KR20220024694A

KR20220024694A - Mcl-1의 거대환식 억제제

Info

Publication number: KR20220024694A
Application number: KR1020227001787A
Authority: KR
Inventors: 프레데릭 얀 리타 롬바우츠; 알도 페스치울리
Original assignee: 얀센 파마슈티카 엔.브이.
Priority date: 2019-06-21
Filing date: 2020-06-18
Publication date: 2022-03-03
Also published as: BR112021025732A2; CN114641481A; AU2020296918A1; EP3986902B1; JP2022537393A; US20220306653A1; WO2020254471A1; MA56505A; CA3143613A1; MX2021015770A; EP3986902A1

Abstract

본 발명은 암과 같은 질환의 치료에 유용한, 대상체에서의 치료 및/또는 예방에 유용한 의약품(pharmaceutical agent), 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 MCL-1 억제제로서의 이의 용도에 관한 것이다:

Description

MCL-1의 거대환식 억제제

본 발명은 암과 같은 질환의 치료 또는 예방에 유용한, 대상체에서의 치료 및/또는 예방에 유용한 의약품(pharmaceutical agent), 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 MCL-1 억제제로서의 이의 용도에 관한 것이다.

세포 아폽토시스 또는 예정 세포사는 조혈계를 비롯한 많은 기관의 발달 및 항상성에 매우 중요하다. 아폽토시스는 사멸 수용체에 의해 매개되는 외인성 경로를 통하여 또는 B 세포 림프종(BCL-2) 단백질 패밀리를 사용하는 내인성 경로에 의해 개시될 수 있다. 골수 세포 백혈병-1(MCL-1)은 세포 생존 조절자의 BCL-2 패밀리의 구성원이며, 내인성 아폽토시스 경로의 중요한 매개체이다. MCL-1은 세포 생존의 유지에 책임이 있는 5가지 주요 항-아폽토시스 BCL-2 단백질(MCL-1, BCL-2, BCL-XL, BCL-w 및 BFL1/A1) 중 하나이다. MCL-1은 프로-아폽토시스 BCL-2 패밀리 단백질 Bak 및 Bax의 활성을 지속적으로 그리고 직접적으로 억제하고, BH3 온리(only) 아폽토시스 감지 단백질, 예컨대 Bim 및 Noxa의 격리에 의해 아폽토시스를 간접적으로 차단한다. 다양한 유형의 세포 스트레스 후의 Bak/Bax의 활성화는 미토콘드리아 외막 상에서 응집을 초래하고, 이 응집은 기공 형성, 미토콘드리아 외막 전위의 손실 및 시토크롬 C의 세포질 내로의 후속 방출을 촉진한다. 세포질 시토크롬 C는 Apaf-1에 결합하고 프로카스파아제 9의 모집을 개시하여 아폽토솜 구조를 형성한다(문헌[Cheng et al. eLife 2016; 5: e17755]). 아폽토솜의 조립은 실행형(executioner) 시스테인 프로테아제 3/7을 활성화하고, 이 이펙터 카스파아제는 다양한 세포질 및 핵 단백질을 절단하여 세포 사멸을 유도한다(문헌[Julian et al. Cell Death and Differentiation 2017; 24, 1380-1389]).

아폽토시스를 피하는 것은 암 발생의 확립된 특징이며, 종양 형성성 스트레스, 성장 인자 결핍 또는 DNA 손상으로 인해 제거될 종양 세포의 생존을 촉진한다(문헌[Hanahan and Weinberg. Cell 2011;1-44]). 따라서, 당연히 MCL-1은 형질전환되지 않은 정상적인 조직 대응물에 비해 많은 고형암 및 혈액암에서 고도로 상향조절된다. MCL-1의 과발현은 불량한 결과, 재발 및 공격적인 질환과 상관관계가 있는 여러 암의 병인과 관련이 있다. 또한 MCL-1의 과발현은 하기 암의 병인과 관련이 있다: 전립선암, 폐암, 췌장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 흑색종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 및 급성 림프모구성 백혈병(ALL). 인간 MCL-1 유전자좌(1q21)는 종양에서 빈번하게 증폭되고 총 MCL-1 단백질 수준을 정량적으로 증가시킨다(문헌[Beroukhim et al. Nature 2010;463 (7283) 899-905]). MCL-1은 또한 통상적인 암 치료제에 대한 저항성을 매개하고, BCL-2 기능의 억제에 반응하여 전사적으로 상향조절된다(문헌[Yecies et al. Blood 2010;115 (16)3304-3313]).

BCL-2의 소분자 BH3 억제제는 만성 림프구성 백혈병 환자에서 임상 효능을 보여주었으며, CLL 또는 AML 환자용으로 FDA 승인을 받았다(문헌[Roberts et al. NEJM 2016;374:311-322]). BCL-2 길항작용의 임상적 성공은 혈액 악성 종양 및 고형 종양 둘 다의 전임상 모델에서 효능을 나타내는 여러 MCL-1 BH3 모방체의 개발로 이어졌다(문헌[Kotschy et al. Nature 2016;538 477-486], 문헌[Merino et al. Sci. Transl. Med;2017 (9)]).

MCL-1은 미토콘드리아 무결성 및 DNA 손상 후의 비상동 말단 결합을 비롯하여 세포 생존을 매개하는 정식 역할 외에도 여러 세포 과정을 조절한다(문헌[Chen et al. JCI 2018;128(1):500-516]). MCL-1의 유전자 상실은 발달 타이밍 및 조직 결실에 따라 다양한 표현형을 나타낸다. MCL-1 넉아웃 모델은 MCL-1에 많은 역할이 있고 기능 상실이 광범위한 표현형에 영향을 줌을 보여준다. 전반적 MCL-1 결함 마우스는 배아 치사성을 나타내며, 조건부 유전자 결실을 사용한 연구에서는 미토콘드리아 기능 장애, 자가포식 활성화 장애, B 및 T 림프구 감소, B 및 T 아폽토시스 증가, 심부전/심근병증 발생이 보고되었다(문헌[Wang et al. Genes and Dev 2013;27 1351-1364], 문헌[Steimer et al. Blood 2009;(113) 2805-2815]).

WO2018178226에는 MCL-1 억제제 및 이의 사용 방법이 개시되어 있다.

WO2017182625에는 암 치료용 거대환식 MCL-1 억제제가 개시되어 있다.

WO2018178227에는 MCL-1 억제제의 합성이 개시되어 있다.

WO2020063792에는 인돌 거대환식 유도체가 개시되어 있다.

CN110845520 및 WO2020103864에는 MCL-1 억제제로서의 거대환식 인돌이 개시되어 있다.

CN20191114551에는 MCL-1 억제제가 개시되어 있다.

암, 예컨대 전립선암, 폐암, 췌장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 흑색종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 및 급성 림프모구성 백혈병(ALL)의 치료 또는 예방에 유용한 MCL-1 억제제에 대한 필요성이 남아 있다.

본 발명은 하기 화학식 I의 신규 화합물, 이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태, 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다:

[화학식 I]

여기서,

X¹은

(여기서, 'a' 및 'b'는 가변성 X¹이 분자의 나머지 부분에 부착되는 방식을 나타냄)를 나타내며;

R¹은 수소 또는 C_1-6알킬을 나타내며;

X²는

(이는 분자의 나머지 부분에 양방향으로 부착될 수 있음)를 나타내며;

R²는 수소 또는 C_1-6알킬을 나타내며;

X는 -S- 또는 -N(R^x)-를 나타내며;

R^x는 수소, 메틸, C_2-6알킬, -C(=O)-C_1-6알킬, -S(=O)₂-C_1-6알킬, C_3-6시클로알킬, -C(=O)-C_3-6시클로알킬, 또는 -S(=O)₂-C_3-6시클로알킬(여기서, C_2-6알킬, -C(=O)-C_1-6알킬, -S(=O)₂-C_1-6알킬, C_3-6시클로알킬, -C(=O)-C_3-6시클로알킬, 및 -S(=O)₂-C_3-6시클로알킬은 할로, C_1-4알킬, 및 1, 2 또는 3개의 할로 원자로 치환된 C_1-4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)을 나타낸다.

본 발명은 또한 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 및 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

추가로, 본 발명은 의약으로 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 및 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물에 관한 것이다.

특정 실시 형태에서, 본 발명은 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 추가 의약품과 조합된 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물의 용도에 관한 것이다.

더욱이, 본 발명은 제약상 허용가능한 담체를 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물과 친밀하게 혼합하는 것을 특징으로 하는, 본 발명에 따른 제약 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 암의 치료 또는 예방에서의 동시적 사용, 별개 사용 또는 순차적 사용을 위한 병용 제제로서의, 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 및 추가 의약품을 포함하는 생성물에 관한 것이다.

추가로 본 발명은, 본원에 정의된 바와 같은 유효량의 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 본원에 정의된 바와 같은 제약 조성물 또는 조합물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 세포 증식성 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 '할로' 또는 '할로겐'은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 나타낸다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 접두어 'C_x-y'(여기서, x 및 y는 정수임)는, 주어진 기에서의 탄소 원자의 수를 나타낸다. 따라서, C_1-6알킬 기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 등의 식이다.

본원에서 기 또는 기의 일부로서 사용되는 용어 'C_1-4알킬'은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 완전 포화 탄화수소 라디칼, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸 등을 나타낸다.

본원에서 기 또는 기의 일부로서 사용되는 용어 'C_1-6알킬'은 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 완전 포화 탄화수소 라디칼, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, n-헥실 등을 나타낸다.

본원에서 기 또는 기의 일부로서 사용되는 용어 'C_2-6알킬'은 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 완전 포화 탄화수소 라디칼, 예컨대 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, n-헥실 등을 나타낸다.

본원에서 기 또는 기의 일부로서 사용되는 용어 'C_3-6 시클로알킬'은 3 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 완전 포화, 환형 탄화수소 라디칼, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실로 정의된다.

S(=O)₂ 또는 SO₂는 술포닐 모이어티를 나타냄이 당업자에게 명백할 것이다.

CO 또는 C(=O)는 카르보닐 모이어티를 나타냄이 당업자에게 명백할 것이다.

일반적으로 용어 "치환된"이 본 발명에 사용되는 경우에는 항상, 달리 명시되지 않거나 문맥으로부터 명확하지 않은 경우, 이는 '치환된'을 사용한 표현으로 나타내는 원자 또는 라디칼 상에 있는 1개 이상의 수소, 특히 1 내지 4개의 수소, 더욱 특히는 1 내지 3개의 수소, 바람직하게는 1 또는 2개의 수소, 더 바람직하게는 1개의 수소가 나타낸 기들로부터 선택되는 기로 치환되되, 단, 정상 원자가는 초과되지 않고, 이 치환은 화학적으로 안정한 화합물, 즉 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도까지 단리되는 것을 견디기에 충분히 견고한 화합물로 이어지는 것을 나타냄을 의미한다.

치환체들 및/또는 변수들의 조합은 이러한 조합이 화학적으로 안정한 화합물을 생성할 경우에만 허용가능하다. '안정한 화합물'은 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도까지 단리되는 것을 견디기에 충분히 견고한 화합물을 나타냄을 의미한다.

당업자는 '선택적으로 치환된'이라는 용어가 '선택적으로 치환된'을 사용한 표현에서 지시된 원자 또는 라디칼이 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있다는 것을 의미함(이는 각각 치환되거나 비치환된 것을 의미함)을 이해할 것이다.

둘 이상의 치환체가 모이어티 상에 존재할 때, 가능한 경우, 그리고 달리 명시되지 않거나 문맥으로부터 명백하지 않은 한, 이들은 동일한 원자 상의 수소를 대체할 수 있거나 모이어티 내에서 상이한 원자 상의 수소를 대체할 수 있다.

달리 명시되지 않거나 문맥으로부터 명확하지 않은 한, 헤테로시클릴 기 상의 치환체가 고리 탄소 원자 상의 또는 고리 헤테로원자(예컨대 질소 원자 상의 수소가 치환체에 의해 대체될 수 있음) 상의 임의의 수소 원자를 대체할 수 있음은 당업자에게 명확할 것이다.

화학식 I의 화합물은 화학식 I-a 및 I-b의 화합물을 포함함이 명백할 것이다(X²의 양방향은

임).

임의의 변수가 임의의 구성 요소에 1회 초과로 나타날 때, 각각의 정의는 독립적이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 동물, 바람직하게는 포유동물(예를 들어, 고양이, 개, 영장류 또는 인간), 더 바람직하게는 치료, 관찰 또는 실험의 대상이거나 대상이었던 인간을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료적 유효량"은 치료 중인 질환 또는 장애의 증상을 완화 또는 역전시키는 것을 비롯하여, 연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의가 조사 중인 조직계, 또는 대상체(예를 들어, 인간)에서의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 활성 화합물 또는 의약품의 양을 의미한다.

용어 "조성물"은 특정된 성분을 특정된 양으로 포함하는 생성물 및 특정된 성분들을 특정된 양으로 조합함으로써 직접적으로 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물을 포함하는 것으로 의도된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료"는 질환의 진행을 늦추거나, 방해하거나, 중지시키거나, 중단시킬 수 있지만 반드시 모든 증상을 완전히 제거하는 것을 나타내는 것은 아닌 모든 과정을 지칭하고자 한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "(본) 발명의 화합물(들)" 또는 "(본) 발명에 따른 화합물(들)"은, 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물을 포함하는 것을 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 실선으로만 표시되고 실선 쐐기 또는 빗금 쐐기 결합으로 표시되지 않거나, 달리 1개 이상의 원자 주위에 특정 배열(예를 들어, R, S)을 갖는 것으로 나타내지 않은 결합을 갖는 임의의 화학식은 각각의 가능한 입체이성질체, 또는 2가지 이상의 입체이성질체의 혼합물을 고려한다.

이상 및 이하에서, 용어 "화학식 I의 화합물(들)"은 이의 호변이성질체와 이의 입체이성질체 형태를 포함하는 것을 의미한다.

이상 또는 이하에서 용어 "입체이성질체", "입체이성질체 형태" 또는 "입체화학적 이성질체 형태"는 상호교환가능하게 사용된다.

본 발명은 순수한 입체이성질체로서 또는 2가지 이상의 입체이성질체의 혼합물로서의 본 발명의 화합물의 모든 입체이성질체를 포함한다.

거울상 이성질체는 서로 겹쳐지지 않는(non-superimposable) 거울상인 입체이성질체이다. 한 쌍의 거울상 이성질체의 1:1 혼합물은 라세미체 또는 라세미 혼합물이다.

회전장애 이성체(atropisomer 또는 atropoisomer)는 큰 입체 장애로 인해 단일 결합 주위의 제한된 회전으로부터 생기는 특정한 공간 배열을 갖는 입체이성질체이다. 화학식 I의 화합물의 모든 회전장애 이성질체 형태는 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

특히, 본원에 개시된 화합물은 바이아릴 결합 주위의 제한된 회전으로 인해 축방향 키랄성을 가지며, 따라서 회전장애 이성질체들의 혼합물로서 존재할 수 있다. 화합물이 순수한 회전장애 이성질체인 경우 각각의 키랄 중심의 입체화학은 R_a 또는 S_a로 특정될 수 있다. 이러한 지정은 또한 하나의 회전장애 이성질체가 풍부한 혼합물에 사용될 수 있다. 회전장애 이성질 현상 및 축방향 키랄성과, 배열 할당 규칙에 대한 추가 설명은 문헌[Eliel, E.L. & Wilen, S. H. 'Stereochemistry of Organic Compounds' John Wiley and Sons, Inc. 1994]에서 찾을 수 있다.

부분입체 이성질체(diastereomer 또는 diastereoisomer)는 거울상 이성질체가 아닌 입체이성질체로, 즉, 이들은 거울상으로서 관련되지 않는다. 화합물이 이중 결합을 포함하는 경우, 치환체는 E 또는 Z 배열일 수 있다.

2가 환형 포화 또는 부분 포화 라디칼 상의 치환체는 시스(cis)- 또는 트랜스(trans)-배열을 가질 수 있으며; 예를 들어 화합물이 이치환된 시클로알킬 기를 포함하는 경우, 치환체는 시스 또는 트랜스 배열일 수 있다.

따라서, 본 발명은 화학적으로 가능한 경우에는 언제나, 거울상 이성질체, 회전장애 이성질체, 부분입체 이성질체, 라세미체, E 이성질체, Z 이성질체, 시스 이성질체, 트랜스 이성질체 및 이의 혼합물을 포함한다.

모든 이들 용어, 즉 거울상 이성질체, 회전장애 이성질체, 부분입체 이성질체, 라세미체, E 이성질체, Z 이성질체, 시스 이성질체, 트랜스 이성질체 및 이의 혼합물의 의미는 당업자에게 알려져 있다.

절대 배열은 칸-인골드-프렐로그(Cahn-Ingold-Prelog) 시스템에 따라 특정된다. 비대칭 원자에서의 배열은 R 또는 S 중 어느 하나로 특정된다. 절대 배열이 알려지지 않은 분해 입체이성질체는, 이들이 평면 편광을 회전시키는 방향에 따라 (+) 또는 (-)로 지정될 수 있다. 예를 들어, 절대 배열이 알려지지 않은 분해 거울상 이성질체는, 이들이 평면 편광을 회전시키는 방향에 따라 (+) 또는 (-)로 지정될 수 있다. 광학 활성 (R_a)- 및 (S_a)-회전장애 이성질체는 키랄 신톤, 키랄 시약 또는 키랄 촉매를 사용하여 제조될 수 있거나, 키랄 HPLC와 같은 당업계에 잘 알려진 통상적인 기술을 사용하여 분해될 수 있다.

특정 입체이성질체가 확인될 때, 이는 상기 입체이성질체에 다른 입체이성질체가 실질적으로 없음을 의미하며, 즉, 상기 입체이성질체가 50% 미만, 바람직하게는 20% 미만, 더 바람직하게는 10% 미만, 더욱 더 바람직하게는 5% 미만, 특히 2% 미만, 그리고 가장 바람직하게는 1% 미만의 다른 입체이성질체와 결부됨을 의미한다. 따라서, 화학식 I의 화합물이, 예를 들어 (R)로서 특정될 때, 이는 해당 화합물에 (S) 이성질체가 실질적으로 없음을 의미하고; 화학식 I의 화합물이, 예를 들어 E로서 특정될 때, 이는 해당 화합물에 Z 이성질체가 실질적으로 없음을 의미하며; 화학식 I의 화합물이, 예를 들어 시스로서 특정될 때, 이는 해당 화합물에 트랜스 이성질체가 실질적으로 없음을 의미하고; 화학식 I의 화합물이 예를 들어 R_a로서 특정될 때, 이는 해당 화합물에 S_a 회전장애 이성질체가 실질적으로 없음을 의미한다.

제약상 허용가능한 염, 구체적으로 제약상 허용가능한 부가염은 산 부가염 및 염기 부가염을 포함한다. 이러한 염은 통상적인 수단에 의해, 예를 들어, 유리 산 또는 유리 염기 형태를 선택적으로 용매 중에, 또는 염이 불용성인 매질 중에, 1 당량 이상의 적절한 염기 또는 산과 반응시키고, 이어서 표준 기술을 사용하여(예를 들어, 진공에서, 동결 건조에 의해, 또는 여과에 의해) 상기 용매 또는 상기 매질을 제거함으로써 형성될 수 있다. 또한, 염은 염 형태의 본 발명의 화합물의 반대 이온을, 예를 들어 적합한 이온 교환 수지를 사용하여 또 다른 반대 이온으로 교환시킴으로써 제조될 수 있다.

이상 또는 이하에 언급된 바와 같은 제약상 허용가능한 염은 화학식 I의 화합물 및 이의 용매화물이 형성할 수 있는 치료적으로 활성인 비독성 산 및 염기 염 형태를 포함함을 의미한다.

적절한 산은, 예를 들어 무기 산, 예를 들어 할로겐화수소산, 예를 들어 염화수소산 또는 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등의 산; 또는 유기 산, 예를 들어 아세트산, 프로판산, 히드록시아세트산, 락트산, 피루브산, 옥살산(즉, 에탄디오익산), 말론산, 숙신산(즉, 부탄디오익산), 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 시클람산, 살리실산, p-아미노살리실산, 파모익산 등의 산을 포함한다. 역으로, 상기 염 형태는 적절한 염기로 처리함으로써 유리 염기 형태로 전환될 수 있다.

화학식 I의 화합물 및 산성 양성자를 포함하는 이의 용매화물은 또한, 적절한 유기 및 무기 염기로 처리함으로써 이의 비독성 금속 또는 아민 염 형태로 전환될 수 있다.

적절한 염기 염 형태는, 예를 들어 암모늄 염, 알칼리 및 알칼리토금속 염, 예를 들어 리튬, 나트륨, 칼륨, 세슘, 마그네슘, 칼슘 염 등, 유기 염기와의 염, 예를 들어 1차, 2차 및 3차 지방족 및 방향족 아민, 예를 들어 메틸아민, 에틸아민, 프로필아민, 이소프로필아민, 4가지의 부틸아민 이성질체, 디메틸아민, 디에틸아민, 디에탄올아민, 디프로필아민, 디이소프로필아민, 디-n-부틸아민, 피롤리딘, 피페리딘, 모르폴린, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 퀴누클리딘, 피리딘, 퀴놀린 및 이소퀴놀린과의 염; 벤자틴, N-메틸-D-글루카민, 히드라바민 염, 및 예를 들어 아르기닌, 리신 등과 같은 아미노산과의 염을 포함한다. 역으로, 이 염 형태는 산으로 처리함으로써 유리 산 형태로 전환될 수 있다.

용매화물이라는 용어는, 화학식 I의 화합물이 형성할 수 있는 용매 부가 형태와 이의 염을 포함한다. 이러한 용매 부가 형태의 예로는 예를 들어 수화물, 알코올레이트 등이 있다.

후술하는 공정에서 제조되는 본 발명의 화합물은 당해 분야에 알려진 분할 절차에 따라 서로로부터 분리될 수 있는 거울상 이성질체의 혼합물, 특히 거울상 이성질체의 라세미 혼합물의 형태로 합성될 수 있다. 화학식 I의 화합물, 및 이의 제약상 허용가능한 염, N-옥시드 및 용매화물의 거울상 이성질체 형태를 분리하는 방식에는 키랄 고정상을 사용하는 액체 크로마토그래피가 포함된다. 상기 순수한 입체화학적 이성질체 형태는 또한, 반응이 입체특이적으로 일어난다면, 적절한 출발 물질의 상응하는 순수한 입체화학적 이성질체 형태로부터 유도될 수 있다. 바람직하게는, 특정 입체이성질체가 요구되는 경우, 상기 화합물은 입체특이적 제조 방법에 의해 합성될 것이다. 이들 방법은 유리하게는 거울상 이성질체로서 순수한 출발 물질을 이용할 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "거울상 이성질체로서 순수한"이라는 용어는 생성물이 적어도 80 중량%의 하나의 거울상 이성질체 및 20 중량% 이하의 다른 거울상 이성질체를 함유하는 것을 의미한다. 바람직하게는, 생성물은 적어도 90 중량%의 하나의 거울상 이성질체 및 10 중량% 이하의 다른 거울상 이성질체를 함유한다. 가장 바람직한 실시 형태에서, "거울상 이성질체로서 순수한"이라는 용어는 조성물이 적어도 99 중량%의 하나의 거울상 이성질체 및 1 중량% 이하의 다른 거울상 이성질체를 함유하는 것을 의미한다.

본 발명은 또한, 하나 이상의 원자가 자연에서 통상 발견되는 원자 질량 또는 질량수(또는 자연에서 발견되는 가장 풍부한 것)와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체된다는 사실을 제외하고는, 본원에서 언급된 것들과 동일한 본 발명의 동위원소-표지 화합물을 포함한다.

천연적으로 존재하거나 합성에 의해 생성되는, 천연적으로 풍부하거나 동위원소가 풍부한 형태의, 본원에 명시된 바와 같은 임의의 특정 원자 또는 원소의 모든 동위원소 및 동위원소 혼합물이 본 발명의 화합물의 범주 내에 있는 것으로 고려된다. 본 발명의 화합물 내에 혼입될 수 있는 예시적인 동위원소는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 염소 및 요오드의 동위원소, 예컨대 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸O, ³²P, ³³P, ³⁵S, ¹⁸F, ³⁶Cl, ¹²²I, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I,⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br 및 ⁸²Br을 포함한다 바람직하게는 방사성 동위원소는 ²H, ³H, ¹¹C 및 ¹⁸F의 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 방사성 동위원소는 ²H이다. 특히, 중수소화 화합물은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

본 발명의 특정한 동위원소 표지 화합물(예를 들어 ³H 및 ¹⁴C로 표지된 것)은 예를 들어 기질 조직 분포 분석에서 유용할 수 있다. 삼중 수소(³H) 및 탄소-14(¹⁴C) 동위원소는 그의 제조의 용이함 및 검출가능성 때문에 유용하다. 추가로, 중수소(즉, ²H)와 같은 더 무거운 동위원소에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성으로부터 기인하는 특정한 치료적 장점(예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량 요건)을 제공할 수 있으며, 따라서 일부 상황에서 바람직할 수 있다. ¹⁵O, ¹³N, ¹¹C 및 ¹⁸F와 같은 양전자 방출 동위원소는 양전자 방출 단층촬영(PET) 연구에 유용하다. 암에서 PET 이미징은 종양의 위치를 찾아내고 확인하고, 질환의 병기를 결정하고 적합한 처치를 결정하는 것을 돕는 데 있어서 유용성이 발견된다. 인간 암 세포는 잠재적 질환-특이적 분자 표적인 많은 수용체 또는 단백질을 과발현한다. 종양 세포 상의 이러한 수용체 또는 단백질에 대하여 높은 친화성 및 특이성을 갖고 결합하는 방사성동위원소 표지된 추적자는 진단적 이미징 및 표적화된 방사성 핵종 요법에서 큰 가능성을 갖는다(문헌[Charron, Carlie L. et al. Tetrahedron Lett. 2016, 57(37), 4119-4127]. 추가적으로, 표적-특이적 PET 방사성 추적자는, 예를 들어 표적 발현 및 치료 반응을 측정함으로써, 병상을 검사 및 평가하기 위한 바이오마커로서 사용될 수 있다(문헌[Austin R. et al. Cancer Letters (2016), doi: 10.1016/j.canlet.2016.05.008].

본 발명은 구체적으로, 본원에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물, 및 이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태, 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것으로, 여기서,

X¹은

R¹은 수소 또는 C_1-6알킬을 나타내며;

X²는

R²는 수소 또는 C_1-6알킬을 나타내며;

X는 -S- 또는 -N(R^x)-를 나타내며;

R^x는 수소, 메틸, C_2-6알킬, -C(=O)-C_1-6알킬, -S(=O)₂-C_1-6알킬, C_3-6시클로알킬, -C(=O)-C_3-6시클로알킬, 또는 -S(=O)₂-C_3-6시클로알킬(여기서, C_2-6알킬, -C(=O)-C_1-6알킬, -S(=O)₂-C_1-6알킬, C_3-6시클로알킬, -C(=O)-C_3-6시클로알킬, 및 -S(=O)₂-C_3-6시클로알킬은 할로, C_1-4알킬, 및 1, 2 또는 3개의 할로 원자로 치환된 C_1-4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)을 나타내며;

단,

및 이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태는 제외된다.

X¹은

R¹은 수소 또는 C_1-6알킬을 나타내며;

X²는

R²는 수소 또는 C_1-6알킬을 나타내며;

X는 -S- 또는 -N(R^x)-를 나타내며;

R^x는 수소, 메틸 또는 C_2-6알킬을 나타낸다.

X¹은

R¹은 C_1-6알킬을 나타내며;

X²는

R²는 C_1-6알킬을 나타내며;

X는 -S- 또는 -N(R^x)-를 나타내며;

R^x는 수소 또는 메틸을 나타낸다.

X¹은

R¹은 메틸을 나타내며;

X²는

R²는 메틸을 나타내며;

X는 -S- 또는 -N(R^x)-를 나타내며;

R^x는 수소 또는 메틸을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서,

X는 -N(R^x)-를 나타낸다.

X는 -N(R^x)-를 나타내며; R^x는 수소를 나타낸다.

X는 -N(R^x)-를 나타내며; R^x는 메틸을 나타낸다.

X¹은

를 나타낸다.

X¹은

를 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R¹은 수소를 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R¹은 C_1-6알킬을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R¹은 C_2-6알킬을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R¹은 메틸을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R²는 수소를 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R¹ 및 R² 중 적어도 하나는 수소 또는 C_2-6알킬을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R¹ 및 R² 중 적어도 하나는 메틸 이외의 것이다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R²는 C_1-6알킬을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R²는 C_2-6알킬을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R²는 수소 또는

C_2-6알킬을 나타낸다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R²는 메틸을 나타낸다.

i) R¹ 및 R² 중 적어도 하나는 메틸 이외의 것이거나; 또는

ii) R^x는 메틸 또는 -S(=O)₂-C_1-6알킬 이외의 것이다.

R^x는 수소, C_2-6알킬, -C(=O)-C_1-6알킬, C_3-6시클로알킬, -C(=O)-C_3-6시클로알킬, 또는 -S(=O)₂-C_3-6시클로알킬을 나타내며; C_2-6알킬, -C(=O)-C_1-6알킬, C_3-6시클로알킬, -C(=O)-C_3-6시클로알킬, 및 -S(=O)₂-C_3-6시클로알킬은 할로, C_1-4알킬, 및 1, 2 또는 3개의 할로 원자로 치환된 C_1-4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 선택적으로 치환된다.

R^x는 수소 또는 C_2-6알킬을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 I-x의 화합물로 한정된다:

[화학식 I-x]

화학식 I-x의 구조에서의 모든 변수는 화학식 I의 화합물 또는 다른 실시 형태들 중 임의의 것에서 언급된 이의 임의의 하위군에 대하여 정의된 바와 같이 정의됨이 명백할 것이다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 I-y의 화합물로 한정된다:

[화학식 I-y]

화학식 I-y의 구조에서의 모든 변수는 화학식 I의 화합물 또는 다른 실시 형태들 중 임의의 것에서 언급된 이의 임의의 하위군에 대하여 정의된 바와 같이 정의됨이 명백할 것이다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, 하기 화합물

및 이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태는 제외된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 범주는 상기 제외된 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염을 포함하지 않는다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 범주는 상기 제외된 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물을 포함하지 않는다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 일반 반응식에 정의된 바와 같은 화학식 I의 하위군에 관한 것이다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 임의의 예시된 화합물,

이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태, 이의 임의의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다.

위에 나타낸 실시 형태의 모든 가능한 조합은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 간주된다.

화합물의 제조 방법

이 섹션에서, 문맥상 달리 나타내지 않는 한 모든 다른 섹션에서처럼, 화학식 I에 대한 언급은 본원에 정의된 이의 모든 다른 하위군 및 예도 포함한다.

화학식 I의 화합물의 일부 전형적인 예의 일반적인 제조는 하기에 그리고 특정 실시예에서 기술되고, 일반적으로, 구매가능하거나 유기 화학 분야의 숙련자가 일반적으로 사용하는 표준 합성 공정에 의해 제조되는 출발 물질로부터 제조된다. 하기 반응식은 본 발명의 예를 나타내기 위한 것일 뿐이며 결코 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다.

대안적으로, 본 발명의 화합물은 또한 당업자가 통상적으로 사용하는 표준 합성 공정과 조합하여 하기 일반 반응식에 기술된 것과 유사한 반응 프로토콜에 의해 제조될 수 있다.

당업자는 반응식에 기술된 반응에서, 최종 생성물에 요구되는 반응성 작용기(예를 들어, 히드록시, 아미노, 또는 카르복시 기)가 반응에 원치 않게 참여하는 것을 피하기 위해 이들을 보호하는 것이 필요할 수 있다는 것을 인식할 것이지만, 이것은 항상 명백하게 예시되는 것은 아니다. 일반적으로, 통상적인 보호기는 표준 관행에 따라 사용될 수 있다. 보호기는 당업계에 알려진 방법을 사용하여 편리한 후속 단계에서 제거될 수 있다.

당업자는 반응식에 기술된 반응에서, 예를 들어 N₂ 가스 분위기와 같은 불활성 분위기 하에서 반응을 수행하는 것이 바람직하거나 필요할 수 있다는 것을 인식할 것이다.

반응 후처리(work-up)(화학 반응의 생성물(들)의 단리 및 정제에 필요한 일련의 조작, 예를 들어, 켄칭, 컬럼 크로마토그래피, 추출을 지칭함) 전에 반응 혼합물을 냉각시키는 것이 필요할 수 있다는 것은 당업자에게 자명할 것이다.

당업자라면 교반 하에 반응 혼합물을 가열하는 것이 반응 결과를 향상시킬 수 있다는 것을 인식할 것이다. 일부 반응에서, 전체 반응 시간을 단축하기 위해 종래의 가열 대신에 마이크로웨이브 가열을 사용할 수 있다.

당업자는 하기 반응식에 도시된 화학 반응의 또 다른 시퀀스(sequence)가 원하는 화학식 I의 화합물을 또한 생성할 수 있다는 것을 인식할 것이다.

당업자라면 하기 반응식에 도시된 중간체 및 최종 화합물이 당업자에게 잘 알려진 방법에 따라 더 작용화될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 본원에 기술된 중간체 및 화합물은 유리 형태 또는 염 또는 이의 용매화물로 단리될 수 있다. 본원에 기술된 중간체 및 화합물은 당업계에 공지된 분해 절차에 따라 서로 분리될 수 있는 호변이성질체들 및 입체이성질체 형태들의 혼합물 형태로 합성될 수 있다.

화학식 I-a 및 I-b의 화합물에서 모든 변수는 본 발명의 범주 내에 있는 화학식 I에 대하여 정의된 바와 같다.

당업자는 X¹이 다음을 나타내는 본 발명의 화합물을 제조하기 위하여 유사한 반응 프로토콜이 또한 사용될 수 있음을 이해할 것이다:

이러한 화합물을 얻기 위해, 화학식 XVIII의 중간체를 화학식 XVII의 중간체로 전환시키는 단계 동안, 대안적인 피라졸-보로네이트가 사용되어야 한다. 하기 합성 반응 단계는 화합물 (I-a) 및 (I-b)에 대하여 기술된 바와 유사하다.

하기 반응식에서, Me는 메틸을 의미하며, Et는 에틸을 의미하며, Ac는 아세틸을 의미한다.

화학식 I-a의 화합물은 하기 화학식 III의 중간체:

[화학식 III]

(여기서, X, R¹ 및 R²는 화학식 I-a에 정의된 바와 같음)를, 적합한 용매, 예컨대 물 또는 물과 적합한 유기 용매, 예컨대 디옥산 또는 THF의 혼합물, 또는 MeOH와 THF의 혼합물에서, 적합한 염기, 예를 들어 LiOH 또는 NaOH의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 실온 또는 60℃에서 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

이와 유사하게, 화학식 I-b의 화합물은 하기 화학식 IV의 화합물:

[화학식 IV]

(여기서, X, R¹ 및 R²는 화학식 I-b에 정의된 바와 같음)을, 적합한 용매, 예컨대 물 또는 물과 적합한 유기 용매, 예컨대 디옥산 또는 THF의 혼합물, 또는 MeOH와 THF의 혼합물에서, 적합한 염기, 예를 들어 LiOH 또는 NaOH의 존재 하에, 적합한 온도, 예컨대 실온 또는 60℃에서 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 III의 중간체 및 화학식 IV의 중간체는 하기 화학식 V의 중간체:

[화학식 V]

(여기서, X 및 R¹은 화학식 I-a 또는 화학식 I-b에서 정의된 바와 같음)를, 적합한 용매, 예를 들어, DMF, 또는 아세토니트릴에서, 적합한 염기, 예를 들어, 트리에틸아민(Et₃N), N,N-디이소프로필에틸아민(iPr₂EtN), 또는 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]운데스-7 - 엔(DBU)의 존재 하에, 적합한 온도, 예를 들어, 실온 또는 60℃에서, 적합한 알킬화제, 예를 들어 알킬 할라이드와 반응시키고, 이어서 이성질체 (III) 및 (IV)를 적절하게 분리하여, 예를 들어, 크로마토그래피 분리하여 제조할 수 있다.

X가 S(황)로 정의되는 경우, 화학식 V의 중간체는 하기 화학식 VI의 중간체:

[화학식 VI]

(여기서, 이 화학 프로토콜에서 P²는 적합한 보호기, 예를 들어 파라메톡시벤질(PMB), 디메톡실벤질(DMB), 또는 테트라히드로피라닐(THP)로 정의되며, X는 S(황)로 정의됨)를, 적합한 용매, 예를 들어, 1,4-디옥산, CH₂Cl₂, 또는 톨루엔에서, 적합한 온도, 예를 들어 실온 또는 80℃에서, 적합한 탈보호제, 예를 들어, HCl 또는 트리플루오로아세트산(TFA), 또는 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ)과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

X가 NR^x(이때 R^x는 화학식 I에 정의된 바와 같음)로 정의되는 경우, 화학식 V의 중간체는 하기 화학식 VII의 화합물:

[화학식 VII]

(여기서, P²는 적합한 보호기, 예를 들어, 파라메톡시벤질(PMB), 디메톡실벤질(DMB), 또는 테트라히드로피라닐(THP)임)을, 적합한 용매, 예를 들어, 1,4-디옥산, CH₂Cl₂, 또는 톨루엔에서, 적합한 온도, 예를 들어 실온 또는 80℃에서, 적합한 탈보호제, 예를 들어, HCl 또는 TFA, 또는 DDQ와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 VII의 중간체는 하기 화학식 VIII의 중간체:

[화학식 VIII]

(여기서, P²는 화학식 VII에서 정의된 바와 같음)를, 적합한 용매, 예를 들어, DMF, 또는 아세토니트릴에서, 적합한 염기, 예를 들어, Et₃N, iPr₂EtN, 또는 DBU의 존재 하에, 적합한 온도, 예를 들어, 실온 또는 60℃에서, 적합한 알킬화제, 예를 들어 알킬 할라이드와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

대안적으로, 화학식 VII의 중간체는 화학식 VIII의 중간체를, 적합한 용매, 예를 들어, CH₂Cl₂에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 적합한 알데히드, 예를 들어, 포름알데히드, 및 적합한 환원제, 예를 들어, NaBH₃CN과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 VIII의 중간체는 화학식 VI의 중간체(여기서, P²는 화학식 VII에서 정의된 바와 같으며, X는 예를 들어 2-니트로페닐술포닐과 같이 보호기에 의해 보호된 질소로 정의됨)를, 적합한 염기, 예를 들어, K₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, 아세토니트릴 또는 DMF에서, 적합한 온도, 예를 들어 실온 또는 80℃에서, 적합한 탈보호제, 예를 들어, 티오페놀과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 VI의 중간체는 하기 화학식 IX의 중간체:

[화학식 IX]

(여기서, X는 화학식 I-a에서 정의된 바와 같으며, P²는 적합한 보호기, 예를 들어, 파라메톡시벤질(PMB), 디메톡실벤질(DMB), 또는 테트라히드로피라닐(THP)이거나, 또한 적합한 알킬 치환체, 예를 들어 메틸일 수 있음)를, 적합한 포스핀, 예를 들어, PPh₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, THF, 톨루엔, 또는 이들의 혼합물에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온 또는 60℃에서, 적합한 시약, 예를 들어, 디에틸 아조디카르복실레이트(DEAD) 또는 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트(DBAD)와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 IX의 중간체는 하기 화학식 X의 중간체:

[화학식 X]

(여기서, X 및 P²는 화학식 IX에서 정의된 바와 같으며, SiP³은 적합한 보호기, 예를 들어, tert-부틸디메틸실릴(TBDMS) 또는 tert-부틸디페닐실릴(TBDPS)임)를, 적합한 용매, 예를 들어, THF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온 또는 60℃에서, 탈보호 시약, 예를 들어, 테트라부틸암모늄 플루오라이드(TBAF)와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

X가 S(황)로 정의되는 경우, 화학식 X의 중간체는 하기 화학식 XI의 중간체:

[화학식 XI]

(여기서, SiP³은 화학식 X에서 정의된 바와 같으며, L은 적합한 이탈기, 예를 들어, 할로겐 또는 알킬술포네이트임)를, 적합한 염기, 예를 들어, K₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, MeOH에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온 또는 60℃에서, 하기 화학식 XII의 중간체:

[화학식 XII]

(여기서, SiP³ 및 P²는 화학식 X에서 정의된 바와 같음)와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

X가 예를 들어 2-니트로페닐술포닐과 같이 보호기에 의해 보호된 질소로 정의되는 경우, 화학식 X의 중간체는 하기 화학식 XIII의 중간체:

[화학식 XIII]

(여기서, SiP³은 화학식 X에서 정의된 바와 같음)를, 적합한 포스핀, 예를 들어, 트리페닐포스핀(PPh₃)의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, THF, 톨루엔, 또는 이들의 혼합물에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온 또는 60℃에서, 하기 화학식 XIV의 중간체:

[화학식 XIV]

(여기서, SiP³ 및 P²는 화학식 X에서 정의된 바와 같음)와, 적합한 시약, 예를 들어, DEAD 또는 DBAD와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XIII의 중간체는 하기 화학식 XV의 중간체:

[화학식 XV]

(여기서, SiP³은 화학식 X에서 정의된 바와 같음)를, 적합한 시약, 예를 들어, DEAD 또는 DBAD의 존재 하에, 적합한 포스핀, 예를 들어, PPh₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, THF, 톨루엔, 또는 이들의 혼합물에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온 또는 60℃에서, 적합한 보호된 질소, 예를 들어, 2-니트로페닐술폰아미드와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XI의 중간체는 화학식 XV의 중간체를, 적합한 염기, 예를 들어, 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, CH₂Cl₂에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 적합한 알킬술포닐 클로라이드, 예를 들어, 메실 클로라이드와 반응시킴으로서 제조될 수 있다.

대안적으로, 화학식 XI의 중간체는 화학식 XV의 중간체를, 적합한 염기, 예를 들어, 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, CH₂Cl₂에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서 적합한 알킬술포닐 클로라이드, 예를 들어, 메실 클로라이드와 반응시키고; 이어서 적합한 용매, 예를 들어, 아세토니트릴에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온 또는 60℃에서, 적합한 금속 할로겐화물, 예를 들어, 요오드화칼륨과 반응시킴으로써 2단계로 제조될 수 있다.

화학식 XV의 중간체는 하기 화학식 XVI의 중간체:

[화학식 XVI]

를, 적합한 염기, 예를 들어, Cs₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, DMF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 적합한 O-보호 프로필 할라이드 또는 알킬술포네이트, 예를 들어, (3-브로모프로폭시)(tert-부틸)디메틸실란과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XVI의 중간체는 하기 화학식 XVII의 중간체:

[화학식 XVII]

를, 적합한 용매, 예를 들어, CH₂Cl₂에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 적합한 탈보호제, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산 또는 TFA와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XVII의 중간체는 하기 화학식 XVIII의 중간체:

[화학식 XVIII]

를, 적합한 촉매, 예를 들어, Pd₂(dba)₃의 존재 하에, 적합한 포스핀 리간드, 예를 들어, S-Phos의 존재 하에, 적합한 염기, 예를 들어, 중탄산나트륨의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, 디옥산, 물, 또는 이들의 혼합물에서, 적합한 온도, 예를 들어, 100℃에서, 적합한 치환 피라졸 유도체, 예를 들어, 3-(((4-메톡시벤질)옥시)메틸)-1,5-디메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸과 반응시킴으로서 제조될 수 있다.

화학식 XVIII의 중간체는 하기 화학식 XIX의 중간체:

[화학식 XIX]

((E) 및 (Z) 이성질체의 혼합물)

를, 적합한 용매, 예를 들어, 아세트산에서, 적합한 온도, 예를 들어, 70℃에서, 적합한 산, 예를 들어, 황산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XIX의 중간체는 (3-브로모-4-클로로페닐)히드라진을, 적합한 산, 예를 들어, 염산의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, 메탄올에서, 적합한 온도, 예를 들어, 65℃에서, 메틸 2-옥소부타노에이트와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XII의 중간체는 하기 화학식 XX의 중간체:

[화학식 XX]

(여기서, SiP³ 및 P²는 화학식 X에서 정의된 바와 같으며, L은 적합한 이탈기임)를, 적합한 용매, 예를 들어, DMF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 티오아세트산칼륨과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XX의 중간체는 화학식 XIV의 중간체를, 필요한 경우 적합한 염기, 예를 들어, 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, CH₂Cl₂에서, 적합한 온도, 예를 들어, 0℃ 또는 실온에서, 적합한 시약, 예를 들어, 메실 클로라이드 또는 티오닐 클로라이드와 반응시킴으로서 제조될 수 있다.

화학식 XIV의 중간체는 하기 화학식 XXII의 중간체:

[화학식 XXII]

(여기서, SiP³ 및 P²는 화학식 X에서 정의된 바와 같음)를, 적합한 용매, 예를 들어, THF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 0℃ 또는 실온에서, 적합한 환원제, 예를 들어, DIBALH와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXII의 중간체는 하기 화학식 XXIII의 중간체:

[화학식 XXIII]

(여기서, P²는 화학식 X에서 정의된 바와 같음)를, 적합한 염기, 예를 들어, 이미다졸의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, DMF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 적합한 삼치환 실릴 클로라이드 예를 들어, TBDMSCl(tert-부틸디메틸실릴 클로라이드) 또는 TBDPSCl(tert-부틸디페닐실릴 클로라이드)과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXIII의 중간체는 하기 화학식 XXIV의 중간체:

[화학식 XXIV]

(여기서, P²는 화학식 X에서 정의된 바와 같으며, L은 적합한 이탈기, 예를 들어, 클로라이드 또는 메실레이트임)를, 적합한 염기, 예를 들어, K₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, 메탄올에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 3-(아세틸티오)나프탈렌-1-일 아세테이트와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXIV의 중간체는 하기 화학식 XXV의 중간체:

[화학식 XXV]

(여기서, P²는 화학식 X에서 정의된 바와 같음)를, 필요한 경우 적합한 염기, 예를 들어, 트리에틸아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, CH₂Cl₂에서, 적합한 온도, 예를 들어, 0℃ 또는 실온에서, 적합한 시약, 예를 들어, 메실 클로라이드 또는 티오닐 클로라이드와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXV의 중간체는 하기 화학식 XXVI의 중간체:

[화학식 XXVI]

(여기서, P²는 화학식 X에서 정의된 바와 같음)를, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 탈보호제, 예를 들어, TBAF와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXVI의 중간체는 에틸 5-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-1H-피라졸-3-카르복실레이트를, 적합한 염기, 예를 들어, 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 0℃ 또는 실온에서, 적합한 보호기 전구체, 예를 들어, 파라메톡시벤질 클로라이드, 디메톡실벤질 클로라이드, 또는 또한 적합한 알킬 할라이드, 예를 들어, 메틸 요오다이드와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

대안적으로, 화학식 XXVI의 중간체는 에틸 5-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-1H-피라졸-3-카르복실레이트를, 적합한 촉매, 예를 들어, p-톨루엔술폰산(PTSA)의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 테트라히드로푸란(THF) 또는 CH₂Cl₂에서, 적합한 온도, 예를 들어,

0℃ 또는 실온에서, 적합한 보호기 전구체, 예를 들어, 3,4-디히드로-2H-피란과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

대안적으로, 화학식 VI의 중간체는 하기 화학식 XXVII의 중간체:

[화학식 XXVII]

(여기서, X는 화학식 I-a에서 정의된 바와 같으며, P²는 적합한 보호기, 예를 들어, 테트라히드로피라닐(THP)이거나, 또한 적합한 알킬 치환체, 예를 들어, 메틸일 수 있으며, L¹은 적합한 이탈기, 예를 들어, 메실레이트임)를, 적합한 염기, 예를 들어, K₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, 아세토니트릴에서, 적합한 온도, 예를 들어, 80℃에서, 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXVII의 중간체는 하기 화학식 XXVIII의 중간체:

[화학식 XXVIII]

(여기서, L²는 적합한 이탈기 예를 들어, 요오다이드임)를, 적합한 염기, 예를 들어, K₂CO₃의 존재 하에, 적합한 촉매 예를 들어, PPh₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, 메탄올 또는 THF, 또는 이들의 혼합물의 존재 하에, 적합한 온도, 예를 들어, 0℃ 또는 실온에서, 3-(아세틸티오)나프탈렌-1-일 아세테이트와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXVIII의 중간체는 하기 화학식 XXIX의 중간체:

[화학식 XXIX]

를 먼저, 적합한 염기, 예를 들어, DIPEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, THF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 0℃ 또는 실온에서, 적합한 활성화제, 예를 들어, 메실 무수물과 반응시키고; 그 후, 적합한 용매, 예를 들어, THF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 수득된 중간체 비스-메실레이트를 적합한 할라이드, 예를 들어, 요오드화나트륨과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXIX의 중간체는 하기 화학식 XXX의 중간체:

[화학식 XXX]

(여기서, P¹ 및 P²는 적합한 보호기, 예를 들어, TBDMS 또는 TBDPS임)를, 적합한 용매, 예를 들어, THF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 적합한 탈보호제, 예를 들어, TBAF와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXX의 중간체는 하기 화학식 XXXI의 중간체:

[화학식 XXXI]

(여기서, X'는 적합한 활성화/보호 형태의 X, 예를 들어, 티오아세테이트임)를, 적합한 염기, 예를 들어, K₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, MeOH에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 화학식 XI의 중간체와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

대안적으로, 화학식 XXX의 중간체는 화학식 XXXI의 중간체(여기서, X'는 적합한 활성화/보호 형태의 X, 예를 들어, 2-니트로페닐술폰아미드임)를, 적합한 시약, 예를 들어, DEAD 또는 DBAD의 존재 하에, 그리고 적합한 포스핀, 예를 들어, 트리페닐포스핀(PPh₃)의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, THF, 톨루엔, 또는 이들의 혼합물에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온, 또는 60℃에서, 화학식 XV의 중간체와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

X'가 S(황)의 전구체인 화학식 XXXI의 중간체는 하기 화학식 XXXII의 중간체:

[화학식 XXXII]

를 먼저, 적합한 염기, 예를 들어, Et₃N의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, THF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 또는 실온에서, 적합한 활성화제, 예를 들어, MsCl과 반응시키고; 그 후, 적합한 용매, 예를 들어, DMF 또는 THF, 또는 이들의 혼합물에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온에서, 수득된 활성화 중간체를 적합한 X' 공급원, 예를 들어, 티오아세트산칼륨과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

대안적으로, X'가 NR^x의 전구체인 화학식 XXXI의 중간체는 화학식 XXXII의 중간체를, 적합한 시약, 예를 들어, DEAD 또는 DBAD의 존재 하에, 그리고 적합한 포스핀, 예를 들어, 트리페닐포스핀(PPh₃)의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어, THF, 톨루엔, 또는 이들의 혼합물에서, 적합한 온도, 예를 들어, 실온, 또는 60℃에서, 적합한 X' 전구체, 예를 들어, 2-니트로페닐술폰아미드와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXXII의 중간체는 화학식 XXVI의 중간체를, 적합한 용매, 예를 들어, THF에서, 적합한 온도, 예를 들어, 0℃에서, 적합한 환원제, 예를 들어, DIBAL-H와 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

화학식 XXVII의 중간체는 또한 다른 피라졸 질소에 보호기 P₂를 가질 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 이 경우 중간체(XXVI)의 해당 이성질체에서 시작하여 유사한 합성 경로를 사용할 수 있다.

적절한 작용기가 존재할 경우, 다양한 화학식의 화합물 또는 이의 제조에 사용된 임의의 중간체는 축합, 치환, 산화, 환원, 또는 절단 반응을 이용하는 하나 이상의 표준 합성 방법에 의해 추가로 유도체화될 수 있음을 알 것이다. 특정 치환 접근법에는 통상의 알킬화, 아릴화, 헤테로아릴화, 아실화, 술포닐화, 할로겐화, 질화, 포르밀화 및 커플링 절차가 포함된다.

화학식 I의 화합물은 당업계에 공지된 분할 절차에 따라 서로 분리될 수 있는 거울상 이성질체의 라세미 혼합물의 형태로 합성될 수 있다. 염기성 질소 원자를 포함하는 화학식 I의 라세미 화합물은 적합한 키랄 산과의 반응에 의해 상응하는 부분입체 이성질체 염 형태들로 전환될 수 있다. 상기 부분입체 이성질체 염 형태는 후속적으로, 예를 들어 선택적 또는 분별 결정화에 의해 분리되고, 거울상 이성질체는 알칼리에 의해 이로부터 유리된다. 화학식 I의 화합물의 거울상 이성질체 형태를 분리하는 대안적인 방식은 키랄 고정상을 사용하는 액체 크로마토그래피를 포함한다. 상기 순수한 입체화학적 이성질체 형태는 또한, 반응이 입체특이적으로 일어난다면, 적절한 출발 물질의 상응하는 순수한 입체화학적 이성질체 형태로부터 유도될 수 있다.

본 발명의 화합물의 제조에 있어서, 중간체의 원위 작용체(예를 들어, 1차 또는 2차 아민)의 보호가 필요할 수 있다. 이와 같은 보호의 필요성은 원위 작용체의 성질과 제조 방법의 조건에 따라서 달라질 것이다. 적합한 아미노-보호기 (NH-Pg)는 아세틸, 트리플루오로아세틸, t-부톡시카르보닐(Boc), 벤질옥시카르보닐(CBz) 및 9-플루오레닐메틸렌옥시카르보닐(Fmoc)을 포함한다. 이러한 보호의 필요성은 당업자에 의해 쉽게 결정된다. 보호기 및 이들의 사용에 대한 일반적인 설명에 대해서는 문헌[T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 4th ed., Wiley, Hoboken, New Jersey, 2007]을 참조한다.

화합물의 약리학적 특성

본 발명의 화합물은 MCL-1 항아폽토시스 활성과 같은 하나 이상의 MCL-1 활성을 억제하는 것으로 밝혀졌다.

MCL-1 억제제는 프로아폽토시스 이펙터인 Bak 및 Bax 또는 BH3 전용 감작체, 예컨대 Bim, Noxa 또는 Puma에 결합하고 이를 억제하는 능력과 같은 하나 이상의 MCL-1 기능을 차단하는 화합물이다.

본 발명의 화합물은 MCL-1 생존 촉진 기능을 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 암과 같은 면역계의 영향에 민감한 질환의 치료 및/또는 예방, 특히 치료에 유용할 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 예를 들어 면역 조절을 통해 항종양 특성을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 여기서, 암은 본원에 기술된 것으로부터 선택되며, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체(바람직하게는 인간)에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체, 바람직하게는 인간에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함하며, 암은 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), B 세포 급성 림프모구성 백혈병, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 방광암, 유방암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 결장 선암종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 식도암, 여포성 림프종, 위암, 두경부암(두경부 편평 세포 암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 조혈암, 간세포 암종, 호지킨 림프종, 간암, 폐암(폐 선암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 림프종, 수모세포종, 흑색종, 미결정 유의성 단클론 감마병증, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 골수섬유증, 골수증식성 신생물, 난소암, 난소 투명 세포 암종, 난소 장액성 낭선종, 췌장암, 진성 적혈구 증가증, 전립선암, 직장 선암종, 신세포 암종, 무증상 다발성 골수종, T 세포 급성 림프모구성 백혈병, T 세포 림프종, 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체, 바람직하게는 인간에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함하며, 암은 바람직하게는 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), B 세포 급성 림프모구성 백혈병, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 유방암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 조혈암, 호지킨 림프종, 폐암(폐 선암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 림프종, 미결정 유의성 단클론 감마병증, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 골수섬유증, 골수증식성 신생물, 무증상 다발성 골수종, T 세포 급성 림프모구성 백혈병, T 세포 림프종 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체, 바람직하게는 인간에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함하며, 암은 선암종, 양성 단클론성 감마병증, 담도암(담관암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 방광암, 유방암(유방의 선암종, 유방의 유두상 암종, 유선암, 유방의 수질 암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 뇌암(수막종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 신경교종(성상세포종, 핍지교종; 수모세포종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 기관지암, 자궁경부암(자궁경부 선암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 척색종, 융모막암종, 결장직장암(결장암, 직장암, 결장직장 선암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 상피 암종, 내피 육종(카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 다발성 특발성 출혈성 육종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 자궁내막암(자궁암, 자궁 육종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 식도암(식도 선암종, 바렛 선암종(Barrett' s adenocarinoma)을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 유잉 육종(Ewing sarcoma), 위암(위 선암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 위장관 기질 종양(GIST), 두경부암(두경부 편평 세포 암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 조혈암(백혈병, 예컨대 급성 림프구성 백혈병(ALL)(B 세포 ALL, T 세포 ALL을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 급성 골수세포 백혈병(AML)(예를 들어, B 세포 AML, T 세포 AML), 만성 골수세포 백혈병(CML)(예를 들어, B 세포 CML, T 세포 CML) 및 만성 림프구성 백혈병(CLL)(예를 들어, B 세포 CLL, T 세포 CLL), 림프종, 예컨대 호지킨 림프종(HL)(B 세포 HL, T 세포 HL) 및 비호지킨 림프종(NHL)(예를 들어, B 세포 NHL, 예컨대 미만성 거대 세포 림프종(DLCL)(예를 들어, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)), 여포성 림프종, 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종(CLL/SLL), 외투 세포 림프종(MCL), 변연부 B 세포 림프종(점막 관련 림프 조직(MALT) 림프종, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 비장 변연부 B 세포 림프종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 원발성 종격동 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 림프형질세포성 림프종(발덴스트롬 거대글로불린혈증을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 면역모세포성 대세포 림프종, 모양 세포성 백혈병(HCL), 전구체 B 림프모구성 림프종 및 원발성 중추신경계(CNS) 림프종, T 세포 NHL, 예컨대 전구체 T 림프모구성 림프종/백혈병, 말초 T 세포 림프종(PTCL)(예를 들어, 피부 T 세포 림프종(CTCL)(균상식육종, 세자리(Sezary) 증후군을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종, 결절외 자연 살해 T 세포 림프종, 장병증형 T 세포 림프종, 피하 지방층염-유사 T 세포 림프종, 역형성 대세포 림프종, 상기 기술된 바와 같은 하나 이상의 백혈병/림프종의 혼합, 다발성 골수종(MM), 중쇄 질환(알파 쇄 질환, 감마 쇄 질환, 뮤 쇄 질환을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 면역세포성 아밀로이드증, 신장암(빌름스 종양(Wilms' tumor)으로도 알려진 신모세포종, 신세포 암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 간암(간세포암(HCC), 악성 간암을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 폐암(기관지 암종, 비소세포폐암(NSCLC), 편평세포 폐암(SLC), 폐의 선암종, 루이스 폐암종, 폐 신경내분비 종양, 전형적 유암종, 비정형 유암종, 소세포폐암(SCLC) 및 대세포 신경내분비 암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 골수이형성 증후군(MDS), 골수증식성 장애(MPD), 진성 적혈구 증가증(PV), 본태성 혈소판 증가증(ET), 골수섬유증(MF)으로도 알려진 원인불명 골수화생(AMM), 만성 특발성 골수섬유증, 만성 골수구성 백혈병(CML), 만성 호중구성 백혈병(CNL), 과호산구 증후군(HES), 난소암(낭선암종, 난소 배아 암종, 난소 선암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 췌장암(췌장 선암종, 관내 유두상 점액성 신생물(IPMN), 췌도 세포 종양을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 전립선암(전립선 선암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 피부암(편평 세포 암종(SCC), 각화극세포종(KA), 흑색종, 기저 세포 암종(BCC)을 포함하지만 이에 한정되지 않음) 및 연조직 육종(예를 들어, 악성 섬유성 조직구종(MFH), 지방육종, 악성 말초 신경초 종양(MPNST), 연골육종, 섬유육종, 점액육종)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체, 바람직하게는 인간에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함하며, 암은 양성 단클론성 감마병증, 유방암(유방의 선암종, 유방의 유두상 암종, 유선암, 유방의 수질 암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 조혈암(백혈병, 예컨대 급성 림프구성 백혈병(ALL)(B 세포 ALL, T 세포 ALL을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 급성 골수세포 백혈병(AML)(예를 들어, B 세포 AML, T 세포 AML), 만성 골수세포 백혈병(CML)(예를 들어, B 세포 CML, T 세포 CML) 및 만성 림프구성 백혈병(CLL)(예를 들어, B 세포 CLL, T 세포 CLL), 림프종, 예컨대 호지킨 림프종(HL)(B 세포 HL, T 세포 HL) 및 비호지킨 림프종(NHL)(예를 들어, B 세포 NHL, 예컨대 미만성 거대 세포 림프종(DLCL)(예를 들어, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)), 여포성 림프종, 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종(CLL/SLL), 외투 세포 림프종(MCL), 변연부 B 세포 림프종(점막 관련 림프 조직(MALT) 림프종, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 비장 변연부 B 세포 림프종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 원발성 종격동 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 림프형질세포성 림프종(발덴스트롬 거대글로불린혈증을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 면역모세포성 대세포 림프종, 모양 세포성 백혈병(HCL), 전구체 B 림프모구성 림프종 및 원발성 중추신경계(CNS) 림프종, T 세포 NHL, 예컨대 전구체 T 림프모구성 림프종/백혈병, 말초 T 세포 림프종(PTCL)(예를 들어, 피부 T 세포 림프종(CTCL)(균상식육종, 세자리(Sezary) 증후군을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 혈관면역모세포성 T 세포 림프종, 결절외 자연 살해 T 세포 림프종, 장병증형 T 세포 림프종, 피하 지방층염-유사 T 세포 림프종, 역형성 대세포 림프종, 상기 기술된 바와 같은 하나 이상의 백혈병/림프종의 혼합, 다발성 골수종(MM), 중쇄 질환(알파 쇄 질환, 감마 쇄 질환, 뮤 쇄 질환을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 면역세포성 아밀로이드증, 간암(간세포암(HCC), 악성 간암을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 폐암(기관지 암종, 비소세포폐암(NSCLC), 편평세포 폐암(SLC), 폐의 선암종, 루이스 폐암종, 폐 신경내분비 종양, 전형적 유암종, 비정형 유암종, 소세포폐암(SCLC) 및 대세포 신경내분비 암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음), 골수이형성 증후군(MDS), 골수증식성 장애(MPD), 및 전립선암(전립선 선암종을 포함하지만 이에 한정되지 않음)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체, 바람직하게는 인간에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함하며, 암은 전립선암, 폐암, 췌장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 흑색종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML) 및 급성 림프모구성 백혈병(ALL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 암의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체, 바람직하게는 인간에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함하며, 암은 다발성 골수종이다.

본 발명에 따른 화합물 또는 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물은 또한, 면역 조절제, 예컨대 PD1/PDL1 면역 체크포인트 축의 억제제, 예를 들어 PD-1에 결합하고/하거나 이의 활성을 억제하거나 또는 PD-L1 및/또는 CTLA-4에 결합하고/하거나 이의 활성을 억제하는 항체(또는 펩티드) 또는 종양 관련 항원을 표적화하는 조작된 키메라 항원 수용체 T 세포(CART)와 조합되어 치료적 응용을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 화합물 또는 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물은 또한, 방사선요법 또는 화학요법제(항암제를 포함하지만 이에 한정되지 않음), 또는 암에 걸린 대상체의 암을 치료하기 위한 또는 상기 대상체의 암의 치료와 관련된 부작용의 치료 또는 예방을 위한, 암에 걸린 대상체에게 투여되는 임의의 다른 의약품과 조합될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물 또는 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물은 또한, 면역 반응을 자극하거나 향상시키는 다른 약제, 예컨대 백신과 조합될 수 있다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 암(여기서, 암은 본원에 기술된 것으로부터 선택됨)의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체(바람직하게는 인간)에게 치료적 유효량의 공동요법제 또는 병용 요법제를 투여하는 단계를 포함하며; 여기서, 공동요법제 또는 병용 요법제는 본 발명의 화학식 I의 화합물 및 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 항암제(들)를 포함한다: (a) 면역 조절제(예컨대 PD1/PDL1 면역 체크포인트 축의 억제제, 예를 들어 PD-1에 결합하고/하거나 이의 활성을 억제하거나 또는 PD-L1 및/또는 CTLA-4에 결합하고/하거나 이의 활성을 억제하는 항체(또는 펩티드); (b) 종양 관련 항원을 표적화하는 조작된 키메라 항원 수용체 T 세포(CART); (c) 방사선요법; (d) 화학요법; 및 (e) 면역 반응을 자극하거나 향상시키는 약제, 예컨대 백신.

본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 MCL-1 활성의 억제에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 달리 언급되지 않는 한, 용어 "항암제"는 "종양 세포 성장 방지제" 및 "항신생물제"를 포함할 것이다.

본 발명은 상기 언급된 질환(바람직하게는 암)의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 상기 언급된 질환(바람직하게는 암)의 치료 및/또는 예방을 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 질환, 바람직하게는 암(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료 및/또는 예방을 위한, 구체적으로 치료를 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 본원에 기술된 바와 같은 질환, 바람직하게는 암(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한, 구체적으로 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 MCL-1 매개된 질환 또는 병태, 바람직하게는 암, 더 바람직하게는 본원에 기술된 바와 같은 암(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료 및/또는 예방을 위한, 구체적으로 치료를 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 MCL-1 매개된 질환 또는 병태, 바람직하게는 암, 더 바람직하게는 본원에 기술된 바와 같은 암(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한, 구체적으로 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 MCL-1 억제용 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 암, 바람직하게는 본원에 기술된 바와 같은 암의을 치료 및/또는 예방을 위한, 구체적으로 치료를 위한 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다. 더 구체적으로, 암은 MCL-1의 억제에 반응하는 암(예를 들어, 다발성 골수종)이다.

본 발명은 상기 언급된 질환 병태 중 어느 하나의 치료 및/또는 예방을 위한, 구체적으로 치료를 위한 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 상기 언급된 질환 병태 중 어느 하나의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물에 관한 것이다.

화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물은 상기 언급된 질환 중 어느 하나의 치료 및/또는 예방을 위해 대상체, 바람직하게는 인간에게 투여될 수 있다.

화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물의 유용성의 관점에서, 상기 언급된 질환 중 임의의 것을 앓고 있는 대상체, 바람직하게는 포유류, 예컨대 인간을 치료하는 방법; 또는 대상체, 인간에서 상기 언급된 질환 중 임의의 것의 진행을 늦추는 방법; 또는 대상체, 바람직하게는 포유류, 예컨대 인간이 상기 언급된 질환 중 어느 하나를 앓는 것을 예방하는 방법이 제공된다.

상기 방법은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물을 대상체, 예컨대 인간에게 투여(즉, 전신 또는 국소 투여, 바람직하게는 경구 또는 정맥내 투여, 더 바람직하게는 경구 투여)하는 단계를 포함한다.

당업자는, 본 발명의 화합물의 치료적 유효량이 치료 활성을 갖기에 충분한 양이고, 이 양은 특히, 질환의 유형, 치료용 제형 중 화합물의 농도, 및 환자의 상태에 따라 달라지는 것임을 인식할 것이다. 일 실시 형태에서, 치료적 유효량은 약 0.005 mg/kg 내지 100 mg/kg일 수 있다.

본원에서 활성 성분으로도 지칭되고, 치료 효과를 달성하기 위해 필요한 본 발명에 따른 화합물의 양은 사례별로 달라질 수 있는데, 예를 들어 특정 화합물, 투여 경로, 수용자의 연령과 상태, 그리고 치료 중인 특정 장애 또는 질환에 따라서 달라질 수 있다. 본 발명의 방법은 또한, 일일 1회 내지 4회 섭취의 요법으로 활성 성분을 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 본 발명의 이러한 치료 방법에서, 본 발명에 따른 화합물은 바람직하게는 투여 전에 제형화된다.

본 발명은 또한 본원에 언급된 장애(바람직하게는 본원에 기술된 바와 같은 암)를 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 및 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.

활성 성분(예를 들어, 본 발명의 화합물)을 단독으로 투여하는 것이 가능하지만, 이를 제약 조성물로서 투여하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명은 추가로, 본 발명에 따른 화합물을 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 담체 또는 희석제는 조성물의 다른 성분과 상용성이고 이의 수용자에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용가능"하여야 한다.

본 발명의 제약 조성물들은 제약업계에 널리 알려진 임의의 방법들에 의해, 예를 들어, 예컨대 문헌[Gennaro et al. Remington's Pharmaceutical Sciences (18^th ed., Mack Publishing Company, 1990, 특히 Part 8 : Pharmaceutical preparations and their Manufacture 참조)]에 기술된 것과 같은 방법들을 사용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물은 단독으로, 또는 하나 이상의 추가 치료제와 조합되어 투여될 수 있다. 병용 요법은 본 발명에 따른 화합물 및 하나 이상의 추가의 치료제를 포함하는 단일한 약학적 투여 형태를 투여하는 것뿐만 아니라, 본 발명에 따른 화합물 및 그 자체가 별개의 약학적 투여 제형으로 된 각각의 추가의 치료제를 투여하는 것도 포함한다.

그러므로, 일 실시 형태에서, 본 발명은 암 환자의 치료에서의 동시, 별개 또는 순차적 사용을 위한 병용 제제로서, 본 발명에 따른 화합물을 제1 활성 성분으로서, 그리고 하나 이상의 항암제(들)를 추가적인 것으로서, 추가의 활성 성분으로서 포함하는 생성물에 관한 것이다.

상기 하나 이상의 기타 항암제 및 본 발명에 따른 화합물은 동시에(예를 들어, 개별 또는 일원화 조성물로) 또는 어느 순서든 순차적으로 투여될 수 있다. 일 실시 형태에서, 유리한 효과 또는 상승 효과 달성을 보장하기에 충분한 양 및 방식으로 상기 보장에 충분한 기간 내에 상기 둘 이상의 화합물이 투여된다. 조합물의 바람직한 투여의 방법 및 순서, 및 각각의 성분에 대한 각각의 투여량 및 섭생법은 투여되는 특정한 다른 항암제 및 본 발명의 화합물, 그 투여 경로, 치료될 특정 병태, 구체적으로 종양, 및 치료받는 특정 숙주에 의존할 것임이 이해될 것이다.

다음의 실시예는 본 발명을 추가로 예시한다.

실시예

본 발명의 화합물을 제조하기 위한 몇 가지 방법이 하기 실시예에 예시되어 있다. 달리 언급되지 않는 한, 모든 출발 물질은 상업적 공급처로부터 입수하여 추가 정제 없이 사용하거나, 또는 대안적으로, 잘 알려진 방법을 사용하여 당업자에 의해 합성될 수 있다.

당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 나타낸 프로토콜을 사용하여 합성된 화합물은 잔존 용매 또는 소량의 불순물을 함유할 수 있다.

당업자는 아래 실험 프로토콜에서 명시적으로 언급되지 않았다 하더라도, 전형적으로 컬럼 크로마토그래피 정제 이후 원하는 분획을 수집하고 용매를 증발시켰음을 인식할 것이다.

입체화학이 명시되지 않은 경우, 이것은 달리 명시되지 않거나 문맥으로부터 명백하지 않은 한, 이것이 입체이성질체의 혼합물임을 의미한다.

중간체의 제조

다음 반응 단계에서 조 물질로서 또는 부분적으로 정제된 중간체로서 사용한 중간체의 경우, 일부 경우에 다음 반응 단계에서 이러한 중간체에 대한 몰량을 언급하지 않거나 또는 대안적으로 다음 반응 단계에서 이러한 중간체에 대한 추정된 몰량 또는 이론적 몰량을 나타낸다(아래에 설명된 반응 프로토콜에서).

메틸 (E)-2-(2-(3- 브로모 -4- 클로로페닐 ) 히드라조노 ) 부타노에이트 (중간체 1)

HCl (93 mL, MeOH 중 1.25 M) 중 (3-브로모-4-클로로페닐)히드라진 (4.655 g, 18.047 mmol) 및 메틸 2-옥소부타노에이트 (1.02 당량)의 용액을 90분 동안 환류시켰다. 반응물을 실온까지 냉각시키고 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 5.768 g의 중간체 1을 갈색 유성 잔사로서 수득하였으며, 이는 수 분 내에 고화되었다. 조 물질을 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

메틸 4- 브로모 -5- 클로로 -3- 메틸 -1H-인돌-2- 카르복실레이트 (중간체 2)

아세트산 (37 mL) 중 중간체 1 (5.768 g, 조 물질)의 현탁액을 70℃까지 가열하였다. 황산 (4.81 mL, 5 당량)을 10분에 걸쳐 적가하였다(발열이 나타났고 침전물이 형성되었다). 추가로 15분 후에, 반응물을 실온까지 냉각시킨 다음, 얼음을 첨가하여 0℃까지 냉각시켰다. 고체 침전물을 여과시키고, 여과액이 중성 pH가 될 때까지 물로 세척하였다. 고체를 차가운 헵탄/디이소프로필에테르 (8/2, 50 mL)로 미분화하여(triturated) 황백색(off-white) 고체를 수득하였다. 이러한 고체를 분취용 SFC (고정상: Chiralpak Daicel IG 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% i-PrNH₂)로 정제하여 중간체 2 (1.745 g, 32%)를 수득하였다.

메틸 5- 클로로 -4-(3-(((4-메톡시벤질) 옥시 ) 메틸 )-1,5-디메틸-1H- 피라졸 -4-일)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 3)

중간체 2 (500 mg), 3-(((4-메톡시벤질)옥시)메틸)-1,5-디메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (800 mg, 1.3 당량), Pd₂(dba)₃ (76 mg, 0.05 당량), 및 S-Phos (68 mg, 0.1 당량)를 N₂ 하에 압력관 내에 칭량하였다. 디옥산 (10.5 mL) 및 포화 NaHCO₃ 수용액 (4.5 mL)을 첨가하고 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, EtOAc (40 mL) 및 물 (40 mL)로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 혼합물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (40 g, 구배: 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 4/6까지)로 정제하였다. 중간체 3 (790 mg, 89%)을 황색을 띠는 오일로서 수득하였고, 이것은 정치 시에 고화되었다. 중간체 3을 다음 반응 단계에서 그대로 사용하였다.

메틸 5- 클로로 -4-(3-( 히드록시메틸 )-1,5-디메틸-1H- 피라졸 -4-일)-3- 메틸 -1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 4)

트리플루오로메탄술폰산 (0.888 mL, 5 당량)을 DCM (25 mL) 중 중간체 3 (1080 mg)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 DCM (100 mL)로 희석시키고 포화 NaHCO₃ (30 mL)로 처리하였다. 유기 상을 분리하고 수성 상을 DCM (50 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 중간체 4 (625 mg, 89%)를 황색을 띠는 고체로 수득하였고 다음 단계에 그대로 사용하였다.

메틸 1-(3-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )프로필)-5- 클로로 -4-(3-( 히드록시 메틸)-1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 5)

탄산세슘 (732 mg, 1.25 당량)을 질소 분위기 하에서 DMF (10 mL) 중 중간체 4 (625 mg)의 용액에 첨가하였다. (3-브로모프로폭시)(tert-부틸)디메틸실란 (0.458 mL, 1.1 당량)을 적가하고 반응물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응물을 EtOAc (100 mL) 및 물 (50 mL)로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고 염수 (2 x 30 mL)로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc (50 mL)로 추출하였다. 그 후, 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 혼합물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (40 g, 구배: 헵탄 100%에서 EtOAc 100%까지)로 정제하여 중간체 5 (360 mg, 38%)를 백색 고체로서 수득하였다.

메틸 1-(3-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )프로필)-5- 클로로 -4-(1,5-디메틸-3-(((메틸술포닐)옥시)메틸)-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 6)

메실 클로라이드 (0.12 mL, 2.5 당량)를 질소 하에 0℃에서 교반시키는 DCM (10 mL) 중 중간체 5 (320 mg) 및 트리에틸아민 (0.256 mL, 3 당량)의 용액에 적가하였다. 그 후, 반응물을 실온까지 가온되게 하고 실온에서 교반시켰다. 추가의 트리에틸아민 (3 당량) 및 메실 클로라이드 (2.5 당량)를 첨가하고 실온에서 1시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 DCM (10 mL)로 희석시키고 포화 수성 NaHCO₃ (5 mL)으로 처리하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 중간체 6 (368 mg, 정량적)을 수득하였고, 다음 단계에 그대로 사용하였다.

메틸 1-(3-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )프로필)-5- 클로로 -4-(3-( 요오도메 틸)-1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 7)

요오드화칼륨 (1.021 g, 10 당량)을 아세토니트릴 (5 mL) 중 중간체 6 (368 mg)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석시키고 Dicalite®에서 여과시켰다. 물 (25 mL)을 여과액에 첨가하고, 약간의 교반 후에, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (25 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 중간체 7을 수득하였고, 다음 단계에 그대로 사용하였다.

메틸 5-(((4-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )나프탈렌-2-일) 티오 ) 메틸 )-1- 메 틸-1H-피라졸-3-카르복실레이트 (중간체 8)

이미다졸 (258 mg, 1.4 당량)을 DMF (17.8 mL) 중 메틸 5-(((4-히드록시나프탈렌-2-일)티오)메틸)-1-메틸-1H-피라졸-3-카르복실레이트 (890 mg) 및 TBDMSCl (511 mg, 1.25 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 48시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL) 및 물 (50 mL)로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고 염수 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc (50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 혼합물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (40 g, 구배: 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 6/4까지)로 정제하여 중간체 8 (1.24 g, 정량적)을 수득하였다.

(5-(((4-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )나프탈렌-2-일) 티오 ) 메틸 )-1- 메틸 -1H-피라졸-3-일)메탄올 (중간체 9)

DIBALH (헵탄 중 1M, 5.82 mL, 2.5 당량)를 질소 분위기 하에 0℃에서 THF (40 mL) 중 중간체 8의 용액에 적가하고 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. 추가의 DIBALH (1 당량)를 첨가하고 반응 혼합물 10분 동안 추가로 교반시켰다. 반응물을 습윤 THF (40 mL)로 처리하고, 수 분간 교반시킨 후에, 물 (10 mL, 초기 적가)로 처리하였다. 혼합물을 실온까지 가온되게 한 다음, Celite®를 첨가하였다. 5분간 교반시킨 후에, EtOAc로 세척하여 혼합물을 여과시켰다. 여과액을 MgSO₄로 처리하고, 여과시키고, 증발시켜, 조 중간체 9 (892 mg, 92%)를 무색 페이스트로서 수득하였고, 이것은 정치 시에 고화되었다. 중간체 9를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

5-(((4-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )나프탈렌-2-일) 티오 ) 메틸 )-3-( 클로로 메틸)-1-메틸-1H-피라졸 (중간체 10)

티오닐 클로라이드 (0.187 mL, 1.2 당량)를 질소 분위기 하에 0℃에서 교반시키는 DCM (20 mL)중 중간체 9 (892 mg)의 용액에 적가하였다. 그 후, 반응물을 실온까지 가온되게 하고 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, DCM (20 mL)로 희석시키고, NaHCO₃의 포화 수용액 (20 mL)으로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 중간체 10 (931 mg, 정량적)을 무색 오일로서 수득하였고 추가 정제 없이 사용하였다.

S-((5-(((4-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )나프탈렌-2-일) 티오 ) 메틸 )-1- 메틸 -1H-피라졸-3-일)메틸) 에탄티오에이트 (중간체 11)

티오아세트산칼륨 (295 mg, 1.2 당량)을 질소 분위기 하에 DMF (10 mL) 중 중간체 10 (931 mg)의 용액에 첨가하였다 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL) 및 물 (30 mL)로 희석시켰다. 수성 층을 분리하고 유기 층을 염수 (2 x 30 mL)로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc (50 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 혼합물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (40 g, 구배: 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 6/4까지)로 정제하여 중간체 11 (900 mg, 2 단계에 걸쳐 88%)을 무색 페이스트로서 수득하였다.

메틸 1-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로필)-5-클로로-4-(3-((((5-(((4-히드록시나프탈렌-2-일)티오)메틸)-1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)티오)메틸)-1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 12)

탄산칼륨 (170 mg, 2 당량)을 질소-탈기된 MeOH (7 mL) 중 중간체 7 (387 mg, 조 물질) 및 중간체 11 (407 mg, 1.4 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고 잔사를 EtOAc (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 혼합물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (12 g, 구배: 헵탄 100%에서 EtOAc 100%까지)로 정제하여 중간체 12의 2개의 배치(290 mg(불순물 함유); 및 135 mg(순수))를 수득하였다.

메틸 5-클로로-4-(3-((((5-(((4-히드록시나프탈렌-2-일)티오)메틸)-1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)티오)메틸)-1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)-1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 13)

TBAF (THF 중 1 M, 0.247 mL, 1.5 당량)를 질소 분위기 하에서 THF (5 mL) 중 중간체 12 (135 mg)의 용액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 잔사를 EtOAc (20 mL)에 용해시키고, 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 혼합물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (12 g, 구배: DCM 100%에서 DCM/MeOH 95/5까지)로 정제하여 중간체 13 (96 mg, 83% 수율)을 백색 발포형(foamy) 고체로서 수득하였다.

메틸 1 ⁵ -클로로-1 ³ ,2 ¹ ,2 ⁵ ,6 ¹ -테트라메틸-1 ¹ H,2 ¹ H,6 ¹ H-10-옥사-4,8-디티아-1(4,1)-인돌라-2(4,3),6(3,5)-디피라졸라-9(3,1)-나프탈렌아시클로트리데카판-1 ² -카르복실레이트

(중간체 14: S _a 또는 R _a ; 하나의 회전장애 이성질체 그러나 절대적인 입체화학은 결정되지 않음)

(중간체 15: R _a 또는 S _a ; 하나의 회전장애 이성질체 그러나 절대적인 입체화학은 결정되지 않음)

톨루엔 (6 mL) 및 THF (0.4 mL) 중 중간체 13 (100 mg) 및 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트 (65 mg, 2 당량)의 용액을 주사기 펌프 (0.075 ml/min)로 톨루엔 (4 mL) 중 트리페닐포스핀 (75 mg, 2 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 잔사를 EtOAc (40 mL)에 용해시키고 물 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (40 g, 구배: DCM 100%에서 DCM/MeOH 95/5까지)로 정제하였다. 생성물이 여전히 트리페닐포스핀 옥시드로 오염되어 있었기 때문에 회전장애 이성질체를 분리하기 위해서, 분취용 SFC (고정상: Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% i-PrNH₂)로 정제하여, 중간체 14 (S_a또는 R_a 회전장애 이성질체, 27 mg, 28%) 및 중간체 15 (R_a또는 S_a 회전장애 이성질체, 29 mg, 30%)를 수득하였다.

메틸 1-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로필)-5-클로로-4-(1,5-디메틸-3-(((2-니트로페닐)술폰아미도)메틸)-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 16)

DCM (1 mL) 중 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트 (78 mg, 2 당량)의 용액을 질소 분위기 하에 실온에서 교반시키는 DCM (2.5 mL) 중 중간체 5 (88 mg), 2-니트로벤젠술폰아미드 (38 mg, 1.1 당량), 및 트리페닐포스핀 (89 mg, 2 당량)의 현탁액에 적가하였다. 15분 후에, 반응 혼합물을 실리카 겔 컬럼 (12 g)에 직접 로딩하고, 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 1/1까지의 구배로 용리시켜 생성물을 정제하였다. 중간체 16 (120 mg, 정량적)을 황색 고체로서 수득하였다.

3-((( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-5-( 클로로메틸 )-1- 메틸 -1H- 피라졸 (중간체 17)

티오닐 클로라이드 (270 μL, 1.2 당량)를 질소 분위기 하에 0℃에서 DCM 중 (3-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-1-메틸-1H-피라졸-5-일)메탄올 (1.18 g, 3.1 mmol)의 용액에 적가하였다. 그 후, 반응물을 실온까지 가온되게 하고 45분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, DCM (30 mL)로 희석시키고, 포화 NaHCO₃ 수용액 (20 mL)으로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 중간체 17 (1.17 g)을 무색 오일로서 수득하였고, 추가 정제 없이 사용하였다.

3-(((3-((( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-1- 메틸 -1H- 피라졸 -5-일) 메틸 )티오)나프탈렌-1-올 (중간체 18)

K₂CO₃을 MeOH 중 중간체 17 (820 mg, 2.05 mmol) 및 3-(아세틸티오)나프탈렌-1-일 아세테이트 (588 mg, 2.26 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔사를 EtOAc (40 mL) 및 물 (25 mL)에 용해시켰다. 유기 층을 분리하고 물 (15 mL) 및 염수 (15 mL)로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc (30 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (24 g, 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 6/4까지의 구배)로 정제하였다. 수득: 분홍색 고체로서의 중간체 18 (825 mg, 74% 수율).

3-((( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 ) 메틸 )-5-(((4-((4-메톡시벤질) 옥시 )나프탈렌-2-일)티오)메틸)-1-메틸-1H-피라졸 (중간체 19)

K₂CO₃ (423 mg, 2 당량)을 질소 분위기 하에서 DMF (8 mL) 중 중간체 18 (825 mg, 1.53 mmol) 및 4-메톡시벤질 클로라이드 (260 μL, 1.25 당량)의 용액에 조금씩 첨가하였다.

반응물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 그 후, 추가의 4-메톡시벤질 클로라이드 (207 μL, 1 당량)를 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반을 계속하였다. 반응물을 EtOAc (50 mL) 및 물 (20 mL)로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고 염수 (2 x 20 mL)로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc (30 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (40 g, 구배: 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 6/4까지)로 정제하였다. 중간체 19 (950 mg)를 갈색을 띠는 페이스트로서 수득하였고 추가 정제 없이 사용하였다.

5-(((4-((4-메톡시벤질) 옥시 )나프탈렌-2-일) 티오 ) 메틸 )-1- 메틸 -1H- 피라졸 -3-일)메탄올 (중간체 20)

TBAF (2.16 mL, 1.5 당량, THF 중 1 M)를 질소 분위기 하에서 건조 THF 중 중간체 19 (950 mg)의 용액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc (60 mL)와 포화 NH₄Cl 수용액 (30 mL) 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (40 g, 헵탄 100%에서 EtOAc 100%까지의 구배)로 정제하였다. 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피(120 g, 구배: DCM 100%에서 DCM/MeOH 96/4까지)에 의한 제2 정제를 수행하여, 중간체 20 (362 mg, 60%)을 백색 고체로서 수득하였다.

메틸 1-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로필)-5-클로로-4-(3-(((N-((5-(((4-((4-메톡시벤질)옥시)나프탈렌-2-일)티오)메틸)-1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-니트로페닐)술폰아미도)메틸)-1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 21)

DCM (2 mL) 중 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트 (81 mg, 1.5 당량)의 용액을 질소 분위기 하에 실온에서 교반시키는 DCM (2 mL) 중 중간체 16 (165 mg), 중간체 20 (108 mg, 1.1 당량), 및 트리페닐포스핀 (92 mg, 1.5 당량)의 현탁액에 15분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 15분 후에, DCM (0.5 mL) 중 트리페닐포스핀 (18 mg, 0.3 당량) 및 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트 (16 mg, 0.3 당량)를 추가로 적가하였다. 용매를 증발시키고 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (40 g, 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 2/8까지의 구배)로 정제하여, 중간체 21을 수득하였다. 다른 배치와 합한 후에, 총 480 mg의 중간체 21을 수득하였고, 다음 단계에 그대로 사용하였다.

메틸 5-클로로-1-(3-히드록시프로필)-4-(3-(((N-((5-(((4-((4-메톡시벤질)옥시)나프탈렌-2-일)티오)메틸)-1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-니트로페닐)술폰아미도)메틸)-1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 22)

TBAF (452 μL, 1.1 당량, THF 중 1 M)를 질소 분위기 하에 실온에서 건조 THF 중 중간체 21 (455 mg)의 용액에 적가하였다. 15분 동안 교반시킨 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc (50 mL)에 용해시키고 물 (25 mL) 및 염수 (25 mL)로 세척하였다. 유기 층을 MgsO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (24 g, DCM 100%에서 DCM/MeOH 95/5까지의 구배)로 정제하여, 중간체 22 (418 mg, 정량적)를 발포형 고체로서 수득하였다.

메틸 5-클로로-4-(3-(((N-((5-(((4-히드록시나프탈렌-2-일)티오)메틸)-1-메틸-1H-피라졸-3-일)메틸)-2-니트로페닐)술폰아미도)메틸)-1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)-1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-인돌-2-카르복실레이트 (중간체 23)

트리플루오로메탄술폰산 (156 μL, 5 당량)을 0℃에서 교반시키는 아니솔 (10 mL) 중 중간체 22 (350 mg)의 용액에 적가하였다. 반응물을 0℃에서 15분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (30 mL)로 희석시키고 포화 NaHCO₃ 수용액 (20 mL)으로 처리하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (40 g, DCM 100%에서 DCM/MeOH 95/5까지의 구배)로 정제하여 중간체 23 (175 mg)을 발포형 백색 고체로서 수득하였다.

메틸 15-클로로-13,21,25,61-테트라메틸-4-((2-니트로페닐)술포닐)-11H,21H,61H-10-옥사-8-티아-4-아자-1(4,1)-인돌라-2(4,3),6(3,5)-디피라졸라-9(3,1)-나프탈렌아시클로트리데카판-12-카르복실레이트 (중간체 24)

톨루엔 (6 mL) 및 THF (0.6 mL) 중 중간체 23 및 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트 (185 mg, 4 당량)의 용액을 70℃에서 교반시키는 톨루엔 (6 mL) 중 트리페닐포스핀 (210 mg, 4 당량)의 용액에 주사기 펌프 (0.1 mL/min)로 첨가하였다. 일단 첨가가 완료되면, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (40 g, DCM 100%에서 DCM/MeOH 98/2까지의 구배)로 정제하여 중간체 24 (95 mg, 55%)를 수득하였다.

메틸 15- 클로로 -13,21,25,61- 테트라메틸 - 11H,21H,61H -10-옥사-8- 티아 -4-아자-1(4,1)-인돌라-2(4,3),6(3,5)-디피라졸라-9(3,1)-나프탈렌아시클로트리데카판-12-카르복실레이트 (중간체 25)

티오페놀 (57 μL, 5 당량)을 질소 분위기 하에서 아세토니트릴 중 중간체 24 및 K₂CO₃ (77 mg, 5 당량)의 현탁액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 추가의 티오페놀 (57 μL, 5 당량) 및 K₂CO₃ (77 mg, 5 당량)을 반응 혼합물에 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 티오페놀 (28 μL, 2.5 당량) 및 K₂CO₃ (39 mg, 2.5 당량)의 추가 첨가 후에, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (20 mL)로 희석시키고 Celite®를 첨가하였다. 혼합물을 Celite®로 여과시키고 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (24 g, DCM 100%에서 DCM/MeOH 90/10까지의 구배)로 정제하여 중간체 25 (48 mg, 64%)를 수득하였다.

메틸 15- 클로로 -13,21,25,61,4- 펜타메틸 - 11H,21H,61H -10-옥사-8- 티아 -4-아자-1(4,1)-인돌라-2(4,3),6(3,5)-디피라졸라-9(3,1)-나프탈렌아시클로트리데카판-12-카르복실레이트

포름알데히드 (16 μL, 3 당량, 물 중 37%)를 실온에서 DCM (0.7 mL) 중 중간체 25 (48 mg) 및 아세트산 (12 μL, 3 당량)의 용액에 첨가하였다. 그 후, 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (45 mg, 3 당량)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 포화 NaHCO₃ 수용액(2.5 mL)으로 켄칭하고 물 (2.5 mL) 및 DCM (10 mL)으로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (2 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (24 g, DCM 100%에서 DCM/MeOH 93/7까지의 구배)로 정제하여, 중간체 26 (회전장애 이성질체들의 혼합물)을 백색 고체 (30 mg, 61% 수율)로서 수득하였다.

중간체 26의 다른 배치를 동일한 방식으로 제조하고, 후속하여 분취용 SFC (고정상: Chiralpak Daicel IG 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, iPrOH + 0.4% i-PrNH₂)에 의해 그의 회전장애 이성질체들로 분리하여 중간체 27 (R_a또는 S_a 회전장애 이성질체) 및 중간체 28 (S_a또는 R_a 회전장애 이성질체)을 수득하였다.

중간체 29

3-(히드록시메틸)-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-카르복실산 에틸 에스테르 [847139-28-0] (5.2 g, 20.45 mmol)를 질소 분위기 하에서 건조 DMF (60 mL)에 용해시켰다. 이미다졸 (2.088 g, 1.5 당량) 및 DMAP (0.25 g, 0.1 당량)를 첨가하였다. TBDPSCl (6.91 mL, 1.3 당량)를 천천히 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (250 mL) 및 물 (200 mL)로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고 염수 (3 x 100 mL)로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc (150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (120 g, 구배: 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 8/2까지)로 정제하여 중간체 29 (11.56 g, 수율: 97%)를 무색 페이스트로서 수득하였다.

중간체 30

LiAlH₄ (THF 중 2 M, 10. 97 mL, 1.1 당량)를 질소 분위기 하에 0℃에서 교반시키는 THF (80 mL) 중 중간체 29 (9.826 g, 19.94 mmol)의 용액에 적가하였다. 15분 후에, 반응 혼합물을 습윤 THF (25 mL)로 처리한 후, 물 (5 mL, 적가함)로 처리한 다음, 실온까지 가온되게 하였다. Celite를 첨가하고 이어서 MgSO₄ 및 EtOAc를 첨가하였다. 5분간 교반시킨 후에, EtOAc로 세척하여 현탁액을 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (120 g, 구배: 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 1/1까지)로 정제하여 중간체 30 (8.54 g, 수율: 95%)을 무색 페이스트로서 수득하였다.

중간체 31

MsCl (1.84 mL, 1.25 당량)을 질소 분위기 하에 0℃에서 교반시키는 THF (85 mL) 중 중간체 30 (8.54 g, 18.95 mmol) 및 Et₃N (3.95 mL, 1.5 당량)의 용액에 적가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 실온까지 가온되게 하고 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. DMF (85 mL) 중 KSAc (3.246 g, 1.5 당량)의 용액을 첨가하고 실온에서 3시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (250 mL) 및 물 (200 mL)로 희석시켰다. 수성 층을 분리하고 유기 층을 염수 (3 x 150 mL)로 세척하였다. 합한 수성 층을 EtOAc (200 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (120 g, 구배: 헵탄 100%에서 헵탄/EtOAc 8/2까지)로 정제하여 중간체 31 (8.78 g, 91%)을 황색 페이스트로서 수득하였다.

중간체 32

건조 MeOH (86 mL) 중 중간체 7 (5.34 g, 1.2 당량) 및 중간체 31 (3.593 g, 7.06 mmol)의 용액을 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 용액을 탈기시키고 질소로 3회 재충전하였다. 그 후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고 K₂CO₃ (1.952 g, 2 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 탈기시키고 질소로 2회 재충전한 후, 실온까지 가온되게 하고 질소 유동 하에 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔사에 EtOAc 및 물을 첨가하였다. 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 중간체 32 (7.47 g, 98%)를 주황색 끈적끈적한 폼(sticky foam)으로 수득하였고, 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 33

TBAF (THF 중 1 M, 11.1 mL, 1.6 당량)를 질소 분위기 하에서 건조 THF (130 mL) 중 중간체 32 (7.47 g, 6.94 mmol)의 교반되는 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반시킨 후에 추가 TBAF (THF 중 1 M, 8 mL, 1.15 당량)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반시킨 후에, 용매를 증발시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고 물에 이어서 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카; MeOH/DCM 0/100 내지 5/95)로 정제하여 중간체 33 (3.51 g, 수율: 82%)을 밝은 황색 고체로 수득하였다.

중간체 34

DIPEA (282 μL, 4 당량)에 이어서 Ms₂O (283 mg, 4 당량)를 THF (14 mL) 중 중간체 33 (250 mg, 0.406 mmol)의 용액에 첨가하고, 0℃까지 냉각시켰다. 일단 첨가가 완료되면, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 후에 NaI (304 mg, 5 당량)를 첨가하였다. 30분 후에, 반응물을 실온까지 가온되게 하고 이 온도에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 희석시키고 티오황산나트륨 포화 수용액 (25 mL), 포화 NH₄Cl (25 mL) 및 염수 (25 mL)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 (배스 온도: 30℃ 분해를 방지하기 위해) 중간체 34 (380 mg, 수율: 66%)를 무색 오일로서 수득하였고, 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 35

중간체 34 (380 mg, 0.378 mmol)을 MeOH (17 mL)와 THF (5 mL)의 혼합물에 용해시켰다. 반응 혼합물을 탈기시키고 질소로 2회 재충전하였다. 에탄티오산, S-[4-(아세틸옥시)-2-나프탈레닐] 에스테르 [2143010-96-0] (98 mg, 1 당량) 및 PPh₃ (10 mg, 0.1 당량)을, 탈기되고 질소로 2회 재충전된 혼합물에 첨가하였다. 일단 모든 시약이 용액 중에 있으면, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시킨 후에 K₂CO₃ (130 mg, 2.5 당량)을 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 탈기시키고 질소로 2회 재충전하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (30 mL) 및 물 (20 mL)로 희석시켰다. 층을 분리하고 수성 층을 DCM (30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 NH₄Cl 수용액 (20 mL)으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (헵탄:EtOAc - 3:1에서 1:3까지)로 정제하여 중간체 35 (160 mg, 수율: 44%)를 황색 폼으로서 수득하였다.

중간체 36

중간체 35 (156 mg, 0.164 mmol)를 ACN (3 mL)에 용해시켰다. 생성된 용액을 주사기 펌프 (0.02 mL/min)를 통해 82℃에서 ACN (3 mL) 중 K₂CO₃ (45 mg, 2 당량)의 용액에 첨가하였다. 첨가가 완료된 후에, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 황색 오일을 수득하였다. 이러한 오일을 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (헵탄:EtOAc - 1:0에서 1:1까지)로 정제하여 중간체 36 (107 mg, 수율: 82%)을 투명한 오일로서 수득하였고, 이는 정치 시에 고화되었다.

중간체 37 및 중간체 38

MeOH 중 HCl(1.25 M, 5 mL, 50 당량)을 THF (5 mL) 중 중간체 36 (100 mg, 0.126 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 백색 고체를 수득하였다. 백색 고체를 분취용 SFC (고정상: Chiralpak Diacel AD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% i-PrNH₂)로 정제하여 중간체 37 (35 mg, 수율: 39%) 및 중간체 38 (34 mg, 수율: 38%)을 투명한 오일로서 수득하였고, 이는 정치 시에 고화되었다.

중간체 39

ACN (300 mL) 중 중간체 2 (37.4 g, 123.6 mmol), (3-브로모프로폭시)-tert-부틸디메틸실란 [89031-84-5] (37.56 g, 1.2 당량), 및 K₂CO₃ (51.25 g, 3 당량)의 혼합물을 80℃에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고 여과시켰다. 필터 케이크를 EtOAc (100 mL)로 세척하였다. 여과액을 농축시키고 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (용리액: 석유 에테르/EtOAc 100/0에서 10/90까지)로 정제하여 중간체 39 (42 g, 71%)를 적색 검으로서 수득하였다.

중간체 40

아세톤 (37 μL, 4 당량) 및 AcOH (14 μL, 2 당량)를 밀봉관에서 DCE (2 mL) 중 중간체 25 (83 mg, 0.124 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반시켰다. NaBH(OAc)₃ (53 mg, 2 당량)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석시키고 Na₂CO₃의 포화 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 중간체 40 (61 mg, 수율: 69%)을 오일로서 수득하였다.

중간체 41 및 중간체 42

요오도에탄 (40 μL, 2.51 당량)을 질소 분위기 하에 밀봉관에서 DMF (3 mL) 중 중간체 38 (140 mg, 0.197 mmol) 및 Cs₂CO₃ (193.3 mg, 3 당량)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4.5시간 동안 교반시켰다. 물을 첨가하고 (10 mL), 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 추출하였다. 층을 분리하고 수성 층을 추가의 EtOAc (10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM: MeOH - 100/0에서 95/5까지)로 정제하였다. 수득된 혼합물을 분취용 SFC (고정상: Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% i-PrNH₂)로 추가로 정제하여 중간체 41 (49.1 mg, 수율: 35%) 및 중간체 42 (62 mg, 수율: 45%)를 수득하였다.

중간체 43 및 중간체 44

2-브로모프로판 (67 μL, 2.63 당량)을 질소 분위기 하에 밀봉관에서 DMF (4.4 mL) 중 중간체 38 (200 mg, 0.28 mmol) 및 Cs₂CO₃ (278.7 mg, 3 당량)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 물을 첨가하고 (15 mL), 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 추출하였다. 층을 분리하고 수성 층을 추가의 EtOAc (15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM: MeOH - 100/0에서 95/5까지)로 정제하여 중간체 43 (93 mg, 수율: 46%) 및 중간체 44 (116 mg, 수율: 58%)를 둘 다 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 45

리튬 보로히드라이드 (32.2 g, 4 당량)를 0℃에서 2-Me-THF (1 L) 중 1H-피라졸-3-카르복실산, 4-브로모-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-, 에틸 에스테르 [2246368-58-9] (130 g, 369.7 mmol)의 용액에 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온되게 하고 실온에서 하룻밤 교반되게 두었다. 물 (800 mL)의 첨가에 의해 반응을 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc (800 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (500 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 중간체 45 (105 g, 수율: 94%)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 46

DMAP (16.28 g, 0.4 당량) 및 Et₃N (92.38 mL, 2 당량)을 THF (1 L) 중 중간체 45 (100 g, 333.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. TBDMSCl (75.3 g, 1.5 당량)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반시켰다. 반응물을 포화 수성 NaHCO₃ (800 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 혼합물을 EtOAc (1 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (800 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 30/70까지의 석유 에테르/ EtOAc)로 정제하여 중간체 46 (130 g, 수율: 94%)을 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 47

BuLi (104.55 mL, 1 당량)를 질소 분위기 하에 -78℃에서 THF (1 L) 중 중간체 46 (108 g, 261.4 mmol)의 용액에 서서히 첨가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후, 2-이소프로폭시-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (97.2 g, 2 당량)을 서서히 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 포화 수성 NH₄Cl (800 mL)을 서서히 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc (1 L x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (800 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 중간체 47 (140 g, 정량적인 것으로 추정됨)을 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 48

TBAF (THF 중 1 M, 192.4 mL, 1.2 당량)를 질소 분위기 하에 실온에서 DCM (700 mL) 중 중간체 47 (70 g, 160 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO₃ (500 mL)의 교반 용액에 첨가하고, 이 혼합물을 EtOAc (700 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (500 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 50/50까지의 석유 에테르/ EtOAc)로 정제하여 중간체 48 (35 g, 수율: 62%)을 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 49

K₂CO₃ (6.9 g, 2 당량)을 물 (40 mL) 및 디옥산 (200 mL) 중 중간체 39 (12 g, 24.9 mmol) 및 중간체 48 (9.6 g, 1.2 당량)의 용액에 첨가하였다. Pd(amphos)Cl₂ [887919-35-9] (0.8 g, 0.05 당량)를 질소 분위기 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 물 (40 mL)을 상기 혼합물에 첨가하고, 이것을 EtOAc (60 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 60/40까지의 석유 에테르/ EtOAc)로 정제하여 중간체 49 (15 g, 수율: 99%)를 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 50

중간체 49 (23 g, 37.8 mmol) 및 2-니트로벤젠술폰아미드 (11.48 g, 1.5 당량)의 용액을 질소 분위기 하에 DCM (150 mL) 중에 제조하고, 0℃까지 냉각시켰다. 이 용액에, DTBAD (13.1 g, 1.5 당량) 및 PPh₃ (14.9 g, 1.5 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고, 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 50/50까지의 석유 에테르/EtOAc)로 정제하여 중간체 50 (24.6 g, 수율: 83%)을 황색 액체로서 수득하였다.

중간체 51

이미다졸 (6.64 g, 3 당량)을 DCM (75 mL) 중 5-[[(4-히드록시-2-나프탈레닐)티오]메틸]-1-메틸-1H-피라졸-3-카르복실산 메틸 에스테르 [2245716-34-9] (11 g, 32.5 mmol) 및 TBDMSCl (9.8 g, 2 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응물을 포화 수성 NH₄Cl (20 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 혼합물을 DCM (30 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 30/70까지의 석유 에테르/ EtOAc)로 정제하여 중간체 51 (14 g, 수율: 97%)을 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 52

DIBAL-H (톨루엔 중 1 M 용액, 28.5 mL, 1.8 당량)를 THF (100 mL) 중 중간체 51 (7 g, 15.8 mmol)의 용액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응물을 0℃의 물 (10 mL), 이어서 10% 수성 NaOH (10 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. MgSO₄ (30 g)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반시켰다. 고체를 여과시키고, EtOAc (100 mL)로 세척하였다. 여과액을 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 20/80까지의 석유 에테르/ EtOAc)로 정제하여 중간체 52 (5.8 g, 수율: 88%)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 53

DCM (250 mL) 중 중간체 50 (24.6 g, 31.5 mmol) 및 중간체 52 (15.6 g, 1.2 당량)의 용액을 질소 분위기 하에 제조하고, 0℃에서 냉각시켰다. 그 후, DTBAD (10.8 g, 1.5 당량) 및 PPh₃ (12.4 g, 1.5 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고, 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 60/40까지의 석유 에테르/EtOAc)로 정제하여 중간체 53 (32 g, 수율: 76%)을 황색 액체로서 수득하였다.

중간체 54

TBAF (THF 중 1 M, 27.1 mL, 3 당량)를 THF (80 mL) 중 중간체 53 (12 g, 9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. EtOAc (100 mL)를 첨가하고, 혼합물을 물 (50 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 0/100까지의 석유 에테르/ EtOAc)로 정제하여 중간체 54 (11.7 g, 수율: 87%)를 황색 액체로서 수득하였다.

중간체 55

DTBAD (0.9 g, 3 당량)를 질소 분위기 하에 0℃에서 DCM (80 mL) 중 중간체 54 (2 g, 1.35 mmol) 및 PPh₃ (1 g, 3 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고, 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 20/80까지의 석유 에테르/EtOAc)로 정제하여 중간체 55 (2 g, 수율: 66%)를 황색 액체로서 수득하였다.

중간체 56

티오페놀 (10 g. 6.7 당량)을 ACN (150 mL) 중 중간체 55 (20.7 g, 13.6 mmol) 및 K₂CO₃ (5.6 g, 3 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반시켰다. 추가의 티오페놀 (6.5 g, 4.4 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가 48시간 동안 교반시켰다. 물 (40 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (80 x 2 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 90/10까지의 DCM/ MeOH)로 정제하여 중간체 56 (5.4 g, 수율: 44%)을 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 57

NaBH₃CN (100 mg, 3 당량)을 MeOH (8 mL) 중 중간체 56 (470 mg, 0.528 mmol) 및 파라포름알데히드 (238 mg, 5 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응물을 물 (20 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 혼합물을 EtOAc (20 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH 100/0 ~ DCM/MeOH 90/10)로 정제하여 중간체 57 (400 mg, 수율: 80%)을 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 58 및 중간체 59

HCl (디옥산 중 4 M, 935 μL, 10 당량)을 디옥산 (3 mL) 중 중간체 57 (350 mg, 0.374 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고, 잔사를 분취용 SFC (컬럼: Daicel Chiralpak AD (250 mm x 30 mm, 10 um); 이동상: A: CO₂, B: (0.1% NH₃.H₂O) iPrOH, A:B = 60:40)로 정제하여 중간체 58 (85 mg, 수율: 34%) 및 중간체 59 (80 mg, 수율: 32%)를 수득하였다.

중간체 60

Ms₂O (2.775 g, 2 당량)를 0℃의 THF (80 mL) 중 중간체 49 (4.8 g, 7.966 mmol) 및 DIPEA (3 g, 3 당량)의 용액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반시켰다. 그 후 LiI (3.2 g, 3 당량)를 0℃에서 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 교반을 실온에서 24시간 동안 계속하였다. 반응물을 물 (40 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 혼합물을 DCM (80 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 증발시켜 중간체 60 (5.7 g, 수율: 73%)을 제공하고, 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 61

K₂CO₃ (2.435 g, 3 당량) 및 PPh₃ (154 mg, 0.1 당량)을 MeOH (100 mL) 중 중간체 60 (5.7 g, 5.873 mmol) 및 에탄티오익산, S-[[5-[[[4-(아세틸옥시)-2-나프탈레닐]티오]메틸]-1-메틸-1H-피라졸-3-일]메틸] 에스테르 [2245716-36-1] (3.835 g, 1.5 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고, 잔사를 물 (40 mL)과 EtOAc 사이에 분배하였다. 층들을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 중간체 61 (8 g, 수율: 63%)을 제공하고, 추가 정제 없이 사용하였다.

중간체 62

TBAF (THF 중 1 M, 11.2 mL, 3 당량)를 THF (50 mL) 중 중간체 61 (8 g, 41%의 순도, 3.731 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. EtOAc (60 mL)를 상기 혼합물에 첨가하고, 용액을 물 (40 mL x 2) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 0/100까지의 석유 에테르/EtOAc)로 정제하였다. 단리된 생성물을 다시 분취용 HPLC (컬럼: YMC-Triart Prep C18 150 x 40 mm x 7 um; 구배: 40/60에서 30/70까지의 물 (0.04% NH₃.H₂O + 10 mM NH₄.HCO₃)/ACN)로 정제하여 중간체 62 (2.5 g, 수율: 84%)를 백색 고체로서 제공하였다.

중간체 63

DTBAD (2.42 g, 3 당량)을 질소 분위기 하에 0℃에서 DCM (150 mL) 중 중간체 62 (2.5 g, 3.196 mmol) 및 PBu₃ (2.37 mL, 3 당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고, 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0에서 30/70까지의 석유 에테르/EtOAc)로 정제하여 중간체 63 (2.4 g, 수율: 79%)을 백색 고체로서 제공하였다.

중간체 64 및 중간체 65

HCl (디옥산 중 4 M, 6.33 mL, 10 당량)을 디옥산 (30 mL) 중 중간체 63 (2.4 g, 2.534 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO₃의 점진적 첨가에 의해 pH 8로 조정하고, 그 후 DCM (30 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 0/100까지의 석유 에테르/EtOAc)로 정제하여 중간체 64와 중간체 65의 라세미 혼합물을 제공하였다. 이 혼합물을 1.8 g의 회전장애 이성질체로 분리하고, SFC (컬럼: Daicel Chiralpak AD (250 mm x 30 mm, 10 um); 이동상: A: CO₂, B: EtOH 중 0.1% NH₃.H₂O, A:B = 55:45)로 분리하여 중간체 64 (630 mg, 수율: 48%) 및 중간체 65 (620 mg, 수율: 47%)를 수득하였다.

화합물의 제조

1 ⁵ - 클로로 -1 ³ ,2 ¹ ,2 ⁵ ,6 ¹ - 테트라메틸 - 1 ¹ H,2 ¹ H,6 ¹ H -10-옥사-4,8- 디티아 -1(4,1)-인돌라-2(4,3),6(3,5)-디피라졸라-9(3,1)-나프탈레나시클로트리데카판-1 ² -카르복실산, S _a 또는 R _a 회전장애 이성질체 (하나의 회전장애 이성질체 그러나 절대 입체화학은 결정되지 않음)(화합물 1)

물 (0.6 mL) 중 수산화리튬 (15 mg, 10 당량)의 용액을 THF (1.8 mL)/MeOH(1.8 mL) 중 중간체 14 (42 mg)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, HCl (1 mL, 물 중 1 M)을 첨가하고, 휘발성 물질을 진공에서 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)로 정제하였다. 그 후, 생성물을 DIPE로 미분화하고, 여과시키고, 진공에서 60℃에서 건조시켜 화합물 1 (30 mg, 73%)을 제공하였다.

LC-MS m/z 672 [M + H]+ (LCMS 방법 코드 2)

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 27℃) δ ppm 1.90 (s, 3 H) 1.98 (s, 3 H) 2.30 - 2.43 (m, 2 H) 2.91 (d, J=14.0 Hz, 1 H) 3.10 (d, J=14.0 Hz, 1 H) 3.15 (d, J=13.2 Hz, 1 H) 3.25 - 3.28 (m, 1 H) 3.68 (s, 3 H) 3.74 (s, 3 H) 3.79 - 3.99 (m, 2 H) 4.18 (d, J=15.5 Hz, 1 H) 4.30 (d, J=15.5 Hz, 1 H) 4.51 - 4.63 (m, 1 H) 4.89 (s, 1 H) 5.00 - 5.10 (m, 1 H) 6.64 (s, 1 H) 7.19 (d, J=8.9 Hz, 1 H) 7.38 (s, 1 H) 7.43 - 7.53 (m, 2 H) 7.66 (d, J=9.0 Hz, 1 H) 7.69 - 7.75 (m, 1 H) 8.10 - 8.17 (m, 1 H).

1 ⁵ -클로로-1 ³ ,2 ¹ ,2 ⁵ ,6 ¹ -테트라메틸-1 ¹ H,2 ¹ H,6 ¹ H-10-옥사-4,8-디티아-1(4,1)-인돌라-2(4,3),6(3,5)-디피라졸라-9(3,1)-나프탈레나시클로트리데카판-1 ² -카르복실산, R _a 또는 S _a 회전장애 이성질체 (하나의 회전장애 이성질체 그러나 절대 입체화학은 결정되지 않음 ) ( 화합물 2)

물 (0.6 mL) 중 수산화리튬 (15 mg, 10 당량)의 용액을 THF (1.8 mL)/MeOH(1.8 mL) 중 중간체 15 (43 mg)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, HCl (1 mL, 물 중 1 M)을 첨가하고, 휘발성 물질을 진공에서 제거하였다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)로 정제하였다. 그 후, 생성물을 DIPE로 미분화하고, 여과시키고, 진공에서 60℃에서 건조시켜 화합물 2 (30 mg, 71%)을 제공하였다.

LC-MS m/z 672 [M + H]+ (LCMS 방법 코드 2)

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 27℃) δ ppm 1.90 (s, 3 H) 1.98 (s, 3 H) 2.30 - 2.42 (m, 2 H) 2.91 (d, J=14.0 Hz, 1 H) 3.10 (d, J=14.0 Hz, 1 H) 3.15 (d, J=13.2 Hz, 1 H) 3.25 - 3.28 (m, 1 H) 3.68 (s, 3 H) 3.74 (s, 3 H) 3.81 - 3.97 (m, 2 H) 4.17 (d, J=15.5 Hz, 1 H) 4.30 (d, J=15.5 Hz, 1 H) 4.51 - 4.63 (m, 1 H) 4.89 (s, 1 H) 5.00- 5.10 (m, 1 H) 6.64 (s, 1 H) 7.19 (d, J=8.9 Hz, 1 H) 7.38 (s, 1 H) 7.43 - 7.53 (m, 2 H) 7.66 (d, J=9.0 Hz, 1 H) 7.69 - 7.75 (m, 1 H) 8.09 - 8.17 (m, 1 H).

15- 클로로 -13,21,25,61,4- 펜타메틸 - 11H,21H,61H -10-옥사-8- 티아 -4-아자-1(4,1)-인돌라-2(4,3),6(3,5)-디피라졸라-9(3,1)-나프탈레나시클로트리데카판-12-카르복실산

S _a 및 R _a 회전장애 이성질체의 혼합물) (화합물 3)

물 (1 mL) 중 수산화리튬 (21 mg, 20 당량)의 용액을 THF (2.5 mL) 및 MeOH (2.5 mL) 중 중간체 26 (30 mg)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 용액을 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD- 5 μm, 50x250 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)로 정제하여, 화합물 3 (22 mg, 75%)을 백색 고체 (S_a 및 R_a 회전장애 이성질체의 혼합물)로서 수득하였다.

LC-MS m/z 669 [M + H]+ (LCMS 방법 코드 1)

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆, 27℃) δ ppm 1.76 (s, 3 H), 1.90 (s, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 2.35 - 2.48 (m, 2 H), 2.74 (d, J=12.2 Hz, 1 H), 2.77 (d, J=13.3 Hz, 1 H), 3.04 (d, J=13.3 Hz, 1 H), 3.30 (d, J=12.2 Hz, 1 H), 3.75 (s, 3 H), 3.76 (s, 3 H), 3.77 - 3.83 (m, 1 H), 4.23-4.39 (m, 3 H), 4.43 - 4.54 (m, 1 H), 4.70 (s, 1 H), 5.05 - 5.14 (m, 1 H), 6.86 (d, J=1.1 Hz, 1 H), 7.29 (s, 1 H), 7.34 (d, J=9.0 Hz, 1 H), 7.38 - 7.48 (m, 2 H), 7.64 - 7.69 (m, 1 H), 7.78 (d, J=9.0 Hz, 1 H), 7.99 - 8.05 (m, 1 H).

15- 클로로 -13,21,25,61- 테트라메틸 - 11H,21H,61H -10-옥사-8- 티아 -4-아자-1(4,1)-인돌라-2(4,3),6(3,5)-디피라졸라-9(3,1)-나프탈레나시클로트리데카판-12-카르복실산 (S _a 및 R _a 회전장애 이성질체의 혼합물) (화합물 4)

물 (0.5 mL) 중 수산화리튬 (12 mg, 15 당량)의 용액을 THF (0.8 mL) 및 MeOH (0.8 mL) 중 중간체 25 (22 mg)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 용액을 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD- 5 μm, 50x250 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)로 정제하여, 화합물 4 (17 mg, 79%)를 백색 고체 (S_a 및 R_a 회전장애 이성질체의 혼합물)로서 수득하였다.

LC-MS m/z 655 [M + H]+ (LCMS 방법 코드 2)

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d _6,27℃) δ ppm 1.92 (s, 3 H), 1.93 (s, 3 H), 2.35 - 2.44 (m, 2 H), 3.22 - 3.30 (m, 2 H), 3.33 (d, J=13.0 Hz, 1 H), 3.39 (d, J=13.0 Hz, 1 H), 3.74 (s, 3 H), 3.77 (s, 3 H), 3.82 - 3.92 (m, 1 H), 3.93 - 4.04 (m, 1 H), 4.26 (d, J=15.7 Hz, 1 H), 4.43 (d, J=15.7 Hz, 1 H), 4.47 - 4.56 (m, 1 H), 5.03 (s, 1 H), 5.07 - 5.17 (m, 1 H), 6.79 (d, J=0.8 Hz, 1 H), 7.23 (d, J=8.9 Hz, 1 H), 7.32 (br s, 1 H), 7.38 - 7.49 (m, 2 H), 7.65 - 7.71 (m, 2 H), 8.03 - 8.08 (m, 1 H).

화합물 5

중간체 26 대신 중간체 27로부터 출발하여, 화합물 3에 대한 것과 유사한 절차에 따라 화합물 5를 제조하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.76 (s, 3 H), 1.88 (s, 3 H), 1.97 (s, 3 H), 2.36 - 2.46 (m, 2 H), 2.70 (d, J=12.2 Hz, 1 H), 2.75 (d, J=13.3 Hz, 1 H), 3.04 (d, J=13.3 Hz, 1 H), 3.32 (d, J=12.2 Hz, 1 H), 3.72 - 3.80 (m, 7 H), 4.25 - 4.34 (m, 2 H), 4.37 (d, J=15.5 Hz, 1 H), 4.41 - 4.52 (m, 1 H), 4.64 (s, 1 H), 5.04 - 5.13 (m, 1 H), 6.86 (d, J=1.6 Hz, 1 H), 7.28 (s, 1 H), 7.34 (d, J=9.0 Hz, 1 H), 7.37 - 7.42 (m, 1 H), 7.42 - 7.47 (m, 1 H), 7.63 - 7.68 (m, 1 H), 7.79 (d, J=9.0 Hz, 1 H), 7.98 - 8.03 (m, 1 H)

화합물 6

중간체 27 대신 중간체 28로부터 출발하여, 화합물 5에 대한 것과 유사한 절차에 따라 화합물 6을 제조하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.76 (s, 3 H), 1.88 (s, 3 H), 1.96 (s, 3 H), 2.35 - 2.46 (m, 2 H), 2.70 (d, J=12.3 Hz, 1 H), 2.75 (d, J=13.3 Hz, 1 H), 3.04 (d, J=13.3 Hz, 1 H), 3.32 (d, J=12.2 Hz, 1 H), 3.71 - 3.80 (m, 7 H), 4.25 - 4.34 (m, 2 H), 4.37 (d, J=15.5 Hz, 1 H), 4.41 - 4.51 (m, 1 H), 4.64 (s, 1 H), 5.09 (dt, J=14.6, 4.5 Hz, 1 H), 6.86 (d, J=1.6 Hz, 1 H), 7.28 (s, 1 H), 7.34 (d, J=8.9 Hz, 1 H), 7.37 - 7.42 (m, 1 H), 7.42 - 7.47 (m, 1 H), 7.64 - 7.68 (m, 1 H), 7.79 (d, J=9.0 Hz, 1 H), 7.98 - 8.03 (m, 1 H)

화합물 7

LiOH (14 mg, 15 당량)을 MeOH (1 mL), THF (1 mL), 및 물 (0.5 mL)의 혼합물 중 중간체 37 (27 mg, 0.04 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 백색 고체를 제공하였다. 상기 고체를 물 (5 mL)에 용해시키고, 1 M 수성 HCl을 사용하여 pH 4~5까지 산성화시켰으며, 산성화 시 백색 침전물이 형성되었다. 수성 층을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 백색 고체를 제공하였다. 이 조 생성물을 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH - 1:0 ~ 9:1)로 정제하여 백색 고체를 제공하고, 이를 DIPE로 미분화하고, 여과시켜 화합물 7 (24 mg, 수율 86%)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.90 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 2.31 - 2.42 (m, 2 H), 3.02 (d, J=14.3 Hz, 1 H), 3.20 (br dd, J=13.9, 3.7 Hz, 2 H), 3.75 (s, 3 H), 3.79 - 3.93 (m, 3 H), 4.05 - 4.16 (m, 2 H), 4.57 (ddd, J=14.1, 9.1, 4.6 Hz, 1 H), 4.90 (s, 1 H), 4.97 - 5.08 (m, 1 H), 6.66 (d, J=1.6 Hz, 1 H), 7.11 (d, J=8.9 Hz, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 7.43 - 7.54 (m, 3 H), 7.56 - 7.65 (m, 2 H), 7.71 - 7.77 (m, 1 H), 8.17 (d, J=8.0 Hz, 1 H)

화합물 8

중간체 37 대신 중간체 38로부터 출발하여, 화합물 7에 대한 것과 유사한 절차에 따라 화합물 8을 제조하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.90 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 2.30 - 2.42 (m, 2 H), 3.02 (d, J=14.3 Hz, 1 H), 3.20 (dd, J=13.9, 3.9 Hz, 3 H), 3.35 (s, 1 H), 3.75 (s, 3 H), 3.86 (dq, J=17.0, 8.6 Hz, 2 H), 4.06 - 4.16 (m, 2 H), 4.57 (ddd, J=14.2, 9.1, 4.5 Hz, 1 H), 4.90 (s, 1 H), 5.03 (dt, J=14.6, 4.8 Hz, 1 H), 6.66 (d, J=1.6 Hz, 1 H), 7.11 (d, J=8.9 Hz, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 7.44 - 7.54 (m, 2 H), 7.56 - 7.62 (m, 1 H), 7.71 - 7.78 (m, 1 H), 8.17 (d, J=8.0 Hz, 1 H)

화합물 9

LiOH (물 중 1 M, 607 μL, 4 당량)를 THF (1.5 mL) 중 중간체 40 (108 mg, 0.152 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응을 완료하기 위해, 추가 LiOH (물 중 1 M, 607 μL, 4 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (2 mL)으로 희석시키고, Amberlite® IR-120 (H+) 수지로 pH 3이 될 때까지 산성화하였다. 상기 혼합물을 여과시켜 수지를 제거하고, 수지를 ACN 및 MeOH로 세척하였다. 용매를 증발시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (RPC18, ACN:MeOH 1:1/25 mM NH₄HCO₃, 41/59로부터 83/17까지)로 정제하였다. 수집된 분획으로부터의 유기 용매를 증발시키고, 생성된 수성 현탁액을 1 M HCl 용액으로 pH 3까지 산성화하고, EtOAc (x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켜 화합물 9 (69 mg, 수율: 64%)를 백색 고체로서 생성하였다.

¹H NMR (400 MHz, 373 K, DMSO-d6) δ ppm: 8.05 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.50 - 7.38 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.27 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.64 (s, 1H), 5.28 (s, 1H), 5.15 - 5.02 (m, 1H), 4.68 - 4.55 (m, 1H), 4.30 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 4.01 - 3.92 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 2.40 - 2.29 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.04 - 0.12 (br m, 6H).

화합물 10

LiOH (25 mg, 15 당량)를 MeOH (1.6 mL), THF (1.6 mL) 및 물 (0.8 mL)의 혼합물 중 중간체 41 (49 mg, 0.07 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 백색 고체를 제공하였다. 이 고체를 물 (15 mL)에 용해시키고, 1 M 수성 HCl을 사용하여 pH 4~5까지 산성화시켰으며, 산성화 시 백색 침전물이 형성되었다. 수성 층을 DCM (2 x 20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 이 조 생성물을 실리카 겔에서 플래시 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH - 100:0 ~ 95:5)로 정제하여 고체를 제공하고, 이를 Et₂O로 미분화하고, 여과시켜 화합물 10 (34.5 mg, 수율: 72%)을 황백색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.35 (t, J=7.2 Hz, 3 H), 2.03 (s, 3 H), 2.22 (s, 3H), 2.33 - 2.47 (m, 2H), 2.82 (d, J=14.4 Hz, 1 H), 3.18 (d, J=13.3 Hz, 1 H), 3.27 (d, J=14.6 Hz, 1 H), 3.46- 3.53 (m, 3 H), 3.64- 3.75 (m, 1 H), 3.81- 3.97 (m, 7 H), 4.59 (ddd, J=14.5, 8.2, 3.9 Hz, 1 H) 5.14 - 5.24 (m, 2 H), 6.10 (d, J=1.3 Hz, 1 H), 7.08 (d, J=8.9 Hz, 1 H), 7.33 (d, J=9.1 Hz, 1 H), 7.49- 7.59 (m, 2 H), 7.60 (s, 1 H), 7.69 - 7.77 (m, 1 H), 8.34 (dd, J=8.1, 0.89 Hz, 1 H).

화합물 11

중간체 41 대신 중간체 42로부터 출발하여, 화합물 10에 대한 것과 유사한 절차에 따라 화합물 11을 제조하였다.

¹H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.27 (t, J=7.21 Hz, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 2.20 (s, 3 H), 2.33 - 2.54 (m, 2 H), 3.04 (d, J=14.74 Hz, 1 H), 3.24 (d, J=14.74 Hz, 1 H), 3.28 (d, J=14.32 Hz, 1 H), 3.45 (d, J=14.32 Hz, 1 H), 3.58 (td, J=9.48, 3.50 Hz, 1 H), 3.82 - 3.98 (m, 7 H), 4.09 (d, J=15.15 Hz, 1 H), 4.57 - 4.68 (m, 1 H), 5.11 (s, 1 H), 5.16 (dt, J=14.55, 4.27 Hz, 1 H), 6.58 (d, J=1.36 Hz, 1 H), 6.89 (d, J=8.99 Hz, 1 H), 7.24 (d, J=9.09 Hz, 1 H), 7.46 - 7.52 (m, 2 H), 7.53 (s, 1 H), 7.68 - 7.73 (m, 1 H), 8.34 (dd, J=8.31, 1.31 Hz, 1 H).

화합물 12

LiOH (45 mg, 15 당량)를 MeOH (2.8 mL), THF (2.8 mL) 및 물 (1.5 mL)의 혼합물 중 중간체 43 (90 mg, 0.13 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (DCM:MeOH - 100:0 ~ 95:5)로 정제하여 화합물 12 (66 mg, 수율: 75%)를 황백색 고체로서 수득하였다.

1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.34 - 1.54 (m, 1 H), 1.42 (d, J=6.60 Hz, 3 H), 1.49 (d, J=6.38 Hz, 2 H), 2.00 (s, 3 H), 2.21 (s, 3 H), 2.37 - 2.49 (m, 2 H), 2.79 (d, J=13.86 Hz, 1 H), 3.20 (d, J=13.64 Hz, 1 H), 3.29 - 3.36 (m, 1 H), 3.38 - 3.45 (m, 1 H), 3.46 - 3.56 (m, 1 H), 3.76 - 3.95 (m, 6 H), 4.48 (spt, J=6.60 Hz, 1 H), 4.54 - 4.64 (m, 1 H), 5.02 (s, 1 H), 5.16 (dt, J=14.58, 4.15 Hz, 1 H), 6.22 (d, J=1.32 Hz, 1 H), 7.00 (d, J=8.80 Hz, 1 H), 7.30 (d, J=9.02 Hz, 1 H), 7.45 - 7.57 (m, 3 H), 7.66 - 7.72 (m, 1 H), 8.28 - 8.36 (m, 1 H).

화합물 13

LiOH (57 mg, 15 당량)를 MeOH (3.6 mL), THF (3.6 mL) 및 물 (1.8 mL)의 혼합물 중 중간체 44 (114 mg, 0.16 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 물 (15 mL)로 희석시키고, pH 4~5가 될 때까지 1 M 수성 HCl로 산성화하였다. 수성 층을 DCM (2 x 10 mL)으로 추출하고, 그 후 EtOAc:THF의 1:1 혼합물 (10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (DCM:MeOH - 100:0 ~ 95:5)로 정제하여 화합물 13 (91 mg, 수율: 81%)을 황백색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.24 (d, J=6.58 Hz, 3 H), 1.31 (d, J=6.58 Hz, 3 H), 1.98 (s, 3 H) 2.17 (s, 3 H), 2.31 - 2.52 (m, 2 H), 3.09 (d, J=14.74 Hz, 1 H), 3.28 (dd, J=14.27, 9.56 Hz, 2 H), 3.43 (d, J=13.90 Hz, 1 H), 3.47 - 3.56 (m, 1 H), 3.83 - 3.92 (m, 5 H), 4.10 (d, J=15.15 Hz, 1 H), 4.29 (spt, J=6.55 Hz, 1 H), 4.55 - 4.69 (m, 1 H), 5.15 (dt, J=14.58, 4.36 Hz, 1 H), 5.21 (s, 1 H), 6.55 (d, J=1.36 Hz, 1 H), 6.82 (d, J=8.99 Hz, 1 H), 7.21 (d, J=9.09 Hz, 1 H), 7.44 - 7.52 (m, 3 H), 7.65 - 7.73 (m, 1 H), 8.29 - 8.36 (m, 1 H).

화합물 14

물 (0.5 mL) 중 LiOH.H₂O (27 mg, 5 당량)의 용액을 THF (3 mL) 중 중간체 58 (85 mg, 0.127 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 16시간 동안 교반시켰다. HCl (물 중 0.5 M)을 첨가하여 pH 6에 도달하였다. 용매를 증발시키고, 잔사를 분취용 HPLC (컬럼: Phenomenex Gemini-NX 150 x 30 mm x 5 um; 구배: 77/23으로부터 47/53까지의 물 (0.05% HCl)/ACN)로 정제하여 화합물 14 (35 mg, 수율: 41%)를 백색 고체로서 제공하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm 1.89 (br d, J=7.28 Hz, 8 H) 2.39 (br s, 2 H) 3.20 - 3.27 (m, 2 H) 3.40 - 3.48 (m, 3 H) 3.73 (s, 5 H) 4.24 (br s, 2 H) 4.54 (br s, 2 H) 5.00 - 5.13 (m, 1 H) 6.69 (br s, 1 H) 7.28 (br d, J=8.82 Hz, 2 H) 7.35 - 7.48 (m, 2 H) 7.64 (br d, J=8.16 Hz, 1 H) 7.80 (d, J=9.04 Hz, 1 H) 7.98 (br d, J=6.61 Hz, 1 H) 13.22 (br s, 1 H)

화합물 15

중간체 58 대신 중간체 59로부터 출발하여, 화합물 14에 대한 것과 유사한 절차에 따라 화합물 15를 제조하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm 1.83 (s, 5 H) 1.93 (s, 3 H) 2.27 - 2.41 (m, 2 H) 3.08 (br s, 2 H) 3.17 - 3.28 (m, 3 H) 3.73 (s, 4 H) 4.17 - 4.34 (m, 3 H) 4.40 - 4.62 (m, 2 H) 4.99 - 5.10 (m, 1 H) 6.77 (s, 1 H) 7.23 (s, 1 H) 7.30 - 7.46 (m, 3 H) 7.62 (d, J=7.94 Hz, 1 H) 7.79 (d, J=9.04 Hz, 1 H) 7.97 (br d, J=7.94 Hz, 1 H) 12.86 (br s, 1 H)

화합물 16

중간체 58 대신 중간체 64로부터 출발하여, 화합물 14에 대한 것과 유사한 절차에 따라 화합물 16을 제조하였다.

¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) ppm 1.92 (s, 3 H) 2.01 (s, 3 H) 2.45 (br s, 2 H) 2.58 - 2.70 (m, 2 H) 2.84 - 2.92 (m, 1 H) 3.08 (d, J=14.33 Hz, 1 H) 3.76 (s, 3 H) 3.78 - 3.89 (m, 2 H) 3.96 - 4.06 (m, 2 H) 4.61 - 4.69 (m, 2 H) 5.14 - 5.23 (m, 1 H) 6.43 (s, 1 H) 7.06 (d, J=8.82 Hz, 1 H) 7.19 (s, 1 H) 7.41 - 7.49 (m, 2 H) 7.53 (d, J=9.04 Hz, 1 H) 7.63 (br dd, J=6.50, 2.76 Hz, 1 H) 8.09 - 8.16 (m, 1 H)

화합물 17

중간체 58 대신 중간체 65로부터 출발하여, 화합물 14에 대한 것과 유사한 절차에 따라 화합물 17을 제조하였다.

1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) ppm 1.92 (s, 3 H) 2.01 (s, 3 H) 2.44 (br dd, J=9.59, 4.30 Hz, 2 H) 2.57 - 2.69 (m, 2 H) 2.84 - 2.92 (m, 1 H) 3.08 (d, J=14.33 Hz, 1 H) 3.75 (s, 3 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.94 - 4.03 (m, 2 H) 4.58 - 4.70 (m, 2 H) 5.12 - 5.22 (m, 1 H) 6.42 (s, 1 H) 7.06 (d, J=9.04 Hz, 1 H) 7.18 (s, 1 H) 7.40 - 7.47 (m, 2 H) 7.52 (d, J=9.04 Hz, 1 H) 7.62 (br dd, J=6.62, 2.65 Hz, 1 H) 8.07 - 8.16 (m, 1 H)

분석적 분석

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 측정을 LC 펌프, 다이오드-어레이(DAD) 또는 UV 검출기, 및 각각의 방법에 명시된 바와 같은 컬럼을 사용하여 수행하였다. 필요한 경우, 추가의 검출기를 포함시켰다(하기의 방법에 대한 표를 참조).

컬럼으로부터의 유동물을 대기압 이온 공급원과 함께 구성된 질량 분광계(MS)로 가져왔다. 화합물의 공칭 단일동위원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위해 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터를 획득하였다.

화합물은 이의 실험적 체류 시간(R_t) 및 이온에 의해 기술된다. 데이터의 표에 상이하게 명시되어 있지 않다면, 보고된 분자 이온은 [M+H]⁺(양성자화된 분자) 및/또는 [M-H]^-(탈양성자화된 분자)에 상응한다. 화합물이 직접 이온화될 수 없었을 경우, 부가물의 유형이 특정되어 있다(즉, [M+NH₄]⁺, [M+HCOO]^- 등 …). 다수의 동위 원소 패턴을 갖는 분자(Br, Cl)에 있어서, 보고된 값은 최저 동위원소 질량에 대하여 얻어진 것이다. 모든 결과는 사용된 방법과 일반적으로 연관되어 있는 실험적 불확실성을 가지고서 얻어졌다.

이하, "SQD"는 단일 사중극자 검출기(Single Quadrupole Detector), "MSD"는 질량 선택적 검출기(Mass Selective Detector), "RT"는 실온, "BEH"는 가교된 에틸실록산/실리카 하이브리드, "DAD"는 다이오드 어레이 검출기, "HSS"는 고강도 실리카를 의미한다.

LCMS 방법 코드(유량은 mL/분 단위로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분 단위로 표현됨)

SFC-MS 방법

이산화탄소(CO₂) 전달용의 이원 펌프 및 모디파이어(modifier), 오토샘플러(autosampler), 컬럼 오븐, 400 bar까지 견디는 고압 유동 셀을 갖춘 다이오드 어레이 검출기로 구성된 분석용 초임계 유체 크로마토그래피(Supercritical fluid chromatography; SFC)를 사용하여 SFC 측정을 수행하였다. 질량 분광계(MS)와 함께 구성되어 있다면, 컬럼으로부터의 유동물을 (MS)로 가져왔다.

화합물의 공칭 단일동위원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위해 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터 획득을 수행하였다. 분석적 SFC-MS 방법(유량은 mL/분 단위로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분 단위로 표현되며; 배압(backpressure; BPR)은 bar 단위로 표현됨).

“i-PrNH₂”는 이소프로필아민을 의미하며, “EtOH”는 에탄올을 의미하며, “min”은 분을 의미하며, “DEA”는 디에틸아민을 의미한다.

NMR

¹H NMR 스펙트럼은 Bruker Avance III 및 Avance NEO 분광계에서 기록되었다. 달리 언급되지 않는 한, CDCl₃을 용매로 사용하였다. 화학적 이동을 테트라메틸실란에 대한 ppm으로 표시한다.

약리학적 분석

생물학적 실시예 1

Annexin V 및 7AAD를 사용한 Molp8 다발성 골수종 세포주의 생존성 분석.

Annexin V/7AAD의 원리는 원형질막에서의 포스파티딜세린의 위치와 막 장벽의 무결성을 기반으로 한다. 초기 아폽토시스 동안, 포스파티딜세린은 원형질막의 내부 소엽에서 정상적인 분포 패턴을 잃고 원형질막 외부에 나타난다. Annexin 단백질은 칼슘 의존성 인지질 결합 단백질이며 세포 사멸 동안 외막의 포스파티딜세린에 결합할 수 있다. 생존성 염료 7AAD는 온전한 원형질막을 갖는 세포의 진입이 차단되지만 막 무결성을 상실한 세포에는 축적된다. Annexin Fitc는 7AAD(여기: 488 nm, 방출: 650 nm)와 마찬가지로 488 nm 레이저(최대 여기: 490 nm, 최대 방출: 525 nm)에 의해 여기되며, 이로써 본 분석을 임의의 다색 유세포 분석기에서 완료할 수 있다.

분석 조건은 다음의 1x 반응 완충액을 사용하여 최적화하였다: 5 mM HEPES(4-(2-히드록시)-1-피페라진에탄 술폰산), 70 mM NaCl, 1.25 mM CaCl₂, pH 7.4. 분석에 사용된 시약/재료는 아래 표에 열거된 바와 같았다.

표:

Molp 8 세포는 현탁 상태의 인간의 다발성 골수종이었다(*세포는 주당 2회 계수하였고 배양 밀도는 ml당 0.5 내지 1.5x10⁶개 세포로 유지함).

분석 절차

제1일에, 웰당 5x10⁴개의 생세포를 96웰 U자형 바닥 플레이트에 플레이팅하고, 세포를 100 uL RPMI + 10% FBS에 플레이팅하였다. 11포인트 화합물 희석 플레이트를 3개의 배수 단계(최종 농도 범위 10 μM~0.1 nM)로 준비하고 웰당 1 μL의 농도로 첨가하였다. 그 후 플레이트를 37℃ 및 5% CO₂에서 3일 동안 인큐베이션하였다.

제4일에, 세포를 펠렛화하고 배지를 버렸다. 그 후 세포를 Annexin 결합 완충액 중 50 μL AnnexinV-Fitc(1:40 희석) 및 7AAD(1:100 희석)에 재현탁한 다음 암실에서 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 그 후 50 μL 결합 완충액(총 부피 100 uL)을 세포에 첨가하였다. 세척 단계는 필요하지 않았다.

2시간 이내에 PeCy5(7AAD) 및 Fitc(Annexin) 채널을 BD Canto를 사용하여 기록하고 단일선당 최소 10,000개의 이벤트를 수집하였다.

분석

생세포 백분율을 기반으로 하여 테스트 화합물의 활성을 계산하였다.

LC = 저 대조군 값의 중앙값

= 저 대조군: 처리하지 않은 세포 (100% 이하의 생세포)

HC = 고 대조군 값의 중앙값

= 고 대조군: 10 uM 약물로 처리한 세포 (0% 이상의 생세포)

최소 자승 합 방법에 의해 생세포 퍼센트 대 화합물 농도의 그래프에 최적 부합 곡선을 피팅하였다. 이로부터, IC₅₀ 값(50% 세포독성을 야기하는 억제 농도)을 수득하였다. 힐(Hill) 계수 측면에서 그래프의 기울기의 추정값도 얻었다.

본 발명의 대표적인 화학식 I의 화합물을 생물학적 실시예 1에 기술된 절차에 따라 테스트하였고, 그 결과는 하기 표에 열거된 바와 같다. 화합물을 1회 초과로 테스트한 경우, 각각의 측정 결과는 개별적으로 열거되어 있다.

하기 표에 보고된 IC50 값에는 사용된 분석법 및 장비와 관련된 오차 한계가 적용된다.

표:

생물학적 실시예 2

MCL-1은 아폽토시스의 조절자이며 세포 사멸을 피하는 종양 세포에서 고도로 과발현된다. 이 분석은 아폽토시스 경로의 조절자, 주로 MCL-1, Bfl-1, Bcl-2, 및 Bcl-2 패밀리의 다른 단백질을 표적화하는 소분자 화합물의 세포 효력을 평가한다. BH3-도메인 단백질과 항-아폽토시스 조절자의 상호작용을 방해하는 단백질-단백질 억제제는 아폽토시스를 개시한다.

아폽토시스 경로의 활성화는 CellEvent™ Caspase-3/7 Green ReadyProbes™ Reagent(Thermo Fisher C10423, C10723)를 사용하여 측정하였다. 이 분석은 아폽토시스 경로에 진입하는 세포에서 녹색 형광 염색을 생성한다. CellEvent® Caspase-3/7 Green 시약은 DNA에 결합하지 않을 때 비형광성인 핵산 결합 염료에 콘쥬게이션된 4개의 아미노산 펩티드(DEVD)이다. DEVD 펩티드는 염료가 DNA에 결합하는 것을 억제하기 때문에 CellEvent® Caspase-3/7 Green 시약은 본질적으로 비형광성이다. 아폽토시스 세포에서 caspase-3/7이 활성화되면, DEVD 펩티드가 절단되고 유리 염료가 DNA에 결합하여 밝은 녹색 형광을 생성한다. Caspase-3 및 Caspase-7의 활성화는 이에 의존하는 세포주에서의 다른 아폽토시스 억제 단백질 또는 MCL-1의 억제의 하류이다.

IncuCyte에서의 생세포 판독값을 통해 시간 경과에 따른 Caspase 활성화 추적이 가능하다. 동적 판독값은 (a) 아폽토시스 유도 메커니즘의 차이와 관련될 수 있는 발병 시간의 차이를 나타내고(즉, 이것은 더 직접적이거나 간접적임); (b) 자가형광 또는 침전 화합물로 인한 잡음(artifact)을 인식할 수 있기 때문에 유용하였다. IncuCyte 판독값은 또한 세포수의 정규화를 가능하게 하며, 그 이유는 현탁 세포가 고르게 분포되기 어렵기 때문이다.

신호를 22시간 동안 2시간마다 측정하였다. 미가공 데이터로서 이미지당 Caspase 마스크 대 Confluence 마스크의 비를 계산하고, 모든 웰에 대한 동적 흔적이 분석을 위해 Genedata Screener로 엑스포트되었다.

Genedata Screener에서 동적 흔적으로부터의 6시간, 12시간 및 22시간에 대한 값을 추출하였다. 값은 음성 대조군(미처리 세포)에 대해 정규화하였다. 정규화된 데이터에 대해 표준 용량-반응 분석을 수행하였다.

다음의 3개의 전술한 시점 각각에서 다음의 데이터가 보고되었다: (a) 용량-반응 곡선, (b) qAC50 및 qAC50 모드, (c) 최대 활성.

분석에 사용된 재료는 아래 표에 열거된 바와 같다.

표:

10% 열 불활성화(HI) FBS, 2 mM L-글루타민 및 50 μg/mL 겐타마이신 페놀 레드 무함유 RPMI-1640을 함유하는 배양 배지에서 세포를 유지하였다. 세포를 주 2회 40만개/mL로 분할하였다.

제1일에, 플레이트는 10 M 농도의 테스트 화합물을 포함하는 개별 웰(웰당 150 nL)을 포함하였다. 최종 농도 범위는 100 μM 내지 10 pM 화합물(및 화합물 무함유 대조군)이고, 화합물을 실온에서 1시간 동안 해동시켰다. 예열된 배지 25 μl를 멀티드롭(컬럼 1, 3~22, 24)으로 각각의 웰에 첨가하고, 이어서 컬럼 2에 DMSO 대조군(0.6% DMSO)을 첨가하였다. 플레이트를 Breathe-Easy® 밀봉 막을 사용하여 밀봉하고, 실온에서 30분 동안 진탕시켜 테스트 화합물(들)을 배지에 용해시켰다. 그 후 플레이트를 37℃, 5% CO₂에서 1시간 동안 인큐베이터에 보관하였다.

40000개/25 μl(분석에서 최종 20000개/50 μl)의 배지 중 MOLP8 세포는 4 μM(분석에서 최종 2 μM)의 CellEvent™ Caspase-3/7 Green Detection Reagent를 이용하여 준비하였다. 일단 준비되면, 세포를 20000개의 양으로 테스트 화합물 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 즉시 IncuCyte에 넣고, 다음의 설정을 사용하여 이미징을 시작하였다: 10X 대물렌즈, 녹색 채널에서 2초 노출 시간, 2시간 간격, 22시간 후에 획득 중지.

IncuCyte의 분석을 위해, 기본 분석 프로토콜은 다음과 같이, 각각 "위상" 및 "녹색" 이미지에서 "컨플루언스" 및 "카스파아제" 면적을 계산하도록 정의되었다: (a) 컨플루언스: 분할 조정 1, 홀 필(Hole File) 0, 크기 조정 -2, 필터 없음 (b) 카스파아제: Top-Hat 분할, 반경 10, 임계값 0.3 GCU, 감도가 0인 에지 스플릿 온(Edge Split On), 홀 필 0, 크기 조정 1, 및 최소 면적 20 μm²에서 필터링. 분석자는 충분한 수의 양성 및 음성 대조 웰과, 화합물 처리된 웰에 대해 훈련되어 "컨플루언스" 층이 생세포와 죽은(응축된) 세포 둘 다를 탐지하는지를 확인한다. "카스파아제 면적 / 컨플루언스 면적"에 의해, "이미지당" 계산된 Caspase3/7 염색에 양성인 세포의 분율의 근사치를 구한다.

사전 정의된 템플릿을 사용하여 Genedata Screener에서 분석법의 분석을 완료하였다. 더 구체적으로, 실험 분석을 위한 분석 특이적 설정은 다음과 같았다: (a) 플레이트 레이아웃: 음성 대조 웰은 DMSO 이외의 화합물은 포함하지 않으며, "중립 대조군"으로 정의되었다, (b) 흔적 채널: "Measured" 유형의 "Measured Channel"이라는 하나의 흔적 채널이 있어야 한다. 이것은 IncuCyte의 미가공 데이터였다; 및 (c) 층: 유형 "Aggregated: Time Series"의 3개의 층, 이때 명칭은 "평균 6시간", "평균 12시간" 및 "평균 22시간"이다. 이들은 각각 5.5 내지 6.5시간, 11.5 내지 12.5시간, 및 21.5 내지 22.5시간의 값으로부터 측정된 평균을 포함하였다.

정규화 및 보정: 3개의 층 각각은 중립 대조군을 중심 기준으로 하고 자극자 대조군을 척도 기준으로 하여 대조군 퍼센트로 정규화하였다. 또는 μ_CR이 중심 기준의 평균이고 μ_SC가 척도 기준의 평균이면 정규화된 값은 다음과 같이 계산되었다:

층 화합물 결과: S_inf, IC₅₀ 및 h를 자유 파라미터로 하고 S₀을 0으로 고정한 표준 적합 모델을 아래와 같이 사용하였다.

로버스트(Robust) Z' 계수 또는 "RZ' 계수"를 Screener에서 계산하였다. 대조 웰에서 동적 흔적 이상치를 제외한 후(아래 참조), RZ' 값은 임의의 FBS 농도에서 그리고 임의의 시점(6시간, 12시간, 22시간)에 대하여 테스트된 MOLP8 세포에 있어서 RZ ≥ 0.5여야 한다.

"Global SD"는 정규화 후 양성 또는 음성 대조군의 로버스트 표준 편차(둘 중 더 큰 것)로서 Screener에서 계산되었다. 대조 웰에서 동적 흔적 이상치를 제외한 후(아래 참조), Global SD 값은 임의의 FBS 농도에서 그리고 임의의 시점(6시간, 12시간, 22시간)에 대하여 테스트된 MOLP8 세포에 있어서 Global SD ≤ 10이어야 한다.

본 발명의 대표적인 화학식 I의 화합물을 생물학적 실시예 2에 기술된 절차에 따라 테스트하였고, 그 결과는 하기 표에 열거된 바와 같다. 하기 표에 보고된 AC50 값에는 사용된 분석법 및 장비와 관련된 오차 한계가 적용된다.

표:

생물학적 실시예 3

Caspase-Glo® 3/7 Assay는 부착성 또는 현탁 세포의 배양물 또는 정제 효소 제제에서의 카스파아제-3 및 -7의 활성을 측정하는 발광 분석법이다. 이 분석은 테트라펩티드 서열 DEVD를 포함하는 프로루미네선트(proluminescent) 카스파아제-3/7 기질을 제공한다. 이 기질은 절단되어 광 생성에 사용되는 루시퍼라아제의 기질인 아미노루시페린이 방출된다. 단일 Caspase-Glo® 3/7 Reagent를 "첨가-믹스-측정" 형식으로 첨가하면 세포 용해가 발생하고, 이어서 기질의 카스파아제에 의한 절단이 일어나고 "글로-타입(glow-type)" 발광 신호가 생성된다.

이 분석은 MCL-1 억제에 민감한 MOLP-8 인간 다발성 골수종 세포주를 사용한다.

재료:

· Perkin Elmer Envision

· Multidrop 384 및 소량 디스펜스 카세트

· 원심분리기

· Countess 자동 세포 계수기

· Countess 계수 챔버 슬라이드

· 분석 플레이트: ProxiPlate-384 Plus, White 384-얕은 웰 마이크로플레이트

· 밀봉 테이프: Topseal A plus

· T175 배양 플라스크

세포 배양:

세포 배양물을 0.2 내지 2.0 x10⁶개 세포/mL로 유지하였다. 세포를 50 mL 코니칼 튜브에서 수집하여 수확하였다. 그 후 세포를 500 g에서 5분 동안 펠렛화한 후 상청액을 제거하고 신선한 예열 배양 배지에 재현탁하였다. 세포를 계수하고, 필요에 따라 희석하였다.

Caspase-Glo 시약:

분석 시약은 완충 용액을 기질 바이알에 옮기고 혼합함으로써 제조하였다. 용액은 4℃에서 최대 1주일 동안 보관할 수 있으며, 이때 신호 손실은 무시할 수 있다.

분석 절차:

화합물을 분석 준비가 된 플레이트(Proxiplate) 내에 전달하고, -20℃에서 보관하였다.

분석에는 항상 기준 화합물을 포함하는 1개의 기준 화합물 플레이트가 포함된다. 40 nL의 화합물(세포 내 최종 0.5% DMSO, 연속 희석, 30 μM 최고 농도 1/3 희석, 10회 용량, 중복)로 플레이트에 스팟팅하였다. 화합물을 실온에서 사용하고 컬럼 2 및 23을 제외한 모든 웰에 4 μL의 예열 배지를 첨가하였다. 음성 대조군은 배지에 1% DMSO를 첨가하여 제조하였다. 양성 대조군은 배지 중 최종 농도가 60 μM인 적절한 양성 대조군 화합물을 첨가하여 제조하였다. 플레이트는 컬럼 23에 4 μL 음성 대조군, 컬럼 2에 4 μL 양성 대조군 및 플레이트의 모든 웰에 4 μL 세포 현탁액을 첨가함으로써 준비하였다. 그 후 세포가 있는 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 분석 신호 시약은 위에서 설명한 Caspase-Glo 용액이며 모든 웰에 8 μL를 첨가하였다. 그 후 플레이트를 밀봉하고, 30분 후에 측정하였다.

테스트 화합물의 활성은 다음과 같이 아폽토시스 유도의 퍼센트 변화로서 계산하였다:

LC = 저 대조군 값의 중앙값

= Screener에서 중심 기준

= DMSO

= 0%

HC = 고 대조군 값의 중앙값

= Screener에서 척도 기준

= 30 μM의 양성 대조군

= 100%의 아폽토시스 유도

%효과 (AC₅₀) = 100 - (샘플-LC) / (HC-LC) *100

%대조군 = (샘플 /HC)*100

%대조군 min = (샘플-LC) / (HC-LC) *100

표: 화학식 I의 대표적인 화합물에 대한 측정된 AC₅₀ 평균 값은 특정 화합물의 모든 배치에 대한 모든 실행에 대해 보고된다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 호변이성질체 또는 입체이성질체 형태, 또는 이의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물:
[화학식 I]

[여기서,
X¹은

(여기서, 'a' 및 'b'는 가변성 X¹이 분자의 나머지 부분에 부착되는 방식을 나타냄)를 나타내며;
R¹은 수소 또는 C_1- ₆알킬을 나타내며;
X²는

(이는 분자의 나머지 부분에 양방향으로 부착될 수 있음)를 나타내며;
R²는 수소 또는 C_1- ₆알킬을 나타내며;
X는 -S- 또는 -N(R^x)-를 나타내며;
R^x는 수소, 메틸, C_2- ₆알킬, -C(=O)-C_1- ₆알킬, -S(=O)₂-C_1- ₆알킬, C_3-6시클로알킬, -C(=O)-C_3- ₆시클로알킬, 또는 -S(=O)₂-C_3- ₆시클로알킬(여기서, C_2- ₆알킬, -C(=O)-C_1-6알킬, -S(=O)₂-C_1- ₆알킬, C_3- ₆시클로알킬, -C(=O)-C_3- ₆시클로알킬, 및 -S(=O)₂-C_3-6시클로알킬은 할로, C_1- ₄알킬, 및 1, 2 또는 3개의 할로 원자로 치환된 C_1-4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 선택적으로 치환됨)을 나타냄].
제1항에 있어서,
X¹은

(여기서, 'a' 및 'b'는 가변성 X¹이 분자의 나머지 부분에 부착되는 방식을 나타냄)를 나타내며;
R¹은 C_1- ₆알킬을 나타내며;
R²는 C_1- ₆알킬을 나타내며;
R^x는 수소 또는 메틸을 나타내는 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
X는 -N(R^x)-를 나타내는 화합물.
제1항에 있어서,
X¹은

를 나타내는 화합물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물 및 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물.
제약상 허용가능한 담체를 치료적 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화합물과 혼합하는 단계를 포함하는, 제5항에서 정의된 제약 조성물의 제조 방법.
의약으로 사용하기 위한, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제5항의 제약 조성물.
암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제5항의 제약 조성물.
암은 전립선암, 폐암, 췌장암, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 흑색종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 및 급성 림프모구성 백혈병(ALL)으로부터 선택되는, 제8항에 따른 사용을 위한 화합물 또는 제약 조성물.
암의 치료 또는 예방 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제5항의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.