KR20220003556A

KR20220003556A - 그램-음성 박테리아 감염, 오염 및 부착물의 예방 및 처리를 위한 신규한 피리미딘 유도체

Info

Publication number: KR20220003556A
Application number: KR1020217037606A
Authority: KR
Inventors: 파트리치오 란셀로티; 세실 우리; 베르나르 피로트; 루시아 무수메시; 니콜라 자크; 에릭 고핀
Original assignee: 유니버시떼 드 리에즈
Priority date: 2019-04-18
Filing date: 2020-04-17
Publication date: 2022-01-10
Also published as: WO2020212553A1; BR112021012834A2; AU2020258017A1; CN113329753A; US20210290625A1; CA3128304A1; JP2022529052A; EP3955929B1; EP3955929A1

Abstract

본 발명은 그램-음성 박테리아 감염의 치료 또는 예방이 필요한 숙주 포유류에서 그램-음성 박테리아 감염의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 검출가능한 동위원소를 임의로 갖고 막투과제와 함께 사용한 신규한 피리미딘 유도체 및 이의 약제학적 조성물, 및 생체재료 또는 의료 장치, 특히 심혈관 장치, 예를 들면, 인공심장판막 또는 심장박동기의 표면 상 그램-음성 생물막 형성 억제제로서의 용도에 관한 것이다. 또한 본 발명은 숙주 포유류에서 그램-음성 박테리아 감염의 진단 또는 예후에서 방사성트레이서로서 사용하기 위한 막투과제와 함께 사용한 피리미딘 유도체에 관한 것이다.

Description

그램-음성 박테리아 감염, 오염 및 부착물의 예방 및 처리를 위한 신규한 피리미딘 유도체

발명의 분야

본 발명은 그램-음성 박테리아 감염의 예방 및 치료에서 사용하기 위한 신규한 피리미딘 유도체 및 생물막 형성의 억제에서 이들의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 그램-음성 박테리아 감염의 진단 또는 예후에서 방사성트레이서로서 사용하기 위해 피리미딘 유도체를 임의로 검출가능한 동위원소와 함께 제공한다.

도입

그램-음성 박테리아, 항생제-내성 박테리아 및 다중약물-내성 그램-음성 박테리아에 의해 야기되는 감염은 전세계적으로 극적으로 증가하여 왔다.

항생제 내성은 그램-양성 박테리아 및 그램-음성 박테리아 둘 다에 관한 공중 보건 문제이지만, 상기 문제는 그램-음성 박테리아에 대해서 더욱 심각한데, 그 이유는 다중약물 내성 (MDR) 그램-음성 박테리아에 대항하는 약물 활성이 극적으로 부족하기 때문이다. 이는 부분적으로 박테리아의 수명을 지속하기 위해 요구되는 분자의 필요한 교환을 손상시키지 않고 추가 보호 층을 제공하는 그램-음성 박테리아의 외부 막에 기인한다. ?캇? 리(Jianguo Li) 등에 의해 문헌 (참조: 2017, Frontiers in Neuroscience, 11, 73)에 나타낸 바와 같이, 그램-음성 박테리아는 이들의 세포벽 구조에 대해서 그램-양성 박테리아와 상이하다. 사실상, 도 1에 나타낸 바와 같이 (도 1로서 재생산됨), 그램-양성 박테리아 (2)는 세포질 또는 내부 막 및 펩티도글리칸 층으로 구성된 외피(envelope)를 갖지만, 그램-음성 박테리아 (1)는 3개의 주요 층으로 이루어진 외피를 갖는다. 그램-음성 (1) 외피는 리포폴리삭카라이드 (LPS)를 포함하는 외부 막 (C), 일반적으로 가교-링크된 펩타이드 쇄를 갖는 펩티도글리칸 세포벽 (A), 및 세포질 또는 또한 통합 막 단백질로 칭명되는 내부 막 (B)을 포함한다. 외부 막 (C) 구조는 막 (C)을 통해 친수성 소분자의 확산을 가능하게 하는 포린으로 칭명되는 기공 (D)을 포함한다.

그램-음성 박테리아 (1)의 외부 막 (C)은, 항생물질 및 숙주 선천 면역 분자를 포함하는 독성 화합물에 대한 투과성 장벽으로서 역할을 한다. 이는 또한 항생물질과 같은 화학제제의 투과 및 체류의 차이를 야기한다. 예를 들면, 그램-음성 박테리아는 반코마이신에 대해 자연적으로 무감응성인데, 이는 이러한 항생제가 외부 막 (C)을 투과할 수 없기 때문이다. 클레브시엘라 뉴모니아애(Klebsiella pneumoniae)는 암피실린에 대해 선천적 무감응성을 나타내고, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)는 설폰아미드, 테트라사이클린, 클로람페니콜 및 트리메토프림에 대해 자연적으로 무감응성이다. 선천적 내성을 제외하고는, 그램-음성 박테리아는 또한 게놈 돌연변이를 통해 항생물질에 대해 내성이 될 수 있다.

세계 보건 기구에 따르면, 신규한 항생물질이 긴급하게 필요한 가장 위태로운 박테리아는 그램-음성 박테리아, 즉, 카르바페넴-내성 아시네토박터 바우만닐(Acinetobacter baumannil), 카르바페넴-내성 슈도모나스 아에루기노사, 및 제3 세대 세팔로스포린-내성 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae) (클레브시엘라 뉴모니아, 에쉐리키아 콜리(Escherichia coli), 엔테로박터 종(Enterobacter spp), 세리티아 종(Serratia spp), 프로테우스 종(Proteus spp), 프로비덴티아 종(Providentia spp), 및 모르가넬라 종(Morganella spp))이다.

단지 2개 이하의, 관련 없는 항생물질이 박테리아에 대항하여 활성인 임상적 단리물을 통상 다중약물-내성 (MDR) 박테리아로서 언급한다. 수개의 다중내성 단리물은 병원에서 관찰되었다. 이는, 메로페넴 또는 이미페넴, 제3-세대 세팔로스포린, 피페라실린/타조박탐, (티게사이클린), 아미노글리코시드, 퀴놀론, 트리메토프림, 콜리스틴 중 2개 이하에 대해 감수성인 아시네토박터 바우만니; β-락타마제 억제제, 피페라실린/타조박탐, 테모실린, 티게사이클린, 아미노글리코시드, 퀴놀론, 트리메토프림 또는 콜리스틴을 포함하는 카르바페넴, 제3-세대 세팔로스포린의 2개 이하에 대해 감수성인 클레브시엘라 종(Klebsiella spp), 엔테로박터 종, 세리티아 종 및 시트로박터 종(Citrobacter spp); 제3-세대 세팔로스포린, 피페라실린/타조박탐, 및 아미노글리코시드에 대해 내성이고, 단지 카르바페넴, 및 신규한 BL/BLI 병용물 (세프톨로잔/타조박탐 또는 세프타지딤/아비박탐)에만 감수성인 프로테우스 종, 모르가넬라 종 및 브로비덴시아 종(Providencia spp)을 포함한다. 이들 프로테아제는 티게사이클린 및 콜리스틴에 대하여 선천적으로 내성이다.

따라서, 신규한 그램-음성 항박테리아 요법이 당해 기술 분야에 절실하게 필요하다.

발명의 요지

본 발명자들은 놀랍게도 막투과제와 함께 투여되는 경우 그램-음성 박테리아에 대항하는 항박테리아 활성을 갖고 숙주 포유류에서 박테리아 감염의 치료 또는 예방 및 박테리아 오염 및 부착물의 처리 및/또는 예방에 사용될 수 있는 신규한 피리미딘 유도체를 발견하였다.

임의로 검출가능한 동위원소를 사용하는 피리미딘 유도체는, 또한 박테리아 감염의 진단 또는 예후에서 방사성트레이서(radiotracer)로서 사용할 수 있다.

또한, 이러한 피리미딘 유도체가 단계 1 또는 2와 같은 초기단계에서 생물막 형성시 그램-음성 박테리아 성장을 제어하기 위한 방법 또는 마지막 단계 3을 포함하는 생물막 형성의 전체 단계에서 박테리아를 사멸시키기 위한 방법에서 사용할 수 있고, 여기서, 생물막은 매트릭스 형성의 성숙 스테이지에 도달하고, 박테리아는 결과적으로 박테리아가 다른 위치로 계속 확산하면서 표면으로부터 분리되기 시작한다는 것이 발견되었다. 이러한 용도의 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 피리미딘 유도체를 막투과제와 병용하여 사용한다.

하나의 측면에서, 본 발명은 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 숙주 포유류에서 그램-음성 박테리아 감염의 치료 또는 예방에서 막투과제와 함께 사용하기 위한 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물을 제공한다:

화학식 (I)

상기 화학식 (I)에서,

X¹ 및 X²는 독립적으로 N, CH, CR⁸이고, 여기서, R⁸은 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐 또는 C_2-6 알키닐이고; 단, X¹ 또는 X² 중 하나가 N과 동일한 경우, X¹ 또는 X² 중 나머지 하나는 CH, CR⁸로부터 선택되고;

-Y-는 -O- 또는 -S-이고;

R¹ 및 R²는 독립적으로 C_1-6-알킬, C_2-6-알케닐, C_2-6-알키닐, C_3-6-사이클로알킬, 아릴, 아릴-C_1-6-알킬이고, 여기서, 상기 알킬 또는 사이클로알킬 모이어티(moiety)는 OH 또는 할로겐으로 임의로 일치환 또는 다치환되고, 상기 아릴 모이어티는 할로겐, -C_1-6 알킬, -C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂로 임의로 일치환 또는 다치환되고;

R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷은 독립적으로 H, 할로겐, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂이다.

특정한 실시형태에서, R³ 및 R⁷은 수소이고, R⁴ 및 R⁵는 독립적으로 할로겐이다. 특정한 실시형태에서, X¹는 CH 또는 CR⁸이고, X²는 N이다. 특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는 화학식 (V)로 나타낸 N-(2-페닐사이클로프로필)-9H-푸린-6-아민 골격을 포함한다:

화학식 (V)

특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는 다음으로부터 선택된다:

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (1c);

9-메틸-N-((1R,2S)-2-페닐사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (2c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (3c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (4c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-이소프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (5c);

9-사이클로프로필-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (6c);

9-부틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (7c);

9-(2급-부틸)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (8c);

9-(3급-부틸)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (9c);

9-사이클로부틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (10c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-펜틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (11c);

9-사이클로펜틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (12c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-헥실-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (13c);

9-사이클로헥실-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (14c);

9-알릴-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (15c);

2-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)에탄올 (16c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (17c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9-(2,2,2-트리플루오로에틸)-9H-푸린-6-아민 (18c);

(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)사이클로펜탄-1,2,3-트리올 (19d);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(에틸티오)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (20c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(에틸티오)-9H-푸린-6-아민 (21c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (22c);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-프로폭시-9H-푸린-6-아민 하이드로클로라이드 (23t.HCl);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (24c);

2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (25c);

2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-9H-푸린-6-아민 (26c);

또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물.

특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (1c); 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물이다.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (17c); 또는

(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)사이클로펜탄-1,2,3-트리올 (19d).

특정한 실시형태에서, X¹은 N이고, X²는 CH 또는 CR⁸이다. 특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는 다음으로부터 선택된다:

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-메틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (27k);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(에틸티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (28x.HCl);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(프로필티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (29x.HCl);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (30k);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(에틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (31x.HCl);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(프로필티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (32x.HCl);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-이소프로필-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (33k.HCl);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(메틸티오)-1-프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (34k.HCl);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민(30k);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-이소프로필-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드(33k.HCl);

특정한 실시형태에서, X¹ 및 X²는 CH 또는 CR⁸이다.

특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는 다음과 같다:

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-7-에틸-2-(메틸티오)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (35p.HCl);

특정한 실시형태에서, R³ 및 R⁷은 H이고, R⁴, R⁵는 불소이다.

본 발명은 추가로 의료 장치의 표면 상 생물막 형성시 그램-음성 박테리아 성장의 억제제로서 생체외에서 막투과제와 함께 사용한 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체의 용도에 관한 것이다.

화학식 (I)

상기 화학식 (I)에서,

-Y-는 -O- 또는 -S-이고;

R¹ 및 R²는 독립적으로 C_1-6-알킬, C_2-6-알케닐, C_2-6-알키닐, C_3-6-사이클로알킬, 아릴, 아릴-C_1-6-알킬이고, 여기서, 상기 알킬 또는 사이클로알킬 모이어티는 OH 또는 할로겐으로 임의로 일치환 또는 다치환되고, 상기 아릴 모이어티는 할로겐, -C_1-6 알킬, -C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂로 임의로 일치환 또는 다치환되고;

R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷은 독립적으로 H, 할로겐, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂로 임의로 일치환 또는 다치환된다.

본 발명은 추가로 유효량의 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체를 막투과제와 함께 의료 장치의 표면 상 도포함을 포함하는 생물막 형성시 그램-음성 박테리아를 사멸시키거나 이의 성장을 예방하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 사람 또는 동물 신체의 치료 방법이 아니다.

화학식 (I)

상기 화학식 (I)에서,

-Y-는 -O- 또는 -S-이고;

특정한 실시형태에서, 의료 장치는 심혈관 장치이다.

본 발명은 추가로 그램-음성 박테리아 감염의 진단 또는 예후에서 막투과제와 함께 사용하기 위한 마커를 포함하는 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체에 관한 것이다:

화학식 (I)

상기 화학식 (I)에서,

-Y-는 -O- 또는 -S-이고;

본원에 기재된 조성물, 용도 및 방법의 특정한 실시형태에서, 막투과제는 폴리믹신 B 노나펩타이드이다.

본 발명은 추가로 그램-음성 박테리아 감염의 예방 또는 치료에서 사용하기 위해 본원에 제공된 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 특정한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 추가로 막-투과제를 포함한다.

상세한 설명

첫번째 측면에서, 본 발명은 이러한 치료 또는 예방을 필요로 하는 숙주 포유류에서 그램-음성 박테리아 감염의 치료 또는 예방에서 사용하기 위한 신규한 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물을 제공한다:

화학식 (I)

상기 화학식 (I)에서,

X¹ 및 X²는 독립적으로 N, CH, CR⁸이고, 여기서, R⁸은 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐 또는 C_2-6 알키닐이고; 단, X¹ 또는 X² 중 하나가 N과 동일한 경우, X¹ 또는 X² 중 나머는 CH, CR⁸로부터 선택되고;

-Y-는 -O- 또는 -S-이고;

특정한 실시형태에서 상기 용도는 막투과제와 함께 사용한 용도이다.

이의 범위 내에서, 본 발명은 화학식 (I)의 피리미딘 유도체의 모든 광학 이성질체를 포함하고, 이들 중 일부는 광학적으로 활성이고, 또한 이의 라세미 혼합물을 포함하는 이들의 혼합물 뿐만 아니라 이들의 다형태(polymorphic forms)이다.

본원에 사용된 용어 "C_1-6-알킬"은, 단독으로 또는 조합하여, 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형, 포화 탄화수소 쇄를 언급하고, 예를 들면, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 2급-부틸, 이소-부틸, 3급-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 4-메틸펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 1,2-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1,2,2-트리메틸프로필 등이다.

본원에 사용된 용어 "C_2-6-알케닐"은, 단독으로 또는 조합하여, 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 2 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 선형 또는 분지형, 불포화 탄화수소 쇄를 언급하고, 예를 들면, 비닐, 알릴, 1-부테닐, 2-부테닐, 이소부테닐, 1-펜테닐, 2-펜테닐, 3-메틸-1-부테닐, 1-메틸-2-부테닐, 2,3-디메틸-2-부테닐, 1-헥세닐, 2-헥세닐, 3-헥세닐 등이다.

본원에 사용된 용어 "C_2-6-알키닐"은, 단독으로 또는 조합하여, 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 2 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 선형 또는 분지형, 불포화 탄화수소 쇄를 언급하고, 예를 들면, 아세틸레닐, 프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 1-펜티닐, 2-펜티닐, 3-메틸-1-부티닐, 1-헥시닐, 2-헥시닐, 3-헥세닐 등이다.

본원에 사용된 용어 "C_3-6-사이클로알킬"은, 단독으로 또는 조합하여, 3 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 포화 사이클릭 탄화수소의 라디칼을 언급하고, 예를 들면, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실이다.

본원에 사용된 용어 "아릴"은, 단독으로 또는 조합하여, 6 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 방향족 환을 언급하고, 예를 들면, 페닐, 안트라세닐, 나프틸 등이다.

본원에 사용된 용어 "C_1-6-알콕시"는, 에테르 산소로부터의 이의 유리 원자가 결합을 갖고 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는, 에테르 산소를 통해 링크된 C_1-6-알킬 그룹을 포함하는 선형 또는 분지형 1가 치환체를 언급하고, 예를 들면, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 펜톡시이다.

본원에 사용된 용어 "-CN"은 탄소-질소 삼중 결합을 언급한다.

본원에 사용된 용어 할로겐은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 언급한다.

허용가능한 염은, 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 인산, 황산, 트리플루오로아세트산, 트리클로로아세트산, 옥살산, 말레산, 피루브산, 말론산, 석신산, 시트르산, 타르타르산, 푸마르산, 만델산, 벤조산, 신남산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 피크르산 등과 같은 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 임의로 알킬화 암모늄 염을 포함하고, 문헌 [참조: Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977) 및 본원에 참조로서 포함됨]에 열거된 약제학적으로 허용되는 염에 관련된 산 또는 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘 등을 포함한다.

용어 전구약물은 화합물로서 문헌에 정의되어 있고 [참조: Burger's Medicinal Chemistry and Drug discovery (5^th edition 1995)], 이는 이들의 약리학적 효과를 나타내기 전에 생체내 변환을 겪는다. 따라서, 본원에 사용된 용어 전구약물은, 생물학적 조건하에 수득된 생체가수분해성(biohydrolysable) 모이어티, 생체가수분해성 에스테르 관능기, 생체가수분해성 카바메이트 관능기, 생체가수분해성 우레이드 등을 포함하는, 화학식 (I)의 화합물의 유사체 또는 유도체를 언급한다. 전구약물은 문헌 [참조: Burgers medicinal chemistry and Drug discovery (1995)172-178, 949-982 (Manfred E.Wolff)]에 기재된 잘 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "막투과제"는 그램-음성 박테리아의 외부 막을 통해 투과할 수 있는 분자를 언급한다. 이는 예를 들면, 포린에 의해 형성된 기공을 사용하여 외부 막 층을 가로질러 확산하는 박테리아 또는 소수성 분자 내로 접근하는, β-락탐과 같은 소 친수성 분자이다.

바람직한 막투과제는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 폴리믹신, 폴리믹신 유도체, 아미노글리코시드, 2염기성 마크롤라이드, 올리고-아실-리실 (OAKs) 또는 예를 들면 디리피드 초단파 양이온성 지질펩타이드(dilipid ultrashort cationic lipopeptide)와 같은 양이온성 펩타이드를 포함한다.

폴리믹신은 예를 들면 폴리믹신 B (PMB) 및 폴리믹신 E (또한 콜리스틴 로 칭명됨)이다. 폴리믹신은 사이클릭 리포데카펩타이드이고, 5개의 유리 아미노 그룹 (디아미노부티르산 잔기) 및 화학식 (VII)로 나타낸 C₈-C₉ 지방 산 측쇄를 갖는다. 따라서 폴리믹신은 양이온성 및 친유성 둘 다이다.

화학식 (VI)

폴리믹신 유도체는 예를 들면 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN) (여기서, 지방 아실 테일(tail) 및 폴리믹신 B의 N-말단 디아미노부티릴 (Dab) 잔기는 화학식 (VII)로 나타낸 바와 같이 없다(lacking)):

화학식 (VII)

또는 폴리믹신 B 유도체 (여기서, 폴리믹신의 선형 쇄의 DAB 잔기 (디아미노부티릴 잔기)는 각각 화학식 (VIII) 및 화학식 (IX)로 나타낸 바와 같이 아미노부티르산 또는 세린로 대체되었다)이다:

화학식 (VIII)

화학식 (IX)

화학식 (VIII) 및 (IX)에 상응하는 폴리믹신 유도체는 또한 각각 당해 기술 분야에서 SPR7061 및 SPR741로 칭명된다.

아미노글리코시드는 아미노-개질된 글리코시드이다. 아미노글리코시드는 아미노 그룹으로 치환된 2 내지 5개의 글리코시드를 갖는다. 아미노글리코시드는 예를 들면 스트렙토마이신, 카나마이신, 토브라마이신, 겐타마이신 등이다.

2염기성 마크롤라이드는, 예를 들면 아지트로마이신, 디리트로마이신 등이다.

올리고-아실-리실 (OAKs)은 화학식 (X)로 나타낸 바와 같이 양이온성 아미노 산, 예를 들면, 리신, 히스티딘 및 아르기닌과 교호하는(alternating) 아실 쇄를 갖는 펩타이드이다.

화학식 (X)

바람직한 올리고-아실-리실은 C₁₂K-7α₈이고, 여기서, α는 화학식 (XI) (여기서, n은 7이다)로 나타낸 바와 같이 아미노옥타노일리실을 나타낸다:

화학식 (XI)

상기 화학식에서, n=7

디리피드 초단파 양이온성 리포펩타이드는 7 (C₇) 내지 14 (C₁₄)개의 탄소 길이 범위일 수 있는 가변적인 지방족 디리피드를 갖는 단지 4개의 아미노 산의 양이온성 펩타이드이다.

바람직한 초단파 디리피드 양이온성 리포펩타이드는 짧은 서열 KKKK 및 KKGK를 갖고, 화학식 (XII) 및 (XIII)로 나타낸 바와 같이 9개 탄소-길이의 지방족 디리피드로 아세틸화된다.

화학식 (XII)

화학식 (XIII)

가장 바람직한 투과제는 폴리믹신 B 노나펩타이드이다.

본원에 사용된 용어 "박테리아 감염"은 일반적으로 바람직하지 않는 그램-음성 박테리아의 존재를 언급한다. 특정한 실시형태에서 상기 원하지 않는 감염은 박테리아에 의한 신체, 신체 조직 또는 세포의 침습이다. 그러나, 이는 박테리아 부착물 (이는 전형적으로 바이오-센서, 심혈관 임플란트, 카테터, 콘택트 렌즈, 및 수술 도구 상과 같은 표면 상 원하지 않는 오염을 언급한다) 또는 다른 유형의 오염 (식품, 사료 및 다른 유체 제품에서와 같은)을 언급하기 위해 본원에서 사용된다.

본 발명의 맥락에서, 사람 및 동물에서 박테리아 감염은, 예를 들면 뉴모니아, 패혈증, 심내막염, 수막염, 요로, 위장염, 피부 및 연조직 감염과 같은 그램-음성 박테리아 감염을 언급한다.

박테리아 감염의 근원은 다양할 수 있고, 예를 들면 생체재료 임플란트의 사용에 의해 야기될 수 있다.

생체재료, 또는 생체재료 임플란트는, 인공관절, 심장박동기, 이식가능한 심장율동전환기-제세동기, 혈관내 또는 요로 카테터, 심장동맥 스텐트를 포함하는 스텐트, 인공심장판막, 생체인공삽입물, 안내 렌즈, 치아 임플란트, 유방 임플란트, 기관내 관, 위조루 관 등과 같은 숙주 포유류에서 임상적 사용을 위한 모든 이식가능한 이물을 언급한다.

숙주 포유류는, 바람직하게는 사람, 뿐만 아니라 박테리아 처리의 치료 또는 예방을 필요로 하는 동물을 언급하는 것을 의도한다.

박테리아 감염의 예방은, 감염 획득 위험의 감소, 또는 감염 재발의 감소 또는 억제를 언급하는 것을 의도한다. 예를 들면, 피리미딘 유도체는 감염을 예방하기 위해 수술적 처치 전 예방으로서 막투과제와 함께 투여할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "그램-음성 박테리아"는 당해 기술 분야에 공지된 용어, 즉, 3개의 주요 층, 즉, 리포폴리삭카라이드 (LPS)를 포함하는 외부 막, 일반적으로 가교-링크된 펩타이드 쇄를 갖는 펩티도글리칸 세포벽 및 세포질 또는 또한 통합 막 단백질로 칭명되는 내부 막으로 이루어진 외피를 특징으로 하는 박테리아와 상응한다. 특정한 실시형태에서, 그램-음성 박테리아는, 예를 들면 아시네토박터 종(Acinetobacter spp.), 예를 들면, 아시네토박터 바우만니(Acinetobacter baumannii), 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis), 캄필로박터 종(Campylobacter spp.); 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae), 예를 들면, 시트로박터 종(Citrobacter spp.), 엔테로박터 종(Enterobacter spp.), 에쉐리키아 콜리(Escherichia coli), 클레브시엘라 종(Klebsiella spp.), 살모넬라 종(Salmonella spp.), 세리티아 마르세센스(Serratia marcescens), 시겔라 종(Shigella spp.), 예르시니아 종(Yersinia spp.); 하에모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenza), 헬로코박터 파일로리레지오넬라 뉴모필라(Helocobacter pylorilegionella pneumophila), 네이세리아 종(Neisseria spp.), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 비브리오 콜레라(Vibrio cholera) 등이다.

특정한 실시형태에서, "그램-음성 박테리아"는 퀴놀론 (예를 들면, 시프로플록사신), 콜리스틴 (폴리믹신), 카르바페넴 (예를 들면, 이미페넴, 메로페넴), 세팔로스포린 (예를 들면, 세포탁심, 세프타지딤), 및 다른 β-락탐 항생물질 등을 포함하는 하나 이상의 통상 사용되는 항생물질에 대해 내성이다.

사람 이외에, 고양이, 개, 및 말과 같은 반려 동물은, 또한 숙주 적응 없이 그램-음성 박테리아에 의해 집락형성되고 감염될 수 있고, 따라서 사람 감염을 위한 저장소로서 작용할 수 있다. 박테리아는 또한 동물이 숙주가 되는 경우 별개의 내성을 발달시킬 수 있다. 농업에서 항생제 사용 (예를 들면 식용 동물에서 항생물질의 부적합한 사용 및 농업 및 수경재배의 다른 측면)은 내성 박테리아의 발생 및 이들의 사람으로의 확산에 기여한다.

특정한 실시형태에서, 본 발명은 이미다졸로 그룹을 포함하고 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체 (여기서, X¹은 CH 또는 CR⁸이고, X²는 N이다); 또는 이의 허용가능한 염 또는 전구약물을 언급하고; 상기 이미다졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는 또한 푸린 유도체로 칭명될 수 있다.

놀랍게도 상기 이미다졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체가 그램-음성 박테리아에 대항하여 항박테리아 활성을 나타낸다는 것을 발견하였다. 바람직한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는 막투과제와 함께 투여된다.

바람직한 이미다졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는, 예를 들면 9-메틸-N-((1R,2S)-2-페닐사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (2c)와 같은 화학식 (IV)로 나타낸 페닐사이클로프로필 그룹; 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물을 포함한다:

화학식 (IV)

보다 바람직한 이미다졸로 그룹을 갖는 피리미딘 유도체는 화학식 (II)로 나타낸 바와 같이 3,4-디플루오로페닐사이클로프로필 그룹을 포함한다:

화학식 (II)

가장 바람직한 이미다졸로 그룹을 갖는 피리미딘 유도체는 예를 들면 화학식 (III)로 나타낸 바와 같이 3,4-디플루오로페닐사이클로프로필아미노 그룹으로 치환되고:

화학식 (III)

예를 들면, 다음과 같다:

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (17c.);

가장 바람직한 이미다졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는 다음과 같다:

특정한 실시형태에서, 본 발명은 피라졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체에 관한 것이고, 화학식 (I) (여기서, X¹은 N이고, X²는 CH 또는 CR⁸이다); 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물로 나타낸다.

본 발명자들은 놀랍게도 상기 피라졸로 그룹을 갖는 피리미딘 유도체가 그램-음성 항박테리아 활성을 나타낸다는 것을 발견하였다. 특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는 막투과제와 함께 투여된다.

바람직한 피라졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는 3,4-디플루오로페닐사이클로프로필 그룹으로 치환되고, 가장 바람직한 피라졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는 3,4-디플루오로페닐사이클로프로필아미노 그룹으로 치환되고, 예를 들면, 다음과 같다:

가장 바람직한 피라졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는 다음과 같다:

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(에틸티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (28xHCl);

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-이소프로필-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드(33kHCl);

특정한 실시형태에서, 본 발명은 피롤로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체에 관한 것이고, X¹ 및 X²는 CH 또는 CR⁸인 화학식 (I), 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물로 나타낸다.

놀랍게도 상기 피롤로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체가 항생제 활성을 나타낸다는 것을 발견하였다. 특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체를 막투과제와 함께 투여한다.

바람직한 피롤로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는, 3,4-디플루오로페닐사이클로프로필 그룹을 포함한다. 가장 바람직한 피롤로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는, 3,4-디플루오로페닐사이클로프로필아미노 그룹을 포함한다.

가장 바람직한 피롤로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는

또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물이다.

추가로 바람직한 화학식 (I)에 따른 피리미딘 유도체는 ³H, ¹⁸F,¹⁹F, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ¹²⁰I, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁵O, 및 ¹³N으로부터 선택된 적어도 하나의 검출가능한 동위원소를 포함한다.

추가로 바람직한 화학식 (I)에 따른 피리미딘 유도체는 ³H, ¹⁸F,¹⁹F, ¹¹C, ¹⁴C 및 ¹²³I로부터 선택된 검출가능한 동위원소를 포함한다.

특히 바람직한 화학식 (I)에 따른 피리미딘 유도체는 ¹⁸F 및 ¹¹C로부터 선택된 검출가능한 동위원소를 포함한다.

특히 바람직한 화학식 (I)에 따른 피리미딘 유도체 또는 이의 염은 검출가능한 동위원소 ¹⁸F를 포함한다.

적어도 하나의 검출가능한 동위원소를 포함하는 바람직한 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염은, 또한 페닐사이클로프로필 그룹 (IV)을 포함한다:

화학식 (IV)

적어도 하나의 검출가능한 동위원소를 포함하는 특히 바람직한 피리미딘 유도체는 또한 3,4-디플루오로페닐사이클로프로필 그룹을 포함한다.

특정한 실시형태에서, 박테리아 감염은 엔테로박테리아세아에, 보다 특히 이. 콜리(E. coli)에 의해 야기되는 감염이다.

또다른 특정한 실시형태에서, 박테리아 감염은 슈도모나스 아에루기노사에 의해 야기되는 감염이다.

특정한 실시형태에서, 막투과제는 약물이다. 추가 특정한 실시형태에서, 막투과제는 화학식 (VI)로 나타낸 폴리믹신 B 노나펩타이드이다.

화학식 (IV)

다른 특정한 실시형태에서, 막투과제는 7 (C₇) 내지 14 (C₁₄)개의 탄소-길이 범위의 지방족 지질에 링크된 10개 미만의 아미노 산, 바람직하게는 7개의 아미노 산의 디리피드 초단파 양이온성 지질펩타이드이다.

또한 다른 특정한 실시형태에서, 막투과제는 예를 들면 리실-리실-아미노도데카노일-리실-아미드 서열과 같이 양이온성 아미노 산과 교호하는 8 내지 15개의 탄소, 바람직하게는 12개의 탄소 길이를 포함하는 아실 쇄를 갖는 올리고-아실-리실이다. 바람직한 올리고-아실-리실은 화학식 (XI) (여기서, n은 7이다)로 나타낸 바와 같이 C₁₂ K-7 α₈이다:

여기서, n=7

피리미딘 유도체 및 이의 허용가능한 염을 하기 화학적 경로에 따라서 제조한다:

특정한 실시형태에서, 이미다졸로 그룹을 포함하거나 푸린 유도체에 상응하는 화학식 (I)에 따른 피리미딘 유도체 또는 이의 허용가능한 염은, 먼저 다음을 포함하는 일반적인 통상의 화학적 경로에 따라 제조된다: 반응식 1에 따른 출발 생성물, 2-치환된-4,6-디할로게노피리미딘-5-아민 (Xh), 예를 들면, 2-치환된-4,6-디클로로피리미딘-5-아민의 제조, 및 반응식 2에서 하기 단계 ib 내지 iiib에 따라 출발 생성물을 시약과 추가로 반응시킴. 일반적인 화학적 경로는 -S- 또는 -O-와 동일한 -Y-를 갖는 이미다졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체에 대해 공통이다. 3개 중간체 Xa, Xb, Xc (여기서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷은 화학식 (I)에 정의된 바와 같다)의 형성을, 3 단계 ib 내지 iiib에 따라서 연속적으로 제공한다.

최종적으로, -Y- = -O-를 갖는 이미다졸로 그룹을 포함하는 피리미딘 유도체는, 티오에테르 (여기서, Y는 S이다) 피리미딘 유도체를 상응하는 에테르 (Y = O) 피리미딘 유도체로 전환시키는 (반응식 3) 추가 화학적 경로에 의해 구분된다.

1 출발 생성물: 하기 화학적 경로에 따른 2-치환된 4,6-디할로게노피리미딘-5-아민, 예를 들면, 2-치환된 4,6-디클로로피리미딘-5-아민의 제조:

반응식 1

여기서, R¹은 화학식 (I)에 상기 정의된 바와 같다.

수성 알칼리성 매질, 예를 들면, KOH에서 20℃ 내지 100℃의 온도에서 티오바르비투르산을 할라이드 R¹hal와 반응시키고 (단계 ia), 이어서, 또다른 산, 예를 들면, 아세트산의 존재하에 -20℃ 내지 실온까지 가변적인 저온에서 질산을 사용하여 질화 반응시키고 (단계 iia), -20℃ 내지 100℃까지 가변적인 온도에서 유기 염기, 예를 들면, 디에틸아민, 2,6-루티딘 등을 사용하여 포스포릴 할라이드, 포스포릴 클로라이드와 방향족 친핵성 치환하여 (단계 iiia), 2-치환된 4,6-디할로게노-5-니트로피리미딘 (Xg), 예를 들면, 2-치환된 4,6-디클로로-5-니트로피리미딘을 수득한다.

이어서, 상기 2-치환된 4,6-디할로게노-5-니트로피리미딘 (Xg)를 실온에서 산성 배지, 예를 들면, 아세트산 중 철에 의해 환원시켜 상응하는 2-치환된 4,6-디할로게노피리미딘-5-아민 (Xh), 예를 들면, 2-치환된 4,6-디클로로피리미딘-5-아민을 수득한다 (단계 iva).

2°하기 단계 ib 내지 ivb에 따른 출발 생성물의 시약과의 반응

반응식 2

첫번째 단계 (ib)에서, N⁴,2-이치환된 6-할로게노피리미딘-4,5-디아민 (Xa), 예를 들면, N⁴,2-이치환된 6-클로로피리미딘-4,5-디아민을 R²NH₂를 상기 2-치환된 4,6-디할로게노피리미딘-5-아민 (Xh), 예를 들면, 2-치환된 4,6-디클로로피리미딘-5-아민과 반응시켜 수득하고, 알콜, 예를 들면, 메탄올에서, 예를 들면, 100℃의 온도에서 수행한다.

첫번째 단계에 후속하여 트리알킬 오르토포메이트, 예를 들면, 트리에틸 오르토포메이트를 통한 중간체 Xa의 폐환 반응을, 예를 들면, 130℃의 온도에서, 산, 예를 들면, 아세트산의 존재하에 수행하여 (단계 iib) 상응하는 중간체 2,9-이치환된 6-할로게노-9H-푸린 (Xb), 예를 들면, 2,9-이치환된 6-클로로-9H-푸린을 수득한다.

단계 iiib에서, 2,9-이치환된 N-((R³-R⁷)-치환된 페닐)사이클로프로필-9H-푸린-6-아민 (Xc)을 예를 들면, 90℃의 온도에서 중간체 (Xb)의 할로겐 원자, 바람직하게는 염소 원자의 (R³-R⁷)-치환된 페닐사이클로프로필아민으로의 친핵성 치환에 의해 수득한다.

펜탄-1,2,3-트리올 중간체의 아세토나이드의 경우에, 탈보호가 산성 하이드로알콜성(hydroalcoholic) 조건에서 발생하여 펜탄-1,2,3-트리올 (Xd) (단계 ivb)를 제조한다. 반응을 실온에서 수행한다.

3° 티오에테르 (Y = S) 피리미딘 유도체의 상응하는 에테르 (Y = O) 피리미딘 유도체로의 전환:

반응식 3

이미다졸로 그룹 (Xt), 피라졸로 (Xu) 및 피롤로 그룹 (Xv)을 각각 포함하는 피리미딘 유도체에 상응하는 화합물 Xt, Xu 및 Xv는, 상응하는 메틸티오 화합물 Xc, Xk 및 Xp로부터 출발하여 2 단계로 수득할 수 있다 (반응식 3).

첫번째 반응은 실온에서 또는 가열하에 수행하여 이러한 티오에테르 관능기의 황 원자를 산화하여 메틸설포닐 그룹을 수득하는 것으로 이루어진다 (단계 ic). Xq, Xr 및 Xs를 알콜레이트로 치환하여 에테르 유도체 Xt, Xu 및 Xv를 수득하고 (단계 iic) 10℃ 내지 80℃의 온도에서 수행하였다.

대안적으로 각각 이미다졸로, 피라졸로 또는 피롤로 그룹을 포함하는 화학식 (I)의 피리미딘 유도체에 상응하는 화합물 Xw, Xx, Xy (여기서, Y는 S와 동일하고 R¹은 -CH₃과 상이하다)는, 반응식 3bis에 따라 수득할 수 있다. 메틸설파닐-치환된 피리미딘 유도체 (여기서, Y는 S이고, R¹은 메틸 그룹이다)의 다른 상응하는 알킬설파닐-치환된 피리미딘 유도체 (여기서, Y는 S이고, R¹은 메틸 그룹과 상이하다)로의 전환에 상응한다. 전환을 2 단계로 수행한다. 상응하는 메틸티오 화합물 Xc, Xk, Xp로부터 시작하는 첫번째 단계는, 메틸설포닐 그룹을 수득하기 위한 티오에테르 관능기의 황 원자의 산화 반응이고 (단계 ic) 반응식 3에서와 같이 실온에서 또는 가열하에 수행한다.

반응식 3 bis

두번째 단계 (반응식 3bis에서 iiic)에서 Xq, Xr, Xs의 메틸설포닐 그룹과 알킬티올을 치환 반응시켜 알킬설파닐-치환된 유도체 Xw, Xx, Xy (여기서, R¹은 -CH₃과 상이하다)을 수득한다. 치환 반응을 10℃ 내지 100℃의 온도에서 수행한다.

두번째 실시형태에서, 피라졸로 그룹을 포함하고 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체 (여기서, X¹은 N이고, X²는 CH 또는 CR⁸이다); 또는 이의 허용가능한 염의 제조를 일반적으로 하기 화학적 경로에 따라서 수행한다:

반응식 4

여기서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷은 화학식 (I)에 정의되어 있다.

예를 들면, 80℃의 온도에서 티오바르비투르산과 R¹-할라이드 간의 반응 (단계 id) 후, 상기 2-치환된 피리미딘 4,6-디올 (Xe)를 포스포릴 할라이드, 예를 들면, 포스포릴 클로라이드와, DMF의 존재하에 0℃ 내지 110℃의 온도에서 반응시켜 상응하는 2-치환된 4,6-디클로로피리미딘-5-카브알데히드 (Xi)를 수득한다 (단계 iid).

치환된 하이드라진에 의한 (Xi)의 폐환 반응으로 상응하는 1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (Xj)를 -80℃ 내지 20℃의 온도에서 제공하였다 (단계 iiid).

티오에테르 (Y = S) 피리미딘 유도체의 상응하는 에테르 (Y=O) 피리미딘 유도체 (Xu)로의 추가의 전환을 상기한 반응식 3에 따라 수행하였다.

대안적으로 피라졸로 그룹을 포함하는 화학식 (I)의 피리미딘 유도체를 반응식 4bis에 따라 제조할 수 있고, 여기서, 단계 (id) 및 (iid)는 반응식 4와 동일하지만, (Xi)의 폐환은 비-치환된 하이드라진에 의해 단계 (vd)에서 수행하여 비-알킬화 1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (Xi')를 -80℃ 내지 20℃의 온도에서 제공하고 (단계 vd), 이어서, 단계 vid에서 N-알킬화하여 (Xj)를 0℃ 내지 80℃의 온도에서 제공한다.

반응식 4bis

세번째 실시형태에서, 피롤로 그룹을 포함하고 화학식 (I) (여기서, X¹ 및 X²는 CH 또는 CR⁸이다)로 나타내는 피리미딘 유도체 또는 이의 허용가능한 염의 제조를 일반적으로 하기 화학적 경로에 따라 수행한다:

반응식 5

여기서, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷은 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.

상기 2-치환된 6-아미노-4-하이드록시피리미딘 (Xl)을 6-아미노-2-머캅토피리미딘-4-올과 R¹-할라이드를 알칼리성 매질 중에 70℃ 내지 110℃ 온도에서 반응시켜 수득한다 (단계 ie).

(Xl)을 할로게노아세트알데히드, 예를 들면, 클로로아세트알데히드에 의해 60℃ 내지 100℃의 온도에서 상응하는 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (Xm)으로 전환시킨다 (단계 iie).

이어서, 0℃ 내지 110℃의 온도에서 포스포릴 할라이드, 예를 들면, 포스포릴 클로라이드를 사용하여 방향족 친핵성 치환을 성취하여 (Xn) (단계 iiie)을 수득하고, 이어서, N-알킬화하여 (Xo) (단계 ive)를 0℃ 내지 100℃의 온도에서 수득한다.

2,7-이치환된 N-((R³-R⁷)-치환된 페닐)사이클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 (Xp)을 40℃ 내지 90℃의 온도에서 (Xo)의 염소 원자를 적절한 페닐사이클로프로필아민으로 친핵성 치환하여 수득한다 (단계 ve).

대안적으로, 피롤로 그룹을 포함하는 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체 (여기서, X¹ 및 X²는 CH 또는 CR⁸이다)는 반응식 5bis에 따라 제공될 수 있고, 여기서, 단계 ie 내지 iiie는 반응식 5과 동일하지만, (Xn)에서 할로겐 원자, 예를 들면, 염소 원자의 친핵성 치환은 (R³-R⁷)-치환된 페닐사이클로프로필아민을 사용하여 40℃ 내지 90℃의 온도에서 수행되어 (단계 vie) (Xo')를 제공하고, 이어서, R²-할라이드로 0℃ 내지 100℃의 온도에서 N-알킬화하여 (단계 viie) (Xp)를 제공한다.

반응식 5bis

티오에테르 (Y = S) 피리미딘 유도체의 상응하는 에테르(Y = O) 피리미딘 유도체 (Xv)로의 추가의 전환은 상기한 반응식 3에 따라 수행될 수 있다.

동일한 반응을 적어도 하나의 검출가능한 동위원소를 포함하는 화학식 (I)으로 나타내는 피리미딘 유도체 또는 이의 허용가능한 염의 제조를 위해 사용하고, 마지막 단계로서 검출가능한 동위원소를 도입한다. 이러한 검출가능한 동위원소 도입 또는 표지화 단계는 당해 기술분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있고, 예를 들면, 문헌 [참조: Lanstrom et al Acta.Chem.Scand 1999, 53,651]에 기술된다.

특정한 실시형태에서, 본 발명의 치료학적 용도에서, 본 발명에 따른 피리미딘 유도체를 환자에게 수일 동안 (특히 예방의 경우에) 투여한다. 피리미딘 유도체를 자체로 또는 약제학적 조성물로서 투여할 수 있고, 비-독성 용량은 1일당 3 g보다 더 낮다.

본 발명의 추가의 바람직한 측면은, 그램-음성 박테리아 감염의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 본원에 기재된 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물을 포함하는 약제학적 조성물이다.

약제학적 조성물은 생리학적 적합성(compatibility)을 갖는 무수 분말 또는 액체 조성물 형태일 수 있다. 특정한 실시형태에서, 조성물은 막투과제를 추가로 포함한다. 추가 실시형태에서, 조성물은, 피리미딘 유도체 및 막투과제 이외에, 보조 물질, 보존제, 용매 및/또는 점도 조절제를 포함한다. 용매는, 예를 들면, 물, 염수 또는 임의의 다른 생리학적 용액, 에탄올, 글리세롤, 오일, 예를 들면, 식물성 오일, 또는 이의 혼합물을 의미한다. 점도 조절제는, 예를 들면, 카복시메틸셀룰로스를 언급한다.

임의로 막투과제를 갖는 피리미딘 유도체는 경구, 정맥내, 혈관내, 근육내, 비경구, 또는 국소 투여를 통해 이의 효과를 나타내고, 추가로 비경구 투여를 위한 조성물, 특히 주입 조성물로 또는 국소 투여를 위한 조성물로 사용될 수 있다. 이는 또한 특히 에어로졸 조성물로 사용되는 경우, 나노의학 적용을 위해 나노입자로 적재되거나 이의 생체이용률을 개선시키기 위해 페길화(PEGylated)될 수 있다. 에어로졸 조성물은, 예를 들면, 용액, 현탁액, 미분화 분말 혼합물 등이다. 조성물은 네뷸라이저, 계량된 용량 흡입기 또는 무수 분말 흡입기 또는 이러한 투여를 위해 디자인된 임의의 장치를 사용하여 투여될 수 있다.

생약 조성물의 예는 정제, 캡슐, 분말, 알약, 시럽, 츄잉제, 과립 등을 포함한다. 이들은 잘 공지된 기술을 통해 그리고 전형적인 첨가제, 예를 들면, 부형제, 윤활제, 및 결합제를 사용하여 제조할 수 있다.

적합한 보조 물질 및 약제학적 조성물은 오슬로(Oslo) 등에 의해 편집된 문헌 [참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th ed., 1980, Mack Publishing Co.]에 기재되어 있다. 전형적으로, 적절한 양의 약제학적으로-허용가능한 염을 조성물에 사용하여 조성물이 등장성이 되게 한다. 약제학적으로 허용되는 물질의 예는 염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액을 포함한다. 용액의 pH는 바람직하게는 약 5 내지 약 8, 및 바람직하게는 약 7 내지 약 7.5이다.

본 발명의 또한 추가의 측면은 이러한 치료 또는 예방이 필요한 숙주 포유류에서 그램-음성 박테리아 감염의 치료 또는 예방 방법이다. 상기 방법은 숙주에게 유효량의 화학식 (I)에 정의된 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물을 투여함을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 본 발명의 피리미딘 유도체는 막투과제와 함께 투여된다. 특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는 디플루오로페닐사이클로프로필 그룹로 치환되고; 예를 들면, 본 발명의 첫번째 측면에서 선택된 것들; 및 가장 바람직하게는 하기 그룹으로부터 선택된 피리미딘 유도체이다:

본 발명에 따른 화합물은 단독 활성 성분으로서 투여될 수 있거나, 또는, 즉, 막투과제와 함께 고정 또는 유리 병용물로서, 함께 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물 및 막투과제는 함께 또는 개별적으로 투여될 수 있고, 개별적으로 투여되는 경우, 투여는 임의의 순서로 동시에 또는 순차적으로 일어날 수 있다. 본 발명에 따른 화합물 및 막투과제의 양, 및 상대적인 투여 시기는 목적하는 병용 치료학적 효과를 성취하기 위해 선택될 것이다. 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물의, 막투과제와의 병용 투여는 병용물로 부수적(concomitantly) 투여로 투여될 수 있다: (1) 둘 다의 화합물을 포함하는 단일 약제학적 조성물; 또는 (2) 화합물 중 하나를 각각 포함하는 개별적인 약제학적 조성물. 대안적으로, 병용물은 순차적으로 방식으로, 개별적으로 투여될 수 있고, 여기서, 하나의 치료 제제는 첫번째로 투여되고, 다른 제제가 두번째로 투여되거나, 그 반대이다. 이러한 순차적으로 투여는 적합한 시간 내에 근접할 수 있거나 적합한 시간 내에 떨어져 있을 수 있다.

본원에 사용된 막-투과제와 함께 투여는 하나의 약제학적 조성물로 투여, 개별적인 조성물의 동시 투여 및 개별적인 투여, 예를 들면 본원에 기재된 순차적으로 투여를 포함하고, 단, 체내에서 피리미딘 유도체 및 막-투과제의 둘 다의 존재를 보장한다.

또한 추가의 측면에서, 본 발명은 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물의 숙주 포유류에서 생체재료 임플란트의 표면 상 그램-음성 생물막 형성 억제제로서의 용도를 제공한다.

보다 특히, 본 발명은, 그램-음성 박테리아 감염 또는 오염의 예방에서 사용하기 위한; 화학식 (I)의 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물을 제공하고, 여기서, 상기 피리미딘 유도체는 생체재료 임플란트의 표면에 도포된다. 특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는 막투과제와 함께 도포된다. 특정한 실시형태에서, 감염 또는 오염은 임플란트-관련 감염 또는 오염 (즉, 임플란트의 존재에 의해 야기됨)이다. 유사하게는, 본 발명은 예를 들면, 임플란트에서의 박테리아 오염 또는 부착물의 예방 및 처리를 위한 본원에 기재된 본 발명의 유도체의 용도를 제공한다. 명세서 전반에 걸쳐서, 유도체의 용도는 이들 상이한 생체내, 생체외 및 시험관내 측면을 위해 구상된다는 것을 이해하여야 한다.

생체재료 임플란트, 예를 들면, 심장박동기 및 삽입형 제세동기 [ICDs])는 0.8 내지 5.7 퍼센트 범위의 감염율로 감염될 수 있다.

감염은 생체재료 임플란트 또는 리드(leads)의 피하 세그먼트를 포함하는 피하 주머니(pocket)와 연관될 수 있다. 보통 세균혈증 및/또는 혈관내 감염에 연관된 리드의 경정맥 부분에 관련된 심각한 감염이 또한 발생할 수 있다. 이는 이러한 임플란트를 갖는 환자가 이와 관련된 질환으로 고통받을 수 있음을 암시한다.

임플란트 및/또는 주머니 자체는 보통 이식시 오염 때문에 감염의 원천일 수 있거나, 감염은 상이한 원천으로부터의 세균혈증에 부수적일 수 있다.

피부 균무리(skin flora)에 의한 심장박동기 주머니의 수술전후 오염은 피하 감염의 가장 통상의 원천인 것으로 나타난다.

예를 들어, 심장 임플란트-관련 감염 심내막염(Cardiac implant-related infective endocarditis) (CDRIE)은 생명을-위협하는 상태이고, 이식 (유럽에서 매년 81,000건의 심장박동기 이식) 건수 증가 때문에 발생정도가 증가한다.

감염된 생체재료 임플란트의 성공적인 처치는, 관련 성분에도 불구하고, 일반적으로 원인 박테리아를 표적화하는 임플란트의 제거 및 항생제의 투여를 요구한다. 중요하게는, 의약 치료 단독은 높은 사망률 및 재발 위험과 연관된다.

인공판막 심내막염 (PVE; Prosthetic valve endocarditis)은 잠재적으로 치명적인 결과를 갖는 심각한 감염이다.

박테리아는 수술 중 직접 오염에 의해 또는 수술 후 초기 수일 및 수주 동안 혈행 확산을 통해 인공 판막에 도달할 수 있다. 박테리아는 보철-고리(prosthesis-annulus) 계면에 및 판막주변(perivalvular) 조직에 봉합사 경로를 따라 직접 접근하는데, 그 이유는 판막 봉합 환, 심장 고리 및 고정 봉합사가 판막 이식 후 조기에 내피화되지 않기 때문이다. 판막 구조는 숙주 단백질, 예를 들면, 섬유결합소 및 피브리노겐으로 코팅되고, 여기에 박테리아가 접착하고 감염을 개시할 수 있다.

PVE에서 가장 빈번하게 접하는 박테리아는 에스. 아우레우스 (S. aureus) (23%) 및 코아굴라제-음성 스타필로코키 (16,9%)이지만, 에쉐리키아 콜리는 또한 1,3%로 보고된다.

인공관절주위 감염(Periprosthetic joint infection) (PJI)은 관절 대체술의 1 내지 2 퍼센트에서 발생하는 또다른 발병기전이고, 관절성형술 실패의 주요 원인이다.

생물막은 PJI의 발병기전에서 중요한 역할을 한다. 생물막 내에 박테리아는 요법에 내성이 되고; 결과적으로, 항박테리아 요법은 종종, 생물막이 죽은조직제거술에 의해 물리적으로 붕괴되거나 제거되지 않는다면 성공적이지 않다.

인공관절 감염은 하기 특징을 갖는다. 조기-발병 감염은 보통 이식 동안 획득되고, 종종 병독성 박테리아, 또는 혼합 감염 때문이다. 지연-발병 감염은 또한 보통 이식 동안 획득된다. 무통 제시(indolent presentation)와 일관되게, 지연된 감염은 보통 더 약한 병독성 박테리아에 의해 야기된다.

본 발명은 수술 없이 인공관절주위 감염 (PJIs)을 억제되게 할 수 있다. 특정한 실시형태에서, 임플란트는 이식 전에 본 발명의 피리미딘 유도체로 처리된다. 추가로 또는 대안적으로, 환자는 임플란트를 받기 전 또는 후에 감염을 예방 또는 치료하기 위해 본 발명의 피리미딘 유도체를 투여받는다.

추가의 측면에서 본 발명은 표면, 예를 들면, 의료 장치의 표면상 그램-음성 생물막 형성 억제제로서의 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 염의 용도를 제공한다.

본원에 사용된 용어 의료 장치는 특히 의료 또는 사람 또는 수의과 의료 실행에 관련되는, 임의의 장비, 도구, 장치 등, 예를 들면, 수술 장치, 니들, 관, 장갑 등, 질병의 치유 또는 치료 또는 예방을 위한 용도를 의도하는 것들, 예를 들면, 산소공급기, 연동 펌프 챔버, 신장 막 등; 의료 제품, 예를 들면, 상처 드레싱, 연조직 필러, 치근관 필러, 콘택트 렌즈, 혈액 주머니; 뿐만 아니라 포유류 숙주에 도입되는 멸균이 필요한 생체재료를 언급한다.

화학식 (I)의 바람직하게는 피리미딘 유도체 또는 이의 허용가능한 염 또는 전구약물은 디플루오로페닐사이클로프로필 그룹을 포함하고;

가장 바람직하게는 (N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (1c);

표면 상 그램-음성 생물막의 가장 바람직한 억제제는 하기에 나타낸 N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (1c):

또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물이다

의료 장치 및 생체재료 임플란트는 박테리아 집락화에 민감성이고, 각각 이들이 사람 또는 동물 신체 밖에서 사용되거나 사람 또는 동물 신체 내부에서 사용되는 경우에 박테리아 생물막 형성에 의해 감염될 수 있다.

숙주로부터 감염된 생체재료 임플란트를 제거하는 것을 피하기 위해 또는 숙주에게 박테리아 감염을 억제하는 고 용량의 항생제의 추가 투여를 피하기 위해, 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 허용가능한 염을, 의료 장치의 또는 생체재료 임플란트의 표면 상에 직접적으로 도포하는 것이, 박테리아 오염을 예방한다는 것을 놀랍게도 발견하였다.

이러한 도포는, 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 염으로 또는 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염을 포함하는 약제학적 조성물로, 표면이 코팅되도록 디핑하는 것, 또는 표면에 분무하는 것과 같은 당해 기술 분야에 잘 공지된 다양한 기술에 의해 수행될 수 있다.

모든 표면의 타입, 예를 들면, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리우레탄, 폴리비닐 클로라이드, 폴리비닐피롤리돈, 폴리테트라플루오로에틸렌, 실리콘 등, 또는 공중합체로 만들어진 표면과 같은 고무 또는 플라스틱 표면 뿐만 아니라, 바람직하게는 스테인레스 스틸, 은, 금, 티탄, 금속 합금 열분해 탄소 등과 같은 금속 표면을 의미한다. 이는 또한 돼지 심장판막 또는 소 심장막과 같은 생물학적 물질로 만들어지는 생물학적 보철 또는 장치와 같은 생체흡수성 또는 생체재료 표면 상에서 사용될 수 있다.

표면 상 생물막 억제는 단계 1에서 표면 상 박테리아의 부착의 예방 또는 억제에서 시작하는 이의 형성의 모든 스테이지에서 박테리아 생물막 형성의 억제 뿐만 아니라 주로 단계 2에서 표면 상 박테리아 성장, 증식, 및 미세집락의 형성의 억제를 의미한다. 생물막 억제는 또한 성숙 단계 3에서 매트릭스의 억제 및 집락형성 단계에서 매트릭스로부터 박테리아 분산의 억제를 의미한다. 생물막 억제는, 또한 생물막 형성의 모든 단계에서 박테리아 사멸을 의미한다.

본 발명에 따른 추가의 측면은, 표면 상 생물막 형성 동안 그램-음성 박테리아를 사멸시키거나 이의 성장을 예방하는 방법이다.

상기 방법은 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염을; 기질 상에서 박테리아 부착 및 생존을 감소시키는 예방 단계에서, 또는 생물막이 이미 존재하거나 심지어 매트릭스 형성과 함께 성숙 단계 (여기서, 종래의 항박테리아 제제에 대한 장벽으로서 박테리아를 보호하는 생물막의 더 복잡한 구성이 확립된다)에 있는 스테이지에서 표면 상에 도포함을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 상기 방법은 피리미딘 유도체를 막 투과제와 함께 도포함을 포함한다. 본원에 사용된 막-투과제와 함께 도포은 하나의 병용된 조성물로서 도포, 개별적인 조성물의 동시 도포 및 개별적인 도포를 포함하고, 단, 소정 시간 동안 표면 상에 둘 다의 피리미딘 유도체 및 막-투과제 둘 다가 존재함을 보장한다.

다양한 생체재료 또는 의료 장치 상 생존에 특히 능숙한 박테리아를 만드는 인자는 생물막의 부착 및 생산을 포함한다.

생물막 형성의 초기 스테이지는 표면에 대한 부착/접착이고, 이는 응력 상태보다 더 강력하다. 이러한 접착에 주로 책임이 있는 단백질은 폴리삭카라이드 세포간 부착소(polysaccharide intercellular adhesin) (PIA)이고, 이는 박테리아가 서로에게 결합하고, 뿐만 아니라 표면에 결합하여, 생물막을 형성하게 한다. 생물막 형성의 두번째 스테이지는 지역사회 구조 및 생태계의 발달이고, 이는 숙성(mature) 생물막을 발생시킨다. 최종 스테이지는 표면으로부터의 분리이고, 결과적으로 다른 위치로 확산된다. 생물막 형성의 모든 스테이지에서, 세포-대-세포 소통을 중재하는 정족수 감지(quorum sensing) (QS) 시스템이, 연루된다.

생물막에서 박테리아는, 면역계 성분 및 항미생물제를 포함하는 외부 위협으로부터 이들을 보호하는, 폴리삭카라이드, 핵산 (세포외 DNA) 및 단백질로 주로 이루어진 세포외 중합체성 물질(extracellular polymeric substances) (EPS)을 생산한다. 또한, 생물막에서 박테리아는 감소된 대사작용을 하고, 이들을 항생제에 덜 민감성으로 만드는데; 이는 대부분의 항미생물제가 효과적이기 위해서는 어느 정도의 세포 활성을 요구한다는 사실 때문이다. 이러한 내성을 강화하는 또다른 인자는 EPS 매트릭스 배리어의 존재로 인한 생물막 도처에 걸친 항생제의 확산 장애이다.

생물막에서 천연 발생 및 항미생물-유발 내성을 발달시키는 기회를 증가시키는 더 높은 속도의 플라스미드 교환이 존재한다는 것이 또한 공지되어 있다.

생물막을 제거하기 위해 개발된 전략은 생물막 형성에서 3개의 상이한 단계를 표적화한다: 초기 스테이지, 즉, 표면에 박테리아의 부착의 억제; 성숙 과정 또는 단계 2 동안 생물막 구조의 붕괴; QS 시스템 또는 단계 3의 억제.

항생제에 대한 이들 생물막의 높은 내성 때문에, 항생제를 사용한 장기간 치료와 함께 숙주로부터 생체재료 임플란트의 제거를 피하기 위해 스테이지 2에서 미생물 성장 및 생물막 형성의 제어 및 예방의 필요성이 증가하고 있다.

표면 상 박테리아의 사멸 또는 박테리아 성장의 예방 방법은 일반적으로 생체재료 임플란트 또는 임의의 삽입형이거나 그외의 의료 장치에 적용된다.

생체재료 임플란트 또는 의료 장치는 바람직하게는 숙주 포유류에서 임상적 용도를 위한 삽입형 이물, 예를 들면, 보철 장치, 심장박동기, 삽입형 제세동기, 혈관내 카테터, 관상동맥 스텐트, 심장판막, 안내 렌즈 등이지만, 멸균될 필요가 있는 다른 비-삽입형 의료 장치, 예를 들면, 상처 드레싱, 국소 마취제를 포함하는 연조직 필러, 보조적 의약 물질을 갖는 치근관 필러 등을 포함한다.

박테리아의 사멸 또는 박테리아 성장의 예방 방법은 또한 이러한 항박테리아 치료가 필요한 실험 또는 수술 장치의 표면에 적용될 수 있다. 사실상 상기 방법이 적용될 수 있고, 의료 또는 사람 또는 수의과 의료의 실행에 관련되거나 질환을 치유 또는 치료 또는 예방하기 위한 사용을 의도하는 어떠한 장치, 도구, 장비도 제한하지 않는다.

또한 추가의 측면에서, 본 발명은, 숙주 포유류에서 박테리아 감염을 진단 또는 예후에 사용하기 위한 검출가능한 마커를 임의로 포함하는 신규한 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 염을 제공한다.

본원에 사용된 용어 "검출가능한 마커"는 검출가능하고 피리미딘 유도체에 링크되거나 피리미딘 유도체 내에 도입되고, 이에 따라 피리미딘 유도체 존재의 측정을 가능하게 하는 임의의 타입의 태그를 언급한다. 특정한 실시형태에서, 마커는 방사성트레이서로서 피리미딘 유도체의 사용을 가능하게 하는 동위원소, 예를 들면, 방사성동위원소이다. 마커, 예를 들면, 동위원소를 화합물로 도입하는 방법은 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 마커의 존재는 진단 또는 예후에서 본 발명의 피리미딘 유도체의 사용을 가능하게 한다. 특정한 실시형태에서, 마커를 포함하는 피리미딘 유도체는 막-투과제와 함께 사용된다.

본 발명은 또한 숙주 포유류에서 박테리아 감염의 진단 또는 예후에 사용하기 위한 임의로 검출가능한 마커를 포함하는 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 염을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 특정한 실시형태에서, 조성물은 막-투과제를 추가로 포함한다.

본 발명자들은 검출가능한 동위원소 원자를 임의로 포함하는 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 조성물이, 숙주 포유류에서 박테리아 감염을 검출하기 위해: 예를 들면, 인공판막 수술 후 발병되는 질환인 심내막염을 진단하기 위해 사용할 수 있다는 것을 놀랍게도 발견하였다. 사실상, 검출가능한 표지를 포함하는 본 발명에 따른 피리미딘 유도체 또는 이의 조성물은 숙주에서 그램-음성 박테리아 감염을 확인할 수 있고, 박테리아 세포에 의해 흡수될 수 있다. 바람직하게는, 이들의 사용은 막-투과제의 존재하에 있다. 따라서, 피리미딘 유도체 또는 이의 조성물은 예를 들어 생체내-영상법을 위한 방사성트레이서로서 사용할 수 있다.

일반적으로, 진단에서 사용되는 검출 방법은 마커의 특성에 좌우된다. 예를 들어, 생체내 영상법의 목적을 위해 피리미딘 유도체는 방사성트레이서를 포함할 것이고, 검출 장비의 타입은 방사성트레이서에 좌우될 것이다. 예를 들면, 본 발명에 따른 임의로 적어도 하나의 검출가능한 동위원소를 포함하는 피리미딘 유도체는, 베타, 감마, 양전자 또는 x-선 영상법을 사용하여 검출할 수 있고, 예를 들면, 베타 또는 감마 조사는 관련 동위원소에 의해 제공되고, 적절한 파장에서 검출된다.

임의로 검출가능한 동위원소를 포함하는 피리미딘 유도체는, 예를 들면, X-선 영상법, 자기공명 분광법 (MRS) 또는 영상법 (MRI), 초음파검사, 양전자방출단층촬영술 (PET) 및 단일 방출 컴퓨터 단층촬영술 (SPECT)와 함께 사용될 수 있다.

검출가능한 피리미딘 유도체는 잘 공지된 유기 화학 기술에 의해 MRS/MRI에서 동위원소 ¹⁹F 또는 ¹³C 또는 이의 조합을 통해 검출될 수 있다.

다른 검출가능한 피리미딘 유도체는 또한 PET 기술에서 ¹⁹F, ¹¹C, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br 또는 ¹²⁰I 또는 이의 조합으로부터 선택된 동위원소를 포함할 수 있다.

다른 검출가능한 피리미딘 유도체는 문헌에 기재된 바와 같이 PET 생체내 영상법을 위한 ¹⁸F 또는 ¹¹C 또는 이의 조합으로부터 선택된 동위원소를 포함한다 [참조: Bengt Langstrom in Acta Chemica Scandinavia, 53:651-669 (1999) or the journal of Nuclear Medicine 58(7): 1094-1099(2017) A.M.J.Paans in https://cds.cern.ch/record/1005065/files/p363.pdf].

피리미딘 유도체는 문헌 [참조: Kulkarni, Int.J.Rad.Appl.& Inst (partB)18:647(1991)]에 기술된 바와 같이 SPECT에서 또한 ¹²³I 및 ¹³¹I를 포함할 수 있다.

피리미딘 유도체는 또한 테크네튬-99m(^99mTc)로 검출가능할 수 있다. 이러한 금속 이온에 결합하는 리간드를 도입하기 위한 피리미딘 유도체의 개질은 당해 기술분야의 숙련가에 의해 수행될 수 있다. ^99mTc의 검출가능한 유도체의 제조는 당해 기술 분야에 잘 공지되어 있다 [참조: Zhuang in Nuclear Medicine & Biology 26(2):217-24 (1999)].

바람직한 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염은; 예를 들면, 박테리아 감염의 진단 또는 예후에서 방사성트레이서로서 사용하기 위해, 화학식 (IV)로 예시된 페닐 사이클로프로필 그룹을 포함한다:

화학식 (IV)

가장 바람직한 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염은, 예를 들면, 방사성트레이서로서 사용하기 위해, 디플루오로페닐사이클로프로필 그룹을 포함한다.

가장 바람직한 화학식 (I)의 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염을; 방사성트레이서로서 사용하기 위해 화학식 (II)로 예시된 3,4-디플루오로페닐사이클로프로필 그룹을 포함한다.

방사성트레이서는, 하나 이상의 원자가 포유류로부터의 세포, 조직 또는 체액을 탐구하고 예를 들면, 인공판막의 표면에서와 같은 숙주에서 박테리아 감염의 존재 및 중대성을 확인하기 위해 트레이서로서 사용되는 방사성핵종 또는 동위원소로 대체되는, 피리미딘 유도체를 의미한다.

방사성핵종 또는 동위원소는, 예를 들면, ³H, ¹⁸F,¹⁹F, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ¹²⁰I, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁵O, ¹³N을 의미한다.

방사성트레이서는, 또한 자기공명 영상법 (MRI)을 위한 조영제, 예를 들면, MRI 조영제 또는 MR 트레이서; 또는 조영-증강 초음파 영상법에서 사용되는 조영제와 연관된 피리미딘 유도체를 의미한다.

방사성트레이서로서 사용된 피리미딘 유도체 또는 이의 조성물은 포유류 숙주에서 흡입, 섭취 또는 주사에 의해 또는 임플란트된 저장소를 통해 선택된 영상법 장치에 관련된 용량으로 국소 또는 전신 투여된다. 투여는 경구, 비경구, 국소, 직장, 비내, 질내일 수 있다.

비경구는, 피하, 정맥내, 동맥내, 복강내, 경막내, 뇌실내 등을 의미한다.

특정한 실시형태에서, 피리미딘 유도체는 막-투과제와 함께 투여된다. 본원에 사용된 막-투과제과 함께 투여는 하기 형태로 부수적 투여로 투여할 수 있다: (1) 둘 다의 화합물을 포함하는 단일 약제학적 조성물; 또는 (2) 화합물 중 하나를 각각 포함하는 개별적인 약제학적 조성물, 단, 체내에서 피리미딘 유도체 및 막-투과제의 둘 다의 존재를 보장한다. 대안적으로, 병용물은 순차적 순서로 개별적으로 투여될 수 있고, 여기서, 하나의 치료 제제는 첫번째로 투여되고, 다른 제제가 두번째로 투여되거나, 그 반대이다. 이러한 순차적으로 투여는 적합한 시간 내에 근접할 수 있거나 적합한 시간 내에 떨어져 있을 수 있고, 단, 체내에서 피리미딘 유도체 및 막-투과제의 둘 다의 존재를 보장한다.

숙주에 대한 투여 용량 수준은 숙주의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 투여 시간, 투여 형태 등에 좌우되고, 이는 당해 기술분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있다. 상기 수준은 선택된 영상법 기술에 따라서 0.001μg/kg/일 내지 10,000mg/kg/일로 가변적일 수 있다.

숙주 포유류의 박테리아 감염의 수득한 생체내 영상이, 예를 들면, 인공판막 위치에서 제공된다.

본 발명의 피리미딘 유도체의 추가의 적용은 생물학적 샘플에서와 같은 샘플에서의 박테리아 오염을 모니터링함을 포함한다. 이를 위한 관심 대상의 전형적인 샘플은 물, 혈액, 고기(meat) 등이다.

도 1은, 포린 (D)으로부터 만들어진 유사한 내부 세포질 막 (B) 및 둘 다의 부류의 박테리아에 대해 일반적으로 가교링크된 펩타이드 쇄로부터 만들어진 펩티도글리칸 세포벽 (A)을 갖는 그램-음성 박테리아 (1) 및 그램-양성 박테리아 (2) 외피 간의 세포벽 구조 비교를 나타낸다. 그램-음성 박테리아 (1)는 리포폴리삭카라이드 (LPS) 및 포린 (D)으로 만들어진 추가 외부 막 (C)에 의해 그램-양성 박테리아 (2)와 상이하다.
도 2는 이. 콜리 생물막 형성에 미치는 35μg/ml PMBN (P로 나타냄)과 병용된 상이한 농도에서 분자 2329 (푸린) 및 2666 (피라졸로피리미딘)의 효과를 나타낸다.
도 3은 암피실린과 비교하여 50μg/ml PMBN (P50으로 나타냄)과 병용한 피라졸로 분자 (2666) 및 푸린 (2329)의 이. 콜리의 억제 속도를 나타낸다.
본 발명은 하기 비제한적인 실시예로 예시된다.

1. 신규한 피리미딘 유도체의 제조:

실시예 1: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (1c)의 합성

6-클로로-N⁴-메틸-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (1a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 메틸아민 33% w/w의 메탄올 중 용액 (0.76 mL, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 96%.

융점: 119-121℃.

6-클로로-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린 (1b)

(1a) (233.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 77%.

융점: 75-78℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (1c)

(1b) (122.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 42%.

융점: 94-96℃.

실시예 2: 9-메틸-N-((1R,2S)-2-페닐사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (2c)의 합성

9-메틸-N-((1R,2S)-2-페닐사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (2c)

(1b) (122.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-페닐사이클로프로판아민 (56.0 mg, 1.1 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서 90℃에서 환류하에 4 시간 동안 가열하였다. 용매를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 27%.

융점: 171-172.5℃.

실시예 3: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (3c)의 합성

6-클로로-N⁴-에틸-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (3a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 에틸아민 2.0 M의 메탄올 중 용액 (3.2 mL, 6.4 mmol)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 77%.

융점: 96-98℃.

6-클로로-9-에틸-2-(프로필티오)-9H-푸린 (3b)

(3a) (247.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 77%.

융점: 96-97.5℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (3c)

(3b) (129.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 43%.

융점: 109.5-111.5℃.

실시예 4: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (4c)의 합성

6-클로로-N⁴-프로필-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (4a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, n-프로필아민 (370.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 30 분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 91%.

융점: 100-102℃.

6-클로로-9-프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린 (4b)

(4a) (261.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 94%.

융점: 액체.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (4c)

(4b) (136.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 45%.

융점: 97-99℃.

실시예 5: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-이소프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (5c)의 합성

6-클로로-N⁴-이소프로필-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (5a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 이소프로필아민 (370.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 90 분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 95%.

융점: 81-83℃.

6-클로로-9-이소프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린 (5b)

(5a) (261.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 37%.

융점: 121-122.5℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-이소프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (5c)

(5b) (136.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 47%.

융점: 98.5-100.5℃.

실시예 6: 9-사이클로프로필-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (6c)의 합성

6-클로로-N⁴-사이클로프로필-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (6a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 사이클로프로필아민 (360.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 30 분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 92%.

융점: 96-98℃.

6-클로로-9-사이클로프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린 (6b)

(6a) (259.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 58%.

융점: 128.5-130℃.

9-사이클로프로필-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (6c)

(6b) (135.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 40%.

융점: 137-139℃.

실시예 7: 9-부틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (7c)의 합성

N⁴-부틸-6-클로로-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (7a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, n-부틸아민 (460.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 30 분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 95%.

융점: 액체.

9-부틸-6-클로로-2-(프로필티오)-9H-푸린 (7b)

(7a) (275.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 72%.

융점: 액체.

9-부틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (7c)

(7b) (143.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 61%.

융점: 85-87℃.

실시예 8: 9-(2급-부틸)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (8c)의 합성

N⁴-(2급-부틸)-6-클로로-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (8a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 2급-부틸아민 (460.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 90 분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 81%.

융점: 액체.

9-(2급-부틸)-6-클로로-2-(프로필티오)-9H-푸린 (8b)

(8a) (275.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 4 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 39%.

융점: 64-66℃.

9-(2급-부틸)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (8c)

(8b) (143.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서 90℃에서 환류하에 4 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 66%.

융점: 68-71℃.

실시예 9: 9-(3급-부틸)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (9c)의 합성

N⁴-(3급-부틸)-6-클로로-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (9a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 3급-부틸아민 (460.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 24 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 88%.

융점: 88-89℃.

9-(3급-부틸)-6-클로로-2-(프로필티오)-9H-푸린 (9b)

(9a) (275.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 10 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 41%.

융점: 116-117℃.

9-(3급-부틸)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (9c)

(9b) (143.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서 90℃에서 환류하에 2 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 56%.

융점: 125-128℃.

실시예 10: 9-사이클로부틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (10c)의 합성

6-클로로-N⁴-사이클로부틸-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (10a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 사이클로부틸아민 (440.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 96%.

융점: 73-75.5℃.

6-클로로-9-사이클로부틸-2-(프로필티오)-9H-푸린 (10b)

(10a) (273.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 62%.

융점: 89-91.5℃.

9-사이클로부틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (10c)

(10b) (142.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서 90℃에서 환류하에 2 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 76%.

융점: 143-145℃.

실시예 11: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-펜틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (11c)의 합성

6-클로로-N⁴-펜틸-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (11a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, n-펜틸아민 (550.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 30 분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 96%.

융점: 68-69℃.

6-클로로-9-펜틸-2-(프로필티오)-9H-푸린 (11b)

(11a) (289.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 87%.

융점: 액체.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-펜틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (11c)

(11b) (150.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서 90℃에서 환류하에 3 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 83%.

융점: 98-100.5℃.

실시예 12: 9-사이클로펜틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (12c)의 합성

6-클로로-N⁴-사이클로펜틸-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (12a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 사이클로펜틸아민 (536.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 2 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 95%.

융점: 86-88℃.

6-클로로-9-사이클로펜틸-2-(프로필티오)-9H-푸린 (12b)

(12a) (287.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 37%.

융점: 81-83℃.

9-사이클로펜틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (12c)

(12b) (149.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서 90℃에서 환류하에 3 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 35%.

융점: 112-114℃.

실시예 13: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-헥실-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (13c)의 합성

6-클로로-N⁴-헥실-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (13a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, n-헥실아민 (638.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 85%.

융점: 54-57℃.

6-클로로-9-헥실-2-(프로필티오)-9H-푸린 (13b)

(13a) (303.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 90%.

융점: 액체.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-헥실-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (13c)

(13b) (157.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 60%.

융점: 84-86℃.

실시예 14: 9-사이클로헥실-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (14c)의 합성

6-클로로-N⁴-사이클로헥실-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (14a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 사이클로헥실아민 (625.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 91%.

융점: 90-93℃.

6-클로로-9-사이클로헥실-2-(프로필티오)-9H-푸린 (14b)

(14a) (301.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 2 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 62%.

융점: 93-95℃.

9-사이클로헥실-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (14c)

(14b) (156.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 84%.

융점: 85-88℃.

실시예 15: 9-알릴-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (15c)의 합성

N⁴-알릴-6-클로로-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (15a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 알릴아민 (360.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 30 분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 92%.

융점: 55-57℃.

9-알릴-6-클로로-2-(프로필티오)-9H-푸린 (15b)

(15a) (259.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 2 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 89%.

융점: 47.5-49.5℃.

9-알릴-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (15c)

(15b) (135.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 89%.

융점: 액체.

실시예 16: 2-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)에탄올 (16c)의 합성

2-((5-아미노-6-클로로-2-(프로필티오)피리미딘-4-일)아미노)에탄올 (16a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 2-아미노에탄올 (385.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 30 분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 79%.

융점: 99-102℃.

2-(6-클로로-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)에탄올 (16b)

(16a) (263.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 4 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 57%.

융점: 81-83℃.

2-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)에탄올 (16c)

(16b) (137.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 42%.

융점: 81-83℃.

실시예 17: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 하이드로클로라이드 (17c.HCl)의 합성

6-클로로-N⁴-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)피리미딘-4,5-디아민 (17a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 프로파르길아민 (347.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 3 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 78%.

융점: 90-92℃.

6-클로로-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린 (17b)

(17a) (258.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 2 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 62%.

융점: 68-70℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (17c)

(17b) (134.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서 90℃에서 환류하에 4 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 86%.

융점: 72-74℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 하이드로클로라이드 (17c.HCl)

(17c) (200.0 mg, 0.5 mmol)의 디에틸 에테르 (5 mL) 중 용액에 HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 적가하였다. 표제 화합물의 수득한 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 99%.

융점: 178-180℃.

실시예 18: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9-(2,2,2-트리플루오로에틸)-9H-푸린-6-아민 (18c)의 합성

6-클로로-2-(프로필티오)-N⁴-(2,2,2-트리플루오로에틸)피리미딘-4,5-디아민 (18a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 2,2,2-트리플루오로에탄아민 (625.0 mg, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 24 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 76%.

융점: 107-109℃.

6-클로로-2-(프로필티오)-9-(2,2,2-트리플루오로에틸)-9H-푸린 (18b)

(18a) (301.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 2 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 48%.

융점: 140-143℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9-(2,2,2-트리플루오로에틸)-9H-푸린-6-아민 (18c)

(18b) (156.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 89%.

융점: 102-104℃.

실시예 19: (1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)사이클로펜탄-1,2,3-트리올 (19d)의 합성

(3aR,4S,6R,6aS)-6-((5-아미노-6-클로로-2-(프로필티오)피리미딘-4-일)아미노)-2,2-디메틸테트라하이드로-3aH-사이클로펜타[d][1,3]디옥솔-4-올 (19a)

4,6-디클로로-2-(프로필티오)피리미딘-5-아민 (0.5 g, 2.1 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, (3aR,4S,6R,6aS)-6-아미노-2,2-디메틸테트라하이드로-3aH-사이클로펜타[d][1,3]디옥솔-4-올 (1.1 g, 6.3 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 12 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 90%.

융점: ND.

(3aR,4S,6R,6aS)-6-(6-클로로-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)-2,2-디메틸테트라하이드로-3aH-사이클로펜타[d][1,3]디옥솔-4-올 (19b)

(19a) (375.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 10 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 23%.

융점: ND.

(3aR,4S,6R,6aS)-6-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)-2,2-디메틸테트라하이드로-3aH-사이클로펜타[d][1,3]디옥솔-4-올 (19c)

(19b) (193.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 91%.

융점: ND.

(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)사이클로펜탄-1,2,3-트리올 (19d)

(19c) (259.0 mg, 0.5 mmol)의 메탄올 (2 mL) 및 12N HCl (1 mL) 중 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 76%.

융점: 92-94℃.

실시예 20: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(에틸티오)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (20c)의 합성

2-(에틸티오)피리미딘-4,6-디올 (20e)

2-티오바르비투르산 (2.5 g, 17.4 mmol)을 KOH 10% (25 mL)에 용해시키고, 에틸 요오다이드 (1.63 mL, 20.0 mmol)를 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 80℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 빙욕 상에서 5℃로 냉각시킨 후, 혼합물을 염산 6N을 첨가하여 산성화시키고, 수득한 침전물을 여과 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하였다.

수율: 69%.

융점: >300℃.

2-(에틸티오)-5-니트로피리미딘-4,6-디올 (20f)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 6 mL의 아세트산에 발연 질산 (2.5 mL) 및 (20e) (1.8 g, 10.5 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1 시간 교반 후, 혼합물을 5℃에서 빙욕 상에 냉각하고, 물 (50 mL)을 첨가하고, 수득한 침전물을 여과제거하였다.

수율: 69%.

융점: 210-213℃ (분해).

4,6-디클로로-2-(에틸티오)-5-니트로피리미딘 (20g)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (20f) (1.5 g, 6.9 mmol)의 POCl₃ (10 mL) 중 용액에 2,6-루티딘 (2.5 mL)을 적가하였다. 80℃에서 2시간 교반한 후, 혼합물을 분쇄된 얼음에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 물 및 탄산수소나트륨의 포화 수용액으로 세척하고, 에틸 아세테이트를 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 수득한 유성 잔류물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다 (20h).

수율: 85%.

융점: 오일.

4,6-디클로로-2-(에틸티오)피리미딘-5-아민 (20h)

(20g) (1.0 g, 3.9 mmol)의 메탄올 (10 mL) 및 아세트산 (4 mL) 중 용액에 철 분말 (1.07 g, 19.5 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 1 시간 교반 후, 에틸 아세테이트 (50 mL)를 첨가하고, 현탁액을 여과하였다. 여액을 물로 세척하고, 탄산수소나트륨의 포화 수용액으로 세척하고, 유기 층을 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 물을 잔류물에 첨가하고, 수득한 침전물을 여과제거하였다.

수율: 86%.

융점: 48-50℃.

6-클로로-2-(에틸티오)-N⁴-메틸피리미딘-4,5-디아민 (20a)

4,6-디클로로-2-(에틸티오)피리미딘-5-아민 (20h) (0.5 g, 2.2 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 메틸아민 33% w/w의 메탄올 중 용액 (0.80 mL, 6.6 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 7%.

융점: 112-114℃.

6-클로로-2-(에틸티오)-9-메틸-9H-푸린 (20b)

(20a) (219.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 86%.

융점: 89-100℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(에틸티오)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (20c)

(20b) (114.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 89%.

융점: 116-118.5℃.

실시예 21: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(에틸티오)-9H-푸린-6-아민 (21c)의 합성

6-클로로-N⁴-에틸-2-(에틸티오)피리미딘-4,5-디아민 (21a)

4,6-디클로로-2-(에틸티오)피리미딘-5-아민 (20h) (0.5 g, 2.2 mmol)을 에틸아민 2.0 M의 메탄올 중 용액 (3.3 mL, 6.6 mmol)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 91%.

융점: 93-95℃.

6-클로로-9-에틸-2-(에틸티오)-9H-푸린 (21b)

(21a) (233.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 91%.

융점: 64-66℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(에틸티오)-9H-푸린-6-아민 (21c)

(21b) (121.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 96%.

융점: 107.5-109.5℃.

실시예 22: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (22c)의 합성

2-(메틸티오)피리미딘-4,6-디올 (22e)

2-티오바르비투르산 (2,5 g, 17.4 mmol)을 KOH 10% (25 mL)에 용해시키고, 메틸 요오다이드 (1.25 mL, 20.0 mmol)를 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 80℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 빙욕 상에서 5℃로 냉각시킨 후, 혼합물을 염산 6N을 첨가하여 산성화시키고, 수득한 침전물을 여과 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하였다.

수율: 77%.

융점: >300℃.

2-(메틸티오)-5-니트로피리미딘-4,6-디올 (22f)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 6 mL의 아세트산에 발연 질산 (2.5 mL) 및 (22e) (2.0 g, 12.6 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1 시간 교반 후, 혼합물을 5℃에서 빙욕 상에서 냉각하고, 물 (50 mL)을 첨가하고, 수득한 침전물을 여과제거하였다.

수율: 67%.

융점: 220-221℃ (분해).

4,6-디클로로-2-(메틸티오)-5-니트로피리미딘 (22g)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (22f) (1.5 g, 7.4 mmol)의 POCl₃ (10 mL) 중 용액에 2,6-루티딘 (2.5 mL)을 적가하였다. 80℃에서 2시간 교반한 후, 혼합물을 분쇄된 얼음에 붓고, 수득한 침전물을 여과제거하였다.

수율: 92%.

융점: 63-64℃.

4,6-디클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-아민 (22h)

(22g) (1.0 g, 4.2 mmol)의 메탄올 (10 mL) 및 아세트산 (4 mL) 중 용액에 철 분말 (1,07 g, 19.5 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 1 시간 교반 후, 에틸 아세테이트 (50 mL)를 첨가하고, 현탁액을 여과하였다. 여액을 물로 세척하고, 탄산수소나트륨의 포화 수용액으로 세척하고, 유기 층을 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 물을 잔류물에 첨가하고, 수득한 침전물을 여과제거하였다.

수율: 95%.

융점: 105-108℃.

6-클로로-N⁴-메틸-2-(메틸티오)피리미딘-4,5-디아민 (22a)

4,6-디클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-아민 (22h) (0.5 g, 2.4 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 메틸아민 33% w/w의 메탄올 중 용액 (0.87 mL, 7.2 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 82%.

융점: 141-143℃.

6-클로로-9-메틸-2-(메틸티오)-9H-푸린 (22b)

(22a) (205.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 92%.

융점: 140-142℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (22c)

(22b) (107.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 80%.

융점: 156-159℃.

실시예 23: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-프로폭시-9H-푸린-6-아민 하이드로클로라이드 (23t.HCl)의 합성

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(메틸설포닐)-9H-푸린-6-아민 (23q)

(22c) (125.0 mg, 0.36 mmol)의 메틸렌 클로라이드 (10 mL) 중 용액을 5℃로 빙욕 상에 냉각시키고, 3-클로로퍼벤조산 (140.0 mg, 0.80 mmol)을 보충하였다. 실온에서 4 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 NaOH 0.1 M (2 x 10 mL)의 용액으로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고, 여과하고, 메틸렌 클로라이드를 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 현탁시키고, 여과제거하였다.

수율: 88%.

융점: 206-208.5℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-프로폭시-9H-푸린-6-아민 (23t)

나트륨을 프로판-1-올 (3 mL) 중에 빙욕(iced bath) 상에 용해시키고, (23q) (150.0 mg, 0.40 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배시켰다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 수득한 오일을 다음 단계 (23t.HCl)에서 추가 정제 없이 사용하였다.

수율: 73%.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-프로폭시-9H-푸린-6-아민 하이드로클로라이드 (23t.HCl)

(23t) (90.0 mg, 0.25 mmol)의 디에틸 에테르 (5 mL) 중 용액에 HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 적가하였다. 표제 화합물의 수득한 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 95%.

융점: 199-202℃.

실시예 24: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (24c)의 합성

6-클로로-N⁴-에틸-2-(메틸티오)피리미딘-4,5-디아민 (24a)

4,6-디클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-아민 (22h) (0.5 g, 2.4 mmol)을 메탄올 중 에틸아민 2.0 M 용액 (3.6 mL, 7.2 mmol)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 86%.

융점: 120-122℃.

6-클로로-9-에틸-2-(메틸티오)-9H-푸린 (24b)

(24a) (219.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 77%.

융점: 99.5-101.5℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (24c)

(24b) (114.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 38%.

융점: 126-127.5℃.

실시예 25: 2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (25c)의 합성

2-(부틸티오)피리미딘-4,6-디올 (25e)

2-티오바르비투르산 (2.5 g, 17.4 mmol)을 KOH 10% (25 mL)에 용해시키고, 부틸 요오다이드 (2.27 mL, 20.0 mmol)를 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 80℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 빙욕 상에서 5℃로 냉각시킨 후, 혼합물을 염산 6N을 첨가하여 산성화시키고, 수득한 침전물을 여과 제거하고, 디에틸 에테르로 세척하였다.

수율: 72%.

융점: >300℃.

2-(부틸티오)-5-니트로피리미딘-4,6-디올 (25f)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 6 mL의 아세트산에 발연 질산 (2.5 mL) 및 (25e) (2.0 g, 10.0 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 1 시간 교반 후, 혼합물을 5℃에서 빙욕 상에 냉각하고, 물 (50 mL)을 첨가하고, 수득한 침전물을 여과제거하였다.

수율: 68%.

융점: 178-179.5℃ (분해).

2-(부틸티오)-4,6-디클로로-5-니트로피리미딘 (25g)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (25f) (1.5 g, 6.1 mmol)의 POCl₃ (10 mL) 중 용액에 2,6-루티딘 (2.5 mL)을 적가하였다. 80℃에서 2시간 교반한 후, 혼합물을 분쇄된 얼음에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, 탄산수소나트륨의 포화 수용액으로 세척하고, 에틸 아세테이트를 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 수득한 유성 잔류물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다 (25h).

수율: 92%.

융점: 오일.

2-(부틸티오)-4,6-디클로로피리미딘-5-아민 (25h)

(25g) (1 g, 3.5 mmol)의 메탄올 (10 mL) 및 아세트산 (4 mL) 중 용액에 철 분말 (0.78 g, 14.0 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 1 시간 교반 후, 에틸 아세테이트 (50 mL)를 첨가하고, 현탁액을 여과하였다. 여액을 물로 세척하고, 탄산수소나트륨의 포화 수용액으로 세척하고, 유기 층을 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 수득한 유성 잔류물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다 (25a).

수율: 97%.

융점: 오일.

2-(부틸티오)-6-클로로-2-N⁴-메틸피리미딘-4,5-디아민 (25a)

2-(부틸티오)-4,6-디클로로피리미딘-5-아민 (25h) (0.5 g, 2.0 mmol)을 메탄올 (2 mL)에 용해시키고, 메틸아민 33% w/w의 메탄올 중 용액 (0.73 mL, 6.0 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 87%.

융점: 오일.

2-(부틸티오)-6-클로로-9-메틸-9H-푸린 (25b)

(25a) (247.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 76%.

융점: 56-58℃.

2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (25c)

(25b) (128.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 66%.

융점: 98-100℃.

실시예 26: 2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-9H-푸린-6-아민 (26c)의 합성

2-(부틸티오)-6-클로로-N⁴-에틸피리미딘-4,5-디아민 (26a)

4,6-디클로로-2-(에틸티오)피리미딘-5-아민 (25h) (0.5 g, 2.0 mmol)을 메탄올 중 에틸아민 2.0 M 용액 (3.0 mL, 6.0 mmol)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 100℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 91%.

융점: 80-82℃.

2-(부틸티오)-6-클로로-9-에틸-9H-푸린 (26b)

(26a) (261.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (2.5 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (2.5 mL, 15 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 70%.

융점: 69-71℃.

2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-9H-푸린-6-아민 (26c)

(26b) (135.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 56%.

융점: 92-94℃.

실시예 27: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-메틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (27k)의 합성

4,6-디클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카브알데히드 (27i)

POCl₃ (3.2 mL)를 5℃에서 빙욕 상에 냉각시키고, 디메틸포름아미드 (20 mL, 215 mmol)를 액적으로 보충하였다. 이어서, 2-(메틸티오)피리미딘-4,6-디올 (22e) (5 g, 31.6 mmol)을 분획으로 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 20 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 분쇄된 얼음에 붓고, CH₂Cl₂ (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발시켜 건조시켰다.

수율: 52%.

융점: 87-89℃.

4-클로로-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (27i')

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (27i) (2.5 g, 11.2 mmol)의 THF (25 mL) 중 현탁액에, 하이드라진 모노하이드레이트 (0.65 mL, 13 mmol) 및 트리에틸아민 (1.8 mL, 13 mmol)을 적가하였다. 5℃에서 1 시간 교반한 후, 혼합물을 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 95%.

융점: >300℃.

4-클로로-1-메틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (27j)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (27i') (1.0 g, 5.0 mmol)의 아세토니트릴 (10 mL) 중 용액에, NaH (144 mg, 6.0 mmol) 및 요오도메탄 (0.47 mL, 7.5 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 3시간 교반한 후, 아세토니트릴을 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배시켰다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 82%.

융점: 85-87℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-메틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (27k)

(27j) (107.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 84%.

융점: 128.5-130℃.

실시예 28: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(에틸티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (28x.HCl)의 합성

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-메틸-6-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (28r)

(27j) (125.0 mg, 0.36 mmol)의 메틸렌 클로라이드 (10 mL) 중 용액을 5℃로 빙욕 상에 냉각시키고, 3-클로로퍼벤조산 (140.0 mg, 0.80 mmol)을 보충하였다. 실온에서 4 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 NaOH 0.1 M (2 x 10 mL)의 용액으로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고, 여과하고, 메틸렌 클로라이드를 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 수득한 유성 잔류물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다 (28x).

수율: 58%.

융점: 오일.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(에틸티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (28x.HCl)

(28r) (150.0 mg, 0.40 mmol)의 THF (6 mL) 중 용액에 에탄티올 (0.06 mL, 0.80 mmol) 및 K₂CO₃ (110.0 mg, 0.80 mmol)를 보충하였다. 실온에서 24 시간 동안 교반한 후, THF를 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득한 오일을 디에틸 에테르 (10 mL)에 용해시키고, HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 액적으로 보충하였다. 표제 화합물의 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 67%.

융점: 164-168℃.

실시예 29: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(프로필티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (29x.HCl)의 합성

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-메틸-6-(프로필티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (29x.HCl)

(28r) (150.0 mg, 0.40 mmol)의 THF (6 mL) 중 용액에 프로판티올 (0.07 mL, 0.80 mmol) 및 K₂CO₃ (110.0 mg, 0.80 mmol)를 보충하였다. 실온에서 24 시간 동안 교반한 후, THF를 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득한 오일을 디에틸 에테르 (10 mL)에 용해시키고, HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 액적으로 보충하였다. 표제 화합물의 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 66%.

융점: 110-115℃.

실시예 30: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (30k.HCl)의 합성

4-클로로-1-에틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (30j)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (27i') (1.0 g, 5.0 mmol)의 아세토니트릴 (10 mL) 중 용액에, NaH (144 mg, 6.0 mmol) 및 요오도에탄 (0.60 mL, 7.5 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 3시간 교반한 후, 아세토니트릴을 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배시켰다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 77%.

융점: 92-93.5℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (30k.HCl)

(30j) (114.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득한 오일을 디에틸 에테르 (10 mL)에 용해시키고, HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 액적으로 보충하였다. 표제 화합물의 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 54%.

융점: 176-180℃.

실시예 31: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(에틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (31x.HCl)의 합성

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(메틸설포닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (31r)

(30k) (125.0 mg, 0.35 mmol)의 메틸렌 클로라이드 (10 mL) 중 용액을 5℃로 빙욕 상에 냉각시키고, 3-클로로퍼벤조산 (140.0 mg, 0.80 mmol)을 보충하였다. 실온에서 4 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 NaOH 0.1 M (2 x 10 mL)의 용액으로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고, 여과하고, 메틸렌 클로라이드를 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 87%.

융점: 95-100℃ (분해).

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(에틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (31x.HCl)

(31r) (150.0 mg, 0.38 mmol)의 THF (6 mL) 중 용액에 에탄티올 (0.06 mL, 0.80 mmol) 및 K₂CO₃ (110.0 mg, 0.80 mmol)를 보충하였다. 실온에서 24 시간 동안 교반한 후, THF를 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득한 오일을 디에틸 에테르 (10 mL)에 용해시키고, HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 액적으로 보충하였다. 표제 화합물의 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 64%.

융점: 168-172℃.

실시예 32: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(프로필티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (32x.HCl)의 합성

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(프로필티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (32x.HCl)

(31r) (150.0 mg, 0.38 mmol)의 THF (6 mL) 중 용액에 프로판티올 (0.07 mL, 0.80 mmol) 및 K₂CO₃ (110.0 mg, 0.80 mmol)를 보충하였다. 실온에서 24 시간 동안 교반한 후, THF를 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득한 오일을 디에틸 에테르 (10 mL)에 용해시키고, HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 액적으로 보충하였다. 표제 화합물의 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 62%.

융점: 150-154℃.

실시예 33: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-이소프로필-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (33k.HCl)의 합성

4-클로로-1-이소프로필-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (33j)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (27i') (1.0 g, 5.0 mmol)의 아세토니트릴 (10 mL) 중 용액에, NaH (144 mg, 6.0 mmol) 및 2-요오도프로판 (0.75 mL, 7.5 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 3시간 교반한 후, 아세토니트릴을 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배시켰다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 73%.

융점: 114-115.5℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-이소프로필-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (33k.HCl)

(33j) (121.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득한 오일을 디에틸 에테르 (10 mL)에 용해시키고, HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 액적으로 보충하였다. 표제 화합물의 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 87%.

융점: 159-163℃.

실시예 34: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(메틸티오)-1-프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (34k.HCl)의 합성

4-클로로-1-프로필-6-(메틸티오)-1-프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (34j)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (27i') (1.0 g, 5.0 mmol)의 아세토니트릴 (10 mL) 중 용액에, NaH (144 mg, 6.0 mmol) 및 1-요오도프로판 (0.73 mL, 7.5 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 3시간 교반한 후, 아세토니트릴을 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배시켰다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 78%.

융점: 41-43℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(메틸티오)-1-프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (34k.HCl)

(34j) (121.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (93.0 mg, 0.55 mmol) 및 트리에틸아민 (0.13 mL)을 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득한 오일을 디에틸 에테르 (10 mL)에 용해시키고, HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 액적으로 보충하였다. 표제 화합물의 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 76%.

융점: 155-159℃.

실시예 35: N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-7-에틸-2-(메틸티오)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (35p.HCl)의 합성

6-아미노-2-(메틸티오)피리미딘-4-올 (35l)

6-아미노-2-머캅토피리미딘-4-올 (2.5 g, 17.5 mmol)을 KOH 10% (25 mL)에 용해시키고, 메틸 요오다이드 (1.25 mL, 20.0 mmol)를 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 80℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 빙욕 상에서 5℃로 냉각시킨 후, 혼합물을 염산 6N을 첨가하여 산성화시키고, 수득한 침전물을 여과 제거하고, 건조시켰다.

수율: 95%.

융점: 261-264℃.

2-(메틸티오)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-올 (35m)

35l (1.57 g, 10.0 mmol)의 물 (40 mL) 중 현탁액에 나트륨 아세테이트 (2.0 g, 24.5 mmol) 및 50% 클로르아세트알데히드 수용액 (2 mL, 14.2 mmol)을 첨가하였다. 80℃에서 1 시간 후, 반응 혼합물을 빙욕 상에 5℃로 냉각하고, 수득한 침전물을 여과 제거하고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 45%.

융점: >300℃.

4-클로로-2-(메틸티오)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (35n)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (35m) (1.0 g, 5.5 mmol)의 POCl₃ (10 mL) 중 용액에 디에틸아닐린 (1.0 mL, 6.2 mmol)을 적가하였다. 80℃에서 2시간 교반한 후, 혼합물을 분쇄된 얼음에 붓고, 수득한 침전물을 여과 제거하고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 33%.

융점: 206-208℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(메틸티오)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 (35o')

(35n) (200.0 mg, 1.0 mmol)의 아세토니트릴 (5 mL) 중 용액에 (1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로판아민 (340.0 mg, 2.0 mmol) 및 트리에틸아민 (0.30 mL)를 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 1 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 15%.

융점: 208-211℃.

N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-7-에틸-2-(메틸티오)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (35p.HCl)

5℃에서 빙욕 상에 냉각시킨 (35o') (166.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (10 mL) 중 용액에, NaH (15 mg, 0.6 mmol) 및 요오도에탄 (0.060 mL, 0.75 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 1 시간 교반 후, 아세토니트릴을 진공하에 증발시켜 건조시키고, 잔류물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배시켰다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 수득한 오일을 디에틸 에테르 (10 mL)에 용해시키고, HCl의 디에틸 에테르 중 포화 용액을 액적으로 보충하였다. 표제 화합물의 침전물을 여과하여 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다.

수율: 74%.

융점: 189-194℃.

2. 그램-음성 박테리아 감염의 예방 및 치료에 사용하기 위한 피리미딘 유도체의 예

하기 생물학적 실시예를 본 발명을 설명하기 위한 목적으로 제공하고, 절대로 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석하여서는 안된다.

실시예 1: 에쉐리키아 콜리 (ATCC8739)에 미치는 폴리믹신 B 노나펩타이드와 함께 사용한 분자 2329, 2412, 2452, 및 2461의 항박테리아 효과: 최소 억제 농도 (MIC)의 측정.

분자 2329, 2412, 2452, 및 2461은 각각 하기 화학식에 상응한다:

2329는 N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (또한 상기에 1c로 칭명됨)이다

2412는 9-알릴-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (또한 15c로 칭명됨)이다

2461은 (1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)사이클로펜탄-1,2,3-트리올 (또한 19d로 칭명됨)이다.

2452는 N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (또한 17c로 칭명됨)이다.

폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)를 하기 화학식 (VII)로 나타내고, Sigma-Aldrich (제품 P2076)에서 제조된다.

화학식 (VII)

상기 화학식 (VII)에서, R은 Ph이다.

폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)와 함께 사용한 분자 2329, 2412, 2452 및 2461의 최소 억제 농도 (MIC)를 EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) 권고에 따라서 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대해 측정하였다.

간단히, 루리아-버타니(Luria-Bertani) 우무 (LB) 플레이트 상에서 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, LB 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤(Mueller-Hinton) 브로쓰 (MHB) 중 1:50 접종물을 호기성 조건에서 1시간 30분 동안 인큐베이팅하고 (OD=0.08-0.1), 3x10⁶ CFU/ml에 상응하는 1:300 희석된 접종물을, 1% DMSO (비히클) 중 상이한 농도의 분자의 존재 또는 부재하에 40μg/ml에서의 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅하였다. O/N 성장 후 각 배양물의 OD를 분광광도계에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고, 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도(optical density) (OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도 (OD) 사이의 차이이다.

표 1에 나타낸 바와 같이, 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대항하는 PMBN와 함께 사용한 분자 2329, 2452 및 2461에 대한 MIC는 10 μM과 동등한 반면, 분자 2412에 대해서 50 μM이다. 100 μM 이하의 농도에서 분자 2329, 2452, 2461 및 2412 단독 또는 40 μg/ml PMBN 단독은 이. 콜리 성장을 억제할 수 없다.

실시예 2: 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 미치는 폴리믹신 B 노나펩타이드와 함께 사용한 피라졸로피리미딘 분자 2666의 항박테리아 효과: 최소 억제 농도 (MIC)의 측정.

피라졸로피리미딘 분자 2666은 하기에 상응한다:

2666은 N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(에틸티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (또한 상기에 28x.HCl로 칭명됨)이다;

추가 실험을 박테리아 성장을 방지하는데 요구되는 최소 농도인 최소 억제 농도 (MIC)를 측정하기 위해 수행하였다.

루리안-버타니(Lurian-Bertani) (LB) 우무 플레이트 상에서 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, LB 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤 브로쓰 (MHB) 중 1:50 접종물을 호기성 조건에서 1시간 30분 동안 인큐베이팅하고 (OD=0,08-0,1), 3x10⁶ CFU/ml에 상응하는 1:300 희석된 접종물을, 1% DMSO (비히클) 중 상이한 농도의 시험된 분자의 존재 또는 부재하에 40μg/ml에서의 PMBN의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅한다. O/N 성장 후 각 배양물의 OD를 분광광도계 (Victor 3-Perkin Elmer)에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고, 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도 (OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도 (OD) 사이의 차이이다.

표 1에 나타난 바와 같이, 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대항하는 PMBN과 함께 사용한 2666에 대한 MIC는 10 μM과 동등하다. 100 μM 이하의 농도에서 분자 2666 단독 또는 40 μg/ml PMBN 단독은 이. 콜리 성장을 억제하지 않았다.

실시예 3: 슈도모나스 아에루기노사에 미치는 폴리믹신 B 노나펩타이드와 함께 사용한 분자 2329, 2412, 2452, 및 2461의 항박테리아 효과: 최소 억제 농도 (MIC)의 측정

추가 실험을 슈도모나스 아에루기노사(ATCC27853)의 임상적으로 관련 있는 그램-음성 박테리아 균주를 사용하여 수행하였다.

트립신 대두(tryptic soy) 우무 플레이트 상에서 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, 트립신 대두 브로쓰 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤 브로쓰 (MHB) 중 1:100 접종물을 호기성 조건에서 3 시간 동안 인큐베이팅하고 (OD=0.5-0.6), 1-3x10⁵ CFU/ml에 상응하는, 1:1000 희석된 접종물을, 1% DMSO(비히클) 중 상이한 농도의 시험된 분자의 존재 또는 부재하에 0.5μg/ml에서의 PMBN의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅한다. 28-30 시간 성장 후, 각 배양물의 OD를 분광광도계 (Victor 3-Perkin Elmer)에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고 (블랭크는 배지 단독이다), 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도(OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도(OD) 사이의 차이이다.

표 1에 나타난 바와 같이, 슈도모나스 아에루기노사 (ATCC27853)에 대항하여 PMBN과 함께 사용한 분자 2329, 2412, 2452 및 2461에 대한 MIC는 50 μM과 동등하다.

100 μM 이하의 농도에서 분자 2329, 2412, 2452, 및 2461 단독 또는 0.5 μg/ml PMBN 단독은 슈도모나스 아에루기노사 성장을 억제하지 않았다.

실시예 4: 슈도모나스 아에루기노사 (ATCC27853)에 미치는 폴리믹신 B 노나펩타이드와 함께 사용한 피라졸로피리미딘 분자 2666의 항박테리아 효과: 최소 억제 농도 (MIC)의 측정.

추가 실험을 슈도모나스 아에루기노사의 임상적으로 관련 있는 그램-음성 박테리아 균주 (ATCC27853)를 사용하여 수행하였다.

트립신 대두 우무 플레이트 상에서 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, 트립신 대두 브로쓰 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤 브로쓰 (MHB) 중 1:100 접종물을 호기성 조건에서 3 시간 동안 인큐베이팅하고 (OD=0.5-0.6), 1-3x10⁵ CFU/ml에 상응하는, 1:1000 희석된 접종물을, 1% DMSO(비히클) 중 상이한 농도의 시험된 분자의 존재 또는 부재하에 0.5μg/ml에서의 PMBN의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅한다. 28-30 시간 후, 성장 각 배양물의 OD를 분광광도계 (Victor 3-Perkin Elmer)에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고 (블랭크는 배지 단독이다), 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도 (OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도(OD) 사이의 차이이다.

표 1에 나타난 바와 같이, 슈도모나스 아에루기노사에 대항하는 PMBN과 함께 사용한 분자 2666에 대한 MIC는 50 μM과 동등하다. 100 μM 이하의 농도에서 분자 2666 단독 또는 0.5 μg/ml PMBN 단독은, 피. 아에루기노사(P. aeruginosa) 성장을 억제하지 않았다.

실시예 5: 에쉐리키아 콜리 (ATCC8739)에 미치는 폴리믹신 B 노나펩타이드와 함께 사용한 푸린 분자 2511, 2525 및 2833의 항박테리아 효과: 최소 억제 농도 (MIC)의 측정.

분자 2511, 2525 및 2833은 각각 하기 화학식에 상응한다:

2511은 N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (또한 상기에 24c로 칭명됨)이다.

2525는 N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(에틸티오)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (또한 상기에 20c로 칭명됨)이다;

2833은 2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (또한 상기에 25c로 칭명됨)이다;

추가 실험을 MedChemExpress #HY-106783에 의해 제공된 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)와 함께 사용한 분자 2511, 2525 및 2833의 최소 억제 농도 (MIC)를 측정하기 위해 수행하였다. MIC를 EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) 권고에 따라서 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대해 측정하였다.

간단히, 루리아-버타니 우무 (LB) 플레이트 상에서 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, LB 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤 브로쓰 (MHB) 중 1:50 접종물을 호기성 조건에서 1시간 30분 동안 인큐베이팅하고 (OD=0.08-0.1), 3x10⁶ CFU/ml에 상응하는 1:300 희석된 접종물을, 1% DMSO (비히클) 중 상이한 농도의 상기 언급된 분자의 존재 또는 부재하에 40μg/ml에서의 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅하였다. O/N 성장 후 각 배양물의 OD를 분광광도계에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고, 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도 (OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도 (OD) 사이의 차이이다.

표 1에 나타난 바와 같이, 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대항하는 PMBN과 함께 사용한 분자 2511 및 2525에 대한 MIC는 50 μM과 동등한 반면, 분자 2833에 대해 90 μM이다. 100 μM 이하의 농도에서 분자 2511, 2525 및 2833 단독 또는 40 μg/ml PMBN 단독은 이. 콜리 성장을 억제할 수 없었다.

실시예 6: 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 미치는 폴리믹신 B 노나펩타이드(MedChemExpress #HY-106783에 의해 제공됨)와 함께 사용한 피라졸로피리미딘 분자 2539의 항박테리아 효과: 최소 억제 농도 (MIC)의 측정.

피라졸로피리미딘 분자 2539는 하기에 상응한다:

2539는 N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-메틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (또한 상기에 27k로 칭명됨)이다;

루리아-버타니 (LB) 우무 플레이트 상 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, LB 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤 브로쓰 (MHB) 중 1:50 접종물을 호기성 조건에서 1시간 30분 동안 인큐베이팅하고 (OD=0,08-0,1), 3x10⁶ CFU/ml에 상응하는 1:300 희석된 접종물을, 1% DMSO (비히클) 중 상이한 농도의 상기 언급된 피라졸로피리미딘 분자의 존재 또는 부재하에 40μg/ml에서의 PMBN의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅한다. O/N 성장 후 각 배양물의 OD를 분광광도계 (Victor 3-Perkin Elmer)에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고, 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도 (OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도 (OD) 사이의 차이이다.

표 1에 나타난 바와 같이, 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대항하는 PMBN과 함께 사용한 2539에 대한 MIC는 25 μM과 동일하다. 100 μM 이하의 농도에서 분자 2539 단독 또는 40 μg/ml PMBN 단독은 이. 콜리 성장을 억제하지 않았다.

표 1: 이. 콜리 및 피. 아에루기노사에 대항하여 PMBN과 함께 사용한 푸린 및 피라졸로피리미딘 분자의 최소 억제 농도. PMBN (폴리믹신 B 노나펩타이드)을 이. 콜리에 대해 40 μg/ml에서 및 피. 아에루기노사에 대해 0.5μg/ml를 사용하였다.

3. 폴리믹신 B 노나펩타이드의 존재 및 부재하에 그램-음성 박테리아의 생물막 형성의 억제에서 사용하기 위한 피리미딘 유도체의 예

조기 대수기(logarithmic phase)에서 1.5x10⁴ CFU의 이. 콜리 (ATCC 8739)를 5% 만노스 (제조원: Sigma-aldrich # M6020-25G)로 보충된 루리아 버타니 (LB) 배지를 포함하는 48-웰 폴리스티렌 플레이트의 웰에 첨가하고, 48시간 동안 37℃에서 인큐베이팅하였다. 인큐베이션을 정적(static) 조건하에 투과제 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN) (35μg/ml) (Sigma-aldrich #P2076-5MG에 의해 제공됨)과 병용하거나 병용하지 않은 상이한 농도의 분자 2329 또는 2666의 존재 또는 부재하에 수행하였다. 인큐베이션 후, 액상 배지에서 부유하는 박테리아인, 플랑크톤 박테리아를, 제거하고, 부착 박테리아를 PBS에서 2회 세척하였다. 이어서, 크리스탈 바이올렛 (Crystal Violet) (Sigma-aldrich # C0775-25G) (dH₂O 중 1% 용액)을 웰에 15 분 동안 실온에서 첨가하여 생물막을 염색하였다. 웰을 PBS (포스페이트 완충된 염수, 제조원: Lonza #17-516F)로 3회 세척하여 결합되지 않은 크리스탈 바이올렛을 제거하고, 250μl 아세트산 20%를 첨가하고, 실온에서 10 분 동안 인큐베이팅하였다. 용액의 흡광도를 570nm에서, 살아있는 및 사멸된 박테리아의 합계에 상응하는, 생물막의 총 바이오매스를 반영하는 Infinite 200 PRO (Tecan)로 측정하였다. 퍼센트로 표현되는, 생물막 질량을, 하기 식으로 계산한다: Abs(샘플) / Abs(DMSO 1%) * 100, 여기서, Abs(샘플) 또는 Abs(DMSO)는 샘플 또는 DMSO 및 블랭크 (블랭크는 박테리아가 없는 배지 단독이다)의 흡광도 차이를 나타낸다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 35μg/ml PMBN과 병용한 푸린 2329 분자 (5 μM)는 이. 콜리 생물막 형성을 상승적 방식으로 완전히 억제하였다. 분자 2329 단독은 효과가 없지만, PMBN (35μg/ml) 단독은 생물막 성장을 반으로 감소시켰다. 유사하게는, 35μg/ml PMBN과 병용한 피라졸로피리미딘 2666 분자 (10 μM)는 이. 콜리 생물막 형성을 상승적 방식으로 완전히 억제하였다. 분자 2666 단독은 생물막 성장에 어떠한 효과를 미치지 않았다.

표 2: 폴리믹신 B 노나펩타이드 (표에서 P로 칭명됨)의 존재 및 부재하에 상이한 농도의 피리미딘 유도체 (2329 및 2666)의 존재하에 백분율로 표현된 이. 콜리 생물막 질량 감소

4. WO2009/034386에 개시된 푸린과 본 발명에 따른 피리미딘 유도체의 비교.

본 발명자들은 WO2009/034386로부터 4 분자 (84, 127, 128 및 129)를 합성하였다. 이러한 모 출원에서, 이. 파에칼리스(E. faecalis), 이. 파에슘(E. faecium) 및 에스. 아우레우스로부터의 MurI 효소를 억제하는 2 분자 (25 및 81)의 능력이 기술된다. 2 분자는 이. 파에칼리스 및 이. 파에슘으로부터의 MurI 동종효소의 효소 활성을 각각 2 및 5 μM과 동일한 절반 최대 억제 농도 (IC₅₀)로 억제할 수 있었다 (WO2009/034386의 표 9). 반대로, 2 분자에 대한 에스. 아우레우스 MurI 동종효소 대항하여 IC₅₀ >400 μM을 보고하고, 이는 이러한 박테리아 균주로부터 MurI 효소를 억제하는데 실패하였음을 나타낸다. WO2009/034386은 이들 푸린 분자의 항박테리아 효능을 입증하는 임의의 다른 시험을 보고하지 않는다.

본 발명자들은 이. 콜리 (ATCC8739)에 대항하는 분자 84, 127, 128 및 129의 어떠한 항박테리아 활성도 발견하지 못하였다.

상기 분자 84, 127, 128 및 129를 본 발명에 기재된 바와 유사한 화학적 경로에 따라서 합성하고, 단, Xb 상 염소 원자의 친핵성 치환을 또다른 아민에 의해 수행한다.

R¹ = CH₃인 경우, Y = O인 상응하는 알콕시-치환된 화합물 Xz"를 하기 반응식 6에 따라서 Xz로부터 시작하여 제공하였다:

반응식 6

실시예 1 :

2-부톡시-N-사이클로프로필-9-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-9H-푸린-6-아민 (38z")

본 발명자들은 헤테로사이클 환의 위치-6에 링크된 질소 원자에 부착된 사이클로프로필 환을 갖는 38z" (WO2009/034386에서 분자 129)를 합성하였다. 이러한 화합물의 화학적 구조는 본 출원에 기재된 화합물의 화학적 구조에 가장 밀접하게 관련되어 있다.

6-클로로-N⁴-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-2-(메틸티오)피리미딘-4,5-디아민 (38a)

4,6-디클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-아민 (22h) (0.5 g, 2.4 mmol)을 메탄올 (10 mL)에 용해시키고, 2,6-디플루오로-3-메틸벤질아민 (0.80 mL, 6.0 mmol)을 보충하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 용기에 도입하고, 130℃에서 2 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 진공하에 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 95%.

융점: 190-192℃.

6-클로로-9-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-2-(메틸티오)-9H-푸린 (38b)

(38a) (331.0 mg, 1 mmol)의 아세트산 (3.0 mL) 및 트리에틸 오르토포메이트 (3.0 mL, 18 mmol) 중 용액을 130℃의 온도에서 환류하에 3 시간 동안 가열하였다. 아세트산 및 트리에틸 오르토포메이트를 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 66%.

융점: 124-126℃.

N-사이클로프로필-9-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (38z)

(38b) (170.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (3 mL) 중 용액에 사이클로프로필아민 (0.07 mL, 1.0 mmol) 및 트리에틸아민 (0.10 mL)을 보충하고, 이어서 90℃에서 환류하에 5 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 86%.

융점: 150-152℃.

N-사이클로프로필-9-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-2-(메틸설포닐)-9H-푸린-6-아민 (38z')

(38z) (195.0 mg, 0.54 mmol)의 메틸렌 클로라이드 (10 mL) 중 용액을 5℃로 빙욕 상에 냉각시키고, 3-클로로퍼벤조산 (208.0 mg, 1.20 mmol)을 보충하였다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 NaOH 0.1 M (2 x 10 mL)의 용액으로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고, 여과하고, 메틸렌 클로라이드를 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 잔류물을 다음 단계 (38z")에서 추가 정제 없이 사용하였다.

수율: 69%.

나트륨 금속 (46.0 mg, 2 mmol)을 부탄-1-올 (3 mL)에 빙욕 상에서 용해시키고, (37z') (150.0 mg, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배시켰다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발시켜 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 75%.

융점: 123-125℃.

화합물 38z"의 적합성 및 순도를 NMR 분광법 및 원소 분석으로 입증하고, 하기에 기록한다:

분석 (C₂₀H₂₃F₂N₅O) 이론치: C, 62.00; H, 5.98; N, 18.08. 실측치: C, 61.97; H, 6.07; N, 18.03.

분자 38z" (WO2009/034386에서 분자 129)를 박테리아 균주에 대한 항생제의 효능을 평가하기 위해 EUCAST에 의해 추천된 프로토콜에 따라서 최종적인 최소 억제 농도를 측정하여 이의 잠재적 항박테리아 활성에 대해 시험하였다. Sigma-aldrich #P2076-5MG에 의해 제공된 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)와 함께 사용한 38z" (WO2009/034386에서 분자 129)에 대한 MIC를 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대해 측정하였다. 간단히, 루리아-버타니 우무 (LB) 플레이트 상에서 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, LB 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤 브로쓰 (MHB) 중 1:50 접종물을 호기성 조건에서 1시간 30분 동안 인큐베이팅하고 (OD=0.08-0.1), 3x10⁶ CFU/ml에 상응하는 1:300 희석된 접종물을, 1% DMSO (비히클) 중 상이한 농도의 분자의 존재 또는 부재하에 40μg/ml에서의 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅하였다. O/N 성장 후 각 배양물의 OD를 분광광도계에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고, 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도 (OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도 (OD) 사이의 차이이다. 분자 38z"를 100μM 이하의 농도에서 사용하는 경우 어떠한 항박테리아 활성도 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739) 균주에 대항하여 발견되지 않았다.

실시예 2: N-벤질-2-부톡시-9-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-9H-푸린-6-아민 (39z")

본 발명자들은 WO2009/034386에 보고된 화합물 127 (39z")을 합성하였다.

N-벤질-9-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (39z)

(38b) (170.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (3 mL) 중 용액을 벤질아민 (0.09 mL, 1.0 mmol) 및 트리에틸아민 (0.10 mL)으로 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 5 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 78%.

융점: 164-165.5℃.

N-벤질-9-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-2-(메틸설포닐)-9H-푸린-6-아민 (39z')

(39z) (180.0 mg, 0.41 mmol)의 메틸렌 클로라이드 (10 mL) 중 용액을 5℃로 빙욕에서 냉각하고, 3-클로로퍼벤조산 (155.0 mg, 0.90 mmol)으로 보충하였다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 NaOH 0.1 M (2 x 10 mL)의 용액으로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜, 진공하에 건조시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 및 헥산의 혼합물 중에서 재결정화하였다.

수율: 65%.

융점: 143-144℃

N-벤질-2-부톡시-9-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-9H-푸린-6-아민 (39z")

나트륨 금속을 1-부탄올 (3 mL) 중에 빙욕에서 용해시키고, (39z') (150.0 mg, 0.34 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배하였다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발하여 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 72%.

융점: 124-127.5℃

화합물 127의 적합성 및 순도를 NMR 분광법 및 원소 분석으로 입증하였다 (하기 참조):

분석 (C₂₄H₂₅F₂N₅O) 이론치: C, 65.89; H, 5.76; N, 16.01. 실측치: C, 65.98; H, 6.03; N, 16.24.

분자 39z" (WO2009/034386에서 분자 127)를 박테리아 균주에 대항하는 항생물질의 효능을 평가하기 위한 EUCAST에 의해 권고된 프로토콜에 따라서 궁극적인 최소 억제 농도를 측정하여 이의 잠재적인 항박테리아 활성에 대해 시험하였다. Sigma-aldrich #P2076-5MG에 의해 제공된 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)와 함께 사용한 39z" (WO2009/034386에서 분자 127)에 대한 MIC를 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대해 측정하였다. 간단히, 루리아-버타니 우무 (LB) 플레이트 상에서 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, LB 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤 브로쓰 (MHB) 중 1:50 접종물을 호기성 조건에서 1시간 30분 동안 인큐베이팅하고 (OD=0.08-0.1), 3x10⁶ CFU/ml에 상응하는 1:300 희석된 접종물을, 1% DMSO (비히클) 중 상이한 농도의 분자의 존재 또는 부재하에 40μg/ml에서의 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅하였다. O/N 성장 후 각 배양물의 OD를 분광광도계에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고, 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도 (OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도 (OD) 사이의 차이이다. 분자 39z"를 100μM 이하의 농도에서 사용하는 경우, 어떠한 항박테리아 활성도 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739) 균주에 대항하여 발견되지 않았다.

실시예 3: N-벤질-9-(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-2(펜틸옥시)-9H-푸린-6-아민 (40z")

본 발명자들은 WO2009/034386에 보고된 화합물 128 (40z")을 합성하였다.

나트륨 금속을 1-펜탄올 (3 mL) 중에 빙욕에서 용해시키고, (39z') (150.0 mg, 0.34 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배하였다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발하여 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 68%.

융점: 112-114℃

화합물 128의 적합성 및 순도를 NMR 분광법 및 원소 분석으로 입증하였다 (하기 참조):

분석 (C₂₅H₂₇F₂N₅O) 이론치: C, 66.50; H, 6.03; N, 15.51. 실측치: C, 66.60; H, 6.36; N, 15.88.

분자 40z" (WO2009/034386에서 분자 128)를 박테리아 균주에 대항하는 항생물질의 효능을 평가하기 위한 EUCAST에 의해 권고된 프로토콜에 따라서 궁극적인 최소 억제 농도를 측정하여 이의 잠재적인 항박테리아 활성에 대해 시험하였다. Sigma-aldrich #P2076-5MG에 의해 제공된 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)와 함께 사용한 40z" (WO2009/034386에서 분자 127)를 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대해 측정하였다. 간단히, 루리아-버타니 우무 (LB) 플레이트 상에서 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, LB 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤 브로쓰 (MHB) 중 1:50 접종물을 호기성 조건에서 1시간 30분 동안 인큐베이팅하고 (OD=0.08-0.1), 3x10⁶ CFU/ml에 상응하는 1:300 희석된 접종물을, 1% DMSO (비히클) 중 상이한 농도의 분자의 존재 또는 부재하에 40μg/ml에서의 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅하였다. O/N 성장 후 각 배양물의 OD를 분광광도계에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고, 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도 (OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도 (OD) 사이의 차이이다. 분자 40z"를 100μM 이하의 농도에서 사용하는 경우 어떠한 항박테리아 활성도 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739) 균주에 대항하여 발견되지 않았다.

실시예 4: 2-(부틸티오)-N,9-비스(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-9H-푸린-6-아민 (41z")

본 발명자들은 WO2009/034386에 보고된 화합물 84 (41z")를 합성하였다.

N,9-비스(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (41z)

(38b) (170.0 mg, 0.5 mmol)의 아세토니트릴 (3 mL) 중 용액을 2,6-디플루오로-3-메틸벤질아민 (0.135 mL, 1.0 mmol) 및 트리에틸아민 (0.10 mL)으로 보충하고, 이어서, 90℃에서 환류하에 5 시간 동안 가열하였다. 아세토니트릴 및 트리에틸아민을 진공하에 증류한 후, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 75%.

융점: 151-153℃.

N,9-비스(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-2-(메틸설포닐)-9H-푸린-6-아민 (41z')

(39z) (180.0 mg, 0.39 mmol)의 메틸렌 클로라이드 (10 mL) 중 용액에 5℃까지 빙욕에서 냉각하고, 3-클로로퍼벤조산 (155.0 mg, 0.90 mmol)으로 보충하였다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 NaOH 0.1 M의 용액으로 세척하였다 (2 x 10 mL). 유기 층을 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜, 진공하에 건조시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 및 헥산의 혼합물에서 재결정화하였다.

수율: 72%.

융점: 183-185℃

2-(부틸티오)-N,9-비스(2,6-디플루오로-3-메틸벤질)-9H-푸린-6-아민 (41z")

(41z') (150.0 mg, 0.30 mmol)의 아세토니트릴 (3 mL) 중 용액을 K₂CO₃ (100 mg, 0.72 mmol) 및 부탄티올 (0.08 mL, 0.75 mmol)로 보충하였다. 100℃에서 4 시간 동안 밀봉된 용기에서 교반한 후, 혼합물을 증발시키고, 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (2 x 50 mL) 사이에 분배하였다. 합한 유기 층을 건조시키고, 진공하에 증발하여 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다.

수율: 65%.

융점: 127.5-129.5℃

화합물 84의 적합성 및 순도를 NMR 분광법 및 원소 분석으로 입증하였다 (하기 참조):

분석 (C₂₅H₂₅F₄N₅S) 이론치: C, 59.63; H, 5.00; N, 13.91; S, 6.37. 실측치: C, 59.46; H, 5.12; N, 13.92; S, 6,11.

분자 41z" (WO2009/034386에서 분자 84)를 박테리아 균주에 대항하는 항생물질의 효능을 평가하기 위한 EUCAST에 의해 권고된 프로토콜에 따라서 궁극적인 최소 억제 농도를 측정하여 이의 잠재적인 항박테리아 활성에 대해 시험하였다. Sigma-aldrich #P2076-5MG에 의해 제공된 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)와 함께 사용한 41z" (WO2009/034386에서 분자 84)를, 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739)에 대해 측정하였다. 간단히, 루리아-버타니 우무 (LB) 플레이트 상에서 성장시킨 단일 집락을 재현탁시키고, LB 배지에서 밤새 (O/N) 호기성 조건에서 (37℃ 220rpm 진탕하면서) 배양하고, 다음날 뮐러-힌톤 브로쓰 (MHB) 중 1:50 접종물을 호기성 조건에서 1시간 30분 동안 인큐베이팅하고 (OD=0.08-0.1), 3x10⁶ CFU/ml에 상응하는 1:300 희석된 접종물을, 1% DMSO (비히클) 중 상이한 농도의 분자의 존재 또는 부재하에 40μg/ml에서의 폴리믹신 B 노나펩타이드 (PMBN)의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅하였다. O/N 성장 후 각 배양물의 OD를 분광광도계에서 600nm에서 측정하였다 (OD₆₀₀). MIC는 박테리아의 가시적 성장이 없는 농도를 나타내고, 즉, 600nm에서 ΔOD는 0과 동일하고, 여기서, ΔOD는 PMBN과 함께 분자를 사용하여 수득한 광학 밀도 (OD), 및 블랭크 (블랭크는 배지이다) 단독의 광학 밀도 (OD) 사이의 차이이다. 분자 41z"를 100μM 이하의 농도에서 사용하는 경우 어떠한 항박테리아 활성도 에쉐리키아 콜리 (ATCC 8739) 균주에 대항하여 발견되지 않았다.

실시예 5. 시간-사멸 실험: 이. 콜리에 대항하는 살균 항생제로서 암피실린을 사용한 본 발명에 따른 피리미딘 유도체의 비교.

그램-음성 박테리아에 미치는 분자 2329 및 2666의 살균성 효과를 평가하기 위해, 본 발명자들은 1x10⁸ CFU/ml 이. 콜리 (ATCC 8739)의 접종물을 루리아-버타니 (LB) 배지에서 50 μg/ml PMBN과 병용한 하나 또는 다른 분자의 MIC 5 배 (5 times)에 노출시켰다. 이. 콜리를 240 분 동안 37℃에서 220rpm에서 진탕하면서 성장시켰다.

배양물의 분취량을 시험된 분자의 첨가 전 및 30, 90, 150 및 240 분의 인큐베이션 후 수집하였다.

희석된 배양 분취량을 LB 우무 플레이트 상에 펼쳐서 각 시점에서 CFU의 수를 평가하였다. 이들 수를 도 3에서 시험된 분자의 항박테리아 효과를 나타내는 Log (ml당 c.f.u. 이. 콜리)로서 나타낸다.

분자의 항박테리아 효과를 또한 Sigma-aldrich #A0166-5G에 의해 제공된 100μg/ml 암피실린 (AMP)과 비교하였다. 에쉐리키아 콜리 (ATCC8739)에 대한 폴리믹신 B 노나펩타이드 (도 3에서 P로 칭명됨)와 병용된 피리미딘 유도체 2329 및 2666의 항박테리아 효과는 놀랍게도 암피실린과 유사하다.

Claims

그램-음성 박테리아 감염의 치료 또는 예방을 필요로 하는 숙주 포유류에서 그램-음성 박테리아 감염의 치료 또는 예방에서 막투과제(membrane penetrating agent)와 함께 사용하기 위한 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물;
화학식 (I)

상기 화학식 (I)에서,
X¹ 및 X²는 독립적으로 N, CH, CR⁸이고, 여기서, R⁸은 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐 또는 C_2-6 알키닐이고; 단, X¹ 또는 X² 중 하나가 N과 동일하면, X¹ 또는 X² 중 나머지 하나는 CH, CR⁸로부터 선택되고;
-Y-는 -O- 또는 -S-이고;
R¹ 및 R²는 독립적으로 C_1-6-알킬, C_2-6-알케닐, C_2-6-알키닐, C_3-6-사이클로알킬, 아릴, 아릴-C_1-6-알킬이고, 여기서, 상기 알킬 또는 사이클로알킬 모이어티(moiety)는 OH 또는 할로겐으로 임의로 일치환 또는 다치환되고, 상기 아릴 모이어티는 할로겐, -C_1-6 알킬, -C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂로 임의로 일치환 또는 다치환되고;
R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷은 독립적으로 H, 할로겐, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂이다.
제1항에 있어서, R³ 및 R⁷이 수소이고, R⁴ 및 R⁵가 독립적으로 할로겐인, 피리미딘 유도체.
제1항 또는 제2항에 있어서, X¹이 CH 또는 CR⁸이고, X²가 N인, 피리미딘 유도체.
제3항에 있어서, 화학식 (V)로 나타낸 N-(2-페닐사이클로프로필)-9H-푸린-6-아민 골격(scaffold)을 포함하는 피리미딘 유도체.
화학식 (V)
제3항 또는 제4항에 있어서,
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (1c);
9-메틸-N-((1R,2S)-2-페닐사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (2c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (3c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (4c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-이소프로필-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (5c);
9-사이클로프로필-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (6c);
9-부틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (7c);
9-(2급-부틸)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (8c);
9-(3급-부틸)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (9c);
9-사이클로부틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (10c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-펜틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (11c);
9-사이클로펜틸-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (12c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-헥실-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (13c);
9-사이클로헥실-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (14c);
9-알릴-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (15c);
2-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)에탄올 (16c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (17c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9-(2,2,2-트리플루오로에틸)-9H-푸린-6-아민 (18c);
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)사이클로펜탄-1,2,3-트리올 (19d);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(에틸티오)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (20c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(에틸티오)-9H-푸린-6-아민 (21c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (22c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-프로폭시-9H-푸린-6-아민 하이드로클로라이드 (23t.HCl);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (24c);
2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (25c); 또는
2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-9H-푸린-6-아민 (26c) 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물로부터 선택되는, 피리미딘 유도체.
제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (1c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (3c);
9-알릴-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (15c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (17c);
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)사이클로펜탄-1,2,3-트리올 (19d);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (22c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(메틸티오)-9H-푸린-6-아민 (24c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(에틸티오)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (20c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-에틸-2-(에틸티오)-9H-푸린-6-아민 (21c); 또는
2-(부틸티오)-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-9H-푸린-6-아민 (25c) 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물로부터 선택되는, 피리미딘 유도체.
제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-메틸-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (1c);
9-알릴-N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (15c);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-9-(프로프-2-인-1-일)-2-(프로필티오)-9H-푸린-6-아민 (17c); 또는
(1S,2R,3S,4R)-4-(6-(((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)아미노)-2-(프로필티오)-9H-푸린-9-일)사이클로펜탄-1,2,3-트리올 (19d)로부터 선택되는, 피리미딘 유도체.
제1항 또는 제2항에 있어서, X¹이 N이고, X²가 CH 또는 CR⁸이고, 바람직하게는 상기 피리미딘 유도체가:
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-메틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (27k);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(에틸티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (28x.HCl);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(프로필티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (29x.HCl);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (30k);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(에틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (31x.HCl);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(프로필티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (32x.HCl);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-이소프로필-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (33k.HCl);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(메틸티오)-1-프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (34k.HCl) 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물로부터 선택되고,
가장 바람직하게는, 상기 피리미딘 유도체가:
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-메틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (27k);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-에틸-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민(30k);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-6-(에틸티오)-1-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (28x.HCl);
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-1-이소프로필-6-(메틸티오)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드(33k.HCl) 또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물로부터 선택되는, 피리미딘 유도체.
제1항 또는 제2항에 있어서, X¹ 및 X²가 CH 또는 CR⁸이고, 바람직하게는 상기 피리미딘 유도체가,
N-((1R,2S)-2-(3,4-디플루오로페닐)사이클로프로필)-7-에틸-2-(메틸티오)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (35p.HCl);
또는 이의 이성질체, 라세미 혼합물, 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 또는 알킬화 암모늄 염 또는 전구약물로부터 선택되는, 피리미딘 유도체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R³ 및 R⁷이 H이고, R⁴, R⁵가 불소인, 피리미딘 유도체.
의료 장치의 표면 상 생물막 형성시 그램-음성 박테리아 성장의 억제제로서 생체외(ex vivo)에서 막투과제와 함께 사용한 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체의 용도:
화학식 (I)

상기 화학식 (I)에서,
X¹ 및 X²는 독립적으로 N, CH, CR⁸이고, 여기서, R⁸은 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐 또는 C_2-6 알키닐이고; 단, X¹ 또는 X² 중 하나가 N과 동일한 경우, X¹ 또는 X² 중 나머지 하나는 CH, CR⁸로부터 선택되고;
-Y-는 -O- 또는 -S-이고;
R¹ 및 R²는 독립적으로 C_1-6-알킬, C_2-6-알케닐, C_2-6-알키닐, C_3-6-사이클로알킬, 아릴, 아릴-C_1-6-알킬이고, 여기서, 상기 알킬 또는 사이클로알킬 모이어티는 OH 또는 할로겐으로 임의로 일치환 또는 다치환되고, 상기 아릴 모이어티는 할로겐, -C_1-6 알킬, -C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂로 임의로 일치환 또는 다치환되고;
R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷은 독립적으로 H, 할로겐, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂이다.
의료 장치, 바람직하게는 심혈관 장치의 표면상에, 유효량의 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체를 막투과제와 함께 도포함을 포함하는, 생물막 형성시 그램-음성 박테리아를 사멸시키거나 이의 성장을 예방하는 방법으로서, 상기 방법이 사람 또는 동물 신체의 치료 방법이 아닌, 방법.
화학식 (I)

상기 화학식 (I)에서,
X¹ 및 X²는 독립적으로 N, CH, CR⁸이고, 여기서, R⁸은 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐 또는 C_2-6 알키닐이고; 단, X¹ 또는 X² 중 하나가 N과 동일한 경우, X¹ 또는 X² 중 나머지 하나는 CH, CR⁸로부터 선택되고;
-Y-는 -O- 또는 -S-이고;
R¹ 및 R²는 독립적으로 C_1-6-알킬, C_2-6-알케닐, C_2-6-알키닐, C_3-6-사이클로알킬, 아릴, 아릴-C_1-6-알킬이고, 여기서, 상기 알킬 또는 사이클로알킬 모이어티는 OH 또는 할로겐으로 임의로 일치환 또는 다치환되고, 상기 아릴 모이어티는 할로겐, -C_1-6 알킬, -C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂로 임의로 일치환 또는 다치환되고;
R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷은 독립적으로 H, 할로겐, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂이다.
그램-음성 박테리아 감염의 진단 또는 예후에서 막투과제와 함께 사용하기 위한 화학식 (I)로 나타낸 피리미딘 유도체로서, 상기 피리미딘 유도체가 마커를 포함하는, 피리미딘 유도체:
화학식 (I)

상기 화학식 (I)에서,
X¹ 및 X²는 독립적으로 N, CH, CR⁸이고, 여기서, R⁸은 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐 또는 C_2-6 알키닐이고; 단, X¹ 또는 X² 중 하나가 N과 동일한 경우, X¹ 또는 X² 중 나머지 하나는 CH, CR⁸로부터 선택되고;
-Y-는 -O- 또는 -S-이고;
R¹ 및 R²는 독립적으로 C_1-6-알킬, C_2-6-알케닐, C_2-6-알키닐, C_3-6-사이클로알킬, 아릴, 아릴-C_1-6-알킬이고, 여기서, 상기 알킬 또는 사이클로알킬 모이어티는 OH 또는 할로겐으로 임의로 일치환 또는 다치환되고, 상기 아릴 모이어티는 할로겐, -C_1-6 알킬, -C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂로 임의로 일치환 또는 다치환되고;
R³, R⁴, R⁵, R⁶ 및 R⁷은 독립적으로 H, 할로겐, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, -OH, -NO₂, -CN, -NH₂, -NHR⁸, -N(R⁸)₂ -COOH, -COOR⁸, -CONH₂, -CONHR⁸, -CON(R⁸)₂, -SO₂NH₂, -SO₂NHR⁸, 또는 -SO₂N(R⁸)₂이다.
제1항 내지 제10항 또는 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막투과제가 폴리믹신 B 노나펩타이드인, 피리미딘 유도체.
제12항에 있어서, 상기 막투과제가 폴리믹신 B 노나펩타이드(polymixyn B nonapeptide)인, 방법.