KR20210125474A - 고순도 스테비올 글리코사이드 - Google Patents
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Abstract
고도로 정제된 스테비올 글리코사이드, 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7의 제조 방법이 기재된다. 상기 방법은 다양한 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시키기 위한 효소 제제 및 재조합 미생물을 이용하는 것을 포함한다. 상기 고도로 정제된 스테비올 글리코사이드는 식용(edible) 및 저작성(chewable) 조성물, 예컨대 임의의 음료, 과자류, 베이커리 제품, 쿠키, 및 츄잉검에서 무칼로리 감미료, 향미 증강제, 감미성 증강제(sweetness enhancer), 및 거품발생 억제제로서 유용하다.
Description
서열 목록
본 출원과 동시에 출원되고, 15 킬로바이트의 데이터를 갖는, 2018년 11월 27일자로 작성된 파일명 "39227_80PROV_Sequence_Listing_ST25.txt"의 텍스트 파일이 이로써 본 출원에 전체적으로 참고로 포함된다.
기술분야
본 발명은, 고도로 정제된 스테비올 글리코사이드 조성물을 비롯한, 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
고강도 감미료는 수크로스의 감미도 수준(sweetness level)보다 수 배 더 큰 감미도 수준을 갖는다. 이들은 본질적으로 무칼로리이며, 식품 및 음료를 포함한 다이어트 및 저칼로리 제품에 통상 사용된다. 고강도 감미료는 혈당 반응을 유도하지 않아서, 당뇨병 환자 및 탄수화물 섭취를 제어하는 데 관심 있는 기타 환자를 타깃으로 한 제품에 사용하기에 적합하다.
스테비올 글리코사이드는 남아메리카의 소정 지역이 원산지인 국화과(Asteraceae(Compositae) family)의 다년생 관목인 스테비아 레바우디아나 베르토니(Stevia rebaudiana Bertoni)의 잎에서 발견되는 화합물 부류이다. 이들은, C13 및 C19 위치에서의 탄수화물 잔기의 존재에 의해 상이한 단일 염기, 스테비올에 의해 구조적으로 특징지어진다. 이들은 스테비아 잎에 축적되어, 총 건조 중량의 대략 10% 내지 20%를 구성한다. 건조 중량 기준으로, 스테비아 잎에서 발견되는 4개의 주요 글리코사이드는 전형적으로 스테비오사이드(9.1%), 레바우디오사이드 A(3.8%), 레바우디오사이드 C(0.6 내지 1.0%) 및 둘코사이드 A(0.3%)를 포함한다. 다른 알려진 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 B, C, D, E, F 및 M, 스테비올바이오사이드 및 루부소사이드를 포함한다.
스테비아 레바우디아나로부터 스테비올 글리코사이드를 제조하기 위한 방법이 알려져 있기는 하지만, 이들 방법 중 다수는 상업적으로 사용하기에 부적합하다.
따라서, 고도로 정제된 스테비올 글리코사이드 조성물을 비롯한 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물을 제조하기 위한 간단하고, 효율적이며, 경제적인 방법에 대한 필요성이 남아 있다.
하기 출원들은 전체적으로 본 출원에 참고로 포함된다: 2018년 4월 10일자로 출원된 국제 특허 출원 공개 PCT/US2018/026920호; 2018년 3월 16일자로 출원된 미국 가출원 제62/644,065호; 및 2018년 3월 17일자로 출원된 미국 가출원 제62/644,407호에 기재되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 약어 용어 "reb"는 "레바우디오사이드"를 지칭한다. 이들 두 용어는 동일한 의미를 가지며, 상호교환 가능하게 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "생물촉매작용" 또는 "생물촉매적"은 유기 화합물 상에서의 단일 단계 또는 다단계 화학적 변환이 가능한 천연 또는 유전자 조작된 생물촉매, 예컨대 효소, 또는 하나 이상의 효소를 포함하는 세포의 사용을 지칭한다. 생물촉매작용 공정은 발효, 생합성, 생물전환 및 생물변환 공정을 포함한다. 단리된 효소 및 전세포 생물촉매작용 방법 둘 모두가 당업계에 알려져 있다. 생물촉매 단백질 효소는 천연 발생 또는 재조합 단백질일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "스테비올 글리코사이드(들)"는 스테비올의 글리코사이드를 지칭하는데, 이에는 천연 발생 스테비올 글리코사이드, 예를 들어 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a, 합성 스테비올 글리코사이드, 예를 들어 효소적으로 글루코실화된 스테비올 글리코사이드 및 이들의 조합이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "SvG7"은 임의의 천연 발생 스테비올 글리코사이드 또는 임의의 합성 스테비올 글리코사이드 - 효소적으로 글루코실화된 스테비올 글리코사이드를 포함함 -, 및 이들의 조합을 지칭하며, 구체적으로는 7개의 글루코스 잔기가 공유적으로 부착된 스테비올을 포함하는 분자를 지칭하는데, 이에는 reb 1a, reb 1b, reb 1c, reb 1d, reb 1e, reb 1f, reb 1g, reb 1h, reb 1i, reb 1j, reb 1k, reb 1l, reb 1m, reb 1n, 및/또는 reb 2a가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. SvG7은 7개의 글루코스 잔기가 공유적으로 부착된 단일 스테비올 글리코사이드 또는 7개의 글루코스 잔기가 공유적으로 부착된 스테비올 글리코사이드들의 혼합물을 지칭할 수 있다.
본 발명은 유기 기질을 포함하는 출발 조성물을 미생물 세포 및/또는 효소 제제와 접촉시켜, 목표 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물을 생성함으로써, 목표 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물을 제조하기 위한 방법을 제공한다.
출발 조성물은 적어도 하나의 탄소 원자를 포함하는 임의의 유기 화합물일 수 있다. 일 실시 형태에서, 출발 조성물은 스테비올 글리코사이드, 폴리올 또는 당 알코올, 다양한 탄수화물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
목표 스테비올 글리코사이드는 임의의 스테비올 글리코사이드일 수 있다. 일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a, SvG7 또는 합성 스테비올 글리코사이드이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1a이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1b이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1c이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1d이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1e이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1f이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1g이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1h이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1i이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1j이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1k이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1l이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1m이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1n이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 2a이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 M4이다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 SvG7이다.
일부 바람직한 실시 형태에서, 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시킬 수 있는, 하나 이상의 효소를 포함하는 효소 제제, 또는 하나 이상의 효소를 포함하는 미생물 세포가 사용된다. 효소는 세포 표면 상에 그리고/또는 세포 내부에 위치될 수 있다. 효소 제제는 전세포(whole cell) 현탁액 형태로, 조 용해물(crude lysate) 형태로, 또는 정제된 효소(들)로서 제공될 수 있다. 효소 제제는 자유로운 형태일 수 있거나 무기 또는 유기 물질로부터 제조된 고체 지지체에 고정화될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 미생물 세포는 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시키는 데 필요한 효소 및 이를 인코딩하는 유전자를 포함한다. 따라서, 본 발명은 또한 유기 기질을 포함하는 출발 조성물을, 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시킬 수 있는 적어도 하나의 효소를 포함하는 미생물 세포와 접촉시켜, 적어도 하나의 목표 스테비올 글리코사이드를 포함하는 배지를 생성함으로써, 목표 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물을 제조하기 위한 방법을 제공한다.
출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시키는 데 필요한 효소는 스테비올 생합성 효소, NDP-글루코실트랜스퍼라제(NGT), ADP-글루코실트랜스퍼라제(AGT), CDP-글루코실트랜스퍼라제(CGT), GDP-글루코실트랜스퍼라제(GGT), TDP-글루코실트랜스퍼라제(TDP), UDP-글루코실트랜스퍼라제(UGT) 및/또는 NDP-재순환 효소, ADP-재순환 효소, CDP-재순환 효소, GDP-재순환 효소, TDP-재순환 효소, 및/또는 UDP-재순환 효소를 포함한다.
일 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소는 메발로네이트(MVA) 경로 효소를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소는 비-메발로네이트 2-C-메틸-D-에리트리톨-4-포스페이트 경로(MEP/DOXP) 효소를 포함한다.
일 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소는 제라닐제라닐 다이포스페이트 신타제, 코팔릴 다이포스페이트 신타제, 카우렌 신타제, 카우렌 옥시다제, 카우렌산 13-하이드록실라제(KAH), 스테비올 신테타제, 데옥시자일룰로스 5-포스페이트 신타제(DXS), D-1-데옥시자일룰로스 5-포스페이트 환원이성질화 효소(DXR), 4-다이포스포시티딜-2-C-메틸-D-에리트리톨 신타제(CMS), 4-다이포스포시티딜-2-C-메틸-D-에리트리톨 키나제(CMK), 4-다이포스포시티딜-2-C-메틸-D-에리트리톨 2,4-사이클로다이포스페이트 신타제(MCS), 1-하이드록시-2-메틸-2(E)-부테닐 4-다이포스페이트 신타제(HDS), 1-하이드록시-2-메틸-2(E)-부테닐 4-다이포스페이트 리덕타제(HDR), 아세토아세틸-CoA 티올라제, 절단된 HMG-CoA 리덕타제, 메발로네이트 키나제, 포스포메발로네이트 키나제, 메발로네이트 피로포스페이트 데카르복실라제, 사이토크롬 P450 리덕타제 등을 포함하는 군으로부터 선택된다.
UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올 및/또는 스테비올 글리코사이드 기질에 첨가하여 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제일 수 있다.
이하에서 사용되는 바와 같이, 용어 "SuSy_At"는, 달리 명시되지 않는 한, 실시예 1에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 "서열 번호 1"을 갖는 수크로스 신타제, 또는 서열 번호 1 폴리펩티드뿐만 아니라 그러한 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자와 실질적인(85% 초과, 86% 초과, 87% 초과, 88% 초과, 89% 초과, 90% 초과, 91% 초과, 92% 초과, 93% 초과, 94% 초과, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과, 99% 초과) 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다.
이하에서 사용되는 바와 같이, 용어 "UGTSl2"는, 달리 명시되지 않는 한, 실시예 1에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 "서열 번호 2"를 갖는 UDP-글루코실트랜스퍼라제, 또는 서열 번호 2 폴리펩티드뿐만 아니라 그러한 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자와 실질적인(85% 초과, 86% 초과, 87% 초과, 88% 초과, 89% 초과, 90% 초과, 91% 초과, 92% 초과, 93% 초과, 94% 초과, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과, 99% 초과) 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다.
이하에서 사용되는 바와 같이, 용어 "UGT76G1"은, 달리 명시되지 않는 한, 실시예 1에 기재된 바와 같은 아미노산 서열 "서열 번호 3"을 갖는 UDP-글루코실트랜스퍼라제, 또는 서열 번호 3 폴리펩티드뿐만 아니라 그러한 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자와 실질적인(85% 초과, 86% 초과, 87% 초과, 88% 초과, 89% 초과, 90% 초과, 91% 초과, 92% 초과, 93% 초과, 94% 초과, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과, 99% 초과) 아미노산 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다.
일 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소 및 UDP-글루코실트랜스퍼라제는 미생물 세포에서 생성된다. 미생물 세포는, 예를 들어 E. 콜라이(E. coli), 사카로미세스 종(Saccharomyces sp.), 아스페르길루스 종(Aspergillus sp.), 피키아 종(Pichia sp.), 바실루스 종(Bacillus sp.), 야로위아 종(Yarrowia sp.) 등일 수 있다. 다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 합성된다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, UGT85C2, UGT76G1, UGT91D2, UGTSl2, EUGT11, 및 이들 폴리펩티드뿐만 아니라 이들 UGT를 코딩하는 단리된 핵산 분자와 실질적인(85% 초과, 86% 초과, 87% 초과, 88% 초과, 89% 초과, 90% 초과, 91% 초과, 92% 초과, 93% 초과, 94% 초과, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과, 99% 초과) 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT를 포함하는 군으로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소, UGT, 및 UDP-글루코스 재순환 시스템은 하나의 미생물(미생물 세포)에 존재한다. 미생물은, 예를 들어 E. 콜라이, 사카로미세스 종, 아스페르길루스 종, 피키아 종, 바실루스 종, 야로위아 종일 수 있다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 C13에서 -OH 작용기를 갖는 스테비올 또는 임의의 출발 스테비올 글리코사이드에 부가하여 C13에서 -O-글루코스 베타-글루코피라노사이드 글리코사이드 결합을 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 C19에서 -COOH 작용기를 갖는 스테비올 또는 임의의 출발 스테비올 글리코사이드에 부가하여 C19에서 -COO-글루코스 베타-글루코피라노사이드 글리코사이드 결합을 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C19 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→2 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C19 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→3 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C19 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→4 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C19 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→6 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C13 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→2 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C13 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→3 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C13 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→4 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C13 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→6 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올에 부가하여 스테비올모노사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올에 부가하여 스테비올모노사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드에 부가하여 스테비올바이오사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드에 부가하여 스테비올바이오사이드 D를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드에 부가하여 루부소사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드 A에 부가하여 루부소사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드 A에 부가하여 스테비올바이오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드 A에 부가하여 스테비올바이오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드에 부가하여 레바우디오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드에 부가하여 스테비오사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 D에 부가하여 레바우디오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 D에 부가하여 레바우디오사이드 G를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 루부소사이드에 부가하여 스테비오사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 루부소사이드에 부가하여 레바우디오사이드 G를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 루부소사이드에 부가하여 스테비오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 루부소사이드에 부가하여 스테비오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 A에 부가하여 스테비오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 A에 부가하여 스테비오사이드 C를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 B에 부가하여 스테비오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 B에 부가하여 스테비오사이드 C를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 B에 부가하여 레바우디오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드에 부가하여 레바우디오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드에 부가하여 레바우디오사이드 E를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드에 부가하여 레바우디오사이드 E2를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 G에 부가하여 레바우디오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 G에 부가하여 레바우디오사이드 E4를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 G에 부가하여 레바우디오사이드 E6을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 E를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 E4를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 E3을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 B에 부가하여 레바우디오사이드 E2를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 B에 부가하여 레바우디오사이드 E6을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 B에 부가하여 레바우디오사이드 E3을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 C에 부가하여 레바우디오사이드 E3을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 D를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 I를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E에 부가하여 레바우디오사이드 D를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E에 부가하여 레바우디오사이드 AM을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E2에 부가하여 레바우디오사이드 I를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E2에 부가하여 레바우디오사이드 AM을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E4에 부가하여 레바우디오사이드 D를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E4에 부가하여 레바우디오사이드 D7을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E6에 부가하여 레바우디오사이드 I를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E6에 부가하여 레바우디오사이드 D7을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E3에 부가하여 레바우디오사이드 AM을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E3에 부가하여 레바우디오사이드 D7을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 D에 부가하여 레바우디오사이드 M을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 I에 부가하여 레바우디오사이드 M을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 AM에 부가하여 레바우디오사이드 M을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 AM에 부가하여 레바우디오사이드 M4를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 D7에 부가하여 레바우디오사이드 M을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1a를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1b를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1c를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1d를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1e를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1f를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1g를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1h를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1i를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1j를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1k를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1l을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1m을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1n을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M4에 부가하여 레바우디오사이드 2a를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
선택적으로, 본 발명의 방법은 UDP를 재순환시켜 UDP-글루코스를 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 상기 방법은 재순환 촉매 및 재순환 기질을 제공함으로써 UDP를 재순환시키는 단계를 포함하며, 이에 따라 스테비올 및/또는 스테비올 글리코사이드 기질의 목표 스테비올 글리코사이드로의 생물변환이 촉매량의 UDP-글루코실트랜스퍼라제 및 UDP-글루코스를 사용하여 수행된다.
일 실시 형태에서, 재순환 촉매는 수크로스 신타제 SuSy_At, 또는 SuSy_At와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 수크로스 신타제이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코스 재순환 촉매를 위한 재순환 기질은 수크로스이다.
선택적으로, 본 발명의 방법은 당 공여체로서 올리고당 또는 다당을 사용하여 수용체 목표 스테비올 글리코사이드 분자를 변형시키는 트랜스글리코시다제의 사용을 추가로 포함한다. 비제한적인 예에는 사이클로덱스트린 글리코실트랜스퍼라제(CGTase), 프룩토푸라노시다제, 아밀라제, 사카라제, 글루코수크라제, 베타-h-프룩토시다제, 베타-프룩토시다제, 수크라제, 프룩토실인버타제, 알칼리성 인버타제, 산 인버타제, 프룩토푸라노시다제가 포함된다. 일부 실시 형태에서, 글루코스, 및 글루코스 이외의 당(들) - 프룩토스, 자일로스, 람노스, 아라비노스, 데옥시글루코스, 갈락토스가 포함되지만 이로 한정되지 않음 - 이 수용체 목표 스테비올 글리코사이드에 전달된다. 일 실시 형태에서, 수용체 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 및/또는 레바우디오사이드 1n이다. 다른 실시 형태에서, 수용체 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 2a이다. 다른 실시 형태에서, 수용체 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 M4이다. 다른 실시 형태에서, 수용체 스테비올 글리코사이드는 SvG7이다.
선택적으로, 본 발명의 방법은 목표 스테비올 글리코사이드를 배지로부터 분리하여 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드 조성물을 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 목표 스테비올 글리코사이드는, 예를 들어 결정화, 막에 의한 분리, 원심분리, 추출, 크로마토그래피 분리 또는 그러한 방법들의 조합과 같은 적어도 하나의 적합한 방법에 의해 분리될 수 있다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 미생물 내에서 생성될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 배지 중에 분비될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 방출된 스테비올 글리코사이드는 배지로부터 연속적으로 제거될 수 있다. 또 다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 전환 반응의 완료 후에 분리된다.
일 실시 형태에서, 분리는 무수 기준으로 약 80 중량% 초과의 목표 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물, 즉 고도로 정제된 스테비올 글리코사이드 조성물을 생성한다. 다른 실시 형태에서, 분리는 약 90 중량% 초과의 목표 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물을 생성한다. 특정 실시 형태에서, 조성물은 약 95 중량% 초과의 목표 스테비올 글리코사이드를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 조성물은 약 99 중량% 초과의 목표 스테비올 글리코사이드를 포함한다.
목표 스테비올 글리코사이드는 수화물, 용매화물, 무수 형태 또는 이들의 조합을 포함한 임의의 다형 형태 또는 비정질 형태일 수 있다.
정제된 목표 스테비올 글리코사이드는 감미료, 향미 개질제, 개질 특성을 갖는 향미료, 및/또는 거품발생 억제제로서 소비 제품에 사용될 수 있다. 적합한 소비자 제품은 식품, 음료, 약제학적 조성물, 담배 제품, 뉴트라슈티컬(nutraceutical) 조성물, 구강 위생 조성물, 및 화장용 조성물을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
도 1a 내지 도 1o는 각각 일부 SvG7 스테비올 글리코사이드, 즉 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n 및 레바우디오사이드 2a의 화학 구조를 나타낸다.
도 1p는 레바우디오사이드 M4의 화학 구조를 나타낸다.
도 2a 내지 도 2k는 스테비올 및 다양한 중간 스테비올 글리코사이드로부터 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a, 레바우디오사이드 M4 및 다양한 스테비올 글리코사이드를 생성하는 경로를 나타낸다.
도 3a 내지 도 3n은 효소 UGTSl2 및 UGT76G1을 사용한 레바우디오사이드 A로부터의, 각각 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m 및 레바우디오사이드 1n의 생물촉매적 생성, 및 수크로스 신타제 SuSy_At를 통한 UDP의 UDP-글루코스로의 동시 재순환을 나타낸다.
도 3o 및 도 3p는 효소 UGTSl2 및 UGT76G1을 사용한 스테비오사이드로부터의, 각각 레바우디오사이드 2a 및 레바우디오사이드 M4의 생물촉매적 생성, 및 수크로스 신타제 SuSy_At를 통한 UDP의 UDP-글루코스로의 동시 재순환을 나타낸다.
도 3q 및 도 3r은 효소 UGTSl2 및 UGT76G1을 사용한 레바우디오사이드 AM으로부터의, 각각 레바우디오사이드 2a 및 레바우디오사이드 M4의 생물촉매적 생성, 및 수크로스 신타제 SuSy_At를 통한 UDP의 UDP-글루코스로의 동시 재순환을 나타낸다.
도 3s는 효소 UGTSl2 및 UGT76G1을 사용한 레바우디오사이드 M4로부터의 레바우디오사이드 2a의 생물촉매적 생성, 및 수크로스 신타제 SuSy_At를 통한 UDP의 UDP-글루코스로의 동시 재순환을 나타낸다.
도 4는 스테비오사이드의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다. 20.958분의 체류 시간을 갖는 피크는 스테비오사이드에 상응한다. 20.725분의 체류 시간을 갖는 피크는 레바우디오사이드 A에 상응한다. 32.925분에서의 피크는 레바우디오사이드 B에 상응한다. 33.930분에서의 피크는 스테비오바이오사이드에 상응한다.
도 5는 스테비오사이드로부터의 SvG7 분자의 생물촉매적 생성의 산물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다. 6.459분에서의 피크는 레바우디오사이드 2a에 상응한다. 9.825분에서의 피크는 레바우디오사이드 AM에 상응한다. 13.845분에서의 피크는 레바우디오사이드 M에 상응한다. 32.974분에서의 피크는 레바우디오사이드 B에 상응한다. 33.979분에서의 피크는 스테비오바이오사이드에 상응한다.
도 6은 HPLC에 의한 정제 후의 레바우디오사이드 2a의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다. 6.261분의 체류 시간을 갖는 피크는 레바우디오사이드 2a에 상응한다.
도 7은 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 1H NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 8은 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 HSQC 스펙트럼을 나타낸다.
도 9는 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 H,H COSY 스펙트럼을 나타낸다.
도 10은 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 HMBC 스펙트럼을 나타낸다.
도 11a는 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 HSQC-TOCSY 스펙트럼을 나타낸다. 도 11b는 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 1D-NOESY 스펙트럼을 나타낸다.
도 12a 및 도 12b는 각각 레바우디오사이드 2a의 LC 크로마토그램 및 질량 스펙트럼을 나타낸다.
도 1p는 레바우디오사이드 M4의 화학 구조를 나타낸다.
도 2a 내지 도 2k는 스테비올 및 다양한 중간 스테비올 글리코사이드로부터 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a, 레바우디오사이드 M4 및 다양한 스테비올 글리코사이드를 생성하는 경로를 나타낸다.
도 3a 내지 도 3n은 효소 UGTSl2 및 UGT76G1을 사용한 레바우디오사이드 A로부터의, 각각 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m 및 레바우디오사이드 1n의 생물촉매적 생성, 및 수크로스 신타제 SuSy_At를 통한 UDP의 UDP-글루코스로의 동시 재순환을 나타낸다.
도 3o 및 도 3p는 효소 UGTSl2 및 UGT76G1을 사용한 스테비오사이드로부터의, 각각 레바우디오사이드 2a 및 레바우디오사이드 M4의 생물촉매적 생성, 및 수크로스 신타제 SuSy_At를 통한 UDP의 UDP-글루코스로의 동시 재순환을 나타낸다.
도 3q 및 도 3r은 효소 UGTSl2 및 UGT76G1을 사용한 레바우디오사이드 AM으로부터의, 각각 레바우디오사이드 2a 및 레바우디오사이드 M4의 생물촉매적 생성, 및 수크로스 신타제 SuSy_At를 통한 UDP의 UDP-글루코스로의 동시 재순환을 나타낸다.
도 3s는 효소 UGTSl2 및 UGT76G1을 사용한 레바우디오사이드 M4로부터의 레바우디오사이드 2a의 생물촉매적 생성, 및 수크로스 신타제 SuSy_At를 통한 UDP의 UDP-글루코스로의 동시 재순환을 나타낸다.
도 4는 스테비오사이드의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다. 20.958분의 체류 시간을 갖는 피크는 스테비오사이드에 상응한다. 20.725분의 체류 시간을 갖는 피크는 레바우디오사이드 A에 상응한다. 32.925분에서의 피크는 레바우디오사이드 B에 상응한다. 33.930분에서의 피크는 스테비오바이오사이드에 상응한다.
도 5는 스테비오사이드로부터의 SvG7 분자의 생물촉매적 생성의 산물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다. 6.459분에서의 피크는 레바우디오사이드 2a에 상응한다. 9.825분에서의 피크는 레바우디오사이드 AM에 상응한다. 13.845분에서의 피크는 레바우디오사이드 M에 상응한다. 32.974분에서의 피크는 레바우디오사이드 B에 상응한다. 33.979분에서의 피크는 스테비오바이오사이드에 상응한다.
도 6은 HPLC에 의한 정제 후의 레바우디오사이드 2a의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다. 6.261분의 체류 시간을 갖는 피크는 레바우디오사이드 2a에 상응한다.
도 7은 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 1H NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 8은 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 HSQC 스펙트럼을 나타낸다.
도 9는 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 H,H COSY 스펙트럼을 나타낸다.
도 10은 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 HMBC 스펙트럼을 나타낸다.
도 11a는 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 HSQC-TOCSY 스펙트럼을 나타낸다. 도 11b는 레바우디오사이드 2a(500 ㎒, 피리딘-d5)의 1D-NOESY 스펙트럼을 나타낸다.
도 12a 및 도 12b는 각각 레바우디오사이드 2a의 LC 크로마토그램 및 질량 스펙트럼을 나타낸다.
본 발명은 유기 기질을 포함하는 출발 조성물을 미생물 세포 및/또는 효소 제제와 접촉시켜, 목표 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물을 생성함으로써, 목표 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물을 제조하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 하나의 목적은 다양한 출발 조성물로부터 목표 스테비올 글리코사이드, 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a, 및/또는 SvG7 또는 합성 스테비올 글리코사이드를 제조하기 위한 효율적인 생물촉매적 방법을 제공하는 것이다.
출발 조성물
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "출발 조성물"은 적어도 하나의 탄소 원자를 포함하는 하나 이상의 유기 화합물을 함유하는 임의의 조성물(일반적으로 수용액)을 지칭한다.
일 실시 형태에서, 출발 조성물은 스테비올, 스테비올 글리코사이드, 폴리올 및 다양한 탄수화물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비올, 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 및/또는 레바우디오사이드 M4 또는 스테비아 레바우디아나 식물에서 발생되는 스테비올의 다른 글리코사이드, 합성 스테비올 글리코사이드, 예를 들어 효소적으로 글루코실화된 스테비올 글리코사이드 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 출발 조성물은 스테비올이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비올모노사이드이다.
또 다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비올모노사이드 A이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비올바이오사이드이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비올바이오사이드 D이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 루부소사이드이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 루부소사이드이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비올바이오사이드 A이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비올바이오사이드 B이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 B이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비오사이드이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 G이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비오사이드 A이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비오사이드 B이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 스테비오사이드 C이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 A이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E2이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E4이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E6이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E3이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 D이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 I이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 AM이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 D7이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 M이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 M4이다.
용어 "폴리올"은 하나 초과의 하이드록실 기를 함유하는 분자를 지칭한다. 폴리올은, 2개, 3개, 및 4개의 하이드록실 기를 각각 함유하는 다이올, 트라이올, 또는 테트라올일 수 있다. 폴리올은 또한 4개 초과의 하이드록실 기를 함유할 수 있으며, 이는, 예를 들어, 5개, 6개, 또는 7개의 하이드록실 기를 각각 함유하는 펜타올, 헥사올, 헵타올 등일 수 있다. 추가적으로, 폴리올은 또한 탄수화물의 환원된 형태인 당 알코올, 다가 알코올, 또는 폴리알코올일 수 있는데, 여기서는 카르보닐 기(알데하이드 또는 케톤, 환원당(reducing sugar))가 1차 또는 2차 하이드록실 기로 환원되었다. 폴리올의 예에는 에리트리톨, 말티톨, 만니톨, 소르비톨, 락티톨, 자일리톨, 이노시톨, 아이소말트, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 트레이톨, 갈락티톨, 수소화 아이소말툴로스, 환원된 아이소말토-올리고당, 환원된 자일로-올리고당, 환원된 겐티오-올리고당, 환원된 말토스 시럽, 환원된 글루코스 시럽, 수소화 전분 가수분해물, 폴리글리시톨 및 당 알코올 또는 환원될 수 있는 임의의 다른 탄수화물이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
용어 "탄수화물"은 일반 화학식 (CH2O)n(여기서, n은 3 내지 30임)의 다수의 하이드록실 기로 치환된 알데하이드 또는 케톤 화합물뿐만 아니라 이들의 올리고머 및 중합체를 지칭한다. 게다가, 본 발명의 탄수화물은 하나 이상의 위치에서 치환되거나 탈산소화될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 탄수화물은 비변형된 탄수화물, 탄수화물 유도체, 치환된 탄수화물, 및 변형된 탄수화물을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 어구 "탄수화물 유도체", "치환된 탄수화물", 및 "변형된 탄수화물"은 동의어이다. 변형된 탄수화물은 적어도 하나의 원자가 부가, 제거, 또는 치환된 임의의 탄수화물, 또는 이들의 조합을 의미한다. 따라서, 탄수화물 유도체 또는 치환된 탄수화물은 치환 및 비치환된 단당, 이당, 올리고당, 및 다당을 포함한다. 탄수화물 유도체 또는 치환된 탄수화물은, 탄수화물 유도체 또는 치환된 탄수화물이 감미료 조성물의 단맛을 개선하도록 기능한다면, 선택적으로 임의의 상응하는 C-위치에서 탈산소화될 수 있고/있거나, 수소, 할로겐, 할로알킬, 카르복실, 아실, 아실옥시, 아미노, 아미도, 카르복실 유도체, 알킬아미노, 다이알킬아미노, 아릴아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 설포, 메르캅토, 이미노, 설포닐, 설페닐, 설피닐, 설파모일, 카르보알콕시, 카르복스아미도, 포스포닐, 포스피닐, 포스포릴, 포스피노, 티오에스테르, 티오에테르, 옥시미노, 하이드라지노, 카르바밀, 포스포, 포스포네이토, 또는 임의의 다른 실행가능한 작용기와 같은 하나 이상의 모이어티(moiety)로 치환될 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 탄수화물의 예에는 타가토스, 트레할로스, 갈락토스, 람노스, 다양한 사이클로덱스트린, 환형 올리고당, 다양한 유형의 말토덱스트린, 덱스트란, 수크로스, 글루코스, 리불로스, 프룩토스, 트레오스, 아라비노스, 자일로스, 릭소스, 알로스, 알트로스, 만노스, 이도스, 락토스, 말토스, 전화당, 아이소트레할로스, 네오트레할로스, 아이소말툴로스, 에리트로스, 데옥시리보스, 굴로스, 이도스, 탈로스, 에리트룰로스, 자일룰로스, 프시코스, 투라노스, 셀로바이오스, 아밀로펙틴, 글루코사민, 만노사민, 푸코스, 글루쿠론산, 글루콘산, 글루코노-락톤, 아베쿠오스, 갈락토사민, 비트 올리고당, 아이소말토-올리고당(아이소말토스, 아이소말토트라이오스, 파노스 등), 자일로-올리고당(자일로트라이오스, 자일로바이오스 등), 자일로-종결된 올리고당, 겐티오-올리고당(겐티오바이오스, 겐티오트라이오스, 겐티오테트라오스 등), 소르보스, 니게로-올리고당, 팔라티노스 올리고당, 프룩토올리고당(케스토스, 니스토스 등), 말토테트라올, 말토트라이올, 말토-올리고당(말토트라이오스, 말토테트라오스, 말토펜타오스, 말토헥사오스, 말토헵타오스 등), 전분, 이눌린, 이눌로-올리고당, 락툴로스, 멜리바이오스, 라피노스, 리보스, 이성질화 액체 당, 예컨대 고 프룩토스 옥수수 시럽, 커플링 당, 및 대두 올리고당이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 추가적으로, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 탄수화물은 D-배치 또는 L-배치 중 어느 하나일 수 있다.
출발 조성물은 합성 또는 정제되거나(부분적으로 또는 전체적으로), 구매가능하거나 제조될 수 있다.
일 실시 형태에서, 출발 조성물은 글리세롤이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물은 글루코스이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물은 람노스이다.
또 다른 실시 형태에서, 출발 조성물은 수크로스이다.
또 다른 실시 형태에서, 출발 조성물은 전분이다.
다른 실시 형태에서, 출발 조성물은 말토덱스트린이다.
또 다른 실시 형태에서, 출발 조성물은 셀룰로스이다.
또 다른 실시 형태에서, 출발 조성물은 아밀로스이다.
출발 조성물의 유기 화합물(들)은 본 명세서에 기재된 바와 같이 목표 스테비올 글리코사이드(들)의 생성을 위한 기질(들)로서의 역할을 한다.
목표 스테비올 글리코사이드
본 방법의 목표 스테비올 글리코사이드는 본 명세서에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있는 임의의 스테비올 글리코사이드일 수 있다. 일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a, SvG7 또는 스테비아 레바우디아나 식물에서 발생되는 스테비올의 다른 글리코사이드, 합성 스테비올 글리코사이드, 예를 들어 효소적으로 글루코실화된 스테비올 글리코사이드 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비올모노사이드이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비올모노사이드 A이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비올바이오사이드이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비올바이오사이드 D이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 루부소사이드이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비올바이오사이드 A이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비올바이오사이드 B이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 B이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비오사이드이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 G이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비오사이드 A이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비오사이드 B이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 스테비오사이드 C이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 A이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E2이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E4이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E6이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 E3이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 D이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 I이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 AM이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 D7이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 M이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 M4이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1a이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1b이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1c이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1d이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1e이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1f이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1g이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1h이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1i이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1j이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1k이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1l이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1m이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1n이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 2a이다.
다른 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드는 SvG7이다.
목표 스테비올 글리코사이드는 수화물, 용매화물, 무수 형태 또는 이들의 조합을 포함한 임의의 다형 형태 또는 비정질 형태일 수 있다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비올모노사이드의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비올모노사이드 A의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비올바이오사이드의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비올바이오사이드 D의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 루부소사이드의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비올바이오사이드 A의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비올바이오사이드 B의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 B의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비오사이드의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 G의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비오사이드 A의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비오사이드 B의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 스테비오사이드 C의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 E의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 E2의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 E4의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 E6의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 E3의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 D의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 I의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 AM의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 D7의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 E3의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M4의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1a의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1b의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1c의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1d의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1e의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1f의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1g의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1h의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1i의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1j의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1k의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1l의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1m의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 1n의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 2a의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 SvG7의 생성을 위한 생물촉매적 공정이다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1a의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1b의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1c의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1d의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1e의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1f의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1g의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1h의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1i의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1j의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1k의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1l의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1m의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1n의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 스테비오사이드 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 2a의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 스테비오사이드 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 M4의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 AM 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 2a의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 AM 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 M4의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M4 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 2a의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1a의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1b의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1c의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1d의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1e의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1f의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1g의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1h의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1i의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1j의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1k의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1l의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1m의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 1n의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M4 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 레바우디오사이드 2a의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 스테비오사이드 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 SvG7의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 SvG7의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 스테비오사이드, 레바우디오사이드 A 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 SvG7의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 AM 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 SvG7의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 SvG7의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 레바우디오사이드 M4 및 UDP-글루코스를 포함하는 출발 조성물로부터의 SvG7의 생성을 위한 생물촉매적 공정을 제공한다.
선택적으로, 본 발명의 방법은 목표 스테비올 글리코사이드를 배지로부터 분리하여 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드 조성물을 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 목표 스테비올 글리코사이드는, 예를 들어 결정화, 막에 의한 분리, 원심분리, 추출, 크로마토그래피 분리 또는 그러한 방법들의 조합과 같은 임의의 적합한 방법에 의해 분리될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법은 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드 조성물을 생성한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "고도로 정제된"은 무수(건조) 기준으로 약 80 중량% 초과의 목표 스테비올 글리코사이드를 갖는 조성물을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드 조성물은 무수(건조) 기준으로 약 90 중량% 초과의 목표 스테비올 글리코사이드를 함유하며, 예를 들어 건조 기준으로 약 91% 초과, 약 92% 초과, 약 93% 초과, 약 94% 초과, 약 95% 초과, 약 96% 초과, 약 97% 초과, 약 98% 초과 또는 약 99% 초과의 목표 스테비올 글리코사이드 함량을 함유한다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드가 레바우디오사이드 M4인 경우, 본 명세서에 기재된 방법은 건조 기준으로 약 90 중량% 초과의 레바우디오사이드 M4 함량을 갖는 조성물을 제공한다. 다른 특정 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드가 레바우디오사이드 M4인 경우, 본 명세서에 기재된 방법은 건조 기준으로 약 95 중량% 초과의 함량을 포함하는 조성물을 제공한다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드가 레바우디오사이드 2a인 경우, 본 명세서에 기재된 방법은 건조 기준으로 약 90 중량% 초과의 레바우디오사이드 2a 함량을 갖는 조성물을 제공한다. 다른 특정 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드가 레바우디오사이드 2a인 경우, 본 명세서에 기재된 방법은 건조 기준으로 약 95 중량% 초과의 함량을 포함하는 조성물을 제공한다.
일 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드가 SvG7인 경우, 본 명세서에 기재된 방법은 건조 기준으로 약 90 중량% 초과의 SvG7 함량을 갖는 조성물을 제공한다. 다른 특정 실시 형태에서, 목표 스테비올 글리코사이드가 SvG7인 경우, 본 명세서에 기재된 방법은 건조 기준으로 약 95 중량% 초과의 SvG7 함량을 포함하는 조성물을 제공한다.
미생물 및 효소 제제
본 발명의 일 실시 형태에서, 미생물(미생물 세포) 및/또는 효소 제제가 목표 스테비올 글리코사이드를 생성하기 위한 출발 조성물을 함유하는 배지와 접촉된다.
효소는 전세포 현탁액, 조 용해물, 정제된 효소 또는 이들의 조합 형태로 제공될 수 있다. 일 실시 형태에서, 생물촉매는 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시킬 수 있는 정제된 효소이다. 다른 실시 형태에서, 생물촉매는 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시킬 수 있는 적어도 하나의 효소를 포함하는 조 용해물이다. 또 다른 실시 형태에서, 생물촉매는 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시킬 수 있는 적어도 하나의 효소를 포함하는 전세포 현탁액이다.
다른 실시 형태에서, 생물촉매는 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시킬 수 있는 효소(들)를 포함하는 하나 이상의 미생물 세포이다. 효소는 세포의 표면 상에 위치되거나, 세포 내부에 위치되거나, 세포의 표면 상 및 세포 내부 둘 모두에 위치될 수 있다.
출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시키기에 적합한 효소는 스테비올 생합성 효소, NDP-글루코실트랜스퍼라제(NGT), ADP-글루코실트랜스퍼라제(AGT), CDP-글루코실트랜스퍼라제(CGT), GDP-글루코실트랜스퍼라제(GGT), TDP-글루코실트랜스퍼라제(TDP), UDP-글루코실트랜스퍼라제(UGT)를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 선택적으로, 그것은 NDP-재순환 효소(들), ADP-재순환 효소(들), CDP-재순환 효소(들), GDP-재순환 효소(들), TDP-재순환 효소(들), 및/또는 UDP-재순환 효소(들)를 포함할 수 있다.
일 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소는 메발로네이트(MVA) 경로 효소를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소는 비-메발로네이트 2-C-메틸-D-에리트리톨-4-포스페이트 경로(MEP/DOXP) 효소를 포함한다.
일 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소는 제라닐제라닐 다이포스페이트 신타제, 코팔릴 다이포스페이트 신타제, 카우렌 신타제, 카우렌 옥시다제, 카우렌산 13-하이드록실라제(KAH), 스테비올 신테타제, 데옥시자일룰로스 5-포스페이트 신타제(DXS), D-1-데옥시자일룰로스 5-포스페이트 환원이성질화 효소(DXR), 4-다이포스포시티딜-2-C-메틸-D-에리트리톨 신타제(CMS), 4-다이포스포시티딜-2-C-메틸-D-에리트리톨 키나제(CMK), 4-다이포스포시티딜-2-C-메틸-D-에리트리톨 2,4-사이클로다이포스페이트 신타제(MCS), 1-하이드록시-2-메틸-2(E)-부테닐 4-다이포스페이트 신타제(HDS), 1-하이드록시-2-메틸-2(E)-부테닐 4-다이포스페이트 리덕타제(HDR), 아세토아세틸-CoA 티올라제, 절단된 HMG-CoA 리덕타제, 메발로네이트 키나제, 포스포메발로네이트 키나제, 메발로네이트 피로포스페이트 데카르복실라제, 사이토크롬 P450 리덕타제 등을 포함하는 군으로부터 선택된다.
UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올 및/또는 스테비올 글리코사이드 기질에 첨가하여 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제일 수 있다.
일 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소 및 UDP-글루코실트랜스퍼라제는 미생물 세포에서 생성된다. 미생물 세포는, 예를 들어 E. 콜라이, 사카로미세스 종, 아스페르길루스 종, 피키아 종, 바실루스 종, 야로위아 종 등일 수 있다. 다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 합성된다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, UGT85C2, UGT76G1, UGT91D2, UGTSl2, EUGT11, 및 이들 폴리펩티드뿐만 아니라 이들 UGT를 코딩하는 단리된 핵산 분자와 실질적인(85% 초과, 86% 초과, 87% 초과, 88% 초과, 89% 초과, 90% 초과, 91% 초과, 92% 초과, 93% 초과, 94% 초과, 95% 초과, 96% 초과, 97% 초과, 98% 초과, 99% 초과) 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT를 포함하는 군으로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 스테비올 생합성 효소, UGT, 및 UDP-글루코스 재순환 시스템은 하나의 미생물(미생물 세포)에 존재한다. 미생물은, 예를 들어, E. 콜라이, 사카로미세스 종, 아스페르길루스 종, 피키아 종, 바실루스 종, 야로위아 종일 수 있다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 C13에서 -OH 작용기를 갖는 스테비올 또는 임의의 출발 스테비올 글리코사이드에 부가하여 C13에서 -O-글루코스 베타-글루코피라노사이드 글리코사이드 결합을 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 C19에서 -COOH 작용기를 갖는 스테비올 또는 임의의 출발 스테비올 글리코사이드에 부가하여 C19에서 -COO-글루코스 베타-글루코피라노사이드 글리코사이드 결합을 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C19 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→2 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C19 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→3 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C19 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→4 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C19 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→6 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C13 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→2 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C13 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→3 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C13 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→4 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 임의의 출발 스테비올 글리코사이드의 C13 측에 있는 임의의 기존의 글루코스에 부가하여, 새로 형성된 글리코사이드 결합(들)에서 적어도 하나의 베타 1→6 글루코피라노사이드 글리코사이드 결합(들)을 갖는 적어도 하나의 추가의 글루코스를 갖는 목표 스테비올 글리코사이드를 제공할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올에 부가하여 스테비올모노사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올에 부가하여 스테비올모노사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드에 부가하여 스테비올바이오사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드에 부가하여 스테비올바이오사이드 D를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드에 부가하여 루부소사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드 A에 부가하여 루부소사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드 A에 부가하여 스테비올바이오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올모노사이드 A에 부가하여 스테비올바이오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드에 부가하여 레바우디오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드에 부가하여 스테비오사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 D에 부가하여 레바우디오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 D에 부가하여 레바우디오사이드 G를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 루부소사이드에 부가하여 스테비오사이드를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 루부소사이드에 부가하여 레바우디오사이드 G를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 루부소사이드에 부가하여 스테비오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 루부소사이드에 부가하여 스테비오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 A에 부가하여 스테비오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 A에 부가하여 스테비오사이드 C를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 B에 부가하여 스테비오사이드 B를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 B에 부가하여 스테비오사이드 C를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 B에 부가하여 레바우디오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT74G1, 또는 UGT74G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드에 부가하여 레바우디오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드에 부가하여 레바우디오사이드 E를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드에 부가하여 레바우디오사이드 E2를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 G에 부가하여 레바우디오사이드 A를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 G에 부가하여 레바우디오사이드 E4를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 G에 부가하여 레바우디오사이드 E6을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 E를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 E4를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 E3을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 B에 부가하여 레바우디오사이드 E2를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 B에 부가하여 레바우디오사이드 E6을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비오사이드 B에 부가하여 레바우디오사이드 E3을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 스테비올바이오사이드 C에 부가하여 레바우디오사이드 E3을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT85C2, 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT 또는 UGT85C2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 D를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 A에 부가하여 레바우디오사이드 I를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E에 부가하여 레바우디오사이드 D를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E에 부가하여 레바우디오사이드 AM을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E2에 부가하여 레바우디오사이드 I를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E2에 부가하여 레바우디오사이드 AM을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E4에 부가하여 레바우디오사이드 D를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E4에 부가하여 레바우디오사이드 D7을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E6에 부가하여 레바우디오사이드 I를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E6에 부가하여 레바우디오사이드 D7을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E3에 부가하여 레바우디오사이드 AM을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 E3에 부가하여 레바우디오사이드 D7을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 D에 부가하여 레바우디오사이드 M을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 I에 부가하여 레바우디오사이드 M을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 AM에 부가하여 레바우디오사이드 M을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 AM에 부가하여 레바우디오사이드 M4를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 D7에 부가하여 레바우디오사이드 M을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1a를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1b를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1c를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1d를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1e를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1f를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1g를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1h를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1i를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1j를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1k를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1l을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1m을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M에 부가하여 레바우디오사이드 1n을 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
다른 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 적어도 하나의 글루코스 단위를 레바우디오사이드 M4에 부가하여 레바우디오사이드 2a를 형성할 수 있는 임의의 UDP-글루코실트랜스퍼라제이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGTSl2, 또는 UGTSl2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 EUGT11, 또는 EUGT11과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 또 다른 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT91D2, 또는 UGT91D2와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다. 특정 실시 형태에서, UDP-글루코실트랜스퍼라제는 UGT76G1, 또는 UGT76G1과 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 UGT이다.
선택적으로, 본 발명의 방법은 UDP를 재순환시켜 UDP-글루코스를 제공하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 상기 방법은 재순환 촉매 및 재순환 기질을 제공함으로써 UDP를 재순환시키는 단계를 포함하며, 이에 따라 스테비올 및/또는 스테비올 글리코사이드 기질의 목표 스테비올 글리코사이드로의 생물변환이 촉매량의 UDP-글루코실트랜스퍼라제 및 UDP-글루코스를 사용하여 수행된다.
일 실시 형태에서, 재순환 촉매는 수크로스 신타제 SuSy_At, 또는 SuSy_At와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 수크로스 신타제이다.
일 실시 형태에서, UDP-글루코스 재순환 촉매를 위한 재순환 기질은 수크로스이다.
선택적으로, 본 발명의 방법은 당 공여체로서 올리고당 또는 다당을 사용하여 수용체 목표 스테비올 글리코사이드 분자를 변형시키는 트랜스글리코시다제의 사용을 추가로 포함한다. 비제한적인 예에는 사이클로덱스트린 글리코실트랜스퍼라제(CGTase), 프룩토푸라노시다제, 아밀라제, 사카라제, 글루코수크라제, 베타-h-프룩토시다제, 베타-프룩토시다제, 수크라제, 프룩토실인버타제, 알칼리성 인버타제, 산 인버타제, 프룩토푸라노시다제가 포함된다. 일부 실시 형태에서, 글루코스, 및 글루코스 이외의 당(들) - 프룩토스, 자일로스, 람노스, 아라비노스, 데옥시글루코스, 갈락토스가 포함되지만 이로 한정되지 않음 - 이 수용체 목표 스테비올 글리코사이드에 전달된다. 일 실시 형태에서, 수용체 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 및/또는 레바우디오사이드 1n이다. 다른 실시 형태에서, 수용체 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 2a이다. 다른 실시 형태에서, 수용체 스테비올 글리코사이드는 레바우디오사이드 M4이다. 다른 실시 형태에서, 수용체 스테비올 글리코사이드는 SvG7이다.
다른 실시 형태에서, 적어도 하나의 글루코스 단위를 출발 조성물 스테비올 글리코사이드에 부가할 수 있는 UDP-글루코실트랜스퍼라제는 GenInfo 식별 번호의 하기 목록으로부터, 바람직하게는 표 1 및 표 2에 제시된 군으로부터 선택되는 UGT와 85% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
[표 1]
[표 2]
본 발명의 일 실시 형태는 효소, 즉 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시킬 수 있는 효소를 포함하는 미생물 세포이다. 따라서, 본 방법의 일부 실시 형태는 미생물을 출발 조성물을 함유하는 배지와 접촉시켜 적어도 하나의 목표 스테비올 글리코사이드를 포함하는 배지를 제공하는 단계를 포함한다.
미생물은 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드(들)로 전환시키는 데 필요한 효소(들)를 갖는 임의의 미생물일 수 있다. 이들 효소는 미생물의 게놈 내에 인코딩된다.
적합한 미생물은 E. 콜라이, 사카로미세스 종, 아스페르길루스 종, 피키아 종, 바실루스 종, 야로위아 종 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
일 실시 형태에서, 미생물은 출발 조성물과 접촉될 때 자유로운 상태이다.
다른 실시 형태에서, 미생물은 출발 조성물과 접촉될 때 고정화되어 있다. 예를 들어, 미생물은 무기 또는 유기 물질로부터 제조된 고체 지지체에 고정화될 수 있다. 미생물을 고정화하는 데 적합한 고체 지지체의 비제한적인 예에는 유도체화된 셀룰로스 또는 유리, 세라믹, 금속 산화물 또는 막이 포함된다. 미생물은, 예를 들어 공유 부착, 흡착, 가교결합, 포획 또는 캡슐화에 의해 고체 지지체에 고정화될 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 출발 조성물을 목표 스테비올 글리코사이드로 전환시킬 수 있는 효소는 미생물로부터 반응 배지 내로 분비된다.
목표 스테비올 글리코사이드는 선택적으로 정제된다. 반응 배지로부터의 목표 스테비올 글리코사이드의 정제는 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드 조성물을 제공하기에 적합한 적어도 하나의 방법에 의해 달성될 수 있다. 적합한 방법은 결정화, 막에 의한 분리, 원심분리, 추출(액체상 또는 고체상), 크로마토그래피 분리, HPLC(분취용 또는 분석용) 또는 그러한 방법들의 조합을 포함한다.
용도
본 발명에 따라 얻어지는 고도로 정제된 목표 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 "그대로" 사용될 수 있거나, 또는 다른 감미료, 향미료, 식품 성분 및 이들의 조합과 조합하여 사용될 수 있다.
향미료의 비제한적인 예에는 라임, 레몬, 오렌지, 프루트, 바나나, 포도, 배, 파인애플, 망고, 베리, 비터 아몬드, 콜라, 시나몬, 설탕, 솜사탕, 바닐라 및 이들의 조합이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
다른 식품 성분의 비제한적인 예에는 산미료, 유기산 및 아미노산, 착색제, 벌킹제(bulking agent), 변성 전분, 검, 질감부여제, 방부제, 카페인, 산화방지제, 유화제, 안정제, 증점제, 겔화제 및 이들의 조합이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
본 발명에 따라 얻어지는 고도로 정제된 목표 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 수화물, 용매화물, 무수 형태, 비정질 형태 및 이들의 조합을 포함하지만 이로 한정되지 않는 다양한 다형 형태로 제조될 수 있다.
본 발명에 따라 얻어지는 고도로 정제된 목표 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 식료품, 음료, 약제학적 조성물, 화장품, 츄잉검, 식탁용 제품, 시리얼, 유제품, 치약 및 다른 구강 조성물 등에 고강도 천연 감미료로서 혼입될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 고도로 정제된 목표 글리코사이드(들)는 약 0.0001% 내지 약 12 중량%, 예컨대 약 0.0001 중량%, 약 0.0005 중량%, 약 0.001 중량%, 약 0.005 중량%, 약 0.01 중량%, 약 0.05 중량%, 약 0.1 중량%, 약 0.5 중량%, 약 1.0 중량%, 약 1.5 중량%, 약 2.0 중량%, 약 2.5 중량%, 약 3.0 중량%, 약 3.5 중량%, 약 4.0 중량%, 약 4.5 중량%, 약 5.0 중량%, 약 5.5 중량%, 약 6.0 중량%, 약 6.5 중량%, 약 7.0 중량%, 약 7.5 중량%, 약 8.0 중량%, 약 8.5 중량%, 약 9.0 중량%, 약 9.5 중량%, 약 10.0 중량%, 약 10.5 중량%, 약 11.0 중량%, 약 11.5 중량% 또는 약 12.0 중량%의 양으로 식료품, 음료, 약제학적 조성물, 화장품, 츄잉검, 식탁용 제품, 시리얼, 유제품, 치약 및 다른 구강 조성물 등에 존재한다.
특정 실시 형태에서, 감미료는 약 0.0001 중량% 내지 약 8 중량%, 예컨대 약 0.0001 중량% 내지 약 0.0005 중량%, 약 0.0005 중량% 내지 약 0.001 중량%, 약 0.001 중량% 내지 약 0.005 중량%, 약 0.005 중량% 내지 약 0.01 중량%, 약 0.01 중량% 내지 약 0.05 중량%, 약 0.05 중량% 내지 약 0.1 중량%, 약 0.1 중량% 내지 약 0.5 중량%, 약 0.5 중량% 내지 약 1 중량%, 약 1 중량% 내지 약 2 중량%, 약 2 중량% 내지 약 3 중량%, 약 3 중량% 내지 약 4 중량%, 약 4 중량% 내지 약 5 중량%, 약 5 중량% 내지 약 6 중량%, 약 6 중량% 내지 약 7 중량%, 및 약 7 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
본 발명에 따라 얻어지는 고도로 정제된 목표 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a, SvG7 및/또는 이들의 조합은 감미부여 화합물로서 사용될 수 있거나, 또는 그것은 둘코사이드 A, 둘코사이드 B, 둘코사이드 C, 둘코사이드 D, 레바우디오사이드 A2, 레바우디오사이드 A3, 레바우디오사이드 A4, 레바우디오사이드 B2, 레바우디오사이드 C, 레바우디오사이드 C2, 레바우디오사이드 C3, 레바우디오사이드 C4, 레바우디오사이드 C5, 레바우디오사이드 C6, 레바우디오사이드 D2, 레바우디오사이드 D3, 레바우디오사이드 D4, 레바우디오사이드 D5, 레바우디오사이드 D6, 레바우디오사이드 D8, 레바우디오사이드 E5, 레바우디오사이드 E7, 레바우디오사이드 F, 레바우디오사이드 F2, 레바우디오사이드 F3, 레바우디오사이드 H, 레바우디오사이드 H2, 레바우디오사이드 H3, 레바우디오사이드 H4, 레바우디오사이드 H5, 레바우디오사이드 H6, 레바우디오사이드 I2, 레바우디오사이드 I3, 레바우디오사이드 J, 레바우디오사이드 K, 레바우디오사이드 K2, 레바우디오사이드 KA, 레바우디오사이드 L, 레바우디오사이드 M2, 레바우디오사이드 M3, 레바우디오사이드 N, 레바우디오사이드 N2, 레바우디오사이드 N3, 레바우디오사이드 N4, 레바우디오사이드 N5, 레바우디오사이드 O, 레바우디오사이드 O2, 레바우디오사이드 O3, 레바우디오사이드 O4, 레바우디오사이드 Q, 레바우디오사이드 Q2, 레바우디오사이드 Q3, 레바우디오사이드 R, 레바우디오사이드 S, 레바우디오사이드 T, 레바우디오사이드 T1, 레바우디오사이드 U, 레바우디오사이드 U2, 레바우디오사이드 V, 레바우디오사이드 V2, 레바우디오사이드 V3, 레바우디오사이드 W, 레바우디오사이드 W2, 레바우디오사이드 W3, 레바우디오사이드 Y, 레바우디오사이드 Z1, 레바우디오사이드 Z2, 스테비올바이오사이드 C, 스테비올바이오사이드 E, 스테비오사이드 D, 스테비오사이드 E, 스테비오사이드 E2, 스테비오사이드 F, 스테비오사이드 G, 스테비오사이드 H, 모그로사이드, 브라제인, 네오헤스페리딘 다이하이드로칼콘, 글리시리즈산 및 이의 염, 타우마틴, 페릴라르틴, 페르난둘신, 무쿠로지오사이드, 베이유노사이드, 플로미소사이드-I, 다이메틸-헥사하이드로플루오렌-다이카르복실산, 아브루소사이드, 페리안드린, 카르노시플로사이드, 사이클로카리오사이드, 프테로카리오사이드, 폴리포도사이드 A, 브라질린, 헤르난둘신, 필로둘신, 글리시필린, 플로리진, 트릴로바틴, 다이하이드로플라보놀, 다이하이드로퀘르세틴-3-아세테이트, 네오아스틸리빈, 트랜스-신남알데하이드, 모나틴, 모나틴 염, 다른 인돌 유도체 감미료, 셀리구에아인 A, 헤마톡실린, 모넬린, 오슬라딘, 프테로카리오사이드 A, 프테로카리오사이드 B, 마빈린, 펜타딘, 미라쿨린, 쿠르쿨린, 네오쿨린, 클로로겐산, 시나린, 나한과(Luo Han Guo) 감미료, 모그로사이드 V, 시아메노사이드, 시라토스 및 이들의 조합과 같은 적어도 하나의 천연 발생 고강도 감미료와 함께 사용될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 둘코사이드 A, 둘코사이드 B, 둘코사이드 C, 둘코사이드 D, 레바우디오사이드 A2, 레바우디오사이드 A3, 레바우디오사이드 A4, 레바우디오사이드 B2, 레바우디오사이드 C, 레바우디오사이드 C2, 레바우디오사이드 C3, 레바우디오사이드 C4, 레바우디오사이드 C5, 레바우디오사이드 C6, 레바우디오사이드 D2, 레바우디오사이드 D3, 레바우디오사이드 D4, 레바우디오사이드 D5, 레바우디오사이드 D6, 레바우디오사이드 D8, 레바우디오사이드 E5, 레바우디오사이드 E7, 레바우디오사이드 F, 레바우디오사이드 F2, 레바우디오사이드 F3, 레바우디오사이드 H, 레바우디오사이드 H2, 레바우디오사이드 H3, 레바우디오사이드 H4, 레바우디오사이드 H5, 레바우디오사이드 H6, 레바우디오사이드 I2, 레바우디오사이드 I3, 레바우디오사이드 J, 레바우디오사이드 K, 레바우디오사이드 K2, 레바우디오사이드 KA, 레바우디오사이드 L, 레바우디오사이드 M2, 레바우디오사이드 M3, 레바우디오사이드 N, 레바우디오사이드 N2, 레바우디오사이드 N3, 레바우디오사이드 N4, 레바우디오사이드 N5, 레바우디오사이드 O, 레바우디오사이드 O2, 레바우디오사이드 O3, 레바우디오사이드 O4, 레바우디오사이드 Q, 레바우디오사이드 Q2, 레바우디오사이드 Q3, 레바우디오사이드 R, 레바우디오사이드 S, 레바우디오사이드 T, 레바우디오사이드 T1, 레바우디오사이드 U, 레바우디오사이드 U2, 레바우디오사이드 V, 레바우디오사이드 V2, 레바우디오사이드 V3, 레바우디오사이드 W, 레바우디오사이드 W2, 레바우디오사이드 W3, 레바우디오사이드 Y, 레바우디오사이드 Z1, 레바우디오사이드 Z2, 스테비올바이오사이드 C, 스테비올바이오사이드 E, 스테비오사이드 D, 스테비오사이드 E, 스테비오사이드 E2, 스테비오사이드 F, 스테비오사이드 G, 스테비오사이드 H, NSF-02, 모그로사이드 V, 시라토스, 나한과, 알룰로스, 알로스, D-타가토스, 에리트리톨 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물을 포함하는 감미료 조성물에 사용될 수 있다.
고도로 정제된 목표 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 또한 수크랄로스, 포타슘 아세설팜, 아스파르탐, 알리탐, 사카린, 네오헤스페리딘 다이하이드로칼콘, 사이클라메이트, 네오탐, 둘신, 수오산 아드반탐, 이들의 염, 및 이들의 조합과 같은 합성 고강도 감미료와 조합하여 사용될 수 있다.
더욱이, 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 짐넴산, 호둘신, 지지핀, 락티솔, 및 기타와 같은 천연 감미료 억제제와 조합하여 사용될 수 있다. 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 또한 다양한 감칠맛(umami taste) 증강제와 조합될 수 있다. 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 글루타메이트, 아스파르트산, 글리신, 알라닌, 트레오닌, 프롤린, 세린, 글루타메이트, 라이신, 트립토판 및 이들의 조합과 같은 감칠맛 및 감미 아미노산과 혼합될 수 있다.
고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 탄수화물, 폴리올, 아미노산 및 이의 상응하는 염, 폴리아미노산 및 이의 상응하는 염, 당산(sugar acid) 및 이의 상응하는 염, 뉴클레오타이드, 유기산, 무기산, 유기 염(유기산 염 및 유기 염기 염을 포함함), 무기 염, 쓴맛 화합물, 향미료 및 향미 성분, 쌉쌀한 맛 화합물, 단백질 또는 단백질 가수분해물, 계면활성제, 유화제, 플라보노이드, 알코올, 중합체 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 첨가제와 조합하여 사용될 수 있다.
고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 폴리올 또는 당 알코올과 조합될 수 있다. 용어 "폴리올"은 하나 초과의 하이드록실 기를 함유하는 분자를 지칭한다. 폴리올은, 2개, 3개, 및 4개의 하이드록실 기를 각각 함유하는 다이올, 트라이올, 또는 테트라올일 수 있다. 폴리올은 또한 4개 초과의 하이드록실 기를 함유할 수 있으며, 이는, 예를 들어, 5개, 6개, 또는 7개의 하이드록실 기를 각각 함유하는 펜타올, 헥사올, 헵타올 등일 수 있다. 추가적으로, 폴리올은 또한 탄수화물의 환원된 형태인 당 알코올, 다가 알코올, 또는 폴리알코올일 수 있는데, 여기서는 카르보닐 기(알데하이드 또는 케톤, 환원당)가 1차 또는 2차 하이드록실 기로 환원되었다. 폴리올의 예에는 에리트리톨, 말티톨, 만니톨, 소르비톨, 락티톨, 자일리톨, 이노시톨, 아이소말트, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 트레이톨, 갈락티톨, 수소화 아이소말툴로스, 환원된 아이소말토-올리고당, 환원된 자일로-올리고당, 환원된 겐티오-올리고당, 환원된 말토스 시럽, 환원된 글루코스 시럽, 수소화 전분 가수분해물, 폴리글리시톨 및 당 알코올 또는 환원될 수 있는 임의의 다른 탄수화물이 포함되지만 이로 한정되지 않으며, 이들은 감미료 조성물의 맛에 불리한 영향을 주지 않는다.
고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은, 예를 들어 D-타가토스, L-당, L-소르보스, L-아라비노스 및 이들의 조합과 같은 저칼로리 감미료와 조합될 수 있다.
고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 또한 다양한 탄수화물과 조합될 수 있다. 용어 "탄수화물"은 일반적으로 일반 화학식 (CH2O)n(여기서, n은 3 내지 30임)의 다수의 하이드록실 기로 치환된 알데하이드 또는 케톤 화합물뿐만 아니라 이들의 올리고머 및 중합체를 지칭한다. 게다가, 본 발명의 탄수화물은 하나 이상의 위치에서 치환되거나 탈산소화될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 탄수화물은 비변형된 탄수화물, 탄수화물 유도체, 치환된 탄수화물, 및 변형된 탄수화물을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 어구 "탄수화물 유도체", "치환된 탄수화물", 및 "변형된 탄수화물"은 동의어이다. 변형된 탄수화물은 적어도 하나의 원자가 부가, 제거, 또는 치환된 임의의 탄수화물, 또는 이들의 조합을 의미한다. 따라서, 탄수화물 유도체 또는 치환된 탄수화물은 치환 및 비치환된 단당, 이당, 올리고당, 및 다당을 포함한다. 탄수화물 유도체 또는 치환된 탄수화물은, 탄수화물 유도체 또는 치환된 탄수화물이 감미료 조성물의 단맛을 개선하도록 기능한다면, 선택적으로 임의의 상응하는 C-위치에서 탈산소화될 수 있고/있거나, 수소, 할로겐, 할로알킬, 카르복실, 아실, 아실옥시, 아미노, 아미도, 카르복실 유도체, 알킬아미노, 다이알킬아미노, 아릴아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 설포, 메르캅토, 이미노, 설포닐, 설페닐, 설피닐, 설파모일, 카르보알콕시, 카르복스아미도, 포스포닐, 포스피닐, 포스포릴, 포스피노, 티오에스테르, 티오에테르, 옥시미노, 하이드라지노, 카르바밀, 포스포, 포스포네이토, 또는 임의의 다른 실행가능한 작용기와 같은 하나 이상의 모이어티로 치환될 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 탄수화물의 예에는 프시코스, 투라노스, 알로스, 타가토스, 트레할로스, 갈락토스, 람노스, 다양한 사이클로덱스트린, 환형 올리고당, 다양한 유형의 말토덱스트린, 덱스트란, 수크로스, 글루코스, 리불로스, 프룩토스, 트레오스, 아라비노스, 자일로스, 릭소스, 알트로스, 만노스, 이도스, 락토스, 말토스, 전화당, 아이소트레할로스, 네오트레할로스, 아이소말툴로스, 에리트로스, 데옥시리보스, 굴로스, 이도스, 탈로스, 에리트룰로스, 자일룰로스, 프시코스, 투라노스, 셀로바이오스, 아밀로펙틴, 글루코사민, 만노사민, 푸코스, 글루쿠론산, 글루콘산, 글루코노-락톤, 아베쿠오스, 갈락토사민, 비트 올리고당, 아이소말토-올리고당(아이소말토스, 아이소말토트라이오스, 파노스 등), 자일로-올리고당(자일로트라이오스, 자일로바이오스 등), 자일로-종결된 올리고당, 겐티오-올리고당(겐티오바이오스, 겐티오트라이오스, 겐티오테트라오스 등), 소르보스, 니게로-올리고당, 팔라티노스 올리고당, 프룩토올리고당(케스토스, 니스토스 등), 말토테트라올, 말토트라이올, 말토-올리고당(말토트라이오스, 말토테트라오스, 말토펜타오스, 말토헥사오스, 말토헵타오스 등), 전분, 이눌린, 이눌로-올리고당, 락툴로스, 멜리바이오스, 라피노스, 리보스, 이성질화 액체 당, 예컨대 고 프룩토스 옥수수 시럽, 커플링 당, 및 대두 올리고당이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 추가적으로, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 탄수화물은 D-배치 또는 L-배치 중 어느 하나일 수 있다.
본 발명에 따라 얻어지는 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 다양한 생리학적으로 활성인 물질 또는 기능성 성분과 조합하여 사용될 수 있다. 기능성 성분은 일반적으로 카로테노이드, 식이 섬유, 지방산, 사포닌, 산화방지제, 뉴트라슈티컬, 플라보노이드, 아이소티오시아네이트, 페놀, 식물 스테롤 및 스타놀(피토스테롤 및 피토스타놀); 폴리올; 프리바이오틱스, 프로바이오틱스; 피토에스트로겐; 대두 단백질; 설파이드/티올; 아미노산; 단백질; 비타민; 및 미네랄과 같은 카테고리로 분류된다. 기능성 성분은 또한 심혈관, 콜레스테롤 감소, 및 항염증과 같은 그들의 건강상의 이익에 기초하여 분류될 수 있다. 예시적인 기능성 성분이 국제 특허 출원 공개 WO2013/096420호에 제공되어 있으며, 이의 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 발명에 따라 얻어지는 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 개선된 맛 특성을 갖는 무칼로리, 저칼로리 또는 당뇨병 음료 및 식품 제품을 생성하기 위해 고강도 감미료로서 적용될 수 있다. 그것은 또한 드링크, 식료품, 의약품, 및 당이 사용될 수 없는 다른 제품에 사용될 수 있다. 게다가, 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 인간 소비 전용의 드링크, 식료품, 및 다른 제품을 위한 감미료로서 사용될 뿐만 아니라, 개선된 특성을 갖는 동물 먹이 및 사료에서의 감미료로서 또한 사용될 수 있다.
본 발명에 따라 얻어지는 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 무칼로리, 저칼로리 또는 당뇨병 음료 및 식품 제품을 생성하기 위해 거품발생 억제제로서 적용될 수 있다.
고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7이 감미부여 화합물로서 사용될 수 있는 소비 제품(consumable product)의 예에는 알코올성 음료, 예컨대 보드카, 와인, 맥주, 양주(liquor), 및 사케 등; 천연 주스; 청량 드링크; 탄산 소프트 드링크; 다이어트 드링크; 무칼로리 드링크; 저칼로리 드링크 및 식품; 요거트 드링크; 인스턴트 주스; 인스턴트 커피; 분말 유형의 인스턴트 음료; 통조림 제품; 시럽; 발효 된장; 간장; 식초; 드레싱; 마요네즈; 케첩; 커리; 수프; 인스턴트 부용(bouillon); 분말형 간장; 분말형 식초; 비스킷 유형; 쌀 비스킷; 크래커; 빵; 초콜릿; 캐러멜; 캔디; 츄잉검; 젤리; 푸딩; 보존처리된 과일 및 채소; 신선한 크림; 잼; 마멀레이드; 꽃 반죽; 분유; 아이스크림; 셔벗; 병에 채운 채소 및 과일; 통조림으로 된 삶은 콩; 감미부여된 소스에서 끓인 육류 및 식품; 농업용 채소 식품 제품; 해산물; 햄; 소시지; 생선 햄; 생선 소시지; 어묵; 튀긴 생선 제품; 건조 해산물 제품; 냉동 식품 제품; 보존처리된 해초류; 보존처리된 육류; 담배; 의약품; 및 많은 기타 제품이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 원칙적으로, 그것은 무제한의 응용을 가질 수 있다.
고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7이 향미 개질제 또는 개질 특성을 갖는 향미료로서 사용될 수 있는 소비 제품의 예에는 알코올성 음료, 예컨대 보드카, 와인, 맥주, 양주, 및 사케 등; 천연 주스; 청량 드링크; 탄산 소프트 드링크; 다이어트 드링크; 무칼로리 드링크; 저칼로리 드링크 및 식품; 요거트 드링크; 인스턴트 주스; 인스턴트 커피; 분말 유형의 인스턴트 음료; 통조림 제품; 시럽; 발효 된장; 간장; 식초; 드레싱; 마요네즈; 케첩; 커리; 수프; 인스턴트 부용; 분말형 간장; 분말형 식초; 비스킷 유형; 쌀 비스킷; 크래커; 빵; 초콜릿; 캐러멜; 캔디; 츄잉검; 젤리; 푸딩; 보존처리된 과일 및 채소; 신선한 크림; 잼; 마멀레이드; 꽃 반죽; 분유; 아이스크림; 셔벗; 병에 채운 채소 및 과일; 통조림으로 된 삶은 콩; 감미부여된 소스에서 끓인 육류 및 식품; 농업용 채소 식품 제품; 해산물; 햄; 소시지; 생선 햄; 생선 소시지; 어묵; 튀긴 생선 제품; 건조 해산물 제품; 냉동 식품 제품; 보존처리된 해초류; 보존처리된 육류; 담배; 의약품; 및 많은 기타 제품이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 원칙적으로, 그것은 무제한의 응용을 가질 수 있다.
식료품, 드링크, 의약품, 화장품, 식탁용 제품, 및 츄잉검과 같은 제품의 제조 동안, 혼합, 혼련, 용해, 산세(pickling), 침투, 퍼콜레이션(percolation), 스프링클링(sprinkling), 무화(atomizing), 주입 및 다른 방법과 같은 통상적인 방법이 사용될 수 있다.
더욱이, 본 발명에서 얻어지는 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들) 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 건조 또는 액체 형태로 사용될 수 있다.
고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드는 식품 제품의 열처리 전 또는 후에 첨가될 수 있다. 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7의 양은 사용 목적에 좌우된다. 상기에 논의된 바와 같이, 그것은 단독으로 첨가되거나 다른 화합물과 조합하여 첨가될 수 있다.
본 발명은 또한 음료에서 감미성 증강제(sweetness enhancer)로서 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7을 사용한 감미성 증강에 관한 것으로, 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 그들 각각의 감미성 인식 역치(sweetness recognition threshold) 이하의 농도로 존재한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "감미성 증강제"는 조성물, 예컨대 음료에서 단맛의 지각을 증강 또는 강화시킬 수 있는 화합물을 지칭한다. 용어 "감미성 증강제"는 용어 "단맛 증진제", "감미성 증진제", "감미성 증폭제", 및 "감미성 강화제"와 동의어이다.
본 명세서에 일반적으로 사용되는 바와 같이, 용어 "감미성 인식 역치 농도"는 인간의 미각에 의해 지각가능한, 전형적으로 약 1.0% 수크로스 등가(sucrose equivalence)(1.0% SE)인, 감미 화합물의 최저로 알려진 농도이다. 일반적으로, 감미성 증강제는, 주어진 감미성 증강제의 감미성 인식 역치 농도 이하로 존재할 때, 그 자체는 어떠한 식별가능한 단맛도 제공하지 않으면서 감미제의 단맛을 증강 또는 강화시킬 수 있지만; 감미성 증강제는 그 자체가 그들의 감미성 인식 역치 농도를 초과하는 농도에서 단맛을 제공할 수 있다. 감미성 인식 역치 농도는 특정 증강제에 대해 특이적이며, 음료 매트릭스에 기초하여 변동될 수 있다. 감미성 인식 역치 농도는 주어진 음료 매트릭스에서 1.0% 초과의 수크로스 등가가 검출될 때까지 주어진 증강제의 농도를 증가시키면서 시식(taste testing)함으로써 용이하게 결정될 수 있다. 약 1.0%의 수크로스 등가를 제공하는 농도가 감미성 인식 역치로 간주된다.
일부 실시 형태에서, 감미료는 약 0.0001% 내지 약 12 중량%, 예컨대 약 0.0001 중량%, 약 0.0005 중량%, 약 0.001 중량%, 약 0.005 중량%, 약 0.01 중량%, 약 0.05 중량%, 약 0.1 중량%, 약 0.5 중량%, 약 1.0 중량%, 약 1.5 중량%, 약 2.0 중량%, 약 2.5 중량%, 약 3.0 중량%, 약 3.5 중량%, 약 4.0 중량%, 약 4.5 중량%, 약 5.0 중량%, 약 5.5 중량%, 약 6.0 중량%, 약 6.5 중량%, 약 7.0 중량%, 약 7.5 중량%, 약 8.0 중량%, 약 8.5 중량%, 약 9.0 중량%, 약 9.5 중량%, 약 10.0 중량%, 약 10.5 중량%, 약 11.0 중량%, 약 11.5 중량% 또는 약 12.0 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
특정 실시 형태에서, 감미료는 약 0.0001 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 0.0001 중량% 내지 약 0.0005 중량%, 약 0.0005 중량% 내지 약 0.001 중량%, 약 0.001 중량% 내지 약 0.005 중량%, 약 0.005 중량% 내지 약 0.01 중량%, 약 0.01 중량% 내지 약 0.05 중량%, 약 0.05 중량% 내지 약 0.1 중량%, 약 0.1 중량% 내지 약 0.5 중량%, 약 0.5 중량% 내지 약 1 중량%, 약 1 중량% 내지 약 2 중량%, 약 2 중량% 내지 약 3 중량%, 약 3 중량% 내지 약 4 중량%, 약 4 중량% 내지 약 5 중량%, 약 5 중량% 내지 약 6 중량%, 약 6 중량% 내지 약 7 중량%, 약 7 중량% 내지 약 8 중량%, 약 8 중량% 내지 약 9 중량%, 또는 약 9 중량% 내지 약 10 중량%의 양으로 음료에 존재한다. 특정 실시 형태에서, 감미료는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%의 양으로 음료에 존재한다. 다른 특정 실시 형태에서, 감미료는 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
일 실시 형태에서, 감미료는 전통적인 칼로리 감미료이다. 적합한 감미료는 수크로스, 프룩토스, 글루코스, 고 프룩토스 옥수수 시럽 및 고 프룩토스 전분 시럽을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
다른 실시 형태에서, 감미료는 에리트리톨이다.
또 다른 실시 형태에서, 감미료는 희소당(rare sugar)이다. 적합한 희소당에는 D-알로스, D-프시코스, D-리보스, D-타가토스, L-글루코스, L-푸코스, L-아라비노스, D-투라노스, D-류크로스 및 이들의 조합이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
감미료는 단독으로 사용되거나 다른 감미료와 조합하여 사용될 수 있는 것으로 고려된다.
일 실시 형태에서, 희소당은 D-알로스이다. 더 특정한 실시 형태에서, D-알로스는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
다른 실시 형태에서, 희소당은 D-프시코스이다. 더 특정한 실시 형태에서, D-프시코스는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
또 다른 실시 형태에서, 희소당은 D-리보스이다. 더 특정한 실시 형태에서, D-리보스는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
또 다른 실시 형태에서, 희소당은 D-타가토스이다. 더 특정한 실시 형태에서, D-타가토스는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
추가의 실시 형태에서, 희소당은 L-글루코스이다. 더 특정한 실시 형태에서, L-글루코스는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
일 실시 형태에서, 희소당은 L-푸코스이다. 더 특정한 실시 형태에서, L-푸코스는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
다른 실시 형태에서, 희소당은 L-아라비노스이다. 더 특정한 실시 형태에서, L-아라비노스는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
또 다른 실시 형태에서, 희소당은 D-투라노스이다. 더 특정한 실시 형태에서, D-투라노스는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
또 다른 실시 형태에서, 희소당은 D-류크로스이다. 더 특정한 실시 형태에서, D-류크로스는 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 8 중량%의 양으로 음료에 존재한다.
감미성 인식 역치 이하의 농도로의 감미성 증강제의 첨가는, 감미성 증강제의 부재 하의 상응하는 음료에 비하여, 감미료 및 감미성 증강제를 포함하는 음료의 검출된 수크로스 등가를 증가시킨다. 더욱이, 임의의 감미료의 부재 하에서의 동일한 농도의 적어도 하나의 감미성 증강제를 함유하는 용액의 검출가능한 감미도보다 더 많은 양만큼 감미도가 증가될 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 감미료를 포함하는 음료의 감미성을 증강시키기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 감미료를 포함하는 음료를 제공하는 단계 및 감미성 증강제를 첨가하는 단계를 포함하며, 상기 감미성 증강제는 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7 또는 이들의 조합으로부터 선택되며, 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7은 그들의 감미성 인식 역치 이하의 농도로 존재한다.
감미료를 함유하는 음료에 대한 감미성 인식 역치 이하의 농도로의 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7의 첨가는 검출된 수크로스 등가를 약 1.0% 내지 약 5.0%, 예컨대, 약 1.0%, 약 1.5%, 약 2.0%, 약 2.5%, 약 3.0%, 약 3.5%, 약 4.0%, 약 4.5% 또는 약 5.0%로 증가시킬 수 있다.
하기 실시예는 고도로 정제된 목표 스테비올 글리코사이드(들), 특히 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 레바우디오사이드 1a, 레바우디오사이드 1b, 레바우디오사이드 1c, 레바우디오사이드 1d, 레바우디오사이드 1e, 레바우디오사이드 1f, 레바우디오사이드 1g, 레바우디오사이드 1h, 레바우디오사이드 1i, 레바우디오사이드 1j, 레바우디오사이드 1k, 레바우디오사이드 1l, 레바우디오사이드 1m, 레바우디오사이드 1n, 레바우디오사이드 2a 및/또는 SvG7의 제조를 위한 본 발명의 바람직한 실시 형태를 예시한다. 본 발명은 실시예에 기재된 재료, 비율, 조건 및 절차로 제한되지 않으며, 이는 단지 예시적임이 이해될 것이다.
실시예
실시예 1
생물촉매적 공정에 사용되는 조작된 효소의 단백질 서열
서열 번호 1:
>SuSy_At, 변이체 PM1-54-2-E05 (조작된 수크로스 신타제; WT 유전자의 공급원: 아라비돕시스 탈리아나)
>UGTSl2 변이체 0234 (조작된 글루코실트랜스퍼라제; WT 유전자의 공급원: 솔라눔 리코페르시쿰)
>UGT76G1 변이체 0042 (조작된 글루코실트랜스퍼라제; WT 유전자의 공급원: 스테비아 레바우디아나)
서열 번호 1의 SuSy_At 변이체의 발현 및 제형화
서열 번호 1의 SuSy_At 변이체(실시예 1)를 코딩하는 유전자를 발현 벡터 pLE1A17(pRSF-1b의 유도체, Novagen) 내로 클로닝하였다. 생성된 플라스미드를 E. 콜라이 BL21(DE3) 세포의 형질전환을 위해 사용하였다.
37℃에서 카나마이신(50 mg/l)이 보충된 ZYM505 배지(문헌[F. William Studier, Protein Expression and Purification 41 (2005) 207-234]) 중에서 세포를 배양하였다. IPTG(0.2 mM)에 의해 대수기(logarithmic phase)에서 유전자의 발현을 유도하고, 30℃ 및 200 rpm에서 16 내지 18시간 동안 수행하였다.
세포를 원심분리(3220 x g, 20분, 4℃)에 의해 수집하고, 세포 용해 완충액(100 mM Tris-HCl pH 7.0; 2 mM MgCl2, DNA 뉴클레아제 20 U/mL, 라이소자임 0.5 mg/mL)을 사용하여 200의 광학 밀도(600 nm에서 측정됨(OD600))로 재현탁하였다. 이어서, 세포를 초음파처리에 의해 파괴하고, 조 추출물(crude extract)을 원심분리(18000 x g, 40분, 4℃)에 의해 세포 잔해로부터 분리하였다. 상층액을 0.2 μm 필터를 통한 여과에 의해 멸균하고, 증류수를 사용하여 50:50으로 희석시켜 효소 활성 제제를 생성하였다.
SuSy_At의 효소 활성 제제의 경우, 단위(Unit) 활성은 하기와 같이 정의된다: 1 mU의 SuSy_At는 1 nmol의 수크로스를 1분만에 프룩토스로 변환시킨다. 이 검정을 위한 반응 조건은 30℃, 50 mM 인산칼륨 완충액(pH 7.0), t0에서의 400 mM 수크로스, 3 mM MgCl2, 및 15 mM 우리딘 다이포스페이트(UDP)이다.
실시예 3
서열 번호 2의 UGTSl2 변이체의 발현 및 제형화
서열 번호 2의 UGTSl2 변이체(실시예 1)를 코딩하는 유전자를 발현 벡터 pLE1A17(pRSF-1b의 유도체, Novagen) 내로 클로닝하였다. 생성된 플라스미드를 E. 콜라이 BL21(DE3) 세포의 형질전환을 위해 사용하였다.
37℃에서 카나마이신(50 mg/l)이 보충된 ZYM505 배지(문헌[F. William Studier, Protein Expression and Purification 41 (2005) 207-234]) 중에서 세포를 배양하였다. IPTG(0.1 mM)에 의해 대수기에서 유전자의 발현을 유도하고, 30℃ 및 200 rpm에서 16 내지 18시간 동안 수행하였다.
세포를 원심분리(3220 x g, 20분, 4℃)에 의해 수집하고, 세포 용해 완충액(100 mM Tris-HCl pH 7.0; 2 mM MgCl2, DNA 뉴클레아제 20 U/mL, 라이소자임 0.5 mg/mL)을 사용하여 200의 광학 밀도(600 nm에서 측정됨(OD600))로 재현탁하였다. 이어서, 세포를 초음파처리에 의해 파괴하고, 조 추출물을 원심분리(18000 x g, 40분, 4℃)에 의해 세포 잔해로부터 분리하였다. 상층액을 0.2 μm 필터를 통한 여과에 의해 멸균하고, 1 M 수크로스 용액을 사용하여 50:50으로 희석시켜 효소 활성 제제를 생성하였다.
UGTSl2의 효소 활성 제제의 경우, 단위 활성은 하기와 같이 정의된다: 1 mU의 UGTSl2는 1 nmol의 레바우디오사이드 A(Reb A)를 1분만에 레바우디오사이드 D(Reb D)로 변환시킨다. 이 검정을 위한 반응 조건은 30℃, 50 mM 인산칼륨 완충액(pH 7.0), t0에서의 10 mM Reb A, 500 mM 수크로스, 3 mM MgCl2, 0.25 mM 우리딘 다이포스페이트(UDP) 및 3 U/mL의 SuSy_At이다.
실시예 4
서열 번호 3의 UGT76G1 변이체의 발현 및 제형화
서열 번호 3의 UGT76G1 변이체(실시예 1)를 코딩하는 유전자를 발현 벡터 pLE1A17(pRSF-1b의 유도체, Novagen) 내로 클로닝하였다. 생성된 플라스미드를 E. 콜라이 BL21(DE3) 세포의 형질전환을 위해 사용하였다.
37℃에서 카나마이신(50 mg/l)이 보충된 ZYM505 배지(문헌[F. William Studier, Protein Expression and Purification 41 (2005) 207-234]) 중에서 세포를 배양하였다. IPTG(0.1 mM)에 의해 대수기에서 유전자의 발현을 유도하고, 30℃ 및 200 rpm에서 16 내지 18시간 동안 수행하였다.
세포를 원심분리(3220 x g, 20분, 4℃)에 의해 수집하고, 세포 용해 완충액(100 mM Tris-HCl pH 7.0; 2 mM MgCl2, DNA 뉴클레아제 20 U/mL, 라이소자임 0.5 mg/mL)을 사용하여 200의 광학 밀도(600 nm에서 측정됨(OD600))로 재현탁하였다. 이어서, 세포를 초음파처리에 의해 파괴하고, 조 추출물을 원심분리(18000 x g, 40분, 4℃)에 의해 세포 잔해로부터 분리하였다. 상층액을 0.2 μm 필터를 통한 여과에 의해 멸균하고, 1 M 수크로스 용액을 사용하여 50:50으로 희석시켜 효소 활성 제제를 생성하였다.
UGT76G1의 효소 활성 제제의 경우, 단위 활성은 하기와 같이 정의된다: 1 mU의 UGT76G1은 1 nmol의 레바우디오사이드 D(Reb D)를 1분만에 레바우디오사이드 M(Reb M)으로 변환시킨다. 이 검정을 위한 반응 조건은 30℃, 50 mM 인산칼륨 완충액(pH 7.0), t0에서의 10 mM Reb D, 500 mM 수크로스, 3 mM MgCl2, 0.25 mM 우리딘 다이포스페이트(UDP) 및 3 U/mL의 SuSy_At이다.
실시예 5
UGTSl2, SuSy_At 및 UGT76G1을 동시에 첨가하여, 원-포트(one-pot) 반응으로 SvG7의 합성
하기 3가지 효소(실시예 1, 실시예 2, 실시예 3 및 실시예 4 참조)를 이용하여, 다양한 SvG7 분자를 원-포트 반응으로 스테비오사이드로부터 직접 합성하였다(도 4 참조): UGTSl2(서열 번호 2의 변이체), SuSy_At(서열 번호 1의 변이체) 및 UGT76G1(서열 번호 3의 변이체).
최종 반응 용액은 348 U/L UGTSl2, 1341 U/L SuSy_At, 10 U/L UGT76G1, 47 mM 스테비오사이드, 0.32 mM 우리딘 다이포스페이트(UDP), 0.99 M 수크로스, 3.9 mM MgCl2 및 인산칼륨 완충액(pH 6.6)을 함유하였다. 먼저, 206 mL의 증류수를 0.24 g의 MgCl2·6 H2O, 102 g의 수크로스, 9.8 mL의 1.5 M 인산칼륨 완충액(pH 6.6) 및 15 g의 스테비오사이드와 혼합하였다. 반응 혼합물의 최종 부피를 300 mL로 조정하였다.
이들 성분을 용해시킨 후에, 온도를 45℃로 조정하고, UGTSl2, SuSy_At, UGT76G1 및 39 mg의 UDP를 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃ 진탕기에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 추가 39 mg의 UDP를 12시간, 24시간, 및 36시간에 첨가하였다. 반응의 종료 시점(48시간)에서 reb 2a 및 다양한 SvG7의 함량을 HPLC로 분석하였다.
실시예 6
HPLC 분석
분석을 위해, 반응 혼합물을 17% H3PO4를 사용하여 pH 5.5로 조정함으로써 생물변환 샘플을 불활성화하고, 이어서 10분 동안 비등시켰다. 생성된 샘플을 여과하고, 여과액을 10회 희석시키고, HPLC 분석을 위한 샘플로서 사용하였다. 펌프, 컬럼 서모스탯(thermostat), 자동 샘플러, 백그라운드 보정이 가능한 UV 검출기, 및 데이터 획득 시스템으로 구성된 Agilent HP 1200 HPLC 시스템에서 HPLC 검정을 수행하였다. 40℃에서 Agilent Poroshell 120 SB-C18, 4.6 mm x 150 mm, 2.7 μm를 사용하여 분석물을 분리하였다. 이동상은 하기 2개의 프리믹스(premix)로 이루어졌다:
-
75% 10 mM 인산염 완충액(pH 2.6) 및 25% 아세토니트릴을 함유하는 프리믹스 1, 및
-
68% 10 mM 인산염 완충액(pH 2.6) 및 32% 아세토니트릴을 함유하는 프리믹스 2.
용리 구배는 프리믹스 1로 시작하여, 12.5분에서 50%까지 프리믹스 2로 변경되고, 13분에서 100%까지 프리믹스 2로 변경되었다. 총 실행 시간은 45분이었다. 컬럼 온도는 40℃로 유지하였다. 주입 부피는 5 μL였다. 레바우디오사이드 종이 210 nm에서 UV에 의해 검출되었다.
표 3은 매 시점마다에 대해 스테비오사이드의 확인된 레바우디오사이드 종으로의 전환율(면적 백분율)을 나타낸다. 출발 물질 스테비오사이드 및 48시간에서의 반응 혼합물의 크로마토그램이 각각 도 4 및 도 5에 나타나 있다. 당업자는 체류 시간이 때때로 용매 및/또는 장비의 변화에 따라 달라질 수 있음을 이해할 것이다.
[표 3]
실시예 7
레바우디오사이드
2a
및 다양한 SvG7의 정제
300 mL의 실시예 5의 반응 혼합물(48시간 후)을 H3PO4를 사용하여 pH를 pH 5.5로 조정함으로써 불활성화하고, 이어서 10분 동안 비등시키고 여과하였다. 여과액을 물과 미리 평형을 이룬 500 mL YWD03(중국 창저우 유안웨이 소재) 수지가 담긴 컬럼 내로 로딩하였다. 수지를 2.5 L의 물로 세척하고, 이 단계로부터의 물 유출물을 폐기하였다.
스테비올 글리코사이드를 2.5 L의 70% v/v 에탄올/물에 의한 용리에 의해 YWD03 수지 컬럼으로부터 용리시켰다. 이 단계로부터의 유출물을 수집하고, 60℃에서 진공 하에서 건조시켜 20 g의 건조된 고체 생성물을 얻었다. 이 샘플을 물 중에 용해시키고, 하기 표 4에 열거된 조건을 사용하여 HPLC에 의한 추가의 분획화 및 분리를 거쳤다.
다회의 실행으로부터 개별 화합물에 상응하는 HPLC 분획을 체류 시간에 따라 합하였다. 분획을 냉동-건조시켰다.
[표 4]
얻어진 분획의 순도를 실시예 6에 기재된 분석용 HPLC 방법에 의해 평가하였다. 정제된 레바우디오사이드 2a의 크로마토그램이 도 6에 나타나 있다.
실시예 8
레바우디오사이드
2a
의 구조 설명
Bruker 500 ㎒ 분광계 상에서 NMR 실험을 수행하였는데, 이때 샘플은 피리딘-d5 중에 용해시켰다. 샘플로부터의 신호와 함께, δC 123.5, 135.5, 149.9 ppm 및 δH 7.19, 7.55, 8.71 ppm에서의 피리딘-d5로부터의 신호를 관찰하였다. 피리딘-d 5 에서 기록된 레바우디오사이드 2a의 1H-NMR 스펙트럼은 샘플의 탁월한 품질을 확인시켜 주었다(도 7 참조). HSQC(도 8 참조)는 H,H-COSY(도 9)에서 관찰가능한, C-15에 대한 장거리 커플링을 갖는 당 영역 내의 엑소-메틸렌 기의 존재를 나타낸다. 4차 탄소의 다른 깊은 필드(deep-fielded) 신호(C-13, C-16 및 C-19)가 HMBC에 의해 검출된다(도 10). HSQC, HMBC 및 H,H-COSY에서의 신호의 상관관계는 하기 아글리콘 구조를 갖는 스테비올 글리코사이드의 존재를 밝혀준다:
HSQC와 HMBC의 상관관계는 1i, 1ii, 1iii, 1iv, 1v, 1vi 및 1vii로 표기된 7개의 아노머 신호의 존재를 나타낸다. 약 8 ㎐의 아노머 양성자의 커플링 상수, 그들의 당 결합의 넓은 신호 및 아노머 양성자의 NOE-상관성은 β-D-글루코피라노사이드로서의 이들 7개의 당의 확인을 가능하게 한다.
HSQC 및 HMBC로부터의 조합된 데이터는 당-당 결합 및 당-아글리콘 결합을 밝혀준다. HSQC-TOCSY(도 11a)와 NOESY(도 11b)의 조합을 사용함으로써 당 서열의 배정이 확인되었다.
종합하면, 상기 NMR 실험으로부터의 결과를 사용하여 레바우디오사이드 2a의 구조의 양성자 및 탄소의 화학적 이동을 배정하였다(표 5 참조).
[표 5]
모든 NMR 결과의 상관관계는 7개의 β-D-글루코스가 스테비올 아글리콘에 부착된 레바우디오사이드 2a를 나타내는데, 이는 하기 화학 구조로 나타낸 바와 같다:
레바우디오사이드 2a의 LCMS(도 12a 및 도 12b) 분석은 m/z 1451.6에서 [M-H]- 이온을 나타내었는데, 이는 C62H100O38의 예상된 분자식([C62H99O38]- 단일동위원소 이온에 대한 계산치: 1451.6)과 우수하게 일치하였다. MS 데이터는 레바우디오사이드 2a가 C62H100O38의 분자식을 가짐을 확인시켜 준다. LCMS 분석은 표 6에 열거된 하기 조건에서 수행하였다.
[표 6]
SEQUENCE LISTING
<110> PureCircle Sdn Bhd
<120> HIGH-PURITY STEVIOL GLYCOSIDES
<130> 39227-80PROV
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 808
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 1
Met Ala Asn Ala Glu Arg Met Ile Thr Arg Val His Ser Gln Arg Glu
1 5 10 15
Arg Leu Asn Glu Thr Leu Val Ser Glu Arg Asn Glu Val Leu Ala Leu
20 25 30
Leu Ser Arg Val Glu Ala Lys Gly Lys Gly Ile Leu Gln Gln Asn Gln
35 40 45
Ile Ile Ala Glu Phe Glu Ala Leu Pro Glu Gln Thr Arg Lys Lys Leu
50 55 60
Glu Gly Gly Pro Phe Phe Asp Leu Leu Lys Ser Thr Gln Glu Ala Ile
65 70 75 80
Val Leu Pro Pro Trp Val Ala Leu Ala Val Arg Pro Arg Pro Gly Val
85 90 95
Trp Glu Tyr Leu Arg Val Asn Leu His Ala Leu Val Val Glu Glu Leu
100 105 110
Gln Pro Ala Glu Phe Leu His Phe Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Val
115 120 125
Lys Asn Gly Asn Phe Thr Leu Glu Leu Asp Phe Glu Pro Phe Asn Ala
130 135 140
Ser Ile Pro Arg Pro Thr Leu His Lys Tyr Ile Gly Asn Gly Val Asp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe His Asp Lys Glu Ser
165 170 175
Leu Leu Pro Leu Leu Asp Phe Leu Arg Leu His Ser His Gln Gly Lys
180 185 190
Asn Leu Met Leu Ser Glu Lys Ile Gln Asn Leu Asn Thr Leu Gln His
195 200 205
Thr Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Ala Glu Leu Lys Ser Glu Thr
210 215 220
Leu Tyr Glu Glu Phe Glu Ala Lys Phe Glu Glu Ile Gly Leu Glu Arg
225 230 235 240
Gly Trp Gly Asp Asn Ala Glu Arg Val Leu Asp Met Ile Arg Leu Leu
245 250 255
Leu Asp Leu Leu Glu Ala Pro Asp Pro Ser Thr Leu Glu Thr Phe Leu
260 265 270
Gly Arg Val Pro Met Val Phe Asn Val Val Ile Leu Ser Pro His Gly
275 280 285
Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln
290 295 300
Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu Glu Ile Glu Met Leu
305 310 315 320
Gln Arg Ile Lys Gln Gln Gly Leu Asn Ile Lys Pro Arg Ile Leu Ile
325 330 335
Leu Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Glu Arg
340 345 350
Leu Glu Arg Val Tyr Asp Ser Glu Tyr Cys Asp Ile Leu Arg Val Pro
355 360 365
Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Lys Trp Ile Ser Arg Phe Glu
370 375 380
Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Glu Asp Ala Ala Val Glu Leu
385 390 395 400
Ser Lys Glu Leu Asn Gly Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser
405 410 415
Asp Gly Asn Leu Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Leu Gly Val Thr
420 425 430
Gln Cys Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser
435 440 445
Asp Ile Tyr Trp Lys Lys Leu Asp Asp Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln
450 455 460
Phe Thr Ala Asp Ile Phe Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr
465 470 475 480
Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Glu Thr Val Gly Gln Tyr
485 490 495
Glu Ser His Thr Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His
500 505 510
Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala
515 520 525
Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu Lys Arg Arg Leu Thr
530 535 540
Lys Phe His Ser Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Val Glu Asn
545 550 555 560
Asp Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Lys Lys Lys Pro Ile Leu Phe
565 570 575
Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Ser Gly Leu Val Glu
580 585 590
Trp Tyr Gly Lys Asn Thr Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val
595 600 605
Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Asn Glu Glu Lys Ala
610 615 620
Glu Met Lys Lys Met Tyr Asp Leu Ile Glu Glu Tyr Lys Leu Asn Gly
625 630 635 640
Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asp Arg Val Arg Asn Gly Glu
645 650 655
Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala
660 665 670
Leu Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly
675 680 685
Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Lys Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val
690 695 700
His Gly Lys Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr His Gly Asp Gln Ala
705 710 715 720
Ala Asp Leu Leu Ala Asp Phe Phe Thr Lys Cys Lys Glu Asp Pro Ser
725 730 735
His Trp Asp Glu Ile Ser Lys Gly Gly Leu Gln Arg Ile Glu Glu Lys
740 745 750
Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Gln Arg Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val
755 760 765
Tyr Gly Phe Trp Lys His Val Ser Asn Leu Asp Arg Leu Glu His Arg
770 775 780
Arg Tyr Leu Glu Met Phe Tyr Ala Leu Lys Tyr Arg Pro Leu Ala Gln
785 790 795 800
Ala Val Pro Leu Ala Gln Asp Asp
805
<210> 2
<211> 442
<212> PRT
<213> Solanum lycopersicum
<400> 2
Met Ala Thr Asn Leu Arg Val Leu Met Phe Pro Trp Leu Ala Tyr Gly
1 5 10 15
His Ile Ser Pro Phe Leu Asn Ile Ala Lys Gln Leu Ala Asp Arg Gly
20 25 30
Phe Leu Ile Tyr Leu Cys Ser Thr Arg Ile Asn Leu Glu Ser Ile Ile
35 40 45
Lys Lys Ile Pro Glu Lys Tyr Ala Asp Ser Ile His Leu Ile Glu Leu
50 55 60
Gln Leu Pro Glu Leu Pro Glu Leu Pro Pro His Tyr His Thr Thr Asn
65 70 75 80
Gly Leu Pro Pro His Leu Asn Pro Thr Leu His Lys Ala Leu Lys Met
85 90 95
Ser Lys Pro Asn Phe Ser Arg Ile Leu Gln Asn Leu Lys Pro Asp Leu
100 105 110
Leu Ile Tyr Asp Val Leu Gln Pro Trp Ala Glu His Val Ala Asn Glu
115 120 125
Gln Gly Ile Pro Ala Gly Lys Leu Leu Val Ser Cys Ala Ala Val Phe
130 135 140
Ser Tyr Phe Phe Ser Phe Arg Lys Asn Pro Gly Val Glu Phe Pro Phe
145 150 155 160
Pro Ala Ile His Leu Pro Glu Val Glu Lys Val Lys Ile Arg Glu Ile
165 170 175
Leu Ala Lys Glu Pro Glu Glu Gly Gly Arg Leu Asp Glu Gly Asn Lys
180 185 190
Gln Met Met Leu Met Cys Thr Ser Arg Thr Ile Glu Ala Lys Tyr Ile
195 200 205
Asp Tyr Cys Thr Glu Leu Cys Asn Trp Lys Val Val Pro Val Gly Pro
210 215 220
Pro Phe Gln Asp Leu Ile Thr Asn Asp Ala Asp Asn Lys Glu Leu Ile
225 230 235 240
Asp Trp Leu Gly Thr Lys Pro Glu Asn Ser Thr Val Phe Val Ser Phe
245 250 255
Gly Ser Glu Tyr Phe Leu Ser Lys Glu Asp Met Glu Glu Ile Ala Phe
260 265 270
Ala Leu Glu Ala Ser Asn Val Asn Phe Ile Trp Val Val Arg Phe Pro
275 280 285
Lys Gly Glu Glu Arg Asn Leu Glu Asp Ala Leu Pro Glu Gly Phe Leu
290 295 300
Glu Arg Ile Gly Glu Arg Gly Arg Val Leu Asp Lys Phe Ala Pro Gln
305 310 315 320
Pro Arg Ile Leu Asn His Pro Ser Thr Gly Gly Phe Ile Ser His Cys
325 330 335
Gly Trp Asn Ser Val Met Glu Ser Ile Asp Phe Gly Val Pro Ile Ile
340 345 350
Ala Met Pro Ile His Asn Asp Gln Pro Ile Asn Ala Lys Leu Met Val
355 360 365
Glu Leu Gly Val Ala Val Glu Ile Val Arg Asp Asp Asp Gly Lys Ile
370 375 380
His Arg Gly Glu Ile Ala Glu Ala Leu Lys Ser Val Val Thr Gly Glu
385 390 395 400
Thr Gly Glu Ile Leu Arg Ala Lys Val Arg Glu Ile Ser Lys Asn Leu
405 410 415
Lys Ser Ile Arg Asp Glu Glu Met Asp Ala Val Ala Glu Glu Leu Ile
420 425 430
Gln Leu Cys Arg Asn Ser Asn Lys Ser Lys
435 440
<210> 3
<211> 458
<212> PRT
<213> Stevia rebaudiana
<400> 3
Met Glu Asn Lys Thr Glu Thr Thr Val Arg Arg Arg Arg Arg Ile Ile
1 5 10 15
Leu Phe Pro Val Pro Phe Gln Gly His Ile Asn Pro Ile Leu Gln Leu
20 25 30
Ala Asn Val Leu Tyr Ser Lys Gly Phe Ala Ile Thr Ile Leu His Thr
35 40 45
Asn Phe Asn Lys Pro Lys Thr Ser Asn Tyr Pro His Phe Thr Phe Arg
50 55 60
Phe Ile Leu Asp Asn Asp Pro Gln Asp Glu Arg Ile Ser Asn Leu Pro
65 70 75 80
Thr His Gly Pro Leu Ala Gly Met Arg Ile Pro Ile Ile Asn Glu His
85 90 95
Gly Ala Asp Glu Leu Arg Arg Glu Leu Glu Leu Leu Met Leu Ala Ser
100 105 110
Glu Glu Asp Glu Glu Val Ser Cys Leu Ile Thr Asp Ala Leu Trp Tyr
115 120 125
Phe Ala Gln Asp Val Ala Asp Ser Leu Asn Leu Arg Arg Leu Val Leu
130 135 140
Met Thr Ser Ser Leu Phe Asn Phe His Ala His Val Ser Leu Pro Gln
145 150 155 160
Phe Asp Glu Leu Gly Tyr Leu Asp Pro Asp Asp Lys Thr Arg Leu Glu
165 170 175
Glu Gln Ala Ser Gly Phe Pro Met Leu Lys Val Lys Asp Ile Lys Ser
180 185 190
Ala Tyr Ser Asn Trp Gln Ile Gly Lys Glu Ile Leu Gly Lys Met Ile
195 200 205
Lys Gln Thr Lys Ala Ser Ser Gly Val Ile Trp Asn Ser Phe Lys Glu
210 215 220
Leu Glu Glu Ser Glu Leu Glu Thr Val Ile Arg Glu Ile Pro Ala Pro
225 230 235 240
Ser Phe Leu Ile Pro Leu Pro Lys His Leu Thr Ala Ser Ser Ser Ser
245 250 255
Leu Leu Asp His Asp Arg Thr Val Phe Glu Trp Leu Asp Gln Gln Ala
260 265 270
Pro Ser Ser Val Leu Tyr Val Ser Phe Gly Ser Thr Ser Glu Val Asp
275 280 285
Glu Lys Asp Phe Leu Glu Ile Ala Arg Gly Leu Val Asp Ser Gly Gln
290 295 300
Ser Phe Leu Trp Val Val Arg Pro Gly Phe Val Lys Gly Ser Thr Trp
305 310 315 320
Val Glu Pro Leu Pro Asp Gly Phe Leu Gly Glu Arg Gly Lys Ile Val
325 330 335
Lys Trp Val Pro Gln Gln Glu Val Leu Ala His Pro Ala Ile Gly Ala
340 345 350
Phe Trp Thr His Ser Gly Trp Asn Ser Thr Leu Glu Ser Val Cys Glu
355 360 365
Gly Val Pro Met Ile Phe Ser Ser Phe Gly Gly Asp Gln Pro Leu Asn
370 375 380
Ala Arg Tyr Met Ser Asp Val Leu Arg Val Gly Val Tyr Leu Glu Asn
385 390 395 400
Gly Trp Glu Arg Gly Glu Val Val Asn Ala Ile Arg Arg Val Met Val
405 410 415
Asp Glu Glu Gly Glu Tyr Ile Arg Gln Asn Ala Arg Val Leu Lys Gln
420 425 430
Lys Ala Asp Val Ser Leu Met Lys Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Ser Leu
435 440 445
Glu Ser Leu Val Ser Tyr Ile Ser Ser Leu
450 455
Claims (17)
- 하기 화학식을 갖는 스테비올 글리코사이드 I-XVI:
상기 식에서, R1 및 R2 당 사슬은 하기 표에 정의되어 있음:
- 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드를 생성하기 위한 방법으로서,
a. 적어도 하나의 탄소 원자를 갖는 유기 화합물을 포함하는 출발 조성물을 제공하는 단계;
b. 스테비올 생합성 효소, UDP-글루코실트랜스퍼라제, 및 선택적으로 UDP-글루코스 재순환 효소로부터 선택되는 적어도 하나의 효소를 함유하는 효소 제제 또는 미생물을 제공하는 단계;
c. 상기 효소 제제 또는 미생물을 상기 출발 조성물을 함유하는 배지와 접촉시켜 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드를 포함하는 배지를 생성하는 단계를 포함하는, 방법. - 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드를 생성하기 위한 방법으로서,
a. 적어도 하나의 탄소 원자를 갖는 유기 화합물을 포함하는 출발 조성물을 제공하는 단계;
b. 스테비올 생합성 효소, UDP-글루코실트랜스퍼라제, 및 선택적으로 UDP-글루코스 재순환 효소로부터 선택되는 적어도 하나의 효소를 포함하는 생물촉매를 제공하는 단계;
c. 상기 생물촉매를 상기 출발 조성물을 함유하는 배지와 접촉시켜 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드를 포함하는 배지를 생성하는 단계를 포함하는, 방법. - 제2항 또는 제3항에 있어서,
d. 상기 배지로부터 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드를 분리하여 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드의 고도로 정제된 조성물을 제공하는 단계를 추가로 포함하는, 방법. - 제2항, 제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 출발 조성물은 스테비올, 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 D, 루부소사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 레바우디오사이드 B, 스테비오사이드, 레바우디오사이드 G, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 AM, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M4, 다른 스테비올 글리코사이드, 폴리올, 탄수화물, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 미생물은 E. 콜라이(E. coli), 사카로미세스 종(Saccharomyces sp.), 아스페르길루스 종(Aspergillus sp.), 피키아 종(Pichia sp.), 바실루스 종(Bacillus sp.), 및 야로위아 종(Yarrowia sp.)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 생물촉매는 상기 출발 조성물을 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드로 전환시킬 수 있는 효소, 또는 하나 이상의 효소를 포함하는 세포인, 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 효소는 메발로네이트(MVA) 경로 효소, 2-C-메틸-D-에리트리톨-4-포스페이트 경로(MEP/DOXP) 효소, 제라닐제라닐 다이포스페이트 신타제, 코팔릴 다이포스페이트 신타제, 카우렌 신타제, 카우렌 옥시다제, 카우렌산 13-하이드록실라제(KAH), 스테비올 신테타제, 데옥시자일룰로스 5-포스페이트 신타제(DXS), D-1-데옥시자일룰로스 5-포스페이트 환원이성질화 효소(DXR), 4-다이포스포시티딜-2-C-메틸-D-에리트리톨 신타제(CMS), 4-다이포스포시티딜-2-C-메틸-D-에리트리톨 키나제(CMK), 4-다이포스포시티딜-2-C-메틸-D-에리트리톨 2,4-사이클로다이포스페이트 신타제(MCS), 1-하이드록시-2-메틸-2(E)-부테닐 4-다이포스페이트 신타제(HDS), 1-하이드록시-2-메틸-2(E)-부테닐 4-다이포스페이트 리덕타제(HDR), 아세토아세틸-CoA 티올라제, 절단된 HMG-CoA 리덕타제, 메발로네이트 키나제, 포스포메발로네이트 키나제, 메발로네이트 피로포스페이트 데카르복실라제, 사이토크롬 P450 리덕타제, UGT74G1, UGT85C2, UGT91D2, EUGT11, UGTSl2, UGT76G1, UGlyT91C1 또는 85% 초과의 아미노산 서열 동일성, 86% 초과의 아미노산 서열 동일성, 87% 초과의 아미노산 서열 동일성, 88% 초과의 아미노산 서열 동일성, 89% 초과의 아미노산 서열 동일성, 90% 초과의 아미노산 서열 동일성, 91% 초과의 아미노산 서열 동일성, 92% 초과의 아미노산 서열 동일성, 93% 초과의 아미노산 서열 동일성, 94% 초과의 아미노산 서열 동일성, 95% 초과의 아미노산 서열 동일성, 96% 초과의 아미노산 서열 동일성, 97% 초과의 아미노산 서열 동일성, 98% 초과의 아미노산 서열 동일성, 99% 초과의 아미노산 서열 동일성을 갖는 이들의 돌연변이 변이체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제4항에 있어서, 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드의 고도로 정제된 조성물 중의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드의 함량은 건조 기준으로 약 95 중량% 초과인, 방법.
- 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드를 포함하는 소비 제품으로서,
상기 제품은 식품, 음료, 약제학적 조성물, 담배 제품, 뉴트라슈티컬(nutraceutical) 조성물, 구강 위생 조성물, 및 화장용 조성물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 소비 제품. - 제10항에 있어서, 상기 제품은 음료; 천연 주스; 청량 드링크; 탄산 소프트 드링크; 다이어트 드링크; 무칼로리 드링크; 저칼로리 드링크 및 식품; 요거트 드링크; 인스턴트 주스; 인스턴트 커피; 분말 유형의 인스턴트 음료; 통조림 제품; 시럽; 발효 된장; 간장; 식초; 드레싱; 마요네즈; 케첩; 커리; 수프; 인스턴트 부용(bouillon); 분말형 간장; 분말형 식초; 비스킷 유형; 쌀 비스킷; 크래커; 빵; 초콜릿; 캐러멜; 캔디; 츄잉검; 젤리; 푸딩; 보존처리된 과일 및 채소; 신선한 크림; 잼; 마멀레이드; 꽃 반죽; 분유; 아이스크림; 셔벗; 병에 채운 채소 및 과일; 통조림으로 된 삶은 콩; 감미부여된 소스에서 끓인 육류 및 식품; 농업용 채소 식품 제품; 해산물; 햄; 소시지; 생선 햄; 생선 소시지; 어묵; 튀긴 생선 제품; 건조 해산물 제품; 냉동 식품 제품; 보존처리된 해초류; 보존처리된 육류; 담배 및 의약품으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 소비 제품.
- 제10항에 있어서, 탄수화물, 폴리올, 아미노산 및 이의 상응하는 염, 폴리아미노산 및 이의 상응하는 염, 당산(sugar acid) 및 이의 상응하는 염, 뉴클레오타이드, 유기산, 무기산, 유기 염(유기산 염 및 유기 염기 염을 포함함), 무기 염, 쓴맛 화합물, 카페인, 향미료 및 향미 성분, 쌉쌀한 맛 화합물, 단백질 또는 단백질 가수분해물, 계면활성제, 유화제, 플라보노이드, 알코올, 중합체 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 첨가제를 추가로 포함하는, 소비 제품.
- 제10항에 있어서, 사포닌, 산화방지제, 식이 섬유 공급원, 지방산, 비타민, 글루코사민, 미네랄, 방부제, 수화제, 프로바이오틱스, 프리바이오틱스, 체중 관리제, 골다공증 관리제, 피토에스트로겐, 장쇄 1차 지방족 포화 알코올, 피토스테롤 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 기능성 성분을 추가로 포함하는, 소비 제품.
- 제10항에 있어서, 스테비올모노사이드, 스테비올모노사이드 A, 스테비올바이오사이드, 스테비올바이오사이드 A, 스테비올바이오사이드 B, 스테비올바이오사이드 C, 스테비올바이오사이드 D, 스테비올바이오사이드 E, 루부소사이드, 둘코사이드 A, 둘코사이드 B, 둘코사이드 C, 둘코사이드 D, 스테비오사이드, 스테비오사이드 A, 스테비오사이드 B, 스테비오사이드 C, 스테비오사이드 D, 스테비오사이드 E, 스테비오사이드 E2, 스테비오사이드 F, 스테비오사이드 G, 스테비오사이드 H, 레바우디오사이드 A, 레바우디오사이드 A2, 레바우디오사이드 A3, 레바우디오사이드 A4, 레바우디오사이드 B, 레바우디오사이드 B2, 레바우디오사이드 C, 레바우디오사이드 C2, 레바우디오사이드 C3, 레바우디오사이드 C4, 레바우디오사이드 C5, 레바우디오사이드 C6, 레바우디오사이드 D, 레바우디오사이드 D2, 레바우디오사이드 D3, 레바우디오사이드 D4, 레바우디오사이드 D5, 레바우디오사이드 D6, 레바우디오사이드 D7, 레바우디오사이드 D8, 레바우디오사이드 E, 레바우디오사이드 E2, 레바우디오사이드 E3, 레바우디오사이드 E4, 레바우디오사이드 E5, 레바우디오사이드 E6, 레바우디오사이드 E7, 레바우디오사이드 F, 레바우디오사이드 F2, 레바우디오사이드 F3, 레바우디오사이드 G, 레바우디오사이드 H, 레바우디오사이드 H2, 레바우디오사이드 H3, 레바우디오사이드 H4, 레바우디오사이드 H5, 레바우디오사이드 H6, 레바우디오사이드 I, 레바우디오사이드 I2, 레바우디오사이드 I3, 레바우디오사이드 J, 레바우디오사이드 K, 레바우디오사이드 K2, 레바우디오사이드 KA, 레바우디오사이드 L, 레바우디오사이드 M, 레바우디오사이드 M2, 레바우디오사이드 M3, 레바우디오사이드 N, 레바우디오사이드 N2, 레바우디오사이드 N3, 레바우디오사이드 N4, 레바우디오사이드 N5, 레바우디오사이드 O, 레바우디오사이드 O2, 레바우디오사이드 O3, 레바우디오사이드 O4, 레바우디오사이드 Q, 레바우디오사이드 Q2, 레바우디오사이드 Q3, 레바우디오사이드 R, 레바우디오사이드 S, 레바우디오사이드 T, 레바우디오사이드 T1, 레바우디오사이드 U, 레바우디오사이드 U2, 레바우디오사이드 V, 레바우디오사이드 V2, 레바우디오사이드 V3, 레바우디오사이드 W, 레바우디오사이드 W2, 레바우디오사이드 W3, 레바우디오사이드 Y, 레바우디오사이드 Z1, 레바우디오사이드 Z2, 레바우디오사이드 AM, SvG7, NSF-02, 모그로사이드 V, 시라토스, 나한과(Luo Han Guo), 알룰로스, D-알로스, D-타가토스, 에리트리톨, 브라제인, 네오헤스페리딘 다이하이드로칼콘, 글리시리즈산 및 이의 염, 타우마틴, 페릴라르틴, 페르난둘신, 무쿠로지오사이드, 베이유노사이드, 플로미소사이드-I, 다이메틸-헥사하이드로플루오렌-다이카르복실산, 아브루소사이드, 페리안드린, 카르노시플로사이드, 사이클로카리오사이드, 프테로카리오사이드, 폴리포도사이드 A, 브라질린, 헤르난둘신, 필로둘신, 글리시필린, 플로리진, 트릴로바틴, 다이하이드로플라보놀, 다이하이드로퀘르세틴-3-아세테이트, 네오아스틸리빈, 트랜스-신남알데하이드, 모나틴 및 이의 염, 셀리구에아인 A, 헤마톡실린, 모넬린, 오슬라딘, 프테로카리오사이드 A, 프테로카리오사이드 B, 마빈린, 펜타딘, 미라쿨린, 쿠르쿨린, 네오쿨린, 클로로겐산, 시나린, 시아메노사이드, 수크랄로스, 포타슘 아세설팜, 아스파르탐, 알리탐, 사카린, 사이클라메이트, 네오탐, 둘신, 수오산 아드반탐, 짐넴산, 호둘신, 지지핀, 락티솔, 글루타메이트, 아스파르트산, 글리신, 알라닌, 트레오닌, 프롤린, 세린, 라이신, 트립토판, 말티톨, 만니톨, 소르비톨, 락티톨, 자일리톨, 이노시톨, 아이소말트, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 트레이톨, 갈락티톨, 수소화 아이소말툴로스, 환원된 아이소말토-올리고당, 환원된 자일로-올리고당, 환원된 겐티오-올리고당, 환원된 말토스 시럽, 환원된 글루코스 시럽, 수소화 전분 가수분해물, 폴리글리시톨, 당 알코올, L-당, L-소르보스, L-아라비노스, 트레할로스, 갈락토스, 람노스, 다양한 사이클로덱스트린, 환형 올리고당, 다양한 유형의 말토덱스트린, 덱스트란, 수크로스, 글루코스, 리불로스, 프룩토스, 트레오스, 자일로스, 릭소스, 알트로스, 만노스, 이도스, 락토스, 말토스, 전화당, 아이소트레할로스, 네오트레할로스, 아이소말툴로스, 에리트로스, 데옥시리보스, 굴로스, 탈로스, 에리트룰로스, 자일룰로스, 셀로바이오스, 아밀로펙틴, 글루코사민, 만노사민, 글루쿠론산, 글루콘산, 글루코노-락톤, 아베쿠오스, 갈락토사민, 비트 올리고당, 아이소말토-올리고당(아이소말토스, 아이소말토트라이오스, 파노스 등), 자일로-올리고당(자일로트라이오스, 자일로바이오스 등), 자일로-종결된 올리고당, 겐티오-올리고당(겐티오바이오스, 겐티오트라이오스, 겐티오테트라오스 등), 니게로-올리고당, 팔라티노스 올리고당, 프룩토올리고당(케스토스, 니스토스 등), 말토테트라올, 말토트라이올, 말토-올리고당(말토트라이오스, 말토테트라오스, 말토펜타오스, 말토헥사오스, 말토헵타오스 등), 전분, 이눌린, 이눌로-올리고당, 락툴로스, 멜리바이오스, 라피노스, 이성질화 액체 당, 예컨대 고 프룩토스 옥수수 시럽, 커플링 당, 대두 올리고당, D-프시코스, D-리보스, L-글루코스, L-푸코스, D-투라노스, D-류크로스로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물을 추가로 포함하는, 소비 제품.
- 감미료를 포함하는 음료 또는 식품 제품의 감미성(sweetness)을 증강시키기 위한 방법으로서,
a. 감미료를 포함하는 음료 또는 식품 제품을 제공하는 단계; 및
b. 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드를 포함하는 감미성 증강제(sweetness enhancer)를 첨가하는 단계를 포함하며,
제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드는 감미성 인식 역치(sweetness recognition threshold) 이하의 농도로 존재하는, 방법. - 음료 또는 식품 제품의 향미를 개질하기 위한 방법으로서,
a. 음료 또는 식품 제품을 제공하는 단계, 및
b. 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드를 포함하는 조성물을 첨가하는 단계를 포함하는, 방법. - 음료 또는 식품 제품의 거품발생을 억제하기 위한 방법으로서,
a. 음료 또는 식품 제품을 제공하는 단계, 및
b. 제1항의 적어도 하나의 스테비올 글리코사이드를 포함하는 거품 억제제를 첨가하는 단계를 포함하는, 방법.
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