KR20210102927A - 박테리아 균주를 포함하는 조성물 - Google Patents

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KR20210102927A
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안나 에토레
수아드 아흐메드
존 크라이언
테드 디난
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Abstract

본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에서 사용을 위한 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공한다.

Description

박테리아 균주를 포함하는 조성물
기술 분야
본 발명은 포유류 소화관으로부터 단리된 박테리아 균주를 포함하는 조성물 및 이러한 조성물을 질환 치료에 사용하는 용도 분야에 관한 것이다.
발명의 배경
인간의 장은 태내(in utero)에서 무균 상태로 여겨지지만, 출생 직후 다양한 양육 및 환경 미생물에 노출된다. 그 후에, 미생물 집락형성과 천이의 동적 기간이 발생하는데, 이것은 인자, 예를 들면, 전달 방식, 환경, 식이 및 숙주 유전자형에 의해 영향을 받고, 이들 모두 특히, 어린 시절 동안 소화관 미생물 균총의 조성에 영향을 준다. 후속적으로, 상기 미소생물군은 안정화되고, 성인과 유사하게 된다 [1]. 인간 장내 미소생물군은 두 가지 중요 박테리아 강목(divisions), 의간균류(Bacteroidetes)와 후벽균(Firmicutes)에 기본적으로 속하는 500-1000개 이상의 상이한 계통형(phylotypes)을 함유한다 [2]. 인간 장내 박테리아 군집화로 인해 발생하는 성공적인 공생 관계는 다양한 대사적, 구조적, 보호적 그리고 기타 유익한 기능을 제공한다. 군집화된 장의 강화된 신진대사 활동은 숙주에게 중요한 영양 공급원을 제공하는 부-산물의 방출과 함께 소화 불가능한 식이 성분이 분해되도록 한다. 유사하게, 장내 미생물총의 면역학적 중요성은 잘-알려져 있으며, 공생 박테리아의 도입에 따라 기능적으로 재구성되는 손상된 면역 체계를 가진 무균 동물에서 예시된다 [3-5].
염증성 장 질환 (IBD)과 같은 위장 장애에서 미소생물군 구성에서 극적인 변화들이 기록되고 있었다. 예를 들어, 클로스트리듐(Clostridium) 집락 XIVa 박테리아의 수준은 IBD 환자에서 감소하는 반면, 대장균(E. coli)의 수는 증가하여 장내 공생체(symbionts)와 병균체(pathobionts)의 균형에 변화가 있음을 시사한다 [6-9].
특정 박테리아 균주가 동물의 장과 다른 조직에 미칠 수 있는 잠재적인 긍정적 효과를 인식하여, 다양한 질환의 치료에 사용하기 위해 용도로 제안되었다 (예를 들어, [10-13]). 또한, 대부분 락토바실러스(Lactobacillus) 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 균주를 비롯한 특정 균주들은 장과 직접적으로 연계되지 않은 다양한 염증성 질환 및 자가면역 질환을 치료하기 위한 용도로 제안되었다(검토용으로 [14] 및 [15] 참고). 그러나, 상이한 박테리아 균주들과 상이한 질환 간의 상관관계, 그리고 특정 유형의 질환에 대해 특정 박테리아 균주들이 전신 수준에서 장과 다른 특정 조직들에 미치는 정확한 영향은 아직 제대로 특성화되지 않았다.
최근에, 인간 정신계 장애에서 병리생리학적 역할을 수행할 수 있는 소화관 마이크로바이옴에서 변경에 관하여 당해 분야에서 관심이 증가되었다 임상전 및 임상적 증거는 정신 건강 문제와 미소생물군사이에 연계를 강하게 암시한다 [16]. 임상전 문헌의 성장하는 중심부는 복수 신경내분비 및 내분비 신호전달 시스템을 수반하는, 뇌 및 소화관 마이크로바이옴 사이에 이중-지향성(bidirectional) 신호전달을 증명하였다. 프로바이오틱스는 또한 생리학의 장-외(extra-intestinal) 측면에 영향을 미치는 신경화학 물질의 전달 수단으로 작용하는 것으로 제안되었다. 그러나, 이러한 연구는 박테리아가 신경생리학적 과정에 영향을 미치는 기전을 확인하는 데 실패했으며, 특히 박테리아에 대한 유용한 효과를 보여주지 못했다. 이것은 현재, 마이크로바이옴과 인간 정신계 장애 사이에 연계의 실질적인 효과가 불량하게 특징화된다는 것을 지시한다. 따라서, 정신계 장애에 대한 마이크로바이옴을 변경하는 치료적 영향을 확인하기 위한 더욱 직접적인 분석적 연구가 필요하다.
정신계 장애를 치료하는 새로운 방법이 당해 분야에서 요구된다. 장내 박테리아를 이용하는 새로운 요법이 개발될 수 있도록, 장내 박테리아의 잠재적 효과가 특징화되는 것이 또한 요구된다.
발명의 요약
본 발명자들은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 및 예방을 위한 새로운 치료법을 개발했다. 구체적으로, 본 발명자들은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 정신계 장애의 치료 및 예방을 위한 새로운 치료법을 개발했다. 세로토닌은 그중에서도(inter alia) 안녕(well-being)과 행복감에 기여하는 모노아민 전달체다. 대상체에서 세로토닌 결핍은 무엇보다도 대상체의 기분, 식욕 및/또는 수면의 자율화를 악화시킬 수 있다.
실시예에 나타난 바와 같이, 본 발명자들은 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물에 의해 뉴런에서 트립토판 수산화효소 1 및 2의 발현이 상향조절됨을 확인하였다. 트립토판 수산화효소는 세로토닌 생산에 관여하는 효소다. 따라서, 본 발명의 조성물은 트립토판 수산화효소 경로를 통한 세로토닌 생산을 증가시킴으로써 해당 대상체의 뉴런에서 이용가능한 세로토닌의 양의 증가에 유용하며, 이로 인하여 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.
본 발명자들은 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물에 의해 세로토닌 운반자 (SERT) 유전자 SLC6A4의 발현을 상향조절됨을 또한 보여주었다. SERT는 시냅스 틈새(synaptic cleft)로부터 시냅스이전(presynaptic) 뉴런으로의 세로토닌을 수송하는 모노아민 운반자 단백질의 일종이다. SERT는 세로토닌성 뉴런의 표지다. 따라서, 본 발명의 조성물은 나이브(
Figure pct00001
) 뉴런이 생체내에서 세로토닌성 뉴런으로의 분화를 촉진시키는데 효과적일 수 있다. 세로토닌성 뉴런이 세로토닌을 생산하기 때문에, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애에 이 조성물은 특히 유익할 수 있다. 따라서, 대상체에서 세로토닌-생산하는 뉴런 수의 증가는 세로토닌의 생산을 증가시킬 수 있고, 따라서 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 완화시킬 수 있다.
본 발명자들은 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물에 의해 생체내 세로토닌의 분비가 증가됨을 또한 보여주었다. 따라서, 본 발명자들은 본 발명의 조성물을 이용하여 생체내 세로토닌의 생체이용성을 유익하게 증가시킬 수 있음을 알아내었다. 구체적으로, 본 발명자들은 본 발명의 조성물이 생체내 세로토닌의 생체이용성을 증가시키는 것을 알았다. 따라서, 본 발명의 조성물은 장애, 구체적으로 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 정신 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.
제 1 구체예에서, 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료 또는 예방하는 방법에 사용을 위한 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 정신 장애를 치료 또는 예방하는 방법에 사용을 위한 것이다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 우울증, 불안, 외상-후 스트레스 장애 및 강박 장애로 구성된 군에서 선택된 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위한 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공한다.
바람직한 구체예들에서, 본 발명은 우울증을 치료하거나 또는 예방하는 방법에서 이용을 위한, 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 구체예들에서, 상기 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis)이다. 밀접하게 관련된 균주, 이를 테면, 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 박테리아 균주의 16S rRNA 유전자 서열에 대하여 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 유전자 서열을 갖는 박테리아 균주가 이용될 수 있다. 바람직하게는, 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 1 또는 2와 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다. 바람직하게는, 서열 동일성은 서열 식별 번호: 2에 대한 것이다. 바람직하게는, 본 발명에 사용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 2에 의해 나타낸 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다. 가장 바람직하게는, 상기 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 42787로 기탁된 균주다.
특히 바람직한 구체예에서, 본 발명은 우울증을 치료하거나 또는 예방하는 방법에서 이용을 위한, 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 종의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공한다.
바람직하게는, 본 발명에 사용되는 메가스파에라(Megasphaera)) 속의 박테리아 균주는 대사산물 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산중 하나 또는 그 이상을 생산한다. 바람직하게는, 본 발명에 사용되는 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주는 아세테이트와 프로피오네이트중 하나 또는 이 둘 모두를 소비한다. 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 박테리아 균주는 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산을 생산하고, 아세테이트 및 프로피오네이트를 소비한다. 특히 바람직한 구체예들에서, 우울증을 치료하거나 또는 예방하는 방법에서 이용을 위한, 본 발명은 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산을 생산하고, 아세테이트 및 프로피오네이트를 소비하는 메가스파에라(Megasphaera) 속, 가장 바람직하게는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 종의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공한다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 경구 투여용이다. 본 발명의 균주의 경구 투여는 정신계 장애에 효과적일 수 있다. 또한, 경구 투여는 환자 및 의사에게 편의하고, 그리고 장에 전달 및/또는 장의 부분적인 또는 전체 집락형성을 허용한다.
일정한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 한 가지 또는 그 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함한다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 동결 건조된 박테리아 균주를 포함한다. 동결건조는 박테리아의 전달을 가능하게 하는 안정된 조성물을 제조하기 위한 효과적이고 편리한 기술이다.
일정한 구체예에서, 본 발명은 전술된 바와 같은 조성물을 포함하는 식품 산물을 제공한다.
추가적으로, 본 발명은 메가스파에라 (Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료하거나 또는 예방하는 방법을 제공한다.
상기 발명을 개발하는 동안, 본 발명자들은 요법에 특히 유용한 박테리아 균주를 확인하고 특징화하였다. 본 발명의 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주는 본원에서 설명된 질환, 예를 들면, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 정신계 장애를 치료하는데 효과적인 것으로 밝혀진다. 따라서, 또다른 측면에서, 본 발명은 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주의 세포, 또는 이의 유도체를 제공한다. 본 발명은 또한, 이런 세포를 포함하는 조성물, 또는 이런 세포의 생물학적으로 순수한 배양액을 제공한다. 본 발명은 또한, 특히 본원에서 설명된 질환에 대한 요법에서 이용을 위한, 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주의 세포, 또는 이의 유도체를 제공한다.
본 발명의 구체예들
1. 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에서 사용을 위한, 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물.
2. 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 정신 장애의 치료 또는 예방에서 구체예 1에 따른 사용을 위한 조성물.
3. 구체예 1 또는 2에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 장애는 우울증, 불안, 외상-후 스트레스 장애 (PTSD) 및 강박 장애로 구성된 군에서 선택된다.
4. 구체예 3에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 장애는 우울증이다.
5. 구체예 3에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 장애는 PTSD이다.
6. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 트립토판 수산화효소 경로를 통하여 해당 대상체에서 세로토닌의 생산을 증가시킨다.
7. 구체예 6에 따른 사용을 위한 조성물, 이때, 상기 조성물은 해당 대상체의 뇌에서 세로토닌의 생산을 증가시킨다.
8. 구체예 6 또는 7에 따른 사용을 위한 조성물, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 트립토판 수산화효소 1의 발현을 증가시킨다.
9. 구체예 6 또는 7에 따른 사용을 위한 조성물, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 트립토판 수산화효소 2의 발현을 증가시킨다.
10. 구체예 6 또는 7에 따른 사용을 위한 조성물, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 트립토판 수산화효소 1 및 2의 발현을 증가시킨다.
11. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체의 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다.
12. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체, 임의선택적으로 해당 대상체의 뇌에서 세로토닌의 분비를 증가시킨다.
13. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 박테리아 균주는 다음의 대사산물중 하나 또는 그 이상을 생산한다: 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산.
14. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 박테리아 균주는 아세테이트와 프로피오네이트중 하나 또는 이 둘 모두를 소비한다.
15. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 박테리아 균주는 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산을 생산하고, 아세테이트 및 프로피오네이트를 소비한다.
16. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 박테리아 균주는 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주의 16S rRNA 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는다.
17. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16중 임의의 하나에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16s rRNA 서열을 갖거나, 또는 이때 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 11, 12, 13, 14, 15 또는 16중 임의의 하나로 나타내는 16s rRNA 유전자 서열을 갖는다.
18. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis)이다.
19. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis)의 박테리아 균주의 16s rRNA 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16s rRNA 유전자 서열을 갖는다.
20. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 1 또는 2와 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16s rRNA 유전자 서열을 갖는다.
21. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 2에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16s rRNA 유전자 서열을 갖거나, 또는 이때 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 2로 제시되는 16s rRNA 유전자 서열을 갖는, 조성물.
22. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 조성물은 경구 투여용이다.
23. 임의의 선행 구체예에 따른 용도를 위한 조성물, 이때 상기 조성물은 하나 또는 그 이상의 약제학적으로 수용가능한 부형제 또는 담체를 포함한다.
24. 임의의 선행 구체예에 따른 용도를 위한 조성물, 이때 박테리아 균주는 동결건조된다.
25. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 조성물은 임의의 다른 속으로부터의 박테리아를 포함하지 않거나, 또는 상기 조성물은 임의의 다른 속의 박테리아 균주를 최소한의 양(de minimis)으로 또는 생물학적으로 무관한 양으로 포함한다.
26. 구체예 11에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 조성물은 임의의 다른 종으로부터의 박테리아를 포함하지 않거나, 또는 상기 조성물은 또다른 종의 박테리아 균주를 최소한의 양(de minimis)으로 또는 생물학적으로 무관한 양으로 포함한다.
27. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 박테리아 균주는 생존 가능하고, 부분적으로 또는 전체적으로 장에서 군집화될 수 있다.
28. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 상기 조성물은 메가스파에라(Megasphaera) 속의 단일 균주, 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 종의 단일 균주를 포함한다.
29. 구체예 1-19 또는 22중 임의의 것에 따른 사용을 위한 조성물, 이 조성물은 미생물 컨소시엄의 일부로서 메가스파에라(Megasphaera) 박테리아 균주를 포함한다.
30. 임의의 선행 구체예의 용도를 위한, 임의의 선행 구체예의 해당 조성물을 포함하는 식품.
31. 임의의 선행 구체예의 용도를 위한, 임의의 선행 구체예의 해당 조성물을 포함하는 백신 조성물.
32. 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료 또는 예방하는 방법, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
33. 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주의 세포, 또는 이의 유도체.
34. 구체예 28의 세포를 포함하는 조성물.
35. 구체예 29의 조성물, 이 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함한다.
36. 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주, 또는 이의 유도체의 생물학적으로 순수한 배양액.
37. 요법에서 이용을 위한, 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주의 세포, 또는 이의 유도체.
38. 구체예 32의 세포, 이때 이 세포는 구체예 1-24중 임의의 것에 따른 사용을 위한 것이다.
39. 임의의 선행 구체예에 따른 사용을 위한 조성물, 이때 여기서 치료될 대상체는 선택적 세로토닌 재흡수 억제제를 투여받았거나, 또는 투여받을 것이다.
40. 구체예 1-24중 임의의 하나에 따라 특징화된 장애의 치료 또는 예방에서 구체예 1-24중 임의의 하나에 따른 조성물과 병용하여 사용을 위한 선택적 세로토닌 재흡수 억제제.
41. 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에서 사용을 위한 선택적 세로토닌 재흡수 억제제, 이때 치료될 대상체는 구체예 1-24, 25 또는 30중 임의의 하나에 따라 특징화된 조성물을 제공받았거나, 또는 제공받을 것이다.
42. 구체예 34 - 36중 임의의 하나에 따른 선택적 세로토닌 재흡수 억제제, 이때 선택적 세로토닌 재흡수 억제제는 시타로프람(citalopram), 답옥세틴(dapoxetine), 에시타로프람(escitalopram), 플루옥세틴(fluoxetine), 플루복사민(fluvoxamine), 파로옥세틴(paroxetine), 세르트랄린(sertraline) 및 보르티옥세틴(vortioxetine)으로 구성된 목록에서 선택된다.
43. 치료요법에 사용을 위한 박테리아 균주, 이때 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 11, 12, 13, 14, 15 또는 16중 임의의 하나에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는다.
44. 치료요법에 사용을 위해, 서열 식별 번호: 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16중 임의의 하나로 제시되는 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주.
본 발명은 다음의 도면을 참고하여 설명된다:
도 1에서는 NCIMB 42787의 투여 후 뇌에서 신경전달물질 대사산물의 수준을 보여준다.
도 2에서는 SH-SY5Y 신경모세포종 세포에서 트립토판 수산화효소 1 및 2 (TPH1 및 TPH2) 발현에 있어서 배수-변화를 보여준다. 세포는 10% NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 24 h 동안 항온처리되었다.
도 3에서는 SH-SY5Y 신경모세포종 세포에서 트립토판 수산화효소 1 및 2 (TPH1 및 TPH2) 발현에 있어서 배수-변화를 보여준다. 세포는 5% NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 72 h 동안 항온처리되었다.
도 4에서는 SH-SY5Y 신경모세포종 세포에서 SLC6A4 발현에 있어서 배수-변화를 보여준다. 세포는 10% NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 24 h 동안 항온처리되었다.
도 5에서는 SH-SY5Y 신경모세포종 세포에서 SLC6A4 발현에 있어서 배수-변화를 보여준다. 세포는 5% NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 72 h 동안 항온처리되었다.
도 6에서는 분화된 Caco2 세포에서 트립토판 수산화효소 1 (TPH1) 발현에 있어서 배수-변화를 보여준다. 세포는 10% NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 24 h 동안 항온처리되었다.
도 7에서는 분화된 Caco2 세포에서 SLC6A4 발현에 있어서 배수-변화를 보여준다. 세포는 10% NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 24 h 동안 항온처리되었다.
도 8에서는 상층액에서 대사산물 생산 - 유기 산의 수준을 보여준다.
도 9에서는 대사산물 생산 수준을 보여준다 - 참고 균주 1, 참고 균주 2 및 참고 균주 3.
도 10: NCIMB 42787, NCIMB 43385, NCIMB 43388 및 NCIMB 43389에 의한 유기산 생산 및 소비.
도 11: NCIMB 42787은 BALB/c 마우스에서 결장의 Tph1 mRNA 발현에 영향을 끼친다.
도 12: 메가스파에라(Megasphaera) 참고 균주 NCIMB 43385는 BALB/c 마우스에서 미네랄코르티코이드 수용체 발현을 조절한다.
도 13: 메가스파에라(Megasphaera) 참고 균주 NCIMB 43385는 해마 및 편도체에서 GABA A2 발현을 조절한다.
도 14: 메가스파에라(Megasphaera) 참고 균주 NCIMB 43387은 옥시토신 수용체의 발현을 조절한다.
본 발명의 개시
박테리아 균주
본 발명의 조성물은 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함한다. 실시예는 이러한 속의 박테리아가 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료하거나 예방하는데 특별히 유용할 것임을 증명한다. 바람직하게는, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 1 또는 2와 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다. 바람직하게는, 서열 동일성은 서열 식별 번호: 2에 대한 것이다. 바람직하게는, 본 발명에 사용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 2에 의해 나타낸 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다. 바람직한 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 종의 박테리아 균주이다.
본 발명에서 이용을 위한 메가스파에라 (Megasphaera) 종의 실례는 메가스파에라 엘스데니이 (Megasphaera elsdenii), 메가스파에라 세레비지애 (Megasphaera cerevisiae), 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis), 메가스파에라 인디카 (Megasphaera indica), 메가스파에라 파우시보란스 (Megasphaera paucivorans), 메가스파에라 수에시엔시스 (Megasphaera sueciensis) 및 메가스파에라 마이크로누시포르미스 (Megasphaera micronuciformis)를 포함한다. 본 발명에서 이용을 위한 메가스파에라 (Megasphaera) 종의 추가 실례는 메가스파에라 헥사노이카 (Megasphaera hexanoica)이다. 메가스파에라 (Megasphaera)는 인간을 비롯하여, 반추 및 비반추 포유동물의 절대 혐기성, 유산염-발효, 위장관 미생물이다.
M. 마실리엔시스 (M. massiliensis)의 균주 유형은 NP3 (=CSUR P245=DSM 26228)이다 [17]. 메가스파에라 마실리엔시스 (M. massiliensis) 균주 NP3의 16S rRNA 유전자 서열에 대한 GenBank 수탁 번호는 JX424772.1 (본원에서 서열 식별 번호: 1로서 개시됨)이다.
실시예에서 검사된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 박테리아는 본원에서 균주 NCIMB 42787로서 지칭된다. 테스트된 NCIMB 42787 균주의 16S rRNA 유전자 서열은 서열 식별 번호: 2로 제공된다.
균주 NCIMB 42787는 2017년 7월 13일자에 4D Pharma Research Ltd. (Life Sciences Innovation Building, Cornhill Road, Aberdeen, AB25 2ZS, Scotland)에 의해 국제 기탁 기관 NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB21 9YA, Scotland)에 기탁되었고, 그리고 수탁 번호 NCIMB 42787이 배정되었다.
실시예에서 검사된 균주에 밀접하게 관련된 박테리아 균주는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료하거나 예방하는데 또한 효과적일 것으로 예상된다. 일정한 구체예에서, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis)의 박테리아 균주의 16S rRNA 유전자 서열과 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다. 바람직하게는, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 1 또는 2와 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다. 바람직하게는, 서열 동일성은 서열 식별 번호: 2에 대한 것이다. 바람직하게는, 본 발명에 사용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 2에 의해 나타낸 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다.
균주 NCIMB 42787 또는 NP3의 바이오타입인 박테리아 균주는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료하거나 예방하는데 또한 효과적일 것으로 예상된다. 바이오타입은 동일하거나 또는 매우 유사한 생리학적 특성 및 생화학적 특성을 갖는 밀접하게 관련된 균주다.
균주 NCIMB 42787 또는 NP3의 바이오타입이고, 본 발명에서 이용에 적합한 균주는 균주 NCIMB 42787 또는 NP3에 대한 다른 뉴클레오티드 서열을 서열화으로써 확인될 수 있다. 예를 들면, 실질적으로 전체 게놈이 서열화되고, 본 발명의 용도를 위한 바이오타입 균주는 이의 전체 게놈의 적어도 80%에 걸쳐 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 서열 동일성(예를 들면, 적어도 85%, 90%, 95% 또는 99%, 또는 이의 전체 게놈에 걸쳐)을 가질 수 있다. 바이오타입 균주 식별용으로 사용에 적합한 다른 서열에는 hsp60 또는 반복 서열, 이를 테면, BOX, ERIC, (GTG)5, 또는 REP 또는 [18]이 내포될 수 있다. 바이오타입 균주는 균주 NCIMB 42787 또는 NP3의 상응하는 서열에 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 서열 동일성을 갖는 서열을 가질 수 있다.
대안으로, 균주 NCIMB 42787 또는 NP3의 바이오타입이고 본 발명에서 이용에 적합한 균주는 균주 NCIMB 42787 또는 NP3 및 제한 단편 분석 및/또는 PCR 분석을 이용함으로써, 예를 들면, 형광 증폭된 단편 길이 다형성 (FAFLP) 및 반복성 DNA 요소 (rep)-PCR 지문확인, 또는 단백질 프로파일링, 또는 부분적인 16S 또는 23S rDNA 서열화함으로써 확인될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 이런 기술은 다른 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주를 확인하는데 이용될 수 있다.
일정한 구체예에서, 균주 NCIMB 42787 또는 NP3의 바이오타입이고, 본 발명에서 이용에 적합한 균주는 증폭된 리보솜 DNA 제한 분석 (ARDRA)에 의해 분석될 때, 예를 들면, Sau3AI 제한 효소를 이용할 때 균주 NCIMB 42787 또는 NP3와 동일한 패턴을 제공하는 균주이다 (예시적인 방법 및 보도를 위해, 예를 들면, [19]를 참조한다). 대안으로, 바이오타입 균주는 균주 NCIMB 42787 또는 NP3과 동일한 탄수화물 발효 패턴을 갖는 균주로서 확인된다.
균주 NCIMB 42787 또는 NP3과 유사한 성장 패턴, 물질대사 유형 및/또는 표면 항원을 갖는 박테리아 균주가 본 발명에서 유용할 수 있다. 유용한 균주는 균주 NCIMB 42787 또는 NP3와 비교하여 필적할 수준의 정신생물적(psychobiotic) 속성을 가질 것이다. 구체적으로, 바이오타입 균주는 실시예들에서 제시된 모델에서 효과와 필적하는 효과를 유발할 것이며, 이는 실시예들에서 기재된 배양 및 투여 프로토콜을 사용하여 확인될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명에 유용한 박테리아 균주는 해당 박테리아 균주에 의한 대사산물의 생산 및 소비를 일상적으로 프로파일링하여 확인할 수 있다. 본 발명자들은 실시예들에서 사용된 상기 박테리아 균주눈 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산을 생산하고, 아세테이트 및 프로피오네이트를 소비하는 것을 알았다 (도 6 참고). 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 참고 균주 1, 참고 균주 2와 참고 균주 3 또한 이들 대사산물을 소비하고, 생산하는 것으로 밝혀졌다 (도 7 참고). 따라서, 일부 구체예들에서, 본 발명의 박테리아 균주는 대사산물 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산중 하나 또는 그 이상을 생산한다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 박테리아 균주는 아세테이트와 프로피오네이트중 하나 또는 이 둘 모두를 소비한다. 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 박테리아 균주는 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산을 생산하고, 아세테이트 및 프로피오네이트를 소비한다.
본 발명의 조성물과 방법에서 유용한 다른 메가스파에라 (Megasphaera) 균주, 예를 들면, 균주 NCIMB 42787 또는 NP3의 바이오타입은 실시예에서 설명된 검정을 비롯하여, 임의의 적합한 방법 또는 전략을 이용하여 확인될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에서 이용을 위한 균주는 SH-SY5Y 신경모세포종 세포와 함께 배양하고, 그 다음 트립토판 수산화효소 1 및/또는 2 및/또는 세로토닌 운반자의 발현 수준을 평가함으로써, 확인될 수 있다. 본 발명에서 이용을 위한 균주는 마우스에게 공급하고, 대조군에 비교하여, 증가된 세로토닌 분비에 대해 생체외 뇌 조직을 스크리닝하여 확인할 수도 있다.
본 발명의 특히 바람직한 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) NCIMB 42787 균주이다. 이것은 실시예에서 테스트된 예시적인 균주이며, 세로토닌 운반자 및 트립토판 수산화효소 1 및 2의 발현 증가 및 세로토닌의 분비 증가에 대해 효과적인 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명은 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787의 세포, 예를 들면, 단리된 세포, 또는 이의 유도체를 제공한다. 본 발명은 또한, 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787의 세포, 또는 이의 유도체를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한, 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787의 생물학적으로 순수한 배양액을 제공한다. 본 발명은 또한, 특히 본원에서 설명된 질환에 대한 요법에서 이용을 위한 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787의 세포, 또는 이의 유도체를 제공한다.
본 발명의 특히 바람직한 균주는 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주이다. 이것은 실시예에서 검사된 예시적인 NCIMB 42787 균주이다. 따라서, 본 발명은 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주의 세포, 예를 들면, 단리된 세포, 또는 이의 유도체를 제공한다. 본 발명은 또한, 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주의 세포, 또는 이의 유도체를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한, 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주의 생물학적으로 순수한 배양액을 제공한다. 본 발명은 또한, 특히 본원에서 설명된 질환에 대한 요법에서 이용을 위한, 수탁 번호 NCIMB 42787 하에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주의 세포, 또는 이의 유도체를 제공한다.
본 발명 균주의 유도체는 원래 균주의 딸 균주 (자손) 또는 원래 균주로부터 배양된 균주(서브클론된)일 수 있다. 본 발명 균주의 유도체는 생물학적 활성을 제거하지 않고, 예를 들어 유전자 수준에서 변형될 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 유도 균주는 치료요법적으로 활성이다. 유도 균주는 NCIMB 42787 균주에 필적하는 치료적 활성을 가질 것이다. 구체적으로, 유도 균주는 뉴런에서 실시예에서 보여준 효과에 필적하는 수준의 트립토판 수산화효소 1 및/또는 2 및/또는 세로토닌 운반자의 발현 수준을 유도할 것이며, 세로토닌의 분비에서도 필적하는 효과를 유도할 것이며, 이들은 실시예에서 설명된 배양 및 투여 프로토콜을 이용함으로써 확인될 수 있다. NCIMB 42787 유도 균주는 일반적으로 NCIMB 42787 균주의 바이오타입일 것이다.
메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) NCIMB 42787 균주의 세포에 대한 언급은 균주 NCIMB 42787과 동일한 안전성 및 치료 효력 특징을 갖는 임의의 세포를 포괄하고, 그리고 이런 세포는 본 발명에 의해 포괄된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물에서 박테리아 균주는 생존가능하고, 그리고 장을 부분적으로 또는 완전히 집락화할 수 있다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 수탁 번호 NCIMB 42787로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주의 세포를 포함하지 않는다.
실시예들에서는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 유용한 다른 박테리아 균주를 추가로 설명한다. 이들 박테리아 균주는 4D Pharma Research Ltd. (Life Sciences Innovation Building, Cornhill Road, Aberdeen, AB25 2ZS, Scotland)에 의해 2019년 5월 6일자로 국제 기탁 기관 NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB21 9YA, Scotland)에 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) (수탁 번호 NCIMB 43388 및 NCIMB 43389) 및 메가스파에라 종(Megasphaera spp.) (수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386 및 NCIMB 43387)으로 기탁되었다. 따라서, 대체 구체예에서, 본 발명의 조성물은 하나 또는 그 이상의 이들 박테리아 균주, 또는 바이오타입 또는 이의 유도 균주를 포함한다. 의심의 소지를 없애기 위해, 상기에서 언급된 참고 균주 1은 수탁 번호 NCIMB 43385로 기탁된 균주이며, 상기에서 언급된 참고 균주 2는 수탁 번호 NCIMB 43388로 기탁된 균주이며, 그리고 참고 균주 3은 수탁 번호 NCIMB 43389로 기탁된 균주다.
실시예에서 검사된 균주에 밀접하게 관련된 박테리아 균주는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료하거나 예방하는데 또한 효과적일 것으로 예상된다.
특정 구체예들에서 본 발명에서 이용을 위한 상기 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43388로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주이다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위하여 수탁 번호 NCIMB 43388로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43388로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 본원에 기재된 질환들중 임의의 하나에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43388로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다.
바람직한 구체예들에서, 본 발명은 바람직하게는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, NCIMB에 수탁 번호 NCIMB 43388로 기탁된 균주, 또는 이의 유도 균주 또는 이의 바이오타입을 포함하는 조서물을 제공한다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 수탁 번호 NCIMB 43388에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주의 세포를 포함하지 않는다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43388에 기탁된 균주는 아니다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis), 종의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43388에 기탁된 균주는 아니다.
따라서, 특정 구체예에서, 본 발명에서 이용을 위한 상기 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43389로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 이다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위하여 수탁 번호 NCIMB 43389로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43389로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 본원에 기재된 질환들중 임의의 하나에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43389로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다.
바람직한 구체예들에서, 본 발명은 바람직하게는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, NCIMB에 수탁 번호 NCIMB 43389로 기탁된 균주, 또는 이의 유도 균주 또는 이의 바이오타입을 포함하는 조서물을 제공한다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 수탁 번호 NCIMB 43389에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주의 세포를 포함하지 않는다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43389에 기탁된 균주는 아니다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis), 종의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43389에 기탁된 균주는 아니다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 용도를 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호:12에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 12에 의해 대표되는 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위한 서열 식별 번호:12에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주를 제공한다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위한 서열 식별 번호: 12로 제시되는 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주를 제공한다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 용도를 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호:13에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 13에 의해 대표되는 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위한 서열 식별 번호:13에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주를 제공한다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위한 서열 식별 번호: 13으로 제시되는 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주를 제공한다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 이용을 위한 상기 박테리아 균주는 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주의 16S rRNA 서열과 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서 본 발명에서 이용을 위한 상기 박테리아 균주는 메가스파에라(Megasphaera) 속이다.
특정 구체예들에서 본 발명에서 이용을 위한 상기 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43385로 기탁된 메가스파에라(Megasphaera) 균주다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위하여 수탁 번호 NCIMB 43385로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43385로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 본원에 기재된 질환들중 임의의 하나에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43385로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다.
바람직한 구체예들에서, 본 발명은 바람직하게는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, NCIMB에 수탁 번호 NCIMB 43385로 기탁된 균주, 또는 이의 유도 균주 또는 이의 바이오타입을 포함하는 조서물을 제공한다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 수탁 번호 NCIMB 43385에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주의 세포를 포함하지 않는다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43385에 기탁된 균주는 아니다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis), 종의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43385에 기탁된 균주는 아니다.
특정 구체예들에서 본 발명에서 이용을 위한 상기 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43386으로 기탁된 메가스파에라(Megasphaera) 균주다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위하여 수탁 번호 NCIMB 43386으로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43386으로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 본원에 기재된 질환들중 임의의 하나에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43386으로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다.
바람직한 구체예들에서, 본 발명은 바람직하게는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, NCIMB에 수탁 번호 NCIMB 43386으로 기탁된 균주, 또는 이의 유도 균주 또는 이의 바이오타입을 포함하는 조서물을 제공한다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 수탁 번호 NCIMB 43386에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주의 세포를 포함하지 않는다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43386에 기탁된 균주는 아니다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis), 종의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43386에 기탁된 균주는 아니다.
특정 구체예들에서 본 발명에서 이용을 위한 상기 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43387로 기탁된 메가스파에라(Megasphaera) 균주다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위하여 수탁 번호 NCIMB 43387로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43387로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서 본 발명은 본원에 기재된 질환들중 임의의 하나에 사용을 위해, 수탁 번호 NCIMB 43387로 기탁된 균주 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다.
바람직한 구체예들에서, 본 발명은 바람직하게는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위해, NCIMB에 수탁 번호 NCIMB 43387로 기탁된 균주, 또는 이의 유도 균주 또는 이의 바이오타입을 포함하는 조서물을 제공한다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 수탁 번호 NCIMB 43387에 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주의 세포를 포함하지 않는다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43387에 기탁된 균주는 아니다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물 안의 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis), 종의 박테리아 균주이며, 이때 해당 박테리아 균주는 수탁 번호 NCIMB 43387에 기탁된 균주는 아니다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 용도를 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호:11에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 용도를 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호:14에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 용도를 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호:15에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 용도를 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호:11, 14 또는 15에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위한 서열 식별 번호:11, 14 또는 15에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주를 제공한다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 11에 의해 대표되는 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 14에 의해 대표되는 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 15에 의해 대표되는 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 11, 14 또는 15에 의해 대표되는 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위한 서열 식별 번호: 11, 14 또는 15로 제시되는 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주를 제공한다.
수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주의 바이오타입인 박테리아 균주는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료하거나 예방하는데 또한 효과적일 것으로 예상된다. 바이오타입은 동일하거나 또는 매우 유사한 생리학적 특성 및 생화학적 특성을 갖는 밀접하게 관련된 균주다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 치료요법에 사용을 위하여 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 박테리아 균주 또는 이의 바이오타입을 제공한다.
수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된, 그리고 본 발명에 사용에 적합한, 하나 또는 그 이상의 균주의 바이오타입인 균주는 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주에 대해 다른 뉴클레오티드 서열을 서열화함으로써 확인될 수 있다. 예를 들면, 실질적으로 전체 게놈이 서열화되고, 본 발명의 용도를 위한 바이오타입 균주는 이의 전체 게놈의 적어도 80%에 걸쳐 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 서열 동일성(예를 들면, 적어도 85%, 90%, 95% 또는 99%, 또는 이의 전체 게놈에 걸쳐)을 가질 수 있다. 바이오타입 균주 식별용으로 사용에 적합한 다른 서열에는 hsp60 또는 반복 서열, 이를 테면, BOX, ERIC, (GTG)5, 또는 REP가 내포될 수 있다. 바이오타입 균주는 수수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주의 대응하는 서열에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 서열 동일성을 갖는 이러한 서열을 가질 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 사용에 적합하며, 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 바이오타입의 균주는 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주, 그리고 제한 단편 분석 및/또는 PCR 분석을 이용하여, 예를 들면, 형광 증폭된 단편 길이 다형성 (FAFLP) 및 반복적 DNA 요소 (rep)-PCR 핑거프린팅, 또는 단백질 프로파일링, 또는 부분적 16S 또는 23S rDNA 서열화를 이용하여 식별될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 이런 기술은 다른 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 균주를 확인하는데 이용될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 사용에 적합하며, 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 바이오타입의 균주는 증폭된 리보좀 DNA 제한 분석(ARDRA), 예를 들면, Sau3AI 제한절단 효소를 이용하여 분석할 때, 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주와 동일한 패턴을 제공하는 균주다. 대안적으로, 바이오타입 균주는 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주와 동일한 탄수화물 발효 패턴을 갖는 균주로 식별된다.
본 발명의 조성물 및 방법에 유용한, 이를 테면, 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주의 바이오타입과 같은 다른 균주는 실시예들에서 기재된 검증법들이 내포된 임의의 적합한 방법 또는 전략을 이용하여 식별될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에서 이용을 위한 균주는 SH-SY5Y 신경모세포종 세포와 함께 박테리아 무-세포 현탁액을 배양하고, 그 다음 트립토판 수산화효소 1 및/또는 2 및/또는 세로토닌 운반자의 발현 수준을 평가함으로써, 확인될 수 있다. 본 발명에서 이용을 위한 균주는 마우스에게 공급하고, 대조군에 비교하여, 증가된 세로토닌 분비에 대해 생체외 뇌 조직을 스크리닝하여 확인할 수도 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 바람직한 균주는 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 균주들이다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 세포, 이를 테면, 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주, 또는 이의 유도 균주의 단리된 세포를 제공한다. 본 발명은 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주 및/또는 NCIMB 43389, 또는 이의 유도 균주의 세포를 포함하는 조성물을 또한 제공한다. 본 발명은 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주의 생물학적으로 순수 배양물을 또한 제공한다. 본 발명은 치료요법에 사용을 위한, 구체적으로 본원에 기재된 질병 치료에 사용을 위한 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주, 또는 이의 유도 균주의 세포를 또한 제공한다.
본 발명 균주의 유도체는 원래 균주의 딸 균주 (자손) 또는 원래 균주로부터 배양된 균주(서브클론된)일 수 있다. 본 발명 균주의 유도체는 생물학적 활성을 제거하지 않고, 예를 들어 유전자 수준에서 변형될 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 유도 균주는 치료요법적으로 활성이다. 유도 균주는 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주에 필적하는 치료요법적 활성을 가질 것이다. 구체적으로, 유도 균주는 뉴런에서 실시예에서 보여준 효과에 필적하는 수준의 트립토판 수산화효소 1 및/또는 2 및/또는 세로토닌 운반자의 발현 수준을 유도할 것이며, 세로토닌의 분비에서도 필적하는 효과를 유도할 것이며, 이들은 실시예에서 설명된 배양 및 투여 프로토콜을 이용함으로써 확인될 수 있다. 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주의 유도 균주는 일반적으로, (차례로) 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, NCIMB 43387, NCIMB 43388 및/또는 NCIMB 43389로 기탁된 하나 또는 그 이상의 균주의 바이오타입일 것이다.
본 발명자들은 실시예들에서 사용된 상기 박테리아 균주가 2-메틸-프로판산 및 3-메틸-프로판산을 생산하고, 포름산을 소비한다는 것을 발견하였다(도 10). 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43388 및 NCIMB 43389로 기탁된 균주도 또한 2-메틸-프로판산 및 3-메틸-프로판산을 생산하는 것으로 밝혀졌다. 또한, 수탁 번호 NCIMB 43385 및 NCIMB 43388로 기탁된 균주 또한 포름산을 소비한다는 것을 발견하였다. 따라서, 일부 구체예들에서, 본 발명의 박테리아 균주는 대사산물 2-메틸-프로판산 및 3-메틸-프로판산중 하나 또는 그 이상을 생산한다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 박테리아 균주는 포름산을 소비한다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 박테리아 균주는 2-메틸-프로판산 및 3-메틸-프로판산 및 포름산을 소비한다. 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 박테리아 균주는 부티레이트, 발레르산, 헥사노산, 2-메틸-프로판산 및 3-메틸-프로판산을 생산하고, 아세테이트, 프로피오네이트 및 포름산을 소비한다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii)를 포함하지 않는다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 유용한 박테리아 균주는 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii)가 아니다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 이용을 위한 균주는 수탁 번호 NCIMB 8927로 기탁된 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii) 균주다. 이것은 실시예에서 검사된 예시적인 M. 엘스데니(M. elsdenii) 균주다. 따라서, 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애, 구체적으로 본원에 기재된 질환의 치료 또는 예방에 사용을 위한수탁 번호 NCIMB 8927로 기탁된 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii) 균주, 또는 이의 유도 균주의 세포를 제공한다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위한, NCIMB 8927로 기탁된 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii) 균주의 바이오타입 또는 유도 균주인 박테리아 균주를 제공한다.
수탁 번호 NCIMB 8927로 기탁된 M. 엘스데니(M. elsdenii) 균주의 16S rRNA 유전자 서열에 대한 GenBank 수탁 번호는 LC036319.1 (본원에서 서열 식별 번호: 16으로 개시됨)이다. 일정한 구체예에서, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii)의 박테리아 균주의 16S rRNA 유전자 서열과 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 용도를 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호:16에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 이용을 위한 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 16에 의해 대표되는 16S rRNA 서열을 갖는다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위한 서열 식별 번호:16에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주를 제공한다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위한 서열 식별 번호: 16으로 제시되는 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주를 제공한다.
치료요법적 용도
실시예에서 증명된 바와 같이, 본 발명의 박테리아 조성물은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료하는데 효과적이다. "세로토닌 결핍"은 대상체에서 세로토닌의 최적 수준보다 낮고, 이는 다른 증상들중에서도 불안, 걱정, 공황, 공포증, 정신적 집착, 행동 충동, 수면 장애, 공격성 및/또는 식욕 억제 또는 욕구로 이어질 수 있음을 의미한다. 일반적으로, 세로토닌 결핍은 대상체에서 세로토닌 수준을 생화학적으로 분석하는 것과 대조적으로, 대상체에서 이러한 증상들중 하나 또는 그 이상을 관찰함으로써 대상체를 진단한다. 따라서, "세로토닌 결핍"은 세로토닌 결핍이 병리생물학의 원인이될 수 있는 다양한 장애로 기재된다. 일부 구체예들에서, "세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애"는 또한 생체내 세로토닌의 농도를 증가시키는 것이 대상체의 치료에 유익한 효과 (예를 들어, 장애와 관련된 증상을 완화함으로써)를 포함하며, 이때 대상체는 낮은(즉, 기준선 이하) 세로토닌 수준을 나타내지 않는다. 즉, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애는 세로토닌의 생체내 농도를 증가시키는 것이 유익한 효과를 갖는 모든 장애가 내포될 수 있다.
본 발명자들은 본 발명의 조성물을 이용한 치료에 의해 세로토닌의 생산에 연루된 효소인 트립토판 수산화효소의 발현이 증가됨을 알았다. 트립토판 수산화효소는 세로토닌 전구체 5-하이드록시트립토판이 형성되는 동안 L-트립토판의 수산화를 촉매하는데, 이 단계는 세로토닌 형성에 있어서 속도 제한 단계다. 따라서, 본 발명의 조성물은 트립토판 수산화효소 경로를 통하여 세로토닌의 생산을 증가시킴으로써, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다. 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 뇌에서 트립토판 수산화효소 경로를 통하여 세로토닌의 생산을 증가시킨다.
좀더 구체적으로, 본 발명자들은 본 발명의 조성물이 뉴런에서 트립토판 수산화효소 2의 발현을 증가시킨다는 것을 알았다. 트립토판 수산화효소 2는 뇌의 세로토닌성 뉴런에서 발현되는 주요 아이소형이다 [20]. 따라서, 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체, 예를 들면, 해당 대상체의 뇌에서 트립토판 수산화효소 2의 발현 증가에 의해 세로토닌의 생산을 증가시킴으로써, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.
본 발명자들은 본 발명의 조성물이 뉴런에서 트립토판 수산화효소 1의 발현을 증가시킨다는 것을 또한 알았다. 트립토판 수산화효소 1은 뇌 이외의 조직에서 주로 발현된다. 그러나, 트립토판 수산화효소 1 발현은 스트레스를 겪는 대상체 뇌의 세로토닌성 뉴런에서 증가되는 것으로 나타났다 [21]. 이론에 결부되지 않고, 스트레스를 겪는 대상체 뇌의 세로토닌성 뉴런에서 트립토판 수산화효소 1의 발현 증가는 대상체에서 세로토닌의 생산을 강화시키고, 이로 인해 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 스트레스-유도된 정신계 장애의 "자가" 치료 또는 예방하는, 생물학적 대응 기전일 수 있다. 이것은 트립토판 수산화효소 1이 세로토닌 신호 전달이 주로 발생하는 뇌 영역에서 발견되는 우세한 아이소형이 아니지만, 관련 뇌 영역에서 트립토판 수산화효소 1의 발현 증가는 활성 부위에서 세로토닌의 국소 농도 증가에 효과적이라는 것을 암시한다. 따라서, 대상체의 뉴런에서 트립토판 수산화효소 1 및/또는 2의 발현 증가는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방, 구체적으로 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 정신계 장애의 치료 또는 예방에 효과적일 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체, 예를 들면, 해당 대상체의 뇌에서 트립토판 수산화효소 1의 발현 증가에 의해 세로토닌의 생산을 증가시킴으로써, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 스트레스-유도된 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에서 이용을 위한 것이다.
더욱이, 본 발명의 조성물을 이용한 치료는 뉴런에서 세로토닌성 뉴런 표지 세로토닌 운반자(SERT)의 발현을 증가시킨다. 따라서, 본 발명의 조성물은 생체내에서 미성숙 뉴런이 세로토닌성 뉴런으로의 분화를 증가시킬 수 있다. 세로토닌성 뉴런은 생체내에서 세로토닌을 생산한다. 따라서 본 발명의 조성물은 생체내 대상체의 세로토닌성 뉴런 수를 증가시키고, 이로 인한 세로토닌의 생산 증가에 의해 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 효과적일 것이다.
더욱이, 본 발명자들은 본 발명의 조성물을 이용한 치료가 뇌에서 세로토닌의 분비를 증가시키는 것을 알았다. 따라서, 본 발명의 조성물은 해당 대상체에서 세로토닌의 분비를 증가시킴으로써, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 특히 효과적일 수 있다. 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 해당 대상체의 뇌에서 세로토닌의 분비를 증가시킨다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 봉선 핵(Raphe Nuclei)의 세로토닌성 뉴런 수를 증가시키는데 사용된다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 세로토닌 수준을 증가시키기 위한 용도이다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 5-하이드록시트립토판 수준을 증가시키기 위한 용도이다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 세로토닌 및 5-하이드록시트립토판 수준을 증가시키기 위한 용도이다. 특정 구체예들에서 세로토닌 및/또는 5-하이드록시트립토판은 선조체에서 증가된다. 세로토닌 및 5-하이드록시트립토판 수준은 당분야에 공지된 임의의 적합한 방법, 이를 테면, 예를 들면, CSF에서 효소-연계된 면역흡착 검정법(ELISA), (예를 들면, [22]에서 기재된 바와 같이), 또는 예를 들면, 혈장 또는 CSF에서 가능하게는 전기화학적 검출과 함께 역-상 HPLC 방법 (예를 들면, [23]에서 기재된 바와 같이)에 의해 측정될 수 있다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 세로토닌 수준이 낮아진 것으로 의심되는, 또는 낮아진 것으로 확인된 환자의 치료를 위한 용도이다.
우울증
본 발명의 조성물은 우울증의 치료 또는 예방에 특히 유용할 것이다. 우울증은 이소 기분 및 활동성에 대한 반감을 특징으로 하며, 대상체의 생각, 행동, 성향, 감정 및 안녕 감각에 영향을 미칠 수 있다. 우울증의 원인이 되는 생물학적 기전은 완전히 규명되지 않았지만, 낮은 수준의 세로토닌, 즉 세로토닌 결핍은 적어도 우울증에 기여하는 것으로 나타났다 [24]. 따라서, 본 발명의 조성물은 예를 들면, 세로토닌의 생체이용성을 증가시킴으로써 우울증 치료에 효과적이다.
우울증은 다음 증상 중 하나 또는 그 이상을 특징으로 하는 다양한 이소가분의 정신 장애를 나타낸다: 가라앉은 기분, 슬픔, 절망, 무력감, 낮은 자존감, 눈물이 많음, 과민성, 동기 부족, 불안, 상실 또는 식욕, 식욕 증가, 체중 감소, 체중 증가, 변비, 성욕 상실 및 수면 장애. 본 발명의 조성물은 우울증과 연합된 이들 증상중 하나 또는 그 이상의 치료에 효과적이다. 본 발명이 효과적인 치료가될 수있는 우울증의 하위 범주의 비-제한적인 예로는 다음이 내포된다: 주요 우울 장애, 지속성 우울 장애, 양극성 장애, 산후 우울증, 월경-전 불쾌 장애, 계절성 정서 장애 및 비정형 우울증.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 우울증의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때, 대상체에게 투여될 때 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 1의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 2의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 1 및 2의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 세로토닌성 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 봉선 핵의 세로토닌성 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 상기 봉선 핵은 뇌 간(brain stem)에서 발견되는 중간-크기의 핵 클러스터를 포함한다. 이들 핵의 주요 기능 중 하나는 뇌의 나머지 부분으로 세로토닌을 방출하는 것이다. 따라서, 봉선 핵의 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시키는 것은 뇌에 근접가능한 세로토닌의 생산을 증가시키는데 효과적일 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 우울증의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때, 대상체에게 투여될 때 상기 조성물은 해당 대상체에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 세로토닌성 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 봉선 핵의 세로토닌성 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 우울증의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때 해당 대상체는 우울증으로 진단받았다. 우울증은 Hamilton 우울증 평가 척도를 사용하여 대상체에서 진단될 수 있다. 우울증은 또한 정신 장애 진단 및 통계 매뉴얼 (DSM-5)에 명시된 기준에 따라 대상체에서 진단될 수 있다 [25]. 대상체는 DSM-5에 따라 다음의 우울 증상 중 5 가지 또는 그 이상이 존재하면, 임상적으로 우울증으로 진단받을 수 있다: 1) 주관적인 보고서 (예를 들면, 슬픔, 침울, "우울함" 또는 공허함을 느낌), 또는 다른 사람이 관찰한 내용 (예를 들면, 눈물을 흘리거나 또는 울기 직전처럼 보임)에 표시된 대로 거의 매일 우울한 기분. (어린이와 청소년의 경우, 이것은 슬프다기보다는 짜증스럽거나 또는 불안한 기분으로 나타날 수 있다.); 2) 취미, 스포츠 또는 그 사람이 즐기던 다른 일에 대한 관심 없어짐과 같이 매일 모든 또는 거의 모든 활동에 대한 관심이나 즐거움이 현저히 감소; 3) 다이어트 또는 체중 증가를 의도하지 않았는데 상당한 체중 감소 (예를 들면, 한 달에 체중의 5 % 이상 변화) 또는 거의 매일 식욕 감소 또는 증가; 4) 거의 매일 불면증 (수면 불능 또는 수면 장애) 또는 과다 수면 (수면 과다); 5) 끊임없는 안절부절, 옷을 고를 때, 가만히 앉아있는 문제 (전문가의 정신 운동 동요라고 함); 또는 그 반대, 움직임을 느리게 하고, 느리게 말하며 매우 조용히 말하는 것 (전문가에 의해 정신 운동 지체라고 함); 6) 거의 매일 피로, 권태 또는 활력 상실-옷을 입거나 씻는 것과 같은 사소한 작업조차도 어렵고 평소보다 오래 걸림; 7) 거의 매일 무가치한 느낌이나 또는 과도하거나 부적절한 죄책감 (예를 들면, 사소한 과거의 실패에 대한 반추); 8) 거의 매일 생각하거나 집중하는 능력의 감소 또는 우유부단함 (예를 들면, 쉽게 산만해 보임, 기억력 장애에 대한 불평); 9) 죽음에 대한 반복적 인 생각 (단순히 죽음에 대한 두려움이 아님), 특정 계획이 없는 반복적인 자살 생각, 자살 시도 또는 자살을 위한 특정 계획. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 임상적 우울증 치료에 사용을 위한 것이다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 우울증의 상기 하나 또는 그 이상의 증상 치료에 사용을 위한 것이다. 우울증의 하나 또는 그 이상의 증상 치료는 우울증과 관련된 하나 또는 그 이상의 증상의 개선을 확인하기 위해, 조성물의 투여 전과 투여 후 해당 대상체를 임상적으로 평가함으로써 결정될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 증후성 또는 진단적 검사 및/또는 척도에 따라 우울증과 연관된 증상을 향상시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 검사 또는 척도는 Hamilton 우울 등급 척도 (HAM-D 17; 우울증)이다. 특정 구체예들에서, 상기 검사 또는 척도는 DSM-5에 명시된 것이다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 정신의학적 및 신경학적 장애를 사정하기 위한 전반적 임상 인상 - 전반적 향상 (CGI-I) 척도를 향상시킨다. 일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 임상적으로 우울증으로 진단받은 대상체의 전반적인 사회적 및 직업적 장애에 대한 긍정적인 효과를 전시한다.
일부 구체예들에서, 상기 조성물은 우울증의 하나 또는 그 이상의 증상 치료 또는 예방에 사용을 위한 것이다. 예를 들면, 본 발명의 조성물은은 이소 기분, 슬픔, 절망, 무력감, 낮은 자존감, 눈물 흘림, 과민성, 동기 부족 및 불안으로 구성된 목록으로부터 선택된 우울증의 심리적 증상 중 하나 또는 그 이상의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 다음으로 구성된 목록에서 선택된 하나 또는 그 이상의 우울증의 신체적 증상의 예방에 사용하기 위한 것이다: 식욕 상실 또는 식욕 증가, 체중 감소, 체중 증가, 변비, 성욕 상실 및 수면증.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 선택적 세로토닌 재흡수 억제제 (SSRI)와 병용하여 사용을 위한 것이다. SSRIs는 세로토닌 운반자 (SERT)의 활동을 차단함으로써, 세로토닌의 재흡수를 선택적으로 차단하는 약물 유형이다. SERT는 시냅스 틈새(synaptic cleft)로부터 시냅스이전(presynaptic) 뉴런으로의 세로토닌을 수송하는 모노아민 운반자 단백질의 일종이다. 따라서, SSRI는 시냅스에서 세로토닌의 체류 시간을 증가시켜, 세로토닌 신호 전달 이벤트의 반감기를 증가시킨다. SSRI와 본 발명의 조성물의 조합은 우울증 치료에 특히 유용한데, 그 이유는 대상체에서 이 조합이 세로토닌의 생체이용성을 더 개선시킬 수 있기 때문이다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 우울증의 치료 또는 예방에 있어서 SSRI와 동시, 순차적 또는 별개 사용된다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 우울증의 치료 또는 예방에 있어서 본 발명의 조성물과 동시, 순차적 또는 별개 사용되는 SSRI에 관계한다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 대상체에서 우울증의 치료 또는 예방에 사용을 위한 SSRI에 관계하며, 이때 해당 대상체는 본 발명의 조성물을 투여받거나, 또는 투여받았다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체에서 우울증의 치료 또는 예방에 사용을 위한 것으로, 이때 해당 대상체는 SSRI를 투여받거나, 또는 투여받았다.
본 발명에 사용하기에 적합한 예시적인 SSRIs로는 시타로프람, 답옥세틴, 에시타로프람, 플루옥세틴, 플루복사민, 파로옥세틴, 세르트랄린 및 보르티옥세틴이 내포되지만, 이에 국한되지 않는다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 다음으로 구성된 목록에서 선택된 하나 또는 그 이상의 항-우울 치료와 병용하여 우울증 치료에 사용을 위한 것이다: 인지 행동 요법, 상담, 대인 요법, 정신역학 요법, 삼환계(tricyclic) 항우울제, 세로토닌-노르아드레날린 재흡수 억제제, 노르아드레날린 및 특정 세로토닌성 항우울제 및 모노아민 산화 효소 억제제.
불안
본 발명의 조성물은 불안의 치료 또는 예방에 특히 유용할 것이다. 불안은 걱정이나 두려움과 같은 느낌이나 불안으로 특징되는데, 이는 경미하거나 또는 심할 수 있다. 불안은 위에서 설명한 증상과 관련된 다양한 상태를 나타낸다. 본 발명의 조성물에 의해 치료 또는 예방될 수 있는 불안 장애의 비-제한적 예로는 다음이 내포된다: 공황 장애, 공포증, 외상 후 스트레스 장애, 사회 불안 장애 및 일반 불안 장애. 연구에 따르면 대상체에서 세로토닌의 생체이용률을 높이면 불안 치료에 효과적 일 수 있다 [26].
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체에서 일반적인 불안 장애 (GAD)의 치료 또는 예방에 사용된다. GAD는 특정 사건이 아닌 광범위한 상황과 문제에 대해 대상체가 불안감을 느끼게 하는 장기적인 상태다. GAD가 있는 대상체는 대부분의 경우 불안감을 느낀다: 특정 생각과 관련된 불안이 해결되면 다른 불안이 나타날 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 GAD의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때, 대상체에게 투여될 때 상기 조성물은 트립토판 수산화효소의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 1의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 2의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 1 및 2의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 세로토닌성 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 봉선 핵의 세로토닌성 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 상기 봉선 핵은 뇌 간(brain stem)에서 발견되는 중간-크기의 핵 클러스터를 포함한다. 이들 핵의 주요 기능 중 하나는 뇌의 나머지 부분으로 세로토닌을 방출하는 것이다. 따라서, 봉선 핵의 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시키는 것은 뇌에 근접가능한 세로토닌의 생산을 증가시키는데 유익하다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 트립토판 수산화효소 경로를 통하여 해당 대상체에서 세로토닌의 생산을 증가시킨다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 GAD의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때, 대상체에게 투여될 때 상기 조성물은 해당 대상체에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 세로토닌성 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 봉선 핵의 세로토닌성 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 GAD의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때 해당 대상체는 GAD로 진단받았다. DSM-5에 따르면, 대상체는 다음과 같은 증상을 보이면 GAD 진단을 받을 수 있다: 과도한 불안의 존재와 다양한 주제, 사건 또는 활동에 대한 걱정, 이때 걱정이 최소 6 개월 동안 자주 발생하지 않고, 분명히 과도하게 발생하는 경우; 걱정은 통제하기 매우 어렵다는 것을 경험하고; 불안과 걱정은 다음의 신체적 또는 인지적 증상 중 적어도 세 가지를 동반한다 (어린이의 경우 GAD 진단을 위해 하나의 증상만 요구됨): 초조함 또는 안절부절함, 쉽게 피곤함, 평소보다 더 피곤함, 집중력 저하 또는 정신이 멍해지는 느낌, 과민성 (다른 사람이 관찰할 수 있거나 보이지 않을 수 있음), 근육통 또는 통증 증가, 수면 어려움 (잠들거나 또는 수면을 유지하는 것이 어려움, 밤에 안절부절 못함 또는 불만족스러운 수면).
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 GAD의 상기 하나 또는 그 이상의 증상 치료에 사용을 위한 것이다. GAD의 하나 또는 그 이상의 증상 치료는 GAD와 관련된 하나 또는 그 이상의 증상의 개선을 확인하기 위해, 조성물의 투여 전과 투여 후 해당 대상체를 임상적으로 평가함으로써 결정될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 증후성 또는 진단적 검사 및/또는 척도에 따라 GAD와 연관된 증상을 향상시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 검사 또는 척도는 DSM-5에 명시된 것이다. 특정 구체예들에서, 상기 척도는 Hamilton 불안 등급 척도 (HAM-A)이다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 정신의학적 및 신경학적 장애를 사정하기 위한 전반적 임상 인상 - 전반적 향상 (CGI-I) 척도를 향상시킨다. 일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 임상적으로 GAD로 진단받은 대상체의 전반적인 사회적 및 직업적 장애에 대한 긍정적인 효과를 전시한다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 불안의 치료 또는 예방에서 선택적 세로토닌 재흡수 억제제 (SSRI)와 동시, 순차적 또는 별개 사용된다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 불안 치료 또는 예방에 있어서 본 발명의 조성물과 동시, 순차적 또는 별개 사용되는 SSRI에 관계한다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 대상체에서 불안 치료 또는 예방에 사용을 위한 SSRI에 관계하며, 이때 해당 대상체는 본 발명의 조성물을 투여받거나, 또는 투여받았다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 불안 치료 또는 예방에 사용을 위한 것으로, 이때 해당 대상체는 SSRI를 투여받거나, 또는 투여받았다.
본 발명에 사용하기에 적합한 예시적인 SSRIs로는 시타로프람, 답옥세틴, 에시타로프람, 플루옥세틴, 플루복사민, 파로옥세틴, 세르트랄린 및 보르티옥세틴이 내포되지만, 이에 국한되지 않는다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 다음으로 구성된 목록에서 선택된 하나 또는 그 이상의 치료와 병용하여 불안 치료 또는 예방에 사용을 위한 것이다: 인지 행동 요법, 적용된 이완, 삼환계 항우울제, 세로토닌-노르아드레날린 재흡수 억제제, 모노아민 산화효소 억제제, 벤조디아제핀 또는 프레가발린.
외상-후 스트레스 장애
본 발명의 조성물은 외상-후 스트레스 장애 (PTSD)의 치료 또는 예방에 특히 유용할 것이다. PTSD는 특이한 유형의 불안 장애다. 세로토닌 재흡수 억제제를 이용한 PTSD의 치료는 치료요법적으로 효과적인 것으로 나타났다 [27]. 따라서, 본 발명의 조성물은 PTSD의 치료에 효과적일 것이다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 PTSD의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때, 대상체에게 투여될 때 상기 조성물은 트립토판 수산화효소의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 1의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 2의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 1 및 2의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 세로토닌성 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 봉선 핵의 세로토닌성 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 상기 봉선 핵은 뇌 간(brain stem)에서 발견되는 중간-크기의 핵 클러스터를 포함한다. 이들 핵의 주요 기능 중 하나는 뇌의 나머지 부분으로 세로토닌을 방출하는 것이다. 따라서, 봉선 핵의 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시키는 것은 뇌에 근접가능한 세로토닌의 생산을 증가시키는데 유익하다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 PTSD의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때, 대상체에게 투여될 때 상기 조성물은 해당 대상체에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 세로토닌성 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 봉선 핵의 세로토닌성 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 PTSD의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때 해당 대상체는 PTSD로 진단받았다. DSM-IV-TR에 따르면 다음과 같은 경우 PTSD 진단을 내릴 수 있다: (1) 환자가 실제 또는 위협적인 죽음이나 심각한 부상, 또는 자신이나 타인의 신체적 완전성에 대한 위협과 강렬한 두려움, 무력감 또는 공포를 수반하는 반응을 포함하는 사건, 또는 사건을 경험하거나 목격했거나 직면한 경우; (2) 외상성 사건의 결과로 환자는 적어도 한 번의 재-경험/침입 증상, 세 번의 회피/무감각 증상, 두 번의 과다 각성 증상을 경험하며, 증상의 지속 기간은 한 달 이상인 경우; 그리고 (3) 이들 증상은 사회적, 직업적 또는 기타 중요한 기능 영역에서 임상적으로 심각한 고통이나 장애를 유발하는 경우.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 다음으로 이루어진 PTSD의 하나 이상의 증상 또는 치료에 사용하기 위한 것이다: 반복적이고 침입적인 외상 회상, 외상 사건에 대한 반복적이고 괴로운 꿈, 외상 사건이 반복되는 것처럼 행동하거나 느끼는 것, 외상 회상에 노출되었을 때의 스트레스, 외상 회상에 노출되었을 때 생리적 반응성, 한 활동에 대한 관심이 현저히 감소, 타인과의 분리 또는 소원 감, 제한된 범위의 정서, 단축된 미래에 대한 감각, 사회적 불안, 익숙하지 않은 환경에 대한 불안, 잠에 빠지거나 수면 유지의 어려움, 과민 반응 또는 분노의 폭발, 집중에 어려움, 과도한 경계, 통증 인지에 문제, 통증 내성 및 과장된 놀라움 반응.
PTSD의 하나 또는 그 이상의 증상 치료는 PTSD와 관련된 하나 또는 그 이상의 증상의 개선을 확인하기 위해, 조성물의 투여 전과 투여 후 해당 대상체를 임상적으로 평가함으로써 결정될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 증후성 또는 진단적 검사 및/또는 척도에 따라 PTSD와 연관된 증상을 향상시킨다. 특정 구체예들에서 상기 검사 또는 척도는 임상의-관리 PTSD 척도 및 또는 임상의-관리 PTSD 척도 파트 2이다. 특정 구체예들에서 상기 검사 또는 척도는 DSM-IV-TR에 명시된 것이다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 정신의학적 및 신경학적 장애를 사정하기 위한 전반적 임상 인상 - 전반적 향상 (CGI-I) 척도를 향상시킨다. 일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 임상적으로 PTSD로 진단받은 대상체의 전반적인 사회적 및 직업적 장애에 대한 긍정적인 효과를 전시한다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 PTSD의 치료에 있어서 SSRI와 동시, 순차적 또는 별개 사용된다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 PTSD 치료에 있어서 본 발명의 조성물과 동시, 순차적 또는 별개 사용되는 SSRI에 관계한다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 대상체에서 PTSD 치료 또는 예방에 사용을 위한 SSRI에 관계하며, 이때 해당 대상체는 본 발명의 조성물을 투여받거나, 또는 투여받았다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체에서 PTSD 치료에 사용을 위한 것으로, 이때 해당 대상체는 SSRI를 투여받거나, 또는 투여받았다.
본 발명에 사용하기에 적합한 예시적인 SSRIs로는 시타로프람, 답옥세틴, 에시타로프람, 플루옥세틴, 플루복사민, 파로옥세틴, 세르트랄린 및 보르티옥세틴이 내포되지만, 이에 국한되지 않는다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 다음으로 구성된 목록에서 선택된 하나 또는 그 이상의 항-우울 치료와 병용하여 PTSD 치료에 사용을 위한 것이다: 외상-집중된 인지 행동 요법, 안구 운동 치밀화 및 재-처리, 삼환 항우울제, 세로토닌-노르아드레날린 재흡수 억제제, 노르아드레날린 및 특정 세로토닌성 항우울제 및 모노아민 산화효소 억제제.
강박 장애
본 발명의 조성물은 강박 장애 (OCD)의 치료 또는 예방에 특히 유용할 것이다. OCD는 대상체가 일을 반복적으로 확인하고, 수행해야 할 필요성을 느끼는 특정 유형의 정신 장애다 (예를 들면, "의례(rituals)" 수행). 세로토닌 결핍은 OCD의 병리와 관련있다[28]. 따라서, 본 발명의 조성물은 OCD의 생체이용성을 증가시킴으로써 우울증 치료에 효과적이다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 OCD의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때, 대상체에게 투여될 때 상기 조성물은 트립토판 수산화효소의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 1의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 2의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 1 및 2의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 세로토닌성 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 봉선 핵의 세로토닌성 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시킨다. 상기 봉선 핵은 뇌 간(brain stem)에서 발견되는 중간-크기의 핵 클러스터를 포함한다. 이들 핵의 주요 기능 중 하나는 뇌의 나머지 부분으로 세로토닌을 방출하는 것이다. 따라서, 봉선 핵의 뉴런에서 트립토판 수산화효소 발현을 증가시키는 것은 뇌에 근접가능한 세로토닌의 생산을 증가시키는데 유익하다. 일부 구체예들에서, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 트립토판 수산화효소 경로를 통하여 해당 대상체에서 세로토닌의 생산을 증가시킨다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 OCD의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때, 대상체에게 투여될 때 상기 조성물은 해당 대상체에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 조성물은 대상체의 세로토닌성 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 봉선 핵의 세로토닌성 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시킨다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 OCD의 치료 또는 예방에 사용되며, 이때 해당 대상체는 OCD로 진단받았다. DSM-5에 따르면 다음과 같은 경우 OCD 진단을 내릴 수 있다: (1) 대상체는 집착과 강박이 있다; (2) 집착과 강박은 대상체의 일상 생활에 큰 영향을 미친다; 그리고 (3) 대상체는 집착과 강박이 과도하거나 불합리하다는 것을 깨닫지 못할 수도 있다. 집착은 방해가 되고, 반복적이며 끈질긴 생각, 충동 또는 고통을 유발하는 이미지여야 한다; 삶의 실제 문제에 지나치게 집중하지 않는다; 해당 대상체가 성공적으로 억제하거나 무시할 수 없다; 그리고 (iv) 생각, 충동 또는 이미지가 주제에 진정한 위협이 되지 않는다고 받아들일 수 없다. 강박은 대상체가 수행해야 한다고 느끼는 과도하고 반복적인 의식 행동이어야하며, 그렇지 않으면 나쁜 일이 발생할 것이라고 생각하고; 하루에 적어도 한 시간을 차지하고; 그리고 강박적 사고로 인한 심각한 불안을 줄이기 위해 수행해야 한다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 OCD의 하나 또는 그 이상의 강박 및/또는 집착의 치료에 사용을 위한 것이다.
하나 또는 그 이상의 강박 및/또는 집착의 치료는 하나 또는 그 이상의 강박 및/또는 집착의 개선을 확인하기 위해, 조성물의 투여 전과 투여 후 해당 대상체를 임상적으로 평가함으로써 결정될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 증후성 또는 진단적 검사 및/또는 척도에 따라 강박 및/또는 집착을 개선시킨다. 특정 구체예들에서 상기 검사 또는 척도는 DSM-V에서 명시된다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 정신의학적 및 신경학적 장애를 사정하기 위한 전반적 임상 인상 - 전반적 향상 (CGI-I) 척도를 향상시킨다. 일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 임상적으로 OCD로 진단받은 대상체의 전반적인 사회적 및 직업적 장애에 대한 긍정적인 효과를 전시한다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 OCD의 치료에 있어서 SSRI와 동시, 순차적 또는 별개 사용된다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 OCD 치료에 있어서 본 발명의 조성물과 동시, 순차적 또는 별개 사용되는 SSRI에 관계한다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 대상체에서 OCD 치료 또는 예방에 사용을 위한 SSRI에 관계하며, 이때 해당 대상체는 본 발명의 조성물을 투여받거나, 또는 투여받았다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 대상체에서 OCD 치료에 사용을 위한 것으로, 이때 해당 대상체는 SSRI를 투여받거나, 또는 투여받았다.
본 발명에 사용하기에 적합한 예시적인 SSRIs로는 시타로프람, 답옥세틴, 에시타로프람, 플루옥세틴, 플루복사민, 파로옥세틴, 세르트랄린 및 보르티옥세틴이 내포되지만, 이에 국한되지 않는다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 다음으로 구성된 목록에서 선택된 하나 또는 그 이상의 항-우울 치료와 병용하여 OCD 치료에 사용을 위한 것이다: 노출 및 반응 예방.
투여 방식
바람직하게는, 본 발명의 조성물은 본 발명의 박테리아 균주로 장에 전달 및/또는 장의 부분적인 또는 전체 집락형성을 할 수 있도록 위장관에 투여될 것이다. 일반적으로, 본 발명의 조성물은 경구 투여되지만, 이들은 직장, 비내, 또는 협측 또는 설하 루트를 통해 투여될 수도 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 포옴(foram), 스프레이 또는 겔로 투여될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 좌약, 이를 테면, 예를 들어 테오브로마 오일 (코코아 버터), 합성 경질 지방 (예를 들어, 서포사이어(suppocire), 위텝솔), 글리세로-젤라틴, 폴리에틸렌 글리콜 또는 비누 글리세린 조성물의 형태로 투여될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 코 경유 위, 빈창자, 삽입관(nasogastric tube), 입을 통한 위삽입관(orogastric tube), 위관, 공장 절 개관 (J 튜브), 경피 내시경 위루술 (PEG) 또는 위 공장에 접근가능하게 하는 흉벽 포트(chest wall port)와 같은 포트 및 기타 적절한 액세스 포트를 통하여 위장관으로 투여된다.
본 발명의 조성물은 한 번 투여될 수 있거나, 또는 치료 요법의 일부로서 순차적으로 투여될 수 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 매일 투여된다.
본 발명의 특정 구체예들에서, 본 발명에 따른 치료는 환자의 장내 미소생물군의 평가를 수반한다. 만약 본 발명의 균주의 전달 및/또는 이것으로 부분적인 또는 전체 집락형성이 효력이 관찰되는 정도로 달성되지 않으면 치료는 반복될 수 있고, 또는 만약 전달 및/또는 부분적인 또는 전체 집락형성이 성공적이고 효력이 관찰되면 치료는 중단될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 임신한 동물, 예를 들어 인간과 같은 포유 동물에게 투여되어 자궁에서 및/또는 출생 후에 그녀의 아이에서 발생되는 세로토닌 결핍과 연합된 장애를 치료할 수 있다.
본 발명의 조성물은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애로 진단되었거나, 또는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 위험에 처해 있는 것으로 확인된 환자에게 투여될 수 있다. 이들 조성물은 또한, 건강한 환자에서 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 발달을 예방하기 위한 예방적 조치로서 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 비-정상적인 장내 미소생물군을 갖는 것으로 확인된 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 환자는 메가스파에라 (Megasphaera), 그리고 특히, 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis)에 의한 감소된 집락형성을 갖거나 또는 집락형성이 없을 수 있다.
본 발명의 조성물은 이를 테면, 영양 보충제와 같은 식품으로 투여될 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 조성물은 가금류, 돼지, 고양이, 개, 말 또는 토끼와 같은 단위(monogastric) 포유 동물을 포함하는 동물을 치료하는데 사용될 수도 있지만, 인간의 치료를 위한 것이다. 본 발명의 조성물은 동물의 성장 및 성능 향상에 유용할 수 있다. 동물에게 투여하는 경우, 입을 통한 위관법을 사용할 수 있다.
조성물
일반적으로, 본 발명의 해당 조성물은 박테리아를 포함한다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 조성물은 동결-건조된 형태에서 조제된다. 예를 들면, 본 발명의 해당 조성물은 과립 또는 젤라틴 캡슐, 예를 들어, 본 발명의 박테리아 균주를 포함하는 경질 젤라틴 캡슐을 포함할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 해당 조성물은 동결건조된 박테리아를 포함한다. 박테리아의 동결 건조는 잘 확립된 절차이며, 관련 지침은 예를 들어, 참고 문헌 [29], [], [31]]을 이용가능하다.
대안적으로, 본 발명의 해당 조성물은 살아있는, 활성 박테리아 배양물을 포함할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물에서 박테리아 균주는 불활성화되지 않았으며, 예를 들어, 열에 의해-불활성화되지 않았다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물에서 박테리아 균주는 사멸되지 않았으며, 예를 들어 열에 의해-사멸되지 않았다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물에서 박테리아 균주는 약화되지 않았으며, 예를 들어 열에 의해-약화되지 않았다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물에서 박테리아는 균주는 사멸되거나, 불활성화되거나 및/또는 약화되지 않았다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물에서 박테리아는 살아있다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물에서 박테리아는 생존가능하다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물에서 박테리아는 부분적으로 또는 전체적으로 장에서 집락화할 수 있다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물에서 박테리아는 생존가능하고, 부분적으로 또는 전체적으로 장에서 집락화할 수 있다.
일부 구체예들에서, 해당 조성물은 생균 균주 및 사멸된 박테리아 균주의 혼합물을 포함한다.
바람직한 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 박테리아 균주를 장으로 전달할 수 있도록 캡슐화된다. 캡슐화는 예로서, 화학적 또는 물리적 자극, 예를 들면, 압력, 효소 활성, 또는 pH에서 변화에 의해 촉발될 수 있는 물리적 붕괴로 파열하는 것을 통해, 표적 위치에서 전달 때까지 조성물을 분해로부터 보호한다. 적절한 임의의 캡슐화 방법을 사용할 수 있다. 예시적인 캡슐화 기술은 다공성 매트릭스 내에 포획, 고체 담체 표면에 부착 또는 흡착, 응집 또는 가교제에 의한 자가-응집, 및 미세다공성 막 또는 마이크로 캡슐 다음에 기계적 봉사슬이 내포된다. 본 발명의 조성물을 제조하는데 유용할 수 있는 캡슐화에 관한 보도는 예를 들면, 참고문헌 [32] 및 [33]에서 가용하다.
상기 조성물은 경구로 투여될 수 있고 정제, 캡슐 또는 분말 형태일 수 있다. 메가스파에라 (Megasphaera)가 혐기균이기 때문에, 캡슐화된 제품이 선호된다. 다른 성분들 (예를 들면, 비타민 C와 같은)은 전달 및/또는 부분적 또는 전체적인 집락화 및 생체내 생존을 개선시키기 위해 산소 제거제, 프리바이오틱(prebiotic) 기질로서 내포될 수 있다. 대안적으로, 상기 본 발명의 프로바이오틱은 우유 또는 유청-기반 발효 유제품과 같은 식품 또는 영양 제품으로서 또는 의약품으로서 경구 투여될 수 있다.
상기 조성물은 프로바이오틱(probiotic)으로 제형화될 수 있다.
본 발명의 조성물은 치료요법적으로 효과량의 본 발명의 박테리아 균주를 내포한다. 치료요법적으로 효과량의 박테리아 균주는 환자에게 유익한 효과를 발휘하기에 충분하다. 치료요법적으로 효과량의 박테리아 균주은 환자의 장으로 전달되고, 환자의 장으로의 전달되고 및/또는 부분적 또는 전체적 집락화를 초래하기에 충분할 수 있다.
성인 인간의 경우, 상기 박테리아의 적합한 일일 투여분량은 예를 들면, 성인 인간의 경우, 약 1 x 103 ~ 약 1 x 1011 콜리니 형성 단위 (CFU)이며; 예를 들면, 약 1 x 107 ~ 약 1 x 1010 CFU이며; 또다른 실시예에서 약 1 x 106 ~ 약 1 x 1010 CFU이며; 또다른 실시예에서 약 1 x 107 ~ 약 1 x 1011 CFU이며; 또다른 실시예에서 약 1 x 108 ~ 약 1 x 1010 CFU이며; 또다른 실시예에서 약 1 x 108 ~ 약 1 x 1011 CFU이다.
특정 구체예들에서, 상기 박테리아의 투여분량은 적어도 일일 109 세포이며, 이를 테면, 일일 적어도 1010, 적어도 1011, 또는 적어도 1012 세포이다.
특정 구체예들에서, 해당 조성물은 이 조성물의 중량에 대해 이 박테리아 균주를 약 1 x 106 ~ 약 1 x 1011 CFU/g의 양으로 함유하는데, 예를 들면, 약 1 x 108 ~ 약 1 x 1010 CFU/g을 함유한다. 상기 투여분량은 예를 들면, 1 g, 3g, 5g, 및 10g일 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 이 박테리아 균주의 양는 해당 조성물의 중량 g에 대해 약 1 x 103 ~ 약 1 x 1011 콜리니 형성 단위이다.
전형적으로, 프로바이오틱, 이를 테면, 본 발명의 해당 조성물은 적어도 한 가지 적합한 프리바이오틱(prebiotic) 화합물과 임의선택적으로 조합된다. 프리바이오틱 화합물은 일반적으로 올리고당 또는 다당류와 같은 소화-불능 탄수화물이거나, 또는 상부 소화관에서 분해되지 않거나 또는 흡수되지 않는 당-알코올이다. 공지된 프리바이오틱스는 상업적인 산물, 예를 들면, 이눌린 및 트랜스갈락토-올리고당류를 포함한다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 프로바이오틱 조성물에는 이 조성물의 총 중량에 대해 프리바이오틱 화합물이 약 1 ~ 약 30wt% (예를 들면, 5 내지 20wt%)의 양으로 내포된다. 탄수화물은 하기와 같이 구성된 군에서 선택될 수 있다: 프럭토-올리고당류 (또는 FOS), 짧은 사슬 프럭토-올리고당류, 이눌린, 이소말트-올리고당류, 펙틴, 자일로올리고당류 (또는 XOS), 키토산-올리고당류 (또는 COS), 베타-글루칸, 경작가능 검 변형된 및 난소화성 전분, 폴리덱스트로스, D-타가토오스, 아카시아 섬유, 캐럽, 귀리, 그리고 감귤류 섬유. 한 측면에서, 상기 프리바이오틱은 단-사슬 프럭토-올리고당 (이하 본원에서 FOSs-cc로 간략히 나타냄); 전술한 FOSs-cc는 일반적으로 사탕무 당의 전환에 의해 얻어지고, 3 개의 포도당 분자가 결합된 사카로스 분자를 포함하는 소화불능 탄수화물이다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방을 위한 또다른 치료요법적 화합물과 병용 사용된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 신경보호 또는 신경증식을 조정하는 영양 보충제와 함께 투여된다. 바람직한 구체예에서, 영양 보충제는 영양 비타민을 포함하거나 또는 이것으로 구성된다. 특정 구체예들에서, 비타민은 비타민 B6, 마그네슘, 디메틸글리신 (비타민 B16) 및 비타민 C이다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 또다른 프로바이오틱과 병용 투여된다.
특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애에 대한 두 번째 작용제의 효과를 증강하는데 이용을 위한 것이다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 수용가능한 부형제 또는 담체을 포함할 수 있다. 이러한 적합한 부형제의 예들은 참고문헌에서 찾아볼 수 있다 [34]. 치료용으로 허용되는 담체 또는 희석제는 제약 분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 참고문헌 [35]에 설명되어 있다. 적합한 담체의 실례는 락토오스, 전분, 글루코오스, 메틸 셀룰로오스, 스테아르산마그네슘, 만니톨, 소르비톨 등을 포함한다. 적합한 희석제의 실례는 에탄올, 글리세롤 및 물을 포함한다. 약제학적 담체, 부형제 또는 희석제의 선택은 의도된 투여 경로 및 표준 약제학적 실행과 관련하여 선택될 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 담체, 부형제 또는 희석제로서 또는 이에 추가하여, 임의의 적합한 결합제(들), 윤활제(들), 현탁 제(들), 코팅제(들), 가용화제(들)를 포함할 수 있다. 적합한 결합제의 예로는 전분, 젤라틴, 포도당과 같은 천연 당, 무수 락토오스, 자유-흐름 락토오스, 베타-락토오스, 옥수수 감미료, 천연 검 및 합성 검, 이를 테면, 아카시아, 트라가칸트 또는 알긴산 나트륨, 카르복시메틸 셀룰로오스 및 폴리에틸렌 글리콜이 내포된다. 적합한 윤활제의 예로는 올레산 나트륨, 스테아르산 나트륨, 스테아르산 마그네슘, 벤조산 나트륨, 아세트산 나트륨, 염화나트륨 및 이와 유사한 것들이 내포된다. 보존제, 안정제, 염료 및 심지어 풍미제가 약제학적 조성물에서 제공될 수 있다. 이러한 보존제는 벤조에이트 나트륨, 소르브산 및 p-히드록시벤조산의 에스테르로부터 선택된다. 항산화제 및 현탁제를 또한 사용할 수도 있다.
본 발명의 조성물은 식품으로 제형화될 수 있다. 예를 들면, 식품은 영양 보충제에서와 같이, 본 발명의 치료 효과에 더하여 영양적 이점을 제공할 수 있다. 유사하게, 식품 산물은 본 발명의 조성물의 맛을 증강하거나, 또는 상기 조성물이 약제학적 조성물보다는 통상적인 식품과 더욱 유사함으로써 소비하기에 더욱 매력적으로 만들어지도록 조제될 수 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 우유-기반 제품으로 제형화된다. 이 용어 "우유-기반 제품"이란 다양한 지방 함량을 갖는 액체 또는 반-고형 우유 또는 유청-기반 제품을 의미한다. 우유-기반 제품은 예를 들어 소 우유, 염소 우유, 양 우유, 탈지 우유, 전유, 임의의 가공없이 분유 및 유청에서 재결합된 우유, 또는 가공 제품 이를 테면, 요구르트, 응유(curdled milk), 커드(curd), 시큼한 전유(sour whole milk), 버터 우유 및 기타 시큼한 유제품일 수 있다. 또다른 중요한 그룹에는 우유 음료, 이를 테면, 유청 음료, 발효유, 응축된 우유(condensed milks), 유아 또는 유아용 우유; 풍미 우유, 아이스크림, 과자와 같은 우유 함유 식품이 내포된다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 메가스파에라 (Megasphaera) 속의 한 가지 또는 그 이상의 박테리아 균주를 포함하고 임의의 다른 속으로부터 박테리아를 내포하지 않거나, 또는 다른 속으로부터 단지 최소한의(de minimis), 또는 생물학적으로 무관한 양의 박테리아를 포함한다. 따라서, 일부 구체예에서, 본 발명은 요법에서 이용을 위한 메가스파에라 (Megasphaera) 속의 한 가지 또는 그 이상의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공하는데, 이것은 임의의 다른 속으로부터 박테리아를 내포하지 않거나, 또는 다른 속으로부터 단지 최소한의, 또는 생물학적으로 무관한 양의 박테리아를 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 종의 한 가지 또는 그 이상의 박테리아 균주를 포함하고 임의의 다른 종으로부터 박테리아를 내포하지 않거나, 또는 다른 종으로부터 단지 최소한의, 또는 생물학적으로 무관한 양의 박테리아를 포함한다. 따라서, 일부 구체예에서, 본 발명은 요법에서 이용을 위한 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 종의 한 가지 또는 그 이상의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공하는데, 이것은 임의의 다른 종으로부터 박테리아를 내포하지 않거나, 또는 다른 종으로부터 단지 최소한의, 또는 생물학적으로 무관한 양의 박테리아를 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 종의 한 가지 또는 그 이상의 박테리아 균주를 포함하고 임의의 다른 메가스파에라 (Megasphaera) 종으로부터 박테리아를 내포하지 않거나, 또는 다른 메가스파에라 (Megasphaera) 종으로부터 단지 최소한의, 또는 생물학적으로 무관한 양의 박테리아를 포함한다. 따라서, 일부 구체예에서, 본 발명은 요법에서 이용을 위한 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 종의 한 가지 또는 그 이상의 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공하는데, 이것은 임의의 다른 메가스파에라 (Megasphaera) 종으로부터 박테리아를 내포하지 않거나, 또는 다른 메가스파에라 (Megasphaera) 종으로부터 단지 최소한의, 또는 생물학적으로 무관한 양의 박테리아를 포함한다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 단일 박테리아 균주 또는 종을 함유하고, 임의의 다른 박테리아 균주 또는 종을 함유하지 않는다. 이러한 조성물은 다른 박테리아 균주 또는 종을 최소한의 양으로 또는 생물학적으로 무관한 양으로 포함한다. 이러한 조성물은 다른 종의 유기체가 실질적으로 없는 배양 물일 수 있다.
일부 구체예에서, 본 발명은 요법에서 이용을 위한 메가스파에라 (Megasphaera) 속의 단일 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공하는데, 이것은 임의의 다른 균주로부터 박테리아를 내포하지 않거나, 또는 다른 균주로부터 단지 최소한의, 또는 생물학적으로 무관한 양의 박테리아를 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명은 요법에서 이용을 위한 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 종의 단일 박테리아 균주를 포함하는 조성물을 제공하는데, 이것은 임의의 다른 균주로부터 박테리아를 내포하지 않거나, 또는 다른 균주로부터 단지 최소한의, 또는 생물학적으로 무관한 양의 박테리아를 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 한 가지 이상의 박테리아 균주를 포함한다. 예를 들면, 일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 동일한 종 내부로부터 한 가지 이상의 균주 (예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 45가지 보다 많은 균주)를 포함하고, 그리고 임의선택적으로, 임의의 다른 종으로부터 박테리아를 내포하지 않는다. 일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 동일한 종 내부로부터 50가지 보다 적은 균주 (예를 들면, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 또는 3가지 보다 적은 균주)를 포함하고, 그리고 임의선택적으로, 임의의 다른 종으로부터 박테리아를 내포하지 않는다. 일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 동일한 종 내부로부터 1-40, 1-30, 1-20, 1-19, 1-18, 1-15, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-50, 2-40, 2-30, 2-20, 2-15, 2-10, 2-5, 6-30, 6-15, 16-25, 또는 31-50 가지 균주를 포함하고, 그리고 임의선택적으로, 임의의 다른 종으로부터 박테리아를 내포하지 않는다. 본 발명은 전술한 것들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 조성물은 미생물 컨소시엄(consortium)을 포함한다. 예를 들면, 일부 구체예에서, 조성물은 미생물 컨소시엄의 일부로서 메가스파에라 (Megasphaera) 박테리아 균주를 포함한다. 예를 들면, 일부 구체예에서, 메가스파에라 (Megasphaera) 박테리아 균주는 이것이 생체내에서 장에서 공생하여 생존할 수 있는 다른 속으로부터 한 가지 또는 그 이상 (예를 들면, 최소한 2, 3, 4, 5, 10, 15 또는 20가지)의 다른 박테리아 균주와 조합으로 존재한다. 예를 들면, 일부 구체예에서, 조성물은 상이한 속으로부터 박테리아 균주와 조합으로 메가스파에라 (Megasphaera)의 박테리아 균주를 포함한다. 일부 구체예에서, 미생물 컨소시엄은 단일 생물체, 예를 들면, 인간의 대변 표본으로부터 획득된 두 가지 또는 그 이상의 박테리아 균주를 포함한다. 일부 구체예에서, 미생물 컨소시엄은 자연에서 함께 발견되지 않는다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 미생물 컨소시엄은 최소한 2가지의 상이한 생물체의 대변 표본으로부터 획득된 박테리아 균주를 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 2가지의 상이한 생물체는 동일한 종, 예를 들면, 2명의 상이한 인간으로부터 유래된다. 일부 구체예들에서, 상기 2가지의 상이한 생물체는 영아 인간 및 성체 인간이다. 일부 구체예들에서, 상기 2가지의 상이한 생물체는 인간 및 비-인간 포유동물이다.
대안적 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 16개, 15개, 14개, 13개, 12개, 11개, 10개, 9개, 8개, 7개, 6개, 5개 또는 이보다 더 작은 수의 별개 박테리아 종을 포함한다. 특정 구체예들에서 상기 조성물은 4개 또는 이보다 더 작은 수의 별개 박테리아 종을 포함한다. 특정 구체예들에서 상기 조성물은 3개 또는 이보다 더 작은 수의 별개 박테리아 종을 포함한다. 특정 구체예들에서 상기 조성물은 2개 또는 이보다 더 작은 수의 별개 박테리아 종을 포함한다. 특정 구체예들에서 상기 조성물은 메가스파에라(Megasphaera) 종, 구체적으로 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis)을 포함하고, 다른 박테리아 종을 포함하지 않는다. 바람직한 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 메가스파에라(Megasphaera) 의 단일 균주, 구체적으로 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis)의 단일 균주를 포함하고, 다른 박테리아 균주 또는 종을 포함하지 않는다. 이러한 조성물은 다른 박테리아 균주 또는 종을 최소한의 양으로 또는 생물학적으로 무관한 양으로 포함한다. 놀랍게도, 이들 실시예는 본 발명의 단일 균주만을 포함하는 조성물이 다른 균주 또는 종과의 의존하지 않고, 강력한 효과를 가질 수 있음을 입증한다 (예를 들면, 실시예 1 및 3 참고).
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 균주 NCIMB 42787와 동일한 안전성 및 치료 효력 특징을 갖지만, 그러나 NCIMB 42787가 아닌, 또는 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis)가 아닌 박테리아 균주를 부가적으로 포함한다.
본 발명의 해당 조성물이 하나 이상의 박테리아 균주, 종 또는 속를 포함하는 일부 구체예들에서, 이들 개별 박테리아 균주, 종 또는 속은 별개로, 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 조성물은 한 가지 이상의 박테리아 균주, 종 또는 속 모두를 포함할 수 있거나, 또는 이들 박테리아 균주, 종 또는 속은 별개로 보관되고 별개로, 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 한 가지 이상의 박테리아 균주, 종 또는 속은 별개로 보관되지만, 이용에 앞서 함께 혼합된다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 용도를 위한 박테리아 균주는 인간 성체 대변으로부터 수득된다. 본 발명의 조성물이 한 가지 이상의 박테리아 균주를 포함하는 일부 구체예에서, 모든 박테리아 균주는 성인 대변으로부터 획득되거나, 또는 만약 다른 박테리아 균주가 존재하면, 이들은 최소한의 양으로만 존재한다. 상기 박테리아는 인간 성체 대변으로부터 수득되어 배양되고, 본 발명의 조성물에 사용될 수 있다.
앞서 언급된 바와 같이, 일부 구체예에서, 한 가지 또는 그 이상의 메가스파에라 (Megasphaera) 박테리아 균주는 본 발명의 조성물에서 유일한 치료적으로 활성제(들)이다. 일부 구체예들에서, 해당 조성물안에 이 박테리아 균주(들)은 본 발명의 조성물에서 유일한 치료요법적으로 활성 제제(들)이다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 조성물은 마케팅 승인을 요구할 수도 있고, 필요하지 않을 수도 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 전술한 박테리아 균주는 동결건조된다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 전술한 박테리아 균주는 분무 건조된다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 이 박테리아 균주는 동결건조되거나 또는 분무 건조되며, 이 균주는 살아있다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 이 박테리아 균주는 동결건조되거나 또는 분무 건조되며, 이 균주는 생존가능하다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 이 박테리아 균주는 동결건조되거나 또는 분무 건조되며, 이 균주는 장내에서 부분적으로 또는 전체적으로 집락화할 수 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 이 박테리아 균주는 동결건조되거나 또는 분무 건조되며, 이 균주는 생존가능하고, 장내에서 부분적으로 또는 전체적으로 집락화할 수 있다.
일부 경우들에서, 상기 동결건조된 박테리아 균주는 투여 전, 재구성된다. 일부 경우들에서, 재구성은 본원에 기재된 희석제의 사용에 의해 이루어진다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 수용가능한 부형제들, 희석제들 또는 담체들을 포함할 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다: 본 발명의 박테리아 균주; 그리고 약제학적으로 수용가능한 부형제, 담체 또는 희석제; 이때 이 박테리아 균주는 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 때 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료하는데 충분한 양이다.
특정 구체예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고: 본 발명의 박테리아 균주; 그리고 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제; 여기서 상기 박테리아 균주는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 치료하거나 또는 예방하는데 충분한 양으로 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 이 박테리아 균주의 양는 해당 조성물의 중량 g에 대해 약 1 x 103 ~ 약 1 x 1011 콜리니 형성 단위이다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 해당 조성물은 1 g, 3 g, 5 g 또는 10 g의 투여량으로 투여된다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 해당 조성물은 경구, 직장, 피하, 비강, 볼 및 설하로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 투여된다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 락토스, 전분, 글루코스, 메틸 셀룰로스, 스테아레이트 마그네슘, 만니톨 및 소르비톨로 이루어진 군으로부터 선택된 담체를 포함하는 상기 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 에탄올, 글리세롤 및 물로 구성된 군으로부터 선택된 희석제를 포함하는 상기 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 전분, 젤라틴, 글루코스, 무수 락토오스, 자유 흐름 락토오스, 베타-락토오스, 옥수수 감미료, 아카시아, 트라가칸트, 알긴산 나트륨, 카르복시메틸 셀룰로오스, 폴리에틸렌 글리콜, 올레산 나트륨, 스테아르산 나트륨, 스테아르산 마그네슘, 벤조산 나트륨, 아세트산 나트륨 및 염화나트륨으로 이루어진 군으로부터 선택된 부형제를 포함하는 상기 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 보존제, 항산화제 및 안정화제 중 적어도 하나를 추가로 포함하는 상기 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 벤조에이트 나트륨, 소르브산 및 p-히드록시벤조산의 에스테르로 이루어진 군으로부터 선택된 보존제를 포함하는 상기 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 전술한 박테리아 균주는 동결건조된다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 상기 약제학적 조성물을 제공하며, 이때 해당 조성물이 약 4℃ 또는 약 25℃의 밀봉 용기에 보관되며, 이 용기는 50% 상대습도를 갖는 대기중에 배치될 때, 콜리니 형성 단위로 측정하였을 때, 이 박테리아 균주의 적어도 80%는 적어도 약: 1 개월, 3 개월, 6 개월, 1 년, 1.5 년, 2 년, 2.5 년 또는 3 년의 기간 후에도 남아있다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 본원에서 설명된 바와 같은 조성물을 포함하는 밀봉된 용기에서 제공된다. 일부 구체예들에서, 상기 밀봉된 용기는 사세(sachet) 또는 병이다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 해당 조성물은 본원에서 기재된 바의 조성물을 포함하는 주사기에 제공된다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 상기 조성물은 약제학적 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 해당 조성물은 정제 또는 캡슐로 제공될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기캡슐은 젤라틴 캡슐 ("gel-cap")이다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 경구 투여된다. 경구 투여는 화합물이 위장관에 들어가도록 삼키기 및/또는 화합물이 입으로부터 직접적으로 혈류에 들어가는 협측, 설측 또는 설하 투여를 수반할 수 있다.
경구 투여에 적합한 약제학적 제제는 고체 플러그, 고체 미세미립자, 반고체 및 액체 (복수 상 또는 분산된 시스템 포함), 예를 들면, 정제; 복수- 또는 나노-미립자, 액체 (예를 들면, 수성 용액), 유제 또는 분말을 내포하는 연성 또는 경성 캡슐; 로젠지 (액체-충전된 로젠지 포함); 츄; 겔; 빠른 분산 약형; 필름; 소란; 스프레이; 그리고 협측/점막점착성 패치를 포함한다.
일부 구체예들에서, 상기 약제학적 제형은 장용(enteric) 제형, 즉, 위장-저항성 제형 (예를 들면, 위 안의 pH에 저항성)으로써, 이는 경구 투여에 의해 본 발명의 조성물을 장으로 전달하는데 적합하다. 장용 제형은 박테리아 또는 조성물의 다른 성분이 산에 민감할 때, 예를 들어, 위 안의 조건 하에서 분해되기 쉬운 경우 특히 유용할 수 있다.
일부 구체예들에서, 상기 장용 제형은 장용 코팅을 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 제형은 장용-코팅된 투약형(dosage form)이다. 예를 들어, 상기 제형은 장용-코팅된 정제 또는 장용-코팅된 캡슐 또는 이와 유사한 것일 수 있다. 상기 장용 코팅은 통상적인 장용 코팅, 예를 들어, 경구 전달을 위한 정제, 캡슐 또는 이와 유사한 것에 대한 통상적인 코팅일 수 있다. 상기 제형은 필름 코팅, 예를 들어, 장용성 중합체, 예를 들어, 산-불용성 중합체의 박막 층을 포함할 수 있다.
일부 구체예들에서, 상기 장용 제형은 본질적으로 장용성으로써, 예를 들어, 장용 코팅의 필요없는 위장-저항성이다. 따라서, 일부 구체예들에서, 상기 제형은 장용 코팅을 포함하지 않는 장용 제형이다. 일부 구체예들에서, 상기 제형은 열-겔화(thermogelling) 물질로 만들어진 캡슐이다. 일부 구체예들에서, 상기 열-겔화 물질은 메틸 셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스 또는 히드록시프로필메틸셀룰로오스 (HPMC)와 같은 셀룰로오스 물질이다. 일부 구체예에서, 상기 캡슐은 어떤 필름 형성 중합체도 내포하지 않는 껍질을 포함한다. 일부 구체예들에서, 캡슐은 쉘을 포함하고 쉘은 히드 록시 프로필 메틸 셀룰로스를 포함하고, 어떠한 필름 형성 중합체도 포함하지 않는다 (예를 들면, [36] 참고). 일부 구체예들에서, 상기 제형은 내재성 장용 캡슐 (예를 들면, Capsugel의 Vcaps®)이다.
일부 구체예들에서, 상기 제형은 연질 캡슐이다. 연질 캡슐은 예를 들어, 글리세롤, 소르비톨, 말티톨 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 연화제의 첨가로 인해 캡슐 껍질에 존재함으로써 특정 탄력성과 부드러움을 가질 수 있는 캡슐이다. 예를 들어, 젤라틴 또는 전분을 기준으로 연질 캡슐을 만들 수 있다. 젤라틴-기반 연질 캡슐은 다양한 공급업체에서 시판되고 있다. 예를 들어, 경구 또는 직장과 같은 투여 방법에 따라, 연질 캡슐은 다양한 형태, 예를 들어 원형, 타원형, 직사각형 또는 어뢰-형태를 가질 수 있다. 연질 캡슐은 이를 테면, 예를 들어, Scherer 공정, Accogel 공정 또는 액적(droplet) 또는 취입 공정과 같은 통상적인 공정에 의해 만들어질 수 있다.
배양 방법
본 발명에서 사용하기 위한 박테리아 균주는 예를 들어, 참고 문헌 [37], [] 및 [39]에 상세히 설명된 바와 같이, 표준 미생물학 기술을 사용하여 배양될 수 있다.
배양에 이용되는 고체 또는 액체 배지는 YCFA+ 한천 또는 YCFA 배지일 수 있다. YCFA 배지에는 다음이 내포될 수 있다(100ml 당, 적합한 값): 카시톤 (1.0 g), 효모 추출물 (0.25 g), NaHCO3 (0.4 g), 시스테인 (0.1 g), K2HPO4 (0.045 g), KH2PO4 (0.045 g), NaCl (0.09 g), (NH4)2SO4 (0.09 g), MgSO4 ㆍ 7H2O (0.009 g), CaCl2 (0.009 g), 라자주린 (0.1 mg), 헤민 (1 mg), 바이오틴 (1 μg), 코발아민 (1 μg), p-아미노벤조산 (3 μg), 엽산 (5 μg), 그리고 피리독사민 (15 μg).
백신 조성물에서 이용을 위한 박테리아 균주
발명자는 본 발명의 박테리아 균주는 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 유용하다는 것을 확인하였다. 이것은 본 발명의 박테리아 균주가 숙주 면역계에 대해 갖는 효과의 결과일 가능성이 높다. 따라서, 본 발명의 해당 조성물은 또한 백신 조성물로 투여될 때 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애를 예방하는데 유용할 수 있다. 이러한 특정 구체예들에서, 본 발명의 박테리아 균주는 사멸, 불활성화 또는 약화될 수 있다. 일정한 이런 구체예에서, 조성물은 백신 어쥬번트를 포함할 수 있다. 특정 구체예들에서, 해당 조성물은 이를 테면, 피하 주사와 같은 주사를 통한 투여를 위한 것이다.
일반적 내용
본 발명의 실시는 달리 지시되지 않으면, 당해 분야의 기술 내에 화학, 생화학, 분자생물학, 면역학 및 약리학의 전통적인 방법을 이용할 것이다. 이러한 기술은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들면, 참고문헌 [40] 및 [41, 47],등등을 참고한다.
용어 "~을 포함하는(comprising)"이란 "~을 내포하는(including)" 뿐만 아니라 "~로 구성되는(consisting)"을 포괄하는데, 예를 들어, X를 "포함하는"이란 X로 배타적으로 구성될 수 있거나, 예를 들어, X + Y와 같은 추가적인 것을 내포할 수 있다.
숫자 값 x와 관련하여 사용될 때, 용어 "약(about)"이란 예를 들어 x ± 10 %를 의미한다.
"실질적으로(substantially)"이라는 단어는 "완전히(completely)"를 배제하지 않는데, 예를 들어, Y가 "실질적으로 없는" 조성물은 Y가 완전히 없을 수 있다. 필요한 경우, "실질적으로"라는 단어는 본 발명의 정의에서 생략될 수 있다.
2개의 뉴클레오티드 서열 사이에 서열 동일성 백분율에 대한 언급은 정렬될 때, 뉴클레오티드들의 상기 백분율이 이들 두 서열의 비교에서 동일하다는 것을 의미한다. 이러한 정렬 및 상동성 백분율 또는 서열 동일성은 예를 들어 참고문헌 [48]의 섹션 7.7.18에 기재된 바와 같이, 당해 분야에 공지된 소프트웨어 프로그램을 이용하여 결정될 수 있다. 바람직한 정렬은 갭 오픈 페널티가 12이고, 갭 연장 페널티가 2, BLOSUM 매트릭스가 62인 아핀(affine) 갭 검색을 사용하는 Smith-Waterman 상동성 검색 알고리즘에 의해 결정된다. Smith-Waterman 상동성 검색 알고리즘은 참고문헌 [49]에 기재되어 있다.
특정적으로 언급되지 않으면, 다양한 단계를 포함하는 과정 또는 방법은 상기 방법의 시작 또는 종결 시점에서 추가 단계를 포함할 수 있거나, 또는 추가 개재성 단계를 포함할 수 있다. 또한, 적절한 경우, 단계들을 결합하거나 또는 생략하거나 대안적인 순서로 수행할 수 있다.
본 발명의 다양한 구체예들이 본원에 기재된다. 각 구체예에서 명시된 특징은 추가의 구체예들을 제공하기 위해 다른 명시된 특징들과 결합될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 특히, 본 명세서에서 적합하거나, 전형적이거나 또는 바람직한 것으로 강조된 구체예들은 서로 결합될 수 있다 (서로 배타적인 경우에는 제외).
발명을 실행하기 위한 방식
실시예 1 - 신경화학물질 생산 - 뇌의 대사산물
배경
신경학적 과정에서 핵심적인 역할을 하는 신경화학적 인자, 신경 펩티드 및 신경전달물질의 수준은 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787이 공급된 마우스의 뇌 조직에서 생체외 스크리닝 동안 측정되었다. 예를 들어, 이러한 화학물질의 불균형, 예를 들어 세로토닌의 결핍 (예를 들면, 최적 수준 이하)은 수많은 정신 장애의 병리와 관련있다.
방법
동물
BALBc (Envigo, UK) 성체 수컷 생쥐는 12 시간 명암 주기 하에 집단 수용되었다; 표준 설치류 사료 및 물은 무제한으로 이용하도록 하였다. 모든 실험은 University College Cork Animal Ethics Experimentation Committee에 의한 승인 이후에 유럽 지침에 따라서 수행되었다. 동물은 실험의 시작 시점에서 8 주령이었다.
연구 설계
동물은 동물 단위 내로 도착 후 1 주 동안 그들의 홀딩 룸에 순치하도록 허용되었다. 이들은 6-연일 동안 15:00에서 17:00 사이에 1 X 109 CFU의 용량에서 살아있는 생체치료제의 경구 위관영양 (200μL 용량)을 제공받는다. 7 일 차 시점에서, 이들 동물은 머리가 제거되고, 그리고 실험을 위해 조직이 수거되었다.
조직 수집
동물은 치료 및 검사 조건에 관하여 무작위 방식으로 희생되었다; 표본추출은 오전 9.00시에서 오후 1:00시 사이에 일어났다. 체간 혈액이 EDTA 칼륨 (에틸렌 디아민 테트라 아세트산) 튜브에서 수집되고 4000 g에서 15 분 동안 회전되었다. 혈장이 단리되었고, 추가 분석을 위해 -80 ℃에서 보관되었다. 뇌가 빠르게 절제되고, 절개되고, 그리고 각 뇌 영역이 드라이아이스에서 즉시 동결되고 추가 분석을 위해 -80 ℃에서 보관되었다.
분석
신경화학 인자, 뉴로펩티드 및 신경전달물질 농도는 뇌간으로부터 샘플 상에서 HPLC에 의해 분석되었다. 간략하게 설명하자면, 뇌간 조직이 내부 표준으로서 4 ng/40 μl의 N-메틸 5-HT (Sigma Chemical Co., UK)로 스파이크된 500 μl의 냉각된 이동상에서 초음파처리되었다. 이동상은 0.1 M 구연산, 5.6 mM 옥탄-1-술폰산 (Sigma), 0.1 M 인산이수소나트륨, 0.01 mM EDTA (Alkem/Reagecon, Cork) 및 9% (v/v) 메탄올 (Alkem/Reagecon)을 내포하고, 그리고 4 N 수산화나트륨 (Alkem/Reagecon)을 이용하여 pH 2.8로 조정되었다. 균질액은 이후, 4 ℃에서 15 분 동안 22,000 x g로 원심분리되었고, 그리고 40 μl의 상층액이 SCL 10-Avp 시스템 제어장치, LECD 6A 전기화학적 검출기 (Shimadzu), LC-10AS 펌프, CTO-10A 오븐, SIL-10A 자기주입기 (표본 냉각기가 40 C에서 유지됨)과 배치된(online) Gastorr Degasser (ISS, UK)로 구성되는 HPLC 시스템 위에 주입되었다. 30 ℃에서 유지된 역-상 칼럼 (Kinetex 2.6 u C18 100 x 4.6 mm, Phenomenex)이 분리 (유속 0.9 ml/분)에서 이용되었다. 유리질 탄소 작업 전극이 +0.8 V에서 작동된 Ag/AgCl 기준 전극 (Shimdazu)과 조합되었고, 그리고 산출된 크로마토그램이 Class-VP 5 소프트웨어 (Shimadzu)를 이용하여 분석되었다. 신경전달물질은 표본 분석 동안 규칙적인 간격에서 이행되는 표준 주입에 의해 결정될 때 그들의 특징적인 체류 시간에 의해 확인되었다. 피분석물 대 내부 표준의 피크 높이의 비율이 계측되고 표준 주입과 비교되었다. 결과는 조직의 생중량 g 당 ng의 신경전달물질로서 표현되었다.
결과 - 신경전달물질 생산
결과는 도 1에서 도시되는데, NCIMB 42787이 공급된 마우스의 뇌에서 노르아드레날린 (p=0.0507), 세로토닌 및 5-HIAA 수준이 증가됨을 보여준다. 따라서, 본 발명의 조성물은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.
실시예 2 - 트립토판 수산화효소 발현
배경
트립토판 수산화효소는 세로토닌 생산에 관여하는 효소다. 본 발명자들은 따라서 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787은 뉴런-유사 세포에서 트립토판 수산화효소 유전자 TPH1 및 TPH2의 상향조절된 발현을 유도할 수 있는 지 여부를 조사하였다. 이것은 생체내에서 어떻게 NCIMB 42787이 세로토닌 수준을 증가시키는 지를 설명할 수 있다.
재료 및 방법
신경모세포종 SH-SY5Y 세포는 2mM L-글루타민, 10% 열-비활성화된 FBS, 100 U/ml 페니실린, 100 μg/ml 스트렙토마이신으로 보충된 50% MEM 50% 영양 혼합물 F-12 Ham 배지 상에서 성장되었다. 세포는 10 cm 접시에서 2x106 세포의 밀도로 도말되었다. 24h 휴식 후, 세포를 10% NCIMB 42787 현탁액 또는 YCFA+와 함께 성장 배지(1% FBS 함유)로 24h 동안 처리하였다. 그 다음 세포를 수거하여, 총 RNA는 RNeasy 미니 키트 프로토콜 (Qiagen)에 따라 단리시켰다. cDNA는 고성능 cDNA 역 전사 키트 (Applied Biosystems)를 이용하여 만들었다. 프라이머 서열들을 표 1에 나타낸다. 유전자 발현은 qPCR에 의해 측정되었다. Β-액틴을 내부 대조군으로 이용하였다. 2^(-ΔΔct) 방법에 따라 배수-변화를 산출하였다.
세포가 0.5x106 세포/웰의 밀도로 6 웰 접시에 플레이팅된 것을 제외한, 유사한 두번째 세트의 실험이 수행되었다. 24h 휴식 후, 세포를 5% 박테리아 현탁액 또는 YCFA+와 함께 성장 배지(1% FBS 함유)로 72h 동안 처리하였다. 총 RNA는 위에서 설명한대로 분석되었다.
Figure pct00002
세포가 처리되지 않은 상태로 두거나 또는 YCFA+ 배지에서 동등한 시간 동안 배양된 대조군을 함께 수행했다. YCFA+ 배지는 다음의 조성물을 갖는다:
박토 카시톤 1.0 g
효모 추출물 0.25 g
탄산 수소 나트륨 0.4 g
글루코스 0.2 g
셀로비오스 0.2 g
가용성 전분 0.2 g
미네랄 용액 1 15 ml
미네랄 용액 2 15 ml
SCFA 용액 0.31 ml
헤민 용액 1 ml
비타민 용액 1 100 μl
비타민 용액 2 100 μl
레사주린 용액 0.1 ml
시스테인 0.1 g
d. H2O를 총 부피: 100 m로
미네랄 용액 1: K2HPO4 -3.0 g; d.H2O을 총 부피 1 l가 되도록.
미네랄 용액 2: KH2PO4 -3.0 g; (NH4)2SO4 - 6.0 g; NaCl-6.0 g; MgSO4 - 0.6 g; CaCl2 - 0.6 g; d. H2O를 총 부피 1 l가 되도록.
레사주린 용액: 0.1% 분말 레사주린/100 ml 증류수.
짧은 사슬 지방산 용액: 아세트산 -17 ml; 프로피온산-6 ml; n-발레르산-1 ml; Iso-발레르산-1 ml; 이소-부티르산- 1 ml
헤민 용액: KOH-0.28 g 에탄올 95%-25 ml; 헤민-100 mg; d. H2O를 총 부피 100 ml가 되도록
비타민 용액 1: 바이오틴-1 mg; 코발아민-1 mg; p-아미노벤조산-3 mg; 엽산-5 mg; 피리독사민-15 mg; d. H2O를 총 부피 100 ml가 되도록
비타민 용액 2: 티아민-5 mg; 리보플라빈-5 mg; d. H2O를 총 부피 100 ml가 되도록
결과
도 2에 나타낸 결과에서, 세포를 10% NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 24 h 동안 항온처리하였을 때, TPH1의 발현 수준이 처리안된 또는 YCFA+-처리된 대조군과 비교하여 5-배 증가되었다. TPH2의 발현 수준 또한 처리안된 대조군과 비교하여 30-배 증가된다.
도 3에 나타낸 결과에서, 세포를 5% NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 72 h 동안 항온처리하였을 때, TPH1의 발현 수준이 처리안된 또는 YCFA+-처리된 대조군과 비교하여 5-배 증가되었다. TPH2의 발현 수준 또한 처리안된 대조군과 비교하여 30-배 증가된다.
따라서, 본 발명의 조성물은 세로토닌의 생산을 증가시킴으로써, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.
실시예 3 - 세로토닌 운반자 발현
배경
SLC6A4 유전자는 세로토닌 운반자를 인코드한다. 세로토닌 운반자는 분화된 세로토닌성 뉴런의 생물표지다. 따라서 본 발명자들은 M. 마실리엔시스(M.massilensis) 종의 박테리아 균주가 뉴런-유사 세포에서 세로토닌성 표지를 상향조절시킬 수 있는 지를 측정하였다.
재료 및 방법
실시예 2에 기술된 바와 같은 동일한 세트의 실험이 실행되었다. SLC6A4 유전자의 프라이머 서열은 표 2에 나타낸다.
Figure pct00003
결과
도 4에 나타낸 결과에서 세포를 10% 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 24 h 동안 항온처리하면, 처리안된 대조군과 비교하여 SLC6A4의 발현은 3-배 상향조절되지만, YCFA + 처리된 세포와 비교하여 차이가 없음을 보여준다. 도 5에 나타낸 결과에서 세포를 5% 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 72 h 동안 항온처리하면, SLC6A4의 발현은 처리안된 대조군과 비교하여 3-배 상향조절되고, YCFA+ 처리된 세포와 비교하여 약-2배 상향조절된다.
생체내 세로토닌성 뉴런 수의 증가는 NCIMB 42787이 공급된 건강한 마우스의 뇌에서 세로토닌 수준을 NCIMB 42787이 어떻게 증가시켰는지를 설명할 수 있다. 따라서, 본 발명의 조성물은 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.
실시예 4 - Caco2 세포에서 트립토판 수산화효소 및 세로토닌 운반자 발현 분석
개요
대부분의 세로토닌은 장에서 생성된다. 장 세로토닌은 장과 뇌 사이에 중요한 소통 역할을 하는 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명자들은 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787이 장-유사 세포에서 TPH1 및 SLC6A4의 발현을 증가시킬 수 있는 지를 결정하기로 하고, 따라서 NCIMB 42787이 장에서 세로토닌 수준을 증가시킨다면, 이는 도처, 예를 들면, 뇌에서 세포토닌 생체이용성을 강화시킬 수 있음을 나타낸다.
이를 목적으로, 본 발명자들은 분화된 Caco2 세포를 NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 항온처리하였다. 분화된 Caco2 세포는 불침투성이고, 구조적으로 그리고 기능적으로 소장의 상피 세포와 유사한 분극된 정점/점막 및 기저측면/장막(serosal)을 형성한다.
재료 및 방법
Caco2 세포를 12 웰 플레이트 상에 씨딩하였고, 10일 동안 분화시켰고; 그 다음 이들 세포를 12 시간 동안 혈청-결핍 조건에 두었고, 후속적으로 정지 상(stationary phase) NCIMB 42787로부터 유도한 10% 상청액에 24h 동안 노출시켰다. 세포를 수거하여, 총 RNA는 RNeasy 미니 키트 프로토콜 (Qiagen)에 따라 단리시켰다. cDNA는 고성능 cDNA 역 전사 키트 (Applied Biosystems)를 이용하여 만들었다. 유전자 발현은 qPCR에 의해 측정되었다. β-액틴은 내부 대조군으로 이용되었다. 2^(-ΔΔct) 방법에 따라 배수 변화를 산출하였다. 프라이머 서열들을 표 1에 나타낸다.
결과
도 6에 나타낸 결과에서, 분화된 Caco2 세포를 10% NCIMB 42787 박테리아 무-세포 현탁액과 함께 24 h 동안 항온처리하였을 때, TPH1의 발현은 처리안된 또는 YCFA+-처리된 대조군과 비교하여, 거의 3-배 상향조절되었다. 도 7에 나타낸 결과에서 이러한 항온처리에 의해 처리안된 대조군과 비교하여 3-배 이상으로 SLC6A4의 발현이 증가된다.
장에서 세로토닌 수준의 증가는 NCIMB 42787이 공급된 마우스의 뇌에서 세로토닌 수준을 NCIMB 42787이 어떻게 증가시켰는지를 설명할 수 있다
실시예 5 - 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787 대사산물 분석
개요
소화관 미생물 균총은 이의 막대한 다양성 및 물질대사 능력으로, 방대한 다양한 분자의 생산을 위한 거대한 물질대사 보관소를 나타낸다. 박테리아 상층액 내에 존재하는 대사산물은 산화 스트레스에 대한 숙주 반응, 세포-대-세포 통신 및 효과적인 뉴런 프로세스에 직접적으로 영향을 줄 수 있다. 본 발명자들은 M. 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787에 의해 생성되는 대사 산물, 특히 단사슬 지방산 및 중사슬 지방산이 무엇인지 결정하고자 했다.
재료 및 방법
박테리아 배양 및 무세포 상층액 수집
박테리아의 순수한 배양액은 이들이 그들의 정체 성장기에 도달할 때까지, YCFA 액상배지에서 혐기성으로 성장되었다. 배양물은 5 분 동안 5,000 x g에서 원심분리되었고, 그리고 무세포 상층액 (CFS)은 0.2 μM 필터 (Millipore, UK)를 이용하여 여과되었다. CFS의 1 mL 분취량은 이용될 때까지 -80 ℃에서 보관되었다. 부티르산나트륨, 헥산산 및 발레르산은 Sigma Aldrich (UK)로부터 획득되었고, 그리고 현탁액은 YCFA+ 액상배지에서 제조되었다.
박테리아 상층액의 SCFA 및 MCFA 정량
박테리아 상층액으로부터 짧은 사슬 지방산 (SCFAs) 및 중간 사슬 지방산 (MCFAs)은 하기와 같이 분석되고 MS Omics APS에 의해 정량되었다. 염산을 사용하여 샘플을 산성화하고, 중수소 라벨된 내부 표준 물질을 첨가했다. 모든 표본은 무작위 순서로 분석되었다. 분석은 사중극(quadropole) 검출기 (59977B, Agilent)와 연계된 GC (7890B, Agilent)에서 설치된 높은 극성 칼럼 (Zebron™ ZB-FFAP, GC Cap. 칼럼 30 m x 0.25 mm x 0.25 μm)을 이용하여 수행되었다. 상기 시스템은 ChemStation (Agilent)에 의해 제어되었다. 미가공 데이터는 Chemstation (Agilent)을 이용하여 netCDF 형식으로 전환되었고, 이후 상기 데이터는 [50]에서 설명된 PARADISe 소프트웨어를 이용하여 Matlab R2014b (Mathworks, Inc.)에서 이입되고 처리되었다.
결과
NCIMB 42787은 대사산물 부티레이트 및 발레르산을 생산한다.
NCIMB 42787은 차례로 5.08 mM, 1.60 mM의 평균 농도의 발레르산, 헥사노산을 만들었다 (도 8). 본 발명자들은 M. 마실리엔시스(M. massiliensis) 균주의 다른 균주들도 필적할 수준의 발레르산, 헥사노산, 부틸산을 생산하고, 유사한 양의 아세테이트 및 프로피오네이트를 소비한다는 것을 또한 발견하였다 (도 9).
부티레이트의 생산은 뇌에서 세로토닌 분비를 증가시키는 맥락에서 중요할 수 있는데, 그 이유는 부티레이트는 혈액 뇌 장벽의 불-침투성을 줄이는 역할을 하는 것으로 알려져 있기 때문이며, 이는 NCIMB 42787이 존재할 때, 세로토닌 분비를 향상시키는 생리활성 분자가 뇌에 대한 접근을 증가시킨다을 의미한다 [51]. NCIMB 42787 (및 다른 박테리아)의 이러한 속성은 이의 효력에 기여할 수 있다.
실시예 6 - 안정성 검사
본원에 기재된 적어도 한 가지 박테리아 균주를 함유하는 본원에 기재된 조성물은 25 ℃ 또는 4 ℃에서 밀봉된 용기에 저장되고, 용기는 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 90 % 또는 95 % 상대 습도 하에 둔다. 1 개월, 2 개월, 3 개월, 6 개월, 1 년, 1.5 년, 2 년, 2.5 년 또는 3 년 후, 박테리아 균주 중에서 최소한 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%가 표준 프로토콜에 의해 결정된 집락 형성 단위에서 계측될 때 남아있을 것이다.
실시예 7 - 대사산물 분석
실시예 5에서 제공된 데이터에 추가하여, 도 10에서는 M. 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787 및 수탁 번호 NCIMB 43385, NCIMB 43388 및 NCIMB 43389로 기탁된 균주에 의해 생산되고 소비되는 다른 짧은 사슬 지방산을 보여준다.
M. 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787은 2-메틸-프로판산 및 3-메틸-프로판산의 수준을 증가시키는 한편, 포름산을 감소시킨다 (도 10). 따라서, 균주 NCIMB 42787은 2-메틸-프로판산 및 3-메틸-프로판산을 생산하고, 포름산을 소비한다. 본 발명자들은 다른 기탁된 균주들 또한 필적하는 수준으로 2-메틸-프로판산 및 3-메틸-프로판산을 생산하고, 유사한 양의 포름산을 소비한다는 것을 또한 알았다.
실시예 8 - NCIMB 42787은 BALB/c 마우스의 결장에서 Tph1 mRNA 발현의 유의적 증가를 야기한다.
BALB/c 마우스에게 살아있는 생물치료제를 투여하였고, qPCR을 이용한 유전자 발현 분석을 위해 조직을 단리하였다.
도 11에서는 NCIMB 42787이 비히클 대조군과 비교하여 BALB/c 마우스 결장에서 Tph1 발현 증가를 촉발시켰음을 증명한다 (β-액틴으로 정규화된 qPCR에 의한 정량화를 사용하여).
상기에서 개요가 설명된 바와 같이, Tph1은 세로토닌의 생산을 구동시키고, 따라서, 우울증 치료에 Tph1의 증가는 효과적일 것으로 기대된다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 Tph1의 발현을 증가시킨다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 Tph1 발현 증가를 통하여 세로토닌 생산을 증가시킨다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 세로토닌 발현의 증가를 유도함으로써, 특히 우울증 치료에 치료요법적으로 효과적이다.
실시예 9 - 메가스파에라(Megasphaera) 균주 NCIMB 43385는 BALB/c 마우스의 해마, 편도체 및 전두엽 피질에서 미네랄코르티코이드 수용체 발현을 크게 증가시킨다.
BALB/c 마우스에게 살아있는 생물치료제를 투여하였고, qPCR을 이용한 유전자 발현 분석을 위해 조직을 단리하였다.
도 12는 비히클 대조군과 비교하여 NCIMB 43385가 뇌의 세 영역에서 미네랄코르티코이드(mineralocorticoid) 수용체 발현을 유의적으로 증가시키는 능력을 보여준다 (β-액틴으로 정규화된 qPCR에 의한 정량화 사용).
우울증은 미네랄코르티코이드 활동의 감소를 동반할 수 있다고 이해한다. 실제로, 이 수용체는 만성 스트레스와 우울증에 의해 하향 조절되는 것으로 보이지만, 항우울제에 의해 유도된다. 미네랄코르티코이드 수용체의 증가된 활성은 HPA 축 활성을 억제하고, 서파 수면(slow wave sleep) 촉진, 불안 감소 및 모방행위(copying)를 지원하기 위한 회로 연결 전환이 내포된, 치료요법적으로 유익한 효과를 가질 수 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 미네랄코르티코이드 수용체의 발현을 증가시킨다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 미네랄코르티코이드 수용체 발현의 발현 영향에 있어서 세로토닌 결핍과 연합된 우울증 및 다른 장애에 있어서 치료요법적 효과를 나타낸다.
실시예 10 - 메가스파에라(Megasphaera) 균주 NCIMB 43385는 BALB/c 마우스의 해마 및 편도체에서 GABA A2 발현을 유의적으로 증가시킨다.
BALB/c 마우스에게 살아있는 생물치료제를 투여하였고, qPCR을 이용한 유전자 발현 분석을 위해 조직을 단리하였다.
도 13에서는 비히클 대조군과 비교하여 NCIMB 43385가 뇌에서 GABA A2의 발현을 유의적으로 증가시키는 능력을 보여준다 (β-액틴으로 정규화된 qPCR에 의한 정량화 사용).
신경 전달 물질 GABA는 우울증에 영향을 미치는 것으로 연관되어 있으며, GABA 수치는 주요 우울증 장애 환자에서 감소하며, 항우울제로 만성 치료 후 정상화된다. 따라서, GABA A2 발현 증가는 우울증 및 불안과 같은 장애에 유익한 치료요법적 효과를 갖는다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 GABA A2의 발현을 증가시킨다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 GABA A2의 발현 증가 관점에서 세로토닌 결핍과 연합된 장애, 예를 들면, 우울증에 치료요법적 효과를 나타낸다.
실시예 11 - 메가스파에라(Megasphaera) 균주 NCIMB 43387은 BALB/c 마우스의 전액골 피질에서 옥시토신 수용체 발현을 유의적으로 증가시킨다.
BALB/c 마우스에게 살아있는 생물치료제를 투여하였고, qPCR을 이용한 유전자 발현 분석을 위해 조직을 단리하였다.
도 14에서는 NCIMB 43387이 비히클 대조군과 비교하여 전액골 피질에서 옥시토신 수용체 발현에 있어서 유의적인 증가를 촉발시켰음을 증명한다 (β-액틴으로 정규화된 qPCR에 의한 정량화 사용를 사용하여).
옥시토신은 정서적, 사회적, 인지적 및 신경 내분비 생리, 뿐만 아니라 자율 조절과 관련있다. 구체적으로, 옥시토신 방출은 불안 해소; 긍정적인 분위기; 모성 행동, 쌍 결합(pair bonding); 성행위; 사회적 기억; 후각 기억; 식욕 부진 효과; 스트레스에 대한 HPA 축 반응의 감쇠; 출산 및 젖먹이 동안 자동 흥분(autoexcitation), 뿐만 아니라 다른 생리적 및 심리적 과정에 연루된다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 옥시토신 수준을 증가시킨다. 특정 구체예들에서 본 발명의 조성물은 옥시토신 수용체의 발현 증가 관점에서 세로토닌 결핍과 연합된 장애에 치료요법적으로 유익한 효과를 나타낸다.
실시예 12 - 시험관내에서 짧은 사슬 지방산 생산에 있어서 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 DSM 26228, 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii) 균주 NCIMB 8927 및 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787의 효과
요약
이 연구는 DSM 26228, NCIMB 8927 및 NCIMB 42787이 시험관에서 짧은 사슬 지방산 (SCFA) 생산에 미치는 영향을 조사했다. 아세테이트, 프로피오네이트, 발레레이트, 이소부티레이트 및 이소발레레이트가 내포된 SCFAs는식이 섬유의 미생물 부-산물이다. 임의의 SCFA의 증가는 미생물의 생산성 증가를 시사하며, 이는 바람직한 성향이다.
재료 및 방법
DSM 26228, NCIMB 8927 및 NCIMB 42787의 순수 배양물은 YCFA+ 브로스에 혐기성으로 성장되었다 [리터당: 카제인 가수분해물 10.0 g, 효모 추출물 2.5 g, 탄산 수소 나트륨 4.0 g, 글루코스 2.0 g, 셀로비오스 2.0 g, 가용성 전분 2.0 g, 인산 수소 이-칼륨 0.45 g, 인산 이-산소 칼륨 0.45 g, 레사주린 0.001 g, L-시스테인 HCl 1.0 g, 황산 암모늄 0.9 g, 염화 나트륨 0.9 g, 황산 마그네슘 0.09 g, 염화칼슘 0.09 g, 헤민 0.01 g, SCFA 3.1 ml (아세트산 2.026 ml/L, 프로피온산 0.715 ml/L, n-발레르산 0.119 ml/L, 이소-발레르산 0.119 ml/L, 이소-부티르산 0.119 ml/L), 비타민 믹스 1: 1 ml (바이오틴 1mg/100 ml, 시아노코발아민 1mg/100 ml, p-아미노벤조산 3mg/100 ml, 피리독신 15mg/100 ml), 비타민 믹스 2: 1 ml (티아민 5mg/100 ml, 리보플라빈 5mg/100 ml), 비타민 믹스 3: 1 ml (엽산 5mg/100 ml)]에서 이들이 정지 상장 단계에 이를 때 까지 혐기성으로 성장되었다. 배양물을 5000 xg에서 10 분 동안 원심분리하고, 무-세포 상청액 (CFS)을 0.45 μM 필터에 이어 0.2 μM 필터(Millipore, UK)를 사용하여 여과한 후, CFS의 1 mL 분취량을 사용할 때까지 -80℃에서 보관했다.
박테리아 상청액으로부터 짧은 사슬 지방산 (SCFAs) 및 중간 사슬 지방산 (MCFAs)을 분석하였고, MS Omics APS, Denmark에 의해 정량화시켰다. 염산을 사용하여 샘플을 산성화하고, 중수소 라벨된 내부 표준 물질을 첨가했다. 모든 샘플은 무작위 순서로 분석되었다. 분석은 사중극자 검출기 (5977B, Agilent)가 연결된 기체 크로마토그래프 (7890B, Agilent)에 내장된-고 극성 컬럼 (Zebron ™ ZB-FFAP, GC Cap. 컬럼 30m x 0.25mm x 0.25μm)을 사용하여 수행되었다. 상기 시스템은 ChemStation (Agilent)에 의해 제어되었다. 미가공 데이터는 Chemstation (Agilent)을 이용하여 netCDF 형식으로 전환되었고, 이후 상기 데이터는 참고문헌 [50]에서 설명된 PARADISe 소프트웨어를 이용하여 Matlab R2014b (Mathworks, Inc.)에서 이입되고 처리되었다.
결과
상기 각 박테리아 균주에서 다음의 패턴이 관찰되었다:
Figure pct00004
이들 데이터는 메가스파에라(Megasphaera) 균주 세 가지 모두 부티레이트(부탄산) 및 발레르산(펜타논산)을 증가시켰음을 입증한다.
발레르산은 GABA-A 작용제이며, 시냅스 GABA의 가용성을 높이고 및/또는 시냅스-후 GABA 반응을 향상시켜 GABAergic 활성을 향상시키는 것으로 생각된다. 따라서, 상기에서 개요를 나타낸 바와 같이, GABA 반응 증가는 우울증 및 불안과 같은 장애에 유익한 치료요법적 효과를 갖는다. 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 및 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii) 균주 모두 발레르산의 유익한 증가를 촉발시킨다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 발레르산 증가 관점에서 세로토닌 결핍과 연합된 장애, 예를 들면, 우울증에 치료요법적 효과를 나타낸다.
상기에서 개요를 나타낸 바와 같이, 부티레이트는 신경보호 활성을 갖고, 세로토닌 및 BDNF 발현을 증가시키고, 그리고 혈액 뇌 장벽 손상의 복원을 지원할 수 있다. 따라서, 부티레이트는 우울증-유사 거동을 유의적으로 개선시킬 수 있다. 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 및 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii) 균주 모두 부티레이트의 유익한 증가를 촉발시킨다. 특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 부티레이트 증가 관점에서 세로토닌 결핍과 연합된 장애, 예를 들면, 우울증에 치료요법적 효과를 나타낸다.
실시예 13 - 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 43389 및 메가스파에라 종(Megasphaera sp.) 균주 NCIMB 43385의 짧은/중간 사슬 지방산 생산 프로파일
재료 및 방법
메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 43389 및 메가스파에라 종(Megasphaera sp.) 균주 NCIMB 43385의 순수 배양물은 YCFA+ 브로스에서 혐기성으로 성장되었다. 박테리아 상청액으로부터 짧은 사슬 지방산 (SCFAs) 및 중간 사슬 지방산 (MCFAs)을 분석하였고, MS Omics APS, Denmark에 의해 정량화시켰다. 염산을 사용하여 샘플을 산성화하고, 중수소 라벨된 내부 표준 물질을 첨가했다. 모든 샘플은 무작위 순서로 분석되었다. 분석은 사중극자 검출기 (5977B, Agilent)가 연결된 기체 크로마토그래프 (7890B, Agilent)에 내장된-고 극성 컬럼 (Zebron™ ZB-FFAP, GC Cap. 컬럼 30m x 0.25mm x 0.25μm)을 사용하여 수행되었다. 상기 시스템은 ChemStation (Agilent)에 의해 제어되었다. 미가공 데이터는 PARADISe 소프트웨어를 사용하여 Matlab R2014b (Mathworks, Inc.)에서 데이터를 가져와 처리하기 전, Chemstation (Agilent)을 사용하여 netCDF 형식으로 변환되었다.
결과
Figure pct00005
이 결과는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 43389 및 메가스파에라 종(Megasphaera sp.) 균주 NCIMB 43385에 대해 실시예 7(그리고 도 9-10)에서 보고된 것과 일치하며, 이는 이들 균주의 짧은/중간 사슬 지방산 프로파일을 추가 확인시킨다.
서열
서열 식별 번호: 1 (16S 리보솜 RNA에 대한 메가스파에라 마실리엔시스 (Megasphaera massiliensis) 유전자, 부분적인 서열, 균주: NP3 - JX424772.1)
1 agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ttaacacatg caagtcgaac
61 gagaagagat gagaagcttg cttcttatca attcgagtgg caaacgggtg agtaacgcgt
121 aagcaacctg cccttcagat ggggacaaca gctggaaacg gctgctaata ccgaatacgt
181 tctttccgcc gcatgacggg aagaagaaag ggaggccttc gggctttcgc tggaggaggg
241 gcttgcgtct gattagctag ttggaggggt aacggcccac caaggcgacg atcagtagcc
301 ggtctgagag gatgaacggc cacattggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg
361 cagcagtggg gaatcttccg caatggacga aagtctgacg gagcaacgcc gcgtgaacga
421 tgacggcctt cgggttgtaa agttctgtta tatgggacga acagggcatc ggttaatacc
481 cggtgtcttt gacggtaccg taagagaaag ccacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg
541 taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg taaagggcgc gcaggcggca
601 tcgcaagtcg gtcttaaaag tgcggggctt aaccccgtga ggggaccgaa actgtgaagc
661 tcgagtgtcg gagaggaaag cggaattcct agtgtagcgg tgaaatgcgt agatattagg
721 aggaacacca gtggcgaaag cggctttctg gacgacaact gacgctgagg cgcgaaagcc
781 aggggagcaa acgggattag ataccccggt agtcctggcc gtaaacgatg gatactaggt
841 gtaggaggta tcgactcctt ctgtgccgga gttaacgcaa taagtatccc gcctggggag
901 tacggccgca aggctgaaac tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagtat
961 gtggtttaat tcgacgcaac gcgaagaacc ttaccaagcc ttgacattga ttgctacgga
1021 aagagatttc cggttcttct tcggaagaca agaaaacagg tggtgcacgg ctgtcgtcag
1081 ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccctat cttctgttgc
1141 cagcacctcg ggtggggact cagaagagac tgccgcagac aatgcggagg aaggcgggga
1201 tgacgtcaag tcatcatgcc ccttatggct tgggctacac acgtactaca atggctctta
1261 atagagggac gcgaaggagc gatccggagc aaaccccaaa aacagagtcc cagttcggat
1321 tgcaggctgc aactcgcctg catgaagcag gaatcgctag taatcgcagg tcagcatact
1381 gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccacgaa agtcattcac
1441 acccgaagcc ggtgaggcaa ccgcaaggaa ccagccgtcg aaggtggggg cgatgattgg
1501 ggtgaagtcg taacaaggt
서열 식별 번호: 2 (메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주 NCIMB 42787에 대한 콘센수스 16S rRNA 유전자 서열)
TGAGAAGCTTGCTTCTTATCGATTCTAGTGGCAAACGGGTGAGTAACGCGTAAGCAACCTGCCCTTCAGATGGGGACAACAGCTGGAAACGGCTGCTAATACCGAATACGTTCTTTCCGCCGCATGACGGGAAGAAGAAAGGGAGGCCTTCGGGCTTTCGCTGGAGGAGGGGCTTGCGTCTGATTAGCTAGTTGGAGGGGTAACGGCCCACCAAGGCGACGATCAGTAGCCGGTCTGAGAGGATGAACGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAACGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAAGTTCTGTTATATGGGACGAACAGGACATCGGTTAATACCCGGTGTCTTTGACGGTACCGTAAGAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCGCGCAGGCGGCATCGCAAGTCGGTCTTAAAAGTGCGGGGCTTAACCCCGTGAGGGGACCGAAACTGTGAAGCTCGAGTGTCGGAGAGGAAAGCGGAATTCCTAGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATTAGGAGGAACACCAGTGGCGAAAGCGGCTTTCTGGACGACAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCCAGGGGAGCAAACGGGATTAGATACCCCGGTAGTCCTGGCCGTAAACGATGGATACTAGGTGTAGGAGGTATCGACTCCTTCTGTGCCGGAGTTAACGCAATAAGTATCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGCCTTGACATTGATTGCTACGGAAAGAGATTTCCGGTTCTTCTTCGGAAGACAAGAAAACAGGTGGTGCACGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATCTTCTGTTGCCAGCACCTCGGGTGGGGACTCAGAAGAGACTGCCGCAGACAATGCGGAGGAAGGCGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGGCTTGGGCTACACACGTACTACAATGGCTCTTAATAGAGGGAAGCGAAGGAGCGATCCGGAGCAAACCCCAAAAACAGAGTCCCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCAGGAATCGCTAGTAATCGCAGGTCAGCATACTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAAAGTCATTCACACCCGAAGCCGGTGAGGCAACCGCAAG
Figure pct00006
서열 식별 번호: 11 (수탁 번호 NCIMB 43385로 기탁된 메가스파에라 (Megasphaera) 균주에 대한 콘센수스 16S rRNA 서열)
GGCTGGTTCCTTGCGGTTGCCTCACCGGCTTCGGGTGTGAATGACTTTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGTATGCTGACCTGCGATTACTAGCGATTCCTGCTTCATGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAATCCGAACTGGGACTCTGTTTTTGGGGTTTGCTCCGGATCGCTCCTTCGCTTCCCTCTATTAAGAGCCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCAAGCCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCCGCATTGTCTGCGGCAGTCTCTTCTGAGTCCCCACCCTTAGTGCTGGCAACAGAAGATAGGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCGTGCACCACCTGTTTTCTTGTCTTCCGAAGAAGAACCGGAAATCTCTTTCCGTAGCAATCAATGTCAAGGCTTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCGTCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGATACTTATTGCGTTAACTCCGGCACAGAAGGAGTCGATACCTCCTACACCTAGTATCCATCGTTTACGGCCAGGACTACCGGGGTATCTAATCCCGTTTGCTCCCCTGGCTTTCGCGCCTCAGCGTCAGTTGTCGTCCAGAAAGCCGCTTTCGCCACTGGTGTTCCTCCTAATATCTACGCATTTCACCGCTACACTAGGAATTCCGCTTTCCTCTCCGACACTCGAGCTTCACAGTTTCGGTCCCCTCACGGGGTTAAGCCCCGCACTTTTAAGACCGACTTGCGATGCCGCCTGCGCGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTCTTACGGTACCGTCAGGGATAACGGGTATTGACCGCTATCCTGTTCGTCCCATATAACAGAACTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCGTTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGTTCATCCTCTCAGACCGGCTACTGATCGTCGCCTTGGTGGGCCGTTACCCCTCCAACTAGCTAATCAGACGCAAGCCCCTCCTCCAGCGAAAGCCCGAAGGCCTCCCTTTCTTCATCCCGTCATGCGGCGGAAAGAACGTATTCGGTATTAGCAGCCGTTTCCAGCTGTTGTCCCCATCTGAAGGGCAGGTTGCTTACGCGTTACTCACCCGTTTGCCACTCGAATTGATAAGAAGCAAGCTTCTCATC
서열 식별 번호: 12 (수탁 번호 NCIMB 43388로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주에 대한 콘센수스 16S rRNA 서열)
GGCTGGTTCCTTGCGGTTGCCTCACCGGCTTCGGGTGTGAATGACTTTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGTATGCTGACCTGCGATTACTAGCGATTCCTGCTTCATGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAATCCGAACTGGGACTCTGTTTTTGGGGTTTGCTCCGGATCGCTCCTTCGCTTCCCTCTATTAAGAGCCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCAAGCCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCCGCATTGTCTGCGGCAGTCTCTTCTGAGTCCCCACCCGAGGTGCTGGCAACAGAAGATAGGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCGTGCACCACCTGTTTTCTTGTCTTCCGAAGAAGAACCGGAAATCTCTTTCCGTAGCAATCAATGTCAAGGCTTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCGTCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGATACTTATTGCGTTAACTCCGGCACAGAAGGAGTCGATACCTCCTACACCTAGTATCCATCGTTTACGGCCAGGACTACCGGGGTATCTAATCCCGTTTGCTCCCCTGGCTTTCGCGCCTCAGCGTCAGTTGTCGTCCAGAAAGCCGCTTTCGCCACTGGTGTTCCTCCTAATATCTACGCATTTCACCGCTACACTAGGAATTCCGCTTTCCTCTCCGACACTCGAGCTTCACAGTTTCGGTCCCCTCACGGGGTTAAGCCCCGCACTTTTAAGACCGACTTGCGATGCCGCCTGCGCGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTCTTACGGTACCGTCAAAGACACCGGGTATTAACCGATGTCCTGTTCGTCCCATATAACAGAACTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCGTTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGTTCATCCTCTCAGACCGGCTACTGATCGTCGCCTTGGTGGGCCGTTACCCCTCCAACTAGCTAATCAGACGCAAGCCCCTCCTCCAGCGAAAGCCCGAAGGCCTCCCTTTCTTCTTCCCGTCATGCGGCGGAAAGAACGTATTCGGTATTAGCAGCCGTTTCCAGCTGTTGTCCCCATCTGAAGGGCAGGTTGCTTACGCGTTACTCACCCGTTTGCCACTAGAATCGATAAGAAGCAAGCTTCTCATGTCTTCT
서열 식별 번호: 13 (수탁 번호 NCIMB 43389로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis) 균주에 대한 콘센수스 16S rRNA 서열)
CGACGGCTGGTTCCTTGCGGTTGCCTCACCGGCTTCGGGTGTGAATGACTTTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGTATGCTGACCTGCGATTACTAGCGATTCCTGCTTCATGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAATCCGAACTGGGACTCTGTTTTTGGGGTTTGCTCCGGATCGCTCCTTCGCTTCCCTCTATTAAGAGCCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCAAGCCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCCGCATTGTCTGCGGCAGTCTCTTCTGAGTCCCCACCCGAGGTGCTGGCAACAGAAGATAGGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCGTGCACCACCTGTTTTCTTGTCTTCCGAAGAAGAACCGGAAATCTCTTTCCGTAGCAATCAATGTCAAGGCTTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCGTCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGATACTTATTGCGTTAACTCCGGCACAGAAGGAGTCGATACCTCCTACACCTAGTATCCATCGTTTACGGCCAGGACTACCGGGGTATCTAATCCCGTTTGCTCCCCTGGCTTTCGCGCCTCAGCGTCAGTTGTCGTCCAGAAAGCCGCTTTCGCCACTGGTGTTCCTCCTAATATCTACGCATTTCACCGCTACACTAGGAATTCCGCTTTCCTCTCCGACACTCGAGCTTCACAGTTTCGGTCCCCTCACGGGGTTAAGCCCCGCACTTTTAAGACCGACTTGCGATGCCGCCTGCGCGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTCTTACGGTACCGTCAAAGACACCGGGTATTAACCGATGCCCTGTTCGTCCCATATAACAGAACTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCGTTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGTTCATCCTCTCAGACCGGCTACTGATCGTCGCCTTGGTGGGCCGTTACCCCTCCAACCAGCTAATCAGACGCAAGCCCCTCCTCCAGCGAAAGCCCGAAGGCCTCCCTTTCTTCTTCCCGTCATGCGGCGGAAAGAACGTATTCGGTATTAGCAGCCGTTTCCAGCTGTTGTCCCCATCTGAAGGGCAGGTTGCTTACGCGTTACTCACCCGTTTGCCACTAGAATCGATAAGAAGCAAGCTTCTCATGTCTTCTCGTTCGACTTGCAT
서열 식별 번호: 14 (수탁 번호 NCIMB 43386으로 기탁된 메가스파에라 (Megasphaera) 균주에 대한 콘센수스 16S rRNA 서열)
CGACGGCTGGTTCCTTGCGGTTGCCTCACCGGCTTCGGGTGTGAATGACTTTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGTATGCTGACCTGCGATTACTAGCGATTCCTGCTTCATGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAATCCGAACTGGGACTCTGTTTTTGGGGTTTGCTCCGGATCGCTCCTTCGCTTCCCTCTATTAAGAGCCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCAAGCCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCCGCATTGTCTGCGGCAGTCTCTTCTGAGTCCCCACCCTTAGTGCTGGCAACAGAAGATAGGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCGTGCACCACCTGTTTTCTTGTCTTCCGAAGAAGAACCGGAAATCTCTTTCCGTAGCAATCAATGTCAAGGCTTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCGTCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGATACTTATTGCGTTAACTCCGGCACAGAAGGAGTCGATACCTCCTACACCTAGTATCCATCGTTTACGGCCAGGACTACCGGGGTATCTAATCCCGTTTGCTCCCCTGGCTTTCGCGCCTCAGCGTCAGTTGTCGTCCAGAAAGCCGCTTTCGCCACTGGTGTTCCTCCTAATATCTACGCATTTCACCGCTACACTAGGAATTCCGCTTTCCTCTCCGACACTCGAGCTTCACAGTTTCGGTCCCCTCACGGGGTTAAGCCCCGCACTTTTAAGACCGACTTGCGATGCCGCCTGCGCGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTCTTACGGTACCGTCAGGGATAACGGGTATTGACCGCTATCCTGTTCGTCCCATATAACAGAACTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCGTTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGTTCATCCTCTCAGACCGGCTACTGATCGTCGCCTTGGTGGGCCGTTACCCCTCCAACTAGCTAATCAGACGCAAGCCCCTCCTCCAGCGAAAGCCCGAAGGCCTCCCTTTCTTCATCCCGTCATGCGGCGGAAAGAACGTATTCGGTATTAGCAGCCGTTTCCAGCTGTTGTCCCCATCTGAAGGGCAGGTTGCTTACGCGTTACTCACCCGTTTGCCACTCGAATTGATAAGAAGCAAGCTTCTCATCTCTTCTCGTTCGACTGCA
서열 식별 번호: 15 (수탁 번호 NCIMB 43387로 기탁된 메가스파에라 (Megasphaera) 균주에 대한 콘센수스 16S rRNA 서열)
TCGAACGGCTGGTTCCTTGCGGTTGCCTCACCGGCTTCGGGTGTGAATGACTTTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGTATGCTGACCTGCGATTACTAGCGATTCCTGCTTCATGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAATCCGAACTGGGACTCTGTTTTTGGGGTTTGCTCCGGATCGCTCCTTCGCTTCCCTCTATTAAGAGCCATTGTAGTACGTGTGTAGCCCAAGCCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCGCCTTCCTCCGCATTGTCTGCGGCAGTCTCTTCTGAGTCCCCACCCTTAGTGCTGGCAACAGAAGATAGGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCGTGCACCACCTGTTTTCTTGTCTTCCGAAGAAGAACCGGAAATCTCTTTCCGTAGCAATCAATGTCAAGGCTTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCGTCGAATTAAACCACATACTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGATACTTATTGCGTTAACTCCGGCACAGAAGGAGTCGATACCTCCTACACCTAGTATCCATCGTTTACGGCCAGGACTACCGGGGTATCTAATCCCGTTTGCTCCCCTGGCTTTCGCGCCTCAGCGTCAGTTGTCGTCCAGAAAGCCGCTTTCGCCACTGGTGTTCCTCCTAATATCTACGCATTTCACCGCTACACTAGGAATTCCGCTTTCCTCTCCGACACTCGAGCTTCACAGTTTCGGTCCCCTCACGGGGTTAAGCCCCGCACTTTTAAGACCGACTTGCGATGCCGCCTGCGCGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTCTTACGGTACCGTCAGGGATAACGGGTATTGACCGCTATCCTGTTCGTCCCATATAACAGAACTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCGTTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGTTCATCCTCTCAGACCGGCTACTGATCGTCGCCTTGGTGGGCCGTTACCCCTCCAACTAGCTAATCAGACGCAAGCCCCTCCTCCAGCGAAAGCCCGAAGGCCTCCCTTTCTTCATCCCGTCATGCGGCGGAAAGAACGTATTCGGTATTAGCAGCCGTTTCCAGCTGTTGTCCCCATCTGAAGGGCAGGTTGCTTACGCGTTACTCACCCGTTTGCCACTCGAATTGATAAGAAGCAAGCTTCTCATCTCTTCTCGTTCGACTTGCA
서열 식별 번호: 16 (수탁 번호 NCIMB 8927로 기탁된 M. 엘스데니(M. elsdenii) 균주에 대한 콘센수스 16S rRNA 서열)
1 agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ttaacacatg caagtcgaac
61 gagaagagat gagaagcttg cttcttatcg attcgagtgg caaacgggtg agtaacgcgt
121 aagcaacctg cccttcagat ggggacaaca gctggaaacg gctgctaata ccgaatacgt
181 tctttttgtc gcatggcaga gggaagaaag ggaggctctt cggagctttc gctgaaggag
241 gggcttgcgt ctgattagct agttggaggg gtaacggccc accaaggcga cgatcagtag
301 ccggtctgag aggatgaacg gccacattgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga
361 ggcagcagtg gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga cggagcaacg ccgcgtgaac
421 gatgacggcc ttcgggttgt aaagttctgt tatacgggac gaatggcgta gcggtcaata
481 cccgttacga gtgacggtac cgtaagagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc
541 ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg aattattggg cgtaaagggc gcgcaggcgg
601 cgtcgtaagt cggtcttaaa agtgcggggc ttaaccccgt gaggggaccg aaactgcgat
661 gctagagtat cggagaggaa agcggaattc ctagtgtagc ggtgaaatgc gtagatatta
721 ggaggaacac cagtggcgaa agcggctttc tggacgacaa ctgacgctga ggcgcgaaag
781 ccaggggagc aaacgggatt agataccccg gtagtcctgg ccgtaaacga tggatactag
841 gtgtaggagg tatcgacccc ttctgtgccg gagttaacgc aataagtatc ccgcctgggg
901 agtacggccg caaggctgaa actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagt
961 atgtggttta attcgacgca acgcgaagaa ccttaccaag ccttgacatt gattgctatg
1021 gatagagata tccagttcct cttcggagga caagaaaaca ggtggtgcac ggctgtcgtc
1081 agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaacccct atcttctgtt
1141 accagcggtt cggccgggga ctcaggagag actgccgcag acaatgcgga ggaaggcggg
1201 gatgacgtca agtcatcatg ccccttatgg cttgggctac acacgtacta caatggctct
1261 taatagaggg aagcgaagga gcgatccgga gcaaacccca aaaacagagt cccagttcgg
1321 attgcaggct gcaactcgcc tgcatgaagc aggaatcgct agtaatcgca ggtcagcata
1381 ctgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg aaagtcattc
1441 acacccgaag ccggtgaggt aaccttttgg agccagccgt ccaaggtggg ggcgatgatt
1501 ggggtgaagt cgtaacaagg taacc
Figure pct00007
SEQUENCE LISTING <110> 4D PHARMA RESEARCH LIMITED <120> COMPOSITIONS COMPRISING BACTERIAL STRAINS <130> P074586WO <150> EP18212096.4 <151> 2018-12-12 <150> GB1906728.9 <151> 2019-05-13 <150> GB1914852.7 <151> 2019-10-14 <160> 16 <170> SeqWin2010, version 1.0 <210> 1 <211> 1519 <212> DNA <213> Megasphaera massiliensis gene for 16S ribosomal RNA, partial sequence, strain: NP3 - JX424772.1 <400> 1 agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ttaacacatg caagtcgaac 60 gagaagagat gagaagcttg cttcttatca attcgagtgg caaacgggtg agtaacgcgt 120 aagcaacctg cccttcagat ggggacaaca gctggaaacg gctgctaata ccgaatacgt 180 tctttccgcc gcatgacggg aagaagaaag ggaggccttc gggctttcgc tggaggaggg 240 gcttgcgtct gattagctag ttggaggggt aacggcccac caaggcgacg atcagtagcc 300 ggtctgagag gatgaacggc cacattggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg 360 cagcagtggg gaatcttccg caatggacga aagtctgacg gagcaacgcc gcgtgaacga 420 tgacggcctt cgggttgtaa agttctgtta tatgggacga acagggcatc ggttaatacc 480 cggtgtcttt gacggtaccg taagagaaag ccacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg 540 taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg taaagggcgc gcaggcggca 600 tcgcaagtcg gtcttaaaag tgcggggctt aaccccgtga ggggaccgaa actgtgaagc 660 tcgagtgtcg gagaggaaag cggaattcct agtgtagcgg tgaaatgcgt agatattagg 720 aggaacacca gtggcgaaag cggctttctg gacgacaact gacgctgagg cgcgaaagcc 780 aggggagcaa acgggattag ataccccggt agtcctggcc gtaaacgatg gatactaggt 840 gtaggaggta tcgactcctt ctgtgccgga gttaacgcaa taagtatccc gcctggggag 900 tacggccgca aggctgaaac tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagtat 960 gtggtttaat tcgacgcaac gcgaagaacc ttaccaagcc ttgacattga ttgctacgga 1020 aagagatttc cggttcttct tcggaagaca agaaaacagg tggtgcacgg ctgtcgtcag 1080 ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccctat cttctgttgc 1140 cagcacctcg ggtggggact cagaagagac tgccgcagac aatgcggagg aaggcgggga 1200 tgacgtcaag tcatcatgcc ccttatggct tgggctacac acgtactaca atggctctta 1260 atagagggac gcgaaggagc gatccggagc aaaccccaaa aacagagtcc cagttcggat 1320 tgcaggctgc aactcgcctg catgaagcag gaatcgctag taatcgcagg tcagcatact 1380 gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccacgaa agtcattcac 1440 acccgaagcc ggtgaggcaa ccgcaaggaa ccagccgtcg aaggtggggg cgatgattgg 1500 ggtgaagtcg taacaaggt 1519 <210> 2 <211> 1398 <212> DNA <213> consensus 16S rRNA gene sequence for Megasphaera massiliensis strain MRx0029 <400> 2 tgagaagctt gcttcttatc gattctagtg gcaaacgggt gagtaacgcg taagcaacct 60 gcccttcaga tggggacaac agctggaaac ggctgctaat accgaatacg ttctttccgc 120 cgcatgacgg gaagaagaaa gggaggcctt cgggctttcg ctggaggagg ggcttgcgtc 180 tgattagcta gttggagggg taacggccca ccaaggcgac gatcagtagc cggtctgaga 240 ggatgaacgg ccacattggg actgagacac ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg 300 ggaatcttcc gcaatggacg aaagtctgac ggagcaacgc cgcgtgaacg atgacggcct 360 tcgggttgta aagttctgtt atatgggacg aacaggacat cggttaatac ccggtgtctt 420 tgacggtacc gtaagagaaa gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta 480 ggtggcaagc gttgtccgga attattgggc gtaaagggcg cgcaggcggc atcgcaagtc 540 ggtcttaaaa gtgcggggct taaccccgtg aggggaccga aactgtgaag ctcgagtgtc 600 ggagaggaaa gcggaattcc tagtgtagcg gtgaaatgcg tagatattag gaggaacacc 660 agtggcgaaa gcggctttct ggacgacaac tgacgctgag gcgcgaaagc caggggagca 720 aacgggatta gataccccgg tagtcctggc cgtaaacgat ggatactagg tgtaggaggt 780 atcgactcct tctgtgccgg agttaacgca ataagtatcc cgcctgggga gtacggccgc 840 aaggctgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagta tgtggtttaa 900 ttcgacgcaa cgcgaagaac cttaccaagc cttgacattg attgctacgg aaagagattt 960 ccggttcttc ttcggaagac aagaaaacag gtggtgcacg gctgtcgtca gctcgtgtcg 1020 tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccccta tcttctgttg ccagcacctc 1080 gggtggggac tcagaagaga ctgccgcaga caatgcggag gaaggcgggg atgacgtcaa 1140 gtcatcatgc cccttatggc ttgggctaca cacgtactac aatggctctt aatagaggga 1200 agcgaaggag cgatccggag caaaccccaa aaacagagtc ccagttcgga ttgcaggctg 1260 caactcgcct gcatgaagca ggaatcgcta gtaatcgcag gtcagcatac tgcggtgaat 1320 acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccacga aagtcattca cacccgaagc 1380 cggtgaggca accgcaag 1398 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> TPH1 forward primer <400> 3 aaagagcgta caggtttttc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> TPH1 reverse primer <400> 4 gtctcacata ttgagtgcag 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Beta-actin forward primer <400> 5 gatcaagatc attgctcctc 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Beta-actin reverse primer <400> 6 ttgtcaagaa agggtgtaac 20 <210> 7 <211> 19 <212> DNA <213> SLC6A4 forward primer <400> 7 aatctgccga ttttcaaag 19 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> SLC6A4 reverse primer <400> 8 gtgttgtagt aggaagcaat g 21 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> TPH2 forward primer <400> 9 cactattgtg acgctgaatc 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> TPH2 reverse primer <400> 10 agctcagaac catacatgag 20 <210> 11 <211> 1409 <212> DNA <213> consensus 16S rRNA sequence for the Megasphaera strain deposited under accession number NCIMB 43385 <400> 11 ggctggttcc ttgcggttgc ctcaccggct tcgggtgtga atgactttcg tggtgtgacg 60 ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcagta tgctgacctg cgattactag 120 cgattcctgc ttcatgcagg cgagttgcag cctgcaatcc gaactgggac tctgtttttg 180 gggtttgctc cggatcgctc cttcgcttcc ctctattaag agccattgta gtacgtgtgt 240 agcccaagcc ataaggggca tgatgacttg acgtcatccc cgccttcctc cgcattgtct 300 gcggcagtct cttctgagtc cccaccctta gtgctggcaa cagaagatag gggttgcgct 360 cgttgcggga cttaacccaa catctcacga cacgagctga cgacagccgt gcaccacctg 420 ttttcttgtc ttccgaagaa gaaccggaaa tctctttccg tagcaatcaa tgtcaaggct 480 tggtaaggtt cttcgcgttg cgtcgaatta aaccacatac tccaccgctt gtgcgggccc 540 ccgtcaattc ctttgagttt cagccttgcg gccgtactcc ccaggcggga tacttattgc 600 gttaactccg gcacagaagg agtcgatacc tcctacacct agtatccatc gtttacggcc 660 aggactaccg gggtatctaa tcccgtttgc tcccctggct ttcgcgcctc agcgtcagtt 720 gtcgtccaga aagccgcttt cgccactggt gttcctccta atatctacgc atttcaccgc 780 tacactagga attccgcttt cctctccgac actcgagctt cacagtttcg gtcccctcac 840 ggggttaagc cccgcacttt taagaccgac ttgcgatgcc gcctgcgcgc cctttacgcc 900 caataattcc ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag 960 ccgtggcttt ctcttacggt accgtcaggg ataacgggta ttgaccgcta tcctgttcgt 1020 cccatataac agaactttac aacccgaagg ccgtcatcgt tcacgcggcg ttgctccgtc 1080 agactttcgt ccattgcgga agattcccca ctgctgcctc ccgtaggagt ctgggccgtg 1140 tctcagtccc aatgtggccg ttcatcctct cagaccggct actgatcgtc gccttggtgg 1200 gccgttaccc ctccaactag ctaatcagac gcaagcccct cctccagcga aagcccgaag 1260 gcctcccttt cttcatcccg tcatgcggcg gaaagaacgt attcggtatt agcagccgtt 1320 tccagctgtt gtccccatct gaagggcagg ttgcttacgc gttactcacc cgtttgccac 1380 tcgaattgat aagaagcaag cttctcatc 1409 <210> 12 <211> 1415 <212> DNA <213> consensus 16s rrna sequence for the megasphaera massiliensis strain deposited under accession number ncimb 43388 <400> 12 ggctggttcc ttgcggttgc ctcaccggct tcgggtgtga atgactttcg tggtgtgacg 60 ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcagta tgctgacctg cgattactag 120 cgattcctgc ttcatgcagg cgagttgcag cctgcaatcc gaactgggac tctgtttttg 180 gggtttgctc cggatcgctc cttcgcttcc ctctattaag agccattgta gtacgtgtgt 240 agcccaagcc ataaggggca tgatgacttg acgtcatccc cgccttcctc cgcattgtct 300 gcggcagtct cttctgagtc cccacccgag gtgctggcaa cagaagatag gggttgcgct 360 cgttgcggga cttaacccaa catctcacga cacgagctga cgacagccgt gcaccacctg 420 ttttcttgtc ttccgaagaa gaaccggaaa tctctttccg tagcaatcaa tgtcaaggct 480 tggtaaggtt cttcgcgttg cgtcgaatta aaccacatac tccaccgctt gtgcgggccc 540 ccgtcaattc ctttgagttt cagccttgcg gccgtactcc ccaggcggga tacttattgc 600 gttaactccg gcacagaagg agtcgatacc tcctacacct agtatccatc gtttacggcc 660 aggactaccg gggtatctaa tcccgtttgc tcccctggct ttcgcgcctc agcgtcagtt 720 gtcgtccaga aagccgcttt cgccactggt gttcctccta atatctacgc atttcaccgc 780 tacactagga attccgcttt cctctccgac actcgagctt cacagtttcg gtcccctcac 840 ggggttaagc cccgcacttt taagaccgac ttgcgatgcc gcctgcgcgc cctttacgcc 900 caataattcc ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag 960 ccgtggcttt ctcttacggt accgtcaaag acaccgggta ttaaccgatg tcctgttcgt 1020 cccatataac agaactttac aacccgaagg ccgtcatcgt tcacgcggcg ttgctccgtc 1080 agactttcgt ccattgcgga agattcccca ctgctgcctc ccgtaggagt ctgggccgtg 1140 tctcagtccc aatgtggccg ttcatcctct 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cgtttccagc tgttgtcccc atctgaaggg caggttgctt acgcgttact cacccgtttg 1380 ccactagaat cgataagaag caagcttctc atgtcttctc gttcgacttg cat 1433 <210> 14 <211> 1431 <212> DNA <213> consensus 16S rRNA sequence for the Megasphaera strain deposited under accession number NCIMB 43386 <400> 14 cgacggctgg ttccttgcgg ttgcctcacc ggcttcgggt gtgaatgact ttcgtggtgt 60 gacgggcggt gtgtacaagg cccgggaacg tattcaccgc agtatgctga cctgcgatta 120 ctagcgattc ctgcttcatg caggcgagtt gcagcctgca atccgaactg ggactctgtt 180 tttggggttt gctccggatc gctccttcgc ttccctctat taagagccat tgtagtacgt 240 gtgtagccca agccataagg ggcatgatga cttgacgtca tccccgcctt cctccgcatt 300 gtctgcggca gtctcttctg agtccccacc cttagtgctg gcaacagaag ataggggttg 360 cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc acgacacgag ctgacgacag ccgtgcacca 420 cctgttttct tgtcttccga agaagaaccg gaaatctctt tccgtagcaa tcaatgtcaa 480 ggcttggtaa ggttcttcgc gttgcgtcga attaaaccac atactccacc gcttgtgcgg 540 gcccccgtca attcctttga gtttcagcct tgcggccgta ctccccaggc gggatactta 600 ttgcgttaac tccggcacag aaggagtcga tacctcctac acctagtatc catcgtttac 660 ggccaggact accggggtat ctaatcccgt ttgctcccct ggctttcgcg cctcagcgtc 720 agttgtcgtc cagaaagccg ctttcgccac tggtgttcct cctaatatct acgcatttca 780 ccgctacact aggaattccg ctttcctctc cgacactcga gcttcacagt ttcggtcccc 840 tcacggggtt aagccccgca cttttaagac cgacttgcga tgccgcctgc gcgcccttta 900 cgcccaataa ttccggacaa cgcttgccac ctacgtatta ccgcggctgc tggcacgtag 960 ttagccgtgg ctttctctta cggtaccgtc agggataacg ggtattgacc gctatcctgt 1020 tcgtcccata taacagaact ttacaacccg aaggccgtca tcgttcacgc ggcgttgctc 1080 cgtcagactt tcgtccattg cggaagattc cccactgctg cctcccgtag gagtctgggc 1140 cgtgtctcag tcccaatgtg gccgttcatc ctctcagacc ggctactgat cgtcgccttg 1200 gtgggccgtt acccctccaa ctagctaatc agacgcaagc ccctcctcca gcgaaagccc 1260 gaaggcctcc ctttcttcat cccgtcatgc ggcggaaaga acgtattcgg tattagcagc 1320 cgtttccagc tgttgtcccc atctgaaggg caggttgctt acgcgttact cacccgtttg 1380 ccactcgaat tgataagaag caagcttctc atctcttctc gttcgactgc a 1431 <210> 15 <211> 1434 <212> DNA <213> consensus 16S rRNA sequence for the Megasphaera strain deposited under accession number NCIMB 43387 <400> 15 tcgaacggct ggttccttgc ggttgcctca ccggcttcgg gtgtgaatga ctttcgtggt 60 gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcagtatgct gacctgcgat 120 tactagcgat tcctgcttca tgcaggcgag ttgcagcctg caatccgaac tgggactctg 180 tttttggggt ttgctccgga tcgctccttc gcttccctct attaagagcc attgtagtac 240 gtgtgtagcc caagccataa ggggcatgat gacttgacgt catccccgcc ttcctccgca 300 ttgtctgcgg cagtctcttc tgagtcccca cccttagtgc tggcaacaga agataggggt 360 tgcgctcgtt gcgggactta acccaacatc tcacgacacg agctgacgac agccgtgcac 420 cacctgtttt cttgtcttcc gaagaagaac cggaaatctc tttccgtagc aatcaatgtc 480 aaggcttggt aaggttcttc gcgttgcgtc gaattaaacc acatactcca ccgcttgtgc 540 gggcccccgt caattccttt gagtttcagc cttgcggccg tactccccag gcgggatact 600 tattgcgtta actccggcac agaaggagtc gatacctcct acacctagta tccatcgttt 660 acggccagga ctaccggggt atctaatccc gtttgctccc ctggctttcg cgcctcagcg 720 tcagttgtcg tccagaaagc cgctttcgcc actggtgttc 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ttaacacatg caagtcgaac 60 gagaagagat gagaagcttg cttcttatcg attcgagtgg caaacgggtg agtaacgcgt 120 aagcaacctg cccttcagat ggggacaaca gctggaaacg gctgctaata ccgaatacgt 180 tctttttgtc gcatggcaga gggaagaaag ggaggctctt cggagctttc gctgaaggag 240 gggcttgcgt ctgattagct agttggaggg gtaacggccc accaaggcga cgatcagtag 300 ccggtctgag aggatgaacg gccacattgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga 360 ggcagcagtg gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga cggagcaacg ccgcgtgaac 420 gatgacggcc ttcgggttgt aaagttctgt tatacgggac gaatggcgta gcggtcaata 480 cccgttacga gtgacggtac cgtaagagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc 540 ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg aattattggg cgtaaagggc gcgcaggcgg 600 cgtcgtaagt cggtcttaaa agtgcggggc ttaaccccgt gaggggaccg aaactgcgat 660 gctagagtat cggagaggaa agcggaattc ctagtgtagc ggtgaaatgc gtagatatta 720 ggaggaacac cagtggcgaa agcggctttc tggacgacaa ctgacgctga ggcgcgaaag 780 ccaggggagc aaacgggatt agataccccg gtagtcctgg ccgtaaacga tggatactag 840 gtgtaggagg tatcgacccc ttctgtgccg gagttaacgc aataagtatc ccgcctgggg 900 agtacggccg caaggctgaa actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagt 960 atgtggttta attcgacgca acgcgaagaa ccttaccaag ccttgacatt gattgctatg 1020 gatagagata tccagttcct cttcggagga caagaaaaca ggtggtgcac ggctgtcgtc 1080 agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaacccct atcttctgtt 1140 accagcggtt cggccgggga ctcaggagag actgccgcag acaatgcgga ggaaggcggg 1200 gatgacgtca agtcatcatg ccccttatgg cttgggctac acacgtacta caatggctct 1260 taatagaggg aagcgaagga gcgatccgga gcaaacccca aaaacagagt cccagttcgg 1320 attgcaggct gcaactcgcc tgcatgaagc aggaatcgct agtaatcgca ggtcagcata 1380 ctgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg aaagtcattc 1440 acacccgaag ccggtgaggt aaccttttgg agccagccgt ccaaggtggg ggcgatgatt 1500 ggggtgaagt cgtaacaagg taacc 1525

Claims (19)

  1. 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에서 사용을 위한, 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주를 포함하는 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 정신 장애의 치료 또는 예방에 사용을 위한 조성물.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 이때 상기 장애는 우울증, 불안, 외상-후 스트레스 장애 (PTSD) 및 강박 장애로 구성된 군에서 선택된, 조성물.
  4. 청구항 3에 있어서, 이때 상기 장애는 우울증인, 조성물.
  5. 청구항 3에 있어서, 이때 상기 장애는 PTSD인, 조성물.
  6. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 트립토판 수산화효소 경로를 통하여 해당 대상체에서 세로토닌의 생산을 증가시키는, 조성물.
  7. 청구항 6에 있어서, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체에서 트립토판 수산화효소 1 및/또는 트립토판 수산화효소 2의 발현을 증가시키는, 조성물.
  8. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체의 뉴런에서 세로토닌 운반자의 발현을 증가시키는, 조성물.
  9. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때, 대상체에게 투여될 때, 상기 조성물은 해당 대상체의 뇌에서 세로토닌의 분비를 증가시키는, 조성물.
  10. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때 상기 박테리아 균주는 다음의 대사산물 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산중 하나 또는 그 이상을 생산하고, 아세테이트와 프로피오네이트중 하나 또는 이 둘 모두를 소비하며, 임의선택적으로 이때 상기 박테리아 균주 부티레이트, 발레르산 및 헥사노산을 생산하고, 아세테이트 및 프로피오네이트를 소비하는, 조성물.
  11. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때 상기 박테리아 균주는 메가스파에라(Megasphaera) 속의 박테리아 균주의 16S rRNA 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는, 조성물.
  12. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16중 임의의 하나에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16s rRNA 서열을 갖거나, 또는 이때 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 11, 12, 13, 14, 15 또는 16중 임의의 하나로 나타내는 16s rRNA 유전자 서열을 갖는, 조성물.
  13. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때 상기 박테리아 균주는 메가스파에라 마실리엔시스(Megasphaera massiliensis)인, 조성물.
  14. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 1 또는 2와 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 유전자 서열을 갖는, 조성물.
  15. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 2에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16s rRNA 유전자 서열을 갖거나, 또는 이때 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 2로 제시되는 16s rRNA 유전자 서열을 갖는, 조성물.
  16. 임의의 선행 청구항에 따른 용도를 위한 조성물에 있어서, 이때 치료될 대상체는 선택적 세로토닌 재흡수 억제제를 투여받았거나, 또는 투여받는, 조성물.
  17. 세로토닌 결핍을 특징으로 하는 장애의 치료 또는 예방에서 사용을 위한 선택적 세로토닌 재흡수 억제제에 있어서, 이때 해당 대상체는 청구항 1-15중 임의의 항에 의해 특징화된 조성물을 제공받았거나, 또는 제공받는, 선택적 세로토닌 재흡수 억제제.
  18. 치료요법에 사용을 위한 박테리아 균주에 있어서, 이때 상기 박테리아 균주는 서열 식별 번호: 11, 12, 13, 14, 15 또는 16중 임의의 하나에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% 동일한 16S rRNA 서열을 갖는, 박테리아 균주.
  19. 치료요법에 사용을 위해, 서열 식별 번호: 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16중 임의의 하나로 제시되는 16S rRNA 서열을 갖는 박테리아 균주.
KR1020217020937A 2018-12-12 2019-12-12 박테리아 균주를 포함하는 조성물 KR20210102927A (ko)

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