KR20220041144A

KR20220041144A - 아프리카 돼지 열병 백신

Info

Publication number: KR20220041144A
Application number: KR1020227006051A
Authority: KR
Inventors: 린다 딕슨; 크리스 네서튼; 제럴딘 테일러; 데이브 채프먼
Original assignee: 더 피르브라이트 인스티튜트
Priority date: 2019-07-29
Filing date: 2020-07-28
Publication date: 2022-03-31
Also published as: JP2022542174A; AU2020322191A1; WO2021019232A1; CA3148586A1; EP4003412A1; US20220273788A1; BR112022000865A2; MX2022001028A; CO2022001782A2; CN114375199A; TW202118771A; CL2022000161A1; GB201910794D0

Abstract

본 발명은 하기를 포함하는 아프리카 돼지 열병 바이러스 (ASFV) 서브유닛 백신을 제공한다: (i) 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1, 2 또는 3 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 재조합 폴리뉴클레오티드; 여기서 하나 이상의 재조합 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 상이한 ASFV 폴리펩티드의 총 개수는 10개 이하임; 또는 (ii) 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1, 2 및 3 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체; 여기서 백신은 10개 이하의 상이한 ASFV 폴리펩티드를 포함함.

Description

아프리카 돼지 열병 백신

본 발명은 아프리카 돼지 열병의 치료 및/또는 예방을 위한 백신에 관한 것이다.

아프리카 돼지 열병 (ASF)은 이중-가닥 DNA 바이러스인 아프리카 돼지 열병 바이러스 (ASFV)에 의해 가축용 돼지에서 유발되는 치명적인 출혈성 질환이다. ASFV는 우세하게 세포의 세포질에서 복제하는 아스파비리다에(Asfarviridae) 과의 유일한 구성원이다. ASFV의 병독성 균주는 감염 후 약 5-14일 이내에 가축용 돼지를 죽일 수 있으며, 치사율은 100%에 달한다.

현재 ASF에 대한 치료법은 없다. 아프리카 이외의 국가에서는 수입 돼지 및 돼지고기 제품에 대한 반입 제한, 돼지에게 먹이기 전에 허가 하에 폐축산물을 강제로 끓이기, 질환 진단 시 도축 정책을 적용하는 등 국가 차원에서 예방을 시도하고 있다. 아프리카에서 야생 동물로부터의 확산 방지는 멧돼지, 및 멧돼지에 오염된 물질을 무리에서 멀리 떨어뜨리는 조치를 기반으로 한다. 가축용 돼지 집단에서의 확산은 우수한 생물학적 보안 조치와 영향을 받는 농장에서의 돼지 검역 및 도살 조치를 기반으로 한다.

현재까지는 효과적인 약독화된 또는 불활성화된 바이러스 백신이 개발되지 않았다 (http://www.thepigsite.com/pighealth/article/441/african-swine-fever-asf 참조).

연진드기에서 회수한 저 병독성 ASFV 균주 OURT88/3을 사용하여 치명적인 챌린지로부터 실험적으로 방어할 수 있다. OURT88/3은 포르투갈로부터의 ASFV의 비-병원성 분리주이다. ASFV OURT88/3에 의한 이전 감염은 관련된 병독성 바이러스의 챌린지로부터의 방어를 부여하는 것으로 제시된 바 있다 (Boinas et al. (2004) J Gen Virol 85:2177-2187; Oura et al. (2005) J. Gen. Virol. 86:2445-2450). 추가로, 일부 유전자-결실된 바이러스가 또한 챌린지로부터의 방어를 유도하는데 효과적이다 (예를 들어, BeninΔMGF 및 BeninΔDP148R).

상기 바이러스가 특정 동물에서 방어 면역 반응을 유도하는 것으로 제시된 바 있지만, 이러한 효과가 보편적인 것으로 보이지는 않는다. 면역화는 일부 돼지를 후속 챌린지로부터 방어하는데 효과가 없는 것으로 보이다. 또한, 일부 돼지에서 발열 또는 관절 종창과 같은 유해 임상 반응 유도와 연관이 있을 수 있다.

ASFV에 대한 방어를 유도할 수 있는 ASFV 폴리펩티드를 포함하는 서브유닛 조성물의 능력도 또한 조사되었다. 그러나, ASFV 폴리펩티드가 면역원성 반응을 유도하는 능력이 ASFV 챌린지에 대한 방어를 유도하는 능력을 반드시 예측하는 것은 아니라는 것이 상기 연구를 통해 결정되었다 (문헌 [Neilan et al.; Virology; 319(2); 337-342; 2004] 참조). 추가로, ASFV 폴리펩티드는 특정한 조합으로 사용될 때만 방어를 유도할 수 있다. 예를 들어, 닐란(Neilan) 등 (상기와 같음)은 p30, p54, p72 및 p22의 조합이 방어를 유도하기에 충분하지 않다고 보고하였다. 대조적으로, 아르길라구에트(Argilaguet) 등은 (Antiviral Res; 98(1); 61-65; 2013)은 p30, p54 및 EP402R의 조합이 DNA 백신접종 실험에서 ASFV에 대한 부분적 방어를 제공했다고 보고하였다.

따라서, ASFV 감염을 제어하고 질환 확산을 예방하기 위한 대안적 조치가 요구된다.

본 발명자들은 ASFV 챌린지 이전에 투여될 때 ASFV에 대한 반복가능한 방어를 유도할 수 있는 3개의 ASFV 폴리펩티드의 최소 조합을 결정하였다. 본 발명자들은 3개의 ASFV 폴리펩티드 중 어느 하나가 부재할 때 방어가 유도되지 않는다는 것을 결정하였다. 추가로, 본 발명자들은 3개의 ASFV 폴리펩티드의 이러한 최소 조합이 추가의 ASFV 폴리펩티드와 함께 조합되어 ASFV 챌린지에 대한 신뢰가능한 방어 및 ASF의 치료 및/또는 예방을 유도하기 위한 개선된 백신 조성물을 제공할 수 있다는 것을 입증하였다.

따라서, 제1 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는 ASF 바이러스 서브유닛 백신을 제공한다: (i) 서열식별번호(SEQ ID NO): 1, 2 및 3으로 제시된 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1, 2 또는 3 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 재조합 폴리뉴클레오티드; 여기서 하나 이상의 재조합 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 상이한 ASFV 폴리펩티드의 총 개수는 10개 이하임; 또는 (ii) 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1, 2 및 3 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체; 여기서 백신은 10개 이하의 상이한 ASFV 폴리펩티드를 포함함.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 서브유닛 백신은 전체 바이러스 입자 (살아있는, 약독화된 바이러스 및 죽은 바이러스)를 포함하는 백신과 달리, 개별 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 백신을 지칭한다.

하나 이상의 재조합 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 상이한 ASFV 폴리펩티드의 개수는 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 또는 6개 이하의 폴리펩티드 ASFV 폴리펩티드일 수 있거나; 또는 백신은 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 또는 6개 이하를 포함할 수 있다.

백신은 (i) 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 ASFV 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 추가 폴리뉴클레오티드; 또는 (ii) 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 하나 이상의 추가 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다.

백신은 a) 서열식별번호: 1-8을 포함하는 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드; 또는 서열식별번호: 1-8을 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체; (b) 서열식별번호: 1-3 및 6-8을 포함하는 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-3 및 6-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드; 또는 서열식별번호: 1-3 및 6-8을 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-3 및 6-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체; 또는 (c) 서열식별번호: 1-5를 포함하는 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-5 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드; 또는 서열식별번호: 1-5를 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-5 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다.

재조합 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 9, 10 및 11, 또는 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함할 수 있다.

추가 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 12-16 중 하나 이상 또는 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함할 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 벡터에 존재할 수 있다. 벡터는 아데노바이러스, 변형된 백시니아 앙카라 벡터 및 가성광견병 바이러스 벡터로부터 선택될 수 있다.

각각의 재조합 폴리뉴클레오티드는 동일한 벡터에 제공될 수 있다.

추가 측면에서, 본 발명은 대상체에서 아프리카 돼지 열병을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 본 발명의 제1 측면에 따른 백신을 제공한다.

본 발명은 추가로 대상체에게 치료 유효량의 본 발명에 따른 백신을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 아프리카 돼지 열병을 치료 및/또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서의 아프리카 돼지 열병의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 제조에서의 본 발명의 제1 측면에 정의된 바와 같은 재조합 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 재조합 폴리펩티드의 용도에 관한 것이다.

대상체는 돼지 대상체일 수 있다. 적합하게는, 대상체는 가축용 돼지일 수 있다.

백신은 프라임-부스트 절차에 따라 투여될 수 있다. 예를 들어, 프라이밍 조성물은 하나 이상의 아데노바이러스 벡터를 포함할 수 있고, 부스팅 조성물은 하나 이상의 변형된 백시니아 앙카라 벡터를 포함할 수 있다.

백신은 경구, 정맥내, 근육내, 피하, 비내 또는 진피내 투여에 의해 투여될 수 있다.

도 1 - 아데노바이러스-MVA 프라임/부스트 프로토콜의 개략도
도 2 - 본 발명에서 사용하기 위한 ASFV 폴리펩티드에 대한 대표적인 아미노산 서열 (서열식별번호: 1-8 및 17)
도 3 - 본 발명에서 사용하기 위한 ASFV 폴리펩티드를 코딩하는 대표적인 핵산 서열 (서열식별번호: 9-16)
도 4 - 표 1

아프리카 돼지 열병 바이러스 (ASFV)

본 발명자들은 ASFV에 대한 반복가능한 방어를 유도할 수 있는 3개의 ASFV 폴리펩티드의 최소 조합을 결정하였다.

아프리카 돼지 열병 바이러스 (ASFV)는 아프리카 돼지 열병 (ASF)의 병원체이다. 이 바이러스는 돼지에서 치사율이 높은 출혈열을 유발하지만, 질병 징후가 없는 그의 자연 숙주, 멧돼지, 부시피그를 지속적으로 감염시킨다. 또한 매개체로 사용되는 것으로 간주되는 오르니토도로스(Ornithodoros) 속의 연진드기를 감염시킨다.

ASFV는 감염된 세포의 세포질에서 복제하며, 그렇게 하는 아스파비리다에 과의 유일한 구성원이다. ASFV는 사하라 사막 이남의 아프리카 고유종이며, 진드기와 야생 돼지, 부시피그, 멧돼지 사이의 감염 주기를 통해 야생에 존재한다. ASFV는 유럽 정착민이 돼지를 ASFV 고유 지역으로 가져온 후 처음 기재되었으며, 따라서 '신종 감염'의 한 예가 된다.

ASFV는 적어도 150개의 유전자를 포함하는 선형 게놈을 가진 큰 20면체 이중-가닥 DNA 바이러스이다. 유전자 개수는 바이러스의 다른 분리주마다 약간씩 상이하다. ASFV는 다른 대형 DNA 바이러스, 예를 들어, 폭스바이러스, 이리도바이러스 및 미미바이러스와 유사하다. 다른 바이러스성 출혈열과 마찬가지로, 복제의 주요 표적 세포는 단핵구, 대식세포 계통의 세포이다.

주요 캡시드 단백질 p72를 코딩하는 B646L 유전자의 C-말단 영역의 서열 변이에 기초하여, 24개의 ASFV 유전자형 (I-XXIX)이 확인되었다. 모든 ASFV p72 유전자형은 동부 및 남부 아프리카에서 유행하고 있다. 유전자형 I은 사르데냐와 서부 아프리카에서 유행하고 있다. 유전자형 II는 유럽, 중국, 베트남 및 캄보다에서 유행하고 있다. 유전자형 VIII은 4개의 동아프리카 국가에 국한되어 있다.

일부 유전자형의 균주의 예는 하기에 제공되어 있다. 볼드체로 제시된 균주는 하기 표 2에 제시된 아이덴티티 분석에서 사용되었다.

유전자형 I: OURT88 /3; Brazil/79; Lisbon/60; BA715; ASFV - Pret; Benin 97/1; IC/1/96; IC/576; CAM/82; Madrid/62; Malta/78; ZAR85; Katange63; Togo; Dakar59; OURT88/1; BEN/1/97; Dom_Rep; VAL/76; IC/2/96; Awoshie/99; NIG/1/99; NIG/1/98; ANG/70; BEL/85; SPEC120; Lisbon/57; ASFV -Warm; GHA/1/00; GAM/1/00; Ghana; HOL/86; NAM/1/80; NUR/90/1; CAM/4/85; ASFV - Teng; Tengani; ASFV-E75.

유전자형 II: Georgia 2007/1, Belgium 2018/1, China/2018/AnhuiXCGQ

유전자형 III: BOT 1/99

유전자형 IV: ASFV-Warthog; RSA/1/99/W

유전자형 VI: MOZ 94/1

유전자형 VII: VICT/90/1; ASFV - Mku; RSA/1/98

유전자형 VIII: NDA/1/90; KAL88/1; ZAM/2/84; JON89/13; KAV89/1; DEZda; Malawi LIL 20/1

유전자형 IX: UGA/1/95; Ken06.Bus

유전자형 X: BUR/1/84; BUR/2/84; BUR/90/1; UGA/3/95; TAN/Kwh12; HindeII; ASFV-Ken; 병독성 Uganda 65; Ken05/Tk1.

본 발명자들은 ASFV 폴리펩티드 서열식별번호: 1-3의 최소 조합을 포함하는 조성물이 ASFV 챌린지에 대한 방어를 유도할 수 있다는 것을 결정하였다.

표 2

표 2의 폴리펩티드의 대표적인 아미노산 서열은 도 2에 제시되어 있다 (서열식별번호: 1-8 및 17).

표 2의 폴리펩티드를 코딩하는 대표적인 핵산 서열은 도 3에 서열식별번호: 9-16으로 제시되어 있다.

폴리펩티드

용어 "폴리펩티드"는 일반적인 의미에서 전형적으로 인접한 아미노산의 α-아미노 기와 카르복실기 사이의 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 일련의 잔기, 전형적으로, L-아미노산을 의미하는 것으로 사용된다. 이 용어는 "단백질"과 동의어이다.

용어 "재조합 폴리펩티드"는 폴리펩티드가 그의 자연 환경으로부터 단리되고, 예를 들어, ASFV로부터 추출되거나, ASFV 외부에서 생성되었다는 것을 의미하는데 사용된다. 특히, 재조합 폴리펩티드는 ASFV와 관련하여 제공되지 않고, 재조합 핵산, 즉, 인공적으로 생성된 DNA 또는 RNA로부터 발현된다.

본 발명의 백신은 본원에 정의되는 바와 같이, ASFV 폴리펩티드의 조합을 포함할 수 있다.

본 백신은 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1, 2 및 3 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다.

본 발명의 임의의 실시양태에서, 서열식별번호: 3의 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 3 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체는 서열식별번호: 17 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 17 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체로 치환될 수 있다.

서열식별번호: 17은 유전자형 II 균주로부터의 대표적인 EP153R 서열이다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 1, 2 또는 3 중 하나; 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 1 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 2 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 3 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

본 백신은 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 재조합 폴리펩티드; 또는 서열식별번호: 1, 2 및/또는 3 중 하나와 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 백신은 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 재조합 폴리펩티드; 또는 서열식별번호: 1, 2 및/또는 3 중 하나와 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체로 이루어질 수 있다.

한 실시양태에서, 재조합 폴리펩티드는 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 아미노산 서열 또는 적어도 70%의 서열 동일성을 공유하는 그의 변이체로 이루어질 수 있다.

백신은 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 하나 이상의 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 추가로 포함할 수 있다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 4-8 중 하나; 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 4 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 5 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 6 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 7 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

적합하게는, 변이체는 서열식별번호: 8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

백신은 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 하나 이상의 폴리펩티드 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나와 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 추가로 포함할 수 있다.

백신은 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4 또는 적어도 5개의 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나와 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다.

백신은 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 2, 3, 4 또는 5개의 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다.

적합하게는, 백신은 서열식별번호: 1-8을 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다.

적합하게는, 백신은 서열식별번호: 1-3 및 6-8을 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1-3 및 6-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다.

적합하게는, 백신은 서열식별번호: 1-5를 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1-5 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다.

변이체

변이체를 유사성 (즉, 유사한 화학적 특성/기능을 갖는 아미노산 잔기)의 관점에서 고려해 볼 수 있지만, 본 발명과 관련하여, 변이체를 서열 동일성 관점에서 표현하는 것이 바람직하다.

서열 비교는 육안으로, 또는 더욱 일반적으로는 쉽게 이용가능한 서열 비교 프로그램의 도움으로 수행할 수 있다. 이러한 공개적으로 상업적으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램은 둘 이상의 서열 사이의 서열 동일성을 계산할 수 있다.

서열 동일성은 인접한 서열에 대해 계산될 수 있고, 즉, 한 서열은 다른 서열과 정렬되고, 한 서열 중의 각 아미노산은 한 번에 한 잔기씩 다른 서열의 상응하는 아미노산과 직접 비교된다. 이는 "갭이 없는" 정렬로 불린다. 전형적으로, 상기 갭이 없는 정렬은 비교적 짧은 개수의 잔기 (예를 들어, 50개 미만의 연속 아미노산)에 대해서만 수행된다.

이는 매우 간단하고 일관된 방법이지만, 예를 들어, 다른 동일한 서열 쌍에서, 하나의 삽입 또는 결실로 인해 다음 아미노산 잔기가 정렬에서 벗어나 잠재적으로는, 전역 정렬이 수행될 때, % 상동성을 크게 감소시키는 결과를 초래할 수 있다는 점을 고려하지 못한다. 결과적으로, 대부분의 서열 비교 방법은 전체 상동성 점수에 과도하게 불이익을 주지 않으면서, 가능한 삽입 및 결실을 고려하는 최적의 정렬을 생성하도록 디자인된다. 이는 국소 상동성을 최대화하기 위해 서열 정렬에 "갭"을 삽입함으로써 달성된다.

그러나, 이러한 더 복잡한 방법은 정렬에 존재하는 각 갭에 "갭 페널티"를 부여하여 동일한 개수의 동일한 아미노산에 대해 가능한 한 적은 갭을 갖는 서열 정렬 - 비교되는 두 서열 사이의 관련성이 더 높다는 것을 반영함 - 많은 갭을 갖는 것보다 더 높은 점수를 달성하게 될 것이다. "아핀 갭 비용"은 전형적으로 갭의 존재에 대해 상대적으로 높은 비용을 부과하고, 갭에서 각 후속 잔기에 대해 더 작은 페널티를 부과하는데 사용된다. 이는 가장 일반적으로 사용되는 갭 점수화 시스템이다. 높은 갭 페널티는 물론 더 적은 갭을 갖는 최적화된 정렬을 생성할 것이다. 대부분의 정렬 프로그램을 통해 갭 페널티는 수정될 수 있다. 그러나, 서열 비교를 위해 상기 소프트웨어를 사용할 때에는 디폴트 값을 사용하는 것이 바람직하다. 예를 들어, GCG 위스콘신 베스티핏 패키지(GCG Wisconsin Bestfit package) (하기 참조)를 사용할 때, 아미노산 서열에 대한 디폴트 갭 페널티는 갭에 대해서는 -12이고, 각 연장에 대해서는 -4이다.

그러므로, 최대 % 서열 동일성을 계산하려면 먼저 갭 페널티를 고려하여 최적의 정렬을 생성하여야 한다. 상기 정렬을 수행하는데 적합한 컴퓨터 프로그램은 GCG 위스콘신 베스티핏 패키지 (University of Wisconsin, U.S.A; Devereux et　al., 1984, Nucleic Acids Research 12:387)이다. 서열 비교를 수행할 수 있는 다른 소프트웨어의 예로는 BLAST 패키지 (문헌 [Ausubel et al., 1999 ibid - Chapter 18] 참조), FASTA (Atschul et al., 1990, J. Mol. Biol., 403-410) 및 GENEWORKS 비교 도구 제품군을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. BLAST 및 FASTA 둘 다가 오프라인 및 온라인 검색에 이용가능하다 (문헌 [Ausubel et al., 1999 ibid, pages 7-58 내지 7-60] 참조). 그러나, GCG 베스티핏 프로그램을 사용하는 것이 바람직하다.

한 실시양태에서, 서열 동일성은 서열식별번호: 1-8 또는 서열식별번호: 9-16으로부터 선택되는 서열 전역에 걸쳐 결정된다. 한 실시양태에서, 서열 동일성은 서열식별번호: 1-8 또는 서열식별번호: 9-16으로부터 선택되는 서열과 비교되는 후보 서열 전역에 걸쳐 결정된다.

최종 서열 동일성은 동일성 측면에서 측정될 수 있지만, 정렬 프로세스 자체는 전형적으로 양자택일 쌍 비교를 기반으로 하지 않는다. 대신, 화학적 유사성 또는 진화적 거리를 기반으로 각 쌍별 비교에 점수를 부여하는 스케일링된 유사성 점수 매트릭스가 일반적으로 사용된다. 일반적으로 사용되는 상기 매트릭스의 예로는 BLOSUM62 매트릭스 - BLAST 프로그램 제품군에 대한 디폴트 매트릭스 -이 있다. GCG 위스콘신 프로그램은 일반적으로 공개 디폴트 값 또는 제공된 경우 맞춤형 기호 비교 표를 사용한다 (추가의 상세한 설명에 대해서는 사용자 설명서 참조). GCG 패키지의 경우, 공개 디폴트 값을 사용하거나, 다른 소프트웨어의 경우, BLOSUM62와 같은 디폴트 매트릭스를 사용하는 것이 바람직하다.

일단 소프트웨어가 최적의 정렬을 생성하고 나면, % 서열 동일성을 계산할 수 있다. 소프트웨어는 전형적으로 서열 비교의 일부로 이를 수행하고, 수치 결과를 생성한다.

본 발명에 따른 용어 "변이체"는, 생성된 아미노산 서열이 비변형된 서열과 실질적으로 동일한 활성을 유지하는 바, 서열로부터, 또는 서열로의 하나(또는 그 초과의) 아미노산의 임의의 치환, 변이, 변형, 대체, 결실 또는 부가를 포함한다.

예를 들어, 하기 표에 따라 보존적 치환이 이루어질 수 있다. 두 번째 칼럼의 동일한 블록, 및 바람직하게는 세 번째 칼럼의 동일한 라인에 있는 아미노산은 서로 치환될 수 있다:

기능과 관련하여, 변이체는 면역 반응을 유도할 수 있어야 한다. 예를 들어, 면역 반응의 유도는 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편으로 이전에 면역화된 대상체로부터 단리된 말초 면역 세포 또는 비장세포에서의 회상 반응을 입증함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 회상 반응은 대상체를 면역화시키기 위해 이전에 사용된 항원 또는 폴리펩티드를 이용한 시험관내 챌린지 이후의 인터페론 생산 (예를 들어, IFNγ) 및/또는 증식 반응에 의해 입증될 수 있다. 바람직하게는, 변이체는 본원에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 1-3으로부터 선택되는 폴리펩티드 또는 그의 변이체 또는 면역원성 단편과 함께 조합하여 투여될 때 ASFV를 이용하는 후속 챌린지에 대해 대상체에서 방어 면역 반응을 유도할 수 있어야 한다.

폴리펩티드는 서열식별번호: 1-8로부터 선택되는 아미노산 서열의 면역원성 단편 또는 적어도 70% 서열 동일성을 공유하는 그의 변이체를 포함할 수 있다.

면역원성 단편은 면역 반응을 유도할 수 있는 서열식별번호: 1-8의 일부 또는 한 부분을 의미한다. 바람직하게는, 면역원성 단편은 본원에 기재된 바와 같은 서열식별번호: 1-3으로부터 선택되는 폴리펩티드 또는 그의 변이체 또는 면역원성 단편과 함께 조합하여 투여될 때 ASFV를 이용하는 후속 챌린지에 대해 대상체에서 방어 면역 반응을 유도할 수 있어야 한다.

서열식별번호: 1-8의 면역원성 단편, 또는 그의 변이체는, 예를 들어, 8 내지 200개의 아미노산, 예를 들어, 8 내지 150개의 아미노산, 8 내지 100개의 아미노산, 8 내지 75개의 아미노산, 8 내지 50개의 아미노산, 8 내지 25개의 아미노산, 8 내지 20개의 아미노산, 8 내지 15개의 아미노산 또는 8 내지 12개의 아미노산일 수 있다. 한 실시양태에서, 서열식별번호: 1-8의 면역원성 단편, 또는 그의 변이체는 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50개의 아미노산 길이일 수 있다.

폴리뉴클레오티드

폴리뉴클레오티드는 합성 RNA/DNA 서열, cDNA 서열 또는 부분 게놈 DNA 서열과 같은 임의의 적합한 유형의 폴리뉴클레오티드일 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 및 핵산 서열 및 폴리뉴클레오티드는 서로 동의어인 것으로 의도된다. "폴리뉴클레오티드"는 일반적으로 비변형된 RNA 또는 DNA, 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있는, 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드를 지칭한다. "폴리뉴클레오티드"로는, 제한 없이, 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥, 또는 더욱 전형적으로, 이중-가닥, 또는 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물일 수 있는, DNA 및 RNA를 포함하는 하이브리드 분자를 포함한다. 추가로, "폴리뉴클레오티드"는 RNA 또는 DNA, 또는 RNA 및 DNA 둘 다를 포함하는 삼중-가닥 영역을 지칭한다. 용어 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNA 또는 RNA 및 안정성을 위해 또는 다른 이유로 변형된 백본을 갖는 DNA 또는 RNA를 포함한다. "변형된" 염기는, 예를 들어, 트리틸화된 염기 및 이노신과 같은 특이한 염기를 포함한다. DNA 및 RNA에 다양한 변형이 이루어질 수 있고; 따라서, "폴리뉴클레오티드"는 자연에서 일반적으로 발견되는 화학적으로, 효소적으로 또는 대사적으로 변형된 형태의 폴리뉴클레오티드 뿐만 아니라, 바이러스 및 세포에 특징적인 화학적 형태의 DNA 및 RNA를 포괄한다. "폴리뉴클레오티드"는 또한 종종 올리고뉴클레오티드로 지칭되는 비교적 짧은 폴리뉴클레오티드를 포괄한다.

용어 "재조합 폴리뉴클레오티드"는 폴리뉴클레오티드가 그의 자연 환경으로부터 단리된, 예를 들어, ASFV로부터 추출되거나, 또는 ASFV 외부에서 생성되는 것을 의미하는데 사용된다. 특히, 재조합 폴리뉴클레오티드는 ASFV와 관련하여 제공되지 않고, 인공적으로 생성된 폴리뉴클레오티드, 즉, 인공적으로 생성된 DNA 또는 RNA로 제공된다.

다수의 상이한 폴리뉴클레오티드가 유전자 코드의 축퇴성의 결과로서 동일한 폴리펩티드를 코딩할 수 있다는 것을 통상의 기술자는 이해할 것이다. 추가로, 통상의 기술자는 폴리펩티드가 발현되는 임의의 특정한 숙주 유기체의 코돈 사용빈도를 반영하기 위해, 통상적인 기술을 사용하여 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리펩티드 서열에 영향을 미치지 않는 뉴클레오티드 치환을 수행할 수 있다는 것을 이해하여야 한다.

용어 "변이체"는 대상 서열과 상이한 자연 발생 핵산 서열을 의미하는데 사용된다. 변이체는 대상 서열과 적어도 70% 서열 동일성을 갖거나 최대 20개 이하의 돌연변이를 포함할 수 있다.

본 백신은 본 발명의 백신에 따른 재조합 폴리펩티드의 조합을 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 1-8의 각 폴리펩티드를 코딩하는 예시적인 폴리뉴클레오티드는 표 2에 제시되어 있다.

본 백신은 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1, 2 및 3 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

본 백신은 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 재조합 폴리펩티드; 또는 서열식별번호: 1, 2 및/또는 3 중 하나와 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 백신은 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 재조합 폴리펩티드; 또는 서열식별번호: 1, 2 및/또는 3 중 하나와 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드로 이루어질 수 있다.

백신은 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 하나 이상의 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다.

백신은 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 하나 이상의 폴리펩티드 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나와 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다.

백신은 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4 또는 적어도 5개의 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나와 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

백신은 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 2, 3, 4 또는 5개의 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

적합하게는, 백신은 서열식별번호: 1-8을 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

적합하게는, 백신은 서열식별번호: 1-3 및 6-8을 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1-3 및 6-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

적합하게는, 백신은 서열식별번호: 1-5를 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1-5 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 1-3에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 각각 서열식별번호: 9-11; 또는 서열식별번호: 9-11 중 하나와 적어도 70% 서열 동일성을 공유하는 그의 변이체를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 1에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 9; 또는 서열식별번호: 9와 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 그의 변이체를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 2에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 10; 또는 서열식별번호: 10과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 그의 변이체를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 3에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 11; 또는 서열식별번호: 11과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 그의 변이체를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 4-8에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 각각 서열식별번호: 12-16; 또는 서열식별번호: 12-16 중 하나와 적어도 70% 서열 동일성을 공유하는 그의 변이체를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 4에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 12; 또는 서열식별번호: 12와 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 그의 변이체를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 5에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 13; 또는 서열식별번호: 13과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 그의 변이체를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 6에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 14; 또는 서열식별번호: 14와 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 그의 변이체를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 7에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 15; 또는 서열식별번호: 15와 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 그의 변이체를 포함할 수 있다.

서열식별번호: 8에 제시된 폴리펩티드 또는 그의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 16; 또는 서열식별번호: 16과 적어도 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 동일한 그의 변이체를 포함할 수 있다.

적합하게는, 백신은 서열식별번호: 9-16 또는 서열식별번호: 9-16과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

적합하게는, 백신은 서열식별번호: 9-11 및 14-16; 또는 서열식별번호: 9-11 및 14-16과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

적합하게는, 백신은 서열식별번호: 9-13; 또는 서열식별번호: 9-13과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 그의 면역원성 단편을 포함할 수 있다.

조합

본 발명은, 적어도 부분적으로, ASFV에 대한 방어를 유도할 수 있는 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편의 최소 조합에 대한 본 발명자의 결정에 기초한다.

본원에 제공되는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드의 조합에 대한 언급은 상기 폴리펩티드를 코딩하는 상응하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드의 조합에 동일하게 적용되는 것으로 의도됨을 이해하여야 한다.

본 백신에서 상이한 ASFV 폴리펩티드 (또는 하나 이상의 재조합 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 것)의 총 개수는 10개 이하이다.

적합하게는, 상이한 ASFV 폴리펩티드의 개수는 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 또는 6개 이하이다.

적합하게는, 상이한 ASFV 폴리펩티드의 개수는 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개이다.

적합하게는, 상이한 ASFV 폴리펩티드의 개수는 3개이다.

적합하게는, 상이한 ASFV 폴리펩티드의 개수는 5개이다.

적합하게는, 상이한 ASFV 폴리펩티드의 개수는 6개이다.

적합하게는, 상이한 ASFV 폴리펩티드의 개수는 8개이다.

벡터

본원에 사용된 바와 같이, "벡터"는 숙주 세포에서 핵산을 전달하거나 또는 유지할 수 있는 임의의 작용제일 수 있으며, 바이러스, 박테리아 및 진핵성 벡터, 플라스미드, 네이키드 핵산, 폴리펩티드 또는 다른 분자와 복합체를 형성한 핵산 및 고체상 입자에 고정된 핵산을 포함한다.

본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드는 바이러스 또는 비-바이러스 기술에 의해 전달될 수 있다.

비-감염성 전달 시스템으로는 DNA 형질감염 방법을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 여기서 형질감염은 본 발명의 핵산을 표적 세포에 전달하기 위해 비-감염성 벡터를 사용하는 프로세스를 포함한다.

전형적인 형질감염 방법으로는 전기천공, 핵산 바이오리스틱, 지질-매개 형질감염, 콤팩티드 핵산-매개 형질감염, 리포좀, 면역리포좀, 리포펙틴, 양이온성 작용제-매개, 양이온성 표면 양친매체 (CFA), 다가 양이온, 예컨대 스페르민, 양이온성 지질 또는 폴리리신, 1,2,-비스(올레오일옥시)-3-(트리메틸암모니오)프로판 (DOTAP)-콜레스테롤 복합체 및 그의 조합을 포함한다.

비-바이러스 전달 시스템은 또한 박테리아 전달 시스템을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 박테리아는 이전에 항암제 및 항암제의 전달제로 사용되어 왔다.

세포 부착 분자는 다양한 세포-대-세포 및 세포-대-세포 외 기질 (ECM) 상호 작용에 관여하는 큰 분자 그룹이며, 세포 진입을 위한 수용체로서 많은 병원성 미생물에 의해 이용된다. 이들 분자는 유전자 및 약물 전달 시스템 둘 다의 표적화 및 흡수를 위해 사용될 수 있다.

유전자 총 전달 시스템이 또한 DNA 전달을 위해 사용될 수 있다.

바이러스 전달 시스템으로는 아데노바이러스 벡터, 변형된 백시니아 앙카라 벡터, 아데노-연관 바이러스 (AAV) 벡터, 헤르페스 바이러스 벡터, 예컨대 가성광견병 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터 또는 바큘로바이러스 벡터, 베네수엘라 말 뇌염 바이러스 (VEE), 폭스바이러스, 예컨대: 카나리폭스 바이러스, 엔토모폭스 바이러스, 펭귄 알파바이러스, 및 알파바이러스 기반 DNA 벡터를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

한 실시양태에서, 벡터는 아데노바이러스 벡터일 수 있다.

아데노바이러스는 RNA 중간체를 통해 복제되지 않는 이중-가닥 선형 DNA 바이러스이다. 아데노바이러스에는 50개를 초과하는 상이한 인간 혈청형이 있으며, 이는 그의 유전자 서열에 기초하여 6개의 하위군으로 나뉜다.

아데노바이러스는 인간 및 비-인간 기원의 광범위한 세포 유형의 생체내, 생체외 및 시험관내 형질도입이 가능한 이중-가닥 DNA 비-외피보유 바이러스이다. 이러한 세포에는 호흡 기도 상피 세포, 간세포, 근육 세포, 심장 근육세포, 활막세포, 1차 유방 상피 세포 및 유사분열 후 최종적으로 분화된 세포, 예컨대 뉴런을 포함한다. 아데노바이러스 벡터는 또한 비-분열 세포를 형질도입할 수 있다.

아데노바이러스는 유전자 요법 및 이종 유전자의 발현을 위한 벡터로 사용되어 왔다. 큰 (36kb) 게놈은 최대 8 kb의 외래 삽입 DNA를 수용할 수 있고, 보완 세포주에서 효율적으로 복제하여 ml당 최대 1012개의 형질도입 단위의 매우 높은 역가를 생성할 수 있다. 따라서, 아데노바이러스는 1차 비-복제 세포에서 유전자 발현을 연구하는데 있어 최고의 시스템 중 하나이다. 아데노바이러스 게놈으로부터 바이러스 또는 외래 유전자의 발현은 복제 세포를 필요로 하지 않는다. 아데노바이러스 벡터는 수용체 매개 엔도사이토시스에 의해 세포에 진입한다. 일단 세포 내부에 들어가고 나면, 아데노바이러스 벡터는 숙주 염색체에 거의 통합되지 않다. 대신, 그들은 숙주 핵에서 선형 게놈으로서 에피솜으로 (숙주 게놈과 독립적으로) 작용한다.

한 실시양태에서, 벡터는 변형된 백시니아 앙카라 (MVA) 벡터일 수 있다. MVA 바이러스는 폭스비리다에(Poxviridae) 과의 오르토폭스바이러스(Orthopoxvirus) 속의 구성원인 백시니아 바이러스와 관련이 있다. MVA 바이러스는 장요막 백시니아 앙카라 (CVA: Chorioallantois Vaccinia Ankara) 바이러스의 닭 배 섬유모세포에 대한 516개의 연속 계대에 의해 생성되었다. 닭 유래 물질을 생산 기질로 반복 계대함으로써 약독화 프로세스에서 MVA 바이러스는 여러 부위에서 게놈 DNA의 대략 15%를 상실하였다 (Mayr and Munz 1964 in Zentralbl Bakteriol Orig 195, 24-35; Meyer et al. 1991 in J Gen Virol 72 ( Pt 5), 1031-1038). MVA 바이러스를 분석하여 야생형 CVA 균주 대비로 게놈의 변경을 결정하였다. 게놈 DNA의 6가지 주요 결실 (결실 I, II, III, IV, V 및 VI), 총 31,000개 염기쌍이 확인되었다 (Meyer, et al. 1991 in J Gen Virol 72 (Pt 5), 1031-1038). MVA는 인간 및 비-인간 영장류 세포에서 복제되지 않는다.

백시니아 벡터에 대한 대안으로 인간 세포에서 재조합 단백질을 감염 및 발현할 수 있지만, 복제는 할 수 없는 아비폭스 벡터, 예컨대, ALVAC로 알려진 조류폭스 또는 카나리아폭스 및 그로부터 유래된 균주를 포함한다.

다른 벡터의 예로는 생체외 전달 시스템을 포함하며, 이는 DNA 형질감염 방법, 예컨대, 전기천공, DNA 바이오리스틱, 지질-매개 형질감염 및 콤팩티드 DNA-매개 형질감염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

벡터는 플라스미드 DNA 벡터일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "플라스미드"는 그의 발현 또는 복제를 위해 이종 DNA를 세포 내로 도입하는데 사용되는 별개의 요소를 지칭한다.

한 실시양태에서, 벡터는 각각이 본 백신에서 사용하기 위한 것으로 기재된 것과 같은 상이한 폴리펩티드를 코딩하는 하나 초과의 핵산 서열을 포함할 수 있다.

적합하게는, 하나 이상의 벡터는, 다중 핵산 서열 사이에서 본 백신에서 사용하기 위한 것으로 기재된 것과 같은 폴리펩티드의 조합을 코딩하는 다중 핵산 서열을 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 벡터는 하나 초과의 핵산 서열을 포함할 수 있고, 이로써, 벡터는 핵산 서열 사이에서 본 백신에서 사용하기 위한 것으로 기재된 것과 같은 폴리펩티드의 조합을 코딩하는 핵산 서열을 포함한다.

하나 초과의 핵산 서열이 발현되도록 하기 위해, 각 핵산 서열에 대해 하나씩인 벡터 내에 2개 이상의 전사 단위가 존재할 수 있다. 한 실시양태에서, 내부 리보솜 진입 부위 (IRES)를 사용하여 폴리시스트론 메시지에서 제2 (및 후속) 코딩 서열(들)의 번역을 개시한다 (Adam et al. 1991 J.Virol. 65, 4985).

IRES 요소를 레트로바이러스 벡터에 삽입하는 것은 레트로바이러스 복제 주기와 호환되며, 단일 프로모터로부터 다중 코딩 영역이 발현될 수 있게 한다 (Adam et al. (상기와 같음); Koo et al. (1992) Virology 186:669-675; Chen et al. 1993 J. Virol 67:2142-2148). IRES 요소는 바이러스 단백질의 캡-비의존 번역을 촉진하는 피코르나바이러스의 비-번역된 5' 말단에서 처음 발견되었다 (Jang et al. (1990) Enzyme 44: 292-309). RNA의 오픈 리딩 프레임 사이에 위치하는 경우, IRES 요소는 IRES 요소에서 리보솜의 진입, 이어서, 번역의 하류 개시를 촉진함으로써 하류 오픈 리딩 프레임이 효율적으로 번역될 수 있게 한다.

IRES에 대한 리뷰는 몬트포드(Mountford) 및 스미쓰(Smith) (TIG May 1995 vol 11, No 5:179-184)에 의해 제공된다. 뇌심근염 바이러스 (EMCV) (Ghattas, I.R., et al., Mol. Cell. Biol., 11:5848-5859 (1991); BiP 단백질 [Macejak and Sarnow, Nature 353:91 (1991)]; 초파리의 안테나페디아 유전자 (엑손 d 및 e) [Oh, et al., Genes & Development, 6:1643-1653 (1992)]로부터의 것 뿐만 아니라, 폴리오바이러스 (PV)에서의 것 [Pelletier and Sonenberg, Nature 334: 320-325 (1988)]을 비롯한 다수의 상이한 IRES 서열이 공지되어 있고; 문헌 [Mountford and Smith, TIG 11, 179-184 (1985)] 또한 참조한다.

용어 "IRES"는 IRES로 작동하거나 또는 그의 기능을 개선시키는 임의의 서열 또는 서열의 조합을 포함한다.

IRES(들)는 바이러스 기원 (예컨대 EMCV IRES, PV IRES 또는 FMDV 2A-유사 서열) 또는 세포 기원 (예컨대 FGF2 IRES, NRF IRES, Notch 2 IRES 또는 EIF4 IRES)일 수 있다.

IRES가 각 폴리뉴클레오티드의 번역을 개시할 수 있게 하기 위해서는 벡터 게놈에서 폴리뉴클레오티드 사이 또는 그 앞에 위치하여야 한다.

폴리뉴클레오티드는 본 백신에 사용하기 위한 2개 이상의 면역원성 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드를 코딩할 수 있으며, 여기서 각 폴리펩티드는 절단 부위에 의해 연결된다. 절단 부위는 자가-절단될 수 있으며, 이로써, 폴리펩티드가 생성될 때, 외부 절단 활성을 필요로 하지 않으면서 개별 면역원성 폴리펩티드로 즉시 절단된다.

하기 제시된 서열을 갖는 구제역 바이러스 (FMDV) 2a 자가-절단 펩티드를 비롯한, 다양한 자가-절단 부위가 공지되어 있다:

서열식별번호: 19

RAEGRGSLLTCGDVEENPGP.

또는

서열식별번호: 18

QCTNYALLKLAGDVESNPGP

'자가-절단 펩티드'는 본 백신에 사용하기 위한 2개 이상의 폴리펩티드를 포함하는 초기 폴리펩티드 및 자가-절단 펩티드가 생성될 때, 외부 절단 활성을 필요로 하지 않으면서 구별되는 별개의 ASFV 폴리펩티드로 즉시 "절단" 또는 분리되도록 작용하는 펩티드를 지칭한다.

폴리펩티드가 본 백신에 사용하기 위한 다중 ASFV 폴리펩티드, 예를 들어, 3개 이상의 ASFV 폴리펩티드를 포함하는 실시양태에서, 각 ASFV 폴리펩티드 사이에 자가-절단 폴리펩티드가 존재할 수 있다. 적합하게는, 제1 및 제2 ASFV 폴리펩티드 사이, 제2 및 제3 ASFV 폴리펩티드 사이 등에 자가-절단 폴리펩티드가 존재할 수 있다.

자가-절단 펩티드는 아프토바이러스 또는 카디오바이러스로부터의 2A 자가-절단 펩티드일 수 있다. 아프토바이러스 및 카디오바이러스의 1차 2A/2B 절단은 그 자체의 C-말단에서 2A "절단"에 의해 매개된다. 아프토바이러스, 예컨대 구제역 바이러스 (FMDV) 및 말 비염 A 바이러스에서, 2A 영역은, 단백질 2B의 N-말단 잔기 (보존된 프롤린 잔기)와 함께 그 자체의 C-말단에서 "절단"을 매개할 수 있는 자율 요소를 나타내는 것인, 약 18개의 아미노산으로 이루어진 짧은 섹션이다.

핵산 서열의 발현은 프로모터/인핸서 및 다른 발현 조절 신호를 포함하는 제어 서열을 사용하여 제어될 수 있다. 원핵성 프로모터 및 진핵 세포에서 기능성을 띠는 프로모터가 사용될 수 있다. 조직 특이적 또는 자극 특이적 프로모터가 사용될 수 있다. 2개 이상의 상이한 프로모터로부터의 서열 요소를 포함하는 키메라 프로모터 또한 사용될 수 있다.

적합한 촉진 서열은 폴리오마 바이러스, 아데노바이러스, 계두 바이러스, 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 거대세포바이러스 (CMV), 레트로바이러스 및 원숭이 바이러스 40 (SV40)과 같은 바이러스의 게놈 유래의 것, 또는 이종성 포유동물 프로모터, 예컨대 액틴 프로모터, EF1a, CAG, TK, SV40, 유비퀴틴, PGK 또는 리보솜 단백질 프로모터로부터의 것을 비롯한 강력한 프로모터이다. 대안적으로, 조직-특이적 프로모터, 예컨대 로돕신 (Rho), 로돕신 키나제 (RhoK), 원추형 호메오박스 함유 유전자 (CRX), 신경 망막-특이적 류신 지퍼 단백질 (NRL), 난황형 황반부 이영양증 2 (VMD2), 티로신 히드록실라제, 뉴런-특이적 뉴런-특이적 에놀라제 (NSE) 프로모터, 성상세포-특이적 신경교 섬유 산성 단백질 (GFAP) 프로모터, 인간 α1-항트립신 (hAAT) 프로모터, 포스포에놀피루베이트 카르복시키나제 (PEPCK), 간 지방산 결합 단백질 프로모터, Flt-1 프로모터, INF-β 프로모터, Mb 프로모터, SP-B 프로모터, SYN1 프로모터, WASP 프로모터, SV40/hAlb 프로모터, SV40/CD43, SV40/CD45, NSE/RU5' 프로모터, ICAM-2 프로모터, GPIIb 프로모터, GFAP 프로모터, 피브로넥틴 프로모터, 엔도글린 프로모터, 엘라스타제-1 프로모터, 데스민 프로모터, CD68 프로모터, CD14 프로모터 및 B29 프로모터가 전사를 구동시키는데 사용될 수 있다.

유전자의 전사는 인핸서 서열을 벡터에 삽입함으로써 추가로 증가될 수 있다. 인핸서는 상대적으로 방향- 및 위치-비의존적이지만; 진핵 세포 바이러스로부터의 인핸서, 예컨대, 복제 기점 (bp 100-270)의 후반에 있는 SV40 인핸서 및 CMV 초기 프로모터 인핸서가 사용될 수 있다. 인핸서는 프로모터의 5' 또는 3' 위치에서 벡터 내로 스플라이싱될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터 5' 부위에 위치한다.

프로모터는 적합한 표적 세포에서의 발현을 보장하거나 또는 증가시키기 위한 특색을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 특색은 보존 영역, 예컨대 프립나우 박스(Pribnow Box) 또는 TATA 박스일 수 있다. 프로모터는 뉴클레오티드 서열의 발현 수준에 영향을 미치는 (예컨대, 유지하는, 증진시키는 또는 감소시키는) 다른 서열을 함유할 수 있다. 적합한 다른 서열로는 Sh1-인트론 또는 ADH 인트론을 포함한다. 다른 서열로는 온도, 화학물질, 빛 또는 응력 유도 요소와 같은 유도 요소를 포함한다. 또한, 전사 또는 번역을 증진시키는데 적합한 요소가 존재할 수 있다.

백신

본원에 사용된 바와 같이, 용어 '백신'은, 대상체에게 투여되었을 때, 방어 면역 반응을 유도하거나 또는 자극하는 제제를 지칭한다. 백신은 유기체가 특정한 질환, 예를 들어, 본 경우에서, ASF에 면역성을 띠게 할 수 있다. 따라서, 본 발명의 백신은 후속 ASFV 챌린지에 대해 방어성인 면역 반응을 대상체에서 유도한다.

본 백신은 본원에 기재된 바와 같은 벡터, 재조합 폴리펩티드 및/또는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

한 실시양태에서, 본 백신은 복수의, 본원에 정의된 바와 같은 벡터, 재조합 폴리펩티드 및/또는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 '복수'란, 본원에 기재된 바와 같은 벡터, 재조합 폴리펩티드 및/또는 재조합 폴리뉴클레오티드가 1개 초과라는 것을 의미한다. 예를 들어, 복수란, 본원에 정의된 바와 같은 재조합 폴리펩티드 및/또는 재조합 폴리뉴클레오티드가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개라는 것을 의미할 수 있다.

백신은 아프리카 돼지 열병을 예방하는데 유용할 수 있다.

백신 조성물은 임의적으로 제약상 허용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 아주반트를 포함할 수 있다. 제약 담체, 부형제 또는 희석제의 선택은 의도된 투여 경로 및 표준 제약 관행과 관련하여 선택될 수 있다. 백신 조성물은 담체, 부형제 또는 희석제로서 (또는 그에 더하여), 임의의 적합한 결합제(들), 윤활제(들), 현탁화제(들), 코팅제(들), 가용화제(들), 및 백신의 전달 또는 면역원성을 지원하거나 또는 그를 증가시킬 수 있는 다른 담체 작용제를 포함할 수 있다.

상기 제제는, 예를 들어, 경구, 정맥내, 근육내, 피하, 비내, 진피내 투여 또는 좌제 경로 또는 이식 (예를 들어, 서방성 분자를 사용함)에 적합한 형태일 수 있다.

백신은 아주반트를 추가로 포함할 수 있다. 아주반트의 예로는 알루미늄 염, 오일 에멀젼 및 박테리아 성분 (예를 들어, LPS 및 리포솜)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

예방/치료 방법

본 발명은 또한 유효량의 본 발명의 백신을 투여함으로써 대상체에서 ASF를 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 ASF를 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 본 발명의 제1 측면의 백신을 추가로 제공한다.

'예방하는'이라는 용어는 ASF의 이환을 방지, 지연, 방해 또는 저해하는 것을 지칭하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 백신은 감염성 ASFV가 세포에 진입할 가능성을 예방하거나 또는 감소시킬 수 있다.

'치료하는'이라는 용어는 현존 ASF 감염의 적어도 하나의 증상을 감소 또는 완화시키는 것을 지칭하는 것으로 의도된다.

투여

백신은 경구, 정맥내, 근육내, 피하, 비내, 진피내 또는 좌제 경로 또는 이식 (예를 들어, 서방성 분자를 사용함)과 같은 편리한 방식으로 투여될 수 있다.

전형적으로, 수의사 또는 생산자는 개별 대상체 또는 대상체 그룹에 가장 적합한 실제 투여량을 결정할 것이며, 예를 들어, 특정한 대상체(들)의 연령, 체중 및 반응에 따라 다를 수 있다. 투여량은 질환 증상을 감소 및/또는 예방하기에 충분한 정도이다.

통상의 기술자는, 예를 들어, 전달 경로 (예를 들어, 경구 vs 정맥내 vs 피하 vs 종양내 등)가 투여량에 영향을 미칠 수 있고/거나 필요한 투여량이 전달 경로에 영향을 미칠 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 특정한 부위 또는 위치 내에서 (예를 들어, 종양 내에서) 특히 고농도의 작용제가 관심의 대상이 되는 경우, 집중 전달 (예를 들어, 이러한 예에서, 종양내 전달)이 요망되고/거나 유용할 수 있다. 주어진 치료 레지멘에 대한 경로 및/또는 투약 일정을 최적화할 때 고려되어야 하는 다른 인자는, 예를 들어, 치료되는 특정한 암 (예를 들어, 유형, 병기, 위치 등), 대상체의 임상 상태 (예를 들어, 연령, 전반적인 건강 상태 등), 조합 요법의 존재 유무, 및 의료 종사자에게 알려져 있는 다른 인자를 포함할 수 있다.

투여량은 질환의 증상을 안정화시키거나 또는 개선시키는데 충분한 양이다.

백신은 프라임-부스트 레지멘에 따라 투여될 수 있다. 예를 들어, 1차 접종 후, 대상체는 일정 시간 (예를 들어, 3 내지 21, 3 내지 14, 5 내지 14 또는 5 내지 7일) 후에 2차 부스팅 투여를 받을 수 있다. 예를 들어, 대상체는 1차 접종 후 약 3, 5, 7, 14 또는 21일째에 2차 부스팅 투여를 받을 수 있다.

한 실시양태에서, 1차 접종은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아데노바이러스 벡터로서 투여될 수 있고; 2차 접종은 본원에 정의된 바와 같은 하나 이상의 MVA 벡터로서 투여될 수 있다. 전형적으로, 부스팅 투여는 프라이밍 투여보다 더 높은 용량으로 이루어진다.

모든 척추동물 사용을 위해, 벡터, 면역원성 조성물 또는 백신은, 예를 들어, 피하 또는 근육내 주사에 의해 비경구적으로 투여될 수 있다. 다른 투여 모드에 적합한 추가 제제로는 좌제 및 경구용 제제를 포함한다. 면역원성 조성물 또는 백신이 동결건조되는 경우, 동결건조된 물질은 투여 전에, 예를 들어, 현탁제로서 재구성될 수 있다.

대상체

대상체는 ASF 감염에 감수성인 모든 동물일 수 있다. ASF에 감수성인 동물로는 가축용 돼지, 멧돼지, 부시 피그 및 진드기를 포함한다.

본 발명에 따라 백신 접종을 받게 되는 대상체는 가축용 돼지일 수 있다.

대상체는 ASF 감염에 감수성일 수 있다.

확립된 감염을 치료하기 위해 백신이 사용되는 경우, 대상체는 질환에 대해 양성 진단을 받았고/거나 감염과 연관된 하나 이상의 증상(들)을 나타낼 수 있다.

본 개시내용은 본원에 개시된 예시적인 방법 및 물질에 의해 제한되지는 않으며, 본원에 기재된 것과 유사하거나 또는 등가인 임의의 방법 및 물질이 본 개시내용의 실시양태의 실시 또는 테스트에서 사용될 수 있다. 수치 범위는 그 범위를 정의하는 수치를 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 각각 임의의 핵산 서열은 5'에서 3' 방향으로 좌측에서 우측으로 작성되고; 아미노산 서열은 각각 아미노에서 카르복시 방향으로 좌측에서 우측으로 작성된다.

값이 범위로 제공되는 경우, 문맥상 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 해당 범위의 상한과 하한 사이의 각 중간 값이 하한 단위의 10분의 1까지 구체적으로 개시되는 것으로 이해된다. 언급된 범위의 임의의 언급된 값 또는 중간 값과 상기 언급된 범위의 임의의 다른 언급된 또는 중간 값 사이의 각각의 더 작은 범위는 본 개시내용 내에 포함된다. 이러한 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 범위에 포함되거나 또는 배제될 수 있으며, 언급된 범위 중의 임의의 구체적으로 배제된 제한을 조건으로, 더 작은 범위에 상한과 하한 중 어느 하나가 포함되거나, 또는 그 둘 다가 포함되지 않거나, 또는 그 둘 다가 포함되는 각 범위가 또한 본 개시내용에 포함된다. 언급된 범위가 상한과 하한 중 어느 하나 또는 그 둘 다를 포함하는 경우, 상기 포함된 제한 중 어느 하나 또는 그 둘 다를 배제한 범위도 본 개시내용에 포함된다.

본원에 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 복수의 지시대상을 포함한다는 점에 주의하여야 한다.

본원에 사용된 바와 같이, "포함하는", "포함한다" 및 "로 구성된"이라는 용어는 "수반하는", "수반한다" 또는 "함유하는", "함유한다"와 동의어이고, 포괄적이거나, 또는 개방적이고, 추가의, 언급되지 않은 구성원, 요소 또는 방법 단계를 배제시키지 않는다. "포함하는", "포함한다" 및 "로 구성된"이라는 용어는 또한 "로 이루어진"이라는 용어도 포함한다.

본원에 논의된 공개문헌은 단지 본 출원의 출원일 이전에 상기 공개문헌의 개시를 위해서만 제공된다. 본원의 어느 것도 상기 공개문헌이 본원에 첨부된 청구범위에 대한 선행 기술을 구성한다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다.

이제 본 발명은 실시예를 통해 추가로 설명될 것이며, 이는 통상의 기술자가 본 발명을 수행하는데 도움을 주기 위한 것이며, 어떤 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

실시예

실시예 1 - 서브유닛 ASFV 폴리펩티드 풀을 사용한 돼지의 면역화 및 ASFV로 의 챌린지

상이한 ASFV 폴리펩티드를 코딩하는 다양한 폴리뉴클레오티드를 재조합 아데노바이러스 및 변형된 백시니아 앙카라 (MVA) 벡터에서 개별적으로 클로닝하였다. 클로닝된 서열은 유전자형 I 균주 Benin 1997/1으로부터의 것인 EP153R 및 MGF360-11L을 제외하면, 유전자형 I OURT88/3 균주로부터 유래된 것이었다.

하기 표 1에 제시된 바와 같이 10개의 돼지 군을 면역화시켰다.

실험 AR000737 및 AR000742에서의 돼지를 5E9 IU의 아데노바이러스 및 7.5E7 pfu의 MVA로 프라이밍하였다. 실험 AR000750 및 AR000858에서의 돼지는 1.5 x 10¹⁰ 감염 단위의 각각의 재조합 아데노바이러스 벡터로 프라이밍하고, 2 x 10⁸ 플라크 형성 단위의 각각의 재조합 MVA 벡터로 부스팅하였다.

항원의 상이한 조합, 프라이밍 및 부스팅 투약에 사용된 벡터, 및 방어 유도에 대한 세부사항은 표 1에 제공되어 있다.

B602L, E183L 및 EP153R은 챌린지 후 방어가 관찰된 모든 군에 존재한다. 동물이 연구의 미리 결정된 인도적 종말점에 도달하지 않았을 때 방어가 결정되었다.

그러나, B602L 및 EP153R 둘 다가 또한 방어가 관찰되지 않은 실험 2의 풀 B에 존재하였다. E183L은 챌린지 후 방어가 관찰된 실험 4의 풀 5에 존재하였다. 그러므로, B602L 및 EP153R 조합만으로는 단독 방어에 충분하지 않으며, 유사하게는, E183L만으로는 방어에 충분하지 않다.

물질 & 방법

물질 및 방법

아프리카 돼지 열병 바이러스 및 세포

OUR T88/1 분리주를 돼지 골수로부터의 1차 대식세포에서 성장시켰다. 바이러스 스톡은 감염된 돼지로부터의 비장 현탁액으로부터 제조하였고, 바이러스 감염 세포를 검출하기 위해 혈구흡착을 사용하여 제한 희석에 의해 역가를 측정하고, 스피어만-카르버(Spearman-Karber) 방법으로 역가를 계산하였다.

돼지 면역화 및 챌린지

돼지는 건강 상태가 높은 농장으로부터의 비근교계 교잡종 라지 화이트(Large White) 및 랜드레이스(Landrace), 또는 비근교계 교잡종 화이트, 랜드레이스 및 햄프셔(Hampshire)였다. 실험 시작 시 돼지의 평균 크기는 20 kg이었다.

재조합 아데노바이러스 (rAd) 및 변형된 백시니아 앙카라 바이러스를 별개의 2개 부위에 최대 5 ml의 총 부피로 근육내 주사에 의해 전달하였다. MVA 또는 rAd 부스트는 초기 rAd 프라임 후 4주째에 돼지에게 전달하였다. 부스트 후 4 내지 8주째에 돼지에게 10⁴ HAD₅₀ Georgia 2007/1 바이러스를 근육내로 챌린지하였다. 돼지는 임상 징후 발생이 관찰되었고, 이들은 이전에 사용된 점수화 체계를 사용하여 점수화하였다. 혈액 및 조직 샘플을 수집하여 바이러스 복제 수준을 측정하였다.

상기 명세서에서 언급된 모든 공개문헌은 본원에 참조로 포함된다. 본 발명의 기재된 방법 및 시스템의 다양한 수정 및 변형은 본 발명의 범주 및 정신을 벗어나지 않으면서 통상의 기술자에게 명백해질 것이다. 본 발명이 구체적인 바람직한 실시양태와 관련하여 기재되었지만, 청구된 바와 같은 본 발명은 그러한 구체적인 실시양태에 과도하게 제한되어서는 안된다는 것을 이해하여야 한다. 실제로, 통상의 기술자에게 자명한 기재된 본 발명 수행 모드의 다양한 수정은 하기 청구범위의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

SEQUENCE LISTING <110> The Pirbright Institute <120> Vaccine <130> P111907PCT <150> GB 1910794.5 <151> 2019-07-29 <160> 19 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 674 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> African swine fever virus (ASFV) polypeptide, B602L (OUR T88/3) <400> 1 Met Ala Glu Phe Asn Ile Asp Glu Leu Leu Lys Asn Val Leu Glu Asp 1 5 10 15 Pro Ser Thr Glu Ile Ser Glu Glu Thr Leu Lys Gln Leu Tyr Gln Arg 20 25 30 Thr Asn Pro Tyr Lys Gln Phe Lys Asn Asp Ser Arg Val Ala Phe Cys 35 40 45 Ser Phe Thr Asn Leu Arg Glu Gln Tyr Ile Arg Arg Leu Ile Met Thr 50 55 60 Ser Phe Ile Gly Tyr Val Phe Lys Ala Leu Gln Glu Trp Met Pro Ser 65 70 75 80 Tyr Ser Lys Pro Thr His Thr Thr Lys Thr Leu Leu Ser Glu Leu Ile 85 90 95 Thr Leu Val Asp Thr Leu Lys Gln Glu Thr Asn Asp Val Pro Ser Glu 100 105 110 Ser Val Val Asn Thr Ile Leu Ser Ile Ala Asp Ser Cys Lys Thr Gln 115 120 125 Thr Gln Lys Ser Lys Glu Ala Lys Thr Thr Ile Asp Ser Phe Leu Arg 130 135 140 Glu His Phe Val Phe Asp Pro Asn Leu His 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tattcgacgt 180 cttataatga ctagctttat tggatatgtc ttcaaagctc tgcaggaatg gatgccttcc 240 tattcaaaac ctacccacac gaccaaaact cttctcagtg agctaataac gttagttgat 300 actttgaaac aggaaactaa tgatgttccc tctgaatcgg tagtaaatac aattttatct 360 atagcggata gctgcaaaac ccagacgcag aaaagcaagg aagctaaaac aacgatcgat 420 agctttttac gagaacattt tgtgtttgat cctaatcttc atgctcaaag tgcgtatact 480 tgtgcaagca cttgtgcaga taccaatgta gacacctgtg caagcacttg tgcaagcact 540 tgtgcaagca cttgtgcaag cacttgtgca agcacttgtg caagcacttg tgcaagcact 600 tgtgcaagca cttgtgcaag cacttgtgca agcacttgtg caagcacttg tgcaagcact 660 tgtgcaagca caggtgcaag cacaggtgca agcacttgtg cagataccaa tgtagacacc 720 tgtgcaagca cttgtgcaga taccaatgta gacacctgtg caagcacttg tgcaagcact 780 tgtgcaagca cttgtgcaag cacttgtgca agcacaggtg caagcacttg tgcagatacc 840 aatgtagaca cctgtgcaag cacttgtgca gataccaatg tagacacctg tgcaagcact 900 tgtgcagata ccaatgtaga cacctgtgca agcacttgtg cagataccaa tgtaaacact 960 tgtgcaagca tgtgtgcaga taccaatgta gacacctgtg caagcacctg tgcaaacacc 1020 tgtgcaagca cagaatacac cgatttagca gatcctgagc gcatcccttt acacatcatg 1080 caaaaaacat taaatgtgcc taatgagctt caggccgata ttgatgcaat tacccaaacc 1140 ccacagggct atagggcagc agcccacata ttacaaaata tagaacttca tcaaagcatt 1200 aaacatatgc ttgaaaatcc gagggcgttt aaacccattc tctttaacac aaaaattact 1260 agatatcttt cgcagcatat tccacctcag gatacttttt ataagtggaa ttattacatt 1320 gaggataatt acgaagagtt gcgggccgct acggaaagca tctacccaga aaagcccgac 1380 ctagagtttg ccttcattat ttatgatgtg gtggatagca gcaaccaaca aaaggttgat 1440 gaattttatt ataaatataa agaccagatt ttctcagagg tttcatccat tcaattaggc 1500 aactggacac tcctgggaag ctttaaggcc aacagagagc gctacaatta ttttaatcaa 1560 aataatgaaa taataaaacg gattttggac cgtcatgagg aagacctaaa gataggaaaa 1620 gagattctac gaaataccat ttaccacaaa aaagcaaaaa atatacaaga aaccggcccg 1680 gatgctccgg ggctctccat ctataattca acctttcaca cggatagcgg gattaaggga 1740 ctgctttcct ttaaggagct aaaaaaccta gaaaaagcat ctggaaatat caaaaaagct 1800 cgagagtatg attttataga cgactgcgaa gaaaaaatta agcaactgct tagtaaagaa 1860 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tgttccagta gggtttgaat acaataaagt acgcccgcat 240 acgggtaccc ccaccttggg aaacaagctt acctttggta ttccccagta cggagacttt 300 ttccatgata tggtgggcca ccatatattg ggtgcatgtc attcgtcctg gcaggatgct 360 ccgattcagg gcacggccca gatgggggcc catggtcagc ttcaaacgtt tcctcgcaac 420 ggatatgact gggacaacca aacaccttta gagggcgccg tttacacgct tgtagatccc 480 tttggaagac ctattgtacc cggcacaaag aatgcgtacc gaaacttggt ttactactgc 540 gaataccccg gagaacgact ttatgaaaac gtaagattcg atgtaaatgg aaattccctg 600 gacgaatata gttcggatgt cacaacgctt gtgcgcaaat tttgcatccc aggggataaa 660 atgactggat ataagcactt ggtcggccag gaggtatcgg tggagggaac tagtggccct 720 ctcctatgca acattcatga tttgcacaag ccgcaccaaa gcaaacctat tcttaccgat 780 gaaaatgata cgcagcgaac gtgcagccat accaacccga aattcctttc acaacatttt 840 cccgagaact ctcacaatat ccaaacagca ggtaaacaag atattactcc tattacggac 900 gcaacgtatc tggacataag acgtaatgtt cattacagct gtaatggacc tcaaacccct 960 aaatactatc agccccctct tgcgctctgg attaagctgc gcttttggtt taacgagaac 1020 gtgaaccttg ctattccctc ggtatccatt cccttcggcg agcgctttat caccataaag 1080 cttgcatcgc aaaaggattt ggtgaatgaa tttcctggac tttttatacg ccagtcgcgt 1140 tttatacctg gacgccccag tagacgcaat atacgcttta aaccatggtt tatcccagga 1200 gtcattaatg aaatctcgct cacgaataat gaactttaca tcaataacct gtttgtaacc 1260 cctgaaatac acaacctttt tgtaaaacgc gttcgatttt ccctgatacg tgtccataaa 1320 acgcaggtga cccacaccaa caataaccac cacgatgaaa aactaatgtc tgctcttaaa 1380 tggcccattg aatatatgtt tataggatta aaacctacct ggaacatctc cgatcaaaat 1440 cctcatcaac accgagattg gcacaagttc ggacatgttg ttaacgccat tatgcagcct 1500 actcaccacg cagagataag ctttcaggat agagatacag ctcttccaga cgcatgttca 1560 tctatatcgg atattagccc cgttacgtat ccgatcacat tacctattat taaaaacatt 1620 tccgtaactg ctcatggtat caatcttatc gataagtttc catcaaagtt ctgcagctct 1680 tacataccct tccactacgg aggcaatgca attaaaaccc ccgatgatcc gggtgcgatg 1740 atgattacct ttgctttgaa gccacgggag gaataccaac ccagtggtca tattaacgta 1800 tccagagcaa gagaatttta tattagttgg gacacggatt acgtggggtc tatcactacg 1860 gctgatcttg tggtatcggc atctgctatt aactttcttc ttcttcagaa cggttcagct 1920 gtgctgcgtt acagtaccta a 1941 <210> 13 <211> 585 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid sequence encoding CP204L (p30) (OUR T88/3) <400> 13 atggatttta ttttaaatat atccatgaaa atggaggtca tcttcaaaac ggatttaaga 60 tcatcttcac aagttgtgtt tcatgcgggt agcttgtata attggttttc tgttgagatt 120 atcaatagcg gtagaattgt tacgaccgct ataaaaacat tgctcagtac tgttaagtat 180 gatattgtga aatctgctca tatatatgca gggcaagggt atactgaaca tcaggctcaa 240 gaagaatgga atatgattct gcatgtgctg tttgaagagg agacagaatc ctcagcatca 300 tcggaaagca ttcatgaaaa aaatgataat gaaaccaatg aatgcgcatc ctcctttgaa 360 acattgtttg agcaagagcc ctcatcagag gaacctaaag actccaagct gtatatgctt 420 gcacaaaaga ctgtgcaaca tattgaacaa tatggaaagg cacctgattt taacaaggtt 480 attagagcac ataactttat tcaaaccatt catggaaccc ctctaaagga agaagaaaaa 540 gaggtggtaa gactcatggt cattaaactt ttaaaaaaaa aataa 585 <210> 14 <211> 600 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid sequence encoding E199L (OUR T88/3) <400> 14 atgtcttgca tgccagtttc cacgaaatgc aatgatattt gggtcgactt tagctgtaca 60 ggcccttcga tttccgagct gcaaaaaaag gagcccaagg cctgggccgc tattttacgc 120 tcgcatacaa atcaacaaac ggcggaggat gacaatatta ttgggagcat atgcgataaa 180 cggggattgt gctcaaagga tgagtatgcg tatagccagt attgtgcctg tgtgaactcc 240 ggcaccctat gggctgaatg tgcgtttgct ccgtgtaatg gaaataaaaa tgcctataaa 300 acaacggagc aaagaaatat tttgaccaac aagcagtgcc cctccggact caccatatgt 360 cagaacattg cagaatacag aggctcgggc aatatttccg acctatacca aaatttcaac 420 tgcaacagcg ttataaatac gtttttaatt aatgtgatga atcatccttt tttaaccctt 480 atattaatca ttttgattct tataattatt taccgtttga tgccttccag tgggggtaaa 540 cacaatgacg ataagttgcc ccctccatct cttatttttt caaacctaaa caatttttaa 600 <210> 15 <211> 954 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid sequence encoding F317L (OUR T88/3) <400> 15 atggttgaga cacaaatgga caaacttggt tttctgctaa atcacatagg taaacaggtt 60 accactaagg tgcttagcaa tgcccatata actcaaacga tgaaggagat tattttggaa 120 aatcatggtg tagatggtgg agccgcaaaa aatgtttcaa aagggaagtc ttccccaaaa 180 gaaaaaaaac attggaccga gttcgaatcc tgggaacagc tcagcaagtc taaaagaagt 240 ttcaaggaat actgggcgga gcgtaatgag attgtgaaca ctctgttgct taattgggac 300 aatgttcggg gtgccatcaa aaaatttttg gacgatgacc gtgaatggtg cggccgcatt 360 aatatgataa acggtgtacc cgagatagtg gaaatcattc caagccccta tagggcagga 420 gagaacattt attttggcag cgaggctatg atgcctgctg atatttatag cagggtggcc 480 aacaagcctg ctatgtttgt gtttcacacg catcctaatt tgggttcatg ttgtggagga 540 atgccttcca tatgtgacat ttctacaacg ctgcgttatc tacttatggg gtggaccgcc 600 gggcatctaa tcatttcttc gaatcaagta ggaatgctca cggttgataa gagaattatt 660 gttgatttgt gggccaatga gaatccgcgc tggctcatgg cgcaaaaaat attagatatt 720 tttatgatgc tcacttcgcg tagaagcctg gtaaatccct ggaccctgag agacctaaaa 780 aaaatattac aagactatgg tattgagtat atcatttttc cttcgaatga cttttttatt 840 tatgaagacg aacgtctttt aatgttttca aaaaaatgga ccaacttttt tacgttacat 900 gagttattgg atgacctcga aactattgag acaaaggcat cgtccacaac atag 954 <210> 16 <211> 1497 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid sequence encoding MGF505-5R (OUR T88/3) <400> 16 atgttctccc tccaggagat ctgtcgaaag aacatctact ttctacctga ctggctcagt 60 gagcatgtga ttcagcgact aggtctgtac tgggaaaaac atggttctct tcagcgaatc 120 ggagacgact atgtacttat acaacaggat ctcatcatcc ccatcaatga agctctaaga 180 atggcagggg aggaggggaa tgatgaggtg gtacaactcc tattactatg ggagggaaac 240 attcattatg ccatcatagg agctttggag agtgaccatt atagcctaat acgtaagctc 300 tatgaccaaa tcggagactg tcacgacatc cttcccttaa ttcaagaccc aaaaatcttt 360 gaaaaatgcc atgaattaga taaattttgt aacattttat gtctcgtatt acacgccgta 420 aaaaacgata tgctttgcat tcttcaagag tataaaatgc atctaagtgg agaggatatt 480 caagtggtgt ttgaaacagc atgccgttca caaaaaaacg atattgtgtc atggatggga 540 caaaatattg caatatacaa ctccggagtt atttttgata ttgcctttga taagatgaat 600 gtgtccttat tatctatagg gtacacgctt cttttcaatc atcatataaa taatacgaac 660 gaaaatatta attctttatt gacacaacat cttgaatggg ctgccggcat gggccttctt 720 cattttatgc tggaaacttt aaagtatggc ggggatgtaa cgataatagt tttgtctgag 780 gccgtaaaat atgaccacag aaagatttta gattattttc tccgtcgaaa aaacttgtac 840 caagaagatc ttgaagaact attattgttg gcgatacgtg cagattgttc taaaaagacc 900 ttaaacttgt tattatctta cttaaactat tccataaaca atatccgtaa aaaaatatta 960 caatgtgtaa aagaatatga aacgaccgtt attataaaaa ttctatggaa aagaaagata 1020 aatctgatag agcccatttt ggcagacttt ataggatatc atagctatac ctatatggta 1080 gattttatgc gcgagttttc catccatccg gaaaaaatga tcaaaatggc tgcgcgagaa 1140 tcgagggagg acttaatcat aaaattttcc aaaaaagttt gcaaagagcc taaagataga 1200 cttcactatc tcaaaagctt agtgtatact atgcgacata aagaaggcaa acaactgtta 1260 atttatacaa tccataactt atacaaagct tgtcatctag agagtaaaga aatgtttaat 1320 ttggcacgat tttatgcacg gcataatgca gtgatccagt tcaaatcgat ttgtcacgat 1380 ctctccaagc tgaatattaa tatcaaaaac ttgttgttag aatgtttagg tattgctatt 1440 aaaaaaaatt actttcaact tatcaaaaca atagaaacgg atatgcgtta tgagtaa 1497 <210> 17 <211> 158 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ASFV polypeptide, 17 EP153R (Genotype II) <400> 17 Met Phe Ser Asn Lys Lys Tyr Ile Gly Leu Ile Asn Lys Lys Glu Gly 1 5 10 15 Leu Lys Lys Lys Ile Asp Asp Tyr Ser Ile Leu Ile Ile Gly Ile Leu 20 25 30 Ile Gly Thr Asn Ile Leu Ser Leu Ile Ile Asn Ile Ile Gly Glu Ile 35 40 45 Asn Lys Pro Ile Cys Tyr Gln Asn Asp Asp Lys Ile Phe Tyr Cys Pro 50 55 60 Lys Asp Trp Val Gly Tyr Asn Asn Val Cys Tyr Tyr Phe Gly Asn Glu 65 70 75 80 Glu Lys Asn Tyr Asn Asn Ala Ser Asn Tyr Cys Lys Gln Leu Asn Ser 85 90 95 Thr Leu Thr Asn Asn Asn Thr Ile Leu Val Asn Leu Thr Lys Thr Leu 100 105 110 Asn Leu Thr Lys Thr Tyr Asn His Glu Ser Asn Tyr Trp Val Asn Tyr 115 120 125 Ser Leu Ile Lys Asn Glu Ser Val Leu Leu Arg Asp Ser Gly Tyr Tyr 130 135 140 Lys Lys Gln Lys His Val Ser Leu Leu Tyr Ile Cys Ser Lys 145 150 155 <210> 18 <211> 20 <212> PRT <213> Foot-and-mouth disease virus <400> 18 Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Gly Pro 20 <210> 19 <211> 20 <212> PRT <213> Foot-and-mouth disease virus <400> 19 Arg Ala Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu 1 5 10 15 Asn Pro Gly Pro 20

Claims

하기를 포함하는 아프리카 돼지 열병 바이러스 (ASFV) 서브유닛 백신:
(i) 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1, 2 또는 3 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 재조합 폴리뉴클레오티드; 여기서 하나 이상의 재조합 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 상이한 ASFV 폴리펩티드의 총 개수는 10개 이하임; 또는
(ii) 서열식별번호: 1, 2 및 3으로 제시된 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 1, 2 및 3 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체; 여기서 백신은 10개 이하의 상이한 ASFV 폴리펩티드를 포함함.
제1항에 있어서, 하나 이상의 재조합 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 상이한 ASFV 폴리펩티드의 개수가 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 또는 6개 이하이거나; 또는 백신이 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 또는 6개 이하의 ASFV 폴리펩티드를 포함하는 것인 백신.
제1항 또는 제2항에 있어서, 하기를 포함하는 백신:
(i) 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 ASFV 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 하나 이상의 추가 재조합 폴리뉴클레오티드; 또는
(ii) 서열식별번호: 4-8로부터 선택되는 하나 이상의 추가 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편; 또는 서열식별번호: 4-8 중 하나 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는 백신:
a) 서열식별번호: 1-8을 포함하는 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드(들); 또는 서열식별번호: 1-8을 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체;
(b) 서열식별번호: 1-3 및 6-8을 포함하는 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-3 및 6-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드(들); 또는 서열식별번호: 1-3 및 6-8을 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-3 및 6-8 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체; 또는
(c) 서열식별번호: 1-5를 포함하는 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-5 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체를 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드(들); 또는 서열식별번호: 1-5를 포함하는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 면역원성 단편, 또는 서열식별번호: 1-5 또는 그의 면역원성 단편과 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 변이체.
제1항에 있어서, 재조합 폴리뉴클레오티드가 서열식별번호: 9, 10 및 11, 또는 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하는 것인 백신.
제3항에 있어서, 추가 폴리뉴클레오티드가 서열식별번호: 12-16 중 하나 이상 또는 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하는 것인 백신.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리뉴클레오티드가 벡터에 존재하는 것인 백신.
제7항에 있어서, 벡터가 아데노바이러스, 변형된 백시니아 앙카라 벡터 및 가성광견병 바이러스 벡터로부터 선택되는 것인 백신.
제7항 또는 제8항에 있어서, 각각의 재조합 폴리뉴클레오티드가 동일한 벡터에 제공되는 것인 백신.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 아프리카 돼지 열병을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 백신.
대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 백신을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 아프리카 돼지 열병을 치료 및/또는 예방하는 방법.
대상체에서의 아프리카 돼지 열병의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 제조에서의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 재조합 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 재조합 폴리펩티드의 용도.
제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 돼지 대상체인, 사용하기 위한 백신, 방법, 또는 재조합 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 재조합 폴리펩티드의 용도.
제13항에 있어서, 대상체가 가축용 돼지인, 사용하기 위한 백신, 방법, 또는 용도.
제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 백신이 프라임-부스트 절차에 따라 투여되는 것인, 사용하기 위한 백신, 방법, 또는 용도.
제15항에 있어서, 프라이밍 조성물이 하나 이상의 아데노바이러스 벡터를 포함하고, 부스팅 조성물이 하나 이상의 변형된 백시니아 앙카라 벡터를 포함하는 것인, 사용하기 위한 백신, 방법, 또는 용도.
제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 백신이 경구, 정맥내, 근육내, 피하, 비내 또는 진피내 투여에 의해 투여되는 것인, 사용하기 위한 백신, 방법, 또는 용도.