격 관절에 영향을 미치는 병태 및 힘줄과 같은 근육을 뼈에 연결하는 조직에 영향을 미치는 병태를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 이러한 면역 장애의 예는 관절염(예를 들어, 골관절염, 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 급성 및 만성 감염성 관절염, 통풍 및 가성통풍과 관련된 관절염, 및 소아 특발성 관절염 포함), 건염, 활막염, 건초염, 윤활낭염, 섬유조직염(섬유근육통), 위관절융기염, 근육염, 및 골염(예를 들어, 파제트병, 치골 골염, 및 낭성 섬유뼈염 포함)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

안구 면역 장애는 눈꺼풀을 포함하여, 눈의 임의의 구조에 영향을 미치는 면역 장애를 지칭한다. 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 안구 면역 장애의 예는 안검염, 안검피부이완증, 결막염, 누선염, 각막염, 건성 각막결막염(건성안), 공막염, 속눈썹증, 및 포도막염을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

본 명세서에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 신경계 면역 장애의 예는 뇌염, 길랭-바레 증후군, 수막염, 신경근긴장증, 기면증, 다발성 경화증, 골수염 및 조현병을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 맥관계 또는 림프계의 염증의 예는 관절경화, 관절염, 정맥염, 혈관염 및 림프관염을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

본 명세서에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 소화계 면역 장애의 예는 담관염, 담낭염, 장염, 소장대장염, 위염, 위창자염, 염증성 장 질환, 회장염 및 직장염을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 염증성 장 질환은 예를 들어, 관련 병태군의 기술 분야에서 인식된 일부 형태를 포함한다. 몇몇 주요한 형태의 염증성 장 질환이 공지되어 있는데, 크론병(지역성 장 질환, 예를 들어, 비활성 및 활성 형태) 및 궤양성 대장염(예를 들어, 비활성 및 활성 형태)이 이러한 장애 중 가장 흔하다. 또한, 염증성 장 질환은 과민성 대장 증후군, 미세 대장염, 림프구-형질세포 장염, 복강 질환, 콜라겐성 대장염, 림프구성 대장염 및 호산구성 소장대장염을 포함한다. 기타 덜 흔한 형태의 IBD는 불확정 대장염, 거짓막 대장염(괴사성 대장염), 허혈성 염증성 장 질환, 베체트병, 사코이드증, 공피증, IBD 관련 이형성증, 이형성증 관련 덩어리 또는 병변, 및 원발성 경화성 담관염을 포함한다.

본 명세서에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 생식계 면역 장애의 예는 자궁경부염, 융모양막염, 자궁내막염, 부고환염, 배꼽염, 난소염, 고환염, 자궁관염, 자궁관 난소 농양, 요도염, 질염, 외음염 및 외음부통을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

본 명세서에 기재된 방법 및 조성물은 염증 성분을 갖는 자가면역 병태를 치료하는 데 사용될 수 있다. 이러한 병태는 급성 파종 전신 탈모증, 베체트병, 샤가스병, 만성 피로 증후군, 자율신경기능이상, 뇌척수염, 강직성 척추염, 재생불량성 빈혈, 화농성 한선염, 자가면역 간염, 자가면역 난소염, 복강 질환, 크론병, 제1형 당뇨병, 거대세포 동맥염, 굿파스쳐 증후군, 그레이브병, 길랭-바레 증후군, 하시모토병, 헤노흐-쇤라인 자반병, 가와사키병, 홍반성 루푸스, 미세 대장염, 미세 다발동맥염, 혼합 결합조직 질환, 머클-웰스 증후군, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 안구간대경련 근간대경련 증후군, 시신경염, 오드 갑상선염(ord's thyroiditis), 수포창, 결절성다발성동맥염, 다발성 근육통, 류마티스 관절염, 라이터 증후군, 쇼그렌 증후군, 측두 동맥염, 베게너 육아종증, 웜(warm) 자가면역 용혈성 빈혈, 간질성 방광염, 라임병, 국소피부경화증, 건선, 사코이드증, 공피증, 궤양성 대장염, 및 백반증을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

본 명세서에 기재된 방법 및 조성물은 염증 성분을 갖는 T 세포 매개성 과민성 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 이러한 병태는 접촉 과민증, 접촉성 피부염(덩굴 옻나무로 인한 것 포함), 두드러기, 피부 알레르기, 호흡기 알레르기(고초열, 알레르기 비염, 집먼지 진드기 알레르기) 및 글루텐 민감성 장 질환(복강 질환)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

방법 및 조성물로 치료될 수 있는 기타 면역 장애는 예를 들어, 충수염, 피부염, 피부근염, 심내막염, 섬유조직염, 치은염, 설염, 간염, 화농성 한선염, 홍채염, 후두염, 유선염, 심근염, 신장염, 이염, 췌장염, 이하선염, 심막염, 복막염, 인두염, 흉막염, 폐렴, 전립선염, 신우신염, 및 구내염, (신장, 간, 심장, 폐, 췌장(예를 들면, 섬 세포), 골수, 각막, 작은 창자, 피부 동종 이식(allograft), 피부 동종 이식(homograft) 및 심장 판막 이식, 혈청병, 및 이식편대 숙주병과 같은 기관을 포함하는) 이식 거부, 급성 췌장염, 만성 췌장염, 급성 호흡 곤란 증후군, 시자리 증후군, 선천성 부신 비후증, 비화농성 갑상선염, 암과 연관된 고칼슘혈증, 수포창, 수포성 포진 피부염, 중증 다형성 홍반, 박피성 피부염, 지루성 피부염, 계절성 또는 알레르기 비염, 기관지 천식, 접촉성 피부염, 아토피 피부염, 약물 과민 반응, 알레르기 결막염, 각막염, 안 대상포진, 각막 홍체 모양체 염, 홍체모양체염, 맥락 망막염, 시신경염, 증상성 사코이드증, 전격 또는 파종 폐 결핵 화학요법, 성인의 특발 혈소판감소 자색반증, 성인의 2차 혈소판 감소증, 후천성 (자가면역) 용혈성 빈혈, 백혈병 및 성인 림프종, 유아의 급성 백혈병, 지역성 장염, 자가면역 혈관염, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐 질환, 고형 장기 이식 거부, 패혈증을 포함한다. 바람직한 치료법은 이식 거부, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 다발성 경화증, 1형 당뇨병, 천식, 염증성 장 질환, 전신 홍반성 루푸스, 건선, 만성 폐쇄성 폐 질환, 및 감염성 질환(예를 들어, 패혈증)을 수반하는 염증의 치료를 포함한다.

일부 양태에서, 건선 및/또는 아토피성 피부염의 치료에 사용하기 위한 박테리아 조성물이 개시된다. 일부 양태에서, 건선을 치료하는 데 사용하기 위한 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는 박테리아 조성물이 본 명세서에 기재되며, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 다른 양태에서, 아토피성 피부염을 치료하는 데 사용하기 위한 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는 박테리아 조성물이 본 명세서에 기재되며, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다.

일부 양태에서, 건선(예를 들어, 경증 내지 중등도의 건선) 및/또는 아토피성 피부염(예를 들어, 경증 내지 중등도 아토피성 피부염)을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 박테리아 조성물의 용도가 개시된다. 일부 양태에서, 건선의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 박테리아 조성물의 용도가 본 명세서에 기재되며, 박테리아 조성물은 프레보텔라 히스티콜라를 포함하고, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 다른 양태에서, 아토피성 피부염의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 박테리아 조성물의 용도가 본 명세서에 기재되며, 박테리아 조성물은 프레보텔라 히스티콜라를 포함하고, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다.

본 명세서에 기재된 본 발명의 임의의 양태에 적용될 수 있는 다수의 실시형태가 추가로 제공된다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99.9% 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 실시형태에서, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)이다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 경구로 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 캡슐 또는 정제로서 제형화된다. 일부 실시형태에서, 캡슐은 장용 코팅 캡슐이다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 최대 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 최대 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 최대 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 1.6×10¹⁰ 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 약 2.76 ㎎, 약 55 ㎎, 약 550 ㎎ 또는 약 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함한다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 적어도 1일 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 1일 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 연속 15일 동안 1일 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 연속 28일 동안 1일 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 박테리아 조성물은 연속 29일 동안 1일 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 건선은 경증 내지 중등도의 건선이다. 일부 실시형태에서, 아토피성 피부염은 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염이다.

추가 예시적인 실시형태

예시적인 실시형태 1에서, 본 명세서에는 대상체에게 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 건선을 치료하는 방법이 제공되며, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다.

예시적인 실시형태 2에서, 본 명세서에는 대상체에게 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체(예를 들어, 건선을 갖는 대상체)에서 병변 중증도 점수(LSS)(예를 들어, 평균 LSS)를 (예를 들어, 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여) 감소시키는 방법이 제공되며, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다.

예시적인 실시형태 3에서, 본 명세서에는 평균 LSS가 대상체에서 감소되는, 실시형태 2의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 4에서, 본 명세서에는 LSS가 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여 감소되는, 실시형태 2 또는 실시형태 3의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 5에서, 본 명세서에는 대상체에게 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체(예를 들어, 건선을 갖는 대상체)에서 건선 부위 중증도 지수(PASI) 점수(예를 들어, 평균 PASI 점수)를 (예를 들어, 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여) 감소시키는 방법이 제공되며, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다.

예시적인 실시형태 6에서, 본 명세서에는 평균 PASI 점수가 대상체에서 감소되는, 실시형태 5의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 7에서, 본 명세서에는 PASI 점수가 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여 감소되는, 실시형태 5 또는 실시형태 6의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 8에서, 본 명세서에는 대상체에게 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체(예를 들어, 건선을 갖는 대상체)에서 지속적인 임상 효과(예를 들어, 투여 완료 2주 후에, 예를 들어, 평균 LSS 및/또는 PASI의 기준선(또는 위약)으로부터의 계속적인 감소)를 증가시키는 방법이 제공되며, 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다.

예시적인 실시형태 9에서, 본 명세서에는 지속적인 임상 효과가 투여 완료 후 평균 LSS 및/또는 PASI의 기준선 또는 위약으로부터의 계속적인 감소를 포함하는, 실시형태 8의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 10에서, 본 명세서에는 평균 LSS 및/또는 PASI의 기준선 또는 위약으로부터의 감소가 투여 후 적어도 2주 동안 계속되는, 실시형태 9의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 11에서, 본 명세서에는 LSS 및/또는 PASI 점수가 기준선 또는 위약에 비해서 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40% 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%만큼 감소되는, 실시형태 2 내지 10 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 12에서, 본 명세서에는 프레보텔라 히스티콜라가 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99.9% 서열 동일성을 포함하는 균주인, 실시형태 1 내지 11 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 13에서, 본 명세서에는 프레보텔라 히스티콜라가 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)인, 실시형태 1 내지 11 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 14에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 경구로 투여되는, 실시형태 1 내지 13 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 15에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 캡슐 또는 정제로서 제형화되는, 실시형태 1 내지 14 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 16에서, 본 명세서에는 캡슐이 장용 코팅 캡슐인, 실시형태 15의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 17에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 적어도 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 18에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 19에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 20에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 최대 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 21에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 22에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 최대 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 23에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 1.6×10¹⁰ 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 24에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 적어도 약 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 25에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 26에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 55 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 27에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 550 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 28에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 적어도 1일 1회 투여되는, 실시형태 1 내지 27 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 29에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 1일 1회 투여되는, 실시형태 1 내지 27 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 30에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 연속 15일 동안 1일 1회 투여되는, 실시형태 1 내지 27 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 31에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 연속 28일 동안 1일 1회 투여되는, 실시형태 1 내지 27 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 32에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 연속 29일 동안 1일 1회 투여되는, 실시형태 1 내지 27 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 33에서, 본 명세서에는 건선이 경증 내지 중등도의 건선인, 실시형태 1 내지 32 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 34에서, 본 명세서에는 대상체에게 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는 박테리아 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 아토피성 피부염을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다.

예시적인 실시형태 35에서, 본 명세서에는 프레보텔라 히스티콜라가 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99.9% 서열 동일성을 포함하는 균주인, 실시형태 34의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 36에서, 본 명세서에는 프레보텔라 히스티콜라가 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)인, 실시형태 34의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 37에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 경구로 투여되는, 실시형태 34 내지 36 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 38에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 캡슐 또는 정제로서 제형화되는, 실시형태 34 내지 37 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 39에서, 본 명세서에는 캡슐이 장용 코팅 캡슐인, 실시형태 38의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 40에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 적어도 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 41에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 42에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 43에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 최대 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 44에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 45에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 최대 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 46에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 1.6×10¹⁰ 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 47에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 적어도 약 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 48에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 49에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 55 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 50에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 550 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 34 내지 39 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 51에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 적어도 1일 1회 투여되는, 실시형태 34 내지 50 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 52에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 1일 1회 투여되는, 실시형태 34 내지 50 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 53에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 연속 15일 동안 1일 1회 투여되는, 실시형태 34 내지 50 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 54에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 연속 28일 동안 1일 1회 투여되는, 실시형태 34 내지 50 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 55에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 연속 29일 동안 1일 1회 투여되는, 실시형태 34 내지 50 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 56에서, 본 명세서에는 아토피성 피부염이 경증 내지 중등도 아토피성 피부염인, 실시형태 34 내지 55 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 57에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 박테리아의 하나의 균주를 포함하고, 박테리아의 하나의 균주가 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 99.9% 서열 동일성을 포함하는 균주인, 실시형태 1 내지 56 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 58에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 박테리아의 하나의 균주를 포함하고, 박테리아의 하나의 균주가 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)인, 실시형태 1 내지 56 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 59에서, 본 명세서에는 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는 박테리아 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 투여하는 단계를 포함하는 항염증성 사이토카인 생산을 향상시키는 방법이 제공되며, 여기서 프레보텔라 히스티콜라는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열과 적어도 85% 서열 동일성을 포함하는 균주이다.

예시적인 실시형태 60에서, 본 명세서에는 프레보텔라 히스티콜라가 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)인, 실시형태 59의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 61에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 경구로 투여되는, 실시형태 59 내지 60 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 62에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 캡슐 또는 정제로서 제형화되는, 실시형태 59 내지 61 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 63에서, 본 명세서에는 캡슐이 장용 코팅 캡슐인, 실시형태 62의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 64에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 적어도 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 65에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 66에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 67에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 최대 약 1.6×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 68에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 69에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 최대 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 70에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 1.6×10¹⁰ 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 71에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 적어도 약 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 72에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 2.76 g의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 73에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 55 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 74에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 약 550 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 실시형태 59 내지 63 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 75에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 적어도 1일 1회 투여되는, 실시형태 59 내지 74 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 76에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 1일 1회 투여되는, 실시형태 59 내지 74 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 77에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 연속 15일 동안 1일 1회 투여되는, 실시형태 59 내지 74 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 78에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 연속 28일 동안 1일 1회 투여되는, 실시형태 59 내지 74 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 79에서, 본 명세서에는 박테리아 조성물이 연속 29일 동안 1일 1회 투여되는, 실시형태 59 내지 74 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 80에서, 본 명세서에는 항염증성 사이토카인이 IL-10 및/또는 IL-27인, 실시형태 59 내지 79 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

예시적인 실시형태 81에서, 본 명세서에는 항염증성 사이토카인이 M1형 APC에 의해서 발현되는, 실시형태 59 내지 80 중 어느 하나의 방법이 제공된다.

실시예

실시예 1: 지연형 과민증(DTH)의 마우스 모델에서의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B

지연형 과민증(DTH)은 Petersen 등(문헌[In vivo pharmacological disease models for psoriasis and atopic dermatitis in drug discovery. Basic & Clinical Pharm & Toxicology. 2006. 99(2): 104-115]; 또한 문헌[Irving C. Allen (ed.) Mouse Models of Innate Immunity: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, 2013. vol. 1031, DOI 10.1007/978-1-62703-481-4_13] 참고)에 의해 검토된 바와 같이 아토피성 피부염(또는 알레르기성 접촉 피부염)의 동물 모델이다. 다양한 합텐 또는 항원, 예를 들어, 완전 프로인트 아주반트(Complete Freund's Adjuvant: CFA) 또는 다른 아주반트로 유화된 항원을 사용하여, 다양한 마우스 및 래트 균주에서 유도될 수 있다. DTH는 홍반, 부종, 및 세포 침윤 - 특히 항원 제시 세포(APC), 호산구, 활성화된 CD4+ T 세포, 및 사이토카인 발현 Th2 세포의 침윤을 초래하는 항원 특이적 T 세포 매개성 반응뿐만 아니라 감작을 특징으로 한다.

일반적으로, 마우스를 종창 및 항원-특이적 항체 역가에 의해 측정된 이차(또는 기억) 면역 반응을 유도하기 위해 아주반트(예를 들어, 완전 프로인트 아주반트)와 관련하여 투여된 항원으로 프라이밍한다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 DTH의 마우스 모델에서 단독으로 또는 다른 항-염증 치료제를 첨가하거나 첨가하지 않으면서, 이들의 효능에 대해 시험되었다. 예를 들어, 6 내지 8주령 C57Bl/6 마우스를 Taconic(미국 뉴욕주 저먼타운 소재) 또는 다른 공급업체에서 입수한다. 마우스 군에 유효량(부위당 50 ul 총 부피)으로 항원(예를 들어, 키홀-림펫 헤모시아닌 (KLH) 또는 오발부민(OVA))을 등(상단 및 하단) 위의 네 부위에 4개의 피하(s.c.) 주사를 투여한다. DTH 반응의 경우, 동물에게 당업계에 공지된 방법을 사용하여 귀에 피부내(i.d.)에 주사할 수 있다. 일부 마우스는 대조군 동물 역할을 한다. 일부 마우스 군에게 제8일에 귀당 10 ul(왼쪽 귀에 비히클 대조군(0.01% DMSO) 및 항원(오른쪽 귀에 대략 21.2 ug(12 n㏖)))을 시험감염시킬 수 있다. 귀 염증을 측정하기 위해, 수동 억제 동물의 귀 두께를 Mitutoyo 마이크로미터를 사용하여 측정할 수 있다. 각각의 개별 동물의 귀 두께를 기준선 수준에서 피부내 접종 전에 측정할 수 있다. 이후, 대략 24시간 및 48시간(즉, 제9일 및 제10일)에 피부내 접종 후 귀 두께를 2회 측정할 수 있다. 코르티코스테로이드인 덱사메타손을 양성 대조군을 위해서 사용할 수 있다.

박테리아에 의한 치료는 프라이밍 시간 또는 DTH 접종 시간 중 어느 시점에서 개시된다. 예를 들어, 박테리아는 피하 주사(제0일)와 동시에 투여될 수 있거나, 피부내 주사 전에 또는 피부내 주사시에 투여될 수 있다. 박테리아는 다양한 용량 및 정해진 간격으로 투여된다. 일부 마우스는 i.v. 주사를 통해 박테리아를 제공받을 수 있는 반면, 다른 마우스는 복강내(i.p.) 주사, 피하(s.c.), 비강 경로 투여, 경구 위관영양, 국소 투여, 피부내(i.d.) 주사 또는 다른 투여 수단을 통해 박테리아를 제공받을 수 있다. 일부 마우스는 매일(예를 들어, 제0일에 시작) 박테리아를 제공받을 수 있는 반면, 다른 마우스는 다른 간격(예를 들어, 격일 또는 3일에 한 번)으로 박테리아를 제공받을 수 있다. 박테리아 세포는 생 박테리아, 사멸된 박테리아, 또는 약화된 박테리아일 수 있다. 박테리아 세포는 새로 수거(또는 냉동)되어 투여될 수 있거나, 또는 투여 전에 방사선 조사되거나, 동결건조되거나, 가열 사멸될 수 있다.

예를 들어, 일부 마우스 군은 1×10⁴ 내지 5×10⁹개 박테리아 세포를 제공받을 수 있다.

다른 실험에서, 일부 마우스 군은 다양한 시점에 유효한 용량으로 항염증제(들)(예를 들어, 항-CD154, TNF 패밀리의 구성원 차단, 또는 기타 치료) 및/또는 적절한 대조군(예를 들어, 비히클 또는 대조 항체)으로 처리될 수 있다. 추가로, 일부 마우스는 치료 전에 항생제로 처리될 수 있다. 예를 들어, 반코마이신(0.5 g/ℓ), 암피실린(1.0 g/ℓ), 겐타마이신(1.0 g/ℓ) 및 암포테리신 B(0.2 g/ℓ)을 식수에 첨가하고, 치료 시에 또는 치료 며칠 전에 항생제 치료를 중단한다. 일부 면역화된 마우스는 항생제를 제공받지 않고 처리된다.

다양한 시점에서, 혈청 샘플을 채취한다. 다른 마우스 군을 희생시키고, 당업계에 공지된 방법을 사용하여 조직학 연구, 생체외 조직학적, 사이토카인 및/또는 유세포 분석을 위해 림프절, 비장, 장간막 림프절(MLN), 소장, 결장, 및 다른 조직을 제거할 수 있다. 일부 마우스를 O2/CO2 마취하에 안와 신경총에서 방혈시키고, ELISA 분석을 수행한다.

조직은 제조업체의 지시에 따라 해리 효소를 사용하여 해리될 수 있다. 세포를 당업계에 공지된 기술을 사용하여 유세포 분석법에 의한 분석을 위해 염색한다. 염색 항체는 항-CD11c(수지상 세포), 항-CD80, 항-CD86, 항-CD40, 항-MHCII, 항-CD8a, 항-CD4, 및 항-CD103을 포함할 수 있다. 분석될 수 있는 다른 마커는 범-면역 세포 마커 CD45, T 세포 마커(CD3, CD4, CD8, CD25, Foxp3, T-bet, Gata3, Roryt, 그랜자임 B, CD69, PD-1, CTLA-4), 및 대식세포/골수성 마커(CD11b, MHCII, CD206, CD40, CSF1R, PD-L1, Gr-1, F4/80)를 포함한다. 면역 표현형에 추가하여, TNFa, IL-17, IL-13, IL-12p70, IL12p40, IL-10, IL-6, IL-5, IL-4, IL-2, IL-1b, IFNy, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, MIG, IP10, MIP1b, RANTES, 및 MCP-1을 포함하지만, 이에 제한되지 않는, 혈청 사이토카인을 분석한다. 사이토카인 분석은 림프절 또는 다른 조직으로부터 얻은 면역 세포, 및/또는 생체외에서 얻은 정제된 CD45+ 침윤 면역 세포에서 수행될 수 있다. 마지막으로, T 세포, 대식세포, 수지상 세포, 및 관문 분자 단백질 발현을 측정하기 위하여 면역조직화학이 다양한 조직 섹션에서 수행된다.

상기에 기술된 바와 같이 마우스를 KLH로 프라이밍시키고, 접종시켰고, 48시간에서의 귀 종창 측정 후 마우스를 희생시켰다.

희생시킨 동물로부터 귀를 제거하고 냉 EDTA-비함유 프로테아제 저해제 칵테일(Roche)에 넣었다. 비드 파괴를 사용하여 귀를 균질화시키고, 제조사의 지침에 따라 Luminex 키트(EMD Millipore)에 의해 IL-1에 대해 상청액을 분석하였다.

희생시키지 않고 DTH 보호의 영향 및 수명을 조사하기 위해, 일부 마우스는 접종 항원으로 재접종시킬 수 있다. DTH에 대한 민감성 및 반응의 중증도에 대해 다양한 시점에 마우스를 분석한다.

실시예 2 : 건선의 마우스 모델에서의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B

건선은 T 세포 매개성 만성 염증성 피부 질환이다. 소위 "플라크형" 건선은 건선의 가장 흔한 형태이며, 진피 및 표피로의 면역 세포 침윤으로 인한 건성 비늘, 붉은 플라크 및 피부 두꺼워짐을 특징으로 한다. Gudjonsson 등(문헌[Mouse models of psoriasis. J Invest Derm. 2007. 127: 1292-1308]; 또한 문헌[van der Fits et al. Imiquimod-induced psoriasis-like skin inflammation in mice is mediated via the IL-23/IL-17 axis. J. Immunol. 2009 May 1. 182(9): 5836-45] 참고)에 의해 검토된 바와 같이, 일부 동물 모델이 이 질환의 이해에 기여하였다.

건선은 형질전환, 넉아웃 또는 이종이식 모델을 사용하는 것뿐만 아니라 TLR7/8 리간드인 이미퀴모드(IMQ)의 국소 적용을 이용하는 것도 포함하는 다양한 마우스 모델에서 유도될 수 있다.

다른 항염증 치료의 첨가와 함께, 또는 첨가 없이, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효능을 건선의 마우스 모델에서 시험한다. 예를 들어, 6 내지 8주령의 C57Bl/6 또는 Balb/c 마우스를 Taconic(미국 뉴욕주 저먼타운 소재) 또는 다른 판매사로부터 입수한다. 마우스의 등과 오른쪽 귀를 면도한다. 마우스 군은 1일 국소 용량 62.5 ㎎의 시판되는 IMQ 크림(5%)(Aldara; 3M Pharmaceuticals)을 제공받는다. 이 용량을 5일 또는 6일 연속하여 면도 영역에 도포한다. 규칙적인 간격으로, 문헌[van der Fits et al. (2009)]에 기술된 바와 같이, 0 내지 4의 척도로 마우스의 홍반, 스케일링 및 두꺼워짐을 점수화한다. Mitutoyo 마이크로미터를 사용하여 마우스의 귀 두께를 모니터링한다.

박테리아에 의한 치료는 IMQ의 최초 적용 시점 또는 그 이후에 어느 시점에서 개시된다. 예를 들어, 박테리아는 피하 주사(제0일)와 동시에 투여될 수 있거나, 적용 전에 또는 적용 시에 투여될 수 있다. 박테리아는 다양한 용량 및 정해진 간격으로 투여된다. 일부 마우스는 i.v. 주사를 통해 박테리아를 제공받을 수 있는 반면, 다른 마우스는 복강내(i.p.) 주사, 비강 경로 투여, 경구 위관영양, 국소 투여, 피부내(i.d.) 주사, 피하(s.c.) 주사, 또는 다른 투여 수단을 통해 박테리아를 제공받을 수 있다. 일부 마우스는 매일(예를 들어, 제0일에 시작) 박테리아를 제공받을 수 있는 반면, 다른 마우스는 다른 간격(예를 들어, 격일 또는 3일에 한 번)으로 박테리아를 제공받을 수 있다. 박테리아 세포는 생 박테리아, 사멸된 박테리아, 또는 약화된 박테리아일 수 있다. 박테리아 세포는 새로 수거(또는 냉동)되어 투여될 수 있거나, 또는 투여 전에 방사선 조사되거나, 동결건조되거나, 가열 사멸될 수 있다.

일부 마우스 군은 다양한 시점에서 및 유효한 용량으로 항염증제(들)(예를 들어, 항-CD154, TNF 패밀리의 구성원 차단, 또는 기타 치료) 및/또는 적절한 대조군(예를 들어, 비히클 또는 대조 항체)으로 처리될 수 있다.

또한, 일부 마우스는 치료 전에 항생제로 처리된다. 예를 들어, 반코마이신(0.5 g/ℓ), 암피실린(1.0 g/ℓ), 겐타마이신(1.0 g/ℓ) 및 암포테리신 B(0.2 g/ℓ)를 식수에 첨가하고, 치료시에 또는 치료 며칠 전에 항생제 치료를 중단한다. 일부 면역화된 마우스는 항생제를 제공받지 않고 처리된다.

다양한 시점에서, 등 및 귀 피부로부터의 샘플을 당업계에 공지된 방법을 사용하여 냉동섹션 염색 분석을 위해 채취한다. 다른 마우스 군을 희생시키고, 당업계에 공지된 방법을 사용하여 조직학 연구, 생체외 조직학적, 사이토카인 및/또는 유세포 분석을 위해 림프절, 비장, 장간막 림프절(MLN), 소장, 결장, 및 다른 조직을 제거할 수 있다. 일부 조직은 제조업체의 지시에 따라 해리 효소를 사용하여 해리될 수 있다. 냉동섹션 샘플, 조직 샘플, 또는 생체외에서 수득된 세포를 당업계에 공지된 기술을 사용하여 유세포 분석법에 의한 분석을 위해 염색한다. 염색 항체는 항-CD11c(수지상 세포), 항-CD80, 항-CD86, 항-CD40, 항-MHCII, 항-CD8a, 항-CD4, 및 항-CD103을 포함할 수 있다. 분석될 수 있는 다른 마커는 범-면역 세포 마커 CD45, T 세포 마커(CD3, CD4, CD8, CD25, Foxp3, T-bet, Gata3, Roryt, 그랜자임 B, CD69, PD-1, CTLA-4), 및 대식세포/골수성 마커(CD11b, MHCII, CD206, CD40, CSF1R, PD-L1, Gr-1, F4/80)를 포함한다. 면역 표현형에 추가하여, TNFa, IL-17, IL-13, IL-12p70, IL12p40, IL-10, IL-6, IL-5, IL-4, IL-2, IL-1b, IFNy, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, MIG, IP10, MIP1b, RANTES, 및 MCP-1을 포함하지만, 이에 제한되지 않는, 혈청 사이토카인을 분석한다. 사이토카인 분석은 림프절 또는 다른 조직으로부터 얻은 면역 세포, 및/또는 생체외에서 얻은 정제된 CD45+ 피부 침윤 면역 세포에서 수행될 수 있다. 마지막으로, T 세포, 대식세포, 수지상 세포, 및 관문 분자 단백질 발현을 측정하기 위하여 면역조직화학이 다양한 조직 섹션에서 수행된다.

건선 보호의 영향 및 수명을 조사하기 위해서, 희생시키기 보다는, 일부 마우스를 회복을 평가하기 위하여 연구할 수 있거나, 이들에게 IMQ를 재시험감염시킬 수 있다. 재시험감염시킨 마우스의 군의 건선에 대한 감수성 및 반응의 중증도를 분석한다.

실시예 3: 건강한 참가자 및 경증 내지 중등도의 건선 또는 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참가자에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B

근거:

이러한 인간 최초(first-in-human: FIH) 연구는 건강한 지원자 및 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 환자 및 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 환자에서 단클론성 미생물 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 안전성 및 내약성을 조사한다. 추가로, 이들 환자 집단에 이익을 제공하기 위해서 면역 체계를 변형시키는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 가능성을 평가한다. 따라서, 이러한 FIH 연구는 건강한 지원자 및 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 환자 코호트 및 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 환자 코호트에서 약력학적 효과를 조사함으로써 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 잠재적인 이익에 대한 최대 정보 및 이해를 제공하기 위해서 설계된다.

프레보텔라 히스티콜라는 구강, 비인두, 위장(GI) 및 비뇨 생식기 점막 표면에서 일반적으로 발견되는 자연 인간 공생 유기체이다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 사용한 전임상 연구는 다양한 인간 및 마우스 일차 세포 시험관내 검정, 뿐만 아니라 5가지의 주요 생체내 모델에서 수행되어 왔으며, 이것 모두는 면역염증성 질환의 치료에서의 이러한 작용제의 사용을 뒷받침한다.

시험관내에서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 인간 대식세포 및 수지상 세포로부터 항염증성 사이토카인, 예컨대, 인터류킨 (IL)-10, IL-27 및 IL-1RA의 분비를 자극하지만, 전염증성 사이토카인, 예컨대, IL-17, IL-12 및 과립구-대식세포 집락-자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor: GM-CSF)의 최소 수준만을 유도하는 것으로 확인되었다.

생체내에서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 지연형 과민증(DTH), 덱스트란 설페이트 나트륨(dextran sulphate sodium: DSS) 대장염, 플루오레세인 이소티오시아네이트(fluorescein isothyocyanate: FITC) 피부 과민증, 면역염증성 질환의 콜라겐-유도 관절염(collagen-induced arthritis: CIA) 모델 및 실험적 알레르기성 뇌척수염(experimental allergic encephalomyelitis: EAE)에서 효능의 증가를 나타내었다. 21일까지 매일 투여한 이러한 실험에 사용된 동물에서는 잠재적으로 관련된 부작용이 나타나지 않았다. 이들 데이터는, 이러한 프레보텔라의 단클론성 미생물 균주로의 치료가 건선 및 아토피성 피부염을 비롯한 다양한 면역염증성 병태에 이익을 제공할 수 있다는 것을 시사한다.

건강한 지원자, 그 다음 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 참가자의 2개의 코호트를 연구하여 생성물의 안전성 및 내약성의 증거를 제공한다. 이들 첫 번째 3개의 코호트 이후에, 최대 4개의 추가 코호트(경증 내지 중등도의 건선 2개 및 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염 2개)를 연구하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 안전성 및 내약성을 평가하고, 또한 조직 및 전신 면역 환경에서 잠재적인 이로운 변화의 증가를 연구한다. 이들 코호트는 상대성장 스케일링(allometric scaling)에 기초하여 인간 등가 용량의 1 내지 5배의 용량을 평가한다. 투여 순서는 처음 3개의 코호트에서 관찰된 임의의 안전성 또는 내약성 문제에 우선적으로 기초하며, 이어서 문제가 없으면, 약물 공급의 가용성을 따르고, 이는 이들 코호트가 비-번호 순서로 운영될 수 있다는 것을 의미한다(즉, 코호트 6 및 코호트 7을 코호트 4 및 코호트 5 이전에 실시할 수 있다). 연구될 예측 용량은 마우스 생체내 모델로부터의 상대성장 스케일링에 기초하여 인간 등가 용량(HED)의 1 내지 5배이다.

전체 설계:

이것은 건강한 참여자 및 경증 내지 중등도의 건선 또는 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참여자에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 예비 안전성, 내약성 및 효능을 평가하기 위해 용량 증량 및 용량 확장을 이용한 단일 지점, 무작위 위약-대조 임상 연구이다. 본 연구자 및 참가자는 연구 약물에 대해서 맹검되지만, 의뢰자는 맹검되지 않는다. 연구는 건강한 지원자의 2개의 코호트, 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 참가자의 3개의 코호트 및 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참가자의 2개의 코호트로 이루어진다. 위약 대비 추정 치료 용량의 1/10에서부터 추정 치료 용량의 최대 5배까지 증가 용량을 평가한다. 본 연구의 1차 목표는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다. 2차 및 탐색적 평가변수는 전신 면역 체계 및 잠재적인 임상 이익에 대해서 임의의 효과가 있는지의 여부를 확립하도록 설계된다.

코호트 내 단일 용량 및 다중 용량 치료요법은 각각의 개인에 대해서 단일 투여와 다중 투여 기간의 시작 사이에 적어도 48시간의 간격을 두고 사용한다. 각각의 개인에 대한 다중 투여 기간 이전에, 해당 개인의 안전성 데이터에 대한 평가를 책임 연구자(또는 대리인) 및 의료 모니터에 의해 수행한다.

성공적으로 스크리닝된 참가자를 제1일에 (프레보텔라 히스티콜라 균주 B) 또는 위약군으로 무작위 배정하고, 투여를 시작한다. 건강한 지원자의 각각의 용량 수준에 대해, 2명의 참가자(1명의 활성, 1명의 위약)의 감시군(sentinel group)이 존재한다. 코호트의 나머지는 다중 투여 적어도 3일 후에 안전성 데이터의 검토 후에 투여된다.

모든 안전성 데이터는 책임 연구자(또는 대리인), 의료 모니터 및 안전성 검토 위원회(safety review committee: SRC)에 의해 지속적이고 누적된 방식으로 검토된다.

참가자 수:

최소 참가자 수(코호트 1 내지 코호트 7)는 총 120명이고, 최대 참가자 수는 총 132명이지만, 필요한 경우 추가 대체자가 등록될 수 있다.

2:1 무작위화 비율을 사용하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 또는 위약에 무작위로 배정된 24명의 건강한 지원자를 달성하기 위해 충분한 참가자를 스크리닝한다: 코호트 1 및 코호트 2에서 총 12명의 평가 가능한 참가자.

2:1 무작위화 비율을 사용하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 또는 위약에 무작위로 배정된 최대 60명의 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 평가 가능한 참가자를 달성하기 위해서 충분한 참가자를 스트리닝한다: 코호트 3의 총 12명의 평가 가능한 참가자 및 코호트 4의 최대 총 24명의 평가 가능한 참가자 및 코호트 6의 최대 총 24명의 평가 가능한 참가자.

2:1 무작위화 비율을 사용하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 또는 위약에 무작위로 배정된 최대 48명의 경증 내지 중등도 아토피성 피부염을 갖는 평가 가능한 참가자를 달성하기 위해서 충분한 참가자를 스트리닝한다: 코호트 5의 최대 총 24명의 평가 가능한 참가자 및 코호트 7의 최대 총 24명의 평가 가능한 참가자.

코호트 4, 코호트 5, 코호트 6 및 코호트 7에서의 투여는 코호트 3으로부터의 안전성 데이터의 검토 이후에 동시에 일어날 수 있다. 코호트의 순서 결정은 사용 가능한 약물 공급을 수용하도록 조정될 수 있고, 예를 들어, 코호트 6은 코호트 4 이전에 수행될 수 있고, 코호트 7은 코호트 5 이전에 수행될 수 있다. 이전 저용량 코호트로부터의 모든 안전성 데이터는 용량 증량 전에 검토된다.

개입 군 및 기간:

연구의 설계는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 인간(코호트 1 및 코호트 2)에서 안전하고, 내약성이 우수하다는 것을 보장하기 위해서 건강한 참가자에서 용량 증량을 허용한다. 그 다음 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 안전성 및 내약성, 및 질환 병리학에 대한 효과에 대해서 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 참가자에서 시험한다(코호트 3). 그 다음 Th2-유도 면역염증성 장애를 치료하기 위한 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 가능성을 조사하기 위해서 2개의 추가 건선 코호트(코호트 4 및 코호트 6) 및 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참가자의 2개 코호트(코호트 5 및 코호트 7)에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 시험한다.

코호트 1: 12명의 건강한 참가자를 코호트 1에 무작위 배정한다: 8명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 0.1배(용량 1, 추정 치료 용량의 대략 1/10)인 대략 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 최저 투여량에 무작위 배정하고, 4명의 참가자를 위약에 무작위 배정한다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생한다. 코호트의 나머지는 제6일부터 투여한다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 14일 다중 투여 기간을 시작한다.

코호트 2: 12명의 건강한 참가자를 코호트 2에 무작위 배정한다: 8명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 1배(용량 2, 추정 치료 용량)인 대략 1.6×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 4명의 참가자를 위약에 무작위 배정한다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생한다. 코호트의 나머지는 제6일부터 투여한다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 14일 다중 투여 기간을 시작한다.

코호트 3: 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 12명의 참가자를 코호트 3에 무작위 배정한다: 8명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 1배(용량 2, 추정 치료 용량)인 대략 1.6×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 4명의 참가자를 위약에 무작위 배정한다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생한다. 코호트의 나머지는 제6일부터 투여한다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 28일 다중 투여 기간을 시작한다.

코호트 4: 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 최대 24명의 참가자를 코호트 4에 무작위 배정한다: 16명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 5배(용량 3, 추정 치료 용량의 5배)인 대략 8.0×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 8명의 참가자를 위약에 무작위 배정한다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생한다. 코호트의 나머지는 제6일부터 투여한다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 28일 다중 투여 기간을 시작한다.

코호트 5: 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 최대 24명의 참가자를 코호트 5에 무작위 배정한다: 16명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 5배(용량 3, 추정 치료 용량의 5배)인 대략 8.0×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 8명의 참가자를 위약에 무작위 배정한다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생한다. 코호트의 나머지는 제6일부터 투여한다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 28일 다중 투여 기간을 시작한다.

코호트 6: 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 최대 24명의 참가자를 코호트 6에 무작위 배정한다: 16명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 5배(용량 3, 추정 치료 용량의 5배)인 대략 8.0×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 8명의 참가자를 위약에 무작위 배정한다. 모든 참가자에게 28일 동안 투여한다.

코호트 7: 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 최대 24명의 참가자를 코호트 7에 무작위 배정한다: 16명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 5배(용량 3, 추정 치료 용량의 5배)인 대략 8.0×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 8명의 참가자를 위약에 무작위 배정한다. 모든 참가자에게 28일 동안 투여한다.

하기 표 3은 연구의 모든 부분에 대해 연구 동안 평가될 수 있는 개시 용량 및 예상 용량 수준 및 최대 용량 수준을 기재한다.

안전성 검토 위원회:

책임 연구자(또는 대리인), 의료 모니터, 통계학자 및 의뢰자의 임상 리드로 이루어진 SRC는 맹검 안전성 데이터를 검토하고, 연구 및 용량 증량 단계에 대한 거버넌스(governance)를 제공한다. SRC는 각각의 코호트가 끝날 때 다음 투여 수준으로 진행할지의 여부를 결정할 것이며, 이들은 타당한 경우 코호트 또는 용량 증량 단계를 생략하기로 결정할 수 있다. 적어도 9명의 참가자가 명시된 용량 수준의 다중 투여 기간을 완료한 경우 용량 증량 결정을 수행할 것이다. 용량 증량 결정을 구현하기 위해서, 입수 가능한 이상 반응(AE) 및 검사실 검사 데이터를 용량 결정 회의 또는 원격 회의에서 평가한다. 다음 용량 코호트에서의 약물 투여는 연구자가 의뢰자로부터 이전 용량 코호트의 결과가 평가되었고, 다음 더 높은 용량 코호트로 진행하는 것이 허용된다는 것을 나타내는 서면 확인을 받을 때까지 진행되지 않을 수 있다. 의뢰자 또는 책임 연구자(또는 대리인)가 필요하다고 판단하는 경우 특별 SRC 회의가 소집될 수 있다. 절차에 대한 자세한 설명은 별도의 SRC 헌장에 설명되어 있다. 코호트 3이 성공적으로 완료되고 계속하기로 한 SRC의 결정에 따라서, 코호트 4 내지 코호트 7은 동시에 실시되거나 또는 입수 가능한 약물 공급의 사용을 최적화하는 순서로 실시될 수 있다. 각각의 코호트가 완료된 후 안전성 데이터 검토가 수행되지만, 코호트 4 내지 코호트 7에서 한 코호트에서 다음 코호트로 이동할 필요는 없다.

각각의 안전성 검토는 다음 데이터에 기초할 것이며, 이것은 모두 실질적으로 가능한 한 확인되고, 품질 관리(QC'd)되어야 한다.

1.1. 개략도(도 25)

참고: 코호트 1 내지 코호트 3에 대한 다음 코호트로의 진행은 SRC에 의해 결정될 것이다. 코호트 4 내지 코호트 7은 약물 공급의 입수 가능성에 따라 실시될 것이다. 용량 증량이 발생하는 경우 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명 및 위약 1명)는 코호트 4, 코호트 5, 코호트 6 및 코호트 7의 제1일에 발생할 것이다.

1.2. 활동 스케줄(SoA)

도입부

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 프레보텔라 히스티콜라의 순수한 단클론성 미생물이며, 이것은 시험관내 마우스 및 인간 세포 검정에서, 인간 대식세포 및 수지상 세포로부터 항염증성 사이토카인, 예컨대, 인터류킨(IL)-10, IL-27 및 IL-1RA의 분비를 증가시키지만, 전염증성 사이토카인, 예컨대, IL-17, IL-12 및 과립구-대식세포 집락-자극 인자(GM-CSF)의 최소 수준만을 유도한다. 단클론성 미생물은 경구로 전달되고, 노출은 위장관(GI)에 제한되지만, 생체내 연구에서 면역 체계에 대한 측정 가능한 효과가 위장관을 넘어서도 발생하는 것으로 나타났는데, 이는 소화관 내의 숙주-미생물 상호작용이 말초 조직의 면역 반응에 영향을 미칠 수 있다는 것을 시사한다. 본 발명자들뿐만 아니라 공개된 연구[Mangalam, 2017; Marietta, 2016]에 기초하여, 경구 투여된 프레보텔라 히스티콜라가 전신 질환을 개선할 가능성이 있다는 증거가 구축되고 있다. 이러한 병태를 치료하는 데 있어서의 이의 가치를 이해하기 위해서, 만성 프레보텔라 히스티콜라 B 균주 투여의 효과를 다양한 면역염증성 장애, 예를 들어, 건선 및 아토피성 피부염에서 조사할 것이다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 사용한 전임상 연구는 다양한 인간 및 마우스 일차 세포 시험관내 검정, 뿐만 아니라 5가지의 주요 생체내 모델: 지연형 과민증(DTH), 덱스트란 설페이트 나트륨(DSS) 대장염, 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC) 피부 과민증, 면역염증성 질환의 콜라겐-유도 관절염(CIA) 모델 및 실험적 알레르기성 뇌척수염(EAE)에서 수행되어 왔으며, 이것 모두는 면역염증성 질환의 치료에서의 이러한 작용제의 사용을 뒷받침한다. 모든 생체내 모델에서 긍정적인 약력학적 효과의 증거가 나타났는데, 이는 긍정적인 임상 이익의 가능성을 시사한다. 21일까지 매일 투여한 이러한 실험에 사용된 동물에서는 잠재적으로 관련된 부작용이 나타나지 않았다.

연구 근거

프레보텔라 히스티콜라 균주 B-101은 구강, 비인두, GI 및 비뇨 생식기 점막에서 일반적으로 발견되는 자연 인간 공생 유기체인 프레보텔라 히스티콜라의 특정 순수한 균주인 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 대한 인간 최초(FIH) 연구이다. 의뢰자 미공개 데이터는, 치료 효과를 평가 중인 단클론성 미생물이 전신 순환계로 침투하지 않아 안전성 및 내약성이 양호할 가능성이 있다는 것을 나타낸다. 따라서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B-101은 건강한 참가자 및 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 참가자 또는 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참가자 모두에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 안전성 및 내약성을 확인하도록 설계되었는데, 그 이유는 이들이 상대적으로 건강한 군이기 때문이다.

건강한 지원자 코호트는 추정 치료 용량의 1/10에서부터 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 예측된 치료 용량의 최대 5배까지의 용량 증량의 안전성 및 내약성을 확립할 것이다. 본 연구에서 사용될 제형은 pH에 민감성 코팅을 기반으로 하는 십이지장의 시작 부분에서 미생물을 방출하도록 설계된 장용 코팅 캡슐이다.

면역염증성 병태에서 전신 면역 반응을 조절하는 생성물의 잠재력을 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 개인 및 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 개인을 사용하여 확립할 것이다. 두 병태는, 이들이 상이한 주요 면역학적 드라이버(driver) 가지며, 질병 조직의 생검을 허용하는 이점이 있기 때문에 사용된다. 이 코호트(3 내지 7)는 28일 연속 투여 동안 투여되는데, 그 이유는 이것이 임상 반응을 입증하는 데 필요한 최소 시간이기 때문이다. 치료전 및 제30일에 채취된 쌍을 이루는 피부 생검을 사용하여 특정 면역조절을 예측하는 바이오마커 변화를 평가할 것이다. 본 연구에서 건선을 갖는 참가자 및 아토피성 피부염을 갖는 참가자 그리고 건강한 참가자의 조합은 의뢰자가 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 안전성 및 내약성을 효율적으로 확립 가능하게 하면서, 이 생성물로부터 이익을 얻을 수 있는 환자 집단의 잠재적인 징후를 알릴 수 있을 것이다.

1.3. 배경

프레보텔라 히스티콜라는 그람 음성이고, 포자를 형성하지 않으며, 절대 혐기성이다. 이것은 자연 인간 공생 유기체이며, 프레보텔라 속의 농축은 고섬유질, 식물성, 비-서구식 식단과 관련이 있다[문헌[Wu, 2011]]. 소화관 미생물군에서 프레보텔라의 더 낮은 상대적 존재비(abundance)는 비만[문헌[Tagliabue, 2013]] 및 다발성 경화증[문헌[Cosorich, 2017]; 문헌[Mangalam, 2017]; 문헌[Marietta, 2016]; 문헌[Jangi, 2016]; 문헌[Miyake, 2015]]과 같은 일부 질환과 관련이 있는 반면, 더 높은 존재비는 운동이 풍부한 생활방식[문헌[Petersen, 2017]] 및 건강한 체중 유지[문헌[Hjorth, 2018]]와 관련이 있다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 프로그램에서 생성된 전임상 데이터는 개별 균주가 단일 속 내에서도 상이한 특성을 가지고 있음을 강조하는데, 이는 균주 선택이 중요함을 입증한다. 또한, 필요한 약리학적 특성을 얻기 위해 유기체의 노출 수준이 중요함을 시사하는 용량-반응 곡선이 관찰되었다. 의뢰자는 다양한 면역염증성 적응증 및 환자 집단의 치료를 위한 의약품으로 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 개발할 것을 의도한다. 추가 정보는 연구자 자료집(IB)에서 찾을 수 있다.

유익/유해 평가

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 구강, 비인두, GI 및 비뇨 생식기 점막에서 일반적으로 발견되는 자연 인간 공생 유기체인 프레보텔라 히스티콜라의 특정 순수한 균주이다. 이것은 주요 항생제 부류, 예를 들어, 페니실린 및 세팔로스포린에 민감한 그람 음성 박테리아이다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 만성 면역염증성 장애에서 잠재적인 이점에 대해 조사되고 있다. 시험될 초기 병태는 경증 내지 중등도의 건선 및 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염이다. 내약성이 우수한 경구 요법은 이러한 병태 둘 다에서 상당한 이익을 제공할 수 있고, 현재 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 생물학적 요법의 개입이 필요하기 전에 확립되었지만 초기 질환에 사용될 것으로 예상된다.

연구 설계

이것은 유럽 의약품청(European Medicines Agency: EMA) FIH 지침[문헌[EMA, 2017]]에 따라 설계되고 수행되는 FIH 단일 지점 연구이다. 그러나 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 구강, 비인두, GI 및 비뇨 생식기 점막에서 일반적으로 발견되는 자연 발생 유기체이기 때문에, 연구 개발 프로그램이 이에 따라서 변형되었다. 연구 설계는 다른 공생 유형 유기체에 대한 보건 당국의 조언과 일치한다.

본 연구는 연구의 단일 투여 기간에서 다중 투여 기간까지 코호트내 진행을 사용할 것이다. 성공적으로 스크리닝된 참가자를 제1일에 (프레보텔라 히스티콜라 균주 B) 또는 위약군으로 무작위 배정하고, 투여를 시작할 것이다. 코호트 1 내지 코호트 5의 경우, 2명의 참가자(1명의 활성, 1명의 위약)의 감시군이 존재할 것이다. 코호트의 나머지는 다중 투여 적어도 3일 후에 감시군으로부터의 안전성 데이터의 검토 후에 투여될 것이다. 단일 투여 및 48시간 약효세척 기간 후에, 건강한 참가자는 프로토콜의 14일 다중 투여 기간을 시작할 것이고, 건선을 갖는 참가자 또는 아토피성 피부염을 갖는 참가자는 28일 다중 투여 기간을 시작할 것이다. 제1 코호트 단독의 경우, 모두 참가자는 제-1일(제1 투여 적어도 24 시간 전)에 다중 투여 기간에서 제1 투여 후 24시간까지 임상 시설에서 입원환자로서 존재할 것이다. 그 후, 안전성 검토 후 그렇게 하는 것이 안전한 것으로 간주되는 경우, 해당 코호트 및 다른 모든 코호트의 모든 추가 투여는 외래 환자를 기준으로 한다. 모든 건강한 지원자 참가자는 각각의 투여 동안 매일 임상 시설로 복귀할 것이고, 외래 환자 투여 후 적어도 0.5시간 동안 관찰될 것이다. 경증 내지 중등도의 건선 또는 아토피성 피부염을 갖는 참가자는 이들의 연구 개입의 수집을 위해서 예정된 외래 환자 방문 시에 임상 시설로 복귀할 것이다.

잠재적인 부작용을 임상 연구 동안 인간에서 쉽게 모니터링할 수 있다. 전신 부작용은 거의 없지만, 장 상피 접합부의 잠재적인 파괴 지표는 C-반응성 단백질(CRP) 및 대변 칼프로텍틴과 같은 전신 척도에 의해서 모니터링될 수 있다. 이는 안전성 검토 위원회(SRC)에 의해 모니터링되고 용량 증량 전에 검토될 것이다.

국소 효과의 지표는 AE, 브리스톨 대변 척도 및 대변 칼프로텍틴으로 모니터링할 수 있다. 일반적인 안전성은 일상적인 안전성 혈액 및 활력 징후 모니터링으로 모니터링될 수 있다. 안전성은 지속적이고 누적적으로 평가될 것이다.

전체 설계

본 연구는 건강한 지원자 및 경증 내지 중등도의 건선 또는 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참여자에서 용량 증량 및 용량 확장을 이용한 단일 지점, 무작위 위약-대조 임상 연구이다. 본 연구자 및 참가자는 연구 약물에 대해서 맹검되지만, 의뢰자는 맹검되지 않을 것이다. 의뢰자가 맹검되지 않은 근거는 의뢰자가 프로그램에 대한 전략적 결정을 내리고 다음 연구를 계획할 수 있도록 하기 위해서이다. 또한, 바이오마커 데이터의 상용성은 적응증 및 환자 집단의 선택과 관련하여 향후 연구 계획을 가능하게 할 것이다.

본 연구는 건강한 지원자의 2개의 코호트, 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 참가자의 3개의 코호트 및 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참가자의 2개의 코호트로 이루어지고, 위약에 대해서 추정 치료 용량의 대략 1/10에서 추정 치료 용량의 최대 대략 5배까지 용량 증량을 시험할 것이다. 본 연구의 1차 목표는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다. 2차 및 탐색적 평가변수는 전신 면역 체계 및 잠재적인 임상 이익에 대해서 임의의 효과가 있는지의 여부를 확립하도록 설계된다. 코호트의 설명은 하기에 기재되어 있고, 각각에 대한 근거는 본 명세서에 기재되어 있다.

연구의 설계는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 인간(코호트 1 및 코호트 2)에서 안전하고, 내약성이 우수하다는 것을 보장하기 위해서 건강한 참가자에서 용량 증량을 허용한다. 그 다음 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 안전성 및 내약성, 및 질환 병리학에 대한 효과에 대해서 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 참가자에서 시험할 것이다(코호트 3). 그 다음 Th2-유도 면역염증성 장애를 치료하기 위한 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 가능성을 조사하기 위해서 2개의 추가 건선 코호트(코호트 4 및 코호트 6) 및 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참가자의 2개 코호트(코호트 5 및 코호트 7)에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 시험할 것이다.

코호트 1: 12명의 건강한 참가자를 코호트 1에 무작위 배정할 것이다: 8명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 0.1배(용량 1, 추정 치료 용량의 대략 1/10)인 대략 1.6×10¹⁰개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 최저 투여량에 무작위 배정하고, 4명의 참가자를 위약에 무작위 배정할 것이다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생할 것이다. 코호트의 나머지에는 제6일부터 투여가 이루어질 것이다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 14일 다중 투여 기간을 시작할 것이다.

코호트 2: 12명의 건강한 참가자를 코호트 2에 무작위 배정할 것이다: 8명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 1배(용량 2, 추정 치료 용량)인 대략 1.6×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 4명의 참가자를 위약에 무작위 배정할 것이다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생할 것이다. 코호트의 나머지에는 제6일부터 투여가 이루어질 것이다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 14일 다중 투여 기간을 시작할 것이다.

코호트 3: 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 12명의 참가자를 코호트 3에 무작위 배정할 것이다: 8명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 1배(용량 2, 추정 치료 용량)인 대략 1.6×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 4명의 참가자를 위약에 무작위 배정할 것이다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생할 것이다. 코호트의 나머지에는 제6일부터 투여가 이루어질 것이다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 28일 다중 투여 기간을 시작할 것이다.

코호트 4: 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 최대 24명의 참가자를 코호트 4에 무작위 배정(프레보텔라 히스티콜라 균주 B 및 위약의 2:1 무작위화 비율)할 것이다: 16명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 5배(용량 3, 추정 치료 용량의 5배)인 대략 8.0×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 8명의 참가자를 위약에 무작위 배정할 것이다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생할 것이다. 코호트의 나머지에는 제6일부터 투여가 이루어질 것이다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 28일 다중 투여 기간을 시작할 것이다.

코호트 5: 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 최대 24명의 참가자를 코호트 5에 무작위 배정(프레보텔라 히스티콜라 균주 B 및 위약의 2:1 무작위화 비율)할 것이다: 16명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 5배(용량 3, 추정 치료 용량의 5배)인 대략 8.0×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 8명의 참가자를 위약에 무작위 배정할 것이다. 첫 번째 쌍의 감시 투여(활성 1명, 위약 1명)는 제1일에 발생할 것이다. 코호트의 나머지에는 제6일부터 투여가 이루어질 것이다. 48시간의 약효세척 기간 후에, 그 다음 참가자는 28일 다중 투여 기간을 시작할 것이다.

코호트 6: 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 최대 24명의 참가자를 코호트 6에 무작위 배정(프레보텔라 히스티콜라 균주 B 및 위약의 2:1 무작위화 비율)할 것이다: 16명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 5배(용량 3, 추정 치료 용량의 5배)인 대략 8.0×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 8명의 참가자를 위약에 무작위 배정할 것이다. 모든 참가자에게 28일 동안 투여할 것이다.

코호트 7: 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 최대 24명의 참가자를 코호트 7에 무작위 배정(프레보텔라 히스티콜라 균주 B 및 위약의 2:1 무작위화 비율)할 것이다: 16명의 참가자를 상대성장 스케일링된 전임상 유효 용량 수준의 5배(용량 3, 추정 치료 용량의 5배)인 대략 8.0×10¹¹개 총 세포까지의 최대 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 무작위 배정하고, 8명의 참가자를 위약에 무작위 배정할 것이다. 모든 참가자에게 28일 동안 투여할 것이다.

코호트 4, 코호트 5, 코호트 6 및 코호트 7에서의 투여는 코호트 3으로부터의 안전성 데이터의 검토 이후에 동시에 일어날 수 있다. 코호트의 순서 결정은 사용 가능한 약물 공급을 수용하도록 조정될 수 있고, 예를 들어, 코호트 6은 코호트 4 이전에 수행될 수 있고, 코호트 7은 코호트 5 이전에 수행될 수 있다. 이전 저용량 코호트로부터의 모든 안전성 데이터는 용량 증량 전에 검토될 것이다.

개략도 1 연구 개락도(도 25)

연구 설계에 대한 과학적 근거

프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 인간에서 내약성이라는 것을 보장하고, 그 다음 2개의 추가 가설을 시험하기 위해서 연구의 설계를 건강한 지원자에서 용량 증량을 허용한다.

가설 1:

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 인간에서 내약성이 우수하다.

평가변수: CRP, 분변 칼프로텍틴 및 브리스톨 대변 척도를 포함하는 표준 안전성 및 내약성 평가변수를 평가할 것이다. GI AE 및 잠재적 감염성 AE에 특히 주의를 기울일 것이다.

가설 2:

프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 매일 투여는 경증 내지 중등도의 건선을 개선한다.

평가변수:

1. 표준 안전성 및 내약성 평가변수

2. PASI 점수

3. IGA

4. LSS

5. 코호트 3, 4, 5, 6 및 7에서 질환에 의해 영향을 받은 BSA의 백분율

6. 짝을 이룬 생검 샘플에서의 IHC 및 IHC/IF

7. 조직 및 순환 케모카인 및 사이토카인 측정치

8. 조직 전사 프로파일링

가설 3:

프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 매일 투여는 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 개선한다.

평가변수:

1. 표준 안전성 및 내약성 평가변수

2. EASI 점수

3. SCORAD

4. IGA

5. LSS

6. 코호트 3, 4, 5, 6 및 7에서 질환에 의해 영향을 받은 BSA의 백분율

7. 짝을 이룬 생검 샘플에서의 IHC 및 IHC/IF

8. 조직 및 순환 케모카인 및 사이토카인 측정치

9. 조직 전사 프로파일링

용량에 대한 정당화

투여는 순차적인 방식으로 일어날 것인데, 제1 코호트에게 가장 낮은 용량 수준을 제공할 것이고, 투여는 SRC가 이전 코호트로부터의 안전성 데이터를 검토한 후 다음 용량 수준으로만 진행할 것이다. 제1 용량 수준(코호트 1)은 추정 치료 용량의 1/10(×0.1)을 제공받을 것이고, 코호트 2는 최대 1×추정 치료 용량을 제공받을 것이다. 이러한 순차적인 투여 요법은 프로바이오틱 제형에서 일반적인 경험 및 전임상 모델에 정의된 용량-반응 관계에 대한 이해에 의해서 지시된 시작 용량을 사용하여 참가자의 위험을 최소화하도록 설계되었다. 스케일링을 고려할 때, 의약품은 주로 GI 점막의 세포와 국소 상호작용을 하는 것으로 간주되어, 후속적으로 면역 체계의 세포에 전신 효과가 있는 것으로 간주되었다. 이러한 기전은 전통적인 상대성장 스케일링의 가정과 일치하지 않기 때문에, GI 관에서의 국소 상호작용, 즉 상대 GI 점막 표면적 및 상대 대변 질량을 반영할 수 있는 2개의 다른 매개변수를 고려하였다. 상대 GI 점막 표면적의 완전한 분석은 문헌에서 확인할 수 없었지만, 체질량 대 ¾ 제곱의 함수로 추정되었다[문헌[Karasov, 2012]]. 대변 질량비, 표준 상대성장 스케일링 및 GI 점막 표면적 계산을 사용하여, 각각 약 100×, 300× 및 450×의 인간:마우스 용량 비율을 계산하였다. 가능한 유효 용량을 고려하기 위해서, 345× 스케일 인자에 대한 계산을 사용하였다.

임상 연구에 대한 시작 용량은 전임상 시험관내 및 생체내 실험에 기초한 예상된 치료 범위에 기초한다. 이러한 예측 범위는 전임상 동물 모델 실험에서 마우스에 경구 위관 영양법으로 제공된 미생물의 총 세포 계수치에 기초한다. 이것은 상대성장 스케일링 접근법을 사용하여 조정되었으며, 가능한 치료 범위의 추정치를 제공하는 밀리그램 등가 용량으로 변환되었다.

연구 종료 정의

참가자는 배정된 코호트가 종료될 때까지 치료가 완료되고, 마지막 투여 14일 후에 최종 안전성 추적연구 방문을 완료한 경우, 연구를 완료한 것으로 간주된다.

연구의 종료는 연구의 마지막 참가자의 마지막 방문일 또는 활동 스케줄(Schedule of Activities: SoA)에 제시된 마지막 예정된 절차로 정의된다.

위험 완화 및 관리

이것은 FIH 연구이며, FIH 연구를 수행한 경험이 있는 의약품 및 헬쓰케어 제품 규제 기관(Medicines and Healthcare Products Regulatory Agency: MHRA) 공인 임상 연구 시설에서 수행될 것이다. 본 연구는 EMA FIH 지침, 임상 시험 승인 조건 및 모든 관련 우수 관리제도(good practice)에 따라 수행될 것이다.

연구자는 연구 시작 전 현지 절차에 따라서 그리고 MHRA 인증 제도의 요건에 따라서 상세한 위험 관리 계획을 작성할 것이다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 위험 그룹 1 미생물로 정의되는 자연 발생 유기체이므로, 직원 및 환경에 대한 위험이 매우 낮다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 유전자 변형되지 않는다. 특정 생물학적 안전 요구 사항이 없다. 일반 임상 치료 이상의 직원에 대한 추가 요구 사항이 없으며 특정 격리 절차가 필요하지 않다. 전반적으로, 이것은 새로운 치료제 형태에 대한 FIH 연구이지만, 치료제는 구강, 비인두, GI 및 비뇨 생식기 점막 표면에서 일반적으로 발견되는 일반적인 자연 유기체이기 때문에, 일반적으로 내약성이 우수할 것이라고 예측된다. 프레보텔라 종은 기도(폐, 코, 목, 귀 감염)에 혐기성 감염을 일으킬 수 있고, 치주 질환 및 농양은 프레보텔라 종 감염과 연관될 수 있다. 임상 설정 및 항생제 민감성 시험에 따라 다양한 항생제를 사용하여 이러한 환자를 치료할 수 있다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 구제 요법(rescue therapy)으로 사용 가느할 페니실린 및 세팔로스포린과 같은 표준 항생제에 감응성이다. 참가자가 이러한 구제 요법에 알레르기가 있는 경우 마크로리드(예를 들어, 클라리스로마이신 또는 에리트로마이신) 또는 테트라시클린(예를 들어, 독시시클린)을 대안으로 사용할 수 있다.

정량적 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction: PCR) 및 균주-특이적 프라이머를 사용하여, 장관을 통과하는 동안 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 대한 생체 분포 연구 및 마우스에서 단일 경구 투여 후 전신 분포 수준 연구를 수행하였다. 동일한 샘플로부터의 총 공생 박테리아 부하를 또한 16초 분석으로 측정하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 경구 투여는 균주-특이적 PCR 프라이머에 의해 측정된 바와 같이 유기체의 존재비를 증가시켰지만, 총 상주 미생물 부하 수준보다 대략 6 로그만큼 상당히 낮은 수준을 유지하였다. 중요하게도, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 어느 시점에서도 GI관 외부에서 검출되지 않았고, 치료 후 최대 8시간 동안만 장에서 검출되었는데, 이는 이 박테리아가 단일 용량 후 장관내에서 장기간 집락을 확립하지 않음을 시사한다. 이러한 데이터는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 경구 투여 후 내강에 제한되며, 전신 노출은 검출되지 않음을 입증한다. 이론적으로 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 국소적인 소화관 염증 반응 및/또는 장 상피 접합부의 파괴를 유발할 수 있다. 이러한 효과는 증상(AE), CRP, 배변 습관의 변화(브리스톨 대변 척도) 및 분변 칼프로텍틴과 같은 방법에 의해서 인간에서 모니터링될 수 있다.

연구 집단

이 프로토콜은 건강한 지원자 및 경증 내지 중등도의 건선 또는 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참가자를 포함한다. 프로토콜 의무면제(waiver) 및 면제(exemption)라고도 하는 프로토콜 위반(protocol deviation)에 대한 잠정적 승인은 허용되지 않는다.

포함 기준

모든 참가자

참가자는 다음 기준이 모두 적용되는 경우에만 연구에 포함될 자격이 있다:

1. 사전동의 양식(informed consent form: ICF) 및 이 프로토콜에 열거된 요구 사항 및 제한 사항 준수를 포함한 부록 1에 기재된 바와 같이 서명된 사전동의를 제공할 수 있다. 임의의 스크리닝 절차 이전에 그리고 국가, 지역, 기관 지침에 따라 사전동의를 얻을 것이다.

2. 18세 이상 내지 60세 이상(이들 연령 포함).

3. 참가자는 스크리닝 시 체질량 지수가 18 ㎏/㎡ 이상 내지 35 ㎏/㎡ 이하이다.

4. 피임:

남성 참가자:

남성 참가자는 본 연구에 참여하는 동안 그리고 마지막 투여 후 90일 동안 본 프로토콜의 부록 4에 상세히 설명된 바와 같이 피임법을 사용하는 데 동의해야 하며, 이 기간 동안 정자 기증을 삼가야 한다.

여성 참가자:

여성 참가자는 임신 중이 아니고(부록 4 참조), 모유 수유 중이 아니고, 다음 조건 중 적어도 1개가 적용되는 경우 자격이 있다:

i. 부록 4에 정의된 가임기 여성(woman of child-bearing potential: WOCBP)이 아님

또는

ii. 본 연구에 참여하는 동안 부록 4의 피임 지침을 따르기로 동의한 WOCBP, 첫 번째 투여 전 28일 및 마지막 투여 후 적어도 1회의 완전한 월경 주기(30일 이상).

5. 연구자 또는 의뢰자에 의해 결과가 임상적으로 유의하지 않다고 간주되지 않는 한, 참가자는 시험 검사실에 대한 참조 범위 내에서 임상 검사실 평가(임상 화학, 혈액학 및 완전 소변검사 포함)를 받는다(1회 반복 시험 허용).

6. 10 ㎎/ℓ 이하의 CRP 및 110 mcg/g 대변 이하의 분변 칼프로텍틴(결과가 연구자에 의해서 임상적으로 유의하지 않은 것으로 간주되는 경우 약간 증가된 분변 칼프로텍틴을 갖는 참가자가 포함될 수 있음에 유의).

7. 스크리닝 시 그리고 제1일에 병력, 신체 검사, 검사실 검사 및 ECG 모니터링을 포함하는 의학적 평가에 의해 결정된 바와 같이 매우 건강한 참가자.

경증 내지 중등도의 건선을 갖는 참가자에 대한 추가 포함 기준

1. 참가자는 적어도 6개월 동안 체표면적(BSA)(두피 제외)의 10% 이하에 발생한 경증 내지 중등도의 플라크형 건선에 대해 확정 진단을 받았다.

2. 참가자는 생검에 적합한 부위에 적어도 1개의 플라크를 갖는 최소 2개의 건선 병변을 갖는다.

경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참가자에 대한 추가 포함 기준

1. 최소 3% 내지 최대 15% BSA 관련된 경증 내지 중등도 아토피성 피부염.

2. 참가자는 적어도 6개월 간의 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염(IGA 점수 2 또는 3)에 대해 확정 진단을 받았다.

3. 참가자는 생검에 적합한 부위에 적어도 1개를 갖는 최소 2개의 아토피성 피부염 병변을 갖는다.

제외 기준

모든 참가자

1. 임신 중이거나 연구 동안 임신 계획이 있거나, 모유 수유 중이거나, 부록 4에 제시된 바와 같은 매우 효과적인 피임법을 사용하지 않는 가임기이며 성생활을 하는 여성 참가자.

2. 참가자는 스크리닝 전 6주 이내에 약독화 생 백신접종을 제공받았거나 연구 과정에서 이러한 백신접종을 받으려고 의도한다.

3. 참가자는 연구 개입 투여 전에 90일 또는 5개의 반감기 중 더 긴 기간 동안 시험 약물 또는 실험 절차를 제공받았다.

4. 참가자는 연구 기간 동안 항염증제로 치료될 필요가 있다. 파라세타몰은 해열제 및/또는 진통제로 사용하도록 허용될 것이다(임의의 24시간 동안 최대 4 그램/일).

5. 참가자는 활성 감염(예를 들어, 패혈증, 폐렴, 농양)이 있거나 연구 개입 투여 전 6주 이내에 항생제 치료가 필요한 감염을 경험했다. 확실하지 않은 경우, 연구자는 의뢰자 연구 의사와 상의해야 한다.

6. 참가자는 하기에 정의된 신장 또는 간 장애를 갖는다:

a. 건강한 지원자의 경우:

i. 여성의 경우, 혈청 크레아티닌 수치 72 μ㏖/ℓ 이상; 남성의 경우 102 μ㏖/ℓ 이상, 또는

ii. 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) 및 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 1.5×정상 상한(ULN) 이상, 또는

iii. 알칼리 포스파타제(ALP) 및/또는 빌리루빈 1.5×ULN 초과.

b. 경증 내지 중등도의 건선 또는 아토피성 피부염을 갖는 참가자의 경우:

ii. ALT 또는 AST 2×ULN 초과 및/또는 빌리루빈 1.5×ULN 초과.

7. 참가자는 스크리닝 5년 이내에 활성 신생물 질환 또는 신생물 질환의 이력이 있다(표준 치료로 확정적으로 치료된 피부의 기저 또는 편평 세포 암종 또는 동소 암종 제외).

8. 이전 4주 이내에 주요 수술.

9. 하기 중 임의의 것을 포함하여, 손상된 심장 기능 또는 임상적으로 중요한 심장 질환:

a. 스크리닝 전 3개월 이내에 불안정 협심증 또는 급성 심근 경색;

b. 임상적으로 중요한 심장 질환(예를 들어, 증상이 있는 울혈성 심부전[예를 들어, 클래스 2 초과의 뉴욕 심장 학회[NYHA]]; 통제되지 않은 부정맥 또는 고혈압; 불안정한 고혈압 병력 또는 항 고혈압 요법에 대한 적응 불량).

10. 참가자는 인간 면역결핍 바이러스(HIV)의 알려진 병력을 갖고; 본 연구의 일부로서 HIV 검사가 필요하다.

11. 활동 A형 간염, B형 간염(HBV) 또는 C형 간염(HCV) 감염이라고 알려지거나; 또는 HCV 리보핵산(RNA) 또는 B형 간염 표면 항원(HBsAg)에 대해 양성인 것으로 알려짐.

12. 참가자는 활성 중추 신경계(CNS) 악성 종양이 있다. CNS 질환에 대해 예방적 척수강내 또는 정맥내 화학요법만 받은 참가자는 자격이 있다.

13. 참가자는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 GI 전달 및 통과 시간을 방해할 수 있는 GI관 질환(예를 들어, 단장 증후군, 설사 우세 과민성 대장 증후군[IBS])이 있다.

14. 조사관의 견해로 치료, 규정준수 또는 동의 능력을 방해할 수 있는 심각한 정신적 또는 의학적 병태.

15. 참가자는 임의의 관련 부형제를 포함하여 프레보텔라(또는 프레보텔라-함유 프로바이오틱스)에 과민증 또는 알레르기의 병력이 있거나 위약 캡슐(스테아르산마그네슘 및 셀룰로스) 또는 경질 캡슐 쉘(히드록실 프로필 메틸 셀룰로스 및 이산화티타늄)에 과민증 또는 알레르기 병력이 있다.

16. 참가자는 기준선 전(제-1일) 14일 이내에 파라세타몰 및 항히스타민제를 제외한 비타민, 허브 보충제 및 기능식품(예를 들어, 일반적으로 캡슐/정제/분말에서 발견되는 고용량의 프로바이오틱스 및 프리바이오틱스를 포함하는 보충제)을 포함하는 임의의 일반 의약품(OTC) 또는 처방 약물을 복용했거나, 연구 기간 동안 이러한 제품을 삼가할 수 능력이 없을 것으로 예상된다. 저용량을 함유한 프로바이오틱 및 프리바이오틱 식품(예를 들어, 요구르트, 케피어, 콤부차)은 허용된다는 것을 주목하기 바란다.

17. 참가자는 스크리닝 전 1년 이내에 상당한 약물 남용 또는 불법 약물의 정기적 사용 또는 알코올 남용의 이력이 있거나 스크리닝 시에 약물 남용 또는 알코올에 대해 양성으로 시험되었다.

18. 참가자는 본 연구 과정 동안 그리고 마지막 투여 후 90일 동안 정자를 기증할 의도이다.

19. 참가자는 기준선 전(제-1일) 90일 이내에 400 ㎖ 초과의 혈액 또는 혈액 제품을 기증했거나 연구 기간 동안 혈액을 기증할 계획이다.

20. 참가자는 연구 개입의 첫 번째 투여 전 30일 이내에 임상적으로 심각한 급성 질환을 앓았다.

경증 내지 중등도의 건선을 갖는 참가자에 대한 추가 제외 기준

1. 참가자는 스크리닝 전 4주 이내에 전신 비-생물학적 건선 요법(메토트렉세이트[MTX], 스테로이드, 사이클로포스파미드) 또는 소랄렌(psoralen)과 자외선 A(PUVA)/자외선 A(UVA) 광요법을 제공받았다.

2. 참가자는 제1 투여 전 12개월 이내에 생물학적 제제로의 치료를 제공받았다.

3. 참가자는 필요한 생검 및 질병 측정에 필요한 샘플 수집을 포함하여 프로토콜을 따르지 않는다.

4. 참가자는 투여 시작 2주 전에 국소 또는 경구 약리학적 활성제를 계속적으로 사용한다. 참가자가 이미 치료의 일부로 사용하고 있는 경우 완화제를 사용할 수 있다.

경증 내지 중등도의 아토피성 피부염을 갖는 참가자에 대한 추가 제외 기준

1. 참가자는 전신-비생물학적 아토피성 피부염 요법(MTX, 스테로이드, 사이클로포스파미드)을 제공받고 있거나, 스크리닝 전 4주 이내에 요법을 제공받았다.

1.4. 생활방식 제한

코호트 1에서, 참가자는 다중 투여 기간에서 제-1일(제1 투여 24시간 전)부터 제1 투여 후 48시간까지 5박 동안 연구 유닛에 머물도록 요청받는다. 참가자는 기준선 방문 전(제-1일) 14일 동안 그리고 추적관찰 방문 완료까지 파라세타몰 및 항히스타민제(연구자 및 의뢰자의 의견으로 이 약물이 연구를 방해하지 않는 한)를 제외한, 처방 약물 또는 OTC 약물(캡슐/정제/분말, 비타민 및 식이 또는 허브 보충제에서 일반적으로 발견되는 고용량의 프로바이오틱스 및 프리바이오틱스 포함)을 복용하지 않아야 한다. 저용량을 함유한 프로바이오틱 및 프리바이오틱 식품(예를 들어, 요구르트, 케피어, 콤부차)은 허용된다는 것을 주목하기 바란다. 참가자는 투여 전후 1시간 동안 산성 음료 섭취를 금지하고, 투여 2시간 전 및 투여 후 1시간까지 음식 섭취를 금지해야 한다. 이 외에는, 이 프로토콜에는 생활방식 제한이 없다.

1.5. 스크리닝 실패

스크리닝 실패는 임상 연구 참여에 동의했지만, 이후에 연구 개입에 무작위로 배정되지 않았거나 연구에 참여하지 않은 참가자로 정의된다. 시험 보고 통합 표준(Consolidated Standards of Reporting Trials: CONSORT) 공개 요구 사항을 충족하고 규제 당국으로부터의 질문에 응답하기 위해 스크리닝 실패 참가자의 투명한 보고를 보장하기 위해서 최소한의 스크리닝 실패 정보 세트가 필요하다. 최소한의 정보는 인구통계학, 스크리닝 실패 세부 정보, 자격 기준 및 임의의 SAE를 포함한다.

본 연구에서 참여를 위한 기준을 충족하지 않은 개인(스크리닝 실패)은 그들이 포함 기준 #5, 제외 기준 #2, 3, 5, 16 또는 20 및/또는 경증 내지 중등도의 건선 또는 아토피성 피부염을 갖는 환자에 대한 추가 제외 기준 # 1, 2 및 4에 포함되지 않는 경우 재스크리닝될 수 있다. 모든 참가자의 재스크리닝은 재검사 전에 의료 모니터가 동의해야 한다. 재스크리닝된 참가자는 초기 스크리닝에서와 같이 새로운 참가자 번호가 배정될 것이다.

참가자는 또한 그들이 처음에 스크리닝 평가를 통과했지만 28일의 스크리닝 기간 시간 제한을 초과하는 경우 재스크리닝될 수 있다.

2. 연구 개입

연구 개입은 연구 프로토콜에 따라 연구 참가자에게 투여되도록 의도된 임의의 연구 개입(들), 시판 제품(들), 위약 또는 의료 디바이스(들)로 정의된다.

2.1. 투여된 연구 개입

본 연구의 모든 연구 개입은 경구 투여될 것이다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 캡슐은 십이지장에서 내용물을 방출하도록 장용 코팅되어 공급될 것이다. 3가지 용량 수준의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 제공될 것이다:

용량 수준 1 = 추정 치료 용량의 1/10

용량 수준 2 = 전임상 데이터에 기초하여 최대 1× 추정 치료 용량

용량 수준 3 = 전임상 데이터에 기초하여 최대 5× 추정 치료 용량

매칭된 위약 캡슐이 공급될 것이다. 참가자는 투여 1시간 전후에 산성 음료 섭취가 금지되고, 투여 2시간 전 및 투여 후 1시간까지 음식 섭취가 금지되어야 한다. 주요 정보의 요약은 아래 표 5를 참조하거나 더 자세한 내용은 약국 매뉴얼을 참조하기 바란다.

2.2. 제조/취급/보관/책임

모든 캡슐은 블리스터 팩으로 공급되며, 2 내지 8℃의 제어된 조건에서 유지되어야 한다.

1. 연구자 또는 피지명인은 제공받은 모든 연구 개입에 대해 보관 및 운송 동안 적절한 온도 조건이 유지되었으며, 연구 개입을 사용하기 전에 임의의 이탈이 보고되고 해결되었는지 확인해야 한다.

2. 연구에 등록된 참가자만 연구 개입을 제공받을 수 있으며 승인된 현장 직원만 연구 개입을 공급하거나 관리할 수 있다. 모든 연구 개입은 연구자 및 승인된 현장 직원에게만 접근이 제한된 라벨링된 보관 조건에 따라서 안전하고, 환경적으로 제어되고, 모니터링되는 (매일 최소 및 최대 온도를 표시하는 능력을 갖는 수동 또는 자동화된) 영역에 보관해야 한다.

3. 연구자는 연구 개입 책임, 조정 및 기록 유지(즉, 수령, 조정 및 최종 처분 기록)에 대한 책임이 있다.

4. 사용하지 않은 연구 개입의 최종 처분에 대한 추가 지침 및 정보는 약국 매뉴얼에 제공된다.

2.3. 편향 최소화 조치: 무작위화 및 맹검

이것은 무작위 대조 연구이기 때문에, 코호트 내 치료 할당은 무작위이다. 무작위 치료는 선택 편향 최소화를 보장하여, 2개의 치료군 내의 개인은 이들이 제공받는 치료 이외에, 체계적으로 상이하지 않다. 참가자에게 연구 개입을 배정하기 위해 종이 무작위 배정이 사용될 것이다.

연구 개입에 관한 정보가 참가자의 의학적 치료에 필요하지 않는 한 연구자는 조사 약물 맹검을 파손해서는 안 된다.

참가자의 맹검을 해제하기 위해서, 봉인된 봉투를 개봉함으로써 조사 약물 맹검을 얻을 수 있다.

조사 약물 맹검이 파손된 경우 의뢰자에게 즉시(24시간 이내) 통지해야 한다. 맹검이 파손된 날짜, 시간 및 이유를 적절한 증례 기록서(Case Report Form: CRF)에 기록해야 한다.

2.4. 연구 개입 준수

약물 공급은 반환되기 전에 연구 현장에서 계수되고, 조정될 것이다.

연구자는 연구에 전체 참여하는 동안 제공받고, 분배된 모든 연구 개입에 대해 100% 책임을 유지해야 한다. 적절한 약물 책임은 다음이 포함되지만 이에 제한되지 않는다:

만료 날짜 또는 재시험 날짜가 연구자에게 제공된 경우 만료 날짜를 지속적으로 모니터링한다.

실제 물품 목록이 문서화된 물품 목록과 일치하는지 자주 확인한다.

각각의 용량을 준비하는 데 사용된 약물 로트에 대한 로그가 완성되었는지 확인한다.

사용된 모든 컨테이너 및/또는 팩이 로그에 정확하게 문서화되었는지 확인한다.

필요한 필드가 정확하고 읽기 쉽게 완성되었는지 확인한다.

분배 오류 또는 불일치가 발견되면, 의뢰자에게 즉시 공지해야 한다.

연구자는 현장에 전달된 모든 연구 개입의 현재 물품 목록(약물 책임 로그), 현장 물품 목록, 분배 로그 및 참가자의 사용 기록을 유지해야 한다. 이 로그는 항상 연구 개입의 약물 책임을 정확하게 반영해야 한다. 다음 정보는 최소로 기록될 것이다: 연구 개입을 분배하고, 제공받는 사람의 이니셜을 포함하여, 프로토콜 번호 및 제목, 연구자 이름, 현장 식별자 및 번호, 연구 개입 설명, Med ID 번호, 만료 또는 재시험 날짜 및 분배된 양, 참여자에 의해 현장으로 반환된 날짜 및 양. 로그는 연구 개입이 분배된 각각의 참가자에 대해 별도의 항목으로 필요한 모든 정보가 포함되어야 한다.

현장 폐쇄 전 또는 적절한 간격으로, 의뢰자 또는 이의 피지명인으로부터의 대표자는 임상 연구 자료가 폐기를 위해 의뢰자 또는 이의 피지명인에게 반환되기 전에 임상 연구 자료 책임 및 조정을 수행할 것이다. 연구자는 임상 연구 자료의 책임, 반환 및/또는 파기에 관한 원본 문서를 보관하고, 사본을 의뢰자에게 보낼 것이다.

연구자는 연구 수행 동안 임상 연구 자료의 만료 날짜 또는 재시험 날짜의 임의의 변경에 대해 통지를 받을 것이다. 의뢰자 또는 피지명인의 만료일 통지 시, 현장은 폐기를 위해 의뢰자 또는 피지명인에게 반환하기 위해 만료된 임상 연구 자료의 분리를 포함하여 통지에 요약된 모든 지침을 완료해야 한다. 연구 현장에 이미 있는 소모품의 만료 날짜가 연장된 경우, 소모품을 해당 현장의 새로운 만료일로 재라벨링할 수 있다. 이러한 경우, 의뢰자 또는 이의 피지명인은 현장에서 절차를 완료하기 위해 추가 라벨, 분석 인증서 및 모든 필요한 문서를 준비할 것이다.

2.5. 병용 요법

참가자는 연구자 및 의뢰자의 의견으로 이 약물이 연구를 방해하지 않는 한 연구 개입의 시작 전 14일 이내에 그리고 추적관찰 방문 완료까지 처방 약물 또는 OTC 약물(캡슐/정제/분말, 비타민 및 식이 또는 허브 보충제에서 일반적으로 발견되는 고용량의 프로바이오틱스 및 프리바이오틱스 포함)을 복용하지 않아야 한다. 저용량을 함유한 프로바이오틱 및 프리바이오틱 식품(예를 들어, 요구르트, 케피어, 콤부차)은 허용된다는 것을 주목하기 바란다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B 이외의 조사용 작용제는 연구 동안 허용되지 않는다. 연화제를 제외하고 건선 또는 아토피성 피부염에 대한 약리학적 활성 치료는 금기되며, 연구 시작 적어도 2주 전에 중단해야 한다.

OTC 약물을 포함하여, 참가자의 치료에 절대적으로 필요한 것으로 간주되는 임의의 병용 약물의 사용은 GI 통과 시간 또는 기능에 대해 알려진 효과가 없는 경우 연구 동안 허용된다. 면역억제제의 사용은 사례별로 연구자와 의료 모니터 간에 논의되어야 한다. 호르몬 피임약은 WOCBP에서 허용된다(호르몬 피임약은 에스트로겐 및/또는 프로게스테론 작용제를 포함하는 시판되는 임의의 피임약을 포함한다).

참가자가 등록 시에 제공받고 있거나 연구 동안 제공받은 모든 약물 또는 백신(OTC 또는 처방약, 프로바이오틱스 및/또는 허브 보충제 포함)은 다음과 함께 기록되어야 한다:

사용 이유

시작일 및 종료일을 포함한 투여 날짜

투여 및 빈도를 포함한 투여량 정보

날짜, 절차 설명 및 해당되는 경우 임의의 임상 소견을 포함하여, 연구 기간 동안 수행된 임의의 진단, 치료 또는 수술 절차가 기록되어야 한다. 병용 요법 또는 사전 요법에 관한 질문이 있는 경우 의료 모니터에게 연락해야 한다.

항히스타민제 및 4 g/일 이하(임의의 24시간 기간 동안)의 파라세타몰 용량은 연구 동안 언제든지 사용된다. 필요한 경우 의료 모니터와 상담하여 연구자가 사례별로 다른 병용 약물을 고려할 수 있다. 본 연구에 참여할 의향이 있는 건선 또는 아토피성 피부염을 갖는 참가자는 첫 번째 연구 개입 용량 2주 전에 국소 또는 경구 약리학적 활성제를 복용해서는 안 된다. 참가자가 이미 치료의 일부로 사용하고 있는 경우 완화제를 사용할 수 있다.

참가자는 순전히 본 연구에 참여하기 위한 것이 아니라 약물의 내약성 또는 효과가 없기 때문에 현재 약물을 중단할 의사가 있어야 한다. 이것은 참가자의 메모에 명확하게 문서화되어야 한다.

2.5.1. 구제 의약

임상 상황에서 이것이 필요하다고 제안하는 경우 연구 현장에 적절한 항생제를 공급할 것이다. 다음 구제 의약을 사용할 수 있다:

1. 페니실린 V

2. 아목시실린

또는 상기 약물에 알레르기가 있는 경우:

3. 마크로리드(예를 들어, 클라리스로마이신 또는 에리트로마이신)

4. 테트라시클린(예를 들어, 독시시클린)

추가 대체 항생제의 사용은 의료 모니터와 논의할 수 있다.

구제 약물 투여일 및 투여 시간, 구제 약물의 명칭 및 투여 요법을 기록해야 한다.

2.6. 용량 증량 및 전환

각각의 참가자에 대해 단일 용량에서 다중 용량으로의 전환을 허용하는 결정은 책임 연구자(또는 대리인) 및 의료 모니터에 의해 행해질 것이다.

적어도 9명의 참가자가 명시된 용량 수준의 다중 투여 기간을 완료한 경우 용량 증량 결정을 수행할 것이다. 용량 증량 결정을 구현하기 위해서, 입수 가능한 AE 및 검사실 검사 데이터를 용량 결정 회의 또는 원격 회의에서 평가한다. 다음 용량 코호트에서의 약물 투여는 연구자가 의뢰자로부터 이전 용량 코호트의 결과가 평가되었고, 다음 더 높은 용량 코호트로 진행하는 것이 허용된다는 것을 나타내는 서면 확인을 받을 때까지 진행되지 않을 수 있다. 용량 증량 증가는 상기 표 5에 기재된 바와 같이 최대 10배일 것이다. 이 증가의 근거는 프레보텔라가 일부 집단에서 총 미생물 부하의 최대 50%에 도달할 수 있는 인간 공생 유기체라는 사실에 기초하는데[De Filippo, 2010], 이는 참가자에게 최소한의 위험이라는 것을 시사한다.

2.6.1. 중단 규칙

안전성 데이터는 이러한 중단 규칙에 대해 지속적으로 평가될 것이다. 연구자 또는 의뢰자가 이러한 사건 중 임의의 것이 중등도 또는 중증이고, 연구 치료와 관련될 가능성이 있다고 간주하는 경우, 해당 참가자(들)에 대한 치료는 맹검 해제되어 그들이 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 제공받고 있었는지를 결정할 것이다. 활성 치료 중인 참가자에 대해 다음 기준 중 1개 이상이 충족되면 용량 증량은 중단되고 다른 참가자는 이 용량 또는 더 높은 용량을 제공받지 않는다. 용량을 증량하기 전에, 검토 및 승인을 위해 윤리 위원회(Ethics Committee) 및 MHRA에 수정된 프로토콜을 제출한다.

1명의 참가자가 연구 개입과 관련된 SAE를 경험한다.

1명 초과의 참가자가 연구 개입과 관련된 심한 강도의 설사가 없는 AE를 경험한다.

동일한 군의 2명의 참가자는 연구 개입과 관련된 중간 강도의 동일한 AE를 경험한다.

동일한 군의 2명의 참가자가 20 ㎎/ℓ 이상의 CRP 또는 165 mcg/g 이상의 분변 칼프로텍틴과 같은 GI 점막 장벽 파괴의 증거 및 배변 습관 또는 다른 국소 비내약성의 다른 지표의 상당한 변화를 경험한다.

1.5×ULN 초과의 1명의 참가자의 혈청 크레아티닌 및 결과는 초기 샘플의 24시간 이내에 채취한 반복에서 확인된다.

1명의 참가자가 미국 식품의약국(FDA)이 Industry Drug Induced Liver Injury: Premarketing Clinical Evaluation[FDA, 2009]에서 정의한 약물 유발 간 손상에 대한 다음 기준을 충족한다.

o 간세포 손상(AST 또는 ALT의 경우 ULN보다 3배 이상 증가); 및

o 담즙정체(2×ULN 초과의 혈청 ALP 활성)의 초기 소견 없이 혈청 총 빌리루빈이 2×ULN 초과까지 상승; 및

o 증가된 트랜스아미나제 및 혈청 총 빌리루빈(예컨대, 바이러스성 간염, 기존 또는 급성 간 질환 또는 관찰된 손상을 유발할 수 있는 또 다른 약물 등)의 조합을 설명할 수 있는 어떠한 다른 이유도 발견될 수 없다.

48 내지 72시간 후에 반복 샘플에서 임상적으로 우려되는 트랜스아미나제 및 빌리루빈의 상승을 확인해야 한다.

2명의 참가자가 3×ULN 이상의 AST 또는 ALT 또는 2×ULN 초과까지의 또는 혈청 총 빌리루빈 상승을 경험한다.

책임 연구자(또는 대리인) 또는 의뢰자는 다른 이유로 증량을 중단하기로 결정할 수 있다.

상기 중 하나를 경험하는 참가자는 AE가 해결될 때까지 추적관찰될 것이다.

공식 문서화된 안전성 검토는 다음과 같이 수행될 것이다:

1. 감시군에서 다중 투여 기간으로 진행하기 전에 각각의 감시군에서 투여 후 적어도 46시간.

2. 해당 코호트의 나머지를 투여하기 전에 감시군에서 다중 투여의 적어도 3회 투여 후.

3. 다음 용량 수준으로 증량하기 전에 각각의 용량 수준에서 코호트 완료 후.

4. 환자로 진행하기 전.

문서화된 안전성 검토를 위한 데이터 요구 사항

안전성 검토는 다음 데이터(표 6)에 기초할 것이며, 이것은 모두 실질적으로 가능한 한 확인되고, 품질 관리(QC'd)되어야 한다.

용량 증량 증분은 제안된 것(즉, 10배)을 초과할 수 없다. 그러나 필요한 경우 더 낮은 용량 증량, 용량 감소 및 반복 용량 수준이 허용된다. 새로운 용량 수준은 책임 연구자(또는 대리인) 및 의료 모니터가 동의할 것이다.

2.7. 연구 종료 후 개입

연구 개입의 마지막 투여 후 제14일에 안전성 방문인 연구 종료 후 특정 개입이 계획되지 않는다. 미생물군 분석을 위한 샘플은 연구 개입의 마지막 투여 후 14일 또는 이 시점에 가능한 한 가깝게(즉, 48시간 이내) 최종 안전 방문에서 수집될 것이다.

3. 연구 개입의 중단 및 참가자 중단/철회

3.1. 연구 개입의 중단

비정상적인 간 기능에 대한 연구 개입의 중단은 참가자가 부록 6에 요약된 조건을 충족하거나 연구자가 이것이 참가자에게 최선의 이익이라고 믿는 경우 연구자에 의해서 고려되어야 한다.

등록 후 임상적으로 유의한 소견이 확인되면(프리데리시아식(Fridericia’s formula)[QTcF]을 사용하여 수정된 QT 간격의 기준선으로부터의 변화를 포함하지만 이에 제한되지 않음), 연구자 또는 자격이 있는 피지명인은 참가자가 연구를 계속할 수 있는지의 여부 및 참가자 관리의 임의의 변경이 필요한지의 여부를 결정한다. 수집 시기에 인쇄된 이러한 ECG의 검토는 문서화되어야 한다. 임의의 새로운 임상 관련 소견은 AE로 보고되어야 한다. 개입 중단 및 추적관찰 시 수집될 데이터 및 완료할 필요가 있는 임의의 추가 평가에 대해서는 SoA를 참고하기 바란다.

3.1.1. 일시적 중단

투여는 최대 48시간의 기간 동안 AE 또는 병발성 질병으로 인해 연구자의 재량에 따라 일시적으로 중단될 수 있으며, 그 다음 참가자는 연구자가 그렇게 하는 것이 안전하다고 생각하는 경우 나머지 용량으로 계속 진행될 수 있다. 참가자는 그것이 두 번째로 발생할 경우 영구적으로 중단해야 한다.

3.1.2. 재시험

간 또는 심장 효과로 중단된 참가자에 대한 재시험은 허용되지 않는다.

3.2. 참가자 중단/연구로부터의 철회

참가자는 자신의 요청 시에는 언제든지 연구를 철회할 수 있고, 안전성, 행동, 규정 준수 또는 관리의 이유로 연구자의 재량에 따라 언제든지 철회할 수 있다. 연구를 철회한 임의의 참가자는 최소 120명의 평가 가능한 참가자를 달성하기 위해 교체될 수 있다.

참가자가 향후 정보 공개에 대한 동의를 철회하는 경우 의뢰자는 이러한 동의 철회 이전에 수집된 모든 데이터를 보유하고 계속 사용할 수 있다.

참가자가 연구를 철회하는 경우, 그는 채취하고 시험하지 않은 임의의 샘플의 폐기를 요청할 수 있으며, 연구자는 이를 현장 연구 기록에 문서화해야 한다.

연구를 철회한 참가자는 SoA에 설명된 바와 같이 추적관찰 방문을 위한 평가를 완료해야 한다.

3.3. 추적관찰 실패

참가자가 반복적으로 예정된 방문을 위해 돌아오지 않고 연구 현장에서 연락할 수 없는 경우 추적관찰에 실패한 것으로 간주된다. 추적관찰 방문은 마지막 투여 후 적어도 14일에서 최대 28일이어야 한다.

참가자가 요구된 연구 방문을 위해 병원에 돌아오지 않는 경우 다음 조치를 취해야 한다:

현장은 참가자에게 연락을 시도하고, 가능한 한 빨리 누락된 방문 일정을 재조정해야 한다. 참가자에게 모든 방문에 참석하는 것의 중요성을 상기시키고, 참석에 문제가 있는 경우 참가자가 연구를 계속하기를 원하는지 그리고/또는 연구를 계속해야 하는지 여부를 확인하기 위해 논의해야 한다.

참가자를 추적관찰에 실패한 것으로 간주하기 전에 연구자 또는 피지명인은 참가자와 다시 연락하기 위해 모든 노력을 기울여야 한다(가능한 경우, 3회의 전화 통화를 시도하고, 필요한 경우 참가자의 마지막으로 알려진 주소로 인증된 편지를 보내거나 이에 준하는 현지 기준의 방법을 사용함). 이러한 연락 시도는 참가자의 기록에 문서화되어야 한다.

참가자에게 계속 연락할 수 없으면, 그가 연구를 철회한 것으로 간주한다.

4. 연구 평가 및 절차

연구 절차 및 이의 시기는 SoA에 요약되어 있다. 프로토콜 의무면제 또는 면제는 허용되지 않는다.

즉각적인 안전성 문제는 참가자가 연구 개입을 계속해야 하는지 또는 중단해야 하는지를 결정하기 위해 발생 또는 인지 즉시 의뢰자와 논의되어야 한다.

SoA에 명시된 것을 비롯하여 연구 설계 요구 사항을 준수하는 것이 연구 수행에 필수적이며 요구된다.

모든 스크리닝 평가를 완료하고, 검토하여 잠재적 참가자가 모든 자격 기준을 충족하는지 확인해야 한다. 연구자는 스크리닝된 모든 참가자의 세부 정보를 기록하고, 적격성을 확인하거나 해당되는 경우 스크리닝 실패 이유를 기록하기 위해 스크리닝 로그를 유지할 것이다.

참가자의 일상적인 임상 관리(예를 들어, 혈구 수치)의 일부로 수행되고 ICF에 서명하기 전에 얻은 절차는 그 절차가 프로토콜에 명시된 기준을 충족하고, SoA에 정의된 시간 프레임 내에서 수행되는 한 스크리닝 또는 기준선 목적을 위해서 사용될 수 있다.

요구될 수 있는 임의의 추가 평가를 포함하여 연구 기간 동안 각각의 참가자로부터 수집된 최대 혈액량은 400 ㎖를 초과하지 않을 것이다. 안전성 이유로 또는 샘플의 기술적인 문제로 인해 반복 또는 예정에 없는 샘플을 채취할 수 있다.

반복 또는 예정에 없는 방문은 연구자의 재량에 따라 수행될 수 있지만 모든 세부 사항은 CRF에 기록되어야 한다.

4.1. 효능 평가

코호트 3, 4, 5, 6 및 7에 대해서만, 다음 효능 측정치가 SoA에 제공된 바와 같은 계획된 시점에서 투여 후 수집될 것이다.

PASI 종합 점수(건선 참가자만)

EASI 종합 점수(아토피성 피부염 참가자만)

LSS - 병변 중증도 점수

IGA - 연구자의 종합 평가

SCORAD - 아토피성 피부염 지수

건선 또는 아토피성 피부염에 의해 영향을 받는 BSA의 백분율은 또한 PASI 및 EASI 측정치에 해당하는 계획된 시점에서 수집될 것이다(전신의 %로 기록됨).

또한 기준선에서 병변 면적이 2×2 ㎝ 이상인 최대 6개의 병변 부위를 사진 찍어야 한다. 기준선, 제10일, 제30일 및 추적관찰 방문 시 동일한 부위를 촬영해야 한다.

4.2. 안전성 평가

모든 안전성 평가에 대한 계획된 시점이 SoA에 제공된다.

4.2.1. 신체 검사

완전한 신체 검사는 최소한 심혈관, 호흡기, GI 및 신경계에 대한 평가를 포함한다. 신장(스크리닝 시에만) 및 몸무게를 또한 측정하고, 기록할 것이다.

연구자는 이전의 심각한 질병과 관련된 임상 징후에 특별한 주의를 기울여야 한다.

4.2.2. 활력 징후

혈압, 맥박, 호흡률 및 구강 체온을 평가할 것이다.

혈압 및 맥박 측정치는 완전히 자동화 디바이스로 앉은 자세에서 평가될 것이다.

혈압 및 맥박 측정치는 방해 요소(예를 들어, 텔레비전, 휴대 전화)가 없는 조용한 환경에서 참가자를 위해 적어도 5분의 휴식이 선행되어야 한다.

활력 징후(투여 및/또는 임의의 절차 전에 확인해야 함)는 1회의 맥박 및 3회의 혈압 측정으로 이루어질 것이다(3개의 연속적인 혈압 판독값을 적어도 1분 간격으로 기록할 것이다). 3개의 혈압 판독값의 평균을 CRF에 기록할 것이다.

4.2.3. 심전도

심박수를 자동으로 계산하고, PR, QRS, QT 및 수정된 QT(QTc) 간격을 측정하는 ECG 기계를 사용하여 SoA(본 명세서 참조)에 설명된 바와 같이 단일 12-리드 ECG를 얻을 것이다. QTc 철회 기준 및 필요할 수 있는 임의의 추가 QTc 판독값에 대해서는 본 명세서 다른 섹션을 참고하기 바란다.

각각의 시점에서 3회 반복 ECG가 요구되며, 3개의 개별 ECG 추적을 가능한 한 가깝게 그러나 2분 이하의 간격을 두면서 연속적으로 얻는다. 3회 반복의 전체 세트는 4분 이내에 완료되어야 한다.

투여 후 ECG를 투여 후 2시간 이내에 수행해야 한다.

4.2.4. 임상 안전성 검사실 평가

수행할 임상 검사실 검사 목록 및 시간 및 빈도에 대한 SoA는 부록 2를 참고하기 바란다.

연구자는 검사실 보고서를 검토하고, 이 검토를 문서화하고, CRF의 AE 섹션에서 연구 동안 발생한 임의의 임상적으로 관련된 변경을 기록해야 한다. 검사실 보고서는 근거 문서(source document)와 함께 제출해야 한다. 임상적으로 유의한 비정상적인 검사실 소견은 연구자가 참가자의 병태에 대해 예측한 것보다 더 심각한 것으로 판단하지 않는 한 기저 질환과 연관되지 않는 것이다.

연구에 참여하는 동안 또는 연구 개입의 마지막 투여 후 28일 이내에 임상적으로 유의하게 비정상적으로 간주된 값을 갖는 모든 검사실 검사 값이 정상 또는 기준선으로 복귀하거나 연구자 또는 의료 모니터에 의해 더 이상 임상적으로 유의하지 않은 것으로 간주될 때까지 반복되어야 한다.

o 연구자가 합리적으로 판단한 시간 기간 내에 이러한 값이 정상/기준선으로 복귀하지 않으면, 병인을 식별하고 의뢰자에게 통지해야 한다.

o 부록 2에 정의된 바와 같은 모든 프로토콜-요구 검사실 평가는 현지 절차에 더하여 검사실 매뉴얼 및 SoA에 따라 수행되어야 한다.

o 기관의 현지 검사실에서 수행된 비-프로토콜 지정된 검사실 평가의 검사실 값이 참가자 관리의 변경을 필요로 하거나 연구자가 임상적으로 중요하다고 간주하는 경우(예를 들어, SAE 또는 AE 또는 용량 수정), 결과는 CRF에 기록되어야 한다.

4.3. 이상 반응 및 중대한 이상 반응

AE 또는 SAE의 정의는 부록 3에서 찾을 수 있다.

AE는 참가자(또는 적절한 경우 간병인, 대리인 또는 참가자의 법적으로 위임된 대리인)에 의해 보고될 것이다.

연구자 및 임의의 자격을 갖춘 피지명인은 AE 또는 SAE의 정의를 충족하는 사건을 감지, 문서화 및 기록할 책임이 있고, 연구 개입 또는 연구 절차와 관련된 것으로 간주되는 중대한 AE 및 참가자가 연구 개입을 중단하게 만든 원인을 추적관찰할 책임이 있다(본 명세서 참고).

4.3.1. AE 및 SAE 정보를 수집하기 위한 시간 간격 및 빈도

모든 AE 및 SAE는 스크리닝 시 ICF의 서명에서부터 SoA(본 명세서)에 명시된 시점의 추적관찰 방문(마지막 투여 후 14 내지 28일)까지 수집될 것이다.

연구 개입 시작 전이지만 사전동의를 얻은 후에 시작되는 의학적 사건은 AE 섹션이 아닌 CRF의 병력/현재 의학적 병태 섹션에 기록될 것이다.

모든 SAE는 부록 3에 제시된 바와 같이, 24시간 이내에 기록되고 의뢰자 또는 피지명인에게 보고될 것이다. 연구자는 임의의 업데이트된 SAE 데이터를 입수한 후 24시간 이내에 의뢰자에게 제출할 것이다.

연구자는 연구 참여 종료 후 AE 또는 SAE를 적극적으로 찾을 의무는 없다. 그러나 연구자가 참가자가 연구를 끝낸 후 언제든지 사망을 포함한 임의의 SAE에 대해 알게 되고, 그 사건이 연구 개입 또는 연구 참여와 합리적으로 관련이 있다고 생각하는 경우, 연구자는 즉시 의뢰자에게 통지해야 한다.

AE 및 SAE의 인과관계를 기록, 평가 및 평가하는 방법 및 SAE 보고서를 완성하고 전송하는 절차는 부록 3에 제공된다.

4.3.2. AE 및 SAE의 검출 방법

AE 및/또는 SAE를 검출할 때 편향을 도입하지 않도록 주의할 것이다. 참여자에 대한 개방형 및 비선도적 구두 질문이 AE 발생에 대해 문의하는 데 선호되는 방법이다.

4.3.3. AE 및 SAE의 추적관찰

초기 AE/SAE 보고 후, 연구자는 후속 방문/접촉에서 각각의 참가자를 사전에 추적관찰할 필요가 있다. 모든 SAE는 그 사건이 달리 설명되지 않는 한 해결, 안정화까지 또는 참가자가 추척관찰되지 않을 때까지(본 명세서에 정의됨) 추적관찰될 것이다. 추적관찰 절차에 대한 추가 정보는 부록 3에 제공되어 있다.

4.3.4. SAE에 대한 규제 보고 요건

연구자가 SAE의 의뢰자에게 즉시 통지하는 것은 참가자의 안전성 및 임상 조사 중인 연구 개입의 안전성에 대한 법적 의무 및 윤리적 책임이 충족되도록 하는 데 필수적이다.

의뢰자는 임상 조사 중인 연구 개입의 안전성에 대해 지역 규제 당국 및 기타 규제 기관에 통지할 법적 책임이 있다. 의뢰자는 규제 당국, 생명윤리위원회(Institutional Review Boards: IRB)/독립 윤리 위원회(Independent Ethics Committees: IEC) 및 연구자에 대한 안전 보고와 관련된 국가-특이적 규제 요건을 준수할 것이다.

연구자 안전성 보고서는 현지 규제 요건 및 의뢰자 정책에 따라 의심되는 예상치 못한 심각한 부작용(SUSAR)에 대해 작성하고 필요에 따라 연구자에게 전달해야 한다.

의뢰자로부터 SAE 또는 기타 특정 안전성 정보(예를 들어, SAE 요약 또는 목록)를 기재한 연구자 안전성 보고서를 받은 연구자는 검토한 다음 IB와 함께 그것을 제출하고, 적절한 경우 현지 요건에 따라 IRB/IEC에 통지할 것이다.

4.3.5. 임신

여성 참가자의 모든 임신에 대한 세부 정보는 연구 개입이 시작된 후 그리고 임신이 끝날 때까지 수집될 것이다.

임신이 보고된 경우, 연구자는 임신을 알게 된 후 24시간 이내에 의뢰자에게 알려야 하고, 부록 4에 요약된 절차를 따라야 한다.

비정상적인 임신 결과(예를 들어, 자연 유산, 태아 사망, 사산, 선천성 기형 및 자궁외 임신)는 SAE로 간주된다.

4.3.6. 심혈관 및 사망 사건

관련성 평가에 관계없이 모든 사망은 임의의 추가 참가자에게 투여되기 전에 SRC에서 긴급하게 검토될 것이다. 모든 사망 및 심혈관 사건은 인과관계 평가와 관계없이 MHRA에 보고될 것이다.

4.3.7. AE 또는 SAE로서 자격이 없는 질환-관련 사건 및/또는 질환-관련 결과

환자 집단의 기전 또는 지식에 대한 이해에 기초하여 예측되는 AE는 존재하지 않는다.

4.4. 과다복용의 치료

본 연구의 경우, 24시간 기간 내에 해당 코호트에 대해 지정된 1일 용량보다 더 많이 복용된 프레보텔라 히스티콜라 균주의 임의의 용량이 과다복용으로 간주될 것이다.

의뢰자는 감염 및/또는 대장염의 증거가 없는 한 과다복용에 대한 특정 치료를 권장하지 않는다. 임상 상황이 타당한 경우, 의뢰자는 과다복용의 경우에 사용될 수 있는 페니실린계 항생제(예를 들어, 페니실린 V)의 사용을 권장할 것이다.

과다복용의 경우에, 연구자는 다음을 수행해야 한다:

1. 과다복용을 알게 된 즉시 의료 모니터에게 연락한다.

2. 72시간 동안 또는 그것이 해결될 때까지 중에서 더 긴 기간 동안 모든 AE/SAE 및 검사실 이상에 대해 참가자를 면밀히 모니터링한다.

3. 초과 투여의 양 및 과다복용의 기간을 CRF에 문서화한다.

투여 중단 또는 수정에 관한 결정은 참가자의 임상 평가에 기초하여 의료 모니터와 상의하여 연구자가 행할 것이다.

4.5. 약동학

특정 약동학(PK) 매개변수는 요법의 특성으로 인해 본 연구에서 평가되지 않는다. 히스티콜라 균주 B는 경구 투여되고, 노출은 소환관에 제한되므로 전신 노출은 예상되지 않는다. 연구를 통해 전신 흡수의 부재를 확인하기 위해 샘플을 채취하지만, 특정 PK 매개변수는 유도되지 않을 것이다. 미생물군 샘플의 경우 집락화가 예상되지 않는 경우에도 집락화 확인을 위해서 본 연구(본 명세서 참조) 동안 분석될 것이다.

4.6. 약력학

400 ㎖를 초과하지 않는 정맥혈 샘플을 SoA에 따른 평가 측정을 위해 수집할 것이다.

피부 생검 샘플을 SoA에 따라 기준선 및 제30일에 환자 코호트에서 채취할 것이다. 이것은 4 ㎜ 펀치 생검일 것이다.

미생물군 다양성 및 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 측정을 위해 분변 샘플을 기준선(투여일 전 임의의 시간), 단일 및 다중 투여 기간 종료 시 그리고 마지막 투여 후 제14일 내지 제28일에 수집할 것이다.

4.7. HLA 검사

DNA 단리를 위한 2개의 혈액 샘플을 참가자로부터 수집할 것이다. 하나의 샘플은 HLA 상태에 대해 분석되고, 다른 하나는 수행될 수 있는 추가 분석에 대해 분석될 것이다.

이러한 샘플의 수집, 선적 및 폐기 과정에 대한 세부 사항은 검사실 매뉴얼에서 찾을 수 있다.

4.8. 바이오마커

다른 바이오마커 연구를 위한 샘플 수집이 또한 본 연구의 일부이다. 다음 바이오마커 연구 샘플이 필요하며, SoA에 명시된 바와 같이 본 연구의 모든 참가자로부터 수집될 것이다.

o 혈액

o 피부

o 대변

혈액 샘플을 사용하여 사이토카인의 순환 수준을 측정하고, 생체외 항원 자극 검정에서 선천 및 후천 면역계의 반응성을 평가할 수 있다. 혈액 샘플은을 또한 전사체 프로파일링에도 사용할 수 있다.

피부 샘플을 조직학적 분석할 것이며, 여기서 관련 샘플은 IHC 및 전사 분석을 수행한다.

미생물군-기반 치료의 일부로 사용되는 경우 유익한 효과가 있을 수 있는 추가 미생물을 식별하기 위한 연구에 다른 샘플을 사용할 수 있다.

4.8.1. RNA 전사체 연구

선택된 혈액 및 피부 샘플에 대해 전사체 연구를 수행할 것이다. 이것은 건선 또는 아토피성 피부염의 개선 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 작용과 관련된 생물학적 반응과 상관관계가 있을 수 있는 전사체 프로파일의 변화를 평가할 수 있을 것이다.

동일한 샘플을 사용하여 대체 기술의 적용에 의한 소견을 확인할 수도 있다.

4.8.2. 미생물군 연구

치료 중 또는 치료 중단 후 개인의 미생물군에 대한 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효과를 이해하기 위해 대변 및 분변액 분석을 수행할 수 있다. 반응에 현저한 가변성이 있는 경우 미생물군 내 특정 미생물과 약물 반응의 연관성을 또한 조사할 수 있다. 미생물군 분석은 질문에 따라 16s 서열분석 및/또는 전체 게놈 미생물 서열분석을 통해 수행될 것이다.

5. 통계학적 고려 사항

모든 분석은 SAS^® 버전 9.3 이상(SAS Institute, 미국 노쓰캐롤라이나주 캐리 소재)을 사용하여 수행될 것이다.

용량 코호트에 의한 안전성 및 효능 평가변수를 요약하기 위해 기술적인 통계가 제공될 것이다. 범주 변수의 경우, 적절한 경우 각각의 카테고리 내의 참가자의 빈도 및 백분율에 대한 요약 표를 양측 95%의 정확한 신뢰 구간(CI)과 함께 제시될 것이다. 연속 변수의 경우, 참가자 수, 평균, 중앙값, 표준편차(SD), 최소값 및 최대값이 제시될 것이다.

5.1 샘플 규모 결정

본 FIH 연구의 주요 목적은 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다. 모집될 최소 참가자 수(코호트 1 내지 코호트 7)는 총 120명이고, 최대 참가자 수는 총 132명이지만, 필요한 경우 추가 대체자가 등록될 수 있다. 연구를 철회한 임의의 참가자는 최소 120명의 평가 가능한 참가자를 달성하기 위해 교체될 수 있다.

샘플 규모는 이러한 새로운 치료의 내약성 및 안전성을 조사하면서, 최소 참가자 수에 대한 노출을 제한하기 위해 선택되었다. 공식적인 검정력 계산은 수행되지 않았지만 질환-관련 효능 매개변수에 대해 유용한 결론을 도출할 수 있도록 코호트 4 내지 코호트 7에 대해 더 큰 샘플 규모가 결정되었다.

5.2. 분석용 집단

분석을 위해 다음과 같은 집단이 정의된다:

모든 집단에서, 치료는 무작위 배정된 치료에 관계없이 참가자가 실제로 제공받은 치료를 기반으로 배정될 것이다.

5.3. 통계학적 분석

통계 분석 계획(Statistical Analysis Plan: SAP)은 데이터베이스 잠금 전에 개발 및 완료되며, 분석에 포함될 참가자 집단 및 누락, 미사용 및 허위 데이터를 설명하는 절차에 대해 설명한다. 본 섹션은 1차 평가변수 및 2차 평가변수의 계획된 통계학적 분석의 요약이다.

5.3.1. 효능 분석

효능 분석은 안전성 또는 평가 가능한 집단에 대해 수행될 것이다(추가 상세사항은 SAP에 명시될 것임).

5.3.2. 안전성 분석

모든 안전성 분석은 안전성 집단에 대해서 수행될 것이다.

5.3.4. 다른 분석

약력학 및 바이오마커 탐색적 분석은 데이터베이스 잠금 전에 완성된 SAP에 기재될 것이다. 집단 약력학 분석은 주요 임상 연구 보고서(CSR)와 별도로 제시될 것이다.

5.3.4. 안전성 검토 위원회(SRC)

책임 연구자(또는 대리인), 의료 모니터, 통계학자 및 의뢰자의 임상 리드로 이루어진 SRC는 맹검 안전성 데이터를 검토하고, 연구 및 용량 증량 단계에 대한 거버넌스를 제공할 것이다. SRC는 코호트 1 내지 코호트 3의 경우 각각의 코호트가 끝날 때 다음 투여 수준으로 진행할지의 여부를 결정할 것이며, 이들은 타당한 경우 코호트 또는 용량 증량 단계를 생략하기로 결정할 수 있다. 책임 연구자(또는 대리인) 및 의료 모니터는 각각의 참가자에 대해 단일 용량에서부터 다중 용량까지의 전환을 각각의 코호트 내에서 검토할 것이다. 의뢰자 또는 책임 연구자(또는 대리인)가 필요하다고 판단하는 경우 특별 SRC 회의가 소집될 수 있다. 절차에 대한 자세한 설명은 별도의 SRC 헌장에 설명되어 있다. 코호트 3이 성공적으로 완료되고 계속하기로 한 SRC의 결정에 따라서, 코호트 4 내지 코호트 7은 동시에 실시되거나 또는 입수 가능한 약물 공급의 사용을 최적화하는 순서로 실시될 수 있다. 각각의 코호트가 완료된 후 안전성 데이터 검토가 수행되지만, 코호트 4 내지 코호트 7에서 한 코호트에서 다음 코호트로 이동할 필요는 없다.

문서화된 검토는 본 명세서에 명시된 시기에 수행될 것이다.

6. 지원 문서 및 운영 고려 사항

6.1. 부록 1: 규제, 윤리 및 연구 감독 고려 사항

6.1.1. 규제 및 윤리 고려 사항

본 연구는 프로토콜 및 다음 사항에 따라 수행될 것이다.

o 헬싱키 선언문 및 국제 의학 기구협회(Council for International Organizations of Medical Sciences: CIOMS) 국제 윤리 지침을 포함한 국제 지침으로부터 도출한 합의된 윤리 원칙

o 적용 가능한 국제 조화 위원회(Applicable International Council for Harmonization: ICH) 우수 임상 관행(GCP) 지침

o 관련 법률 및 규정

프로토콜, 프로토콜 수정, ICF, IB 및 기타 관련 문서(예를 들어, 광고)는 연구자가 IRB/IEC에 제출하고, 연구가 시작되기 전에 IRB/IEC에 의해서 검토 및 승인되어야 한다.

프로토콜에 대한 임의의 수정은 연구 참가자에 대한 즉각적인 위험을 제거하는 데 필요한 변화를 제외하고는, 연구 설계에 대한 변화를 구현하기 전에 IRB/IEC 승인이 필요할 것이다.

연구자는 다음 사항에 대한 책임이 있다:

o IRB/IEC에 의해서 확립된 요구 사항, 정책 및 절차에 따라 매년 또는 더 자주 연구 상태에 대한 서면 요약을 IRB/IEC에 제공한다.

o IRB/IEC 절차에서 요구되는 바와 같은 SAE 또는 기타 중요한 안전성 결과를 IRB/IEC에 통지한다.

o 현장에서 연구 수행을 감독하고 21 CFR, ICH 가이드라인, IRB/IEC, 임상 연구에 대한 유럽 규정 536/2014(해당되는 경우) 및 기타 모든 해당 지역 규정의 요구 사항을 준수한다.

6.1.2. 사전동의 과정

연구자 또는 대표자는 연구의 성격을 참가자 또는 법적으로 위임된 대리인에게 설명하고 연구에 관한 모든 질문에 답변한다.

참가자는 자신의 참여가 자발적임을 알려야 한다. 참가자 또는 법적으로 위임된 대리인은 21 CFR 50, 현지 규정, ICH 지침, 건강 보험 양도 및 책임에 대한 법안(Health Insurance Portability and Accountability Act: HIPAA) 요구 사항(해당되는 경우) 및 IRB/IEC 및 연구 현장의 요구 사항을 충족하는 사전동의서에 서명해야 한다.

의료 기록은 참가자에게 연구에 등록하기 전에 사전동의를 얻었다는 진술 및 서면 동의를 얻은 날짜가 포함되어야 한다. 사전동의를 얻은 위임된 사람이 또한 ICF에 서명해야 한다.

참가자는 연구에 참여하는 동안 최신 버전의 ICF에 다시 동의해야 한다.

ICF 사본은 참가자 또는 참가자의 법적으로 위임된 대리인에게 제공되어야 한다.

재스크리닝되는 참가자는 28일의 스크리닝 기간 제한을 초과했기 때문에 재스크리닝을 받지 않는 한 새로운 ICF에 서명할 것이 요구된다.

ICF는 집중된 유전자 및 바이오마커 연구를 위한 샘플(예를 들어, HLA 샘플)의 사용을 다루는 섹션을 포함할 것이다. 연구자 또는 위임된 대리인은 각각의 참가자에게 연구 목적을 설명할 것이다.

6.1.3. 데이터 보호

의뢰자는 참가자에게 고유한 식별자를 배정한다. 의뢰자에게 전송되는 임의의 참가자 기록 또는 데이터세트는 식별자만 포함할 것이고; 참가자 성명 또는 참가자를 식별 가능하게 하는 어떠한 정보도 전송되지 않을 것이다.

참가자는 자신의 개인 연구-관련 데이터가 해당 데이터 보호법에 따라 의뢰자에 의해 사용될 것이라는 것에 대해 설명받아야 한다. 공개 수준도 참가자에게 설명해야 한다.

참가자는 자신의 의료 기록이 임상 품질 보증 감사관 또는 의뢰자 저장한 기타 위임된 직원, 적절한 IRB/IEC 회원 및 규제 당국의 검사관에 의해 조사될 수 있음에 대해서 설명받아야 한다.

6.1.4. 위원회 구조

본 연구를 위해 구성된 유일한 위원회는 SRC이며 본 명세서에 설명이 열거되어 있다.

6.1.4. 임상 연구 데이터의 보급

6.1.6. 데이터 품질 보증

연구와 관련된 모든 참가자 데이터(예를 들어, 검사실 데이터)는 의뢰자 또는 피지명인에게 전자적으로 전송되지 않는 한 전자 CRF(eCRF)에 기록될 것이다. 연구자는 CRF에 물리적 또는 전자적으로 서명하여 데이터 입력이 정확하고 정확한지 확인할 책임이 있다.

연구자는 CRF에 입력된 정보를 뒷받침하는 정확한 문서(근거 데이터(source data))를 유지해야 한다.

연구자는 연구-관련 모니터링, 감사, IRB/IEC 검토 및 규제 기관 검사를 허용하고, 근거 데이터 문서에 대한 직접적인 접근을 제공해야 한다.

의뢰자 또는 피지명인은 데이터의 품질 확인을 포함하여 본 연구의 데이터 관리에 책임이 있다.

연구 모니터는 위임된 현장 직원이 CRF에 입력한 데이터가 정확하고, 완전하며, 근거 문서에서 검증할 수 있는지; 참가자의 안전 및 권리가 보호되고 있는지; 현재 승인된 프로토콜 및 기타 연구 계약, ICH GCP 및 모든 해당 규제 요건에 따라 연구가 수행되고 있는지를 확인하기 위해 지속적인 근거 데이터 검증을 수행할 것이다.

서명된 ICF를 포함하여 본 연구의 수행과 관련된 기록 및 문서는 현지 규정 또는 기관 정책이 더 긴 보관 기간이 요구되지 않는 한 연구 완료 후 15년 동안 연구자가 보관해야 한다. 의뢰자의 서면 승인 없이 보관 기간 동안 어떠한 기록도 파기할 수 없다. 의뢰자에게 서면 통지 없이 기록을 다른 장소 또는 당사자에게 양도할 수 전달할 수 없다.

6.1.7. 근거 문서

근거 문서는 참가자의 존재에 대한 증거를 제공하고 수집된 데이터의 무결성을 입증한다. 근거 문서는 연구자의 현장에 제출된다.

근거 문서에서 기록된 eCRF에 입력된 데이터는 근거 문서와 일치해야 하거나 불일치가 설명되어야 한다. 연구자는 연구에 따라 이전 의료 기록 또는 이관 기록을 요청해야 할 수 있다. 또한 현재 의료 기록이 입수 가능해야 한다.

근거 데이터를 구성하는 것에 대한 정의는 원본 데이터 계약 양식에서 찾을 수 있다.

6.1.8. 연구 및 현장 폐쇄

의뢰자는 의뢰자의 단독 재량에 따라 언제든지 어떤 이유로든 연구 현장을 폐쇄하거나 연구를 종료할 수 있는 권리를 갖는다. 연구 현장은 연구 완료 시 폐쇄될 것이다. 연구 현장은 모든 요구 문서 및 연구 용품이 수집되고 연구 현장 폐쇄 방문이 수행되었을 때 폐쇄된 것으로 간주된다.

연구자는 합리적인 이유가 있고, 의도된 종료에 앞서 충분한 통지가 제공되는 경우 언제든지 연구 현장 폐쇄를 시작할 수 있다.

의뢰자 또는 연구자가 연구 현장을 조기에 폐쇄하는 이유는 다음을 포함할 수 있지만 이들로 제한되지 않는다:

연구자가 프로토콜, IRB/IEC 또는 지역 보건 당국의 요구 사항, 의뢰자의 절차 또는 GCP 지침을 준수하지 않는 경우

연구자에 의한 부적절한 참가자 등록

추가 연구 개입 개발 중단

6.1.9. 공개 정책

공개 정책에 대한 완전한 세부 사항은 의뢰자와 연구자 간의 계약서에 제공된다. 요약: 본 연구의 결과는 공개되거나 과학 회의에서 발표될 수 있다. 이것이 예상되는 경우, 연구자는 모든 원고 또는 초록을 제출하기 적어도 30일 전에 의뢰자에게 제출하는 데 동의한다. 이는 의뢰자가 독점 정보를 보호하고, 특허권을 보호하기 위해 필요한 경우 공개를 연기하고, 의견을 제공하는 것을 가능하게 한다.

의뢰자는 본 명세서에 상술된 바와 같은 연구 결과의 공개에 대한 요구 사항을 준수할 것이다. 표준 편집 및 윤리적 관행에 따라, 의뢰자는 일반적으로 현장 데이터가 아닌 전체에 대해서만 다중현장 연구의 출판을 지원한다. 이 경우, 상호 협의에 의해서 조정 연구자를 지정할 것이다.

저자는 상호 합의에 의해서 그리고 국제 의학 저널 편집자 위원회(International Committee of Medical Journal Editors) 저자 자격 요건에 따라 상호 합의에 따라 결정된다.

6.2. 부록 2: 임상 검사실 검사

표 7에 자세히 설명된 검사의 대부분은 연구 현장 또는 지정된 공급업체에서 수행될 것이다. 추가 검사를 수행할 수도 있다.

참가자의 포함 또는 제외에 대한 프로토콜-특이적 요구 사항은 프로토콜에 자세히 설명되어 있다.

연구자가 필요하다고 판단하거나 현지 규정에서 요구하는 경우 연구 동안 언제든지 추가 검사를 수행할 수 있다.

연구자는 각각의 검사실 안전성 보고서의 검토를 문서화해야 한다.

6.3. 부록 3: 이상 반응: 기록, 평가, 추적관찰 및 보고에 대한 정의 및 절차

AE의 정의

SAE의 정의

AE 및/또는 SAE의 기록 및 추적관찰

SAE의 보고

6.4. 부록 4: 피임 지침 및 임시 정보 수집

정의:

가임기 여성(WOCBP)

여성은 영구적으로 불임이 아닌 한 초경 이후 그리고 폐경 후가 될 때까지 가임기로 간주된다(하기 참고).

다음 카테고리의 여성은 WOCBP로 간주되지 않는다:

1. 초경 전

2. 다음 중 1개를 갖는 폐경 전 여성:

문서화된 자궁적출술

문서화된 양측 난관 절제술

문서화된 양측 난소 절제술

주석: 문서화는 참가자의 의료 기록, 건강 검진 또는 병력 인터뷰에 대한 현장 직원의 검토로부터 유래할 수 있다.

3. 폐경 후 여성

폐경 후 상태는 대체 의학적 원인 없이 12개월 동안 월경이 없는 상태로 정의된다. 폐경 후 범위의 높은 난포 자극 호르몬(follicle stimulating hormone: FSH) 수치는 호르몬 피임 또는 호르몬 대체 요법(hormonal replacement therapy: HRT)을 사용하지 않는 여성의 폐경 후 상태를 확인하는 데 사용할 수 있다. 그러나, 12개월의 무월경의 부재 하에서, 단일 FSH 측정은 불충분하다.

HRT 중이고, 폐경기 상태가 의심되는 여성은 연구 동안 HRT를 계속하기를 원할 경우 비에스트로겐 호르몬의 매우 효과적인 피임법 중 하나를 사용해야 한다.

피임 지침:

남성 참가자는 다음 중 하나를 수행해야 한다.

평소 선호하는 생활 방식으로서의 음경-질 성교를 금하고(장기적이고 지속적으로 금욕), 금욕을 유지하는 데 동의한다.

연구에 참여하는 동안 그리고 연구 약물의 마지막 투여 후 90일 동안 음경 삽입의 각각의 에피소드 동안 남성 콘돔을 사용한다. 또한 남성 참가자는 연구 기간 및 최종 방문 후 최소 90일 동안 정자 기증을 삼가야 한다.

여성 참가자

가임기 여성 참가자는 표 8에 기재된 바와 같이 매우 효과적인 피임 방법을 일관되고 정확하게 사용하는 데 동의하는 경우 참가 자격이 있다.

임신 검사:

WOCBP는 확인된 월경 기간 후 그리고 음성 혈청 HCG 임신 검사 후에만 포함되어야 한다.

임신 검사는 스크리닝, 무작위 배정 및 추적관찰 방문 시 마지막 투여 후 14일에 요구된다.

임신 검사는 월경 주기를 건너뛰거나 달리 임신이 예상되는 경우에 수행될 것이다.

임신 정보 수집:

임신한 파트너가 있는 남성 참가자

연구자는 남성 참가자가 본 연구에 참여하는 동안 임신한 남성 참가자의 여성 파트너에 대한 임신 정보를 수집하려고 시도할 것이다. 이는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 제공받는 모든 남성 참가자에게 적용된다.

임신한 여성 파트너로부터 직접 필요한 사전동의 사인을 얻은 후, 연구자는 파트너의 임신을 알게 된 후 24시간 이내에 적절한 양식에 임신 정보를 기록하고, 이를 의뢰자에게 제출할 것이다. 임신 결과를 결정하기 위해 여성 파트너가 또한 추적관찰될 것이다. 산모 및 아이의 상태에 대한 정보가 의뢰자에게 전달될 것이다. 일반적으로, 추적관찰은 추정된 전달일로부터 8주를 초과하지 않을 것이다. 임의의 임신 중절은 태아 상태(기형 유무) 또는 절차에 대한 표시에 관계없이 보고될 것이다.

임신한 여성 참가자

연구자는 본 연구에 참여하는 동안 임의의 임신한 여성 참가자에 대한 임신 정보를 수집할 것이다. 정보는 참가자의 임신 사실을 알게 된 후 24시간 이내에 적절한 양식에 기록되고, 의뢰자에게 제출될 것이다. 참가자를 추적관찰하여 임신 결과를 결정할 것이다. 연구자는 참가자 및 신생아에 대한 추적관찰 정보를 수집하고, 정보를 의뢰자에게 전달할 것이다. 일반적으로, 추정된 전달일을 지나서 6 내지 8주를 초과하지 않을 것이 요구될 것이다. 임의의 임신 중절은 태아 상태(기형 유무) 또는 절차에 대한 표시에 관계없이 보고될 것이다.

임신 자체는 AE 또는 SAE로 간주되지 않지만, 임의의 임신 합병증 또는 선택적 임신 중절은 AE 또는 SAE로 보고될 것이다. 자연 유산은 항상 SAE로 간주되고, 따라서 보고될 것이다. 연구자의 연구 개입과 합리적으로 관련이 있다고 간주되는 연구 후 임신 관련 SAE는 본 명세서에서와 같이 의뢰자에게 보고될 것이다. 연구자는 이전 연구 참가자에서 이 정보를 적극적으로 찾을 의무가 없지만, 자발적 보고를 통해 SAE에 대해 알 수 있다.

본 연구에 참여하는 동안 임의의 임신한 여성 참가자는 연구 개입을 중단하거나 연구에서 철회될 것이다.

6.5. 부록 5: HLA 검사

DNA의 사용/분석

유전자 변이는 연구 개입에 대한 참가자의 반응, 질환에 대한 감수성, 중증도 및 진행에 영향을 미칠 수 있다. 연구 개입에 대한 가변적인 반응은 약물 흡수, 분포, 대사 및 배설에 영향을 미치는 유전적 결정인자; 약물 작용 기전; 질환 병인학; 및/또는 치료될 질환의 하위유형으로 인한 것일 수 있다. 따라서 현지 규정 및 IRB/IEC가 허용하는 경우, 동의한 참가자로부터 DNA 분석을 위해 혈액 샘플을 수집할 것이다.

HLA 검사를 위해 하나의 샘플이 분석될 것이다. 두 번째 샘플은 이것이 임상 데이터를 더 이해하는 데 도움이 될 수 있다고 가정되는 경우 수행될 수 있는 추가 분석을 위해 채취될 것이다.

샘플은 연구 질환 또는 관련 병태를 이해하기 위해서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 또는 이러한 부류의 연구 개입에 대한 반응과 관련된 유전 인자의 다중 연구 평가의 일부로 분석될 수 있다.

유전자 분석 결과는 CSR에 보고될 수 있다.

의뢰자 또는 이의 대리인은 기밀을 보호하기 위한 적절한 조치와 함께 안전한 보관 공간에 DNA 샘플을 보관할 것이다.

샘플은 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 대한 연구 또는 이러한 부류 또는 적응증의 연구 중재가 계속되는 동안 보유될 것이지만, 12개월 또는 현지 요구 사항에 따른 다른 기간을 초과하지 않을 것이다.

6.6. 부록 6: 간 안전성: 제안된 조치 및 추적관찰 평가

6.6.1. 건강한 지원자

건강한 지원자는 ALT 또는 AST가 3×ULN을 초과하고/하거나 빌리루빈이 2×ULN을 초과하는 경우 투여를 중단해야 한다. 비정상적인 간 기능 검사(LFT)가 정상 수준 내로 복귀될 때까지 LFT 모니터링을 수행해야 한다. 간 이상의 바이러스/감염성 원인을 제외하기 위해서 일상적인 조사를 수행해야 한다.

6.6.2. 경증 내지 중등도의 건선 또는 아토피성 피부염을 갖는 참가자

ALT 또는 AST가 3×ULN을 초과하고/하거나 빌리루빈이 2×ULN을 초과하는 경우 두 병태 중 하나를 갖는 참가자는 투여를 중단해야 한다. 비정상적인 LFT가 정상 수준 내로 복귀될 때까지 LFT 모니터링을 수행해야 한다. 간 이상의 바이러스/감염성 원인을 제외하기 위해서 일상적인 조사를 수행해야 한다.

6.7. 부록 8: 약어

7. 참고문헌

예비 결과:

- 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 내약성이 우수하였고, 위약과의 전반적인 차이는 보고되지 않았다.

- 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 투여된 환자는 위약에 비해 평균 병변 중증도 점수가 감소한 것으로 나타났다.

- 임상 반응과 일치하는 세포 조직학적 및 혈액 면역 세포 바이오마커에서 관찰된 감소

경증 내지 중등도의 건선을 갖는 12명의 환자를 2:1로 무작위 배정하여 28일 동안 프레보텔라 히스티콜라 균주 B, 또는 위약 550 ㎎(1×용량)을 매일 경구 투여하였다. 1차 평가변수는 안전성 및 내약성이었다. 2차 평가변수 및 탐색적 평가변수는 임상 활성의 척도인 병변 중증도 점수(LSS), 28일 투여 기간의 시작과 끝에서 각각 생검 및 혈액 샘플로부터 취한 세포 조직학적 바이오마커 및 혈액 면역 세포 바이오마커를 포함하였다.

28일 동안 매일 550 ㎎의 장용 캡슐 제형의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 투여받은 환자가 위약을 제공받은 환자에서의 0.25점의 평균 증가와 비교하여, 28일에 2점의 평균 LSS의 통계학적으로 유의한(p<0.05) 감소를 나타내었다(도 1a). 도 1b는 연구 과정에 걸친 병변 중증도 점수(LSS)의 평균 백분율 변화를 도시한다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 투여받은 환자로부터의 데이터는 투여 기간에 걸쳐서 0 내지 67% 범위의 LSS의 감소를 나타내었다(도 2). 2차 평가변수인 LSS는 건선 부위 중증도 지수(PASI) 점수의 성분이고, 투여 기간 동안 개별 건선 병변의 발적, 두께 및 스케일링을 측정하고, 경증 내지 중등도 질환을 갖는 환자에 대한 민감한 임상 척도이다.

2차 평가변수이고, 건선 병리의 세포 드라이버인 기저 상피 유사분열 수의 투여 기간에 따른 변화 분석은, 위약을 제공받은 환자에서의 변화가 없는 경우와 비교하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B을 제공받은 환자에서 평균 2.25 세포/㎟ 감소를 나타내었다(도 3). 더 낮은 기저 상피 유사분열 수는 건선 병리의 감소를 나타낸다.

탐색적 평가변수인 지질다당류로 자극한 후 혈액 면역 세포 사이토카인 생산의 분석에서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 투여 환자군은 위약군에서의 감소가 없는 경우와 비교하여 전신 항염증 반응을 나타내는 사이토카인 생산의 감소를 나타내었다(도 4). 검출된 사이토카인: IL10, IL8, TNFα, IL6, IL1B, IFN-γ.

1상 연구:

본 연구는 약 108명의 건강한 지원자 및 경증 또는 중등도의 건선 또는 아토피성 피부염을 갖는 환자에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 안전성 및 내약성을 평가하기 위해 설계된 이중 맹검 위약 대조 1b상 시험이다. 하기에 정의된 2차 평가변수 및 탐색적 평가변수는 질환의 임상적 측정 및 다양한 바이오마커에 대한 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효과를 포함한다. 등록은 2.76 g(5x 용량)의 장용 캡슐 제형을 투여받을 경증 내지 중등도의 건선 환자의 코호트에서 진행 중이다. 건선 환자의 하나의 추가 코호트 및 아토피성 피부염 환자의 하나의 코호트는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 새로운 제형이 투여될 예정이다.

2상 임상 시험:

의뢰자는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 2상으로 발전시킬 계획이다. 본 시험은 경증 내지 중등도의 건선에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 1일 투여량을 조사하기 위해 설계된다. 임상시험의 1차 평가변수는 24주에 걸쳐 PASI 점수가 감소할 것으로 예측되며, 중간 분석은 중간 분석으로 12주이거나 또는 16주 초과이다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 다중 용량 및 제형이 조사될 것이다. 임상시험의 파트 A는 최적의 제형을 선택하기 위해서 설계되며, 대략 180명의 환자에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 장용 캡슐 제형과 새로운 제형을 위약과 비교하여 시험할 것이다. 연구의 파트 B는 대략 250명의 환자에서 24주 또는 16주 동안 위약에 대해 최적의 제형의 다중 용량을 시험할 것이다.

고용량 1b상 임상시험에서 건선을 갖는 환자에서의 추가 긍정적 중간 임상 데이터

경증에서 중등도의 건선을 갖는 18명의 환자(예를 들어, 대상체)를 2:1로 무작위 배정하여 이들에게 2.76g(5×또는 고용량)의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 또는 위약을 28일 동안 매일 경구로 제공하였다. 1차 평가변수는 안전성 및 내약성이었다. 2차 평가변수 및 탐색적 평가변수는 임상 활성의 척도인 병변 중증도 점수(LSS), 건선 부위 중증도 지수(PASI)뿐만 아니라 각각 투여 기간의 시작과 끝에서 생검 및 혈액 샘플로부터 취한 세포 조직학적 바이오마커 및 혈액 면역 세포 바이오마커를 포함하였다. 안전성 및 내약성 및 2차 임상 평가변수를 투여 완료 2주 후인 제42일에 측정하였다.

병변 중증도 점수(LSS)는 건선에서 질환 변화의 민감한 임상 척도이다. LSS는 PASI 점수 시스템의 기본 성분이며, 단일 건선 병변에서 병변 심각도의 근본적인 변화를 측정한다. LSS는 동일한 개별 병변에 대해 12점 척도로 발적, 두께 및 스케일링을 측정한다. LSS는 일반적으로 개별 병변이 상당히 심각할 수 있지만 신체 표면에 비해서 영향을 받은 전체 면적이 작을 수 있는 경증 내지 중등도 질환을 갖는 환자에 대해 보다 민감한 척도로 간주된다. 또한 기준선으로부터의 더 작은 변화를 검출할 수 있기 때문에 투여 기간이 짧을 때 더 민감하다.

PASI(건선 부위 중증도 지수)는 LSS와 동일한 건선 피부 병변의 근본 변화를 측정하지만, 모든 피부 병변에 걸쳐 이러한 변화를 캡처하고 신체의 각각의 영역에 영향을 받는 체표면적에 의한 점수를 가중한다. PASI는 면적 커버리지 및 플라크 외관에 기초한 건선 병변의 중증도를 측정하기 위한 정량적 평가 점수이다. PASI는 이 평가를 0(질환 없음) 내지 72(최대 질환) 범위의 단일 점수로 조합한다. 신체는 4개 부분(머리, 팔, 몸통, 다리)으로 나뉜다. 평균 병변 중증도 점수 및 병변에 의해 영향을 받는 면적은 이러한 면적 각각에 대해 개별적으로 평가되고, 그 다음 4개의 점수에 가중치를 부여하고, 최종 PASI 점수로 조합된다.

LSS 및 PASI는 강하게 상관되며, 동시에 이동할 것으로 예상될 것이다.

결과:

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 이 코호트에서 계속 내약성이 우수하였고, 위약과의 전반적인 차이는 보고되지 않았다. 28일의 투여 기간이 끝날 때, 고용량 코호트는 저용량 코호트에서 이전에 보고된 데이터와 일치하는 LSS의 평균 감소를 나타내었다.

투여 기간 완료 2주 후, 제42일에 고용량 코호트는 평균 LSS 및 PASI 둘 다에서 기준선으로부터 지속적인 감소를 나타내었는데, 이는 지속적인 임상 효과 및 용량 반응을 나타낼 수 있다.

LSS 및 PASI 결과의 요약을 하기 표 9 및 표 10에 제시한다.

고용량 코호트에서 다양한 조직학적 및 분자 바이오마커를 측정하였는데, 코호트 수준에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 임상 효과와 일치하는 경향이 있었다.

도 5는 고용량 코호트로부터의 LSS 데이터를 나타낸다. 그래프는 28일의 투여 기간 동안 관찰된 LSS의 변화 및 제42일의 후속 2주 추적관찰을 플로팅한다. 저용량 및 고용량 코호트 둘 다로부터의 위약 아암을 함께 나타내었다. 이는 비대칭 2:1 무작위화에 대한 수정을 가능하게 하고, 위약 데이터의 견고성을 향상시킨다.

제28일에 고용량의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 복용한 환자에서 기준선으로부터 15%의 평균 LSS 감소가 인지되었다. 투여 완료 2주 후, 제42일에, 평균 LSS 감소는 24%까지 계속되었는데, 이는 지속적인 임상 효과 및 용량 반응을 시사한다.

도 6은 관찰된 LSS 변화가 28일의 투여 기간 동안 고용량(2.76 g) 및 저용량(550 ㎎) 코호트 사이에서 일관되었음을 나타낸다. 그러나, 제42일에 저용량 코호트는 거의 기준선으로 복귀되었고, 고용량에서는 감소가 계속되었다. 다시, 이는 지속적인 임상 효과 및 가능한 용량 반응을 시사한다.

도 7은 고용량 코호트의 환자 각각에 대해 제42일에 기준선으로부터 LSS의 개별 변화를 나타낸다.

하단에는 수치 점수가 존재하는데, 이는 추적된 병변에 대한 기준선 LSS이다. 해당 점수에 대해 주목할 몇 가지 사항:

- 위약이 투여된 환자들 또는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 투여된 환자들 사이에는 기준선 차이가 없다.

- 환자의 체표면적과 관련하여 환자는 경증으로 분류되었지만, 추적된 실제 병변은 상당히 활성인 질환이었다.

- 이 환자들의 대부분은 12점 중에서 8점 내지 10점 사이이다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 제공받은 12명의 환자 중 9명은 LSS의 감소를 나타내었고, 이 9명의 환자 중 7명은 감소가 25% 이상이었다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 투여된 군에서 관찰된 최대 반응은 80% 감소였다.

42일에 이 효과의 크기는 짧은 기간 및 환자가 요법을 중단한 지 2주 후에 측정되었다는 사실을 고려할 때 현저하다.

도 8 및 도 9는 동일한 투여 기간 동안 PASI 데이터의 분석을 나타낸다.

도 8은 집단 PASI 결과를 나타낸다:

- 고용량에서 평균 감소는 28일에 16%이다. PASI 감소는 투여 중단에도 불구하고 다음 2주 동안 계속 개선되었고, 제42일의 감소는 21%였다.

- PASI 점수에 대한 관찰된 효과는 LSS에서 관찰된 경향과 매우 일치하였다.

도 9는 고용량 코호트의 환자 각각에 대해 제42일에 기준선으로부터 PASI의 개별 변화를 나타낸다.

하단에는 기준선 PASI 점수가 표시되어 있는데, 이것은 이들 환자에 존재하는 PASI에 의해 측정된 바와 같은, 경증 수준 질환을 반영하는 1.2 내지 18의 낮은 범위이다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B 치료된 환자에서 최대 61%의 PASI 감소가 관찰되었다.

이러한 중간 데이터는 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 환자를 위한 새로운 요법으로서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 잠재력을 강력하게 뒷받침한다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 계속 내약성이 우수하였다.

투여 후 2주에, LSS의 평균 감소는 23%였고, PASI의 평균 감소는 21%였으며, 최대 관찰된 감소는 각각 80% 및 61%였다.

요법 28일 후 건선에서 경구 투여된 단일 균주 공생 미생물의 안전성 및 효능: 프레보텔라 히스티콜라 균주 B

개요 및 목적:

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 인간 공여자의 십이지장으로부터 단리된 프레보텔라 히스티콜라의 단일 균주의 약제학적 제제로 제조되었다. 그것은 시험관내 인간 면역 세포 및 생체내 마우스 모델에서 강력한 항염증 효과를 갖는다. 전임상적으로, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 TNF, IL-6 및 IL-17을 포함한 다수의 사이토카인을 전신적으로 억제한다. 이러한 효과는 IL-10 신호전달에 의존적이며, FoxP3의 증가된 상피 발현과 연관된다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 소장과 신체의 나머지 사이의 연결망인 소장 축에 작용한다. 그것은 전신 흡수 없이 전신 치료 효과를 도출한다. 소장 점막 내의 상피 세포 및 수지상 세포는 내강의 내용물을 지속적으로 샘플링한다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 노출되면, 이들 세포는 사이토카인 신호전달 및 T-세포 수송(trafficking)을 통해 전신에서 염증을 조절한다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 키홀 림펫 헤모시아닌 지연형 과민증, 이미퀴모드-유도 피부 염증 및 실험적 자가면역 뇌척수염을 포함한 건선-관련 전임상 마우스 모델에서 타입 1 및 타입 3 염증을 유의하게 감소시켰다.

물질 및 방법:

프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 2:1 활성:위약으로 무작위 배정된 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 환자 12명 및 18명 환자의 2개 용량 코호트를 포함하는 1b상 임상 연구에서 평가하였다. 용량은 28일 동안 장용 캡슐 내의 1.6×10¹¹개 박테리아 세포(코호트 L) 또는 8.0×10¹¹개 세포(코호트 H)였으며, 42일 동안 약물을 추적관찰하였다. 회수 가능한 세포 생존율은 1% 초과였다. 병변 중증도 점수(LSS) 및 PASI 점수의 백분율 변화는 기준선, 28일 및 42일에 측정하였다. 위약 대상체를 두 코호트에 걸쳐 통합하였다. 이러한 1b상 연구는 통계학적 유의성에 대해 검증되지 않았다.

결과:

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 최대 28일 동안 투여된 최대 8.0×10¹¹개 세포의 1일 용량에서 내약성이 우수하였고, 내약성 프로파일은 위약과 대등하였다. 심각한 부작용은 없었다. 기준선 평균 PASI 점수는 9.5(코호트 L), 6.2(코호트 H) 및 6.7(합동 위약 코호트)이었다. 평균 LSS 점수는 8.1(코호트 L), 7.8(코호트 H) 및 7.8(합동 위약 코호트).

제28일에, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 코호트에 대한 PASI 감소 백분율은 위약의 경우 1%에 비해 16%였다. 제42일에, 기준선으로부터의 백분율 개선은 고용량 코호트에서 21%까지 증가하였지만, 저용량 코호트(10%) 또는 위약 코호트(3%)에서는 증가하지 않았다.

제28일에 LSS 점수의 백분율 감소는 위약군에서의 기준선으로부터 1% 증가와 비교하여, 15%(코호트 H) 및 23%(코호트 L)였다. 제42일에, 고용량 군에서 LSS의 백분율 감소는 계속 개선되었지만(24% 감소), 저용량군(9%) 또는 합동 위약 코호트(7%)에서는 개선되지 않았다.

결론:

이러한 데이터는 경구의 안전한 내강-제한된 미생물 치료제에 의한 전신 염증 조절의 첫 번째 임상 증거를 제공한다. 현재 이 작용 기전에 의해서 인간의 질환을 치료하는 것으로 알려진 허가된 약물은 존재하지 않는다. 두 용량 모두 PASI 및 LSS 점수 % 변화와 관련하여 유사하게 수행되었다. 제42일에, 더 높은 용량의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 임상적 개선을 계속해서 나타내었다. 이러한 데이터는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 추가의 임상적 진전을 뒷받침한다.

추가 데이터

표 11은 피부 및 혈액에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 처리에 대한 바이오마커 반응의 표현을 나타낸다. LSS의 백분율 변화(DLSS %)는 도 2의 결과에 따라 첫 번째 열에 표시된다. 피부 생검을 기준선(치료 전) 및 투여 마지막 날(치료 후)에 수집하고, FFPE 블록으로 처리하고, 그 다음 절단하고, H&E로 염색하였다. 치료 후 대 치료 전 기저 상피의 유사분열 세포 수의 백분율 변화(%)을 두 번째 열(DBEMC %)에 나타낸다. 전혈을 치료 전 및 치료 후에서 수집하고, 24시간 동안 LPS로 생체외 자극하였다. 사이토카인 수준을 Luminex에 의해 평가하였다. 치료 후 대 치료 전 배수 변화 비율을 각각의 사이토카인에 대해서 나타낸다.

실시예 4 : 사이토카인 생산에 대한 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효과

1차 인간 세포 검정.

인간 CD14+ PBMC를 GM-CSF에서 성장시켜 M1형 전염증성 표현형을 유도하였다. 그 다음 세포를 LPS + IFNg로 24시간 동안 활성화하였다. 세포를 개별 미생물 균주와 함께 24시간 동안 인큐베이션시킨 후, 상청액의 사이토카인을 측정하였다.

88개의 절대 혐기성 미생물을 이 스크리닝에서 시험하였다(도 10). 각각의 점은 3명의 개별 건강한 기증자의 평균 값을 나타낸다. 원의 크기는 IL-10/TNFa 비율을 나타낸다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 M1형 편향 대식세포로부터 다량의 항염증성 사이토카인 IL-10 및 IL-27을 유도하였다(도 10). 이 데이터는 또한 각각의 균주가 고유한 사이토카인 프로파일을 가지며, 분류 체계(taxonomy)가 기능에 대한 지침이 아님을 입증한다.

실시예 5: 지연형 과민증(DTH)의 마우스 모델에서의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B

지연형 과민증(DTH)은 Petersen 등(문헌[In vivo pharmacological disease models for psoriasis and atopic dermatitis in drug discovery. Basic & Clinical Pharm & Toxicology. 2006. 99(2): 104-115]; 또한 문헌[Irving C. Allen (ed.) Mouse Models of Innate Immunity: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, 2013. vol. 1031, DOI 10.1007/978-1-62703-481-4_13] 참고)에 의해 검토된 바와 같이 아토피성 피부염(또는 알레르기성 접촉 피부염)의 동물 모델이다.

마우스에 등을 따라 4개 위치에 KLH 및 CFA를 i.d 주사하였다(부위 당 총 부피 50ul의 CFA와 1:1 비로 제조된 KLH를 마우스 당 50 ug). 마우스에게 하기와 같이 8일 동안 투여하였다; 1) 혐기성 PBS(비히클)의 경구 투여; 2) 비코팅된 고체 투여 형태의 1.8 ㎎ 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 경구 투여; 3) 덱사메타손(Dex)(양성 대조군)의 i.p. 투여. 10 ug의 KLH(10 ul 부피)로의 시험감염 후 제9일에, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 제공받은 군은 귀 두께 점수에서 더 낮은 변화를 가졌다(도 11a). DTH 연구 완료 후에, 마우스를 희생시키고, 귀 드레이닝 림프절 및 비장으로부터의 총 세포를 KLH와 함께 2일 동안 인큐베이션시켰다. 상청액으로부터의 사이토카인을 MSD에 의해서 측정하였다(도 11b).

실시예 6 : 건선의 마우스 모델에서의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B

건선은 T 세포 매개성 만성 염증성 피부 질환이다. Gudjonsson 등(문헌[Mouse models of psoriasis. J Invest Derm. 2007. 127: 1292-1308]; 또한 문헌[van der Fits et al. Imiquimod-induced psoriasis-like skin inflammation in mice is mediated via the IL-23/IL-17 axis. J. Immunol. 2009 May 1. 182(9): 5836-45] 참고)에 의해 검토된 바와 같이, 일부 동물 모델이 이 질환의 이해에 기여하였다.

실험 시작 전 제-2일에, BALB/c 마우스의 등을 면도하고, Nair(약 25초)로 탈모시켰다. Nair를 닦아내고 따뜻한 물로 마우스를 씻었다(2X).

제0일에, 캘리퍼스를 사용하여, 기준선 귀 측정을 수행하였다.

제1 내지 7일에, 5% 이미퀴모드(TLR7 및 TLR8 효능제)(마우스당 62.5 ㎎-등, 20 ㎎-귀) 또는 대조군 크림을 마우스의 등 및 귀에 도포하였다. 균일한 도포를 위해 크림을 다시 펴발랐다. 마우스에게 매일 100 ul 부피로 경구 위관 영양법으로 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 분말(10 ㎎)을 투여하고, 양성 대조군에게 덱사메타손(Dex)(1 ㎎/㎏ IP)을 i.p. 투여하였다. 음성 대조군에게 비히클을 제공하였다.

이미퀴모드 도포로 인한 탈수에 대처하기 위해 400 내지 500 ul의 0.9% 식염수를 매일 s.c. 주사하였다.

제8일에, 마우스를 안락사시키고, 하류 분석을 위해서 조직을 수거하였다.

덱사메타손(양성 대조군)의 제조: 25 ㎎의 덱사메타손(Sigma)을 1.6 ㎖의 96% 에탄올에 재현탁시킴으로써 덱사메타손 스톡 용액을 제조하였다.

도 12a는 이미퀴모드 유도 건선 마우스 모델로부터의 결과를 나타낸다. 등 점수를 매일 기록하여 홍반 및 건선과 연관된 스케일링을 측정하였다. 도 12b는 마우스의 건선성 피부로부터의 Il17a mRNA 전사체를 RT-qPCR로 측정한 것을 나타낸다. 도 12c는 비장세포의 생체외 자극을 나타낸다. 연구의 종료 시, 마우스를 희생시키고, 비장세포를 PMA/이오노마이신으로 48시간 동안 자극하였다. IL-17A를 MSD에 의해서 상청액으로부터 측정하였다.

실시예 7 : 소장 축을 조절하는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B

전신 염증의 다중 경로의 수복은 프레보텔라 히스티콜라의 경구 투여된 단일 균주에 의한 소장 축의 조절에 의해 유도된다.

물질 및 방법

마우스. 암컷 BALB/c, C57BL/6 마우스(6 내지 8주령)는 Taconic Farms 또는 Jackson Labs에서 구입하였다. 암컷 DO11.10 TCR Tg 및 SJL 마우스(8 내지 10주령)는 Jackson Labs에서 구입하였다. 동물을 동물 사육장(케이지당 5마리)의 특정 병원체 없는 조건에 수용하였고, 모든 실험은 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재의 Avastus Preclinical Services 시설에서 동물 실험 윤리 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee: IACUC) 승인 프로토콜 및 지침에 따라 수행하였다. EAE 실험은 Hooke Laboratories(미국 매사추세츠주 로렌스 소재)에서 IACUC 승인 프로토콜에 따라 수행하였다. 실험 시작 전 1 내지 2주 동안 마우스를 사육장에 적응시켰다. PicoLab Rodent Diet 20을 제공하였고, 물을 시퍼병을 통해 가압 멸균하고, 자유식으로 제공하고, 매일 확인하였다.

박테리아 균주. 본 연구를 위해 프레보텔라 종의 4가지 개별 균주를 얻었다. 모든 균주를 단일 집락 단리 방법을 통해 정제시켰다. 균주 동일성은 16S rDNA 및 전체 게놈 서열분석에 의해 확인하였다. 프레보텔라 히스티콜라 및 피. 제주니를 인간 십이지장 생검에서 단리시켰고(문헌[Marietta et al., 2016]), Mayo Clinic에서 얻었다. 피. 멜라니노게니카(P. melaninogenica)는 건강한 지원자의 새로운 인간 치은연하 플라크 샘플에서 단리시켰다. 지원자로부터 사전동의를 얻었다.

미생물 바이오매스. 모든 균주를 상업용 Tryptic Soy Broth(TSB, Corning #61-411-RO) 배지 또는 환원제로서 L-시스테인-HCl을 함유한 인-하우스에서 개발된 Soy Peptone-Yeast Extract-Glucose 배지에서 성장시켰다. 미생물의 성장을 지원하기 위해서, 배지에 5 ㎎/ℓ 헤민과 0.05㎎/ℓ 비타민 K 또는 20㎎/ℓ 헤모글로빈을 보충하였다. 미생물 배양물을 수거 전에 12 내지 18시간 동안 37℃에서 혐기성으로 배양시켰다. 박테리아 바이오매스를 10℃에서 20분 동안 7000 g에서 원심분리시킴으로써 농축시키고, 혐기성 효모 추출물-수크로스 용액에 재현탁시키고, 혐기성 조건에서 냉동바이알에 분배하였다. 냉동바이알을 즉시 액체 N₂에서 동결시키고, -80℃에 저장하였다. 박테리아 총 세포 수치(TCC)를 Coulter Counter Multisizer4e로 측정하였다. 바이오매스 TCC는 8.2e+10 내지 9.4e+10개 세포/㎖로 달라졌다. 16S rDNA 서열측정에 의해서 박테리아 동일성을 확인하였다.

박테리아 바이오매스를 실온에서 해동시켰다. 100 ㎕의 현탁액을 4 내지 9일 동안 매일 각각의 마우스에게 경구 투여하였다. 시험관내 검정을 위해서, 해동된 박테리아 바이오매스를 대략 2E+6개 박테리아 세포/㎖에 도달하도록 혐기성 챔버(Coy Lab Products, USA) 내부의 RPMI 탈기 배지에서 연속 희석시켰다. 100,000개의 박테리아 세포를 수동으로 또는 맞춤형 Coy 혐기성 챔버 내부에서 자동화 Liquid handler Biomek 4000(Beckman Coulter)을 사용하여 각각의 96웰당 200,000개의 정제된 인간 면역 세포에 첨가하였다. 공배양물을 미세산소 조건(1% O₂, 5% CO₂, 나머지 N₂) 하에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후 세포 상청액을 수집하고, Luminex 기술을 사용하여 사이토카인 생산을 측정하였다.

동결건조 분말. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 동결건조 분말을 외부 계약 제조사 또는 내부적으로 프레보텔라 히스티콜라로부터 생산하였다. 분말을 4℃에서 데시케이터 내부의 밀봉된 마일라 백에 저장하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 분말을 TCC에 의해 특징규명하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 분말의 시험 분취물을 캡이 있는 플라스틱 시험관에 분배하고, 4℃에 저장하였다. 마우스에게 투여하기 위해서, 분말을 실온에서 혐기성 효모 추출물-수크로스 용액에 재현탁시켰다. 100 ㎕의 현탁액을 매일 각각의 마우스에게 경구 투여하였다. 1일 용량은 TCC를 기준으로 계산하였다. 평균 10 ㎎/용량은 4.1e+9 TCC/용량 및 1.0 e+7 CFU/용량에 상응하였다.

생존-불가능 동결건조 분말의 경우, 분취물을 Sterigenics U.S., LLC에서 25 kGy 감마선 조사 처리하였다. 처리된 분말을 TCC 및 VCC 방법으로 특징규명하였다. 총 세포 수는 변하지 않았다. 조사 후 생존 가능한 세포가 존재하지 않았다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B 및 대조군의 생체내 투여. 상이한 모델의 기간 동안 마우스를 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(4.1E+9 TCC/0.1 ㎖/일 PO) 또는 비히클 대조군(혐기성 수크로스, PO)으로 경구 치료하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 바이오매스, 재현탁 분말 또는 압축 정제 제형(총 세포 수치(TCC))과 같은 다양한 형태로 투여되었다. 달리 명시되지 않는 한 덱사메타손(1 ㎎/㎏, i.p., Sigma)을 양성 대조군으로 사용하였다.

항-IL10R 차단을 위해서, 항-IL10R(BioXCell Clone IB13.A) 및 래트 IgG1 HRPN 이소타입 대조군(BioXCell)을 각각 해당 희석 완충액, InVivoPure pH 6.0T Dilution Buffer(BioXCell) 및 InVivoPure pH 7.0 Dilution Buffer (BioXCell)로 희석시켰다. 마우스에게 제0일, 제3일 및 제7일에 마우스당 200 ㎍ 농도의 용액 100㎕를 i.p.로 투여하였다.

이미퀴모드 유도 건선의 경우, 항-IL-17A(Bio X Cell Clone C17.8)를 제2일, 제4일 및 제6일에 마우스당 200 ㎍으로 i.p.로 투여하였다. EAE 연구의 경우, 핑골리모드(1 ㎎/㎏, PO, Tocris Biosciences)를 매일 투여하였다.

지연형 과민증 마우스 모델. 마우스 등의 4개 부위에 완전 프로인트 아주반트(Complete Freund's Adjuvant: CFA) 중의 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH) 에멀젼 50 ㎕를 사용하여 마우스를 면역화시켰다. 8일 후, 귀에 피부내로 KLH(10 ㎍/10 ㎕)를 사용하여 수여자 마우스를 시험감염시켰다. 디지털 캘리퍼스를 사용하여 귀 시험감염 후 24시간에 귀 측정치를 기록하였다. 제7일의 귀 두께에서 기준선에서의 귀 두께를 뺀 값으로 귀 두께의 변화를 표현하였다.

입양 전달 DTH를 위해서, DO11.10 TCR Tg 마우스의 비장 및 모든 림프절에서 세포를 단리시켰다. 200 ㎕의 PBS 중에 재현탁된 4 내지 5×10⁷개 세포를 미경험 BALB/c 수여자 마우스에 주사하였다. 그 다음, 등의 4개 부위에 200 ㎕의 오브알부민-CFA 에멀젼을 사용하여 마우스를 면역화시켰다. 8일 후, 귀에 피부내로 오브알부민(20 ㎍/20 ㎕)으로 수여자 마우스를 시험감염시켰다. 귀 시험감염 후 24시간에 귀 측정치를 기록하였다. 제7일의 귀 두께에서 기준선에서의 귀 두께를 뺀 값으로 귀 두께의 변화를 표현하였다.

이미퀴모드-유도 건선-유사 피부 염증 프로토콜. 연속 7일 동안 매일 62.5 ㎎ 이미퀴모드 크림(Aldara; 3M Pharmaceuticals, 미국 미네소타주 세인트 폴 소재)으로 마우스를 국소적으로 감작시켰다. 등 피부 염증의 중증도를 병변 건선 중증도 점수 시스템을 사용하여 평가하였다. 마우스를 모니터링하고, 다음 척도로 매일 등급을 매겼다: 0(변화 없음), 1(경증 홍반), 2(중등도 내지 중증 홍반 및 일부 플라크), 3(뚜렷한 홍반 및 플라크) 및 4(매우 뚜렷한 홍반 및 플라크). 귀에 이미퀴모드 20 ㎎을 사용하여 동일한 마우스를 또한 감작시켰다. 디지털 캘리퍼스를 사용하여 매일 귀 측정을 수행하였고, 제8일 귀 점수에서 제1일 기준선 귀 점수를 뺀 값으로 계산된 귀 두께의 변화로 점수를 보고하였다. 연구 종료 제8일에, 마우스의 등 병변으로부터의 피부 샘플을 10% 포르말린에서 고정시키고, 파라핀에 포매시켰다. 탈파라핀화된 섹션을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하여 미세구조를 연구하고, 병리학자가 질환 매개변수에 대해 점수를 매겼다.

실험적 자가면역 뇌척수염. 암컷 SJL 마우스(8 내지 10주령)에게 CFA 에멀젼(0.05 ㎖/주사 부위; 약 0.5 ㎎ PLP PLP139-151/㎖, Hooke Laboratories; EK-2120) 중의 미엘린 단백질지질 단백질(PLP)139-151을 4개 부위에 피하 주사하였다. 면역화 후, EAE 유도는 면역화 2시간 이내에 백일해 독소(6 ㎍/㎖; 0.1 ㎖/마우스)의 복강내 주사에 의해 완료되었다. 마우스를 군에 무작위 배정하고, 42일 동안 EAE 임상 점수를 모니터링하였다. 질환 진행은 치료 또는 이전 측정에 대해 맹검으로 점수를 매겼다. 질환 중증도는 표준 EAE 기준을 사용하여 점수를 매겼다: 0(정상); 1(꼬리 톤의 손실); 2(뒷다리 약화); 3(뒷다리 마비); 4(뒷다리 마비 및 앞다리 마비 또는 쇠약); 5(이환율/사망). 임상 증상에 대해 매일 마우스를 관찰하였다. 마우스가 2일 동안 4점인 경우 안락사시키고, 이들 동물에 대한 나머지 연구 동안 5점을 기록하였다.

종점 조직 수집 및 조직학. 연구 종료 시에 안락사 후, EAE 마우스에 5 내지 10 ㎖ PBS를 관류시키고, 척추를 두개골 기저부에서부터 골반 뼈의 시작 부분까지 추출시켰다. 그 다음 척주를 10% 중성 완충 포르말린 중에 적가 고정시키고, 48시간 동안 수평으로 저장하였다. 고정 후, 척주를 실온에서 밤새(12 내지 24시간) 약한 포름산 석회화 용액(Immunocal-Statlab, Fisher Scientific, #141432)으로 처리하였다. 그 다음 척주를 4 ㎜ 두께의 경추, 흉부 및 요추 부분으로 자르고, 등급별 알코올 탈수에 의해서 Sakura Tissue Tek VIP 5를 사용하여 처리하고, 자일렌에서 정화시키고, 마지막으로 파라핀으로 침윤시켰다. 처리 후, 척주 부분을 파라핀 블록에 포매시켰다. 그 다음 파라핀 블록을 충전된 슬라이드에서 4 μm로 절단하고, 밤새 공기 건조시키고, 표준 자동화 H&E 프로토콜(Tissue-Tek Prisma)에 따라 헤마톡실린 및 에오신으로 염색시키고, 그 다음 커버를 덮었다(Tissue-Tek Glass). 그 다음 준비된 조직 섹션을 20X 배율에서 NanoZoomer 2.0 HT(Hamamatsu)를 사용하여 영상화하였다.

FITC-유도 알레르기 염증. 암컷 BALB/c 마우스의 등을 면도하고, 제1일 및 제2일에 400 ㎕의 0.5% FITC 용액(아세톤:디부틸 프탈레이트, 1:1, v/v에 용해)을 면도한 피부에 칠했다. 제6일에 기준선 귀 측정을 수행하고, 그 다음 오른쪽 귀에 20 ㎕의 0.5% FITC를 사용하여 마우스를 시험감염시켰다. FITC 시험감염 24시간 후에 제7일에 디지털 캘리퍼스(Fowler)를 사용하여 귀 두께를 측정하였다. 제7일의 귀 두께에서 기준선에서의 귀 두께를 뺀 값으로 귀 두께의 변화를 표현하였다.

MC903 유도 아토피성 피부염. 귀에 20 uL의 100% EtOH 중의 MC903(칼시포트리올; Tocris Bioscience) 2 n㏖을 사용하여 마우스를 연속 14일 동안 매일 감작시켰다. 디지털 캘리퍼스(Fowler)를 사용하여 제1일에 첫 번째 귀 감작 이전에 기준선 귀 측정을 수행하였다. 제14일에 귀 두께를 측정하였다. 제14일의 귀 두께에서 기준선에서의 귀 두께를 뺀 값으로 귀 두께의 델타 변화를 표현하였다.

생체외 재자극 검정. 귀-드레이닝 자궁 경부 림프절(CLN), 소화관 드레이닝 장간막 림프절(MLN) 및 비장을 다양한 연구로부터의 최종 시점에서 수거하고, 0.5 ㎖의 차가운 완전-RPMI(10% FBS, 1×Glutamax, 1 mM 피루브산나트륨, 100 mM HEPES, 1× 비필수 아미노산, 1× 베타-메르캅토에탄올, 1× 항생제-항진균제)(모든 시약은 Gibco 제품)에 수집하였다. 단일 세포 현탁액을 제조하고(비장을 ACK 용해 완충액으로 RBC 용해시켰음), 200,000개 세포/웰을 플레이팅하였다. 세포를 생체외에서 LPS(200 ng/㎖, Invivogen) 또는 PMA(eBioscience)로 48시간 동안 또는 KLH(50 ㎍/ml, Sigma) 또는 OVA(50㎍/ml)로 37℃ 및 5% CO₂에서 72시간 동안 자극하였다. 자극 종료 시 상청액을 수집하고, Meso Scale Discovery 키트를 사용하여 사이토카인 수준의 다중 ELISA에 사용하였다. 귀 조직을 Halt Protease(Thermo Scientific)를 함유한 250 ㎕ T-PER 완충액(Thermo Scientific)에서 해리시키고, 단백질을 BCA 키트(Thermo Scientific)로 정량하였다. 100 ㎍의 단백질을 사용하여 MSD 키트를 사용한 사이토카인 수준을 측정하였다.

인간 대식세포 검정. 3명의 상이한 인간 공여자로부터의 동결된 PBMC를 CD14+ 대식세포의 단리를 위해서 사용하였다. PPBMC를 10 ㎖ MACS 완충액에서 세척하고, 회전시키고, 80 ㎕당 총 10⁷개 세포의 농도로 재현탁시켰다. 항-CD14+ 비드를 첨가하고(10⁷개 세포당 20 ㎕), 세포 현탁액을 4℃에서 15분 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후, 세포를 세척하고, MACS 완충액에 재현탁시키고, CD14+ 세포를 제조사 프로토콜(Miltenyi)에 따라 자기 분리를 사용하여 단리시켰다. 단리된 세포를 100 ㎕에서 100,000 CD14+ 세포/웰로 추가로 배양하고, 37℃에서 밤새 인큐베이션시켰다. 100 ㎕의 GMCSF를 50 ng/㎖의 최종 농도를 위해 첨가하였다. 격일로 100 ㎕의 상청액을 제거하고, 100 ㎕의 새로운 GMCSF(100ng/㎖)로 교체하였다. 세포를 7일 동안 배양하였다. 제7일에 GMCSF를 세척하고, 100 ng/㎖의 LPS 및 IFNγ를 무항생제 배지에 첨가하였다. 미생물을 첨가하기 전에 배양물을 18시간 동안 인큐베이션시켰다. 미생물을 혐기성 조건에서 첨가하고, 1% 산소로 플러싱하였다. 플레이트를 37℃ + 5% CO₂의 혐기성 상자에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 24시간 후, 플레이트를 원심분리시키고, 상청액을 수집하여 MSD 검정을 사용하여 사이토카인 수준을 검정하였다.

인간 세포 배양. 인간 Caco-2(ATCC, HTB-37) 및 HT-29 MTX(Sigma, 12040401-1VL) 결장 상피 세포를 조직 배양 처리된 T-175 플라스크에서 37℃ 및 5% CO₂에서 배양하고, 유지시켰다. 오래된 배지를 흡인시키고, 미리 가온된 신선한 배지 30 ㎖로 교체함으로써 배지(보충 방법의 레시피)를 2 내지 3일마다 변경하였다. 90% 컨플루언시에서, 세포를 10 ㎖의 따뜻한 PBS로 세척한 후, 그 다음 5 ㎖의 0.25% 트립신-EDTA로 세척한 후 계대시켰다. 37℃에서 5 내지 10분 동안 인큐베이션시킨 후, 30 ㎖의 완전 배지를 플라스크에 첨가하여 트립신을 저해하고, 단일-세포 현탁액을 계수하였다. 60% Caco-2 및 40% HT-29를 포함하는 75,000개 세포/㎖를 갖는 공배양 현탁액을 준비하였다. 이 공배양물 200 ㎕를 24웰 트랜스웰 플레이트의 막의 정점 측에 첨가하고, 600 ㎕ 배지를 막의 기저 측에 첨가하였다. 세포를 상피 장벽 형성 및 세포 분극화를 허용하기 위해 2 내지 3일마다 배지를 교체하면서 28일 동안 배양하였다.

인간 상피 세포주 미생물 자극. 상피 세포를 플레이팅한 후 28일에 미생물을 사용한 트랜스웰의 자극을 수행하였다. Millicell ERS-2 전압저항계(Millipore Sigma, # MERS00002)를 사용하여 상피통과 전기 저항(TEER)을 통해 상피 장벽 무결성을 측정하였다. 세포를 기저부는 600 ㎕ PBS로 정점부는 200 ㎕ PBS로 세척하였다. 그 다음 동일한 부피의 새로운 PBS를 첨가하였다. 검정을 시작하기 전에 기저 저항 측정치를 얻었다. 검정일에 TEER 측정치를 각각의 웰에 대해 기록하였다. 그런 다음 PBS를 기저부는 600 ㎕의 새로운 항생제-함유 배지로 교체하고, 정점부는 150 ㎕의 항생제-무함유 배지로 교체하였다. 50 ㎕의 미생물 현탁액(1×10⁷개 TCC/웰 또는 표시된 농도) 또는 대조군을 각각의 웰에 정점부에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 플러시 박스에 넣고, 5분 동안 1% 산소로 플러싱하였다. 24시간 후, MSD U-plex 검정에 의한 사이토카인 검정을 위해 상청액을 수집하였다. TEER을 각각의 웰에 대해 기록하고, TEER의 변화를 0시부터 24시간까지 계산하고, 수크로스 비히클 대조군과 비교하여 백분율 변화로 기록하였다.

통계학적 분석 데이터를 평균±표준 편차로 표현하였다. 군 간의 통계학적 유의성을 수크로스-처리 대조군과 비교하여 일원 ANOVA를 사용하여 비교하였다. EAE 데이터의 통계학적 분석을 위해, 각각의 판독값에 대해 다음 시험을 사용하였다: EAE 발생률, 카이 제곱 시험; EAE 발병 평균일, 양측 스튜던트 t-검정; EAE 발병의 중앙 일, 윌콕슨(Wilcoxon)의 생존 시험; 평균 임상 점수, 양측 스튜던트 t-검정; 평균 최종 임상 점수, 윌콕슨 비모수 검정; 평균 최대 점수(MMS), 윌콕슨 비모수 검정; 평균 체중 증가/감소, 양측 스튜던트 t-검정; 체중 증가/감소 종료, 양측 스튜던트 t-검정; EAE 재발의 발생률, 카이 제곱 검정; 재발의 MMS, 윌콕슨 비모수 검정; 재발 기간의 MMS, 윌콕슨 비모수 검정. 유의성은 p<0.05로 지정되었고, 모든 통계 시험은 Prism 8(GraphPad Software, 미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재)을 사용하여 수행되었다.

결과

프레보텔라 히스티콜라 균주 B 치료는 생체내에서 타입-1 염증 및 염증성 사이토카인 생산을 감소시키고, IL-10에 의존적이다.

키홀-림펫 헤모시아닌 (KLH) 단백질에 의해 유도되는 지연형 과민증(DTH) 마우스 모델에서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 1일 1회 경구 투여하였고, 이것은 제9일 귀 감염 후 24시간에 귀 염증을 유의하게 억제하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 프레보텔라, 피. 제주니 및 피. 멜라니노게니카의 다른 종과 비교하여 가장 효능이 있는 치료였다(도 13a). 염증의 저해는 10 ㎎ 내지 0.1 ㎎의 용량 범위에 걸쳐 용량 의존적이었으며, 이는 약리학적 효과를 입증하였다(도 13b).

프레보텔라 히스티콜라 균주 B 치료는 사이토카인의 세포 생산을 조절하였다. 비장, 소화관-드레이닝 장간막 림프절(mLN) 및 귀-드레이닝 경부 림프절(cLN)로부터의 세포를 귀 시험감염 24시간 후에 마우스로부터 채취하고, 지질다당류(LPS- 미생물 자극을 모방하기 위해서) 또는 KLH(항원 자극을 나타내기 위해서)로 생체외에서 재자극하였다. 비히클 처리된 마우스의 mLN 및 비장으로부터의 LPS-자극 세포는 TNFα 및 IL-6을 비롯한 전염증성 사이토카인을 상당한 양으로 생산하였다. 이에 반해서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리된 마우스로부터의 세포는 상당히 감소된 수준의 전염증성 사이토카인을 가졌고, 증가된 IL-10 생산 경향을 가졌는데, 이는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 경구 치료가 소화관-드레이닝 mLN에서 세포에 대한 인접한 항염증 효과를 가졌다는 것을 시사한다(도 13c). cLN에서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로의 처리는, 비히클로 처리된 마우스에서 이들 사이토카인의 증가된 수준과 비교하여, LPS 또는 KLH 자극에 의해서 생산되는 전염증성 사이토카인 TNFα, IL-6, GMCSF 및 IFNγ의 유사한 감소 경향을 나타내었다(도 13c).

프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 항염증 효과에서 IL-10의 역할은 DTH 동안 IL-10 신호전달 경로를 차단함으로써 평가되었다. 이전 연구에서 보고된 효능에 기초하여, 항-IL-10 수용체 항체를 사용하여 IL-10 신호전달을 차단하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리된 마우스 중에서, 항-IL-10R 항체를 공동 투여한 동물이 이소타입 항체가 제공된 마우스와 비교하여 상당히 높은 귀 염증을 가졌다. 이러한 발견은 IL-10이 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 의한 DTH의 귀 염증 조절에 필요함을 시사한다(도 13d).

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 CD4+T 세포를 통해 항염증 활성을 매개한다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 세포 하위집합의 빈도에 변화를 일으키지 않았지만, DTH-KLH로 유도된 프레보텔라 히스티콜라 균주 B-처리된 공여자 마우스로부터의 면역화되었지만 미처리된 수여자 마우스의 제2 세트로의 림프구의 수동 전달(passive transfer)은 마우스의 후자 군에서 귀 염증을 억제하였다(도 13e). 이것은 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 지속적인 이의 투여가 효과를 위해 필요하지 않음을 나타낸다. 이러한 데이터는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 CD4+ T 세포의 기능적 반응을 변경할 수 있고, 이것이 이러한 세포가 수여자 마우스에서 항염증 반응을 유도하기에 충분하도록 유지된다는 것을 시사한다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 치료 투여 치료요법에서 효과적이다. KLH-CFA로 면역화된 마우스를 10일 동안 어떠한 치료적 개입도 없이 면역 프라이밍 단계에 두었다. 이것 후, 귀 시험감염 이전에 1일, 3일 또는 8일 동안 마우스에게 투여하고, 시험감염 24시간 후에 귀 염증을 측정하였다. 1일의 투여로도 염증이 어느 정도 감소하였다. 3일 또는 8일 투여에서 더 강력한 항염증 반응이 관찰되었다(도 13f). 이는, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 제한된 수의 투여에서도 예방적 및 치료적 환경에서 동등하게 효과적이었다는 것을 시사하였다.

종합하면, 이러한 데이터는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 염증의 지연형 과민증 모델에서 CD4+ T 세포 반응을 조절함으로써 전신뿐만 아니라 소화관에 국소적으로 면역 세포로부터 사이토카인 생산을 저해함으로써 염증을 효과적으로 낮춘다는 것을 나타낸다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B 치료는 생체내에서 항원 특이적 T 세포 반응을 저해한다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 항원 특이적 T 세포 매개 염증을 조절하였다. CD4+ T 세포에서 오브알부민(OVA) 펩티드 특이적 ab-TCR을 발현하는 DO11.10 TCR-Tg 마우스와 함께 입양 전달 모델을 사용하였다. 공여자 DO11.10 TcR Tg 마우스로부터의 세포를 수여자 BALB/c 마우스로 전달하고, 그 다음 CFA 중의 OVA로 면역화시키고, 9일 후 귀에서 OVA로 피부내로 시험감염시켜 국소 염증을 유발하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리된 마우스는 비히클 처리된 마우스와 비교하여 귀 염증을 상당히 감소시켰다(도 14a). 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 처리된 마우스에서 T 세포의 기능적 변경을 결정하기 위해서, 귀 드레이닝 경부 림프절로부터의 세포를 CD4+ T 세포 하위세트에 의해 인식되는 OVA 323-339 펩티드로 생체외에서 재자극하였다. 이는 전염증성 사이토카인 IL-12p70 및 IFNγ 수준을 감소시켰다(도 14b).

DTH의 면역병리학은 주로 Th1 세포에 기인하지만, Th17 세포에 대한 역할은 또한 염증을 유도하는 것으로 확립되어 있다. 귀 염증에 기여하는 호중구 동원에 관여하는 케모카인인 IL-17A, IL-22 및 KC(IL-8의 마우스 동족체)와 같은 Th17 경로와 연관된 사이토카인도 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 의해 드레이닝 cLN에서 상당히 감소되었다(도 14c).

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 이미퀴모드-유도 건선에서 피부 병리를 완화한다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B 처리를 사용한 Th17 경로 사이토카인의 수준 감소는 강한 Th17 성분을 갖는 질환에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 항염증 역할을 시사하였다. 건선의 면역병리는 타입 3 염증 경로, 특히 IL-23/IL-17A에 의해 유도된다. 이미퀴모드(IMQ)-유도 건선은 인간 건선과 유사한 임상 및 조직학적 특성, 예컨대, 표피 두꺼워짐, 스케일링 및 홍반, T 세포 침윤물, 호중구 및 수지상 세포를 갖는 널리 확립된 마우스 모델이다. IMQ를 BALB/c 마우스의 등 피부 및 귀에 7일 동안 매일 도포하였다. 제8일에, 방법에 기재된 채점 방식에 따라 마우스를 채점하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 처리된 마우스는 IMQ-유도 피부 염증과 연관된 홍반, 스케일링 및 두꺼워짐의 가시적으로 상당한 억제를 나타내었다(도 15a). IMQ-처리된 등 피부로부터의 H&E 염색 섹션은 비히클과 비교하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 처리된 마우스에서 감소된 표피 두꺼워짐 또는 과각화증 및 가시세포증, 건선 피부 병변의 전형적인 표피 분화 변경의 징후를 나타내었다(도 15b).

귀 조직의 단백질 수준은 비히클과 비교하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리시 IL-17A 수준의 감소를 나타내었다. IMQ는 또한 비장종대(splenomegaly) 및 비장세포에서 IL-17 생산의 동반 증가를 유도하는 것으로 공지되어 있다. PMA/이오노마이신을 사용한 비장세포의 생체외 재자극은 IL-17A의 감소된 생산을 나타내었다(도 15c).

건선에 대한 현재 치료법은 항-IL-17A 생물학적 제제 및 코르티코스테로이드를 포함한다. 이들 작용제는 중등도에서 중증 건선을 갖는 환자에서 효과적이지만, 경증 내지 중등도의 질환을 환자를 위한 안전하고 효과적인 항염증 옵션에 대한 충족되지 않은 요구가 존재한다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 이러한 작용제와 비교하였다. IMQ 도포 시작 후 4일만에 효능이 인지되었고, 덱사메타손과 동등하게 효능이 있었고, 귀뿐만 아니라 등 염증 감소에서 항-IL-17A보다 약간 더 우수하였다(도 15d).

종합적으로, 이러한 데이터는 IL-23/IL-17A 축에서 사이토카인의 수준을 감소시키는 것을 포함하는 효과와 함께 IMQ-유도 건선 모델에서 타입 3 피부 염증 및 병리를 감소시는 데 있어서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효능을 입증한다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 사용한 치료는 재발-완화형 다발성 경화증의 뮤린 모델에서 신경염증을 개선한다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 타입 3/Th17 유발 병리를 제어하는 역할을 추가로 구축하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 재발 완화형 다발성 경화증의 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 모델에서 시험하였다. 예방적 환경에서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리된 마우스는 질환의 경과에 따라 비히클 처리된 동물과 비교하여 감소된 평균 임상 점수를 나타내었다(도 16a). 그 효과는 질환의 재발 단계에서 가장 두드러졌다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 처리된 마우스는 또한 곡선 그래프 하 면적으로부터 인지될 수 있는 바와 같이 대조군과 비교하여 더 낮은 누적 EAE 점수를 나타내었다(도 16a).

프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 사용한 치료는 감소된 CNS 병리와 연관되었다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B, 양성 대조군 약물인 핑골리모드로의 처리된 EAE 마우스 및 비히클 처리군으로부터 척수 조직의 섹션을 분석하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리된 마우스는 비히클 처리된 동물과 비교하여 감소된 신경염증 뿐만 아니라 척수에서 염증성 세포 침윤 빈도의 유의하게 감소된 빈도를 나타내었다(도 16b). 이러한 데이터는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 EAE의 재발 완화형 형태에서 질환을 억제하는 데 효과적임을 나타내며, 이는 비-재발 EAE 모델에서 이전에 보고된 결과와 일치한다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 뮤린 소장에서 Treg 및 IL10 유전자 발현을 조절한다.

EAE 모델에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 사용한 41일 동안의 연장된 치료는 소화관 면역 환경의 변화를 연구할 기회를 제공하였다. 장 전사 차이는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 또는 비히클로 처리된 마우스로부터의 장의 다른 부분으로부터의 qPCR 분석에 의해 결정되었다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 처리는 비히클 처리된 마우스와 비교하여 십이지장 부분에서 Treg 특이적 유전자인 Foxp3 및 Il10의 발현을 증가시켰다. 대조적으로, 결장에서는 차등적인 Foxp3 및 Il10 유전자 발현이 관찰되지 않았다(도 16c). 이 데이터는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 소장에서 효과를 조절하여 CNS의 염증성 병리를 완화하는 반응을 유도한다는 것을 입증한다. 이것은 소장이 CNS에 대한 면역 입구(immune portal)라는 놀라운 관찰이다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 1차 인간 대식세포에서 IL-10 생산을 유도하고 상피 장벽 무결성을 개선한다.

십이지장 및 결장 부분에서 관찰된 전사 변화를 고려하여, 면역 및 상피 세포에서 기능적 반응을 유도하는 역할에 대해서 설명하기 위해서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 시험관내에서 시험하였다. 1차 인간 대식세포(HuMAC)에서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 용량 의존적으로 IL12p70 분비를 저해하면서 IL-10 생산을 유도하였다. 생체내 데이터(도 13b)에 따르면, 사이토카인 프로파일은 미생물 균주 및 종 특이성을 나타냈고, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 동일한 속의 또 다른 종보다 항염증성이 더 우수하였고, 피. 제주니는 역 사이토카인 분비 프로파일을 가졌다(도 17a).

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 경구 요법이기 때문에, 소화관에 존재하는 우세한 세포 유형은 상피 세포이다. 시험관내에서 분극된 인간 상피 CaCO2-HT29 트랜스웰 공배양 시스템을 사용하여 프레보텔라 히스티콜라 균주 B와 24시간 동안 인큐베이션시키기 전 또는 인큐베이션시킨 후에 상피 장벽 무결성에 대한 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효과를 결정하였다. 상피 장벽은 상피통과 전기 저항(TEER) 측정을 통해 평가하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 처리된 세포는 비히클 처리와 비교하여 TEER 값의 대략 50% 증가를 유도하는데, 이는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 의한 장벽 무결성의 강화를 나타내었다(도 17b).

프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 타입 2 염증(아토피성 피부염)의 뮤린 모델에서 피부 염증을 감소시킨다.

타입 1 및 타입 3 염증 경로에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효능은, 그것이 타입 2 염증성 알레르기 또는 아토피성 질환에도 효과적일 수 있음을 시사한다. 이것은 IL-4, IL-5, IL-13, 및 알라민(alarmin), 예컨대, IL-33 및 TSLP를 비롯한 사이토카인뿐만 아니라, 특히 Th2 및 ILC2 세포에 의해서 유도되는 아토피성 피부염(AD), 알레르기 비염, 천식 및 식품 알레르기를 포함하는 병태의 부류를 포함한다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B를 합텐 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC)에 대한 접촉 과민증을 사용하여, 아토피성 염증의 뮤린 모델에서 시험하였다. 이 모델에서, 마우스를 제1일 및 제2일에 FITC로 감작시키고, 귀에 대한 감작 후 6일에 귀에 시험감염시켰다. 이 모델은 인간 AD와 유사하다. 그것은 CD4+ T 헬퍼 세포에 의존적이고, 질환과 연관된 병리는 급성 AD 병변의 특징을 나타낸다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로의 경구 치료는 비히클 치료와 비교하여 FITC 시험감염 24시간 후 귀 염증을 저해하였다(도 18a). FITC 시험감염 24시간 후 수거된 귀로부터의 조직 균질액에서 사이토카인 수준을 측정하였다. 필수 Th2 사이토카인인 IL-4 및 염증과 연관된 부종을 유도하는 호중구 유인 케모카인인 KC의 수준은 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리된 동물에서 저해되었다(도 18b).

타입 2 염증 생물학을 촉발하는 책임이 잇는 중요한 사이토카인인 알라민은 AD에서 손상된 각질세포에 의해 생산되는 흉선 기질 림프포이에틴(TSLP)이다. TSLP는타입 2 염증성 사이토카인, 예컨대, IL-4, IL-5 및 IL-13의 발현을 유도한다. TSLP는 피부의 알레르기 염증 동안 Th2 분화를 촉진하기 위해 미경험 CD4 + T 세포에 직접 작용할 수 있다고 보고되어 있다. 비타민 D3 유사체인 MC903의 국소 적용으로 유도된 AD에 대한 실험 모델은 AD를 갖는 환자의 병변에서 관찰되는 면역 특징과 유사한 피부 형태 및 염증의 변화로 TSLP를 유도할 수 있다. 이 모델을 사용하여 AD와 연관된 피부 염증을 낮추는 데 있어서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효과를 연구하였다. 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리된 MC903-유도 AD를 갖는 마우스는 감소된 귀 염증을 나타내었다(도 18c). 또한 Tslp, Il4 및 Il19의 비히클-처리된 코호트와 비교하여 RNA 수준에서 상당한 감소가 존재하였다(도 18d). 이러한 관찰은 프레보텔라 히스티콜라 균주 B가 알레르겐-유도 타입 2 피부 염증을 조절하는 데 있어서 면역조절 역할을 할 수 있음을 강조한다.

프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 비-복제 형태는 약리학적 활성을 가지며, 염증 조절에 효능이 있다.

치료적 이점이 장의 미생물 집락화를 요구하는지 여부를 결정하기 위해서, 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 비-복제 형태를 경구 요법으로 시험하였다. DTH 유도 마우스를 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 감마-조사된 형태 처리하였다. 이러한 비복제 형태로의 처리는 KLH 항원에 대한 시험감염 시 귀 염증을 낮추는 데 상당한 효능을 초래하였다(도 19). 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로 처리한 후 GI의 생체외 분석은 림프절 및 비장에서 다양한 효과를 나타내었다.

실시예 8 : TLR2 신호전달은 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 작용 기전에 관여한다.

5주령 암컷 C57BL/6 마우스를 Taconic Biosciences에서 구입하여 사육장에서 1주 동안 적응시켰다. 마우스를 제0일에 피하 면역화에 의해 KLH 및 CFA(1:1)의 에멀젼으로 프라이밍시켰다. 마우스에게 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(10 ㎎ 분말)를 매일 경구 위관영양법으로 투여하거나 제5일 내지 제8일에 덱사메타손(양성 대조군) 1 ㎎/㎏을 복강내로 투여하였다 항-TLR2 항체 및 이소타입 대조군(IgG1)의 처리를 제0일, 제3일 및 제6일에 200ug/마우스로 제공하였다. 제8일 투여 후, 마우스를 이소플루란으로 마취시켰고, 기준선 측정을 위해 왼쪽 귀를 Fowler 캘리퍼스로 측정하였고, 마우스의 왼쪽 귀에 식염수(10 ㎕) 중의 KLH를 피부내로 시험감염시키고, 귀 두께를 24시간에 측정하였다.

24시간 귀 측정 결과를 도 20에 나타낸다(프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 도면에서 "프레보텔라 히스티콜라"로 표시된다). 항-TLR2 항체 치료는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효능을 감소시켰는데, 이는 TLR2가 DTH 모델에서 염증 감소에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 대한 MOA의 중요한 인자임을 입증하였다.

추가 실시예:

24시간 귀 측정 결과를 도 21에 나타낸다(프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 도면에서 "프레보텔라 히스티콜라"로 표시된다). 도 20에서 나타난 결과와 일관되게, 항-TLR2 항체 치료는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효능을 감소시켰는데, 이는 TLR2가 DTH 모델에서 염증 감소에서 프레보텔라 히스티콜라 균주 B에 대한 MOA의 중요한 인자임을 입증하였다.

실시예 9 : 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 30일 투여 후 효능 증가를 나타낸다.

5주령 암컷 C57BL/6 마우스를 Taconic Biosciences에서 구입하여 사육장에서 1주 동안 적응시켰다. 마우스를 제0일에 피하 면역화에 의해 KLH 및 CFA(1:1)의 에멀젼으로 프라이밍시켰다. 마우스에게 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 분말 10 ㎎을 매일 경구 위관영양법으로 투여하거나 제1일 내지 제30일에 평일에만 덱사메타손(양성 대조군) 1 ㎎/㎏을 복강내로 투여하였다 제15일 및 제30일에 투여한 후, 마우스를 이소플루란으로 마취시켰고, 기준선 측정을 위해 왼쪽 귀를 Fowler 캘리퍼스로 측정하였고, 마우스의 왼쪽 귀에 식염수(10 ㎕) 중의 KLH를 피부내로 시험감염시키고, 귀 두께를 24시간에 측정하였다.

제15일 시험감염 및 제30일 시험감염에 대한 24시간 귀 측정 결과를 도 22a 및 도 22b에 나타낸다(프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 도면에서 "프레보텔라 히스티콜라"로 표시된다). 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 30일 투여 후 효능 증가를 나타내었다.

추가 실시예:

5주령 암컷 C57BL/6 마우스를 Taconic Biosciences에서 구입하여 사육장에서 1주 동안 적응시켰다. 마우스를 제0일에 피하 면역화에 의해 KLH 및 CFA(1:1)의 에멀젼으로 프라이밍시켰다. 마우스에게 프레보텔라 히스티콜라 균주 B(10 ㎎ 분말)을 매일 경구 위관영양법으로 투여하거나 제1일 내지 제30일에 평일에만 덱사메타손(양성 대조군) 1 ㎎/㎏을 복강내로 투여하였다 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 5개의 개별 분말 제제를 시험하였다. 동일한 용량을 각각의 분말 제제에 대해서 시함하였다. 제15일 및 제30일에 투여한 후, 마우스를 이소플루란으로 마취시켰고, 기준선 측정을 위해 왼쪽 귀를 Fowler 캘리퍼스로 측정하였고, 마우스의 왼쪽 귀에 식염수(10 ㎕) 중의 KLH를 피부내로 시험감염시키고, 귀 두께를 24시간에 측정하였다.

제15일 시험감염 및 제30일 시험감염에 대한 24시간 귀 측정 결과를 도 23a 및 도 23b에 나타낸다(프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 도면에서 "프레보텔라 히스티콜라"로 표시된다). 프레보텔라 히스티콜라 균주 B는 프레보텔라 히스티콜라 분말의 모든 배취에 대해서 투야 30일 후 효능 증가를 나타내었다.

실시예 10 : 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 효능 지속성

9주령 암컷 C57BL/6 마우스를 Taconic Biosciences에서 구입하여 사육장에서 1주 동안 적응시켰다. 마우스를 제0일에 피하 면역화에 의해 KLH 및 CFA(1:1)의 에멀젼으로 프라이밍시켰다. 마우스를 제1일 내지 제8일까지 매일 마취시키고, 마우스에게 10 ㎎ 또는 1.82 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 분말을 경구 위관영양법으로 투여하거나, 1 ㎎/㎏의 덱사메타손(양성 대조군)을 복강내로 투여하거나, 1.82 ㎎의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B의 비코팅된 고체 투여 형태(MMT)를 투여하였다(MMT를 pH 4.2 diH2O 50 ul가 충전된 주사기에 부착된 래트 피딩 바늘 넣고 마취된 마우스의 식도로 직접 주입하고, 그 다음 스테인리스강 일회용 마우스 피딩 바늘로 누른다(tamping down)). 제8일 투여 후, 마우스를 이소플루란으로 마취시켰고, 기준선 측정을 위해 왼쪽 귀를 Fowler 캘리퍼스로 측정하였고, 마우스의 왼쪽 귀에 식염수(10 ㎕) 중의 KLH를 피부내로 시험감염시키고, 귀 두께를 24시간에 측정하였다. 그 다음 마우스를 2주 동안 혼자 방치하고, 귀 시험감염시키고, 그 후 24시간에 측정하였다.

제8일 시험감염 및 제23일 시험감염으로부터의 24시간 귀 측정치를 도 24a 및 24b에 나타낸다. 분말 및 MMT 형태의 프레보텔라 히스티콜라의 경구 투여는 투여 8일 후 효능을 나타내고(도 24a), 이러한 효능은 어떠한 미생물의 추가 투여 없이도 적어도 2주 초과 동안 유지된다(도 24b).

실시예 11: 경증 내지 중등도 플라크 건선의 치료에서 프레보텔라 균주 B 50329의 효과를 조사하는 2상, 다기관, 무작위 배정, 이중-맹검, 위약-대조, 병렬-코호트, 용량-범위 연구 실시예.

근거:

전신 노출 없이 경구 투여 후 전신 면역 체계 조절 가능성을 제공하는 치료제가 개발 중이다. 프레보텔라 균주 B 50329는 인간 십이지장 생검에서 단리된 프레보텔라 히스티콜라의 균주의 약제학적 제제이며: 이것은 유전자 변형되지 않았다.

다양한 인간 및 마우스 검정에서 시험관내 프레보텔라 균주 B 50329의 연구 및 모델 증상에 대한 생체내 연구는 건선을 포함한 염증성 질환의 치료에서 프레보텔라 균주 B 50329의 사용을 뒷받침한다.

마우스에게 프레보텔라 균주 B 50329를 경구 투여하면 지연형 과민증, 플루오레세인 이소티오시아네이트 피부 과민증, 콜라겐-유도 관절염 및 실험적 급성 뇌척수염의 동물 모델에서 현저한 약력학적 효과를 초래한다. 효과 및 용량 둘 다의 높은 수준의 일관성은 다수의 타입 1, 타입 2 및 타입 3 염증성 병태 전체에 대한 임상적 이점의 가능성을 시사한다. 최대 3주 동안 매일 투여하거나 7주 초과 동안 격일로 투여하는 경우 이러한 실험에 사용된 동물에서 잠재적으로 관련된 부작용이 관찰되지 않았다. 이 모델에서 생체외 면역표현형분석(immunophenotyping)은 비장 및 장간막 림프절에서 조절 T 세포 수 및 조절 수지상 세포의 증가뿐만 아니라 전염증성 사이토카인, 예컨대, IL 23p40, IL-17, TNF, IL-6 및 IL-13과 같은 전염증성 사이토카인의 감소를 나타낸다. 치료는 또한 염증성 질환을 갖는 환자에서 종종 방해를 받는 소화관 장벽 무결성의 향상으로 이어졌다. 면역 매개변수에 대한 이러한 효과는 GI관 내부 및 외부 둘 다에서 관찰되었는데, 이는 소화관 내의 숙주-미생물 상호작용이 말초 조직의 면역 반응에 영향을 미칠 수 있다는 것을 입증한다.

건선은 과활성 T 세포가 과도한 각질세포 증식을 촉발하는 만성 면역-매개 타입 1/3 염증성 피부 질환이다. 이는 스케일링과 함께 융기된 홍반성 플라크의 형성을 초래한다. 건선 병변은 신체 어느 곳에서나 나타날 수 있지만, 무릎, 팔꿈치, 두피 및 요추 부위에서 가장 흔히 볼 수 있다. 염증 과정에서 중요한 사건은 랑게르한스 세포 및 T 세포의 활성화, 활성화된 T 세포의 피부로의 선택적 수송 및 피부 병변에서의 염증성 사이토카인 및 케모카인 캐스케이드의 유도를 포함한다. 임상 데이터는 중등도 내지 중증의 건선에서 항-TNFα, 항-IL-17 및 항-IL-23 요법의 역할을 검증하였다. 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 환자의 경우, 요법은 보통 국소 작용제(국소 코르티코스테로이드, 비타민 D3 유사체)를 포함하며, 국소 코르티코스테로이드는 최대 범위의 효능 및 광범위한 제형을 제공한다. 보다 최근에, 에타너셉트, 인플릭시맙, 아달리무맙, 우스테키누맙 및 세쿠키누맙을 포함하는 생물학적 요법에 앞서서, 혁신 신약(first-in-class)인 경구 PDE4 저해제인 아프레밀라스트를 처방하고 있다.

또 다른 연구에서, 총 56명의 참가자가 코호트 1 내지 코호트 4에 참여했는데, 이들 참가자 중 36명은 프레보텔라 균주 B 50329를 1일 1회 제공받았고; 이들 중 16명은 14일 동안 치료되었고(건강한 지원자), 건선을 갖는 20명의 참가자는 28일 동안 치료되었다. 동일한 시점에 아프레밀라스트 및 토파시티닙과 유사한 임상 반응이 제28일에 (건선) LSS 및 PASI에서 관찰되었다. 또한, 제42일 추적관찰 방문 시에, 참가자가 14일 동안 "치료 중단"한 경우, 더 높은 용량이 투여된 참가자에 대해 LSS 및 PASI 둘 다에 의해 측정된 바와 같이 약력학적 반응의 지속적인 개선이 존재하였지만, 더 낮은 투여량에서는 지속적인 개선이 존재하지 않았는데, 이는 효과 지속성에 대한 용량 관계를 시사한다. 프레보텔라 균주 B 50329의 안전성 프로파일은 어떠한 심각한 강도의 SAE 또는 AE도 없이 위약과 유사하였다.

지금까지 입수 가능한 증거는 프레보텔라 균주 B 50329가 내약성이 매우 우수하고, 그것이 경증 내지 중등도의 건선에서 계속 임상적 진전을 보이고 있다는 것을 시사한다. 내약성이 우수한 경구 요법은 건선의 치료에 상당한 이점을 제공할 수 있으며, 현재 프레보텔라 균주 B 50329는 생물학적 요법을 사용하기 이전에, 확립되었지만 초기 질환에 사용될 것으로 예상된다.

이러한 2상 연구는 프레보텔라 균주 B 50329의 임상 안전성 및 효능을 조사하고, 최적의 용량을 식별하기 위해 설계되었다.

목적:

1차 목적:

본 연구의 1차 목적은 16주 동안 매일 투여한 후 건선의 치료를 위해 3가지 상이한 용량의 프레보텔라 균주 B 50329의 안전성 및 효능을 평가하는 것이다.

2차 목적:

본 연구의 2차 목적은 다음과 같다:

제16주에 프레보텔라 균주 B 50329의 효능 용량 반응을 평가하기 위해

제16주에 프레보텔라 균주 B 50329의 최대 임상 이점을 평가하기 위해

제16주까지의 효능 및 안전성에 기초한 프레보텔라 균주 B 50329의 최적 용량을 평가하기 위해

연구 전반에 걸쳐 프레보텔라 균주 B 50329(모든 용량 수준)의 안전성 및 내약성을 평가하기 위해

탐색적 목적:

본 연구의 탐색적 목적은 다음과 같다:

프레보텔라 균주 B 50329에 대한 임상 반응의 시작 시간을 평가하기 위해

삶의 질 및 통증을 포함한 환자-보고 결과에 대한 프레보텔라 균주 B 50329 치료의 효과를 평가하기 위해

혈액 중의 바이오마커에 대한 프레보텔라 균주 B 50329 치료의 효과를 평가하기 위해

피부 플라크 중의 바이오마커에 대한 프레보텔라 균주 B 50329 치료의 효과를 평가하기 위해

분변 미생물군 조성물에 대한 프레보텔라 균주 B 50329 치료의 효과를 평가하기 위해

모수(estimand):

1차 모수

1차 모수는 프로토콜로부터의 편차에 관계없이, 모든 치료된 참가자의 변형된 배정된 대로(modified intent-to-treat: mITT) 세트에서 기준선에서부터 제16주의 PASI 점수의 백분율 변화에 대한 프레보텔라 균주 B 50329의 효과일 것이다. 치료 중 수집된 데이터만 치료 중단의 간헐적 사건을 설명하는 데 사용될 것이다(치료 순응도에만 기초한 가상 전략). 각각의 활성 용량과 합동 위약 간의 사후 평균 차이를 추정할 것이다.

1차 분석을 위해, 2개의 지원 모수(supportive estimand)가 또한 고려될 것이다:

효능에 영향을 미치는 것으로 생각되는 프로토콜 위반과 관련된 동시 사건의 영향을 평가하기 위해서, 임의의 이러한 식별된 프로토콜 위반 이후에 수집된 모든 데이터가 제외되는 지원 분석이 수행될 것이다. 제1 치료 용량(치료 순응도 및 효능에 영향을 미치는 프로토콜의 양상에 기초한 가상 전략) 전에 효능에 영향을 미치는 것으로 생각되는 프로토콜을 위반한 참가자는 이 분석에서 완전히 제외될 것이다.

치료 중단의 영향을 평가하기 위해서, 치료 중단 후 수집된 임의의 데이터를 포함한, 연구 동안 수집된 모든 데이터가 포함될 지원 분석이 수행될 것이다(치료 정책 전략).

2차 모수의 요약:

모든 2차 모수의 경우, 관심 집단은 mITT 세트일 것이다.

연구 집단:

포함 기준

각각의 참가자는 본 연구에 등록되기 위해서 다음 기준 모두를 충족해야 한다:

1. 서면 사전동의(서명하고, 날짜를 기재함) 및 현지 법률에서 요구하는 승인을 제공하고, 모든 연구 요구 사항을 준수할 수 있어야 한다.

2. 사전동의 당시 18세 이상 내지 70세 미만의 남성 또는 여성.

3. 6개월 이상 동안 플라크 건선의 문서화된 진단.

4. 3% 이상 내지 10% 이하의 BSA를 덮는 플라크가 있는 경증 내지 중등도의 플라크 건선을 갖고, 다음 추가 기준을 모두 충족한다:

a. 6 이상 내지 15 이하의 PASI 점수, 및

b. 2 또는 3의 PGA 점수.

이 기준의 모든 매개변수는 무작위 배정 전 기준선 방문 시 재확인되어야 한다.

5. 다음 피임 기준을 충족한다:

a. 남성 참가자:

i. 남성 참가자는 본 연구에 참여하는 동안 그리고 마지막 투여 후 90일 동안 본 프로토콜의 부록 13.1에 상세히 설명된 바와 같이 피임법을 사용하는 데 동의해야 하며, 이 기간 동안 정자 기증을 삼가야 한다.

b. 여성 참가자:

i. 여성 참가자는 임신 중이 아니고(부록 13.1 참조), 모유 수유 중이 아니고, 다음 조건 중 적어도 1개가 적용되는 경우 자격이 있다:

1. 부록 13.1에 정의된 바와 같은 WOCBP가 아님, 또는

2. 본 연구에 참여하는 동안 부록 13.1의 피임 지침을 따르기로 동의한 WOCBP, 첫 번째 투여 전 28일 및 마지막 투여 후 적어도 1회의 완전한 월경 주기(28일 이상).

6. 본 연구동안 평소 태양 노출을 늘리지 않기로 동의한다.

제외 기준

다음 기준 중 임의의 것을 충족하는 참가자는 본 연구에서 제외될 것이다:

1. 스크리닝 전 3개월 이내에 프레보텔라 균주 B 50329를 투여받은 적이 있다.

2. 비-플라크 건선 진단을 받았다.

3. 두피, 손바닥 및 발바닥에만 국한된 플라크 건선.

4. 건선 평가 또는 치료 반응을 방해할 피부 병태의 증거(예를 들어, 아토피성 피부염, 진균 또는 박테리아 중복감염).

5. 연구 약물의 첫 번째 투여 후 4주 이내에 전신 면역억제 요법(MTX, 아프레밀라스트, 아자티오프린, 사이클로스포린, 6-티오구아닌, 메르캅토푸린, 미코페놀레이트 모페틸, 히드록시우레아 및 타크로리무스)을 제공받은 적이 있다.

6. 생물학적 제제(TNFα 저해제, 나탈리주맙, 에팔리주맙, 아나킨라 또는 B 세포 또는 T 세포를 조절하는 작용제를 포함하지만 이들로 제한되지 않음)의 사전 사용에 반응하지 않는다.

7. 사전 생물학적 요법이 있고, 반응성인 경우, 참가자는 연구 약물의 첫 번째 투여 전 적어도 12개월 동안 요법을 중단해야 한다.

8. 연구 약물의 첫 번째 투여 4주 이내에 광요법 또는 건선 또는 PGA 평가에 영향을 미칠 수 있는 임의의 전신 약물/치료제(경구 또는 주사용 코르티코스테로이드, 레티노이드, 1,25-디히드록시 비타민 D3 및 유사체, 소랄렌, 설파살라진, 히드록시우레아 또는 푸마르산 유도체를 포함하지만 이들로 제한되지 않음)를 제공받은 적이 있다.

9. 현재 리튬, 항말라리아제, 레플루노미드 또는 IM 골드를 제공받고 있거나, 연구 약물의 첫 번째 투여 4주 이내에 리튬, 항말라리아제, IM 골드 또는 레플루노미드를 제공받은 적이 있다.

10. 연구 약물의 첫 번째 투여 후 2주 이내에 건선 또는 PGA 평가에 영향을 미칠 수 있는 국소 약물/치료제(고효력 및 중간 효력 코르티코스테로이드, 안트랄린, 칼시포트리엔, 국소 비타민 D 유도체, 레티노이드, 타자로텐, 메톡살렌, 트리메틸소랄렌, 피크롤리무스 및 타크로리무스를 포함함[이들로 제한되지는 않음])를 사용한 적이 있다. 국소 비약물 연화제 및 저효력 국소 코르티코스테로이드는 제외되지 않는다.

11. GI 전달 및 통과 시간을 방해할 수 있는 위장관 질환(예를 들어, 단장 증후군, 설사-우세 과민성 대장 증후군).

12. 활성 염증성 장 질환.

13. 제1일(방문 2) 이전에 완료되지 않을 전신 항바이러스 또는 항미생물 요법을 필요로 하는 활성 감염.

14. 스크리닝 전 6주 이내에 생 또는 약독화 생 백신접종을 받은 적이 있거나 연구 동안 이러한 백신접종을 받을 의도이다.

15. 참가자를 포함시키기에 부적합하게 만드는 스크리닝 검사실 값의 임상적으로 유의한 이상(조사자 판단에 따라).

16. 여성의 경우, 125 μ㏖/ℓ(1.414 ㎎/㎗) 이상의 혈청 크레아티닌; 남성의 경우 135 μ㏖/ℓ(1.527 ㎎/㎗) 이상의 혈청 크레아티닌.

17. 2×ULN 초과의 ALT 및 AST

18. HIV의 알려진 이력 또는 이에 대한 양성 검사 또는 C형 간염 또는 만성 B형 간염에 대한 활성 감염.

19. 스크리닝 전 6개월 이내에 임상적으로 유의한 급성 심장 또는 뇌혈관 사건의 이력(뇌졸중, 일과성 허혈 발작 및 관상 심장 질환[협심증, 심근 경색증, 심부전, 혈관 재생 절차] 포함).

20. 연구자의 의견에서, ECG에 의해 판단되는 스크리닝 시 임상적으로 중요한 심장 전도 이상의 증거.

21. 건선 또는 건선성 관절염 이외의 현재 급성 또는 만성 염증성 질환(예를 들어, 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 전신성 홍반성 루푸스).

22. P 히스티콜라 또는 임의의 부형제에 대한 과민증.

23. 치료되지 않은 활성 정신 또는 정신의학적 장애. 스크리닝 전 적어도 6개월 동안 정신 또는 정신의학적 장애에 대한 약물을 안정적으로 투여 중이고, 치료 의사가 정신적으로 안정적이라고 간주한 참가자는 등록될 수 있다.

24. 스크리닝 6개월 이내에 임의의 주요 또는 경미한 GI 수술.

25. 스크리닝 6개월 이내의 모든 주요 수술.

26. 성공적으로 치료된 피부의 기저 또는 편평 세포 암종 또는 자궁경부의 동소 암종을 제외한, 5년 이내의 악성종양.

27. 스크리닝 1개월 이내 또는 조사 작용제의 5 반감기 중 더 긴 기간 내에 또 다른 조사 약물, 생물학적 작용제 또는 장치로의 치료.

28. 기준선 전 14일 이내에 아세트아미노펜/파라세타몰 및 항히스타민제를 제외한 비타민, 허브 보충제 및 기능식품(예를 들어, 일반적으로 캡슐/정제/분말에서 발견되는 고용량의 프로바이오틱스 및 프리바이오틱스를 포함하는 보충제)을 포함하는 임의의 OTC 또는 처방 약물을 시작하거나 연구 기간 동안 투여량의 변화를 예상한다. 저용량을 함유한 프로바이오틱 및 프리바이오틱 식품(예를 들어, 요구르트, 케피어, 콤부차)은 허용된다는 것을 주목하기 바란다.

29. 스크리닝 30일 이내에 100 ㎖ 초과 또는 스크리닝의 12주 이내에 499 ㎖ 초과의 헌혈.

30. 이 프로토콜에 명시된 바와 같이 추적관찰을 포함하는 연구 절차를 준수하려는 의지가 없거나 연구자와 충분히 협력하려는 의지가 없다.

31. 연구자 또는 의뢰자의 의견에 따라, 참가자를 포함시키기에 부적합하거나 참가자가 연구에 참여하거나 연구를 완료하는 데 방해가 될 수 있는 임의의 다른 조건을 갖는다.

연구 설계:

이것은 최대 4주의 스크리닝 기간, 기준선 방문, 16주의 치료 기간(8회의 계획된 연구 현장 방문) 및 4주의 추적관찰 기간(연구 종료 시 1회의 계획된 연구 현장 방문)을 포함하는, 경증 내지 중등도의 플라크 건선을 갖는 참가자의 다기관, 무작위 배정, 이중-맹검, 위약-대조, 병렬-코호트, 용량-범위 연구이다.

스크리닝 기간 동안 자격이 확인된 후, 참가자는 다음 3개의 병렬 코호트 중 1개에 대해 1:1:1 비율로 무작위 배정될 것이다:

코호트 1: 1일 1회 1개의 PIC로 투여되는 0.8×10¹¹개 세포의 프레보텔라 균주 B 50329 또는 매칭 위약.

코호트 2: 1일 1회 4개의 PIC로 투여되는 3.2×10¹¹개 세포의 프레보텔라 균주 B 50329 또는 매칭 위약.

코호트 3: 1일 1회 10개의 PIC로 투여되는 8.0×10¹¹개 세포의 프레보텔라 균주 B 50329 또는 매칭 위약.

각각의 코호트에서, 대략 75명의 참가자를 2:1 비율로 무작위로 배정하여 16주 동안 1일 1회 프레보텔라 균주 B 50329 또는 매칭 위약을 제공할 것이다.

중간 분석은 참가자의 적어도 50%가 적어도 12주의 치료를 완료한 후에 수행될 수 있다.

계획된 16주의 치료 후, 모든 참가자는 4주의 치료 후 추적관찰 기간에 도입하고, 치료 평가가 종료될 것이다.

추정된 연구 기간:

각각의 참가자에 대한 최대 계획 기간은 24주(11회의 예정된 연구 방문 포함)일 것이고, 연구 기간은 서명된 사전동의가 마지막 추적관찰 방문을 통해 제공된 날짜로서 각각의 참가자에 대해 정의된다.

효능 평가:

효능 평가는 PASI 점수, LSS, 정적 PGA의 국제 건선 재단 건선 점수 버전(National Psoriasis Foundation Psoriasis Score version of a static PGA), BSA 관련 백분율, mNAPSI, DLQI, PSI, SF-36 신체 통증 척도, VAS 통증 평가, SF-36의 활력 하위스케일(피로 평가용) 및 피로 VAS를 포함할 것이다.

약동학 또는 약력학 평가:

약동학 평가는 기준선에서의 투여전 혈액 샘플 및 제16주 방문(치료 종료) 시의 또 다른 샘플로 제한될 것이다.

약력학 및 바이오마커 평가는 탐색적 평가변수이며, 바이오마커에 대한 분석 결과는 CSR에 포함되지 않을 것이다. 이것은 CSR과 별도로 보고된다.

약력학 및 바이오마커 평가는 최대 6개의 병변 부위의 디지털 사진, 피부 플라크 생검의 표준 조직학적 평가, 피부 플라크 생검의 mRNA 전사 분석, 혈액 사이토카인 및 케모카인 분석 및 분변 미생물군의 미생물군 조성을 포함한다.

안전성 및 내약성 평가:

안전성 및 내약성 평가는 AE(SAE 포함) 모니터링, 병용 약물 모니터링, BSFS 카테고리화(대변 일지에 기록), 신체 검사, 활력 징후 측정 및 ECG를 포함한다.

연구 약물, 투여량 및 투여 경로:

연구 약물은 프레보텔라 균주 B 50329를 함유하는 캡슐 또는 위약을 포함하는 매칭 캡슐일 것이다.

1개의 캡슐, 4개의 캡슐 또는 10개의 캡슐의 투여량을 갖는 3개의 투여 코호트가 존재할 것이고; 프레보텔라 균주 B 50329의 캡슐은 각각 8.0×10¹⁰개 세포의 프레보텔라 균주 B 50329를 함유하는 반면, 위약 캡슐은 박테리아를 함유하지 않는다.

참가자는 아침에 물과 함께 경구로 연구 약물의 용량을 자가 투여할 것이다.

샘플 규모:

총 225명의 참가자의 샘플 규모를 프레보텔라 균주 B 50329의 내약성 및 안전성을 조사하기 위해 선택하였다. 본 연구는 다음 가정이 충족되는 경우 활성 용량 및 위약 간의 임상적으로 의미 있는 차이를 찾을 수 있는 충분한 참가자가 있다는 신뢰를 제공하기 위해서, 베이시안 프레임워크에서 모델-기반 확률 추론 접근법을 사용할 것이지만, 다음 검정력 계산을 또한 수행하였다(기본 빈도주의적 접근법 사용).

1차 효능 평가변수는 제16주차의 PASI 점수의 기준선으로부터의 백분율 변화이다. 위약에 대한 기준선으로부터의 백분율 변화는 모델 내에서 (활성군의 백분율 변화) - (위약군의 백분율 변화)로 추정될 것이고, 음의 값은 위약군보다 활성군에서의 더 큰 개선을 나타낸다. 적어도 20%의 위약에 대한 기준선으로부터의 백분율 변화는 임상적으로 의미 있는 것으로 간주될 것이다. 모든 용량에 대한 합동 표준 편차는 25%로 가정된다.

각각의 코호트의 위약군 아암의 참가자를 활성군 아암과 대조군 아암을 비교하기 위해서 통계학적 분석을 위해 통합하여, 합동 위약군에 75명의 참가자를 무작위 배정하고, 각각의 활성 치료군(프레보텔라 균주 B 50329 0.8×10¹¹개 세포, 프레보텔라 균주 B 50329 3.2×10¹¹개 세포, 프레보텔라 균주 B 50329 8.0×10¹¹개 세포)에 50명의 참가자를 무작위 배정한다. 참가자의 15% 이하가 제16주 방문 전에 치료를 중단할 것이라고 가정하면, 3개 코호트 각각에서 적어도 42명의 활성 참가자 및 21명의 위약 참가자가 제16주 방문을 통해 데이터를 제공할 것으로 예상된다.

합동 위약과 활성 용량 간의 각각의 쌍별 비교는 위약군 통합이 유효한 전략이라는 가정 하에 5% 유의 수준에서 치료군 간의 차이를 검출하는 95% 초과의 검정력을 가질 것으로 예상될 것이다. 3개의 위약 코호트가 단일 참조군으로 합산하기에는 너무 이질적인 것으로 간주되는 경우, 활성 용량과 위약 용량 간의 각각의 코호트 내 쌍별 비교의 차이를 검출하는 검정력은 80%를 초과할 것이다.

본 연구에 대한 통계적 추론은 형식적 가설을 시험하기보다 추정에 초점을 맞출 것이기 때문에, 연구별 타입 1 오류율을 제어하기 위해 군 간의 서로 상이한 비교에 대한 다중도 조정을 수행하지 않을 것이다.

유사하게, 효능에 대해서 연구를 조기에 중단하기 위해 어떠한 중간 분석을 사용할 의도가 없기 때문에, 중간 분석의 일부로 수행된 임의의 분석을 설명하기 위해서 다중도에 대해서 조정하지 않을 것이다.

통계학적 방법:

주요 평가변수에 대한 분석 방법을 다음에 간략하게 기재한다. 모든 분석에 대한 추가 세부사항은 SAP에 기재되어 있다.

형식적인 가설은 시험되지 않을 것이다. 베이시안 프레임워크의 모델-기반 확률 추론 접근법을 사용하여 용량 선택에 관한 의사-결정을 안내한다. 각각의 활성 용량과 위약 간의 차이에 대한 사후 추정치 및 95% 신뢰 구간(CrI)을 관련 1차 평가변수 및 2차 평가변수에 대해 생성할 것이다.

달리 명시되지 않는 한, 누락된 데이터는 무작위로 누락된 것으로 간주될 것이고, 그 모델에 포함된 관련 평가변수에 대해 수집된 모든 시점과 함께, 반복 측정에 대해 혼합 모델을 사용하여 설명될 것이다. 이것은 분석에 사용된 모수의 정의에 적용 가능한 바와 같은 치료 중단 후 또는 프로토콜 위반 후 수집으로 인해 제외된 데이터를 포함한다.

분석 세트:

mITT 세트는 치료에 무작위 배정되고, 연구 치료의 적어도 1회 용량을 제공받은 모든 참가자로 이루어질 것이다.

PPS는 (제4주가 끝나기 전에 연구 철회 후) 교체되지 않고, 연구 치료 시작 전에 편차에 대해서 시작 날짜와 함께 효능에 영향을 미칠 수 있는 프로토콜 위반이 없는 모든 mITT 참가자로 이루어질 것이다.

안전성 세트는 임의의 연구 약물을 제공받은 모든 참가자로 이루어질 것이다.

mITT 세트는 PPS를 사용하여 수행된 일부 지원 분석과 함께 효능 섹션에 대한 주요 관심 집단일 것이다. 안전성 세트는 모든 안전성 요약에 사용될 것이다.

통계학적 분석 방법론:

통계학적 분석은 SAS 소프트웨어 버전 9.3 이상을 사용하여 수행할 것이다. 연속 변수는 평균, 표준 편차, 중앙값, 최소값 및 최대값을 사용하여 요약될 것이다. 범주 변수는 빈도 수와 백분율을 사용하여 요약될 것이다. 사건까지의 시간 변수는 각각의 방문 시에 그 사건을 갖는 참가자 비율에 대한 카플란-마이어 추정치를 사용하여 요약될 것이다. 데이터를 데이터 목록에 열거할 것이다.

1차 효능 평가변수의 분석:

1차 분석은 베이시안 MMRM을 사용하여 수행될 것이다. 모델은 치료*방문 및 기준선 PASI 점수*방문 상호작용에 대한 매개변수를 포함할 것이다. 체질량 지수, 성별 및 기타 기준선 공변량이 또한 고려될 것이고, 유의한 것(p<0.05)으로 확인되면 매개변수로 포함된다. 이 모델은 기울기를 포함하지 않을 것이다. 모델의 모든 매개변수에 대한 사전분포(priors)는 정보가 아니며, 평균이 0이고 SD가 1000인 정규 분포를 따른다. 분산-공분산 행렬에 대한 사전은 자유도가 방문 횟수와 동일한 역 위샤트(Wishart) 분포 및 항등 척도 행렬(identity scale matrix)을 따를 것이다.

기준선으로부터의 조정된 사후 평균 백분율 변화 및 제16주의 각각의 치료에 대한 연관된 95% HDP CrI가, 각각의 방문 시 위약으로부터의 조정된 평균 차이 및 각각의 활성 용량에 대한 연관된 95% HDP CrI 및 각각의 처리 차이가 0%, 20%, 30% 및 -50% 미만일 확률과 함께 보고될 것이다.

2차 효능 평가변수의 분석:

모든 2차 분석은 어떠한 프로토콜 위반도 고려하지 않고, 치료 중단 후 수집된 데이터를 제외하고 mITT 세트에 대해 수행될 것이다. 용량은 범주 변수로 처리되며, 용량 반응 모델링은 수행되지 않을 것이다. 관심 비교는 개별 프레보텔라 균주 B 50329 용량과 위약 간의 비교일 것이다. 계산된 모든 사후 확률 및 CrI는 수행된 다중성에 대한 추가 조정 없이 설명적인 것으로 간주될 것이다.

탐색적 효능 평가변수의 분석

탐색적 평가변수는 mITT 집단을 사용하여 요약될 것이고, 치료 중단 후 수집된 데이터는 제외되지만, 어떠한 프로토콜 위반도 고려되지 않는다.

바이오마커의 분석은 연구 SAP 외부의 데이터 분석 계획에서 다루어질 것이다.

약동학 분석:

혈액 샘플에서 정량 가능한 농도의 프레보텔라 균주 B 50329를 갖는 참가자의 수 및 백분율을 방문에 의해 설정된 안전성을 사용하여 요약할 것이다. 위약 참가자는 단일 치료군으로 통합될 것이다. 치료군 내 참가자의 적어도 20%가 방문 중 하나에서 정량 가능한 수준을 갖는 것으로 발견되는 경우, 그 농도는 해당 방문에서 관련 치료군에 대한 연속 변수로 요약될 것이다.

안전성 분석:

모든 안전성 평가변수는 안전성 세트를 사용하여 치료군에 의해 표로 작성되거나 플로팅될 것이다. 모든 안전성 분석은 합동 위약을 사용할 것이다. 추가 세부사항은 SAP에 기재될 것이다.

도입부

전신 노출 없이 경구 투여 후 전신 면역 체계 조절 가능성을 제공하는 치료제가 개발 중이다. 프레보텔라 균주 B 50329는 인간 십이지장 생검에서 단리된 프레보텔라 히스티콜라의 균주의 약제학적 제제이며: 이것은 유전자 변형되지 않았다. 프레보텔라 속의 미생물 균주는 현재까지 시험된 모든 인간 집단에서 총 분변 미생물 부하의 1% 미만에서 거의 50%까지의 범위의 존재비로 발견되었다(문헌[Vandeputte 2017]). 프레보텔라는 구강 및 GI관에서 자연 인간 공생인 그람 음성, 절대 혐기균이다. 프레보텔라 균주 B 50329 주요 항생제 부류, 예를 들어, 페니실린 및 세팔로스포린에 민감한 그람 음성 박테리아이다. 비임상 연구 및 임상 연구에서, 이의 치료 효과는 용량 의존적이었다.

몇몇 연구(문헌[de Groot et al 2017]; 문헌[Hindson et al 2017]; 문헌[Yan et al 2017]; 문헌[Felix et al 2018])은, 소화관 및 특히 소장에서 숙주-미생물 상호작용이 전신 염증에 영향을 미칠 수 있다는 것을 시사한다. 전임상 데이터는, 개별 미생물 균주가 고유한 약리학적 프로파일을 나타낸다는 것을 확인해 준다. 이것은 소장 상피에서 숙주 패턴 인식 수용체의 다양한 조합물과 상호작용하는 다수의 구별되는 미생물 구조 패턴 모티프에 기초한다고 생각된다.

다양한 인간 및 마우스 검정에서 시험관내 프레보텔라 균주 B 50329의 연구 및 모델 증상에 대한 생체내 연구는 건선을 포함한 염증성 질환의 치료에서 프레보텔라 균주 B 50329의 사용을 뒷받침한다. 프레보텔라 균주 B 50329는 전염증성 사이토카인, 예컨대, IL-6, TNFα 및 IFNγ의 최소한의 생산을 유도하면서, 인간 면역 세포로부터의 항-염증성 사이토카인, 예컨대, IL-10, IL1RA 및 IL-27의 분비를 증가시킨다.

마우스에게 프레보텔라 균주 B 50329를 경구 투여하면 지연형 과민증, 플루오레세인 이소티오시아네이트 피부 과민증, 콜라겐-유도 관절염(문헌[Marietta et al 2016]) 및 실험적 급성 뇌척수염(문헌[Mangalam et al 2017])의 동물 모델에서 현저한 약력학적 효과를 초래한다. 효과 및 용량 둘 다의 높은 수준의 일관성은 다수의 타입 1, 타입 2 및 타입 3 염증성 병태 전체에 대한 임상적 이점의 가능성을 시사한다. 최대 3주 동안 매일 투여하거나 7주 초과 동안 격일로 투여하는 경우 이러한 실험에 사용된 동물에서 잠재적으로 관련된 부작용이 관찰되지 않았다. 이 모델에서 생체외 면역표현형분석은 비장 및 장간막 림프절에서 조절 T 세포 수 및 조절 수지상 세포의 증가뿐만 아니라 전염증성 사이토카인, 예컨대, IL 23p40, IL-17, TNF, IL-6 및 IL-13과 같은 전염증성 사이토카인의 감소를 나타낸다. 치료는 또한 염증성 질환을 갖는 환자에서 종종 방해를 받는 소화관 장벽 무결성의 향상으로 이어졌다. 면역 매개변수에 대한 이러한 효과는 GI관 내부 및 외부 둘 다에서 관찰되었는데, 이는 소화관 내의 숙주-미생물 상호작용이 말초 조직의 면역 반응에 영향을 미칠 수 있다는 것을 입증한다.

연구 목적

모든 목적은 성인 참가자에서 경증 내지 중등도의 플라크 건선의 프레보텔라 균주 B 50329의 치료의 안정성, 효능 및 투여 효과를 이해하는 것과 관련된다.

1차 목적

2차 목적

본 연구의 2차 목적은 다음과 같다:

탐색적 목적

본 연구의 탐색적 목적은 다음과 같다:

조사 계획

연구 설계

이것은 최대 4주의 스크리닝 기간, 기준선 방문, 16주의 치료 기간(8회의 계획된 연구 현장 방문) 및 4주의 추적관찰 기간(EOS 시 1회의 계획된 연구 현장 방문)을 포함하는, 경증 내지 중등도의 플라크 건선을 갖는 참가자의 다기관, 무작위 배정, 이중-맹검, 위약-대조, 병렬-코호트, 용량-범위 연구이다. 총 11회의 예정된 연구 방문이 존재한다.

스크리닝 기간(본 명세서에 기재된 바와 같음) 동안 자격이 확인된 후, 참가자는 다음 3개의 병렬 코호트 중 1개에 대해 1:1:1 비율로 무작위 배정될 것이다:

계획된 16주의 치료 후, 모든 참가자는 4주의 치료 후 추적관찰 기간에 도입하고, 치료 평가가 종료될 것이다. 각각의 참가자에 대한 최대 계획 기간은 24주일 것이고, 연구 기간은 서명된 사전동의가 마지막 추적관찰 방문을 통해 제공된 날짜로서 각각의 참가자에 대해 정의된다. 참가자는 연구의 모든 단계를 완료하고, 이의 EOS 추적관찰 방문을 끝으로, 연구를 완료한 것으로 간주될 것이다.

연구 설계 근거

프레보텔라 균주 B 50329 1상 프로그램은 건강한 지원자에서 2주 동안 매일 제공된 1.6×10¹⁰개 세포 내지 8.0×10¹¹개 세포의 용량 및 경증 내지 중등도의 건선을 갖는 참가자에게 4주 동안 매일 제공된 1.6×10¹¹개세포 및 8.0×10¹¹개세포의 용량을 평가하였다. 모든 용량은 내약성이 우수한 것으로 확인되었고, 1.6×10¹¹개 및 8.0×10¹¹개 세포의 용량은 플라크 건선 및 건선 병변 중증도의 징후 및 증상에서 임상적으로 관련된 감소를 유도하였다.

프로그램에서 시험된 용량은 1상 연구에서 얻은 전임상 데이터 및, 임상 및 바이오마커 데이터의 예측에 기초한다. 최대 8.0×10¹¹개 세포의 시험된 모든 용량은 동등하게 내약성이 우수하였다. 28일 투여 기간 동안 이전 연구에서 1.6×10¹¹개 세포 및 8.0×10¹¹개 세포 사이에 명확한 효능 차이가 관찰되지 않았지만, 14일 추적관찰(제42일)에서 더 높은 용량을 제공받은 참여자(예를 들어, 대상체)는 더 낮은 용량을 제공받은 참가자에 비해 건선이 지속적으로 개선되었다. 이것은 고용량 군에서 더 지속적이고 잠재적으로 더 강력한 반응을 시사한다. 따라서, 용량 반응, 최대 임상 이익을 확립하고, 시험된 용량의 참가자 내약성 및 허용 가능성을 평가하기 위해서 본 연구에서 가능한 최저 및 최고 용량(캡슐 부하 기준)을 포함시키는 것이 제안된다.

프레보텔라 균주 B 50329 치료에 대한 임상 반응은 다중 평가를 사용하여 평가되어, 향후 연구를 위한 효능 측정의 적절한 선택을 용이하게 할 것이다.

위약 대조약의 사용은 다음 이유로 경증 내지 중등도의 플라크 건선을 갖는 개인의 이러한 참가자 집단에 적절하다.

잠재적으로 활성 대조약으로 작용할 수 있는 경증 내지 중등도의 플라크 건선을 갖는 환자에서 다른 치료(국소 코르티코스테로이드, 비타민 D3 유사체 및 아프레밀라스트)의 제한된 입증된 효능

각각의 참가자에 대한 제한된 연구 기간(최대 16주 치료)

각각의 코호트에서 프레보텔라 균주 B 50329 치료 대 위약 치료에 대한 2:1의 무작위 비율

참가자 선택 및 철회 기준

연구 집단 선택

대략 225명의 참가자가 미국, 영국 및 폴란드의 현장을 포함하지만 이에 제한되지 않는 여러 국가에서 등록(치료에 무작위 배정)될 것이다. 참가자는 모든 포함 기준을 충족하고, 스크리닝 동안 제외 기준이 없는 경우에만 연구 치료에 배정될 것이다.

포함 및 제외 기준으로부터의 편차는 허용되지 않는다: 프로토콜에 명시된 바와 같은 자격 기준을 준수하는 것이 필수적이다.

스크리닝 실패는 임상 연구 참여에 동의했지만, 이후에 연구 약물(프레보텔라 균주 B 50329 또는 위약)에 무작위로 배정되지 않았거나 연구에 참여하지 않은 참가자로 정의된다. 시험 보고 통합 표준 공개 요구 사항을 충족하고 규제 당국으로부터의 질문에 응답하기 위해 스크리닝 실패 참가자의 투명한 보고를 보장하기 위해서 최소한의 스크리닝 실패 정보 세트가 eCRF에 포함될 필요가 있다. 최소한의 정보는 인구통계학, 스크리닝 실패 세부 정보, 자격 기준 및 임의의 SAE를 포함한다.

스크리닝 시 포함 및 제외 기준을 충족하지 못한 개인은 재스크리닝 전에 의료 모니터의 동의 하에 1회 추가 재스크리닝될 수 있다. 참가자는 또한 그들이 처음에 스크리닝 평가를 통과했지만 스크리닝 기간 시간 제한을 초과하는 경우 재스크리닝될 수 있다. 예외적인 상황에서, 스크리닝 창은 의뢰자와 협의 후 사례별로 연장될 수 있고: 이러한 예외적인 연장은 프로토콜 위반으로 간주되지 않을 것이다.

포함 기준

3. 6개월 이상 동안 플라크 건선의 문서화된 진단.

4. 3% 이상 내지

% 이하의 체표면적(BSA)을 덮는 플라크가 있는 경증 내지 중등도의 플라크 건선을 갖고, 다음 추가 기준을 모두 충족한다:

a. 6 이상 내지 15 이하의 PASI 점수, 및

b. 2 또는 3의 PGA 점수.

5. 다음 피임 기준을 충족한다:

a. 남성 참가자:

b. 여성 참가자:

1. 부록 13.1에 정의된 바와 같은 WOCBP가 아님, 또는

6. 본 연구동안 평소 태양 노출을 늘리지 않기로 동의한다.

제외 기준

2. 비-플라크 건선 진단을 받았다.

3. 두피, 손바닥 및 발바닥에만 국한된 플라크 건선.

10. 연구 약물의 첫 번째 투여 후 2주 이내에 건선 또는 PGA 평가에 영향을 미칠 수 있는 국소 약물/치료제(고효력 및 중간 효력 코르티코스테로이드[부록 13.2], 안트랄린, 칼시포트리엔, 국소 비타민 D 유도체, 레티노이드, 타자로텐, 메톡살렌, 트리메틸소랄렌, 피크롤리무스 및 타크로리무스를 포함함[이들로 제한되지는 않음])를 사용한 적이 있다. 국소 비약물 연화제 및 저효력 국소 코르티코스테로이드는 제외되지 않는다.

12. 활성 염증성 장 질환.

17. 2×ULN 초과의 ALT 및 AST

22. P 히스티콜라 또는 임의의 부형제에 대한 과민증.

24. 스크리닝 6개월 이내에 임의의 주요 또는 경미한 GI 수술.

25. 스크리닝 6개월 이내의 모든 주요 수술.

치료제 연구

참가자를 치료군에 배정하는 방법

참가자를 기준선 방문(방문 2) 시에, 1일 1회 용량에 따라 투여되는 캡슐의 수에 의해 참가자와 연구 직원을 구별할 수 있게 하는 3개의 코호트(1:1:1 배정 비율) 중 1개에 무작위 배정할 것이다. 코호트 내에서, 참가자를 프레보텔라 균주 B 50329 또는 매칭 위약 치료(본 명세서에 기재된 바와 같음)를 제공받기 위해 2:1 배정 비율로 무작위로 배정할 것이다. 쌍방향 대응 기술(IRT)을 사용하여 무작위 배정 일정을 관리할 것이다.

치료제 투여

각각의 코호트(본 명세서에 기재된 바와 같음)의 참가자는 아침에 물과 함께 경구로 연구 약물 용량을 자가 투여할 것이며, 투여 1시간 전후에 산성 음료 섭취를 금지하고, 투여 2시간 전 및 투여 후 1시간까지 음식 섭취를 금지한다. 캡슐의 조성은 본 명세서에 기재되어 있다. 규정 준수를 개선하기 위한 전략이 본 명세서에 제시되어 있다.

연구 약물의 정체성

프레보텔라 균주 B 50329 의약품은 스웨덴-오렌지 색상의 장용-코팅된 HPMC 경질 캡슐로 입수 가능하다. 프레보텔라 균주 B 50329 PIC는 P 히스티콜라, 만니톨, 스테아르산마그네슘 및 콜로이드성 이산화규소의 동결-건조 분말로 이루어진다. 각각의 프레보텔라 균주 B 50329 PIC는 8.0×10¹⁰개 세포의 피 히스티콜라를 함유한다.

매칭 위약은 외관이 동일하지만 피 히스티콜라 또는 임의의 다른 박테리아를 함유하지 않는다. 위약 부형제는 미세결정질 셀룰로스 및 스테아르산마그네슘을 포함한다.

임상 공급 관리

연구 약물 포장 및 보관

프레보텔라 균주 B 50329 PIC 및 매칭 위약은 10개 캡슐의 블리스터 월렛(blister wallet)에서 준비할 것이다. 블리스터 월렛은 숫자 코드로 식별되는 1개의 무작위 참가자를 위한 대략 1주 분량의 연구 약물을 함유하는 팩으로 포장될 것이다. 연구 방문 사이의 간격에 적절한 경우, 치료 기간 전체에서 각각의 참가자에게 다수의 팩이 배정되고, 분배될 것이다.

연구 약물(프레보텔라 균주 B 50329 및 위약)은 안전한 장소(예를 들어, 잠긴 냉장고)에 보관되어야 하고, 2℃ 내지 8℃의 제어된 온도에서 유지되어야 한다. 연구자 또는 피지명인은 제공받은 모든 연구 약물에 대해서 운송 동안 그리고 각각의 현장에서 보관 동안 적절한 온도 조건이 유지되었으며, 연구 약물을 사용하기 전에 임의의 불일치가 보고되고 해결되었는지 확인해야 한다.

병용 요법

표지된 투여 지침에 따라느 항히스타민제 및 아세트아미노펜/파라세타몰이 연구 동안 언제든지 사용된다. 참가자가 연구 시작 전에 치료의 일부로 이미 사용하고 있는 경우 국소 비약물 연화제 및 저효력 국소 스테로이드가 또한 허용된다(제외 기준 #10). 참가자는 이들이 연구 시작 전과 같이 이러한 요법을 계속 사용하도록 조언될 것이다.

본 연구에서는 비-생(non-live) 백신이 허용된다.

필요한 경우 의료 모니터와 상담하여 연구자가 사례별로 다른 병용 약물을 고려할 수 있다.

금지된 병용 요법

제외 기준(본 명세서에 기재된 바와 같음)에 상세히 기술된 바와 같이 본 연구에 적격한 참가자에 대해 제한된 사전 요법은 연구 동안 금지된 병용 요법이다.

생 또는 약독화 생 백신은 본 연구에서 금기이다.

효능 평가

건선 부위 중증도 지수 점수

PASI 점수는 문헌[Langley and Ellis (2004)]에 의해 기재된 바와 같이 평가될 것이다. PASI는 0(질환 없음)에서 72(최대 질환) 범위의 단일 점수로 건선의 중증도 및 건선에 의해서 영향을 받는 영역의 평가를 결합한 의사의 평가이다. 본 연구에서 절대 PASI 점수는 포함 기준 #4의 일부로 사용된다. PASI 백분율 응답률은 효능 평가변수(즉, PASI-50, PASI-75, PASI-90 및 PASI 100)이다. 예를 들어, 기준선으로부터 PASI 점수에서 75% 이상의 감소를 달성한 참가자의 백분율은 PASI-75 값으로 표현된다. PASI 평가에 대한 세부사항은 연구 매뉴얼에 제공될 것이다.

병변 중증도 점수

LSS는 건선 플라크의 중증도를 점수 매기는 데 사용된다(문헌[Patel and Tsui 2011]). 스케일링, 홍반 및 플라크 상승의 치수를 각각 0에서 4까지의 척도로 점수를 매기며, 총 LSS는 단일 연구 방문에서 관찰된 3차원 점수의 수치 합이다.

의사의 종합 평가

정적 PGA의 국제 건선 재단 건선 점수 버전은 전신 홍반, 경결(induration) 및 박리 점수를 평균내어 계산된다(문헌[Feldman and Krueger 2005]). 홍반, 경결 및 박리는 0(없음)에서 5(심각함)까지 범위의 6점 규모로 점수 매겨질 것이고: 총 PGA 점수는 홍반, 경결 및 박리의 평균으로 정의된다. PGA 평가에 대한 세부사항은 연구 매뉴얼에 제공될 것이다.

체표면적 관여 백분율

BSA 관여 백분율은 각각의 참가자에 대해 추정되며, 여기서 1%는 대략 참가자의 손바닥 자국의 면적이다(문헌[Walsh et al 2013]). BSA 평가에 대한 세부사항은 연구 매뉴얼에 제공될 것이다.

Walsh 및 동료들은 임상 시험에서 건선의 중증도를 측정하기 위한 간단하고 효과적인 대안으로서 PGA 및 BSA 관여를 제안하였다(문헌[Walsh et al 2013]).

변형된 손발톱 건선 중증도 지수

mNAPSI는 의사가 손발톱 단위의 관여 영역에 의해서 손발톱 기저 건선 및 손발톱 기질 건선의 중증도를 평가하기 위한 수치적이고, 재현 가능하고, 객관적이며 간단한 툴이다(문헌[Cassell et al 2007]). mNAPSI 수행에 대한 세부사항은 연구 매뉴얼에서 제공될 것이다.

피부과적 삶의 질 지수

DLQI는 환자의 삶의 질에 대한 피부 병태의 영향을 평가하기 위한 환자 보고 결과 도구이다(문헌[Finlay and Khan 1994]). DLQI 관리에 대한 세부사항은 연구 매뉴얼에서 제공될 것이다.

건선 증상 목록

PSI는 플라크 건선 증상의 중증도를 평가하는 데 사용되는 환자 보고 결과 도구이다(문헌[Bushnell et al 2013]). 모든 증상(가려움증, 발적, 스케일링, 작열감, 갈라짐, 따끔거림, 박편 및 통증)을 5점 중증도 척도로 점수 매긴다. PSI는 양호한 구성 타당성을 나타내었고, 대상체내 변화에 민감하였다(p<0.0001). PSI 관리에 대한 세부사항은 연구 매뉴얼에서 제공될 것이다.

통증

예를 들어, 통증은 SF-36 신체 통증 척도(SF-36 BPS) 또는 VAS 통증에 의해서 평가될 것이다(문헌[Hawker et al 2011]). 통증 평가 관리에 대한 세부사항은 연구 매뉴얼에서 제공될 것이다.

피로

건선의 피로에 대한 최근 연구(문헌[Skoie et al 2017])와 일치하게, 피로는 SF-36(문헌[van der Heijden et al 2003]) 및 피로 VAS(문헌[Wolfe 2004])의 활력 하위척도에 의해 평가될 것이다. 피로 평가 관리에 대한 세부사항은 연구 매뉴얼에서 제공될 것이다.

조직학적 평가

표준 조직학은 각각의 코호트의 대략 15명의 참가자로부터 피부 플라크 생검(표피 두께, 기저 유사분열 수 및 면역 세포 침윤물, 면역조직화학 포함)에 대해 수행될 것이다. 세부사항은 연구 매뉴얼에서 제공될 것이다. 조직학적 평가는 탐색적이며, CSR의 범위를 벗어난다.

mRNA 전사 분석

mRNA 전사 분석을 피부 플라크 생검에서 수행할 것이다.

혈액 사이토카인 및 케모카인 분석

혈액 샘플을 생체외에서 자극하고, 사이토카인 및 케모카인, 예컨대, IL-1 베타, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p40, IL-17A, TNFα 및 IFNγ의 수준을 분석할 것이다.

통계학적 고려 사항

주요 평가변수에 대한 분석 방법을 다음에 기재한다. 모든 분석에 대한 추가 세부사항은 SAP에 기재되어 있다.

형식적인 가설은 시험되지 않을 것이다. 베이시안 프레임워크의 모델-기반 확률 추론 접근법을 사용하여 용량 선택에 관한 의사-결정을 안내한다. 각각의 활성 용량과 위약 간의 차이에 대한 사후 추정치 및 95% CrI를 관련 1차 평가변수 및 2차 평가변수에 대해 생성할 것이다.

모수 및 동시 사건

1차 효능 모수

1차 모수는 프로토콜로부터의 편차에 관계없이, 모든 치료된 참가자의 mITT 세트에서 기준선에서부터 제16주의 PASI 점수의 백분율 변화에 대한 프레보텔라 균주 B 50329의 효과일 것이다. 치료 중 수집된 데이터만 치료 중단의 간헐적 사건을 설명하는 데 사용될 것이다(치료 순응도에만 기초한 가상 전략). 각각의 활성 용량과 합동 위약 간의 사후 평균 차이를 추정할 것이다.

각각의 반문 시 PASI 점수의 기준선으로부터의 백분율 변화를 하기와 같이 계산할 것이다:

100*(방문 시 PASI 점수 - 기준선 PASI 점수) / 기준선 PASI 점수.

기준선으로부터의 음의 백분율 변화는 개선을 나타낼 것이다.

1차 분석을 위해, 2개의 지원 모수가 또한 고려될 것이다:

1차 분석은 본 명세서에 전부 기재된 바와 같은 베이시안 MMRM을 사용하여 수행될 것이다. 제16주 이전의 방문으로부터의 데이터는 이 모델에 포함될 것이고, 누락 데이터는 명시적으로 전가되지 않을 것이다.

지원 분석을 상기에 정의된 바와 같은 2개의 대체 모수를 사용하여, 동일한 방식으로 수행할 것이다. 이들은 치료 중단의 동시 사건 및 효능에 영향을 미칠 수 있는 프로토콜 위반과 관련된 사건의 가능한 영향을 조사할 것이다.

2차 효능 모수

모든 2차 평가변수의 분석에 대한 추정치를 하기 표에 제시한다.

표: 2차 모수의 요약:

2차 평가변수는 본 명세서에 충분히 설명되어 있다.

탐색적 평가변수

탐색적 평가변수는 다음과 같다:

제4주, 제8주 및 제12주에 PASI-50, PASI-75, PASI-90 및 PASI-100을 달성한 참가자의 백분율

제4주, 제8주 및 제12주에 2점 이상의 개선으로 PGA 0 또는 1을 달성한 참가자의 백분율

제4주, 제8주 및 제12주에 PGA 0을 달성한 참가자의 백분율

제12주 및 제16주에 PSI 삶의 질 점수에서 기준선으로부터의 평균 변화

제12주 및 제16주에 PSI 삶의 질 점수에서 기준선으로부터의 평균 백분율 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 통증 및 피로 점수의 기준선으로부터의 평균 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 통증 및 피로 점수의 기준선으로부터의 평균 백분율 변화

제8주 및 제16주에 공복 혈중 글루코스 및 공복 지질 패널에서의 기준선으로부터의 평균 변화

바이오마커 평가변수(CSR과 별개로 나타나는 통계학적 분석)은 다음을 포함한다:

기준선 대비 제16주에 피부 플라크 생검의 조직학적 평가(표피 두께, 기저 유사분열 수 및 면역 세포 침윤물)

기준선 대비 제16주에 피부 플라크 생검에 대한 mRNA 전사 분석

기준선 대비 제16주에 혈액 사이토카인 및 케모카인 수준

기준선 대비 제16주 및 제20주에 (대변에서) 미생물군 조성

탐색적 평가변수는 mITT 세트를 사용하여 요약될 것이고, 치료 중단 후 수집된 데이터는 제외되지만, 어떠한 프로토콜 위반도 고려되지 않는다.

샘플 규모 결정

1차 효능 평가변수는 제16주차의 PASI 점수의 기준선으로부터의 백분율 변화이다. 위약에 대한 기준선으로부터의 백분율 변화는 모델(본 명세서에 기재된 바와 같음) 내에서 (활성군의 백분율 변화) - (위약군의 백분율 변화)로 추정될 것이고, 음의 값은 위약군보다 활성군에서의 더 큰 개선을 나타낸다. 적어도 20%의 위약에 대한 기준선으로부터의 백분율 변화는 임상적으로 의미 있는 것으로 간주될 것이다. 모든 용량에 대한 합동 표준 편차는 25%로 가정된다.

유사하게, 효능에 대해서 연구(본 명세서에 기재된 바와 같음)를 조기에 중단하기 위해 어떠한 중간 분석을 사용할 의도가 없기 때문에, 중간 분석의 일부로 수행된 임의의 분석을 설명하기 위해서 다중도에 대해서 조정하지 않을 것이다.

분석 세트

다음 분석 세트를 통계학적 분석에 사용할 것이다.

등록 세트: 등록 세트는 ICF에 사인한 모든 참가자로 이루어질 것이다.

mITT 세트: mITT 세트는 치료에 무작위 배정되고, 연구 치료의 적어도 1회 용량을 제공받은 모든 참가자로 이루어질 것이다. 4주가 끝나기 전에 연구를 철회하고 대체된 참가자가 본 분석 세트에 포함될 것이다. mITT를 사용한 모든 분석은 무작위 치료에 따라 참가자를 그룹화할 것이다.

PPS: PPS는 (제4주가 끝나기 전에 연구 철회 후) 교체되지 않고, 연구 치료 시작 전에 편차에 대해서 시작 날짜와 함께 효능에 영향을 미칠 수 있는 프로토콜 위반이 없는 모든 mITT 참가자로 이루어질 것이다. 치료 시작 후 효능에 잠재적인 영향을 갖는 프로토콜을 위반한 참가자의 경우, 그 참가자는 PPS에 남아 있지만, 프로토콜 위반이 발생한 후 수집된 모든 데이터는 PPS를 사용하여 수행된 임의의 분석에서 제외될 것이다. PPS를 사용한 모든 분석은 연구 시작 시 제공받은 치료에 따라 참가자를 그룹화할 것이다.

안전성 세트: 안전성 세트는 임의의 연구 약물을 제공받은 모든 참가자로 이루어질 것이다. 안전성 세트를 사용한 모든 분석은 제공받은 치료에 따라 참가자를 그룹화할 것이다. 참가자가 연구 동안 다수의 치료를 제공받은 경우, 이들은 다음과 같은 방식으로 치료군에 배정될 것이다:

참가자가 활성 치료 및 위약 치료 둘 다를 제공받은 경우, 이들은 활성 치료군에 배정될 것이다.

참가자가 2개 이상의 상이한 활성 용량 수준을 제공받은 경우, 이들은 가장 오랜 기간 동안 제공받은 치료에 배정될 것이다.

1차 효능 평가변수의 분석:

위약 참가자의 3개 코호트를 단일 위약군에 통합하여 모든 활성 용량에 대한 대조군으로 사용할 수 있다는 가정은 시간에 대한 PASI 점수의 백분율 변화의 평균(±SD) 플롯을 사용하여 조사될 것이다.

1차 분석은 베이시안 MMRM을 사용하여 수행될 것이다. 모델은 치료*방문 및 기준선 PASI 점수*방문 상호작용에 대한 매개변수를 포함할 것이다. 체질량 지수, 성별 및 기타 기준선 공변량이 또한 고려될 것이고, 유의한 것(p<0.05)으로 확인되면 매개변수로 포함된다. 이 모델은 기울기를 포함하지 않을 것이다. 방문은 6개 수준(제1주, 제2주, 제4주, 제8주, 제12주 및 제16주)으로 이루어질 것이고, 위약 합동 전략이 적절하다고 간주되는 경우에는 치료는 4개 수준(합동 위약, 프레보텔라 균주 B 50329 0.8×10¹¹개 세포, 프레보텔라 균주 B 50329 3.2×10¹¹개 세포 및 프레보텔라 균주 B 50329 8.0×10¹¹개 세포)로 이루어질 것이고, 위약 합동 전략이 적절하다고 간주되지 않는 경우에는 6개 수준(위약 매칭 프레보텔라 균주 B 50329 0.8×10¹¹개 세포, 위약 매칭 프레보텔라 균주 B 50329 3.2×10¹¹개 세포, 위약 매칭 프레보텔라 균주 B 50329 8.0×10¹¹개 세포, 프레보텔라 균주 B 50329 0.8×10¹¹개 세포, 프레보텔라 균주 B 50329개 3.2×10¹¹개 세포 및 프레보텔라 균주 B 50329 8.0×10¹¹개 세포)으로 이루어질 것이다.

모델의 모든 매개변수에 대한 사전분포(priors)는 정보가 아니며, 평균이 0이고 SD가 1000인 정규 분포를 따른다. 분산-공분산 행렬에 대한 사전은 자유도가 방문 횟수와 동일한 역 위샤트(Wishart) 분포 및 항등 척도 행렬(identity scale matrix)을 따를 것이다. 위샤트 분포의 선택은 그것이 다변량-정규 랜덤 벡터의 역-공분산 행렬의 켤레 사전분포(conjugate prior)인 것에 기초한다.

3개의 위약 코호트 간의 유사성에 대한 가정이 적절하다고 간주되는 경우, 위약 코호트를 통합하고, 위약에 대한 각각의 활성 용량에 대한 쌍별 차이에 대해 단일 위약 대조군을 사용할 것이다. 유사성에 대한 가정이 부적절하다고 간주되는 경우, 각각의 위약 용량은 별도의 용량 수준으로 모델에 포함되고, 각각의 활성 용량과 위약 간의 쌍별 비교는 관련 활성 용량에 대한 매칭 위약 용량 데이터만 사용하여 수행될 것이다.

모델의 모든 매개변수에 대한 사후 샘플의 사후 밀도 플롯 및 모델의 기초가 되는 분포 가정을 평가하기 위한 잔차 플롯을 포함하는, 모델 검사 및 진단 플롯을 생성할 것이다. 데이터가 무작위로 누락되었다는 가정은 제16주 방문 이전에 연구 약물을 중단한 참가자와 비교하여 16주 연구 약물을 완료한 참가자의 하위군에 대해서, 치료군에 의한 방문에 대한 PASI 점수의 평균 백분율 변화를 플로팅함으로써 평가될 것이다.

모델 검사 및 진단 플롯이 분석의 기초가 되는 가정의 위반을 나타내는 경우, 관찰된 위반 유형에 적절한 대체 통계학적 방법이 고려될 것이다.

이 1차 분석은 본 명세서에 정의된 2개의 지원 모수를 사용하여 반복될 것이다.

1차 모수를 갖는 모델에 대해서 추가 민감성 분석을 수행할 것인데, 여기서 치료 실패로 인해 연구 약물을 철회한 참가자(참가자가 플라크 건선을 위해서 경구 작용제, 생물학적 또는 중간 또는 고효력 국소 요법을 시작함으로써 입증됨)는 연구 약물 중단 후 모든 방문에서 치료 중 최대 값에 도달함(즉, 이월된 최악의 점수)에 따라 귀속되는 PASI로부터의 백분율 변화를 가질 것이다.

위약 코호트 사이의 유사성에 대한 가정이 뒷받침되는 경우, 합동 코호트에 대한 용량-반응 모델을 사용하여 PASI 점수의 기준선에서 제16주까지의 백분율 변화에 대한 보충 분석을 수행할 것이다. 로그-선형, 3-매개변수 및 4-매개변수 E_max 모델을 출력에 사용하기 위해 선택된 가장 적합한 모델(가장 낮은 DIC)과 피팅하고, 비교할 것이다.

용량-반응 모델을 E₀ 및 E_max에 대한 비정보 사전분포 및 ED₅₀(3- 및 4-매개변수 모델만)에 대한 FUP 및 기울기 매개변수 m(4-매개변수 모델만)을 사용한 베이시안 기술을 사용하여 데이터에 피팅할 것이다. 이러한 추론 선택의 근거는 FUP가 용량 범위 전체에서 편평한 선을 향해 용량 반응을 수축시키기 때문에, 최대 가능성과 비교하여 용량-반응 관계에 대한 보다 보수적인 추정치를 제공하기 때문이다(문헌[Bornkamp 2014]). 모델은 SAP에 전부 기재될 것이다.

선택된 모델에 기초하여, 각각의 활성 용량에 대한 위약과의 차이에 대한, 연관된 95% HDP CrI를 갖는 사후 평균은 사후 평균 및 각각의 활성 용량에 대한 위약으로부터의 치료 차이의 95% HDP CrI 및 위약과의 차이가 0, -20%, -30% 및 -50% 미만인 사후 확률과 함께, 각각의 활성 용량과 위약 간의 쌍별 차이에 대해 생성될 것이다. 용량 반응 모델에서 추가 민감도 분석이 수행될 것인데, 여기서 치료로 인해서 연구 약물을 철회한 참가자는 연구 약물을 중단한 후 100%로서 귀속되는 PASI로부터의 제16주 백분율 변화를 가질 것이다.

PASI 점수의 기준선으로부터의 백분율 변화는 방문에 의해서 요약될 것이다.

2차 효능 평가변수의 분석:

모든 2차 분석은 위약 코호트에 대한 유사성 가정이 적절하다고 간주되는 경우 합동 위약군을 사용하거나 유사성 가정이 적절하지 않은 것으로 간주되는 경우 3개의 코호트-수준 위약군을 사용하여 수행될 것이다.

달리 명시되지 않는 한, 모든 2차 분석은 어떠한 프로토콜 위반도 고려하지 않고, 치료 중단 후 수집된 데이터를 제외하고 mITT 세트에 대해 수행될 것이다. 용량은 범주 변수로 처리되며, 용량 반응 모델링은 수행되지 않을 것이다. 관심 비교는 개별 프레보텔라 균주 B 50329 용량과 위약 간의 비교일 것이다. 계산된 모든 사후 확률 및 CrI는 수행된 다중성에 대한 추가 조정 없이 설명적인 것으로 간주될 것이다.

데이터를 수집된 그대로 분석할 것이고, 누락 데이터의 대체를 수행할 것이다.

4주, 8주 및 12주에 PASI 점수의 기준선으로부터의 평균 백분율 변화를 1차 모수에 대해서 MMRM의 일부로서 분석할 것이다. 제16주 시점에 대해 생성된 동일한 통계학이 또한 제4주, 제8주 및 제12주에 생성될 것이다.

다음 2차 평가변수를 1차 분석에 대해서 기재된 바와 동일한 방식으로 분석할 것이다.

제4주, 제8주, 제12주 및 제16에 PASI 점수의 기준선으로부터의 평균 절대값 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 LSS의 기준선으로부터의 평균 백분율 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 LSS의 기준선으로부터의 평균 절대값 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 PGAХBSA의 기준선으로부터의 평균 백분율 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 PGAХBSA의 기준선으로부터의 평균 절대값 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 DLQI 점수의 기준선으로부터의 평균 백분율 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 DLQI 점수의 기준선으로부터의 평균 절대값 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 mNAPSI 총 점수의 기준선으로부터의 평균 백분율 변화

제4주, 제8주, 제12주 및 제16주에 mNAPSI 총 점수의 기준선으로부터의 평균 절대값 변화

PASI-50의 경우, 로짓 링크 함수(logit link function)를 사용한 베이시안 일반화 선형 혼합 효과 모델을 모든 방문으로부터의 데이터를 사용하여 피팅할 것이다. 치료*방문 및 기준선 PASI 점수*방문 상호작용은 고정 효과로 모델에 포함될 것이다. 체질량 지수, 성별 및 기타 기준선 공변량이 또한 고려될 것이고, 유의한 것(p<0.05)으로 확인되면 고정된 효과로서 피팅된다. 각각의 방문에서 위약과 비교한 각각의 활성 용량에 대한 교차비 및 95% HDP CrI를 제시할 것이다.

PASI-50에 대한 민감도 분석을 또한 상기에 기재된 것과 동일한 방식으로 수행할 것이며, 여기서 치료 실패로 인해 제16주 이전에 연구 약물을 철회한 참가자는 연구 약물 철회 후 모든 방문에서 '달성되지 않음'으로 귀속되는 PASI-50 매개변수를 갖는 모델에 포함될 것이다.

2점 이상의 개선으로 0 또는 1의 PGA를 달성한 참가자의 백분율 및 0의 PGA를 달성한 참가자의 백분율을 PASI-50에 대해 상기에 기재된 것과 동일한 방식으로 분석할 것이다.

PASI-50의 첫 번째 달성까지의 시간 동안, 베이시안 콕스 비례 위험 모델을 공변량으로서 치료 및 기준선 PASI 점수에 피팅할 것이다. 위약과 비교한 각각의 활성 용량에 대한 위험비 및 95% HDP CrI를 제시할 것이다.

탐색적 효능 평가변수의 분석

탐색적 평가변수는 mITT 집단을 사용하여 요약될 것이고, 치료 중단 후 수집된 데이터는 제외되지만, 어떠한 프로토콜 위반도 고려되지 않는다. 탐색적 평가변수에 대해서 수행될 모든 분석의 세부사항을 SAP에 설명할 것이다.

약동학 분석:

중간 분석

참가자의 적어도 50%가 적어도 12주의 치료를 완료하거나 치료를 철회한 후 연구를 수행하는 동안 중간 분석을 수행할 수 있다. 이 분석의 목적은 향후 연구 계획을 지원하고 프레보텔라 균주 B 50329의 유익/유해 프로파일을 더 잘 이해하는 것을 목적으로 할 것이다.

중간 분석을 위해, 맹검되지 않은 집계 결과는 전략적 계획 사용을 위해 맹검되지 않은 팀에 의해 생성될 것이다. 이는 개별 연구 데이터의 수집 및 검토에 관여할 임의의 연구 현장 직원, 참가자 또는 임상 모니터와 공유되지 않을 것이다.

중간 분석은 PASI 점수, 2차 평가변수 및 안전성 평가변수에서 기준선으로부터 백분율 변화의 1차 평가변수를 살펴볼 것이다. 합동 위약과 비교하여 각각의 활성 용량에서 적어도 20% 더 낮은 PASI 점수의 기준선으로부터 백분율 변화의 사후 예측 확률(문헌[Spiegelhalter et al 2004])을 또한 1차 분석에 대해서 기재된 베이시안 MMRM을 사용하여 제12주에 발견된 치료 차이의 추정치를 사용하여 계산할 것이다. 모든 활성 용량에 대한 사후 예측 확률이 30% 미만인 것으로 밝혀진 경우, 연구는 무의미로 인해서 중단될 수 있다.

연구 수행에 관한 결정은 무의미로 인해서 연구를 조기에 중단할 가능성 외에는 이러한 평가에 기초하지 않을 것이며, 우수한 효능이 발견되면 연구를 중단하지 않을 것이다. 비맹검 처리 배정을 특징으로 하는 결과는 비맹검 분석군에 의해 생성될 것이다(데이터 보급 계획에 포함됨).

참고문헌

참고문헌에 의한 통합

본 명세서에 언급된 모든 공보 특허 출원은 각각의 개별 공보 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참고에 의해 통합된 것으로 표시된 것처럼 그의 전문이 본 명세서에 참고로 통합된다. 상충되는 경우, 본 명세서의 임의의 정의를 포함하여 본 출원이 우선시될 것이다.

등가물

당업자는 본 명세서에 기재된 본 발명의 특정 실시형태와 많은 등가물을 일상적인 실험을 사용하여 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 청구범위에 의해 포함되는 것으로 의도된다.

SEQUENCE LISTING <110> EVELO BIOSCIENCES, INC. <120> COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING PSORIASIS AND ATOPIC DERMATITIS USING PREVOTELLA HISTICOLA <130> ETB-04725 <140> PCT/US2020/044851 <141> 2020-08-04 <150> 63/030,581 <151> 2020-05-27 <150> 63/023,559 <151> 2020-05-12 <150> 62/940,005 <151> 2019-11-25 <150> 62/930,370 <151> 2019-11-04 <150> 62/883,943 <151> 2019-08-07 <150> 62/883,085 <151> 2019-08-05 <160> 69 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 770 <212> PRT <213> Prevotella histicola <400> 1 Met Asn Leu Lys Thr Phe Thr Lys Thr Val Leu Cys Phe Ala Leu Phe 1 5 10 15 Ala Val Ser Ala Ile Thr Ala Lys Ala Ala Asp His Leu Ala Ile Val 20 25 30 Gly Glu Ala Val Trp Gly Gly Trp Asp Leu Val Lys Ala Thr Ala Met 35 40 45 Val Lys Ser Pro Asn Asn Pro Asp Val Phe Met Ala Thr Val His Leu 50 55 60 Asn Ala Gly Lys Gly Phe Lys Phe Leu Thr Glu Arg Glu Trp Gly Lys 65 70 75 80 Leu Glu Tyr Arg Ser Gly Ala Ser Asp Val Val Leu Lys Ser Gly Ile 85 90 95 Arg Tyr Lys Leu Tyr Ala Ser Ile Gly Ala Ser Glu 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Lys Thr Val Lys Gly Lys Arg Gln Tyr Thr Val Thr 290 295 300 Lys Ala Thr Gly Glu Leu Val Asp Val Lys Glu Leu Lys Ala Asp Asp 305 310 315 320 Ala Phe Ile Gln His Phe Gln Pro Glu Ile Asp Ala Val Lys Ala Trp 325 330 335 Ser Asp Gln Val Ile Gly Arg Phe Glu Asn Thr Ile Tyr Ser Lys Asp 340 345 350 Ser Tyr Phe Gly Asn Ser Ala Phe Asn Asp Leu Ile Leu Asn Leu Glu 355 360 365 Leu Glu Ile Thr Lys Ala Asp Ile Ala Phe Asn Ala Pro Leu Leu Phe 370 375 380 Asn Ala Ser Ile Lys Ala Gly Pro Ile Thr Val Ala Asp Met Phe Asn 385 390 395 400 Leu Tyr Lys Tyr Glu Asn Asn Leu Cys Thr Met Arg Leu Thr Gly Lys 405 410 415 Glu Ile Arg Lys His Leu Glu Met Ser Tyr Asp Leu Trp Cys Asn Thr 420 425 430 Met Lys Ser Pro Glu Asp His Leu Leu Leu Leu Ser Ser Thr Gln Asn 435 440 445 Asp Ala Gln Arg Leu Gly Phe Lys Asn Phe Ser Phe Asn Phe Asp Ser 450 455 460 Ala Ala Gly Ile Asp Tyr Glu Val Asp Val Thr Lys Pro Asp Gly Gln 465 470 475 480 Lys Val Arg Ile Leu Arg Met Ser Asn Gly Glu Pro Phe Asp Glu Asn 485 490 495 Lys Trp Tyr Thr 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Leu Ala Ile Lys Leu Leu Glu His Asp Lys 325 330 335 Asp Val Glu Gln Leu Val Ser Pro Leu Gly Asp Ser Ile Glu Ile Phe 340 345 350 Asn His Arg Asp Thr Ala Ala Ala Arg Val Lys Glu Glu Thr Gly Asn 355 360 365 Asp Ser Glu Thr Ala Ile Met Asp Ala Lys Tyr Gly Phe Ile Asn Gly 370 375 380 Ala Leu Lys Glu Ala Asn Phe Ser Thr Gly Asp Lys Lys Asp Thr Tyr 385 390 395 400 Gln Thr Thr His Val Ile Asp His Val Leu Thr Asn Lys Tyr Phe Gly 405 410 415 Phe Pro Ile Phe Phe Leu Val Leu Leu Val Met Phe Thr Ala Thr Phe 420 425 430 Val Ile Gly Gln Tyr Pro Met Asp Trp Ile Glu Ala Gly Val Gly Trp 435 440 445 Leu Gly Glu Phe Ile Ser Lys Asn Met Pro Ala Gly Pro Val Lys Asp 450 455 460 Met Ile Val Asp Gly Ile Ile Gly Gly Val Gly Ala Val Ile Val Phe 465 470 475 480 Leu Pro Gln Ile Leu Ile Leu Tyr Phe Phe Ile Ser Tyr Met Glu Asp 485 490 495 Cys Gly Tyr Met Ser Arg Ala Ala Phe Ile Met Asp Arg Leu Met His 500 505 510 Lys Met Gly Leu His Gly Lys Ser Phe Ile Pro Leu Ile Met Gly Phe 515 520 525 Gly Cys Asn Val Pro Ala Val 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Ile Ala Lys Pro Gly Gly Asp Lys Ile Gly Arg Arg Arg Leu 115 120 125 Asp Thr His Phe Leu Gly Phe Lys Asn Leu Gly Ala His Phe Gly Arg 130 135 140 Val Glu Asp Arg Asp Val Tyr Glu Ile Gln Ala Asp Lys Leu Val Gly 145 150 155 160 Thr Tyr Met Leu Leu Asp Glu Ala Ser Ile Thr Gly Thr Ala Asn Ile 165 170 175 Ile Met Ala Ala Val Leu Ala Glu Gly Thr Thr Thr Ile Tyr Asn Ala 180 185 190 Ala Cys Glu Pro Tyr Ile Gln Gln Leu Cys Lys Met Leu Asn Ala Met 195 200 205 Gly Ala Lys Ile Ser Gly Ile Ala Ser Asn Leu Ile Thr Ile Glu Gly 210 215 220 Val Lys Glu Leu His Ser Ala Asp His Arg Ile Leu Pro Asp Met Ile 225 230 235 240 Glu Val Gly Ser Phe Ile Gly Ile Ala Ala Met Ile Gly Asp Gly Val 245 250 255 Arg Ile Lys Asp Val Ser Val Pro Asn Leu Gly Leu Ile Leu Asp Thr 260 265 270 Phe His Arg Leu Gly Val Gln Ile Ile Val Asp Asn Asp Asp Leu Ile 275 280 285 Ile Pro Arg Gln Asp His Tyr Val Ile Asp Ser Phe Ile Asp Gly Thr 290 295 300 Ile Met Thr Ile Ser Asp Ala Pro Trp Pro Gly Leu Thr Pro Asp Leu 305 310 315 320 Ile Ser 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Claims

인간 대상체에서 건선을 치료하는 방법으로서, 상기 인간 대상체에게 하나 이상의 장용 코팅 캡슐 또는 정제로 제형화된 8×10¹⁰ 내지 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라(Prevotella histicola) 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 용량을 경구 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
인간 대상체(예를 들어, 건선을 갖는 대상체)에서 병변 중증도 점수(Lesion Severity score: LSS)(예를 들어, 평균 LSS)를 (예를 들어, 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여) 감소시키는 방법으로서, 상기 인간 대상체에게 하나 이상의 장용 코팅 캡슐 또는 정제로 제형화된 8×10¹⁰ 내지 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 용량을 경구 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제2항에 있어서, 상기 평균 LSS가 상기 대상체에서 감소되는, 방법.
제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 LSS가 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여 감소되는, 방법.
인간 대상체(예를 들어, 건선을 갖는 대상체)에서 건선 부위 중증도 지수(Psoriasis Area and Severity Index: PASI) 점수(예를 들어, 평균 PASI 점수)를 (예를 들어, 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여) 감소시키는 방법으로서, 상기 인간 대상체에게 하나 이상의 장용 코팅 캡슐 또는 정제로 제형화된 8×10¹⁰ 내지 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 용량을 경구 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제5항에 있어서, 상기 평균 PASI 점수가 상기 대상체에서 감소되는, 방법.
제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 PASI 점수가 기준선 또는 위약 대조군과 비교하여 감소되는, 방법.
인간 대상체(예를 들어, 건선을 갖는 대상체)에서 지속적인 임상 효과(예를 들어, 투여 완료 2주 후에, 예를 들어, 평균 LSS 및/또는 PASI의 기준선(또는 위약)으로부터의 계속적인 감소)를 증가시키는 방법으로서, 상기 인간 대상체에게 하나 이상의 장용 코팅 캡슐 또는 정제로 제형화된 8×10¹⁰ 내지 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 용량을 경구 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제8항에 있어서, 상기 지속적인 임상 효과는 투여 완료 후 평균 LSS 및/또는 PASI의 기준선 또는 위약으로부터의 계속적인 감소를 포함하는, 방법.
제9항에 있어서, 평균 LSS 및/또는 PASI의 기준선 또는 위약으로부터의 상기 감소는 투여 후 적어도 2주 동안 계속되는, 방법.
제2항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LSS 및/또는 PASI 점수는 기준선 또는 위약에 비해서 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40% 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%만큼 감소되는, 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 약 0.8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 약 8.0×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 적어도 1일 1회 투여되는, 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 1일 1회 투여되는, 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 연속 15일 동안 1일 1회 투여되는, 방법.
제17항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 연속 28일 동안 1일 1회 투여되는, 방법.
제17항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 16주 동안 1일 1회 투여되는, 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 건선은 경증 내지 중등도의 건선인, 방법.
인간 대상체에서 아토피성 피부염을 치료하는 방법으로서, 상기 인간 대상체에게 하나 이상의 장용 코팅 캡슐 또는 정제로 제형화된 8×10¹⁰ 내지 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 용량을 경구 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제21항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 약 0.8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제21항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제21항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 약 8.0×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 적어도 1일 1회 투여되는, 방법.
제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 1일 1회 투여되는, 방법.
제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 연속 15일 동안 1일 1회 투여되는, 방법.
제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 연속 28일 동안 1일 1회 투여되는, 방법.
제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 연속 29일 동안 1일 1회 투여되는, 방법.
제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아토피성 피부염은 경증 내지 중등도의 아토피성 피부염인, 방법.
인간 대상체에서 항염증성 사이토카인 생산을 향상시키는 방법으로서, 상기 인간 대상체에게 8×10¹⁰ 내지 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라 균주 B 50329(NRRL 수탁 번호 B 50329)의 용량을 경구 투여하는 단계를 포함하되, 상기 박테리아 조성물은 약 0.8×10¹¹ 내지 약 8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제31항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 약 0.8×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제31항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 약 3.2×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제31항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 약 8.0×10¹¹개 총 세포의 프레보텔라 히스티콜라를 포함하는, 방법.
제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 적어도 1일 1회 투여되는, 방법.
제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 1일 1회 투여되는, 방법.
제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 연속 15일 동안 1일 1회 투여되는, 방법.
제37항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 연속 28일 동안 1일 1회 투여되는, 방법.
제37항에 있어서, 상기 박테리아 조성물은 16주 동안 1일 1회 투여되는, 방법.
제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항염증성 사이토카인은 IL-10 및/또는 IL-27인, 방법.
제31항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항염증성 사이토카인은 M1형 APC에 의해서 발현되는, 방법.