KR20210141539A - Ctla-4 및 pd-1 차단제를 포함하는 항암 조합 요법 - Google Patents

Ctla-4 및 pd-1 차단제를 포함하는 항암 조합 요법 Download PDF

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Abstract

CTLA-4 차단제 및 PD-1 차단제를 포함하는 항암 조합 요법이 개시되어 있다. 특히, CTLA-4 차단제가 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편이고, PD-1 차단제가 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체, 또는 그의 항체 단편인 조합 요법이 개시되어 있다.

Description

CTLA-4 및 PD-1 차단제를 포함하는 항암 조합 요법
(1) 발명의 분야
본 발명은 CTLA-4 차단제 및 PD-1 차단제를 포함하는 항암 조합 요법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 조합 요법에 관한 것이며, 여기서 CTLA-4 차단제는 감소된 또는 측정불가능한 이펙터 기능을 갖는 항-CTLA-4 항체 또는 Fc 도메인이 결여된 항-CTLA-4 항체 단편이고, PD-1 차단제는 항-PD-1 항체, 항-PD-1 항체 단편, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L1 항체 단편이다.
(2) 관련 기술의 설명
종양 면역요법은 다양한 암 적응증의 치료에 더 탁월한 역할을 하는 것으로 추정된다. T 세포 상에 발현되는 면역 체크포인트 억제성 수용체, 예컨대 세포독성 T-림프구 항원-4 (CTLA-4) 및 프로그래밍된 사멸 수용체-1 (PD-1)의 항체 차단을 활용한 임상적 성공은 암에 대한 면역요법의 주목할 만한 발전에 활력을 불어넣었다. 모노클로날 항체 (mAb)에 의한 CTLA-4 또는 PD-1 단독요법 차단은 제어된 무작위 임상 시험에서 향상된 항종양 반응 및 유익한 임상 결과를 가져왔다.
다양한 암 치료를 위한 면역 체크포인트 차단의 탁월한 특징은 항-PD-1 및 항-CTLA-4 항체를 포함하는 조합 요법의 임상적으로 검증된 이점이다. 점점 더 많은 임상 데이터가 발표됨에 따라, 항-PD-1/CTLA-4 조합 요법이 체크포인트 경로를 단독으로 표적화하는 것과 비교할 때 우수한 임상적 효능을 제공할 수 있다는 것이 명백해지고 있다. 그러나, 항-CTLA-4 항체와 연관된 면역-관련 독성 (irAE)은 단독요법 설정 및 항-PD-1 항체와의 조합 요법 둘 다에서 유의미하였다. 예를 들어, 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb)에 의해 상표명 여보이로 판매되고 미국 식품의약국 (U.S. FDA)에 의해 승인된 유일한 항-CTLA-4 항체인 항-CTLA-4 항체 이필리무맙은 중증 및 치명적인 면역-매개 유해 반응, 예컨대 장, 간, 피부, 호르몬-생산 선 및/또는 눈의 염증을 유도하는 잠재력으로 인해 블랙박스 경고에 해당한다. 이필리무맙은 또한 진행성 신장 세포 암종 및 특정 결장직장암에 대해 항-PD-1 항체 니볼루맙 (브리스톨-마이어스 스큅에 의해 상표명 옵디보로 판매됨)과의 조합 요법에 대해 승인되었지만, 상당한 irAE에 대한 위험으로 인해 이필리무맙은 1 mg/kg의 낮은 또는 치료이하 용량으로 투여된다. 조합 요법에 대한 치료이하 용량은 절제불가능한 또는 전이성 흑색종에 대한 3 mg/kg 단독요법 용량 또는 보조 흑색종에 대한 10 mg/kg 단독요법 용량보다 유의하게 더 낮다 (여보이의 패키지 인서트 및 라벨 참조 (2018년 7월)).
FDA-승인된 항-PD1 mAb인 니볼루맙 및 펨브롤리주맙 둘 다는 인간화 항-PD1 IgG4 카파 항체이며, 이는 각각 미국 특허 번호 8,008,449 및 미국 특허 번호 8,354,509에 개시되어 있다. IgG4 이소타입 Fc 도메인은 일반적으로 검출가능한 이펙터 기능이 거의 없는 것으로 인식된다.
이필리무맙은 인간 항-CTLA-4 IgG1 카파 항체이며, 이는 미국 특허 번호 6,984,720에 개시되어 있다. IgG1 이소타입의 중쇄 (HC) 불변 도메인은 일반적으로 Fc 수용체 (FcR)에 대해 높은 친화성을 갖는 것으로 인식되는 Fc 도메인을 가지며, 이는 항체에 유의한 이펙터 기능을 제공한다 (예를 들어, 항체-의존적 세포 세포독성 (ADCC), 항체-의존적 세포 식세포작용 (ADCP), 및/또는 보체-의존적 세포독성 (CDC) 유도). 연구는 Fc 이펙터 기능이 항-CTLA-4 항체의 효능에 필요하다는 것을 제시한 바 있다. 예를 들어, 문헌 [Ingram et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 115: 3912-3917 (2018)]은 마우스 모델에서 중쇄 Fc 도메인 및 그의 수반되는 이펙터 기능이 결여된 항-CTLA-4 알파카 중쇄-단독 항체 단편 (VHH)이 항종양 효능을 갖지 않았으나; 항종양 효능이 이펙터 기능을 나타내는 마우스 IgG2 중쇄 Fc 도메인에 융합함으로써 분자에 회복될 수 있음을 제시하였고; 문헌 [Selby et al., Cancer Immunol. Res. 1: 32-42 (2013)]은 마우스 모델에서 이펙터 기능을 제거하도록 돌연변이된 Fc 도메인에 융합되거나 연결된 항-CTLA-4 항체가 어떠한 항종양 활성도 나타내지 않음을 제시하였다. 또한, 문헌 [Simpson et al., J. Exp. Med.;210:1695-710 (2013)] 및 국제 특허 출원 번호 WO2014089113을 참조한다.
트레멜리무맙은 인간 항-CTLA-4 인간 IgG2 항체이며, 이는 미국 특허 번호 8,491,895에 개시되어 있다. 인간 IgG2 이소타입은 잠재적인 이펙터 기능 활성을 최소화하고 이에 의해 irAE를 잠재적으로 감소시키기 위해 선택되었다. 그러나, 문헌 [Vargas et al., Cancer Cell 33: 649-663 (2018)]에 제시된 바와 같이, 트레멜리무맙은 이펙터 기능을 유지하고; 문헌 [Bertrand et al., BMC Med. 13: 211-214 (2015)]은 트레멜리무맙이 이필리무맙보다 더 높은 용량으로 투여될 수 있지만, 여전히 irAE, 특히 장 및 피부 염증성 면역-매개 독성을 유도할 수 있음을 제시하였다. 또한 문헌 [Ribas et al.,The Oncologist 12: 873-993 (2007)], [Schneider-Merck et al., J. Immunol. 184: 512-520 (2010)] 및 [Koenitzer et al., PLoS One. 10:e0145633(2015)]을 참조하며, 이는 시험관내에서 인간 IgG1 이소형과 유사한 등가의 ADCC 및 ADCP를 유도하는 다른 인간 IgG2 항체를 나타내었다.
이필리무맙의 irAE를 감소시키려는 다른 시도는 프로테아제-절단가능한 링커를 통해 항체의 활성 항원-결합 부위를 커버하는 독점 차폐 펩티드에 연결된 이필리무맙으로 구성된 프로바디인 BMS-986249를 포함한다. 차폐 펩티드는 정상 조직에서 CTLA-4에 결합하는 이필리무맙의 능력을 최소화함으로써 irAE를 감소시킬 수 있다 (국제 특허 출원 WO2009025846, WO2010081173, WO2018222949, WO2018085555, 문헌 [Pai et al., J. Clin. Invest. 129: 349-363 (2019)], 및 [Korman et al., Abstract SY09-01, AACR Annual Meeting Vol 77, issue 13 (2017)] 참조).
이필리무맙과 같은 항-CTLA-4 항체의 치료 효능이 조절성 T 세포 (Treg)의 고갈을 포함할 수 있음을 제안하는 연구에 비추어, 향상된 ADCC 활성을 갖는 항-CTLA-4 항체, 예컨대 이필리무맙이 현재 항체보다 더 효과적인 항종양 활성을 제공할 것으로 제안되었다. 미국 특허 번호 10,196,445는 향상된 ADCC 활성을 갖는 여러 이필리무맙 변이체를 개시하고 있다.
일부 항암 요법에 대한 표준 치료는 화학요법과 조합하여 항-PD-1 항체를 제공하는 것을 포함한다. 항-CTLA-4 항체의 항종양 활성은 이들 요법의 효능을 추가로 향상시킬 수 있지만; 위장 독성은 화학요법 동안 경험된 가장 흔히 발생하는 부작용 중 하나이기 때문에, 요법에 항-CTLA-4 항체를 추가하는 것은 대신 위장 독성을 악화시킬 수 있다.
명백히, 연관 irAE, 특히 현재 항-CTLA-4 항체와 연관된 피부 및 장 염증성 면역-매개 독성 없이 더 높고 보다 최적의 수준에서 투약을 가능하게 하는 항-CTLA-4 항체는 항-PD-1 길항제 및 임의로 화학요법과 조합하여 더 효과적인 요법을 허용할 가능성이 높다.
본 발명자들은 CTLA-4에 결합하는 특정 CTLA-4 차단제가 단독요법으로 투여될 때 감소된 또는 측정불가능한 항종양 활성을 갖지만, PD-1 차단제와의 조합 요법에서 사용될 때 임상적으로 관련된 항종양 활성을 나타낼 수 있음을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 이들 특정 CTLA-4 차단제가 현재 승인된 CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법과 연관된 면역-매개 유해 반응 (irAE) (피부 및 장에서의 irAE 포함)을 유도하지 않고 CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법에서 항종양 활성을 나타낼 수 있음을 발견하였다. 본원에 개시된 CTLA-4/PD-1 차단 조합은 개선된 환자 결과와 함께 보다 효능있는 암 치료로 이어질 수 있는 화학요법을 포함하는 조합 요법을 포함하는 현재 CTLA-4/ PD-1 차단 조합 요법에 비해 증가된 치료 지수의 요법을 가능하게 한다.
본 발명의 CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법의 일부로서 사용되는 특정 CTLA-4 차단제는 (i) 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 및 (ii) 단편 결정화가능한 (Fc) 도메인이 결여되거나 Fc 수용체 (FcR)에 결합하는 Fc 도메인 내의 영역의 결실을 포함하는 Fc 도메인을 갖는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 이펙터-침묵 항체 또는 항체 단편은 (i) 마이크로몰 범위의 회합 상수가 측정불가능한 결합을 나타내는 것인 비아코어(Biacore) 검정에서 측정될 수 있는 바와 같은 하나 이상의 FcR에 대한 측정불가능한 결합 또는 (ii) 동일한 이소타입의 항체에 대해 전형적인 결합과 비교하여 감소된, 비아코어 검정에서 측정될 수 있는 바와 같은 하나 이상의 FcR에 대한 측정가능한 결합을 나타낸다. 이들 특정 CTLA-4 차단제는 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제이다.
특정한 실시양태에서, 이들 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 및 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 항암 단독요법에서 측정가능한 항종양 활성을 나타내지 않을 수 있지만, CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법과 전형적으로 연관된 irAE, 특히 피부 또는 장 염증성 면역-관련 독성을 나타내지 않으면서 PD-1 또는 PD-L1 차단제와의 조합 항암 요법에서 측정가능한 항종양 활성을 나타낼 것이다.
본원에 개시된 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법과 전형적으로 연관된 irAE, 특히 피부 또는 장 염증성 면역-관련 독성을 나타내지 않으면서 PD-1 또는 PD-L1 차단제와 조합하여 더 높은 용량으로 및 더 긴 기간 동안 사용될 수 있다. 현재, 항-CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법에 사용하도록 승인된 항-CTLA-4 항체 이필리무맙 용량은 단독요법에 사용하도록 승인된 3 mg/kg 또는 10 mg/kg 용량 (여보이에 대한 패키지 인서트 및 라벨 (2018년 7월) 참조) 또는 국제 특허 출원 WO2018183408에서 CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법에 대해 고려되는 100 mg 이하의 고정 용량과 비교하여 1 mg/kg이다. 그러므로, 본 발명의 CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법은 단독요법에서 항-CTLA-4 항체에 대해 현재 승인된 용량과 동일하거나 더 높은 용량으로 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편을 사용할 수 있다. 본원에 개시된 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 항-CTLA-4 항체 단편은 또한 CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법과 전형적으로 연관된 irAE, 특히 피부 또는 장 염증성 면역-관련 독성을 나타내지 않으면서, CTLA-4/PD-1 차단 조합 요법에서 현재 사용되거나 고려되는 용량과 유사한 용량으로, 그러나 항-CTLA-4 항체에 대해 현재 수득가능한 것보다 더 긴 지속시간 동안 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체와 조합하여 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 암 치료를 필요로 하는 개체에서 암을 치료하기 위한 조합 요법을 제공하며, 상기 방법은 암을 치료하기 위해 (i) PD-1 또는 PD-L1 차단제의 치료 용량 및 (ii) 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제의 치료 용량을 암을 갖는 개체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 PD-1 또는 PD-L1 차단제 없이 단독요법에서 개체에게 투여될 때 나타나지 않는 조합 요법에서 항종양 활성을 나타낸다. 추가 실시양태에서, 조합 요법은 이펙터 기능을 나타내는 항-CTLA-4 항체를 포함하는 조합 요법과 비교하여 유해 사건에 대한 공통 용어 기준 (CTCAE) 버전 5.0에 정의된 바와 같은 등급 2보다 큰 조합 요법의 과정 동안 장 또는 피부에서 면역-매개 유해 반응 (irAE)을 유도하지 않거나 유도할 위험이 감소된다. 특정한 실시양태에서, 조합 요법의 일부로서 사용되는 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 조합 요법의 적어도 처음 10주 동안 등급 2보다 더 큰 피부 또는 장에서 irAE를 유도하지 않는다. 특정한 실시양태에서, 조합 요법은 조합 요법의 적어도 처음 4주 동안 검출가능한 irAE 또는 조합 요법의 적어도 처음 4주 동안 등급 1보다 더 큰 irAE를 초래하지 않는다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 조합 요법의 일부로서 사용되는 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 조합 요법의 일부로서 사용되는 PD-1 차단제는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 단편이다. 특정한 실시양태에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 항체를 이펙터-침묵으로 만드는 Fc 도메인에 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 HC 도메인을 포함한다. PD-1 차단제는 또한 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 단편일 수 있으며, 이들 각각은 Fc 도메인 또는 하나 이상의 FcR에 결합하는 Fc 도메인의 영역이 결여되며, 이는 항체 단편을 이펙터-침묵으로 만든다.
본 발명은 암 요법을 필요로 하는 개체에게 (i) IgG4 또는 IgG2 Fc 도메인을 갖는 항-PD-1 항체, 이펙터-침묵 항-PD-1 항체, 및 이펙터-침묵 항-PD-1 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 PD-1 차단제를 포함하는 제1 제형; 및 (ii) 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 및 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제를 포함하는 제2 제형을 투여하는 것을 포함하는 항암 조합 요법을 추가로 제공한다.
본 발명은 암 요법을 필요로 하는 개체에게 (i) IgG4 또는 IgG2 Fc 도메인을 갖는 항-PD-1 항체, 이펙터-침묵 항-PD-1 항체, 및 이펙터-침묵 항-PD-1 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 PD-1 차단제; 및 (ii) 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 및 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제를 포함하는 제형을 투여하는 것을 포함하는 항암 조합 요법을 추가로 제공한다.
본 발명은 암 요법을 필요로 하는 개체에게 (i) IgG4 또는 IgG2 Fc 도메인을 갖는 항-PD-L1 항체, 이펙터-침묵 항-PD-L1 항체, 및 이펙터-침묵 항-PD-L1 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 PD-L1 차단제를 포함하는 제1 제형; 및 (ii) 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 및 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제를 포함하는 제2 제형을 투여하는 것을 포함하는 항암 조합 요법을 추가로 제공한다.
본 발명은 암 요법을 필요로 하는 개체에게 (i) IgG4 또는 IgG2 Fc 도메인을 갖는 항-PD-L1 항체, 이펙터-침묵 항-PD-L1 항체, 및 이펙터-침묵 항-PD-L1 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 PD-L1 차단제; 및 (ii) 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 및 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제를 포함하는 제형을 투여하는 것을 포함하는 항암 조합 요법을 추가로 제공한다.
조합 요법의 보다 구체적인 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A,S267E/L328F, S2339D/A330L/I332E, L235G/G236R, N297A/D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D365E/L358M, 및 D265A/N297G로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 및 L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A,S267E/L328F, S2339D/A330L/I332E, L235G/G236R, D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D365E/L358M, 및 D265A로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 갖는 IgG1 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 (i), (ii) 및 (iii)에서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 및 N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 갖는 IgG2 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 (i), (ii) 및 (iii)에서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 S228P 아미노산 치환을 갖고 (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N267A, P329G, 및 D265A/N297A로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 및 N267A, P329G, 및 D265A/N297A로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 추가로 포함하는 IgG4 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 (i), (ii) 및 (iii)에서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
조합 요법의 추가 실시양태에서, Fc 도메인이 결여된 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 단일쇄 가변 단편 (scFv), 항원 결합 단편 (Fab), 또는 항원 결합 단편 이량체 F(ab')2이거나 또는 그를 포함한다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 이필리무맙, 트레멜리무맙, REGN4659, AGEN1884w, 8D2/8D2 (RE), 8D2/8D2 (RE)-변이체 1, 8D2H1L1, 8D2H1L1-변이체 1, 8D2H2L2, 8D2H2L2-변이체 1, 8D3H3L3, 8D2H2L15, 8D2H2L15-변이체 1, 8D2H2L17, 및 8D2H2L17-변이체 1로 이루어진 군으로부터 선택된 항-CTLA-4 항체의 3개의 중쇄 (HC) 상보성 결정 영역 (CDR) 및 3개의 경쇄 (LC) CDR을 포함한다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 이필리무맙의 VH 및 VL, 트레멜리무맙의 VH 및 VL, REGN4659의 VH 및 VL, AGEN1884w의 VH 및 VL, 8D2/8D2 (RE)의 VH 및 VL, 8D2/8D2 (RE)-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H1L1의 VH 및 VL, 8D2H1L1-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H2L2의 VH 및 VL, 8D2H2L2-변이체 1의 VH 및 VL, 8D3H3L3의 VH 및 VL, 8D2H2L15의 VH 및 VL, 8D2H2L15-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H2L17의 VH 및 VL, 또는 8D2H2L17-변이체 1의 VH 및 VL을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 (i) 서열식별번호(SEQ ID NO): 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; (ii) 서열식별번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; (iii) 서열식별번호: 95에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는 (iv) 서열식별번호: 97에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 98에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 (i) 서열식별번호: 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ii) 서열식별번호: 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (iii) 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (iv) 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (v) 서열식별번호: 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vi) 서열식별번호: 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vii) 서열식별번호: 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (viii) 서열식별번호: 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 88에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ix) 서열식별번호: 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (x) 서열식별번호: 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; 또는 (xi) 서열식별번호: 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
조합 요법의 추가 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 표 4-18에 개시된 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체로부터 선택된 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체이다.
조합 요법의 추가 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 결합제는 하나 이상의 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인 (ISVD)을 포함하는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편이고, 각각의 ISVD는 낙타과 중쇄 단독 항체의 가변 도메인 (VHH)을 포함하되; 단, ISVD 중 어느 것도 아미노 서열 FYGMG (서열식별번호: 69)를 포함하는 CDR1, 아미노산 서열 DIRTSAGRTTYADSVKG (서열식별번호: 70)를 포함하는 CDR2, 및 아미노산 EMSGISGWDY (서열식별번호: 71) 또는 EPSGISGWDY (서열식별번호: 72)를 포함하는 CDR3을 갖는 VHH (상기 ISVD는 국제 특허 출원 WO2008071447, WO2017087587 및 WO2017087588에 개시된 바와 같음), 또는 WO2008071447에 개시된 바와 같이 CDR3에 1, 2 또는 3개의 돌연변이를 포함하는 VHH를 포함하지 않으며, 하나 이상의 ISVD가 예를 들어, 본원에 개시된 이펙터-침묵 항체 HC 도메인 또는 Fc 도메인 중 어느 하나를 포함하는 이펙터-침묵 이종 HC 도메인 또는 Fc 도메인에 융합되거나 연결된 실시양태에서 상기 CDR을 포함하는 ISVD는 이 단서에 의해 배제되지 않는다는 점이 제외된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편은 펨브롤리주맙, 니볼루맙 또는 세미플리맙-rwlc의 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다. 조합 요법의 특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 (i) 펨브롤리주맙의 VH 및 VL; (ii) 니볼루맙의 VH 및 VL; 또는 (iii) 세미플리맙-rwlc의 VH 및 VL을 포함한다.
추가 실시양태에서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편은 (i) 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL; (ii) 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL; 또는 (iii) 서열식별번호: 99에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 100에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 추가 실시양태에서, 항-PD1 항체는 (i) 서열식별번호: 27에 제시된 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 28에 제시된 아미노산 서열을 갖는 LC; (ii) 서열식별번호: 25에 제시된 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 26에 제시된 아미노산 서열을 갖는 LC; 또는 (iii) 서열식별번호: 101에 제시된 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 102에 제시된 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함한다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L1 항체 단편은 (i) 아테졸리주맙의 VH 및 VL 도메인; (ii) 아벨루맙의 VH 및 VL 도메인; 또는 (iii) 두르발루맙의 VH 및 VL 도메인을 포함한다.
추가 실시양태에서; 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L1 항체 단편은 (i) 서열식별번호: 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 104에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ii) 서열식별번호: 105에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 106에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; 또는 (iii) 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 본원에 개시된 바와 같은 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인을 포함할 수 있으며, 이는 C-말단 리신을 포함할 수 있거나 C-말단 리신 또는 C-말단 글리신-리신 디펩티드가 결여될 수 있다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 (i) IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인; (ii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이를 포함하는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (iii) N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A, L235G/G236R, S267E/L328F, S2339D/A330L/I332E, 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 포함하는 IgG1 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (iv) N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S 아미노산 치환을 포함하는 IgG2 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (v) S228P 아미노산 치환 및 N267A, P329G, 또는 D265A/N297A 아미노산 치환을 포함하는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 표 19-27에 개시된 항-PD-1 항체로부터 선택된 항-PD-1 항체 또는 표 28-36에 개시된 항-PD-L1 항체로부터 선택된 항-PD-L1 항체이다.
조합 요법의 추가 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편 또는 항-PD-L1 항체 단편 (이들 각각은 Fc 도메인이 결여됨)은 단일쇄 가변 단편 (scFv), 항원 결합 단편 (Fab), 또는 항원 결합 단편 이량체 F(ab')2이다.
조합 요법의 추가 실시양태에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 단편은 하나 이상의 ISVD를 포함하고, 각각의 ISVD는 낙타과 중쇄 단독 항체의 VHH를 포함한다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, CTLA-4 차단제는 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg의 CTLA-4 차단제를 포함하는 용량 또는 개체의 체중에 의존하지 않고 약 100 mg 초과인 CTLA-4 차단제의 고정 용량으로 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, CTLA-4 차단제는 1 mg/kg 내지 3 mg/kg의 CTLA-4 차단제를 포함하는 용량으로 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, CTLA-4 차단제는 3 mg/kg 내지 10 mg/kg의 CTLA-4 차단제를 포함하는 용량으로 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, CTLA-4 차단제는 약 10 mg/kg 초과의 CTLA-4 차단제를 포함하는 용량으로 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 약 2 또는 3 mg/kg 이상을 포함하는 용량, 또는 개체의 체중에 의존하지 않고 약 200 mg 이상인 고정 용량으로 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 200 mg 내지 400 mg인 개체의 체중에 의존하지 않는 용량으로 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 개체의 체중에 의존하지 않고 400 mg인 용량으로 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제가 개체에게 첫 번째로 투여되고 CTLA-4 차단제가 개체에게 두 번째로 투여되거나, CTLA-4 차단제가 개체에게 첫 번째로 투여되고 PD-1 차단제가 개체에게 두 번째로 투여된다. 특정한 실시양태에서, Pd-1 차단제 및 CTLA-4 차단제는 공동으로 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 개체는 조합 요법 이전에, 그와 공동으로, 또는 이후에 화학요법제를 투여받는다. 특정한 실시양태에서, 화학요법제는 악티노마이신, 전체-트랜스 레티노산, 알리트레티노인, 아자시티딘, 아자티오프린, 벡사로텐, 블레오마이신, 보르테조밉, 카르모푸르, 카보플라틴, 카페시타빈, 시스플라틴, 클로람부실, 시클로포스파미드, 시타라빈, 다카바진, 다우노루비신, 도세탁셀, 독시플루리딘, 독소루비신, 에피루비신, 에포틸론, 에토포시드, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 이다루비신, 이매티닙, 익사베필론, 이리노테칸, 메클로레타민, 멜팔란, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 미톡산트론, 니트로소우레아, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 페메트렉시드, 로미뎁신, 테가푸르, 테모졸로마이드(경구 다카바진), 테니포시드, 티오구아닌, 토포테칸, 유티델론, 발루비신, 베무라페닙, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈 및 보리노스타트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 암은 흑색종, 비소세포 폐암, 두경부암, 요로상피암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 비-호지킨 림프종, 신암, 호지킨 림프종, 중피종, 난소암, 소세포 폐암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암 또는 타액선암이다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 암은 췌장암, 기관지암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계 암, 말초 신경계 암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 부신암, 골육종, 연골육종, 또는 혈액 조직의 암이다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 개체는 인간이고, CTLA-4 차단제는 인간 CTLA-4에 결합하고, PD-1 차단제는 인간 PD-1에 결합하고, PD-L1 차단제는 인간 PD-L1에 결합한다.
항체 및 조성물
본 발명은 각각 VH 및 VL을 포함하는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편을 추가로 제공하며, 여기서 VH는 3개의 중쇄 CDR을 포함하고, VL은 3개의 경쇄 CDR을 포함하며, 이들은 함께 CTLA-4에 결합한다. 특정한 실시양태에서, CTLA-4는 인간 CTLA-4이다.
보다 구체적인 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인 (단, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 N297A 치환으로 단독으로 이루어진 이필리무맙을 포함하지 않음); (ii) N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A,S267E/L328F, S2339D/A330L/I332E, L235G/G236R, N297A/D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D365E/L358M, 및 D265A/N297G로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 및 L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A,S267E/L328F, S2339D/A330L/I332E, L235G/G236R, D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D365E/L358M, 및 D265A로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 갖는 IgG1 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 (i), (ii) 및 (iii)에서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 및 N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 갖는 IgG2 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 (i), (ii) 및 (iii)에서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 S228P 아미노산 치환을 갖고 (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N267A, P329G, 및 D265A/N297A로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 및 N267A, P329G, 및 D265A/N297A로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 추가로 포함하는 IgG4 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 (i), (ii) 및 (iii)에서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 이필리무맙, 트레멜리무맙, REGN4659, AGEN1884w, 8D2/8D2 (RE), 8D2H1L1, 8D2H2L2, 8D3H3L3, 8D2H2L15 및 8D2H2L17로 이루어진 군으로부터 선택된 항-CTLA-4 항체의 3개의 중쇄 (HC) 상보성 결정 영역 (CDR) 및 3개의 경쇄 (LC) CDR을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 이필리무맙의 VH 및 VL, 트레멜리무맙의 VH 및 VL, REGN4659의 VH 및 VL, AGEN1884w의 VH 및 VL, 8D2/8D2 (RE)의 VH 및 VL, 8D2H1L1의 VH 및 VL, 8D2H2L2의 VH 및 VL, 8D3H3L3의 VH 및 VL, 8D2H2L15의 VH 및 VL, 또는 8D2H2L17의 VH 및 VL을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 8D2/8D2 (RE)-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H1L1-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H2L2-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H2L15-변이체 1의 VH 및 VL, 또는 8D2H2L17-변이체 1의 VH 및 VL을 포함한다. 이들 변이체는 VH 아미노산 서열의 위치 18에서 메티오닌에 대한 이소류신의 치환을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 항-이펙터-침묵 CTLA-4 항체 단편은 (i) 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL; (ii) 서열식별번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 16에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL; (iii) 서열식별번호: 95에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 96에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL; 또는 (iv) 서열식별번호: 97에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 98에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 (i) 서열식별번호: 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ii) 서열식별번호: 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (iii) 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (iv) 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (v) 서열식별번호: 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vi) 서열식별번호: 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vii) 서열식별번호: 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (viii) 서열식별번호: 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 88에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ix) 서열식별번호: 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (x) 서열식별번호: 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; 또는 (xi) 서열식별번호: 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 F(ab), F(ab')2, Fv 및 scFv로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 하나 이상의 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인 (ISVD)을 포함하고, 각각의 ISVD는 낙타과 중쇄 단독 항체의 가변 도메인 (VHH)을 포함하되; 단, ISVD 중 어느 것도 아미노 서열 FYGMG (서열식별번호: 69)를 포함하는 CDR1, 아미노산 서열 DIRTSAGRTTYADSVKG (서열식별번호: 70)를 포함하는 CDR2, 및 아미노산 EMSGISGWDY (서열식별번호: 71) 또는 EPSGISGWDY (서열식별번호: 72)를 포함하는 CDR3을 포함하는 VHH (상기 ISVD는 국제 특허 출원 WO2008071447, WO2017087587 및 WO2017087588에 개시된 바와 같음), 또는 WO2008071447에 개시된 바와 같이 CDR3에 1, 2 또는 3개의 돌연변이를 포함하는 VHH를 포함하지 않으며, 하나 이상의 ISVD가 예를 들어, 본원에 개시된 이펙터-침묵 항체 HC 도메인 또는 Fc 도메인 중 어느 하나를 포함하는 이펙터-침묵 이종 HC 도메인 또는 Fc 도메인에 융합되거나 연결된 실시양태에서 상기 CDR을 포함하는 ISVD는 이 단서에 의해 배제되지 않는다는 점이 제외된다.
본 발명은 표 4-18에 개시된 각각의 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체를 추가로 제공하되, 단, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 N297A 치환으로 단독으로 이루어진 이필리무맙을 포함하지 않는다.
본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PD-1 항체를 추가로 제공한다:
(a) HC 가변 도메인 (VH)을 갖는 중쇄 (HC) 및 LC 가변 도메인 (VL)을 갖는 경쇄 (LC), 여기서 (i) VH는 펨브롤리주맙의 적어도 3개의 HC-상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL은 펨브롤리주맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하거나, (ii) VH는 니볼루맙의 적어도 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 니볼루맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하거나, 또는 (iii) VH는 세미플리맙-rwlc의 적어도 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 세미플리맙-rwlc의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함함, 및
(b) (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A, N297A/D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D356E/L358M, 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 포함하는 IgG1 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (iii) N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S 아미노산 치환을 포함하는 IgG2 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iv) S228P 아미노산 치환 및 N267A, P329G, D265A/N297A 아미노산 치환을 포함하는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 포함하는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인, 여기서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별됨.
상기 항-PD-1 항체의 추가의 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 (i) 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL, (ii) 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL, 또는 (iii) 서열식별번호: 99에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 100에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
항-PD-1 항체의 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인은 C-말단 리신을 추가로 포함하거나 C-말단 리신 또는 C-말단 글리신-리신 디펩티드가 결여될 수 있다.
본 발명은 HC 가변 도메인 (VH)을 갖는 중쇄 (HC) 및 LC 가변 도메인 (VL)을 갖는 경쇄 (LC)를 포함하는 항-PD-1 항체 단편을 추가로 제공하며, 여기서 (i) VH는 펨브롤리주맙의 적어도 3개의 HC-상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL은 펨브롤리주맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하거나, (ii) VH는 니볼루맙의 적어도 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 니볼루맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하거나, 또는 (iii) VH는 세미플리맙-rwlc의 적어도 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 세미플리맙-rwlc의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함한다.
항-PD-1 항체 단편의 추가의 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편은 (i) 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL, (ii) 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL, 또는 (iii) 서열식별번호: 99에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 100에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
상기 항-PD-1 항체 단편의 특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편은 F(ab), F(ab')2, Fv 및 scFv로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명은 표 19-27에 개시된 각각의 항-PD-1 항체를 추가로 제공한다.
본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 항-PD-1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 하기를 포함하는 항-PD-L1 항체를 추가로 제공한다:
(a) HC 가변 도메인 (VH)을 갖는 중쇄 (HC) 및 LC 가변 도메인 (VL)을 갖는 경쇄 (LC), 여기서 (i) VH는 두르발루맙의 적어도 3개의 HC-상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL은 두르발루맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하거나, (ii) VH는 아벨루맙의 적어도 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 아벨루맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하거나, 또는 (iii) VH는 아테졸리주맙의 적어도 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 아테졸리주맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함함, 및
(b) (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A, N297A/D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D356E/L358M, 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 포함하는 IgG1 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (iii) N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S 아미노산 치환을 포함하는 IgG2 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iv) S228P 아미노산 치환 및 N267A, P329G, D265A/N297A 아미노산 치환을 포함하는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 포함하는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인, 여기서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별되되, 단, VH 및 VL이 서열식별번호: 107 및 서열식별번호: 108의 아미노산 서열을 각각 갖는 경우, 중쇄 (HC) 불변 도메인은 치환의 N297A/D356E/L358M 조합을 갖는 IgG1 이소타입이 아니거나, VH 및 VL이 서열식별번호: 103 및 서열식별번호: 104의 아미노산 서열을 각각 갖는 경우, HC 불변 도메인은 치환의 L234F/L235E/P331S/D356E/L358M 조합을 갖는 IgG1 이소타입이 아니다.
상기 항-PD-L1 항체의 추가의 또 다른 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 (i) 서열식별번호: 103에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 104에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL, (ii) 서열식별번호: 105에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 106에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL, 또는 (iii) 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
항-PD-L1 항체의 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인은 C-말단 리신을 추가로 포함하거나 C-말단 리신 또는 C-말단 글리신-리신 디펩티드가 결여될 수 있다.
본 발명은 HC 가변 도메인 (VH)을 갖는 중쇄 (HC) 및 LC 가변 도메인 (VL)을 갖는 경쇄 (LC)를 포함하는 항-PD-L1 항체 단편을 추가로 제공하며, 여기서 (i) VH는 두르발루맙의 적어도 3개의 HC-상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL은 두르발루맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하거나, (ii) VH는 아벨루맙의 적어도 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 아벨루맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하거나, 또는 (iii) VH는 아테졸리주맙의 적어도 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 아테졸리주맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함한다.
추가의 또 다른 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 (i) 서열식별번호: 103에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 104에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL, (ii) 서열식별번호: 105에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 106에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL, 또는 (iii) 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다.
상기 항-PD-L1 항체 단편의 특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편은 F(ab), F(ab')2, Fv 및 scFv로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명은 표 28-36에 개시된 각각의 항-PD-L1 항체를 추가로 제공하되, 단, VH 및 VL이 서열식별번호: 107 및 서열식별번호: 108의 아미노산 서열을 각각 갖는 경우, 중쇄 (HC) 불변 도메인은 치환의 N297A/D356E/L358M 조합을 갖는 IgG1 이소타입이 아니거나, VH 및 VL이 서열식별번호: 103 및 서열식별번호: 104의 아미노산 서열을 각각 갖는 경우, HC 불변 도메인은 치환의 L234F/L235E/P331S/D356E/L358M 조합을 갖는 IgG1 이소타입이 아니다.
본 발명은 본원에 개시된 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L1 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 (i) 본원에 개시된 항-CTLA-4 항체 및 본원에 개시된 항-PD-1 항체 및 제약상 허용되는 담체; 또는 (ii) 본원에 개시된 항-CTLA-4 항체 및 본원에 개시된 항-PD-L1 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 (i) 본원에 개시된 항-CTLA-4 항체 단편 및 본원에 개시된 항-PD-1 항체 및 제약상 허용되는 담체 또는 (ii) 본원에 개시된 항-CTLA-4 항체 단편 및 본원에 개시된 항-PD-L1 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 (i) 본원에 개시된 항-CTLA-4 항체 단편 및 본원에 개시된 항-PD-1 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체 또는 (ii) 본원에 개시된 항-CTLA-4 항체 단편 및 본원에 개시된 항-PD-L1 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 (i) 본원에 개시된 항-CTLA-4 항체 및 본원에 개시된 항-PD-1 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체 또는 (ii) 본원에 개시된 항-CTLA-4 항체 및 본원에 개시된 항-PD-L1 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 개체에서 암 치료를 위한 또는 개체에서 암 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본원에 개시된 바와 같은 항-CTLA-4, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 또는 조성물 중 어느 하나를 추가로 제공한다.
본 발명은 개체에서 암 치료를 위한 또는 개체에서 암 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본원에 개시된 바와 같은 항-CTLA-4, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 단편 또는 조성물 중 어느 하나를 추가로 제공한다.
특정한 실시양태에서, 암은 흑색종, 비소세포 폐암, 두경부암, 요로상피암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 비-호지킨 림프종, 신암, 호지킨 림프종, 중피종, 난소암, 소세포 폐암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암 또는 타액선암이다.
특정한 실시양태에서, 암은 췌장암, 기관지암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계 암, 말초 신경계 암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 부신암, 골육종, 연골육종, 또는 혈액 조직의 암이다.
도 1a-1e: CTLA-4 차단 매개 결장염은 Fc-의존적이다. Balb/c 마우스를 55일 동안 표시된 바와 같이 항체로 일주일에 2회 치료하였다. 도 1a: Fc-적격 항-CTLA-4 항체 (α-CTLA4) 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체의 투여 후 장 염증 유전자 발현 프로파일링은 D265A 치환 (α-CTLA4 (D265S))을 갖는다. 매주 2회 치료 7주 후, 역전사-정량적 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에 의한 장 염증 마커의 평가를 위해 근위 소장을 수집하였다. 이소타입 대조군 치료와 비교하여 2개의 항체에 대한 장 염증 유전자의 발현의 배수 변화의 히트 맵이 제시되어 있다. 발현을 다중 패널에서 분석하였고, 사이클 역치 데이터를 각 패널 내에서 유비퀴틴으로 정규화하였다. 다중 패널의 일부로서 분석된 유전자로부터의 정규화된 데이터는 이소타입 대조군에 대비한 배수 변화를 결정하기 전에 평균을 내었다. 도 1b: 실험 시간 경과에 따른 체중 감소. 도 1c: 49 및 50일차에 혈청에서 FITC-덱스트란 형광을 측정함으로써 장 투과성을 평가하였다. 도 1d: 상대적 장 염증 및 결장염의 중증도에 대한 조직학적 소견을 공인 병리학자가 검사하고 스코어링하였다. 도 1e: 55일차부터 결장의 헤마톡실린 및 에오신 (H & E) 염색된 조직학적 절편의 대표적인 현미경 사진.
도 2a-2e: CTLA-4 ISVD (nAb)의 특징화. 도 2a: 이펙터-적격 α-CTLA4와 이펙터-침묵 CTLA4 ISVD (CTLA4 nAb)의 비교; 도 2b: 비장 활성화된 T 세포를 표시된 바와 같이 CLTA4 nAb 또는 α-CTLA4의 존재 하에 3일 동안 배양하였다. 증식 (도 2c), IFNγ (도 2d) 및 IL-2 (도 22e)의 생산을 측정하고, 이소타입 대조군 (마우스 IgG2a)에 대비한 배수 변화로서 플롯팅하였다. 데이터는 2-3개의 독립적 실험을 대표한다.
도 3a-3d: 항-PD-1 항체 (α-PD1)와 조합된 CTLA4 nAb는 강력한 항종양 효능을 갖는다. 도 3a: CT26 종양-보유 마우스는 종양이 100 ㎣의 평균 크기 (범위 78-125 ㎣)에 도달하였을 때 5회 용량 동안 4일마다 20 mpk의 표시된 항체 (α-CTLA4, α-PD1, α-CTLA4 (D265A)) 및/또는 30 mpk의 CTLA4 nAb의 용량을 투여받았다. 데이터는 32일 기간에 걸친 평균 종양 부피를 제시한다. 결과는 2개의 독립적 실험을 대표한다 (그룹당 n=10마리 마우스); 도 3b: 표시된 바와 같이 치료 후 1일차에 종양에서 CD8 T 세포/ Foxp3+ Treg 비. 결과는 2개의 독립적 실험을 대표한다 (n=7마리 마우스 그룹당); 도 3c 및 도 3d: 치료 후 8일차에 전체 종양으로부터의 유전자 발현 프로파일. 결과는 1 또는 2개의 독립적 실험을 대표한다 (그룹당 n=5마리 마우스). * p<0.05, **p<0.01, *** p<0.001 (독립표본-t 검정). 오차 막대 ± SEM. 도 3e: 이소타입 대조군과 비교하여 각 치료 그룹에 대한 개별 동물 종양 부피를 제시한다. 반응성 치료 그룹에 대해 39일차까지의 완전 반응 (CR)이 제시된다. 데이터는 그룹당 n=10마리 마우스를 사용한 2개의 독립적 실험을 대표한다.
도 4a-4d: 항-CTLA-4 항체 매개 결장염은 Fc-의존적이다. Balb/c 마우스를 55일 동안 표시된 바와 같이 항체 (α-CTLA4, α-PD1, α-CTLA4 (D265A))로 단독으로 또는 CTLA4 nAb와 조합하여 일주일에 2회 치료하였다. 도 4a: 실험 시간 경과에 따른 체중 감소; 도 4b: 55일차에 근위 공장에서의 장염의 조직학적 평가; 도 4c: 결장의 H&E 염색된 조직학적 절편의 현미경 사진; 도 4d: 이소타입 대조군 치료와 비교하여 제시된 샘플에 대한 장 염증 유전자의 발현의 배수 변화의 히트 맵을 제시한다. 발현을 다중 패널에서 분석하였고, 사이클 역치 데이터를 각 패널 내에서 유비퀴틴으로 정규화하였다. 다중 패널의 일부로서 분석된 유전자로부터의 정규화된 데이터는 이소타입 대조군에 대비한 배수 변화를 결정하기 전에 평균을 내었다.
도 5a-5c: Fc 이펙터 기능 항-CTLA-4는 피부 염증을 유도하지만 전신 염증을 유도하지 않는다. Balb/c 마우스를 표시된 바와 같이 55일 동안 α-CTLA4 또는 α-CTLA4 (D265A)로 일주일에 2회 치료하였다. 도 5a: 귀 피부의 H&E 염색된 조직학적 절편의 현미경 사진. 도 5b: 귀 피부 IL-17-생산 T 세포, Foxp3+ Treg 세포 및 호중구의 절대 수를 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. 도 5c: 신장 (상단 패널), 간 (중간 패널) 및 폐 (하단 패널)의 H & E 염색된 조직학적 절편의 현미경 사진. 결과는 2개의 독립적 실험 중 하나를 대표한다 (그룹당 n=4-8마리 마우스). 스케일 바는 100μm를 나타낸다. 오차 막대 ± SEM.
도 6a-6d: Fc-충분한 항-CTLA-4 항체는 결장 Foxp3+ Treg를 고갈시키지 않는다. 도 6a: 표시된 장기에서 CT26-종양 보유 마우스의 세포내 CTLA-4 염색. 도 6b: Foxp3+ Treg 세포 상의 CTLA-4의 평균 형광 강도 (MFI). **p<0.01, *** p<0.001 (대응표본-t 검정). 도 6c 및 도 6d: 표시된 바와 같이 치료 후 24시간에 결장 고유판 및 CT26 종양 침윤 Foxp3+ Treg의 대표적인 도트 플롯 및 통계. 데이터는 2 내지 4개의 독립적 실험을 대표한다 (그룹당 n=4-12마리 마우스). **p<0.01, *** p<0.001 (독립표본-t 검정). 오차 막대 ± SEM.
도 7a-7d: 항-CTLA-4에서 Fc-기능 매개된 장은 결장염의 Treg-매개 억제를 손상시켰다. 비장 CD45Rbhigh 나이브 T 세포를 CB17-SCID 수용자 마우스로 전달하고, 표시된 바와 같이 α-CTLA4 또는 CTLA4 nAb로 치료하였다. 도 7a: 실험 시간 경과에 따른 체중 감소. 도 7b: 결장의 H&E 염색된 조직학적 절편의 현미경 사진 및 도 7c: 47일차의 병리학 스코어 (그룹당 n=14-18마리 마우스). 도 7d: 나이브 T 세포 전달 후 47일차에 전체 결장의 유전자 발현 프로파일 (그룹당 n=6마리 마우스). 데이터는 2개의 독립적 실험 중 1개를 대표한다. Ns=유의하지 않음 **** p<0.0001 (독립표본-t 검정). 오차 막대 ± SEM.
도 8a-8e: FcγR 결착 및 CTLA-4 차단은 결장 대식세포를 활성화시킨다. 도 8a 및 도 8b: CT26-보유 마우스로부터의 비장, 결장 고유판 및 종양으로부터 단리된 대식세포 상의 CD16/CD32 표면 발현을 유동 세포계측법에 의해 평가하였다. 도 8c: CT26-보유 마우스로부터의 비장, 결장 고유판 및 종양에서 대식세포 (CD45+CD11b+F4/80+)의 비율 유동 세포계측법에 의해 평가하였다. 도 8d: 치료 후 0, 10 및 18일차에 α-CTLA4, α-CTLA4 (D265A), 또는 CTLA4 nAb로 치료된 마우스의 결장으로부터 Il1b, Tnfα, Ifnγ 및 Stat1 mRNA 발현을 평가하였다. 데이터는 2개의 독립적 실험을 대표한다 (그룹당 n=8-10마리 마우스). ns= 유의하지 않음, **p<0.01, *** p<0.001 (대응표본-t 검정). 오차 막대 ± SEM. 도 8e: 결장 고유판 IL-17-생산 CD4+ T 세포 (CD45+TCRb+CD4+CD8a-IL-17A+)의 비율, IFNγ-생산 CD8a+ T 세포 (CD45+TCRb+CD4-CD8a+IFNγ+) 및 호중구 (CD45+CD11b+Ly6Ghigh)의 절대 수를 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. 결과는 2개의 독립적 실험 중 1개를 대표한다 (그룹당 n=4-8마리 마우스). **p<0.01 (독립표본-t 검정). 스케일 바는 100 μm를 나타낸다. 오차 막대 ± SEM.
도 9a-9b: 마우스 동계 MB49 방광 종양 모델 연구에서 항종양 효능. 도 9a: MB49 종양-보유 마우스는 종양이 102 ㎣의 평균 크기 (범위 87-117 ㎣)에 도달하였을 때 4회 용량 동안 4일마다 표시된 항체의 용량 (30 mg/kg CTLA-4 nAb, 10 mg/kg α-CTLA4, 5 mg/kg α-PD1, 또는 CTLA4 nAb 및 α-PD-1의 조합)을 투여받았다. 데이터는 21일 기간에 걸친 평균 종양 부피를 제시한다. 결과는 2개의 독립적 실험을 대표한다 (그룹당 n=10마리 마우스). 도 9b: 각 치료 그룹에 대한 개별 동물 종양 부피를 제시한다. 반응성 치료 그룹에 대해 21일차까지의 완전 반응 (CR)이 제시된다. 데이터는 그룹당 n=10마리 마우스를 사용한 실험으로부터의 결과를 제시한다.
도 10a-10b: 마우스 동계 MC38 결장 종양 모델 연구에서 항종양 효능. 도 10a: MC38 종양-보유 마우스는 종양이 220 ㎣의 평균 크기 (범위 179-261 ㎣)에 도달하였을 때 4회 용량 동안 4일마다 표시된 항체의 용량 (30 mg/kg CTLA-4 nAb, 10 mg/kg α-CTLA4, 5 mg/kg α-PD1, 또는 CTLA4 nAb 및 α-PD-1의 조합)을 투여받았다. 데이터는 23일 기간에 걸친 평균 종양 부피를 제시한다. 결과는 2개의 독립적 실험을 대표한다 (그룹당 n=10마리 마우스). 도 10b: 각 치료 그룹에 대한 개별 동물 종양 부피를 제시한다. 반응성 치료 그룹에 대해 23일차까지의 완전 반응 (CR)이 제시된다. 데이터는 그룹당 n=10마리 마우스를 사용한 실험으로부터의 결과를 제시한다.
도 11: 이펙터 세포에 의한 장 염증의 유도. 장 염증의 Fc-매개 유도를 예시하는 만화는 Treg 고갈과는 독립적으로 이펙터 T 세포에 의해 유도될 수 있다.
정의
본원에서 사용된 바와 같은 "유해 사건" 또는 "AE"는 의학적 치료 또는 절차와 관련된 것으로 고려될 수 있거나 고려되지 않을 수 있는 인간 개체에서 의학적 치료 또는 절차의 사용과 함께 의학적 치료의 사용과 일시적으로 연관된 임의의 불리한 및 의도되지 않은 징후 (비정상적인 실험실 소견 포함), 증상 또는 질환으로, 미국 보건복지부가 2017년 11월 27일에 발행한 유해 사건에 대한 공통 용어 기준 (CTCAE) 버전 5.0에 제시되어 있다. AE는 의학 문서 및 과학적 분석에 사용되는 특정 사건의 고유한 표시인 용어이다. 의학적 치료는 하나 이상의 연관된 AE를 가질 수 있고, 각 AE는 동일한 또는 상이한 수준의 중증도를 가질 수 있다. AE의 중증도는 등급으로 할당된다. CTCAE는 이 일반 가이드라인에 기초하여 각 AE에 대한 중증도의 고유한 임상적 설명과 함께 등급 1 내지 5를 표시한다: 등급 1, 경증, 또는 무증상 또는 경증 증상, 임상적 또는 진단적 관찰만, 또는 개입이 필요하지 않음; 등급 2, 중등도, 또는 최소, 국소적 또는 비침습적 개입이 필요함, 또는 연령-적절한 도구적 일상생활활동 (ADL) 제한; 등급 3, 중증이거나 의학적으로 유의하지만 즉시 생명을 위협하지는 않음, 또는 입원 또는 입원 연장이 필요함, 또는 무능력, 또는 자가-관리 (ADL) 제한; 등급 4, 생명을 위협하는 결과 또는 긴급한 개입이 필요함; 및 등급 5, AE와 관련된 사망.
본원에서 사용된 바와 같은 "항체"는 (a) 디술피드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (HC) 및 2개의 경쇄 (LC), 또는 (b) 낙타과 항체 종의 경우, 디술피드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (HC)를 포함하는 당단백질을 지칭한다. 각 HC는 중쇄 가변 영역 또는 도메인 (VH) 및 중쇄 불변 영역 또는 도메인으로 구성된다. 특정 자연 발생 IgG, IgD 및 IgA 항체에서, 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3으로 구성된다. 일반적으로, 항체에 대한 기본 항체 구조적 단위는 2개의 HC/LC 쌍을 포함하는 사량체이며, 단 2개의 HC만을 포함하는 낙타과 항체 종을 제외하고, 이 경우 구조적 단위는 동종이량체이다. 각 사량체는 폴리펩티드 쇄의 2개의 동일한 쌍을 포함하며, 각 쌍은 1개의 LC (약 25 kDa) 및 HC 쇄 (약 50-70 kDa)를 갖는다.
특정 자연 발생 항체에서, 각 경쇄는 LC 가변 영역 또는 도메인 (VL) 및 LC 불변 도메인으로 구성된다. LC 불변 도메인은 1개의 도메인, CL로 구성된다. 인간 VH는 6개의 패밀리 구성원: VH1, VH2, VH3, VH4, VH5 및 VH6을 포함하고; 인간 VL은 16개의 패밀리 구성원: Vκ1, Vκ2, Vκ3, Vκ4, Vκ5, Vκ6, Vλ1, Vλ2, Vλ3, Vλ4, Vλ5, Vλ6, Vλ7, Vλ8, Vλ9 및 Vλ10을 포함한다. 이들 패밀리 구성원 각각은 특정한 서브타입으로 추가로 나눌 수 있다. VH 및 VL 도메인은 프레임워크 영역 (FR)이라고 하는 더 보존된 영역이 산재된 상보성 결정 영역 (CDR)이라고 하는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 영역 및 4개의 FR 영역으로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 CDR을 포함하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 고전적 보체 시스템의 제1 구성성분 (C1q)을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 이뮤노글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 각 도메인에 대한 아미노산의 할당은 일반적으로 문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991)]; [Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75]; [Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616]; [Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196:901-917] 또는 [Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883]의 정의에 따른다.
전형적으로, 중쇄 불변 도메인에서 아미노산의 넘버링은 번호 118로 시작하며, 이는 Eu 넘버링 방식에 따른다. Eu 넘버링 방식은 인간 IgG1 (Eu)의 아미노산 서열에 기초하며, 이는 문헌 [Edelman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 63: 78-85 (1969)]에 기재된 IgG1의 아미노산 서열의 아미노산 위치 118에서 시작하는 불변 도메인을 갖고, www.imgt.org/IMGTScientificChart/Numbering/ Hu_IGHGnber.html#r)에서 액세스가능한 문헌 [Beranger, et al., Ed. Ginetoux, Correspondence between the IMGT unique numbering for C-DOMAIN, the IMGT exon numbering, the Eu and Kabat numberings: Human IGHG] (생성: 17/05/2001, 버전: 08/06/2016)에서 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 도메인에 대해 제시되어 있다.
일반적으로, 항체의 VH/VL 쌍은 6개의 CDR, VH 상에 3개의 CDR 및 VL 상에 3개의 CDR을 포함하지만, 최신 기술은 대부분의 경우, 중쇄의 CDR3 영역이 항체 특이성의 일차 결정기임을 인식하고, 중쇄의 CDR3 단독에 기초한 특이적 항체 생성의 예는 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Beiboer et al., J. Mol. Biol. 296: 833-849 (2000)]; [Klimka et al., British J. Cancer 83: 252-260 (2000)]; [Rader et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 8910-8915 (1998)]; [Xu et al., Immunity 13: 37-45 (2000)] 참조). 문헌 [Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] (항체의 CDR 영역을 서열에 의해 정의함)을 참조하고; 또한, 문헌 [Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987)] (항체의 CDR 영역을 구조에 의해 정의함)을 참조한다.
문헌 [www.bioinf.org.uk : Prof. Andrew C.R. Martin's Group]에 개시되고 아래 표에 재현된 하기 일반 규칙은 항체가 결합하는 항원에서 에피토프를 포함하는 아미노산과 특이적으로 상호작용하는 아미노산을 포함하는 항체 서열에서 CDR을 확인하는데 사용될 수 있다. 이러한 일반적으로 일정한 특징이 발생하지 않는 드문 예가 있지만; Cys 잔기가 가장 보존된 특징이다.
Figure pct00001
Figure pct00002
일반적으로, 기본 항체 구조적 단위는 사량체를 포함한다. 각 사량체는 폴리펩티드 쇄의 2개의 동일한 쌍을 포함하며, 각 쌍은 1개의 LC (약 25 kDa) 및 HC 쇄 (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각 쇄의 아미노-말단 부분은 항원 인식을 주로 담당하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. HC의 카르복시-말단 부분은 항체의 이펙터 기능을 주로 담당하는 불변 영역을 정의할 수 있다. 전형적으로, 인간 LC는 카파 및 람다 LC로 분류된다. 또한, 인간 HC는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로 분류되고, 항체의 이소타입을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 정의한다. LC 및 HC 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되며, HC는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌 [Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)]을 참조한다.
항체의 중쇄는 말단 리신 (K) 잔기, 또는 말단 글리신 및 리신 (GK) 잔기를 가질 수 있거나 갖지 않을 수 있다. 그러므로, 특정한 실시양태에서 본원에서 항체는 말단 리신이 추가로 결여되고 글리신 잔기로 종결되는 본원에 제시된 중쇄 불변 영역 아미노산 서열 또는 말단 글리신 잔기가 또한 결여된 추가 실시양태를 포함한다. 이는 말단 리신 및 때때로 글리신 및 리신이 함께 항체의 발현 동안 절단되거나, 인체에 도입될 때 항체 효능, 안정성 또는 면역원성에 명백한 유해 효과 없이 절단될 수 있기 때문이다. 일부 경우에, 중쇄를 코딩하는 핵산 분자는 말단 리신을 코딩하는 코돈 또는 말단 리신 및 글리신에 대한 코돈을 의도적으로 생략할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "항체 단편" 또는 "항원 결합 단편"은 전장 항체의 단편, 즉 전장 항체에 의해 결합된 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하지만, 전장보다 작은 항체 단편을 지칭하며, 이는 Fc 도메인이 전체적으로 결여되어 있거나 FcγR에 대한 항체의 결합을 부여하는 Fc 도메인의 부분이 결여되어 있다. 항체 결합 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; scFv 분자; 나노바디, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용된 바와 같은 "키메라 항체"는 제1 항체로부터의 가변 도메인 및 제2 항체로부터의 불변 도메인을 갖는 항체이며, 여기서 (i) 제1 및 제2 항체는 상이한 종으로부터 유래되거나 (미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855 (1984)]), 또는 (ii) 제1 및 제2 항체는 상이한 이소타입으로부터 유래된다 (예를 들어, IgG1 항체로부터의 가변 도메인 및 IgG4 항체로부터의 불변 도메인). 한 측면에서, 가변 도메인은 비-인간 항체, 예컨대 마우스 항체 ("모 항체")로부터 수득되고, 불변 도메인 서열은 인간 항체로부터 수득된다. 추가 측면에서, 가변 도메인은 마우스 항체로부터의 인간화 가변 도메인 및 인간 항체의 불변 도메인이다.
본원에서 사용된 바와 같은 "조합 요법"은 제1 치료제 및 제2 치료제를 개체에게 연속적으로 또는 공동으로 투여하는 것을 포함하는 인간 또는 동물 개체의 치료를 지칭한다. 일반적으로, 제1 및 제2 치료제는 혼합물이 아닌 별도로 개체에게 투여되지만; 투여 전에 제1 및 제2 치료제가 혼합되는 실시양태가 있을 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "보존적 치환"은 유사한 특징 (예를 들어 전하, 측쇄 크기, 소수성/친수성, 백본 형태 및 강성 등)을 갖는 다른 아미노산으로 아미노산을 치환하여 단백질의 생물학적 활성을 변경하지 않고 빈번하게 변화가 이루어질 수 있음을 의미한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 일반적으로 폴리펩티드의 비필수 영역에서의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경하지 않는다는 것을 인식한다 (예를 들어, 문헌 [Watson et al. Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.) (1987)] 참조). 또한, 구조적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산의 치환은 생물학적 활성을 파괴할 가능성이 적다. 예시적인 보존적 치환은 표 2에 제시되어 있다.
Figure pct00003
"세포독성 T 림프구-연관 항원-4", "CTLA-4", "CTLA4", "CTLA-4 항원" 및 "CD152" (예를 들어, 문헌 [Murata, Am. J. Pathol. 155:453-460 (1999)] 참조)는 상호교환적으로 사용되고, 변이체, 이소형, 인간 CTLA-4의 종 상동체, 및 CTLA-4와 적어도 하나의 공통 에피토프를 갖는 유사체를 포함한다 (예를 들어 문헌 [Balzano, Int. J. Cancer Suppl. 7:28-32 (1992)] 참조). 완전한 CTLA-4 핵산 서열은 진뱅크(GenBank) 수탁 번호 L15006에서 찾을 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "이펙터 기능"은 항체의 Fc 영역에 기인하고 항체 이소타입에 따라 달라지는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예는 하기를 포함한다: Clq 결합 및 보체 의존적 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어 B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화. 항체는 수많은 메커니즘에 의해 작용하며, 이들 중 대부분은 면역계의 다른 아암에 결착한다. 항체는 단순히 분자의 상호작용을 차단할 수 있거나, 클러스터링된 항체와 C1 복합체 상의 C1q의 상호작용에 의해 고전적 보체 경로 (보체 의존적 세포독성 또는 CDC로 공지됨)를 활성화시킬 수 있다. 결정적으로 항체는 또한 Fc 수용체의 결착을 통해 항체-매개 면역 반응과 세포-매개 면역 반응 사이의 연결로서 작용한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "이펙터-침묵"은 (i) 마이크로몰 범위의 회합 상수가 측정불가능한 결합을 나타내는 것인 비아코어 검정에서 측정될 수 있는 바와 같은 하나 이상의 Fc 수용체 (FcR)에 대한 측정불가능한 결합 또는 (ii) 동일한 이소타입의 항체에 대해 전형적인 결합과 비교하여 감소된, 비아코어 검정에서 측정될 수 있는 바와 같은 하나 이상의 FcR에 대한 측정가능한 결합을 나타내는 항체 또는 항체 단편을 지칭한다. 특정한 실시양태에서, 항체는 특히 돌연변이된 항체가 돌연변이된 항체와 동일한 이소타입의 야생형 항체와 비교하여 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI에 대한 감소된 또는 측정불가능한 결합을 갖도록 HC 불변 도메인 및 Fc 도메인에 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 특정한 실시양태에서, FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI 중 하나 이상에 대한 이펙터-침묵 항체의 친화성 또는 회합 상수는 야생형 이소타입의 친화성과 비교하여 적어도 1000배 감소되거나; 야생형 이소타입의 친화성과 비교하여 적어도 100배 내지 1000배 감소되거나; 야생형 이소타입의 친화성과 비교하여 적어도 50배 내지 100배 감소되거나; 야생형 이소타입의 친화성과 비교하여 적어도 10배 내지 50배 감소된다. 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항체는 야생형 이소타입에 의한 결합과 비교하여 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI 중 하나 이상에 대한 검출불가능한 또는 측정불가능한 결합을 갖는다. 일반적으로, 이펙터-침묵 항체는 측정가능한 항체-의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC) 활성이 결여될 것이다. 이펙터-침묵 항체 단편은 Fc 도메인 또는 FcR에 대한 결합을 부여하는 Fc 도메인의 부분이 결여되어 있어, FcγRIIIa, FcγRIIa 또는 FcγRI 중 하나 이상에 대한 검출불가능한 또는 측정불가능한 결합을 나타낼 것이다. 이펙터-침묵 항체 또는 항체 단편의 경우, 결합은 인간 FcR에 대해 측정된다.
본원에서 사용된 바와 같은 "Fab 단편"은 1개의 LC 및 1개의 HC의 VH 및 CH1을 포함하고, HC 불변 도메인의 나머지를 배제한다. Fab 분자의 CH1은 또 다른 Fab 단편 또는 HC 함유 분자와 디술피드 결합을 형성할 수 없다. "Fab 단편"은 항체의 파파인 절단의 산물일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "Fab' 단편"은 CH1 및 CH2 도메인 사이의 영역까지 VH 도메인 및 HC 불변 도메인을 함유하고 HC 불변 도메인의 나머지를 배제하는 1개의 LC 및 1개의 HC의 단편을 포함하여, 쇄간 디술피드 결합이 2개의 Fab' 단편의 2개의 HC 사이에 형성되어 F(ab')2 분자를 형성할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "F(ab')2 단편"은 2개의 LC 및 2개의 HC 단편을 포함하며, 각 HC 단편은 CH1 및 CH2 도메인 사이의 영역까지 VH 도메인 및 HC 불변 도메인을 함유하고 HC 불변 도메인의 나머지를 배제하여, 쇄간 디술피드 결합이 2개의 HC 사이에 형성되도록 한다. 그러므로, F(ab')2 단편은 2개의 중쇄 사이의 디술피드 결합에 의해 함께 유지되는 2개의 Fab' 단편으로 구성된다. F(ab')2 단편은 항체를 CH1 및 CH2 도메인 사이의 부위에서 절단하는 펩신을 사용하여 항체를 소화시킴으로써 수득될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "Fc 도메인" 또는 "Fc"는 항체의 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 항체로부터 수득된 결정화가능한 단편 도메인 또는 영역이다. 항체에서, 2개의 Fc 도메인은 2개 이상의 디술피드 결합에 의해 및 CH3 도메인의 소수성 상호작용에 의해 함께 유지된다. Fc 도메인은 항체를 프로테아제 파파인으로 소화시킴으로써 수득될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체 매개 (체액성) 면역 반응을 세포 이펙터 기능에 연결하는 주요 면역 조절성 수용체이다. FcγR (IgG), FcεRI (IgE), FcαRI (IgA), FcμR (IgM) 및 FcδR (IgD)을 포함한 모든 클래스의 이뮤노글로불린에 대한 수용체가 확인되었다. 백혈구에서 발견되는 인간 IgG에 대한 수용체에는 세 가지 클래스가 있다: CD64 (FcγRI), CD32 (FcγRIIa, FcγRIIb 및 FcγRIIc) 및 CD16 (FcγRIIIa 및 FcγRIIIb). FcγRI는 높은 친화성 수용체 (나노몰 범위 KD)로 분류되는 반면, FcγRII 및 FcγRIII은 낮은 내지 중간 친화성 (마이크로몰 범위 KD)이다. 항체 의존적 세포 세포독성 (ADCC)에서, 이펙터 세포 (자연 살해 세포, 대식세포, 단핵구 및 호산구)의 표면 상의 FcR은 자체가 표적 세포에 결합되는 IgG의 Fc 영역에 결합한다. 결합 시 표적 세포의 파괴에서 매개하는 다양한 물질, 예컨대 용해성 효소, 퍼포린, 그랜자임 및 종양 괴사 인자의 분비를 초래하는 신호전달 경로가 촉발된다. ADCC 이펙터 기능의 수준은 인간 IgG 서브타입에 대해 다양하다. 이것은 단순한 용어로 알로타입 및 특이적 FcR에 의존적이지만, ADCC 이펙터 기능은 인간 IgG1 및 IgG3에 대해 높고 IgG2 및 IgG4에 대해 낮다.
본원에서 사용된 바와 같은 "Fv 영역"은 VH 폴리펩티드 및 VL 폴리펩티드가 디술피드 결합에 의해 함께 유지되는 단일 VH 및 VL 쌍을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "인간화" (또한 재형성 또는 CDR-그라프팅이라고 함)는 이종 공급원 (일반적으로 설치류)으로부터의 모노클로날 항체 (mAb)의 면역원성을 감소시키고 이펙터 기능 (ADCC, 보체 활성화, C1q 결합)을 개선하기 위한 잘 확립된 기술이다. 조작된 mAb는 분자 생물학 기술을 사용하여 조작되지만, 설치류 상보성-결정 영역 (CDR)의 인간 프레임워크에의 단순 CDR-그라프팅은 종종 원래 mAb의 결합 친화성 및/또는 특이성의 손실을 초래한다. 항체를 인간화하기 위해, 인간화 항체의 설계는 변이, 예컨대 CDR 잔기의 보존적 아미노산 치환, 및 설치류 mAb로부터 인간 프레임워크 영역으로의 잔기의 역치환 (역돌연변이)을 포함한다. 위치는 구조적 분석을 위한 서열 비교에 의해 또는 가변 영역의 3차원 구조의 상동성 모델의 분석에 의해 식별 또는 확인될 수 있다. 친화성 성숙 프로세스는 가장 최근에 선택된 위치에서 아미노산을 변경하기 위해 파지 라이브러리를 사용하였다. 유사하게, 설치류 CDR을 그라프팅할 가장 적절한 인간 프레임워크를 선택하기 위해 많은 접근법이 사용되었다. 항체 구조에 대한 공지된 파라미터의 데이터세트가 증가함에 따라, 이들 기술의 정교함 및 개선도 증가한다. 단일 항체로부터의 컨센서스 또는 생식계열 서열 또는 여러 상이한 인간 mAb로부터의 각 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 내의 프레임워크 서열의 단편이 사용될 수 있다. 인간화에 대한 또 다른 접근법은 설치류 서열의 표면 잔기만을 인간 mAb에서 발견되는 가장 흔한 잔기로 변형시키는 것이며, "재표면화" 또는 "비니어링"이라고 불린다. 종종, 인간 또는 인간화 항체는 인간에서 실질적으로 비-면역원성이다.
본원에서 사용된 바와 같은 "인간화 항체"는 인간 및 비-인간 (예를 들어, 뮤린, 래트) 항체 둘 다로부터의 서열을 함유하는 항체 또는 항체 단편의 형태를 지칭한다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인 모두를 포함할 것이며, 여기서 초가변 루프는 비-인간 이뮤노글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 (FR) 영역은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이다. 인간화 항체는 인간 이뮤노글로불린 불변 영역 (예를 들어, Fc 도메인)의 적어도 일부를 임의로 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "과증식성 질환"은 세포 성장이 정상적인 수준보다 증가된 상태를 지칭한다. 예를 들어, 과증식성 질환 또는 장애는 악성 질환 (예를 들어, 식도암, 결장암, 담도암) 및 비악성 질환 (예를 들어, 죽상경화증, 양성 과형성, 양성 전립선 비대)을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "면역-관련 유해 사건" 또는 irAE"는 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제, 예컨대 항-PD-1, 항-PD-L1 및 항-CTLA-4 항체의 사용에 기인할 수 있는 면역계의 불균형으로 인한 자가면역 발현인 AE를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "면역 반응"은 예를 들어, 침입한 병원체, 병원체로 감염된 세포 또는 조직, 암성 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우, 정상 인간 세포 또는 조직의 선택적 손상, 파괴 또는 인체로부터의 제거를 초래하는 림프구, 항원 제시 세포, 식세포성 세포, 과립구, 및 상기 세포 또는 간 (항체, 시토카인 및 보체 포함)에 의해 생산된 가용성 거대분자의 작용을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "이뮤노글로불린 단일 가변 도메인" (또한 "ISV" 또는 ISVD"로 지칭됨)은 일반적으로 또 다른 가변 도메인과의 상호작용 없이 (예를 들어 통상적인 4-쇄 모노클로날 항체의 VH 및 VL 도메인 사이에 요구되는 VH/VL 상호작용 없이) 기능적 항원 결합 부위를 형성할 수 있는 이뮤노글로불린 가변 도메인 (VH, VHH 또는 VL 도메인을 포함하는 중쇄 또는 경쇄 도메인일 수 있음)을 지칭하는데 사용된다. ISVD의 예는 나노바디 (VHH, 인간화 VHH 및/또는 낙타화 VH, 예컨대 낙타화 인간 VH 포함), IgNAR, 도메인, VH 도메인이거나 VH 도메인으로부터 유래된 (단일 도메인) 항체 (예컨대 dAb™) 및 VL 도메인이거나 VL 도메인으로부터 유래된 (단일 도메인) 항체 (예컨대 dAb™)를 포함한다. 중쇄 가변 도메인 (예컨대 VH 또는 VHH 도메인)에 기초하고/거나 이로부터 유래된 ISVD가 일반적으로 바람직하다.
본원에서 사용된 바와 같은 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단을 지칭하며, 즉, 상기 집단을 포함하는 항체 분자는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열이 동일하다. 대조적으로, 통상적인 (폴리클로날) 항체 제제는 전형적으로 종종 상이한 에피토프에 특이적인 가변 도메인에 상이한 아미노산 서열을 갖는 다수의 상이한 항체를 포함한다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득되는 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al., Nature 256: 495 (1975)]에 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조)에 의해 제조될 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한 예를 들어, 문헌 [Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991)] 및 [Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1991)]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 또한 문헌 [Presta J. Allergy Clin. Immunol. 116:731 (2005)]을 참조한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "나노바디" 및 "나노바디들"은 아블링스 엔.브이.(Ablynx N.V.)의 등록 상표이다.
항체 또는 이뮤노글로불린과 관련하여 본원에서 사용된 바와 같은 "비-인간 아미노산 서열"은 비-인간 포유동물의 아미노산 서열의 특징인 아미노산 서열을 지칭한다. 상기 용어는 라이브러리의 다양성이 인실리코 생성되는 완전 인간 항체 라이브러리로부터 수득된 항체 또는 이뮤노글로불린의 아미노산 서열을 포함하지 않는다 (예를 들어, 미국 특허 번호 8,877,688 또는 8,691,730 참조).
"PD-1"은 T 세포 조절인자의 연장된 CD28/CTLA-4 패밀리의 억제성 구성원인 프로그래밍된 사멸 1 (PD-1) 단백질을 지칭한다 (Okazaki et al., Curr. Opin. Immunol. 14: 391779-82 (2002); Bennett et al., J. Immunol. 170:711-8 (2003)). CD28 패밀리의 다른 구성원은 CD28, CTLA-4, ICOS 및 BTLA를 포함한다. PD-1 유전자는 55 kDa 유형 I 막횡단 단백질을 코딩한다 (Agata et al., Intl. Immunol. 8:765-72 (1996)). PD-1에 대한 두 가지 리간드인 PD-L1 (B7-H1) 및 PD-L2 (B7-DC)가 확인되었으며, PD-1에 결합할 때 T 세포 활성화를 하향조절하는 것으로 제시된 바 있다 (Freeman et al. (2000) J. Exp. Med. 192:1027-34; Carter et al. (2002) Eur. J. Immunol. 32:634-43). PD-1은 TCR 신호를 음성적으로 조절하는 면역억제성 단백질로 공지되어 있다 (Ishida, Y. et al., EMBO J. 11:3887-3895 (1992); Blank, C. et al., Immunol. Immunother. 56(5):739-745 (Epub 2006 Dec. 29)). PD-1 및 PD-L1 사이의 상호작용은 면역 체크포인트로 작용할 수 있으며, 이는 예를 들어 종양 침윤 림프구의 감소, T-세포 수용체 매개 증식의 감소, 및/또는 암성 세포에 의한 면역 회피를 유발할 수 있다 (Dong et al., J. Mol. Med. 81:281-7 (2003); Blank et al., Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314 (2005); Konishi et al., Clin. Cancer Res. 10:5094-100 (2004)). 면역 억제는 PD-1과 PD-L1 또는 PD-L2의 국소 상호작용을 억제함으로써 역전될 수 있으며; 효과는 PD-1과 PD-L2의 상호작용이 또한 차단될 때 부가적이다 (Iwai et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-12297 (2002); Brown et al., J. Immunol. 170:1257-66 (2003)).
"프로그래밍된 사멸 1", "프로그래밍된 세포 사멸 1", "단백질 PD-1", "PD-1", "PD1", "PDCD1", "hPD-1" 및 "hPD-1"은 상호교환적으로 사용되며, 변이체, 이소형, 인간 PD-1의 종 상동체, 및 PD-1과 적어도 하나의 공통 에피토프를 갖는 유사체를 포함한다. 완전한 PD-1 서열은 진뱅크 수탁 번호 U64863에서 찾을 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "ScFv" 또는 "단일쇄 가변 단편"은 10 내지 약 25개 아미노산의 짧은 링커 펩티드에 의해 함께 융합되거나 연결된 VH 및 VL을 포함하는 융합 단백질이다. 링커는 통상적으로 유연성을 위한 글리신, 뿐만 아니라 용해도를 위한 세린 또는 트레오닌이 풍부하고, VH의 N-말단을 VL의 C-말단과 연결하거나 그 반대로 연결할 수 있다. 이 단백질은 불변 영역의 제거 및 링커의 도입에도 불구하고 원래 이뮤노글로불린의 특이성을 보유한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "치료이하 용량"은 과증식성 질환 (예를 들어, 암)의 치료를 위해 단독으로 투여되는 경우 치료용 화합물의 통상적인 또는 전형적인 용량보다 더 낮은 치료용 화합물 (예를 들어, 항체)의 용량을 의미한다. 치료용 화합물의 용량은 표적화되는 질환에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, CTLA-4 항체의 치료이하 용량은 약 3 mg/kg 미만의 항체의 단일 용량, 즉, 절제불가능한 또는 전이성 흑색종의 치료를 위한 항-CTLA-4 항체 여보이의 공지된 단독요법 용량, 또는 보조 흑색종에 대한 공지된 단독요법 용량인 약 10 mg/kg 미만의 여보이의 단일 용량이다.
본원에서 사용된 바와 같은 "치료하다" 또는 "치료하는"은 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편 중 임의의 것을 함유하는 조성물과 같은 치료제를 하나 이상의 질환 증상을 갖거나 작용제가 치료적 활성 또는 예방적 활성을 갖는 질환을 갖는 것으로 의심되는 대상체 또는 환자에게 내부적으로 또는 외부적으로 투여하는 것을 의미한다. 전형적으로, 작용제는 임의의 임상적으로 측정가능한 정도로 이러한 증상(들)의 퇴행을 유도하거나 진행을 억제함으로써 치료되는 대상체 또는 집단에서 하나 이상의 질환 증상을 경감시키는데 효과적인 양으로 투여된다. 임의의 특정한 질환 증상을 경감시키는데 효과적인 치료제의 양은 환자의 질환 상태, 연령 및 체중, 및 대상체에서 원하는 반응을 유도하는 약물의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 질환 증상이 경감되었는지 여부는 해당 증상의 중증도 또는 진행 상태를 평가하기 위해 의사 또는 다른 숙련된 의료 제공자가 전형적으로 사용하는 임의의 임상 측정에 의해 평가될 수 있다. 상기 용어는 장애와 연관된 증상의 발생의 연기 및/또는 이러한 장애의 증상의 중증도의 감소를 추가로 포함한다. 상기 용어는 제어되지 않거나 원치않는 기존의 증상을 호전시키고, 추가 증상을 예방하고, 이러한 증상의 근본 원인을 호전시키거나 예방하는 것을 추가로 포함한다. 그러므로, 상기 용어는 장애, 질환 또는 증상을 갖거나, 이러한 장애, 질환 또는 증상을 발생할 잠재성을 갖는 인간 또는 동물 대상체에게 유익한 결과가 부여되었음을 나타낸다.
본원에서 사용된 바와 같은 "치료 유효량"은 치료될 대상체에서 원하는 효과를 달성하기에 충분한 특정 물질의 양을 지칭한다. 예를 들어, 이는 각각 CTLA-4의 활성화를 억제하고 항종양 반응을 유도하는데 필요한 CTLA-4 차단제의 양, 또는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 차단제와 공동투여될 때 향상된 항-PD-1 또는 PD-L1 반응성에 필요한 양일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "치료 지수" ("치료 창", "안전 창" 또는 "치료 비"로도 공지됨)는 독성을 유발하는 치료제의 양과 치료적 효과를 유발하는 치료제의 양의 비교이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 인간 또는 수의학적 개체에 적용되는 "치료"는 항체 또는 항체 단편에 의한 치료를 필요로 하는 인간 또는 동물 개체에 대한 항체 또는 항원 결합 단편의 접촉을 포함하는 치료적 치료를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "VHH"는 VH 도메인이 HC 항체로부터 수득되거나 이로부터 비롯되거나 유래됨을 나타낸다. 중쇄 항체는 2개의 HC를 갖고 LC를 갖지 않는 기능적 항체이다. 중쇄 항체는 생물학적 과인 낙타과의 구성원인 낙타과에 존재하고 이로부터 수득가능하다.
도입
PD-1 길항제, 예컨대 상업적으로 판매되는 항-PD-1 항체 키트루다 및 옵디보는 감소된 FcγR 기능을 갖는 인간 IgG4 백본을 포함하는데, 이는 FcγR 결합 기능을 갖는 항-PD-1 항체에 대한 전임상 연구가 CD8+ 세포독성 T 세포 (CTL)의 고갈로 인해 불량한 항종양 효능을 나타내었기 때문이며, 이는 종양 면역요법에 필수적인 것이다 (예를 들어, 국제 특허 출원 WO2014/089113 참조). 대조적으로, 항-CTLA-4 항체를 사용한 단독요법은 강한 항종양 y 반응을 일으키기 위해 FcγR 기능을 필요로 하는 측정가능한 FcγR-결합 친화성이 결여된 돌연변이체 마우스 IgG1-항-CTLA-4 항체와 높은 FcγR-결합 친화성을 갖는 마우스 IgG2a-항-CTLA-4 항체를 비교한 전임상 실험에서 나타났다 (예를 들어, 문헌 [Selby et al., Cancer Immunol Res. 1:32-42 (2013)] 참조). 항-CTLA-4 길항제 단독요법에서 FcγR 기능에 대한 요구사항은 비장 또는 림프절에서의 Treg 집단과 비교하여 TIL 상의 더 높은 CTLA-4 발현으로 인해 뮤린 종양 모델에서의 T 조절성 세포 (Treg)의 고갈과 상관관계가 있었다 (Simpson et al., J. Exp. Med. 210:1695-710 (2013)).
본 발명의 발명자들은 항-CTLA-4 항체를 항-PD-1 항체와 조합함으로써 항-CTLA-4 항체 효능을 위한 FcγR 기능에 대한 요구사항을 회피할 수 있다는 가설을 세웠다. 이 가설은 소진된 CD8+ 세포독성 T 세포의 항-PD-1-매개 활성화에서 CD28-매개 공동자극에 대한 중요한 역할을 예시하는 새로운 데이터에 의해 지지된다. 항-CTLA-4 및 항-PD-1 항체는 상이한 메커니즘을 통해 항종양 활성을 발휘한다. 중요하게, 항-CTLA-4 및 항-PD-1 항체의 조합 효과는 단순히 부가적인 것이 아니며, 2개의 항체에 의해 발휘된 조합된 차단이 항체 단독에 의해 활성화되지 않는, 증식-연관 및 케모카인 유전자를 포함한 많은 유전자의 활성화를 초래하기 때문이다 (예를 들어 도 3c 및 4d 참조). 이들 데이터는 단독요법에서 CTLA-4 차단에 대한 작용 메커니즘이 PD-1 차단과 조합하여 수행될 때의 그의 작용 메커니즘과 상이하다는 것을 시사한다.
새로운 데이터는 PD-1 차단 후 이펙터 T (Teff) 세포를 활성화시키는데 있어서 CD28-매개 공동자극의 중요성을 나타낸다. PD-1 신호전달은 이전에 추정된 바와 같이 TCR보다는 CD28을 탈인산화시키고, PD-1 차단 후 관찰되는 향상된 항종양 반응을 위해서는 CD28 신호전달이 필요하다. 따라서, 단독요법 CTLA-4 차단은 주로 T 세포 프라이밍 사건을 표적화할 수 있지만, CTLA-4 차단을 PD-1 차단과 조합하는 것은 PD-1 차단 단독으로부터 예상되는 것 이상으로 소진된 T 세포의 활성화를 촉진할 것으로 예상될 수 있다. 본 발명자들은 이 메커니즘이 Fc-수용체의 기능과는 독립적으로 증가된 CD28-매개 활성화를 가능하게 하는 CTLA-4 길항제, 및 irAE 매개 독성에 중요한 역할을 할 수 있는 Treg 세포의 고갈에 의해 향상된다고 가정하였다.
그 후, FcR에 결합하는 항-CTLA-4 항체 (Fc-기능적 항체)에 대한 잠재적인 경고는 Treg 고갈 또는 T 세포와 골수성 세포의 세포 가교가 원치않는 면역-관련 염증을 유도할 수 있다는 것이다. 본 발명자들은 CTLA-4 차단 암 면역요법과 연관된 관찰된 irAE에 기여할 수 있는 것이 Fc 기능이라는 가설을 세웠다. irAE의 유도를 위한 Fc 기능의 잠재적인 역할에 반대 의견을 말하기 위해 사용된 한 가지 비평은 이필리무맙 (인간 IgG1 백본에 대한) 및 트레멜리무맙 (인간 IgG2 백본에 대한) 치료 둘 다가 장 염증과 연관되어 있다는 것이다. 인간 IgG2 Fc 도메인은 인간 IgG1과 비교하여 인간 FcγR에 대한 유의하게 더 낮은 친화성을 갖지만, 인간 IgG2 및 IgG1 백본을 갖는 항체의 직접 비교는 둘 다가 시험관내 ADCC 및 ADCP 생물검정을 사용하여 유사한 수준의 Fc 기능을 유도한다는 것을 제시한 바 있다 (예를 들어, 문헌 [Vargas et al., Cancer Cell. 33: 649-663 (2018)]). 더욱이, 인간 IgG1 이소타입 백본 또는 인간 IgG2 이소타입 백본을 갖는 키메라 항-마우스 CTLA-4 항체의 생체내 Treg 고갈 및 항종양 활성은 인간 FcγR 녹인 마우스에서 동등하였다 (Vargas et al., ibid.).
동계 종양 모델에서 장 염증을 유도하기 위한 Fc 기능의 잠재적인 역할을 평가하기 위한 주요 장애물은 마우스 항-CTLA-4 대리 항체를 사용하여 측정가능한 염증 및 결장염의 결여였다. 이러한 장애물을 회피하기 위해, 본 발명자들은 마우스 IBD 모델에서 염증성 장 질환 (IBD)과 연관된 장 염증 유전자의 상향조절을 측정하기 위해 문헌 [Cayatte et al., Clin. Transl. Gastroenterol. 3: e10 (2012)]에 의해 이전에 개발된 PCR-기반 패널을 사용하였다. 본원의 실시예에 제시된 바와 같이, 이러한 PCR-기반 패널을 통해, 본 발명자들은 명백한 결장염 또는 조직 손상의 조직학적 증거의 부재 하에서도 Fc 기능적 항-마우스 CTLA-4 항체 (α-CTLA4)로 치료된 마우스에서 장 염증을 나타내는 바이오마커 유전자의 증가된 발현을 검출할 수 있었다 (도 1a, 3c 및 4d 참조). 장 염증 유전자 발현 경로의 준임상적 자극의 이러한 관찰은 본 발명자들이 근본적인 염증이 임상적 결장염의 발달로 진행될 것인지 결정하기 위해 치료 스케쥴을 연장하도록 고무시켰다. 이러한 irAE 결장염 마우스 모델은 본 발명자들이 면역-종양학 전임상 개발에 사용되는 동계 종양 모델에서 수반되는 항종양 반응의 부재 또는 맥락에서 장 염증의 유도를 위한 Fc 기능의 요구사항을 평가하기 위한 경험적 실험을 실행할 수 있게 하였다.
실시예에 기재된 결과는 단독요법 설정에서 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체도 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편도 측정가능한 항종양 활성을 유도하지 않는다는 것을 명백히 제시한다. 그러나, 항-PD1 항체와 조합하여 이펙터-침묵 항체 또는 이펙터-침묵 항체 단편을 투여하는 것은 이펙터-기능적 항-CTLA-4 항체 단독 또는 항-PD-1 항체와의 조합에 의해 유도된 항종양 활성에 필적하는 항종양 활성을 초래하며 (도 3a 참조), 이펙터-기능적 항-CTLA-4 항체 단독 또는 항-PD-1 항체와의 조합에 대해 관찰된 장 또는 피부 irAE (도 4b 및 5a) 또는 체중 감소 (도 4a)는 없었다. 이들 결과 및 Fc-매개 항종양 활성 및 장-염증과 연관된 잠재적인 Treg-독립적 메커니즘의 본 발명자들의 발견에 비추어, 본 발명은 개선된 치료 지수 및 더 넓은 유용성과 함께 CTLA-4/ PD-1 차단 조합 항암 면역요법을 가능하게 한다.
조합 요법
본 발명은 암 요법을 필요로 하는 개체에게 (i) 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 이펙터-침묵 항-PD-1 항체, 이펙터-침묵 항-PD-L1 항체, 이펙터-침묵 항-PD-1 항체 단편, 및 이펙터-침묵 항-PD-L1 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 PD-1 차단제; 및 (ii) 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 및 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제를 투여하는 것을 포함하는 항암 조합 요법을 제공한다.
이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 진행성 신장 세포 암종 또는 고도 현미부수체 불안정성 또는 불일치 복구 결핍 전이성 결장직장암을 표적화하는 이필리무맙/니볼루맙 조합 요법에 대해 미국 FDA에 의해 승인된 이필리무맙의 치료이하 1 mg/kg 용량보다 큰 용량으로, 및 이필리무맙/니볼루맙 조합 요법에 대해 관찰된 것보다, 조합 요법의 지속시간 동안 또는 개체가 조합 요법을 받고 있는 기간의 적어도 일부 동안, 유해 사건에 대한 공통 용어 기준 (CTCAE) 버전 5.0에 제시된 기준에 따라 등급 1-2보다 큰 피부 또는 장 irAE를 유도할 더 낮은 위험으로, PD-1 차단제와의 조합 요법으로 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 용량은 조합 요법의 지속시간 동안 또는 개체가 조합 요법을 받고 있는 기간의 적어도 일부 동안 등급 1보다 큰 irAE를 유도하지 않는다.
그러므로, 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 1 mg/kg 초과의 용량으로 개체에게 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 적어도 3 mg/kg의 용량으로 개체에게 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 적어도 10 mg/kg의 용량으로 개체에게 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 적어도 15 mg/kg의 용량으로 개체에게 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 적어도 20 mg/kg의 용량으로 개체에게 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 3 mg/kg 내지 20 mg/kg의 용량으로 개체에게 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 개체의 체중에 의존하지 않는 고정 용량, 예를 들어 100 mg 초과의 용량으로 개체에게 투여될 수 있다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 (b) 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편이다. 항-CTLA-4 항체에 대해 이펙터 기능 활성이 필요하지 않기 때문에, 항-CTLA-4 항체는 "이펙터-침묵"으로 조작된 HC 도메인을 갖는다 (즉, 비아코어 검정에 의해 결정된 바와 같이 이펙터-침묵 항체와 동일한 이소타입의 야생형 항체의 Fc 도메인 (예를 들어, 비-돌연변이된 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 도메인의 Fc 도메인)과 비교하여 감소된 또는 측정불가능한 FcR 결합을 갖도록 그의 Fc 도메인을 변형시킴). 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 Fc 도메인 또는 하나 이상의 FcR에 결합하는 Fc 도메인의 영역이 결여된다.
특정한 실시양태에서, 본 발명의 조합 요법은 종양을 제거하기 위한 수술 이전 또는 이후에 개체에게 투여되고, 방사선 요법 이전, 동안 또는 이후에 사용될 수 있다.
특정한 실시양태에서, 본 발명의 조합 요법은 이전에 생물요법제 또는 화학요법제로 치료받은 적이 없는 개체, 즉, 치료 경험이 없는 개체에게 투여된다. 다른 실시양태에서, 조합 요법은 생물요법제 또는 화학요법제를 사용한 선행 요법 후 지속적인 반응을 달성하지 못한 개체, 즉 치료 경험이 있는 개체에게 투여된다.
특정한 실시양태에서, 본 발명의 조합 요법은 촉진에 의해 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 이미징 기술, 예컨대 MRI, 초음파 또는 CAT 스캔에 의해 발견될 만큼 충분히 큰 종양을 치료하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 조합 요법은 적어도 약 200 ㎣, 300 ㎣, 400 ㎣, 500 ㎣, 750 ㎣, 또는 최대 1000 ㎣의 치수를 갖는 진행성 병기 종양을 치료하는데 사용된다.
특정한 실시양태에서, 본 발명의 조합 요법은 PD-L1 발현에 대해 양성으로 시험되는 암을 갖는 개체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, PD-L1 발현은 개체로부터 제거된 종양 샘플의 고정 포르말린 파라핀 포매 (FFPE) 또는 동결 조직 절편에 대한 면역조직화학 (IHC) 검정에서 진단용 항-인간 PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 사용하여 검출된다. 개체의 의사는 본 발명의 조합 요법을 사용한 치료의 개시 전에 개체로부터 제거된 종양 조직 샘플에서 PD-L1 발현을 결정하기 위해 진단 시험을 지시할 수 있지만, 의사는 치료 개시 후, 예를 들어 치료 사이클의 완료 후 임의의 시간에 첫 번째 또는 후속 진단 시험을 지시할 수 있다고 생각된다.
조합 요법은 본원에 개시된 예시적인 항-PD-1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편 중 어느 하나 또는 본원에 개시된 예시적인 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L1 항체 단편 중 어느 하나와 조합하여 본원에 개시된 예시적인 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편 중 어느 하나를 포함할 수 있다.
(a) 이펙터-침묵 항체
본 발명의 이펙터-침묵 항체는 항체가 동일한 IgG 이소타입의 비변형된 항체와 비교하여 하나 이상의 FcR에 대한 측정불가능한 결합을 나타내거나 또는 하나 이상의 FcR에 대한 감소된 결합을 나타내도록 변형된 HC 불변 도메인 또는 그의 Fc 도메인을 포함한다. 이펙터-침묵 항체는 추가 실시양태에서 동일한 IgG 이소타입의 비변형된 항체와 비교하여 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI 각각에 대한 측정불가능한 결합을 나타내거나 또는 FcγRIIIa, FcγRIIa 및 FcγRI 각각에 대한 감소된 결합을 나타낼 수 있다. 특정한 실시양태에서, HC 불변 도메인 또는 Fc 도메인은 인간 HC 불변 도메인 또는 Fc 도메인이다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항체는 HC 불변 도메인의 위치 297 (Eu 넘버링 시스템)에서 아스파라긴 (Asn) 잔기의 N-글리코실화가 결여되도록 변형된 IgG1 또는 IgG2, IgG3 또는 IgG4 이소타입의 Fc 도메인을 포함한다. N-글리코실화에 대한 컨센서스 서열은 Asn-Xaa-Ser/Thr (여기서 위치 298의 Xaa는 Pro를 제외한 임의의 아미노산임)이고; 4개의 이소타입 모두에서 N-글리코실화 컨센서스 서열은 Asn-Ser-Thr이다. 변형은 HC 불변 도메인을 코딩하는 핵산 분자의 위치 297의 Asn을 코딩하는 코돈을 또 다른 아미노산, 예를 들어 Ala, Asp, Gln, Gly 또는 Glu를 코딩하는 코돈으로 대체함으로써 달성될 수 있다 (예를 들어, N297A, N297Q, N297G, N297E 또는 N297D). 대안적으로, 위치 298의 Ser에 대한 코돈은 Pro에 대한 코돈으로 대체될 수 있거나, 위치 299의 Thr에 대한 코돈은 Ser에 대한 코돈을 제외한 임의의 코돈으로 대체될 수 있다. 추가 대안에서, N-글리코실화 컨센서스 서열을 포함하는 각각의 아미노산은 또 다른 아미노산으로 대체된다. 이러한 변형된 IgG 분자는 측정불가능한 이펙터 기능을 갖는다. 특정한 실시양태에서, 이들 돌연변이된 HC 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다. 추가 실시양태에서, 위치 297에서 N-글리코실화가 결여되도록 변형된 이러한 IgG는 측정가능한 이펙터 기능을 제거하기 위해 본원에 개시된 하나 이상의 추가 돌연변이를 추가로 포함할 수 있다.
HC 불변 도메인의 N-글리코실화를 무효화시키는 위치 297에서 돌연변이된 예시적인 IgG1 HC 불변 도메인은 서열식별번호: 44에 제시되어 있고, HC 불변 도메인의 N-글리코실화를 무효화시키는 위치 297에서 돌연변이된 예시적인 IgG2 HC 불변 도메인은 서열식별번호: 50에 제시되어 있고, HC 불변 도메인의 N-글리코실화를 무효화시키도록 위치 297에서 돌연변이된 예시적인 IgG4 HC 불변 도메인은 서열식별번호: 56에 제시되어 있다. 특정한 실시양태에서, 이들 돌연변이된 HC 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항체를 포함하는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 HC 불변 도메인의 Fc 도메인은 E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, D265S 및 P331S로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하도록 변형되고 (여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별됨), 여기서 상기 HC 불변 도메인은 이펙터-침묵이다. 특정한 실시양태에서, 변형된 IgG1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
특정한 실시양태에서, HC 불변 도메인은 L234A, L235A 및 D265S 치환을 포함한다 (여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별됨). 특정한 실시양태에서, HC 불변 도메인은 위치 Pro329의 아미노산 치환 및 E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, D265S 및 P331S로부터 선택된 적어도 하나의 추가 아미노산 치환을 포함한다 (여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별됨). 이들 및 다른 치환은 WO9428027; WO2004099249; WO20121300831, 미국 특허 번호 9,708,406; 8,969,526; 9,296,815; 문헌 [Sondermann et al. Nature 406, 267-273 (20 Jul. 2000)]에 개시되어 있다.
상기의 특정한 실시양태에서, HC 불변 도메인은 L234A/L235A/D265A; L234A/L235A/P329G; L235E; D265A; D265A/N297G; 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S 치환을 포함하며, 여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다. 특정한 실시양태에서, HC 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항체는 IgG1 이소타입을 포함하며, 여기서 HC 불변 도메인의 Fc 도메인은 IgG1의 위치 233에서 위치 236까지의 아미노산을 인간 IgG2 HC의 상응하는 아미노산으로 치환하고 위치 327, 330 및 331의 아미노산을 인간 IgG4 HC의 상응하는 아미노산으로 치환함으로써 이펙터-침묵이 되도록 변형되었으며, 여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다 (Armour et al., Eur. J. Immunol. 29(8):2613-24 (1999); Shields et al., J. Biol. Chem. 276(9):6591-604(2001)). 특정한 실시양태에서, 변형된 IgG1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항체는 N-말단에서 C-말단 방향으로 힌지 영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 하이브리드 인간 이뮤노글로불린 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결된 VH 도메인을 포함하며, 여기서 힌지 영역은 인간 IgD 힌지 영역 또는 인간 IgG1 힌지 영역의 적어도 부분적인 아미노산 서열을 포함하고; CH2 도메인은 인간 IgG4 CH2 도메인의 것이고, 그의 일부는 그의 N-말단 영역에서 인간 IgG2 CH2 또는 인간 IgD CH2 도메인의 N-말단 영역의 4-37개의 아미노산 잔기에 의해 대체된다. 이러한 하이브리드 인간 HC 불변 도메인은 미국 특허 번호 7,867,491에 개시되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항체는 Eu 시스템에 따른 위치 228의 세린이 프롤린으로 치환된 IgG4 HC 불변 도메인을 포함한다 (예를 들어 서열식별번호: 52 참조). 이러한 변형은 EU 시스템에서 위치 Cys226 및 Cys229의 시스테인 사이의 잠재적인 쇄간 디술피드 결합의 형성을 방지하고, 적절한 쇄내 디술피드 결합 형성을 방해할 수 있다. 문헌 [Angal et al. Mol. Imunol. 30:105 (1993)]을 참조하며; 또한 문헌 [(Schuurman et al., Mol. Immunol. 38: 1-8, (2001); 서열식별번호: 14 및 41)]을 참조한다. 추가 실시양태에서, IgG4 불변 도메인은 S228P 치환 외에, P239G, D265A 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 포함하며, 여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다. 상기의 특정한 실시양태에서, IgG4 HC 불변 도메인은 인간 HC 불변 도메인이다. 특정한 실시양태에서, HC 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
예시적인 IgG1 HC 불변 도메인은 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 40, 서열식별번호: 41, 서열식별번호: 42, 서열식별번호: 43 및 서열식별번호: 44에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HC 불변 도메인을 포함한다. 예시적인 IgG2 HC 불변 도메인은 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48 및 서열식별번호: 49에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다. 예시적인 IgG4 HC 불변 도메인은 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 55 및 서열식별번호: 56에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다.
이펙터-침묵 항체의 보다 구체적인 예는 특정한 예시적인 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체, 항-PD-1 항체, 및 항-PD-1 항체와 조합하여 하기 기재되어 있다.
(b) 예시적인 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체
본 발명의 조합 요법에 사용될 수 있는 예시적인 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 및 이들 항체를 포함하는 조성물은 CTLA-4에 결합하고 CTLA-4가 B7에 결합하는 것을 억제하는 임의의 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체를 포함한다. 특이적 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 하기 이펙터 침묵 항-CTLA-4 항체 및 이들 항체 중 어느 하나 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 (i) 비아코어 검정에 의해 결정된 바와 같이 야생형 IgG 불변 도메인 영역을 포함하는 폴리펩티드와 비교하여 FcγRIIIA, FcγRIIA 및 FcγRI에 대한 측정불가능한 결합 또는 감소된 결합을 나타내는 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결된 이필리무맙의 3개의 HC-CDR을 포함하는 VH 및 (ii) LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결된 이필리무맙의 3개의 LC-CDR을 포함하는 VL을 포함한다. 3개의 HC-CDR은 각각 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5 및 서열식별번호: 6을 포함하고, 3개의 LC-CDR은 각각 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2 및 서열식별번호: 3을 포함한다.
추가 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 (i) 비아코어 검정에 의해 결정된 바와 같이 야생형 IgG 불변 도메인 영역을 포함하는 폴리펩티드와 비교하여 FcγRIIIA, FcγRIIA 및 FcγRI에 대한 측정불가능한 결합 또는 감소된 결합을 나타내는 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결된 트레멜리무맙의 3개의 HC-CDR을 포함하는 VH 및 (ii) LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결된 트레멜리무맙의 3개의 LC-CDR을 포함하는 VL을 포함한다. 3개의 HC-CDR은 각각 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13 및 서열식별번호: 14를 포함하고, 3개의 LC-CDR은 각각 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11을 포함한다.
추가 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 (i) 이필리무맙의 VH 및 VL 도메인, (ii) 트레멜리무맙의 VH 및 VL 도메인, (iii) REGN4659의 VH 및 VL 도메인, (iv) AGEN1884w의 VH 및 VL 도메인, 또는 (v) 국제 특허 출원 WO2017194265에 개시된 항-CTLA-4 항체 클론 2C8의 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 이필리무맙 VH 도메인은 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 트레멜리무맙 VH 도메인은 서열식별번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 16에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. REGN4659 VH 도메인은 서열식별번호: 95에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 96에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. AGEN1884w VH 도메인은 서열식별번호: 97에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 98에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VH 및 VL 도메인은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
추가 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 8D2/8D2 (RE)의 VH 및 VL 도메인 (미국 공개 특허 출원 번호 20170216433 및 국제 출원 WO2018183408 참조), 8D2H1L1, 8D2H2L2, 8D3H3L3, 8D2H2L15 또는 8D2H2L17을 포함하며, 여기서 VH 도메인은 비아코어 검정에 의해 결정된 바와 같이 야생형 IgG 불변 도메인 영역을 포함하는 폴리펩티드와 비교하여 FcγRIIIA, FcγRIIA 및 FcγRI에 대한 측정불가능한 결합 또는 감소된 결합을 나타내는 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결되고, VL 도메인은 LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결된다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 8D2/8D2 (RE)의 변이체, 8D2H1L1, 8D2H2L2, 8D2H2L15 또는 8D2H2L17을 포함하며, 여기서 변이체의 VH 아미노산 서열에서 위치 18의 메티오닌은 이소류신으로 치환된다. 그러므로, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 8D2/8D2 (RE)-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H1L1-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H2L2-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H2L15-변이체 1의 VH 및 VL, 또는 8D2H2L17-변이체 1의 VH 및 VL을 포함할 수 있다.
추가 실시양태에서, 이펙터 침묵 항-CTLA4 항체는 (i) 서열식별번호: 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ii) 서열식별번호: 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (iii) 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (iv) 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (v) 서열식별번호: 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vi) 서열식별번호: 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vii) 서열식별번호: 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (viii) 서열식별번호: 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 88에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ix) 서열식별번호: 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (x) 서열식별번호: 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; 또는 (xi) 서열식별번호: 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 갖는다. 특정한 실시양태에서, VH 및 VL 도메인은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체의 추가 실시양태에서, VH 도메인은 생성된 항-CTLA4 항체를 이펙터-침묵으로 만들기 위해 하나 이상의 돌연변이를 포함하도록 변형된 IgG4 HC 불변 도메인 또는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결된다.
한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A,S267E/L328F, S2339D/A330L/I332E, L235G/G236R, N297A/D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D365E/L358M, 및 D265A/N297G로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 및 L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A,S267E/L328F, S2339D/A330L/I332E, L235G/G236R, D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D365E/L358M, 및 D265A로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 갖는 IgG1 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 (i), (ii) 및 (iii)에서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
또 다른 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 및 N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 갖는 IgG2 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 (i), (ii) 및 (iii)에서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
추가 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 S228P 아미노산 치환을 갖고 (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; (ii) N267A, P329G, 및 D265A/N297A로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는 (iii) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 및 N267A, P329G, 및 D265A/N297A로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 치환 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인을 추가로 포함하는 IgG4 Fc 도메인을 포함하며, 여기서 (i), (ii) 및 (iii)에서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
표 4-18은 암을 갖는 개체를 치료하기 위한 요법에서 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체와 조합하여 사용될 수 있는 특정 예시적인 항-CTLA-4 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 N297A 치환으로 단독으로 이루어진 이필리무맙을 제외하고 표에 제시된 항체 및 조성물을 제공하며, 각각의 조성물은 N297A 치환으로 단독으로 이루어진 이필리무맙을 포함하는 조성물을 제외하고는 표에 제시된 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 표 4-18의 모든 HC 아미노산 치환 위치는 Eu 넘버링 방식에 따른 것이다.
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
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(c) 예시적인 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편
본 발명의 조합 요법에 사용될 수 있는 예시적인 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편 및 그를 포함하는 조성물은 CTLA-4에 결합하고 CTLA-4가 B7에 결합하는 것을 억제하는 임의의 항체 단편을 포함한다. 이들 항-CTLA-4 항체 단편의 특정 예는 하기 항-CTLA-4 항체 단편 및 조성물을 포함하며, 각각의 조성물은 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 (i) 이필리무맙의 3개의 HC-CDR을 포함하는 VH 및 (ii) 이필리무맙의 3개의 LC-CDR을 포함하는 VL을 포함하는 Fv, scFv, F(ab) 또는 F(ab')2이다. 3개의 HC-CDR은 각각 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2 및 서열식별번호: 3을 포함하고, 3개의 LC-CDR은 각각 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 5 및 서열식별번호: 7을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 (i) 트레멜리무맙의 3개의 HC-CDR을 포함하는 VH 및 (ii) 트레멜리무맙의 3개의 LC-CDR을 포함하는 VL을 포함한다. 3개의 HC-CDR은 각각 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11을 포함하고, 3개의 LC-CDR은 각각 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13 및 서열식별번호: 14를 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 (i) 이필리무맙의 VH 및 VL 도메인, (ii) 트레멜리무맙의 VH 및 VL 도메인, (iii) REGN4659의 VH 및 VL 도메인, (iv) AGEN1884w의 VH 및 VL 도메인, 또는 (v) 국제 특허 출원 WO2017194265에 개시된 항-CTLA-4 항체 클론 2C8의 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 이필리무맙 VH 도메인은 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 트레멜리무맙 VH 도메인은 서열식별번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 16에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. REGN4659 VH 도메인은 서열식별번호: 95에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 96에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. AGEN1884w VH 도메인은 서열식별번호: 97에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 98에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 이필리무맙의 VH 및 VL, 트레멜리무맙의 VH 및 VL, REGN4659의 VH 및 VL, AGEN1884w의 VH 및 VL, 8D2/8D2 (RE)의 VH 및 VL, 8D2H1L1의 VH 및 VL, 8D2H2L2의 VH 및 VL, 8D3H3L3의 VH 및 VL, 8D2H2L15의 VH 및 VL, 또는 8D2H2L17의 VH 및 VL을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 항-CTLA-4 항체 또는 항-CTLA-4 항체 단편은 8D2/8D2 (RE)-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H1L1-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H2L2-변이체 1의 VH 및 VL, 8D2H2L15-변이체 1의 VH 및 VL, 또는 8D2H2L17-변이체 1의 VH 및 VL을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 (i) 서열식별번호: 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ii) 서열식별번호: 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (iii) 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (iv) 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (v) 서열식별번호: 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vi) 서열식별번호: 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vii) 서열식별번호: 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (viii) 서열식별번호: 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 88에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ix) 서열식별번호: 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (x) 서열식별번호: 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; 또는 (xi) 서열식별번호: 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편은 하나 이상의 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인 (ISVD)을 포함하고, 각각의 ISVD는 낙타과 중쇄 단독 항체의 가변 도메인 (VHH)을 포함하되; 단, ISVD는 아미노 서열 FYGMG (서열식별번호: 69)를 포함하는 CDR1, 아미노산 서열 DIRTSAGRTTYADSVKG (서열식별번호: 70)를 포함하는 CDR2, 및 아미노산 EMSGISGWDY (서열식별번호: 71) 또는 EPSGISGWDY (서열식별번호: 72)를 포함하는 CDR3을 포함하지 않고 (상기 ISVD는 국제 특허 출원 WO2008071447, WO2017087587 및 WO2017087588에 개시된 바와 같음), ISVD 변이체는 WO2008071447에 개시된 바와 같이 CDR3에 1, 2 또는 3개의 돌연변이를 포함하며, 하나 이상의 ISVD가 이펙터-침묵 항체 불변 도메인 또는 Fc 도메인, 예를 들어 본원에 개시된 이펙터-침묵 항체 불변 도메인 또는 Fc 도메인 중 어느 하나에 융합되거나 연결된 실시양태에서 상기 CDR을 포함하는 ISVD는 이 단서에 의해 배제되지 않는다는 점이 제외된다.
(d) 예시적인 항-PD-1 항체
본 발명의 조합 요법에 사용될 수 있는 예시적인 항-PD-1 항체는 PD-1에 결합하고 PD-1이 PD-L1에 결합하는 것을 억제하는 임의의 항체를 포함한다. 추가 실시양태에서, 예시적인 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙 및 세미플리맙-rwlc로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예시적인 항체는 하기 항-PD-1 항체 및 항-PD1 항체 및 제약상 허용되는 염을 포함하는 조성물을 포함한다.
키트루다, 램브롤리주맙, MK-3475 또는 SCH-900475로도 공지된 펨브롤리주맙은 미국 특허 번호 8,354,509 및 WO2009/114335에 기재되고 예를 들어, 문헌 [Hamid, et al., New England J. Med. 369 (2): 134-144 (2013)]에 개시된 인간화 항-PD-1 항체이다. 펨브롤리주맙에 대한 중쇄 및 경쇄는 각각 서열식별번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열로 표시된다.
옵디보, MDX-1106-04, ONO-4538 또는 BMS-936558로도 공지된 니볼루맙은 WO2006/121168 및 미국 특허 번호 8,008,449에 기재된 완전 인간 IgG4 항-PD-1 항체이다. 니볼루맙에 대한 중쇄 및 경쇄는 각각 서열식별번호: 25 및 26에 제시된 아미노산 서열로 표시된다.
세미플리맙, LIBTAYO 또는 REGN2810으로도 공지된 세미플리맙-rwlc는 WO2015112800 및 미국 특허 번호 9,987,500에 기재된 재조합 인간 IgG4 모노클로날 항체이다. 세미플리맙-rwlc에 대한 중쇄 및 경쇄는 각각 서열식별번호: 101 및 102에 제시된 아미노산 서열로 표시된다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 (i) 이펙터-침묵 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결된 펨브롤리주맙의 3개의 HC-CDR을 포함하는 VH 및 (ii) LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결된 펨브롤리주맙의 3개의 LC-CDR을 포함하는 VL을 포함한다. 3개의 HC-CDR은 각각 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 32 및 서열식별번호: 33을 포함하고, 3개의 LC-CDR은 각각 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 35 및 서열식별번호: 36을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 (i) 이펙터-침묵 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결된 니볼루맙의 3개의 HC-CDR을 포함하는 VH 및 (ii) LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결된 니볼루맙의 3개의 LC-CDR을 포함하는 VL을 포함한다. 3개의 HC-CDR은 각각 서열식별번호: 17, 서열식별번호: 18 및 서열식별번호: 19를 포함하고, 3개의 LC-CDR은 각각 서열식별번호: 20, 서열식별번호: 21 및 서열식별번호: 2를 포함한다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 (i) 이펙터-침묵 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결된 세미플리맙-rwlc의 3개의 HC-CDR을 포함하는 VH 및 (ii) LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결된 니볼루맙의 3개의 LC-CDR을 포함하는 VL을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 (i) 펨브롤리주맙의 VH 및 VL 도메인 (여기서 VH 도메인은 이펙터-침묵 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결되고, VL 도메인은 LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결됨); (ii) 니볼루맙의 VH 및 VL 도메인 (여기서 VH 도메인은 이펙터-침묵 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결되고, VL 도메인은 LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결됨); 또는 (iii) 세미플리맙-rwlc의 VH 및 VL 도메인 (여기서 VH 도메인은 이펙터-침묵 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결되고, VL 도메인은 LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결됨)을 포함한다. 펨브롤리주맙 VH 도메인은 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 니볼루맙 VH 도메인은 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 세미플리맙-rwlc VH 도메인은 서열식별번호: 99에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 100에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VH 및 VL 도메인은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 VH 도메인은 현재 특정한 VH에 연결되지 않은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결될 수 있거나, 생성된 항-PD-1 항체를 이펙터-침묵으로 만드는 Fc 도메인에 하나 이상의 돌연변이를 포함하도록 변형된 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 HC 불변 도메인에 연결된다.
특정 실시양태에서, HC 불변 도메인은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이소타입의 것이며, 이는 HC 불변 도메인을 코딩하는 핵산 분자의 위치 297의 Asn에 대한 코돈을 또 다른 아미노산, 예를 들어 Gln에 대한 코돈으로 대체함으로써 HC 불변 도메인의 위치 297의 아스파라긴 (Asn) 잔기의 N-글리코실화가 결여되도록 변형된다. 추가 실시양태에서, 위치 297에서 N-글리코실화가 결여되도록 변형된 이러한 IgG는 검출가능한 이펙터 기능을 제거하기 위해 본원에 개시된 하나 이상의 추가 돌연변이를 추가로 포함한다. 특정한 실시양태에서, HC 불변 도메인은 인간 HC 불변 도메인이다. 특정한 실시양태에서, 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
특정한 실시양태에서, 본 발명은 S228P 치환을 갖고 S228P 치환 외에, P239G, D265A 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 추가로 포함하도록 변형된 IgG4 HC 불변 도메인을 포함하는 항-PD-1 항체를 제공하며, 여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다. 상기의 특정한 실시양태에서, IgG4 HC 불변 도메인은 인간 HC 불변 도메인이다. 특정한 실시양태에서, 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 인간 IgG1 이소타입을 포함할 수 있으며, 여기서 HC 불변 도메인의 Fc 도메인은 IgG1의 위치 233에서 위치 236까지의 아미노산을 인간 IgG2 HC의 상응하는 아미노산으로 치환하고 위치 327, 330 및 331의 아미노산을 인간 IgG4 HC의 상응하는 아미노산으로 치환함으로써 이펙터-침묵이 되도록 변형되었으며, 여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다. 특정한 실시양태에서, HC 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
또 다른 실시양태에서, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 HC 불변 도메인의 Fc 도메인은 E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, D265S 및 P331S로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하도록 변형되며, 여기서 상기 폴리펩티드는 비아코어 검정에 의해 결정된 바와 같이 야생형 IgG 불변 도메인 영역을 포함하는 폴리펩티드와 비교하여 FcγRIIIA, FcγRIIA 및 FcγRI에 대한 측정불가능한 결합 또는 감소된 결합을 나타낸다. 이들 및 다른 치환은 WO9428027; WO2004099249; WO20121300831, 미국 특허 번호 9,708,406; 8,969,526; 9,296,815; 문헌 [Sondermann et al. Nature 406, 267-273 (20 Jul. 2000)]에 개시되어 있다. 특정한 실시양태에서, HC 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
표 19-27은 암을 갖는 개체를 치료하기 위한 요법에서 본원에 개시된 바와 같은 항-CTLA-4 항체와 조합하여 사용될 수 있는 특정 예시적인 항-PD-1 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 표에 제시된 항체 및 조성물을 제공하며, 각각의 조성물은 표에 제시된 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 표 19-27의 모든 HC 아미노산 치환 위치는 Eu 넘버링 방식에 따른 것이다.
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
(e) 예시적인 항-PD-1 항체 단편
본 발명의 조합 요법에 사용될 수 있는 예시적인 항-PD-1 항체 단편은 PD-1에 결합하고 PD-1이 PD-L1에 결합하는 것을 억제하는 임의의 항-PD-1 항체 단편을 포함하고, PD-1에 결합하는 하기 항-PD-1 항체 단편 및 하기 항-PD-1 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 포함한다.
특정한 실시양태에서, 항체 단편은 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 갖는 펨브롤리주맙 VH 및 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 펨브롤리주맙 VL을 포함하는 Fv 또는 scFv이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편은 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 갖는 펨브롤리주맙 VH 및 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 펨브롤리주맙 VH를 포함하는 F(ab)이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편은 서열식별번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 갖는 펨브롤리주맙 VH 및 서열식별번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 갖는 펨브롤리주맙 VH를 포함하는 F(ab')2이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편은 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 니볼루맙 VH 및 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 니볼루맙 VH를 포함하는 Fv 또는 scFv이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편은 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 니볼루맙 VH 및 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 니볼루맙 VH를 포함하는 F(ab)이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편은 서열식별번호: 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 니볼루맙 VH 및 서열식별번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 니볼루맙 VH를 포함하는 F(ab')2이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 단편은 하나 이상의 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인 (ISVD)을 포함하고, 각각의 ISVD는 낙타과 중쇄 단독 항체의 가변 도메인 (VHH)을 포함하되; 단, ISVD는 아미노 서열 THAMG (서열식별번호: 73)을 포함하는 CDR1, 아미노산 서열 VITWSGGITTYADSVKG (서열식별번호: 74) 또는 VITVSGGITYYADSVKG (서열식별번호: 75)를 포함하는 CDR2, 및 아미노산 DKHQSSWYDY (서열식별번호: 76) 또는 DKHQSSFYDY (서열식별번호: 77)를 포함하는 CDR3을 포함하지 않고 (상기 ISVD는 국제 특허 출원 WO2008071447, WO2017087587 및 WO2017087589에 개시된 바와 같음), 변이체는 WO2008071447에 개시된 바와 같이 CDR3에 1, 2 또는 3개의 돌연변이를 포함하며, 하나 이상의 ISVD가 이펙터-침묵 항체 불변 도메인 또는 Fc 도메인, 예를 들어 본원에 개시된 이펙터-침묵 항체 불변 도메인 또는 Fc 도메인 중 어느 하나에 융합되거나 연결된 실시양태에서 상기 CDR을 포함하는 ISVD는 이 단서에 의해 배제되지 않는다는 점이 제외된다.
(f) 예시적인 항-PD-L1 항체
본 발명의 조합 요법에 사용될 수 있는 예시적인 항-PD-L1 항체는 PD-1이 PD-L1에 결합하는 것을 억제하는 임의의 항-PD-L1 항체를 포함하고, 하기 항-PD-L1 항체 및 하기 항-PD-L1 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 추가로 포함한다. 특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙, 아벨루맙 및 두르발루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 (i) 아테졸리주맙의 VH 및 VL 도메인 (여기서 VH 도메인은 HC 불변 도메인 또는 이펙터-침묵 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결되고, VL 도메인은 LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결됨), (ii) 아벨루맙의 VH 및 VL 도메인 (여기서 VH 도메인은 HC 불변 도메인 또는 이펙터-침묵 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결되고, VL 도메인은 LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결됨), 또는 (iii) 두르발루맙의 VH 및 VL 도메인 (여기서 VH 도메인은 HC 불변 도메인 또는 이펙터-침묵 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결되고, VL 도메인은 LC 카파 또는 람다 불변 도메인에 융합되거나 연결됨)을 포함한다. 두르발루맙 VH 도메인은 서열식별번호: 103에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 104에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 아벨루맙 VH 도메인은 서열식별번호: 105에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 106에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 아테졸리주맙 VH 도메인은 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL 도메인은 서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 특정한 실시양태에서, VH 및 VL 도메인은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 VH 도메인은 현재 특정한 VH에 연결되지 않은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 HC 불변 도메인에 융합되거나 연결될 수 있거나, 생성된 항-PD-L1 항체를 이펙터-침묵으로 만드는 Fc 도메인에 하나 이상의 돌연변이를 포함하도록 변형된 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 HC 불변 도메인에 연결된다.
특정 실시양태에서, HC 불변 도메인은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이소타입의 것이며, 이는 HC 불변 도메인을 코딩하는 핵산 분자의 위치 297의 Asn에 대한 코돈을 또 다른 아미노산, 예를 들어 Gln에 대한 코돈으로 대체함으로써 HC 불변 도메인의 위치 297의 아스파라긴 (Asn) 잔기의 N-글리코실화가 결여되도록 변형된다. 대안적으로, Ser에 대한 코돈은 Pro에 대한 코돈으로 대체될 수 있거나, Thr에 대한 코돈은 Ser에 대한 코돈을 제외한 임의의 코돈으로 대체될 수 있다 (예를 들어 N297A, N297G 또는 N297D). 대안적으로, 모든 3개의 코돈이 변형된다. 추가 실시양태에서, 위치 297에서 N-글리코실화가 결여되도록 변형된 이러한 IgG는 검출가능한 이펙터 기능을 제거하기 위해 본원에 개시된 하나 이상의 추가 돌연변이를 추가로 포함한다. 특정한 실시양태에서, HC 불변 도메인은 인간 HC 불변 도메인이다. 특정한 실시양태에서, 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
특정한 실시양태에서, 본 발명은 S228P 치환을 갖고 S228P 치환 외에, P239G, D265A 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 추가로 포함하도록 변형된 IgG4 HC 불변 도메인을 포함하는 항-PD-L1 항체를 제공하며, 여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다. 상기의 특정한 실시양태에서, IgG4 HC 불변 도메인은 인간 HC 불변 도메인이다. 특정한 실시양태에서, 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 인간 IgG1 이소타입을 포함할 수 있으며, 여기서 HC 불변 도메인의 Fc 도메인은 IgG1의 위치 233에서 위치 236까지의 아미노산을 인간 IgG2 HC의 상응하는 아미노산으로 치환하고 위치 327, 330 및 331의 아미노산을 인간 IgG4 HC의 상응하는 아미노산으로 치환함으로써 이펙터-침묵이 되도록 변형되었으며, 여기서 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다. 특정한 실시양태에서, HC 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
또 다른 실시양태에서, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 HC 불변 도메인의 Fc 도메인은 E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, D265S 및 P331S로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하도록 변형되며, 여기서 상기 폴리펩티드는 비아코어 검정에 의해 결정된 바와 같이 야생형 IgG 불변 도메인 영역을 포함하는 폴리펩티드와 비교하여 FcγRIIIA, FcγRIIA 및 FcγRI에 대한 측정불가능한 결합 또는 감소된 결합을 나타낸다. 이들 및 다른 치환은 WO9428027; WO2004099249; WO20121300831, 미국 특허 번호 9,708,406; 8,969,526; 9,296,815; 문헌 [Sondermann et al. Nature 406, 267-273 (20 Jul. 2000)]에 개시되어 있다. 특정한 실시양태에서, HC 분자는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하며, 여기서 상기 치환은 보존적 돌연변이 또는 비보존적 돌연변이일 수 있다.
표 28-36은 암을 갖는 개체를 치료하기 위한 요법에서 본원에 개시된 바와 같은 항-CTLA-4 항체와 조합하여 사용될 수 있는 예시적인 항-PD-L1 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 항체 25-9 및 31-8을 제외하고 표에 제시된 항체 및 조성물을 제공하며, 각각의 조성물은 항체 25-9 및 31-8을 제외하고 표에 제시된 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 표 28-36의 모든 HC 아미노산 치환 위치는 Eu 넘버링 방식에 따른 것이다.
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
(g) 예시적인 항-PD-L1 항체 단편
본 발명의 조합 요법에 사용될 수 있는 예시적인 항-PD-L1 항체 단편은 PD-L1에 결합하고 PD-L1이 PD-1에 결합하는 것을 억제하는 임의의 항-PD-L1 항체 단편을 포함하고, 하기 항-PD-L1 항체 단편 및 조성물을 추가로 포함하며, 각각의 조성물은 하기 항-PD-L1 항체 단편 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 서열식별번호: 103에 제시된 아미노산 서열을 갖는 두르발루맙 VH 및 서열식별번호: 104에 제시된 아미노산 서열을 갖는 두르발루맙 VL을 포함하는 Fv 또는 scFv이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 서열식별번호: 103에 제시된 아미노산 서열을 갖는 두르발루맙 VH 및 서열식별번호: 104에 제시된 아미노산 서열을 갖는 두르발루맙 VH를 포함하는 F(ab)이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 서열식별번호: 103에 제시된 아미노산 서열을 갖는 두르발루맙 VH 및 서열식별번호: 104에 제시된 아미노산 서열을 갖는 두르발루맙 VH를 포함하는 F(ab')2이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 서열식별번호: 105에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아벨루맙 VH 및 서열식별번호: 106에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아벨루맙 VH를 포함하는 Fv 또는 scFv이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 서열식별번호: 105에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아벨루맙 VH 및 서열식별번호: 106에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아벨루맙 VH를 포함하는 F(ab)이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 서열식별번호: 105에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아벨루맙 VH 및 서열식별번호: 106에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아벨루맙 VH를 포함하는 F(ab')2이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아테졸리주맙 VH 및 서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아테졸리주맙 VH를 포함하는 Fv 또는 scFv이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아테졸리주맙 VH 및 서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아테졸리주맙 VH를 포함하는 F(ab)이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 서열식별번호: 107에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아테졸리주맙 VH 및 서열식별번호: 108에 제시된 아미노산 서열을 갖는 아테졸리주맙 VH를 포함하는 F(ab')2이다.
특정한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체 단편은 하나 이상의 이뮤노글로불린 단일 가변 도메인 (ISVD)을 포함하고, 각각의 ISVD는 낙타과 중쇄 단독 항체의 가변 도메인 (VHH)을 포함하되, 단, ISVD는 서열식별번호: 394-399를 갖는 국제 출원 WO2008071447에 개시되거나 WO2009030285에 개시된 항-PD-L1 ISVD를 포함하지 않고 (상기 문헌 둘 다는 본원에 참조로 포함됨), 하나 이상의 ISVD가 이펙터-침묵 항체 불변 도메인 또는 Fc 도메인, 예를 들어 본원에 개시된 이펙터-침묵 항체 불변 도메인 또는 Fc 도메인 중 어느 하나에 융합되거나 연결된 ISVD는 이 단서에 의해 배제되지 않는다는 점이 제외된다.
(h) 예시적인 조합 요법 투약 레지멘
본 발명은 PD-1 차단제의 면역-자극 효과를 CTLA-4 차단제의 항종양 효과와 조합하지만 PD-1 차단제와 조합하여 투여된 CTLA-4 차단제에서 전형적으로 관찰되는 피부 또는 장 irAE가 없는 항암 요법을 제공한다. 본 발명의 특징은 CTLA-4 차단제가 비아코어 검정에서 결정된 바와 같이 하나 이상의 FcR에 대한 측정가능한 결합 또는 비아코어 검정에서 측정된 바와 같이 동일한 이소타입의 야생형 항체와 비교하여 하나 이상의 FcR에 대한 감소된 결합이 결여되어 있다는 것이다. 그러므로, CTLA-4 차단제는 측정불가능한 이펙터 기능을 나타내거나 또는 감소된 이펙터 기능을 나타내며, 이는 이펙터 기능을 나타내는 CTLA-4 차단제와 함께 사용할 수 없는 용량 및 투약 지속시간에서 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제를 PD-1 차단제와의 조합 요법으로 사용할 수 있게 한다. 이러한 특징은 본 발명의 CTLA-4 차단제를 현재 이용가능한 CTLA-4 차단제와 구분한다.
본 발명의 전형적인 투약 레지멘에서, CTLA-4 차단제 및 PD-1 차단제는 별도의 용량 및 상이한 형식으로 개체에게 공동으로 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 CTLA-4 차단제는 적어도 특정한 적응증을 위한 이필리무맙/니볼루맙 조합 요법에 대해 미국 FDA에 의해 현재 승인된 동일한 용량, 투약 빈도 및 치료 지속시간으로 PD-1 차단제와의 조합 요법으로 투여될 수 있다. 그러나, 조합 요법은 미국 FDA에 의해 승인된 특정한 적응증에 제한되지 않지만, 본 발명의 조합 요법으로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 적응증을 포함할 수 있다. 현재 승인된 용량은 3 mg/kg의 용량으로 제공된 니볼루맙의 투여 후 1 mg/kg의 이필리무맙이다. 그 후, 이 용량 조합은 4회 용량 동안 3주마다 반복될 수 있으며, 필요에 따라 그 후 2주마다 니볼루맙의 투여가 계속될 수 있다. 그러나, 추가 실시양태에서, 본 발명의 CTLA-4 차단제는 1 mg/kg 초과의 용량, 예를 들어 적어도 3 mg/kg의 용량으로 조합 요법에서 투여될 수 있다. 추가의 또 다른 실시양태에서, 용량은 적어도 10 mg/kg일 수 있고, 추가의 또 다른 실시양태에서, 용량은 약 1 mg/kg 내지 10 mg/kg일 수 있다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 CTLA-4 차단제는 승인된 이필리무맙/니볼루맙 조합 요법에서와 동일한 투약 빈도 및 치료 지속시간으로 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 CTLA-4 차단제는 승인된 이필리무맙/니볼루맙 조합 요법에서 니볼루맙에 대한 것과 동일한 투약 빈도 및 치료 지속시간으로 투여될 수 있다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, CTLA-4 차단제는 개체의 체중에 기초하지 않는 용량으로 투여된다. 그러므로, 특정한 실시양태에서, CTLA-4 결합제는 약 10 mg 내지 300 mg의 용량으로 투여될 수 있다. 추가 실시양태에서, 용량은 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 및 300 mg으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 조합 요법에서, PD-1 차단제는 특정한 적응증에 대한 단독요법에서 PD-1 차단제에 대해 승인된 것과 동일한 용량, 투약 빈도 및 치료 지속시간으로 투여될 수 있다. CTLA-4 차단제의 용량은 상기 언급된 바와 같고, CTLA-4 차단제는 상기 언급된 바와 같은 동일한 투약 빈도 및 치료 지속시간으로 또는 CTLA-4 차단제와 쌍형성되는 특정한 PD-1 차단제에 대한 투약 빈도 및 치료 지속시간으로 투여될 수 있다.
현재 판매되는 PD-1 차단제의 특정한 용량은 PD-1 차단제 간에 다양하므로, 본 발명의 조합 요법의 특정한 실시양태에서, 용량, 투약 빈도, 및/또는 치료 지속시간은 특정한 적응증에 대한 특정한 PD-1 차단제에 대해 미국 FDA에 의해 승인된 것과 적어도 동일할 수 있다. 예를 들어, 펨브롤리주맙은 필요에 따라 3주마다 200 mg의 용량으로 승인되고 (소아 개체 (2세에서 18세까지)는 필요에 따라 3주마다 2 mg/kg으로 최대 200 mg); 니볼루맙은 2주마다 3 mg/kg의 용량으로 승인되고; 세미플리맙-rwlc는 필요에 따라 3주마다 350 mg의 용량으로 승인되고; 아테졸리주맙은 필요에 따라 3주마다 1200 mg의 용량으로 승인되고; 아벨루맙은 필요에 따라 2주마다 10 mg/kg 또는 800 mg의 용량으로 승인되고; 두르발루맙은 필요에 따라 2주마다 10 mg/kg의 용량으로 승인되었다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편이며, 이는 약 150 mg 내지 약 250 mg, 약 175 mg 내지 약 250 mg, 약 200 mg 내지 약 250 mg, 약 150 mg 내지 약 240 mg, 약 175 mg 내지 약 240 mg, 또는 약 200 mg 내지 약 240 mg의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용량은 150 mg, 175 mg, 200 mg, 225 mg, 240 mg, 또는 250 mg이다. 추가 실시양태에서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편은 필요에 따라 3주마다의 빈도로 투여될 수 있다. 본 발명의 조합 요법의 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편은 필요에 따라 6주마다의 빈도로 250 mg 초과의 용량, 예를 들어 약 400 mg의 용량으로 투여될 수 있다
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편이며, 이는 약 10 mg/kg 내지 약 1200 mg의 용량으로 투여될 수 있다. 추가 실시양태에서, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편은 필요에 따라 2 내지 3주마다의 빈도로 투여될 수 있다.
PD-1 차단제는 적어도 단독요법에서 현재 판매되는 PD-1 차단제에 대해 승인된 용량, 투약 빈도 및 치료 지속시간으로 투여될 수 있지만, 본 발명의 임의의 특정한 조합에 대한 실제 용량, 투약 빈도 및 치료 지속시간은 PD-1 차단제 단독요법에 대해 승인된 것과 상이할 수 있다. 그러므로, 본 발명의 조합 요법의 특정한 실시양태에서, 조합 요법에서 임의의 특정한 PD-1 차단제의 용량, 투약 빈도 및 치료 지속시간은 조합 요법에 대해 수행된 임상 시험으로부터 결정될 것이다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 니볼루맙 또는 니볼루맙의 이펙터-침묵 변이체이며, 이는 필요에 따라 2-3주마다 30 내지 60분에 걸쳐 3 mg/kg의 용량으로 개체에게 정맥내로 투여되며, 여기서 CTLA-4 차단제의 각 용량은 PD-1 차단제와 동일한 치료 지속시간 동안 또는 PD-1 차단제 지속시간보다 짧거나 긴 지속시간 동안 PD-1 차단제의 투여 후 정맥내로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 니볼루맙 또는 니볼루맙의 이펙터-침묵 변이체는 3 mg/kg의 초기 용량으로 정맥내로 30분에 걸쳐 개체에게 정맥내로 투여된 후, CTLA-4 차단제는 4회 용량 동안 3주마다 동일한 날에 30분에 걸쳐 정맥내로 투여된 후, 니볼루맙은 2주마다 30분에 걸쳐 240 mg 또는 4주마다 30분에 걸쳐 480 mg의 고정 용량으로 정맥내로 투여된다.
특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 펨브롤리주맙 또는 펨브롤리주맙의 이펙터-침묵 변이체이며, 이는 필요에 따라 3주마다 30분에 걸쳐 200 mg의 용량으로 성인 개체에게 정맥내로 투여되거나, 3주마다 30분에 걸쳐 2 mg/kg에서 최대 약 200 mg까지의 용량으로 소아 개체에게 정맥내로 투여되며, 여기서 각 치료 후에 CTLA-4 차단제의 용량이 뒤따르며, 여기서 CTLA-4 차단제의 각 용량은 PD-1 차단제와 동일한 치료 지속시간 동안 또는 PD-1 차단제 지속시간보다 짧거나 긴 지속시간 동안 PD-1 차단제의 투여 후 정맥내로 투여된다.
특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 펨브롤리주맙 또는 펨브롤리주맙의 이펙터-침묵 변이체이며, 이는 필요에 따라 6주마다 30분에 걸쳐 400 mg의 용량으로 성인 개체에게 정맥내로 투여되며, 여기서 각 치료 후에 CTLA-4 차단제의 용량이 뒤따르며, 여기서 CTLA-4 차단제의 각 용량은 PD-1 차단제와 동일한 치료 지속시간 동안 또는 PD-1 차단제 지속시간보다 짧거나 긴 지속시간 동안 PD-1 차단제의 투여 후 정맥내로 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 세미플리맙-rwlc 또는 세미플리맙-rwlc의 이펙터-침묵 변이체이며, 이는 필요에 따라 3주마다 30분에 걸쳐 350 mg의 용량으로 개체에게 정맥내로 투여되며, 여기서 CTLA-4 차단제의 각 용량은 PD-1 차단제와 동일한 치료 지속시간 동안 또는 PD-1 차단제 지속시간보다 짧거나 긴 지속시간 동안 PD-1 차단제의 투여 후 정맥내로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 세미플리맙-rwlc 또는 세미플리맙-rwlc의 이펙터-침묵 변이체는 30분에 걸쳐 350 mg의 초기 용량으로 개체에게 정맥내로 투여된 후, CTLA-4 차단제는 필요에 따라 3주마다 동일한 날에 30분에 걸쳐 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 아테졸리주맙 또는 아테졸리주맙의 이펙터-침묵 변이체이며, 이는 필요에 따라 3주마다 60분에 걸쳐 1200 mg의 용량으로 개체에게 정맥내로 투여되며, 여기서 CTLA-4 차단제의 각 용량은 PD-1 차단제와 동일한 치료 지속시간 동안 또는 PD-1 차단제 지속시간보다 짧거나 긴 지속시간 동안 PD-1 차단제의 투여 후 정맥내로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 아테졸리주맙 또는 아테졸리주맙의 이펙터-침묵 변이체는 60분에 걸쳐 1200 mg의 초기 용량으로 개체에게 정맥내로 투여된 후, CTLA-4 차단제는 필요에 따라 3주마다 동일한 날에 30분에 걸쳐 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 아벨루맙 또는 아벨루맙의 이펙터-침묵 변이체이며, 이는 필요에 따라 2주마다 60분에 걸쳐 10 mg/kg 또는 800 mg의 용량으로 개체에게 정맥내로 투여되며, 여기서 CTLA-4 차단제의 각 용량은 PD-1 차단제와 동일한 치료 지속시간 동안 또는 PD-1 차단제 지속시간보다 짧거나 긴 지속시간 동안 PD-1 차단제의 투여 후 정맥내로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 아벨루맙 또는 아벨루맙의 이펙터-침묵 변이체는 60분에 걸쳐 10 mg/kg 또는 800 mg의 초기 용량으로 개체에게 정맥내로 투여된 후, CTLA-4 차단제는 필요에 따라 2주마다 동일한 날에 30분에 걸쳐 투여된다.
조합 요법의 특정한 실시양태에서, PD-1 차단제는 두르발루맙 또는 두르발루맙의 이펙터-침묵 변이체이며, 이는 필요에 따라 2주마다 60분에 걸쳐 10 mg/kg의 용량으로 개체에게 정맥내로 투여되며, 여기서 CTLA-4 차단제의 각 용량은 PD-1 차단제와 동일한 치료 지속시간 동안 또는 PD-1 차단제 지속시간보다 짧거나 긴 지속시간 동안 PD-1 차단제의 투여 후 정맥내로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 두르발루맙 또는 두르발루맙의 이펙터-침묵 변이체는 60분에 걸쳐 10 mg/kg의 초기 용량으로 개체에게 정맥내로 투여된 후, CTLA-4 차단제는 필요에 따라 2주마다 동일한 날에 30분에 걸쳐 투여된다.
현재 승인된 CTLA-4 차단제 및 PD-1 차단제는 30 내지 60분 시간 프레임에 걸쳐 개체에게 정맥내 투여를 허용하는 농도의 제형으로 제공되지만, 본 발명의 조합 요법은 CTLA-4 차단제 및/또는 PD-1 차단제가 각각 단일 주사로 개체에게 별도로 투여될 수 있는 농도의 제형으로 각각 제공되는 실시양태를 고려한다. 단일 주사로 2개의 차단제 중 적어도 하나를 제공할 수 있다는 것은 개체에게 차단제 둘 다를 투여하는 시간을 유의하게 감소시킬 것이다.
추가 실시양태에서, 본 발명은 CTL-4 차단제 및 PD-1 차단제가 동시에 공동투여되는 조합 요법을 제공한다. 공동투여는 CTLA-4 및 PD-1 차단제를 별도의 제형으로 제공하고, 별도의 IV에 의해 또는 IV에 의해 개체에게 IV에 의해 혼합물을 투여하기 전에 혼합하여 개체에게 각 제형을 동시에 제공함으로써, 또는 개체에게 각 제형의 별도의 주사에 의해 성취될 수 있다. 공동투여는 또한 단일 제형으로 CTLA-4 및 PD-1 차단제를 제공함으로써 성취될 수 있으며, 이는 이후 단일 IV 또는 단일 주사로 개체에게 투여된다.
(i) 조합 요법 치료
본 발명의 조합 요법은 임의의 증식성 질환의 치료, 특히 암의 치료에 사용될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 조합 요법은 흑색종, 비소세포 폐암, 두경부암, 요로상피암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 비-호지킨 림프종, 신암, 호지킨 림프종, 중피종, 난소암, 소세포 폐암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암 또는 타액선암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조합 요법은 췌장암, 기관지암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계 암, 말초 신경계 암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 부신암, 골육종, 연골육종, 또는 혈액 조직의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
현재 판매되는 PD-1 차단제는 흑색종 (전이성 또는 절제불가능), 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종 (PMBCL), 요로상피암종, MSIHC, 위암, 자궁경부암, 간세포성 암종 (HCC), 메르켈 세포 암종 (MCC), 신장 세포 암종 (진행성 포함), 및 피부 편평 암종으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 암을 치료하기 위해 미국 FDA에 의해 승인되었다. 그러므로, 본 발명의 조합 요법은 흑색종 (전이성 또는 절제불가능), 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종 (PMBCL), 요로상피암종, MSIHC, 위암, 자궁경부암, 간세포성 암종 (HCC), 메르켈 세포 암종 (MCC), 신장 세포 암종 (진행성 포함), 및 피부 편평 암종으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
(j) 화학요법과 조합된 조합 요법
본 발명의 조합 요법은 화학요법과 조합하여 암을 갖는 개체에게 투여될 수 있다. 개체는 개체가 본 발명의 조합 요법을 받는 동시에 화학요법을 받을 수 있다. 개체는 개체가 화학요법을 완료한 후에 본 발명의 조합 요법을 받을 수 있다. 개체는 조합 요법의 완료 후 화학요법을 투여받을 수 있다. 본 발명의 조합 요법은 또한 질환 진행 또는 재발 암이 있는 재발성 또는 전이성 암을 갖고 화학요법을 받고 있거나 화학요법을 완료한 개체에게 투여될 수 있다.
화학요법은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학요법제를 포함할 수 있다:
(i) 이관능성 알킬화제, 시클로포스파미드, 메클로레타민, 클로람부실 및 멜팔란을 포함하나 이에 제한되지는 않는 알킬화제;
(ii) 다카바진, 니트로소우레아 및 테모졸로마이드 (경구 다카바진)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 일관능성 알킬화제;
(iii) 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론 및 발루비신을 포함하나 이에 제한되지는 않는 안트라사이클린;
(iv) 파클리탁셀, 도세탁셀, 아브락산 및 탁소테레를 포함하나 이에 제한되지는 않는 세포골격 파괴제 (탁산);
(v) 익사베필론 및 유티델론을 포함하나 이에 제한되지는 않는 에포틸론;
(vi) 보리노스타트 및 로미뎁신을 포함하나 이에 제한되지는 않는 히스톤 데아세틸라제 억제제;
(vii) 이리노테칸 및 토포테칸을 포함하나 이에 제한되지는 않는 토포이소머라제 i의 억제제;
(viii) 에토포시드, 테니포시드 및 타플루포시드를 포함하나 이에 제한되지는 않는 토포이소머라제 ii의 억제제;
(ix) 보르테조밉, 엘로티닙, 제피티닙, 이매티닙, 베무라페닙 및 비스모데집을 포함하나 이에 제한되지는 않는 키나제 억제제;
(x) 아자시티딘, 아자티오프린, 플루오로피리미딘 (예를 들어, 예컨대 카페시타빈, 카르모푸르, 독시플루리딘, 플루오로우라실 및 테가푸르) 시타라빈, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트 및 티오구아닌 (이전에 치오구아닌)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 뉴클레오티드 유사체 및 전구체 유사체;
(xi) 블레오마이신 및 악티노마이신을 포함하나 이에 제한되지는 않는 펩티드 항생제; 카보플라틴, 시스플라틴 및 옥살리플라틴을 포함하나 이에 제한되지는 않는 백금-기반 작용제;
(xii) 트레티노인, 알리트레티노인 및 벡사로텐을 포함하나 이에 제한되지는 않는 레티노이드; 및
(xiii) 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 및 비노렐빈을 포함하나 이에 제한되지는 않는 빈카 알칼로이드 및 유도체.
화학요법을 위한 화학요법제의 용량 선택은 실체의 혈청 또는 조직 회전율, 증상 수준, 실체의 면역원성, 및 치료될 개체에서 표적 세포, 조직 또는 장기의 접근성을 포함한 여러 인자에 의존한다. 추가 치료제의 용량은 허용가능한 수준의 부작용을 제공하는 양이어야 한다. 따라서, 각각의 추가 치료제의 투약량 및 투약 빈도는 특정한 치료제, 치료될 암의 중증도 및 환자 특징에 부분적으로 의존할 것이다. 항체, 시토카인 및 소분자의 적절한 용량 선택에 대한 지침이 이용가능하다. 예를 들어, 문헌 [Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608]; [Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341:1966-1973]; [Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792]; [Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613-619]; [Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32]; [Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594-1602]; [Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed)]; [Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002)]을 참조한다. 적절한 용량 레지멘의 결정은 예를 들어 치료에 영향을 미치거나 치료에 영향을 미칠 것으로 예측되는 관련 기술분야에 알려져 있거나 의심되는 파라미터 또는 인자를 사용하여 임상의에 의해 이루어질 수 있고, 예를 들어 개체의 임상 병력 (예를 들어, 이전 요법), 치료될 암의 유형 및 병기 및 조합 요법에서 하나 이상의 치료제에 대한 반응의 바이오마커에 의존할 것이다.
예를 들어, 펨브롤리주맙은 현재 (i) 펨브롤리주맙과 페메트렉시드 및 백금 화학요법 또는 카보플라틴 및 파클리탁셀 또는 nab-파클리탁셀을 포함하는 비소세포 폐암 (NSCLC)의 치료; 및 (ii) 펨브롤리주맙 및 백금-함유 화학요법을 포함하는 두경부 편평 세포 암 (HNSCC)의 치료를 위한 조합 요법에 대해 미국 FDA에 의해 승인되었고, 아테졸리주맙은 현재 베바시주맙 (상표명 아바스틴으로 판매되는 항-VEGF-A 항체), 파클리탁셀 및 카보플라틴을 포함하는 NSCLC의 치료를 위한 조합 요법에 대해 승인되었다.
그러므로, 본 발명은 백금-함유 화학요법, 페메트렉시드 및 백금 화학요법 또는 카보플라틴 및 파클리탁셀 또는 nab-파클리탁셀을 포함하는 화학요법 단계를 추가로 포함하는 본 발명의 조합 요법의 실시양태를 고려한다. 특정한 실시양태에서, 화학요법 단계와의 조합 요법은 적어도 NSCLC 및 HNSCC를 치료하기 위해 사용될 수 있다.
추가로 화학요법 단계와 조합된 조합 요법은 임의의 증식성 질환의 치료, 특히 암의 치료에 사용될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 조합 요법은 흑색종, 비소세포 폐암, 두경부암, 요로상피암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 비-호지킨 림프종, 신암, 호지킨 림프종, 중피종, 난소암, 소세포 폐암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암 또는 타액선암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 추가로 화학요법 단계와 조합된 조합 요법은 췌장암, 기관지암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계 암, 말초 신경계 암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 부신암, 골육종, 연골육종, 또는 혈액 조직의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
특정한 실시양태에서, 화학요법 단계와의 조합 요법은 흑색종 (전이성 또는 절제불가능), 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종 (PMBCL), 요로상피암종, MSIHC, 위암, 자궁경부암, 간세포성 암종 (HCC), 메르켈 세포 암종 (MCC), 신장 세포 암종 (진행성 포함), 및 피부 편평 암종으로부터 선택된 하나 이상의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
하기 실시예는 본 발명의 추가 이해를 촉진하기 위한 것이다.
실시예 1
Fc-기능은 장 염증 irAE의 유도에 필요하다.
장 염증성 irAE가 항-CTLA-4 항체 단독요법 또는 항-PD-1 항체와 조합된 면역요법 동안 암 환자에서 관찰되었다. 구성적 및 조건부 녹아웃 모델에서 CTLA-4 결핍 마우스의 전임상 연구는 다중 장기에서 최중증 면역 매개 염증성 질환의 발병을 입증하였다. 그러나, 대리 항-CTLA-4 항체를 사용한 동계 종양 모델의 치료는 암 환자에서 관찰된 독성을 예측하는 명백한 irAE를 유도하는 것으로 보고되지 않았다. 유사하게, 장 염증에 대한 조직병리학적 평가는 CT26 동계 또는 제노그래프 모델 (CT26 결장암종 세포주로 접종된 마우스)에서 평가되었다. Fc-적격 항-마우스 CTLA-4 mAb 9D9-mIgG2a (α-CTLA-4 또는 α-CTLA4) (q4x4)로 치료된 CT26 종양 보유 마우스는 고유판 장 조직에서 관찰된 최소 과립구 침윤물 (등급 5 중 등급 1)을 초래하였다. Fc-돌연변이체 항-mCTLA-4 mAb 9D9-mIgG1-D265A (α-CTLA-4 (D265A)), Fc-무함유 항-mCTLA-4 ISVD F894 (CTLA-4 Nab), 또는 이소타입으로 치료된 코호트에서 과립구 침윤물이 관찰되지 않았다. 그러나, 동반된 궤양 또는 다른 조직 손상이 관찰되지 않았다.
α-CTLA-4 (D265A) Fc-돌연변이체는 Fcγ 수용체에 대한 측정가능한 친화성이 결여되어 있고 (Nimmerjahn et al., Immunity, 23: 41-51 (2005)), 따라서 Fc-이펙터 기능이 결여되어 있다. 마우스에서, 항-마우스 CTLA4 mAb 단독요법의 항종양 효능은 Fc-이펙터 기능을 통해 종양내 조절성 T 세포 고갈을 매개하는 항체의 능력에 의존한다 (Selby et al., op. cit). 이와 같이, CTLA-4 Nab 및 α-CTLA-4 (D265A) 둘 다는 단독요법 항종양 이점을 가질 것으로 예상되지 않았다.
최소 조직병리학적 소견은 장에서 염증성 세포 활성화의 마커를 검출하기 위한 잠재적으로 더 민감한 수단으로 유전자 발현 프로파일을 평가하도록 촉구하였다. 본 발명자들은 염증성 장 질환 (IBD) 전임상 모델 및 환자의 대변 샘플 및 생검에서 장 염증과 연관된 유전자의 단백질체 및 발현 프로파일링을 위해 본 발명자들이 이전에 개발한 PCR 유전자-발현 패널을 활용하였다 (Cayatte, C, et al., Clinical and Translational Gastroenterology, 3: e10 (2012)).
α-CTLA-4를 사용한 치료의 개시 후 다양한 시간에 소장 및 결장 조직 샘플에서 유전자 발현 프로파일을 측정하고, α-CTLA-4 (D265A)와 비교하여 유도 장 염증에 대한 Fc-기능의 역할을 구체적으로 평가하였다. 도 1a에 예시된 바와 같이, 수많은 장 염증 유전자의 발현은 α-CTLA-4로 치료된 마우스로부터의 근위 소장 샘플에서 상향조절되었지만, α-CTLA-4로 치료된 마우스에서는 그렇지 않았다 (D265A). 결과는 장 염증 경로의 발현이 준임상적 설정에서 소장 및 결장 조직에서의 유전자 발현에 의해 검출될 수 있음을 제시하였다.
장 염증과 연관된 유전자의 상향조절은 6 내지 7주 이상의 치료 후 이필리무맙 치료된 환자에서 관찰된 바와 같이 임상적 소장결장염으로 진행하는 지속적인 치료의 효과를 평가할 수 있게 하였다 (Samaan et al., Nat. Rev. Gastroenterol. Hepatol. 15: 222-234 (2018)). 장 염증 및 소장결장염으로의 진행에 대한 CTLA-4 차단 및 Fc-기능의 상대적 효과를 평가하기 위해, BALB/c 마우스는 α-CTLA-4, α-CTLA-4 (D265A)를 매주 2회 투약받았다. 두 그룹의 마우스를 Fc-적격 α-CTLA-4로 치료하여 (CT26 종양을 갖는 한 그룹의 마우스 및 종양을 갖지 않는 한 그룹의 나이브 BALB/c 마우스), 종양 성장 및 장 염증의 유도에 대한 종양 면역의 유도로부터의 잠재적인 기여를 평가하였다. 소장결장염으로의 진행을 모니터링하기 위해 지속적인 치료 전체에 걸쳐 체중 및 신체 상태 스코어를 매주 2회 평가하였다.
체중은 이소타입 항체 및 α-CTLA-4 (D265A)를 투약받은 마우스에서 50일차까지 계속 증가하였다. 대조적으로, α-CTLA-4를 투약받은 마우스는 약 35 내지 40일 후에 평균 체중의 감소를 나타내었다 (도 1b). 장 투과성은 49 및 50일차에 FITC-덱스트란 위관영양 마우스에서 평가된 바와 같이 α-CTLA-4 치료 그룹 둘 다에서 증가되었지만, α-CTLA-4 (D265A)로 치료된 마우스에서는 증가되지 않았다 (도 1c). 병리학자 (L.A)에 의해 평가된 바와 같은 근위 소장 및 결장에서의 염증의 조직학적 증거는 α-CTLA-4 치료 그룹에서 중증도 및 중증 소장결장염으로의 진행을 나타내었으며 (도 1d 및 도 1e), 광범위한 면역 침윤, 점막의 비후화 및 술잔 세포의 손실이 나타났다. 대조적으로, α-CTLA-4 (D265A) 치료된 마우스에서 소장결장염이 관찰되지 않았으며, 이는 CTLA-4 차단 유도된 소장결장염에 Fc-기능이 필요하다는 증거를 제공한다. 특히, α-CTLA-4 유도된 장 염증에 종양 성장 및 항종양 반응이 필요하지 않았다.
높은 FcγR-친화성을 갖는 마우스 IgG2a-키메라 항체를 검출가능한 FcγR-결합이 없는 돌연변이체-IgG1 키메라와 비교하는 실험에서 강한 FcγR 기능을 갖는 항-CTLA-4 항체가 강한 단독요법 항종양 반응에 필요하다고 이전에 보고되었다 (Selby et al., Cancer Immunol. Res. 1: 32-42 (2013)). 종양에서 Treg의 특이적 고갈은 표면으로는 마우스 IgG2a (mIgG2a) 백본에서 항-CTLA-4 항체로 관찰된 강한 단독요법에서 핵심 역할을 한다 (Simpson et al., J. Exp. Med. 210:1695-710 (2013). 항-PD-1 효능에 대한 CD28의 중요성을 입증하는 최근 보고서 (참고문헌 참조)는 리간드 CD80 및 CD86에 대한 CTLA-4와 CTLA-4 길항제의 더 강한 상호작용을 차단함으로써 CD28 기능의 증대가 Treg TIL 고갈에 대한 요구사항 없이 강한 조합 항종양 효능을 제공할 수 있다는 것을 시사하였다. CD80 및 CD86에 대한 결합을 억제할 수 있는 마우스 CTLA-4 (mCTLA-4)에 특이적인 ISVD는 중쇄 전용 낙타과 항체로부터 유래된 단일-도메인 VHH 항체 단편을 사용하여 개발되었다. 이들 작은 15 kDa 단백질은 Fc 영역이 결여되어 있으며, 그러므로 FcγR에 결합하지 않는다. 완전히 Fc-기능적인 항체와 비교하기 위해, 본 발명자들은 이전에 강한 단독요법 항종양 효능을 갖는 것으로 제시된 α-CTLA-4를 활용하였다 (참고문헌 참조). 상이한 CTLA-4 에피토프 결합의 잠재적인 효과에 대한 제어를 위해, 본 발명자들은 항종양 효능 및 내약성을 위한 강한 FcγR-기능의 요구사항을 제어하기 위해 FcγR에 대한 검출가능한 친화성이 결여된 α-CTLA-4 (D265A)를 활용하였다.
35GS-링커에 의해 연결된 2개의 항-CTLA-4 VHH 도메인 및 반감기 연장 (HLE) 서브유닛으로서 항-인간 알부민 VHH 도메인으로 구성된 CTLA-4 nAb (서열식별번호: 61 참조). 항-CTLA-4 VHH는 참조 길항제 (100%)로서 사용된 α-CTLA-4와 비교하여 CD80 및 CD86 둘 다에 대해 96% 억제를 스코어링하였다 (도 2a 및 도 2b). CTLA-4 nAb는 증식 (도 2c), IFNγ (도 2d) 및 IL-2 반응 (도 2e)을 증가시키는 능력에 대해 시험관내 MLR-기반 생물검정에서 α-CTLA-4 및 이펙터-침묵 α-CTLA-4 (D265A)와 추가로 비교되었다.
CTLA-4 차단을 위한 Fc-기능은 PD-1 조합 면역요법에서 필요하지 않다.
3개의 CTLA-4 길항제를 사용한 단독요법 및 항-마우스 PD-1 항체 mDX400 (α-PD-1)과의 조합 요법에 의해 유도된 상대적 항종양 효능은 항-PD-1 단독요법에 대해 오직 중등도로 반응하는 동계 CT26 결장암종 종양 모델 (도 3a-3e)에서 시간 경과에 따른 종양 부피의 변화를 측정함으로써 평가하였다. CTLA-4 nAb 또는 α-CTLA-4 (D265A)로 치료된 단독요법 코호트에서 항종양 활성이 관찰되지 않았으며, 이소타입 대조군 (도 3a에서 그룹 1)에 필적하였다. 강한 항종양 단독요법 활성이 α-CTLA-4로 치료된 마우스에서 관찰되었으며, 이는 마우스 동계 종양 모델에서 항종양 단독요법 효능에 대한 항-CTLA-4 항체의 Fc-기능에 대한 요구사항을 입증하는 이전 보고서와 일치하였다 (Simpson et al., J. Exp. Med. 210: 1695-710 (2013)) (도 3a에서 그룹 2), α-PD-1 단독을 사용한 치료는 α-CTLA-4와 비교하여 낮은 내지 중간의 항종양 성장 억제를 제공하였다. 그러나, α-PD-1과 CTLA-4 nAb 또는 α-CTLA-4 (D265A)의 조합 요법은 α-CTLA-4 단독 또는 α-PD-1과 조합된 α-CTLA-4에서 관찰된 것에 필적하는 강한 항종양 이점을 제공하였다 (도 3a의 그룹 2). CTLA-4 nAb 및 α-CTLA-4 (D265A)는 CTLA-4 상의 별도의 에피토프에 결합하므로, 효과가 에피토프에 특이적이지 않다. CTLA-4 nAb, α-CTLA-4 (D265A) 및 α-CTLA-4 사이에 α-PD-1 조합 치료에서 유사한 항종양 반응이 관찰되었기 때문에 Fc-기능과는 독립적인 강력한 조합 이점에 대한 추가 증거가 분명하였다. 도 3d는 도 3a에 요약된 10마리의 마우스 치료 각각에 대한 개별 결과를 제시한다. CD8 T 세포의 확장 및 증가된 CD8/Treg 비는 α-CTLA-4 (D265S) 단독을 투여받은 마우스와 비교하여 α-CTLA-4 치료된 마우스 및 α-CTLA-4 (D265S) 플러스 α-PD-1의 조합을 투여받은 마우스에서 관찰되었다 (도 3b). 이들 결과는 항-PD-1 길항제와 조합된 Fc-기능이 결여된 항-CTLA-4 길항제가 항-PD-1 길항제 단독요법으로 달성가능한 것보다 우수한 항종양 효능을 제공하였고, 단독요법에서 Fc-기능을 갖는 항-CTLA-4 항체의 항종양 효능과 효과가 유사한 조합에서 항종양 효능을 제공하였음을 나타낸다.
본 발명자들은 강한 조합 활성과 연관된 잠재적인 보완 메커니즘을 설명하기 위해 치료 개시 후 9일에 종양에서 효과적인 암 면역요법과 연관된 면역 반응 유전자의 조절을 조사하였다. α-CTLA-4로 치료된 마우스로부터의 종양의 PCR-발현 프로파일링은 IFNγ, IFN-반응 유전자, 케모카인, 전염증성 시토카인 및 MHC를 포함하여 효과적인 면역요법과 연관된 수많은 유전자의 강한 상향조절을 제시하였다 (도 3c). α-CTLA-4 (D265A) 치료된 마우스로부터의 종양에서 약간의 상향조절만이 관찰되었으며, 이는 α-CTLA-4 치료된 종양에서 관찰된 강한 상향조절이 Fc-기능에 적어도 부분적으로 의존적임을 나타낸다. CTLA-4 nAb 및 α-PD-1 치료된 마우스로부터의 종양에서 약간의 반응이 또한 관찰되었다. 대조적으로, 종양 면역 반응 유전자의 강력한 상향조절이 CTLA-4 nAb 또는 α-CTLA-4 (D265A) + α-PD-1로 치료된 조합 요법 코호트에서 관찰되었다. 도 3d는 CTLA-4 nAb 또는 α-CTLA-4 (D265A)가 PD-1 차단의 부재 하에 항종양 활성을 갖지 않는다는 것을 제시한다. 이들 데이터는 순수한 CTLA-4 차단 및 PD-1 차단에 대한 보완 메커니즘이 Fc-독립적 방식으로 강한 조합 이점을 제공할 수 있다는 가설을 지지한다.
항-PD-1과 조합된 Fc-기능이 없는 CTLA-4 차단은 우수한 치료 지수를 제공한다.
면역 체크포인트 차단의 탁월한 특징은 항-PD-1 및 항-CTLA-4 항체의 임상적으로 검증된 조합 이점으로, 체크포인트 경로를 단독으로 표적화하는 것과 비교할 때 우수한 임상적 효능을 생성한다. 그러나, 항-PD-1과의 CTLA-4 차단 조합 요법과 연관된 면역-관련 독성 (irAE)은 환자에서 장 염증의 증가된 유도와 연관되었다 (Ribas & Wolchok, Science 359: 1350-1355 (2018). 또한, α-CTLA (D265A) 및 Fc-무함유 CTLA-4 nAb 둘 다는 강한 항종양 면역을 유도하기 위해 α-PD-1과의 조합을 필요로 하였다. 장 염증의 유도에 대한 강한 종양 면역의 잠재적인 효과를 제어하기 위해, 본 발명자들은 치료 개시 후 18일차에 5회-치료 후 α-PD-1과 α-CTLA, α-CTLA (D265A) 또는 CTLA-4 nAb와의 조합 요법을 투여받은 마우스에서 장 염증 발현 프로파일을 검사하였다 (도 4d).
장 염증에 대한 CTLA-4 차단 및 Fc-기능의 상대적 효과를 평가하기 위해, 나이브 BALB/c 마우스는 α-CTLA, α-CTLA (D265A), Fc-무함유 CTLA4 nAb, α-PD-1, 또는 다양한 항-mCTLA4 길항제와 α-PD-1의 조합을 매주 2회 투약받았다. 체중 및 신체 상태 스코어를 연구 전반에 걸쳐 매주 2회 평가하였다. 모든 그룹의 마우스 체중은 대략 20일차까지 증가하였다 (도 4a). 체중은 이소타입, α-CTLA (D265A), CTLA4 nAb, 또는 α-PD-1 또는 이들의 조합을 투약받은 마우스에서 50일차까지 계속 증가하였다. α-CTLA를 투약받은 마우스는 약 30일차 후에 평균 체중의 감소를 나타내었고 50일차까지 치료전 수준에 가깝게 감소하는 것으로 나타났다. α-PD-1과 조합된 α-CTLA의 투여는 20일차부터 50일차까지 치료전 수준 미만으로 평균 체중의 더 급속한 감소를 유발하였다. 특히, α-CTLA를 투약받은 마우스에서 8마리 마우스 중 2마리에 대한 신체 상태 스코어는 42일차에 시작하여 2 (조건화 하에)로 떨어졌고, α-PD-1과 조합하여 α-CTLA로 치료된 마우스에서는 28일차에 시작하였다. 이들 코호트는 광택이 있고 엉성한 털을 나타내었고, 부은 복부가 이들 코호트에서 관찰되었다.
염증 분석은 투약 7주 후 예정되었으며, α-CTLA를 투약받은 마우스는 일정 기간에 걸쳐 체중 감소를 나타내었고, 이는 α-PD-1과 조합하여 투여될 때 악화되었다 (도 4a에서 그룹 B). 대조적으로, 이펙터-침묵 CTLA-4 차단제 또는 α-PD-1 중 어느 것도 이 기간 동안 이소타입 대조군과 비교하여 어떠한 유의한 체중 감소도 나타내지 않았다 (도 4b에서 그룹 A).
조합 치료 그룹의 모든 마우스 및 이소타입 대조군 및 α-PD-1 치료 그룹으로부터의 4마리의 마우스를 조직 수집을 위해 50일차에 안락사시켰다. 이소타입 대조군 및 α-PD-1 치료 그룹으로부터의 4마리의 나머지 마우스 및 단일 작용제 치료 그룹으로부터의 모든 마우스를 조직 수집을 위해 54일차에 안락사시켰다. 부검 시, 염증 유전자의 발현을 결정하고 조직병리학에 의한 염증 평가를 위해 RT-qPCR을 위해 근위 소장 및 결장을 절제하였다.
이소타입 대조군에 비한 각 치료 그룹으로부터의 근위 소장에서의 유전자 발현의 히트 맵이 (도 4d)에 제시되어 있다. α-CTLA의 투여는 공장 (도 4d) 및 결장 (도 4e)에서 염증 유전자의 상향조절을 유도하기에 충분하였다. α-PD-1과 α-CTLA의 조합은 α-CTLA 단독요법보다 염증 유전자의 훨씬 더 강한 상향조절을 유도하였다. 대조적으로, CTLA-4 nAb의 투여는 α-PD-1과 조합한 경우 장 염증 유전자 발현을 거의 또는 전혀 유도하지 않았고, 단지 약간의 상향조절을 유도하였다. 유사하게, α-CTLA (D265A)를 단독으로 또는 α-PD-1과 조합하여 투여하는 것은 염증 유전자의 최소 내지 낮은 유도를 초래하였다. FITC-덱스트란 위관영양 후 혈청에서 평가된 장 투과성은 α-CTLA로 치료된 마우스 및 α-CTLA 및 α-PD-1과의 조합 치료를 투여받은 마우스에서 유의하게 증가되었다.
근위 소장에서의 염증 중증도를 50일차에 근위 공장에서의 장염의 조직학적 평가에 의해 스코어링하였다. 조직병리학적 평가에 의해, α-CTLA의 투여는 대부분의 마우스에서 경증 내지 중증 염증을 초래하였다. α-CTLA 및 α-PD-1의 조합으로 치료된 코호트에서, 지속적인 치료는 모든 마우스에서 중등도 내지 매우 중증의 염증을 유도하였다 (도 4b). 매우 중증의 장염을 갖는 마우스는 공장염, 적당한 수의 비만 세포를 갖는 미만성 호중구 병변 및 마이스너총의 뉴런의 퇴행을 나타내었다. 대조적으로, CTLA-4 nAb 또는 α-CTLA (D265A)의 투여는 조직병리학 평가에서 염증을 유도하지 않았다. α-PD-1과 조합하여 CTLA-4 nAb를 투여하는 것은 여러 마우스에서 염증이 없거나 또는 최소 내지 경증의 염증을 유발하였다. α-PD-1과 조합하여 α-CTLA (D265A)를 투여하는 것은 8마리 마우스 중 1마리에서만 경증 염증을 유발하였다. 대표적인 현미경 사진은 각 치료 그룹에서 염증의 상대적 수준을 나타낸다 (도 4c).
도 5a-5c에 제시된 바와 같이, α-CTLA-4 Fc 이펙터 기능은 피부 염증을 유도하지만 (도 5a), 전신 염증을 유도하지 않으며, 여기서 신장, 간 또는 폐에서 검출가능한 염증이 없었다 (도 5c). 귀 피부 IL-17-생산 T 세포, Foxp3+ Treg 세포 및 호중구의 절대 수를 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. 도 5b에 제시된 바와 같이, IL-17-생산 T 세포, Foxp3+ Treg 세포 및 호중구의 상승된 수준이 α-CTLA-4로 치료된 마우스로부터의 귀 피부에 존재하였지만, α-CTLA-4 (D265A)로 치료되지 않은 마우스에서는 그렇지 않았다. 종합하여, 이들 데이터는 이펙터 기능을 갖는 항-마우스 CTLA-4 항체에 의한 장 염증의 유도에서 Fc-이펙터 기능의 핵심 역할을 지지한다. Fc-이펙터 기능은 소장결장염의 BALB/c 마우스 모델에서 항-마우스 α-CTLA 유도된 장 염증에 기여한 반면, 장 염증은 CTLA-4 nAb로 치료된 마우스 또는 α-CTLA (D265A)로 치료된 마우스에서 경증이거나 부재한다.
요약하면, 두 가지 속성이 α-CTLA-4에 의한 CT26 종양 모델에서의 장 염증의 유도와 연관되었다. 첫째, Fc-기능적 이소타입 대조군이 염증과 연관된 유전자 발현을 유도하지 않았기 때문에 CTLA-4 특이성이 요구되었다. 그러나, CD80/CD86 리간드에 대한 CTLA-4 결합의 차단은 CTLA-4 nAb 및 α-CTLA-4 (D265A) 치료된 마우스의 장에서 염증 유전자의 상향조절을 유도하기에 불충분하였다. 따라서, α-CTLA-4의 IgG2a 이소형에 존재하는 강한 Fc-기능 능력은 장 염증의 유도에 필요하였다.
장 염증의 활성화는 Treg의 고갈과는 독립적으로 Teff 세포의 활성화에 의해 개시된다.
항-CTLA-4 매개 항종양 면역에 대한 작용 메커니즘 (MOA)은 이론적으로 T 조절성 (Treg) 세포 뿐만 아니라 T 이펙터 (Teff) 세포 집단 (CTL, TH1 세포 등)에 대한 약력학 (PD) 효과에 의해 매개된다. 종양 미세환경 (TIL) 내의 Treg 세포의 고갈은 뮤린 동계 종양 모델에서 항-CTLA-4 항체에 대한 탁월한 MOA이다 (Simpson et al., op. cit.). 또한, 항-CTLA-4 mAb에 의한 Fc-FcγR 공동결착은 T 세포 수용체 (TCR) 및 CD28 신호전달을 조정하여 Treg 고갈과는 독립적으로 향상된 T 세포 활성화를 초래하였다 (Waight et al., Cancer Cell, 33: 1033-1047 (2018)).
Treg 및 T 이펙터 세포에 대한 CTLA-4 nAb로부터의 α-CTLA-4의 효과의 차등적 효과를 특징화하기 위해, 피하 투여 후 20시간에 종양 (TIL), 결장의 고유판, 혈액 및 비장으로부터의 T 세포 집단에 대해 유동 세포계측법을 수행하였다. 약물-결합 CTLA-4의 염색을 가능하게 하는 교차-차단을 하지 않기 때문에, 항-CTLA-4 mAb 클론 UC10-4B9 (써모피셔(ThermoFisher))를 사용하여 α-CTLA-4 또는 α-CTLA-4 (D265A)로 치료된 마우스로부터의 Treg의 CTLA-4 발현 수준을 측정할 수 있었다. 이전에 문헌 (Selby et al. op. cit., Simpson et al. op. cit.)에 보고된 바와 같이, 본 발명자들은 CT26 종양 보유 마우스의 비장 내의 Treg (CTLA-4lo) 및 종양 미세환경 (Treg hi)에서의 CTLA-4의 차등적 발현을 관찰하였다. PBMC 내의 Treg는 CTLA-4lo-mid의 바이모달 수준을 나타내었다. 흥미롭게도, 결장의 고유판으로부터의 Treg는 CTLA-4mid-hi의 바이모달 수준을 나타내었다. 결장에서 CTLA-4hi Treg는 Treg TIL 집단과 유사한 수준을 나타내었다. 다양한 T 세포 집단에 대한 CTLA-4의 차등적 발현 수준은 수용체 밀도 의존적 사멸 메커니즘으로 인한 ADCC 매개된 고갈 능력에 영향을 미친다. Treg 집단은 정상적으로 더 높은 수준의 CTLA-4를 발현하지만, 종양 환경의 Treg는 비장 (MFI= 2,400)에서 발견되는 것보다 훨씬 더 높은 수준 (Treg TIL의 이소타입 대조군에서 3.3배 더 높음, MFI = 8,100)을 발현한다. 더 높은 CTLA-4 수준을 발현한 결장으로부터의 고유판 Treg (CTLA-4hi 모드 MFI = 10,000)는 유동 세포계측법을 사용하여 상대적 발현 수준에 대해 Treg TIL과 유사하였다 (도 6a). 도 6b-6d에 예시된 바와 같이, Treg의 유의한 고갈은 CTLA-4 발현의 가장 높은 밀도를 갖는 α-CTLA-4로 치료된 마우스의 종양 미세환경으로부터의 TIL로 제한되었다. Fc-기능이 결여된 Fc-돌연변이체 α-CTLA-4 (D265A)를 사용한 치료는 Treg 고갈을 초래하지 않았다.
단지 더 높은 CTLA-4 수준을 발현하는 세포가 α-CTLA에 의해 고갈되기 쉽다는 추정에 기초하여, 본 발명자들은 Treg TIL 집단과 유사하게 고유판의 CTLA-4hi Treg가 고갈될 것이라고 예측하였다. 놀랍게도, α-CTLA-4 치료된 마우스의 종양으로부터 단리된 Treg TIL만이 고갈된 것으로 나타났다. α-CTLA-4 치료된 마우스의 결장으로부터의 고유판 유래된 Treg는 고갈되지 않은 것으로 나타났다. α-CTLA-4 치료된 마우스의 결장으로부터의 고유판 유래된 Treg의 검출가능한 고갈이 관찰되지 않았으며, 이는 장 염증의 유도가 장 점막에서 Treg의 손실에 의해 개시되지 않았음을 시사한다.
α-CTLA-4 유도된 장 염증에 기여할 수 있는 억제 기능에 영향을 미치는 Treg의 가능한 표현형 변화를 조사하였다. MC38 종양 이식된 FoxP3 GLD 리포터 마우스로부터의 결장 고유판 (LP) Treg를 Treg 기능과 연관된 유전자의 PCR 발현 프로파일링을 위해 분류하였다 (도 7a). 그러나, α-CTLA-4 (D265A) 치료된 마우스와 비교하여 α-CTLA로부터의 LP Treg 세포에서 유의한 유전자 발현 차이가 관찰되지 않았다. Treg에 대한 Fc-기능의 잠재적인 효과를 결장염의 CD45RBhi T 세포 전달 모델을 사용하여 추가로 조사하였다. CD45RBhi T 세포를 사용한 Treg 세포의 수동 전달은 마우스를 결장염 발병으로부터 보호하였다 (도 7b-7c). α-CTLA-4와 함께 CD45RBhi T 세포와 Treg 세포를 공동투여받은 마우스의 치료는 Treg 보호의 손실 및 결장염의 발병을 초래하였다. 대조적으로, CTLA-4 nAb 치료된 마우스에서 보호 손실이 관찰되지 않았다 (도 7b-7c). 치료 후 24시간에 마우스로부터의 유동 세포계측법 분류된 결장 Foxp3+ Treg 세포로부터의 유전자 발현 프로파일은 α-CTLA-4로 치료된 마우스로부터의 유전자 발현의 유의한 상향조절을 보여주었으며, 이는 CTLA-4 nAb 또는 이소타입 대조군으로 치료된 마우스로부터 수득된 세포에서 관찰된 유전자 발현과 비교하여 CD45RBhigh에서 관찰된 것과 유사하다. 종합적으로, 이들 결과는 Fc-매개 Treg 고갈이 α-CTLA-4에 의한 장 염증의 유도에 필수적이지 않지만, 장 염증에 반응한 Treg의 조절 기능이 조정될 수 있음을 시사한다.
T 세포 상의 CTLA-4 및 CD28, 및 항원 제시 세포 상의 CD80, CD86 및 FcγR의 제한된 발현은 Treg 고갈과는 독립적으로 T 세포의 Fc-기능적 α-CTLA-4 nAb 활성화에 핵심 역할을 할 수 있다 (Waight et al., Cancer Cell, 33: 1033-1047, 2018). 종양에서 Fc-향상된 활성화는 유리하지만, 장 조직에서 의도하지 않은 irAE에 기여할 수 있다. 장 조직에서 면역 이펙터 세포 활성화에서 Fc-기능의 잠재적인 기여를 조사하였다. 종양 및 결장 둘 다로부터의 대식세포 상의 CD16/32 발현의 유동 세포계측법 분석은 비장 대식세포와 비교하여 항원 제시 세포 상의 유의하게 더 높은 수준의 FcR을 보여주었다 (도 8a & 8b). 또한, 종양 및 결장 고유판에서 CD45+CD11b+F4/80+ 대식세포의 비율은 비장에서보다 실질적으로 더 높았다 (도 8c). Fc-기능은 장 조직에서 IL1β, TNFα 및 IFNγ 시토카인 반응의 활성화에 필요하였으며, irAE 유도에서 중요한 역할을 시사하는 장 염증의 명백한 증거가 있기 훨씬 전에 치료 개시 후 10일만에 분명하였다 (도 8c).
1개월 치료 후 α-CTLA-4 치료된 마우스의 결장 고유판으로부터 단리된 CD4 T 세포에서의 시토카인 반응은 Fc-매개 장 염증과 연관된 IL-17, TNFα 및 IFNγ 생산 세포의 더 높은 비율을 보여주었다 (도 8e). 또한, α-CTLA-4 치료된 마우스에서도 호중구의 Fc-의존적 증가가 유도되었다 (도 8e). 종합적으로, 결과는 CTLA-4 차단 연관된 장 염증이 이펙터 세포의 Fc-매개 활성화에 의해 유도되고, T 세포와 APC의 세포 가교의 FcγR-항체 향상에 의해 증대되며, 이는 도 11에 예시된 바와 같이 염증성 시토카인 반응의 자극을 초래한다는 것을 나타낸다. 장 염증의 Fc-매개 유도는 Treg 고갈과는 독립적으로 이펙터 T 세포에 의해 유도될 수 있다.
논의
여러 최근 보고서는 동계 마우스 암 면역요법 종양 모델에서 CTLA-4 차단 단독요법에 대한 Fc-기능의 핵심 역할을 지지하였다 (국제 특허 출원 WO 2014/089113; 문헌 [Selby et al., Cancer Immunol. Res. 32-42 (2013)]; [Vargas et al., Cancer Cell, 33: 649-663 (2018)]). 인그램(Ingram) 등은 문헌 [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 115: 3912-3917, (2018)]에 항종양 효능을 갖는 항-CTLA-4 ISVD를 제공하기 위해 Fc 도메인을 ISVD에 융합시키는 것이 필요하다는 것을 보고하였다. 실제로, 본 발명자들은 단독요법으로서 CTLA-4 nAb 또는 α-CTLA-4 (D265A)로 종양을 치료할 때 유사한 효능 결여를 관찰하였다. 더 높은 세포 표면 CTLA-4 수준을 발현하는 종양 침윤 Treg의 특이적 고갈은 종양 모델에서 종양 효능에 기여하는 것으로 입증되었다 (Simpson et al., J. Exp. Med., 210: 1695-1710 (2013); Selby et al., Cancer Immunol. Res 1: 32-42 (2013).
α-CTLA-4에 의한 소장결장염의 유도는 고유판에 존재하는 Treg의 검출가능한 고갈과 연관되지 않았다. 본 발명자들의 연구는 항-PD-1 항체와 조합될 때 강한 장 염증 유도 없이 강한 항종양 활성을 입증함으로써 항암 치료에서 CTLA-4 차단에 대한 잠재성을 확장한다. Fc-기능은 CTLA-4 및 PD-1 차단에 대한 조합 이점을 달성하는데 필요하지 않았다. α-PD-1과 CTLA-4 nAb 또는 α-CTLA-4 (D265A)를 포함하는 조합 치료는 강한 Fc-기능을 보유하는 α-CTLA-4에 의해 유도된 것과 같은 종양에서 IFNγ-연관 면역 반응 유전자의 유사한 활성화를 유도하였다. 대조적으로, 소장결장염으로 진행하는 강한 장 염증은 α-CTLA-4로 치료된 마우스에서 주로 관찰되었으며, 항-PD-1 항체 mDX400과 조합될 때 증가되었다. 이들 결과는 CD28의 활성화를 촉진하는 CTLA-4의 단순한 차단이 PD-1 차단과 조합될 때 소진된 T 세포의 항종양 반응을 증가시키기에 충분하다는 것을 나타낸다.
문헌 [Science 355: 1423-1427 (2017)]에서 캄포르스트(Kamphorst) 등의 이전 보고서는 소진된 CD8 T 세포의 PD-1 차단 구조가 TCR 활성화의 CD28 공동자극을 필요로 한다는 것을 입증하였다. 더욱이, 문헌 [Science 355: 1428-1433 (2017)]에서 후이(Hui) 등의 동반 보고서는 공동수용체인 CD28이 PD-1-동원된 Shp2 포스파타제에 의한 탈인산화에 대한 표적으로서 TCR보다 강하게 바람직하며, CD28이 우선적으로 탈인산화됨을 입증하였다. 본 발명자들의 결과는 Fc-기능이 없는 항-CTLA-4 항체에 의한 CTLA-4의 단순한 차단에 의해 매개되는 TCR 공동수용체 CD28의 보완 활성화 및 CD28의 PD-1 매개 탈인산화의 차단이 암 면역요법에 대한 조합 이점을 달성하기에 충분할 수 있음을 제시한다. Fc-FcγR 브리징을 통한 Fc-매개 향상된 활성화 없이 단순한 조합 차단의 장점은 더 높은 용량 범위 및 더 긴 치료 시간을 가능하게 하는 더 큰 치료 지수를 허용할 수 있다. 이 장점은 또한 더 낮은 장 염증 irAE 위험 프로파일로 인해 치료의 화학요법 표준과의 추가 조합을 용이하게 할 수 있다.
실험 절차
마우스
야생형 C57BL/6J 마우스는 잭슨(Jackson) 실험실로부터 수득하였다. 야생형 Balb/c 및 CB17-SCID 마우스는 타코닉(Taconic)으로부터 수득하였다. B6.Foxp3GDL (GFP-DTR-루시페라제) 마우스는 특이적 병원체-무함유 조건 하에 생성 및 유지하였으며, 미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재의 머크 리서치 래보러토리즈(Merck Research Laboratories) (MRL) 동물 시설에서 공기가 여과되는 마이크로아이솔레이터에 보관하였다. 모든 동물 절차는 실험 동물 관리 평가 및 인증 협회의 지침에 따라 MRL의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었다.
종양 과제 및 치료
동계 종양 실험을 위해, CT26, MC38 및 MB49 종양 모델을 사용하였다. 8- 내지 12-주령 Balb/c 또는 C57BL/6J 마우스에게 측복부에 3 x105개 CT26 세포를 피하로 (s.c.) 주사하였다. 종양 직경을 전자 캘리퍼스에 의해 측정하고, 종양 부피를 길이 × 너비 × 너비 × 1/2에 의해 계산하였다. 종양이 대략 100 ㎣에 도달하였을 때 치료를 시작하였다. 마우스를 α-CTLA-4, α-CTLA-4 (D265A), 마우스 항-IgG1- D265A 항체 이소타입 대조군, 마우스 항-IgG2a 항체 이소타입 대조군, α-PD-1 항체로 10 mg/kg으로 일주일에 2회 피하로 (s.c.) 치료하였다. 마우스를 CTLA-4 nAb 또는 ISVD 대조군으로 30 mg/kg으로 일주일에 2회 s.c. 치료하였다.
α-CTLA-4는 서열식별번호: 58에 제시된 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 59의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함한다.
α-CTLA-4 (D265A)는 서열식별번호: 60에 제시된 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함한다.
α-PD-1은 서열식별번호: 63에 제시된 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함한다.
CTLA-4 nAb는 서열식별번호: 61에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
항-PD-1 ISVD F037 (PD-1 nAb)은 서열식별번호: 62에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
결장염 및 피부 염증의 유도
나이브 8- 내지 12-주령 Balb/c 마우스를 α-CTLA-4, α-CTLA-4 (D265A), 마우스 항-IgG1-D265A 이소타입 대조군, 마우스 항-IgG2a 이소타입 대조군, 항체로 20 mg/kg으로 8주 동안 일주일에 2회 s.c. 치료하였다. 마우스를 CTLA-4 nAb 또는 ISVD 대조군으로 30 mg/kg으로 일주일에 2회 s.c. 치료하였다. 55일차에, ELISA 및 루미넥스(Luminex) 검정을 위해 혈장을 수집하였다. 장기를 수집하고, 하기와 같이 치료하였다: 1) 10 % 중성 완충 포르말린에 고정하고, 조직 병리학을 평가하기 위해 파라핀-포매된 조직 절편을 H&E로 염색하거나; 2) 추가 RNA 추출을 위해 액체 질소에서 급속-동결하거나; 또는 3) 세포 단리를 위해 HBSS에 위치시켰다.
T 세포-유도 결장염
Balb/c 마우스로부터의 비장 세포를 자성 비드 분리 (줄기 세포 기술)를 사용하여 CD4에 대해 프로세싱 및 정제하였다. TCRb+ CD4+ CD25- CD45RBhigh T 세포 (CD45RBhigh T 세포) 및 TCRb+ CD4+ CD25+ CD45RBlow (Treg 세포)를 FACS Aria (BD)로 분류하였다. 3x105개 CD45RBhigh T 세포 및 1x105개 Treg 세포를 정맥내로 주사하였다. 마우스는 350 μg의 α-CTLA-4 또는 이소타입 대조군 또는 600 μg의 CTLA-4 nAb 또는 ISVD 대조군을 일주일에 2회 i.p. 투약받았다. 주사 후 7주 동안 마우스를 모니터링하고 체중을 측정하였다.
장 투과성
마우스는 혈청에서 FITC의 형광 측정 4시간 전에 FITC-덱스트란 (4kDa, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich))을 위관영양 받았다.
결장 고유판, 피부 및 종양 세포 단리
먼저 37℃에서 20분 동안 5 mM EDTA 및 10 mM HEPES를 함유하는 행크 완충 염 용액에서 0.5-cm 장 조직 조각의 인큐베이션을 통해 상피 세포를 제거한 후, 이 인큐베이션을 한번 더 반복함으로써 결장 고유판 세포를 단리하였다. 나머지 조직을 작은 단편으로 절단한 후, 동일한 조건에서 0.250 mg/mL 리베라제 (로슈), 30 U/mL DNase I (시그마-알드리치) 및 디스파제 (코닝(Corning))를 함유하는 HBSS 1X 배지로 소화시켰다. 생성된 세포 현탁액을 40%/80% 퍼콜 구배로 적층하고, 600 g에서 10분 동안 원심분리하고; LP 세포를 경계면에서 회수하였다.
귀 피부를 세단하고, 0.250 mg/mL 리베라제 (로슈), 30 U/mL DNase I (시그마-알드리치) 및 디스파제 (코닝)를 함유하는 HBSS 1X 배지에서 90분 동안 37℃에서 소화시켰다. 세포 현탁액을 여과하고, HBSS 1X 완충액으로 2회 세척하였다. 종양을 세단하고, 0.250 mg/mL 리베라제 (로슈), 30 U/mL DNase I (시그마-알드리치) 및 디스파제 (코닝)를 함유하는 HBSS 1X 배지에서 30분 동안 37℃에서 소화시켰다. 세포 현탁액을 여과하고, HBSS 1X 완충액으로 2회 세척하였다.
결장, 귀 피부, 간, 폐, 신장 스트립으로부터의 조직구조를 밤새 10% 중성 완충 포르말린에 고정하고, 70% 에탄올로 옮기고, 일상적으로 프로세싱하고, 파라핀에 포매하고, 4-5 μm으로 절편화한 후, 헤마톡실린 및 에오신 (H & E)으로 염색하였다. 결장을 세 가지 기준에 따라 맹검 방식으로 병리학자에 의해 질환의 중증도에 대해 스코어링하였다: 염증: 존재하는 경우 단핵 세포 (대식세포 및 림프구)의 많은 수 (60-70%) 및 호중구 및 밴드 세포의 30-40%의 침윤을 특징으로 하였다. 염증의 스코어링은 침윤의 중증도, 선의 손실, 침식, 선 내강의 확장, 음와 농양의 존재 및 상피 세포의 퇴행을 포함한다. 염증을 0-4의 척도로 스코어링하였다, 0 = 음성; 1 = 최소, 2 = 경증; 3 = 중등도; 4 중증. 아폽토시스: 아폽토시스체의 유병률을 0-3의 척도로 스코어링하였다, 0 = 음성; 1 = 낮음, 2 = 중등도; 3 = 높음. 재생: 평가된 재생 변화는 점막의 상부 1/3에서 유사분열상의 유병률, 개별 선 구조 내의 핵 밀도 (핵 밀집), 표면 상피의 규칙성의 스코어링을 포함한다. 아폽토시스를 0-3의 척도로 스코어링하였다, 0 = 음성; 1 = 낮음, 2 = 중등도; 3 = 높음.
유동 세포계측법 및 항체
세포를 PBS에 재현탁하고, 고정가능한 생존가능성 염색 (비디 바이오사이언스(BD Bioscience))으로 암실에서 30분 동안 얼음에서 염색하였다. 그 후, 세포를 염색 완충액 (FBS, 비디 바이오사이언스)에 재현탁하고, 직접 형광색소-접합의 다양한 조합으로 30분 동안 얼음에서 염색하였다. 세포내 항원의 경우, 표면 염색된 세포를 투과화하고, Foxp3 염색 완충액 세트 (이바이오사이언시스)로 30분 동안 얼음에서 고정한 후, 특이적 항체로 염색하였다. 마우스 항체: CD45 (30-F11), CD8a (53-6.7), CTLA-4 (UC10-4B9), CD11c (HL3), CD11b (M1/70), TCRβ (H57-597), TCRγδ (GL3), CD4 (RM4-5 또는 GK1.5), CD25 (PC61), CD45RB (16A), Ly6G (1A8), F4/80 (T45-2342), CD16/32 (2.4G2), IFNγ (XMG1.2), IL-17A (TC11-18H10), TNFα (MP6-XT22), Foxp3 (FJK-16s). 모든 항체를 비디 바이오사이언시스, 바이오레전드 또는 이바이오사이언스로부터 구입하였다. 모든 샘플에 대해, LSR II 유동 세포계측기 (BD)에서 획득을 수행하였다. 플로우조(FLOWJO) 소프트웨어 (트리 스타(Tree Star))를 사용하여 데이터를 분석하였다.
시토카인 생산이 유동 세포계측법에 의해 측정되었을 때, 세포를 500 ng/mL 이오노마이신, 50 ng/mL PMA (시그마-알드리치)로 자극하였다. 1시간 후, 염색하기 전에 추가 2시간 동안 브레펠딘(Brefeldin) A (비디 바이오사이언스)를 첨가하였다.
마우스 동종이계 혼합 백혈구 반응 (MLR) 검정
2.105 마우스 C57B6/J (8-12주령, 암컷) 비장 T 세포를 이지셉(EASYSEP) 마우스 T 세포 단리 키트 (스템셀(STEMCELL))를 사용하여 단리하고, 표시된 농도의 α-CTLA-4, α-CTLA-4 (D265A), CTLA-4 nAb 또는 이소타입 대조군의 존재 하에 1 x 105개 조사된 (2000 rad에서) Balb/c 마우스 비장세포와 공동배양하였다. 3일차에, 상청액을 수집하고, IL-2 및 IFN-감마 생산을 제조업체의 프로토콜 (메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery))에 따라 ELISA에 의해 측정하였다. 그 후, 세포를 6시간 또는 16-18시간 동안 [3H]-티미딘 (웰당 1 μCi)으로 펄스화하였다. 세포를 세포 수확기를 사용하여 유리 섬유 필터에서 수확하였다. 필터를 마이크로베타 플레이트 계수기 (퍼킨엘머 마이크로베타(PerkinElmer MicroBeta) 2450)에서 제조업체의 지침에 따라 계수하였다.
조직 및 세포로부터의 총 RNA 단리 및 플루이다임(Fluidigm) 바이오마크(BIOMARK) 플랫폼을 사용한 후속 유전자 발현 분석
실시간 PCR 분석을 위해, 총 RNA를 두 가지 방법 중 하나로 단리하였다. 폴리트론 균질화기를 사용하여 RNA STAT-60 (텔-테스트 인크.(Tel-Test Inc.), 미국 텍사스주 프렌즈우드)에서 장기를 균질화한 후, 제조업체의 지침에 따라 마이크로어레이스 키트용 MagMAX-96 (써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific), 미국 매사추세츠주 월섬)을 사용하여 RNA 추출을 수행하였다. 세포 샘플의 경우, 제조업체의 지침에 따라 아크투루스 피코퓨어(ARCTURUS PICOPURE) RNA 단리 키트 (써모피셔 사이언티픽, 미국 매사추세츠주 월섬)를 사용하여 RNA를 단리하였다.
제조업체의 지침에 따라 퀀티텍트(QUANTITECT) 역전사 (퀴아젠, 미국 캘리포니아주 발렌시아)를 사용하여 DNase-치료된 총 RNA를 역전사하였다. 프라이머를 써모피셔 사이언티픽 (미국 캘리포니아주 포스터 시티)으로부터 상업적으로 수득하였다. 플루이다임 바이오마크 제조업체의 지침 (플루이다임, 미국 포스터 시티)에 따라 적어도 2 ng cDNA에서 유전자 특이적 사전-증폭을 수행하였다. 그 후, UNG를 함유하는 태크맨(TAQMAN) 범용 PCR 마스터 믹스와 함께 각각 900 nM 및 250 nM의 FAM-라벨링 프로브 (써모피셔 사이언티픽, 미국 캘리포니아주 포스터 시티)에서 2개의 라벨링되지 않은 프라이머를 사용하여 플루이다임 바이오마크에서 실시간 정량 PCR을 수행하였다. 제조업체의 지침 (플루이다임, 미국 포스터 시티)에 따라 48x48 어레이 또는 96x96 어레이에서 샘플 및 프라이머를 실행하였다. 유비퀴틴 수준을 별도의 반응에서 측정하고, ΔCt 방법에 의해 데이터를 정규화하는데 사용하였다. (유비퀴틴에 대한 평균 사이클 역치 값 및 각 샘플에 대한 관심 유전자 사용, 방정식 1.8 ^ (Ct 유비퀴틴 - Ct 관심 유전자) x 104를 사용하여 정규화된 값을 수득하였다.). 프라이머 참조 서열은 요청시 이용가능하다.
통계
이 연구의 나머지 부분에서 통계적 유의성을 계산하기 위해 양쪽꼬리 대응표본 및 독립표본 t 검정을 사용하였다. * P<0.05, ** P<0.01, *** P<0.001. 그래프패드 프리즘 7 소프트웨어를 사용하여 통계를 수행하였다.
실시예 2
CTLA-4 nAb의 항종양 효능을 마우스 동계 MB49 종양 모델에서 평가하였다. MB49 세포는 24시간 동안 7,12-디메틸벤즈[a]안트라센 (DMBA)에 일차 방광 상피 세포 외식편을 노출시킨 후 장기간 배양하여 성체 C57BL/6 마우스로부터 유래된 요로상피암종 세포주이다. 방광암의 동계 뮤린 모델은 35년 이상 동안 널리 사용되어 왔다.
MB49 마우스 방광암 세포를 80마리 마우스에 피하로 (s.c.) 이식하고, 동물을 각각 10마리 마우스를 갖는 5개의 치료 그룹에 할당하였다. 중앙값 출발 종양 부피가 103 ㎣에 도달하였을 때, 마우스에 4일마다 1회 총 4회 용량 동안 s.c. 주사하였다. 관련 없는 대조군 ISVD (30 mg/kg, 로트 번호 01AQL) 및 5 mg/kg mIgG1 이소타입 대조군 mAb (로트 번호 64AIS)를 치료 대조군으로 투여하였다. 치료는 30 mg/kg CTLA-4 nAb, 10 mg/kg Fc-적격 α-CTLA-4 (D265A), 5 mg/kg α-PD-1, 또는 CTLA4 표적화 작용제 및 α-PD-1의 조합을 포함하였다. 치료 개시 후 21일 동안 종양 성장을 모니터링하였다.
도 9a는 각 치료 그룹에 대한 개별 동물 종양 부피를 제시한다. 반응성 치료 그룹에 대해 21일차까지의 완전 반응 (CR)이 제시된다. 도 9b는 각 치료 그룹에 대한 평균 종양 부피 및 평균의 표준 오차를 제시한다 (출발 수 n=10/그룹). 큰 종양 부피로 인해 연구로부터 제거된 동물 형태의 종양 부피는 해당 치료 그룹에 대한 마지막 측정이 수행될 때까지 평균으로 이월되었다. 도 9a-9b는 CT26 결장 종양 모델 (도 3a 참조), MB49 방광 종양 모델 및 MC38 결장 종양 모델에서와 같이, Fc-무함유 CTLA-4 nAb와 α-PD-1과의 조합 요법이 Fc-기능과는 독립적으로 강한 항종양 이점을 제공하였음을 제시한다.
실시예 3
CTLA-4 nAb의 항종양 효능을 마우스 동계 MC38 종양 모델에서 평가하였다. MC38 마우스 결장암 세포를 80마리의 마우스에 SC 이식하고, 동물을 각각 10마리의 마우스를 갖는 5개의 치료 그룹에 할당하였다. 중앙값 출발 종양 부피가 246 ㎣에 도달하였을 때, 마우스에 4일마다 1회 총 4회 용량 동안 SC 주사하였다. 관련 없는 대조군 ISVD (30 mg/kg) 및 5 mg/kg mIgG1 이소타입 대조군 mAb를 치료 대조군으로 투여하였다. 치료는 30 mg/kg CTLA-4 nAb, 10 mg/kg Fc-적격 α-CTLA-4 (D265A), 5 mg/kg α-PD-1, 또는 CTLA4 표적화 작용제 및 α-PD-1의 조합을 포함하였다. 치료 개시 후 23일 동안 종양 성장을 모니터링하였다.
도 10a는 각 치료 그룹에 대한 개별 동물 종양 부피를 제시한다. 반응성 치료 그룹에 대해 23일차까지의 완전 반응 (CR)이 제시된다. 도 10b는 각 치료 그룹에 대한 평균 종양 부피 및 평균의 표준 오차를 제시한다 (출발 수 n=10/그룹). 큰 종양 부피로 인해 연구로부터 제거된 동물 형태의 종양 부피는 해당 치료 그룹에 대한 마지막 측정이 수행될 때까지 평균으로 이월되었다. 도 10a-10b는 CT26 결장 종양 모델 (도 3a 참조), MB49 방광 종양 모델 및 MC38 결장 종양 모델에서와 같이, Fc-무함유 CTLA-4 nAb와 α-PD-1과의 조합 요법이 Fc-기능과는 독립적으로 강한 항종양 이점을 제공하였음을 제시한다.
서열
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본 발명은 예시된 실시양태를 참조하여 본원에서 설명되지만, 본 발명은 이에 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자 및 본원의 교시내용에 대한 접근은 본 발명의 범주 내에서 추가 변형 및 실시양태를 인식할 것이다. 따라서, 본 발명은 본원에 첨부된 청구범위에 의해서만 제한된다.
SEQUENCE LISTING <110> Merck Sharp & Dohme Corp LaFace, Drake Punnonen, Juha Bowman, Edward Bauche, David Chackerian, Alissa Grein, Jeffery Mauze, Smita Sawant, Anandi Annamalai, Laksmanan <120> ANTI-CANCER COMBINATION THERAPIES COMPRISING CTLA-4 AND PD-1 BLOCKING AGENTS <130> 24702 <150> 62/817,749 <151> 2019-03-13 <160> 117 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ipilimumab LC-CDR1 <400> 1 Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ipilimumab LC-CDR2 <400> 2 Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ipilimumab LC-CDR3 <400> 3 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ipilimumab HC-CDR1 <400> 4 Ser Tyr Thr Met His 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ipilimumab HC-CDR2 <400> 5 Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys 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Trp Lys Ser His 180 185 190 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 195 200 205 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 113 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Atezolizumab HC (IgG1 N297A/D235E/L358M) <400> 113 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 20 25 30 Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 114 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Atezolizumab LC <400> 114 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 115 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human IgG1 HC Constant domain (N297A/D356E/L358M) <400> 115 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 116 <211> 317 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human IgG1 HC Constant domain (L234F/L235E/P331S/D356E/L358M) <400> 116 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 225 230 235 240 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 245 250 255 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 260 265 270 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 275 280 285 Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 290 295 300 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 305 310 315 <210> 117 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human LC lambda Constant domain <400> 117 Gly Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 1 5 10 15 Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp 20 25 30 Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro 35 40 45 Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 50 55 60 Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys 65 70 75 80 Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95 Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105

Claims (37)

  1. 암 치료를 필요로 하는 개체에서 암을 치료하기 위한 조합 요법으로서,
    방법은 암 요법을 필요로 하는 개체에게 PD-1 차단제 및 CTLA-4 차단제를 투여하는 것을 포함하며,
    여기서 CTLA-4 차단제는 (i) 비아코어 검정에 의해 결정된 바와 같이, 항체와 동일한 이소타입의 야생형 IgG와 비교하여 하나 이상의 Fc 수용체 (FcR)에 대한 측정불가능한 결합 또는 하나 이상의 FcR에 대한 감소된 결합을 갖는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체, 또는 (ii) Fc 도메인이 결여되거나 또는 하나 이상의 Fc 수용체에 결합하는 Fc 도메인의 영역이 결여된 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편을 포함하는 것인
    조합 요법.
  2. 제1항에 있어서, PD-1 차단제가 항-PD-1 항체, 항-PD-1 항체 단편, 항-PD-L1 항체 및 항-PD-L1 항체 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조합 요법.
  3. 제1항에 있어서, PD-1 차단제가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이고, CTLA-4 차단제가 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체인 조합 요법.
  4. 제1항에 있어서, PD-1 차단제가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이고, CTLA-4 차단제가 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편인 조합 요법.
  5. 제2항에 있어서, 항-PD1 항체 또는 항-PD-L1 항체가 하기를 포함하는 것인 조합 요법:
    IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인;
    N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이를 포함하는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A, N297A/D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D356E/L358M, 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 포함하는 IgG1 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S 아미노산 치환을 포함하는 IgG2 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는
    S228P 아미노산 치환 및 N267A, P329G, D265A/N297A 아미노산 치환을 포함하는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    여기서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별된다.
  6. 제2항에 있어서, PD-1 차단제가 항-PD-1 항체 단편 또는 항-PD-L1 항체 단편이고, CTLA-4 차단제가 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 또는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체 단편인 조합 요법.
  7. 제3항에 있어서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체가 하기를 포함하며:
    N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이를 포함하는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A, N297A/D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D356E/L358M, 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 포함하는 IgG1 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S 아미노산 치환을 포함하는 IgG2 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 또는
    S228P 아미노산 치환 및 N267A, P329G, D265A/N297A 아미노산 치환을 포함하는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    여기서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별되는 것인
    조합 요법.
  8. 제1항에 있어서, 이펙터 침묵 항-CTLA-4 항체 단편이 단일쇄 가변 단편 (scFv), 항원 결합 단편 (Fab), 또는 항원 결합 단편 이량체 F(ab')2이거나 또는 그를 포함하는 것인 조합 요법.
  9. 제1항에 있어서,
    (a) 항-PD1 항체 또는 항-PD-1 항체 단편이 (i) 펨브롤리주맙의 3개의 중쇄 (HC) 상보성 결정 영역 (CDR) 및 3개의 경쇄 (LC) CDR, (ii) 니볼루맙의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, 또는 (iii) 세미플리맙-rwlc의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR을 포함하고,
    (b) 항-PD-L1 항체 또는 항-PD-L1 항체 단편이 (i) 두르발루맙의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (ii) 아벨루맙의 3개의 HC CDRA 및 3개의 LC CDR, 또는 (iii) 아테졸리주맙의 3개의 HC CDRA 및 3개의 LC CDR을 포함하는 것인
    조합 요법.
  10. 제1항에 있어서, 항-CTLA-4 항체 또는 항-CTLA-4 항체 단편이 (i) 이필리무맙의 3개의 중쇄 (HC) 상보성 결정 영역 (CDR) 및 3개의 경쇄 (LC) CDR, (ii) 트레멜리무맙의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (iii) REGN4659의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (iv) AGEN1884w의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (v) 8D2/8D2 (RE)의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (vi) 8D2/8D2 (RE)-변이체 1의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (vii) 8D2H1L1의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (viii) 8D2H1L1-변이체 1의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (ix) 8D2H2L2의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (x) 8D2H2L2-변이체 1의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (xi) 8D3H3L3의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (xii) 8D2H2L15의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (xiii) 8D2H2L15-변이체 1의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, (xiv) 8D2H2L17의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR, 또는 (xv) 8D2H2L17-변이체 1의 3개의 HC CDR 및 3개의 LC CDR을 포함하는 것인 조합 요법.
  11. 제1항에 있어서, CTLA-4 차단제가 1 mg/kg 초과를 포함하는 용량, 또는 100 mg 이상인 개체의 체중에 의존하지 않는 고정 용량으로 투여되는 것인 조합 요법.
  12. 제1항에 있어서, PD-1 차단제가 (i) 2 또는 3 mg/kg을 포함하는 용량, 또는 200 mg인 개체의 체중에 의존하지 않는 고정 용량, (ii) 3 mg/kg 초과를 포함하는 용량, 또는 200 mg 초과인 개체의 체중에 의존하지 않는 고정 용량, 또는 (iii) 약 200 mg 내지 약 400 mg인 개체의 체중에 의존하지 않는 고정 용량으로 투여되는 것인 조합 요법.
  13. 제1항에 있어서, PD-1 차단제가 개체에게 첫 번째로 투여되고 CTLA-4 차단제가 개체에게 두 번째로 투여되거나; CTLA-4 차단제가 개체에게 첫 번째로 투여되고 PD-1 차단제가 개체에게 두 번째로 투여되거나; 또는 PD-1 차단제 및 CTLA-4 차단제가 개체에게 공동으로 투여되는 것인 조합 요법.
  14. 제1항에 있어서, 개체가 조합 요법 이전에, 이후에 또는 그와 공동으로 화학요법제를 추가로 투여받는 것인 조합 요법.
  15. 제1항에 있어서, 암이 흑색종, 비소세포 폐암, 두경부암, 요로상피암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 비-호지킨 림프종, 신암, 호지킨 림프종, 중피종, 난소암, 소세포 폐암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암 또는 타액선암인 조합 요법.
  16. 제1항에 있어서, 암이 췌장암, 기관지암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계 암, 말초 신경계 암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 부신암, 골육종, 연골육종, 또는 혈액 조직의 암인 조합 요법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 인간이고, CTLA-4 차단제가 인간 CTLA-4에 결합하고, PD-1 차단제가 인간 PD-1에 결합하고, PD-L1 차단제가 인간 PD-L1에 결합하는 것인 조합 요법.
  18. 하기를 포함하는 항-CTLA-4 차단제로서:
    (i) 이필리무맙의 3개의 HC 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 가변 중쇄 (HC) 도메인 (VH) 및 3개의 LC CDR을 포함하는 가변 경쇄 (LC) 도메인 (VL), (ii) 트레멜리무맙의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (iii) REGN4659의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (iv) AGEN1884w의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (v) 8D2/8D2 (RE)의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (vi) 8D2H1L1의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (vii) 8D2H2L2의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (viii) 8D3H3L3의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (ix) 8D2H2L15의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (x) 8D2H2L17의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (xi) 8D2/8D2 (RE)-변이체 1의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (xii) 8D2H1L1-변이체 1의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (xiii) 8D2H2L2-변이체 1의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, (xiv) 8D2H2L15-변이체 1의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL, 또는 (xv) 8D2H2L17-변이체 1의 3개의 HC CDR을 포함하는 VH 및 3개의 LC CDR을 포함하는 VL을 갖는 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체,
    여기서 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체는 비아코어 검정에 의해 결정된 바와 같이, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체와 동일한 이소타입의 야생형 IgG와 비교하여 하나 이상의 Fc 수용체 (FcR)에 대한 측정불가능한 결합 또는 하나 이상의 FcR에 대한 감소된 결합을 나타내는 것인
    항-CTLA-4 차단제.
  19. 제18항에 있어서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체가 (i) 이필리무맙의 VH 및 VL, (ii) 트레멜리무맙의 VH 및 VL, (iii) REGN4659의 VH 및 VL, (iv) AGEN1884w의 VH 및 VL, (v) 8D2/8D2 (RE)의 VH 및 VL, (vi) 8D2H1L1의 VH 및 VL, (vii) 8D2H2L2의 VH 및 VL, (viii) 8D3H3L3의 VH 및 VL, (ix) 8D2H2L15의 VH 및 VL, (x) 8D2H2L17의 VH 및 VL, (xi) 8D2/8D2 (RE)-변이체 1의 VH 및 VL, (xii) 8D2H1L1-변이체 1의 VH 및 VL, (xiii) 8D2H2L2-변이체 1의 VH 및 VL, (xiv) 8D2H2L15-변이체 1의 VH 및 VL, 또는 (xv) 8D2H2L17-변이체 1의 VH 및 VL을 포함하는 것인 항-CTLA-4 차단제.
  20. 제18항에 있어서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체가 (i) 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; (ii) 서열식별번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; (iii) 서열식별번호: 95에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 96에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는 (iv) 서열식별번호: 97에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열식별번호: 98에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL; (v) 서열식별번호: 73에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vi) 서열식별번호: 75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 76에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (vii) 서열식별번호: 77에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 78에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (viii) 서열식별번호: 79에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 80에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (ix) 서열식별번호: 81에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 82에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (x) 서열식별번호: 83에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 84에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (xi) 서열식별번호: 85에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 86에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (xii) 서열식별번호: 87에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 88에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (xiii) 서열식별번호: 89에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 90에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; (xiv) 서열식별번호: 91에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 92에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인; 또는 (xv) 서열식별번호: 93에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열식별번호: 94에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 것인 항-CTLA-4 차단제.
  21. 제18항에 있어서, 이펙터-침묵 항-CTLA-4 항체가 하기 중 하나 이상을 포함하는 것인 항-CTLA-4 차단제:
    (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이를 포함하는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인, 단 항-CTLA-4 항체는 N297A 치환으로 단독으로 이루어진 이필리무맙을 포함하지 않음;
    (ii) N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A, N297A/D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D356E/L358M, 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 포함하는 IgG1 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    (iii) N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S 아미노산 치환을 포함하는 IgG2 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 및/또는
    (iv) S228P 아미노산 치환 및 N267A, P329G, D265A/N297A 아미노산 치환을 포함하는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인, 여기서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별됨.
  22. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항-CTLA-4 차단제 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물.
  23. 하기를 포함하는 항-PD-1 차단제로서:
    (a) HC 가변 도메인 (VH)을 갖는 중쇄 (HC) 및 LC 가변 도메인 (VL)을 갖는 경쇄 (LC)를 포함하며, 여기서 (i) VH는 펨브롤리주맙의 3개의 HC-상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL은 펨브롤리주맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하거나, (ii) VH는 니볼루맙의 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 니볼루맙의 3개의 LC-CDR을 포함하거나, 또는 (iii) VH는 세미플리맙-rwlc의 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 세미플리맙-rwlc의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하는 것인 항-PD-1 항체; 또는
    (b) VH를 갖는 HC 및 VL을 갖는 LC를 포함하며, 여기서 (i) VH는 두르발루맙의 3개의 HC-상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL은 두르발루맙의 3개의 LC-CDR을 포함하거나, (ii) VH는 아벨루맙의 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 아벨루맙의 3개의 LC-CDR을 포함하거나, 또는 (iii) VH는 아테졸리주맙의 3개의 HC-CDR을 포함하고, VL은 아테졸리주맙의 적어도 3개의 LC-CDR을 포함하는 것인 항-PD-L1 항체;
    여기서 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 하기 중 하나 이상을 포함하는 이펙터-침묵 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 도메인을 추가로 포함하며:
    (i) N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 무효화시키는 아미노산 위치 297에서 시작하는 N-글리코실화 부위 Asn-Xaa-Ser/Thr의 돌연변이 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    (ii) N297A, L234A/L235A/D265A, L234A/L235A/P329G, L235E, D265A, E233A/L235A, N297A/D356E/L358M, L234F/L235E/P331S/D356E/L358M, 또는 D265A/N297G 아미노산 치환을 포함하는 IgG1 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    (iii) N297A/D265S, D265A, P329G/D265A/N297G, 또는 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S 아미노산 치환을 포함하는 IgG2 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인; 및/또는
    (iv) S228P 아미노산 치환 및 N267A, P329G, D265A/N297A 아미노산 치환을 포함하는 IgG4 Fc 도메인 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 추가 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 추가로 포함하는 돌연변이된 Fc 도메인;
    여기서 아미노산 위치는 Eu 넘버링에 따라 식별되고, 여기서 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 비아코어 검정에 의해 결정된 바와 같이, 야생형 IgG Fc 도메인 영역을 포함하는 폴리펩티드와 비교하여 FcγRIIIA, FcγRIIA 및 FcγRI에 대한 측정불가능한 결합 또는 감소된 결합을 나타내는 이펙터-침묵 Fc 도메인을 포함하는 것인
    항-PD-1 차단제.
  24. 제23항에 있어서, 항-PD-1 항체가 펨브롤리주맙의 VH 및 VL, 니볼루맙의 VH 및 VL, 또는 세미플리맙-rwlc의 VH 및 VL을 포함하고, 항-PD-L1 항체가 두르발루맙의 VH 및 VL, 아벨루맙의 VH 및 VL, 또는 아테졸리주맙의 VH 및 VL을 포함하는 것인 항-PD-1 차단제.
  25. 제23항에 있어서, 펨브롤리주맙 VH 및 VL 아미노산 서열이 각각 서열식별번호: 29 및 서열식별번호: 30에 제시되고; 니볼루맙 VH 및 VL 아미노산 서열이 각각 서열식별번호: 23 및 서열식별번호: 24에 제시되고; 세미플리맙-rwlc VH 및 VL 아미노산 서열이 각각 서열식별번호: 99 및 서열식별번호: 100에 제시되고; 두르발루맙 VH 및 VL 아미노산 서열이 각각 서열식별번호: 103 및 서열식별번호: 104에 제시되고; 아벨루맙 VH 및 VL 아미노산 서열이 각각 서열식별번호: 105 및 서열식별번호: 106에 제시되고; 아테졸리주맙 VH 및 VL 아미노산 서열이 각각 서열식별번호: 107 및 서열식별번호: 108에 제시된 것인 항-PD-1 차단제.
  26. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에서 암 치료를 위한 항-CTLA-4 차단제.
  27. 제26항에 있어서, 암이 흑색종, 비소세포 폐암, 두경부암, 요로상피암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 비-호지킨 림프종, 신암, 호지킨 림프종, 중피종, 난소암, 소세포 폐암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암 또는 타액선암인 항-CTLA-4 차단제.
  28. 제26항에 있어서, 암이 췌장암, 기관지암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계 암, 말초 신경계 암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 부신암, 골육종, 연골육종, 또는 혈액 조직의 암인 항-CTLA-4 차단제.
  29. 개체에서 암 치료를 위한 의약의 제조를 위한 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항의 항-CTLA-4 차단제의 용도.
  30. 제29항에 있어서, 암이 흑색종, 비소세포 폐암, 두경부암, 요로상피암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 비-호지킨 림프종, 신암, 호지킨 림프종, 중피종, 난소암, 소세포 폐암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암 또는 타액선암인 용도.
  31. 제29항에 있어서, 암이 췌장암, 기관지암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계 암, 말초 신경계 암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 부신암, 골육종, 연골육종, 또는 혈액 조직의 암인 용도.
  32. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 개체에서 암 치료를 위한 항-PD-1 차단제.
  33. 제32항에 있어서, 암이 흑색종, 비소세포 폐암, 두경부암, 요로상피암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 비-호지킨 림프종, 신암, 호지킨 림프종, 중피종, 난소암, 소세포 폐암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암 또는 타액선암인 항-PD-1 차단제.
  34. 제32항에 있어서, 암이 췌장암, 기관지암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계 암, 말초 신경계 암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 부신암, 골육종, 연골육종, 또는 혈액 조직의 암인 항-PD-1 차단제.
  35. 개체에서 암 치료를 위한 의약의 제조를 위한 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항의 항-PD-1 차단제의 용도.
  36. 제35항에 있어서, 암이 흑색종, 비소세포 폐암, 두경부암, 요로상피암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 비-호지킨 림프종, 신암, 호지킨 림프종, 중피종, 난소암, 소세포 폐암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암 또는 타액선암인 용도.
  37. 제35항에 있어서, 암이 췌장암, 기관지암, 전립선암, 췌장암, 위암, 난소암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계 암, 말초 신경계 암, 자궁 또는 자궁내막 암, 구강 또는 인두의 암, 간암, 신장암, 고환암, 담도암, 소장 또는 충수 암, 부신암, 골육종, 연골육종, 또는 혈액 조직의 암인 용도.
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