KR20210097756A - 폴리클로날 면역글로불린을 사용한 급성 악화를 예방하거나 치료하기 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 폴리클로날 면역글로불린을 호흡기에 투여함에 의해, 특히 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 에어로졸화된 조성물을 직접 적용함에 의해 만성 폐쇄성 폐 질환과 같은 만성 폐 질환 및 비-낭성 섬유증 기관지확장증에서 급성 악화를 예방하거나 치료하는 분야에 관한 것이다.

Description

폴리클로날 면역글로불린을 사용한 급성 악화를 예방하거나 치료하기 위한 방법 및 조성물

본 발명은 폴리클로날 면역글로불린을 호흡기에 투여함에 의해, 특히 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 에어로졸화된 조성물을 직접 적용함에 의해 만성 폐쇄성 폐 질환 및 비-낭성 섬유증 기관지확장증과 같은 만성 폐 질환에서 급성 악화를 예방하거나 치료하는 분야에 관한 것이다.

만성 폐 질환, 특히 감염이 주요 원인인 악화를 수반하는 질환은 대상체가 폐에서 공기를 완전히 내쉬는 것이 어렵다는 것을 특징으로 한다. 상기 만성 폐 질환을 갖는 환자들은 폐로부터 모든 공기를 내쉬기 어려워 숨가쁨을 갖는다. 폐의 손상 또는 폐 내부에서 기도의 협착 때문에, 내쉰 공기는 정상 보다 더 느리게 나온다. 완전히 숨을 내쉬면 비정상적으로 많은 양의 공기가 여전히 폐에 남아있다. 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 및 비-낭성 섬유증 기관지확장증(NCFB)은 상기 만성 폐 질환의 예이다. COPD는 일반적으로 점진적이고 유독한 입자 또는 가스에 대한 기도 및 폐에서의 증진된 만성 염증 반응과 연관된 지속적 기류 제한을 특징으로 한다. 악화 및 동시이환(comorbidity)은 개별 환자에서 전체 중증도에 기여한다[1]. NCFB는 기도의 병리학적 확장을 특징으로한다 -기도 확대의 방사선 사진 입증에 의해 임상적으로 확인됨 (즉, CT 스캔으로)[2]. 악화는 NCFB의 진행에서 핵심 반응인 것으로 고려된다[3].

호흡기 증상의 급성 악화는 흔히 COPD 및 NCFB와 같은 만성 폐 질환을 갖는 환자에서 발생한다. 이들 급성 악화는 세균 또는 바이러스 (공존할 수 있는)에 의한 감염에 의해 유발될 수 있다. 악화 동안에, 염증의 재발, 팽창 및 가스 포획 증가, 호기류 감소 및 호흡 곤란 증가가 나타난다. 다른 의학적 병태, 예를 들어, 폐렴은 예를 들어 COPD의 악화를 악화시킬 수 있다.

COPD의 급성 악화는 정상적인 일상의 변화를 넘어 추가의 치료요법 약물처리를 유발하는 환자의 호흡기 증상의 급성 악화로서 만성 폐쇄성 폐 질환(GOLD)에 대한 전반적 기선에 의해 정의된다[4]. 악화가 발생하는 속도는 환자 들간에 크게 다양하다. COPD를 갖는 환자에서 악화의 만성은 기도의 조직 리모델링을 지원하고 질환의 악화에 기여한다. 이들 급성 악화는 고도의 전신 염증 및 면역 활성화와 상호관련된다. COPD 중증도가 악화됨에 따라 악화의 빈도는 증가한다. 이어서, 급성 악화는 COPD의 진행을 증가시킬 가능성이 있고, 추가로 급성 악화에 의해 유발된 염증 상태가 추가의 재발성 급성 악화에 대한 민감성을 증가시킬 가능성이 있다. 이것은 COPD의 진행을 구동하는 악순환을 유도한다.

NCFB의 악화는 정상적인 일상의 변화, 기침 증가, 객담 용적 증가 또는 객담 고름 악화와 같은 하나 이상의 증상의 존재하에 항생제의 요구를 넘어서는 NCFB의 하나 이상의 증상의 급성 악화로서 정의될 수 있다. 중증 악화는 스케줄에 없는 입원 또는 응급실 방문을 요구하는 것으로서 정의될 수 있다[3].

예를 들어, COPD 또는 NCFB와 같은 만성 폐 질환을 환자들은 급성 악화를 유발할 수 있는 재발성 호흡기 감염이 존재할 가능성이 있다. COPD의 급성 악화의 가장 통상적인 원인은 상부 호흡기 및 기관지 트리의 바이러스 감염이다. COPD 악화 동안에 검출되는 가장 통상적인 바이러스는 사람 리노바이러스(HRV)[5]이고, 이것은 세균 기도 미생물군집의 파생물과 관련된다[6]. COPD 내 세균 플로라는 일반적으로 고도로 가변성이다. 많은 상이한 세균들이 COPD와 관련되어 있다. 그러나, 대부분의 병원성인 것들에는 해모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenza), 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumonia), 모락셀라 카타르할리스(Moraxella catarrhalis), 해모필러스 파라인플루엔자(Haemophilus parainfluenzae) 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)가 포함된다. 추가로, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)(PA)는 안정한 COPD에서 및 악화 동안에 과도한 중증 기류 차단을 갖는 환자에서 발견된 가장 해로운 세균 중 하나인 것으로 보고되었다[7].

COPD에 대한 치료는 흡입 코르티코스테로이드(ICS), 장기 작용성 베타2-효능제를 포함하는 흡입 기관지확장제, 및 장기 작용성 무스카린 수용체 길항제를 포함하는 항콜린성제, 및 이들의 조합을 기반으로 한다. 예를 들어, 고위험의 악화와 함께 중증의 COPD는 통상적으로 모든 3개 부류의 약물의 조합으로 치료된다. 이들 치료요법은 악화를 감소시키지만 최대 흡입 치료요법을 받은 환자들은 악화를 계속 경험하게 되고 따라서 새로운 치료학적 접근법이 요구된다. 실제로, ICS 치료요법은 고위험의 폐렴, 구강 칸디다증, 애성(hoarse voice) 및 피부 상처를 포함하는 부작용과 관련된다. 다른 부작용은 신규 발생 당뇨병, 당뇨병 진행, 백내장 및 결핵의 증가된 위험을 포함한다. 장기 사용은 또한 COPD 환자에서 골절의 증가된 위험과 관련된다[8]. 특히, ICS 치료요법은 단지 약하게 악화의 빈도를 감소시키고 임상 시험은 COPD에서 ICS 사용과 함께 폐렴의 증가된 위험을 보고한다. 이것은 ICS가 항바이러스 면역력을 감소시켜 점액 과다분비 및 증가된 폐 세균 부하량을 유도하는 것으로 나타났기 때문일 수 있다[9].

만성 기관지염을 갖는 COPD 환자에서, 포스포디에스테라제-4 효소 억제제(예를 들어, 로플루밀라스트)는 선택된 치료에 부가될 수 있다. 로플루밀라스트는 COPD와 관련된 전신 및 폐 염증 둘다를 표적화하도록 디자인된 비-스테로이드성 소염 활성 물질이다. 이것은 흔한 악화 병력을 갖는 성인 환자에서 만성 기관지염과 관련된 중증의 COPD의 유지 치료를 위해 기관지확장제 치료에 보조 치료요법으로서 지적된다.

COPD의 급성 악화는 현재 기관지확장제, ICS 및 항생제를 포함하는 약리학적 치료요법으로 관리되고 있다. ICS 치료요법은 상기 논의된 바와 같은 부작용과 관련된다. 항생제는 세균성 호흡기 감염을 치료하기 위해 사용되어 악화의 발생 및 중증도를 감소시킨다. 마크롤리드는 또한 소염 효과를 갖고 중증 COPD 및 빈번한 악화 병력을 갖는 환자에 사용될 수 있다. 그러나, 장기 마크롤리드 치료요법은 미생물 내성 및 심혈관 부작용의 위험과 관련된다. 현재 COPD에서 리노바이러스 감염과 같은 바이러스 감염을 치료하기 위한 제제가 없다.

NCFB에 가용한 치료제가 없다. NCFB의 급성 악화는 통상적으로 항생제로 치료되어 기저 호흡기 감염을 제거한다. 일부 NCFB 환자는 악화를 예방하기 위해 예방적 항생제 치료요법을 받지만 상기 치료요법의 효능은 입증되지 않았다.

본 발명의 목적은 추가로 만성 폐 질환, 특히, 감염 관련 악화를 갖는 것들, 예를 들어, COPD 및 NCFB에 대한 개선된 치료를 제공하기 위한 것이고, 특히 급성 악화를 예방하거나 치료하기 위한 것이다.

본 발명의 개시내용

임의로 코르티코스테로이드, 베타2-효능제 및/또는 항콜린성 기관지확장제와 조합된 항생제를 기반으로 하는 급성 악화를 예방하거나 치료하기 위한 선행 기술의 치료요법과는 대조적으로, 본 발명에 따라 급성 악화는 동시이환을 포함하는 조성물의 사람 대상체의 호흡기로의 투여에 의해 예방되거나 치료된다.

따라서, 본 발명은 만성 폐 질환을 갖는 사람 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 조성물을 제공하고, 여기서, 상기 조성물은 대상체의 호흡기로 투여된다.

본 발명은 또한 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 조성물을 대상체의 호흡기에 투여함에 의해 만성 폐 질환을 갖는 사람 대상체에서 급성 악화를 예방하거나 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 만성 폐 질환을 갖는 사람 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료를 위한 약물의 제조를 위한 폴리클로날 면역글로불린의 용도를 제공하고, 여기서, 상기 약물은 대상체의 호흡기에 투여된다.

놀랍게도, 호흡기의 점막 상피로의 면역글로불린의 적용은 염증을 감소시키고, 점막 층에 존재하는 잠재적 면역원성 미생물 (예를 들어, 세균 및/또는 바이러스)의 면역 배제를 구동시키고, 예를 들어, 세균 세포외효소 및 독소, 및/또는 바이러스 복제 (발산)에 의한 상피에 대한 직접적 손상을 예방할 수 있다. 이들 효과는 예를 들어, 세균 및/또는 바이러스에 의한 호흡기 감염에 의해 유발될 수 있는, 급성 악화를 예방하거나 치료하기 위해 유리하다.

시판되는 면역글로불린 조성물은 정맥내 또는 피하로, 즉, 전신 투여에 의해 투여된다. 예를 들어, 에어로졸 흡입에 의한 표적 호흡기로의 직접적인 국소 투여는 호흡기에서 면역글로불린으로의 동일한 노출을 성취할 수 있지만 전신 투여 (예를 들어, 정맥내)를 위해 요구될 수 있는 것 보다 적은 총 용량을 요구한다. 표적 호흡기 조직으로 직접적인 상기 국소 투여에 의해 전신 부작용을 회피할 수 있다. 추가로, 호흡기로의 투여는 전신 투여된 면역글로불린의 단지 일부가 호흡기에서 잔류하기 때문에 전신 투여에 의해 성취될 수 있는 것 보다 높은 국소 농도가 성취될 수 있게 한다.

추가로, 정맥내 또는 피하 면역글로불린 치료요법은 고가이다. 호흡기에 직접적인 표적화된 국소 투여는 호흡기에서 면역글로불린, 예를 들어, IgG에 전신 투여에 의해 수득되는 바와 동일한 노출을 성취하기 위해 보다 적은 용량의 투여를 필요로 할 수 있다. 결과로서, 호흡기로의 직접적인 투여는 호흡기에서 동일한 치료학적 효과를 성취하는데 보다 적은 조성물이 요구되기 때문에 보다 저렴할 수 있다.

추가로, 정맥내 또는 피하 면역글로불린 치료요법은 일반적으로 건강보호 전문가의 주의를 필요로 한다. 예를 들어, 정맥내 투여는 간호사 또는 의사를 필요로 하고 일반적으로 진료소에서 수행된다. 에어로졸 면역글로불린의 흡입은 건강보호 전문가에 의한 감독을 필요로 하지 않을 수 있고 따라서 집에서 자가 투여를 위해 적합할 수 있다. 결과적으로, 호흡기로의 직접적인 투여는 대상체를 위해 보다 실용적일 수 있고 따라서 대상체는 치료에 보다 적합할 가능성이 있다. 증가된 적합성은 예를 들어, 급성 악화 및 입원을 유도할 수 있는 치료학적 실패를 감소시킨다.

급성 악화

본 발명은 만성 폐 질환, 전형적으로 COPD 또는 NCFB를 갖는 사람 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료를 포함한다.

급성 악화는 정상적인 일상의 변화를 넘어서고 추가의 치료요법을 필요로 하는 환자 호흡기 증상의 악화를 특징으로 하는 급성 사건이다. 상기 급성 악화는 상이한 중증도를 가질 수 있다.

COPD를 갖는 대상체에서, 약한 급성 악화는 대상체에 대한 의약 처방의 변화를 요구하는 것이고 특히 상기 대상체는 단기 작용성 기관지확장제 (SABD)로 치료된다. 중등 급성 악화는 의학적 중재, 특히 SABD + 항생제 및/또는 경구 코르티코스테로이드를 사용한 치료를 필요로 한다. 중증의 급성 악화는 입원 또는 응급실로의 방문을 필요로 한다. 본 발명의 대상체는 약한, 중등 또는 중증 급성 악화를 가질 수 있다. 전형적으로, 대상체는 중등 또는 중증 급성 악화를 갖는다.

NCFB를 갖는 대상체에서, 급성 악화는 국소 증상 (기침, 객담 용적 증가 또는 점도의 변화, 천명의 존재 또는 부재하의 객담 고름 증가, 숨죽임, 객혈) 및/또는 전신 혼란(upset)을 악화시킴을 특징으로 한다[10]. 여러 급성 악화는 스케줄에 없는 입원 또는 응급실로의 방문을 필요로 하는 것으로서 특징화될 수 있다[3].

하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 급성 악화의 예방, 즉 예방학적 치료요법에 사용하기 위한 것이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 급성 악화의 예방에 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 조성물은 대상체의 호흡기에 확립된 감염을 예방하고/하거나 치료한다. 상기 예방학적 치료요법은 특히 이것이 세균 감염 뿐만 아니라 바이러스 감염을 예방할 수 있기 때문에 효과적이고 하나 이상의 항생제에 내성을 갖는 세균에 대해 효과적이다.

따라서, 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 특히 호흡기 내 기본 감염을 치료하고/하거나 예방함에 의해 급성 악화의 예방에 사용하기 위한 것이다. 폴리클로날 면역글로불린은 특히 이것이 세균 감염 뿐만 아니라 바이러스 감염을 치료할 수 있기 때문에 적합하고 하나 이상의 항생제에 내성을 갖는 세균에 대해 효과적이다.

또 다른 구현예에서, 본 발명의 조성물은 급성 악화의 치료에 사용된다. 전형적으로, 급성 악화는 호흡기의 바이러스 또는 세균 감염에 의해 유발된다. 폴리클로날 면역글로불린은 호흡기에서 광범위한 잠재적 병원성 미생물(전형적으로 세균 및 바이러스)을 인지한다. 광범위한 세균의 인지는 상기 면역글로불린이 예를 들어, 면역 배제에 의해 세균성 호흡기 감염의 치료를 위해 효과적임을 의미한다. 광범위한 바이러스의 인지는 상기 면역글로불린이 예를 들어, 바이러스의 숙주 세포로의 결합을 차단함으로서 바이러스 복제 및 발산을 예방함에 의해 바이러스 호흡기 감염의 치료를 위해 효과적임을 의미한다. 또한 진단학적 시험을 위한 필요 없이 조성물의 투여가 곧바로 개시될 수 있음을 의미하는, 급성 악화을 유발할 수 있거나 유발하는 특정 세균 또는 바이러스 감염을 동정하기 위해 사용될 수 있다.

급성 악화의 치료는 급성 악화의 중증도가 악화되는 것을 예방할 수 있다. 예를 들어, 약한 급성 악화의 치료는 이것이 중증의 급성 악화로 진행되는 것을 예방할 수 있다.

본 발명의 조성물은 급성 악화의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 것이다. 급성 악화의 상기 치료 또는 예방을 위해, 본 발명의 조성물은 특정 병원체를 인지하는 항체가 집적될 수 있다. 하나의 구현예에서, 급성 악화를 갖는 대상체는 급성 악화의 근간이 되는 감염을 유발하는 병원체 (예를 들어, 세균 및/또는 바이러스)를 동정하기 위해 시험되고 감염 조성물은 동정된 병원체에 특이적인 항체가 집적된다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 조성물에 동정된 병원체에 특이적인 모노클로날 항체를 보충하여 집적된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 조성물은 대상체의 호흡기에서 동정된 병원체에 특이적인 모노클로날 항체를 보충함에 의해 집적된다. 추가로 또는 대안적으로, 조성물은 예를 들어, 사람 면역글로불린을 생성하도록 가공된 유전자전이 동물의 면역화에 의해 또는 목적하는 병원체(들)에 대해 특이성을 갖는 항체에 대한 사람 항체 레퍼토리 라이브러리를 스크리닝하고 이어서 동정된 항체를 재조합적으로 생성함에 의해 수득될 수 있는, 특정 병원체에 특이적인 폴리클로날 면역글로불린이 집적될 수 있다.

특정 구현예에서, 조성물은 대상체의 호흡기에서 중복감염을 예방하거나 치료하는데 사용하기 위한 것이다. 중복감염은 호흡기의 제1 감염 동안에 호흡기에서 일어나는 제2 감염이다. 특히, 호흡기 중복감염은 제1 감염체에 대해 사용 중인 치료에 내성인 제2 감염체에 의한 감염과 함께 일어날 수 있다. 하나의 구현예에서, 감염 둘다는 세균성 호흡기 감염이다. 또 다른 구현예에서, 감염은 하나의 세균성 호흡기 감염 및 하나의 바이러스 호흡기 감염을 포함한다.

하나의 구현예에서, 본 발명의 대상체는 적어도 하나의 항생제에 내성인 세균에 의해 유발되는 호흡기 감염을 갖는다. 특히, 세균은 다중 항생제에 내성 (다중 내성)일 수 있다. 본 발명의 조성물은 폴리클로날 면역글로불린이 항생제 활성 및 내성의 기전과 관련 없는 에피토프를 포함하는, 세균 상에 많은 에피토프를 인지하기 때문에 다중 내성 세균을 포함하는 이들 내성 세균에 대해 효과적이다.

하나의 구현예에서, 본 발명의 대상체는 바이러스에 의해 유발되는 호흡기 감염을 갖는다. 본 발명의 조성물은 바이러스를 인지하고 감염을 치료한다. 특히, 폴리클로날 면역글로불린은 바이러스에 결합하고 바이러스가 이의 숙주 세포, 예를 들어, 상피 세포에 결합하는 것을 차단한다. 폴리클로날 면역글로불린은 숙주 세포로의 바이러스 진입, 바이러스 복제 및 바이러스 발산을 차단한다. 상기 치료는 특히 호흡기 감염을 치료하는데 사용하기 위해 효과적인 항바이러스 제제가 없기 때문에 유용할 수 있다.

환자 병력

본 발명의 대상체는 급성 악화의 병력을 갖는 만성 폐 질환을 갖는 환자일 수 있다.

급성 악화율은 대상체간에 다양할 수 있다. 본 발명의 대상체는 빈번한 급성 악화를 가질 수 있고, 예를 들어, 이들은 연간 2회 이상의 급성 악화를 경험한다. 빈번한 급성 악화를 갖는 대상체의 최상의 예측 인자 중 하나는 이전에 치료받은 급성 악화의 병력이다. 따라서, 본 발명의 조성물은 특히 악화 병력을 갖는 대상체에 상응하는 빈번한 급성 악화 위험에 처한 대상체의 치료를 위해 유용하다. 따라서, 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 대상체는 예방 또는 치료 전 12개월 내에 1회 이상의 급성 악화를 경험하였다. 바람직하게, 대상체는 예방 또는 치료 전 12개월 내에 2회 이상의 급성 악화를 경험하였다. 특히, 대상체는 예방 또는 치료 전 12개월 내에 3회 이상의 급성 악화를 경험하였다.

유지 치료요법 (하기 논의된)은 특히 급성 악화의 병력을 갖는 상기 대상체를 위해 적합하다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 발명의 대상체는 치료요법 전 12개월 내에 적어도 하나의 급성 악화를 경험하였고 적어도 12개월 동안 상기 조성물로 치료하였다.

구체적으로, COPD에서, 환자 미래의 급성 악화 빈도의 가장 강력한 예측 인자 중 하나는 이전의 해에 경험된 급성 악화의 수이다[4]. 특히, 이전의 해에 2회 이상의 급성 악화를 경험한 COPD를 갖는 대상체는 빈번한 악화를 가질 가능성이 있다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 COPD를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방에 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 예방은 COPD를 갖는 대상체에서 유지 치료요법이고, 상기 대상체는 유지 치료요법 개시 전 12개월 내에 2회 이상의 급성 악화를 경험하였고 유지 치료요법은 적어도 12개월 동안 계속한다.

구체적으로, NCFB에서, 환자 미래의 급성 악화 빈도의 가장 강력한 예측 인자 중 하나는 이전의 해에 경험된 급성 악화의 수이다[3]. 특히, 이전의 해에 3회 이상의 급성 악화를 경험한 NCFB를 갖는 대상체는 빈번한 악화를 가질 가능성이 있다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방에 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 예방은 NCFB를 갖는 대상체에서 유지 치료요법이고, 상기 대상체는 유지 치료요법 개시 전 12개월 내에 3회 이상의 급성 악화를 경험하였고 유지 치료요법은 적어도 12개월 동안 계속한다.

만성 폐 질환

본 발명은 만성 폐 질환, 특히, 감염이 악화에 대한 주요 원인인 만성 폐 질환, 전형적으로 COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료를 포함한다.

COPD

COPD를 갖는 대상체는 전형적으로 기관지확장제 후 FEV1 (1초에 강제 호기량)/FVC(강제 활력 용량) 비율이 0.7 미만이다. FEV1 및 FVC는 당업계 표준 방법을 사용한 폐활량 측정에 의해 측정될 수 있다[11]. 예를 들어, 기관지확장제 후 폐활량 측정을 위해, 폐활량 측정은 하기 시점에 수행될 수 있다: (i) 단기 작용성 베타2-효능제 (400 μg)가 투여된 후 10-15분; (ii) 단기 작용성 항콜린성제(160 μg)가 투여된 후 30-45분; 또는 (iii) 2개 부류의 약물의 조합물이 투여된 후 30-45분

본 발명은 특히 중등 내지 매우 중증의 COPD, 즉, 중등 COPD, 중증 COPD, 또는 매우 중증의 COPD를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료를 위해 적합하다. 전형적으로, 대상체는 중증 또는 매우 중증의 COPD를 갖는다.

COPD의 중증도의 상기 등급화는 문헌[1]에서 설명되고, 대상체에서 기류 제한의 증중도를 기준으로 한다. 간략하게, FEV1/FVC 비율 <0.7을 갖는 대상체에서, 기류 제한의 중증도의 등급화는 측정된 기관지확장제 후 FEV1 및 상기 측정된 값을 건강한 대상체에 대해 예측된 값과 비교하는 법을 기준으로 한다. 경미한 COPD를 갖는 대상체는 예측된 것의 적어도 80%인 FEV1을 갖는다. 중등 COPD를 갖는 대상체는 예측된 것의 50% 내지 80%인 FEV1을 갖는다. 중증 COPD를 갖는 대상체는 예측된 것의 30% 내지 50%인 FEV1을 갖는다. 매우 중증의 COPD를 갖는 대상체는 예측된 것의 30% 미만인 FEV1을 갖는다.

건강한 대상체에 대한 예측된 FEV1은 하기 수학식을 사용하여 계산된다[12]:

남성 FEV1{리터} = 4.30*신장{미터} - 0.029*연령{년(years)} - 2.49

여성 FEV1{리터} = 3.95*신장{미터} - 0.025*연령{년(years)} - 2.60

예를 들어, 50세 연령이고 1.8m 신장을 갖는 남성 대상체는 3.8 L (4.3*1.8 - 0.029*50 - 2.49)의 예측된 FEV1을 갖는다. 상기 대상체가 이어서 폐활량 측정에 의해 측정되어 기관지확장제 후 FEV1 2.09 L을 갖는 경우, 상기 값은 예측된 FEV1(3.8L)의 55%이고 따라서 상기 대상체는 중등 COPD를 갖는 것으로 고려된다.

중등 내지 매우 중증의 COPD는 치료하기가 어렵고 심지어 3중 치료요법 (흡입된 코르티코스테로이드/베타2-효능제/항콜린성 기관지확장제)도 항상 성공적인것은 아니다. 본 발명의 폴리클로날 면역글로불린은 현재 치료의 기전과는 구분되는 기전 (호흡기 감염을 예방하고 호흡기 염증을 감소시킴을 포함하는)에 의해 COPD를 갖는 대상체에서 급성 악화를 예방하거나 치료하는 것으로 사료되고 따라서 추가의 보충적 치료를 제공한다.

또 다른 양상에서, 본 발명의 조성물은 대상체에서 COPD를 치료하는데 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 조성물은 상기 대상체의 호흡기에 투여된다. 급성 악화는 COPD의 병리에 기여하고 염증과 추가의 감염 간의 악순환에 기여할 수 있다. 급성 악화의 예방은 따라서 COPD의 치료이다. COPD를 갖는 대상체에서 본 발명의 조성물을 사용한 유지 치료요법은 특히 이것이 급성 악화 (이는 급성 악화의 발생률을 감소시키고/시키거나 중증도를 감소시킴을 포함하는)을 예방하기 때문에 COPD를 치료하기 위해 적합하다. 유사한 이유 때문에, 본 발명의 조성물의 계절적 투여는 특히 COPD를 치료하기 위해 적합하다.

비-낭성 섬유증 기관지확장증

본 발명은 만성 폐 질환, 특히, 감염이 악화에 대한 주요 원인인 만성 폐 질환, 전형적으로 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 치료를 포함한다. NCFB는 다수의 원인을 갖고 광범위한 징후가 나타날 수 있다. 이것은 기도의 병리학적 확장을 특징으로 한다. 특히, 이것은 기도의 영구적 확장으로서 정의되고[2], 이는 방사선사진술로, 예를 들어, 컴퓨터 단층촬영 (CT) 스캔에 의해 입증될 수 있다. NCFB의 징후는 기도의 낭성 변화에 대한 미묘한 확장을 포괄한다. 환자는 무증상 (및 예상치 않게 발견되는 기도 확장)일 수 있거나, 주기적 악화와 함께 기침 및/또는 객담 생성과 같은 다양한 증상을 가질 수 있다.

본 발명은 특히 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료를 위해 적합하다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화를 예방하거나 치료하는데 사용하기 위한 것이다. 상기 조성물은 특히 NCFB를 갖는 대상체에서 중증의 급성 악화를 예방하는데 사용하기 위해 적합하다. 또 다른 양상에서, 본 발명의 조성물은 대상체에서 NCFB를 치료하는데 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 조성물은 상기 대상체의 호흡기에 투여된다. 급성 악화는 NCFB의 병리에 기여하고 염증과 추가의 감염 간의 악순환에 기여할 수 있다. 급성 악화의 예방은 따라서 NCFB의 치료이다. NCFB를 갖는 대상체에서 본 발명의 조성물을 사용한 유지 치료요법은 특히 이것이 급성 악화 (이는 급성 악화의 발생률을 감소시키고/시키거나 중증도를 감소시킴을 포함하는)를 예방하기 때문에 NCFB를 치료하기 위해 적합하다. 유사한 이유 때문에, 본 발명의 조성물의 계절적 투여는 특히 NCFB를 치료하기 위해 적합하다.

대상체는 동시이환으로 COPD 및 NCFB가 나타날 수 있다. 실제로, NCFB는 COPD의 보다 진행된 단계와 관련된다[2]. 따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 조성물은 특히 COPD 및 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위해 적합하다.

낮은 IgG 수준

본 발명의 대상체는 건강한 성인에 대한 정상 범위 보다 낮은 수준의 면역글로불린 G (IgG)를 갖는 대상체일 수 있다. 이들 대상체는 COPD를 앓을 증가된 위험, COPD의 증가된 중증도 및/또는 COPD의 급성 악화의 증가된 위험을 갖는다. NCFB는 또한 저수준의 IgG를 포함하는, 면역 결핍을 갖는 대상체의 통상적인 증상이다.

호흡기, 특히 폐에서 IgG는 2개의 공급원으로부터 유래한다: 기관지 점액에 위치한 혈장 세포에 의해 국소적으로 생성되고 여출(transudation)에 의해 혈장으로부터 유래됨. 따라서, 본 발명의 대상체는 예를 들어, IgG의 낮은 전신 수준 및/또는 IgG의 낮은 국소 생성 대문에 호흡기에서 낮은 수준의 IgG를 가질 수 있다.

하나의 구현예에서, 대상체는 낮은 혈장 수준의 IgG를 갖는다. 문헌[13]에 제시된 바와 같이, 건강한 성인에서 총 혈장 IgG의 정상 범위는 639-1,349 mg/dL이고, 평균은 994 mg/dL이다. 성인에서 혈장 IgG의 낮은 수준은 700mg/dL 미만의 수준일 수 있다. 성인에서 보다 낮은 총 혈장 IgG 수준은 경증-중등 (300-600 mg/dL), 유의적 (100-300mg/dL), 또는 매우 감소된(약 100 mg/dL 미만)것으로서 분류될 수 있다. 특정 구현예에서, 대상체는 약 700 mg/dL 미만, 약 600 mg/dL 미만, 약 300 mg/dL 미만, 또는 약 100 mg/dL 미만의 혈장 IgG 수준을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 약 100 내지 약 600 mg/dL 범위 (약 300 내지 약 600 mg/dL, 약 100 내지 약 300 mg/dL의 범위를 포함하는)의 범위에서 혈장 IgG 수준을 갖는다.

총 혈장 IgG 농도를 결정하기 위한 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 속도 비탁법(rate nephelometry) 및/또는 방사형 면역확산이 있다[14]. 혈청 IgG는 또한 예를 들어, 하기 발명을 수행하기 위한 방식으로 기재된 프로토콜에 따라 ELISA에 의해 정량될 수 있다.

본 발명에 의해 예방되거나 치료되는 급성 악화는 호흡기에서 나타나고, 따라서, 호흡기에서 IgG의 국소 농도는 호흡기 감염의 위험 따라서 또한 급성 악화의 위험을 결정하는데 있어서 중요한 인자이다. 건강한 성인에서 보다 호흡기에서 보다 낮은 수준의 IgG를 갖는 대상체는 호흡기 감염 및 급성 악화 위험이 보다 크다. 따라서, 하나의 구현예에서, 본 발명의 대상체는 건강한 성인 보다 호흡기에서 보다 낮은 수준의 IgG를 갖는다.

호흡기에서 IgG의 수준은 대상체로부터 객담을 분석함에 의해 측정될 수 있다. 객담은 전형적으로 감염 또는 다른 질환, 예를 들어, COPD 또는 NCFB의 결과로서 호흡기로부터 기침에 의해 올라오는 침샘과 점액의 혼합물이다. 이것은 흔히 의학적 진단을 원조하기 위해 현미경으로 조사된다. 이것은 또한 면역글로불린 (예를 들어, IgG, IgA 및/또는 IgM), 및 사이토킨 (예를 들어, IL-1β, IL-6 및/또는 IL-8)을 포함하는, 생물학적 분자의 함량에 대해 분석될 수 있다. 객담 면역글로불린 농도를 결정하기 위한 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 속도 비탁법(rate nephelometry) 및/또는 방사형 면역확산이 있다[15]. 객담 면역글로불린은 또한 예를 들어, 하기 발명을 수행하기 위한 방식으로 기재된 프로토콜에 따라 ELISA에 의해 정량될 수 있다.

본 발명의 치료학적 효과

호흡기 감염의 예방 및/또는 치료

호흡기 감염은 급성 악화의 하나의 원인일 수 있고, 따라서 호흡기 감염의 예방 또는 치료는 특히 급성 악화의 예방 또는 치료를 위해 유용하다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 급성 악화의 예방에 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 폴리클로날 면역글로불린은 호흡기에서 하나 이상의 잠재적 병원성 미생물 (세균 및/또는 바이러스)의 면역 배제를 유발한다. 폴리클로날 면역글로불린은 호흡기에서 잠재적 병원성 미생물에 결합함에 의해 면역 배제를 유발할 수 있고, 예를 들어, 상기 폴리클로날 면역글로불린은 잠재적 병원성 미생물에 결합하고 이들이 호흡기의 점막 상피에 부착되는 것을 차단한다.

또 다른 구현예에서, 본 발명의 조성물은 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 폴리클로날 면역글로불린은 호흡기에서 하나 이상의 잠재적 병원성 미생물 (세균 및/또는 바이러스)의 응집을 유발한다. 미생물의 응집은 또한 응집반응 (agglutination)으로서 공지되어 있다.

또 다른 구현예에서, 본 발명의 조성물은 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 폴리클로날 면역글로불린은 면역 세포를 동원하여 예를 들어, 항체-의존성 세포 독성 (ADCC)으로 호칭되는 공정에서 미생물을 사멸시킨다.

호흡기 감염에 의해 유발된 손상의 예방 및/또는 감소

대상체의 호흡기에서 미생물의 활성은 병원성 효과를 가질 수 있다. 따라서, 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 폴리클로날 면역글로불린은 병원체 (예를 들어, 세균 및/또는 바이러스)에 의해 유발된 호흡기에 대한 손상을 감소시킨다. 예를 들어, 폴리클로날 면역글로불린은 세포외효소의 활성을 억제할 수 있다. 상기 세포외효소는 예를 들어, 세균에 의해 점막으로 분비되는 효소이고 예를 들어, 조직 분해 활성을 갖는 효소, 예를 들어, 프로테아제를 포함한다. 상기 세포외효소의 활성 차단은 대상체의 호흡기 상피를 손상으로부터 보호한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 상피 장벽 통합성의 손실을 방지하고 상피를 통한 병원체의 통과를 방지한다. 특정 구현예에서, 병원체는 바이러스이고 폴리클로날 면역글로불린은 상기 바이러스에 결합하여 대상체의 호흡기에서 바이러스의 숙주 세포로의 직접적인 결합을 차단한다. 따라서, 상기 면역글로불린은 대상체의 호흡기에서 바이러스 진입, 복제 및 발산을 차단한다.

염증의 감소

만성 염증은 작은 기도의 구조적 변화와 협착을 유발하여 COPD의 징후에 기여하고, NCFB에서 기관지의 비가역적 확장을 유도하는 기도 손상 및 리모델링을 유발한다. 증가된 염증 및 이에 따른 손상은 급성 악화의 위험을 증가시킬 수 있다. 본 발명의 조성물은 대상체에서 염증을 감소시킬 수 있고, 따라서 이것은 특히 전형적으로 COPD 또는 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위해 적합하다.

하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 대상체에서 염증, 전형적으로 국소 염증, 예를 들어, 호흡기 염증을 감소시킨다. 특히, 상기 조성물은 병원체 유도된 염증, 특히, 대상체의 호흡기에서 병원체 유도된 염증을 감소시킨다.

염증은 하나 이상의 염증 촉진 사이토킨, 예를 들어, IL-1β 및/또는 IL-6 및/또는 IL-8의 증가된 수준을 특징으로 할 수 있다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 특히 호흡기의 점막 층에서 IL-1β 및/또는 IL-6 및/또는 IL8의-8의 수준을 감소시킨다.

호흡기의 점막층에서 하나 이상의 사이토킨의 수준(예를 들어, IL-1β 및/또는 IL-6 및/또는 IL-8의 수준)은 대상체에 의해 생성되는 객담 내 수준의 분석에 의해 정량될 수 있다. 객담 내 사이토킨 농도는 표준 방법에 따라, 예를 들어, 속도 비탁법[14] 또는 ELISA (예를 들어, 하기된 발명의 방식에서)에 의해 정량될 수 있다.

폴리클로날 면역글로불린

본 발명은 만성 폐 질환을 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료를 위한 폴리클로날 면역글로불린의 용도를 포함한다. 상기 폴리클로날 면역글로불린은 1차 면역결핍 장애를 갖는 대상체에서 대체 치료요법으로서 감염성 질환의 치료를 위해 및 특정 병리학적 장애 뿐만 아니라 다양한 염증 및 자가면역 병태의 예방 및 치료를 위해 성공적으로 사용되어 왔다.

이들 폴리클로날 면역글로불린 제제는 전신 투여를 위해 개발되었고 대부분 IgG를 포함한다. 현재, 이들 제제는 수천의 건강한 공여자 (1,000 내지 60,000명 공여자)의 풀링된 혈장으로부터 유래하고, 특이적 및 천연 항체 둘다를 함유하여 공여자 집단의 누적 항원 경험을 반영한다. 상기 광범위한 특이적 및 천연 항체는 광범위한 항원 (예를 들어, 병원체, 외래 항원 및/또는 자가항원)을 인지할 수 있다.

일반적으로, 폴리클로날 면역글로불린은 정맥내 또는 피하내로 투여된다. 여러 상업적 제형은 이들 투여 경로를 위해 가용하다.

본 발명의 조성물은 또한 Ig로서 언급되는 폴리클로날 면역글로불린을 포함한다. 전형적으로, 폴리클로날 면역글로불린은 사람 공여자의 혈장으로부터 수득된다. 바람직하게, 다수의 공여자 기원의 혈장은 다양한 표적 항원 특이성을 최대화하기 위해, 예를 들어, 100명 초과의 공여자, 바람직하게, 500명 초과의 공여자, 보다 더 바람직하게 1,000명 초과의 공여자로부터 풀링된다.

전형적으로, 혈장 풀은 에탄올 분획화에 이어서 여러 정제 단계, 예를 들어, 추가의 침전 단계 및/또는 컬럼 크로마토그래피 단계, 및 바이러스 및 다른 병원체를 불활성화시키고 제거하는 단계, 예를 들어, 문헌[16]에 나타낸 방법인 나노여과 또는 용매/세제 처리 단계에 적용된다.

또한, 폴리클로날 면역글로불린은 재조합적으로 예를 들어, 사람 면역 레퍼토리를 포함하는 라이브러리로부터 생성될 수 있다.

전형적으로, 폴리클로날 면역글로불린은 폴리클로날 IgG, 폴리클로날 단량체 IgA, 폴리클로날 이량체 IgA, 폴리클로날 IgM, 또는 이의 조합이다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 폴리클로날 IgG를 포함한다. 폴리클로날 면역글로불린은 또한 WO2013/132052에 기재된 바와 같이, 분비 성분과 조합된 J-쇄 함유 IgA 및/또는 IgM을 포함할 수 있다.

IgG

본 발명은 만성 폐 질환, 전형적으로 COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위해 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 놀랍게도, 본원 발명자들에 의해 대형 면역 복합체가 IgG와 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa.)간에 형성된다는 것이 밝혀졌다. 면역글로불린에 의한 항원 결합은 대부분 표적 항원-결합(Fab) 도메인에 의존한다. IgG는 Fab 도메인과 같은 2가임으로, 슈도모나스 아에루기노사와 IgG 간의 상기 응집물(면역 복합체)은 예상치 않았다. 따라서, 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 폴리클로날 사람 혈장-유래된 IgG를 포함한다. 폴리클로날 면역글로불린은 적어도 95% IgG, 바람직하게 적어도 98% IgG이다. 폴리클로날 IgG는 특히 하나 이상의 호흡기 감염을 치료하고/하거나 예방함에 의해, 만성 폐 질환, 전형적으로 COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위해 적합하다.

IgG와 슈도모나스 아에루기노사의 예상치 않은 면역 복합체의 형성에 대한 하나의 설명은 IgG가 잠재적으로 이의 당을 통해 Fab 영역 외부에서 슈도모나스 아에루기노사와 추가로 결합할 수 있다는 것이다. IgG는 따라서 놀랍게도 슈도모나스 아에루기노사를 면역계에 신호전달하는데 있어서 예상된 것 보다 강력할 수 있다. 결과적으로, 특정 구현예에서, IgG를 포함하는 본 발명의 조성물은 만성 폐 질환, 전형적으로 COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료를 위해 사용되고, 여기서, 상기 대상체는 동시에 슈도모나스 아에루기노사 감염을 갖는다. 또 다른 구현예에서, IgG를 포함하는 본 발명의 조성물은 슈도모나스 아에루기노사에 의한 호흡기 감염을 예방하기 위해 대상체에게 투여된다. 따라서, 바람직한 구현예에서, IgG를 포함하는 본 발명의 조성물은 급성 악화의 예방을 위해 사용되고, 여기서, 상기 조성물은 유지 치료요법으로서 투여된다. 상기 조성물은 특히 슈도모나스 아에루기노사가 손상된 폐 방어를 갖는 대상체에, 예를 들어, COPD 또는 NCFB를 갖는 환자에 영향을 미칠 수 있는 기회주의적 병원체이기 때문에 만성 폐 질환, 전형적으로 COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체에서 유지 치료요법을 위해 유용하다. 특히, 이것은 COPD를 갖는 대상체에서 및 COPD의 급성 악화 동안에 발견되는 가장 해로운 세균 중 하나인 것으로 보고되었다[7].

정상 사람 IgG는 적어도 95%의 IgG의 순도로 수득될 수 있고, 이는 폴리클로날 IgG의 95%가 IgG임을 의미한다. 따라서, 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물에 함유된 IgG는 일반적으로 적어도 95%의 IgG, 바람직하게 적어도 96%의 IgG, 보다 바람직하게 적어도 98%의 IgG, 예를 들어, 적어도 99%의 IgG의 순도를 갖는다.

IgA를 포함하는 조성물의 선택적 IgA 결핍을 갖는 대상체로의 투여는 대상체에서 아나필락시스를 유도할 수 있다. 아나필락시스는 흔히 신속하게 개시하고 대상체의 사망을 유도할 수 있는 심각한 알레르기 반응이다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 단지 최소량의 IgA, 예를 들어, 200　μg/mL 미만의 IgA, 바람직하게 25 μg/mL 미만의 IgA를 포함한다. 이들 조성물은 특히 대상체로의 투여를 위해 적합하고, 여기서, 상기 대상체는 선택적 IgA 결핍을 갖는다. 더우기, 선택적 IgA 결핍은 중증의 증상을 갖지 않고 따라서 본 발명의 대상체는 선택적 IgA 결핍을 갖는지를 알 수 없다. 따라서, 이들 조성물은 특히 이것이 선택적 IgA 결핍을 갖는지의 여부를 알수 없는 대상체로의 투여를 위해 유용하다.

따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 적어도 98%의 IgG인 폴리클로날 면역글로불린을 포함하고 25 μg/mL 미만의 IgA를 포함한다.

특정 구현예에서, 본 발명에 사용하기 위한 조성물은 Privigen™이다. 또한 본 발명에 따라 사용될 수 있는 시판되는 면역글로불린 제형은 다음을 포함한다: Bivigam™, Clairyg™, Flebogam™ 5%, Flebogamma™ DIF 5%, Gammagard™ Liquid 10%, Gammaplex™, Gamunex™ 10%, IG Vena™ N, Intratect™, Kiovig™, Nanogam™, Octagam™, Octagam™ 10%, Polyglobin™ N10%, Sandoglobulin™ NF liquid, Vigam™ 및 IQYMUNE™.

특이적 항체가 집적된 폴리클로날 면역글로불린

본 발명은 만성 폐 질환, 전형적으로 COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 조성물에 관한 것이다. 상기된 바와 같이 급성 악화는 대상체에서 호흡기 감염에 의해 유발될 수 있다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 특정 병원체 (예를 들어, 세균 및/또는 바이러스) 또는 잠재적으로 병원성 미생물 (예를 들어, 세균 및/또는 바이러스)에 특이적인 하나 이상의 항체가 집적되어 있다. 상기 조성물은 특히 미생물 또는 병원체에 대해 활성인 면역글로불린의 유효량을 증가시키는 효과를 갖기 때문에 유용할 수 있고, 이는 따라서 보다 큰 치료학적 효과를 갖거나, 보다 낮은 조성물의 총 용량이 투여되는 경우 동등한 치료학적 효과를 성취할 수 있다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 상기 조성물에 병원체에 특이적인 모노클로날 항체를 보충함에 의해 병원체에 특이적인 항체가 집적된다.

하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 리노바이러스, 인플루엔자 A, 사람 메타뉴모바이러스, RSV, 코로나바이러스, 인플루엔자 B, 아데노바이러스, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 해모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenza), 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumonia), 모락셀라 카타르할리스(Moraxella catarrhalis), 해모필러스 파라인플루엔자(Haemophilus parainfluenzae) 및/또는 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 중 하나 이상에 특이적인 항체가 집적된다. 상기 조성물은 특히 이들 병원체가 만성 폐쇄성 호흡기 질환, 전형적으로, COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체에서 급성 악화의 가장 공통된 원인이기 때문에 유용할 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 조성물은 COPD를 갖는 대상체에서 및 COPD의 악화 동안에 발견되는 가장 해로운 세균 중 하나인 것으로 보고된 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)에 특이적인 항체가 집적된다[7]. 바람직하게, 본 발명의 조성물은 COPD의 급성 악화를 유발하는 가장 통상적인 바이러스 감염인, 사람 리노바이러스에 특이적인 항체가 집적된다.

하나의 구현예에서, 특정 병원체에 특이성을 갖는 항체가 집적된 본 발명의 조성물은 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 조성물에 하기로 부터 선택된 하나 이상의 병원체에 특이성을 갖는 모노클로날 Ab 또는 2개 이상의 모노클로날 항체의 혼합물을 보충함에 의해 수득될 수 있다: 리노바이러스, 인플루엔자 A, 사람 메타뉴모바이러스, RSV, 코로나바이러스, 인플루엔자 B, 아데노바이러스, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 해모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenza), 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumonia), 모락셀라 카타르할리스(Moraxella catarrhalis), 해모필러스 파라인플루엔자(Haemophilus parainfluenzae) 및/또는 스트렙토코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)

하나의 구현예에서, 특정 병원체에 특이성을 갖는 항체가 집적된 본 발명의 조성물은 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 조성물에 특정 병원체를 사용한 면역접종 후 사람 면역글로불린을 발현하도록 가공된 유전자전이 동물로부터 수득된 폴리클로날 면역글로불린을 보충함에 의해 수득될 수 있다.

하나의 구현예에서, 특정 병원체에 대해 특이성을 갖는 항체가 집적된 본 발명의 조성물은 특정 병원체로부터 유래된 특정 병원체 또는 항원과 함께 사람 항원 결합 부위의 라이브러리를 스크리닝하고 이들 항원 결합 부위를 갖는 병원체-특이적 면역글로불린을 재조합적으로 생성하여 수득된 여러 특이적 면역글로불린에 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 조성물에 보충함에 의해 수득될 수 있다.

IgA 및 IgM

하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 IgA 및/또는 IgM을 포함한다. 특정 구현예에서 적어도 95중량%의 폴리클로날 면역글로불린은 IgA 및/또는 IgM이다. IgA 및/또는 IgM은 재조합 분비 성분과 조합함에 의해 분비 항체로 어셈블리될 수 있다. 특정 구현예에서 상기 조성물은 약 2:1의 질량 비율로 IgA 및 IgM을 포함한다.

바람직하게, IgA 및/또는 IgM은 예를 들어, WO 2013/132053에 상세히 기재된 바와 같이 혈장으로부터 제조한다.

본 발명에 바람직하게 사용되는 조성물은 WO2013/132052에 상세히 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 바람직하게, IgA 및/또는 IgM을 포함하는 혈장 유래된 제제는 시험관내에서 SC와 조합되고, 이량체/중합체 J-쇄 함유 IgA/IgM의 사전 정제를 필요로 하지 않는다. 상기 물질은 분비형 IgA 또는 분비형 IgM으로서 언급되거나 SCIgA 또는 SCIgM으로서 약칭된다. 그러나, 상기 물질은 생체내 생성된 분비 IgA (일반적으로 SIgA로 약칭됨) 및 생체내 생성된 분비 IgM (일반적으로 SIgM으로 약칭됨)과 매우 유사하게 작용한다.

하나의 구현예에서, 상기 조성물은 폴리클로날 사람 혈장-유래된 중합체 IgA 및 IgM을 포함한다. 바람직한 구현예에서, IgA 및 IgM은 재조합 분비 성분 (SC)와 조합함에 의해 분비 항체로 어셈블리된다. 바람직하게, 상기 조성물은 2:1의 질량비로 IgA 및 IgM을 포함한다.

또 다른 특정 구현예에서, 상기 조성물은 적어도 90%, 바람직하게 적어도 92%, 보다 바람직하게 적어도 94%, 보다 더 바람직하게 적어도 96%, 가장 바람직하게 적어도 98%의 순도로 IgA를 포함한다. 바람직하게, IgA는 사람 혈장으로부터 정제되지만; IgA의 다른 공급원이 또한 사용될 수 있고, 예를 들어, 밀크, 침샘 또는 다른 IgA-함유 체액이 있다. 또 다른 특정 구현예에서, IgA는 단량체 IgA이다. 또 다른 특정 구현예에서, IgA는 또한 J-쇄를 포함하는 이량체 IgA로 집적되고; 바람직하게 IgA의 적어도 20%, 보다 바람직하게 적어도 30%, 보다 더 바람직하게 적어도 40%, 가장 바람직하게 적어도 50%는 이량체 형태이다. 임의로, IgA 조성물은 추가로 분비 성분 (SC), 바람직하게 재조합적으로-생성된 분비 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 이의 전문이 본원에 참조로 인용된 WO2013/132052에 기재된 바와 같은 조성물 이 사용될 수 있다.

또 다른 특정 구현예에서, 상기 조성물은 IgM을 포함한다. 하나의 구현예에서, 조성물은 IgM 및 IgA를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 조성물은 IgM, 및 J-쇄를 또한 포함하는 이량체 IgA를 포함한다. 임의로, 상기 조성물은 또한 분비 성분, 바람직하게 재조합적으로-생성된 분비 성분을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 조성물은 IgM, IgA 및 IgG를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 76% IgG, 12% IgA 및 12% IgM을 함유할 수 있다.

IgA 및/또는 IgM은 사람 혈장으로부터 제조한다. 바람직하게, IgA 및/또는 IgM은 시험관내에서 분비 성분(SC)과 조합된다. 보다 바람직하게, SC는 사람 분비 성분이다. 보다 더 바람직하게, SC는 포유동물 세포주에서 발현되는 재조합 SC이다.

바람직하게 조성물 중에 적어도 10%의 단백질은 SCIgA (SC와 조합된 IgA)이고, 보다 바람직하게, 상기 조성물 중에 적어도 15%, 18%, 20%, 또는 25%, 보다 더 바람직하게 적어도 30%, 40% 또는 50%의 단백질은 SCIgA이다. 바람직하게 조성물 중에 적어도 10%의 단백질은 SCIgM (SC와 조합된 IgM)이고, 보다 바람직하게, 상기 조성물 중에 적어도 15%, 18%, 20%, 또는 25%, 보다 더 바람직하게 적어도 30%, 40% 또는 50%의 단백질은 SCIgM이다.

바람직하게, 조성물 중에 적어도 10%의 단백질은 SCIgA이고 조성물 중에 적어도 10%의 단백질은 SCIgM이고, 보다 바람직하게 적어도 15%는 SCIgA이고 적어도 15%는 SCIgM이고, 보다 더 바람직하게 적어도 20%는 SCIgA이고 적어도 20%는 SCIgM이다.

에어로졸

본 발명은 만성 폐 질환, 특히 COPD 및/또는 NCFB를 갖는 환자에서 급성 악화의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 조성물에 관한 것이고, 여기서, 상기 조성물은 대상체의 호흡기로 투여된다. 전형적으로, 본 발명의 조성물은 에어로졸로서 대상체의 호흡기에 투여된다. 상기 에어로졸은 폴리클로날 면역글로빈을 포함하는 액체 수성 조성물을 분무시킴에 의해 생성될 수 있다. 또한, 에어로졸은 예를 들어, 건조 분말 흡입 시스템에 의해 생성된 바와 같은 건조 분말 에어로졸일 수 있다[17]. 또한, 연질의 연무 흡입기, 수성 액적 흡입기 또는 가압된 계량된 용량 흡입기 또는 면역글로불린을 환자의 호흡기로 전달하기 위해 적합한 임의의 다른 장치가 사용될 수 있다.

액체 수성 조성물

액체 수성 조성물은 특히 대상체의 호흡기로의 투여를 위한 에어로졸을 형성하기 위한 분무용으로 적합하다. 따라서, 본 발명의 조성물은 일반적으로 액체 수성 형태로 있다. 액체 수성 조성물은 액체 시스템이고, 여기서, 액체 담체 또는 용매는 주로 또는 완전히 물로 이루어진다. 특정 경우에, 액체 담체는 적어도 부분적으로 수혼화성인 하나 이상의 액체의 소분획을 함유할 수 있다.

본 발명은 대상체의 호흡기에 본 발명의 조성물을 투여하는 것에 관한 것이다. 호흡기로의 상기 투여를 위해, 고농도의 폴리클로날 면역글로불린을 사용하는 것이 바람직하다. 일반적으로, 고용량의 폴리클로날 면역글로불린은 효능을 증가시키기위해 유용하고, 또한 예를 들어, 가능한한 짧게 분무 시간을 유지하기 위해 분무기에 의해 투여되는 경우 가능한한 많이 투여될 용적을 최소화하기 위해 유용하다. 분무 시간을 가능한한 짧게 유지하는 것은 특히 대상체 순응도를 유지하기 위해 유용하다. 따라서, 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 예를 들어, 약 20 내지 약 200mg/mL의 고농도의 폴리클로날 면역글로불린을 갖는다. 폴리클로날 면역글로불린의 농도는 20 내지 190 mg/mL, 20 내지 180 mg/mL, 20 내지 170　mg/mL, 20 내지 160 mg/mL, 20 내지 150 mg/mL, 30 내지 200 mg/mL, 30 내지 190 mg/mL, 30 내지 180 mg/mL, 30 내지 170 mg/mL, 30 내지 160 mg/mL, 30 내지 150 mg/mL, 40 내지 200　mg/mL, 40 내지 190 mg/mL, 40 내지 180 mg/mL, 40 내지 170 mg/mL, 40 내지 160 mg/mL, 40 내지 150 mg/mL 범위일 수 있다. 본 발명의 조성물을 위해 적합한 폴리클로날 면역글로불린 농도는 20 내지 140 mg/mL, 20 내지 130 mg/mL, 20 내지 120 mg/mL, 30 내지 140 mg/mL, 30 내지 130 mg/mL, 30 내지 120 mg/mL, 40 내지 140 mg/mL, 40 내지 130 mg/mL, 40 내지 120 mg/mL, 50 내지 140 mg/mL, 50 내지 130 mg/mL 또는 50 내지 120　mg/mL의 범위이고; 특히, 폴리클로날 면역글로불린의 농도는 약 50　mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 70 mg/mL, 약 80 mg/mL, 약 90 mg/mL, 약 100　mg/mL, 약 110 mg/mL, 또는 약 120 mg/mL이다.

상대적으로 높은 농도는 낮은 충전 용적 및 짧은 분무 시간을 가능하게 하고, 따라서 치료의 치료학적 효능을 보장하기 위해 중요하다. 특정 바람직한 구현예에서, 조성물은 약 50　mg/mL 내지 약 100　mg/mL의 농도로 폴리클로날 IgG를 포함한다. 가장 바람직하게, 조성물은 약 100　mg/mL의 농도로 폴리클로날 IgG를 포함한다.

전형적으로, 본 발명의 액체 수성 조성물은 하나 이상의 안정화제를 함유한다. 액체 면역글로불린 제형을 제형화하는 경우 통상적으로 접하게 되는 문제는 면역글로불린이 적당한 첨가제로 충분히 안정화되지 않는 경우 응집하여 침전물을 형성하는 경향이 있다는 것이다. 따라서, 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 안정화제, 예를 들어, 아미노산, 예를 들어, 프롤린, 글라이신 및 히스티딘, 또는 사카라이드 또는 슈가 알콜, 또는 단백질, 예를 들어, 알부민, 또는 이의 조합물을 포함한다. 이들 첨가제 각각은 액체 수성 제형 중에 면역글로불린을 안정화시키는 것으로 공지되어 있고 본 발명의 액체 수성 조성물에 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 안정화제를 포함하고, 상기 안정화제는 프롤린, 글라이신 또는 히스티딘이고, 바람직하게는 프롤린이다.

액체 수성 조성물에서 면역글로불린 농도의 증가는 점도의 비선형 증가를 유도한다. 높은 점도에 의해 유발되는 분무 문제를 회피하기 위해, 프롤린은 특히 본 발명의 조성물의 비교적 낮은 점도가, 폴리클로날 면역글로불린의 농도가 WO2011/095543에 기재된 바와 같이 높다하더라도 성취될 수 있기 때문에 안정화제로서 적합한 것으로 밝혀졌다. 프롤린은 한편으로는 액체 수성 조성물에서 폴리클로날 면역글로불린의 목적하는 안정성을 제공하고 다른 한편으로는 조성물의 점도를 감소킴에 따라서 작은 액체 용적의 분무가 높은 폴리클로날 면역글로불린 농도로 가능하게 하여 분무에 의한 신속하고 효능적인 치료를 유도한다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 특히 본 발명의 조성물이 액체 수성 형태로 있는 경우 프롤린을 포함한다.

L-프롤린은 특히 이것이 정상적으로 사람 신체에 존재하고 매우 선호될 수 있는 독성 프로필을 갖기 때문에 본 발명의 조성물에 사용하기에 적합하다. L-프롤린의 안전성은 반복 투여 독성 연구, 생식 독성 연구, 돌연변이유발 연구 및 안전성 약리학 연구에서 조사되었고 어떠한 부작용이 주지되지 않았다. 따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 L-프롤린을 포함한다. 일반적으로, 본 발명의 조성물은 프롤린, 바람직하게 L-프롤린을 약 10 내지 약 1000 mmol/L, 예를 들어, 약 100 내지 약 500 mmol/L, 특히, 약 250 mmol/L 범위로 포함한다.

바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 약 210-290 mmol/L의 L-프롤린, 특히 250 mmol/L의 L-프롤린을 함유한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 폴리클로날 IgG 및 약 250 mmol/L의 L-프롤린을 포함한다.

하나의 구현예에서, 폴리클로날 면역글로불린 및 프롤린을 포함하는 본 발명의 액체 수성의 점도는 1 mPa-s 내지 17 mPa-s (20.0°C +/- 0.1°C의 온도에서)의 범위이다. 특정 구현예에서, 100　mg/mL 폴리클로날 IgG 및 250 mmol/L의 L-프롤린을 포함하는 조성물의 점도는 20.0°C +/- 0.1 °C의 온도에서 약 3 mPa-s이다.

전형적으로, 폴리클로날 IgG를 포함하고 프롤린을 함유하는 본 발명의 조성물은 pH 4.2 내지 5.4, 바람직하게 4.6 내지 5.0, 가장 바람직하게 약 4.8을 갖고, 이는 추가로 제제의 높은 안정성에 기여한다.

프롤린의 사용은 하나의 단일 제제를 사용함에 의해 제형의 안정성이 증가되고 조성물의 점도가 감소된 조성물이 제조될 수 있게 한다. 이것은 메쉬 분무기로 에어로졸을 생성하기 위한 방법에 특히 유용한 조성물을 유도한다.

본 발명의 조성물은 일반적으로 폴리클로날 면역글로불린에 추가로 성분들을 포함하고, 예를 들어, 이것은 전형적으로 하나 이상의 추가의 약제학적 담체(들) 및/또는 부형제(들)을 포함한다. 상기 성분의 논의는 참조 문헌에서 가용하다[18].

하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 또한 조성물의 특징 및/또는 에어로졸의 특징을 최적화하는 작용을 하는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 상기 부형제의 예는 pH를 조정하거나 완충시키기 위한 부형제, 삼투압을 조정하기 위한 부형제, 항산화제, 계면활성제, 지속 방출 또는 지연 국소 체류를 위한 부형제, 맛 차폐제, 감미제 및 향제이다. 이들 부형제는 최적의 pH, 삼투압, 점도, 표면 장력 및 맛을 수득하기 위해 사용되고, 이는 제형 안정성, 에어로졸화, 내약성 및/또는 흡입시 제형의 효능을 지지한다.

본 발명의 액체 수성 조성물은 전형적으로 약 60 내지 75 mLM/m, 바람직하게 약 64 내지 71 mLM/m의 표면 장력을 갖는다. 계면활성제는 본 발명의 조성물에 첨가될 수 있다. 이들은 조성물에서 (즉, 저장 동안에 및 저장소에서) 및 분무화 동안에 (즉, 분무기의 메쉬를 통과하는 동안 및 통과 후) 폴리클로날 면역글로불린의 응집률을 제어하는 것을 도와주어 에어로졸 내 폴리클로날 면역글로불린의 활성에 대해 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 계면활성제, 예를 들어, 폴리소르베이트, 예를 들어, 폴리소르베이트 80을 포함하는 액체 수성 조성물이다.

분무화

본 발명은 대상체의 호흡기에 상기 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 조성물은 분무기를 사용하여 본 발명의 액체 수성 조성물의 분무화에 의해 생성된 에어로졸로서 대상체의 호흡기에 투여될 수 있다.

분무기는 액체 물질을 분산된 액체상으로 에어로졸화할 수 있는 장치이다. 에어로졸은 연속적이고 여기에 분산된 가스 상, 고체 또는 액체 입자, 전형적으로 액체 수성 조성물의 분무화에 의해 생성된 경우 액체 입자를 포함하는 시스템이다.

본 발명의 액체 수성 조성물은 메쉬 분무기 또는 초음파 분무기 또는 제트 분무기에 의해 또는 본 발명의 조성물을 분무시킬 수 있는 임의의 다른 장치에 의해 분무될 수 있다. 하나의 구현예에서, 메쉬 분무기를 사용하여, 대상체로의 투여용 에어로졸을 생성할 수 있다. 예를 들어, 전문이 본원에 참조로 인용되는 WO 2015/150510에 기재된 바와 같은 메쉬 분무기 및 생성된 에어로졸이 사용될 수 있다.

분산된 액체 상(에어로졸)은 필수적으로 액체 액적으로 이루어진다. 분산된 상의 액적은 액체 환경 중에 폴리클로날 Ig, 예를 들어, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물을 포함한다. 액체 환경은 하기에 추가로 기재된 바와 같은 추가의 부형제의 존재 또는 부재하에 주로 수성상이다. 당업자는 본원에 기재된 바와 같은 액체 조성물과 관련하여 특성 및 선호도가 또한 이로부터 생성된 에어로졸의 분산된 상에 적용될 수 있고 이와 반대로 적용될 수 있음을 이해할 것이다.

2개의 값은 실험적으로 결정될 수 있고 생성된 에어로졸의 입자 크기 또는 액적 크기를 기재하기 위해 유용할 수 있다: 질량 메디안 직경 (MMD) 및 질량 메디안 공기역학적 직경(MMAD). 2개의 값 간의 차이는 MMAD가 물의 밀도 (등가의 공기역학)로 정규화된 것이다.

MMAD는 임팩터, 예를 들어, 앤더슨 캐스케이드 임팩터 (ACI) 또는 차세대 임팩터(NGI)에 의해 측정될 수 있다. 또한, 레이저 회절 방법, 예를 들어, Malvern MasterSizer X™을 사용하여 MMD를 측정할 수 있다.

본 발명의 방법에 의해 생성된 에어로졸의 분산된 상은 전형적으로 입자 크기, 예를 들어, 바람직하게 10 μm 미만, 바람직하게 약 1 내지 약 6　μm, 보다 바람직하게 약 1.5 내지 약 5 μm 및 보다 더 바람직하게 약 2 내지 약 4.5 μm의 MMD를 나타낸다. 또한, 상기 입자 크기는 바람직하게 10 μm 미만, 바람직하게 약 1 내지 약 6　μm, 보다 바람직하게 약 1.5 내지 약 5 μm 및 보다 더 바람직하게 약 2 내지 약 4.5 μm의 MMAD를 가질 수 있다. 에어로졸의 분산된 상을 기재하는 또 다른 파라미터는 에어로졸화된 액체 입자 또는 액적의 입자 크기 분포이다. 기하학적 표준 편차 (GSD)는 생성된 에어로졸 입자 또는 액적의 입자 또는 액적 크기 분포의 폭을 측정하는데 자주 사용된다. 상기된 범위 내 정확한 MMD의 선택은 에어로졸의 침적을 위한 표적 영역 또는 조직을 고려해야만 한다. 예를 들어, 최적의 액적 직경은 경구, 비강 또는 기관 흡입이 의도되는지의 여부 및/또는 상부 및/또는 하부 호흡기 전달 (예를 들어, 구강 인두, 인후, 기관, 기관지, 폐포, 폐, 코, 및/또는 부비동으로)이 어디에 집중되는지의 여부에 따라 상이하다. 추가로, 연령에 따른 해부학적 구조(예를 들어, 코, 입 또는 기도 구조) 및 호흡기 질환 및 대상체의 병태 및 이들의 호흡 패턴은 하부 또는 상부 호흡기로의 약물 전달을 위한 최적의 입자 크기 (예를 들어, MMD 및 GSD)를 결정하는 중요한 인자에 속한다.

일반적으로, 2mm 미만의 내부 직경에 의해 정의되는 작은 기도는 폐 용적의 거의 99%를 차지하고 따라서 폐 기능에서 중요한 역할을 수행한다. 폐포는 산소와 이산화탄소가 혈액과 교환되는 심부 폐 내 부위이다. 일부 바이러스 또는 세균에 의해 유도된 폐포에서의 염증은 부위 상에 유체 분비를 유도하고 폐에 의한 산소 흡수에 직접적인 영향을 미친다. 에어로졸을 사용한 심부 폐 기도의 치료학적 표적화는 5.0 μm 미만, 바람직하게 4.0 μm 미만, 보다 바람직하게 3.5 μm 미만 및 보다 더 바람직하게 3.0 μm 미만의 MMD를 갖는 에어로졸을 필요로 한다. 상기 MMD 값은 따라서 본 발명에 사용하기 위해 고려된다.

호흡기로의 에어로졸 전달을 위해, 에어로졸은 10.0 μm 미만, 바람직하게 5.0 μm 미만, 보다 바람직하게 3.3 μm 미만, 및 보다 더 바람직하게 2.0 μm 미만의 MMD를 갖는다. 바람직하게, MMD는 (액적 크기는) 약 1.0 내지 약 5.0 μm의 범위이고, 크기 분포는 2.2 미만, 바람직하게 2.0 미만, 보다 바람직하게 1.8 미만 또는 보다 더 바람직하게 1.6 미만의 GSD를 갖는다. 상기 입자 크기 및 입자 크기 분포 파라미터는 특히 에어로졸화된 약물의 양에 상대적으로, 기관지 및 세기관지를 포함하는, 사람의 호흡기 (예를 들어, 폐)에서 높은 국소 약물 농도를 성취하기 위해 유용하다. 이와 관련하여, 심부 폐 침적이 성인 및 어린이의 중앙 기도에서의 침적 보다 작은 MMD를 필요로 하고, 유아 및 아기에 대해서는 약 1.0 내지 약 3.3μm 범위의 보다 더 작은 액적 크기 (MMD)가 보다 바람직하고 2.0 μm 미만의 범위는 보다 더 바람직하다. 따라서, 에어로졸 치료요법에서, 5 μm 보다 작은 액적 분획 (성인에 의해 호흡될 수 있는 분획을 나타내는) 및 3.3 μm 보다 작은 액적 분획 (어린이에 의해 호흡될 수 있거나 성인의 보다 심부의 폐에서 침적되는 분획을 나타내는)을 평가하는 것은 통상적이다. 또한, 2 μm 보다 작은 액적의 분획은 흔히 이것이 최적으로 성인 및 어린이의 말단 세기관지 및 폐포에 도달할 수 있고 유아 및 아기의 폐를 침투할 수 있는 에어로졸의 분획을 나타내는 것으로 평가된다.

본 발명에서, 5 μm 보다 작은 입자 크기를 갖는 액적의 분획은 바람직하게 65% 초과, 보다 바람직하게는 70% 초과 및 보다 더 바람직하게 80% 초과이다. 3.3 μm 보다 작은 입자 크기를 갖는 액적의 분획은 바람직하게 25% 초과, 보다 바람직하게 30% 초과, 보다 더 바람직하게 35% 초과 및 여전 보다 바람직하게 40% 초과이다. 2 μm 보다 작은 입자 크기를 갖는 액적의 분획은 바람직하게 4% 초과, 보다 바람직하게는 6% 초과 및 보다 더 바람직하게 8% 초과이다.

에어로졸은 또한 호흡 자극 실험에서 결정된 바와 같이 이의 전달된 용량(DD)을 특징으로 할 수 있다. 전달된 용량은 예를 들어, 레이저 산란(예를 들어, Malvern MasterSizer X™)에 의해 또는 임팩터 (예를 들어, 앤더슨 캐스케이드 임팩터 - ACI, 또는 차세대 임팩터 - NGI)에 의해 측정된 호흡가능한 분획(RF)을 기준으로 호흡가능한 용량(RD)을 계산하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 방법을 성인 호흡 패턴 (사인곡선 흐름, 500 mL의 1회 호흡량, 15 호흡/min)을 갖는 호흡 시뮬레이션 실험에 적용하고 (예를 들어, 제조원(Copley)로부터 BRS3000 또는 제조원(PARI)으로부터 Compass Ii™와 같은 호흡 시뮬레이터를 사용하여) 2 mL의 조성물(예를 들어, 200 mg Ig, 200 mg IgG, 200mg IgA, 200mg IgM 또는 이의 조합물)의 메쉬 분무기에 충전하는 경우, 전달된 용량(DD)은 바람직하게 40% 초과 (80 mg Ig, 예를 들어, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물), 보다 바람직하게 45% 초과 (90 mg Ig, 예를 들어, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물) 및 보다 더 바람직하게 50% 초과(100 mg Ig, 예를 들어, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물)이다.

상부 기도, 특히, 코, 비강 및/또는 비부비동 점막, 부비동개구 복합체, 및 부비강의 치료를 위해, 약 5.0 μm 미만, 또는 약 4.5 μm 미만, 또는 약 4.0 μm 미만, 또는 약 3.3 μm 미만 또는 약 3.0 μm 미만의 MMD는 특히 적합하다.

상부 기도로의 적용을 위해 생성된 에어로졸의 적합성은 WO2009/027095에 기재된 사람 비강 주조 모델과 같은 비강 흡입 모델에서 평가될 수 있다. 코로의 에어로졸 전달을 위해, 예를 들어, 제조원(PARI)으로부터의 Sinus™ 장치 (제트 분무기) 및 또한 메쉬 분무기(Vibrent™ technology의 프로토타입)가 존재한다.

본 발명에 사용되는 분무기는 메쉬 분무기일 수 있다. 바람직하게, 상기 메쉬 분무기는 진동 막 분무기이다. 후자 유형의 분무기는 분무화를 위한 액체가 충전된 저장소를 포함한다. 분무기를 작동하는 경우, 액체는 진동하도록 만들어진 (예를 들어, 압전 요소에 의해) 메쉬에 공급된다. 진동 메쉬의 한 측면에 존재하는 액체는 이로써 진동 메쉬 (또한 “공극” 또는 “구멍”으로서 언급되는)에서 개구부를 통해 수송되어 진동 메쉬 (예를 들어, 제조원 (PARI)로부터의 eFlow rapid 및 eRapid, 제조원(Health and Life)으로부터 HL100 및 제조원(Aerogen)으로부터 AeronebGo 및 AeronebSolo)의 다른 측면 상에서 에어로졸 형태를 취한다. 상기 분무기는 “활성 막 분무기”로서 언급될 수 있다.

다른 유용한 메쉬 분무기에서, 상기 조성물은 막 보다는 차라리 액체를 진동시킴에 의해 분무될 수 있다. 상기 진동 유체 메쉬 분무기는 분무될 액체가 충전된 저장소를 포함한다. 분무기를 작동하는 경우, 액체는 진동하게 되는 (즉, 예를 들어, 압전 요소에 의해 진동하는) 액체 공급 시스템을 통해 막으로 공급된다. 상기 액체 공급 시스템은 저장소의 진동 백 월(vibrating back wall)(예를 들어, AerovectRx™ Technology, Pfeifer Technology) 또는 진동 액체 수송 슬라이더(예를 들어, 제조원(Respironics)으로부터 I-Neb™ 장치 또는 제조원 (Omron)으로부터 U22™ 장치)일 수 있다. 이들 분무기는 “수동 메쉬 분무기”로서 언급될 수 있다.

상이한 막 유형은 메쉬 분무기와 함께 액체의 분무를 위해 가용하다. 이들 막은 상이한 액적 크기 (MMD 및 GSD의)로 에어로졸을 생성하는 상이한 공극 크기를 특징으로 한다. 조성물의 특징 및 목적하는 에어로졸 특징에 의존하여, 상이한 막 유형(즉, 상이한 변형된 메쉬 분무기 또는 에어로졸 생성기)이 사용될 수 있다. 본 발명에서, 2.0 μm 내지 5.0　μm의 범위, 바람직하게 3.0 μm 내지 4.9 μm의 범위 및 보다 바람직하게 3.4　μm 내지 4.5 μm의 범위의 MMD를 갖는 에어로졸을 생성하는 막 유형을 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 2.8 μm 내지 5.5　μm의 범위, 바람직하게 3.3 μm 내지 5.0 μm의 범위 및 보다 바람직하게 3.3　μm 내지 4.4 μm의 범위의 MMD를 갖는 에어로졸, 예를 들어, 등장성 식염수 (NaCl 0.9%)를 생성하는 에어로졸 생성기 장치에 구축된 막 유형을 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 2.8 μm 내지 5.5　μm의 범위, 바람직하게 2.9 μm 내지 5.0 μm의 범위 및 보다 바람직하게 3.8　μm 내지 5.0 μm의 범위의 MMD를 갖는 에어로졸, 예를 들어, 등장성 식염수를 생성하는 에어로졸 생성기 장치에 구축된 막 유형을 사용하는 것이 바람직하다.

치료가 기관지 또는 심부 폐와 같은 보다 하부의 호흡기를 표적화하기 위해 의도된 경우, 압전 천공된 메쉬-유형 분무기가 에어로졸을 생성하기 위해 선택되는 것이 특히 바람직하다. 적합한 분무기의 예는 수동 메쉬 분무기, 예를 들어, l-Neb™, U22™, U1™, Micro Air™, 초음파 분무기, 예를 들어, Multisonic™, 및/또는 활성 메쉬 분무기, 예를 들어, HL100™, Respimate™, eFlow™ Technology 분무기, AeroNeb™, AeroNeb Pro™, AeronebGo™, 및 AeroDose™ 장치 계열, 및 프로토타입 Pfeifer, Chrysalis (Philip Morris) 또는 AerovectRx™ 장치를 포함한다. 약물을 보다 하부의 호흡기에 표적화하기 위해 특히 바람직한 분무기는 예를 들어, eFlow™ 분무기 (제조원(PARI, Germany)으로부터 가용한 전기 진동 막 분무기)와 같은 진동 천공된 막 분무기 또는 소위 활성 메쉬 분무기이다. 또한, 수동 메쉬 분무기, 예를 들어, 제조원(Omron)으로부터의 U22™ 또는 U1™ 또는 Telemaq.fr 기술 또는 Ing. Erich Pfeiffer GmbH 기술을 기반으로 하는 분무기가 사용될 수 있다.

보다 상부의 호흡기를 표적화하기 위해 바람직한 메쉬 분무기는 eFlow™ 기술을 사용하여 변형된 시험용 막 분무기와 같은 천공된 진동 막 원리를 통해 에어로졸을 생성하고 또한 목적하는 위치에서 또는 에어로졸 클라우드를 목적하는 위치 (예를 들어, 비부비동 또는 부비동)로 수송하는 동안에 맥동시키도록 (즉, 압력에서의 변동을 진행하는) 맥동 기류를 방출할 수 있는 분무기이다. 상기 유형의 분무기는 에어로졸 클라우드를 수송하는 흐름을 코로 지시하기 위한 코 조각을 갖는다. 상기 변형된 전기 분무기에 의해 전달되는 에어로졸은 상기 에어로졸이 연속 (비-맥동) 방식으로 전달되는 경우 보다 양호하게 비강 또는 부비강에 도달할 수 있다. 맥동 압력 파장은 동시에 적용되는 에어로졸이 이들 공동에 보다 양호하게 분포되고 침적되도록 부비강의 보다 강력한 진동을 성취한다.

보다 특히, 대상체의 상부 호흡기를 표적화하기 위해 바람직한 분무기는 약 5리터/min 미만의 효과적인 유속으로 에어로졸을 생성하고 약 10 내지 약 90Hz 범위의 주파수로 에어로졸의 압력 맥동을 수행하기 위한 수단을 동시에 작동시키기에 적합한 분무기이고, 상기 효과적인 유속은 이것이 대상체의 호흡계에 진입함에 따른 에어로졸의 유속이다. 상기 전기 분무 장치의 예는 WO2009/027095에 기재되어 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에서, 상부 호흡기를 표적화하기 위한 분무기는 에어로졸 클라우드가 목적하는 위치에 도달하는 경우 중단될 수 있는 수송 흐름을 사용하고 이어서 예를 들어, 교대 방식으로 에어로졸 클라우드의 맥동을 개시하는 분무기이다. 세부 사항은 WO2010/097119 및 WO2011/134940에 기재되어 있다.

폐 또는 비부비동 전달을 위해 적합한지에 상관없이, 분무기는 바람직한 생성 속도로 유닛 용량을 에어로졸화할 수 있도록 선택되거나 적합해야 한다. 유닛 용량은 본원에서 단일 투여 동안에 투여될 것으로 지정된 유효량의 활성 화합물, 즉, Ig, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물을 포함하는 액체 수성 조성물의 용적으로 정의된다. 바람직하게, 분무기는 상기 유닛 용량을 적어도 0.1 mL/min의 속도로 또는 조성물의 상대적 밀도가 정상적으로 약 1일 것으로 추정하여 적어도 100mg/min의 속도로 전달할 수 있다. 보다 바람직하게, 분무기는 각각 적어도 0.4 mL/min 또는 400 mg/min의 생성률을 생성할 수 있다. 추가의 구현예에서, 분무기 또는 에어로졸 생성기의 액체 생성률은 적어도 0.50 mL/min, 바람직하게 적어도 0.55 mL/min, 보다 바람직하게 적어도 0.60 mL/min, 보다 더 바람직하게 적어도 0.65 mL/min, 및 가장 바람직하게 적어도 0.7 mL/min이고, 상기 장치는 높은 생성 또는 높은 생성률을 갖는 에어로졸 생성기로 불리운다. 바람직하게, 상기 액체 생성률은 약 0.35 내지 약 1.0　 mL/min 또는 약 350 내지 약 1000　mg/min의 범위이고; 바람직하게, 상기 액체 생성률은 약 0.5 내지 약 0.90 mL/min 또는 약 500 내지 약 800 mg/min의 범위이다. 액체 생성률은 시간 유닛 당 분무된 액체 조성물의 양을 의미한다. 상기 액체는 활성 화합물, 약물, Ig, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물 및.또는 0.9%의 염화나트륨과 같은 대용물을 포함할 수 있다.

분무기의 생성률은 전형적으로 액체 조성물의 짧은 분무 시간을 성취하기 위해 선택되어야만 한다. 명백하게, 분무 시간은 에어로졸화된 조성물의 용적 및 생성률에 의존한다. 바람직하게, 분무기는 유효량의 폴리클로날 Ig, 예를 들어, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물을 포함하는 액체 조성물의 용적을 20분 이하 내에 에어로졸화할 수 있도록 선택되거나 적합해야만 한다. 보다 바람직하게, 유닛 용량에 대한 분무 시간은 15분 이하이다. 추가의 구현예에서, 분무기는 10분 이하 및 보다 바람직하게 6분 이하 및 보다 더 바람직하게 3분 이하의 유닛 용량 당 분무 시간이 가능하도록 선택되고 적합하다. 0.5 내지 5분 범위의 분무 시간이 현재 가장 바람직하다.

본 발명에 따른 분무된 조성물의 용적은 바람직하게 낮아서 짧은 분무 시간을 가능하게 한다. 용량의 용적, 또는 용량 유닛 용적 또는 유닛 용량 용적으로서 언급되는 용적은 하나의 단일 투여 또는 분무기 치료요법 기간 동안 사용되도록 의도된 용적으로서 이해되어야만 한다. 구체적으로, 상기 용적은 0.3 mL 내지 6.0 mL, 바람직하게 0.5 mL 내지 4.0 mL, 또는 보다 바람직하게 1.0 mL 내지 약 3.0 mL의 범위, 또는 보다 더 바람직하게 약 2.0 mL일 수 있다. 잔여 용적이 요구되거나 도움이 되는 경우에, 상기 잔여 용적은 1.0 mL 미만, 보다 바람직하게 0.5 mL 미만, 및 가장 바람직하게 0.3 mL 미만이어야 한다. 효과적으로 분무된 용적은 이어서 바람직하게 0.2 내지 3.0 mL 또는 0.5 내지 2.5 mL의 범위 또는 보다 바람직하게 0.75 내지 2.5 mL 또는 1.0 내지 2.5 mL의 범위이다.

바람직하게, 분무기는 에어로졸을 생성시키는데 적합하고, 여기서, 액체 조성물의 부하된 용량의 주요 분획물은 즉, 높은 생성을 갖도록 에어로졸로서 전달된다. 보다 구체적으로, 상기 분무기는 조성물에서 Ig, 예를 들어, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물의 용량의 적어도 50%를 함유하거나, 다른 말로 저장소에 충전된 액체 조성물의 적어도 50%를 방출하는 에어로졸을 생성하기에 적합하다. 특히, 이의 용량이 이들의 특이성으로 인해 높을 필요가 없는 모노클로날 항체와 비교하여, 폴리클로날 Ig, 예를 들어, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물의 높은 생성을 생성할 수 있는 분무기를 선택하는 것은 중요하다. 본 발명의 방법에 사용된 바와 같은 메쉬 분무기는 폴리클로날 Ig, 예를 들어, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물, 특히 높은 생성률을 갖는 조성물의 에어로졸을 생성할 수 있는 것으로 밝혀졌다.

건조 분말 흡입

본 발명의 조성물은 또한 건조 분말일 수 있다. 다양한 형태의 건조 분말 흡입기가 가용하고, 예를 들어 캡슐 및 다중 용량 건조 분말 흡입기, 단일 투여 형태, 예를 들어, 회전 흡입기, 다중 용량, 예를 들어, Accuhaler 및 디스크 흡입기가 있다. 건조 분말 흡입기는 보다 빈번한 사용을 위해 적합한 사용하기가 용이한 신속 흡입 시스템을 제공함에 의해 유리할 수 있다.

투여

본 발명의 조성물은 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 것이다.

하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 만성 폐 질환(전형적으로 COPD 또는 NCFB)을 갖는 대상체에서 급성 악화의 예방에 사용하기 위한 것이고, 여기서, 상기 조성물은 유지 치료요법으로서 투여된다. 유지 치료요법은 치료요법 개시시 대상체가 연장된 시기 동안 치료요법을 계속함을 의미한다. 예를 들어, 상기 치료요법은 적어도 6개월 동안 계속한다. 전형적으로, 상기 치료요법은 적어도 1년 동안 계속한다.

본 발명의 조성물은 전형적으로 에어로졸로서 대상체의 호흡기에 투여된다. 특히, 에어로졸은 분무기를 사용하여 액체 수성 조성물로부터 생성될 수 있다. 적합한 액체 수성 조성물은 상기 제시되어 있다. 바람직한 구현예에서, 액체 수성 조성물은 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 예를 들어, 약 100 mg/mL의 폴리클로날 면역글로불린 (예를 들어, IgG, IgA, IgM 또는 이의 조합물) 농도를 갖는다.

본 발명의 대상체의 호흡기로의 투여를 위해, 에어로졸을 생성하기 위해 사용되는 액체 수성 조성물은 2-10　mL의 용적으로 투여될 수 있다.

급성 악화, 예를 들어, COPD 또는 NCFB의 급성 악화의 치료 또는 예방 (전형적으로 예방)에 사용하기 위해, 상기 조성물은 치료요법 동안에 48시간 마다 1회, 24시간 마다 1회 또는 12시간 마다 1회 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 12시간 마다 1회 투여된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 24시간 마다 투여된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물은 48시간 마다 투여된다.

급성 악화의 예방 또는 치료 (전형적으로 예방), 예를 들어, COPD 또는 NCFB의 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위해, 약 0.01 g 내지 약 1.5 g의 폴리클로날 면역글로불린의 용량이 사용된다. 본 발명의 조성물의 특히 적합한 용량은 폴리클로날 면역글로불린 약 0.1 g 내지 약 1.5 g, 예를 들어, 약 0.2 g 내지 약 1 g의 용량, 특히, 약 0.2g의 용량이다. 특정 구현예에서, 약 0.2g의 용량은 하루 1회 투여된다.

상기 용량은 급성 악화의 위험, 예를 들어, 호흡기 감염의 위험을 증가시킬 수 있는 인자들에 의존하여 조정될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 투여 용량 및/또는 빈도는 가을 및 겨울 달 동안에, 특히 겨울 달동안에 증가될 수 있다.

또 다른 구현예에서, 에어로졸은 건조 분말 흡입기를 사용하여 건조 조성물로부터 생성될 수 있다. 전형적으로, 1회 투여에서 전달된 용량은 상대적으로 낮을 수 있고, 에를 들어, 약 0.5mg일 수 있지만 대상체는 하루 다중 흡입, 예를 들어, 하루 동안에 1 내지 20회, 바람직하게 2회 내지 약 15회 흡입을 사용할 수 있다.

계절적 투여

본 발명의 치료요법 (예방 또는 치료)은 특히 보다 추운 계절 동안에 유용하고 이는 만성 폐 질환, 전형적으로 COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체에서 호흡기 감염 및 급성 악화율에서의 증가와 관련된다. 하나의 구현예에서, 상기 조성물은 가을 및/또는 겨울 달 동안에 투여된다. 특히, 상기 조성물은 겨울 달 동안에 투여된다. COPD의 급성 악화의 발생률은 계절적 변화를 보여주고 보다 높은 비율은 가을 및 겨울 달 동안이다[19]. 급성 악화에서 상기 증가는 호흡기 감염, 예를 들어, 리노바이러스 감염의 증가된 비율에 의해 유발될 수 있다. 따라서, 가을 및 겨울 달 동안에 조성물의 투여는 증가된 위험 기간 동안에 상기 감염에 대한 보호를 제공한다.

상기 계절적 변화는 COPD를 갖는 대상체에 영향을 미치는 것으로 사료되고 따라서, 예를 들어, 가을 및 겨울 달에, 특히 겨울 달에 상기 계절적 투여는 본원에서 특징으로 하는 COPD를 갖는 임의의 대상체에 대해 유용하다. 호흡기 감염에 의해 유발될 수 있는 COPD와 NCFB, 특히 급성 악화 간의 유사성은 상기 계절적으로 다양한 투여가 NCFB를 갖는 대상체를 위해 유용한 것으로 예상됨을 시사한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "가을 달"은 가을(fall) 또는 가을 (autumn) 동안에 일어나는 것으로서 통상적으로 인지되는 달을 언급한다. 북반구에서, 이들 달은 9월, 10월 및 11월을 포함한다. 남반구에서, 이들 달은 3월, 4월 및 5월을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "겨울 달"은 겨울 동안에 일어나는 것으로서 통상적으로 인지되는 달을 언급한다. 북반구에서 이들 달은 10월, 11월, 12월, 1월 및 2월을 포함한다. 남반구에서, 이들 달은 4월, 5월, 6월, 7월 및 8월을 포함한다.

항생제를 사용한 조합 치료요법

본 발명의 폴리클로날 면역글로불린은 특히 예를 들어, 만성 폐 질환, 전형적으로 COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체에서 세균 호흡기 감염을 예방하거나 치료하기 위해 항생제와 조합하여 투여하기 위해 적합하다.

하나의 구현예에서, 본 발명의 조성물은 세균 감염의 급성 단계 동안에 항생제와 함께 투여되고, 상기 대상체는 항생제 치료요법을 받고, 즉, 상기 조성물은 표준 항생제 치료요법에 추가로, 감염의 처음 2일 동안에, 특히, 처음 3일 동안에, 처음 4일 동안에, 또는 처음 5일 동안에 투여된다.

일반사항

용어 “포함하는(comprising)”은 “이루어진” 뿐만 아니라 “포함하는(including)”을 포괄하고, 예를 들어, X를 “포함하는” 조성물은 전적으로 X로 이루어질 수 있거나, 추가적인 것, 예를 들어 X+Y를 포함할 수 있다. 용어 "실질적으로"는 “완전하게”를 배제하지 않고, 예를 들어, Y가 “실질적으로 부재”인 조성물은 Y가 완전하게 부재일 수 있다. 경우에 따라, 용어 “실질적으로”는 본 발명의 정의로부터 생략될 수 있다.

수치 x와 관련하여 용어 “약”은 임의의 및 평균, 예를 들어, x +10%이다. 본 발명의 조성물은 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 조성물이다. 달리 구체적으로 진술되지 않는 경우, 조성물에 기인하는 효과는 불특정 추가의 성분 보다는 차라리 폴리클로날 면역글로불린에 의해 매개된다.

구체적으로 진술되지 않는 경우, 2개 이상의 성분을 혼합하는 단계를 포함하는 공정은 임의의 특정 혼합 순서를 요구하지 않는다. 따라서, 성분들은 임으의 순서로 혼합될 수 있다. 3개의 성분들이 있는 경우, 2개의 성분들은 서로 조합될 수 있고 이어서 상기 조합물은 제3 성분 등과 조합될 수 있다.

지금 본 발명은 하기의 도면을 참조로 하기 비제한적인 예에서 설명된다:
도 1. 혈장 유래된 Ab 제형은 슈도모나스 아에로기노사(Pseudomonas aeruginosa) (PA)와 상호작용한다. ELISA에 의한 측정시 증가하는 농도의 혈장-유래된 Ab 또는 분비 IgA/M의 코팅된 PA로의 결합.
도 2. 혈장-유래된 IgG 제형과 PA의 연합은 응집을 촉진시킨다. 혈장-유래된 IgG와 연합된 PA의 면역 복합체의 레이저 스캐닝 공초점 현미경 이미지. 세균은 CFSE 및 Cy3 염료를 갖는 IgG로 표지시켰다. 이미지는 2개의 독립적 슬라이드로부터 5 내지 10개의 관찰로부터 수득된 하나의 관찰된 분야를 나타낸다.
도 3. 혈장-유래된 면역글로불린 제형 PA-유도된 LDH 조직 방출. 조직 손상은 MucilAir™의 기저측부 배지에서 LDH 방출을 측정함에 의해 평가하였다. 비히클 또는 혈장 유래된 면역글로불린 제형만을 수용한 비-감염된 트랜스웰은 대조군으로서 작용하였다. PA-감염된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다. 데이터는 3개의 독립적 실험을 나타낸다.
도 4. 혈장-유래된 IgG 제형은 용량-의존성 방식으로 경상피 전기 저항성의 상실을 예방한다. 조직 통합성은 경상피 전기 저항성을 측정함에 의해 평가하였다. 비-감염되고 프롤린 처리된 트랜스웰은 음성 대조군으로서 작용하였고 PA 감염된-트랜스웰은 조직 손상의 양성 대조군으로서 작용하였다. 데이터는 3개의 독립적 실험을 나타낸다.
도 5. 혈장-유래된 IgG 제형은 용량 의존 방식으로 PA-유도된 조직 손상을 예방한다. 파라핀-고정된 MucilAir™ 섹션의 레이저 스캐닝 공초점 현미경 이미지를 획득하고 시토케라틴 및 베타-튜불린의 발현에 대해 분석하였다. 비히클 또는 IgG 제형만을 수용한 비-감염된 트랜스웰은 대조군으로서 작용하였다. 비히클로 처리된 PA-감염된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다. 데이터는 3개의 독립적 실험을 나타낸다.
도 6. 혈장-유래된 면역글로불린 제형은 상피 세포에 의한 PA-유도된 IL-8 방출을 감소시킨다. IL-8은 MucilAir™의 기저측면 배지에서 측정하였다. 비히클 또는 면역글로불린 제형만을 수용한 비-감염된 트랜스웰은 대조군으로서 작용하였다. 프롤린으로 처리된 PA-감염된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다. 데이터는 3개의 독립적 실험을 나타낸다.
도 7. 혈장-유래된 IgG 제형은 용량-의존적 방식으로 상피 세포에 의해 PA-d유도된 IL-8 방출을 감소시킨다. IL-8 분비의 상대적 농도는 24h 동안 10 CFU의 PA에 노출된 경우 MucilAir™에 의해 분비된 IL-8에 대하여 계산하였다. 비히클 또는 면역글로불린 제형만을 수용한 비-감염된 트랜스웰은 대조군으로서 작용하였다. 프롤린으로 처리된 PA-감염된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다. 데이터는 조건 당 3개의 상이한 공여자로부터 MucilAir™를 사용한 하나의 실험을 나타낸다.
도 8. 혈장-유래된 Ab 제형은 상피 세포에 의한 PA-유도된 IL-6 방출을 감소시킨다. IL-6은 MucilAir™의 기저측면 배지에서 측정하였다. 비히클 또는 면역글로불린 제형만을 수용한 비-감염된 트랜스웰은 대조군으로서 작용하였다. 비히클로 처리된 PA-감염된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다. 데이터는 3개의 독립적 실험을 나타낸다.
도 9. 혈장-유래된 Ab 제형은 사람 리노바이러스 C15와 상호작용한다. ELISA에 의한 측정시 증가하는 농도의 혈장-유래된 Ab 또는 분비 IgAM의 코팅된 HRV C15로의 결합.
도 10. 혈장-유래된 Ab는 HRV 발산을 감소시킨다. HRV-C15 게놈의 카피수는 q-PCR을 사용하여 정점의 세척에서 측정하였다. 프롤린으로 처리된 HRV-감염된 트랜스웰은 감염의 양성 대조군으로서 작용하였다. 효율 측정을 위해, 루핀트리비르 처리된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다.
도 11. 혈장-유래된 Ab는 HRV-유도된 조직 손상을 감소시킨다. 조직 통합성은 경상피 전기 저항성을 측정함에 의해 평가하였다. 프롤린으로 처리된 비-감염된 트랜스웰은 음성 대조군으로서 작용하였다. 프롤린으로 처리된 HRV-감염된 트랜스웰은 감염의 양성 대조군으로서 작용하였다. 효율 측정을 위해, 루핀트리비르 처리된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다.
도 12. 혈장-유래된 Ab는 HRV-유도된 점액섬모 제거율 감소를 방지한다. 점액섬모 제거율은 MucilAir™의 정점 표면 상에 부가된 30　μm 직경의 폴리스티렌 마이크로비드의 속도를 측정함에 의해 평가하였다. 프롤린으로 처리된 비-감염된 트랜스웰은 음성 대조군으로서 작용하였다. 프롤린으로 처리된 HRV-감염된 트랜스웰은 감염의 양성 대조군으로서 작용하였다. 효율 측정을 위해, 루핀트리비르 처리된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다.
도 13. 혈장-유래된 면역글로불린 제형은 용량 의존적 방식으로 HRV 증식을 억제한다. HRV-C15 게놈의 카피수는 상이한 면역글로불린 제형의 4 μg/웰, 20 μg/웰, 100 μg/웰 및 500 μg/웰로 처리 후 q-PCR을 사용하여 정점 세척에서 측정하였다. 프롤린으로 처리된 HRV-감염된 트랜스웰은 감염의 양성 대조군으로서 작용하였다. 효율 측정을 위해, 루핀트리비르 처리된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다.
도 14. 혈장-유래된 면역글로불린 제형은 용량 의존적 방식으로 인플루엔자 바이러스 증식을 억제한다. 인플루엔자 바이러스 게놈의 카피수는 상이한 면역글로불린 제형의 4 μg/웰, 20 μg/웰, 100 μg/웰 및 500 μg/웰로 처리 후 q-PCR을 사용하여 정점 세척에서 측정하였다. 프롤린으로 처리된 인플루엔자 바이러스-감염된 트랜스웰은 감염의 양성 대조군으로서 작용하였다. 효율 측정을 위해, 오셀타미비르 처리된 트랜스웰은 양성 대조군으로서 작용하였다.

하기 실시예는 본 발명을 예시하는 역할을 한다.

하기 실시예에 포함된 연구는 기도 조직상으로 전달된 면역글로불린이 조합된 항미생물 (면역 배제) 및 소염 효과를 가질 수 있고, 따라서 COPD 및 NCFB와 같은 만성 폐 질환을 앓는 대상체에서 악화, 특히 감염 관련 악화의 효과적인 치료 또는 예방을 위해 매력적인 선택 사항이다. 특히, 만성 감염 및 급성 악화를 예방하기 위해 이들 질환을 갖는 대상체에서 유지 치료요법을 위해 적합하다.

미생물에 의한 콜로니화 및 가능한 진입 및 공격에 대한 점막 표면의 보호는 항시성 비-특이적 물질 (점액, 리소자임 및 데펜신)의 조합에 의해 그리고 또한 체액 수준에서 분비 Ig (Sig)를 포함하는 특이적 면역 기전에 의해 제공된다[20; 21]. 생체내, 감염에 대한 실험 및 임상 내성은 점막 표면에서 면역학적 장벽으로서 작용하는 특이적 분비 IgA (SIgA) 항체 (Ab)와 상호관련될 수 있다[22;23]. 점막 표면에서 병원체의 응집, 고정화 및 중화는 다가의 SIgA에 의해 촉진되는 것으로 사료된다[24;25]. IgA-결핍 개체에서 SIgA의 대용물로서 작용하는 SIgM은 유사한 보호 기전을 통해 작용하는 것으로 나타난다[26].

폴리오바이러스, 살모넬라 또는 인플루엔자와 같은 몇몇 병원체의 경우, 점막 감염에 대한 보호는 허가된 백신을 사용한 활성 점막 면역화에 의해 유도될 수 있다. 그러나, 대다수의 점막 병원체에 대해, 어떠한 활성 점막 백신에 대해서 가용하지 않다. 또한, 보호 수준의 Ab는 직접적으로 수동적 면역화에 의해 점막 표면으로 전달될 수 있다. 자연적으로, 이것은 생리학적으로 모계 항체의 밀크를 통한 이들의 자손으로의 전달에 의해 많은 포유동물 종에 존재한다[27]. 수동적 점막 면역화를 사용한 사람 및 동물 연구는 경구, 비강내, 자궁내 또는 폐 점안에 의해 투여되는 pIgA 및 SIgA 항체 분자가 세균 및 바이러스 감염을 예방하거나, 감소시키거나 치유할 수 있음을 입증하였다[28]. 그러나, 점막 표면에서 천연적으로 발견되는 분비 형태의 IgA는 드물게 사용되고, SIgA의 대량 생산은 지금까지 가능하지 않다. 생물공학적 방법을 사용한 SIgA의 작제는 해결 과제이지만 상기 분자는 중요한 임상 적용을 가질 수 있다[29]. 또한 분비 성분-함유 IgM에 동일하게 적용된다.

혈장-유래된 면역글로불린은 잠재적으로 치명적 감염으로부터 면역결핍을 갖는 환자를 보호하기 위해 수십년 동안 사용되어 왔다[30]. 혈장-유래된 면역글로불린은 일반적으로 IgG에 대해 고도로 순수하다. 그러나, 제형 (예를 들어, Pentaglobin^TM)에 IgM이 집적된 IgG 제품은 거의 없다. 혈장-유래된 면역글로불린의 전달은 정맥내 또는 피하이고 이는 신체를 통한 면역글로불린의 전신 분포를 보장한다. Ig 대체 치료요법은 면역결핍을 갖는 환자에서 폐렴 발생률을 저하시키는 것으로 나타났지만, 이들은 기관지 감염 뿐만 아니라 상부 기도 감염에 제한된 영향을 갖는 것으로 보인다. 혈장-유래된 면역글로불린의 국소 적용은 전신 Ig 전달을 증가시킬 필요 없이 점막 표면에 보다 높은 Ig 함량을 지지할 수 있다.

HRV 및 PA는 COPD 및 NCFB 악화에서 이들의 주요 역할 때문에 상피 조직 감염을 예방하는 혈장-유래된 면역글로불린의 효능을 시험하기 위해 선택되었다. 사람에서 상황을 보다 양호하게 모방하기 위해, 사람 1차 세포 기반 기도 모델인 MucilAir™ (Epithelix Sarl, Geneva)을 사용하였다. MucilAir™는 시험관내 재구성된 사람 기도 상피의 세포 모델이다. MucilAir™-풀은 각각 14개의 상이하거나 특유의 공여자(들)로부터 단리된 비강 또는 기관지 세포의 혼합물로 구성된다. 기체-액체 인터페이스에서 배양된, 상기 모델은 높은 경상피 전기 저항성, 섬모 박동 및 점액 생성을 나타내고, 이는 이것이 생체내 존재하는 바와 같이 상피 조직의 완전한 기능을 입증한다. 락테이트 데하이드로게나제 (LDH) 방출 뿐만 아니라 사이토킨 방출(예를 들어, IL-8 및 IL-6)은 감염 동안에 검출될 수 있고, 이는 감염이 상기 모델에서 염증 및 조직 손상과 어떻게 관련되어 있는지를 반영한다.

재료 및 방법

기도의 감염은 기도 상피의 정점 측면 상에 병원성 세균 및 바이러스의 침적과 함께 개시한다. 조직에 도달하기 위해, 바이러스는 상기 세포를 감염시키고 세균은 외독소의 분비를 통해 세포를 손상시키는 경향이 있다. 슈도모나스 아에루기노사 감염의 모델은 조직 손상을 예방하는 혈장 유래된 면역글로불린의 효능을 시험하기 위해 사용되었다.

세균 균주

상기 모델을 위해 사용된 슈도모나스 아에루기노사(PA)는 감염성 질환 연구소(Institute of Infectious Disease) (University of Bern, Switzerland))로부터 수득된 임상 단리물이다. PA는 사람에서 질환을 유발하는 병원성 유기체이고 폐 감염에 관여한다. PA는 혈액 한천 페트리 디쉬 상에서 배양하였다. 콜로니를 선택하고 뇌 심장 주입(BHI) 배지에서 37°C에서 24시간 동안 및 분당 회전 (RPM) 400으로 배양하였다. 다음 날, 배양물은 새로운 BHI 배지와 1:10으로 희석하고 37°C에서 및 400　rpm에서 추가의 시간 동안 위치시켰다. 이어서 OD를 측정하고 세균의 수는 다중 배양 사전 실험으로 작성된 OD/세균 부하 곡선으로부터 평가하였다. 분취액은 투여 전에 추가의 희석을 위해 수거하고 제2 분취액은 혈액 한천 플레이트 상에 추가로 분주하기 위해 수거하여 세균 부하량을 정확하게 입증하였다.

바이러스 종

리노바이러스 C15는 제네바 병원(Hospital of Geneva)으로부터 수득된 임상 분리물 (S07-09-08-U로 명명)이다. 바이러스 스톡은 MucilAir™ 배양물에서 생성하였고 배양 배지로 희석하고, 이들은 정제되지 않거나 농축되지 않는다.

용량-반응 연구를 위해, 리노바이러스 C15 (2009) 및 인플루엔자 A/스위스/7717739/2013 (H1N1)는 문헌 [31]에 기재된 바와 같은 임상 표본으로부터 MucilAir™ 상에 직접 단리하였다. 실험을 위한 바이러스 스톡은 MucilAir™상에서 생성하였고, 배양 배지와 함께 정점 세척액을 수거하였다. 수일의 생성물을 풀링하고 qPCR에 의해 정량하고, 분취하고 -80 °C에서 저장하였다.

조직

MucilAir™ (Epithelix Sarl, Geneva)를 사용하여 사람 기관지 조직을 모방하였다. 각각의 연구 그룹을 위해, 3개의 MucilAir™ 트랜스웰을 사용하였고, 각각의 트랜스웰은 하나의 특유의 공여자 또는 용량-반응 연구에서 사용되는 14명의 공여자의 혼합물로부터 기원한다. MucilAir™의 배양물은 기체-액체 인터페이스에서 수행하였다. 기저측면에 사용된 배지는 MucilAir™ 배양 배지(Epithelix Sarl, Geneva)이고, 이는 성장 인자 및 페놀 레드를 함유한다. 이것은 혈청을 함유하지 않는다.

슈도모나스 아에루기노사 감염 모델 및 치료

PA를 사용한 감염 모델은 10 μL 용적 하에 하나의 MucilAir™ 트랜스웰의 정점 측면상에 PA의 10개 콜로니 형성 유닛 (CFU) 정도로 낮은 침적을 기준으로 한다. 24h 동안, PA는 성장하여 >10⁹ CFU/트랜스웰에 도달한다. 감염은 락테이트 데하이드로게나제 (LDH) (조직 손상과 관련된) 및 IL-8 및 IL-6와 같은 염증 촉진 분자의 방출을 유도한다. 조직 손상은 또한 조직내 구멍의 출현 및 경상피 전기 저항성 상실에 의해 입증된다.

일부 실험에서, 면역글로불린은 세균에 앞서 10분 전에 또는 동시에 침적시켰다. 면역글로불린은 10 μL 최종 용적으로 적용하였다. 면역글로불린의 효과는 비히클 용액(25 mM 프롤린)과 비교하였다.

사람 리노바이러스 C15 및 인플루엔자 H1N1 감염 모델 및 치료

t=0에서, 개념 증명 실험에서 15 μL의 3.8 x10⁷ 게놈 카피수/mL HRV C15 (임상 종: S07-09-08-U) 스톡 용액(도 10) 및 용량-반응 연구에서 HRV 및 인플루엔자 H1N1 둘다에 대한 10 μL의 1.0 x 10⁸ 게놈 카피수/mL(도 13 & 14)는 34°C에서 3시간동안 및 5% CO2에서 MucilAir™의 정점 측면 상에 적용하였다. 면역글로불린은 MucilAir™의 정점 표면 상에 5 μL 중에 바이러스와 동시에 적용하였고 3.5 및 24시간에 새롭게 하였다. 면역글로불린의 효과는 비히클 용액(25 mM 프롤린)과 비교하였다. 접종 후 3시간에, 상피는 PBS( Ca2+/Mg2+를 갖는)로 3회 세척하여 접종물을 세정하였다.

200 μL MucilAir™ 배양 배지를 사용한 세포 부재 정점 세척액 (20분)을 접종 후 3.5시간에 이어서 24, 48시간에 수거하고 -80°C에서 저장하였다.

면역글로불린

사람 혈장-유래된 IgG 제제 (IgPro10, Privigen)는 문헌[32]에 보고된 바와 같이 제조하였다. IgA 및 IgM을 함유하는 제제는 사람 혈장 기원의 IgG의 대량 제조에 사용되는 이온 교환 크로마토그래피 측면 분획물로부터 수득하였다. IgA 및 IgM을 함유한 용출 분획물을 농축시키고 접선 유동 여과(tangential-flow filtration) (TFF; Pellicon XL Biomax 30, Merck Millipore)에 의해 PBS 중에서 50g/l의 단백질로 재완충시켰다. 2:1의 질량 비율로 IgA 및 IgM을 함유한 수득한 IgA/M 용액을 추가로 시험관내 IgA/M을 재조합 사람 SC와 조합함에 의해 SCIgA/M으로 가공하였다[33].

ELISA

감염 시 사람 기관지 조직에 의한 염증 촉진 사이토킨 방출은 감염 후 24시간에 수거된 기저측면 배지의 분취액에서 측정하였다. 특히, IL-8 (RnD Systems; DY208) 및 IL-6 (RnD Systems; DY206)을 평가하였다. 측정은 사용자 매뉴얼에 따라 수행하였다.

PA ELISA에 대해, PA는 BBL Todd Hewitt 브로쓰 배지에서 37°C에서 밤새 배양하였다. PA는 10분 동안 원심분리(3220g)에 의해 펠렛화하였다. 상등액을 제거하고 펠렛은 0.1M 카보네이트 완충액(pH 9.6)으로 2회 세척하였다. 펠렛은 카보네이트 완충액 중에 재현탁시키고 50l/웰 (4 x 10⁶ 세균)을 폴리소르베이트 플레이트 상에 첨가하였다. 코팅은 2-8°C에서 밤새 수행하였다. 다음 날, 웰은 PBS/Tween (0.05%)으로 3회 세척하고 실온에서 1.5h 동안 PBS/FCS (2.5%)로 차단하였다. 웰은 이어서 PBS/Tween (0.05%)으로 3회 세척하였다. Ig 제형 (0.7 μg/ml-500　μg/ml)은 실온에서 2시간 동안 웰에 첨가하였다. PBS/Tween (0.05%)으로 2회 세척한 후, 2차 항체인 염소 항 사람 IgG/A/M-HRP (1 mg/ml, 차단 완충액 중에 1:2’000)를 샘플 상에서 실온에서 2시간 동안 항온처리하였다. PBS/Tween (0,05%)을 사용한 최종 세척은 퍼옥시다제의 TMB 기질을 사용하기 전 3회 수행하였다. 청색 침전물 형성은 각각의 웰 중에 효소의 양에 직비례한다. 효소 반응은 50 μl/웰 HCl 1M을 사용하여 중단하였다. 흡광도는 450nm (620nm 참조 파장)에서 판독하였다. 각각 3회 동안의 평균 블랭크 흡광도는 세균 코팅된 흡광도로부터 공제하였다.

리노바이러스 ELISA를 위해, Maxisorp 플레이트 (Nunc)는 0.1M 카보네이트 완충액 중에서 정제된 리노바이러스 C 스톡 (3 x 10⁶/ml; 임상명: S07-09-09-U) (2-4°C)으로 밤새 코팅하였다. 제2 Maxisorp 플레이트는 0.1M 카보네이트 완충액 중에서 5% BSA로 코팅시키고 “블랭크” 플레이트로서 사용하였다. 다음 날, 웰은 PBS/Tween (0.05%)으로 3회 세척하고 실온에서 1.5h 동안 PBS/FCS (2.5%)로 차단하였다. 웰은 이어서 PBS/Tween (0.05%)으로 3회 세척하였다. Ig 제형 (0.7 μg/ml-500　μg/ml)은 실온에서 2시간 동안 웰에 첨가하였다. PBS/Tween (0,05%)으로 2회 세척한 후, 2차 항체인 염소 항 사람 IgG/A/M-HRP (1 mg/ml, 차단 완충액 중에 1:2’000)를 샘플 상에서 실온에서 2시간 동안 항온처리하였다. PBS/Tween (0.05%)을 사용한 최종 세척은 퍼옥시다제의 TMB 기질을 사용하기 전 3회 수행하였다. 청색 침전물 형성은 각각의 웰 중에 효소의 양에 직비례한다. 효소 반응은 50 μl /웰 HCl 1M을 사용하여 중단하였다. 흡광도는 450nm (620nm 참조 파장)에서 판독하였다. 각각 3회 동안의 평균 블랭크 흡광도는 바이러스 코팅된 흡광도로부터 공제하였다.

면역조직화학

조직 손상은 레이저 스캐닝 공초점 현미경을 사용하여 평가하였다. 조직은 다음과 같이 제조하였다. MucilAir™ 트랜스웰은 PBS 중에서 1회 세척하였고 4% 파라포름알데하이드 중에서 4°C에서 밤새 고정시켰다. 다음 날, 트랜스웰은 PBS로 3회 세척하였고, 조직에는 -20°C에서 30분동안 빙냉 메탄올을 투과시켰다. 조직은 이어서 PBS로 3회 세척하였고, 차단 단계는 PBS 중에서 3% 염소 혈청을 사용하여 4°C에서 밤새 수행하였다. PBS를 사용한 또 다른 세척 단계 (3회) 후, 염색은 항-시토케라틴 항체 (Abcam; ab192643)(1/200), 항-베타 튜불린 항체(Abcam; ab11309)(1/200) 및 DAPI (Sigma D9542)(1/2000)를 사용하여 4°C에서 48h-72h 동안 조직 상에 수행하였고, 모두는 PBS 중에서 희석시켰다. 조직은 이어서 PBS 중에서 3회 세척하였고, 트랜스웰은 조직으로부터 분리하였다. 조직은 이어서 슬라이드 상에 탑재하고 탑재 배지 및 커버 슬립으로 커버하였다. 슬라이드는 실온에서 24h 유지시켜 이들이 Zeiss LSM800 공초점 현미경 상에 이미지화되기 전에 건조되도록 하였다.

경상피 전기 저항성 (TEER)

TEER은 역학적 파라미터이고, 이는 상피 상태를 반영한다. 그러나, 이것은 여러 인자들에 의해 영향받을 수 있다. 예를 들어, 구멍이 존재하는 경우 또는 단단한 세포 접속부가 상실된 경우, TEER 값은 100 Ω.cm² 미만의 값에 도달한다. 대조적으로, 상피가 건강한 경우, TEER 값은 전형적으로 200 Ω.cm² 초과이다.

바이러스 또는 세균 없이 비히클로 처리된 샘플 뿐만 아니라 비처리된 샘플은 음성 대조군으로서 작용하였고, 10% Triton X-100은 양성 대조군으로서 사용하였다.

TEER 값을 측정하기 위해, 200 μL의 MucilAir™ 배지를 MucilAir™ 배양물의 정점 격실에 첨가하였고, 저항성은 각각의 조건에 대해 EVOMX 볼트-옴-미터 (World Precision Instruments UK, Stevenage)를 사용하여 측정하였다. 저항성 값 (Ω)은 하기의 식을 사용함에 의해 TEER (Ω.cm²)로 전환시켰다:

TEER (Ω.cm²) = (저항성 값 (Ω) - 100(Ω)) x 0.33 (cm²)

여기서, 100 Ω은 막의 저항성이고 0.33 cm²는 상피의 총 표면이다.

락테이트 데하이드로게나제 (LDH) 검정

락테이트 데하이드로게나제는 세포질막의 붕괴시 배양 배지로 신속하게 방출되는 안정한 세포질 효소이다. 100 μL의 기저측면 배지는 각각의 시점에서 수거하고 제조업자의 지침(Sigma, Roche, 11644793001)에 따라 세포독성 검출 KitPLUS의 반응 혼합물로 항온처리하였다. 방출된 LDH의 양은 이어서 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 490nm에서 각각의 샘플의 흡광도를 측정함에 의해 정량하였다. 비처리된 것과 비히클 (바이러스 또는 세균 부재)은 음성 대조군으로서 작용하였고 LDH의 생리학적 방출(≤ 5%)에 상응한다. 10% Triton X-100은 음성 대조군으로서 사용하였고 막대한 LDH 방출 (동등한 100% 세포독성)에 상응한다. 세포독성의 퍼센트를 결정하기 위해, 하기의 방정식을 사용하였다(A = 흡광도 값):

세포독성 (%) = (A (exp 값)-A (낮은 대조군)/A (높은 대조군)-A (낮은 대조군))*100

바이러스 발산

연구의 각각의 시점에서, 정점 세척은 200μL MucilAir™ 배양 배지로 수행하였다. 20 μL는 추가로 바이러스 RNA 추출(QIAamp® Viral RNA 키트 (Qiagen))에 사용하여, 60 μL의 RNA 용출 용적을 수득한다. 바이러스 RNA는 5 μL의 바이러스 RNA를 사용한 정량적 RT-PCR(QuantiTect Probe RT-PCR, Qiagen)에 의해 정량하였다. 2개의 피고나비리대 과 특이적 범-피코나비리대 프라이머 및 피코나비리대 및 인플루엔자-A 특이적 프라이머 및 프로브를 또한 FAM-TAMRA 리포터-켄처 염료와 함께 사용하였다.

RT-PCR에 대한 대조군 뿐만 아니라 HRV-A16 또는 H3N2 RNA의 공지된 농도의 4개 희석물을 포함시키고 플레이트는 TaqMan ABI 7000 (제조원: Applied Biosystems) 또는 Chromo4 PCR 검출 시스템(제조원: Bio-Rad) 상에서 전개하였다. Ct 데이터는 표준 곡선으로 보고하였고, 희석 인자로 보정하였고 그래프 상에 ml 당 게놈 카피 수로서 제공하였다.

점액섬모 제거율

점액섬모 제거율은 5X 대물렌즈를 갖는 Olympus BX51 현미경에 연결된 Sony XCD-U100CR 카메라를 사용하여 모니터링하였다. 30 μm 직경의 폴리스티렌 마이크로비드(Sigma, 84135)를 MucilAir™의 정점 표면 상에 첨가하였다. 마이크로비드 이동은 실온에서 30개의 이미지에 대해 초당 2 프레임으로 비디오 추적하였다. 3개의 영상은 삽입 당 취득하였다. 평균 비드 이동 속도 (μm/sec)는 ImageProPlus 6.0 소프트웨어를 사용하여 계산하였다. 데이터는 평균 + SEM (n=3개 삽입)으로서 제공한다.

실시예 1: 혈장-유래된 면역글로불린은 슈도모나스 아에루기노사와 상호작용한다

PA는 낭성 섬유증을 갖거나 중증의 COPD를 갖는 대상체에서와 같이 호흡기의 많은 감염과 관련되어 있다. 많은 상이한 종이 존재한다. 임상적 분리물은 임상 셋업과의 이의 관련성을 위해 사용하였다. 시판되는 혈장 유래된 면역글로불린은 주로 수천의 성인 공여자로부터 수거된 혈장 풀의 분획화로부터 수득된, 고도로 정제된 IgG로 이루어진다. 이의 다중 공여자 기원으로 인해, 단리된 면역글로불린은 다가 및 다클론성 뿐만 아니라 백신 접종의 결과로서 특정 병원체에 대해 보다 높은 역가를 제공한다. 단량체 IgA 및 5량체 IgM 및 단량체/이량체 IgA의 혼합물은 폐기물 분획으로부터 단리될 수 있다. 본원 발명자들은 이전에 다중반응성 혈청 유래된 중합체 IgA, IgM 및 2개의 이소타입(IgA/M)의 혼합물이 재조합 분비 성분(SC)과의 조합시 분비 Ab에 어셈블리될 수 있음을 확립하였다[34]. 국소 수동적 면역화를 위한 이의 용도에 대한 지지에서, 분자들은 프로테아제가 풍부한 장 세척액에 노출시 높은 시험관내 안정성을 나타낸다[35].

도 1은 ELISA 검정에서 혈장-유래된 면역글로불린의 PA로의 결합을 제공한다. 중요하게, 모든 혈장-유래된 면역글로불린은 상기 검정에서 PA 임상적 단리물에 결합할 수 있다(재료 및 방법 섹션 참조). PA로의 결합은 용량-의존적이고, 면역글로불린의 양은 0.7 μg/mL에서 500 μg/mL로 다양하다. 면역글로불린 제형간의 비교는 PA의 결합 능력에서 차이를 보여주었다. 예를 들어, SC와의 연관성 존재 또는 부재하에 IgA 및 IgM의 혼합물은 PA에 최고의 친화성을 보여주었고, 그 다음은 IgG 및 IgA였다.

실시예 2: 혈장-유래된 면역글로불린 IgG는 PA와 대형 응집물을 형성한다

면역글로불린은 점막 표면에서 여러 역할을 설명할 수 있다. 이들은 옵소닌으로 작용하여 증진된 식세포 인지를 유도하거나 보체의 침적 및 후속적 용해를 촉진시킬 수 있다. 이들은 항체 의존성 세포 매개된 세포독성 (ADCC)으로 불리우는 기전을 통한 파괴를 위해 감염된 세포에 결합하고 이를 태그할 수 있다. 면역글로불린은 이의 표면 항원에 결합하고 이의 성장을 억제함에 의해 병원체를 중화시킬 수 있다. 이것은 또한 병원체를 코팅하여 이의 점막 상피로의 접착을 예방할 수 있고, 이의 기전은 면역 배제로 불리운다. 마침내, 면역글로불린은 이들의 2가 또는 다가 결합 성질 때문에, 미생물을 보다 큰 클러스터로 응집시켜 면역계에 의한 보다 효과적인 인지 및 숙주에 의한 기계적 제거율을 가능하게 할 수 있다[36]. 점막 부위에 존재하는 분비 IgA 및 IgM은 각각 4가 및 10 내지 12가를 제공한다. 대조적으로, IgG는 단지 2가를 나타낸다. IgA 및 IgM은 IgG 보다 미생물 응집을 유도하는 경향이 크다[37;38].

도 2는 공초점 현미경에 의한 IgG와 PA 간에 형성된 면역 복합체의 분석을 보여준다. CFSE-표지된 PA 및 Cy3-표지된 혈장-유래된 IgG를 사용하여 IgG-PA의 대형 면역 복합체를 검출하는 것은 놀라운 일이다. 면역글로불린에 의한 항원 결합은 대체로 이들의 항원-결합 (Fab) 단편에 의존한다. IgG는 단지 2가 임으로, 상기 응집체를 보일 것이라고는 예상되지 않는다. 이러한 결과는 IgG가 잠재적으로 이의 당을 통해 Fab 영역의 외부에서 PA에 추가로 결합할 수 있음을 지적할 수 있다. IgG는 따라서 예상된 바와 같이 PA를 면역계에 신호전달하는데 보다 강력할 수 있다.

실시예 3: 혈장-유래된 면역글로불린은 PA에 의해 유도된 조직 손상을 예방한다

PA는 많은 항생제에 대한 이의 내성 뿐만 아니라 생물막 형성에서 이의 관여에 대해 공지된 병원성 미생물이다[39]. PA는 많은 독성 인자를 제공한다. 이들 중 일부는 세포외효소, 예를 들어, 엘라스타제 A 및 B, 프로테아제 IV, 엑소톡신 A, 세포외효소 S 또는 헤모라이신이다. 세포외효소는 이의 독성 및 관련 조직 손상에 관여할 뿐만 아니라 면역계의 성분에 대해 PA를 방어하는 작용을 한다.

본 발명의 감염 모델에서 얼마나 많은 PA가 조직 손상을 유도하는지를 평가하기 위해, 본원 발명자들은 세포질막 붕괴와 연관된 락테이트 데하이드로게나제 (LDH)의 방출을 측정하였다. 실험은 본원 발명의 1차 3D 세포 배양 시스템에서 수행하였고 LDH는 감염 후 24시간에 수거된 샘플에서 측정하였다. 모든 면역글로불린 제형(예를 들어, IgG, IgA, IgAM 및 sIgAM) 프롤린(비히클)을 시험하였다. 도 3은 PA 감염이 정상 상태의 배지에서 발견되는 정상적인 LDH 수준보다 높은 수준에서 LDH의 방출을 유도하고 있음을 입증한다. 중요한 것은 면역글로불린을 PA와 함께 투여했을 때 모든 면역 글로불린 제형이 LDH의 방출을 막아 조직 손상을 예방할 수있는 것으로 나타났다.

조직 손상을 평가하는 또 다른 방법은 시험관내 조직의 경상피 전기 저항성(TEER)을 측정하는 것이다. 실제로, 상기 파라미터는 상피 단층 또는 다층의 세포 배양 모델에서 단단한 접합 역학의 통합성을 반영한다[40]. 결과로서, 조직 통합성이 영향받는 경우, TEER은 감소된다. PA 감염이 1차 상피 조직을 나타내는 장벽에 어떻게 영향을 미치는지를 이해하기 위해, 감염 전 및 감염 24 시간 후에 TEER를 측정하였다. 도 4는 감염이 조직 통합성에 어떠한 영향을 미치고 IgG가 이를 예방하는 역할을 어떻게 하는지를 보여준다. IgG와 프롤린의 최대 용량은 트랜스웰의 정점 측면 상에 세균이 존재하지 않은 경우 TEER에 영향을 미치지 않는다. PA 감염시 도 3에 나타낸 바와 같이 LDH가 방출될 뿐만 아니라 TEER도 감소한다(프롤린 샘플). 이러한 결과는 PA가 첨가된 경우 MucilAir™의 조직 통합성의 상실을 지적한다. 이러한 맥락에서 IgG의 활성을 평가하기 위해, PA와 조합된 IgG의 증가된 용량 (5 ~ 500 μg 범위의 용량)이 사용되었다. 가장 낮은 IgG 용량은 조직 손상에 대한 양호한 보호를 보여주지 못했지만 용량을 늘리면 (50 내지 500 μg) 조직을 양호하게 보호하고 2회 최고 용량에 대해 최상의 효과를 보여주었다.

LDH 방출 및 TEER 측정 외에도 MucilAir ™ 조직은 PA 감염 동안 발생하는 손상을 평가하기 위해 현미경을 사용하여 관찰되었다. MucilAir ™는 다층 상피 조직이므로 공초점 현미경을 사용하였다. 도 4에 기재된 바와 동일한 셋업을 사용하였다. 감염 후 24시간에, 조직을 고정시키고 염색 및 분석을 위해 슬라이드 상에 절단 탑재하였다. 도 5는 PA 유도된 조직 손상을 예방하는 IgG 효능을 입증한다. 건강한 조직 (대조군)은 맨 오른쪽 하단에 나타나는 섹션으로 나타낸다. PA 감염시 조직에 큰 구멍이 나타난다(프롤린으로 처리된 트랜스웰, 상단, 왼쪽). 증가하는 용량의 IgG를 PA (5 ~ 500 μg 범위의 용량)와 함께 적용하였다. 조직 손상을 예방하는데 IgG의 용량 의존적 효과를 관찰하였다. 최저 IgG 용량은 조직 손상을 막지 못했지만 구멍이 보다 작은 표면으로 나타나는 효과를 갖는 것으로 보였다. 증가하는 IgG 용량은 구멍 부재와 연관되었다. 그러나 50 ~ 250 μg 범위의 용량에서 조직 손상은 여전히 관찰 할 수 있다. 500 μg IgG는 대조군 웰에서와 같이 좋게 보이는 조직으로 최상의 결과를 제공하였다.

전체적으로, 모든 혈장 유래 면역글로불린 제형은 LDH 방출을 예방할 수 있다. IgG를 사용한 상기 결과에 대한 작용 기전의 세부사항을 살펴보면, 면역글로불린이 조직 손상 뿐만 아니라 조직 통합성의 상실을 예방할 수 있는 것으로 나타났다.

실시예 4: 혈장-유래된 면역글로불린은 염증 촉진 사이토킨의 슈도모나스 아에루기노사-유도된 조직 방출을 차단한다

점막 환경에서 상피 조직은 외부 세계에 대해 장벽으로서 기능하여 물리적으로 미생물이 조직으로 진입하지 못하도록 한다. 그러나, 손상되면, 미생물은 자유롭게 진입할 수 있다. 따라서, 잠재적 감염 및 이들 장벽의 손상이 있는 경우의 신호를 생성하기 위해, 상피 조직은 “위험” 신호 또는 사이토킨의 분비를 통해 면역계와 상호작용하여 면역계의 세포 성분들에 경보하여 이들이 조직으로 이동하고 2차 방어층을 제공하도록 한다.

IL-6 및 IL-8은 염증 촉진 사이토킨이고 이는 이들 조직이 손상되는 경우 상피 조직에 의해 분비될 수 있다. 다음 실험 세트에서, 혈장-유래된 면역글로불린은 PA 감염시 염증 촉진 사이토킨 방출의 예방에서 평가하였다. 도 6은 PA 감염 후 24시간에 MucilAir™에 의한 IL-8 방출을 보여준다. 모든 면역글로불린 제형 (예를 들어, IgG, IgA, IgAM 및 sIgAM)은 프롤린(비히클)과 함께 시험하였다. 도 6은 IL-8 분비가 PA 감염 동안에 고도로 증가되어 거의 3배 증가에 도달함을 입증한다. 면역글로불린 제형의 어떠한 것도 정상 상태에서 조직에 의한 IL-8 방출에 대해 유의적 효과를 갖지 않았다. 그러나, PA와 함께 적용되는 경우, 모든 면역글로불린 제형은 IL-8의 PA -유도된 분비를 차단할 수 있다.

PA-유도된 IL-8 방출을 방지하는 IgG의 효과를 묘사하기 위해, 증가하는 용량의 IgG (5 내지 500 ㎍ 범위의 용량)를 PA와 조합하여 시험하였다. 도 7은 IgG에 대한 IL-8 분비의 용량 반응을 상세히 기재한다. 실험은 3명의 다른 공여자로부터 생성된 MucilAir ™에 대해 수행하였다. 공여자 간 가변성을 설명하기 위해, 감염 후 IL-8 분비를 100 % 방출 조건으로 프롤린과 조합하여 설정하였다. 100 % 방출과 관련하여 추가 조건이 계산되었다. 도 7에서 나타낸 바와 같이, IgG와 프롤린의 최대 용량은 IL-8 방출에 영향을 미치지 않는다. 흥미롭게도 IgG는 최대 용량 (500μg)에서 수득된 최상의 효과와 함께 용량 의존적 방식으로 실질적으로 PA-유도된 IL-8 분비를 감소시켰다.

동일한 방식으로, PA 감염 후 IL-6 분비를 연구하였다. 도 8은 PA 감염 후 24시간에 MucilAir™에 의한 IL-6 방출을 보여준다. 모든 면역글로불린 제형 (예를 들어, IgG, IgA, IgAM 및 sIgAM)은 프롤린(비히클)과 함께 시험하였다. 도 8은 IL-6 분비가 PA에 의해 고도로 증가되어 거의 6배 증가에 도달함을 입증한다. 면역글로불린 제형의 어떠한 것도 일정 상태에서 조직에 의한 IL-6 방출에 대해 유의적 효과를 갖지 않았다. 그러나, PA와 함께 적용되는 경우, 모든 면역글로불린 제형은 IL-6의 PA -유도된 분비를 차단할 수 있다.

모두 함께, 상기 데이터 세트는 모든 면글로불린 제형이 IL-6 및 IL-8과 같은 염증 촉진 사이토킨의 방출을 차단하고, 예방으로서 국소적으로 적용된 면역글로불린을 투여받은 PA-감염된 대상체에서 잠재적으로 국소적 염증을 감소시킴을 입증한다. PA 감염 시 IL-8 및 IL-6 분비의 차단은 실제로 PA에 대해 국소적으로 적용된 면역글로불린에 의한 조직 손상의 예방으로 이어질 수 있다. 혈장-유래된 면역글로불린은 세포외효소 활성을 억제함에 의한 것 뿐만 아니라 PA에 대한 면역 배제를 통해 작용할 수 있다.

실시예 5: 혈장-유래된 면역글로불린은 사람 리노바이러스와 상호작용한다

HRV는 주로 감기와 같은 질병의 절반 초과에 관여하는 것으로 공지되어 있다[41]. 그러나, 또한 천식 뿐만 아니라 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)의 악화에 관여한다. 100개 초과의 혈청형이 존재한다. 분무된 혈장-유래된 면역글로불린이 HRV 감염으로부터 개체를 보호할 수 있는지를 평가하기 위해, 상이한 혈장-유래된 면역글로불린에 의한 HRV의 임상 단리물로부터의 결합을 시험하였다. 도 9는 모든 면역글로불린 제형이 용량 의존적 방식으로 ELISA 검정 (재료 및 방법 섹션 참조)에서 HRV에 결합할수 있음을 보여주고, 용량 범위는 0.7 μg/mL 내지 500 μg/mL이다. 그러나, 결합은 각각의 면역글로불린 제형 간에 상이하였다. IgG는 덜 강력한 결합제이고, IgAM 및 IgA는 양호한 결합을 보여준다. SC의 IgAM으로의 첨가는 IgAM이 HRV에 결합하는 효능을 감소시키는 것으로 보인다. 이는 결합 일부가 Fab 의존성이 아님을 지적할 수 있다.

실시예 6: 혈장-유래된 면역글로불린은 사람 리노바이러스에 의해 유도된 발산 및 조직 손상을 방지한다

다른 바이러스와 같이, HRV는 세포를 감염시켜 복제할 수 있다. 하기의 단계에서, 비리온은 이어서 어셈블리되고 세포 용해를 통한 세포 방출/발산 전에 팩키징된다. 도 10은 MucilAir™의 감염 후 HRV 발산을 방지하는 혈장-유래된 면역글로불린의 효과를 입증한다. 비히클 대조군 (프롤린)이 사용되는 경우, 높은 발산 (~10⁹ HRV C15 게놈 카피수/mL)의 PA가 MucilAir™의 정점 측면 상에서 검출되었다. 양성 대조군으로서, 사람 리노바이러스에 대한 리노바이러스 3C 프로테아제 억제제인 루핀트리비르를 사용하였다. 관찰된 바와 같이, 루핀트리비르의 적용은 3log까지 HRV 발산을 효과적으로 감소시켰다. 놀랍게도, 감염 시에 혈장-유래된 면역글로불린의 적용은 HRV 발산을 본원 발명의 검정으로 검출될 수 없는 수준까지 완전히 감소시켰다. 모든 면역글로불린 제형 그러나 IgAM은 상기 감소를 보여줄 수 있다. 그러나, 및 중요하게, IgAM은 여전히 적어도 4log까지 HRV 발산을 감소시킬 수 있다.

따라서 혈장 유래된 면역글로불린은 상피에서 HRV의 진입을 방지하여 그에 따른 복제와 발산을 차단할 수 있다.

복제하면서, HRV는 세포 용해를 유도할 수 있다. 상피와 관련하여, 본원 발명자는 혈장-유래된 면역글로불린이 HRV-유도된 조직 손상에 대해 상피 세포를 보호할 수 있는지를 평가하였다. 이를 평가하기 위해, TEER 파라미터는 HRV 감염 후 조직 통합성을 평가하는 수단으로서 사용하였다(도 11). 정상 상태에서 (감염 부재), TEER 측정은 비히클로 처리 후(음성 대조군) 약 260 Ohm.cm²이었다. HRV 감염 및 조직에 대한 비히클의 적용시(양성 대조군), TEER은 거의 5배까지 감소되었고, 감염 후 조직 통합성의 상실을 지적한다. 도 11에 나타낸 바와 같이, 루핀트리비르는 HRV-유도된 조직 손상을 예방함에 의해 양성 효과를 가졌다. 모든 혈장-유래된 제형은 HRV가 투여되는 경우 조직 통합성의 상실을 예방할 수 있었다. 혈장-유래된 면역글로불린에 의한 HRV의 면역 배제는 PA-유도된 세포 손상 뿐만 아니라 PA 침입에 대한 폐 조직을 보호하기에 충분한 것으로 입증한다.

실시예 7: 혈장-유래된 면역글로불린은 사람 리노바이러스-유도된 점액섬모 제거율 감소를 감소시킨다

점액섬모 제거율은 기관지 조직의 주요 기능이다. 점막에 포집된 병원체는 폐로부터 배출되고 병원체가 페조직 상에 정체되고 복제되는 것을 방지하기 위해 객담이 된다. 점액섬모 제거율은 상기한 기전에 의해 영향받을 수 있고, 이들 중 하나는 조직 손상이다.

HRV 감염은 조직 손상과 연관되어 있으므로, HRV 감염 48h 후 점액섬모 제거율에 대한 혈장-유래된 면역글로불린의 효과를 평가하였다(도 12). 정상 상태 (감염 부재)에서, 점액섬모 제거율은 비히클을 사용한 처리 후 (음성 대조군) 40mm/s이었다. HRV 감염 및 조직에 대한 비히클의 적용 시 (양성 대조군), 점액섬모 제거율은 2-배 감소하였다. 도 12에 나타낸 바와 같이, 루핀트리비르는 점액섬모 제거율의 HRV-유도된 감소를 차단함에 의해 양성 효과를 가졌다. 모든 혈장-유래된 제형은 점액섬모 제거율의 감소를 차단할 수 있고 최상의 효과는 IgA 및 IgM에 대해서 나타나고, 이에 대한 점액섬모 제거율 상실이 관찰되지 않았다.

실시예 8: 사람 리노바이러스 감염에 대한 사람 혈장-유래된 면역글로불린 제형의 효과의 용량 의존성

이어서, 관찰된 효과가 용량 의존성인지가 조사되었다. 면역글로불린 제형은 4, 20, 100 및 500 μg/웰로 첨가하고, HRV 발현에 대한 이들의 효과는 HRV 게놈 카피수를 측정함에 의해 평가하였다. 도 13은 혈장-유래된 사람 면역글로불린 제형이 용량 의존적 방식으로 HRV 확장을 억제할 수 있음을 입증한다.

TEER에 대한 효과는 또한 상기된 바와 같이 조사하였다. 면역글로불린 제형은 4 μg/웰 및 20 μg/웰에서, 100 μg/웰에서 HRV 유도된 TEER 감소를 지연시켰다. 500　μg/웰에서, 상기 감소는 완전히 차단되었다.

또한, 상기 명시된 것과 동일한 용량을 사용하여 섬모 박동 빈도 및 점막섬모 제거율에 대한 상이한 용량의 면역글로불린 제형의 효과를 평가 하였다. 다시, 시험된 모든 면역글로불린 제형에서 섬모 박동 빈도 및 점액섬모 제거율에 대한 용량 의존적 효과가 관찰되었다.

감염 후 2일째 HRV-유도된 IL-8 분비는 또한 혈장-유래된 면역글로불린 제형에 의해 억제되었고; 4 μg/웰의 IgAM 및 SIgAM에서도 완전한 억제를 성취하였고; IgG 및 IgA는 4 μg/웰에서 매우 유의적인 감소를 성취하였고, 모든 면역글로불린 제형은 보다 높은 용량에서 완전한 억제를 성취하였다. RANTES의 HRV-유도된 생성은 또한 사용된 최저 용량의 면역글로불린 (4 μg/ml)에 의해 유의적으로 억제되었고, 2일째에 모든 면역글로불린 제형의 보다 높은 용량에 의해 완전히 억제되었다.

모두 함께, 혈장-유래된 면역글로불린은 HRV 감염 및 이의 연관된 조직 손상에 대해 시험관내 폐 조직을 보호할 수 있었다. 폐 감염의 위험에 처한 대상체의 폐로의 국소적으로 혈장-유래된 면역글로불린의 예방적 적용은 이들에게 바이러스 또는 세균 오리진의 미생물에 대해 보호를 제공한다.

실시예 9: 인플루엔자 바이러스 감염에 대한 사람 혈장-유래된 면역글로불린 제형의 효과

실험은 인플루엔자 종 H1N1을 사용한 MucilAir^TM 배양물의 리노바이러스 감염에 대한 것과 동일한 프로토콜을 사용하여 설정하였다. 오셀타미비르는 10 μg/웰에서 양성 대조군으로서 사용하였다. 면역글로불린 제형은 모두 도 14에 나타낸 바와 같이 용량 의존적 방식으로 인플루엔자 확장을 감소시키는 것으로 나타났다.

인플루엔자 바이러스에 의한 TEER 파괴도 각 면역글로불린 제형의 4 μg/웰 및 20 μg/웰까지 감소되었으며 100 μg/ml 및 500 μg/웰로 완전히 차단되었다.

섬모 박동 빈도에서 인플루엔자 바이러스-유도된 감소는 감염 후 4일에 관찰되었다. IgG는 섬모 박동 빈도에 최상의 구제 효과를 보였으며 이미 4 μg/웰로 완전한 회복을 보여주었다. IgA, IgAM 및 sIgAM 제형은 20μg/웰 및 보다 높은 농도에서만 섬모 박동 빈도를 구제할 수 있었다. Ig 제형은 또한 점액섬모 제거율을 회복하고, 인플루엔자 유도 IL-8 분비 및 인플루엔자 유도 RANTES 분비를 감소시킬 수 있다.

실시예 10: 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)을 갖고/갖거나 비-낭성 섬유증 기관지확장증 (NCFB)을 갖는 대상체에서 분무된 혈장-유래된 면역글로불린을 사용한 호흡기 감염-구동된 악화의 예방

COPD 및/또는 NCFB를 갖는 대상체는 질환의 악화에 참여할 수 있는 만성 호흡기 감염의 대상이 된다. 이들 감염의 만성은 조직의 리모델링을 구동하여 질환의 중증도를 증가시킨다.

상기 실시예에서 보여진 바와 같이, 국소적으로 적용된 혈장 유래 면역 글로불린은 시험관내 1차 사람 호흡기 조직에서 세균 및 바이러스의 부착 및 침입을 방지한다. 이러한 미생물의 면역 배제는 조직 손상을 예방하고 간접적으로 염증 촉진 사이토킨의 방출과 점액섬모 제거율의 상실을 방지하였다.

이러한 감염의 만성을 중단시키기 위해, NCFB 또는 잠재적으로 NCFB와 관련하여 경증에서 중증의 COPD를 앓고 있는 대상체는 분무된 혈장 유래 면역글로불린으로 매일 1 또는 2 회 치료를 받는다. 50 mg/mL 내지 150 mg/mL에서 용액 중에 제형화된 혈장-유래된 면역글로불린은 활성 진동 메쉬 분무기를 사용하여 분무된다. 2-10mL의 혈장-유래된 면역글로불린 제형은 매일 기준으로 아침 및/또는 저녁에 적용한다.

감염 구동된 악화의 감소는 COPD 및 NCFB 대상체에서 국소 염증을 감소시키고 질환의 진행을 지연시킨다.

본원 발명은 단지 실시예에 의해 기재된 것으로 이해되고 본 발명의 범위 및 취지 내에서 유지하면서 변형이 만들어질 수 있다.

참조문헌

Claims (25)

1. 만성 폐 질환을 갖는 사람 대상체에서 급성 악화의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리클로날 면역글로불린을 포함하는 조성물로서, 상기 조성물이 상기 대상체의 호흡기로 투여되는, 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 만성 폐 질환이 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)인, 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 COPD가 중등 내지 중증 COPD인, 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 만성 폐 질환이 비-낭성 섬유증 기관지확장증 (NCFB)인, 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, COPD 및/또는 NCFB의 급성 악화의 예방에 사용하기 위한, 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 낮은 IgG 수준, 예를 들어, 700 mg/dL 미만의 혈장 수준을 갖는, 조성물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 객담에서 낮은 IgG 수준을 갖는, 조성물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 예방 또는 치료 개시 12개월 전에 하나 이상의 급성 악화를 경험한, 조성물.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 객담에 하나 이상의 검출가능한 염증 촉진 사이토킨, 예를 들어, IL-1β 및/또는 IL-6 및/또는 IL-8을 갖는, 조성물.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 폐렴을 앓는, 조성물.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 바이러스 호흡기 감염, 예를 들어, 리노바이러스 감염을 갖는, 조성물.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 세균 호흡기 감염, 예를 들어, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 감염을 갖는, 조성물.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리클로날 면역글로불린이 상기 대상체의 호흡기에서 염증을 감소시키는, 조성물.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리클로날 면역글로불린이 대상체의 호흡기에서 하나 이상의 염증 촉진 사이토킨, 예를 들어, IL-1β 및/또는 IL 6 및/또는 IL 8의 수준을 감소시키는, 조성물.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리클로날 면역글로불린이 상기 대상체의 호흡기를 감염시키는 적어도 하나의 잠재적으로 병원성 미생물의 면역 배제를 유발하는, 조성물.
16. 제10항 내지 제12항 또는 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리클로날 면역글로불린이 적어도 하나의 병원체에 의해 유발된 상기 대상체에서 상피 조직에 대한 직접적인 손상을 감소시키고, 예를 들어, 상기 폴리클로날 면역글로불린이 세포외효소의 활성을 감소시키고, 상피 장벽 통합성의 상실을 감소시키고/시키거나 바이러스 발산(shedding)을 감소시키는, 조성물.
17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 사람 혈장-유래된 IgG를 포함하고, 특히, 상기 조성물이 적어도 95%, 보다 특히 적어도 98% IgG인, 조성물.
18. 제17항에 있어서, 상기 조성물이 프롤린, 예를 들어, 약 210 내지 약 290 mmol/L의 L 프롤린, 바람직하게 약 250 mmol/L의 L 프롤린을 포함하는, 조성물.
19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 에어로졸로서 투여되는, 조성물.
20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 50 mg/mL 내지 150 mg/mL, 예를 들어, 약 100 mg/mL의 폴리클로날 면역글로불린 농도를 갖는 수용액인, 조성물.
21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 2-10 mL로 투여되는, 조성물.
22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 상기 치료 동안에 48시간 마다 1회 또는 24시간 마다 1회 또는 12시간 마다 1회 투여되는, 조성물.
23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 가을 및 겨울 달 동안에 투여되는, 조성물.
24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 항생제, 코르티코스테로이드, 베타2 효능제 및 항콜린성 기관지확장제 중 하나 이상과 조합 치료요법으로 투여되는, 조성물.
25. 제19항에 있어서, 상기 조성물이 건조 분말인, 조성물.
    

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