RU2654586C2 - Рекомбинационная кассета, содержащая гены EP153R и EP364R штамма Congo (КК-262) вируса африканской чумы свиней и рекомбинантный штамм ΔСongoCD2v вируса африканской чумы свиней - Google Patents
Рекомбинационная кассета, содержащая гены EP153R и EP364R штамма Congo (КК-262) вируса африканской чумы свиней и рекомбинантный штамм ΔСongoCD2v вируса африканской чумы свиней Download PDFInfo
- Publication number
- RU2654586C2 RU2654586C2 RU2016115461A RU2016115461A RU2654586C2 RU 2654586 C2 RU2654586 C2 RU 2654586C2 RU 2016115461 A RU2016115461 A RU 2016115461A RU 2016115461 A RU2016115461 A RU 2016115461A RU 2654586 C2 RU2654586 C2 RU 2654586C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- virus
- swine fever
- african swine
- asf
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и генной инженерии и касается рекомбинантного штамма вируса африканской чумы свиней. Предложен штамм ΔCongoCD2v вируса африканской чумы свиней с делецией гена EP402R (CD2v), содержащий репортерный ген EGFP под контролем р72 промотора. Получен заявленный штамм из штамма КК-262 вируса АЧС путем гомологичной рекомбинации и депонирован в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии под №3148. Штамм может быть использован для изучения роли белка CD2v вируса АЧС в репродукции вируса в культурах клеток, в восприимчивых животных, а также его функций в модуляции иммунного ответа. 1 ил., 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области молекулярной вирусологии и генной инженерии, в частности к штаммам вируса африканской чумы свиней (АЧС), и может быть использовано в научно-исследовательских институтах для изучения роли белка гемагглютинина (CD2v) вируса африканской чумы свиней в репродукции вируса в культурах клеток, в восприимчивых животных, их функций в модуляции иммунного ответа, а также создания прототипных вакцинных препаратов против АЧС.
Начиная с 2007 года, во многих субъектах Российской Федерации отмечается неблагополучная эпизоотологическая обстановка по АЧС. На территорию нашей страны АЧС была занесена в ноябре 2007 г., заболевание диагностировали у кабанов в Шатойском районе Республики Чечня. В последующие годы (2007-2015 гг.) вспышки болезни регистрировали еще в 35 субъектах России.
Африканская чума свиней является сложным заболеванием, для которого нет доступной вакцины. АЧС относится к списку конвенционных трансграничных болезней, оказывающих значительный экономических и социальный ущерб регионам, в которых они обнаруживаются. Возбудитель АЧС - вирус африканской чумы свиней - единственный известный представитель семейства Asfarviridae [6]. Вирус АЧС способен инфицировать всех представителей семейства Suidae вне зависимости от возраста и пола, кроме того, способен размножаться в мягких клещах рода Ornithodoros [5, 6].
Профилактика и контроль АЧС базируется на двух принципах: раннем выявлении (на основе эпидемиологических, клинических и лабораторных исследований) и строгих санитарных мерах. Таким образом, соответствующие диагностические инструменты должны совершенствоваться, чтобы быть применимыми ко всем сценариям развития болезни и иметь решающее значение для осуществления эффективных программ управления эпидемиями [1, 2, 4].
Несмотря на многолетние исследования, до сих пор не разработаны эффективные средства специфической профилактики АЧС. Неоднократные попытки создания «классических» инактивированных и живых аттенуированных вакцин, ДНК-вакцин и субъединичных вакцин на основе рекомбинатных антигенов не увенчались успехом.
В настоящее время известно более 400 штаммов и изолятов вируса АЧС, обнаруженных на территории стран Карибского бассейна, Европы, Африки и Восточной Европы. Данные исследований различных штаммов демонстрируют, что вирус АЧС обладает выраженным плюралитетом по патогенности, иммуногенности, антигенности, способности вызывать гемадсорбцию [3]. По результатам Bastos et al., 2003 получены данные о существовании 22 генотипов вируса АЧС, на основе филогенетического анализа участка гена р72 [5]. Все отмеченные генотипы вируса циркулируют на территории африканского континента и могут быть субтипированы на группы и субтипы с использованием анализа нуклеотидных последовательностей вариабельных областей генома [4]. Генотипирование вируса АЧС позволило проследить географическое распространение и молекулярную эволюцию возбудителя, однако абсолютно не коррелировало с данными о протективных свойствах различных изолятов.
Предположения о существовании нескольких иммунологических типов вируса АЧС появились в 30-х годах прошлого столетия и получили экспериментальное подтверждение на рубеже 50-60 годов. De Tray D. обнаружил антигенные различия африканских изолятов Хинде, Уганда, Тенгани в реакции задержки гемадсорбции [3]. Используя эту реакцию и иммунологическую пробу на животных, Malmquist W. доказал существование антигенной множественности изолятов, выделенных в Африке [6]. Им установлено семь иммунологических и серологических типов с референс-штаммами: Л-57, Л-60, Хинде-2, Родезия, Дакар, 2743, Мозамбик. Однако представители даже одного иммунологического типа сильно отличались между собой по фенотипическим и биологическим свойствам, что позволило предположить участие регуляторных и репродуктивных систем вируса в данном феномене.
Согласно разработанной в ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии классификации, в основу которой положены результаты РЗГАд типоспецифическими сыворотками и иммунобиологической пробы на свиньях, имеющиеся в коллекции института изоляты вируса АЧС разделены на 8 серогрупп [1]. Наиболее изученными являются штаммы вируса, отнесенные к I-IV серогруппам. Референс-штаммом I-ой серогруппы определен штамм «Лиссабон 57», II-ой - «Конго 49», III-ей - «Мозамбик 78», IV-ой «Франция 32». Нами были определены генетические маркеры, определяющие принадлежность вируса к определенной серогруппе. На основе данных нуклеотидного секвенирования локусов генома, филогенетического анализа, а также использования рекомбинантных штаммов вируса АЧС (Патент на изобретение №2571858) нами были установлены генетические маркеры серотиповой специфичности - гены EP402R (CD2v) и EP153R (C-type lectin).
В продолжение этой работы была рассмотрена гипотеза об использовании локуса C-type lectin/CD2v в качестве протективного антигена для профилактики АЧС. С целью обоснования этой гипотезы необходимо было создать рекомбинантный вирус, лишенный гена гемагглютинина (CD2v), и установить его биологические свойства.
Целью данного изобретения является получение нового рекомбинантного авирулентного штамма вируса африканской чумы свиней ΔCongoCD2v. Рекомбинантный штамм ΔCongoCD2v должен обладать способностью размножаться на перевиваемой клеточной линии COS-1, а также первичной культуре клеток косного мозга свиньи и лейкоцитов. Полученный штамм должен быть не патогенен для свиней и не вызывать гемадсорбцию эритроцитов на поверхности зараженных клеток в условиях in vitro.
Поставленная цель достигается путем создания рекомбинантного штамма вируса АЧС с удаленным геном EP402R (CD2v) и содержит репортерный ген EGFP. Штамм ΔCongoCD2v получен из аттенуированного штамма КК-262 вируса африканской чумы свиней путем гомологичной рекомбинации. Рекомбинационная кассета представляет собой рекомбинантную плазмиду на основе вектора pUC19, содержащая фрагменты генов EP153R и EP364R (плечи рекомбинации), штамма КК-262 вируса АЧС, а также репортерный ген EGFP (Рис. 1). Рекомбинантные клоны вируса были получены при одновременной трансфекции культуры клеток COS-1 рекомбинационной кассетой и инфицировании ее вирусом АЧС штамм КК-262. Для дальнейшего скрининга клонов использовали реакцию бляшкообразования и метод предельных разведений (7 последовательных пассажей на перевиваемой культуре клеток COS-1) и селекции мутантных вариантов вируса по репортерной флюоресценции гена EGFP. Чистота клональной популяции рекомбинантного вируса была подтверждена в ПЦР со специфическими праймерами, фланкирующими фрагмент генов EP152R и EP364R вируса АЧС, а также в ПЦР в режиме реального времени с использованием олигонуклеотидных праймеров и зондов, комплиментарных фрагментам гена EP402R (CD2v). Отсутствие нуклеотидных замен в сайте рекомбинации определяли нуклеотидным секвенированием фрагментов генома вируса.
Изобретение характеризуется следующими нуклеотидными последовательностями:
SEQ ID No 1: Нуклеотидная последовательность рекомбинантной кассеты для получения рекомбинантного штамма ΔCongoCD2v, которая представляет собой плазмиду на основе вектора pUC19, содержащую фрагменты генов EP153R и EP364R штамма КК-262 вируса АЧС, а также репортерный ген EGFP под контролем р72 промотора. pUC19 - последовательность вектора pUC19, Larm (EP153R) - последовательность гена EP153R штамма КК-262 вируса АЧС, p72EGFP - последовательность репортерного гена EGFP и р72 промотора, Rarm (EP364R) - последовательность гена EP364R штамма КК-262 вируса АЧС.
Полученный рекомбинантный авирулентный штамм обозначен как штамм «ΔCongoCD2v» и депонирован в Коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3148.
Молекулярно-генетические свойства.
Проводили генетическую идентификацию полученного рекомбинантного штамма ΔCongoCD2v вируса африканской чумы свиней и сравнительный анализ нуклеотидной последовательности фрагмента генома. Использовали полимеразную цепную реакцию (ПЦР) с последующим секвенированием продуктов амплификации. ДНК выделяли из 0,2 мл культуры клеток макрофагов свиней, инфицированной рекомбинантным вирусом с помощью набора QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Германия), согласно инструкции изготовителя. ПЦР проводили с праймерами, комплементарными фрагментам генов EP152R и EP364R и представленными в таблице 1.
* Тm - температура отжига праймеров
** bp - пар оснований
Гемадсорбирующие свойства.
Рекомбинантный штамм ΔCongoCD2v утратил гемадсорбирующую активность и не взаимодействовал с эритроцитами свиньи после инфицирования культуры клеток макрофагов свиней.
Культуральные свойства.
Рекомбинантный штамм ΔCongoCD2v вируса АЧС размножается в первичной культуре клеток макрофагов свиней, а также в перевиваемой культуре клеток COS-1. Репродукция вируса в культуре клеток макрофагов свиней сопровождается развитием цитопатического эффекта (ЦПЭ). Отмечается округление клеток и отслоение от субстрата на 2 день после заражения. Инфицированные клетки формируют обособленные кластеры, которые разрушаются по мере репродукции вируса на 3-4 день после заражения. Репродукция вируса в культуре клеток COS-1 не сопровождается выраженным цитолизом. По результатам флюоресцентой микроскопии репортерную флюоресценции от EGFP наблюдают в инфицированных клетках, формирующих небольшие локусы (3-5 клеток). Количество флюоресцирующих (инфицированных) клеток увеличивается по мере культивирования вируса. Накопление вируса как в первичной, так и перевиваемой культуре клеток составляет 6,0-7,0 lg ГАЕ 50/см3.
Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами.
Рекомбинантный штамм ΔCongoCD2v не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами.
Условия хранения.
Рекомбинантный штамм ΔCongoCD2v хранят при минус 40°С в виде лиофилизированной культуры клеток COS-1, инфицированной рекомбинантным штаммом вируса АЧС. Периодичность освежения штамма один раз в 10 лет.
Пример 1.
Создание рекомбинационной кассеты.
Для получения рекомбинантного штамма ΔCongoCD2v вируса АЧС была сконструирована рекомбинационная кассета, представляющая собой рекомбинантную плазмиду на основе вектора pUC19, содержащая фрагменты генов EP152R и EP364R штамма КК-262 вируса АЧС и репортерный ген EGFP, кодирующий зеленый флюоресцентный белок, под контролем промотера р72 вируса АЧС. Фрагменты генов EP152R и EP364R штамма КК-262 являлись плечами рекомбинации. Клонирование всех фрагментов в бактериальный вектор проводили последовательно с использованием фермента Т4 ДНК-лигазы (NEB, США).
Пример 2.
Рекомбинантный штамм ΔCongoCD2v получен из аттенуированного штамма КК-262 вируса африканской чумы свиней путем гомологичной рекомбинации. Рекомбинантные клоны вируса были получены при одновременной трансфекции культуры клеток COS-1 рекомбинационной кассетой и инфицировании ее штаммом КК-262 вируса АЧС. В результате гомологичной рекомбинации по плечам рекомбинации (фрагментам генов EP152R и EP364R) полученный рекомбинантный вирус представлял собой делетированный мутант вируса КК-262 (не содержал ген EP402R (CD2v)). Для дальнейшего скрининга клонов использовали реакцию бляшкообразования и метод предельных разведений (7 последовательных пассажей на перевиваемой культуре клеток COS-1) и селекции мутантных вариантов вируса по репортерной флюоресценции за счет введенного в состав вируса гена EGFP. Чистота клональной популяции рекомбинатного вируса была подтверждена в ПЦР со специфическими праймерами, фланкирующими фрагмент гена EP402R штамма КК-262 вируса АЧС, а также в ПЦР в режиме реального времени с использованием олигонуклеотидных праймеров и зондов, комплиментарных фрагментам гена EP402R (CD2v). Отсутствие нуклеотидных изменений в сайте рекомбинации определяли путем нуклеотидного секвенирования.
Пример 3.
Определение гемаглютинирующих характеристик рекомбинантного штамма ΔCongoCD2v.
Установлено, что рекомбинантный вирус ΔCongoCD2v утратил гемадсорбирующую активность и не вызывал адгезию эритроцитов на поверхности инфицированных клеток. На основании этих исследований рекомбинантный штамм вируса АЧС ΔCongoCD2v является негемадсорбирующим.
Источники информации:
1. Сероиммунологическая классификация природных изолятов вируса африканской чумы свиней. И.Ф. Вишняков, Н.И. Митин, Ю.И. Петров // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии: Материалы научно-практической конференции ВНИИВВиМ. - Покров. - 1995. - С. 141-143.
2. Черятников Л.Л. Получение аттенуированных вариантов из различных изолятов вируса АЧС и их сравнительная оценка. / Л.Л. Черятников, Ю.И. Петров, Н.И. Митин // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии 1992. - 4.1. - С. 56.
3. D.Е. De Tray, African swine fever / De Tray D.E., // Adv. Vet. Sci. Comp. Med. - 1963. - №19. P. 299-333.
4. Enhanced discrimination of African swine fever virus isolates through nucleotide sequencing of the p54, p72, and pB602L (CVR) genes / Gallardo C., Mwaengo D.M., Macharia J.M., Arias M., Taracha E.A., Soler A. // Virus Genes. - 2009. - №38. - P. 85-95.
5. Genotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 gene characterization / Bastos ADS, Penrith M.L., Cruciere C., Edrich J.L., Hutchings G., Roger F., Couacy-Hymann E., Thomson G.R. // Arch. Virol. - 2003. - №148. P. 693-706.
6. W. Malmquist, D. Hay, Haemadsorption and cytopathic effect produced by African swine fever virus in swine bone marrow and buffy coat cultures /Malmquist W., Hay D. // J. Vet. Res. - 1960. - №21. P. 104-108
Claims (1)
- Рекомбинантный штамм ΔCongoCD2v вируса африканской чумы свиней с делецией гена EP402R (CD2v), содержащий репортерный ген EGFP под контролем р72 промотора, полученный из штамма КК-262 вируса АЧС путем гомологичной рекомбинации, депонированный в коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии под №3148, для изучения роли белка CD2v вируса АЧС в репродукции вируса в культурах клеток, в восприимчивых животных, а также его функций в модуляции иммунного ответа.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016115461A RU2654586C2 (ru) | 2016-04-20 | 2016-04-20 | Рекомбинационная кассета, содержащая гены EP153R и EP364R штамма Congo (КК-262) вируса африканской чумы свиней и рекомбинантный штамм ΔСongoCD2v вируса африканской чумы свиней |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016115461A RU2654586C2 (ru) | 2016-04-20 | 2016-04-20 | Рекомбинационная кассета, содержащая гены EP153R и EP364R штамма Congo (КК-262) вируса африканской чумы свиней и рекомбинантный штамм ΔСongoCD2v вируса африканской чумы свиней |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016115461A RU2016115461A (ru) | 2017-10-25 |
RU2654586C2 true RU2654586C2 (ru) | 2018-05-21 |
Family
ID=60153808
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016115461A RU2654586C2 (ru) | 2016-04-20 | 2016-04-20 | Рекомбинационная кассета, содержащая гены EP153R и EP364R штамма Congo (КК-262) вируса африканской чумы свиней и рекомбинантный штамм ΔСongoCD2v вируса африканской чумы свиней |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2654586C2 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108504687A (zh) * | 2018-03-28 | 2018-09-07 | 扬州大学 | 一种表达非洲猪瘟病毒ep402r基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法 |
CN111172321A (zh) * | 2020-01-02 | 2020-05-19 | 中国检验检疫科学研究院 | 鉴别非洲猪瘟感染与免疫的荧光pcr检测试剂盒 |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111471089B (zh) * | 2019-01-24 | 2023-11-24 | 浙江海隆生物科技有限公司 | 一种重组的非洲猪瘟病毒cd2v亚单位蛋白及其制备方法和应用 |
GB201910794D0 (en) * | 2019-07-29 | 2019-09-11 | Pirbright Inst | Vaccine |
JP2022547533A (ja) * | 2019-09-16 | 2022-11-14 | チェン,ダル | 細胞受容体の妨害を通じてasfv感染症を阻止する方法 |
CN113122655A (zh) * | 2019-12-30 | 2021-07-16 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) | 非洲猪瘟病毒EP402R基因TaqMan荧光定量PCR检测方法 |
CN112472801A (zh) * | 2020-12-22 | 2021-03-12 | 华南农业大学 | 非洲猪瘟p30、p54、p72和B602L的DNA疫苗和亚单位疫苗及其制备方法与应用 |
CN113150079B (zh) * | 2021-01-21 | 2021-12-31 | 中国检验检疫科学研究院 | 一种真核表达的非洲猪瘟病毒p72抗原及其应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2452511C1 (ru) * | 2010-11-16 | 2012-06-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Аттенуированный штамм вируса африканской чумы свиней 2-го серотипа для разработки диагностических и вакцинных препаратов |
WO2012079016A1 (en) * | 2010-12-10 | 2012-06-14 | Brandeis University | Compositions and methods for the detection and analysis of african swine fever virus |
-
2016
- 2016-04-20 RU RU2016115461A patent/RU2654586C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2452511C1 (ru) * | 2010-11-16 | 2012-06-10 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Аттенуированный штамм вируса африканской чумы свиней 2-го серотипа для разработки диагностических и вакцинных препаратов |
WO2012079016A1 (en) * | 2010-12-10 | 2012-06-14 | Brandeis University | Compositions and methods for the detection and analysis of african swine fever virus |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
BASTOS A.D. et al., "Genotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 gene characterisation", Arch Virol. 2003 Apr;148(4):693-706. * |
GALLARDO C. et al., "Enhanced discrimination of African swine fever virus isolates through nucleotide sequencing of the p54, p72, and pB602L (CVR) genes", Virus Genes. 2009 Feb;38(1):85-95. * |
GALLARDO C. et al., "Enhanced discrimination of African swine fever virus isolates through nucleotide sequencing of the p54, p72, and pB602L (CVR) genes", Virus Genes. 2009 Feb;38(1):85-95. BASTOS A.D. et al., "Genotyping field strains of African swine fever virus by partial p72 gene characterisation", Arch Virol. 2003 Apr;148(4):693-706. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108504687A (zh) * | 2018-03-28 | 2018-09-07 | 扬州大学 | 一种表达非洲猪瘟病毒ep402r基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法 |
CN111172321A (zh) * | 2020-01-02 | 2020-05-19 | 中国检验检疫科学研究院 | 鉴别非洲猪瘟感染与免疫的荧光pcr检测试剂盒 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2016115461A (ru) | 2017-10-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2654586C2 (ru) | Рекомбинационная кассета, содержащая гены EP153R и EP364R штамма Congo (КК-262) вируса африканской чумы свиней и рекомбинантный штамм ΔСongoCD2v вируса африканской чумы свиней | |
JP6845266B2 (ja) | 多価組換型鳥ヘルペスウイルス及び鳥類を免疫化するためのワクチン | |
Monteagudo et al. | BA71ΔCD2: a new recombinant live attenuated African swine fever virus with cross-protective capabilities | |
US9528094B2 (en) | Attenuated African swine fever virus vaccine based in the deletion of MGF genes | |
García et al. | Evaluation and comparison of various PCR methods for detection of Mycoplasma gallisepticum infection in chickens | |
Lüschow et al. | Differentiation of avian poxvirus strains on the basis of nucleotide sequences of 4b gene fragment | |
JP2019520827A (ja) | 合理的に開発されたアフリカ豚コレラ弱毒化ウイルス株による、ジョージア2007単離株親ウイルスの攻撃に対する防護 | |
CN112063592A (zh) | 非洲猪瘟多基因联合缺失减毒株的构建及作为疫苗的应用 | |
US9701943B2 (en) | Genetic variant of cytomegalovirus (CMV) | |
Ball et al. | Partial characterization of new adenoviruses found in lizards | |
Cheng et al. | Pathogenicity of blood orf virus isolates in the development of dairy goat contagious pustular dermatitis | |
Marín-López et al. | Generation of recombinant modified vaccinia virus Ankara encoding VP2, NS1, and VP7 proteins of bluetongue virus | |
CN114107228A (zh) | 缺失十二个基因的减毒非洲猪瘟病毒株的构建及其作为疫苗的应用 | |
CN114015660B (zh) | 缺失十个基因的减毒非洲猪瘟病毒株的构建及其作为疫苗的应用 | |
CN115851623A (zh) | 非洲猪瘟mgf505-2r基因缺失减毒株的构建及作为疫苗的应用 | |
RU2571858C1 (ru) | РЕКОМБИНАЦИОННАЯ КАССЕТА, СОДЕРЖАЩАЯ ГЕНЫ EP153R И EP402R ШТАММА Ф-32 ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ DswCongo/FranceLectinCD2 ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ | |
Mase et al. | Fowl adenoviruses type 8b isolated from chickens with inclusion body hepatitis in Japan | |
Wang et al. | Protection of chickens against infectious bronchitis by a recombinant fowlpox virus co-expressing IBV-S1 and chicken IFNγ | |
US9463234B2 (en) | Attenuated african swine fever virus strain induces protection against challenge with homologous virulent parental virus georgia 2007 isolate | |
Williams et al. | A recombinant bovine herpesvirus-4 vectored vaccine delivered via intranasal nebulization elicits viral neutralizing antibody titers in cattle | |
CN108866240A (zh) | 用于鉴别DAdV-3和DAdV-A的引物和酶及其应用 | |
CN114657154B (zh) | 一种羊传染性脓疱病毒减毒株的制备方法及其应用 | |
Yang et al. | Isolation and molecular characterization of feline herpesvirus 1 from naturally infected Korean cats | |
CN108842000A (zh) | 用于鉴别DAdV-3和DAdV-A的引物组 | |
Lachheb et al. | Molecular characterization of a unique variant of avian infectious bronchitis virus in Tunisia |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180507 |