KR20210100560A - 화학적 합성에 의한 악사카신의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은, 화학적 합성 방법을 이용하는, 1-N-(S-4-아미노-2-히드록시부티르산)-카나마이신 X(1-N-(S-4-amino-2-hydroxybutyric acid)-kanamycin X; 1-N-AHBA-kanamycin X a.k.a. Axakacin)의 제조방법에 관한 것이다.

Description

화학적 합성에 의한 악사카신의 제조방법{Method for preparation of Axakacin by chemical synthesis}

본 발명은, 화학적 합성 방법을 이용하는, 1-N-(S-4-아미노-2-히드록시부티르산)-카나마이신 X(1-N-(S-4-amino-2-hydroxybutyric acid)-kanamycin X; 1-N-AHBA-kanamycin X a.k.a. Axakacin)의 제조방법에 관한 것이다.

악사카신 즉, 1-N-(S-4-아미노-2-히드록시부티르산)-카나마이신 X(1-N-(S-4-amino-2-hydroxybutyric acid)-kanamycin X; 1-N-AHBA-카나마이신 X)는 그램음성균 감염 치료에 널리 사용되는 기존 반합성 항생제인 아미카신(amikacin)의 구조 개량 의약소재로써, 2세대 반합성 아미노글리코시드(aminoglycoside; AG) 계열 항생제인 아미카신에 비교하여 독성학적으로 보다 안전하며 내성균 발생 가능성이 훨씬 낮은 약물특성을 가질 뿐 아니라, 아미카신 내성균에도 우수한 항균활성을 제공할 수 있다.

이와 같이 우수한 약물학적 특성이 확인되었음에도 불구하고, 현재까지 확보된 생산성은 후속 산업화를 위해 필수적인 비임상시험 수행용 시료를 생산하기에는 다소 미흡하기 때문에, 비임상시험 시료 생산에 활용될 수 있는 수준의 생산성을 갖는 제조공정의 확보가 필요하다. 이에 천연물인 카나마이신 A로부터 최종 생성물인 1-N-AHBA-카나마이신 X, 즉, 악사카신을 화학적으로 합성할 수 있는 공정을 발굴하고자 한다.

예컨대, 기존의 방법인 미생물을 이용한 악사카신의 생산방법은 많은 비용이나 시간 및 노력을 요구할 뿐만 아니라 대량합성이 어렵다. 나아가, 보다 우수한 활성의 유도체 발굴을 위한 화합물의 개질 가능성의 측면에서도 이의 화학적 합성 공정을 정립하는 것이 필요하다.

Nature Chemical Biology, (2011) 7: 843-852.

본 발명자들은 악사카신의 안정적 생산을 위하여 일련의 화학적 합성에 의한 이의 제조방법을 발굴하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 중간체인 카나마이신 X로부터 일련의 화학적 반응에 의해 이를 달성할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은

중간체인 카나마이신-X의 6'번 탄소에 치환된 히드록실기를 제외한 7개 히드록실기가 벤질옥시기로 보호된 유도체에 포함된 3개 아자이드기를 아민기로 치환하는 제1단계(환원 단계);

상기 제1단계로부터의 생성물에 포함된 1번 탄소에 치환된 아민기에 S-4-아미노-2-히드록시부티르산 보호기를 도입하는 제2단계(아민 치환단계); 및

상기 제2단계로부터의 생성물에 포함된 7개 벤질옥시기와 벤질카르복시기(Cbz)를 제거하여 각각 히드록실기와 아민기로 전환하는 제3단계(전체 탈보호화 단계)를 포함하는, 악사카신(Axakacin)의 제조방법을 제공한다.

예컨대, 상기 벤질로 보호된 중간체로부터의 악사카신 제조방법은 하기 일련의 반응식으로 요약될 수 있으며, 하기 반응식에 구체적인 반응 조건 또한 함께 예시하고 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제1단계는, 아자이드기를 아민기로 환원시키는 단계로서, 카나마이신-X의 6'번 탄소에 치환된 히드록실기를 제외한 7개 히드록실기가 벤질옥시기로 보호된 유도체 및 염기를 용해시킨 용액을 -5 내지 5℃로 냉각시킨 후 트리메틸포스핀 용액을 첨가하고, 5 내지 30분 후 10 내지 40℃로 가온하여 12 내지 36시간 동안 반응시킴으로써 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 염기는 수산화이온을 제공할 수 있는 물질, 예컨대, 수산화나트륨일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제2단계는, 특정 아민기에 치환기를 도입하는 단계로서, 제1단계의 생성물, (S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 4-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-히드록시부타노에이트, 및 N,N-디이소프로필에틸아민을 용해시키고 10 내지 40℃에서 12 내지 36시간 동안 반응시킴으로써 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제3단계는, 분자 전체를 탈보호화하는 단계로서, 제2단계의 생성물을 용해시킨 용액에 아세트산 및 수산화팔라듐을 첨가하여 10 내지 40℃에서 2 내지 5일 동안 반응시킴으로써 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 반응은 용액을 불활성 가스로 퍼징한 후 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

구체적으로, 상기 중간체는,

카나마이신 A에 포함된 4개 아민기를 아자이드기로, 7개 히드록실기는 벤질옥시기로 전환하는 제a단계(보호 단계);

상기 제a단계로부터의 생성물에 포함된 4개 아자이드기를 아민기로 전환하는 제b단계(환원 단계);

상기 제b단계로부터의 생성물에 포함된 아민기 중 6'번 탄소에 치환된 아민기에 Boc 보호기를 도입하는 제c단계(Boc 보호 단계);

상기 제c단계로부터의 생성물에 포함된 Boc 보호되지 않은 3개 아민기를 아자이드기로 전환하는 제d단계(아자이드화 단계);

상기 제d단계로부터의 생성물에 포함된 Boc로 보호된 아민기를 탈보호화하는 제e단계(Boc 탈보호화 단계);

상기 제e단계로부터의 생성물에 포함된 3개 아민기를 아자이드기로 전환하고, 6'번 탄소에 치환된 아민기는 터트-부틸디페닐실릴옥시기로 전환하는 제f단계(탈아민화 및 알콜 보호 단계); 및

상기 제f단계로부터의 생성물에 포함된 6'번 탄소에 치환된 아민기는 터트-부틸디페닐실릴옥시기를 히드록실기로 전환하는 제g단계(TBDPS 탈보호화 단계)를 포함하는 일련의 공정을 통해, 카나마이신 A로부터 제조될 수 있다:

[화학식 1]

.

예컨대, 상기 벤질로 보호된 중간체의 제조방법은 하기 일련의 반응식으로 요약할 수 있다.

또는, 상기 중간체인 카나마이신 X는 Streptomyces kanamyceticus의 생산물로부터 분리 정제하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제a단계는, 반응물인 카나마이신 A에 포함된 복수의 아민기 및 히드록실기에 보호기를 도입하기 위한 단계로서, 카나마이신 A를 트리플루오로메탄설포닐 아자이드와 반응시켜 이에 포함된 아자이드기를 도입하는 제a-1단계 및 상기 아자이드기가 도입된 유도체를 벤질할라이드와 반응시켜 히드록실기를 벤질옥실기로 전환하는 제a-2단계에 의해 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

이때, 제a-1단계는 황산구리 존재 하에 트리에틸아민을 첨가하여 10 내지 40℃에서 12 내지 48시간 동안 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 반응물인 카나마이신 A 및 트리플루오로메탄설포닐 아자이드는 상업화된 제품을 구입하거나, 당업계에 공지된 반응을 이용하여 합성된 물질을 사용할 수 있다. 예컨대, 트리플루오로메탄설포닐 아자이드는 소듐 아자이드 용액에 -5 내지 5℃의 저온에서 트리플루오로메탄설폰산을 투입하여 10 내지 40℃에서 30분 내지 3시간 동안 반응시켜 합성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

한편, 제a-2단계는 유기용매에 제a-1단계로부터 수득한 생성물을 용해시킨 용액에 -5 내지 5℃에서 과량의 염기, 테트라 n-부틸암모늄할로겐화물 및 반응물인 벤질할라이드를 첨가하고, 5 내지 30분 후 10 내지 40℃로 가온하여 2 내지 6시간 동안 반응시켜 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 제a-2단계의 반응물로는 제a-1단계로부터 수득한 조생성물을 추가적인 정제과정 없이 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제b단계는, 아자이드기를 아민기로 환원시키는 단계로서, 염기를 첨가한 제a단계의 생성물을 용해시킨 용액을 -5 내지 5℃로 냉각시킨 후 트리메틸포스핀 용액을 첨가하고, 5 내지 30분 후 10 내지 40℃로 가온하여 2 내지 6시간 동안 반응시킴으로써 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제c단계는, 특정 아민기를 보호하기 위해 Boc를 도입하는 단계로서, 제b단계의 생성물을 용해시킨 용액을 -5 내지 5℃로 냉각시킨 후 디-터트-부틸 디카보네이트와 트리에틸아민을 첨가하여 상기 저온 상태를 유지하면서 12 내지 36시간 동안 반응시킴으로써 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제d단계는, Boc로 보호되지 않은 아민기들을 아자이드화하는 단계로서, 제c단계의 생성물을 용해시킨 용액을 사용하는 것을 제외하고는 상기 제a단계와 유사한 방법으로 반응시켜 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제e단계는, Boc기를 제거하여 탈보호화하는 단계로서, 제d단계의 생성물을 용해시킨 용액에 -5 내지 5℃에서 트리플루오로아세트산을 투입하여 30분 내지 2시간 동안 저온 상태로 유지한 후, 10 내지 40℃로 가온하면서 30분 내지 2시간 더 반응시킴으로써 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제f단계는, 탈아민화 및 알콜 보호하는 단계로서, 제e단계의 생성물을 용해시킨 용액에 -5 내지 5℃에서 아질산나트륨을 첨가하여 상기 저온 상태를 유지하면서 12 내지 36시간 동안 반응시키는 제f-1단계 및 상기 제f-1단계의 생성물과 이미다졸을 용해시킨 용액에 터트-부틸디페닐실릴에테르를 투입하여 10 내지 40℃에서 6 내지 24시간 동안 반응시키는 제f-2단계를 통해 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 제f-2단계의 반응물로는 제f-1단계로부터 수득한 조생성물을 추가적인 정제과정 없이 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 제g단계는, TBDPS를 제거하여 탈보호화하는 단계로서, 제f단계의 생성물을 용해시킨 용액에 테트라-n-부틸암모늄 플로라이드를 첨가하여 10 내지 40℃에서 12 내지 36시간 동안 반응시킴으로써 달성할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 각 단계의 반응은 물, 알콜, 및 유기용매를 단독 또는 혼합하여 준비한 용매에 용해시킨 용액 상태에서 수행할 수 있다. 상기 알콜은 메탄올 또는 에탄올 등의 저급알콜일 수 있으며, 유기용매는 톨루엔, 테트라하이드로퓨란, 디메틸포름아마이드, 디클로로메탄, 아세트산, 아세토나이트릴 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

예컨대, 상기 각 단계의 반응은 당업계에 공지된 해당 반응을 그대로 또는 적절히 변경하여 수행할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 생성물의 수율 및/또는 순도를 향상시키기 위하여, 각 반응 사이에 필요에 따라, 세척, 분리, 및/또는 정제하는 과정을 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 세척, 분리 및 정제하는 과정 역시 당업계에 공지된 방법을 적절히 선택하여 수행할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 악사카신을 제공한다.

나아가, 본 발명은 상기 악사카신 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.

상기 악사카신은, 아미노글리코시드계 화합물로서, 항균활성을 나타낼 수 있다. 예컨대, 대장균(E.coli) 및 슈도모나스 종(Pseudomonas species)으로 이루어지는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 그람음성균에 대해 항균 활성을 나타낼 수 있다. 나아가, 아미노글리코시드 내성 균주와 아미노글리코시드 감수성 균주 모두에 대해 항균 활성을 가질 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 조성물은 아미카신 내성 P. aeruginosa 에도 항균 효과를 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

여러 연구에서 2-데옥시스트렙타민(2-deoxystreptamine; 2-DOS) 구조를 포함하는 아미노글리코시드 항생제가 소의 바이러스성 설사 바이러스(BVDV), 뎅구열 바이러스 (DENV)를 비롯한 여러 바이러스의 복제를 억제하여 항바이러스 효능이 있다는 보고가 있다. 또한 아미노글리코시드계 항생제가 포유류의 리보솜이 미성숙 정지 코돈의 돌연변이를 감지하고 교정하게 자극함으로써 낭성섬유증, 근위축증, 후를러증후군, 모세혈관확장증 및 어셔증후군과 같은 관련 유전병의 치료 및 개선 효과가 있다는 많은 연구 결과 보고가 있다. 본 발명의 조성물에 함유된 악사카신 역시 2-DOS 구조를 포함하므로 항바이러스 효능 및 상기와 같은 유전병의 치료 및 개선효과를 나타낼 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명의 조성물에 함유된 악사카신은 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 존재할 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산가염이 유용하다. 본 발명의 용어 "약학적으로 허용가능한 염"이란 개체에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 갖는 농도로서 이 염에 기인한 부작용이 상기 화합물의 이로운 효능을 저하시키지 않는 상기 화합물의 임의의 모든 유기 또는 무기 부가염을 의미한다.

산부가염은 통상의 방법, 예를 들어 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성(watermiscible) 유기 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고, 이어서 상기 혼합물을 증발시켜 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.

이때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산(methane sulfonic acid), p-톨루엔술폰산(p-toluenesulfonic acid), 아세트산(acetic acid), 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid), 말레인산(maleic acid), 숙신산(succinic acid), 옥살산(oxalic acid), 벤조산(benzoic acid), 타르타르산(tartaric acid), 푸마르산(fumaric acid), 만데르산(mandelic acid), 프로피온산(propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산(galacturonic acid), 글루탐산(glutamic acid), 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산(aspartic acid), 아스코르브산(ascorbic acid), 카본산(carbonic acid), 바닐릭산(vanillic acid), 요오드화수소산(hydroiodic acid) 등을 사용할 수 있으며, 이들에 제한되지 않는다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속염 또는 알칼리 토금속염은, 예를 들어 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해시키고, 비용해 화합물 염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 특히 나트륨, 칼륨, 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하나 이들에 제한되는 것은 아니다. 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.

본 발명의 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 상기 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성 기의 염을 포함한다. 예를 들어, 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨염 등이 포함될 수 있고, 아미노기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로브롬화물, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄술포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔술포네이트(토실레이트) 염 등이 있으며, 당업계에 알려진 염의 제조방법을 통하여 제조될 수 있다.

또한, 상기 악사카신은, 이의 약학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라 이로부터 제조될 수 있는 가능한 수화물 등의 용매화물을 제한없이 포함한다. 상기 화합물의 용매화물은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다.

나아가, 상기 악사카신은 결정 형태 또는 비결정 형태로 제조될 수 있으며, 결정 형태로 제조될 경우 임의로 수화되거나 용매화될 수 있다. 본 발명에서는 상기 화합물의 화학양론적 수화물뿐만 아니라 다양한 양의 물을 함유하는 화합물이 포함될 수 있다. 본 발명에 따른 상기 화합물의 용매화물은 화학양론적 용매화물 및 비화학양론적 용매화물 모두를 포함한다.

한편, 본 발명의 약 조성물에 사용되는 악사카신 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 획득 방법에 특별히 한정되지 않으며, 당업계에 공지된 방법으로 화학적으로 합성하거나, 시판되는 물질을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 악사카신 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항바이러스 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 상기 악사카신 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 낭성섬유증, 근위축증, 후를러증후군, 모세혈관확장증 및 어셔증후군으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 유전병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

더 나아가, 본 발명은 상기 악사카신 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 유전병의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

이때, 상기 유전병은 낭성섬유증, 근위축증, 후를러증후군, 모세혈관확장증 및 어셔증후군으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 질환일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 용어, "예방"이란 본 발명의 약학적 조성물을 이용하여 유전병의 발생, 진행 및 재발을 억제시키거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료"란 본 발명의 약학적 조성물을 이용하여 상기 질환이 의심되거나 발병된 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 용어, "개체"란, 유전병이 발명하였거나 발병할 수 있는, 유전병이 의심되는 개체로서, 인간을 포함한 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함한 모든 동물을 의미하고, 본 발명의 약학적 조성물을 이들 개체에게 투여함으로써 상기 질환을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 기존의 치료제와 병행하여 투여함으로써 시너지적인 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 용어 "투여"란, 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수도 있다. 바람직한 투여방식 및 제제는 정맥 주사제, 피하 주사제, 피내 주사제, 근육 주사제, 점적 주사제 등이다. 주사제는 생리식염액, 링겔액 등의 수성 용제, 식물유, 고급 지방산 에스테르(예, 올레인산에칠 등), 알코올 류(예, 에탄올, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세린 등) 등의 비수성 용제 등을 이용하여 제조할 수 있고, 변질 방지를 위한 안정화제(예, 아스코르빈산, 아황산수소나트륨, 피로아황산나트륨, BHA, 토코페롤, EDTA 등), 유화제, pH 조절을 위한 완충제, 미생물 발육을 저지하기 위한 보존제(예, 질산페닐수은, 치메로살, 염화벤잘코늄, 페놀, 크레솔, 벤질알코올 등) 등의 약학적 담체를 포함할 수 있다.

예컨대, 본 발명의 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사 용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥내, 복강내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 이러한 조성물에 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토즈, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제가 사용될 수 있다.

경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈61. 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 한편, 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.

상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있으며 활성 성분을 약 0.1 내지 75 중량%, 바람직하게는 약 1 내지 50 중량%의 범위에서 함유할 수 있다. 약 50 내지 70 kg의 포유동물에 대한 단위 제형은 약 10 내지 200 mg의 활성성분을 함유한다.

이때, 본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

예컨대, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물의 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물을 1일 0.0001 내지 100 mg/kg(체중), 바람직하게는 0.001 내지 100 mg/kg(체중)으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 1일 1회 또는 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여될 수 있다.

본 발명의 유전병 예방 또는 치료용 조성물은, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 약학적 제형으로 제조될 수 있다. 제형의 제조에 있어서, 활성 성분을 담체와 함께 혼합 또는 희석하거나, 용기 형태의 담체 내에 봉입시킬 수 있다.

이에 따라, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사 용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥내, 복강내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 이러한 조성물에 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토즈, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제가 사용될 수 있다.

경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈61. 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 한편, 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.

상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있으며 활성 성분을 약 0.1 내지 75 중량%, 바람직하게는 약 1 내지 50 중량%의 범위에서 함유할 수 있다. 약 50 내지 70 kg의 포유동물에 대한 단위 제형은 약 10 내지 500 mg의 활성성분을 함유한다.

이때, 본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물의 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물을 1일 0.001 내지 100 mg/kg(체중), 바람직하게는 0.001 내지 100 mg/kg(체중)으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 1일 1회 또는 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여될 수 있다.

예컨대, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한 본 발명의 약학적 조성물은 유전병의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. 본 발명의 목적상, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 유전병의 치료에 통상적으로 사용되는 하나 이상의 추가적인 약물과 병용 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물을 유전병의 치료를 위해 투여하는 경우, 해당 유전병의 치료 또는 예방에 효과가 있는 성분 및/또는 약제 1종 이상과 병용 및/또는 조합하여 투여할 수 있다. 이때 전술한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다

구체적으로 상기 병용 및/또는 조합 투여는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 상기 하나 이상의 추가적인 약물을 각각 동시, 순차적, 또는 역순으로 투여할 수 있으며, 적절한 유효량의 조합으로 동시에 투여하거나, 각각 별도의 용기에 보관한 후 동시, 순차적 또는 역순으로 병용 투여할 수 있다.

본 발명은 기존의 반합성 항생제에 비해 독성학적으로 보다 안정하고 내성균 발생 가능성이 낮으며, 우수한 항균 활성을 나타내는 항생제인 1-N-AHBA-카나마이신 X를 제공하기 위한 화학적 합성 방법, 구체적으로는 천연물인 카나마이신 A로부터의 화학적 합성 방법을 제공할 수 있다.

도 1은 악사카신의 500 MHz ¹H NMR 스펙트럼을 나타낸 도이다.
도 2는 악사카신의 125 MHz ¹³C NMR 스펙트럼을 나타낸 도이다.
도 3은 악사카신의 COSY NMR 스펙트럼을 나타낸 도이다.
도 4는 악사카신의 HSQC NMR 스펙트럼을 나타낸 도이다.
도 5는 악사카신의 HMBC NMR 스펙트럼을 나타낸 도이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

제조예 1: (2R,3S,4S,5R,6S)-4-azido-3,5-bis(benzyloxy)-2-((benzyloxy)methyl)-6-(((1S,2R,3R,4S,6R)-4,6-diazido-3-(((2R,3R,4S,5R,6R)-6-(azidomethyl)-3,4,5-tris(benzyloxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2-(benzyloxy)cyclohexyl)oxy)tetrahydro-2H-pyran (1)의 제조

소듐 아자이드(24.12 당량)를 물과 톨루엔의 혼합 용매(1:1, 3.0 M)에 녹인 후, 0℃에서 트리플루오로메탄설폰산 무수물(12.0 당량)을 투입하여 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이후 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 반응을 종결한 후 상기 반응 용액을 톨루엔으로 추출하였다.

상기 추출한 톨루엔 혼합물(트리플루오로메탄설포닐 아자이드 용액)을 황산염 형태의 카나마이신 A(Kanamcin A sulfate form, 1.0 당량) 및 황산구리5수화물(0.08 당량)의 수용액에 투입하였다. 그리고 메탄올(0.03 M)과 트리에틸아민(9.0 당량)을 차례대로 투입하여 25℃에서 27시간 동안 교반하였다. 이후 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 반응을 종결하고 25℃에서 회전증발농축기로 유기층을 완전히 증발시켜 제거하였다. 이후 상기 반응 혼합물을 에틸아세이트로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켜 노란색 오일 형태의 조생성물(crude product)을 수득하였다. 수득한 조생성물은 추가적인 정제 과정 없이 다음 반응에 사용하였다.

상기 반응으로부터 수득한 조생성물을 디메틸포름아마이드(0.04 M)에 녹인 후, 0℃에서 수소화나트륨(15.0 당량), 테트라 n-부틸암모늄브롬화물(0.05 당량), 및 벤질브로마이드(18.8 당량)를 차례로 투입하였다. 10분 후 25℃로 바꾸어 4시간 동안 교반한 후 포화 염화암모늄 수용액으로 반응을 종결하였다. 상기 반응 혼합물을 디에틸에테르로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켰다. 이후 헥산/에틸 아세테이트(5:1)를 사용하여 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피를 진행하여 거품 형태의 흰색 고체인 순수 화합물 1(수율 63%)을 수득하였다.

제조예 2: (1S,3R,4S,5R,6R)-4-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-amino-3,5-bis(benzyloxy)-6-((benzyloxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-6-(((2R,3R,4S,5R,6R)-6-(aminomethyl)-3,4,5-tris(benzyloxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-5-(benzyloxy)cyclohexane-1,3-diamine (2)의 제조

상기 제조예 1로부터 수득한 화합물 1(1.0 당량)을 테트라하이드로퓨란 및 물의 혼합 용매(10:1, 0.05 M)와 수산화나트륨 수용액(0.1 M, 1.2 당량)에 녹여 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 0℃로 냉각시킨 후, 트리메틸포스핀 용액(1.0 M in THF, 6.0 당량)을 천천히 투입하였다. 10분 후 25℃로 바꾸어 4시간 동안 교반하였다. 이후 회전증발농축기로 25℃에서 상기 반응 후 남은 트리메틸포스핀 용액을 제거하고, 상기 반응 혼합물을 에틸아세테이트로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켰다. 이후 메탄올/암모니아수(50:1)를 사용하여 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피를 진행하여 거품 형태의 연노란 고체 형태인 순수 화합물 2(수율 91%)를 수득하였다.

제조예 3: tert -butyl (((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benzyloxy)-6-(((1R,2R,3S,4R,6S)-4,6-diamino-3-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-amino-3,5-bis(benzyloxy)-6-((benzyloxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2-(benzyloxy)cyclohexyl)oxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methyl)carbamate (3)의 제조

상기 제조예 2로부터 수득한 화합물 2(1.0 당량)를 메탄올 (0.05 M)에 녹이고 0℃로 냉각시켰다. 상기 용액에 디-터트-부틸 디카보네이트(1.07 당량)와 트리에틸아민(2.0 당량)을 천천히 투입하였다. 0℃를 유지한 상태로 18시간 교반하였다. 회전증발농축기로 유기층을 농축시킨 후 잔류물을 에틸아세테이트/메탄올(2:3)을 사용해 실리카겔상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피를 진행하여 거품 형태의 연노란색 고체형태인 순수 화합물 3(BRSM(Based on Recovered Starting Materials) 수율 81%)을 수득하였으며, 메탄올/암모니아수 (50:1)을 사용하여 미반응 화합물 2를 회수하였다.

제조예 4: tert -butyl (((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benzyloxy)-6-(((1R,2R,3S,4R,6S)-4,6-diazido-3-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-azido-3,5-bis(benzyloxy)-6-((benzyloxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2-(benzyloxy)cyclohexyl)oxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methyl)carbamate (4)의 제조

소듐 아자이드(24.12 당량)를 물과 톨루엔의 혼합 용매(1:1, 3.0 M)에 녹인 후, 0℃에서 트리플루오로메탄설폰산 무수물(12.0 당량)을 투입하여 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이후 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 반응을 종결한 후 상기 반응 용액을 톨루엔으로 추출하였다.

상기 추출한 톨루엔 혼합물(트리플루오로메탄설포닐 아자이드 용액)을 물 (0.1 M)과 메탄올(0.03 M)에 녹인 3(1.0 당량), 및 황산구리5수화물(0.08 당량)에 투입하였다. 그리고 트리에틸아민(9.0 당량)을 투입하여 27시간 동안 25℃에서 교반하였다. 이후 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 반응을 종결하고 25℃에서 회전증발농축기로 유기층을 완전히 증발시켜 제거하였다. 이후 상기 반응 혼합물을 에틸아세이트로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켰다. 이후 헥산/에틸 아세테이트(5:1)를 사용하여 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피를 진행하여 거품 형태의 흰색 고체인 순수 화합물 4(수율 98%)를 수득하였다.

제조예 5: ((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benzyloxy)-6-(((1R,2R,3S,4R,6S)-4,6-diazido-3-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-azido-3,5-bis(benzyloxy)-6-((benzyloxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2-(benzyloxy)cyclohexyl)oxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methanamine (5)의 제조

상기 제조예 4로부터 수득한 화합물 4(1.0 당량)를 디클로로메탄(0.05 M)에 녹인 후 0℃에서 트리플루오로아세트산(0.2 M)을 천천히 투입하였다. 1시간 동안 0℃로 유지하면서 교반한 후, 천천히 25℃로 올리면서 1시간 더 교반하였다. 이후 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 반응을 종결하였다. 상기 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켰다. 이후 헥산/에틸아세테이트(5:1 → 2:1)를 사용하여 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피를 진행하여 거품 형태의 흰색 고체인 순수 화합물 5(수율 78%)를 수득하였다.

제조예 6: tert -butyldiphenyl(((2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-tris(benzyloxy)-6-(((1R,2R,3S,4R,6S)-4,6-diazido-3-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-azido-3,5-bis(benzyloxy)-6-((benzyloxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2-(benzyloxy)cyclohexyl)oxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methoxy)silane (6)의 제조

상기 제조예 5로부터 수득한 화합물 5(1.0 당량)를 30% 아세트산 수용액과 아세토나이트릴(1:1, 0.1 M)의 혼합 용매에 녹인 후, 0℃에서 아질산나트륨(10.0 당량)을 투입하여, 0℃를 유지한 채로 24시간 동안 교반하였다. 이후 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하여 반응을 종결하고 상기 반응 혼합물을 에틸아세이트로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켜 노란색 오일형태의 조생성물을 수득하였다. 수득한 조생성물에 대한 추가적인 정제 과정 없이 다음 반응을 진행하였다.

상기 반응에서 수득한 조생성물과 이미다졸(3.0 당량)을 디메틸포름아마이드(0.1 M)에 녹였다. 그 후, 터트-부틸디페닐실릴에테르(3.0 당량)를 투입하고 25℃에서 13시간 동안 교반한 후 포화 염화암모늄 수용액으로 반응을 종결하였다. 상기 반응 혼합물을 디에틸에테르로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켰다. 이후 헥산/에틸 아세테이트(20:1)를 사용하여 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피를 진행하여 거품 형태의 흰색 고체인 순수 화합물 6(수율 42%)을 수득하였다.

제조예 7: ((2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-tris(benzyloxy)-6-(((1R,2R,3S,4R,6S)-4,6-diazido-3-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-azido-3,5-bis(benzyloxy)-6-((benzyloxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2-(benzyloxy)cyclohexyl)oxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methanol (7)의 제조

상기 제조예 6으로부터 수득한 화합물 6(1.0 당량)을 테트라하이드로퓨란 (0.1 M)에 녹인 후 테트라-n-부틸암모늄 플로라이드(1.0 M in THF, 1.5 당량)를 투입하여 18시간 동안 25℃에서 교반하였다. 이후 포화 증류수로 반응을 종결하고 상기 반응 혼합물을 에틸아세이트로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켰다. 이후 헥산/에틸아세테이트(3:1)를 사용하여 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피를 진행하여 거품 형태의 흰색 고체인 순수 화합물 7(수율 96%)을 수득하였다.

실시예 1: ((2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-tris(benzyloxy)-6-(((1R,2R,3S,4R,6S)-4,6-diamino-3-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-amino-3,5-bis(benzyloxy)-6-((benzyloxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2-(benzyloxy)cyclohexyl)oxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)methanol (8)의 제조

상기 제조예 7로부터 수득한 화합물 7(1.0 당량)을 테트라하이드로퓨란:물 (10:1, 0.05 M)과 수산화나트륨 수용액 (0.1 M, 1.2 당량)에 녹여 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 0℃로 만든 후, 트리메틸포스핀 용액(1.0 M in THF, 6.0 당량)을 천천히 투입하였다. 10분 후 25℃로 전환하여 18시간 동안 교반하였다. 이후 회전증발농축기로 25℃에서 상기 반응 후 남은 트리메틸포스핀 용액을 제거하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 에틸아세이트로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켰다. 이후 에틸아세테이트/메탄올(5:1)를 사용해 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피를 진행하여 거품 형태의 연노란 고체형태인 순수 화합물 8(수율 60%)을 수득하였다.

실시예 2: Benzyl ((3S)-4-(((1S,2S,3S,4R,5S)-5-amino-2-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-amino-3,5-bis(benzyloxy)-6-((benzyloxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-3-(benzyloxy)-4-(((2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(benzyloxy)-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)cyclohexyl)amino)-3-hydroxy-4-oxobutyl)carbamate (9)의 제조

상기 실시예 1로부터 수득한 화합물 8(1.0 당량), (S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 4-(벤질옥시카르보닐아미노)-2-히드록시부타노에이트((S)-2,5-dioxopyrrolidin-1-yl 4-(benzyloxycarbonylamino)-2-hydroxybutanoate, 1.5 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(5.0 당량)을 디메틸포름아미드(0.1 M)에 녹여 25℃에서 24시간 동안 교반한 후 포화 염화암모늄 수용액으로 반응을 종결하였다. 이후 상기 반응 혼합물을 에틸아세이트로 추출하였다. 황산 마그네슘을 사용하여 조합된 유기층으로부터 수분을 제거하고 여과한 후 여과액을 회전증발농축기로 농축시켰다. 이후 에틸아세테이트/메탄올(5:1)을 사용하여 실리카겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피를 진행하여 거품 형태의 흰색 고체인 순수 화합물 9(수율 73%)를 수득하였다.

실시예 3: (2S)-4-amino-N-((1S,2S,3S,4R,5S)-5-amino-2-(((2S,3R,4S,5S,6R)-4-amino-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-3-hydroxy-4-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)cyclohexyl)-2-hydroxybutanamide (10, Axakacin)의 제조

상기 실시예 2로부터 수득한 화합물 9(1.0 당량)를 메탄올:물(3:1, 0.04 M) 및 아세트산(10.4 당량)을 넣고 마지막으로 수산화팔라듐(20% on carbon, 2.1 당량)을 첨가하였다. 이후, 수소 가스를 퍼징하고, 25℃에서 3일 동안 교반하였다. 3일 후, 셀라이트를 이용하여 물로 씻어주면서 여과하여 촉매를 제거하였다. 이후 남은 잔류물을 회전증발농축기로 농축시킨 후, 클로로포름과 물을 이용하여 물층을 추출하였다. 추출한 물층을 회전증발농축기로 농축한 후, 고체를 HPLC로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 500 MHz NMR을 이용하여, ¹H 및 ¹³C NMR의 1D 데이터와 COSY, HSQC 및 HMBC의 2D 데이터로부터 합성된 화합물의 구조를 동정하였다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (6)

1. 중간체인 카나마이신-X의 6'번 탄소에 치환된 히드록실기를 제외한 7개 히드록실기가 벤질옥시기로 보호된 유도체에 포함된 3개 아자이드기를 아민기로 치환하는 제1단계(환원 단계);
   상기 제1단계로부터의 생성물에 포함된 1번 탄소에 치환된 아민기에 S-4-아미노-2-히드록시부티르산 보호기를 도입하는 제2단계(아민 치환단계); 및
   상기 제2단계로부터의 생성물에 포함된 7개 벤질옥시기와 벤질카르복시기(Cbz)를 제거하여 각각 히드록실기와 아민기로 전환하는 제3단계(전체 탈보호화 단계)를 포함하는, 악사카신(Axakacin)의 제조방법.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 중간체는
   카나마이신 A에 포함된 4개 아민기를 아자이드기로, 7개 히드록실기는 벤질옥시기로 전환하는 제a단계(보호 단계);
   상기 제a단계로부터의 생성물에 포함된 4개 아자이드기를 아민기로 전환하는 제b단계(환원 단계);
   상기 제b단계로부터의 생성물에 포함된 아민기 중 6'번 탄소에 치환된 아민기에 Boc 보호기를 도입하는 제c단계(Boc 보호 단계);
   상기 제c단계로부터의 생성물에 포함된 Boc 보호되지 않은 3개 아민기를 아자이드기로 전환하는 제d단계(아자이드화 단계);
   상기 제d단계로부터의 생성물에 포함된 Boc로 보호된 아민기를 탈보호화하는 제e단계(Boc 탈보호화 단계);
   상기 제e단계로부터의 생성물에 포함된 3개 아민기를 아자이드기로 전환하고, 6'번 탄소에 치환된 아민기는 터트-부틸디페닐실릴옥시기로 전환하는 제f단계(탈아민화 및 알콜 보호 단계); 및
   상기 제f단계로부터의 생성물에 포함된 6'번 탄소에 치환된 아민기는 터트-부틸디페닐실릴옥시기를 히드록실기로 전환하는 제g단계(TBDPS 탈보호화 단계)를 포함하는 일련의 공정에 의해 카나마이신 A로부터 준비되는 것인, 제조방법:
   [화학식 1]
   

   

   .
   
3. 제1항 또는 제2항의 방법으로 제조된 악사카신.
   
4. 제3항의 악사카신 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물.
   
5. 제4항에 있어서,
   대장균(E.coli) 및 슈도모나스 종(Pseudomonas species)으로 이루어지는 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 그람음성균에 대해 항균 활성을 나타내는 것인, 항균용 조성물.
   
6. 제4항에 있어서,
   아미노글리코시드 내성 균주와 아미노글리코시드 감수성 균주 모두에 대해 항균 활성을 가지는 것인, 항균용 조성물.
   

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