KR20220044244A - 혈전증 및 혈관 플라크의 검출 및 치료하기 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

혈전증 및 혈관 플라크의 검출 및 치료하기 위한 조성물 및 방법 Download PDF

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KR20220044244A
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에반 씨. 웅거
엠마뉴엘 제이. 뮤일렛
이만 다르야에이
마리아 에프. 아코스타
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마이크로바스큘러 테라퓨틱스 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 혈관 혈전증(예컨대, 피브린 응고) 및 혈관 플라크, 또는 관련 질환 및 병태의 검출 및 치료, 뿐만 아니라 그의 제조 및 사용 방법에 유용한 표적화 리간드로 표지된 나노액적을 제공한다.

Description

혈전증 및 혈관 플라크의 검출 및 치료하기 위한 조성물 및 방법
우선권 주장 및 관련 특허 출원
본 출원은 2019년 6월 5일에 출원된 미국 가특허 출원 제62/857,766호로부터 우선권의 이익을 주장하며, 그 전체 내용은 모든 목적을 위해 여기에 참조로 포함된다.
본 발명의 기술 분야
본 발명은 약학 조성물 및 이의 제조 방법 및 진단 또는 치료 용도에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 혈관 혈전(예를 들어, 피브린 응괴) 및 혈관 플라크의 검출 및 파괴에 유용한 진단 및/또는 치료 리간드로 표지된 표적화된 미세기포 및/또는 나노액적, 및 이들의 에멀젼뿐만 아니라, 이들의 제조 및 용도에 관한 것이다.
본 발명의 배경기술
심혈관 질환(CVD)은 전 세계적으로 사망 및 장애의 주요 원인이다. 혈전증은 정맥 혈전색전증(VTE), 허혈성 심장 질환 및 허혈성 뇌졸중을 포함하여 많은 유형의 CVD의 근본 원인이다. 혈관성형술/스텐트 삽입술, 혈전색전절제술, 기계적 파괴 및/또는 생화학적 용해에 의해 폐쇄성 혈전을 제거하려는 노력은 복합된 효능을 가져 왔다. 이러한 기술은 일반적으로 수행하는 데 시간이 많이 걸리고 비용이 많이 들며, 종종 출혈 합병증의 상당한 위험을 동반한다.
미세기포는 급성 심근경색증(MI) 및 급성 허혈성 뇌졸중의 치료에서 관상동맥 음파 혈전용해를 향상시키기 위해 사용되어 왔다. MI 및 허혈성 뇌졸중 모두에서, 혈전은 혈류의 하류 조직을 박탈하는 동맥 폐색을 유발하여, 허혈 및 잠재적으로 세포 사멸을 초래한다. 혈전은 피브린과 혈소판으로 다양하게 구성되어 있으며, 그 안에 얽힌(enmeshed) 적혈구가 풍부할 수 있다.
팩터 Ia로도 불리는 피브린은 혈액 응고에 관여하는 섬유질의 비구형 단백질이다. 피브린은 정맥 및 동맥 혈전증 모두에서 고농도로 존재하여 피브린-표적화 요법에 대해 높은 민감도를 제공한다. 동시에, 피브린은 순환 혈액에 존재하지 않으므로, 이러한 요법에 대해 잠재적으로 높은 특이성을 가능하게 한다. 단백질-기반 접근법 이외에도, 피브린에 대한 높은 친화도와 피브리노겐에 대한 높은 선택성을 나타내는 작은 고리형 펩티드도 설명되어 있다. 항체와 비교하여 작은 펩티드의 잠재적인 이점은 더 빠른 혈류 청소와 피브린 메쉬내로 침투하는 능력을 포함하며, 이들 둘 다 개선된 표적-대-배경 비율을 가져온다.
염증 및 내피 기능장애는 아테롬성 동맥경화증의 진행에서 주된 임계치 발달(threshold developments)이다. 혈관 세포 부착 분자-1(VCAM-1)과 같은 내피 세포 부착 분자의 발현은 백혈구 모집에 중요한 역할을 하는 것으로 나타났으며, 종종 병리학적 염증 부위에서 증가한다. 기능 장애 내피 세포에서의 VCAM-1의 지속적인 발현은 단핵 백혈구의 부착, 롤링 및 테더링을 매개하고, 발달하는 동맥경화 플라크로의 이행(transmigration)을 촉진한다. 따라서, VCAM-1은 영상화에 의한 조기 발견뿐만 아니라 치료 약물 전달을 위한 표적이 된다.
초음파를 사용하여 혈전을 파괴할 수 있다. 그러나, 시간/효율과 건강한 조직 손상 사이에는 균형(trade-off)이 있다. 음을 국부적으로 증폭할 수 있는 미세기포와 같은 시약은 전달된 에너지를 낮게 유지하면서 파괴를 가속화할 수 있다. 기포 사용에 대한 주의 사항은 기포의 크기(1-5 미크론)로부터 비롯되며, 이는 혈전 내부에 대한 접근을 방해할 수 있다. 혈전은 다공성 기질을 나타내지만, 혈전의 틈새는 일반적으로 미크론 크기 구조의 진입을 방해한다.
따라서, 혈전증 및 관련 질환 및 병태의 검출 및 치료를 위한 개선된 치료제 및 치료 방법에 대한 지속적인 요구가 남아 있다. 혈전 제거의 안전성, 효능 및 효율성을 향상시키기 위한 노력은 높은 잠재적인 임상 영향을 갖는다.
본 발명의 요약
본 발명은 특정 질환 및 병태, 특히 혈전증의 진단 및 치료에 유용하며, 바이오마커를 선택하는 표적화 능력을 갖는 신규한 미세기포와 나노액적, 및 이들의 에멀젼에 부분적으로 기초한다. 이러한 운반체는 심혈관 질환에서 발생하는 혈전, 혈소판 및 혈관 플라크의 검출 또는 파괴를 개선하기 위해, 피브린 및 VCAM-1과 같은 다양한 단백질 표적을 표적화할 수 있다. 본 발명은 또한 약학 조성물, 이의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다.
일 측면에서, 본 발명은 일반적으로 하나 이상의 피브린-결합 리간드가 부착된 미세기포 및/또는 나노액적의 수성 에멀젼 또는 현탁액에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 하나 이상의 VCAM-1-결합 리간드가 부착된 미세기포 및/또는 나노액적의 수성 에멀젼 또는 현탁액에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 피브린-결합 리간드가 부착된 미세기포 및/또는 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 VCAM-1-결합 리간드가 부착된 미세기포 및/또는 나노액적을 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 혈관 혈전 또는 플라크를 검출하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 혈관 혈전 또는 플라크의 존재를 검출하기 위해 대상체의 일부를 영상화하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 혈전증을 진단하거나 평가하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 대상체에서의 혈전증을 진단하거나 평가하기 위해 대상체의 일부를 영상화하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 혈관 혈전 또는 플라크를 파괴 또는 제거하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 혈관 혈전 또는 플라크를 갖는 대상체 기관의 표적 영역에 초음파를 적용하여, 혈관 혈전 또는 플라크를 파괴 또는 감소시키는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 혈전증 또는 동맥 플라크를 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 대상체의 표적 영역에 초음파를 적용하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 초음파 혈전 용해를 수행하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 대상체의 표적 영역에 초음파를 적용하는 단계를 포함한다.
도 1. 디벤조시클로옥타(dibenzocycoocta) 트리아졸 링커를 갖는 생성물을 제조하기 위해 DSPE-PEG5000-DBCO에 접합된 아지드 작용기를 갖는 피브린-결합 펩티드(FBP)
도 2. 아미드 링커를 갖는 생성물을 제조하기 위해 DSPE-PEG5000-NHS 에스테르(Ester)에 접합된 아민 작용기를 갖는 피브린-결합 펩티드(FBP)
도 3. 퍼플루오로비페닐 설파이드를 산화시켜 보다 활성인 설폰 유도체를 생성한 다음, DSPE-PEG5000-아민과 반응시켜 DSPE-PEG5000-PFPhSO2를 생성한다. 마지막으로, DSPE-PEG5000-PFPhSO2를 아민기를 함유한 FBP와 반응시켜, 접합된 최종 생성물을 생성하였다.
도 4. DSPE-PEG5000-DBCO(A), DSPE-PEG5000-NHS 에스테르(B) 및 DSPE-PEG5000-PFPhSO2(C)에 대한 FBP의 접합이 MS 데이터에 의해 확인되었다.
도 5. FBP-Rh(MW= 2100.75 Da)를 생성하기 위해 5(6)-카르복시테트라메틸로다민 N-숙신이미딜 에스테르로 태그된 FBP(상부), 및 DK-12-Rh(MW= 2182.49 Da)를 생성하기 위해 5(6)-카르복시테트라메틸로다민 N-숙신이미딜 에스테르로 태그된 DK-12(하부) .
도 6. 대조군 펩티드(DK12)의 형광(로다민 표지) 대 피브린-결합 펩티드의 형광(로다민 표지)의 시험관내 친화성 결합 분석.
도 7. 표적화된 MB의 개략적인 도시로서, 표적화된 MB는 다양한 인지질의 조합이 구형 쉘을 형성하는 반면, 내부는 퍼플루오로카본 가스, 우선적으로는 옥타플루오로프로판으로 채워짐. VCAM-1 리간드 또는 FBP(녹색 별으로 도시됨)를 포함하는 표적 결합 리간드는 PEG 링커를 통해 기포의 표면 쉘에 부착되었다.
도 8. 상이한 FBP 접합 인지질을 갖는 다양한 유형의 MB의 크기 분포 및 MPEG 대조군(A) 및 모든 샘플의 수 가중 평균(B).
도 9. MB의 가스 함량. 4가지 유형의 모든 샘플의 가스 함량은 GC로 측정되었다.
도 10. (A) 피브린 결합 펩티드 표적화된 미세기포의 TEM 현미경 사진; (B) 피브린 결합 펩티드 표적화된 나노액적의 TEM 현미경 사진.
도 11. (A) 피브린 응괴에 침투하는 피브린 결합 펩티드 표적화된 미세기포의 TEM 현미경 사진; (B) 피브린 응괴에 침투하는 피브린 결합 펩티드 표적화된 나노액적의 TEM 현미경 사진.
도 12. VCAM-1 리간드는 N-말단 아민기를 통해 DSS 링커에 접합되었다. DSPE-PEG2K-아민은 DSS 링커의 다른 헤드에 접합되어, VCAM-1_DSPE-PEG2K 접합체를 생성하였다.
도 13. 피브린 응괴의 파괴에 대한 예시적인 형광 데이터.
본 발명은 특정 질환 및 병태, 특히 혈전증 및 동맥 플라크에 대한 진단 프로브 및 치료제로서 유용하며, 바이오마커를 선택하는 표적화 능력을 갖는 신규한 미세기포 및 나노액적, 및 이의 에멀젼을 제공한다. 이러한 미세기포 및/또는 나노액적은 다양한 심혈관 질환에서 발생하는 혈전(예컨대, 혈전, 혈소판 및 혈관 플라크)의 검출 및/또는 파괴를 개선하기 위해 피브린 및 VCAM-1과 같은 다양한 단백질 표적을 표적화할 수 있다. 표적화 미세기포 및/또는 나노액적은 제자리에서 음향적으로 활성화되어 혈전 파괴를 일으킬 수 있다. 본 발명은 추가로 약학 조성물 및 이의 제조 방법 및 용도를 제공한다.
본 발명의 주요 특징은, 예를 들어 약 100 nm 내지 약 300 nm 범위의 나노규모의 음향 활성 나노액적이며, 이는 통상적인 미세기포 크기의 일부이다. 크기가 작을수록 액적이 혈전에 더 쉽게 침투할 수 있으므로 초음파 혈전 용해 효율과 임상 효능이 크게 증가시킨다.
본 발명의 또 다른 주요 특징은 플루오로카본 미세기포(예를 들어, 옥타플루오로프로판 미세기포)를 나노액적(예를 들어, 옥타플루오로프로판 나노액적)으로 응축시키기 위해 저온 및 고압이 사용된다는 것이다. 옥타플루오로프로판의 끓는점(-34℃)이 체온보다 훨씬 낮지만, 나노액적은 정맥 주사(IV) 투여 후 응축된 상태를 유지하고 그것이 음향 필드에 들어간 후 미세기포를 개질(reform)한다.
본 발명의 또 다른 주요 특징은 하나 이상의 표적화 리간드를 보유하는 나노액적이 제자리에서 음향적으로 및 국부적으로 활성화될 수 있다는 것이다. 순환 혈액에 피브린이 존재하지 않기 때문에 높은 특이성을 얻을 수 있다. 본원에서 표적화 리간드로 사용된 작은 펩티드는 피브린에 대한 높은 친화도 및 피브리노겐에 대한 높은 선택성을 나타낸다. 이러한 작은 펩티드는 더 빠른 혈류 청소와 피브린 메쉬내로 침투하는 능력의 이점을 제공하여, 표적-대-배경 비율을 개선한다.
본 발명의 또 다른 주요 특징은 본원에 개시된 독특한 제형인데, 이는 제조, 저장 및 치료 절차 동안, 조작 및 취급에 필요한 충분히 향상된 안정성을 갖는 나노액적을 제공한다.
2019년 3월 28일자로 출원된 미국 특허 9,801,959 B2 및 PCT/US19/24713의 개시내용은 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 여기에 포함된다.
일 측면에서, 본 발명은 일반적으로 하나 이상의 피브린-결합 리간드가 부착된 미세기포 및/또는 나노액적의 수성 에멀젼 또는 현탁액에 관한 것이다.
특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적 각각은 복수의 피브린-결합 리간드에 접합된다.
특정 실시예에서, 하나 이상의 피브린-결합 리간드는 약 11 내지 약 16개의 아미노산을 갖는 피브린-결합 펩티드를 포함한다.
특정 실시예에서, 피브린-결합 펩티드는 Tn6, Tn7, 또는 Tn10 패밀리로부터 선택된다(표 1)
표 1. 피브린-특이적 펩티드의 예
Figure pct00001
Oliveira et al. 2017 Dalton Trans. 46(42): 14488-14508.
Kolodziej, et al. 2012 Bioconj. Chem. 23:548-556.
특정 실시예에서, 피브린-결합 리간드는 2-작용성 스페이서, 바람직하게는 약 1,000 내지 약 10,000 달톤(예를 들어, 약 2,000 내지 약 10,000 달톤, 약 3,000 내지 약 10,000 달톤, 약 4,000 내지 약 10,000 달톤, 약 1,000 내지 약 8,000 달톤, 약 1,000 내지 약 6,000 달톤, 약 3,000 내지 약 7,000 달톤, 약 4,000 내지 약 6,000 달톤)의 범위, 더욱 바람직하게는 약 5,000 달톤의 수 평균 분자량(MW)을 갖는 바람직하게는 폴리에틸렌글리콜(PEG) 기를 통해 미세기포 및/또는 나노액적에 접합된다. PEG 기는 지질 앵커, 바람직하게는 인지질에 공유 결합된다.
특정 실시예에서, 인지질 조성물은 디팔미토일포스파티딜콜린("DPPC")을 포함한다. DPPC는 양쪽 이온성 화합물이며, 실질적으로 중성인 인지질이다. 특정 실시예에서, 조성물은 PEG화 지질을 포함한다.
지질의 예는 포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-2000](암모늄 염), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-2000](암모늄염), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-2000](암모늄염), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-3000](암모늄염), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-3000](암모늄염), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-3000](암모늄염), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-3000](암모늄염), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-5000](암모늄염), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-5000](암모늄염), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-5000](암모늄 염) 및 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌글리콜)-5000](암모늄염)을 포함한다. 디팔미토일포스파티딜에탄올아민("DPPE")은 바람직하게는 5 내지 20몰%, 가장 바람직하게는 10몰% 농도의 다른 지질과의 제형에서 바람직한 지질이다.
특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 기체 물질로 충전된다.
특정 실시예에서, 기체 물질은 플루오르화 가스를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "플루오르화 가스"는 수소, 불소 및 탄소를 함유하는 하이드로플루오로카본, 또는 탄소 및 불소 원자만 함유하는 화합물(퍼플루오로카본으로도 알려짐) 및 황 및 불소를 함유하는 화합물을 지칭한다. 본 발명과 관련하여, 상기 용어는 분자 구조가 탄소 및 불소 또는 황 및 불소로 구성되고 상온 및 상압에서 기체인 물질을 지칭할 수 있다.
특정 실시예에서, 플루오르화 가스는 퍼플루오로메탄, 퍼플루오로에탄, 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로시클로프로판, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로시클로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로시클로펜탄, 퍼플루오로헥산, 퍼플루오로시클로헥산, 및 이들 중 둘 이상의 혼합물로부터 선택된다.
특정 실시예에서, 플루오르화 가스는 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로시클로프로판, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로시클로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로시클로펜탄, 및 이들 중 둘 이상의 혼합물로부터 선택된다.
특정 실시예에서, 플루오르화 가스는 옥타플루오로프로판을 포함한다.
특정 실시예에서, 수성 에멀젼 또는 현탁액은 안정화제를 추가로 포함한다.
특정 실시예에서, 안정화제는 D(+) 트레할로스 이수화물, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 폴리에틸렌글리콜, 글루코스 및 수크로스로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시예에서, 기체 물질은 적절한 백분율의 비-플루오르화 가스 또는 기체 혼합물, 예를 들어 약 2% 내지 약 20% 공기 또는 질소(예를 들어, 약 5% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 20%, 약 15% 내지 약 20%, 약 2% 내지 약 15%, 약 2% 내지 약 10%, 약 2% 내지 약 5%의 공기 또는 질소)를 더 포함한다.
특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적 내의 플루오로카본은 응축된, 즉 액체 상태로 존재한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 하나 이상의 VCAM-1-결합 리간드가 부착된 미세기포 및/또는 나노액적의 수성 에멀젼 또는 현탁액에 관한 것이다.
특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적 각각은 복수의 VCAM-1-결합 리간드에 접합된다.
특정 실시예에서, 하나 이상의 VCAM-1-결합 리간드는 약 8 내지 약 16개의 아미노산을 갖는 VCAM-1-결합 펩티드이다.
특정 실시예에서, VCAM-1-결합 펩티드는 B2702p1-20 펩티드로부터 선택된다 (표 2).
표 2. 예시적인 VCAM-1-결합 펩티드
Figure pct00002
Dimastromatteo, et al. 2013 J Nucl Med. 54(8):1442-9.
특정 실시예에서, VCAM-1-결합 리간드는 본원에 개시된 PEG 링커를 통해 미세기포 및/또는 나노액적에 접합된다.
특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 기체 물질로 채워진다.
특정 실시예에서, 기체 물질은 플루오르화 가스를 포함한다.
특정 실시예에서, 플루오르화 가스는 퍼플루오로메탄, 퍼플루오로에탄, 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로시클로프로판, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로시클로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로시클로펜탄, 퍼플루오로헥산, 퍼플루오로시클로헥산, 및 이들 중 둘 이상의 혼합물로부터 선택된다.
특정 실시예에서, 플루오르화 가스는 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로시클로프로판, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로시클로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로시클로펜탄, 및 이들 중 둘 이상의 혼합물로부터 선택된다.
특정 실시예에서, 플루오르화 가스는 옥타플루오로프로판을 포함한다.
특정 실시예에서, 수성 에멀젼 또는 현탁액은 안정화제를 추가로 포함한다.
특정 실시예에서, 안정화제는 D(+) 트레할로스 이수화물, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 폴리에틸렌글리콜, 글루코스 및 수크로스로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 피브린-결합 리간드가 부착된 미세기포 및/또는 나노액적, 및 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 VCAM-1-결합 리간드을 갖는 미세기포 및/또는 나노액적을 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액에 관한 것이다.
본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액의 특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 필름-형성 물질에 의해 코팅된다.
특정 실시예에서, 필름-형성 물질은 하나 이상의 지질을 포함한다.
특정 실시예에서, 지질은 인지질 또는 인지질의 혼합물을 포함한다.
임의의 적합한 지질이 이용될 수 있다. 지질의 지질 사슬은 약 10 내지 약 24(예를 들어, 약 10 내지 약 20, 약 10 내지 약 18, 약 12 내지 약 20, 약 14 내지 약 20, 약 16 내지 약 20, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24)의 탄소 길이로 변할 수 있다. 보다 바람직하게는, 사슬 길이는 약 16 내지 약 18개의 탄소이다.
일부 실시예에서, 미세 크기 또는 나노 크기의 기포는 약 10 nm 내지 약 10 ㎛(예를 들어, 약 10 nm 내지 약 5 ㎛, 약 10 nm 내지 약 1 ㎛, 약 10 nm 내지 약 500 nm, 약 10 nm 내지 약 100 nm, 약 50 nm 내지 약 10 ㎛, 약 100 nm 내지 약 10 ㎛, 약 1 ㎛ 내지 약 10 ㎛) 범위의 직경을 갖는다. 일부 실시예에서, 미세 또는 나노 크기의 입자 또는 기포는 약 10 nm 내지 약 100 nm의 직경을 갖는다. 일부 실시예에서, 미세 또는 나노 크기의 입자 또는 기포는 약 100 nm 내지 약 1 ㎛의 직경을 갖는다. 일부 실시예에서, 미세 또는 나노 크기의 입자 또는 기포는 약 1 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 직경을 갖는다.
특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 약 0.5 내지 약 10 미크론(예를 들어, 약 1 ㎛ 내지 약 10 ㎛, 약 2 ㎛ 내지 약 10 ㎛, 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛, 약 0.5 ㎛ 내지 약 5 ㎛, 약 0.5 ㎛ 내지 약 2 ㎛, 약 1 ㎛ 내지 약 5 ㎛) 범위의 미세 크기를 갖는 미세기포이다.
특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 약 100 nm 내지 약 800 nm(예를 들어, 약 100 nm 내지 약 500 nm, 약 100 nm 내지 약 300 nm, 약 120 nm 내지 약 280 nm) 범위의 나노 크기를 갖는 나노액적이다. 특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 약 120 nm 내지 약 280 nm 범위의 나노크기를 갖는 나노액적이다.
특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 약 120 nm 내지 약 280 nm 외부의 크기를 갖는 미세기포 및/또는 나노액적을 포함하지 않는다(즉, 실질적으로, 모든 미세기포 및/또는 나노액적은 약 120 nm 내지 약 280 nm 범위의 나노크기를 갖는 나노액적을 먹었다.).
특정 실시예에서, 수성 에멀젼 또는 현탁액은 균질화된 형태이다.
특정 실시예에서, 수성 에멀젼 또는 현탁액은 제약상 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 혈관 혈전 또는 플라크를 검출하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 혈관 혈전 또는 플라크의 존재를 검출하기 위해 대상체의 일부를 영상화하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 혈전증 또는 아테롬성 동맥경화증을 진단하거나 평가하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 대상체의 혈전증을 진단하거나 평가하기 위해 대상체의 일부를 영상화하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 혈관 혈전증 또는 플라크를 파괴 또는 제거하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 혈관 혈전 또는 플라크를 갖는 대상체 기관의 표적 영역에 초음파를 적용하여 혈관 혈전 또는 플라크를 파괴 또는 감소시키는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 혈전증, 아테롬성 동맥경화증 또는 동맥 플라크를 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 대상체의 표적 영역에 초음파를 적용하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 일반적으로 초음파 혈전 용해를 수행하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본원에 개시된 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및 대상체의 표적 영역에 초음파를 적용하는 단계를 포함한다.
상기 방법의 특정 실시예에서, 플루오르화 가스는 퍼플루오로메탄, 퍼플루오로에탄, 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로시클로프로판, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로시클로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로시클로펜탄, 퍼플루오로헥산, 퍼플루오로시클로헥산, 및 이들 중 둘 이상의 혼합물을 포함한다.
상기 방법의 특정 실시예에서, 플루오르화 가스는 옥타플루오로프로판을 포함한다.
상기 방법의 특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 약 0.5 내지 약 10 미크론 범위의 미세 크기를 갖는 미세기포이다.
상기 방법의 특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 약 120 nm 내지 약 280 nm 범위의 나노 크기를 갖는 나노액적이다.
상기 방법의 특정 실시예에서, 미세기포 및/또는 나노액적은 약 120 nm 내지 약 280 nm 외부의 크기를 갖는 미세기포 및/또는 나노액적을 포함하지 않는다(즉, 실질적으로, 모든 미세기포 및/또는 나노액적은 약 120 nm 내지 약 280 nm 범위의 나노크기를 갖는 나노액적을 먹었다).
본원에 사용된 "에멀젼"은 크기가 나노미터로부터 미크론까지 변할 수 있는 액적 형태로 다른 것에 분산된 적어도 하나의 비혼화성 액체로 구성된 불균일(heterogeneous) 시스템을 지칭한다. 에멀젼의 안정성은 넓게 변하며 에멀젼이 분리되는 시간은 몇 초로부터 몇 년이 될 수 있다. 현탁액은 벌크 액상에서의 고체 입자 또는 액체 액적으로 구성될 수 있다. 예로서, 도데카플루오로펜탄의 에멀젼은 인지질 또는 플루오로계면활성제, 및 에멀젼 안정화에 사용된 계면활성제에 대해 약 0.1몰% 내지 약 1몰% 또는 심지어 5몰%만큼의 비율로 에멀젼에 혼입된 접합체로 제조될 수 있다.
특정 실시예에서, 에멀젼 또는 현탁액은 제약상 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 추가로 포함한다. 각 부형제, 담체 또는 희석제는 에멀젼 또는 현탁액의 다른 성분과 융화성이고(compatible) 환자에게 해를 끼치지 않는다는 의미에서, "허용"되어야 한다. 제약상 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제로 작용할 수 있는 물질의 일부 예는 생리 식염수, 인산염 완충 식염수, 프로필렌 글리콜, 글리세롤 및 폴리에틸렌글리콜, 예를 들어 PEG 400 또는 PEG 3350 MW를 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "대상체" 및 "환자"는 살아있는 동물(인간 또는 비-인간)을 지칭하기 위해 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 대상체는 포유류일 수 있다. "포유류" 또는 "포유동물"이라는 용어는 분류학적 분류상 포유류 내의 모든 동물을 지칭한다. 포유동물은 인간 또는 비-인간 포유동물, 예를 들어 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 염소, 말, 래트 및 마우스일 수 있다. "대상체"라는 용어는 질병이나 병태와 관련하여 완전히 정상이거나 모든 면에서 정상인 개인을 배제하지 않는다.
본원에 사용된 용어 "치료" 또는 질환 또는 장애를 "치료하는"은 그것이 발생하기 이전 또는 이후에, 그러한 병태, 또는 그러한 질환 또는 병태의 하나 이상의 증상을 감소, 지연 또는 개선하는 방법을 지칭한다. 치료는 질병 및/또는 기저 병리의 하나 이상의 영향 또는 증상에 지향될 수 있다. 치료는 임의의 감소일 수 있고 질병 또는 질병 증상의 완전한 제거일 수 있지만, 이들에 국한되지 않는다. 동등한 미처리 대조군과 비교하여, 이러한 감소 또는 예방 정도는 모든 표준 기술로 측정된 바와 같이, 적어도 5%, 10%, 20%, 40%, 50%, 60%, 80%, 90%, 95%, 또는 100%이다.
실시예들
실시예 1. 피브린-표적화된 생체접합체의 제조
상이한 링커를 갖는 펩티드-인지질 접합된 분자를 생성하기 위해 3가지 접합 전략을 사용하였다. (1) 미니-PEG 링커와 아지드 작용기를 갖는 피브린-결합 펩티드(FBP)는 N-[디벤조시클로옥틸(폴리에틸렌글리콜-5000)]카르바밀-디스테아로일포스파티딜-에탄올아민(암모늄염)(DSPE-PEG5000-DBCO)에 직접 접합되어, 디벤조시클로옥타 트리아졸 링커를 갖는 생성물을 생성한다(전략 1). (2) 미니-PEG 링커 및 아민 작용기를 갖는 FBP는 [(숙신이미딜옥시글루타릴)아미노프로필, 폴리에틸렌글리콜-5000]-카르바밀 디스테아로일포스파티딜-에탄올아민(나트륨염)(DSPE-PEG5000-NHS 에스테르)에 접합되어, 아미드 링커를 갖는 생성물을 생성한다(전략 2). (3) 세 번째 전략은 N-[아미노프로필(폴리에틸렌글리콜-5000)]-카르바밀-디스테아로일포스파티딜-에탄올아민(나트륨염)(DSPE-PEG5000-아민)과 6,6'-술포닐비스(1,2,3,4,5-펜타플루오로벤젠)(PFPhSO2)의 제1 반응으로 이루어져, DSPE-PEG5000-PFPhSO2를 생성한다. 그 다음, 미니-PEG 링커 및 아민을 갖는 FBP가 DSPE-PEG5000-PFPhSO2와 접합되어, 퍼플루오로벤젠 링커를 갖는 생성물을 생성한다(전략 3).
도 1은 디벤조시클로옥타 트리아졸 링커를 갖는 생성물을 제조하기 위해 DSPE-PEG5000-DBCO에 접합된 아지드 작용기를 갖는 FBP를 도시한다.
도 2는 아미드 링커를 갖는 생성물을 제조하기 위해 DSPE-PEG5000-NHS 에스테르에 접합된 아민 작용기를 갖는 FBP를 도시한다.
도 3은 퍼플루오로비페닐 설파이드를 산화시켜 보다 활성인 설폰 유도체를 생성한 다음, DSPE-PEG5000-아민과 반응하여 DSPE-PEG5000-PFPhSO2를 생성함을 도시한다. 마지막으로, DSPE-PEG5000-PFPhSO2를 아민기를 함유한 FBP와 반응시켜, 접합된 최종 생성물을 생성하였다.
모든 생성물은 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)로 정제되고, 질량 분광기(MS) 기기로 특징화하였다(도 1).
도 4는 DSPE-PEG5000-DBCO(A), DSPE-PEG5000-NHS 에스테르(B) 및 DSPE-PEG5000-PFPhSO2(C)에 대한 FBP의 접합이 MS 데이터에 의해 확인되었음을 도시한다.
실시예 2. 피브린-표적화 및 비-표적화 미세기포 제형
디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포릴에탄올아민(DPPE), N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 5000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 나트륨염(DPPE-MPEG5000) 및 DSPE-PEG5000-FBP 접합체의 혼합물이 표적 미세기포(MB)의 제형화에 사용되었다(도 2). DSPE-PEG5000-FBP는 비-표적화 미세기포의 제형화에서 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 5000)-카르바밀 디스테아로일포스파티딜-에탄올아민(나트륨염)(DSPE-MPEG5000)으로 대체되었다. 아미드, 디벤조시클로옥타 트리아졸 및 퍼플루오로벤젠 링커와 접합된 인지질을 함유하는 바이알은 각각 Ester, DBCO 및 PFPhSO2로 명명되었다. DSPE-MPEG5000을 포함하는 대조군 샘플은 실험을 위해 MPEG로 명명되었다.
도 5는 표적화된 MB의 일반적인 표현. 다양한 인지질의 조합이 구형 쉘을 형성하는 반면, 내부는 퍼플루오로카본 가스, 우선적으로는 옥타플루오로프로판으로 채워진 표적화된 MB의 개략도를 도시한다. FBP(녹색 별로 도시됨)는 PEG 링커를 통해 기포의 표면 쉘에 부착되었다.
용액에 인지질 혼합물을 함유하는 모든 바이알은 옥타플루오로프로판 가스(OFP)로 채워졌다. 각 바이알 시리즈의 2-4개 샘플이 크기 측정을 위해 NiComp Acusazie 780 기기(도 3)에 의해 테스트되었다. 우리의 결과는 모든 Ester, DBCO, PFPhSO2 및 MPEG 샘플이 MB를 형성했음을 보여주었다. 그러나, 크기 분포는 상이한 FBP 접합 생성물로 구성된 MB에 대해 다양하였다. DBCO 및 PFPhSO2 샘플을 갖는 바이알은 Ester 및 MPEG 바이알에 비해 직경이 0.56-1.06 μm인 기포 파퓰레이션이 ~10% 더 적은 것으로 나타났다. 대조적으로, DBCO 및 PFPhSO2 샘플은 Ester 및 MPEG 바이알에 비해 직경이 각각 1.06-2.03 및 2.03-5.99μm인 기포 파퓰레이션(population)이 ~7% 및 ~2% 더 많은 것으로 나타났다(도 3A). 상이한 샘플의 수 가중 평균에서 상당한 차이는 관찰되지 않았다(도 3B).
도 6은 상이한 FBP 결합 인지질을 갖는 다양한 유형의 MB의 크기 분포 및 MPEG 대조군(A) 및 모든 샘플의 수 가중 평균(B)을 도시한다. 각 바이알 시리즈의 가스 함량은 각 그룹으로부터의 2-4개 샘플을 사용하여 GC 기기(도 4)에 의해 분석되었다.
도 7은 4가지 유형의 모든 샘플의 가스 함량이 GC에 의해 측정되었음을 도시한다. Ester 샘플은 이 실험에서 가장 큰 가스 함량을 보인 반면 PFPHSO2 및 MPEG 바이알은 가장 낮은 양의 OFP 가스를 보여주었다. 그러나, GC 결과는 가스 충전 과정에서 가스 함량이 >80%로 나타나서, MB 제형화에 매우 효율적임을 확인하였다.
실시예 3. VCAM-1 표적화된 생체접합체의 제조
디이소프로필아민 및 디메틸포름아미드의 존재 하에 VCAM-1 리간드의 활성화에 의해 생체접합체를 제조하였다. 그 다음, 활성화된 펩티드를 DSPE-PEG5000-NH2와 반응시켜 최종 생성물을 생성하였고, 이를 HPLC로 정제하였다.
도 8은 DSPE-PEG2000-VCAM 리간드 생체접합체의 제조를 도시한다.
실시예 4. VCAM-1 표적화된 미세기포 제형
표적화된 미세기포 제형은 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 디팔미토일-sn-글리세로포스파티딜에탄올아민-폴리에틸렌글리콜-2000-OMe(DPPE-MPEG-2000) 및 아미드 결합을 통해 링크된 DPPE-PEG2000-C(=O)-리간드 중 하나로 구성된 지질-리간드 생체접합체를 함유하였다. 접합체는 총 인지질의 약 1 mol%로 사용되었다. 미세기포는 고형물이 완전히 용해될 때까지, 50-65℃에서 교반된 프로필렌-글리콜에, DPPC(90 mol%), DPPE-PEG2000(9 mol%) 및 표적화된 인지질-PEG2000-링커-펩티드 접합체(1%)를 첨가함으로써, 제조되었다. 그 다음, 프로필렌 글리콜 중 인지질의 따뜻한 용액을 50-65℃에서 교반하면서 부피 기준 5% 글리세롤을 함유하는 인산염 완충 식염수의 용액에 여러 분취량으로 첨가하였다. 이 용액을 5-10분 동안 교반하였다. 그 다음, 용액을 혈청 바이알로 옮기자마자, 즉시 마개를 막고 크림프 캡을 씌웠다. 용액을 주변 온도가 되도록 한 다음, 4℃에서 보관하였다. 25-50 2mL 공칭 용량의 혈청 바이알 일부를 냉각된 인지질 용액의 1.5mL 분취량으로 채운 후, 라이트 진공을 적용하고 퍼플루오로부탄 가스로 퍼징한 후, 바이알을 신속하게 마개를 닫고 크림프 캡핑을 수행하였다. 바이알을 사용할 때까지 4℃에서 보관한 후, 주변 온도로 가온하고 브리스톨 마이어스 스킵 바이알 혼합(Bristol Myers Squibb Vial Mix) 장치에서 75Hz(4500rpm)로 45초 동안 교반하여, 미세기포를 형성하였다.
실시예 5. 나노액적의 제조
지질 현탁액은 75℃에서 1시간 동안 가열함으로써, 프로필렌 글리콜(10.35mg/mL)에서 0.75 mg/mL의 총 지질 농도에서, DPPC(82%), DPPE(10%), DPPE-MPEG5000(7%) 및 DSPE-MPEG5000-FBP 생체접합체(1%)의 혼합물로부터 제조되었다. 지질 현탁액을 염화나트륨(4.78 mg/mL), 일염기성 인산나트륨(2.34 mg/mL), 이염기성 인산나트륨(2.16 mg/mL) 및 글리세롤(12.62 mg/mL)의 수용액과 혼합하여, 최종 용액을 제조하였다. 최종 용액을 사용하여 바이알(1.5mL/바이알)을 채우고, 바이알을 밀봉하고 크림핑하기 전에 퍼플루오로프로판 가스를 바이알에 첨가하였다. 바이알을 -15 내지 -18℃의 얼음 수조에서 3분 동안 인큐베이션하였다. 상기 언급된 부형제에 더하여, 3% w/v 글루코스, 0.25% w/v, 0.5% w/v 및 1.0% w/v D(+) 트레할로스 이수화물이 또한 부형제로서 첨가되었다. 아말감 쉐이커 장치(Vialmix, BMS Medical Imaging Inc, 4500rpm)를 사용하여 45초 동안 바이알을 교반하여, 미세기포(MB)의 형성을 나타내는 우유빛 외관을 형성하였다. 바이알을 -15 내지 -18℃의 얼음 수조에서 3분 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 바이알을 N2와 함께 40-80psi에서 가압하여, 나노액적(ND)의 형성을 나타내는 보다 투명한 외관을 형성하였다. 그 다음, 바이알을 -15 내지 -18℃의 얼음 수조에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 바이알을 실온에서 1시간 동안 유지한 다음, 다른 조건에서 보관하였다.
MVT-100이라고 하는 미세기포를 비교기로 사용하였다. 모든 샘플은 AccuSizer 780(PSS.NiComp Particle Sizing Systems) 및 Nanobrook 90 Plus(Brookhaven) 크기 분석기로 입자 크기를 조정하여, MB 및 ND 크기를 각각 측정하였다. MVT-100 MB와 피브린-표적화된 MB의 평균 크기는 1-3 미크론이었다. 그 결과를 하기 표에 나타내었다. MVT-100 유래 나노액적의 평균 크기는 빠르게 증가하였다가 퍼플루오로프로판 가스가 나노액적으로부터 손실됨에 따라 감소하였다. 3% 글루코스는 보호 효과가 있었지만, D(+) 트레할로스 이수화물만큼 많지는 않았다. 1% D(+) 트레할로스 이수화물이 24시간 동안 안정적인 나노액적을 생성하기 때문에 선호되었다.
실시예 6. FTMB에 의한 피브린 응괴의 파괴
피브리노겐 및 트롬빈을 첨가하고 플레이트를 밤새 방치해 둠으로써, 24-웰 플레이트의 모든 웰을 피브린으로 코팅하였다. 간단히 말해서, 160 μL의 피브리노겐(PBS 중 1.75 μM)을 30 μM 티오플라빈의 존재 하에서 각 웰에 첨가하였다. 이어서, 트롬빈(PBS 중 7.5 Units/mL의 40 μL)을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 어두운 공간에서 밤새 실온에서 인큐베이션하였다. 피브린 응괴는 대조 위상차 현미경으로 시각화되었다.
표 3. 37℃에서 인큐베이션된 상이한 나노액적 제형의 안정성(n=3)
Figure pct00003
표 4. 대조군, 네이키드, 및 FBP 미세기포와 나노액적으로 타겟화된 것의 크기 분포, 가스 함량 및 제타 전위(n=3)
Figure pct00004
MB는 활성화되었다(바이알 믹스 교반, 45초). 각 MB 제형의 최종 저장 용액을 5.2mL PBS에서 500μL로 만들었다. MB를 웰에 추가하기 전에 피브린 코팅된 웰을 PBS(1.0mL x 1)로 세척하였다. 피브린 코팅된 웰에서 MB를 3분 동안 인큐베이션하였다.
초음파는 30초 동안 각 웰에 전달되었다(파라미터: 2000mW, PRF 10, 10ms 버스트 길이, 주파수 590Hz).
상청액을 수집하고 실온에서 15분 동안 10000rpm으로 회전시켰다. 방출된 형광은 어두운 96-웰 플레이트에서 측정되었다. 티오플라빈의 형광은 485nm에서 측정되었다(λexcit = 450nm; λemis = 485nm).
일 예에서, 증폭기에서의 전력 레벨 판독값은 2,000mW였지만, 변환기와 함께있는 전력계에서의 전력 판독값은 약 100mW였다. 초음파의 추정된 기계적 인덱스는 약 0.28 메가파스칼이었다(도 9).
다른 예에서, 0.40 메가파스칼보다 큰 초음파의 MI가 ND에 대한 초음파 혈전 용해에 사용된다.
실시예 8
급성 STEMI를 갖는 환자가 나노액적 강화된 초음파 혈전 용해로 치료된다. 나노액적 제형은 MVT-100 + 1% D(+) 트레할로스 이수화물을 포함하여 나노액적을 형성하기 위해 위에서 설명한 독점적인(proprietary) 냉각/가압 공정을 거친다. 환자는 나노액적(동시적인 초음파 동안 30분 주입 기간 동안 4mL)을 IV 투여받았다. 사용된 초음파 프로토콜은 Mathias(Mathias, Wilson, et al. 2016 J. Am. Coll. Cardiol. 67.21: 2506-2515)에 의해 기재된 대로이다. 영상-유도 진단 높은 기계적 인덱스 초음파가 적용되고(1.8MHz, 1.1 내지 1.3 기계적 인덱스, 3-ms 펄스 지속 시간), 임펄스가 심근의 위험 영역을 포함하는 에이피컬(apical) 4-, 2- 및 3-챔버 뷰들에 적용된다. 초음파 혈전 용해 후, 환자는 기존의 혈관 성형술과 스텐트 시술로 치료된다. 치료 후 30일째에 심근 흐름이 개선되고 좌심실 박출률이 개선된다.
실시예 9
급성 STEMI를 갖는 다른 환자가 실시예 1에 기술된 것과 유사한 초음파 파라미터를 사용하여 피브린 표적화화된 나노액적으로 치료된다. 관상동맥 혈관재생은 표적화되지 않은 나노액적보다 표적화된 나노액적으로 더 빠르게 달성되는 것으로 보인다.
실시예 10
급성 허혈성 뇌졸중이 있는 환자가 t-PA의 수반된 IV 주입 동안 60분 기간에 걸쳐 피브린 표적화된 나노액적(총 6mL)의 3개 바이알을 IV 주입받는다. 초음파는 t-PA 및 나노액적의 동시 주입과 동일한 기간 동안 MU = 1.0에서 1MHz 프로브로 일시(temporal) 창을 가로질러 적용된다. 혈류가 중간대뇌동맥으로 빠르게 회복된다.
실시예 11
환자가 좌전 하행 관상동맥에 광범위한 플라크를 가지고 있어 LAD의 90% 폐색을 초래한다. 환자는 실시예 1에서와 같이 초음파가 적용되는 동안 6mL의 VCAM-1 표적화된 나노액적을 IV 주입받는다. 이는 플라크의 감소 및 관상동맥 혈류의 개선을 가져온다.
실시예 12
환자는 하지에 급성 말초 동맥 폐색이 있다. 혈전은 대퇴 동맥에 국한되어, 다리로의 혈류 손실을 초래한다. 피브린 표적화된 나노액적의 IV 주입이 시작된다. 나노액적을 2 시간 동안 시간당 2.0cc의 속도로 IV 주입하는 동안, 중심 주파수 = 2MHz인 3-D 초음파 변환기를 사용하여, 1.6메가파스칼에서 전원을 인가하면서 초음파를 2초 온하고 2초 오프하도록 펄싱하여 동맥 폐색 부위에 초음파를 경피적으로 적용한다. 동맥 폐색이 제거되고 하지로의 혈류가 회복된다.
출원인의 개시 내용은 도면을 참조하여 바람직한 실시 예에서 설명되며, 동일한 번호는 동일하거나 유사한 요소를 나타낸다. 본 명세서 전체에 걸쳐서, "일 실시 예", "실시 예" 또는 유사한 언어는 실시 예와 관련하여 설명된 특정 특징, 구조 또는 특성이 본 발명의 적어도 하나의 실시 예에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전체에 걸쳐서, "일 실시 예에서", "실시 예에서" 및 유사한 언어와 같은 표현은 반드시 동일한 실시 예를 지칭할 수도 있지만, 반드시 그러한 것이 아닐 수 있다.
출원인의 개시 내용의 설명된 특징, 구조 또는 특성은 하나 이상의 실시 예에서 임의의 적절한 방식으로 결합될 수 있다. 본 명세서의 설명에서, 다수의 특정 세부 사항이 본 발명의 실시 예들의 완전한 이해를 제공하기 위해 인용된다. 그러나, 관련 기술 분야의 당업자는 하나 이상의 특정 세부 사항 없이도, 또는 다른 방법, 구성 요소, 재료 등과 함께, 출원인의 구성 및/또는 방법이 실시될 수 있음을 인식할 것이다. 다른 예들에서, 공지된 구조들, 재료들 또는 동작들은 본 개시 내용의 모한한 측면들을 피하기 위해 상세히 도시되거나 설명되지 않는다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥에 명백하게 달리 지시되어 있지 않는 한, 복수 기준을 포함한다.
구체적으로 언급되지 않거나 문맥상 명백하지 않는 한, 본 명세서에 사용된 용어 "약"은 예를 들어, 평균의 2 표준 편차 내에서 당업계의 정상적인 허용 오차 범위 내로 이해된다. 약은 명시된 값의 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% 이내로 이해될 수 있다. 문맥상 명백하지 않는 한, 여기에 제공된 모든 수치는 약이라는 용어로 변경될 수 있다.
구체적으로 언급되지 않거나 문맥상 명백하지 않는 한, 본 명세서에 사용된 용어 "또는"은 포괄적인 것으로 이해된다.
구성 및 방법을 정의하는 데 사용되는 용어 "포함하는"은 구성 및 방법이 인용된 요소를 포함하지만 다른 요소를 배제하지 않음을 의미하도록 의도된다. 구성 및 방법을 정의하는 데 사용되는 "필수적으로 구성되는"이라는 용어는 구성 및 방법이 인용된 요소를 포함하고 구성 및 방법에 본질적으로 중요한 다른 요소를 배제함을 의미한다. 예를 들어, "필수적으로 구성되는"은 명시적으로 언급된 약리학적 활성제의 투여를 지칭하고 명시적으로 언급되지 않은 약리학적 활성제는 제외한다. 필수적으로 구성되는이라는 용어는 약리학적으로 비활성이거나 불활성인 제제, 예를 들어 약학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 배제하지 않는다. 구성 및 방법을 정의하는 데 사용되는 용어 "구성된"은 다른 성분의 미량 원소 및 실질적인 방법 단계를 배제하는 것을 의미한다. 이러한 과도(transition) 용어 각각에 의해 정의된 실시예는 본 발명의 범위 내에 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사한 또는 동등한 임의의 방법 및 물질이 또한 본 개시 내용의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 기술되어 있다. 본 명세서에 인용된 방법은 개시된 특정 순서에 추가하여 논리적으로 가능한 임의의 순서로 수행될 수 있다.
참조로 포함됨
특허, 특허 출원, 특허 공보, 저널, 서적, 논문, 웹 컨텐츠와 같은 다른 문서에 대한 참조 및 인용이 본 개시 내용에 기재되어있다. 모든 상기 문헌은 모든 목적을 위해 그 전체가 본원에 참고 문헌으로 포함된다. 여기에 참조로 포함되었으나, 여기에 명시적으로 제시된 기존 정의, 진술 또는 기타 공개 자료와 충돌하는 모든 자료 또는 그 일부는 통합된 자료와 본 발명의 자료 간에 충돌이 발생하지 않는 범위 내에서만 통합된다. 충돌이 발생하는 경우, 그러한 충돌은 우선적인 개시사항으로서 본 발명의 개시내용에 유리하게 해석되어야 한다.
등가물
대표적인 실시 예는 본 발명을 예시하는 것을 돕기 위한 것이며, 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것이 아니며, 또한 이들로 해석되어서는 안된다. 실제로, 여기에 도시되고 설명된 것 이외에, 본 발명의 다양한 변형 및 그 많은 실시 예는 본 명세서의 전체 내용으로부터 당업자에게 명백하게 될 것이며, 본 발명은 실시 예 및 과학적 및 특허 문헌에 대한 참조를 포함한다. 이 예들은 그 다양한 실시 예들 및 그 등가물들에서 본 발명의 실시에 적용될 수 있는 중요한 추가 정보, 예시 및 지침을 포함한다.

Claims (42)

  1. 하나 이상의 피브린-결합 리간드가 부착되어 있는 미세기포 및/또는 나노액적의 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  2. 제1항에 있어서, 미세기포 및/또는 나노액적 각각이 복수의 피브린-결합 리간드에 접합된 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  3. 제1항에 있어서, 실질적으로 모든 미세기포 및/또는 나노액적이 복수의 피브린-결합 리간드에 접합되는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 피브린-결합 리간드는 약 11 내지 약 16개의 아미노산을 갖는 피브린-결합 펩티드인 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  5. 제4항에 있어서, 상기 피브린-결합 펩티드는 표 1로부터 선택되는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피브린-결합 리간드는 폴리에틸렌글리콜(PEG) 링커를 통해 미세기포 및/또는 나노액적에 접합되는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  7. 제6항에 있어서, 상기 PEG 링커는 약 1,000 내지 약 10,000 달톤 범위의 수평균 분자량(MW)을 갖는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미세기포 및/또는 나노액적은 기체 물질로 충전된 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 기체 물질은 플루오르화 가스를 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  10. 제9항에 있어서, 상기 플루오르화 가스는 퍼플루오로메탄, 퍼플루오로에탄, 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로사이클로프로판, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로사이클로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로사이클로펜탄, 퍼플루오로헥산, 퍼플루오로사이클로헥산, 및 이들의 둘 이상의 혼합물로부터 선택되는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 상기 플루오르화 가스는 옥타플루오로프로판을 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화제를 추가로 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  13. 제12항에 있어서, 상기 안정화제는 트레할로스 및 D(+) 트레할로스 이수화물로 이루어진 군으로부터 선택되는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  14. 하나 이상의 VCAM-1-결합 리간드가 부착되어 있는 미세기포 및/또는 나노액적의 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  15. 제14항에 있어서, 미세기포 및/또는 나노액적 각각이 복수의 VCAM-1-결합 리간드에 접합된 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 하나 이상의 VCAM-1-결합 리간드는 약 8 내지 약 16개의 아미노산을 갖는 VCAM-1-결합 펩티드인 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  17. 제16항에 있어서, 상기 VCAM-1-결합 펩티드는 표 2로부터 선택되는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피브린-결합 리간드는 폴리에틸렌글리콜(PEG) 링커를 통해 미세기포 및/또는 나노액적에 접합된 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  19. 제18항에 있어서, 상기 PEG 링커는 약 1,000 내지 약 10,000 달톤 범위의 수평균 분자량(MW)을 갖는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  20. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미세기포 및/또는 나노액적은 기체 물질로 충전된 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  21. 제14항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 기체 물질은 플루오르화 가스를 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  22. 제21항에 있어서, 상기 플루오르화 가스는 퍼플루오로메탄, 퍼플루오로에탄, 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로사이클로프로판, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로사이클로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로사이클로펜탄, 퍼플루오로헥산, 퍼플루오로사이클로헥산, 및 이들의 둘 이상의 혼합물로부터 선택되는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 상기 플루오르화 가스는 옥타플루오로프로판을 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  24. 제14항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화제를 추가로 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  25. 제24항에 있어서, 상기 안정화제는 D(+) 트레할로스 이수화물로 이루어진 군으로부터 선택되는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 피브린-결합 리간드가 부착된 미세기포 및/또는 나노액적, 및 하나 이상의 VCAM-1-결합 리간드가 부착된 미세기포 및/또는 나노액적을 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미세기포 및/또는 나노액적은 필름-형성 물질에 의해 코팅된 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  28. 제27항에 있어서, 상기 필름-형성 물질은 하나 이상의 지질을 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  29. 제28항에 있어서, 상기 지질은 인지질 또는 인지질의 혼합물을 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미세기포 및/또는 나노액적은 약 0.5 내지 약 10 미크론 범위의 미세 크기를 갖는 미세기포를 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  31. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미세기포 및/또는 나노액적은 약 120 nm 내지 약 280 nm 범위의 나노 크기를 갖는 나노액적을 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 균질화된 형태인 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 수성 에멀젼 또는 현탁액.
  34. 혈관 혈전 또는 플라크를 검출하는 방법으로서,
    제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및
    혈관 혈전 또는 플라크의 존재를 검출하기 위해 대상체의 일부를 영상화하는 단계;
    를 포함하는 방법.
  35. 혈전증 또는 아테롬성 동맥경화증을 진단 또는 평가하는 방법으로서,
    제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및
    대상체에서 혈전증 또는 동맥경화증을 진단 또는 평가하기 위해 대상체의 일부를 영상화하는 단계;
    를 포함하는 방법.
  36. 혈관 혈전 또는 플라크를 파열 또는 파괴하는 방법으로서,
    제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및
    혈관 혈전 또는 플라크를 갖는 대상체 기관의 표적 영역에 초음파를 적용하여, 혈관 혈전 또는 플라크를 파괴 또는 감소시키는 단계;
    를 포함하는 방법.
  37. 혈전증, 동맥경화증 또는 동맥 플라크를 치료하는 방법으로서,
    제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및
    대상체의 표적 영역에 초음파를 적용하는 단계;
    를 포함하는 방법.
  38. 음파 혈전 용해를 수행하는 방법으로서,
    제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 수성 에멀젼 또는 현탁액을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계; 및
    대상체의 표적 영역에 초음파를 적용하는 단계;
    를 포함하는 방법.
  39. 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 플루오르화 가스는 퍼플루오로메탄, 퍼플루오로에탄, 퍼플루오로프로판, 퍼플루오로시클로프로판, 퍼플루오로부탄, 퍼플루오로시클로부탄, 퍼플루오로펜탄, 퍼플루오로시클로펜탄, 퍼플루오로헥산, 퍼플루오로시클로헥산, 및 이들 중 둘 이상의 혼합물을 포함하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 플루오르화 가스는 옥타플루오로프로판을 포함하는 방법.
  41. 제34항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 미세 또는 나노 크기의 기포/액적은 약 0.5 내지 약 10 미크론 범위의 미세 크기를 갖는 방법.
  42. 제34항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 미세 또는 나노 크기의 기포/액적은 약 120 nm 내지 약 280 nm 범위의 나노 크기를 갖는 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113848332B (zh) * 2021-09-17 2024-04-19 广州徕西姆医学诊断技术有限公司 一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用
WO2023107746A1 (en) * 2021-12-10 2023-06-15 Microvascular Therapeutics, Llc Compositions and methods of detecting and treating thrombosis and vascular plaques
WO2024050075A2 (en) * 2022-09-01 2024-03-07 Microvascular Therapeutics, Llc Methods and compositions for treatment of vascular obstruction

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6245318B1 (en) * 1997-05-27 2001-06-12 Mallinckrodt Inc. Selectively binding ultrasound contrast agents
AU768859B2 (en) * 1999-07-29 2004-01-08 Dyax Corp. Binding moieties for fibrin
MXPA05007730A (es) * 2003-02-04 2006-01-31 Bracco Int Bv Agentes de contraste para ultrasonido y proceso para la preparacion de los mismos.
US20070128117A1 (en) * 2003-02-04 2007-06-07 Bracco International B.V. Ultrasound contrast agents and process for the preparation thereof
EP1866416A2 (en) * 2005-03-22 2007-12-19 Medstar Health Inc. Delivery systems and methods for diagnosing and treating cardiovascular diseases
JP5364589B2 (ja) * 2006-12-11 2013-12-11 ブラッコ・イメージング・ソシエタ・ペル・アチオニ 診断および治療適用用フィブリン結合ペプチドコンジュゲート
EP2117603A2 (en) * 2006-12-19 2009-11-18 Bracco International B.V. Targeting and therapeutic compounds and gas-filled microvesicles comprising said compounds
CA2684752A1 (en) * 2007-04-20 2008-10-30 Oregon Health & Science University Ultrasound imaging with targeted microbubbles
JP2013507365A (ja) * 2009-10-07 2013-03-04 サンフォード−バーナム メディカル リサーチ インスティテュート 血餅結合脂質化合物に関する方法および組成物
US10279053B2 (en) * 2011-07-19 2019-05-07 Nuvox Pharma Llc Microbubble compositions, method of making same, and method using same
US20220023447A1 (en) * 2018-12-07 2022-01-27 Nanovalent Pharmaceuticals Inc. Fibrin-targeted polymerized shell lipid microbubbles for diagnostic and therapeutic applications

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230171660A (ko) 2022-06-14 2023-12-21 오상민 공기 살균 정화기

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